JPH05508859A

JPH05508859A - ペプチド合成方法

Info

Publication number: JPH05508859A
Application number: JP91512957A
Authority: JP
Inventors: ハップス，ジョン　クラーク; パーカー，スティーブン　ウェイン
Original assignee: イーストマンコダックカンパニー
Priority date: 1990-07-24
Filing date: 1991-07-22
Publication date: 1993-12-09
Also published as: WO1992001709A1; EP0540626A1; US5322931A; CA2086416A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、生物活性を有するペプチド又は生物活性を有するペプチドを製造するために使用できるペプチド中間体を製造する溶液相方法に関する。好ましくは、本発明は、動物に投与したとき成長ホルモン放出活性を有するペプチド又はペプチド中間体を合成する方法に関する。

蛋白質はペプチド結合により一緒に結合された複数のアミノ酸からなる。アミノ酸は、生物源の蛋白質中に見出される種類のもの（どのようにして製造したかに拘らず天然アミノ酸という）であってよく、又はこれは生物学的片割れを有することなしに化学的に合成してもよい（合成アミノ酸という）。天然に存在する種類又は合成的種類から製造されたペプチドは種々の用途を有している。

α−アミノ酸は典型的に１個の不斉炭素原子を有し、偏光面を右手方向（右旋性）又は左手方向（左旋性）の何れかに回転できる。

それでジペプチドは二つのジアステレオマー形の一方又は他方（又は混合物）の何れかとして存在し得る。ジアステレオマー形のそれぞれは二つの鏡像異性形の一方又は他方（又は対）の何れかとして存在し得る。より大きいペプチドについて、ジアステレオマー形及び鏡像形の可能な数は、アミノ酸残基の数と共に指数関数的に増加する。種々の応用について、特に生物活性について、唯一のジアステレオマー形及び鏡像形を有することがしばしば望ましい。例えば、生きている生物には典型的にＬ−アミノ酸のみが見出される。

アミノ酸残基でのラセミ化がペプチドの合成の間にしばしば生じる。、−のようなラセミ化（Ｄ形及びＬ形の画ブ）での１個又（４それ以上のアミノ酸残基の成長）の結果一般ｒニ、Ｅ終ペプチドの大部分か生物学的不活波形になる。

従って、兇−のジアステレオマー・形及び単一の鏡像形でペプチドを作ることができる方法が非常に望ましい。

Ｓｔｅｗａｒｔ及びＹｏｕｎｇ、固相ペプチド合成（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓｅ　ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓＸ第２版、Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅａ＋１ｅａｌ　Ｃｏ。、　Ｒｏｃｋｆｏｒｄ　ＩＬＸ１９８４年）には、固相法を使用するペプチド製造方法が記載されている。

従来の固相合成によるペプチド製造方法には、ペプチドのＣ−末端から段階的方法で進行する合成が含まれている。段階的合成で使用するアミノ酸のためのウレタン保護基を注意深く選択することによって、ラセミ化を最少にできるか又は除くことができる。出発物質は、例えば、保護したα−アミノ酸をクロロメチル化樹脂、ヒドロキシメチル化樹脂、ベンジルヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂又はノくラーメチルベンジルヒドリルアミン（ｐ　−Ｍｅ−ＢＨＡ）樹脂に結合させることによって作ることができる。最初の結合の後で、α−アミノ保護基を有機溶媒中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）又は塩酸（ＨＣＩ）溶液を含む酸性試薬により室温で除去することができる。α−アミノ保護基を除去した後、残りの保護されたアミノ酸を所望の順序で段階的に結合できる。所望のアミノ酸鎖が完結した後、得られたペプチドを弗化水素（ＨＦ）のような試薬で処理することによって樹脂から切り離すことができる。この方法は、大規模の量のペプチドを製造したいときには効率が悪くコストがかかる。

溶液相法が知られているが、これらの方法は一般に固相法に関して上に記載したのと同じ手順、即ち、合成をペプチドのＣ末端から開始し、各アミノ酸鎖が残基毎に追加される段階方法を辿る。このようなＣからＮへの末端合成は遅く時間がかかる。更に、ラセミ化及び収率の問題を郵、にする必要性がまだある。ラセミ化を最少にする方法があるが、このような方法は一般的なアブ口・−チの柔軟性及び得られる収率への不利な影響を有しでいる。

Ｎ−末端残基からの段階的合成は経済的で魅力有るアプローチであろう。実際に、これはリポソーム中での蛋白質の合成のためにインビボ（ｉｎ　ｖｉｖｏ）で使用される作戦である。しかしながらこのような作戦はペプチド鎖の成功した実際的な合成にはなっていない。それは活性化及びカップリングの間、中間体のＣ −末端残基で起きるラセミ化に於ける問題のためである。従って、カップリング工程及び次の各カップリング工程に於いて、光学活性の生成物の代わりに、ジアステレオ異性体の混合物がしばしば形成される。即ち、このような合成は一般的に実際的ではない。

生物活性を有するか又は生物活性を有するペプチドへの中間体であるペプチドを合成する簡単な方法であって、単純で比較的安価であり、標準的方法よりも一層便利にペプチドの大規模製造で使用できる方法を持つことが有用であろう。若しこのようなペプチドを高収率で及び／又は低いレベルのラセミ化で製造できる方法があれば、また有用であろう。

発明の開示本発明者らは今や、生物活性を有するペプチド又は生物活性ペプチドのための中間体であるペプチドを合成する方法を見出した。この方法は、ペプチド断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ）　Ｘ−ＡＩ　−Ｙをペプチド断片Ｕ−Ｖ−Ｗ（但し、Ａ、以外の全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護されている）と縮合させることからなる。上記のペプチド断片に於いて、式ＸはＰｒｏｔ又はＰｒｏｔ　−Ａ　＋　（Ｐｒｏｔは窒素保護基である）であり、ＹはＡｓ　−Ｑ、Ａｌａ−Ａｓ　− Ｑ、　Ａｓ　−Ａ４−Ｑ。

Ａｌａ　−Ａ３　−Ａ４−Ｑ、Ａｘ　−Ａ４　−ＡＩ　−Ｑ、Ａｌａ−Ａｓ　− Ａａ−Ａ　ｓ　Ｑ　、Ａｌａ−Ｑ又は−Ｑであり（但し、ＹがＱであるとき、ＵはＴ−Ａｓ　−Ａ４−ＡＩ又はＴ　−Ａｌａ−Ａ　ｓ　−Ａ　ａ　Ａ　ｓであり、ＹがＡｌａ−Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａｔ　Ａａ　Ａｈであり、ＹがＡｓ−Ｑ又はＡｌａ−Ａ、−Ｑであるとき、ＵはＴ　−Ａ　ａ　−Ａ　ｓであり、ＹがＡ　＄　−Ａ　４−　Ｑ又はＡｌａ−Ａｔ　Ａ４　Ｑであるとき、ＵはＴ　−Ａ　ｓであり、モしてＹがＡｔ−Ａ４−Ａ１　Ｑ又はＡｌａ−Ａｓ−−Ａ　４　Ａ　＄　−−Ｑ　テあるとき、ＵはＴである）、ｖはＡ、又はＺであり（但し、ＶがＡ、であるときＷはＡ、−Ｚ又はＺであり、ＶがＺであるときＷは存在しない）、ＡＩは全ての天然に存在するし−アミノ酸、Ｍｅｔ（０）、　ＤＯＰＡ、　Ａｂｕ又はＡ　ｏ　−Ａ　’　＋であり（但し、Ａ。

はＨ，ＤＯＰＡ、　Ｌｙｓ、　Ｐｈｅ、　ＴＹｒ、　Ｃｙｓ、　Ｔｙｒ　−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ　−Ｇｌｙ、　Ｔｙｒ　−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ　−Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ −Ａｌａ　−Ｇｌｙ　−Ｔｈｒ　、又はＴｙｒ　−ＤＡｌａ　−Ｐｈｅ−Ｓａｒであり、Ａ’ｌは全ての天然に存在するＬ−アミノ酸、Ｍｅｔ（０）。

ＤＯＰＡ又はＡｂｕである）、ＡｔはＨｉｓ、　３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ、　Ａｌａ又はＴｙｒであり、Ａ、はＤＴｒｐ、　ＤＰｈｅ、Ｄ’　Ｎａ１．　Ｄ’　Ｎａｌ、　Ｎ（ｉｎ）Ｍｅ（Ｄ　／Ｌ）Ｔｒｐ　。

５−　Ｆ　−（Ｄ／ＬＴｒｐ）のようなり芳香族アミノ酸であり、Ａ４はＡｌａ。

Ｇｌｙ又はＳｅｔであり、ＡｓはＴｒｐであり、Ａ、はＤＰｈｅ、　Ｄ（ＮＭｅ）Ｐｈｅ又はＤ／Ｌ　’　（Ｍｅ）Ｐｈｅであり、Ａ７はＢ−Ｇ又はＧであり（但し、Ｂは任意の天然アミノ酸、任意の天然アミノ酸のジペプチド、ＨｔＮ−（ＣＨｔ）−−ＣＯｔＨ（但し、ｎ　＝　２〜１２）であり、ＧはＡｒｇ、１Ｌｙｓ、　Ｌｙｓ又は叶ｎである）、Ｑはペプチド断片のカルボキシ末端であり且つ −ＯＨ又は−Ｍであり（但し、Ｍは窒素含有求核試薬により置換できる部分である）、Ｔは指示断片（ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔ）のアミン末端を表わし且つＨ又はカップリング反応を阻止又は実質的に妨害しない保護基であり、そしてＺはポリペプチド又はペプチド断片のＣ末端を表わす〔但し、Ｚは一〇〇ＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＯＲ’、−Ｃ）！２ＯＲ’、　−Ｇｌｙ−Ｚ’、−Ｍｅｔ −Ｚ’、−Ｌｙｓ−Ｚ’、−Ｃｙｓ−Ｚ’ｒ　−Ｇｌｙ　−Ｔｙｒ−ｚ’又は− Ａｌａ　−Ｔｙｒ−Ｚ’であり（但し、Ｒ１はＨ１炭素数１〜約６のアルキル基、炭素数３〜約８のシクロアルキル基、炭素数２〜約８のアルケニル基又は炭素数６〜約１２のアリール基であり、Ｚ′は−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＯＲ’又は −ＣＨ，ＯＲ’であり、Ｒ１はＲ１と同様に定義され、同一でも異なってもよい）〕。

その後保護基を除く。また、より大きいペプチドを製造するために、その後の縮合に於いてこのようにして形成された保護されたペプチドを使用することもできる。

発明の詳細な説明生物活性を有するペプチド又は生物活性を育するペプチドを形成する際の中間体であるペプチドを合成する方法を開示する。この方法は、ペプチド断片Ｘ　ＡＩ　−Ｙをペプチド断片Ｕ−Ｖ−Ｗ　（但し、ＸはＰｒｏｔ又はＰｒｏｔ　ＡＩであり、ＹはＡｓ　−Ｑ、Ａｌａ　Ａｘ　−Ｑ。

Ａｓ　−Ａ４−Ｑ、Ａｌａ−Ａｓ　−Ａ４−Ｑ、　Ａｓ　−Ａ４−Ａｓ　−Ｑ。

Ａｌａ−Ａｓ　−Ａ４−ＡＩ　−Ｑ、Ａｌａ−Ｑ又はＱである）と縮合させることからなる。ＹがＱであるとき、ＵはＴ−Ａｓ−Ａ、−Ａｌ又はＴ　Ａｌａ−Ａ　＊　−Ａ　ａ　−Ａ　＊である。ＹがＡｌａ−Ｑであるとき、ＵはＴ’−Ａｍ −Ａ４−ＡＩである。ＹがＡ、−Ｑ又はＡｌａ　Ａｓ　−Ｑであるとき、ＵはＴ　−Ａ　４−　Ａ　ｉである。ＹがＡｓ　Ａ４　Ｑ又はＡｌａ　Ａｓ　Ａａ−Ｑであるとき、Ｕは’ｒ−Ａｓであり、そしてＹがＡｓ　Ａ４−Ａｓ−Ｑ又はＡｌａ−Ａ　ｓ　−Ａ　ａ　−Ａ　ｓ　−Ｑであるとき、ＵはＴである。ＶはＡ、又はＺである。ＶがＡ６であるときＷはＡ、−Ｚ又はＺである。ＶがＺであるときＷは存在しない。

本明細書で使用するとき、その前に文字の無いアミノ酸は「ＬＪ形であり、「Ｄ」は「ＤＪ形を表わし、モしてｒＤ／ＬＪは何れかの形が存在することを表わす。

Ａ、は任意の天然ＱＬ−アミノ酸、Ｎｅｔ（０）、　ＤＯＰＡ、　Ａｂｕ又はＡｏ−Ａ′、である。

Ａ、はＨ，ＤＯＰＡ、　Ｌｙｓ、　Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　Ｃｙｓ、Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ　−Ｇｌｙ。

Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｇｕｙ　−Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ−Ａｌａ　−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ又はＴｙｒ−ＤＡｌａ　−Ｐｈｅ−Ｓａｒである。Ａ’ｌは任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｎｅｔ（０）、　ＤＯＰＡ又はＡｂｕである。

Ａ、又はＡ’ｌは、好ましくは任意の天然Ｌ−アミノ酸であり、更に好ましくは、Ａ１又はＡ’＋はＡｌａ又はＬｙｓである。最も好ましくはＡ、はＡｌａ又はＬｙｓである。

Ａ、はＨｉｓ、　３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ、　Ａｌａ又はＴｙｒである。Ａ、は好ましくは）１ｉｓ又は３（ＮＭｅ）Ｈｉｓである。更に好ましくはＡ、はＨｉｓである。ヒスチジン側鎖は（例えば、トシル保護基により）保護されていても保護されていなくてもよい。ヒスチジン側鎖は保護されていないことが好ましい。

Ａ、はＤ−芳香族アミノ酸である。好ましくは、Ａ、はＤＴｒｐ。

ＤＰｈｅ、　Ｄ’　Ｎａ１．　Ｄ’　Ｎａ１．　Ｎ−インドール−（Ｍｅ）Ｄ／ＬＴｒｌ）又は５−フルオロ−Ｄ／ＬＴｒｐである。Ａ、は更に好ましくはＤＴｒｐ、　Ｄ　’Ｎａｌ又はＤＰｈｅである。Ａ、はＤＴｒｐであることが最も好ましい。

Ａ４はＡｌａ、　Ｓｅｒ又はｃｘｙである。Ａ４はＡｌａであることが好ましい。

ＡｓはＴｒｐである。

Ａ６はＤＰｈｅ、　Ｄ（ＮＭｅ）Ｐｈｅ又はＤ／Ｌ　’（Ｍｅ）Ｐｈｅである。

Ａ、は好ましくはＤＰｈｅ又はＤ（ＮＭｅ）Ｐｈｅである。Ａ、は最も好ましくはＤＰｈｅである。

Ａ、はＢ−Ｇ又はＧである（但し、Ｂは任意の天然アミノ酸、任意の天然アミノ酸のジペプチド、Ｈ，Ｎ−（Ｃ１，−Ｃｏ□Ｈ（但し、ｎ＝２〜１２）であり、ＧはＡｒｇ、　１Ｌｙｓ、　Ｌｙｓ又は叶ｎである）、Ａ、、は好ましくはＢ− Ｇ　（但し、Ｂは任意の天然アミノ酸である）又はＧである。更に好ましくはＡ、はＧである。

Ｚはポリペプチド又はペプチド断片のＣ末端を表わす〔但し、Ｚは−ＣＯＮＲ’ Ｒ”、−ＣＯＯＲ’、−ＣＨ！ＯＲ’　（但し、Ｒ１はＨ１炭素数１〜約６のアルキル基、炭素数３〜約８のシクロアルキル基、炭素数２〜約８のアルケニル基又は炭素数６〜約１２のアリール基であり、Ｒ２はＲ＋　と同様に定義され、同一でも異なってもよい）　、−Ｇｌｙ　−Ｚ’、　−Ｍｅｔ−Ｚ’、　−Ｌｙｓ −Ｚ’、　−Ｃｙｓ−Ｚ’、−Ｇｌｙ　−Ｔｙｒ−Ｚ′又は−Ａｌａ　−Ｔｙｒ　−Ｚ’　（但し、Ｚ′は−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＯＲ’又は−ＣＨ，ＯＲ’ であり、Ｒ１及びＲ″は上記と同様に定義される）である〕。Ｚは好ましくは− ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＯＲ’又は−ＣＯ□ＯＲ’である。

好ましくは、ＡＴ　−ＺはＧ−ＣＤＯＲ’、Ｇ−ＣＯＮＲ’Ｒ”又はＧ−ＣＤ、ＯＲ’である。更に好ましくは、Ａ、−ＺはＧ　−ＣｏＮｏｔである。最も好ましくは、ＡＴ−ＺはＬｙｓ　−ＮＨ＊である。

Ａ、以外の全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護基により保護されている。

Ｔは指示断片のアミン末端を表わし且つＨ又は本発明のカップリング（即ち縮合）反応を阻止又は実質的に妨害しない保護基である。

Ｔ単位の例には、窒素保護基、例えばベンジルが含まれる。好ましくは、ＴはＨである。

Ｐｒｏｔは窒素保護基である。

Ｑはペプチド断片のカルボキシ末端を表わし、且つ一〇〇（ＱがＯＨであるとき、Ｑを窒素含有求核試薬により置換するために、一般に脱水剤が必要である）又は−Ｍ（但し、Ｍは窒素含有求核試薬により置換できる単位である）である。このようなエステル及び活性エステルは当該技術分野でよく知られており、活性化基とも言われる。

例えば、［ペプチド合成に於ける活性エステル」（“Ａｃｔｉｖｅ　Ｅｓｔｅｒｓｉｎ　Ｐｅｐｔｆｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ”）、１０５−１９６頁、Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、１巻、ε。

Ｇｒｏｓｓ、　Ｊ、Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ。

１９８１年（本明細書に参照して含める）にＭ、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙにより記載されている例を参照されたい。Ｑには、アミノ酸及びペプチド断片のカップリングに普通使用されている、混合又は対称無水物と普通言われている化合物（試薬）が含まれる。好ましくはＭはエステル又は活性エステルである。Ｍは例えば、 −ＯＲ’、ハロゲン（即ち、−Ｃ１，−Ｂｒ、　−Ｆ及び−Ｉ）　、−ＳＲ”　（但し、Ｒ３は、炭素数１〜約１０のアルキル基、炭素数６〜約１２のアリール基、炭素数１〜１２のアシル基又は炭素数７〜約１２のアリールアルキル基である）又は窒素含有環状単位（例えば、イミダゾール、スクシンイミド、フタルイミド、ベンゾトリアゾール、ニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシ−フタルイミド、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール等々の残基）であってよい。更に好ましくは、ＱはＯＨ，ＯＲ”又は窒素含有環状単位である。Ｒ３は好ましくは、アルキル基、特にメチル、エチル又はプロピル：又はアリール基、特にフェニル及び置換フェニル、例えばハロゲン置換フェニルである。好ましい活性エステルは、良好な離脱基を作る電子求引性置換基、例えば、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシ−フタルイミド及びＮ− ヒドロキシ−ベンゾトリアゾールである。ＱがＯＨであるとき、脱水剤（カップリング剤とも言われる）は典型的に、Ｘ−Ａ、−ＹとＵ−Ｖ−Ｗとのカップリングの前若しくは間に、又は活性エステルへのＯｆ（の転化の前若しくは間に使用されるであろう。好ましい脱水剤はカルボジイミド、特にジシクロへキシルカルボジイミドである。

出発及び／若しくは最終ペプチド又はペプチド断片の医薬的に許容される有機又は無機塩も、本発明の範囲内であるものとする。

Ａ、以外の全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護されている。Ａ、がＨｉｓ又は３（ＮＭｅ）Ｈｉｓであるとき、この側鎖は保護してもよいが保護しなくてもよい。中性の側鎖は保護してもよいが保護しなくてもよい。縮合反応の後、保護基を除去できる。このことは生物活性ペプチドを形成するとき一般に行われている。典型的に、生物活性ペプチドを製造する最後から二番目の工程が完結するまで、ペプチド中間体から保護基を除去しない。

若し、それをすぐ使用しないでそれを貯蔵するならば、ペプチド又はペプチド中間体の保護基を離脱してもよい。例えば、ペプチド又はペプチド中間体を、簡単な貯蔵のために沈澱、凍結乾燥又はフラッシュ凍結することもできる。保護したペプチド中間体はまた、他のペプチド断片又はアミノ酸と更に縮合させてより大きいペプチドを製造するために使用することもできる。

保護基は、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル保護基の場合に酸性試薬、例えば、トリフルオロ酢酸又は塩酸を使用するような従来の脱保護処理により除去することができる。ベンジルオキシカルボニル保護基の場合には、水素化が脱保護の好ましい方法である。

２個のペプチド断片のそれぞれは、好ましくは少な（とも２個のアミノ酸残基である。更に好ましくは、２個の断片の１個はトリペプチド又はテトラペプチドである。

本発明の方法により形成される得られたペプチド又はペプチド中間体は少な（ともテトラペプチドである。更に好ましくは、長さが５〜１５個のアミノ酸残基の範囲内にあるペプチドを作るために本発明の方法が使用される。なお更に好ましくは、長さが６〜１１個のアミノ酸残基の範囲内にあるペプチドを作るために本発明の方法が使用される。

゛ｊ−ルヤ・ル、アルケニル、アリ・−ル、丁リールチルキル及びアリールオキシ基は置換されていてもよく置換されていなくてもよい。Ｆｉ−ましい置換基には、ヘテロ原子（例えば、０９Ｎｉ　Ｓ）　、ハロゲン（ＣＩ、　Ｆ、　Ｂｒ、Ｉ）　、ヒドロキシ、炭素数１〜約６のアルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、ニトロ基等々が含まれる。更に好ましい置換基には、Ｏ，Ｎ、ヒドロキシ及びアルキル基が含まれる。

本発明の方法は、Ｃ末端アミノ酸からの段階的延長を必要としない溶液相方法によるペプチドの形成を許容する。段階的アプローチは面相合成で殆どもっばら使用されている。従って、本発明の方法はペプチドの形成に於いてより大きい柔軟度を許容する。

ペプチド又はペプチド中間体の合成はペプチド断片の断片縮合に基づいている。

このことは、典型的に、より僅かな工程を必要とし、そうして段階的合成よりも高い全体収率を与える。

ペプチド断片は、以下に示すラセミ化抑制剤の使用、使用温度等のようなラセミ化を伴う問題点を最少にするために標準的な注意を払う種々の方法により製造できる。

例えば、ペプチド断片の製造に於いて、市販されているアミノ酸から出発できる。しかしながら、アミノ酸は熟練者により製造することもできる。好ましくは、アミノ酸を１個又はそれ以上の保護基により保護する。

本明細書の開示から熟練者により認められるように、保護基の適当な使用は、ペプチド断片の形成及びペプチド断片の化学的カップリングのために望ましい。即ち、酸性側ＩＩ（例えば、グルタミン酸及びアスパラギン酸）及び塩基性側鎖（例えば、オルニチン、リジン及びアルギニン）のために、側鎖に中性の性質を与える保護基を使用することが一般的に望ましい。アミノ酸の反応性側鎖のために使用される保護基は、側鎖をペプチド合成及び断片カップリングの条件に不活性にするようなものである１：ども望ましい。ヒドロキシル官能性（例えば、スレオニン又はセリン）又はフェノール官能性（例えば、チロシン又はＤＯＰＡ）を含むアミノ酸側鎖は、ペプチド合成で使用される反応条件に依存して保護された形又は保護されない形の何れかでしばしば使用される。

本発明のＸＡｔ−ＹとＵ−Ｖ−Ｗとの断片カップリングのために、熟練者はＮ− 末端断片のアミン末端（例えば、Ｘ）が所望の結合形成に関与しないことに注目するであろう。かくして、Ｎ−末端断片のアミン末端を断片カップリングの間保護しておくことが望ましい。熟練者はまた、カルボキシ末端断片のカルボキシ末端（例えば、Ｗ）がまた断片カップリングの所望の結合形成に関与しないことに注目するであろう。かくして、カルボキシ末端断片のカルボキシ末端を保護しておくことが望ましい。好ましくは、Ｃ−末端断片のカルボキシ末端は、カルボキサミドが本発明の方法により製造されるペプチドの好ましいＣ−末端であるので、カルボキサミドとして保護する。

保護基の選択は、合成の反応条件に対する不活性性、可溶化性又は脱可溶化性、結晶化度の増大、コスト、導入の容易性、除去の容易性等々を含む多数の要因により決定される。多数の保護基を当業者により使用できる。このような保護基の例は、Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、　３巻、「ペプチド合成に於ける官能基の保護」（“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆＦｕｎｅｔｉｏｎａｌ　Ｇｒｏｕｐ　ｉｎ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ″）、　Ｅ、Ｇｒｏｓｓ及びＪ、　Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、１９８１年、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋｌ（本明細書に参照して含める）に開示されている。

一般に、Ｐｒｏｔのようなアミン保護のために、アミド及びウレタンが好ましい保護基である。モノアシル化保護基が好ましい。ウレタン保護基が最も好ましい。ウレタン保護基の種類の最も好ましい例には、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）及びｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基が含まれる。カルボン酸基のために、エステル保護が一般的に好ましい。最も好ましいエステルはアルキルエステルである。アルギニンのグアニジン側鎖のために、若し高いアルカリ性の反応条件が避けられるならば、保護を使用することはしばしば必要ではない。ヒスチジンのイミダゾール側鎖は保護された形又は保護されない形の何れでも使用できる。本発明の好ましい態様に於いて、Ａ、がヒスチジンであることが好ましく、Ａ、が保護しないことが好ましい。

熟練者は本発明のペプチド断片を本発明の開示に基づいて当該技術分野で公知の種々の方法により作ることができる。例えば、Ｕ−ｖ−Ｗのような断片の製造に於いて、α−アミノ窒素で保護されず適当に側鎖保護を含む（意図するペプチドのＣ−末端になることが意図される）アミノ酸アミドで出発することができる。

このアミノ酸アミドは、Ｎ−保護アミノ酸又はＮ−保護アミノ酸活性エステル若しくはＮ−保護アミノ酸イミダゾールのような活性化Ｎ−保護アミノ酸とカップリングできる。

本発明の溶液相カップリング反応のために広範囲の種々の溶媒が適しており、これには水及びアルコールのようなプロトン性溶媒、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン又はＮ−メチル−ピロリジノンのような極性溶媒及び酢酸エチルのようなエステル、塩化メチレンのようなハロゲン化炭化水素、並びにベンゼン又はトルエンのような芳香族溶媒及びヘプタンのような飽和又は不飽和炭化水素を含む非極性溶媒のような溶媒が含まれるが、これらに限定されない。本発明の方法に於いて溶媒のために基本的に要求されることは、反応に含まれるアミノ酸及びペプチドのためのその溶媒和力、カップリング反応に含まれる活性化アミノ酸残基のための溶媒の（アミン成分に対し相対的な）限定された反応性、及びラセミ化が制限されるか又は起きないようにカップリング反応を行う能力である。

Ａ　＊　−Ａ　ｔのような保護されたペプチド中間体が形成されると、窒素保護基を除去する。例えば、窒素保護基がベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）であるとき、例えば、５％　Ｐｄ／Ｃの触媒スラリーを含むメタノール（ＭｅＯＨ）のような適当な溶媒中での水素化分解により、窒素保護基は有効に除去される。

次いでＮ−脱保護したジペプチド断片を上記のような別のアミノ酸残基とカップリングさせてトリペプチド断片を得ることができる。上記の方法の追加の繰り返しを、より大きい長さのペプチド断片を得るために使用できる。

上記例示したペプチド断片の合成へのアプローチは、Ｃ−末端ペプチド断片のＣ末端からＮ末端へと進行する。このアプローチは本発明のＣ−末端アミド断片の合成に特に適している。Ｃ−末端トリペプチドアミド断片をどのようにして製造するかを示す一般的なスキームを下記に示す（スキームＩ）が、他の方法も可能である。例えば、別の保護基を使用するか又は保護基を使用しない。

スキーム１２ＫＮ−Ａ６−Ａ、　（保　護　基　）−ＮＨ２★保護基は同一でも異なってもよい。アミノ酸名称の後の括弧内の保護基はアミノ酸の側鎖にある。

★★ＣＤＩ＝カルボニルジイミダゾール★★★〔〕＝中間体この方法及び次の方法（スキーム２）は、異なった長さの広範囲のペプチド断片を製造するために当業者により容易に採用できる。

Ｎ−末端ペプチド断片も種々の方法により製造できる。例えば、ペプチドエステルとして終わりから２番目のＮ−末端断片を製造することがしばしば有利である。これが真実であるとき、Ｎ−脱保護したジペプチドエステルの介在を避ける様式でＮ−末端断片を製造することがしばしば有利である。このような様式でジケトピペラジン形成を避けることができる。Ｎ−脱保護したジペプチドエステルの介在を避けるための一つの方法は、Ｎ−末端で又はその近くにアミノ酸残基で出発することによりペプチド又はペプチド中間体のＮ−末端断片を合成することである。かくして、スキーム２で述べた例に於いて、Ｎ−保護アミノ酸（Ａ２）をＮ−非保護アミノ酸エステル（Ａ、）とカップリングする。ラセミ化を避ける注意を払わなくてはならない。Ｎ−保護基、カップリング剤、反応条件及び反応温度を賢明に選択することにより、これを行うことができる。得られるＮ−保護ジペプチドエステルの金属水酸化物（好ましくは、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム）での処理は、Ｎ−保護ジペプチド酸を与えるであろう。金属水酸化物を使用するとき、最少のラセミ化で高収率を得るために水酸化物の量を最少にし、反応温度を５０°Ｃより低く全般的に維持する注意を払わなくてはならない。ラセミ化を最少にするために注意深く制御した条件下でのＮ−保護ジペプチド酸とＮ−非保護アミノ酸エステルとのカップリングにより、Ｎ−保護トリペプチドエステルが得られる。Ｎ−保護トリペプチドエステルを金属水酸化物で処理することにより、Ｎ−保護トリペプチド酸が得られる。また、同じＮ−保護トリペプチド酸はＮ−保護ジペプチド酸を非保護アミノ酸と直接カップリングすることによって製造することができる。この後者のアプローチは一般により低い収率である。

アミノ酸Ａ！は好ましくはＬ−ヒスチジンであり、ヒスチジンのイミダゾール＠鎖を保護しないことが好ましい。この保護しない側鎖はＡ、を含むペプチド中間体に予期しない可溶性を与えることが″　分かづた。−かくして、−水溶液中で、１加したペプチドは一般的−に水に可溶性であることが分かるが、両性イオン及び中性分子は一般的に水に不溶性であることが分かる。ペプチド中間体のｐＫａ（及びｐＫａ’　）に対して細心の注意を払うことにより、反応のためにペプチドを可溶化させるか又は精製の目的のためにペプチドを沈澱／結晶化させることが一般に可能である。

下記のスキーム２は、Ｎ−末端トリペプチド断片の合成のために使用できるけれども、本発明の開示に基づいて他のアプローチを使用することができる。

スキーム２ラセミ化に影響を与える種々の要因は、ラセミ化を伴う問題点を最少にするために熟練者により考慮できる。アミン成分の塩基仕度比に対する核性、使用する溶媒（ラセミ化し易いジオキサンのような含有物の分離を増大する溶媒）及びアミノ成分の立体障害は、全てラセミ化に影響を与える。かくして、アミノ酸、保護基、溶媒、ｐＨ及びアミノ酸側鎖のｐＫａは全て影響を有する。

更に、温度もまたラセミ化の程度に影響を与える。かくして、低い温度が典型的に好ましい。好ましくは、反応温度はできるだけ低いが、受容できる速度で反応を起こさせる温度である。好ましくは、この温度は約−１０〜約５０℃である。

更に好ましくは、この温度は一１０〜約２５℃であり、更に一層好ましくは、この温度は約０〜約２５℃であり、もっと好ましくは、この温度は約５〜約１５℃ である。上記の温度範囲は、出発ペプチド断片の製造並びに本発明の縮合反応の両方に適用できる。特定の反応で使用しなくてはならない温度は本発明の開示に基づいて経験的に容易に決定できる。

なお更に、ラセミ化抑制剤を使用することもできる。本発明の開示に基づいて、Ｎ−末端断片のカルボキシ末端でのラセミ化は、好ましくは１５％より小さく、更に好ましくは１０％より小さく、更になお好ましくは５％より小さく、最も好ましくは１％より小さい。

本発明の縮合方法の利点の一つは、ペプチド生成物をしばしば（必然的にではないが）沈澱及び／又は結晶化により精製できることである。このような精製工程はカップリングの前のカルボキシ末端でのラセミ化の間に形成し得る少量のジアステレオマーを除去する傾向がある。

この生成物は典型的に、水又はテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）　、メタノール（ＭｅＯＨ）　、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）　、酢酸エチル、トルエン等のような有機溶媒のような、２個の断片を可溶化する溶媒中で作られる。、本発明の開示及び特別の要木に基づいて、熟練者１フ、使用するための最も適当な溶媒は何であるかを容易に決定できる。有機溶媒が好ましい。ＤＭＦが最も好ましい。

ペプチド断片、中間体及び最終ペプチドは、標準的精製方法、例えば、沈澱、真空濾過、結晶化、カラムクロマトグラフィー等により溶液から容易に分離できる。本発明の技術に対する一つの予期しない利点は、精製を一般に結晶化又は沈澱により行うことができ、それによって大規模製造に適した方法を作ることである。

２個の断片の棺合反応は、有機溶媒中で脱水剤（例えば、ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ））及び活性化剤（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＮＳｕ））のような縮合試薬での２個のペプチド断片の処理のような標準的方法により行うことができる。一つの好ましい態様に於いて、活性化剤はまたラセミ化抑制剤（例えば、ＨＯＮＳｕ）である。任意に、カップリングの前にペプチド中間体の活性エステルを単離してもよい。得られた保護ペプチド又は保護ペプチド中間体は、次いで次のペプチド合成に使用するか、又は保護基を除去するための従来の方法により、例えば、カルボカチオンスカベンジャーとしてのジメチルスルフィド及び１，２−エタンジチオールの存在下でトリフルオロ酢酸のような酸性試薬での処理により処理する。

Ｑが一〇Ｈのような−ＯＲ”であるとき、当該技術分野で普通に知られているカップリング剤を、Ｃ−末端ペプチド断片とＮ−末端ペプチド断片との間のペプチド結合を形成するために典型的に使用できる。このようなカップリング剤には、カルボニルジイミダゾール及びジシクロへキシルカルボジイミドのようなカルボジイミドが含まれるが、これらに限定されない。

Ｑが窒素含有求核試薬により置換されるとき、ＱＨは実際に又は形式、的にＭ離される。Ｑは、得られるＱＨ！：：３ｇ以下のｐ’ｆ、Ｂを有する化合物が含まれるように選択することが好ましい。このような化合物には、Ｎ−ヒドロキシ− スクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシ−フタルイミド、モノ−及びジ−ニトロフェノール、ハロゲン化フェノール、イミダゾール、１−ヒドロキシピペリジン、ヒドラゾ酸（例えば、ＮｓＨ，Ｑ　”　Ｎ　ｔである）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール等々が含まれる。更に好ましくは、ＱＨは、Ｑ置換基がＱ置換基を有するアミノ酸残基で最少のラセミ化で乃至ラセミ化無しにアミド結合を形成させる化合物、例えば、ｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾール及びＮ−ヒドロキシ−スクシンイミドを表わす。

スキーム３は、トリペプチドからテトラペプチドを形成するための一般的な反応及び続く生物活性ペプチドを形成するための縮合反応を示す。

スキーム３例えば、ＡＩ又はＡ７がＬｙｓであるとき、側鎖保護のための保護基はＢａｃであってよい。Ｎ−末端断片のＮ−末端保護のための保護基は、Ｂｏｃ又はＣＢＺのような適当なＮ−末端保護基であってよい。

ＣＦｓＣＯＯＨは酸感受性保護基で有用である。最も適当な脱保護剤は、本発明の開示及び使用する保護基に基づいて熟練者により容易に選択できる。

スキーム４はペプチド中間体を形成し、次いで結果としての生物活性ペプチドを形成する一般的な方法を示す。

スキーム４Ａ１−人２−＾コー＾４−Ａ５−＾６−＾フましくはＴｒｐであり、Ａ、は好ましくはＤＰｈｅであり、モしてＡ７は好ましくはＬｙｓである。

使用できる。

例えば、ＣＢＺ−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−ＯＭｅ又はＢｏａ　−Ｌｙｓ（ＢｏＣ）　−Ｈｉｓ−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−ＯＭｅのようなＣＢＺ−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−Ｑ又はＢｏａ−Ｌｙｓ（Ｂｏａ）−［（ｉｓ　−Ａｌ　−Ａｌａ　−Ｑ　（但し、Ｑはアルキルエステルである）のような保護断片を使用するとき、Ｌｙｓ−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ　−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨｔ又はＨｉｓ−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ，を製造するために使用できるＣＢＺ−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−ＤＨ又はＲｏｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　−Ｈｌｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−ＯＨを製造することができる。

ＣＢＺ−Ｈｉｓ　−Ｄ’　Ｎａ１−Ａｌａ　−ＯＭｅ、　ＣＢＺ−Ｈｉｓ　−Ｄ ’　Ｎａ１−Ａｌａ　−ＯＨ。

ＣＢＺ−Ａｌａ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　Ｎａ１−Ａｌａ　−ＯＭｅ、　ＣＢＺ−Ａｌａ　−Ｈｌｓ　−Ｄ’　Ｎａ１−Ａｌａ　−ＯＨ，ＣＢＺ−Ｈｉｓ　−Ｄ’　Ｎａ１−Ａｌａ　−ＯＭｅ、　ＣＢＺ−Ｈｉｓ　−Ｄ”　Ｎａ１−Ａｌａ−ＯＨのようなペプチド断片は、Ｈｉｓ−Ｄ’　Ｎａ１−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ　−ＮＨ，、Ａｌａ−Ｈｉｓ　−Ｄ’　Ｎａ１−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　 −ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ　−ＮＦｌ、及びＨｉｓ−Ｄ’　Ｎａ１−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨｔのような生物活性ペプチドを製造するために使用できる。保護基としてＮ−ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）を使用することは、典型的に結晶化できる生成物を製造することにより精製を単純化することができる。

他の保護基もまた使用できる。例えば、典型的にリジンのようなアミノ酸残基と共にＢｏｃを使用する。

水溶液のｌ）Ｈを適当に変更することにより、断片、特にＮ−末端断片ペプチド中間体及びペプチドを溶液から沈澱させることが一般的に可能になる。特定の変更は本発明の開示に基づいて熟練者により経験的に決定できる。

上記例示したちの以外の他のペプチド断片も使用できる。例えば、Ｌｙｓ−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−ＤＰｂｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ，のようなヘプタペプチドを合成することを望むとき、Ｃ−末端からの段階的合成に対比する種々の異なったペプチド断片を使用できる。例えば、Ｈ２Ｎ−Ｔｒｐ　−ＤＰｈｅ −Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　−ＮＨｚのような弐ＨｚＮ　Ａｓ　−Ａｓ　−Ａｔ（保護基）　ＮＨｔの保護トリペプチドのような上記のトリペプチド、及びＢｏｅ−１、ｙｓ（Ｂｏｅ）−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−ＯＨのような式Ｂｏｅ　Ａ＋〜Ａｔ　−Ａｓ−Ａ４の保護テトラペプチドでの縮合反応を使用して、標準的な縮合技術、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＮＳｕ）の存在下でジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）での処理により保護へブタペプチドを製造することができる。次いでこの保護へブタペプチドを保護基を除去する従来の処理によって所望の生物活性へブタペプチドに転化する。例えば、トリフルオロ酢酸での処理による。また、断片ＨｚＮ−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｅ）−ＮＨｚ及びＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏａ）−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ− ＯＨを使用することもできる。

最終的生物活性ペプチドを、上記のようなペプチド中間体を作ることによって作った。例えば、二つの保護ペプチド断片、例えば、保護トリペプチドＣＢＺ−Ｈｉｓ　−Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ＯＨ及びＨ，Ｎ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨｔを組み合わせることができる。

他の態様に於いて、ジペプチド断片ＣＢＺ−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ−ＯＨをテトラペプチド断片ＨＪ−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨｔと共に使用してペプチド中間体を製造できる。次いで得られた保護ペプチド中間体を種々の方法により生物活性ペプチドを製造するために使用できる。例えば、窒素保護基ＣＢＺをメタノール性水素化分解のような標準的方法により除去して、ヘキサペプチドｆ（ｉｓ−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨｔを製造することができる。このヘキサペプチドは次いで、例えば、ビス−ｔ−ブトキシカルボニルリジンのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルでの処理により所望のへブタペプチドに転化して、保護へブタペプチドＢｏｃ　−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　−Ｈｉｓ−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−ＤＰｈｅ −Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨｔを製造でき、これは精製して保護基を除去するために処理できる。また、上記の例に於いて、部分的に脱保護したヘキサペプチドＨｉｓ−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨｗをトリフルオロ酢酸での処理によって更に脱保護して、生物活性へキサペプチドＨｉｓ−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨｔを製造することができ名。

縮合反応を行う際に、例えば、ＤＣＣ及びＨＯＮＳｕを使用する。この反応は典型的にジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）のような有機溶媒中で、ラセミ化に伴う問題点を最少にするために５〜１０″Ｃのような低温度で行う。意外にも、得られた保護中間体は、作動すると期待されなかった沈澱又は結晶化のような従来の精製技術により精製することができる。

精製したペプチド断片は、二つの断片の縮合のためにその断片を精製すること無しに、インシトゥで形成されたペプチド断片に直接添加できる。このアプローチは合成工程を単純化できる。

本発明で使用した方法は、フラスコ、８０ガロン反応器又は工業的規模の反応器中で行うことができる。得られた生成物及びその組成並びにその他の事柄に基づいて特定の断片を使用する。例えば、種々の異なった生物活性ペプチドを作るために使用できるペプチド中間体の製造は、添加する特定の追加のアミノ酸残基に依存する。

一つの好ましい態様に於いて、動物に投与したとき成長ホルモンの放出を促進するペプチド化合物を作るためにこれらの方法を使用する。これらのペプチドのあるものは、例えば、米国特許第４．２２３．０１９号、同第４．２２３．０２０号、同第４．２２３．０２１号、同第４．２２４．３１６号、同第４．２２６．８５７号、同第４．２２８．１５５号、同第４．２２８．１５６号、同第４、２２８．１５７号、同第４．２２８．１５８号、同第４．４１０．５１２号、同第４．４１０．５１３号、同第４．４１１，８９０号及び同第４．８３９．３４４号に記載されている。成長ホルモンの放出を促進する能力を有する短鎖ペプチドは、それが化学的及び／又は物理的に容易に変性でき、優れた輸送性能を育するので望ましい。本発明の方法の結果として、これは容易に且つ安価に製造でき、そして容易に精製できる。

本明細書で使用するアミノ酸残基略号は標準ペプチド命名法による。グリシンは用語「天然に存在するアミノ酸」の範囲に含める。

本明細書で使用する略号及び用語並びにそれぞれの意味のリストは下記の通りである。

１１ｅ−Ｌ−イソロイシンＧｌｕ＝Ｌ−グルタミン酸Ｔｈｒ＝Ｌ−スレオニンＰｈｅ＝Ｌ−フェニルアラニンＡｓｐ＝Ｌ−アスパラギン酸Ｇｉｎ＝Ｌ−グルタミンＰｒｏ＝Ｌ−プロリンＬｅｕ＝Ｌ−ロイシンＭｅｔ＝Ｌ−メチオニン５ｅｒ＝Ｌ−セリンＡｓｎ＝Ｌ−アスパラギンＨｉｓ＝Ｌ−ヒスチジンＴｒｐ＝Ｌ−）リブトファンＶａｌ＝Ｌ−バリンＤＯＰＡ＝３．　４−ジヒドロキシフェニルアラニンＭｅｔ（０）＝メチオニンスルホキシドＡｂｕ　−α−アミノ酪鮫１Ｌｙｓ＝Ｎ’−イソプロピル−Ｌ−リジン４−Ａｂｕ＝４−アミノ酪酸０ｒｎ＝Ｌ−オルニチンＤ’Ｎａ１＝α−ナフチル−Ｄ−アラニンＤβＮａｌ　＝β−ナフチルーＤ−アラニンＳａｒ　＝サルコシンＤＭＦ　＝ジメチルホルムアミドＣＢＺ＝ベンジルオキシカルボニルＢｏｃ＝ｔ−ブトキシカルボニルＭｅ　＝メチルＴＨＦ　＝テトラヒドロフランＣＤＩ　＝カルボニルジイミダゾールＰｄ／　Ｃ＝炭素上パラジウムＤＣＣ＝ジシクロへキシルカルボジイミドＨＯＮＳｕ　＝Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ　＝　３位のイミダゾール窒素がメチル化されているヒスチジンＮ（ｉｎ）Ｍｅ　（Ｄ／Ｌ）Ｔｒｐ　−インドール窒素がメチル化されているＤ／Ｌトリプトファン５−Ｆ　−（Ｄ／ＬＴｒＰ）　＝５−位が弗素化されているＤ／Ｌ　トリプトファンＤ（ＮＭｅ）Ｐｈｅ　＝α窒素がメチル化されているＤ／ＬフェニルアラニンＤ／Ｌβ（Ｍｅ）Ｐｈｅ　＝β炭素がメチル化されているＤ／Ｌフェニルアラニンこれらのペプチドの医薬的に受容できる塩が使用でき、人体への投与を意図するとぎ好ましい。このような塩には、ナＩ・リウム７、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、バリウム、アンモニウム及びプロトアミン塩を含む、医薬業界で普通に使用されている無毒性のアルカリ金属、アルカリ土類金属及びアンモニウム塩が含まれ、これらは当該技術分野でよく知られている方法により製造できる。この語には、得られた化合物を適当な有機酸又は無機酸と反応させることにより一般に製造される無毒性酸付加塩も含まれる。

代表的な塩には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、酢酸塩、蓚酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、燐酸塩、トシラート、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、琥珀酸塩、酒石酸塩、ナフチレート等々が含まれる。

本発明を下記の例により更に説明する。これらの例は本発明の理解を助けるために記載するもので、その限定として解釈すべきではない。

融点は、Ｔｈｏｍａｓ　Ｈｏｏｖｅｒ毛細管融点測定装置を使用して測定し、補正しない。赤外（ＩＲ）スペクトルはＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　１３７又はＮ１ｅｏｌｅｔ　Ｍｏｄｅｌ　５ＤＸ分光光度計で記録し、波長（ｃｍ−’　）で報告する。

全ての質量スペクトルはＶＧ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｌｔｄ、　Ｍｏｄｅｌ　ＺＡＢ−ＩＦ質量分析計を使用し、Ｅｌ（電子衝撃）　、ＦＤ　（フィールドディソーブシコン）又はＦＡＢ（高速原子衝撃）法で得た。ＧＣＭＳは３０ａ＋　０８５毛細管カラム（Ｊ　＆　Ｗ　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｅ）を取り付けたＦｉｎｎｉｇａｎ　４０２３　ＧＣＭＳを使用し、ヘリウムキャリヤーガスを使用して得た。元素分析は、ＥａＳｔｍａＩＩＣｈｅｍｉｃａｌ　ＤｉｖｉｓｉｏｎのＰｈｙｓｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈＤｉｖｉｓｉｏｎで行った。旋光はＲｕｄｏｌｐｈ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈにより製作されたＡｕｔｏｐｏｌ　ＩＩＩ旋光計を使用して測定した。

他に特定しない限り、全ての’ＨＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚで操作するＪＥＯＬ　ＧＸ−４００ＮＭＲ装置又は２７０ＭＨｚで操作するＪＥＯＬ　ＧＸ −２７０ＮＭＲ装置で得た。これらの装置は、０．７Ｈ２より小さいルーチンデジタル分解が可能である。化学的シフトは内部の３−（トリメチルシリル）−テトラジュウテロナトリウムブロビオネー）　（ＴＳＰ）に対してｐｐｍで表わした。

高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Ｖｙｄａｃ　２０１ＴＰＩＯ１０又は２１８ＴＰＩＯ１０準分取カラムに取り付けたＬ−５０００勾配調節器及び６５５Ａポンプからなる日立システムを使用して行った。溶離溶剤として０．２％トリフルオロ酢酸を含む水とメタノールとの組合せを使用した。

典型的に、目的の化合物を約１〜２％／分の速度で有機成分を増加させる勾配で６　ｍＬ／分の流速で溶出した。化合物は、ＬＫＢ　２１４０ダイオードアレイＵ、　Ｖ、検出器を使用し適当な波長で検出した。積算はＮｅ１ｓｏｎ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ　３．６）を使用して行った。

全ての反応は他に特定しない限り窒素又はアルゴンの不活性雰囲気下に行った。

無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、　Ｕ−Ｖ、グレード）及びジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）はＢｕｒｄｉｃｋ　ａｎｄ　Ｊａｃｋｓｏｎから購入し、瓶から直接使用した。

び乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、　１５００ｍＬ）の１０℃の溶液に、Ｎ　 −ベンジルオキシカルボニル−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル）す間にガス発生が認められた。Ｎ’−ベンジルオキシカルボニル−（Ｎ’−ｔ−ブトキシカルボニル）リジンイミダゾリド中間体、互が形成される間にアンモニアとＴＨＦ（２０００ｍＬ）との飽和溶液を製造した（無水ＮＨ２ガスをＴＨＦの中に５〜１０ ℃で通した）。中間体重の形成が完結したと判断した（ガス発生が終わったとき、約２時間）後、互を含むＴＨＦ溶液の半分をアンモニア溶液に添加した。互を含む溶液の残りは３０分後に添加した。この添加の間及びその後頁に４５分間アンモニアガスを連続して流し続けた。二つの３を含む溶液を添加した際、白色沈澱が形成した。反応物を室温にまで加温し、１５時間攪拌した。スラリーから溶媒を真空下で除去した。残渣を水中でスラリーにし、得られた固体を真空濾過により捕集した。’ＨＮＭＲ及びＦＤＭＳによる分析は、高レベルの純度で４の存在と一致した（１８１．４８ｇ、０．４７９モル、存在する微量の溶媒と共に１０１％）。

１００１００Ｏ中の溶液を、メタノール（２５０ｍＬ）中の５％　Ｐｄ／Ｃ（５ｇ）の触媒スラリーにアルゴン下で添加した。水素を反応混合物を通してバブリングさせ（約１５分間）、次いで反応物を水素の雰囲気下でＨＰＬＣ分析が反応が完結したことを示すまで（３６時間）攪拌した。次いで水素雰囲気をアルゴンで置き換えた。反応溶液をＣｅ１ｉｔｅ　（登録商標）パッドに通して透明にし、溶媒を真空下で除去して、固体を得た。ＩＨＮＭＲ及びＦＤＭＳによる分析は、単離した物質がアミン５と一致したことを示した（１１０．７５ｇ、０．４５２モル、９４％）。

１２６．３９ｇ、０．４２３モル）を、ＴＨＦ　（５００ｍＬ）中のＣＤＩ（２，６６、０３ｇ　。

０、４０９モル）の１０°Ｃの溶液にゆっくり添加した。添加の間にガス放出が認められた。ガス放出が終わったとき、リジンアミド５（１１０，７５ｇ、０．４５２モル）をＴＨＦ　（５００ｍＬ）中の溶液として添加した。約４８時間後、混合物を濾過して固体を除去した。濾液を真空下で濃縮した。

得られた残渣を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、５００＋ｎＬ）中に入れ、分離ロート中で次のようにして洗浄した。

１、）ＩＣＩ水溶液（Ｉ　Ｎ、　３　ｘ５００ｍＬ）洗液１のｐＨは８であった。次の洗液ｐ）ｌは約１゜２、水（５００ｍＬ）３、　ＮａｔＣＯｉ水溶液（１／２飽和、２　ｘ　５００ｍＬ）、形成した結晶性固体（１４２，７７ｇ、０．２７１モル、６６％）を捕集するために濾過４、水（３Ｘ　５００ｍＬ）有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥した。透明にした後、溶媒を真空下で除去した。得られた残渣を熱ＥｔＯＡｃから再結晶して、８の第二の試料（３０ｇ、０．０５７モル、約１４％）を得た。’ＨＮＭＲ及びＦＤＭＳによる結晶性固体の二つの収得物の分析は８と一致した。この反応は約８０％の一緒にした生成物収率を与えた。

Ｄ−フェニルアラニル−（Ｎ’−ｔ−ブトキシカルボニル）リジンを、メタノール（２００ｍＬ）中の５％　Ｐｄ／Ｃ（５０ｇ）の触媒スラリーに添加した。アルゴン雰囲気を水素で置き換えた。ＨＰＬＣ分析が反応か完結したことを示したとき（４時間）、水素雰囲気をアルゴンで置き換えた。次いで反応溶液をＣｅ１ｉｔｅバツドに通して透明にし、濾液を真空下で残渣にした。この反応はジペプチド９　（６０，７５ｇ、　０．１５５モル）の６８％収率を与えた。このジペプチド生成物をトリペプチド化生成物の高純度のために、低い全体収率は、生成物の小さい溶解度及び濾過により除去したＰｄ／Ｃ触媒への生成物の付着のためであると信じられる。

Ｎ’−ベンジルオキシカルボニル−トリブトフィル−Ｄ−フェニルアラニル−（Ｎ’−ｔ−ブトキシカルボニル）リジン−アミド、１２゜Ｎ’−ベンジルオキシカルボニル−トリプトファン（１０，６７、６０ｇ、　０．２００モル）　、ＴＨＦ　（５００ｍＬ）及びＣＤＩ（２、３３，０５ｇ、０．２０４モル）の１０ °Ｃの溶液をガス放出が終わるまで攪拌した。ＴＨＦ（約２００ｍＬ）中の９　（４０，８ｇ、０．１０３モル）の溶液を反応混合物に添加した。得られた溶液を室温にまで加温しながら１５時間反応させた。次いで形成された固体を真空濾過により捕集した。濾液を真空下で濃縮することにより残渣にした。得られた残渣及び固体を再び一緒にし、僅かに加温しなからＥｔＯＡｃ　（４００ｍＬ）中に入れた。溶液を室温にまで冷却する際に固体が形成された。固体（３４，５３ｇ　）を真空濾過により捕集した。この固体を熱ＭｅＯＨから再結晶して、精製したトリペプチド１２（２２，３６ｇ　、０．０３１モル）を得た。（最初の結晶化からの）　ＥｔＯＡｃ濾液を、分離ロート中で次のようにして洗浄した。

１、　８ＣＩ水溶液（Ｉ　Ｎ、　２　ｘ５００ｍＬ）２、水（ｌ　Ｘ５００ｍＬ）３、　ＮａｔＣＯｓ水溶液（ｌ／２飽和、２　Ｘ　５００ｍＬ）４、ＮａＣ１水溶液（Ｉ　Ｘ５００ｍＬ）有機層をＭｇ５Ｏ＜上で乾燥し、次いで真空濾過により透明にした。

濾液の溶媒を真空下で除去した。得られた残渣を前記のようにＥｔＯＡｃ中に入れ、乾燥固体（２２，５３ｇ　）を得た。この固体を熱ＭｅＯＨ再結晶化に付し、白色固体（１５，０４ｇ、０．０２１モル）として婬の第二の収得物を得た。

この反応は精製した生成物（３７，４０ｇ、０．０５３モル）の全体収率５１％を与えた。この生成物について得られた’ＨＮＭＲ及びＦＤＭＳデータは、トリペプチド１２と一致した。この方法のスケールアップ（約０．１５モルスケール）は全体生成物収率６０％で行われた。

トリプトフィル−Ｄ−フェニルアラニル−（Ｎ’−ｔ−ブトキシ力ｍＬ）を、アルゴン雰囲気下に５％　Ｐｄ／Ｃ（５ｇ）及びＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）の触媒スラリーに添加した。追加の体積のＭｅＯＨ（２２５０ｍＬ）を添加した。アルゴン雰囲気を水素で置き換え、反応させた（２４時間）。反応が完結したとき（出発ペプチドの消失をＨＰＬＣにより確認した）、水素雰囲気をアルゴンで置き換えた。溶液をＣｅ１ｉｔｅ、パッドに通して透明にし、濾液を真空下で濃縮してトリペプチド１３（５０，３１ｇ、０、０８７モル）を白色固体として得た。この固体から得た’ＨＮＭＲ及びＦＤＭＳデータは、トリペプチド１３と一致した。この物質をペプチドの製造及びペプチド中間体の製造に直接使用した。

Ａ　（ｂ）　、下記の化合物（１７及び２１）は、望ましくない副生物（２１）を与える例を表わす。

乾燥ＴＨＦ　（５００ｍＬ）及び２　（２６，３６ｇ、０．１４８モル）の１０ °Ｃ溶液に、Ｎ’−ベンジルオキシカルボニル−Ｄ−トリプトファン（１４，５０，０ｇ、０．１４８モル）を添加し、反応させて中間体Ｎ′−ベンジルオキシカルボニル−Ｄ−）リブトファンイミダゾリドを形成させた。得られた溶液をガスの放出が終わるまで攪拌した。アラニンメチルエ応をＨＰＬＣによりモニターした。カップリングが完結したとき、反応の間に形成された固体を真空濾過により捕集した。濾液を減圧化に濃縮して、ゆっくり結晶化する油を生成した。固体及び油の両方をＨＰＬＣにより分析した。その結果は、ジペプチド１７が両方の試料中に存在していたことを示した。部分的に結晶化した油及び固体を一緒にし、ＥｔＯＡｃと共に粉砕した。得られた結晶性物質を真空濾過により捕集した。

濾液を貯めておいた。結晶性の物体をＥｔＯＡｃ（１０００ｍＬ）中にスラリー化し、次のようにして洗浄した。

１．１ＮＨＣ１水溶液（２Ｘ　５００［＋１Ｌ）２、水（１ｘ５００ｍＬ）３、　Ｎａ２ＣＯ，水溶液（ｌ／２飽和、２　ｘ　５００ｍＬ）４、水（Ｉ　Ｘ　５００ｍＬ）有機層中の固体（６，３０ｇ、０．０１５モル、１１％）を真空濾過により捕集した。陽子ＮＭＲは１７のこの固体試料が高純度であることを示した。

シクロ−Ｄ−）リブトフィルーし一アラニン、２１ＭｅＯＨ（２５００ｍＬ）中のジペプチド１７（２７，００ｇ、０．０６４モル）の溶液をアルゴン雰囲気下で５％　Ｐｄ／Ｃ（２０ｇ）が入った丸そこフラスコに注意深く添加した。この系をアルゴンでパージし、次いで水素を反応溶液を通してバブリングさせた。小さいアリコート（約２５ｍＬ）を反応混合物から取り出し、水素化を’ＨＮＭＲ（６０ＭＨｚ）によりモニターした。上記反応の実施と同時に、中間体Ｎ　−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジンイミダゾリド１９ａを、乾燥ＴＨＦ　（５００ｍＬ）、２（Ｉ３．６４ｇ、０．０８４モル）及びＮ′−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジン（１９，２３，９９ｇ、０．０８３モル）をアルゴン雰囲気下で一緒にすることにより形成した。この混合物を０〜１０°Ｃで攪拌したが、溶液を形成しなかった。この混合物を室温に加温し、部分的溶液になった。得られた懸濁液をガスの放出が終わるまで攪拌した。１時間後に、ジペプチド１７の水素化が完結した（’ＨＮＭＲ）。水素化混合物をアルゴンでパージし、次いでそれをＣｅ１ｉｔｅパツドに通すことにより透明にした。透明になった溶液を減圧下に残渣にまで濃縮した。

得られた残渣を乾燥ＤＭＦ中に入れ、１９ａを含むと推定される溶液−懸濁液に添加した。得られた懸濁液を室温で約１７時間攪拌した。固体が反応の間に形成され、水を添加して溶液を形成した。この溶液はニンヒドリン試験で陽性であった。この溶液を真空下で濃縮して残渣にし、黄褐色油を得た。Ｎａｚｅ島の希釈溶液（ｐＨ８）を添加して生成物を沈澱させた。得られた固体を真空濾過により捕集し、濾液を凍結乾燥した。固体を水中にスラリー化し、濾過により捕集した。

捕集した固体を減圧下に乾燥し、水性濾液を凍結乾燥した。全ての単離した物質についての’ＨＮＭＲ及びＦＤＭＳデータは、Ｎａ−ベンジルオキシカルボニル −ヒスチジル−Ｄ−トリプトフィル−アラニンメチルエステル（２０）が製造されなかったが、その代わりにジケトピペラジン２１が形成し、実際に固体中に高レベルの純度で存在していた（７．９５ｇ、０．０３１モル、４９％）。

Ｂ、）リベブチド断片ＣＢＺ−）１ｉｓ　−ＤＴｒｌｌ−Ａｌａ　−ＯＭｅ　、　Ｎ’−ベンジルオキシカルボニル−Ｄ−トリプトフィル−アラニンメチルエステル、１７の製造Ｎ’−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジル−Ｄ−）リプトファンメチルエステル、２５ＥｔＯＡｃ　（４００ｍＬ）及びＤ−トリプトファンメチルエステル塩酸塩（２２，１５８ｇ、０．６２モル）の溶液を、飽和炭酸ナトリウム（４００ｍＬ）及び０．８Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（約５００ｍＬ）で洗浄した。得られた水相（ｐＨ８，５）を除去し、続いて有機相を半飽和Ｎａ２ＣＯｉ水溶液（１５０ｍＬ）で次いで水（５０ｍＬ）で洗浄した。芸の遊離塩基形（１１５，６ｇ、０．５３モル、８５％）を真空下での酢酸エチル層の濃縮で単離した。最初の水性洗液のｐＨを約１０に調節したとき、トリプトファンメチルエステルの遊離塩基のより高い収率が得られると思われる。

ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ１約９５ｇ、　０．４６モル）を、ＤＭＦ（約３Ｌ）中のＮ′−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジン形（１１４，５ｇ、約０．５２モル）の−５°Ｃ（氷−エタノール浴）溶液に添加した。得られた反応溶液を室温に加温しながら２４時間攪拌した。

この時点でのＨＰＬＣ分析は、反応が未完結であることを示した。次いで反応溶液を約−５℃に冷却し、ジシクロへキシルカルボジイミドの追加部分（約３５ｇ、約０．１７モル）を反応物に添加した。次いで反応混合物を室温に加温しながら更に２４時間攪拌した。次いで混合物を濾過してジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を除去した。濾液に水（ｌＬ）を添加し得られた溶液を真空下で濃縮した。

得られた残渣をＩＮ　ＨＣＩ水溶液（水相のｐＨがｌのｐＨに達するまで約ＩＬ）に入れた。

次いで水相を２回分の酢酸エチル（各ＩＬ）で抽出した。次いで水相のｐＨを冷２Ｎ水酸化ナトリウム（５００ｍＬ）及び水酸化ナトリウムベレットを添加することによって調節した。この中和の間、冷酢酸エチル（ＩＬ）を添加することによって冷だ（維持した。水相のｐＨが７に達したとき、白色固体の多量の沈澱が得られた。この固体を真空濾過により捕集し、半飽和炭酸ナトリウム（２ｘ　１５００ｍＬ）　、水（６Ｘ　１５００ｍＬ）及び酢酸エチル（３ｘ　１５００ｍＬ）で次々に洗浄した。

得られたフィルターケーキを高真空下で一定の重量になるまで乾燥した。この物質（１８７，１ｇ、約０，３８モル、約７７％）の’ＨＮＭＲスペクトルは、少量のジシクロヘキシル尿素の存在下に単一異性体として亜を含む生成物と一致した。この物質を更に精製すること無く直接加水分解した。

Ｎ’−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジル−Ｄ−トリブトファ０．３８モル）を、ジペプチド２５（１８７，Ｉｇ、約０．３８モル）、水（３６０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（約６Ｌ）の溶液に添加した。この溶液を室温で加水分解が完結するまで攪拌した（約２４時間）。出発物質の消失をＨＰＬＣ分析により確認した。

この溶液を真空下で、水（約ＩＬ’）に溶解する残渣に濃縮した。次いで水相（１）Ｈ約１０）を分離フラスコ中でＥｔＯＡｃ（２ｘ　５００ｍＬ）で抽出した。得られた水相を濃ＨＣＩでｐＨ５に調節し、この時点で結晶性沈澱が形成した。固体を真空濾過により捕集し、真空下で乾燥した（１４８．４ｇ、０．３１モル、８２％）。固体の第二の収得物を再び真空濾過により捕集し、真空下で乾燥した（２０．２ｇ、０．０４３モル、１１％）。’ＨＮＭＲは両方の試料が高純度でジペプチド２６を含んでいることを示した。この反応を２回繰り返して、８３％の収率（約０．０６モル規模）及び−の収率（約０．３モル規模）が得られた。

ジペプチドＮ＃−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジル−Ｄ−ｇ、０．３０３モル）、Ｎ−メチルモルホリン（艮、３０．６６ｇ、０．３０３モル）及びＤＭＰ　（２００ｍＬ）の混合物を添加した。得られた溶液をｉｏ’ｃに冷却し、その時点で塩化メチレン（２７３ｆｆｌＬ）中のジシクロへキシルカルボジイミド（２４，５４，６４ｇ、０．２６５モル）を添加した。反応をＨＰＬＣによりモニターし、その間反応温度を１０℃に維持した。４日後、反応は完結するまで進まなかった。聾の追加の装入物（１６，４ｇ、ｏ、　ｏｓｏモル）を添加し、反応混合物を１０℃で更に１日間攪拌した。

この期間の後、ＨＰＬＣは反応が完結まで進行したことを示した。反応の間に形成した固体を真空濾過により捕集した。次いで濾液を真空下で残渣に濃縮した。

得られた残渣を酢酸エチル（約５００ｍＬ）中に入れ、半飽和ＮａｚＣＯ３水溶液（２Ｘ　５００ｍＬ）で抽出した。酢酸エチル相をＭｇＳＯ４上で乾燥した。

得られた溶液を透明にし、真空下で残渣に濃縮した。この溶液の濃縮の間に、固体が形成した。この固体を捕集し、溶液を真空下で粘稠な油に濃縮した。この油は’ＨＮＭＲ及びＦＤＭＳにより２０（１５１，５ｇ　、溶媒湿潤、約１００％）と一致した。最終濃縮の間に単離された固体は、ＦＤＭＳによる分析で不純物（基準ピーク４４９、分子イオンは生成物を示さず）であると確認された。トリペプチド２０を含む粘稠な油は更に精製しなかったが、ペプチド断片の製造に直接使用した。

ヒスチジル−Ｄ−トリプトフィル−アラニンメチルエステル、３０炭素上の５％パラジウム（３ｇ）をメタノール（５００ｍＬ）中のＮ”−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジル−Ｄ−トリプトフィル−アラニンメチルエステル２０　（４０，１ｇ、　７１ミリモル）の溶液にアルゴン雰囲気下で注意深く添加した。アルゴンを反応混合物を通して１５分間バブリングさせ、次いで酢酸（１５ｍＬ、　０．２６モル）を添加した。

得られた混合物を通して水素を１５分間（表面下で）バブリングさせ、次いで反応物を室温で水素バラスト（１気圧）下に攪拌した。全部で５日後、ＨＰＬＣ分析は出発物質の約１０％が残っていたことを示した。

反応混合物を通してアルゴンを注意深（バブリングした（表面下で３０分間）後、炭素上の５％パラジウムの追加の部分（２，５ｇ　）を添加した。次の日、全部で６日間反応させて、アルゴンを再び反応混合物を通してバブリングさせ、得られた溶液を珪藻土のパッドを通して濾過することにより透明にした。得られた溶液を真空下で濃縮して、所望の生成物に加えて’ＨＮＭＲにより３当量の酢酸を含んでいると思われる固体発泡＃（３９，４０ｇ　）を得た。この発泡体の一部（３１，８８ｇ）を水（５０ＱＩＬ）に溶解し、濾過して少量の微粒子（’ＨＮＭＲにより、多分前の反応から持ち込まれたジシクロヘキシル尿素であると決定される）を除去した。酢酸エチル（５０００１Ｌ）及び飽和炭酸ナトリウム水溶液を得られた濾液に添加した。層を激しく攪拌することにより固体懸濁液が形成し、これを濾過した。得られたフィルターケーキを酢酸エチル（３０ＱＩＬ）及び水（３Ｘ　２０ＱＩＬ）で洗浄した。この白色固体を真空下で一定重量になるまで乾燥し、Ｈｉｓ−Ｄ　−Ｔｒｐ　−Ａｌａ　−ＯＭｅ（３０）（８，７１ｇ　、　２０．４ミリモル、３５％）を得た。ＦＤＭＳ＝４２７（Ｍ＋　１　）ビスーＢｏｃ−リジン　Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、３１゜ジシクロへキシルカルボジイミド（８，９ｇ、４３ミリモル）を、塩化メチレン（２５ＱＩＬ）中の（Ｂｏｃ）ｔリジン（１５ｇ、４３ミリモル）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（５，４８ｇ、　４８ミリモル）の室温溶液に添加した。得られた溶液を一夜攪拌した。次いで反応混合物を濾過してジシクロヘキシル尿素を除去し、透明にした濾液を真空下で白色固体（１９，０ｇ、約４２ミリモル、約９７％）に濃縮した。この白色固体は’ＨＮＭＲ及びＦＤＭＳ　（Ｍ”　＝４４３）により主生成物として３１を含むことが示された。エステル旦は、使用する前にアルゴン雰囲気下で−２゜°Ｃで貯蔵した。真空下での乾燥を延長した以外は上記の方法を繰り返すと、油ではなく発泡体を生成した。

Ｂｏｃ　−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｉｓ　−Ｄ　−Ｔｒｐ　−Ａｌａ　−ＯＭｅ　、３２゜Ｎ’、Ｎ’−ビス−ｔ−ブトキシカルボニル−リジン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（１０，６ｇ、　２３．９ミリモル〕を、無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、　２０ＱＩＬ）中のＨｉｓ−Ｄ　−Ｔｒｐ　−Ａｌａ　 −ＯＭｅ（３０）（８，５８ｇ、　２０．１ミリモル）の溶液に添加した。得られた均一な溶液を室温で週末の間攪拌した。全部で３日後、ＨＰＬＣ分析はトリペプチドの１％未満が反応混合物中に残っていたことを示した。水（５０ｍＬ）を尺応物に添加し、得られた混合物を更に１日攪拌した。

次いでこの溶液を真空下で濃縮した。得られた油状の残渣を酢酸エチル（５０ＱＩＬ）に溶解し、半飽和炭酸ナトリウム水溶液（２Ｘ　３００ｍ１、）で抽出した。有機相を、ＭｇＳＯ４及びＮａｔＳＯ４を通して濾過することにより乾燥し、真空下で濃縮して、固体発泡体としてテトラペプチド（１５，７４ｇ、　２０．９ミリモル、１０４％）を得た。この物質は更に精製すること無しにＢｏａ− Ｌｙｓ（Ｂｏａ）−Ｈｉｓ　−Ｄ−Ｔｒｐ　−Ａｌａ　−ＯＨの製造に使用した。

ＦＤＭＳ＝７５５（Ｍ＋　１　）Ｂｏｃ　−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｉｓ　−Ｄ　−Ｔｒｐ　−Ａｌａ　−ＯＨ，３２゜２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（７，５ｍＬ、　１５ミリモル）を、Ｈｏｅ　 −Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｉｓ　−Ｄ　−’ｒｒｐ　−Ａｌａ　−ＯＭｅ　（１０，３５ｇ、　１３．７ミリモル）を含むメタノール（５０ＱＩＬ）及び水（２００１１Ｌ）溶液に添加した。反応物を一夜室温で攪拌した後、ｆ（Ｐ［、Ｃ分析は出発物質の３％未満が残りでいたことを示した。得られた溶液を真空下で約２００ｍＬの体積になるまで濃縮した。水（１０ＱＩＬ）を添加し、２Ｎ水酸化ナトリウム（１ａ＋Ｌ）の添加によりＤＨを約１２に調節した。得られた溶液を酢酸エチル（２ｘ　５０ＱＩＬ）で抽出した。次いで、水相の９ＨをＨＣＩ水溶液の添加により５に調節し、その結果論が沈降した。水相を油から傾瀉して分け、次いで油を水（２Ｘ　５０ｍＬ）ですすいだ。この油は、真空下で一定重量になるまで乾燥すると固体発泡体（５，６２ｇ、　５５％）に転化した。

’ＨＮＭＲは高純度での単一異性体の存在を示した。

ＦＤＭＳ＝７４１（Ｍ＋　１　）１．９１ｇ、２．６ミリモル）及びＴｒｐ　−ＤＰｈｅ　−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　 −ＮＨｔ（１３，１，６４ｇ、２．８ミリモル）を、無水ＤＭＦに溶解し、得られた溶液を真空下で濃縮して粘稠油を製造した。この予備濃縮は両方のペプチド試料の’ＨＮＭＲで観察された微量のメタノールを除去する試みで行った。

得られたペプチド混合物をＤＭＦ　（２０ＱＩＬ）に溶解し、次いでＮ−ヒドロキシスクシンイミド（０，５９ｇ、５．１ミリモル）を添加した。次いで得られた溶液を一２°Ｃの溶液温度に冷却し、次いでジシクロへキシルカルボジイミド（０，７ｇ、３．４ミリモル）を塩化メチレン（３゜５ｍＬ）中の溶液として添加した。得られた反応混合物を一２°Ｃの溶液温度で３日間攪拌した。この期間の後、ＨＰＬＣ分析は出発物質の５０％未満が反応したことを示した。次いで追加のジシクロへキシルカルボジイミド（塩化メチレン４ｍＬ中０．８ｇ、３．９ミリモル）を添加し、得られた反応混合物を更に１日ｆｆ１−２°Ｃで攪拌した。次の日（全部で４日間）　Ｉ（ＰＬＣ分析が再び不完全な反応を示したとき、反応混合物の冷却を停止した。８時間かけて反応物の溶液温度を１８°Ｃに上昇させた。得られた反応混合物を室温で一夜攪拌した。次の朝、ＨＰＬＣ分析はテトラペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏａ）−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−０）１　（３３）の２％未満が残っていることを示した（２８０ｎａ＋での吸収の相対強度で判定した）。水（５０ｍＬ）を添加し、得られた混合物を更に１日間攪拌した。次いで反応溶液を濾過してジシクロヘキシル尿素を除去し、得られて濾液を粘稠な油まで真空下で濃縮した。酢酸エチル（２５ＱＩＬ）及び半飽和炭酸ナトリウム水溶液（２０ＱＩＬ）を得られた残渣に添加した。２相混合物をロータリー蒸発器で約１時間激しく渦巻かせゼラチン状固体の沈澱を起こさせた。焼結ガラスロート上で濾過して固体を捕集した。得られた固体を水（２Ｘ　２０ＱＩＬ）及び酢酸エチル（２００■Ｌ）で洗浄し、真空下で一定重量になるまで乾燥した（３４．１．６７ｇ、５０％）。上記単離工程からの濾液を全部−緒にし酢酸エチル相を単離することによって、第二の更に不純なペプチド３４の収得物を得た。

酢酸エチル溶液の濃縮により、３４の第二の不純収得物を得、これを水中に懸濁させ凍結乾燥した（　１．５６　ｇ　”）。この第二の収得物は使用しないか又は更に精製した。この第二の収得物の’ＨＮＭＲ分析は、この物質の主成分が３４であったことを示した。

ＦＤＭＳ＝１３０１　（Ｍ＋　１　）Ｌｙｓ　−Ｈｌｓ　−Ｄ　−Ｔｒｐ　−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−Ｄ−Ｐｈｅ　−Ｌｙｓ　−ＮＨｚ　、３５゜ヘプタペプチドＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｉｓ　 −Ｄ　−Ｔｒｐ　−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−Ｄ　−Ｐｈｅ　−Ｌｙｓ　−（Ｂｏｃ）−ＮＨｚ（３４，１，３３ｇ、　１．０２ミリモル）を、塩化メチレン（１５ｍＬ）中のトリフルオロ酢酸（３０ＱＩＬ）　、ジメチルスルフィド（１４ｍＬ）、１．　２−エタンジチオール（７ｍＬ）及びアニソール（２，２ｍＬ）の室温溶液に添加した。この均一な反応混合物を１５分間攪拌した。この時間の後、無水エーテル（４５ＱＩＬ）を添加して粗の生物活性ペプチド生成物競を沈澱させた。この生成物を焼結ガラスロート上の濾過により単離した。得られた明らかに非吸湿性の生成物を水に溶解し凍結乾燥した。凍結乾燥が終わると、ふわふわした白色固体（１，４６ｇ）が生成され、これはｆ（ＰＬＯにより約３〜１の比率で２種の生成物からなっていることが示された。主のより速く溶出する生成物は真正の試料とのＨＰＬＣでの共溶出により３５であることが確定された。粗ペプチド生成物を、Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ　（登録商標）ＲＰ−１８カラム充填物質（Ｃ−１８，２５〜４０ｎｍ、不規則メツシュ）を含む２６Ｘ４６０ｍｍガラスカラムで中圧クロマトグラフィーにより精製した。水中の溶液としてペプチドを注入した後、カラムを９　ｍＬ／分の流速で、１０から２５９６メタノールの浅い勾配で５時間、続いて１０から２５％メタノールの勾配で６．７時間溶出した。次いでメタノールの濃度を３５％で一定に６時間維持した。次いで勾配のメタノール濃度を１％／時間の速度で増加させた。溶出の間、溶媒組成物の残りは０．２％トリフルオロ酢酸を含有する水で作った。生成物（並）（凍結乾燥後０．７６　ｇ　。

０．５３ミリモル、５１％）を、メタノール濃度が３２％〜３６％の範囲内にある勾配の部分（溶液約１ガロン）から単離した。この方法で製造した試料について得られた高解像度陽子ＮＭＲデータは、以下に示す方法により製造した精製した３５の試料について得られた高解像度陽子ＮＭＲデータと本質的に同一であり、重ねることができるものであった。第二のより遅く溶出する不純物（０，１３ｇ）は、約４６％のメタノール濃度での後のフラクシヨンで溶出した。並及び後者の溶出成分の両方を含む混合フラクシヨンも得た（０．１４ｇ）。

ＦＤＭＳ　（競）　＝１００１　（Ｍ＋　１　）ＦＤＭＳ　（遅く溶出する不純物）＝１１０１．この遅く溶出する不純物についての１１０１の分子量は、１個のｔ−ブトキシカルボニル基の存在を強く示唆している。１個のｔ−ブトキシカルボニルビークは、’ＨＮＭＲで（並で汚された）この不純物についてＩｌ！察された。それは、もっと長い時間（Ｂｏｃ）ｔ−Ｌｙｓ　−Ｈｌｓ　−Ｄ　−Ｔｒｐ　−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　−ＮＨｚをトリフルオロ酢酸で処理すると、亜の粗生成物純度及び収率の両方が著しく増加するであろうことにっなかる。分析：　ＣａｚＨｇａＮｒ４０ｔ、　４ＴＦＡとしテノ計算値：Ｃ，４９，４５，）ｆ、　４．９８　；Ｎ。

１３．４６：Ｆ、　１５．６４゜実測値：Ｃ，４７，５；Ｈ，４，７８；Ｎ、　１２．１４．Ｆ。

１６、１５　（３５１：ライて）　。ＣｓｚＨｇａＮｒａＯｒ、　５ＴＦＡとしテノ計算値：ｃ。

４７．３９；Ｈ，４，６４；Ｎ、　１２．４８；Ｆ、　１８．１４゜Ｅ７　ヘキサペプチド中間体の合成Ｎ＃−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジル−Ｄ−トリブトライ稠な油を、ＭｅＯＨ（１５００ｍＬ）　、ＨｚＯ（５００ｍｌ、）及びＮａＯＨ（０−０８ｇ　／　ｍＬ、１１．１１ｇ、０．２７８モル）の溶液中で加水分解した。反応物をＨＰＬＣによりモニターしながら室温（約２５℃）で反応させた。２日後、ＨＰＬＣ分析は加水分解が完結したことを示した。溶液を真空下で残渣に濃縮した。次いで水（５００ｍＬ）を残渣に添加した。得られた溶液のｐＨは約１０であった。次いでこの水溶液をＢｔＯＡｅ（２Ｘ　５００ｍＬ）で抽出した。

この抽出後水相のｐＨは約９であった。水槽中の全ての不溶性物質を真空濾過により捕集した。次いで濾液のｐＨを２ＮＨＣＩで約５に調節した。この結果傾瀉により水相から単離した油が沈澱することになった。この油をメタノール−水溶液に入れ、真空下で残渣に濃縮した（１０９．４２ｇ、０．２００モル、ジペプチド２６からの全収率的７９％）。

Ｎ＃−ベンジルオキシカルボニル−ヒスチジル−ＤＩリプトフィルーアラニルートリブトフィルーＤ−フェニルアラニル−（Ｎ′−ｔ−ブチルオキシカルボニル）−リジンアミド、２８塩化メチレン（１２，５ｍＬ）中のジシクロへキシルカルボジイミド（召、２．４９　ｇ　Ｓｏ、　０１２１モル）を、ＤＭＦ　（１００ｍＬ）中の１３　（８，９９ｇ１０．０１２１モル）、２７　（６゜ＯＯｇ、　０．０１１０モル）及び競（２，５３ｇ、　０．０２２０モル）の０℃溶液に添加した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。６日後、反応は完結した。反応物を濾過してジシクロヘキシル尿素を除去した。水を添加し、得られた溶液を真空下で濃縮した。得られた油をＥｔＯＡｃに入れ、その結果固体が形成した。１時間放置した後、この固体は油に戻った。この物質をＮａｖＣＯｓ水溶液（ｌ／２飽和、２Ｘ　２５０ａｉＬ）で分離ロート中で洗浄した。次いでこの油は分離ロート中で固体を形成した。この固体を真空濾過により捕集した。層を分離し、有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥した。溶液を透明にし、溶媒を真空下で除去した（３．１９ｇ、約０．００３０モル）。塩基性洗浄から得られた固体をＭｅＯＨに入れ、エーテルを添加して沈澱させた（６．３５ｇ、約０．００５８モル、約５０％）。この物質のＩＨＮＭＲスペクトルは少量のジシクロヘキシル尿素を含む単一のへキサペプチド生成物２８と一致した。

びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１３，５ｇ、、１１７ミリモル）の３℃溶液に添加した。得られた反応混合物を４日間３〜５°Ｃで攪拌した。

この期間の後、ＨＰＬＣ分析は２種のトリペプチドが５％より小さい相対強度（２８０ｎｍ）で存在していたことを示した。水（約２００ｍＬ）を反応混合物に添加し、得られた溶液を濾過して沈澱したジシクロヘキシル尿素を除去した。透明にした溶液を真空下で粘稠な油に濃縮した。追加の水を添加し、得られた混合物を真空下で粘稠な油に濃縮した。１リツトルフラスコ中でこの油に、酢酸エチル（４００ｍＬ）及び半飽和炭酸ナトリウム水溶液を添加した。このフラスコをロータリー蒸発器（約１００ｍｍ、　２５℃）で３０分間渦巻かせて、濃厚なゼラチン状沈澱を作った。この沈澱を濾過により捕集し、フィルターケーキを半飽和炭酸ナトリウム（２５０ｍＬ）　、水（６Ｘ　２５０ｍＬ）及び酢酸エチル（２Ｘ　５００ｍＬ）で次々に洗浄した。得られた固体を、高真空下で一定重量になるまで乾燥して、２８　（５２，３ｇ、約４７ミリモル、約９０％）を得た。

２８に加えて、ＩＩ（ＮＭＲはこの固体中に著しい量のジシクロヘキシル尿素が存在することを示した。この物質は３６への水素化の前に更に精製しなかった。

ＦＤＭＳ＝　１１０７　（名目上の質量のＭ＋１）Ｆ、ヘキサペプチド中間体からのへブタペプチドの製造Ｈｉｓ　−Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−Ｄ−Ｐｈｅ　−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨｔ　、３６炭素上のパラジウム（５％、１２ｇ）を、メタノール（ＩＬ）中の下で添加した。反応物を付属する水素バラストで水素雰囲気（約１バール）下にシールする前に、水素を反応混合物を通して約１５分間バブリングさせた。水素バラストは１〜２日毎に交換し、４日目及び８日目に炭素上パラジウムの追加の装入物（それぞれ４ｇ）を反応混合物に添加した。この自燃性の触媒は、アルゴンを３０分間反応混合物中にバブリングさせた後でのみ添加した。触媒を添加した後、水素をバブリングさせることによって反応を再開始した。２６２時間（約１１日）後、ＨＰＬＣ分析は出発物質の相対強度（２１４ｎｍ）が２％より小さいことを示した。次いで反応混合物をＣｅ１ｉｔｅを通して濾過し、得られた溶液を真空下で一定重量になるまで濃縮して、３６（３４，７４ｇ　。

約３６ミリモル、約７７％）を薄黄色固体として得、これは更に精製しなかった。

ＦＤＭＳ＝９９５　（９７２（名目上の質量）　＋”Ｎａ）（Ｂｏａ）ｔＬｙｓ　−Ｈｌｓ　−Ｄ　−Ｔｒｐ　−Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−Ｄ　−Ｐｈｅ　−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　−ＮＨｔ　、　３７ビスーＢｏｃ−リジン　Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル加した。全部で４２時間後、エステル旦の３番目の部分（６ｇ１約１４ミリモル）を反応混合物に添加した。ピークがこの反応混合物についての１（ＰＬＯ記録で、出発物質（３６）について予想される位置に残存する（２７５ｎｍで積算ｔ＋Ｖ吸収の約１２〜２５％）が、この反応混合物についてのＨＰＬＣ記録に於ける変化は、エステル３１の後の２回の添加の後で観察されなかった。全部で６６時間後、水（１００ｍＬ）を反応混合物に添加し、得られた懸濁液を濾過して微粒子を除去した。透明にした濾液を真空下で粘稠な油まで濃縮した。酢酸エチル（４００ｍＬ）及び半飽和綴酸ゴ用・リウム水溶液（４００ｍｌ、）を、１リツトルフラスコ中でこの油に添加した。得られた混合物を室温でロータリー蒸発器（約１００ｍｍ）上で１０分間渦巻かせて、ゼラチン状固体の多量の沈澱を作った。この固体を濾過により捕集し、水（６Ｘ　２００ｍＬ）及び酢酸エチル（３００ｍＬ）で次々に洗浄した。この固体を、真空下で一定重量になるまで乾燥して、３７の部分的に精製した試料（１０，４９ｇ、約８．１ミリモル）を得た。上記濾過からの濾液を一緒にし、酢酸エチル層を単離した。酢酸エチル溶液を真空下で粘稠な油まで濃縮した。この油をメタノール（２００ｍＬ）に溶解し、エーテル（８００ｍＬ）を添加することによって沈澱させた。得られた固体を濾過により捕集し、真空下で乾燥してＨの２番目の試料（２，７５ｇ、約２．１ミリモル）を得た。

この沈澱からの濾液を真空下で粘稠な油にまで濃縮し、これを後で使用するために別にしておいた。３７の固体試料は更に精製しなかったが、代わりに一緒にし３５の製造で使用した。

ＦＤＭＳ＝１３０１　（名目上のＭ”）Ｌｙｓ　−Ｈｌｓ　−Ｄ　−Ｔｒｐ　− Ａｌａ　−Ｔｒｐ　−Ｄ　−Ｐｈｅ　−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨｓ、距保護したヘプタペプチド３７（１２，３３ｇ、約９．５ミリモル）をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、１５４ｍＬ）、１．　２−ｊ：、タンジチオール（３５ｍＬ）　、アニソール（１１ｍＬ）　、ジメチルスルフィド（７０ｍＬ）及び塩化メチレン（７７ｍＬ）の室温溶液に添加した。得られた溶液を２０分間攪拌し、その後エーテル（２，５Ｌ）を反応混合物に添加することによって粗生成物を沈澱させた。濾過により吸湿性の沈澱を単離し、水（２５０ｍＬ）に溶解させた。得られた溶液を、８０％水（０，２％ＴＦＡを含む）及び２０％メタノール（約３Ｌ）で予め平衡化した、Ｅ、Ｍｅｒｃｋ　Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ　ＲＰ−１８カラム充填物質（Ｃ−１８，２５〜４０ｎｍ、不規則メツシュ、５００ｇ）を含むガラスクロマトグラフィーカラム（８０ｍｍｌＤＸ６０ｃｍ）にかけた。

このカラムを窒素（約１〜２バール）で加圧し、約２Ｌ／時間の流速で、下記の水（０，２％ＴＦＡを含む）／メタノール混合物：　８０／２０（１，５Ｌ）　、７５／２５　（３Ｌ）　、７０／３０　（３Ｌ）　、６５／３５　（４Ｌ）　、６０／４０（６Ｌ）で溶出した。ＨＰＬＣによる分析は３５％及び４０％のメタノール濃度で３５が溶出したことを示した。適当なフラクシヨンを一緒にし、真空下で濃縮しそして凍結乾燥して、ふわふわした白色粉末としてＥＰ−１（４，６５ｇ、％ペプチド６２％、２．９ミリモル）を得た。

（トリフルオロ酢酸を除く）遊離塩基としてのパーセントペプチド（６２±２％）は、ペプチドがテトラトリフルオロ酢酸塩として存在すると仮定して、炭素及び窒素分析から算出したパーセントペプチド含有量の平均値である。この物質の純度はＨＰＬＣ（２８０ｎｍでの全積算強度）により９５％よりも高く、ＮＭＲで不純物は検出できなかった。

ＦＤＭＳ＝１００１　（名目上の質量のＭ＋１）分析：　Ｃ１ｔＨｓｓＮ＋Ｊｙ、　４ＴＦＡとしての計算値：Ｃ，４９，４５；Ｈ，４，９８。

Ｎ、　１３．４６実測値：　Ｃ，４６，８６；Ｈ，４，７８；Ｎ、　１２．１８１．２−エタンジチオール、アニソール及びジメチルスルフィドで処理した。エーテルで粗生成物を沈澱させ上記のクロマトグラフィーから得られた並を含む不純なフラクション（１，５５ｇ）と−緒にした。第二のクロマトグラフィーを前記Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅρカラムで前記条件を使用して行った。適当なフラクシヨンを一緒にし、真空下で濃縮しそして凍結乾燥して競の２番目の試料（２，６１ｇ、約１．６ミリモル）を得た。この物質はＨＰＬＣにより約り０％純度であることが分かった。

陽子ＮＭＲは有機成分について８０％より高い純度を示唆した。

ス←ム■ ス←ム■ スキーム■ Ｊスキーム■ スキームＸスキームＸｉす・・働中！１＋鋤＋ｉす・参−書Ｌ％＋ＮＮ。

本発明をその好ましい態様を特に参照して詳細に記載した。しかしながら、本明細書の開示を検討すれば、本発明の精神及び範囲内でその当業者が変形及び修正をすることができることが認められるであろう。

要約書生物活性を育するペプチド又は生物活性を有するペプチドを製造するために使用できるペプチド中間体を製造する溶液相方法。この方法には２（ｉｔのペプチド断片の縮合反応が含まれる。

補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成５年　１月２９日３、特許出願人住　所　アメリカ合衆国、ニューヨーク　１４６５０−２２０１゜ロチェスター、ステイト　ストリート　３４３名　称　イーストマン　コダック　カンノくニー４、代理人住　所　〒１０５　東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号５、補正書の提出年月日１９９２年８月２０日６、添付書類の目録補正書の翻訳文　１通１）請求の範囲第１６頁（請求の範囲翻訳文第５６頁〜第６４頁）のペプチド断片と、式のペプチド断片〔式中、ＸはＰｒ０ｔ又はＰｒｏｔ　−Ａ　＋であり、ＹはＡ。

−Ｑ、Ａｌａ−Ａｔ　−Ｑ、　Ａｓ　−Ａａ　−Ｑ、Ａｌａ−Ａｓ　−Ａ４−Ｑ。

Ａ３−Ａ４　Ａｓ−Ｑ、Ａｌａ　Ａｓ　−Ａａ　Ａｓ−Ｑ、Ａｌａ−Ｑ又は−Ｑであり（但し、ＹがＱであるとき、ＵはＴ　Ａ３−Ａｓ　−Ａｓ又はＴ　−Ａｌａ−Ａ　ｓ　−Ａ　ａ　−Ａ　ｓであり、ＹがＡｌａ−Ｑであるとき、ＵはＴ− Ａ、−Ａ、−Ａｓであり、ＹがＡ２　Ｑ又はＡｌａ−Ａｘ　−Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａ、−Ａｌであり、ＹがＡａ−Ａ、−Ｑ又はＡｌａ−Ａｓ　−Ａａ−Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａ、であり、ＹがＡ。

−Ａ４−ＡＨ−Ｑ又はＡｌａ−Ａｔ　−Ａ４−Ａｓ−Ｑであるとき、ＵはＴでｔ６）、ＶはＡ、　であり、ＷハＡ　？　、　Ａ　−−Ｚ　又ハＺ　テアリ、Ａ、は任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（０）、　ＤＯＰＡ、　Ａｂｕ又はＡｏ−Ａ ′１であり（但し、ＡｏはＨ，ＤＯＰＡ、　Ｌｙｓ、　Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　ＣＹｓ、　Ｔｙｒ−ＤＡＩａ−Ｐｈｅ　−Ｇｌｙ、　Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ　 −Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ−Ａｌａ　−Ｇｌｙ　−Ｔｈｒ、又はＴｙｒ−ＤＡＩａ−Ｐｈｅ−５ａｒであり、Ａ’＋は任意の天然Ｌアミノ酸、Ｎｅｔ（０）、　ＤＯＰＡ又はＡｂｕであり）、Ａｔは）Ｉｉｓ、　３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ。

Ａｌａ又はＴｙｒであり、Ａ、はＤ芳香族アミノ酸であり、Ａ４はＡｌａ。

Ｇｉｙ又はＳｅｒであり、Ａ、はＴｒｐであり、Ａ、はＤＰｈｅ、　Ｄ（ＮＭｅ）Ｐｈｅ又はＤ／Ｌ’　（Ｍｅ）Ｐｈｅであり、Ａ７はＢ−Ｇ又はＧであり（但し、Ｂ去する、請求の範囲第１項記載の方法。

は任意の天然アミノ酸、任意の天然アミノ酸のジペプチド、Ｈ，Ｎ−（ＣＨ，）　、　−Ｃｏ！Ｈ（但し、ｎ　＝　２〜１２）であり、ＧはＡｒｇ、　１Ｌｙｓ、　Ｌｙｓ又はＯｒｎである）　、Ｐｒｏｔは窒素保護基であり、Ｑはペプチド断片のカルボキシ末端を表わし且つ−ＯＨ又は−Ｍであり（但し、Ｍは讐素含有求核試薬により置換できる単位である）、ＴはＨ又は縮合反応を実質的に妨害しない保護基であり、そして２はポリペプチド又はペプチド断片のＣ末端を表わし〔但し、Ｚは−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＯＲ’。

−ＣＨ，ＯＲ’、　−Ｇｕｙ　−Ｚ’　、　−Ｍｅｔ　−Ｚ’　、　−Ｌｙｓ　 −Ｚ’　、　−Ｃｙｓ　−Ｚ’　、−ａｉｙ　−Ｔｙｒ　＝Ｚ’又は−Ａｌａ　 −Ｔｙｒ−Ｚ’であり（但し、Ｒ’はＨ１炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基又は炭素数６〜１２のアリール基であり、Ｚ’　Ｉｔ−Ｃ［ｌＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＯＲ’　又は−ＣＨ！ｏｆ？Ｉテあり、Ｒ２はＲ’　と同様に定義され、同一でも異なってもよい）、モしてＡ。

以外の全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護基により保護されている〕とを前記２断片を溶解化させる溶剤中で、脱水剤及び活性化剤の存在下に、前記断片が反応する十分な条件下に、反応させ、そしてラセミ化を最小にするのに十分な条件下に反応させることからなる、ペプチドの生成方法。

２、　Ｑが一〇Ｈ，−ＯＲ″又は窒素含有環状単位（但し、Ｒ２は炭素数６〜１２のアリール基である）である請求の範囲第１項記載の方法。

３、窒素含有環状単位が、イミダゾール、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド、Ｎ −ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール又はＮ−ヒドロキシ−フタルイミドの残基である、請求の範囲第２項記載の方法。

４、合成されるペプチド中間体を次いで追加のペプチド断片と反応させてペプチドを特徴する請求の範囲第１項記載の方法。

５、ペプチド又はペプチド断片を合成した後、次いで保護基を除１７　Ａ、がＤＴｒＤ、　Ｄ’　Ｎａｌ又はＤＰｈｅであり、Ａ４がＡｌａである、請６、　ＸがＰｒｏｔ−Ａであり、ＹがＡ、又はＡ、−Ａ４であり、ＶがＡ、であり、ＷがＡｔ−Ｚであり、Ａ７がＧであり、そしてＡ、がＡｌａ又はＬｙｓである、請求の範囲第１項記載の方法。

７　Ａ、がＤＴｒｏ、　ＤＰｈｅ、　Ｄ’Ｎａ１．　Ｄ’Ｎａｌ、　請求１Ｂ、　ＸがＰｒｏｔ−Ａ、であり、そしてＡｔがＬｙｓ又はＡｌａである、ジル第１ニジカルボニル−Ｈｌｓ　−ＤＰｈｅ−Ａｌａ　−ＤＨ，Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　−Ｈｌｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−０ｆｔ　Ｂｏａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）− Ｈｉｓ　−Ｄ’Ｎａ１−Ａｌａ　−ＯＨ又はＢｏｅ−Ｌｙｓ（Ｉ３ｏｅ）−Ｈｉｓ　−ＤＩ’ｈｅ−Δ１ａ−ＯＨである、請求の範囲第１５項記載の方法。

２６、Ｘ−ＡＩ　−Ｙがベンジルオキシカルボニル−Ｈｌｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｉａ−ＯＨ，ベンジルオキシカルボニル−Ｈｌｓ　−Ｄ’Ｎａｌ　−Ａｌａ−ＯＨ，ベンジルオキシカルボニル−Ｈｌｓ　−ＤＰｈｅ−Ａｌａ　−０ｆ（、Ｂｏｃ −Ｌｙｓ（Ｂｏａ）　−Ｈｌｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−ＯＨ又はＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　−Ｈｌｓ　−Ｄ’Ｎａ１−Ａｌａ　−ＯＨである、請求の範囲第２１項記載の方法。

のペプチド断片と、式のペプチド断片〔式中、ＸはＰｒｏｔ又はＰｒｏｔ−Ａｓであり、ＹはＡ。

Ｑ、Ａｌａ　ＡＩ　Ｑ、Ａｓ　−Ａｓ−Ｑ、Ａｌａ−Ａｊ−Ａ４−Ｑ。

Ａｓ　−Ａａ　−Ａｓ　−Ｑ、Ａｌａ−Ａｓ　−Ａａ　−Ａｓ　−Ｑ、Ａｌａ− Ｑ又は−Ｑであり（但し、ＹがＱであるとき、ＵはＴ−Ａｓ　−Ａ４−ＡＩ又はＬ−Ａｌａ−Ａｘ　−Ａ４−Ａｓであり、ＹがＡｌａ−Ｑであるとき、ＵはＴ　Ａｓ−Ａ４　Ａｓであり、ＹがＡｘ　Ｑ又はＡｌａ　Ａ３−Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａ４−Ａｓであり、ＹがＡ３　Ａ４−Ｑ又はＡｌａ−Ａ　ｓ　−Ａ　ａ　− Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａ、であり、ＹがＡ。

−Ａ　ａ　−Ａ　ｓ　−Ｑ又はＡ１１−Ａｓ　−Ａｓ　−Ａｓ−Ｑであるとき、ＵはＴであ６）、Ｖｌ；！Ａｓ　であり、ＷはＡｔ−ｚ又＋ｔｚであり、Ａｓは任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（０）、　ＤＯＰＡ、　Ａｂｕ又はＡｓ　Ａ’ １であり（但し、Ａ、はＨ，ＤＯＰＡ、　Ｌｙｓ、　Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ、　Ｃｙｓ、　Ｔｙｒ　−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ　−Ｇｌｙ、　Ｔｙｒ−ＤＡｌａ−Ｇｌｙ　 −Ｐｈｅ、　ＴＹｒ−Ａｌａ　−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ、又はＴｙｒ−〇Ａｌａ−円ｓｅ　＝Ｓａｒであり、Ａ’＋は任意の天然Ｌ−アミノ醋、Ｍｅｔ（０）、　ＤＯＰＡ又はＡｂｕである）、Ａ、はＨｉｓ、　３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ、　Ａｌａ又はＴｙｒであり、Ａ、はＤ芳香族アミノ酸であり、Ａ４はＡｌａ、　Ｇｕｙ又はＳｅｒであり、ＡｓはＴｒｐであり、Ａ、はＤＰｈｅ、Ｄ（ＮＭｅ）Ｐｈｅ又はＤ／Ｌ　’　（Ｍｅ）Ｐｈｅであり、Ａ、はＢ−Ｇ又はＧであり（但し、Ｂは任意の天然アミノ酸、任意の天然アミノ酸のジペプチド、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）　、　 −Ｃｏｔ）Ｉ　（但し、ｎ　＝　２〜２２）であり、ＧはＡｒｇ、ルｙｓ、　Ｌｙｓ又はＯｒｎである）、Ｑはペプチド断片のカルボキシ末端を表わし且つ−ＯＨ又は−Ｍであり（但し、Ｍは窒素含有求核試薬により置換できる単位である）　、Ｐｒｏｔは窒素保護基であり、ＴはＨであり、モしてＺはポリペプチド又はペプチド断片のＣ末端を表わし〔但し、Ｚｆｔ−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＣＯＯＲ’ 、−ＣＨ，ＯＲ’、　−Ｇｌｙ　−Ｚ’　、　−Ｎｅｔ　−Ｚ’　。

−Ｌｙｓ　−Ｚ’　、　−Ｃｙｓ　−Ｚ’　、　−Ｇｌｙ　−Ｔｙｒ−Ｚ’又は −Ａｌａ　−Ｔｙｒ−Ｚ′であり（但し、Ｒ１はＨ１炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基又は炭素数６〜１２〕７１Ｊ−ル基テアリ、Ｚ’　バーＣ０ＮＩ？’Ｒ”、−ＣＤＯＲ’　又バーＣＨ，ＯＲ’であり、Ｒ２はＲ′と同様に定義され、同一でも異なってもよい）、そしてＡ、以外の全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護基により保護されている〕とを、二つの断片を可溶化する溶媒中で、脱水剤及び活性化剤の存在下で断片を反応させるに十分な条件下で反応させることからなる、式Ａ＋　 −Ａｔ　Ａｓ　−Ａ４−ＡｓＡ　＃　−Ａ　を又はＡｔ　−Ａｓ　Ａ４−Ａｓ　 −Ａｓ　Ａｔのペプチドの形成方法。

２８、溶剤が水又はジメチルホルムアミド若しくはＮ−メチル−ピロリジノンから選択される有機溶媒であり、ラセミ化抑制剤を該溶剤に任意に添加する、請求の範囲第１５項記載の方法。

２９、脱水剤がカルボジイミドである請求の範［Ｅ２７項記載の方法。

３０、カルボジイミドがジシクロへキシルカルボジイミドであり、活性化剤がＮ −ヒドロキシスクシンイミドである請求の範囲第２９項記載の方法。

３１、反応を一１０〜５０℃の温度で行う請求の範囲第２８項記載の方法。

３２、式Ｘ−Ａ、−Ｙ　Ｃ式中、ＸはＰｒｏｔ又はＰｒｏｔ−Ａｓであり、ＹはＡ、　−Ｑ＋　Ａｌａ−Ａｓ　−Ｑ、　Ａｓ　−Ａ４−Ｑ、Ａｌａ−Ａｓ　−Ａ４−Ｑ、　Ａｓ−Ａ４−Ａｓ　Ｑ、Ａｌａ−Ａｓ　Ａ４　Ａｓ−Ｑ、Ａｌａ−Ｑ又は−Ｑであり、Ａ１は任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｎｅｔ（０）。

ＤＯＰＡ、　Ａｂｕ又はＡｓ　−Ａ’　ｒであり（Ａ６はＨ，ＤＯＰＡ、　Ｌｙｓ、　Ｐｈｅ。

Ｔｙｒ、　Ｃｙｓ、　Ｔｙｒ　−ＤＡｌａ−Ｐｈｅ　−ｃｉｙ、　Ｔｙｒ−Ａｌａ　−Ｇｌｙ　−Ｐｈｅ、　Ｔｙｒ　−Ａｌａ　−Ｃ１ｙ−Ｔｈｒ又はＴｙｒ− ＤＡｌａ−Ｐｈｅ−Ｓａｒであり、Ａ’ｌは任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（０）、　ＤＯＰＡ又はＡｂｕである）、Ａ、はＨｉｓ。

３（ＮＭｅ））ｌｉｓ　、又はＴｙｒであり、Ａ、はＤ芳香族アミノ酸であり、Ａ４はＡｌａ、　Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、Ａ、はＴｒｐであり、Ｐｒｏｔは窒素保護基であり、Ｑはペプチド断片のカルボキシ末端を表わし且つ−ＯＨ又は− Ｍであり（但し、Ｍは窒素含有求核試薬により置換できる単位である）、並びにその有機又は無機の医薬的に許容できる塩であり、Ａ、以外の全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護基により保護されている〕のペプチド断片。

３３、　ｉｌ素保護基がモノアシル化保護基であり、ＸがＰｒｏｔ−Ａｓ又はＰｒｏｔである請求の範囲第３２項記載のペプチド断片。

３４、　：ｉｉ素保護基がウレタン保護基である請求の範囲第３２項記載のペプチド断片。

３５、Ｑが−ＯＲ３又は窒素含有環状基（但し、Ｒ３は炭素数６〜１２のアリール基である）である請求の範囲第３２項記載のペプチド断片。

３６、　Ｐｒｏｔが水素で置換されている請求の範囲第３２項記載のペプチド断片。

３７、　ＡｔがＨｉｓであり、ＹがＡｓ　−Ａ４−Ｑ　（但し、Ａ４はＡｌａでありＡ、はＤＴｒｐ、　Ｄ’　Ｎａｌ、　Ｄ“Ｎａｌ又はＤＰｈｅである）である、請求の範ｖ！ｉ第３３項記載のペプチド断片。

３８、式Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ、　Ｂｏａ− Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｈｉｓ−ＤＴｒｐ−Ａｌａ　−ＯＭｅ、　Ｈｉｓ−ＤＴｒｐ −Ａｌａ　−ＯＭｅ、　ＣＢＺ−Ｈｉｓ　−ＤＴｒｐ−Ａｌａ−ＯＭｅ又はＣＢＺ−Ｈｉｓ　−ＤＴｒ９−Ａｌａのペプチド断片。

３９、式Ｕ−Ｖ−Ｗ　（式中、ＵはＴ−Ａｓ　Ａ４　Ａｓ　、　Ｔ−ＡｌａＡｘ　−Ａ４−Ａｓ　、Ｔ−Ａａ　Ａｓ又はＴ−Ａ、であり、ＶはＡ６又は２であり（但し、■がＡ、であるときＷはＡＴ−Ｚ又は２であり、ＶがＺであるときＷは存在しない）、Ａ２はＤ芳香族アミノ酸であり、Ａ４はＡｌａ、　Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、ＡｓはＴｒｐであり、Ａ。

はＤＰｈｅ、　Ｄ（ＮＭｅ）Ｐｈｅ又はＤ／Ｌ’　（Ｍｅ）Ｐｈｅであり、Ａ７はＢ−Ｇ又はＧであり（但し、Ｂは任意の天然アミノ酸、任意の天然アミノ酸のジペプチド、）１１Ｎ　（ＣＨｔ）−−ＣＯＪ　（但し、ｎ＝２〜１２）であり、ＧはＡｒｇ、　１Ｌｙｓ、　Ｌｙｓ又はＯｒｎである）、ＴはＨ又は窒素保護基であり、モしてＺはポリペプチド又はペプチド断片のＣ末端を表わし〔但し、Ｚは−ＣＯＮＲ’Ｒ’、−ＣＯＱＲ’、−ＣＨ！ＯＲ’、　−Ｇｌｙ　−Ｚ’　、　−Ｍｅｔ−Ｚ’、　−Ｌｙｓ−Ｚ’、　−Ｃｙｓ−Ｚ’、　−Ｇｌｙ　−Ｔｙｒ−Ｚ’又は−Ａｌａ　−Ｔｙｒ−Ｚ’であり（但し、Ｒ１はＨ１炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基又は炭素数６〜１２のアリール基であり、２′は−ＣＯＮＲＩＲ１゜−ＣＯＯＲ’又は−ＣＨ，ＯＲ’であり、Ｒ１はＲ１と同様に定義され、同一でも異なってもよく、並びにその有機又は無機の医薬的に許容できる塩であり、全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護基により保護されている〕のペプチド断片。

４０．　Ａｖの側鎖が保護基により保護されている、請求の範囲第３９項記載のペプチド断片。

４１、ＵがＡａ　Ａｓ又はＡｓであり、Ａ７がＧであり、Ａ４がＡｌａでありモしてＶがＡ、でありＡ、がＤＰｈｅである、請求の範囲第３９項記載のペプチド断片。

４２、ＡｙがＬｙｓである請求の範囲第４１項記載のペプチド断片。

４３、　Ａ、がＡｌａであり、ＵがＡｓである請求の範囲第４１項記載のペプチド断片。

４４、ＷがＡ？　−Ｚである請求の範囲第４１項記載のペプチド断片。

４５、式Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨｔ又はＣＢＺ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ　−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）　−Ｎ１（ｔのペプチド断片。

国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．式Ｘ−Ａ２−Ｙのペプチド断片と、式Ｕ−Ｖ−Ｗのペプチド断片〔式中、ＸはＰｒｏｔ又はＰｒｏｔ−Ａ１であり、ＹはＡ３−Ｑ，Ａｌａ−Ａ３−Ｑ，Ａ３−Ａ４−Ｑ，Ａｌａ−Ａ３−Ａ４−Ｑ，Ａ３−Ａ４− Ａ５−Ｑ，Ａｌａ−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｑ，Ａｌａ−Ｑ又は−Ｑであり（但し、ＹがＱであるとき、ＵはＴ−Ａ３−Ａ４−Ａ５又はＴ−Ａｌａ−Ａ３−Ａ４−Ａ５であり、ＹがＡｌａ−Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａ３−Ａ４−Ａ５であり、ＹがＡ３−Ｑ又はＡｌａ−Ａ３−Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａ４−Ａ５であり、ＹがＡ３−Ａ４−Ｑ又はＡｌａ−Ａ３−Ａ４−Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａ５であり、ＹがＡ３−Ａ４−Ａ５−Ｑ又はＡｌａ−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｑであるとき、ＵはＴである）、ＶはＡ６又はＺであり（但し、ＶがＡ６であるときＷはＡ７，Ａ７− Ｚ又はＺであり、ＶがＺであるときＷは存在しない）、Ａ１は任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（０），ＤＯＰＡ，Ａｂｕ又はＡｏ−Ａ′１であり（但し、ＡｏはＨ，ＤＯＰＡ，Ｌｙｓ、Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，【配列があります】、【配列があります】、【配列があります】、又は【配列があります】であり、Ａ′１は任意の天然アミノ酸▽、Ｍｅｔ（Ｏ），ＤＯＰＡ又はＡｂｕである）、Ａ２はＨｉｓ，３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ，Ａｌａ又はＴｙｒであり、Ａ３はＤ芳香族アミノ酸であり、Ａ４はＡｌａ，Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、Ａ５はＴｒＰであり、Ａ６はＤＰｈｅ，Ｄ（ＮＭｅ）Ｐｈｅ又はＤ／Ｌβ（Ｍｅ）Ｐｈｅであり、Ａ７はＢ −Ｇ又はＧであり（但し、Ｂは任意の天然アミノ酸、任意の天然アミノ酸のジペプチド、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）２−ＣＯ２Ｈ（但し、ｎ＝２〜１２）であり、ＧはＡｒｇ，ｉＬｙｓ，Ｌｙｓ又はＯｒｎである）、Ｐｒｏｔは窒素保護基であり、Ｑはペプチド断片のカルボキシ末端を表わし且つ−ＯＨ又は−Ｍであり（但し、Ｍは窒素含有求核試薬により置換できる単位である）、ＴはＨ又は縮合反応を実質的に妨害しない保護基であり、そしてＺはポリペプチド又はペプチド断片のＣ末端を表わし〔但し、Ｚは−ＣＯＮＲ１Ｒ２，−ＣＯＯＲ１，−ＣＨ２ＯＲ１， −Ｇｌｙ−Ｚ′，−Ｍｅｔ−Ｚ′，−Ｌｙｓ−Ｚ′，−Ｃｙｓ−Ｚ′，−Ｇｌｙ −Ｔｙｒ−Ｚ′又は−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｚ′であり（但し、Ｒ１はＨ、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基又は炭素数６〜１２のアリール基であり、Ｚ′は−ＣＯＮＲ１Ｒ２，−ＣＯＯＲ１又は−ＣＨ２ＯＲ１であり、Ｒ２はＲ１と同様に定義され、同一でも異なってもよい）、そしてＡ２以外の全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護基により保護されている〕との間の縮合を行うことからなる、ペプチド又はペプチド中間体の合成方法。
２．Ｑが−ＯＨ，−ＯＲ３又は窒素含有環状単位（但し、Ｒ３は炭素数６〜１２のアリール基である）である請求の範囲第１項記載の方法。
３．窒素含有環状単位が、イミダゾール、Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド、Ｎ −ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール又はＮ−ヒドロキシ−フタルイミドの残基である、請求の範囲第２項記載の方法。
４．合成されるペプチド中間体を次いで追加のペプチド断片と反応させてペプチドを形成する、請求の範囲第１項記載の方法。
５．ペプチド又はペプチド断片を合成した後、次いで保護基を除去する、請求の範囲第１項記載の方法。
６．ＸがＰｒｏｔ−Ａであり、ＹがＡ３又はＡ３−Ａ４であり、ＶがＡ６であり、ＷがＡ７−Ｚであり、Ａ７がＧであり、そしてＡ１がＡｌａ又はＬｙＳである、請求の範囲第１項記載の方法。
７．Ａ２がＤＴｒｐ，ＤＰｈｅ，ＤαＮａｌ，ＤβＮａｌ，Ｎ−インドール−（Ｍｅ）−Ｄ／ＬＴｒｐ又は５−フルオロ−Ｄ／ＬＴｒｐである、請求の範囲第１項又は第６項記載の方法。
８．Ａ３がＤＴｒｐ，ＤβＮａｌ又はＤＰｈｅであり、Ａ４がＡｌａである、請求の範囲第１項又は第６項記載の方法。
９．各ペプチド断片が、長さに於いて少なくとも２個のアミノ酸残基である請求の範囲第１項又は第６項記載の方法。
１０．ペプチド断片の１個が、少なくともトリペプチド又はテトラペプチドである請求の範囲第１項又は第６項記載の方法。
１１．カップリング剤及びラセミ化抑制剤も添加する請求の範囲第１０項記載の方法。
１２．Ｎ−末端断片のカルボキシ末端でのラセミ化が５％より少ない、請求の範囲第１項又は第６項記載の方法。
１３．合成されるペプチドが、式Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６−Ａ７又はＡ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６−Ａ７を有する、請求の範囲第１項記載の方法。
１４．ペプチド断片Ｕ−Ｖ−Ｗが、式Ｌ−Ａ５−Ａ６−Ａ７−Ｚを有し、且つ側鎖保護基により任意的に保護されている、請求の範囲第１項記載の方法。
１５．側鎖保護基がｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）である、請求の範囲第１４項記載の方法。
１６．トリペプチドが式Ｈ２Ｎ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨ２を有する、請求の範囲第１５項記載の方法。
１７．ペプチド断片Ｘ−Ａ２−Ｙが式Ｘ−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ｑを有する、請求の範囲第１項又は第１４項記載の方法。
１８．Ａ３がＤＴｒｐ，ＤβＮａｌ又はＤＰｈｅであり、Ａ４がＡｌａである、請求の範囲第１７項記載の方法。
１９．ＸがＰｒｏｔ−Ａ１であり、そしてＡ１がＬｙｓ又はＡｌａである、請求の範囲第１８項記載の方法。
２０．窒素保護基が、ベンジルオキシカルボニル又はｔ−ブチルオキシカルボニルから選択されたウレタン保護基である、請求の範囲第１項記載の方法。
２１．ＸがＰｒｏｔ−Ａ１であり、Ａ１がＬｙｓ又はＡｌａであり、Ａ６がＤＰｈｅであり、そしてＡγがＧである、請求の範囲第１８項記載の方法。
２２．Ｘ−Ａ２−ＹがＰｒｏｔ−Ｌｙｓ（Ｐｒｏｔ）−Ｈｉｓ−Ａ３−Ａｌａ− ＯＨ又はＰｒｏｔ−Ｈｉｓ−Ａ３−Ａ１ａ−ＯＨであり、Ｕ−Ｖ−ＷがＴ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２であり、且つ、ＰｒｏｔがＢｏｃ又はＣＢＺであり、ＴがＨであり、そしてＡ３がＤＴｒｐ，ＤβＮａｌ又はＤＰｈｅである、請求の範囲第１項記載の方法。
２３．Ａ２がＨｉｓであり、Ｈｉｓが保護基で保護されていない、請求の範囲第１項記載の方法。
２４．Ａ２が中性であるか又は側鎖保護基で保護されている請求の範囲第１項記載の方法。
２５．Ｘ−Ａ２−Ｙがベンジルオキシカルボニル【配列があります】、ベンジルオキシカルボニル【配列があります】、ベンジルオキシカルボニル【配列があります】、【配列があります】又は【配列があります】である、請求の範囲第１項記載の方法。
２６．Ｘ−Ａ２−Ｙがベンジルオキシカルボニル【配列があります】、ベンジルオキシカルボニル【配列があります】、ベンジルオキシカルボニル【配列があります】、【配列があります】、【配列があります】又は【配列があります】である、請求の範囲第１６項記載の方法。
２７．Ｘ−Ａ２−Ｙがベンジルオキシカルボニル【配列があります】、ベンジルオキシカルボニル【配列があります】、ベンジルオキシカルボニル【配列があります】、【配列があります】又は【配列があります】である、請求の範囲第２２項記載の方法。
２８．式Ｘ−Ａ２−Ｙのペプチド断片と、式Ｕ−Ｖ−Ｗのペプチド断片〔式中、ＸはＰｒｏｔ又はＰｒｏｔ−Ａ１であり、ＹはＡ３−Ｑ，Ａｌａ−Ａ３−Ｑ，Ａ３−Ａ４−Ｑ，Ａｌａ−Ａ３−Ａ４−Ｑ，Ａ３−Ａ４− Ａ５−Ｑ，Ａｌａ−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｑ，Ａｌａ−Ｑ又は−Ｑであり（但し、ＹがＱであるとき、ＵはＴ−Ａ３−Ａ４−Ａ５又はＬ−Ａｌａ−Ａ３−Ａ４−Ａ５であり、ＹがＡｌａ−Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａ３−Ａ４−Ａ５であり、ＹがＡ３−Ｑ又はＡｌａ−Ａ３−Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａ４−Ａ５であり、ＹがＡ３−Ａ４−Ｑ又はＡｌａ−Ａ３−Ａ４−Ｑであるとき、ＵはＴ−Ａ５であり、ＹがＡ３−Ａ４−Ａ５−Ｑ又はＡｌａ−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｑであるとき、ＵはＴである）、ＶはＡ６であり、ＷはＡ７−Ｚ又はＺであり、Ａ１は任意の天然Ｌ− アミノ酸、Ｍｅｔ（Ｏ），ＤＯＰＡ，Ａｂｕ又はＡｏ−Ａ′１であり（但し、ＡｏはＨ，ＤＯＰＡ，Ｌｙｓ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，【配列があります】、又は【配列があります】であり、Ａ′１は任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（Ｏ），ＤＯＰＡ又はＡｂｕである）、Ａ２はＨｉｓ，３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ，Ａｌａ又はＴｙｒであり、Ａ３はＤ芳香族アミノ酸であり、Ａ４はＡｌａ，Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、Ａ５はＴｒｐであり、Ａ６はＤＰｈｅ，Ｄ（ＮＭｅ）Ｐｈｅ又はＤ／Ｌβ（Ｍｅ）Ｐｈｅであり、Ａ７はＢ−Ｇ又はＧであり（但し、Ｂは任意の天然アミノ酸、任意の天然アミノ酸のジペプチド、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ（但し、ｎ＝２〜１２）であり、ＧはＡｒｇ，ｉＬｙｓ，Ｌｙｓ又はＯｒｎである）、Ｑはペプチド断片のカルボキシ末端を表わし且つ−ＯＨ又は−Ｍであり（但し、Ｍは窒素含有求核試薬により置換できる単位である）、Ｐｒｏｔは窒素保護基であり、ＴはＨであり、そしてＺはポリペプチド又はペプチド断片のＣ末端を表わし〔但し、Ｚは−ＣＯＮＲ１Ｒ２，−ＣＯＯＲ１，−ＣＨ２ＯＲ１，− Ｇｌｙ−Ｚ′，−Ｍｅｔ−Ｚ′，−Ｌｙｓ−Ｚ′，−Ｃｙｓ−Ｚ′，−Ｇｌｙ− Ｔｙｒ−Ｚ′又は−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｚ′であり（但し、Ｒ１はＨ、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基又は炭素数６〜１２のアリール基であり、Ｚ′は−ＣＯＮＲ１Ｒ２，−ＣＯＯＲ１又は−ＣＨ２ＯＲ１であり、Ｒ２はＲ１と同様に定義され、同−でも異なってもよい）、そしてＡ２以外の全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護基により保護されている〕とを、二つの断片を可溶化する溶媒中で、脱水剤及び活性化剤の存在下で断片を反応させるに十分な条件下で反応させることからなる、式Ａ１−Ａ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６−Ａ７又はＡ２−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ａ６ −Ａ７のペプチドの形成方法。
２９．溶剤が水又はジメチルホルムアミド若しくはＮ−メチル−ピロリジノンから選択される有機溶媒であり、ラセミ化抑制剤を該溶剤に任意に添加する、請求の範囲第２８項記載の方法。
３０．脱水剤がカルボジイミドである請求の範囲第２８項記載の方法。
３１．カルボジイミドがジシクロヘキシルカルボジイミドであり、活性化剤がＮ −ヒドロキシスクシンイミドである請求の範囲第３０項記載の方法。
３２．反応を−１０〜５０℃の温度で行う請求の範囲第５５項記載の方法。
３３．式Ｘ−Ａ２−Ｙ〔式中、ＸはＰｒｏｔ又はＰｒｏｔ−Ａ１であり、ＹはＡ３−Ｑ，Ａｌａ−Ａ３−Ｑ，Ａ３−Ａ４−Ｑ，Ａｌａ−Ａ３−Ａ４−Ｑ，Ａ３− Ａ４−Ａ５−Ｑ，Ａｌａ−Ａ３−Ａ４−Ａ５−Ｑ，Ａｌａ−Ｑ又は−Ｑであり、Ａ１は任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（Ｏ），ＤＯＰＡ，Ａｂｕ又はＡ６−Ａ ′１であり（ＡｏはＨ，ＤＯＰＡ，Ｌｙｓ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，【配列があります】、【配列があります】、【配列があります】又は【配列があります】であり、Ａ′１は任意の天然Ｌ−アミノ酸、Ｍｅｔ（Ｏ），ＤＯＰＡ又はＡｂｕである）、Ａ２はＨｉｓ，３（ＮＭｅ）Ｈｉｓ、又はＴｙｒであり、Ａ３はＤ芳香族アミノ酸であり、Ａ４はＡｌａ，Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、Ａ６はＴｒｐであり、Ｐｒｏｔは窒素保護基であり、Ｑはペプチド断片のカルボキシ末端を表わし且つ−ＯＨ又は−Ｍであり（但し、Ｍは窒素含有求核試薬により置換できる単位である）、並びにその有機又は無機の医薬的に許容できる塩であり、Ａ２以外の全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護基により保護されている〕のペプチド断片。
３４．窒素保護基がモノアシル化保護基であり、ＸがＰｒｏｔ−Ａ１又はＰｒｏｔである請求の範囲第３３項記載のペプチド断片。
３５．窒素保護基がウレタン保護基である請求の範囲第３３項記載のペプチド断片。
３６．Ｑが−ＯＲ３又は窒素含有環状基（但し、Ｒ３は炭素数６〜１２のアリール基である）である請求の範囲第３３項記載のペプチド断片。
３７．Ｐｒｏｔが水素で置換されている請求の範囲第３３項記載のペプチド断片。
３８．Ａ２がＨｉｓであり、ＹがＡ３−Ａ４−Ｑ（但し、Ａ４はＡｌａでありＡ３はＤＴｒｐ，ＤβＮａｌ，ＤαＮａｌ又はＤＰｈｅである）である、請求の範囲第３４項記載のペプチド断片。
３９．式【配列があります】、【配列があります】、【配列があります】、【配列があります】又は【配列があります】のペプチド断片。
４０．式Ｕ−Ｖ−Ｗ〔式中、ＵはＴ−Ａ３−Ａ４−Ａ５，Ｔ−Ａｌａ−Ａ３−Ａ４−Ａ５，Ｔ−Ａ４−Ａ５又はＴ−Ａ５であり、ＶはＡ６又はＺであり（但し、ＶがＡ６であるときＷはＡ７−Ｚ又はＺであり、ＶがＺであるときＷは存在しない）、Ａ３はＤ芳香族アミノ酸であり、Ａ４はＡｌａ，Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、Ａ５はＴｒＰであり、Ａ６はＤＰｈｅ，Ｄ（ＮＭｅ）Ｐｈｅ又はＤ／Ｌβ（Ｍｅ）Ｐｈｅであり、Ａ７はＢ−Ｇ又はＧであり（但し、Ｂは任意の天然アミノ酸、任意の天然アミノ酸のジペプチド、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｈ（但し、ｎ＝２〜１２）であり、ＧはＡｒｇ，ｉＬｙｓ，Ｌｙｓ又はＯｒｎである）、ＴはＨ又は窒素保護基であり、そしてＺはポリペプチド又はペプチド断片のＣ末端を表わし〔但し、Ｚは−ＣＯＮＲ１Ｒ２，−ＣＯＯＲ１，−ＣＨ２ＯＲ１，−Ｇｌｙ−Ｚ′，−Ｍｅｔ−Ｚ′，−Ｌｙｓ−Ｚ′，−Ｃｙｓ−Ｚ′，−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｚ′又は−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｚ′であり（但し、Ｒ１はＨ、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数２〜８のアルケニル基又は炭素数６〜１２のアリール基であり、Ｚ′は−ＣＯＮＲ１Ｒ２，−ＣＯＯＲ１又は−ＣＨ２ＯＲ１であり、Ｒ２はＲ１と同様に定義され、同一でも異なってもよく、並びにその有機又は無機の医薬的に許容できる塩であり、全てのアミノ酸側鎖は中性であるか又は保護基により保護されている〕のペプチド断片。
４１．Ａ７の側鎖が保護基により保護されている、請求の範囲第８１項記載のペプチド断片。
４２．ＵがＡ４−Ａ５又はＡ５であり、Ａ７がＧであり、Ａ４がＡｌａでありそしてＶがＡ６でありＡ６がＤＰｈｅである、請求の範囲第８１項記載のペプチド断片。
４３．Ａ７がＬｙｓである請求の範囲第４２項記載のペプチド断片。
４４．Ａ４がＡｌａであり、ＵがＡ５である請求の範囲第４２項記載のペプチド断片。
４５．ＷがＡ７−Ｚである請求の範囲第４２項記載のペプチド断片。
４６．式Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨ２又はＣＢＺ−Ｔｒｐ−ＤＰｈｅ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＮＨ２のペプチド断片。