TW202309065A - 包含n-取代胺基酸殘基之環狀化合物的製造方法 - Google Patents

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Abstract

本發明找出透過在含有選自由不與水混合的溶劑、水溶性烷基腈類、及水溶性醚類所組成的群組之1個或複數個的溶劑中，使胜肽化合物的N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基連接，可有效率地製造環狀胜肽化合物。

Description

包含N－取代胺基酸殘基之環狀化合物的製造方法
本發明關於包含N－取代胺基酸殘基之環狀化合物的製造方法。
可作為習知口服藥的化合物，如里賓斯基規則（Lipinski's rule）所知，希望分子量為500g／mol以下者（非專利文獻1）。近年來，分子量大於500g／mol的化合物難以與習知的小分子化合物交互作用，已知可助於在稱為艱難目標（tough target）的標靶蛋白的表面的交互作用，亦即蛋白－蛋白交互作用抑制等。這些分子被關注不是可主要使用作為口服藥的分子量500g／mol以下的小分子，也不是如抗體藥物的分子量大於100000g／mol的大分子，而是稱為中分子化合物（分子量500～2000g／mol）、對艱難目標可實現藥物開發的新穎模態（非專利文獻2）。
如用於高血糖症治療的胰島素，來自天然胺基酸所形成的胜肽缺乏代謝穩定性，習知難以將胜肽作為口服藥進行開發。然而，經由胜肽的環化、使用胜肽中的N－甲基胺基酸所舉例的非天然胺基酸，發現可提高胜肽的代謝穩定性、膜穿透性（非專利文獻3）。
已知即使在包含非天然胺基酸的環狀胜肽之中，特別是包含N－取代胺基酸的環狀胜肽可具有代謝穩定性、膜穿透性，亦即可具有類藥性（drug-likeness）（專利文獻1）。
含有非天然胺基酸的環狀胜肽化合物，被暗示有效於蛋白－蛋白交互作用的抑制劑的創造（非專利文獻5）。
隨著胜肽作為醫藥越來越受到重視，其合成方法也被廣泛的研究（非專利文獻6）。胜肽的合成經由使胺基酸依序進行醯胺鍵形成反應，向所欲的胺基酸序列延長而達成，但是在該序列中含有非天然胺基酸的胜肽、特別是包含N－甲基胺基酸的胜肽的製造，因N－甲基的立體障礙造成的縮合反應的低反應性、以及因胺基酸殘基的α位的外消旋化等造成目的物的產率下降，一直被認為是個問題（非專利文獻7）。鹵化烴溶劑（例如二氯甲烷等）、及醯胺溶劑（例如DMF等），被廣泛使用在胜肽的合成，但是可在具有N－取代胺基酸等的低反應性胺基酸的胜肽合成觀察到如此的副反應（非專利文獻8）。又，從環境負荷的觀點，鹵化烴溶劑（例如二氯甲烷等）、醯胺溶劑（例如DMF等）的使用（非專利文獻9）受到限制。 ［先行技術文獻］ ［專利文獻］
專利文獻1：國際專利公開案第2013／100132號 ［非專利文獻］
非專利文獻1：Adv. Drug Del. Rev. 1997, 23, 3－25. 非專利文獻2：Future Med. Chem., 2009, 1, 1289－1310. 非專利文獻3：Acc. Chem. Res., 2008, 41, 1331－1342. 非專利文獻4：Angew. Chem. Int. Ed., 2013, 52, 254－269. 非專利文獻5：Chem. Rev., 2019, 119, 10360－10391. 非專利文獻6：Amino Acids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry： Building Blocks, Catalysis and Coupling Chemistry, Volume 3, 2011. 非專利文獻7：J. Peptide Res., 2005, 65, 153－166. 非專利文獻8：Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015. 非專利文獻9：Green Chem. Lett. Rev., 2021, 14, 153－164.
［發明所欲解決的問題］
本發明為鑑於如此狀況而完成者，在一方面，本發明提供，透過分離中間體、即使例如做為下一步驟的前操作不分離中間體的大規模也可適用的手法，有效率地製造胜肽化合物，特別是含有複數個N－取代胺基酸等的非天然胺基酸的直鏈或環狀胜肽化合物的方法作為議題。在一方面，本發明提供，不使用柱層析法而分離、純化目的環狀胜肽化合物或其鹽或該等的溶劑合物的方法為議題。在一態樣，本發明之目的提供，經由胜肽化合物的製造步驟所使用的溶劑所含的安定劑（例如BHT等的抗氧化劑）以可溶解安定劑的溶劑洗淨，不分離在各步驟所製造的目的物，去除安定劑的方法。在一態樣，本發明之目的提供，將特別是含有N－取代胺基酸等複數個非天然胺基酸的例如直鏈狀或環狀的胜肽，經由不分離各反應步驟的中間體或胜肽化合物，縮短各步驟的作業時間，連續進行下一步驟之方法。因此，本說明書所記載之本發明之一方面，提供包含可溶解安定劑的溶劑的使用、可包含1個以上的反應步驟的胜肽化合物的製造方法。
胜肽合成通常經由重複進行將胺基酸或胜肽的C端的羧基、與胺基酸或胜肽的N端的胺基連接之步驟，使肽鏈延長而進行，但是已知此步驟會產生各種的副反應（Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.）。因此，胜肽合成，特別是經由液相法的胜肽合成，在延長步驟之間、或環化步驟之前，分離、純化產物是一般的。但是，在工業規模的胜肽合成，由於中間體的分離、純化造成合成時間的增加、費用增大，因此希望在達到目的胜肽之前不分離、純化中間體，連續地進行之後的延長反應、環化反應。
另一方面，在肽鏈的延長反應，延長的原胺基酸或胜肽的羧基、使延長的胺基酸或胜肽的胺基被保護的情形多，胺基酸的ω鏈也多被保護（胜肽合成的基礎與實驗：泉屋信夫（著）丸善（1985））。如此受保護的胺基酸或受保護的胜肽容易從反應液中析出，常有不溶於有機溶劑的情形（國際專利公開案第2017／038650號、國際專利公開案第2018／021233號、國際專利公開案第2018／155669號、國際專利公開案第2019／123994號、國際專利公開案第2017／221889號）。又，未受保護的胺基酸或未受保護的胜肽也因為其親水性難以溶解於有機溶劑。再者，隨著肽鏈延長、促進凝集，胜肽化合物的溶解性下降者也多（生物與化學, 2018, 56（8）, 558; J. Biol. Chem., 1963, 238, 4074.、Sci Rep, 2016, 6（28）, 1.）。
為了使此等胺基酸或胜肽溶解，在胜肽的合成反應使用溶解能力高的溶劑，例如DMF或二甲基亞碸，又也多使用具有優良溶解能力的二氯甲烷。例如已有報導在胜肽合成中，使用DMF為全體的47%，二氯甲烷為36%的比例，當合併該等溶劑的使用例，為全體的83%（Green Chem., 2013,15, 596－600.）。
然而，二氯甲烷有毒性，DMF根據使用量為法規制定的對象，因此在工業上的製造方法應該避免此等溶劑的使用。再加上，DMF及二甲基亞碸可經加熱分解、且沸點高，因此當混入目的產物時難以去除。再者，因為DMF的分解所產生的二甲基胺與胜肽延長反應有關，因此可能導致不欲的胜肽的副產物（Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.）。從二甲基亞碸所產生的二甲硫醚也有發出異味的問題。
特別是，在工業規模上，使用的溶劑大量，即使餾去也多需要嚴苛的時間與加熱，因此在如此操作中分解物增加是容易被推測的。因此發現，可在餾去溶劑時以熱穩定、且有效率地進行肽鏈的延長反應或環化反應的溶劑是重要的。
又，DMF或二甲基亞碸對水的溶解度高，由於與水混合，使得目的物與該等有機溶劑一起向水層移動，有造成產率下降的情形，與水溶液的分液處理操作也沒有效率。例如，當在有機層混入水時，含有目的物的有機溶劑在餾去後殘留水，視情況造成肽鏈的水解（Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.）。
在工業上的製法，為了餾去溶劑，需要的時間也增加，所以不只產率下降，也因為水的混入容易發生副反應而成為問題。
於是，也有必要找出在分液操作中與水層的分離形成良好的有機層的手法，或者發現可合成胜肽且對水的溶解度低、難與水混合的溶劑。
再者，根據溶劑，有含有安定劑（例如BHT等的抗氧化劑）的情形。在小量規模或短步驟的合成，殘留的安定劑的總量不多，作為雜質不明顯。但是，當步驟數或生產量增加時，安定劑在中間體等直接大量殘留，因此對之後步驟的影響有不能忽視的情形（例如，中間體所含的安定劑對於下一步驟的化學反應造成影響的情形，或在醫藥品的有效成分的情形，在作為目的最終化合物所含的安定劑造成藥效以外非預期的作用的情形等）。當分離、純化中間體時，可經過此等過程去除安定劑。但是，對於希望省略如此作業的工業生產過程，安定劑可能蓄積於中間體及最終化合物中。在工業生產過程希望有一般技術以有效率地去除安定劑。
又，為了不分離、純化中間體連續進行肽鏈的延長、合成最終產物，在縮合或脫保護等的各步驟，必須抑制副反應，設定反應條件只以分液操作等的後處理繼續下一步驟。特別是，在以工業規模的胜肽合成的情形，目的物以柱層析法的純化是沒有效率的，因此必須不使用柱層析法而透過進行晶析獲得可純化的粗產物的手法或只以分液操作等的後處理獲得目的物的手法，為此也有必要找出新的反應條件或後處理條件。 ［用以解決問題的手段］
本發明人等為了解決上述議題致力研究的結果，發現與胜肽的液相合成習知慣用的DMF、二氯甲烷、二甲基亞碸等的溶劑不同的特定溶劑，滿足例如（i）難以經加熱而分解、（ii）在分液操作與水層的分離良好、且（iii）肽鏈的延長反應或環化反應良好進行之要件，有用於胜肽合成的溶劑。有效於本說明書記載之方法的溶劑，可對熱分解具有耐受性。如此的耐受性較佳可使用測量機器（例如GC、LC、或NMR，較佳為GC）經由在某溫度範圍的溶劑的安定性試驗而確定。特定用途的溶劑可具有在高溫的耐受性（例如，在沸點附近48小時安定，或在室溫附近2個月安定，較佳為在沸點附近48小時安定），在上述舉例的條件下，該等純度可維持在99%以上，較佳為99.9%以上。本發明之溶劑在分液操作可顯示從水層良好分離。如此的分離可經由以等量的溶劑與水，在分液漏斗、反應燒瓶、或反應槽中，以室溫附近（例如15℃～40℃，較佳為20℃～30℃），30分鐘內、較佳為15分鐘內混合而確定。本發明之溶劑可使肽鏈的延長反應及環化反應充分進行。如此的反應進行較佳可經由使用測量機器（例如GC、LC、或NMR，較佳為GC）確定目的化合物的化學產率、或起始物質向目的化合物的化學轉換。特定用途的溶劑可提供化學產率70%～100%，或化學轉換率70%～100%，較佳提供化學產率與化學轉換率兩者80%～100%。較佳為，本發明之溶劑為，可在沸點附近48小時安定的溶劑，在20℃～30℃、15分鐘內以分液操作可顯示良好分離的溶劑，可達成起始物質的化學產率與化學轉換兩者為80%～100%的溶劑。透過在各反應或反應的後處理操作時適當組合使用滿足此等要件的1種或複數種的溶劑，不分離中間體，可只經由分液或過濾等的簡便操作使肽鏈連續性延長，可使胜肽化合物環化，可去除溶劑所含的安定劑。亦即，關於其後的反應，不一定要如該技術領域所理解的分離中間體例如單一的產物。當然，根據本發明，用於下一反應的溶液可包含中間體（之前反應的產物），及可更包含前一反應的1個以上的反應物質或試劑，可在下一反應之前使該等溶解化。又，本發明人等透過在分液操作使用特定的水溶液或有機溶劑，發現可有效率地洗淨有機層或水層。再者，本發明人等，根據本發明之方法，找出不分離、純化中間體所製造的環狀胜肽化合物，不使用柱層析法，透過經由晶析而分離、純化，可獲得環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物，更者環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物的結晶。又，本發明人等找出在縮合及脫保護的各反應可抑制副產物生成的反應條件。
本發明在非限定的一具體態樣，包括下述。 ［1］一種製造環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物之方法，經由包含在含有選自由1種或複數種的不與水混合的溶劑、1種或複數種的水溶性烷基腈類、及1種或複數種的水溶性醚類所組成的群組之1個或複數個的溶劑（溶劑A）中，連接胜肽化合物的N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基之步驟的液相法。 ［1－1］如［1］之方法，其中，溶劑A包含1個以上選自由2－MeTHF、THF、4－甲基四氫吡喃、MTBE、CPME、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、甲氧苯、MeCN、庚烷、及甲苯所組成的群組的溶劑。 ［2］如［1］之方法，其中，N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基經由醯胺鍵、或選自－（CH 2） nS（CH 2） m－、－（CH 2） nS（O）（CH 2） m－、或－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m－的鍵所連接，此處n及m各自獨立為1或2。 ［3］如［1］或［2］之方法，其中，環狀胜肽化合物包含8～20個胺基酸殘基，該胺基酸殘基的至少1個為非天然胺基酸殘基。 ［4］如［1］～［3］任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物包含9～15個胺基酸殘基，該胺基酸殘基的至少1個為非天然胺基酸殘基。 ［5］如［1］～［4］任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物包含至少1個N－取代的非天然胺基酸殘基。 ［6］如［1］～［5］任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物包含至少1個N－未取代的非天然胺基酸殘基。 ［7］如［1］～［6］任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物包含至少1個α,α二取代胺基酸殘基。 ［8］如［1］～［7］任一項之方法，其中，C端的胺基酸殘基或N端的胺基酸殘基的一方或兩方為，在羧基的α位的碳不具有不對稱碳的胺基酸殘基。 ［9］如［1］～［8］任一項之方法，其中，C端的胺基酸殘基為在羧基的α位的碳不具有不對稱碳的胺基酸殘基。 ［10］如［1］～［8］任一項之方法，其中，N端的胺基酸殘基為N－未取代的胺基酸殘基。 ［11］如［1］～［10］任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物為環狀胜肽化合物的溶劑合物。 ［12］如［1］～［11］任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物的溶劑合物為環狀胜肽化合物的水合物。 ［13］如［1］～［12］任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物為以下式所表示：
Figure 02_image001
。 ［14］如［1］～［13］任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物的分離及／或純化不使用柱層析法。 ［15］如［1］～［14］任一項之方法，更包含經由晶析而分離及／或純化環狀胜肽化合物，獲得環狀胜肽化合物的結晶之步驟。 ［16］如［15］之方法，其中，環狀胜肽化合物的結晶為以下式所表示的環狀胜肽化合物的非溶劑合物結晶、或溶劑合物結晶：
Figure 02_image004
。 ［17］如［16］之方法，其中，環狀胜肽化合物的溶劑合物結晶為水合物結晶。 ［18］如［17］之方法，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少7個峰的C型結晶。 ［18－1］如［17］之方法，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少8個峰的C型結晶。 ［18－2］如［17］之方法，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少9個峰的C型結晶。 ［18－3］如［17］之方法，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少10個峰的C型結晶。 ［18－4］如［17］之方法，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少11個峰的C型結晶。 ［18－5］如［17］之方法，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少12個峰的C型結晶。 ［18－6］如［17］之方法，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）的峰的C型結晶。 ［19］如［16］之方法，其中，非溶劑合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）5.370∘、6.934∘、8.940∘、9.838∘、10.771∘、12.181∘、13.525∘、15.179∘、16.202∘、及17.554∘（±0.2∘）的峰的F型結晶。 ［20］如［16］之方法，其中，溶劑合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）8.006∘、9.002∘、9.943∘、11.501∘、13.067∘、14.854∘、16.320∘、17.275∘、19.261∘、及20.324∘（±0.2∘）的峰的A型的DMSO－水合物結晶。 ［21］如［16］之方法，其中，溶劑合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）8.223∘、9.594∘、9.976∘、11.879∘、13.841∘、14.572∘、15.934∘、16.350∘、19.805∘、及20.480∘（±0.2∘）的峰的B型的DMSO－水合物結晶。 ［22］如［16］之方法，其中，溶劑合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）7.942∘、8.283∘、8.861∘、10.097∘、10.491∘、11.805∘、12.673∘、12.830∘、13.514∘、13.855∘、15.853∘、16.405∘、16.642∘、及17.772∘（±0.2∘）的峰的H型的丙酮－水合物結晶。 ［23］如［1］～［22］任一項之方法，其中，溶劑A為由2－MeTHF所構成的溶劑、或含有2－MeTHF的溶劑。 ［23－1］如［1］～［22］任一項之方法，其中，溶劑A含有選自由2－MeTHF、碳酸二甲酯、甲氧苯、乙酸異丙酯、乙酸乙酯、MTBE、CPME、4－甲基四氫吡喃、庚烷、及甲苯所組成的群組之1個以上的不與水混合的溶劑。 ［24］如［1］～［22］任一項之方法，其中，溶劑A含有乙腈、及／或丙腈之水溶性烷基腈類。 ［25］如［1］～［22］任一項之方法，其中，溶劑A含有選自由THF、1,4－二噁烷、1,3－二噁烷、及二甲氧基乙烷所組成的群組之1個以上的水溶性醚類。 ［26］一種經由液相法製造胜肽化合物之方法，包括： 步驟1：使C－保護胺基酸或C－保護胜肽、與N－保護胺基酸或N－保護胜肽連接之步驟， 步驟2：在步驟1之後去除N－保護基之步驟，以及 任意地重複進行複數次的步驟1與步驟2，製造胜肽化合物之步驟， 不包含分離步驟1與步驟2的產物之步驟。 ［27］如［1］～［26］任一項之方法，其中，胜肽化合物為直鏈胜肽化合物。 ［28］如［26］或［27］之方法，其中，胜肽化合物包含環狀結構為其部分結構。 ［29］如［1］～［25］任一項之方法，其中，溶劑A包含製造胜肽化合物之後的溶劑，胜肽化合物經由［26］之方法所製造。 ［30］如［26］～［29］任一項之方法，其中，步驟1與步驟2各進行1次，或者步驟1與步驟2重複進行2次～20次。 ［31］如［26］～［30］任一項之方法，其中，製造胜肽化合物的方法更包含去除C－保護基之步驟3。 ［32］如［26］～［31］任一項之方法，其中，重複進行的最後1次不包含步驟2。 ［33］如［31］或［32］任一項之方法，其中，在重複進行的最後1次的步驟1之後，進行步驟3。 ［34］如［26］～［33］任一項之方法，其中，製造胜肽化合物的方法所包括的各步驟，在獨立選自由甲苯、丙酮、DMF、乙腈、THF、2－MeTHF、碳酸二甲酯、甲氧苯、乙酸異丙酯、庚烷、乙酸乙酯、MTBE、及4－甲基四氫吡喃所組成的群組之1個或複數個的溶劑（溶劑B）中進行。 ［34－1］如［26］～［33］任一項之方法，其中，溶劑B選自由2－MeTHF、MTBE、乙酸異丙酯、及乙酸乙酯所組成的群組。 ［35］如［26］～［34］任一項之方法，其中，製造胜肽化合物的方法所包括的各步驟的後處理，包含選自由分液操作、過濾操作、及濃縮操作所組成的群組之1個或複數個的操作。 ［36］如［35］之方法，其中，在分液操作之前，添加不與水混合的溶劑（溶劑C）、水溶性烷基腈類、及／或水溶性醚類。 ［37］如［36］之方法，其中，溶劑C為選自由2－MeTHF、碳酸二甲酯、甲氧苯、乙酸異丙酯、乙酸乙酯、MTBE、CPME、4－甲基四氫吡喃、及庚烷所組成的群組之1個或複數個。 ［38］如［36］或［37］之方法，其中，溶劑C為2－MeTHF。 ［39］如［36］～［38］任一項之方法，其中，溶劑C以可分離水層與有機層的量添加。 ［40］如［39］之方法，其中，可分離的量相對於有機層全體，為約50重量%～100重量%。 ［41］如［35］～［40］任一項之方法，其中，有機層包含2－MeTHF。 ［42］如［35］～［40］任一項之方法，其中，分液操作包含有機層的洗淨操作。 ［42－1］如［35］～［41］任一項之方法，其中，洗淨操作包含，使用含有檸檬酸與磷酸氫二鉀的水溶液進行的有機層的洗淨操作，或者使用2－MeTHF、庚烷、MTBE、或乙酸異丙酯進行的水層的洗淨操作。 ［43］如［35］～［42］任一項之方法，其中，洗淨操作包含，使用乙腈與碳酸鉀水溶液的混合液進行的有機層的洗淨操作。 ［44］如［35］～［43］任一項之方法，其中，分液操作包含，使用碳酸鈉水溶液、硫酸氫鈉水溶液、及／或碳酸鈉水溶液進行的有機層的洗淨操作。 ［44－1］如［35］～［43］任一項之方法，其中，分液操作包括，使用碳酸鈉水溶液、硫酸氫鈉水溶液、及碳酸鈉水溶液進行的有機層的洗淨操作。 ［45］如［35］～［44］任一項之方法，其中，分液操作後，有機層包含相對於目的物為2%以下的BHT。 ［45－1］如［1］～［23－1］任一項之方法，其中，（1）胜肽化合物以［26］～［35］任一項之方法製造，以及，（2）溶劑A更包含在［35］～［45］任一項之方法所使用的溶劑。 ［46］如［26］～［45］任一項之方法，其中，步驟1包含使C－保護胺基酸或C－保護胜肽的N端的胺基、與N－保護胺基酸或N－保護胜肽的C端的羧基縮合之步驟。 ［47］如［46］之方法，其中，羧基被活化。 ［48］如［46］之方法，其中，步驟1在縮合試劑的存在下進行。 ［49］如［48］之方法，其中，縮合試劑包含選自由T3P、EDCI、HATU、COMU、BEP、PyBOP、DMT－MM、及PyOxim所組成的群組之縮合劑。 ［50］如［26］～［49］任一項之方法，其中，步驟2在觸媒的存在下，經由觸媒氫化進行。 ［51］如［50］之方法，其中，觸媒選自Pd／C、Pd（OH） 2／C、或PtO 2。 ［52］如［26］～［49］任一項之方法，其中，步驟2在脫保護試劑的存在下進行。 ［53］如［50］之方法，其中，脫保護試劑選自TBAF、LiBH 4、哌啶、三氟乙酸、或甲烷磺酸。 ［54］如［26］～［53］任一項之方法，其中，N－保護基選自Cbz、p－硝基苄氧基羰基、2－萘基甲氧基羰基、二苯基甲氧基羰基、9－蒽基甲氧基羰基、Teoc、Boc、三氟乙醯基、Fmoc、或Alloc。 ［55］如［26］～［44］任一項之方法，其中，步驟3在脫保護試劑的存在下進行。 ［56］如［55］之方法，其中，脫保護反應在酸性條件進行。 ［57］如［56］之方法，其中，酸性條件以HMDS、與選自由TMSOTf、TMSI、TMSBr、及TMSCl所組成的群組的試劑的組合所達成。 ［58］如［26］～［57］任一項之方法，其中，C－保護基選自t－Bu、三苯甲基、枯基（cumyl）、甲基、或乙基。 ［59］如［26］～［58］任一項之方法，其中，C－保護胜肽及N－保護胜肽的一方或兩方包含2～20個胺基酸殘基，該C－保護胜肽及N－保護胜肽的一方或兩方所含的該胺基酸殘基的至少1個為非天然胺基酸殘基。 ［60］如［26］～［59］任一項之方法，其中，C－保護胜肽及N－保護胜肽的一方或兩方包含至少1個N－取代胺基酸殘基。 ［61］如［26］～［60］任一項之方法，其中，C－保護胜肽及N－保護胜肽的一方或兩方包含至少1個N－未取代的非天然胺基酸殘基。 ［62］如［26］～［61］任一項之方法，其中，在重複進行的最後1次的步驟1所使用的C－保護胜肽及N－保護胜肽的一方或兩方，包含4個以上的N－取代胺基酸殘基，或者包含2個以上的N－取代胺基酸殘基，且包含1個以上的α,α二取代胺基酸殘基。 ［63］如［26］～［62］任一項之方法，其中，在重複進行的最後1次的步驟1所使用的C－保護胜肽及N－保護胜肽的一方或兩方，由5個或6個胺基酸殘基所構成，包含4個或5個的非天然胺基酸殘基。 ［64］如［63］之方法，其中，在重複進行的最後1次的步驟1所使用的C－保護胜肽為C－受保護的MeLeu－Ile－MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGly，在重複進行的最後1次的步驟1所使用的N－保護胜肽為N－受保護的Hph（4－CF3－35F2）－Pro－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2。 ［65］如［26］～［61］任一項之方法，其中，C－保護胺基酸或其鹽、或C－保護胜肽或其鹽為
Figure 02_image006
。 ［66］如［26］～［61］任一項之方法，其中，N－保護胺基酸或其鹽、或N－保護胜肽或其鹽為
Figure 02_image008
。 ［67］如［26］～［61］任一項之方法，其中，胜肽化合物為
Figure 02_image010
Figure 02_image012
。 ［68］如［26］～［67］任一項之方法，更包括使胜肽化合物的N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基連接之步驟。 ［69］一種以下式所表示的環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物之製造方法，
Figure 02_image014
包括： （1）準備以下式所表示的直鏈胜肽化合物之步驟，
Figure 02_image016
， （2）使N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基連接之步驟。 ［70］一種以下式所表示的環狀胜肽化合物的鹽、溶劑合物、或鹽的溶劑合物：
Figure 02_image014
。 ［70－1］如以式1所表示之化合物、其鹽、或該等的溶劑合物，經由HPLC分析在210nm的UVArea值確定，具有90%以上、95%以上、98%以上、或99%以上的純度。 ［70－2］如以高純度的式1所表示之化合物、其鹽、或該等的溶劑合物，其特徵在於，經由HPLC分析在210nm的UVArea值確定，總雜質小於5%、小於2%、小於1%、小於0.5%、或為無法偵測的量。 ［70－3］如［70－2］之高純度的以式1所表示之化合物、其鹽、或該等的溶劑合物，其特徵在於，經由HPLC分析在210nm的UVArea值確定，各雜質分別小於1%、小於0.5%、小於0.1%、或為無法偵測的量。 ［70－4］如［70－2］或［70－3］之高純度的以式1所表示之化合物、其鹽、或該等的溶劑合物，其特徵在於，經由HPLC分析在210nm的UVArea值確定，雜質小於1%、小於0.5%、小於0.1%、或為無法偵測的量，該雜質由表異構物（epimer）、過剩的延長體、缺失體、二聚體、及三聚體所組成的群組所作成。 ［70－5］如［70－2］、［70－3］或［70－4］之高純度的以式1所表示之化合物、其鹽、或該等的溶劑合物，其特徵在於，經由HPLC分析在210nm的UVArea值確定，雜質小於1%、小於0.5%、小於0.1%、或為無法偵測的量，該雜質為以下所示之環狀二聚體（Cyclic dimer）、及／或以下所示之環狀三聚體（Cyclic trimer）：
Figure 02_image019
Figure 02_image021
。 ［71］如［70］之環狀胜肽化合物的溶劑合物，其為水合物、DMSO－水合物、丙酮－水合物、或DMSO溶劑合物。 ［72］一種以下式所表示的環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物的結晶：
Figure 02_image014
。 ［73］如［72］之結晶，其中，結晶選自由非溶劑合物結晶、溶劑合物結晶、鹽的結晶、及鹽的溶劑合物結晶所組成的群組。 ［74］如［73］之結晶，其中，結晶為溶劑合物結晶。 ［75］如［72］之結晶，其中，溶劑合物結晶為水合物結晶。 ［76］如［75］之結晶，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少7個峰的C型結晶。 ［76－1］如［75］之結晶，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少8個峰的C型結晶。 ［76－2］如［75］之結晶，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少9個峰的C型結晶。 ［76－3］如［75］之結晶，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少10個峰的C型結晶。 ［76－4］如［75］之結晶，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少11個峰的C型結晶。 ［76－5］如［75］之結晶，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少12個峰的C型結晶。 ［76－6］如［75］之結晶，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）的峰的C型結晶。 ［77］如［73］之結晶，其中，非溶劑合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）5.370∘、6.934∘、8.940∘、9.838∘、10.771∘、12.181∘、13.525∘、15.179∘、16.202∘、及17.554∘（±0.2∘）的峰的F型結晶。 ［78］如［73］之結晶，其中，溶劑合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）8.006∘、9.002∘、9.943∘、11.501∘、13.067∘、14.854∘、16.320∘、17.275∘、19.261∘、及20.324∘（±0.2∘）的峰的A型的DMSO－水合物結晶。 ［79］如［73］之結晶，其中，溶劑合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）8.223∘、9.594∘、9.976∘、11.879∘、13.841∘、14.572∘、15.934∘、16.350∘、19.805∘、及20.480∘（±0.2∘）的峰的B型的DMSO－水合物結晶。 ［80］如［73］之結晶，其中，溶劑合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）7.942∘、8.283∘、8.861∘、10.097∘、10.491∘、11.805∘、12.673∘、12.830∘、13.514∘、13.855∘、15.853∘、16.405∘、16.642∘、及17.772∘（±0.2∘）的峰的H型的丙酮－水合物結晶。 ［81］一種製造以下式所表示的環狀胜肽化合物的水合物結晶之方法，
Figure 02_image024
包括： 使該環狀胜肽化合物溶解於可溶解該環狀胜肽化合物的量的極性有機溶劑，獲得溶液之步驟； 使該溶液濃縮，獲得該環狀胜肽化合物的殘渣之步驟；以及 在該殘渣加入水與極性有機溶劑的混合液，獲得該環狀胜肽化合物的水合物結晶之步驟。 ［82］一種製造以下式所表示的環狀胜肽化合物的水合物結晶之方法，
Figure 02_image014
包括： 使非晶質狀態的該環狀胜肽化合物溶解於DMSO，獲得溶液之步驟； 使該溶液冷凍乾燥，獲得該環狀胜肽化合物的冷凍乾燥體之步驟；以及 在該冷凍乾燥體加入水－乙腈混合液，獲得該環狀胜肽化合物的水合物結晶之步驟。 在上述編號，依附項引用的編號只要沒有特別說明包含該編號的分枝編號。例如，在依附項引用的［1］表示包含［1］及其分枝編號［1－1］。其他編號亦同。 ［發明功效］
根據本發明，即使是在具有含有複數個非天然胺基酸殘基的複雜的胺基酸序列的情形，也可抑制胺基酸殘基的外消旋化或分子間的反應，可有效率地製造環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物。又，根據本發明，不分離、純化中間體，只進行分液、過濾、及濃縮等的單純的後處理，可使肽鏈的連續延長、或之後的環化進行，因此可效率良好地製造目的胜肽化合物。本發明之製造方法可削減胜肽化合物的製造成本，也可減輕環境負荷，因此特別有用於大規模的胜肽合成。
［用以實施發明的形態］
本說明書所使用的縮寫如下記載。 2－MeTHF：2－甲基四氫呋喃 AcOEt：乙酸乙酯 Alloc：烯丙氧基羰基 BEP：2－溴－1－乙基吡啶四氟硼酸鹽 BHT：2,6－二－叔(tert)丁基－4－甲基酚 Boc：t－丁氧基羰基 Cbz：苄氧基羰基 COMU：（1－氰基－2－乙氧基－2－側氧基亞乙基胺基氧基）二甲基胺基－嗎啉基－碳鎓六氟磷酸鹽 CPME：環戊基甲基醚 CSA：10－樟腦磺酸 DIPEA：N,N－二異丙基乙基胺 DMA：二甲基乙醯胺 DMAP：4－二甲基胺基吡啶 DMF：N,N－二甲基甲醯胺 DMT－MM：4－（4,6－二甲氧基－1,3,5－三嗪－2－基）－4－甲基嗎啉鹽酸鹽 EDCI：1－乙基－3－（3－二甲基胺基丙基）碳二亞胺 HATU：O－（7－氮雜苯併三唑－1－基）－N,N,N',N'－四甲基脲六氟磷酸鹽 HMDS：1,1,1,3,3,3－六甲基二矽氮烷 HOAt：1－羥基－7－氮雜苯併三唑 HOBt：1－羥基苯併三唑 IPAc：乙酸異丙酯 MeCN：乙腈 MTBE：甲基叔丁基醚 MTHP：4－甲基四氫吡喃 NMP：N－甲基吡咯酮 PyBOP：1H－苯併三唑－1－基氧基三吡咯啶基鏻六氟磷酸鹽 PyOxim：（乙基氰基（羥基亞胺基）乙酸基－O2）－三－（1－吡咯啶基）－鏻六氟磷酸鹽 T3P：丙基膦酸酐 TBAF：氟化四丁基銨 Teoc：2－（三甲基矽基）乙氧基羰基 THF：四氫呋喃 TMSOTf：三氟甲烷磺酸三甲基矽酯
官能基等的定義（下列舉例用語為舉例說明，不意圖特別限定，為此技術領域之人士共同可理解者） 本說明書之「鹵素原子」例如F、Cl、Br、或I。
本說明書中的「烷基」為從脂肪族烴去除任意的1個氫原子所衍生的1價基，骨架結構中不含有雜原子（碳及氫原子以外的原子）或不飽和的碳－碳鍵，具有含氫及碳原子的烴基或烴基結構的部分集合。烷基不僅有直鏈狀者，也包含支鏈狀者。烷基具體為碳原子數1～20（C 1－C 20，下述的「C p－C q」表示碳原子數為p～q個）的烷基，較佳如C 1－C 10烷基，更佳如C 1－C 6烷基。烷基具體例如甲基、乙基、n－丙基、i－丙基、n－丁基、s－丁基、t－丁基、異丁基（2－甲基丙基）、n－戊基、s－戊基（1－甲基丁基）、t－戊基（1,1－二甲基丙基）、新戊基（2,2－二甲基丙基）、異戊基（3－甲基丁基）、3－戊基（1－乙基丙基）、1,2—二甲基丙基、2－甲基丁基、n－己基、1,1,2－三甲基丙基、1,2,2－三甲基丙基、1,1,2,2－四甲基丙基、1,1－二甲基丁基、1,2－二甲基丁基、1,3－二甲基丁基、2,2－二甲基丁基、2,3－二甲基丁基、3,3－二甲基丁基、1－乙基丁基、2－乙基丁基等。
本說明書中「烯基」為具有至少1個雙鍵（2個鄰接SP 2碳原子）的1價基。根據雙鍵及取代部分（如果存在的話）的配置，雙鍵的幾何學形態可採對側（E）或同側（Z）、順式或反式配置。烯基不只有直鏈狀，也包含支鏈狀。烯基較佳如C 2－C 10烯基，更佳如C 2－C 6烯基，具體例如乙烯基、烯丙基、1－丙烯基、2－丙烯基、1－丁烯基、2－丁烯基（包含順式、反式）、3－丁烯基、戊烯基、3－甲基－2－丁烯基、己烯基等。
本說明書中「炔基」為具有至少1個三鍵（2個鄰接SP碳原子）的1價基。炔基不只有直鏈狀，也包含支鏈狀。炔基較佳如C 2－C 10炔基，更佳如C 2－C 6炔基，具體例如乙炔基、1－丙炔基、炔丙基、3－丁炔基、戊炔基、己炔基、3－苯基－2－丙炔基、3－（2'－氟苯基）－2－丙炔基、2－羥基－2－丙炔基、3－（3－氟苯基）－2－丙炔基、3－甲基－（5－苯基）－4－戊炔基等。
本說明書中「環烷基」表示飽和或部分飽和的環狀1價脂肪族烴基，包含單環、雙環、螺環。環烷基較佳如C 3－C 8環烷基，具體如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、雙環［2.2.1］庚基、螺［3.3］庚基等。
本說明書中「芳基」表示1價的芳香族烴環，較佳如C 6－C 10芳基。芳基具體如苯基、萘基（如1－萘基、2－萘基）等。
本說明書中「雜環基」表示除碳原子外還含有1～5個雜原子的非芳香族環狀1價基。雜環基可為環中具有雙鍵及或三鍵，也可為環中的碳原子氧化形成羰基，可為單環也可為縮合環。構成環的原子數較佳為4～10（4～10員雜環基），更佳為4～7（4～7員雜環基）。雜環基具體如氮雜環丁基（azetidinyl）、環氧乙烷基（oxiranyl）、氧雜環丁烷基（oxetanyl）、氮雜環丁基、二氫呋喃基、四氫呋喃基、二氫吡喃基、四氫吡喃基、四氫吡啶基、四氫嘧啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、吡咯啶基（pyrrolidinyl）、哌啶基（piperidinyl）、哌嗪基（piperazinyl）、吡唑烷基（pyrazolidinyl）、咪唑啉基（imidazolinyl）、咪唑啶基（imidazolidinyl）、噁唑啶基（oxazolidinyl）、異噁唑啶基、四氫噻唑基（thiazolidinyl）、異四氫噻唑基、1,2－噻嗪烷（1,2－thiazinane）、噻二唑啶基（thiadiazolidinyl）、氮雜環丁基、噁唑烷酮（oxazolidone）、苯併二噁烷基（benzodioxanyl）、苯併噁唑基（benzoxazolyl）、二氧環戊烷基（dioxolanyl）、二氧雜環己烷基（dioxanyl）、四氫吡咯併［1,2－c］咪唑基、硫雜環丁烷基（thietanyl）、3,6－二氮雜雙環［3.1.1］庚基、2,5－二氮雜雙環［2.2.1］庚基、3－氧雜－8－氮雜雙環［3.2.1］辛基、磺內醯胺（sultams）、2－氧雜螺［3.3］庚基等。
本說明書中「雜芳基」表示除了碳原子外還含有1～5個雜原子的芳香族性環狀1價基。環可為單環，也可為和其他環的縮合環，也可部分飽和。構成環的原子數較佳為5～10（5～10員雜芳基），更佳為5～7（5～7員雜芳基）。雜芳基具體如呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、嗒嗪基（pyridazinyl）、吡嗪基（pyrazinyl）、三嗪基、苯併呋喃基、苯併噻吩基、苯併噻二唑基、苯併噻唑基、苯併噁唑基、苯併噁二唑基、苯併咪唑基、吲哚基、異吲哚基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、辛啉基（cinnolinyl）、喹唑啉基（quinazolinyl）、喹噁啉基（quinoxalinyl）、苯併二氧雜環戊烷基（benzodioxolyl）、吲哚嗪基（indolizinyl）、咪唑併吡啶基等。
本說明書中「烷氧基」表示鍵結上述定義之「烷基」的氧基，較佳如C 1－C 6烷氧基。烷氧基具體如甲氧基、乙氧基、1－丙氧基、2－丙氧基、n－丁氧基、i－丁氧基、s－丁氧基、t－丁氧基、戊氧基、3－甲基丁氧基等。
本說明書中「烯氧基」表示鍵結上述定義之「烯基」的氧基，較佳如C 2－C 6烯氧基。烯氧基具體如乙烯氧基、烯丙氧基、1－丙烯氧基、2－丙烯氧基、1－丁烯氧基、2－丁烯氧基（包含順式、反式）、3－丁烯氧基、戊烯氧基、己烯氧基等。
本說明書中「環烷氧基」表示鍵結上述定義之「環烷基」的氧基，較佳如C 3－C 8環烷氧基。環烷氧基具體如環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基等。
本說明書中「芳氧基」表示鍵結上述定義之「芳基」的氧基，較佳如C 6－C 10芳氧基。芳氧基具體如苯氧基、1－萘氧基、2－萘氧基等。
本說明書中「胺基」狹義地表示－NH 2，廣義地表示－NRR'，此處R及R'獨立選自氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基、或雜芳基，或者R及R'與該等鍵結的氮原子一起形成環。胺基較佳如－NH 2、單C 1－C 6烷基胺基、二C 1－C 6烷基胺基、4～8員環狀胺基等。
本說明書中「單烷基胺基」表示上述定義之「胺基」之中R為氫且R'為上述上述定義之「烷基」之基，較佳如單C 1－C 6烷基胺基。單烷基胺基的具體例如甲基胺基、乙基胺基、n－丙基胺基、i－丙基胺基、n－丁基胺基、s－丁基胺基、t－丁基胺基等。
本說明書中「二烷基胺基」表示上述定義之「胺基」之中R及R'獨立為上述上述定義之「烷基」之基，較佳如二C 1－C 6烷基胺基。二烷基胺基具體例如二甲基胺基、二乙基胺基等。
本說明書中「環狀胺基」表示上述定義之「胺基」之中R及R' 與該等鍵結的氮原子一起形成環的基，較佳如4～8員環狀胺基。環狀胺基具體例如1－氮雜環丁基、1－吡咯啶基、1－哌啶基、1－哌嗪基、4－嗎啉基、3－噁唑啶基、1,1－二氧硫代嗎啉－4－基、3－氧雜－8－氮雜雙環［3.2.1］辛烷－8－基等。
本說明書中「保護胺基」表示以任意的保護基受保護的胺基。受保護的胺基具體例如以Boc、Fmoc、Cbz、Troc、Alloc、Teoc、或三氟乙醯基等的保護基受保護的胺基。
本說明書中「胺基羰基」表示鍵結上述定義之「胺基」的羰基，較佳如－CONH 2、單C 1－C 6烷基胺基羰基、二C 1－C 6烷基胺基羰基、4～8員環狀胺基羰基。胺基羰基的具體例如－CONH 2、二甲基胺基羰基、1－氮雜環丁基羰基、1－吡咯啶基羰基、1－哌啶基羰基、1－哌嗪基羰基、4－嗎啉基羰基、3－噁唑啶基羰基、1,1－二氧硫代嗎啉－4－基羰基、3－氧雜－8－氮雜雙環［3.2.1］辛烷－8－基羰基等。
本說明書中「烯氧基羰基」表示鍵結上述定義之「烯氧基」的羰基，較佳如C 2－C 6烯氧基羰基。烯氧基羰基具體例如乙烯氧基羰基、烯丙氧基羰基、1－丙烯氧基羰基、2－丙烯氧基羰基、1－丁烯氧基羰基、2－丁烯氧基羰基（包含順式、反式）、3－丁烯氧基羰基、戊烯氧基羰基、己烯氧基羰基等。
本說明書中「烷基磺醯基」表示鍵結上述定義之「烷基」的磺醯基，較佳如C 1－C 6烷基磺醯基。烷基磺醯基具體如甲基磺醯基等。
本說明書中「羥烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以羥基取代的基，較佳為C 1－C 6羥烷基。羥烷基具體如羥甲基、1－羥乙基、2－羥乙基、2－羥基－2－甲基丙基、5－羥戊基等。
本說明書中「鹵烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫以鹵素取代的基，較佳為C 1－C 6鹵烷基，更佳為C 1－C 6氟烷基。鹵烷基具體如二氟甲基、三氟甲基、2,2－二氟乙基、2,2,2－三氟乙基、3,3－二氟丙基、4,4－二氟丁基、5,5－二氟戊基等。
本說明書中「氰基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫以氰基取代的基，較佳如C 1－C 6氰基烷基。氰基烷基具體例如氰基甲基、2－氰基乙基等。
本說明書中「胺基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫以上述定義之「胺基」取代的基，較佳如C 1－C 6胺基烷基。胺基烷基具體例如1－吡啶基甲基、2－（1－哌啶基）乙基、3－（1－哌啶基）丙基、4－胺基丁基等。
本說明書中「羧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以羧基取代的基，較佳為C 2－C 6羧基烷基。羧基烷基具體例如羧基甲基等。
本說明書中「烯氧基羰基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫以上述定義之「烯氧基羰基」取代的基，較佳如C 2－C 6烯氧基羰基C 1－C 6烷基，更佳如C 2－C 6烯氧基羰基C 1－C 2烷基。烯氧基羰基烷基具體例如烯丙氧基羰基甲基、2－（烯丙氧基羰基）乙基等。
本說明書中「烷氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個氫以上述定義之「烷氧基」取代的基，較佳為C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基，更佳為C 1－C 6烷氧基C 1－C 2烷基。烷氧基烷基具體如甲氧基甲基、乙氧基甲基、1－丙氧基甲基、2－丙氧基甲基、n－丁氧基甲基、i－丁氧基甲基、s－丁氧基甲基、t－丁氧基甲基、戊氧基甲基、3－甲基丁氧基甲基、1－甲氧基乙基、2－甲氧基乙基、2－乙氧基乙基等。
本說明書中「環烷基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以上述定義之「環烷基」取代的基，較佳為C 3－C 8環烷基C 1－C 6烷基，更佳為C 3－C 6環烷基C 1－C 2烷基。環烷基烷基具體例如環丙基甲基、環丁基甲基、環戊基甲基、環己基甲基等。
本說明書中「環烷氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以上述定義之「環烷氧基」取代的基，較佳為C 3－C 8環烷氧基C 1－C 6烷基，更佳為C 3－C 6環烷氧基C 1－C 2烷基。環烷氧基烷基具體如環丙氧基甲基、環丁氧基甲基等。
本說明書中「雜環基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以被上述定義之「雜環基」取代的基，較佳為4～7員雜環基C 1－C 6烷基，更佳為4～7員雜芳基C 1－C 2烷基。雜環基烷基具體例如2－（四氫－2H－吡喃－4－基）乙基、2－（氮雜環丁烷－3－基）乙基等。
本說明書中「烷基磺醯基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以上述定義之「烷基磺醯基」取代的基，較佳為C 1－C 6烷基磺醯基C 1－C 6烷基，更佳為C 1－C 6烷基磺醯基C 1－C 2烷基。烷基磺醯基烷基具體例如甲基磺醯基甲基、2－（甲基磺醯基）乙基等。
本說明書中「胺基羰基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以上述定義之「胺基羰基」取代的基，較佳為胺基羰基C 1－C 6烷基，更佳為胺基羰基C 1－C 4烷基。胺基羰基烷基具體例如甲基胺基羰基甲基、二甲基胺基羰基甲基、t－丁基胺基羰基甲基、1－氮雜環丁基羰基甲基、1－吡咯啶基羰基甲基、1－哌啶基羰基甲基、4－嗎啉基羰基甲基、2－（甲基胺基羰基）乙基、2－（二甲基胺基羰基）乙基、2－（1－氮雜環丁基羰基）乙基、2－（1－吡咯啶基羰基） 乙基、2－（4－嗎啉基羰基）乙基、3－（二甲基胺基羰基）丙基、4－（二甲基胺基羰基）丁基等。
本說明書中「芳氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以上述定義之「芳氧基」取代的基，較佳為C 6－C 10芳氧基C 1－C 6烷基，更佳為C 6－C 10芳氧基C 1－C 2烷基。芳氧基烷基具體例如苯氧基甲基、2－苯氧基乙基等。
本說明書中「芳烷基（芳基烷基）」表示上述定義之「烷基」的至少1個的氫原子以上述定義之「芳基」取代的基，較佳如C 7－C 14芳烷基，更佳如C 7－C 10芳烷基。芳烷基具體例如苄基、苯乙基、3－苯基丙基等。
本說明書中「芳烷氧基」表示鍵結上述定義之「芳烷基」的氧基，較佳如C 7－C 14芳烷氧基，更佳如C 7－C 10芳烷氧基。芳烷氧基具體例如苄氧基、苯乙基氧基、3－苯基丙氧基等。
本說明書中「芳烷氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以上述定義之「芳烷氧基」取代的基，較佳為C 7－C 14芳烷氧基C 1－C 6烷基，更佳為C 7－C 14芳烷氧基C 1－C 2烷基。芳烷氧基烷基具體例如苄氧基甲基、1－（苄氧基）乙基等。
本說明書中「雜芳基烷基」表示上述定義之「烷基」的至少1個的氫原子以上述定義之「雜芳基」取代的基，較佳如5～10員雜芳基C 1－C 6烷基，更佳為5～10員雜芳基C 1－C 2烷基。雜芳基烷基具體例如3－噻吩基甲基、4－噻唑基甲基、2－吡啶基甲基、3－吡啶基甲基、4－吡啶基甲基、2－（2－吡啶基）乙基、2－（3－吡啶基）乙基、2－（4－吡啶基）乙基、2－（6－喹啉基）乙基、2－（7－喹啉基）乙基、2－（6－吲哚基）乙基、2－（5－吲哚基）乙基、2－（5－苯併呋喃基）乙基等。
本說明書中「雜芳基烷氧基」表示鍵結上述定義之「雜芳基烷基」的氧基，較佳如5～10員雜芳基C 1－C 6烷氧基，更佳為5～10員雜芳基C 1－C 2烷氧基。雜芳基烷氧基具體例如3－噻吩基甲氧基、3－吡啶基甲氧基等。
本說明書中「雜芳基烷氧基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以上述定義之「雜芳基烷氧基」取代的基，較佳如5～10員雜芳基C 1－C 6烷氧基C 1－C 6烷基，更佳為5～10員雜芳基C 1－C 2烷基C 1－C 2烷基。雜芳基烷氧基烷基具體例如3－吡啶基甲氧基甲基等。
本說明書中「雜環亞烷基烷基」表示上述定義之「烷基」的1個或複數個的氫以上述定義之「雜環亞烷基」取代的基，較佳如4～7員雜環亞烷基C 1－C 6烷基，更佳為4～7員雜環亞烷基C 1－C 2烷基。雜芳基烷氧基烷基具體例如四氫－4H－吡喃－4－亞基甲基、氮雜環丁烷－3－亞基甲基等。
本說明書中「烷氧基烯基」表示上述定義之「烯基」的1個或複數個的氫以上述定義之「烷氧基」取代的基，較佳如C 1－C 6烷氧基C 2－C 6烯基。烷氧基烯基具體例如（E）－4－甲氧基丁－2－烯－1－基等。
本說明書之「胺基羰基烯基」表示上述定義之「烯基」的1個或複數個的氫以上述定義之「胺基羰基」取代的基，較佳如胺基羰基C 2－C 6烯基。胺基羰基烯基具體例如（E）－3－（二甲基胺基羰基）－丙－2－烯－1－基等。
本說明書中「鹵烷氧基」表示上述定義之「烷氧基」的1個或複數個氫以鹵素取代的基，較佳為C 1－C 6鹵烷氧基。鹵烷氧基具體例如二氟甲氧基、三氟甲氧基、2,2－二氟乙氧基、2,2,2－三氟乙氧基等。
本說明書中「伸烷基」表示從上述「烷基」再去除任意1個氫原子所衍生的二價基，較佳為C 4－C 8伸烷基。伸烷基具體例如－CH 2－、－（CH 2） 2－、－（CH 2） 3－、－CH（CH 3）CH 2－、－C（CH 3） 2－、－（CH 2） 4－、－CH（CH 3）CH 2CH 2－、－C（CH 3） 2CH 2－、－CH 2CH（CH 3）CH 2－、－CH 2C（CH 3） 2－、－CH 2CH 2CH（CH 3）－、－（CH 2） 5－、－（CH 2） 6－、－（CH 2） 7－、－（CH 2） 8－等。
本說明書之「脂環式環」表示非芳香族烴環。脂環式環可在環中具有不飽和鍵，也可以是具有2個以上的環的多環性的環。又，也可以是構成環的碳原子被氧化形成羰基。脂環式環較佳如3～8員脂環式環，具體例如環丙烷環、環丁烷環、環戊烷環、環己烷環、環庚烷環、環辛烷環、雙環［2.2.1］庚烷環等。
本說明書之「飽和雜環」表示除碳原子外還含有1～5個雜原子、環中不含雙鍵及／或三鍵的非芳香族的雜環。飽和雜環也可為單環，也可以和其他環如苯環等的芳環形成縮合環。飽和雜環較佳如4～7員飽和雜環，具體如氮雜環丁烷（azetidine）環、氧雜環丁烷（oxetane）環、四氫呋喃環、四氫吡喃環、嗎啉環、硫代嗎啉環、吡咯啶環、4－側氧基吡咯啶環、哌啶環、4－側氧基哌啶環、哌嗪環（piperazine）、吡唑烷環（pyrazolidine）、咪唑啶環（imidazolidine）、噁唑啶環（oxazolidine）、異噁唑啶環、四氫噻唑環（thiazolidine）、異四氫噻唑環、噻二唑啶環（thiadiazolidine）、噁唑烷酮環（oxazolidone）、二氧環戊烷環（dioxolane）、二氧雜環己烷環（dioxane）、硫雜環丁烷環（thietane）、八氫吲哚環、吲哚啉環（indoline）等。
本說明書之「胜肽」只要是天然胺基酸及／或非天然胺基酸以醯胺鍵或酯鍵所形成的胜肽，沒有特別限定，較佳為5～30個殘基，更佳為7～15個殘基、再更佳為9～13個殘基的胜肽。胜肽可以是直鏈胜肽，也可以是環狀胜肽。
在本說明書，「肽鏈」是指1、2、3、4個或該等以上的天然胺基酸及／或非天然胺基酸經由醯胺鍵及／或酯鍵連接的肽鏈。肽鏈較佳為包含1～4個胺基酸殘基的肽鏈，更佳為由1～4個胺基酸殘基所構成的肽鏈。
在本說明書，「可經取代」表示某基也可經由任意的取代基所取代。
在本說明書，「可受保護」表示某基也可經由任意的保護基所保護。
在本說明書，「1個或複數個」表示1個或2個以上的數。「1個或複數個」在使用於與某基的取代基相關的內容時，此用語表示從1個至該基容許的取代基的最大數的數。「1個或複數個」具體例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、及／或大於該等的數。
本發明之化合物可為其鹽，較佳為其化學上或藥學上容許的鹽。又，本發明之化合物或其鹽可為該等的溶劑合物，較佳為其化學上或藥學上容許的溶劑合物。本發明之化合物的鹽包含，例如鹽酸鹽；氫溴酸鹽；氫碘酸鹽；磷酸鹽；膦酸鹽；硫酸鹽；甲烷磺酸鹽、p－甲苯磺酸鹽等的磺酸鹽；乙酸鹽、檸檬酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、水楊酸鹽等的羧酸鹽；或鈉鹽、鉀鹽等的鹼金屬鹽；鎂鹽、鈣鹽等的鹼土金屬鹽；銨鹽、烷基銨鹽、二烷基銨鹽、三烷基銨鹽、四烷基銨鹽等的銨鹽等。這些鹽例如經由使該化合物與可使用於醫藥品製造的酸或鹼接觸所製造。在本發明，所謂化合物的溶劑合物，只要是化合物與溶劑一起形成1個分子集團，經由容許隨著藥物的投予而被攝取的溶劑所形成的溶劑合物，沒有特別限定。如果溶劑是水，則稱為水合物。本發明之化合物的溶劑合物以水合物為佳，如此的水合物具體例如1～10水合物，較佳為1～5水合物，更佳為1～3水合物。本發明之化合物的溶劑合物不只是與水、醇類（如甲醇、乙醇、1－丙醇、2－丙醇等）、二甲基甲醯胺等的單獨的溶劑的溶劑合物，也包含與複數種溶劑的溶劑合物。
本說明書之「胺基酸」包括天然胺基酸及非天然胺基酸。本說明書之「天然胺基酸」是指Gly、Ala、Ser、Thr、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、His、Glu、Asp、Gln、Asn、Cys、Met、Lys、Arg、Pro。非天然胺基酸沒有特別限定，例如β－胺基酸、γ－胺基酸、D型胺基酸、N取代胺基酸、α,α－二取代胺基酸、側鏈與天然胺基酸不同的胺基酸、羥基羧酸等。本說明書之胺基酸容許任意的立體配置。胺基酸的側鏈的選擇沒有特別限制，除氫原子外，也可自由選自例如烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、環烷基，這些基之中未鄰接的1或2個亞甲基也可以氧原子、羰基（－CO－）、或磺醯基（－SO 2－）取代。可各自賦予取代基，該等取代基也沒有限制，例如可從含有鹵原子、O原子、S原子、N原子、B原子、Si原子、或P原子的任意取代基之中獨立自由選擇1個或2個以上。亦即，例如可被取代的烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、環烷基等。在非限定的一態樣中，本說明書之胺基酸可為，在同一分子內具有羧基及胺基的化合物（即是在此情形，如脯胺酸、羥基脯胺酸的亞胺酸也包含於胺基酸）。
胺基酸的主鏈胺基可為未取代（NH 2基），也可被取代（即，－NHR基：R表示可有取代基的烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、環烷基，這些基之中未鄰接的1或2個亞甲基可以氧原子、羰基（－CO－）、或磺醯基（－SO 2－）取代，又也可如脯胺酸使鍵結在N原子的碳鏈和α位的碳原子形成環）。上述R的取代基可與上述胺基酸側鏈的取代基相同選擇。在主鏈胺基被取代的情形的上述R，包含於本說明書之「胺基酸的側鏈」。如此的主鏈胺基被取代的胺基酸，在本說明書稱為「N取代胺基酸」。本說明書之「N取代胺基酸」較佳如N－烷基胺基酸、N－C 1－C 6烷基胺基酸、N－C 1－C 4烷基胺基酸、N－甲基胺基酸，但不限定於此等。
本說明書之構成胜肽化合物的「胺基酸」包含各自對應的所有同位素。「胺基酸」的同位素為至少1個原子以原子序（質子數）相同、質量數（質子數和中子數的和）不同的原子，以與天然者不同的存在比被取代者。本說明書之構成胜肽化合物的「胺基酸」所含的同位素之例，有氫原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子等，分別包括 2H、 3H、 13C、 14C、 15N、 17O、 18O、 32P、 35S、 18F、 36Cl等。
本說明書之含有鹵原子的取代基，例如取代基具有鹵素的烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基等，更具體例如氟烷基、二氟烷基、三氟烷基等。
含有O原子的取代基，例如羥基（－OH）、氧基（－OR）、羰基（－C＝O－R）、羧基（－CO 2H）、氧基羰基（－C＝O－OR）、羰基氧基（－O－C＝O－R）、硫基羰基（－C＝O－SR）、羰基硫基（－S－C＝O－R）、胺基羰基（－C＝O－NHR）、羰基胺基（－NH－C＝O－R）、氧基羰基胺基（－NH－C＝O－OR）、磺醯基胺基（－NH－SO 2－R）、胺基磺醯基（－SO 2－NHR）、胺磺醯基胺基（－NH－SO 2－NHR）、硫基羧基（－C（＝O）－SH）、羧基羰基（－C（＝O）－CO 2H）等的基。
氧基（－OR）之例，如烷氧基、環烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、雜芳氧基、芳烷基氧基等。烷氧基較佳為C 1－C 4烷氧基、C 1－C 2烷氧基，特別以甲氧基、乙氧基為佳。
羰基（－C＝O－R）之例，如甲醯基（－C＝O－H）、烷基羰基、環烷基羰基、烯基羰基、炔基羰基、芳基羰基、雜芳基羰基、芳烷基羰基等。
氧基羰基（－C＝O－OR）之例，如烷氧基羰基、環烷氧基羰基、烯氧基羰基、炔氧基羰基、芳氧基羰基、雜芳氧基羰基、芳烷氧基羰基等。
羰氧基（－O－C＝O－R）之例，如烷基羰氧基、環烷基羰氧基、烯基羰氧基、炔基羰氧基、芳基羰氧基、雜芳基羰氧基、芳烷基羰氧基等。
硫基羰基（－C＝O－SR）之例，如烷基硫基羰基、環烷基硫基羰基、烯基硫基羰基、炔基硫基羰基、芳基硫基羰基、雜芳基硫基羰基、芳烷基硫基羰基等。
羰基硫基（－S－C＝O－R）之例，如烷基羰基硫基、環烷基羰基硫基、烯基羰基硫基、炔基羰基硫基、芳基羰基硫基、雜芳基羰基硫基、芳烷基羰基硫基等。
胺基羰基（－C＝O－NHR）之例，如烷基胺基羰基（例如C 1－C 6或C 1－C 4烷基胺基羰基，特別例如乙基胺基羰基、甲基胺基羰基等）、環烷基胺基羰基、烯基胺基羰基、炔基胺基羰基、芳基胺基羰基、雜芳基胺基羰基、芳烷基胺基羰基等。除這些以外，例如和－C＝O－NHR中的N原子鍵結的H原子再以烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基取代的基。
羰基胺基（－NH－C＝O－R）之例，如烷基羰基胺基、環烷基羰基胺基、烯基羰基胺基、炔基羰基胺基、芳基羰基胺基、雜芳基羰基胺基、芳烷基羰基胺基等。除這些以外，例如和－NH－C＝O－R中的N原子鍵結的H原子再以烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基取代的基。
氧基羰基胺基（－NH－C＝O－OR）之例，如烷氧基羰基胺基、環烷氧基羰基胺基、烯氧基羰基胺基、炔氧基羰基胺基、芳氧基羰基胺基、雜芳氧基羰基胺基、芳烷氧基羰基胺基等。除這些以外，例如和－NH－C＝O－OR中的N原子鍵結的H原子再以烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基取代的基。
磺醯基胺基（－NH－SO 2－R）之例，如烷基磺醯基胺基、環烷基磺醯基胺基、烯基磺醯基胺基、炔基磺醯基胺基、芳基磺醯基胺基、雜芳基磺醯基胺基、芳烷基磺醯基胺基等。除這些以外，例如和－NH－SO 2－R中的N原子鍵結的H原子再以烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基取代的基。
胺基磺醯基（－SO 2－NHR）之例，如烷基胺基磺醯基、環烷基胺基磺醯基、烯基胺基磺醯基、炔基胺基磺醯基、芳基胺基磺醯基、雜芳基胺基磺醯基、芳烷基胺基磺醯基等。除這些以外，例如和－SO 2－NHR中的N原子鍵結的H原子再以烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基取代的基。
胺磺醯基胺基（－NH－SO 2－NHR）之例，如烷基胺磺醯基胺基、環烷基胺磺醯基胺基、烯基胺磺醯基胺基、炔基胺磺醯基胺基、芳基胺磺醯基胺基、雜芳基胺磺醯基胺基、芳烷基胺磺醯基胺基等。再者，和－NH－SO 2－NHR中的N原子鍵結的2個H原子也可以獨立選自由烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、及芳烷基所組成的群組的取代基所取代，又也可以此等的2個取代基形成環。
含有S原子的取代基，例如硫醇基（－SH）、硫基（－S－R）、亞磺醯基（－S＝O－R）、磺醯基（－SO 2－R）、磺酸基（－SO 3H）等的基。
硫基（－S－R）之例，選自烷基硫基、環烷基硫基、烯基硫基、炔基硫基、芳基硫基、雜芳基硫基、芳烷基硫基等之中。
磺醯基（－SO 2－R）之例，如烷基磺醯基、環烷基磺醯基、烯基磺醯基、炔基磺醯基、芳基磺醯基、雜芳基磺醯基、芳烷基磺醯基等。
含有N原子的取代基，例如疊氮（－N 3，也稱為「疊氮基」）、氰基（－CN）、1級胺基（－NH 2）、2級胺基（－NH－R；也稱為單取代胺基）、3級胺基（－NR（R'）；也稱為二取代胺基）、脒基（－C（＝NH）－NH 2）、經取代的脒基（－C（＝NR）－NR'R''）、胍基（－NH－C（＝NH）－NH 2）、經取代的胍基（－NR－C（＝NR'''）－NR'R''）、胺基羰基胺基（－NR－CO－NR'R''）、吡啶基、哌啶基、嗎啉基、氮雜環丁基等的基。
2級胺基（－NH－R；單取代胺基）之例，如烷基胺基、環烷基胺基、烯基胺基、炔基胺基、芳基胺基、雜芳基胺基、芳烷基胺基等。
3級胺基（－NR（R'）；二取代胺基）之例，如烷基（芳烷基）胺基等，具有從烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基等之中各自獨立選擇的任意2個取代基的胺基，也可此等任意的2個取代基形成環。具體例如，二烷基胺基，特別是C 1－C 6二烷基胺基、C 1－C 4二烷基胺基、二甲基胺基、二乙基胺基等。在本說明書，「C p－C q二烷基胺基」是指在胺基有2個C p－C q烷基被取代的基，兩個C p－C q烷基可相同也可不同。
經取代的脒基（－C（＝NR）－NR'R''）之例，如N原子上的3個取代基R、R'、及R'' 為從烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基之中各自獨立選擇的基，例如烷基（芳烷基）（芳基） 脒基等。
經取代的胍基（－NR－C（＝NR'''）－NR'R''）之例，如R、R'、R''、及R'''為從烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基之中各自獨立選擇的基，或此等形成環的基等。
胺基羰基胺基（－NR－CO－NR'R''）之例，如R、R'、及R''為從氫原子、烷基、環烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基之中各自獨立選擇的基，或此等形成環的基等。
在本說明書，構成胜肽化合物的「胺基酸殘基」有簡稱為「胺基酸」者。
本說明書中，「及／或」用語的意義包含適當組合「及」和「或」的所有組合。具體例如「A、B、及／或C」包含下列7種變化： （i） A、（ii） B、（iii） C、（iv） A及B、（v） A及C、（vi） B及C、（vii） A、B、及C。
在本說明書所使用的所謂「實質上／實質上成為」的表現，表示本說明書所列舉的成分為主成分（例如包含環狀胜肽化合物、環狀胜肽化合物及胜肽化合物的結晶形，但不限於此等），在對本發明之實施形態不造成負面影響的情形、不造成如此負面影響的程度的量的情形、或者不造成如此負面影響的程度的實施形態，可含有其他成分。例如，其他成分如本說明書未記載的成分（例如目的結晶形以外的結晶、反應副產物、或未反應物質等的雜質，但不限於此等）在對本發明之實施形態不造成負面影響的情形、不造成如此負面影響的程度的量的情形、或者不造成如此負面影響的程度的實施形態，可含有該等成分。
在本說明書所使用的所謂「實質上不包含／不包含」的表現，表示本說明書所列舉的成分為主成分（例如包含環狀胜肽化合物、環狀胜肽化合物及胜肽化合物的結晶形，但不限於此等），不包含其他成分，或者如此的成分在對本發明之實施形態的效果不造成負面影響的情形、不造成如此負面影響的程度的量的情形、或者不造成如此負面影響的程度的實施形態，可含有其他成分。例如，本說明書記載的如此成分，在對本發明之實施形態的效果不造成負面影響的情形、不造成如此負面影響的程度的量的情形、或者不造成如此負面影響的程度的實施形態，可含有該等成分。
在與本發明之效果相關所使用的所謂「負面影響」用語，表示否定本發明之效果的影響。例如，自然應顯示的作用為100%時，使本發明之作用下降30%、20%、10%、或5%以下者，也可稱為有「負面影響」。
製造環狀胜肽化合物的方法 在某態樣，本發明關於經由液相法製造環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物的方法，該方法包括，在含有選自由1種或複數種不與水混合的溶劑（例如，對水的溶解度低的溶劑、水／辛醇分配係數（log Kow）大的溶劑、或水／辛醇分配係數預測值大的溶劑）、1種或複數種的水溶性烷基腈類、及1種或複數種的水溶性醚類所組成的群組之1個或複數個的溶劑（溶劑A）中，使胜肽化合物的N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基連接之步驟。
在某實施態樣，不與水混合的溶劑可具有特徵為具有3個以上10個以下的碳原子的酯類，具體例如乙酸乙酯、乙酸異丙酯、乙酸n－丙酯、乙酸t－丁酯、丙酸甲酯或丙酸乙酯等。
在某實施態樣，不與水混合的溶劑可具有特徵為具有4個以上10個以下的碳原子的環狀醚類，具體例如2－MeTHF、THF、4－甲基四氫吡喃或1,4－二噁烷等。在某實施態樣，不與水混合的溶劑可具有特徵為具有4個以上10個以下的碳原子的非環狀醚，具體例如MTBE、二異丙醚或二乙醚等。
在某實施態樣，不與水混合的溶劑可具有特徵為具有6個以上10個以下的碳原子的環狀及非環狀烷基兩方的醚，具體例如CPME等。
在某實施態樣，不與水混合的溶劑可具有特徵為具有3個以上10個以下的碳原子的碳酸酯，具體例如碳酸二甲酯、碳酸二乙酯或碳酸二異丙酯等。
在某實施態樣，不與水混合的溶劑可具有特徵為具有5個以上10個以下的碳原子的烴，具體例如戊烷、己烷或庚烷等。
在某實施態樣，不與水混合的溶劑可具有特徵為具有6個以上10個以下的碳原子的芳香族烴環，具體例如甲苯、二甲苯或苯等。
在某實施態樣，不與水混合的溶劑可具有特徵為在周圍壓力（約1大氣壓）具有低沸點者。在某實施態樣，在常壓（1大氣壓附近）的低沸點例如35℃以上、小於140℃。
在某實施態樣，如DMF、DMA、NMP、或二甲基亞碸在常壓（約1大氣壓）具有140℃以上的沸點的溶劑，在本發明可排除。
在特定的實施形態，可具有與胜肽化合物或環狀胜肽化合物反應的可能性的溶劑，在本發明可排除於不與水混合的溶劑。 在某實施形態，作為不與水混合的溶劑的不適當溶劑，可具有特徵為胺類（例如n－丙基胺或二異丙基胺）、或醇類（例如甲醇、乙醇、n－丙醇、苯酚）。
在某實施形態，在本說明書中使用的不與水混合的溶劑，不特別意圖限定，包含具有低水溶性（例如，對150g／L以下的水具有溶解度）的溶劑。對水的溶解度可經由此技術領域已知或本說明書所記載之任何方法而確定。用以確定溶解性的舉例方法，不特別意圖限定，包含氣相層析，透過測量經由將溶劑在室溫（例如，15℃～40℃，較佳為20℃～30℃）與等量的水混合所調製的水中的上述溶劑的濃度而確定。
如本說明書所使用，具有大的水／辛醇分配係數（log Kow）值的溶劑較佳具有大於0（零）、小於5的分配係數。水／辛醇分配係數（log Kow）可經由此技術領域已知或本說明書所記載之任意方法而確定。具有大的水／辛醇分配係數（log Kow）的溶劑包括具有大的水／辛醇分配係數的預測值的溶劑，未特別限定，例如可根據數據檢索或文獻檢索，在各個清楚的測量經由公知方法確定。
在某態樣，不與水混合的溶劑為，選自由THF、2－MeTHF、MTHP、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯所組成的群組的溶劑，較佳為THF或2－MeTHF，更佳為2－MeTHF。溶劑與水的混合性，在Merck Index第14版記載，例如DMSO溶解於水，但乙腈與水混合。另一方面記載庚烷不溶於水。2－MeTHF不與水混合（Org. Process Res. Dev. 2007, 11, 1, 156－159.）。關於溶劑與水的混合性的確定，此技術領域之人士可以下列舉例的周知方法測量。例如，可在室溫附近（例如15℃～40度，較佳為20℃～30℃），使同容量的溶劑與水混合時，透過溶劑與水分成兩層而顯示。溶劑與水的混合性試驗可經由在室溫附近（例如15℃～40度，較佳為20℃～30℃），使同容量的溶劑與水在分液漏斗、反應燒瓶、或反應釜等的容器中混合，目視確認溶劑與水是否分成兩層，採取溶劑中的上層與下層的液體進行確認而進行。在可以如此方法確認溶劑與水分成兩層時，也是表示該溶劑為不與水混合的溶劑。
溶劑與水的混合性可取決於溶劑對水的溶解度。不與水混合的溶劑例如對水的溶解度低的溶劑。對水的溶解度可根據溫度而改變，但本說明書之溶解度表示在室溫附近例如20℃～30℃附近的溶解度。溶劑對水的溶解度也可以不特定於上述舉例方法的方法實際測量，記載於市售業者的商品目錄或Merck Index第14版。Merck Index第14版記載，對水1L，碳酸二甲酯溶解139g、乙酸異丙酯溶解43g、乙酸乙酯溶解100g。記載庚烷不溶於水。記載對水1L，2－MeTHF溶解140g（Org. Process Res. Dev. 2007, 11, 1, 156－159.）、碳酸二甲酯溶解139g（J. Mol. Catal. A Chem. 2010, 317, 1－18.）。又，溶劑對水的溶解度預測也可經由SciFinder（註冊商標）等的數據檢索工具調查。記載對水1L，甲氧苯溶解3.2g、乙酸異丙酯溶解20g、乙酸乙酯溶解39g、庚烷溶解4.7mg。也可在ChemIDplus Advanced （NIH）（［2022年5月1日檢索］，網址〈URL：https：／／chem.nlm.nih.gov／chemidplus／〉）調查對水的溶解度。與水混合的乙腈、THF、及DMSO對水的溶解度，記載為1000g／L。亦即，不與水混合的溶劑對水的溶解度為999g／L以下、500g／L以下、250g／L以下，較佳為200g／L以下，更佳為150g／L以下。
2－MeTHF在室溫（例如25℃）對水的溶解度為150g／L受到關注。因此，在室溫（例如25℃）附近，溶劑對水的溶解度為150g／L以下的性質，該溶劑也可具有與2－MeTHF相等或更優良的性質。如本說明書所記載，使用本發明之溶劑的方法可用於（1）在作為反應溶劑使用的情形，因為不與水混合，所以可利用作為在使用反應混合物的水溶液的後處理的萃取溶劑；（2）在作為萃取溶劑使用的情形，可將含有胜肽化合物的萃取溶液使用作為後續的步驟／反應用的起始材料（即，含有後續步驟的起始化合物的溶液）；等不與水混合的溶劑在胜肽化合物合成的使用。在某實施態樣，根據本方法，可從起始反應的溶劑，不分離中間體，而實施、結束全反應。
對水的溶解度低的溶劑包含對水的溶解度為999g／L以下的溶劑，不特別限定，例如2－MeTHF、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、庚烷、甲氧苯、MTBE、CPME、4－甲基四氫吡喃、甲苯等，相當於對水的溶解度為999g／L以下的溶劑。從提高在環化反應向目的物的轉換率、抑制副產物的生成的觀點，較佳使用包含2－MeTHF、碳酸二甲酯、或甲氧苯、或該等的1種或複數種的溶劑。
溶劑與水的混合性，如本說明書所述，可取決於溶劑固有的水／辛醇分配係數（log Kow）、或水／辛醇分配係數預測值。水／辛醇分配係數表示化合物的脂溶性，已知脂溶性高者數值大。log Kow如本說明書記載，也可由此技術領域之人士以周知方法測量。作為其他態樣，log Kow值的預測值也可經由例如文獻記載的值、使用SciFinder（註冊商標）等的數據檢索工具的檢索、以ChemIDplus Advanced （NIH）（［2022年5月1日檢索］，網址〈URL： https：／／chem.nlm.nih.gov／chemidplus／〉）的檢索而知。不與水混合的溶劑的log Kow值、或log Kow值的預測值的舉例，分別為2－MeTHF為1.35，碳酸二甲酯為0.23、甲氧苯為2.11，乙酸異丙酯為1.02，乙酸乙酯為0.73，庚烷為4.66，取正值。另一方面，與水混合的溶劑的log Kow值、或log Kow值的預測值，分別為乙腈為－0.34，DMSO為－0.31，取負值。亦即，不與水混合的溶劑的log Kow值、或log Kow值的預測值取正值者為佳，較佳例如0以上、5以下。
水／辛醇分配係數（log Kow）大的溶劑、或水／辛醇分配係數預測值大的溶劑，例如2－MeTHF、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、庚烷、甲氧苯、MTBE、CPME、4－甲基四氫吡喃等。
不與水混合的溶劑，例如對水的溶解度低的溶劑，或水／辛醇分配係數（log Kow）取正數者。
水溶性烷基腈類，例如乙腈、丙腈等。
水溶性醚類，例如THF、1,4－二噁烷、二甲氧基乙烷等。
在某態樣，溶劑A可包含選自不與水混合的溶劑、水溶性烷基腈類、及水溶性醚類所組成的群所屬的溶劑的1個或複數個。在某態樣，溶劑A可包含選自由2－MeTHF、THF、MTHB、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、甲氧苯、乙腈、二氯甲烷、及甲苯所組成的群的溶劑。例如，溶劑A可只由選自由1個以上的不與水混合的溶劑、1個以上的水溶性烷基腈類、及1個以上的水溶性醚類所組成的群的1種溶劑所構成，也可包含選自此等的2種以上的溶劑。在某態樣，在溶劑A包含不與水混合的溶劑的情形，溶劑A所含的該溶劑也可為選自水溶性烷基腈類、及水溶性醚類的1種以上。在某態樣，在溶劑A包含水溶性烷基腈類的情形，溶劑A所含的該溶劑也可選自不與水混合的溶劑、及水溶性醚類的1種以上。在某態樣，在溶劑A包含水溶性醚類的情形，溶劑A所含的該溶劑也可選自水溶性烷基腈類、及不與水混合的溶劑的1種以上。
在某態樣，溶劑A除了不與水混合的溶劑、水溶性烷基腈類、及水溶性醚類外，也可包含不相當於該等任一個的溶劑，例如DMF或丙酮。
在某實施態樣，有溶劑A不包含可具有與本說明書記載的胜肽化合物或環狀化合物反應的可能性的溶劑，例如選自醇類（MeOH、EtOH、n－PrOH、iPrOH、nBuOH、iBuOH、tBuOH）、一級胺（nPrNH 2、iPrNH 2、nBuNH 2、tBuNH 2）、二級胺（Et 2NH、nPr 2NH、iPr 2NH、nBu 2NH、tBu 2NH）、及羧酸（AcOH、EtCO 2H、nPrCO 2H）等的質子性溶劑的溶劑的情形。
在溶劑A含有不相當於不與水混合的溶劑、水溶性烷基腈類、及水溶性醚類任一種的溶劑的情形，該溶劑較佳為溶劑A全體的40重量%以下，更佳為30重量%以下、25重量%以下、20重量%以下、15重量%以下、10重量%以下、或5重量%以下。
在某態樣，本發明之胜肽化合物可為直鏈胜肽化合物。在其他態樣，本發明之胜肽化合物可為環狀胜肽化合物。在某態樣，直鏈或環狀胜肽化合物也可含有環狀結構作為其部分結構。環狀結構具體例如某胺基酸殘基的側鏈與其他胺基酸殘基的側鏈連接者、某胺基酸殘基的N取代基與其他胺基酸殘基的側鏈連接者、某胺基酸殘基的N取代基與其他胺基酸殘基的N取代基連接者等。與環狀結構的連接相關的2個胺基酸殘基，可以鄰接，也可以其間存在任意數的胺基酸殘基，例如1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、或19個的胺基酸殘基。經由環狀結構所形成的環的大小沒有特別意圖限定，例如4員環、5員環、6員環、7員環、8員環、9員環、10員環、11員環、12員環、13員環、14員環、15員環、16員環、17員環、18員環、19員環、20員環、21員環、22員環、23員環、24員環、25員環、26員環、27員環、28員環、29員環、30員環、31員環、32員環、33員環、34員環、或35員環等。在胜肽化合物存在環狀結構的情形，未限定環狀結構的數，較佳存在1個、2個、3個、4個、或5個環狀結構。
在本發明，胜肽化合物的N端側的胺基酸殘基與C端側的胺基酸殘基經由醯胺鍵、或選自－（CH 2） nS（CH 2） m－、－（CH 2） nS（O）（CH 2） m－、或－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m的鍵而連接。此處n及m分別獨立為1或2。
在胜肽化合物的N端側的胺基酸殘基與C端側的胺基酸殘基經由醯胺鍵連接的情形，經由使N端的胺基酸殘基的胺基、與C端的胺基酸殘基的羧基縮合，可製造環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物。醯胺鍵可在N端胺基酸殘基的主鏈的胺基與C端胺基酸殘基的主鏈的羧基之間形成，也可在N端胺基酸殘基的主鏈的胺基與C端胺基酸殘基的側鏈的羧基之間形成，也可在N端胺基酸殘基的側鏈的胺基與C端胺基酸殘基的主鏈的羧基之間形成，也可在N端胺基酸殘基的側鏈的胺基與C端胺基酸殘基的側鏈的羧基之間形成。在縮合時，可使用縮合試劑使羧基在反應系中活化，也可利用預先將羧基轉換成活性酯者。在本說明書，「胺基與羧基的縮合」使用於胺基與羧基以醯胺鍵連接的情形。
在某態樣，縮合反應可在縮合試劑存在下或不存在下，在溶劑A中，－20℃～溶劑的沸點附近的溫度，較佳為－20℃～100℃、較佳－5℃～60℃的溫度，攪拌反應混合物10分鐘～48小時。在縮合反應使用縮合試劑的情形，可在原料及任意含有鹼的溶劑添加縮合試劑或含有縮合試劑的溶液，也可在含有縮合試劑的溶液添加原料及任意含有鹼的溶液。在本說明書，在含有縮合試劑的溶液滴入原料及任意含有鹼的溶液的操作，稱為「逆滴入」。透過將含有縮合試劑的溶液經長時間例如數小時～數日，較佳1～24小時、更佳1～10小時進行逆滴入，可抑制二聚體或三聚體的副生成。在縮合反應不使用縮合試劑的情形，也可利用預先將羧基轉換成活性酯者。
使胺基與羧基縮合時的縮合劑及其使用量只要是可形成醯胺鍵者，沒有特別限定，以一般於胜肽合成使用的縮合劑及使用量為佳（例如Peptide Coupling Reagents, More than a Letter Soup （Chem. Rev. 2011, 111, 6557－6602.））。
如此的縮合劑具體例如具有碳二亞胺骨架的縮合劑。例如，具有碳二亞胺骨架的縮合劑與可形成活性酯的羥基化合物組合，可用於縮合反應。具有碳二亞胺骨架的縮合劑，例如N,N'－二環己基碳二亞胺（DCC）、N,N'－二異丙基碳二亞胺（DIC）、1－乙基－3－（3－二甲基胺基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDCI HCl）等（例如見WATANABE Chemical的商品目錄，Amino acids and chiral building blocks to new medicine）。 可形成活性酯的羥基化合物，例如1－羥基－1H－苯併三唑（HOBt）、1－羥基－7－氮雜苯併三唑（HOAt）、2－氰基－2－（羥基亞胺基）乙酸乙酯（oxyma）、3,4－二氫－3－羥基－4－側氧基－1,2,3－苯併三嗪（HOOBt或HODhbt）、N－羥基－5－降莰烯－2,3－二羧醯亞胺（HONB）、2,3,4,5,6－五氟苯酚（HOPfp）、N－羥基琥珀醯亞胺（HOSu）、6－氯－1－羥基－1H－苯併三唑（Cl－HOBt）（例如見WATANABE Chemical的商品目錄，Amino acids and chiral building blocks to new medicine）。又，也可使用具有該等骨架的鹽，例如oxyma的鉀鹽K－oxyma等。這些之中，特別以HOBt、HOAt、oxyma、HOOBt為佳。特別是，以組合DIC與HOAt使用者、或組合DIC與oxyma使用者為佳。其他可組合作為鏻類縮合劑•脲類縮合劑的O－（1H－苯併三唑－1－基）－N,N,N',N'－四甲基脲六氟磷酸鹽（HBTU）、O－（7－氮雜－1H－苯併三唑－1－基）－N,N,N',N'－四甲基脲六氟磷酸鹽（HATU）、N－［1－（氰基－2－乙氧基－2－側氧基亞乙基胺基氧基）二甲基胺基（嗎啉基）］脲六氟磷酸鹽（COMU）、O－［（乙氧基羰基）氰基亞甲基胺基］－N,N,N',N'－四甲基脲六氟磷酸鹽（HOTU）、O－（1H－苯併三唑－1－基）－ N,N,N',N'－四甲基脲四氟硼酸鹽（TBTU）、O－（7－氮雜苯併三唑－1－基）－N,N,N',N'－四甲基脲四氟硼酸鹽（TATU）、［乙基氰基（羥基亞胺基）乙酸基－O 2）三－1－吡咯啶基鏻六氟磷酸鹽（PyOxim）、2－溴－1－乙基吡啶四氟硼酸鹽（BEP）、1H－苯併三唑－1－基氧基－三（吡咯啶基）鏻六氟磷酸鹽（PyBOP）、1H－苯併三唑－1－基氧基－叁（二甲基胺基）鏻六氟磷酸鹽（BOP）、溴化三（吡咯啶基） 鏻六氟磷酸鹽（PyBroP）、氯化三（吡咯啶基） 鏻六氟磷酸鹽（PyCloP）、（7－氮雜苯併三唑－1－基氧基）－三吡咯啶基鏻六氟磷酸鹽（PyAOP）、溴化叁（二甲基胺基）鏻六氟磷酸鹽（BroP）、3－（二乙氧基磷氧基氧基）－1,2,3－苯併三嗪－4（3H）－酮（DEPBT）、N,N,N',N'－四甲基－O－（N－琥珀醯亞胺基） 脲四氟硼酸鹽（TSTU）、N,N,N',N'－四甲基－O－（N－琥珀醯亞胺基） 脲六氟磷酸鹽（HSTU）、O－（3,4－二氫－4－側氧基－1,2,3－苯併三嗪－3－基）－ N,N,N',N'－四甲基脲四氟硼酸鹽（TDBTU）、四甲基硫脲S－（1－氧代－2－吡啶基）－ N,N,N',N'－四氟硼酸鹽（TOTT）、O－（2－側氧基－1（2H）吡啶基）－ N,N,N',N'－四甲基脲四氟硼酸（TPTU）之中的任一個，與N,N－二異丙基乙基胺（DIPEA）、三乙胺（TEA）、2,4,6－三甲基吡啶（2,4,6－三甲吡啶）、2,6－二甲基吡啶（2,6－二甲吡啶）之中的任一個鹼，利用於縮合反應。特別是組合HATU與DIPEA使用者、或組合COMU與DIPEA使用者為佳。其他也可利用N,N'－羰基二咪唑（CDI）、1,1－羰基－二－（1,2,4－三唑）（CDT）、4－（4,6－二甲氧基－1,3,5－三嗪－2－基）－4－甲基嗎啉氯化物（DMT－MM）、丙基膦酸酐（T3P）等的縮合劑。從提高環化反應的轉換率、抑制副產物的觀點，本發明之縮合劑以HATU、PyBOP、PyOxim為佳。又，溶劑與縮合劑的組合以HATU與甲氧苯、碳酸二甲酯，或2－MeTHF、PyBOP與乙腈、甲氧苯、碳酸二甲酯、2－MeTHF、4－甲基四氫吡喃，或乙酸乙酯、PyOxim與乙腈、甲氧苯、碳酸二甲酯、2－MeTHF、乙酸乙酯為佳。溶劑與縮合劑的組合以甲氧苯與PyBOP、碳酸二甲酯與PyBOP、2－MeTHF與PyBOP的組合較佳。
在以選自－（CH 2） nS（CH 2） m－、－（CH 2） nS（O）（CH 2） m－、或－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m－的鍵使胜肽化合物的N端側的胺基酸殘基與C端側的胺基酸殘基連接的情形，例如使N端側的胺基酸殘基所含的鹵烷基、或乙烯基，與C端側的胺基酸殘基所含的硫醇基反應，形成C－S－C鍵，視需要經由使硫原子氧化轉換成亞碸、碸，可製造環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物。
在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物包含8～20個、較佳為9～15個的胺基酸殘基，該胺基酸殘基之中，至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、或至少19個可為非天然胺基酸殘基。在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物所含的非天然胺基酸的比例，例如為胜肽化合物所含的胺基酸總數的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。
環狀胜肽化合物所含的非天然胺基酸可以是N－取代的非天然胺基酸殘基，也可以是N－未取代的非天然胺基酸殘基。天然胺基酸的主鏈的胺基以氫以外的任何原子或官能基取代的胺基酸殘基、或側鏈具有與天然胺基酸不同結構且主鏈以氫以外的任何原子或官能基取代的胺基酸殘基，相當於N－取代的非天然胺基酸殘基。又，雖主鏈的胺基未被取代、但側鏈具有與天然胺基酸不同結構的胺基酸殘基，相當於N－未取代的非天然胺基酸殘基。
在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物可包含至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、或至少19個的N－取代胺基酸殘基。在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物所含的N－取代胺基酸殘基的比例為，例如胜肽化合物所含的胺基酸總數的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。N－取代胺基酸殘基可為N－取代的非天然胺基酸殘基。
在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物可包含至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、或至少19個的N－未取代的非天然胺基酸殘基。在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物所含的N－未取代的非天然胺基酸殘基的比例為，例如胜肽化合物所含的胺基酸總數的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。
在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物可包含至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、或至少19個的α,α二取代胺基酸殘基。在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物所含的α,α二取代胺基酸殘基的比例為，例如胜肽化合物所含的胺基酸總數的5%以上、10%以上、20%以上、30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。
根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物由9～11個胺基酸殘基所構成，其中的1個以上、2個以上、3個以上、4個以上、5個以上、或6個以上可為N－取代胺基酸殘基，其中的1個以上、或2個以上可為N－未取代的非天然胺基酸殘基。本發明之方法特別有用於包含許多如此非天然胺基酸殘基的環狀胜肽化合物的大規模製造。
在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物以溶劑合物為佳，以水合物、DMSO－水合物、丙酮－水合物、或DMSO溶劑合物較佳，以水合物更佳。
在某態樣，直鏈胜肽化合物的C端側的胺基酸殘基或N端側的胺基酸殘基的一方或兩方可為在羧基的α位的碳不具有不對稱碳的胺基酸殘基。透過提供環化的胺基酸殘基為如此不具有不對稱碳者，可抑制環化反應之時的外消旋化。在羧基的α位的碳不具有不對稱碳的胺基酸殘基，例如在α位的碳上的取代基是相同者。例如，在α位的碳以2個氫原子取代、亦即在α位的碳為－CH 2－的胺基酸原子（例如甘胺酸或N－甲基甘胺酸的N－取代甘胺酸）不具有不對稱碳。具有甲基與如甲基的相同取代基者作為在α位的碳上的取代基為相同者，不具有不對稱碳。在α位的碳以螺環丙基、螺環丁基、螺環戊基、螺環己基等的螺環基取代者，亦即在α位的碳上的取代基彼此與該α位的碳一起形成環者（例如cLeu等），也在羧基的α位的碳不具有不對稱碳。
在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物為以下式（1）所表示的環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物。
Figure 02_image027
如國際專利公開案的2013／100132號所記載，以式1所表示的化合物有效作為KRAS抑制劑，可使用於與多種KRAS相關的疾病，例如與KRAS相關的癌症。
式（1）的環狀胜肽化合物可經由包括使具有下式（2）的直鏈胜肽化合物的N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基連接之步驟的方法而製造。
Figure 02_image029
在某態樣，該連接步驟包括，在含有選自由1種或複數種不與水混合的溶劑、1種或複數種的水溶性烷基腈類、及1種或複數種的水溶性醚類所組成的群組之1個或複數個的溶劑中，使式（2）的化合物的N端的胺基與C端的羧基縮合。此環狀胜肽化合物的製造較佳使用含有水溶性烷基腈類例如含有乙腈的溶劑、不與水混合的溶劑例如甲氧苯、碳酸二甲酯、及／或2－MeTHF的溶劑。
在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物的分離及／或純化，以不使用柱層析法者為佳。
根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物，可經由例如經由晶析而結晶化，代替柱層析法，進行分離及／或純化。 具體可透過例如將縮合反應後的反應溶液提供於分液操作，視需要使有機層濃縮、及／或過濾後，在所得的殘渣加入適合晶析的溶劑，任意的添加晶種，視需要攪拌，獲得環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物。添加於晶析時的溶劑只要是可使環狀胜肽化合物形成結晶的溶劑，沒有特別限制，對於使環狀胜肽化合物溶解的溶液，以可進行使環狀胜肽化合物的溶解度下降的操作的溶劑為佳。例如在經由不良溶劑的添加或溶液的冷卻，使環狀胜肽化合物的溶解度下降而可結晶化的情形，例如可如此操作的溶劑。又，在環狀胜肽化合物的粗結晶為懸浮液狀態下，透過在任意時間維持懸浮狀態可獲得環狀胜肽化合物的結晶的情形，可如此操作的溶劑可用於結晶化。晶析時所添加的溶劑具體例如丙酮、水、DMSO、乙腈、或乙醇、及此等的混合溶劑等。
在某態樣，根據本發明的方法所製造的環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物可為如後述的式（1）的化合物的非溶劑合物結晶、溶劑合物結晶、鹽的結晶、或鹽的溶劑合物結晶。在某態樣，非溶劑合物結晶（無溶劑合物結晶）是指不是溶劑合物結晶、或水合物結晶的結晶。式（1）的化合物的溶劑合物結晶以DMSO－水合物結晶（A型結晶、或B型結晶）、水合物結晶（C型結晶）、或丙酮－水合物結晶（H型結晶）為佳，以水合物結晶為較佳。
製造胜肽化合物的方法 在某態樣，本發明關於經由液相法製造胜肽化合物的方法。該方法在不包含分離各步驟的產物的步驟下，包含下列步驟1及步驟2、以及任意地重複進行複數次的該步驟1及該步驟2，經由此等可製造胜肽化合物。 （步驟1）使C－保護胺基酸或C－保護胜肽、與N－保護胺基酸或N－保護胜肽連接／縮合之步驟； （步驟2）在步驟1之後去除／脫保護N－保護基之步驟。
在某態樣，本發明之方法可包含步驟1及步驟2各1次，在某態樣，本發明之方法可重複進行複數次的步驟1及步驟2。為了使肽鏈連續的延長，以重複進行複數次例如2～20次的步驟1及步驟2為佳。
在本說明書，「C－保護胺基酸」表示羧基受保護的天然或非天然的胺基酸，「C－保護胜肽」表示C端的胺基酸殘基的羧基受保護的胜肽。該胜肽可只由天然胺基酸殘基所構成，也可只由非天然胺基酸殘基所構成，也可由天然胺基酸殘基與非天然胺基酸殘基的任意組合所構成。
C－保護胜肽可含有2～20個胺基酸殘基，以至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、或至少19個為非天然胺基酸殘基為佳。C－保護胜肽所含的非天然胺基酸殘基可為N－取代胺基酸殘基，也可為N－未取代的非天然胺基酸殘基。在某態樣，C－保護胜肽所含的非天然胺基酸殘基的比例為，例如C－保護胜肽所含的胺基酸總數的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。
在C－保護胜肽含有N－取代胺基酸殘基的情形，C－保護胜肽可含有至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、或至少19個的N－取代胺基酸殘基。在某態樣，C－保護胜肽所含的N－取代胺基酸殘基的比例為，例如C－保護胜肽所含的胺基酸總數的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。N－取代胺基酸殘基可為非天然胺基酸殘基。
在C－保護胜肽含有N－未取代的非天然胺基酸殘基的情形，C－保護胜肽可含有至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、或至少19個的N－未取代的非天然胺基酸殘基。在某態樣，C－保護胜肽所含的N－未取代的非天然胺基酸殘基的比例為，例如C－保護胜肽所含的胺基酸總數的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。
「C－保護胺基酸」及「C－保護胜肽」的羧基的保護基只要是不使胜肽對溶劑的溶解性下降，可利用本技術領域已知的任意保護基。C－保護胺基酸、及C－保護胜肽的溶解度在此等用於反應的溶劑中為至少1%（w／v）以上，更佳為5%（w／v）以上。如此的羧基的保護基具體例如甲基、乙基、t－Bu基、三苯甲基、枯基（cumyl）等，這些之中以t－Bu基為佳。
在本說明書「N－保護胺基酸」表示胺基受保護的天然或非天然的胺基酸，「N－保護胜肽」表示N端的胺基酸殘基的胺基受保護的胜肽。該胜肽可只由天然胺基酸殘基所構成，也可只由非天然胺基酸殘基所構成，也可由天然胺基酸殘基與非天然胺基酸殘基的任意組合所構成。
N－保護胜肽可含有2～20個胺基酸殘基，以至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、或至少19個為非天然胺基酸殘基為佳。N－保護胜肽所含的非天然胺基酸殘基可為N－取代胺基酸殘基，也可為N－未取代的非天然胺基酸殘基。在某態樣，N－保護胜肽所含的非天然胺基酸殘基的比例為，例如N－保護胜肽所含的胺基酸總數的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。
在N－保護胜肽含有N－取代胺基酸殘基的情形，N－保護胜肽可含有至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、或至少19個的N－取代胺基酸殘基。在某態樣，N－保護胜肽所含的N－取代胺基酸殘基的比例為，例如N－保護胜肽所含的胺基酸總數的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。N－取代胺基酸殘基可為非天然胺基酸殘基。
在N－保護胜肽含有N－未取代的非天然胺基酸殘基的情形，N－保護胜肽可含有至少1個、至少2個、至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個、至少13個、至少14個、至少15個、至少16個、至少17個、至少18個、或至少19個的N－未取代的非天然胺基酸殘基。在某態樣，N－保護胜肽所含的N－未取代的非天然胺基酸殘基的比例為，例如N－保護胜肽所含的胺基酸總數的30%以上、40%以上、50%以上、60%以上、70%以上、80%以上。
「N－保護胺基酸」及「N－保護胜肽」的胺基的保護基只要是不使胜肽對溶劑的溶解性下降，可利用本技術領域已知的任意保護基。如此的胺基的保護基具體例如Cbz、p－硝基苄氧基羰基、2－萘基甲氧基羰基、二苯基甲氧基羰基、9－蒽基甲氧基羰基、Teoc、Boc、三氟乙醯基、或Alloc等，這些之中，以Cbz、Teoc、或三氟乙醯基為佳。
如此技術領域所公知，關於N－保護及C－保護胺基酸、及／或N－保護及C－保護胜肽各自的保護基，通常根據化學反應條件選擇，可經由此技術領域公知的一般方法確定。 例如，在使用不與水混合的溶劑（例如親油性溶劑）的情形，親水性保護基在有機溶劑中使受保護的化合物的溶解度下降，所以也有如此的親水性保護基非合適的保護基的情形。因此，在如本說明書記載使用不與水混合的溶劑的情形，親油性保護基由於可維持在不與水混合的溶劑中的例如胜肽化合物的溶解度，因此可為較佳的保護基。
如此的保護基的選擇可經由此技術領域已知方法、或本說明書所記載知方法，例如「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014」記載之方法等進行。 作為非限定的實施態樣，在本發明之方法可使用的N－保護基之例為Cbz基。當胺基酸在胺基酸殘基中的α位具有如螺－環烷基的立體障礙大的官能基的情形，較佳例如三氟乙烯基。
（縮合） 步驟1為，使C－保護胺基酸或C－保護胜肽、與N－保護胺基酸或N－保護胜肽連接，獲得N端及C端分別受保護的直鏈胜肽化合物之步驟。
在某態樣，在步驟1的C－保護胺基酸或C－保護胜肽、與N－保護胺基酸或N－保護胜肽的連接，經由C－保護胺基酸或C－保護胜肽的N端的胺基、與N－保護胺基酸或N－保護胜肽的C端的羧基，在縮合試劑的存在下或不存在下進行縮合而進行。在縮合試劑的存在下進行反應的情形，可在反應系中使羧基活化。在縮合試劑不存在下進行反應的情形，也可利用使羧基預先活化的N－保護胺基酸或N－保護胜肽。
在步驟1，除溶劑外，可採用前述的「製造環狀胜肽化合物的方法」記載之方法例如反應條件、試劑，在本步驟較佳使用的縮合試劑包含選自由T3P、EDCI、HATU、COMU、BEP、PyBOP、DMT－MM、及PyOxim所組成的群組的縮合劑。
步驟1可在獨立選自由甲苯、丙酮、DMF、乙腈、THF、2－MeTHF、碳酸二甲酯、甲氧苯、乙酸異丙酯、庚烷、乙酸乙酯、及4－甲基四氫吡喃所組成的群組之1個或複數個溶劑（溶劑B）中進行反應及之後的後處理，可不分離或純化產物亦即目的縮合物，進行下一步驟。溶劑B較佳含有2－MeTHF、2－MeTHF與乙腈的混合溶劑（混合比：相對於乙腈1重量份，2－MeTHF為0.5重量份以上，較佳為0.5重量份至20重量份，更佳為1重量份至10重量份，更佳為1重量份至5重量份）、4－甲基四氫吡喃、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、及／或甲氧苯至少1重量%以上、5重量%以上、10重量%以上、15重量%以上、20重量%以上、25重量%以上、30重量%以上、35重量%以上、40重量%以上、45重量%以上、50重量%以上、55重量%以上、60重量%以上、65重量%以上、70重量%以上、75重量%以上、80重量%以上、85重量%以上、90重量%以上、或95重量%以上。此傾向特別是在使用HATU作為縮合劑的情形顯著。又，在進行複數次步驟1的情形，在其中至少1次、至少2次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次、至少9次、或至少10次，或在全步驟1的至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%，溶劑B含有2－MeTHF至少1重量%以上、5重量%以上、10重量%以上、15重量%以上、20重量%以上、25重量%以上、30重量%以上、35重量%以上、40重量%以上、45重量%以上、或50重量%以上、55重量%以上、60重量%以上、65重量%以上、70重量%以上、75重量%以上、80重量%以上、85重量%以上、90重量%以上、或95重量%以上者為佳。
（脫保護） 步驟2為，從步驟1所得的N端及C端分別受保護的胜肽，去除N端的保護基的步驟。
在某態樣，步驟2在例如N－保護基為Cbz、p－硝基苄氧基羰基、2－萘基甲氧基羰基、二苯基甲氧基羰基、及9－蒽基甲氧基羰基的情形等，可經由接觸氫化而進行。接觸氫化可使用本技術領域已知的任意觸媒。觸媒具體例如Pd／C、Pd（OH） 2／C、或PtO 2等，以Pd／C為佳。接觸氫化所使用的氫可在常壓使用，也可加壓使用。在加壓使用的情形，可為1 atm （14.7 psi）以上，較佳為1 atm （14.7 psi）以上、3 atm （44.1 psi）以下，更佳為1 atm （14.7 psi）以上、2 atm （29.4 psi）以下，再更佳為1 atm （14.7 psi）以上、1.8 atm （26.5 psi）以下。隨著反應的進行，例如在氫壓減少至反應開始時的氫壓的約90%以下的情形，也可再追加氫壓到大約反應開始時的初期氫壓，其次數不限，可進行到目的脫保護反應達到目的反應轉換率為止。又，也可以在起始原料的存在下使反應容器內以氫置換而開始反應，也可以在起始原料不存在下使反應容器內以氫置換後、將起始原料投入反應容器內而開始反應。
在某態樣，步驟2可在脫保護試劑存在下進行。脫保護試劑根據N－保護基的種類可利用本技術領域已知的任意試劑，例如「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014」記載的試劑，例如在N－保護基為Teoc、三氟乙醯基、Fmoc、或Boc的情形等，較佳使用TBAF、LiBH 4、哌啶、三氟乙酸、或甲烷磺酸等。
在使用三氟乙醯基作為非天然胺基酸及胜肽的氮原子的保護基的情形，已知可以硼氫化鈉等的金屬氫化物還原劑去除（Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014），但視情況有不能完全去除、有產生副產物者。本發明人等當以硼氫化鈉處理受三氟乙醯基保護的cLeu衍生物（TFA－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp（OtBu）NMe2）時，除了預期的脫保護體以外，遭遇到醯胺鍵被切斷的MeGly（cPent）－MeAsp（OtBu）NMe2副生成。於是發現，當使用硼氫化鋰時，抑制副反應。又了解在反應結束後立即使用氯化銨水溶液作為反應終止劑時，過剩的還原體副生成。於是，檢討反應條件，發現在氯化銨水溶液作為反應終止劑投入反應液之前，在－20℃～－10℃加入三氟乙醇後，經過1小時成為0℃，之後攪拌1小時後，加入氯化銨水溶液，進行分液處理，可抑制過剩的還原體的副生成。又發現，在該分液操作後，由於硼原子與脫保護體的氮原子結合，在10℃～30℃加入三氟乙酸在25℃攪拌後，與氫氧化鈉水溶液混合進行分液操作，獲得硼－氮鍵被切斷的所欲胜肽。此時，為了防止硼與氮的再結合，發現將上述以三氟乙酸處理的溶液在10℃～30℃以50～90分鐘向氫氧化鈉水溶液滴入是重要的。
非限定的一實施態樣為，也提供在三氟乙醯基的脫保護反應包含（1）硼氫化鋰作為還原試劑的使用，及／或（2）在作為終止劑的氨水添加前的三氟乙醇的使用，之方法。在使用三氟乙醯基作為保護基的情形，該方法包含（1）作為還原試劑的硼氫化鋰的使用，及（2）在作為終止劑的氨水添加前的三氟乙醇的使用兩者為佳。
步驟2，與步驟1相同，可在獨立選自由甲苯、丙酮、DMF、乙腈、THF、2－MeTHF、碳酸二甲酯、甲氧苯、乙酸異丙酯、庚烷、乙酸乙酯、及4－甲基四氫吡喃所組成的群組之1個或複數個溶劑（溶劑B）中進行反應及之後的後處理，可不分離或純化產物亦即目的脫保護體，進行下一步驟。溶劑B含有2－MeTHF者為佳。
在某態樣，步驟2可透過在－40℃～溶劑的沸點附近的溫度、較佳在－30℃～100℃的溫度、較佳在－5℃～40℃的溫度，攪拌反應混合物15分鐘～48小時而進行。
以下顯示舉例的反應參數及條件。在一態樣，本說明書記載的方法包含C－保護胜肽的保護基為tBu的胜肽化合物之C－端胺基酸的脫保護，再者，脫保護試劑為與HMDS及TMSOTf的組合，在脫保護步驟的溶劑包含IPAc或2－MeTHF，C－保護胜肽為由2～13個胺基酸殘基所構成的胜肽化合物。
相關的或在另一態樣，本說明書記載的方法包含胜肽化合物的N－端胺基酸的脫保護反應，在此，N－保護胜肽的保護基為Cbz基，脫保護條件為觸媒氫化，氫化的觸媒為Pd／C，氫化的氫壓為1atm（14.7psi）以上、3atm（44.1psi）以下，脫保護步驟的溶劑包含2－MeTHF或THF，N－保護胜肽為由2～13個胺基酸殘基所構成的胜肽化合物。
相關的或在另一態樣，本說明書記載的方法包含胜肽化合物的N－端胺基酸的脫保護反應，在此，N－保護胜肽的保護基為Teoc，脫保護試劑可生成氟化物陰離子，脫保護試劑為TBAF，脫保護步驟的溶劑包含2－MeTHF、乙酸異丙酯、碳酸二甲酯或甲氧苯，N－保護胜肽為由2～13個胺基酸殘基所構成的胜肽化合物。
相關的或在另一態樣，本說明書記載的方法包含胜肽化合物的N－端胺基酸的脫保護反應，在此，N－保護胜肽的保護基為三氟乙醯基（TFA），脫保護試劑為還原試劑，脫保護試劑為硼氫化鋰，脫保護步驟的溶劑包含2－MeTHF或甲醇，N－保護胜肽為由2～13個胺基酸殘基所構成的胜肽化合物。
已知當去除胜肽的N端的胺基酸殘基的氮原子的保護基時，形成二酮哌嗪（diketopiperazine），有無法獲得目的脫保護體的情形（J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1987, 1155－1156.）。 本發明人等發現，為了去除Cbz－Ile－MeAla－Aze衍生物的末端氮原子的保護基Cbz基，進行氫解反應時，反應中形成二酮哌嗪，接著胜肽無法延長。 於是，檢討脫Cbz反應與胜肽延長的反應條件，發現在胺基酸活性酯存在下，使Cbz進行氫解，當進行脫Cbz時，可有效率地使胜肽延長。文獻（J. Chem. Soc., Chem. Ccmmun., 1987, 1155－6.）報導，在胺基酸活性酯存在下使Cbz體進行氫解而使胜肽延長之例，但是Cbz體僅報導Cbz－Ala－D－Pro－OMe、Cbz－Asu（OBut）－D－Pro－OMe、Cbz－D－Val－Pro－OMe，對於Aze衍生物之例則未記載。又，也沒有揭示關於與N－烷基胺基酸活性酯的反應之例。N－烷基胺基酸活性酯由於其立體的要因，容易推測較氮未被烷基化的一般胺基酸活性酯反應性下降。因此，當在早於N－烷基胺基酸活性酯反應的時間進行脫Cbz時，生成二酮哌嗪。亦即，在脫Cbz後，有必要及時找出與N－烷基胺基酸活性酯反應的條件。本發明人等檢討反應條件的結果，發現在N－烷基胺基酸活性酯Teoc MeLeu－pFp存在下，使Cbz－Ile－MeAla－Aze－EtPh（4－Me）－MeGly體在乙酸異丙酯中，加入N－甲基嗎啉與Pd／C，在氫壓0.10～0.18MPaG進行氫解反應時，抑制二酮哌嗪的生成，獲得Teoc－MeLeu－Ile－MeAla－Aze－EtPh（4－Me）－MeGly體。又發現，此時在丙酮存在下進行本反應，反應後經由分液操作可去除未反應的被脫保護的胜肽。亦即可知，使丙酮以36等量存在進行氫解反應時，使未反應的被脫保護的胜肽的胺基被亞異丙基（isopropylidene）化，抑制向二酮哌嗪的轉換，此亞異丙基化的胜肽為末端氮未被醯胺化的鹼性化合物，因此可在反應後的分液處理經由酸洗淨而輕易去除。
製造本發明之胜肽化合物的方法，可更包含去除C－保護基的步驟3。
步驟3在例如C－保護基為t－Bu、三苯甲基、枯基、甲基、或乙基的情形等，可在脫保護試劑的存在下，在酸性條件進行。脫保護試劑可利用本技術領域已知的任意試劑例如「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014」記載的試劑。在本發明，為了達到酸性條件，較佳使用例如HMDS、與選自由TMSOTf、TMSI、TMSBr、及TMSCl所組成的群組的試劑之組合。
步驟3，與步驟1及步驟2相同，可在獨立選自由甲苯、丙酮、DMF、乙腈、THF、2－MeTHF、碳酸二甲酯、甲氧苯、乙酸異丙酯、庚烷、乙酸乙酯、及4－甲基四氫吡喃所組成的群組之1個或複數個溶劑（溶劑B）中進行反應及之後的後處理，可不分離或純化產物亦即目的脫保護體，進行下一步驟。溶劑B含有2－MeTHF者為佳。
步驟3也可在步驟1之後（亦即步驟1與步驟2之間）、或在步驟2之後任一者進行。更具體為，如後所述，在本發明之方法可複數次重複進行步驟1與步驟2時，步驟3可在最初的步驟1之後或在步驟2之後進行，也可在重複進行幾次步驟1與步驟2的步驟1之後或步驟2之後進行，也可在重複進行步驟1與步驟2的最後一次的步驟1之後或步驟2之後進行。在某態樣，步驟3在重複進行步驟1與步驟2的最後一次的步驟1之後或步驟2之後進行為佳，在重複進行的最後一次的步驟1之後進行為較佳。在步驟1之後進行步驟3的情形，可獲得只有N端受保護的直鏈胜肽化合物。在步驟2之後進行步驟3的情形，可獲得N端與C端兩方皆脫保護的直鏈胜肽化合物。
在某態樣，步驟3可透過在－20℃～溶劑的沸點附近的溫度、較佳在0℃～180℃的溫度，攪拌反應混合物15分鐘～48小時而進行。
（步驟1與步驟2的重複進行） 在某態樣，製造本發明之胜肽化合物的方法包括重複進行上述步驟1與步驟2，經由此等可使肽鏈延長。重複進行的次數沒有限定，以2次～20次為佳，以2次～15次為較佳。當重複進行步驟1與步驟2時，重複進行的最後一次也可不包含步驟2。在某態樣，在重複進行的最後一次不包含步驟2的情形，本發明之方法的最後步驟可為步驟1。在此情形，所製造的直鏈胜肽化合物可成為N端及C端雙方受保護的直鏈胜肽化合物。在某態樣，在重複進行的最後一次不包含步驟2的情形，在步驟1之後進行的步驟3可成為本發明之方法的最後步驟。在此情形，所製造的直鏈胜肽化合物可成為只有N端受保護的直鏈胜肽化合物。
（後處理） 在步驟1～步驟3的各反應後可進行後處理，經由該後處理可不分離中間體而進行下一反應。後處理具體包含選自由含有有機層或水層的洗淨的分液處理、過濾處理、及濃縮處理所組成的群組之1個或複數個的操作，可適宜組合此等操作以成為適合下一步驟的狀態。例如，在使用縮合試劑或脫保護試劑進行步驟1～步驟3的各反應的情形，該後處理通常進行至少1次以上的分液處理。又，在經由觸媒氫化進行步驟2的反應的情形，通常進行過濾處理作為該後處理。在任一情形，例如也可在下一步驟準備，以調節溶劑量的目的、或以溶劑置換的目的，再進行濃縮操作，餾去部分溶劑。
在某態樣，也可在步驟1～步驟3的各反應結束後進行分液操作以液液萃取目的物，此等也可包含有機層或水層的洗淨。在進行分液操作的情形，適合分液操作的量，例如有機層：水層成為20：80～80：20的體積比的範圍的量的水及／或水溶液、及／或有機溶劑，添加於反應系中。分液操作用所添加的水溶液，例如硫酸氫鈉水溶液、碳酸鉀水溶液、碳酸鈉水溶液、磷酸氫二鉀水溶液、磷酸氫二鈉水溶液、磷酸二氫鈉水溶液、氯化鈉水溶液、檸檬酸水溶液、氨水溶液、鹽酸水溶液等。分液操作用所添加的有機溶劑，例如不與水混合溶劑、水溶性烷基腈類、及水溶性醚類等。在本說明書，分液操作用所添加的不與水混合的溶劑稱為「溶劑C」。分液操作用所添加的有機溶劑，具體例如選自由2－甲基四氫呋喃（2－MeTHF）、碳酸二甲酯、甲氧苯、乙酸異丙酯、乙酸乙酯、MTBE、CPME、4－甲基四氫吡喃、庚烷、及乙腈所組成的群組之1個或複數個等。又在分液操作之時，有機層較佳含有對鹼性安定、化合物的溶解性優良的2－MeTHF。
在某態樣，在步驟1～步驟3的各反應後含有許多乙腈或THF的情形等，溶劑B為與水混合性，水層與有機層不能適當分離的情形，在分液操作之前加入於水及／或水溶液，透過加入不與水混合的溶劑（溶劑C），可使水層與有機層分離。在步驟1～步驟3的各反應後的分液操作，確定水層與有機層是否適當分離，未意圖限定的舉例為，以步驟1～步驟3的各反應後的分液操作後靜置1～30分鐘是否形成2層而確定。溶劑C為對水的溶解度低的溶劑，例如對水的溶解度為999g／L以下的溶劑、500g／L以下的溶劑、250g／L以下的溶劑，較佳為200g／L以下的溶劑，更佳為150g／L以下的溶劑。又，溶劑C為，log Kow値、或log Kow値的預測值取正值，例如0以上且5以下的值的溶劑。具體例如2－MeTHF、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、庚烷、甲氧苯、MTBE、CPME、4－甲基四氫吡喃等，從可效率良好以有機溶劑萃取因反應所生成的產物的觀點，較佳使用2－MeTHF、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、或庚烷、或含有這些的溶劑。
溶劑C較佳以可分離水層與有機層的量添加，例如，相對於有機層全體，以約50重量%～100重量%的量添加於反應系中。水層與有機層的分離例如可在分液操作添加溶劑C後，使水層與有機層的混合物靜置1～30分鐘，觀察是否形成2層的方法之標準方法而確定。
在某態樣，分液操作可包含有機層或水層的洗淨。在分液操作的洗淨可使用不包含目的物的溶液而進行，以從含有目的物的溶液去除可成為目的物以外的雜質的物質。目的物通常存在於有機層，在此情形，經由以水溶液洗淨有機層，可萃取去除在水層可成為雜質的物質。另一方面，在分液操作的過程，當目的物從有機層移到水層的情形等而使目的物存在水層的情形，洗淨水層。
有機層的洗淨可使用中性、鹼性或酸性的水溶液。可利用於有機層的洗淨的水溶液具體可利用硫酸氫鈉水溶液、硫酸氫鉀水溶液、碳酸鉀水溶液、碳酸鈉水溶液、磷酸氫二鉀水溶液、磷酸氫二鈉水溶液、磷酸二氫鈉水溶液、氯化鈉水溶液、檸檬酸水溶液、氨水溶液、鹽酸水溶液等的水溶液。在某態樣，為了充分去除存在反應系中的未反應的胺基酸或胜肽，依序以碳酸鈉水溶液、硫酸氫鈉水溶液、及／或碳酸鈉水溶液洗淨有機層為佳。在仍然無法充分去除胺基酸或胜肽的情形等，透過使用含有檸檬酸與磷酸氫二鉀的水溶液洗淨有機層，可效率良好的去除該等。又在某態樣，脂溶性高的胺基或胜肽的去除，使用乙腈與碳酸鉀水溶液的混合液洗淨有機層是有效的。
水層的洗淨可使用不與水混合的有機溶劑，較佳使用2－MeTHF、庚烷、MTBE、乙酸異丙酯等的有機溶劑。
本發明關於去除來自溶劑的安定劑BHT（2,6－二－叔丁基－4－甲基酚）的方法。具體地說，該方法包括，在分液操作例如本發明之各步驟後的分液操作，使用含有乙腈、丙腈、2－MeTHF、及庚烷的溶劑作為有機層，經由此等去除可有效率地去除BHT。根據此方法，有機層中的BHT的殘存量，以HPLC分析在210nm的UVArea%值，相對於目的物，可為2.0%以下、1.9%以下、1.8%以下、1.7%以下、1.6%以下、1.5%以下、1.4%以下、1.3%以下、1.2%以下、1.1%以下、1.0%以下、0.9%以下、0.8%以下、0.7%以下、0.6%以下、0.5%以下、0.4%以下、0.3%以下、0.2%以下、0.1%以下、或0.05%以下。可透過使目的物溶解於含有水與水溶性烷基腈的水層後，使用特定的溶劑作為有機層，去除BHT。此處所使用的水溶性烷基腈較佳為乙腈。為了去除BHT可使用的有機層以含有不與水混合的溶劑者為佳。組合複數種的不與水混合溶劑使用者也可，較佳組合為2－MeTHF與庚烷、或MTBE與庚烷。較佳的溶劑的比，以相對於水溶性烷基腈，使用100重量%以上的不與水混合的溶劑為佳，透過較佳使用100重量%以上400重量%以下的範圍，更佳使用100重量%以上300重量%以下的範圍，可有效率地去除BHT。在組合2－MeTHF與庚烷、或MTBE與庚烷使用的情形，透過相對於庚烷使用10重量%以上100重量%以下的範圍、較佳為10重量%以上80重量%以下的範圍的2－MeTHF或MTBE，可有效率地去除BHT。 市售的THF或2－MeTHF有包含約150～400ppm的BHT作為安定劑。在大量使用如此的THF或2－MeTHF的情形，例如當步驟數為20個步驟以上時，BHT的殘存量達到4%，不能忽視對反應的負面影響。經由使用本發明之方法，不必進行事先從溶劑去除BHT的操作、或用以去除在步驟過程中蓄積的BHT的分離操作（例如柱層析法）。因此，在包含複數個步驟、大規模的胜肽液相合成的情形等，經由適用此方法，可使肽鏈連續地延長，可有效率獲得目的胜肽化合物。
本發明之過濾操作及濃縮操作可利用本技術領域已知的過濾操作及濃縮操作。
在某態樣，作為各步驟的後處理，在選自由分液操作、過濾操作、及濃縮操作所組成的群組的1個或複數個操作之前或後，或者在開始下一步驟的反應之前，有在反應系中添加溶劑例如洗淨反應釜等的反應容器的溶劑的情形。具體例如，可在反應系中添加獨立選自由甲苯、丙酮、DMF、乙腈、THF、2－MeTHF、碳酸二甲酯、甲氧苯、乙酸異丙酯、庚烷、乙酸乙酯、及4－甲基四氫吡喃所組成的群組之1個或複數個的溶劑。在本說明書，添加此溶劑的操作也包含於後處理。
製造本發明之胜肽化合物的方法不包含中間體做為單一化合物分離的步驟。因此，第一次的步驟2的後處理後的溶劑、或重複進行幾次步驟1與步驟2的步驟2的後處理後的溶劑，可成為該等的下一次的步驟1的反應溶劑（溶劑B）。同樣地，第一次的步驟1的後處理後的溶劑、或重複進行幾次步驟1與步驟2的步驟1的後處理後的溶劑，可成為該等的次的步驟2的反應溶劑（溶劑B）。亦即，可隨著重複進行步驟1與步驟2而改變溶劑B的組成，但是構成溶劑B的溶劑種類可與可用於到該等的步驟1與步驟2的反應及後處理的溶劑種類相同。
在某態樣，用於製造本發明之環狀胜肽化合物的方法的溶劑（溶劑A），包含經由製造本發明之胜肽化合物的方法製造直鏈胜肽化合物後的溶劑（溶劑X）。在某態樣，溶劑X為溶劑A，可直接用於環化反應。在其他態樣，可在溶劑X再加入選自由1種或複數種不與水混合的溶劑、1種或複數種的水溶性烷基腈類、及1種或複數種的水溶性醚類所組成的群組的1個或複數個作為溶劑A。在溶劑X再加入溶劑作為溶劑A的情形，加入的溶劑較佳為2－MeTHF、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、乙酸異丙酯、甲氧苯、乙腈、THF、4－MeTHP、氯苯、1,3－二甲氧基苯、MTBE、CPME等，以乙腈、2－MeTHF、甲氧苯、碳酸二甲酯為特佳。例如，在溶劑X加入溶劑例如乙腈、2－MeTHF、甲氧苯、或碳酸二甲酯作為溶劑A的情形，較佳加入相對於溶劑X的重量的20～80倍的溶劑。
如前述，在製造本發明之胜肽化合物的方法，可重複進行步驟1與步驟2，但該重複進行的最後一次的步驟1所使用的C－保護胜肽及N－保護胜肽的一方或兩方含有4個以上的N－取代胺基酸殘基，或含有2個以上的N－取代胺基酸殘基，且含有1個以上的α,α二取代胺基酸殘基為佳。N－取代胺基酸殘基較佳為N－甲基或N－乙基胺基酸殘基等的N－烷基胺基酸殘基、或脯胺酸或Aze（2）等的N－取代環狀胺基酸殘基。又，α,α二取代胺基酸殘基較佳為α,α二甲基胺基酸殘基等的α,α二烷基胺基酸殘基、或存在α位的2個基連接形成脂環式環的cLeu等的α,α二取代環狀胺基酸殘基等。
又，在某態樣，在重複進行的最後一次的步驟1所使用的C－保護胜肽及N－保護胜肽的一方或兩方由5個胺基酸殘基所構成，其中的4個為非天然胺基酸殘基者為佳。 在其他態樣，在重複進行的最後一次的步驟1所使用的C－保護胜肽及N－保護胜肽的一方或兩方由6個胺基酸殘基所構成，其中的5個為非天然胺基酸殘基者為佳。
在某態樣，可利用製造本發明之胜肽化合物的方法，以獲得在製造本發明之環狀胜肽化合物的方法的原料所使用的直鏈胜肽化合物。例如，經由製造本發明之環狀胜肽化合物的方法，製造上式（1）的環狀胜肽化合物的情形，為了製造作為其原料的直鏈胜肽化合物，在重複進行的最後一次的步驟1所使用的C－保護胜肽可使用C－受保護的MeLeu－Ile－MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGly，又在重複進行的最後一次的步驟1所使用的N－保護胜肽可使用N－受保護的Hph（4－CF3－35F2）－Pro－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2。
在某態樣，透過使用製造本發明之胜肽化合物的方法，可製造成為上式（1）的環狀胜肽化合物的製造原料之上式（2）的直鏈胜肽化合物。
具體例如，作為第1批次，可使用
Figure 02_image031
（MeAsp（OtBu）－NMe2） 作為C－保護胺基酸， 使用
Figure 02_image033
（Z－MeGly（cPent）） 作為N－保護胺基酸， 經過步驟1，製造
Figure 02_image035
（Z－MeGly（cPent）－MeAsp（OtBu）－NMe2） 經過步驟2，製造
Figure 02_image037
（MeGly（cPent）－MeAsp（OtBu）－NMe2）。
之後，可使用此化合物作為C－保護胺基酸，使用
Figure 02_image039
（TFA－cLeu） 或
Figure 02_image041
（Cbz－cLeu） 作為N－保護胺基酸， 經過步驟1，製造
Figure 02_image043
（TFA－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp（OtBu）－NMe2） 或
Figure 02_image045
（Cbz－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp（OtBu）－NMe2） 經過步驟2，製造
Figure 02_image047
（cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp（OtBu）－NMe2）。
之後，可使用此化合物作為C－保護胜肽，使用
Figure 02_image049
（Z－Pro） 作為N－保護胺基酸，經過步驟1，製造
Figure 02_image051
（Z－Pro－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp（OtBu）－NMe2） 經過步驟2，製造
Figure 02_image053
（Pro－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp（OtBu）－NMe2）。
之後，可使用此化合物作為C－保護胜肽，使用
Figure 02_image055
（Z－Hph（4－CF3－35F2） Cy 2NH） 作為N－保護胺基酸， 經過步驟1，製造
Figure 02_image057
（Z－Hph（4－CF3－35F2）－Pro－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp（OtBu）－NMe2） 經過步驟3，製造此批次之目的物
Figure 02_image059
（Z－Hph（4－CF3－35F2）－Pro－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2）。 此批次為，在步驟1之後包含步驟3，且重複進行步驟1與步驟2的最後一次不包含步驟2的案例。
接著，作為第2批次，可使用
Figure 02_image061
（MeGlyOtBu HCl） 作為C－保護胺基酸， 使用
Figure 02_image063
（Z－EtPhe（4－Me） Cy 2NH） 作為N－保護胺基酸， 經過步驟1，製造
Figure 02_image065
（Z－EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu） 經過步驟2，製造
Figure 02_image067
（EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu）。
之後，可使用此化合物作為C－保護胜肽，使用
Figure 02_image069
（Z－Aze（2）） 作為N－保護胺基酸， 經過步驟1，製造
Figure 02_image071
（Z－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu） 經過步驟2，製造
Figure 02_image073
（Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu）。
之後，可使用此化合物作為C－保護胜肽，使用
Figure 02_image075
（Z－MeAla） 作為N－保護胺基酸，經過步驟1，製造
Figure 02_image077
（Z－MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu） 經過步驟2，製造
Figure 02_image079
（MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu）。
之後，可使用此化合物作為C－保護胜肽，使用
Figure 02_image081
（Z－Ile） 作為N－保護胺基酸， 經過步驟1，製造
Figure 02_image083
（Z－Ile－MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu） 經過步驟2，製造
Figure 02_image085
（Ile－MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu）。
之後，可使用此化合物作為C－保護胜肽，使用
Figure 02_image087
（Teoc－MeLeu－Opfp） 作為N－保護胺基酸， 經過步驟1，製造
Figure 02_image089
（Teoc－MeLeu－Ile－MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu） 經過步驟2，製造
Figure 02_image091
（MeLeu－Ile－MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu）。
之後，可使用此化合物作為C－保護胜肽，作為N－保護胺基酸，以第1批次製造。使用
Figure 02_image093
， 經過步驟1，製造
Figure 02_image095
Z－Hph（4－CF3－35F2）－Pro－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2－MeLeu－Ile－MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGlyOtBu）， 經過步驟3，製造
Figure 02_image097
Z－Hph（4－CF3－35F2）－Pro－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2－MeLeu－Ile－MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGly）， 經過步驟2，製造此批次的目的物之化合物（2）：
Figure 02_image029
Hph（4－CF3－35F2）－Pro－cLeu－MeGly（cPent）－MeAsp－NMe2－MeLeu－Ile－MeAla－Aze（2）－EtPhe（4－Me）－MeGly）。 此批次為，在重複進行步驟1與步驟2的最後一次，在步驟1之後包含步驟3的案例。 又，此批次所獲得的化合物2不分離或純化，可利用作為製造本發明之環狀胜肽化合物的方法的原料。
使用本發明之方法的上述批次皆可不分離或純化中間體而有效率地製造目的直鏈胜肽化合物，因此本發明之方法非常有用於大規模的胜肽合成。
在某態樣，製造本發明之胜肽化合物的方法可更包含使胜肽化合物的N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基連接的步驟，經過如此的步驟可製造環狀胜肽化合物。在某態樣，N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基的連接，使經由重複進行複數次的步驟1與步驟2所製造的直鏈胜肽化合物的N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基連接而達成。在某態樣，本步驟可適用前述「製造環狀胜肽化合物的方法」項所記載的方法，例如反應條件、試劑。
在某態樣，本發明關於以前述式（1）所表示的環狀胜肽化合物的鹽、溶劑合物、或鹽的溶劑合物。該化合物的溶劑合物以水合物或DMSO－水溶劑合物為佳。
在某態樣，本發明關於前述式（1）的環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物的結晶。此化合物的結晶具體例如此化合物的非溶劑合物結晶、或溶劑合物結晶、或此化合物的鹽的非溶劑合物結晶、或溶劑合物結晶。溶劑合物結晶較佳為水合物結晶、DMSO－水合物結晶、丙酮－水合物結晶。
X光粉末繞射的繞射角2θ為使用CuKα、或CuKα1放射線測量的繞射峰。此等的溶劑合物結晶進一步以X光粉末繞射的繞射角2θ所辨識的結晶，也稱為例如下述所示的水合物的「C型結晶」，也可簡稱為「C型」。
在某態樣，在式（1）化合物的結晶為水合物結晶的情形，該結晶為C型結晶，具有X光粉末繞射圖譜含有在X光粉末繞射的繞射角2θ為下列之中的至少1個的峰：4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）。
在某態樣，在式（1）化合物的結晶為水合物結晶的情形，該結晶為C型結晶，具有X光粉末繞射圖譜含有在X光粉末繞射的繞射角2θ為下列的峰：4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）。
在繞射角2θ的記載，列舉的繞射角2θ的最後記載「（±0.2∘）」的情形，表示在所列舉的所有繞射角2θ，對所記載的各數值容許±0.2∘的範圍。
在某態樣，該C型結晶具有與圖1記載者實質上相同的X光繞射圖譜。在某態樣，該C型結晶具有與圖8記載者實質上相同的DSC及TG溫度自記曲線。
在某態樣，在式（1）化合物的結晶為非溶劑合物結晶的情形，該結晶為F型結晶，具有X光粉末繞射圖譜含有在X光粉末繞射的繞射角2θ為下列之中的至少1個的峰：5.370∘、6.934∘、8.940∘、9.838∘、10.771∘、12.181∘、13.525∘、15.179∘、16.202∘、或17.554∘（±0.2∘）。
在某態樣，該F型結晶具有與圖2記載者實質上相同的X光繞射圖譜。
在某態樣，在式（1）化合物的結晶為溶劑合物結晶的情形，該結晶為A型的DMSO－水合物結晶，具有X光粉末繞射圖譜含有在X光粉末繞射的繞射角2θ為下列之中的至少1個的峰：8.006∘、9.002∘、9.943∘、11.501∘、13.067∘、14.854∘、16.320∘、17.275∘、19.261∘、或20.324∘（±0.2∘）。
在某態樣，該A型結晶具有與圖3記載者實質上相同的X光繞射圖譜。
在某態樣，在式（1）化合物的結晶為溶劑合物結晶的情形，該結晶為B型的DMSO－水合物結晶，具有X光粉末繞射圖譜含有在X光粉末繞射的繞射角2θ為下列之中的至少1個的峰：8.223∘、9.594∘、9.976∘、11.879∘、13.841∘、14.572∘、15.934∘、16.350∘、19.805∘、20.480∘（±0.2∘）。
在某態樣，該B型結晶具有與圖4記載者實質上相同的X光繞射圖譜。在某態樣，該B型結晶具有與圖5記載者實質上相同的DSC溫度自記曲線。
在某態樣，在式（1）化合物的結晶為溶劑合物結晶的情形，該結晶為H型的丙酮－水合物結晶，具有X光粉末繞射圖譜含有在X光粉末繞射的繞射角2θ為下列之中的至少1個的峰：7.942∘、8.283∘、8.861∘、10.097∘、10.491∘、11.805∘、12.673∘、12.830∘、13.514∘、13.855∘、15.853∘、16.405∘、16.642∘、及17.772∘（±0.2∘）。
在某態樣，該H型結晶具有與圖13記載者實質上相同的X光繞射圖譜。
在某態樣，式（1）化合物的結晶在任何型態皆實質上不含有雜質。例如，式（1）化合物的結晶可具有至少約90%的純度。在某態樣，式（1）化合物的結晶可具有至少約95%的純度。在某態樣，式（1）化合物的結晶可具有至少約98%的純度。例如，式（1）化合物的結晶可具有至少98.5%、98.6%、98.7%、98.8%、98.9%、99%、99.1%、99.2%、99.3%、99.4%、99.5%、99.6%、99.7%、99.8%、或99.9%的純度。在某態樣，式（1）化合物的結晶實質上不含有其他形態。
在一態樣，C型結晶實質上不含有以式（1）所表示的化合物的其他結晶形態。
在一態樣，F型結晶實質上不含有以式（1）所表示的化合物的其他結晶形態。
在一態樣，A型結晶實質上不含有以式（1）所表示的化合物的其他結晶形態。
在一態樣，B型結晶實質上不含有以式（1）所表示的化合物的其他結晶形態。
在一態樣，H型結晶實質上不含有以式（1）所表示的化合物的其他結晶形態。
在某態樣，本發明關於上以式（1）所表示的環狀胜肽化合物的水合物結晶的製造方法。該製造方法包含下列步驟。 步驟A：使環狀胜肽化合物溶解於可溶解該環狀胜肽化合物的量的極性有機溶劑，獲得溶液之步驟， 步驟B：使該溶液濃縮，獲得環狀胜肽化合物的殘渣之步驟；以及 步驟C：在該殘渣加入水與極性有機溶劑的混合液，獲得該環狀胜肽化合物的水合物結晶之步驟。
在某態樣，步驟A所使用的極性有機溶劑，可使用可使式（1）的環狀胜肽化合物例如粗純化物狀態的該環狀胜肽化合物溶解的溶劑，具體較佳例如DMSO、DMF、DMA、NMP、丙酮、甲醇、乙醇、乙腈等，更佳舉例丙酮、DMSO、或乙醇。可溶解的量，相對於式（1）的環狀胜肽化合物，可使用3～10w／v的範圍，較佳使用3～7w／v的範圍。
在某態樣，步驟B的濃縮包含冷凍乾燥。在某態樣，步驟B所得的殘渣可為非晶質、油狀物質、或固體。在某態樣，步驟B所得的殘渣可為冷凍乾燥體。
在某態樣，步驟C所使用的極性有機溶劑可為與步驟A所使用的極性有機溶劑相同的溶劑。在步驟C所使用的混合液的水與極性有機溶劑的混合比，相對於極性有機溶劑1重量份，可使用水0.5～10重量份，較佳使用水1～7重量份，更佳使用水1～5重量份。又，步驟C所使用的極性有機溶劑較佳為乙腈、乙醇、或丙酮。
本發明關於以上述式（1）所表示的環狀胜肽化合物的結晶之製造方法。該製造方法包括： 使非晶質狀態的該環狀胜肽化合物溶解於DMSO，獲得溶液之步驟； 使該溶液冷凍乾燥，獲得該環狀胜肽化合物的冷凍乾燥體之步驟；以及 在該冷凍乾燥體加入水－乙腈混合液，獲得該環狀胜肽化合物的水合物結晶之步驟。
又，在本說明書所引用之所有先前技術文獻作為參照併入本說明書。 ［實施例］
以下述實施例進一步說明本發明之內容，但本發明不限定於此內容。除特別記載外，起始物質、起始原料、溶劑、及試劑從商業上供給業者獲得或者使用公知方法合成。化合物2、及化合物3經由國際專利公開案第2020／189540號記載之方法製造。
經由HPLC的分析條件顯示如下。 HPLC分析條件      方法1 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class 管柱：Ascentis Express 90A C18 （Sigma－Aldrich），2.1 mm ID×50 mm，2.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 5%（0 min）→100%（5 min）→5%（5.1 min）→5%（7 min） 流速：0.5 mL／min 管柱溫度：35 ℃ 偵測波長：210nm（PDA）
HPLC分析條件  方法2 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class 管柱：Ascentis Express 90A C18 （Sigma－Aldrich），2.1 mm ID×50 mm，2.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 5%（0 min）→100%（6 min）→5%（6.1min）→5%（8 min） 流速：0.5 mL／min 管柱溫度：35 ℃ 偵測波長：210nm（PDA）
HPLC分析條件  方法3 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class 管柱：CAPCELL CORE ADME （OSAKA SODA），2.1 mm ID×50 mm，2.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 5%（0 min）→100%（5 min）→5%（5.1 min）→5%（7 min） 流速：0.5 mL／min 管柱溫度：35 ℃ 偵測波長：210nm（PDA）
HPLC分析條件  方法4 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class 管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 （Waters），2.1 mm ID×100 mm，1.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 20%（0 min）→100%（10 min）→100%（13.5 min）→20%（13.6 min）→20%（18.0 min） 流速：0.3 mL／min 管柱溫度：50℃ 偵測波長：210nm（PDA）
HPLC分析條件  方法5 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class 管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 （Waters），2.1 mm ID×150 mm，1.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 20%（0 min）→100%（24 min）→100%（29 min）→20%（29.1 min）→20%（34 min） 流速：0.3 mL／min 管柱溫度：50 ℃ 偵測波長：220nm（PDA）
HPLC分析條件  方法6 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class 管柱：CAPCELL CORE ADME （OSAKA SODA），2.1 mm ID×50 mm，2.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B）：5%（0 min）→100%（10 min）→5%（10.1 min）→5%（12 min） 流速：0.5 mL／min 管柱溫度：35 ℃ 偵測波長：210nm（PDA）
［表1］
實施例編號（化合物編號） HPLC分析條件 滯留時間（分鐘）
實施例1（化合物4） 方法1 4.500
實施例2（化合物5） 方法1 2.389
實施例3（化合物7） 方法1 4.065
實施例4（化合物8） 方法1 2.538
實施例5（化合物10） 方法1 4.004
實施例6（化合物11） 方法1 2.510
實施例7（化合物13） 方法1 4.235
實施例8（化合物15） 方法2 6.175
實施例9（化合物16） 方法2 5.964
實施例10（化合物17） 方法1 3.057
實施例11（化合物19） 方法3 3.510
實施例12（化合物20） 方法3 1.560
實施例13（化合物22） 方法3 4.356
實施例14（化合物23） 方法3 2.297
實施例15（化合物25） 方法3 6.166
實施例15－1（化合物25a） 方法6 6.712
實施例16（化合物26） 方法3 2.725
實施例17（化合物28） 方法3 4.189
實施例18（化合物29） 方法3 2.846
實施例19（化合物31） 方法3 4.978
實施例20（化合物32） 方法3 4.220
實施例21（化合物33） 方法4 10.272
實施例22（化合物34） 方法4 9.215
實施例23（化合物35） 方法4 6.480
實施例24（化合物1） 方法5 18.008
經由LCMS的分析條件顯示如下。 LCMS分析條件     方法1 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class + ACQUITY QDA 管柱：Ascentis Express 90A C18 （Sigma－Aldrich）, 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 5%（0 min）→100%（5 min）→5%（5.1 min）→5%（7 min） 流速：0.5 mL／min 管柱溫度：35 ℃ 偵測波長：210nm（PDA）
LCMS分析條件  方法2 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class + ACQUITY QDA 管柱：Ascentis Express 90A C18 （Sigma－Aldrich）, 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 5%（0 min）→100%（6 min）→5%（6.1 min）→5%（8 min） 流速：0.5 mL／min 管柱溫度：35 ℃ 偵測波長：210nm（PDA）
LCMS分析條件  方法3 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class + ACQUITY QDA 管柱：CAPCELL CORE ADME （OSAKA SODA）, 2.1 mm ID×50 mm, 2.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 5%（0 min）→100%（5 min）→5%（5.1 min）→5%（7 min） 流速：0.5 mL／min 管柱溫度：35 ℃ 偵測波長：210nm（PDA）
LCMS分析條件  方法4 裝置：Waters SQD2 管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 （Waters）, 2.1 mm ID×100 mm, 1.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 20%（0 min）→100%（10 min）→100%（13.5 min）→20%（13.6 min）→20%（18.0 min） 流速：0.3 mL／min 管柱溫度：50 ℃ 偵測波長：210nm（PDA）
LCMS分析條件  方法5 裝置：Waters SQD2 管柱：ACQUITY UPLC CSH C18 （Waters）, 2.1 mm ID×150 mm, 1.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 20%（0 min）→100%（24 min）→100%（29 min）→20%（29.1 min）→20%（34 min） 流速：0.3 mL／min 管柱溫度：50 ℃ 偵測波長：220nm（PDA）
LCMS分析條件  方法6 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class + ACQUITY QDA 管柱：CAPCELL CORE ADME （OSAKA SODA）， 2.1 mm ID×50 mm，2.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B）：5%（0 min）→100%（10 min）→5%（10.1 min）→5%（12 min） 流速：0.5 mL／min 管柱溫度：35 ℃ 偵測波長：210nm（PDA）
［表2］
實施例編號（化合物編號） LCMS 分析條件 滯留時間（分） MS Found（m／z） MS polarity
實施例1（化合物4） 方法1 4.507 469 ［M＋H］ ＋
實施例2（化合物5） 方法1 2.411 335 ［M＋H］ ＋
實施例3（化合物7） 方法1 4.083 574 ［M＋Na］ ＋
實施例4（化合物8） 方法1 2.578 418 ［M＋H］ ＋
實施例5（化合物10） 方法1 4.011 659 ［M＋Na］ ＋
實施例6（化合物11） 方法1 2.536 503 ［M＋H］ ＋
實施例7（化合物13） 方法1 4.260 772 ［M＋Na］ ＋
實施例8（化合物15） 方法2 5.791 428 ［M－CH 2＝CH 2＋H］ ＋
實施例9（化合物16） 方法2 5.950 910 ［M＋Na］ ＋
實施例10（化合物17） 方法1 2.978 743 ［M＋H］ ＋
實施例11（化合物19） 方法3 3.496 387 ［M＋Na］ ＋
實施例12（化合物20） 方法3 1.532 231 ［M＋H］ ＋
實施例13（化合物22） 方法3 4.329 526 ［M＋Na］ ＋
實施例14（化合物23） 方法3 2.229 370 ［M＋H］ ＋
實施例15（化合物25） 方法3 6.181 599 ［M＋Na］ ＋
實施例15－1（化合物25a） 方法6 6.696 637 ［M＋Na］ ＋
實施例16（化合物26） 方法3 2.749 503 ［M＋Na］ ＋
實施例17（化合物28） 方法3 4.206 735 ［M＋Na］ ＋
實施例18（化合物29） 方法3 2.839 578 ［M＋H］ ＋
實施例19（化合物31） 方法3 4.827 1000 ［M＋Na］ ＋
實施例20（化合物32） 方法3 4.133 943 ［M＋Na］ ＋
實施例21（化合物33） 方法4 10.53 1669 ［M＋Na］ ＋
實施例22（化合物34） 方法4 9.47 1613 ［M＋Na］ ＋
實施例23（化合物35） 方法4 6.71 1457 ［M＋H］ ＋
實施例24（化合物1） 方法5 18.36 1439 ［M＋H］ ＋
1H－NMR光譜使用核磁共振裝置ECX500II（JEOL社製）進行測量，作為內部標準品使用的Me 4Si的化學位移作為0ppm，參照來自樣本溶劑的氘鎖定訊號。樣本溶液根據測量目的使用市售的氘化溶劑作為樣本溶劑，與測量對象化合物混合，進行調整。訊號的積分值根據各訊號的訊號面積強度的比計算。
經由qNMR的測量法是使含有目的化合物的殘渣與內部標準品溶解於DMSO－d 6，根據下列分析條件進行。產率的計算使用根據qNMR所計算的殘渣中的目的物含量的值，及根據HPLC分析所計算的殘渣的目的物純度的值，根據下式進行。
Figure 02_image100
測量裝置：JNM－ECZ500R 內部標準品：3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸 測量條件（ 1H－NMR）：DMSO－d 6，24.3℃，脈衝角度90℃，數位解析度 0.25Hz，弛緩時間 60秒，無自旋，累積次數8次 測量條件（ 19F－NMR）：DMSO－d 6，24.3℃，脈衝角度90℃，數位解析度 0.22Hz，弛緩時間 60秒，無自旋，累積次數8次
X光粉末繞射（XRPD）測量係以下列條件測量，計算掃瞄範圍的2θ值。X光繞射圖譜以繞射的角度（2θ值）作為橫坐標，繞射強度作為縱座標作圖。 （測量方法1） 測量裝置：SmartLab System（Rigaku Corporation社製） 光源：CuKα1 管電壓：45 kV 管電流：200 mA 掃瞄範圍：3～35∘ 取樣寬度：0.02∘
（測量方法2） 測量裝置：SmartLab System，D／Tex Ultra detector（Rigaku社製） 光源：CuKα1 管電壓：45 kV 管電流：200 mA 掃瞄範圍：5～30∘ 掃瞄速度：5∘／分 取樣寬度：0.02∘
（測量方法3） 測量裝置：D8 Discover，2D VANTEC－500 固態偵測器（Bruker社製） 光源：CuKα 管電壓、管電流：40 kV、40 mA或50 kV、1000 μA（使用MicroFocus X光源IμS時） 測量範圍：5～31∘ 曝光時間：100秒或600秒（使用MicroFocus X光源IμS時）
（測量方法4） 測量裝置：X’pert－pro MPD（PANalytical社製） 光源：CuKα 管電壓：45 kV 管電流：40 mA 掃瞄範圍：3～40∘ 掃瞄速度：4.2∘／分 取樣寬度：0.017∘
（測量方法4） 測量裝置：X’pert－pro MPD（PANalytical社製） 光源：Cu 管電壓：45 kV 管電流：40 mA 掃瞄範圍：3～25∘ 掃瞄速度：0.33∘／秒 取樣寬度：0.026∘ 測量：將取樣的懸浮液填充於X光晶體分析用毛細管，進行測量。
熱分析以下列條件測量。 （測量方法1） 測量裝置：EXSTAR TG／DTA6200R装置（Seiko Instruments（現社名：Hitachi High－Tech）社製） 測量範圍：30～350℃ 升溫速度：10℃／分 氛圍氣：氮
（測量方法2） 測量裝置：SmartLab System，DSC attachment（Rigaku社製） 測量範圍：35～270℃ 氛圍氣：氮 DSC條件顯示於表3。 ［表3］
設定溫度（℃） 升溫速度（℃／分） 滯留時間（分）
35.0 5.0 0
270.0 5.0 5
35.0 20.0 5
（測量方法3） 測量裝置：STA7200RV+AS－3T（Hitachi High－Tech製） 測量範圍：30～350℃ 升溫速度：10℃／分 氛圍氣：氮
（測量方法4） 測量裝置：TGA／DSC 3+（Mettler Toledo製） 測量範圍：25～350℃ 升溫速度：10℃／分 氛圍氣：乾燥氮
經由HPLC的測量法是以下列任一方法將含有目的化合物的混合液進行樣本調製，根據上述分析條件進行。 樣本調製法1：將含有目的化合物的混合液以乙腈稀釋。 樣本調製法2：將含有目的化合物的混合液以乙腈與丙胺以9比1的比例混合的混合液稀釋。 樣本調製法3：將含有目的化合物的混合液以甲醇稀釋。 樣本調製法4：將含有目的化合物的混合液以甲醇與水以4比1的比例混合的混合液稀釋。
反應轉換率的計算是使用經由HPLC分析所計算的原料的面積值與目的物的面積值、或原料的面積值與原料的丙醯胺體的面積值與目的物的面積值、或反應前的原料的面積值與反應後的原料的面積值，根據下列任一式進行。 式1：反應轉換率（%）＝目的物的面積值／（原料的面積值+目的物的面積值）×100 式2：反應轉換率（%）＝目的物的面積值／（原料的面積值+原料的丙醯胺體的面積值+目的物的面積值）×100 式3：反應轉換率（%）＝100－（反應後的原料的面積值／反應前的原料的面積值×100）
實施例1 化合物4：（2－［［（2S）－2－［苄氧基羰基（乙基）胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image102
在以氮置換的反應釜，室溫下加入化合物2（4.60kg）及化合物3（1.92kg），之後加入2－MeTHF（22.8kg）攪拌。設定反應釜的外溫為10℃，加入DIPEA（6.15kg）後，滴入T3P（50 w／w% 2－MeTHF溶液，13.45kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌5小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法2），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.6%（反應轉換率的算式2）。設定反應釜的外溫為10℃，邊攪拌邊滴入5%碳酸鈉水溶液（26.6kg），之後加入水（6.9kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌20分鐘後，從反應釜排出水層。同樣在外溫25℃以5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（34.5kg×3）、5%碳酸鈉水溶液（34.5kg）洗淨所得的有機層。將所得的有機層收集於保存容器，合併以2－MeTHF（25.6kg）洗淨反應釜的洗淨液做為保存溶液，收集於保存容器。在以氮置換的反應釜，邊以2－MeTHF（1.7kg）洗淨保存容器內，邊加入上述保存溶液。設定反應釜的外溫為50℃，進行減壓濃縮至液體量成為約12L。將所得的殘渣收集於保存容器，合併以2－MeTHF（8.5kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物4的2－MeTHF溶液（17.8kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.500分（HPLC分析條件：方法1）
實施例2 化合物5：（2－［［（2S）－2－（乙基胺基）－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image104
在以氮置換的反應釜，加入實施例1所得的含有化合物4的2－MeTHF溶液（16.9kg）、2－MeTHF（8.6kg）後，加入5% Pd／C（1.78kg，50%含水品）。設定反應釜的外溫為25℃，以氫加壓至反應釜的內壓成為0.18MPaG。1小時後，確認內壓未變動後，在氮置換後，再以氫加壓至0.18MPaG，攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。使反應容器內以氮置換後，加壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（10.8kg）洗淨反應釜與過濾機後，將濾液與洗淨液作為保存溶液，收集於保存容器。在外溫40℃使所得的濾液及洗淨液減壓濃縮至液體量成為約5L。合併以2－MeTHF（8.5kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物5的2－MeTHF溶液（12.4kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.389分（HPLC分析條件：方法1）
實施例3 化合物7：（（2S）－2－［［（1S）－2－［（2－叔丁氧基－2－側氧基－乙基）－甲基－胺基］－2－側氧基－1－（p－甲苯基甲基）乙基］－乙基－胺甲醯基）氮雜環丁烷－1－羧酸苄酯）的合成
Figure 02_image106
在以氮置換的反應釜，邊攪拌邊以2－MeTHF（8.0kg）洗淨及加入實施例2所得的含有化合物5的2－MeTHF溶液（12.3kg）、與化合物6（2.92kg）溶解於2－MeTHF（3.87kg）的溶液。設定反應釜的外溫為10℃，邊攪拌邊加入DIPEA（5.35kg）後，滴入T3P（1.6 M 2－MeTHF溶液，15.53kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌反應混合物2小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.6%（反應轉換率的算式1）。設定反應釜的外溫為10℃，於反應混合物邊攪拌邊加入5%碳酸鈉水溶液（25.2kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌10分鐘後，停止攪拌，從反應釜排出水層。以5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（33.2kg）洗淨有機層2次後，以5%碳酸鈉水溶液（33.2kg）洗淨。將有機層收集於保存容器，合併以2－MeTHF（25.6kg）洗淨反應釜的洗淨液作為保存溶液，收集於保存容器。在以氮置換的反應釜，邊以2－MeTHF（1.7kg）洗淨保存容器內邊加入上述保存溶液。設定反應釜的外溫為50℃，邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約12L。合併所得殘渣及以2－MeTHF（8.5kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物7的2－MeTHF溶液（18.9kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.065分（HPLC分析條件：方法1）
實施例4 化合物8：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image108
在以氮置換的反應釜，邊以2－MeTHF（6.9kg）洗淨保存容器邊加入實施例3所得的含有化合物7的2－MeTHF溶液（18.7kg）。在反應釜加入5% Pd／C（1.74kg，50%含水品）。設定反應釜的外溫為25℃，以氫加壓至反應釜的內壓成為0.18MPaG。攪拌50分鐘後，確認內壓未變動後，以氮置換後以氫加壓至0.18MPaG，攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。使反應容器內以氮置換後，加壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（10.6kg）洗淨反應釜與過濾機後，將濾液與洗淨液作為保存溶液，收集於保存容器。在外溫40℃使所得的濾液及洗淨液減壓濃縮至液體量成為約6L。合併殘渣、及以2－MeTHF（8.5kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物8的2－MeTHF溶液（14.0kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.538分（HPLC分析條件：方法1）
實施例5 化合物10：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［苄氧基羰基（甲基）胺基］丙醯基］－氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image110
在以氮置換的反應釜，依序加入實施例4所得的含有化合物8的2－MeTHF溶液（13.9kg）、化合物9（2.31kg）、2－MeTHF（10.4kg）。設定反應釜的外溫為10℃，邊攪拌邊加入DIPEA（4.61kg）後，滴入T3P（1.6 M 2－MeTHF溶液，12.15kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌反應混合物1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為96.8%（反應轉換率的算式1）。設定反應釜的外溫為10℃，於反應混合物邊攪拌邊加入5%碳酸鈉水溶液（24.3kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌10分鐘後，停止攪拌，從反應釜排出水層。以5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（32.4kg）洗淨有機層2次後，以5%碳酸鈉水溶液（32.4kg）洗淨。在所得的有機層加入2－MeTHF（25.6kg）。設定反應釜的外溫為50℃，邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約12L後，將殘渣收集於保存容器。合併以2－MeTHF（8.5kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物10的溶液（19.0kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.004分（HPLC分析條件：方法1）
實施例6 化合物11：（2－［［（2S）－2－［乙基－［（2S）－1－［（2S）－2－（甲基胺基）丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image112
在以氮置換的反應釜，依序加入實施例5所得的含有化合物10的溶液（18.8kg）、2－MeTHF（7.0kg）。在反應釜加入5% Pd／C（1.70kg，50%含水品）。設定反應釜的外溫為25℃，以氫加壓至反應釜的內壓成為0.18MPaG。1小時40分鐘後，確認內壓未變動，以氮置換後以氫加壓至0.18MPaG，攪拌2小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。使反應釜內以氮置換後，加壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（10.3kg）洗淨反應釜與過濾機後，收集濾液與洗淨液作為保存溶液。在外溫40℃使所得的濾液及洗淨液進行減壓濃縮至液體量成為約7L。合併殘渣、及以甲苯（10.4kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物11的溶液（16.7kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.510分（HPLC分析條件：方法1）
實施例7 化合物13：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－（苄氧基羰基胺基）－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image114
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入實施例6所得的含有化合物11的溶液（16.5kg）、2－MeTHF（2.12kg）。之後，在反應釜室溫下依序加入化合物12（2.52kg）溶解於2－MeTHF（8.1kg）的溶液、2－MeTHF（8.1kg）、乙腈（3.1kg）。室溫下邊攪拌邊加入DIPEA（4.51kg）後，設定反應釜的外溫為25℃，依序加入HATU（4.52kg）、2－MeTHF（0.3L）後，在25℃攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。在反應釜加入N－甲基咪唑（0.65kg），再邊攪拌邊加入5%碳酸鈉水溶液（23.9kg）後，攪拌1小時。之後，加入2.5%氨水溶液（23.9kg），攪拌30分鐘後，從反應釜排出水層。所得有機層以2.5%氨水溶液（31.9kg）、10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（31.9kg×2）、3%磷酸氫二鉀水溶液（31.9kg）洗淨。在所得有機層加入2－MeTHF（25.6kg）。設定反應釜的外溫為50℃，邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約12L。合併殘渣及以丙酮（7.9kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物13的溶液（18.2kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.235分（HPLC分析條件：方法1）
化合物11與化合物12的縮合反應（實施例7的反應條件的檢討） 檢討在化合物11與化合物12的縮合反應的溶劑。縮合反應經由HPLC分析追蹤。產率經由HPLC分析求得的面積%（Area%）計算。
Figure 02_image116
實施例7－1 化合物13：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－（苄氧基羰基胺基）－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成（溶劑的檢討） 將實施例6所得的含有化合物11（50.69mg（0.100mmol））的溶液（72.62mg）加入反應容器，在外溫60℃進行減壓濃縮乾燥。之後，在反應容器加入化合物12（32.50mg（0.122mmol）），室溫下加入2－MeTHF（0.35mL）。室溫下邊攪拌邊加入DIPEA（58.3mg（0.451mmol））後，設定反應容器的外溫為25℃，加入HATU（58.37mg（0.154mmol））後，在25℃攪拌4小時。在反應容器加入N－甲基咪唑（8.17mg（0.099mmol）），再邊攪拌邊加入5%碳酸鈉水溶液（300μL）後攪拌2小時30分鐘。之後以棉條過濾去除不溶物後，排出水層。在所得的有機層加入2.5%氨水溶液（300μL），攪拌5分鐘後，排出水層。以2.5%氨水溶液（320μL）、10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（320μL×2）、3%磷酸氫二鉀水溶液（320μL）洗淨所得的有機層。使所得的有機層在外溫60℃進行減壓濃縮乾燥。將所得殘渣以HPLC分析。使用標準品的HPLC分析結果，所得化合物13為56.77mg（75.1%產率）。 化合物13的LCMS （ESI）：滯留時間：4.012分，m／z＝750 ［M+H］ +（LCMS分析條件：方法 1） 經由HPLC分析的滯留時間：4.261分（HPLC分析條件：方法1）
使用4－甲基四氫吡喃、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、或甲氧苯作為溶劑，取代在上述化合物13的合成法（溶劑的檢討）所使用的2－MeTHF之情形，結果顯示於下表。
［表4］ 化合物13的製造
實施例編號 溶劑 產率（%）
實施例7－1 2－MeTHF 75
實施例7－2 4－甲基四氫吡喃 63
實施例7－3 碳酸二甲酯 66
實施例7－4 乙酸乙酯 62
實施例7－5 甲氧苯 60
由此等結果顯示，除了2－MeTHF以外，4－甲基四氫吡喃、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、或甲氧苯為適合於使用HATU的縮合反應的溶劑。顯示除了2－MeTHF以外，4－甲基四氫吡喃、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、或甲氧苯為適合於使化合物11與化合物12縮合製造化合物13的溶劑。特別是從目的物產率的觀點，顯示2－MeTHF為適合的溶劑。
實施例8 化合物15：（（2,3,4,5,6－五氟苯基）（2S）－4－甲基－2－［甲基（2－三甲基矽基乙氧基羰基）胺基］戊酸酯）的合成
Figure 02_image118
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入化合物14（3.0kg）、乙酸異丙酯（13.7kg）、及DMF（18.3kg）。室溫下邊攪拌邊依序加入五氟苯酚（2.38kg）溶解於乙酸異丙酯（2.8kg）的溶液、乙酸異丙酯（0.6kg）。設定反應釜的外溫為0℃，在反應釜加入1－（3－二甲基胺基丙基）－3－乙基碳二亞胺鹽酸鹽（2.48kg）。以1小時使反應釜的外溫升溫至25℃後，在外溫25℃攪拌2小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認原料化合物14為未檢出（反應轉換率的算式3）。設定反應釜的外溫為0℃，加入0.5M鹽酸水溶液（19.4kg）。設定反應釜的外溫為25℃後攪拌10分鐘，停止攪拌後，從反應釜排出水層。以0.5M鹽酸水溶液（27.5kg）洗淨所得的有機層。在所得的有機層加入5%碳酸鉀水溶液（27.5kg×2）之後加入DMF（2.8kg）。攪拌反應混合物10分鐘，停止攪拌後，從反應釜排出水層。以5%碳酸鉀水溶液（27.5kg）、之後10%氯化鈉水溶液（27.5kg）洗淨所得有機層。加入乙酸異丙酯（27.6kg）後，在外溫40℃進行減壓濃縮至液體量成為約8L。合併殘渣、及以丙酮（8.7kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物15的溶液（16.2kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：6.175分（HPLC分析條件：方法2）
實施例9 化合物16：（2－［［（2S）－2－［乙基－［（2S）－1－［（2S）－2－［甲基－［（2S,3S）－3－甲基－2－［［（2S）－4－甲基－2－［甲基（2－三甲基矽基乙氧基羰基）胺基］戊醯基］胺基］戊醯基］胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image120
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入實施例8所得的含有化合物15的溶液（7.4kg）、實施例7所得的含有化合物13的溶液（9.0kg）、乙酸異丙酯（4.0kg）、及N－甲基嗎啉（2.38kg）。在反應釜加入5% Pd／C（0.83kg，50%含水品）後，設定反應釜的外溫為25℃，以氫加壓至反應釜的內壓成為0.18MPaG。1小時後，確認內壓未變動後，以氫加壓至0.18MPaG，再攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。使反應釜內以氮置換後，加壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（10.0kg×2）洗淨反應釜內與過濾機後，合併濾液與洗淨液獲得保存溶液（第一批次）。
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入實施例8所得的含有化合物15的溶液（7.4kg）、實施例7所得的含有化合物13的溶液（9.0kg）、乙酸異丙酯（4.0kg）、及N－甲基嗎啉（2.38kg）。在反應釜加入5% Pd／C（0.83kg，50%含水品）後，設定反應釜的外溫為25℃，以氫加壓至反應釜的內壓成為0.18MPaG。1小時後，確認內壓未變動後，以氫加壓至0.18MPaG，再攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。使反應釜內以氮置換後，加壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（10.0kg×2）洗淨反應釜內與過濾機後，合併濾液與洗淨液獲得保存溶液（第二批次）。
在以氮置換的反應釜，加入上述各保存溶液及2－MeTHF（1.8kg），在外溫40℃進行減壓濃縮至液體量成為約20L。加壓過濾濃縮的殘渣。以2－MeTHF（8.5kg×2）洗淨反應釜內與過濾機後，合併濾液與洗淨液作為保存溶液，收集於保存容器。在以氮置換的反應釜，加入上述保存溶液及2－MeTHF（3.1kg）。設定反應釜的外溫為25℃，邊攪拌邊依序加入5%碳酸鉀水溶液（25.9kg）與4－二甲基胺基吡啶（0.96kg）。30分鐘後停止攪拌，從反應釜排出水層。以5%硫酸氫鉀水溶液（34.1kg×2）、5%碳酸鉀水溶液（34.1kg）洗淨有機層2次。加入2－MeTHF（26.5kg），在外溫50℃進行減壓濃縮至液體量成為約12L。合併所得的殘渣、及以2－MeTHF（8.5kg）洗淨反應釜內的洗淨液，獲得含有化合物16的溶液（19.0kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：5.964分（HPLC分析條件：方法2）
實施例9－1（使用2－MeTHF取代在實施例9所使用的乙酸異丙酯的情形） 化合物16：（2－［［（2S）－2－［乙基－［（2S）－1－［（2S）－2－［甲基－［（2S,3S）－3－甲基－2－［［（2S）－4－甲基－2－［甲基（2－三甲基矽基乙氧基羰基）胺基］戊醯基］胺基］戊醯基］胺基）丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image122
在反應容器加入實施例7所得的含有化合物13的保存溶液（482.7mg），進行減壓濃縮，獲得含有化合物13的殘渣。在反應容器，室溫下依序加入含有化合物15的殘渣（91.2mg，81.2wt%）及2－MeTHF（1000μL）。在反應容器加入5% Pd／C（29.8mg，50%含水品）後，設定外溫為25℃，進行經由氫氣的脫氣置換，攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），進行HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。過濾反應混合物，以2－MeTHF（400μL×2）洗淨殘渣。設定含有濾液的反應容器的外溫為25℃，邊攪拌邊依序加入5%碳酸鉀水溶液（440μL）及4－二甲基胺基吡啶（16.6mg）。30分鐘後停止攪拌，排出水層。以5%硫酸氫鉀水溶液（440μL×2）、5%碳酸鉀水溶液（440μL×2）洗淨有機層。使所得的有機層減壓濃縮，獲得含有化合物16的殘渣（113.3mg）。取得的殘渣以乙腈稀釋，進行LCMS分析（方法2；化合物16的滯留時間：5.573分，m／z＝910 ［M+Na］ +）。使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析（產率：58%）。
實施例9－2（使用碳酸二甲酯取代實施例9所使用的乙酸異丙酯的情形） 化合物16：（2－［［（2S）－2－［乙基－［（2S）－1－［（2S）－2－［甲基－［（2S,3S）－3－甲基－2－［［（2S）－4－甲基－2－［甲基（2－三甲基矽基乙氧基羰基）胺基］戊醯基］胺基］戊醯基］胺基）丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成 在反應容器加入實施例7所得的含有化合物13的保存溶液（477.4mg），進行減壓濃縮，獲得含有化合物13的殘渣。在反應容器，室溫下依序加入含有化合物15的殘渣（92.0mg，81.2wt%）及碳酸二甲酯（1000μL）。在反應容器加入5% Pd／C（29.7mg，50%含水品）後，設定外溫為25℃，進行經由氫氣的脫氣置換，攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），進行HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。過濾反應混合物，殘渣以碳酸二甲酯（400μL×2）洗淨。設定含有濾液的反應容器的外溫為25℃，邊攪拌邊依序加入5%碳酸鉀水溶液（880μL）及4－二甲基胺基吡啶（17.1mg）。30分鐘後停止攪拌，排出水層。有機層以5%硫酸氫鉀水溶液（880μL×2）、5%碳酸鉀水溶液（880μL×2）洗淨。使所得的有機層進行減壓濃縮，獲得含有化合物16的殘渣（107.3mg）。取得的殘渣以乙腈稀釋，進行LCMS分析（方法2；化合物16的滯留時間：5.579分，m／z＝910 ［M+Na］ +）。使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析（產率：62%）。
實施例9－3（使用甲氧苯取代實施例9所使用的乙酸異丙酯的情形） 使用碳酸二甲酯、苯乙醚作為溶劑，取代化合物16在上述合成法所使用的2－MeTHF的情形，結果顯示於下表。
［表5］ 化合物16的製造
實施例編號 溶劑 產率（%）
實施例9－1 2－MeTHF 58
實施例9－2 碳酸二甲酯 62
實施例9－3 甲氧苯 78
實施例10 化合物17：（2－［［（2S）－2－［乙基－［（2S）－1－［（2S）－2－［甲基－［（2S,3S）－3－甲基－2－［［（2S）－4－甲基－2－（甲基胺基）戊醯基］胺基］戊醯基］胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image124
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入實施例9所得的含有化合物16的溶液（18.8kg）、2－MeTHF（5.8kg）。設定反應釜的外溫為47℃，以1小時加入四丁基氟化銨（1M THF溶液，17.6kg）。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認原料的化合物16為未檢出（反應轉換率的算式1）。停止攪拌後，將反應混合物平分為二。在分出的反應混合物加入乙酸異丙酯（9.1kg），設定反應釜的外溫為25℃，邊攪拌邊以5%碳酸鉀水溶液（10.3kg×3）洗淨有機層。所得的有機層為保存溶液保存。分出的另一份的反應混合物也進行相同操作，合併所得的有機層，進行減壓濃縮至液體量成為約12L。合併所得殘渣、及以2－MeTHF（8.5kg）洗淨反應釜內的洗淨液，獲得含有化合物17的溶液（12.6kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：3.057分（HPLC分析條件：方法1）
實施例11 化合物19：（（3S）－3－［苄氧基羰基（甲基）胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image126
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入化合物18（4.78kg）、2－MeTHF（23.8kg）。設定反應釜的外溫為10℃，邊攪拌反應混合物邊依序加入DIPEA（3.22kg）、二甲基胺－THF溶液（2 M，THF溶液，5.49kg），攪拌30分鐘。加入T3P （50%w／w 2－MeTHF溶液，8.64kg）後，設定反應釜的外溫為25℃，攪拌6小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法3），經由HPLC分析確認反應轉換率為96.2%（反應轉換率的算式1）。設定反應釜的外溫為10℃，在反應混合物加入10%檸檬酸一水合物水溶液（28.7kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌10分鐘後，停止攪拌，從反應釜排出水層。以10%檸檬酸一水合物水溶液（28.7kg×2）及5%碳酸鈉水溶液（28.7kg×3）洗淨所得的有機層。在所得的有機層加入2－MeTHF（26.0kg），在外溫60℃進行減壓濃縮至液體量成為約7L。合併殘渣、及以2－MeTHF（6.8kg×2）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物19的溶液（19.8kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：3.510分（HPLC分析條件：方法3）
實施例12 化合物20：（（3S）－4－（二甲基胺基）－3－（甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image128
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入5% Pd／C（1.31kg，50%含水品）、實施例11所得的含有化合物19的溶液（19.8kg）、2－MeTHF（6.0kg）。設定反應釜的外溫為25℃，以氫加壓至反應釜的內壓成為0.18MPaG。攪拌2小時後，確認內壓未變動後，以氫加壓反應釜至0.18MPaG，再攪拌1.5小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為100%（原料未檢出）（反應轉換率的算式1）。使反應釜內以氮置換後，加壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（11.3kg×3）洗淨反應釜內與過濾機後，濾液與洗淨液作為保存溶液，收集於保存容器。在氮置換的反應釜，加入上述保存溶液、及2－MeTHF（0.4kg），在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約4L。合併殘渣、及以2－MeTHF（6.8kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物20的溶液（10.4kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：1.560分（HPLC分析條件：方法3）
實施例13 化合物22：（（3S）－3－［［（2S）－2－［苄氧基羰基（甲基）胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image130
加入實施例12所得的含有化合物20的溶液（10.3kg），在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約10L。在室溫加入化合物21（61 w／w% MeTHF溶液，4.97kg）、2－MeTHF（1.0L）、乙腈 （2.8kg）。使外溫冷卻至10℃，依序加入DIPEA（4.93kg）、HATU （4.95kg）後，使外溫升溫至25℃。將反應混合物在25℃攪拌4小時後，對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.3%（反應轉換率的算式1）。在反應釜依序加入CPME（4.0kg）、5%碳酸鉀水溶液（3.5kg）、N－甲基咪唑（712g），攪拌30分鐘。然後加入2.5%氨水溶液（14.1kg）及2－MeTHF（3.9kg），攪拌10分鐘後，排出水層。以2.5%氨水溶液（17.6kg）、10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（17.6kg×3）、5%碳酸鉀水溶液（17.6kg）洗淨所得的有機層。在外溫40℃邊攪拌所得的有機層邊進行減壓濃縮至液體量成為約9L。合併加入以2－MeTHF（13.6kg）洗淨的洗淨液，獲得含有化合物22的溶液（21.6kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.356分（HPLC分析條件：方法3）
化合物20與化合物21的縮合反應（實施例13的反應條件的檢討） 檢討在化合物20與化合物21的縮合反應的溶劑。縮合反應經由HPLC分析追蹤。產率經由HPLC分析所求得的面積%（Area%）、及由qNMR的測量值計算。
實施例13－1（使用甲氧苯取代在實施例13所使用的2－MeTHF及乙腈的情形） 化合物22：（（3S）－3－［［（2S）－2－［苄氧基羰基（甲基）胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image132
在反應容器，依序加入實施例12所得的含有化合物20的溶液（590.9mg）、化合物21（61w／w% 2－MeTHF溶液，252.7mg），進行減壓濃縮，獲得含有化合物20、及21的殘渣。室溫下在反應容器加入甲氧苯（800μL），使殘渣溶解。使外溫冷卻至10℃，依序在反應混合物加入DIPEA（334μL）、HATU （248.2mg）後，使外溫升溫至25℃。在25℃攪拌反應混合物5小時後，對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為97.0%（反應轉換率的算式1）。設定外溫為10℃，依序在反應容器加入N－甲基咪唑（34.6μL）、5%碳酸鉀水溶液（200μL），設定外溫為25℃攪拌30分鐘。然後，加入2.5%氨水溶液（800μL）與甲氧苯（260μL），攪拌10分鐘後，排出水層。以2.5%氨水溶液（1000μL）、10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（1000μL×3）洗淨所得的有機層。在所得的有機層加入溶劑（甲氧苯（260μL）），以10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（1000μL×1）、5%碳酸鉀水溶液（1000μL×2）洗淨。使所得的有機層進行減壓濃縮，獲得含有化合物22（175.7 mg，產率：82%）的殘渣。 LCMS （ESI）：滯留時間：4.269分，m／z＝526 ［M+Na］ +（LCMS分析條件  方法 3） 產率：82%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
使用碳酸二甲酯、乙酸乙酯、或2－MeTHF作為溶劑取代在實施例13－1的化合物22的合成法（溶劑的檢討）所使用的甲氧苯的情形，結果顯示於下表。
［表6］ 化合物22的製造
實施例編號 溶劑 產率（%）
實施例13－1 甲氧苯 82
實施例13－2 碳酸二甲酯 67
實施例13－3 乙酸乙酯 81
實施例13－4 2－MeTHF 64
由此等結果顯示，甲氧苯、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、及2－MeTHF，取代乙腈，為適合於化合物22的製造的溶劑。特別顯示，當使用甲氧苯、或乙酸乙酯作為溶劑時，從目的物產率的觀點，是適合者。
實施例14 化合物23：（（3S）－3－［［（2S）－2－環戊基－2－（甲基胺基）乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image134
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入5% Pd／C（1.26kg，50%含水品）、實施例13所得的含有化合物22的溶液（21.0kg）、2－MeTHF（5.1kg）。設定反應釜的外溫為25℃，以氫加壓至反應容器的內壓成為0.18MPaG。攪拌40分鐘後，確認內壓未變動後，以氫加壓反應釜至0.18MPaG，再攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為100%（原料未檢出）（反應轉換率的算式1）。使反應釜內以氮置換後，加壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（10.9kg×4，5.4kg）洗淨反應釜內與過濾機後，收集濾液與洗淨液作為保存溶液。在外溫60℃邊攪拌所得的濾液及洗淨液邊進行減壓濃縮，至反應混合物的液體量成為約6L。合併殘渣、及以2－MeTHF（6.8kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物23的溶液（11.8kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.297分（HPLC分析條件：方法3）
實施例15 化合物25：（（3S）－3－［［（2S）－2－環戊基－2－［甲基－［1－［（2,2,2－三氟乙醯基）胺基］環戊烷羰基］胺基］乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image136
在以氮置換的反應釜，室溫下加入化合物24（3.76kg）、2－MeTHF（13.0kg）。設定反應釜的外溫為10℃，依序加入DIPEA（5.39kg）、實施例14所得的含有化合物23的溶液（11.7kg）、T3P（50% 2－MeTHF溶液，14.1kg）、及DMAP（2.04kg）。設定反應釜的外溫為50℃，攪拌4小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.0%（反應轉換率的算式1）。設定反應釜的外溫為10℃，加入5%碳酸鈉水溶液（25.3kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌30分鐘後，停止攪拌，從反應釜排出水層。然後，設定反應釜的外溫為15℃，加入5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（25.3kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌10分鐘後，停止攪拌，從反應釜排出水層。以5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（25.3kg）、5%碳酸鈉水溶液（25.3kg）洗淨所得的有機層。加入2－MeTHF（26.0kg），在外溫60℃進行減壓濃縮至液體量成為約10L。合併殘渣、以2－MeTHF（4.5kg）與MeOH（2.1kg）的混合溶劑洗淨反應釜的洗淨液、及以2－MeTHF（6.8kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物25的溶液（22.6kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：6.166分（HPLC分析條件：方法3）
實施例16 化合物26：（（3S）－3－［［（2S）－2－［（1－胺基環戊烷羰基）－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image138
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入實施例15所得的含有化合物25的溶液（22.4kg）、2－MeTHF（0.76kg）。設定反應釜的外溫為－20℃，邊攪拌邊加入LiBH 4（10w／w% THF溶液，3.67kg）後，攪拌2小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法4），經由HPLC分析確認反應轉換率為100%（原料未檢出）（反應轉換率的算式1）。在外溫－20～－30℃以3小時在反應釜滴入2,2,2－三氟乙醇（16.5kg）。然後，以1小時使反應釜的外溫升溫至0℃後，在外溫0℃再攪拌1小時。在反應釜加入20%氯化銨水溶液（14.3kg），攪拌13小時後，停止攪拌，從反應釜排出水層。設定反應釜的外溫為10℃，加入三氟乙酸（1.88kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌1小時。合併所得的反應混合物、及以2－MeTHF（6.7kg）洗淨反應釜的洗淨液，收集於保存容器。在以氮置換的另一反應釜，室溫下加入2M氫化鈉水溶液（61.9kg），設定反應釜的外溫為10℃。對於這些，以70分鐘滴入上述收集於保存容器的反應混合物後，加入2－MeTHF（0.6kg），設定反應釜的外溫為25℃。攪拌10分鐘後，停止攪拌，從反應釜排出水層。以2M氫氧化鈉水溶液（47.6kg×2）、10%磷酸氫二鉀水溶液（23.8kg）洗淨所得的有機層。在外溫40℃使所得的有機層進行減壓濃縮至液體量成為約40L。在所得的濃縮液加入2－MeTHF（30.5kg）後，以2.5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（34kg）、常水（34kg）洗淨有機層，在水層萃取目的物。以2－MeTHF（48.9kg）與庚烷（3.9kg）的混合液洗淨合併的水層2次後，加入2－MeTHF（53.8kg），邊攪拌邊加入15%碳酸鈉水溶液（15.2kg）。排出水層後，以5%磷酸氫二鉀水溶液（31.5kg）洗淨有機層。在所得的有機層加入2－MeTHF（25.9kg）後，在外溫40℃進行減壓濃縮至反應混合液的液體量成為約8L。在所得的殘渣加入2－MeTHF（9.8kg），在外溫40℃進行減壓濃縮至反應混合液的液體量成為約8L。合併殘渣、及以乙腈（6.2kg×2）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物26的溶液（19.3kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.725分（HPLC分析條件：方法3）
實施例15－1 化合物25a：N 2－｛（2S）－2－［（1－｛［（苄氧基）羰基］胺基｝環戊烷－1－羰基）（甲基）胺基］－2－環戊基乙醯基}－N,N,N 2－三甲基－L－α－天冬醯胺酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image140
在反應容器室溫下依序加入化合物23 HCl鹽（1.00g）、乙腈（10.01mL）。之後，在室溫邊攪拌邊加入DIPEA（2.72mL）後，加入化合物24a（1.74g）、HATU（2.75g），在50℃攪拌6小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），進行HPLC分析確認反應轉換率為99.7%（反應轉換率的算式1）。在反應容器加入N－甲基咪唑（0.78mL）、自來水（3.99mL）後，攪拌1小時。之後，冷卻至25℃後攪拌14小時。過濾反應混合物，以乙腈／水混合液（8：3 （v／v），5.33mL）洗淨殘渣。使濾過的固體減壓乾燥，獲得化合物25a（1.27g）。 將取得的固體稀釋於乙腈，進行HPLC分析（方法6，化合物25a的滯留時間：6.712分） LCMS（ESI）：滯留時間：6.696分，m／z＝637.29 ［M+Na］ +（LCMS分析條件      方法6） 產率：84%
實施例16－1 化合物26：N 2－｛（2S）－2－［（1－胺基環戊烷－1－羰基）（甲基）胺基］－2－環戊基乙醯基｝－N,N,N 2－三甲基－L－α－天冬醯胺酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image142
在反應容器室溫下加入5% Pd／C（0.85g，50%含水品）與THF（14.04mL）後，，設定外溫為25℃。之後，在反應容器室溫下加入溶解於THF（42.12mL）的化合物25a（3.51g）後，設定外溫為25℃，進行經由氫氣的脫氣置換，攪拌2小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），進行HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。過濾反應混合物，以THF（14.04mL×2）洗淨殘渣。將所得的溶液進行減壓濃縮，獲得含有化合物26的殘渣（7.37g）。使所得的殘渣與所得的殘渣與1,3,5－三甲氧基苯溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析（產率：93%）。 LCMS （ESI）：滯留時間：2.421分，m／z＝503.19 ［M+Na］ +（LCMS分析條件      方法 3）
實施例17 化合物28：（（2S）－2－［［1－［［（1S）－2－［［（1S）－3－叔丁氧基－1－（二甲基胺甲醯基）－3－側氧基－丙基］－甲基－胺基］－1－環戊基－2－側氧基－乙基］－甲基－胺甲醯基］環戊基］胺甲醯基］吡咯啶－1－羧酸苄酯）的合成
Figure 02_image144
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入化合物27（2.65kg）、乙腈（2.9kg）。設定反應釜的外溫為10℃，依序加入實施例16所得的含有化合物26的溶液（19.1kg）、DIPEA（3.17kg）、及2－溴－1－乙基吡啶四氟硼酸鹽（3.36kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌2小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.3%（反應轉換率的算式1）。設定反應釜的外溫為10℃，依序加入CPME（34.1kg）、5%碳酸鈉水溶液（23.6kg）、N－甲基咪唑（0.67kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌40分鐘後，從反應釜排出水層。設定反應釜的外溫為10℃，加入5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（23.6kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌10分鐘後，從反應釜排出水層。以5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（23.6kg×2）、5%碳酸鈉水溶液（23.6kg×2）洗淨所得的有機層後，加入2－MeTHF（26.0kg）。在外溫40℃邊攪拌所得的有機層邊進行減壓濃縮至液體量成為約12L。對所得的殘渣加入THF（19.7kg）後，在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約12L。設定反應釜的外溫為20℃後，在反應釜加入CPME（9.0kg）。在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約12L。在反應釜加入CPME（10.0kg），在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約12L。停止攪拌後，在反應釜加入THF（14.1kg）。合併所得的殘渣、及以THF（5.2kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物28的溶液（28.8kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.189分（HPLC分析條件：方法3）
實施例17－1（使用2－MeTHF取代在實施例17的合成法所使用的乙腈的情形） 化合物28：（（2S）－2－［［1－［［（1S）－2－［［（1S）－3－叔丁氧基－1－（二甲基胺甲醯基）－3－側氧基－丙基］－甲基－胺基］－1－環戊基－2－側氧基－乙基］－甲基－胺甲醯基］環戊基］胺甲醯基］吡咯啶－1－羧酸苄酯）的合成
Figure 02_image146
在反應容器將含有化合物26的保存溶液（1.29g）加入反應容器，在外溫40℃進行減壓濃縮乾燥。之後，在反應容器加入2－MeTHF（0.91mL）、化合物27（126.90mg）。在室溫邊攪拌邊加入DIPEA（0.37mL）後，加入HATU（338.30mg），在室溫攪拌3小時。在反應容器加入2－MeTHF（1.84mL）、5%碳酸鈉水溶液（1.09mL），再加入N－甲基咪唑（30.30μL）後，攪拌30分鐘。排出水層之後，以2.5%氨水溶液（1.09mL）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（1.09mL×2）、5%碳酸鈉水溶液（1.09mL×2）、2.5%氨水溶液（1.09mL×3）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（1.09mL×2）、5%碳酸鈉水溶液（1.09mL×2），洗淨所得的有機層。在外溫40℃使所得的有機層減壓濃縮乾燥，獲得含有化合物28的殘渣（0.19g，產率50.9%）。 LCMS （ESI）：滯留時間：4.178分，m／z＝735 ［M+Na］ +（LCMS分析條件  方法 3） 產率：50.9%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）。
實施例18 化合物29：（（3S）－3－［［（2S）－2－環戊基－2－［甲基－［1－［［（2S）－吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］胺基］乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image148
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入5% Pd／C（1.16kg，50%含水品）、實施例17所得的含有化合物28的溶液（27.4kg）、THF（0.4kg）。設定反應釜的外溫為25℃，以氫加壓至反應釜的內壓成為0.18MPaG。2小時30分鐘後，確認內壓未變動後，在氮置換後，以氫加壓至0.18MPaG，再攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.6%（反應轉換率的算式1）。使反應釜內以氮置換後，加壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（10.0kg×3）洗淨反應釜內與過濾機。在外溫40℃邊攪拌所得的濾液及洗淨液邊進行減壓濃縮至液體量成為約9L。在所得的殘渣加入2－MeTHF（6.9kg），再於外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至反應混合物的液體量成為約9L。再次在所得的殘渣加入2－MeTHF（4.3kg），在外溫40℃進行減壓濃縮至反應混合物的液體量成為約9L，獲得含有化合物29的反應混合物的濃縮液。 經由HPLC分析的滯留時間：2.846分（HPLC分析條件：方法3）
實施例18－1（使用2－MeTHF取代在實施例18的合成法所使用的THF／2－MeTHF的情形） 化合物29：（（3S）－3－［［（2S）－2－環戊基－2－［甲基－［1－［［（2S）－吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］胺基］乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image150
在反應容器加入實施例17所得的含有化合物28（121.49mg）的溶液（1014.92mg），在外溫60℃進行減壓濃縮乾燥。之後，在以氮置換的反應容器，室溫下依序加入2－MeTHF（2081mg）、5% Pd／C（25.89mg，50%含水品）。設定反應容器的外溫為25℃，以氫加壓至反應容器的內壓成為0.18MPaG。7小時後，對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%（反應轉換率的算式1）。使反應容器內以氮置換後，減壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（1041mg×3）洗淨反應容器與桐山漏斗及過濾機。以HPLC分析所得的溶液。使用標準品的HPLC分析的結果，所得的化合物29為91.00mg（92.3%產率）。 化合物29的LCMS （ESI）：滯留時間：2.826分，m／z＝578 ［M+H］ +（LCMS分析條件     方法 3）
實施例19 化合物31：（（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image152
在裝有實施例18所得的含有化合物29的反應混合物的濃縮液之以氮置換的反應釜，室溫下依序加入2－MeTHF（5.0kg）、化合物30（3.08kg）。設定反應釜的外溫為10℃，邊攪拌邊依序加入DIPEA（2.44kg）、T3P （50wt% 2－MeTHF溶液（6.56kg））、2－MeTHF（0.4kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.3%（反應轉換率的算式1）。設定反應釜的外溫為15℃，邊攪拌邊加入5%碳酸鉀水溶液（15.9kg）、N－甲基咪唑（352.4g）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌3小時30分鐘後，從反應釜排出水層。設定反應釜的外溫為20℃，加入10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（14.9kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌15分鐘後，從反應釜排出水層。以10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（14.9kg）洗淨所得的有機層後，在外溫25℃在所得的有機層依序加入乙腈（4.5kg）、MTBE（4.4kg）、庚烷（6.2kg）、及2.5%碳酸鉀水溶液（14.1kg）。攪拌10分鐘後，停止攪拌，從反應釜排出水層。在所得的有機層加入2.5%碳酸鉀水溶液（21.3kg）、乙腈（6.6kg）、及2－MeTHF（2.1kg），攪拌10分鐘，停止攪拌後，從反應釜排出水層。在所得的有機層加入2.5%碳酸鉀水溶液（21.3kg）、及乙腈（6.6kg），攪拌10分鐘，停止攪拌後，從反應釜排出水層。在所得的有機層追加2－MeTHF（26.0kg），在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至反應混合物的液體量成為約9L。在所得的殘渣加入乙酸異丙酯（15.1kg），重覆進行2次減壓濃縮至反應混合物的液體量成為約9L的操作。合併殘渣、及以乙酸異丙酯（7.0kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物31的溶液（16.5kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.978分（HPLC分析條件：方法3）
實施例20 化合物32：（（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸）的合成
Figure 02_image154
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入實施例19所得的含有化合物31的溶液（16.3kg）、乙酸異丙酯（5.7kg）、六甲基二矽氮烷（1.69kg）。設定反應釜的外溫為10℃，邊攪拌邊加入三氟甲烷磺酸三甲基矽酯（1.87kg）。維持外溫為20℃到30℃，攪拌反應混合物1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。設定反應釜的外溫為0℃，在反應釜依序加入2－MeTHF（17.6kg）、5%磷酸氫二鉀水溶液（41.1kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌反應混合物10分鐘後，停止攪拌，從反應釜排出水層。之後以5%磷酸二氫鈉水溶液（41.1kg）洗淨有機層。在所得的有機層邊攪拌邊加入DIPEA（2.39kg）及2－MeTHF（26.0kg）後，在外溫30～33℃進行減壓濃縮至液體量成為約8L。合併殘渣、及以2－MeTHF（6.8kg×2）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物32的溶液（14.7kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.220分（HPLC分析條件：方法3）
實施例20－1（使用2－MeTHF取代在實施例20的合成法所使用的乙酸異丙酯的情形） 化合物32：（（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸）的合成
Figure 02_image156
在反應容器加入實施例19所得的含有化合物31（93.45mg）的溶液（401.94mg），在外溫60℃進行減壓濃縮乾燥。在室溫依序加入2－MeTHF（402mg）、六甲基二矽氮烷（38.6mg）。設定反應容器的外溫為0℃，邊攪拌邊加入三氟甲烷磺酸三甲基矽酯（43.4mg）。設定反應容器的外溫為25℃，攪拌反應混合物1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。設定反應容器的外溫為0℃，在反應容器依序加入2－MeTHF（402mg）、5%磷酸氫二鉀水溶液（0.93mL）。設定反應容器的外溫為室溫，攪拌反應混合物10分鐘後，停止攪拌，從反應容器排出水層。然後，以5%磷酸二氫鈉水溶液（0.93mL）洗淨有機層。在所得的有機層邊攪拌邊加入DIPEA（54.4mg）。以HPLC分析所得的溶液。使用標準品的HPLC分析的結果，所得的化合物32為81.01mg（92.0%產率）。 化合物32的LCMS （ESI）：滯留時間：4.132分，m／z＝921 ［M+H］ +（LCMS分析條件：方法 3）
實施例21 化合物33：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基）－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image158
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入實施例10所得的含有化合物17的溶液（11.9kg）、實施例20所得的含有化合物32的溶液（12.84kg）、及2－MeTHF（3.1kg）。設定反應釜的外溫為10℃，在反應混合物加入DMF（6.4kg）、DIPEA（1.6kg）、及HATU（2.78kg）。維持外溫為20℃到30℃同時攪拌3小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.6%以上（反應轉換率的算式1）。在外溫10℃加入2.5%氨水溶液（19.9kg）後，設定反應釜的外溫為25℃，攪拌10分鐘。停止攪拌，從反應釜排出水層後，在外溫20℃在所得的有機層加入10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（19.9kg）後，設定反應釜的外溫為25℃，攪拌10分鐘。停止攪拌，從反應釜排出水層後，以5%碳酸鈉水溶液（19.9kg）洗淨所得的有機層。在外溫40℃邊攪拌所得的有機層邊進行減壓濃縮至液體量成為約10L。在反應混合物加入2－MeTHF（17.0kg），進行2次在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約10L的操作。合併殘渣、及以2－MeTHF（6.8ｋｇ）洗淨反應釜的洗淨液，作為含有化合物33的溶液（23.9kg），收集於保存容器。 經由HPLC分析的滯留時間：10.272分（HPLC分析條件：方法4）
化合物17與化合物32的縮合反應（實施例21的反應條件的檢討） 檢討在化合物17與化合物32的縮合反應的溶劑。縮合反應經由HPLC分析追蹤。產率經由HPLC分析求得的面積%（Area%）及qNMR的測量值所計算。
實施例21－1（在使用2－MeTHF及乙腈取代在的合成法所使用的2－MeTHF及DMF的情形） 化合物33：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基）－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成
Figure 02_image160
室溫下在燒瓶依序加入實施例10所得的含有化合物17的溶液（1017.1mg）、實施例20所得的含有化合物32的溶液（1133.0mg）、及2－MeTHF（313.7μL）。使外溫冷卻至10℃，在反應混合物加入乙腈（575μL）、DIPEA（266μL）、及HATU（238.0mg）後，使外溫升溫至25℃。在25℃攪拌反應混合物3小時後，對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.8%（反應轉換率的算式1）。設定外溫為10℃，加入2.5%氨水溶液（1700μL）後，設定外溫為25℃攪拌10分鐘，排出水層。以10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（1700μL）、5%碳酸鈉水溶液（1700μL）洗淨所得的有機層。獲得含有化合物33的殘渣（622.6mg）。 LCMS （ESI）：滯留時間：10.35分，m／z＝1669 ［M+Na］ +（LCMS分析條件      方法 4） 產率：83%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
實施例21－2（在使用2－MeTHF取代在實施例21的合成法所使用的2－MeTHF及DMF的情形） 化合物33：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基）－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成 室溫下在燒瓶依序加入實施例10所得的含有化合物17的溶液（4062.5mg）、實施例20所得的含有化合物32的溶液（4534.0mg）、及2－MeTHF（1254μL），獲得含有化合物17與化合物31的溶液。在反應容器加入含有化合物17與化合物31的溶液（969.5mg），在外溫40℃進行減壓濃縮，獲得含有化合物17及31的殘渣。室溫下在反應容器加入2－MeTHF（1140μL），使殘渣溶解。使外溫冷卻至10℃，在反應混合物加入DIPEA（106μL）及HATU（94.9mg）後，使外溫升溫至25℃。在25℃攪拌反應混合物3小時後，對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.8%（反應轉換率的算式1）。設定外溫為10℃，加入2.5%氨水溶液（680μL）後，設定外溫為25℃攪拌10分鐘，排出水層。以10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（680μL）、5%碳酸鈉水溶液（680μL）洗淨所得的有機層。使所得的有機層進行減壓濃縮，獲得含有化合物33的殘渣（262.3mg）。 LCMS （ESI）：滯留時間：10.49分，m／z＝1669 ［M+Na］ +（LCMS分析條件      方法 4） 產率：85%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
實施例21－3（在使用甲氧苯取代在實施例21的合成法所使用的2－MeTHF及DMF的情形） 化合物33：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基）－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成 室溫下在燒瓶依序加入實施例10所得的含有化合物17的溶液（4062.5mg）、實施例20所得的含有化合物32的溶液（4534.0mg）、及2－MeTHF（1254μL），獲得含有化合物17與化合物32的溶液。在反應容器加入含有化合物17與化合物32的溶液（969.8mg），在外溫40℃進行減壓濃縮，獲得含有化合物17及32的殘渣。室溫下在反應容器加入甲氧苯（1140μL），使殘渣溶解。使外溫冷卻至10℃，在反應混合物加入DIPEA（106μL）及HATU（97.7mg）後，使外溫升溫至25℃。在25℃攪拌反應混合物3小時後，對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%（反應轉換率的算式1）。設定外溫為10℃，加入2.5%氨水溶液（680μL）後，設定外溫為25℃攪拌10分鐘。在反應容器加入甲氧苯（570μL）與2.5%氨水溶液（340μL），攪拌10分鐘，排出水層。以10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（920μL）、5%碳酸鈉水溶液（920μL）洗淨所得的有機層。使所得的有機層進行減壓濃縮，獲得含有化合物33的殘渣（207.3mg）。 LCMS （ESI）：滯留時間：10.38分，m／z＝1669 ［M+Na］ +（LCMS分析條件      方法 4） 產率：68%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
實施例21－4（在使用碳酸二甲酯取代在實施例21的合成法所使用的2－MeTHF及DMF的情形） 化合物33：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基）－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯）的合成 室溫下在燒瓶依序加入實施例10所得的含有化合物17的溶液（4062.5mg）、實施例20所得的含有化合物32的溶液（4534.0mg）、及2－MeTHF（1254μL），獲得含有化合物17與化合物32的溶液。在反應容器加入含有化合物17與化合物32的溶液（968.4mg），在外溫40℃進行減壓濃縮，獲得含有化合物17及32的殘渣。室溫下在反應容器加入碳酸二甲酯（1140μL），使殘渣溶解。使外溫冷卻至10℃，在反應混合物加入DIPEA（106μL）及HATU（95.2mg）後，使外溫升溫至25℃。在25℃攪拌反應混合物3小時後，對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%（反應轉換率的算式1）。設定外溫為10℃，加入2.5%氨水溶液（680μL）後，設定外溫為25℃攪拌10分鐘。在反應容器加入碳酸二甲酯（1140μL）與2.5%氨水溶液（680μL），攪拌10分鐘，排出水層。以10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（1360μL）、5%碳酸鈉水溶液（1360μL）洗淨所得的有機層。使所得的有機層進行減壓濃縮，獲得含有化合物33的殘渣（264.6mg）。 LCMS （ESI）：滯留時間：10.35分，m／z＝1669 ［M+Na］ +（LCMS分析條件      方法 4） 產率：84%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
實施例21－5及實施例21－6 除了使用乙酸乙酯（實施例21－5）、或乙酸異丙酯（實施例21－6）取代2－MeTHF／乙腈的點外，以與實施例21－1相同的條件合成化合物33。在實施例21－5為76%的產率，在實施例21－6為75%的產率，獲得化合物33。
實施例21－1～21－6的結果顯示於下表。 ［表7］ 化合物33的製造
實施例編號 溶劑 產率（%）
實施例21－1 2－MeTHF／乙腈 83
實施例21－2 2－MeTHF 85
實施例21－3 甲氧苯 68
實施例21－4 碳酸二甲酯 84
實施例21－5 乙酸乙酯 76
實施例21－6 乙酸異丙酯 75
由此等結果發現，使用2－MeTHF與乙腈的混合溶劑、或2－MeTHF、甲氧苯、碳酸二甲酯、乙酸乙酯、或乙酸異丙酯，取代實施例21所使用的2－MeTHF與DMF的混合溶劑的情形，也可以高產率製造化合物33。
實施例22 化合物34：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S－1）－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基）－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸）的合成
Figure 02_image162
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入實施例21所得的含有化合物33的溶液（23.7kg）、2－MeTHF（32.0kg）、六甲基二矽氮烷（3.46kg）。設定反應釜的外溫為0℃，邊攪拌邊加入三氟甲烷磺酸三甲基矽酯（3.99kg）。維持外溫為20℃到30℃同時攪拌3小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.6%以上（反應轉換率的算式1）。設定反應釜的外溫為0℃，在反應混合物加入5%磷酸氫二鉀水溶液（23.8kg）。設定反應釜的外溫為25℃，攪拌10分鐘後，從反應釜排出水層。以含有檸檬酸一水合物（0.57kg）及磷酸氫二鉀（0.88kg）的水溶液（23.3kg×4）洗淨所得的有機層後，再以5%碳酸鈉水溶液（23.8kg）洗淨。在所得的有機層加入2－MeTHF（26.0kg），在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約10L。在所得的殘渣追加THF（13.6kg），在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約10L。之後，追加2－MeTHF（8.5kg），在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約10L。合併在所得的殘渣加入THF（6.8kg）的溶液、及以THF（6.6kg）、2－MeTHF（7.1kg）洗淨反應釜的洗淨液，獲得含有化合物34的溶液（29.0kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：9.215分（HPLC分析條件：方法4）
實施例23 化合物35：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－胺基－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基）－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸）的合成
Figure 02_image164
實施例23使用實施例22所得的含有化合物34的溶液（14.5kg），分兩次實施下列操作。 在以氮置換的反應釜，加入5% Pd／C（756.6g，50%含水品）後，加入THF（7.5kg）。設定反應釜的外溫為25℃。依序加入實施例22所得的含有化合物34的溶液（14.5kg）、THF（0.7kg）。設定反應釜的外溫為25℃，邊攪拌邊以氫加壓至反應釜的內壓成為0.18MPaG。2.5小時後，確認內壓未變動後，以氫加壓反應釜至0.18MPaG，再攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.6%（反應轉換率的算式1）。使反應釜內以氮置換後，加壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（4.9kg×2）洗淨反應釜內與過濾機後，合併濾液與洗淨液，獲得含有化合物34的保存溶液（第一批次）。
在以氮置換的反應釜，加入5% Pd／C（756.6g，50%含水品）後，加入THF（7.5kg）。設定反應釜的外溫為25℃。依序加入實施例22所得的含有化合物34的溶液（14.5kg）、THF（0.7kg）。設定反應釜的外溫為25℃，邊攪拌邊以氫加壓至反應釜的內壓成為0.18MPaG。1小時後，確認內壓未變動後，以氫加壓反應釜至0.18MPaG，再攪拌1小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.6%（反應轉換率的算式1）。使反應釜內以氮置換後，加壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（4.9kg×3）洗淨反應釜內與過濾機後，合併濾液、洗淨液、及上述獲得的第一批次的保存溶液，獲得含有化合物34的保存溶液（60.5kg）。
在以氮置換的反應釜，室溫下依序加入含有化合物34的保存溶液（60.5kg）、2－MeTHF（0.4kg）。在外溫40℃邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約7.3L後，設定外溫為25℃。在所得的殘渣加入乙腈（20.3kg）、2－MeTHF（6.3kg）、及庚烷（35.4kg），攪拌30分鐘。停止攪拌後，將下層收集於保存容器。在所得的下層的有機層加入乙腈（52.7kg）、及DIPEA（1.6kg），獲得含有化合物35的溶液（83.6kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：6.480分（HPLC分析條件：方法4）
實施例23－1（在使用2－MeTHF取代在實施例23的合成法所使用的THF的情形） 化合物35：（2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－胺基－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基）－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸）的合成
Figure 02_image166
在反應容器加入實施例22所得的含有化合物34的溶液（2447.7mg），進行減壓濃縮，獲得含有化合物34的殘渣。在反應容器加入2－MeTHF（2040μL）、5% Pd／C（96.8mg，50%含水品）後，進行經由氫氣的脫氣置換，攪拌4小時。在反應容器加入2－MeTHF（460μL）、5% Pd／C（47.3mg，50%含水品）後，進行經由氫氣的脫氣置換，攪拌4小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.7%（反應轉換率的算式1）。過濾反應混合物，以2－MeTHF（690μL×2）洗淨殘渣。使所得的有機層進行減壓濃縮，獲得含有化合物35的殘渣（670.1mg）。取得的殘渣以乙腈稀釋，進行LCMS分析（LCMS分析條件：方法4：化合物35的滯留時間；滯留時間：6.94分，m／z＝1457［M+H］ +）。使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析（產率：95%）。
實施例24 化合物1：（（5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS）－8－（（S）－sec－丁基）－18－環戊基－29－（3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯乙基）－36－乙基－11－異丁基－N,N,5,6,12,16,19,33－八甲基－35－（4－甲基苄基）－4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37－十一側氧基三十四氫－2H,4H－螺［氮雜環丁烷併［2,1－u］吡咯併［2,1－i］［1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31］十一氮雜環三十四炔－21,1'－環戊烷］－15－羧醯胺）的合成
Figure 02_image168
在以氮置換的反應釜，加入乙腈（21.4kg）、HATU（3.86kg），再加入乙腈（55.0kg）。設定反應釜的外溫為25℃，以0.3～0.4kg／分在反應混合物滴入實施例23所得的含有化合物35的溶液（82.8kg）。實施以乙腈（6.1kg）洗淨，加入潤濕液，攪拌30分鐘。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），經由HPLC分析確認反應轉換率為99.9%（反應轉換率的算式1）。設定反應釜的外溫為30℃，邊攪拌邊進行減壓濃縮至液體量成為約27L。設定反應釜的外溫為25℃，在所得的殘渣加入乙酸乙酯（104.7kg）。在外溫25℃邊攪拌邊加入2.5%氨水溶液（77.8kg），攪拌85分鐘。從反應釜排出水層後，在外溫20℃對所得的有機層邊攪拌邊加入5%硫酸氫鉀一水合物水溶液（89.8kg）。在外溫25℃攪拌12分鐘。從反應釜排出水層後，在外溫25℃以5%磷酸氫二鈉水溶液（89.8kg）、5%氯化鈉水溶液（89.8kg）、及0.5%氯化鈉水溶液（89.8kg×2）洗淨所得的有機層。設定反應釜的外溫為40℃，邊攪拌所得的有機層邊進行減壓濃縮至液體量成為約19L。加壓過濾所得的殘渣，以乙酸乙酯（17.4kg）洗淨反應釜及過濾機後，以乙酸乙酯（17.4kg）洗淨濾液與洗淨液，獲得含有化合物1的溶液（63.1kg）。在含有上述化合物1的保存溶液（63.1kg），加入丙酮（15.3kg），重複進行7次減壓濃縮至液體量成為約8～12L的操作。加壓過濾所得的殘渣，收集作為保存溶液。以丙酮（15.3kg×2）洗淨反應釜及過濾機後，進行加壓過濾，合併洗淨液作為含有化合物1的溶液（51.4kg），收集於保存容器。 經由HPLC分析的滯留時間：18.008分（HPLC分析條件：方法5）
化合物35的環化反應（實施例24的反應條件的檢討） 使用化合物35作為起始原料，檢討在向化合物1的環化反應的縮合劑及溶劑。環化反應經由HPLC分析追蹤。產率使用苯甲酸甲酯作為內部標準品，經由HPLC分析的Area%計算。
Figure 02_image170
Figure 02_image172
實施例24－1 化合物1：（（5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS）－8－（（S）－sec－丁基）－18－環戊基－29－（3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯乙基）－36－乙基－11－異丁基－N,N,5,6,12,16,19,33－八甲基－35－（4－甲基苄基）－4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37－十一側氧基三十四氫－2H,4H－螺［氮雜環丁烷併［2,1－u］吡咯併［2,1－i］［1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31］十一氮雜環三十四炔－21,1'－環戊烷］－15－羧醯胺）的合成（使用HATU作為縮合劑，使用乙腈作為溶劑） 在反應容器秤量化合物35（10.44mg（7.17 μmol））與內部標準品（苯甲酸甲酯，3.60mg（26.44μmol）），以溶劑（乙腈，2mL（200v／w））溶解。在室溫邊攪拌邊加入DIPEA（5.74μL（32.9μmol））。設定反應容器的外溫為25℃，加入縮合劑（HATU，10.39mg（27.3μmol））攪拌30分鐘。以MeCN／丙胺（9：1）的混合液（100μL）稀釋反應液（50μL），調製HPLC分析用的溶液。使用苯甲酸甲酯作為內部標準品的HPLC分析的結果，產率為76%（HPLC分析條件：方法5）。 化合物1的LCMS （ESI）：滯留時間：18.08分，m／z＝1439 ［M+H］ +（LCMS分析條件     方法 5） 化合物35的丙醯胺體的LCMS （ESI）：滯留時間：13.39分，m／z＝1498 ［M+H］ +（LCMS分析條件   方法 5） 環狀二聚體（c－Dimer）的LCMS （ESI）：滯留時間：23.18分，m／z＝2898 ［M+Na］ +（LCMS分析條件 方法 5） 環狀三聚體（c－Trimer）的LCMS （ESI）：滯留時間：25.74分，m／z＝2157 ［M+2H］ 2+（LCMS分析條件      方法 5）
使用多種的縮合劑及溶劑，進行化合物1的合成的結果，顯示於表7。實驗操作根據使用HATU作為縮合劑、使用乙腈作為溶劑時（實施例24－1）。表中的SM為化合物35與化合物35的丙醯胺體的殘存量的總和（HPLC的Area%比）。又，表中的TM為目的物（化合物1），c－Dimer及c－Trimer分別為副產物的環狀二聚體及環狀三聚體，該等的生成量以HPLC測量的Area%比表示（HPLC分析條件：方法5）。經由使用苯甲酸甲酯作為內部標準品的HPLC分析，計算產率。
［表8］
縮合劑 實施例編號 溶劑 SM, TM, c－Dimer, 及c－Trimer的比（%） 產率（%）
SM TM c－Dimer c－Trimer
HATU 實施例24－1 CH 3CN 0.0 83.0 13.9 3.0 76
實施例24－2 CH 2Cl 2 0.0 90.3 7.9 1.7 90
實施例24－3 甲苯 89.2 10.4 0.4 0.0 12
實施例24－4 甲氧苯 0.0 87.0 11.9 1.1 74
實施例24－5 碳酸二甲酯 0.0 86.8 11.3 1.9 71
實施例24－6 2－MeTHF 21.8 64.8 11.9 1.5 54
實施例24－7 MTHP 72.0 25.0 3.0 0.0 23
實施例24－8 AcOEt 0.1 82.1 14.1 3.6 59
實施例24－9 DMF 0.1 77.7 17.8 4.4 52
實施例24－10 NMP 0.0 75.8 19.4 4.8 69
PyBOP 實施例24－11 CH 3CN 0.2 88.0 10.1 1.8 79
實施例24－12 CH 2Cl 2 0.3 92.9 5.6 1.2 89
實施例24－13 甲苯 0.0 86.7 11.7 1.5 57
實施例24－14 甲氧苯 0.0 91.5 7.6 0.8 86
實施例24－15 碳酸二甲酯 0.1 92.3 6.8 0.8 87
實施例24－16 2－MeTHF 0.1 89.6 9.1 1.2 82
實施例24－17 MTHP 0.4 88.3 9.8 1.5 81
實施例24－18 AcOEt 0.4 90.5 7.6 1.5 78
實施例24－19 DMF 0.4 86.1 11.3 2.2 73
實施例24－20 NMP 0.1 86.4 11.8 1.7 78
DMT－MM 實施例24－21 CH 3CN 0.1 83.7 13.7 2.6 78
實施例24－22 甲苯 40.8 47.7 9.2 2.3 32
實施例24－23 甲氧苯 0.0 87.2 11.2 1.6 71
實施例24－24 碳酸二甲酯 0.1 89.1 9.4 1.5 78
實施例24－25 2－MeTHF 3.0 80.6 13.9 2.6 82
實施例24－26 MTHP 23.4 62.4 11.4 2.9 53
實施例24－27 AcOEt 0.0 87.1 11.0 1.9 72
實施例24－28 DMF 0.0 80.8 15.8 3.4 68
實施例24－29 NMP 0.0 80.0 16.4 3.6 70
PyOxim 實施例24－30 CH 3CN 0.4 80.0 15.3 4.3 74
實施例24－31 甲苯 66.7 32.3 1.0 ND 16
實施例24－32 甲氧苯 0.1 92.7 6.6 0.6 70
實施例24－33 碳酸二甲酯 0.3 90.8 7.6 1.4 82
實施例24－34 2－MeTHF 3.6 87.0 8.5 1.0 77
實施例24－35 MTHP 14.8 76.8 7.4 1.0 68
實施例24－36 EtOAc 0.2 90.8 7.8 1.2 81
實施例24－37 DMF 0.8 76.4 17.7 5.0 68
實施例24－38 NMP 0.0 80.4 15.7 3.9 71
從此等結果顯示，考慮向目的物的轉換率高、副產物的生成率低者、且考慮環境負荷，以甲氧苯、碳酸二甲酯、及2－MeTHF作為溶劑為較佳溶劑。縮合劑顯示以HATU、PyBOP、及PyOxim為佳。溶劑與縮合劑的組合顯示以甲氧苯與PyBOP、碳酸二甲酯與PyBOP、及2－甲基四氫呋喃與PyBOP的組合為佳。
提高實施例24－15與實施例24－16的反應規模，進行與化合物1的合成（縮合劑使用PyBOP，溶劑使用2－MeTHF或碳酸二甲酯）的實驗相同的操作。
實施例24－39 化合物1：（（3S,9S,12S,17S,20S,23S,27S,30S,36S）－30－環戊基－3－［2－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］乙基］－10－乙基－23－異丁基－N,N,7,17,18,24,28,31－八甲基－20－［（1S）－1－甲基丙基］－2,5,8,11,16,19,22,25,29,32,35－十一側氧基－9－（p－甲苯基甲基）螺［1,4,7,10,15,18,21,24,28,31,34－十一氮雜三環［34.3.0.0 12,15］三十九烷－33,1'－環戊烷］－27－羧醯胺）的合成
Figure 02_image174
加入實施例23所得的含有化合物35（100.16mg（0.069mmol））的溶液（2152.63mg），在外溫40℃進行減壓濃縮乾燥。在濃縮的殘渣加入2－MeTHF（2150mg）及DIPEA（42.2mg），獲得含有化合物35的溶液。在以氮置換的反應容器加入PyBOP（141.10mg）、2－MeTHF（2150mg）。設定反應容器的外溫為25℃，以4小時在反應混合物滴下含有化合物35的溶液。實施以2－MeTHF（172mg）洗淨，加入潤濕液，攪拌2小時。在外溫25℃邊攪拌邊加入2.5%氨水溶液（2mL），攪拌90分鐘。減壓過濾反應混合物。以2－MeTHF（172mg）洗淨反應容器與桐山漏斗。排出水層後，在外溫25℃邊攪拌所得的有機層邊加入5%硫酸氫鉀一水合物水溶液（2mL）。在外溫25℃攪拌4分鐘。排出水層後，在外溫25℃以5%磷酸氫二鈉水溶液（2mL）、5%氯化鈉水溶液（2mL）、及0.5%氯化鈉水溶液（2mL×2）洗淨所得的有機層。以HPLC分析所得的有機層。使用標準品的HPLC分析的結果，所得化合物1為78.38mg（79.2%產率）。 經由HPLC分析的滯留時間：17.992分（HPLC分析條件：方法5）
在上述使用PyBOP為縮合劑的化合物1的合成法，使用碳酸二甲酯作為溶劑取代使用為溶劑的2－MeTHF的情形，結果顯示如下表。
［表9］
縮合劑 實施例編號 溶劑 SM, TM, c－Dimer, 及c－Trimer的比（%） 產率（%）
SM TM c－Dimer c－Trimer
PyBOP 實施例24－39 2－MeTHF 0.4 98.3 1.6 ＜0.1 79
實施例24－40 碳酸二甲酯 4.4 94.1 1.5 ＜0.1 79
實施例25 化合物1的結晶化：（（5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS）－8－（（S）－sec－丁基）－18－環戊基－29－（3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯乙基）－36－乙基－11－異丁基－N,N,5,6,12,16,19,33－八甲基－35－（4－甲基苄基）－4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37－十一側氧基三十四氫－2H,4H－螺［氮雜環丁烷併［2,1－u］吡咯併［2,1－i］［1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31］十一氮雜環三十四炔－21,1'－環戊烷］－15－羧醯胺）的水合物結晶（C型結晶）的合成 在以氮置換的裝有含有化合物1的溶液的反應釜，設定反應釜的外溫為40℃，加入已過濾的純水（10.9kg）。在丙酮（59.2g）／水（61.2g）的混合液，加入經由與實施例25－1相同操作所得的化合物1的粉碎結晶（10.2g），將所得的懸浮液加入反應釜。以丙酮（59.2g）／水（61.2g）的混合液洗淨裝有懸浮液的容器，並加入反應釜後，攪拌2小時1分鐘。加入已過濾的純水（2.7kg），攪拌7小時10分鐘。再於丙酮（59.2g）／水（61.2g）的混合液，加入經由與實施例25－1相同操作所得的化合物1的粉碎結晶（10.2g），將所得的懸浮液加入反應釜。以丙酮（59.2g）／水（61.2g）的混合液洗淨裝有懸浮液的容器，並加入反應釜後，攪拌12小時40分鐘。加入已過濾的純水（2.7kg），攪拌2小時。使反應釜的外溫以1小時從40℃降溫至25℃後，攪拌反應混合物18小時44分鐘。加壓過濾反應混合物，以已過濾的丙酮（7.5kg）與純水（7.5kg）的混合液洗淨反應釜內與過濾機，並洗淨所得的結晶。以已過濾的純水（17.0kg×2）洗淨所得的結晶，使收集結晶的過濾裝置減壓，將過濾裝置的外溫設定在70℃，使結晶乾燥17小時。再於外溫為室溫～30℃使結晶乾燥27小時。從過濾機收集乾燥粉末，獲得白色粉末（2.6kg）。 經由HPLC分析的滯留時間：18.199分（HPLC分析條件：方法5） 使用XRPD裝置的X光粉末分析（測量方法4）的結果， 在2θ值為4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）被觀測到主要峰。分析結果顯示於圖1。
實施例25－1：在實施例25所使用的晶種的製造實施例 使非晶質狀態的化合物1（122.3mg）溶解於DMSO（0.612mL），將此溶解液（0.015mL）在－20℃冷凍乾燥2日。在所得的冷凍乾燥物加入水－乙腈混合液（3：1，0.015mL），透過在室溫振動攪拌7日，獲得化合物1的水合物結晶（C型結晶）。
化合物1的結晶化的檢討 實施例25－2 化合物1     （（5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS）－8－（（S）－sec－丁基）－18－環戊基－29－（3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯乙基）－36－乙基－11－異丁基－N,N,5,6,12,16,19,33－八甲基－35－（4－甲基苄基）－4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37－十一側氧基三十四氫－2H,4H－螺［氮雜環丁烷併［2,1－u］吡咯併［2,1－i］［1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31］十一氮雜環三十四炔－21,1'－環戊烷］－15－羧醯胺）的非溶劑合物結晶（F型）的合成 將以實施例24相同方法所得的化合物1的水合物結晶（C型結晶）密封裝入7mm×7mm×0.25mm鋁樣本容器，經由以下列條件（X光粉末（XRPD）繞射測量的測量方法2，及熱分析的測量方法2）進行XRD－DSC同時測試，獲得化合物1的非溶劑合物結晶（F型）為測試結束後的樣本。 使用XRPD裝置的X光粉末分析（測量方法2）的結果， 在2θ值為5.370∘、6.934∘、8.940∘、9.838∘、10.771∘、12.181∘、13.525∘、15.179∘、16.202∘、及17.554∘（±0.2∘）被觀測到主要峰。分析結果顯示於圖2。
實施例25－3 化合物1     （（5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS）－8－（（S）－sec－丁基）－18－環戊基－29－（3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯乙基）－36－乙基－11－異丁基－N,N,5,6,12,16,19,33－八甲基－35－（4－甲基苄基）－4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37－十一側氧基三十四氫－2H,4H－螺［氮雜環丁烷併［2,1－u］吡咯併［2,1－i］［1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31］十一氮雜環三十四炔－21,1'－環戊烷］－15－羧醯胺）的DMSO－水合物結晶（A型、B型）的合成 在化合物1的水合物結晶（C型結晶，104.3mg）加入DMSO（0.52mL），透過在室溫以100rpm振動攪拌17小時，獲得粉末狀結晶的標題化合物的DMSO－水合物結晶（33.8mg）。過濾後的粉末狀結晶為DMSO－水合物結晶A型，過濾後在室溫進行減壓乾燥8小時的粉末狀結晶為DMSO－水合物結晶B型。
化合物1的DMSO－水合物結晶（DMSO－水合物結晶A型、及DMSO－水合物結晶B型）分別進行X光粉末繞射測量（測量方法3）。結果顯示於下。
DMSO－水合物結晶A型在2θ值為8.006∘、9.002∘、9.943∘、11.501∘、13.067∘、14.854∘、16.320∘、17.275∘、19.261∘、及20.324∘（±0.2∘）被觀測到主要峰。分析結果顯示於圖3。
DMSO－水合物結晶B型在2θ值為8.223∘、9.594∘、9.976∘、11.879∘、13.841∘、14.572∘、15.934∘、16.350∘、19.805∘、及20.480∘（±0.2∘）被觀測到主要峰。分析結果顯示於圖4。
熱重•差熱分析 將實施例25－3所得的化合物1的DMSO－水合物結晶（DMSO－水合物結晶B型）進行熱分析（測量方法3）。結果顯示於圖5。
1H－NMR測量 將實施例25－3所得的化合物1的DMSO－水合物結晶（DMSO－水合物結晶B型）進行 1H－NMR測量。結果顯示於圖6。
從在熱重•差熱分析的重量變化、及在 1H－NMR測量的化合物1與DMSO峰的積分值面積比，確認DMSO－水合物結晶B型為相對於化合物1含有2.5當量DMSO的DMSO－水合物結晶。
實施例25－4 化合物1     （（5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS）－8－（（S）－sec－丁基）－18－環戊基－29－（3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯乙基）－36－乙基－11－異丁基－N,N,5,6,12,16,19,33－八甲基－35－（4－甲基苄基）－4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37－十一側氧基三十四氫－2H,4H－螺［氮雜環丁烷併［2,1－u］吡咯併［2,1－i］［1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31］十一氮雜環三十四炔－21,1'－環戊烷］－15－羧醯胺）的水合物結晶（C型結晶）的合成 使非晶質狀態的化合物1（293.2mg）室溫下溶解於乙醇（0.586mL）。在此溶液加入水（0.147mL）與以實施例25－1相同方法獲得的化合物1的水合物結晶（C型結晶）的晶種，在室溫攪拌30分鐘。再加入水（0.147mL），室溫下攪拌2小時。再加入水（0.147mL），室溫下攪拌30分鐘後，加入水（0.147mL），室溫下攪拌30分鐘，過濾收集沉澱物，以水洗淨，進行減壓乾燥，獲得粉末狀結晶的化合物1的水合物結晶（C型結晶，256.0mg）。
實施例26 化合物1的水合物結晶（C型結晶）的物化性質的測量 使用以實施例25相同方法獲得的化合物1的水合物結晶（C型結晶），進行X光粉末繞射測量、熱重•差熱分析、水分量的測量、及X光單晶結構分析。 （1） X光粉末繞射測量 以下述方法實施在實施例26所調製的化合物1的水合物結晶（C型結晶）的溫度變化X光粉末繞射測量。 測量裝置：SmartLab System，D／Tex Ultra偵測器，水蒸氣產生裝置HUM－SL（Rigaku社製） 陽極：Cu 管電壓：45 kV 管電流：200 mA 掃瞄範圍：5～30∘ 掃瞄速度：0.7∘／分 取樣寬度：0.02∘ 溫度變化條件：
［表10］
設定溫度（℃） 相對濕度（%） 滯留時間（分）
35.0 75 120
35.0 70 120
35.0 60 120
35.0 50 120
35.0 40 120
35.0 30 120
35.0 20 120
35.0 10 120
35.0 0 120
在相對濕度75%到0%的環境下，確認2θ值的位移在實施例25所得的水合物結晶（C型結晶）的2θ值±0.2∘的範圍內。結果顯示於圖7。
在相對濕度75%的水合物結晶（C型結晶） 的2θ值：7.904∘、8.277∘、8.833∘、9.937∘、10.416∘、11.711∘、12.683∘、13.533∘、13.885∘、15.887∘、16.627∘、17.799∘（±0.2∘）具有繞射峰。
在相對濕度30%的水合物結晶（C型結晶） 的2θ值：7.892∘、8.286∘、8.839∘、9.921∘、10.424∘、11.703∘、12.710∘、13.556∘、13.903∘、15.891∘、16.664∘、17.846∘（±0.2∘）具有繞射峰。
在相對濕度0%的水合物結晶（C型結晶） 的2θ值：7.883∘、8.306∘、8.845∘、9.923∘、10.446∘、11.702∘、12.767∘、13.546∘、13.896∘、15.875∘、16.694∘、17.935∘（±0.2∘）具有繞射峰。
（2）熱重•差熱分析 實施例26所調製的化合物1的水合物結晶（C型結晶）的熱重•差熱分析以熱分析的測量方法4實施。結果顯示於圖8。
（3）水分量的測量 實施例26所調製的化合物1的水合物結晶（C型結晶）的水分量以卡爾－費雪滴定法（Karl Fischer titration） 測量。在實驗室環境下馴化樣本後使用CA－310（Nittoseiko Analytech社製）進行測量。測量結果，化合物1的水合物結晶（C型結晶）的水分量為6.50wt%。 （4）X光單晶結構分析 以下述方法進行實施例26所調製的化合物1的水合物結晶（C型結晶）的X光單晶結構分析。 測量裝置：Rigaku R－AXIS RAPID－II具有VariMax Cu繞射儀（Rigaku社製） 陽極：Cu 管電壓：40 kV 管電流：30 mA 溫度：－180℃ 測量：以考量在結構分析獲得充分的繞射斑點的策略、曝光時間，進行測量。 結構分析：初期結構的確定以直接法（SIR2004，CrystalStructure，Rigaku）進行，結構精密化以全矩陣最小平方法（full－matrix least－squares法）（SHELXL－2017／1，APEX3，Bruker）進行。所有的非氫原子以異方性溫度因子而精密化。水分子的氫原子使用限制條件位於適當的位置，以所鍵結的氧原子的1.5倍大的等方性溫度因子而精密化。其他的氫原子使用騎乘模式（riding model） 位於適當的位置，以所鍵結的非氫原子的1.2倍大的等方性溫度因子而精密化。 結果顯示於圖9。
從X光粉末繞射測量、熱重•差熱分析、水分量的測量、及X光單晶結構分析的結果，確認實施例26所調製的化合物1的水合物結晶（C型結晶）在晶體結構中具有水分子，確實為水合物結晶。
以下述方法實施在實施例26所調製的化合物1的水合物結晶（C型結晶）的動態水蒸氣吸附測量。結果顯示於圖10。 測量裝置：DVS Intrinsic（Surface Measurement Systems製） 溫度：25℃ 相對濕度（%）測量點： 循環1：0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0（%）; 循環2：10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0（%） 閾值：0.001 dm／dt（%／分） 最小吸附時間：10分鐘 最大吸附時間：1440分鐘
測量結果，確認化合物1的水合物結晶（C型結晶），在相對濕度0～95%的範圍，隨著水合數的變化，與相對濕度0%時的重量相比，在3.3%重量的範圍，為水合數可變化的水合物結晶。
實施例26－1 化合物1的DMSO－水合物結晶（A型）的X光單晶測量 化合物1：（（5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS）－8－（（S）－sec－丁基）－18－環戊基－29（3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯乙基）－36－乙基－11－異丁基－N,N,5,6,12,16,19,33－八甲基－35－（4－甲基苄基）－4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37－十一側氧基三十四氫－2H,4H－螺［氮雜環丁烷併［2,1－u］吡咯併［2,1－i］［1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31］十一氮雜環三十四炔－21,1'－環戊烷］－15－羧醯胺）的DMSO－水合物結晶（A型）的合成 室溫下使化合物1的水合物結晶（C型結晶）（54.9mg）溶解於DMSO（0.784mg）。將此溶液在室溫振動110分鐘，獲得在DMSO中的化合物1的DMSO－水合物結晶（A型）。
X光單晶結構分析 以下述方法進行實施例26－1所調製的化合物1的DMSO－水合物結晶（A型）的X光單晶結構分析。 測量裝置：Rigaku XtaLAB Synergy Custom 具有VariMax Cu繞射儀（Rigaku社製） 陽極：Cu 管電壓：40 Kv 管電流：30 mA 溫度：－180℃ 測量：以考量在結構分析獲得充分的繞射斑點的策略、曝光時間，進行測量。 結構分析：初期結構的確定以直接法（SHELXT－2018／2，CrysAlisPro，Rigaku）進行，結構精密化以全矩陣最小平方法（full－matrix least－squares法）（SHELXL－2017／1，APEX3，Bruker）進行。非氫原子的溫度因子基本上為異方性，但無序的原子以等方性而精密化。水分子的氫原子使用限制條件位於適當的位置，以所鍵結的氧原子的1.5倍大的等方性溫度因子而精密化。其他的氫原子使用騎乘模式（riding model） 位於適當的位置，為所鍵結的非氫原子的1.2倍或1.5倍大的等方性溫度因子。結果顯示於圖11。
實施例26－2 化合物1的丙酮－水合物結晶（H型）的物化性質的測量 （1） X光單晶結構分析 化合物1     （（5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS）－8－（（S）－sec－丁基）－18－環戊基－29（3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯乙基）－36－乙基－11－異丁基－N,N,5,6,12,16,19,33－八甲基－35－（4－甲基苄基）－4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37－十一側氧基三十四氫－2H,4H－螺［氮雜環丁烷併［2,1－u］吡咯併［2,1－i］［1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31］十一氮雜環三十四炔－21,1'－環戊烷］－15－羧醯胺）的丙酮－水合物結晶（H型，X光單晶結構分析用）的合成 在9mL小玻璃瓶添加丙酮（0.8mL）與水（0.2mL）後混合，於其中放入添加化合物1的非晶質固體（約1mg）的0.3mL小玻璃瓶，將9mL小玻璃瓶封蓋，使溶劑蒸氣擴散，3小時後獲得結晶。
以下述方法進行上述所得的化合物1的丙酮－水合物結晶（H型，X光單晶結構分析用）的X光單晶結構分析。 測量裝置：Rigaku XtaLAB Synergy Custom 具有VariMax Cu繞射儀（Rigaku社製） 陽極：Cu 管電壓：40 Kv 管電流：30 mA 溫度：－180℃ 測量：以考量在結構分析獲得充分的繞射斑點的策略、曝光時間，進行測量。 結構分析：初期結構的確定以直接法（SHELXT－2018／2，CrysAlisPro，Rigaku）進行，結構精密化以全矩陣最小平方法（full－matrix least－squares法）（SHELXL－2018／3，Olex2，OlexSys）進行。非氫原子的溫度因子為異方性而精密化。水分子的氫原子位於適當的位置，以所鍵結的氧原子的1.5倍大的等方性溫度因子而精密化。其他的氫原子使用騎乘模式（riding model） 位於適當的位置，為所鍵結的非氫原子的1.2倍或1.5倍大的等方性溫度因子。結果顯示於圖12。
（2）X光粉末繞射測量 化合物1：（（5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS）－8－（（S）－sec－丁基）－18－環戊基－29（3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯乙基）－36－乙基－11－異丁基－N,N,5,6,12,16,19,33－八甲基－35－（4－甲基苄基）－4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37－十一側氧基三十四氫－2H,4H－螺［氮雜環丁烷併［2,1－u］吡咯併［2,1－i］［1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31］十一氮雜環三十四炔－21,1'－環戊烷］－15－羧醯胺）的丙酮－水合物結晶（H型，X光粉末繞射測量用與溶劑含量的測量用）的合成 在反應容器加入化合物1的水合物結晶（C型結晶）（2.1g）與丙酮（16mL）。設定外溫為40℃，邊攪拌邊加入水（6.4mL）。在小玻璃瓶加入以研缽粉碎的化合物1的水合物結晶（6mg），以丙酮水混合液（80μL、5／4 v／v）懸浮後，將懸浮液加入反應容器。再於小玻璃瓶加入丙酮水混合液（80μL，5／4 v／v），將懸浮液加入反應容器。攪拌晶析液2小時。以10分鐘加入水（1.6mL）後，攪拌懸浮液3小時。以10分鐘加入水（1.6mL）後，攪拌懸浮液2小時。以1小時使懸浮液冷卻至外溫25℃。靜置保存懸浮液過夜。隔日，在外溫25℃攪拌後，將懸浮液一部分取樣，懸浮液直接實施X光粉末繞射測量（測量方法4）。將懸浮液以桐山漏斗過濾後，以丙酮水混合液（5.6mL、4.4mL）洗淨結晶。之後，以水（10mL）洗淨結晶2次。所得的濕性粉末用於溶劑含量的測量。
以下列方法，使上述所得的化合物1的丙酮－水合物結晶（H型，X光粉末繞射測量用）進行X光粉末繞射測量（測量方法4）。結果顯示如下。
丙酮－水合物結晶（H型）在2θ值為7.942∘、8.283∘、8.861∘、10.097∘、10.491∘、11.805∘、12.673∘、12.830∘、13.514∘、13.855∘、15.853∘、16.405∘、16.642∘、及17.772∘（±0.2∘）被觀測到主要峰。分析結果顯示於圖13。
（3）溶劑含量的測量 以下顯示經由GC的丙酮量的分析條件。 裝置：GC－2010（島津社製） 管柱：DB－624（Agilent），0.530 mm ID×30 m，3.00 μm 管柱溫度：50 ℃（5min）→10 ℃／min→90 ℃（0min）→50 ℃／min→240 ℃（5min） 注入口溫度：230 ℃ 偵測器溫度：250 ℃ 分流比：20／1 流量：30 cm／sec
以下顯示經由卡爾－費雪滴定法的水分量的分析條件。 裝置：CA－200（Nittoseiko Analytech社製） 陽極液：Aquamiron AKX 陰極液：Aquamiron CXU 在此等測量，濕性粉末的丙酮量為3.7%，水分量為17.5%。
調製例1：非晶質狀態的化合物1的製造 根據下列流程圖1合成具有下列構造的化合物1（「（5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS）－8－（（S）－sec－丁基）－18－環戊基－29（3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯乙基）－36－乙基－11－異丁基－N,N,5,6,12,16,19,33－八甲基－35－（4－甲基苄基）－4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37－十一側氧基三十四氫－2H,4H－螺［氮雜環丁烷併［2,1－u］吡咯併［2,1－i］［1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31］十一氮雜環三十四炔－21,1'－環戊烷］－15－羧醯胺」）
化合物1
Figure 02_image176
流程圖1
Figure 02_image178
化合物aa033－b（（2S）－2－［9H－芴－9－基甲氧基羰基（甲基）胺基］－4－側氧基－4－丙－2－烯氧基丁酸）的合成
Figure 02_image180
在甲苯混合Fmos－Asp（OAI）－OH（（2S）－2－（9H－芴－9－基甲氧基羰基胺基）－4－側氧基－4－丙－2－烯氧基丁酸，CAS編號146982－24－3） （200g，506mmol）、p－甲苯磺酸（5.7g，0.05當量）、三聚甲醛（45.6g，3當量），在110℃攪拌16小時。減壓下使反應液餾去溶劑，將殘渣溶解於乙酸乙酯，以碳酸氫鈉水溶液洗淨2次。以無水硫酸鈉乾燥有機層，減壓下餾去溶劑。以矽膠柱層析法（乙酸乙酯／石油醚，0／100～30／70）純化殘渣，獲得化合物aa033－a（（4S）－5－側氧基－4－（2－側氧基－2－丙－2－烯氧基乙基）－1,3－噁唑啶－3－羧酸9H－芴－9－基甲酯）（175g，85%）。混合相同合成的其他批次，用於下一反應。 LCMS（ESI）m／z＝408（M+H） +滯留時間：1.407分（分析條件SMDmethod_20）
氮氛圍氣下，室溫攪拌化合物aa033－a（100g，245mmol）、溴化鋅（ZnBr 2） （110g，496mmol）、三乙基矽烷（TES）（56g，481.6mmol）的二氯甲烷（DCM）（1L）混合溶液48小時。混合相同規模的4批次的反應液，減壓下餾去溶劑。將殘渣溶解於TBME，以0.5M磷酸緩衝液（pH＝約7.5）萃取10次。混合水層，以5M鹽酸水溶液調整pH為2，以乙酸異丙酯（IPAC）萃取2次。混合有機層以無水硫酸鈉乾燥後，減壓下餾去溶劑。為了去除IPAC，重複6次在所得的殘渣添加TBME、減壓下餾去溶劑，獲得化合物aa033－b（（2S）－2－［9H－芴－9－基甲氧基羰基（甲基）胺基］－4－側氧基－4－丙－2－烯氧基丁酸）（270g，54%）。 LCMS（ESI）m／z＝410（M+H） +滯留時間：1.956分（分析條件SMDmethod_05）
化合物aa011－a的合成 氮氛圍氣下，冰冷下在WSCI・HCl（27.4g，143mmol）的DMF（217mL）溶液加入HOBt（17.72g，131mmol），再將化合物aa033b（48.8g，119mmol）作成DCM（90mL）與DMF（90mL）的混合溶液加入，在0℃攪拌30分鐘。在該處滴入二甲基胺的THF溶液（2mol／L，65.6mL，131mmol），在0℃攪拌30分鐘。以乙酸乙酯（488mL）稀釋反應液，以鹽酸（1mol／L，390mL）洗淨有機層2次，再以飽和碳酸氫鈉水溶液與水的混合溶液（1：1，488mL）洗淨2次，再以飽和食鹽水與水的混合溶液（1：1，488mL）洗淨1次後，以無水硫酸鈉使所得的有機層乾燥後，減壓下餾去溶劑，獲得化合物aa011－a（51.16g，產率98%）。 LCMS（ESI）m／z＝437.0（M+H） +滯留時間：1.262分（分析條件SMDFA05）
化合物aa079，（2S）－2－環戊基－2－［9H－芴－9－基甲氧基羰基（甲基）胺基］乙酸（Fmoc－MeGly）（cPent）－OH）的合成
Figure 02_image182
在化合物aa079－a（（2S）－2－環戊基－2－［9H－芴－9－基甲氧基羰基胺基］乙酸，Fmoc－Gly（cPent）－OH）（ CAS編號：220497－61－0） （30.0g，82mmol）、三聚甲醛（7.39g，246mmol）、及CSA（0.954g，4.10mmol）的甲苯（160mL）混合液，加入三氟乙酸（TFA）（9.0mL）後，在60℃攪拌4小時。使反應液冷卻至室溫後，經由過濾去除固體。減壓下濃縮濾液，以乙酸乙酯（220mL）稀釋後，依序以飽和碳酸氫鈉水溶液及飽和食鹽水洗淨。以無水硫酸鈉使有機層乾燥，過濾後減壓濃縮，獲得化合物aa079－b粗產物。不實施進一步的純化，進行下一反應。 LCMS（ESI）m／z＝378（M+H） +滯留時間：1.01分（分析條件SQDFA05）
使用上述所得的化合物aa079－b全量，在三乙基矽烷（TES）（65.5mL，410mmol）與aa079－b的二氯乙烷（DCE）（90mL）的混合液，加入三氟乙酸（TFA）（76mL，984mmol），在60℃攪拌16小時。使反應液冷卻至室溫後，進行減壓濃縮，以n－己烷／乙酸乙酯（95／5）洗淨所得的固體，透過減壓乾燥，獲得化合物aa079（（2S）－2－環戊基－2－［9H－芴－9－基甲氧基羰基（甲基）胺基］乙酸，Fmoc－MeGly（cPent）－OH） （29.1g，2步驟93%）。 LCMS（ESI）m／z＝380（M+H） +滯留時間：0.92分（分析條件SMDFA05）
化合物1217－a的合成 在化合物aa079（42.2g，111mmol）與Oxyma（19.99g，141mmol）的DMF（391mL）溶液，室溫下加入WSCI・HCl（31.5g，164mmol），攪拌30分鐘，獲得溶液A。
氮氛圍氣下，在化合物aa011－a（51.16g，117mmol）的DMF（391mL）溶液室溫下滴入DBU（17.49mL，117mmol），攪拌5分鐘。在此加入吡啶鹽酸鹽（14.9g，129mmol），攪拌10分鐘。在所得的反應液加入溶液A與DIPEA（22.46mL，129mmol），氮氛圍氣下室溫攪拌7小時。以乙酸乙酯（422mL）稀釋反應液，以鹽酸（1mol／L，422mL）洗淨2次，以乙酸乙酯（422mL）萃取所得的水層2次。混合所有的有機層，依序以水（422mL）、飽和碳酸氫鈉水溶液與水的混合溶液（1：1，422mL）、飽和食鹽水與水的混合溶液（1：1，422mL）洗淨後，以硫酸鈉使所得的有機層乾燥，減壓下餾去溶劑。在所得的殘渣加入DCM（422mL），攪拌0.5小時。於此加入硫酸鎂（30g），攪拌30分鐘後，過濾去除固形物。以矽膠柱層析法（己烷／乙酸乙酯）純化所得的溶液，獲得化合物1217－a（55.55g，產率87%）。 LCMS（ESI）m／z＝598.2（M+Na） +滯留時間：1.320分（分析條件SMDAM05）
化合物1217－b的合成 氮氛圍氣下，室溫下在化合物1217－a（55.55g，96mmol）的DCM（193mL）溶液加入肆（三苯基膦）鈀（0） （1.115g，0.965mmol），再滴加苯基矽烷（8.31mL，67.5mmol），攪拌30分鐘。以MTBE（556mL）稀釋反應液，以飽和碳酸氫鈉水溶液與水的混合溶液（1：1，556mL）萃取。以水（278mL）萃取所得的有機層。混合水層，加入DCM（556mL）。於此滴加磷酸（56.7g，579mmol），調整pH為2～3，分離有機層後，以DCM（556mL）萃取水層。混合所得的有機層，以飽和食鹽水與水的混合溶液（1：1，556mL）洗淨後，以硫酸鈉乾燥，減壓下餾去溶劑，獲得化合物1217－b（48.87g，產率95%）。 LCMS（ESI）m／z＝536（M+H） +滯留時間：1.138分（分析條件SMDFA05）
化合物1217－b－樹脂的合成 在具有過濾器的反應容器，安裝2－氯三苯甲基氯樹脂（購自SUNRESIN社，1.36mmol／g，114g，155mmol），加入DCM（1140mL），在25℃攪拌45分鐘後，從過濾器排出溶劑。在反應容器加入化合物1217－b（48.87g，91mmol）與甲醇（29.6mL，730mmol）與DIPEA（76mL，438mmol）的DCM（798mL）溶液，在25℃攪拌60分鐘，從過濾器排出溶液。接著，在反應容器加入甲醇（111mL，2737mmol）與DIPEA（76mL，438mmol）的DCM（684mL）溶液，在25℃攪拌90分鐘，從過濾器排出溶液。在反應容器加入DCM（570mL）攪拌5分鐘，從過濾器排出溶液。再重複4次此樹脂的洗淨操作，使所得的樹脂在減壓下乾燥，獲得化合物1217－b－樹脂（140.5g）。經由定量與樹脂結合的化合物的Fmos基，計算出擔載量為0.482mmol／g。
化合物1217－c－樹脂的合成 將上述所得的樹脂（0.482mmol／g，60g，28.92mmol）安裝在塑膠製固相反應容器。室溫下在此固相反應容器加入DCM（600mL），振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。在此固相反應容器加入DMF（420mL），振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。再重複1次此樹脂的洗淨步驟。在此固相反應容器添加二氮雜雙環十一烯（DBU）的DMF溶液（2v／v%，420mL），進行Fmoc基的脫保護。振盪10分鐘後，從玻料排出溶液。在此固相反應容器加入DMF（420mL），振盪5分鐘後，從玻料排出溶液。在此固相反應容器加入三乙基胺鹽酸鹽（7.96g，57.8mmol）的DCM（420mL）溶液，振盪5分鐘後，從玻料排出溶液。在此固相反應容器加入DCM（420mL），振盪5分鐘後，從玻料排出溶液。在此固相反應容器加入DMF（420mL），振盪5分鐘後，從玻料排出溶液。再重複進行1次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。
混合Fmoc－cLeu－OH（37.98g，108mmol）（CAS編號：117322－30－2）與Oxyma（9.6g，67.6mmol）的DMF（180mL）溶液、與N,N'－二異丙基碳二亞胺（DIC）的DMF溶液（10%，216mL），2分鐘後加入經由上述所得的固相反應容器。將此固相反應容器在50℃振盪24小時後，從玻料排出溶液。在此固相反應容器加入DMF（420mL），在室溫振盪5分鐘後，從玻料排出溶液。再重複進行4次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。在此固相反應容器加入DCM（420mL），在室溫振盪5分鐘後，從玻料排出溶液。再重複進行5次此經由DCM的樹脂洗淨步驟。所得樹脂在減壓下乾燥，獲得化合物1217－c－樹脂（62.5g）。
化合物aa134的合成 化合物aa134，（2S）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］－2－［9H－芴－9－基甲氧基羰基胺基］丁酸，Fmoc－Hph（4－CF3－35－F2）－OH的合成
Figure 02_image184
化合物aa132－a，（5－O－（1,3－二側氧基異吲哚－2－基）（2S）－2－［（2－甲基丙烷－2－基）氧基羰基胺基］戊二酸1－O－苄酯）的合成
Figure 02_image186
在氮氛圍氣下，在（4S）－4－［（2－甲基丙烷－2－基）氧基羰基胺基］－5－側氧基－5－苯基甲氧基戊酸（Boc－Glu－OBn，CAS編號30924－93－7）（200g，592.82mmol）、N－羥基酞醯亞胺（106g，649.78mmol，1.10當量）、DMAP（3.6g，29.47mmol，0.05當量）的THF（2L）溶液，在0℃滴加DIC（138mL，1.54當量）。在25℃攪拌反應液16小時，過濾去除固形物，濾液在減壓下餾去溶劑。以甲苯稀釋殘渣，過濾去除產生的固體，濾液在減壓下餾去溶劑。以再結晶（丙酮／庚烷）純化殘渣，獲得化合物aa132－a（5－O－（1,3－二側氧基異吲哚－2－基）（2S）－2－［（2－甲基丙烷－2－基）氧基羰基胺基］戊二酸1－O－苄酯）（230g，80%）。 LCMS（ESI）m／z＝505.2（M+Na） +滯留時間：0.992分（分析條件SMDmethod_16）
將溴化鎳三水合物（NiBr 2･3H 2O）（13.5g，49.7mmol，0.3當量）及4,4'－二－叔丁基－2,2'－聯吡啶（dtbbpy，CAS編號72914－19－3）（13.3g，49.7mmol，0.3當量）加入DMA（400mL），氮氛圍氣下在50℃攪拌3小時，調製Ni溶液。
氮氛圍氣下在室溫攪拌化合物aa132－a（5－O－（1,3－二側氧基異吲哚－2－基）（2S）－2－［（2－甲基丙烷－2－基）氧基羰基胺基］戊二酸1－O－苄酯）（80g，166mmol）、鋅粉（54.2g，829mmol，5當量）及4－溴－1,3—二氟－2－（三氟甲基）苯（CAS編號156243－64－0，86.6g，332mmol，2當量）的DMA（400mL）混合液1小時，添加事先調製的Ni溶液，在室溫攪拌16小時。在反應液加入EDTA・2Na水溶液（800mL，10%），過濾去除固體。以乙酸乙酯萃取濾液，合併的有機層以飽和食鹽水洗淨後，以無水硫酸鈉乾燥，減壓下餾去溶劑。以矽膠柱層析法（乙酸乙酯／石油醚）純化所得的殘渣，獲得化合物aa134－a（57.2g，69%）。 LCMS（ESI）m／z＝496（M+Na） +滯留時間：1.544分（分析條件SMDmethod_15）
使化合物aa134－a（57.2g，121mmol）的甲苯混合液（690mL）冷卻至0℃，滴加三氟甲烷磺酸（TfOH）（54.4g，362mmol，3當量）。在室溫攪拌1小時後，加入水（58mL）。以水萃取此混合液，以乙酸乙酯萃取合併的水層。以水洗淨合併的有機層，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓餾去溶劑，獲得60g的殘渣。在殘渣加入乙腈／水（400／400mL），以氫氧化鈉水溶液（48%）調整pH為7。在此溶液加入Fmoc－OSu（36.6g，108.6mmol，0.9當量），以氫氧化鈉水溶液（48%）調整pH為7後，在室溫攪拌16小時。邊以乙腈／水（1／1）洗淨邊過濾反應液，去除固體成分，以乙腈稀釋濾液，透過以6mol／L鹽酸水溶液調整為酸性，過濾收集析出的固體，獲得化合物aa134（（2S）－4－［3,5－二氟－4－（三氟甲基）苯基］－2－［9H－芴－9－基甲氧基羰基胺基］丁酸，Fmoc－Hph（4－CF3－35－F2）－OH） （52g，83%）。
LCMS（ESI）m／z＝528.45（M+Na） +滯留時間：3.538分（分析條件SMDmethod_14） 1H－NMR（300MHz, DMSO－d6）δ：12.69（s, 1H）, 7.90（d, J＝7.5Hz, 2H）, 7.78－7.54（m, 3H）, 7.48－7.20（m, 6H）, 4.33（d, J＝6.3Hz, 2H）, 4.24（t, J＝6.9Hz, 1H）, 3.97－3.84（m, 1H）, 2.79－2.65（m, 2H）, 2.15－2.00（m, 1H）, 2.00－1.83（m, 1H）
化合物aa113，（2S）－2－［乙基（9H－芴－9－基甲氧基羰基）胺基］－3－（4－甲基苯基）丙酸（Fmoc－EtPhe（4－Me）－OH）的合成
Figure 02_image188
在氮氛圍氣下，使化合物aa113－a（（2S）－2－（9H－芴－9－基甲氧基羰基胺基）－3－（4－甲基苯基）丙酸，Fmoc－Phe（4－Me）－OH）（5.62g，14.0mmol，CAS編號199006－54－7）懸浮於二氯乙烷（DCE）（17.5mL），加入三聚甲醛（5.61mL，42.0mmol）、三氟乙酸（TFA）（9.65mL，126mmol），在60℃攪拌6小時。含有所得的化合物aa113－b的反應液直接用於下一步驟。 LCMS（ESI）m／z＝428（M+H） +滯留時間：1.03分（分析條件SQDFA05）
在所得的化合物aa113－b的反應液加入二氯乙烷（DCE）（17.5mL）、三氟乙酸（TFA）（19.3mL，252mmol）、三乙基矽烷（TES）（20.1mL，126mmol），在60℃攪拌17小時。冷卻至室溫，進行減壓濃縮後，將所得的殘渣溶解於乙酸乙酯（40mL）。以飽和碳酸氫鈉水溶液（40mL）、飽和食鹽水（40mL）洗淨有機層，以無水硫酸鈉乾燥後，減壓下餾去溶劑。將所得殘渣溶解於乙腈（30mL），以己烷（15mL）洗淨2次，減壓下餾去溶劑。以逆相層析法（含有0.1%甲酸的乙腈／含有0.1%甲酸的蒸餾水）純化所得的殘渣，獲得化合物aa113（（2S）－2－［乙基（9H－芴－9－基甲氧基羰基）胺基］－3－（4－甲基苯基）丙酸，Fmoc－EtPhe（4－Me）－OH） （4.4g，2步驟73%）。 LCMS（ESI）m／z＝430（M+H） +滯留時間：0.95分（分析條件SQDFA05）
以下的Fmoc－Pro－OH（CAS編號：71989－31－6）、Fmoc－Hph（4－CF3－35－F2）－OH（化合物aa134）、Fmoc－MeGly－OH（CAS編號：77128－70－2）、Fmoc－EtPhe（4－Me）－OH（化合物aa113）、Fmoc－Aze（2）－OH（CAS編號：136552－06－2）、Fmoc－MeAla－OH（CAS編號：84000－07－7）及Fmoc－Ile－OH（CAS編號：71989－23－6）的延長，使用Intavis社製的胜肽合成機（Multipep RSi），經由Fmoc固相合成法合成。關於操作的詳細步驟遵循合成機所附的操作手冊。
將經由上述所得的化合物1217－c－樹脂（對1個固相反應容器為200mg）加入30個固相反應容器，安裝在胜肽合成機。在此全部30個的固相反應容器加入二氯甲烷（DCM），靜置1小時，進行樹脂的膨潤。之後，從玻料排出溶劑。
Fmoc－Pro－OH的延長 在全部30個固相反應容器添加二氮雜雙環十一烯（DBU）的DMF溶液（2v／v%，對1個固相反應容器為1.4mL），加溫到30℃，10分鐘後從玻料排出溶液。在此全部30個固相反應容器添加DMF溶液（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行3次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。接著，將Fmoc－Pro－OH（CAS編號71989－31－6）（0.6mol／L）與HOAt（0.375mol／L）的NMP溶液（對1個固相反應容器為0.6mL）、與N,N'－二異丙基碳二亞胺（DIC）的DMF溶液（10v／v%，對1個固相反應容器為0.72mL）以合成機的混合小玻璃瓶混合後，對全部30個固相反應容器添加，在40℃靜置4小時。之後，從玻料排出溶液。對全部30個固相反應容器添加DMF溶液（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行2次此樹脂洗淨步驟。
Fmoc－Hph（4－CF3－35－F2）－OH（化合物aa134）的延長 在含有上述所得的樹脂的全部30個固相反應容器，添加二氮雜雙環十一烯（DBU）的DMF溶液（2v／v%，對1個固相反應容器為1.4mL），加溫到35℃，10分鐘後從玻料排出溶液。在此全部30個固相反應容器添加DMF溶液（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行3次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。接著，將Fmoc－Hph（4－CF3－35－F2）－OH（化合物aa134）（0.45mol／L）與HOAt（0.375mol／L）的NMP溶液（對1個固相反應容器為0.6mL）、與N,N'－二異丙基碳二亞胺（DIC）的DMF溶液（10v／v%，對1個固相反應容器為0.72mL）以合成機的混合小玻璃瓶混合後，對全部30個固相反應容器添加，在40℃靜置2.5小時。之後，從玻料排出溶液。對全部30個固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行2次此樹脂洗淨步驟。
Fmoc－MeGly－OH的延長 在含有上述所得的樹脂的全部30個固相反應容器，添加二氮雜雙環十一烯（DBU）的DMF溶液（2v／v%，對1個固相反應容器為1.4mL），加溫到35℃，10分鐘後從玻料排出溶液。在此全部30個固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行3次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。接著，將Fmoc－MeGly－OH （0.6mol／L）與HOAt（0.375mol／L）的NMP溶液（對1個固相反應容器為0.6mL）、與N,N'－二異丙基碳二亞胺（DIC）的DMF溶液（10v／v%，對1個固相反應容器為0.72mL）以合成機的混合小玻璃瓶混合後，對全部30個固相反應容器添加，在40℃靜置2.5小時。之後，從玻料排出溶劑。對30個全部的固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行2次此樹脂洗淨步驟。
Fmoc－EtPhe（4－Me）－OH（化合物aa113）的延長 在含有上述所得的樹脂的全部30個固相反應容器，添加二氮雜雙環十一烯（DBU）的DMF溶液（2v／v%，對1個固相反應容器為1.4mL），加溫到35℃，10分鐘後從玻料排出溶液。在此全部30個固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行3次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。接著，如前述製造的Fmoc－EtPhe（4－Me）－OH（0.6mol／L）與HOAt（0.375mol／L）的NMP溶液（對1個固相反應容器為0.6mL）、與N,N'－二異丙基碳二亞胺（DIC）的DMF溶液（10v／v%，對1個固相反應容器為0.72mL）以合成機的混合小玻璃瓶混合後，對全部30個固相反應容器添加，在40℃靜置2.5小時。之後，從玻料排出溶液。對全部30個固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行2次此樹脂洗淨步驟。
Fmoc－Aze（2）－OH的延長 在含有上述所得的樹脂的全部30個固相反應容器，添加二氮雜雙環十一烯（DBU）的DMF溶液（2v／v%，對1個固相反應容器為1.4mL），加溫到35℃，10分鐘後從玻料排出溶液。在此全部30個固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行3次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。接著，將Fmoc－Aze（2）－OH（0.6mol／L）與HOOBt（0.375mol／L）的NMP與DMSO的混合溶液（7：3）（對1個固相反應容器為0.6mL）、與N,N'－二異丙基碳二亞胺（DIC）的DMF溶液（10v／v%，對1個固相反應容器為0.72mL）以合成機的混合小玻璃瓶混合後，對全部30個固相反應容器添加，在60℃靜置5小時。之後，對全部30個固相反應容器添加N,N'－二異丙基碳二亞胺（DIC）的DMF溶液（10v／v%，對1個固相反應容器為0.72mL），在60℃靜置5小時。之後，從玻料排出溶液。對全部30個固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行2次此樹脂洗淨步驟。
Fmoc－MeAla－OH的延長 在含有上述所得的樹脂的全部30個固相反應容器，添加二氮雜雙環十一烯（DBU）的DMF溶液（2v／v%，對1個固相反應容器為1.4mL），加溫到35℃，10分鐘後從玻料排出溶液。在此全部30個固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行3次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。接著，將Fmoc－MeAla－OH（0.6mol／L）與HOAt（0.375mol／L）的NMP溶液（對1個固相反應容器為0.6mL）、與N,N'－二異丙基碳二亞胺（DIC）的DMF溶液（10v／v%，對1個固相反應容器為0.72mL）以合成機的混合小玻璃瓶混合後，對全部30個固相反應容器添加，在40℃靜置2.5小時。之後，從玻料排出溶液。對全部30個固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行2次此樹脂洗淨步驟。
Fmoc－Ile－OH的延長 在含有上述所得的樹脂的全部30個固相反應容器，添加二氮雜雙環十一烯（DBU）的DMF溶液（2v／v%，對1個固相反應容器為1.4mL），加溫到35℃，10分鐘後從玻料排出溶液。在此全部30個固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行3次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。接著，將Fmoc－Ile－OH（0.6mol／L）與HOAt（0.375mol／L）的NMP溶液（對1個固相反應容器為0.6mL）、與N,N'－二異丙基碳二亞胺（DIC）的DMF溶液（10v／v%，對1個固相反應容器為0.72mL）以合成機的混合小玻璃瓶混合後，對全部30個固相反應容器添加，在40℃靜置10小時。之後，從玻料排出溶液。對全部30個固相反應容器添加DMF（對1個固相反應容器為1.4mL），從玻料排出溶劑。再重複進行2次此樹脂洗淨步驟。接著，對全部30個固相反應容器添加DCM溶液（對1個固相反應容器為1.6mL），從玻料排出溶劑。再重複進行5次此樹脂洗淨步驟。從全部30個固相反應容器收集樹脂，混合繼續進行操作。
Fmoc－MeLeu－OH（CAS編號：103478－62－2）的延長 將上述所得的樹脂加入200mL的塑膠製固相反應容器，於此加入DCM（600mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。在此固相反應容器加入甲苯（50mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。再重複進行1次此經由甲苯的樹脂洗淨步驟。在此固相反應容器加入二氮雜雙環十一烯（DBU）的甲苯溶液（2v／v%，45mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶液。
在此固相反應容器加入甲苯（50mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。再重複進行1次此經由甲苯的樹脂洗淨步驟。在此固相反應容器加入DCM（50mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。再重複進行1次此經由DCM的樹脂洗淨步驟。在此固相反應容器加入Fmoc－MeLeu－OH（4.25g，11.57mmol）、［乙基氰基（羥基亞胺基）乙酸基－O2］三－1－吡咯啶基鏻六氟磷酸鹽（PyOxim）（6.10g，11.57mmol）、DIPEA（3.03mL，17.35mmol）的DCM（45mL）溶液，在30℃振盪3小時。之後，從玻料排出溶液。在此固相反應容器加入DMF（50mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。再重複進行4次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。在此固相反應容器加入DCM（50mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。再重複進行3次此經由DCM的樹脂洗淨步驟。之後，減壓下乾燥所得樹脂。
在上述固相反應容器加入DCM（60mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。在此固相反應容器加入DMF（50mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。再重複進行1次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。在此固相反應容器加入二氮雜雙環十一烯（DBU）的DMF溶液（2v／v%，45mL），在30℃振盪15分鐘後，從玻料排出溶液。在此固相反應容器加入DMF（50mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。再重複進行4次此經由DMF的樹脂洗淨步驟。在此固相反應容器加入DCM（50mL），在30℃振盪5分鐘後，從玻料排出溶劑。再重複進行4次此經由DCM的樹脂洗淨步驟，獲得擔載化合物1217－d的樹脂。
化合物1217－d的合成（從樹脂切出胜肽） 在含有上述所得樹脂的固相反應容器，加入2,2,2－三氟乙醇（TFE）（60mL）與DCM（60mL）與DIPEA（0.909mL）的混合溶液，室溫下振盪2小時。之後，從玻料收集溶液。在此固相反應容器，加入2,2,2－三氟乙醇（TFE）（30mL）與DCM（30mL）的混合溶液，室溫下振盪5分鐘後，從玻料收集溶液。再於此固相反應容器，加入2,2,2－三氟乙醇（TFE）（30mL）與DCM（30mL），室溫下振盪5分鐘後，從玻料收集溶液。混合收集的所有溶液，減壓下餾去溶劑，獲得粗產物的化合物1217－d（3.85g）。 LCMS（ESI）m／z＝1453.9（M－H） －滯留時間：0.67分（分析條件SQDAA50）
化合物1的合成（胜肽的環化與純化） 將上述所得的化合物1217－d（3.85g）溶解於乙酸異丙酯（529mL）與DIPEA（0.915mL，5.24mmol）的混合液，加入HCTU（O－（1H－6－氯苯併三唑－1－基）－1,1,3,3－四甲基脲六氟磷酸鹽，CAS編號330645－87－9）（1.805g，4.36mmol），室溫下攪拌21小時。之後，減壓下餾去溶劑至溶液量成為約一半。在所得溶液加入飽和氯化銨水溶液（40mL）與水（40mL）的混合溶液，以乙酸異丙酯（350mL）萃取。依序以飽和碳酸氫鈉水溶液（40mL）與水（40mL）的混合溶液、飽和食鹽水（40mL）與水（40mL）的混合溶液洗淨所得的有機層後，以硫酸鈉乾燥，減壓下餾去溶劑，獲得3.36g的殘渣。所得殘渣以逆相矽膠柱層析法（Daisogel SP－120－40／60－ODS－RPS，使用乙腈（含0.1%的甲酸）／水（含0.1%的甲酸）作為溶出液）純化，透過使含有目的物的溶出液冷凍乾燥，獲得非晶質狀態的化合物1（1.36g，產率34%）。所得的化合物1的質譜圖的值與液相層析法的滯留時間如下述。 LCMS（ESI）m／z＝1437.7（M+H） +滯留時間：7.496分（分析條件SSC－A－AF－01）
表11顯示在調製例1的LC／MS的分析條件。
Figure 02_image190
［表12］
步驟（化合物編號） LCMS分析條件 滯留時間（分鐘） MS Found（m／z） MS polarity
步驟H’1（化合物a03） 方法3 4.499 447 ［M＋H］ ＋
步驟H’2－1（化合物a04） 方法3 2.419 313 ［M＋H］ ＋
步驟H’2－2（化合物a06） 方法3 4.458 540 ［M＋Na］ ＋
步驟H’3－1（化合物a07） 方法3 2.848 384 ［M＋H］ ＋
步驟H’3－2（化合物a09） 方法3 4.055 611 ［M＋Na］ ＋
步驟H’4－1（化合物a10） 方法3 2.521 455 ［M＋H］ ＋
步驟H’4－2（化合物a12） 方法1 4.006 703 ［M＋H］ ＋
步驟H’5－1（化合物a13） 方法1 2.776 569 ［M＋H］ ＋
步驟H’5－2（化合物a15） 方法1 4.919 840 ［M＋H］ ＋
步驟H’6（化合物a16） 方法1 2.909 696 ［M＋H］ ＋
步驟S’0（化合物a19） 方法3 3.934 405 ［M＋H］ ＋
步驟S’1－1（化合物a20） 方法3 2.058 271 ［M＋H］ ＋
步驟S’1－2（化合物a22） 方法3 4.428 518 ［M＋H］ ＋
步驟S’2－1（化合物a23） 方法3 2.393 384 ［M＋H］ ＋
步驟S’2－2（化合物a25） 方法3 4.002 613 ［M＋Na］ ＋
步驟S’3－1（化合物a26） 方法3 2.868 517 ［M＋Na］ ＋
步驟S’3－2（化合物a28） 方法3 4.323 748 ［M＋Na］ ＋
步驟S’4－1（化合物a29） 方法3 2.970 592 ［M＋H］ ＋
步驟S’4－2（化合物a31） 方法3 4.794 910 ［M＋Na］ ＋
步驟1’（化合物a32） 方法3 4.001 831 ［M＋H］ ＋
步驟2’（化合物a33） 方法4 10.65 1531 ［M＋Na］ ＋
步驟3’（化合物a34） 方法4 9.26 1474 ［M＋Na］ ＋
步驟4’（化合物a35） 方法4 12.39 1319 ［M＋H］ ＋
步驟5’（化合物a36） 方法5 18.69 1300 ［M＋H］ ＋
實施例27 步驟   H’1 化合物a03：2－［［（2S）－2－［苄氧基羰基（甲基）胺基］－3－環己基－丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image192
在反應容器加入化合物a01（2.00g）及化合物a02（1.37g），之後加入2－MeTHF（19.0mL）進行攪拌。再加入DIPEA（5.5mL）後，將反應混合物的內溫維持在32℃以下並滴入T3P（50 w／w% 2－MeTHF溶液，11.7mL），之後在室溫攪拌1小時。將反應混合物的內溫維持在36℃以下滴入5%碳酸鈉水溶液（12mL），進行攪拌後，排出水層。以5%碳酸鈉水溶液（12mL×1）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（12mL×1）、10%氯化鈉水溶液（50mL×2）洗淨所得的有機層。使所得有機層減壓濃縮，獲得含有化合物a03的殘渣（2.72g）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.499分（HPLC分析條件：方法3）
實施例28 步驟 H’2－1 化合物a04：2－［［（2S）－3－環己基－2－（甲基胺基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image194
在步驟H’1所得的含有化合物a03的殘渣（2.70g）加入2－MeTHF（18mL）後，加入5% Pd／C（1.27kg，50%含水品）。進行3次經由氫氣的脫氣置換，之後攪拌2小時。使用濾紙吸引過濾反應混合物，以2－MeTHF溶液（18mL×3）洗淨殘渣。合併所得濾液及洗淨液進行減壓濃縮，獲得含有化合物a04的殘渣（1.77g）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.419分（HPLC分析條件：方法3）
實施例29 步驟   H’2－2 化合物a06：2－［［（2S）－2－［［2－［苄氧基羰基（甲基）胺基］乙醯基］－甲基－胺基］－3－環己基－丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image196
使步驟H’2－1所得的含有化合物a04的殘渣（1.71g）與化合物a05（1.29g）溶解於2－MeTHF（11.6mL），進行攪拌。再加入DIPEA（3.4mL）後，維持反應混合物的內溫在27℃以下並滴入T3P（50 w／w% 2－MeTHF溶液，7.2mL），之後在室溫攪拌2小時。維持反應混合物的內溫在29℃以下滴入5%碳酸鈉水溶液（7.2mL），進行攪拌後，排出水層。以5%碳酸鈉水溶液（7.2mL×1）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（7.2mL×1）、10%氯化鈉水溶液（7.2mL×2）洗淨所得的有機層。使所得的有機層減壓濃縮，獲得含有化合物a06的殘渣（2.70g）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.458分（HPLC分析條件：方法3）
實施例30 步驟   H’3－1 化合物a07：2－［［（2S）－3－環己基－2－［甲基－［2－（甲基胺基）乙醯基］胺基］丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image198
在步驟H’2－2所得的含有化合物a06的殘渣（2.70g）加入2－MeTHF（10mL）後，加入5% Pd／C（0.71kg，50%含水品）。進行3次經由氫氣的脫氣置換，之後攪拌2小時。使用濾紙吸引過濾反應混合物，以2－MeTHF溶液（10mL×3）洗淨殘渣。合併所得濾液及洗淨液進行減壓濃縮，獲得含有化合物a07的殘渣（1.82g）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.848分（HPLC分析條件：方法3）
實施例31 步驟   H’3－2 化合物a09：2－［［（2S）－2－［［2－［［2－［苄氧基羰基（甲基）胺基］乙醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－胺基］－3－環己基－丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image200
使步驟H’3－1所得的含有化合物a07的殘渣（1.80g）、與化合物a08（1.57g）溶解於2－MeTHF（14.2mL），進行攪拌。再加入DIPEA（4.1mL）後，將反應混合物的內溫維持在30℃以下並滴入T3P（50 w／w% 2－MeTHF溶液，8.8mL），之後在室溫攪拌2小時。將反應混合物的內溫維持在33℃以下滴入5%碳酸鈉水溶液（10.8mL），進行攪拌後，排出水層。以5%碳酸鈉水溶液（10.8mL×1）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（10.8mL×1）、5%碳酸鈉水溶液（10.8mL×2）洗淨所得的有機層。使所得有機層減壓濃縮，獲得含有化合物a09的殘渣（2.61g）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.055分（HPLC分析條件：方法3）
實施例32 步驟   H’4－1 化合物a10：2－［［（2S）－3－環己基－2－［甲基－［2－［甲基－［2－（甲基胺基）乙醯基］胺基］乙醯基］胺基］丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image202
在步驟H’3－2所得的含有化合物a09的殘渣（2.40g）加入2－MeTHF（12.3mL）後，加入5% Pd／C（0.44kg，50%含水品）。實施3次經由氫氣的脫氣置換，之後攪拌1小時。 使用濾紙吸引過濾反應混合物，以2－MeTHF溶液（12mL×3）洗淨殘渣。合併所得濾液及洗淨液進行減壓濃縮，獲得含有化合物a10的殘渣（1.97g）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.521分（HPLC分析條件：方法3）
實施例33 步驟   H’4－2 化合物a12：2－［［（2S）－2－［［2－［［2－［［（2S,3S）－2－（苄氧基羰基胺基）－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－胺基］－3－環己基－丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image204
使步驟H’4－1所得的含有化合物a10的殘渣（1.92g）、與化合物a11（1.69g）溶解於2－MeTHF（12.8mL），進行攪拌。再加入DIPEA（3.7mL）後，將反應混合物的內溫維持在29℃以下並滴入T3P（50 w／w% 2－MeTHF溶液，7.8mL），之後在室溫攪拌2小時。將反應混合物的內溫維持在33℃以下滴入5%碳酸鈉水溶液（14.4mL），進行攪拌後，排出水層。以5%碳酸鈉水溶液（14.4mL×1）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（14.4mL×1）、5%碳酸鈉水溶液（14.4mL×1）洗淨所得的有機層。重複2次再以5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（14.4mL×1）、5%碳酸鈉水溶液（14.4mL×1）洗淨所得的有機層。加入2－MeTHF（14.4mL），以5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（14.4mL×1）、5%碳酸鈉水溶液（14.4mL×1）洗淨這些。再以1%碳酸鈉水溶液（14.4mL×3）、5%碳酸鈉水溶液（14.4mL×5）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（14.4mL×1）、5%碳酸鈉水溶液（14.4mL×1）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（14.4mL×1）、5%碳酸鈉水溶液（14.4mL×1、7.2mL×10）洗淨。再以2.5氨水溶液（7.2mL×3）、10%氯化鈉水溶液（1mL×1）洗淨。使所得有機層減壓濃縮，獲得含有化合物a12的殘渣（2.39g）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.006分（HPLC分析條件：方法1）
實施例34 步驟   H’5－1 化合物a13：2－［［（2S）－2－［［2－［［2－［［（2S,3S）－2－胺基－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－胺基］－3－環己基－丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image206
在步驟H’4－2所得的含有化合物a12的殘渣（2.15g）加入2－MeTHF（9.3mL）後，加入5% Pd／C（0.66kg，50%含水品）。實施3次經由氫氣的脫氣置換，之後攪拌2小時。使用濾紙吸引過濾反應混合物，以2－MeTHF溶液（10mL×3）洗淨殘渣。合併所得濾液及洗淨液進行減壓濃縮，獲得含有化合物a13的殘渣（1.95g）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.776分（HPLC分析條件：方法1）
實施例35 步驟   H’5－2 化合物a15：2－［［（2S）－3－環己基－2－［甲基－［2－［甲基－［2－［甲基－［（2S,3S）－3－甲基－2－［［（2S）－4－甲基－2－［甲基（2－三甲基矽基乙氧基羰基）胺基］戊醯基］胺基］戊醯基］胺基］乙醯基］胺基］乙醯基］胺基］丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image208
使步驟H’5－1所得的含有化合物a13的殘渣（1.94g）、與化合物a14（1.49g）溶解於2－MeTHF（10.3mL），進行攪拌。使反應容器以冰浴冷卻，加入DIPEA（3.0mL）後，將反應混合物的內溫維持在9℃以下並滴入T3P（50 w／w% 2－MeTHF溶液，6.3mL），之後移除冰浴在室溫攪拌1小時。將反應混合物的內溫維持在22℃以下滴入5%碳酸鈉水溶液（12mL），進行攪拌後，排出水層。以5%碳酸鈉水溶液（12mL×1）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（12mL×1）、5%碳酸鈉水溶液（12mL×1）洗淨所得的有機層，使所得有機層減壓濃縮。再次溶解於2－MeTHF（20mL），以5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（12mL×1）、5%碳酸鈉水溶液（12mL×2）洗淨。在有機層加入N－甲基咪唑（0.3mL）及5%碳酸鈉水溶液（12mL），攪拌6.5小時後，排出水層。以5%碳酸鈉水溶液（12mL×1）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（12mL×2）、5%碳酸鈉水溶液（12mL×2）洗淨，進行減壓濃縮。再次溶解於2－MeTHF（20mL），再加入庚烷：MTBE混合液（1.5：1）（20mL），以5%碳酸鈉水溶液（20mL×2）洗淨，進行減壓濃縮，獲得含有化合物a15的殘渣（2.38g）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.919分（HPLC分析條件：方法1）
實施例36     步驟 H’6 化合物a16：2－［［（2S）－3－環己基－2－［甲基－［2－［甲基－［2－［甲基－［［（2S,3S）－3－甲基－2－［［（2S）－4－甲基－2－（甲基胺基）戊醯基］胺基］戊醯基］ 胺基］乙醯基］ 胺基］乙醯基］胺基］丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image210
在步驟H’5－2所得的含有化合物a15的殘渣（2.35g）加入2－MeTHF（14mL）後，將反應容器的外溫設定在50℃，加入四丁基氟化銨（1M THF溶液，7.0mL）。此反應液直接攪拌2小時。冷卻至室溫後，加入乙酸異丙酯（7mL），以5%碳酸鉀水溶液（7mL×6）洗淨後，進行減壓濃縮，獲得含有化合物a16的殘渣（1.92g）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.909分（HPLC分析條件：方法1）
實施例37 步驟 S’0 化合物a19：（3S）－3－［苄氧基羰基（甲基）胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁酸叔丁酯的合成
Figure 02_image212
在反應容器加入化合物a17（2.01g）、2－MeTHF（11.7mL），進行攪拌。加入DIPEA（1.8mL）、化合物a18（0.53mL）後，室溫下添加T3P（50 w／w% 2－MeTHF溶液，3.61mL），之後攪拌1小時。邊攪拌邊加入10%檸檬酸水溶液（12mL）後，排出水層。以10%檸檬酸水溶液（12mL×1）、5%碳酸鈉水溶液（12mL×2）洗淨所得的有機層。使所得有機層減壓濃縮，獲得含有化合物a19的殘渣（1.56g）。 經由HPLC分析的滯留時間：3.934分（HPLC分析條件：方法3）
實施例38 步驟S’1－1 化合物a20：（3S）－3－（甲基胺基）－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁酸叔丁酯的合成
Figure 02_image214
在步驟S’0所得的含有化合物a19的殘渣（3.08g）加入2－MeTHF（21.3mL）後，添加5% Pd／C（4.09g，50%含水品）。實施3次經由氫氣的脫氣置換，之後攪拌2小時。使用濾紙吸引過濾反應混合物，以2－MeTHF溶液（21.3mL×3）洗淨殘渣。合併所得濾液及洗淨液進行減壓濃縮，獲得含有化合物a20的殘渣（2.09g）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.058分（HPLC分析條件：方法3）
實施例39 步驟S’1－2 化合物a22：（3S）－3－［［（2S）－2－［苄氧基羰基（甲基）胺基］－3－甲基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁酸叔丁酯的合成
Figure 02_image216
使步驟S’1－1所得的含有化合物a20的殘渣（2.04g）、與化合物a21（2.14g）溶解於2－MeTHF（6.3mL），進行攪拌。再加入DIPEA（5.3mL）後，室溫下添加溶解於2－MeTHF（5.9mL）與MeCN（4.1mL）的HATU（3.95g），之後在50℃攪拌5小時。在室溫加入CPME（5.3mL）後，加入5%碳酸鉀水溶液（4.1mL）與NMI（0.55mL），攪拌1小時30分鐘。邊攪拌邊加入2.5%氨水溶液（16.3mL）後，排出水層。以2.5%氨水溶液（16.3mL×1）、10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（20.4mL×4）、5%碳酸鉀水溶液（20.4mL×1）、10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（20.4mL×3）、5%碳酸鉀水溶液（20.4mL×1）洗淨所得的有機層。使所得有機層減壓濃縮，獲得含有化合物a22的殘渣（3.66g）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.428分（HPLC分析條件：方法3）
實施例40 步驟S’2－1 化合物a23：（3S）－3－［甲基－［（2S）－3－甲基－2－（甲基胺基）丁醯基］胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁酸叔丁酯的合成
Figure 02_image218
在步驟S’1－2所得的含有化合物a22的殘渣（3.56g）加入2－MeTHF（18.3mL）後，添加5% Pd／C（2.10g，50%含水品）。實施3次經由氫氣的脫氣置換，之後攪拌2小時30分鐘。使用濾紙吸引過濾反應混合物，以2－MeTHF溶液（18.3mL×3）洗淨殘渣。合併所得濾液及洗淨液進行減壓濃縮，獲得含有化合物a23的殘渣（2.58g）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.393分（HPLC分析條件：方法3）
實施例41 步驟S’2－2 化合物a25：（3S）－3－［甲基－［（2S）－3－甲基－2－［甲基－［1－［（2,2,2－三氟乙醯基）胺基］環戊烷羰基］胺基］丁醯基］胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁酸叔丁酯的合成
Figure 02_image220
使化合物a24（2.09g）溶解於2－MeTHF（18.6mL），進行攪拌。再加入DIPEA（5.3mL）與步驟S’2－1所得的含有化合物a23的殘渣（2.50g）後，室溫下添加T3P（50 w／w% 2－MeTHF溶液，10.4mL）與DMAP（1.59g），之後攪拌8小時。分別追加化合物a24（1.47g）、DMAP（0.80g）、T3P（50w／w% 2－MeTHF溶液，5.5mL）、DIPEA（2.8mL）後，攪拌2小時。邊攪拌邊加入5%碳酸鈉水溶液（20.5mL） 後，排出水層。以5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（20.5mL×4）、5%碳酸鈉水溶液（20.5mL×2）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（20.5mL×2）、5%碳酸鈉水溶液（20.5mL×1）洗淨所得的有機層。使所得有機層減壓濃縮，獲得含有化合物a25的殘渣（3.45g）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.002分（HPLC分析條件：方法3）
實施例42 步驟S’3－1 化合物a26：（3S）－3－［［（2S）－2－［（1－胺基環戊烷羰基）－甲基－胺基］－3－甲基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁酸叔丁酯的合成
Figure 02_image222
攪拌使步驟S’2－2所得的含有化合物a25的殘渣（3.41g）溶解於2－MeTHF（1362mL）與MeOH（1.4mL）。在－20℃滴入LiBH 4（2M THF溶液，4.5mL），之後攪拌2小時。滴入2,2,2－三氟乙醇（6.4mL）後升溫至0℃，之後攪拌20分鐘。滴入20%氯化銨水溶液（10.2mL），排出水層。對所得的有機層，室溫下加入三氟乙酸（0.69mL）後，攪拌10分鐘。對含有2M氫氧化鈉水溶液（44.3mL）的反應容器，滴入含有化合物a25的反應溶液。排出水層，之後以2M氫氧化鈉水溶液（34.1mL×2）、10%磷酸氫二鉀水溶液（17.0mL×1）洗淨。使所得有機層減壓濃縮，獲得含有化合物a26的殘渣（2.90g）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.868分（HPLC分析條件：方法3）
實施例43 步驟S’3－2 化合物a28：（2S）－2－［［1－［［（1S）－1－［［（1S）－3－叔丁氧基－3－側氧基－1－（哌啶－1－羰基）丙基］－甲基－胺甲醯基］－2－甲基－丙基］－甲基－胺甲醯基］環戊基］胺甲醯基］吡咯啶－1－羧酸苄酯的合成
Figure 02_image224
攪拌使步驟S’3－1所得的含有化合物a26的殘渣（2.90g）與化合物a27（1.66g）溶解於MeCN（14.5mL）。再加入DIPEA（2.67mL）後，室溫下添加BEP（2.11g），之後攪拌3小時。加入CPME（29.3mL）後，加入5%碳酸鉀水溶液（17.4mL）與N－甲基咪唑（0.41mL），室溫下攪拌30分鐘。排出水層後，以5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（17.4mL×5）、5%碳酸鈉水溶液（17.4mL×2）、5%硫酸氫鈉一水合物水溶液（17.4mL×3）、5%碳酸鈉水溶液（17.4mL×2）洗淨所得的有機層。使所得有機層減壓濃縮，獲得含有化合物a28的殘渣（3.86g）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.323分（HPLC分析條件：方法3）
實施例44 步驟S’4－1 化合物a29：（3S）－3－［甲基－［（2S）－3－甲基－2－［甲基－［1－［［（2S）－吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］胺基］丁醯基］胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁酸叔丁酯的合成
Figure 02_image226
在步驟S’3－2所得的含有化合物a28的殘渣（3.81g）加入THF（16.8mL）後，添加5% Pd／C（0.40g，50%含水品）。實施3次經由氫氣的脫氣置換，之後攪拌4小時30分鐘。追加5% Pd／C（0.20g，50%含水品），之後攪拌1小時30分鐘。使用濾紙吸引過濾反應混合物，以2－MeTHF溶液（6.6mL×3）洗淨殘渣。合併所得濾液及洗淨液進行減壓濃縮，獲得含有化合物a29的殘渣（3.12g）。 經由HPLC分析的滯留時間：2.970分（HPLC分析條件：方法3）
實施例45 步驟S’4－2 化合物a31：（3S）－3－［ ［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－苯基－丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－3－甲基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁酸叔丁酯的合成
Figure 02_image228
攪拌使步驟S’4－1所得的含有化合物a29的殘渣（2.06g）與化合物a30（1.10g）溶解於2－MeTHF（10.3mL）。再加入DIPEA（2.8mL）後，室溫下添加T3P（50 w／w% 2－MeTHF溶液，5.4mL），之後攪拌2小時。分別追加化合物a30（0.55g）、DIPEA（1.1mL）、T3P（50w／w% 2－MeTHF溶液，2.2mL）後，攪拌5小時。再追加化合物a30（0.57g）、DIPEA（1.1mL）、T3P（50w／w% 2－MeTHF溶液，2.2mL），靜置過夜，隔天攪拌2小時。加入5%碳酸鉀水溶液（12.4mL）與N－甲基咪唑（0.29mL），室溫下攪拌3小時。加入N－甲基咪唑（0.23mL），攪拌1小時後，排出水層。加入2－MeTHF（12.4mL）、N－甲基咪唑（0.23mL）、5%碳酸鉀水溶液（12.4mL），攪拌1小時後，排出水層。以10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（12.4mL×2）、5%碳酸鉀水溶液（12.4mL×1）洗淨所得的有機層。在有機層加入庚烷與MTBE的混合溶液（庚烷／MTBE＝1.5：1，12.4mL）、MeCN（4.7mL），排出水層。在有機層加入2－MeTHF（2.1mL）後，以MeCN（7.0mL）與5%碳酸鉀水溶液（17.7mL）洗淨7次。對有機層添加乙酸異丙酯（7.6mL）後進行減壓濃縮，在所得的殘渣加入乙酸異丙酯（7.6mL），獲得含有化合物a31的溶液（10.31g）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.794分（HPLC分析條件：方法3）
實施例46 步驟1’ 化合物a32：（3S）－3－［ ［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－苯基－丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－3－甲基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁酸的合成
Figure 02_image230
攪拌使步驟S’4－2所得的含有化合物a31的殘渣（10.27g）溶解於乙酸異丙酯（51.4mL）。加入HMDS（2.1mL）後，0℃滴入TMSOTf（1.4mL），之後在室溫攪拌2小時30分鐘。室溫下加入2－MeTHF（51.4mL）、5%磷酸氫二鉀水溶液（102.8mL），排出水層。以5%磷酸二氫鈉水溶液（102.8mL） 洗淨有機層後，在所得有機層加入DIPEA（3.0mL），進行減壓濃縮，加入乙酸異丙酯（7.6mL），獲得含有化合物a32的溶液（7.92g）。 經由HPLC分析的滯留時間：4.001分（HPLC分析條件：方法3）
實施例47 步驟2’ 化合物a33：2－［［（2S）－2－［［2－［［2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－苯基－丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－3－甲基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁醯基］－甲基－胺基］－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－ 胺基］－3－環己基－丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image232
攪拌使步驟2’所得的含有化合物a32的殘渣（7.92g）與步驟H’6所得的含有化合物a16的殘渣（1.33g）溶解於2－MeTHF（4.6mL）。室溫下添加DIPEA（1.6mL）、HATU（1.43g），之後攪拌2小時。添加含有化合物a16的殘渣（約300mg），再攪拌2小時。之後追加含有化合物a16的殘渣（約300mg），攪拌1小時30分鐘。加入HATU（0.79g）後，攪拌1小時。加入CPME（3.5mL）、N－甲基咪唑（0.13mL）、5%碳酸鉀水溶液（2.7mL），室溫攪拌3小時。排出水層後，以2.5氨水溶液（9.2mL×1）、10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（9.2mL×1）、5%碳酸鈉水溶液（9.2mL×1）、10%硫酸氫鈉一水合物水溶液（9.2mL×3）、5%碳酸氫鈉水溶液（9.2mL×2）洗淨。在有機層加入庚烷／MTBE（1.5：1，9.2mL）後，以5%碳酸鈉水溶液（9.2mL×2）洗淨。對所得的有機層加入2－MeTHF（9.2mL），進行減壓濃縮，獲得含有化合物a33的殘渣（4.49g）。 經由HPLC分析的滯留時間：10.65分（HPLC分析條件：方法4）
實施例48 步驟3’ 化合物a34：2－［［（2S）－2－［［2－［［2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－（苄氧基羰基胺基）－4－苯基－丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－3－甲基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁醯基］－甲基－胺基］－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－胺基］－3－環己基－丙醯基］－甲基－胺基］乙酸的合成
Figure 02_image234
攪拌使步驟2’所得的含有化合物a33的殘渣（4.49g）溶解於2－MeTHF（49.5mL）。室溫下添加HMDS（2.9mL）與TMSOTf（2.1mL），之後攪拌2小時。加入5%磷酸氫二鉀水溶液（14.2mL）後，排出水層。所得有機層以10%檸檬酸水溶液（3.4mL）與5%磷酸氫二鉀水溶液（10.5mL）的混合水溶液洗淨3次，以5%碳酸鈉水溶液洗淨1次。對有機層，加入THF（20.9mL）進行共沸脫水3次後，對所得的殘渣加入THF（5.9mL），獲得含有化合物a34的溶液（9.59g）。 經由HPLC分析的滯留時間：9.26分（HPLC分析條件：方法4）
實施例49 步驟4’ 化合物a35：2－［［（2S）－2－［［2－［［2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－［（2S）－2－胺基－4－苯基－丁醯基］吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－3－甲基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－側氧基－4－（1－哌啶基）丁醯基］－甲基－胺基］－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－胺基］乙醯基］－甲基－胺基］－3－環己基－丙醯基］－甲基－胺基］乙酸的合成
Figure 02_image236
在反應容器加入5% Pd／C（0.49g，50%含水品），於THF（8mL）懸浮，作成氫氛圍氣下，攪拌30分鐘。之後以氮置換，加入步驟3’所得的含有化合物a34的殘渣（9.3g）溶解於THF（8mL）的溶液，在氫氛圍氣下攪拌6小時，反應轉換率為76%。以氮置換，在冰箱保存過夜後，隔日回復到室溫下攪拌2小時，反應轉換率為87%。以氮置換後，在反應液加入5% Pd／C（0.24g，50%含水品）的THF（4mL）懸浮液，以氫置換後攪拌4小時（反應轉換率99.0%）。以氮置換，在冰箱保存過夜後，隔日回復到室溫下測量時，反應轉換率為99.4%。使用濾紙吸引過濾反應混合物，以2－MeTHF溶液（6.5mL×10）洗淨殘渣。合併所得濾液及洗淨液進行減壓濃縮。將所得的殘渣溶解於乙睛（16.3mL）及2－ MeTHF（6.5mL），以庚烷（37.1mL）洗淨後進行濃縮。所得殘渣再次溶解於乙睛（16.3mL）及2－ MeTHF（6.5mL） ，以庚烷（37.1mL）洗淨後進行濃縮，獲得含有化合物a35的殘渣（2.96g）。 經由HPLC分析的滯留時間：12.39分（HPLC分析條件：方法4）
實施例50 步驟5’ 化合物a36：（3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S）－9－（環己基甲基）－21－異丁基－28－異丙基－7,10,13,16,22,26,29－七甲基－18－［（1S）－1－甲基丙基］－3－（2－苯基乙基）－25－（哌啶－1－羰基）螺［1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32－十一氮雜雙環［32.3.0］ 三十七烷－31,1'－環戊烷］－ 2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33－十一酮的合成
Figure 02_image238
調製含有前一步驟所得的含有化合物a35的殘渣（2.90g）與DIPEA（1.44mL）的碳酸二甲酯溶液（72.5mL），將此等以3小時滴入PyBOP（4.34g）的碳酸二甲酯溶液（72.5mL）。在滴入結束後的30分鐘的時點進行取樣，確認反應後，用濾紙吸引過濾去除不溶物，以碳酸二甲酯（15mL）洗淨殘渣。合併濾液與洗淨液的溶液，以2.5%氨水溶液（58mL）、5%硫酸氫鉀水溶液（58mL）、5%磷酸氫二鈉水溶液（58mL）、5%氯化鈉水溶液（58mL）、0.5%氯化鈉水溶液（58mL）洗淨。將所得的有機層進行減壓下濃縮，獲得含有化合物a36的殘渣（2.72g）。 經由HPLC分析的滯留時間：18.69分（HPLC分析條件：方法5）
實施例50－1 化合物a36：（3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S）－9－（環己基甲基）－21－異丁基－28－異丙基－7,10,13,16,22,26,29－七甲基－18－［（1S）－1－甲基丙基］－3－（2－苯基乙基）－25－（哌啶－1－羰基）螺［1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32－十一氮雜雙環［32.3.0］ 三十七烷－31,1'－環戊烷］－ 2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33－十一酮的合成（使用PyBOP為縮合劑，碳酸二甲酯為溶劑）
Figure 02_image240
在反應容器秤量化合物a35（9.7mg），以碳酸二甲酯（2mL）溶解。室溫下邊攪拌邊加入DIPEA（6.1μL）。於此等加入PyBOP（14.9mg），攪拌30分鐘。反應液（50μL）以MeCN／丙胺（9：1）的混合液（100μL）稀釋，使用此溶液進行HPLC分析。目的物：環狀二聚體的面積%比、及目的物的LC純度（%）顯示於表13。
實施例50－2 使用甲氧苯及2－甲基四氫呋喃作為溶劑的情形，結果也顯示於表13（實驗操作與實施例50－1相同）。任何情形皆未觀測到環狀三聚體。
實施例50－3 化合物a36：（3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S）－9－（環己基甲基）－21－異丁基－28－異丙基－7,10,13,16,22,26,29－七甲基－18－［（1S）－1－甲基丙基］－3－（2－苯基乙基）－25－（哌啶－1－羰基）螺［1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32－十一氮雜雙環［32.3.0］ 三十七烷－31,1'－環戊烷］－ 2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33－十一酮的合成（使用PyBOP為縮合劑，碳酸二甲酯為溶劑，經由逆滴入法製造） 在反應容器秤量PyBOP （59.9mg），懸浮於碳酸二甲酯（1mL）。在另一個容器使化合物a35（39.9mg）溶解於碳酸二甲酯（1mL），於此等加入DIPEA（24.3μL）。室溫下使用注射泵以3小時向PyBOP懸浮液加入此原料溶液。加入結束後，殘留於容器的原料溶液以碳酸二甲酯（0.2mL）洗淨，之後攪拌30分鐘。以MeCN／丙胺（9：1） （100μL）的混合液稀釋反應液（50μL），使用此溶液進行HPLC分析。結果顯示於表13。
［表13］
縮合劑 實施例編號 溶劑 滴入方法 SM. TM. c－Dimer的比例（%） LC純度 （%）
SM （a35） TM （a36） c－Dimer （a37）
   PyBOP 實施例50 碳酸二甲酯 順滴入 0.0 92.7 7.3 77.4
實施例50－1 甲氧苯 順滴入 0.0 92.3 7.7 76.7
實施例50－2 2－甲基四氫呋喃 順滴入 0.0 90.1 9.9 63.0
實施例50－3 碳酸二甲酯 逆滴入 0.0 95.4 4.6 78.7
Figure 02_image242
a37：在本衍生物的c－dimer
實施例51 化合物b1：（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－苄氧基羰基吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸的合成
Figure 02_image244
在反應容器加入含有化合物28的2－MeTHF溶液（17.45g，11.7wt%），進行減壓濃縮，在所得殘渣加入IPAc（10.2mL）。室溫下邊攪拌邊加入HMDS（1.52mL）後，使外溫冷卻至0℃，緩緩滴入TMSOTf（1.04mL）。升溫至室溫，攪拌30分鐘。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），進行HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。使外溫冷卻至0℃，在反應液滴入5%磷酸氫二鉀水溶液（14.3mL），在室溫攪拌10分鐘。去除有機層，在水層加入0.5M鹽酸水溶液（11.2mL）與IPAc（10.2mL），攪拌10分鐘。排出水層，以5%氯化鈉水溶液（14.3mL）洗淨有機層後，排出水層。將所得的有機層在外溫30℃進行減壓濃縮乾燥，獲得含有化合物b1的殘渣（1.88g，產率94.1%）。 LCMS （ESI）：滯留時間：2.929分，m／z＝678.61［M+Na］ +（LCMS分析條件      方法 1） 產率：94.1%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
實施例52 化合物b2：（2S）－2－［［1－［［（1S）－2－［［（1S）－3－［［（1S）－1－［［（1S,2S）－1－［［（1S）－2－［［（2S）－2－［［（1S）－2－［（2－叔丁氧基－2－側氧基－乙基）－甲基－胺基］－2－側氧基－1－（p－甲苯基甲基）乙基］－乙基－胺甲醯基］氮雜環丁烷－1－基］－1－甲基－2－側氧基－乙基］－甲基－胺甲醯基］－2－甲基－丁基］胺甲醯基］－3－甲基－丁基］－甲基－胺基］－1－（二甲基胺甲醯基）－3－側氧基－丙基］－甲基－胺基］－1－環戊基－2－側氧基－乙基］－甲基－胺甲醯基］環戊基］胺甲醯基］吡咯啶－1－羧酸苄酯的合成
Figure 02_image246
在反應容器秤量含有化合物17的IPAc溶液（1.50g，55.0wt%）及化合物b1（0.98 g，78.3wt%），加入2－MeTHF（5.44mL）及MeCN（0.80mL）。室溫下邊攪拌邊加入DIPEA（1.05mL）後，加入HATU（988.4mg）。在室溫攪拌4小時後，對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法2），進行HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式2）。使外溫冷卻至0℃，在反應液加入N－甲基咪唑（86μL）、及5%碳酸鈉水溶液（5.6mL），室溫下攪拌10分鐘。排出水層，以2.5%氨水溶液（5.6mL）、5%硫酸氫鈉水溶液（5.6mL×2）、5%碳酸鈉水溶液（8.2mL×3）洗淨有機層。將所得有機層在外溫30℃進行減壓濃縮乾燥，獲得含有化合物b2的殘渣（1.88g，產率93.8%）。 LCMS （ESI）：滯留時間：21.17分，m／z＝1403.06［M+Na］ +（LCMS分析條件      方法 5） 產率：93.8%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
實施例53 化合物b3：2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－［［（2S）－1－苄氧基羰基吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸的合成
Figure 02_image248
在反應容器加入實施例52所得的含有化合物b2的殘渣（1.44g，90.3wt%），加入IPAc（6.50mL）。室溫下邊攪拌邊加入HMDS（0.50mL）後，使外溫冷卻至0℃，緩緩滴入TMSOTf（0.340mL）。升溫至室溫，攪拌2小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），進行HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。在反應液滴入5%磷酸氫二鉀水溶液（9.10mL），在室溫攪拌10分鐘。去除有機層，在水層加入0.5M鹽酸水溶液（7.41mL）與2－MeTHF（9.0mL），攪拌10分鐘。排出水層，以5%氯化鈉水溶液（13.0mL）洗淨有機層後，排出水層。將所得的有機層在外溫35℃進行減壓濃縮乾燥，獲得含有化合物b3的殘渣（3.36g，產率92.7%）。 LCMS （ESI）：滯留時間：18.19分，m／z＝1325.02［M+H］ +（LCMS分析條件      方法 5） 產率：92.7%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
實施例54 化合物b4：2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－環戊基－2－［甲基－［1－［［（2S）－吡咯啶－2－羰基］胺基］環戊烷羰基］胺基］乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸的合成
Figure 02_image250
室溫下在反應容器依序加入實施例53所得的化合物b3（1.01g，0.762mmol）與2－MeTHF（2.02mL）、THF（6.87mL）。在反應容器加入5% Pd／C（0.162g，50%含水品）後，進行3次經由氫氣的脫氣置換，攪拌2小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），進行HPLC分析確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。使用濾紙及薄膜過濾紙過濾反應混合物，以2－MeTHF（5.0mL×2）洗淨殘渣。使所得的濾液減壓濃縮，獲得含有化合物b4的殘渣（1.43g，產率96.7%）。 LCMS （ESI）：滯留時間：2.921分，m／z＝1191.00［M+H］ +（LCMS分析條件      方法 1） 產率：96.7%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
化合物b4的環化反應（實施例55的反應條件的檢討） 使用化合物b4為起始原料，檢討在向化合物b5的環化反應的縮合劑、及溶劑。環化反應經由HPLC分析追蹤。
Figure 02_image252
實施例55－6 化合物b5：（6S,9S,14S,17S,20S,24S,27S,33S）－27－環戊基－7－乙基－20－異丁基－N,N,4,14,15,21,25,28－八甲基－17－［（1S）－1－甲基丙基］－ 2,5,8,13,16,19,22,26,29,32－十側氧基－6－（p－甲苯基甲基）螺［1,4,7,12,15,18,21,25,28,31－十氮雜三環［31.3.0.09,12］三十六烷－30,1'－環戊烷］－24－羧醯胺的合成 在反應容器秤量化合物b4（9.99mg（8.39μmol）），加入溶劑（2－MeTHF，2.0mL（200v／w））。室溫下邊攪拌邊加入DIPEA（6.74μL（38.6μmol））。設定反應容器的外溫為25℃，加入縮合劑（PyAOP，17.2mg （33.0μmol））攪拌30分鐘。以MeCN／丙胺（9：1）的混合液（100μL）稀釋反應液（50μL），調製HPLC分析用的溶液。 化合物b5的LCMS （ESI）：滯留時間：16.81分，m／z＝1173.51［M+H］ +（LCMS分析條件    方法 5） 環狀二聚體b6（c－Dimer）的LCMS （ESI）：滯留時間：22.36分，m／z＝2367.91［M+Na］ +（LCMS分析條件       方法 5） 環狀三聚體b7（c－Trimer）的LCMS （ESI）：滯留時間：24.41分，m／z＝1759.26［M+2H］ 2+（LCMS分析條件 方法 5）
Figure 02_image254
Figure 02_image256
使用下表所示的縮合劑及溶劑，進行與實施例55－6（使用PyAOP為縮合劑，使用2－MeTHF為溶劑）的實驗相同的操作，測量起始原料（SM，化合物b5）的耗費、目的物（TM，化合物b5）的生成、及副產物（環狀二聚體b6（c－Dimer）、及環狀三聚體b7（c－Trimer））的生成量，檢討較佳的反應條件。表中匯整起始原料：起始原料的丙醯胺體（化合物b8）：目的物：環狀二聚體：環狀三聚體的面積%比。 ［表14］
縮合劑 實施例編號 溶劑 SM, TM, c－Dimer, 及c－Trimer的比（%）
SM SM－nPrNH TM c－Dimer c－Trimer
HATU 實施例55－1 MeCN 0 0 46 39 15
HATU 實施例55－2 2－MeTHF 44 26 12 15 3
HATU 實施例55－3 碳酸二甲酯 0 0 35 45 20
HATU 實施例55－4 甲氧苯 51 5 14 24 6
PyAOP 實施例55－5 碳酸二甲酯 0 0 37 44 19
PyAOP 實施例55－6 2－MeTHF 0 0 30 48 23
PyAOP 實施例55－7 MeCN 0 0 36 47 17
PyOxim 實施例55－8 碳酸二甲酯 0 0 34 46 20
COMU 實施例55－9 碳酸二甲酯 0 0 37 46 17
DMT－MM 實施例55－10 碳酸二甲酯 0 0 32 48 21
Figure 02_image258
實施例55－11（經由實施例55－6的逆滴入法的製造） 在小玻璃瓶加入化合物b4（9.89mg（8.31μmol））與2－MeTHF（0.99mL（100v／w）），在50℃攪拌10分鐘。確認原料溶解後，加入DIPEA（6.67μL （38.2μmol）），以注射器吸取反應液。在另一反應容器加入PyAOP（17.1mg（32.8μmol））與2－MeTHF（0.99mL（100v／w）），室溫下邊攪拌邊以3小時滴入前述注射器內的溶液。滴入結束後，以MeCN／丙胺（9：1）的混合液（100μL）稀釋反應液（50μL），調製HPLC分析用的溶液。 ［表15］
縮合劑 實施例編號 溶劑 SM, TM, c－Dimer, 及c－Trimer的比（%）
SM SM－nPrNH TM c－Dimer c－Trimer
PyAOP 實施例55－11 2－MeTHF 0 0 95 5 0
實施例56 化合物c1：（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－（苄氧基羰基胺基）環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸叔丁酯的合成
Figure 02_image260
在反應容器室溫下加入含有化合物23的2－MeTHF溶液（16.006g，32.5wt%），進行減壓濃縮。使殘渣溶解於MeCN（10.0mL），重複進行3次減壓濃縮的操作。在反應容器，室溫下加入MeCN（53.9mL）、1－（（（苄氧基）羰基）胺基）環戊烷－1－羧酸（9.604g）及DIPEA（12.7mL），進行攪拌。將反應容器的外溫設定在55℃，邊攪拌邊在反應混合物分2次加入HATU（15.257g），攪拌6小時。以MeCN／丙胺（9：1）的混合液稀釋反應混合物，進行HPLC分析，確認反應轉換率為99.6%以上（反應轉換率的算式2）。在反應混合物加入N－甲基咪唑（4.3mL），攪拌5分鐘。之後，加入自來水（27.0mL），攪拌30分鐘後，使反應容器的外溫從55℃降溫至25℃，攪拌反應混合物過夜。使用濾紙吸引過濾反應混合物，以MeCN（18.0mL）及自來水（9.0mL）的混合液洗淨殘渣。在40℃使濾取的結晶真空乾燥3小時，獲得含有化合物c1的白色粉末（6.957g）。以MeCN稀釋所得的結晶，以下列分析條件進行LCMS測量（化合物c1的滯留時間：6.914分，m／z＝637.30 ［M+Na］ +）。 LCMS分析條件 裝置：Waters ACQUITY UPLC H－Class + ACQUITY QDA 管柱：CAPCELL CORE ADME （OSAKA SODA），2.1 mm ID×50 mm，2.7 μm 流動相：0.05% TFA／水 （A），0.05% TFA／MeCN （B） 溶出法：B） 5%（0 min）→100%（10 min）→5%（10.1 min）→5%（12 min） 流速：0.5 mL／min 管柱溫度：35 ℃ 偵測波長：210nm（PDA） 使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析（產率：78.32%）
實施例57 化合物c2：（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－（苄氧基羰基胺基）環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁酸的合成
Figure 02_image262
在反應容器室溫下加入含有化合物c1的白色粉末（2.504g，95.9wt%）及二氯甲烷（12.0mL）後，加入HMDS（2.07mL）。以冰浴冷卻反應容器，邊攪拌邊加入TMSOTf（1.41mL）。將反應容器移出冰浴，室溫下攪拌1小時。以MeCN稀釋反應混合物，進行HPLC分析，確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。以冰浴冷卻反應容器，加入二氯甲烷（12.0mL）與5%磷酸氫二鉀水溶液（24.0mL），攪拌10分鐘，排出有機層。在水層加入2－MeTHF（72.0mL）後，以0.5M鹽酸水溶液（12.0mL）、5%氯化鈉水溶液（24.0mL）洗淨有機層。使所得有機物進行減壓濃縮，獲得含有化合物c2的白色粉末（1.977g）。以MeCN稀釋所得的白色粉末，進行LCMS測量（方法3：化合物c2的滯留時間：3.307分，m／z＝581.13 ［M+Na］ +）。使所得的白色粉末與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析（產率：81.51%）
實施例58 化合物c3：2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－（苄氧基羰基胺基）環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸叔丁酯的合成
Figure 02_image264
在反應容器秤量化合物c2（618.1mg，90.0wt%）及含有化合物17的2－MeTHF溶液（1.22g，55.0wt%），加入2－MeTHＦ（10.9mL）及MeCN（1.22mL）。室溫下邊攪拌邊加入DIPEA（0.885mL）後，加入HATU（792mg）。室溫下攪拌2小時後，對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法2），進行HPLC分析，確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式2）。使外溫冷卻至0℃，在反應液加入N－甲基咪唑（72μL）及5%碳酸鈉水溶液（10mL），室溫下攪拌10分鐘。排出水層，以2.5%氨水溶液（10mL）、5%硫酸氫鈉水溶液（10mL×2）、5%碳酸鈉水溶液（10mL×2）洗淨有機層。使所得有機層在外溫30℃進行減壓濃縮乾燥，獲得含有化合物c3的殘渣（1.94g，產率91.2%）。 HPLC：滯留時間：4.606分（HPLC分析條件  方法1） 產率：91.2%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
實施例59 化合物c4：2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［［1－（苄氧基羰基胺基）環戊烷羰基］－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸的合成
Figure 02_image266
在反應容器加入實施例58所得的含有化合物c3的殘渣（1.41g，50.2wt%），加入2－MeTHF（7.0mL）。室溫下邊攪拌邊加入HMDS（579μL）後，使外溫冷卻至0℃，緩緩滴入TMSOTf（394μL）。升溫至室溫，攪拌2小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），進行HPLC分析，確認反應轉換率為99.9%以上（反應轉換率的算式1）。使外溫冷卻至0℃，在反應液滴入5%磷酸氫二鉀水溶液（5.25mL），室溫下攪拌10分鐘。排出水層，以5%磷酸氫二鉀水溶液（5.25mL）與0.5M鹽酸水溶液（3.5mL）洗淨有機層2次，以0.5%氯化鈉水溶液（7.0mL）洗淨，排出水層。使所得有機層在外溫30℃進行減壓濃縮乾燥，獲得含有化合物c4的殘渣（0.85g，產率95.2%）。 LCMS （ESI）：滯留時間：3.974分，m／z＝1228.38［M+H］ +（LCMS分析條件      方法 1） 產率：95.2%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
實施例60 化合物c5：2－［［（2S）－2－［［（2S）－1－［（2S）－2－［［（2S,3S）－2－［［（2S）－2－［［（3S）－3－［［（2S）－2－［（1－胺基環戊烷羰基）－甲基－胺基］－2－環戊基－乙醯基］－甲基－胺基］－4－（二甲基胺基）－4－側氧基－丁醯基］－甲基－胺基］－4－甲基－戊醯基］胺基］－3－甲基－戊醯基］－甲基－胺基］丙醯基］氮雜環丁烷－2－羰基］－乙基－胺基］－3－（p－甲苯基）丙醯基］－甲基－胺基］乙酸的合成
Figure 02_image268
在反應容器室溫下依序加入實施例59所得的含有化合物c4的殘渣（462mg，53.5wt%）與2－MeTHF（2.47mL）。在反應容器加入5%Pd／C（74.7mg，50%含水品）後，進行3次經由氫氣的脫氣置換，攪拌8小時。對反應混合物進行取樣，進行樣本調製（樣本調製法1），進行HPLC分析，確認反應轉換率為99.7%（反應轉換率的算式1）。在反應混合物加入2－MeTHF（10mL）後，使用濾紙及薄膜過濾紙進行過濾，以2－MeTHF（5.0mL×2）洗淨殘渣。使所得的濾液減壓濃縮，獲得含有化合物b5的溶液（1.16g，產率91.0%）。 LCMS （ESI）：滯留時間：2.920分，m／z＝1093.88［M+H］ +（LCMS分析條件      方法 1） 產率：91.0%（使所得的殘渣與3,5－雙（三氟甲基）苯甲酸溶解於DMSO－d 6，進行qNMR分析）
化合物c5的環化反應（實施例61的反應條件的檢討） 使用化合物c5為起始原料，檢討在向化合物c6的環化反應的縮合劑、及溶劑。環化反應經由HPLC分析追蹤。
Figure 02_image270
實施例61－1 化合物c6：（3S,6S,9S,13S,16S,25S,28S）－16－環戊基－26－乙基－9－異丁基－N,N,3,4,10,14,17,23－八甲基－6－［（1S）－1－甲基丙基］－ 2,5,8,11,15,18,21,24,27－九側氧基－25－（p－甲苯基甲基）螺［1,4,7,10,14,17,20,23,26－九氮雜雙環［26.2.0］三十烷－19,1'－環戊烷］－13－羧醯胺的合成 在反應容器秤量化合物c5（44.19mg，21.8wt%（8.81μmol）），使濃縮乾燥後加入溶劑（MeCN，1.9mL（200v／w)）。室溫下邊攪拌邊加入DIPEA（7.19μL（41.2μmol））。加入縮合劑（HATU，12.84mg（33.8μmol）），攪拌30分鐘。以MeCN／丙胺（9：1）的混合液（100μL）稀釋反應液（50μL），調製HPLC分析用的溶液。 化合物c6的LCMS （ESI）：滯留時間：17.22分，m／z＝1076.38［M+H］ +（LCMS分析條件    方法 5） 環狀二聚體c7（c－Dimer）的LCMS （ESI）：滯留時間：21.85分，m／z＝2151.42［M+H］ +（LCMS分析條件     方法 5） 環狀三聚體c8（c－Trimer）的LCMS （ESI）：滯留時間：24.50分，m／z＝1614.13［M+2H］ 2+（LCMS分析條件     方法 5）
Figure 02_image272
Figure 02_image274
使用下表所示的縮合劑及溶劑，進行與實施例61－1（使用PyAOP為縮合劑，使用2－MeTHF為溶劑）的實驗相同的操作，測量起始原料（SM，化合物c5）的耗費、目的物（TM，化合物c6）的生成、及副產物（環狀二聚體c7（c－Dimer）、及環狀三聚體c8（c－Trimer））的生成量，檢討較佳的反應條件。表中匯整起始原料：起始原料的丙醯胺體（化合物c9）：目的物：環狀二聚體：環狀三聚體的面積%比。 ［表16］
縮合劑 實施例編號 溶劑 SM, TM, c－Dimer, 及c－Trimer的比（%）
SM SM－nPrNH TM c－Dimer c－Trimer
HATU 實施例61－1 MeCN 0 0 38 49 14
HATU 實施例61－2 2－MeTHF 34 35 17 13 2
HATU 實施例61－3 碳酸二甲酯 0 0 38 47 15
PyAOP 實施例61－4 2－MeTHF 0 0 39 47 15
Figure 02_image276
實施例61－5（經由實施例61－4的逆滴入法的製造） 在小玻璃瓶秤量化合物c5（45.0mg，21.8wt%（8.97μmol）），使濃縮乾燥後，加入2－MeTHF（0.98mL（100v／w）），在50℃攪拌10分鐘。確認原料溶解後，加入DIPEA（7.21μL （41.2μmol）），以注射器吸取反應液。在另一反應容器加入PyAOP（17.8mg（34.1μmol））與2－MeTHF（0.98mL（100v／w）），室溫下邊攪拌邊以3小時滴入前述注射器內的溶液。滴入結束後，以MeCN／丙胺（9：1）的混合液（100μL）稀釋反應液（50μL），調製HPLC分析用的溶液。 ［表17］
縮合劑 實施例編號 溶劑 SM, TM, c－Dimer, 及c－Trimer的比（%）
SM SM－nPrNH TM c－Dimer c－Trimer
PyAOP 實施例61－5 2－MeTHF 0 0 89 11 0
［產業利用性］
根據本發明，提供製造有效作為醫藥品的環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物之方法，及製造用於該環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物的製造的胜肽化合物之方法。
無
［圖1］圖1顯示實施例25所得的化合物1的水合物結晶（C型結晶）的X光粉末繞射測量結果。縱座標為繞射強度，橫坐標為繞射角2θ（∘）。 ［圖2］圖2顯示實施例25－2所得的化合物1的非溶劑合物結晶（F型結晶）的X光粉末繞射測量結果。縱座標為繞射強度，橫坐標為繞射角2θ（∘）。 ［圖3］圖3顯示實施例25－3所得的化合物1的結晶（A型結晶）的X光粉末繞射測量結果。縱座標為繞射強度，橫坐標為繞射角2θ（∘）。 ［圖4］圖4顯示實施例25－3所得的化合物1的結晶（B型結晶）的X光粉末繞射測量結果。縱座標為繞射強度，橫坐標為繞射角2θ（∘）。 ［圖5］圖5顯示實施例25－3所得的化合物1的結晶（B型結晶）的熱重•差熱分析結果。橫坐標為溫度（℃），右縱坐標為在熱重分析的樣本的重量變化（%）。左縱坐標表示在差熱分析所觀測到的熱流。 ［圖6］圖6顯示實施例25－3所得的化合物1的結晶（B型結晶）的 1H－NMR測量結果。 ［圖7］圖7顯示實施例25－4所得的化合物1的水合物結晶（C型結晶）在相對濕度75%、30%、0%的X光粉末繞射測量結果。縱座標為繞射強度，橫坐標為繞射角2θ（∘）。 ［圖8］圖8顯示實施例26所得的化合物1的水合物結晶（C型結晶）的熱重•差熱分析結果。橫坐標為溫度（℃）及測量時間（分），右縱坐標為在熱重分析的樣本的重量變化（mg）。左縱坐標表示在差熱分析所觀測到的熱流（mW）。 ［圖9］圖9顯示實施例26所得的化合物1的水合物結晶（C型結晶）經由單晶X光結構分析的晶體結構。 ［圖10］圖10顯示實施例26所得的化合物1的水合物結晶（C型結晶）的動態水蒸氣吸附測量結果。縱座標為重量變化（%），橫坐標為相對濕度（%）。在圖10，「Cycle1 Sorp」（實心菱形）表示在循環1的吸附，「Cycle1 Desorp」（實心正方形）表示在循環1的脫離，「Cycle2 Sorp」（實心三角形）表示在循環2的吸附，「Cycle2 Desorp」（實心正方形）表示在循環2的脫離。 ［圖11］圖11顯示實施例26－1所得的化合物1的DMSO－水合物結晶（A型結晶）經由單晶X光結構分析的晶體結構。在此晶體結構以化合物1：DMSO：水為1：6：3模態化。 ［圖12］圖12顯示實施例26－2所得的化合物1的丙酮－水合物結晶（H型結晶，單晶X光結構分析用）經由單晶X光結構分析的晶體結構。在此晶體結構以化合物1：丙酮：水為1：1：4模態化。 ［圖13］圖13顯示實施例26－2所得的化合物1的丙酮－水合物結晶（H型結晶，單晶X光結構分析用）的結果。縱座標為繞射強度，橫坐標為繞射角2θ（∘）。
Figure 111117093-A0101-11-0001-1

Claims (16)

  1. 一種製造環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物之方法，經由包含在含有選自由1種或複數種的不與水混合的溶劑、1種或複數種的水溶性烷基腈類、及1種或複數種的水溶性醚類所組成的群組之1個或複數個的溶劑（溶劑A）中，連接胜肽化合物的N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基之步驟的液相法。
  2. 如請求項1之方法，其中，N端的胺基酸殘基與C端的胺基酸殘基經由醯胺鍵、或選自－（CH 2） nS（CH 2） m－、－（CH 2） nS（O）（CH 2） m－、或－（CH 2） nS（O） 2（CH 2） m－的鍵所連接，此處n及m各自獨立為1或2。
  3. 如請求項1或2之方法，其中，環狀胜肽化合物包含8～20個胺基酸殘基，該胺基酸殘基的至少1個為非天然胺基酸殘基。
  4. 如請求項1～3任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物包含至少1個的N－取代的非天然胺基酸殘基。
  5. 如請求項1～4任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物包含至少1個的N－未取代的非天然胺基酸殘基。
  6. 如請求項1～5任一項之方法，其中，C端的胺基酸殘基或N端的胺基酸殘基的一方或兩方為，在羧基的α位的碳不具有不對稱碳的胺基酸殘基。
  7. 如請求項1～6任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物、或其鹽或該等的溶劑合物為環狀胜肽化合物的溶劑合物。
  8. 如請求項1～7任一項之方法，其中，環狀胜肽化合物為以下式所表示：
    Figure 03_image001
    。
  9. 如請求項1～8任一項之方法，更包含經由晶析而分離及／或純化環狀胜肽化合物，獲得環狀胜肽化合物的結晶之步驟。
  10. 如請求項9之方法，其中，環狀胜肽化合物的結晶為以下式所表示的環狀胜肽化合物的非溶劑合物結晶、或溶劑合物結晶：
    Figure 03_image004
    。
  11. 如請求項10之方法，其中，環狀胜肽化合物的溶劑合物結晶為水合物結晶。
  12. 如請求項11之方法，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少7個峰的C型結晶。
  13. 一種環狀胜肽化合物或其鹽或該等的溶劑合物的結晶，以下式所表示：
    Figure 03_image014
    。
  14. 如請求項13之結晶，其中，結晶選自由非溶劑合物結晶、溶劑合物結晶、鹽的結晶、及鹽的溶劑合物結晶所組成的群組。
  15. 如請求項14之結晶，其中，溶劑合物結晶為水合物結晶。
  16. 如請求項15之結晶，其中，水合物結晶為含有作為X光粉末繞射的繞射角（2θ值）選自由4.964∘、7.921∘、8.296∘、8.855∘、9.956∘、10.435∘、11.729∘、12.704∘、13.552∘、13.901∘、15.895∘、16.643∘、及17.813∘（±0.2∘）所組成之群組之至少7個峰的C型結晶。
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