TW202235429A - 含ｎ－置換－胺基酸殘基之胜肽化合物的製備方法 - Google Patents

含ｎ－置換－胺基酸殘基之胜肽化合物的製備方法 Download PDF

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Abstract

本發明的議題在於提供有效率地以高產率製造高純度的胜肽化合物之方法。發現在固相法中之最初的延長反應之前，藉由使胜肽負載於固相合成用樹脂，可解決此問題。

Description

含N－置換－胺基酸殘基之胜肽化合物的製備方法
本發明係關於含N－置換－胺基酸殘基之胜肽化合物的製備方法。
中分子化合物（分子量500～2000）作為治療性工具（modality）而受到注目，所述治療性工具能實現對於以蛋白－蛋白交互作用抑制等為代表之頑固標靶（tough target）的藥物研發（非專利文獻1）。
胜肽因一般而言類藥性（druglikeness）（代謝穩定性、膜穿透性等）低，故被認為難以將胜肽本身作為醫藥品進行開發。近年來，發現藉由胜肽的環化、在胜肽中使用N－甲基胺基酸所例示之非天然胺基酸等，而代謝穩定性、膜穿透性等會提升（非專利文獻2、3）。
在包含非天然胺基酸之環狀胜肽中，已知尤其是包含N－置換胺基酸之環狀胜肽具有類藥性（專利文獻1）。
亦暗示包含非天然型胺基酸之環狀胜肽的展示庫（library）化合物對於創建蛋白－蛋白交互作用的抑制劑是有用的（非專利文獻4）。
亦已知包含非天然型胺基酸之環狀胜肽成為具有可利用作為醫藥品的程度的膜穿透性與代謝穩定性之類藥（druglike）分子之所需條件，作為醫藥品治療性工具的環狀胜肽的注目度正進一步提高（專利文獻2、3）。
另一方面，製造在序列中包含N－甲基胺基酸之胜肽的問題為起因於N－甲基的立體阻礙之縮合反應的低反應性、及由胺基酸殘基的α位的消旋化等所導致之目標物的產率的降低。又，已報導N－甲基胺基酸殘基部位之醯胺鍵在酸性條件下容易受到開裂反應之點、因由二酮哌𠯤形成所導致之N端的2個胺基酸殘基的脫離反應而容易造成缺失之點等許多問題，而眾所周知相較於天然型胜肽的合成為高難度（非專利文獻5）。
胜肽的合成係藉由醯胺鍵的形成而往期望的序列延長，藉此而達成。作為更具體的方法，可列舉液相法與固相法（非專利文獻6）。
此等之中，固相法包含：將與聚合物樹脂（固相合成用樹脂）連結之原子團作為連接子，製備將胺基酸或胜肽的C端負載於固相合成用樹脂之固相合成用樹脂之步驟（負載步驟）；負載於固相合成用樹脂之胺基酸或胜肽的N端胺基之脫保護步驟；作為下一序列而藉由縮合反應將N端被保護之胺基酸進行導入之縮合步驟；重複此等脫保護步驟與縮合步驟直至達到所期望的序列，藉此使胺基酸殘基連結至具有目標序列之胜肽鏈之延長步驟；進一步將具有來自固相合成用樹脂的目標序列之胜肽進行剪切（脫樹脂步驟）。作為使用於延長步驟之N端被保護之胺基酸，主要廣泛使用N端的胺基被Fmoc基或Boc基保護之胺基酸（非專利文獻7、8）。
固相合成用樹脂係依據成為連接子之原子團而被大致劃分，所述連接子係與使用於樹脂之聚合物進行結合，所述固相合成用樹脂廣泛使用包含三苯甲基骨架、苄基骨架等之連接子原子團所結合的固相合成用樹脂。更具體而言，以CTC樹脂、Wang樹脂、SASRIN樹脂、或者Rink Amide樹脂等為代表（非專利文獻8）。
脫樹脂步驟主要是以酸性條件實施，但因應連接子原子團對於酸的穩定性而決定脫樹脂的容易度。例如，源自可將三苯甲基骨架作為連接子而使胜肽殘基負載之CTC樹脂的胜肽的脫樹脂反應，即使以弱酸性試劑亦能實施。另一方面，源自可將苄基骨架作為連接子而使胜肽結合之Wang樹脂的胜肽的脫樹脂反應係適用強酸條件（非專利文獻8）。
若使用CTC樹脂，則在更溫和的酸性條件下能進行胜肽的脫樹脂反應，因此在使用CTC樹脂之胜肽的製造中，可將具有在酸性下容易被去除的保護基之胜肽以該保護基不被脫保護的方式進行選擇性脫樹脂。因此，CTC樹脂在此種被保護基保護之胜肽的製造中為有用（非專利文獻9）。另一方面，已報導在使用CTC樹脂之胜肽的固相合成中，胜肽能在溫和的條件下從CTC樹脂被脫樹脂，因此在縮合反應條件下，負載於CTC樹脂之胺基酸或胜肽與樹脂的連接子之共價鍵被剪切，目標的胜肽的產率降低（亦被稱為過早分裂（premature cleavage）、或者過早胜肽釋放（premature peptide release）、過早酸解分裂（premature acidolytic cleavage））（非專利文獻10、11）。 [先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]國際公開第2013／100132號 [專利文獻2]國際公開第2018／115864號 [專利文獻3]國際公開第2020／122182號 [非專利文獻]
[非專利文獻1]Future Med. Chem., 2009, 1, 1289-1310. [非專利文獻2]Acc. Chem. Res., 2008, 41, 1331-1342. [非專利文獻3]Angew. Chem. Int. Ed., 2013, 52, 254-269. [非專利文獻4]Chem. Rev., 2019, 119, 10360-10391. [非專利文獻5]J. Peptide Res., 2005, 65, 153-166. [非專利文獻6]Amino Acids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry: Building Blocks, Catalysis and Coupling Chemistry, Volume 3, 2011 [非專利文獻7]Amino Acids, 2018, 50, 39-68. [非專利文獻8]Solid phase peptide synthesis (Bachem公司發行) [2020年11月6日檢索]、網際網路＜URL: https://www.bachem.com/fileadmin/user_upload/pdf/Catalogs_Brochures/Solid_Phase_Peptide_Synthesis.pdf＞ [非專利文獻9]QSAR Comb. Sci., 2007, 26, 1027-1035. [非專利文獻10]Biopolymers, 2012, 98, 89-97. [非專利文獻11]ACS Comb. Sci., 2013, 15, 229-234.
[發明所欲解決的問題]
本發明的問題在於提供有效率地以高產率製造高純度的胜肽化合物之方法。
非專利文獻10、11敘述以下主旨：在對於負載於CTC樹脂之天然胺基酸的胺基使被Fmoc保護之天然胺基酸的羧基進行縮合而形成醯胺鍵之縮合反應中，若使用oxyma、HOBt、HOAt等酸性添加劑，則會發生伴隨過早分裂之產量降低，另一方面，在使用鹼性條件亦即HBTU與DIPEA之縮合反應中，產量能提升。但是，過早分裂的抑制效果為限定性，且在鹼性條件中亦會發生胺基酸的消旋化，因此不能稱是較佳的反應條件。尤其，至今未知針對以下的報告：在包含N－甲基胺基酸等立體阻礙大的非天然胺基酸之胜肽合成時之過早分裂的問題。
本發明人等嘗試在使用CTC樹脂之固相合成法中特定會發生過早分裂之胺基酸。再者，探討在使用CTC樹脂之固相合成法中包含N－置換－胺基酸等立體阻礙大的胺基酸殘基之胜肽合成，結果發現在使負載於固相合成樹脂之C端的胺基酸（有時亦稱為「第一個殘基的胺基酸」）與從C端起第二個殘基的胺基酸（有時亦僅稱為「第二個殘基的胺基酸」）縮合之步驟中，有以下狀況：（i）第一個殘基的胺基酸殘基從CTC樹脂的脫離反應，亦即伴隨過早分裂之產量降低；及（ii）已脫離的胺基酸被過多地併入目標的胺基酸序列而發生伴隨過剩延長體的副生成之純度降低。
如上所述，負載於固相合成用樹脂之胺基酸殘基或胜肽殘基從固相合成用樹脂連接子的脫離，更具體而言，與固相合成用樹脂直接結合之第一個殘基的胺基酸殘基從固相合成用樹脂連接子的脫離，能在各種的胺基酸殘基發生，即使如此，至今仍未知抑制上述的不良狀況、抑制副生成物的生成之有效率的胜肽的合成法。本發明的問題在於提供一種方法，其將負載於固相合成用樹脂之胜肽使用作為起始原料，並利用亦能適用於製造包含非天然胺基酸殘基之胜肽的製造法，以高產率製造高純度的胜肽化合物。 [用於解決問題的手段]
本發明人等為了解決上述問題而進行探討的結果，發現一種手法，其在包含立體阻礙大的非天然胺基酸之胜肽化合物的固相合成中，將寡胜肽直接負載於樹脂。藉此，可避免在容易發生過早分裂之固相合成法中的第一個殘基與第二個殘基的胺基酸之縮合步驟。並且，寡胜肽難以發生從樹脂的脫離，在對於負載於固相合成用樹脂之寡胜肽殘基進行追加的胺基酸的延長步驟之情形中，亦確認到會抑制過早分裂。
本發明在非限定的具體一態樣中包含以下內容。 〔1〕一種由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的製備方法，前述方法之特徵在於，在固相法中之最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。 〔2〕一種由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的製備方法，前述方法包含使胜肽負載於固相合成用樹脂之步驟。 〔3〕如〔1〕或〔2〕所記載之方法，其中，胜肽為包含2個以上的胺基酸殘基之寡胜肽。 〔4〕如〔1〕～〔3〕中任一者所記載之方法，其中，胜肽為二胜肽或三胜肽。 〔5〕如〔1〕～〔4〕中任一者所記載之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基、及/或與該C端的胺基酸殘基相鄰之胺基酸殘基為非天然胺基酸殘基。 〔6〕如〔1〕～〔5〕中任一者所記載之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基為非天然胺基酸殘基。 〔7〕如〔5〕或〔6〕記載的方法，其中，非天然胺基酸殘基為N－置換胺基酸殘基。 〔8〕如〔1〕～〔7〕中任一者所記載之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基藉由已與胺基的β位的碳原子或γ位的碳原子結合之羧基而負載於固相合成用樹脂。 〔9〕如〔1〕～〔8〕中任一者所記載之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基、及/或與該C端的胺基酸殘基相鄰之胺基酸殘基具有大體積的側鏈。 〔10〕如〔9〕所記載之方法，其中，大體積的側鏈為可被置換的分支鏈烷基。 〔11〕如〔10〕所記載之方法，其中，鏈烷基與羧基的α位的碳原子結合。 〔12〕如〔11〕所記載之方法，其中，分支鏈烷基在羧基的β位的碳原子或γ位的碳原子具有分支。 〔13〕如〔1〕～〔12〕中任一者所記載之方法，其中，胜肽化合物所含知至少1個N－置換胺基酸殘基為非天然N－置換胺基酸殘基。 〔14〕如〔1〕～〔13〕中任一者所記載之方法，其中，胜肽化合物包含至少2個N－置換胺基酸殘基。 〔15〕如〔1〕～〔14〕中任一者所記載之方法，其中，構成胜肽化合物之總胺基酸殘基數的30%以上為N－置換胺基酸殘基。 〔16〕如〔1〕～〔15〕中任一者所記載之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基為天冬醯胺酸、2－胺基丁酸、甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、脯胺酸、酪胺酸、或者2－胺基異丁酸、或其等的N－置換體或者衍生物，於此，天冬醯胺酸或其N－置換體或者衍生物藉由胺基的β位的羧基而負載於固相合成用樹脂。 〔17〕如〔1〕～〔16〕中任一者所記載之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基係由下述式（A）所表示。
Figure 02_image001
式中， L 1為單鍵或－CHM 1－、－CH 2CHM 1－、－CHM 1CH 2－、－（CH 2） nS（CH 2） m－、－（CH 2） nS（O）（CH 2） m－、或者－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m－，於此，n及m係各自獨立且為1或2， R 1為氫、C 1－C 6烷基、C 2－-C 6烯基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 7－C 14芳烷基（aralkyl）、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基），其各自可被獨立選自由鹵素、側氧基、羥基、C 1－C 6烷基、4～7員雜環基、胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）、C 1－C 6烷基磺醯基、及C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基所組成之群組之1個或複數個基所置換，或R 1為包含1～4個胺基酸殘基之胜肽鏈，或者 R 1及P 1係與R 1所結合之碳原子及P 1所結合之氮原子一起形成4～7員飽和雜環，或者 R 1及Q 1係與此等所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環，或者 R 1及M 1係與R 1所結合之碳原子及M 1所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環， 排除R 1及P 1形成4～7員飽和雜環之情形，P 1為氫、或C 1－C 6烷基，該C 1－C 6烷基可被獨立選自由鹵素、羥基、C 1－C 6烷氧基、胺基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、及胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）所組成之群組之1個或複數個基所置換， 排除R 1及Q 1形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環之情形，Q 1為氫或C 1－C 6烷基， 排除R 1及M 1形成3～8員脂環式環之情形，M 1為氫， ＊表示與固相合成用樹脂的結合部位， 波浪線表示與相鄰之胺基酸殘基的結合部位。 〔18〕如〔17〕所記載之方法，其中，L 1為－CHM 1－， R 1為氫、C 1－C 6烷基、鹵C 1－C 6烷基、C 2－C 6烯基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基（該C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基可被羥基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）所置換）、1個或複數個鹵素置換之C 7－C 14芳烷基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，該環狀胺基可被1個或複數個鹵素、1個或複數個側氧基、1個或複數個C 1－C 6烷基、或4～7員雜環基置換），或者 R 1及M 1係與R 1所結合之碳原子及M 1所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環，或者 R 1及P 1係與P 1所結合之氮原子及R 1所結合之碳原子一起形成4～7員飽和雜環， 排除R 1及M 1形成3～8員脂環式環之情形，M 1為氫， 排除R 1及P 1形成4～7員飽和雜環之情形，P 1為氫或C 1－C 6烷基， Q 1為氫。 〔19〕如〔17〕所記載之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基為bAla、bMeAla、2－ACHxC、2－ACPnC、3－CF3－bAla、Asp－mor、Asp－mor（26－bicyc）、Asp－mor（SO2）、Asp－NMe2、Asp－oxz、Asp－pip、Asp－pip（345－F6）、Asp－pip（4－Me）、Asp－pip－tBu、Asp－piz（oxe）、Asp－pyrro、Asp－pyrro（34－F4）、Asp－pyrro（3－Me2）、D－（Propargyl）Gly－（C#CH2）、D－3－Abu、D－3－MeAbu、D－Gly（Allyl）－（C#CH2）、D－Hph－（C#CH2）、D－Leu－（C#CH2）、D－MeAsp－pyrro、D－MeLeu－（C#CH2）、D－Pic（2）－（C#CH2）、D－Pro－（C#CH2）、D－Ser（iPen）－（C#CH2）、D－Ser（NtBu－Aca）－（C#CH2）、EtAsp－pip、MeAsp－aze、MeAsp－mor、MeAsp－mor（26－bicyc）、MeAsp－mor（SO2）、MeAsp－NMe2、MeAsp－oxz、MeAsp－pip、MeAsp－pip（345－F6）、MeAsp－pip（3－F2）、MeAsp－pip（4－F2）、MeAsp－pip（4－Me）、MeAsp－piz（oxe）、MeAsp－pyrro、MeAsp－pyrro（34－F4）、MeAsp－pyrro（3－Me2）、nPrAsp－pip、MeGly、MeVal、Pro、Aib、Ala、Gly、Tyr（tBu）、Val、D－MeAsp－NMe2、Glu－mor、Glu－pip、MeGlu－pip、Glu－NMe2、MeGlu－NMe2、或MeCys（AcOH）－NMe2。 〔20〕如〔1〕～〔19〕中任一者所記載之方法，其中，與胜肽的C端的胺基酸殘基相鄰之胺基酸殘基係由下述式（B）所表示。
Figure 02_image003
式中， L 2為單鍵或－CH 2－， R 2為氫、C 1－C 6烷基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷基、C 3－C 8環烷基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷氧基C 1－C 6烷基、或C 7－C 14芳烷基，其各自可被獨立選自由鹵素、羥基、胺基（該胺基為－NH 2、保護胺基、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、胺基羰基（該胺基為－NH 2、保護胺基、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）、及C 1－C 6烷基磺醯基所組成之群組之1個或複數個基所置換，或者 R 2及P 2係與R 2所結合之碳原子及P 2所結合之氮原子一起形成4～7員飽和雜環，或者 R 2及Q 2係與此等所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環，或者 排除R 2及P 2形成4～7員飽和雜環之情形，P 2為氫或C 1－C 6烷基，該C 1－C 6烷基可被獨立選自由鹵素、羥基、C 1－C 6烷氧基、胺基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、及胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）所組成之群組之1個或複數個基所置換， 排除R 2及Q 2形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環之情形，Q 2為氫或C 1－C 6烷基， ＊表示與C端的胺基酸殘基的結合部位， 波浪線表示與相鄰之胺基酸殘基或胺基的保護基的結合部位。 〔21〕如〔20〕所記載之方法，其中，R 2為C 1－C 6烷基、鹵C 1－C 6烷基、羥基C 1－C 6烷基、C 1－C 6烷基磺醯基C 1－C 6烷基、C 2－C 6炔基、可被1個或複數個鹵素置換之C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷基、C 3－C 8環烷基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷氧基C 1－C 6烷基、或C 7－C 14芳烷基，或者 R 2及P 2係與P 2所結合之氮原子及R 2所結合之碳原子一起形成4～7員飽和雜環， 排除R 2及P 2形成4～7員飽和雜環之情形，P 2為氫或C 1－C 6烷基。 〔22〕如〔21〕所記載之方法，其中，與胜肽的C端的胺基酸殘基相鄰之胺基酸殘基為MeAla、MeLeu、MeCha、MeVal、MeAla（cPent）、MeAla（cBu）、MeAla（cPr）、MeChg、MeGly（cPent）、MeGly（cBu）、MeGly（cPr）、MeAbu、MeNva、MeNle、Val、Leu、MeNva（5－F2）、MeHle、MeIle、MeSer（nPr）、MeSer（cPr）、MeHnl、MeHnl（7－F2）、MePRA、MeSer（Me）、MeThr、MeSer（cBu）、MeSer（Tfe）、MeThr（Me）、MeHse（Me）、MeMet（O2）、Ile、Nle、Chg、Ala（cBu）、Gly（cPent）、Hle、Nva、Phe、Hph、Gly、Aib、Lys（Boc）、Ala、D－MeVal、Asn（Trt）、Ser（tBu）、或bAla（2－Me2）。 〔23〕如〔1〕～〔22〕中任一者所記載之方法，其中，胜肽為由下述式（1）所表示之二胜肽。
Figure 02_image005
式中， L 1為單鍵或－CHM 1－、－CH 2CHM 1－、－CHM 1CH 2－、－（CH 2） nS（CH 2） m－、－（CH 2） nS（O）（CH 2） m－、或者－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m，於此，n及m係各自獨立且為1或2， R 1為氫、C 1－C 6烷基、C 2－C 6烯基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 7－C 14芳烷基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基），其各自可被獨立選自由鹵素、側氧基、羥基、C 1－C 6烷基、4～7員雜環基、胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）及C 1－C 6烷基磺醯基所組成之群組之1個或複數個基所置換，或R 1為包含1～4個胺基酸殘基之胜肽鏈，或者 R 1及P 1係與R 1所結合之碳原子及P 1所結合之氮原子一起形成4～7員飽和雜環，或者 R 1及Q 1係與此等所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環，或者 R 1及M 1係與R 1所結合之碳原子及M 1所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環， 排除R 1及P 1形成4～7員飽和雜環之情形，P 1為氫、或C 1－C 6烷基，該C 1－C 6烷基可被獨立選自由鹵素、羥基、C 1－C 6烷氧基、胺基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、及胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）所組成之群組之1個或複數個基所置換， 排除R 1及Q 1形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環之情形，Q 1為氫或C 1－C 6烷基， 排除R 1及M 1形成3～8員脂環式環之情形，M 1為氫， L 2為單鍵或－CH 2－， R 2為氫、C 1－C 6烷基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷基、C 3－C 8環烷基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷氧基C 1－C 6烷基、或C 7－C 14芳烷基，其各自可被獨立選自由鹵素、羥基、胺基（該胺基為－NH 2、保護胺基、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、胺基羰基（該胺基為－NH 2、保護胺基、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）、及C 1－C 6烷基磺醯基所組成之群組之1個或複數個基所置換，或者 R 2及P 2係與R 2所結合之碳原子及P 2所結合之氮原子一起形成4～7員飽和雜環，或者 R 2及Q 2係與此等所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環，或者 排除R 2及P 2形成4～7員飽和雜環之情形，P 2為氫或C 1－C 6烷基，該C 1－C 6烷基可被獨立選自由鹵素、羥基、C 1－C 6烷氧基、胺基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、及胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）所組成之群組之1個或複數個基所置換， 排除R 2及Q 2形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環之情形，Q 2為氫或C 1－C 6烷基， ＊表示與固相合成用樹脂的結合部位， PG為胺基的保護基， 但是，P 1及P 2不皆為氫。 〔24〕如〔23〕所記載之方法，其中，胜肽為由下述式（2）所表示之二胜肽。
Figure 02_image007
式中， R 1為氫、C 1－C 6烷基、鹵C 1－C 6烷基、C 2－C 6烯基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基（該C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基可被羥基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）置換）、可被1個或複數個鹵素置換之C 7－C 14芳烷基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，該環狀胺基可被1個或複數個鹵素、1個或複數個側氧基、1個或複數個C 1－C 6烷基、或4～7員雜環基進一步置換），或者 R 1及M 1係與R 1所結合之碳原子及M 1所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環，或者 R 1及P 1係與P 1所結合之氮原子及R 1所結合之碳原子一起形成4～7員飽和雜環， 排除R 1及M 1形成3～8員脂環式環之情形，M 1為氫， 排除R 1及P 1形成4～7員飽和雜環之情形，P 1為氫或C 1－C 6烷基， R 2為C 1－C 6烷基、鹵C 1－C 6烷基、羥基C 1－C 6烷基、C 1－C 6烷基磺醯基C 1－C 6烷基、C 2－C 6炔基、可被1個或複數個鹵素置換之C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷基、C 3－C 8環烷基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷氧基C 1－C 6烷基、或C 7－C 14芳烷基，或者 R 2及P 2係與P 2所結合之氮原子及R 2所結合之碳原子一起形成4～7員飽和雜環， 排除R 2及P 2形成4～7員飽和雜環之情形，P 2為氫或C 1－C 6烷基， Q 2為氫， ＊表示與固相合成用樹脂的結合部位， PG為胺基的保護基， 但是，P 1及P 2不皆為氫。 〔25〕如〔1〕～〔24〕中任一者所記載之方法，其中，固相合成用樹脂為能在溫和的酸性條件去除的樹脂。 〔26〕如〔25〕所記載之方法，其中，溫和的酸性條件為不會去除負載於固相合成用樹脂之胜肽化合物所含之1個或複數個胺基酸的側鏈的保護基之條件。 〔27〕如〔25〕或〔26〕中任一者所記載之方法，其中，溫和的酸性條件包含室溫附近的溫度條件。 〔28〕如〔25〕～〔27〕中任一者所記載之方法，其中，溫和的條件包含使用酸的稀溶液之條件，酸的稀溶液係利用非酸性溶媒稀釋酸而成者。 〔29〕如〔25〕～〔28〕所記載之方法，其中，溫和的酸性條件為pH2以上的酸性條件。 〔30〕如〔28〕或〔29〕所記載之方法，其中，酸係在水中的pKa為－1以上、1以上、2以上、3以上、4以上、5以上、6以上、7以上、8以上、9以上、10以上、11以上、或12以上的酸。 〔31〕如〔30〕所記載之方法，其中，酸為TFA、2,2,2－三氟乙醇、1,1,1,3,3,3－六氟異丙醇、三氯乙酸、乙酸、甲酸、或者草酸、或此等的混合物。 〔32〕如〔29〕～〔31〕中任一者所記載之方法，其中，稀溶液中的酸的容量%為60%以下、50%以下、40%以下、30%以下、20%以下、10%以下、5%以下、4%以下、3%以下、2%以下、或1%以下。 〔33〕如〔29〕～〔32〕中任一者所記載之方法，其中，非酸性溶媒為DCM、二氯乙烷、水、或者2－MeTHF、或此等的混合溶媒。 〔34〕如〔26〕～〔33〕中任一者所記載之方法，其中，保護基係選自由Boc、Trt、THP、及tBu所組成之群組。 〔35〕如〔26〕～〔34〕中任一者所記載之方法，其中，在側鏈具有保護基之胺基酸為Tyr（tBu）、Ser（tBu）、Thr（tBu）、Asp（tBu）、Glu（tBu）、Trp（Boc）、Lys（Boc）、His（Boc）、Ser（Trt）、Thr（Trt）、Trp（Trt）、Lys（Trt）、His（Trt）、Asn（Trt）、Gln（Trt）、Ser（THP）、或者Thr（THP）、或此等的N－烷基體。 〔36〕如〔1〕～〔35〕中任一者所記載之方法，其中，固相合成用樹脂為CTC樹脂、Wang樹脂、SASRIN樹脂、Trt樹脂、Mtt樹脂、Mmt樹脂、或Sieber樹脂。 〔37〕如〔36〕所記載之方法，其中，固相合成用樹脂為CTC樹脂、或Sieber樹脂。 〔38〕如〔1〕、及〔3〕～〔37〕中任一者所記載之方法，其中，包含使胜肽負載於固相合成用樹脂之步驟。 〔39〕如〔1〕～〔38〕中任一者所記載之方法，其中，進一步包含使胜肽延長1個或複數個胺基酸殘基之步驟。 〔40〕一種環狀胜肽、其鹽、或其等的溶劑合物的製備方法，其包含以下的步驟： 遵循如〔1〕～〔39〕中任一者所記載之方法，獲得含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物之步驟； 去除固相合成用樹脂之步驟；及 將該胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的C端側的基與N端側的基進行環化而形成環狀部之步驟。 〔41〕一種相較於將胺基酸一個殘基一個殘基地延長之情形，使胜肽化合物的回收率提升的方法，前述方法之特徵在於，在由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物之製造中，在最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。 〔42〕一種相較於將胺基酸一個殘基一個殘基地延長之情形，抑制不純物的生成的方法，前述方法之特徵在於，在由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物之製造中，在最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。 〔43〕一種相較於將胺基酸一個殘基一個殘基地延長之情形，抑制過早分裂的方法，前述方法之特徵在於，在由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物之製造中，在最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。 [發明功效]
本發明係提供能適應包含任意的種類及數量的胺基酸殘基之任意序列的胜肽化合物的製造，並可高產率且高純度地製造胜肽化合物之有用的手法。本發明能藉由抑制過早分裂而使產率提升，且能藉由避免過剩延長體的副生成而使純度提升，藉此，使目標胜肽化合物的精製效率戲劇性地提升，使胜肽固相合成法的生產性大幅提升。
[用以實施發明的形態]
（簡稱） 以下記載本說明書中所使用之簡稱。 AA：乙酸銨 Al：烯丙基 Alloc：烯丙基氧基羰基 Boc：t－丁氧羰基 Cbz：苄基氧基羰基 COMU：（1―氰基－2－乙氧基－2－側氧基亞乙基胺基氧基）二甲基胺基N－𠰌啉基碳鎓　六氟磷酸鹽 DBU：1,8－二吖雙環[5.4.0]－7－十一烯 DCM：二氯甲烷 DIC：N,N’－二異丙基碳化二亞胺 DIPEA：N,N－二異丙基乙基胺 DMF：N,N－二甲基甲醯胺 DMSO：二甲亞碸 EDCI：1－乙基－3－（3－二甲基胺基丙基）碳化二亞胺鹽酸鹽 FA：甲酸 Fmoc：9－茀基甲基氧基羰基 NMP：N－甲基－2－吡咯啶酮 HATU：O－（7－氮雜－1H－苯并三唑－1－基）－N,N,N′,N′－四甲基脲　六氟磷酸鹽 HBTU：O－（1H－苯并三唑－1－基）－N,N,N′,N′－四甲基脲　六氟磷酸鹽 HFIP：1,1,1,3,3,3－六氟異丙醇 HOAt：1－羥基－7－氮雜苯并三唑 HOBt：1－羥基苯并三唑 oxyma：氰基（羥基亞胺基）乙酸乙酯 TBME：t－丁基甲醚 Teoc：2－（三甲基矽基）乙氧基羰基 TFA：三氟乙酸 TFE：2,2,2－三氟乙醇 THF：四氫呋喃 Trt：三苯甲基
以下表示本說明書中所使用之胺基酸的簡稱與其結構之關係。此外，在以下的表中，各胺基酸係利用以Fmoc基保護胺基之形式列舉，但去除Fmoc基而具有遊離的胺基之各胺基酸或其殘基的簡稱與其等的結構之關係亦可由以下的表而掌握。具體而言，例如，MeAsp－pip為具有從下述表的Fmoc－MeAsp－pip去除Fmoc基而成的以下的結構之胺基酸一事係本發明所屬技術領域中具有通常知識者可理解，所述胺基酸殘基亦即MeAsp－pip的結構亦為本發明所屬技術領域中具有通常知識者可理解。
Figure 02_image009
[表A]
Figure 02_image011
Figure 02_image013
Figure 02_image015
Figure 02_image017
Figure 02_image019
Figure 02_image021
（官能基等的定義） 作為本說明書中之「鹵素原子」，例示F、Cl、Br或I。
本說明書中所謂「烷基」，係指從脂肪族烴去除任意的1個氫原子所衍生之一價的基，在骨架中不含有雜原子（指碳及氫原子以外的原子）或不飽和的碳－碳鍵，且具有包含氫及碳原子之烴基（hydrocarbyl）或烴基結構的部分集合。烷基不僅為直鏈狀者，亦包含分支鏈狀者。作為烷基，具體而言，為碳原子數1～20（C 1－C 20，以下所謂「C p－C q」意指碳原子數為p～q個）的烷基，較佳列舉為C 1－C 10烷基、更佳列舉為C 1－C 6烷基。作為烷基，具體而言，可列舉甲基、乙基、n－丙基、i－丙基、n－丁基、s－丁基、t－丁基、異丁基（2－甲基丙基）、n－戊基、s－戊基（1－甲基丁基）、t－戊基（1,1－二甲基丙基）、新戊基（2,2－二甲基丙基）、異戊基（3－甲基丁基）、3－戊基（1－乙基丙基）、1,2－二甲基丙基、2－甲基丁基、n－己基、1,1,2－三甲基丙基、1,2,2－三甲基丙基、1,1,2,2－四甲基丙基、1,1－二甲基丁基、1,2－二甲基丁基、1,3－二甲基丁基、2,2－二甲基丁基、2,3－二甲基丁基、3,3－二甲基丁基、1－乙基丁基、2－乙基丁基等。
本說明書中所謂「烯基」，係指具有至少1個雙鍵（2個相鄰的SP 2碳原子）之一價的基。藉由雙鍵及置換部分（存在之情形）的配置，雙鍵的幾何學形態可為entgegen（E）或zusammen（Z）、順式或反式配置。烯基不僅為直鏈狀者，亦包含分支鏈狀者。作為烯基，較佳列舉為C 2－C 10烯基，更佳列舉為C 2－C 6烯基，具體而言，可列舉例如乙烯基、烯丙基、1－丙烯基、2－丙烯基、1－丁烯基、2－丁烯基（包含順式、反式）、3－丁烯基、戊烯基、3－甲基－2－丁烯基、己烯基等。
本說明書中所謂「炔基」，係指具有至少1個三鍵（2個相鄰的SP碳原子）之一價的基。炔基不僅為直鏈狀者，亦包含分支鏈狀者。作為炔基，較佳列舉為C 2－C 10炔基，更佳列舉為C 2－C 6炔基，具體而言，可列舉例如，乙炔基、1－丙炔基、炔丙基、3－丁炔基、戊炔基、己炔基、3－苯基－2－丙炔基、3－（2'－氟苯基）－2－丙炔基、2－羥基－2－丙炔基、3－（3－氟苯基）－2－丙炔基、3－甲基－（5－苯基）－4－戊炔基等。
本說明書中所謂「環烷基」，意指飽和或部分飽和的環狀的一價的脂肪族烴基，包含單環、雙環、螺環。作為環烷基，較佳列舉為C 3－C 8環烷基，具體而言，可列舉例如，環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、雙環[2.2.1]庚基、螺[3.3]庚基等。
本說明書中所謂「芳基」，意指一價的芳香族烴環，較佳列舉為C 6－C 10芳基。作為芳基，具體而言，可列舉例如，苯基、萘基（例如，1－萘基、2－萘基）等。
本說明書中所謂「雜環基」，意指除了碳原子更含有1～5個雜原子之非芳香族的環狀的一價的基。雜環基可在環中具有雙鍵及或三鍵，環中的碳原子可被氧化而形成羰基，且可為單環亦可為縮合環。構成環之原子的數量較佳為4～10（4～10員雜環基）、更佳為4～7（4～7員雜環基）。作為雜環基，具體而言，可列舉例如，吖呾基（azetidinyl）、環氧乙烷基（oxiranyl）、氧環丁烷基（oxetanyl）、吖呾基、二氫呋喃基、四氫呋喃基、二氫哌喃基、四氫哌喃基、四氫吡啶基、四氫嘧啶基、𠰌啉基、硫代𠰌啉基、吡咯啶基、呱啶基（piperidinyl）、哌𠯤基、吡唑啶基、咪唑啉基（imidazolinyl）、咪唑啶基、㗁唑啶基、異㗁唑啶基、四氫噻唑基、異四氫噻唑基、1,2－噻嗪烷、噻二唑烷基（thiadiazolidinyl）、吖呾基、㗁唑啶酮（oxazolidone）、苯并二㗁烷基（benzodioxanyl）、苯并㗁唑基（benzoxazolyl）、二氧戊環基（dioxolanyl）、二㗁烷基（dioxanyl）、四氫吡咯并[1,2－c]咪唑（tetrahydropyrrolo[1,2-c]imidazole）、噻坦基（thietanyl）、3,6－二吖雙環[3.1.1]庚基、2,5－二吖雙環[2.2.1]庚基、3－氧雜－8－氮雜雙環[3.2.1]辛基、磺內醯胺（sultam）、2-氧雜螺[3.3]庚基（2-oxaspiro[3.3]heptyl）等。
本說明書中所謂「保護雜環基」，意指前述定義的「雜環基」所含之1個或複數個官能基，例如，胺基被任意的保護基保護之基，較佳列舉為保護4～7員雜環基。作為保護基，具體而言，可列舉Boc、Fmoc、Cbz、Troc、Alloc等，作為保護雜環基，具體而言，可列舉例如Boc保護吖丁啶（azetidine）等。
本說明書中所謂「雜環亞烷基」，意指藉由從前述定義的「雜環基」的1個碳原子去除2個氫原子而產生之遊離原子價成為雙鍵的一部分之二價的基。作為雜環亞烷基，較佳列舉為4～7員雜環亞烷基，具體而言，可列舉例如，四氫哌喃－4－亞基、吖丁啶－3－亞基等。
本說明書中所謂「保護雜環亞烷基」，意指前述定義的「雜環亞烷基」所含之1個或複數個官能基，例如，胺基被任意的保護基保護之基，較佳列舉為保護4～7員雜環亞烷基。作為保護基，具體而言，可列舉Boc、Fmoc、Cbz、Troc、Alloc等，作為保護雜環基，具體而言，可列舉例如Boc保護吖丁啶－3－亞基等。
本說明書中所謂「雜芳基」，意指除了碳原子更含有1～5個雜原子之芳香族性的環狀的一價的基。環可為單環亦可為與其他環的縮合環，且可為部分飽和。構成環之原子的數量較佳為5～10（5～10員雜芳基），更佳為5～7（5～7員雜芳基）。作為雜芳基，具體而言，可列舉例如，呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、㗁唑基、異㗁唑基、㗁二唑基（oxadiazolyl）、噻二唑基（thiadiazolyl）、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、嗒𠯤基、吡𠯤基、三𠯤基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并㗁唑基、苯并㗁二唑基（benzoxadiazolyl）、苯并咪唑基、吲哚基、異吲哚基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、辛啉基（cinnolinyl）、喹唑啉基、喹㗁啉基、苯并1,3-二氧呃基（benzodioxolyl）、吲哚嗪基（indolizinyl）、咪唑并吡啶基等。
本說明書中所謂「烷氧基」，意指前述定義的「烷基」所結合之氧基，較佳列舉為C 1－C 6烷氧基。作為烷氧基，具體而言，可列舉例如，甲氧基、乙氧基、1－丙氧基、2－丙氧基、n－丁氧基、i－丁氧基、s－丁氧基、t－丁氧基、戊基氧基、3－甲基丁氧基等。
本說明書中所謂「烯基氧基」，意指前述定義的「烯基」所結合之氧基，較佳列舉為C 2－C 6烯基氧基。作為烯基氧基，具體而言，可列舉例如，乙烯基氧基、烯丙基氧基、1－丙烯基氧基、2－丙烯基氧基、1－丁烯基氧基、2－丁烯基氧基（包含順式、反式）、3－丁烯基氧基、戊烯基氧基、己烯基氧基等。
本說明書中所謂「環烷氧基」，意指前述定義的「環烷基」所結合之氧基，較佳列舉為C 3－C 8環烷氧基。作為環烷氧基，具體而言，可列舉例如，環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基等。
本說明書中所謂「芳基氧基」，意指前述定義的「芳基」所結合之氧基，較佳列舉為C 6－C 10芳基氧基。作為芳基氧基，具體而言，可列舉例如，苯氧基、1－萘基氧基、2－萘基氧基等。
本說明書中所謂「胺基」，狹義上意指－NH 2，廣義上意指－NRR’，於此，R及R’係獨立且選自氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、或雜芳基，或者R及R’係與其等所結合之氮原子一起形成環。作為胺基，較佳列舉為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、4～8員環狀胺基等。
本說明書中所謂「單烷基胺基」，意指前述定義的「胺基」之中，R為氫且R’為前述定義的「烷基」之基，較佳列舉為單C 1－C 6烷基胺基。作為單烷基胺基，具體而言，可列舉例如，甲基胺基、乙基胺基、n－丙基胺基、i－丙基胺基、n－丁基胺基、s－丁基胺基、t－丁基胺基等。
本說明書中所謂「二烷基胺基」，意指前述定義的「胺基」之中，R及R’係獨立且為前述定義的「烷基」之基，較佳列舉為二C 1－C 6烷基胺基。作為二烷基胺基，具體而言，可列舉例如，二甲基胺基、二乙基胺基等。
本說明書中所謂「環狀胺基」，意指前述定義的「胺基」之中，R及R’係與其等所結合之氮原子一起形成環，較佳列舉為4～8員環狀胺基。作為環狀胺基，具體而言，可列舉例如，1-氮雜環丁基、1－吡咯啶基、1－哌啶基、1－六氫吡𠯤基、4－𠰌啉基、3-㗁唑啶基、1,1－二氧化物硫代𠰌啉基－4－基、3－氧雜－8－氮雜雙環[3.2.1]辛烷－8－基等。
本說明書中所謂「保護胺基」，意指被任意的保護基保護之胺基。作為保護胺基，具體而言，可列舉例如，被Boc、Fmoc、Cbz、Troc、Alloc、Trt等保護基保護之胺基。
本說明書中所謂「胺基羰基」，意指前述定義的「胺基」所結合之羰基，較佳列舉為－CONH 2、單C 1－C 6烷基胺基羰基、二C 1－C 6烷基胺基羰基、4～8員環狀胺基羰基。作為胺基羰基，具體而言，可列舉例如，－CONH 2、二甲基胺基羰基、1－吖呾基羰基、1－吡咯啶基羰基、1－呱啶基羰基、1－哌𠯤基羰基、4－𠰌啉基羰基、3－㗁唑啶基羰基、1,1－二氧化物硫代𠰌啉基－4－基羰基、3－氧雜－8－氮雜雙環[3.2.1]辛烷－8－基羰基等。
本說明書中所謂「烯基氧基羰基」，意指前述定義的「烯基氧基」所結合之羰基，較佳列舉為C 2－C 6烯基氧基羰基。作為烯基氧基羰基，具體而言，可列舉例如，乙烯基氧基羰基、烯丙基氧基羰基、1－丙烯基氧基羰基、2－丙烯基氧基羰基、1－丁烯基氧基羰基、2－丁烯基氧基羰基（包含順式、反式）、3－丁烯基氧基羰基、戊烯基氧基羰基、己烯基氧基羰基等。
本說明書中所謂「烷基磺醯基」，意指前述定義的「烷基」所結合之磺醯基，較佳列舉為C 1－C 6烷基磺醯基。作為烷基磺醯基，具體而言，可列舉例如甲基磺醯基等。
本說明書中之「羥基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被羥基置換之基，較佳為羥基C 1－C 6烷基。作為羥基烷基，具體而言，可列舉例如，羥基甲基、1－羥乙基、2－羥乙基、2－羥基－2－甲基丙基、5－羥基戊基等。
本說明書中之「鹵烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被鹵素置換之基，較佳為鹵C 1－C 6烷基，更佳為C 1－C 6氟烷基。作為鹵烷基，具體而言，可列舉例如，二氟甲基、三氟甲基、2,2－二氟乙基、2,2,2－三氟乙基、3,3－二氟丙基、4,4－二氟丁基、5,5－二氟戊基等。
本說明書中之「氰基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被氰基置換之基，較佳為氰基C 1－C 6烷基。作為氰基烷基，具體而言，可列舉例如，氰基甲基、2－氰基乙基等。
本說明書中之「胺基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「胺基」置換之基，較佳為胺基C 1－C 6烷基。作為胺基烷基，具體而言，可列舉例如，1－吡啶基甲基、2－（1－哌啶基）乙基、3－（1－哌啶基）丙基、4－胺基丁基等。
本說明書中之「羧基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被羧基置換之基，較佳為羧基C 1－C 6烷基。作為羧基烷基，具體而言，可列舉例如，羧基甲基等。
本說明書中之「烯基氧基羰基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「烯基氧基羰基」置換之基，較佳為C 2－C 6烯基氧基羰基C 1－C 6烷基，更佳為C 2－C 6烯基氧基羰基C 1－C 2烷基。作為烯基氧基羰基烷基，具體而言，可列舉例如，烯丙基氧基羰基甲基、2－（烯丙基氧基羰基）乙基等。
本說明書中之「烷氧基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「烷氧基」置換之基，較佳為C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基，更佳為C 1－C 6烷氧基C 1－C 2烷基。作為烷氧基烷基，具體而言，可列舉例如，甲氧基甲基、乙氧基甲基、1－丙氧基甲基、2－丙氧基甲基、n－丁氧基甲基、i－丁氧基甲基、s－丁氧基甲基、t－丁氧基甲基、戊基氧基甲基、3－甲基丁氧基甲基、1－甲氧基乙基、2－甲氧基乙基、2－乙氧基乙基等。
本說明書中之「環烷基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「環烷基」置換之基，較佳為C 3－C 8環烷基C 1－C 6烷基，更佳為C 3－C 6環烷基C 1－C 2烷基。作為環烷基烷基，具體而言，可列舉例如，環丙基甲基、環丁基甲基、環戊基甲基、環己基甲基等。
本說明書中之「環烷氧基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「環烷氧基」置換之基，較佳為C 3－C 8環烷氧基C 1－C 6烷基，更佳為C 3－C 6環烷氧基C 1－C 2烷基。作為環烷氧基烷基，具體而言，可列舉例如，環丙氧基甲基、環丁氧基甲基等。
本說明書中之「雜環基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「雜環基」置換之基，較佳為4～7員雜環基C 1－C 6烷基，更佳為4～7員雜環基C 1－C 2烷基。作為雜環基烷基，具體而言，可列舉例如，2－（四氫－2H－哌喃－4－基）乙基、2－（吖丁啶－3－基）乙基等。
說明書中之「烷基磺醯基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「烷基磺醯基」置換之基，較佳為C 1－C 6烷基磺醯基C 1－C 6烷基，更佳為C 1－C 6烷基磺醯基C 1－C 2烷基。作為烷基磺醯基烷基，具體而言，可列舉例如，甲基磺醯基甲基、2－（甲基磺醯基）乙基等。
本說明書中之「胺基羰基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「胺基羰基」置換之基，較佳為胺基羰基C 1－C 6烷基，更佳為胺基羰基C 1－C 4烷基。作為胺基羰基烷基，具體而言，可列舉例如，甲基胺基羰基甲基、二甲基胺基羰基甲基、t－丁基胺基羰基甲基、1－吖呾基羰基甲基、1－吡咯啶基羰基甲基、1－哌啶基羰基甲基、4－𠰌啉基羰基甲基、2－（甲基胺基羰基）乙基、2－（二甲基胺基羰基）乙基、2－（1－吖呾基羰基）乙基、2－（1－吡咯啶基羰基）乙基、2－（4－𠰌啉基羰基）乙基、3－（二甲基胺基羰基）丙基、4－（二甲基胺基羰基）丁基等。
本說明書中之「芳基氧基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「芳基氧基」置換之基，較佳為C 6－C 10芳基氧基C 1－C 6烷基，更佳為C 6－C 10芳基氧基C 1－C 2烷基。作為芳基氧基烷基，具體而言，可列舉例如，苯氧基甲基、2－苯氧基乙基等。
本說明書中之「芳烷基（芳基烷基）」，意指前述定義的「烷基」的至少一個氫原子被前述定義的「芳基」置換之基，較佳為C 7－C 14芳烷基，更佳為C 7－C 10芳烷基。作為芳烷基，具體而言，可列舉例如，苄基、苯乙基、3－苯基丙基等。
本說明書中之「芳烷氧基（aralkoxy）」，意指前述定義的「芳烷基」所結合之氧基，較佳為C 7－C 14芳烷氧基，更佳為C 7－C 10芳烷氧基。作為芳烷氧基，具體而言，可列舉例如，苄基氧基、苯乙基氧基、3－苯基丙氧基等。
本說明書中之「芳烷氧基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「芳烷氧基」置換之基，較佳為C 7－C 14芳烷氧基C 1－C 6烷基，更佳為C 7－C 14芳烷氧基C 1－C 2烷基。作為芳烷氧基烷基，具體而言，可列舉例如，苄基氧基甲基、1－（苄基氧基）乙基等。
本說明書中之「雜芳基烷基」，意指前述定義的「烷基」的至少一個氫原子被前述定義的「雜芳基」置換之基，較佳為5～10員雜芳基C 1－C 6烷基，更佳為5～10員雜芳基C 1－C 2烷基。作為雜芳基烷基，具體而言，可列舉例如，3－噻吩基甲基、4－噻唑基甲基、2－吡啶基甲基、3－吡啶基甲基、4－吡啶基甲基、2－（2－吡啶基）乙基、2－（3－吡啶基）乙基、2－（4－吡啶基）乙基、2－（6－喹啉基）乙基、2－（7－喹啉基）乙基、2－（6－吲哚基）乙基、2－（5－吲哚基）乙基、2－（5－苯并呋喃基）乙基等。
本說明書中之「雜芳基烷氧基」，意指前述定義的「雜芳基烷基」所結合之氧基，較佳為5～10員雜芳基C 1－C 6烷氧基，更佳為5～10員雜芳基C 1－C 2烷氧基。作為雜芳基烷氧基，具體而言，可列舉例如，3－噻吩基甲氧基、3－吡啶基甲氧基。
本說明書中之「雜芳基烷氧基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「雜芳基烷氧基」置換之基，較佳為5～10員雜芳基C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基，更佳為5～10員雜芳基C 1－C 2烷氧基C 1－C 2烷基。作為雜芳基烷氧基烷基，具體而言，可列舉例如，3－吡啶基甲氧基甲基等。
本說明書中之「雜環亞烷基烷基」，意指前述定義的「烷基」的1個或複數個氫被前述定義的「雜環亞烷基」置換之基，較佳為4～7員雜環亞烷基C 1－C 6烷基，更佳為4～7員雜環亞烷基C 1－C 2烷基。作為雜芳基烷氧基烷基，具體而言，可列舉例如，四氫－4H－哌喃－4－亞基甲基、吖丁啶－3－亞基甲基等。
本說明書中之「烷氧基烯基」，意指前述定義的「烯基」的1個或複數個氫被前述定義的「烷氧基」置換之基，較佳為C 1－C 6烷氧基C 2－C 6烯基。作為烷氧基烯基，具體而言，可列舉例如，（E）－4－甲氧基丁－2－烯－1－基（(E)-4-methylbut-2-en-1-yl）等。
本說明書中之「胺基羰基烯基」，意指前述定義的「烯基」的1個或複數個氫被前述定義的「胺基羰基」置換之基，較佳為胺基羰基C 2－C 6烯基。作為胺基羰基烯基，具體而言，可列舉例如，（E）－3－（二甲基胺基羰基羰基）－丙－2－烯－1－基等。
本說明書中之「鹵烷氧基」，意指前述定義的「烷氧基」的1個或複數個氫被鹵素置換之基，較佳為鹵C 1－C 6烷氧基。作為鹵烷氧基，具體而言，可列舉例如，二氟甲氧基、三氟甲氧基、2,2－二氟乙氧基、2,2,2－三氟乙氧基等。
本說明書中之「亞烷基」，意指從前述「烷基」進一步去除任意的1個氫原子所衍生之二價的基，較佳為C 4－C 8亞烷基。作為亞烷基，具體而言，可列舉－CH 2－、－（CH 2） 2－、－（CH 2） 3－、－CH（CH 3）CH 2－、－C（CH 3） 2－、－（CH 2） 4－、－CH（CH 3）CH 2CH 2－、－C（CH 3） 2CH 2－、－CH 2CH（CH 3）CH 2－、－CH 2C（CH 3） 2－、－CH 2CH 2CH（CH 3）－、－（CH 2） 5－、－（CH 2） 6－、－（CH 2） 7－、－（CH 2） 8－等。
本說明書中之「脂環式環」，意指非芳香族烴環。脂環式環可在環中具有不飽和鍵，亦可為具有2個以上的環之多環性的環。並且，構成環之碳原子可被氧化而形成羰基。作為脂環式環，較佳列舉為3～8員脂環式環，具體而言，可列舉例如，環丙烷環、環丁烷環、環戊烷環、環己烷環、環庚烷環、環辛烷環、雙環[2.2.1]庚烷環等。
本說明書中之「飽和雜環」，意指除了碳原子更含有1～5個雜原子之在環中不包含雙鍵及/或三鍵之非芳香族的雜環。飽和雜環可為單環，亦可與其他環例如苯環等芳香環形成縮合環。作為飽和雜環，較佳列舉為4～7員飽和雜環，具體而言，可列舉例如，吖丁啶環、氧雜環丁烷（oxetane）環、四氫呋喃環、四氫哌喃環、𠰌啉環、硫代𠰌啉環、吡咯啶環、4－側氧基吡咯啶環、哌啶環、4－側氧基哌啶環、哌𠯤環、吡唑烷環、咪唑啶環、㗁唑烷環、異㗁唑烷環、噻唑烷環、異噻唑烷環、噻唑烷環、㗁唑烷環、二氧戊環、二㗁烷環、硫雜環丁烷環（thietane ring）、八氫吲哚環、吲哚啉環等。
本說明書中之「胜肽鏈」，係指1、2、3、4、或其以上的天然胺基酸及/或非天然胺基酸藉由醯胺鍵及/或酯鍵而連結之胜肽鏈。作為胜肽鏈，較佳為包含1～4個胺基酸殘基之胜肽鏈，更佳為由1～4個胺基酸殘基所構成之胜肽鏈。
本說明書中之「胺基的保護基」中，可列舉胺甲酸酯型的保護基、醯胺型的保護基、芳基碸醯胺型的保護基、烷基胺型的保護基、醯亞胺型的保護基等，具體而言，例示Fmoc基、Boc基、Alloc基、Cbz基、Teoc基、三氟乙醯基、五氟丙醯基、酞醯基、苯磺醯基、對甲苯磺醯基、2－硝基苯磺醯基（Nosyl）、二硝基2－硝基苯磺醯基、t－Bu基、三苯甲基、
Figure 02_image023
基、亞苄基、4－甲氧基亞苄基、二苯基亞甲基等。
本說明書中所謂「羧基的保護基」中，可列舉烷基酯型的保護基、苄基酯型的保護基、經置換之烷基酯型的保護基等。作為羧基的保護基，具體而言，例示甲基、乙基、t－Bu基、苄基、三苯甲基、
Figure 02_image023
基、甲氧基三苯甲基、2－（三甲基矽基）乙基、2,2,2－三氯乙基、烯丙基等。
本說明書中所謂「羥基的保護基」中，可列舉烷基醚型的保護基、芳烷基醚型的保護基、矽基醚型、碳酸酯型的保護基等。作為羥基的保護基，具體而言，例示甲氧基甲基、苄基氧基甲基、四氫哌喃基、tert－丁基、烯丙基、2,2,2－三氯乙基、苄基、4－甲氧基苄基、三甲基矽基、三乙基矽基、三異丙基矽基、t－丁基二甲基矽基、t－丁基二苯基矽基、甲氧羰基、9－茀基甲氧羰基、2,2,2－三氯乙氧基羰基等。
本說明書中所謂「可被置換」，意指一基可被任意的置換基置換。
本說明書中所謂「可被保護」，意指一基可被任意的保護基保護。
本說明書中所謂「1個或複數個」，意指1個或2個以上的數。「1個或複數個」使用於與一基的置換基相關之文章之情形，此用語意指從1個起至其基所容許之置換基的最大數為止的數。作為「1個或複數個」，具體而言，可列舉例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、及/或更大的數。
本發明的化合物可為其鹽，較佳為其化學上或者藥學上所容許之鹽。並且，本發明的化合物或其鹽可為其等的溶劑合物，較佳為其化學上或者藥學上所容許之溶劑合物。本發明的化合物的鹽中，例如包含鹽酸鹽；氫溴酸鹽；氫碘酸鹽；磷酸鹽；膦酸鹽；硫酸鹽；甲磺酸鹽、p－甲苯磺酸鹽等磺酸鹽；乙酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、丁二酸鹽、柳酸鹽等羧酸鹽；或、鈉鹽、鉀鹽等鹼金屬鹽；鎂鹽、鈣鹽等鹼土類金屬鹽；銨鹽、烷基銨鹽、二烷基銨鹽、三烷基銨鹽、四烷基銨鹽等銨鹽等。此等鹽例如係藉由使該化合物與能使用於醫藥品製造之酸或鹼接觸而製造。在本發明中，所謂化合物的溶劑合物，係指化合物與溶媒一起形成一個分子集團者，只要為藉由容許隨著醫藥的投與而攝取之溶媒所形成的溶劑合物，則未被特別限定。只要溶媒為水，則稱為水合物。作為本發明的化合物的溶劑合物，較佳為水合物，作為該種水合物，具體而言列舉1～10水合物，較佳為1～5水合物，再佳為1～3水合物。本發明的化合物的溶劑合物中，不僅包含與水、醇（例如，甲醇、乙醇、1－丙醇、2－丙醇等）、二甲基甲醯胺等單獨溶媒之溶劑合物，亦包含與多種溶媒之溶劑合物。
本說明書中之「胺基酸」中，包含天然胺基酸、及非天然胺基酸。本說明書中之「天然胺基酸」，意指Gly、Ala、Ser、Thr、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、His、Glu、Asp、Gln、Asn、Cys、Met、Lys、Arg、Pro。非天然胺基酸未被特別限定，但例示β－胺基酸、γ－胺基酸、D型胺基酸、N－置換胺基酸、α,α－二置換胺基酸、側鏈與天然不同的胺基酸、羥基羧酸等。作為本說明書中之胺基酸，容許任意的立體配置。胺基酸的側鏈的選擇未設有特別限制，但除了氫原子以外，例如亦自由地選自烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、環烷基，此等基之中未相鄰之1或2個亞甲基可被氧原子、羰基（－CO－）、或磺醯基（－SO 2－）置換。可分別賦予置換基，此等置換基亦未被限制，例如，可從包含鹵素原子、O原子、S原子、N原子、B原子、Si原子、或P原子之任意置換基中獨立且自由地選擇1個或2個以上。亦即，例示可被置換之烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、環烷基等。在非限定的一態樣中，本說明書中之胺基酸可為在同一分子內具有羧基與胺基之化合物（即使在此情形，脯胺酸、如羥基脯胺酸般的亞胺基酸亦包含在胺基酸中）。
本說明書中之「胺基酸的側鏈」，意指α－胺基酸之情形，結合至胺基與羧基所結合之碳（α－碳）之原子團。例如，Ala的甲基為胺基酸的側鏈。β－胺基酸之情形，結合至α－碳、及/或β－碳之原子團成為胺基酸的側鏈，γ－胺基酸之情形，結合至α－碳、β－碳、及/或γ－碳之原子團能成為胺基酸的側鏈。
本說明書中之「胺基酸的主鏈」，意指α－胺基酸之情形為由胺基、α－碳、及羧基所構成之鏈狀部分，β－胺基酸之情形為由胺基、β－碳、α－碳、及羧基所構成之鏈狀部分，及γ－胺基酸之情形為由胺基、γ－碳、β－碳、α－碳、及羧基所構成之鏈狀部分。
本說明書中之「胜肽的主鏈」、「胜肽化合物的主鏈」及「環狀胜肽化合物的主鏈」，意指上述「胺基酸的主鏈」藉由醯胺鍵而複數個連結，藉此所形成之結構。
胺基酸的主鏈胺基可為非置換（NH 2基），亦可被置換（亦即，－NHR基：R表示可具有置換基之烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、環烷基，此等基之中未相鄰之1或2個亞甲基可被氧原子、羰基（－CO－）、或磺醯基（－SO 2－）置換，又，如脯胺酸般結合至N原子之碳鏈與α位的碳原子可形成環）。前述R的置換基係與上述胺基酸側鏈中之置換基同樣地選擇。主鏈胺基被置換之情形的前述R被包含在本說明書中之「胺基酸的側鏈」中。本說明書中將此種主鏈胺基被置換之胺基酸稱為「N－置換胺基酸」。作為本說明書中之「N－置換胺基酸」，較佳例示為N－烷基胺基酸、N－C 1－C 6烷基胺基酸、N－C 1－C 4烷基胺基酸、N－甲基胺基酸，但未受限於此等。此外，脯胺酸因是天然胺基酸，故從非天然的N－置換胺基酸殘基排除。
本說明書中之構成胜肽化合物之「胺基酸」中，包含與各自對應之全部同位素。「胺基酸」的同位素係至少1個原子以與天然存在比例不同的存在比例被原子編號（質子數）相同且質量數（質子與中子之數量的和）不同的原子置換者。作為構成本發明的胜肽化合物之「胺基酸」所含之同位素的例子，有氫原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子等，分別包含 2H、 3H、 13C、 14C、 15N、 17O、 18O、 31P、 32P、 35S、 18F、 36Cl等。
作為本說明書中之包含鹵素原子之置換基，例示在置換基具有鹵素之烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基等，更具體而言，例示氟烷基、二氟烷基、三氟烷基等。
作為包含O原子之置換基，可列舉羥基（－OH）、氧基（－OR）、羰基（－C＝O－R）、羧基（－CO 2H）、氧基羰基（－C＝O－OR）、羰基氧基（－O－C＝O－R）、硫代羰基（－C＝O－SR）、羰基硫基（－S－C＝O－R）、胺基羰基（－C＝O－NHR）、羰基胺基（－NH－C＝O－R）、氧基羰基胺基（－NH－C＝O－OR）、磺醯基胺基（－NH－SO 2－R）、胺基磺醯基（－SO 2－NHR）、胺磺醯基胺基（－NH－SO 2－NHR）、硫代羧基（－C（＝O）－SH）、羧基羰基（－C（＝O）－CO 2H）等基。
作為氧基（－OR）的例子，可列舉烷氧基、環烷氧基、烯基氧基、炔基氧基、芳基氧基、雜芳基氧基、芳烷基氧基等。作為烷氧基，較佳為C 1－C 4烷氧基、C 1－C 2烷氧基，其中較佳為甲氧基、或乙氧基。
作為羰基（－C＝O－R）的例子，可列舉甲醯基（－C＝O－H）、烷基羰基、環烷基羰基、烯基羰基、炔基羰基、芳基羰基、雜芳基羰基、芳烷基羰基等。
作為氧基羰基（－C＝O－OR）的例子，可列舉烷基氧基羰基、環烷基氧基羰基、烯基氧基羰基、炔基氧基羰基、芳基氧基羰基、雜芳基氧基羰基、芳烷基氧基羰基等。
作為羰基氧基（－O－C＝O－R）的例子，可列舉烷基羰基氧基、環烷基羰基氧基、烯基羰基氧基、炔基羰基氧基、芳基羰基氧基、雜芳基羰基氧基、芳烷基羰基氧基等。
作為硫代羰基（－C＝O－SR）的例子，可列舉烷基硫代羰基、環烷基硫代羰基、烯基硫代羰基、炔基硫代羰基、芳基硫代羰基、雜芳基硫代羰基、芳烷基硫代羰基等。
作為羰基硫基（－S－C＝O－R）的例子，可列舉烷基羰基硫基、環烷基羰基硫基、烯基羰基硫基、炔基羰基硫基、芳基羰基硫基、雜芳基羰基硫基、芳烷基羰基硫基等。
作為胺基羰基（－C＝O－NHR）的例子，可列舉烷基胺基羰基（例如，C 1－C 6或C 1－C 4烷基胺基羰基，其中例示乙基胺基羰基、甲基胺基羰基等）、環烷基胺基羰基、烯基胺基羰基、炔基胺基羰基、芳基胺基羰基、雜芳基胺基羰基、芳烷基胺基羰基等。除此等以外，還可列舉與－C＝O－NHR中的N原子結合之H原子被烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基進一步置換之基。
作為羰基胺基（－NH－C＝O－R）的例子，可列舉烷基羰基胺基、環烷基羰基胺基、烯基羰基胺基、炔基羰基胺基、芳基羰基胺基、雜芳基羰基胺基、芳烷基羰基胺基等。除此等以外，還可列舉與－NH－C＝O－R中的N原子結合之H原子被烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基進一步置換之基。
作為氧基羰基胺基（－NH－C＝O－OR）的例子，可列舉烷氧羰基（alkoxycarbonyl）胺基、環烷氧羰基胺基、烯基氧基羰基胺基、炔基氧基羰基胺基、芳基氧基羰基胺基、雜芳基氧基羰基胺基、芳烷基氧基羰基胺基等。除此等以外，還可列舉與－NH－C＝O－OR中的N原子結合之H原子被烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基進一步置換之基。
作為磺醯基胺基（－NH－SO 2－R）的例子，可列舉烷基磺醯基胺基、環烷基磺醯基胺基、烯基磺醯基胺基、炔基磺醯基胺基、芳基磺醯基胺基、雜芳基磺醯基胺基、芳烷基磺醯基胺基等。除此等以外，還可列舉與－NH－SO 2－R中的N原子結合之H原子被烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基進一步置換之基。
作為胺基磺醯基（－SO 2－NHR）的例子，可列舉烷基胺基磺醯基、環烷基胺基磺醯基、烯基胺基磺醯基、炔基胺基磺醯基、芳基胺基磺醯基、雜芳基胺基磺醯基、芳烷基胺基磺醯基等。除此等以外，還可列舉與－SO 2－NHR中的N原子結合之H原子被烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基進一步置換之基。
作為胺磺醯基胺基（－NH－SO 2－NHR）的例子，可列舉烷基胺磺醯基胺基、環烷基胺磺醯基胺基、烯基胺磺醯基胺基、炔基胺磺醯基胺基、芳基胺磺醯基胺基、雜芳基胺磺醯基胺基、芳烷基胺磺醯基胺基等。再者，與－NH－SO 2－NHR中的N原子結合之2個H原子可被獨立選自由烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、及芳烷基所組成之群組之置換基置換，又，此等2個置換基可形成環。
作為包含S原子之置換基，可列舉硫醇（－SH）、硫基（－S－R）、亞磺醯基（－S＝O－R）、磺醯基（－SO 2－R）、磺酸基（－SO 3H）等基。
作為硫基（－S－R）的例子，係選自烷基硫基、環烷基硫基、烯基硫基、炔基硫基、芳基硫基、雜芳基硫基、芳烷基硫基等之中。
作為磺醯基（－SO 2－R）的例子，可列舉烷基磺醯基、環烷基磺醯基、烯基磺醯基、炔基磺醯基、芳基磺醯基、雜芳基磺醯基、芳烷基磺醯基等。
作為包含N原子之置換基，可列舉疊氮（－N 3，亦稱為「疊氮基」）、氰基（－CN）、一級胺基（－NH 2）、二級胺基（－NH－R；亦稱為單置換胺基）、三級胺基（－NR（R'）；亦稱為二置換胺基）、甲脒基（－C（＝NH）－NH 2）、置換甲脒基（－C（＝NR）－NR'R"）、胍基（－NH－C（＝NH）－NH 2）、置換胍基（－NR－C（＝NR'''）－NR'R"）、胺基羰基胺基（－NR－CO－NR'R"）、吡啶基、哌啶基、N－𠰌啉基、吖呾基等基。
作為二級胺基（－NH－R；單置換胺基）的例子，可列舉烷基胺基、環烷基胺基、烯基胺基、炔基胺基、芳基胺基、雜芳基胺基、芳烷基胺基等。
作為三級胺基（－NR（R'）；二置換胺基）的例子，可列舉例如具有分別獨立選自烷基（芳烷基）胺基等、烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基等中之任意的2個置換基之胺基，此等任意的2個置換基可形成環。具體而言，二烷基胺基之中，例示C 1－C 6二烷基胺基、C 1－C 4二烷基胺基、二甲基胺基、二乙基胺基等。本說明書中所謂「C p－C q二烷基胺基」，係指在胺基中置換2個C p－C q烷基之基，兩個C p－C q烷基可為相同亦可不同。
作為置換甲脒基（－C（＝NR）－NR'R"）的例子，可列舉N原子上的3個置換基R、R'、及R"係分別獨立選自烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基中之基，例如烷基（芳烷基）（芳基）甲脒基等。
作為置換胍基（－NR－C（＝NR'''）－NR'R"）的例子，可列舉R、R'、R"、及R'''係分別獨立選自烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基中之基，或者此等形成環之基等。
作為胺基羰基胺基（－NR－CO－NR'R"）的例子，可列舉R、R'、及R"係分別獨立選自氫原子、烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基中之基，或者此等形成環之基等。
本說明書中有時將構成胜肽化合物之「胺基酸殘基」簡稱為「胺基酸」。
本說明書中所謂「直鏈狀的胜肽化合物」，係指天然胺基酸及/或非天然胺基酸藉由醯胺鍵或者酯鍵而連結，藉此所形成者，只要為不具有環狀部之化合物，則未被特別限定。構成直鏈狀的胜肽化合物之天然胺基酸及非天然胺基酸的總數可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30個，較佳的範圍為6～20個、7～19個、7～18個、7～17個、7～16個、7～15個、8～14個、9～13個。
本說明書中所謂「環狀胜肽化合物」，係指天然胺基酸及/或非天然胺基酸藉由醯胺鍵或者酯鍵而連結，藉此所形成者，只要為具有環狀部之化合物，則未被特別限定。構成環狀的胜肽化合物之天然胺基酸及非天然胺基酸的總數可為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30個，較佳的範圍為6～20個、7～19個、7～18個、7～17個、7～16個、7～15個、8～14個、9～13個。
本說明書中，胜肽化合物的「環狀部」，意指連結2個以上的胺基酸殘基所形成之環狀的部分。又，本說明書中，指向環狀胜肽化合物的部分結構時所使用之「直鏈部」，係指環狀部的主鏈結構不包含的部分，且在該部分的鏈上具有至少一個醯胺鍵及/或酯鍵者。
本說明書中之構成環狀胜肽化合物的環狀部之胺基酸的數量未被限定，但可列舉例如，2以上、3以上、4以上、5以上、6以上、7以上、8以上、9以上、10以上、11以上、12以上、30以下、20以下、18以下、16以下、15以下、14以下、13以下、12以下、11以下、7、8、9、10、11、12、13、14、15、及16。若考慮兼顧膜穿透性與代謝穩定性，則前述構成環狀部之胺基酸的數量較佳為2～30、2～15、或5～15，更佳為5～14、7～14、或8～14，再佳為8～13、9～13、8～12、8～11、或9～12，特佳為9～11。
在一態樣中，直鏈部的胺基酸的數量（單元的數量）較佳為0～8，更佳為0～5，再佳為0～3。此外，在非限定的一態樣中，本說明書中之「直鏈部」中，有包含天然胺基酸或非天然胺基酸（包含經化學修飾、骨架變換等之胺基酸）之情形。
在一態樣中，本說明書中之環狀胜肽化合物的分子量可為500～2000。
本說明書中之「胜肽化合物」中，可包含其藥學上容許之鹽、或此等的溶劑合物。
本說明書中所謂「側鏈」，意指胺基酸的側鏈、或環狀胜肽化合物的環狀部的側鏈等的文章所使用且各自的主鏈結構不包含之部分。
本說明書中所謂「胺基酸的數量」，係指構成胜肽化合物之胺基酸殘基（胺基酸單元）的數量，意指在剪切連結胺基酸之醯胺鍵、酯鍵、及環化部的結合時所產生之胺基酸單元的數量。
本說明書中所謂「延長反應」，意指在胺基酸或胜肽上使胺基酸或胜肽延長之反應。延長可藉由對於負載於固相合成用樹脂之胺基酸或胜肽進行之固相合成法、及不使用固相合成用樹脂之液相合成法而進行。
本說明書中所謂「使…負載於固相合成用樹脂」，意指對於未結合有胺基酸或胜肽之固相合成用樹脂，使胺基酸或胜肽結合。
本說明書中，「及/或」的用語意義包含將「及」與「或」適當組合之全部組合。具體而言，例如，「A、B、及/或C」中，包含以下的7種變化： （i）A、（ii）B、（iii）C、（iv）A及B、（v）A及C、（vi）B及C、（vii）A、B及C。
（製法） 在一態樣中，本發明係關於一種由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的製備方法，方法特徵在於在固相法中之最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。 又，在一態樣中，本發明係關於一種由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的製備方法，前述方法包含使胜肽負載於固相合成用樹脂之步驟。
亦即，本發明使預先藉由液相法等而製備之寡胜肽等胜肽負載於固相合成用樹脂，並對於所述胜肽進行固相法中之胜肽鏈的延長，藉此合成伴隨所期望的胺基酸序列之胜肽化合物。在本說明書中，有將在固相法中之最初的延長反應之前負載於固相合成用樹脂之胜肽稱為「起始胜肽」之情形。
本說明書中之最初的延長反應較佳為在起始胜肽上使胺基酸延長。
以往，使用固相法之胜肽化合物的製造係藉由在使胺基酸負載於固相合成用樹脂後，依序使胺基酸延長而進行。然而，在此方法中，用於在負載於固相合成用樹脂之胺基酸（第一個殘基的胺基酸殘基）上使下一個胺基酸（第二個殘基的胺基酸殘基）延長度之縮合步驟中，有第一個殘基的胺基酸殘基從固相合成用樹脂脫離之情形（過早分裂）。此脫離在使用能以溫和的條件切出胜肽化合物之固相合成用樹脂之情形中為明顯。又，在第二個殘基的胺基酸殘基的延長之前，有副生成過剩延長體之情形，所述過剩延長體係在第一個殘基的胺基酸殘基上，藉由過早分裂而脫離之第一個殘基的胺基酸殘基延長，接著第二個殘基的胺基酸殘基延長而成。再者，在非天然胺基酸殘基之中，有由固相法所進行之延長反應，例如，第一個殘基的胺基酸對於第二個殘基的胺基酸殘基的延長反應未充分進行者，亦有第二個殘基的胺基酸殘基未連結而保持缺失地連結下一個胺基酸之情形。此等在第二個殘基的胺基酸殘基為具有大體積的側鏈之N－置換胺基酸殘基之情形中為明顯。藉由使用本發明的方法，能避免此等缺點，以高產率且高純度製造所期望的胜肽化合物。
在本發明中，起始胜肽可使用包含任意數量及任意種類的胺基酸殘基之胜肽。作為此種胜肽，具體而言，可列舉包含2個以上的胺基酸殘基之寡胜肽，較佳為二胜肽或三胜肽。又，起始胜肽的N端的胺基酸殘基的胺基較佳為被保護基保護。此種起始胜肽可使用本技術領域所習知的方法例如液相法而製造。N端被保護之起始胜肽的製備法並無限制，但例如，具體而言可藉由以下步驟而製造：對於羧基被保護之胺基酸殘基，使用胺基被保護之胺基酸殘基與縮合劑，進行該胺基酸殘基的延長反應，接著對於所生成之胜肽，進行N端的保護基的脫保護反應與胺基被保護之胺基酸的延長反應，重複此過程直到成為所期望的殘基數為止，在最終步驟進行C端的保護基的脫保護反應。成為起始胜肽的製造原料之胺基酸殘基，可從商業共有人取得，或藉由習知的方法例如WO2018／225864所記載之方法而製造。
在一態樣中，起始胜肽可列舉其C端的胺基酸殘基（第一個殘基的胺基酸殘基）為非天然胺基酸殘基者，作為非天然胺基酸殘基，較佳列舉為N－烷基胺基酸等N－置換胺基酸殘基。作為N－烷基胺基酸，較佳為N－C 1－C 6烷基胺基酸，更佳為N－甲基胺基酸。雖不為受特定理論所拘束者，但第一個殘基的胺基酸殘基為N－置換胺基酸殘基之情形，相較於為N－非置換胺基酸殘基之情形，有容易發生過早分裂之傾向，又，在其側鏈具有大體積的基之情形中，此傾向更為明顯。因此，本發明特別有用於伴隨該種胺基酸殘基作為C端的胺基酸殘基之胜肽化合物的製造。
在一態樣中，起始胜肽的C端的胺基酸殘基（第一個殘基的胺基酸殘基）係藉由與胺基的α位的碳原子、β位的碳原子、或γ位的碳原子結合之羧基而負載於固相合成用樹脂。作為藉由與胺基的β位的碳原子結合之羧基而負載於固相合成用樹脂之胺基酸殘基的例子，可列舉天冬醯胺酸或其衍生物。具體而言，藉由存在於天冬醯胺酸的側鏈之羧基而負載於固相合成用樹脂之情形，符合藉由與胺基的β位的碳原子結合之羧基而負載於固相合成用樹脂之情形。又，作為藉由與胺基的γ位的碳原子結合之羧基而負載於固相合成用樹脂之胺基酸殘基的例子，可列舉麩醯胺酸或其衍生物。具體而言，藉由存在於麩醯胺酸的側鏈之羧基而負載於固相合成用樹脂之情形，符合藉由與胺基的γ位的碳原子結合之羧基而負載於固相合成用樹脂之情形。其他天然胺基酸殘基或其N－置換胺基酸殘基，通常藉由與其α位的碳原子結合之羧基而負載於固相合成用樹脂。
在一態樣中，起始胜肽的C端的胺基酸殘基（第一個殘基的胺基酸殘基）可為天冬醯胺酸、2－胺基丁酸、甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、脯胺酸、酪胺酸、或者2－胺基異丁酸、或此等的N－置換體及/或者衍生物。在第一個殘基的胺基酸殘基為此等胺基酸殘基之情形中，容易發生過早分裂。作為此等胺基酸殘基的N－置換體，較佳列舉為N－烷基體，更佳列舉為N－甲基體。作為此等胺基酸殘基的衍生物，可列舉無關固相合成用樹脂及與第二個殘基的胺基酸殘基的結合之任意的官能基（例如，胺基、羧基、羥基等）被任意的置換基（例如，保護基）保護者。尤其，作為天冬醯胺酸的衍生物，具體而言，例示無關固相合成用樹脂及與第二個殘基的胺基酸殘基的結合之遊離的羧基被胺基羰基化者。作為經胺基羰基化之天冬醯胺酸，具體而言，可列舉二甲基胺基羰基等經二烷基胺基羰基化之天冬醯胺酸、在包含N原子之飽和雜環（例如，吖丁啶環、𠰌啉環、吡咯啶環、哌啶環、氮𠰢環等）的該N原子之間經胺基羰基化之天冬醯胺酸等，此等天冬醯胺酸亦可為N－烷基體等N－置換體。第一個殘基的胺基酸殘基為天冬醯胺酸或其N－置換體及/或者衍生物之情形，該胺基酸殘基較佳為藉由胺基的β位的羧基而負載於固相合成用樹脂。又，作為任意的官能基（例如，胺基、羧基、羥基等）被任意的保護基保護之胺基酸殘基，例示胺基酸殘基的側鏈的胺基被Boc基、或Cbz基等胺甲酸酯型的保護基保護者，具體而言，例如，Lys的側鏈的胺基被Boc基保護者。另外，例示胺基酸殘基的側鏈的醯胺基被t－Bu基或Trt基等烷基胺型的保護基保護者，具體而言，例如，Asn、Gln等的側鏈的醯胺基被Trt基保護者、胺基酸殘基的側鏈的羥基被t－Bu基等烷基醚型的保護基保護者等，具體而言，例如，Ser的側鏈的羥基、Thr的側鏈的羥基、Tyr的側鏈的羥基等被t－Bu基保護者等。
在一態樣中，起始胜肽可列舉為與其C端的胺基酸殘基相鄰之胺基酸殘基（第二個殘基的胺基酸）為非天然胺基酸殘基者。作為非天然胺基酸殘基，較佳為N－烷基胺基酸等N－置換胺基酸殘基及/或者胺基酸衍生物，作為N－置換胺基酸殘基，較佳為N－甲基體。作為胺基酸殘基的衍生物，可列舉無關與相鄰之胺基酸殘基的結合之任意的官能基（例如，胺基、羧基、羥基等）被任意的置換基（例如，保護基）保護者。具體而言，例示胺基酸殘基的側鏈地胺基被Boc基、或Cbz基等胺甲酸酯型的保護基保護者，更具體而言，例如，Lys的側鏈的胺基被Boc基保護者。另外，例示胺基酸殘基的側鏈的醯胺基被t－Bu基、或Trt基等烷基胺型的保護基保護者，具體而言，例如，Asn、Gln等的側鏈的醯胺基被Trt基保護者、胺基酸殘基的側鏈的羥基被t－Bu基等烷基醚型的保護基保護者等，具體而言，例如，Ser的側鏈的羥基、Thr的側鏈的羥基、Tyr的側鏈的羥基等被t－Bu基保護者等。雖非受特定的理論所拘束者，但在第二個殘基的胺基酸為N－置換胺基酸殘基之情形中，相較於為N－非置換胺基酸殘基之情形，有容易發生過早分裂之傾向，尤其，在其側鏈具有大體積的基之情形中，所述傾向明顯。因此，本發明特別有用於在第二個殘基伴隨該種胺基酸殘基之胜肽化合物的製造。
在一態樣中，起始胜肽的C端的胺基酸殘基（第一個殘基的胺基酸殘基）及與C端的胺基酸殘基相鄰之胺基酸殘基（第二個殘基的胺基酸）可兩者皆為天然胺基酸殘基，但較佳為其中一者或兩者為非天然胺基酸殘基。
在一態樣中，起始胜肽的C端的胺基酸殘基（第一個殘基的胺基酸殘基）、及/或與該C端的胺基酸殘基相鄰之胺基酸殘基（第二個殘基的胺基酸殘基）具有大體積的側鏈。例如，作為具有大體積的側鏈之天然胺基酸，可列舉具有碳數為2以上的側鏈之胺基酸，例示Met、Phe、Tyr、Val、Leu、Ile、Trp、Arg、His、Glu、Lys、Gln、Asp、Asn、Cys、Thr等。又，在側鏈具有大體積的保護基之情形，亦能為具有大體積的側鏈之胺基酸殘基。例如，Ser本身雖不具有大體積的側鏈，但Ser的側鏈被tBu保護之Ser（tBu）符合具有大體積的側鏈之胺基酸殘基。又，不論是天然或非天然，在胺基酸殘基的側鏈具有可被置換的分支鏈烷基之胺基酸殘基能為具有大體積的側鏈之胺基酸殘基。此種分支鏈烷基較佳為與胺基酸殘基的羧基的α位的碳原子結合，分支鏈烷基的分支位置較佳為該羧基的β位的碳原子或γ位的碳原子。例如，Val係在胺基酸殘基的羧基的α位的碳原子具有分支鏈烷基，且在其β位的碳原子具有分支之胺基酸殘基的一個例子，Val樣的胺基酸殘基能為具有大體積的側鏈之胺基酸殘基。又，Leu係在胺基酸的羧基的α位的碳原子具有分支鏈烷基，且在其γ位的碳原子具有分支之胺基酸殘基的一個例子，Leu樣的胺基酸能為具有大體積的側鏈之胺基酸殘基。分支鏈烷基所能具有之置換基的數量及種類未被特別限定，但分支鏈烷基可具有獨立選自由烯基、炔基、環烷基、芳基、雜環基、雜芳基、烷氧基、烯基氧基、環烷氧基、芳基氧基、胺基、胺基羰基、烯基氧基羰基、烷基磺醯基、羥基、鹵素、氰基、羧基、烯基氧基羰基、芳烷氧基、雜芳基烷氧基、烷氧基烯基、胺基羰基烯基、及鹵烷氧基所組成之群組之1～5個置換基。雖未受特定的理論所拘束，但在第一個殘基的胺基酸殘基及/或第二個殘基的胺基酸殘基具有大體積的側鏈之情形中，因容易發生過早分裂，故本發明特別有用於包含此種胺基酸之胜肽化合物的製造。
在一態樣中，起始胜肽的C端的胺基酸殘基（第一個殘基的胺基酸殘基）能由下述式（A）所表示。
Figure 02_image001
式（A）中，L 1為單鍵或－CHM 1－、－CH 2CHM 1－、－CHM 1CH 2－、－（CH 2） nS（CH 2） m－、－（CH 2） nS（O）（CH 2） m－、或者－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m－，於此，n及m係各自獨立且為1或2。
L 1為－（CH 2） nS（CH 2） m－之情形，作為－（CH 2） nS（CH 2） m－，具體而言，可列舉例如，－CH 2SCH 2－、－CH 2CH 2SCH 2－、－CH 2SCH 2CH 2－、－CH 2CH 2SCH 2CH 2－等。
L 1為－（CH 2） nS（O）（CH 2） m－之情形，作為－（CH 2） nS（O）（CH 2） m－，具體而言，可列舉例如，－CH 2S（O）CH 2－、－CH 2CH 2S（O）CH 2－、－CH 2S（O）CH 2CH 2－、－CH 2CH 2S（O）CH 2CH 2－等。
L 1為－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m－之情形，作為－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m－，具體而言，可列舉例如，－CH 2S（O） 2CH 2－、－CH 2CH 2S（O） 2CH 2－、－CH 2S（O） 2CH 2CH 2－、－CH 2CH 2S（O） 2CH 2CH 2－等。
式（A）中，R 1為氫、C 1－C 6烷基、C 2－C 6烯基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 7－C 14芳烷基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基），其各自可被獨立選自由鹵素、側氧基、羥基、C 1－C 6烷基、4～7員雜環基、胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）、C 1－C 6烷基磺醯基、及C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基所組成之群組之1個或複數個基所置換，或R 1為包含1～4個胺基酸殘基之胜肽鏈。R 1為包含1～4個胺基酸殘基之胜肽鏈之情形，構成該胜肽鏈之1～4個胺基酸殘基可為天然胺基酸殘基，亦可為非天然胺基酸殘基，且可為相同亦可為不同。
L 1為單鍵之情形，R 1較佳為氫、C 1－C 6烷基、可被羥基置換之C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、或可被1個或者複數個鹵素或者C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基置換之C 7－C 14芳烷基。
L 1為單鍵之情形，作為R 1，更佳為氫、甲基、異丙基、可被羥基置換之C 1－C 6烷氧基C 1－C 2烷基、可被氟或t－丁氧基置換之苄基，具體而言，可列舉例如，氫、（2－羥基－2－甲基－丙基氧基）甲基、苄基、3－氟苄基、4－氟苄基。
L 1為－CHM 1－、－CH 2CHM 1－、或－CHM 1CH 2－之情形，R 1較佳為氫、C 1－C 6烷基、鹵C 1－C 6烷基、C 2－C 6烯基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基（該C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基可被羥基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）置換）、可被1個或複數個鹵素置換之C 7－C 14芳烷基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，該環狀胺基可被1個或複數個鹵素、1個或複數個側氧基、1個或複數個C 1－C 6烷基、或4～7員雜環基進一步置換）。
L 1為－CHM 1－、－CH 2CHM 1－、或－CHM 1CH 2－之情形，作為R 1，更佳為氫、C 1－C 6烷基、C 1－C 6氟烷基、C 2－C 3烯基、C 2－C 3炔基、可被單C 1－C 4烷基胺基羰基置換之C 1－C 6烷氧基C 1－C 2烷基、二甲基胺基羰基；1個或複數個氟、C 1－C 4烷基、或者可被4～7員雜環基置換之4～8員環狀胺基羰基；苄基、苯乙基。
L 1為－CHM 1－、－CH 2CHM 1－、或－CHM 1CH 2－之情形，作為R 1，具體而言，可列舉氫、甲基、異丁基、三氟甲基、烯丙基、丙－2－異－1－基、（異戊基氧基）甲基、｛2－（t－丁基胺基）－2－側氧基乙氧基｝甲基、二甲基胺基羰基、吖呾基羰基、吡咯啶基羰基、3,3－二甲基吡咯啶基羰基、3,3,4,4－四氟吡咯啶基羰基、4－甲基呱啶基羰基、4－（t－丁基）－呱啶基羰基、3,3,4,4,5,5－六氟呱啶基羰基、3,3－二氟呱啶基羰基、4,4－二氟呱啶基羰基、呱啶基羰基、N－𠰌啉基羰基、㗁唑烷－3－基羰基、3－氧雜－8－氮雜雙環[3.2.1]辛烷－8－基羰基、1,1－二氧化物硫代𠰌啉基羰基、1－（氧雜環丁烷－3－基）－哌𠯤－4－基羰基、苯乙基等。
L 1為－（CH 2） nS（CH 2） m－、－（CH 2） nS（O）（CH 2） m或、－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m之情形，R 1較佳為胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）。
式（A）中，R 1及P 1可與R 1所結合之碳原子及P 1所結合之氮原子一起形成4～7員飽和雜環。
R 1及P 1形成4～7員飽和雜環之情形，作為4～7員飽和雜環，較佳為吖丁啶環、吡咯啶環、哌啶環、哌𠯤環、𠰌啉環。
式（A）中，R 1及Q 1可與此等所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環。
R 1及Q 1為3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環之情形，作為3～8員脂環式環，較佳為環丙烷環、環丁烷環、環戊烷環、環己烷環，作為4～7員飽和雜環，較佳為四氫呋喃環、四氫哌喃環。
式（A）中，L 1為－CHM 1－、－CH 2CHM 1－、或－CHM 1CH 2－之情形，R 1及M 1可與R 1所結合之碳原子及M 1所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環。
R 1及M 1形成3～8員脂環式環之情形，作為3～8員脂環式環，較佳為環戊烷環、環己烷環。
式（A）中，L 1為－CHM 1－、－CH 2CHM 1－、或－CHM 1CH 2－之情形，排除R 1及M 1形成3～8員脂環式環之情形，M 1為氫。
式（A）中，排除R 1及P 1形成4～7員飽和雜環之情形，P 1為氫、或C 1－C 6烷基，該C 1－C 6烷基可被獨立選自由鹵素、羥基、C 1－C 6烷氧基、胺基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、及胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）所組成之群組之1個或複數個基所置換。
作為P 1，較佳為氫、C 1－C 6烷基。作為此種P 1，具體而言，可列舉例如，氫、甲基、乙基、n－丙基等。
排除R 1及Q 1形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環之情形，Q 1為氫或C 1－C 6烷基，較佳為氫或甲基。
較佳為R 1為－CONR 1AR 1B，於此，R 1A及R 1B係各自獨立且為氫或C 1－C 6烷基（較佳為甲基），或者R 1A及R 1B係與其等所結合之氮原子一起形成4～8員飽和雜環。該4～8員飽和雜環可被獨立選自由1個或複數個鹵素（較佳為氟）、1或複數個側氧基、1或複數個C 1－C 6烷基（較佳為C 1－C 4烷基）、及4～7員雜環基（較佳為氧雜環丁烷－3－基）所組成之群組之1個或複數個基所置換。
式（A）中，＊表示與固相合成用樹脂的結合部位，波浪線表示與相鄰之胺基酸殘基的結合部位。
L 1為單鍵之情形，作為由式（A）所表示之胺基酸殘基，具體而言，可列舉例如，MeSer（tBuOH）、MeGly、MePhe、MePhe（3－F）、MePhe（4－F）、D－MePhe、MeVal、Pro、Aib、Ala、Gly、Tyr（tBu）、Val。
L 1為－CHM 1－之情形，作為由式（A）所表示之胺基酸殘基，具體而言，可列舉例如，bAla、bMeAla、2－ACHxC、2－ACPnC、3－CF3－bAla、Asp－mor、Asp－mor（26－bicyc）、Asp－mor（SO2）、Asp－NMe2、Asp－oxz、Asp－pip、Asp－pip（345－F6）、Asp－pip（4－Me）、Asp－pip－tBu、Asp－piz（oxe）、Asp－pyrro、Asp－pyrro（34－F4）、Asp－pyrro（3－Me2）、D－（Propargyl）Gly－（C#CH2）、D－3－Abu、D－3－MeAbu、D－Gly（Allyl）－（C#CH2）、D－Hph－（C#CH2）、D－Leu－（C#CH2）、D－MeAsp－pyrro、D－MeLeu－（C#CH2）、D－Pic（2）－（C#CH2）、D－Pro－（C#CH2）、D－Ser（iPen）－（C#CH2）、D－Ser（NtBu－Aca）－（C#CH2）、EtAsp－pip、MeAsp－aze、MeAsp－mor、MeAsp－mor（26－bicyc）、MeAsp－mor（SO2）、MeAsp－NMe2、MeAsp－oxz、MeAsp－pip、MeAsp－pip（345－F6）、MeAsp－pip（3－F2）、MeAsp－pip（4－F2）、MeAsp－pip（4－Me）、MeAsp－piz（oxe）、MeAsp－pyrro、MeAsp－pyrro（34－F4）、MeAsp－pyrro（3－Me2）、nPrAsp－pip、D－MeAsp－NMe2。
L 1為－CH 2CHM 1－、或－CHM 1CH 2－之情形，作為由式（A）所表示之胺基酸殘基，具體而言，可列舉例如，Glu－mor、Glu－pip、MeGlu－pip、Glu－NMe2、或MeGlu－NMe2。
L 1為－（CH 2） nS（CH 2） m－、－（CH 2） nS（O）（CH 2） m或、－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m－之情形，作為由式（A）所表示之胺基酸殘基，具體而言，可列舉例如，MeCys（AcOH）－NMe2。
在一態樣中，起始胜肽之與其C端的胺基酸殘基相鄰之胺基酸殘基（第二個殘基的胺基酸殘基）能由下述式（B）所表示。
Figure 02_image003
式（B）中，L 2為單鍵或－CH 2－。
式（B）中，R 2為氫、C 1－C 6烷基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷基、C 3－C 8環烷基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷氧基C 1－C 6烷基、或C 7－C 14芳烷基，其各自可被獨立選自由鹵素、羥基、胺基（該胺基為－NH 2、保護胺基、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、胺基羰基（該胺基為－NH 2、保護胺基、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）、及C 1－C 6烷基磺醯基所組成之群組之1個或複數個基所置換。
L 2為單鍵之情形，作為R 2，較佳為氫、C 1－C 6烷基、鹵C 1－C 6烷基、羥基C 1－C 6烷基、胺基C 1－C 6烷基（該胺基為－NH 2、保護胺基、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自可被1個或複數個鹵素置換）、胺基羰基C 1－C 6烷基（該胺基為－NH 2、保護胺基、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自可被1個或複數個鹵素置換）、C 1－C 6烷基磺醯基C 1－C 6烷基、C 2－C 6炔基、可被1個或複數個鹵素置換之C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷基、C 3－C 8環烷基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷氧基C 1－C 6烷基、或C 7－C 14芳烷基。
L 2為單鍵之情形，作為R 2，更佳為C 1－C 6烷基、氟C 1－C 6烷基、羥基C 1－C 4烷基、保護胺基C 1－C 4烷基、保護胺基羰基C 1－C 4烷基、甲基磺醯基C 1－C 2烷基、C 2－C 3炔基、可被1個或複數個氟置換之C 1－C 4烷氧基C 1－C 2烷基、C 3－C 6環烷基、C 3－C 6環烷基C 1－C 2烷基、C 3－C 6環烷氧基C 1－C 2烷基、苄基、苯乙基。
L 2為單鍵之情形，作為R 2，更具體而言，可列舉甲基、乙基、n－丙基、i－丙基、2－甲基丙基、1－甲基丙基、n－丁基、2－甲基丁基、3－甲基丁基、n－戊基、炔丙基、3,3－二氟丁基、5,5－二氟戊基、甲氧基甲基、1－甲氧基乙基、2－甲氧基乙基、n－丙氧基甲基、1－羥乙基、環丙氧基甲基、環丁氧基甲基、（2,2,2－三氟乙氧基）甲基、2－甲基磺醯基乙基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環丙基甲基、環丁基甲基、環戊基甲基、環己基甲基、苄基、苯乙基、4－（t－丁氧羰基胺基）丁基、三苯甲基胺基羰基甲基、t－丁氧基甲基等。
L 2為－CH 2－之情形，作為R 2，較佳為C 1－C 6烷基，更佳為甲基。
式（B）中，R 2及P 2可與R 2所結合之碳原子及P 2所結合之氮原子一起形成4～7員飽和雜環。
R 2及P 2形成4～7員飽和雜環之情形，作為4～7員飽和雜環，較佳為吖丁啶環、吡咯啶環、哌啶環、哌𠯤環、𠰌啉環。
式（B）中，R 2及Q 2可與此等所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環。
R 2及Q 2形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環之情形，作為3～8員脂環式環，較佳為環丙烷環、環丁烷環、環戊烷環、環己烷環，作為4～7員飽和雜環，較佳為四氫呋喃環、四氫哌喃環。
式（B）中，排除R 2及P 2形成4～7員飽和雜環之情形，P 2為氫或C 1－C 6烷基，該C 1－C 6烷基可被獨立選自由鹵素、羥基、C 1－C 6烷氧基、胺基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、及胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）所組成之群組之1個或複數個基所置換。作為P 2，較佳為氫或C 1－C 2烷基，具體而言，可列舉例如氫、甲基。
排除R 2及Q 2形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環之情形，Q 2為氫或C 1－C 6烷基，較佳為氫或甲基。
＊表示與C端的胺基酸殘基的結合部位， 波浪線表示與相鄰之胺基酸殘基或胺基的保護基的結合部位。
作為由式（B）所表示之胺基酸殘基，具體而言，可列舉例如，MeAla、MeLeu、MeCha、MeVal、MeAla（cPent）、MeAla（cBu）、MeAla（cPr）、MeChg、MeGly（cPent）、MeGly（cBu）、MeGly（cPr）、MeAbu、MeNva、MeNle、Val、Leu、MeNva（5－F2）、MeHle、MeIle、MeSer（nPr）、MeSer（cPr）、MeHnl、MeHnl（7－F2）、MePRA、MeSer（Me）、MeThr、MeSer（cBu）、MeSer（Tfe）、MeThr（Me）、MeHse（Me）、MeMet（O2）、Ile、Nle、Chg、Ala（cBu）、Gly（cPent）、Hle、Nva、Phe、Hph、Gly、Aib、Lys（Boc）、Ala、D－MeVal、Asn（Trt）、Ser（tBu）、bAla（2－Me2）。
在一態樣中，在固相法中之最初的延長反應之前負載於固相合成用樹脂之胜肽能為由下述式（1）所表示之二胜肽。
Figure 02_image005
（式中， L 1為單鍵或－CHM 1－、－CH 2CHM 1－、－CHM 1CH 2－、－（CH 2） nS（CH 2） m－、－（CH 2） nS（O）（CH 2） m－、或者－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m－，於此，n及m係各自獨立且為1或2， R 1為氫、C 1－C 6烷基、C 2－C 6烯基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 7－C 14芳烷基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基），其各自可被獨立選自由鹵素、側氧基、羥基、C 1－C 6烷基、4～7員雜環基、胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）及C 1－C 6烷基磺醯基所組成之群組之1個或複數個基所置換，或R 1為包含1～4個胺基酸殘基之胜肽鏈，或者 R 1及P 1係與R 1所結合之碳原子及P 1所結合之氮原子一起形成4～7員飽和雜環，或者 R 1及Q 1係與此等所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環，或者 R 1及M 1係與R 1所結合之碳原子及M 1所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環， 排除R 1及P 1形成4～7員飽和雜環之情形，P 1為氫或C 1－C 6烷基，該C 1－C 6烷基可被獨立選自由鹵素、羥基、C 1－C 6烷氧基、胺基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、及胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）所組成之群組之1個或複數個基所置換， 排除R 1及Q 1形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環之情形，Q 1為氫或C 1－C 6烷基， 排除R 1及M 1形成3～8員脂環式環之情形，M 1為氫， L 2為單鍵或－CH 2－， R 2為氫、C 1－C 6烷基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷基、C 3－C 8環烷基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷氧基C 1－C 6烷基、或C 7－C 14芳烷基，其各自可被獨立選自由鹵素、羥基、胺基（該胺基為－NH 2、保護胺基、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、胺基羰基（該胺基為－NH 2、保護胺基、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）、及C 1－C 6烷基磺醯基所組成之群組之1個或複數個基所置換，或者 R 2及P 2係與R 2所結合之碳原子及P 2所結合之氮原子一起形成4～7員飽和雜環，或者 R 2及Q 2係與此等所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環，或者 排除R 2及P 2形成4～7員飽和雜環之情形，P 2為氫或C 1－C 6烷基，該C 1－C 6烷基可被獨立選自由鹵素、羥基、C 1－C 6烷氧基、胺基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，其各自亦可被鹵素置換）、及胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）所組成之群組之1個或複數個基所置換， 排除R 2及Q 2形成3～8員脂環式環或4～7員飽和雜環之情形，Q 2為氫或C 1－C 6烷基， ＊表示與固相合成用樹脂的結合部位， PG為胺基的保護基， 但是，P 1及P 2不皆為氫。）
作為由下述式（1）所表示之二胜肽，較佳為由下述式（2）所表示之二胜肽。
Figure 02_image007
（式中， R 1為氫、C 1－C 6烷基、鹵C 1－C 6烷基、C 2－C 6烯基、C 2－C 6炔基、C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基（該C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基可被羥基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基）置換）、可被1個或複數個鹵素置換之C 7－C 14芳烷基、或胺基羰基（該胺基為－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、或4～8員環狀胺基，該環狀胺基可被1個或複數個鹵素、1個或複數個側氧基、1個或複數個C 1－C 6烷基、或4～7員雜環基進一步置換），或者 R 1及M 1係與R 1所結合之碳原子及M 1所結合之碳原子一起形成3～8員脂環式環，或者 R 1及P 1係與P 1所結合之氮原子及R 1所結合之碳原子一起形成4～7員飽和雜環， 排除R 1及M 1形成3～8員脂環式環之情形，M 1為氫， 排除R 1及P 1形成4～7員飽和雜環之情形，P 1為氫或C 1－C 6烷基， R 2為C 1－C 6烷基、鹵C 1－C 6烷基、羥基C 1－C 6烷基、C 1－C 6烷基磺醯基C 1－C 6烷基、C 2－C 6炔基、可被1個或複數個鹵素置換之C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷基、C 3－C 8環烷基C 1－C 6烷基、C 3－C 8環烷氧基C 1－C 6烷基、或C 7－C 14芳烷基，或者 R 2及P 2係與P 2所結合之氮原子及R 2所結合之碳原子一起形成4～7員飽和雜環， 排除R 2及P 2形成4～7員飽和雜環之情形，P 2為氫或C 1－C 6烷基， Q 2為氫， ＊表示與固相合成用樹脂的結合部位， PG為胺基的保護基， 但是，P 1及P 2不皆為氫。）
在一態樣中，式（1）或式（2）中的L 1、P 1、Q 1、及R 1可分別與前述式（A）的L 1、P 1、Q 1、及R 1為相同的基，L 2、P 2、Q 2、及R 2可分別與前述式（B）的L 2、P 2、Q 2、及R 2為相同的基。但是，在式（1）或式（2）中，較佳為P 1及P 2皆不為氫。
式（1）或式（2）中的PG為胺基的保護基。
在一態樣中，起始胜肽為二胜肽之情形，作為該二胜肽的非限定的具體例，可列舉例如，Fmoc－MeVal－MeAsp－pip、Fmoc－MeIle－MeAsp－pip、Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp－pip、Fmoc－MeChg－MeAsp－pip、Fmoc－MeLeu－MeAsp－pip、Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2、Fmoc－MeLeu－MeAsp－NMe2、Fmoc－MeVal－D－3－MeAbu－OH、Fmoc－MeChg－D－3－MeAbu－OH、Fmoc－MeVal－MeGly－OH、Fmoc－MeVal－Asp－NMe2、Fmoc－Gly－MeAsp－NMe2、Fmoc－Aib－MeAsp－NMe2、Fmoc－D－MeVal－MeAsp－NMe2、Fmoc－MeVal－D－MeAsp－NMe2、Fmoc－bAla（2－Me2）－MeAsp－NMe2、Fmoc－bAla（2－Me2）－D－3－MeAbu－OH、Fmoc－MeLeu－MeVal－OH、Fmoc－MeVal－Pro－OH、Fmoc－Phe－Pro－OH、Fmoc－Lys（Boc）－Pro－OH、Fmoc－MeLeu－Aib－OH、Fmoc－MeVal－Gly－OH、Fmoc－Ala－Ala－OH、Fmoc－Gly－Tyr（tBu）－OH、Fmoc－Phe－Gly－OH、Fmoc－Asn（Trt）－Gly－OH、Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp－mor、Fmoc－Gly－Val－OH、Fmoc－Ser（tBu）－Gly－OH等。
在一態樣中，起始胜肽為三胜肽之情形，作為該三胜肽的非限定的具體例，可列舉例如，Ala－Ala－Pro、Gly－Gly－Gly、Ala－Gly－Asp或其N－置換體或者衍生物等。構成三胜肽之各胺基酸殘基可被N－置換，亦可被衍生物化。如此，藉由使用負載三胜肽之固相合成用樹脂，可抑制過早分裂。在將同種的胺基酸連續之序列進行延長之情形，可利用胜肽進行1次延長以取代進行多次的胺基酸延長反應，而可縮短反應步驟。
本發明之藉由由固相法所進行之前述方法所製造之「胜肽化合物」為直鏈狀的胜肽化合物，除了上述的天然胺基酸殘基及非天然胺基酸殘基的總數的條件之外，更包含至少1個較佳為至少2個（具體而言2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30個、較佳為5、6或7個，較佳的範圍為2～30個、3～30個、6～20個、7～19個、7～18個、7～17個、7～16個、7～15個、8～14個、9～13個）N－置換胺基酸殘基，並包含至少1個未被N－置換之胺基酸殘基。作為此胜肽化合物所含之N－置換胺基酸殘基數的比例，例示構成胜肽化合物之總胺基酸殘基數的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。本發明中之N－置換胺基酸殘基可為脯胺酸以外的非天然N－置換胺基酸殘基。本發明的胜肽化合物可包含重複序列，例如，2胺基酸殘基、3胺基酸殘基、4胺基酸殘基、或5胺基酸殘基的重複序列，但其重複次數較佳為2次以下或3次以下。又，本發明的胜肽化合物較佳為不包含該種重複序列。
在一態樣中，本發明所使用之「固相合成用樹脂」只要為可使用於由固相法所進行之胜肽化合物的合成者，則未被特別限定。作為此種固相合成用樹脂，具體而言，可列舉例如，CTC樹脂、Sieber樹脂、Wang樹脂、SASRIN樹脂、三苯甲基氯化樹脂（Trt樹脂）、4－甲基三苯甲基氯化樹脂（Mtt樹脂）、4－甲氧基三苯甲基氯化樹脂（Mmt）等在酸性條件下能去除者。樹脂可配合所使用之胺基酸側的官能基而適當選擇。例如，在使用羧酸（主鏈羧酸、或者、以Asp、Glu等為代表之側鏈羧酸）、或、芳香環上的羥基（以Tyr為代表之酚基）作為胺基酸側的官能基之情形中，作為樹脂，較佳為使用三苯甲基氯化樹脂（Trt樹脂）或者2－氯三苯甲基氯化樹脂（CTC樹脂）。在使用脂肪族羥基（以Ser、Thr等為代表之脂肪族醇基）作為胺基酸側的官能基之情形中，作為樹脂，較佳為使用三苯甲基氯化樹脂（Trt樹脂）、2－氯三苯甲基氯化樹脂（CTC樹脂）或者4－甲基三苯甲基氯化樹脂（Mtt樹脂）。此外，在本說明書中，亦有將樹脂記載為resin之情形。固相合成用樹脂能與未受限於胜肽中的C端的胺基酸之任意位置的胺基酸連結。較佳為C端的胺基酸的羧基與固相合成用樹脂連結，其羧基可為主鏈的羧基亦可為側鏈的羧基。使用在連接子部位具有三苯甲基骨架之樹脂，具體而言，使用CTC樹脂、Trt樹脂、Mtt樹脂、Mmt樹脂作為固相合成用樹脂之情形中，因容易發生過早分裂，故本發明的方法特別有益。
針對構成樹脂之聚合物的種類，未被特別限定。在由聚苯乙烯所構成之樹脂之情形中，可使用100－200mesh或者200－400mesh之任一者。又，針對交聯率，亦未被特別限定，但較佳為1%DVB（二乙烯基苯）交聯者。又，作為構成樹脂之聚合物的種類，可列舉Tentagel或Chemmatrix。
在一態樣中，本發明能包含使胜肽負載於固相合成用樹脂之步驟。此步驟的反應條件中，可使用本技術領域所習知的任意反應條件，未被特別限定，但較佳為應用例如WO2013／100132或者WO2018／225864所記載之反應條件、默克股份有限公司在平成14年5月1日所發行之固相合成手冊所記載之反應條件等。
作為使胜肽負載於固相合成用樹脂之步驟，具體而言例示以下內容，但不受限於此。 利用適當的溶媒使樹脂膨潤，使胺基被保護基保護之胜肽（保護胜肽）溶液在鹼存在下與固相合成用樹脂作用，藉此可使該樹脂負載保護胜肽。作為用於膨潤之溶媒及用於胜肽溶液的製備之溶媒，可列舉DCM（二氯甲烷）、氯仿、DCE（1,2－二氯乙烷）等鹵素系溶媒、THF（四氫呋喃）、2－甲基四氫呋喃、4－甲基四氫哌喃、二㗁烷、DME（1,2－二甲氧乙烷）、TBME（t－丁基甲醚）、CPME（環戊基甲醚）、異山梨醇二甲醚等醚系溶媒、丙酮、MEK（甲基乙基酮）、4－甲基－2－戊酮、環戊酮等酮系溶媒、TMU（N,N,N′,N′－四甲基脲）、DMI（1,3－二甲基－2－咪唑啉酮）、DMPU（N,N’－二甲基丙烯脲）等脲系溶媒、DMF（N,N－二甲基甲醯胺）、DMA（N,N－二甲基乙醯胺）、NFM（N－甲醯基𠰌啉）、NMP（N－甲基－2－吡咯啶酮）、NBP（N－丁基－2－吡咯啶酮）等醯胺系溶媒、DMSO（二甲亞碸）等亞碸系溶媒、環丁碸等碸系溶媒、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、GVL（γ－戊內酯）等酯系溶媒、甲基苯基醚、甲苯、α,α,α－三氟甲苯、1,2－二氯苯、苯等芳香族系溶媒、碳酸二甲酯、碳酸二乙酯、碳酸乙烯、碳酸丙烯等碳酸酯系溶媒等，除此等之外，亦可使用乙腈、甲醇、乙二醇、水、矽碳烯（silene）、檸烯（limonene）等溶媒。又，此等溶媒亦可使用以任意比例混合多種溶媒者。在胺基的保護基中，可使用Fmoc基、Boc基、Alloc基、Cbz基、Teoc基等胺甲酸酯型的保護基、三氟乙醯基等醯胺型的保護基、苯磺醯基、對甲苯磺醯基、2－硝基苯磺醯基、二硝基2－硝基苯磺醯基等芳基碸醯胺型的保護基、t－Bu基、三苯甲基、
Figure 02_image023
基等烷基胺型的保護基、亞苄基、4－甲氧基亞苄基、二苯基亞甲基等醯亞胺型的保護基等。在鹼中，可使用三乙胺、DIPEA（N,N－二異丙基乙基胺）、NMM（N－甲基𠰌啉）、DABCO（1,4－二吖雙環[2.2.2]－辛烷）等三級胺鹼、吡啶、二甲吡啶（lutidine）、柯林鹼、DMAP（4－二甲基胺基吡啶）等吡啶系鹼等。
在一態樣中，本發明進一步包含使負載於固相合成用樹脂之胜肽延長1個或複數個胺基酸之步驟。藉由此步驟，可獲得具備所期望的胺基酸序列之胜肽化合物。在此步驟中，可使用本技術領域所習知的方法，可應用例如WO2013／100132、WO2018／225851、WO2018／225864所記載之方法、默克股份有限公司在平成14年5月1日所發行之固相合成手冊所記載之方法等。
作為使負載於固相合成用樹脂之胜肽延長1個或複數個胺基酸殘基之步驟，具體而言，例示以下內容，但不受限此。 進行將負載於固相合成用樹脂之胜肽的N端的保護基進行脫保護之步驟、使胺基被保護基保護之胺基酸殘基（保護胺基酸殘基）與縮合試劑在鹼的存在下或非存在下於溶媒中與前述胜肽作用之步驟，重複此2步驟，藉此可使複數個胺基酸殘基延長。在N端的保護基中，可使用Fmoc基、Boc基、Alloc基、Cbz基、Teoc基等胺甲酸酯型的保護基、三氟乙醯基等醯胺型的保護基、苯磺醯基、對甲苯磺醯基、2－硝基苯磺醯基、二硝基2－硝基苯磺醯基等芳基碸醯胺型的保護基、t－Bu基、三苯甲基、
Figure 02_image023
基等烷基胺型的保護基、亞苄基、4－甲氧基亞苄基、二苯基亞甲基等醯亞胺型的保護基等，較佳為使用Fmoc基。使用Fmoc基作為保護基之情形，在其脫保護中，可使用哌啶或DBU（1,8－二吖雙環[5.4.0]－7－十一烯）、DBN（1,5－二吖雙環[4.3.0]－5－壬烯）等。在縮合試劑中，可使用DCC（N,N’－二環己基碳化二亞胺）、DIC（N,N’－二異丙基碳化二亞胺）、EDCI（1－乙基－3－（3－二甲基胺基丙基）碳化二亞胺鹽酸鹽）等碳化二亞胺系縮合劑與HOAt（1－羥基－7－氮雜苯并三唑）、HOBt（1－羥基苯并三唑）、HOOBt（3,4－二氫－3－羥基－4－側氧基－1,2,3－苯并三𠯤）、oxyma（氰基（羥基亞胺基）乙酸乙酯）等活化劑之組合；HATU（O－（7－氮雜－1H－苯并三唑－1－基）－N,N,N′,N′－四甲基脲六氟磷酸鹽）、HBTU（O－（1H－苯并三唑－1－基）－N,N,N′,N′－四甲基脲六氟磷酸鹽）、HCTU（O－（6－氯－1H－苯并三唑－1－基）－N,N,N′,N′－四甲基脲六氟磷酸鹽）、COMU（（1－氰基－2－乙氧基－2－側氧基亞乙基胺基氧基）二甲基胺基N－𠰌啉基碳鎓　六氟磷酸鹽）等脲鹽系縮合劑；PyAOP（（7－氮雜苯并三唑－1－基氧基）參吡咯烷鏻六氟磷酸鹽）、PyBOP（1H－苯并三唑－1－基氧基－三（吡咯烷）鏻六氟磷酸鹽）、PyOxim（[乙基氰基（羥基亞胺基）乙酸鹽－O 2]三－1－吡咯啶基鏻六氟磷酸鹽）等鏻鹽系縮合劑；1－氯－N,N－2－三甲基－1－丙烯基胺（Ghosez試劑）、TCFH（氯－N,N,N’,N’－四甲基甲脒六氟磷酸鹽）、PyCIU（N,N,N’,N’－雙（四亞甲基）氯仿脒六氟磷酸鹽）、BTFFH（氟－N,N,N’,N’－雙（四亞甲基）甲脒六氟磷酸鹽）、TFFH（氟－N,N,N’,N’－四甲基脒六氟磷酸鹽）等甲脒鹽系縮合劑等。在鹼中，可使用三乙胺、DIPEA（N,N－二異丙基乙基胺）、NMM（N－甲基𠰌啉）、DABCO（1,4－二吖雙環[2.2.2]－辛烷）等三級胺鹼、吡啶、二甲吡啶、柯林鹼、DMAP（4－二甲基胺基吡啶）等吡啶系鹼等。作為溶媒，可列舉DCM（二氯甲烷）、氯仿、DCE（1,2－二氯乙烷）等鹵素系溶媒、THF（四氫呋喃）、4－甲基四氫呋喃、4－甲基四氫哌喃、二㗁烷、DME（1,2－二甲氧乙烷）、TBME（t－丁基甲醚）、CPME（環戊基甲醚）、異山梨醇二甲醚等醚系溶媒、丙酮、MEK（甲基乙基酮）、4－甲基－2－戊酮、環戊酮等酮系溶媒、TMU（N,N,N′,N′－四甲基脲）、DMI（1,3－二甲基－2－咪唑啉酮）、DMPU（N,N’－二甲基丙烯脲）等脲系溶媒、DMF（N,N－二甲基甲醯胺）、DMA（N,N－二甲基乙醯胺）、NFM（N－甲醯基𠰌啉）、NMP（N－甲基－2－吡咯啶酮）、NBP（N－丁基－2－吡咯啶酮）等醯胺系溶媒、DMSO（二甲亞碸）等亞碸系溶媒、環丁碸等碸系溶媒、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、GVL（γ－戊內酯）等酯系溶媒、甲基苯基醚、甲苯、α,α,α－三氟甲苯、1,2－二氯苯、苯等芳香族系溶媒、碳酸二甲酯、碳酸二乙酯、碳酸乙烯、碳酸丙烯等碳酸酯系溶媒等，除此等之外，亦可使用乙腈、甲醇、乙二醇、水、矽碳烯、檸烯等溶媒。又，此等溶媒亦可使用以任意比例混合多種溶媒者。
在一態樣中，本發明係關於一種環狀胜肽化合物的製備方法，其進一步包含：獲得藉由本發明的上述方法所製造之直鏈狀的胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物之步驟；去除固相合成用樹脂之步驟；及將C端側的基與N端側的基進行環化而形成環狀部之步驟。
在從固相合成用樹脂去除胜肽化合物之步驟、及將胜肽化合物的C端側的基與N端側的基進行環化而形成環狀部之步驟中，皆可使用本技術領域所習知的方法，可應用例如WO2013／100132、WO2018／225851、WO2018／225864所記載之方法、默克股份有限公司在平成14年5月1日所發行之固相合成手冊所記載之方法等。
作為從固相合成用樹脂去除胜肽化合物之步驟，具體而言，例示以下內容，但不受限於此。 在進行胜肽鏈的延長直至成為所期望的胺基酸序列後，利用適當的溶媒使固相合成用樹脂膨潤，接著使酸性溶液作用，藉此可從該樹脂去除胜肽化合物。作為使用於膨潤之溶媒，可列舉DCM（二氯甲烷）、氯仿、DCE（1,2－二氯乙烷）等鹵素系溶媒、THF（四氫呋喃）、4－甲基四氫呋喃、4－甲基四氫哌喃、二㗁烷、DME（1,2－二甲氧乙烷）、TBME（t－丁基甲醚）、CPME（環戊基甲醚）、異山梨醇二甲醚等醚系溶媒、丙酮、MEK（甲基乙基酮）、4－甲基－2－戊酮、環戊酮等酮系溶媒、TMU（N,N,N′,N′－四甲基脲）、DMI（1,3－二甲基－2－咪唑啉酮）、DMPU（N,N’－二甲基丙烯脲）等脲系溶媒、DMF（N,N－二甲基甲醯胺）、DMA（N,N－二甲基乙醯胺）、NFM（N－甲醯基𠰌啉）、NMP（N－甲基－2－吡咯啶酮）、NBP（N－丁基－2－吡咯啶酮）等醯胺系溶媒、DMSO（二甲亞碸）等亞碸系溶媒、環丁碸等碸系溶媒、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、GVL（γ－戊內酯）等酯系溶媒、甲基苯基醚、甲苯、α,α,α－三氟甲苯、1,2－二氯苯、苯等芳香族系溶媒、碳酸二甲酯、碳酸二乙酯、碳酸乙烯、碳酸丙烯等碳酸酯系溶媒等，除此等之外，亦可使用乙腈、甲醇、乙二醇、水、矽碳烯、檸烯等溶媒。又，此等溶媒亦可使用以任意比例混合多種溶媒者。在酸性溶液中，可使用TFE（2,2,2－三氟乙醇）、HFIP（1,1,1,3,3,3－六氟異丙醇）等氟醇、TFA（三氟乙酸）等羧酸、鹽酸等。
在一態樣中，本發明所使用之「固相合成用樹脂」較佳為可將藉由固相法所合成之具有目標胺基酸序列之胜肽化合物，例如，在如不會去除構成該胜肽化合物之胺基酸的側鏈的保護基般的溫和的酸性條件下進行切出者。作為胺基酸的側鏈的保護基，具體而言，可列舉例如，Boc、Trt、THP、tBu等。作為在側鏈具有保護基之胺基酸，可列舉例如，Tyr（tBu）、Ser（tBu）、Thr（tBu）、Asp（tBu）、Glu（tBu）、Trp（Boc）、Lys（Boc）、His（Boc）、Ser（Trt）、Thr（Trt）、Trp（Trt）、Lys（Trt）、His（Trt）、Asn（Trt）、Gln（Trt）、Ser（THP）、或者Thr（THP）、此等的N－烷基體例如N甲基體等。
在一態樣中，本發明所使用之「固相合成用樹脂」，較佳為可在溫和的酸性條件下切出所負載之胜肽化合物者。例如，較佳為在連接子部位具有三苯甲基骨架之樹脂，具體而言為CTC樹脂、Trt樹脂、Mtt樹脂或Mmt樹脂、在連接子部位具有二苯基甲基骨架之樹脂等，具體而言為Sieber樹脂。作為此種固相合成用樹脂，再佳列舉為CTC樹脂或Sieber樹脂，最佳列舉為CTC樹脂。
在一態樣中，在溫和的酸性條件中，能包含溫度條件。本發明所使用之「固相合成用樹脂」，較佳為可在室溫附近的溫度例如室溫±10℃的溫度下的溫和的酸性條件之下去除者。
在一態樣中，溫和的酸性條件為pH2以上的酸性條件。又，在一態樣中，在溫和的酸性條件中，能包含使用酸的稀溶液之條件。本說明書中，酸的稀溶液意指以非酸性溶媒稀釋酸而成者，能藉由將酸與非酸性溶媒進行混合而製備。作為該稀溶液所使用之酸，可列舉在水中的pKa為－1以上、1以上、2以上、3以上、4以上、5以上、6以上、7以上、8以上、9以上、10以上、11以上、或12以上的酸，具體而言，可列舉例如，TFA、2,2,2－三氟乙醇、1,1,1,3,3,3－六氟異丙醇、三氯乙酸、乙酸、甲酸、或者草酸、或此等的混合物等。作為此種酸，較佳列舉為TFA、2,2,2－三氟乙醇、1,1,1,3,3,3－六氟異丙醇、乙酸、或此等的混合物，更佳列舉為TFA。稀溶液中的酸的容量%可為60%以下、50%以下、40%以下、30%以下、20%以下、10%以下、5%以下、4%以下、3%以下、2%以下、或1%以下，較佳為20%以下、10%以下、5%以下、4%以下、3%以下、2%以下、或1%以下，更佳為10%以下、5%以下、4%以下、3%以下、2%以下、或1%以下。作為酸的稀溶液所使用之非酸性溶媒，較佳為DCM、二氯乙烷、水、或者2－MeTHF、或此等的混合溶媒，更佳為DCM。作為此種酸的稀溶液，具體而言，可列舉例如，包含20%以下的容量%的TFA之DCM溶液、包含10%以下的容量%的TFA之DCM溶液、包含5%以下的容量%的TFA之DCM溶液、包含1%以下的容量%的TFA之DCM溶液、包含20%以下的乙酸與20%以下的2,2,2－三氟乙醇之DCM溶液、包含20%以下的1,1,1,3,3,3－六氟異丙醇之DCM溶液等。
作為將胜肽化合物的C端側的基與N端側的基進行環化而形成環狀部之步驟，具體而言，例示以下內容，但不受限於此。 使已溶解於適當溶媒之直鏈狀的胜肽化合物與縮合試劑在鹼的存在下或非存在下作用，藉此可在胜肽化合物的C端側的基與N端側的基進行環化而形成環狀部。作為溶媒，可列舉DCM（二氯甲烷）、氯仿、DCE（1,2－二氯乙烷）等鹵素系溶媒、THF（四氫呋喃）、4－甲基四氫呋喃、4－甲基四氫哌喃、二㗁烷、DME（1,2－二甲氧乙烷）、TBME（t－丁基甲醚）、CPME（環戊基甲醚）、異山梨醇二甲醚等醚系溶媒、丙酮、MEK（甲基乙基酮）、4－甲基－2－戊酮、環戊酮等酮系溶媒、TMU（N,N,N′,N′－四甲基脲）、DMI（1,3－二甲基－2－咪唑啉酮）、DMPU（N,N’－二甲基丙烯脲）等脲系溶媒、DMF（N,N－二甲基甲醯胺）、DMA（N,N－二甲基乙醯胺）、NFM（N－甲醯基𠰌啉）、NMP（N－甲基－2－吡咯啶酮）、NBP（N－丁基－2－吡咯啶酮）等醯胺系溶媒、DMSO（二甲亞碸）等亞碸系溶媒、環丁碸等碸系溶媒、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、GVL（γ－戊內酯）等酯系溶媒、甲基苯基醚、甲苯、α,α,α－三氟甲苯、1,2－二氯苯、苯等芳香族系溶媒、碳酸二甲酯、碳酸二乙酯、碳酸乙烯、碳酸丙烯等碳酸酯系溶媒等，除此等之外，亦可使用乙腈、矽碳烯、檸烯等溶媒。又，此等溶媒亦可使用以任意比例混合多種溶媒者。在縮合試劑中，可使用DCC（N,N’－二環己基碳化二亞胺）、DIC（N,N’－二異丙基碳化二亞胺）、EDCI（1－乙基－3－（3－二甲基胺基丙基）碳化二亞胺鹽酸鹽）等碳化二亞胺系縮合劑與HOAt（1－羥基－7－氮雜苯并三唑）、HOBt（1－羥基苯并三唑）、HOOBt（3,4－二氫－3－羥基－4－側氧基－1,2,3－苯并三𠯤）、oxyma（氰基（羥基亞胺基）乙酸乙酯）等活化劑之組合；HATU（O－（7－氮雜－1H－苯并三唑－1－基）－N,N,N′,N′－四甲基脲六氟磷酸鹽）、HBTU（O－（1H－苯并三唑－1－基）－N,N,N′,N′－四甲基脲六氟磷酸鹽）、HCTU（O－（6－氯－1H－苯并三唑－1－基）－N,N,N′,N′－四甲基脲六氟磷酸鹽）、COMU（（1－氰基－2－乙氧基－2－側氧基亞乙基胺基氧基）二甲基胺基N－𠰌啉基碳鎓六氟磷酸鹽）等脲鹽系縮合劑；PyAOP（（7－氮雜苯并三唑－1－基氧基）參吡咯烷鏻六氟磷酸鹽）、PyBOP（1H－苯并三唑－1－基氧基－三（吡咯烷）鏻六氟磷酸鹽）、PyOxim（[乙基氰基（羥基亞胺基）乙酸鹽－O 2]三－1－吡咯啶基鏻六氟磷酸鹽）等鏻鹽系縮合劑；1－氯－N,N－2－三甲基－1－丙烯基胺（Ghosez試劑）、TCFH（氯－N,N,N’,N’－四甲基甲脒六氟磷酸鹽）、PyCIU（N,N,N’,N’－雙（四亞甲基）氯仿脒六氟磷酸鹽）、BTFFH（氟－N,N,N’,N’－雙（四亞甲基）甲脒六氟磷酸鹽）、TFFH（氟－N,N,N’,N’－四甲基脒六氟磷酸鹽）等甲脒鹽系縮合劑等。在鹼中，可使用三乙胺、DIPEA（N,N－二異丙基乙基胺）、NMM（N－甲基𠰌啉）、DABCO（1,4－二吖雙環[2.2.2]－辛烷）等三級胺鹼、吡啶、二甲吡啶、柯林鹼、DMAP（4－二甲基胺基吡啶）等吡啶系鹼等。
在一態樣中，環狀胜肽化合物的胜肽部位所含之N－置換胺基酸的數量較佳為2以上或3以上，更佳為4以上、5以上、或6以上，再佳為7以上，特佳為8以上，又，較佳例示20以下、15以下、14以下、13以下、12以下、10以下、9以下。作為本說明書中之環狀胜肽化合物所含之N－置換胺基酸的數量，例示構成環狀部之胺基酸的數量的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。
在一態樣中，本發明係關於一種方法，其相較於將胺基酸一個殘基一個殘基地延長之情形，使胜肽化合物的回收率提升，且特徵在於，在由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的製造中，在最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。亦即，本發明係關於在出發物質使用胜肽（較佳為二胜肽或三胜肽），進行由固相法所進行之胜肽鏈的延長，獲得伴隨目標胺基酸序列之胜肽化合物者，其結果，相較於在出發物質使用胺基酸並藉由固相法製造伴隨相同胺基酸序列之胜肽化合物之情形，可使目標胜肽化合物的回收率提升例如5%以上、10%以上、20%以上、30%以上、40%以上、50%以上。
在一態樣中，本發明係關於一種方法，其相較於將胺基酸一個殘基一個殘基地延長之情形，抑制不純物的生成，且特徵在於，在由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的製造中，在最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。亦即，本發明係關於在出發物質使用胜肽（較佳為二胜肽或三胜肽），進行由固相法所進行之胜肽鏈的延長，獲得伴隨目標胺基酸序列之胜肽化合物者，其結果，相較於在出發物質使用胺基酸並藉由固相法製造伴隨相同胺基酸序列之胜肽化合物之情形，可將不純物（例如，差向異構物、過剩延長體、胺基酸缺失體）的生成抑制例如0.5%以上、1%以上、5%以上、10%以上、20%以上、30%以上、40%以上。
在一態樣中，本發明係關於一種方法，其相較於將胺基酸一個殘基一個殘基地延長之情形，抑制過早分裂，且特徵在於，在由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物之製造中，在最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。亦即，本發明係關於在出發物質使用胜肽（較佳為二胜肽或三胜肽），進行由固相法所進行之胜肽鏈的延長，獲得伴隨目標胺基酸序列之胜肽化合物者，其結果，相較於在出發物質使用胺基酸並藉由固相法製造伴隨相同胺基酸序列之胜肽化合物之情形，可將過早分裂大幅地抑制例如5%以上、10%以上、20%以上、30%以上、40%以上、50%以上。
在本發明的化合物、其鹽、或此等的溶劑合物中，包含全部的立體異構物（例如，鏡像異構物、非鏡像異構物（包含順式及反式幾何異構物））、前述異構物的外消旋體、及其他混合物。例如，本發明的化合物可具有1個以上的不對稱點，本發明中，包含該種化合物的外消旋混合物、非鏡像異構物混合物、及鏡像異構物。
本發明之化合物能為游離體之情形，該化合物可在該化合物可形成之鹽或其等的水合物或者溶劑合物之狀態下，遵循常法而進行變換。
又，本發明之化合物能為該化合物的鹽、水合物、或溶劑合物之情形，該化合物可遵循常法而變換成其游離體。
此外，本說明書中所引用之全部習知技術文獻係作為參照而併入本說明書。 [實施例]
利用以下的實施例進一步說明本發明的內容，但本發明不受限於其內容。全部的出發物質及試劑係從商業的供給業者取得，或者使用習知的方法而合成。
LCMS的分析條件記載於下表 [表1]
分析條件 裝置 管柱 (I.D. x 長度)(mm) 移動相 梯度(A/B) 流速 (mL/分鐘) 管柱 溫度(℃) 波長
SQDFA05 Acquity UPLC/SQD2 Ascentis Express C18 (2.1x50) A) 0.1% FA, 水 B) 0.1% FA, 乙腈 95/5 (起始) 0/100(1.0分鐘) =＞ 0/100(0.4分鐘) 1.0 35 210-400nm PDA 總量
SQDFA05_55deg Acquity UPLC/SQD2 Ascentis Express C18 (2.1x50) A) 0.1% FA, 水 B) 0.1% FA, 乙腈 95/5 (起始) 0/100(1.0分鐘) =＞ 0/100(0.4分鐘) 1.0 35 210-400nm PDA 總量
SQDFA05long Acquity UPLC/SQD2 Ascentis Express C18 (2.1x50) A) 0.1% FA, 水 B) 0.1% FA, 乙腈 95/5 (起始) 0/100(4.5分鐘) =＞ 0/100(0.5分鐘) 1.0 35 210-400nm PDA 總量
SQDAA50 Acquity UPLC/SQD2 Ascentis Express C18 (2.1x50) A) 10mM AA, 水 B) 甲醇 50/50 (起始) 0/100(0.7分鐘) =＞ 0/100(0.7分鐘) 1.0 35 210-400nm PDA 總量
SQDAA50long Acquity UPLC/SQD2 Ascentis Express C18 (2.1x50) A) 10mM AA, 水 B) 甲醇 50/50 (起始) 0/100(4.5分鐘) =＞ 0/100(0.5分鐘) 1.0 35 210-400nm PDA 總量
SMDmethod_1 Shimadzu /2020 Ascentis Express C18 (2.1x50) A) 0.1% FA, 水 B) 0.1% FA, 乙腈 95/5 (起始) 5/95(2.5分鐘) 5/95(1.2分鐘) =＞ 95/5(0.1分鐘) 1.0 40 190-400nm PDA 總量
SMDmethod_2 Shimadzu /2020 Ascentis Express C18 (2.1x50) A) 0.1% FA, 水 B) 0.1% FA, 乙腈 95/5 (起始) 5/95(2.0分鐘) 5/95(0.7分鐘) =＞ 95/5(0.1分鐘) 1.0 40 190-400nm PDA 總量
SMDmethod_3 Shimadzu /2020 Ascentis Express C18 (3.0x50) A) 0.05% TFA, 水 B) 0.05% TFA, 乙腈 70/30 (起始) 30/70(3.2分鐘) 5/95(0.5分鐘) 5/95(1.0分鐘) =＞ 95/5(0.1分鐘) 1.0 40 190-400nm PDA 總量
SMDmethod_4 Shimadzu /2020 HALO C18 (3.0x30) A) 0.05% TFA, 水 B) 0.05% TFA, 乙腈 95/5 (起始) 0/100(0.7分鐘) 0/100(0.4分鐘) =＞ 95/5(0.02分鐘) 1.5 40 190-400nm PDA 總量
SMDmethod_5 Shimadzu /2020 HALO C18 (3.0x30) A) 0.05% TFA, 水 B) 0.05% TFA, 乙腈 95/5 (起始) 0/100(1.1分鐘) 0/100(0.6分鐘) =＞ 95/5(0.05分鐘) 1.5 40 190-400nm PDA 總量
SMDmethod_6 Shimadzu /2020 HALO C18 (3.0x30) A) 0.05% TFA, 水 B) 0.05% TFA, 乙腈 95/5 (起始) 0/100(1.1分鐘) 0/100(0.6分鐘) =＞ 95/5(0.05分鐘) 1.3 40 190-400nm PDA 總量
SMDmethod_7 Shimadzu /2020 Shim-pack XR-ODS (3.0x50) A) 0.05% TFA, 水 B) 0.05% TFA, 乙腈 60/40 (起始) 5/95(3.0分鐘) 5/95(0.7分鐘) =＞ 95/5(0.05分鐘) 1.2 40 190-400nm PDA 總量
實施例1 由胜肽合成機所進行之胜肽合成所使用的胺基酸等化合物的合成 本說明書內所記載之胜肽合成中，使用表2、表3、表4、及表5所記載之胺基酸或者胜肽、及已負載其等之樹脂。
實施例1－1. 直接使用購入品之Fmoc－胺基酸、及胜肽 表2記載的Fmoc－胺基酸、及胜肽係從商業的供給業者購入。
[表2]
Figure 02_image028
Figure 02_image030
Figure 02_image032
Figure 02_image034
實施例1－2. Fmoc－二胜肽的合成 表3記載的Fmoc－胜肽係如同以下所示之流程圖而合成。
[表3]
Figure 02_image036
化合物aa2－001、Fmoc－MeVal－MeAsp－pip的合成
Figure 02_image038
化合物aa2－001－a、（3S）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeVal－MeAsp（OAl）－pip）的合成
Figure 02_image040
起始原料的Fmoc－MeAsp（OAl）－pip係遵循WO2018/225864所記載之方法而合成。 在氮氣流下，在反應容器中添加Fmoc－MeVal－OH（4.25 g, 12.0 mmol）、EDCI（3.23 g, 16.8 mmol）、oxyma（2.05 g, 14.4 mmol）及DMF（40 mL）。將反應液攪拌30分鐘，獲得Fmoc－MeVal－OH的活性酯溶液。 在氮氣流下，在反應容器中添加Fmoc－MeAsp（OAl）－pip（5.00 g, 10.5 mmol）與DMF（40 mL），接著在室溫下添加DBU（1.60 g, 10.5 mmol）。在將反應液攪拌5分鐘後，在氮氣流下、室溫下，添加吡啶鹽酸鹽（1.33 g, 11.5 mmol）。在將反應液攪拌10分鐘後，在氮氣流下、室溫下，添加上述所製備之Fmoc－MeVal－OH的活性酯溶液與DIPEA（1.49 g, 11.5 mmol），將反應液攪拌5小時。將反應液進行減壓濃縮，將所得之殘渣利用逆相矽膠管柱層析法（水／乙腈=95/5→20/80）進行精製，獲得為桃色固體之3.03g（產率48%）的化合物aa2－001－a。 LCMS（ESI） m/z=590.6 （M+H） +保持時間：1.06分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－001、（3S）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸（Fmoc－MeVal－MeAsp－pip）的合成
Figure 02_image042
在氮氣流下，在反應容器中添加化合物aa2－001－a（1.18 g, 2.00 mmol）與肆三苯基膦鈀（23.1 mg, 0.020 mmol），接著添加DCM（4.0 mL）。在反應液中滴下苯基矽烷（0.152 g, 1.40 mmol）後，在室溫將反應液攪拌30分鐘。以TBME（11.8 mL）稀釋反應液後，以飽和碳酸氫鈉水溶液／水（1/1，11.8 mL）進行萃取，再以水（5.9 mL）進行萃取。在合併水層中添加85%磷酸水溶液（0.700 mL, 10.2 mmol），成為在pH 2附近的酸性，將水層以DCM（11.8 mL）萃取2次。將合併有機層以飽和氯化鈉水溶液／水（1/1，11.8 mL）清洗後，以硫酸鈉乾燥有機層。濾除乾燥材後，將濾液進行減壓濃縮，獲得為淡褐色無定形晶之1.06g（產率97%）的化合物aa2－001。 LCMS（ESI） m/z=550.5 （M+H） +保持時間：0.93分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－002、Fmoc－MeIle－MeAsp－pip的合成
Figure 02_image044
化合物aa2－002－a、（3S）－3－[[（2S,3S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeIle－MeAsp（OAl）－pip）的合成
Figure 02_image046
將化合物Fmoc－MeAsp（OAl）－pip（10.0 g, 21.0 mmol）、及Fmoc－MeIle－OH（6.80 g, 18.5 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為橙色固體之3.64 g（產率29%）的化合物aa2－002－a。 LCMS（ESI） m/z=604.6 （M+H） +保持時間：1.10分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－002、（3S）－3－[[（2S,3S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸（Fmoc－MeIle－MeAsp－pip）的合成
Figure 02_image048
將化合物aa2－002－a（1.21 g, 2.00 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之1.05 g（產率93%）的化合物aa2－002。 LCMS（ESI） m/z=564.7 （M+H） +保持時間：0.99分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－003、Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp－pip的合成
Figure 02_image050
化合物aa2－003－a、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp（OAl）－pip）的合成
Figure 02_image052
將化合物Fmoc－MeAsp（OAl）－pip（10.0 g, 21.0 mmol）、及Fmoc－MeGly（cPent）－OH（8.75 g, 23.1 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為橙色固體之3.49 g（產率27%）的化合物aa2－003－a。 LCMS（ESI） m/z=616.6 （M+H） +保持時間：1.11分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－003、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp－pip）的合成
Figure 02_image054
將化合物aa2－003－a（1.23 g, 2.00 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之1.12 g（產率97%）的化合物aa2－003。 LCMS（ESI） m/z=576.8 （M+H） +保持時間：0.95分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－004、Fmoc－MeChg－MeAsp－pip的合成
Figure 02_image056
化合物aa2－004－a、（3S）－3－[[（2S）－2－環己基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeChg－MeAsp（OAl）－pip）的合成
Figure 02_image058
將化合物Fmoc－MeAsp（OAl）－pip（10.0 g, 21.0 mmol）、及Fmoc－MeChg－OH（9.10 g, 23.1 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為黃色固體之5.52 g（產率42%）的化合物aa2－004－a。 LCMS（ESI） m/z=630.6 （M+H） +保持時間：1.13分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－004、（3S）－3－[[（2S）－2－環己基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸（Fmoc－MeChg－MeAsp－pip）的合成
Figure 02_image060
將化合物aa2－004－a（1.26 g, 2.00 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之0.953 g（產率81%）的化合物aa2－004。 LCMS（ESI） m/z=590.6 （M+H） +保持時間：0.97分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－005、Fmoc－MeLeu－MeAsp－pip的合成
Figure 02_image062
化合物aa2－005－a、（3S）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeLeu－MeAsp（OAl）－pip）的合成
Figure 02_image064
將化合物Fmoc－MeAsp（OAl）－pip（8.00 g, 16.79 mmol）、及Fmoc－MeLeu－OH（6.48 g, 17.63 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為黃色無定形晶之5.00 g（產率49%）的化合物aa2－005－a。 LCMS（ESI） m/z=604.6 （M+H） +保持時間：1.10分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－005、（3S）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸（Fmoc－MeLeu－MeAsp－pip）的合成
Figure 02_image066
將化合物aa2－005－a（1.21 g, 2.00 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之1.09 g（產率96%）的化合物aa2－005。 LCMS（ESI） m/z=564.5 （M+H） +保持時間：0.94分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－006、Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2的合成
Figure 02_image068
化合物aa2－006－a、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image070
起始原料的Fmoc－MeAsp（OAl）－OH係遵循WO2018/225864所記載之方法而合成。在氮氣流下，在反應容器中添加EDCI（16.9 g, 88.0 mmol）、及DMF（144 mL），冷卻至0℃。在0℃依序添加HOBt（10.9 g, 80.6 mmol）、及已將Fmoc－MeAsp（OAl）－OH（30.0 g, 73.3 mmol）溶解於DCM/DMF（60 mL/60 mL）之溶液，在0℃攪拌30分鐘。在0℃滴下二甲基胺（2 mol/L THF solution, 40.5 mL, 80.6 mmol）後，在0℃攪拌30分鐘。在反應液中添加乙酸乙酯（300 mL），將有機層依序以1 mol/L鹽酸水溶液（240 mL）清洗2次、以水（300 mL）清洗2次、以飽和碳酸氫鈉水溶液／水（1/1，300 mL）清洗2次、以飽和氯化鈉水溶液／水（1/1，300 mL）清洗後，以硫酸鈉乾燥有機層。濾除乾燥材後，將濾液進行減壓濃縮，獲得為淡褐色無定形晶之32.7 g（產率102%）的化合物aa2－006－a。 LCMS（ESI） m/z=437.2 （M+H） +保持時間：0.86分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－006－b、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image072
將化合物aa2－006－a（8.50 g, 19.5 mmol）、及Fmoc－MeGly（cPent）－OH（7.76 g, 20.5 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為黃色無定形晶之5.02 g（產率43%）的化合物aa2－006－b。 LCMS（ESI） m/z=576.5 （M+H） +保持時間：1.02分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－006、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2）的合成
Figure 02_image074
將化合物aa2－006－b（0.921 g, 1.60 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之0.786 g（產率92%）的化合物aa2－006。 LCMS（ESI） m/z=536.5 （M+H） +保持時間：0.85分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－007、Fmoc－MeLeu－MeAsp－NMe2的合成
Figure 02_image076
化合物aa2－007－b、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeLeu－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image078
將化合物aa2－006－a（8.50 g, 19.5 mmol）、及Fmoc－MeLeu－OH（7.76 g, 20.5 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為黃色無定形晶之5.00 g（產率48%）的化合物aa2－007－b。 LCMS（ESI） m/z=564.5 （M+H） +保持時間：1.02分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－007、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeLeu－MeAsp－NMe2）的合成
Figure 02_image080
將化合物aa2－007－b（1.13 g, 2.00 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之0.995 g（產率95%）的化合物aa2－007。 LCMS（ESI） m/z=524.5 （M+H） +保持時間：0.86分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－008、Fmoc－MeVal－D－3－MeAbu－OH的合成
Figure 02_image082
化合物aa2－008－a、（3R）－3－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丁酸丙－2－烯基（Fmoc－D－3－MeAbu－OAl）的合成
Figure 02_image084
在氮氣流下，在0℃，在反應容器中依序添加Fmoc－D－3－MeAbu－OH（20.0 g, 59.0 mmol）、EDCI（17.0 g, 88.5 mmol）、HOBt（13.6 g, 88.5 mmol）、烯丙醇（8.1 mL, 118 mmol）、DMF（140 mL）、及DCM（40 mL），在0℃攪拌30分鐘。接著，添加DIPEA（15.4 mL, 88.5 mmol），在0℃攪拌30分鐘後、在室溫下攪拌15分鐘。在反應液中添加乙酸乙酯（200 mL），將有機層以飽和碳酸氫鈉水溶液（200 mL）清洗後，以硫酸鈉乾燥有機層。濾除乾燥材後，將濾液進行減壓濃縮，獲得為黃色油狀物質之22.1 g（產率99%）的化合物aa2－008－a的粗生成物。 LCMS（ESI） m/z=380.1 （M+H） +保持時間：2.12分鐘（分析條件 SMDmethod_1）
化合物aa2－008－b、（3R）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeVal－D－3－MeAbu－OAl）的合成
Figure 02_image086
將化合物aa2－008－a（6.00 g, 15.8 mmol）、及Fmoc－MeVal－OH（5.82 g, 16.62 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為褐色無定形晶質之3.79 g（產率49%）的化合物aa2－008－b。 LCMS（ESI） m/z=493.5 （M+H） +保持時間：1.03分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－008、（3R）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]丁酸（Fmoc－MeVal－D－3－MeAbu－OH）的合成
Figure 02_image088
將化合物aa2－008－b（0.788 g, 1.60 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之0.607 g（產率84%）的化合物aa2－008。 LCMS（ESI） m/z=453.4 （M+H） +保持時間：0.85分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－009、Fmoc－MeChg－D－3－MeAbu－OH的合成
Figure 02_image090
化合物aa2－009－b、（3R）－3－[[（2S）－2－環己基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeChg－D－3－MeAbu－OAl）的合成
Figure 02_image092
將化合物aa2－008－a（4.70 g, 12.4 mmol）、及Fmoc－MeChg－OH（5.10 g, 13.0 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為黃色油狀物質之3.70 g（產率56%）的化合物aa2－009－b。 LCMS（ESI） m/z=533.6 （M+H） +保持時間：1.11分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－009、（3R）－3－[[（2S）－2－環己基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]丁酸（Fmoc－MeChg－D－3－MeAbu－OH）的合成
Figure 02_image094
將化合物aa2－009－b（0.799 g, 1.50 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之0.501 g（產率68%）的化合物aa2－009。 LCMS（ESI） m/z=493.5 （M+H） +保持時間：0.95分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－010、Fmoc－MeVal－MeGly－OH的合成
Figure 02_image096
化合物aa2－010－a、2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙酸丙－2－烯基（Fmoc－MeGly－OAl）的合成
Figure 02_image098
在氮氣流下，在反應容器中依序添加Fmoc－MeGly－OH（6.00 g, 19.3 mmol）、EDCI（4.43 g, 23.1 mmol）、HOBt（3.12 g, 23.1 mmol）、烯丙醇（1.23 g, 21.2 mmol）、DMF（40 mL）、及DCM（12 mL），在室溫攪拌30分鐘。在反應液中添加乙酸乙酯（60 mL），將有機層依序以1 mol/L鹽酸水溶液（60 mL）、飽和碳酸氫鈉水溶液（60 mL）、飽和氯化鈉水溶液（60 mL）清洗後，將有機層進行減壓濃縮，獲得為黃色油狀物質之6.00 g（產率89%）的化合物aa2－010－a的粗生成物。 LCMS（ESI） m/z=352.1 （M+H） +保持時間：1.75分鐘（分析條件 SMDmethod_2）
化合物aa2－010－b、2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]乙酸丙－2－烯基（Fmoc－MeVal－MeGly－OAl）的合成
Figure 02_image100
將化合物aa2－010－a（6.00 g, 17.07 mmol）、及Fmoc－MeVal－OH（6.63 g, 18.76 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為桃色無定形晶之3.37 g（產率43%）的化合物aa2－010－b。 LCMS（ESI） m/z=465.5 （M+H） +保持時間：1.00分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－010、2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]乙酸（Fmoc－MeVal－MeGly－OH）的合成
Figure 02_image102
將化合物aa2－010－b（0.929 g, 2.00 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之0.841 g（產率99%）的化合物aa2－010。 LCMS（ESI） m/z=425.4 （M+H） +保持時間：0.83分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－011、Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp－mor的合成
Figure 02_image104
化合物aa2－011－a、（3S）－3－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－N－𠰌啉基－4－側氧基－丁酸烯丙基（Fmoc－MeAsp（OAl）－mor）的合成
Figure 02_image106
起始原料的Fmoc－MeAsp（OAl）－OH係遵循WO2018/225864所記載之方法而合成。羧基與𠰌啉的縮合反應係藉由使用𠰌啉以取代化合物aa2－006－a的合成所使用之二甲基胺而進行合成。
化合物aa2－011－b、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基－胺基]－4－N－𠰌啉基－4－側氧基－丁酸烯丙基（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp（OAl）－mor）的合成
Figure 02_image108
氮氣體環境下，在化合物aa2－011－a（10 g, 20.90 mmol）的脫水DMF（50 mL）溶液中，在室溫滴下DBU（3.15 mL, 20.90 mmol）並且攪拌10分鐘。在反應混合物中，在室溫添加吡啶鹽酸鹽（2.66 g, 22.99 mmol）並攪拌10分鐘。在此反應混合物中，在室溫添加另外製備之活性酯溶液（後述），接著滴下DIPEA（4.01 mL, 22.99 mmol）。將所得之反應混合物在室溫攪拌4小時15分鐘後，添加乙酸乙酯（100 mL）、己烷（20 mL）及1 mol/L鹽酸水溶液（100 mL）。將所得之混合物以乙酸乙酯－己烷（5：1）進行萃取（有機相總量約300 mL）、將有機相以1 mol/L鹽酸水溶液（100 mL）、水（100 mL）、碳酸氫鈉水溶液（100 mL x2）及飽和氯化鈉水溶液（100 mL）進行清洗，以硫酸鈉進行乾燥後，在減壓下餾去溶媒。將所得之粗生成物利用順相矽膠層析法（己烷－乙酸乙酯）進行精製，獲得9.98 g之化合物aa2－011－b（產率 81%）。 活性酯溶液的製備係如同以下般實施。氮氣體環境下，在（2S）－2－環戊基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙酸（7.53 g, 19.85 mmol）、WSCI・HCl（5.21 g, 27.2 mmol）及Oxyma（3.56 g, 25.08 mmol）的混合物中，在室溫添加脫水DMF（55 mL），攪拌40分鐘，將所得之反應混合物使用作為活性酯溶液。 LCMS（ESI） m/z=618 （M+H） +保持時間：0.96分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－011、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基－胺基]－4－N－𠰌啉基－4－側氧基－丁酸（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp－mor）的合成
Figure 02_image110
氮氣體環境下，在化合物aa2－011－b（9.90 g, 16.03 mmol）與肆（三苯基膦）鈀（0）（0.185 g, 0.16 mmol）的混合物中添加脫水DCM（15 ml），在室溫進行攪拌。在所得之溶液中，滴下苯基矽烷（1.38 mL, 11.22mmol）。將所得之反應混合物攪拌30分鐘後，添加MTBE（100 mL），接著緩慢滴下碳酸氫鈉水溶液（將飽和水溶液稀釋2倍者）（100 mL）而停止反應。將所得之混合物以水萃取2次（水相總量約150 mL），在水相中添加DCM（100 mL）及磷酸（5.6 mL）。將所得之混合物以DCM萃取2次（有機相總量約200ml），將有機相以飽和氯化鈉水溶液（80 mL x2）進行清洗，並以硫酸鈉進行乾燥後，在減壓下餾去溶媒，將所得之9.57 g之化合物aa2－011（產率：100%）使用於下一個反應。 LCMS（ESI） m/z=578 （M+H） +保持時間：0.79分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－012、Fmoc－MeVal－Asp－NMe2的合成
Figure 02_image112
化合物aa2－012－a、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－Asp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image114
將從商業的供給業者所購入之Fmoc－Asp（OAl）－OH（100.0 g, 252.9 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－006－a的合成同樣的手法，獲得為黃色油狀物質之89 g（產率82%）的化合物aa2－012－a。 LCMS（ESI） m/z=423.2 （M+H） +保持時間：2.24分鐘（分析條件 SMDmethod_3）
化合物aa2－012－b、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]胺基]－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeVal－Asp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image116
將化合物aa2－012－a（5.0 g, 11.8 mmol）、及Fmoc－MeVal－OH（4.39 g, 12.4 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為灰白色固體之3.4 g（產率53%）的化合物aa2－012－b。 LCMS（ESI） m/z=536.5 （M+H） +保持時間：0.94分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－012、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeVal－Asp－NMe2）的合成
Figure 02_image118
將化合物aa2－012－b（1.16 g, 2.17 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為白色無定形晶之1.02 g（產率95%）的化合物aa2－012。 LCMS（ESI） m/z=496.5 （M+H） +保持時間：0.78分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－013、Fmoc－Gly－MeAsp－NMe2的合成
Figure 02_image120
化合物aa2－013－b、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－Gly－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image122
將化合物aa2－006－a（5.0 g, 11.5 mmol）、及Fmoc－Gly－OH（7.15 g, 24.1 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為黃色無定形晶之3.9 g（產率68%）的化合物aa2－013－b。 LCMS（ESI） m/z=494.5 （M+H） +保持時間：0.81分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－013、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－Gly－MeAsp－NMe2）的合成
Figure 02_image124
將化合物aa2－013－b（1.07 g, 2.17 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之1.01 g（產率103%）的化合物aa2－013。 LCMS（ESI） m/z=454.4 （M+H） +保持時間：0.67分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－014、Fmoc－Aib－MeAsp－NMe2的合成
Figure 02_image126
化合物aa2－014－a、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－（甲基胺基）－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（H－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image128
在反應容器中添加化合物aa2－006－a（18.0 g, 41.2 mmol）與DCM（180 mL），接著在室溫添加DBU（6.28 g, 41.2 mmol）。在將反應液攪拌5分鐘後，使反應液進行減壓濃縮，將所得之殘渣以順相矽膠管柱層析法（石油醚／乙酸乙酯=100/0→0/100，接著DCM／甲醇=100/0→85/15）進行精製，獲得為黃色油狀物質之8.1 g（產率87%）的化合物aa2－014－a。 LCMS（ESI） m/z=215.2 （M+H） +保持時間：0.41分鐘（分析條件 SMDmethod_4）
化合物aa2－014－b、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2－甲基丙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－Aib－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image130
在氮氣流下，在反應容器中添加化合物aa2－014－a（4.35 g, 20.3 mmol）、Fmoc－Aib－OH（6.0 g, 18.4 mmol）、COMU（11.8 g, 27.7 mmol）、及DMF（60 mL），接著在0 ℃滴下DIPEA（2.38 g, 18.4 mmol）。將反應液在40 ℃攪拌16小時後，在反應液中添加乙酸乙酯（120 mL），將有機層依序以1 mol/L鹽酸水溶液（60 mL）清洗2次、以水（60 mL）清洗1次、以飽和碳酸氫鈉水溶液（60 mL）清洗2次、以飽和氯化鈉水溶液（60 mL）清洗後，以硫酸鈉乾燥有機層。濾除乾燥材後，將濾液進行減壓濃縮，將所得之殘渣以順相矽膠管柱層析法（石油醚／乙酸乙酯=100/0→50/50）、接著以逆相矽膠管柱層析法（水／乙腈=95/5→50/50）進行精製，獲得為黃色固體之3.31 g（產率37%）的化合物aa2－014－b。 LCMS（ESI） m/z=522.5 （M+H） +保持時間：0.85分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－014、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2－甲基丙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－Aib－MeAsp－NMe2）的合成
Figure 02_image132
將化合物aa2－014－b（1.14 g, 2.19 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之1.04 g（產率99%）的化合物aa2－014。 LCMS（ESI） m/z=482.4 （M+H） +保持時間：0.70分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－015、Fmoc－bAla（2－Me2）－D－3－MeAbu－OH的合成
Figure 02_image134
化合物aa2－015－b、（3R）－3－[[3－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2,2－二甲基丙醯基]－甲基胺基]丁酸丙－2－烯基（Fmoc－bAla（2－Me2）－D－3－MeAbu－OAl）的合成
Figure 02_image136
將化合物aa2－008－a（8.0 g, 21.1 mmol）、及Fmoc－bAla（2－Me2）－OH（7.5 g, 22.2 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為淡黃色油狀物質之1.28 g（產率13%）的化合物aa2－015－b。 LCMS（ESI） m/z=479.5 （M+H） +保持時間：1.00分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－015、（3R）－3－[[3－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2,2－二甲基丙醯基]－甲基胺基]丁酸（Fmoc－bAla（2－Me2）－D－3－MeAbu－OH）的合成
Figure 02_image138
在氮氣流下，在反應容器中添加化合物aa2－015－b（602 mg, 1.26 mmol）與肆三苯基膦鈀（14.5 mg, 0.013 mmol），接著添加DCM（2.5 mL）。在反應液中，滴下苯基矽烷（95 mg, 0.88 mmol）後，在室溫將反應液攪拌30分鐘。接著在反應液中添加肆三苯基膦鈀（14.5 mg, 0.013 mmol）與苯基矽烷（95 mg, 0.88 mmol），在室溫攪拌30分鐘。以TBME（6.0 mL）稀釋反應液後，以飽和碳酸氫鈉水溶液／水（1/1，6.0 mL）進行萃取，再以水（3.0 mL）進行萃取。在合併水層中添加85%磷酸水溶液（0.516 mL, 7.55 mmol），成為在pH 2附近的酸性，將水層以DCM（6.0 mL）萃取2次。將合併有機層以飽和氯化鈉水溶液／水（1/1，6.0 mL）清洗後，以硫酸鈉乾燥有機層。濾除乾燥材後，將濾液進行減壓濃縮，將所得之殘渣以逆相矽膠管柱層析法（水／乙腈=90/10→30/70）進行精製，獲得為白色固體之285 mg（產率52%）的化合物aa2－015。 LCMS（ESI） m/z=439.5 （M+H） +保持時間：0.80分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－016、Fmoc－MeLeu－MeVal－OH的合成
Figure 02_image140
化合物aa2－016－a、（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeVal－OAl）的合成
Figure 02_image142
在氮氣流下，在反應容器中添加Fmoc－MeVal－OH（2.00 g, 5.66 mmol）、烯丙基溴（0.75 g, 6.20 mmol）、碳酸鉀（1.17 g, 8.47 mmol）及DMF（20 mL），將反應液在室溫攪拌4小時。過濾後，將濾液在0 ℃以1 mol/L鹽酸水溶液進行中和，以乙酸乙酯萃取3次。將合併有機層以水清洗1次，以飽和氯化鈉水溶液清洗2次後，以硫酸鈉乾燥有機層。濾除乾燥材後，將濾液進行減壓濃縮，將所得之殘渣以順相矽膠管柱層析法（石油醚／乙酸乙酯=100/0→90/10）進行精製，獲得為無色油狀物質之1.9 g（產率85%）的化合物aa2－016－a。 LCMS（ESI） m/z=394.2 （M+H） +保持時間：1.21分鐘（分析條件 SMDmethod_5）
化合物aa2－016－b、（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeLeu－MeVal－OAl）的合成
Figure 02_image144
將化合物aa2－016－a（1.0 g, 2.64 mmol）、及Fmoc－MeLeu－OH（1.02 g, 2.77 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為無色油狀物質之0.90 g（產率64%）的化合物aa2－016－b。 LCMS（ESI） m/z=521.6 （M+H） +保持時間：1.16分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－016、（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁酸（Fmoc－MeLeu－MeVal－OH）的合成
Figure 02_image146
將化合物aa2－016－b（417 mg, 0.80 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之185 mg（產率48%）的化合物aa2－016。 LCMS（ESI） m/z=481.5 （M+H） +保持時間：0.97分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－017、Fmoc－MeVal－Pro－OH的合成
Figure 02_image148
化合物aa2－017－a、（2S）－吡咯啶－1,2－二羧酸 2－O－丙－2－烯基 1－O－（9H－茀－9－基甲基）（Fmoc－Pro－OAl）的合成
Figure 02_image150
將Fmoc－Pro－OH（5.00 g, 14.8 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－016－a的合成同樣的手法，獲得為無色油狀物質之5.3 g（產率94%）的化合物aa2－017－a。 LCMS（ESI） m/z=378.2 （M+H） +保持時間：1.10分鐘（分析條件 SMDmethod_5）
化合物aa2－017－b、（2S）－1－[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]吡咯啶－2－羧酸丙－2－烯基（Fmoc－MeVal－Pro－OAl）的合成
Figure 02_image152
將化合物aa2－017－a（5.3 g, 14.0 mmol）、及Fmoc－MeVal－OH（5.21 g, 14.7 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為無色油狀物質之5.2 g（產率74%）的化合物aa2－017－b。 LCMS（ESI） m/z=491.5 （M+H） +保持時間：1.00分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－017、（2S）－1－[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]吡咯啶－2－羧酸（Fmoc－MeVal－Pro－OH）的合成
Figure 02_image154
將化合物aa2－017－b（1.57 g, 3.20 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之1.35 g（產率94%）的化合物aa2－017。 LCMS（ESI） m/z=451.5 （M+H） +保持時間：0.81分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－018、Fmoc－MeLeu－Aib－OH的合成
Figure 02_image156
化合物aa2－018－a、2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2－甲基丙烷酸丙－2－烯基（Fmoc－Aib－OAl）的合成
Figure 02_image158
將Fmoc－Aib－OH（7.00 g, 21.5 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－016－a的合成同樣的手法，獲得為無色油狀物質之7.5 g（產率94%）的化合物aa2－018－a。 LCMS（ESI） m/z=366.1 （M+H） +保持時間：1.08分鐘（分析條件 SMDmethod_5）
化合物aa2－018－b、2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]－2－甲基丙烷酸丙－2－烯基（Fmoc－MeLeu－Aib－OAl）的合成
Figure 02_image160
將化合物aa2－018－a（7.00 g, 19.2 mmol）、及Fmoc－MeLeu－OH（7.39 g, 20.1 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為黃色油狀物質之6.2 g（產率65%）的化合物aa2－018－b。 LCMS（ESI） m/z=493.5 （M+H） +保持時間：1.07分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－018、2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]－2－甲基丙烷酸（Fmoc－MeLeu－Aib－OH）的合成
Figure 02_image162
將化合物aa2－018－b（985 mg, 2.00 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之608 mg（產率67%）的化合物aa2－018。 LCMS（ESI） m/z=453.5 （M+H） +保持時間：0.91分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－019、Fmoc－MeVal－Gly－OH的合成
Figure 02_image164
化合物aa2－019－a、2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）乙酸丙－2－烯基（Fmoc－Gly－OAl）的合成
Figure 02_image166
將Fmoc－Gly－OH（7.00 g, 23.5 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－016－a的合成同樣的手法，獲得為無色油狀物質之7.5 g（產率91%）的化合物aa2－019－a。 LCMS（ESI） m/z=338.2 （M+H） +保持時間：1.16分鐘（分析條件 SMDmethod_6）
化合物aa2－019－b、2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]胺基]乙酸丙－2－烯基（Fmoc－MeVal－Gly－OAl）的合成
Figure 02_image168
將化合物aa2－019－a（5.0 g, 14.8 mmol）、及Fmoc－MeVal－OH（5.5 g, 15.6 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為無色油狀物質之4.3 g（產率64%）的化合物aa2－019－b。 LCMS（ESI） m/z=451.5 （M+H） +保持時間：0.96分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－019、2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]胺基]乙酸（Fmoc－MeVal－Gly－OH）的合成
Figure 02_image170
將化合物aa2－019－b（1.47 g, 3.27 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之1.31 g（產率98%）的化合物aa2－019。 LCMS（ESI） m/z=411.4 （M+H） +保持時間：0.79分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－020、Fmoc－D－MeVal－MeAsp－NMe2的合成
Figure 02_image172
化合物aa2－020－b、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2R）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－D－MeVal－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image174
將化合物aa2－006－a（5.00 g, 11.5 mmol）、及Fmoc－D－MeVal－OH（4.08 g, 11.5 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為白色固體之3.1 g（產率49%）的化合物aa2－020－b。 LCMS（ESI） m/z=550.5 （M+H） +保持時間：0.98分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－020、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2R）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－D－MeVal－MeAsp－NMe2）的合成
Figure 02_image176
將化合物aa2－020－b（1.37 g, 2.50 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為白色無定形晶之1.20 g（產率94%）的化合物aa2－020。 LCMS（ESI） m/z=510.5 （M+H） +保持時間：0.79分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－021、Fmoc－bAla（2－Me2）－MeAsp－NMe2的合成
Figure 02_image178
化合物aa2－021－b、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[3－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2,2－二甲基丙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－bAla（2－Me2）－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image180
將化合物aa2－014－a（5.92 g, 27.6 mmol）、及Fmoc－bAla（2－Me2）－OH）（8.6 g, 25.3 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－014－b的合成同樣的手法，獲得為黃色固體之3.63 g（產率26%）的化合物aa2－021－b。 LCMS（ESI） m/z=536.6 （M+H） +保持時間：0.90分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－021、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[3－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2,2－二甲基丙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－bAla（2－Me2）－MeAsp－NMe2）的合成
Figure 02_image182
將化合物aa2－021－b（1.07 g, 2.00 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之874 mg（產率88%）的化合物aa2－021。 LCMS（ESI） m/z=496.5 （M+H） +保持時間：0.74分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－022、Fmoc－MeVal－D－MeAsp－NMe2的合成
Figure 02_image184
化合物aa2－022－a、（4R）－5－側氧基－4－（2－側氧基－2－丙－2－環氧乙基）－1,3－㗁唑烷－3－羧酸 9H－茀－9－基甲基的合成
Figure 02_image186
在氮氣流下，在反應容器中添加Fmoc－D－Asp（OAl）－OH（20.0 g, 50.6 mmol）、三聚甲醛（4.56 g, 152 mmol）、p－甲苯磺酸（0.09 g, 0.506 mmol）及甲苯（500 mL），將反應液在90 ℃攪拌16小時。將反應混合物冷卻至室溫後，在減壓下餾去溶媒。將所得之殘渣溶解於TBME，以碳酸鈉水溶液進行清洗後，以硫酸鈉乾燥有機相。濾除乾燥材後，將濾液進行減壓濃縮，獲得為黃色油狀物質之20 g（產率90%）的化合物aa2－022－a。 LCMS（ESI） m/z=408.2 （M+H） +保持時間：1.05分鐘（分析條件 SMDmethod_5）
化合物aa2－022－b、（2R）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－側氧基－4－丙－2－環氧丁酸（Fmoc－D－MeAsp（OAl）－OH）的合成
Figure 02_image188
在氮氣流下，在反應容器中添加化合物aa2－022－a（20 g, 49.1 mmol）、三乙基矽烷（11.4 g, 98.2 mmol）、DCM（200 mL）及溴化鋅（11.1 g, 49.1 mmol），將反應液在室溫攪拌48小時後，在減壓下餾去溶媒。將所得之殘渣溶解於碳酸鉀水溶液，以己烷清洗2次。以鹽酸使將水相成為pH2後，以乙酸乙酯萃取3次，以硫酸鈉乾燥有機相。濾除乾燥材後，將濾液進行減壓濃縮，獲得為白色固體之15 g（產率93%）的化合物aa2－022－b。 LCMS（ESI） m/z=410.2 （M+H） +保持時間：0.98分鐘（分析條件 SMDmethod_5）
化合物aa2－022－c、（3R）－4－（二甲基胺基）－3－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－D－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image190
將化合物aa2－022－b（15.7 g, 38.3 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－006－a的合成同樣的手法，獲得為黃色油狀物質之13 g（產率78%）的化合物aa2－022－c。 LCMS（ESI） m/z=437.2 （M+H） +保持時間：1.86分鐘（分析條件 SMDmethod_7）
化合物aa2－022－d、（3R）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－MeVal－D－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image192
將化合物aa2－022－c（7.00 g, 16.0 mmol）、及Fmoc－MeVal－OH（6.23 g, 17.6 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為白色固體之3.34 g（產率35%）的化合物aa2－022－d。 LCMS（ESI） m/z=550.6 （M+H） +保持時間：0.97分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－022、（3R）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeVal－D－MeAsp－NMe2）的合成
Figure 02_image194
將化合物aa2－022－d（1.37 g, 2.50 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為白色無定形晶之1.26 g（產率99%）的化合物aa2－022。 LCMS（ESI） m/z=510.5 （M+H） +保持時間：0.79分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－023、Fmoc－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2的合成
Figure 02_image196
化合物aa2－023－b、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[[（2S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）丙醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸丙－2－烯基（Fmoc－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp（OAl）－NMe2）的合成
Figure 02_image198
將化合物aa2－006－b（1.17 g, 2.03 mmol）、及Fmoc－Ala－OH（601 mg, 1.93 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－a的合成同樣的手法，獲得為黃色無定形晶之575 mg（產率44%）的化合物aa2－023－b。 LCMS（ESI） m/z=647.7 （M+H） +保持時間：0.98分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa2－023、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[[（2S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）丙醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸（Fmoc－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2）的合成
Figure 02_image200
將化合物aa2－023－b（575 mg, 0.889 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為粗生成物之化合物aa2－023。將所得之粗生成物溶解於DMSO，以逆相矽膠管柱層析法（水／乙腈=85/15→20/80）進行精製，獲得為白色固體之476 mg（產率88%）的化合物aa2－023。 LCMS（ESI） m/z=607.6 （M+H） +保持時間：0.83分鐘（分析條件 SQDFA05）
實施例1－3. Fmoc－胺基酸的合成 表4所記載的Fmoc－胺基酸係如同以下所示之流程圖而合成。
[表4]
Figure 02_image202
化合物aa3－001、（3S）－3－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸（Fmoc－MeAsp－pip）的合成
Figure 02_image204
化合物aa3－001係遵循WO2018/225864所記載之方法而合成。
化合物aa3－002、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAsp－NMe2）的合成
Figure 02_image206
將化合物aa2－006－a（32.0 g, 73.3 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001的合成同樣的手法，獲得為淡褐色無定形晶之25.1 g（產率 86%）的化合物aa3－002。 LCMS（ESI） m/z=397.2 （M+H） +保持時間：0.68分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa3－003、Fmoc－Asp－NMe2的合成
Figure 02_image208
化合物aa3－003－a、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－4－側氧基丁酸－2－甲基丙烷－2－基（Fmoc－Asp（OtBu）－NMe2）的合成
Figure 02_image210
將從商業的供給業者所購入之Fmoc－Asp（OtBu）－OH（25.0 g, 60.8 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－006－a的合成同樣的手法，獲得為粗生成物之29.8 g的化合物aa3－003－a。 LCMS（ESI） m/z=461.3 （M+Na） +保持時間：0.88分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物aa3－003、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－4－側氧基丁酸（Fmoc－Asp－NMe2）的合成
Figure 02_image212
在反應容器中添加化合物aa3－003－a的粗生成物（29.8 g）、TFE（270 mL），接著滴下4 mol/L鹽酸二㗁烷溶液（15.2 mL, 60.8 mmol）後，將反應液在室溫攪拌1小時。以TBME（500 mL）稀釋反應液後，以5%碳酸鈉水溶液（600 mL）進行萃取。在所得之水層中添加85%磷酸水溶液（40～50 mL），成為pH 2～3附近的酸性，將水層以TBME（400 mL）進行萃取。將所得之有機層以10%氯化鈉水溶液（400 mL）、水（400 mL）進行清洗後，以硫酸鈉乾燥有機層。濾除乾燥材後，將濾液進行減壓濃縮，獲得21.4 g之化合物aa3－003（產率92%）。 LCMS（ESI） m/z=383.2 （M+H） +保持時間：0.66分鐘（分析條件 SQDFA05）
實施例1－4. 胺基酸、及胜肽負載樹脂的合成
Figure 02_image214
在本說明書中，聚合物或樹脂與化合物結合之情形，有以○標記聚合物或樹脂部位之情形。又，以使樹脂部位的反應點明確為目的，有與○連接而標記反應部位的化學結構之情形。例如，在上述的結構Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip中，樹脂的2－氯三苯甲基係透過MeAsp的側鏈羧酸與酯鍵而結合，在Fmoc－MeAsp（NH－Sieber resin）－pip中，樹脂的9H－𠮿
Figure 02_image216
－9－胺基係透過MeAsp的側鏈羧酸與醯胺鍵而結合。此外，所謂pip，意指哌啶，在上述的結構中，C端的羧酸基形成哌啶與醯胺鍵。2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25～1.69 mmol/g, 100－200 mesh, 1%DVB）購自渡邊化學工業股份有限公司及SUNRESIN公司，Fmoc－NH－Sieber樹脂（0.69 mmol/g, 100－200 mesh, 1%DVB）購自Novabiochem公司。
表5記載的Fmoc－胺基酸或者胜肽負載樹脂係如同以下所示之流程圖而合成。
[表5]
Figure 02_image218
Figure 02_image220
化合物aa2－001－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeVal－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成
Figure 02_image222
在附過濾器的反應容器中置入2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.10 g, 3.87 mmol）與DCM（21.7 mL），在室溫振盪45分鐘。施加氮壓而去除DCM後，在化合物aa2－001（1.06 g, 1.94 mmol）、甲醇（0.627 mL, 15.5 mmol）及DIPEA（1.62 mL, 9.29 mmol）中添加DCM，將所製備之合計21.7 mL的混合液添加至反應容器，在室溫振盪60分鐘。施加氮壓並去除反應液後，在甲醇（4.39 mL, 108 mmol）及DIPEA（1.62 mL, 9.29 mmol）中添加DCM，將所製備之合計21.7 mL的混合液添加至反應容器，在室溫振盪90分鐘。施加氮壓並去除反應液後，置入DCM（21.7 mL），振盪5分鐘後，施加氮壓而去除反應液。將此使用DCM之樹脂的清洗操作重複5次，使所得之樹脂在減壓下乾燥一晩，獲得3.58 g的aa2－001－resin。
Fmoc定量法 為了確認負載量，將所得之aa2－001－resin（11.94 mg）置入反應容器，添加DMF（4.0 mL），在室溫振盪30分鐘。之後，添加DBU（40 μL），在30℃振盪15分鐘。之後，以反應混合液成為10.0 mL之方式添加DMF，以DMF（920 μL）稀釋該溶液80 μL。將所得之稀釋溶液以LC/MS進行分析（injection volume： 5 μL），由二苯并富烯的UVarea值（294 nm：4211.62、304 nm：3791.08）算出aa2－001－resin的負載量為0.363 mmol/g。（將濃度已知的Fmoc－Gly－OH（購自商業的供給業者）與DBU的混合溶液作為標準物質，使用將每個測量日在波長294 nm與304 nm之二苯并富烯的UVarea值為基準所作成之校正曲線，將在各波長所算出之負載量的平均值作為樹脂的負載量）。
化合物aa2－002－resin、（3S）－3－[[（2S,3S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeIle－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成
Figure 02_image224
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 2.98 g, 3.72 mmol）與化合物aa2－002（1.05 g, 1.86 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.54 g的化合物aa2－002－resin。若使用乾燥樹脂（10.47 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.326 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3648.96，在304 nm之UVarea值：3280.91）
化合物aa2－003－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成
Figure 02_image226
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.11 g, 3.88 mmol）與化合物aa2－003（1.12 g, 1.94 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.73 g的化合物aa2－003－resin。若使用乾燥樹脂（11.34 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.362 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3979.93，在304 nm之UVarea值：3588.46）
化合物aa2－004－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－環己基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeChg－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成
Figure 02_image228
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 2.57 g, 3.22 mmol）與化合物aa2－004（0.949 g, 1.61 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.07 g的化合物aa2－004－resin。若使用乾燥樹脂（10.09 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.347 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3412.72，在304 nm之UVarea值：3069.21）
化合物aa2－005－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeLeu－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成
Figure 02_image230
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.09 g, 3.86 mmol）與化合物aa2－005（1.09 g, 1.93 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.57 g的化合物aa2－005－resin。若使用乾燥樹脂（10.42 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.355 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3592.54，在304 nm之UVarea值：3232.59）
化合物aa2－006－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image232
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 2.35 g, 2.94 mmol）與化合物aa2－006（0.786 g, 1.47 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得2,72 g的化合物aa2－006－resin。若使用乾燥樹脂（11.77 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.345 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3965.86，在304 nm之UVarea值：3566.11）
化合物aa2－007－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeLeu－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image234
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.04 g, 3.80 mmol）與化合物aa2－007（0.995 g, 1.90 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.51 g的化合物aa2－007－resin。若使用乾燥樹脂（10.88 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.384 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4057.77，在304 nm之UVarea值：3645.68）
化合物aa2－008－resin、（3R）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeVal－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image236
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 2.15 g, 2.68 mmol）與化合物aa2－008（0.607 g, 1.34 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得2.47 g的化合物aa2－008－resin。若使用乾燥樹脂（11.13 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.415 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4513.80，在304 nm之UVarea值：4054.24）
化合物aa2－009－resin、（3R）－3－[[（2S）－2－環己基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基胺基]丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeChg－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image238
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.62 g, 2.03 mmol）與化合物aa2－009（0.500 g, 1.02 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.91 g的化合物aa2－009－resin。若使用乾燥樹脂（12.74 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.397 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4946.37，在304 nm之UVarea值：4444.88）
化合物aa2－010－resin、2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]乙酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeVal－MeGly－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image240
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.17 g, 3.96 mmol）與化合物aa2－010（0.841 g, 1.98 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.49 g的化合物aa2－010－resin。若使用乾燥樹脂（11.25 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.374 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4080.46，在304 nm之UVarea值：3686.94）
化合物aa2－011－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙醯基]－甲基－胺基]－4－N－𠰌啉基－4－側氧基－丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp－（O－Trt（2－Cl）resin）－mor）的合成
Figure 02_image242
在附過濾器的反應容器（400 mL）中置入2－氯三苯甲基氯樹脂（1.36 mmol/g、20.5 g, 15.07 mmol）與DCM（140 mL），在室溫靜置1小時。施加氮壓而去除DCM後，將化合物aa2－011（9.50 g, 16.45 mmol）、甲醇（5.32 mL, 132 mmol）及DIPEA（13.8 mL,79 mmol）的DCM（140 mL）溶液添加至反應容器，在25℃以60 rpm振盪60分鐘。施加氮壓並去除反應液後，將甲醇（20 ml, 493 mmol）及DIPEA（13.8 mL, 79 mmol）的DCM（140 mL）溶液添加至反應容器，在25℃以60 rpm振盪60分鐘。施加氮壓並去除反應液後，置入DCM（140 mL）並混合後，施加氮壓而排出。將此使用DCM之樹脂的清洗操作重複共計5次，將所得之樹脂在減壓下乾燥一日，獲得26.89 g的化合物aa2－011－resin。樹脂上的胺基酸的負載量的算出係如同以下般實施。將所得之化合物化合物aa2－011－resin（10 mg）置入反應容器，添加DMF（2 mL），在室溫靜置1小時。之後，添加DBU（40 μL），在25℃振動30分鐘。之後，在反應混合液中添加DMF（8 mL），以DMF（11.5 mL）稀釋該溶液1ml。測量所得之稀釋溶液的吸光度（294 nm）（使用Shimadzu、UV－1600PC（石英比色管長1.0 cm）測量），算出化合物化合物aa2－011－resin的負載量為0.415 mmol/g。
化合物aa2－012－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeVal－Asp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image244
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.28 g, 4.10 mmol）與化合物aa2－012（1.02 g, 2.05 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.73 g的化合物aa2－012－resin。若使用乾燥樹脂（12.55 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.373 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：5042.25，在304 nm之UVarea值：4531.21）
化合物aa2－013－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Gly－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image246
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.57 g, 4.46 mmol）與化合物aa2－013（1.01 g, 2.23 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.98 g的化合物aa2－013－resin。若使用乾燥樹脂（12.33 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.386 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：5134.21，在304 nm之UVarea值：4593.14）
化合物aa2－014－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2－甲基丙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Aib－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image248
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.46 g, 4.32 mmol）與化合物aa2－014（1.04 g, 2.16 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.96 g的化合物aa2－014－resin。若使用乾燥樹脂（10.22 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.413 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4205.24，在304 nm之UVarea值：3774.43）
化合物aa2－015－resin、（3R）－3－[[3－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2,2－二甲基丙醯基]－甲基胺基]丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－bAla（2－Me2）－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image250
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.02 g, 1.28 mmol）與化合物aa2－015（281 mg, 0.640 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.14 g的化合物aa2－015－resin。若使用乾燥樹脂（10.46 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.443 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4615.90，在304 nm之UVarea值：4143.20）
化合物aa2－016－resin、（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeLeu－MeVal－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image252
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 617 mg, 0.771 mmol）與化合物aa2－016（185 mg, 0.386 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得663 mg的化合物aa2－016－resin。若使用乾燥樹脂（12.18 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.348 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4325.21，在304 nm之UVarea值：3876.60）
化合物aa2－017－resin、（2S）－1－[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]吡咯啶－2－羧酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeVal－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image254
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 4.79 g, 5.99 mmol）與化合物aa2－017（1.35 g, 3.00 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得5.40 g的化合物aa2－017－resin。若使用乾燥樹脂（10.38 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.364 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3850.10，在304 nm之UVarea值：3472.31）
化合物aa2－018－resin、2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]－2－甲基丙烷酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeLeu－Aib－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image256
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 2.15 g, 2.69 mmol）與化合物aa2－018（608 mg, 1.34 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得2.29 g的化合物aa2－018－resin。若使用乾燥樹脂（9.61 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.300 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2934.11，在304 nm之UVarea值：2651.64）
化合物aa2－019－resin、2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]胺基]乙酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeVal－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image258
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 5.11 g, 6.38 mmol）與化合物aa2－019（1.31 g, 3.19 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得5.46 g的化合物aa2－019－resin。若使用乾燥樹脂（10.73 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.303 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3312.44，在304 nm之UVarea值：2987.09）
化合物aa2－020－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2R）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－D－MeVal－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image260
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.77 g, 4.71 mmol）與化合物aa2－020（1.20 g, 2.36 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得4.47 g的化合物aa2－020－resin。若使用乾燥樹脂（11.75 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.396 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4635.95，在304 nm之UVarea值：4167.33）
化合物aa2－021－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[3－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2,2－二甲基丙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－bAla（2－Me2）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image262
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 2.82 g, 3.53 mmol）與化合物aa2－021（874 mg, 1.76 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.24 g的化合物aa2－021－resin。若使用乾燥樹脂（9.82 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.407 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3979.96，在304 nm之UVarea值：3574.96）
化合物aa2－022－resin、（3R）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeVal－D－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image264
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.97 g, 4.96 mmol）與化合物aa2－022（1.26 g, 2.48 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得4.75 g的化合物aa2－022－resin。若使用乾燥樹脂（10.79 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.396 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4264.54，在304 nm之UVarea值：3819.26）
化合物aa2－023－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[[（2S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）丙醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image266
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 700 mg, 0.875 mmol）與化合物aa2－023（265 mg, 0.437 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得801 mg的化合物aa2－023－resin。若使用乾燥樹脂（9.35 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.378 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3477.62，在304 nm之UVarea值：3130.63）
化合物aa2－024－resin、（2S）－1－[（2S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－苯基丙醯基]吡咯啶－2－羧酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Phe－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image268
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.12 g, 1.40 mmol）與Fmoc－Phe－Pro－OH（339 mg, 0.700 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.23 g的化合物aa2－024－resin。若使用乾燥樹脂（9.62 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.383 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3782.71，在304 nm之UVarea值：3403.88）
化合物aa2－025－resin、（2S）－1－[（2S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－6－[（2－甲基丙烷－2－基）氧基羰基胺基]己醯基]吡咯啶－2－羧酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Lys（Boc）－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image270
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.12 g, 1.40 mmol）與Fmoc－Lys（Boc）－Pro－OH（396 mg, 0.700 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.24 g的化合物aa2－025－resin。若使用乾燥樹脂（11.50 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.339 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4200.46，在304 nm之UVarea值：3772.96）
化合物aa2－026－resin、（2S）－2－[[2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）乙醯基]胺基]－3－[4－[（2－甲基丙烷－2－基）氧基]苯基]丙烷酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Gly－Tyr（tBu）－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image272
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.12 g, 1.40 mmol）與Fmoc－Gly－Tyr（tBu）－OH（362 mg, 0.700 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.15 g的化合物aa2－026－resin。若使用乾燥樹脂（9.88 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.244 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2478.91，在304 nm之UVarea值：2222.03）
化合物aa2－027－resin、（2S）－2－[[（2S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）丙醯基]胺基]丙烷酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ala－Ala－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image274
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.28 g, 1.60 mmol）與Fmoc－Ala－Ala－OH（306 mg, 0.800 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.39 g的化合物aa2－027－resin。若使用乾燥樹脂（9.69 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.334 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3496.53，在304 nm之UVarea值：3128.64）
化合物aa2－028－resin、2－[[（2S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－苯基丙醯基]胺基]乙酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Phe－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image276
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.28 g, 1.60 mmol）與Fmoc－Phe－Gly－OH（356 mg, 0.800 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.36 g的化合物aa2－028－resin。若使用乾燥樹脂（10.12 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.248 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2703.55，在304 nm之UVarea值：2442.89）
化合物aa2－029－resin、2－[[（2S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－4－側氧基－4－（三苯甲基胺基）丁醯基]胺基]乙酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Asn（Trt）－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image278
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.12 g, 1.40 mmol）與Fmoc－Asn（Trt）－Gly－OH（458 mg, 0.700 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.15 g的化合物aa2－029－resin。若使用乾燥樹脂（9.67 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.259 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2698.79，在304 nm之UVarea值：2427.13）
化合物aa2－030－resin、（2S）－2－[[2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）乙醯基]胺基]－3－甲基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Gly－Val－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image280
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.28 g, 1.60 mmol）與Fmoc－Gly－Val－OH（317 mg, 0.800 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.38 g的化合物aa2－030－resin。若使用乾燥樹脂（10.06 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.278 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3013.51，在304 nm之UVarea值：2712.54）
化合物aa2－031－resin、2－[[（2S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－[（2－甲基丙烷－2－基）氧基]丙醯基]胺基]乙酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ser（tBu）－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image282
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.12 g, 1.40 mmol）與Fmoc－Ser（tBu）－Gly－OH（308 mg, 0.700 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.10 g的化合物aa2－031－resin。若使用乾燥樹脂（10.35 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.258 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2884.14，在304 nm之UVarea值：2584.43）
化合物aa2－032－resin、（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）丙醯基]胺基]丙醯基]吡咯啶－2－羧酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ala－Ala－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image284
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 1.12 g, 1.40 mmol）與Fmoc－Ala－Ala－Pro－OH（336 mg, 0.700 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得1.24 g的化合物aa2－032－resin。若使用乾燥樹脂（11.15 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.393 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4495.05，在304 nm之UVarea值：4047.48）
化合物aa3－001－resin、（3S）－3－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成
Figure 02_image286
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.44 mmol/g, 44.5 g, 64.1 mmol）與化合物aa3－001（14.0 g, 32.1 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得52.7 g的化合物aa3－001－resin。若使用乾燥樹脂（11.29 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.455 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：5277.47，在304 nm之UVarea值：4746.13）
化合物aa3－002－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image288
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.60 mmol/g, 8.83 g, 14.1 mmol）與化合物aa3－002（2.80 g, 7.06 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得10.4 g的化合物aa3－002－resin。若使用乾燥樹脂（11.04 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.442 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4990.63，在304 nm之UVarea值：4516.89）
化合物aa3－003－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Asp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image290
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.44 mmol/g, 39.0 g, 56.2 mmol）與化合物aa3－003（10.7 g, 28.0 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得45.0 g的化合物aa3－003－resin。若使用乾燥樹脂（10.48 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.469 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4929.82，在304 nm之UVarea值：4428.76）
化合物aa4－001－resin、（3R）－3－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image292
在附過濾器的反應容器中置入2－氯三苯甲基氯樹脂（1.60 mmol/g, 25.0 g, 40.0 mmol）與DCM（125 mL），在室溫振盪20分鐘。施加氮壓而去除DCM後，在Fmoc－D－3－MeAbu－OH（3.60 g, 10.6 mmol）、甲醇（0.859 mL, 21.2 mmol）及DIPEA（12.3 mL, 70.7 mmol）中添加DCM，將所製備之合計145 mL的混合液添加至反應容器，在室溫振盪30分鐘。施加氮壓並去除反應液後，在甲醇（12.5 mL, 143 mmol）及DIPEA（12.5 mL, 71.8 mmol）中添加DCM，將所製備之合計250 mL的混合液添加至反應容器，在室溫振盪90分鐘。施加氮壓並去除反應液後，置入DCM（180 mL），振盪5分鐘後，施加氮壓而去除反應液。將此使用DCM之樹脂的清洗操作重複3次，使所得之樹脂在減壓下乾燥一晩，獲得28.3 g的aa4－001－resin。若使用乾燥樹脂（10.36 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.369 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3920.38，在304 nm之UVarea值：3530.84）
化合物aa4－002－resin、2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]乙酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeGly－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image294
在附過濾器的反應容器中置入2－氯三苯甲基氯樹脂（1.60 mmol/g, 12.3 g, 19.7 mmol）與DCM（125 mL），在室溫振盪20分鐘。施加氮壓而去除DCM後，將Fmoc－MeGly－OH（3.07 g, 9.87 mmol）、DIPEA（8.25 mL, 47.4 mmol）、及DCM（110 mL）的混合液添加至反應容器，在室溫振盪60分鐘。施加氮壓並去除反應液後，將甲醇（12.8 mL, 316 mmol）、DIPEA（8.25 mL, 47.4 mmol）、及DCM（110 mL）的混合液添加至反應容器，在室溫振盪90分鐘。施加氮壓並去除反應液後，置入DCM（180 mL），振盪5分鐘後，施加氮壓而去除反應液。將此使用DCM之樹脂的清洗操作重複2次，使所得之樹脂在減壓下乾燥一晩，獲得22.2 g的化合物aa4－002－resin。若使用乾燥樹脂（10.00 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.573 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：5879.66，在304 nm之UVarea值：5289.40）
化合物aa4－003－resin、（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]－3－甲基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－MeVal－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image296
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.03 g, 3.79 mmol）與Fmoc－MeVal－OH（669 mg, 1.89 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.37 g的化合物aa4－003－resin。若使用乾燥樹脂（10.21 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.436 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4751.39，在304 nm之UVarea值：4274.97）
化合物aa4－004－resin、（2S）－吡咯啶－1,2－二羧酸 1－O－（9H－茀－9－基甲基） 2－O－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image298
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.69 mmol/g, 25.0 g, 42.3 mmol）與Fmoc－Pro－OH（7.13 mg, 21.1 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得28.8 g的化合物aa4－004－resin。若使用乾燥樹脂（10.87 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.432 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4714.30，在304 nm之UVarea值：4225.61）
化合物aa4－005－resin、2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－2－甲基丙烷酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Aib－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image300
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 3.15 g, 3.93 mmol）與Fmoc－Aib－OH（640 mg, 1.97 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得3.41 g的化合物aa4－005－resin。若使用乾燥樹脂（10.43 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.390 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4336.95，在304 nm之UVarea值：3918.58）
化合物aa4－006－resin、2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）乙酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image302
將2－氯三苯甲基氯樹脂（1.25 mmol/g, 2.40 g, 3.00 mmol）與Fmoc－Gly－OH（446 mg, 1.50 mmol）作為起始原料，利用與化合物aa2－001－resin的合成同樣的手法，獲得2.39 g的化合物aa4－006－resin。若使用乾燥樹脂（10.06 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.250 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2563.25，在304 nm之UVarea值：2311.09）
化合物aa5－001－resin、N－[（2S）－1－[[（2S）－4－[（Sieber樹脂）胺基]－1,4－二側氧基－1－哌啶－1－基丁烷－2－基]－甲基胺基]－3－甲基－1－側氧基丁烷－2－基]－N－甲基胺甲酸 9H－茀－9－基甲基（Fmoc－MeVal－MeAsp（NH－Sieber resin）－pip）的合成
Figure 02_image304
將Fmoc－NH－Sieber樹脂（0.69 mmol/g, 600 mg, 0.414 mmol）置入附過濾器（玻料）的固相反應容器，添加DCM（7.2 mL），靜置30分鐘，藉此進行樹脂的膨潤後，將溶液從玻料排出。在包含樹脂之固相反應容器中添加DBU的DMF溶液（2%v/v, 4.2 mL），在室溫使其反應4.5分鐘，進行Fmoc基的去除反應後，將溶液從玻料排出。於此添加DMF（4.2 mL），靜置5分鐘後，將溶液從玻料排出。將此樹脂的清洗步驟進一步重複3次。接著，在將化合物aa2－001（594 mg, 1.08 mmol）與HOAt（92 mg, 0.676 mmol）的NMP溶液（1.80 mL）、及DIC（192 mg, 1.52 mmol）的DMF溶液（2.16 mL）進行混合後，添加至樹脂，將固相反應容器加溫至40℃，使其反應2.5小時，藉此進行縮合反應後，將溶液從玻料排出。接著將樹脂以DMF（4.2 mL）清洗4次後，以DCM（4.2 mL）清洗5次，使所得之樹脂在減壓下乾燥一晩，獲得688 mg的化合物aa5－001－resin。若使用乾燥樹脂（11.46 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.538 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：6072.34，在304 nm之UVarea值：5457.70）
實施例2. 在固相下的胜肽合成中，已負載二胜肽之情形與已負載胺基酸單體之情形的胜肽的回收率與純度的比較實驗 在本實施例中，記載藉由使用胜肽合成機之固相反應，利用以下的3條件合成由Fmoc－AA3－AA2－AA1－resin所示之三胜肽時的回收率、純度的比較。
Figure 02_image306
[表6]
Figure 02_image308
[表7]
Figure 02_image310
本實施例中所記載之由固相反應所進行之胜肽合成係使用胜肽合成機（Multipep RS；Intavis公司製）並藉由Fmoc法而進行。關於操作的詳細流程係遵循合成機所附的手冊。
實施例2中之詳細合成條件係揭示於以下的合成法1。
合成法1 作為構成目標胜肽之Fmoc保護胺基酸（0.6 mol/L）與羧酸的活化劑，將HOAt或者oxyma（0.375 mol/L）溶解於NMP而製備溶液1。Fmoc保護胺基酸為難溶之情形，以成為20～30%（v/v）之方式添加DMSO而製備溶液1。又，以DIC成為10%（v/v）之方式與DMF進行混合，製備溶液2。將已負載在實施例1－4所製備之Fmoc胺基酸或者胜肽之樹脂（100 mg）置入附過濾器（玻料）的固相反應容器，並安裝至胜肽合成機。添加DCM（1.2 mL）並靜置30分鐘，藉此進行樹脂的膨潤後，將溶液從玻料排出。將溶液1及溶液2安裝至胜肽合成機，開始由胜肽合成機所進行之自動合成。
在包含樹脂之固相反應容器中添加DBU的DMF溶液（2%v/v, 0.7 mL），在室溫進行Fmoc基的去除反應。在第一個殘基的脫保護中，使其反應4.5分鐘，在第二個殘基以後的脫保護中，使其反應10分鐘後，將溶液從玻料排出。於此添加DMF（0.7 mL），靜置5分鐘後，將溶液從玻料排出。將此樹脂的清洗步驟進一步重複3次。接著，將溶液1（0.3 mL）與溶液2（0.36 mL）以合成機的mixing vial進行混合後，添加至樹脂，將固相反應容器加溫至40℃或者50℃，進行反應2.5小時或者10小時，藉此進行樹脂上的胺基與Fmoc保護胺基酸的縮合反應後，將溶液從玻料排出。接著將樹脂以DMF（0.7 mL）清洗3次。在此Fmoc基的去除反應後，將Fmoc胺基酸的縮合反應設為1循環，藉由重複此循環，而使胜肽在樹脂表面上延長。
胜肽延長結束後，將所得之樹脂以DMF（0.7 mL）清洗4次後，以DCM（0.7 mL）清洗4次，在48小時室溫進行自然乾燥。將所得之樹脂的一部分（10 mg左右）置入反應容器，遵循實施例1－4所記載之Fmoc定量法，算出樹脂上的胜肽的負載量。又，將所得之樹脂的一部分（20 mg左右）置入反應容器，添加包含0.75%（v/v）的DIPEA或者不包含之TFE/DCM溶液（1/1，1 mL），在室溫振盪2小時，進行胜肽的切出反應。反應後，將切出溶液以LCMS進行分析，確認樹脂上的生成物。
實施例2中之回收率的定義、及算出方法係揭示於以下的回收率算出法。
回收率算出法 在實施例2中，將回收率如以下般進行定義，評價固相反應中之胺基酸及胜肽從樹脂的脫離率，換言之過早分裂(premature cleavage)的抑制率。 回收率=反應生成物負載樹脂的負載量（mmol/g）÷目標物已100%生成之情形的樹脂的負載量（mmol/g）（式1）
目標物已100%生成之情形的樹脂的負載量（mmol/g）係如以下般算出。 目標物已100%生成之情形的樹脂的負載量（mmol/g）= 起始原料樹脂的負載量（mmol/g）×原出發料樹脂的重量（g）÷目標物已100%生成之情形的樹脂的重量（g）（式2）
目標物已100%生成之情形的樹脂的重量（g）係如以下般算出。 目標物已100%生成之情形的樹脂的重量（g）= 起始原料樹脂的重量（g） － 起始原料樹脂上的胺基酸、或者胜肽成分的重量（g）+目標物已100%生成之情形的樹脂上的胜肽成分的重量（g）（式3）
起始原料樹脂上的胺基酸、或者胜肽成分的重量（g）係如以下般算出。 起始原料樹脂上的胺基酸、或者胜肽成分的重量（g）= 起始原料樹脂的重量（g）×起始原料樹脂的負載量（mmol/g）×起始原料樹脂上的胺基酸、或者胜肽成分的分子量（g/mol）×0.001（mol/mmol）（式4）
目標物已100%生成之情形的樹脂上的胜肽成分的重量（g）係如以下般算出。 目標物已100%生成之情形的樹脂上的胜肽成分的重量（g）= 起始原料樹脂的重量（g）×起始原料樹脂的負載量（mmol/g）×目標物的胜肽成分的分子量（g/mol）×0.001（mol/mmol）（式5）
若在式2中代入式3、式4、及式5，則 目標物已100%生成之情形的樹脂的負載量（mmol/g）= 起始原料樹脂的負載量（mmol/g）÷（1 －起始原料樹脂的負載量（mmol/g）× 起始原料樹脂上的胺基酸、或者胜肽成分的分子量（g/mol）×0.001（mol/mmol） +　起始原料樹脂的負載量（mmol/g）×目標物的胜肽成分的分子量（g/mol）×0.001（mol/mmol）） =　1 ÷（1÷起始原料樹脂的負載量（mmol/g） － 起始原料樹脂上的胺基酸、或者胜肽成分的分子量（g/mol）×0.001（mol/mmol） + 目標物的胜肽成分的分子量（g/mol）×0.001（mol/mmol））（式6）
若在式1中代入式6，則回收率係藉由以下的式所算出。 回收率=反應生成物負載樹脂的負載量（mmol/g）×（1÷起始原料樹脂的負載量（mmol/g） － 起始原料樹脂上的胺基酸、或者胜肽成分的分子量（g/mol）×0.001（mol/mmol） + 目標物的胜肽成分的分子量（g/mol）×0.001（mol/mmol））
化合物pd2－001－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeVal－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成 由條件1所進行之pd2－001－resin的合成
Figure 02_image312
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－001－resin（Fmoc－MeVal－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.363 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－001－resin。若使用乾燥樹脂（11.36 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.344 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3907.18，在304 nm之UVarea值：3521.50）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.344 × （1 ÷ 0.363 － 549.67 × 0.001 + 662.83 × 0.001）=98.7% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－001的純度為98.2 面積(area)%，差向異構物pd2－001－a被觀測到為1.8 面積%。此外，此差向異構物為在化合物aa2－001的製備階段中已可見之不純物，並非源自使AA3（於此為Ile）延長之本步驟之不純物。
分析條件：SQDAA50long [表8]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－001 目標物 662.83 663.7（M+H）+ 1.78 98.2
pd2－001－a 差向異構物 662.83 663.7（M+H）+ 2.01 1.8
由條件2所進行之pd2－001－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－001－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.455 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－001－resin。若使用乾燥樹脂（10.45 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.292 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3046.82，在304 nm之UVarea值：2746.87）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.292 × （1 ÷ 0.455 － 436.51 × 0.001 + 662.83 × 0.001）=70.8% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－001的純度為61.6 面積%，差向異構物pd2－001－a為6.5 面積%，過剩延長體pd2－001－b為2.4 面積%，AA2缺失體pd2－001－c被觀測到為29.5 面積%。於此，所謂過剩延長體pd2－001－b，表示以下化合物：在AA2（於此為MeVal）的延長時，AA1（於此為MeAsp－pip）從樹脂脫落，所脫落之AA1會對於負載於樹脂上之AA1進行延長之化合物，亦即結合2個AA1，之後，AA2與AA3延長之化合物。只要無特別記載，則以後的實施例中，所謂過剩延長體，亦表示結合2個AA1之化合物。
分析條件：SQDAA50long [表9]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－001 目標物 662.83 663.7（M+H）+ 1.78 61.6
pd2－001－a 差向異構物 662.83 663.7（M+H）+ 2.00 6.5
pd2－001－b 過剩延長體 859.08 859.8（M+H）+ 2.18 2.4
pd2－001－c AA2缺失體 549.67 550.5（M+H）+ 1.63 29.5
由條件3所進行之pd2－001－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－001－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.455 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－001－resin。若使用乾燥樹脂（10.89 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.332 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3612.81，在304 nm之UVarea值：3267.35）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.332 × （1 ÷ 0.455 － 436.51 × 0.001 + 662.83 × 0.001）=80.5% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－001的純度為93.7 面積%，差向異構物pd2－001－a為2.6 面積%，過剩延長體pd2－001－b被觀測到為3.7 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表10]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－001 目標物 662.83 663.6（M+H）+ 1.79 93.7
pd2－001－a 差向異構物 662.83 663.7（M+H）+ 2.02 2.6
pd2－001－b 過剩延長體 859.08 859.8（M+H）+ 2.20 3.7
將以上的結果統整於下表。 [表11]
   回收率（%） 目標物 pd2－001 （面積%） 差向異構物 pd2－001－a （面積%） 過剩延長體 pd2－001－b （面積%） AA2缺失體 pd2－001－c （面積%）
條件1 98.7 98.2 1.8 － －
條件2 70.8 61.6 6.5 2.4 29.5
條件3 80.5 93.7 2.6 3.7 －
在負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 已負載胺基酸單體之情形，在通常的條件2中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成、由難延長部位亦即AA2的延長不良所致之AA2缺失體的生成。在與難延長序列對應之條件3中，亦觀測到由過早分裂所致之回收率的降低，雖未見AA2缺失體的生成，但確認到過剩延長體的生成增加。
此外，在條件1中，與條件2及條件3同樣，亦確認到為不純物之差向異構物（pd2－001－a）。此亦如同先前所記載，為在化合物aa2－001的製備階段中已可見之不純物。亦即，為利用液相法所製備之化合物aa2－001之藉由嚴格精製所能避免之不純物。另一方面，在一般的胜肽合成法亦即條件2及條件3中，會伴隨由固相上的差向異構化進行所致之純度降低。在AA2為難延長胺基酸而在延長時容易引起差向異構化之情形中，在具有由差向異構化所致之胜肽純度降低的避免可能性之點中，亦顯示已負載二胜肽之胜肽延長法的優勢。
化合物pd2－002－resin、（3S）－3－[[（2S,3S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeIle－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成
Figure 02_image314
由條件1所進行之pd2－002－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－002－resin（Fmoc－MeIle－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.326 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－002－resin。若使用乾燥樹脂（10.24 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.336 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3446.83，在304 nm之UVarea值：3102.30）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.336 × （1 ÷ 0.326 － 563.70 × 0.001 + 676.86 × 0.001）=106.9% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－002的純度為99.4 面積%，差向異構物pd2－002－a被觀測到為0.6 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表12]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－002 目標物 676.86 677.6（M+H）+ 2.00 99.4
pd2－002－a 差向異構物 676.86 677.7（M+H）+ 2.20 0.6
由條件2所進行之pd2－002－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－001－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.455 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeIle－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－002－resin。若使用乾燥樹脂（10.81 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.326 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3524.40，在304 nm之UVarea值：3171.55）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.326 × （1 ÷ 0.455 － 436.51 × 0.001 + 676.86 × 0.001）=79.5% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－002的純度為58.0 面積%，差向異構物pd2－002－a為1.4 面積%，過剩延長體pd2－002－b為1.8 面積%，AA2缺失體pd2－002－c被觀測到為38.8 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表13]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－002 目標物 676.86 677.6（M+H）+ 2.00 58.0
pd2－002－a 差向異構物 676.86 677.7（M+H）+ 2.00 1.4
pd2－002－b 過剩延長體 873.11 873.8（M+H）+ 2.37 1.8
pd2－002－c AA2缺失體 549.67 550.5（M+H）+ 1.62 38.8
由條件3所進行之pd2－002－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－001－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.455 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeIle－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－002－resin。若使用乾燥樹脂（10.41 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.330 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3437.60，在304 nm之UVarea值：3100.91）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.330 × （1 ÷ 0.455 － 436.51 × 0.001 + 676.86 × 0.001）=80.5% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－002的純度為95.2 面積%，差向異構物pd2－002－a為1.4 面積%，過剩延長體pd2－002－b被觀測到為3.4 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表14]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－002 目標物 676.86 677.7（M+H）+ 2.01 95.2
pd2－002－a 差向異構物 676.86 677.6（M+H）+ 2.22 1.4
pd2－002－b 過剩延長體 873.11 873.9（M+H）+ 2.39 3.4
將以上的結果統整於下表。 [表15]
   回收率（%） 目標物 pd2－002 （面積%） 差向異構物 pd2－002－a （面積%） 過剩延長體 pd2－002－b （面積%） AA2缺失體 pd2－002－c （面積%）
條件1 106.9 99.4 0.6 － －
條件2 79.5 58.0 1.4 1.8 38.8
條件3 80.5 95.2 1.4 3.4 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 已負載胺基酸單體之情形，在通常的條件2中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成、由難延長部位亦即AA2的延長不良所致之AA2缺失體的生成。在與難延長序列對應之條件3中，亦觀測到由過早分裂所致之回收率的降低，雖未見到AA2缺失體的生成，但確認到過剩延長體的生成增加。
化合物pd2－003－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成
Figure 02_image316
由條件1所進行之pd2－003－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－003－resin（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.362 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－003－resin。若使用乾燥樹脂（10.14 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.348 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3532.70，在304 nm之UVarea值：3179.43）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.348 × （1 ÷ 0.362 － 575.71 × 0.001 + 688.87 × 0.001）=100.1% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－003的純度為99.8 面積%，差向異構物pd2－003－a被觀測到為0.2 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表16]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－003 目標物 688.87 689.7（M+H）+ 2.06 99.8
pd2－003－a 差向異構物 688.87 689.6（M+H）+ 2.27 0.2
由條件2所進行之pd2－003－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－001－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.455 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeGly（cPent）－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－003－resin。若使用乾燥樹脂（10.05 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.320 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3216.77，在304 nm之UVarea值：2905.18）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.320 × （1 ÷ 0.455 － 436.51 × 0.001 + 688.87 × 0.001）=78.4% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－003的純度為83.9 面積%，差向異構物pd2－003－a為1.2 面積%，過剩延長體pd2－003－b為3.9 面積%，AA2缺失體pd2－003－c被觀測到為11.0 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表17]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－003 目標物 688.87 689.6（M+H）+ 2.06 83.9
pd2－003－a 差向異構物 688.87 689.7（M+H）+ 2.27 1.2
pd2－003－b 過剩延長體 885.12 885.8（M+H）+ 2.43 3.9
pd2－003－c AA2缺失體 549.67 550.5（M+H）+ 1.63 11.0
由條件3所進行之pd2－003－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－001－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.455 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeGly（cPent）－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－003－resin。若使用乾燥樹脂（9.45 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.232 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2194.45，在304 nm之UVarea值：1975.12）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.232 × （1 ÷ 0.455 － 436.51 × 0.001 + 688.87 × 0.001）=56.8% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－003的純度為91.4 面積%，差向異構物pd2－003－a為0.1 面積%，過剩延長體pd2－003－b被觀測到為8.5 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表18]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－003 目標物 688.87 689.7（M+H）+ 2.09 91.4
pd2－003－a 差向異構物 688.87 689.5（M+H）+ 2.29 0.1
pd2－003－b 過剩延長體 885.12 885.8（M+H）+ 2.45 8.5
將以上的結果統整於下表。 [表19]
   回收率（%） 目標物 pd2－003 （面積%） 差向異構物 pd2－003－a （面積%） 過剩延長體 pd2－003－b （面積%） AA2缺失體 pd2－003－c （面積%）
條件1 100.1 99.8 0.2 － －
條件2 78.4 83.9 1.2 3.9 11.0
條件3 56.8 91.4 0.1 8.5 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 已負載胺基酸單體之情形，在通常的條件2中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成、由難延長部位亦即AA2的延長不良所致之AA2缺失體的生成。在與難延長序列對應之條件3中，亦觀測到由過早分裂所致之回收率的降低，雖未見到AA2缺失體的生成，但確認到過剩延長體的生成增加。
化合物pd2－004－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－環己基－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeChg－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成
Figure 02_image318
由條件1所進行之pd2－004－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－004－resin（Fmoc－MeChg－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.347 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－004－resin。若使用乾燥樹脂（10.66 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.328 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3502.36，在304 nm之UVarea值：3152.54）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.328 × （1 ÷ 0.347 － 589.73 × 0.001 + 702.89 × 0.001）=98.2% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－004的純度為99.2 面積%，差向異構物pd2－004－a被觀測到為0.8 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表20]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－004 目標物 702.89 703.6（M+H）+ 2.23 99.2
pd2－004－a 差向異構物 702.89 703.6（M+H）+ 2.43 0.8
由條件2所進行之pd2－004－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－001－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.455 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeChg－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－004－resin。若使用乾燥樹脂（9.68 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.314 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3037.14，在304 nm之UVarea值：2743.09）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.314 × （1 ÷ 0.455 － 436.51 × 0.001 + 702.89 × 0.001）=77.4% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－004的純度為74.1 面積%，差向異構物pd2－004－a為2.3 面積%，過剩延長體pd2－004－b為4.0 面積%，AA2缺失體pd2－004－c被觀測到為19.5 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表21]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－004 目標物 702.89 703.6（M+H）+ 2.24 74.1
pd2－004－a 差向異構物 702.89 703.6（M+H）+ 2.43 2.3
pd2－004－b 過剩延長體 899.14 899.8（M+H）+ 2.58 4.0
pd2－004－c AA2缺失體 549.67 550.5（M+H）+ 1.63 19.5
由條件3所進行之pd2－004－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－001－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.455 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeChg－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－004－resin。若使用乾燥樹脂（9.91 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.226 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2235.50，在304 nm之UVarea值：2016.81）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.226 × （1 ÷ 0.455 － 436.51 × 0.001 + 702.89 × 0.001）=55.7% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－004的純度為91.7 面積%，差向異構物pd2－004－a為0.6 面積%，過剩延長體pd2－004－b被觀測到為7.7 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表22]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－004 目標物 702.89 703.6（M+H）+ 2.26 91.7
pd2－004－a 差向異構物 702.89 703.7（M+H）+ 2.44 0.6
pd2－004－b 過剩延長體 899.14 899.8（M+H）+ 2.60 7.7
將以上的結果統整於下表。 [表23]
   回收率（%） 目標物 pd2－004 （面積%） 差向異構物 pd2－004－a （面積%） 過剩延長體 pd2－004－b （面積%） AA2缺失體 pd2－004－c （面積%）
條件1 98.2 99.2 0.8 － －
條件2 77.4 74.1 2.3 4.0 19.5
條件3 55.7 91.7 0.6 7.7 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 已負載胺基酸單體之情形，在通常的條件2中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成、由難延長部位亦即AA2的延長不良所致之AA2缺失體的生成。在與難延長序列對應之條件3中，亦觀測到由過早分裂所致之回收率的降低，雖未見到AA2缺失體的生成，但確認到過剩延長體的生成增加。
化合物pd2－005－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeLeu－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）的合成
Figure 02_image320
由條件1所進行之pd2－005－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－005－resin（Fmoc－MeLeu－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.355 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－005－resin。若使用乾燥樹脂（10.81 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.342 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3697.14，在304 nm之UVarea值：3330.28）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.342 × （1 ÷ 0.355 － 563.70 × 0.001 + 676.86 × 0.001）=100.2% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－005的純度為99.9 面積%，差向異構物pd2－005－a被觀測到為0.1 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表24]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－005 目標物 676.86 677.7（M+H）+ 2.03 99.9
pd2－005－a 差向異構物 676.86 677.6（M+H）+ 2.23 0.1
由條件2所進行之pd2－005－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－001－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.455 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeLeu－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－005－resin。若使用乾燥樹脂（10.74 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.369 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3953.19，在304 nm之UVarea值：3570.96）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.369 × （1 ÷ 0.455 － 436.51 × 0.001 + 676.86 × 0.001）=90.0% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－005的純度為98.3 面積%，差向異構物pd2－005－a為0.1 面積%，過剩延長體pd2－005－b被觀測到為1.6 面積%。在本基質中，在條件2中亦觀測到AA2缺失體pd2－005－c。
分析條件：SQDAA50long [表25]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－005 目標物 676.86 677.6（M+H）+ 2.03 98.3
pd2－005－a 差向異構物 676.86 677.6（M+H）+ 2.23 0.1
pd2－005－b 過剩延長體 873.11 873.8（M+H）+ 2.41 1.6
pd2－005－c AA2缺失體 549.67 未檢測到
由條件3所進行之pd2－005－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－001－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100 mg, 0.455 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeLeu－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－005－resin。若使用乾燥樹脂（10.73 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.337 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3610.72，在304 nm之UVarea值：3254.78）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.337 × （1 ÷ 0.455 － 436.51 × 0.001 + 676.86 × 0.001）=82.2% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－005的純度為97.7 面積%，差向異構物pd2－005－a為0.1 面積%，過剩延長體pd2－005－b被觀測到為2.2 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表26]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－005 目標物 676.86 677.6（M+H）+ 2.05 97.7
pd2－005－a 差向異構物 676.86 677.6（M+H）+ 2.25 0.1
pd2－005－b 過剩延長體 873.11 873.9（M+H）+ 2.42 2.2
將以上的結果統整於下表。 [表27]
   回收率（%） 目標物 pd2－005 （面積%） 差向異構物 pd2－005－a （面積%） 過剩延長體 pd2－005－b （面積%） AA2缺失體 pd2－005－c （面積%）
條件1 100.2 99.9 0.1 － －
條件2 90.0 98.3 0.1 1.6 －
條件3 82.2 97.7 0.1 2.2 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成。
化合物pd2－006－resin、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image322
由條件1所進行之pd2－006－resin的合成 在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－006－resin（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.345 mmol/g）將作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－006－resin。若使用乾燥樹脂（10.23 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.349 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3565.79，在304 nm之UVarea值：3223.59）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.349 × （1 ÷ 0.345 － 535.64 × 0.001 + 648.80 × 0.001）=105.1% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－006的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05 [表28]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－006 目標物 648.80 649.6（M+H）+ 0.96 100
pd2－006－a 差向異構物 648.80 未檢測到
由條件2所進行之pd2－006－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－002－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.442 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeGly（cPent）－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－006－resin。若使用乾燥樹脂（10.73 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.304 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3263.10，在304 nm之UVarea值：2945.28）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.304 × （1 ÷ 0.442 － 396.44 × 0.001 + 648.80 × 0.001）=76.5% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－006的純度為76.3 面積%，差向異構物pd2－006－a為1.2 面積%，過剩延長體pd2－006－b為5.6 面積%，AA2缺失體pd2－006－c被觀測到為16.9 面積%。
分析條件：SQDFA05 [表29]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－006 目標物 648.80 649.7（M+H）+ 0.97 76.3
pd2－006－a 差向異構物 648.80 649.6（M+H）+ 1.03 1.2
pd2－006－b 過剩延長體 804.98 805.7（M+H）+ 0.93 5.6
pd2－006－c AA2缺失體 509.60 510.5（M+H）+ 0.88 16.9
由條件3所進行之pd2－006－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－002－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.442 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeGly（cPent）－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－006－resin。若使用乾燥樹脂（10.60 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.211 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2239.56，在304 nm之UVarea值：2018.13）。
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.211 × （1 ÷ 0.442 － 396.44 × 0.001 + 648.80 × 0.001）=53.1% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－006的純度為85.9 面積%，過剩延長體pd2－006－b被觀測到為14.1 面積%。
分析條件：SQDFA05 [表30]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－006 目標物 648.80 649.6（M+H）+ 0.96 85.9
pd2－006－a 差向異構物 648.80 未檢測到
pd2－006－b 過剩延長體 804.98 805.7（M+H）+ 0.92 14.1
將以上的結果統整於下表。 [表31]
   回收率（%） 目標物 pd2－006 （面積%） 差向異構物 pd2－006－a （面積%） 過剩延長體 pd2－006－b （面積%） AA2缺失體 pd2－006－c （面積%）
條件1 105.1 100 － － －
條件2 76.5 76.3 1.2 5.6 16.9
條件3 53.1 85.9 － 14.1 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 已負載胺基酸單體之情形，在通常的條件2中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成、由難延長部位亦即AA2的延長不良所致之AA2缺失體的生成。在與難延長序列對應之條件3中，亦觀測到由過早分裂所致之回收率的降低，雖未見到AA2缺失體的生成，但確認到過剩延長體的生成增加。
化合物pd2－007－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeLeu－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image324
由條件1所進行之pd2－007－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－007－resin（Fmoc－MeLeu－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.384 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－007－resin。若使用乾燥樹脂（9.96 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.367 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3654.86，在304 nm之UVarea值：3298.78）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.367 × （1 ÷ 0.384 － 523.63 × 0.001 + 636.79 × 0.001）=99.7% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－007的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05 [表32]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－007 目標物 636.79 637.6（M+H）+ 0.96 100
pd2－007－a 差向異構物 636.79 未檢測到
由條件2所進行之pd2－007－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－002－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.442 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeLeu－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－007－resin。若使用乾燥樹脂（10.15 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.371 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3770.57，在304 nm之UVarea值：3391.62）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.371 × （1 ÷ 0.442 － 396.44 × 0.001 + 636.79 × 0.001）=92.9% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－007的純度為97.9 面積%，過剩延長體pd2－007－b被觀測到為2.1 面積%。在本基質中，在條件2中亦未觀測到AA2缺失體pd2－007－c。
分析條件：SQDFA05 [表33]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－007 目標物 636.79 637.7（M+H）+ 0.97 97.9
pd2－007－a 差向異構物 636.79 未檢測到
pd2－007－b 過剩延長體 792.97 793.7（M+H）+ 0.92 2.1
pd2－007－c AA2缺失體 509.60 未檢測到
由條件3所進行之pd2－007－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－002－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.442 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeLeu－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－007－resin。若使用乾燥樹脂（10.73 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.334 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3587.19，在304 nm之UVarea值：3234.07）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.334 × （1 ÷ 0.442 － 396.44 × 0.001 + 636.79 × 0.001）=83.6% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－007的純度為96.6 面積%，過剩延長體pd2－007－b被觀測到為3.4 面積%。
分析條件：SQDFA05 [表34]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－007 目標物 636.79 637.6（M+H）+ 0.96 96.6
pd2－007－a 差向異構物 636.79 未檢測到
pd2－007－b 過剩延長體 792.97 793.7（M+H）+ 0.92 3.4
將以上的結果統整於下表。 [表35]
   回收率（%） 目標物 pd2－007 （面積%） 差向異構物 pd2－007－a （面積%） 過剩延長體 pd2－007－b （面積%） AA2缺失體 pd2－007－c （面積%）
條件1 99.7 100 － － －
條件2 92.9 97.9 － 2.1 －
條件3 83.6 96.6 － 3.4 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成。
化合物pd2－008－resin、（3R）－3－[[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeVal－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image326
由條件1所進行之pd2－008－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－008－resin（Fmoc－MeVal－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.415 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－008－resin。若使用乾燥樹脂（10.74 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.378 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4060.03，在304 nm之UVarea值：3652.89）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.378 × （1 ÷ 0.415 － 452.44 × 0.001 + 565.71 × 0.001）=95.4% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－008的純度為100 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表36]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－008 目標物 565.71 566.5（M+H）+ 1.49 100
pd2－008－a 差向異構物 565.71 未檢測到
由條件2所進行之pd2－008－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－001－resin（Fmoc－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.369 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－008－resin。若使用乾燥樹脂（10.62 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.295 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3138.26，在304 nm之UVarea值：2821.05）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.295 × （1 ÷ 0.369 － 339.39 × 0.001 + 565.71 × 0.001）=86.6% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－008的純度為99.1 面積%，過剩延長體pd2－008－b被觀測到為1.0 面積%。在本基質中，在條件2中亦未觀測到AA2缺失體pd2－008－c。
分析條件：SQDAA50long [表37]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－008 目標物 565.71 566.5（M+H）+ 1.50 99.1
pd2－008－a 差向異構物 565.71 未檢測到
pd2－008－b 過剩延長體 664.84 665.6（M+H）+ 1.58 1.0
pd2－008－c AA2缺失體 452.55 未檢測到
由條件3所進行之pd2－008－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－001－resin（Fmoc－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.369 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－008－resin。若使用乾燥樹脂（10.44 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.284 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2964.86，在304 nm之UVarea值：2667.78）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.284 × （1 ÷ 0.369 － 339.39 × 0.001 + 565.71 × 0.001）=83.4% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－008的純度為98.1 面積%，過剩延長體pd2－008－b被觀測到為1.9 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表38]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－008 目標物 565.71 566.5（M+H）+ 1.51 98.1
pd2－008－a 差向異構物 565.71 未檢測到
pd2－008－b 過剩延長體 664.84 665.6（M+H）+ 1.59 1.9
將以上的結果統整於下表。 [表39]
   回收率（%） 目標物 pd2－008 （面積%） 差向異構物 pd2－008－a （面積%） 過剩延長體 pd2－008－b （面積%） AA2缺失體 pd2－008－c （面積%）
條件1 95.4 100 － － －
條件2 86.6 99.1 － 1.0 －
條件3 83.4 98.1 － 1.9 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成。
化合物pd2－009－resin、（3R）－3－[[（2S）－2－環己基－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeChg－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image328
由條件1所進行之pd2－009－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－009－resin（Fmoc－MeChg－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.397 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－009－resin。若使用乾燥樹脂（11.10 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.362 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4014.43，在304 nm之UVarea值：3627.15）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.362 × （1 ÷ 0.397 － 492.62 × 0.001 + 605.78 × 0.001）=95.3% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－009的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表40]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－009 目標物 605.78 606.5（M+H）+ 3.04 100
pd2－009－a 差向異構物 605.78 未檢測到
此外，本實驗（條件1）中之pd2－009的保持時間，雖與條件3中之pd2－009的保持時間不完全一致，但此為由測量間誤差所導致。
由條件2所進行之pd2－009－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－001－resin（Fmoc－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.369 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeChg－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－009－resin。若使用乾燥樹脂（10.20 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.293 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2987.04，在304 nm之UVarea值：2692.68）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.293 × （1 ÷ 0.369 － 339.39 × 0.001 + 605.78 × 0.001）=87.2% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－009的純度為92.8 面積%，過剩延長體pd2－009－b為3.4 面積%，AA2缺失體pd2－009－c被觀測到為3.8 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表41]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－009 目標物 605.78 606.5（M+H）+ 3.03 92.8
pd2－009－a 差向異構物 605.78 未檢測到
pd2－009－b 過剩延長體 704.91 705.6（M+H）+ 2.96 3.4
pd2－009－c AA2缺失體 452.56 453.5（M+H）+ 2.52 3.8
此外，本實驗（條件2）中之pd2－009及pd2－009－b的保持時間雖與條件3中之pd2－009及pd2－009－b的保持時間不完全一致，但此為由測量間誤差所導致。
由條件3所進行之pd2－009－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－001－resin（Fmoc－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.369 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeChg－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－009－resin。若使用乾燥樹脂（9.56 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.217 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2072.81，在304 nm之UVarea值：1864.82）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.217 × （1 ÷ 0.369 － 339.39 × 0.001 + 605.78 × 0.001）=64.6% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－009的純度為94.5 面積%，過剩延長體pd2－009－b被觀測到為5.5 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表42]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－009 目標物 605.78 606.6（M+H）+ 2.97 94.5
pd2－009－a 差向異構物 605.78 未檢測到
pd2－009－b 過剩延長體 704.91 705.7（M+H）+ 2.92 5.5
將以上的結果統整於下表。 [表43]
   回收率（%） 目標物 pd2－009 （面積%） 差向異構物 pd2－009－a （面積%） 過剩延長體 pd2－009－b （面積%） AA2缺失體 pd2－009－c （面積%）
條件1 95.3 100 － － －
條件2 87.2 92.8 － 3.4 3.8
條件3 64.6 94.5 － 5.5 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 已負載胺基酸單體之情形，在通常的條件2中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成、由難延長部位亦即AA2的延長不良所致之AA2缺失體的生成。在與難延長序列對應之條件3中，亦觀測到由過早分裂所致之回收率的降低，雖未見到AA2缺失體的生成，但確認到過剩延長體的生成增加。
化合物pd2－010－resin、2－[[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]乙酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeVal－MeGly－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image330
由條件1所進行之pd2－010－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－010－resin（Fmoc－MeVal－MeGly－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.374 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－010－resin。若使用乾燥樹脂（10.86 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.325 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3525.31，在304 nm之UVarea值：3180.92）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.325 × （1 ÷ 0.374 － 424.50 × 0.001 + 537.66 × 0.001）=90.6% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－010的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05 [表44]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－010 目標物 537.66 538.5（M+H）+ 0.94 100
pd2－010－a 差向異構物 537.66 未檢測到
由條件2所進行之pd2－010－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－002－resin（Fmoc－MeGly－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.573 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－010－resin。若使用乾燥樹脂（10.20 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.326 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3322.12，在304 nm之UVarea值：3002.34）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.326 × （1 ÷ 0.573 － 311.34 × 0.001 + 537.66 × 0.001）=64.3% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－010的純度為95.6 面積%，過剩延長體pd2－010－b被觀測到為4.4 面積%。在本基質中，在條件2中亦未觀測到AA2缺失體pd2－010－c。
分析條件：SQDFA05 [表45]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－010 目標物 537.66 538.5（M+H）+ 0.94 95.6
pd2－010－a 差向異構物 537.66 未檢測到
pd2－010－b 過剩延長體 608.74 607.4（M+H）+ 0.90 4.4
pd2－010－c AA2缺失體 424.50 未檢測到
由條件3所進行之pd2－010－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－002－resin（Fmoc－MeGly－（O－Trt（2－Cl）resin））（100 mg, 0.573 mmol/g）作為起始原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－010－resin。若使用乾燥樹脂（10.69 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.331 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3542.66，在304 nm之UVarea值：3189.92）
回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.331 × （1 ÷ 0.573 － 311.34 × 0.001 + 537.66 × 0.001）=65.3% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－010的純度為93.9 面積%，過剩延長體pd2－010－b被觀測到為6.1 面積%。
分析條件：SQDFA05 [表46]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－010 目標物 537.66 538.5（M+H）+ 0.93 93.9
pd2－010－a 差向異構物 537.66 未檢測到
pd2－010－b 過剩延長體 608.74 607.6（M+H）+ 0.89 6.1
將以上的結果統整於下表。 [表47]
   回收率（%） 目標物 pd2－010 （面積%） 差向異構物 pd2－010－a （面積%） 過剩延長體 pd2－010－b （面積%） AA2缺失體 pd2－010－c （面積%）
條件1 90.6 100 － － －
條件2 64.3 95.6 － 4.4 －
條件3 65.3 93.9 － 6.1 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成。
化合物pd2－011－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeVal－Asp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image332
由條件1所進行之pd2－011－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－012－resin（Fmoc－MeVal－Asp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.373 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－011－resin。若使用乾燥樹脂（9.87 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.343 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3397.67，在304 nm之UVarea值：3086.76） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.343 × （1 ÷ 0.373 － 495.57 × 0.001 + 608.73 × 0.001）=95.8% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－011的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表48]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－011 目標物 608.73 609.6（M+H）+ 2.41 100
pd2－011－a 差向異構物 608.73 未檢測到
由條件2所進行之pd2－011－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－003－resin（Fmoc－Asp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.469 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－011－resin。若使用乾燥樹脂（10.54 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.292 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3084.36，在304 nm之UVarea值：2800.28） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.292 × （1 ÷ 0.469 － 382.41 × 0.001 + 608.73 × 0.001）=68.9% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－011的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表49]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－011 目標物 608.73 609.6（M+H）+ 2.42 100
pd2－011－a 差向異構物 608.73 未檢測到
pd2－011－b 過剩延長體 750.88 未檢測到
pd2－011－c AA2缺失體 495.57 未檢測到
由條件3所進行之pd2－011－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－003－resin（Fmoc－Asp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.469 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－011－resin。若使用乾燥樹脂（10.13 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.320 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3260.97，在304 nm之UVarea值：2943.08） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.320 × （1 ÷ 0.469 － 382.41 × 0.001 + 608.73 × 0.001）=75.5% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－011的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表50]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－011 目標物 608.73 609.6（M+H）+ 2.41 100
pd2－011－a 差向異構物 608.73 未檢測到
pd2－011－b 過剩延長體 750.88 未檢測到
將以上的結果統整於下表。 [表51]
   回收率（%） 目標物 pd2－011 （面積%） 差向異構物 pd2－011－a （面積%） 過剩延長體 pd2－011－b （面積%） AA2缺失體 pd2－011－c （面積%）
條件1 95.8 100 － － －
條件2 68.9 100 － － －
條件3 75.5 100 － － －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，確認到能以高純度獲得目標物者之由過早分裂所致之回收率的降低。
化合物pd2－012－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－Gly－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image334
由條件1所進行之pd2－012－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－013－resin（Fmoc－Gly－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.386 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－012－resin。若使用乾燥樹脂（12.05 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.364 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4412.01，在304 nm之UVarea值：3987.67） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.364 × （1 ÷ 0.386 － 453.49 × 0.001 + 566.65 × 0.001）=98.4% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－012的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表52]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－012 目標物 566.65 567.5（M+H）+ 2.14 100
由條件2所進行之pd2－012－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－002－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.442 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Gly－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－012－resin。若使用乾燥樹脂（10.16 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.375 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3841.95，在304 nm之UVarea值：3448.96） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.375 × （1 ÷ 0.442 － 396.44 × 0.001 + 566.65 × 0.001）=91.2% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－012的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表53]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－012 目標物 566.65 567.5（M+H）+ 2.14 100
pd2－012－b 過剩延長體 722.83 未檢測到
pd2－012－c AA2缺失體 509.59 未檢測到
由條件3所進行之pd2－012－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－002－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.442 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Gly－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－012－resin。若使用乾燥樹脂（10.23 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.346 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3565.67，在304 nm之UVarea值：3211.93） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.346 × （1 ÷ 0.442 － 396.44 × 0.001 + 566.65 × 0.001）=84.2% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－011的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表54]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－012 目標物 566.65 567.5（M+H）+ 2.14 100
pd2－012－b 過剩延長體 722.83 未檢測到
將以上的結果統整於下表。 [表55]
   回收率（%） 目標物 pd2－012 （面積%） 過剩延長體 pd2－012－b （面積%） AA2缺失體 pd2－012－c （面積%）
條件1 98.4 100 － －
條件2 91.2 100 － －
條件3 84.2 100 － －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，確認到能以高純度獲得目標物者之由過早分裂所致之回收率的降低。
化合物pd2－013－resin、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]胺基]－2－甲基丙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－Aib－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）的合成
Figure 02_image336
由條件1所進行之pd2－013－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－014－resin（Fmoc－Aib－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.413 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－013－resin。若使用乾燥樹脂（10.37 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.305 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3188.07，在304 nm之UVarea值：2860.10） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.305 × （1 ÷ 0.413 － 481.54 × 0.001 + 594.7 × 0.001）=77.3% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－013的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表56]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－013 目標物 594.70 595.6（M+H）+ 2.21 100
由條件2所進行之pd2－013－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－002－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.442 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Aib－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－013－resin。若使用乾燥樹脂（10.66 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.360 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3850.25，在304 nm之UVarea值：3502.10） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.360 × （1 ÷ 0.442 － 396.44 × 0.001 + 594.7 × 0.001）=88.6% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－013的純度為2.6 面積%，能獲得作為主生成物之93.0 面積%的AA2缺失體pd2－013－c。並且，雖未觀測到過剩延長體pd2－013－b，但觀測到作為其他副產物之pd3－013－d為4.5面積%。
分析條件：SQDFA05long [表57]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－013 目標物 594.70 595.6（M+H）+ 2.21 2.6
pd2－013－b 過剩延長體 750.88 未檢測到
pd2－013－c AA2缺失體 509.59 510.5（M+H）+ 2.33 93.0
pd2－013－d 其他 665.78 666.7（M+H）+ 2.25 4.5
由條件3所進行之pd2－013－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa3－002－resin（Fmoc－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100 mg, 0.442 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Aib－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－013－resin。若使用乾燥樹脂（10.33 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.195 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2012.66，在304 nm之UVarea值：1833.56） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.195 × （1 ÷ 0.442 － 396.44 × 0.001 + 594.7 × 0.001）=48.0% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－013的純度為21.6 面積%，過剩延長體pd2－013－b 為27.3 面積%，能獲得比目標物更多之36.5 面積%的AA2缺失體pd2－013－c。並且，作為其他副產物，pd3－013－d為6.9面積%，pd3－013－e為5.6面積%，pd3－013－f被觀測到為2.1面積%。
分析條件：SQDFA05long [表58]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－013 目標物 594.70 595.6（M+H）+ 2.21 21.6
pd2－013－b 過剩延長體 750.88 751.7（M+H）+ 2.12 27.3
pd2－013－c AA2缺失體 509.59 510.5（M+H）+ 2.33 36.5
pd2－013－d 其他 665.78 666.7（M+H）+ 2.25 6.9
pd2－013－e 其他 907.06 907.9（M+H）+ 2.07 5.6
pd2－013－f 其他 821.96 822.7（M+H）+ 2.18 2.1
將以上的結果統整於下表。 [表59]
   回收率（%） 目標物 pd2－013 （面積%） 過剩延長體 pd2－013－b （面積%） AA2缺失體 pd2－013－c （面積%） 其他副產物的合計 （面積%）
條件1 77.3 100 － － －
條件2 88.6 2.6 － 93.0 4.5
條件3 48.0 21.6 27.3 36.5 14.6
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，Aib的延長反應的產率差，能獲得為主生成物之過剩延長體、AA2缺失體等。
化合物pd2－014－resin、（3R）－3－[[3－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]胺基]－2,2－二甲基丙醯基]－甲基胺基]丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－bAla（2－Me2）－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image338
由條件1所進行之pd2－014－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－015－resin（Fmoc－bAla（2－Me2）－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.443 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－014－resin。若使用乾燥樹脂（11.21 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.397 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4470.95，在304 nm之UVarea值：4038.87） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.397 × （1 ÷ 0.443 － 438.52 × 0.001 + 551.67 × 0.001）=94.1% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－014的純度為100 面積%。
分析條件：SQDAA50long [表60]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－014 目標物 551.67 552.5（M+H）+ 1.21 100
由條件2所進行之pd2－014－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－001－resin（Fmoc－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.369 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－bAla（2－Me2）－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－014－resin。若使用乾燥樹脂（9.9 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.239 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2380.93，在304 nm之UVarea值：2140.88） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.239 × （1 ÷ 0.369 － 339.38 × 0.001 + 551.67 × 0.001）=69.8% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－014的純度為68.1 面積%，過剩延長體pd2－014－b 為4.8 面積%，AA2缺失體pd2－014－c為22.8 面積%，作為其他副產物，觀測到pd3－014－d為4.3 area%。
分析條件：SQDAA50long [表61]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－014 目標物 551.67 552.5（M+H）+ 1.25 68.1
pd2－014－b 過剩延長體 650.81 651.7（M+H）+ 1.36 4.8
pd2－014－c AA2缺失體 452.54 453.5（M+H）+ 1.17 22.8
pd2－014－d 其他 749.94 750.7（M+H）+ 1.45 4.3
由條件3所進行之pd2－014－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－001－resin（Fmoc－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.369 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－bAla（2－Me2）－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－014－resin。若使用乾燥樹脂（10.86 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.227 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2472.50，在304 nm之UVarea值：2237.05） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.227 × （1 ÷ 0.369 － 339.38 × 0.001 + 551.67 × 0.001）=66.3% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－014的純度為73.9 面積%，過剩延長體pd2－014－b 為22.4 面積%，作為其他副產物，pd3－014－d被觀測到為3.7面積%。
分析條件：SQDAA50long [表62]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－014 目標物 551.67 552.5（M+H）+ 1.25 73.9
pd2－014－b 過剩延長體 650.81 651.7（M+H）+ 1.35 22.4
pd2－014－d 其他 749.94 750.8（M+H）+ 1.44 3.7
將以上的結果統整於下表。 [表63]
   回收率（%） 目標物 pd2－014 （面積%） 過剩延長體 pd2－014－b （面積%） AA2缺失體 pd2－014－c （面積%） 其他副產物的合計 pd2－014－d （面積%）
條件1 94.1 100 － － －
條件2 69.8 68.1 4.8 22.8 4.3
條件3 66.3 73.9 22.4 － 3.7
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 已負載胺基酸單體之情形，在通常的條件2中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成、由難延長部位亦即AA2的延長不良所致之AA2缺失體的生成。在與難延長序列對應之條件3中，亦觀測到由過早分裂所致之回收率的降低，雖未見到AA2缺失體的生成，但確認到過剩延長體的生成增加。
化合物pd2－015－resin、（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeLeu－MeVal－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image340
由條件1所進行之pd2－015－resin的合成 在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－016－resin（Fmoc－MeLeu－MeVal－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.348 mmol/g）將作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－015－resin。若使用乾燥樹脂（10.89 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.336 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3689.12，在304 nm之UVarea值：3325.56） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.336 × （1 ÷ 0.348 － 480.6 × 0.001 + 593.75 × 0.001）=100.4% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－015的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表64]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－015 目標物 593.75 594.6（M+H）+ 3.10 100
pd2－015－a 差向異構物 593.75 未檢測到
由條件2所進行之pd2－015－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－003－resin（Fmoc－MeVal－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.436 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeLeu－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－015－resin。若使用乾燥樹脂（10.26 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.196 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2024.53，在304 nm之UVarea值：1825.85） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.196 × （1 ÷ 0.436 － 353.41 × 0.001 + 593.75 × 0.001）=49.7% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－015的純度為94.5 面積%，AA2缺失體pd2－015－c被觀測到為5.5面積%。
分析條件：SQDFA05long [表65]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－015 目標物 593.75 594.6（M+H）+ 3.10 94.5
pd2－015－a 差向異構物 593.75 未檢測到
pd2－015－b 過剩延長體 706.91 未檢測到
pd2－015－c AA2缺失體 466.57 467.5（M+H）+ 2.69 5.5
由條件3所進行之pd2－015－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－003－resin（Fmoc－MeVal－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.436 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeLeu－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－015－resin。若使用乾燥樹脂（11.7 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.172 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2031.91，在304 nm之UVarea值：1827.32） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.172 × （1 ÷ 0.436 － 353.41 × 0.001 + 593.75 × 0.001）=43.6% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－015的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表66]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－015 目標物 593.75 594.6（M+H）+ 3.10 100
pd2－015－a 差向異構物 593.75 未檢測到
pd2－015－b 過剩延長體 706.91 未檢測到
將以上的結果統整於下表。 [表67]
   回收率（%） 目標物 pd2－015 （面積%） 差向異構物 pd2－015－a （面積%） 過剩延長體 pd2－015－b （面積%） AA2缺失體 pd2－015－c （面積%）
條件1 100.4 100.0 － － －
條件2 49.7 94.5 － － 5.5
條件3 43.6 100.0 － － －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 已負載胺基酸單體之情形，在通常的條件2中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到由難延長部位亦即AA2的延長不良所致之AA2缺失體的生成。在與難延長序列對應之條件3中，觀測到能以高純度獲得目標物者之由過早分裂所致之回收率的降低。
化合物pd2－016－resin、（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]吡咯啶－2－羧酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeVal－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image342
由條件1所進行之pd2－016－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－017－resin（Fmoc－MeVal－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.364 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－016－resin。若使用乾燥樹脂（10.32 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.344 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3574.16，在304 nm之UVarea值：3214.28） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.344 × （1 ÷ 0.364 － 450.53 × 0.001 + 563.68 × 0.001）=98.4% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－016的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表68]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－016 目標物 563.68 564.5（M+H）+ 2.62 100
pd2－016－a 差向異構物 563.68 未檢測到
由條件2所進行之pd2－016－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－004－resin（Fmoc－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.432 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－016－resin。若使用乾燥樹脂（10.58 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.312 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3327.96，在304 nm之UVarea值：2998.45） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.312 × （1 ÷ 0.432 － 337.37 × 0.001 + 563.68 × 0.001）=79.3% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－016的純度為96.1 面積%，過剩延長體pd2－016－b被觀測到為3.9 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表69]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－016 目標物 563.68 564.6（M+H）+ 2.62 96.1
pd2－016－a 差向異構物 563.68 未檢測到
pd2－016－b 過剩延長體 660.80 661.7（M+H）+ 2.54 3.9
pd2－016－c AA2缺失體 450.53 未檢測到
由條件3所進行之pd2－016－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－004－resin（Fmoc－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.432 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－016－resin。若使用乾燥樹脂（11.71 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.314 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3704.39，在304 nm之UVarea值：3340.1） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.314 × （1 ÷ 0.432 － 337.37 × 0.001 + 563.68 × 0.001）=79.8% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－016的純度為96.2 面積%，過剩延長體pd2－016－b被觀測到為3.8 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表70]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－016 目標物 563.68 564.5（M+H）+ 2.62 96.2
pd2－016－a 差向異構物 563.68 未檢測到
pd2－016－b 過剩延長體 660.80 661.8（M+H）+ 2.54 3.8
將以上的結果統整於下表。 [表71]
   回收率（%） 目標物 pd2－016 （面積%） 差向異構物 pd2－016－a （面積%） 過剩延長體 pd2－016－b （面積%） AA2缺失體 pd2－016－c （面積%）
條件1 98.4 100.0 － － －
條件2 79.3 96.1 － 3.9 －
條件3 79.8 96.2 － 3.8 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成。
化合物pd2－017－resin、（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]胺基]－3－苯基丙醯基]吡咯啶－2－羧酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－Phe－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image344
由條件1所進行之pd2－017－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－024－resin（Fmoc－Phe－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.383 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－017－resin。若使用乾燥樹脂（10.41 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.356 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3739.14，在304 nm之UVarea值：3351.23） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.356 × （1 ÷ 0.383 － 484.54 × 0.001 + 597.7 × 0.001）=97.0% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－017的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表72]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－017 目標物 597.70 598.5（M+H）+ 2.68 100
pd2－017－a 差向異構物 597.70 未檢測到
由條件2所進行之pd2－017－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－004－resin（Fmoc－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.432 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Phe－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－017－resin。若使用乾燥樹脂（10.8 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.339 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3688.78，在304 nm之UVarea值：3317.01） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.339 × （1 ÷ 0.432 － 337.37 × 0.001 + 597.7 × 0.001）=87.3% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－017的純度為97.0 面積%，過剩延長體pd2－017－b被觀測到為3.0 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表73]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－017 目標物 597.70 598.5（M+H）+ 2.68 97.0
pd2－017－a 差向異構物 597.70 未檢測到
pd2－017－b 過剩延長體 694.82 695.7（M+H）+ 2.60 3.0
pd2－017－c AA2缺失體 450.53 未檢測到
由條件3所進行之pd2－017－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－004－resin（Fmoc－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.432 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Phe－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－017－resin。若使用乾燥樹脂（10.85 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.320 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3510.64，在304 nm之UVarea值：3136.09） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.320 × （1 ÷ 0.432 － 337.37 × 0.001 + 597.7 × 0.001）=82.4% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－017的純度為94.8 面積%，過剩延長體pd2－017－b被觀測到為5.2 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表74]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－017 目標物 597.70 598.6（M+H）+ 2.68 94.8
pd2－017－a 差向異構物 597.70 未檢測到
pd2－017－b 過剩延長體 694.82 695.6（M+H）+ 2.60 5.2
將以上的結果統整於下表。 [表75]
   回收率（%） 目標物 pd2－017 （面積%） 差向異構物 pd2－017－a （面積%） 過剩延長體 pd2－017－b （面積%） AA2缺失體 pd2－017－c （面積%）
條件1 97.0 100.0 － － －
條件2 87.3 97.0 － 3.0 －
條件3 82.4 94.8 － 5.2 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成。
化合物pd2－018－resin、（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]胺基]－6－[（2－甲基丙烷－2－基）氧基羰基胺基]己醯基]吡咯啶－2－羧酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－Lys（Boc）－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image346
由條件1所進行之pd2－018－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－025－resin（Fmoc－Lys（Boc）－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.339 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－018－resin。若使用乾燥樹脂（10.97 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.319 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3517.51，在304 nm之UVarea值：3171.30） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.319 × （1 ÷ 0.339 － 565.66 × 0.001 + 678.81 × 0.001）=97.7% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－018的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表76]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－018 目標物 678.81 679.7（M+H）+ 2.74 100.0
pd2－018－a 差向異構物 678.81 未檢測到
由條件2所進行之pd2－018－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－004－resin（Fmoc－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.432 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Lys（Boc）－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－018－resin。若使用乾燥樹脂（10.72 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.311 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3353.43，在304 nm之UVarea值：3026.12） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.311 × （1 ÷ 0.432 － 337.37 × 0.001 + 678.81 × 0.001）=82.6% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－018的純度為95.7 面積%，過剩延長體pd2－018－b被觀測到為4.3 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表77]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－018 目標物 678.81 679.7（M+H）+ 2.74 95.7
pd2－018－a 差向異構物 678.81 未檢測到
pd2－018－b 過剩延長體 775.93 776.8（M+H）+ 2.67 4.3
pd2－018－c AA2缺失體 450.53 未檢測到
由條件3所進行之pd2－018－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－004－resin（Fmoc－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.432 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Lys（Boc）－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－018－resin。若使用乾燥樹脂（9.90 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.313 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3111.54，在304 nm之UVarea值：2815.86） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.313 × （1 ÷ 0.432 － 337.37 × 0.001 + 678.81 × 0.001）=83.1% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－018的純度為92.2 面積%，過剩延長體pd2－018－b被觀測到為7.8 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表78]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－018 目標物 678.81 679.7（M+H）+ 2.74 92.2
pd2－018－a 差向異構物 678.81 未檢測到
pd2－018－b 過剩延長體 775.93 776.7（M+H）+ 2.68 7.8
將以上的結果統整於下表。 [表79]
   回收率（%） 目標物 pd2－018 （面積%） 差向異構物 pd2－018－a （面積%） 過剩延長體 pd2－018－b （面積%） AA2缺失體 pd2－018－c （面積%）
條件1 97.7 100.0 － － －
條件2 82.6 95.7 － 4.3 －
條件3 83.1 92.2 － 7.8 －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，除了由過早分裂所致之回收率的降低以外，亦觀測到過剩延長體的生成。
化合物pd2－019－resin、2－[[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]－2－甲基丙烷酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeLeu－Aib－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image348
由條件1所進行之pd2－019－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－018－resin（Fmoc－MeLeu－Aib－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.300 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－019－resin。若使用乾燥樹脂（12.24 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.292 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3596.70，在304 nm之UVarea值：3242.23） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.292 × （1 ÷ 0.300 － 452.54 × 0.001 + 565.7 × 0.001）=100.6% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－019的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表80]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－019 目標物 565.70 566.6（M+H）+ 2.86 100
pd2－019－a 差向異構物 565.70 未檢測到
由條件2所進行之pd2－019－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－005－resin（Fmoc－Aib－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.390 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeLeu－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－019－resin。若使用乾燥樹脂（9.87 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.334 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3325.50，在304 nm之UVarea值：2988.67） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.334 × （1 ÷ 0.390 － 325.36 × 0.001 + 565.7 × 0.001）=93.7% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－019的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表81]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－019 目標物 565.70 566.6（M+H）+ 2.86 100
pd2－019－a 差向異構物 565.70 未檢測到
pd2－019－b 過剩延長體 650.81 未檢測到
pd2－019－c AA2缺失體 438.52 未檢測到
由條件3所進行之pd2－019－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－005－resin（Fmoc－Aib－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.390 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeLeu－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－019－resin。若使用乾燥樹脂（10.16 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.294 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3010.23，在304 nm之UVarea值：2713.79） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.294 × （1 ÷ 0.390 － 325.36 × 0.001 + 565.7 × 0.001）=82.5% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－019的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表82]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－019 目標物 565.70 566.6（M+H）+ 2.85 100
pd2－019－a 差向異構物 565.70 未檢測到
pd2－019－b 過剩延長體 650.81 未檢測到
將以上的結果統整於下表。 [表83]
   回收率（%） 目標物 pd2－019 （面積%） 差向異構物 pd2－019－a （面積%） 過剩延長體 pd2－019－b （面積%） AA2缺失體 pd2－019－c （面積%）
條件1 100.6 100.0 － － －
條件2 93.7 100.0 － － －
條件3 82.5 100.0 － － －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，確認到能以高純度獲得目標物者之由過早分裂所致之回收率的降低。
化合物pd2－020－resin、2－[[（2S）－2－[[（2S,3S）－2－（9H－茀－9－基甲氧羰基胺基）－3－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]胺基]乙酸－2－氯三苯甲基樹脂（Fmoc－Ile－MeVal－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）的合成
Figure 02_image350
由條件1所進行之pd2－020－resin的合成 將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－019－resin（Fmoc－MeVal－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.303 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－020－resin。若使用乾燥樹脂（10.5 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.264 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2792.18，在304 nm之UVarea值：2514.31） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.264 × （1 ÷ 0.303 － 410.46 × 0.001 + 523.62 × 0.001）=90.1% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－020的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表84]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－020 目標物 523.62 524.5（M+H）+ 2.45 100
pd2－020－a 差向異構物 523.62 未檢測到
由條件2所進行之pd2－020－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－006－resin（Fmoc－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.250 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－020－resin。若使用乾燥樹脂（10.18 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.185 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1889.34，在304 nm之UVarea值：1720.13） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.185 × （1 ÷ 0.250 － 297.3 × 0.001 + 523.62 × 0.001）=78.2% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－020的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表85]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－020 目標物 523.62 524.5（M+H）+ 2.45 100
pd2－020－a 差向異構物 523.62 未檢測到
pd2－020－b 過剩延長體 580.67 未檢測到
pd2－020－c AA2缺失體 410.46 未檢測到
由條件3所進行之pd2－020－resin的合成 將在實施例1－4所製備之胺基酸負載樹脂aa4－006－resin（Fmoc－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）（100 mg, 0.250 mmol/g）作為原料，遵循合成法1，進行Fmoc－MeVal－OH的延長（oxyma、50℃、10小時），接著進行Fmoc－Ile－OH的延長（HOAt、40℃、2.5小時），合成pd2－011－resin。若使用乾燥樹脂（10.93 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.199 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2175.24，在304 nm之UVarea值：1978.49） 回收率係遵循回收率計算法並利用以下的公式進行計算。 回收率=0.199 × （1 ÷ 0.250 － 297.3 × 0.001 + 523.62 × 0.001）=84.1% 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd2－020的純度為100 面積%。
分析條件：SQDFA05long [表86]
      分子量 LCMS（ESI） m/z 保持時間（分鐘） LC 面積%
pd2－020 目標物 523.62 524.5（M+H）+ 2.45 100
pd2－020－a 差向異構物 523.62 未檢測到
pd2－020－b 過剩延長體 580.67 未檢測到
將以上的結果統整於下表。 [表87]
   回收率（%） 目標物 pd2－020 （面積%） 差向異構物 pd2－020－a （面積%） 過剩延長體 pd2－020－b （面積%） AA2缺失體 pd2－020－c （面積%）
條件1 90.1 100.0 － － －
條件2 78.2 100.0 － － －
條件3 84.1 100.0 － － －
在已負載二胜肽之條件1中，能以高回收率、高純度獲得目標物。 在已負載胺基酸單體之條件2、條件3中，確認到能以高純度獲得目標物者之由過早分裂所致之回收率的降低。
以上，由實施例2的結果所示，相對於一般的胜肽合成法亦即使胺基酸單體負載於樹脂並依序延長胺基酸之方法，藉由採用本發明的方法亦即在預先製備二胜肽後使其負載並依序延長胺基酸之方法，可以高回收率製備胜肽，並且亦使其純度大幅地提升。此外，作為一般的方法中之純度降低的主要原因，雖確認為差向異構物、過剩延長體、AA2缺失體，但藉由本發明的方法，能完全避免由過剩延長體及AA2缺失體所製之純度降低。又，如同先前亦有記載，針對差向異構物，亦因在往樹脂進行負載前進行嚴格的精製，故能謀求避免或者大幅地減少，相對於一般的胜肽合成法為優點。
實施例3. 發明條件下之各種胜肽的合成 本實施例中，記載關於將已負載由2個以上的胺基酸所構成之胜肽之樹脂作為起始原料之5殘基至15殘基的鏈長的鏈狀胜肽、及環狀胜肽的合成。 針對鏈狀胜肽，遵循實施例2所記載之合成法1而合成。 針對環狀胜肽，遵循以下所記載之合成法2而合成。 合成法2 針對使用胜肽合成機之胺基酸延長反應，利用與合成法1同樣的手法進行。胜肽延長結束後，在包含樹脂之固相反應容器中添加DBU的DMF溶液（2%v/v, 0.7 mL），在室溫使其反應15分鐘，進行Fmoc基的去除反應後，將溶液從玻料排出。將所得之樹脂以DMF（0.7 mL）清洗4次後，以DCM（0.7 mL）清洗4次。 對於所得之樹脂，添加包含0.75%（v/v）的DIPEA之TFE/DCM（1/1，2.0 mL），在室溫使其反應2小時，進行胜肽鏈從樹脂的切出反應。反應後，從玻料回收管內的溶液。在殘留的樹脂中添加TFE/DCM（1/1，1.0 mL），進行2次從玻料回收溶液的操作。將所得之全部的切出溶液進行混合，在混合DMF（4.0 mL）後，藉由Genevac公司製高通量離心蒸發器（HT－12），在減壓下餾去溶媒。 將藉由上述的方法所得之殘渣溶解於DMF（4.0 mL）與DCM（4.0 mL）之混合液，添加HATU的DMF溶液（0.5 mol/L, 1.5當量）與DIPEA（1.8等量），在室溫攪拌2小時，藉此進行N端的胺基與為樹脂結合部位之羧酸的縮合環化反應後，藉由Genevac公司製高通量離心蒸發器（HT－12），在減壓下餾去溶媒。此外，等量數係以將使用作為原料之樹脂的胜肽負載量（mmol/g）乘以所使用之樹脂量而得者作為基準以進行計算。 在藉由上述的方法所得之殘渣中添加DMSO，利用過濾器過濾去除不溶物後，以preparative－HPLC進行精製，獲得目標的環狀胜肽。精製裝置係使用Waters Auto Purification System，管柱係使用YMC－Actus Triart C18（內徑20 mm，長度100 mm），移動相係使用甲醇－乙酸銨水溶液（50 mmol/L）。
實施例3－1. 使用二胜肽負載樹脂之鏈狀胜肽的合成 在本實施例中，記載藉由使用胜肽合成機之固相反應，將在實施例1－4所製備之胜肽負載樹脂作為原料而合成以下的表88所示之鏈狀胜肽時的產率、純度。
[表88]
Figure 02_image352
化合物pd3－001、（3S）－3－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸（Fmoc－MeAla－MeLeu－Ala－MeVal－MeAsp－pip）（序列識別號：1）的合成
Figure 02_image354
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－001－resin（Fmoc－MeVal－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（100.07 mg, 0.363 mmol/g, 0.0363 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－001－resin（106.39 mg）。若使用乾燥樹脂（11.61 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.290 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3317.18，在304 nm之UVarea值：2984.87）。因此而得之胜肽被算出為106.39 × 0.001 × 0.290=0.0309 mmol（產率84.9%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－001的純度為96.9 面積%。 LCMS（ESI） m/z=833.9 （M+H） +保持時間：0.98分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－002、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAla－MeLeu－Gly－MeVal－Asp－NMe2）（序列識別號：2）的合成
Figure 02_image356
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－012－resin（Fmoc－MeVal－Asp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（99.97 mg, 0.373 mmol/g, 0.0373 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－002－resin（103.97 mg）。若使用乾燥樹脂（11.18 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.282 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3102.95，在304 nm之UVarea值：2794.81）。因此而得之胜肽被算出為103.97 × 0.001 × 0.282=0.0293 mmol（產率78.6%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－002的純度為94.7 面積%。 LCMS（ESI） m/z=765.7 （M+H） +保持時間：0.85分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－003、（3R）－3－[[3－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]乙醯基]胺基]－2,2－二甲基丙醯基]－甲基胺基]丁酸（Fmoc－MeAla－MeLeu－Gly－bAla（2－Me2）－D－3－MeAbu－OH）（序列識別號：3）的合成
Figure 02_image358
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－015－resin（Fmoc－bAla（2－Me2）－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（99.55 mg, 0.443 mmol/g, 0.0441 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－003－resin（108.03 mg）。若使用乾燥樹脂（10.1 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.284 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2819.65，在304 nm之UVarea值：2543.21）。因此而得之胜肽被算出為108.03 × 0.001 × 0.284=0.0307 mmol（產率69.6%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－003的純度為98.3 面積%。 LCMS（ESI） m/z=708.7 （M+H） +保持時間：0.85分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－004、（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－3－苯基丙醯基]吡咯啶－2－羧酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeAla－Phe－Pro－OH）（序列識別號：4）的合成
Figure 02_image360
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－024－resin（Fmoc－Phe－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100.43 mg, 0.383 mmol/g, 0.0385 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－004－resin（107.41 mg）。若使用乾燥樹脂（10.43 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.279 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2859.19，在304 nm之UVarea值：2585.67）。因此而得之胜肽被算出為107.41 × 0.001 × 0.279=0.0300 mmol（產率77.9%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－004的純度為97.7 面積%。 LCMS（ESI） m/z=768.7 （M+H） +保持時間：0.91分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－005、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－MeAla－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2）（序列識別號：5）的合成
Figure 02_image362
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－006－resin（Fmoc－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100.13 mg, 0.345 mmol/g, 0.0345 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－005－resin（109.69 mg）。若使用乾燥樹脂（12.17 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.249 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2972.89，在304 nm之UVarea值：2684.40）。因此而得之胜肽被算出為109.69 × 0.001 × 0.249=0.0273 mmol（產率79.1%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－005的純度為98.5 面積%。 LCMS（ESI） m/z=962.0 （M+H） +保持時間：0.84分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－006、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]－2－甲基丙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－MeAla－Gly－Aib－MeAsp－NMe2）（序列識別號：6）的合成
Figure 02_image364
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－014－resin（Fmoc－Aib－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（101.05 mg, 0.413 mmol/g, 0.0417 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－006－resin（117.09 mg）。若使用乾燥樹脂（9.53 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.282 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2641.40，在304 nm之UVarea值：2381.48）。因此而得之胜肽被算出為117.09 × 0.001 × 0.282=0.0330 mmol（產率79.1%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－006的純度為97.2 面積%。 LCMS（ESI） m/z=949.9 （M+H） +保持時間：0.85分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－007、2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]胺基]乙酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－MeAla－Ala－MeVal－Gly－OH）（序列識別號：7）的合成
Figure 02_image366
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－019－resin（Fmoc－MeVal－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）（99.65 mg, 0.303 mmol/g, 0.0302 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－007－resin（100.83 mg）。若使用乾燥樹脂（10.16 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.150 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1498.17，在304 nm之UVarea值：1349.88）。因此而得之胜肽被算出為100.83 × 0.001 × 0.150=0.0151 mmol（產率50.1%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－007的純度為100 面積%。 LCMS（ESI） m/z=836.8 （M+H） +保持時間：0.81分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－008、（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]－3－[4－[（2－甲基丙烷－2－基）氧基]苯基]丙烷酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－MeAla－Gly－Tyr（tBu）－OH）（序列識別號：8）的合成
Figure 02_image368
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－026－resin（Fmoc－Gly－Tyr（tBu）－O－Trt（2－Cl）resin）（99.51 mg, 0.244 mmol/g, 0.0243 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－008－resin（103.75 mg）。若使用乾燥樹脂（10.03 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.124 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1220.62，在304 nm之UVarea值：1102.84）。因此而得之胜肽被算出為103.75 × 0.001 × 0.124=0.0129 mmol（產率53.0%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－008的純度為98.1 面積%。 LCMS（ESI） m/z=999.0 （M+H） +保持時間：1.01分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－009、（3R）－3－[[（2S）－2－環己基－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－MeAla－Leu－MePhe－Ala－MeChg－D－3－MeAbu－OH）（序列識別號：9）的合成
Figure 02_image370
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－009－resin（Fmoc－MeChg－D－3－MeAbu－O－Trt（2－Cl）resin）（98.87 mg, 0.397 mmol/g, 0.0393 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－009－resin（123.62 mg）。若使用乾燥樹脂（9.5 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.261 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2436.27，在304 nm之UVarea值：2197.47）。因此而得之胜肽被算出為123.62 × 0.001 × 0.261=0.0323 mmol（產率82.2%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－009的純度為100 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1193.1 （M+H） +保持時間：3.35分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－010、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－MePhe－Ala－MeLeu－Gly－MeAsp－NMe2）（序列識別號：10）的合成
Figure 02_image372
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－013－resin（Fmoc－Gly－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（102.05 mg, 0.386 mmol/g, 0.0394 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－010－resin（124.68 mg）。若使用乾燥樹脂（10.93 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.256 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2749.59，在304 nm之UVarea值：2477.73）。因此而得之胜肽被算出為124.68 × 0.001 × 0.256=0.0319 mmol（產率81.0%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－010的純度為96.2 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1210.1 （M+H） +保持時間：3.08分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－011、（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]吡咯啶－2－羧酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－MeAla－Leu－MePhe－Ala－MeVal－Pro－OH）（序列識別號：11）的合成
Figure 02_image374
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－017－resin（Fmoc－MeVal－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（100.4 mg, 0.364 mmol/g, 0.0365 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－011－resin（120.38 mg）。若使用乾燥樹脂（11.24 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.251 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2775.79，在304 nm之UVarea值：2505.11）。因此而得之胜肽被算出為120.38 × 0.001 × 0.251=0.0302 mmol（產率82.7%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－011的純度為100 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1151.1 （M+H） +保持時間：3.03分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－012、（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]胺基]丙烷酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－MePhe－Gly－MeLeu－Ala－Ala－OH）（序列識別號：12）的合成
Figure 02_image376
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－027－resin（Fmoc－Ala－Ala－O－Trt（2－Cl）resin）（100.08 mg, 0.334 mmol/g, 0.0334 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－012－resin（112.35 mg）。若使用乾燥樹脂（11.29 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.154 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1713.25，在304 nm之UVarea值：1541.67）。因此而得之胜肽被算出為112.35 × 0.001 × 0.154=0.0173 mmol（產率51.8%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－012的純度為100 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1125.1 （M+H） +保持時間：3.09分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－013、（3S）－3－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]丙醯基]吡咯啶－2－羰基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－Ala－Leu－MePhe－Ala－Pro－Ala－MeLeu－MeAsp－pip）（序列識別號：13）的合成
Figure 02_image378
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－005－resin（Fmoc－MeLeu－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（98.77 mg, 0.355 mmol/g, 0.0351 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－013－resin（122.47 mg）。若使用乾燥樹脂（12.12 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.238 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2831.35，在304 nm之UVarea值：2559.52）。因此而得之胜肽被算出為122.47 × 0.001 × 0.238=0.0291 mmol（產率83.1%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－013的純度為97.6 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1418.3 （M+H） +保持時間：3.06分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－014、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2R）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－Gly－MePhe－MeAla－Leu－Gly－D－MeVal－MeAsp－NMe2）（序列識別號：14）的合成
Figure 02_image380
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－020－resin（Fmoc－D－MeVal－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100.30 mg, 0.396 mmol/g, 0.0397 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－014－resin（129.26 mg）。若使用乾燥樹脂（10.50 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.240 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2480.95，在304 nm之UVarea值：2240.17）。因此而得之胜肽被算出為129.26 × 0.001 × 0.240=0.0310 mmol（產率78.1%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－014的純度為97.8 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1380.3 （M+H） +保持時間：2.98分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－015、（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]丙醯基]吡咯啶－2－羰基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－6－[（2－甲基丙烷－2－基）氧基羰基胺基]己醯基]吡咯啶－2－羧酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－Ala－Leu－MePhe－Ala－Pro－MeAla－Lys（Boc）－Pro－OH）（序列識別號：15）的合成
Figure 02_image382
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－025－resin（Fmoc－Lys（Boc）－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（101.94 mg, 0.339 mmol/g, 0.0346 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－015－resin（126.91 mg）。若使用乾燥樹脂（9.80 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.207 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1996.33，在304 nm之UVarea值：1798.34）。因此而得之胜肽被算出為126.91 × 0.001 × 0.207=0.0263 mmol（產率76.0%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－015的純度為100 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1434.3 （M+H） +保持時間：3.02分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－016、2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]乙酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－Gly－MePhe－MeAla－Leu－MeAla－Phe－Gly－OH）（序列識別號：16）的合成
Figure 02_image384
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－028－resin（Fmoc－Phe－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）（100.91 mg, 0.248 mmol/g, 0.0250 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－016－resin（111.48 mg）。若使用乾燥樹脂（11.35 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.107 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1190.73，在304 nm之UVarea值：1072.44）。因此而得之胜肽被算出為111.48 × 0.001 × 0.107=0.0119 mmol（產率47.7%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－016的純度為100 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1343.2 （M+H） +保持時間：3.17分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－017、（3S）－3－[[（2S）－2－環己基－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基－4－哌啶－1－基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－MeAla－Leu－MePhe－MeAla－Gly－Leu－MeLeu－Ala－MeChg－MeAsp－pip）（序列識別號：17）的合成
Figure 02_image386
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－004－resin（Fmoc－MeChg－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－pip）（101.83 mg, 0.347 mmol/g, 0.0353 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－017－resin（138.64 mg）。若使用乾燥樹脂（10.89 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.217 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2322.69，在304 nm之UVarea值：2091.98）。因此而得之胜肽被算出為138.64 × 0.001 × 0.217=0.0301 mmol（產率85.1%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－017的純度為97.9 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1672.6 （M+H） +保持時間：3.59分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－018、（3S）－4－（二甲基胺基）－3－[[3－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]乙醯基]胺基]－2,2－二甲基丙醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－MePhe－Gly－MeAla－Leu－Ala－MeLeu－Gly－bAla（2－Me2）－MeAsp－NMe2）（序列識別號：18）的合成
Figure 02_image388
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－021－resin（Fmoc－bAla（2－Me2）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100.87 mg, 0.407 mmol/g, 0.0411 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－018－resin（143.00 mg）。若使用乾燥樹脂（9.92 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.234 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2287.01，在304 nm之UVarea值：2057.57）。因此而得之胜肽被算出為143.00 × 0.001 × 0.234=0.0335 mmol（產率81.5%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－018的純度為97.9 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1564.5 （M+H） +保持時間：3.05分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－019、2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]－2－甲基丙烷酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－MeAla－Leu－MePhe－MeAla－Gly－Leu－MeLeu－Ala－MeLeu－Aib－OH）（序列識別號：19）的合成
Figure 02_image390
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－018－resin（Fmoc－MeLeu－Aib－O－Trt（2－Cl）resin）（99.74 mg, 0.300 mmol/g, 0.0299 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－019－resin（125.92 mg）。若使用乾燥樹脂（9.72 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.190 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1817.28，在304 nm之UVarea值：1638.87）。因此而得之胜肽被算出為125.92 × 0.001 × 0.190=0.0239 mmol（產率80.0%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－019的純度為100 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1535.5 （M+H） +保持時間：3.35分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－020、2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－側氧基－4－（三苯甲基胺基）丁醯基]胺基]乙酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－MePhe－Gly－MeAla－Leu－Ala－MeLeu－MeAla－Asn（Trt）－Gly－OH）（序列識別號：20）的合成
Figure 02_image392
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－029－resin（Fmoc－Asn（Trt）－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）（99.73 mg, 0.259 mmol/g, 0.0258 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－020－resin（119.40 mg）。若使用乾燥樹脂（9.67 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.144 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1373.79，在304 nm之UVarea值：1235.99）。因此而得之胜肽被算出為119.4 × 0.001 × 0.144=0.0172 mmol（產率66.6%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－020的純度為100 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1750.6 （M+H） +保持時間：3.69分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－021、（3R）－4－（二甲基胺基）－3－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－1－[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]吡咯啶－2－羰基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－Ala－Leu－MePhe－MeAla－Gly－MePhe－Pro－Ala－MeLeu－Gly－MeVal－D－MeAsp－NMe2）（序列識別號：21）的合成
Figure 02_image394
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－022－resin（Fmoc－MeVal－D－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（99.76 mg, 0.396 mmol/g, 0.0395 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－021－resin（143.67 mg）。若使用乾燥樹脂（9.81 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.230 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2215.34，在304 nm之UVarea值：1997.01）。因此而得之胜肽被算出為143.67 × 0.001 × 0.230=0.0330 mmol（產率83.6%）。又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－021的純度為98.0 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1780.6 （M+H） +保持時間：2.91分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－022、2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－3－甲基丁醯基]－甲基胺基]乙酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－MePhe－Gly－MeAla－Leu－MePhe－MeAla－Ala－MeLeu－Ala－MeVal－MeGly－OH）（序列識別號：22）的合成
Figure 02_image396
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－010－resin（Fmoc－MeVal－MeGly－O－Trt（2－Cl）resin）（99.21 mg, 0.374 mmol/g, 0.0371 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－022－resin（130.94 mg）。若使用乾燥樹脂（10.65 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.178 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1866.70，在304 nm之UVarea值：1683.07）。因此而得之胜肽被算出為130.94 × 0.001 × 0.178=0.0233 mmol（產率62.8%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－022的純度為100 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1753.6 （M+H） +保持時間：3.46分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－023、（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]－3－甲基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－Ala－Leu－MePhe－MeAla－Gly－MePhe－MeAla－Ala－MeLeu－MeAla－Gly－Val－OH）（序列識別號：23）的合成
Figure 02_image398
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－030－resin（Fmoc－Gly－Val－O－Trt（2－Cl）resin）（99.41 mg, 0.278 mmol/g, 0.0276 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－023－resin（131.81 mg）。若使用乾燥樹脂（9.88 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.162 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1576.35，在304 nm之UVarea值：1424.24）。因此而得之胜肽被算出為131.81 × 0.001 × 0.162=0.0214 mmol（產率77.3%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－023的純度為99.6 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1683.5 （M+H） +保持時間：2.98分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－024、2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]吡咯啶－2－羰基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－3－[（2－甲基丙烷－2－基）氧基]丙醯基]胺基]乙酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－MePhe－Gly－MeAla－Leu－MePhe－Pro－Ala－MeLeu－MeAla－Ser（tBu）－Gly－OH）（序列識別號：24）的合成
Figure 02_image400
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－031－resin（Fmoc－Ser（tBu）－Gly－O－Trt（2－Cl）resin）（98.17 mg, 0.258 mmol/g, 0.0253 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－024－resin（128.02 mg）。若使用乾燥樹脂（9.96 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.139 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：1361.24，在304 nm之UVarea值：1223.95）。因此而得之胜肽被算出為128.02 × 0.001 × 0.139=0.0178 mmol（產率70.3%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－024的純度為98.8 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1795.6 （M+H） +保持時間：3.38分鐘（分析條件 SQDFA05long）
實施例3－2.使用三胜肽負載樹脂之鏈狀胜肽的合成 在本實施例中，記載藉由使用胜肽合成機之固相反應，將在實施例1－4所製備之三胜肽負載樹脂作為原料而合成以下的表89所示之鏈狀胜肽時的產率、純度。
[表89]
Figure 02_image402
化合物pd3－025、（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]胺基]丙醯基]吡咯啶－2－羧酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－Ala－Pro－OH）（序列識別號：25）的合成
Figure 02_image404
將在實施例1－4所製備之三胜肽負載樹脂aa2－032－resin（Fmoc－Ala－Ala－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（99.58 mg, 0.393 mmol/g, 0.0391 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－025－resin（106.62 mg）。若使用乾燥樹脂（11.42 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.274 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3085.85，在304 nm之UVarea值：2775.25）。因此而得之胜肽被算出為106.62 × 0.001 × 0.274=0.0292 mmol（產率74.6%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－025的純度為99.0 面積%。 LCMS（ESI） m/z=805.8 （M+H） +保持時間：0.88分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－026、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2）（序列識別號：26）的合成
Figure 02_image406
將在實施例1－4所製備之三胜肽負載樹脂aa2－023－resin（Fmoc－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（99.54 mg, 0.378 mmol/g, 0.0376 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－026－resin（105.54 mg）。若使用乾燥樹脂（9.85 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.286 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2767.26，在304 nm之UVarea值：2504.21）。因此而得之胜肽被算出為105.54 × 0.001 × 0.286=0.0302 mmol（產率80.2%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－026的純度為98.0 面積%。 LCMS（ESI） m/z=932.9 （M+H） +保持時間：0.99分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd3－027、（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]胺基]丙醯基]吡咯啶－2－羧酸（Fmoc－MeAla－MeLeu－Ala－MeGly－MePhe－Leu－MeLeu－Ala－Ala－Pro－OH）（序列識別號：27）的合成
Figure 02_image408
將在實施例1－4所製備之三胜肽負載樹脂aa2－032－resin（Fmoc－Ala－Ala－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（98.96 mg, 0.393 mmol/g, 0.0389 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－027－resin（115.73 mg）。若使用乾燥樹脂（9.65 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.216 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2050.67，在304 nm之UVarea值：1843.73）。因此而得之胜肽被算出為115.73 × 0.001 × 0.216=0.0258 mmol（產率64.3%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－027的純度為98.3 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1236.2 （M+H） +保持時間：3.04分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－028、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAla－MeLeu－Ala－MeLeu－MePhe－Leu－MeAla－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2）（序列識別號：28）的合成
Figure 02_image410
將在實施例1－4所製備之三胜肽負載樹脂aa2－023－resin（Fmoc－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（98.56 mg, 0.378 mmol/g, 0.0373 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－028－resin（117.53 mg）。若使用乾燥樹脂（9.53 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.225 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2107.24，在304 nm之UVarea值：1901.56）。因此而得之胜肽被算出為117.53 × 0.001 × 0.225=0.0264 mmol（產率71.0%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－028的純度為96.3 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1377.3 （M+H） +保持時間：3.44分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－029、（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]丙醯基]胺基]丙醯基]吡咯啶－2－羧酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－MeAla－Leu－MePhe－MeAla－Gly－Leu－MeLeu－MeAla－Ala－Ala－Pro－OH）（序列識別號：29）的合成
Figure 02_image412
將在實施例1－4所製備之三胜肽負載樹脂aa2－032－resin（Fmoc－Ala－Ala－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（99.49 mg, 0.393 mmol/g, 0.0391 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－029－resin（135.39 mg）。若使用乾燥樹脂（10.35 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.223 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2277.17，在304 nm之UVarea值：2047.71）。因此而得之胜肽被算出為135.39 × 0.001 × 0.223=0.0302 mmol（產率77.2%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－029的純度為100 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1576.4 （M+H）+ 保持時間：2.89分鐘（分析條件 SQDFA05long）
化合物pd3－030、（3S）－3－[[（2S）－2－環戊基－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[[2－[[（2S）－2－[[（2S）－2－[9H－茀－9－基甲氧羰基（甲基）胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－3－苯基丙醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]－4－甲基戊醯基]－甲基胺基]丙醯基]胺基]丙醯基]－甲基胺基]乙醯基]－甲基胺基]－4－（二甲基胺基）－4－側氧基丁酸（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－MeAla－Leu－MePhe－MeAla－Gly－Leu－MeLeu－MeAla－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2）（序列識別號：30）的合成
Figure 02_image414
將在實施例1－4所製備之三胜肽負載樹脂aa2－023－resin（Fmoc－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（100.21 mg, 0.378 mmol/g, 0.0379 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd3－030－resin（135.50 mg）。若使用乾燥樹脂（9.36 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.229 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：2106.02，在304 nm之UVarea值：1896.06）。因此而得之胜肽被算出為135.50 × 0.001 × 0.229=0.0310 mmol（產率81.9%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd3－030的純度為97.2 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1703.6 （M+H） +保持時間：3.12分鐘（分析條件 SQDFA05long）
實施例3－3.使用二胜肽負載Sieber樹脂之鏈狀胜肽的合成 在本實施例中，記載藉由使用胜肽合成機之固相反應，將在實施例1－4所製備之二胜肽負載Sieber樹脂作為原料而合成以下的表90所示之鏈狀胜肽時的產率、純度。 此外，使用Sieber樹脂時，胜肽的延長反應雖亦遵循合成法1，但在胜肽的切出反應中使用TFE/DCM/TFA溶液（1/1/0.02, 1 mL）。
[表90]
Figure 02_image416
化合物pd4－001、N－[（2S）－1－[[（2S）－1－[[（2S）－1－[[（2S）－1－[[（2S）－4－胺基－1,4－二側氧基－1－哌啶－1－基丁烷－2－基]－甲基胺基]－3－甲基－1－側氧基丁烷－2－基]－甲基胺基]－1－側氧基丙烷－2－基]胺基]－4－甲基－1－側氧基戊烷－2－基]胺基]－1－側氧基丙烷－2－基]－N－甲基胺甲酸 9H－茀－9－基甲基（Fmoc－MeAla－Leu－Ala－MeVal－MeAsn－pip）（序列識別號：31）的合成
Figure 02_image418
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa5－001－resin（Fmoc－MeVal－MeAsp（NH－Sieber resin）－pip）（99.51 mg, 0.538 mmol/g, 0.0535 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd4－001－resin（114.04 mg）。若使用乾燥樹脂（11.54 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.455 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：5167.27，在304 nm之UVarea值：4651.86）。因此而得之胜肽被算出為114.04 × 0.001 × 0.455=0.0519 mmol（產率97.0%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd4－001的純度為95.0 面積%。 LCMS（ESI） m/z=818.9 （M+H） +保持時間：0.88分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd4－002、N－[（2S）－1－[[（2S）－1－[[2－[[（2S）－1－[[（2S）－1－[[（2S）－1－[[（2S）－4－胺基－1,4－二側氧基－1－哌啶－1－基丁烷－2－基]－甲基胺基]－3－甲基－1－側氧基丁烷－2－基]－甲基胺基]－1－側氧基丙烷－2－基]胺基]－1－側氧基丙烷－2－基]－甲基胺基]－2－側氧基乙基]－甲基胺基]－4－甲基－1－側氧基戊烷－2－基]胺基]－1－側氧基丙烷－2－基]－N－甲基胺甲酸 9H－茀－9－基甲基（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－MeAla－Ala－MeVal－MeAsn－pip）（序列識別號：32）的合成
Figure 02_image420
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa5－001－resin（Fmoc－MeVal－MeAsp（NH－Sieber resin）－pip）（97.92 mg, 0.538 mmol/g, 0.0527 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd4－002－resin（123.73 mg）。若使用乾燥樹脂（11.08 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.404 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：4405.15，在304 nm之UVarea值：3963.55）。因此而得之胜肽被算出為123.73 × 0.001 × 0.404=0.0500 mmol（產率94.9%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd4－002的純度為95.0 面積%。 LCMS（ESI） m/z=975.0 （M+H） +保持時間：0.83分鐘（分析條件 SQDFA05）
化合物pd4－003、N－[（2S）－1－[[（2S）－1－[[2－[[（2S）－1－[[（2S）－1－[[（2S）－1－[[（2S）－1－[（2S）－2－[[（2S）－1－[[（2S）－1－[[（2S）－4－胺基－1,4－二側氧基－1－哌啶－1－基丁烷－2－基]－甲基胺基]－3－甲基－1－側氧基丁烷－2－基]－甲基胺基]－1－側氧基丙烷－2－基]胺甲醯基]吡咯啶－1－基]－1－側氧基丙烷－2－基]胺基]－1－側氧基－3－苯基丙烷－2－基]－甲基胺基]－4－甲基－1－側氧基戊烷－2－基]胺基]－1－側氧基丙烷－2－基]胺基]－2－側氧基乙基]－甲基胺基]－4－甲基－1－側氧基戊烷－2－基]胺基]－1－側氧基丙烷－2－基]－N－甲基胺甲酸 9H－茀－9－基甲基（Fmoc－MeAla－Leu－MeGly－Ala－Leu－MePhe－Ala－Pro－Ala－MeVal－MeAsn－pip）（序列識別號：33）的合成
Figure 02_image422
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa5－001－resin（Fmoc－MeVal－MeAsp（NH－Sieber resin）－pip）（97.73 mg, 0.538 mmol/g, 0.0526 mmol）作為原料，遵循合成法1，依序進行對應之胺基酸的延長反應，合成pd4－003－resin（146.90 mg）。若使用乾燥樹脂（9.45 mg）並藉由Fmoc定量法計算負載量，則為0.336 mmol/g。（在294 nm之UVarea值：3126.02，在304 nm之UVarea值：2813.70）。因此而得之胜肽被算出為146.90 × 0.001 × 0.336=0.0494 mmol（產率93.9%）。 又，以LCMS分析切出反應液的結果，目標物pd4－003的純度為98.8 面積%。 LCMS（ESI） m/z=1403.3 （M+H） +保持時間：2.85分鐘（分析條件 SQDFA05long） 以上，如同實施例3－3，本發明顯示為不僅可應用於2－氯三苯甲基樹脂。
實施例3－4.使用二胜肽負載樹脂之環狀胜肽的合成 在本實施例中，記載將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂作為原料，經過使用胜肽合成機之固相反應、切出、環化、精製之環狀胜肽的合成。
化合物pd5－001、（3S,9S,12S,15S,18S,21S,27S,30S,34S）－18－苄基－1,4,12,13,19,21,25,30,31－九甲基－9,15,27－參（2－甲基丙基）－34－（哌啶－1－羰基）－3－丙烷－2－基－1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31－十一氮雜環十四烷－2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32－十一酮（藉由H－MeAla－Leu－MeGly－Ala－MePhe－Leu－MeAla－Leu－Gly－MeVal－MeAsp－pip（序列識別號：34）的N端胺基與MeAsp的側鏈羧酸而形成醯胺鍵之環狀化合物）的合成
Figure 02_image424
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－001－resin（100.78 mg, 0.363 mmol/g, 0.0366 mmol）作為原料，遵循合成法2，依序進行對應之胺基酸的延長反應，經過切出、環化、精製而合成28.6 mg之pd5－001（產率66%）。 LCMS（ESI） m/z=1180.2 （M+H） +保持時間：0.73分鐘（分析條件 SQDAA50）
化合物pd5－002、（2S,5S,8S,11S,14S,20S,23S,26S,29S,32S）－14－苄基－N,N,1,2,7,11,13,19,20,26,28－十一烷甲基－5,8,23－參（2－甲基丙基）－3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,34－十一烷側氧基－29－丙烷－2－基－1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31－十一氮雜環十四烷－32－甲醯胺（carboxamide）（藉由H－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－MePhe－Gly－MeAla－Leu－Ala－MeVal－Asp－NMe2（序列識別號：35）的N端胺基與Asp的側鏈羧酸而形成醯胺鍵之環狀化合物）的合成
Figure 02_image426
在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－012－resin（99.83 mg, 0.373 mmol/g, 0.0372 mmol）將作為原料，遵循合成法2，依序進行對應之胺基酸的延長反應，經過切出、環化、精製而合成27.1 mg之pd5－002（產率64%）。 LCMS（ESI） m/z=1140.2 （M+H） +保持時間：0.70分鐘（分析條件 SQDAA50）
化合物pd5－003、（3S,6S,12S,15S,18S,21S,24S,27S,30S,33S）－27－苄基－6,7,10,13,15,19,21,22,28,30－十甲基－3,18,24－參（2－甲基丙基）－12－丙烷－2－基－1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31－十一烷雜雙環[31.3.0]十六烷－2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32－十一酮（藉由H－MeAla－Leu－Pro－Ala－MePhe－Leu－MeAla－MeLeu－Ala－MeVal－MeGly－OH（序列識別號：36）的N端胺基與C端羧酸而形成醯胺鍵之環狀化合物）的合成
Figure 02_image428
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－010－resin（101.36 mg, 0.374 mmol/g, 0.0379 mmol）作為原料，遵循合成法2，依序進行對應之胺基酸的延長反應，經過切出、環化、精製而合成7.07 mg之pd5－003（產率17%）。 LCMS（ESI） m/z=1109.2 （M+H） +保持時間：0.85分鐘（分析條件 SQDFA05_55deg）
化合物pd5－004、（3S,9S,12S,18S,21S,24S,27S,30S,33S）－18,33－二苄基－1,3,4,10,12,13,21,22,28,30－十甲基－9,24,27－參（2－甲基丙基）－1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31－十一氮雜環十三烷－2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32－十一酮（藉由H－MeAla－MeLeu－Gly－MeAla－MePhe－Ala－MeLeu－Leu－MeAla－Phe－Gly－OH（序列識別號：37）的N端胺基與C端羧酸而形成醯胺鍵之環狀化合物）的合成
Figure 02_image430
將在實施例1－4所製備之二胜肽負載樹脂aa2－028－resin（100.88 mg, 0.248 mmol/g, 0.025 mmol）作為原料，遵循合成法2，依序進行對應之胺基酸的延長反應，經過切出、環化、精製而合成7.03 mg之pd5－004（產率25%）。 LCMS（ESI） m/z=1117.2 （M+H） +保持時間：0.75分鐘（分析條件 SQDAA50）
實施例3－5.使用三胜肽負載樹脂之環狀胜肽的合成 在本實施例中，記載將在實施例1－4所製備之三胜肽負載樹脂作為原料，經過使用胜肽合成機之固相反應、切出、環化、精製之環狀胜肽的合成。
化合物pd5－005、（3S,6S,9S,12S,15S,18S,21S,24S,30S,33S,36S）－21－苄基－3,6,10,15,16,22,24,28,33,34－十甲基－9,12,18,30－肆（2－甲基丙基）－1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34－十二雜雙環[34.3.0]十九烷－2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35－十二酮（藉由H－MeAla－Leu－MeGly－Ala－MePhe－Leu－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－Ala－Pro－OH（序列識別號：38）的N端胺基與C端羧酸而形成醯胺鍵之環狀化合物）的合成
Figure 02_image432
將在實施例1－4所製備之三胜肽負載樹脂aa2－032－resin（Fmoc－Ala－Ala－Pro－O－Trt（2－Cl）resin）（99.1 mg, 0.393 mmol/g, 0.0389 mmol）作為原料，遵循合成法2，依序進行對應之胺基酸的延長反應，經過切出、環化、精製而合成23.8 mg之pd5－005（產率52%）。 LCMS（ESI） m/z=1180.2 （M+H） +保持時間：0.73分鐘（分析條件 SQDAA50）
化合物pd5－006、（2S,5S,8S,11S,14S,20S,23S,26S,29S,32S,35S）－14－苄基－32－環戊基－N,N,1,2,7,11,13,19,20,25,26,29,31,34－十四甲基－5,8,23－參（2－甲基丙基）－3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,37－十二側氧基－1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34－十二氮雜環庚烷－35－甲醯胺（藉由H－MeAla－Leu－MeLeu－Ala－MePhe－Gly－MeAla－Leu－MeAla－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2（序列識別號：39）的N端胺基與MeAsp的側鏈羧酸而形成醯胺鍵之環狀化合物）的合成
Figure 02_image434
將在實施例1－4所製備之三胜肽負載樹脂aa2－023－resin（Fmoc－Ala－MeGly（cPent）－MeAsp（O－Trt（2－Cl）resin）－NMe2）（99.12 mg, 0.378 mmol/g, 0.0375 mmol）作為原料，遵循合成法2，依序進行對應之胺基酸的延長反應，經過切出、環化、精製而合成25.6 mg之pd5－006（產率54%）。 LCMS（ESI） m/z=1265.3 （M+H） +保持時間：0.73分鐘（分析條件 SQDAA50） [產業利用性]
藉由本發明，提供使用固相法之胜肽化合物的製備方法。又，藉由本發明，提供在由固相法所進行之胜肽化合物的製造中使胜肽化合物的回收率提升之方法、抑制不純物的生成之方法、及/或抑制過早分裂之方法。
無
無。
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Claims (19)

  1. 一種由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的製備方法，前述方法之特徵在於，在固相法中之最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。
  2. 一種由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的製備方法，前述方法包含使胜肽負載於固相合成用樹脂之步驟。
  3. 如請求項1或2之方法，其中，胜肽為包含2個以上的胺基酸殘基之寡胜肽。
  4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基、及/或與該C端的胺基酸殘基相鄰之胺基酸殘基為非天然胺基酸殘基。
  5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基為非天然胺基酸殘基。
  6. 如請求項5或6之方法，其中，非天然胺基酸殘基為N－置換胺基酸殘基。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基藉由已與胺基的β位的碳原子或γ位的碳原子結合之羧基而負載於固相合成用樹脂。
  8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中，胜肽的C端的胺基酸殘基、及/或與該C端的胺基酸殘基相鄰之胺基酸殘基具有大體積的側鏈。
  9. 如請求項8之方法，其中，大體積的側鏈為可被置換的分支鏈烷基。
  10. 如請求項9之方法，其中，分支鏈烷基係與羧基的α位的碳原子結合。
  11. 如請求項10之方法，其中，分支鏈烷基在羧基的β位的碳原子或γ位的碳原子具有分支。
  12. 如請求項1至11中任一項之方法，其中，固相合成用樹脂為CTC樹脂、Wang樹脂、SASRIN樹脂、Trt樹脂、Mtt樹脂或Mmt樹脂。
  13. 如請求項12之方法，其中，固相合成用樹脂為CTC樹脂。
  14. 如請求項1及3至13中任一項之方法，其中，包含使胜肽負載於固相合成用樹脂之步驟。
  15. 如請求項1至14中任一項之方法，其中，進一步包含使胜肽延長1個或複數個胺基酸之步驟。
  16. 一種環狀胜肽、其鹽、或其等的溶劑合物的製備方法，其包含以下的步驟： 遵循如請求項1至15中任一項之方法，獲得含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物之步驟； 去除固相合成用樹脂之步驟；及 將該胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的C端側的基與N端側的基進行環化而形成環狀部之步驟。
  17. 一種相較於將胺基酸一個殘基一個殘基地延長之情形，使胜肽化合物的回收率提升的方法，其特徵在於，在由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物之製造中，在最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。
  18. 一種相較於將胺基酸一個殘基一個殘基地延長之情形，抑制不純物的生成的方法，其特徵在於，在由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物的製造中，在最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。
  19. 一種相較於將胺基酸一個殘基一個殘基地延長之情形，抑制過早分裂（premature cleavage）的方法，其特徵在於，在由固相法所進行之含至少1個N－置換胺基酸殘基之胜肽化合物、其鹽、或其等的溶劑合物之製造中，在最初的延長反應之前，胜肽負載於固相合成用樹脂。
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