WO2022234864A1 - Ｎ－置換アミノ酸残基を含む環状化合物の製造方法 - Google Patents

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compound
solvent
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methf
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増▲華▼ 侯
健太郎 瀬戸
耕太 田中
雅英 青木
彩 佐近
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中外製薬株式会社
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    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Definitions

  • the present invention relates to methods for producing cyclic compounds containing N-substituted amino acid residues.
  • Non-Patent Document 1 compounds that have been conventionally used as oral drugs should preferably have a molecular weight of 500 g/mol or less.
  • Non-Patent Document 2 compounds that have been conventionally used as oral drugs should preferably have a molecular weight of 500 g/mol or less.
  • Non-Patent Document 3, 4 Like insulin, which is used to treat hyperglycemia, peptides composed of natural amino acids have poor metabolic stability, and it has been difficult to develop peptides as oral drugs. However, it has been found that the metabolic stability and membrane permeability of peptides are improved by cyclizing peptides or using non-natural amino acids exemplified by N-methylamino acids in peptides (Non-Patent Document 3, 4).
  • cyclic peptides containing unnatural amino acids it has become known that cyclic peptides containing N-substituted amino acids in particular can have metabolic stability and membrane permeability, that is, can have drug-likeness ( Patent document 1).
  • Non-Patent Document 5 It has been suggested that cyclic peptide compounds containing unnatural amino acids are useful for creating inhibitors of protein-protein interactions.
  • Non-Patent Document 6 Synthesis of peptides is accomplished by elongation of the desired amino acid sequence by sequential amide bond forming reactions of amino acids, including peptides containing unnatural amino acids in their sequence, especially N-methyl amino acids.
  • Non-Patent Document 7 Halogenated hydrocarbon solvents (such as dichloromethane), and amide solvents (such as DMF) are widely used in peptide synthesis, but such side reactions have low reactivity with amino acids such as N-substituted amino acids. It can be observed in peptide synthesis (Non-Patent Document 8).
  • the use of halogenated hydrocarbon solvents (eg, dichloromethane) and amide solvents (eg, DMF) is restricted (Non-Patent Document 9).
  • the present invention has been made in view of such circumstances, and in one aspect, the present invention provides a peptide compound, particularly a linear or cyclic peptide compound containing a plurality of unnatural amino acids such as N-substituted amino acids,
  • An object of the present invention is to provide a method for efficient production by a technique applicable to a large scale without isolation of an intermediate, for example, isolation of an intermediate as a pre-operation for the next step.
  • One aspect WHEREIN This invention makes it a subject to provide the method of isolating and purifying the target cyclic peptide compound, or its salt, or those solvates, without relying on column chromatography.
  • an object of the present invention is to wash a stabilizer (for example, an antioxidant such as BHT) contained in a solvent used in a process for producing a peptide compound with a solvent that solubilizes the stabilizer. , to provide a method for removing the stabilizer without isolating the target product produced in each step.
  • the object of the present invention is inter alia to prepare peptide compounds, e.g. linear or cyclic, containing multiple unnatural amino acids, such as N-substituted amino acids, as intermediates of individual reaction steps, or as peptide compounds.
  • one aspect of the invention described herein is to provide a method of making a peptide compound, which may comprise one or more reaction steps including the use of a solvent to solubilize the stabilizing agent. be.
  • Peptide synthesis is generally carried out by repeating the process of linking the C-terminal carboxyl group of an amino acid or peptide with the N-terminal amino group of an amino acid or peptide to extend the peptide chain. It is known that reactions can occur (Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.). Therefore, in peptide synthesis, especially liquid phase peptide synthesis, it is common to isolate and purify the product between the elongation steps and before the cyclization step. However, in peptide synthesis on an industrial scale, isolation and purification of intermediates lead to longer synthesis times and higher costs. It is desirable to be able to continuously perform the following elongation reaction and cyclization reaction.
  • unprotected amino acids and unprotected peptides are also difficult to dissolve in organic solvents due to their hydrophilicity. Furthermore, aggregation is promoted as the peptide chain is elongated, and the solubility of the peptide compound is often reduced (Biology and Chemistry, 2018, 56(8), 558; J. Biol. Chem., 1963, 238, 4074., Sci Rep, 2016, 6(28), 1.).
  • a solvent with high solubility such as DMF or dimethyl sulfoxide
  • dichloromethane which has excellent solubility, is also often used.
  • DMF is used in 47% of the total and dichloromethane in 36% of the total. , 2013, 15, 596-600.
  • DMF and dimethyl sulfoxide are highly soluble in water and are miscible with water, so the target product may migrate to the aqueous layer together with these organic solvents, causing a decrease in yield. inefficiency. For example, if the organic layer is contaminated with water, water will remain after the organic solvent containing the target substance is distilled off, and in some cases, hydrolysis of peptide bonds will occur (Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.).
  • some solvents contain stabilizers (for example, antioxidants such as BHT).
  • stabilizers for example, antioxidants such as BHT.
  • the total amount of remaining stabilizer is not large and is not conspicuous as an impurity.
  • the impact on subsequent processes may not be negligible (for example, the stabilizer contained in the intermediate may In the case of affecting the chemical reaction in the next step, in the case of active ingredients of pharmaceuticals, and in the case of stabilizing agents contained in the target final compound causing unexpected effects other than medicinal effects).
  • the stabilizing agent can be removed during these processes.
  • stabilizers can accumulate in intermediates and final compounds. Industrial production processes require general techniques for efficient removal of stabilizers.
  • solvents useful in the methods described herein can be resistant to thermal decomposition. Such resistance can preferably be determined by solvent stability tests over a temperature range using measuring instruments such as GC, LC or NMR, preferably GC. Solvents of particular use can be resistant to elevated temperatures (e.g., stable for 48 hours near boiling, or stable for 2 months near room temperature, preferably stable for 48 hours near boiling) under the conditions exemplified above.
  • Solvents of the present invention can exhibit good separation from the aqueous layer in a liquid separation operation. Such separation is carried out by adding equal parts of solvent and water in a separatory funnel, reaction flask, or reaction vessel at about room temperature (for example, 15° C. to 40° C., preferably 20° C. to 30° C.) within 30 minutes. can be determined by mixing, preferably within 15 minutes.
  • the solvent of the present invention allows the elongation reaction and cyclization reaction of the peptide chain to proceed satisfactorily.
  • Such reaction progress is preferably determined by measuring the chemical yield of the target compound or the chemical conversion of the starting material to the target compound using a measuring instrument such as GC, LC or NMR, preferably GC. be able to.
  • Solvents of particular use may provide chemical yields of 70% to 100%, or chemical conversions of 70% to 100%, preferably both chemical yields and chemical conversions of 80% to 100%.
  • the solvent of the present invention is a solvent that can be stable for 48 hours near the boiling point, a solvent that can show good separation in a liquid separation operation within 15 minutes at 20°C to 30°C, a chemical yield of the starting material and A solvent that can achieve 80% to 100% of both chemical conversions.
  • the peptide chain can be prepared by simple operations such as liquid separation and filtration without isolating intermediates. can be continuously elongated, the peptide compound can be cyclized, and the stabilizing agent contained in the solvent can be removed. That is, subsequent reactions do not require isolation of an intermediate, eg, a single product, as understood in the art.
  • the solution used in the next reaction contains intermediates (products of the previous reaction) and may further contain one or more reactants, or reagents, of the previous reaction, which are can be solubilized prior to the reaction of
  • the present inventors have found that the organic layer or aqueous layer can be efficiently washed by using a specific aqueous solution or organic solvent in the liquid separation operation.
  • the present inventors have found that the cyclic peptide compound produced without isolating and purifying the intermediate by the method of the present invention can be isolated and purified by crystallization without relying on column chromatography.
  • a cyclic peptide compound, a salt thereof, or a solvate thereof, and a crystal of a cyclic peptide compound, a salt thereof, or a solvate thereof can be obtained.
  • the present inventors have found reaction conditions that can suppress the formation of by-products in each of the condensation and deprotection reactions.
  • the present invention includes the following in one non-limiting specific aspect.
  • one or more selected from the group consisting of one or more water-immiscible solvents, one or more water-soluble alkylnitriles, and one or more water-soluble ethers A cyclic peptide compound, or a salt thereof, or a solvate thereof by a liquid phase method, which includes the step of linking the N-terminal amino acid residue and the C-terminal amino acid residue of the peptide compound in a solvent (solvent A) containing how to manufacture
  • Solvent A is selected from the group consisting of 2-MeTHF, THF, 4-methyltetrahydropyran, MTBE, CPME, dimethyl carbonate, ethyl acetate, isopropyl acetate, anisole, MeCN, heptane, and toluene.
  • [15] The method of any one of [1] to [14], further comprising the step of isolating and/or purifying the cyclic peptide compound by crystallization to obtain crystals of the cyclic peptide compound.
  • the hydrate crystals have diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, and 10.435 by powder X-ray diffraction. °, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, and 17.813° ( ⁇ 0.2°)
  • the method of [17] which is a C-type crystal containing at least 7 peaks.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, and 10 as measured by powder X-ray diffraction.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10 from the group consisting of .435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, and 17.813° ( ⁇ 0.2°)
  • the method of [17], wherein the selected is a C-type crystal containing at least 9 peaks.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, and 10 by powder X-ray diffraction.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10 from the group consisting of .435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, and 17.813° ( ⁇ 0.2°)
  • the method of [17], wherein the selected is a C-type crystal containing at least 11 peaks.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10 from the group consisting of .435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, and 17.813° ( ⁇ 0.2°)
  • the method of [17], wherein the selected are C-type crystals containing at least 12 peaks.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, and 10 as determined by powder X-ray diffraction.
  • the solvate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 8.006°, 9.002°, 9.943°, 11.501°, 13.067°, and 14.854 by powder X-ray diffraction. °, 16.320 °, 17.275 °, 19.261 °, and 20.324 ° ( ⁇ 0.2 °) DMSO-hydrate crystals of form A, described in [16] the method of. [21] The solvate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 8.223°, 9.594°, 9.976°, 11.879°, 13.841°, and 14.572 by powder X-ray diffraction.
  • solvent A is a solvent consisting of 2-MeTHF or a solvent containing 2-MeTHF.
  • Solvent A is one or more water selected from the group consisting of 2-MeTHF, dimethyl carbonate, anisole, isopropyl acetate, ethyl acetate, MTBE, CPME, 4-methyltetrahydropyran, heptane, and toluene
  • solvent A is a solvent consisting of 2-MeTHF or a solvent containing 2-MeTHF.
  • Solvent A is one or more water selected from the group consisting of 2-MeTHF, dimethyl carbonate, anisole, isopropyl acetate, ethyl acetate, MTBE, CPME, 4-methyltetrahydropyran, heptane, and toluene
  • solvent A contains water-soluble alkylnitriles that are acetonitrile and/or propionitrile.
  • solvent A contains one or more water-soluble ethers selected from the group consisting of THF, 1,4-dioxane, 1,3-dioxane, and dimethoxyethane; Any method described.
  • a method for producing a peptide compound by a liquid phase method comprising: Step 1: Linking an N-protected amino acid or N-protected peptide to a C-protected amino acid or C-protected peptide, Step 2: removing the N-protecting group after step 1, and optionally repeating steps 1 and 2 multiple times to produce the peptide compound; and not including the step of isolating the products of steps 1 and 2.
  • step 3 The method according to any one of [26] to [31], wherein the method for producing a peptide compound further comprises step 3 of removing the C-protecting group.
  • step 3 The method according to any one of [26] to [31], wherein the final repetition does not include step 2.
  • step 3 is performed after step 1 of the final iteration.
  • Each step included in the method for producing a peptide compound comprises toluene, acetone, DMF, acetonitrile, THF, 2-MeTHF, dimethyl carbonate, anisole, isopropyl acetate, heptane, ethyl acetate, MTBE, and 4-methyltetrahydro
  • solvent B solvent B
  • each step included in the method for producing a peptide compound includes one or more operations selected from the group consisting of liquid separation operation, filtration operation, and concentration operation, [26]-[ 34].
  • a water-immiscible solvent (solvent C) wherein a water-immiscible solvent (solvent C), water-soluble alkylnitriles, and/or water-soluble ethers are added before the liquid separation operation.
  • Solvent C is one or more selected from the group consisting of 2-MeTHF, dimethyl carbonate, anisole, isopropyl acetate, ethyl acetate, MTBE, CPME, 4-methyltetrahydropyran, and heptane, [36 ].
  • a washing operation of the organic layer in which the washing operation is performed with an aqueous solution containing citric acid and dipotassium hydrogen phosphate, or an aqueous layer in which the washing operation is performed with 2-MeTHF, heptane, MTBE, or isopropyl acetate The method according to any one of [35] to [41], including the washing operation.
  • step 1 comprises the step of condensing the N-terminal amino group of the C-protected amino acid or C-protected peptide with the C-terminal carboxyl group of the N-protected amino acid or N-protected peptide, [26] The method according to any one of to [45]. [47] The method of [46], wherein the carboxyl group is activated.
  • step 1 is performed in the presence of a condensing reagent.
  • the condensing agent comprises a condensing agent selected from the group consisting of T3P, EDCI, HATU, COMU, BEP, PyBOP, DMT-MM, and PyOxim.
  • step 2 is carried out by catalytic hydrogenation in the presence of a catalyst.
  • the catalyst is selected from Pd/C, Pd(OH) 2 /C, or PtO2 .
  • step 2 is performed in the presence of a deprotecting reagent.
  • the deprotecting reagent is selected from TBAF, LiBH 4 , piperidine, trifluoroacetic acid, or methanesulfonic acid.
  • the N-protecting group is Cbz, p-nitrobenzyloxycarbonyl, 2-naphthylmethyloxycarbonyl, diphenylmethyloxycarbonyl, 9-anthrylmethyloxycarbonyl, Teoc, Boc, trifluoroacetyl, Fmoc, or Alloc
  • the method of [55], wherein the deprotection reaction is performed under acidic conditions.
  • one or both of the C-protected peptide and the N-protected peptide contain 2 to 20 amino acid residues, and the amino acid residues contained in one or both of the C-protected peptide and the N-protected peptide.
  • one or both of the C-protected peptide and the N-protected peptide used in step 1 of the final iteration contains 4 or more N-substituted amino acid residues, or 2 N-substituted amino acid residues;
  • one or both of the C-protected and N-protected peptides used in step 1 of the last iteration consist of 5 or 6 amino acid residues and contain 4 or 5 unnatural amino acid residues; The method according to [26] to [62].
  • the C-protected peptide used in step 1 of the final iteration is C-protected MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGly, and is N-protected Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2.
  • a C-protected amino acid, or a salt thereof, or a C-protected peptide, or a salt thereof The method according to any one of [26] to [61].
  • Each impurity is less than 1%, less than 0.5%, less than 0.1%, or an undetectable amount, as determined by UVArea% at 210 nm by HPLC analysis, [70- 2], a highly purified compound represented by Formula 1, a salt thereof, or a solvate thereof.
  • the impurity is less than 1%, less than 0.5%, less than 0.1%, or an undetectable amount as determined by UVArea% at 210 nm by HPLC analysis, and the impurity is an epimer, overextension, or deletion
  • Impurity is less than 1%, less than 0.5%, less than 0.1%, or an undetectable amount as determined by UVArea% at 210 nm by HPLC analysis, and the impurity is a cyclic dimer shown below. (Cyclic dimer), and / or a cyclic trimer shown below (Cyclic trimer), [70-2], [70-3], or high purity according to [70-4] or a salt or solvate thereof.
  • the solvate of the cyclic peptide compound of [70] which is a hydrate, DMSO-hydrate, acetone-hydrate, or DMSO solvate.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, and 10.435 by powder X-ray diffraction.
  • the crystal of [75] which is a C-type crystal containing at least 7 peaks.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, and 10 as measured by powder X-ray diffraction.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10 from the group consisting of .435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, and 17.813° ( ⁇ 0.2°)
  • the crystal of [75] which is a C-type crystal comprising at least 9 peaks.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, and 10 as measured by powder X-ray diffraction.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10 from the group consisting of .435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, and 17.813° ( ⁇ 0.2°)
  • the crystal of [75] which is a C-type crystal comprising at least 11 peaks.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10 from the group consisting of .435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, and 17.813° ( ⁇ 0.2°)
  • the crystal of [75] which is a C-type crystal comprising at least 12 peaks.
  • the hydrate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10 including peaks at .435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, and 17.813° ( ⁇ 0.2°)
  • the crystal of [75] which is a C-type crystal.
  • the non-solvate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 5.370°, 6.934°, 8.940°, 9.838°, 10.771°, 12.0°, and 12.0° as diffraction angles (2 ⁇ values) by powder X-ray diffraction.
  • the crystal of [73] which is an F-type crystal containing peaks at 181°, 13.525°, 15.179°, 16.202° and 17.554° ( ⁇ 0.2°).
  • the solvate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 8.006°, 9.002°, 9.943°, 11.501°, 13.067°, and 14.854 by powder X-ray diffraction. °, 16.320 °, 17.275 °, 19.261 °, and 20.324 ° ( ⁇ 0.2 °) DMSO-hydrate crystals of form A, described in [73] crystals.
  • the solvate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 8.223°, 9.594°, 9.976°, 11.879°, 13.841°, and 14.572 by powder X-ray diffraction. °, 15.934 °, 16.350 °, 19.805 °, and 20.480 ° ( ⁇ 0.2 °) are DMSO-hydrate crystals of form B, described in [73] crystals. [80] The solvate crystal has diffraction angles (2 ⁇ values) of 7.942°, 8.283°, 8.861°, 10.097°, 10.491°, and 11.805 by powder X-ray diffraction.
  • the present invention even when having a complex amino acid sequence containing a plurality of non-natural amino acid residues, racemization and intermolecular reaction of amino acid residues are suppressed, and a cyclic peptide compound, or a salt thereof, or Solvates thereof can be efficiently produced.
  • continuous elongation of the peptide chain and subsequent cyclization can be performed by simple post-treatments such as liquid separation, filtration, and concentration without isolating and purifying intermediates. can be performed, the desired peptide compound can be produced efficiently.
  • INDUSTRIAL APPLICABILITY The production method of the present invention is particularly useful for large-scale peptide synthesis because it can reduce the production cost of peptide compounds and reduce environmental impact.
  • FIG. 1 shows the results of powder X-ray diffraction measurement of the hydrate crystals (C-type crystals) of Compound 1 obtained in Example 25.
  • FIG. The vertical axis is the diffraction intensity, and the horizontal axis is the diffraction angle 2 ⁇ (°).
  • FIG. 2 shows the results of powder X-ray diffraction measurement of the non-solvate crystals (F-type crystals) of Compound 1 obtained in Example 25-2.
  • the vertical axis is the diffraction intensity, and the horizontal axis is the diffraction angle 2 ⁇ (°).
  • FIG. 3 shows the results of powder X-ray diffraction measurement of the crystals of Compound 1 (A-type crystals) obtained in Example 25-3.
  • FIG. 4 shows the results of powder X-ray diffraction measurement of the crystals of Compound 1 (B type crystals) obtained in Example 25-3.
  • the vertical axis is the diffraction intensity
  • the horizontal axis is the diffraction angle 2 ⁇ (°).
  • FIG. 5 shows the results of thermogravimetric and differential thermal analysis of the crystals of Compound 1 (B-type crystals) obtained in Example 25-3.
  • the horizontal axis is temperature (°C), and the right vertical axis is weight change (%) of the sample in thermogravimetric analysis.
  • the left vertical axis represents the heat flow observed in the differential thermal analysis.
  • FIG. 4 shows the results of powder X-ray diffraction measurement of the crystals of Compound 1 (B type crystals) obtained in Example 25-3.
  • the vertical axis is the diffraction intensity
  • the horizontal axis is the diffraction angle 2 ⁇ (°).
  • FIG. 5 shows the results of thermogravimetric and differential thermal analysis of the crystal
  • FIG. 6 shows the results of 1 H-NMR measurement of the crystals of Compound 1 (B type crystals) obtained in Example 25-3.
  • FIG. 7 shows the results of powder X-ray diffraction measurement of the hydrate crystals (type C crystals) of Compound 1 obtained in Example 25-4 at relative humidity of 75%, 30% and 0%. The vertical axis is the diffraction intensity, and the horizontal axis is the diffraction angle 2 ⁇ (°). 8 shows the results of thermogravimetric/differential thermal analysis of the hydrate crystals (C-type crystals) of Compound 1 obtained in Example 26.
  • the horizontal axis is temperature (°C) and measurement time (minutes), and the right vertical axis is weight change (mg) of the sample in thermogravimetric analysis.
  • the left vertical axis represents the heat flow (mW) observed in the differential thermal analysis.
  • 9 shows the crystal structure of the hydrate crystal (C-type crystal) of Compound 1 obtained in Example 26, obtained by single-crystal X-ray structure analysis.
  • 10 shows the results of dynamic water vapor adsorption measurement of the hydrate crystals of Compound 1 (C-type crystals) obtained in Example 26.
  • the vertical axis is weight change (%) and the horizontal axis is relative humidity (%).
  • FIG. 11 shows the crystal structure of DMSO-hydrate crystals (A-type crystals) of compound 1 obtained in Example 26-1 by single-crystal X-ray structure analysis. In this crystal structure, compound 1:DMSO:water is modeled as 1:6:3.
  • FIG. 11 shows the crystal structure of DMSO-hydrate crystals (A-type crystals) of compound 1 obtained in Example 26-1 by single-crystal X-ray structure analysis. In this crystal structure, compound 1:DMSO:water is modeled as 1:6:3.
  • FIG. 12 shows the crystal structure of the acetone-hydrate crystal of Compound 1 obtained in Example 26-2 (H-type crystal, for single-crystal X-ray structure analysis) obtained by single-crystal X-ray structure analysis.
  • compound 1:acetone:water is modeled as 1:1:4.
  • FIG. 13 shows the results of acetone-hydrate crystals of Compound 1 obtained in Example 26-2 (H-type crystals, for powder X-ray diffraction measurement).
  • the vertical axis is the diffraction intensity
  • the horizontal axis is the diffraction angle 2 ⁇ (°).
  • alkyl refers to a monovalent group derived from an aliphatic hydrocarbon by removing any one hydrogen atom, and refers to heteroatoms (atoms other than carbon and hydrogen atoms) in the skeleton. ) or a subset of hydrocarbyl or hydrocarbon radical structures containing hydrogen and carbon atoms without containing unsaturated carbon-carbon bonds. Alkyl includes not only straight chain but also branched chain.
  • the alkyl is alkyl having 1 to 20 carbon atoms (C 1 -C 20 , hereinafter “C p -C q ” means having p to q carbon atoms), C 1 -C 10 alkyl is preferred, and C 1 -C 6 alkyl is more preferred.
  • alkyl examples include methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, s-butyl, t-butyl, isobutyl (2-methylpropyl), n-pentyl, s-pentyl (1- methylbutyl), t-pentyl (1,1-dimethylpropyl), neopentyl (2,2-dimethylpropyl), isopentyl (3-methylbutyl), 3-pentyl (1-ethylpropyl), 1,2-dimethylpropyl, 2 -methylbutyl, n-hexyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,2,2-trimethylpropyl, 1,1,2,2-tetramethylpropyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl , 1,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 3,3-
  • alkenyl refers to monovalent radicals having at least one double bond (two adjacent SP 2 carbon atoms). Depending on the configuration of the double bond and substituents (if any), the geometry of the double bond can be
  • E Electrode
  • Z Zero
  • Alkenyl includes not only straight-chain but also branched ones. Alkenyl preferably includes C 2 -C 10 alkenyl, more preferably C 2 -C 6 alkenyl, and specific examples include vinyl, allyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl. (including cis and trans), 3-butenyl, pentenyl, 3-methyl-2-butenyl, hexenyl and the like.
  • alkynyl refers to monovalent radicals having at least one triple bond (two adjacent SP carbon atoms). Alkynyl includes not only straight chain but also branched ones. Alkynyl preferably includes C 2 -C 10 alkynyl, more preferably C 2 -C 6 alkynyl, and specific examples include ethynyl, 1-propynyl, propargyl, 3-butynyl, pentynyl, hexynyl, 3-phenyl.
  • cycloalkyl means a saturated or partially saturated cyclic monovalent aliphatic hydrocarbon group, including monocyclic, bicyclocyclic and spirocyclic rings. Cycloalkyl preferably includes C 3 -C 8 cycloalkyl, and specific examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, bicyclo[2.2.1]heptyl, spiro[ 3.3]heptyl and the like.
  • aryl means a monovalent aromatic hydrocarbon ring, preferably C 6 -C 10 aryl. Specific examples of aryl include phenyl, naphthyl (eg, 1-naphthyl, 2-naphthyl), and the like.
  • heterocyclyl means a non-aromatic cyclic monovalent group containing 1 to 5 heteroatoms in addition to carbon atoms.
  • a heterocyclyl may have double and or triple bonds in the ring, a carbon atom in the ring may be oxidized to form a carbonyl, and may be single or fused rings.
  • the number of atoms constituting the ring is preferably 4-10 (4- to 10-membered heterocyclyl), more preferably 4-7 (4- to 7-membered heterocyclyl).
  • heterocyclyl examples include azetidinyl, oxiranyl, oxetanyl, azetidinyl, dihydrofuryl, tetrahydrofuryl, dihydropyranyl, tetrahydropyranyl, tetrahydropyridyl, tetrahydropyrimidyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, pyrazolidinyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, oxazolidinyl, isoxazolidinyl, thiazolidinyl, isothiazolidinyl, 1,2-thiazinane, thiadiazolidinyl, azetidinyl, oxazolidone, benzodioxanyl, benzoxazolyl, dioxolanyl, dioxanyl, Tetrahydr
  • heteroaryl means an aromatic cyclic monovalent group containing 1 to 5 heteroatoms in addition to carbon atoms.
  • the ring may be monocyclic, condensed with another ring, or partially saturated.
  • the number of atoms constituting the ring is preferably 5-10 (5- to 10-membered heteroaryl), more preferably 5-7 (5- to 7-membered heteroaryl).
  • heteroaryl examples include furyl, thienyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, thiazolyl, isothiazolyl, oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, thiadiazolyl, triazolyl, tetrazolyl, pyridyl, pyrimidyl, pyridazinyl, pyrazinyl, triazinyl, benzofuranyl, benzothienyl .
  • alkoxy means an oxy group to which “alkyl” defined above is bonded, preferably C 1 -C 6 alkoxy. Specific examples of alkoxy include methoxy, ethoxy, 1-propoxy, 2-propoxy, n-butoxy, i-butoxy, s-butoxy, t-butoxy, pentyloxy, 3-methylbutoxy and the like.
  • alkenyloxy means an oxy group to which the above-defined “alkenyl” is attached, preferably C 2 -C 6 alkenyloxy.
  • alkenyloxy include vinyloxy, allyloxy, 1-propenyloxy, 2-propenyloxy, 1-butenyloxy, 2-butenyloxy (including cis and trans), 3-butenyloxy, pentenyloxy, hexenyloxy, and the like. mentioned.
  • cycloalkoxy means an oxy group to which the above-defined “cycloalkyl” is attached, preferably C 3 -C 8 cycloalkoxy. Specific examples of cycloalkoxy include cyclopropoxy, cyclobutoxy, cyclopentyloxy and the like.
  • aryloxy means an oxy group to which the above-defined “aryl” is attached, preferably C 6 -C 10 aryloxy. Specific examples of aryloxy include phenoxy, 1-naphthyloxy, 2-naphthyloxy and the like.
  • amino narrowly means -NH2 and broadly means -NRR', where R and R' are independently hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, cyclo is selected from alkyl, heterocyclyl, aryl, or heteroaryl, or R and R' together with the nitrogen atom to which they are attached form a ring.
  • Preferred amino groups include -NH 2 , mono-C 1 -C 6 alkylamino, di-C 1 -C 6 alkylamino, 4- to 8-membered cyclic amino and the like.
  • “monoalkylamino” means a group of “amino” defined above in which R is hydrogen and R′ is “alkyl” defined above, preferably mono-C 1 —C6 alkylamino. Specific examples of monoalkylamino include methylamino, ethylamino, n-propylamino, i-propylamino, n-butylamino, s-butylamino, t-butylamino and the like.
  • dialkylamino means a group of “amino” defined above in which R and R′ are independently “alkyl” defined above, preferably di-C 1 -C 6 Alkylamino may be mentioned. Specific examples of dialkylamino include dimethylamino and diethylamino.
  • cyclic amino means a group in which R and R′ in the above-defined “amino” form a ring together with the nitrogen atom to which they are attached, preferably A 4- to 8-membered cyclic amino is included.
  • Specific examples of cyclic amino include 1-azetidyl, 1-pyrrolidyl, 1-piperidyl, 1-piperazyl, 4-morpholinyl, 3-oxazolidyl, 1,1-dioxidethiomorpholinyl-4-yl, 3 -oxa-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl and the like.
  • protected amino means an amino group protected with any protecting group.
  • Protected amino specifically includes, for example, amino protected with a protecting group such as Boc, Fmoc, Cbz, Troc, Alloc, Teoc, or trifluoroacetyl.
  • aminocarbonyl means a carbonyl group to which “amino” as defined above is attached, preferably —CONH 2 , mono-C 1 -C 6 alkylaminocarbonyl, di-C 1 -C 6 alkyl Aminocarbonyl, 4- to 8-membered cyclic aminocarbonyl.
  • aminocarbonyl examples include —CONH 2 , dimethylaminocarbonyl, 1-azetidinylcarbonyl, 1-pyrrolidinylcarbonyl, 1-piperidinylcarbonyl, 1-piperazinylcarbonyl, 4-morpholylcarbonyl, nylcarbonyl, 3-oxazolidinylcarbonyl, 1,1-dioxidethiomorpholinyl-4-ylcarbonyl, 3-oxa-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-ylcarbonyl and the like. be done.
  • alkenyloxycarbonyl means a carbonyl group to which the above-defined “alkenyloxy” is bonded, preferably C 2 -C 6 alkenyloxycarbonyl.
  • alkenyloxycarbonyl include vinyloxycarbonyl, allyloxycarbonyl, 1-propenyloxycarbonyl, 2-propenyloxycarbonyl, 1-butenyloxycarbonyl, 2-butenyloxycarbonyl (including cis and trans ), 3-butenyloxycarbonyl, pentenyloxycarbonyl, hexenyloxycarbonyl and the like.
  • alkylsulfonyl means a sulfonyl group to which the above-defined “alkyl” is attached, preferably C 1 -C 6 alkylsulfonyl. Specific examples of alkylsulfonyl include methylsulfonyl and the like.
  • hydroxyalkyl means a group in which one or more hydrogen atoms of “alkyl” defined above are replaced with hydroxyl groups, preferably C 1 -C 6 hydroxyalkyl.
  • Specific examples of hydroxyalkyl include hydroxymethyl, 1-hydroxyethyl, 2-hydroxyethyl, 2-hydroxy-2-methylpropyl, 5-hydroxypentyl and the like.
  • haloalkyl means a group in which one or more hydrogen atoms of “alkyl” defined above is replaced with halogen, preferably C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 fluoroalkyl is more preferred.
  • haloalkyl include difluoromethyl, trifluoromethyl, 2,2-difluoroethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, 3,3-difluoropropyl, 4,4-difluorobutyl, 5,5 - difluoropentyl and the like.
  • cyanoalkyl means a group in which one or more hydrogens of “alkyl” defined above is replaced with cyano, preferably C 1 -C 6 cyanoalkyl. Specific examples of cyanoalkyl include cyanomethyl, 2-cyanoethyl and the like.
  • aminoalkyl as used herein means a group in which one or more hydrogen atoms of “alkyl” as defined above are replaced with “amino” as defined above, preferably C 1 -C 6 aminoalkyl.
  • Specific examples of aminoalkyl include 1-pyridylmethyl, 2-(1-piperidyl)ethyl, 3-(1-piperidyl)propyl, 4-aminobutyl and the like.
  • carboxyalkyl means a group in which one or more hydrogens of "alkyl” as defined above are replaced with carboxy, preferably C 2 -C 6 carboxyalkyl. Specific examples of carboxyalkyl include carboxymethyl and the like.
  • alkenyloxycarbonylalkyl as used herein means a group in which one or more hydrogens of “alkyl” defined above is replaced with “alkenyloxycarbonyl” defined above, and C 2 -C 6 alkenyl Oxycarbonyl C 1 -C 6 alkyl is preferred and C 2 -C 6 alkenyloxycarbonyl C 1 -C 2 alkyl is more preferred.
  • alkenyloxycarbonylalkyl include allyloxycarbonylmethyl, 2-(allyloxycarbonyl)ethyl and the like.
  • alkoxyalkyl means a group in which one or more hydrogen atoms of “alkyl” defined above are replaced with “alkoxy” defined above, and C 1 -C 6 alkoxyC 1 -C 6 alkyl is preferred, and C 1 -C 6 alkoxyC 1 -C 2 alkyl is more preferred.
  • Specific examples of alkoxyalkyl include methoxymethyl, ethoxymethyl, 1-propoxymethyl, 2-propoxymethyl, n-butoxymethyl, i-butoxymethyl, s-butoxymethyl, t-butoxymethyl, pentyloxymethyl, 3-methylbutoxymethyl, 1-methoxyethyl, 2-methoxyethyl, 2-ethoxyethyl and the like.
  • cycloalkylalkyl means a group in which one or more hydrogens of “alkyl” as defined above are replaced with “cycloalkyl” as defined above, and C 3 -C 8 cycloalkylC 1 - C6 alkyl is preferred and C3 - C6 cycloalkyl C1 - C2 alkyl is more preferred.
  • Specific examples of cycloalkylalkyl include cyclopropylmethyl, cyclobutylmethyl, cyclopentylmethyl, cyclohexylmethyl and the like.
  • cycloalkoxyalkyl means a group in which one or more hydrogens of “alkyl” defined above is replaced with “cycloalkoxy” defined above, and C 3 -C 8 cycloalkoxyC 1 - C6 alkyl is preferred, and C3 - C6 cycloalkoxyC1 - C2 alkyl is more preferred.
  • Specific examples of cycloalkoxyalkyl include cyclopropoxymethyl, cyclobutoxymethyl and the like.
  • heterocyclylalkyl means a group in which one or more hydrogens of “alkyl” as defined above is replaced with “heterocyclyl” as defined above, 4- to 7-membered heterocyclyl C 1 -C 6 Alkyl is preferred, and 4- to 7-membered heterocyclyl C 1 -C 2 alkyl is more preferred.
  • Specific examples of heterocyclylalkyl include 2-(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)ethyl, 2-(azetidin-3-yl)ethyl and the like.
  • alkylsulfonylalkyl means a group in which one or more hydrogen atoms of “alkyl” defined above are replaced with “alkylsulfonyl” defined above, and C 1 -C 6 alkylsulfonylC 1 - C6 alkyl is preferred, and C1 - C6 alkylsulfonyl C1 - C2 alkyl is more preferred.
  • Specific examples of alkylsulfonylalkyl include methylsulfonylmethyl, 2-(methylsulfonyl)ethyl and the like.
  • aminocarbonylalkyl means a group in which one or more hydrogen atoms of "alkyl” defined above are replaced with “aminocarbonyl” defined above, and aminocarbonylC 1 -C 6 alkyl is preferred, and aminocarbonyl C 1 -C 4 alkyl is more preferred.
  • aminocarbonylalkyl examples include, for example, methylaminocarbonylmethyl, dimethylaminocarbonylmethyl, t-butylaminocarbonylmethyl, 1-azetidinylcarbonylmethyl, 1-pyrrolidinylcarbonylmethyl, 1-piperidinylcarbonyl methyl, 4-morpholinylcarbonylmethyl, 2-(methylaminocarbonyl)ethyl, 2-(dimethylaminocarbonyl)ethyl, 2-(1-azetidinylcarbonyl)ethyl, 2-(1-pyrrolidinylcarbonyl) ethyl, 2-(4-morpholinylcarbonyl)ethyl, 3-(dimethylaminocarbonyl)propyl, 4-(dimethylaminocarbonyl)butyl and the like.
  • aryloxyalkyl means a group in which one or more hydrogen atoms of “alkyl” defined above are replaced with “aryloxy” defined above, and C 6 -C 10 aryloxy C 1 -C 6 alkyl is preferred, and C 6 -C 10 aryloxy C 1 -C 2 alkyl is more preferred.
  • Specific examples of aryloxyalkyl include phenoxymethyl, 2-phenoxyethyl and the like.
  • aralkyl (arylalkyl) means a group in which at least one hydrogen atom of "alkyl” defined above is replaced with “aryl” defined above, preferably C7 - C14 aralkyl. , C 7 -C 10 aralkyl are more preferred. Specific examples of aralkyl include benzyl, phenethyl, 3-phenylpropyl and the like.
  • aralkoxy means an oxy group to which the above-defined “aralkyl” is attached, preferably C 7 -C 14 aralkoxy, more preferably C 7 -C 10 aralkoxy.
  • aralkoxy include benzyloxy, phenethyloxy, 3-phenylpropoxy and the like.
  • aralkoxyalkyl means a group in which one or more hydrogens of "alkyl” as defined above is replaced with “aralkoxy” as defined above, and C 7 -C 14 aralkoxyC 1 —C 6 alkyl is preferred, and C 7 -C 14 aralkoxy C 1 -C 2 alkyl is more preferred.
  • Specific examples of aralkoxyalkyl include benzyloxymethyl, 1-(benzyloxy)ethyl and the like.
  • heteroarylalkyl means a group in which at least one hydrogen atom of “alkyl” defined above is replaced with “heteroaryl” defined above, and a 5- to 10-membered heteroaryl C 1 - C 6 alkyl is preferred, and 5-10 membered heteroaryl C 1 -C 2 alkyl is more preferred.
  • heteroarylalkyl examples include 3-thienylmethyl, 4-thiazolylmethyl, 2-pyridylmethyl, 3-pyridylmethyl, 4-pyridylmethyl, 2-(2-pyridyl)ethyl, 2-(3-pyridyl ) ethyl, 2-(4-pyridyl)ethyl, 2-(6-quinolyl)ethyl, 2-(7-quinolyl)ethyl, 2-(6-indolyl)ethyl, 2-(5-indolyl)ethyl, 2- (5-benzofuranyl)ethyl and the like.
  • heteroarylalkoxy means an oxy group to which the above-defined “heteroarylalkyl” is attached, preferably 5- to 10-membered heteroaryl C 1 -C 6 alkoxy, 5- to 10-membered heteroaryl More preferred is C 1 -C 2 alkoxy.
  • Specific examples of heteroarylalkoxy include 3-thienylmethoxy and 3-pyridylmethoxy.
  • heteroarylalkoxyalkyl as used herein means a group in which one or more hydrogen atoms of “alkyl” defined above is replaced with “heteroarylalkoxy” defined above, and a 5- to 10-membered heteroaryl C 1 -C 6 alkoxy C 1 -C 6 alkyl is preferred, and 5-10 membered heteroaryl C 1 -C 2 alkoxy C 1 -C 2 alkyl is more preferred.
  • Specific examples of heteroarylalkoxyalkyl include 3-pyridylmethoxymethyl and the like.
  • heterocycloalkylidenealkyl means a group in which one or more hydrogen atoms of "alkyl” defined above is replaced with “heterocycloalkylidene” defined above, and a 4- to 7-membered heterocyclo Alkylidene C 1 -C 6 alkyl is preferred, and 4- to 7-membered heterocycloalkylidene C 1 -C 2 alkyl is more preferred.
  • Specific examples of heteroarylalkoxyalkyl include tetrahydro-4H-pyran-4-ylidenemethyl, azetidin-3-ylidenemethyl and the like.
  • alkoxyalkenyl means a group in which one or more hydrogen atoms of "alkenyl” as defined above are replaced with “alkoxy” as defined above, and C 1 -C 6 alkoxy C 2 -C 6 alkenyl is preferred.
  • alkoxyalkenyl include (E)-4-methoxybut-2-en-1-yl and the like.
  • aminocarbonylalkenyl means a group in which one or more hydrogen atoms of "alkenyl” defined above is replaced with “aminocarbonyl” defined above, and aminocarbonyl C 2 -C 6 alkenyl is preferred.
  • Specific examples of aminocarbonylalkenyl include (E)-3-(dimethylaminocarbonyl)-prop-2-en-1-yl and the like.
  • haloalkoxy means a group in which one or more hydrogen atoms of “alkoxy” defined above is replaced with halogen, preferably C 1 -C 6 haloalkoxy.
  • haloalkoxy include difluoromethoxy, trifluoromethoxy, 2,2-difluoroethoxy, 2,2,2-trifluoroethoxy and the like.
  • alkylene means a divalent group derived by further removing one hydrogen atom from the above “alkyl”, preferably C 4 -C 8 alkylene.
  • alkylene include -CH 2 -, -(CH 2 ) 2 -, -(CH 2 ) 3 -, -CH(CH 3 )CH 2 -, -C(CH 3 ) 2 -, -(CH 2 ) 4- , -CH( CH3 ) CH2CH2- , -C ( CH3 ) 2CH2- , -CH2CH ( CH3 )CH2-, -CH2C ( CH3 ) 2- , -CH 2 CH 2 CH(CH 3 )-, -(CH 2 ) 5 -, -(CH 2 ) 6 -, -(CH 2 ) 7 -, -(CH 2 ) 8 - and the like.
  • Alicyclic ring as used herein means a non-aromatic hydrocarbon ring.
  • the alicyclic ring may have an unsaturated bond in the ring, or may be a polycyclic ring having two or more rings.
  • a carbon atom constituting a ring may be oxidized to form a carbonyl.
  • the alicyclic ring preferably includes a 3- to 8-membered alicyclic ring, and specific examples thereof include cyclopropane ring, cyclobutane ring, cyclopentane ring, cyclohexane ring, cycloheptane ring, cyclooctane ring, bicyclo[ 2.2.1] heptane ring and the like.
  • saturated heterocycle herein is meant a non-aromatic heterocycle containing from 1 to 5 heteroatoms in addition to carbon atoms and no double and/or triple bonds in the ring. do.
  • the saturated heterocyclic ring may be monocyclic, or may form a condensed ring with another ring such as an aromatic ring such as a benzene ring.
  • the saturated heterocyclic ring preferably includes a 4- to 7-membered saturated heterocyclic ring, and specific examples include, for example, azetidine ring, oxetane ring, tetrahydrofuran ring, tetrahydropyran ring, morpholine ring, thiomorpholine ring, pyrrolidine ring, 4-oxo pyrrolidine ring, piperidine ring, 4-oxopiperidine ring, piperazine ring, pyrazolidine ring, imidazolidine ring, oxazolidine ring, isoxazolidine ring, thiazolidine ring, isothiazolidine ring, thiadiazolidine ring, sazolidone ring, dioxolane ring, dioxane ring, thietane ring, octahydroindole ring, indoline ring and the like.
  • Peptide in the present specification is not particularly limited as long as it is a peptide formed by amide bond or ester bond of natural amino acids and/or unnatural amino acids, preferably 5 to 30 residues, more preferably 7 to It is a peptide of 15 residues, more preferably 9-13 residues. Peptides may be linear peptides or cyclic peptides.
  • peptide chain refers to a peptide chain in which 1, 2, 3, 4, or more natural amino acids and/or unnatural amino acids are linked by amide bonds and/or ester bonds.
  • the peptide chain is preferably a peptide chain containing 1 to 4 amino acid residues, more preferably a peptide chain consisting of 1 to 4 amino acid residues.
  • One or more as used herein means one or two or more numbers. When “one or more” is used in the context of substituents on a group, the term means from one to the maximum number of substituents allowed by the group. “One or more” specifically includes, for example, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, and/or greater.
  • the compound of the present invention can be a salt thereof, preferably a chemically or pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the compounds of the present invention or salts thereof can also be solvates thereof, preferably chemically or pharmaceutically acceptable solvates thereof.
  • Salts of the compounds of the present invention include, for example, hydrochloride; hydrobromide; hydroiodide; phosphate; sulfonates; carboxylates such as acetates, citrates, malate, tartrates, succinates, salicylates; or alkali metal salts such as sodium salts, potassium salts; alkaline earth metal salts; ammonium salts such as ammonium salts, alkylammonium salts, dialkylammonium salts, trialkylammonium salts and tetraalkylammonium salts; These salts are produced, for example, by contacting the compound with an acid or base that can be used in the production of pharmaceuticals.
  • the solvate of a compound refers to a compound formed with a solvent to form a single molecular cluster, and is a solvate formed with a solvent that is acceptable for ingestion accompanying administration of a drug.
  • a solvent that is acceptable for ingestion accompanying administration of a drug.
  • the solvent is water, it is called a hydrate.
  • the solvate of the compound of the present invention is preferably a hydrate, and such a hydrate is specifically a 1-10 hydrate, preferably a 1-5 hydrate, more preferably a 1-3 hydrates.
  • Solvates of the compounds of the invention include solvates with a single solvent such as water, alcohols (e.g., methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, etc.), dimethylformamide, etc., as well as multiple solvents. Also included are solvates with a single solvent such as water, alcohols (e.g., methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, etc.), dimethylformamide, etc., as well as multiple solvents. Also included are solvates with a single solvent such as water, alcohols (e.g., methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, etc.), dimethylformamide, etc., as well as multiple solvents. Also included are solvates with a single solvent such as water, alcohols (e.g., methanol, ethanol, 1-propanol, 2-propanol, etc.), dimethylformamide, etc., as well as multiple solvents. Also included are solvates with
  • amino acid includes natural amino acids and non-natural amino acids.
  • natural amino acids include Gly, Ala, Ser, Thr, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, His, Glu, Asp, Gln, Asn, Cys, Met, Lys, Arg, Pro point to Non-natural amino acids are not particularly limited, but are exemplified by ⁇ -amino acids, ⁇ -amino acids, D-amino acids, N-substituted amino acids, ⁇ , ⁇ -disubstituted amino acids, amino acids whose side chains are different from natural ones, and hydroxycarboxylic acids. Any configuration is acceptable for the amino acids herein.
  • the side chains of amino acids are not particularly limited, but may be selected freely from, for example, alkyl groups, alkenyl groups, alkynyl groups, aryl groups, heteroaryl groups, aralkyl groups, and cycloalkyl groups in addition to hydrogen atoms.
  • One or two non-adjacent methylene groups in the group may be substituted with an oxygen atom, a carbonyl group (--CO--), or a sulfonyl group ( --SO.sub.2-- ).
  • each may be given a substituent, and these substituents are not limited, for example, any substituent containing a halogen atom, an O atom, an S atom, an N atom, a B atom, a Si atom, or a P atom
  • substituents are not limited, for example, any substituent containing a halogen atom, an O atom, an S atom, an N atom, a B atom, a Si atom, or a P atom
  • substituents are not limited, for example, any substituent containing a halogen atom, an O atom, an S atom, an N atom, a B atom, a Si atom, or a P atom
  • Examples include optionally substituted alkyl groups, alkenyl groups, alkynyl groups, aryl groups, heteroaryl groups, aralkyl groups, cycloalkyl groups and the like.
  • the amino acid herein may be a compound having a carboxy
  • the backbone amino group of an amino acid can be unsubstituted ( NH2 group) or optionally substituted (i.e. -NHR group: R is optionally substituted alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, heteroaryl, aralkyl, cycloalkyl, wherein 1 or 2 non-adjacent methylene groups in these groups are substituted with an oxygen atom, a carbonyl group (--CO--), or a sulfonyl group (--SO 2 --);
  • the carbon chain bonded to the N atom and the carbon atom at the ⁇ -position may form a ring like proline).
  • the substituents for R are selected in the same manner as the substituents in the amino acid side chains described above.
  • the aforementioned R when the main chain amino group is substituted is included in the "side chain of amino acid" in the present specification.
  • Amino acids in which such backbone amino groups are substituted are referred to herein as "N-substituted amino acids.”
  • the "N-substituted amino acid” in the present specification is preferably exemplified by N-alkylamino acid, N-C 1 -C 6 alkylamino acid, N-C 1 -C 4 alkylamino acid and N-methylamino acid. is not limited to
  • amino acids that make up the peptide compounds herein include all corresponding isotopes.
  • Isotopes of "amino acids” are those in which at least one atom is replaced with an atom with the same atomic number (number of protons) but a different mass number (sum of protons and neutrons) in an abundance ratio different from the natural one. is.
  • Examples of isotopes contained in the "amino acid” that constitutes the peptide compound of the present invention include a hydrogen atom, a carbon atom, a nitrogen atom, an oxygen atom, a phosphorus atom, a sulfur atom, a fluorine atom, a chlorine atom, and the like. 2H , 3H , 13C , 14C , 15N , 17O , 18O , 31P , 32P , 35S , 18F , 36Cl and the like are included.
  • Examples of the substituent containing a halogen atom in the present specification include an alkyl group, a cycloalkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aryl group, a heteroaryl group, an aralkyl group and the like having a halogen as a substituent, and more specifically is exemplified by fluoroalkyl, difluoroalkyl, trifluoroalkyl and the like.
  • oxy examples include alkoxy, cycloalkoxy, alkenyloxy, alkynyloxy, aryloxy, heteroaryloxy, aralkyloxy and the like.
  • alkoxy C 1 -C 4 alkoxy and C 1 -C 2 alkoxy are preferred, and methoxy and ethoxy are especially preferred.
  • Examples of oxycarbonyl include alkyloxycarbonyl, cycloalkyloxycarbonyl, alkenyloxycarbonyl, alkynyloxycarbonyl, aryloxycarbonyl, heteroaryloxycarbonyl, aralkyloxycarbonyl and the like.
  • Examples of carbonyloxy include alkylcarbonyloxy, cycloalkylcarbonyloxy, alkenylcarbonyloxy, alkynylcarbonyloxy, arylcarbonyloxy, heteroarylcarbonyloxy, aralkylcarbonyloxy and the like. .
  • thiocarbonyl examples include alkylthiocarbonyl, cycloalkylthiocarbonyl, alkenylthiocarbonyl, alkynylthiocarbonyl, arylthiocarbonyl, heteroarylthiocarbonyl, aralkylthiocarbonyl and the like.
  • Examples of carbonylthio include alkylcarbonylthio, cycloalkylcarbonylthio, alkenylcarbonylthio, alkynylcarbonylthio, arylcarbonylthio, heteroarylcarbonylthio, aralkylcarbonylthio and the like. .
  • aminocarbonyl examples include alkylaminocarbonyl (e.g. C 1 -C 6 or C 1 -C 4 alkylaminocarbonyl, especially ethylaminocarbonyl, methylaminocarbonyl, etc.) ), cycloalkylaminocarbonyl, alkenylaminocarbonyl, alkynylaminocarbonyl, arylaminocarbonyl, heteroarylaminocarbonyl, aralkylaminocarbonyl and the like.
  • alkylaminocarbonyl e.g. C 1 -C 6 or C 1 -C 4 alkylaminocarbonyl, especially ethylaminocarbonyl, methylaminocarbonyl, etc.
  • cycloalkylaminocarbonyl alkenylaminocarbonyl, alkynylaminocarbonyl, arylaminocarbonyl, heteroarylaminocarbonyl, aralkylaminocarbonyl
  • Examples of carbonylamino include alkylcarbonylamino, cycloalkylcarbonylamino, alkenylcarbonylamino, alkynylcarbonylamino, arylcarbonylamino, heteroarylcarbonylamino, aralkylcarbonylamino and the like. .
  • Examples of oxycarbonylamino include alkoxycarbonylamino, cycloalkoxycarbonylamino, alkenyloxycarbonylamino, alkynyloxycarbonylamino, aryloxycarbonylamino, heteroaryloxycarbonylamino, aralkyloxy carbonylamino and the like.
  • Examples of sulfonylamino include alkylsulfonylamino, cycloalkylsulfonylamino, alkenylsulfonylamino, alkynylsulfonylamino, arylsulfonylamino, heteroarylsulfonylamino, aralkylsulfonylamino, and the like.
  • groups in which the H atom attached to the N atom in —NH—SO 2 —R is further substituted with alkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, heteroaryl, aralkyl.
  • aminosulfonyl examples include alkylaminosulfonyl, cycloalkylaminosulfonyl, alkenylaminosulfonyl, alkynylaminosulfonyl, arylaminosulfonyl, heteroarylaminosulfonyl, aralkylaminosulfonyl, and the like.
  • groups in which the H atom attached to the N atom in —SO 2 —NHR is further substituted with alkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, heteroaryl, aralkyl.
  • sulfamoylamino examples include alkylsulfamoylamino, cycloalkylsulfamoylamino, alkenylsulfamoylamino, alkynylsulfamoylamino, arylsulfamoylamino, hetero arylsulfamoylamino, aralkylsulfamoylamino and the like.
  • the two H atoms attached to the N atom in —NH—SO 2 —NHR are substituents independently selected from the group consisting of alkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, heteroaryl, and aralkyl. It may be substituted and these two substituents may form a ring.
  • thio are selected from alkylthio, cycloalkylthio, alkenylthio, alkynylthio, arylthio, heteroarylthio, aralkylthio and the like.
  • sulfonyl examples include alkylsulfonyl, cycloalkylsulfonyl, alkenylsulfonyl, alkynylsulfonyl, arylsulfonyl, heteroarylsulfonyl, aralkylsulfonyl, and the like.
  • secondary amino examples include alkylamino, cycloalkylamino, alkenylamino, alkynylamino, arylamino, heteroarylamino, aralkylamino and the like.
  • tertiary amino examples include, for example, alkyl(aralkyl)amino, independently among alkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, heteroaryl, aralkyl, and the like. and an amino group having any two substituents selected by , and these two arbitrary substituents may form a ring.
  • Specific examples include dialkylamino, especially C 1 -C 6 dialkylamino, C 1 -C 4 dialkylamino, dimethylamino and diethylamino.
  • C p -C q dialkylamino group refers to a group in which an amino group is substituted with two C p -C q alkyl groups, and both C p -C q alkyl groups are the same. may also be different.
  • substituted amidinos are those in which the three substituents R, R', and R'' on the N atom are alkyl, cycloalkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, hetero Groups independently selected from aryl and aralkyl, such as alkyl(aralkyl)(aryl)amidino and the like.
  • aminocarbonylamino (-NR-CO-NR'R) is a Examples thereof include independently selected groups, groups formed by forming a ring, and the like.
  • amino acid residue that constitutes the peptide compound is sometimes simply referred to as "amino acid”.
  • A, B, and/or C includes any appropriate combination of “and” and “or”.
  • A, B, and/or C includes the following seven variations; (i) A, (ii) B, (iii) C, (iv) A and B, (v) A and C, (vi) B and C, (vii) A, B, and C.
  • the phrase "substantially/substantially consists of” means that the ingredients listed herein are the major ingredients (e.g., cyclic peptide compounds, cyclic peptide compounds, and crystalline forms of peptide compounds are (including but not limited to), if it does not negatively affect the effects of the embodiments of the present invention, if it is in an amount that does not negatively affect the effect of the embodiment of the present invention, or if Embodiments that do not have such a negative impact mean that other ingredients may be included.
  • other components include, but are not limited to, components not described herein (crystals other than the desired crystal form, reaction by-products, or impurities exemplified by unreacted substances). not have a negative impact on embodiments of the invention, or in amounts to the extent that they do not have such a negative impact, or in embodiments to the extent that they do not have such a negative impact. may contain components of
  • substantially free/free means that the ingredients listed herein are not the main ingredients (e.g., cyclic peptide compounds, cyclic peptide compounds and crystalline forms of peptide compounds). (including, but not limited to, ) and no other ingredients, or if such ingredients do not negatively affect the efficacy of an embodiment of the present invention, such negative It is meant that other ingredients may be included in amounts that are insignificant, or in embodiments that are insignificant to such negative effects. For example, such components described herein do not negatively affect the efficacy of the embodiments of the invention, are in amounts such that they do not negatively affect, or Those components may be included in embodiments that do not have a negative impact.
  • negative effect used in relation to the effect of the present invention means an effect that negates the effect of the present invention. For example, when the action that should be exhibited in nature is taken as 100%, what reduces the action of the present invention to 30%, 20%, 10%, or 5% or less can also be said to have a "negative effect”. can.
  • a method for producing a cyclic peptide compound in one aspect, relates to a method for producing a cyclic peptide compound, or a salt thereof, or a solvate thereof by a liquid phase method, the method comprising the steps of adding one or more kinds of water and an immiscible solvent (e.g., a solvent with low water solubility, a solvent with a high water/octanol coefficient (log Kow), or a solvent with a high water/octanol coefficient prediction), one or more water-soluble alkylnitriles, and Linking the N-terminal amino acid residue and the C-terminal amino acid residue of the peptide compound in a solvent (solvent A) containing one or more selected from the group consisting of one or more water-soluble ethers Including process.
  • an immiscible solvent e.g., a solvent with low water solubility, a solvent with a high water/octanol coefficient (log Kow), or
  • the water immiscible solvent can be characterized as an ester having 3 to 10 carbon atoms, specifically ethyl acetate, isopropyl acetate, n-propyl acetate, t-butyl acetate, propionate.
  • ester having 3 to 10 carbon atoms, specifically ethyl acetate, isopropyl acetate, n-propyl acetate, t-butyl acetate, propionate.
  • Examples include methyl acid and ethyl propionate.
  • the water immiscible solvent can be characterized as a cyclic ether having 4 or more and 10 or less carbon atoms, specifically 2-MeTHF, THF, 4-methyltetrahydropyran or 1,4 -dioxane and the like are exemplified.
  • the water immiscible solvent can be characterized as an acyclic ether having 4 or more and 10 or less carbon atoms, such as MTBE, diisopropyl ether or diethyl ether.
  • the water immiscible solvent can be characterized as an ether having both cyclic and non-cyclic alkyl groups having 6 or more and 10 or less carbon atoms, specifically exemplified by CPME and the like. .
  • the water-immiscible solvent can be characterized as a carbonate ester having 3 or more and 10 or less carbon atoms, specifically exemplified by dimethyl carbonate, diethyl carbonate, or diisopropyl carbonate.
  • the water-immiscible solvent can be characterized as a hydrocarbon having 5 or more and 10 or less carbon atoms, specifically exemplified by pentane, hexane, or heptane.
  • the water-immiscible solvent can be characterized as an aromatic hydrocarbon ring having 6 or more and 10 or less carbon atoms, specifically exemplified by toluene, xylene, or benzene.
  • the water immiscible solvent can be characterized as having a low boiling point at ambient pressure (about 1 atmosphere).
  • the low boiling point at normal pressure (around 1 atm) is exemplified as 35°C or higher and lower than 140°C.
  • solvents having a boiling point of 140°C or higher at normal pressure such as DMF, DMA, NMP or dimethylsulfoxide can be excluded in the present invention.
  • solvents that may potentially react with the peptide compound or cyclic peptide compound may be excluded from water-immiscible solvents in the present invention.
  • unsuitable solvents as water immiscible solvents can be characterized as amines (e.g., n-propylamine or diisopropylamine), or alcohols (e.g., methanol, ethanol, n-propanol, phenol). can.
  • the water-immiscible solvent used herein includes, but is not particularly limited to, solvents with low water solubility (eg, having a water solubility of 150 g/L or less).
  • Water solubility can be determined by any method known in the art or described herein. Exemplary methods for determining solubility include, but are not intended to be limiting, gas chromatography, in which the solvent is heated to room temperature (eg, 15°C to 40°C, preferably 20°C to 30°C). ) can also be determined by measuring the concentration of said solvent in water prepared by mixing with an equal volume of water.
  • a solvent with a large water/octanol coefficient (log Kow) value preferably has a coefficient greater than 0 (zero) and less than 5.
  • the water/octanol coefficient (log Kow) can be determined by any method known in the art or described herein. Solvents with large water/octanol coefficients (log Kow) also include solvents with large predicted water/octanol coefficients, including, but not limited to, known in separate explicit measurements, e.g., by database searches or literature searches. can be determined by means.
  • the water immiscible solvent is a solvent selected from the group consisting of THF, 2-MeTHF, MTHP, dimethyl carbonate, ethyl acetate, isopropyl acetate, preferably THF, or 2-MeTHF, more preferably 2 -MeTHF.
  • THF Trifluoride
  • 2-MeTHF Trimethyl carbonate
  • ethyl acetate ethyl acetate
  • isopropyl acetate preferably THF
  • 2-MeTHF preferably 2 -MeTHF.
  • the miscibility of solvents with water is described in the Merck Index 14th Edition , eg DMSO is described as soluble in water and acetonitrile as miscible with water.
  • heptane is described as insoluble in water.
  • 2-MeTHF is immiscible with water (Org. Process Res. Dev. 2007, 11, 1, 156-159.).
  • the miscibility of a solvent with water can be determined by a well-known method exemplified below by those skilled in the art. For example, when the same volume of solvent and water are mixed at around room temperature (eg, 15° C. to 40° C., preferably 20° C. to 30° C.), the solvent and water separate into two layers.
  • the miscibility test of the solvent with water is performed at around room temperature (for example, 15° C. to 40° C., preferably 20° C. to 30° C.), and the same volume of solvent and water are placed in a container such as a separating funnel, a reaction flask, or a reaction kettle.
  • the solvent may be referred to as a solvent immiscible with water.
  • the miscibility of a solvent with water may depend on the solubility of the solvent in water.
  • Solvents that are immiscible with water include solvents that have low solubility in water.
  • the solubility in water may change depending on the temperature, but the solubility in this specification means the solubility around room temperature, for example around 20°C to 30°C.
  • Solubility in water of a solvent can actually be measured by methods not specified in the methods exemplified above, but can be found in commercial supplier catalogs and in the Merck Index 14th Edition .
  • Merck Index 14th Edition states that 139 g of dimethyl carbonate, 43 g of isopropyl acetate, and 100 g of ethyl acetate dissolve in 1 L of water.
  • Heptane is described as insoluble in water.
  • 2-MeTHF is 140 g (Org. Process Res. Dev. 2007, 11, 1, 156-159.), and dimethyl carbonate is 139 g (J. Mol. Catal. A Chem. 2010, 317, 1 -18.) It is described as dissolving.
  • Solvent solubility predictions in water can also be examined by database search tools such as SciFinder®. It states that 3.2 g of anisole, 20 g of isopropyl acetate, 39 g of ethyl acetate, and 4.7 mg of heptane are dissolved in 1 L of water.
  • ChemIDplus Advanced (NIH) ([May 1, 2022], Internet ⁇ URL: https://chem.nlm.nih.gov/chemidplus/>) can also check water solubility.
  • Acetonitrile, THF, and DMSO that are miscible with water have a water solubility of 1000 g/L. That is, the water-immiscible solvent has a solubility in water of 999 g/L or less, 500 g/L or less, 250 g/L or less, preferably 200 g/L or less, more preferably 150 g/L or less.
  • the solubility of 2-MeTHF in water at room temperature is 150 g/L. Therefore, the property that the solvent has a solubility in water of 150 g/L or less at around room temperature (e.g., 25 ° C.) can be said to have properties equivalent to or superior to 2-MeTHF. .
  • the solvent-based process of the present invention (1) is immiscible with water when used as a reaction solvent, and is therefore utilized as an extraction solvent in an aqueous work-up of the reaction mixture; (2) when used as an extraction solvent, the extraction solution containing the peptide compound is used as the starting material for the subsequent step/reaction (i.e. the solution containing the starting compound of the subsequent step); , etc., can be useful for use in the synthesis of peptide compounds.
  • the method allows the entire reaction to be carried out to completion without isolation of intermediates from the solvent of the starting reaction.
  • Solvents with low water solubility include, but are not limited to, solvents with a water solubility of 999 g/L or less, such as 2-MeTHF, dimethyl carbonate, ethyl acetate, isopropyl acetate, heptane, anisole, MTBE, CPME, 4-methyltetrahydropyran, toluene, etc. correspond to solvents with a water solubility of 999 g/L or less.
  • 2-MeTHF, dimethyl carbonate, anisole, or a solvent containing one or more of these is preferably used from the viewpoint of increasing the conversion rate to the target product in the cyclization reaction and suppressing the formation of by-products.
  • the miscibility of a solvent with water can depend on the solvent-specific water/octanol coefficient (log Kow), or water/octanol coefficient prediction, as described herein.
  • the water/octanol coefficient represents the fat-solubility of a compound, and it is known that those with high fat-solubility have large values.
  • Log Kow can actually be measured by methods well known to those skilled in the art, as described herein.
  • the predicted value of the log Kow value is, for example, the value described in the literature, a search using a database search tool such as SciFinder (registered trademark), ChemIDplus Advanced (NIH) ([Search May 1, 2022], It can also be found by searching on the Internet ⁇ URL: https://chem.nlm.nih.gov/chemidplus/>).
  • Examples of log Kow values, or predicted log Kow values, for water immiscible solvents are 1.35 for 2-MeTHF, 0.23 for dimethyl carbonate, 2.11 for anisole, 1.02 for isopropyl acetate, 0.73 for ethyl acetate, and 4.66 for heptane, respectively. and takes a positive value.
  • the log Kow value or predicted log Kow value of water-miscible solvents is -0.34 for acetonitrile and -0.31 for DMSO, respectively, which are negative values. That is, the log Kow value of the solvent immiscible with water or the predicted log Ko value w is preferably a positive value, preferably 0 or more and 5 or less.
  • 2-MeTHF dimethyl carbonate, ethyl acetate, isopropyl acetate, heptane, anisole, MTBE, CPME, 4-methyltetrahydro and pyran.
  • Solvents that are immiscible with water include solvents that have low solubility in water or those that have a positive water/octanol coefficient (log Kow).
  • Acetonitrile, propionitrile and the like are mentioned as water-soluble alkylnitriles.
  • Water-soluble ethers include THF, 1,4-dioxane, and dimethoxyethane.
  • solvent A can include one or more selected from solvents belonging to the group consisting of water-immiscible solvents, water-soluble alkylnitriles, and water-soluble ethers.
  • solvent A can include solvents selected from the group consisting of 2-MeTHF, THF, MTHP, dimethyl carbonate, ethyl acetate, isopropyl acetate, anisole, acetonitrile, dichloromethane, and toluene.
  • solvent A may consist of only one solvent selected from the group consisting of one or more water-immiscible solvents, one or more water-soluble alkylnitriles, and one or more water-soluble ethers.
  • solvent A may contain two or more solvents selected from these.
  • solvent A when solvent A contains a water-immiscible solvent, the solvent contained in solvent A may be one or more selected from water-soluble alkylnitriles and water-soluble ethers. .
  • solvent A when solvent A contains water-soluble alkylnitriles, the solvent contained in solvent A may be one or more selected from water-immiscible solvents and water-soluble ethers. .
  • solvent A when solvent A contains water-soluble ethers, the solvent contained in solvent A may be one or more selected from water-soluble alkylnitriles and water-immiscible solvents. .
  • solvent A may include water-immiscible solvents, water-soluble alkylnitriles, and water-soluble ethers, as well as solvents that are none of these, such as DMF and acetone. good.
  • solvent A is a solvent that may potentially react with the peptide compounds or cyclic peptide compounds described herein, such as alcohols (MeOH, EtOH, n-PrOH, iPrOH, nBuOH, iBuOH, tBuOH), primary amines ( nPrNH2 , iPrNH2, nBuNH2 , tBuNH2 ), secondary amines ( Et2NH , nPr2NH , iPr2NH , nBu2NH , tBu2NH ), and carboxylic acids It may be free of solvents selected from protic solvents such as (AcOH, EtCO2H , nPrCO2H ).
  • protic solvents such as (AcOH, EtCO2H , nPrCO2H ).
  • solvent A contains a solvent that is neither a water-immiscible solvent, a water-soluble alkylnitrile, nor a water-soluble ether
  • the solvent is preferably 40% by weight or less of the total solvent A, More preferably, it is 30% by weight or less, 25% by weight or less, 20% by weight or less, 15% by weight or less, 10% by weight or less, or 5% by weight or less.
  • the peptide compounds of the invention can be linear peptide compounds.
  • the peptide compounds of the invention can be cyclic peptide compounds.
  • a linear or cyclic peptide compound may contain a cyclic structure as its substructure.
  • the cyclic structure includes a side chain of one amino acid residue and a side chain of another amino acid residue linked to each other, and an N-substituent of one amino acid residue and a side chain of another amino acid residue. Examples include those in which the amino acid residue is linked, and the one in which the N-substituent of one amino acid residue and the N-substituent of another amino acid residue are linked.
  • the two amino acid residues involved in linking for the cyclic structure may be adjacent, with any number of amino acid residues therebetween, such as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, or 19 amino acid residues are present may
  • the size of the ring formed by the cyclic structure is not particularly limited, but is a 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10-, and 11-membered ring.
  • peptide compound has a cyclic structure
  • the number of cyclic structures is not limited, but preferably 1, 2, 3, 4, or 5 cyclic structures are present.
  • the amino acid residue on the N-terminal side and the amino acid residue on the C-terminal side of the peptide compound are amide bonds, -(CH 2 ) n S(CH 2 ) m -, -(CH 2 ) n S( linked by a bond selected from O)( CH2 ) m- , or -( CH2 ) nS (O) 2 ( CH2 ) m- .
  • n and m are each independently 1 or 2;
  • the amino group of the N-terminal amino acid residue and the carboxyl group of the C-terminal amino acid residue are condensed.
  • a cyclic peptide compound, a salt thereof, or a solvate thereof can be produced.
  • the amide bond may be formed between the main chain amino group of the N-terminal amino acid residue and the main chain carboxyl group of the C-terminal amino acid residue, or the main chain amino group of the N-terminal amino acid residue.
  • the carboxyl group may be activated in the system using a condensing reagent, or the carboxyl group may be converted to an active ester in advance.
  • condensation of an amino group and a carboxyl group is used when an amino group and a carboxyl group are linked via an amide bond.
  • the condensation reaction is carried out in the presence or absence of a condensing reagent in solvent A at a temperature of -20°C to around the boiling point of the solvent, preferably -20°C to 100°C, preferably -5°C to 60°C. by stirring the reaction mixture at a temperature of from 10 minutes to 48 hours.
  • a condensing reagent is used in the condensation reaction, the condensing reagent and a solution containing the condensing reagent may be added to a solvent containing the starting material and optionally a base, and the solution containing the starting material and optionally a base is added to the solution containing the condensing reagent.
  • the operation of dropping a solution containing a raw material and optionally a base into a solution containing a condensing reagent is sometimes referred to as "reverse dropping".
  • reverse dropping By back-dropping the solution containing the condensation reagent over a long period of time, for example, several hours to several days, preferably 1 to 24 hours, more preferably 1 to 10 hours, the by-production of dimers and trimers can be suppressed. can.
  • no condensing reagent is used for the condensation reaction, the one in which the carboxyl group has been previously converted to an active ester may be used.
  • the condensing agent and the amount used when condensing the amino group and the carboxyl group are not particularly limited as long as they can form an amide bond, and the condensing agent and the amount used generally used in peptide synthesis are preferable (e.g., Peptide Coupling Reagents, More than a Letter Soup (Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602.)).
  • condensing agents include condensing agents having a carbodiimide skeleton.
  • a condensing agent having a carbodiimide skeleton can be used in the condensation reaction in combination with a hydroxy compound capable of forming an active ester.
  • Condensing agents having a carbodiimide skeleton include, for example, N,N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), N,N'-diisopropylcarbodiimide (DIC), 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride (EDCI HCl) and the like (see, for example, WATANABE Chemical Catalog, Amino acids and chiral building blocks to new medicine).
  • DCC N,N'-dicyclohexylcarbodiimide
  • DIC N,N'-diisopropylcarbodiimide
  • EDCI HCl 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride
  • Hydroxy compounds capable of forming active esters include, for example, 1-hydroxy-1H-benzotriazole (HOBt), 1-hydroxy-7-azabenzotriazole (HOAt), ethyl 2-cyano-2-(hydroxyimino)acetate ( oxyma), 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazine (HOOBt or HODhbt), N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide (HONB), 2,3,4,5,6-pentafluorophenol (HOPfp), N-hydroxysuccinimide (HOSu), 6-chloro-1-hydroxy-1H-benzotriazole (Cl-HOBt) (e.g.
  • Salts having these skeletons such as K-oxyma, which is a potassium salt of oxyma, can also be used.
  • K-oxyma which is a potassium salt of oxyma
  • HOBt, HOAt, oxyma, and HOOBt are particularly preferred. Among them, it is preferable to use a combination of DIC and HOAt, or to use a combination of DIC and oxyma.
  • O-(1H-benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate HBTU
  • O -(7-aza-1H-benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate HATU
  • O-[(ethoxycarbonyl)cyanomethyleneamino]-N,N,N',N'-tetramethyluro hexafluorophosphate HOTU
  • O-(1H-benzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium tetrafluoroborate TBTU
  • HATU and DIPEA in combination, or to use COMU and DIPEA in combination.
  • N,N'-carbonyldiimidazole (CDI), 1,1'-carbonyl-di-(1,2,4-triazole) (CDT), 4-(4,6-dimethoxy-1,3, Condensing agents such as 5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium chloride (DMT-MM), propylphosphonic anhydride (T3P) can also be utilized.
  • HATU, PyBOP, and PyOxim are preferable as the condensing agent of the present invention from the viewpoint of increasing the conversion rate of the cyclization reaction and suppressing the formation of by-products.
  • Combinations of solvents and condensing agents are HATU and anisole, dimethyl carbonate or 2-MeTHF, PyBOP and acetonitrile, anisole, dimethyl carbonate, 2-MeTHF, 4-methyltetrahydropyran or ethyl acetate, PyOxim and acetonitrile, anisole. , dimethyl carbonate, 2-MeTHF and ethyl acetate are preferred. More preferred combinations of solvent and condensing agent are anisole and PyBOP, dimethyl carbonate and PyBOP, and 2-MeTHF and PyBOP.
  • the cyclic peptide compound produced by the method of the present invention comprises 8-20, preferably 9-15 amino acid residues, of which at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15 , at least 16, at least 17, at least 18, or at least 19 can be non-natural amino acid residues.
  • the proportion of non-natural amino acids contained in the cyclic peptide compound produced by the method of the present invention is 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% or more of the total number of amino acids contained in the peptide compound. , 70% or more, and 80% or more.
  • the non-natural amino acid residue contained in the cyclic peptide compound may be an N-substituted non-natural amino acid residue or an N-unsubstituted non-natural amino acid residue.
  • Amino acid residues in which the amino group of the main chain of a natural amino acid is substituted with some atom or functional group other than hydrogen, or an amino acid residue in which the side chain has a structure different from that of the natural amino acid and the amino group of the main chain of which is not hydrogen Amino acid residues substituted with atoms or functional groups correspond to N-substituted unnatural amino acid residues.
  • an amino acid residue having a side chain structure different from that of a natural amino acid, although the main chain amino group is not substituted corresponds to an N-unsubstituted non-natural amino acid residue.
  • the cyclic peptide compounds produced by the methods of the invention have at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, or at least 19 N-substituted amino acid residues can include
  • the ratio of N-substituted amino acid residues contained in the cyclic peptide compound produced by the method of the present invention is 30% or more, 40% or more, 50% or more of the total number of amino acids contained in the peptide compound, 60% or more, 70% or more, and 80% or more are exemplified.
  • the N-substituted amino acid residue can be an N-substituted non-natural amino acid residue.
  • the cyclic peptide compounds produced by the methods of the invention have at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, or at least 19 N-unsubstituted non- It can contain naturally occurring amino acid residues.
  • the ratio of N-unsubstituted non-natural amino acid residues contained in the cyclic peptide compound produced by the method of the present invention is 30% or more, 40% or more of the total number of amino acids contained in the peptide compound, Examples are 50% or more, 60% or more, 70% or more, and 80% or more.
  • the cyclic peptide compounds produced by the methods of the invention have at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, or at least 19 ⁇ , ⁇ -disubstituted amino acids It can contain residues.
  • the ratio of ⁇ , ⁇ -disubstituted amino acid residues contained in the cyclic peptide compound produced by the method of the present invention is 5% or more, 10% or more, or 20% of the total number of amino acids contained in the peptide compound. Above, 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% or more, 70% or more, 80% or more are exemplified.
  • the cyclic peptide compound produced by the method of the present invention consists of 9 to 11 amino acid residues, of which 1 or more, 2 or more, 3 or more, 4 or more, 5 or more, or 6 or more are N-substituted amino acid residues, one or more, or two or more of which may be N-unsubstituted non-natural amino acid residues.
  • the methods of the present invention are particularly useful for large-scale production of cyclic peptide compounds containing many such unnatural amino acid residues.
  • the cyclic peptide compound produced by the method of the present invention is preferably a solvate, which is a hydrate, DMSO-hydrate, acetone-hydrate, or DMSO solvate. is more preferred, and a hydrate is even more preferred.
  • one or both of the amino acid residue on the C-terminal side and the amino acid residue on the N-terminal side of the linear peptide compound may be an amino acid residue that does not have an asymmetric carbon at the ⁇ -position carbon of the carboxyl group. can.
  • Amino acid residues having no asymmetric carbon at the ⁇ -position carbon of the carboxyl group include amino acid residues having the same substituent at the ⁇ -position carbon.
  • an amino acid atom eg glycine or N-substituted glycines such as N-methylglycine
  • the ⁇ -carbon is replaced by two hydrogen atoms, i.e., the ⁇ -carbon is —CH 2 —
  • the substituents on the ⁇ -position carbon are the same, those having the same substituents such as a methyl group and a methyl group do not have an asymmetric carbon.
  • the ⁇ -position carbon is substituted with a spirocyclyl group such as a spirocyclopropyl group, spirocyclobutyl group, spirocyclopentyl group, or spirocyclohexyl group, that is, the substituents on the ⁇ -position carbon are combined with the ⁇ -position carbon.
  • a spirocyclyl group such as a spirocyclopropyl group, spirocyclobutyl group, spirocyclopentyl group, or spirocyclohexyl group, that is, the substituents on the ⁇ -position carbon are combined with the ⁇ -position carbon.
  • Those that form a ring also do not have an asymmetric carbon at the ⁇ -carbon of the carboxyl group.
  • the cyclic peptide compound produced by the method of the present invention has the following formula (1): Is a cyclic peptide compound represented by, or a salt thereof or a solvate thereof.
  • compounds of Formula 1 are useful as KRAS inhibitors and are used in various KRAS-related diseases, such as KRAS-related cancers. can be
  • the cyclic peptide compound of formula (1) has the following formula (2): can be produced by a method comprising linking the N-terminal amino acid residue and the C-terminal amino acid residue of a linear peptide compound having
  • the linking step is selected from the group consisting of one or more water-immiscible solvents, one or more water-soluble alkylnitriles, and one or more water-soluble ethers.
  • a solvent comprising one or more of
  • a solvent containing water-soluble alkylnitriles such as acetonitrile, or a solvent immiscible with water such as anisole, dimethyl carbonate and/or 2-MeTHF.
  • column chromatography is preferably not used for the isolation and/or purification of the cyclic peptide compound produced by the method of the present invention, or a salt or solvate thereof.
  • the cyclic peptide compound produced by the method of the present invention, or a salt thereof, or a solvate thereof can be isolated and/or purified by, for example, crystallization by crystallization instead of column chromatography.
  • the reaction solution after the condensation reaction is subjected to a liquid separation operation, the organic layer is concentrated and/or filtered as necessary, and then a solvent suitable for crystallization is added to the resulting residue, Crystals of the cyclic peptide compound, or a salt thereof, or a solvate thereof can be obtained by optionally adding seed crystals and stirring as necessary.
  • the solvent added during crystallization is not particularly limited as long as it is a solvent that allows the cyclic peptide compound to form crystals.
  • Solvents in which the operation can be carried out are preferred.
  • a solvent capable of such operation is exemplified.
  • the crystals of the cyclic peptide compound can be obtained by keeping the crude crystals of the cyclic peptide compound suspended in a suspension state for an arbitrary time, a solvent that allows such an operation is used for crystallization.
  • the solvent added during crystallization include acetone, water, DMSO, acetonitrile, ethanol, and mixed solvents thereof.
  • the crystals of the cyclic peptide compound, its salt, or solvate thereof produced by the method of the present invention are nonsolvate crystals and solvates of the compound of formula (1) as described below. It can be a crystal, a salt crystal, or a salt solvate crystal.
  • non-solvate crystals may refer to crystals that are not solvate or hydrate crystals.
  • the solvate crystals of the compound of formula (1) are DMSO-hydrate crystals (A-type crystals or B-type crystals), hydrate crystals (C-type crystals), or acetone-hydrate crystals (H-type crystals). crystals), more preferably hydrate crystals.
  • the present invention relates to a method for producing a peptide compound by a liquid phase method.
  • the method comprises steps 1 and 2 below, and optionally repeating steps 1 and 2 multiple times, without isolating the product of each step, thereby producing a peptide compound. can be manufactured.
  • Step 1) Linking/condensing an N-protected amino acid or N-protected peptide to a C-protected amino acid or C-protected peptide;
  • Step 2 Step of removing/deprotecting the N-protecting group after Step 1.
  • the method of the present invention can include Step 1 and Step 2 once each, and in certain embodiments, the method of the present invention can repeat Step 1 and Step 2 multiple times. In order to extend the peptide chain continuously, it is preferable to repeat step 1 and step 2 a plurality of times, for example, 2 to 20 times.
  • C-protected amino acid means a natural or non-natural amino acid whose carboxyl group is protected
  • C-protected peptide means a C-terminal amino acid residue whose carboxyl group is protected.
  • the peptide may be composed only of natural amino acid residues, composed only of non-natural amino acid residues, or composed of any combination of natural amino acid residues and non-natural amino acid residues. .
  • the C-protecting peptide can comprise 2-20 amino acid residues, at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8 , at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, or at least 19 non-natural amino acid residues It is preferably a group.
  • the non-natural amino acid residue contained in the C-protected peptide may be an N-substituted amino acid residue or an N-unsubstituted non-natural amino acid residue.
  • the ratio of non-natural amino acid residues contained in the C-protected peptide is 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% or more, 70% of the total number of amino acids contained in the C-protected peptide. Above, 80% or more are exemplified.
  • the C-protected peptide comprises N-substituted amino acid residues
  • the C-protected peptide contains at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, or at least 19 N- Substitution amino acid residues can be included.
  • the proportion of N-substituted amino acid residues contained in the C-protected peptide is 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% or more, 70% of the total number of amino acids contained in the C-protected peptide. % or more and 80% or more are exemplified.
  • N-substituted amino acid residues can be non-natural amino acid residues.
  • the C-protected peptide comprises N-unsubstituted unnatural amino acid residues
  • the C-protected peptide contains at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, or at least 19 N-unsubstituted non-natural amino acid residues.
  • the proportion of N-unsubstituted non-natural amino acid residues contained in the C-protected peptide is 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% of the total number of amino acids contained in the C-protected peptide. % or more, 70% or more, and 80% or more are exemplified.
  • any protective group known in the art can be used as the protective group for the carboxyl group of "C-protected amino acid” and "C-protected peptide” as long as it does not reduce the solubility of the peptide in a solvent.
  • the solubility of the C-protected amino acid and C-protected peptide in the solvent used for the reaction is at least 1% (w/v), more preferably 5% (w/v) or more.
  • Specific examples of such a carboxyl-protecting group include a methyl group, an ethyl group, a t-Bu group, a trityl group, and a cumyl group, and among these, the t-Bu group is preferred.
  • N-protected amino acid means a natural or non-natural amino acid whose amino group is protected
  • N-protected peptide means that the amino group of the N-terminal amino acid residue is protected.
  • the peptide may be composed only of natural amino acid residues, composed only of non-natural amino acid residues, or composed of any combination of natural amino acid residues and non-natural amino acid residues. .
  • N-protected peptides can comprise from 2 to 20 amino acid residues, at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8 , at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, or at least 19 non-natural amino acid residues It is preferably a group.
  • Non-natural amino acid residues contained in N-protected peptides may be N-substituted amino acid residues or N-unsubstituted non-natural amino acid residues.
  • the ratio of non-natural amino acid residues contained in the N-protected peptide is 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% or more, 70% of the total number of amino acids contained in the N-protected peptide. Above, 80% or more are exemplified.
  • the N-protected peptide comprises N-substituted amino acid residues
  • the N-protected peptide contains at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, or at least 19 N- Substitution amino acid residues can be included.
  • the proportion of N-substituted amino acid residues contained in the N-protected peptide is 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% or more, 70% of the total number of amino acids contained in the N-protected peptide. % or more and 80% or more are exemplified.
  • N-substituted amino acid residues can be non-natural amino acid residues.
  • the N-protected peptide comprises N-unsubstituted non-natural amino acid residues
  • the N-protected peptide contains at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least 15, at least 16, at least 17, at least 18, or at least 19 N-unsubstituted non-natural amino acid residues.
  • the ratio of N-unsubstituted non-natural amino acid residues contained in the N-protected peptide is 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% of the total number of amino acids contained in the N-protected peptide. % or more, 70% or more, and 80% or more are exemplified.
  • Any protecting group known in the art can be used as the protecting group for the amino group of "N-protected amino acid” and "N-protected peptide” as long as it does not reduce the solubility of the peptide in solvents.
  • Specific examples of such amino-protecting groups include Cbz, p-nitrobenzyloxycarbonyl, 2-naphthylmethyloxycarbonyl, diphenylmethyloxycarbonyl, 9-anthrylmethyloxycarbonyl, Teoc, Boc, trifluoroacetyl , or Alloc, among which Cbz, Teoc, or trifluoroacetyl is preferred.
  • protecting groups for each of the N-protected and C-protected amino acids and/or N-protected and C-protected peptides are generally selected depending on the chemical reaction conditions and are It can be determined by conventional methods known in the art. For example, when a water-immiscible solvent (e.g., a lipophilic solvent) is used, such hydrophilic protecting groups are suitable protecting groups, as they can reduce the solubility of the protected compound in organic solvents. Sometimes not. Thus, when a water-immiscible solvent is used as described herein, a lipophilic protecting group is a preferred protecting group because it can maintain the solubility of, for example, a peptide compound in the water-immiscible solvent. Possible.
  • a water-immiscible solvent e.g., a lipophilic solvent
  • N-protecting groups examples include Cbz groups.
  • Trifluoroacetyl is a preferred example when the amino acid has a highly sterically hindered functional group such as a spiro-cycloalkyl group at the ⁇ -position in the amino acid residue.
  • Step 1 is a step of linking an N-protected amino acid or N-protected peptide to a C-protected amino acid or C-protected peptide to obtain a linear peptide compound with N-terminal and C-terminal protected, respectively.
  • the linking of the C-protected amino acid or C-protected peptide and the N-protected amino acid or N-protected peptide in step 1 consists of the N-terminal amino group of the C-protected amino acid or C-protected peptide and N -protected amino acids or N-protected peptides with C-terminal carboxyl groups in the presence or absence of condensing reagents.
  • Carboxyl groups can be activated in the system when the reaction is carried out in the presence of a condensing reagent.
  • N-protected amino acids or N-protected peptides with preactivated carboxyl groups may be utilized.
  • step 1 except for the solvent, the method described in the above section "Method for producing a cyclic peptide compound", for example, the reaction conditions and reagents can be employed, and the condensation reagent preferably used in this step is Condensing agents selected from the group consisting of T3P, EDCI, HATU, COMU, BEP, PyBOP, DMT-MM, and PyOxim are included.
  • Condensing agents selected from the group consisting of T3P, EDCI, HATU, COMU, BEP, PyBOP, DMT-MM, and PyOxim are included.
  • step 1 is one or The reaction and subsequent work-up can be carried out in multiple solvents (solvent B) and the next step can be carried out without isolating or purifying the product, ie the desired condensate.
  • Solvent B includes 2-MeTHF, a mixed solvent of 2-MeTHF and acetonitrile (mixing ratio: 1 part by weight of acetonitrile, 0.5 parts by weight or more of 2-MeTHF, preferably 0.5 to 20 parts by weight , more preferably 1 to 10 parts by weight, more preferably 1 to 5 parts by weight), 4-methyltetrahydropyran, dimethyl carbonate, ethyl acetate, and/or anisole at least 1% by weight or more, 5% by weight % or more, 10 wt% or more, 15 wt% or more, 20 wt% or more, 25 wt% or more, 30 wt% or more, 35 wt% or more, 40 wt% or more, 45 wt% or
  • step 1 when step 1 is performed multiple times, at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, or Solvent B in at least 10 times or in at least 10%, at least 20%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, or at least 90% of all steps 1 contains at least 1% by weight, 5% by weight or more, 10% by weight or more, 15% by weight or more, 20% by weight or more, 25% by weight or more, 30% by weight or more, 35% by weight or more, 40% by weight of 2-MeTHF % or more, 45 wt% or more, or 50 wt% or more, 55 wt% or more, 60 wt% or more, 65 wt% or more, 70 wt% or more, 75 wt% or more, 80 wt% or more, 85 wt% or more, 90 It is preferably contained in an amount
  • Step 2 is a step of removing N-terminal protecting groups from the N-terminal and C-terminal protected peptides obtained in Step 1.
  • step 2 includes, for example, when the N-protecting group is Cbz, p-nitrobenzyloxycarbonyl, 2-naphthylmethyloxycarbonyl, diphenylmethyloxycarbonyl, and 9-anthrylmethyloxycarbonyl. It can be carried out by catalytic hydrogenation. Any catalyst known in the art can be used for catalytic hydrogenation. Specific examples of the catalyst include Pd/C, Pd(OH) 2 /C, PtO 2 and the like, with Pd/C being preferred. Hydrogen used for catalytic hydrogenation may be used under normal pressure or under pressure.
  • hydrogen pressure decreases to about 90% or less of the hydrogen pressure at the start of the reaction
  • hydrogen can be added again to about the initial hydrogen pressure at the start of the reaction, and the number of times is limited. Instead, the desired deprotection reaction can be carried out until the desired reaction conversion rate is reached.
  • the inside of the reaction vessel may be replaced with hydrogen in the presence of the starting materials to initiate the reaction, or the inside of the reaction vessel may be replaced with hydrogen in the absence of the starting materials, and then the starting materials are introduced into the reaction vessel. can also be used to initiate the reaction.
  • step 2 can be performed in the presence of a deprotecting reagent.
  • a deprotecting reagent Any reagent known in the technical field, for example, reagents described in "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014" can be used as the deprotecting reagent depending on the type of N-protecting group. However, for example, when the N-protecting group is Teoc, trifluoroacetyl, Fmoc, or Boc, TBAF, LiBH 4 , piperidine, trifluoroacetic acid, methanesulfonic acid, or the like is preferably used.
  • the deprotection reaction of the trifluoroacetyl group includes (1) the use of lithium borohydride as a reducing reagent and/or (2) the addition of aqueous ammonia as a terminating agent.
  • Use of fluoroethanol is also provided.
  • the method includes (1) the use of lithium borohydride as the reducing reagent and (2) the use of trifluoroethanol prior to the addition of aqueous ammonia as a stopping agent. preferably includes both
  • Step 2 is the same as Step 1 independently from the group consisting of toluene, acetone, DMF, acetonitrile, THF, 2-MeTHF, dimethyl carbonate, anisole, isopropyl acetate, heptane, ethyl acetate, and 4-methyltetrahydropyran.
  • the reaction and subsequent work-up can be carried out in one or more solvents of choice (solvent B) to carry on to the next step without isolation or purification of the product, i.e. the desired deprotected form. be able to.
  • Solvent B preferably contains 2-MeTHF.
  • step 2 comprises heating the reaction mixture at a temperature of -40°C to about the boiling point of the solvent, preferably -30°C to 100°C, preferably -5°C to 40°C, for 15 minutes to 48 hours. It can be done by stirring.
  • the methods described herein involve deprotection of the C-terminal amino acid of a peptide compound, wherein the C-protected peptide protecting group is tBu, and the deprotection reagent is a combination of HMDS and TMSOTf.
  • the solvent in the deprotection step contains IPAc or 2-MeTHF
  • the C-protected peptide can be a peptide compound consisting of 2-13 amino acid residues.
  • the methods described herein comprise a deprotection reaction of the N-terminal amino acid of the peptide compound, wherein the N-protected peptide protecting group is a Cbz group and the deprotection
  • the protective condition is catalytic hydrogenation
  • the catalyst in hydrogenation is Pd/C
  • the hydrogen pressure in hydrogenation is 1 atm (14.7 psi) or more and 3 atm (44.1 psi) or less
  • the solvent in the deprotection step is 2- Including MeTHF or THF
  • the N-protected peptide can be a peptide compound consisting of 2-13 amino acid residues.
  • the methods described herein comprise a deprotection reaction of the N-terminal amino acid of the peptide compound, wherein the protecting group of the N-protected peptide is Teoc and the deprotection reagent. can generate a fluoride anion, the deprotection reagent is TBAF, the solvent for the deprotection step includes 2-MeTHF, isopropyl acetate, dimethyl carbonate or anisole, and the N-protected peptide has 2-13 amino acid residues It can be a peptide compound consisting of
  • the methods described herein involve deprotection of the N-terminal amino acid of the peptide compound, wherein the protecting group of the N-protected peptide is trifluoroacetyl (TFA).
  • the deprotection reagent is a reducing reagent
  • the deprotection reagent is lithium borohydride
  • the solvent for the deprotection step contains 2-MeTHF or methanol
  • the N-protected peptide is a peptide consisting of 2-13 amino acid residues. can be a compound.
  • the unreacted deprotected peptide can be removed by carrying out this reaction in the presence of acetone and performing a liquid separation operation after the reaction. That is, when a hydrogenolysis reaction is carried out in the presence of 36 equivalents of acetone, the amino group of the unreacted deprotected peptide is isopropylidened, suppressing the conversion to diketopiperazine and suppressing this isopropylidenation. Since the obtained peptide is a basic compound in which the terminal nitrogen is not amidated, it was found that it can be easily removed by acid washing in liquid separation treatment after the reaction.
  • the method for producing the peptide compound of the present invention can further include step 3 of removing the C-protecting group.
  • Step 3 can be performed under acidic conditions in the presence of a deprotecting reagent, for example, when the C-protecting group is t-Bu, trityl, cumyl, methyl, or ethyl.
  • a deprotecting reagent for example, when the C-protecting group is t-Bu, trityl, cumyl, methyl, or ethyl.
  • Any reagent known in the technical field for example, the reagent described in "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014" can be used as the deprotection reagent.
  • a combination of HMDS and a reagent selected from the group consisting of TMSOTf, TMSI, TMSBr, and TMSCl is preferably used to achieve acidic conditions.
  • Step 3 as in steps 1 and 2, from the group consisting of toluene, acetone, DMF, acetonitrile, THF, 2-MeTHF, dimethyl carbonate, anisole, isopropyl acetate, heptane, ethyl acetate, and 4-methyltetrahydropyran.
  • the reaction and subsequent work-up can be carried out in one or more independently selected solvents (solvent B) without isolation or purification of the product, i.e. the desired deprotected form, as follows: process can be performed.
  • Solvent B preferably contains 2-MeTHF.
  • Step 3 may be performed either after Step 1 (that is, between Steps 1 and 2) or after Step 2. More specifically, as described below, in the method of the present invention, step 1 and step 2 may be repeated multiple times, step 3 may be performed after the first step 1 or after step 2, and step It may be performed after step 1 or after step 2 for a certain number of iterations of steps 1 and 2, or after step 1 or after step 2 for the final iteration of steps 1 and 2. In one aspect, step 3 is preferably performed after step 1 or after step 2 in the final iteration of steps 1 and 2, more preferably after step 1 in the final iteration.
  • step 3 is performed after step 1
  • a linear peptide compound in which only the N-terminus is protected can be obtained.
  • step 3 is performed after step 2
  • a linear peptide compound in which both the N-terminus and C-terminus are deprotected can be obtained.
  • step 3 can be carried out by stirring the reaction mixture at a temperature of -20°C to around the boiling point of the solvent, preferably 0°C to 180°C, for 15 minutes to 48 hours.
  • the method for producing the peptide compound of the present invention comprises repeating Step 1 and Step 2, thereby extending the peptide chain.
  • the number of repetitions is not limited, but is preferably 2 to 20 times, more preferably 2 to 15 times.
  • the final step of the method of the present invention can be step 1 if the final iteration does not include step 2.
  • the linear peptide compound produced can be a linear peptide compound in which both the N-terminus and C-terminus are protected.
  • step 3, performed after step 1 can be the final step of the method of the invention if the final iteration does not include step 2.
  • the linear peptide compound produced can be a linear peptide compound in which only the N-terminus is protected.
  • a post-treatment After each reaction in Steps 1 to 3, a post-treatment can be performed, and the post-treatment allows the next reaction to be carried out without isolation of intermediates.
  • the post-treatment includes one or more operations selected from the group consisting of a liquid separation operation including washing of the organic layer and the aqueous layer, a filtration operation, and a concentration operation. These operations can be combined as appropriate to achieve the state.
  • a liquid separation operation including washing of the organic layer and the aqueous layer
  • a filtration operation As a subsequent treatment
  • liquid separation operation is usually carried out at least once.
  • a filtration operation is usually carried out as a post-treatment.
  • a part of the solvent can be distilled off by carrying out a further concentration operation.
  • a liquid separation operation can be performed for liquid-liquid extraction of the target product after the completion of each reaction in Steps 1 to 3, which can include washing of the organic layer or aqueous layer.
  • an amount suitable for the liquid separation operation for example, an amount of water and / or an aqueous solution such that the volume ratio of the organic layer: aqueous layer is within the range of 20: 80 to 80: 20, and /
  • an organic solvent is added into the system.
  • Aqueous solutions added for liquid separation include an aqueous sodium hydrogen sulfate solution, an aqueous potassium carbonate solution, an aqueous sodium carbonate solution, an aqueous dipotassium hydrogen phosphate solution, an aqueous disodium hydrogen phosphate solution, an aqueous sodium dihydrogen phosphate solution, and an aqueous sodium chloride solution. , an aqueous citric acid solution, an aqueous ammonia solution, an aqueous hydrochloric acid solution, and the like.
  • the organic solvent added for the liquid separation operation include water-immiscible solvents, water-soluble alkylnitriles, and water-soluble ethers.
  • the water-immiscible solvent added for liquid separation operation may be referred to as "solvent C".
  • the organic solvent added for the liquid separation operation include 2-methyltetrahydrofuran (2-MeTHF), dimethyl carbonate, anisole, isopropyl acetate, ethyl acetate, MTBE, CPME, 4-methyltetrahydropyran , heptane, and one or more selected from the group consisting of acetonitrile.
  • the organic layer preferably contains 2-MeTHF, which is stable against basicity and has excellent compound solubility.
  • a liquid separation operation is performed.
  • solvent C a water-immiscible solvent
  • the aqueous layer and the organic layer can be separated.
  • solvent C a solvent with low solubility in water, for example, a solvent with a water solubility of 999 g/L or less, a solvent of 500 g/L or less, a solvent of 250 g/L or less, preferably a solvent of 200 g/L or less, more preferably includes solvents of 150 g/L or less.
  • Solvent C is preferably a solvent having a positive log Kow value or a predicted log Kow value, such as a value of 0 or more and 5 or less.
  • 2-MeTHF dimethyl carbonate
  • ethyl acetate isopropyl acetate
  • heptane anisole
  • MTBE MTBE
  • CPME 4-methyltetrahydropyran
  • 2-MeTHF, ethyl acetate, isopropyl acetate, or heptane, or solvents containing these are preferably used.
  • Solvent C is preferably added in an amount that can be separated into the aqueous layer and the organic layer.
  • it can be added to the system in an amount of about 50% to 100% by weight with respect to the entire organic layer. Separation of the aqueous layer and the organic layer is exemplified by the method of adding solvent C in a liquid separation operation, and then allowing the mixture of the aqueous layer and the organic layer to stand for 1 to 30 minutes to observe whether or not two layers are formed. can be determined by standard methods.
  • the liquid separation operation can include washing the organic layer or the aqueous layer. Washing in the liquid separation operation can be performed using a solution containing no target substance to remove substances other than the target substance that can be impurities.
  • the target substance is usually present in the organic layer, and in this case, by washing the organic layer with an aqueous solution, substances that can become impurities in the aqueous layer can be extracted and removed.
  • the target substance is once transferred from the organic layer to the aqueous layer during the liquid separation process, the aqueous layer is washed when the target substance exists in the aqueous layer.
  • a neutral, basic or acidic aqueous solution can be used to wash the organic layer.
  • aqueous solutions that can be used for washing the organic layer include sodium hydrogen sulfate aqueous solution, potassium hydrogen sulfate aqueous solution, potassium carbonate aqueous solution, sodium carbonate aqueous solution, dipotassium hydrogen phosphate aqueous solution, disodium hydrogen phosphate aqueous solution, phosphoric acid
  • Aqueous solutions such as an aqueous sodium dihydrogen solution, an aqueous sodium chloride solution, an aqueous citric acid solution, an aqueous ammonia solution, an aqueous hydrochloric acid solution, and the like can be used.
  • the organic layer in order to sufficiently remove unreacted amino acids and peptides present in the system, can be washed with an aqueous sodium carbonate solution, an aqueous sodium hydrogensulfate solution, and/or an aqueous sodium carbonate solution in that order. preferable. If amino acids and peptides are still not sufficiently removed, they can be efficiently removed by washing the organic layer with an aqueous solution containing citric acid and dipotassium hydrogen phosphate. In one embodiment, washing the organic layer with a mixture of acetonitrile and an aqueous potassium carbonate solution is effective for removing highly fat-soluble amino acids and peptides.
  • organic solvent that is immiscible with water can be used to wash the aqueous layer, and organic solvents such as 2-MeTHF, heptane, MTBE, and isopropyl acetate are preferably used.
  • the present invention relates to a method for removing the solvent-derived stabilizer BHT (2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol).
  • the method includes using a solvent containing acetonitrile, propionitrile, 2-MeTHF, and heptane as the organic layer in a liquid separation operation, for example, a liquid separation operation after each step of the present invention. , which can effectively remove BHT.
  • the residual amount of BHT in the organic layer was 2.0% or less, 1.9% or less, 1.8% or less, 1.7% or less, 1.6% or less, and 1.5% or less, 1.4% or less, 1.3% or less, 1.2% or less, 1.1% or less, 1.0% or less, 0.9% or less, 0.8% or less, 0.7% or less, 0.6% or less, 0.5% or less, 0.4% or less, 0.3% 0.2% or less, 0.1% or less, or 0.05% or less.
  • BHT can be removed by using a specific solvent for the organic layer after dissolving the target substance in an aqueous layer containing water and a water-soluble alkylnitrile. Acetonitrile is preferred as the water-soluble alkylnitrile used here.
  • the organic layer that can be used to remove BHT preferably contains a water immiscible solvent.
  • Combinations of water-immiscible solvents can also be used, with preferred combinations being 2-MeTHF and heptane, or MTBE and heptane.
  • the ratio of the solvent is preferably 100% by weight or more, more preferably 100% by weight or more and 400% by weight or less, and still more preferably 100% by weight or more and 300% by weight, based on the water-soluble alkylnitrile. It is possible to efficiently remove BHT by using it in the range of weight % or less.
  • 2-MeTHF and heptane or MTBE and heptane are used in combination, 2-MeTHF or MTBE is used in a range of 10% by weight or more and 100% by weight or less, preferably 10% by weight or more and 80% by weight or less, based on heptane. It is possible to remove BHT efficiently by using in .
  • Commercially available THF and 2-MeTHF may contain 150-400 ppm of BHT as a stabilizer. When a large amount of such THF or 2-MeTHF is used, for example, when the number of steps is 20 or more, the residual amount of BHT reaches 4%, and the adverse effect on the reaction cannot be ignored.
  • Filtration operations and concentration operations known in this technical field can be used for the filtration operations and concentration operations in the present invention.
  • a solvent for example, a solvent obtained by washing a reaction vessel such as a reaction vessel, may be added to the system.
  • a solvent for example, independently selected from the group consisting of toluene, acetone, DMF, acetonitrile, THF, 2-MeTHF, dimethyl carbonate, anisole, isopropyl acetate, heptane, ethyl acetate, and 4-methyltetrahydropyran
  • One or more solvents may be added into the system. In the present specification, the operation of adding this solvent is also included in post-treatment.
  • the method for producing the peptide compound of the present invention does not include the step of isolating the intermediate as a single compound. Therefore, the solvent after the post-treatment of step 2 for the first time, or the solvent after the post-treatment of step 2 for a certain repetition of steps 1 and 2 is the reaction solvent (solvent B) for the next step 1 can be. Similarly, the solvent after the post-treatment of step 1 for the first time, or the solvent after the post-treatment of step 1 in a repetition of steps 1 and 2 becomes the reaction solvent (solvent B) in step 2 of those times. obtain. That is, the composition of solvent B may change as steps 1 and 2 are repeated, but the solvent species that make up solvent B are the same as the solvent species that have been used in the reactions and post-treatments in steps 1 and 2. can do
  • the solvent (solvent A) used in the method for producing the cyclic peptide compound of the present invention includes the solvent (solvent X) after producing the linear peptide compound by the method for producing the peptide compound of the present invention.
  • solvent X can be used as solvent A for the cyclization reaction as such.
  • solvent X is further selected from the group consisting of one or more water-immiscible solvents, one or more water-soluble alkylnitriles, and one or more water-soluble ethers. can be added as solvent A.
  • the solvent to be added is preferably 2-MeTHF, dimethyl carbonate, ethyl acetate, isopropyl acetate, anisole, acetonitrile, THF, 4-MeTHP, chlorobenzene, 1,3-dimethoxy.
  • Benzene, MTBE, CPME and the like can be mentioned, and acetonitrile, 2-MeTHF, anisole and dimethyl carbonate are particularly preferred.
  • solvent X when a solvent such as acetonitrile, 2-MeTHF, anisole, or dimethyl carbonate is added to solvent X to obtain solvent A, it is preferable to add the solvent in an amount of 20 to 80 times the weight of solvent X.
  • a solvent such as acetonitrile, 2-MeTHF, anisole, or dimethyl carbonate
  • Step 1 and Step 2 can be repeated, and one or both of the C-protected peptide and the N-protected peptide used in Step 1 of the final round of repetition preferably contains four or more N-substituted amino acid residues, or two or more N-substituted amino acid residues and one or more ⁇ , ⁇ disubstituted amino acid residues.
  • N-substituted amino acid residues are preferably N-alkyl amino acid residues such as N-methyl or N-ethyl amino acid residues, or N-substituted cyclic amino acid residues such as proline or Aze(2).
  • ⁇ , ⁇ -disubstituted amino acid residues examples include ⁇ , ⁇ -dialkylamino acid residues such as ⁇ , ⁇ -dimethylamino acid residues and cLeu in which two groups present at the ⁇ -position are linked to form an alicyclic ring.
  • ⁇ , ⁇ -disubstituted cyclic amino acid residues such as, and the like are preferred.
  • one or both of the C-protected peptide and N-protected peptide used in step 1 of the final iteration consists of 5 amino acid residues, 4 of which are non-natural amino acid residues. is preferred.
  • one or both of the C-protected peptide and N-protected peptide used in step 1 of the last iteration consists of 6 amino acid residues, 5 of which are unnatural amino acid residues. is preferred.
  • the method for producing the peptide compound of the present invention can be used to obtain a linear peptide compound used as a raw material for the method for producing the cyclic peptide compound of the present invention.
  • a linear peptide compound used as a raw material for the method for producing the cyclic peptide compound of the present invention.
  • step 1 is the final round of repetition, in order to produce a linear peptide compound as a raw material.
  • C-protected MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGly can be used
  • N- As a protected peptide N-protected Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2 can be used.
  • This compound was then used as a C-protected peptide and as an N-protected amino acid, (Z-Pro) using, through step 1, (Z-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2) , and through step 2, (Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2) can be manufactured.
  • This compound was then used as a C-protected peptide and as an N-protected amino acid, (Z-Hph(4-CF3-35F2) Cy2NH ) using, through step 1, (Z-Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2) and through step 3, the target of this batch (Z-Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2) can be manufactured.
  • This batch includes step 3 after step 1, and the final iteration of steps 1 and 2 is the case without step 2.
  • This compound was then used as a C-protected peptide and as an N-protected amino acid, (Z-Aze(2)) using, through step 1, (Z-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu) , and through step 2, (Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu) can be manufactured.
  • This compound was then used as a C-protected peptide and as an N-protected amino acid, (Z-Me Ala) using, through step 1, (Z-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu) , and through step 2, (MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu) can be manufactured.
  • This compound was then used as a C-protected peptide and as an N-protected amino acid, (Z-Ile) using, through step 1, (Z-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu) , and through step 2, (Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu) can be manufactured.
  • This compound was then used as a C-protected peptide and as an N-protected amino acid, (Teoc-MeLeu-Opfp) using, through step 1, (Teoc-MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu) , and through step 2, (MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu) can be manufactured.
  • This compound was then used as a C-protected peptide and prepared in a first batch as an N-protected amino acid.
  • the target compound (2) of this batch Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2-MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-
  • any of the above batches using the method of the present invention can efficiently produce the desired linear peptide compound without isolating or purifying intermediates, the method of the present invention can be used on a large scale. is very useful for peptide synthesis of
  • the method for producing the peptide compound of the present invention can further comprise the step of linking the N-terminal amino acid residue and the C-terminal amino acid residue of the peptide compound, and the cyclic Peptide compounds can be produced.
  • the linking of the N-terminal amino acid residue and the C-terminal amino acid residue is performed by repeating steps 1 and 2 multiple times to link the N-terminal amino acid residue and C Accomplished by ligating the terminal amino acid residues.
  • the method described in the section "Method for Producing a Cyclic Peptide Compound" above, such as the reaction conditions and reagents, can be applied to this step.
  • the present invention relates to a salt, solvate, or solvate of a salt of the cyclic peptide compound represented by formula (1).
  • the solvate of the compound is preferably a hydrate or a DMSO-water solvate.
  • the present invention relates to a crystal of the cyclic peptide compound of formula (1), or a salt or solvate thereof.
  • Crystals of this compound specifically include non-solvate crystals or solvate crystals of this compound, or non-solvate crystals or solvate crystals of salts of this compound.
  • Preferred solvate crystals include hydrate crystals, DMSO-hydrate crystals, and acetone-hydrate crystals.
  • the diffraction angle 2 ⁇ in powder X-ray diffraction is a diffraction peak measured using CuK ⁇ or CuK ⁇ 1 radiation. Crystals of these solvate crystals further identified by the diffraction angle 2 ⁇ in powder X-ray diffraction, for example, are sometimes referred to as "C-type crystals" of the hydrates shown below, but are simply referred to as "C-type". Sometimes.
  • the crystal of the compound of formula (1) when the crystal of the compound of formula (1) is a hydrate crystal, the crystal contains at least one of the following peaks as a diffraction angle 2 ⁇ in powder X-ray diffraction: It is a C-type crystal with a diffraction pattern. 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, and 17.813° ( ⁇ 0.2°)
  • the crystal of the compound of formula (1) when the crystal of the compound of formula (1) is a hydrate crystal, the crystal has a powder X-ray diffraction pattern containing the following peaks as diffraction angle 2 ⁇ in powder X-ray diffraction: C type crystal. 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, and 17.813° ( ⁇ 0.2°)
  • the Form C crystal has an X-ray diffraction pattern substantially identical to that described in FIG. In some embodiments, the Form C crystals have DSC and TG thermograms substantially identical to those set forth in FIG.
  • the crystals of the compound of formula (1) when the crystals of the compound of formula (1) are non-solvate crystals, the crystals contain at least one of the following peaks in powder X-ray diffraction as diffraction angle 2 ⁇ : It is an F-type crystal with a line diffraction pattern. 5.370°, 6.934°, 8.940°, 9.838°, 10.771°, 12.181°, 13.525°, 15.179°, 16.202°, or 17.554° ( ⁇ 0.2°)
  • the F-type crystal has an X-ray diffraction pattern substantially identical to that shown in FIG.
  • the crystal of the compound of formula (1) when the crystal of the compound of formula (1) is a solvate crystal, the crystal contains at least one of the following peaks as diffraction angle 2 ⁇ in powder X-ray diffraction: Form A of DMSO-hydrate crystals with a diffraction pattern. 8.006°, 9.002°, 9.943°, 11.501°, 13.067°, 14.854°, 16.320°, 17.275°, 19.261°, or 20.324° ( ⁇ 0.2°)
  • the A-type crystal has substantially the same X-ray diffraction pattern as described in FIG.
  • the crystal of the compound of formula (1) when the crystal of the compound of formula (1) is a solvate crystal, the crystal contains at least one of the following peaks as diffraction angle 2 ⁇ in powder X-ray diffraction: Form B of DMSO-hydrate crystals with a diffraction pattern. 8.223°, 9.594°, 9.976°, 11.879°, 13.841°, 14.572°, 15.934°, 16.350°, 19.805°, 20.480° ( ⁇ 0.2°)
  • the B-type crystal has an X-ray diffraction pattern substantially identical to that shown in FIG.
  • the Form B crystals have a DSC thermogram substantially identical to that set forth in FIG.
  • the crystal of the compound of formula (1) when the crystal of the compound of formula (1) is a solvate crystal, the crystal contains at least one of the following peaks as diffraction angle 2 ⁇ in powder X-ray diffraction: H-form acetone-hydrate crystals with a diffraction pattern. 7.942°, 8.283°, 8.861°, 10.097°, 10.491°, 11.805°, 12.673°, 12.830°, 13.514°, 13.855°, 15.853°, 16.405°, 16.642°, and 17.772° ( ⁇ 0.2°)
  • the Form H crystal has an X-ray diffraction pattern substantially identical to that shown in FIG.
  • the crystals of the compound of formula (1) are substantially free of impurities in any form.
  • crystals of the compound of formula (1) can have a purity of at least about 90%.
  • crystals of the compound of formula (1) have a purity of at least about 95%.
  • crystals of the compound of Formula (1) have a purity of at least about 98%.
  • crystals of the compound of formula (1) are at least 98.5%, 98.6%, 98.7%, 98.8%, 98.9%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7% , 99.8%, or 99.9% purity.
  • the crystals of the compound of formula (1) are substantially free of other forms.
  • the Form C crystal is substantially free of other crystalline forms of the compound represented by formula (1).
  • the F-type crystal is substantially free of other crystalline forms of the compound represented by formula (1).
  • the A-form crystal is substantially free of other crystalline forms of the compound represented by formula (1).
  • the B-form crystal is substantially free of other crystalline forms of the compound represented by formula (1).
  • the Form H crystal is substantially free of other crystal forms of the compound represented by formula (1).
  • the present invention relates to a method for producing a hydrate crystal of the cyclic peptide compound represented by formula (1).
  • the manufacturing method includes the following steps. Step A: a step of dissolving a cyclic peptide compound in a polar organic solvent in an amount capable of dissolving the cyclic peptide compound to obtain a solution; Step B: concentrating the solution to obtain a residue of the cyclic peptide compound, and Step C: adding a mixture of water and a polar organic solvent to the residue to obtain a hydrate crystal of the cyclic peptide compound. process.
  • the polar organic solvent used in step A can be a solvent in which the cyclic peptide compound of formula (1), for example, the cyclic peptide compound in a crudely purified state can be dissolved.
  • DMSO, DMF, DMA, NMP, acetone, methanol, ethanol, acetonitrile, and the like and more preferably acetone, DMSO, or ethanol.
  • a soluble amount can be used in the range of 3 to 10 w/v, preferably in the range of 3 to 7 w/v, relative to the cyclic peptide compound of formula (1).
  • concentration in step B includes lyophilization.
  • the residue obtained in step B can be amorphous, oily, or solid.
  • the residue obtained in step B can be a lyophilisate.
  • the polar organic solvent used in step C can be the same solvent as the polar organic solvent used in step A.
  • the mixing ratio of water and the polar organic solvent in the mixed solution used in step C 0.5 to 10 parts by weight of water can be used with respect to 1 part by weight of the polar organic solvent, preferably 1 to 7 parts by weight of water. More preferably, 1 to 5 parts by weight of water is used.
  • the polar organic solvent used in step C is preferably acetonitrile, ethanol, or acetone.
  • the present invention relates to a method for producing crystals of a cyclic peptide compound represented by formula (1).
  • the manufacturing method is dissolving the amorphous cyclic peptide compound in DMSO to obtain a solution; freeze-drying the solution to obtain a lyophilized form of the cyclic peptide compound; and adding a water-acetonitrile mixture to the lyophilized form to obtain a hydrate crystal of the cyclic peptide compound.
  • HPLC analysis conditions 1 Equipment: Waters ACQUITY UPLC H-Class Column: Ascentis Express 90A C18 (Sigma-Aldrich), 2.1 mm ID x 50 mm, 2.7 ⁇ m Mobile phase: 0.05% TFA/water (A), 0.05% TFA/MeCN (B) Elution method: B) 5% (0 min) ⁇ 100% (5 min) ⁇ 5% (5.1 min) ⁇ 5% (7 min) Flow rate: 0.5mL/min Column temperature: 35°C Detection wavelength: 210 nm (PDA)
  • LCMS analysis conditions 1 Equipment: Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA Column: Ascentis Express 90A C18 (Sigma-Aldrich), 2.1 mm ID x 50 mm, 2.7 ⁇ m Mobile phase: 0.05% TFA/water (A), 0.05% TFA/MeCN (B) Elution method: B) 5% (0 min) ⁇ 100% (5 min) ⁇ 5% (5.1 min) ⁇ 5% (7 min) Flow rate: 0.5mL/min Column temperature: 35°C Detection wavelength: 210 nm (PDA)
  • the 1 H-NMR spectrum was measured using a nuclear magnetic resonance spectrometer ECX500II (manufactured by JEOL), and the chemical shift of Me 4 Si used as an internal standard was set to 0 ppm, and the deuterium lock signal from the sample solvent was referenced. did.
  • a sample solution was prepared by using a commercially available deuterated solvent suitable for the purpose of measurement as a sample solvent and mixing it with the compound to be measured. The signal integral value was calculated based on the ratio of the signal area intensity of each signal.
  • the measurement method by qNMR was carried out by dissolving the residue containing the target compound and an internal standard substance in DMSO - d6 and performing the following analysis conditions.
  • the yield was calculated according to the following formula using the content of the target substance in the residue calculated by qNMR and the purity of the target substance of the residue calculated by HPLC analysis.
  • Measuring device JNM-ECZ500R Internal standard substance: 3,5-bis(trifluoromethyl)benzoic acid Measurement conditions ( 1 H-NMR): DMSO-d 6 , 24.3° C., pulse angle 90° C., digital resolution 0.25 Hz, relaxation time 60 seconds , no spin, 8 integrations Measurement conditions ( 19 F-NMR): DMSO-d 6 , 24.3°C, pulse angle 90°C, digital resolution 0.22 Hz, relaxation time 60 seconds, no spin, 8 integrations
  • Powder X-ray (XRPD) diffraction measurement was performed under the following conditions, and the 2 ⁇ value of the scanning range was calculated.
  • the diffraction angle (2 ⁇ value) is plotted on the horizontal axis and the diffraction intensity is plotted on the vertical axis.
  • Measurement method 1 Measurement device: SmartLab System (manufactured by Rigaku Corporation) Radiation source: CuK ⁇ 1 Tube voltage: 45 kV Tube current: 200mA Scanning range: 3-35° Sampling width: 0.02°
  • Measurement method 2 Measurement equipment: SmartLab System, D/Tex Ultra detector (manufactured by Rigaku) Radiation source: CuK ⁇ 1 Tube voltage: 45 kV Tube current: 200mA Scanning range: 5-30° Scanning speed: 5°/min Sampling width: 0.02°
  • Measurement method 3 Measurement equipment: D8 Discover, 2D VANTEC-500 solid state detector (manufactured by Bruker) Radiation source: CuK ⁇ Tube voltage, tube current: 40 kV, 40 mA or 50 kV, 1000 ⁇ A (when using microfocus X-ray source I ⁇ S) Measuring range: 5-31° Exposure time: 100 seconds or 600 seconds (when using microfocus X-ray source I ⁇ S)
  • Measuring device X'pert-pro MPD (manufactured by PANalytical) Radiation source: CuK ⁇ Tube voltage: 45 kV Tube current: 40mA Scanning range: 3-40° Scanning speed: 4.2°/min Sampling width: 0.017°
  • Measuring device X'pert-pro MPD (manufactured by PANalytical) Source: Cu Tube voltage: 45 kV Tube current: 40mA Scanning range: 3-25° Scanning speed: 0.33°/s Sampling width: 0.026° Measurement: The sampled suspension was packed in a capillary for X-ray crystallography and measured.
  • Measurement method 2 Measurement device: SmartLab System, DSC attachment (manufactured by Rigaku) Measurement range: 35-270°C Atmosphere: Nitrogen DSC conditions are shown in Table 3.
  • the measurement method by HPLC was carried out by preparing a sample of a mixed solution containing the target compound by any of the following methods, and performing the above analysis conditions.
  • Sample preparation method 1 A mixture containing the target compound was diluted with acetonitrile.
  • Sample preparation method 2 A mixture containing the target compound was diluted with a mixture of acetonitrile and propylamine in a ratio of 9:1.
  • Sample preparation method 3 A mixture containing the target compound was diluted with methanol.
  • Sample preparation method 4 The mixture containing the target compound was diluted with a mixture of methanol and water in a ratio of 4:1.
  • the reaction conversion rate is calculated by the area value of the raw material and the area value of the target product calculated by HPLC analysis, or the area value of the raw material, the area value of the propylamide form of the raw material and the area value of the target product, or the raw material before the reaction. Using the area value of and the area value of the raw material after the reaction, it was carried out by one of the following equations.
  • Reaction conversion rate (%) area value of target product / (area value of raw material + area value of target product) x 100
  • Reaction conversion rate (%) area value of target product/(area value of starting material + area value of propylamide of starting material + area value of target product) x 100
  • Reaction conversion rate (%) 100 - (area value of raw material after reaction/area value of raw material before reaction x 100)
  • the external temperature of the reaction vessel was set to 10° C., 5% aqueous sodium carbonate solution (26.6 kg) was added dropwise with stirring, and then water (6.9 kg) was added. After setting the external temperature of the reactor to 25° C. and stirring for 20 minutes, the water layer was discharged from the reactor.
  • the obtained organic layer was similarly washed with a 5% sodium hydrogensulfate monohydrate aqueous solution (34.5 kg ⁇ 3) and a 5% sodium carbonate aqueous solution (34.5 kg) at an external temperature of 25°C.
  • the obtained organic layer was collected in a storage container, and the washing solution obtained by washing the reaction kettle with 2-MeTHF (25.6 kg) was combined and collected in the storage container as a storage solution.
  • the external temperature of the reactor was set at 10° C., and 5% aqueous sodium carbonate solution (25.2 kg) was added to the reaction mixture while stirring.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and after stirring for 10 minutes, the stirring was stopped and the water layer was discharged from the reactor.
  • the organic layer was washed twice with a 5% sodium hydrogensulfate monohydrate aqueous solution (33.2 kg) and then with a 5% sodium carbonate aqueous solution (33.2 kg).
  • the organic layer was recovered in a storage container, and the reaction kettle was combined with the washing solution washed with 2-MeTHF (25.6 kg) and recovered in a storage container as a storage solution.
  • the storage solution was added to the nitrogen-purged reaction vessel while rinsing the inside of the storage vessel with 2-MeTHF (1.7 kg).
  • the external temperature of the reactor was set to 50° C., and the mixture was concentrated under reduced pressure while stirring until the liquid volume reached about 12 L.
  • a 2-MeTHF solution (18.9 kg) containing compound 7 was obtained by combining the obtained residue and the washing liquid obtained by washing the reaction kettle with 2-MeTHF (8.5 kg).
  • a 2-MeTHF solution (18.7 kg) containing compound 7 obtained in Example 3 was added to the nitrogen-purged reaction vessel while rinsing the storage container with 2-MeTHF (6.9 kg).
  • 5% Pd/C (1.74 kg, 50% wet) was added to the reactor.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and hydrogen was pressurized until the internal pressure of the reactor reached 0.18 MPaG. After stirring for 50 minutes, it was confirmed that there was no change in the internal pressure. After purging with nitrogen, the system was further pressurized to 0.18 MPaG with hydrogen and stirred for 1 hour.
  • a sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and it was confirmed by HPLC analysis that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1). After purging the inside of the reaction vessel with nitrogen, the reaction mixture was filtered under pressure. After washing the reaction kettle and filter with 2-MeTHF (10.6 kg), the filtrate and washings were collected in a storage container as a storage solution. The obtained filtrate and washing liquid were concentrated under reduced pressure at an external temperature of 40° C. until the liquid volume became about 6 L. A 2-MeTHF solution (14.0 kg) containing compound 8 was obtained by combining the residue and the washing liquid obtained by washing the reaction kettle with 2-MeTHF (8.5 kg). Retention time by HPLC analysis: 2.538 minutes (HPLC analysis conditions: method 1)
  • a 2-MeTHF solution (13.9 kg) containing compound 8 obtained in Example 4, compound 9 (2.31 kg) and 2-MeTHF (10.4 kg) were sequentially added to a reaction vessel purged with nitrogen. After setting the external temperature of the reactor to 10° C. and adding DIPEA (4.61 kg) while stirring, T3P (1.6 M 2-MeTHF solution, 12.15 kg) was added dropwise. The external temperature of the reaction kettle was set to 25° C. and the reaction mixture was stirred for 1 hour. A sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and the reaction conversion rate was confirmed to be 96.8% by HPLC analysis (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • the external temperature of the reaction kettle was set at 10° C., and 5% aqueous sodium carbonate solution (24.3 kg) was added to the reaction mixture while stirring.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and after stirring for 10 minutes, the stirring was stopped and the aqueous layer was discharged from the reactor.
  • the organic layer was washed twice with a 5% sodium hydrogensulfate monohydrate aqueous solution (32.4 kg) and then washed with a 5% sodium carbonate aqueous solution (32.4 kg).
  • 2-MeTHF (25.6 kg) was added to the obtained organic layer.
  • the external temperature of the reactor was set to 50° C., and the residue was collected in a storage container after concentration under reduced pressure with stirring until the liquid volume became about 12 L.
  • the reaction vessel was washed with 2-MeTHF (8.5 kg), and the washings were combined to obtain a solution containing compound 10 (19.0 kg).
  • Retention time by HPLC analysis 4.004 minutes (analysis conditions: method 1)
  • a solution (18.8 kg) containing compound 10 obtained in Example 5 and 2-MeTHF (7.0 kg) were sequentially added to a reaction vessel purged with nitrogen.
  • 5% Pd/C (1.70 kg, 50% water content) was added to the reactor.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and hydrogen was pressurized until the internal pressure of the reactor reached 0.18 MPaG. After 1 hour and 40 minutes, it was confirmed that there was no change in the internal pressure, and after purging with nitrogen, the pressure was increased to 0.18 MPaG with hydrogen, and the mixture was stirred for 2 hours.
  • a sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and it was confirmed by HPLC analysis that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • Example 7 Compound 13: (tert-butyl 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3 -methyl-pentanoyl]-methyl-amino]propanoyl]azetidine-2-carbonyl]-ethyl-amino]-3-(p-tolyl)propanoyl]-methyl-amino]acetate)
  • a solution (16.5 kg) containing compound 11 obtained in Example 6 and 2-MeTHF (2.12 kg) were sequentially added to a nitrogen-purged reactor at room temperature. Then, a solution of compound 12 (2.52 kg) dissolved in 2-MeTHF (8.1 kg), 2-MeTHF (8.1 kg) and acetonitrile (3.1 kg) were sequentially added to the reactor at room temperature. After adding DIPEA (4.51 kg) with stirring at room temperature, the external temperature of the reaction vessel was set to 25°C, and HATU (4.52 kg) and 2-MeTHF (0.3 L) were sequentially added, Stirred at 25° C. for 1 hour.
  • reaction conversion rate calculation formula 1 A sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and it was confirmed by HPLC analysis that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • N-Methylimidazole (0.65 kg) was added to the reactor, and 5% aqueous sodium carbonate solution (23.9 kg) was added with stirring, followed by stirring for 1 hour. Then, a 2.5% aqueous ammonia solution (23.9 kg) was added, and after stirring for 30 minutes, the aqueous layer was discharged from the reaction vessel.
  • Example 7-1 Compound 13: (tert-butyl 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-(benzyloxycarbonylamino)-3 -methyl-pentanoyl]-methyl-amino]propanoyl]azetidine-2-carbonyl]-ethyl-amino]-3-(p-tolyl)propanoyl]-methyl-amino]acetate) (solvent study) A solution (72.62 mg) containing compound 11 (50.69 mg (0.100 mmol)) obtained in Example 6 was added to a reaction vessel and concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of 60°C.
  • reaction conversion rate calculation formula 3 The reaction mixture was sampled for sample preparation (sample preparation method 1), and it was confirmed by HPLC analysis that the raw material compound 14 was not detected (reaction conversion rate calculation formula 3).
  • the external temperature of the reactor was set to 0° C., and 0.5 M hydrochloric acid aqueous solution (19.4 kg) was added. After setting the external temperature of the reactor to 25° C., the mixture was stirred for 10 minutes. After stopping the stirring, the water layer was discharged from the reactor. The obtained organic layer was washed with a 0.5 M hydrochloric acid aqueous solution (27.5 kg). A 5% potassium carbonate aqueous solution (27.5 kg x 2) and then DMF (2.8 kg) were added to the obtained organic layer.
  • a solution (7.4 kg) containing compound 15 obtained in Example 8, a solution (9.0 kg) containing compound 13 obtained in Example 7, isopropyl acetate (4. 0 kg) and N-methylmorpholine (2.38 kg) were sequentially added at room temperature.
  • 5% Pd/C (0.83 kg, 50% water content) was added to the reaction vessel, the external temperature of the reaction vessel was set to 25°C, and hydrogen was added until the internal pressure of the reaction vessel reached 0.18 MPaG. pressured. After 1 hour, after confirming that there was no change in the internal pressure, the pressure was increased to 0.18 MPaG with hydrogen, and the mixture was further stirred for 1 hour.
  • reaction conversion rate calculation formula 1 A sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and it was confirmed by HPLC analysis that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1). After purging the inside of the reaction vessel with nitrogen, the reaction mixture was filtered under pressure. After washing the inside of the reactor and the filter with 2-MeTHF (10.0 kg x 2), the filtrate and washings were combined to obtain a storage solution (first batch).
  • a solution (7.4 kg) containing compound 15 obtained in Example 8, a solution (9.0 kg) containing compound 13 obtained in Example 7, isopropyl acetate (4. 0 kg) and N-methylmorpholine (2.38 kg) were sequentially added at room temperature.
  • 5% Pd/C (0.83 kg, 50% water content) was added to the reactor, the external temperature of the reactor was set to 25°C, and hydrogen was added until the internal pressure of the reactor reached 0.18 MPaG. pressured. After 1 hour, after confirming that there was no change in the internal pressure, the pressure was increased to 0.18 MPaG with hydrogen, and the mixture was further stirred for 1 hour.
  • reaction conversion rate calculation formula 1 A sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and it was confirmed by HPLC analysis that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1). After purging the inside of the reaction vessel with nitrogen, the reaction mixture was filtered under pressure. After washing the inside of the reactor and the filter with 2-MeTHF (10.0 kg x 2), the filtrate and washings were combined to obtain a storage solution (second batch).
  • Example 9-1 (When using 2-MeTHF instead of isopropyl acetate used in Example 9) Compound 16 (tert-butyl 2-[[(2S)-2-[ethyl-[(2S)-1-[(2S)-2-[methyl-[(2S,3S)-3-methyl-2-[ [(2S)-4-methyl-2-[methyl(2-trimethylsilylethoxycarbonyl)amino]pentanoyl]amino]pentanoyl]amino]propanoyl]azetidine-2-carbonyl]amino]-3-(p-tolyl)propanoyl] -methyl-amino]acetate)
  • a storage solution (482.7 mg) containing compound 13 obtained in Example 7 was added to the reaction vessel and concentrated under reduced pressure to obtain a residue containing compound 13.
  • a residue containing Compound 15 (91.2 mg, 81.2 wt %) and 2-MeTHF (1000 ⁇ L) were sequentially added to the reaction vessel at room temperature.
  • 5% Pd/C (29.8 mg, 50% water content) was added to the reaction vessel at room temperature.
  • the external temperature was set to 25° C.
  • deaeration was performed with hydrogen gas
  • the mixture was stirred for 1 hour.
  • a sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and subjected to HPLC analysis to confirm that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • the reaction mixture was filtered and the residue was washed with 2-MeTHF (400 ⁇ L ⁇ 2).
  • the external temperature of the reaction vessel containing the filtrate was set to 25° C., and 5% potassium carbonate aqueous solution (440 ⁇ L) and 4-dimethylaminopyridine (16.6 mg) were sequentially added with stirring. Stirring was stopped after 30 minutes and the aqueous layer was drained.
  • the organic layer was washed with a 5% aqueous potassium hydrogensulfate solution (440 ⁇ L ⁇ 2) and a 5% aqueous potassium carbonate solution (440 ⁇ L ⁇ 2).
  • the obtained organic layer was concentrated under reduced pressure to obtain a residue containing compound 16 (113.3 mg).
  • Example 9-2 (when dimethyl carbonate was used instead of isopropyl acetate used in Example 9)
  • Compound 16 (tert-butyl 2-[[(2S)-2-[ethyl-[(2S)-1-[(2S)-2-[methyl-[(2S,3S)-3-methyl-2-[ [(2S)-4-methyl-2-[methyl(2-trimethylsilylethoxycarbonyl)amino]pentanoyl]amino]pentanoyl]amino]propanoyl]azetidine-2-carbonyl]amino]-3-(p-tolyl)propanoyl]
  • a storage solution (477.4 mg) containing compound 13 obtained in Example 7 was added to a reaction vessel for synthesizing compound 13 (methyl-amino]acetate) and concentrated under reduced pressure to obtain a residue containing compound 13.
  • a residue containing Compound 15 (92.0 mg, 81.2 wt %) and dimethyl carbonate (1000 ⁇ L) were sequentially added to the reaction vessel at room temperature. After adding 5% Pd/C (29.7 mg, 50% water content) to the reaction vessel, the external temperature was set to 25° C., deaeration was performed with hydrogen gas, and the mixture was stirred for 1 hour.
  • a sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and subjected to HPLC analysis to confirm that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1). The reaction mixture was filtered and the residue was washed with dimethyl carbonate (400 ⁇ L ⁇ 2).
  • the external temperature of the reaction vessel containing the filtrate was set to 25° C., and 5% potassium carbonate aqueous solution (880 ⁇ L) and 4-dimethylaminopyridine (17.1 mg) were sequentially added with stirring. Stirring was stopped after 30 minutes and the aqueous layer was drained. The organic layer was washed with a 5% aqueous potassium hydrogensulfate solution (880 ⁇ L ⁇ 2) and a 5% aqueous potassium carbonate solution (880 ⁇ L ⁇ 2). The obtained organic layer was concentrated under reduced pressure to obtain a residue containing compound 16 (107.3 mg).
  • Example 9-3 (When using anisole instead of isopropyl acetate used in Example 9) The table below shows the results when dimethyl carbonate and anisole were used as solvents in place of 2-MeTHF used in the synthesis of compound 16 above.
  • a solution (18.8 kg) containing compound 16 obtained in Example 9 and 2-MeTHF (5.8 kg) were sequentially added to a nitrogen-purged reactor at room temperature.
  • the external temperature of the reactor was set to 47° C., and tetrabutylammonium fluoride (1 M THF solution, 17.6 kg) was added over 1 hour.
  • the reaction mixture was sampled for sample preparation (sample preparation method 1), and it was confirmed by HPLC analysis that the raw material compound 16 was not detected (reaction conversion rate calculation formula 1). After stopping the stirring, the reaction mixture was split in half.
  • the external temperature of the reaction kettle was set to 10° C., and 10% aqueous citric acid monohydrate solution (28.7 kg) was added to the reaction mixture.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and after stirring for 10 minutes, the stirring was stopped and the aqueous layer was discharged from the reactor.
  • the resulting organic layer was washed with 10% aqueous citric acid monohydrate solution (28.7 kg ⁇ 2) and 5% aqueous sodium carbonate solution (28.7 kg ⁇ 3).
  • 2-MeTHF (26.0 kg) was added to the obtained organic layer, and the mixture was concentrated under reduced pressure at an external temperature of 60°C until the liquid volume became about 7 L.
  • a solution (19.8 kg) containing compound 19 was obtained by combining the residue and the washing liquid obtained by washing the reaction kettle with 2-MeTHF (6.8 kg x 2). Retention time by HPLC analysis: 3.510 minutes (HPLC analysis conditions: method 3)
  • Condensation reaction of compound 20 and compound 21 (examination of reaction conditions in Example 13) Solvents in the condensation reaction of compound 20 and compound 21 were investigated. Condensation reactions were followed by HPLC analysis. The yield was calculated from the area % (Area%) determined by HPLC analysis and the measured value of qNMR.
  • Example 13-1 (When using anisole instead of 2-MeTHF and acetonitrile used in Example 13 ) Compound 22 (tert-butyl (3S)-3-[[(2S)-2-[benzyloxycarbonyl(methyl)amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4 -oxo-butanoate)
  • reaction conversion rate Calculation formula 1 The external temperature was set to 10° C., N-methylimidazole (34.6 ⁇ L) and 5% potassium carbonate aqueous solution (200 ⁇ L) were sequentially added to the reaction vessel, and the external temperature was set to 25° C. and stirred for 30 minutes. Then, 2.5% aqueous ammonia solution (800 ⁇ L) and anisole (260 ⁇ L) were added and stirred for 10 minutes, and then the aqueous layer was discharged.
  • the resulting organic layer was washed with a 2.5% aqueous ammonia solution (1000 ⁇ L) and a 10% aqueous sodium hydrogensulfate monohydrate solution (1000 ⁇ L ⁇ 3).
  • a solvent anisole (260 ⁇ L)
  • the obtained organic layer was concentrated under reduced pressure to obtain a residue containing compound 22 (175.7 mg, yield: 82%).
  • reaction conversion rate calculation formula 1 5% Pd/C (1.26 kg, 50% water content), the solution containing compound 22 obtained in Example 13 (21.0 kg), and 2-MeTHF (5.1 kg) were placed in a reaction vessel purged with nitrogen. were added sequentially at room temperature.
  • the external temperature of the reaction vessel was set to 25° C., and hydrogen was pressurized until the internal pressure of the reaction vessel reached 0.18 MPaG. After stirring for 40 minutes, after confirming that there was no change in the internal pressure, the reactor was pressurized to 0.18 MPaG with hydrogen and stirred for an additional hour.
  • the reaction mixture was sampled for sample preparation (sample preparation method 1), and HPLC analysis confirmed that the reaction conversion rate was 100% (raw materials not detected) (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • the external temperature of the reactor was set to 10° C., and 5% aqueous sodium carbonate solution (25.3 kg) was added.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and after stirring for 30 minutes, the stirring was stopped and the aqueous layer was discharged from the reactor.
  • the external temperature of the reactor was set to 15° C., and 5% sodium hydrogensulfate monohydrate aqueous solution (25.3 kg) was added.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and after stirring for 10 minutes, the stirring was stopped and the aqueous layer was discharged from the reactor.
  • a solution (22.4 kg) containing Compound 25 obtained in Example 15 and 2-MeTHF (0.76 kg) were added in order to a reaction vessel purged with nitrogen at room temperature.
  • the external temperature of the reactor was set to -20°C, LiBH 4 (10 w/w% THF solution, 3.67 kg) was added with stirring, and the mixture was stirred for 2 hours.
  • the reaction mixture was sampled for sample preparation (sample preparation method 4), and HPLC analysis confirmed that the reaction conversion rate was 100% (raw materials not detected) (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • 2,2,2-Trifluoroethanol (16.5 kg) was added dropwise to the reactor at an external temperature of -20 to -30°C over 3 hours.
  • the external temperature of the reactor was raised to 0°C over 1 hour, and the mixture was further stirred at 0°C for 1 hour.
  • a 20% ammonium chloride aqueous solution (14.3 kg) was added to the reactor, and after stirring for 13 minutes, the stirring was stopped and the aqueous layer was discharged from the reactor.
  • the external temperature of the reactor was set to 10° C. and trifluoroacetic acid (1.88 kg) was added.
  • the external temperature of the reaction kettle was set to 25° C., and the mixture was stirred for 1 hour.
  • the obtained reaction mixture and the washing solution obtained by washing the reaction vessel with 2-MeTHF (6.7 kg) were combined and collected in a storage container.
  • a 2 M sodium hydroxide aqueous solution (61.9 kg) was added to another reaction vessel purged with nitrogen at room temperature, and the external temperature of the reaction vessel was set to 10°C.
  • the reaction mixture collected in the storage container was added dropwise over 70 minutes, then 2-MeTHF (0.6 kg) was added, and the external temperature of the reactor was set to 25°C.
  • the stirring was stopped and the aqueous layer was discharged from the reactor.
  • the obtained organic layer was washed with 2M sodium hydroxide aqueous solution (47.6 kg ⁇ 2) and 10% dipotassium hydrogen phosphate aqueous solution (23.8 kg).
  • the obtained organic layer was concentrated under reduced pressure at an external temperature of 40° C. until the liquid volume became about 40 L.
  • Example 15-1 Compound 25a: tert-butyl N 2 - ⁇ (2S)-2-[(1- ⁇ [(benzyloxy)carbonyl]amino ⁇ cyclopentane-1-carbonyl)(methyl)amino]-2-cyclopentylacetyl ⁇ -N,N,N 2 Synthesis of -trimethyl-L- ⁇ -asparaginate
  • Example 16-1 Compound 26: tert-butyl N 2 - ⁇ (2S)-2-[(1-aminocyclopentane-1-carbonyl)(methyl)amino]-2-cyclopentylacetyl ⁇ -N,N,N 2 Synthesis of -trimethyl-L- ⁇ -asparaginate
  • the external temperature of the reactor was set to 10° C., and CPME (34.1 kg), 5% aqueous sodium carbonate solution (23.6 kg) and N-methylimidazole (0.67 kg) were added in order. After setting the external temperature of the reactor to 25° C. and stirring for 40 minutes, the water layer was discharged from the reactor.
  • the external temperature of the reactor was set to 10° C., and 5% sodium hydrogensulfate monohydrate aqueous solution (23.6 kg) was added. After setting the external temperature of the reactor to 25° C. and stirring for 10 minutes, the aqueous layer was discharged from the reactor.
  • the obtained organic layer was washed with 5% sodium hydrogensulfate monohydrate aqueous solution (23.6 kg x 2) and 5% sodium carbonate aqueous solution (23.6 kg x 2), and then 2-MeTHF (26.0 kg) was added.
  • the obtained organic layer was concentrated under reduced pressure while stirring at an external temperature of 40° C. until the liquid volume became about 12 L.
  • THF (19.7 kg) was added to the obtained residue, the mixture was concentrated under reduced pressure with stirring at an external temperature of 40° C. until the liquid volume became about 12 L.
  • CPME (9.0 kg) was added to the reactor.
  • the mixture was concentrated under reduced pressure while stirring at an external temperature of 40° C. until the liquid volume became about 12 L.
  • Example 17-1 (when using 2-MeTHF instead of acetonitrile used in the synthesis method of Example 17 )
  • Compound 28 (Benzyl (2S)-2-[[1-[[(1S)-2-[[(1S)-3-tert-butoxy-1-(dimethylcarbamoyl)-3-oxo-propyl]-methyl -Amino]-1-cyclopentyl-2-oxo-ethyl]-methyl-carbamoyl]cyclopentyl]carbamoyl]pyrrolidine-1-carboxylate)
  • a storage solution (1.29 g) containing Compound 26 was added to the reaction vessel and concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of 40°C. Then, 2-MeTHF (0.91 mL) and compound 27 (126.90 mg) were added to the reaction vessel. After adding DIPEA (0.37 mL) with stirring at room temperature, HATU (338.30 mg) was added and stirred at room temperature for 3 hours. 2-MeTHF (1.84 mL) and 5% aqueous sodium carbonate solution (1.09 mL) were added to the reaction vessel, and N-methylimidazole (30.30 ⁇ L) was added, followed by stirring for 30 minutes.
  • the obtained organic layer was treated with 2.5% aqueous ammonia solution (1.09 mL), 5% aqueous sodium hydrogen sulfate monohydrate solution (1.09 mL ⁇ 2), 5% aqueous sodium carbonate solution (1 .09 mL x 2), 2.5% ammonia aqueous solution (1.09 mL x 3), 5% sodium hydrogen sulfate monohydrate aqueous solution (1.09 mL x 2), 5% sodium carbonate aqueous solution (1.09 mL x 2) washed with The resulting organic layer was concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of 40° C. to obtain a residue containing compound 28 (0.19 g, yield 50.9%).
  • Example 18 Compound 29: (tert-butyl (3S)-3-[[(2S)-2-cyclopentyl-2-[methyl-[1-[[(2S)-pyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]amino ]Acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4-oxo-butanoate)
  • Example 18-1 (when 2-MeTHF is used instead of THF/2-MeTHF used in the synthesis method of Example 18 )
  • Compound 29 (tert-butyl (3S)-3-[[(2S)-2-cyclopentyl-2-[methyl-[1-[[(2S)-pyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]amino ]Acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4-oxo-butanoate)
  • Example 17 A solution (1014.92 mg) containing Compound 28 (121.49 mg) obtained in Example 17 was added to a reaction vessel and concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of 60°C. Then, 2-MeTHF (2081 mg) and 5% Pd/C (25.89 mg, 50% water content) were sequentially added to the nitrogen-purged reactor at room temperature. The external temperature of the reaction vessel was set to 25° C., and hydrogen was pressurized until the internal pressure of the reaction vessel reached 0.18 MPaG. After 7 hours, the reaction mixture was sampled for sample preparation (sample preparation method 1), and HPLC analysis confirmed that the reaction conversion rate was 99.9% (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • 2-MeTHF (5.0 kg) and compound 30 (3.08 kg) were sequentially added at room temperature to a reaction vessel purged with nitrogen containing the concentrated solution of the reaction mixture containing compound 29 obtained in Example 18. rice field.
  • the external temperature of the reaction kettle was set to 10° C., and DIPEA (2.44 kg), T3P (50 wt % 2-MeTHF solution (6.56 kg)) and 2-MeTHF (0.4 kg) were sequentially added while stirring.
  • the external temperature of the reaction kettle was set to 25° C., and the mixture was stirred for 1 hour.
  • the reaction mixture was sampled for sample preparation (sample preparation method 1), and HPLC analysis confirmed that the reaction conversion rate was 99.3% (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • the external temperature of the reactor was set to 15° C., and 5% potassium carbonate aqueous solution (15.9 kg) and N-methylimidazole (352.4 g) were added while stirring.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and after stirring for 3 hours and 30 minutes, the water layer was discharged from the reactor.
  • the external temperature of the reactor was set to 20° C., and 10% sodium hydrogensulfate monohydrate aqueous solution (14.9 kg) was added.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and after stirring for 15 minutes, the water layer was discharged from the reactor.
  • a 2.5% potassium carbonate aqueous solution (21.3 kg) and acetonitrile (6.6 kg) were added to the obtained organic layer, and the mixture was stirred for 10 minutes. After stopping the stirring, the aqueous layer was discharged from the reaction vessel.
  • 2-MeTHF (26.0 kg) was added to the obtained organic layer, and the reaction mixture was concentrated under reduced pressure with stirring at an external temperature of 40° C. until the liquid volume of the reaction mixture reached about 9 L.
  • Isopropyl acetate (15.1 kg) was added to the obtained residue, and the operation of concentrating under reduced pressure until the liquid volume of the reaction mixture reached about 9 L was repeated twice.
  • a solution (16.5 kg) containing compound 31 was obtained by combining the residue and the washing liquid obtained by washing the reaction kettle with isopropyl acetate (7.0 kg). Retention time by HPLC analysis: 4.978 minutes (HPLC analysis conditions: method 3)
  • Example 20 Compound 32: ((3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-[3,5 -difluoro-4-(trifluoromethyl)phenyl]butanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino) -4-oxo-butanoic acid)
  • a solution (16.3 kg) containing Compound 31 obtained in Example 19, isopropyl acetate (5.7 kg), and hexamethyldisilazane (1.69 kg) were sequentially added to a reaction vessel purged with nitrogen at room temperature. .
  • the external temperature of the reactor was set to 10° C., and trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (1.87 kg) was added with stirring.
  • the reaction mixture was stirred for 1 hour while maintaining the external temperature between 20°C and 30°C.
  • a sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and it was confirmed by HPLC analysis that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • the external temperature of the reactor was set to 0° C., and 2-MeTHF (17.6 kg) and 5% dipotassium hydrogenphosphate aqueous solution (41.1 kg) were sequentially added to the reactor.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and after stirring the reaction mixture for 10 minutes, the stirring was stopped and the aqueous layer was discharged from the reactor.
  • the organic layer was then washed with a 5% aqueous sodium dihydrogen phosphate solution (41.1 kg).
  • DIPEA (2.39 kg) and 2-MeTHF (26.0 kg) were added to the obtained organic layer while stirring, and the mixture was concentrated under reduced pressure at an external temperature of 30 to 33° C. until the liquid volume became approximately 8 L.
  • a solution (14.7 kg) containing compound 32 was obtained by combining the residue and the washing liquid obtained by washing the reaction kettle with 2-MeTHF (6.8 kg x 2). Retention time by HPLC analysis: 4.220 minutes (HPLC analysis conditions: method 3)
  • Example 20-1 (When using 2-MeTHF instead of isopropyl acetate used in the synthesis method of Example 20 ) Compound 32: ((3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-[3,5 -difluoro-4-(trifluoromethyl)phenyl]butanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino) -4-oxo-butanoic acid)
  • a solution (401.94 mg) containing Compound 31 (93.45 mg) obtained in Example 19 was added to a reaction vessel, and the mixture was concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of 60°C.
  • 2-MeTHF (402 mg) and hexamethyldisilazane (38.6 mg) were sequentially added at room temperature.
  • the external temperature of the reaction vessel was set to 0° C. and trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (43.4 mg) was added with stirring.
  • the external temperature of the reaction vessel was set to 25° C. and the reaction mixture was stirred for 1 hour.
  • a sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and it was confirmed by HPLC analysis that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • the external temperature of the reaction vessel was set to 0° C., and 2-MeTHF (402 mg) and 5% dipotassium hydrogenphosphate aqueous solution (0.93 mL) were sequentially added to the reaction vessel.
  • the external temperature of the reaction vessel was set to room temperature, and after stirring the reaction mixture for 10 minutes, the stirring was stopped and the aqueous layer was discharged from the reaction vessel. The organic layer was then washed with a 5% aqueous sodium dihydrogen phosphate solution (0.93 mL).
  • a solution (11.9 kg) containing compound 17 obtained in Example 10, a solution (12.84 kg) containing compound 32 obtained in Example 20, and 2-MeTHF (3 .1 kg) were added sequentially at room temperature.
  • the external temperature of the reaction kettle was set at 10° C. and DMF (6.4 kg), DIPEA (1.6 kg), and HATU (2.78 kg) were added to the reaction mixture.
  • the mixture was stirred for 3 hours while maintaining the external temperature at 20°C to 30°C.
  • the reaction mixture was sampled for sample preparation (sample preparation method 1), and HPLC analysis confirmed that the reaction conversion rate was 99.6% (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • the obtained organic layer was concentrated under reduced pressure while stirring at an external temperature of 40° C. until the liquid volume became about 10 L.
  • An operation of adding 2-MeTHF (17.0 kg) to the reaction mixture and concentrating under reduced pressure while stirring at an external temperature of 40° C. until the liquid volume became about 10 L was performed twice.
  • the residue and the washing liquid obtained by washing the reaction kettle with 2-MeTHF (6.8 kg) were combined and recovered as a solution (23.9 kg) containing compound 33 in a storage container. Retention time by HPLC analysis: 10.272 minutes (HPLC analysis conditions: method 4)
  • Example 21-1 (Instead of 2-MeTHF and DMF used in the synthesis method, when 2-MeTHF and acetonitrile were used) Compound 33: (tert-butyl 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2- [[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-[3,5-difluoro -4-(Trifluoromethyl)phenyl]butanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4 -oxo-butanoyl]-methyl-amino]-4-methyl-pent
  • a solution (1017.1 mg) containing compound 17 obtained in Example 10, a solution (1133.0 mg) containing compound 32 obtained in Example 20, and 2-MeTHF (313.7 ⁇ L) were placed in a flask at room temperature. were added sequentially. After cooling the external temperature to 10°C and adding acetonitrile (575 ⁇ L), DIPEA (266 ⁇ L) and HATU (238.0 mg) to the reaction mixture, the external temperature was raised to 25°C. After the reaction mixture was stirred at 25°C for 3 hours, the reaction mixture was sampled for sample preparation (sample preparation method 1), and HPLC analysis confirmed that the reaction conversion rate was 99.8% (reaction conversion rate Calculation formula 1). After setting the external temperature to 10° C.
  • Example 21-2 (when 2-MeTHF is used instead of 2-MeTHF and DMF used in the synthesis method of Example 21 )
  • Compound 33 (tert-butyl 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2- [[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-[3,5-difluoro -4-(Trifluoromethyl)phenyl]butanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4 -oxo-butanoyl]-methyl-amino]-4-methyl-pentanoyl
  • a solution (969.5 mg) containing compound 17 and compound 31 was added to a reaction vessel and concentrated under reduced pressure at an external temperature of 40°C to obtain a residue containing compounds 17 and 31.
  • 2-MeTHF (1140 ⁇ L) was added to the reaction vessel at room temperature to dissolve the residue.
  • DIPEA 106 ⁇ L
  • HATU HATU
  • Example 21-3 (When using anisole instead of 2-MeTHF and DMF used in the synthesis method of Example 21 ) Compound 33: (tert-butyl 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2- [[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-[3,5-difluoro -4-(Trifluoromethyl)phenyl]butanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4 -oxo-butanoyl]-methyl-amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]
  • a solution (969.8 mg) containing compound 17 and compound 32 was added to a reaction vessel and concentrated under reduced pressure at an external temperature of 40°C to obtain a residue containing compounds 17 and 32.
  • Anisole (1140 ⁇ L) was added to the reaction vessel at room temperature to dissolve the residue.
  • DIPEA 106 ⁇ L
  • HATU 97.7 mg
  • Example 21-4 (when dimethyl carbonate was used instead of 2-MeTHF and DMF used in the synthesis method of Example 21 )
  • Compound 33 (tert-butyl 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2- [[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(benzyloxycarbonylamino)-4-[3,5-difluoro -4-(Trifluoromethyl)phenyl]butanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4 -oxo-butanoyl]-methyl-amino]-4-methyl-pentanoyl]
  • a solution (968.4 mg) containing compound 17 and compound 32 was added to the reaction vessel and concentrated under reduced pressure at an external temperature of 40°C to obtain a residue containing compounds 17 and 32.
  • Dimethyl carbonate (1140 ⁇ L) was added to the reaction vessel at room temperature to dissolve the residue.
  • DIPEA 106 ⁇ L
  • HATU HATU
  • Example 21-5 and Example 21-6 Compound 33 was synthesized under the same conditions as in Example 21-1, except that ethyl acetate (Example 21-5) or isopropyl acetate (Example 21-6) was used instead of 2-MeTHF/acetonitrile. did. Compound 33 was obtained with a yield of 76% in Example 21-5 and a yield of 75% in Example 21-6.
  • a solution (23.7 kg) containing compound 33 obtained in Example 21, 2-MeTHF (32.0 kg), and hexamethyldisilazane (3.46 kg) were sequentially added to a reaction vessel purged with nitrogen at room temperature. rice field.
  • the external temperature of the reactor was set to 0° C., and trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (3.99 kg) was added with stirring.
  • the mixture was stirred for 3 hours while maintaining the external temperature at 20°C to 30°C.
  • a sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and it was confirmed by HPLC analysis that the reaction conversion rate was 99.6% or more (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • the external temperature of the reaction kettle was set to 0° C., and 5% dipotassium hydrogen phosphate aqueous solution (23.8 kg) was added to the reaction mixture.
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and after stirring for 10 minutes, the aqueous layer was discharged from the reactor.
  • the obtained organic layer was washed with an aqueous solution (23.3 kg x 4) containing citric acid monohydrate (0.57 kg) and dipotassium hydrogen phosphate (0.88 kg), and then added with a 5% sodium carbonate aqueous solution (23.0 kg). 8 kg).
  • 2-MeTHF (26.0 kg) was added to the obtained organic layer, and the mixture was concentrated under reduced pressure while stirring at an external temperature of 40° C.
  • Example 23 the solution (14.5 kg) containing compound 34 obtained in Example 22 was used, and the following operation was carried out in two batches. After adding 5% Pd/C (756.6 g, 50% water content) to the reaction vessel purged with nitrogen, THF (7.5 kg) was added. The external temperature of the reaction kettle was set at 25°C. A solution (14.5 kg) containing compound 34 obtained in Example 22 and THF (0.7 kg) were sequentially added. The external temperature of the reaction vessel was set to 25° C., and hydrogen was pressurized with stirring until the internal pressure of the reaction vessel reached 0.18 MPaG. After 2.5 hours, after confirming that there was no change in the internal pressure, the reactor was pressurized to 0.18 MPaG with hydrogen and stirred for another hour.
  • Pd/C 756.6 g, 50% water content
  • reaction conversion rate calculation formula 1 The reaction mixture was sampled for sample preparation (sample preparation method 1), and HPLC analysis confirmed that the reaction conversion rate was 99.6% (reaction conversion rate calculation formula 1). After purging the inside of the reaction vessel with nitrogen, the reaction mixture was filtered under pressure. After washing the inside of the reactor and the filter with 2-MeTHF (4.9 kg x 2), the filtrate and washings were combined to obtain a storage solution (first batch) containing compound 34.
  • reaction conversion rate calculation formula 1 After adding 5% Pd/C (756.6 g, 50% water content) to the nitrogen-purged reactor, THF (7.5 kg) was added. The external temperature of the reaction kettle was set at 25°C. A solution (14.5 kg) containing compound 34 obtained in Example 22 and THF (0.7 kg) were sequentially added. The external temperature of the reaction vessel was set to 25° C., and hydrogen was pressurized with stirring until the internal pressure of the reaction vessel reached 0.18 MPaG. After 1 hour, after confirming that there was no change in the internal pressure, the reactor was pressurized to 0.18 MPaG with hydrogen and stirred for another 1 hour. The reaction mixture was sampled for sample preparation (sample preparation method 1), and HPLC analysis confirmed that the reaction conversion rate was 99.6% (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • a stock solution (60.5 kg) containing compound 34 and 2-MeTHF (0.4 kg) were sequentially added to a reaction vessel purged with nitrogen at room temperature. After concentrating under reduced pressure while stirring at an external temperature of 40°C until the liquid volume became 7.3 L, the external temperature was set to 25°C.
  • Acetonitrile (20.3 kg), 2-MeTHF (6.3 kg) and heptane (35.4 kg) were added to the resulting residue and stirred for 30 minutes. After stopping the stirring, the lower layer was collected in a storage container.
  • Acetonitrile (52.7 kg) and DIPEA (1.6 kg) were added to the resulting lower organic layer to obtain a solution containing compound 35 (83.6 kg). Retention time by HPLC analysis: 6.480 minutes (HPLC analysis conditions: method 4)
  • Example 23-1 (when 2-MeTHF is used instead of THF used in the synthesis method of Example 23 ) Compound 35: (2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[( 3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-amino-4-[3,5-difluoro-4-(trifluoromethyl) Phenyl]butanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4-oxo-butanoyl]-methyl- amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]-3-methyl-pentanoyl]-methyl-amino]prop
  • a solution (2447.7 mg) containing compound 34 obtained in Example 22 was added to the reaction vessel and concentrated under reduced pressure to obtain a residue containing compound 34.
  • 2-MeTHF (2040 ⁇ L) and 5% Pd/C (96.8 mg, 50% water content) were added to the reaction vessel, followed by degassing with hydrogen gas and stirring for 4 hours.
  • 2-MeTHF (460 ⁇ L) and 5% Pd/C (47.3 mg, 50% water content) were added to the reaction vessel, followed by degassing with hydrogen gas and stirring for 4 hours.
  • a sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and subjected to HPLC analysis to confirm that the reaction conversion rate was 99.7% (reaction conversion rate calculation formula 1).
  • Example 24 Compound 1: ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-butyl)-18-cyclopentyl-29-(3,5-difluoro-4 -(trifluoromethyl)phenethyl)-36-ethyl-11-isobutyl-N,N,5,6,12,16,19,33-octamethyl-35-(4-methylbenzyl)-4,7,10, 13,17,20,23,28,31,34,37-undecaoxotetratriacontahydro-2H,4H-spiro[azeto[2,1-u]pyrrolo[2,1-i][1,4 ,7,10,13,16,19,22,25,28,31]undecaazacyclotetratriacontin-21,1′-cyclopentane]-15-carboxamide)
  • the external temperature of the reactor was set to 25° C., and ethyl acetate (104.7 kg) was added to the resulting residue.
  • a 2.5% aqueous ammonia solution (77.8 kg) was added while stirring at an external temperature of 25°C, and the mixture was stirred for 85 minutes.
  • a 5% aqueous solution of potassium hydrogensulfate monohydrate (89.8 kg) was added to the obtained organic layer with stirring at an external temperature of 20°C.
  • the mixture was stirred at an external temperature of 25°C for 12 minutes. After discharging the aqueous layer from the reactor, the organic layer obtained at an external temperature of 25° C.
  • Example 24-1 Compound 1: ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-butyl)-18-cyclopentyl-29-(3,5-difluoro-4 -(trifluoromethyl)phenethyl)-36-ethyl-11-isobutyl-N,N,5,6,12,16,19,33-octamethyl-35-(4-methylbenzyl)-4,7,10, 13,17,20,23,28,31,34,37-undecaoxotetratriacontahydro-2H,4H-spiro[azeto[2,1-u]pyrrolo[2,1-i][1,4 ,7,10,13,16,19,22,25,28,31]undecaazacyclotetratriacontin-21,1′-cyclopentane]-15-carboxamide) (using HA
  • Table 7 shows the results of synthesizing compound 1 using various condensing agents and solvents.
  • the experimental procedure was the same as when HATU was used as the condensing agent and acetonitrile was used as the solvent (Example 24-1).
  • SM in the table is the sum of the remaining amount of Compound 35 and the propylamide form of Compound 35 (Area % ratio of HPLC).
  • TM in the table is the target product (compound 1), c-Dimer and c-Trimer are the by-products cyclic dimer and cyclic trimer, respectively. Shown as a % ratio (HPLC analysis conditions: method 5). Yields were calculated by HPLC analysis using methyl benzoate as an internal standard.
  • anisole, dimethyl carbonate, and 2-MeTHF are preferred solvents in consideration of their high conversion rate to the desired product, low formation rate of by-products, and environmental load. It has been shown.
  • HATU, PyBOP, and PyOxim were shown to be preferred condensing agents.
  • Preferred combinations of solvent and condensing agent were anisole and PyBOP, dimethyl carbonate and PyBOP, and 2-methyltetrahydrofuran and PyBOP.
  • a solution (2152.63 mg) containing compound 35 (100.16 mg (0.069 mmol)) obtained in Example 23 was added, and the mixture was concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of 40°C.
  • 2-MeTHF (2150 mg) and DIPEA (42.2 mg) were added to the concentrated residue to obtain a solution containing compound 35.
  • PyBOP (141.10 mg) and 2-MeTHF (2150 mg) were added to the reaction vessel purged with nitrogen.
  • the external temperature of the reaction vessel was set to 25° C. and the solution containing compound 35 was added dropwise to the reaction mixture over 4 hours. Washing was performed with 2-MeTHF (172 mg), a rinse solution was added, and the mixture was stirred for 2 hours.
  • Example 25 Crystallization of compound 1: ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-butyl)-18-cyclopentyl-29-(3,5- Difluoro-4-(trifluoromethyl)phenethyl)-36-ethyl-11-isobutyl-N,N,5,6,12,16,19,33-octamethyl-35-(4-methylbenzyl)-4,7 ,10,13,17,20,23,28,31,34,37-undecaoxotetratriacontahydro-2H,4H-spiro[azeto[2,1-u]pyrrolo[2,1-i][ 1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]undecaazacyclotetratriacontin-21,1′-cyclopentane]-15-carboxamide) hydrate crystals
  • the vessel containing the suspension was washed with a mixed solution of acetone (59.2 g)/water (61.2 g) and added to the reactor, followed by stirring for 2 hours and 1 minute. Filtered purified water (2.7 kg) was added and stirred for 7 hours and 10 minutes.
  • the reaction mixture was subjected to pressure filtration, and the obtained crystals were washed while washing the inside of the reactor and the filter with a mixture of filtered acetone (7.5 kg) and purified water (7.5 kg).
  • the obtained crystals were washed with filtered purified water (17.0 kg x 2), the pressure of the filtering device that collected the crystals was reduced, and the external temperature of the filtering device was set to 70°C to dry the crystals for 17 hours. Further, the crystals were dried at an external temperature of room temperature to 30° C. for 27 hours.
  • the dry powder was recovered from the filter to obtain a white powder (2.6 kg).
  • Example 25-1 Preparation of seed crystals used in Example 25
  • Example Amorphous compound 1 (122.3 mg) was dissolved in DMSO (0.612 mL), and this solution (0.015 mL) Freeze-dried at °C for 2 days.
  • a water-acetonitrile mixture (3:1, 0.015 mL) was added to the obtained freeze-dried product, and the mixture was shaken and stirred at room temperature for 7 days to obtain hydrate crystals of Compound 1 (C-type crystals). .
  • Example 25-3 Compound 1 ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-butyl)-18-cyclopentyl-29-(3,5-difluoro-4- (Trifluoromethyl)phenethyl)-36-ethyl-11-isobutyl-N,N,5,6,12,16,19,33-octamethyl-35-(4-methylbenzyl)-4,7,10,13 ,17,20,23,28,31,34,37-undecaoxotetratriacontahydro-2H,4H-spiro[azeto[2,1-u]pyrrolo[2,1-i][1,4, 7,10,13,16,19,22,25,28,31]undecaazacyclotetratriacontin-21,1′-cyclopentane]-15-carboxamide) DMSO-hydrate crystals
  • Hydrate crystals (33.8 mg) were obtained as powdery crystals.
  • the powdery crystals immediately after filtration were DMSO-hydrate crystal type A, and the powdery crystals dried under reduced pressure at room temperature for 8 hours after filtration were used as DMSO-hydrate crystal type B.
  • DMSO-hydrate crystals of compound 1 (DMSO-hydrate crystal type A and DMSO-hydrate crystal type B) were each subjected to powder X-ray diffraction measurement (measurement method 3). The results are shown below.
  • DMSO-hydrate crystal type B is 2.5 equivalents of DMSO to compound 1.
  • Example 25-4 Compound 1 ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-butyl)-18-cyclopentyl-29-(3,5-difluoro-4- (Trifluoromethyl)phenethyl)-36-ethyl-11-isobutyl-N,N,5,6,12,16,19,33-octamethyl-35-(4-methylbenzyl)-4,7,10,13 ,17,20,23,28,31,34,37-undecaoxotetratriacontahydro-2H,4H-spiro[azeto[2,1-u]pyrrolo[2,1-i][1,4, 7,10,13,16,19,22,25,28,31]undecaazacyclotetratriacontin-21,1'-cyclopentane]-15-carboxamide) hydrate crystal (type C crystal
  • Example 26 Measurement of Physicochemical Properties of Hydrate Crystals of Compound 1 (C-type Crystals) Using the hydrate crystals of Compound 1 (C-type crystals) obtained in the same manner as in Example 25, powder X-ray diffraction Measurement, thermogravimetric/differential thermal analysis, determination of water content, and single-crystal X-ray structure analysis were performed.
  • Powder X-ray Diffraction Measurement Humidity change powder X-ray diffraction measurement of the hydrate crystals of compound 1 (C type crystals) prepared in Example 26 was carried out by the following method.
  • Measuring device SmartLab System, D/Tex Ultra detector, steam generator HUM-SL (manufactured by Rigaku) Anticathode: Cu Tube voltage: 45kV Tube current: 200mA Scanning range: 5-30° Scanning speed: 0.7°/min Sampling width: 0.02° Humidity change conditions:
  • Measuring device Rigaku R-AXIS RAPID-II with a VariMax Cu diffractometer (manufactured by Rigaku)
  • Anticathode Cu Tube voltage: 40 kV Tube current: 30mA
  • Temperature: -180°C Measurement Measurement was performed with a strategy and an exposure time that are considered to provide sufficient diffraction spots for structural analysis.
  • Structural analysis Initial structural determination was performed by a direct method (SIR2004, CrystalStructure, Rigaku), and structural refinement was performed by a full-matrix least-squares method (SHELXL-2017/1, APEX3, Bruker). All non-hydrogen atoms were refined with anisotropic temperature factors.
  • the hydrogen atoms of the water molecules were placed in proper positions using restraint and refined with an isotropic temperature factor 1.5 times larger than the bound oxygen atoms.
  • Other hydrogen atoms were placed in appropriate positions using the riding model, with an isotropic temperature factor of 1.2 times the magnitude of the non-hydrogen atoms to which they are bound. The results are shown in FIG.
  • Dynamic water vapor adsorption measurement of the hydrate crystals (C-type crystals) of compound 1 prepared in Example 26 was performed by the following method. The results are shown in FIG. Measurement device: DVS Intrinsic (manufactured by Surface Measurement Systems) Temperature: 25°C Relative humidity (%) measurement points: Cycle 1: 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0 (%); Cycle 2 : 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0 (%); Cycle 2 : 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0 (%) Threshold: 0.001 dm/dt (%/min) Minimum sorption time: 10 minutes Maximum sorption time: 1440 minutes
  • the hydrate crystals of Compound 1 were found to be 3.3% lower than the weight at 0% relative humidity as the hydration number changed in the range of 0 to 95% relative humidity. It was confirmed that it is a hydrate crystal whose hydration number can change within the weight range.
  • Example 26-1 Single-crystal X-ray measurement of DMSO-hydrate crystal (A form) of compound 1
  • Compound 1 ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-butyl)-18-cyclopentyl-29-(3,5-difluoro-4- (Trifluoromethyl)phenethyl)-36-ethyl-11-isobutyl-N,N,5,6,12,16,19,33-octamethyl-35-(4-methylbenzyl)-4,7,10,13 ,17,20,23,28,31,34,37-undecaoxotetratriacontahydro-2H,4H-spiro[azeto[2,1-u]pyrrolo[2,1-i][1,4, 7,10,13,16,19,22,25,28,31]undecaazacyclotetratriacon
  • Single crystal X-ray structure analysis Single crystal X-ray structure analysis of the DMSO-hydrate crystal (A-type crystal) of Compound 1 prepared in Example 26-1 was performed by the following method.
  • Measuring device Rigaku XtaLAB Synergy Custom with a VariMax Cu diffractometer (manufactured by Rigaku)
  • Anticathode Cu Tube voltage: 40 kV Tube current: 30mA
  • Temperature: -180°C Measurement Measurement was performed with a strategy and an exposure time that are considered to provide sufficient diffraction spots for structural analysis.
  • Example 26-2 Measurement of physicochemical properties of acetone-hydrate crystals (H form) of Compound 1 (1) Single crystal X-ray structure analysis Compound 1 ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-butyl)-18-cyclopentyl-29-(3,5-difluoro-4- (Trifluoromethyl)phenethyl)-36-ethyl-11-isobutyl-N,N,5,6,12,16,19,33-octamethyl-35-(4-methylbenzyl)-4,7,10,13 ,17,20,23,28,31,34,37-undecaoxotetratriacontahydro-2H,4H-spiro[azeto[2,1-u]pyrrolo[2,1-i][1,4, 7,10,13,16,19,22,25,28,31]undecaaza
  • Single crystal X-ray structure analysis of the acetone-hydrate crystal of compound 1 obtained above was performed by the following method.
  • the external temperature was set to 40° C. and water (6.4 mL) was added with stirring.
  • a mortar-ground hydrate crystal of Compound 1 (6 mg) was added to a glass vial, suspended in an acetone water mixture (80 ⁇ L, 5/4 v/v), and the suspension was added to the reaction vessel. Further, an acetone-water mixture (80 ⁇ L, 5/4 v/v) was added to the glass vial, and the suspension was added to the reaction vessel. The crystallized solution was stirred for 2 hours. After adding water (1.6 mL) over 10 minutes, the suspension was stirred for 3 hours. After adding water (1.6 mL) over 10 minutes, the suspension was stirred for 2 hours. The suspension was cooled to an external temperature of 25° C. over 1 hour.
  • the suspension was stored undisturbed overnight. On the next day, after stirring at an external temperature of 25° C., a portion of the suspension was sampled, and the powder X-ray diffraction measurement (measurement method 4) was performed on the suspension. After filtering the suspension with a Kiriyama funnel, the crystals were washed with an acetone-water mixture (5.6 mL, 4.4 mL). Subsequently, the crystals were washed twice with water (10 mL). The resulting wet powder was used for solvent content determination.
  • Fmoc-Asp(OAl)-OH ((2S)-2-(9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxo-4-prop-2-enoxybutanoic acid, CAS No. 146982-24-3) ( 200 g, 506 mmol), p-toluenesulfonic acid (5.7 g, 0.05 equivalent) and paraformaldehyde (45.6 g, 3 equivalent) were mixed with toluene and stirred at 110° C. for 16 hours. The reaction mixture was evaporated under reduced pressure, and the residue was dissolved in ethyl acetate and washed twice with an aqueous sodium hydrogencarbonate solution.
  • the reaction solution was diluted with ethyl acetate (422 mL), washed twice with hydrochloric acid (1 mol/L, 422 mL), and the obtained aqueous layer was extracted twice with ethyl acetate (422 mL). All organic layers were mixed and washed in order with water (422 mL), a mixed solution of saturated aqueous sodium bicarbonate and water (1:1, 422 mL), and a mixed solution of saturated saline and water (1:1, 422 mL). The resulting organic layer was dried over sodium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure. DCM (422 mL) was added to the resulting residue and stirred for 0.5 hours.
  • the solution was drained from the frit after 10 minutes of shaking.
  • DMF (420 mL) was added to the solid phase reaction vessel and shaken for 5 minutes before draining the solution through the frit.
  • a solution of triethylamine hydrochloride (7.96 g, 57.8 mmol) in DCM (420 mL) was added to the solid phase reaction vessel and shaken for 5 minutes before draining the solution through the frit.
  • DCM (420 mL) was added to the solid phase reaction vessel and shaken for 5 minutes before draining the solution through the frit.
  • DMF (420 mL) was added to the solid phase reaction vessel and shaken for 5 minutes before draining the solution through the frit. This DMF washing step of the resin was repeated one more time.
  • Nickel bromide trihydrate (NiBr 2.3H 2 O) (13.5 g, 49.7 mmol, 0.3 eq) and 4,4′-di-tert-butyl-2,2′-bipyridyl (dtbbpy, CAS No. 72914-19-3) (13.3 g, 49.7 mmol, 0.3 equivalent) was added to DMA (400 mL) and stirred at 50° C. for 3 hours under a nitrogen atmosphere to prepare a Ni solution.
  • TfOH trifluoromethanesulfonic acid
  • Acetonitrile/water 400/400 mL was added to the residue and the pH was adjusted to 7 with aqueous sodium hydroxide (48%).
  • Fmoc-OSu (36.6 g, 108.6 mmol, 0.9 equivalents) was added to this solution, the pH was adjusted to 8.0 with an aqueous sodium hydroxide solution (48%), and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours.
  • the reaction solution was filtered while washing with acetonitrile/water (1/1) to remove solid components, the filtrate was diluted with acetonitrile, and adjusted to be acidic with 6 mol/L aqueous hydrochloric acid.
  • Multipep RSi peptide synthesizer
  • the compound 1217-c-resin obtained above (200 mg per solid-phase reaction vessel) was added to 30 solid-phase reaction vessels and set in a peptide synthesizer.
  • Dichloromethane (DCM) was added to all 30 solid-phase reactors and allowed to stand for 1 hour to swell the resin. The solvent was then drained from the frit.
  • NMP solution of Fmoc-MeGly-OH (0.6 mol/L) and HOAt (0.375 mol/L) (0.6 mL per solid-phase reaction vessel) and N,N'-diisopropylcarbodiimide (DIC) in DMF (10 v/v%, 0.72 mL per solid-phase reaction vessel) was mixed in the mixing vial of the synthesizer and then added to all 30 solid-phase reaction vessels. °C for 2.5 hours. The solution was then drained from the frit. DMF (1.4 mL per solid phase reactor) was added to all 30 solid phase reactors and the solvent was drained through the frit. This resin washing step was repeated two more times.
  • NMP solution of Fmoc-MeAla-OH (0.6 mol/L) and HOAt (0.375 mol/L) (0.6 mL per solid-phase reaction vessel) and N,N'-diisopropylcarbodiimide (DIC) in DMF (10 v/v%, 0.72 mL per solid-phase reaction vessel) was mixed in the mixing vial of the synthesizer and then added to all 30 solid-phase reaction vessels. °C for 2.5 hours. The solution was then drained from the frit. DMF (1.4 mL per solid phase reactor) was added to all 30 solid phase reactors and the solvent was drained through the frit. This resin washing step was repeated two more times.
  • Table 11 shows the LC/MS analysis conditions in Preparation Example 1.
  • the obtained organic layer was washed with 5% aqueous sodium carbonate solution (14.4 mL ⁇ 1), 5% aqueous sodium hydrogensulfate monohydrate solution (14.4 mL ⁇ 1) and 5% aqueous sodium carbonate solution (14.4 mL ⁇ 1).
  • the obtained organic layer was further washed twice with a 5% sodium hydrogensulfate monohydrate aqueous solution (14.4 mL ⁇ 1) and a 5% sodium carbonate aqueous solution (14.4 mL ⁇ 1).
  • 2-MeTHF (14.4 mL) was added and washed with 5% aqueous sodium hydrogensulfate monohydrate solution (14.4 mL x 1) and 5% aqueous sodium carbonate solution (14.4 mL x 1).
  • reaction solution containing compound a25 was added dropwise to a reaction vessel containing a 2M sodium hydroxide aqueous solution (44.3 mL). The aqueous layer was discharged and then washed with a 2M sodium hydroxide aqueous solution (34.1 mL ⁇ 2) and a 10% dipotassium hydrogen phosphate aqueous solution (17.0 mL ⁇ 1). The obtained organic layer was concentrated under reduced pressure to obtain a residue (2.90 g) containing compound a26. Retention time by HPLC analysis: 2.868 minutes (HPLC analysis conditions: method 3)
  • the obtained organic layer was treated with 5% sodium hydrogen sulfate monohydrate aqueous solution (17.4 mL ⁇ 5), 5% sodium hydrogen sulfate aqueous solution (17.4 mL ⁇ 2), and 5% sodium hydrogen sulfate monohydrate solution. Washed with hydride aqueous solution (17.4 mL ⁇ 3) and 5% sodium carbonate aqueous solution (17.4 mL ⁇ 2). The resulting organic layer was concentrated under reduced pressure to obtain a residue (3.86 g) containing compound a28. Retention time by HPLC analysis: 4.323 minutes (HPLC analysis conditions: method 3)
  • compound a30 (0.57 g), DIPEA (1.1 mL) and T3P (50 w/w % 2-MeTHF solution, 2.2 mL) were added, allowed to stand overnight, and stirred for 2 hours the next day.
  • N-Methylimidazole (0.23 mL) was added, and after stirring for 1 hour, the aqueous layer was discharged.
  • reaction conversion rate 99.0% After purging with nitrogen, a suspension of 5% Pd/C (0.24 g, 50% water content) in THF (4 mL) was added to the reaction solution, and after hydrogen substitution, the mixture was stirred for 4 hours (reaction conversion rate 99.0%). ). After purging with nitrogen and storing in a refrigerator overnight, the reaction conversion rate was 99.4% when it was returned to room temperature the next day and measured. The reaction mixture was subjected to suction filtration using filter paper, and the residue was washed with a 2-MeTHF solution (6.5 mL ⁇ 10). The resulting filtrate and washings were combined and concentrated under reduced pressure.
  • Example 50 Step 5' Compound a36: (3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-9-(cyclohexylmethyl)-21-isobutyl-28-isopropyl-7,10,13,16,22,26,29-heptamethyl- 18-[(1S)-1-methylpropyl]-3-(2-phenylethyl)-25-(piperidine-1-carbonyl)spiro[1,4,7,10,13,16,19,22,26 ,29,32-Undecazabicyclo[32.3.0]heptatriacontane-31,1′-cyclopentane]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-undecaone synthesis
  • Example 50-1 Compound a36: (3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-9-(cyclohexylmethyl)-21-isobutyl-28-isopropyl-7,10,13,16,22,26,29-heptamethyl- 18-[(1S)-1-methylpropyl]-3-(2-phenylethyl)-25-(piperidine-1-carbonyl)spiro[1,4,7,10,13,16,19,22,26 ,29,32-Undecazabicyclo[32.3.0]heptatriacontane-31,1′-cyclopentane]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-undecaone Synthesis (using PyBOP as condensing agent and dimethyl carbonate as solvent)
  • Example 50-2 The results when anisole and 2-methyltetrahydrofuran were used as solvents are also shown in Table 13 (experimental procedures were performed in the same manner as in Example 50-1). In neither case was a cyclic trimer observed.
  • Example 50-3 Compound a36: (3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-9-(cyclohexylmethyl)-21-isobutyl-28-isopropyl-7,10,13,16,22,26,29-heptamethyl- 18-[(1S)-1-methylpropyl]-3-(2-phenylethyl)-25-(piperidine-1-carbonyl)spiro[1,4,7,10,13,16,19,22,26 ,29,32-Undecazabicyclo[32.3.0]heptatriacontane-31,1′-cyclopentane]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-undecaone Synthesis (using PyBOP as condensing agent and dimethyl carbonate as solvent, production by reverse dropping method) PyBOP (59.9 mg) was weighed into a reaction vessel and suspended in dimethyl carbonate (1 mL).
  • Example 51 Compound b1: (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-benzyloxycarbonylpyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]- Synthesis of 2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4-oxo-butanoic acid A 2-MeTHF solution (17.45 g, 11.7 wt %) containing Compound 28 was added to the reaction vessel and concentrated under reduced pressure, and IPAc (10.2 mL) was added to the resulting residue.
  • reaction conversion rate calculation formula 1 After adding HMDS (1.52 mL) while stirring at room temperature, the external temperature was cooled to 0° C., and TMSOTf (1.04 mL) was slowly added dropwise. The temperature was raised to room temperature and stirred for 30 minutes. A sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and subjected to HPLC analysis to confirm that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1). The external temperature was cooled to 0° C., 5% dipotassium hydrogenphosphate aqueous solution (14.3 mL) was added dropwise to the reaction solution, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes.
  • the organic layer was removed, 0.5M hydrochloric acid aqueous solution (11.2 mL) and IPAc (10.2 mL) were added to the aqueous layer, and the mixture was stirred for 10 minutes.
  • the aqueous layer was discharged, the organic layer was washed with a 5% sodium chloride aqueous solution (14.3 mL), and the aqueous layer was discharged.
  • the resulting organic layer was concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of 30°C to obtain a residue containing compound b1 (1.88 g, yield 94.1%).
  • reaction conversion rate Equation 2 The external temperature was cooled to 0° C., N-methylimidazole (86 ⁇ L) and 5% aqueous sodium carbonate solution (5.6 mL) were added to the reaction solution, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes.
  • the aqueous layer was discharged, and the organic layer was washed with 2.5% aqueous ammonia solution (5.6 mL), 5% aqueous sodium hydrogensulfate solution (5.6 mL ⁇ 2), and 5% aqueous sodium carbonate solution (8.2 mL ⁇ 3). did.
  • the resulting organic layer was concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of 30°C to obtain a residue containing compound b2 (1.88 g, yield 93.8%).
  • Example 53 Compound b3: 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S )-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-benzyloxycarbonylpyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl ]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4-oxo-butanoyl]-methyl-amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]-3-methyl-pentanoyl]-methyl-amino]propanoyl]azetidine- Synthesis of 2-carbonyl]-ethyl-amino]-3-(p-tolyl)propanoyl]-methyl-amino]acetic acid The
  • the organic layer was removed, 0.5M hydrochloric acid aqueous solution (7.41 mL) and 2-MeTHF (9.0 mL) were added to the aqueous layer, and the mixture was stirred for 10 minutes.
  • the aqueous layer was discharged, the organic layer was washed with a 5% sodium chloride aqueous solution (13.0 mL), and the aqueous layer was discharged.
  • the resulting organic layer was concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of 35°C to obtain a residue containing compound b3 (3.36 g, yield 92.7%).
  • Example 54 Compound b4: 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S )-3-[[(2S)-2-cyclopentyl-2-[methyl-[1-[[(2S)-pyrrolidine-2-carbonyl]amino]cyclopentanecarbonyl]amino]acetyl]-methyl-amino]- 4-(dimethylamino)-4-oxo-butanoyl]-methyl-amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]-3-methyl-pentanoyl]-methyl-amino]propanoyl]azetidine-2-carbonyl]-ethyl- Synthesis of amino]-3-(p-tolyl)propanoyl]-methyl-amino]acetic acid Compound b3 (1.01 g, 0.762
  • reaction conversion rate calculation formula 1 After 5% Pd/C (0.162 g, 50% water content) was added to the reaction vessel, degassing and substitution with hydrogen gas was performed three times, and the mixture was stirred for 2 hours. A sample was prepared by sampling the reaction mixture (sample preparation method 1), and subjected to HPLC analysis to confirm that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1). The reaction mixture was filtered using filter paper and a membrane filter, and the residue was washed with 2-MeTHF (5.0 mL ⁇ 2). The obtained filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a residue containing compound b4 (1.43 g, yield 96.7%).
  • Example 55-6 Compound b5: (6S,9S,14S,17S,20S,24S,27S,33S)-27-cyclopentyl-7-ethyl-20-isobutyl-N,N,4,14,15,21,25,28-octamethyl -17-[(1S)-1-methylpropyl]-2,5,8,13,16,19,22,26,29,32-decaoxo-6-(p-tolylmethyl)spiro[1,4,7 ,12,15,18,21,25,28,31-Decazatricyclo[31.3.0.09,12]hexatriacontane-30,1'-cyclopentane]-24-carboxamide.
  • Example 55-11 (manufacture by reverse dropping method of Example 55-6) Compound b4 (9.89 mg (8.31 ⁇ mol)) and 2-MeTHF (0.99 mL (100 v/w)) were added to the vial and stirred at 50°C for 10 minutes. After confirming the dissolution of the raw materials, DIPEA (6.67 ⁇ L (38.2 ⁇ mol)) was added, and the reaction solution was sucked up into a syringe. PyAOP (17.1 mg (32.8 ⁇ mol)) and 2-MeTHF (0.99 mL (100 v/w)) were added to another reaction vessel, and the solution in the syringe was added dropwise over 3 hours while stirring at room temperature. . After completion of dropping, the reaction solution (50 ⁇ L) was diluted with a mixture of MeCN/propylamine (9:1) (100 ⁇ L) to prepare a solution for HPLC analysis.
  • Example 56 Compound c1: tert-butyl (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-(benzyloxycarbonylamino)cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino Synthesis of ]-4-(dimethylamino)-4-oxo-butanoate A 2-MeTHF solution (16.006 g, 32.5 wt %) containing Compound 23 was added to the reaction vessel at room temperature and concentrated under reduced pressure. The operation of dissolving the residue in MeCN (10.0 mL) and concentrating under reduced pressure was repeated three times.
  • N-methylimidazole (4.3 mL) was added and stirred for 5 minutes, then tap water (27.0 mL) was added and stirred for 30 minutes, then the external temperature of the reaction vessel was increased from 55°C to 25°C. The temperature was allowed to cool and the reaction mixture was stirred overnight.
  • the reaction mixture was subjected to suction filtration using filter paper, and the residue was washed with a mixed solution of MeCN (18.0 mL) and tap water (9.0 mL). The filtered crystals were vacuum-dried at 40° C. for 3 hours to obtain a white powder (6.957 g) containing compound c1.
  • reaction conversion rate calculation formula 1 The reaction vessel was removed from the ice bath and stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was diluted with MeCN and subjected to HPLC analysis to confirm that the reaction conversion rate was 99.9% or more (reaction conversion rate calculation formula 1). The reaction vessel was cooled in an ice bath, dichloromethane (12.0 mL) and 5% dipotassium hydrogenphosphate aqueous solution (24.0 mL) were added, stirred for 10 minutes, and the organic layer was discharged. After adding 2-MeTHF (72.0 mL) to the aqueous layer, the organic layer was washed with 0.5 M hydrochloric acid aqueous solution (12.0 mL) and 5% sodium chloride aqueous solution (24.0 mL).
  • the resulting organic layer was concentrated under reduced pressure to obtain a white powder (1.977 g) containing compound c2.
  • the resulting white powder and 3,5-bis(trifluoromethyl)benzoic acid were dissolved in DMSO-d 6 and subjected to qNMR analysis (yield: 81.51%).
  • Example 58 Compound c3: 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S )-3-[[(2S)-2-[[1-(benzyloxycarbonylamino)cyclopentanecarbonyl]-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino) -4-oxo-butanoyl]-methyl-amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]-3-methyl-pentanoyl]-methyl-amino]propanoyl]azetidine-2-carbonyl]-ethyl-amino]-3-( Synthesis of tert-butyl p-tolyl)propanoyl]-methyl-amino]acetate A 2-MeTHF solution (1.22
  • reaction conversion rate Equation 2 After adding DIPEA (0.885 mL) with stirring at room temperature, HATU (792 mg) was added. After stirring for 2 hours at room temperature, the reaction mixture was sampled to prepare a sample (sample preparation method 2) and subjected to HPLC analysis to confirm that the reaction conversion rate was 99.9% or more (calculation of reaction conversion rate Equation 2). The external temperature was cooled to 0° C., N-methylimidazole (72 ⁇ L) and 5% aqueous sodium carbonate solution (10 mL) were added to the reaction solution, and the mixture was stirred at room temperature for 10 minutes.
  • the aqueous layer was discharged, and the organic layer was washed twice with 5% dipotassium hydrogen phosphate aqueous solution (5.25 mL) and 0.5M hydrochloric acid aqueous solution (3.5 mL), and then washed with 5% sodium chloride aqueous solution (7.0 mL). Wash and drain the aqueous layer. The resulting organic layer was concentrated to dryness under reduced pressure at an external temperature of 30°C to obtain a residue containing compound c4 (0.85 g, yield 95.2%).
  • Example 60 Compound c5: 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S )-3-[[(2S)-2-[(1-aminocyclopentanecarbonyl)-methyl-amino]-2-cyclopentyl-acetyl]-methyl-amino]-4-(dimethylamino)-4-oxo- Butanoyl]-methyl-amino]-4-methyl-pentanoyl]amino]-3-methyl-pentanoyl]-methyl-amino]propanoyl]azetidine-2-carbonyl]-ethyl-amino]-3-(p-tolyl)propanoyl Synthesis of ]-methyl-amino]acetic acid Compound c4 (462 mg, 53.5 wt %) obtained in Example 59 and 2-MeTH
  • reaction conversion rate calculation formula 1 After adding 2-MeTHF (10 mL) to the reaction mixture, it was filtered using filter paper and a membrane filter, and the residue was washed with 2-MeTHF (5.0 mL ⁇ 2). The resulting filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a solution containing compound c5 (1.16 g, yield 91.0%).
  • Example 61-1 Compound c6: (3S,6S,9S,13S,16S,25S,28S)-16-cyclopentyl-26-ethyl-9-isobutyl-N,N,3,4,10,14,17,23-octamethyl-6 -[(1S)-1-methylpropyl]-2,5,8,11,15,18,21,24,27-nonoxo-25-(p-tolylmethyl)spiro[1,4,7,10,14 ,17,20,23,26-nonazabicyclo[26.2.0]triacontane-19,1′-cyclopentane]-13-carboxamide.
  • Example 61-5 (manufacture by reverse dropping method of Example 61-4) Compound c5 (45.0 mg, 21.8 wt% (8.97 ⁇ mol)) was weighed into a vial, concentrated to dryness, 2-MeTHF (0.98 mL (100 v/w)) was added, and the mixture was stirred at 50°C for 10 minutes. . After confirming the dissolution of the raw materials, DIPEA (7.21 ⁇ L (41.2 ⁇ mol)) was added, and the reaction solution was sucked up into a syringe.
  • a method for producing a cyclic peptide compound, or a salt thereof, or a solvate thereof, which is useful as a pharmaceutical, and a peptide compound used for producing the cyclic peptide compound, a salt thereof, or a solvate thereof A method is provided.

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Abstract

水と混和しない溶媒、水溶性アルキルニトリル類、および水溶性エーテル類からなる群より選択される１つまたは複数を含む溶媒中で、ペプチド化合物のN末端のアミノ酸残基をC末端のアミノ酸残基と連結させることで、環状ペプチド化合物を効率的に製造できることを見出した。

Description

Ｎ－置換アミノ酸残基を含む環状化合物の製造方法
　本発明は、Ｎ－置換アミノ酸残基を含む環状化合物の製造方法に関する。
　従来経口薬として用いられてきた化合物は、リピンスキーの法則として知られているように、分子量が５００ｇ／ｍｏｌ以下であることが望ましいとされてきた（非特許文献１）。近年、分子量が５００ｇ／ｍｏｌを超える化合物が、従来の低分子化合物では相互作用することが困難であり、タフターゲットと呼ばれている標的タンパクの表面での相互作用、すなわちタンパク－タンパク相互作用阻害等に寄与しうることが知られるようになってきた。これらの分子は、経口薬として主に用いられてきた分子量が５００ｇ／ｍｏｌ以下の低分子でもなく、抗体医薬品のように分子量が１０００００ｇ／ｍｏｌを超える高分子でもない、中分子化合物（分子量５００～２０００ｇ／ｍｏｌ）と呼ばれ、タフターゲットに対する創薬を実現しうる、新たなモダリティとして注目されている（非特許文献２）。
　高血糖症の治療に用いられているインスリンのように、天然アミノ酸からなるペプチドは、代謝安定性に乏しく、従来はペプチドを経口薬として開発することは困難とされてきた。しかし、ペプチドの環化や、ペプチド中にＮ－メチルアミノ酸に例示される非天然アミノ酸を用いることにより、ペプチドの代謝安定性や膜透過性が向上することが見出されてきた（非特許文献３、４）。
　非天然アミノ酸を含む環状ペプチドの中でも、特にＮ－置換アミノ酸を含む環状ペプチドが代謝安定性や膜透過性を有しうる、すなわちドラッグライクネスを有しうることが知られるようになってきた（特許文献１）。
　非天然型アミノ酸を含む環状ペプチドの化合物が、タンパク－タンパク相互作用の阻害剤の創生に有用であることが示唆されている（非特許文献５）。
　ペプチドが医薬として重要視されるようになってきたことに伴い、その合成法も盛んに研究されるようになってきた（非特許文献６）。ペプチドの合成は、アミノ酸を順次アミド結合形成反応に付することにより、望みのアミノ酸配列へと伸長することで達成されるが、その配列中に非天然アミノ酸を含むペプチド、とりわけ、Ｎ－メチルアミノ酸を含むペプチドの製造は、Ｎ－メチル基の立体障害に起因する縮合反応の低反応性、およびアミノ酸残基のα位のラセミ化などによる目的物の収率の低下が課題とされてきた（非特許文献７）。ハロゲン化炭化水素溶媒（例えばジクロロメタンなど）、およびアミド溶媒（例えばDMFなど）は、ペプチド合成において広く使用されているが、このような副反応は、N-置換アミノ酸などの低反応性アミノ酸を有するペプチド合成において観察され得る（非特許文献８）。また、環境負荷の観点から、ハロゲン化炭化水素溶媒（例えばジクロロメタンなど）やアミド溶媒（例えばDMFなど）の使用が制限されている（非特許文献９）。
国際公開第２０１３／１００１３２号
Adv. Drug Del. Rev. 1997, 23, 3-25. Future Med. Chem., 2009, 1, 1289-1310. Acc. Chem. Res., 2008, 41, 1331-1342. Angew. Chem. Int. Ed., 2013, 52, 254-269. Chem. Rev., 2019, 119, 10360-10391. Amino Acids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry: Building Blocks, Catalysis and Coupling Chemistry, Volume 3, 2011. J. Peptide Res., 2005, 65, 153-166. Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015. Green Chem. Lett. Rev., 2021, 14, 153-164.
　本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、一局面において、本発明は、ペプチド化合物、とりわけN-置換アミノ酸などの非天然アミノ酸を複数含む直鎖または環状のペプチド化合物を、中間体を単離、例えば次工程の前操作として中間体を単離しない大規模スケールにも適用可能な手法で効率的に製造する方法を提供することを課題とする。一局面において、本発明は、カラムクロマトグラフィーに依らずに目的の環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物を単離、精製する方法を提供することを課題とする。一態様において、本発明の目的は、ペプチド化合物の製造工程で用いられる溶媒に含まれる安定化剤（例えば、BHT等の抗酸化剤）を、安定化剤を可溶化する溶媒で洗浄することにより、各工程で製造された目的物を単離することなく、安定化剤を除去する方法を提供することにある。一態様において、本発明の目的は、特に、N-置換アミノ酸などの複数の非天然アミノ酸を含有する、例えば直鎖状、または環状のペプチド化合物を、個々の反応工程の中間体、またはペプチド化合物を単離しないことにより各工程における作業時間が短縮され、次の工程を連続的に行う方法を提供することである。 したがって、本明細書に記載された本発明の1つの局面は、安定化剤を可溶化させる溶媒の使用を含む、１つ以上の反応工程を含み得る、ペプチド化合物の製造方法を提供することである。
　ペプチド合成は、一般に、アミノ酸やペプチドのＣ末端のカルボキシル基を、アミノ酸やペプチドのＮ末端のアミノ基と連結する工程を繰り返し、ペプチド鎖を伸長することによって行われるが、この工程ではさまざまな副反応が起こり得ることが知られている（Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.）。したがって、ペプチド合成、とりわけ液相法によるペプチド合成では、伸長工程間や、環化工程の前に生成物を単離、精製するのが通常である。しかし、工業的スケールでのペプチド合成では、中間体の単離、精製は、合成時間の長大化や費用の増大につながるため、目的のペプチドに至る前の中間体を単離、精製せずに連続して次の伸長反応や環化反応をおこなえることが望ましい。
　一方、ペプチド鎖の伸長反応においては、伸長元のアミノ酸あるいはペプチドのカルボキシル基や、伸長させるアミノ酸またはペプチドのアミノ基は保護されている場合が多く、アミノ酸のω鎖も保護されていることが多い（ペプチド合成の基礎と実験：泉屋信夫（著）丸善（1985）.）。このような保護アミノ酸や保護ペプチドは、反応液中から析出しやすく、有機溶媒に不溶である場合がよくある（国際公開第２０１７／０３８６５０号、国際公開第２０１８／０２１２３３号、国際公開第２０１８／１５５６６９号、国際公開第２０１９／１２３９９４号、国際公開第２０１７／２２１８８９号）。また、無保護アミノ酸や無保護ペプチドもその親水性ゆえに有機溶媒に溶解させるのは困難である。さらには、ペプチド鎖を伸長するにつれて凝集が促進され、ペプチド化合物の溶解性が低下することも多い（生物と化学, 2018, 56(8), 558; J. Biol. Chem., 1963, 238, 4074.、Sci Rep, 2016, 6(28), 1.）。
　これらアミノ酸やペプチドを溶解させるために、ペプチドの合成反応には、溶解能の高い溶媒、例えば、DMFやジメチルスルホキシドが用いられ、また優れた溶解能を有するジクロロメタンも多用される。例えば、ペプチド合成において、DMFは全体の47％で、ジクロロメタンは36％の割合で使用されていると報告されており、それら溶媒の使用例を合わせると、全体の83％となる（Green Chem., 2013,15, 596－600.）。
　しかしながら、ジクロロメタンには毒性があり、DMFは使用量により法規制の対象となっているため、工業的な製造方法では、これらの溶媒の使用を避けるべきである。加えて、DMFおよびジメチルスルホキシドは、加熱によって分解しうることに加え、沸点が高いため、目的とする生成物にこれらが混入すると除去が困難である。さらには、DMFの分解によって生じるジメチルアミンは、ペプチド伸長反応に関与し得るため、望まないペプチドの副生に繋がることがある（Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.）。ジメチルスルホキシドから生じるジメチルスルフィドは異臭を放つという問題もある。
　とりわけ、工業的スケールでは、使用する溶媒が大量になり、その留去にも過酷な時間と加熱が必要とされることが多いために、このような操作中に分解物が増すことは容易に推測される。したがって、溶媒を留去する際に熱的に安定で、かつ効率的にペプチド鎖の伸長反応や環化反応が進行させることが可能な溶媒を見出すことは重要である。
　また、DMFやジメチルスルホキシドは水に対する溶解度が高く、水と混和するため、目的物がこれら有機溶媒と共に水層へ移行して、収量の低下を引き起こす場合があり、水溶液との分液処理操作も非効率となる。例えば、有機層に水が混入すると、目的物を含む有機溶媒の留去後に水が残留し、場合によっては、ペプチド結合の加水分解を引き起こす（Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.）。
　工業的製法においては、溶媒を留去するために必要な時間も増大することから、収量の低下だけでなく、水の混入による副反応も生じやすくなることが問題となる。
　そこで、分液操作において水層との分離が良好な有機層を形成する手法や、ペプチドを合成可能であり、かつ水に対する溶解度が低くて水と混和し難い溶媒を見出すことも必要とされている。
　さらには、溶媒によっては、安定化剤（例えばBHTなどの酸化防止剤）を含有している場合がある。少量スケールや短工程の合成では、残存する安定化剤の総量は多くならず、不純物として際立たない。しかし、工程数や生産量が増加すると、安定化剤が中間体等にそのまま大量に残留するため、その後の工程への影響が無視できない場合がある(例えば、中間体に含まれる安定化剤が次ステップにおける化学反応に影響を及ぼす場合や、医薬品の有効成分の場合、目的とする最終化合物に含まれる安定化剤が薬効以外の予期せぬ作用を引き起こす場合など)。 中間体が単離され、精製されると、安定化剤はこれらの過程を経て除去されうる。 しかし、このような作業を省略することが望ましい工業生産プロセスについては、安定化剤が中間体および最終化合物中に蓄積される可能性がある。 工業生産プロセスでは、安定化剤を効率的に除去するための一般的な技術が求められている。
　また、中間体を単離、精製せずに連続してペプチド鎖の伸長を行って、最終生成物を合成するためには、縮合や脱保護などの各工程において、副反応を抑制し、分液操作などの後処理のみで次の工程に進めるような反応条件とする必要がある。特に、工業的スケールでのペプチド合成の場合には、目的物のカラムクロマトグラフィーでの精製は非効率であるため、カラムクロマトグラフィーに依らずに、晶析に付すことで精製可能な粗生成物を得る手法や分液操作などの後処理のみで目的物を得る手法が必要であり、そのための反応条件や後処理条件を新たに見出す必要もあった。
　本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ペプチドの液相合成に従来から慣用されていたDMF、ジクロロメタン、ジメチルスルホキシドなどの溶媒とは異なる特定の溶媒、例えば、 (i)加熱によって分解しにくく、(ii)分液操作において水層との分離が良好であり、かつ(iii)ペプチド鎖の伸長反応や環化反応が良好に進行する、といった要件を満たすペプチド合成に有用な溶媒を見出した。本明細書に記載されている方法に有用な溶媒は、熱分解に対して抵抗性を有しうる。このような抵抗性は、好ましくは、測定機器（例えば、GC、LCまたはNMR、好ましくはGC）を用いた、ある温度範囲での溶媒の安定性試験によって決定することができる。特定用途の溶媒は、高温で抵抗性（例えば、沸点付近で48時間安定、または室温付近で2ヶ月間安定、好ましくは沸点付近で48時間安定）を有することでき、上記に例示される条件下、それらの純度を99%以上、好ましくは99.9%以上に保つことができる。本発明の溶媒は、分液操作において、水層から良好な分離を示すことができる。このような分離は、溶媒と水を等量ずつ、分液漏斗、反応フラスコ、または反応槽中、室温付近（例えば、15℃～40℃、好ましくは20℃～30℃）で、30分以内、好ましくは15分以内に混合することにより決定され得る。本発明の溶媒は、ペプチド鎖の伸長反応および環化反応を十分に進行させることができる。このような反応進行は、好ましくは、目的化合物の化学収率、または出発物質の目的化合物への化学変換を測定機器（例えば、GC、LCまたはNMR、好ましくはGC）をもちいることにより決定することができる。特定用途の溶媒は、化学収率70%～100%、または化学変換率70%～100%、好ましくは化学収率と化学変換率の両方が80%～100%を与え得る。より好ましくは、本発明の溶媒は、沸点付近で48時間安定であり得る溶媒、20℃～30℃で15分以内に分液操作で良好な分離を示し得る溶媒、出発物質の化学収率および化学変換の両方を80%～100%で達成し得る溶媒である。これら要件を満たす１種または複数種の溶媒を各反応や反応の後処理操作時に適宜組み合わせて用いることで、中間体を単離することなく、分液やろ過などの簡便な操作のみによってペプチド鎖を連続的に伸長でき、ペプチド化合物を環化でき、溶媒に含まれる安定化剤を除去できる。すなわち、その後の反応については、当該技術分野で理解されているように中間体、例えば単一の生成物を単離する必要はない。むしろ、本発明によれば、次の反応に用いられる溶液は中間体（前の反応の生成物）を含み、および前の反応の1以上の反応物質、または試薬をさらに含み得、それらは次の反応に先立って可溶化されうる。また、本発明者らは、分液操作において、特定の水溶液あるいは有機溶媒を用いることで、有機層あるいは水層を効率的に洗浄できることを見出した。さらには、本発明者らは、本発明の方法により、中間体を単離、精製せずに製造された環状ペプチド化合物を、カラムクロマトグラフィーに依らず、晶析により単離、精製することで、環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物、さらに環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物の結晶を得ることができることを見出した。また、本発明者らは、縮合および脱保護の各反応において副生成物の生成を抑制可能な反応条件を見出した。
　本発明は、非限定の具体的な一態様において以下を包含する。
〔１〕１種または複数種の水と混和しない溶媒、１種または複数種の水溶性アルキルニトリル類、および１種または複数種の水溶性エーテル類からなる群より選択される１つまたは複数を含む溶媒（溶媒A）中、ペプチド化合物のN末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基とを連結する工程を含む、液相法によって、環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物を製造する方法。
〔１－１〕溶媒Aが、2-MeTHF、THF、4-メチルテトラヒドロピラン、MTBE、CPME、炭酸ジメチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、アニソール、MeCN、ヘプタン、およびトルエンからなる群から選択される溶媒を１つ以上含む、〔１〕に記載の方法。
〔２〕N末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基が、アミド結合、または-(CH2)nS(CH2)m-、-(CH2)nS(O)(CH2)m-、もしくは-(CH2)nS(O)2(CH2)m-より選択される結合よって連結され、ここでnおよびmはそれぞれ独立して１または２である、〔１〕に記載の方法。
〔３〕環状ペプチド化合物が、８～２０のアミノ酸残基を含み、該アミノ酸残基の少なくとも１つが非天然アミノ酸残基である、〔１〕または〔２〕に記載の方法。
〔４〕環状ペプチド化合物が、９～１５のアミノ酸残基を含み、該アミノ酸残基の少なくとも１つが非天然アミノ酸残基である、〔１〕～〔３〕のいずれかに記載の方法。
〔５〕環状ペプチド化合物が、少なくとも１つのN-置換の非天然アミノ酸残基を含む、〔１〕～〔４〕のいずれかに記載の方法。
〔６〕環状ペプチド化合物が、少なくとも１つのN-非置換の非天然アミノ酸残基を含む、〔１〕～〔５〕のいずれかに記載の方法。
〔７〕環状ペプチド化合物が、少なくとも１つのα，αジ置換アミノ酸残基を含む、〔１〕～〔６〕のいずれかに記載の方法。
〔８〕C末端のアミノ酸残基またはN末端のアミノ酸残基の一方または両方が、カルボキシル基のα位炭素に不斉炭素を有しないアミノ酸残基である、〔１〕～〔７〕のいずれかに記載の方法。
〔９〕C末端のアミノ酸残基が、カルボキシル基のα位炭素に不斉炭素を有しないアミノ酸残基である、〔１〕～〔８〕のいずれかに記載の方法。
〔１０〕N末端のアミノ酸残基が、N-非置換のアミノ酸残基である、〔１〕～〔８〕のいずれかに記載の方法。
〔１１〕環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物が、環状ペプチド化合物の溶媒和物である、〔１〕～〔１０〕のいずれかに記載の方法。
〔１２〕環状ペプチド化合物の溶媒和物が、環状ペプチド化合物の水和物である、〔１〕～〔１１〕のいずれかに記載の方法。
〔１３〕環状ペプチド化合物が、下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
 で表される、〔１〕～〔１２〕のいずれかに記載の方法。
〔１４〕環状ペプチド化合物の単離および／または精製にカラムクロマトグラフィーを用いない、〔１〕～〔１３〕のいずれかに記載の方法。
〔１５〕環状ペプチド化合物を晶析により単離および／または精製して、環状ペプチド化合物の結晶を得る工程をさらに含む、〔１〕～〔１４〕のいずれかに記載の方法。
〔１６〕環状ペプチド化合物の結晶が、下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
 で表される環状ペプチド化合物の非溶媒和物結晶、または溶媒和物結晶である、〔１５〕に記載の方法。
〔１７〕環状ペプチド化合物の溶媒和物結晶が水和物結晶である、〔１６〕に記載の方法。
〔１８〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも７個のピークを含むC型結晶である、〔１７〕に記載の方法。
〔１８－１〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも８個のピークを含むC型結晶である、〔１７〕に記載の方法。
〔１８－２〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも９個のピークを含むC型結晶である、〔１７〕に記載の方法。
〔１８－３〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも１０個のピークを含むC型結晶である、〔１７〕に記載の方法。
〔１８－４〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも１１個のピークを含むC型結晶である、〔１７〕に記載の方法。
〔１８－５〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも１２個のピークを含むC型結晶である、〔１７〕に記載の方法。
〔１８－６〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）のピークを含むC型結晶である、〔１７〕に記載の方法。
〔１９〕非溶媒和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、５．３７０°、６．９３４°、８．９４０°、９．８３８°、１０．７７１°、１２．１８１°、１３．５２５°、１５．１７９°、１６．２０２°、および１７．５５４°（±０．２°）のピークを含むF型結晶である、〔１６〕に記載の方法。
〔２０〕溶媒和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、８．００６°、９．００２°、９．９４３°、１１．５０１°、１３．０６７°、１４．８５４°、１６．３２０°、１７．２７５°、１９．２６１°、および２０．３２４°（±０．２°）のピークを含むA型のDMSO-水和物結晶である、〔１６〕に記載の方法。
〔２１〕溶媒和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、８．２２３°、９．５９４°、９．９７６°、１１．８７９°、１３．８４１°、１４．５７２°、１５．９３４°、１６．３５０°、１９．８０５°、および２０．４８０°（±０．２°）のピークを含むB型のDMSO-水和物結晶である、〔１６〕に記載の方法。
〔２２〕溶媒和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、７．９４２°、８．２８３°、８．８６１°、１０．０９７°、１０．４９１°、１１．８０５°、１２．６７３°、１２．８３０°、１３．５１４°、１３．８５５°、１５．８５３°、１６．４０５°、１６．６４２°、および１７．７７２°（±０．２°）のピークを含むH型のアセトン-水和物結晶である、〔１６〕に記載の方法。
〔２３〕溶媒Aが2-MeTHFからなる溶媒、または2-MeTHFを含む溶媒である、〔１〕～〔２２〕のいずれかに記載の方法。
〔２３－１〕溶媒Aが、2-MeTHF、炭酸ジメチル、アニソール、酢酸イソプロピル、酢酸エチル、MTBE、CPME、4-メチルテトラヒドロピラン、ヘプタン、およびトルエンからなる群より選択される１つ以上の水と混和しない溶媒を含む、〔１〕～〔２２〕のいずれかに記載の方法。
〔２４〕溶媒Aが、アセトニトリル、および／またはプロピオニトリルである水溶性アルキルニトリル類を含む、〔１〕～〔２２〕のいずれかに記載の方法。
〔２５〕溶媒Aが、THF、1,4-ジオキサン、1,3-ジオキサン、およびジメトキシエタンからなる群より選択される１つ以上の水溶性エーテル類を含む、〔１〕～〔２２〕のいずれかに記載の方法。
〔２６〕液相法によってペプチド化合物を製造する方法であって、
工程１：C-保護アミノ酸またはC-保護ペプチドに、N-保護アミノ酸またはN-保護ペプチドを連結する工程、
工程２：工程１の後にN-保護基を除去する工程、および
任意で、工程１と工程２を複数回繰り返して、ペプチド化合物を製造する工程、
を含み、工程１と工程２の生成物を単離する工程を含まない、前記方法。
〔２７〕ペプチド化合物が直鎖ペプチド化合物である、〔１〕～〔２６〕のいずれかに記載の方法。
〔２８〕ペプチド化合物が、その部分構造として環状構造を含む、〔２６〕または〔２７〕に記載の方法。
〔２９〕溶媒Aが、ペプチド化合物を製造した後の溶媒を含む、〔１〕～〔２５〕のいずれかに記載の方法であって、ペプチド化合物が、〔２６〕に記載の方法により製造される、前記方法。
〔３０〕工程１と工程２をそれぞれ１回行うか、または工程１と工程２を２回～２０回繰り返す、〔２６〕～〔２９〕のいずれかに記載の方法。
〔３１〕ペプチド化合物を製造する方法が、C-保護基を除去する工程３をさらに含む、〔２６〕～〔３０〕のいずれかに記載の方法。
〔３２〕繰り返しの最終回は、工程２を含まない、〔２６〕～〔３１〕のいずれかに記載の方法。
〔３３〕工程３が繰り返しの最終回の工程１の後に行われる、〔３１〕または〔３２〕に記載の方法。
〔３４〕ペプチド化合物を製造する方法に含まれる各工程が、トルエン、アセトン、DMF、アセトニトリル、THF、2-MeTHF、炭酸ジメチル、アニソール、酢酸イソプロピル、ヘプタン、酢酸エチル、MTBE、および4-メチルテトラヒドロピランからなる群より独立して選択される１つまたは複数の溶媒（溶媒B）中で行われる、〔２６〕～〔３３〕のいずれかに記載の方法。
〔３４－１〕溶媒Bが2-MeTHF、MTBE、酢酸イソプロピル、および酢酸エチルからなる群より選択される、〔２６〕～〔３３〕のいずれかに記載の方法。
〔３５〕ペプチド化合物を製造する方法に含まれる各工程の後処理が、分液操作、ろ過操作、および濃縮操作からなる群より選択される１つまたは複数の操作を含む、〔２６〕～〔３４〕のいずれかに記載の方法。
〔３６〕分液操作の前に、水と混和しない溶媒（溶媒C）、水溶性アルキルニトリル類、および/または水溶性エーテル類が添加される、〔３５〕に記載の方法。
〔３７〕溶媒Cが、2-MeTHF、炭酸ジメチル、アニソール、酢酸イソプロピル、酢酸エチル、MTBE、CPME、4-メチルテトラヒドロピラン、およびヘプタンからなる群より選択される１つまたは複数である、〔３６〕に記載の方法。
〔３８〕溶媒Cが、2-MeTHFである、〔３６〕または〔３７〕に記載の方法。
〔３９〕溶媒Cが、水層と有機層に分離可能な量で添加される、〔３６〕～〔３８〕のいずれかに記載の方法。
〔４０〕分離可能な量が、有機層全体に対して、約５０重量％～１００重量％である、〔３９〕に記載の方法。
〔４１〕有機層が、2-MeTHFを含む、〔３５〕～〔４０〕のいずれかに記載の方法。
〔４２〕分液操作が、有機層の洗浄操作を含む、〔３５〕～〔４０〕のいずれかに記載の方法。
〔４２－１〕洗浄操作が、クエン酸とリン酸水素二カリウムを含む水溶液を用いて行われる有機層の洗浄操作、または2-MeTHF、ヘプタン、MTBE、もしくは酢酸イソプロピルを用いて行われる水層の洗浄操作を含む、〔３５〕～〔４１〕のいずれかに記載の方法。
〔４３〕洗浄操作が、アセトニトリルと炭酸カリウム水溶液の混合液を用いて行われる有機層の洗浄操作を含む、〔３５〕～〔４２〕のいずれかに記載の方法。
〔４４〕分液操作が、炭酸ナトリウム水溶液、硫酸水素ナトリウム水溶液、および／または炭酸ナトリウム水溶液を用いて行われる有機層の洗浄操作を含む、〔３５〕～〔４３〕のいずれかに記載の方法。
〔４４－１〕分液操作が、炭酸ナトリウム水溶液、硫酸水素ナトリウム水溶液、および炭酸ナトリウム水溶液を用いて行われる有機層の洗浄操作を含む、〔３５〕～〔４３〕のいずれかに記載の方法。
〔４５〕分液操作後に有機層が、目的物に対して２％以下のBHTを含む、〔３５〕～〔４４〕のいずれかに記載の方法。
〔４５－１〕(1) ペプチド化合物が〔２６〕～〔４５〕のいずれかの方法で製造され、および、(2) 溶媒Aが〔３５〕～〔４５〕のいずれかの方法で使われる溶媒をさらに含む、〔１〕～〔２３－１〕のいずれかに記載の方法。
〔４６〕工程１が、C-保護アミノ酸またはC-保護ペプチドのN末端のアミノ基と、N-保護アミノ酸またはN-保護ペプチドのC末端のカルボキシル基とを縮合する工程を含む、〔２６〕～〔４５〕のいずれかに記載の方法。
〔４７〕カルボキシル基が活性化されている、〔４６〕に記載の方法。
〔４８〕工程１が、縮合試薬の存在下で行われる、〔４６〕に記載の方法。
〔４９〕縮合試薬がT3P、EDCI、HATU、COMU、BEP、PyBOP、DMT-MM、およびPyOximからなる群より選択される縮合剤を含む、〔４８〕に記載の方法。
〔５０〕工程２が、触媒の存在下、接触水素化により行われる、〔２６〕～〔４９〕のいずれかに記載の方法。
〔５１〕触媒が、Pd/C、Pd(OH)2/C、またはPtO2より選択される、〔５０〕に記載の方法。
〔５２〕工程２が、脱保護試薬の存在下で行われる、〔２６〕～〔４９〕のいずれかに記載の方法。
〔５３〕脱保護試薬が、TBAF、LiBH4、ピペリジン、トリフルオロ酢酸、またはメタンスルホン酸より選択される、〔５２〕に記載の方法。
〔５４〕N-保護基が、Cbz、p-ニトロベンジルオキシカルボニル、2-ナフチルメチルオキシカルボニル、ジフェニルメチルオキシカルボニル、9-アントリルメチルオキシカルボニル、Teoc、Boc、トリフルオロアセチル、Fmoc、またはAllocより選択される、〔２６〕～〔５３〕のいずれかに記載の方法。
〔５５〕工程３が、脱保護試薬の存在下で行われる、〔２６〕～〔４４〕のいずれかに記載の方法。
〔５６〕脱保護反応が、酸性条件で行われる、〔５５〕に記載の方法。
〔５７〕酸性条件が、HMDSと、TMSOTf、TMSI、TMSBr、およびTMSClからなる群より選択される試薬との組み合わせで達成される、〔５６〕に記載の方法。
〔５８〕C-保護基が、t-Bu、トリチル、クミル、メチル、またはエチルより選択される、〔２６〕～〔５７〕のいずれかに記載の方法。
〔５９〕C-保護ペプチドおよびN-保護ペプチドの一方または両方が、２～２０のアミノ酸残基を含み、該C-保護ペプチドおよびN-保護ペプチドの一方または両方に含まれる該アミノ酸残基の少なくとも１つが非天然アミノ酸残基である、〔２６〕～〔５８〕のいずれかに記載の方法。
〔６０〕C-保護ペプチドおよびN-保護ペプチドの一方または両方が、少なくとも１つのN-置換アミノ酸残基を含む、〔２６〕～〔５９〕のいずれかに記載の方法。
〔６１〕C-保護ペプチドおよびN-保護ペプチドの一方または両方が、少なくとも１つのN-非置換の非天然アミノ酸残基を含む、〔２６〕～〔６０〕のいずれかに記載の方法。
〔６２〕繰り返しの最終回の工程１で用いられるC-保護ペプチドおよびN-保護ペプチドの一方または両方が、N-置換アミノ酸残基を４つ以上含むか、またはN-置換アミノ酸残基を２つ以上含み、かつα，αジ置換アミノ酸残基を１つ以上含む、〔２６〕～〔６１〕のいずれかに記載の方法。
〔６３〕繰り返しの最終回の工程１で用いられるC-保護ペプチドおよびN-保護ペプチドの一方または両方が、５つまたは６つのアミノ酸残基からなり、４つまたは５つの非天然アミノ酸残基を含む〔２６〕～〔６２〕に記載の方法。
〔６４〕繰り返しの最終回の工程１で用いられるC-保護ペプチドが、C-保護されたMeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyであり、繰り返しの最終回の工程１で用いられるN-保護ペプチドが、N-保護されたHph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2である、〔６３〕に記載の方法。
〔６５〕C-保護アミノ酸、もしくはその塩、またはC-保護ペプチド、もしくはその塩が、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
 である、〔２６〕～〔６１〕のいずれかに記載の方法。
〔６６〕N-保護アミノ酸、もしくはその塩、またはN-保護ペプチド、もしくはその塩が、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
 である、〔２６〕～〔６１〕のいずれかに記載の方法。
〔６７〕ペプチド化合物が、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000009
である、〔２６〕～〔６１〕のいずれかに記載の方法。
〔６８〕ペプチド化合物のN末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基とを連結する工程をさらに含む、〔２６〕～〔６７〕のいずれかに記載の方法。
〔６９〕（１）下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
 で表される直鎖ペプチド化合物を用意する工程、
（２）N末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基とを連結する工程、
を含む、下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
 で表される環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物の製造方法。
〔７０〕下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 で表される環状ペプチド化合物の塩、溶媒和物、または塩の溶媒和物。
〔７０－１〕HPLC分析による210nmでのUVArea値により決定される、90%以上、95%以上、98%以上、または99%以上の純度を有する、式１で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物。
〔７０－２〕 HPLC分析による210nmでのUVArea％により決定される、総不純物が5%未満、2%未満、1%未満、0.5%未満、または検出不能な量であることを特徴とする、高純度の式１で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物。
〔７０－３〕HPLC分析による210nmでのUVArea％により決定される、不純物各々がそれぞれ1%未満、0.5%未満、0.1%未満、または検出不能な量であることを特徴とする、〔７０－２〕に記載の高純度の式１で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物。
〔７０－４〕HPLC分析による210nmでのUVArea％により決定される、不純物が1%未満、0.5%未満、0.1%未満、または検出不能な量であり、該不純物がエピマー、過剰伸長体、欠損体、二量体、および三量体からなる群からされることを特徴とする、〔７０－２〕、または〔７０－３〕に記載の高純度の式１で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物。
〔７０－５〕HPLC分析による210nmでのUVArea％により決定される、不純物が1%未満、0.5%未満、0.1%未満、または検出不能な量であり、該不純物が以下に示す環状二量体（Cyclic dimer）、および／または以下に示す環状三量体(Cyclic trimer)であることを特徴とする、〔７０－２〕、〔７０－３〕、または〔７０－４〕に記載の高純度の式１で表される化合物、その塩、またはそれらの溶媒和物。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000014
〔７１〕水和物、DMSO-水和物、アセトン-水和物、またはDMSO溶媒和物である、〔７０〕に記載の環状ペプチド化合物の溶媒和物。
〔７２〕下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
 で表される環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物の結晶。
〔７３〕結晶が、非溶媒和物結晶、溶媒和物結晶、塩の結晶、および塩の溶媒和物結晶からなる群より選択される、〔７２〕に記載の結晶。
〔７４〕結晶が、溶媒和物結晶である、〔７３〕に記載の結晶。
〔７５〕溶媒和物結晶が水和物結晶である、〔７２〕に記載の結晶。
〔７６〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも７個のピークを含むC型結晶である、〔７５〕に記載の結晶。
〔７６－１〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも８個のピークを含むC型結晶である、〔７５〕に記載の結晶。
〔７６－２〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも９個のピークを含むC型結晶である、〔７５〕に記載の結晶。
〔７６－３〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも１０個のピークを含むC型結晶である、〔７５〕に記載の結晶。
〔７６－４〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも１１個のピークを含むC型結晶である、〔７５〕に記載の結晶。
〔７６－５〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも１２個のピークを含むC型結晶である、〔７５〕に記載の結晶。
〔７６－６〕水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）のピークを含むC型結晶である、〔７５〕に記載の結晶。
〔７７〕非溶媒和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、５．３７０°、６．９３４°、８．９４０°、９．８３８°、１０．７７１°、１２．１８１°、１３．５２５°、１５．１７９°、１６．２０２°、および１７．５５４°（±０．２°）のピークを含むF型結晶である、〔７３〕に記載の結晶。
〔７８〕溶媒和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、８．００６°、９．００２°、９．９４３°、１１．５０１°、１３．０６７°、１４．８５４°、１６．３２０°、１７．２７５°、１９．２６１°、および２０．３２４°（±０．２°）のピークを含むA型のDMSO-水和物結晶である、〔７３〕に記載の結晶。
〔７９〕溶媒和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、８．２２３°、９．５９４°、９．９７６°、１１．８７９°、１３．８４１°、１４．５７２°、１５．９３４°、１６．３５０°、１９．８０５°、および２０．４８０°（±０．２°）のピークを含むB型のDMSO-水和物結晶である、〔７３〕に記載の結晶。
〔８０〕溶媒和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、７．９４２°、８．２８３°、８．８６１°、１０．０９７°、１０．４９１°、１１．８０５°、１２．６７３°、１２．８３０°、１３．５１４°、１３．８５５°、１５．８５３°、１６．４０５°、１６．６４２°、および１７．７７２°（±０．２°）のピークを含むH型のアセトン-水和物結晶である、〔７３〕に記載の結晶。
〔８１〕下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 で表される環状ペプチド化合物の水和物結晶を製造する方法であって、
　該環状ペプチド化合物を該環状ペプチド化合物が溶解可能な量の極性有機溶媒に溶解させて溶液を得る工程、
　該溶液を濃縮して、該環状ペプチド化合物の残渣を得る工程、および
　該残渣に水と極性有機溶媒の混合液を加えて、該環状ペプチド化合物の水和物結晶を得る工程
を含む、前記方法。
〔８２〕下記式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
 で表される環状ペプチド化合物の水和物結晶を製造する方法であって、
　アモルファス状態の該環状ペプチド化合物をＤＭＳＯに溶解させて溶液を得る工程、
　該溶液を凍結乾燥して、該環状ペプチド化合物の凍結乾燥体を得る工程、および
　該凍結乾燥体に水－アセトニトリル混合液を加えて、該環状ペプチド化合物の水和物結晶を得る工程
を含む、前記方法。
　上記番号付けにおいて、従属項が引用する番号は、特に言及がない限りその番号の枝番を含む。例えば、従属項において引用する〔１〕は、〔１〕とともに、その枝番である〔１－１〕を含むことを示す。他の番号付けにおいても同様である。
　本発明によれば、複数の非天然アミノ酸残基を含む複雑なアミノ酸配列を有する場合であっても、アミノ酸残基のラセミ化や分子間反応を抑制して、環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物を効率的に製造することができる。また、本発明によれば、中間体を単離、精製せずに、分液、ろ過、および濃縮などの単純な後処理を行うだけで、ペプチド鎖の連続的な伸長や、それに次ぐ環化を行うことができるため、目的とするペプチド化合物を効率よく製造することができる。本発明の製造方法は、ペプチド化合物の製造コストを削減でき、環境負荷も軽減できるため、大規模スケールでのペプチド合成に特に有用である。
図１は、実施例２５で得られた化合物１の水和物結晶（C型結晶）の粉末Ｘ線回折測定の結果を示す。縦軸は回折強度であり、横軸は回折角２θ（°）である。 図２は、実施例２５－２で得られた化合物１の非溶媒和物結晶（F型結晶）の粉末Ｘ線回折測定の結果を示す。縦軸は回折強度であり、横軸は回折角２θ（°）である。 図３は、実施例２５－３で得られた化合物１の結晶（A型結晶）の粉末Ｘ線回折測定の結果を示す。縦軸は回折強度であり、横軸は回折角２θ（°）である。 図４は、実施例２５－３で得られた化合物１の結晶（B型結晶）の粉末Ｘ線回折測定の結果を示す。縦軸は回折強度であり、横軸は回折角２θ（°）である。 図５は、実施例２５－３で得られた化合物１の結晶（B型結晶）の熱重量・示差熱分析の結果を示す。横軸は温度（℃）であり、右縦軸は熱重量分析におけるサンプルの重量変化（％）である。左縦軸は示差熱分析において観測された熱流を表す。 図６は、実施例２５－３で得られた化合物１の結晶（B型結晶）の１Ｈ－ＮＭＲ測定の結果を示す。 図７は、実施例２５－４で得られた化合物１の水和物結晶（C型結晶）の、相対湿度７５％、３０％、０％における粉末Ｘ線回折測定の結果を示す。縦軸は回折強度であり、横軸は回折角２θ（°）である。 図８は、実施例２６で得られた化合物１の水和物結晶（C型結晶）の熱重量・示差熱分析の結果を示す。横軸は温度（℃）および測定時間（分）であり、右縦軸は熱重量分析におけるサンプルの重量変化（mg）である。左縦軸は示差熱分析において観測された熱流（mW）を表す。 図９は、実施例２６で得られた化合物１の水和物結晶（C型結晶）の単結晶X線構造解析による結晶構造を示す。 図１０は、実施例２６で得られた化合物１の水和物結晶（C型結晶）の動的水蒸気吸着測定の結果を示す。縦軸は重量変化（％）であり、横軸は相対湿度（％）である。図１０において、「Cycle1 Sorp」（黒ダイヤモンド印）はサイクル１での吸着を示し、「Cycle1 Desorp」（黒四角印）はサイクル１での脱離を示し、「Cycle2 Sorp」（黒三角印）はサイクル２での吸着を示し、「Cycle2 Desorp」（黒四角印）はサイクル２での脱離を示す。 図１１は、実施例２６－１で得られた化合物１のDMSO－水和物結晶（A型結晶）の単結晶X線構造解析による結晶構造を示す。この結晶構造においては化合物１：DMSO：水が１：６：３でモデル化されている。 図１２は、実施例２６－２で得られた化合物１のアセトン－水和物結晶（H型結晶、単結晶Ｘ線構造解析用）の単結晶X線構造解析による結晶構造を示す。この結晶構造においては化合物１：アセトン：水が１：１：４でモデル化されている。 図１３は、実施例２６－２で得られた化合物１のアセトン－水和物結晶（H型結晶、粉末Ｘ線回折測定用）の結果を示す。縦軸は回折強度であり、横軸は回折角２θ（°）である。
　本明細書において使用される略語を以下に記す。
2-MeTHF：２－メチルテトラヒドロフラン
AcOEt：酢酸エチル
Alloc：アリルオキシカルボニル
BEP：2-ブロモ-1-エチルピリジニウム テトラフルオロホウ酸塩
BHT：2,6-ジ-tert-ブチル-4-メチルフェノール
Boc：ｔ－ブトキシカルボニル
Cbz：ベンジルオキシカルボニル
COMU：(1-シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデンアミノオキシ)ジメチルアミノ-モルホリノ-カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩
CPME：シクロペンチルメチルエーテル
CSA：10-カンファースルホン酸
DIPEA：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
DMA：ジメチルアセトアミド
DMAP：4-ジメチルアミノピリジン
DMF：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
DMT-MM：4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド
EDCI：1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド
HATU：O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩
HMDS：1,1,1,3,3,3-ヘキサメチルジシラザン
HOAt：1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール
HOBt：1-ヒドロキシベンゾトリアゾール
IPAc：酢酸イソプロピル
MeCN：アセトニトリル
MTBE：メチルtert-ブチルエーテル
MTHP：４－メチルテトラヒドロピラン
NMP：Ｎ－メチルピロリドン
PyBOP：1H-ベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロリン酸塩
PyOxim：(エチルシアノ(ヒドロキシイミノ)アセタト-O2)-トリ-(1-ピロリジニル)-ホスホニウム ヘキサフルオロリン酸塩
T3P：プロピルホスホン酸無水物
TBAF：テトラブチルアンモニウムフルオリド
Teoc：2-(トリメチルシリル)エトキシカルボニル
THF：テトラヒドロフラン
TMSOTf：トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル
官能基等の定義（以下に例示される用語は、例示であり特に限定を意図していない当業者が共通して理解できるものである）
　本明細書における「ハロゲン原子」としては、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩが例示される。
　本明細書において「アルキル」とは、脂肪族炭化水素から任意の水素原子を１個除いて誘導される１価の基であり、骨格中にヘテロ原子（炭素及び水素原子以外の原子をいう。）または不飽和の炭素－炭素結合を含有せず、水素及び炭素原子を含有するヒドロカルビルまたは炭化水素基構造の部分集合を有する。アルキルは直鎖状のものだけでなく、分枝鎖状のものも含む。アルキルとして具体的には、炭素原子数１～２０（Ｃ１－Ｃ２０、以下「Ｃｐ－Ｃｑ」とは炭素原子数がｐ～ｑ個であることを意味する）のアルキルであり、好ましくはＣ１－Ｃ１０アルキル、より好ましくはＣ１－Ｃ６アルキルが挙げられる。アルキルとして、具体的には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｓ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル（２－メチルプロピル）、ｎ－ペンチル、ｓ－ペンチル（１－メチルブチル）、ｔ－ペンチル（１，１－ジメチルプロピル）、ネオペンチル（２，２－ジメチルプロピル）、イソペンチル（３－メチルブチル）、３－ペンチル（１－エチルプロピル）、１，２－ジメチルプロピル、２－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，２，２－トリメチルプロピル、１，１，２，２－テトラメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、２，３－ジメチルブチル、３，３－ジメチルブチル、１－エチルブチル、２－エチルブチル等が挙げられる。
　本明細書において「アルケニル」とは、少なくとも１個の二重結合（２個の隣接ＳＰ２炭素原子）を有する１価の基である。二重結合および置換分（存在する場合）の配置によって、二重結合の幾何学的形態は、エントゲーゲン（Ｅ）またはツザンメン（Ｚ）、シスまたはトランス配置をとることができる。アルケニルは、直鎖状のものだけでなく、分枝鎖状ものも含む。アルケニルとして好ましくはＣ２－Ｃ１０アルケニル、より好ましくはＣ２－Ｃ６アルケニルが挙げられ、具体的には、たとえば、ビニル、アリル、１－プロペニル、２－プロペニル、１－ブテニル、２－ブテニル（シス、トランスを含む）、３－ブテニル、ペンテニル、３－メチル－２－ブテニル、ヘキセニルなどが挙げられる。
　本明細書において「アルキニル」とは、少なくとも１個の三重結合（２個の隣接ＳＰ炭素原子）を有する、１価の基である。アルキニルは、直鎖状のものだけでなく、分枝鎖状のものも含む。アルキニルとして好ましくはＣ２－Ｃ１０アルキニル、より好ましくはＣ２－Ｃ６アルキニルが挙げられ、具体的には、たとえば、エチニル、１－プロピニル、プロパルギル、３－ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、３－フェニル－２－プロピニル、３－（２'－フルオロフェニル）－２－プロピニル、２－ヒドロキシ－２－プロピニル、３－（３－フルオロフェニル）－２－プロピニル、３－メチル－（５－フェニル）－４－ペンチニルなどが挙げられる。
　本明細書において「シクロアルキル」とは、飽和または部分的に飽和した環状の１価の脂肪族炭化水素基を意味し、単環、ビシクロ環、スピロ環を含む。シクロアルキルとして好ましくはＣ３－Ｃ８シクロアルキルが挙げられ、具体的には、たとえば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、スピロ［３．３］ヘプチルなどが挙げられる。
　本明細書において「アリール」とは１価の芳香族炭化水素環を意味し、好ましくはＣ６－Ｃ１０アリールが挙げられる。アリールとして具体的には、たとえば、フェニル、ナフチル（たとえば、１－ナフチル、２－ナフチル）などが挙げられる。
　本明細書において「ヘテロシクリル」とは、炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子を含有する、非芳香族の環状の１価の基を意味する。ヘテロシクリルは、環中に二重およびまたは三重結合を有していてもよく、環中の炭素原子は酸化されてカルボニルを形成してもよく、単環でも縮合環でもよい。環を構成する原子の数は好ましくは４～１０であり（４～１０員ヘテロシクリル）、より好ましくは４～７である（４～７員ヘテロシクリル）。ヘテロシクリルとしては具体的には、たとえば、アゼチジニル、オキシラニル、オキセタニル、アゼチジニル、ジヒドロフリル、テトラヒドロフリル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジル、テトラヒドロピリミジル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、１，２－チアジナン、チアジアゾリジニル、アゼチジニル、オキサゾリドン、ベンゾジオキサニル、ベンゾオキサゾリル、ジオキソラニル、ジオキサニル、テトラヒドロピロロ[１,２－ｃ]イミダゾール、チエタニル、３，６－ジアザビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、２，５－ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、３－オキサ－８－アザビシクロ[３．２．１]オクタニル、スルタム、２－オキサスピロ[３．３]ヘプチルなどが挙げられる。
　本明細書において「ヘテロアリール」とは、炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子を含有する、芳香族性の環状の１価の基を意味する。環は単環でも、他の環との縮合環でもよく、部分的に飽和されていてもよい。環を構成する原子の数は好ましくは５～１０（５～１０員ヘテロアリール）であり、より好ましくは５～７（５～７員ヘテロアリール）である。ヘテロアリールとして具体的には、たとえば、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ベンゾジオキソリル、インドリジニル、イミダゾピリジルなどが挙げられる。
　本明細書において「アルコキシ」とは、前記定義の「アルキル」が結合したオキシ基を意味し、好ましくはＣ１－Ｃ６アルコキシが挙げられる。アルコキシとして具体的には、たとえば、メトキシ、エトキシ、１－プロポキシ、２－プロポキシ、ｎ－ブトキシ、ｉ－ブトキシ、ｓ－ブトキシ、ｔ－ブトキシ、ペンチルオキシ、３－メチルブトキシなどが挙げられる。
　本明細書において「アルケニルオキシ」とは、前記定義の「アルケニル」が結合したオキシ基を意味し、好ましくはＣ２－Ｃ６アルケニルオキシが挙げられる。アルケニルオキシとして具体的には、たとえば、ビニルオキシ、アリルオキシ、１－プロペニルオキシ、２－プロペニルオキシ、１－ブテニルオキシ、２－ブテニルオキシ（シス、トランスを含む）、３－ブテニルオキシ、ペンテニルオキシ、ヘキセニルオキシなどが挙げられる。
　本明細書において「シクロアルコキシ」とは、前記定義の「シクロアルキル」が結合したオキシ基を意味し、好ましくはＣ３－Ｃ８シクロアルコキシが挙げられる。シクロアルコキシとして具体的には、たとえば、シクロプロポキシ、シクロブトキシ、シクロペンチルオキシなどが挙げられる。
　本明細書において「アリールオキシ」とは、前記定義の「アリール」が結合したオキシ基を意味し、好ましくはＣ６－Ｃ１０アリールオキシが挙げられる。アリールオキシとして具体的には、たとえば、フェノキシ、１－ナフチルオキシ、２－ナフチルオキシなどが挙げられる。
　本明細書において「アミノ」とは、狭義には－ＮＨ２を意味し、広義には－ＮＲＲ’を意味し、ここでＲおよびＲ’は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールから選択されるか、あるいはＲおよびＲ’はそれらが結合している窒素原子と一緒になって環を形成する。アミノとして好ましくは、－ＮＨ２、モノＣ１－Ｃ６アルキルアミノ、ジＣ１－Ｃ６アルキルアミノ、４～８員環状アミノなどが挙げられる。
　本明細書において「モノアルキルアミノ」とは、前記定義の「アミノ」のうち、Ｒが水素であり、かつＲ’が前記定義の「アルキル」である基を意味し、好ましくは、モノＣ１－Ｃ６アルキルアミノが挙げられる。モノアルキルアミノとして具体的には、たとえば、メチルアミノ、エチルアミノ、ｎ－プロピルアミノ、ｉ－プロピルアミノ、ｎ－ブチルアミノ、ｓ－ブチルアミノ、ｔ－ブチルアミノなどが挙げられる。
　本明細書において「ジアルキルアミノ」とは、前記定義の「アミノ」のうち、ＲおよびＲ’が独立して前記定義の「アルキル」である基を意味し、好ましくは、ジＣ１－Ｃ６アルキルアミノが挙げられる。ジアルキルアミノとして具体的には、たとえば、ジメチルアミノ、ジエチルアミノなどが挙げられる。
　本明細書において「環状アミノ」とは、前記定義の「アミノ」のうち、ＲおよびＲ’はそれらが結合している窒素原子と一緒になって環を形成する基を意味し、好ましくは、４～８員環状アミノが挙げられる。環状アミノとして具体的には、たとえば、１－アゼチジル、１－ピロリジル、１－ピペリジル、１－ピペラジル、４－モルホリニル、３－オキサゾリジル、１，１－ジオキシドチオモルホリニル－４－イル、３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イルなどが挙げられる。
　本明細書において「保護アミノ」とは、任意の保護基で保護されたアミノ基を意味する。保護アミノとして具体的には、例えば、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ、Ｔｒｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｔｅｏｃ、またはトリフルオロアセチルなどの保護基で保護されたアミノが挙げられる。
　本明細書において「アミノカルボニル」とは、前記定義の「アミノ」が結合したカルボニル基を意味し、好ましくは、－ＣＯＮＨ２、モノＣ１－Ｃ６アルキルアミノカルボニル、ジＣ１－Ｃ６アルキルアミノカルボニル、４～８員環状アミノカルボニルが挙げられる。アミノカルボニルとして具体的には、例えば、－ＣＯＮＨ２、ジメチルアミノカルボニル、１－アゼチジニルカルボニル、１－ピロリジニルカルボニル、１－ピペリジニルカルボニル、１－ピペラジニルカルボニル、４－モルホリニルカルボニル、３－オキサゾリジニルカルボニル、１，１－ジオキシドチオモルホリニル－４－イルカルボニル、３－オキサ－８－アザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イルカルボニルなどが挙げられる。
　本明細書において「アルケニルオキシカルボニル」とは、前記定義の「アルケニルオキシ」が結合したカルボニル基を意味し、好ましくは、Ｃ２－Ｃ６アルケニルオキシカルボニルが挙げられる。アルケニルオキシカルボニルとして具体的には、たとえば、ビニルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、１－プロペニルオキシカルボニル、２－プロペニルオキシカルボニル、１－ブテニルオキシカルボニル、２－ブテニルオキシカルボニル（シス、トランスを含む）、３－ブテニルオキシカルボニル、ペンテニルオキシカルボニル、ヘキセニルオキシカルボニルなどが挙げられる。
　本明細書において「アルキルスルホニル」とは、前記定義の「アルキル」が結合したスルホニル基を意味し、好ましくはＣ１－Ｃ６アルキルスルホニルが挙げられる。アルキルスルホニルとして具体的には、たとえば、メチルスルホニルなどが挙げられる。
　本明細書における「ヒドロキシアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つ、または複数の水素が水酸基で置換された基を意味し、Ｃ１－Ｃ６ヒドロキシアルキルが好ましい。ヒドロキシアルキルとして具体的には、たとえば、ヒドロキシメチル、１－ヒドロキシエチル、２－ヒドロキシエチル、２－ヒドロキシ－２－メチルプロピル、５－ヒドロキシペンチルなどが挙げられる。
　本明細書における「ハロアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素がハロゲンで置換された基を意味し、Ｃ１－Ｃ６ハロアルキルが好ましく、Ｃ１－Ｃ６フルオロアルキルがより好ましい。ハロアルキルとして具体的には、たとえば、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２－ジフルオロエチル、２，２，２－トリフルオロエチル、３，３－ジフルオロプロピル、４，４－ジフルオロブチル、５，５－ジフルオロペンチルなどが挙げられる。
　本明細書における「シアノアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素がシアノで置換された基を意味し、Ｃ１－Ｃ６シアノアルキルが好ましい。シアノアルキルとして具体的には、たとえば、シアノメチル、２－シアノエチルなどが挙げられる。
　本明細書における「アミノアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アミノ」で置換された基を意味し、Ｃ１－Ｃ６アミノアルキルが好ましい。アミノアルキルとして具体的には、たとえば、１－ピリジルメチル、２－（１－ピペリジル）エチル、３－（１－ピペリジル）プロピル、４－アミノブチルなどが挙げられる。
　本明細書における「カルボキシアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素がカルボキシで置換された基を意味し、Ｃ２－Ｃ６カルボキシアルキルが好ましい。カルボキシアルキルとして具体的には、たとえば、カルボキシメチルなどが挙げられる。
　本明細書における「アルケニルオキシカルボニルアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アルケニルオキシカルボニル」で置換された基を意味し、Ｃ２－Ｃ６アルケニルオキシカルボニルＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、Ｃ２－Ｃ６アルケニルオキシカルボニルＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。アルケニルオキシカルボニルアルキルとして具体的には、たとえば、アリルオキシカルボニルメチル、２－（アリルオキシカルボニル）エチルなどが挙げられる。
　本明細書における「アルコキシアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アルコキシ」で置換された基を意味し、Ｃ１－Ｃ６アルコキシＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、Ｃ１－Ｃ６アルコキシＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。アルコキシアルキルとして具体的には、たとえば、メトキシメチル、エトキシメチル、１－プロポキシメチル、２－プロポキシメチル、ｎ－ブトキシメチル、ｉ－ブトキシメチル、ｓ－ブトキシメチル、ｔ－ブトキシメチル、ペンチルオキシメチル、３－メチルブトキシメチル、１－メトキシエチル、２－メトキシエチル、２－エトキシエチルなどが挙げられる。
　本明細書における「シクロアルキルアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「シクロアルキル」で置換された基を意味し、Ｃ３－Ｃ８シクロアルキルＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、Ｃ３－Ｃ６シクロアルキルＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。シクロアルキルアルキルとして具体的には、たとえば、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシルメチルなどが挙げられる。
　本明細書における「シクロアルコキシアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「シクロアルコキシ」で置換された基を意味し、Ｃ３－Ｃ８シクロアルコキシＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、Ｃ３－Ｃ６シクロアルコキシＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。シクロアルコキシアルキルとして具体的には、たとえば、シクロプロポキシメチル、シクロブトキシメチルなどが挙げられる。
　本明細書における「ヘテロシクリルアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「ヘテロシクリル」で置換された基を意味し、４～７員ヘテロシクリルＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、４～７員ヘテロシクリルＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。ヘテロシクリルアルキルとして具体的には、たとえば、２－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－４－イル）エチル、２－（アゼチジン－３－イル）エチルなどが挙げられる。
　本明細書における「アルキルスルホニルアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アルキルスルホニル」で置換された基を意味し、Ｃ１－Ｃ６アルキルスルホニルＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、Ｃ１－Ｃ６アルキルスルホニルＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。アルキルスルホニルアルキルとして具体的には、たとえば、メチルスルホニルメチル、２－（メチルスルホニル）エチルなどが挙げられる。
　本明細書における「アミノカルボニルアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アミノカルボニル」で置換された基を意味し、アミノカルボニルＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、アミノカルボニルＣ１－Ｃ４アルキルがより好ましい。アミノカルボニルアルキルとして具体的には、たとえば、メチルアミノカルボニルメチル、ジメチルアミノカルボニルメチル、ｔ－ブチルアミノカルボニルメチル、１－アゼチジニルカルボニルメチル、１－ピロリジニルカルボニルメチル、１－ピペリジ二ルカルボニルメチル、４－モルホリニルカルボニルメチル、２－（メチルアミノカルボニル）エチル、２－（ジメチルアミノカルボニル）エチル、２－（１－アゼチジニルカルボニル）エチル、２－（１－ピロリジニルカルボニル）エチル、２－（４－モルホリニルカルボニル）エチル、３－（ジメチルアミノカルボニル）プロピル、４－（ジメチルアミノカルボニル）ブチルなどが挙げられる。
　本明細書における「アリールオキシアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アリールオキシ」で置換された基を意味し、Ｃ６－Ｃ１０アリールオキシＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、Ｃ６－Ｃ１０アリールオキシＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。アリールオキシアルキルとして具体的には、たとえば、フェノキシメチル、２－フェノキシエチルなどが挙げられる。
　本明細書において「アラルキル（アリールアルキル）」とは、前記定義の「アルキル」の少なくとも一つの水素原子が前記定義の「アリール」で置換された基を意味し、Ｃ７－Ｃ１４アラルキルが好ましく、Ｃ７－Ｃ１０アラルキルがより好ましい。アラルキルとして具体的には、たとえば、ベンジル、フェネチル、３－フェニルプロピルなどが挙げられる。
　本明細書において「アラルコキシ」とは、前記定義の「アラルキル」が結合したオキシ基を意味し、Ｃ７－Ｃ１４アラルコキシが好ましく、Ｃ７－Ｃ１０アラルコキシがより好ましい。アラルコキシとして具体的には、たとえば、ベンジルオキシ、フェネチルオキシ、３－フェニルプロポキシなどが挙げられる。
　本明細書における「アラルコキシアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アラルコキシ」で置換された基を意味し、Ｃ７－Ｃ１４アラルコキシＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、Ｃ７－Ｃ１４アラルコキシＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。アラルコキシアルキルとして具体的には、たとえば、ベンジルオキシメチル、１－（ベンジルオキシ）エチルなどが挙げられる。
　本明細書において「ヘテロアリールアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の少なくとも一つの水素原子が前記定義の「ヘテロアリール」で置換された基を意味し、５～１０員ヘテロアリールＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、５～１０員ヘテロアリールＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。ヘテロアリールアルキルとして具体的には、たとえば、３－チエニルメチル、４－チアゾリルメチル、２－ピリジルメチル、３－ピリジルメチル、４－ピリジルメチル、２－（２－ピリジル）エチル、２－（３－ピリジル）エチル、２－（４－ピリジル）エチル、２－（６－キノリル）エチル、２－（７－キノリル）エチル、２－（６－インドリル）エチル、２－（５－インドリル）エチル、２－（５－ベンゾフラニル）エチルなどが挙げられる。
　本明細書において「ヘテロアリールアルコキシ」とは、前記定義の「ヘテロアリールアルキル」が結合したオキシ基を意味し、５～１０員ヘテロアリールＣ１－Ｃ６アルコキシが好ましく、５～１０員ヘテロアリールＣ１－Ｃ２アルコキシがより好ましい。ヘテロアリールアルコキシとして具体的には、たとえば、３－チエニルメトキシ、３－ピリジルメトキシが挙げられる。
　本明細書における「ヘテロアリールアルコキシアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「ヘテロアリールアルコキシ」で置換された基を意味し、５～１０員ヘテロアリールＣ１－Ｃ６アルコキシＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、５～１０員ヘテロアリールＣ１－Ｃ２アルコキシＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。ヘテロアリールアルコキシアルキルとして具体的には、たとえば、３－ピリジルメトキシメチルなどが挙げられる。
　本明細書における「ヘテロシクロアルキリデンアルキル」とは、前記定義の「アルキル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「ヘテロシクロアルキリデン」で置換された基を意味し、４～７員ヘテロシクロアルキリデンＣ１－Ｃ６アルキルが好ましく、４～７員ヘテロシクロアルキリデンＣ１－Ｃ２アルキルがより好ましい。ヘテロアリールアルコキシアルキルとして具体的には、たとえば、テトラヒドロ－４Ｈ－ピラン－４－イリデンメチル、アゼチジン－３－イリデンメチルなどが挙げられる。
　本明細書における「アルコキシアルケニル」とは、前記定義の「アルケニル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アルコキシ」で置換された基を意味し、Ｃ１－Ｃ６アルコキシＣ２－Ｃ６アルケニルが好ましい。アルコキシアルケニルとして具体的には、たとえば、（Ｅ）－４－メトキシブト－２－エン－１－イルなどが挙げられる。
　本明細書における「アミノカルボニルアルケニル」とは、前記定義の「アルケニル」の１つまたは複数の水素が前記定義の「アミノカルボニル」で置換された基を意味し、アミノカルボニルＣ２－Ｃ６アルケニルが好ましい。アミノカルボニルアルケニルとして具体的には、たとえば、（Ｅ）－３－（ジメチルアミノカルボニル）－プロパ－２－エン－１－イルなどが挙げられる。
　本明細書における「ハロアルコキシ」とは、前記定義の「アルコキシ」の１つまたは複数の水素がハロゲンで置換された基を意味し、Ｃ１－Ｃ６ハロアルコキシが好ましい。ハロアルコキシとして具体的には、たとえば、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、２，２－ジフルオロエトキシ、２，２，２－トリフルオロエトキシなどが挙げられる。
　本明細書において「アルキレン」とは、前記「アルキル」からさらに任意の水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、Ｃ４－Ｃ８アルキレンが好ましい。アルキレンとして具体的には、－ＣＨ２－、－（ＣＨ２）２－、－（ＣＨ２）３－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、－Ｃ（ＣＨ３）２－、－（ＣＨ２）４－、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２－、－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－、－ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）－、－（ＣＨ２）５－、－（ＣＨ２）６－、－（ＣＨ２）７－、－（ＣＨ２）８－などが挙げられる。
　本明細書における「脂環式環」は、非芳香族炭化水素環を意味する。脂環式環は、環中に不飽和結合を有してもよく、２個以上の環を有する多環性の環でもよい。また環を構成する炭素原子は酸化されてカルボニルを形成してもよい。脂環式環として好ましくは３～８員脂環式環が挙げられ、具体的には、たとえば、シクロプロパン環、シクロブタン環、シクロペンタン環、シクロヘキサン環、シクロヘプタン環、シクロオクタン環、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン環などが挙げられる。
　本明細書における「飽和複素環」は、炭素原子に加えて１～５個のヘテロ原子を含有し、環中に二重結合および／または三重結合を含まない、非芳香族の複素環を意味する。飽和複素環は単環でもよく、他の環、例えば、ベンゼン環などの芳香環と縮合環を形成してもよい。飽和複素環として好ましくは４～７員飽和複素環が挙げられ、具体的には、たとえば、アゼチジン環、オキセタン環、テトラヒドロフラン環、テトラヒドロピラン環、モルホリン環、チオモルホリン環、ピロリジン環、４－オキソピロリジン環、ピペリジン環、４－オキソピペリジン環、ピペラジン環、ピラゾリジン環、イミダゾリジン環、オキサゾリジジン環、イソオキサゾリジン環、チアゾリジン環、イソチアゾリジン環、チアジアゾリジン環、サゾリドン環、ジオキソラン環、ジオキサン環、チエタン環、オクタヒドロインドール環、インドリン環などが挙げられる。
　本明細書における「ペプチド」は、天然アミノ酸及び／又は非天然アミノ酸がアミド結合あるいはエステル結合して形成されるペプチドであれば特に限定されないが、好ましくは５～３０残基、より好ましくは７～１５残基、さらに好ましくは９～１３残基のペプチドである。ペプチドは、直鎖ペプチドでも環状ペプチドでもよい。
　本明細書において、「ペプチド鎖」とは、１、２、３、４、またはそれ以上の天然アミノ酸および／または非天然アミノ酸がアミド結合および／またはエステル結合により連結されているペプチド鎖をいう。ペプチド鎖として好ましくは、１～４のアミノ酸残基を含むペプチド鎖であり、より好ましくは１～４のアミノ酸残基からなるペプチド鎖である。
　本明細書において「置換されていてもよい」とは、ある基が任意の置換基によって置換されていてもよいことを意味する。
　本明細書において「保護されていてもよい」とは、ある基が任意の保護基によって保護されていてもよいことを意味する。
　本明細書において「１つまたは複数の」とは、１つまたは２つ以上の数を意味する。「１つまたは複数の」が、ある基の置換基に関連する文脈で用いられる場合、この用語は、１つからその基が許容する置換基の最大数までの数を意味する。「１つまたは複数の」として具体的には、たとえば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、および／またはそれより大きい数が挙げられる。
　本発明の化合物は、その塩、好ましくはその化学的もしくは薬学的に許容される塩であることができる。また本発明の化合物またはその塩は、それらの溶媒和物、好ましくはその化学的もしくは薬学的に許容される溶媒和物であることができる。本発明の化合物の塩には、例えば、塩酸塩；臭化水素酸塩；ヨウ化水素酸塩；リン酸塩；ホスホン酸塩；硫酸塩；メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩などのスルホン酸塩；酢酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、サリチル酸塩などのカルボン酸塩；または、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；マグネシウム塩、カルシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩、アルキルアンモニウム塩、ジアルキルアンモニウム塩、トリアルキルアンモニウム塩、テトラアルキルアンモニウム塩などのアンモニウム塩などが含まれる。これらの塩は、たとえば、当該化合物と、医薬品の製造に使用可能である酸または塩基とを接触させることにより製造される。本発明において、化合物の溶媒和物とは、化合物が溶媒とともに、一つの分子集団を形成したものをさし、医薬の投与に付随して摂取が許容される溶媒により形成された溶媒和物であれば特に限定されない。溶媒が水であれば水和物と言う。本発明の化合物の溶媒和物としては、水和物が好ましく、そのような水和物として具体的には１～１０水和物、好ましくは１～５水和物、さらに好ましくは１～３水和物が挙げられる。本発明の化合物の溶媒和物には、水、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノールなど）、ジメチルホルムアミドなどの単独の溶媒との溶媒和物だけでなく、複数の溶媒との溶媒和物も含まれる。
　本明細書における「アミノ酸」には、天然アミノ酸、及び非天然アミノ酸が含まれる。本明細書における「天然アミノ酸」とは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｐｒｏを指す。非天然アミノ酸は特に限定されないが、β－アミノ酸、γ－アミノ酸、Ｄ型アミノ酸、Ｎ置換アミノ酸、α，α－二置換アミノ酸、側鎖が天然と異なるアミノ酸、ヒドロキシカルボン酸などが例示される。本明細書におけるアミノ酸としては、任意の立体配置が許容される。アミノ酸の側鎖の選択は特に制限を設けないが、水素原子の他にも例えばアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基、シクロアルキル基から自由に選択され、これらの基の中の隣接しない１又は２個のメチレン基は酸素原子、カルボニル基（－ＣＯ－）、又はスルホニル基（－ＳＯ２－）で置換されていてもよい。それぞれには置換基が付与されていてもよく、それら置換基も制限されず、例えば、ハロゲン原子、Ｏ原子、Ｓ原子、Ｎ原子、Ｂ原子、Ｓｉ原子、又はＰ原子を含む任意の置換基の中から独立して１つ又は２つ以上自由に選択されてよい。すなわち、置換されていてもよいアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基、シクロアルキル基などが例示される。非限定の一態様において、本明細書におけるアミノ酸は、同一分子内にカルボキシ基とアミノ基を有する化合物であってよい（この場合であっても、プロリン、ヒドロキシプロリンのようなイミノ酸もアミノ酸に含まれる）。
　アミノ酸の主鎖アミノ基は、非置換（ＮＨ２基）でもよく、置換されていてもよい（即ち、－ＮＨＲ基：Ｒは置換基を有していてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、シクロアルキルを示し、これらの基の中の隣接しない１又は２個のメチレン基は酸素原子、カルボニル基（－ＣＯ－）、又はスルホニル基（－ＳＯ２－）で置換されていてもよく、またプロリンのようにＮ原子に結合した炭素鎖とα位の炭素原子とが環を形成していてもよい。）。前記Ｒの置換基は、上述のアミノ酸側鎖における置換基と同様に選択される。主鎖アミノ基が置換されている場合の前記Ｒは、本明細書における「アミノ酸の側鎖」に含まれる。このような主鎖アミノ基が置換されているアミノ酸を、本明細書において「Ｎ置換アミノ酸」と称する。本明細書における「Ｎ置換アミノ酸」としては、好ましくはＮ－アルキルアミノ酸、Ｎ－Ｃ１－Ｃ６アルキルアミノ酸、Ｎ－Ｃ１－Ｃ４アルキルアミノ酸、Ｎ－メチルアミノ酸が例示されるが、これらに限定されるものではない。
　本明細書におけるペプチド化合物を構成する「アミノ酸」にはそれぞれに対応する全ての同位体を含む。「アミノ酸」の同位体は、少なくとも１つの原子が、原子番号（陽子数）が同じで，質量数（陽子と中性子の数の和）が異なる原子で天然とは異なる存在比で置換されたものである。本発明のペプチド化合物を構成する「アミノ酸」に含まれる同位体の例としては、水素原子、炭素原子、窒素原子、酸素原子、リン原子、硫黄原子、フッ素原子、塩素原子などがあり、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ等が含まれる。
　本明細書におけるハロゲン原子を含む置換基としては、ハロゲンを置換基に有するアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、アラルキル基などが例示され、より具体的には、フルオロアルキル、ジフルオロアルキル、トリフルオロアルキルなどが例示される。
　Ｏ原子を含む置換基としては、ヒドロキシ（－ＯＨ）、オキシ（－ＯＲ）、カルボニル（－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）、カルボキシ（－ＣＯ２Ｈ）、オキシカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＯＲ）、カルボニルオキシ（－Ｏ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）、チオカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＳＲ）、カルボニルチオ（－Ｓ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）、アミノカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＮＨＲ）、カルボニルアミノ（－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）、オキシカルボニルアミノ（－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－ＯＲ）、スルホニルアミノ（－ＮＨ－ＳＯ２－Ｒ）、アミノスルホニル（－ＳＯ２－ＮＨＲ）、スルファモイルアミノ（－ＮＨ－ＳＯ２－ＮＨＲ）、チオカルボキシル（－Ｃ（＝Ｏ）－ＳＨ）、カルボキシルカルボニル（－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＯ２Ｈ）などの基が挙げられる。
　オキシ（－ＯＲ）の例としては、アルコキシ、シクロアルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アラルキルオキシなどが挙げられる。アルコキシとしては、Ｃ１－Ｃ４アルコキシ、Ｃ１－Ｃ２アルコキシが好ましく、なかでもメトキシ、又はエトキシが好ましい。
　カルボニル（－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）の例としては、ホルミル（－Ｃ＝Ｏ－Ｈ）、アルキルカルボニル、シクロアルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルキニルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、アラルキルカルボニルなどが挙げられる。
　オキシカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＯＲ）の例としては、アルキルオキシカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、アルケニルオキシカルボニル、アルキニルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニルなどが挙げられる。
　カルボニルオキシ（－Ｏ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）の例としては、アルキルカルボニルオキシ、シクロアルキルカルボニルオキシ、アルケニルカルボニルオキシ、アルキニルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、ヘテロアリールカルボニルオキシ、アラルキルカルボニルオキシなどが挙げられる。
　チオカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＳＲ）の例としては、アルキルチオカルボニル、シクロアルキルチオカルボニル、アルケニルチオカルボニル、アルキニルチオカルボニル、アリールチオカルボニル、ヘテロアリールチオカルボニル、アラルキルチオカルボニルなどが挙げられる。
　カルボニルチオ（－Ｓ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）の例としては、アルキルカルボニルチオ、シクロアルキルカルボニルチオ、アルケニルカルボニルチオ、アルキニルカルボニルチオ、アリールカルボニルチオ、ヘテロアリールカルボニルチオ、アラルキルカルボニルチオなどが挙げられる。
　アミノカルボニル（－Ｃ＝Ｏ－ＮＨＲ）の例としては、アルキルアミノカルボニル（例えば、Ｃ１－Ｃ６又はＣ１－Ｃ４アルキルアミノカルボニル、なかでもエチルアミノカルボニル、メチルアミノカルボニルなどが例示される。）、シクロアルキルアミノカルボニル、アルケニルアミノカルボニル、アルキニルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ヘテロアリールアミノカルボニル、アラルキルアミノカルボニルなどが挙げられる。これらに加えて、－Ｃ＝Ｏ－ＮＨＲ中のＮ原子と結合したＨ原子が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルでさらに置換された基が挙げられる。
　カルボニルアミノ（－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ）の例としては、アルキルカルボニルアミノ、シクロアルキルカルボニルアミノ、アルケニルカルボニルアミノ、アルキニルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、ヘテロアリールカルボニルアミノ、アラルキルカルボニルアミノなどが挙げられる。これらに加えて－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－Ｒ中のＮ原子と結合したＨ原子が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルでさらに置換された基が挙げられる。
　オキシカルボニルアミノ（－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－ＯＲ）の例としては、アルコキシカルボニルアミノ、シクロアルコキシカルボニルアミノ、アルケニルオキシカルボニルアミノ、アルキニルオキシカルボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシカルボニルアミノ、アラルキルオキシカルボニルアミノなどが挙げられる。これらに加えて、－ＮＨ－Ｃ＝Ｏ－ＯＲ中のＮ原子と結合したＨ原子がアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルでさらに置換された基が挙げられる。
　スルホニルアミノ（－ＮＨ－ＳＯ２－Ｒ）の例としては、アルキルスルホニルアミノ、シクロアルキルスルホニルアミノ、アルケニルスルホニルアミノ、アルキニルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、ヘテロアリールスルホニルアミノ、アラルキルスルホニルアミノなどが挙げられる。これらに加えて、－ＮＨ－ＳＯ２－Ｒ中のＮ原子と結合したＨ原子がアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルでさらに置換された基が挙げられる。
　アミノスルホニル（－ＳＯ２－ＮＨＲ）の例としては、アルキルアミノスルホニル、シクロアルキルアミノスルホニル、アルケニルアミノスルホニル、アルキニルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、ヘテロアリールアミノスルホニル、アラルキルアミノスルホニルなどが挙げられる。これらに加えて、－ＳＯ２－ＮＨＲ中のＮ原子と結合したＨ原子がアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルでさらに置換された基が挙げられる。
　スルファモイルアミノ（－ＮＨ－ＳＯ２－ＮＨＲ）の例としては、アルキルスルファモイルアミノ、シクロアルキルスルファモイルアミノ、アルケニルスルファモイルアミノ、アルキニルスルファモイルアミノ、アリールスルファモイルアミノ、ヘテロアリールスルファモイルアミノ、アラルキルスルファモイルアミノなどが挙げられる。さらに、－ＮＨ－ＳＯ２－ＮＨＲ中のＮ原子と結合した２つのＨ原子はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、およびアラルキルからなる群より独立して選択される置換基で置換されていてもよく、またこれらの２つの置換基は環を形成しても良い。
　Ｓ原子を含む置換基としては、チオール（－ＳＨ）、チオ（－Ｓ－Ｒ）、スルフィニル（－Ｓ＝Ｏ－Ｒ）、スルホニル（－ＳＯ２－Ｒ）、スルホ（－ＳＯ３Ｈ）などの基が挙げられる。
　チオ（－Ｓ－Ｒ）の例としては、アルキルチオ、シクロアルキルチオ、アルケニルチオ、アルキニルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオなどの中から選択される。
　スルホニル（－ＳＯ２－Ｒ）の例としては、アルキルスルホニル、シクロアルキルスルホニル、アルケニルスルホニル、アルキニルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アラルキルスルホニルなどが挙げられる。
　Ｎ原子を含む置換基として、アジド（－Ｎ３、「アジド基」ともいう）、シアノ（－ＣＮ）、１級アミノ（－ＮＨ２）、２級アミノ（－ＮＨ－Ｒ；モノ置換アミノともいう。）、３級アミノ（－ＮＲ（Ｒ'）；ジ置換アミノともいう。）、アミジノ（－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２）、置換アミジノ（－Ｃ（＝ＮＲ）－ＮＲ'Ｒ"）、グアニジノ（－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２）、置換グアニジノ（－ＮＲ－Ｃ（＝ＮＲ'''）－ＮＲ'Ｒ"）、アミノカルボニルアミノ（－ＮＲ－ＣＯ－ＮＲ'Ｒ"）、ピリジル、ピペリジノ、モルホリノ、アゼチジニルなどの基が挙げられる。
　２級アミノ（－ＮＨ－Ｒ；モノ置換アミノ）の例としては、アルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アラルキルアミノなどが挙げられる。
　３級アミノ（－ＮＲ（Ｒ'）；ジ置換アミノ）の例としては、例えばアルキル（アラルキル）アミノなど、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルなどの中からそれぞれ独立して選択される、任意の２つの置換基を有するアミノ基が挙げられ、これらの任意の２つの置換基は環を形成しても良い。具体的には、ジアルキルアミノ、なかでもＣ１－Ｃ６ジアルキルアミノ、Ｃ１－Ｃ４ジアルキルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノなどが例示される。本明細書において「Ｃｐ－Ｃｑジアルキルアミノ基」とは、アミノ基にＣｐ－Ｃｑアルキル基が２個置換された基をいい、両Ｃｐ－Ｃｑアルキル基は同一であっても異なっていてもよい。
　置換アミジノ（－Ｃ（＝ＮＲ）－ＮＲ'Ｒ"）の例としては、Ｎ原子上の３つの置換基Ｒ、Ｒ'、およびＲ"が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルの中からそれぞれ独立して選択された基、例えばアルキル（アラルキル）（アリール）アミジノなどが挙げられる。
　置換グアニジノ（－ＮＲ－Ｃ（＝ＮＲ'''）－ＮＲ'Ｒ"）の例としては、Ｒ，Ｒ'、Ｒ"、およびＲ'''が、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルの中からそれぞれ独立して選択された基、あるいはこれらが環を形成した基などが挙げられる。
　アミノカルボニルアミノ（－ＮＲ－ＣＯ－ＮＲ'Ｒ"）の例としては、Ｒ、Ｒ'、およびＲ"が、水素原子、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルの中からそれぞれ独立して選択された基、あるいはこれらは環を形成した基などが挙げられる。
　本明細書においてペプチド化合物を構成する「アミノ酸残基」を単に「アミノ酸」ということがある。
　本明細書において、「および/または」との用語の意義は、「および」と「または」が適宜組み合わされたあらゆる組合せを含む。具体的には、例えば、「A、B、および/またはC」には、以下の７通りのバリエーションが含まれる；
(i) A、(ii) B、(iii) C、(iv) AおよびB、(v) AおよびC、(vi) BおよびC、(vii) A、B、およびC。
　本明細書で使用される「実質的に／実質的になる」という表現は、本明細書に挙げられている成分が主成分(例えば、環状ペプチド化合物、環状ペプチド化合物およびペプチド化合物の結晶形が含まれるが、これらに限定されない)であることを意味し、本発明の実施形態の効果にマイナスの影響を及ぼさない場合、そのようなマイナスの影響を及ぼさない程度の量である場合、またはそのようなマイナスの影響を及ぼさない程度の実施形態では、他の成分が含まれうることを意味する。例えば、他の成分として、本明細書に記載されていない成分（目的とする結晶形以外の結晶、反応副生成物、または未反応物質などに例示される不純物が例示されるが、これらに限定されない）が本発明の実施形態にマイナスの影響を及ぼさない場合、そのようなマイナスの影響を及ぼさない程度の量である場合、またはそのようなマイナスの影響を及ぼさない程度の実施形態では、それらの成分が含まれることがある。
　本明細書で使用される「実質的に含まれない/含まない」という表現は、本明細書に挙げられている成分が主成分 (例えば、環状ペプチド化合物、環状ペプチド化合物およびペプチド化合物の結晶形が含まれるが、これらに限定されない)であり、他の成分が含まれていないこと、またはそのような成分が本発明の実施形態の効果にマイナスの影響を及ぼさない場合、そのようなマイナスの影響を及ぼさない程度の量である場合、またはそのようなマイナスの影響を及ぼさない程度の実施形態では、他の成分が含まれうることを意味する。例えば、本明細書に記載されるそのような成分は、発明の実施形態の効果にマイナスの影響を及ぼさない場合、そのようなマイナスの影響を及ぼさない程度の量である場合、またはそのようなマイナスの影響を及ぼさない程度の実施形態では、それらの成分が含まれることがある。
　本発明の効果との関連で使用される「マイナスの影響」という用語は、本発明の効果を打ち消す影響を意味する。例えば、自然に示されるべき作用を100%とした場合、本発明の作用を30%、20%、10%、または5%以下に低下させるものを、「マイナスの影響」があると言うこともできる。
環状ペプチド化合物を製造する方法
　ある態様において、本発明は、液相法によって環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物を製造する方法に関し、該方法は、１種または複数種の水と混和しない溶媒（例えば、水に対する溶解度が低い溶媒、水／オクタノール係数（log Kow）の大きい溶媒、または水／オクタノール係数予測値の大きい溶媒）、１種または複数種の水溶性アルキルニトリル類、および１種または複数種の水溶性エーテル類からなる群より選択される１つまたは複数を含む溶媒（溶媒A）中、ペプチド化合物のN末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基とを連結する工程を含む。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、3以上10以下の炭素原子を有するエステルとして特徴付けることができ、具体的には、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、酢酸n-プロピル、酢酸t-ブチル、プロピオン酸メチルまたはプロピオン酸エチルなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、4以上および10以下の炭素原子を有する環状エーテルとして特徴付けることができ、具体的には、2-MeTHF、THF、4-メチルテトラヒドロピランまたは1,4-ジオキサンなどが例示される。ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、4以上および10以下の炭素原子を有する非環状エーテルとして特徴付けることができ、具体的には、MTBE、ジイソプロピルエーテルまたはジエチルエーテルなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、6以上および10以下の炭素原子を有する環状および非環状アルキル基の両方を有するエーテルとして特徴付けることができ、具体的には、CPMEなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、3以上および10以下の炭素原子を有する炭酸エステルとして特徴付けることができ、具体的には、炭酸ジメチル、炭酸ジエチルまたは炭酸ジイソプロピルなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、5以上および10以下の炭素原子を有する炭化水素として特徴付けることができ、具体的には、ペンタン、ヘキサンまたはヘプタンなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、6以上および10以下の炭素原子を有する芳香族炭化水素環として特徴付けることができ、具体的には、トルエン、キシレンまたはベンゼンなどが例示される。
　ある実施態様において、水と混和しない溶媒は、周囲圧力(約1気圧)で低い沸点を有することを特徴付けることができる。ある実施態様において、常圧(1気圧付近)での低沸点とは、35℃以上140℃未満として例示されている。
　ある実施態様において、DMF、DMA、NMP又はジメチルスルホキシドのような常圧(約1気圧)で140℃以上の沸点を有する溶媒は、本発明では除外することができる。
　特定の実施形態において、ペプチド化合物または環状ペプチド化合物と反応する可能性を有し得る溶媒は、本発明において水不混和性溶剤から排除され得る。
ある実施態様において、水と混和しない溶媒としての不適当な溶媒は、アミン（例えば、n-プロピルアミンまたはジイソプロピルアミン）、またはアルコール（例えば、メタノール、エタノール、n-プロパノール、フェノール）として特徴付けることができる。
　ある実施態様において、本明細書中で用いられる水と混和しない溶媒は、特に限定を意図しないが、低い水溶性（例えば、150g/L以下の水に対する溶解度を有する）を有する溶媒を含む。水に対する溶解度は、当技術分野で知られているか、本明細書に記載されているいずれの方法によっても決定され得る。溶解性を決定するための例示的な方法には、特に限定を意図するものではないが、ガスクロマトグラフィーが含まれ、溶媒を室温（例えば、15℃～40℃、好ましくは20℃～30℃）で等量の水と混合することによって調製された、水中の前記溶媒の濃度を測定することで決定することもできる。
　本明細書で使用するように、大きな水/オクタノール係数（log Kow）値を有する溶媒は、好ましくは0(ゼロ)より大きく5未満の係数を有する。水/オクタノール係数(log Kow)は、当該技術分野で知られているか、本明細書に記載されている任意の方法によって決定され得る。大きな水/オクタノール係数（log Kow）を有する溶媒はまた、大きな水/オクタノール係数の予測値を有する溶媒を含み、特に限定しないが、例えばデータベース検索または文献検索により、別々の明示的測定において公知の手段によって決定され得る。
　ある態様において、水と混和しない溶媒はTHF、2-MeTHF、MTHP、炭酸ジメチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピルからなる群から選択される溶媒であり、好ましくはTHF、または2-MeTHF、さらに好ましくは2-MeTHFである。溶媒の水との混和性は、Merck Index　14th Edition に記載されていて、たとえばDMSOは水に溶解することが、アセトニトリルは水と混和することが記載されている。一方でヘプタンは水に不溶と記載されている。2-MeTHFは、水と混和しない（Org. Process Res. Dev. 2007, 11, 1, 156-159.）。溶媒の水との混和性の決定について、当業者は以下に例示される周知の方法で測定可能である。例えば、室温付近（例えば１５℃～４０度、好ましくは２０℃～３０℃）で、同容量の溶媒と水を混和した時に、溶媒と水とが二層に分離することで、示されうる。溶媒の水との混和性試験は、室温付近（例えば１５℃～４０度、好ましくは２０℃～３０℃）で、同容量の溶媒と水を分液ロート、反応フラスコ、または反応釜などの容器中で混和し、溶媒と水が二層に分離するかどうかを例えば目視で確認すること、容器中の上層部と下層部の液体を採取して確認することにより行うことができる。このような方法で溶媒と水が二層に分離したことが確認できた場合、該溶媒を水と混和しない溶媒と指す場合もある。
　溶媒の水との混和性は、溶媒の水に対する溶解度に依存し得る。水と混和しない溶媒には、水に対する溶解度が低い溶媒があげられる。水に対する溶解度は、温度によって変化し得るが、本明細書における溶解度は、室温付近、たとえば20℃～30℃付近における溶解度を意味する。溶媒の水に対する溶解度は、上記に例示された方法に特定されない方法で実際に測定することも可能であるが、商業的供給業者のカタログやMerck Index 14th Edition に記載されていている。Merck Index 14th Editionには、水1Lに対し、炭酸ジメチルは139g、酢酸イソプロピルは43g、酢酸エチルは100g溶解すると記載されている。ヘプタンは水に不溶と記載されている。水1Lに対し、2-MeTHFは140g（Org. Process Res. Dev. 2007, 11, 1, 156-159.）、炭酸ジメチルは、139g（J. Mol. Catal. A Chem. 2010, 317, 1-18.）溶解すると記載されている。また、溶媒の水に対する溶解度予測は、SciFinder（登録商標）などのデータベース検索ツールによって調べることもできる。水1Lに対し、アニソールは3.2g、酢酸イソプロピルは20g、酢酸エチルは39g、ヘプタンは4.7mgが溶解すると記載されている。ChemIDplus Advanced (NIH)（［2022年5月1日検索］、インターネット〈URL:https://chem.nlm.nih.gov/chemidplus/〉）でも、水に対する溶解度を調べることができる。水と混和するアセトニトリル、THF、およびDMSOの水に対する溶解度は1000g/Lと記載されている。すなわち、水と混和しない溶媒の水に対する溶解度は、999g/L以下であり、500g/L以下、250g/L以下、好ましくは、200g/L以下、より好ましくは、150g/L以下である。
　2-MeTHFの室温（例えば、25℃）での水に対する溶解度は150g/Lであることが注目される。したがって、室温（例えば25 ℃）付近において、溶媒の水に対する溶解度が150g/L以下であるという性質は、該溶媒が2-MeTHFと同等かそれより優れた性質を有しているということもできる。本明細書に記載されるように、本発明の溶媒を用いる方法は、(1)反応溶媒として用いた場合、水と混和しないので、反応混合物の水溶液を用いた後処理における抽出溶媒として利用することができること、(2)抽出溶媒として用いた場合、ペプチド化合物を含むする抽出溶液を、後続の工程／反応のための出発材料(すなわち、後続の工程の出発化合物を含有する溶液)として使用することができること、などから水と混和しない溶媒のペプチド化合物合成における使用に有用となりうる。ある実施態様において、本法により、出発反応の溶媒から、中間体を単離することなく、全反応を実施し完了することを可能にする。
　水に対する溶解度が低い溶媒には、水に対する溶解度が999 g/L以下の溶媒が含まれ、特に限定しないが、例えば、2-MeTHF、炭酸ジメチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ヘプタン、アニソール、MTBE、CPME、4-メチルテトラヒドロピラン、トルエンなどは、水に対する溶解度が999 g/L以下の溶媒に該当する。環化反応における目的物への変換率を高め、副生成物の生成を抑制する観点から、2-MeTHF、炭酸ジメチル、もしくはアニソール、またはこれらの１種もしくは複数種を含む溶媒が好ましく用いられる。
　溶媒の水との混和性は、本明細書で述べるように、溶媒固有の水/オクタノール係数（log Kow）、または水/オクタノール係数予測値に依存し得る。水/オクタノール係数は化合物の脂溶性を表し、脂溶性の高いものの数値が大きいことが知られている。log Kowは、本明細書に記載の通り、当業者に周知の方法で実際に測定することも可能である。別の態様として、log Kow値の予測値は、例えば文献記載の値、SciFinder（登録商標）などのデータベース検索ツールを用いた検索、ChemIDplus Advanced (NIH)（［2022年5月1日検索］、インターネット〈URL: https://chem.nlm.nih.gov/chemidplus/〉）での検索によっても知ることができる。水と混和しない溶媒のlog Kow値、またはlog Kow値の予測値の例示はそれぞれ、2-MeTHFが1.35、炭酸ジメチルが0.23、アニソールが2.11、酢酸イソプロピルが1.02、酢酸エチルが0.73、ヘプタンが4.66であり、正の値をとる。一方で、水と混和する溶媒のlog Kow値、またはlog Kow値の予測値はそれぞれ、アセトニトリルが-0.34、ＤＭＳＯが‐0.31であり、負の値をとる。すなわち、水と混和しない溶媒のlog Kow値、またはlog Ko値wの予測値は、正の値をとるものが好ましく、好ましくは０以上５以下が例示される。
　水/オクタノール係数（log Kow値）の大きい溶媒、または水/オクタノール係数予測値の大きい溶媒として、2-MeTHF、炭酸ジメチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ヘプタン、アニソール、MTBE、CPME、4-メチルテトラヒドロピランなどが挙げられる。
　水と混和しない溶媒には、水に対する溶解度が低い溶媒、あるいは水/オクタノール係数（log Kow）が正の数をとるものが挙げられる。
　水溶性アルキルニトリル類としては、アセトニトリル、プロピオニトリルなどが挙げられる。
　水溶性エーテル類としては、THF、1,4-ジオキサン、ジメトキシエタンなどが挙げられる。
　ある態様において、溶媒Aには、水と混和しない溶媒、水溶性アルキルニトリル類、および水溶性エーテル類からなる群に属する溶媒より選択される１つまたは複数が含まれ得る。ある態様において、溶媒Aは、2-MeTHF、THF、MTHP、炭酸ジメチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、アニソール、アセトニトリル、ジクロロメタン、およびトルエンからなる群から選択される溶媒を含みうる。例えば、溶媒Aは、１以上の水と混和しない溶媒、１以上の水溶性アルキルニトリル類、および１以上の水溶性エーテル類からなる群から選択される１種類の溶媒のみからなっていてもよく、これらから選択される２種類以上の溶媒が含まれていてもよい。ある態様において、溶媒Aに水と混和しない溶媒が含まれている場合、溶媒Aに含まれている該溶媒は、水溶性アルキルニトリル類、および水溶性エーテル類から選択される１種類以上でもよい。ある態様において、溶媒Aに水溶性アルキルニトリル類が含まれている場合、溶媒Aに含まれている該溶媒は、水と混和しない溶媒、および水溶性エーテル類から選択される１種類以上でもよい。ある態様において、溶媒Aに水溶性エーテル類が含まれている場合、溶媒Aに含まれている該溶媒は、水溶性アルキルニトリル類、および水と混和しない溶媒から選択される１種類以上でもよい。
　ある態様において、溶媒Aには、水と混和しない溶媒、水溶性アルキルニトリル類、および水溶性エーテル類に加えて、これらのいずれにも該当しない溶媒、例えば、DMFやアセトンが含まれていてもよい。
　ある実施態様において、溶媒Aは、本明細書に記載されたペプチド化合物または環状ペプチド化合物と反応する可能性を有し得る溶媒、例えばアルコール（MeOH、EtOH、n-PrOH、iPrOH、nBuOH、iBuOH、tBuOH）、第一級アミン（nPrNH2、iPrNH2、nBuNH2、tBuNH2）、第二級アミン（Et2NH、nPr2NH、iPr2NH、nBu2NH、tBu2NH）、およびカルボン酸（AcOH、EtCO2H、nPrCO2H）などのプロトン性溶媒から選択される溶媒を含まない場合がある。
　溶媒Aに水と混和しない溶媒、水溶性アルキルニトリル類、および水溶性エーテル類のいずれにも該当しない溶媒が含まれる場合、該溶媒は、溶媒A全体の４０重量％以下であることが好ましく、３０重量％以下、２５重量％以下、２０重量％以下、１５重量％以下、１０重量％以下、または５重量％以下であることがより好ましい。
　ある態様において、本発明のペプチド化合物は、直鎖ペプチド化合物であることができる。別の態様において、本発明のペプチド化合物は、環状ペプチド化合物であることができる。ある態様において、直鎖または環状ペプチド化合物は、その部分構造として環状構造を含んでもよい。環状構造として具体的には、あるアミノ酸残基の側鎖と別のアミノ酸残基の側鎖とが連結したものや、あるアミノ酸残基のＮ置換基と別のアミノ酸残基の側鎖とが連結したものや、あるアミノ酸残基のＮ置換基と別のアミノ酸残基のＮ置換基とが連結したものなどが挙げられる。環状構造のための連結に関与する２つのアミノ酸残基は、隣接していてもよく、その間に任意の数のアミノ酸残基、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、または１９個のアミノ酸残基が存在していてもよい。環状構造によって形成される環の大きさは、特に限定を意図しないが、４員環、５員環、６員環、７員環、８員環、９員環、１０員環、１１員環、１２員環、１３員環、１４員環、１５員環、１６員環、１７員環、１８員環、１９員環、２０員環、２１員環、２２員環、２３員環、２４員環、２５員環、２６員環、２７員環、２８員環、２９員環、３０員環、３１員環、３２員環、３３員環、３４員環、または３５員環などが例示される。ペプチド化合物に環状構造が存在する場合、環状構造の数は限定されないが、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの環状構造が存在することが好ましい。
　本発明において、ペプチド化合物のN末端側のアミノ酸残基とC末端側のアミノ酸残基は、アミド結合、または-(CH2)nS(CH2)m-、-(CH2)nS(O)(CH2)m-、もしくは-(CH2)nS(O)2(CH2)m-より選択される結合よって連結される。ここでnおよびmはそれぞれ独立して１または２である。
　ペプチド化合物のN末端側のアミノ酸残基とC末端側のアミノ酸残基とをアミド結合により連結する場合、N末端のアミノ酸残基のアミノ基と、C末端のアミノ酸残基のカルボキシル基とを縮合することにより、環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物が製造され得る。アミド結合はN末端アミノ酸残基の主鎖のアミノ基とC末端アミノ酸残基の主鎖のカルボキシル基との間で形成されたものあってもよく、N末端アミノ酸残基の主鎖のアミノ基とC末端アミノ酸残基の側鎖のカルボキシル基との間で形成されたものであってもよく、N末端アミノ酸残基の側鎖のアミノ基とC末端アミノ酸残基の主鎖のカルボキシル基との間で形成されたものであってもよく、N末端アミノ酸残基の側鎖のアミノ基とC末端アミノ酸残基の側鎖のカルボキシル基との間で形成されたものであってもよい。縮合に際し、縮合試薬を用いてカルボキシル基を系中で活性化してもよく、あらかじめカルボキシル基を活性エステルに変換したものを利用してもよい。本明細書において、「アミノ基とカルボキシル基の縮合」とは、アミノ基とカルボキシル基をアミド結合で連結する場合に用いられる。
　ある態様において、縮合反応は、縮合試薬の存在下または不存在下、溶媒A中、－２０℃～溶媒の沸点付近の温度、好ましくは－２０℃～１００℃、好ましくは－５℃～６０℃の温度で、反応混合物を１０分～４８時間攪拌することで行うことができる。縮合反応に縮合試薬を用いる場合、原料および任意で塩基を含む溶媒に縮合試薬や縮合試薬を含む溶液を添加してもよく、縮合試薬を含む溶液に原料および任意で塩基を含む溶液を添加してもよい。本明細書においては、縮合試薬を含む溶液に原料および任意で塩基を含む溶液を滴下する操作を「逆滴下」という場合がある。縮合試薬を含む溶液を長時間、例えば、数時間～数日間、好ましくは１～２４時間、より好ましくは１～１０時間かけて逆滴下することで、ダイマーやトリマーの副生を抑制することができる。縮合反応に縮合試薬を用いない場合、あらかじめカルボキシル基を活性エステルに変換したものを利用してもよい。
　アミノ基とカルボキシル基を縮合するときの縮合剤及びその使用量としては、アミド結合を形成できるものであれば特に限定されず、ペプチド合成で一般に使用される縮合剤及び使用量が好ましい（例えば、Peptide Coupling Reagents, More than a Letter Soup (Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602.)）。
　このような縮合剤として具体的には例えば、カルボジイミド骨格を有する縮合剤が挙げられる。例えば、カルボジイミド骨格を有する縮合剤は、活性エステルを形成できるヒドロキシ化合物と組合せて、縮合反応に用いることができる。カルボジイミド骨格を有する縮合剤としては、例えば、N,N’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）、N,N’-ジイソプロピルカルボジイミド（DIC）、1-エチル-3-（3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（EDCI HCl）などが挙げられる（例えば、WATANABE Chemicalのカタログ、Amino acids and chiral building blocks to new medicine参照）。
　活性エステルを形成できるヒドロキシ化合物としては、例えば、1-ヒドロキシ-1H-ベンゾトリアゾール（HOBt）、1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール（HOAt）、2-シアノ-2-（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（oxyma）、3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-4-オキソ-1,2,3-ベンゾトリアジン（HOOBtまたはHODhbt）、N-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシミド（HONB）、2,3,4,5,6-ペンタフルオロフェノール（HOPfp）、N-ヒドロキシスクシンイミド（HOSu）、6-クロロ-1-ヒドロキシ-1H-ベンゾトリアゾール（Cl-HOBt）が挙げられる（例えば、WATANABE Chemicalのカタログ、Amino acids and chiral building blocks to new medicine参照）。また、これらの骨格を有する塩、例えばoxymaのカリウム塩であるK-oxymaなども用いることができる。これらの中では特にHOBt、HOAt、oxyma、HOOBtが好ましい。中でも、DICとHOAtとを組み合わせて用いること、あるいはDICとoxymaとを組み合わせて用いることが好ましい。その他に、ホスホニウム系縮合剤・ウロニウム系縮合剤としてO-（1H-ベンゾトリアゾール-1-イル）-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（HBTU）、O-（7-アザ-1H-ベンゾトリアゾール-1-イル）-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（HATU）、N-［1-（シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノ（モルホリノ）］ウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（COMU）、O-［（エトキシカルボニル）シアノメチレンアミノ］-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（HOTU）、O-（1H-ベンゾトリアゾール-1-イル）-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（TBTU）、O-（7-アザベンゾトリアゾール-1-イル）-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（TATU）、［エチルシアノ（ヒドロキシイミノ）アセタト-O2］トリ-1-ピロリジニルホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（PyOxim）、2-ブロモ-1-エチルピリジニウムテトラフルオロホウ酸塩（BEP）、1H-ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ-トリ（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（PyBOP）、1H-ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ-トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（BOP）、ブロモトリ（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（PyBroP）、クロロトリ（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（PyCloP）、（7-アザベンゾトリアゾール-1-イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸（PyAOP）、ブロモトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（Brop）、3-（ジエトキシホスホリルオキシ）-1,2,3-ベンゾトリアジン-4（3H）-オン（DEPBT）、N,N,N’,N’-テトラメチル-O-（N-スクシンイミジル）ウロニウムテトラフルオロホウ酸（TSTU）、N,N,N’,N’-テトラメチル-O-（N-スクシンイミジル）ウロニウムヘキサフルオロリン酸（HSTU）、O-（3,4-ジヒドロ-4-オキソ-1,2,3-ベンゾトリアジン-3-イル）-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（TDBTU）、テトラメチルチウロニウムS-（1-オキシド-2-ピリジル）-N,N,N’,N’-テトラフルオロホウ酸塩（TOTT）、O-（2-オキソ-1（2H）ピリジル）-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸（TPTU）のうちのいずれかと、N,N-ジイソプロピルエチルアミン（DIPEA）、トリエチルアミン（TEA）、2,4,6-トリメチルピリジン（2,4,6-コリジン）、2,6-ジメチルピリジン（2,6-ルチジン）のうちのいずれかの塩基とを組み合わせて縮合反応に利用することができる。特にHATUとDIPEAと組み合わせて用いること、あるいはCOMUとDIPEAとを組み合わせて用いることが好ましい。その他に、N,N’-カルボニルジイミダゾール（CDI）、1,1’-カルボニル-ジ-（1,2,4-トリアゾール）（CDT）、4-（4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル）-4-メチルモルホリニウム塩化物（DMT-MM）、プロピルホスホン酸無水物（T3P）などの縮合剤を利用することもできる。環化反応の変換率を高め、副生成物を抑制する観点から、本発明の縮合剤としては、HATU、PyBOP、PyOximが好ましい。また、溶媒と縮合剤の組合は、HATUとアニソール、炭酸ジメチル、または2-MeTHF、PyBOPとアセトニトリル、アニソール、炭酸ジメチル、2-MeTHF、4-メチルテトラヒドロピラン、または酢酸エチル、PyOximとアセトニトリル、アニソール、炭酸ジメチル、2-MeTHF、酢酸エチルが好ましい。溶媒と縮合剤の組合せは、アニソールとPyBOP、炭酸ジメチルとPyBOP、2-MeTHFとPyBOPの組合せがより好ましい。
　ペプチド化合物のN末端側のアミノ酸残基とC末端側のアミノ酸残基とを-(CH2)nS(CH2)m-、-(CH2)nS(O)(CH2)m-、または-(CH2)nS(O)2(CH2)m-より選択される結合により連結する場合、例えば、N末端側のアミノ酸残基に含まれるハロアルキル基、またはビニル基と、C末端側のアミノ酸残基に含まれるチオール基とを反応させて、C-S-C結合を形成し、必要に応じて、硫黄原子を酸化してスルホキシド、スルホンに変換することにより、環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物が製造され得る。
　ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物は、８～２０、好ましくは９～１５個のアミノ酸残基を含み、該アミノ酸残基のうち、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、または少なくとも１９個は、非天然アミノ酸残基であることができる。ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物に含まれる非天然アミノ酸の割合としては、ペプチド化合物に含まれるアミノ酸の総数の３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上が例示される。
　環状ペプチド化合物に含まれる非天然アミノ酸残基は、N-置換の非天然アミノ酸残基でも、N-非置換の非天然アミノ酸残基でもよい。天然アミノ酸の主鎖のアミノ基が水素以外の何らかの原子あるいは官能基で置換されたアミノ酸残基や、側鎖に天然アミノ酸とは異なる構造を有し、かつ主鎖のアミノ基が水素以外の何らかの原子あるいは官能基で置換されたアミノ酸残基は、N-置換の非天然アミノ酸残基に該当する。また、主鎖のアミノ基は置換されていないが、側鎖に天然アミノ酸とは異なる構造を有するアミノ酸残基は、N-非置換の非天然アミノ酸残基に該当する。
　ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物は、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、または少なくとも１９個のN-置換アミノ酸残基を含むことができる。ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物に含まれるN-置換アミノ酸残基の割合としては、ペプチド化合物に含まれるアミノ酸の総数の３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上が例示される。N-置換アミノ酸残基は、N-置換の非天然アミノ酸残基であることができる。
　ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物は、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、または少なくとも１９個のN-非置換の非天然アミノ酸残基を含むことができる。ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物に含まれるN-非置換の非天然アミノ酸残基の割合としては、ペプチド化合物に含まれるアミノ酸の総数の３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上が例示される。
　ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物は、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、または少なくとも１９個のα，αジ置換アミノ酸残基を含むことができる。ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物に含まれるα，αジ置換アミノ酸残基の割合としては、ペプチド化合物に含まれるアミノ酸の総数の５％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上が例示される。
　本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物は、９～１１個のアミノ酸残基からなり、そのうちの１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、または６つ以上がN-置換アミノ酸残基であり、そのうちの１つ以上、または２つ以上が、N-非置換の非天然アミノ酸残基であり得る。本発明の方法は、このような非天然アミノ酸残基を数多く含む、環状ペプチド化合物の大規模スケールでの製造に特に有用である。
　ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物は、溶媒和物であることが好ましく、水和物、DMSO-水和物、アセトン-水和物、またはDMSO溶媒和物であることがより好ましく、水和物がさらに好ましい。
　ある態様において、直鎖ペプチド化合物のC末端側のアミノ酸残基またはN末端側のアミノ酸残基の一方または両方は、カルボキシル基のα位炭素に不斉炭素を有しないアミノ酸残基であることができる。環化に供するアミノ酸残基をこのような不斉炭素を有しないものとすることで、環化反応の際のラセミ化を抑制することができる。カルボキシル基のα位炭素に不斉炭素を有しないアミノ酸残基として、α位炭素上の置換基が同一のものが挙げられる。例えばα位炭素が２つの水素原子で置換された、すなわちα位炭素が－ＣＨ２－であるアミノ酸原子（例えばグリシンやN-メチルグリシンのようなN-置換グリシン）は、不斉炭素を持たない。α位炭素上の置換基が同一のものとして、メチル基とメチル基のような同一の置換基をもつものは不斉炭素を持たない。α位炭素が、スピロシクロプロピル基、スピロシクロブチル基、スピロシクロペンチル基、スピロシクロヘキシル基などのスピロシクリル基で置換されたもの、すなわちα位炭素上の置換基同士が該α位炭素と一緒になって環を形成するもの（例えばcLeuなど）も、カルボキシル基のα位炭素に不斉炭素を有しない。
　ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物は、下記式（１）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
 で表される環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物である。国際公開第２０１３／１００１３２号にも記載されているように、式１で表される化合物は、KRAS阻害剤として有用であり、種々のKRASに関連した疾病、たとえばKRASに関連したがんに使用されうる。
　式（１）の環状ペプチド化合物は、下記式（２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
 を有する直鎖ペプチド化合物のN末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基とを連結する工程を含む方法によって製造され得る。ある態様において、該連結する工程は、１種または複数種の水と混和しない溶媒、１種または複数種の水溶性アルキルニトリル類、および１種または複数種の水溶性エーテル類からなる群より選択される１つまたは複数を含む溶媒中で、式（２）の化合物のN末端のアミノ基とC末端のカルボキシル基を縮合させることを含む。この環状ペプチド化合物の製造には、水溶性アルキルニトリル類、例えば、アセトニトリルを含む溶媒や、水と混和しない溶媒、例えば、アニソール、炭酸ジメチル、および／または2-MeTHFを含む溶媒を用いることが好ましい。
　ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物の単離および/または精製には、カラムクロマトグラフィーを用いないことが好ましい。
　本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物は、カラムクロマトグラフィーに代えて、例えば、晶析により結晶化することにより、単離および/または精製することができる。
　具体的には、例えば、縮合反応後の反応溶液を分液操作に供し、必要に応じて有機層を濃縮、および／またはろ過した後、得られた残渣に晶析に適した溶媒を加え、任意で種晶を加えて、必要に応じて攪拌することで、環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物の結晶を得ることができる。晶析の際に添加される溶媒は、環状ペプチド化合物が結晶を形成することができる溶媒であれば特に制限はないが、環状ペプチド化合物が溶解した溶液に対し、環状ペプチド化合物の溶解度を低下させる操作を行うことのできる溶媒が好ましい。例えば貧溶媒の添加や溶液の冷却により、環状ペプチド化合物の溶解度を低下させて結晶化が可能な場合は、そのような操作が可能な溶媒が例示される。また、環状ペプチド化合物の粗結晶を懸濁液状態下、任意の時間懸濁状態を保つことで環状ペプチド化合物の結晶を得ることができる場合は、そのような操作が可能な溶媒を、結晶化に用いることができる。晶析の際に添加される溶媒として、具体的には、例えば、アセトン、水、ＤＭＳＯ、アセトニトリル、またはエタノール、およびこれらの混合溶媒などが挙げられる。
　ある態様において、本発明の方法により製造される環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物の結晶は、後述のとおりの、式（１）の化合物の非溶媒和物結晶、溶媒和物結晶、塩の結晶、または塩の溶媒和物結晶であることができる。ある態様において、非溶媒和物結晶（無溶媒和結晶）は、溶媒和結晶、または水和物結晶でない結晶を指すことがある。式（１）の化合物の溶媒和物結晶は、DMSO-水和物結晶（A型結晶、またはB型結晶）、水和物結晶（C型結晶）、またはアセトン-水和物結晶（H型結晶）であることが好ましく、水和物結晶であることがより好ましい。
ペプチド化合物を製造する方法
　ある態様において、本発明は、液相法によってペプチド化合物を製造する方法に関する。該方法は、各工程の生成物を単離する工程を含まずに、以下の工程１および工程２、並びに任意で該工程１と該工程２を複数回繰り返すことを含み、これによりペプチド化合物を製造することができる。
（工程１）C-保護アミノ酸またはC-保護ペプチドに、N-保護アミノ酸またはN-保護ペプチドを連結／縮合する工程；
（工程２）工程１の後にN-保護基を除去／脱保護する工程。
　ある態様において、本発明の方法は、工程１と工程２をそれぞれ１回ずつ含むことができ、ある態様において、本発明の方法は、工程１と工程２を複数回繰り返すことができる。ペプチド鎖を連続的に伸長させるためには、工程１と工程２を複数回、例えば、２～２０回繰り返すことが好ましい。
　本明細書において「C-保護アミノ酸」とは、カルボキシル基が保護された天然または非天然のアミノ酸を意味し、「C-保護ペプチド」とは、C末端のアミノ酸残基のカルボキシル基が保護されたペプチドを意味する。該ペプチドは、天然アミノ酸残基のみから構成されていても、非天然アミノ酸残基のみから構成されていても、天然アミノ酸残基と非天然アミノ酸残基の任意の組合せから構成されていてもよい。
　C-保護ペプチドは、２～２０のアミノ酸残基を含むことができ、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、または少なくとも１９個が非天然アミノ酸残基であることが好ましい。C-保護ペプチドに含まれる非天然アミノ酸残基は、N-置換アミノ酸残基でも、N-非置換の非天然アミノ酸残基でもよい。ある態様において、C-保護ペプチドに含まれる非天然アミノ酸残基の割合としては、C-保護ペプチドに含まれるアミノ酸の総数の３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上が例示される。
　C-保護ペプチドがN-置換アミノ酸残基を含む場合、C-保護ペプチドは、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、または少なくとも１９個のN-置換アミノ酸残基を含むことができる。ある態様において、C-保護ペプチドに含まれるN-置換アミノ酸残基の割合としては、C-保護ペプチドに含まれるアミノ酸の総数の３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上が例示される。N-置換アミノ酸残基は、非天然アミノ酸残基であることができる。
　C-保護ペプチドがN-非置換の非天然アミノ酸残基を含む場合、C-保護ペプチドは、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、または少なくとも１９個のN-非置換の非天然アミノ酸残基を含むことができる。ある態様において、C-保護ペプチドに含まれるN-非置換の非天然アミノ酸残基の割合としては、C-保護ペプチドに含まれるアミノ酸の総数の３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上が例示される。
　「C-保護アミノ酸」および「C-保護ペプチド」のカルボキシル基の保護基にはペプチドの溶媒への溶解性を低下させない限り、本技術分野で既知の任意の保護基を利用することができる。C-保護アミノ酸、およびC-保護ペプチドの溶解度は、これらを反応に用いる溶媒に、少なくとも１％（w/v）以上、さらに好ましくは５％（w/v）以上である。このようなカルボキシル基の保護基として、具体的には、メチル基、エチル基、t-Bu基、トリチル基、クミル基などが挙げられ、これらのうちではt-Bu基が好ましい。
　本明細書において「N-保護アミノ酸」とは、アミノ基が保護された天然または非天然のアミノ酸を意味し、「N-保護ペプチド」とは、N末端のアミノ酸残基のアミノ基が保護されたペプチドを意味する。該ペプチドは、天然アミノ酸残基のみから構成されていても、非天然アミノ酸残基のみから構成されていても、天然アミノ酸残基と非天然アミノ酸残基の任意の組合せから構成されていてもよい。
　N-保護ペプチドは、２～２０のアミノ酸残基を含むことができ、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、または少なくとも１９個が非天然アミノ酸残基であることが好ましい。N-保護ペプチドに含まれる非天然アミノ酸残基は、N-置換アミノ酸残基でも、N-非置換の非天然アミノ酸残基でもよい。ある態様において、N-保護ペプチドに含まれる非天然アミノ酸残基の割合としては、N -保護ペプチドに含まれるアミノ酸の総数の３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上が例示される。
　N-保護ペプチドがN-置換アミノ酸残基を含む場合、N-保護ペプチドは、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、または少なくとも１９個のN-置換アミノ酸残基を含むことができる。ある態様において、N-保護ペプチドに含まれるN-置換アミノ酸残基の割合としては、N-保護ペプチドに含まれるアミノ酸の総数の３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上が例示される。N-置換アミノ酸残基は、非天然アミノ酸残基であることができる。
　N-保護ペプチドがN-非置換の非天然アミノ酸残基を含む場合、N-保護ペプチドは、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、または少なくとも１９個のN-非置換の非天然アミノ酸残基を含むことができる。ある態様において、N-保護ペプチドに含まれるN-非置換の非天然アミノ酸残基の割合としては、N-保護ペプチドに含まれるアミノ酸の総数の３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上が例示される。
　「N-保護アミノ酸」および「N-保護ペプチド」のアミノ基の保護基には、ペプチドの溶媒への溶解性を低下させない限り、本技術分野で既知の任意の保護基を利用することができる。このようなアミノ基の保護基として、具体的にはCbz、p-ニトロベンジルオキシカルボニル、2-ナフチルメチルオキシカルボニル、ジフェニルメチルオキシカルボニル、9-アントリルメチルオキシカルボニル、Teoc、Boc、トリフルオロアセチル、またはAllocなどが挙げられ、これらのうちではCbz、Teoc、またはトリフルオロアセチルが好ましい。
　当技術分野で公知であるように、N-保護およびC-保護アミノ酸、ならびに/もしくはN-保護およびC-保護ペプチドのそれぞれについての保護基は通常、化学反応条件に応じて選択され、当技術分野で公知の通常の方法によって決定することができる。
　例えば、水と混和しない溶媒(例えば、親油性溶媒)が用いられる場合、親水性保護基は有機溶媒中の保護化合物の溶解度を低下させうるため、そのような親水性保護基は適した保護基でない場合もある。したがって、本明細書に記載のように水と混和しない溶媒を使用する場合、親油性保護基は、水と混和しない溶媒中での例えばペプチド化合物の溶解度を維持しうることから、好ましい保護基でありうる。
　そのような保護基の選択は、当該技術分野で知られている方法、または本明細書に記載されている方法、例えば「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014」に記載されている方法などにより行うことができる。
　非限定的な実施態様として、本発明の方法で使用され得るN-保護基の例示としてはCbz基が挙げられる。アミノ酸がアミノ酸残基中のα位にスピロ-シクロアルキル基のような立体障害の大きい官能基を有する場合、トリフルオロアセチルが好ましく例示される。
（縮合）
　工程１は、C-保護アミノ酸またはC-保護ペプチドに、N-保護アミノ酸またはN-保護ペプチドを連結して、N末端とC末端がそれぞれ保護された直鎖ペプチド化合物を得る工程である。
　ある態様において、工程１におけるC-保護アミノ酸またはC-保護ペプチドと、N-保護アミノ酸またはN-保護ペプチドとの連結は、C-保護アミノ酸またはC-保護ペプチドのN末端のアミノ基と、N-保護アミノ酸またはN-保護ペプチドのC末端のカルボキシル基とを、縮合試薬の存在下または非存在下で縮合することによって行われる。縮合試薬の存在下で反応を行う場合、系中でカルボキシル基を活性化することができる。縮合試薬の非存在下で反応を行う場合、カルボキシル基をあらかじめ活性化したN-保護アミノ酸またはN-保護ペプチドを利用してもよい。
　工程１では、溶媒を除き、先の「環状ペプチド化合物を製造する方法」の項に記載の方法、例えば、反応条件や試薬を採用することができ、本工程で好ましく用いられる縮合試薬には、T3P、EDCI、HATU、COMU、BEP、PyBOP、DMT-MM、およびPyOximからなる群より選択される縮合剤が含まれる。
　工程１は、トルエン、アセトン、DMF、アセトニトリル、THF、2-MeTHF、炭酸ジメチル、アニソール、酢酸イソプロピル、ヘプタン、酢酸エチル、および4-メチルテトラヒドロピランからなる群より独立して選択される１つまたは複数の溶媒（溶媒B）中で反応およびその後の後処理を行うことができ、生成物、すなわち目的の縮合体を単離や精製することなく、次の工程を行うことができる。溶媒Bには、2-MeTHF、2-MeTHFとアセトニトリルの混合溶媒（混合比：アセトニトリル１重量部に対し、2-MeTHFが０．５重量部以上、好ましくは０．５重量部から２０重量部、さらに好ましくは１重量部から１０重量部、さらに好ましくは１重量部から５重量部）、4-メチルテトラヒドロピラン、炭酸ジメチル、酢酸エチル、および/またはアニソールが、少なくとも１重量％以上、５重量％以上、１０重量％以上、１５重量％以上、２０重量％以上、２５重量％以上、３０重量％以上、３５重量％以上、４０重量％以上、４５重量％以上、５０重量％以上、５５重量％以上、６０重量％以上、６５重量％以上、７０重量％以上、７５重量％以上、８０重量％以上、８５重量％以上、９０重量％以上、または９５重量％以上含まれることが好ましい。この傾向は、とりわけ縮合剤としてHATUを用いた場合に顕著である。また、工程１が複数回行われる場合、そのうちの少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、または少なくとも１０回において、あるいは全工程１の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％において、溶媒Bには、2-MeTHFが少なくとも１重量％以上、５重量％以上、１０重量％以上、１５重量％以上、２０重量％以上、２５重量％以上、３０重量％以上、３５重量％以上、４０重量％以上、４５重量％以上、または５０重量％以上、５５重量％以上、６０重量％以上、６５重量％以上、７０重量％以上、７５重量％以上、８０重量％以上、８５重量％以上、９０重量％以上、または９５重量％以上含まれることが好ましい。
（脱保護）
　工程２は、工程１で得られた、N末端とC末端がそれぞれ保護されたペプチドからN末端の保護基を除去する工程である。
　ある態様において、工程２は、例えば、N-保護基がCbz、p-ニトロベンジルオキシカルボニル、2-ナフチルメチルオキシカルボニル、ジフェニルメチルオキシカルボニル、および9-アントリルメチルオキシカルボニルの場合などには、接触水素化により行うことができる。接触水素化には、本技術分野で既知の任意の触媒を用いることができる。触媒として、具体的には、例えば、Pd/C、Pd(OH)2/C、またはPtO2などが挙げられ、Pd/Cが好ましい。接触水素化に用いる水素は常圧で用いても加圧して用いてもよい。加圧して用いる場合、1 atm (14.7 psi)以上であればよく、好ましくは1 atm (14.7 psi)以上3 atm (44.1 psi)以下、好ましくは1 atm (14.7 psi)以上2 atm (29.4 psi)以下、より好ましくは1 atm (14.7 psi)以上1.8 atm (26.5 psi)以下である。反応の進行に伴い、例えば水素圧が反応開始時の水素圧の９０％以下程度に減少した場合、反応開始時の初期水素圧程度まで再度水素を追加することも可能であり、その回数に制限はなく、目的の脱保護反応が目的とする反応転換率に達するまで行うことができる。また、出発原料の存在下で反応容器内を水素で置換して反応を開始することも、出発原料の非存在下で反応容器内を水素で置換した後に、出発原料を反応容器内に投入して反応を開始することもできる。
　ある態様において、工程２は、脱保護試薬の存在下で行うことができる。脱保護試薬は、N-保護基の種類に応じて、本技術分野で既知の任意の試薬、例えば、「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014」に記載の試薬を利用することができるが、例えば、N-保護基がTeoc、トリフルオロアセチル、Fmoc、またはBocの場合などには、TBAF、LiBH4、ピぺリジン、トリフルオロ酢酸、またはメタンスルホン酸などが好ましく用いられる。
　非天然アミノ酸およびペプチドの窒素原子の保護基としてトリフルオロアセチル基が用いられる場合、水素化ホウ素ナトリウムなどの金属ヒドリド還元剤で除去できることが知られているが（Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014）、場合によっては、完全に除去できなかったり、副生成物を生じたりすることがある。本発明者らは、トリフルオロアセチル基で保護されたcLeu誘導体（TFA-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)NMe2）を水素化ホウ素ナトリウムで処理すると、望む脱保護体の他にアミド結合が切断されたMeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)NMe2が副生することに遭遇した。そこで、水素化ホウ素リチウムを用いると、副反応が抑制されることを見出した。また、反応終了直後に反応停止剤として塩化アンモニウム水溶液を用いると過剰還元体が副生してしまうことがわかった。そこで、反応条件を検討したところ、反応停止剤として塩化アンモニウム水溶液を反応液に投入する前に、トリフルオロエタノールを-20～-10℃で加えた後に１時間かけて0℃にし、その後1時間撹拌してから塩化アンモニウム水溶液を加えて分液処理することで過剰還元体の副生が抑制されることを見出した。また、その分液操作後には、ホウ素原子が脱保護体の窒素原子と結合しているため、10℃～30℃でトリフルオロ酢酸を加えて25℃で撹拌した後に、水酸化ナトリウム水溶液と混合して分液操作をすることで、ホウ素－窒素結合が切断された望むペプチドが得られることを見出した。この時、ホウ素と窒素との再結合を防ぐために、水酸化ナトリウム水溶液へ、上記トリフルオロ酢酸で処理した溶液を10℃～30℃で５０～９０分かけて滴下することが重要であることを見出した。
　非限定的な一実施態様として、トリフルオロアセチル基の脱保護反応で、(1)還元試薬としての水素化ホウ素リチウムの使用、および/または(2)停止剤としてのアンモニア水の添加前のトリフルオロエタノールの使用、を含む方法も提供される。トリフルオロアセチル基が保護基として使用される場合、該方法は、(1)還元試薬としての水素化ホウ素リチウムの使用、および(2)停止剤としてのアンモニア水の添加前のトリフルオロエタノールの使用の両方を含むことが好ましい。
　工程２は、工程１と同様に、トルエン、アセトン、DMF、アセトニトリル、THF、2-MeTHF、炭酸ジメチル、アニソール、酢酸イソプロピル、ヘプタン、酢酸エチル、および4-メチルテトラヒドロピランからなる群より独立して選択される１つまたは複数の溶媒（溶媒B）中で反応およびその後の後処理を行うことができ、生成物、すなわち目的の脱保護体を単離や精製することなく、次の工程を行うことができる。溶媒Bには、2-MeTHFが含まれることが好ましい。
　ある態様において、工程２は、－４０℃～溶媒の沸点付近の温度、好ましくは－３０℃～１００℃の温度、好ましくは－５℃～４０℃の温度で、反応混合物を１５分～４８時間攪拌することで行うことができる。
　以下に例示的な反応パラメータおよび条件を示す。一態様において、本明細書に記載の方法は、C-保護ペプチドの保護基がtBuであるペプチド化合物のC-末端アミノ酸の脱保護を含み、さらに脱保護試薬がHMDSおよびTMSOTfとの組み合わせであり、脱保護工程における溶媒がIPAcまたは2-MeTHFを含み、C-保護ペプチドは2～13アミノ酸残基からなるペプチド化合物であることができる。
　関連する、または別の一態様において、本明細書に記載の方法は、ペプチド化合物のN-末端アミノ酸の脱保護反応を含み、ここで、N-保護ペプチドの保護基はCbz基であり、脱保護条件は触媒的水素化であり、水素化における触媒はPd/Cであり、水素化における水素圧は1atm (14.7psi)以上3atm (44.1psi)以下である、脱保護工程における溶媒は2-MeTHFまたはTHFを含み、N-保護ペプチドは2～13アミノ酸残基からなるペプチド化合物であることができる。
　関連する、または別の一態様において、本明細書に記載の方法は、ペプチド化合物のN末端アミノ酸の脱保護反応を含み、ここで、N-保護ペプチドの保護基はTeocであり、脱保護試薬はフッ化物アニオンを生成することができ、脱保護試薬はTBAFであり、脱保護工程の溶媒は2-MeTHF、酢酸イソプロピル、炭酸ジメチルまたはアニソールを含み、N-保護ペプチドは2～13アミノ酸残基からなるペプチド化合物であることができる。
　関連する、または別の一態様において、本明細書に記載の方法は、ペプチド化合物のN末端アミノ酸の脱保護反応を含み、ここで、N-保護ペプチドの保護基はトリフルオロアセチル(TFA)であり、脱保護試薬は還元試薬であり、脱保護試薬は水素化ホウ素リチウムであり、脱保護工程の溶媒は2-MeTHFまたはメタノールを含み、N-保護ペプチドは2～13アミノ酸残基からなるペプチド化合物であることができる。
　ペプチドのN末端のアミノ酸残基の窒素原子の保護基を除去すると、ジケトピペラジンが形成されて、目的とする脱保護体が得られない場合があることが知られている（J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1987, 1155-1156.）。
　本発明者らは、Cbz-Ile-MeAla-Aze誘導体の末端窒素原子の保護基であるCbz基を除去するために、加水素分解反応に付すと、反応中にジケトピペラジンが形成されてしまい、続くペプチド伸長ができなくなることを見出した。
　そこで、脱Cbz反応とペプチド伸長の反応条件を検討したところ、アミノ酸活性エステル存在下に、Cbz体を加水素分解に付して、脱Cbzをおこなうと、効率的にペプチド伸長できることを見出した。文献（J. Chem. Soc., Chem. Ccmmun., 1987, 1155-6.）には、アミノ酸活性エステル存在下に、Cbz体を加水素分解に付してペプチド伸長する例が報告されているが、Cbz体としては、 Cbz-Ala-D-Pro-OMe、Cbz-Asu(OBut)-D-Pro-OMe‐、Cbz-D-Val-Pro-OMe が報告されているのみで、Aze誘導体についての例については、記されていない。また、N-アルキルアミノ酸活性エステルとの反応についての例も開示されていない。N-アルキルアミノ酸活性エステルは、その立体的要因から、窒素がアルキル化されていない通常のアミノ酸活性エステルよりも反応性が低下していることが容易に推察される。したがって、N-アルキルアミノ酸活性エステルが反応する時間よりも早く脱Cbzが起きると、ジケトピペラジンが生成してしまう。すなわち、脱Cbzの後に、すみやかにN-アルキルアミノ酸活性エステルと反応させる条件を見出す必要がある。本発明者らは、反応条件を検討した結果、N-アルキルアミノ酸活性エステルであるTeoc MeLeu－pFp存在下に、Cbz-Ile-MeAla-Aze-EtPh(4-Me)-MeGly体を、酢酸イソプロピル中、Ｎ－メチルモルホリンとPd/Cを加えて、水素圧０．１０～０．１８ＭＰａＧにて加水素分解反応に付すと、ジケトピペラジンの生成を抑制して、Teoc-MeLeu-Ile-MeAla-Aze-EtPh(4-Me)-MeGly体が得られることを見出した。また、このとき、アセトン存在下に本反応をおこない、反応後に分液操作することにより、未反応の脱保護されたペプチドを除去できることを見出した。すなわち、アセトンを３６等量存在させて加水素分解反応をおこなうと、未反応の脱保護されたペプチドのアミノ基がイソプロピリデン化されて、ジケトピペラジンへ変換が抑制されて、このイソプロピリデン化されたペプチドは、末端窒素がアミド化されていない塩基性化合物であるため、反応後の分液処理にて酸洗浄することにより容易に除去できることがわかった。
　本発明のペプチド化合物を製造する方法は、C-保護基を除去する工程３をさらに含むことができる。
　工程３は、例えば、C-保護基が、t-Bu、トリチル、クミル、メチル、またはエチルである場合などには、脱保護試薬の存在下、酸性条件で行うことができる。脱保護試薬には、本技術分野で既知の任意の試薬、例えば、「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014」に記載の試薬を利用することができる。本発明では、酸性条件を達成するために、例えば、HMDSと、TMSOTf、TMSI、TMSBr、およびTMSClからなる群より選択される試薬との組み合わせが好ましく用いられる。
　工程３は、工程１および工程２と同様に、トルエン、アセトン、DMF、アセトニトリル、THF、2-MeTHF、炭酸ジメチル、アニソール、酢酸イソプロピル、ヘプタン、酢酸エチル、および4-メチルテトラヒドロピランからなる群より独立して選択される１つまたは複数の溶媒（溶媒B）中で反応およびその後の後処理を行うことができ、生成物、すなわち目的の脱保護体を単離や精製することなく、次の工程を行うことができる。溶媒Bには、2-MeTHFが含まれることが好ましい。
　工程３は、工程１の後（すなわち、工程１と工程２の間）、または工程２の後のいずれに行ってもよい。より具体的には、後述のとおり、本発明の方法では、工程１と工程２が複数回繰り返され得るところ、工程３は、最初の工程１の後または工程２の後に行ってもよく、工程１と工程２の繰り返しのある回の工程１の後または工程２の後に行ってもよく、工程１と工程２の繰り返しの最終回の工程１の後または工程２の後に行ってもよい。ある態様において、工程３は、工程１と工程２の繰り返しの最終回の工程１の後または工程２の後に行うことが好ましく、繰り返しの最終回の工程１の後に行うことがより好ましい。工程３を工程１の後に行った場合には、N末端のみが保護された直鎖ペプチド化合物を得ることができる。工程３を工程２の後に行った場合には、N末端とC末端の両方が脱保護された直鎖ペプチド化合物を得ることができる。
　ある態様において、工程３は、－２０℃～溶媒の沸点付近の温度、好ましくは０℃～１８０℃の温度で、反応混合物を１５分～４８時間攪拌することで行うことができる。
（工程１と工程２の繰り返し）
　ある態様において、本発明のペプチド化合物を製造する方法は、前記工程１と前記工程２を繰り返すことを含み、これによりペプチド鎖を伸長することができる。繰り返しの回数は、限定されないが、２回～２０回が好ましく、２～１５回がより好ましい。工程１と工程２を繰り返すにあたり、繰り返しの最終回は、工程２を含まなくてもよい。ある態様において、繰り返しの最終回が工程２を含まない場合、本発明の方法の最終工程は工程１となり得る。この場合、製造される直鎖ペプチド化合物は、N末端およびC末端の双方が保護された直鎖ペプチド化合物となり得る。ある態様において、繰り返しの最終回が工程２を含まない場合、工程１の後に行われる工程３が本発明の方法の最終工程となり得る。この場合、製造される直鎖ペプチド化合物は、N末端のみが保護された直鎖ペプチド化合物となり得る。
（後処理）
　工程１～工程３の各反応後には後処理を行うことができ、該後処理により、中間体を単離することなく次の反応を行うことができる。後処理として具体的には、有機層や水層の洗浄を含む分液操作、ろ過操作、および濃縮操作からなる群より選択される１つまたは複数の操作が含まれ、次の工程に適した状態となるようにこれらの操作を適宜組み合わせることができる。例えば、縮合試薬や脱保護試薬を用いて工程１～工程３の各反応を行った場合には、その後処理として、通常、少なくとも１回以上の分液操作が行われる。また、接触水素化により工程２の反応を行った場合には、通常、その後処理としてろ過操作が行われる。いずれの場合でも、例えば、次の工程に備えて溶媒量を調節する目的で、あるいは、溶媒の置換の目的で、さらに濃縮操作を行って溶媒の一部を留去することができる。
　ある態様において、分液操作は、工程１～工程３の各反応の完了後に、目的物を液液抽出するために行うことができ、これには有機層あるいは水層の洗浄も含まれ得る。分液操作を行う場合には、分液操作に適した量、例えば、有機層：水層が２０：８０～８０：２０の体積比の範囲内となる量の水および／もしくは水溶液、並びに／または有機溶媒が、系中に添加される。分液操作のために添加される水溶液としては、硫酸水素ナトリウム水溶液、炭酸カリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、リン酸水素二カリウム水溶液、リン酸水素二ナトリウム水溶液、リン酸二水素ナトリウム水溶液、塩化ナトリウム水溶液、クエン酸水溶液、アンモニア水溶液、塩酸水溶液などが挙げられる。分液操作のために添加される有機溶媒としては、水と混和しない溶媒、水溶性アルキルニトリル類、および水溶性エーテル類などが挙げられる。本明細書において、分液操作のために添加される、水と混和しない溶媒は「溶媒C」と称することがある。分液操作のために添加される有機溶媒として、具体的には、例えば、２－メチルテトラヒドロフラン（2-MeTHF）、炭酸ジメチル、アニソール、酢酸イソプロピル、酢酸エチル、MTBE、CPME、4-メチルテトラヒドロピラン、ヘプタン、およびアセトニトリルからなる群より選択される１つまたは複数などが挙げられる。また、分液操作に際し、有機層には、塩基性に対して安定で、化合物の溶解性に優れた2-MeTHFが含まれていることが好ましい。
　ある態様において、工程１～工程３の各反応後、アセトニトリルやTHFを多く含む場合など、溶媒Bが水と混和性で、水層と有機層とが適切に分離しない場合には、分液操作の前に、水および／もしくは水溶液に加えて、水と混和しない溶媒（溶媒C）を加えることで、水層と有機層を分離することができる。工程１～工程３の各反応後の分液操作で、水層と有機層とが適切に分離したか否かを決定する、限定を意図しない例示として、工程１～工程３の各反応後の分液操作後１～３０分間静置して２層を形成するか否かで決定することができる。溶媒Cとして、水に対する溶解度が低い溶媒、例えば、水に対する溶解度が、999g/L以下の溶媒、500g/L以下の溶媒、250g/L以下の溶媒、好ましくは200g/L以下の溶媒、より好ましくは150g/L以下の溶媒が挙げられる。また、溶媒Cとして、log Kow値、またはlog Kow値の予測値が、正の値、例えば０以上かつ５以下の値をとる溶媒が好ましい。具体的には、2-MeTHF、炭酸ジメチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、ヘプタン、アニソール、MTBE、CPME、4-メチルテトラヒドロピランなどがあげられ、反応による生成物を効率よく有機溶媒で抽出可能であるという観点から、2-MeTHF、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、もしくはヘプタン、またはこれらを含む溶媒が好ましく用いられる。
　溶媒Cは、水層と有機層に分離可能な量で添加することが好ましく、例えば、有機層全体に対して、約５０重量％～１００重量％の量で系中に添加することができる。 水層と有機層の分離は、分液操作で溶媒Cを添加した後、水層と有機層の混合物を１～３０分間静置して２層を形成するか否かを観察する方法に例示される、標準的な方法で決定することができる。
　ある態様において、分液操作は有機層または水層の洗浄を含むことができる。分液操作における洗浄は、目的物を含む溶液から、目的物を含まない溶液を用いて、目的物以外の不純物となりうる物質を取り除くために行われ得る。目的物は、通常、有機層に存在しており、この場合には有機層を水溶液で洗浄することにより、水層に不純物となりうる物質を抽出して取り除くことができる。一方、分液操作の過程で目的物を一旦有機層から水層に移す場合など、水層に目的物が存在している場合には、水層を洗浄する。
　有機層の洗浄には、中性、塩基性または酸性の水溶液を用いることができる。有機層の洗浄に利用可能な水溶液として、具体的には、硫酸水素ナトリウム水溶液、硫酸水素カリウム水溶液、炭酸カリウム水溶液、炭酸ナトリウム水溶液、リン酸水素二カリウム水溶液、リン酸水素二ナトリウム水溶液、リン酸二水素ナトリウム水溶液、塩化ナトリウム水溶液、クエン酸水溶液、アンモニア水溶液、塩酸水溶液、などの水溶液を利用することができる。ある態様において、系中に存在する未反応のアミノ酸やペプチドを十分に除去するためには、有機層を、炭酸ナトリウム水溶液、硫酸水素ナトリウム水溶液、および／または炭酸ナトリウム水溶液の順で洗浄することが好ましい。それでもなおアミノ酸やペプチドを十分に除去できない場合などには、クエン酸とリン酸水素二カリウムを含む水溶液を用いて有機層を洗浄することで、これらを効率よく除去できる。また、ある態様において、脂溶性の高いアミノ酸やペプチドの除去には、アセトニトリルと炭酸カリウム水溶液の混合液を用いて有機層を洗浄することが有効である。
　水層の洗浄には、水と混和しない有機溶媒を用いることができ、2-MeTHF、ヘプタン、MTBE、酢酸イソプロピルなどの有機溶媒が好ましく用いられる。
　本発明は、溶媒由来の安定化剤であるBHT (2,6-ジ-tert-ブチル-4-メチルフェノール)を除去する方法に関する。具体的には、該方法は、分液操作、例えば本発明の各工程後の分液操作において、有機層として、アセトニトリル、プロピオニトリル、2-MeTHF、およびヘプタンを含む溶媒を用いることを含み、これにより、BHTを効率的に除去できる。この方法により、有機層中のBHTの残存量を、HPLC分析における210nmでのUVArea％値で、目的物に対して2.0%以下、1.9%以下、1.8%以下、1.7%以下、1.6%以下、1.5%以下、1.4%以下、1.3%以下、1.2%以下、1.1%以下、1.0%以下、0.9%以下、0.8%以下、0.7%以下、0.6%以下、0.5%以下、0.4%以下、0.3%以下、0.2%以下、0.1%以下、または0.05%以下とすることができる。目的物を水と水溶性アルキルニトリルとを含む水層に溶解させた後に、有機層として特定の溶媒を用いることでBHTを除去することが可能である。ここで用いられる水溶性アルキルニトリルはアセトニトリルが好ましい。BHTを除くために用いられ得る有機層には、水と混和しない溶媒が含まれることが好ましい。複数の水と混和しない溶媒を組み合わせて用いることも可能であり、好ましい組み合わせは2-MeTHFとヘプタン、またはMTBEとヘプタンである。好ましい溶媒の比は、水溶性アルキルニトリルに対し、水と混和しない溶媒を１００重量％以上用いることが好ましく、より好ましくは１００重量％以上４００重量％以下の範囲、さらに好ましくは１００重量％以上３００重量％以下の範囲で用いることで効率的にBHTを除去することが可能である。2-MeTHFとヘプタン、またはMTBEとヘプタンを組み合わせて用いる場合、ヘプタンに対して2-MeTHFまたはMTBEを、１０重量％以上１００重量％以下の範囲、好ましくは１０重量％以上８０重量％以下の範囲で用いることで、効率的にBHTを除去することが可能である。
　市販されているTHFや2-MeTHFには、安定化剤として150～400 ppm程度のBHTが含まれていることがある。このようなTHFや2-MeTHFを大量に用いた場合、例えば、工程数が２０工程以上になると、BHTの残存量は４％に達することになり、反応への悪影響が無視できなくなり得る。本発明の方法を用いることにより、事前に溶媒からBHTを除去する操作や、工程の途中で蓄積したBHTを除去するための単離操作（例えば、カラムクロマトグラフィー）を行う必要がなくなる。したがって、複数工程を含み、大スケールでのペプチドの液相合成の場合などにこの方法を適用することにより、ペプチド鎖を連続的に伸長することができ、目的のペプチド化合物を効率的に得ることができる。
　本発明におけるろ過操作、および濃縮操作には、本技術分野で既知のろ過操作、および濃縮操作を利用することができる。
　ある態様において、各工程の後処理として、分液操作、ろ過操作、および濃縮操作からなる群より選択される１つまたは複数の操作の前または後、あるいは次の工程の反応を開始する前に、溶媒、例えば、反応釜などの反応容器を洗浄した溶媒が系中に添加される場合がある。具体的には、例えば、トルエン、アセトン、DMF、アセトニトリル、THF、2-MeTHF、炭酸ジメチル、アニソール、酢酸イソプロピル、ヘプタン、酢酸エチル、および4-メチルテトラヒドロピランからなる群より独立して選択される１つまたは複数の溶媒が、系中に添加され得る。本明細書においては、この溶媒を添加する操作も後処理に含まれる。
　本発明のペプチド化合物を製造する方法は、中間体を単一化合物として単離する工程を含まない。したがって、初回の工程２の後処理後の溶媒、あるいは工程１と工程２の繰り返しのある回の工程２の後処理後の溶媒が、それらの次の回の工程１の反応溶媒（溶媒B）となり得る。同様に、初回の工程１の後処理後の溶媒、あるいは工程１と工程２の繰り返しのある回の工程１の後処理後の溶媒は、それらの回の工程２の反応溶媒（溶媒B）となり得る。すなわち、工程１と工程２を繰り返すにつれて溶媒Bの組成は変わり得るが、溶媒Bを構成する溶媒種は、それまでの工程１および工程２の反応および後処理に用いられてきた溶媒種と一致し得る。
　ある態様において、本発明の環状ペプチド化合物を製造する方法に用いられる溶媒（溶媒A）は、本発明のペプチド化合物を製造する方法によって直鎖ペプチド化合物を製造した後の溶媒（溶媒X）を含む。ある態様において、溶媒Xを溶媒Aとして、そのまま環化反応に利用することができる。別の態様において、溶媒Xに、さらに１種または複数種の水と混和しない溶媒、１種または複数種の水溶性アルキルニトリル類、および１種または複数種の水溶性エーテル類からなる群より選択される１つまたは複数を加えて溶媒Aとすることができる。溶媒Xにさらに溶媒を加えて溶媒Aとする場合、加える溶媒として好ましくは、2-MeTHF、炭酸ジメチル、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、アニソール、アセトニトリル、THF、4-MeTHP、クロロベンゼン、1,3-ジメトキシベンゼン、MTBE、CPMEなどが挙げられ、アセトニトリル、2-MeTHF、アニソール、炭酸ジメチルが特に好ましい。例えば、溶媒Xに溶媒、例えば、アセトニトリル、2-MeTHF、アニソール、または炭酸ジメチルを加えて溶媒Aとする場合、溶媒Xの重量に対して２０～８０倍量の溶媒を加えることが好ましい。
　前述のとおり、本発明のペプチド化合物を製造する方法では、工程１と工程２が繰り返され得るが、その繰り返しの最終回の工程１に用いられるC-保護ペプチドおよびN-保護ペプチドの一方または両方は、N-置換アミノ酸残基を４つ以上含むか、またはN-置換アミノ酸残基を２つ以上含み、かつα，αジ置換アミノ酸残基を１つ以上含むことが好ましい。N-置換アミノ酸残基としては、N-メチルまたはN-エチルアミノ酸残基などのN-アルキルアミノ酸残基、あるいはプロリンやAze(2)などのN-置換環状アミノ酸残基が好ましい。また、α，αジ置換アミノ酸残基としては、α，αジメチルアミノ酸残基などのα，αジアルキルアミノ酸残基やα位に存在する２つの基が連結して脂環式環を形成したcLeuなどのα，αジ置換環状アミノ酸残基などが好ましい。
　また、ある態様において、繰り返しの最終回の工程１で用いられるC-保護ペプチドおよびN-保護ペプチドの一方または両方は、５つのアミノ酸残基からなり、そのうちの４つが非天然アミノ酸残基であることが好ましい。
　別の態様において、繰り返しの最終回の工程１で用いられるC-保護ペプチドおよびN-保護ペプチドの一方または両方は、６つのアミノ酸残基からなり、そのうちの５つが非天然アミノ酸残基であることが好ましい。
　ある態様において、本発明のペプチド化合物を製造する方法は、本発明の環状ペプチド化合物を製造する方法の原料に用いられる直鎖ペプチド化合物を得るために利用することができる。例えば、本発明の環状ペプチド化合物を製造する方法によって、前記式１の環状ペプチド化合物を製造する場合、その原料となる直鎖ペプチド化合物を製造するために、繰り返しの最終回の工程１で用いられるC-保護ペプチドとして、C-保護されたMeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyを用いることができ、また、繰り返しの最終回の工程１で用いられるN-保護ペプチドとして、N-保護されたHph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2を用いることができる。
　ある態様において、本発明のペプチド化合物を製造する方法を用いることで、前記式（１）の環状ペプチド化合物の製造原料となり得る、前記式（２）の直鎖ペプチド化合物を製造することができる。
　具体的には、例えば、１つ目のバッチとして、C-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
 （MeAsp(OtBu)-NMe2）
を用い、N-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
 （Z-MeGly(cPent)）
を用い、工程１を経て
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
 （Z-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2）
を製造し、工程２を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
 （MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2）
を製造することができる。
　次に、この化合物をC-保護アミノ酸として用い、N-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
 （TFA-cLeu）
または
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
 （Cbz-cLeu）
を用い、工程１を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
 （TFA-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2）
または
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
 （Cbz-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2）
を製造し、工程２を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
 （cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2）
を製造することができる。
　次に、この化合物をC-保護ペプチドとして用い、N-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
 （Z-Pro）
を用い、工程１を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
 （Z-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2）
を製造し、工程２を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
 （Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2）
を製造することができる。
　次に、この化合物をC-保護ペプチドとして用い、N-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
 (Z-Hph(4-CF3-35F2) Cy2NH)
を用い、工程１を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
 (Z-Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2)
を製造し、工程３を経て、このバッチの目的物である
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
 (Z-Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2)
を製造することができる。
　このバッチは、工程１の後に工程３を含み、かつ工程１と工程２の繰り返しの最終回は、工程２を含まないケースである。
　次に、２つ目のバッチとして、C-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
 (MeGlyOtBu HCl)
を用い、N-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
 (Z-EtPhe(4-Me) Cy2NH)
を用い、工程１を経て
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
 (Z-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造し、工程２を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
 (EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造することができる。
　次に、この化合物をC-保護ペプチドとして用い、N-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
 (Z-Aze(2)) 
を用い、工程１を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
 (Z-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造し、工程２を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
 (Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造することができる。
　次に、この化合物をC-保護ペプチドとして用い、N-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
 (Z-MeAla)
を用い、工程１を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
 (Z-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造し、工程２を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
 (MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造することができる。
　次に、この化合物をC-保護ペプチドとして用い、N-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
 (Z-Ile)
を用い、工程１を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
 (Z-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造し、工程２を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
 (Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造することができる。
　次に、この化合物をC-保護ペプチドとして用い、N-保護アミノ酸として、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
 (Teoc-MeLeu-Opfp)
を用い、工程１を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
 (Teoc-MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造し、工程２を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
 (MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造することができる。
　次に、この化合物をC-保護ペプチドとして用い、N-保護アミノ酸として、１つ目のバッチで製造した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
 を用い、工程１を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
 Z-Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2-MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
を製造し、工程３を経て、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
 Z-Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2-MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGly)
を製造し、工程２を経て、このバッチの目的物である化合物（２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
 Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2-MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGly)
を製造することができる。
　このバッチは、工程１と工程２の繰り返しの最終回において、工程１の後に工程３を含むケースである。
　また、このバッチで得られた化合物２は、単離や精製することなく、本発明の環状ペプチド化合物を製造する方法の原料として利用することができる。
　本発明の方法を用いた上記のバッチはいずれも、中間体を単離や精製することなく目的の直鎖ペプチド化合物を効率的に製造ことができるため、本発明の方法は、大規模スケールでのペプチド合成に非常に有用である。
　ある態様において、本発明のペプチド化合物を製造する方法は、ペプチド化合物のN末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基とを連結する工程をさらに含むことができ、かかる工程を経ることによって環状ペプチド化合物を製造することができる。ある態様において、N末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基との連結は、工程１と工程２を複数回繰り返すことにより製造された、直鎖ペプチド化合物のN末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基を連結することによって達成される。ある態様において、本工程には、前述の「環状ペプチド化合物を製造する方法」の項に記載の方法、例えば、反応条件や試薬を適用することができる。
　ある態様において、本発明は、前記式（１）で表される環状ペプチド化合物の塩、溶媒和物、または塩の溶媒和物に関する。該化合物の溶媒和物は、水和物またはDMSO-水溶媒和物であることが好ましい。
　ある態様において、本発明は、前記式（１）の環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物の結晶に関する。この化合物の結晶として、具体的には、この化合物の非溶媒和物結晶、もしくは溶媒和物結晶、またはこの化合物の塩の非溶媒和物結晶、もしくは溶媒和物結晶が挙げられる。溶媒和物結晶として好ましくは水和物結晶、DMSO-水和物結晶、アセトン-水和物結晶が挙げられる。
　粉末Ｘ線回折における回折角２θは、ＣｕＫα、またはＣｕＫα１放射線を用いて測定した回折ピークである。これらの溶媒和物結晶がさらに粉末Ｘ線回折における回折角２θで特定された結晶を、例えば以下に示す水和物の「Ｃ型結晶」と呼ぶこともあるが、単に「Ｃ型」と呼ぶこともある。
　ある態様において、式（１）の化合物の結晶が、水和物結晶である場合、該結晶は、粉末Ｘ線回折において、回折角２θとして、下記のうちの少なくとも１つのピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有するＣ型結晶である。
４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）
　ある態様において、式（１）の化合物の結晶が、水和物結晶である場合、該結晶は、粉末Ｘ線回折において、回折角２θとして、下記のピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有するＣ型結晶である。
４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）
　回折角２θの表記において、列記された回折角２θの最後に「（±０．２°）」と記載されている場合は、列記された全ての回折角２θにおいて、記載された各値に対して±０．２°の範囲が許容されることを意味する。
　ある態様において、該C型結晶は、図１に記載のものと実質的に同一のX線回折パターンを有する。ある態様において、該C型結晶は、図８に記載のものと実質的に同一のDSCおよびTGサーモグラムを有する。
　ある態様において、式（１）の化合物の結晶が、非溶媒和物結晶である場合、該結晶は、粉末Ｘ線回折において、回折角２θとして、下記のうちの少なくとも１つのピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有するＦ型結晶である。
５．３７０°、６．９３４°、８．９４０°、９．８３８°、１０．７７１°、１２．１８１°、１３．５２５°、１５．１７９°、１６．２０２°、または１７．５５４°（±０．２°）
　ある態様において、該F型結晶は、図２に記載のものと実質的に同一のX線回折パターンを有する。
　ある態様において、式（１）の化合物の結晶が、溶媒和物結晶である場合、該結晶は、粉末Ｘ線回折において、回折角２θとして、下記のうちの少なくとも１つのピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有するＡ型のDMSO-水和物結晶である。
８．００６°、９．００２°、９．９４３°、１１．５０１°、１３．０６７°、１４．８５４°、１６．３２０°、１７．２７５°、１９．２６１°、または２０．３２４°（±０．２°）
　ある態様において、該Ａ型結晶は、図３に記載のものと実質的に同一のX線回折パターンを有する。
　ある態様において、式（１）の化合物の結晶が、溶媒和物結晶である場合、該結晶は、粉末Ｘ線回折において、回折角２θとして、下記のうちの少なくとも１つのピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有するＢ型のDMSO-水和物結晶である。
８．２２３°、９．５９４°、９．９７６°、１１．８７９°、１３．８４１°、１４．５７２°、１５．９３４°、１６．３５０°、１９．８０５°、２０．４８０°（±０．２°）
　ある態様において、該Ｂ型結晶は、図４に記載のものと実質的に同一のX線回折パターンを有する。ある態様において、該Ｂ型結晶は、図５に記載のものと実質的に同一のDSCサーモグラムを有する。
　ある態様において、式（１）の化合物の結晶が、溶媒和物結晶である場合、該結晶は、粉末Ｘ線回折において、回折角２θとして、下記のうちの少なくとも１つのピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有するＨ型のアセトン-水和物結晶である。
７．９４２°、８．２８３°、８．８６１°、１０．０９７°、１０．４９１°、１１．８０５°、１２．６７３°、１２．８３０°、１３．５１４°、１３．８５５°、１５．８５３°、１６．４０５°、１６．６４２°、および１７．７７２°（±０．２°）
　ある態様において、該Ｈ型結晶は、図１３に記載のものと実質的に同一のX線回折パターンを有する。
　ある態様において、式（１）の化合物の結晶は、いずれの形態においても不純物を実質的に含まない。例えば、式（１）の化合物の結晶は、少なくとも約90%の純度を有しうる。ある態様において、式（１）の化合物の結晶は少なくとも約95%の純度を有する。ある態様において、式（１）の化合物の結晶は少なくとも約98%の純度を有する。例えば、式（１）の化合物の結晶は少なくとも98.5%、98.6%、98.7%、98.8%、98.9%、99%、99.1%、99.2%、99.3%、99.4%、99.5%、99.6%、99.7%、99.8%、または99.9%の純度を有しうる。ある態様において、式（１）の化合物の結晶は他の形態を実質的に含まない。
　一態様において、C型結晶は、式(1)で表される化合物の他の結晶形態を実質的に含まない。
　一態様において、F型結晶は、式(1)で表される化合物の他の結晶形態を実質的に含まない。
　一態様において、A型結晶は、式(1)で表される化合物の他の結晶形態を実質的に含まない。
　一態様において、B型結晶は、式(1)で表される化合物の他の結晶形態を実質的に含まない。
　一態様において、H型結晶は、式(1)で表される化合物の他の結晶形態を実質的に含まない。
　ある態様において、本発明は、前記式（１）で表される環状ペプチド化合物の水和物結晶の製造方法に関する。該製造方法は、以下の工程を含む。
工程A：環状ペプチド化合物を該環状ペプチド化合物が溶解可能な量の極性有機溶媒に溶解させて溶液を得る工程、
工程B: 該溶液を濃縮して、該環状ペプチド化合物の残渣を得る工程、および
工程C: 該残渣に水と極性有機溶媒の混合液を加えて、該環状ペプチド化合物の水和物結晶を得る工程。
　ある態様において、工程Aに用いられる極性有機溶媒には、式（１）の環状ペプチド化合物、例えば、粗精製物状態の該環状ペプチド化合物が溶解可能な溶媒を用いることができ、具体的には、DMSO、DMF、DMA、NMP、アセトン、メタノール、エタノール、アセトニトリルなどが好ましく例示され、アセトン、DMSO、またはエタノールがより好ましく例示される。溶解可能な量として、式（１）の環状ペプチド化合物に対し、３～１０ｗ／ｖの範囲、好ましくは３～７ｗ／ｖの範囲を用いることができる。
　ある態様において、工程Bにおける濃縮には、凍結乾燥が含まれる。ある態様において、工程Bで得られた残渣は、アモルファス、油状物質、または固体であることができる。ある態様において、工程Bで得られた残渣は凍結乾燥体であることができる。
　ある態様において、工程Cに用いられる極性有機溶媒は、工程Aに用いられる極性有機溶媒と同様の溶媒であることができる。工程Cに用いられる混合液における水と極性有機溶媒の混合比としては、極性有機溶媒１重量部に対し、水０．５～１０重量部用いることができ、好ましくは、水１～７重量部、さらに好ましくは、水１～５重量部用いることが好ましい。また、工程Cに用いられる極性有機溶媒は、アセトニトリル、エタノール、またはアセトンが好ましい。
　本発明は、前記式（１）で表される環状ペプチド化合物の結晶の製造方法に関する。該製造方法は、
　アモルファス状態の該環状ペプチド化合物をＤＭＳＯに溶解させて溶液を得る工程、
　該溶液を凍結乾燥して、該環状ペプチド化合物の凍結乾燥体を得る工程、および
　該凍結乾燥体に水－アセトニトリル混合液を加えて、該環状ペプチド化合物の水和物結晶を得る工程を含む。
　なお、本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
　本発明の内容を以下の実施例でさらに説明するが、本発明はその内容に限定されるものではない。特に記載したものを除き、出発物質、出発原料、溶媒、および試薬は商業的供給業者から入手、もしくは公知の方法を用いて合成した。化合物２、および化合物３０は、国際公開第２０２０／１８９５４０号に記載の方法により製造した。
　HPLCによる分析条件は以下に示した。
HPLC分析条件 method 1
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class
カラム：Ascentis Express 90A C18 (Sigma-Aldrich), 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法： B) 5%(0 min)→100%(5 min)→5%(5.1 min)→5%(7 min)
流速：0.5 mL/min
カラム温度：35 ℃
検出波長：２１０ｎｍ（ＰＤＡ）
HPLC分析条件 method 2
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class
カラム：Ascentis Express 90A C18 (Sigma-Aldrich), 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B) 5%(0 min)→100%(6 min)→5%(6.1min)→5%(8 min)
流速：0.5 mL/min
カラム温度：35 ℃
検出波長：２１０ｎｍ（ＰＤＡ）
HPLC分析条件 method 3
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class
カラム：CAPCELL CORE ADME (OSAKA SODA), 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B)：5%(0 min)→100%(5 min)→5%(5.1 min)→5%(7 min)
流速：0.5 mL/min
カラム温度：35℃
検出波長：２１０ｎｍ（ＰＤＡ）
HPLC分析条件 method 4
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class
カラム：ACQUITY UPLC CSH C18 (Waters), 2.1 mm ID×100 mm, 1.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B) 20%(0 min)→100%(10 min)→100%(13.5 min)→20%(13.6 min)→20%(18.0 min)
流速：0.3 mL/min
カラム温度：50 ℃
検出波長：２１０ｎｍ（ＰＤＡ）
HPLC分析条件 method 5
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class
カラム：ACQUITY UPLC CSH C18 (Waters), 2.1 mm ID×150 mm, 1.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B) 20%(0 min)→100%(24 min)→100%(29 min)→20%(29.1 min)→20%(34 min)
流速：0.3 mL/min
カラム温度：50 ℃
検出波長：２２０ｎｍ（ＰＤＡ）
HPLC分析条件 method 6
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class
カラム：CAPCELL CORE ADME (OSAKA SODA), 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B)：5%(0 min)→100%(10 min)→5%(10.1 min)→5%(12 min)
流速：0.5 mL/min
カラム温度：35℃
検出波長：２１０ｎｍ（ＰＤＡ）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000055
　LCMSによる分析条件は以下に示した。
LCMS分析条件 method 1 
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA
カラム：Ascentis Express 90A C18 (Sigma-Aldrich), 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法： B) 5%(0 min)→100%(5 min)→5%(5.1 min)→5%(7 min)
流速：0.5 mL/min
カラム温度：35 ℃
検出波長：２１０ｎｍ（ＰＤＡ）
LCMS分析条件 method 2 
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA
カラム：Ascentis Express 90A C18 (Sigma-Aldrich), 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B) 5%(0 min)→100%(6 min)→5%(6.1 min)→5%(8 min)
流速：0.5 mL/min
カラム温度：35 ℃
検出波長：２１０ｎｍ（ＰＤＡ）
LCMS分析条件 method 3 
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA
カラム：CAPCELL CORE ADME (OSAKA SODA), 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B) 5%(0 min)→100%(5 min)→5%(5.1 min)→5%(7 min)
流速：0.5 mL/min
カラム温度：35 ℃
検出波長：２１０ｎｍ（ＰＤＡ）
LCMS分析条件 method 4 
装置：Waters SQD2
カラム：ACQUITY UPLC CSH C18 (Waters), 2.1 mm ID×100 mm, 1.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B) 20%(0 min)→100%(10 min)→100%(13.5 min)→20%(13.6 min)→20%(18.0 min)
流速：0.3 mL/min
カラム温度：50 ℃
検出波長：２１０ｎｍ（ＰＤＡ）
LCMS分析条件 method 5 
装置：Waters SQD2
カラム：ACQUITY UPLC CSH C18 (Waters), 2.1 mm ID×150 mm, 1.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B) 20%(0 min)→100%(24 min)→100%(29 min)→20%(29.1 min)→20%(34 min)
流速：0.3 mL/min
カラム温度：50 ℃
検出波長：２２０ｎｍ（ＰＤＡ）
LCMS分析条件 method 6
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA
カラム：CAPCELL CORE ADME (OSAKA SODA), 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B)：5%(0 min)→100%(10 min)→5%(10.1 min)→5%(12 min)
流速：0.5 mL/min
カラム温度：35℃
検出波長：２１０ｎｍ（ＰＤＡ）
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000056
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000057
　1H-NMRスペクトルは、核磁気共鳴装置ECX500II(JEOL社製)を用いて測定し、内部標準物質として用いたMe4Siのケミカルシフトを0 ppmとし、サンプル溶媒からの重水素ロック信号を参照した。サンプル溶液は、測定の目的に応じた市販の重水素化溶媒をサンプル溶媒として用い、測定対象化合物と混合して調整した。シグナルの積分値は、各シグナルのシグナル面積強度の比をもとに算出した。
　qNMRによる測定法は、目的化合物を含む残渣と内部標準物質をDMSO‐ｄ６に溶解させ、以下の分析条件により行った。収率の算出は、qNMRにより算出された残渣中の目的物の含量の値、およびHPLC分析により算出された残渣の目的物純度の値を用いて、以下の式により行った。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000058
 測定装置：JNM-ECZ500R
内部標準物質：３，５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸
測定条件（１H-NMR）：DMSO-ｄ６, ２４．３℃, パルス角度　９０℃, デジタル分解能　０．２５Hz, 緩和時間　６０秒、 スピン無し、積算回数８回
測定条件（１９F-NMR）：DMSO-ｄ６, ２４．３℃, パルス角度　９０℃, デジタル分解能　０．２２Hz, 緩和時間　６０秒、 スピン無し、積算回数８回
　粉末Ｘ線（XRPD）回折測定は、以下の条件で測定し、走査範囲の２θ値を算出した。X線回折パターンは、回折の角度（２θ値）を横軸上に、回折強度を縦軸上にプロットした。
（測定方法１）
測定装置：SmartLab System（Rigaku Corporation社製）
線源：CuKα1
管電圧：45 kV
管電流：200 mA
走査範囲：3～35°
サンプリング幅：0.02°
（測定方法２）
測定装置：SmartLab System、D/Tex Ultra detector（リガク社製）
線源：CuKα1
管電圧：45 kV
管電流：200 mA
走査範囲：5～30°
走査速度：5°／分
サンプリング幅：0.02°
（測定方法３）
測定装置：D8 Discover、2D VANTEC-500 solid state detector(Bruker社製）
線源：CuKα
管電圧、管電流：40 kV、40 mAまたは50 kV、1000 μA（マイクロフォーカスＸ線源IμS使用時）
測定範囲：5～31°
露光時間：100秒または600秒（マイクロフォーカスＸ線源IμS使用時）
（測定方法４）
測定装置：X’pert-pro MPD（PANalytical社製）
線源：CuKα
管電圧：45 kV
管電流：40 mA
走査範囲：3～40°
走査速度：4.2°／分
サンプリング幅：0.017°
（測定方法４）
測定装置：X’pert-pro MPD（PANalytical社製） 
線源：Cu 
管電圧：45 kV 
管電流：40 mA 
走査範囲：3～25° 
走査速度：0.33°／秒 
サンプリング幅：0.026°
測定：サンプリングした懸濁液をX線結晶解析用キャピラリーに詰め，測定した。
　熱分析は、以下の条件で測定した。
（測定方法１）
測定装置：EXSTAR TG/DTA6200R装置（セイコーインスツルメンツ（現社名：日立ハイテクサイエンス）社製）
測定範囲：30～350℃
昇温速度：10℃／分
雰囲気：窒素
（測定方法２）
測定装置：SmartLab System、DSC attachment（リガク社製）
測定範囲：35～270℃
雰囲気：窒素
ＤＳＣ条件は表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000059
（測定方法３）
測定装置：STA7200RV+AS-3T（日立ハイテクサイエンス製）
測定範囲：30～350℃
昇温速度：10℃／分
雰囲気：窒素
（測定方法４）
測定装置：TGA/DSC 3+（Mettler Toledo製）
測定範囲：25～350℃
昇温速度：10℃/分
雰囲気：乾燥窒素
　HPLCによる測定法は、目的化合物を含む混合液を以下のいずれかの方法にてサンプル調製し、上述の分析条件により行った。
サンプル調製法１：目的化合物を含む混合液を、アセトニトリルで希釈した。
サンプル調製法２：目的化合物を含む混合液を、アセトニトリルとプロピルアミンを９対１の比率で混ぜた混合液で希釈した。
サンプル調製法３：目的化合物を含む混合液を、メタノールで希釈した。
サンプル調整法４：目的化合物を含む混合液を、メタノールと水を４対１の比率で混ぜた混合液で希釈した。
　反応転換率の算出は、HPLC分析により算出された原料の面積値と目的物の面積値、又は原料の面積値と原料のプロピルアミド体の面積値と目的物の面積値、又は反応前の原料の面積値と反応後の原料の面積値を用いて、以下のいずれかの式により行った。
式１：反応転換率（％）＝目的物の面積値/(原料の面積値＋目的物の面積値)×１００
式２：反応転換率（％）＝目的物の面積値/(原料の面積値＋原料のプロピルアミド体の面積値＋目的物の面積値)×１００
式３：反応転換率（％）＝１００-（反応後の原料の面積値/反応前の原料の面積値×１００）
実施例１
化合物４：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[ベンジルオキシカルボニル(エチル)アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
　窒素で置換した反応釜に、室温にて化合物２（４．６０ｋｇ）および化合物３（１．９２ｋｇ）を加え、次いで2-MeTHF（２２．８ｋｇ）を加えて攪拌した。反応釜の外温を１０℃に設定し、DIPEA（６．１５ｋｇ）を加えた後、T3P（５０ w/w％ 2-MeTHF溶液、１３．４５ｋｇ）を滴下した。反応釜の外温を２５℃に設定し、５時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法２）し、HPLC分析により反応転換率が９９．６％であることを確認した（反応転換率の算出式２）。反応釜の外温を１０℃に設定し、撹拌しながら５％炭酸ナトリウム水溶液（２６．６ｋｇ）を滴下し、次いで、水（６．９ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、２０分間攪拌した後、反応釜から水層を排出した。得られた有機層を、同様に外温２５℃にて５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（３４．５ｋｇｘ３）、５％炭酸ナトリウム水溶液（３４．５ｋｇ）で洗浄した。得られた有機層を保管容器に回収し、反応釜を2-MeTHF（２５．６ｋｇ）で洗浄した洗浄液をあわせて保管溶液として保管容器に回収した。窒素で置換した反応釜に前記の保管溶液を、2-MeTHF（１．７ｋｇ）で保管容器内を洗いこみながら加えた。反応釜の外温を５０℃に設定し、液量が１２Ｌ程度になるまで、減圧濃縮した。得られた残渣を保管容器に回収し、反応釜を2-MeTHF（８．５ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物４を含む2-MeTHF溶液（１７．８ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．５００分（HPLC分析条件：method 1）
実施例２
化合物５：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-(エチルアミノ)-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
　窒素で置換した反応釜に、実施例１で得られた化合物４を含む2-MeTHF溶液（１６．９ｋｇ）、2-MeTHF（８．６ｋｇ）を加えた後、５％ Pd/C（１．７８ｋｇ、５０％含水品）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、反応釜の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。１時間後、内圧の変動がないことを確認した後、窒素置換後にさらに水素で０．１８ＭＰａＧまで加圧し、１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応容器内を窒素で置換後、反応混合物を加圧濾過した。反応釜と濾過機を2-MeTHF（１０．８ｋｇ）で洗浄後、濾液と洗浄液を保管溶液として保管容器に回収した。得られた濾液および洗浄液を、液量が５Ｌ程度になるまで外温40℃にて減圧濃縮した。反応釜を、2-MeTHF（８．５ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物５を含む2-MeTHF溶液（１２．４ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．３８９分（HPLC分析条件：method 1）
実施例３
化合物７：（ベンジル (2S)-2-[[(1S)-2-[(2-tert-ブトキシ-2-オキソ-エチル)-メチル-アミノ]-2-オキソ-1-(p-トリルメチル)エチル]-エチル-カルバモイル]アゼチジン-1-カルボキシラート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
　窒素で置換した反応釜に、撹拌しながら実施例２で得られた化合物５を含む2-MeTHF溶液（１２．３ｋｇ）と、化合物６（２．９２ｋｇ）を2-MeTHF（３．８７ｋｇ）に溶解させた溶液を2-MeTHF（８．０ｋｇ）で洗いこみながら加えた。反応釜の外温を１０℃に設定し、撹拌しながらDIPEA（５．３５ｋｇ）を加えた後に、T3P（1.6 M 2-MeTHF溶液、１５．５３ｋｇ）を滴下した。反応釜の外温を２５℃に設定し、反応混合物を２時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．６％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜の外温を１０℃に設定し、反応混合物に５％炭酸ナトリウム水溶液（２５．２ｋｇ）を攪拌しながら加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、１０分間撹拌後、撹拌を停止し、反応釜から水層を排出した。有機層を５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（３３．２ｋｇ）で２回洗浄後、５％炭酸ナトリウム水溶液（３３．２ｋｇ）で洗浄した。有機層を保管容器に回収し、反応釜を、2-MeTHF（２５．６ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて保管溶液として保管容器に回収した。窒素で置換した反応釜に、前記保管溶液を、2-MeTHF（１．７ｋｇ）で保管容器内を洗いこみながら加えた。反応釜の外温を５０℃に設定し、撹拌しながら液量が１２Ｌ程度になるまで、減圧濃縮した。得られた残渣、および反応釜を2-MeTHF（８．５ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物７を含む2-MeTHF溶液（１８．９ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．０６５分（HPLC分析条件：method 1）
実施例４
化合物８：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[(2S)-アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
　窒素で置換した反応釜に、実施例３で得られた化合物７を含む2-MeTHF溶液（１８．７ｋｇ）を、保管容器を2-MeTHF（６．９ｋｇ）で洗いこみながら加えた。反応釜に、５％ Pd/C（１．７４ｋｇ、５０％含水品）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、反応釜の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。５０分攪拌後、内圧の変動がないことを確認した後、窒素置換後にさらに水素で０．１８ＭＰａＧまで加圧し、１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応容器内を窒素で置換後、反応混合物を加圧濾過した。反応釜と濾過機を2-MeTHF（１０．６ｋｇ）で洗浄後、濾液と洗浄液を保管溶液として保管容器に回収した。得られた濾液および洗浄液を、液量が６Ｌ程度になるまで外温40℃にて減圧濃縮した。残渣、および反応釜を2-MeTHF（８．５ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物８を含む2-MeTHF溶液（１４．０ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．５３８分（HPLC分析条件：method 1）
実施例５
化合物１０：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[ベンジルオキシカルボニル(メチル)アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000064
　窒素で置換した反応釜に、実施例４で得られた化合物８を含む2-MeTHF溶液（１３．９ｋｇ）、化合物９（２．３１ｋｇ）、2-MeTHF（１０．４ｋｇ）を順次加えた。反応釜の外温を１０℃に設定し、撹拌しながらDIPEA（４．６１ｋｇ）を加えた後に、T3P（1.6 M 2-MeTHF溶液, １２．１５ｋｇ）を滴下した。反応釜の外温を２５℃に設定し、反応混合物を１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し（サンプル調製法１）、HPLC分析により反応転換率が９６．８％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜の外温を１０℃に設定し、反応混合物に５％炭酸ナトリウム水溶液（２４．３ｋｇ）を撹拌しながら加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、１０分間撹拌後、撹拌を停止し、反応釜から水層を排出した。有機層を５％硫酸水素ナトリウム一水和水溶液（３２．４ｋｇ）で２回洗浄後、５％炭酸ナトリウム水溶液（３２．４ｋｇ）で洗浄した。得られた有機層に2-MeTHF（２５．６ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を５０℃に設定し、撹拌しながら液量が１２Ｌ程度になるまで、減圧濃縮後、残渣を保管容器に回収した。反応釜を、2-MeTHF（８．５ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物１０を含む溶液(１９．０ｋｇ)を得た。
HPLC分析による保持時間：４．００４分（分析条件：method 1）
実施例６
化合物１１：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[エチル-[(2S)-1-[(2S)-2-(メチルアミノ)プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000065
　窒素で置換した反応釜に、実施例５で得られた化合物１０を含む溶液（１８．８ｋｇ）、2-MeTHF（７．０ｋｇ）を順次加えた。反応釜に、５％ Pd/C（１．７０ｋｇ、５０％含水品）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、反応釜の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。1時間４０分後、内圧の変動がないことを確認し、窒素置換後に水素で０．１８ＭＰａＧまで加圧し、２時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜内を窒素で置換後、反応混合物を加圧濾過した。反応釜と濾過機を2-MeTHF（１０．３ｋｇ）で洗浄後、濾液と洗浄液を保管溶液として回収した。得られた濾液および洗浄液を、液量が７Ｌ程度になるまで外温４０℃にて減圧濃縮した。残渣、および反応釜をトルエン（１０．４ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物１１を含む溶液（１６．７ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．５１０分（HPLC分析条件：method 1）
実施例７
化合物１３：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000066
　窒素で置換した反応釜に、実施例６で得られた化合物１１を含む溶液（１６．５ｋｇ）、2-MeTHF（２．１２ｋｇ）を室温にて順次加えた。次いで、反応釜に化合物１２（２．５２ｋｇ）を2-MeTHF（８．１ｋｇ）に溶解した溶液、2-MeTHF（８．１ｋｇ）、アセトニトリル（３．１ｋｇ）を室温にて順次加えた。DIPEA（４．５１ｋｇ）を室温にて攪拌しながら加えた後、反応釜の外温を２５℃に設定し、HATU（４．５２ｋｇ）、2-MeTHF（０．３Ｌ）を順次加えた後、２５ ℃にて1時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜にN-メチルイミダゾール（０．６５ｋｇ）を加え、さらに５％炭酸ナトリウム水溶液（２３．９ｋｇ）を撹拌しながら加えた後に１時間撹拌した。次いで、２．５％アンモニア水溶液（２３．９ｋｇ）を加え、３０分撹拌後に、反応釜から水層を排出した。得られた有機層を、２．５％アンモニア水溶液（３１．９ｋｇ）、１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（３１．９ｋｇ×２）、３％リン酸水素二カリウム水溶液（３１．９ｋｇ）で洗浄した。得られた有機層に2-MeTHF（２５．６ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を５０℃に設定し、撹拌しながら液量が１２Ｌ程度になるまで減圧濃縮した。残渣、および反応釜をアセトン（７．９ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物１３を含む溶液（１８．２ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．２３５分（HPLC分析条件：method 1）
化合物１１と化合物１２の縮合反応（実施例７の反応条件検討）
　化合物１１と化合物１２の縮合反応における溶媒を検討した。縮合反応はHPLC分析により追跡した。収率はHPLC分析により求めたエリア％（Area％）により算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000067
実施例７－１
化合物１３：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成（溶媒の検討）
　実施例６で得られた化合物１１（５０．６９ｍｇ（０．１００ｍｍｏｌ））を含む溶液（７２．６２ｍｇ）を反応容器に加え、外温６０℃にて減圧濃縮乾固した。次いで、反応容器に化合物１２（３２．５０ｍｇ（０．１２２ｍｍｏｌ））を加え、2-MeTHF（０．３５ｍＬ）を室温にて加えた。DIPEA（５８．３ｍｇ（０．４５１ｍｍｏｌ））を室温にて攪拌しながら加えた後、反応容器の外温を２５℃に設定し、HATU（５８．３７ｍｇ（０．１５４ｍｍｏｌ））を加えた後、２５ ℃にて４時間撹拌した。反応容器にN-メチルイミダゾール（８．１７ｍｇ（０．０９９ｍｍｏｌ））を加え、さらに５％炭酸ナトリウム水溶液（３００μＬ）を撹拌しながら加えた後に２時間３０分撹拌した。次いで、不溶物を綿栓にて濾去後、水層を排出した。得られた有機層に２．５％アンモニア水溶液（３００μＬ）を加え、５分間撹拌後に、水層を排出した。得られた有機層を、２．５％アンモニア水溶液（３２０μＬ）、１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（３２０μＬ×２）、３％リン酸水素二カリウム水溶液（３２０μＬ）で洗浄した。得られた有機層を外温６０℃にて減圧濃縮乾固した。得られた残渣をHPLCで分析した。標品を用いたHPLC分析の結果、得られた化合物１３は５６．７７ｍｇ（７５．１％収率）であった。
化合物１３のLCMS　（ESI）：保持時間：４．０１２分、ｍ／ｚ＝７５０　［M＋H］＋（LCMS分析条件：method 1）
HPLC分析による保持時間：４．２６１分（HPLC分析条件：method 1）
　上記の化合物１３の合成法（溶媒の検討）で用いた2-MeTHFに代えて、溶媒として4-メチルテトラヒドロピラン、炭酸ジメチル、酢酸エチル、またはアニソールを用いた場合の結果を下表に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000068
　これらの結果より、2-MeTHFに加え、４－メチルテトラヒドロピラン、炭酸ジメチル、酢酸エチル、またはアニソールが、HATUを用いた縮合反応に適した溶媒であることが示された。2-MeTHFに加え、４－メチルテトラヒドロピラン、炭酸ジメチル、酢酸エチル、またはアニソールが、化合物１１と化合物１２を縮合させて化合物１３を製造するのに適した溶媒であることが示された。特に、2-MeTHFが目的物の収率の観点から適した溶媒であることが示された。
実施例８
化合物１５：（(2,3,4,5,6-ペンタフルオロフェニル) (2S)-4-メチル-2-[メチル(2-トリメチルシリルエトキシカルボニル)アミノ]ペンタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000069
　窒素で置換した反応釜に、化合物１４（３．０ｋｇ）、酢酸イソプロピル（１３．７ｋｇ）、およびDMF（１８．３ｋｇ）を室温にて順次加えた。ペンタフルオロフェノール（２．３８ｋｇ）を酢酸イソプロピル（２．８ｋｇ）に溶解した溶液、酢酸イソプロピル（０．６ｋｇ）を室温にて攪拌しながら順次加えた。反応釜の外温を０℃に設定し、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（２．４８ｋｇ）を反応釜に加えた。反応釜の外温を１時間かけて２５℃まで昇温した後、外温２５℃にて２時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により原料の化合物１４が未検出となっていることを確認した（反応転換率の算出式３）。反応釜の外温を０℃に設定し、０．５Ｍ 塩酸水溶液（１９．４ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定した後10分攪拌し、撹拌を停止後、反応釜から水層を排出した。得られた有機層を０．５Ｍ 塩酸水溶液（２７．５ｋｇ）で洗浄した。得られた有機層に、５％炭酸カリウム水溶液（２７．５ｋｇ×２）、次いでDMF（２．８ｋｇ）を加えた。反応混合物を１０分間撹拌し、撹拌を停止後、反応釜から水層を排出した。得られた有機層を、５％炭酸カリウム水溶液（２７．５ｋｇ）、次いで１０％塩化ナトリウム水溶液（２７．５ｋｇ）で洗浄した。酢酸イソプロピル（２７．６ｋｇ）を加えた後、液量が８Ｌ程度になるまで外温４０℃にて減圧濃縮した。残渣、および反応釜をアセトン（８．７ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物１５を含む溶液（１６．２ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：６．１７５分（HPLC分析条件：method 2）
実施例９
化合物１６：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[エチル-[(2S)-1-[(2S)-2-[メチル-[(2S,3S)-3-メチル-2-[[(2S)-4-メチル-2-[メチル(2-トリメチルシリルエトキシカルボニル)アミノ]ペンタノイル]アミノ]ペンタノイル]アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000070
　窒素で置換した反応釜に、実施例８で得られた化合物１５を含む溶液（７．４ｋｇ）と、実施例７で得られた化合物１３を含む溶液（９．０ｋｇ）、酢酸イソプロピル（４．０ｋｇ）、Ｎ－メチルモルホリン（２．３８ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜に、５％ Pd/C（０．８３ｋｇ、５０％含水品）を加えた後に、反応釜の外温を２５℃に設定し、反応釜の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。１時間後、内圧の変動がないことを確認した後、水素で０．１８ＭＰａＧまで加圧し、さらに１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜内を窒素で置換後、反応混合物を加圧濾過した。反応釜内と濾過機を2-MeTHF（１０．０ｋｇ×２）で洗浄後、濾液と洗浄液をあわせて保管溶液（第一バッチ）として得た。
　窒素で置換した反応釜に、実施例８で得られた化合物１５を含む溶液（７．４ｋｇ）と、実施例７で得られた化合物１３を含む溶液（９．０ｋｇ）、酢酸イソプロピル（４．０ｋｇ）、Ｎ－メチルモルホリン（２．３８ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜に、５％Pd/C（０．８３ｋｇ、５０％含水品）を加えた後に、反応釜の外温を２５℃に設定し、反応釜の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。１時間後、内圧の変動がないことを確認した後、水素で０．１８ＭＰａＧまで加圧し、さらに１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜内を窒素で置換後、反応混合物を加圧濾過した。反応釜内と濾過機を2-MeTHF（１０．０ｋｇ×２）で洗浄後、濾液と洗浄液をあわせて保管溶液（第二バッチ）として得た。
　窒素で置換した反応釜に前記のそれぞれの保管溶液および2-MeTHF（１．８ｋｇ）を加え、液量が２０Ｌ程度になるまで外温４０℃にて減圧濃縮した。濃縮残渣を加圧濾過した。反応釜内と濾過機を2-MeTHF（８．５ｋｇｘ２）で洗浄後、濾液と洗浄液をあわせて保管溶液として保管容器に回収した。窒素で置換した反応釜に、上記の保管溶液および2-MeTHF（３．１ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、５％炭酸カリウム水溶液（２５．９ｋｇ）と４－ジメチルアミノピリジン（０．９６ｋｇ）を攪拌しながら順次加えた。３０分後に撹拌を停止し、反応釜から水層を排出した。有機層を５％硫酸水素カリウム水溶液（３４．１ｋｇ×２）、５％炭酸カリウム水溶液（３４．１ｋｇ）で２回洗浄した。2-MeTHF（２６．５ｋｇ）を加え、液量が１２Ｌ程度になるまで外温５０℃にて減圧濃縮した。得られた残渣と、反応釜内を2-MeTHF（８．５ｋｇ）で洗浄した洗浄液とを合わせて化合物１６を含む溶液（１９．０ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：５．９６４分（HPLC分析条件：method 2）
実施例９－１（実施例９で用いた酢酸イソプロピルに代えて、2-MeTHFを用いた場合）
化合物１６（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[エチル-[(2S)-1-[(2S)-2-[メチル-[(2S,3S)-3-メチル-2-[[(2S)-4-メチル-2-[メチル(2-トリメチルシリルエトキシカルボニル)アミノ]ペンタノイル]アミノ]ペンタノイル]アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000071
　反応容器に、実施例７で得られた化合物１３を含む保管溶液（４８２．７ｍｇ）を加え減圧濃縮し、化合物１３を含む残渣を得た。反応容器に、化合物１５を含む残渣（９１．２ｍｇ，８１．２ｗｔ％）と2-MeTHF（１０００μＬ）を室温にて順次加えた。反応容器に、５％Pd/C（２９．８ｍｇ、５０％含水品）を加えた後に外温を２５℃に設定し、水素ガスによる脱気置換を行い１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し（サンプル調製法１）、HPLC分析に付して反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応混合物を濾過し、残渣を2-MeTHF（４００μＬ×２）で洗浄した。ろ液を含んだ反応容器の外温を２５℃に設定し、５％炭酸カリウム水溶液（４４０μＬ）と４－ジメチルアミノピリジン（１６．６ｍｇ）を攪拌しながら順次加えた。３０分後に撹拌を停止し、水層を排出した。有機層を５％硫酸水素カリウム水溶液（４４０μＬ×２）、５％炭酸カリウム水溶液（４４０μＬ×２）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し、化合物１６を含む残渣（１１３．３ｍｇ）を得た。取得した残渣をアセトニトリルで希釈し、ＬＣＭＳ分析に付した（method 2：化合物１６の保持時間；５．５７３分、ｍ／ｚ＝９１０　［M+Na]+）。得られた残渣と３，５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO-d6に溶解させ、qNMR分析に付した（収率：５８％）。
実施例９－２（実施例９で用いた酢酸イソプロピルに代えて、炭酸ジメチルを用いた場合）
化合物１６（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[エチル-[(2S)-1-[(2S)-2-[メチル-[(2S,3S)-3-メチル-2-[[(2S)-4-メチル-2-[メチル(2-トリメチルシリルエトキシカルボニル)アミノ]ペンタノイル]アミノ]ペンタノイル]アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
　反応容器に、実施例７で得られた化合物１３を含む保管溶液（４７７．４ｍｇ）を加え減圧濃縮し、化合物１３を含む残渣を得た。反応容器に、化合物１５を含む残渣（９２．０ｍｇ，８１．２ｗｔ％）と炭酸ジメチル（１０００μＬ）を室温にて順次加えた。反応容器に、５％Pd/C（２９．７ｍｇ、５０％含水品）を加えた後に外温を２５℃に設定し、水素ガスによる脱気置換を行い１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し（サンプル調製法１）、HPLC分析に付して反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応混合物を濾過し、残渣を炭酸ジメチル（４００μＬ×２）で洗浄した。ろ液を含んだ反応容器の外温を２５℃に設定し、５％炭酸カリウム水溶液（８８０μＬ）と４－ジメチルアミノピリジン（１７．１ｍｇ）を攪拌しながら順次加えた。３０分後に撹拌を停止し、水層を排出した。有機層を５％硫酸水素カリウム水溶液（８８０μＬ×２）、５％炭酸カリウム水溶液（８８０μＬ×２）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し、化合物１６を含む残渣（１０７．３ｍｇ）を得た。取得した残渣をアセトニトリルで希釈し、ＬＣＭＳ分析に付した（method 2：化合物１６の保持時間；５．５７９分、ｍ／ｚ＝９１０　［M+Na]+）。得られた残渣と３，５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO-d6に溶解させ、qNMR分析に付した（収率：６２％）。
実施例９－３（実施例９で用いた酢酸イソプロピルに代えて、アニソールを用いた場合）
　化合物１６の上記の合成法で用いた2-MeTHFに代えて、溶媒として炭酸ジメチル、アニソールを用いた場合の結果を下表に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000072
実施例１０
化合物１７：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[エチル-[(2S)-1-[(2S)-2-[メチル-[(2S,3S)-3-メチル-2-[[(2S)-4-メチル-2-(メチルアミノ)ペンタノイル]アミノ]ペンタノイル]アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000073
　窒素で置換した反応釜に、実施例９で得られた化合物１６を含む溶液（１８．８ｋｇ）、2-MeTHF（５．８ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を４７℃に設定し、テトラブチルアンモニウムフロリド（1 M THF溶液、１７．６ｋｇ）を1時間かけて加えた。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により原料の化合物１６が未検出となっていることを確認した（反応転換率の算出式１）。撹拌停止後、反応混合物を半分ずつに分割した。分割した反応混合物に酢酸イソプロピル（９．１ｋｇ）を加え、反応釜の外温を２５℃に設定し、撹拌しながら有機層を５％炭酸カリウム水溶液（１０．３ｋｇｘ３）で洗浄した。得られた有機層を保管溶液で保管した。分割したもう一方の反応混合物も同様の操作を行い、得られた有機層を合わせ、液量が１２Ｌ程度になるまで減圧濃縮した。得られた残渣と、反応釜内を2-MeTHF（８．５ｋｇ）で洗浄した洗浄液とを合わせて化合物１７を含む溶液（１２．６ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：３．０５７分（HPLC分析条件：method 1）
実施例１１
化合物１９：（tert-ブチル (3S)-3-[ベンジルオキシカルボニル(メチル)アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000074
　窒素で置換した反応釜に、化合物１８（４．７８ｋｇ）、2-MeTHF（２３．８ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を１０℃に設定し、反応混合物を撹拌しながらDIPEA（３．２２ｋｇ）、ジメチルアミン－THF溶液（2 M、THF溶液、５．４９ｋｇ）を順次加えて３０分間撹拌した。T3P （５０％w／w 2-MeTHF溶液、８．６４ｋｇ）を加えた後、反応釜の外温を２５℃に設定し、６時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法３）し、HPLC分析により反応転換率が９６．２％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜の外温を１０℃に設定し、反応混合物に１０％クエン酸一水和物水溶液（２８．７ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、１０分間撹拌後、撹拌を停止し、反応釜から水層を排出した。得られた有機層を１０％クエン酸一水和物水溶液（２８．７ｋｇ×２）および５％炭酸ナトリウム水溶液（２８．７ｋｇｘ３）で洗浄した。得られた有機層に2-MeTHF（２６．０ｋｇ）を加え、液量が７Ｌ程度になるまで外温６０℃にて減圧濃縮した。残渣、および反応釜を2-MeTHF（６．８ｋｇ×２）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物１９を含む溶液（１９．８ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：３．５１０分（HPLC分析条件：method 3）
実施例１２
化合物２０：（tert-ブチル (3S)-4-(ジメチルアミノ)-3-(メチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000075
　窒素で置換した反応釜に、５％ Pd/C（１．３１ｋｇ、５０％含水品）、実施例１１で得られた化合物１９を含む溶液（１９．８ｋｇ）、2-MeTHF（６．０ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、反応釜の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。２時間撹拌後、内圧の変動がないことを確認した後、反応釜を水素で０．１８ＭＰａＧまで加圧し、さらに１．５時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が１００％（原料が未検出）であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜内を窒素で置換後、反応混合物を加圧濾過した。反応釜内と濾過機を2-MeTHF（１１．３ｋｇｘ３）で洗浄後、濾液と洗浄液を保管溶液として保管容器に回収した。窒素置換した反応釜に、前記保管溶液、および2-MeTHF（０．４ｋｇ）を加え、液量が４Ｌ程度になるまで外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。残渣、および反応釜を2-MeTHF（６．８ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物２０を含む溶液（１０．４ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：１．５６０分（HPLC分析条件：method 3）
実施例１３ 
化合物２２：（tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-[ベンジルオキシカルボニル(メチル)アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000076
　実施例１２で得られた化合物２０を含む溶液（１０．３ｋｇ）を加え、液量が１０Ｌ程度になるまで外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。化合物２１（６１ w/w% MeTHF溶液、４．９７ｋｇ）、2-MeTHF（１．０Ｌ）、アセトニトリル（２．８ｋｇ）を室温にて加えた。外温を１０℃に冷却し、DIPEA（４．９３ｋｇ）、HATU (４．９５ｋｇ)を順次加えた後、外温を２５℃に昇温した。反応混合物を２５ ℃にて４時間撹拌した後、反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．３％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜にCPME（４．０ｋｇ）、５％炭酸カリウム水溶液（３．５ｋｇ）、N-メチルイミダゾール（７１２ｇ）を順次加え、３０分間撹拌した。ついで、２．５％アンモニア水溶液（１４．１ｋｇ）と2-MeTHF（３．９ｋｇ）を加え１０分撹拌後、水層を排出した。得られた有機層を２．５％アンモニア水溶液（１７．６ｋｇ）、１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１７．６ｋｇｘ３）、５％炭酸カリウム水溶液（１７．６ｋｇ）で洗浄した。得られた有機層を液量が９Ｌ程度になるまで、外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。2-MeTHF（１３．６ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて加え、化合物２２を含む溶液（２１．６ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．３５６分（HPLC分析条件：method 3）
化合物２０と化合物２１の縮合反応（実施例１３の反応条件検討）
　化合物２０と化合物２１の縮合反応における溶媒を検討した。縮合反応はHPLC分析により追跡した。収率はHPLC分析により求めたエリア％（Area％）、およびqNMRの測定値より算出した。
実施例１３－１（実施例１３で用いた２－ＭｅＴＨＦ及びアセトニトリルに代えて、アニソールを用いた場合）
化合物２２　（tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-[ベンジルオキシカルボニル(メチル)アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000077
　反応容器に実施例１２で得られた化合物２０を含む溶液（５９０．９ｍｇ）に、化合物２１（６１ｗ／ｗ％ ２－ＭｅＴＨＦ溶液、２５２．７ｍｇ）を順次加えて減圧濃縮し、化合物２０、および２１を含む残渣を得た。反応容器にアニソール（８００μＬ）を室温にて加え、残渣を溶解させた。外温を１０℃に冷却し、反応混合物にDIPEA（３３４μＬ）、HATU (２４８．２ｍｇ)を順次加えた後、外温を２５℃に昇温した。反応混合物を２５ ℃にて５時間撹拌した後、反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９７．０％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。外温を１０℃に設定し、反応容器にN-メチルイミダゾール（３４．６μＬ）、５％炭酸カリウム水溶液（２００μＬ）を順次加え、外温を２５℃に設定し３０分間撹拌した。ついで、２．５％アンモニア水溶液（８００μＬ）とアニソール（２６０μＬ）を加え１０分撹拌後、水層を排出した。得られた有機層を２．５％アンモニア水溶液（１０００μＬ）、１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１０００μＬ×３）で洗浄した。得られた有機層に溶媒（アニソール（２６０μＬ））を加え、１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１０００μＬ×１）、５％炭酸カリウム水溶液（１０００μＬ×２）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し、化合物２２（１７５．７ ｍｇ、収率：８２％）を含む残渣を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：保持時間：４．２６９分、ｍ／ｚ＝５２６　［M+Na］＋（ＬＣＭＳ分析条件 method 3）
収率：８２％（得られた残渣と３，５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO‐d6に溶解させ、qNMR分析に付した。）
　実施例１３－１の化合物２２の合成法（溶媒の検討）で用いたアニソールに代えて、溶媒として炭酸ジメチル、酢酸エチル、または2-MeTHFを用いた場合の結果を下表に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000078
　これらの結果より、アセトニトリルに代えて、アニソール、炭酸ジメチル、酢酸エチル、および2-MeTHFが、化合物２２の製造において適した溶媒であることが示された。特に、アニソール、または酢酸エチルを溶媒として用いると目的物の収率の観点から適していることが示された。
実施例１４
化合物２３：（tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-シクロペンチル-2-(メチルアミノ)アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000079
　窒素で置換した反応釜に、５％ Pd/C（１．２６ｋｇ、５０％含水品）、実施例１３で得られた化合物２２を含む溶液（２１．０ｋｇ）、2-MeTHF（５．１ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、反応容器の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。４０分間撹拌後、内圧の変動がないことを確認した後、反応釜を水素で０．１８ＭＰａＧまで加圧し、さらに１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転化率が１００％（原料が未検出）であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜内を窒素で置換後、反応混合物を加圧濾過した。反応釜内と濾過機を2-MeTHF（１０．９ｋｇｘ４、５．４ｋｇ）で洗浄し、濾液と洗浄液を保管溶液として回収した。得られた濾液および洗浄液を、反応混合物の液量が６Ｌ程度になるまで外温６０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。残渣、および反応釜を2-MeTHF（６．８ｋｇ）を用いて洗浄した洗浄液を合わせて化合物２３を含む溶液（１１．８ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．２９７分（HPLC分析条件：method 3）
実施例１５
化合物２５：（tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-シクロペンチル-2-[メチル-[1-[(2,2,2-トリフルオロアセチル)アミノ]シクロペンタンカルボニル]アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000080
　窒素で置換した反応釜に、化合物２４（３．７６ｋｇ）、2-MeTHF（１３．０ｋｇ）を室温にて加えた。反応釜の外温を１０℃に設定し、DIPEA（５．３９ｋｇ）、実施例１４で得られた化合物２３を含む溶液（１１．７ｋｇ）、T3P（５０％ 2-MeTHF溶液、１４．１ｋｇ）、およびDMAP（２．０４ｋｇ）を順次加えた。反応釜の外温を５０℃に設定し、４時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し（サンプル調製法１）、HPLC分析により反応転化率が９９．０％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜の外温を１０℃に設定し、５％炭酸ナトリウム水溶液（２５．３ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、３０分間撹拌後、撹拌を停止し、反応釜から水層を排出した。ついで、反応釜の外温を１５℃に設定し、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（２５．３ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、１０分間撹拌後、撹拌を停止し、反応釜から水層を排出した。得られた有機層を、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（２５．３ｋｇ）、５％炭酸ナトリウム水溶液（２５．３ｋｇ）で洗浄した。2-MeTHF（２６．０ｋｇ）を加え、液量が１０Ｌ程度になるまで外温６０℃にて減圧濃縮した。残渣、反応釜を2-MeTHF（４．５ｋｇ）とMeOH（２．１ｋｇ）の混合溶媒で洗浄した洗浄液、および反応釜を2-MeTHF（６．８ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物２５を含む溶液（２２．６ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：６．１６６分（HPLC分析条件：method 3）
実施例１６
化合物２６：（tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-[(1-アミノシクロペンタンカルボニル)-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000081
　窒素で置換した反応釜に、実施例１５で得られた化合物２５を含む溶液（２２．４ｋｇ）、2-MeTHF（０．７６ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を－２０℃に設定し、撹拌しながらLiBH4（１０w/w％ THF溶液、３．６７ｋｇ）を加えた後、２時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法４）し、HPLC分析により反応転換率が１００％（原料が未検出）であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜に２，２，２－トリフルオロエタノール（１６．５ｋｇ）を外温－２０～－３０℃にて３時間かけて滴下した。ついで、反応釜の外温を１時間かけて０℃に昇温した後、外温０℃にてさらに１時間攪拌した。反応釜に２０％塩化アンモニウム水溶液（１４．３ｋｇ）を加え、１３分間攪拌後、撹拌を停止し、反応釜から水層を排出した。反応釜の外温を１０℃に設定し、トリフルオロ酢酸（１．８８ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、１時間撹拌した。得られた反応混合物、および反応釜を2-MeTHF（６．７ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて保管容器に回収した。窒素で置換した別の反応釜に2 M 水酸化ナトリウム水溶液（６１．９ｋｇ）を室温にて加え、反応釜の外温を１０℃に設定した。これに対し、上記の保管容器に回収した反応混合物を７０分間かけて滴下した後、2-MeTHF（０．６ｋｇ）を加え、反応釜の外温を２５℃に設定した。１０分間攪拌後、撹拌を停止し、反応釜から水層を排出した。得られた有機層を２Ｍ 水酸化ナトリウム水溶液（４７．６ｋｇｘ２）、１０％リン酸水素二カリウム水溶液（２３．８ｋｇ）で洗浄した。得られた有機層を、液量が４０Ｌ程度になるまで外温４０℃にて減圧濃縮した。得られた濃縮液に2-MeTHF（３０．５ｋｇ）を加えた後、有機層を２．５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（３４ｋｇ）、常水（３４ｋｇ）で洗浄し、目的物を水層に抽出した。合わせた水層を2-MeTHF（４８．９ｋｇ）とヘプタン（３．９ｋｇ）の混液で2回洗浄した後、2-MeTHF （５３．８ｋｇ)を加え、１５％炭酸ナトリウム水溶液（１５．２ｋｇ）を攪拌しながら加えた。水層を排出した後、有機層を５％リン酸水素二カリウム水溶液（３１．５ｋｇ）で洗浄した。得られた有機層に2-MeTHF（２５．９ｋｇ）を加えた後、反応混合物の液量が８Ｌ程度になるまで外温４０℃にて減圧濃縮した。得られた残渣に2-MeTHF（９．８ｋｇ）を加え、反応混合物の液量が８Ｌ程度になるまで外温４０℃にて減圧濃縮した。残渣、および反応釜をアセトニトリル（６．２ｋｇｘ２）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物２６を含む溶液（１９．３ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．７２５分（HPLC分析条件：method 3）
実施例１５－１
化合物２５ａ： tert-ブチル N 2 -{(2S)-2-[(1-{[(ベンジルオキシ)カルボニル]アミノ}シクロペンタン-1-カルボニル)(メチル)アミノ]-2-シクロペンチルアセチル}-N,N,N 2 -トリメチル-L-α-アスパラギナートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000082
　反応容器に、化合物２３ HCl塩（１．００ｇ）、アセトニトリル（１０．０１ｍＬ）を室温にて順次加えた。次いで、DIPEA（２．７２ｍＬ）を室温にて撹拌しながら加えた後、化合物２４ａ（１．７４ｇ）、HATU（２．７５ｇ）を加え、５０℃で６時間攪拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し（サンプル調製法１）、HPLC分析に付して反応転換率が９９．７％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応容器に、N-メチルイミダゾール（０．７８ｍＬ）、市水（３．９９ｍＬ）を加えた後に１時間攪拌した。次いで、２５℃まで冷却した後に１４時間攪拌した。反応混合物を濾過し、残渣をアセトニトリル/水混液（８：３ (ｖ／ｖ)，５．３３ｍＬ）で洗浄した。濾別した固体を減圧乾燥し、化合物２５ａ（１．２７ｇ）を得た。
取得した固体をアセトニトリルに希釈し、HPLC分析に付した（method 6化合物２５ａの保持時間；６．７１２分）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：保持時間：６．６９６分、ｍ／ｚ＝６３７．２９　［M+Na］＋（LCMS分析条件 method 6）
収率：８４％
実施例１６－１
化合物２６： tert-ブチル N 2 -{(2S)-2-[(1-アミノシクロペンタン-1-カルボニル)(メチル)アミノ]-2-シクロペンチルアセチル}-N,N,N 2 -トリメチル-L-α-アスパラギナートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000083
　反応容器に、５％Pd/C（０．８５ｇ、５０％含水品）とTHF（１４．０４ｍＬ）を室温にて加えた後に外温を２５℃に設定した。次いで、反応容器にTHF（４２．１２ｍＬ）に溶解させた化合物２５ａ（３．５１ｇ）を室温にて加えた後に外温を２５℃に設定し、水素ガスによる脱気置換を行い２時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し（サンプル調製法１）、HPLC分析に付して反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応混合物を濾過し、残渣をTHF（１４．０４ｍＬ×２）で洗浄した。得られた溶液を減圧濃縮し、化合物２６を含む残渣（７．３７ｇ）を得た。得られた残渣と得られた残渣と１，３，５－トリメトキシベンゼンをDMSO‐d6に溶解させ、qNMR分析に付した（収率：９３％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：保持時間：２．４２１分、ｍ／ｚ＝５０３．１９　［M+Na］＋（LCMS分析条件 method 3）
実施例１７
化合物２８：（ベンジル (2S)-2-[[1-[[(1S)-2-[[(1S)-3-tert-ブトキシ-1-(ジメチルカルバモイル)-3-オキソ-プロピル]-メチル-アミノ]-1-シクロペンチル-2-オキソ-エチル]-メチル-カルバモイル]シクロペンチル]カルバモイル]ピロリジン-1-カルボキシラート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000084
　窒素で置換した反応釜に、化合物２７（２．６５ｋｇ）、アセトニトリル（２．９ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を１０℃に設定し、実施例１６で得られた化合物２６を含む溶液（１９．１ｋｇ）、DIPEA（３．１７ｋｇ）、および2-ブロモ-1-エチルピリジニウム テトラフルオロホウ酸塩（３．３６ｋｇ）を順次加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、２時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．３％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜の外温を１０℃に設定し、CPME（３４．１ｋｇ）、５％炭酸ナトリウム水溶液（２３．６ｋｇ）、N-メチルイミダゾール（０．６７ｋｇ）を順次加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、４０分間撹拌した後、反応釜から水層を排出した。反応釜の外温を１０℃に設定し、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（２３．６ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、１０分間撹拌した後、反応釜から水層を排出した。得られた有機層を５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（２３．６ｋｇ×２）、５％炭酸ナトリウム水溶液（２３．６ｋｇｘ２）で洗浄後、2-MeTHF（２６．０ｋｇ）を加えた。得られた有機層を、液量が１２Ｌ程度になるまで外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。得られた残渣に対して、THF（１９．７ｋｇ）を加えた後、液量が１２Ｌ程度になるまで外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。反応釜の外温を２０℃に設定した後、反応釜にCPME（９．０ｋｇ）を加えた。液量が１２Ｌ程度になるまで外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。反応釜にCPME（１０．０ｋｇ）を加え、液量が１２Ｌ程度になるまで外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。撹拌停止後、反応釜にTHF（１４．１ｋｇ）を加えた。得られた残渣、および反応釜をTHF（５．２ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物２８を含む溶液（２８．８ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．１８９分（HPLC分析条件：method 3）
実施例１７－１（実施例１７の合成法で用いたアセトニトリルに代えて、2-MeTHFを用いた場合）
化合物２８：（ベンジル (2S)-2-[[1-[[(1S)-2-[[(1S)-3-tert-ブトキシ-1-(ジメチルカルバモイル)-3-オキソ-プロピル]-メチル-アミノ]-1-シクロペンチル-2-オキソ-エチル]-メチル-カルバモイル]シクロペンチル]カルバモイル]ピロリジン-1-カルボキシラート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000085
　反応容器に化合物２６を含む保管溶液（１．２９ｇ）を反応容器に加え、外温４０度で減圧濃縮乾固した。次いで、反応容器に2-MeTHF（０．９１ｍＬ）、化合物２７（１２６．９０ｍｇ）を加えた。DIPEA（０．３７ｍＬ）を室温にて撹拌しながら加えた後、HATU（３３８．３０ｍｇ）を加え、室温で3時間撹拌した。反応容器に2-MeTHF（１．８４ｍＬ）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１．０９ｍＬ）を加え、さらにN-メチルイミダゾール（３０．３０μＬ）を加えた後に３０分撹拌した。水層を排出したのち、得られた有機層を２．５％アンモニア水溶液（１．０９ｍＬ）、５％硫酸水素ナトリウム一水素和物水溶液（１．０９ｍＬ×２）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１．０９ｍＬ×２）、２．５％アンモニア水溶液（１．０９ｍＬ×３）、５％硫酸水素ナトリウム一水素和物水溶液（１．０９ｍＬ×２）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１．０９ｍＬ×２）で洗浄した。得られた有機層を外温４０℃にて減圧濃縮乾固し、化合物２８を含む残渣（０．１９ｇ、収率５０．９％）を得た。
LCMS(ESI)：保持時間：４．１７８分、ｍ／ｚ＝７３５　［M+Na］＋（LCMS分析条件 method 3）
収率：５０．９％（得られた残渣と３，５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO‐d6に溶解させ、qNMR分析に付した。）
実施例１８
化合物２９：（tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-シクロペンチル-2-[メチル-[1-[[(2S)-ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000086
　窒素で置換した反応釜に、５％Pd/C（１．１６ｋｇ、５０％含水品）、実施例１７で得られた化合物２８を含む溶液（２７．４ｋｇ）、THF（０．４ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、反応釜の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。２時間３０分後、内圧の変動がないことを確認した後、窒素置換後に水素で０．１８ＭＰａＧまで加圧し、さらに１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）しHPLC分析により反応転換率が９９．６％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜内を窒素で置換後、反応混合物を加圧濾過した。反応釜と濾過機を2-MeTHF（１０．０ｋｇｘ３）で洗浄した。得られた濾液および洗浄液を、液量が９Ｌ程度になるまで外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。得られた残渣に2-MeTHF（６．９ｋｇ）を加え、再度、反応混合物の液量が９Ｌ程度になるまで外温４０℃にて減圧濃縮した。再度、得られた残渣に2-MeTHF（４．３ｋｇ）を加え、反応混合物の液量が９Ｌ程度になるまで外温４０℃にて減圧濃縮し、化合物２９を含む反応混合物の濃縮液を得た。
HPLC分析による保持時間：２．８４６分（HPLC分析条件：method 3）
実施例１８－１（実施例１８の合成法で用いたTHF／2-MeTHFに代えて、2-MeTHFを用いた場合）
化合物２９：（tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-シクロペンチル-2-[メチル-[1-[[(2S)-ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000087
　実施例１７で得られた化合物２８（１２１．４９ｍｇ）を含む溶液（１０１４．９２ｍｇ）を反応容器に加え、外温６０℃にて減圧濃縮乾固した。次いで、窒素で置換した反応容器に、2-MeTHF（２０８１ｍｇ）、５％Pd/C（２５．８９ｍｇ、５０％含水品）を室温にて順次加えた。反応容器の外温を２５℃に設定し、反応容器の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。７時間後、反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し（サンプル調製法１）、HPLC分析により反応転換率が９９．９％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応容器内を窒素で置換後、反応混合物を減圧濾過した。反応容器と桐山漏斗およびフィルターを2-MeTHF（１０４１ｍｇｘ３）で洗浄した。得られた溶液をHPLCで分析した。標品を用いたHPLC分析の結果、得られた化合物２９は９１．００ｍｇ（９２．３％収率）であった。
化合物２９のLCMS（ESI）：保持時間：２．８２６分、ｍ／ｚ＝５７８　[M+H]＋（LCMS分析条件：method 3）
実施例１９
化合物３１：（tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000088
　実施例１８で得られた化合物２９を含む反応混合物の濃縮液が入った、窒素で置換した反応釜に、2-MeTHF（５．０ｋｇ）、化合物３０（３．０８ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を１０℃に設定し、DIPEA（２．４４ｋｇ）、T3P（５０ｗｔ％　2-MeTHF溶液（６．５６ｋｇ））、2-MeTHF（０．４ｋｇ）を攪拌しながら順次加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、1時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．３％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜の外温を１５℃に設定し、撹拌しながら５％炭酸カリウム水溶液（１５．９ｋｇ）、N-メチルイミダゾール（３５２．４ｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、３時間３０分間撹拌後、反応釜から水層を排出した。反応釜の外温を２０℃に設定し、１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１４．９ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、１５分間撹拌後、反応釜から水層を排出した。得られた有機層を１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１４．９ｋｇ）で洗浄した後、得られた有機層にアセトニトリル（４．５ｋｇ）、MTBE（４．４ｋｇ）、ヘプタン（６．２ｋｇ）、および２．５％炭酸カリウム水溶液（１４．１ｋｇ）を外温25℃にて順次加えた。１０分間撹拌した後、撹拌を停止後、反応釜から水層を排出した。得られた有機層に２．５％炭酸カリウム水溶液（２１．３ｋｇ）、アセトニトリル（６．６ｋｇ）、および2-MeTHF（２．１ｋｇ）を加え１０分間撹拌し、撹拌を停止後、反応釜から水層を排出した。得られた有機層に２．５％炭酸カリウム水溶液（２１．３ｋｇ）、およびアセトニトリル（６．６ｋｇ）を加え１０分間撹拌し、撹拌を停止後、反応釜から水層を排出した。得られた有機層に2-MeTHF（２６．０ｋｇ）を追加し、反応混合物の液量が９Ｌ程度になるまで外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。得られた残渣に酢酸イソプロピル（１５．１ｋｇ）を加え、反応混合物の液量が９Ｌ程度になるまで減圧濃縮する操作を2度繰り返した。残渣、および反応釜を酢酸イソプロピル（７．０ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物３１を含む溶液（１６．５ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．９７８分（HPLC分析条件：method 3）
実施例２０
化合物３２：（(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタン酸）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000089
　窒素で置換した反応釜に、実施例１９で得られた化合物３１を含む溶液（１６．３ｋｇ）、酢酸イソプロピル（５．７ｋｇ）、ヘキサメチルジシラザン（１．６９ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を１０℃に設定し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（１．８７ｋｇ）を攪拌しながら加えた。外温を20℃から30℃に保ちながら、反応混合物を1時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜の外温を０℃に設定し、反応釜に2-MeTHF（１７．６ｋｇ）、５％リン酸水素二カリウム水溶液（４１．１ｋｇ）を順次加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、反応混合物を１０分撹拌後、撹拌を停止し、反応釜から水層を排出した。ついで、有機層を５％リン酸二水素ナトリウム水溶液（４１．１ｋｇ）で洗浄した。得られた有機層に、撹拌しながらDIPEA（２．３９ｋｇ）と2-MeTHF（２６．０ｋｇ）を加えた後、液量が８Ｌ程度になるまで外温３０～３３℃にて減圧濃縮した。残渣、および反応釜を2-MeTHF（６．８ｋｇｘ２）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物３２を含む溶液（１４．７ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．２２０分（HPLC分析条件：method 3）
実施例２０－１（実施例２０の合成法で用いた酢酸イソプロピルに代えて、2-MeTHFを用いた場合）
化合物３２：（(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタン酸）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000090
　反応容器に、実施例１９で得られた化合物３１（９３．４５ｍｇ）を含む溶液（４０１．９４ｍｇ）を加え、外温６０℃にて減圧濃縮乾固した。2-MeTHF（４０２ｍｇ）、ヘキサメチルジシラザン（３８．６ｍｇ）を室温にて順次加えた。反応容器の外温を０℃に設定し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（４３．４ｍｇ）を攪拌しながら加えた。反応容器の外温を２５℃に設定し、反応混合物を1時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し（サンプル調製法１）、HPLC分析により反応転換率が９９．９％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応容器の外温を０℃に設定し、反応容器に2-MeTHF（４０２ｍｇ）、５％リン酸水素二カリウム水溶液（０．９３ｍＬ）を順次加えた。反応容器の外温を室温に設定し、反応混合物を１０分撹拌後、撹拌を停止し、反応容器から水層を排出した。ついで、有機層を５％リン酸二水素ナトリウム水溶液（０．９３ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層に、撹拌しながらDIPEA（５４．４ｍｇ）を加えた。得られた溶液をHPLCで分析した。標品を用いたHPLC分析の結果、得られた化合物３２は８１．０１ｍｇ（９２．０％収率）であった。
化合物３２のLCMS(ESI)：保持時間：４．１３２分、ｍ／ｚ＝９２１ [M+H]+（LCMS分析条件：method 3）
実施例２１
化合物３３：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000091
　窒素で置換した反応釜に、実施例１０で得られた化合物１７を含む溶液（１１．９ｋｇ）、実施例２０で得られた化合物３２を含む溶液（１２．８４ｋｇ）、および2-MeTHF（３．１ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を１０℃に設定し、反応混合物にDMF（６．４ｋｇ）、DIPEA（１．６ｋｇ）、およびHATU（２．７８ｋｇ）を加えた。外温を20℃から30℃に保ちながら、3時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．６％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。外温１０℃にて２．５％アンモニア水溶液（１９．９ｋｇ）を加えた後、反応釜の外温を２５℃に設定し、１０分間撹拌した。撹拌を停止し、反応釜から水層を排出後、得られた有機層を外温２０℃にて１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１９．９ｋｇ）を加えた後、反応釜の外温を２５℃に設定し、１０分間撹拌した。撹拌を停止し、反応釜から水層を排出後、得られた有機層を５％炭酸ナトリウム水溶液（１９．９ｋｇ）で洗浄した。得られた有機層を、液量が１０Ｌ程度になるまで、外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。反応混合物に、2-MeTHF（１７．０ｋｇ）を加え、液量が１０Ｌ程度になるまで外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮する操作を２回行った。残渣、および反応釜を2-MeTHF（６．８ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物３３を含む溶液（２３．９ｋｇ）として保管容器に回収した。
HPLC分析による保持時間：１０．２７２分（HPLC分析条件：method 4）
化合物１７と化合物３２の縮合反応（実施例２１の反応条件検討）
　化合物１７と化合物３２の縮合反応における溶媒を検討した。縮合反応はHPLC分析により追跡した。収率はHPLC分析により求めたエリア％（Area％）、およびqNMRの測定値より算出した。
実施例２１－１（の合成法で用いた２－ＭｅＴＨＦ及びＤＭＦに代えて、２－ＭｅＴＨＦ及びアセトニトリルを用いた場合）
化合物３３：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000092
　フラスコに、実施例１０で得られた化合物１７を含む溶液（１０１７．１ｍｇ）、実施例２０で得られた化合物３２を含む溶液（１１３３．０ｍｇ）、及び2-MeTHF（３１３．７μＬ）を室温にて順次加えた。外温を１０℃に冷却し、反応混合物にアセトニトリル（５７５μＬ）、DIPEA（２６６μＬ）、およびHATU（２３８．０ｍｇ）を加えた後、外温を２５℃に昇温した。反応混合物を２５℃にて３時間撹拌した後、反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．８％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。外温を１０℃に設定し、２．５％アンモニア水溶液（１７００μＬ）を加えた後、外温を２５℃に設定し１０分間撹拌し、水層を排出した。得られた有機層を１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１７００μＬ）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１７００μＬ）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し、化合物３３を含む残渣（６２２．６ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：保持時間：１０．３５分、ｍ／ｚ＝１６６９　［M+Na］＋（LCMS分析条件 method 4）
収率：８３％（得られた残渣と３，５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO‐d6に溶解させ、qNMR分析に付した。）
実施例２１－２（実施例２１の合成法で用いた２－ＭｅＴＨＦ及びＤＭＦに代えて、２－ＭｅＴＨＦを用いた場合）
化合物３３：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
　フラスコに、実施例１０で得られた化合物１７を含む溶液（４０６２．５ｍｇ）、実施例２０で得られた化合物３２を含む溶液（４５３４．０ｍｇ）、および2-MeTHF（１２５４μＬ）を室温にて順次加えて、化合物１７と化合物３１を含む溶液を得た。反応容器に化合物１７と化合物３１を含む溶液（９６９．５ｍｇ）を加え、外温４０℃にて減圧濃縮し、化合物１７及び３１を含む残渣を得た。反応容器に2-MeTHF（１１４０μＬ）を室温にて加え、残渣を溶解させた。外温を１０℃に冷却し、反応混合物にDIPEA（１０６μＬ）、およびHATU（９４．９ｍｇ）を加えた後、外温を２５℃に昇温した。反応混合物を２５℃にて３時間撹拌した後、反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．８％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。外温を１０℃に設定し、２．５％アンモニア水溶液（６８０μＬ）を加えた後、外温を２５℃に設定し１０分間撹拌し、水層を排出した。得られた有機層を１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（６８０μＬ）、５％炭酸ナトリウム水溶液（６８０μＬ）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し、化合物３３を含む残渣（２６２．３ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：保持時間：１０．４９分、ｍ／ｚ＝１６６９　［M+Na］＋（LCMS分析条件 method 4）
収率：８５％（得られた残渣と３，５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO‐d6に溶解させ、qNMR分析に付した。）
実施例２１－３（実施例２１の合成法で用いた２－ＭｅＴＨＦ及びＤＭＦに代えて、アニソールを用いた場合）
化合物３３：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
　フラスコに、実施例１０で得られた化合物１７を含む溶液（４０６２．５ｍｇ）、実施例２０で得られた化合物３２を含む溶液（４５３４．０ｍｇ）、及び2-MeTHF（１２５４μＬ）を室温にて順次加えて、化合物１７と化合物３２を含む溶液を得た。反応容器に化合物１７と化合物３２を含む溶液（９６９．８ｍｇ）を加え、外温４０℃にて減圧濃縮し、化合物１７及び３２を含む残渣を得た。反応容器にアニソール（１１４０μＬ）を室温にて加え、残渣を溶解させた。外温を１０℃に冷却し、反応混合物にDIPEA（１０６μＬ）、およびHATU（９７．７ｍｇ）を加えた後、外温を２５℃に昇温した。反応混合物を２５℃にて３時間撹拌した後、反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．９％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。外温を１０℃に設定し、２．５％アンモニア水溶液（６８０μＬ）を加えた後、外温を２５℃に設定し１０分間撹拌した。反応容器にアニソール（５７０μＬ）と２．５％アンモニア水溶液（３４０μＬ）を加え、１０分間攪拌し、水層を排出した。得られた有機層を１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（９２０μＬ）、５％炭酸ナトリウム水溶液（９２０μＬ）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し、化合物３３を含む残渣（２０７．３ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：保持時間：１０．３８分、ｍ／ｚ＝１６６９　［M+Na］＋（LCMS分析条件 method 4 ）
収率：６８％（得られた残渣と３，５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO‐d6に溶解させ、qNMR分析に付した。）
実施例２１－４（実施例２１の合成法で用いた２－ＭｅＴＨＦ及びＤＭＦに代えて、炭酸ジメチルを用いた場合）
化合物３３：（tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタート）の合成
　フラスコに、実施例１０で得られた化合物１７を含む溶液（４０６２．５ｍｇ）、実施例２０で得られた化合物３２を含む溶液（４５３４．０ｍｇ）、及び2-MeTHF（１２５４μＬ）を室温にて順次加えて、化合物１７と化合物３２を含む溶液を得た。反応容器に化合物１７と化合物３２を含む溶液（９６８．４ｍｇ）を加え、外温４０℃にて減圧濃縮し、化合物１７及び３２を含む残渣を得た。反応容器に炭酸ジメチル（１１４０μＬ）を室温にて加え、残渣を溶解させた。外温を１０℃に冷却し、反応混合物にDIPEA（１０６μＬ）、およびHATU（９５．２ｍｇ）を加えた後、外温を２５℃に昇温した。反応混合物を２５℃にて３時間撹拌した後、反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．９％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。外温を１０℃に設定し、２．５％アンモニア水溶液（６８０μＬ）を加えた後、外温を２５℃に設定し１０分間撹拌した。反応容器に炭酸ジメチル（１１４０μＬ）と２．５％アンモニア水溶液（６８０μＬ）を加え、１０分間攪拌し、水層を排出した。得られた有機層を１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１３６０μＬ）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１３６０μＬ）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し、化合物３３を含む残渣（２６４．６ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：保持時間：１０．３５分、ｍ／ｚ＝１６６９　［M+Na］＋（LCMS分析条件method 4 ）
収率：８４％（得られた残渣と３，５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO‐d6に溶解させ、qNMR分析に付した。）
実施例２１－５および実施例２１－６
　２－ＭｅＴＨＦ／アセトニトリルに代えて、酢酸エチル（実施例２１－５）、または酢酸イソプロピル（実施例２１－６）を用いた点を除き、実施例２１－１と同様の条件で化合物３３を合成した。実施例２１－５では７６％の収率で、実施例２１－６では７５％の収率で化合物３３を得た。
　実施例２１－１～２１－６の結果を下表に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000093
　これらの結果より、実施例２１に使用している2-MeTHFとDMFの混合溶媒に代えて、2-MeTHFとアセトニトリルの混合溶媒や、2-MeTHF、アニソール、炭酸ジメチル、酢酸エチル、または酢酸イソプロピルを用いた場合も、化合物３３を高収率で製造可能であることが見出された。
実施例２２
化合物３４：（2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S-1)-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]酢酸）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000094
　窒素で置換した反応釜に、実施例２１で得られた化合物３３を含む溶液（２３．７ｋｇ）、2-MeTHF（３２．０ｋｇ）、ヘキサメチルジシラザン（３．４６ｋｇ）を室温にて順次加えた。反応釜の外温を０℃に設定し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（３．９９ｋｇ）を攪拌しながら加えた。外温を２０℃から３０℃に保ちながら、３時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．６％以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜の外温を０℃に設定し、反応混合物に５％リン酸水素二カリウム水溶液（２３．８ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、１０分間撹拌した後に、反応釜から水層を排出した。得られた有機層を、クエン酸一水和物（０．５７ｋｇ）およびリン酸水素二カリウム（０．８８ｋｇ）を含む水溶液（２３．３ｋｇｘ４）で洗浄後、さらに５％炭酸ナトリウム水溶液（２３．８ｋｇ）で洗浄した。得られた有機層に2-MeTHF（２６．０ｋｇ）を加え、液量が１０Ｌ程度になるまで、外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。得られた残渣にTHF（１３．６ｋｇ）を追加し、液量が１０Ｌ程度になるまで、外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。次いで、2-MeTHF（８．５ｋｇ）を追加し、液量が１０Ｌ程度になるまで、外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した。得られた残渣にTHF（６．８ｋｇ）を加えた溶液、および反応釜をTHF（６．６ｋｇ）、2-MeTHF（７．１ｋｇ）で洗浄した洗浄液を合わせて化合物３４を含む溶液（２９．０ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：９．２１５分（HPLC分析条件：method 4）
実施例２３
化合物３５：（2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-アミノ-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]酢酸）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000095
　実施例２３は、実施例２２で得られた化合物３４を含む溶液（１４．５ｋｇ）を用い、下記操作を二回に分けて実施した。
　窒素で置換した反応釜に、５％ Pd/C（７５６．６ｇ、５０％含水品）を加えた後に、THF（７．５ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定した。実施例２２で得られた化合物３４を含む溶液（１４．５ｋｇ）、THF（０．７ｋｇ）を順次加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、撹拌しながら反応釜の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。２．５時間後、内圧の変動がないことを確認した後、反応釜を水素で０．１８ＭＰａＧまで加圧し、さらに１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．６％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜内を窒素で置換後、反応混合物を加圧濾過した。反応釜内と濾過機を2-MeTHF（４．９ｋｇｘ２）で洗浄後、濾液と洗浄液を合わせて、化合物３４を含む保管溶液（第一バッチ）を得た。
　窒素で置換した反応釜に、５％　Pd/C（７５６．６ｇ、５０％含水品）を加えた後に、THF（７．５ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定した。実施例２２で得られた化合物３４を含む溶液（１４．５ｋｇ）、THF（０．７ｋｇ）を順次加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、撹拌しながら反応釜の内圧が０．１８ＭＰａＧになるまで水素で加圧した。１時間後、内圧の変動がないことを確認した後、反応釜を水素で０．１８ＭＰａＧまで加圧し、さらに１時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．６％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜内を窒素で置換後、反応混合物を加圧濾過した。反応釜内と濾過機を2-MeTHF（４．９ｋｇｘ３）で洗浄後、濾液、洗浄液、および上記で得た第一バッチの保管溶液を合わせて、化合物３４を含む保管溶液（６０．５ｋｇ）を得た。
　窒素で置換した反応釜に、上記の化合物３４を含む保管溶液（６０．５ｋｇ）、2-MeTHF（０．４ｋｇ）を室温にて順次加えた。液量が７．３Ｌになるまで、外温４０℃にて攪拌しながら減圧濃縮した後、外温を２５℃に設定した。得られた残渣に、アセトニトリル（２０．３ｋｇ）、2-MeTHF（６．３ｋｇ）、およびヘプタン（３５．４ｋｇ）を加え、３０分間撹拌した。撹拌を停止後、下層を保管容器に回収した。得られた下層の有機層に、アセトニトリル（５２．７ｋｇ）、およびDIPEA（１．６ｋｇ）を加え、化合物３５を含む溶液（８３．６ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：６．４８０分（HPLC分析条件：method 4）
実施例２３－１（実施例２３の合成法で用いたTHFに代えて、2-MeTHFを用いた場合）
化合物３５：（2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-アミノ-4-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]酢酸）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000096
　反応容器に実施例２２で得られた化合物３４を含む溶液（２４４７．７ｍｇ）を加え減圧濃縮し、化合物３４を含む残渣を得た。反応容器に、2-MeTHF（２０４０μＬ）、５％　Pd/C（９６．８ｍｇ、５０％含水品）を加えた後に、水素ガスによる脱気置換を行い４時間撹拌した。反応容器に、2-MeTHF（４６０μＬ）、５％　Pd/C（４７．３ｍｇ、５０％含水品）を加えた後に、水素ガスによる脱気置換を行い４時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し（サンプル調製法１）、HPLC分析に付して反応転換率が９９．７％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応混合物を濾過し、残渣を2-MeTHF（６９０μＬ×２）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し、化合物３５を含む残渣（６７０．１ｍｇ）を得た。取得した残渣をアセトニトリルで希釈し、LCMS分析に付した（LCMS分析条件：method 4：化合物３５の保持時間；保持時間：６．９４分、ｍ／ｚ＝１４５７ [M+H]+）。得られた残渣と３，５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO-d6に溶解させ、qNMR分析に付した（収率：９５％）。
実施例２４
化合物１：（(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-ブチル)-18-シクロペンチル-29-(3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェネチル)-36-エチル-11-イソブチル-N,N,5,6,12,16,19,33-オクタメチル-35-(4-メチルベンジル)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-ウンデカオキソテトラトリアコンタヒドロ-2H,4H-スピロ[アゼト[2,1-u]ピロロ[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン-21,1'-シクロペンタン]-15-カルボキサミド）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000097
　窒素で置換した反応釜に、アセトニトリル（２１．４ｋｇ）、HATU（３．８６ｋｇ）を加え、さらにアセトニトリル（５５．０ｋｇ）を加えた。反応釜の外温を２５℃に設定し、実施例２３で得られた化合物３５を含む溶液（８２．８ｋｇ）を、０．３～０．４ｋｇ／分で反応混合物に滴下した。アセトニトリル（６．１ｋｇ）で洗いこみを実施し、リンス液を加え、３０分間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製（サンプル調製法１）し、HPLC分析により反応転換率が９９．９％であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応釜の外温を３０℃に設定し、撹拌しながら液量が２７Ｌ程度になるまで減圧濃縮した。反応釜の外温を２５℃に設定し、得られた残渣に酢酸エチル（１０４．７ｋｇ）を加えた。外温２５℃にて撹拌しながら２．５％アンモニア水溶液（７７．８ｋｇ）を加え、８５分間撹拌した。反応釜から水層を排出後、得られた有機層に外温２０℃にて撹拌しながら５％硫酸水素カリウム一水和物水溶液（８９．８ｋｇ）を加えた。外温２５℃にて１２分攪拌した。反応釜から水層を排出後、外温２５℃にて得られた有機層を５％リン酸水素二ナトリウム水溶液（８９．８ｋｇ）、５％塩化ナトリウム水溶液（８９．８ｋｇ）、および０．５％塩化ナトリウム水溶液（８９．８ｋｇｘ２）で洗浄した。得られた有機層を、撹拌しながら液量が１９Ｌ程度になるまで、反応釜の外温を４０℃に設定し減圧濃縮した。得られた残渣を加圧濾過し、反応釜と濾過機を酢酸エチル（１７．４ｋｇ）で洗浄後、濾液と洗浄液を酢酸エチル（１７．４ｋｇ）で洗いこみながら化合物１を含む溶液（６３．１ｋｇ）を得た。上記化合物１を含む保管溶液（６３．１ｋｇ）に、アセトン（１５．３ｋｇ）を加え、液量が８～１２Ｌ程度になるまで減圧濃縮する操作を７回繰り返した。得られた残渣を加圧濾過し、保管溶液として回収した。反応釜と濾過機をアセトン（１５．３ｋｇｘ２）で洗浄後、加圧濾過し、洗浄液を合わせて化合物１を含む溶液（５１．４ｋｇ）として保管容器に回収した。
HPLC分析による保持時間：１８．００８分（HPLC分析条件：method 5）
化合物３５の環化反応（実施例２４の反応条件検討）
　化合物３５を出発原料として用い、化合物１への環化反応における、縮合剤、および溶媒を検討した。環化反応はHPLC分析により追跡した。収率は安息香酸メチルを内部標準物質として用い、HPLC分析によるArea％比から算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000098
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000099
実施例２４－１
化合物１：（(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-ブチル)-18-シクロペンチル-29-(3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェネチル)-36-エチル-11-イソブチル-N,N,5,6,12,16,19,33-オクタメチル-35-(4-メチルベンジル)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-ウンデカオキソテトラトリアコンタヒドロ-2H,4H-スピロ[アゼト[2,1-u]ピロロ[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン-21,1'-シクロペンタン]-15-カルボキサミド）の合成（縮合剤としてHATUを使用、溶媒としてアセトニトリルを使用）
　反応容器に化合物３５（１０．４４ｍｇ（７．１７ μｍｏｌ））と内部標準物質(安息香酸メチル、３．６０ｍｇ（２６．４４μｍｏｌ））を秤量し、溶媒（アセトニトリル、２ｍＬ（２００ｖ／ｗ））で溶解した。室温で撹拌しながら、DIPEA（５．７４μＬ（３２．９μｍｏｌ））を加えた。反応容器の外温を２５℃に設定し、縮合剤（HATU、１０．３９ｍｇ（２７．３μｍｏｌ））を加えて３０分撹拌した。反応液（５０μＬ）をMeCN／プロピルアミン（９：１）の混合液（１００μＬ）で希釈し、HPLC分析用の溶液を調製した。安息香酸メチルを内部標準物質として用いたHPLC分析の結果、収率は７６％であった（HPLC分析条件：method 5）。
化合物１のLCMS（ＥＳＩ）：保持時間：１８．０８分、ｍ／ｚ＝１４３９　［M＋H］＋（LCMS分析条件 method 5）
化合物３５のプロピルアミド体のLCMS(ESI)：保持時間：１３．３９分、ｍ／ｚ＝１４９８[M+H]+（LCMS分析条件 method 5）
環状ダイマー（c-Dimer）のLCMS（ＥＳＩ）：保持時間：２３．１８分、ｍ／ｚ＝２８９８［M＋Na］＋（LCMS分析条件 method 5）
環状トリマー（c-Trimer）のLCMS（ＥＳＩ）：保持時間：２５．７４分、ｍ／ｚ＝２１５７　［M＋2H］２＋（LCMS分析条件 method 5）
　種々の縮合剤、および溶媒を用いて、化合物１の合成をおこなった結果を表７に示した。実験操作は、縮合剤としてHATUを使用、溶媒としてアセトニトリルを使用したとき（実施例２４－１）に準じた。表中のSMは、化合物３５と化合物３５のプロピルアミド体の残存量の合算（HPLCのArea％比）である。また、表中のTMは、目的物（化合物１）であり、c-Dimerおよびc-Trimerは、それぞれ副生成物である環状ダイマーおよび環状トリマーであり、それらの生成量を、HPLC測定におけるArea％比として示した（HPLC分析条件：method 5）。安息香酸メチルを内部標準物質として用いたHPLC分析により、収率を算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000100
　これらの結果から、目的物への変換率が高く、副生成物の生成率が低いこと、並びに環境負荷を考慮して、溶媒としてアニソール、炭酸ジメチル、および2-MeTHFが、好ましい溶媒であることが示された。縮合剤はHATU、PyBOP、およびPyOximが好ましいことが示された。溶媒と縮合剤の組み合わせは、アニソールとPyBOP、炭酸ジメチルとPyBOP、および２－メチルテトラヒドロフランとPyBOPの組み合わせが好ましいことが示された。
　実施例２４－１５と実施例２４－１６の反応スケールを上げて、化合物１の合成（縮合剤としてPyBOPを使用、溶媒として2-MeTHFまたは炭酸ジメチルを使用）の実験と同様の操作を行った。
実施例２４－３９
化合物１：（(3S,9S,12S,17S,20S,23S,27S,30S,36S)-30-シクロペンチル-3-[2-[3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェニル]エチル]-10-エチル-23-イソブチル-N,N,7,17,18,24,28,31-オクタメチル-20-[(1S)-1-メチルプロピル]-2,5,8,11,16,19,22,25,29,32,35-ウンデカオキソ-9-(p-トリルメチル)スピロ[1,4,7,10,15,18,21,24,28,31,34-ウンデカザトリシクロ[34.3.0.0 12,15 ]ノナトリアコンタン-33,1'-シクロペンタン]-27-カルボキサミド）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000101
　実施例２３で得られた化合物３５（１００．１６ｍｇ（０．０６９ｍｍｏｌ））を含む溶液（２１５２．６３ｍｇ）を加え、外温４０℃にて減圧濃縮乾固した。濃縮残渣に2-MeTHF（２１５０ｍｇ）およびDIPEA（４２．２ｍｇ）を加え、化合物３５を含む溶液を得た。窒素で置換した反応容器にPyBOP（１４１．１０ｍｇ）、2-MeTHF（２１５０ｍｇ）を加えた。反応容器の外温を２５℃に設定し、化合物３５を含む溶液を、４時間かけて反応混合物に滴下した。2-MeTHF（１７２ｍｇ）で洗いこみを実施し、リンス液を加え、２時間撹拌した。外温２５℃にて撹拌しながら２．５％アンモニア水溶液（２ｍＬ）を加え、９０分間撹拌した。反応混合物を減圧濾過した。反応容器と桐山漏斗を2-MeTHF（１７２ｍｇ）で洗浄した。水層を排出後、得られた有機層に外温２５℃にて撹拌しながら５％硫酸水素カリウム一水和物水溶液（２ｍＬ）を加えた。外温２５℃にて４分攪拌した。水層を排出後、外温２５℃にて得られた有機層を５％リン酸水素二ナトリウム水溶液（２ｍＬ）、５％塩化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）、および０．５％塩化ナトリウム水溶液（２ｍＬｘ２）で洗浄した。得られた有機層をHPLCで分析した。標品を用いたHPLC分析の結果、得られた化合物１は７８．３８ｍｇ（７９．２％収率）であった。
HPLC分析による保持時間：１７．９９２分（HPLC分析条件：method 5）
　上記の縮合剤にPyBOPを用いた化合物１の合成法において、溶媒に用いた2-MeTHFに代えて、溶媒として炭酸ジメチルを用いた場合の結果を下表に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000102
実施例２５
化合物１の結晶化：（(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-ブチル)-18-シクロペンチル-29-(3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェネチル)-36-エチル-11-イソブチル-N,N,5,6,12,16,19,33-オクタメチル-35-(4-メチルベンジル)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-ウンデカオキソテトラトリアコンタヒドロ-2H,4H-スピロ[アゼト[2,1-u]ピロロ[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン-21,1'-シクロペンタン]-15-カルボキサミド）の水和物結晶（C型結晶）の合成
　窒素で置換した化合物１を含む溶液が入った反応釜に、反応釜の外温を４０℃に設定し、濾過した精製水（１０．９ｋｇ）を加えた。アセトン（５９．２ｇ）／水（６１．２ｇ）の混合液に、実施例２５－１と同様の操作により得られた、化合物１の粉砕結晶（１０．２ｇ）を加えて得た懸濁液を反応釜に加えた。懸濁液の入った容器をアセトン（５９．２ｇ）／水（６１．２ｇ）の混合液で洗いこみながら反応釜に加えた後、２時間１分間撹拌した。濾過した精製水（２．７ｋｇ）を加え、７時間１０分間撹拌した。さらに、アセトン（５９．２ｇ）／水（６１．２ｇ）の混合液に、実施例２５－１と同様の操作により、得られた化合物１の粉砕結晶 （１０．２ｇ）を加えて得た懸濁液を反応釜に加えた。懸濁液の入った容器をアセトン（５９．２ｇ）／水（６１．２ｇ）の混合液で洗いこみながら、反応釜に加え、１２時間４０分間撹拌した。濾過した精製水（２．７ｋｇ）を加え、２時間撹拌した。反応釜の外温を４０℃から２５℃へ１時間かけて降温後、反応混合物を１８時間４４分間攪拌した。反応混合物を、加圧濾過し、反応釜内と濾過機を、濾過したアセトン（７．５ｋｇ）と精製水（７．５ｋｇ）の混合液で洗浄しながら得られた結晶を洗浄した。得られた結晶を、濾過した精製水（１７．０ｋｇｘ２）で洗浄し、結晶を回収した濾過装置を減圧し、濾過装置の外温を７０℃に設定して結晶を１７時間乾燥した。さらに、外温を室温～３０℃にて結晶を２７時間乾燥した。乾燥末を濾過機から回収し、白色の粉末（２．６ｋｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：１８．１９９分（HPLC分析条件：method 5）
XRPD装置を用いた粉末X線解析（測定方法４）の結果、２θ値は、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）が主要なピークとして観測された。図１に分析結果を示した。
実施例２５－１：実施例２５で使用した種結晶の製造実施例
　アモルファス状態の化合物１（１２２．３ｍｇ）をDMSO（０．６１２ｍＬ）に溶解させ、この溶解液（０．０１５ｍＬ）を－２０℃で２日間凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物に水－アセトニトリル混合液（３：１，０．０１５ｍＬ）を加え、室温にて７日間振とう攪拌することで化合物１の水和物結晶（C型結晶）を得た。
化合物１の結晶化の検討
実施例２５－２
化合物１　（(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-ブチル)-18-シクロペンチル-29-(3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェネチル)-36-エチル-11-イソブチル-N,N,5,6,12,16,19,33-オクタメチル-35-(4-メチルベンジル)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-ウンデカオキソテトラトリアコンタヒドロ-2H,4H-スピロ[アゼト[2,1-u]ピロロ[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン-21,1'-シクロペンタン]-15-カルボキサミド）の非溶媒和物結晶（F型）の合成
　実施例２４と同様の方法で得られた化合物１の水和物結晶（C型結晶）を７ｍｍ×７ｍｍ×０．２５ｍｍアルミニウムサンプル容器に密に詰め、以下の条件（粉末Ｘ線（XRPD）回折測定の測定方法２、および熱分析の測定方法２）でＸＲＤ－ＤＳＣ同時測定を行うことにより、測定終了後サンプルとして化合物１の非溶媒和物結晶（F型）を得た。
　XRPD装置を用いた粉末X線解析（測定方法２）の結果、２θ値は、５．３７０°、６．９３４°、８．９４０°、９．８３８°、１０．７７１°、１２．１８１°、１３．５２５°、１５．１７９°、１６．２０２°、および１７．５５４°（±０．２°）が主要なピークとして観測された。図２に分析結果を示した。
実施例２５－３
化合物１　（(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-ブチル)-18-シクロペンチル-29-(3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェネチル)-36-エチル-11-イソブチル-N,N,5,6,12,16,19,33-オクタメチル-35-(4-メチルベンジル)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-ウンデカオキソテトラトリアコンタヒドロ-2H,4H-スピロ[アゼト[2,1-u]ピロロ[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン-21,1'-シクロペンタン]-15-カルボキサミド）のDMSO-水和物結晶（A型、およびB型）の合成
　化合物１の水和物結晶（C型結晶、１０４．３ｍｇ）にDMSO（０．５２ｍＬ）を加え、室温にて１７時間１００ｒｐｍで振とう攪拌することで標題化合物のDMSO-水和物結晶（３３．８ｍｇ）を粉末状結晶として得た。ろ過直後の粉末状結晶をDMSO-水和物結晶A型、ろ過後、室温で８時間減圧乾燥した粉末状結晶をDMSO-水和物結晶B型とした。
　化合物１のDMSO-水和物結晶（DMSO-水和物結晶A型、およびDMSO-水和物結晶B型）を、それぞれ粉末Ｘ線回折測定（測定方法３）に供した。結果を以下に示した。
　DMSO-水和物結晶A型の２θ値は、８．００６°、９．００２°、９．９４３°、１１．５０１°、１３．０６７°、１４．８５４°、１６．３２０°、１７．２７５°、１９．２６１°、および２０．３２４°（±０．２°）が主要なピークとして観測された。図３に分析結果を示した。
　DMSO-水和物結晶B型の２θ値：８．２２３°、９．５９４°、９．９７６°、１１．８７９°、１３．８４１°、１４．５７２°、１５．９３４°、１６．３５０°、１９．８０５°、および２０．４８０°（±０．２°）が主要なピークとして観測された。図４に分析結果を示した。
熱重量・示差熱分析
　実施例２５－３で得られた化合物１のDMSO-水和物結晶（DMSO-水和物結晶 B型）を、熱分析（測定方法３）に供した。結果を図５に示す。
１ Ｈ－ＮＭＲ測定
　実施例２５－３で得られた化合物１のDMSO-水和物結晶（DMSO-水和物結晶B型）を、１Ｈ－ＮＭＲ測定に供した。結果を図６に示す。
　熱重量・示差熱分析における重量変化、および１Ｈ－ＮＭＲ測定における化合物１とDMSOピークの積分値面積比から、DMSO-水和物結晶B型は、化合物１に対して２．５当量のDMSOを含むDMSO-水和物結晶であることが確認された。
実施例２５－４
化合物１　（(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-ブチル)-18-シクロペンチル-29-(3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェネチル)-36-エチル-11-イソブチル-N,N,5,6,12,16,19,33-オクタメチル-35-(4-メチルベンジル)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-ウンデカオキソテトラトリアコンタヒドロ-2H,4H-スピロ[アゼト[2,1-u]ピロロ[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン-21,1'-シクロペンタン]-15-カルボキサミド）の水和物結晶（C型結晶）の合成 
　アモルファス状態の化合物１（２９３．２ｍｇ）をエタノール（０．５８６ｍＬ）に室温溶解した。この溶液に水（０．１４７ｍＬ）と、実施例２５－１と同様の方法で得た化合物１の水和物結晶（C型結晶）の種結晶を加え、室温で３０分間撹拌した。さらに水（０．１４７ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。さらに水（０．１４７ｍＬ）を加え、室温で３０分間撹拌した後、水（０．１４７ｍＬ）を加え、室温で３０分間撹拌し、沈殿物を濾過回収、水で洗浄、減圧乾燥することで化合物１の水和物結晶（C型結晶、２５６．０ｍｇ）を粉末状結晶として得た。
実施例２６
化合物１の水和物結晶（C型結晶）の物理化学的性質の測定
　実施例２５と同様の用法で得られた化合物１の水和物結晶（C型結晶）を用いて、粉末Ｘ線回折測定、熱重量・示差熱分析、水分量の測定、および単結晶X線構造解析を行った。
（１）粉末Ｘ線回折測定
　以下の方法で、実施例２６で調製した化合物１の水和物結晶（C型結晶）の湿度変化粉末Ｘ線回折測定を実施した。
測定装置：SmartLab System、D/Tex Ultra detector、水蒸気発生装置ＨＵＭ－ＳＬ（リガク社製）
対陰極：Cu
管電圧：４５ｋＶ
管電流：２００ｍＡ
走査範囲：５～３０°
走査速度：０．７°／分
サンプリング幅：０．０２°
湿度変化条件：
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000103
　相対湿度７５％から０％までの環境下で、２θ値のシフトは実施例２５で得られた水和物結晶（C型結晶）の２θ値±０．２°の範囲に入ることが確認された。結果を図７に示す。
　湿度７５％における水和物結晶（C型結晶）の２θ値：７．９０４°、８．２７７°、８．８３３°、９．９３７°、１０．４１６°、１１．７１１°、１２．６８３°、１３．５３３°、１３．８８５°、１５．８８７°、１６．６２７°、１７．７９９°（±０．２°）に回折ピークを有していた。
　湿度３０％における水和物結晶（C型結晶）の２θ値：７．８９２°、８．２８６°、８．８３９°、９．９２１°、１０．４２４°、１１．７０３°、１２．７１０°、１３．５５６°、１３．９０３°、１５．８９１°、１６．６６４°、１７．８４６°（±０．２°）に回折ピークを有していた。
　湿度０％における水和物結晶（C型結晶）の２θ値：７．８８３°、８．３０６°、８．８４５°、９．９２３°、１０．４４６°、１１．７０２°、１２．７６７°、１３．５４６°、１３．８９６°、１５．８７５°、１６．６９４°、１７．９３５°（±０．２°）に回折ピークを有していた。
（２）熱重量・示差熱分析
　実施例２６で調製した化合物１の水和物結晶（C型結晶）の熱重量・示差熱分析を熱分析の測定方法４で実施した。結果を図８に示す。
（３）水分量の測定
　実施例２６で調製した化合物１の水和物結晶（C型結晶）の水分量を、カールフィッシャー滴定法で測定した。測定は、試料を実験室環境下で馴化させた後にCA-310（日東精工アナリテック製）を用いて行った。測定の結果、化合物１の水和物結晶（C型結晶）の水分量は６．５０ｗｔ％であった。
（４）単結晶X線構造解析
　以下の方法で、実施例２６で調製した化合物１の水和物結晶（C型結晶）の単結晶X線構造解析を行った。
測定装置：Rigaku R-AXIS RAPID-II with a VariMax Cu diffractometer（リガク社製）
対陰極：Cu
管電圧：40 kV
管電流：30 mA
温度：-180℃
測定：構造解析に十分な回折斑点が得られると考えらえるストラテジー、露光時間で測定を行った。
構造解析：初期構造決定は直接法（SIR2004、CrystalStructure、Rigaku)で行い、構造精密化はfull-matrix least-squares法（SHELXL-2017/1、APEX3、Bruker)で行った。全ての非水素原子は異方性温度因子で精密化した。水分子の水素原子はリストレインを用いて適切な位置に置き、結合している酸素原子の１．５倍の大きさの等方性温度因子で精密化した。そのほかの水素原子はライディングモデルを用いて適切な位置に置き、結合している非水素原子の１．２倍の大きさの等方性温度因子とした。
結果を図９に示す。
　粉末Ｘ線回折測定、熱重量・示差熱分析、水分量の測定、および単結晶Ｘ線構造解析の結果から、実施例２６で調製した化合物１の水和物結晶（C型結晶）は、結晶構造中に水分子を有する、まさに水和物結晶であることが確認された。
　以下の方法で、実施例２６で調製した化合物１の水和物結晶（C型結晶）の動的水蒸気吸着測定を実施した。結果を図１０に示す。
測定装置：DVS Intrinsic（Surface Measurement Systems製）
温度：25℃
相対湿度（％）測定点：
サイクル１：0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0（％）; サイクル２：10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0（％）
閾値：0.001 dm/dt（％／分）
最小収着時間：10分
最大収着時間：1440分
　測定の結果、化合物１の水和物結晶（C型結晶）は相対湿度０～９５％の範囲において、水和数変化に伴い、相対湿度０％時の重量と比較して、３．３％重量の範囲で水和数が変化しうる水和物結晶であることが確認された。
実施例２６－１
化合物１のDMSO－水和物結晶（A型）の単結晶Ｘ線の測定
化合物１（(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-ブチル)-18-シクロペンチル-29-(3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェネチル)-36-エチル-11-イソブチル-N,N,5,6,12,16,19,33-オクタメチル-35-(4-メチルベンジル)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-ウンデカオキソテトラトリアコンタヒドロ-2H,4H-スピロ[アゼト[2,1-u]ピロロ[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン-21,1'-シクロペンタン]-15-カルボキサミド）のDMSO－水和物結晶（A型）の合成
　化合物１の水和物結晶（C型結晶）（５４．９ｍｇ）をDMSO（０．７８４ｍＬ）に室温溶解した。この溶液を室温で１１０分振とうしたところ、化合物１のDMSO-水和物結晶（A型）をDMSO中に得た。
単結晶Ｘ線構造解析
　以下の方法で、実施例２６－１で調製した化合物１のDMSO－水和物結晶（A型結晶）の単結晶Ｘ線構造解析を行った。
測定装置：Rigaku XtaLAB Synergy Custom with a VariMax Cu diffractometer（リガク社製）
対陰極：Cu
管電圧：40 kV
管電流：30 mA
温度：-180℃
測定：構造解析に十分な回折斑点が得られると考えらえるストラテジー、露光時間で測定を行った。
構造解析：初期構造決定は直接法（SHELXT-2018/2、CrysAlisPro、Rigaku)で行い、構造精密化はfull-matrix least-squares 法（SHELXL-2017/1、APEX3、Bruker)で行った。非水素原子の温度因子は、基本的には異方性としたが、ディスオーダーしている原子は等方性で精密化した。水分子の水素原子はリストレインを用いて適切な位置に置き、結合している酸素原子の１．５倍の大きさの等方性温度因子で精密化した。そのほかの水素原子はライディングモデルを用いて適切な位置に置き、結合している非水素原子の１．２倍または１．５倍の大きさの等方性温度因子とした。結果を図１１に示す。
実施例２６－２
化合物１のアセトン－水和物結晶（H型）の物理化学的性質の測定
（１）単結晶Ｘ線構造解析
化合物１（(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-ブチル)-18-シクロペンチル-29-(3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェネチル)-36-エチル-11-イソブチル-N,N,5,6,12,16,19,33-オクタメチル-35-(4-メチルベンジル)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-ウンデカオキソテトラトリアコンタヒドロ-2H,4H-スピロ[アゼト[2,1-u]ピロロ[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン-21,1'-シクロペンタン]-15-カルボキサミド）のアセトン－水和物結晶（H型、単結晶Ｘ線構造解析用）の合成
　９ｍＬバイアルにアセトン（０．８ｍＬ）と水（０．２ｍＬ）を添加後に混和し、その中に化合物１の非晶質固体（約１ｍｇ）を添加した０．３ｍＬバイアルを入れ、９ｍＬバイアルにキャップをし、溶媒を蒸気拡散させることで３時間後に結晶を得た。
　以下の方法で、上記で得られた化合物１のアセトン－水和物結晶（H型、単結晶Ｘ線構造解析用）の単結晶X線構造解析を行った。
測定装置：Rigaku XtaLAB Synergy Custom with a VariMax Cu diffractometer（リガク社製）
対陰極：Cu
管電圧：40 kV
管電流：30 mA
温度：-180℃
測定：構造解析に十分な回折斑点が得られると考えらえるストラテジー、露光時間で測定を行った。
構造解析：初期構造決定は直接法（SHELXT-2018/2、CrysAlisPro、Rigaku)で行い、構造精密化はfull-matrix least-squares 法（SHELXL-2018/3、Olex2、OlexSys)で行った。非水素原子の温度因子は異方性として精密化した。水分子の水素原子は適切な位置に置き、結合している酸素原子の１．５倍の大きさの等方性温度因子で精密化した。そのほかの水素原子はライディングモデルを用いて適切な位置に置き、結合している非水素原子の１．２倍または１．５倍の大きさの等方性温度因子とした。結果を図１２に示す。
（２）粉末Ｘ線回折測定
化合物１（(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-ブチル)-18-シクロペンチル-29-(3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェネチル)-36-エチル-11-イソブチル-N,N,5,6,12,16,19,33-オクタメチル-35-(4-メチルベンジル)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-ウンデカオキソテトラトリアコンタヒドロ-2H,4H-スピロ[アゼト[2,1-u]ピロロ[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン-21,1'-シクロペンタン]-15-カルボキサミド）のアセトン－水和物結晶（H型、粉末Ｘ線回折測定用と溶媒含有量の測定用）の合成
　反応容器にて、化合物１の水和物結晶（C型結晶）（２．１ｇ）とアセトン（１６ｍＬ）を加えた。外温を４０℃に設定し、水（６．４ｍＬ）を攪拌しながら加えた。ガラスバイアルに乳鉢粉砕した化合物１の水和物結晶（６ｍｇ）を加え、アセトン水混液（８０μＬ、５/４ｖ/ｖ）で懸濁させたのち、懸濁液を反応容器に加えた。さらにガラスバイアルにアセトン水混液（８０μＬ、５/４ｖ/ｖ）を加え、懸濁液を反応容器に加えた。晶析液を２時間攪拌した。水（１．６ｍＬ）を１０分かけ加えた後、懸濁液を３時間攪拌した。水（１．６ｍＬ）を１０分かけ加えた後、懸濁液を２時間攪拌した。懸濁液を１時間かけて外温２５℃へ冷却した。懸濁液を終夜静置保管した。翌日、外温２５℃で攪拌した後、懸濁液を一部サンプリングし、懸濁液のまま粉末Ｘ線回折測定（測定方法４）を実施した。懸濁液を桐山漏斗にて濾過した後に、結晶をアセトン水混液（５．６ｍＬ、４．４ｍＬ）で洗浄した。つづいて、結晶を水（１０ｍＬ）で２回洗浄した。得られた湿性末を溶媒含有量の測定に用いた。
　以下の方法で、上記で得られた化合物１のアセトン－水和物結晶（H型、粉末Ｘ線回折測定用）を、粉末Ｘ線回折測定（測定方法４）に供した。結果を以下に示した。
　アセトン－水和物結晶（H型）の２θ値は、７．９４２°、８．２８３°、８．８６１°、１０．０９７°、１０．４９１°、１１．８０５°、１２．６７３°、１２．８３０°、１３．５１４°、１３．８５５°、１５．８５３°、１６．４０５°、１６．６４２°、および１７．７７２°（±０．２°）が主要なピークとして観測された。図１３に分析結果を示した。
（３）溶媒含有量の測定
　ＧＣによるアセトン量の分析条件を以下に示した。
装置：GC-2010（島津社製） 
カラム：DB-624(Agilent), 0.530 mm ID×30 m, 3.00 μm 
カラム温度：50 ℃(5min)→10 ℃/min→90 ℃(0min)→50 ℃/min→240 ℃(5min)
注入口温度：230 ℃
検出器温度：250 ℃
スプリット比：20/1
流量：30 cm/sec
　カールフィッシャー滴定法による水分量の分析条件を以下に示した。
装置：CA-200（日東精工アナリテック社製） 
陽極液：アクアミクロンAKX
陰極液：アクアミクロンCXU
　これらの測定では、湿性末のアセトン量は３．７％、水分量が１７．５％であった。
調製例１：アモルファス状態の化合物１の製造
　下記の構造を有する化合物１（「(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-ブチル)-18-シクロペンチル-29-(3,5-ジフルオロ-4-(トリフルオロメチル)フェネチル)-36-エチル-11-イソブチル-N,N,5,6,12,16,19,33-オクタメチル-35-(4-メチルベンジル)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-ウンデカオキソテトラトリアコンタヒドロ-2H,4H-スピロ[アゼト[2,1-u]ピロロ[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]ウンデカアザシクロテトラトリアコンチン-21,1'-シクロペンタン]-15-カルボキサミド」）は下記のスキーム１に従って合成した。
化合物１
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000104
スキーム１
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000105
化合物ａａ０３３－ｂ（（２Ｓ）－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］－４－オキソ－４－プロプ－２－エノキシブタン酸）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000106
　Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯＡｌ）－ＯＨ（（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－４－オキソ－４－プロプ－２－エノキシブタン酸、ＣＡＳ番号１４６９８２－２４－３）（２００ｇ，５０６ｍｍｏｌ），ｐ－トルエンスルホン酸（５．７ｇ，０．０５当量）、パラホルムアルデヒド（４５．６ｇ，３当量）をトルエンに混合し、１１０℃にて１６時間撹拌した。反応液を減圧下溶媒留去し、残渣を酢酸エチルに溶解し、炭酸水素ナトリウム水溶液で２回洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル、０／１００～３０／７０）で精製し、化合物ａａ０３３－ａ（９Ｈ－フルオレン－９－イルメチル　（４Ｓ）－５－オキソ－４－（２－オキソ－２－プロプ－２－エノキシエチル）－１，３－オキサゾリジン－３－カルボキシラート）（１７５ｇ，８５％）を得た。同様に合成した別のバッチを混合し、次の反応に用いた。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４０８（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：１．４０７分（分析条件ＳＭＤｍｅｔｈｏｄ＿２０）
　化合物ａａ０３３－ａ（１００ｇ，２４５ｍｍｏｌ），臭化亜鉛（ＺｎＢｒ２）（１１０ｇ，４９６ｍｍｏｌ），トリエチルシラン（ＴＥＳ）（５６ｇ，４８１．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（ＤＣＭ）（１Ｌ）混合溶液を、窒素雰囲気下、室温にて４８時間撹拌した。同じスケールの４バッチの反応液を混合し、減圧下溶媒留去した。残渣をＴＢＭＥに溶解し、０．５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ＝約７．５）で１０回抽出した。水層を混合し５Ｍ塩酸水でｐＨを２に調整し、酢酸イソプロピル（ＩＰＡＣ）で２回抽出した。有機層を混合し無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒留去した。ＩＰＡＣを除くため、得られた残渣にＴＢＭＥを添加し減圧下溶媒留去することを６回繰り返し、化合物ａａ０３３－ｂ（（２Ｓ）－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］－４－オキソ－４－プロプ－２－エノキシブタン酸）を得た。（２７０ｇ，５４％）
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４１０（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：１．９５６分（分析条件ＳＭＤｍｅｔｈｏｄ＿０５）
化合物ａａ０１１－ａの合成
　窒素雰囲気下、氷冷下にてＷＳＣＩ・ＨＣｌ（２７．４ｇ，１４３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２１７ｍＬ）溶液にＨＯＢｔ（１７．７２ｇ，１３１ｍｍｏｌ）を加え、更に化合物ａａ０３３ｂ（４８．８ｇ，１１９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（９０ｍＬ）とＤＭＦ（９０ｍＬ）の混合溶液として加え、０℃で３０分攪拌した。そこにジメチルアミンのＴＨＦ溶液（２ｍｏｌ／Ｌ，６５．６ｍＬ，１３１ｍｍｏｌ）を滴下にて加え、０℃で３０分攪拌した。反応液を酢酸エチル（４８８ｍＬ）で希釈し、有機層を塩酸（１ｍｏｌ／Ｌ，３９０ｍＬ）で２回洗浄し、更に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と水の混合溶液（１：１，４８８ｍＬ））で２回洗浄し、さらに、飽和食塩水と水の混合溶液（１：１、４８８ｍＬ）で１回洗浄後、得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒留去して化合物ａａ０１１－ａを得た。（５１．１６ｇ，収率９８％）。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４３７．０（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：１．２６２分（分析条件ＳＭＤＦＡ０５）
化合物ａａ０７９、（２Ｓ）－２－シクロペンチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］酢酸（Ｆｍｏｃ－ＭｅＧｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000107
　化合物ａａ０７９－ａ（（２Ｓ）－２－シクロペンチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ］酢酸、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ）（ＣＡＳ番号：２２０４９７－６１－０）（３０．０ｇ，８２ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（７．３９ｇ，２４６ｍｍｏｌ）およびＣＳＡ（０．９５４ｇ，４．１０ｍｍｏｌ）のトルエン（１６０ｍＬ）混合液に、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（９．０ｍＬ）を加えた後、６０℃で４時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後、固体をろ過により除去した。ろ液を減圧下濃縮し、酢酸エチル（２２０ｍＬ）で希釈後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で順に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後に減圧濃縮し、化合物ａａ０７９－ｂを粗生成物として得た。これ以上の精製は実施せずに次の反応を行った。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３７８（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：１．０１分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）
　上記で得られた化合物ａａ０７９－ｂの全量を用いて、トリエチルシラン（ＴＥＳ）（６５．５ｍＬ，４１０ｍｍｏｌ）とａａ０７９－ｂのジクロロエタン（ＤＣＥ）（９０ｍＬ）の混合液にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（７６ｍＬ，９８４ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で１６時間撹拌した。反応液を室温まで冷却後に減圧濃縮し、得られた固体をｎ－ヘキサン／酢酸エチル（９５／５）で洗浄し、減圧乾燥することで化合物ａａ０７９（（２Ｓ）－２－シクロペンチル－２－［９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル（メチル）アミノ］酢酸、Ｆｍｏｃ－ＭｅＧｌｙ（ｃＰｅｎｔ）－ＯＨ）を得た（２９．１ｇ，２工程９３％）。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝３８０（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：０．９２分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）
化合物１２１７－ａの合成
　化合物ａａ０７９（４２．２ｇ，１１１ｍｍｏｌ）とＯｘｙｍａ（１９．９９ｇ，１４１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３９１ｍＬ）溶液に、ＷＳＣＩ・ＨＣｌ（３１．５ｇ，１６４ｍｍｏｌ）を室温にて加え、３０分攪拌して溶液Ａを得た。
　窒素雰囲気下、化合物ａａ０１１－ａ（５１．１６ｇ，１１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３９１ｍＬ）溶液にＤＢＵ（１７．４９ｍＬ，１１７ｍｍｏｌ）を室温で滴下にて加え、５分攪拌した。そこにピリジン塩酸塩（１４．９ｇ，１２９ｍｍｏｌ）を加え、１０分攪拌した。得られた反応液に溶液ＡとＤＩＰＥＡ（２２．４６ｍＬ，１２９ｍｍｏｌ）を加え、窒素雰囲気下、室温にて７時間攪拌した。反応液を酢酸エチル（４２２ｍＬ）で希釈し、塩酸（１ｍｏｌ／Ｌ，４２２ｍＬ）で２回洗浄した、得られた水層を酢酸エチル（４２２ｍＬ）で２回抽出した。すべての有機層を混合し、水（４２２ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と水の混合溶液（１：１，４２２ｍＬ）、飽和食塩水と水の混合溶液（１：１、４２２ｍＬ）で順に洗浄後、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒留去した。得られた残渣にＤＣＭ（４２２ｍＬ）を加えて０．５時間攪拌した。そこに硫酸マグネシウム（３０ｇ）を加え、３０分攪拌したのちに、濾過にて固形物を取り除いた。得られた溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、化合物１２１７－ａを得た。（５５．５５ｇ、収率８７％）
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５９８．２（Ｍ＋Ｎａ）＋
　保持時間：１．３２０分（分析条件ＳＭＤＡＭ０５）
化合物１２１７－ｂの合成
　窒素雰囲気下、室温にて化合物１２１７－ａ（５５．５５ｇ，９６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１９３ｍＬ）溶液に、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．１１５ｇ，０．９６５ｍｍｏｌ）を加え、更にフェニルシラン（８．３１ｍＬ、６７．５ｍｍｏｌ）を滴下にて加え、３０分攪拌した。反応液をＭＴＢＥ（５５６ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と水の混合溶液（１：１，５５６ｍＬ）で抽出した。得られた有機層を水（２７８ｍＬ）で抽出した。水層を混合し、ＤＣＭ（５５６ｍＬ）を加えた。そこにリン酸（５６．７ｇ，５７９ｍｍｏｌ）を滴下にて加えてｐＨを２～３に調整し、有機層を分離後、水層をＤＣＭ（５５６ｍＬ）にて抽出した。得られた有機層を混合し、飽和食塩水と水の混合溶液（１：１、５５６ｍＬ）で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒留去して化合物１２１７－ｂを得た。（４８．８７ｇ，収率９５％）
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５３６（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：１．１３８分（分析条件ＳＭＤＡＭ０５）
化合物１２１７－ｂ－ｒｅｓｉｎの合成
　フィルター付きの反応容器に２－クロロトリチルクロライドレジン（ＳＵＮＲＥＳＩＮ社から購入、１．３６ｍｍｏｌ／ｇ，１１４ｇ、１５５ｍｍｏｌ）をセットし、ＤＣＭ（１１４０ｍＬ）を加え、２５℃で４５分攪拌後、フィルターから溶媒を排出した。反応容器に化合物１２１７－ｂ（４８．８７ｇ，９１ｍｍｏｌ）とメタノール（２９．６ｍＬ，７３０ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（７６ｍＬ，４３８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（７９８ｍＬ）溶液を加え、２５℃で６０分攪拌し、フィルターから溶液を排出した。続けて、反応容器にメタノール（１１１ｍＬ，２７３７ｍｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（７６ｍＬ，４３８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６８４ｍＬ）溶液を加え、２５℃で９０分攪拌し、フィルターから溶液を排出した。反応容器にＤＣＭ（５７０ｍＬ）を加えて５分攪拌し、フィルターから溶液を排出した。このレジンの洗浄操作を更に４回繰り返し、得られたレジンを減圧下乾燥して化合物１２１７－ｂ－ｒｅｓｉｎを得た（１４０．５ｇ）。レジンに結合している化合物のＦｍｏｃ基を定量することにより、担持量を０．４８２ｍｍｏｌ／ｇと算出した。
化合物１２１７－ｃ－ｒｅｓｉｎの合成
　上記で得られたレジン（０．４８２ｍｍｏｌ／ｇ、６０ｇ、２８．９２ｍｍｏｌ）をプラスチック製固相反応容器にセットした。室温にて、この固相反応容器にＤＣＭ（６００ｍＬ）を加え、５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。この固相反応容器にＤＭＦ（４２０ｍＬ）を加え、５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。このレジンの洗浄工程を更に１回繰り返した。この固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２ｖ／ｖ％、４２０ｍＬ）を添加しＦｍｏｃ基の脱保護を行った。１０分振盪後に溶液をフリットから排出した。この固相反応容器にＤＭＦ（４２０ｍＬ）を加え、５分振盪した後、溶液をフリットから排出した。この固相反応容器にトリエチルアミン塩酸塩（７．９６ｇ、５７．８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４２０ｍＬ）溶液を加え、５分振盪した後、溶液をフリットから排出した。この固相反応容器にＤＣＭ（４２０ｍＬ）を加え、５分振盪した後、溶液をフリットから排出した。この固相反応容器にＤＭＦ（４２０ｍＬ）を加え、５分振盪した後、溶液をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に１回繰り返した。
　Ｆｍｏｃ－ｃＬｅｕ－ＯＨ（３７．９８ｇ、１０８ｍｍｏｌ）（ＣＡＳ番号：１１７３２２－３０－２）とＯｘｙｍａ（９．６ｇ、６７．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１８０ｍＬ）溶液と、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＤＭＦ溶液（１０％、２１６ｍＬ）を混合し、２分後、上記により得られた固相反応容器に加えた。この固相反応容器を５０℃にて２４時間振盪後、溶液をフリットから排出した。この固相反応容器にＤＭＦ（４２０ｍＬ）を加え、室温で５分振盪した後、溶液をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に４回繰り返した。この固相反応容器にＤＣＭ（４２０ｍＬ）を加え、室温で５分振盪した後、溶液をフリットから排出した。このＤＣＭによるレジンの洗浄工程を更に５回繰り返した。得られたレジンを減圧下にて乾燥し、化合物１２１７－ｃ－ｒｅｓｉｎ（６２．５ｇ）を得た。
化合物ａａ１３４の合成
化合物ａａ１３４、（２Ｓ）－４－［３，５－ジフルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル］－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）ブタン酸、Ｆｍｏｃ－Ｈｐｈ（４－ＣＦ３－３５－Ｆ２）－ＯＨの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000108
化合物ａａ１３２－ａ、（１－Ｏ－ベンジル　５－Ｏ－（１，３－ジオキソイソインドル－２－イル）　（２Ｓ）－２－［（２－メチルプロパン－２－イル）オキシカルボニルアミノ］ペンタンジオエート）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000109
　（４Ｓ）－４－［（２－メチルプロパン－２－イル）オキシカルボニルアミノ］－５－オキソ－５－フェニルメトキシペンタン酸（Ｂｏｃ－Ｇｌｕ－ＯＢｎ、ＣＡＳ番号３０９２４－９３－７）（２００ｇ，５９２．８２ｍｍｏｌ）、Ｎ－ヒドロキシフタルイミド（１０６ｇ，６４９．７８ｍｍｏｌ，１．１０当量）、ＤＭＡＰ（３．６ｇ，２９．４７ｍｍｏｌ，０．０５当量）のＴＨＦ（２Ｌ）溶液に、窒素雰囲気下、０℃にてＤＩＣ（１３８ｍＬ，１．５４当量）を滴下にて加えた。反応液を２５℃で１６時間撹拌し、固形物をろ過にて取り除き、ろ液を減圧下溶媒留去した。残渣をトルエンで希釈し、生じた固体をろ過にて取り除き、ろ液を減圧下溶媒留去した。残渣を再結晶（アセトン／ヘプタン）にて精製し、化合物ａａ１３２－ａ（１－Ｏ－ベンジル　５－Ｏ－（１，３－ジオキソイソインドル－２－イル）　（２Ｓ）－２－［（２－メチルプロパン－２－イル）オキシカルボニルアミノ］ペンタンジオエート）を得た。（２３０ｇ，８０％）
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５０５．２（Ｍ＋Ｎａ）＋
　保持時間：０．９９２分（分析条件ＳＭＤｍｅｔｈｏｄ＿１６）
　臭化ニッケル三水和物（ＮｉＢｒ２・３Ｈ２Ｏ）（１３．５ｇ，４９．７ｍｍｏｌ，０．３当量）および４，４'－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－２，２'－ビピリジル（ｄｔｂｂｐｙ，ＣＡＳ番号７２９１４－１９－３）（１３．３ｇ，４９．７ｍｍｏｌ、０．３当量）をＤＭＡ（４００ｍＬ）に加え、窒素雰囲気下、５０℃で３時間撹拌しＮｉ溶液を調製した。
　化合物ａａ１３２－ａ（１－Ｏ－ベンジル　５－Ｏ－（１，３－ジオキソイソインドル－２－イル）　（２Ｓ）－２－［（２－メチルプロパン－２－イル）オキシカルボニルアミノ］ペンタンジオエート）（８０ｇ，１６６ｍｍｏｌ）、亜鉛粉末（５４．２ｇ，８２９ｍｍｏｌ，５当量）および４－ブロモ－１，３－ジフルオロ－２－（トリフルオロメチル）ベンゼン（ＣＡＳ番号１５６２４３－６４－０，８６．６ｇ，３３２ｍｍｏｌ、２当量）のＤＭＡ（４００ｍＬ）混合液を窒素雰囲気下、室温にて１時間撹拌し、先に調整したＮｉ溶液を添加し、室温で１６時間撹拌した。反応液にＥＤＴＡ・２Ｎａ水溶液（８００ｍＬ，１０％）を加え、固体をろ過にて取り除いた。ろ液を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル）で精製し、化合物ａａ１３４－ａを得た。（５７．２ｇ，６９％）。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４９６（Ｍ＋Ｎａ）＋
　保持時間：１．５４４分（分析条件ＳＭＤｍｅｔｈｏｄ＿１５）
　化合物ａａ１３４－ａ（５７．２ｇ，１２１ｍｍｏｌ）のトルエン混合液（６９０ｍＬ）を０℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸（ＴｆＯＨ）（５４．４ｇ，３６２ｍｍｏｌ，３当量）を滴下にて加えた。室温で１時間撹拌後、水（５８ｍＬ）を加えた。この混合液を水で抽出し、合わせた水層を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒留去し、６０ｇの残渣を得た。残渣にアセトニトリル／水（４００／４００ｍＬ）を加え、水酸化ナトリウム水溶液（４８％）でｐＨを７に調整した。この溶液にＦｍｏｃ－ＯＳｕ（３６．６ｇ，１０８．６ｍｍｏｌ，０．９当量）を加え、水酸化ナトリウム水溶液（４８％）でｐＨを８．０に調整後、室温で１６時間撹拌した。アセトニトリル／水（１／１）で洗いこみながら反応液をろ過して固体成分を除去し、ろ液をアセトニトリルで希釈し、６ｍｏｌ／Ｌ塩酸水で酸性に調整することで析出した固体をろ過にて集めることで、化合物ａａ１３４（（２Ｓ）－４－［３，５－ジフルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル］－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）ブタン酸、Ｆｍｏｃ－Ｈｐｈ（４－ＣＦ３－３５－Ｆ２）－ＯＨ）を得た。（５２ｇ，８３％）
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝５２８．４５（Ｍ＋Ｎａ）＋
　保持時間：３．５３８分（分析条件ＳＭＤｍｅｔｈｏｄ＿１４）
　１Ｈ－ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：１２．６９（ｓ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．７８－７．５４（ｍ，３Ｈ），７．４８－７．２０（ｍ，６Ｈ），４．３３（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．２４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．９７－３．８４（ｍ，１Ｈ），２．７９－２．６５（ｍ，２Ｈ），２．１５－２．００（ｍ，１Ｈ），２．００－１．８３（ｍ，１Ｈ）
化合物ａａ１１３、（２Ｓ）－２－［エチル（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）アミノ］－３－（４－メチルフェニル）プロパン酸（Ｆｍｏｃ－ＥｔＰｈｅ（４－Ｍｅ）－ＯＨ）の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000110
　窒素雰囲気下、化合物ａａ１１３－ａ（（２Ｓ）－２－（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニルアミノ）－３－（４－メチルフェニル）プロパン酸、Ｆｍｏｃ－Ｐｈｅ（４－Ｍｅ）－ＯＨ）（５．６２ｇ，１４．０ｍｍｏｌ，ＣＡＳ番号１９９００６－５４－７）をジクロロエタン（ＤＣＥ）（１７．５ｍＬ）に懸濁させ、パラアルデヒド（５．６１ｍＬ，４２．０ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（９．６５ｍＬ，１２６ｍｍｏｌ）を加え、６０度で６時間撹拌した。得られた化合物ａａ１１３－ｂを含む反応液をそのまま次の工程に用いた。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４２８（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：１．０３分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）
　得られた化合物ａａ１１３－ｂの反応液に、ジクロロエタン（ＤＣＥ）（１７．５ｍＬ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（１９．３ｍＬ，２５２ｍｍｏｌ）、トリエチルシラン（ＴＥＳ）（２０．１ｍＬ，１２６ｍｍｏｌ）を加え、６０度で１７時間撹拌した。室温に冷却し、減圧濃縮した後、得られた残渣を酢酸エチル（４０ｍＬ）に溶解させた。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）、飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下溶媒留去した。得られた残渣をアセトニトリル（３０ｍＬ）に溶解させ、ヘキサン（１５ｍＬ）で２回洗浄し、減圧下溶媒留去した。得られた残渣を逆相カラムクロマトグラフィー（０．１％－ギ酸入りアセトニトリル／０．１％－ギ酸入り蒸留水）で精製して、化合物ａａ１１３（（２Ｓ）－２－［エチル（９Ｈ－フルオレン－９－イルメトキシカルボニル）アミノ］－３－（４－メチルフェニル）プロパン酸、Ｆｍｏｃ－ＥｔＰｈｅ（４－Ｍｅ）－ＯＨ）を得た。（４．４ｇ，２工程７３％）
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝４３０（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：０．９５分（分析条件ＳＱＤＦＡ０５）
　以降のＦｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ（ＣＡＳ番号：７１９８９－３１－６）、Ｆｍｏｃ－Ｈｐｈ（４－ＣＦ３－３５－Ｆ２）－ＯＨ（化合物ａａ１３４）、Ｆｍｏｃ－ＭｅＧｌｙ－ＯＨ（ＣＡＳ番号：７７１２８－７０－２）、Ｆｍｏｃ－ＥｔＰｈｅ（４－Ｍｅ）－ＯＨ（化合物ａａ１１３）、Ｆｍｏｃ－Ａｚｅ（２）－ＯＨ（ＣＡＳ番号：１３６５５２－０６－２）、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｌａ－ＯＨ（ＣＡＳ番号：８４０００－０７－７）およびＦｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ（ＣＡＳ番号：７１９８９－２３－６）の伸長はＩｎｔａｖｉｓ社製ペプチド合成機（Ｍｕｌｔｉｐｅｐ　ＲＳｉ）を用いて、Ｆｍｏｃ固相合成法により合成した。操作の詳細な手順については合成機に付属のマニュアルに従った。
　上記により得られた化合物１２１７－ｃ－ｒｅｓｉｎ（固相反応容器１本に対して２００ｍｇ）を３０本の固相反応容器に加え、ペプチド合成機にセットした。この３０本すべての固相反応容器にジクロロメタン（ＤＣＭ）を加えて１時間静置することでレジンの膨潤を行った。その後、溶媒をフリットから排出した。
Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨの伸長
　３０本すべての固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を添加し、３０℃に加温して１０分後に溶液をフリットから排出した。この３０本すべての固相反応容器にＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に３回繰り返した。続いて、Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ（ＣＡＳ番号７１９８９－３１－６）（０．６ｍｏｌ／Ｌ）とＨＯＡｔ（０．３７５ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液（固相反応容器１本に対して０．６ｍＬ）と、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＤＭＦ溶液（１０ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して０．７２ｍＬ）を合成機のｍｉｘｉｎｇ　ｖｉａｌで混合した後に３０本すべての固相反応容器に対して添加し、４０℃にて４時間静置した。その後、溶液をフリットから排出した。３０本すべての固相反応容器に対してＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このレジンの洗浄工程を更に２回繰り返した。
Ｆｍｏｃ－Ｈｐｈ（４－ＣＦ３－３５－Ｆ２）－ＯＨ（化合物ａａ１３４）の伸長
　上記で得られたレジンを含む３０本すべての固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を添加し、３５℃に加温して１０分後に溶液をフリットから排出した。この３０本すべての固相反応容器にＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に３回繰り返した。続いて、Ｆｍｏｃ－Ｈｐｈ（４－ＣＦ３－３５－Ｆ２）－ＯＨ（化合物ａａ１３４）（０．４５ｍｏｌ／Ｌ）とＨＯＡｔ（０．３７５ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液（固相反応容器１本に対して０．６ｍＬ）と、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＤＭＦ溶液（１０ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して０．７２ｍＬ）を合成機のｍｉｘｉｎｇ　ｖｉａｌで混合した後に３０本すべての固相反応容器に対して添加し、４０℃にて２．５時間静置した。その後、溶液をフリットから排出した。３０本すべての固相反応容器に対してＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このレジンの洗浄工程を更に２回繰り返した。
Ｆｍｏｃ－ＭｅＧｌｙ－ＯＨの伸長
　上記で得られたレジンを含む３０本すべての固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を添加し、３５℃に加温して１０分後に溶液をフリットから排出した。この３０本すべての固相反応容器にＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に３回繰り返した。続いて、Ｆｍｏｃ－ＭｅＧｌｙ－ＯＨ（０．６ｍｏｌ／Ｌ）とＨＯＡｔ（０．３７５ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液（固相反応容器１本に対して０．６ｍＬ）と、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＤＭＦ溶液（１０ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して０．７２ｍＬ）を合成機のｍｉｘｉｎｇ　ｖｉａｌで混合した後に３０本すべての固相反応容器に対して添加し、４０℃にて２．５時間静置した。その後、溶液をフリットから排出した。３０本すべての固相反応容器に対してＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このレジンの洗浄工程を更に２回繰り返した。
Ｆｍｏｃ－ＥｔＰｈｅ（４－Ｍｅ）－ＯＨ（化合物ａａ１１３）の伸長
　上記で得られたレジンを含む３０本すべての固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を添加し、３５℃に加温して１０分後に溶液をフリットから排出した。この３０本すべての固相反応容器にＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に３回繰り返した。続いて、前述のとおり製造したＦｍｏｃ－ＥｔＰｈｅ（４－Ｍｅ）－ＯＨ（０．６ｍｏｌ／Ｌ）とＨＯＡｔ（０．３７５ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液（固相反応容器１本に対して０．６ｍＬ）と、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＤＭＦ溶液（１０ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して０．７２ｍＬ）を合成機のｍｉｘｉｎｇ　ｖｉａｌで混合した後に３０本すべての固相反応容器に対して添加し、４０℃にて２．５時間静置した。その後、溶液をフリットから排出した。３０本すべての固相反応容器に対してＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このレジンの洗浄工程を更に２回繰り返した。
Ｆｍｏｃ－Ａｚｅ（２）－ＯＨの伸長
　上記で得られたレジンを含む３０本すべての固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を添加し、３５℃に加温して１０分後に溶液をフリットから排出した。この３０本すべての固相反応容器にＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に３回繰り返した。続いて、Ｆｍｏｃ－Ａｚｅ（２）－ＯＨ（０．６ｍｏｌ／Ｌ）とＨＯＯＢｔ（０．３７５ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰとＤＭＳＯの混合溶液（７：３）（固相反応容器１本に対して０．６ｍＬ）と、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＤＭＦ溶液（１０ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して０．７２ｍＬ）を合成機のｍｉｘｉｎｇ　ｖｉａｌで混合した後に３０本すべての固相反応容器に対して添加し、６０℃にて５時間静置した。その後、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＤＭＦ溶液（１０ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して０．７２ｍＬ）を３０本すべての固相反応容器に対して添加し、６０℃にて５時間静置した。その後、溶液をフリットから排出した。３０本すべての固相反応容器に対してＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このレジンの洗浄工程を更に２回繰り返した。
Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｌａ－ＯＨの伸長
　上記で得られたレジンを含む３０本すべての固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を添加し、３５℃に加温して１０分後に溶液をフリットから排出した。この３０本すべての固相反応容器にＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に３回繰り返した。続いて、Ｆｍｏｃ－ＭｅＡｌａ－ＯＨ（０．６ｍｏｌ／Ｌ）とＨＯＡｔ（０．３７５ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液（固相反応容器１本に対して０．６ｍＬ）と、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＤＭＦ溶液（１０ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して０．７２ｍＬ）を合成機のｍｉｘｉｎｇ　ｖｉａｌで混合した後に３０本すべての固相反応容器に対して添加し、４０℃にて２．５時間静置した。その後、溶液をフリットから排出した。３０本すべての固相反応容器に対してＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このレジンの洗浄工程を更に２回繰り返した。
Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨの伸長
　上記で得られたレジンを含む３０本すべての固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を添加し、３５℃に加温して１０分後に溶液をフリットから排出した。この３０本すべての固相反応容器にＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に３回繰り返した。続いて、Ｆｍｏｃ－Ｉｌｅ－ＯＨ（０．６ｍｏｌ／Ｌ）とＨＯＡｔ（０．３７５ｍｏｌ／Ｌ）のＮＭＰ溶液（固相反応容器１本に対して０．６ｍＬ）と、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）のＤＭＦ溶液（１０ｖ／ｖ％、固相反応容器１本に対して０．７２ｍＬ）を合成機のｍｉｘｉｎｇ　ｖｉａｌで混合した後に３０本すべての固相反応容器に対して添加し、４０℃にて１０時間静置した。その後、溶液をフリットから排出した。３０本すべての固相反応容器に対してＤＭＦ（固相反応容器１本に対して１．４ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このレジンの洗浄工程を更に２回繰り返した。続いて、３０本すべての固相反応容器に対してＤＣＭ（固相反応容器１本に対して１．６ｍＬ）を加え、溶媒をフリットから排出した。このレジンの洗浄工程を更に５回繰り返した。３０本すべての固相反応容器からレジンを回収し、混合して続く操作を行った。
Ｆｍｏｃ－ＭｅＬｅｕ－ＯＨ（ＣＡＳ番号：１０３４７８－６２－２）の伸長
　上記で得られたレジンを２００ｍＬのプラスチック製固相反応容器に加え、ここにＤＣＭ（６０ｍＬ）を加え、３０℃で５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。この固相反応容器にトルエン（５０ｍＬ）を加え、３０℃で５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。このトルエンによるレジンの洗浄工程を更に１回繰り返した。この固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のトルエン溶液（２ｖ／ｖ％、４５ｍＬ）を添加し、３０℃で５分振盪後に溶液をフリットから排出した。
　この固相反応容器にトルエン（５０ｍＬ）を加え、３０℃で５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。このトルエンによるレジンの洗浄工程を更に１回繰り返した。この固相反応容器にＤＣＭ（５０ｍＬ）を加え、３０℃で５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。このＤＣＭによるレジンの洗浄工程を更に１回繰り返した。この固相反応容器に、Ｆｍｏｃ－ＭｅＬｅｕ－ＯＨ（４．２５ｇ、１１．５７ｍｍｏｌ）、［エチルシアノ（ヒドロキシイミノ）アセタト－Ｏ２］トリ－１－ピロリジニルホスホニウムヘキサフルオロリン酸（ＰｙＯｘｉｍ）（６．１０ｇ、１１．５７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３．０３ｍＬ、１７．３５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４５ｍＬ）溶液を加え、３０℃で３時間振盪した。その後、溶液をフリットから排出した。この固相反応容器にＤＭＦ（５０ｍＬ）を加え、３０℃で５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に４回繰り返した。この固相反応容器にＤＣＭ（５０ｍＬ）を加え、３０℃で５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。このＤＣＭによるレジンの洗浄工程を更に３回繰り返した。その後、得られたレジンは減圧下乾燥した。
　上記の固相反応容器にＤＣＭ（６０ｍＬ）を加え、３０℃で５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。この固相反応容器にＤＭＦ（５０ｍＬ）を加え、３０℃で５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に１回繰り返した。この固相反応容器にジアザビシクロウンデセン（ＤＢＵ）のＤＭＦ溶液（２ｖ／ｖ％、４５ｍＬ）を添加し、３０℃で１５分振盪後に溶液をフリットから排出した。この固相反応容器にＤＭＦ（５０ｍＬ）を加え、３０℃で５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。このＤＭＦによるレジンの洗浄工程を更に４回繰り返した。この固相反応容器にＤＣＭ（５０ｍＬ）を加え、３０℃で５分振盪した後、溶媒をフリットから排出した。このＤＣＭによるレジンの洗浄工程を更に４回繰り返し、化合物１２１７－ｄが担持されたレジンを得た。
化合物１２１７－ｄの合成（ペプチドのレジンからの切り出し）
　上記により得られたレジンを含む固相反応容器に、２，２，２－トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）（６０ｍＬ）とＤＣＭ（６０ｍＬ）とＤＩＰＥＡ（０．９０９ｍＬ）の混合溶液を加え、室温にて２時間振盪した。その後、溶液をフリットから回収した。この固相反応容器に２，２，２－トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）（３０ｍＬ）とＤＣＭ（３０ｍＬ）の混合溶液を加え、室温にて５分間振盪後、溶液をフリットから回収した。更にこの固相反応容器に、２，２，２－トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）（３０ｍＬ）とＤＣＭ（３０ｍＬ）の混合溶液を加え、室温にて５分間振盪後、溶液をフリットから回収した。回収したすべての溶液を混合し、減圧下にて溶媒留去して化合物１２１７－ｄを粗生成物として得た。（３．８５ｇ）
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１４５３．９（Ｍ－Ｈ）－
　保持時間：０．６７分（分析条件ＳＱＤＡＡ５０）
化合物１の合成（ペプチドの環化と精製）
　上記により得られた化合物１２１７－ｄ（３．８５ｇ）を酢酸イソプロピル（５２９ｍＬ）とＤＩＰＥＡ（０．９１５ｍＬ、５．２４ｍｍｏｌ）の混合液に溶解し、ＨＣＴＵ（Ｏ－（１Ｈ－６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウム　ヘキサフルオロリン酸、ＣＡＳ番号３３０６４５－８７－９）（１．８０５ｇ、４．３６ｍｍｏｌ）を加え、室温にて２１時間攪拌した。その後、溶液量が約半分になるまで減圧下溶媒留去した。得られた溶液に、飽和塩化アンモニウム水溶液（４０ｍＬ）と水（４０ｍＬ）の混合溶液を加え、酢酸イソプロピル（３５０ｍＬ）で抽出した。得られた有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）と水（４０ｍＬ）の混合溶液、飽和食塩水（４０ｍＬ）と水（４０ｍＬ）の混合溶液で順に洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下溶媒留去して３．３６ｇの残渣を得た。得られた残渣を逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｄａｉｓｏｇｅｌ　ＳＰ－１２０－４０／６０－ＯＤＳ－ＲＰＳ、溶出液としてアセトニトリル（０．１％のギ酸を含む）／水（０．１％のギ酸を含む）を使用）で精製し、目的物を含む溶出液を凍結乾燥することでアモルファス状態の化合物１（１．３６ｇ、収率３４％）を得た。得られた化合物１のマススペクトルの値と液体クロマトグラフィーの保持時間は下記のとおりであった。
　ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ＝１４３７．７（Ｍ＋Ｈ）＋
　保持時間：７．４９６分（分析条件ＳＳＣ－Ａ－ＡＦ－０１）
　調製例１におけるＬＣ／ＭＳの分析条件を表１１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000111
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000112
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000113
実施例２７　Step H’1
化合物a03：tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[ベンジルオキシカルボニル(メチル)アミノ]-3-シクロヘキシル-プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000114
　反応容器に化合物a01（２．００ｇ）および化合物a02（１．３７ｇ）を加え、次いで2-MeTHF（１９．０ｍＬ）を加えて攪拌した。さらにDIPEA（５．５ｍＬ）を加えた後、反応混合物の内温を３２℃以下に保ちながらT3P（５０ w/w％ 2-MeTHF溶液、１１．７ｍＬ）を滴下し、その後室温にて1時間撹拌した。５％炭酸ナトリウム水溶液（１２ｍＬ）を反応混合物の内温を３６℃以下に保つように滴下し攪拌したのち、水層を排出した。得られた有機層を５％炭酸ナトリウム水溶液（１２ｍＬｘ１）、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１２ｍＬｘ１）、１０％塩化ナトリウム水溶液（５０ｍＬｘ２）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し化合物a03を含む残渣（２．７２ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．４９９分（HPLC分析条件：method 3）
実施例２８　Step H’2-1
化合物a04：tert-ブチル 2-[[(2S)-3-シクロヘキシル-2-(メチルアミノ)プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000115
　Step H’1で得られた化合物a03を含む残渣（２．７０ｇ）に2-MeTHF（１８ｍＬ）を加えた後、５％Pd/C（１．２７ｇ、５０％含水品）を加えた。水素ガスによる脱気置換を３回実施し、その後２時間攪拌した。反応混合物をろ紙を用いて吸引濾過し、残渣を2-MeTHF溶液（１８ｍＬｘ３）で洗浄した。得られた濾液および洗浄液を合わせて減圧濃縮し化合物a04を含む残渣（１．７７ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．４１９分（HPLC分析条件：method 3）
実施例２９　Step H’2-2
化合物a06：tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[2-[ベンジルオキシカルボニル(メチル)アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-3-シクロヘキシル-プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000116
　Step H’2-1で得られた化合物a04を含む残渣（１．７１ｇ）と、化合物a05（１．２９ｇ）を2-MeTHF（１１．６ｍＬ）に溶解させて攪拌した。さらにDIPEA（３．４ｍＬ）を加えた後、反応混合物の内温を２７℃以下に保ちながらT3P（５０ w/w％ 2-MeTHF溶液、７．２ｍＬ）を滴下し、その後室温にて２時間撹拌した。５％炭酸ナトリウム水溶液（７．２ｍＬ）を反応混合物の内温を２９℃以下に保つように滴下し攪拌したのち、水層を排出した。得られた有機層を５％炭酸ナトリウム水溶液（７．２ｍＬｘ１）、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（７．２ｍＬｘ１）、１０％塩化ナトリウム水溶液（７．２ｍＬｘ２）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し化合物a06を含む残渣（２．７０ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．４５８分（HPLC分析条件：method 3）
実施例３０　Step H’3-1
化合物a07：tert-ブチル 2-[[(2S)-3-シクロヘキシル-2-[メチル-[2-(メチルアミノ)アセチル]アミノ]プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000117
　Step H’2-2で得られた化合物a06を含む残渣（２．７０ｇ）に2-MeTHF（１０ｍＬ）を加えた後、５％Pd/C（０．７１ｇ、５０％含水品）を加えた。水素ガスによる脱気置換を３回実施し、その後２時間攪拌した。反応混合物をろ紙を用いて吸引濾過し、残渣を2-MeTHF溶液（１０ｍＬｘ３）で洗浄した。得られた濾液および洗浄液を合わせて減圧濃縮し化合物a07を含む残渣（１．８２ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．８４８分（HPLC分析条件：method 3）
実施例３１　Step H’3-2
化合物a09：tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[ベンジルオキシカルボニル(メチル)アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-3-シクロヘキシル-プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000118
　Step H’3-1で得られた化合物a07を含む残渣（１．８０ｇ）と、化合物a08（１．５７ｇ）を2-MeTHF（１４．２ｍＬ）に溶解させて攪拌した。さらにDIPEA（４．１ｍＬ）を加えた後、反応混合物の内温を３０℃以下に保ちながらT3P（５０ w/w％ 2-MeTHF溶液、８．８ｍＬ）を滴下し、その後室温にて２時間撹拌した。５％炭酸ナトリウム水溶液（１０．８ｍＬ）を反応混合物の内温を３３℃以下に保つように滴下し攪拌したのち、水層を排出した。得られた有機層を５％炭酸ナトリウム水溶液（１０．８ｍＬｘ１）、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１０．８ｍＬｘ１）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１０．８ｍＬｘ１）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し化合物a09を含む残渣（２．６１ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．０５５分（HPLC分析条件：method 3）
実施例３２　Step H’4-1
化合物a10：tert-ブチル 2-[[(2S)-3-シクロヘキシル-2-[メチル-[2-[メチル-[2-(メチルアミノ)アセチル]アミノ]アセチル]アミノ]プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000119
　Step H’3-2で得られた化合物a09を含む残渣（２．４０ｇ）に2-MeTHF（１２．３ｍＬ）を加えた後、５％Pd/C（０．４４ｇ、５０％含水品）を加えた。水素ガスによる脱気置換を３回実施し、その後１時間攪拌した。
　反応混合物をろ紙を用いて吸引濾過し、残渣を2-MeTHF溶液（１２ｍＬｘ３）で洗浄した。得られた濾液および洗浄液を合わせて減圧濃縮し化合物a10を含む残渣（１．９７ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．５２１分（分析条件：method 3）
実施例３３　Step H’4-2
化合物a12：tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-3-シクロヘキシル-プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000120
　Step H’4-1で得られた化合物a10を含む残渣（１．９２ｇ）と、化合物a11（１．６９ｇ）を2-MeTHF（１２．８ｍＬ）に溶解させて攪拌した。さらにDIPEA（３．７ｍＬ）を加えた後、反応混合物の内温を２９℃以下に保ちながらT3P（５０ w/w％ 2-MeTHF溶液、７．８ｍＬ）を滴下し、その後室温にて２時間撹拌した。５％炭酸ナトリウム水溶液（１４．４ｍＬ）を反応混合物の内温を３３℃以下に保つように滴下し攪拌したのち、水層を排出した。得られた有機層を５％炭酸ナトリウム水溶液（１４．４ｍＬｘ１）、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１４．４ｍＬｘ１）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１４．４ｍＬｘ１）で洗浄した。得られた有機層をさらに５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１４．４ｍＬｘ１）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１４．４ｍＬｘ１）での洗浄を２回繰り返した。2-MeTHF（１４．４ｍＬ）を加え、これを５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１４．４ｍＬｘ１）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１４．４ｍＬｘ１）で洗浄した。さらに１％炭酸ナトリウム水溶液（１４．４ｍＬｘ３）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１４．４ｍＬｘ５）、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１４．４ｍＬｘ１）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１４．４ｍＬｘ１）、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１４．４ｍＬｘ１）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１４．４ｍＬｘ１、７．２ｍＬｘ１０）で洗浄した。さらに２．５％アンモニア水（７．２ｍＬｘ３）、１０％塩化ナトリウム水溶液（１ｍＬｘ１）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し化合物a12を含む残渣（２．３９ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．００６分（HPLC分析条件：method 1）
実施例３４　Step H’5-1
化合物a13：tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-アミノ-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-3-シクロヘキシル-プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000121
　Step H’4-2で得られた化合物a12を含む残渣（２．１５ｇ）に2-MeTHF（９．３ｍＬ）を加えた後、５％Pd/C（０．６６ｇ、５０％含水品）を加えた。水素ガスによる脱気置換を３回実施し、その後２時間攪拌した。反応混合物をろ紙を用いて吸引濾過し、残渣を2-MeTHF溶液（１０ｍＬｘ３）で洗浄した。得られた濾液および洗浄液を合わせて減圧濃縮し化合物a13を含む残渣（１．９５ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．７７６分（HPLC分析条件：method 1）
実施例３５　Step H’5-2
化合物a15：tert-ブチル 2-[[(2S)-3-シクロヘキシル-2-[メチル-[2-[メチル-[2-[メチル-[(2S,3S)-3-メチル-2-[[(2S)-4-メチル-2-[メチル(2-トリメチルシリルエトキシカルボニル)アミノ]ペンタノイル]アミノ]ペンタノイル]アミノ]アセチル]アミノ]アセチル]アミノ]プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000122
　Step H’5-1で得られた化合物a13を含む残渣（１．９４ｇ）と、化合物a14（１．４９ｇ）を2-MeTHF（１０．３ｍＬ）に溶解させて攪拌した。反応容器を氷浴にて冷却し、DIPEA（３．０ｍＬ）を加えた後、反応混合物の内温を９℃以下に保ちながらT3P（５０ w/w％ 2-MeTHF溶液、６．３ｍＬ）を滴下し、その後氷浴を外して室温にて１時間撹拌した。５％炭酸ナトリウム水溶液（１２ｍＬ）を反応混合物の内温を２２℃以下に保つように滴下し攪拌したのち、水層を排出した。得られた有機層を５％炭酸ナトリウム水溶液（１２ｍＬｘ１）、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１２ｍＬｘ１）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１２ｍＬｘ１）で洗浄し、得られた有機層を減圧濃縮した。2-MeTHF（２０ｍＬ）に再度溶解し、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１２ｍＬｘ２）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１２ｍＬｘ２）で洗浄した。有機層にN－メチルイミダゾール（０．３ｍＬ）および５％炭酸ナトリウム水溶液（１２ｍＬ）を加えて６．５時間攪拌したのち、水層を排出した。５％炭酸ナトリウム水溶液（１２ｍＬｘ１）、５％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（１２ｍＬｘ２）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１２ｍＬｘ２）で洗浄し、減圧濃縮した。2-MeTHF（２０ｍＬ）に再度溶解し、さらにヘプタン:MTBE混合液（１．５：１）（２０ｍＬ）を加え、５％炭酸ナトリウム水溶液（２０ｍＬｘ２）で洗浄し、減圧濃縮することで化合物a15を含む残渣（２．３８ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．９１９分（HPLC分析条件：method 1）
実施例３６　Step H’6
化合物a16：tert-ブチル 2-[[(2S)-3-シクロヘキシル-2-[メチル-[2-[メチル-[2-[メチル-[(2S,3S)-3-メチル-2-[[(2S)-4-メチル-2-(メチルアミノ)ペンタノイル]アミノ]ペンタノイル]アミノ]アセチル]アミノ]アセチル]アミノ]プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000123
　Step H’5-2で得られた化合物a15を含む残渣（２．３５ｇ）に2-MeTHF（１４ｍＬ）を加えた後、反応容器の外温を５０℃に設定し、テトラブチルアンモニウムフロリド（１M THF溶液、７．０ｍＬ）を加えた。そのまま反応液を２時間攪拌した。室温まで冷却ののち酢酸イソプロピル（７ｍＬ）を加え、５％炭酸カリウム水溶液（７ｍＬｘ６）で洗浄後、減圧濃縮し、化合物a16を含む残渣（１．９２ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．９０９分（HPLC分析条件：method 1）
実施例３７　Step S’0
化合物a19：tert-ブチル (3S)-3-[ベンジルオキシカルボニル(メチル)アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノアートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000124
　反応容器に化合物a17（２．０１ｇ）、2-MeTHF（１１．７ｍＬ）を加えて撹拌した。DIPEA（１．８ｍＬ）、化合物a18（０．５３ｍＬ）を加えた後、室温にてT3P（５０ｗ／ｗ％ 2-MeTHF溶液、３．６１ｍＬ）を添加し、その後1時間撹拌した。１０％クエン酸水溶液（１２ｍＬ）を撹拌しながら加えた後、水層を排出した。得られた有機層を１０％クエン酸水溶液（１２ｍＬ×１）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１２ｍＬ×２）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し化合物a19を含む残渣（１．５６ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：３．９３４分（HPLC分析条件：method 3）
実施例３８　Step S’1-1
化合物a20：tert-ブチル (3S)-3-(メチルアミノ)-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノアートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000125
　Step S’0で得られた化合物a19を含む残渣（３．０８ｇ）に2-MeTHF（２１．３ ｍＬ）を加えた後、５％Pd/C (４．０９ｇ、５０％含水品)を添加した。水素ガスによる脱気置換を３回実施し、その後2時間撹拌した。反応混合物をろ紙を用いて吸引ろ過し、残渣を2-MeTHF溶液（２１．３ ｍＬ×３)で洗浄した。得られたろ液及び洗浄液を合わせて減圧濃縮し化合物a20を含む残渣（２．０９ｇ)を得た。
HPLC分析による保持時間：２．０５８分（HPLC分析条件：method 3）
実施例３９　Step S’1-2
化合物a22：tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-[ベンジルオキシカルボニル(メチル)アミノ]-3-メチル-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノアートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000126
　Step S’1-1で得られた化合物a20を含む残渣（２．０４ｇ）と化合物a21(２．１４ｇ)を2-MeTHF（６．３ｍＬ）に溶解させて撹拌した。さらにDIPEA（５．３ｍＬ）を加えた後、室温にて2-MeTHF（５．９ｍＬ）とMeCN（４．１ｍＬ）に溶解させたHATU（３．９５ｇ）を添加し、その後50℃で5時間撹拌した。CPME（５．３ｍＬ）を室温で加えた後、５％炭酸カリウム水溶液（４．１ｍＬ)とNMI（０．５５ｍＬ）を加え、１時間３０分撹拌した。２．５％アンモニウム水溶液（１６．３ｍＬ）を撹拌しながら加えた後、水層を排出した。得られた有機層を２．５％アンモニウム水溶液（１６．３ｍＬ×1）、１０％硫酸水素ナトリウム一水素和物水溶液（２０．４ｍＬ×４）、５％炭酸カリウム水溶液（２０．４ｍＬ×１）、１０％硫酸水素ナトリウム一水素和物水溶液（２０．４ｍＬ×３）、５％炭酸カリウム水溶液（２０．４ｍＬ×１）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し化合物a22を含む残渣（３．６６ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．４２８分（HPLC分析条件：method 3）
実施例４０　Step S’2-1
化合物a23：tert-ブチル (3S)-3-[メチル-[(2S)-3-メチル-2-(メチルアミノ)ブタノイル]アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノアートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000127
　Step S’1-2で得られた化合物a22を含む残渣（３．５６ｇ）に2-MeTHF（１８．３ｍＬ）を加えた後、５％Pd/C （２．１０ｇ、５０％含水品）を添加した。水素ガスによる脱気置換を３回実施し、その２時間３０分撹拌した。反応混合物をろ紙を用いて吸引ろ過し、残渣を2-MeTHF（１８．３ｍＬ×３）で洗浄した。得られたろ液及び洗浄液を合わせて減圧濃縮し化合物a23を含む残渣（２．５８ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．３９３分（HPLC分析条件：method 3）
実施例４１　Step S’2-2
化合物a25：tert-ブチル (3S)-3-[メチル-[(2S)-3-メチル-2-[メチル-[1-[(2,2,2-トリフルオロアセチル)アミノ]シクロペンタンカルボニル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノアートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000128
　化合物a24を（２．９０ｇ）を2-MeTHF（１８．６ｍＬ）に溶解させて撹拌した。さらにDIPEA（５．４ｍＬ）とStep S’2-1で得られた化合物a23を含む残渣（２．５０ｇ）を加えた後、室温にてT3P（５０ｗ／ｗ％ 2-MeTHF溶液、１０．４ｍＬ）とDMAP（１．５９ｇ）を添加し、その後８時間撹拌した。化合物a24（１．４７ｇ）、DMAP（０．８０ｇ）、T3P（５０ｗ／ｗ％ 2-MeTHF溶液、５．５ｍＬ）、DIPEA（２．８ｍＬ）をそれぞれ追加したのち、２時間撹拌した。５％炭酸ナトリウム水溶液（２０．５ｍＬ）を撹拌しながら加えた後、水層を排出した。得られた有機層を５％硫酸水素ナトリウム一水素和物水溶液（２０．５ｍＬ×４）、５％炭酸ナトリウム水溶液（２０．５ｍＬ×２）、５％硫酸水素ナトリウム一水素和物水溶液（２０．５ｍＬ×２）、５％炭酸ナトリウム水溶液（２０．５ｍＬ×１）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し化合物a25を含む残渣（３．４５ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．００２分（HPLC分析条件：method 3）
実施例４２　Step S’3-1
化合物a26：tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-[(1-アミノシクロペンタンカルボニル)-メチル-アミノ]-3-メチル-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノアートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000129
　Step S’2-2で得られた化合物a25を含む残渣（３．４１ｇ）を2-MeTHF（１３６２ｍＬ）とMeOH（１．４ｍＬ）に溶解させて撹拌した。-20℃にてLiBH4（2M THF溶液、４．５ｍＬ）を滴下し、その後２時間撹拌した。２，２，２－トリフルオロエタノール（６．４ｍＬ）を滴下したのち０℃まで昇温し、その後２０分撹拌した。２０％塩化アンモニウム水溶液（１０．２ｍＬ）を滴下し、水層を排出した。得られた有機層に対し、室温でトリフルオロ酢酸（０．６９ｍＬ）を加えた後１０分撹拌した。2M水酸化ナトリウム水溶液（４４．３ｍＬ）を含む反応容器に対し、化合物a25を含む反応溶液を滴下した。水層を排出し、その後2M水酸化ナトリウム水溶液（３４．１ｍＬ×２）,１０％リン酸水素二カリウム水溶液（１７．０ｍＬ×１）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し化合物a26を含む残渣（２．９０ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．８６８分（HPLC分析条件：method 3）
実施例４３　Step S’3-2
化合物a28：ベンジル (2S)-2-[[1-[[(1S)-1-[[(1S)-3-tert-ブトキシ-3-オキソ-1-(ピペリジン-1-カルボニル)プロピル]-メチル-カルバモイル]-2-メチル-プロピル]-メチル-カルバモイル]シクロペンチル]カルバモイル]ピロリジン-1-カルボキシラートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000130
　Step S’3-1で得られた化合物a26を含む残渣（２．９０ｇ）と化合物a27（１．６６ｇ）をMeCN（１４．５ｍＬ）に溶解させて撹拌した。さらにDIPEA（２．６７ｍＬ）を加えた後、室温にてBEP（２．１１ｇ）を添加し、その後3時間撹拌した。CPME（２９．３ｍＬ）を加えた後, ５％炭酸カリウム水溶液（１７．４ｍＬ）とN－メチルイミダゾール（０．４１ｍＬ）を加え、室温で３０分撹拌した。水層を排出した後、得られた有機層を５％硫酸水素ナトリウム一水素和物水溶液（１７．４ｍＬ×５）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１７．４ｍＬ×２）、５％硫酸水素ナトリウム一水素和物水溶液（１７．４ｍＬ×３）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１７．４ｍＬ×２）で洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し化合物a28を含む残渣（３．８６ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．３２３分（HPLC分析条件：method 3）
実施例４４　Step S’4-1
化合物a29：tert-ブチル (3S)-3-[メチル-[(2S)-3-メチル-2-[メチル-[1-[[(2S)-ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノアートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000131
　Step S’3-2で得られた化合物a28を含む残渣（３．８１ｇ）にTHF（１６．８ｍＬ）を加えた後、５％Pd/C（０．４０ｇ、５０％含水品）を添加した。水素ガスによる脱気置換を３回実施し、その後４時間３０分撹拌した。５％Pd/C（０．２０ｇ、５０％含水品）を追加し、その後１時間３０分撹拌した。反応混合物をろ紙を用いて吸引ろ過し、残渣を2-MeTHF溶液（６．６ｍＬ×３）で洗浄した。得られたろ液及び洗浄液を合わせて減圧濃縮し化合物a29を含む残渣（３．１２ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：２．９７０分（HPLC分析条件：method 3）
実施例４５　Step S’4-2
化合物a31：tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-フェニル-ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-3-メチル-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノアートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000132
　Step S’4-1で得られた化合物a29を含む残渣（２．０６ｇ）と化合物a30（１．１０ｇ）を2-MeTHF（１０．３ｍＬ）に溶解させて撹拌した。さらにDIPEA（２．８ｍＬ）を加えた後、室温にてT3P（５０ｗ／ｗ％ 2-MeTHF溶液、５．４ｍＬ）を添加し、その後２時間撹拌した。化合物a30（０．５５ｇ）、DIPEA（１．１ｍＬ）、T3P（５０ｗ／ｗ％ 2-MeTHF溶液、２．２ｍＬ）をそれぞれ追加した後、５時間撹拌した。さらに、化合物a30（０．５７ｇ）、DIPEA(１．１ｍＬ)、T3P（５０ｗ／ｗ％ 2-MeTHF溶液、２．２ｍＬ）を追加し一晩静置し、翌日２時間撹拌した。５％炭酸カリウム水溶液（１２．４ｍＬ）とN－メチルイミダゾール（０．２９ｍＬ）を加え、室温で３時間撹拌した。N－メチルイミダゾール（０．２３ｍＬ）を加え、１時間撹拌した後水層を排出した。2-MeTHF（１２．４ｍＬ）、N－メチルイミダゾール（０．２３ｍＬ）、５％炭酸カリウム水溶液（１２．４ｍＬ）を加え、１時間撹拌した後、水層を排出した。得られた有機層を１０％硫酸水素ナトリウム一水素和物水溶液（１２．４ｍＬ×２）、５％炭酸カリウム水溶液（１２．４ｍＬ×１）で洗浄した。有機層にヘプタンとMTBEの混合溶液（ヘプタン/MTBE＝１．５：１、１２．４ｍＬ）、MeCN（４．７ｍＬ）を加え水層を排出した。有機層に2-MeTHF（２．１ｍＬ）を加えた後、MeCN（７．０ｍＬ）と５％炭酸カリウム水溶液（１７．７ｍＬ）で７回洗浄した。有機層に対し酢酸イソプロピル（７．６ｍＬ）を加えた後に減圧濃縮し、得られた残渣に酢酸イソプロピル（７．６ｍＬ）を加え、化合物a31を含む溶液（１０．３１ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．７９４分（HPLC分析条件：method 3）
実施例４６　Step 1’
化合物a32：(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-フェニル-ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-3-メチル-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタン酸の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000133
　Step S’4-2で得られた化合物a31を含む残渣（１０．２７ｇ）を酢酸イソプロピル（５１．４ｍＬ）に溶解させて撹拌した。HMDS（２．１ｍＬ）を加えた後、０℃でTMSOTf（１．４ｍＬ）を滴下し、その後室温で２時間３０分撹拌した。2-MeTHFを（５１．４ｍＬ）、５％リン酸水素二カリウム水溶液（１０２．８ｍＬ）を室温で加え、水層を排出した。有機層を５％リン酸二水素ナトリウム水溶液（１０２．８ｍＬ）で洗浄した後、得られた有機層にDIPEA（３．０ｍＬ）を加え減圧濃縮し、酢酸イソプロピル（７．６ｍＬ）を加え化合物a32を含む溶液（７．９２ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：４．００１分（HPLC分析条件：method 3）
実施例４７　Step 2’
化合物a33：tert-ブチル 2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-フェニル-ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-3-メチル-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-3-シクロヘキシル-プロパノイル]-メチル-アミノ]アセタートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000134
　Step 2’で得られた化合物a32を含む残渣（７．９２ｇ）とStep H’6で得られた化合物a16を含む残渣（１．３３ｇ）を2-MeTHF（４．６ｍＬ）に溶解させて撹拌した。室温でDIPEA（１．６ｍＬ）、HATU（１．４３ｇ）を添加し、その後２時間撹拌した。化合物a16を含む残渣（約３００ｍｇ）を添加し、さらに２時間撹拌した。その後、化合物a16を含む残渣（約３００ｍｇ）を追加し、１時間３０分撹拌した。HATU（０．７９ｇ）を加えた後、１時間撹拌した。CPME（３．５ｍＬ）、N－メチルイミダゾール（０．１３ｍＬ）、５％炭酸カリウム水溶液（２．７ｍＬ）を加え、室温で3時間撹拌した。水層を排出した後、２．５％アンモニア水溶液（９．２ｍＬ×１)、１０％硫酸水素ナトリウム一水素和物水溶液（９．２ｍＬ×１)、５％炭酸ナトリウム水溶液（９．２ｍＬ×１）、１０％硫酸水素ナトリウム一水和物水溶液（９．２ｍＬ×３）、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（９．２ｍＬ×２）で洗浄した。有機層にヘプタン/MTBE（１．５：１、９．２ｍＬ）を加えた後、５％炭酸ナトリウム水溶液（９．２ｍＬ×２）で洗浄した。得られた有機層に対し、2-MeTHF（９．２ｍＬ）を加え、減圧濃縮し化合物a33を含む残渣（４．４９ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間:１０．６５分（分析条件：method 4）
実施例４８　Step 3’
化合物a34：2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-フェニル-ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-3-メチル-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-3-シクロヘキシル-プロパノイル]-メチル-アミノ]酢酸の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000135
　Step 2’で得られた化合物a33を含む残渣（４．４９ｇ）を2-MeTHF（４９．５ｍＬ）に溶解させて撹拌した。室温でHMDS（２．９ｍＬ）とTMSOTf（２．１ｍＬ）を添加し、その後２時間撹拌した。５％リン酸水素二カリウム水溶液（１４．２ｍＬ）を加えた後、水層を排出した。得られた有機層を１０％クエン酸水溶液（３．４ｍＬ）と５％リン酸水素二カリウム水溶液（１０．５ｍＬ）の混合水溶液で３回、５％炭酸ナトリウム水溶液で１回洗浄した。有機層に対し、THF（２０．９ｍＬ）を加え共沸脱水を３回した後、得られた残渣に対しTHF（５．９ｍＬ）を加え、化合物a34を含む溶液（９．５９ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間:９．２６分（分析条件：method 4）
実施例４９　Step 4’
化合物a35：2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-アミノ-4-フェニル-ブタノイル]ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-3-メチル-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-オキソ-4-(1-ピペリジル)ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-3-シクロヘキシル-プロパノイル]-メチル-アミノ]酢酸の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000136
　５％Pd/C（０．４９ｇ５０％含水品）を反応容器に加え、THF（８ｍＬ）に懸濁し、水素雰囲気下として３０分攪拌した。その後窒素置換し、Step 3’で得られた化合物a34を含む残渣（９．３ｇ）をTHF（８ｍＬ）に溶解した溶液を加え、水素雰囲気下にて６時間攪拌したところ反応転換率は７６％だった。窒素置換して冷蔵庫にて一晩保管したのち、翌日室温にもどして２時間攪拌したところ反応転換率は８７％だった。窒素置換したのち、５％Pd/C（０．２４ｇ、５０％含水品 ）のTHF （４ｍＬ）懸濁液を反応液に加え、水素置換したのち４時間攪拌した（反応転換率９９．０％）。窒素置換して冷蔵庫にて一晩保管したのち、翌日室温にもどして測定したところ、反応転換率は９９．４％だった。反応混合物をろ紙を用いて吸引濾過し、残渣を2-MeTHF溶液（６．５ｍＬｘ１０）で洗浄した。得られた濾液および洗浄液を合わせて減圧濃縮した。得られた残渣をアセトニトリル（１６．３ｍＬ）および2-MeTHF（６．５ｍＬ）に溶解し、ヘプタン（３７．１ｍＬ）にて洗浄後濃縮した。得られた残渣を再度アセトニトリル（１６．３ｍＬ）および2-MeTHF（６．５ｍＬ）に溶解し、ヘプタン（３７．１ｍＬ）にて洗浄後濃縮し、化合物a35を含む残渣（２．９６ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：１２．３９分（HPLC分析条件：method 4）
実施例５０　Step 5’
化合物a36：(3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-9-(シクロヘキシルメチル)-21-イソブチル-28-イソプロピル-7,10,13,16,22,26,29-ヘプタメチル-18-[(1S)-1-メチルプロピル]-3-(2-フェニルエチル)-25-(ピペリジン-1-カルボニル)スピロ[1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-ウンデカザビシクロ[32.3.0]ヘプタトリアコンタン-31,1'-シクロペンタン]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-ウンデカオンの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000137
　前工程で得られた化合物a35を含む残渣（２．９０ｇ）とDIPEA（１．４４ｍＬ）を含む炭酸ジメチル溶液（７２．５ｍＬ）を調製し、これをPyBOP（４．３４ｇ）の炭酸ジメチル溶液（７２．５ｍＬ）に３時間かけて滴下した。滴下終了後３０分の時点でサンプリングして反応を確認したのち、不溶物をろ紙を用いて吸引濾過にて濾去し、残渣を炭酸ジメチル（１５ｍＬ）で洗浄した。ろ液と洗浄液を合わせた溶液を、２．５％アンモニア水溶液（５８ｍＬ）、５％硫酸水素カリウム水溶液（５８ｍＬ）、５％リン酸水素二ナトリウム水溶液（５８ｍＬ）、５％塩化ナトリウム水溶液（５８ｍＬ）、０．５％塩化ナトリウム水溶液（５８ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を減圧下濃縮することで、化合物a36を含む残渣（２．７２ｇ）を得た。
HPLC分析による保持時間：１８．６９分（HPLC分析条件：method 5）
実施例５０－１
化合物a36：(3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-9-(シクロヘキシルメチル)-21-イソブチル-28-イソプロピル-7,10,13,16,22,26,29-ヘプタメチル-18-[(1S)-1-メチルプロピル]-3-(2-フェニルエチル)-25-(ピペリジン-1-カルボニル)スピロ[1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-ウンデカザビシクロ[32.3.0]ヘプタトリアコンタン-31,1'-シクロペンタン]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-ウンデカオンの合成（縮合剤としてPyBOP、溶媒として炭酸ジメチルを使用）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000138
　反応容器に化合物a35(９．７ｍｇ)を秤量し、炭酸ジメチル(２ｍＬ)で溶解した。室温で攪拌しながらDIPEA (６．１μＬ)を加えた。これにPyBOP(１４．９ｍｇ)を加えて30分攪拌した。反応液（５０μＬ）をMeCN／プロピルアミン（９：１）の混合液（１００μＬ）で希釈し、その溶液を用いてHPLC分析した。目的物：環状ダイマーのエリア%比、および目的物のLC純度（%)を表１３に示した。
実施例５０－２
　アニソールおよび2-メチルテトラヒドロフランを溶媒として用いた場合の結果も表１３に示した（実験操作は、実施例５０－１と同様に行った）。いずれの場合も、環状トリマーは観測されなかった。
実施例５０－３
化合物a36：(3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-9-(シクロヘキシルメチル)-21-イソブチル-28-イソプロピル-7,10,13,16,22,26,29-ヘプタメチル-18-[(1S)-1-メチルプロピル]-3-(2-フェニルエチル)-25-(ピペリジン-1-カルボニル)スピロ[1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-ウンデカザビシクロ[32.3.0]ヘプタトリアコンタン-31,1'-シクロペンタン]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-ウンデカオンの合成（縮合剤としてPyBOP、溶媒として炭酸ジメチルを使用、逆滴下法による製造）
　反応容器にPyBOP (５９．９ｍｇ)を秤量し、炭酸ジメチル（１ｍＬ）に懸濁した。別容器に化合物a35 (３９．９ｍｇ)を炭酸ジメチル（１ｍＬ）に溶解し、これにDIPEA (２４．３μＬ)を加えた。この原料の溶液をPyBOP懸濁液へシリンジポンプを用いて室温にて3時間かけて加えた。加え終わったのち容器に残った原料溶液を炭酸ジメチル（０．２ｍＬ）で洗いこみ、その後３０分攪拌した。反応液（５０μＬ）をMeCN／プロピルアミン（９：１）の混合液（１００μＬ）で希釈し、その溶液を用いてHPLC分析した。結果は、表１３に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000139
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000140
 a37: 本誘導体におけるc-dimer
実施例５１
化合物b1：(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-ベンジルオキシカルボニルピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタン酸の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000141
 　反応容器に、化合物２８を含む2-MeTHF溶液(１７.４５ｇ、１１．７ｗｔ％)を加え減圧濃縮し、得られた残渣にIPAc(１０.２ｍＬ)を加えた。室温で攪拌しながらHMDS(１.５２ｍＬ)を加えた後、外温を０℃に冷却し、TMSOTf(１.０４ｍＬ)をゆっくり滴下した。室温まで昇温し、３０分攪拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し(サンプル調整法１)、HPLC分析に付して反応転換率が９９.９％以上であることを確認した(反応転換率の算出式１)。外温を０℃に冷却し、反応液に５％リン酸水素二カリウム水溶液(１４.３ｍＬ)を滴下し、室温で１０分間攪拌した。有機層を除去し、水層に０.５Ｍ塩酸水溶液(１１.２ｍＬ)とIPAc(１０.２ｍＬ)を加え１０分間攪拌した。水層を排出し、有機層を５％塩化ナトリウム水溶液(１４.３ｍＬ)で洗浄後、水層を排出した。得られた有機層を外温３０℃にて減圧濃縮乾固し、化合物b1を含む残渣(１.８８ｇ、収率９４.１％)を得た。
LCMS(ESI)：保持時間：２．９２９分、ｍ／ｚ＝６７８．６１　［Ｍ＋Ｎａ］＋（LCMS分析条件 method 1）
収率:９４.１％(得られた残渣と３,５-ビス(トリフルオロメチル)安息香酸をDMSO‐d６に溶解させ、qNMR分析に付した。)
実施例５２
化合物b2：(2S)-2-[[1-[[(1S)-2-[[(1S)-3-[[(1S)-1-[[(1S,2S)-1-[[(1S)-2-[(2S)-2-[[(1S)-2-[(2-tert-ブトキシ-2-オキソ-エチル)-メチル-アミノ]-2-オキソ-1-(p-トリルメチル)エチル]-エチル-カルバモイル]アゼチジン-1-イル]-1-メチル-2-オキソ-エチル]-メチル-カルバモイル]-2-メチル-ブチル]カルバモイル]-3-メチル-ブチル]-メチル-アミノ]-1-(ジメチルカルバモイル)-3-オキソ-プロピル]-メチル-アミノ]-1-シクロペンチル-2-オキソ-エチル]-メチル-カルバモイル]シクロペンチル]カルバモイル]ピロリジン-1-カルボン酸ベンジルの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000142
 　反応容器に化合物１７を含むIPAc溶液(１.５０ｇ、５５．０ｗｔ％）および化合物b1(０.９８ｇ、７８．３ｗｔ％)を秤量し、2-MeTHF(５.４４ｍＬ)およびMeCN(０.８０ｍＬ)を加えた。室温で攪拌しながらDIPEA(１.０５ｍＬ)を加えた後、HATU(９８８.４ｍｇ)を加えた。室温で４時間攪拌後、反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し(サンプル調整法２)、HPLC分析に付して反応転換率が９９.９％以上であることを確認した(反応転換率の算出式２)。外温を０℃に冷却し、反応液にN-メチルイミダゾール(８６μＬ)、および５％炭酸ナトリウム水溶液(５.６ｍＬ)を加え、室温で１０分攪拌した。水層を排出し、有機層を２.５％アンモニア水溶液(５.６ｍＬ)、５％硫酸水素ナトリウム水溶液(５.６ mL×２)、５％炭酸ナトリウム水溶液(８.２ｍＬ×３)で洗浄した。得られた有機層を外温３０℃にて減圧濃縮乾固し、化合物b2を含む残渣(１.８８ｇ、収率９３．８％)を得た。
LCMS(ESI)：保持時間：２１．１７分、ｍ／ｚ＝１４０３．０６ ［Ｍ＋Ｎａ］＋(LCMS分析条件 method 5)
収率:９３.８％(得られた残渣と３,５-ビス(トリフルオロメチル)安息香酸をDMSO‐d６に溶解させ、qNMR分析に付した。)
実施例５３
化合物b3:2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-ベンジルオキシカルボニルピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]酢酸の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000143
 　反応容器に、実施例５２で得られた化合物b2を含む残渣(１.４４ｇ、９０.３ｗｔ％)を加えIPAc(６.５０ｍＬ)を加えた。室温で攪拌しながらHMDS(０.５０ｍＬ)を加えた後、外温を０℃に冷却し、TMSOTf(０.３４０ｍＬ)をゆっくり滴下した。室温まで昇温し、２時間攪拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し(サンプル調整１)、HPLC分析に付して反応転換率が９９.９％以上であることを確認した(反応転換率の算出式１)。反応液に５％リン酸水素二カリウム水溶液(９.１０ｍＬ)を滴下し、室温で１０分間攪拌した。有機層を除去し、水層に０.５Ｍ塩酸水溶液(７.４１ mL)と2-MeTHF(９.０ｍＬ)を加え１０分間攪拌した。水層を排出し、有機層を５％塩化ナトリウム水溶液(１３.０ｍＬ)で洗浄後、水層を排出した。得られた有機層を外温３５℃にて減圧濃縮乾固し、化合物b3を含む残渣(３．３６ｇ、収率９２．７％)を得た。
LCMS(ESI)：保持時間：１８．１９分、ｍ／ｚ＝１３２５．０２　［Ｍ＋Ｈ］＋(LCMS分析条件 method 5)
収率:９２.７％(得られた残渣と３,５-ビス(トリフルオロメチル)安息香酸をDMSO‐d６に溶解させ、qNMR分析に付した。)
実施例５４
化合物b4:2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-シクロペンチル-2-[メチル-[1-[[(2S)-ピロリジン-2-カルボニル]アミノ]シクロペンタンカルボニル]アミノ]アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-４-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]酢酸の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000144
 　反応容器に、実施例５３で得られた化合物b3(１.０１ｇ、０.７６２ mmol)と2-MeTHF (２.０２ｍＬ)、THF(６.８７ｍＬ)を室温にて順次加えた。反応容器に、５％Pd/C（０.１６２ｇ、５０％含水品)を加えた後、水素ガスによる脱気置換を３回行い２時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し(サンプル調製法１)、HPLC分析に付して反応転換率が９９.９％以上であることを確認した(反応転換率の算出式１)。反応混合物をろ紙およびメンブレンフィルターを用いて濾過し、残渣を2-MeTHF(５.０ｍＬ×２)で洗浄した。得られた濾液を減圧濃縮し、化合物b4を含む残渣(１.４３ｇ、収率９６.７％)を得た。
LCMS(ESI)：保持時間：２．９２１分、ｍ／ｚ＝１１９１．００ ［Ｍ＋Ｈ］＋(LCMS分析条件 method 1)
収率:９６.７％（得られた残渣と３,５-ビス(トリフルオロメチル)安息香酸をDMSO‐d６に溶解させ、qNMR分析に付した。)
化合物b4の環化反応(実施例５５の反応条件検討)
化合物b4を出発原料として用い、化合物b5への環化反応における、縮合剤、および溶媒を検討した。環化反応はHPLC分析により追跡した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000145
実施例５５－６
化合物b5:(6S,9S,14S,17S,20S,24S,27S,33S)-27-シクロペンチル-7-エチル-20-イソブチル-N,N,4,14,15,21,25,28-オクタメチル-17-[(1S)-1-メチルプロピル]-2,5,8,13,16,19,22,26,29,32-デカオキソ-6-(p-トリルメチル)スピロ[1,4,7,12,15,18,21,25,28,31-デカザトリシクロ[31.3.0.09,12]ヘキサトリアコンタン-30,1'-シクロペンタン]-24-カルボキサミドの合成
　反応容器に化合物b4（９．９９ｍｇ（８．３９μｍｏｌ））を秤量し、溶媒(2-MeTHF、２.０ｍＬ（２００ｖ／ｗ））を加えた。室温で攪拌しながら、DIPEA（６．７４μＬ（３８．６μｍｏｌ））を加えた。反応容器の外温を２５℃に設定し、縮合剤（ＰｙＡＯＰ、１７．２ｍｇ　（３３．０μｍｏｌ））を加えて３０分攪拌した。反応液（５０μＬ）をMeCN／プロピルアミン（９：１）の混合液（１００μＬ）で希釈し、HPLC分析用の溶液を調製した。
化合物b5のLCMS(ESI)：保持時間：１６．８１分、ｍ／ｚ＝１１７３．５１　［Ｍ＋Ｈ］＋(LCMS分析条件 method 5)
環状ダイマーb6(c-Dimer)のLCMS(ESI)：保持時間：２２．３６分、ｍ／ｚ＝２３６７．９１　［Ｍ＋Ｎａ］＋(LCMS分析条件 method 5)
環状トリマーb7(c-Trimer)のLCMS(ESI）：保持時間：２４．４１分、ｍ／ｚ＝１７５９．２６　［Ｍ＋２Ｈ］２＋(LCMS分析条件 method 5)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000146
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000147
　下表に示す、縮合剤、および溶媒を用い、実施例５５-６（縮合剤としてPyAOPを使用、溶媒として2-MeTHFを使用）の実験と同様の操作を行い、出発原料（SM,化合物b5）の消費、目的物（TM,化合物b5）の生成、および副生成物（環状ダイマーb6(c-Dimer)、および環状トリマーb7(c-Trimer)）の生成量を測定し、好ましい反応条件を検討した。表には出発原料：出発原料のプロピルアミド体(化合物b8)：目的物：環状ダイマー：環状トリマーのエリア％比をまとめた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000148
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000149
実施例５５－１１（実施例５５－６の逆滴下法による製造）
バイアルに化合物b4（９．８９ｍｇ（８．３１μｍｏｌ））と2-MeTHF（０．９９ｍＬ（１００ｖ／ｗ））を加え、５０℃で１０分間攪拌した。原料の溶解を確認後、DIPEA（６．６７μＬ　（３８．２μｍｏｌ））を加え、反応液をシリンジに吸い上げた。別の反応容器にPyAOP（１７．１ｍｇ（３２．８μｍｏｌ））と2-MeTHF（０．９９ｍＬ（１００ｖ／ｗ））を加え、室温で攪拌しながら前記シリンジ内の溶液を３時間かけて滴下した。滴下終了後、反応液（５０μＬ）をMeCN／プロピルアミン（９：１）の混合液（１００μＬ）で希釈し、HPLC分析用の溶液を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000150
実施例５６
化合物c１：tert-ブチル (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノアートの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000151
 　反応容器に、室温にて化合物２３を含む2-MeTHF溶液（１６．００６ｇ、３２．５ｗｔ％）を加えて、減圧濃縮した。残渣をMeCN（１０．０ｍＬ）に溶解させ、減圧濃縮する操作を３回繰り返した。反応容器に、室温にてMeCN（５３．９ｍＬ）、1-(((ベンジルオキシ)カルボニル)アミノ)シクロペンタン-1-カルボン酸（９．６０４ｇ）およびDIPEA（１２．７ｍＬ）を加えて攪拌した。反応容器の外温を５５℃に設定し、攪拌しながら反応混合物にHATU（１５．２５７ｇ）を２回に分けて加えて、６時間攪拌した。反応混合物をMeCN／プロピルアミン（９：１）の混合液で希釈し、HPLC分析に付して反応転換率が９９．６％以上であることを確認した（反応転換率の算出式２）。反応混合物に、N－メチルイミダゾール（４.３ｍL）を加えて５分間攪拌し、次いで水道水（２７．０ｍＬ）を加えて３０分間攪拌した後、反応容器の外温を５５℃から２５℃に降温し、反応混合物を終夜攪拌した。反応混合物をろ紙を用いて吸引濾過し、残渣をMeCN（１８．０ｍＬ）および水道水（９．０ｍＬ）の混合液にて洗浄した。ろ取した結晶を４０℃にて３時間真空乾燥し、化合物c1を含む白色の粉末（６．９５７ｇ）を得た。得られた結晶をMeCNで希釈し、下記の分析条件でLCMS測定した（化合物c1の保持時間；６.９１４分、ｍ／ｚ＝６３７．３０ ［Ｍ＋Ｎａ］＋）。
LCMS分析条件
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA
カラム：CAPCELL CORE ADME (OSAKA SODA), 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm
移動相：0.05% TFA/water (A)、0.05% TFA/MeCN (B)
溶出法：B) 5%(0 min)→100%(10 min)→5%(10.1 min)→5%(12 min)
流速：0.5 mL/min
カラム温度：35 ℃
検出波長：２１０ ｎｍ（ＰＤＡ）
得られた残渣と３,５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO‐d６に溶解させ、qNMR分析に付した（収率：７８.３２％）。
実施例５７
化合物c2：(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-４-オキソ-ブタン酸の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000152
 　反応容器に、室温にて化合物c1を含む白色の粉末（２．５０４ｇ、９５．９ｗｔ％）およびジクロロメタン（１２．０ｍＬ）を加えた後、HMDS（２．０７ｍＬ）を加えた。反応容器を氷浴にて冷却し、TMSOTf（１．４１ｍＬ）を攪拌しながら加えた。反応容器を氷浴から外し、室温にて１時間攪拌した。反応混合物をMeCNで希釈し、HPLC分析に付して反応転換率が９９．９%以上であることを確認した（反応転換率の算出式１）。反応容器を氷浴にて冷却し、ジクロロメタン（１２．０ｍＬ）と５％リン酸水素二カリウム水溶液（２４．０ｍＬ）を加えて、１０分間攪拌し、有機層を排出した。水層に2-MeTHF（７２．０ｍＬ）を加えた後、有機層を０.５Ｍ塩酸水溶液（１２．０ｍＬ）、５％塩化ナトリウム水溶液（２４．０ｍＬ）にて洗浄した。得られた有機層を減圧濃縮し、化合物c2を含む白色の粉末（１．９７７ｇ）を得た。得られた白色の粉末をMeCNで希釈し、LCMS分析に付した（method 3化合物c2の保持時間；３.３０７分、ｍ／ｚ＝５８１．１３ ［Ｍ＋Ｎａ］＋）。得られた白色の粉末と３,５－ビス（トリフルオロメチル）安息香酸をDMSO‐d６に溶解させ、qNMR分析に付した（収率：８１．５１％）。
実施例５８
化合物c3：2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]酢酸 tert-ブチルの合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000153
 　反応容器に化合物c2（６１８．１ｍｇ、９０．０ｗｔ％）および化合物１７を含む2-MeTHF溶液（１．２２ｇ、５５．０ｗｔ％）を秤量し、2-MeTHＦ（１０．９ｍＬ）およびMeCN（１．２２ｍＬ）を加えた。室温で攪拌しながらDIPEA（０．８８５ｍＬ）を加えた後、HATU（７９２ｍｇ）を加えた。室温で２時間攪拌後、反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し(サンプル調整法２)、HPLC分析に付して反応転換率が９９．９％以上であることを確認した(反応転換率の算出式２)。外温を０℃に冷却し、反応液にN-メチルイミダゾール（７２μＬ）、および５％炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加え、室温で１０分攪拌した。水層を排出し、有機層を２．５％アンモニア水溶液（１０ｍＬ）、５％硫酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ×２）、５％炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬ×２）で洗浄した。得られた有機層を外温３０℃にて減圧濃縮乾固し、化合物c3を含む残渣１．９４ｇ、収率９１．２％）を得た。
HPLC:保持時間：４.６０６分(HPLC分析条件 method 1)
収率:９１.２％(得られた残渣と３,５-ビス(トリフルオロメチル)安息香酸をDMSO‐d６に溶解させ、qNMR分析に付した。)
実施例５９
化合物c4：2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)シクロペンタンカルボニル]-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]酢酸の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000154
 　反応容器に、実施例５８で得られた化合物c3を含む残渣（１．４１ｇ、５０．２ｗｔ％）を加え2-MeTHF（７．０ｍＬ）を加えた。室温で攪拌しながらHMDS（５７９μＬ）を加えた後、外温を０℃に冷却し、TMSOTf（３９４μＬ）をゆっくり滴下した。室温まで昇温し、２時間攪拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し(サンプル調整法１)、HPLC分析に付して反応転換率が９９.９％以上であることを確認した(反応転換率の算出式１)。外温を０℃に冷却し、反応液に５％リン酸水素二カリウム水溶液（５．２５ｍＬ）を滴下し、室温で１０分間攪拌した。水層を排出し、有機層を５％リン酸水素二カリウム水溶液（５．２５ｍＬ）と０.５Ｍ塩酸水溶液（３．５ｍＬ）で２回洗浄後、５％塩化ナトリウム水溶液（７．０ｍＬ）で洗浄し、水層を排出した。得られた有機層を外温３０℃にて減圧濃縮乾固し、化合物c4を含む残渣（０．８５ｇ、収率９５．２％）を得た。
LCMS(ESI)：保持時間：３．９７４分、ｍ／ｚ＝１２２８．３８ ［Ｍ＋Ｈ］＋(LCMS分析条件 method 1)
収率:９５.２％(得られた残渣と３,５-ビス(トリフルオロメチル)安息香酸をDMSO‐d６に溶解させ、qNMR分析に付した。)
実施例６０
化合物c5：2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[(1-アミノシクロペンタンカルボニル)-メチル-アミノ]-2-シクロペンチル-アセチル]-メチル-アミノ]-4-(ジメチルアミノ)-4-オキソ-ブタノイル]-メチル-アミノ]-4-メチル-ペンタノイル]アミノ]-3-メチル-ペンタノイル]-メチル-アミノ]プロパノイル]アゼチジン-2-カルボニル]-エチル-アミノ]-3-(p-トリル)プロパノイル]-メチル-アミノ]酢酸の合成
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000155
 　反応容器に、実施例５９で得られた化合物c4（４６２ｍｇ、５３．５ｗｔ％）と2-MeTHF（２．４７ｍＬ）を室温にて順次加えた。反応容器に、５％Ｐｄ／Ｃ（７４．７ｍｇ、５０％含水品）を加えた後、水素ガスによる脱気置換を３回行い８時間撹拌した。反応混合物をサンプリングしてサンプル調製し(サンプル調製法１)、HPLC分析に付して反応転換率が９９．７％であることを確認した(反応転換率の算出式１)。反応混合物に2-MeTHF（１０ｍＬ）を加えた後、ろ紙およびメンブレンフィルターを用いて濾過し、残渣を2-MeTHF（５．０ｍＬ×２）で洗浄した。得られた濾液を減圧濃縮し、化合物c5を含む溶液（１．１６ｇ、収率９１．０％）を得た。
LCMS(ESI):保持時間：２.９２０分、ｍ／ｚ＝１０９３．８８ ［Ｍ＋Ｈ］＋(LCMS分析条件 method 1)
収率:９１.０%(得られた残渣と３,５-ビス(トリフルオロメチル)安息香酸をDMSO‐d６に溶解させ、qNMR分析に付した。)
化合物c5の環化反応(実施例６１の反応条件検討)
化合物c5を出発原料として用い、化合物c6への環化反応における、縮合剤、および溶媒を検討した。環化反応はHPLC分析により追跡した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000156
実施例６１－１
化合物c6：(3S,6S,9S,13S,16S,25S,28S)-16-シクロペンチル-26-エチル-9-イソブチル-N,N,3,4,10,14,17,23-オクタメチル-6-[(1S)-1-メチルプロピル]-2,5,8,11,15,18,21,24,27-ノナオキソ-25-(p-トリルメチル)スピロ[1,4,7,10,14,17,20,23,26-ノナザビシクロ[26.2.0]トリアコンタン-19,1'-シクロペンタン]-13-カルボキサミドの合成
　反応容器に化合物c5（４４．１９ｍｇ、２１．８ｗｔ％（８．８１μｍｏｌ））を秤量し、濃縮乾固後に溶媒(MeCN、１．９ｍＬ（２００ｖ／ｗ））を加えた。室温で攪拌しながら、DIPEA（７．１９μＬ（４１．２μｍｏｌ））を加えた。縮合剤（ＨＡＴＵ、１２．８４ｍｇ（３３．８μｍｏｌ））を加えて３０分攪拌した。反応液（５０μＬ）をMeCN／プロピルアミン（９：１）の混合液（１００μＬ）で希釈し、HPLC分析用の溶液を調製した。
化合物c6のLCMS(ESI):保持時間：１７.２２分、ｍ／ｚ＝１０７６．３８ ［Ｍ＋Ｈ］＋(LCMS分析条件 method 5)
環状ダイマーc7(c-Dimer)のLCMS(ESI):保持時間：２１.８５分、ｍ／ｚ＝２１５１．４２　［Ｍ＋Ｈ］＋(LCMS分析条件 method 5)
環状トリマーc8のLCMS(ESI):保持時間：２４.５０分、ｍ／ｚ＝１６１４．１３　［Ｍ＋２Ｈ］２＋(LCMS分析条件 method 5)
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000157
Figure JPOXMLDOC01-appb-I000158
　下表に示す、縮合剤、および溶媒を用い、実施例６１－１（縮合剤としてPyAOPを使用、溶媒として2-MeTHFを使用）の実験と同様の操作を行い、出発原料（SM、化合物c5）の消費、目的物（TM、化合物c6）の生成、および副生成物（環状ダイマーc7(c-Dimer)、および環状トリマーc8(c-Trimer)）の生成量を測定し、好ましい反応条件を検討した。表には出発原料：出発原料のプロピルアミド体(化合物c9)：目的物：環状ダイマー：環状トリマーのエリア％比をまとめた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000159
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000160
実施例６１－５（実施例６１－４の逆滴下法による製造）
　バイアルに化合物c5（４５．０ｍｇ、２１．８ｗｔ％（８．９７μｍｏｌ））を秤量し、濃縮乾固後に2-MeTHF（０．９８ｍＬ（１００ｖ／ｗ））を加え、５０℃で１０分間攪拌した。原料の溶解を確認後、DIPEA（７．２１μＬ（４１．２μｍｏｌ））を加え、反応液をシリンジに吸い上げた。別の反応容器にPyAOP（１７．８ｍｇ（３４．１μｍｏｌ））と2-MeTHF（０．９８ｍＬ（１００ｖ／ｗ））を加え、室温で攪拌しながら前記シリンジ内の溶液を３時間かけて滴下した。滴下終了後、反応液（５０μＬ）をMeCN／プロピルアミン（９：１）の混合液（１００μＬ）で希釈し、HPLC分析用の溶液を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000161
　本発明により、医薬品として有用な環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物を製造する方法、および該環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物の製造に用いられるペプチド化合物を製造する方法が提供される。

Claims (16)

  1. 　１種または複数種の水と混和しない溶媒、１種または複数種の水溶性アルキルニトリル類、および１種または複数種の水溶性エーテル類からなる群より選択される１つまたは複数を含む溶媒（溶媒A）中、ペプチド化合物のN末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基とを連結する工程を含む、液相法によって、環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物を製造する方法。
  2. 　N末端のアミノ酸残基とC末端のアミノ酸残基が、アミド結合、または-(CH2)nS(CH2)m-、-(CH2)nS(O)(CH2)m-、もしくは-(CH2)nS(O)2(CH2)m-より選択される結合よって連結され、ここでnおよびmはそれぞれ独立して１または２である、請求項１に記載の方法。
  3. 　環状ペプチド化合物が、８～２０のアミノ酸残基を含み、該アミノ酸残基の少なくとも１つが非天然アミノ酸残基である、請求項１または２に記載の方法。
  4. 　環状ペプチド化合物が、少なくとも１つのN-置換の非天然アミノ酸残基を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 　環状ペプチド化合物が、少なくとも１つのN-非置換の非天然アミノ酸残基を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 　C末端のアミノ酸残基またはN末端のアミノ酸残基の一方または両方が、カルボキシル基のα位炭素に不斉炭素を有しないアミノ酸残基である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 　環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物が、環状ペプチド化合物の溶媒和物である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 　環状ペプチド化合物が、下記式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     で表される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 　環状ペプチド化合物を晶析により単離および／または精製して、環状ペプチド化合物の結晶を得る工程をさらに含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
  10. 　環状ペプチド化合物の結晶が、下記式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     で表される環状ペプチド化合物の非溶媒和物結晶、または溶媒和物結晶である、請求項９に記載の方法。
  11. 　環状ペプチド化合物の溶媒和物結晶が水和物結晶である、請求項１０に記載の方法。
  12. 　水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも７個のピークを含むC型結晶である、請求項１１に記載の方法。
  13. 　下記式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     で表される環状ペプチド化合物、もしくはその塩またはそれらの溶媒和物の結晶。
  14. 　結晶が、非溶媒和物結晶、溶媒和物結晶、塩の結晶、および塩の溶媒和物結晶からなる群より選択される、請求項１３に記載の結晶。
  15. 　溶媒和物結晶が水和物結晶である、請求項１４に記載の結晶。
  16. 　水和物結晶が、粉末X線回折による回折角（2θ値）として、４．９６４°、７．９２１°、８．２９６°、８．８５５°、９．９５６°、１０．４３５°、１１．７２９°、１２．７０４°、１３．５５２°、１３．９０１°、１５．８９５°、１６．６４３°、および１７．８１３°（±０．２°）からなる群から選択される、少なくとも７個のピークを含むC型結晶である、請求項１５に記載の結晶。
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