KR102569348B1 - N-치환 아미노산 잔기를 포함하는 환상 화합물의 제조 방법 - Google Patents

N-치환 아미노산 잔기를 포함하는 환상 화합물의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

물과 혼화되지 않는 용매, 수용성 알킬나이트릴류, 및 수용성 에터류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수를 포함하는 용매 중에서, 펩타이드 화합물의 N 말단의 아미노산 잔기를 C 말단의 아미노산 잔기와 연결시킴으로써, 환상 펩타이드 화합물을 효율적으로 제조할 수 있는 것을 발견했다.

Description

N-치환 아미노산 잔기를 포함하는 환상 화합물의 제조 방법
본 발명은, N-치환 아미노산 잔기를 포함하는 환상 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
종래 경구약으로서 이용되어 온 화합물은, 리핀스키의 법칙으로서 알려져 있는 바와 같이, 분자량이 500g/mol 이하인 것이 바람직하다고 여겨져 왔다(비특허문헌 1). 근년, 분자량이 500g/mol을 초과하는 화합물이, 종래의 저분자 화합물에서는 상호작용하는 것이 곤란하고, 터프 타겟으로 불리고 있는 표적 단백의 표면에서의 상호작용, 즉 단백-단백 상호작용 저해 등에 기여할 수 있는 것이 알려지게 되었다. 이들 분자는, 경구약으로서 주로 이용되어 온 분자량이 500g/mol 이하인 저분자도 아니고, 항체 의약품과 같이 분자량이 100000g/mol을 초과하는 고분자도 아닌, 중분자 화합물(분자량 500∼2000g/mol)로 불리며, 터프 타겟에 대한 창약을 실현할 수 있는, 새로운 모달리티로서 주목받고 있다(비특허문헌 2).
고혈당증의 치료에 이용되고 있는 인슐린과 같이, 천연 아미노산으로 이루어지는 펩타이드는, 대사 안정성이 부족하여, 종래는 펩타이드를 경구약으로서 개발하는 것은 곤란하다고 여겨져 왔다. 그러나, 펩타이드의 환화나, 펩타이드 중에 N-메틸아미노산으로 예시되는 비천연 아미노산을 이용하는 것에 의해, 펩타이드의 대사 안정성이나 막투과성이 향상되는 것이 발견되어 왔다(비특허문헌 3, 4).
비천연 아미노산을 포함하는 환상 펩타이드 중에서도, 특히 N-치환 아미노산을 포함하는 환상 펩타이드가 대사 안정성이나 막투과성을 가질 수 있는, 즉 드러그 라이크니스를 가질 수 있는 것이 알려지게 되었다(특허문헌 1).
비천연형 아미노산을 포함하는 환상 펩타이드의 화합물이, 단백-단백 상호작용의 저해제의 창생에 유용하다는 것이 시사되어 있다(비특허문헌 5).
펩타이드가 의약으로서 중요시되게 되었던 것에 수반하여, 그의 합성법도 활발히 연구되게 되었다(비특허문헌 6). 펩타이드의 합성은, 아미노산을 순차적으로 아마이드 결합 형성 반응에 부치는 것에 의해, 원하는 아미노산 서열로 신장함으로써 달성되지만, 그 서열 중에 비천연 아미노산을 포함하는 펩타이드, 특히, N-메틸아미노산을 포함하는 펩타이드의 제조는, N-메틸기의 입체 장애에 기인하는 축합 반응의 저반응성, 및 아미노산 잔기의 α위의 라세미화 등에 의한 목적물의 수율의 저하가 과제로 여겨져 왔다(비특허문헌 7). 할로젠화 탄화수소 용매(예를 들면 다이클로로메테인 등), 및 아마이드 용매(예를 들면 DMF 등)는, 펩타이드 합성에 있어서 널리 사용되고 있지만, 이와 같은 부반응은, N-치환 아미노산 등의 저반응성 아미노산을 갖는 펩타이드 합성에 있어서 관찰될 수 있다(비특허문헌 8). 또한, 환경 부하의 관점에서, 할로젠화 탄화수소 용매(예를 들면 다이클로로메테인 등)나 아마이드 용매(예를 들면 DMF 등)의 사용이 제한되어 있다(비특허문헌 9).
국제 공개 제2013/100132호
Adv. Drug Del. Rev. 1997, 23, 3-25. Future Med. Chem., 2009, 1, 1289-1310. Acc. Chem. Res., 2008, 41, 1331-1342. Angew. Chem. Int. Ed., 2013, 52, 254-269. Chem. Rev., 2019, 119, 10360-10391. Amino Acids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry: Building Blocks, Catalysis and Coupling Chemistry, Volume 3, 2011. J. Peptide Res., 2005, 65, 153-166. Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015. Green Chem. Lett. Rev., 2021, 14, 153-164.
본 발명은, 이와 같은 상황을 감안하여 이루어진 것으로, 일 국면에 있어서, 본 발명은, 펩타이드 화합물, 특히 N-치환 아미노산 등의 비천연 아미노산을 복수 포함하는 직쇄 또는 환상의 펩타이드 화합물을, 중간체를 단리, 예를 들면 다음 공정의 전(前)조작으로서 중간체를 단리하지 않는 대규모 스케일에도 적용 가능한 수법으로 효율적으로 제조하는 방법을 제공하는 것을 과제로 한다. 일 국면에 있어서, 본 발명은, 칼럼 크로마토그래피에 의존하지 않고서 목적하는 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물을 단리, 정제하는 방법을 제공하는 것을 과제로 한다. 일 태양에 있어서, 본 발명의 목적은, 펩타이드 화합물의 제조 공정에서 이용되는 용매에 포함되는 안정화제(예를 들면, BHT 등의 항산화제)를, 안정화제를 가용화하는 용매로 세정하는 것에 의해, 각 공정에서 제조된 목적물을 단리하는 일 없이, 안정화제를 제거하는 방법을 제공하는 것에 있다. 일 태양에 있어서, 본 발명의 목적은, 특히, N-치환 아미노산 등의 복수의 비천연 아미노산을 함유하는, 예를 들면 직쇄상, 또는 환상의 펩타이드 화합물을, 개개의 반응 공정의 중간체, 또는 펩타이드 화합물을 단리하지 않는 것에 의해 각 공정에 있어서의 작업 시간이 단축되어, 다음의 공정을 연속적으로 행하는 방법을 제공하는 것이다. 따라서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 1개의 국면은, 안정화제를 가용화시키는 용매의 사용을 포함하는, 1개 이상의 반응 공정을 포함할 수 있는, 펩타이드 화합물의 제조 방법을 제공하는 것이다.
펩타이드 합성은, 일반적으로, 아미노산이나 펩타이드의 C 말단의 카복실기를, 아미노산이나 펩타이드의 N 말단의 아미노기와 연결하는 공정을 반복하여, 펩타이드쇄를 신장하는 것에 의해 행해지지만, 이 공정에서는 다양한 부반응이 일어날 수 있는 것이 알려져 있다(Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.). 따라서, 펩타이드 합성, 특히 액상법에 의한 펩타이드 합성에서는, 신장 공정 사이나, 환화 공정 전에 생성물을 단리, 정제하는 것이 통상이다. 그러나, 공업적 스케일에서의 펩타이드 합성에서는, 중간체의 단리, 정제는, 합성 시간의 장대화나 비용의 증대로 이어지기 때문에, 목적하는 펩타이드에 이르기 전의 중간체를 단리, 정제하지 않고서 연속해서 다음의 신장 반응이나 환화 반응을 행할 수 있는 것이 바람직하다.
한편, 펩타이드쇄의 신장 반응에 있어서는, 신장원인 아미노산 혹은 펩타이드의 카복실기나, 신장시키는 아미노산 또는 펩타이드의 아미노기는 보호되어 있는 경우가 많고, 아미노산의 ω쇄도 보호되어 있는 경우가 많다(펩타이드 합성의 기초와 실험: 이즈미야 노부오(저) 마루젠(1985).). 이와 같은 보호 아미노산이나 보호 펩타이드는, 반응액 중으로부터 석출되기 쉽고, 유기 용매에 불용인 경우가 자주 있다(국제 공개 제2017/038650호, 국제 공개 제2018/021233호, 국제 공개 제2018/155669호, 국제 공개 제2019/123994호, 국제 공개 제2017/221889호). 또한, 무보호 아미노산이나 무보호 펩타이드도 그의 친수성 때문에 유기 용매에 용해시키는 것은 곤란하다. 더욱이, 펩타이드쇄를 신장함에 따라서 응집이 촉진되어, 펩타이드 화합물의 용해성이 저하되는 경우도 많다(생물과 화학, 2018, 56(8), 558; J. Biol. Chem., 1963, 238, 4074., Sci Rep, 2016, 6(28), 1.).
이들 아미노산이나 펩타이드를 용해시키기 위해서, 펩타이드의 합성 반응에는, 용해능이 높은 용매, 예를 들면, DMF나 다이메틸설폭사이드가 이용되고, 또한 우수한 용해능을 갖는 다이클로로메테인도 다용된다. 예를 들면, 펩타이드 합성에 있어서, DMF는 전체의 47%로, 다이클로로메테인은 36%의 비율로 사용되고 있다고 보고되어 있고, 그들 용매의 사용예를 합하면, 전체의 83%가 된다(Green Chem., 2013, 15, 596-600.).
그러나, 다이클로로메테인에는 독성이 있고, DMF는 사용량에 따라 법 규제의 대상이 되어 있기 때문에, 공업적인 제조 방법에서는, 이들 용매의 사용을 피해야 하는 것이다. 게다가, DMF 및 다이메틸설폭사이드는, 가열에 의해 분해될 수 있는 것에 더하여, 비점이 높기 때문에, 목적으로 하는 생성물에 이들이 혼입되면 제거가 곤란하다. 더욱이, DMF의 분해에 의해 생기는 다이메틸아민은, 펩타이드 신장 반응에 관여할 수 있기 때문에, 바라지 않는 펩타이드의 부생으로 이어지는 경우가 있다(Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.). 다이메틸설폭사이드로부터 생기는 다이메틸설파이드는 이취(異臭)를 발한다는 문제도 있다.
특히, 공업적 스케일에서는, 사용하는 용매가 대량이 되어, 그 증류 제거에도 과혹한 시간과 가열이 필요시되는 경우가 많기 때문에, 이와 같은 조작 중에 분해물이 늘어나는 것은 용이하게 추측된다. 따라서, 용매를 증류 제거할 때에 열적으로 안정하고, 또한 효율적으로 펩타이드쇄의 신장 반응이나 환화 반응을 진행시키는 것이 가능한 용매를 발견하는 것은 중요하다.
또한, DMF나 다이메틸설폭사이드는 물에 대한 용해도가 높아, 물과 혼화되기 때문에, 목적물이 이들 유기 용매와 함께 수층으로 이행되어, 수량(收量)의 저하를 야기하는 경우가 있고, 수용액과의 분액 처리 조작도 비효율이 된다. 예를 들면, 유기층에 물이 혼입하면, 목적물을 포함하는 유기 용매의 증류 제거 후에 물이 잔류하고, 경우에 따라서는, 펩타이드 결합의 가수분해를 야기한다(Side Reactions in Peptide Synthesis, Academic Press, 2015.).
공업적 제법에 있어서는, 용매를 증류 제거하기 위해서 필요한 시간도 증대되기 때문에, 수량의 저하뿐만 아니라, 물의 혼입에 의한 부반응도 생기기 쉬워지는 것이 문제가 된다.
그래서, 분액 조작에 있어서 수층과의 분리가 양호한 유기층을 형성하는 수법이나, 펩타이드를 합성 가능하고, 또한 물에 대한 용해도가 낮아서 물과 혼화되기 어려운 용매를 발견하는 것도 필요시되고 있다.
나아가서는, 용매에 따라서는, 안정화제(예를 들면 BHT 등의 산화 방지제)를 함유하고 있는 경우가 있다. 소량 스케일이나 단(短)공정의 합성에서는, 잔존하는 안정화제의 총량은 많아지지 않아, 불순물로서 두드러지지 않는다. 그러나, 공정수나 생산량이 증가하면, 안정화제가 중간체 등에 그대로 대량으로 잔류하기 때문에, 그 후의 공정에 대한 영향을 무시할 수 없는 경우가 있다(예를 들면, 중간체에 포함되는 안정화제가 다음 스텝에 있어서의 화학 반응에 영향을 미치는 경우나, 의약품의 유효 성분의 경우, 목적으로 하는 최종 화합물에 포함되는 안정화제가 약효 이외의 예기치 않은 작용을 야기하는 경우 등). 중간체가 단리되고, 정제되면, 안정화제는 이들 과정을 거쳐 제거될 수 있다. 그러나, 이와 같은 작업을 생략하는 것이 바람직한 공업 생산 프로세스에 대해서는, 안정화제가 중간체 및 최종 화합물 중에 축적될 가능성이 있다. 공업 생산 프로세스에서는, 안정화제를 효율적으로 제거하기 위한 일반적인 기술이 요구되고 있다.
또한, 중간체를 단리, 정제하지 않고서 연속해서 펩타이드쇄의 신장을 행하여, 최종 생성물을 합성하기 위해서는, 축합이나 탈보호 등의 각 공정에 있어서, 부반응을 억제하고, 분액 조작 등의 후처리만으로 다음의 공정으로 진행되는 반응 조건으로 할 필요가 있다. 특히, 공업적 스케일에서의 펩타이드 합성의 경우에는, 목적물의 칼럼 크로마토그래피에서의 정제는 비효율이기 때문에, 칼럼 크로마토그래피에 의존하지 않고서, 정석에 부침으로써 정제 가능한 조(粗)생성물을 얻는 수법이나 분액 조작 등의 후처리만으로 목적물을 얻는 수법이 필요하고, 그를 위한 반응 조건이나 후처리 조건을 새로이 발견할 필요도 있었다.
본 발명자들은, 상기 과제를 해결하기 위해서 예의 검토한 결과, 펩타이드의 액상 합성에 종래부터 관용되고 있던 DMF, 다이클로로메테인, 다이메틸설폭사이드 등의 용매와는 상이한 특정한 용매, 예를 들면, (i) 가열에 의해 분해되기 어렵고, (ii) 분액 조작에 있어서 수층과의 분리가 양호하고, 또한 (iii) 펩타이드쇄의 신장 반응이나 환화 반응이 양호하게 진행된다는 것과 같은 요건을 만족시키는 펩타이드 합성에 유용한 용매를 발견했다. 본 명세서에 기재되어 있는 방법에 유용한 용매는, 열분해에 대해서 저항성을 가질 수 있다. 이와 같은 저항성은, 바람직하게는, 측정 기기(예를 들면, GC, LC 또는 NMR, 바람직하게는 GC)를 이용한, 어떤 온도 범위에서의 용매의 안정성 시험에 의해 결정할 수 있다. 특정 용도의 용매는, 고온에서 저항성(예를 들면, 비점 부근에서 48시간 안정, 또는 실온 부근에서 2개월간 안정, 바람직하게는 비점 부근에서 48시간 안정)을 가질 수 있고, 상기에 예시되는 조건하, 그들의 순도를 99% 이상, 바람직하게는 99.9% 이상으로 유지할 수 있다. 본 발명의 용매는, 분액 조작에 있어서, 수층으로부터 양호한 분리를 나타낼 수 있다. 이와 같은 분리는, 용매와 물을 등량씩, 분액 깔때기, 반응 플라스크, 또는 반응조 중, 실온 부근(예를 들면, 15℃∼40℃, 바람직하게는 20℃∼30℃)에서, 30분 이내, 바람직하게는 15분 이내에 혼합하는 것에 의해 결정될 수 있다. 본 발명의 용매는, 펩타이드쇄의 신장 반응 및 환화 반응을 충분히 진행시킬 수 있다. 이와 같은 반응 진행은, 바람직하게는, 목적 화합물의 화학 수율, 또는 출발 물질의 목적 화합물로의 화학 변환을 측정 기기(예를 들면, GC, LC 또는 NMR, 바람직하게는 GC)를 사용하는 것에 의해 결정할 수 있다. 특정 용도의 용매는, 화학 수율 70%∼100%, 또는 화학 변환율 70%∼100%, 바람직하게는 화학 수율과 화학 변환율의 양쪽이 80%∼100%를 줄 수 있다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 용매는, 비점 부근에서 48시간 안정적일 수 있는 용매, 20℃∼30℃에서 15분 이내에 분액 조작으로 양호한 분리를 나타낼 수 있는 용매, 출발 물질의 화학 수율 및 화학 변환의 양쪽을 80%∼100%로 달성할 수 있는 용매이다. 이들 요건을 만족시키는 1종 또는 복수종의 용매를 각 반응이나 반응의 후처리 조작 시에 적절히 조합하여 이용함으로써, 중간체를 단리하는 일 없이, 분액이나 여과 등의 간편한 조작만에 의해 펩타이드쇄를 연속적으로 신장할 수 있고, 펩타이드 화합물을 환화할 수 있어, 용매에 포함되는 안정화제를 제거할 수 있다. 즉, 그 후의 반응에 대해서는, 당해 기술 분야에서 이해되고 있는 바와 같이 중간체, 예를 들면 단일의 생성물을 단리할 필요는 없다. 오히려, 본 발명에 의하면, 다음의 반응에 이용되는 용액은 중간체(이전의 반응의 생성물)를 포함하고, 및 이전의 반응의 1 이상의 반응 물질, 또는 시약을 추가로 포함할 수 있고, 그들은 다음의 반응에 앞서 가용화될 수 있다. 또한, 본 발명자들은, 분액 조작에 있어서, 특정한 수용액 혹은 유기 용매를 이용함으로써, 유기층 혹은 수층을 효율적으로 세정할 수 있는 것을 발견했다. 나아가서는, 본 발명자들은, 본 발명의 방법에 의해, 중간체를 단리, 정제하지 않고서 제조된 환상 펩타이드 화합물을, 칼럼 크로마토그래피에 의존하지 않고, 정석에 의해 단리, 정제함으로써, 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물, 더욱이 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 결정을 얻을 수 있는 것을 발견했다. 또한, 본 발명자들은, 축합 및 탈보호의 각 반응에 있어서 부생성물의 생성을 억제 가능한 반응 조건을 발견했다.
본 발명은, 비한정의 구체적인 일 태양에 있어서 이하를 포함한다.
〔1〕 1종 또는 복수종의 물과 혼화되지 않는 용매, 1종 또는 복수종의 수용성 알킬나이트릴류, 및 1종 또는 복수종의 수용성 에터류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수를 포함하는 용매(용매 A) 중, 펩타이드 화합물의 N 말단의 아미노산 잔기와 C 말단의 아미노산 잔기를 연결하는 공정을 포함하는, 액상법에 의해, 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물을 제조하는 방법.
〔1-1〕 용매 A가, 2-MeTHF, THF, 4-메틸테트라하이드로피란, MTBE, CPME, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 아세트산 아이소프로필, 아니솔, MeCN, 헵테인, 및 톨루엔으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 용매를 1개 이상 포함하는, 〔1〕에 기재된 방법.
〔2〕 N 말단의 아미노산 잔기와 C 말단의 아미노산 잔기가, 아마이드 결합, 또는 -(CH2)nS(CH2)m-, -(CH2)nS(O)(CH2)m-, 혹은 -(CH2)nS(O)2(CH2)m-으로부터 선택되는 결합에 의해 연결되고, 여기에서 n 및 m은 각각 독립적으로 1 또는 2인, 〔1〕에 기재된 방법.
〔3〕 환상 펩타이드 화합물이, 8∼20의 아미노산 잔기를 포함하고, 해당 아미노산 잔기 중 적어도 1개가 비천연 아미노산 잔기인, 〔1〕 또는 〔2〕에 기재된 방법.
〔4〕 환상 펩타이드 화합물이, 9∼15의 아미노산 잔기를 포함하고, 해당 아미노산 잔기 중 적어도 1개가 비천연 아미노산 잔기인, 〔1〕∼〔3〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔5〕 환상 펩타이드 화합물이, 적어도 1개의 N-치환된 비천연 아미노산 잔기를 포함하는, 〔1〕∼〔4〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔6〕 환상 펩타이드 화합물이, 적어도 1개의 N-비치환된 비천연 아미노산 잔기를 포함하는, 〔1〕∼〔5〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔7〕 환상 펩타이드 화합물이, 적어도 1개의 α,α 다이치환 아미노산 잔기를 포함하는, 〔1〕∼〔6〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔8〕 C 말단의 아미노산 잔기 또는 N 말단의 아미노산 잔기의 한쪽 또는 양쪽이, 카복실기의 α위 탄소에 부제 탄소를 갖지 않는 아미노산 잔기인, 〔1〕∼〔7〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔9〕 C 말단의 아미노산 잔기가, 카복실기의 α위 탄소에 부제 탄소를 갖지 않는 아미노산 잔기인, 〔1〕∼〔8〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔10〕 N 말단의 아미노산 잔기가, N-비치환된 아미노산 잔기인, 〔1〕∼〔8〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔11〕 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물이, 환상 펩타이드 화합물의 용매화물인, 〔1〕∼〔10〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔12〕 환상 펩타이드 화합물의 용매화물이, 환상 펩타이드 화합물의 수화물인, 〔1〕∼〔11〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔13〕 환상 펩타이드 화합물이, 하기 식:
[화학식 1]
으로 표시되는, 〔1〕∼〔12〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔14〕 환상 펩타이드 화합물의 단리 및/또는 정제에 칼럼 크로마토그래피를 이용하지 않는, 〔1〕∼〔13〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔15〕 환상 펩타이드 화합물을 정석에 의해 단리 및/또는 정제하여, 환상 펩타이드 화합물의 결정을 얻는 공정을 추가로 포함하는, 〔1〕∼〔14〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔16〕 환상 펩타이드 화합물의 결정이, 하기 식:
[화학식 2]
으로 표시되는 환상 펩타이드 화합물의 비용매화물 결정, 또는 용매화물 결정인, 〔15〕에 기재된 방법.
〔17〕 환상 펩타이드 화합물의 용매화물 결정이 수화물 결정인, 〔16〕에 기재된 방법.
〔18〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 7개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔17〕에 기재된 방법.
〔18-1〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 8개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔17〕에 기재된 방법.
〔18-2〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 9개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔17〕에 기재된 방법.
〔18-3〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 10개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔17〕에 기재된 방법.
〔18-4〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 11개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔17〕에 기재된 방법.
〔18-5〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 12개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔17〕에 기재된 방법.
〔18-6〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔17〕에 기재된 방법.
〔19〕 비용매화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 5.370°, 6.934°, 8.940°, 9.838°, 10.771°, 12.181°, 13.525°, 15.179°, 16.202°, 및 17.554°(±0.2°)의 피크를 포함하는 F형 결정인, 〔16〕에 기재된 방법.
〔20〕 용매화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 8.006°, 9.002°, 9.943°, 11.501°, 13.067°, 14.854°, 16.320°, 17.275°, 19.261°, 및 20.324°(±0.2°)의 피크를 포함하는 A형의 DMSO-수화물 결정인, 〔16〕에 기재된 방법.
〔21〕 용매화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 8.223°, 9.594°, 9.976°, 11.879°, 13.841°, 14.572°, 15.934°, 16.350°, 19.805°, 및 20.480°(±0.2°)의 피크를 포함하는 B형의 DMSO-수화물 결정인, 〔16〕에 기재된 방법.
〔22〕 용매화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 7.942°, 8.283°, 8.861°, 10.097°, 10.491°, 11.805°, 12.673°, 12.830°, 13.514°, 13.855°, 15.853°, 16.405°, 16.642°, 및 17.772°(±0.2°)의 피크를 포함하는 H형의 아세톤-수화물 결정인, 〔16〕에 기재된 방법.
〔23〕 용매 A가 2-MeTHF로 이루어지는 용매, 또는 2-MeTHF를 포함하는 용매인, 〔1〕∼〔22〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔23-1〕 용매 A가, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아니솔, 아세트산 아이소프로필, 아세트산 에틸, MTBE, CPME, 4-메틸테트라하이드로피란, 헵테인, 및 톨루엔으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 물과 혼화되지 않는 용매를 포함하는, 〔1〕∼〔22〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔24〕 용매 A가, 아세토나이트릴, 및/또는 프로피오나이트릴인 수용성 알킬나이트릴류를 포함하는, 〔1〕∼〔22〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔25〕 용매 A가, THF, 1,4-다이옥세인, 1,3-다이옥세인, 및 다이메톡시에테인으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 수용성 에터류를 포함하는, 〔1〕∼〔22〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔26〕 액상법에 의해 펩타이드 화합물을 제조하는 방법으로서,
공정 1: C-보호 아미노산 또는 C-보호 펩타이드에, N-보호 아미노산 또는 N-보호 펩타이드를 연결하는 공정,
공정 2: 공정 1 후에 N-보호기를 제거하는 공정, 및
임의로, 공정 1과 공정 2를 복수회 반복하여, 펩타이드 화합물을 제조하는 공정
을 포함하고, 공정 1과 공정 2의 생성물을 단리하는 공정을 포함하지 않는, 상기 방법.
〔27〕 펩타이드 화합물이 직쇄 펩타이드 화합물인, 〔1〕∼〔26〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔28〕 펩타이드 화합물이, 그의 부분 구조로서 환상 구조를 포함하는, 〔26〕 또는 〔27〕에 기재된 방법.
〔29〕 용매 A가, 펩타이드 화합물을 제조한 후의 용매를 포함하는, 〔1〕∼〔25〕 중 어느 하나에 기재된 방법으로서, 펩타이드 화합물이, 〔26〕에 기재된 방법에 의해 제조되는, 상기 방법.
〔30〕 공정 1과 공정 2를 각각 1회 행하거나, 또는 공정 1과 공정 2를 2회∼20회 반복하는, 〔26〕∼〔29〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔31〕 펩타이드 화합물을 제조하는 방법이, C-보호기를 제거하는 공정 3을 추가로 포함하는, 〔26〕∼〔30〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔32〕 반복의 최종회는, 공정 2를 포함하지 않는, 〔26〕∼〔31〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔33〕 공정 3이 반복의 최종회의 공정 1 후에 행해지는, 〔31〕 또는 〔32〕에 기재된 방법.
〔34〕 펩타이드 화합물을 제조하는 방법에 포함되는 각 공정이, 톨루엔, 아세톤, DMF, 아세토나이트릴, THF, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아니솔, 아세트산 아이소프로필, 헵테인, 아세트산 에틸, MTBE, 및 4-메틸테트라하이드로피란으로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 또는 복수의 용매(용매 B) 중에서 행해지는, 〔26〕∼〔33〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔34-1〕 용매 B가 2-MeTHF, MTBE, 아세트산 아이소프로필, 및 아세트산 에틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 〔26〕∼〔33〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔35〕 펩타이드 화합물을 제조하는 방법에 포함되는 각 공정의 후처리가, 분액 조작, 여과 조작, 및 농축 조작으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수의 조작을 포함하는, 〔26〕∼〔34〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔36〕 분액 조작 전에, 물과 혼화되지 않는 용매(용매 C), 수용성 알킬나이트릴류, 및/또는 수용성 에터류가 첨가되는, 〔35〕에 기재된 방법.
〔37〕 용매 C가, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아니솔, 아세트산 아이소프로필, 아세트산 에틸, MTBE, CPME, 4-메틸테트라하이드로피란, 및 헵테인으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수인, 〔36〕에 기재된 방법.
〔38〕 용매 C가, 2-MeTHF인, 〔36〕 또는 〔37〕에 기재된 방법.
〔39〕 용매 C가, 수층과 유기층으로 분리 가능한 양으로 첨가되는, 〔36〕∼〔38〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔40〕 분리 가능한 양이, 유기층 전체에 대해서, 약 50중량%∼100중량%인, 〔39〕에 기재된 방법.
〔41〕 유기층이, 2-MeTHF를 포함하는, 〔35〕∼〔40〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔42〕 분액 조작이, 유기층의 세정 조작을 포함하는, 〔35〕∼〔40〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔42-1〕 세정 조작이, 시트르산과 인산수소 이칼륨을 포함하는 수용액을 이용하여 행해지는 유기층의 세정 조작, 또는 2-MeTHF, 헵테인, MTBE, 혹은 아세트산 아이소프로필을 이용하여 행해지는 수층의 세정 조작을 포함하는, 〔35〕∼〔41〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔43〕 세정 조작이, 아세토나이트릴과 탄산 칼륨 수용액의 혼합액을 이용하여 행해지는 유기층의 세정 조작을 포함하는, 〔35〕∼〔42〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔44〕 분액 조작이, 탄산 나트륨 수용액, 황산수소 나트륨 수용액, 및/또는 탄산 나트륨 수용액을 이용하여 행해지는 유기층의 세정 조작을 포함하는, 〔35〕∼〔43〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔44-1〕 분액 조작이, 탄산 나트륨 수용액, 황산수소 나트륨 수용액, 및 탄산 나트륨 수용액을 이용하여 행해지는 유기층의 세정 조작을 포함하는, 〔35〕∼〔43〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔45〕 분액 조작 후에 유기층이, 목적물에 대해서 2% 이하의 BHT를 포함하는, 〔35〕∼〔44〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔45-1〕 (1) 펩타이드 화합물이 〔26〕∼〔45〕 중 어느 하나의 방법으로 제조되고, 및 (2) 용매 A가 〔35〕∼〔45〕 중 어느 하나의 방법에서 사용되는 용매를 추가로 포함하는, 〔1〕∼〔23-1〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔46〕 공정 1이, C-보호 아미노산 또는 C-보호 펩타이드의 N 말단의 아미노기와, N-보호 아미노산 또는 N-보호 펩타이드의 C 말단의 카복실기를 축합하는 공정을 포함하는, 〔26〕∼〔45〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔47〕 카복실기가 활성화되어 있는, 〔46〕에 기재된 방법.
〔48〕 공정 1이, 축합 시약의 존재하에서 행해지는, 〔46〕에 기재된 방법.
〔49〕 축합 시약이 T3P, EDCI, HATU, COMU, BEP, PyBOP, DMT-MM, 및 PyOxim으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 축합제를 포함하는, 〔48〕에 기재된 방법.
〔50〕 공정 2가, 촉매의 존재하, 접촉 수소화에 의해 행해지는, 〔26〕∼〔49〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔51〕 촉매가, Pd/C, Pd(OH)2/C, 또는 PtO2로부터 선택되는, 〔50〕에 기재된 방법.
〔52〕 공정 2가, 탈보호 시약의 존재하에서 행해지는, 〔26〕∼〔49〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔53〕 탈보호 시약이, TBAF, LiBH4, 피페리딘, 트라이플루오로아세트산, 또는 메테인설폰산으로부터 선택되는, 〔52〕에 기재된 방법.
〔54〕 N-보호기가, Cbz, p-나이트로벤질옥시카보닐, 2-나프틸메틸옥시카보닐, 다이페닐메틸옥시카보닐, 9-안트릴메틸옥시카보닐, Teoc, Boc, 트라이플루오로아세틸, Fmoc, 또는 Alloc로부터 선택되는, 〔26〕∼〔53〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔55〕 공정 3이, 탈보호 시약의 존재하에서 행해지는, 〔26〕∼〔44〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔56〕 탈보호 반응이, 산성 조건에서 행해지는, 〔55〕에 기재된 방법.
〔57〕 산성 조건이, HMDS와, TMSOTf, TMSI, TMSBr, 및 TMSCl로 이루어지는 군으로부터 선택되는 시약의 조합으로 달성되는, 〔56〕에 기재된 방법.
〔58〕 C-보호기가, t-Bu, 트라이틸, 큐밀, 메틸, 또는 에틸로부터 선택되는, 〔26〕∼〔57〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔59〕 C-보호 펩타이드 및 N-보호 펩타이드의 한쪽 또는 양쪽이, 2∼20의 아미노산 잔기를 포함하고, 해당 C-보호 펩타이드 및 N-보호 펩타이드의 한쪽 또는 양쪽에 포함되는 해당 아미노산 잔기 중 적어도 1개가 비천연 아미노산 잔기인, 〔26〕∼〔58〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔60〕 C-보호 펩타이드 및 N-보호 펩타이드의 한쪽 또는 양쪽이, 적어도 1개의 N-치환 아미노산 잔기를 포함하는, 〔26〕∼〔59〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔61〕 C-보호 펩타이드 및 N-보호 펩타이드의 한쪽 또는 양쪽이, 적어도 1개의 N-비치환된 비천연 아미노산 잔기를 포함하는, 〔26〕∼〔60〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔62〕 반복의 최종회의 공정 1에서 이용되는 C-보호 펩타이드 및 N-보호 펩타이드의 한쪽 또는 양쪽이, N-치환 아미노산 잔기를 4개 이상 포함하거나, 또는 N-치환 아미노산 잔기를 2개 이상 포함하고, 또한 α,α 다이치환 아미노산 잔기를 1개 이상 포함하는, 〔26〕∼〔61〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔63〕 반복의 최종회의 공정 1에서 이용되는 C-보호 펩타이드 및 N-보호 펩타이드의 한쪽 또는 양쪽이, 5개 또는 6개의 아미노산 잔기로 이루어지고, 4개 또는 5개의 비천연 아미노산 잔기를 포함하는 〔26〕∼〔62〕에 기재된 방법.
〔64〕 반복의 최종회의 공정 1에서 이용되는 C-보호 펩타이드가, C-보호된 MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGly이고, 반복의 최종회의 공정 1에서 이용되는 N-보호 펩타이드가, N-보호된 Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2인, 〔63〕에 기재된 방법.
〔65〕 C-보호 아미노산, 혹은 그의 염, 또는 C-보호 펩타이드, 혹은 그의 염이,
[화학식 3]
인, 〔26〕∼〔61〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔66〕 N-보호 아미노산, 혹은 그의 염, 또는 N-보호 펩타이드, 혹은 그의 염이,
[화학식 4]
인, 〔26〕∼〔61〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔67〕 펩타이드 화합물이,
[화학식 5]
인, 〔26〕∼〔61〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔68〕 펩타이드 화합물의 N 말단의 아미노산 잔기와 C 말단의 아미노산 잔기를 연결하는 공정을 추가로 포함하는, 〔26〕∼〔67〕 중 어느 하나에 기재된 방법.
〔69〕 (1) 하기 식:
[화학식 6]
으로 표시되는 직쇄 펩타이드 화합물을 준비하는 공정,
(2) N 말단의 아미노산 잔기와 C 말단의 아미노산 잔기를 연결하는 공정
을 포함하는, 하기 식:
[화학식 7]
으로 표시되는 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 제조 방법.
〔70〕 하기 식:
[화학식 8]
으로 표시되는 환상 펩타이드 화합물의 염, 용매화물, 또는 염의 용매화물.
〔70-1〕 HPLC 분석에 의한 210nm에서의 UVArea값에 의해 결정되는, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 또는 99% 이상의 순도를 갖는, 식 1로 표시되는 화합물, 그의 염, 또는 그들의 용매화물.
〔70-2〕 HPLC 분석에 의한 210nm에서의 UVArea%에 의해 결정되는, 총불순물이 5% 미만, 2% 미만, 1% 미만, 0.5% 미만, 또는 검출 불능한 양인 것을 특징으로 하는, 고순도의 식 1로 표시되는 화합물, 그의 염, 또는 그들의 용매화물.
〔70-3〕 HPLC 분석에 의한 210nm에서의 UVArea%에 의해 결정되는, 불순물 각각이 각각 1% 미만, 0.5% 미만, 0.1% 미만, 또는 검출 불능한 양인 것을 특징으로 하는, 〔70-2〕에 기재된 고순도의 식 1로 표시되는 화합물, 그의 염, 또는 그들의 용매화물.
〔70-4〕 HPLC 분석에 의한 210nm에서의 UVArea%에 의해 결정되는, 불순물이1% 미만, 0.5% 미만, 0.1% 미만, 또는 검출 불능한 양이고, 해당 불순물이 에피머, 과잉 신장체, 결손체, 이량체, 및 삼량체로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 〔70-2〕, 또는 〔70-3〕에 기재된 고순도의 식 1로 표시되는 화합물, 그의 염, 또는 그들의 용매화물.
〔70-5〕 HPLC 분석에 의한 210nm에서의 UVArea%에 의해 결정되는, 불순물이1% 미만, 0.5% 미만, 0.1% 미만, 또는 검출 불능한 양이고, 해당 불순물이 이하에 나타내는 환상 이량체(Cyclic dimer), 및/또는 이하에 나타내는 환상 삼량체(Cyclic trimer)인 것을 특징으로 하는, 〔70-2〕, 〔70-3〕, 또는 〔70-4〕에 기재된 고순도의 식 1로 표시되는 화합물, 그의 염, 또는 그들의 용매화물.
[화학식 9]
〔71〕 수화물, DMSO-수화물, 아세톤-수화물, 또는 DMSO 용매화물인, 〔70〕에 기재된 환상 펩타이드 화합물의 용매화물.
〔72〕 하기 식:
[화학식 10]
으로 표시되는 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 결정.
〔73〕 결정이, 비용매화물 결정, 용매화물 결정, 염의 결정, 및 염의 용매화물 결정으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 〔72〕에 기재된 결정.
〔74〕 결정이, 용매화물 결정인, 〔73〕에 기재된 결정.
〔75〕 용매화물 결정이 수화물 결정인, 〔72〕에 기재된 결정.
〔76〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 7개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔75〕에 기재된 결정.
〔76-1〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 8개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔75〕에 기재된 결정.
〔76-2〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 9개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔75〕에 기재된 결정.
〔76-3〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 10개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔75〕에 기재된 결정.
〔76-4〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 11개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔75〕에 기재된 결정.
〔76-5〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 12개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔75〕에 기재된 결정.
〔76-6〕 수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)의 피크를 포함하는 C형 결정인, 〔75〕에 기재된 결정.
〔77〕 비용매화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 5.370°, 6.934°, 8.940°, 9.838°, 10.771°, 12.181°, 13.525°, 15.179°, 16.202°, 및 17.554°(±0.2°)의 피크를 포함하는 F형 결정인, 〔73〕에 기재된 결정.
〔78〕 용매화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 8.006°, 9.002°, 9.943°, 11.501°, 13.067°, 14.854°, 16.320°, 17.275°, 19.261°, 및 20.324°(±0.2°)의 피크를 포함하는 A형의 DMSO-수화물 결정인, 〔73〕에 기재된 결정.
〔79〕 용매화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 8.223°, 9.594°, 9.976°, 11.879°, 13.841°, 14.572°, 15.934°, 16.350°, 19.805°, 및 20.480°(±0.2°)의 피크를 포함하는 B형의 DMSO-수화물 결정인, 〔73〕에 기재된 결정.
〔80〕 용매화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 7.942°, 8.283°, 8.861°, 10.097°, 10.491°, 11.805°, 12.673°, 12.830°, 13.514°, 13.855°, 15.853°, 16.405°, 16.642°, 및 17.772°(±0.2°)의 피크를 포함하는 H형의 아세톤-수화물 결정인, 〔73〕에 기재된 결정.
〔81〕 하기 식:
[화학식 11]
으로 표시되는 환상 펩타이드 화합물의 수화물 결정을 제조하는 방법으로서,
해당 환상 펩타이드 화합물을 해당 환상 펩타이드 화합물이 용해 가능한 양의 극성 유기 용매에 용해시켜 용액을 얻는 공정,
해당 용액을 농축하여, 해당 환상 펩타이드 화합물의 잔사를 얻는 공정, 및
해당 잔사에 물과 극성 유기 용매의 혼합액을 가하여, 해당 환상 펩타이드 화합물의 수화물 결정을 얻는 공정
을 포함하는, 상기 방법.
〔82〕 하기 식:
[화학식 12]
으로 표시되는 환상 펩타이드 화합물의 수화물 결정을 제조하는 방법으로서,
어모퍼스 상태의 해당 환상 펩타이드 화합물을 DMSO에 용해시켜 용액을 얻는 공정,
해당 용액을 동결 건조하여, 해당 환상 펩타이드 화합물의 동결 건조체를 얻는 공정, 및
해당 동결 건조체에 물-아세토나이트릴 혼합액을 가하여, 해당 환상 펩타이드 화합물의 수화물 결정을 얻는 공정
을 포함하는, 상기 방법.
상기 번호매김에 있어서, 종속항이 인용하는 번호는, 특별히 언급이 없는 한 그 번호의 지번을 포함한다. 예를 들면, 종속항에 있어서 인용하는 〔1〕은, 〔1〕과 함께, 그 지번인 〔1-1〕을 포함하는 것을 나타낸다. 다른 번호매김에 있어서도 마찬가지이다.
본 발명에 의하면, 복수의 비천연 아미노산 잔기를 포함하는 복잡한 아미노산 서열을 갖는 경우여도, 아미노산 잔기의 라세미화나 분자간 반응을 억제하여, 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물을 효율적으로 제조할 수 있다. 또한, 본 발명에 의하면, 중간체를 단리, 정제하지 않고서, 분액, 여과, 및 농축 등의 단순한 후처리를 행하는 것만으로, 펩타이드쇄의 연속적인 신장이나, 그에 뒤잇는 환화를 행할 수 있기 때문에, 목적으로 하는 펩타이드 화합물을 효율 좋게 제조할 수 있다. 본 발명의 제조 방법은, 펩타이드 화합물의 제조 비용을 삭감할 수 있고, 환경 부하도 경감할 수 있기 때문에, 대규모 스케일에서의 펩타이드 합성에 특히 유용하다.
[도 1] 도 1은, 실시예 25에서 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 분말 X선 회절 측정의 결과를 나타낸다. 세로축은 회절 강도이고, 가로축은 회절각 2θ(°)이다.
[도 2] 도 2는, 실시예 25-2에서 얻어진 화합물 1의 비용매화물 결정(F형 결정)의 분말 X선 회절 측정의 결과를 나타낸다. 세로축은 회절 강도이고, 가로축은 회절각 2θ(°)이다.
[도 3] 도 3은, 실시예 25-3에서 얻어진 화합물 1의 결정(A형 결정)의 분말 X선 회절 측정의 결과를 나타낸다. 세로축은 회절 강도이고, 가로축은 회절각 2θ(°)이다.
[도 4] 도 4는, 실시예 25-3에서 얻어진 화합물 1의 결정(B형 결정)의 분말 X선 회절 측정의 결과를 나타낸다. 세로축은 회절 강도이고, 가로축은 회절각 2θ(°)이다.
[도 5] 도 5는, 실시예 25-3에서 얻어진 화합물 1의 결정(B형 결정)의 열중량·시차 열분석의 결과를 나타낸다. 가로축은 온도(℃)이고, 오른쪽 세로축은 열중량 분석에 있어서의 샘플의 중량 변화(%)이다. 왼쪽 세로축은 시차 열분석에 있어서 관측된 열류를 나타낸다.
[도 6] 도 6은, 실시예 25-3에서 얻어진 화합물 1의 결정(B형 결정)의 1H-NMR 측정의 결과를 나타낸다.
[도 7] 도 7은, 실시예 25-4에서 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의, 상대습도 75%, 30%, 0%에 있어서의 분말 X선 회절 측정의 결과를 나타낸다. 세로축은 회절 강도이고, 가로축은 회절각 2θ(°)이다.
[도 8] 도 8은, 실시예 26에서 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 열중량·시차 열분석의 결과를 나타낸다. 가로축은 온도(℃) 및 측정 시간(분)이고, 오른쪽 세로축은 열중량 분석에 있어서의 샘플의 중량 변화(mg)이다. 왼쪽 세로축은 시차 열분석에 있어서 관측된 열류(mW)를 나타낸다.
[도 9] 도 9는, 실시예 26에서 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 단(單)결정 X선 구조 해석에 의한 결정 구조를 나타낸다.
[도 10] 도 10은, 실시예 26에서 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 동적 수증기 흡착 측정의 결과를 나타낸다. 세로축은 중량 변화(%)이고, 가로축은 상대습도(%)이다. 도 10에 있어서, 「Cycle1 Sorp」(검은 다이아몬드 표시)은 사이클 1에서의 흡착을 나타내고, 「Cycle1 Desorp」(검은 사각 표시)은 사이클 1에서의 탈리를 나타내고, 「Cycle2 Sorp」(검은 삼각 표시)은 사이클 2에서의 흡착을 나타내고, 「Cycle2 Desorp」(검은 사각 표시)은 사이클 2에서의 탈리를 나타낸다.
[도 11] 도 11은, 실시예 26-1에서 얻어진 화합물 1의 DMSO-수화물 결정(A형 결정)의 단결정 X선 구조 해석에 의한 결정 구조를 나타낸다. 이 결정 구조에 있어서는 화합물 1:DMSO:물이 1:6:3으로 모델화되어 있다.
[도 12] 도 12는, 실시예 26-2에서 얻어진 화합물 1의 아세톤-수화물 결정(H형 결정, 단결정 X선 구조 해석용)의 단결정 X선 구조 해석에 의한 결정 구조를 나타낸다. 이 결정 구조에 있어서는 화합물 1:아세톤:물이 1:1:4로 모델화되어 있다.
[도 13] 도 13은, 실시예 26-2에서 얻어진 화합물 1의 아세톤-수화물 결정(H형 결정, 분말 X선 회절 측정용)의 결과를 나타낸다. 세로축은 회절 강도이고, 가로축은 회절각 2θ(°)이다.
본 명세서에 있어서 사용되는 약어를 이하에 기재한다.
2-MeTHF: 2-메틸테트라하이드로퓨란
AcOEt: 아세트산 에틸
Alloc: 알릴옥시카보닐
BEP: 2-브로모-1-에틸피리디늄 테트라플루오로붕산염
BHT: 2,6-다이-tert-뷰틸-4-메틸페놀
Boc: t-뷰톡시카보닐
Cbz: 벤질옥시카보닐
COMU: (1-사이아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)다이메틸아미노-모폴리노-카베늄 헥사플루오로인산염
CPME: 사이클로펜틸 메틸 에터
CSA: 10-캠퍼설폰산
DIPEA: N,N-다이아이소프로필에틸아민
DMA: 다이메틸아세트아마이드
DMAP: 4-다이메틸아미노피리딘
DMF: N,N-다이메틸폼아마이드
DMT-MM: 4-(4,6-다이메톡시-1,3,5-트라이아진-2-일)-4-메틸모폴리늄 클로라이드
EDCI: 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드
HATU: O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로인산염
HMDS: 1,1,1,3,3,3-헥사메틸다이실라제인
HOAt: 1-하이드록시-7-아자벤조트라이아졸
HOBt: 1-하이드록시벤조트라이아졸
IPAc: 아세트산 아이소프로필
MeCN: 아세토나이트릴
MTBE: 메틸 tert-뷰틸 에터
MTHP: 4-메틸테트라하이드로피란
NMP: N-메틸피롤리돈
PyBOP: 1H-벤조트라이아졸-1-일옥시트라이피롤리디노포스포늄 헥사플루오로인산염
PyOxim: (에틸사이아노(하이드록시이미노)아세테이토-O2)-트라이-(1-피롤리딘일)-포스포늄 헥사플루오로인산염
T3P: 프로필포스폰산 무수물
TBAF: 테트라뷰틸암모늄 플루오라이드
Teoc: 2-(트라이메틸실릴)에톡시카보닐
THF: 테트라하이드로퓨란
TMSOTf: 트라이플루오로메테인설폰산 트라이메틸실릴
작용기 등의 정의(이하에 예시되는 용어는, 예시이며 특별히 한정을 의도하고 있지 않는 당업자가 공통적으로 이해할 수 있는 것이다)
본 명세서에 있어서의 「할로젠 원자」로서는, F, Cl, Br 또는 I가 예시된다.
본 명세서에 있어서 「알킬」이란, 지방족 탄화수소로부터 임의의 수소 원자를 1개 제거하여 유도되는 1가의 기이고, 골격 중에 헤테로원자(탄소 및 수소 원자 이외의 원자를 말한다.) 또는 불포화의 탄소-탄소 결합을 함유하지 않고, 수소 및 탄소 원자를 함유하는 하이드로카빌 또는 탄화수소기 구조의 부분 집합을 갖는다. 알킬은 직쇄상의 것뿐만 아니라, 분기쇄상의 것도 포함한다. 알킬로서 구체적으로는, 탄소 원자수 1∼20(C1-C20, 이하 「Cp-Cq」란 탄소 원자수가 p∼q개인 것을 의미한다)의 알킬이고, 바람직하게는 C1-C10 알킬, 보다 바람직하게는 C1-C6 알킬을 들 수 있다. 알킬로서, 구체적으로는, 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-뷰틸, s-뷰틸, t-뷰틸, 아이소뷰틸(2-메틸프로필), n-펜틸, s-펜틸(1-메틸뷰틸), t-펜틸(1,1-다이메틸프로필), 네오펜틸(2,2-다이메틸프로필), 아이소펜틸(3-메틸뷰틸), 3-펜틸(1-에틸프로필), 1,2-다이메틸프로필, 2-메틸뷰틸, n-헥실, 1,1,2-트라이메틸프로필, 1,2,2-트라이메틸프로필, 1,1,2,2-테트라메틸프로필, 1,1-다이메틸뷰틸, 1,2-다이메틸뷰틸, 1,3-다이메틸뷰틸, 2,2-다이메틸뷰틸, 2,3-다이메틸뷰틸, 3,3-다이메틸뷰틸, 1-에틸뷰틸, 2-에틸뷰틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「알켄일」이란, 적어도 1개의 이중 결합(2개의 인접 SP2 탄소 원자)을 갖는 1가의 기이다. 이중 결합 및 치환분(존재하는 경우)의 배치에 따라, 이중 결합의 기하학적 형태는, 엔트게겐(E) 또는 주잠멘(Z), 시스 또는 트랜스 배치를 취할 수 있다. 알켄일은, 직쇄상의 것뿐만 아니라, 분기쇄상의 것도 포함한다. 알켄일로서 바람직하게는 C2-C10 알켄일, 보다 바람직하게는 C2-C6 알켄일을 들 수 있고, 구체적으로는, 예를 들어, 바이닐, 알릴, 1-프로펜일, 2-프로펜일, 1-뷰텐일, 2-뷰텐일(시스, 트랜스를 포함한다), 3-뷰텐일, 펜텐일, 3-메틸-2-뷰텐일, 헥센일 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「알킨일」이란, 적어도 1개의 삼중 결합(2개의 인접 SP탄소 원자)을 갖는 1가의 기이다. 알킨일은, 직쇄상의 것뿐만 아니라, 분기쇄상의 것도 포함한다. 알킨일로서 바람직하게는 C2-C10 알킨일, 보다 바람직하게는 C2-C6 알킨일을 들 수 있고, 구체적으로는, 예를 들어, 에틴일, 1-프로핀일, 프로파질, 3-뷰틴일, 펜틴일, 헥신일, 3-페닐-2-프로핀일, 3-(2'-플루오로페닐)-2-프로핀일, 2-하이드록시-2-프로핀일, 3-(3-플루오로페닐)-2-프로핀일, 3-메틸-(5-페닐)-4-펜틴일 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「사이클로알킬」이란, 포화 또는 부분적으로 포화된 환상의 1가의 지방족 탄화수소기를 의미하고, 단환, 바이사이클로환, 스파이로환을 포함한다. 사이클로알킬로서 바람직하게는 C3-C8 사이클로알킬을 들 수 있고, 구체적으로는, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로뷰틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 바이사이클로[2.2.1]헵틸, 스파이로[3.3]헵틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「아릴」이란 1가의 방향족 탄화수소환을 의미하고, 바람직하게는 C6-C10 아릴을 들 수 있다. 아릴로서 구체적으로는, 예를 들어, 페닐, 나프틸(예를 들어, 1-나프틸, 2-나프틸) 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「헤테로사이클릴」이란, 탄소 원자에 더하여 1∼5개의 헤테로원자를 함유하는, 비방향족의 환상의 1가의 기를 의미한다. 헤테로사이클릴은, 환 중에 이중 및 또는 삼중 결합을 갖고 있어도 되고, 환 중의 탄소 원자는 산화되어 카보닐을 형성해도 되고, 단환이어도 축합환이어도 된다. 환을 구성하는 원자의 수는 바람직하게는 4∼10이고(4∼10원 헤테로사이클릴), 보다 바람직하게는 4∼7이다(4∼7원 헤테로사이클릴). 헤테로사이클릴로서는 구체적으로는, 예를 들어, 아제티딘일, 옥시란일, 옥세탄일, 아제티딘일, 다이하이드로퓨릴, 테트라하이드로퓨릴, 다이하이드로피란일, 테트라하이드로피란일, 테트라하이드로피리딜, 테트라하이드로피리미딜, 모폴린일, 싸이오모폴린일, 피롤리딘일, 피페리딘일, 피페라진일, 피라졸리딘일, 이미다졸린일, 이미다졸리딘일, 옥사졸리딘일, 아이속사졸리딘일, 싸이아졸리딘일, 아이소싸이아졸리딘일, 1,2-싸이아지네인, 싸이아다이아졸리딘일, 아제티딘일, 옥사졸리돈, 벤조다이옥산일, 벤즈옥사졸릴, 다이옥솔란일, 다이옥산일, 테트라하이드로피롤로[1,2-c]이미다졸, 싸이에탄일, 3,6-다이아자바이사이클로[3.1.1]헵탄일, 2,5-다이아자바이사이클로[2.2.1]헵탄일, 3-옥사-8-아자바이사이클로[3.2.1]옥탄일, 설탐, 2-옥사스파이로[3.3]헵틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「헤테로아릴」이란, 탄소 원자에 더하여 1∼5개의 헤테로원자를 함유하는, 방향족성의 환상의 1가의 기를 의미한다. 환은 단환이어도, 다른 환과의 축합환이어도 되고, 부분적으로 포화되어 있어도 된다. 환을 구성하는 원자의 수는 바람직하게는 5∼10(5∼10원 헤테로아릴)이고, 보다 바람직하게는 5∼7(5∼7원 헤테로아릴)이다. 헤테로아릴로서 구체적으로는, 예를 들어, 퓨릴, 싸이엔일, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 싸이아졸릴, 아이소싸이아졸릴, 옥사졸릴, 아이속사졸릴, 옥사다이아졸릴, 싸이아다이아졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 피리딜, 피리미딜, 피리다진일, 피라진일, 트라이아진일, 벤조퓨란일, 벤조싸이엔일, 벤조싸이아다이아졸릴, 벤조싸이아졸릴, 벤즈옥사졸릴, 벤즈옥사다이아졸릴, 벤즈이미다졸릴, 인돌릴, 아이소인돌릴, 인다졸릴, 퀴놀릴, 아이소퀴놀릴, 신놀릴, 퀴나졸린일, 퀴녹살린일, 벤조다이옥솔릴, 인돌리진일, 이미다조피리딜 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「알콕시」란, 상기 정의의 「알킬」이 결합한 옥시기를 의미하고, 바람직하게는 C1-C6 알콕시를 들 수 있다. 알콕시로서 구체적으로는, 예를 들어, 메톡시, 에톡시, 1-프로폭시, 2-프로폭시, n-뷰톡시, i-뷰톡시, s-뷰톡시, t-뷰톡시, 펜틸옥시, 3-메틸뷰톡시 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「알켄일옥시」란, 상기 정의의 「알켄일」이 결합한 옥시기를 의미하고, 바람직하게는 C2-C6 알켄일옥시를 들 수 있다. 알켄일옥시로서 구체적으로는, 예를 들어, 바이닐옥시, 알릴옥시, 1-프로펜일옥시, 2-프로펜일옥시, 1-뷰텐일옥시, 2-뷰텐일옥시(시스, 트랜스를 포함한다), 3-뷰텐일옥시, 펜텐일옥시, 헥센일옥시 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「사이클로알콕시」란, 상기 정의의 「사이클로알킬」이 결합한 옥시기를 의미하고, 바람직하게는 C3-C8 사이클로알콕시를 들 수 있다. 사이클로알콕시로서 구체적으로는, 예를 들어, 사이클로프로폭시, 사이클로뷰톡시, 사이클로펜틸옥시 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「아릴옥시」란, 상기 정의의 「아릴」이 결합한 옥시기를 의미하고, 바람직하게는 C6-C10 아릴옥시를 들 수 있다. 아릴옥시로서 구체적으로는, 예를 들어, 페녹시, 1-나프틸옥시, 2-나프틸옥시 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「아미노」란, 협의로는 -NH2를 의미하고, 광의로는 -NRR'를 의미하며, 여기에서 R 및 R'는 독립적으로, 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 사이클로알킬, 헤테로사이클릴, 아릴, 또는 헤테로아릴로부터 선택되거나, 혹은 R 및 R'는 그들이 결합하고 있는 질소 원자와 하나가 되어 환을 형성한다. 아미노로서 바람직하게는, -NH2, 모노 C1-C6 알킬아미노, 다이 C1-C6 알킬아미노, 4∼8원 환상 아미노 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「모노알킬아미노」란, 상기 정의의 「아미노」 중, R이 수소이고, 또한 R'가 상기 정의의 「알킬」인 기를 의미하며, 바람직하게는, 모노 C1-C6 알킬아미노를 들 수 있다. 모노알킬아미노로서 구체적으로는, 예를 들어, 메틸아미노, 에틸아미노, n-프로필아미노, i-프로필아미노, n-뷰틸아미노, s-뷰틸아미노, t-뷰틸아미노 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「다이알킬아미노」란, 상기 정의의 「아미노」 중, R 및 R'가 독립적으로 상기 정의의 「알킬」인 기를 의미하고, 바람직하게는, 다이 C1-C6 알킬아미노를 들 수 있다. 다이알킬아미노로서 구체적으로는, 예를 들어, 다이메틸아미노, 다이에틸아미노 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「환상 아미노」란, 상기 정의의 「아미노」 중, R 및 R'는 그들이 결합하고 있는 질소 원자와 하나가 되어 환을 형성하는 기를 의미하고, 바람직하게는, 4∼8원 환상 아미노를 들 수 있다. 환상 아미노로서 구체적으로는, 예를 들어, 1-아제티딜, 1-피롤리딜, 1-피페리딜, 1-피페라질, 4-모폴린일, 3-옥사졸리딜, 1,1-다이옥사이드싸이오모폴린일-4-일, 3-옥사-8-아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-일 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「보호 아미노」란, 임의의 보호기로 보호된 아미노기를 의미한다. 보호 아미노로서 구체적으로는, 예를 들면, Boc, Fmoc, Cbz, Troc, Alloc, Teoc, 또는 트라이플루오로아세틸 등의 보호기로 보호된 아미노를 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「아미노카보닐」이란, 상기 정의의 「아미노」가 결합한 카보닐기를 의미하고, 바람직하게는, -CONH2, 모노 C1-C6 알킬아미노카보닐, 다이 C1-C6 알킬아미노카보닐, 4∼8원 환상 아미노카보닐을 들 수 있다. 아미노카보닐로서 구체적으로는, 예를 들면, -CONH2, 다이메틸아미노카보닐, 1-아제티딘일카보닐, 1-피롤리딘일카보닐, 1-피페리딘일카보닐, 1-피페라진일카보닐, 4-모폴린일카보닐, 3-옥사졸리딘일카보닐, 1,1-다이옥사이드싸이오모폴린일-4-일카보닐, 3-옥사-8-아자바이사이클로[3.2.1]옥탄-8-일카보닐 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「알켄일옥시카보닐」이란, 상기 정의의 「알켄일옥시」가 결합한 카보닐기를 의미하고, 바람직하게는, C2-C6 알켄일옥시카보닐을 들 수 있다. 알켄일옥시카보닐로서 구체적으로는, 예를 들어, 바이닐옥시카보닐, 알릴옥시카보닐, 1-프로펜일옥시카보닐, 2-프로펜일옥시카보닐, 1-뷰텐일옥시카보닐, 2-뷰텐일옥시카보닐(시스, 트랜스를 포함한다), 3-뷰텐일옥시카보닐, 펜텐일옥시카보닐, 헥센일옥시카보닐 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「알킬설폰일」이란, 상기 정의의 「알킬」이 결합한 설폰일기를 의미하고, 바람직하게는 C1-C6 알킬설폰일을 들 수 있다. 알킬설폰일로서 구체적으로는, 예를 들어, 메틸설폰일 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「하이드록시알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개, 또는 복수의 수소가 수산기로 치환된 기를 의미하고, C1-C6 하이드록시알킬이 바람직하다. 하이드록시알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 하이드록시메틸, 1-하이드록시에틸, 2-하이드록시에틸, 2-하이드록시-2-메틸프로필, 5-하이드록시펜틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「할로알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 할로젠으로 치환된 기를 의미하고, C1-C6 할로알킬이 바람직하고, C1-C6 플루오로알킬이 보다 바람직하다. 할로알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 다이플루오로메틸, 트라이플루오로메틸, 2,2-다이플루오로에틸, 2,2,2-트라이플루오로에틸, 3,3-다이플루오로프로필, 4,4-다이플루오로뷰틸, 5,5-다이플루오로펜틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「사이아노알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 사이아노로 치환된 기를 의미하고, C1-C6 사이아노알킬이 바람직하다. 사이아노알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 사이아노메틸, 2-사이아노에틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「아미노알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「아미노」로 치환된 기를 의미하고, C1-C6 아미노알킬이 바람직하다. 아미노알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 1-피리딜메틸, 2-(1-피페리딜)에틸, 3-(1-피페리딜)프로필, 4-아미노뷰틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「카복시알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 카복시로 치환된 기를 의미하고, C2-C6 카복시알킬이 바람직하다. 카복시알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 카복시메틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알켄일옥시카보닐알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「알켄일옥시카보닐」로 치환된 기를 의미하고, C2-C6 알켄일옥시카보닐 C1-C6 알킬이 바람직하고, C2-C6 알켄일옥시카보닐 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 알켄일옥시카보닐알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 알릴옥시카보닐메틸, 2-(알릴옥시카보닐)에틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알콕시알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「알콕시」로 치환된 기를 의미하고, C1-C6 알콕시 C1-C6 알킬이 바람직하고, C1-C6 알콕시 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 알콕시알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 메톡시메틸, 에톡시메틸, 1-프로폭시메틸, 2-프로폭시메틸, n-뷰톡시메틸, i-뷰톡시메틸, s-뷰톡시메틸, t-뷰톡시메틸, 펜틸옥시메틸, 3-메틸뷰톡시메틸, 1-메톡시에틸, 2-메톡시에틸, 2-에톡시에틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「사이클로알킬알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「사이클로알킬」로 치환된 기를 의미하고, C3-C8 사이클로알킬 C1-C6 알킬이 바람직하고, C3-C6 사이클로알킬 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 사이클로알킬알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 사이클로프로필메틸, 사이클로뷰틸메틸, 사이클로펜틸메틸, 사이클로헥실메틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「사이클로알콕시알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「사이클로알콕시」로 치환된 기를 의미하고, C3-C8 사이클로알콕시 C1-C6 알킬이 바람직하고, C3-C6 사이클로알콕시 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 사이클로알콕시알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 사이클로프로폭시메틸, 사이클로뷰톡시메틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「헤테로사이클릴알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「헤테로사이클릴」로 치환된 기를 의미하고, 4∼7원 헤테로사이클릴 C1-C6 알킬이 바람직하고, 4∼7원 헤테로사이클릴 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 헤테로사이클릴알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 2-(테트라하이드로-2H-피란-4-일)에틸, 2-(아제티딘-3-일)에틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알킬설폰일알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「알킬설폰일」로 치환된 기를 의미하고, C1-C6 알킬설폰일 C1-C6 알킬이 바람직하고, C1-C6 알킬설폰일 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 알킬설폰일알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 메틸설폰일메틸, 2-(메틸설폰일)에틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「아미노카보닐알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「아미노카보닐」로 치환된 기를 의미하고, 아미노카보닐 C1-C6 알킬이 바람직하고, 아미노카보닐 C1-C4 알킬이 보다 바람직하다. 아미노카보닐알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 메틸아미노카보닐메틸, 다이메틸아미노카보닐메틸, t-뷰틸아미노카보닐메틸, 1-아제티딘일카보닐메틸, 1-피롤리딘일카보닐메틸, 1-피페리딘일카보닐메틸, 4-모폴린일카보닐메틸, 2-(메틸아미노카보닐)에틸, 2-(다이메틸아미노카보닐)에틸, 2-(1-아제티딘일카보닐)에틸, 2-(1-피롤리딘일카보닐)에틸, 2-(4-모폴린일카보닐)에틸, 3-(다이메틸아미노카보닐)프로필, 4-(다이메틸아미노카보닐)뷰틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「아릴옥시알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「아릴옥시」로 치환된 기를 의미하고, C6-C10 아릴옥시 C1-C6 알킬이 바람직하고, C6-C10 아릴옥시 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 아릴옥시알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 페녹시메틸, 2-페녹시에틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「아르알킬(아릴알킬)」이란, 상기 정의의 「알킬」의 적어도 1개의 수소 원자가 상기 정의의 「아릴」로 치환된 기를 의미하고, C7-C14 아르알킬이 바람직하고, C7-C10 아르알킬이 보다 바람직하다. 아르알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 벤질, 펜에틸, 3-페닐프로필 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「아르알콕시」란, 상기 정의의 「아르알킬」이 결합한 옥시기를 의미하고, C7-C14 아르알콕시가 바람직하고, C7-C10 아르알콕시가 보다 바람직하다. 아르알콕시로서 구체적으로는, 예를 들어, 벤질옥시, 펜에틸옥시, 3-페닐프로폭시 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「아르알콕시알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「아르알콕시」로 치환된 기를 의미하고, C7-C14 아르알콕시 C1-C6 알킬이 바람직하고, C7-C14 아르알콕시 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 아르알콕시알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 벤질옥시메틸, 1-(벤질옥시)에틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「헤테로아릴알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 적어도 1개의 수소 원자가 상기 정의의 「헤테로아릴」로 치환된 기를 의미하고, 5∼10원 헤테로아릴 C1-C6 알킬이 바람직하고, 5∼10원 헤테로아릴 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 헤테로아릴알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 3-싸이엔일메틸, 4-싸이아졸릴메틸, 2-피리딜메틸, 3-피리딜메틸, 4-피리딜메틸, 2-(2-피리딜)에틸, 2-(3-피리딜)에틸, 2-(4-피리딜)에틸, 2-(6-퀴놀릴)에틸, 2-(7-퀴놀릴)에틸, 2-(6-인돌릴)에틸, 2-(5-인돌릴)에틸, 2-(5-벤조퓨란일)에틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「헤테로아릴알콕시」란, 상기 정의의 「헤테로아릴알킬」이 결합한 옥시기를 의미하고, 5∼10원 헤테로아릴 C1-C6 알콕시가 바람직하고, 5∼10원 헤테로아릴 C1-C2 알콕시가 보다 바람직하다. 헤테로아릴알콕시로서 구체적으로는, 예를 들어, 3-싸이엔일메톡시, 3-피리딜메톡시를 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「헤테로아릴알콕시알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「헤테로아릴알콕시」로 치환된 기를 의미하고, 5∼10원 헤테로아릴 C1-C6 알콕시 C1-C6 알킬이 바람직하고, 5∼10원 헤테로아릴 C1-C2 알콕시 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 헤테로아릴알콕시알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 3-피리딜메톡시메틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「헤테로사이클로알킬리덴알킬」이란, 상기 정의의 「알킬」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「헤테로사이클로알킬리덴」으로 치환된 기를 의미하고, 4∼7원 헤테로사이클로알킬리덴 C1-C6 알킬이 바람직하고, 4∼7원 헤테로사이클로알킬리덴 C1-C2 알킬이 보다 바람직하다. 헤테로아릴알콕시알킬로서 구체적으로는, 예를 들어, 테트라하이드로-4H-피란-4-일리덴메틸, 아제티딘-3-일리덴메틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「알콕시알켄일」이란, 상기 정의의 「알켄일」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「알콕시」로 치환된 기를 의미하고, C1-C6 알콕시 C2-C6 알켄일이 바람직하다. 알콕시알켄일로서 구체적으로는, 예를 들어, (E)-4-메톡시뷰트-2-엔-1-일 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「아미노카보닐알켄일」이란, 상기 정의의 「알켄일」의 1개 또는 복수의 수소가 상기 정의의 「아미노카보닐」로 치환된 기를 의미하고, 아미노카보닐 C2-C6 알켄일이 바람직하다. 아미노카보닐알켄일로서 구체적으로는, 예를 들어, (E)-3-(다이메틸아미노카보닐)-프로프-2-엔-1-일 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「할로알콕시」란, 상기 정의의 「알콕시」의 1개 또는 복수의 수소가 할로젠으로 치환된 기를 의미하고, C1-C6 할로알콕시가 바람직하다. 할로알콕시로서 구체적으로는, 예를 들어, 다이플루오로메톡시, 트라이플루오로메톡시, 2,2-다이플루오로에톡시, 2,2,2-트라이플루오로에톡시 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 「알킬렌」이란, 상기 「알킬」로부터 임의의 수소 원자를 1개 더 제거해서 유도되는 2가의 기를 의미하고, C4-C8 알킬렌이 바람직하다. 알킬렌으로서 구체적으로는, -CH2-, -(CH2)2-, -(CH2)3-, -CH(CH3)CH2-, -C(CH3)2-, -(CH2)4-, -CH(CH3)CH2CH2-, -C(CH3)2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2C(CH3)2-, -CH2CH2CH(CH3)-, -(CH2)5-, -(CH2)6-, -(CH2)7-, -(CH2)8- 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「지환식 환」은, 비방향족 탄화수소환을 의미한다. 지환식 환은, 환 중에 불포화 결합을 가져도 되고, 2개 이상의 환을 갖는 다환성의 환이어도 된다. 또한 환을 구성하는 탄소 원자는 산화되어 카보닐을 형성해도 된다. 지환식 환으로서 바람직하게는 3∼8원 지환식 환을 들 수 있고, 구체적으로는, 예를 들어, 사이클로프로페인환, 사이클로뷰테인환, 사이클로펜테인환, 사이클로헥세인환, 사이클로헵테인환, 사이클로옥테인환, 바이사이클로[2.2.1]헵테인환 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「포화 헤테로환」은, 탄소 원자에 더하여 1∼5개의 헤테로원자를 함유하고, 환 중에 이중 결합 및/또는 삼중 결합을 포함하지 않는, 비방향족의 헤테로환을 의미한다. 포화 헤테로환은 단환이어도 되고, 다른 환, 예를 들면, 벤젠환 등의 방향환과 축합환을 형성해도 된다. 포화 헤테로환으로서 바람직하게는 4∼7원 포화 헤테로환을 들 수 있고, 구체적으로는, 예를 들어, 아제티딘환, 옥세테인환, 테트라하이드로퓨란환, 테트라하이드로피란환, 모폴린환, 싸이오모폴린환, 피롤리딘환, 4-옥소피롤리딘환, 피페리딘환, 4-옥소피페리딘환, 피페라진환, 피라졸리딘환, 이미다졸리딘환, 옥사졸리딘환, 아이속사졸리딘환, 싸이아졸리딘환, 아이소싸이아졸리딘환, 싸이아다이아졸리딘환, 옥사졸리돈환, 다이옥솔레인환, 다이옥세인환, 싸이에테인환, 옥타하이드로인돌환, 인돌린환 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「펩타이드」는, 천연 아미노산 및/또는 비천연 아미노산이 아마이드 결합 혹은 에스터 결합하여 형성되는 펩타이드이면 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 5∼30잔기, 보다 바람직하게는 7∼15잔기, 더 바람직하게는 9∼13잔기의 펩타이드이다. 펩타이드는, 직쇄 펩타이드여도 환상 펩타이드여도 된다.
본 명세서에 있어서, 「펩타이드쇄」란, 1, 2, 3, 4, 또는 그 이상의 천연 아미노산 및/또는 비천연 아미노산이 아마이드 결합 및/또는 에스터 결합에 의해 연결되어 있는 펩타이드쇄를 말한다. 펩타이드쇄로서 바람직하게는, 1∼4의 아미노산 잔기를 포함하는 펩타이드쇄이고, 보다 바람직하게는 1∼4의 아미노산 잔기로 이루어지는 펩타이드쇄이다.
본 명세서에 있어서 「치환되어 있어도 되는」이란, 어떤 기가 임의의 치환기에 의해 치환되어 있어도 되는 것을 의미한다.
본 명세서에 있어서 「보호되어 있어도 되는」이란, 어떤 기가 임의의 보호기에 의해 보호되어 있어도 되는 것을 의미한다.
본 명세서에 있어서 「1개 또는 복수의」란, 1개 또는 2개 이상의 수를 의미한다. 「1개 또는 복수의」가, 어떤 기의 치환기에 관련하는 문맥에서 이용되는 경우, 이 용어는, 1개로부터 그 기가 허용하는 치환기의 최대수까지의 수를 의미한다. 「1개 또는 복수의」로서 구체적으로는, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 및/또는 그보다 큰 수를 들 수 있다.
본 발명의 화합물은, 그의 염, 바람직하게는 그의 화학적 혹은 약학적으로 허용되는 염일 수 있다. 또한 본 발명의 화합물 또는 그의 염은, 그들의 용매화물, 바람직하게는 그의 화학적 혹은 약학적으로 허용되는 용매화물일 수 있다. 본 발명의 화합물의 염에는, 예를 들면, 염산염; 브로민화 수소산염; 아이오딘화 수소산염; 인산염; 포스폰산염; 황산염; 메테인설폰산염, p-톨루엔설폰산염 등의 설폰산염; 아세트산염, 시트르산염, 말산염, 타타르산염, 석신산염, 살리실산염 등의 카복실산염; 또는, 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리 금속염; 마그네슘염, 칼슘염 등의 알칼리 토류 금속염; 암모늄염, 알킬암모늄염, 다이알킬암모늄염, 트라이알킬암모늄염, 테트라알킬암모늄염 등의 암모늄염 등이 포함된다. 이들 염은, 예를 들어, 당해 화합물과, 의약품의 제조에 사용 가능한 산 또는 염기를 접촉시키는 것에 의해 제조된다. 본 발명에 있어서, 화합물의 용매화물이란, 화합물이 용매와 함께, 하나의 분자 집단을 형성한 것을 가리키고, 의약의 투여에 부수하여 섭취가 허용되는 용매에 의해 형성된 용매화물이면 특별히 한정되지 않는다. 용매가 물이면 수화물이라고 말한다. 본 발명의 화합물의 용매화물로서는, 수화물이 바람직하고, 그와 같은 수화물로서 구체적으로는 1∼10수화물, 바람직하게는 1∼5수화물, 더 바람직하게는 1∼3수화물을 들 수 있다. 본 발명의 화합물의 용매화물에는, 물, 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올 등), 다이메틸폼아마이드 등의 단독의 용매와의 용매화물뿐만 아니라, 복수의 용매와의 용매화물도 포함된다.
본 명세서에 있어서의 「아미노산」에는, 천연 아미노산, 및 비천연 아미노산이 포함된다. 본 명세서에 있어서의 「천연 아미노산」이란, Gly, Ala, Ser, Thr, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, His, Glu, Asp, Gln, Asn, Cys, Met, Lys, Arg, Pro를 가리킨다. 비천연 아미노산은 특별히 한정되지 않지만, β-아미노산, γ-아미노산, D형 아미노산, N 치환 아미노산, α,α-이치환 아미노산, 측쇄가 천연과 상이한 아미노산, 하이드록시카복실산 등이 예시된다. 본 명세서에 있어서의 아미노산으로서는, 임의의 입체 배치가 허용된다. 아미노산의 측쇄의 선택은 특별히 제한을 두지 않지만, 수소 원자 외에도 예를 들면 알킬기, 알켄일기, 알킨일기, 아릴기, 헤테로아릴기, 아르알킬기, 사이클로알킬기로부터 자유롭게 선택되고, 이들 기 중의 인접하지 않는 1 또는 2개의 메틸렌기는 산소 원자, 카보닐기(-CO-), 또는 설폰일기(-SO2-)로 치환되어 있어도 된다. 각각에는 치환기가 부여되어 있어도 되고, 그들 치환기도 제한되지 않고, 예를 들면, 할로젠 원자, O 원자, S 원자, N 원자, B 원자, Si 원자, 또는 P 원자를 포함하는 임의의 치환기 중에서 독립적으로 1개 또는 2개 이상 자유롭게 선택되어도 된다. 즉, 치환되어 있어도 되는 알킬기, 알켄일기, 알킨일기, 아릴기, 헤테로아릴기, 아르알킬기, 사이클로알킬기 등이 예시된다. 비한정의 일 태양에 있어서, 본 명세서에 있어서의 아미노산은, 동일 분자 내에 카복시기와 아미노기를 갖는 화합물이어도 된다(이 경우여도, 프롤린, 하이드록시프롤린과 같은 이미노산도 아미노산에 포함된다).
아미노산의 주쇄 아미노기는, 비치환(NH2기)이어도 되고, 치환되어 있어도 된다(즉, -NHR기: R은 치환기를 갖고 있어도 되는 알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 사이클로알킬을 나타내고, 이들 기 중의 인접하지 않는 1개 또는 2개의 메틸렌기는 산소 원자, 카보닐기(-CO-), 또는 설폰일기(-SO2-)로 치환되어 있어도 되고, 또한 프롤린과 같이 N 원자에 결합한 탄소쇄와 α위의 탄소 원자가 환을 형성하고 있어도 된다.). 상기 R의 치환기는, 전술한 아미노산 측쇄에 있어서의 치환기와 마찬가지로 선택된다. 주쇄 아미노기가 치환되어 있는 경우의 상기 R은, 본 명세서에 있어서의 「아미노산의 측쇄」에 포함된다. 이와 같은 주쇄 아미노기가 치환되어 있는 아미노산을, 본 명세서에 있어서 「N 치환 아미노산」이라고 칭한다. 본 명세서에 있어서의 「N 치환 아미노산」으로서는, 바람직하게는 N-알킬아미노산, N-C1-C6 알킬아미노산, N-C1-C4 알킬아미노산, N-메틸아미노산이 예시되지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에 있어서의 펩타이드 화합물을 구성하는 「아미노산」에는 각각에 대응하는 모든 동위체를 포함한다. 「아미노산」의 동위체는, 적어도 1개의 원자가, 원자 번호(양자수)가 동일하고, 질량수(양자와 중성자의 수의 합)가 상이한 원자로 천연과는 상이한 존재비로 치환된 것이다. 본 발명의 펩타이드 화합물을 구성하는 「아미노산」에 포함되는 동위체의 예로서는, 수소 원자, 탄소 원자, 질소 원자, 산소 원자, 인 원자, 황 원자, 불소 원자, 염소 원자 등이 있고, 각각, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl 등이 포함된다.
본 명세서에 있어서의 할로젠 원자를 포함하는 치환기로서는, 할로젠을 치환기에 갖는 알킬기, 사이클로알킬기, 알켄일기, 알킨일기, 아릴기, 헤테로아릴기, 아르알킬기 등이 예시되고, 보다 구체적으로는, 플루오로알킬, 다이플루오로알킬, 트라이플루오로알킬 등이 예시된다.
O 원자를 포함하는 치환기로서는, 하이드록시(-OH), 옥시(-OR), 카보닐(-C=O-R), 카복시(-CO2H), 옥시카보닐(-C=O-OR), 카보닐옥시(-O-C=O-R), 싸이오카보닐(-C=O-SR), 카보닐싸이오(-S-C=O-R), 아미노카보닐(-C=O-NHR), 카보닐아미노(-NH-C=O-R), 옥시카보닐아미노(-NH-C=O-OR), 설폰일아미노(-NH-SO2-R), 아미노설폰일(-SO2-NHR), 설파모일아미노(-NH-SO2-NHR), 싸이오카복실(-C(=O)-SH), 카복실카보닐(-C(=O)-CO2H) 등의 기를 들 수 있다.
옥시(-OR)의 예로서는, 알콕시, 사이클로알콕시, 알켄일옥시, 알킨일옥시, 아릴옥시, 헤테로아릴옥시, 아르알킬옥시 등을 들 수 있다. 알콕시로서는, C1-C4 알콕시, C1-C2 알콕시가 바람직하고, 그 중에서도 메톡시, 또는 에톡시가 바람직하다.
카보닐(-C=O-R)의 예로서는, 폼일(-C=O-H), 알킬카보닐, 사이클로알킬카보닐, 알켄일카보닐, 알킨일카보닐, 아릴카보닐, 헤테로아릴카보닐, 아르알킬카보닐 등을 들 수 있다.
옥시카보닐(-C=O-OR)의 예로서는, 알킬옥시카보닐, 사이클로알킬옥시카보닐, 알켄일옥시카보닐, 알킨일옥시카보닐, 아릴옥시카보닐, 헤테로아릴옥시카보닐, 아르알킬옥시카보닐 등을 들 수 있다.
카보닐옥시(-O-C=O-R)의 예로서는, 알킬카보닐옥시, 사이클로알킬카보닐옥시, 알켄일카보닐옥시, 알킨일카보닐옥시, 아릴카보닐옥시, 헤테로아릴카보닐옥시, 아르알킬카보닐옥시 등을 들 수 있다.
싸이오카보닐(-C=O-SR)의 예로서는, 알킬싸이오카보닐, 사이클로알킬싸이오카보닐, 알켄일싸이오카보닐, 알킨일싸이오카보닐, 아릴싸이오카보닐, 헤테로아릴싸이오카보닐, 아르알킬싸이오카보닐 등을 들 수 있다.
카보닐싸이오(-S-C=O-R)의 예로서는, 알킬카보닐싸이오, 사이클로알킬카보닐싸이오, 알켄일카보닐싸이오, 알킨일카보닐싸이오, 아릴카보닐싸이오, 헤테로아릴카보닐싸이오, 아르알킬카보닐싸이오 등을 들 수 있다.
아미노카보닐(-C=O-NHR)의 예로서는, 알킬아미노카보닐(예를 들면, C1-C6 또는 C1-C4 알킬아미노카보닐, 그 중에서도 에틸아미노카보닐, 메틸아미노카보닐 등이 예시된다.), 사이클로알킬아미노카보닐, 알켄일아미노카보닐, 알킨일아미노카보닐, 아릴아미노카보닐, 헤테로아릴아미노카보닐, 아르알킬아미노카보닐 등을 들 수 있다. 이들에 더하여, -C=O-NHR 중의 N 원자와 결합한 H 원자가, 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬로 더 치환된 기를 들 수 있다.
카보닐아미노(-NH-C=O-R)의 예로서는, 알킬카보닐아미노, 사이클로알킬카보닐아미노, 알켄일카보닐아미노, 알킨일카보닐아미노, 아릴카보닐아미노, 헤테로아릴카보닐아미노, 아르알킬카보닐아미노 등을 들 수 있다. 이들에 더하여 -NH-C=O-R 중의 N 원자와 결합한 H 원자가, 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬로 더 치환된 기를 들 수 있다.
옥시카보닐아미노(-NH-C=O-OR)의 예로서는, 알콕시카보닐아미노, 사이클로알콕시카보닐아미노, 알켄일옥시카보닐아미노, 알킨일옥시카보닐아미노, 아릴옥시카보닐아미노, 헤테로아릴옥시카보닐아미노, 아르알킬옥시카보닐아미노 등을 들 수 있다. 이들에 더하여, -NH-C=O-OR 중의 N 원자와 결합한 H 원자가 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬로 더 치환된 기를 들 수 있다.
설폰일아미노(-NH-SO2-R)의 예로서는, 알킬설폰일아미노, 사이클로알킬설폰일아미노, 알켄일설폰일아미노, 알킨일설폰일아미노, 아릴설폰일아미노, 헤테로아릴설폰일아미노, 아르알킬설폰일아미노 등을 들 수 있다. 이들에 더하여, -NH-SO2-R 중의 N 원자와 결합한 H 원자가 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬로 더 치환된 기를 들 수 있다.
아미노설폰일(-SO2-NHR)의 예로서는, 알킬아미노설폰일, 사이클로알킬아미노설폰일, 알켄일아미노설폰일, 알킨일아미노설폰일, 아릴아미노설폰일, 헤테로아릴아미노설폰일, 아르알킬아미노설폰일 등을 들 수 있다. 이들에 더하여, -SO2-NHR 중의 N 원자와 결합한 H 원자가 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬로 더 치환된 기를 들 수 있다.
설파모일아미노(-NH-SO2-NHR)의 예로서는, 알킬설파모일아미노, 사이클로알킬설파모일아미노, 알켄일설파모일아미노, 알킨일설파모일아미노, 아릴설파모일아미노, 헤테로아릴설파모일아미노, 아르알킬설파모일아미노 등을 들 수 있다. 또, -NH-SO2-NHR 중의 N 원자와 결합한 2개의 H 원자는 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 및 아르알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 치환기로 치환되어 있어도 되고, 또한 이들 2개의 치환기는 환을 형성해도 된다.
S 원자를 포함하는 치환기로서는, 싸이올(-SH), 싸이오(-S-R), 설핀일(-S=O-R), 설폰일(-SO2-R), 설포(-SO3H) 등의 기를 들 수 있다.
싸이오(-S-R)의 예로서는, 알킬싸이오, 사이클로알킬싸이오, 알켄일싸이오, 알킨일싸이오, 아릴싸이오, 헤테로아릴싸이오, 아르알킬싸이오 등의 중으로부터 선택된다.
설폰일(-SO2-R)의 예로서는, 알킬설폰일, 사이클로알킬설폰일, 알켄일설폰일, 알킨일설폰일, 아릴설폰일, 헤테로아릴설폰일, 아르알킬설폰일 등을 들 수 있다.
N 원자를 포함하는 치환기로서, 아자이드(-N3, 「아자이드기」라고도 한다), 사이아노(-CN), 1급 아미노(-NH2), 2급 아미노(-NH-R; 모노치환 아미노라고도 한다.), 3급 아미노(-NR(R'); 다이치환 아미노라고도 한다.), 아미디노(-C(=NH)-NH2), 치환 아미디노(-C(=NR)-NR'R"), 구아니디노(-NH-C(=NH)-NH2), 치환 구아니디노(-NR-C(=NR''')-NR'R"), 아미노카보닐아미노(-NR-CO-NR'R"), 피리딜, 피페리디노, 모폴리노, 아제티딘일 등의 기를 들 수 있다.
2급 아미노(-NH-R; 모노치환 아미노)의 예로서는, 알킬아미노, 사이클로알킬아미노, 알켄일아미노, 알킨일아미노, 아릴아미노, 헤테로아릴아미노, 아르알킬아미노 등을 들 수 있다.
3급 아미노(-NR(R'); 다이치환 아미노)의 예로서는, 예를 들면 알킬(아르알킬)아미노 등, 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬 등의 중으로부터 각각 독립적으로 선택되는, 임의의 2개의 치환기를 갖는 아미노기를 들 수 있고, 이들 임의의 2개의 치환기는 환을 형성해도 된다. 구체적으로는, 다이알킬아미노, 그 중에서도 C1-C6 다이알킬아미노, C1-C4 다이알킬아미노, 다이메틸아미노, 다이에틸아미노 등이 예시된다. 본 명세서에 있어서 「Cp-Cq 다이알킬아미노기」란, 아미노기에 Cp-Cq 알킬기가 2개 치환된 기를 말하고, 양 Cp-Cq 알킬기는 동일해도 상이해도 된다.
치환 아미디노(-C(=NR)-NR'R")의 예로서는, N 원자 상의 3개의 치환기 R, R', 및 R"가, 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬 중에서 각각 독립적으로 선택된 기, 예를 들면 알킬(아르알킬)(아릴)아미디노 등을 들 수 있다.
치환 구아니디노(-NR-C(=NR''')-NR'R")의 예로서는, R, R', R", 및 R'''가, 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬 중에서 각각 독립적으로 선택된 기, 혹은 이들이 환을 형성한 기 등을 들 수 있다.
아미노카보닐아미노(-NR-CO-NR'R")의 예로서는, R, R', 및 R"가, 수소 원자, 알킬, 사이클로알킬, 알켄일, 알킨일, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬 중에서 각각 독립적으로 선택된 기, 혹은 이들이 환을 형성한 기 등을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서 펩타이드 화합물을 구성하는 「아미노산 잔기」를 간단히 「아미노산」이라고 하는 경우가 있다.
본 명세서에 있어서, 「및/또는」이라는 용어의 의의는, 「및」과 「또는」이 적절히 조합된 모든 조합을 포함한다. 구체적으로는, 예를 들면, 「A, B, 및/또는 C」에는, 이하의 7종류의 베리에이션이 포함된다;
(i) A, (ii) B, (iii) C, (iv) A 및 B, (v) A 및 C, (vi) B 및 C, (vii) A, B, 및 C.
본 명세서에서 사용되는 「실질적으로/실질적이 되는」이라고 하는 표현은, 본 명세서에 예시되어 있는 성분이 주성분(예를 들면, 환상 펩타이드 화합물, 환상 펩타이드 화합물 및 펩타이드 화합물의 결정형이 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다)인 것을 의미하고, 본 발명의 실시형태의 효과에 마이너스의 영향을 미치지 않는 경우, 그와 같은 마이너스의 영향을 미치지 않는 정도의 양인 경우, 또는 그와 같은 마이너스의 영향을 미치지 않는 정도의 실시형태에서는, 다른 성분이 포함될 수 있는 것을 의미한다. 예를 들면, 다른 성분으로서, 본 명세서에 기재되어 있지 않은 성분(목적으로 하는 결정형 이외의 결정, 반응 부생성물, 또는 미반응 물질 등에 예시되는 불순물이 예시되지만, 이들로 한정되지 않는다)이 본 발명의 실시형태에 마이너스의 영향을 미치지 않는 경우, 그와 같은 마이너스의 영향을 미치지 않는 정도의 양인 경우, 또는 그와 같은 마이너스의 영향을 미치지 않는 정도의 실시형태에서는, 그들 성분이 포함되는 경우가 있다.
본 명세서에서 사용되는 「실질적으로 포함되지 않는/포함하지 않는」이라고 하는 표현은, 본 명세서에 예시되어 있는 성분이 주성분(예를 들면, 환상 펩타이드 화합물, 환상 펩타이드 화합물 및 펩타이드 화합물의 결정형이 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다)이고, 다른 성분이 포함되어 있지 않은 것, 또는 그와 같은 성분이 본 발명의 실시형태의 효과에 마이너스의 영향을 미치지 않는 경우, 그와 같은 마이너스의 영향을 미치지 않는 정도의 양인 경우, 또는 그와 같은 마이너스의 영향을 미치지 않는 정도의 실시형태에서는, 다른 성분이 포함될 수 있는 것을 의미한다. 예를 들면, 본 명세서에 기재되는 그와 같은 성분은, 발명의 실시형태의 효과에 마이너스의 영향을 미치지 않는 경우, 그와 같은 마이너스의 영향을 미치지 않는 정도의 양인 경우, 또는 그와 같은 마이너스의 영향을 미치지 않는 정도의 실시형태에서는, 그들 성분이 포함되는 경우가 있다.
본 발명의 효과와의 관련으로 사용되는 「마이너스의 영향」이라고 하는 용어는, 본 발명의 효과를 상충하는 영향을 의미한다. 예를 들면, 자연스럽게 나타날 작용을 100%로 한 경우, 본 발명의 작용을 30%, 20%, 10%, 또는 5% 이하로 저하시키는 것을, 「마이너스의 영향」이 있다고 말할 수도 있다.
환상 펩타이드 화합물을 제조하는 방법
어떤 태양에 있어서, 본 발명은, 액상법에 의해 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물을 제조하는 방법에 관한 것으로, 해당 방법은, 1종 또는 복수종의 물과 혼화되지 않는 용매(예를 들면, 물에 대한 용해도가 낮은 용매, 물/옥탄올 계수(log Kow)가 큰 용매, 또는 물/옥탄올 계수 예측값이 큰 용매), 1종 또는 복수종의 수용성 알킬나이트릴류, 및 1종 또는 복수종의 수용성 에터류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수를 포함하는 용매(용매 A) 중, 펩타이드 화합물의 N 말단의 아미노산 잔기와 C 말단의 아미노산 잔기를 연결하는 공정을 포함한다.
어떤 실시태양에 있어서, 물과 혼화되지 않는 용매는, 3 이상 10 이하의 탄소 원자를 갖는 에스터로서 특징지을 수 있고, 구체적으로는, 아세트산 에틸, 아세트산 아이소프로필, 아세트산 n-프로필, 아세트산 t-뷰틸, 프로피온산 메틸 또는 프로피온산 에틸 등이 예시된다.
어떤 실시태양에 있어서, 물과 혼화되지 않는 용매는, 4 이상 및 10 이하의 탄소 원자를 갖는 환상 에터로서 특징지을 수 있고, 구체적으로는, 2-MeTHF, THF, 4-메틸테트라하이드로피란 또는 1,4-다이옥세인 등이 예시된다. 어떤 실시태양에 있어서, 물과 혼화되지 않는 용매는, 4 이상 및 10 이하의 탄소 원자를 갖는 비환상 에터로서 특징지을 수 있고, 구체적으로는, MTBE, 다이아이소프로필 에터 또는 다이에틸 에터 등이 예시된다.
어떤 실시태양에 있어서, 물과 혼화되지 않는 용매는, 6 이상 및 10 이하의 탄소 원자를 갖는 환상 및 비환상 알킬기의 양쪽을 갖는 에터로서 특징지을 수 있고, 구체적으로는, CPME 등이 예시된다.
어떤 실시태양에 있어서, 물과 혼화되지 않는 용매는, 3 이상 및 10 이하의 탄소 원자를 갖는 탄산 에스터로서 특징지을 수 있고, 구체적으로는, 탄산 다이메틸, 탄산 다이에틸 또는 탄산 다이아이소프로필 등이 예시된다.
어떤 실시태양에 있어서, 물과 혼화되지 않는 용매는, 5 이상 및 10 이하의 탄소 원자를 갖는 탄화수소로서 특징지을 수 있고, 구체적으로는, 펜테인, 헥세인 또는 헵테인 등이 예시된다.
어떤 실시태양에 있어서, 물과 혼화되지 않는 용매는, 6 이상 및 10 이하의 탄소 원자를 갖는 방향족 탄화수소환으로서 특징지을 수 있고, 구체적으로는, 톨루엔, 자일렌 또는 벤젠 등이 예시된다.
어떤 실시태양에 있어서, 물과 혼화되지 않는 용매는, 주위 압력(약 1기압)에서 낮은 비점을 갖는 것을 특징지을 수 있다. 어떤 실시태양에 있어서, 상압(1기압 부근)에서의 저비점이란, 35℃ 이상 140℃ 미만으로서 예시되어 있다.
어떤 실시태양에 있어서, DMF, DMA, NMP 또는 다이메틸설폭사이드와 같은 상압(약 1기압)에서 140℃ 이상의 비점을 갖는 용매는, 본 발명에서는 제외할 수 있다.
특정한 실시형태에 있어서, 펩타이드 화합물 또는 환상 펩타이드 화합물과 반응할 가능성을 가질 수 있는 용매는, 본 발명에 있어서 수불혼화성 용제로부터 배제될 수 있다.
어떤 실시태양에 있어서, 물과 혼화되지 않는 용매로서의 부적당한 용매는, 아민(예를 들면, n-프로필아민 또는 다이아이소프로필아민), 또는 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 페놀)로서 특징지을 수 있다.
어떤 실시태양에 있어서, 본 명세서 중에서 이용되는 물과 혼화되지 않는 용매는, 특별히 한정을 의도하지 않지만, 낮은 수용성(예를 들면, 150g/L 이하의 물에 대한 용해도를 갖는다)을 갖는 용매를 포함한다. 물에 대한 용해도는, 당해 기술 분야에서 알려져 있거나, 본 명세서에 기재되어 있는 어느 방법에 의해서도 결정될 수 있다. 용해성을 결정하기 위한 예시적인 방법에는, 특별히 한정을 의도하는 것은 아니지만, 가스 크로마토그래피가 포함되고, 용매를 실온(예를 들면, 15℃∼40℃, 바람직하게는 20℃∼30℃)에서 등량의 물과 혼합하는 것에 의해 조제된, 수중의 상기 용매의 농도를 측정함으로써 결정할 수도 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 큰 물/옥탄올 계수(log Kow)값을 갖는 용매는, 바람직하게는 0(제로)보다 크고 5 미만의 계수를 갖는다. 물/옥탄올 계수(log Kow)는, 당해 기술 분야에서 알려져 있거나, 본 명세서에 기재되어 있는 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 큰 물/옥탄올 계수(log Kow)를 갖는 용매는 또한, 큰 물/옥탄올 계수의 예측값을 갖는 용매를 포함하고, 특별히 한정하지 않지만, 예를 들면 데이터베이스 검색 또는 문헌 검색에 의해, 각각의 명시적 측정에 있어서 공지된 수단에 의해 결정될 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 물과 혼화되지 않는 용매는 THF, 2-MeTHF, MTHP, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 아세트산 아이소프로필로 이루어지는 군으로부터 선택되는 용매이고, 바람직하게는 THF, 또는 2-MeTHF, 더 바람직하게는 2-MeTHF이다. 용매의 물과의 혼화성은, Merck Index 14th Edition에 기재되어 있고, 예를 들어 DMSO는 물에 용해되는 것이, 아세토나이트릴은 물과 혼화되는 것이 기재되어 있다. 한편으로 헵테인은 물에 불용이라고 기재되어 있다. 2-MeTHF는, 물과 혼화되지 않는다(Org. Process Res. Dev. 2007, 11, 1, 156-159.). 용매의 물과의 혼화성의 결정에 대하여, 당업자는 이하에 예시되는 주지된 방법으로 측정 가능하다. 예를 들면, 실온 부근(예를 들면 15℃∼40도, 바람직하게는 20℃∼30℃)에서, 동일 용량의 용매와 물을 혼화했을 때에, 용매와 물이 2층으로 분리됨으로써, 나타날 수 있다. 용매의 물과의 혼화성 시험은, 실온 부근(예를 들면 15℃∼40도, 바람직하게는 20℃∼30℃)에서, 동일 용량의 용매와 물을 분액 깔때기, 반응 플라스크, 또는 반응 가마 등의 용기 중에서 혼화하고, 용매와 물이 2층으로 분리되는지 여부를 예를 들면 육안으로 확인하는 것, 용기 중의 상층부와 하층부의 액체를 채취하여 확인하는 것에 의해 행할 수 있다. 이와 같은 방법으로 용매와 물이 2층으로 분리된 것을 확인할 수 있었던 경우, 해당 용매를 물과 혼화되지 않는 용매로 지칭하는 경우도 있다.
용매의 물과의 혼화성은, 용매의 물에 대한 용해도에 의존할 수 있다. 물과 혼화되지 않는 용매로는, 물에 대한 용해도가 낮은 용매를 들 수 있다. 물에 대한 용해도는, 온도에 따라 변화할 수 있지만, 본 명세서에 있어서의 용해도는, 실온 부근, 예를 들어 20℃∼30℃ 부근에 있어서의 용해도를 의미한다. 용매의 물에 대한 용해도는, 상기에 예시된 방법에 특정되지 않는 방법으로 실제로 측정하는 것도 가능하지만, 상업적 공급업자의 카탈로그나 Merck Index 14th Edition에 기재되어 있다. Merck Index 14th Edition에는, 물 1L에 대해, 탄산 다이메틸은 139g, 아세트산 아이소프로필은 43g, 아세트산 에틸은 100g 용해된다고 기재되어 있다. 헵테인은 물에 불용이라고 기재되어 있다. 물 1L에 대해, 2-MeTHF는 140g(Org. Process Res. Dev. 2007, 11, 1, 156-159.), 탄산 다이메틸은, 139g(J. Mol. Catal. A Chem. 2010, 317, 1-18.) 용해된다고 기재되어 있다. 또한, 용매의 물에 대한 용해도 예측은, SciFinder(등록상표) 등의 데이터베이스 검색 툴에 의해 조사할 수도 있다. 물 1L에 대해, 아니솔은 3.2g, 아세트산 아이소프로필은 20g, 아세트산 에틸은 39g, 헵테인은 4.7mg이 용해된다고 기재되어 있다. ChemIDplus Advanced(NIH)([2022년 5월 1일 검색], 인터넷<URL: https://chem.nlm.nih.gov/chemidplus/>)에서도, 물에 대한 용해도를 조사할 수 있다. 물과 혼화되는 아세토나이트릴, THF, 및 DMSO의 물에 대한 용해도는 1000g/L라고 기재되어 있다. 즉, 물과 혼화되지 않는 용매의 물에 대한 용해도는, 999g/L 이하이고, 500g/L 이하, 250g/L 이하, 바람직하게는 200g/L 이하, 보다 바람직하게는 150g/L 이하이다.
2-MeTHF의 실온(예를 들면, 25℃)에서의 물에 대한 용해도는 150g/L인 것이 주목된다. 따라서, 실온(예를 들면 25℃) 부근에 있어서, 용매의 물에 대한 용해도가 150g/L 이하라는 성질은, 해당 용매가 2-MeTHF와 동등하거나 그보다 우수한 성질을 갖고 있다고 할 수도 있다. 본 명세서에 기재되는 바와 같이, 본 발명의 용매를 이용하는 방법은, (1) 반응 용매로서 이용한 경우, 물과 혼화되지 않으므로, 반응 혼합물의 수용액을 이용한 후처리에 있어서의 추출 용매로서 이용할 수 있는 것, (2) 추출 용매로서 이용한 경우, 펩타이드 화합물을 포함하는 추출 용액을, 후속의 공정/반응을 위한 출발 재료(즉, 후속의 공정의 출발 화합물을 함유하는 용액)로서 사용할 수 있는 것 등으로부터 물과 혼화되지 않는 용매의 펩타이드 화합물 합성에 있어서의 사용에 유용해질 수 있다. 어떤 실시태양에 있어서, 본법에 의해, 출발 반응의 용매로부터, 중간체를 단리하는 일 없이, 전반응을 실시하여 완료하는 것을 가능하게 한다.
물에 대한 용해도가 낮은 용매에는, 물에 대한 용해도가 999g/L 이하인 용매가 포함되고, 특별히 한정하지 않지만, 예를 들면, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 아세트산 아이소프로필, 헵테인, 아니솔, MTBE, CPME, 4-메틸테트라하이드로피란, 톨루엔 등은, 물에 대한 용해도가 999g/L 이하인 용매에 해당한다. 환화 반응에 있어서의 목적물에 대한 변환율을 높이고, 부생성물의 생성을 억제하는 관점에서, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 혹은 아니솔, 또는 이들의 1종 혹은 복수종을 포함하는 용매가 바람직하게 이용된다.
용매의 물과의 혼화성은, 본 명세서에서 기술하는 바와 같이, 용매 고유의 물/옥탄올 계수(log Kow), 또는 물/옥탄올 계수 예측값에 의존할 수 있다. 물/옥탄올 계수는 화합물의 지용성을 나타내고, 지용성이 높은 것의 수치가 큰 것이 알려져 있다. log Kow는, 본 명세서에 기재된 대로, 당업자에게 주지된 방법으로 실제로 측정하는 것도 가능하다. 다른 태양으로서, log Kow값의 예측값은, 예를 들면 문헌에 기재된 값, SciFinder(등록상표) 등의 데이터베이스 검색 툴을 이용한 검색, ChemIDplus Advanced(NIH)([2022년 5월 1일 검색], 인터넷<URL: https://chem.nlm.nih.gov/chemidplus/>)에서의 검색에 의해서도 알 수 있다. 물과 혼화되지 않는 용매의 log Kow값, 또는 log Kow값의 예측값의 예시는 각각, 2-MeTHF가 1.35, 탄산 다이메틸이 0.23, 아니솔이 2.11, 아세트산 아이소프로필이 1.02, 아세트산 에틸이 0.73, 헵테인이 4.66으로, 양의 값을 취한다. 한편으로, 물과 혼화되는 용매의 log Kow값, 또는 log Kow값의 예측값은 각각, 아세토나이트릴이 -0.34, DMSO가 -0.31로, 음의 값을 취한다. 즉, 물과 혼화되지 않는 용매의 log Kow값, 또는 log Kow값의 예측값은, 양의 값을 취하는 것이 바람직하고, 바람직하게는 0 이상 5 이하가 예시된다.
물/옥탄올 계수(log Kow값)가 큰 용매, 또는 물/옥탄올 계수 예측값이 큰 용매로서, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 아세트산 아이소프로필, 헵테인, 아니솔, MTBE, CPME, 4-메틸테트라하이드로피란 등을 들 수 있다.
물과 혼화되지 않는 용매에는, 물에 대한 용해도가 낮은 용매, 혹은 물/옥탄올 계수(log Kow)가 양의 수를 취하는 것을 들 수 있다.
수용성 알킬나이트릴류로서는, 아세토나이트릴, 프로피오나이트릴 등을 들 수 있다.
수용성 에터류로서는, THF, 1,4-다이옥세인, 다이메톡시에테인 등을 들 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 용매 A에는, 물과 혼화되지 않는 용매, 수용성 알킬나이트릴류, 및 수용성 에터류로 이루어지는 군에 속하는 용매로부터 선택되는 1개 또는 복수가 포함될 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 용매 A는, 2-MeTHF, THF, MTHP, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 아세트산 아이소프로필, 아니솔, 아세토나이트릴, 다이클로로메테인, 및 톨루엔으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 용매를 포함할 수 있다. 예를 들면, 용매 A는, 1 이상의 물과 혼화되지 않는 용매, 1 이상의 수용성 알킬나이트릴류, 및 1 이상의 수용성 에터류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종류의 용매만으로 이루어져도 되고, 이들로부터 선택되는 2종류 이상의 용매가 포함되어 있어도 된다. 어떤 태양에 있어서, 용매 A에 물과 혼화되지 않는 용매가 포함되어 있는 경우, 용매 A에 포함되어 있는 해당 용매는, 수용성 알킬나이트릴류, 및 수용성 에터류로부터 선택되는 1종류 이상이어도 된다. 어떤 태양에 있어서, 용매 A에 수용성 알킬나이트릴류가 포함되어 있는 경우, 용매 A에 포함되어 있는 해당 용매는, 물과 혼화되지 않는 용매, 및 수용성 에터류로부터 선택되는 1종류 이상이어도 된다. 어떤 태양에 있어서, 용매 A에 수용성 에터류가 포함되어 있는 경우, 용매 A에 포함되어 있는 해당 용매는, 수용성 알킬나이트릴류, 및 물과 혼화되지 않는 용매로부터 선택되는 1종류 이상이어도 된다.
어떤 태양에 있어서, 용매 A에는, 물과 혼화되지 않는 용매, 수용성 알킬나이트릴류, 및 수용성 에터류에 더하여, 이들 중 어느 것에도 해당하지 않는 용매, 예를 들면, DMF나 아세톤이 포함되어 있어도 된다.
어떤 실시태양에 있어서, 용매 A는, 본 명세서에 기재된 펩타이드 화합물 또는 환상 펩타이드 화합물과 반응할 가능성이 있을 수 있는 용매, 예를 들면 알코올(MeOH, EtOH, n-PrOH, iPrOH, nBuOH, iBuOH, tBuOH), 제1급 아민(nPrNH2, iPrNH2, nBuNH2, tBuNH2), 제2급 아민(Et2NH, nPr2NH, iPr2NH, nBu2NH, tBu2NH), 및 카복실산(AcOH, EtCO2H, nPrCO2H) 등의 프로톤성 용매로부터 선택되는 용매를 포함하지 않는 경우가 있다.
용매 A에 물과 혼화되지 않는 용매, 수용성 알킬나이트릴류, 및 수용성 에터류 중 어느 것에도 해당하지 않는 용매가 포함되는 경우, 해당 용매는, 용매 A 전체의 40중량% 이하인 것이 바람직하고, 30중량% 이하, 25중량% 이하, 20중량% 이하, 15중량% 이하, 10중량% 이하, 또는 5중량% 이하인 것이 보다 바람직하다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 펩타이드 화합물은, 직쇄 펩타이드 화합물일 수 있다. 다른 태양에 있어서, 본 발명의 펩타이드 화합물은, 환상 펩타이드 화합물일 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 직쇄 또는 환상 펩타이드 화합물은, 그의 부분 구조로서 환상 구조를 포함해도 된다. 환상 구조로서 구체적으로는, 어떤 아미노산 잔기의 측쇄와 다른 아미노산 잔기의 측쇄가 연결된 것이나, 어떤 아미노산 잔기의 N 치환기와 다른 아미노산 잔기의 측쇄가 연결된 것이나, 어떤 아미노산 잔기의 N 치환기와 다른 아미노산 잔기의 N 치환기가 연결된 것 등을 들 수 있다. 환상 구조를 위한 연결에 관여하는 2개의 아미노산 잔기는, 인접하고 있어도 되고, 그 사이에 임의의 수의 아미노산 잔기, 예를 들면, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 또는 19개의 아미노산 잔기가 존재하고 있어도 된다. 환상 구조에 의해 형성되는 환의 크기는, 특별히 한정을 의도하지 않지만, 4원환, 5원환, 6원환, 7원환, 8원환, 9원환, 10원환, 11원환, 12원환, 13원환, 14원환, 15원환, 16원환, 17원환, 18원환, 19원환, 20원환, 21원환, 22원환, 23원환, 24원환, 25원환, 26원환, 27원환, 28원환, 29원환, 30원환, 31원환, 32원환, 33원환, 34원환, 또는 35원환 등이 예시된다. 펩타이드 화합물에 환상 구조가 존재하는 경우, 환상 구조의 수는 한정되지 않지만, 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개의 환상 구조가 존재하는 것이 바람직하다.
본 발명에 있어서, 펩타이드 화합물의 N 말단측의 아미노산 잔기와 C 말단측의 아미노산 잔기는, 아마이드 결합, 또는 -(CH2)nS(CH2)m-, -(CH2)nS(O)(CH2)m-, 혹은 -(CH2)nS(O)2(CH2)m-으로부터 선택되는 결합에 의해 연결된다. 여기에서 n 및 m은 각각 독립적으로 1 또는 2이다.
펩타이드 화합물의 N 말단측의 아미노산 잔기와 C 말단측의 아미노산 잔기를 아마이드 결합에 의해 연결하는 경우, N 말단의 아미노산 잔기의 아미노기와, C 말단의 아미노산 잔기의 카복실기를 축합하는 것에 의해, 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물이 제조될 수 있다. 아마이드 결합은 N 말단 아미노산 잔기의 주쇄의 아미노기와 C 말단 아미노산 잔기의 주쇄의 카복실기 사이에 형성된 것이어도 되고, N 말단 아미노산 잔기의 주쇄의 아미노기와 C 말단 아미노산 잔기의 측쇄의 카복실기 사이에 형성된 것이어도 되고, N 말단 아미노산 잔기의 측쇄의 아미노기와 C 말단 아미노산 잔기의 주쇄의 카복실기 사이에 형성된 것이어도 되고, N 말단 아미노산 잔기의 측쇄의 아미노기와 C 말단 아미노산 잔기의 측쇄의 카복실기 사이에 형성된 것이어도 된다. 축합에 있어서, 축합 시약을 이용하여 카복실기를 계 중에서 활성화해도 되고, 미리 카복실기를 활성 에스터로 변환한 것을 이용해도 된다. 본 명세서에 있어서, 「아미노기와 카복실기의 축합」이란, 아미노기와 카복실기를 아마이드 결합으로 연결하는 경우에 이용된다.
어떤 태양에 있어서, 축합 반응은, 축합 시약의 존재하 또는 부존재하, 용매 A 중, -20℃∼용매의 비점 부근의 온도, 바람직하게는 -20℃∼100℃, 바람직하게는 -5℃∼60℃의 온도에서, 반응 혼합물을 10분∼48시간 교반함으로써 행할 수 있다. 축합 반응에 축합 시약을 이용하는 경우, 원료 및 임의로 염기를 포함하는 용매에 축합 시약이나 축합 시약을 포함하는 용액을 첨가해도 되고, 축합 시약을 포함하는 용액에 원료 및 임의로 염기를 포함하는 용액을 첨가해도 된다. 본 명세서에 있어서는, 축합 시약을 포함하는 용액에 원료 및 임의로 염기를 포함하는 용액을 적하하는 조작을 「역적하」라고 하는 경우가 있다. 축합 시약을 포함하는 용액을 장시간, 예를 들면, 수 시간∼수 일간, 바람직하게는 1∼24시간, 보다 바람직하게는 1∼10시간에 걸쳐서 역적하함으로써, 다이머나 트라이머의 부생을 억제할 수 있다. 축합 반응에 축합 시약을 이용하지 않는 경우, 미리 카복실기를 활성 에스터로 변환한 것을 이용해도 된다.
아미노기와 카복실기를 축합할 때의 축합제 및 그의 사용량으로서는, 아마이드 결합을 형성할 수 있는 것이면 특별히 한정되지 않고, 펩타이드 합성에서 일반적으로 사용되는 축합제 및 사용량이 바람직하다(예를 들면, Peptide Coupling Reagents, More than a Letter Soup(Chem. Rev. 2011, 111, 6557-6602.)).
이와 같은 축합제로서 구체적으로는 예를 들면, 카보다이이미드 골격을 갖는 축합제를 들 수 있다. 예를 들면, 카보다이이미드 골격을 갖는 축합제는, 활성 에스터를 형성할 수 있는 하이드록시 화합물과 조합하여, 축합 반응에 이용할 수 있다. 카보다이이미드 골격을 갖는 축합제로서는, 예를 들면, N,N'-다이사이클로헥실카보다이이미드(DCC), N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC), 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드 염산염(EDCI HCl) 등을 들 수 있다(예를 들면, WATANABE Chemical의 카탈로그, Amino acids and chiral building blocks to new medicine 참조).
활성 에스터를 형성할 수 있는 하이드록시 화합물로서는, 예를 들면, 1-하이드록시-1H-벤조트라이아졸(HOBt), 1-하이드록시-7-아자벤조트라이아졸(HOAt), 2-사이아노-2-(하이드록시이미노)아세트산 에틸(oxyma), 3,4-다이하이드로-3-하이드록시-4-옥소-1,2,3-벤조트라이아진(HOOBt 또는 HODhbt), N-하이드록시-5-노보넨-2,3-다이카복시미드(HONB), 2,3,4,5,6-펜타플루오로페놀(HOPfp), N-하이드록시석신이미드(HOSu), 6-클로로-1-하이드록시-1H-벤조트라이아졸(Cl-HOBt)을 들 수 있다(예를 들면, WATANABE Chemical의 카탈로그, Amino acids and chiral building blocks to new medicine 참조). 또한, 이들 골격을 갖는 염, 예를 들면 oxyma의 칼륨염인 K-oxyma 등도 이용할 수 있다. 이들 중에서는 특히 HOBt, HOAt, oxyma, HOOBt가 바람직하다. 그 중에서도, DIC와 HOAt를 조합하여 이용하는 것, 혹은 DIC와 oxyma를 조합하여 이용하는 것이 바람직하다. 그 밖에, 포스포늄계 축합제·유로늄계 축합제로서 O-(1H-벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로인산염(HBTU), O-(7-아자-1H-벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로인산염(HATU), N-[1-(사이아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)다이메틸아미노(모폴리노)]유로늄 헥사플루오로인산염(COMU), O-[(에톡시카보닐)사이아노메틸렌아미노]-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로인산염(HOTU), O-(1H-벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로붕산염(TBTU), O-(7-아자벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로붕산염(TATU), [에틸사이아노(하이드록시이미노)아세테이토-O2]트라이-1-피롤리딘일포스포늄 헥사플루오로인산염(PyOxim), 2-브로모-1-에틸피리디늄 테트라플루오로붕산염(BEP), 1H-벤조트라이아졸-1-일옥시-트라이(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로인산염(PyBOP), 1H-벤조트라이아졸-1-일옥시-트리스(다이메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로인산염(BOP), 브로모트라이(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로인산염(PyBroP), 클로로트라이(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로인산염(PyCloP), (7-아자벤조트라이아졸-1-일옥시)트라이피롤리디노포스포늄 헥사플루오로인산(PyAOP), 브로모트리스(다이메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로인산(Brop), 3-(다이에톡시포스포릴옥시)-1,2,3-벤조트라이아진-4(3H)-온(DEPBT), N,N,N',N'-테트라메틸-O-(N-석신이미딜)유로늄 테트라플루오로붕산(TSTU), N,N,N',N'-테트라메틸-O-(N-석신이미딜)유로늄 헥사플루오로인산(HSTU), O-(3,4-다이하이드로-4-옥소-1,2,3-벤조트라이아진-3-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로붕산염(TDBTU), 테트라메틸유로늄 S-(1-옥사이드-2-피리딜)-N,N,N',N'-테트라플루오로붕산염(TOTT), O-(2-옥소-1(2H)피리딜)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 테트라플루오로붕산(TPTU) 중 어느 것과, N,N-다이아이소프로필에틸아민(DIPEA), 트라이에틸아민(TEA), 2,4,6-트라이메틸피리딘(2,4,6-콜리딘), 2,6-다이메틸피리딘(2,6-루티딘) 중 어느 염기를 조합하여 축합 반응에 이용할 수 있다. 특히 HATU와 DIPEA를 조합하여 이용하는 것, 혹은 COMU와 DIPEA를 조합하여 이용하는 것이 바람직하다. 그 밖에, N,N'-카보닐다이이미다졸(CDI), 1,1'-카보닐-다이-(1,2,4-트라이아졸)(CDT), 4-(4,6-다이메톡시-1,3,5-트라이아진-2-일)-4-메틸모폴리늄 염화물(DMT-MM), 프로필포스폰산 무수물(T3P) 등의 축합제를 이용할 수도 있다. 환화 반응의 변환율을 높이고, 부생성물을 억제하는 관점에서, 본 발명의 축합제로서는, HATU, PyBOP, PyOxim이 바람직하다. 또한, 용매와 축합제의 조합은, HATU와 아니솔, 탄산 다이메틸, 또는 2-MeTHF, PyBOP와 아세토나이트릴, 아니솔, 탄산 다이메틸, 2-MeTHF, 4-메틸테트라하이드로피란, 또는 아세트산 에틸, PyOxim과 아세토나이트릴, 아니솔, 탄산 다이메틸, 2-MeTHF, 아세트산 에틸이 바람직하다. 용매와 축합제의 조합은, 아니솔과 PyBOP, 탄산 다이메틸과 PyBOP, 2-MeTHF와 PyBOP의 조합이 보다 바람직하다.
펩타이드 화합물의 N 말단측의 아미노산 잔기와 C 말단측의 아미노산 잔기를 -(CH2)nS(CH2)m-, -(CH2)nS(O)(CH2)m-, 또는 -(CH2)nS(O)2(CH2)m-으로부터 선택되는 결합에 의해 연결하는 경우, 예를 들면, N 말단측의 아미노산 잔기에 포함되는 할로알킬기, 또는 바이닐기와, C 말단측의 아미노산 잔기에 포함되는 싸이올기를 반응시켜, C-S-C 결합을 형성하고, 필요에 따라서, 황 원자를 산화하여 설폭사이드, 설폰으로 변환하는 것에 의해, 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물이 제조될 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물은, 8∼20, 바람직하게는 9∼15개의 아미노산 잔기를 포함하고, 해당 아미노산 잔기 중, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개는, 비천연 아미노산 잔기일 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물에 포함되는 비천연 아미노산의 비율로서는, 펩타이드 화합물에 포함되는 아미노산의 총수의 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상이 예시된다.
환상 펩타이드 화합물에 포함되는 비천연 아미노산 잔기는, N-치환된 비천연 아미노산 잔기여도, N-비치환된 비천연 아미노산 잔기여도 된다. 천연 아미노산의 주쇄의 아미노기가 수소 이외의 어떠한 원자 혹은 작용기로 치환된 아미노산 잔기나, 측쇄에 천연 아미노산과는 상이한 구조를 갖고, 또한 주쇄의 아미노기가 수소 이외의 어떠한 원자 혹은 작용기로 치환된 아미노산 잔기는, N-치환된 비천연 아미노산 잔기에 해당한다. 또한, 주쇄의 아미노기는 치환되어 있지 않지만, 측쇄에 천연 아미노산과는 상이한 구조를 갖는 아미노산 잔기는, N-비치환된 비천연 아미노산 잔기에 해당한다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물은, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 N-치환 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물에 포함되는 N-치환 아미노산 잔기의 비율로서는, 펩타이드 화합물에 포함되는 아미노산의 총수의 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상이 예시된다. N-치환 아미노산 잔기는, N-치환된 비천연 아미노산 잔기일 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물은, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 N-비치환된 비천연 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물에 포함되는 N-비치환된 비천연 아미노산 잔기의 비율로서는, 펩타이드 화합물에 포함되는 아미노산의 총수의 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상이 예시된다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물은, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 α,α 다이치환 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물에 포함되는 α,α 다이치환 아미노산 잔기의 비율로서는, 펩타이드 화합물에 포함되는 아미노산의 총수의 5% 이상, 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상이 예시된다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물은, 9∼11개의 아미노산 잔기로 이루어지고, 그 중의 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 또는 6개 이상이 N-치환 아미노산 잔기이고, 그 중의 1개 이상, 또는 2개 이상이, N-비치환된 비천연 아미노산 잔기일 수 있다. 본 발명의 방법은, 이와 같은 비천연 아미노산 잔기를 많이 포함하는, 환상 펩타이드 화합물의 대규모 스케일에서의 제조에 특히 유용하다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물은, 용매화물인 것이 바람직하고, 수화물, DMSO-수화물, 아세톤-수화물, 또는 DMSO 용매화물인 것이 보다 바람직하고, 수화물이 더 바람직하다.
어떤 태양에 있어서, 직쇄 펩타이드 화합물의 C 말단측의 아미노산 잔기 또는 N 말단측의 아미노산 잔기의 한쪽 또는 양쪽은, 카복실기의 α위 탄소에 부제 탄소를 갖지 않는 아미노산 잔기일 수 있다. 환화에 제공하는 아미노산 잔기를 이와 같은 부제 탄소를 갖지 않는 것으로 함으로써, 환화 반응 시의 라세미화를 억제할 수 있다. 카복실기의 α위 탄소에 부제 탄소를 갖지 않는 아미노산 잔기로서, α위 탄소 상의 치환기가 동일한 것을 들 수 있다. 예를 들면 α위 탄소가 2개의 수소 원자로 치환된, 즉 α위 탄소가 -CH2-인 아미노산 원자(예를 들면 글라이신이나 N-메틸글라이신과 같은 N-치환 글라이신)는, 부제 탄소를 가지지 않는다. α위 탄소 상의 치환기가 동일한 것으로서, 메틸기와 메틸기와 같은 동일한 치환기를 가지는 것은 부제 탄소를 가지지 않는다. α위 탄소가, 스파이로사이클로프로필기, 스파이로사이클로뷰틸기, 스파이로사이클로펜틸기, 스파이로사이클로헥실기 등의 스파이로사이클릴로 치환된 것, 즉 α위 탄소 상의 치환기끼리가 해당 α위 탄소와 하나가 되어 환을 형성하는 것(예를 들면 cLeu 등)도, 카복실기의 α위 탄소에 부제 탄소를 갖지 않는다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물은, 하기 식(1):
[화학식 13]
로 표시되는 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물이다. 국제 공개 제2013/100132호에도 기재되어 있는 바와 같이, 식 1로 표시되는 화합물은, KRAS 저해제로서 유용하고, 여러 가지 KRAS에 관련한 질병, 예를 들어 KRAS에 관련한 암에 사용될 수 있다.
식(1)의 환상 펩타이드 화합물은, 하기 식(2):
[화학식 14]
를 갖는 직쇄 펩타이드 화합물의 N 말단의 아미노산 잔기와 C 말단의 아미노산 잔기를 연결하는 공정을 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 해당 연결하는 공정은, 1종 또는 복수종의 물과 혼화되지 않는 용매, 1종 또는 복수종의 수용성 알킬나이트릴류, 및 1종 또는 복수종의 수용성 에터류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수를 포함하는 용매 중에서, 식(2)의 화합물의 N 말단의 아미노기와 C 말단의 카복실기를 축합시키는 것을 포함한다. 이 환상 펩타이드 화합물의 제조에는, 수용성 알킬나이트릴류, 예를 들면, 아세토나이트릴을 포함하는 용매나, 물과 혼화되지 않는 용매, 예를 들면, 아니솔, 탄산 다이메틸, 및/또는 2-MeTHF를 포함하는 용매를 이용하는 것이 바람직하다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 단리 및/또는 정제에는, 칼럼 크로마토그래피를 이용하지 않는 것이 바람직하다.
본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물은, 칼럼 크로마토그래피 대신에, 예를 들면, 정석에 의해 결정화하는 것에 의해, 단리 및/또는 정제할 수 있다.
구체적으로는, 예를 들면, 축합 반응 후의 반응 용액을 분액 조작에 제공하고, 필요에 따라서 유기층을 농축, 및/또는 여과한 후, 얻어진 잔사에 정석에 적합한 용매를 가하고, 임의로 종정(種晶)을 가하고, 필요에 따라서 교반함으로써, 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 결정을 얻을 수 있다. 정석 시에 첨가되는 용매는, 환상 펩타이드 화합물이 결정을 형성할 수 있는 용매이면 특별히 제한은 없지만, 환상 펩타이드 화합물이 용해된 용액에 대해, 환상 펩타이드 화합물의 용해도를 저하시키는 조작을 행할 수 있는 용매가 바람직하다. 예를 들면 빈용매의 첨가나 용액의 냉각에 의해, 환상 펩타이드 화합물의 용해도를 저하시켜 결정화가 가능한 경우는, 그와 같은 조작이 가능한 용매가 예시된다. 또한, 환상 펩타이드 화합물의 조(粗)결정을 현탁액 상태하, 임의의 시간 현탁 상태를 유지함으로써 환상 펩타이드 화합물의 결정을 얻을 수 있는 경우는, 그와 같은 조작이 가능한 용매를 결정화에 이용할 수 있다. 정석 시에 첨가되는 용매로서, 구체적으로는, 예를 들면, 아세톤, 물, DMSO, 아세토나이트릴, 또는 에탄올, 및 이들의 혼합 용매 등을 들 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법에 의해 제조되는 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 결정은, 후술과 같은, 식(1)의 화합물의 비용매화물 결정, 용매화물 결정, 염의 결정, 또는 염의 용매화물 결정일 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 비용매화물 결정(무용매화 결정)은, 용매화 결정, 또는 수화물 결정이 아닌 결정을 가리키는 경우가 있다. 식(1)의 화합물의 용매화물 결정은, DMSO-수화물 결정(A형 결정, 또는 B형 결정), 수화물 결정(C형 결정), 또는 아세톤-수화물 결정(H형 결정)인 것이 바람직하고, 수화물 결정인 것이 보다 바람직하다.
펩타이드 화합물을 제조하는 방법
어떤 태양에 있어서, 본 발명은, 액상법에 의해 펩타이드 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 해당 방법은, 각 공정의 생성물을 단리하는 공정을 포함하지 않고서, 이하의 공정 1 및 공정 2, 및 임의로 해당 공정 1과 해당 공정 2를 복수회 반복하는 것을 포함하고, 이에 의해 펩타이드 화합물을 제조할 수 있다.
(공정 1) C-보호 아미노산 또는 C-보호 펩타이드에, N-보호 아미노산 또는 N-보호 펩타이드를 연결/축합하는 공정;
(공정 2) 공정 1 후에 N-보호기를 제거/탈보호하는 공정.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법은, 공정 1과 공정 2를 각각 1회씩 포함할 수 있고, 어떤 태양에 있어서, 본 발명의 방법은, 공정 1과 공정 2를 복수회 반복할 수 있다. 펩타이드쇄를 연속적으로 신장시키기 위해서는, 공정 1과 공정 2를 복수회, 예를 들면, 2∼20회 반복하는 것이 바람직하다.
본 명세서에 있어서 「C-보호 아미노산」이란, 카복실기가 보호된 천연 또는 비천연의 아미노산을 의미하고, 「C-보호 펩타이드」란, C 말단의 아미노산 잔기의 카복실기가 보호된 펩타이드를 의미한다. 해당 펩타이드는, 천연 아미노산 잔기만으로 구성되어 있어도, 비천연 아미노산 잔기만으로 구성되어 있어도, 천연 아미노산 잔기와 비천연 아미노산 잔기의 임의의 조합으로 구성되어 있어도 된다.
C-보호 펩타이드는, 2∼20의 아미노산 잔기를 포함할 수 있고, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개가 비천연 아미노산 잔기인 것이 바람직하다. C-보호 펩타이드에 포함되는 비천연 아미노산 잔기는, N-치환 아미노산 잔기여도, N-비치환된 비천연 아미노산 잔기여도 된다. 어떤 태양에 있어서, C-보호 펩타이드에 포함되는 비천연 아미노산 잔기의 비율로서는, C-보호 펩타이드에 포함되는 아미노산의 총수의 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상이 예시된다.
C-보호 펩타이드가 N-치환 아미노산 잔기를 포함하는 경우, C-보호 펩타이드는, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 N-치환 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 어떤 태양에 있어서, C-보호 펩타이드에 포함되는 N-치환 아미노산 잔기의 비율로서는, C-보호 펩타이드에 포함되는 아미노산의 총수의 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상이 예시된다. N-치환 아미노산 잔기는, 비천연 아미노산 잔기일 수 있다.
C-보호 펩타이드가 N-비치환된 비천연 아미노산 잔기를 포함하는 경우, C-보호 펩타이드는, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 N-비치환된 비천연 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 어떤 태양에 있어서, C-보호 펩타이드에 포함되는 N-비치환된 비천연 아미노산 잔기의 비율로서는, C-보호 펩타이드에 포함되는 아미노산의 총수의 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상이 예시된다.
「C-보호 아미노산」 및 「C-보호 펩타이드」의 카복실기의 보호기로는 펩타이드의 용매에 대한 용해성을 저하시키지 않는 한, 본 기술 분야에서 기지인 임의의 보호기를 이용할 수 있다. C-보호 아미노산, 및 C-보호 펩타이드의 용해도는, 이들을 반응에 이용하는 용매에, 적어도 1%(w/v) 이상, 더 바람직하게는 5%(w/v) 이상이다. 이와 같은 카복실기의 보호기로서, 구체적으로는, 메틸기, 에틸기, t-Bu기, 트라이틸기, 큐밀기 등을 들 수 있고, 이들 중에서는 t-Bu기가 바람직하다.
본 명세서에 있어서 「N-보호 아미노산」이란, 아미노기가 보호된 천연 또는 비천연의 아미노산을 의미하고, 「N-보호 펩타이드」란, N 말단의 아미노산 잔기의 아미노기가 보호된 펩타이드를 의미한다. 해당 펩타이드는, 천연 아미노산 잔기만으로 구성되어 있어도, 비천연 아미노산 잔기만으로 구성되어 있어도, 천연 아미노산 잔기와 비천연 아미노산 잔기의 임의의 조합으로 구성되어 있어도 된다.
N-보호 펩타이드는, 2∼20의 아미노산 잔기를 포함할 수 있고, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개가 비천연 아미노산 잔기인 것이 바람직하다. N-보호 펩타이드에 포함되는 비천연 아미노산 잔기는, N-치환 아미노산 잔기여도, N-비치환된 비천연 아미노산 잔기여도 된다. 어떤 태양에 있어서, N-보호 펩타이드에 포함되는 비천연 아미노산 잔기의 비율로서는, N-보호 펩타이드에 포함되는 아미노산의 총수의 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상이 예시된다.
N-보호 펩타이드가 N-치환 아미노산 잔기를 포함하는 경우, N-보호 펩타이드는, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 N-치환 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 어떤 태양에 있어서, N-보호 펩타이드에 포함되는 N-치환 아미노산 잔기의 비율로서는, N-보호 펩타이드에 포함되는 아미노산의 총수의 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상이 예시된다. N-치환 아미노산 잔기는, 비천연 아미노산 잔기일 수 있다.
N-보호 펩타이드가 N-비치환된 비천연 아미노산 잔기를 포함하는 경우, N-보호 펩타이드는, 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개, 적어도 7개, 적어도 8개, 적어도 9개, 적어도 10개, 적어도 11개, 적어도 12개, 적어도 13개, 적어도 14개, 적어도 15개, 적어도 16개, 적어도 17개, 적어도 18개, 또는 적어도 19개의 N-비치환된 비천연 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 어떤 태양에 있어서, N-보호 펩타이드에 포함되는 N-비치환된 비천연 아미노산 잔기의 비율로서는, N-보호 펩타이드에 포함되는 아미노산의 총수의 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상이 예시된다.
「N-보호 아미노산」 및 「N-보호 펩타이드」의 아미노기의 보호기로는, 펩타이드의 용매에 대한 용해성을 저하시키지 않는 한, 본 기술 분야에서 기지인 임의의 보호기를 이용할 수 있다. 이와 같은 아미노기의 보호기로서, 구체적으로는 Cbz, p-나이트로벤질옥시카보닐, 2-나프틸메틸옥시카보닐, 다이페닐메틸옥시카보닐, 9-안트릴메틸옥시카보닐, Teoc, Boc, 트라이플루오로아세틸, 또는 Alloc 등을 들 수 있고, 이들 중에서는 Cbz, Teoc, 또는 트라이플루오로아세틸이 바람직하다.
당 기술 분야에서 공지인 바와 같이, N-보호 및 C-보호 아미노산, 및/혹은 N-보호 및 C-보호 펩타이드의 각각에 대한 보호기는 통상, 화학반응 조건에 따라서 선택되고, 당 기술 분야에서 공지된 통상의 방법에 의해 결정할 수 있다.
예를 들면, 물과 혼화되지 않는 용매(예를 들면, 친유성 용매)가 이용되는 경우, 친수성 보호기는 유기 용매 중의 보호 화합물의 용해도를 저하시킬 수 있기 때문에, 그와 같은 친수성 보호기는 적합한 보호기가 아닌 경우도 있다. 따라서, 본 명세서에 기재된 바와 같이 물과 혼화되지 않는 용매를 사용하는 경우, 친유성 보호기는, 물과 혼화되지 않는 용매 중에서의 예를 들면 펩타이드 화합물의 용해도를 유지할 수 있기 때문에, 바람직한 보호기일 수 있다.
그와 같은 보호기의 선택은, 당해 기술 분야에서 알려져 있는 방법, 또는 본 명세서에 기재되어 있는 방법, 예를 들면 「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014」에 기재되어 있는 방법 등에 의해 행할 수 있다.
비한정적인 실시태양으로서, 본 발명의 방법에서 사용될 수 있는 N-보호기의 예시로서는 Cbz기를 들 수 있다. 아미노산이 아미노산 잔기 중의 α위에 스파이로-사이클로알킬기와 같은 입체 장애가 큰 작용기를 갖는 경우, 트라이플루오로아세틸이 바람직하게 예시된다.
(축합)
공정 1은, C-보호 아미노산 또는 C-보호 펩타이드에, N-보호 아미노산 또는 N-보호 펩타이드를 연결하여, N 말단과 C 말단이 각각 보호된 직쇄 펩타이드 화합물을 얻는 공정이다.
어떤 태양에 있어서, 공정 1에 있어서의 C-보호 아미노산 또는 C-보호 펩타이드와, N-보호 아미노산 또는 N-보호 펩타이드의 연결은, C-보호 아미노산 또는 C-보호 펩타이드의 N 말단의 아미노기와, N-보호 아미노산 또는 N-보호 펩타이드의 C 말단의 카복실기를, 축합 시약의 존재하 또는 비존재하에서 축합하는 것에 의해 행해진다. 축합 시약의 존재하에서 반응을 행하는 경우, 계 중에서 카복실기를 활성화할 수 있다. 축합 시약의 비존재하에서 반응을 행하는 경우, 카복실기를 미리 활성화한 N-보호 아미노산 또는 N-보호 펩타이드를 이용해도 된다.
공정 1에서는, 용매를 제외하고, 앞의 「환상 펩타이드 화합물을 제조하는 방법」의 항에 기재된 방법, 예를 들면, 반응 조건이나 시약을 채용할 수 있고, 본공정에서 바람직하게 이용되는 축합 시약에는, T3P, EDCI, HATU, COMU, BEP, PyBOP, DMT-MM, 및 PyOxim으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 축합제가 포함된다.
공정 1은, 톨루엔, 아세톤, DMF, 아세토나이트릴, THF, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아니솔, 아세트산 아이소프로필, 헵테인, 아세트산 에틸, 및 4-메틸테트라하이드로피란으로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 또는 복수의 용매(용매 B) 중에서 반응 및 그 후의 후처리를 행할 수 있고, 생성물, 즉 목적하는 축합체를 단리나 정제하는 일 없이, 다음의 공정을 행할 수 있다. 용매 B에는, 2-MeTHF, 2-MeTHF와 아세토나이트릴의 혼합 용매(혼합비: 아세토나이트릴 1중량부에 대해, 2-MeTHF가 0.5중량부 이상, 바람직하게는 0.5중량부 내지 20중량부, 더 바람직하게는 1중량부 내지 10중량부, 더 바람직하게는 1중량부 내지 5중량부), 4-메틸테트라하이드로피란, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 및/또는 아니솔이, 적어도 1중량% 이상, 5중량% 이상, 10중량% 이상, 15중량% 이상, 20중량% 이상, 25중량% 이상, 30중량% 이상, 35중량% 이상, 40중량% 이상, 45중량% 이상, 50중량% 이상, 55중량% 이상, 60중량% 이상, 65중량% 이상, 70중량% 이상, 75중량% 이상, 80중량% 이상, 85중량% 이상, 90중량% 이상, 또는 95중량% 이상 포함되는 것이 바람직하다. 이 경향은, 특히 축합제로서 HATU를 이용한 경우에 현저하다. 또한, 공정 1이 복수회 행해지는 경우, 그 중의 적어도 1회, 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회, 적어도 6회, 적어도 7회, 적어도 8회, 적어도 9회, 또는 적어도 10회에 있어서, 혹은 전체 공정 1의 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%에 있어서, 용매 B에는, 2-MeTHF가 적어도 1중량% 이상, 5중량% 이상, 10중량% 이상, 15중량% 이상, 20중량% 이상, 25중량% 이상, 30중량% 이상, 35중량% 이상, 40중량% 이상, 45중량% 이상, 또는 50중량% 이상, 55중량% 이상, 60중량% 이상, 65중량% 이상, 70중량% 이상, 75중량% 이상, 80중량% 이상, 85중량% 이상, 90중량% 이상, 또는 95중량% 이상 포함되는 것이 바람직하다.
(탈보호)
공정 2는, 공정 1에서 얻어진, N 말단과 C 말단이 각각 보호된 펩타이드로부터 N 말단의 보호기를 제거하는 공정이다.
어떤 태양에 있어서, 공정 2는, 예를 들면, N-보호기가 Cbz, p-나이트로벤질옥시카보닐, 2-나프틸메틸옥시카보닐, 다이페닐메틸옥시카보닐, 및 9-안트릴메틸옥시카보닐의 경우 등에는, 접촉 수소화에 의해 행할 수 있다. 접촉 수소화에는, 본 기술 분야에서 기지인 임의의 촉매를 이용할 수 있다. 촉매로서, 구체적으로는, 예를 들면, Pd/C, Pd(OH)2/C, 또는 PtO2 등을 들 수 있고, Pd/C가 바람직하다. 접촉 수소화에 이용하는 수소는 상압에서 이용해도 가압해서 이용해도 된다. 가압해서 이용하는 경우, 1atm(14.7psi) 이상이면 되고, 바람직하게는 1atm(14.7psi) 이상 3atm(44.1psi) 이하, 바람직하게는 1atm(14.7psi) 이상 2atm(29.4psi) 이하, 보다 바람직하게는 1atm(14.7psi) 이상 1.8atm(26.5psi) 이하이다. 반응의 진행에 수반하여, 예를 들면 수소압이 반응 개시 시의 수소압의 90% 이하 정도로 감소한 경우, 반응 개시 시의 초기 수소압 정도까지 재차 수소를 추가하는 것도 가능하며, 그 횟수에 제한은 없고, 목적하는 탈보호 반응이 목적으로 하는 반응 전환율에 이를 때까지 행할 수 있다. 또한, 출발 원료의 존재하에서 반응 용기 내를 수소로 치환하여 반응을 개시할 수도 있고, 출발 원료의 비존재하에서 반응 용기 내를 수소로 치환한 후에, 출발 원료를 반응 용기 내에 투입하여 반응을 개시할 수도 있다.
어떤 태양에 있어서, 공정 2는, 탈보호 시약의 존재하에서 행할 수 있다. 탈보호 시약은, N-보호기의 종류에 따라서, 본 기술 분야에서 기지인 임의의 시약, 예를 들면, 「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014」에 기재된 시약을 이용할 수 있지만, 예를 들면, N-보호기가 Teoc, 트라이플루오로아세틸, Fmoc, 또는 Boc인 경우 등에는, TBAF, LiBH4, 피페리딘, 트라이플루오로아세트산, 또는 메테인설폰산 등이 바람직하게 이용된다.
비천연 아미노산 및 펩타이드의 질소 원자의 보호기로서 트라이플루오로아세틸기가 이용되는 경우, 수소화 붕소 나트륨 등의 금속 하이드라이드 환원제로 제거할 수 있는 것이 알려져 있지만(Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014), 경우에 따라서는, 완전히 제거할 수 없거나, 부생성물을 발생시키거나 하는 경우가 있다. 본 발명자들은, 트라이플루오로아세틸기로 보호된 cLeu 유도체(TFA-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)NMe2)를 수소화 붕소 나트륨으로 처리하면, 원하는 탈보호체 외에 아마이드 결합이 절단된 MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)NMe2가 부생하는 것에 조우했다. 그래서, 수소화 붕소 리튬을 이용하면, 부반응이 억제되는 것을 발견했다. 또한, 반응 종료 직후에 반응 정지제로서 염화 암모늄 수용액을 이용하면 과잉 환원체가 부생해 버리는 것을 알 수 있었다. 그래서, 반응 조건을 검토한 바, 반응 정지제로서 염화 암모늄 수용액을 반응액에 투입하기 전에, 트라이플루오로에탄올을 -20∼-10℃에서 가한 후에 1시간에 걸쳐서 0℃로 하고, 그 후 1시간 교반하고 나서 염화 암모늄 수용액을 가하여 분액 처리함으로써 과잉 환원체의 부생이 억제되는 것을 발견했다. 또한, 그 분액 조작 후에는, 붕소 원자가 탈보호체의 질소 원자와 결합하고 있기 때문에, 10℃∼30℃에서 트라이플루오로아세트산을 가하고 25℃에서 교반한 후에, 수산화 나트륨 수용액과 혼합하여 분액 조작을 함으로써, 붕소-질소 결합이 절단된 원하는 펩타이드가 얻어지는 것을 발견했다. 이때, 붕소와 질소의 재결합을 막기 위해서, 수산화 나트륨 수용액에, 상기 트라이플루오로아세트산으로 처리한 용액을 10℃∼30℃에서 50∼90분에 걸쳐서 적하하는 것이 중요한 것을 발견했다.
비한정적인 일 실시태양으로서, 트라이플루오로아세틸기의 탈보호 반응에서, (1) 환원 시약으로서의 수소화 붕소 리튬의 사용, 및/또는 (2) 정지제로서의 암모니아수의 첨가 전의 트라이플루오로에탄올의 사용을 포함하는 방법도 제공된다. 트라이플루오로아세틸기가 보호기로서 사용되는 경우, 해당 방법은, (1) 환원 시약으로서의 수소화 붕소 리튬의 사용, 및 (2) 정지제로서의 암모니아수의 첨가 전의 트라이플루오로에탄올의 사용의 양쪽을 포함하는 것이 바람직하다.
공정 2는, 공정 1과 마찬가지로, 톨루엔, 아세톤, DMF, 아세토나이트릴, THF, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아니솔, 아세트산 아이소프로필, 헵테인, 아세트산 에틸, 및 4-메틸테트라하이드로피란으로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 또는 복수의 용매(용매 B) 중에서 반응 및 그 후의 후처리를 행할 수 있고, 생성물, 즉 목적하는 탈보호체를 단리나 정제하는 일 없이, 다음의 공정을 행할 수 있다. 용매 B에는, 2-MeTHF가 포함되는 것이 바람직하다.
어떤 태양에 있어서, 공정 2는, -40℃∼용매의 비점 부근의 온도, 바람직하게는 -30℃∼100℃의 온도, 바람직하게는 -5℃∼40℃의 온도에서, 반응 혼합물을 15분∼48시간 교반함으로써 행할 수 있다.
이하에 예시적인 반응 파라미터 및 조건을 나타낸다. 일 태양에 있어서, 본 명세서에 기재된 방법은, C-보호 펩타이드의 보호기가 tBu인 펩타이드 화합물의 C-말단 아미노산의 탈보호를 포함하고, 또 탈보호 시약이 HMDS 및 TMSOTf와의 조합이며, 탈보호 공정에 있어서의 용매가 IPAc 또는 2-MeTHF를 포함하고, C-보호 펩타이드는 2∼13 아미노산 잔기로 이루어지는 펩타이드 화합물일 수 있다.
관련된, 또는 다른 일 태양에 있어서, 본 명세서에 기재된 방법은, 펩타이드 화합물의 N-말단 아미노산의 탈보호 반응을 포함하고, 여기에서, N-보호 펩타이드의 보호기는 Cbz기이고, 탈보호 조건은 촉매적 수소화이고, 수소화에 있어서의 촉매는 Pd/C이며, 수소화에 있어서의 수소압은 1atm(14.7psi) 이상 3atm(44.1psi) 이하이고, 탈보호 공정에 있어서의 용매는 2-MeTHF 또는 THF를 포함하고, N-보호 펩타이드는 2∼13 아미노산 잔기로 이루어지는 펩타이드 화합물일 수 있다.
관련된, 또는 다른 일 태양에 있어서, 본 명세서에 기재된 방법은, 펩타이드 화합물의 N 말단 아미노산의 탈보호 반응을 포함하고, 여기에서, N-보호 펩타이드의 보호기는 Teoc이고, 탈보호 시약은 불화물 음이온을 생성할 수 있고, 탈보호 시약은 TBAF이며, 탈보호 공정의 용매는 2-MeTHF, 아세트산 아이소프로필, 탄산 다이메틸 또는 아니솔을 포함하고, N-보호 펩타이드는 2∼13 아미노산 잔기로 이루어지는 펩타이드 화합물일 수 있다.
관련된, 또는 다른 일 태양에 있어서, 본 명세서에 기재된 방법은, 펩타이드 화합물의 N 말단 아미노산의 탈보호 반응을 포함하고, 여기에서, N-보호 펩타이드의 보호기는 트라이플루오로아세틸(TFA)이고, 탈보호 시약은 환원 시약이고, 탈보호 시약은 수소화 붕소 리튬이며, 탈보호 공정의 용매는 2-MeTHF 또는 메탄올을 포함하고, N-보호 펩타이드는 2∼13 아미노산 잔기로 이루어지는 펩타이드 화합물일 수 있다.
펩타이드의 N 말단의 아미노산 잔기의 질소 원자의 보호기를 제거하면, 다이케토피페라진이 형성되어, 목적으로 하는 탈보호체가 얻어지지 않는 경우가 있는 것이 알려져 있다(J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1987, 1155-1156.).
본 발명자들은, Cbz-Ile-MeAla-Aze 유도체의 말단 질소 원자의 보호기인 Cbz기를 제거하기 위해서, 가수소분해 반응에 부치면, 반응 중에 다이케토피페라진이 형성되어 버려, 계속되는 펩타이드 신장을 할 수 없게 되는 것을 발견했다.
그래서, 탈Cbz 반응과 펩타이드 신장의 반응 조건을 검토한 바, 아미노산 활성 에스터 존재하에, Cbz체를 가수소분해에 부쳐, 탈Cbz를 행하면, 효율적으로 펩타이드 신장할 수 있는 것을 발견했다. 문헌(J. Chem. Soc., Chem. Ccmmun., 1987, 1155-6.)에는, 아미노산 활성 에스터 존재하에, Cbz체를 가수소분해에 부쳐 펩타이드 신장하는 예가 보고되어 있지만, Cbz체로서는, Cbz-Ala-D-Pro-OMe, Cbz-Asu(OBut)-D-Pro-OMe-, Cbz-D-Val-Pro-OMe가 보고되어 있을 뿐, Aze 유도체에 대한 예에 대해서는, 기재되어 있지 않다. 또한, N-알킬아미노산 활성 에스터와의 반응에 대한 예도 개시되어 있지 않다. N-알킬아미노산 활성 에스터는, 그 입체적 요인 때문에, 질소가 알킬화되어 있지 않은 통상의 아미노산 활성 에스터보다도 반응성이 저하되어 있는 것이 용이하게 추측된다. 따라서, N-알킬아미노산 활성 에스터가 반응하는 시간보다도 일찍 탈Cbz가 일어나면, 다이케토피페라진이 생성되어 버린다. 즉, 탈Cbz 후에, 신속하게 N-알킬아미노산 활성 에스터와 반응시키는 조건을 발견할 필요가 있다. 본 발명자들은, 반응 조건을 검토한 결과, N-알킬아미노산 활성 에스터인 Teoc MeLeu-pFp 존재하에, Cbz-Ile-MeAla-Aze-EtPh(4-Me)-MeGly체를, 아세트산 아이소프로필 중, N-메틸모폴린과 Pd/C를 가하고, 수소압 0.10∼0.18MPaG에서 가수소분해 반응에 부치면, 다이케토피페라진의 생성을 억제하여, Teoc-MeLeu-Ile-MeAla-Aze-EtPh(4-Me)-MeGly체가 얻어지는 것을 발견했다. 또한, 이때, 아세톤 존재하에 본 반응을 행하고, 반응 후에 분액 조작하는 것에 의해, 미반응의 탈보호된 펩타이드를 제거할 수 있는 것을 발견했다. 즉, 아세톤을 36등량 존재시켜 가수소분해 반응을 행하면, 미반응의 탈보호된 펩타이드의 아미노기가 아이소프로필리덴화되어, 다이케토피페라진으로 변환이 억제되고, 이 아이소프로필리덴화된 펩타이드는, 말단 질소가 아마이드화되어 있지 않은 염기성 화합물이기 때문에, 반응 후의 분액 처리로 산세정하는 것에 의해 용이하게 제거할 수 있는 것을 알 수 있었다.
본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하는 방법은, C-보호기를 제거하는 공정 3을 추가로 포함할 수 있다.
공정 3은, 예를 들면, C-보호기가, t-Bu, 트라이틸, 큐밀, 메틸, 또는 에틸인 경우 등에는, 탈보호 시약의 존재하, 산성 조건에서 행할 수 있다. 탈보호 시약에는, 본 기술 분야에서 기지인 임의의 시약, 예를 들면, 「Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fifth Edition, 2014」에 기재된 시약을 이용할 수 있다. 본 발명에서는, 산성 조건을 달성하기 위해서, 예를 들면, HMDS와, TMSOTf, TMSI, TMSBr, 및 TMSCl로 이루어지는 군으로부터 선택되는 시약의 조합이 바람직하게 이용된다.
공정 3은, 공정 1 및 공정 2와 마찬가지로, 톨루엔, 아세톤, DMF, 아세토나이트릴, THF, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아니솔, 아세트산 아이소프로필, 헵테인, 아세트산 에틸, 및 4-메틸테트라하이드로피란으로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 또는 복수의 용매(용매 B) 중에서 반응 및 그 후의 후처리를 행할 수 있고, 생성물, 즉 목적하는 탈보호체를 단리나 정제하는 일 없이, 다음의 공정을 실시할 수 있다. 용매 B에는, 2-MeTHF가 포함되는 것이 바람직하다.
공정 3은, 공정 1 후(즉, 공정 1과 공정 2 사이), 또는 공정 2 후 중 언제 행해도 된다. 보다 구체적으로는, 후술하는 대로, 본 발명의 방법에서는, 공정 1과 공정 2가 복수회 반복될 수 있을 때, 공정 3은, 최초의 공정 1 후 또는 공정 2 후에 행해도 되고, 공정 1과 공정 2의 반복이 있는 회의 공정 1 후 또는 공정 2 후에 행해도 되고, 공정 1과 공정 2의 반복의 최종회의 공정 1 후 또는 공정 2 후에 행해도 된다. 어떤 태양에 있어서, 공정 3은, 공정 1과 공정 2의 반복의 최종회의 공정 1 후 또는 공정 2 후에 행하는 것이 바람직하고, 반복의 최종회의 공정 1 후에 행하는 것이 보다 바람직하다. 공정 3을 공정 1 후에 행한 경우에는, N 말단만이 보호된 직쇄 펩타이드 화합물을 얻을 수 있다. 공정 3을 공정 2 후에 행한 경우에는, N 말단과 C 말단의 양쪽이 탈보호된 직쇄 펩타이드 화합물을 얻을 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 공정 3은, -20℃∼용매의 비점 부근의 온도, 바람직하게는 0℃∼180℃의 온도에서, 반응 혼합물을 15분∼48시간 교반함으로써 행할 수 있다.
(공정 1과 공정 2의 반복)
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하는 방법은, 상기 공정 1과 상기 공정 2를 반복하는 것을 포함하고, 이에 의해 펩타이드쇄를 신장할 수 있다. 반복의 횟수는, 한정되지 않지만, 2회∼20회가 바람직하고, 2∼15회가 보다 바람직하다. 공정 1과 공정 2를 반복함에 있어서, 반복의 최종회는, 공정 2를 포함하지 않아도 된다. 어떤 태양에 있어서, 반복의 최종회가 공정 2를 포함하지 않는 경우, 본 발명의 방법의 최종 공정은 공정 1이 될 수 있다. 이 경우, 제조되는 직쇄 펩타이드 화합물은, N 말단 및 C 말단의 양쪽이 보호된 직쇄 펩타이드 화합물이 될 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 반복의 최종회가 공정 2를 포함하지 않는 경우, 공정 1 후에 행해지는 공정 3이 본 발명의 방법의 최종 공정이 될 수 있다. 이 경우, 제조되는 직쇄 펩타이드 화합물은, N 말단만이 보호된 직쇄 펩타이드 화합물이 될 수 있다.
(후처리)
공정 1∼공정 3의 각 반응 후에는 후처리를 행할 수 있고, 해당 후처리에 의해, 중간체를 단리하는 일 없이 다음의 반응을 행할 수 있다. 후처리로서 구체적으로는, 유기층이나 수층의 세정을 포함하는 분액 조작, 여과 조작, 및 농축 조작으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수의 조작이 포함되고, 다음의 공정에 적합한 상태가 되도록 이들 조작을 적절히 조합할 수 있다. 예를 들면, 축합 시약이나 탈보호 시약을 이용하여 공정 1∼공정 3의 각 반응을 행한 경우에는, 그 후처리로서, 통상, 적어도 1회 이상의 분액 조작이 행해진다. 또한, 접촉 수소화에 의해 공정 2의 반응을 행한 경우에는, 통상, 그 후처리로서 여과 조작이 행해진다. 어느 경우라도, 예를 들면, 다음의 공정에 대비하여 용매량을 조절할 목적으로, 혹은, 용매의 치환의 목적으로, 추가로 농축 조작을 행하여 용매의 일부를 증류 제거할 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 분액 조작은, 공정 1∼공정 3의 각 반응의 완료 후에, 목적물을 액액 추출하기 위해서 행할 수 있고, 이것에는 유기층 혹은 수층의 세정도 포함될 수 있다. 분액 조작을 행하는 경우에는, 분액 조작에 적합한 양, 예를 들면, 유기층:수층이 20:80∼80:20의 체적비의 범위 내가 되는 양의 물 및/혹은 수용액, 및/또는 유기 용매가, 계 중에 첨가된다. 분액 조작을 위해서 첨가되는 수용액으로서는, 황산수소 나트륨 수용액, 탄산 칼륨 수용액, 탄산 나트륨 수용액, 인산수소 이칼륨 수용액, 인산수소 이나트륨 수용액, 인산이수소 나트륨 수용액, 염화 나트륨 수용액, 시트르산 수용액, 암모니아 수용액, 염산 수용액 등을 들 수 있다. 분액 조작을 위해서 첨가되는 유기 용매로서는, 물과 혼화되지 않는 용매, 수용성 알킬나이트릴류, 및 수용성 에터류 등을 들 수 있다. 본 명세서에 있어서, 분액 조작을 위해서 첨가되는, 물과 혼화되지 않는 용매는 「용매 C」라고 칭하는 경우가 있다. 분액 조작을 위해서 첨가되는 유기 용매로서, 구체적으로는, 예를 들면, 2-메틸테트라하이드로퓨란(2-MeTHF), 탄산 다이메틸, 아니솔, 아세트산 아이소프로필, 아세트산 에틸, MTBE, CPME, 4-메틸테트라하이드로피란, 헵테인, 및 아세토나이트릴로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수 등을 들 수 있다. 또한, 분액 조작에 있어서, 유기층에는, 염기성에 대해서 안정하고, 화합물의 용해성이 우수한 2-MeTHF가 포함되어 있는 것이 바람직하다.
어떤 태양에 있어서, 공정 1∼공정 3의 각 반응 후, 아세토나이트릴이나 THF를 많이 포함하는 경우 등, 용매 B가 물과 혼화성이고, 수층과 유기층이 적절히 분리되지 않는 경우에는, 분액 조작 전에, 물 및/혹은 수용액에 더하여, 물과 혼화되지 않는 용매(용매 C)를 가함으로써, 수층과 유기층을 분리할 수 있다. 공정 1∼공정 3의 각 반응 후의 분액 조작으로, 수층과 유기층이 적절히 분리되었는지 여부를 결정하는, 한정을 의도하지 않는 예시로서, 공정 1∼공정 3의 각 반응 후의 분액 조작 후 1∼30분간 정치하여 2층을 형성하는지 여부로 결정할 수 있다. 용매 C로서, 물에 대한 용해도가 낮은 용매, 예를 들면, 물에 대한 용해도가, 999g/L 이하인 용매, 500g/L 이하인 용매, 250g/L 이하인 용매, 바람직하게는 200g/L 이하인 용매, 보다 바람직하게는 150g/L 이하인 용매를 들 수 있다. 또한, 용매 C로서, log Kow값, 또는 log Kow값의 예측값이, 양의 값, 예를 들면 0 이상이고 5 이하의 값을 취하는 용매가 바람직하다. 구체적으로는, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 아세트산 아이소프로필, 헵테인, 아니솔, MTBE, CPME, 4-메틸테트라하이드로피란 등을 들 수 있고, 반응에 의한 생성물을 효율 좋게 유기 용매로 추출 가능하다는 관점에서, 2-MeTHF, 아세트산 에틸, 아세트산 아이소프로필, 혹은 헵테인, 또는 이들을 포함하는 용매가 바람직하게 이용된다.
용매 C는, 수층과 유기층으로 분리 가능한 양으로 첨가하는 것이 바람직하고, 예를 들면, 유기층 전체에 대해서, 약 50중량%∼100중량%의 양으로 계 중에 첨가할 수 있다. 수층과 유기층의 분리는, 분액 조작에서 용매 C를 첨가한 후, 수층과 유기층의 혼합물을 1∼30분간 정치하여 2층을 형성하는지 여부를 관찰하는 방법으로 예시되는, 표준적인 방법으로 결정할 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 분액 조작은 유기층 또는 수층의 세정을 포함할 수 있다. 분액 조작에 있어서의 세정은, 목적물을 포함하는 용액으로부터, 목적물을 포함하지 않는 용액을 이용하여, 목적물 이외의 불순물이 될 수 있는 물질을 제거하기 위해서 행해질 수 있다. 목적물은, 통상, 유기층에 존재하고 있고, 이 경우에는 유기층을 수용액으로 세정하는 것에 의해, 수층에 불순물이 될 수 있는 물질을 추출하여 제거할 수 있다. 한편, 분액 조작의 과정에서 목적물을 일단 유기층으로부터 수층으로 옮기는 경우 등, 수층에 목적물이 존재하고 있는 경우에는, 수층을 세정한다.
유기층의 세정에는, 중성, 염기성 또는 산성의 수용액을 이용할 수 있다. 유기층의 세정에 이용 가능한 수용액으로서, 구체적으로는, 황산수소 나트륨 수용액, 황산수소 칼륨 수용액, 탄산 칼륨 수용액, 탄산 나트륨 수용액, 인산수소 이칼륨 수용액, 인산수소 이나트륨 수용액, 인산이수소 나트륨 수용액, 염화 나트륨 수용액, 시트르산 수용액, 암모니아 수용액, 염산 수용액 등의 수용액을 이용할 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 계 중에 존재하는 미반응 아미노산이나 펩타이드를 충분히 제거하기 위해서는, 유기층을, 탄산 나트륨 수용액, 황산수소 나트륨 수용액, 및/또는 탄산 나트륨 수용액의 순서로 세정하는 것이 바람직하다. 그런데도 여전히 아미노산이나 펩타이드를 충분히 제거할 수 없는 경우 등에는, 시트르산과 인산수소 이칼륨을 포함하는 수용액을 이용하여 유기층을 세정함으로써, 이들을 효율 좋게 제거할 수 있다. 또한, 어떤 태양에 있어서, 지용성이 높은 아미노산이나 펩타이드의 제거에는, 아세토나이트릴과 탄산 칼륨 수용액의 혼합액을 이용하여 유기층을 세정하는 것이 유효하다.
수층의 세정에는, 물과 혼화되지 않는 유기 용매를 이용할 수 있고, 2-MeTHF, 헵테인, MTBE, 아세트산 아이소프로필 등의 유기 용매가 바람직하게 이용된다.
본 발명은, 용매 유래의 안정화제인 BHT(2,6-다이-tert-뷰틸-4-메틸페놀)를 제거하는 방법에 관한 것이다. 구체적으로는, 해당 방법은, 분액 조작, 예를 들면 본 발명의 각 공정 후의 분액 조작에 있어서, 유기층으로서, 아세토나이트릴, 프로피오나이트릴, 2-MeTHF, 및 헵테인을 포함하는 용매를 이용하는 것을 포함하고, 이에 의해, BHT를 효율적으로 제거할 수 있다. 이 방법에 의해, 유기층 중의 BHT의 잔존량을, HPLC 분석에 있어서의 210nm에서의 UVArea%값으로, 목적물에 대해서 2.0% 이하, 1.9% 이하, 1.8% 이하, 1.7% 이하, 1.6% 이하, 1.5% 이하, 1.4% 이하, 1.3% 이하, 1.2% 이하, 1.1% 이하, 1.0% 이하, 0.9% 이하, 0.8% 이하, 0.7% 이하, 0.6% 이하, 0.5% 이하, 0.4% 이하, 0.3% 이하, 0.2% 이하, 0.1% 이하, 또는 0.05% 이하로 할 수 있다. 목적물을 물과 수용성 알킬나이트릴을 포함하는 수층에 용해시킨 후에, 유기층으로서 특정한 용매를 이용함으로써 BHT를 제거하는 것이 가능하다. 여기에서 이용되는 수용성 알킬나이트릴은 아세토나이트릴이 바람직하다. BHT를 제거하기 위해서 이용될 수 있는 유기층에는, 물과 혼화되지 않는 용매가 포함되는 것이 바람직하다. 복수의 물과 혼화되지 않는 용매를 조합하여 이용하는 것도 가능하고, 바람직한 조합은 2-MeTHF와 헵테인, 또는 MTBE와 헵테인이다. 바람직한 용매의 비는, 수용성 알킬나이트릴에 대해, 물과 혼화되지 않는 용매를 100중량% 이상 이용하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 100중량% 이상 400중량% 이하의 범위, 더 바람직하게는 100중량% 이상 300중량% 이하의 범위에서 이용함으로써 효율적으로 BHT를 제거하는 것이 가능하다. 2-MeTHF와 헵테인, 또는 MTBE와 헵테인을 조합하여 이용하는 경우, 헵테인에 대해서 2-MeTHF 또는 MTBE를, 10중량% 이상 100중량% 이하의 범위, 바람직하게는 10중량% 이상 80중량% 이하의 범위에서 이용함으로써, 효율적으로 BHT를 제거하는 것이 가능하다.
시판되고 있는 THF나 2-MeTHF에는, 안정화제로서 150∼400ppm 정도의 BHT가 포함되어 있는 경우가 있다. 이와 같은 THF나 2-MeTHF를 대량으로 이용한 경우, 예를 들면, 공정수가 20공정 이상이 되면, BHT의 잔존량은 4%에 이르게 되어, 반응에 대한 악영향을 무시할 수 없게 될 수 있다. 본 발명의 방법을 이용하는 것에 의해, 사전에 용매로부터 BHT를 제거하는 조작이나, 공정의 도중에 축적된 BHT를 제거하기 위한 단리 조작(예를 들면, 칼럼 크로마토그래피)을 행할 필요가 없게 된다. 따라서, 복수 공정을 포함하고, 대스케일에서의 펩타이드의 액상 합성의 경우 등에 이 방법을 적용하는 것에 의해, 펩타이드쇄를 연속적으로 신장할 수 있고, 목적하는 펩타이드 화합물을 효율적으로 얻을 수 있다.
본 발명에 있어서의 여과 조작, 및 농축 조작에는, 본 기술 분야에서 기지인 여과 조작, 및 농축 조작을 이용할 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 각 공정의 후처리로서, 분액 조작, 여과 조작, 및 농축 조작으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수의 조작 전 또는 후, 혹은 다음의 공정의 반응을 개시하기 전에, 용매, 예를 들면, 반응 가마 등의 반응 용기를 세정한 용매가 계 중에 첨가되는 경우가 있다. 구체적으로는, 예를 들면, 톨루엔, 아세톤, DMF, 아세토나이트릴, THF, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아니솔, 아세트산 아이소프로필, 헵테인, 아세트산 에틸, 및 4-메틸테트라하이드로피란으로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는 1개 또는 복수의 용매가, 계 중에 첨가될 수 있다. 본 명세서에 있어서는, 이 용매를 첨가하는 조작도 후처리에 포함된다.
본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하는 방법은, 중간체를 단일 화합물로서 단리하는 공정을 포함하지 않는다. 따라서, 초회의 공정 2의 후처리 후의 용매, 혹은 공정 1과 공정 2의 반복이 있는 회의 공정 2의 후처리 후의 용매가, 그들 다음의 회의 공정 1의 반응 용매(용매 B)가 될 수 있다. 마찬가지로, 초회의 공정 1의 후처리 후의 용매, 혹은 공정 1과 공정 2의 반복이 있는 회의 공정 1의 후처리 후의 용매는, 그들 회의 공정 2의 반응 용매(용매 B)가 될 수 있다. 즉, 공정 1과 공정 2를 반복함에 따라서 용매 B의 조성은 바뀔 수 있지만, 용매 B를 구성하는 용매종은, 지금까지의 공정 1 및 공정 2의 반응 및 후처리에 이용되어 온 용매종과 일치할 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 환상 펩타이드 화합물을 제조하는 방법에 이용되는 용매(용매 A)는, 본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하는 방법에 의해 직쇄 펩타이드 화합물을 제조한 후의 용매(용매 X)를 포함한다. 어떤 태양에 있어서, 용매 X를 용매 A로서, 그대로 환화 반응에 이용할 수 있다. 다른 태양에 있어서, 용매 X에, 추가로 1종 또는 복수종의 물과 혼화되지 않는 용매, 1종 또는 복수종의 수용성 알킬나이트릴류, 및 1종 또는 복수종의 수용성 에터류로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수를 가하여 용매 A로 할 수 있다. 용매 X에 추가로 용매를 가하여 용매 A로 하는 경우, 가하는 용매로서 바람직하게는, 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 아세트산 아이소프로필, 아니솔, 아세토나이트릴, THF, 4-MeTHP, 클로로벤젠, 1,3-다이메톡시벤젠, MTBE, CPME 등을 들 수 있고, 아세토나이트릴, 2-MeTHF, 아니솔, 탄산 다이메틸이 특히 바람직하다. 예를 들면, 용매 X에 용매, 예를 들면, 아세토나이트릴, 2-MeTHF, 아니솔, 또는 탄산 다이메틸을 가하여 용매 A로 하는 경우, 용매 X의 중량에 대해서 20∼80배량의 용매를 가하는 것이 바람직하다.
전술한 대로, 본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하는 방법에서는, 공정 1과 공정 2가 반복될 수 있지만, 그 반복의 최종회의 공정 1에 이용되는 C-보호 펩타이드 및 N-보호 펩타이드의 한쪽 또는 양쪽은, N-치환 아미노산 잔기를 4개 이상 포함하거나, 또는 N-치환 아미노산 잔기를 2개 이상 포함하고, 또한 α,α 다이치환 아미노산 잔기를 1개 이상 포함하는 것이 바람직하다. N-치환 아미노산 잔기로서는, N-메틸 또는 N-에틸아미노산 잔기 등의 N-알킬아미노산 잔기, 혹은 프롤린이나 Aze(2) 등의 N-치환 환상 아미노산 잔기가 바람직하다. 또한, α,α 다이치환 아미노산 잔기로서는, α,α 다이메틸아미노산 잔기 등의 α,α 다이알킬아미노산 잔기나 α위에 존재하는 2개의 기가 연결되어 지환식 환을 형성한 cLeu 등의 α,α 다이치환 환상 아미노산 잔기 등이 바람직하다.
또한, 어떤 태양에 있어서, 반복의 최종회의 공정 1에서 이용되는 C-보호 펩타이드 및 N-보호 펩타이드의 한쪽 또는 양쪽은, 5개의 아미노산 잔기로 이루어지고, 그 중의 4개가 비천연 아미노산 잔기인 것이 바람직하다.
다른 태양에 있어서, 반복의 최종회의 공정 1에서 이용되는 C-보호 펩타이드 및 N-보호 펩타이드의 한쪽 또는 양쪽은, 6개의 아미노산 잔기로 이루어지고, 그 중의 5개가 비천연 아미노산 잔기인 것이 바람직하다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하는 방법은, 본 발명의 환상 펩타이드 화합물을 제조하는 방법의 원료에 이용되는 직쇄 펩타이드 화합물을 얻기 위해서 이용할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 환상 펩타이드 화합물을 제조하는 방법에 의해, 상기 식 1의 환상 펩타이드 화합물을 제조하는 경우, 그 원료가 되는 직쇄 펩타이드 화합물을 제조하기 위해서, 반복의 최종회의 공정 1에서 이용되는 C-보호 펩타이드로서, C-보호된 MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGly를 이용할 수 있고, 또한, 반복의 최종회의 공정 1에서 이용되는 N-보호 펩타이드로서, N-보호된 Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2를 이용할 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하는 방법을 이용함으로써, 상기 식(1)의 환상 펩타이드 화합물의 제조 원료가 될 수 있는, 상기 식(2)의 직쇄 펩타이드 화합물을 제조할 수 있다.
구체적으로는, 예를 들면, 1번째의 배치(batch)로서, C-보호 아미노산으로서,
[화학식 15]
(MeAsp(OtBu)-NMe2)
를 이용하고, N-보호 아미노산으로서,
[화학식 16]
(Z-MeGly(cPent))
를 이용하여, 공정 1을 거쳐,
[화학식 17]
(Z-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2)
를 제조하고, 공정 2를 거쳐,
[화학식 18]
(MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2)
를 제조할 수 있다.
다음으로, 이 화합물을 C-보호 아미노산으로서 이용하고, N-보호 아미노산으로서,
[화학식 19]
(TFA-cLeu)
또는
[화학식 20]
(Cbz-cLeu)
를 이용하여, 공정 1을 거쳐,
[화학식 21]
(TFA-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2)
또는
[화학식 22]
(Cbz-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2)
를 제조하고, 공정 2를 거쳐,
[화학식 23]
(cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2)
를 제조할 수 있다.
다음으로, 이 화합물을 C-보호 펩타이드로서 이용하고, N-보호 아미노산으로서,
[화학식 24]
(Z-Pro)
를 이용하여, 공정 1을 거쳐,
[화학식 25]
(Z-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2)
를 제조하고, 공정 2를 거쳐,
[화학식 26]
(Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2)
를 제조할 수 있다.
다음으로, 이 화합물을 C-보호 펩타이드로서 이용하고, N-보호 아미노산으로서,
[화학식 27]
(Z-Hph(4-CF3-35F2)Cy2NH)
를 이용하여, 공정 1을 거쳐,
[화학식 28]
(Z-Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp(OtBu)-NMe2)
를 제조하고, 공정 3을 거쳐, 이 배치의 목적물인
[화학식 29]
(Z-Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2)
를 제조할 수 있다.
이 배치는, 공정 1 후에 공정 3을 포함하고, 또한 공정 1과 공정 2의 반복의 최종회는, 공정 2를 포함하지 않는 케이스이다.
다음으로, 2번째의 배치로서, C-보호 아미노산으로서,
[화학식 30]
(MeGlyOtBu HCl)
를 이용하고, N-보호 아미노산으로서,
[화학식 31]
(Z-EtPhe(4-Me)Cy2NH)
를 이용하여, 공정 1을 거쳐,
[화학식 32]
(Z-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조하고, 공정 2를 거쳐,
[화학식 33]
(EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조할 수 있다.
다음으로, 이 화합물을 C-보호 펩타이드로서 이용하고, N-보호 아미노산으로서,
[화학식 34]
(Z-Aze(2))
를 이용하여, 공정 1을 거쳐,
[화학식 35]
(Z-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조하고, 공정 2를 거쳐,
[화학식 36]
(Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조할 수 있다.
다음으로, 이 화합물을 C-보호 펩타이드로서 이용하고, N-보호 아미노산으로서,
[화학식 37]
(Z-MeAla)
를 이용하여, 공정 1을 거쳐,
[화학식 38]
(Z-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조하고, 공정 2를 거쳐,
[화학식 39]
(MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조할 수 있다.
다음으로, 이 화합물을 C-보호 펩타이드로서 이용하고, N-보호 아미노산으로서,
[화학식 40]
(Z-Ile)
를 이용하여, 공정 1을 거쳐,
[화학식 41]
(Z-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조하고, 공정 2를 거쳐,
[화학식 42]
(Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조할 수 있다.
다음으로, 이 화합물을 C-보호 펩타이드로서 이용하고, N-보호 아미노산으로서,
[화학식 43]
(Teoc-MeLeu-Opfp)
를 이용하여, 공정 1을 거쳐,
[화학식 44]
(Teoc-MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조하고, 공정 2를 거쳐,
[화학식 45]
(MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조할 수 있다.
다음으로, 이 화합물을 C-보호 펩타이드로서 이용하고, N-보호 아미노산으로서, 1번째의 배치로 제조했다.
[화학식 46]
를 이용하여, 공정 1을 거쳐,
[화학식 47]
Z-Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2-MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGlyOtBu)
를 제조하고, 공정 3을 거쳐,
[화학식 48]
Z-Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2-MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGly)
를 제조하고, 공정 2를 거쳐, 이 배치의 목적물인 화합물(2):
[화학식 49]
Hph(4-CF3-35F2)-Pro-cLeu-MeGly(cPent)-MeAsp-NMe2-MeLeu-Ile-MeAla-Aze(2)-EtPhe(4-Me)-MeGly)
를 제조할 수 있다.
이 배치는, 공정 1과 공정 2의 반복의 최종회에 있어서, 공정 1 후에 공정 3을 포함하는 케이스이다.
또한, 이 배치에서 얻어진 화합물 2는, 단리나 정제하는 일 없이, 본 발명의 환상 펩타이드 화합물을 제조하는 방법의 원료로서 이용할 수 있다.
본 발명의 방법을 이용한 상기의 배치는 모두, 중간체를 단리나 정제하는 일 없이 목적하는 직쇄 펩타이드 화합물을 효율적으로 제조할 수 있기 때문에, 본 발명의 방법은, 대규모 스케일에서의 펩타이드 합성에 매우 유용하다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명의 펩타이드 화합물을 제조하는 방법은, 펩타이드 화합물의 N 말단의 아미노산 잔기와 C 말단의 아미노산 잔기를 연결하는 공정을 추가로 포함할 수 있고, 이러한 공정을 거치는 것에 의해 환상 펩타이드 화합물을 제조할 수 있다. 어떤 태양에 있어서, N 말단의 아미노산 잔기와 C 말단의 아미노산 잔기의 연결은, 공정 1과 공정 2를 복수회 반복하는 것에 의해 제조된, 직쇄 펩타이드 화합물의 N 말단의 아미노산 잔기와 C 말단의 아미노산 잔기를 연결하는 것에 의해 달성된다. 어떤 태양에 있어서, 본 공정에는, 전술한 「환상 펩타이드 화합물을 제조하는 방법」의 항에 기재된 방법, 예를 들면, 반응 조건이나 시약을 적용할 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명은, 상기 식(1)로 표시되는 환상 펩타이드 화합물의 염, 용매화물, 또는 염의 용매화물에 관한 것이다. 해당 화합물의 용매화물은, 수화물 또는 DMSO-수용매화물인 것이 바람직하다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명은, 상기 식(1)의 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 결정에 관한 것이다. 이 화합물의 결정으로서, 구체적으로는, 이 화합물의 비용매화물 결정, 혹은 용매화물 결정, 또는 이 화합물의 염의 비용매화물 결정, 혹은 용매화물 결정을 들 수 있다. 용매화물 결정으로서 바람직하게는 수화물 결정, DMSO-수화물 결정, 아세톤-수화물 결정을 들 수 있다.
분말 X선 회절에 있어서의 회절각 2θ는, CuKα, 또는 CuKα1 방사선을 이용하여 측정한 회절 피크이다. 이들 용매화물 결정이 추가로 분말 X선 회절에 있어서의 회절각 2θ로 특정된 결정을, 예를 들면 이하에 나타내는 수화물의 「C형 결정」이라고 부르는 경우도 있지만, 간단히 「C형」이라고 부르는 경우도 있다.
어떤 태양에 있어서, 식(1)의 화합물의 결정이, 수화물 결정인 경우, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 하기 중 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는 C형 결정이다.
4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)
어떤 태양에 있어서, 식(1)의 화합물의 결정이, 수화물 결정인 경우, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 하기의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는 C형 결정이다.
4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)
회절각 2θ의 표기에 있어서, 열기된 회절각 2θ의 마지막에 「(±0.2°)」라고 기재되어 있는 경우는, 열기된 모든 회절각 2θ에 있어서, 기재된 각 값에 대해서 ±0.2°의 범위가 허용되는 것을 의미한다.
어떤 태양에 있어서, 해당 C형 결정은, 도 1에 기재된 것과 실질적으로 동일한 X선 회절 패턴을 갖는다. 어떤 태양에 있어서, 해당 C형 결정은, 도 8에 기재된 것과 실질적으로 동일한 DSC 및 TG 서모그램을 갖는다.
어떤 태양에 있어서, 식(1)의 화합물의 결정이, 비용매화물 결정인 경우, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 하기 중 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는 F형 결정이다.
5.370°, 6.934°, 8.940°, 9.838°, 10.771°, 12.181°, 13.525°, 15.179°, 16.202°, 또는 17.554°(±0.2°)
어떤 태양에 있어서, 해당 F형 결정은, 도 2에 기재된 것과 실질적으로 동일한 X선 회절 패턴을 갖는다.
어떤 태양에 있어서, 식(1)의 화합물의 결정이, 용매화물 결정인 경우, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 하기 중 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는 A형의 DMSO-수화물 결정이다.
8.006°, 9.002°, 9.943°, 11.501°, 13.067°, 14.854°, 16.320°, 17.275°, 19.261°, 또는 20.324°(±0.2°)
어떤 태양에 있어서, 해당 A형 결정은, 도 3에 기재된 것과 실질적으로 동일한 X선 회절 패턴을 갖는다.
어떤 태양에 있어서, 식(1)의 화합물의 결정이, 용매화물 결정인 경우, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 하기 중 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는 B형의 DMSO-수화물 결정이다.
8.223°, 9.594°, 9.976°, 11.879°, 13.841°, 14.572°, 15.934°, 16.350°, 19.805°, 20.480°(±0.2°)
어떤 태양에 있어서, 해당 B형 결정은, 도 4에 기재된 것과 실질적으로 동일한 X선 회절 패턴을 갖는다. 어떤 태양에 있어서, 해당 B형 결정은, 도 5에 기재된 것과 실질적으로 동일한 DSC 서모그램을 갖는다.
어떤 태양에 있어서, 식(1)의 화합물의 결정이, 용매화물 결정인 경우, 해당 결정은, 분말 X선 회절에 있어서, 회절각 2θ로서, 하기 중 적어도 1개의 피크를 포함하는 분말 X선 회절 패턴을 갖는 H형의 아세톤-수화물 결정이다.
7.942°, 8.283°, 8.861°, 10.097°, 10.491°, 11.805°, 12.673°, 12.830°, 13.514°, 13.855°, 15.853°, 16.405°, 16.642°, 및 17.772°(±0.2°)
어떤 태양에 있어서, 해당 H형 결정은, 도 13에 기재된 것과 실질적으로 동일한 X선 회절 패턴을 갖는다.
어떤 태양에 있어서, 식(1)의 화합물의 결정은, 어느 형태에 있어서도 불순물을 실질적으로 포함하지 않는다. 예를 들면, 식(1)의 화합물의 결정은, 적어도 약 90%의 순도를 가질 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 식(1)의 화합물의 결정은 적어도 약 95%의 순도를 갖는다. 어떤 태양에 있어서, 식(1)의 화합물의 결정은 적어도 약 98%의 순도를 갖는다. 예를 들면, 식(1)의 화합물의 결정은 적어도 98.5%, 98.6%, 98.7%, 98.8%, 98.9%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 또는 99.9%의 순도를 가질 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 식(1)의 화합물의 결정은 다른 형태를 실질적으로 포함하지 않는다.
일 태양에 있어서, C형 결정은, 식(1)로 표시되는 화합물의 다른 결정 형태를 실질적으로 포함하지 않는다.
일 태양에 있어서, F형 결정은, 식(1)로 표시되는 화합물의 다른 결정 형태를 실질적으로 포함하지 않는다.
일 태양에 있어서, A형 결정은, 식(1)로 표시되는 화합물의 다른 결정 형태를 실질적으로 포함하지 않는다.
일 태양에 있어서, B형 결정은, 식(1)로 표시되는 화합물의 다른 결정 형태를 실질적으로 포함하지 않는다.
일 태양에 있어서, H형 결정은, 식(1)로 표시되는 화합물의 다른 결정 형태를 실질적으로 포함하지 않는다.
어떤 태양에 있어서, 본 발명은, 상기 식(1)로 표시되는 환상 펩타이드 화합물의 수화물 결정의 제조 방법에 관한 것이다. 해당 제조 방법은, 이하의 공정을 포함한다.
공정 A: 환상 펩타이드 화합물을 해당 환상 펩타이드 화합물이 용해 가능한 양의 극성 유기 용매에 용해시켜 용액을 얻는 공정,
공정 B: 해당 용액을 농축하여, 해당 환상 펩타이드 화합물의 잔사를 얻는 공정, 및
공정 C: 해당 잔사에 물과 극성 유기 용매의 혼합액을 가하여, 해당 환상 펩타이드 화합물의 수화물 결정을 얻는 공정.
어떤 태양에 있어서, 공정 A에 이용되는 극성 유기 용매에는, 식(1)의 환상 펩타이드 화합물, 예를 들면, 조정제물 상태의 해당 환상 펩타이드 화합물이 용해 가능한 용매를 이용할 수 있고, 구체적으로는, DMSO, DMF, DMA, NMP, 아세톤, 메탄올, 에탄올, 아세토나이트릴 등이 바람직하게 예시되며, 아세톤, DMSO, 또는 에탄올이 보다 바람직하게 예시된다. 용해 가능한 양으로서, 식(1)의 환상 펩타이드 화합물에 대해, 3∼10w/v의 범위, 바람직하게는 3∼7w/v의 범위를 이용할 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 공정 B에 있어서의 농축에는, 동결 건조가 포함된다. 어떤 태양에 있어서, 공정 B에서 얻어진 잔사는, 어모퍼스, 유(油)상 물질, 또는 고체일 수 있다. 어떤 태양에 있어서, 공정 B에서 얻어진 잔사는 동결 건조체일 수 있다.
어떤 태양에 있어서, 공정 C에 이용되는 극성 유기 용매는, 공정 A에 이용되는 극성 유기 용매와 마찬가지의 용매일 수 있다. 공정 C에 이용되는 혼합액에 있어서의 물과 극성 유기 용매의 혼합비로서는, 극성 유기 용매 1중량부에 대해, 물 0.5∼10중량부 이용할 수 있고, 바람직하게는 물 1∼7중량부, 더 바람직하게는 물 1∼5중량부 이용하는 것이 바람직하다. 또한, 공정 C에 이용되는 극성 유기 용매는, 아세토나이트릴, 에탄올, 또는 아세톤이 바람직하다.
본 발명은, 상기 식(1)로 표시되는 환상 펩타이드 화합물의 결정의 제조 방법에 관한 것이다. 해당 제조 방법은,
어모퍼스 상태의 해당 환상 펩타이드 화합물을 DMSO에 용해시켜 용액을 얻는 공정,
해당 용액을 동결 건조하여, 해당 환상 펩타이드 화합물의 동결 건조체를 얻는 공정, 및
해당 동결 건조체에 물-아세토나이트릴 혼합액을 가하여, 해당 환상 펩타이드 화합물의 수화물 결정을 얻는 공정을 포함한다.
한편, 본 명세서에 있어서 인용된 모든 선행기술문헌은, 참조로서 본 명세서에 원용된다.
실시예
본 발명의 내용을 이하의 실시예로 더 설명하지만, 본 발명은 그 내용으로 한정되는 것은 아니다. 특별히 기재한 것을 제외하고, 출발 물질, 출발 원료, 용매, 및 시약은 상업적 공급업자로부터 입수, 혹은 공지된 방법을 이용하여 합성했다. 화합물 2, 및 화합물 30은, 국제 공개 제2020/189540호에 기재된 방법에 의해 제조했다.
HPLC에 의한 분석 조건은 이하에 나타냈다.
HPLC 분석 조건 method 1
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class
칼럼: Ascentis Express 90A C18(Sigma-Aldrich), 2.1mm ID×50mm, 2.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B) 5%(0min)→100%(5min)→5%(5.1min)→5%(7min)
유속: 0.5mL/min
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 210nm(PDA)
HPLC 분석 조건 method 2
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class
칼럼: Ascentis Express 90A C18(Sigma-Aldrich), 2.1mm ID×50mm, 2.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B) 5%(0min)→100%(6min)→5%(6.1min)→5%(8min)
유속: 0.5mL/min
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 210nm(PDA)
HPLC 분석 조건 method 3
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class
칼럼: CAPCELL CORE ADME(OSAKA SODA), 2.1mm ID×50mm, 2.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B): 5%(0min)→100%(5min)→5%(5.1min)→5%(7min)
유속: 0.5mL/min
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 210nm(PDA)
HPLC 분석 조건 method 4
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class
칼럼: ACQUITY UPLC CSH C18(Waters), 2.1mm ID×100mm, 1.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B) 20%(0min)→100%(10min)→100%(13.5min)→20%(13.6min)→20%(18.0min)
유속: 0.3mL/min
칼럼 온도: 50℃
검출 파장: 210nm(PDA)
HPLC 분석 조건 method 5
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class
칼럼: ACQUITY UPLC CSH C18(Waters), 2.1mm ID×150mm, 1.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B) 20%(0min)→100%(24min)→100%(29min)→20%(29.1min)→20%(34min)
유속: 0.3mL/min
칼럼 온도: 50℃
검출 파장: 220nm(PDA)
HPLC 분석 조건 method 6
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class
칼럼: CAPCELL CORE ADME(OSAKA SODA), 2.1mm ID×50mm, 2.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B): 5%(0min)→100%(10min)→5%(10.1min)→5%(12min)
유속: 0.5mL/min
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 210nm(PDA)
LCMS에 의한 분석 조건은 이하에 나타냈다.
LCMS 분석 조건 method 1
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA
칼럼: Ascentis Express 90A C18(Sigma-Aldrich), 2.1mm ID×50mm, 2.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B) 5%(0min)→100%(5min)→5%(5.1min)→5%(7min)
유속: 0.5mL/min
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 210nm(PDA)
LCMS 분석 조건 method 2
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA
칼럼: Ascentis Express 90A C18(Sigma-Aldrich), 2.1mm ID×50mm, 2.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B) 5%(0min)→100%(6min)→5%(6.1min)→5%(8min)
유속: 0.5mL/min
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 210nm(PDA)
LCMS 분석 조건 method 3
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA
칼럼: CAPCELL CORE ADME(OSAKA SODA), 2.1mm ID×50mm, 2.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B) 5%(0min)→100%(5min)→5%(5.1min)→5%(7min)
유속: 0.5mL/min
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 210nm(PDA)
LCMS 분석 조건 method 4
장치: Waters SQD2
칼럼: ACQUITY UPLC CSH C18(Waters), 2.1mm ID×100mm, 1.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B) 20%(0min)→100%(10min)→100%(13.5min)→20%(13.6min)→20%(18.0min)
유속: 0.3mL/min
칼럼 온도: 50℃
검출 파장: 210nm(PDA)
LCMS 분석 조건 method 5
장치: Waters SQD2
칼럼: ACQUITY UPLC CSH C18(Waters), 2.1mm ID×150mm, 1.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B) 20%(0min)→100%(24min)→100%(29min)→20%(29.1min)→20%(34min)
유속: 0.3mL/min
칼럼 온도: 50℃
검출 파장: 220nm(PDA)
LCMS 분석 조건 method 6
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA
칼럼: CAPCELL CORE ADME(OSAKA SODA), 2.1mm ID×50mm, 2.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B): 5%(0min)→100%(10min)→5%(10.1min)→5%(12min)
유속: 0.5mL/min
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 210nm(PDA)
1H-NMR 스펙트럼은, 핵자기 공명 장치 ECX500II(JEOL사제)를 이용하여 측정하고, 내부 표준 물질로서 이용한 Me4Si의 케미컬 시프트를 0ppm으로 하고, 샘플 용매로부터의 중수소 로크 신호를 참조했다. 샘플 용액은, 측정의 목적에 따른 시판 중인 중수소화 용매를 샘플 용매로서 이용하고, 측정 대상 화합물과 혼합하여 조정했다. 시그널의 적분값은, 각 시그널의 시그널 면적 강도의 비를 기초로 산출했다.
qNMR에 의한 측정법은, 목적 화합물을 포함하는 잔사와 내부 표준 물질을 DMSO-d6에 용해시켜, 이하의 분석 조건에 의해 행했다. 수율의 산출은, qNMR에 의해 산출된 잔사 중의 목적물의 함량의 값, 및 HPLC 분석에 의해 산출된 잔사의 목적물 순도의 값을 이용하여, 이하의 식에 의해 행했다.
[수학식 1]
측정 장치: JNM-ECZ500R
내부 표준 물질: 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산
측정 조건(1H-NMR): DMSO-d6, 24.3℃, 펄스 각도 90℃, 디지털 분해능 0.25Hz, 완화 시간 60초, 스핀 없음, 적산 횟수 8회
측정 조건(19F-NMR): DMSO-d6, 24.3℃, 펄스 각도 90℃, 디지털 분해능 0.22Hz, 완화 시간 60초, 스핀 없음, 적산 횟수 8회
분말 X선(XRPD) 회절 측정은, 이하의 조건에서 측정하여, 주사 범위의 2θ값을 산출했다. X선 회절 패턴은, 회절의 각도(2θ값)를 가로축 상에, 회절 강도를 세로축 상에 플롯했다.
(측정 방법 1)
측정 장치: SmartLab System(Rigaku Corporation사제)
선원: CuKα1
관 전압: 45kV
관 전류: 200mA
주사 범위: 3∼35°
샘플링 폭: 0.02°
(측정 방법 2)
측정 장치: SmartLab System, D/Tex Ultra detector(리가쿠사제)
선원: CuKα1
관 전압: 45kV
관 전류: 200mA
주사 범위: 5∼30°
주사 속도: 5°/분
샘플링 폭: 0.02°
(측정 방법 3)
측정 장치: D8 Discover, 2D VANTEC-500 solid state detector(Bruker사제)
선원: CuKα
관 전압, 관 전류: 40kV, 40mA 또는 50kV, 1000μA(마이크로 포커스 X선원 IμS 사용 시)
측정 범위: 5∼31°
노광 시간: 100초 또는 600초(마이크로 포커스 X선원 IμS 사용 시)
(측정 방법 4)
측정 장치: X'pert-pro MPD(PANalytical사제)
선원: CuKα
관 전압: 45kV
관 전류: 40mA
주사 범위: 3∼40°
주사 속도: 4.2°/분
샘플링 폭: 0.017°
(측정 방법 4)
측정 장치: X'pert-pro MPD(PANalytical사제)
선원: Cu
관 전압: 45kV
관 전류: 40mA
주사 범위: 3∼25°
주사 속도: 0.33°/초
샘플링 폭: 0.026°
측정: 샘플링한 현탁액을 X선 결정 해석용 캐필러리에 채워, 측정했다.
열분석은, 이하의 조건에서 측정했다.
(측정 방법 1)
측정 장치: EXSTAR TG/DTA6200R 장치(세이코 인스트루먼츠(현 사명: 히타치 하이테크 사이언스)사제)
측정 범위: 30∼350℃
승온 속도: 10℃/분
분위기: 질소
(측정 방법 2)
측정 장치: SmartLab System, DSC attachment(리가쿠사제)
측정 범위: 35∼270℃
분위기: 질소
DSC 조건은 표 3에 나타낸다.
(측정 방법 3)
측정 장치: STA7200RV+AS-3T(히타치 하이테크 사이언스제)
측정 범위: 30∼350℃
승온 속도: 10℃/분
분위기: 질소
(측정 방법 4)
측정 장치: TGA/DSC 3+(Mettler Toledo제)
측정 범위: 25∼350℃
승온 속도: 10℃/분
분위기: 건조 질소
HPLC에 의한 측정법은, 목적 화합물을 포함하는 혼합액을 이하의 어느 방법으로 샘플을 조제하여, 전술한 분석 조건에 의해 행했다.
샘플 조제법 1: 목적 화합물을 포함하는 혼합액을, 아세토나이트릴로 희석했다.
샘플 조제법 2: 목적 화합물을 포함하는 혼합액을, 아세토나이트릴과 프로필아민을 9 대 1의 비율로 혼합한 혼합액으로 희석했다.
샘플 조제법 3: 목적 화합물을 포함하는 혼합액을, 메탄올로 희석했다.
샘플 조정법 4: 목적 화합물을 포함하는 혼합액을, 메탄올과 물을 4 대 1의 비율로 혼합한 혼합액으로 희석했다.
반응 전환율의 산출은, HPLC 분석에 의해 산출된 원료의 면적값과 목적물의 면적값, 또는 원료의 면적값과 원료의 프로필아마이드체의 면적값과 목적물의 면적값, 또는 반응 전의 원료의 면적값과 반응 후의 원료의 면적값을 이용하여, 이하의 어느 식에 의해 행했다.
식 1: 반응 전환율(%)=목적물의 면적값/(원료의 면적값+목적물의 면적값)×100
식 2: 반응 전환율(%)=목적물의 면적값/(원료의 면적값+원료의 프로필아마이드체의 면적값+목적물의 면적값)×100
식 3: 반응 전환율(%)=100-(반응 후의 원료의 면적값/반응 전의 원료의 면적값×100)
실시예 1
화합물 4: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[벤질옥시카보닐(에틸)아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 50]
질소로 치환한 반응 가마에, 실온에서 화합물 2(4.60kg) 및 화합물 3(1.92kg)을 가하고, 이어서 2-MeTHF(22.8kg)를 가하여 교반했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, DIPEA(6.15kg)를 가한 후, T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 13.45kg)를 적하했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 5시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 2)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.6%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 2). 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 교반하면서 5% 탄산 나트륨 수용액(26.6kg)을 적하하고, 이어서, 물(6.9kg)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 20분간 교반한 후, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을, 마찬가지로 외온 25℃에서 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(34.5kgx3), 5% 탄산 나트륨 수용액(34.5kg)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 보관 용기에 회수하고, 반응 가마를 2-MeTHF(25.6kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 보관 용액으로서 보관 용기에 회수했다. 질소로 치환한 반응 가마에 상기의 보관 용액을, 2-MeTHF(1.7kg)로 보관 용기 내를 세정하면서 가했다. 반응 가마의 외온을 50℃로 설정하고, 액량이 12L 정도가 될 때까지, 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 보관 용기에 회수하고, 반응 가마를 2-MeTHF(8.5kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 4를 포함하는 2-MeTHF 용액(17.8kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.500분(HPLC 분석 조건: method 1)
실시예 2
화합물 5: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-(에틸아미노)-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 51]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 1에서 얻어진 화합물 4를 포함하는 2-MeTHF 용액(16.9kg), 2-MeTHF(8.6kg)를 가한 후, 5% Pd/C(1.78kg, 50% 함수품)를 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 가마의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 1시간 후, 내압의 변동이 없는 것을 확인한 후, 질소 치환 후에 수소로 0.18MPaG까지 더 가압하고, 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 용기 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 가압 여과했다. 반응 가마와 여과기를 2-MeTHF(10.8kg)로 세정 후, 여과액과 세정액을 보관 용액으로서 보관 용기에 회수했다. 얻어진 여과액 및 세정액을, 액량이 5L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 감압 농축했다. 반응 가마를, 2-MeTHF(8.5kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 5를 포함하는 2-MeTHF 용액(12.4kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.389분(HPLC 분석 조건: method 1)
실시예 3
화합물 7: (벤질(2S)-2-[[(1S)-2-[(2-tert-뷰톡시-2-옥소-에틸)-메틸-아미노]-2-옥소-1-(p-톨릴메틸)에틸]-에틸-카바모일]아제티딘-1-카복실레이트)의 합성
[화학식 52]
질소로 치환한 반응 가마에, 교반하면서 실시예 2에서 얻어진 화합물 5를 포함하는 2-MeTHF 용액(12.3kg)과, 화합물 6(2.92kg)을 2-MeTHF(3.87kg)에 용해시킨 용액을 2-MeTHF(8.0kg)로 세정하면서 가했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 교반하면서 DIPEA(5.35kg)를 가한 후에, T3P(1.6M 2-MeTHF 용액, 15.53kg)를 적하했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 혼합물을 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.6%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 반응 혼합물에 5% 탄산 나트륨 수용액(25.2kg)을 교반하면서 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 10분간 교반 후, 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 유기층을 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(33.2kg)으로 2회 세정 후, 5% 탄산 나트륨 수용액(33.2kg)으로 세정했다. 유기층을 보관 용기에 회수하고, 반응 가마를, 2-MeTHF(25.6kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 보관 용액으로서 보관 용기에 회수했다. 질소로 치환한 반응 가마에, 상기 보관 용액을, 2-MeTHF(1.7kg)로 보관 용기 내를 세정하면서 가했다. 반응 가마의 외온을 50℃로 설정하고, 교반하면서 액량이 12L 정도가 될 때까지, 감압 농축했다. 얻어진 잔사, 및 반응 가마를 2-MeTHF(8.5kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 7을 포함하는 2-MeTHF 용액(18.9kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.065분(HPLC 분석 조건: method 1)
실시예 4
화합물 8: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[(2S)-아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 53]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 3에서 얻어진 화합물 7을 포함하는 2-MeTHF 용액(18.7kg)을, 보관 용기를 2-MeTHF(6.9kg)로 세정하면서 가했다. 반응 가마에, 5% Pd/C(1.74kg, 50% 함수품)를 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 가마의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 50분 교반 후, 내압의 변동이 없는 것을 확인한 후, 질소 치환 후에 수소로 0.18MPaG까지 더 가압하고, 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 용기 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 가압 여과했다. 반응 가마와 여과기를 2-MeTHF(10.6kg)로 세정 후, 여과액과 세정액을 보관 용액으로서 보관 용기에 회수했다. 얻어진 여과액 및 세정액을, 액량이 6L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 감압 농축했다. 잔사, 및 반응 가마를 2-MeTHF(8.5kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 8을 포함하는 2-MeTHF 용액(14.0kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.538분(HPLC 분석 조건: method 1)
실시예 5
화합물 10: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[벤질옥시카보닐(메틸)아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 54]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 4에서 얻어진 화합물 8을 포함하는 2-MeTHF 용액(13.9kg), 화합물 9(2.31kg), 2-MeTHF(10.4kg)를 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 교반하면서 DIPEA(4.61kg)를 가한 후에, T3P(1.6M 2-MeTHF 용액, 12.15kg)를 적하했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 혼합물을 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 96.8%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 반응 혼합물에 5% 탄산 나트륨 수용액(24.3kg)을 교반하면서 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 10분간 교반 후, 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 유기층을 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(32.4kg)으로 2회 세정 후, 5% 탄산 나트륨 수용액(32.4kg)으로 세정했다. 얻어진 유기층에 2-MeTHF(25.6kg)를 가했다. 반응 가마의 외온을 50℃로 설정하고, 교반하면서 액량이 12L 정도가 될 때까지, 감압 농축 후, 잔사를 보관 용기에 회수했다. 반응 가마를, 2-MeTHF(8.5kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 10을 포함하는 용액(19.0kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.004분(분석 조건: method 1)
실시예 6
화합물 11: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[에틸-[(2S)-1-[(2S)-2-(메틸아미노)프로파노일]아제티딘-2-카보닐]아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 55]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 5에서 얻어진 화합물 10을 포함하는 용액(18.8kg), 2-MeTHF(7.0kg)를 순차적으로 가했다. 반응 가마에, 5% Pd/C(1.70kg, 50% 함수품)를 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 가마의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 1시간 40분 후, 내압의 변동이 없는 것을 확인하고, 질소 치환 후에 수소로 0.18MPaG까지 가압하고, 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 가압 여과했다. 반응 가마와 여과기를 2-MeTHF(10.3kg)로 세정 후, 여과액과 세정액을 보관 용액으로서 회수했다. 얻어진 여과액 및 세정액을, 액량이 7L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 감압 농축했다. 잔사, 및 반응 가마를 톨루엔(10.4kg)으로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 11을 포함하는 용액(16.7kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.510분(HPLC 분석 조건: method 1)
실시예 7
화합물 13: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 56]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 6에서 얻어진 화합물 11을 포함하는 용액(16.5kg), 2-MeTHF(2.12kg)를 실온에서 순차적으로 가했다. 이어서, 반응 가마에 화합물 12(2.52kg)를 2-MeTHF(8.1kg)에 용해시킨 용액, 2-MeTHF(8.1kg), 아세토나이트릴(3.1kg)을 실온에서 순차적으로 가했다. DIPEA(4.51kg)를 실온에서 교반하면서 가한 후, 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, HATU(4.52kg), 2-MeTHF(0.3L)를 순차적으로 가한 후, 25℃에서 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마에 N-메틸이미다졸(0.65kg)을 가하고, 추가로 5% 탄산 나트륨 수용액(23.9kg)을 교반하면서 가한 후에 1시간 교반했다. 이어서, 2.5% 암모니아 수용액(23.9kg)을 가하고, 30분 교반 후에, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을, 2.5% 암모니아 수용액(31.9kg), 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(31.9kg×2), 3% 인산수소 이칼륨 수용액(31.9kg)으로 세정했다. 얻어진 유기층에 2-MeTHF(25.6kg)를 가했다. 반응 가마의 외온을 50℃로 설정하고, 교반하면서 액량이 12L 정도가 될 때까지 감압 농축했다. 잔사, 및 반응 가마를 아세톤(7.9kg)으로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 13을 포함하는 용액(18.2kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.235분(HPLC 분석 조건: method 1)
화합물 11과 화합물 12의 축합 반응(실시예 7의 반응 조건 검토)
화합물 11과 화합물 12의 축합 반응에 있어서의 용매를 검토했다. 축합 반응은 HPLC 분석에 의해 추적했다. 수율은 HPLC 분석에 의해 구한 에어리어%(Area%)에 의해 산출했다.
[화학식 57]
실시예 7-1
화합물 13: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성(용매의 검토)
실시예 6에서 얻어진 화합물 11(50.69mg(0.100mmol))을 포함하는 용액(72.62mg)을 반응 용기에 가하고, 외온 60℃에서 감압 농축 건고했다. 이어서, 반응 용기에 화합물 12(32.50mg(0.122mmol))를 가하고, 2-MeTHF(0.35mL)를 실온에서 가했다. DIPEA(58.3mg(0.451mmol))를 실온에서 교반하면서 가한 후, 반응 용기의 외온을 25℃로 설정하고, HATU(58.37mg(0.154mmol))를 가한 후, 25℃에서 4시간 교반했다. 반응 용기에 N-메틸이미다졸(8.17mg(0.099mmol))을 가하고, 추가로 5% 탄산 나트륨 수용액(300μL)을 교반하면서 가한 후에 2시간 30분 교반했다. 이어서, 불용물을 면전으로 여과 제거 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층에 2.5% 암모니아 수용액(300μL)을 가하고, 5분간 교반 후에, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을, 2.5% 암모니아 수용액(320μL), 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(320μL×2), 3% 인산수소 이칼륨 수용액(320μL)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 외온 60℃에서 감압 농축 건고했다. 얻어진 잔사를 HPLC로 분석했다. 표품을 이용한 HPLC 분석의 결과, 얻어진 화합물 13은 56.77mg(75.1% 수율)이었다.
화합물 13의 LCMS(ESI): 유지 시간: 4.012분, m/z=750[M+H]+(LCMS 분석 조건: method 1)
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.261분(HPLC 분석 조건: method 1)
상기의 화합물 13의 합성법(용매의 검토)에서 이용한 2-MeTHF 대신에, 용매로서 4-메틸테트라하이드로피란, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 또는 아니솔을 이용한 경우의 결과를 아래 표에 나타냈다.
이들 결과로부터, 2-MeTHF에 더하여, 4-메틸테트라하이드로피란, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 또는 아니솔이, HATU를 이용한 축합 반응에 적합한 용매인 것이 나타났다. 2-MeTHF에 더하여, 4-메틸테트라하이드로피란, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 또는 아니솔이, 화합물 11과 화합물 12를 축합시켜 화합물 13을 제조하는 데 적합한 용매인 것이 나타났다. 특히, 2-MeTHF가 목적물의 수율의 관점에서 적합한 용매인 것이 나타났다.
실시예 8
화합물 15: ((2,3,4,5,6-펜타플루오로페닐) (2S)-4-메틸-2-[메틸(2-트라이메틸실릴에톡시카보닐)아미노]펜타노에이트)의 합성
[화학식 58]
질소로 치환한 반응 가마에, 화합물 14(3.0kg), 아세트산 아이소프로필(13.7kg), 및 DMF(18.3kg)를 실온에서 순차적으로 가했다. 펜타플루오로페놀(2.38kg)을 아세트산 아이소프로필(2.8kg)에 용해시킨 용액, 아세트산 아이소프로필(0.6kg)을 실온에서 교반하면서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 0℃로 설정하고, 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카보다이이미드 염산염(2.48kg)을 반응 가마에 가했다. 반응 가마의 외온을 1시간에 걸쳐서 25℃까지 승온한 후, 외온 25℃에서 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 원료인 화합물 14가 미검출로 되어 있는 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 3). 반응 가마의 외온을 0℃로 설정하고, 0.5M 염산 수용액(19.4kg)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정한 후 10분 교반하고, 교반을 정지 후, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 0.5M 염산 수용액(27.5kg)으로 세정했다. 얻어진 유기층에, 5% 탄산 칼륨 수용액(27.5kg×2), 이어서 DMF(2.8kg)를 가했다. 반응 혼합물을 10분간 교반하고, 교반을 정지 후, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을, 5% 탄산 칼륨 수용액(27.5kg), 이어서 10% 염화 나트륨 수용액(27.5kg)으로 세정했다. 아세트산 아이소프로필(27.6kg)을 가한 후, 액량이 8L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 감압 농축했다. 잔사, 및 반응 가마를 아세톤(8.7kg)으로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 15를 포함하는 용액(16.2kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 6.175분(HPLC 분석 조건: method 2)
실시예 9
화합물 16: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[에틸-[(2S)-1-[(2S)-2-[메틸-[(2S,3S)-3-메틸-2-[[(2S)-4-메틸-2-[메틸(2-트라이메틸실릴에톡시카보닐)아미노]펜타노일]아미노]펜타노일]아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 59]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 8에서 얻어진 화합물 15를 포함하는 용액(7.4kg)과, 실시예 7에서 얻어진 화합물 13을 포함하는 용액(9.0kg), 아세트산 아이소프로필(4.0kg), N-메틸모폴린(2.38kg)을 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마에, 5% Pd/C(0.83kg, 50% 함수품)를 가한 후에, 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 가마의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 1시간 후, 내압의 변동이 없는 것을 확인한 후, 수소로 0.18MPaG까지 가압하고, 1시간 더 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 가압 여과했다. 반응 가마 내와 여과기를 2-MeTHF(10.0kg×2)로 세정 후, 여과액과 세정액을 합쳐서 보관 용액(제 1 배치)으로서 얻었다.
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 8에서 얻어진 화합물 15를 포함하는 용액(7.4kg)과, 실시예 7에서 얻어진 화합물 13을 포함하는 용액(9.0kg), 아세트산 아이소프로필(4.0kg), N-메틸모폴린(2.38kg)을 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마에, 5% Pd/C(0.83kg, 50% 함수품)를 가한 후에, 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 가마의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 1시간 후, 내압의 변동이 없는 것을 확인한 후, 수소로 0.18MPaG까지 가압하고, 1시간 더 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 가압 여과했다. 반응 가마 내와 여과기를 2-MeTHF(10.0kg×2)로 세정 후, 여과액과 세정액을 합쳐서 보관 용액(제 2 배치)으로서 얻었다.
질소로 치환한 반응 가마에 상기의 각각의 보관 용액 및 2-MeTHF(1.8kg)를 가하고, 액량이 20L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 감압 농축했다. 농축 잔사를 가압 여과했다. 반응 가마 내와 여과기를 2-MeTHF(8.5kgx2)로 세정 후, 여과액과 세정액을 합쳐서 보관 용액으로서 보관 용기에 회수했다. 질소로 치환한 반응 가마에, 상기의 보관 용액 및 2-MeTHF(3.1kg)를 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 5% 탄산 칼륨 수용액(25.9kg)과 4-다이메틸아미노피리딘(0.96kg)을 교반하면서 순차적으로 가했다. 30분 후에 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 유기층을 5% 황산수소 칼륨 수용액(34.1kg×2), 5% 탄산 칼륨 수용액(34.1kg)으로 2회 세정했다. 2-MeTHF(26.5kg)를 가하고, 액량이 12L 정도가 될 때까지 외온 50℃에서 감압 농축했다. 얻어진 잔사와, 반응 가마 내를 2-MeTHF(8.5kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 16을 포함하는 용액(19.0kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 5.964분(HPLC 분석 조건: method 2)
실시예 9-1(실시예 9에서 이용한 아세트산 아이소프로필 대신에, 2-MeTHF를 이용한 경우)
화합물 16(tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[에틸-[(2S)-1-[(2S)-2-[메틸-[(2S,3S)-3-메틸-2-[[(2S)-4-메틸-2-[메틸(2-트라이메틸실릴에톡시카보닐)아미노]펜타노일]아미노]펜타노일]아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 60]
반응 용기에, 실시예 7에서 얻어진 화합물 13을 포함하는 보관 용액(482.7mg)을 가하고 감압 농축하여, 화합물 13을 포함하는 잔사를 얻었다. 반응 용기에, 화합물 15를 포함하는 잔사(91.2mg, 81.2wt%)와 2-MeTHF(1000μL)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 용기에, 5% Pd/C(29.8mg, 50% 함수품)를 가한 후에 외온을 25℃로 설정하고, 수소 가스에 의한 탈기 치환을 행하고 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 혼합물을 여과하고, 잔사를 2-MeTHF(400μL×2)로 세정했다. 여과액을 포함한 반응 용기의 외온을 25℃로 설정하고, 5% 탄산 칼륨 수용액(440μL)과 4-다이메틸아미노피리딘(16.6mg)을 교반하면서 순차적으로 가했다. 30분 후에 교반을 정지하고, 수층을 배출했다. 유기층을 5% 황산수소 칼륨 수용액(440μL×2), 5% 탄산 칼륨 수용액(440μL×2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여, 화합물 16을 포함하는 잔사(113.3mg)를 얻었다. 취득한 잔사를 아세토나이트릴로 희석하고, LCMS 분석에 부쳤다(method 2: 화합물 16의 유지 시간; 5.573분, m/z=910[M+Na]+). 얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다(수율: 58%).
실시예 9-2(실시예 9에서 이용한 아세트산 아이소프로필 대신에, 탄산 다이메틸을 이용한 경우)
화합물 16(tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[에틸-[(2S)-1-[(2S)-2-[메틸-[(2S,3S)-3-메틸-2-[[(2S)-4-메틸-2-[메틸(2-트라이메틸실릴에톡시카보닐)아미노]펜타노일]아미노]펜타노일]아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
반응 용기에, 실시예 7에서 얻어진 화합물 13을 포함하는 보관 용액(477.4mg)을 가하고 감압 농축하여, 화합물 13을 포함하는 잔사를 얻었다. 반응 용기에, 화합물 15를 포함하는 잔사(92.0mg, 81.2wt%)와 탄산 다이메틸(1000μL)을 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 용기에, 5% Pd/C(29.7mg, 50% 함수품)를 가한 후에 외온을 25℃로 설정하고, 수소 가스에 의한 탈기 치환을 행하고 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 혼합물을 여과하고, 잔사를 탄산 다이메틸(400μL×2)로 세정했다. 여과액을 포함한 반응 용기의 외온을 25℃로 설정하고, 5% 탄산 칼륨 수용액(880μL)과 4-다이메틸아미노피리딘(17.1mg)을 교반하면서 순차적으로 가했다. 30분 후에 교반을 정지하고, 수층을 배출했다. 유기층을 5% 황산수소 칼륨 수용액(880μL×2), 5% 탄산 칼륨 수용액(880μL×2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여, 화합물 16을 포함하는 잔사(107.3mg)를 얻었다. 취득한 잔사를 아세토나이트릴로 희석하고, LCMS 분석에 부쳤다(method 2: 화합물 16의 유지 시간; 5.579분, m/z=910[M+Na]+). 얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다(수율: 62%).
실시예 9-3(실시예 9에서 이용한 아세트산 아이소프로필 대신에, 아니솔을 이용한 경우)
화합물 16의 상기의 합성법에서 이용한 2-MeTHF 대신에, 용매로서 탄산 다이메틸, 아니솔을 이용한 경우의 결과를 아래 표에 나타냈다.
실시예 10
화합물 17: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[에틸-[(2S)-1-[(2S)-2-[메틸-[(2S,3S)-3-메틸-2-[[(2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노일]아미노]펜타노일]아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 61]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 9에서 얻어진 화합물 16을 포함하는 용액(18.8kg), 2-MeTHF(5.8kg)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 47℃로 설정하고, 테트라뷰틸암모늄 클로라이드(1M THF 용액, 17.6kg)를 1시간에 걸쳐서 가했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 원료인 화합물 16이 미검출로 되어 있는 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 교반 정지 후, 반응 혼합물을 절반씩으로 분할했다. 분할한 반응 혼합물에 아세트산 아이소프로필(9.1kg)을 가하고, 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 교반하면서 유기층을 5% 탄산 칼륨 수용액(10.3kgx3)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 보관 용액으로 보관했다. 분할한 다른 한쪽의 반응 혼합물도 마찬가지의 조작을 행하고, 얻어진 유기층을 합치고, 액량이 12L 정도가 될 때까지 감압 농축했다. 얻어진 잔사와, 반응 가마 내를 2-MeTHF(8.5kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 17을 포함하는 용액(12.6kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 3.057분(HPLC 분석 조건: method 1)
실시예 11
화합물 19: (tert-뷰틸 (3S)-3-[벤질옥시카보닐(메틸)아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트)의 합성
[화학식 62]
질소로 치환한 반응 가마에, 화합물 18(4.78kg), 2-MeTHF(23.8kg)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 반응 혼합물을 교반하면서 DIPEA(3.22kg), 다이메틸아민-THF 용액(2M, THF 용액, 5.49kg)을 순차적으로 가하고 30분간 교반했다. T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 8.64kg)를 가한 후, 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 6시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 3)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 96.2%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 반응 혼합물에 10% 시트르산 일수화물 수용액(28.7kg)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 10분간 교반 후, 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 10% 시트르산 일수화물 수용액(28.7kg×2) 및 5% 탄산 나트륨 수용액(28.7kgx3)으로 세정했다. 얻어진 유기층에 2-MeTHF(26.0kg)를 가하고, 액량이 7L 정도가 될 때까지 외온 60℃에서 감압 농축했다. 잔사, 및 반응 가마를 2-MeTHF(6.8kg×2)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 19를 포함하는 용액(19.8kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 3.510분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 12
화합물 20: (tert-뷰틸 (3S)-4-(다이메틸아미노)-3-(메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트)의 합성
[화학식 63]
질소로 치환한 반응 가마에, 5% Pd/C(1.31kg, 50% 함수품), 실시예 11에서 얻어진 화합물 19를 포함하는 용액(19.8kg), 2-MeTHF(6.0kg)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 가마의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 2시간 교반 후, 내압의 변동이 없는 것을 확인한 후, 반응 가마를 수소로 0.18MPaG까지 가압하고, 1.5시간 더 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 100%(원료가 미검출)인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 가압 여과했다. 반응 가마 내와 여과기를 2-MeTHF(11.3kgx3)로 세정 후, 여과액과 세정액을 보관 용액으로서 보관 용기에 회수했다. 질소 치환한 반응 가마에, 상기 보관 용액, 및 2-MeTHF(0.4kg)를 가하고, 액량이 4L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 잔사, 및 반응 가마를 2-MeTHF(6.8kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 20을 포함하는 용액(10.4kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 1.560분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 13
화합물 22: (tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-[벤질옥시카보닐(메틸)아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트)의 합성
[화학식 64]
실시예 12에서 얻어진 화합물 20을 포함하는 용액(10.3kg)을 가하고, 액량이 10L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 화합물 21(61w/w% MeTHF 용액, 4.97kg), 2-MeTHF(1.0L), 아세토나이트릴(2.8kg)을 실온에서 가했다. 외온을 10℃로 냉각하고, DIPEA(4.93kg), HATU(4.95kg)를 순차적으로 가한 후, 외온을 25℃로 승온했다. 반응 혼합물을 25℃에서 4시간 교반한 후, 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.3%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마에 CPME(4.0kg), 5% 탄산 칼륨 수용액(3.5kg), N-메틸이미다졸(712g)을 순차적으로 가하고, 30분간 교반했다. 이어서, 2.5% 암모니아 수용액(14.1kg)과 2-MeTHF(3.9kg)를 가하고 10분 교반 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 2.5% 암모니아 수용액(17.6kg), 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(17.6kgx3), 5% 탄산 칼륨 수용액(17.6kg)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 액량이 9L 정도가 될 때까지, 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 2-MeTHF(13.6kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 가하여, 화합물 22를 포함하는 용액(21.6kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.356분(HPLC 분석 조건: method 3)
화합물 20과 화합물 21의 축합 반응(실시예 13의 반응 조건 검토)
화합물 20과 화합물 21의 축합 반응에 있어서의 용매를 검토했다. 축합 반응은 HPLC 분석에 의해 추적했다. 수율은 HPLC 분석에 의해 구한 에어리어%(Area%), 및 qNMR의 측정값으로부터 산출했다.
실시예 13-1(실시예 13에서 이용한 2-MeTHF 및 아세토나이트릴 대신에, 아니솔을 이용한 경우)
화합물 22(tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-[벤질옥시카보닐(메틸)아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트)의 합성
[화학식 65]
반응 용기에 실시예 12에서 얻어진 화합물 20을 포함하는 용액(590.9mg)에, 화합물 21(61w/w% 2-MeTHF 용액, 252.7mg)을 순차적으로 가하고 감압 농축하여, 화합물 20, 및 21을 포함하는 잔사를 얻었다. 반응 용기에 아니솔(800μL)을 실온에서 가하여, 잔사를 용해시켰다. 외온을 10℃로 냉각하고, 반응 혼합물에 DIPEA(334μL), HATU(248.2mg)를 순차적으로 가한 후, 외온을 25℃로 승온했다. 반응 혼합물을 25℃에서 5시간 교반한 후, 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 97.0%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 외온을 10℃로 설정하고, 반응 용기에 N-메틸이미다졸(34.6μL), 5% 탄산 칼륨 수용액(200μL)을 순차적으로 가하고, 외온을 25℃로 설정하고 30분간 교반했다. 이어서, 2.5% 암모니아 수용액(800μL)과 아니솔(260μL)을 가하고 10분 교반 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 2.5% 암모니아 수용액(1000μL), 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(1000μL×3)으로 세정했다. 얻어진 유기층에 용매(아니솔(260μL))를 가하고, 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(1000μL×1), 5% 탄산 칼륨 수용액(1000μL×2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여, 화합물 22(175.7mg, 수율: 82%)를 포함하는 잔사를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 4.269분, m/z=526[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 3)
수율: 82%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 13-1의 화합물 22의 합성법(용매의 검토)에서 이용한 아니솔 대신에, 용매로서 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 또는 2-MeTHF를 이용한 경우의 결과를 아래 표에 나타냈다.
이들 결과로부터, 아세토나이트릴 대신에, 아니솔, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 및 2-MeTHF가, 화합물 22의 제조에 있어서 적합한 용매인 것이 나타났다. 특히, 아니솔, 또는 아세트산 에틸을 용매로서 이용하면 목적물의 수율의 관점에서 적합한 것이 나타났다.
실시예 14
화합물 23: (tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-사이클로펜틸-2-(메틸아미노)아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트)의 합성
[화학식 66]
질소로 치환한 반응 가마에, 5% Pd/C(1.26kg, 50% 함수품), 실시예 13에서 얻어진 화합물 22를 포함하는 용액(21.0kg), 2-MeTHF(5.1kg)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 용기의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 40분간 교반 후, 내압의 변동이 없는 것을 확인한 후, 반응 가마를 수소로 0.18MPaG까지 가압하고, 1시간 더 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 100%(원료가 미검출)인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 가압 여과했다. 반응 가마 내와 여과기를 2-MeTHF(10.9kgx4, 5.4kg)로 세정하고, 여과액과 세정액을 보관 용액으로서 회수했다. 얻어진 여과액 및 세정액을, 반응 혼합물의 액량이 6L 정도가 될 때까지 외온 60℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 잔사, 및 반응 가마를 2-MeTHF(6.8kg)를 이용하여 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 23을 포함하는 용액(11.8kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.297분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 15
화합물 25: (tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-사이클로펜틸-2-[메틸-[1-[(2,2,2-트라이플루오로아세틸)아미노]사이클로펜테인카보닐]아미노]아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트)의 합성
[화학식 67]
질소로 치환한 반응 가마에, 화합물 24(3.76kg), 2-MeTHF(13.0kg)를 실온에서 가했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, DIPEA(5.39kg), 실시예 14에서 얻어진 화합물 23을 포함하는 용액(11.7kg), T3P(50% 2-MeTHF 용액, 14.1kg), 및 DMAP(2.04kg)를 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 50℃로 설정하고, 4시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.0%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 5% 탄산 나트륨 수용액(25.3kg)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 30분간 교반 후, 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 이어서, 반응 가마의 외온을 15℃로 설정하고, 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(25.3kg)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 10분간 교반 후, 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을, 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(25.3kg), 5% 탄산 나트륨 수용액(25.3kg)으로 세정했다. 2-MeTHF(26.0kg)를 가하고, 액량이 10L 정도가 될 때까지 외온 60℃에서 감압 농축했다. 잔사, 반응 가마를 2-MeTHF(4.5kg)와 MeOH(2.1kg)의 혼합 용매로 세정한 세정액, 및 반응 가마를 2-MeTHF(6.8kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 25를 포함하는 용액(22.6kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 6.166분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 16
화합물 26: (tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-[(1-아미노사이클로펜테인카보닐)-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트)의 합성
[화학식 68]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 15에서 얻어진 화합물 25를 포함하는 용액(22.4kg), 2-MeTHF(0.76kg)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 -20℃로 설정하고, 교반하면서 LiBH4(10w/w% THF 용액, 3.67kg)를 가한 후, 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 4)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 100%(원료가 미검출)인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마에 2,2,2-트라이플루오로에탄올(16.5kg)을 외온 -20∼-30℃에서 3시간에 걸쳐서 적하했다. 이어서, 반응 가마의 외온을 1시간에 걸쳐서 0℃로 승온한 후, 외온 0℃에서 1시간 더 교반했다. 반응 가마에 20% 염화 암모늄 수용액(14.3kg)을 가하고, 13분간 교반 후, 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 트라이플루오로아세트산(1.88kg)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 1시간 교반했다. 얻어진 반응 혼합물, 및 반응 가마를 2-MeTHF(6.7kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 보관 용기에 회수했다. 질소로 치환한 다른 반응 가마에 2M 수산화 나트륨 수용액(61.9kg)을 실온에서 가하고, 반응 가마의 외온을 10℃로 설정했다. 이에 대해, 상기의 보관 용기에 회수한 반응 혼합물을 70분간에 걸쳐서 적하한 후, 2-MeTHF(0.6kg)를 가하고, 반응 가마의 외온을 25℃로 설정했다. 10분간 교반 후, 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 2M 수산화 나트륨 수용액(47.6kgx2), 10% 인산수소 이칼륨 수용액(23.8kg)으로 세정했다. 얻어진 유기층을, 액량이 40L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 감압 농축했다. 얻어진 농축액에 2-MeTHF(30.5kg)를 가한 후, 유기층을 2.5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(34kg), 상수(常水)(34kg)로 세정하여, 목적물을 수층에 추출했다. 합친 수층을 2-MeTHF(48.9kg)와 헵테인(3.9kg)의 혼액으로 2회 세정한 후, 2-MeTHF(53.8kg)를 가하고, 15% 탄산 나트륨 수용액(15.2kg)을 교반하면서 가했다. 수층을 배출한 후, 유기층을 5% 인산수소 이칼륨 수용액(31.5kg)으로 세정했다. 얻어진 유기층에 2-MeTHF(25.9kg)를 가한 후, 반응 혼합물의 액량이 8L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 2-MeTHF(9.8kg)를 가하고, 반응 혼합물의 액량이 8L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 감압 농축했다. 잔사, 및 반응 가마를 아세토나이트릴(6.2kgx2)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 26을 포함하는 용액(19.3kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.725분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 15-1
화합물 25a: tert-뷰틸 N 2 -{(2S)-2-[(1-{[(벤질옥시)카보닐]아미노}사이클로펜테인-1-카보닐)(메틸)아미노]-2-사이클로펜틸아세틸}-N,N,N 2 -트라이메틸-L-α-아스파라기네이트의 합성
[화학식 69]
반응 용기에, 화합물 23 HCl염(1.00g), 아세토나이트릴(10.01mL)을 실온에서 순차적으로 가했다. 이어서, DIPEA(2.72mL)를 실온에서 교반하면서 가한 후, 화합물 24a(1.74g), HATU(2.75g)를 가하고, 50℃에서 6시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.7%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 용기에, N-메틸이미다졸(0.78mL), 시수(市水)(3.99mL)를 가한 후에 1시간 교반했다. 이어서, 25℃까지 냉각한 후에 14시간 교반했다. 반응 혼합물을 여과하고, 잔사를 아세토나이트릴/물 혼액(8:3(v/v), 5.33mL)으로 세정했다. 여과 분별한 고체를 감압 건조하여, 화합물 25a(1.27g)를 얻었다.
취득한 고체를 아세토나이트릴에 희석하고, HPLC 분석에 부쳤다(method 6 화합물 25a의 유지 시간; 6.712분)
LCMS(ESI): 유지 시간: 6.696분, m/z=637.29[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 6)
수율: 84%
실시예 16-1
화합물 26: tert-뷰틸 N 2 -{(2S)-2-[(1-아미노사이클로펜테인-1-카보닐)(메틸)아미노]-2-사이클로펜틸아세틸}-N,N,N 2 -트라이메틸-L-α-아스파라기네이트의 합성
[화학식 70]
반응 용기에, 5% Pd/C(0.85g, 50% 함수품)와 THF(14.04mL)를 실온에서 가한 후에 외온을 25℃로 설정했다. 이어서, 반응 용기에 THF(42.12mL)에 용해시킨 화합물 25a(3.51g)를 실온에서 가한 후에 외온을 25℃로 설정하고, 수소 가스에 의한 탈기 치환을 행하여 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 혼합물을 여과하고, 잔사를 THF(14.04mL×2)로 세정했다. 얻어진 용액을 감압 농축하여, 화합물 26을 포함하는 잔사(7.37g)를 얻었다. 얻어진 잔사와 1,3,5-트라이메톡시벤젠을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다(수율: 93%).
LCMS(ESI): 유지 시간: 2.421분, m/z=503.19[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 3)
실시예 17
화합물 28: (벤질(2S)-2-[[1-[[(1S)-2-[[(1S)-3-tert-뷰톡시-1-(다이메틸카바모일)-3-옥소-프로필]-메틸-아미노]-1-사이클로펜틸-2-옥소-에틸]-메틸-카바모일]사이클로펜틸]카바모일]피롤리딘-1-카복실레이트)의 합성
[화학식 71]
질소로 치환한 반응 가마에, 화합물 27(2.65kg), 아세토나이트릴(2.9kg)을 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 실시예 16에서 얻어진 화합물 26을 포함하는 용액(19.1kg), DIPEA(3.17kg), 및 2-브로모-1-에틸피리디늄 테트라플루오로붕산염(3.36kg)을 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.3%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, CPME(34.1kg), 5% 탄산 나트륨 수용액(23.6kg), N-메틸이미다졸(0.67kg)을 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 40분간 교반한 후, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(23.6kg)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 10분간 교반한 후, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(23.6kg×2), 5% 탄산 나트륨 수용액(23.6kgx2)으로 세정 후, 2-MeTHF(26.0kg)를 가했다. 얻어진 유기층을, 액량이 12L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 대해서, THF(19.7kg)를 가한 후, 액량이 12L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 반응 가마의 외온을 20℃로 설정한 후, 반응 가마에 CPME(9.0kg)를 가했다. 액량이 12L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 반응 가마에 CPME(10.0kg)를 가하고, 액량이 12L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 교반 정지 후, 반응 가마에 THF(14.1kg)를 가했다. 얻어진 잔사, 및 반응 가마를 THF(5.2kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 28을 포함하는 용액(28.8kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.189분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 17-1(실시예 17의 합성법에서 이용한 아세토나이트릴 대신에, 2-MeTHF를 이용한 경우)
화합물 28: (벤질(2S)-2-[[1-[[(1S)-2-[[(1S)-3-tert-뷰톡시-1-(다이메틸카바모일)-3-옥소-프로필]-메틸-아미노]-1-사이클로펜틸-2-옥소-에틸]-메틸-카바모일]사이클로펜틸]카바모일]피롤리딘-1-카복실레이트)의 합성
[화학식 72]
반응 용기에 화합물 26을 포함하는 보관 용액(1.29g)을 반응 용기에 가하고, 외온 40도에서 감압 농축 건고했다. 이어서, 반응 용기에 2-MeTHF(0.91mL), 화합물 27(126.90mg)을 가했다. DIPEA(0.37mL)를 실온에서 교반하면서 가한 후, HATU(338.30mg)를 가하고, 실온에서 3시간 교반했다. 반응 용기에 2-MeTHF(1.84mL), 5% 탄산 나트륨 수용액(1.09mL)을 가하고, 추가로 N-메틸이미다졸(30.30μL)을 가한 후에 30분 교반했다. 수층을 배출한 후, 얻어진 유기층을 2.5% 암모니아 수용액(1.09mL), 5% 황산수소 나트륨 일수소화물 수용액(1.09mL×2), 5% 탄산 나트륨 수용액(1.09mL×2), 2.5% 암모니아 수용액(1.09mL×3), 5% 황산수소 나트륨 일수소화물 수용액(1.09mL×2), 5% 탄산 나트륨 수용액(1.09mL×2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 외온 40℃에서 감압 농축 건고하여, 화합물 28을 포함하는 잔사(0.19g, 수율 50.9%)를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 4.178분, m/z=735[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 3)
수율: 50.9%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 18
화합물 29: (tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-사이클로펜틸-2-[메틸-[1-[[(2S)-피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]아미노]아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트)의 합성
[화학식 73]
질소로 치환한 반응 가마에, 5% Pd/C(1.16kg, 50% 함수품), 실시예 17에서 얻어진 화합물 28을 포함하는 용액(27.4kg), THF(0.4kg)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 가마의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 2시간 30분 후, 내압의 변동이 없는 것을 확인한 후, 질소 치환 후에 수소로 0.18MPaG까지 가압하고, 1시간 더 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.6%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 가압 여과했다. 반응 가마와 여과기를 2-MeTHF(10.0kgx3)로 세정했다. 얻어진 여과액 및 세정액을, 액량이 9L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 2-MeTHF(6.9kg)를 가하고, 재차, 반응 혼합물의 액량이 9L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 감압 농축했다. 재차, 얻어진 잔사에 2-MeTHF(4.3kg)를 가하고, 반응 혼합물의 액량이 9L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 감압 농축하여, 화합물 29를 포함하는 반응 혼합물의 농축액을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.846분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 18-1(실시예 18의 합성법에서 이용한 THF/2-MeTHF 대신에, 2-MeTHF를 이용한 경우)
화합물 29: (tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-사이클로펜틸-2-[메틸-[1-[[(2S)-피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]아미노]아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트)의 합성
[화학식 74]
실시예 17에서 얻어진 화합물 28(121.49mg)을 포함하는 용액(1014.92mg)을 반응 용기에 가하고, 외온 60℃에서 감압 농축 건고했다. 이어서, 질소로 치환한 반응 용기에, 2-MeTHF(2081mg), 5% Pd/C(25.89mg, 50% 함수품)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 용기의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 용기의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 7시간 후, 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 용기 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 감압 여과했다. 반응 용기와 기리야마 깔때기 및 필터를 2-MeTHF(1041mgx3)로 세정했다. 얻어진 용액을 HPLC로 분석했다. 표품을 이용한 HPLC 분석의 결과, 얻어진 화합물 29는 91.00mg(92.3% 수율)이었다.
화합물 29의 LCMS(ESI): 유지 시간: 2.826분, m/z=578[M+H]+(LCMS 분석 조건: method 3)
실시예 19
화합물 31: (tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트)의 합성
[화학식 75]
실시예 18에서 얻어진 화합물 29를 포함하는 반응 혼합물의 농축액이 들어간, 질소로 치환한 반응 가마에, 2-MeTHF(5.0kg), 화합물 30(3.08kg)을 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, DIPEA(2.44kg), T3P(50 wt% 2-MeTHF 용액(6.56kg)), 2-MeTHF(0.4kg)를 교반하면서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.3%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마의 외온을 15℃로 설정하고, 교반하면서 5% 탄산 칼륨 수용액(15.9kg), N-메틸이미다졸(352.4g)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 3시간 30분간 교반 후, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 반응 가마의 외온을 20℃로 설정하고, 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(14.9kg)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 15분간 교반 후, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(14.9kg)으로 세정한 후, 얻어진 유기층에 아세토나이트릴(4.5kg), MTBE(4.4kg), 헵테인(6.2kg), 및 2.5% 탄산 칼륨 수용액(14.1kg)을 외온 25℃에서 순차적으로 가했다. 10분간 교반한 후, 교반을 정지 후, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층에 2.5% 탄산 칼륨 수용액(21.3kg), 아세토나이트릴(6.6kg), 및 2-MeTHF(2.1kg)를 가하고 10분간 교반하고, 교반을 정지 후, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층에 2.5% 탄산 칼륨 수용액(21.3kg), 및 아세토나이트릴(6.6kg)을 가하고 10분간 교반하고, 교반을 정지 후, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층에 2-MeTHF(26.0kg)를 추가하고, 반응 혼합물의 액량이 9L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 아세트산 아이소프로필(15.1kg)을 가하고, 반응 혼합물의 액량이 9L 정도가 될 때까지 감압 농축하는 조작을 2번 반복했다. 잔사, 및 반응 가마를 아세트산 아이소프로필(7.0kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 31을 포함하는 용액(16.5kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.978분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 20
화합물 32: ((3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰탄산)의 합성
[화학식 76]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 19에서 얻어진 화합물 31을 포함하는 용액(16.3kg), 아세트산 아이소프로필(5.7kg), 헥사메틸다이실라제인(1.69kg)을 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 트라이플루오로메테인설폰산 트라이메틸실릴(1.87kg)을 교반하면서 가했다. 외온을 20℃ 내지 30℃로 유지하면서, 반응 혼합물을 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마의 외온을 0℃로 설정하고, 반응 가마에 2-MeTHF(17.6kg), 5% 인산수소 이칼륨 수용액(41.1kg)을 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 혼합물을 10분 교반 후, 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 이어서, 유기층을 5% 인산이수소 나트륨 수용액(41.1kg)으로 세정했다. 얻어진 유기층에, 교반하면서 DIPEA(2.39kg)와 2-MeTHF(26.0kg)를 가한 후, 액량이 8L 정도가 될 때까지 외온 30∼33℃에서 감압 농축했다. 잔사, 및 반응 가마를 2-MeTHF(6.8kgx2)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 32를 포함하는 용액(14.7kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.220분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 20-1(실시예 20의 합성법에서 이용한 아세트산 아이소프로필 대신에, 2-MeTHF를 이용한 경우)
화합물 32: ((3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰탄산)의 합성
[화학식 77]
반응 용기에, 실시예 19에서 얻어진 화합물 31(93.45mg)을 포함하는 용액(401.94mg)을 가하고, 외온 60℃에서 감압 농축 건고했다. 2-MeTHF(402mg), 헥사메틸다이실라제인(38.6mg)을 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 용기의 외온을 0℃로 설정하고, 트라이플루오로메테인설폰산 트라이메틸실릴(43.4mg)을 교반하면서 가했다. 반응 용기의 외온을 25℃로 설정하고, 반응 혼합물을 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 용기의 외온을 0℃로 설정하고, 반응 용기에 2-MeTHF(402mg), 5% 인산수소 이칼륨 수용액(0.93mL)을 순차적으로 가했다. 반응 용기의 외온을 실온으로 설정하고, 반응 혼합물을 10분 교반 후, 교반을 정지하고, 반응 용기로부터 수층을 배출했다. 이어서, 유기층을 5% 인산이수소 나트륨 수용액(0.93mL)으로 세정했다. 얻어진 유기층에, 교반하면서 DIPEA(54.4mg)를 가했다. 얻어진 용액을 HPLC로 분석했다. 표품을 이용한 HPLC 분석의 결과, 얻어진 화합물 32는 81.01mg(92.0% 수율)이었다.
화합물 32의 LCMS(ESI): 유지 시간: 4.132분, m/z=921[M+H]+(LCMS 분석 조건: method 3)
실시예 21
화합물 33: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 78]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 10에서 얻어진 화합물 17을 포함하는 용액(11.9kg), 실시예 20에서 얻어진 화합물 32를 포함하는 용액(12.84kg), 및 2-MeTHF(3.1kg)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 10℃로 설정하고, 반응 혼합물에 DMF(6.4kg), DIPEA(1.6kg), 및 HATU(2.78kg)를 가했다. 외온을 20℃ 내지 30℃로 유지하면서, 3시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.6%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 외온 10℃에서 2.5% 암모니아 수용액(19.9kg)을 가한 후, 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 10분간 교반했다. 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출 후, 얻어진 유기층을 외온 20℃에서 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(19.9kg)을 가한 후, 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 10분간 교반했다. 교반을 정지하고, 반응 가마로부터 수층을 배출 후, 얻어진 유기층을 5% 탄산 나트륨 수용액(19.9kg)으로 세정했다. 얻어진 유기층을, 액량이 10L 정도가 될 때까지, 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 반응 혼합물에, 2-MeTHF(17.0kg)를 가하고, 액량이 10L 정도가 될 때까지 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축하는 조작을 2회 행했다. 잔사, 및 반응 가마를 2-MeTHF(6.8kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 33을 포함하는 용액(23.9kg)으로서 보관 용기에 회수했다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 10.272분(HPLC 분석 조건: method 4)
화합물 17과 화합물 32의 축합 반응(실시예 21의 반응 조건 검토)
화합물 17과 화합물 32의 축합 반응에 있어서의 용매를 검토했다. 축합 반응은 HPLC 분석에 의해 추적했다. 수율은 HPLC 분석에 의해 구한 에어리어%(Area%), 및 qNMR의 측정값으로부터 산출했다.
실시예 21-1(실시예 21의 합성법에서 이용한 2-MeTHF 및 DMF 대신에, 2-MeTHF 및 아세토나이트릴을 이용한 경우)
화합물 33: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
[화학식 79]
플라스크에, 실시예 10에서 얻어진 화합물 17을 포함하는 용액(1017.1mg), 실시예 20에서 얻어진 화합물 32를 포함하는 용액(1133.0mg), 및 2-MeTHF(313.7μL)를 실온에서 순차적으로 가했다. 외온을 10℃로 냉각하고, 반응 혼합물에 아세토나이트릴(575μL), DIPEA(266μL), 및 HATU(238.0mg)를 가한 후, 외온을 25℃로 승온했다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 교반한 후, 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.8%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 외온을 10℃로 설정하고, 2.5% 암모니아 수용액(1700μL)을 가한 후, 외온을 25℃로 설정하고 10분간 교반하고, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(1700μL), 5% 탄산 나트륨 수용액(1700μL)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여, 화합물 33을 포함하는 잔사(622.6mg)를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 10.35분, m/z=1669[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 4)
수율: 83%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 21-2(실시예 21의 합성법에서 이용한 2-MeTHF 및 DMF 대신에, 2-MeTHF를 이용한 경우)
화합물 33: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
플라스크에, 실시예 10에서 얻어진 화합물 17을 포함하는 용액(4062.5mg), 실시예 20에서 얻어진 화합물 32를 포함하는 용액(4534.0mg), 및 2-MeTHF(1254μL)를 실온에서 순차적으로 가하여, 화합물 17과 화합물 31을 포함하는 용액을 얻었다. 반응 용기에 화합물 17과 화합물 31을 포함하는 용액(969.5mg)을 가하고, 외온 40℃에서 감압 농축하여, 화합물 17 및 31을 포함하는 잔사를 얻었다. 반응 용기에 2-MeTHF(1140μL)를 실온에서 가하여, 잔사를 용해시켰다. 외온을 10℃로 냉각하고, 반응 혼합물에 DIPEA(106μL), 및 HATU(94.9mg)를 가한 후, 외온을 25℃로 승온했다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 교반한 후, 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.8%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 외온을 10℃로 설정하고, 2.5% 암모니아 수용액(680μL)을 가한 후, 외온을 25℃로 설정하고 10분간 교반하고, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(680μL), 5% 탄산 나트륨 수용액(680μL)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여, 화합물 33을 포함하는 잔사(262.3mg)를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 10.49분, m/z=1669[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 4)
수율: 85%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 21-3(실시예 21의 합성법에서 이용한 2-MeTHF 및 DMF 대신에, 아니솔을 이용한 경우)
화합물 33: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
플라스크에, 실시예 10에서 얻어진 화합물 17을 포함하는 용액(4062.5mg), 실시예 20에서 얻어진 화합물 32를 포함하는 용액(4534.0mg), 및 2-MeTHF(1254μL)를 실온에서 순차적으로 가하여, 화합물 17과 화합물 32를 포함하는 용액을 얻었다. 반응 용기에 화합물 17과 화합물 32를 포함하는 용액(969.8mg)을 가하고, 외온 40℃에서 감압 농축하여, 화합물 17 및 32를 포함하는 잔사를 얻었다. 반응 용기에 아니솔(1140μL)을 실온에서 가하여, 잔사를 용해시켰다. 외온을 10℃로 냉각하고, 반응 혼합물에 DIPEA(106μL), 및 HATU(97.7mg)를 가한 후, 외온을 25℃로 승온했다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 교반한 후, 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 외온을 10℃로 설정하고, 2.5% 암모니아 수용액(680μL)을 가한 후, 외온을 25℃로 설정하고 10분간 교반했다. 반응 용기에 아니솔(570μL)과 2.5% 암모니아 수용액(340μL)을 가하고, 10분간 교반하고, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(920μL), 5% 탄산 나트륨 수용액(920μL)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여, 화합물 33을 포함하는 잔사(207.3mg)를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 10.38분, m/z=1669[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 4)
수율: 68%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 21-4(실시예 21의 합성법에서 이용한 2-MeTHF 및 DMF 대신에, 탄산 다이메틸을 이용한 경우)
화합물 33: (tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트)의 합성
플라스크에, 실시예 10에서 얻어진 화합물 17을 포함하는 용액(4062.5mg), 실시예 20에서 얻어진 화합물 32를 포함하는 용액(4534.0mg), 및 2-MeTHF(1254μL)를 실온에서 순차적으로 가하여, 화합물 17과 화합물 32를 포함하는 용액을 얻었다. 반응 용기에 화합물 17과 화합물 32를 포함하는 용액(968.4mg)을 가하고, 외온 40℃에서 감압 농축하여, 화합물 17 및 32를 포함하는 잔사를 얻었다. 반응 용기에 탄산 다이메틸(1140μL)을 실온에서 가하여, 잔사를 용해시켰다. 외온을 10℃로 냉각하고, 반응 혼합물에 DIPEA(106μL), 및 HATU(95.2mg)를 가한 후, 외온을 25℃로 승온했다. 반응 혼합물을 25℃에서 3시간 교반한 후, 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 외온을 10℃로 설정하고, 2.5% 암모니아 수용액(680μL)을 가한 후, 외온을 25℃로 설정하고 10분간 교반했다. 반응 용기에 탄산 다이메틸(1140μL)과 2.5% 암모니아 수용액(680μL)을 가하고, 10분간 교반하고, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(1360μL), 5% 탄산 나트륨 수용액(1360μL)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여, 화합물 33을 포함하는 잔사(264.6mg)를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 10.35분, m/z=1669[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 4)
수율: 84%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 21-5 및 실시예 21-6
2-MeTHF/아세토나이트릴 대신에, 아세트산 에틸(실시예 21-5), 또는 아세트산 아이소프로필(실시예 21-6)을 이용한 점을 제외하고, 실시예 21-1과 마찬가지의 조건에서 화합물 33을 합성했다. 실시예 21-5에서는 76%의 수율로, 실시예 21-6에서는 75%의 수율로 화합물 33을 얻었다.
실시예 21-1∼21-6의 결과를 아래 표에 나타냈다.
이들 결과로부터, 실시예 21에 사용하고 있는 2-MeTHF와 DMF의 혼합 용매 대신에, 2-MeTHF와 아세토나이트릴의 혼합 용매나, 2-MeTHF, 아니솔, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 또는 아세트산 아이소프로필을 이용한 경우도, 화합물 33을 고수율로 제조 가능하다는 것이 발견되었다.
실시예 22
화합물 34: (2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S-1)-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세트산)의 합성
[화학식 80]
질소로 치환한 반응 가마에, 실시예 21에서 얻어진 화합물 33을 포함하는 용액(23.7kg), 2-MeTHF(32.0kg), 헥사메틸다이실라제인(3.46kg)을 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 0℃로 설정하고, 트라이플루오로메테인설폰산 트라이메틸실릴(3.99kg)을 교반하면서 가했다. 외온을 20℃ 내지 30℃로 유지하면서, 3시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.6% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마의 외온을 0℃로 설정하고, 반응 혼합물에 5% 인산수소 이칼륨 수용액(23.8kg)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 10분간 교반한 후에, 반응 가마로부터 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을, 시트르산 일수화물(0.57kg) 및 인산수소 이칼륨(0.88kg)을 포함하는 수용액(23.3kgx4)으로 세정 후, 5% 탄산 나트륨 수용액(23.8kg)으로 더 세정했다. 얻어진 유기층에 2-MeTHF(26.0kg)를 가하고, 액량이 10L 정도가 될 때까지, 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 THF(13.6kg)를 추가하고, 액량이 10L 정도가 될 때까지, 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 이어서, 2-MeTHF(8.5kg)를 추가하고, 액량이 10L 정도가 될 때까지, 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축했다. 얻어진 잔사에 THF(6.8kg)를 가한 용액, 및 반응 가마를 THF(6.6kg), 2-MeTHF(7.1kg)로 세정한 세정액을 합쳐서 화합물 34를 포함하는 용액(29.0kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 9.215분(HPLC 분석 조건: method 4)
실시예 23
화합물 35: (2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-아미노-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세트산)의 합성
[화학식 81]
실시예 23은, 실시예 22에서 얻어진 화합물 34를 포함하는 용액(14.5kg)을 이용하여, 하기 조작을 2회로 나누어 실시했다.
질소로 치환한 반응 가마에, 5% Pd/C(756.6g, 50% 함수품)를 가한 후에, THF(7.5kg)를 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정했다. 실시예 22에서 얻어진 화합물 34를 포함하는 용액(14.5kg), THF(0.7kg)를 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 교반하면서 반응 가마의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 2.5시간 후, 내압의 변동이 없는 것을 확인한 후, 반응 가마를 수소로 0.18MPaG까지 가압하고, 1시간 더 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.6%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 가압 여과했다. 반응 가마 내와 여과기를 2-MeTHF(4.9kgx2)로 세정 후, 여과액과 세정액을 합쳐서, 화합물 34를 포함하는 보관 용액(제 1 배치)을 얻었다.
질소로 치환한 반응 가마에, 5% Pd/C(756.6g, 50% 함수품)를 가한 후에, THF(7.5kg)를 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정했다. 실시예 22에서 얻어진 화합물 34를 포함하는 용액(14.5kg), THF(0.7kg)를 순차적으로 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 교반하면서 반응 가마의 내압이 0.18MPaG가 될 때까지 수소로 가압했다. 1시간 후, 내압의 변동이 없는 것을 확인한 후, 반응 가마를 수소로 0.18MPaG까지 가압하고, 1시간 더 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.6%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마 내를 질소로 치환 후, 반응 혼합물을 가압 여과했다. 반응 가마 내와 여과기를 2-MeTHF(4.9kgx3)로 세정 후, 여과액, 세정액, 및 상기에서 얻은 제 1 배치의 보관 용액을 합쳐서, 화합물 34를 포함하는 보관 용액(60.5kg)을 얻었다.
질소로 치환한 반응 가마에, 상기의 화합물 34를 포함하는 보관 용액(60.5kg), 2-MeTHF(0.4kg)를 실온에서 순차적으로 가했다. 액량이 7.3L가 될 때까지, 외온 40℃에서 교반하면서 감압 농축한 후, 외온을 25℃로 설정했다. 얻어진 잔사에, 아세토나이트릴(20.3kg), 2-MeTHF(6.3kg), 및 헵테인(35.4kg)을 가하고, 30분간 교반했다. 교반을 정지 후, 하층을 보관 용기에 회수했다. 얻어진 하층의 유기층에, 아세토나이트릴(52.7kg), 및 DIPEA(1.6kg)를 가하여, 화합물 35를 포함하는 용액(83.6kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 6.480분(HPLC 분석 조건: method 4)
실시예 23-1(실시예 23의 합성법에서 이용한 THF 대신에, 2-MeTHF를 이용한 경우)
화합물 35: (2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-아미노-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세트산)의 합성
[화학식 82]
반응 용기에 실시예 22에서 얻어진 화합물 34를 포함하는 용액(2447.7mg)을 가하고 감압 농축하여, 화합물 34를 포함하는 잔사를 얻었다. 반응 용기에, 2-MeTHF(2040μL), 5% Pd/C(96.8mg, 50% 함수품)를 가한 후에, 수소 가스에 의한 탈기 치환을 행하여 4시간 교반했다. 반응 용기에, 2-MeTHF(460μL), 5% Pd/C(47.3mg, 50% 함수품)를 가한 후에, 수소 가스에 의한 탈기 치환을 행하여 4시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.7%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 혼합물을 여과하고, 잔사를 2-MeTHF(690μL×2)로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여, 화합물 35를 포함하는 잔사(670.1mg)를 얻었다. 취득한 잔사를 아세토나이트릴로 희석하고, LCMS 분석에 부쳤다(LCMS 분석 조건: method 4: 화합물 35의 유지 시간; 유지 시간: 6.94분, m/z=1457[M+H]+). 얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다(수율: 95%).
실시예 24
화합물 1: ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)펜에틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제트[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드)의 합성
[화학식 83]
질소로 치환한 반응 가마에, 아세토나이트릴(21.4kg), HATU(3.86kg)를 가하고, 추가로 아세토나이트릴(55.0kg)을 가했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 실시예 23에서 얻어진 화합물 35를 포함하는 용액(82.8kg)을, 0.3∼0.4kg/분으로 반응 혼합물에 적하했다. 아세토나이트릴(6.1kg)로 세정을 실시하고, 린스액을 가하고, 30분간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제(샘플 조제법 1)하고, HPLC 분석에 의해 반응 전환율이 99.9%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 가마의 외온을 30℃로 설정하고, 교반하면서 액량이 27L 정도가 될 때까지 감압 농축했다. 반응 가마의 외온을 25℃로 설정하고, 얻어진 잔사에 아세트산 에틸(104.7kg)을 가했다. 외온 25℃에서 교반하면서 2.5% 암모니아 수용액(77.8kg)을 가하고, 85분간 교반했다. 반응 가마로부터 수층을 배출 후, 얻어진 유기층에 외온 20℃에서 교반하면서 5% 황산수소 칼륨 일수화물 수용액(89.8kg)을 가했다. 외온 25℃에서 12분 교반했다. 반응 가마로부터 수층을 배출 후, 외온 25℃에서 얻어진 유기층을 5% 인산수소 이나트륨 수용액(89.8kg), 5% 염화 나트륨 수용액(89.8kg), 및 0.5% 염화 나트륨 수용액(89.8kgx2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을, 교반하면서 액량이 19L 정도가 될 때까지, 반응 가마의 외온을 40℃로 설정하여 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 가압 여과하고, 반응 가마와 여과기를 아세트산 에틸(17.4kg)로 세정 후, 여과액과 세정액을 아세트산 에틸(17.4kg)로 세정하면서 화합물 1을 포함하는 용액(63.1kg)을 얻었다. 상기 화합물 1을 포함하는 보관 용액(63.1kg)에, 아세톤(15.3kg)을 가하고, 액량이 8∼12L 정도가 될 때까지 감압 농축하는 조작을 7회 반복했다. 얻어진 잔사를 가압 여과하고, 보관 용액으로서 회수했다. 반응 가마와 여과기를 아세톤(15.3kgx2)으로 세정 후, 가압 여과하고, 세정액을 합쳐서 화합물 1을 포함하는 용액(51.4kg)으로서 보관 용기에 회수했다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 18.008분(HPLC 분석 조건: method 5)
화합물 35의 환화 반응(실시예 24의 반응 조건 검토)
화합물 35를 출발 원료로서 이용하여, 화합물 1에 대한 환화 반응에 있어서의, 축합제, 및 용매를 검토했다. 환화 반응은 HPLC 분석에 의해 추적했다. 수율은 벤조산 메틸을 내부 표준 물질로서 이용하여, HPLC 분석에 의한 Area%비로부터 산출했다.
[화학식 84]
실시예 24-1
화합물 1: ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)펜에틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제트[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드)의 합성(축합제로서 HATU를 사용, 용매로서 아세토나이트릴을 사용)
반응 용기에 화합물 35(10.44mg(7.17μmol))와 내부 표준 물질(벤조산 메틸, 3.60mg(26.44μmol))을 칭량하고, 용매(아세토나이트릴, 2mL(200v/w))로 용해시켰다. 실온에서 교반하면서, DIPEA(5.74μL(32.9μmol))를 가했다. 반응 용기의 외온을 25℃로 설정하고, 축합제(HATU, 10.39mg(27.3μmol))를 가하고 30분 교반했다. 반응액(50μL)을 MeCN/프로필아민(9:1)의 혼합액(100μL)으로 희석하여, HPLC 분석용의 용액을 조제했다. 벤조산 메틸을 내부 표준 물질로서 이용한 HPLC 분석의 결과, 수율은 76%였다(HPLC 분석 조건: method 5).
화합물 1의 LCMS(ESI): 유지 시간: 18.08분, m/z=1439[M+H]+(LCMS 분석 조건 method 5)
화합물 35의 프로필아마이드체의 LCMS(ESI): 유지 시간: 13.39분, m/z=1498[M+H]+(LCMS 분석 조건 method 5)
환상 다이머(c-Dimer)의 LCMS(ESI): 유지 시간: 23.18분, m/z=2898[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 5)
환상 트라이머(c-Trimer)의 LCMS(ESI): 유지 시간: 25.74분, m/z=2157[M+2H]2+(LCMS 분석 조건 method 5)
여러 가지 축합제, 및 용매를 이용하여, 화합물 1의 합성을 행한 결과를 표 7에 나타냈다. 실험 조작은, 축합제로서 HATU를 사용, 용매로서 아세토나이트릴을 사용했을 때(실시예 24-1)에 준했다. 표 중의 SM은, 화합물 35와 화합물 35의 프로필아마이드체의 잔존량의 합산(HPLC의 Area%비)이다. 또한, 표 중의 TM은, 목적물(화합물 1)이고, c-Dimer 및 c-Trimer는, 각각 부생성물인 환상 다이머 및 환상 트라이머이며, 그들의 생성량을, HPLC 측정에 있어서의 Area%비로서 나타냈다(HPLC 분석 조건: method 5). 벤조산 메틸을 내부 표준 물질로서 이용한 HPLC 분석에 의해, 수율을 산출했다.
이들 결과로부터, 목적물에 대한 변환율이 높고, 부생성물의 생성율이 낮은 것, 및 환경 부하를 고려하여, 용매로서 아니솔, 탄산 다이메틸, 및 2-MeTHF가, 바람직한 용매인 것이 나타났다. 축합제는 HATU, PyBOP, 및 PyOxim이 바람직한 것이 나타났다. 용매와 축합제의 조합은, 아니솔과 PyBOP, 탄산 다이메틸과 PyBOP, 및 2-메틸테트라하이드로퓨란과 PyBOP의 조합이 바람직한 것이 나타났다.
실시예 24-15와 실시예 24-16의 반응 스케일을 올리고, 화합물 1의 합성(축합제로서 PyBOP를 사용, 용매로서 2-MeTHF 또는 탄산 다이메틸을 사용)의 실험과 마찬가지의 조작을 행했다.
실시예 24-39
화합물 1: ((3S,9S,12S,17S,20S,23S,27S,30S,36S)-30-사이클로펜틸-3-[2-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]에틸]-10-에틸-23-아이소뷰틸-N,N,7,17,18,24,28,31-옥타메틸-20-[(1S)-1-메틸프로필]-2,5,8,11,16,19,22,25,29,32,35-운데카옥소-9-(p-톨릴메틸)스파이로[1,4,7,10,15,18,21,24,28,31,34-운데카자트라이사이클로[34.3.0.0 12,15 ]노나트라이아콘테인-33,1'-사이클로펜테인]-27-카복사마이드)의 합성
[화학식 85]
실시예 23에서 얻어진 화합물 35(100.16mg(0.069mmol))를 포함하는 용액(2152.63mg)을 가하고, 외온 40℃에서 감압 농축 건고했다. 농축 잔사에 2-MeTHF(2150mg) 및 DIPEA(42.2mg)를 가하고, 화합물 35를 포함하는 용액을 얻었다. 질소로 치환한 반응 용기에 PyBOP(141.10mg), 2-MeTHF(2150mg)를 가했다. 반응 용기의 외온을 25℃로 설정하고, 화합물 35를 포함하는 용액을, 4시간에 걸쳐서 반응 혼합물에 적하했다. 2-MeTHF(172mg)로 세정을 실시하고, 린스액을 가하고, 2시간 교반했다. 외온 25℃에서 교반하면서 2.5% 암모니아 수용액(2mL)을 가하고, 90분간 교반했다. 반응 혼합물을 감압 여과했다. 반응 용기와 기리야마 깔때기를 2-MeTHF(172mg)로 세정했다. 수층을 배출 후, 얻어진 유기층에 외온 25℃에서 교반하면서 5% 황산수소 칼륨 일수화물 수용액(2mL)을 가했다. 외온 25℃에서 4분 교반했다. 수층을 배출 후, 외온 25℃에서 얻어진 유기층을 5% 인산수소 이나트륨 수용액(2mL), 5% 염화 나트륨 수용액(2mL), 및 0.5% 염화 나트륨 수용액(2mLx2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 HPLC로 분석했다. 표품을 이용한 HPLC 분석의 결과, 얻어진 화합물 1은 78.38mg(79.2% 수율)이었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 17.992분(HPLC 분석 조건: method 5)
상기의 축합제에 PyBOP를 이용한 화합물 1의 합성법에 있어서, 용매에 이용한 2-MeTHF 대신에, 용매로서 탄산 다이메틸을 이용한 경우의 결과를 아래 표에 나타냈다.
실시예 25
화합물 1의 결정화: ((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)펜에틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제트[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드)의 수화물 결정(C형 결정)의 합성
질소로 치환한 화합물 1을 포함하는 용액이 들어간 반응 가마에, 반응 가마의 외온을 40℃로 설정하고, 여과한 정제수(10.9kg)를 가했다. 아세톤(59.2g)/물(61.2g)의 혼합액에, 실시예 25-1과 마찬가지의 조작에 의해 얻어진, 화합물 1의 분쇄 결정(10.2g)을 가해서 얻은 현탁액을 반응 가마에 가했다. 현탁액이 들어간 용기를 아세톤(59.2g)/물(61.2g)의 혼합액으로 세정하면서 반응 가마에 가한 후, 2시간 1분간 교반했다. 여과한 정제수(2.7kg)를 가하고, 7시간 10분간 교반했다. 아세톤(59.2g)/물(61.2g)의 혼합액에, 실시예 25-1과 마찬가지의 조작에 의해, 얻어진 화합물 1의 분쇄 결정(10.2g)을 가해서 얻은 현탁액을 추가로 반응 가마에 가했다. 현탁액이 들어간 용기를 아세톤(59.2g)/물(61.2g)의 혼합액으로 세정하면서, 반응 가마에 가하고, 12시간 40분간 교반했다. 여과한 정제수(2.7kg)를 가하고, 2시간 교반했다. 반응 가마의 외온을 40℃에서 25℃로 1시간에 걸쳐서 강온 후, 반응 혼합물을 18시간 44분간 교반했다. 반응 혼합물을, 가압 여과하고, 반응 가마 내와 여과기를, 여과한 아세톤(7.5kg)과 정제수(7.5kg)의 혼합액으로 세정하면서 얻어진 결정을 세정했다. 얻어진 결정을, 여과한 정제수(17.0kgx2)로 세정하고, 결정을 회수한 여과 장치를 감압하고, 여과 장치의 외온을 70℃로 설정하여 결정을 17시간 건조했다. 외온을 실온∼30℃에서 결정을 27시간 더 건조했다. 건조말(末)을 여과기로부터 회수하여, 백색의 분말(2.6kg)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 18.199분(HPLC 분석 조건: method 5)
XRPD 장치를 이용한 분말 X선 해석(측정 방법 4)의 결과, 2θ값은, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)가 주요한 피크로서 관측되었다. 도 1에 분석 결과를 나타냈다.
실시예 25-1: 실시예 25에서 사용한 종 결정의 제조 실시예
어모퍼스 상태의 화합물 1(122.3mg)을 DMSO(0.612mL)에 용해시키고, 이 용해액(0.015mL)을 -20℃에서 2일간 동결 건조했다. 얻어진 동결 건조물에 물-아세토나이트릴 혼합액(3:1, 0.015mL)을 가하고, 실온에서 7일간 진탕 교반함으로써 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)을 얻었다.
화합물 1의 결정화의 검토
실시예 25-2
화합물 1((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)펜에틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제트[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드)의 비용매화물 결정(F형)의 합성
실시예 24와 마찬가지의 방법으로 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)을 7mm×7mm×0.25mm 알루미늄 샘플 용기에 조밀하게 채우고, 이하의 조건(분말 X선(XRPD) 회절 측정의 측정 방법 2, 및 열분석의 측정 방법 2)에서 XRD-DSC 동시 측정을 행하는 것에 의해, 측정 종료 후 샘플로서 화합물 1의 비용매화물 결정(F형)을 얻었다.
XRPD 장치를 이용한 분말 X선 해석(측정 방법 2)의 결과, 2θ값은, 5.370°, 6.934°, 8.940°, 9.838°, 10.771°, 12.181°, 13.525°, 15.179°, 16.202°, 및 17.554°(±0.2°)가 주요한 피크로서 관측되었다. 도 2에 분석 결과를 나타냈다.
실시예 25-3
화합물 1((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)펜에틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제트[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드)의 DMSO-수화물 결정(A형, 및 B형)의 합성
화합물 1의 수화물 결정(C형 결정, 104.3mg)에 DMSO(0.52mL)를 가하고, 실온에서 17시간 100rpm으로 진탕 교반함으로써 표제 화합물의 DMSO-수화물 결정(33.8mg)을 분말상 결정으로서 얻었다. 여과 직후의 분말상 결정을 DMSO-수화물 결정 A형, 여과 후, 실온에서 8시간 감압 건조한 분말상 결정을 DMSO-수화물 결정 B형으로 했다.
화합물 1의 DMSO-수화물 결정(DMSO-수화물 결정 A형, 및 DMSO-수화물 결정 B형)을, 각각 분말 X선 회절 측정(측정 방법 3)에 제공했다. 결과를 이하에 나타냈다.
DMSO-수화물 결정 A형의 2θ값은, 8.006°, 9.002°, 9.943°, 11.501°, 13.067°, 14.854°, 16.320°, 17.275°, 19.261°, 및 20.324°(±0.2°)가 주요한 피크로서 관측되었다. 도 3에 분석 결과를 나타냈다.
DMSO-수화물 결정 B형의 2θ값: 8.223°, 9.594°, 9.976°, 11.879°, 13.841°, 14.572°, 15.934°, 16.350°, 19.805°, 및 20.480°(±0.2°)가 주요한 피크로서 관측되었다. 도 4에 분석 결과를 나타냈다.
열중량·시차 열분석
실시예 25-3에서 얻어진 화합물 1의 DMSO-수화물 결정(DMSO-수화물 결정 B형)을, 열분석(측정 방법 3)에 제공했다. 결과를 도 5에 나타낸다.
1 H-NMR 측정
실시예 25-3에서 얻어진 화합물 1의 DMSO-수화물 결정(DMSO-수화물 결정 B형)을, 1H-NMR 측정에 제공했다. 결과를 도 6에 나타낸다.
열중량·시차 열분석에 있어서의 중량 변화, 및 1H-NMR 측정에 있어서의 화합물 1과 DMSO 피크의 적분값 면적비로부터, DMSO-수화물 결정 B형은, 화합물 1에 대해서 2.5당량의 DMSO를 포함하는 DMSO-수화물 결정인 것이 확인되었다.
실시예 25-4
화합물 1((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)펜에틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제트[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드)의 수화물 결정(C형 결정)의 합성
어모퍼스 상태의 화합물 1(293.2mg)을 에탄올(0.586mL)에 실온 용해시켰다. 이 용액에 물(0.147mL)과, 실시예 25-1과 마찬가지의 방법으로 얻은 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 종 결정을 가하고, 실온에서 30분간 교반했다. 추가로 물(0.147mL)을 가하고, 실온에서 2시간 교반했다. 추가로 물(0.147mL)을 가하고, 실온에서 30분간 교반한 후, 물(0.147mL)을 가하고, 실온에서 30분간 교반하고, 침전물을 여과 회수, 물로 세정, 감압 건조함으로써 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정, 256.0mg)을 분말상 결정으로서 얻었다.
실시예 26
화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 물리화학적 성질의 측정
실시예 25와 마찬가지의 용법으로 얻어진 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)을 이용하여, 분말 X선 회절 측정, 열중량·시차 열분석, 수분량의 측정, 및 단결정 X선 구조 해석을 행했다.
(1) 분말 X선 회절 측정
이하의 방법으로, 실시예 26에서 조제한 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 습도 변화 분말 X선 회절 측정을 실시했다.
측정 장치: SmartLab System, D/Tex Ultra detector, 수증기 발생 장치 HUM-SL(리가쿠사제)
대음극: Cu
관 전압: 45kV
관 전류: 200mA
주사 범위: 5∼30°
주사 속도: 0.7°/분
샘플링 폭: 0.02°
습도 변화 조건:
상대습도 75%에서 0%까지의 환경하에서, 2θ값의 시프트는 실시예 25에서 얻어진 수화물 결정(C형 결정)의 2θ값±0.2°의 범위에 들어가는 것이 확인되었다. 결과를 도 7에 나타낸다.
습도 75%에 있어서의 수화물 결정(C형 결정)의 2θ값: 7.904°, 8.277°, 8.833°, 9.937°, 10.416°, 11.711°, 12.683°, 13.533°, 13.885°, 15.887°, 16.627°, 17.799°(±0.2°)에 회절 피크를 갖고 있었다.
습도 30%에 있어서의 수화물 결정(C형 결정)의 2θ값: 7.892°, 8.286°, 8.839°, 9.921°, 10.424°, 11.703°, 12.710°, 13.556°, 13.903°, 15.891°, 16.664°, 17.846°(±0.2°)에 회절 피크를 갖고 있었다.
습도 0%에 있어서의 수화물 결정(C형 결정)의 2θ값: 7.883°, 8.306°, 8.845°, 9.923°, 10.446°, 11.702°, 12.767°, 13.546°, 13.896°, 15.875°, 16.694°, 17.935°(±0.2°)에 회절 피크를 갖고 있었다.
(2) 열중량·시차 열분석
실시예 26에서 조제한 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 열중량·시차 열분석을 열분석의 측정 방법 4에서 실시했다. 결과를 도 8에 나타낸다.
(3) 수분량의 측정
실시예 26에서 조제한 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 수분량을, 칼 피셔 적정법으로 측정했다. 측정은, 시료를 실험실 환경하에서 순화시킨 후에 CA-310(닛토세이코 애널리테크제)을 이용하여 행했다. 측정의 결과, 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 수분량은 6.50wt%였다.
(4) 단결정 X선 구조 해석
이하의 방법으로, 실시예 26에서 조제한 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 단결정 X선 구조 해석을 행했다.
측정 장치: Rigaku R-AXIS RAPID-II with a VariMax Cu diffractometer(리가쿠사제)
대음극: Cu
관 전압: 40kV
관 전류: 30mA
온도: -180℃
측정: 구조 해석에 충분한 회절 반점이 얻어진다고 생각되는 스트레티지, 노광 시간으로 측정을 행했다.
구조 해석: 초기 구조 결정은 직접법(SIR2004, CrystalStructure, Rigaku)으로 행하고, 구조 정밀화는 full-matrix least-squares법(SHELXL-2017/1, APEX3, Bruker)으로 행했다. 모든 비수소 원자는 이방성 온도 인자로 정밀화했다. 물 분자의 수소 원자는 리스트레인을 이용하여 적절한 위치에 두고, 결합되어 있는 산소 원자의 1.5배의 크기의 등방성 온도 인자로 정밀화했다. 그 밖의 수소 원자는 라이딩 모델을 이용하여 적절한 위치에 두고, 결합되어 있는 비수소 원자의 1.2배의 크기의 등방성 온도 인자로 했다.
결과를 도 9에 나타낸다.
분말 X선 회절 측정, 열중량·시차 열분석, 수분량의 측정, 및 단결정 X선 구조 해석의 결과로부터, 실시예 26에서 조제한 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)은, 결정 구조 중에 물 분자를 갖는, 틀림없이 수화물 결정인 것이 확인되었다.
이하의 방법으로, 실시예 26에서 조제한 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)의 동적 수증기 흡착 측정을 실시했다. 결과를 도 10에 나타낸다.
측정 장치: DVS Intrinsic(Surface Measurement Systems제)
온도: 25℃
상대습도(%) 측정점:
사이클 1: 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0(%); 사이클 2: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 0(%)
임곗값: 0.001dm/dt(%/분)
최소 수착 시간: 10분
최대 수착 시간: 1440분
측정의 결과, 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)은 상대습도 0∼95%의 범위에 있어서, 수화수(水) 변화에 수반하여, 상대습도 0% 시의 중량과 비교해서, 3.3%중량의 범위에서 수화수가 변화할 수 있는 수화물 결정인 것이 확인되었다.
실시예 26-1
화합물 1의 DMSO-수화물 결정(A형)의 단결정 X선의 측정
화합물 1((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)펜에틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제트[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드)의 DMSO-수화물 결정(A형)의 합성
화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)(54.9mg)을 DMSO(0.784mL)에 실온 용해시켰다. 이 용액을 실온에서 110분 진탕한 바, 화합물 1의 DMSO-수화물 결정(A형)을 DMSO 중에 얻었다.
단결정 X선 구조 해석
이하의 방법으로, 실시예 26-1에서 조제한 화합물 1의 DMSO-수화물 결정(A형 결정)의 단결정 X선 구조 해석을 행했다.
측정 장치: Rigaku XtaLAB Synergy Custom with a VariMax Cu diffractometer(리가쿠사제)
대음극: Cu
관 전압: 40kV
관 전류: 30mA
온도: -180℃
측정: 구조 해석에 충분한 회절 반점이 얻어진다고 생각되는 스트레티지, 노광 시간으로 측정을 행했다.
구조 해석: 초기 구조 결정은 직접법(SHELXT-2018/2, CrysAlisPro, Rigaku)으로 행하고, 구조 정밀화는 full-matrix least-squares법(SHELXL-2017/1, APEX3, Bruker)으로 행했다. 비수소 원자의 온도 인자는, 기본적으로는 이방성으로 했지만, 디스오더되어 있는 원자는 등방성으로 정밀화했다. 물 분자의 수소 원자는 리스트레인을 이용하여 적절한 위치에 두고, 결합되어 있는 산소 원자의 1.5배의 크기의 등방성 온도 인자로 정밀화했다. 그 밖의 수소 원자는 라이딩 모델을 이용하여 적절한 위치에 두고, 결합되어 있는 비수소 원자의 1.2배 또는 1.5배의 크기의 등방성 온도 인자로 했다. 결과를 도 11에 나타낸다.
실시예 26-2
화합물 1의 아세톤-수화물 결정(H형)의 물리화학적 성질의 측정
(1) 단결정 X선 구조 해석
화합물 1((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)펜에틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제트[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드)의 아세톤-수화물 결정(H형, 단결정 X선 구조 해석용)의 합성
9mL 바이알에 아세톤(0.8mL)과 물(0.2mL)을 첨가 후에 혼화하고, 그 중에 화합물 1의 비정질 고체(약 1mg)를 첨가한 0.3mL 바이알을 넣고, 9mL 바이알에 마개를 하고, 용매를 증기 확산시킴으로써 3시간 후에 결정을 얻었다.
이하의 방법으로, 상기에서 얻어진 화합물 1의 아세톤-수화물 결정(H형, 단결정 X선 구조 해석용)의 단결정 X선 구조 해석을 행했다.
측정 장치: Rigaku XtaLAB Synergy Custom with a VariMax Cu diffractometer(리가쿠사제)
대음극: Cu
관 전압: 40kV
관 전류: 30mA
온도: -180℃
측정: 구조 해석에 충분한 회절 반점이 얻어진다고 생각되는 스트레티지, 노광 시간으로 측정을 행했다.
구조 해석: 초기 구조 결정은 직접법(SHELXT-2018/2, CrysAlisPro, Rigaku)으로 행하고, 구조 정밀화는 full-matrix least-squares법(SHELXL-2018/3, Olex2, OlexSys)으로 행했다. 비수소 원자의 온도 인자는 이방성으로서 정밀화했다. 물 분자의 수소 원자는 적절한 위치에 두고, 결합되어 있는 산소 원자의 1.5배의 크기의 등방성 온도 인자로 정밀화했다. 그 밖의 수소 원자는 라이딩 모델을 이용하여 적절한 위치에 두고, 결합되어 있는 비수소 원자의 1.2배 또는 1.5배의 크기의 등방성 온도 인자로 했다. 결과를 도 12에 나타낸다.
(2) 분말 X선 회절 측정
화합물 1((5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)펜에틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제트[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드)의 아세톤-수화물 결정(H형, 분말 X선 회절 측정용과 용매 함유량의 측정용)의 합성
반응 용기에서, 화합물 1의 수화물 결정(C형 결정)(2.1g)과 아세톤(16mL)을 가했다. 외온을 40℃로 설정하고, 물(6.4mL)을 교반하면서 가했다. 유리 바이알에 유발 분쇄한 화합물 1의 수화물 결정(6mg)을 가하고, 아세톤수 혼액(80μL, 5/4v/v)으로 현탁시킨 후, 현탁액을 반응 용기에 가했다. 유리 바이알에 아세톤수 혼액(80μL, 5/4v/v)을 더 가하고, 현탁액을 반응 용기에 가했다. 정석액을 2시간 교반했다. 물(1.6mL)을 10분에 걸쳐서 가한 후, 현탁액을 3시간 교반했다. 물(1.6mL)을 10분에 걸쳐서 가한 후, 현탁액을 2시간 교반했다. 현탁액을 1시간에 걸쳐서 외온 25℃로 냉각했다. 현탁액을 종야 정치 보관했다. 익일, 외온 25℃에서 교반한 후, 현탁액을 일부 샘플링하고, 현탁액 그대로 분말 X선 회절 측정(측정 방법 4)을 실시했다. 현탁액을 기리야마 깔때기로 여과한 후에, 결정을 아세톤수 혼액(5.6mL, 4.4mL)으로 세정했다. 계속해서, 결정을 물(10mL)로 2회 세정했다. 얻어진 습성말(末)을 용매 함유량의 측정에 이용했다.
이하의 방법으로, 상기에서 얻어진 화합물 1의 아세톤-수화물 결정(H형, 분말 X선 회절 측정용)을, 분말 X선 회절 측정(측정 방법 4)에 제공했다. 결과를 이하에 나타냈다.
아세톤-수화물 결정(H형)의 2θ값은, 7.942°, 8.283°, 8.861°, 10.097°, 10.491°, 11.805°, 12.673°, 12.830°, 13.514°, 13.855°, 15.853°, 16.405°, 16.642°, 및 17.772°(±0.2°)가 주요한 피크로서 관측되었다. 도 13에 분석 결과를 나타냈다.
(3) 용매 함유량의 측정
GC에 의한 아세톤량의 분석 조건을 이하에 나타냈다.
장치: GC-2010(시마즈사제)
칼럼: DB-624(Agilent), 0.530mm ID×30m, 3.00μm
칼럼 온도: 50℃(5min)→10℃/min→90℃(0min)→50℃/min→240℃(5min)
주입구 온도: 230℃
검출기 온도: 250℃
스플릿 비: 20/1
유량: 30cm/sec
칼 피셔 적정법에 의한 수분량의 분석 조건을 이하에 나타냈다.
장치: CA-200(닛토세이코 애널리테크사제)
양극액: 아쿠아미크론 AKX
음극액: 아쿠아미크론 CXU
이들 측정에서는, 습성말의 아세톤량은 3.7%, 수분량이 17.5%였다.
조제예 1: 어모퍼스 상태의 화합물 1의 제조
하기의 구조를 갖는 화합물 1(「(5S,8S,11S,15S,18S,23aS,29S,35S,37aS)-8-((S)-sec-뷰틸)-18-사이클로펜틸-29-(3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)펜에틸)-36-에틸-11-아이소뷰틸-N,N,5,6,12,16,19,33-옥타메틸-35-(4-메틸벤질)-4,7,10,13,17,20,23,28,31,34,37-운데카옥소테트라트라이아콘타하이드로-2H,4H-스파이로[아제트[2,1-u]피롤로[2,1-i][1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31]운데카아자사이클로테트라트라이아콘틴-21,1'-사이클로펜테인]-15-카복사마이드」)는 하기의 스킴 1에 따라 합성했다.
화합물 1
[화학식 86]
스킴 1
[화학식 87]
화합물 aa033-b((2S)-2-[9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐(메틸)아미노]-4-옥소-4-프로프-2-엔옥시뷰탄산)의 합성
[화학식 88]
Fmoc-Asp(OAl)-OH((2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)-4-옥소-4-프로프-2-엔옥시뷰탄산, CAS 번호 146982-24-3)(200g, 506mmol), p-톨루엔설폰산(5.7g, 0.05당량), 파라폼알데하이드(45.6g, 3당량)를 톨루엔에 혼합하고, 110℃에서 16시간 교반했다. 반응액을 감압하 용매 증류 제거하고, 잔사를 아세트산 에틸에 용해시키고, 탄산수소 나트륨 수용액으로 2회 세정했다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조 후, 감압하 용매 증류 제거했다. 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산 에틸/석유 에터, 0/100∼30/70)로 정제하여, 화합물 aa033-a(9H-플루오렌-9-일메틸(4S)-5-옥소-4-(2-옥소-2-프로프-2-엔옥시에틸)-1,3-옥사졸리딘-3-카복실레이트)(175g, 85%)를 얻었다. 마찬가지로 합성한 다른 배치를 혼합하여, 다음의 반응에 이용했다.
LCMS(ESI)m/z=408(M+H)+
유지 시간: 1.407분(분석 조건 SMDmethod＿20)
화합물 aa033-a(100g, 245mmol), 브로민화 아연(ZnBr2)(110g, 496mmol), 트라이에틸실레인(TES)(56g, 481.6mmol)의 다이클로로메테인(DCM)(1L) 혼합 용액을, 질소 분위기하, 실온에서 48시간 교반했다. 동일한 스케일의 4배치의 반응액을 혼합하고, 감압하 용매 증류 제거했다. 잔사를 TBME에 용해시키고, 0.5M 인산 버퍼(pH=약 7.5)로 10회 추출했다. 수층을 혼합하여 5M 염산수로 pH를 2로 조정하고, 아세트산 아이소프로필(IPAC)로 2회 추출했다. 유기층을 혼합하여 무수 황산 나트륨으로 건조 후, 감압하 용매 증류 제거했다. IPAC를 제거하기 위해, 얻어진 잔사에 TBME를 첨가하고 감압하 용매 증류 제거하는 것을 6회 반복하여, 화합물 aa033-b((2S)-2-[9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐(메틸)아미노]-4-옥소-4-프로프-2-엔옥시뷰탄산)을 얻었다. (270g, 54%)
LCMS(ESI)m/z=410(M+H)+
유지 시간: 1.956분(분석 조건 SMDmethod＿05)
화합물 aa011-a의 합성
질소 분위기하, 빙랭하에서 WSCI·HCl(27.4g, 143mmol)의 DMF(217mL) 용액에 HOBt(17.72g, 131mmol)를 가하고, 추가로 화합물 aa033b(48.8g, 119mmol)를 DCM(90mL)과 DMF(90mL)의 혼합 용액으로서 가하고, 0℃에서 30분 교반했다. 거기에 다이메틸아민의 THF 용액(2mol/L, 65.6mL, 131mmol)을 적하로 가하고, 0℃에서 30분 교반했다. 반응액을 아세트산 에틸(488mL)로 희석하고, 유기층을 염산(1mol/L, 390mL)으로 2회 세정하고, 포화 탄산수소 나트륨 수용액과 물의 혼합 용액(1:1, 488mL))으로 2회 더 세정하고, 포화 식염수와 물의 혼합 용액(1:1, 488mL)으로 1회 더 세정 후, 얻어진 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 감압하 용매 증류 제거하여 화합물 aa011-a를 얻었다. (51.16g, 수율 98%).
LCMS(ESI)m/z=437.0(M+H)+
유지 시간: 1.262분(분석 조건 SMDFA05)
화합물 aa079, (2S)-2-사이클로펜틸-2-[9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐(메틸)아미노]아세트산(Fmoc-MeGly(cPent)-OH)의 합성
[화학식 89]
화합물 aa079-a((2S)-2-사이클로펜틸-2-[9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노]아세트산, Fmoc-Gly(cPent)-OH)(CAS 번호: 220497-61-0)(30.0g, 82mmol), 파라폼알데하이드(7.39g, 246mmol) 및 CSA(0.954g, 4.10mmol)의 톨루엔(160mL) 혼합액에, 트라이플루오로아세트산(TFA)(9.0mL)을 가한 후, 60℃에서 4시간 교반했다. 반응액을 실온까지 냉각 후, 고체를 여과에 의해 제거했다. 여과액을 감압하 농축하고, 아세트산 에틸(220mL)로 희석 후, 포화 탄산수소 나트륨 수용액 및 포화 식염수로 순서대로 세정했다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조, 여과 후에 감압 농축하여, 화합물 aa079-b를 조생성물로서 얻었다. 이 이상의 정제는 실시하지 않고서 다음의 반응을 행했다.
LCMS(ESI)m/z=378(M+H)+
유지 시간: 1.01분(분석 조건 SQDFA05)
상기에서 얻어진 화합물 aa079-b의 전량을 이용하여, 트라이에틸실레인(TES)(65.5mL, 410mmol)과 aa079-b의 다이클로로에테인(DCE)(90mL)의 혼합액에 트라이플루오로아세트산(TFA)(76mL, 984mmol)을 가하고 60℃에서 16시간 교반했다. 반응액을 실온까지 냉각 후에 감압 농축하고, 얻어진 고체를 n-헥세인/아세트산 에틸(95/5)로 세정하고, 감압 건조함으로써 화합물 aa079((2S)-2-사이클로펜틸-2-[9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐(메틸)아미노]아세트산, Fmoc-MeGly(cPent)-OH)를 얻었다(29.1g, 2공정 93%).
LCMS(ESI)m/z=380(M+H)+
유지 시간: 0.92분(분석 조건 SQDFA05)
화합물 1217-a의 합성
화합물 aa079(42.2g, 111mmol)와 Oxyma(19.99g, 141mmol)의 DMF(391mL) 용액에, WSCI·HCl(31.5g, 164mmol)을 실온에서 가하고, 30분 교반하여 용액 A를 얻었다.
질소 분위기하, 화합물 aa011-a(51.16g, 117mmol)의 DMF(391mL) 용액에 DBU(17.49mL, 117mmol)를 실온에서 적하로 가하고, 5분 교반했다. 거기에 피리딘염산염(14.9g, 129mmol)을 가하고, 10분 교반했다. 얻어진 반응액에 용액 A와 DIPEA(22.46mL, 129mmol)를 가하고, 질소 분위기하, 실온에서 7시간 교반했다. 반응액을 아세트산 에틸(422mL)로 희석하고, 염산(1mol/L, 422mL)으로 2회 세정한, 얻어진 수층을 아세트산 에틸(422mL)로 2회 추출했다. 모든 유기층을 혼합하고, 물(422mL), 포화 탄산수소 나트륨 수용액과 물의 혼합 용액(1:1, 422mL), 포화 식염수와 물의 혼합 용액(1:1, 422mL)으로 순서대로 세정 후, 얻어진 유기층을 황산 나트륨으로 건조하고, 감압하 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사에 DCM(422mL)을 가하고 0.5시간 교반했다. 거기에 황산 마그네슘(30g)을 가하고, 30분 교반한 후에, 여과로 고형물을 제거했다. 얻어진 용액을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(헥세인/아세트산 에틸)로 정제하여, 화합물 1217-a를 얻었다. (55.55g, 수율 87%)
LCMS(ESI)m/z=598.2(M+Na)+
유지 시간: 1.320분(분석 조건 SMDAM05)
화합물 1217-b의 합성
질소 분위기하, 실온에서 화합물 1217-a(55.55g, 96mmol)의 DCM(193mL) 용액에, 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0)(1.115g, 0.965mmol)을 가하고, 추가로 페닐실레인(8.31mL, 67.5mmol)을 적하로 가하고, 30분 교반했다. 반응액을 MTBE(556mL)로 희석하고, 포화 탄산수소 나트륨 수용액과 물의 혼합 용액(1:1, 556mL)으로 추출했다. 얻어진 유기층을 물(278mL)로 추출했다. 수층을 혼합하고, DCM(556mL)을 가했다. 거기에 인산(56.7g, 579mmol)을 적하로 가하여 pH를 2∼3으로 조정하고, 유기층을 분리 후, 수층을 DCM(556mL)로 추출했다. 얻어진 유기층을 혼합하고, 포화 식염수와 물의 혼합 용액(1:1, 556mL)으로 세정 후, 황산 나트륨으로 건조하고, 감압하 용매 증류 제거하여 화합물 1217-b를 얻었다. (48.87g, 수율 95%)
LCMS(ESI)m/z=536(M+H)+
유지 시간: 1.138분(분석 조건 SMDAM05)
화합물 1217-b-resin의 합성
필터 부착된 반응 용기에 2-클로로트라이틸클로라이드 레진(SUNRESIN사로부터 구입, 1.36mmol/g, 114g, 155mmol)을 세팅하고, DCM(1140mL)을 가하고, 25℃에서 45분 교반 후, 필터로부터 용매를 배출했다. 반응 용기에 화합물 1217-b(48.87g, 91mmol)와 메탄올(29.6mL, 730mmol)과 DIPEA(76mL, 438mmol)의 DCM(798mL) 용액을 가하고, 25℃에서 60분 교반하고, 필터로부터 용액을 배출했다. 계속해서, 반응 용기에 메탄올(111mL, 2737mmol)과 DIPEA(76mL, 438mmol)의 DCM(684mL) 용액을 가하고, 25℃에서 90분 교반하고, 필터로부터 용액을 배출했다. 반응 용기에 DCM(570mL)을 가하여 5분 교반하고, 필터로부터 용액을 배출했다. 이 레진의 세정 조작을 4회 더 반복하고, 얻어진 레진을 감압하 건조하여 화합물 1217-b-resin을 얻었다(140.5g). 레진에 결합되어 있는 화합물의 Fmoc기를 정량 하는 것에 의해, 담지량을 0.482mmol/g으로 산출했다.
화합물 1217-c-resin의 합성
상기에서 얻어진 레진(0.482mmol/g, 60g, 28.92mmol)을 플라스틱제 고상 반응 용기에 세팅했다. 실온에서, 이 고상 반응 용기에 DCM(600mL)을 가하고, 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(420mL)를 가하고, 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 420mL)을 첨가하고 Fmoc기의 탈보호를 행했다. 10분 진탕 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(420mL)를 가하고, 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 트라이에틸아민 염산염(7.96g, 57.8mmol)의 DCM(420mL) 용액을 가하고, 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DCM(420mL)을 가하고, 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(420mL)를 가하고, 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다.
Fmoc-cLeu-OH(37.98g, 108mmol)(CAS 번호: 117322-30-2)와 Oxyma(9.6g, 67.6mmol)의 DMF(180mL) 용액과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10%, 216mL)을 혼합하고, 2분 후, 상기에 의해 얻어진 고상 반응 용기에 가했다. 이 고상 반응 용기를 50℃에서 24시간 진탕 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(420mL)를 가하고, 실온에서 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 4회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 DCM(420mL)을 가하고, 실온에서 5분 진탕한 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 DCM에 의한 레진의 세정 공정을 5회 더 반복했다. 얻어진 레진을 감압하에서 건조하여, 화합물 1217-c-resin(62.5g)을 얻었다.
화합물 aa134의 합성
화합물 aa134, (2S)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)뷰탄산, Fmoc-Hph(4-CF3-35-F2)-OH의 합성
[화학식 90]
화합물 aa132-a, (1-O-벤질 5-O-(1,3-다이옥소아이소인돌-2-일) (2S)-2-[(2-메틸프로판-2-일)옥시카보닐아미노]펜테인다이오에이트)의 합성
[화학식 91]
(4S)-4-[(2-메틸프로판-2-일)옥시카보닐아미노]-5-옥소-5-페닐메톡시펜탄산(Boc-Glu-OBn, CAS 번호 30924-93-7)(200g, 592.82mmol), N-하이드록시프탈이미드(106g, 649.78mmol, 1.10당량), DMAP(3.6g, 29.47mmol, 0.05당량)의 THF(2L) 용액에, 질소 분위기하, 0℃에서 DIC(138mL, 1.54당량)를 적하로 가했다. 반응액을 25℃에서 16시간 교반하고, 고형물을 여과로 제거하고, 여과액을 감압하 용매 증류 제거했다. 잔사를 톨루엔으로 희석하고, 생긴 고체를 여과로 제거하고, 여과액을 감압하 용매 증류 제거했다. 잔사를 재결정(아세톤/헵테인)으로 정제하여, 화합물 aa132-a(1-O-벤질 5-O-(1,3-다이옥소아이소인돌-2-일) (2S)-2-[(2-메틸프로판-2-일)옥시카보닐아미노]펜테인다이오에이트)를 얻었다. (230g, 80%)
LCMS(ESI)m/z=505.2(M+Na)+
유지 시간: 0.992분(분석 조건 SMDmethod＿16)
브로민화 니켈 삼수화물(NiBr2·3H2O)(13.5g, 49.7mmol, 0.3당량) 및 4,4'-다이-tert-뷰틸-2,2'-바이피리딜(dtbbpy, CAS 번호 72914-19-3)(13.3g, 49.7mmol, 0.3당량)을 DMA(400mL)에 가하고, 질소 분위기하, 50℃에서 3시간 교반하여 Ni 용액을 조제했다.
화합물 aa132-a(1-O-벤질 5-O-(1,3-다이옥소아이소인돌-2-일) (2S)-2-[(2-메틸프로판-2-일)옥시카보닐아미노]펜테인다이오에이트)(80g, 166mmol), 아연 분말(54.2g, 829mmol, 5당량) 및 4-브로모-1,3-다이플루오로-2-(트라이플루오로메틸)벤젠(CAS 번호 156243-64-0, 86.6g, 332mmol, 2당량)의 DMA(400mL) 혼합액을 질소 분위기하, 실온에서 1시간 교반하고, 앞서 조정한 Ni 용액을 첨가하고, 실온에서 16시간 교반했다. 반응액에 EDTA·2Na 수용액(800mL, 10%)을 가하고, 고체를 여과로 제거했다. 여과액을 아세트산 에틸로 추출하고, 합친 유기층을 포화 식염수로 세정 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 감압하 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(아세트산 에틸/석유 에터)로 정제하여, 화합물 aa134-a를 얻었다. (57.2g, 69%).
LCMS(ESI)m/z=496(M+Na)+
유지 시간: 1.544분(분석 조건 SMDmethod＿15)
화합물 aa134-a(57.2g, 121mmol)의 톨루엔 혼합액(690mL)을 0℃로 냉각하고, 트라이플루오로메테인설폰산(TfOH)(54.4g, 362mmol, 3당량)을 적하로 가했다. 실온에서 1시간 교반 후, 물(58mL)을 가했다. 이 혼합액을 물로 추출하고, 합친 수층을 아세트산 에틸로 추출했다. 합친 유기층을 물로 세정하고, 무수 황산 나트륨으로 건조 후, 감압하 용매 증류 제거하여, 60g의 잔사를 얻었다. 잔사에 아세토나이트릴/물(400/400mL)을 가하고, 수산화 나트륨 수용액(48%)으로 pH를 7로 조정했다. 이 용액에 Fmoc-OSu(36.6g, 108.6mmol, 0.9당량)를 가하고, 수산화 나트륨 수용액(48%)으로 pH를 8.0으로 조정 후, 실온에서 16시간 교반했다. 아세토나이트릴/물(1/1)로 세정하면서 반응액을 여과하여 고체 성분을 제거하고, 여과액을 아세토나이트릴로 희석하고, 6mol/L 염산수로 산성으로 조정함으로써 석출된 고체를 여과로 모으는 것에 의해, 화합물 aa134((2S)-4-[3,5-다이플루오로-4-(트라이플루오로메틸)페닐]-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)뷰탄산, Fmoc-Hph(4-CF3-35-F2)-OH)를 얻었다. (52g, 83%)
LCMS(ESI)m/z=528.45(M+Na)+
유지 시간: 3.538분(분석 조건 SMDmethod＿14)
1H-NMR(300MHz, DMSO-d6)δ: 12.69(s, 1H), 7.90(d, J=7.5Hz, 2H), 7.78-7.54(m, 3H), 7.48-7.20(m, 6H), 4.33(d, J=6.3Hz, 2H), 4.24(t, J=6.9Hz, 1H), 3.97-3.84(m, 1H), 2.79-2.65(m, 2H), 2.15-2.00(m, 1H), 2.00-1.83(m, 1H)
화합물 aa113, (2S)-2-[에틸(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐)아미노]-3-(4-메틸페닐)프로판산(Fmoc-EtPhe(4-Me)-OH)의 합성
[화학식 92]
질소 분위기하, 화합물 aa113-a((2S)-2-(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐아미노)-3-(4-메틸페닐)프로판산, Fmoc-Phe(4-Me)-OH)(5.62g, 14.0mmol, CAS 번호 199006-54-7)를 다이클로로에테인(DCE)(17.5mL)에 현탁시키고, 파라알데하이드(5.61mL, 42.0mmol), 트라이플루오로아세트산(TFA)(9.65mL, 126mmol)을 가하고, 60도에서 6시간 교반했다. 얻어진 화합물 aa113-b를 포함하는 반응액을 그대로 다음의 공정에 이용했다.
LCMS(ESI)m/z=428(M+H)+
유지 시간: 1.03분(분석 조건 SQDFA05)
얻어진 화합물 aa113-b의 반응액에, 다이클로로에테인(DCE)(17.5mL), 트라이플루오로아세트산(TFA)(19.3mL, 252mmol), 트라이에틸실레인(TES)(20.1mL, 126mmol)을 가하고, 60도에서 17시간 교반했다. 실온으로 냉각하고, 감압 농축한 후, 얻어진 잔사를 아세트산 에틸(40mL)에 용해시켰다. 유기층을 포화 탄산수소 나트륨 수용액(40mL), 포화 식염수(40mL)로 세정하고, 무수 황산 나트륨으로 건조 후, 감압하 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 아세토나이트릴(30mL)에 용해시키고, 헥세인(15mL)으로 2회 세정하고, 감압하 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 역상 칼럼 크로마토그래피(0.1% 폼산 함유 아세토나이트릴/0.1% 폼산 함유 증류수)로 정제하여, 화합물 aa113((2S)-2-[에틸(9H-플루오렌-9-일메톡시카보닐)아미노]-3-(4-메틸페닐)프로판산, Fmoc-EtPhe(4-Me)-OH)을 얻었다. (4.4g, 2공정 73%)
LCMS(ESI)m/z=430(M+H)+
유지 시간: 0.95분(분석 조건 SQDFA05)
이후의 Fmoc-Pro-OH(CAS 번호: 71989-31-6), Fmoc-Hph(4-CF3-35-F2)-OH(화합물 aa134), Fmoc-MeGly-OH(CAS 번호: 77128-70-2), Fmoc-EtPhe(4-Me)-OH(화합물 aa113), Fmoc-Aze(2)-OH(CAS 번호: 136552-06-2), Fmoc-MeAla-OH(CAS 번호: 84000-07-7) 및 Fmoc-Ile-OH(CAS 번호: 71989-23-6)의 신장은 Intavis사제 펩타이드 합성기(MultipepRSi)를 이용하여, Fmoc 고상 합성법에 의해 합성했다. 조작의 상세한 수순에 대해서는 합성기에 부속된 매뉴얼에 따랐다.
상기에 의해 얻어진 화합물 1217-c-resin(고상 반응 용기 1개에 대해서 200mg)을 30개의 고상 반응 용기에 가하고, 펩타이드 합성기에 세팅했다. 이 30개 고상 반응 용기 모두에 다이클로로메테인(DCM)을 가하고 1시간 정치함으로써 레진의 팽윤을 행했다. 그 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다.
Fmoc-Pro-OH의 신장
30개 고상 반응 용기 모두에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 30℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30개 고상 반응 용기 모두에 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-Pro-OH(CAS 번호 71989-31-6)(0.6mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1개에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial에서 혼합한 후에 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 첨가하고, 40℃에서 4시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.
Fmoc-Hph(4-CF3-35-F2)-OH(화합물 aa134)의 신장
상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30개 고상 반응 용기 모두에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30개 고상 반응 용기 모두에 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-Hph(4-CF3-35-F2)-OH(화합물 aa134)(0.45mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1개에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial에서 혼합한 후에 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 첨가하고, 40℃에서 2.5시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.
Fmoc-MeGly-OH의 신장
상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30개 고상 반응 용기 모두에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30개 고상 반응 용기 모두에 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-MeGly-OH(0.6mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1개에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial에서 혼합한 후에 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 첨가하고, 40℃에서 2.5시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.
Fmoc-EtPhe(4-Me)-OH(화합물 aa113)의 신장
상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30개 고상 반응 용기 모두에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30개 고상 반응 용기 모두에 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, 전술한 대로 제조한 Fmoc-EtPhe(4-Me)-OH(0.6mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1개에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial에서 혼합한 후에 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 첨가하고, 40℃에서 2.5시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.
Fmoc-Aze(2)-OH의 신장
상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30개 고상 반응 용기 모두에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30개 고상 반응 용기 모두에 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-Aze(2)-OH(0.6mol/L)와 HOOBt(0.375mol/L)의 NMP와 DMSO의 혼합 용액(7:3)(고상 반응 용기 1개에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial에서 혼합한 후에 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 첨가하고, 60℃에서 5시간 정치했다. 그 후, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 0.72mL)을 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 첨가하고, 60℃에서 5시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.
Fmoc-MeAla-OH의 신장
상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30개 고상 반응 용기 모두에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30개 고상 반응 용기 모두에 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-MeAla-OH(0.6mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1개에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial에서 혼합한 후에 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 첨가하고, 40℃에서 2.5시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다.
Fmoc-Ile-OH의 신장
상기에서 얻어진 레진을 포함하는 30개 고상 반응 용기 모두에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)을 첨가하고, 35℃로 가온하고 10분 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 30개 고상 반응 용기 모두에 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 계속해서, Fmoc-Ile-OH(0.6mol/L)와 HOAt(0.375mol/L)의 NMP 용액(고상 반응 용기 1개에 대해서 0.6mL)과, N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)의 DMF 용액(10v/v％, 고상 반응 용기 1개에 대해서 0.72mL)을 합성기의 mixing vial에서 혼합한 후에 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 첨가하고, 40℃에서 10시간 정치했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 DMF(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.4mL)를 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 2회 더 반복했다. 계속해서, 30개 고상 반응 용기 모두에 대해서 DCM(고상 반응 용기 1개에 대해서 1.6mL)을 가하고, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 레진의 세정 공정을 5회 더 반복했다. 30개 고상 반응 용기 모두로부터 레진을 회수하고, 혼합해서 계속되는 조작을 행했다.
Fmoc-MeLeu-OH(CAS 번호: 103478-62-2)의 신장
상기에서 얻어진 레진을 200mL의 플라스틱제 고상 반응 용기에 가하고, 여기에 DCM(60mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 톨루엔(50mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 톨루엔에 의한 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 톨루엔 용액(2v/v％, 45mL)을 첨가하고, 30℃에서 5분 진탕 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다.
이 고상 반응 용기에 톨루엔(50mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 톨루엔에 의한 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 DCM(50mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DCM에 의한 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에, Fmoc-MeLeu-OH(4.25g, 11.57mmol), [에틸사이아노(하이드록시이미노)아세테이토-O2]트라이-1-피롤리딘일포스포늄 헥사플루오로인산(PyOxim)(6.10g, 11.57mmol), DIPEA(3.03mL, 17.35mmol)의 DCM(45mL) 용액을 가하고, 30℃에서 3시간 진탕했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(50mL)를 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 4회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 DCM(50mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DCM에 의한 레진의 세정 공정을 3회 더 반복했다. 그 후, 얻어진 레진은 감압하 건조했다.
상기의 고상 반응 용기에 DCM(60mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(50mL)를 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 1회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 다이아자바이사이클로운데센(DBU)의 DMF 용액(2v/v％, 45mL)을 첨가하고, 30℃에서 15분 진탕 후에 용액을 프릿으로부터 배출했다. 이 고상 반응 용기에 DMF(50mL)를 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DMF에 의한 레진의 세정 공정을 4회 더 반복했다. 이 고상 반응 용기에 DCM(50mL)을 가하고, 30℃에서 5분 진탕한 후, 용매를 프릿으로부터 배출했다. 이 DCM에 의한 레진의 세정 공정을 4회 더 반복하여, 화합물 1217-d가 담지된 레진을 얻었다.
화합물 1217-d의 합성(펩타이드의 레진으로부터의 절출)
상기에 의해 얻어진 레진을 포함하는 고상 반응 용기에, 2,2,2-트라이플루오로에탄올(TFE)(60mL)과 DCM(60mL)과 DIPEA(0.909mL)의 혼합 용액을 가하고, 실온에서 2시간 진탕했다. 그 후, 용액을 프릿으로부터 회수했다. 이 고상 반응 용기에 2,2,2-트라이플루오로에탄올(TFE)(30mL)과 DCM(30mL)의 혼합 용액을 가하고, 실온에서 5분간 진탕 후, 용액을 프릿으로부터 회수했다. 추가로 이 고상 반응 용기에, 2,2,2-트라이플루오로에탄올(TFE)(30mL)과 DCM(30mL)의 혼합 용액을 가하고, 실온에서 5분간 진탕 후, 용액을 프릿으로부터 회수했다. 회수한 모든 용액을 혼합하고, 감압하에서 용매 증류 제거하여 화합물 1217-d를 조생성물로서 얻었다. (3.85g)
LCMS(ESI)m/z=1453.9(M-H)-
유지 시간: 0.67분(분석 조건 SQDAA50)
화합물 1의 합성(펩타이드의 환화와 정제)
상기에 의해 얻어진 화합물 1217-d(3.85g)를 아세트산 아이소프로필(529mL)과 DIPEA(0.915mL, 5.24mmol)의 혼합액에 용해시키고, HCTU(O-(1H-6-클로로벤조트라이아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로늄 헥사플루오로인산, CAS 번호 330645-87-9)(1.805g, 4.36mmol)를 가하고, 실온에서 21시간 교반했다. 그 후, 용액량이 약 절반이 될 때까지 감압하 용매 증류 제거했다. 얻어진 용액에, 포화 염화 암모늄 수용액(40mL)과 물(40mL)의 혼합 용액을 가하고, 아세트산 아이소프로필(350mL)로 추출했다. 얻어진 유기층을 포화 탄산수소 나트륨 수용액(40mL)과 물(40mL)의 혼합 용액, 포화 식염수(40mL)와 물(40mL)의 혼합 용액으로 순서대로 세정 후, 황산 나트륨으로 건조하고, 감압하 용매 증류 제거하여 3.36g의 잔사를 얻었다. 얻어진 잔사를 역상 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피(Daisogel SP-120-40/60-ODS-RPS, 용출액으로서 아세토나이트릴(0.1%의 폼산을 포함한다)/물(0.1%의 폼산을 포함한다)을 사용)로 정제하고, 목적물을 포함하는 용출액을 동결 건조함으로써 어모퍼스 상태의 화합물 1(1.36g, 수율 34%)을 얻었다. 얻어진 화합물 1의 매스 스펙트럼의 값과 액체 크로마토그래피의 유지 시간은 하기하는 대로였다.
LCMS(ESI)m/z=1437.7(M+H)+
유지 시간: 7.496분(분석 조건 SSC-A-AF-01)
조제예 1에 있어서의 LC/MS의 분석 조건을 표 11에 나타낸다.
실시예 27 Step H'1
화합물 a03: tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[벤질옥시카보닐(메틸)아미노]-3-사이클로헥실-프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 93]
반응 용기에 화합물 a01(2.00g) 및 화합물 a02(1.37g)를 가하고, 이어서 2-MeTHF(19.0mL)를 가하여 교반했다. 추가로 DIPEA(5.5mL)를 가한 후, 반응 혼합물의 내온을 32℃ 이하로 유지하면서 T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 11.7mL)를 적하하고, 그 후 실온에서 1시간 교반했다. 5% 탄산 나트륨 수용액(12mL)을 반응 혼합물의 내온을 36℃ 이하로 유지하도록 적하하고 교반한 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 5% 탄산 나트륨 수용액(12mLx1), 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(12mLx1), 10% 염화 나트륨 수용액(50mLx2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여 화합물 a03을 포함하는 잔사(2.72g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.499분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 28 Step H'2-1
화합물 a04: tert-뷰틸 2-[[(2S)-3-사이클로헥실-2-(메틸아미노)프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 94]
Step H'1에서 얻어진 화합물 a03을 포함하는 잔사(2.70g)에 2-MeTHF(18mL)를 가한 후, 5% Pd/C(1.27g, 50% 함수품)를 가했다. 수소 가스에 의한 탈기 치환을 3회 실시하고, 그 후 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 여과지를 이용하여 흡인 여과하고, 잔사를 2-MeTHF 용액(18mLx3)으로 세정했다. 얻어진 여과액 및 세정액을 합쳐서 감압 농축하여 화합물 a04를 포함하는 잔사(1.77g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.419분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 29 Step H'2-2
화합물 a06: tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[2-[벤질옥시카보닐(메틸)아미노]아세틸]-메틸-아미노]-3-사이클로헥실-프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 95]
Step H'2-1에서 얻어진 화합물 a04를 포함하는 잔사(1.71g)와, 화합물 a05(1.29g)를 2-MeTHF(11.6mL)에 용해시켜 교반했다. 추가로 DIPEA(3.4mL)를 가한 후, 반응 혼합물의 내온을 27℃ 이하로 유지하면서 T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 7.2mL)를 적하하고, 그 후 실온에서 2시간 교반했다. 5% 탄산 나트륨 수용액(7.2mL)을 반응 혼합물의 내온을 29℃ 이하로 유지하도록 적하하고 교반한 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 5% 탄산 나트륨 수용액(7.2mLx1), 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(7.2mLx1), 10% 염화 나트륨 수용액(7.2mLx2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여 화합물 a06을 포함하는 잔사(2.70g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.458분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 30 Step H'3-1
화합물 a07: tert-뷰틸 2-[[(2S)-3-사이클로헥실-2-[메틸-[2-(메틸아미노)아세틸]아미노]프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 96]
Step H'2-2에서 얻어진 화합물 a06을 포함하는 잔사(2.70g)에 2-MeTHF(10mL)를 가한 후, 5% Pd/C(0.71g, 50% 함수품)를 가했다. 수소 가스에 의한 탈기 치환을 3회 실시하고, 그 후 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 여과지를 이용하여 흡인 여과하고, 잔사를 2-MeTHF 용액(10mLx3)으로 세정했다. 얻어진 여과액 및 세정액을 합쳐서 감압 농축하여 화합물 a07을 포함하는 잔사(1.82g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.848분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 31 Step H'3-2
화합물 a09: tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[벤질옥시카보닐(메틸)아미노]아세틸]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]-3-사이클로헥실-프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 97]
Step H'3-1에서 얻어진 화합물 a07을 포함하는 잔사(1.80g)와, 화합물 a08(1.57g)을 2-MeTHF(14.2mL)에 용해시켜 교반했다. 추가로 DIPEA(4.1mL)를 가한 후, 반응 혼합물의 내온을 30℃ 이하로 유지하면서 T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 8.8mL)를 적하하고, 그 후 실온에서 2시간 교반했다. 5% 탄산 나트륨 수용액(10.8mL)을 반응 혼합물의 내온을 33℃ 이하로 유지하도록 적하하고 교반한 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 5% 탄산 나트륨 수용액(10.8mLx1), 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(10.8mLx1), 5% 탄산 나트륨 수용액(10.8mLx1)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여 화합물 a09를 포함하는 잔사(2.61g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.055분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 32 Step H'4-1
화합물 a10: tert-뷰틸 2-[[(2S)-3-사이클로헥실-2-[메틸-[2-[메틸-[2-(메틸아미노)아세틸]아미노]아세틸]아미노]프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 98]
Step H'3-2에서 얻어진 화합물 a09를 포함하는 잔사(2.40g)에 2-MeTHF(12.3mL)를 가한 후, 5% Pd/C(0.44g, 50% 함수품)를 가했다. 수소 가스에 의한 탈기 치환을 3회 실시하고, 그 후 1시간 교반했다.
반응 혼합물을 여과지를 이용하여 흡인 여과하고, 잔사를 2-MeTHF 용액(12mLx3)으로 세정했다. 얻어진 여과액 및 세정액을 합쳐서 감압 농축하여 화합물 a10을 포함하는 잔사(1.97g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.521분(분석 조건: method 3)
실시예 33 Step H'4-2
화합물 a12: tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]-3-사이클로헥실-프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 99]
Step H'4-1에서 얻어진 화합물 a10을 포함하는 잔사(1.92g)와, 화합물 a11(1.69g)을 2-MeTHF(12.8mL)에 용해시켜 교반했다. 추가로 DIPEA(3.7mL)를 가한 후, 반응 혼합물의 내온을 29℃ 이하로 유지하면서 T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 7.8mL)를 적하하고, 그 후 실온에서 2시간 교반했다. 5% 탄산 나트륨 수용액(14.4mL)을 반응 혼합물의 내온을 33℃ 이하로 유지하도록 적하하고 교반한 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 5% 탄산 나트륨 수용액(14.4mLx1), 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(14.4mLx1), 5% 탄산 나트륨 수용액(14.4mLx1)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(14.4mLx1), 5% 탄산 나트륨 수용액(14.4mLx1)으로의 세정을 2회 더 반복했다. 2-MeTHF(14.4mL)를 가하고, 이것을 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(14.4mLx1), 5% 탄산 나트륨 수용액(14.4mLx1)으로 세정했다. 추가로 1% 탄산 나트륨 수용액(14.4mLx3), 5% 탄산 나트륨 수용액(14.4mLx5), 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(14.4mLx1), 5% 탄산 나트륨 수용액(14.4mLx1), 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(14.4mLx1), 5% 탄산 나트륨 수용액(14.4mLx1, 7.2mLx10)으로 세정했다. 추가로 2.5% 암모니아수(7.2mLx3), 10% 염화 나트륨 수용액(1mLx1)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여 화합물 a12를 포함하는 잔사(2.39g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.006분(HPLC 분석 조건: method 1)
실시예 34 Step H'5-1
화합물 a13: tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-아미노-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]-3-사이클로헥실-프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 100]
Step H'4-2에서 얻어진 화합물 a12를 포함하는 잔사(2.15g)에 2-MeTHF(9.3mL)를 가한 후, 5% Pd/C(0.66g, 50% 함수품)를 가했다. 수소 가스에 의한 탈기 치환을 3회 실시하고, 그 후 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 여과지를 이용하여 흡인 여과하고, 잔사를 2-MeTHF 용액(10mLx3)으로 세정했다. 얻어진 여과액 및 세정액을 합쳐서 감압 농축하여 화합물 a13을 포함하는 잔사(1.95g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.776분(HPLC 분석 조건: method 1)
실시예 35 Step H'5-2
화합물 a15: tert-뷰틸 2-[[(2S)-3-사이클로헥실-2-[메틸-[2-[메틸-[2-[메틸-[(2S,3S)-3-메틸-2-[[(2S)-4-메틸-2-[메틸(2-트라이메틸실릴에톡시카보닐)아미노]펜타노일]아미노]펜타노일]아미노]아세틸]아미노]아세틸]아미노]프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 101]
Step H'5-1에서 얻어진 화합물 a13을 포함하는 잔사(1.94g)와, 화합물 a14(1.49g)를 2-MeTHF(10.3mL)에 용해시켜 교반했다. 반응 용기를 빙욕에서 냉각하고, DIPEA(3.0mL)를 가한 후, 반응 혼합물의 내온을 9℃ 이하로 유지하면서 T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 6.3mL)를 적하하고, 그 후 빙욕에서 빼서 실온에서 1시간 교반했다. 5% 탄산 나트륨 수용액(12mL)을 반응 혼합물의 내온을 22℃ 이하로 유지하도록 적하하고 교반한 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 5% 탄산 나트륨 수용액(12mLx1), 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(12mLx1), 5% 탄산 나트륨 수용액(12mLx1)으로 세정하고, 얻어진 유기층을 감압 농축했다. 2-MeTHF(20mL)에 재차 용해시키고, 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(12mLx2), 5% 탄산 나트륨 수용액(12mLx2)으로 세정했다. 유기층에 N-메틸이미다졸(0.3mL) 및 5% 탄산 나트륨 수용액(12mL)을 가하고 6.5시간 교반한 후, 수층을 배출했다. 5% 탄산 나트륨 수용액(12mLx1), 5% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(12mLx2), 5% 탄산 나트륨 수용액(12mLx2)으로 세정하고, 감압 농축했다. 2-MeTHF(20mL)에 재차 용해시키고, 추가로 헵테인:MTBE 혼합액(1.5:1)(20mL)을 가하고, 5% 탄산 나트륨 수용액(20mLx2)으로 세정하고, 감압 농축함으로써 화합물 a15를 포함하는 잔사(2.38g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.919분(HPLC 분석 조건: method 1)
실시예 36 Step H'6
화합물 a16: tert-뷰틸 2-[[(2S)-3-사이클로헥실-2-[메틸-[2-[메틸-[2-[메틸-[(2S,3S)-3-메틸-2-[[(2S)-4-메틸-2-(메틸아미노)펜타노일]아미노]펜타노일]아미노]아세틸]아미노]아세틸]아미노]프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 102]
Step H'5-2에서 얻어진 화합물 a15를 포함하는 잔사(2.35g)에 2-MeTHF(14mL)를 가한 후, 반응 용기의 외온을 50℃로 설정하고, 테트라뷰틸암모늄 클로라이드(1M THF 용액, 7.0mL)를 가했다. 그대로 반응액을 2시간 교반했다. 실온까지 냉각 후 아세트산 아이소프로필(7mL)을 가하고, 5% 탄산 칼륨 수용액(7mLx6)으로 세정 후, 감압 농축하여, 화합물 a16을 포함하는 잔사(1.92g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.909분(HPLC 분석 조건: method 1)
실시예 37 Step S'0
화합물 a19: tert-뷰틸 (3S)-3-[벤질옥시카보닐(메틸)아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노에이트의 합성
[화학식 103]
반응 용기에 화합물 a17(2.01g), 2-MeTHF(11.7mL)를 가하고 교반했다. DIPEA(1.8mL), 화합물 a18(0.53mL)을 가한 후, 실온에서 T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 3.61mL)를 첨가하고, 그 후 1시간 교반했다. 10% 시트르산 수용액(12mL)을 교반하면서 가한 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 10% 시트르산 수용액(12mL×1), 5% 탄산 나트륨 수용액(12mL×2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여 화합물 a19를 포함하는 잔사(1.56g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 3.934분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 38 Step S'1-1
화합물 a20: tert-뷰틸 (3S)-3-(메틸아미노)-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노에이트의 합성
[화학식 104]
Step S'0에서 얻어진 화합물 a19를 포함하는 잔사(3.08g)에 2-MeTHF(21.3mL)를 가한 후, 5% Pd/C(4.09g, 50% 함수품)를 첨가했다. 수소 가스에 의한 탈기 치환을 3회 실시하고, 그 후 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 여과지를 이용하여 흡인 여과하고, 잔사를 2-MeTHF 용액(21.3mL×3)으로 세정했다. 얻어진 여과액 및 세정액을 합쳐서 감압 농축하여 화합물 a20을 포함하는 잔사(2.09g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.058분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 39 Step S'1-2
화합물 a22: tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-[벤질옥시카보닐(메틸)아미노]-3-메틸-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노에이트의 합성
[화학식 105]
Step S'1-1에서 얻어진 화합물 a20을 포함하는 잔사(2.04g)와 화합물 a21(2.14g)을 2-MeTHF(6.3mL)에 용해시켜 교반했다. 추가로 DIPEA(5.3mL)를 가한 후, 실온에서 2-MeTHF(5.9mL)와 MeCN(4.1mL)에 용해시킨 HATU(3.95g)를 첨가하고, 그 후 50℃에서 5시간 교반했다. CPME(5.3mL)를 실온에서 가한 후, 5% 탄산 칼륨 수용액(4.1mL)과 NMI(0.55mL)를 가하고, 1시간 30분 교반했다. 2.5% 암모늄 수용액(16.3mL)을 교반하면서 가한 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 2.5% 암모늄 수용액(16.3mL×1), 10% 황산수소 나트륨 일수소화물 수용액(20.4mL×4), 5% 탄산 칼륨 수용액(20.4mL×1), 10% 황산수소 나트륨 일수소화물 수용액(20.4mL×3), 5% 탄산 칼륨 수용액(20.4mL×1)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여 화합물 a22를 포함하는 잔사(3.66g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.428분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 40 Step S'2-1
화합물 a23: tert-뷰틸 (3S)-3-[메틸-[(2S)-3-메틸-2-(메틸아미노)뷰타노일]아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노에이트의 합성
[화학식 106]
Step S'1-2에서 얻어진 화합물 a22를 포함하는 잔사(3.56g)에 2-MeTHF(18.3mL)를 가한 후, 5% Pd/C(2.10g, 50% 함수품)를 첨가했다. 수소 가스에 의한 탈기 치환을 3회 실시하고, 그 후 2시간 30분 교반했다. 반응 혼합물을 여과지를 이용하여 흡인 여과하고, 잔사를 2-MeTHF(18.3mL×3)로 세정했다. 얻어진 여과액 및 세정액을 합쳐서 감압 농축하여 화합물 a23을 포함하는 잔사(2.58g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.393분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 41 Step S'2-2
화합물 a25: tert-뷰틸 (3S)-3-[메틸-[(2S)-3-메틸-2-[메틸-[1-[(2,2,2-트라이플루오로아세틸)아미노]사이클로펜테인카보닐]아미노]뷰타노일]아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노에이트의 합성
[화학식 107]
화합물 a24(2.90g)를 2-MeTHF(18.6mL)에 용해시켜 교반했다. 추가로 DIPEA(5.4mL)와 Step S'2-1에서 얻어진 화합물 a23을 포함하는 잔사(2.50g)를 가한 후, 실온에서 T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 10.4mL)와 DMAP(1.59g)를 첨가하고, 그 후 8시간 교반했다. 화합물 a24(1.47g), DMAP(0.80g), T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 5.5mL), DIPEA(2.8mL)를 각각 추가한 후, 2시간 교반했다. 5% 탄산 나트륨 수용액(20.5mL)을 교반하면서 가한 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 5% 황산수소 나트륨 일수소화물 수용액(20.5mL×4), 5% 탄산 나트륨 수용액(20.5mL×2), 5% 황산수소 나트륨 일수소화물 수용액(20.5mL×2), 5% 탄산 나트륨 수용액(20.5mL×1)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여 화합물 a25를 포함하는 잔사(3.45g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.002분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 42 Step S'3-1
화합물 a26: tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-[(1-아미노사이클로펜테인카보닐)-메틸-아미노]-3-메틸-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노에이트의 합성
[화학식 108]
Step S'2-2에서 얻어진 화합물 a25를 포함하는 잔사(3.41g)를 2-MeTHF(1362mL)와 MeOH(1.4mL)에 용해시켜 교반했다. -20℃에서 LiBH4(2M THF 용액, 4.5mL)를 적하하고, 그 후 2시간 교반했다. 2,2,2-트라이플루오로에탄올(6.4mL)을 적하한 후 0℃까지 승온하고, 그 후 20분 교반했다. 20% 염화 암모늄 수용액(10.2mL)을 적하하고, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층에 대해, 실온에서 트라이플루오로아세트산(0.69mL)을 가한 후 10분 교반했다. 2M 수산화 나트륨 수용액(44.3mL)을 포함하는 반응 용기에 대해, 화합물 a25를 포함하는 반응 용액을 적하했다. 수층을 배출하고, 그 후 2M 수산화 나트륨 수용액(34.1mL×2), 10% 인산수소 이칼륨 수용액(17.0mL×1)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여 화합물 a26을 포함하는 잔사(2.90g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.868분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 43 Step S'3-2
화합물 a28: 벤질(2S)-2-[[1-[[(1S)-1-[[(1S)-3-tert-뷰톡시-3-옥소-1-(피페리딘-1-카보닐)프로필]-메틸-카바모일]-2-메틸-프로필]-메틸-카바모일]사이클로펜틸]카바모일]피롤리딘-1-카복실레이트의 합성
[화학식 109]
Step S'3-1에서 얻어진 화합물 a26을 포함하는 잔사(2.90g)와 화합물 a27(1.66g)을 MeCN(14.5mL)에 용해시켜 교반했다. 추가로 DIPEA(2.67mL)를 가한 후, 실온에서 BEP(2.11g)를 첨가하고, 그 후 3시간 교반했다. CPME(29.3mL)를 가한 후, 5% 탄산 칼륨 수용액(17.4mL)과 N-메틸이미다졸(0.41mL)을 가하고, 실온에서 30분 교반했다. 수층을 배출한 후, 얻어진 유기층을 5% 황산수소 나트륨 일수소화물 수용액(17.4mL×5), 5% 탄산 나트륨 수용액(17.4mL×2), 5% 황산수소 나트륨 일수소화물 수용액(17.4mL×3), 5% 탄산 나트륨 수용액(17.4mL×2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여 화합물 a28을 포함하는 잔사(3.86g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.323분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 44 Step S'4-1
화합물 a29: tert-뷰틸 (3S)-3-[메틸-[(2S)-3-메틸-2-[메틸-[1-[[(2S)-피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]아미노]뷰타노일]아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노에이트의 합성
[화학식 110]
Step S'3-2에서 얻어진 화합물 a28을 포함하는 잔사(3.81g)에 THF(16.8mL)를 가한 후, 5% Pd/C(0.40g, 50% 함수품)를 첨가했다. 수소 가스에 의한 탈기 치환을 3회 실시하고, 그 후 4시간 30분 교반했다. 5% Pd/C(0.20g, 50% 함수품)를 추가하고, 그 후 1시간 30분 교반했다. 반응 혼합물을 여과지를 이용하여 흡인 여과하고, 잔사를 2-MeTHF 용액(6.6mL×3)으로 세정했다. 얻어진 여과액 및 세정액을 합쳐서 감압 농축하여 화합물 a29를 포함하는 잔사(3.12g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 2.970분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 45 Step S'4-2
화합물 a31: tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-페닐-뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-3-메틸-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노에이트의 합성
[화학식 111]
Step S'4-1에서 얻어진 화합물 a29를 포함하는 잔사(2.06g)와 화합물 a30(1.10g)을 2-MeTHF(10.3mL)에 용해시켜 교반했다. 추가로 DIPEA(2.8mL)를 가한 후, 실온에서 T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 5.4mL)를 첨가하고, 그 후 2시간 교반했다. 화합물 a30(0.55g), DIPEA(1.1mL), T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 2.2mL)를 각각 추가한 후, 5시간 교반했다. 추가로, 화합물 a30(0.57g), DIPEA(1.1mL), T3P(50w/w% 2-MeTHF 용액, 2.2mL)를 추가하여 하룻밤 정치하고, 익일 2시간 교반했다. 5% 탄산 칼륨 수용액(12.4mL)과 N-메틸이미다졸(0.29mL)을 가하고, 실온에서 3시간 교반했다. N-메틸이미다졸(0.23mL)을 가하고, 1시간 교반한 후 수층을 배출했다. 2-MeTHF(12.4mL), N-메틸이미다졸(0.23mL), 5% 탄산 칼륨 수용액(12.4mL)을 가하고, 1시간 교반한 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 10% 황산수소 나트륨 일수소화물 수용액(12.4mL×2), 5% 탄산 칼륨 수용액(12.4mL×1)으로 세정했다. 유기층에 헵테인과 MTBE의 혼합 용액(헵테인/MTBE=1.5:1, 12.4mL), MeCN(4.7mL)을 가하고 수층을 배출했다. 유기층에 2-MeTHF(2.1mL)를 가한 후, MeCN(7.0mL)과 5% 탄산 칼륨 수용액(17.7mL)으로 7회 세정했다. 유기층에 대해 아세트산 아이소프로필(7.6mL)을 가한 후에 감압 농축하고, 얻어진 잔사에 아세트산 아이소프로필(7.6mL)을 가하여, 화합물 a31을 포함하는 용액(10.31g)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.794분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 46 Step 1'
화합물 a32: (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-페닐-뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-3-메틸-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰탄산의 합성
[화학식 112]
Step S'4-2에서 얻어진 화합물 a31을 포함하는 잔사(10.27g)를 아세트산 아이소프로필(51.4mL)에 용해시켜 교반했다. HMDS(2.1mL)를 가한 후, 0℃에서 TMSOTf(1.4mL)를 적하하고, 그 후 실온에서 2시간 30분 교반했다. 2-MeTHF를(51.4mL), 5% 인산수소 이칼륨 수용액(102.8mL)을 실온에서 가하고, 수층을 배출했다. 유기층을 5% 인산이수소 나트륨 수용액(102.8mL)으로 세정한 후, 얻어진 유기층에 DIPEA(3.0mL)를 가하여 감압 농축하고, 아세트산 아이소프로필(7.6mL)을 가하여 화합물 a32를 포함하는 용액(7.92g)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 4.001분(HPLC 분석 조건: method 3)
실시예 47 Step 2'
화합물 a33: tert-뷰틸 2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-페닐-뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-3-메틸-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]-3-사이클로헥실-프로파노일]-메틸-아미노]아세테이트의 합성
[화학식 113]
Step 2'에서 얻어진 화합물 a32를 포함하는 잔사(7.92g)와 Step H'6에서 얻어진 화합물 a16을 포함하는 잔사(1.33g)를 2-MeTHF(4.6mL)에 용해시켜 교반했다. 실온에서 DIPEA(1.6mL), HATU(1.43g)를 첨가하고, 그 후 2시간 교반했다. 화합물 a16을 포함하는 잔사(약 300mg)를 첨가하고, 2시간 더 교반했다. 그 후, 화합물 a16을 포함하는 잔사(약 300mg)를 추가하고, 1시간 30분 교반했다. HATU(0.79g)를 가한 후, 1시간 교반했다. CPME(3.5mL), N-메틸이미다졸(0.13mL), 5% 탄산 칼륨 수용액(2.7mL)을 가하고, 실온에서 3시간 교반했다. 수층을 배출한 후, 2.5% 암모니아 수용액(9.2mL×1), 10% 황산수소 나트륨 일수소화물 수용액(9.2mL×1), 5% 탄산 나트륨 수용액(9.2mL×1), 10% 황산수소 나트륨 일수화물 수용액(9.2mL×3), 5% 탄산수소 나트륨 수용액(9.2mL×2)으로 세정했다. 유기층에 헵테인/MTBE(1.5:1, 9.2mL)를 가한 후, 5% 탄산 나트륨 수용액(9.2mL×2)으로 세정했다. 얻어진 유기층에 대해, 2-MeTHF(9.2mL)를 가하고, 감압 농축하여 화합물 a33을 포함하는 잔사(4.49g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 10.65분(분석 조건: method 4)
실시예 48 Step 3'
화합물 a34: 2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(벤질옥시카보닐아미노)-4-페닐-뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-3-메틸-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]-3-사이클로헥실-프로파노일]-메틸-아미노]아세트산의 합성
[화학식 114]
Step 2'에서 얻어진 화합물 a33을 포함하는 잔사(4.49g)를 2-MeTHF(49.5mL)에 용해시켜 교반했다. 실온에서 HMDS(2.9mL)와 TMSOTf(2.1mL)를 첨가하고, 그 후 2시간 교반했다. 5% 인산수소 이칼륨 수용액(14.2mL)을 가한 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 10% 시트르산 수용액(3.4mL)과 5% 인산수소 이칼륨 수용액(10.5mL)의 혼합 수용액으로 3회, 5% 탄산 나트륨 수용액으로 1회 세정했다. 유기층에 대해, THF(20.9mL)를 가하고 공비 탈수를 3회 한 후, 얻어진 잔사에 대해 THF(5.9mL)를 가하여, 화합물 a34를 포함하는 용액(9.59g)을 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 9.26분(분석 조건: method 4)
실시예 49 Step 4'
화합물 a35: 2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-아미노-4-페닐-뷰타노일]피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-3-메틸-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-옥소-4-(1-피페리딜)뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]아세틸]-메틸-아미노]-3-사이클로헥실-프로파노일]-메틸-아미노]아세트산의 합성
[화학식 115]
5% Pd/C(0.49g 50% 함수품)를 반응 용기에 가하고, THF(8mL)에 현탁하고, 수소 분위기하로 해서 30분 교반했다. 그 후 질소 치환하고, Step 3'에서 얻어진 화합물 a34를 포함하는 잔사(9.3g)를 THF(8mL)에 용해시킨 용액을 가하고, 수소 분위기하에서 6시간 교반한 바 반응 전환율은 76%였다. 질소 치환하고 냉장고에서 하룻밤 보관한 후, 익일 실온으로 되돌려 2시간 교반한 바, 반응 전환율은 87%였다. 질소 치환한 후, 5% Pd/C(0.24g, 50% 함수품)의 THF(4mL) 현탁액을 반응액에 가하고, 수소 치환한 후 4시간 교반했다(반응 전환율 99.0%). 질소 치환하고 냉장고에서 하룻밤 보관한 후, 익일 실온으로 되돌려 측정한 바, 반응 전환율은 99.4%였다. 반응 혼합물을 여과지를 이용하여 흡인 여과하고, 잔사를 2-MeTHF 용액(6.5mLx10)으로 세정했다. 얻어진 여과액 및 세정액을 합쳐서 감압 농축했다. 얻어진 잔사를 아세토나이트릴(16.3mL) 및 2-MeTHF(6.5mL)에 용해시키고, 헵테인(37.1mL)으로 세정 후 농축했다. 얻어진 잔사를 재차 아세토나이트릴(16.3mL) 및 2-MeTHF(6.5mL)에 용해시키고, 헵테인(37.1mL)에서 세정 후 농축하여, 화합물 a35를 포함하는 잔사(2.96g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 12.39분(HPLC 분석 조건: method 4)
실시예 50 Step 5'
화합물 a36: (3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-9-(사이클로헥실메틸)-21-아이소뷰틸-28-아이소프로필-7,10,13,16,22,26,29-헵타메틸-18-[(1S)-1-메틸프로필]-3-(2-페닐에틸)-25-(피페리딘-1-카보닐)스파이로[1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-운데카자바이사이클로[32.3.0]헵타트라이아콘테인-31,1'-사이클로펜테인]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-운데카온의 합성
[화학식 116]
전공정에서 얻어진 화합물 a35를 포함하는 잔사(2.90g)와 DIPEA(1.44mL)를 포함하는 탄산 다이메틸 용액(72.5mL)을 조제하고, 이것을 PyBOP(4.34g)의 탄산 다이메틸 용액(72.5mL)에 3시간에 걸쳐서 적하했다. 적하 종료 후 30분의 시점에서 샘플링하여 반응을 확인한 후, 불용물을 여과지를 이용하여 흡인 여과로 증류 제거하고, 잔사를 탄산 다이메틸(15mL)로 세정했다. 여과액과 세정액을 합친 용액을, 2.5% 암모니아 수용액(58mL), 5% 황산수소 칼륨 수용액(58mL), 5% 인산수소 이나트륨 수용액(58mL), 5% 염화 나트륨 수용액(58mL), 0.5% 염화 나트륨 수용액(58mL)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압하 농축함으로써, 화합물 a36을 포함하는 잔사(2.72g)를 얻었다.
HPLC 분석에 의한 유지 시간: 18.69분(HPLC 분석 조건: method 5)
실시예 50-1
화합물 a36: (3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-9-(사이클로헥실메틸)-21-아이소뷰틸-28-아이소프로필-7,10,13,16,22,26,29-헵타메틸-18-[(1S)-1-메틸프로필]-3-(2-페닐에틸)-25-(피페리딘-1-카보닐)스파이로[1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-운데카자바이사이클로[32.3.0]헵타트라이아콘테인-31,1'-사이클로펜테인]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-운데카온의 합성(축합제로서 PyBOP, 용매로서 탄산 다이메틸을 사용)
[화학식 117]
반응 용기에 화합물 a35(9.7mg)를 칭량하고, 탄산 다이메틸(2mL)로 용해시켰다. 실온에서 교반하면서 DIPEA(6.1μL)를 가했다. 이것에 PyBOP(14.9mg)를 가하고 30분 교반했다. 반응액(50μL)을 MeCN/프로필아민(9:1)의 혼합액(100μL)으로 희석하고, 그 용액을 이용하여 HPLC 분석했다. 목적물:환상 다이머의 에어리어%비, 및 목적물의 LC 순도(%)를 표 13에 나타냈다.
실시예 50-2
아니솔 및 2-메틸테트라하이드로퓨란을 용매로서 이용한 경우의 결과도 표 13에 나타냈다(실험 조작은, 실시예 50-1과 마찬가지로 행했다). 어느 경우도, 환상 트라이머는 관측되지 않았다.
실시예 50-3
화합물 a36: (3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-9-(사이클로헥실메틸)-21-아이소뷰틸-28-아이소프로필-7,10,13,16,22,26,29-헵타메틸-18-[(1S)-1-메틸프로필]-3-(2-페닐에틸)-25-(피페리딘-1-카보닐)스파이로[1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-운데카자바이사이클로[32.3.0]헵타트라이아콘테인-31,1'-사이클로펜테인]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-운데카온의 합성(축합제로서 PyBOP, 용매로서 탄산 다이메틸을 사용, 역적하법에 의한 제조)
반응 용기에 PyBOP(59.9mg)를 칭량하고, 탄산 다이메틸(1mL)에 현탁했다. 다른 용기에 화합물 a35(39.9mg)를 탄산 다이메틸(1mL)에 용해시키고, 이것에 DIPEA(24.3μL)를 가했다. 이 원료의 용액을 PyBOP 현탁액에 시린지 펌프를 이용하여 실온에서 3시간에 걸쳐서 가했다. 다 가한 후 용기에 남은 원료 용액을 탄산 다이메틸(0.2mL)로 세정하고, 그 후 30분 교반했다. 반응액(50μL)을 MeCN/프로필아민(9:1)의 혼합액(100μL)으로 희석하고, 그 용액을 이용하여 HPLC 분석했다. 결과는, 표 13에 나타냈다.
[화학식 118]
a37: 본 유도체에 있어서의 c-dimer
실시예 51
화합물 b1: (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-벤질옥시카보닐피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰탄산의 합성
[화학식 119]
반응 용기에, 화합물 28을 포함하는 2-MeTHF 용액(17.45g, 11.7wt%)을 가하여 감압 농축하고, 얻어진 잔사에 IPAc(10.2mL)를 가했다. 실온에서 교반하면서 HMDS(1.52mL)를 가한 후, 외온을 0℃로 냉각하고, TMSOTf(1.04mL)를 천천히 적하했다. 실온까지 승온하고, 30분 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조정법 1), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 외온을 0℃로 냉각하고, 반응액에 5% 인산수소 이칼륨 수용액(14.3mL)을 적하하고, 실온에서 10분간 교반했다. 유기층을 제거하고, 수층에 0.5M 염산 수용액(11.2mL)과 IPAc(10.2mL)를 가하고 10분간 교반했다. 수층을 배출하고, 유기층을 5% 염화 나트륨 수용액(14.3mL)으로 세정 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 외온 30℃에서 감압 농축 건고하여, 화합물 b1을 포함하는 잔사(1.88g, 수율 94.1%)를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 2.929분, m/z=678.61[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 1)
수율: 94.1%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 52
화합물 b2: (2S)-2-[[1-[[(1S)-2-[[(1S)-3-[[(1S)-1-[[(1S, 2S)-1-[[(1S)-2-[(2S)-2-[[(1S)-2-[(2-tert-뷰톡시-2-옥소-에틸)-메틸-아미노]-2-옥소-1-(p-톨릴메틸)에틸]-에틸-카바모일]아제티딘-1-일]-1-메틸-2-옥소-에틸]-메틸-카바모일]-2-메틸-뷰틸]카바모일]-3-메틸-뷰틸]-메틸-아미노]-1-(다이메틸카바모일)-3-옥소-프로필]-메틸-아미노]-1-사이클로펜틸-2-옥소-에틸]-메틸-카바모일]사이클로펜틸]카바모일]피롤리딘-1-카복실산 벤질의 합성
[화학식 120]
반응 용기에 화합물 17을 포함하는 IPAc 용액(1.50g, 55.0wt%) 및 화합물 b1(0.98g, 78.3wt%)을 칭량하고, 2-MeTHF(5.44mL) 및 MeCN(0.80mL)을 가했다. 실온에서 교반하면서 DIPEA(1.05mL)를 가한 후, HATU(988.4mg)를 가했다. 실온에서 4시간 교반 후, 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조정법 2), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 2). 외온을 0℃로 냉각하고, 반응액에 N-메틸이미다졸(86μL), 및 5% 탄산 나트륨 수용액(5.6mL)을 가하고, 실온에서 10분 교반했다. 수층을 배출하고, 유기층을 2.5% 암모니아 수용액(5.6mL), 5% 황산수소 나트륨 수용액(5.6mL×2), 5% 탄산 나트륨 수용액(8.2mL×3)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 외온 30℃에서 감압 농축 건고하여, 화합물 b2를 포함하는 잔사(1.88g, 수율 93.8%)를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 21.17분, m/z=1403.06[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 5)
수율: 93.8%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 53
화합물 b3: 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-벤질옥시카보닐피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세트산의 합성
[화학식 121]
반응 용기에, 실시예 52에서 얻어진 화합물 b2를 포함하는 잔사(1.44g, 90.3wt%)를 가하고 IPAc(6.50mL)를 가했다. 실온에서 교반하면서 HMDS(0.50mL)를 가한 후, 외온을 0℃로 냉각하고, TMSOTf(0.340mL)를 천천히 적하했다. 실온까지 승온하고, 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조정 1), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응액에 5% 인산수소 이칼륨 수용액(9.10mL)을 적하하고, 실온에서 10분간 교반했다. 유기층을 제거하고, 수층에 0.5M 염산 수용액(7.41mL)과 2-MeTHF(9.0mL)를 가하고 10분간 교반했다. 수층을 배출하고, 유기층을 5% 염화 나트륨 수용액(13.0mL)으로 세정 후, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 외온 35℃에서 감압 농축 건고하여, 화합물 b3을 포함하는 잔사(3.36g, 수율 92.7%)를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 18.19분, m/z=1325.02[M+H]+(LCMS 분석 조건 method 5)
수율: 92.7%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 54
화합물 b4: 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-사이클로펜틸-2-[메틸-[1-[[(2S)-피롤리딘-2-카보닐]아미노]사이클로펜테인카보닐]아미노]아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세트산의 합성
[화학식 122]
반응 용기에, 실시예 53에서 얻어진 화합물 b3(1.01g, 0.762mmol)과 2-MeTHF (2.02mL), THF(6.87mL)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 용기에, 5% Pd/C(0.162g, 50% 함수품)를 가한 후, 수소 가스에 의한 탈기 치환을 3회 행하고 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 혼합물을 여과지 및 멤브레인 필터를 이용하여 여과하고, 잔사를 2-MeTHF(5.0mL×2)로 세정했다. 얻어진 여과액을 감압 농축하여, 화합물 b4를 포함하는 잔사(1.43g, 수율 96.7%)를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 2.921분, m/z=1191.00[M+H]+(LCMS 분석 조건 method 1)
수율: 96.7%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
화합물 b4의 환화 반응(실시예 55의 반응 조건 검토)
화합물 b4를 출발 원료로서 이용하여, 화합물 b5에 대한 환화 반응에 있어서의, 축합제, 및 용매를 검토했다. 환화 반응은 HPLC 분석에 의해 추적했다.
[화학식 123]
실시예 55-6
화합물 b5: (6S,9S,14S,17S,20S,24S,27S,33S)-27-사이클로펜틸-7-에틸-20-아이소뷰틸-N,N,4,14,15,21,25,28-옥타메틸-17-[(1S)-1-메틸프로필]-2,5,8,13,16,19,22,26,29,32-데카옥소-6-(p-톨릴메틸)스파이로[1,4,7,12,15,18,21,25,28,31-데카자트라이사이클로[31.3.0.09,12]헥사트라이아콘테인-30,1'-사이클로펜테인]-24-카복사마이드의 합성
반응 용기에 화합물 b4(9.99mg(8.39μmol))를 칭량하고, 용매(2-MeTHF, 2.0mL(200v/w))를 가했다. 실온에서 교반하면서, DIPEA(6.74μL(38.6μmol))를 가했다. 반응 용기의 외온을 25℃로 설정하고, 축합제(PyAOP, 17.2mg(33.0μmol))를 가하고 30분 교반했다. 반응액(50μL)을 MeCN/프로필아민(9:1)의 혼합액(100μL)으로 희석하여, HPLC 분석용의 용액을 조제했다.
화합물 b5의 LCMS(ESI): 유지 시간: 16.81분, m/z=1173.51[M+H]+(LCMS 분석 조건 method 5)
환상 다이머 b6(c-Dimer)의 LCMS(ESI): 유지 시간: 22.36분, m/z=2367.91[M+Na]+(LCMS 분석 조건 method 5)
환상 트라이머 b7(c-Trimer)의 LCMS(ESI): 유지 시간: 24.41분, m/z=1759.26[M+2H]2+(LCMS 분석 조건 method 5)
[화학식 124]
아래 표에 나타내는, 축합제, 및 용매를 이용하여, 실시예 55-6(축합제로서 PyAOP를 사용, 용매로서 2-MeTHF를 사용)의 실험과 마찬가지의 조작을 행하여, 출발 원료(SM, 화합물 b5)의 소비, 목적물(TM, 화합물 b5)의 생성, 및 부생성물(환상 다이머 b6(c-Dimer), 및 환상 트라이머 b7(c-Trimer))의 생성량을 측정하고, 바람직한 반응 조건을 검토했다. 표에는 출발 원료: 출발 원료인 프로필아마이드체(화합물 b8):목적물:환상 다이머:환상 트라이머의 에어리어%비를 정리했다.
[화학식 125]
실시예 55-11(실시예 55-6의 역적하법에 의한 제조)
바이알에 화합물 b4(9.89mg(8.31μmol))와 2-MeTHF(0.99mL(100v/w))를 가하고, 50℃에서 10분간 교반했다. 원료의 용해를 확인 후, DIPEA(6.67μL(38.2μmol))를 가하고, 반응액을 시린지로 빨아 올렸다. 다른 반응 용기에 PyAOP(17.1mg(32.8μmol))와 2-MeTHF(0.99mL(100v/w))를 가하고, 실온에서 교반하면서 상기 시린지 내의 용액을 3시간에 걸쳐서 적하했다. 적하 종료 후, 반응액(50μL)을 MeCN/프로필아민(9:1)의 혼합액(100μL)으로 희석하여, HPLC 분석용의 용액을 조제했다.
실시예 56
화합물 c1: tert-뷰틸 (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-(벤질옥시카보닐아미노)사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노에이트의 합성
[화학식 126]
반응 용기에, 실온에서 화합물 23을 포함하는 2-MeTHF 용액(16.006g, 32.5wt%)을 가하고, 감압 농축했다. 잔사를 MeCN(10.0mL)에 용해시키고, 감압 농축하는 조작을 3회 반복했다. 반응 용기에, 실온에서 MeCN(53.9mL), 1-(((벤질옥시)카보닐)아미노)사이클로펜테인-1-카복실산(9.604g) 및 DIPEA(12.7mL)를 가하고 교반했다. 반응 용기의 외온을 55℃로 설정하고, 교반하면서 반응 혼합물에 HATU(15.257g)를 2회로 나누어 가하고, 6시간 교반했다. 반응 혼합물을 MeCN/프로필아민(9:1)의 혼합액으로 희석하고, HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.6% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 2). 반응 혼합물에, N-메틸이미다졸(4.3mL)을 가하여 5분간 교반하고, 이어서 수돗물(27.0mL)을 가하여 30분간 교반한 후, 반응 용기의 외온을 55℃에서 25℃로 강온하고, 반응 혼합물을 종야 교반했다. 반응 혼합물을 여과지를 이용하여 흡인 여과하고, 잔사를 MeCN(18.0mL) 및 수돗물(9.0mL)의 혼합액으로 세정했다. 여과 채취한 결정을 40℃에서 3시간 진공 건조하여, 화합물 c1을 포함하는 백색의 분말(6.957g)을 얻었다. 얻어진 결정을 MeCN으로 희석하고, 하기의 분석 조건에서 LCMS 측정했다(화합물 c1의 유지 시간; 6.914분, m/z=637.30[M+Na]+).
LCMS 분석 조건
장치: Waters ACQUITY UPLC H-Class + ACQUITY QDA
칼럼: CAPCELL CORE ADME(OSAKA SODA), 2.1mm ID×50mm, 2.7μm
이동상: 0.05% TFA/water(A), 0.05% TFA/MeCN(B)
용출법: B) 5%(0min)→100%(10min)→5%(10.1min)→5%(12min)
유속: 0.5mL/min
칼럼 온도: 35℃
검출 파장: 210nm(PDA)
얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다(수율: 78.32%).
실시예 57
화합물 c2: (3S)-3-[[(2S)-2-[[1-(벤질옥시카보닐아미노)사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰탄산의 합성
[화학식 127]
반응 용기에, 실온에서 화합물 c1을 포함하는 백색의 분말(2.504g, 95.9wt%) 및 다이클로로메테인(12.0mL)을 가한 후, HMDS(2.07mL)를 가했다. 반응 용기를 빙욕에서 냉각하고, TMSOTf(1.41mL)를 교반하면서 가했다. 반응 용기를 빙욕으로부터 빼고, 실온에서 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 MeCN으로 희석하고, HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 용기를 빙욕에서 냉각하고, 다이클로로메테인(12.0mL)과 5% 인산수소 이칼륨 수용액(24.0mL)을 가하고, 10분간 교반하여, 유기층을 배출했다. 수층에 2-MeTHF(72.0mL)를 가한 후, 유기층을 0.5M 염산 수용액(12.0mL), 5% 염화 나트륨 수용액(24.0mL)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 감압 농축하여, 화합물 c2를 포함하는 백색의 분말(1.977g)을 얻었다. 얻어진 백색의 분말을 MeCN으로 희석하고, LCMS 분석에 부쳤다(method 3 화합물 c2의 유지 시간; 3.307분, m/z=581.13[M+Na]+). 얻어진 백색의 분말과 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다(수율: 81.51%).
실시예 58
화합물 c3: 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-(벤질옥시카보닐아미노)사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세트산 tert-뷰틸의 합성
[화학식 128]
반응 용기에 화합물 c2(618.1mg, 90.0wt%) 및 화합물 17을 포함하는 2-MeTHF 용액(1.22g, 55.0wt%)을 칭량하고, 2-MeTHF(10.9mL) 및 MeCN(1.22mL)을 가했다. 실온에서 교반하면서 DIPEA(0.885mL)를 가한 후, HATU(792mg)를 가했다. 실온에서 2시간 교반 후, 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조정법 2), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 2). 외온을 0℃로 냉각하고, 반응액에 N-메틸이미다졸(72μL), 및 5% 탄산 나트륨 수용액(10mL)을 가하고, 실온에서 10분 교반했다. 수층을 배출하고, 유기층을 2.5% 암모니아 수용액(10mL), 5% 황산수소 나트륨 수용액(10mL×2), 5% 탄산 나트륨 수용액(10mL×2)으로 세정했다. 얻어진 유기층을 외온 30℃에서 감압 농축 건고하여, 화합물 c3을 포함하는 잔사(1.94g, 수율 91.2%)를 얻었다.
HPLC: 유지 시간: 4.606분(HPLC 분석 조건 method 1)
수율: 91.2%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 59
화합물 c4: 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-(벤질옥시카보닐아미노)사이클로펜테인카보닐]-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세트산의 합성
[화학식 129]
반응 용기에, 실시예 58에서 얻어진 화합물 c3을 포함하는 잔사(1.41g, 50.2wt%)를 가하고 2-MeTHF(7.0mL)를 가했다. 실온에서 교반하면서 HMDS(579μL)를 가한 후, 외온을 0℃로 냉각하고, TMSOTf(394μL)를 천천히 적하했다. 실온까지 승온하고, 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조정법 1), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.9% 이상인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 외온을 0℃로 냉각하고, 반응액에 5% 인산수소 이칼륨 수용액(5.25mL)을 적하하고, 실온에서 10분간 교반했다. 수층을 배출하고, 유기층을 5% 인산수소 이칼륨 수용액(5.25mL)과 0.5M 염산 수용액(3.5mL)으로 2회 세정 후, 5% 염화 나트륨 수용액(7.0mL)으로 세정하고, 수층을 배출했다. 얻어진 유기층을 외온 30℃에서 감압 농축 건고하여, 화합물 c4를 포함하는 잔사(0.85g, 수율 95.2%)를 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 3.974분, m/z=1228.38[M+H]+(LCMS 분석 조건 method 1)
수율: 95.2%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
실시예 60
화합물 c5: 2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2-[(1-아미노사이클로펜테인카보닐)-메틸-아미노]-2-사이클로펜틸-아세틸]-메틸-아미노]-4-(다이메틸아미노)-4-옥소-뷰타노일]-메틸-아미노]-4-메틸-펜타노일]아미노]-3-메틸-펜타노일]-메틸-아미노]프로파노일]아제티딘-2-카보닐]-에틸-아미노]-3-(p-톨릴)프로파노일]-메틸-아미노]아세트산의 합성
[화학식 130]
반응 용기에, 실시예 59에서 얻어진 화합물 c4(462mg, 53.5wt%)와 2-MeTHF(2.47mL)를 실온에서 순차적으로 가했다. 반응 용기에, 5% Pd/C(74.7mg, 50% 함수품)를 가한 후, 수소 가스에 의한 탈기 치환을 3회 행하고 8시간 교반했다. 반응 혼합물을 샘플링하여 샘플 조제하고(샘플 조제법 1), HPLC 분석에 부쳐 반응 전환율이 99.7%인 것을 확인했다(반응 전환율의 산출식 1). 반응 혼합물에 2-MeTHF(10mL)를 가한 후, 여과지 및 멤브레인 필터를 이용하여 여과하고, 잔사를 2-MeTHF(5.0mL×2)로 세정했다. 얻어진 여과액을 감압 농축하여, 화합물 c5를 포함하는 용액(1.16g, 수율 91.0%)을 얻었다.
LCMS(ESI): 유지 시간: 2.920분, m/z=1093.88[M+H]+(LCMS 분석 조건 method 1)
수율: 91.0%(얻어진 잔사와 3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤조산을 DMSO-d6에 용해시키고, qNMR 분석에 부쳤다.)
화합물 c5의 환화 반응(실시예 61의 반응 조건 검토)
화합물 c5를 출발 원료로서 이용하여, 화합물 c6에 대한 환화 반응에 있어서의, 축합제, 및 용매를 검토했다. 환화 반응은 HPLC 분석에 의해 추적했다.
[화학식 131]
실시예 61-1
화합물 c6: (3S,6S,9S,13S,16S,25S,28S)-16-사이클로펜틸-26-에틸-9-아이소뷰틸-N,N,3,4,10,14,17,23-옥타메틸-6-[(1S)-1-메틸프로필]-2,5,8,11,15,18,21,24,27-노나옥소-25-(p-톨릴메틸)스파이로[1,4,7,10,14,17,20,23,26-노나자바이사이클로[26.2.0]트라이아콘테인-19,1'-사이클로펜테인]-13-카복사마이드의 합성
반응 용기에 화합물 c5(44.19mg, 21.8wt%(8.81μmol))를 칭량하고, 농축 건고 후에 용매(MeCN, 1.9mL(200v/w))를 가했다. 실온에서 교반하면서, DIPEA(7.19μL(41.2μmol))를 가했다. 축합제(HATU, 12.84mg(33.8μmol))를 가하고 30분 교반했다. 반응액(50μL)을 MeCN/프로필아민(9:1)의 혼합액(100μL)으로 희석하여, HPLC 분석용의 용액을 조제했다.
화합물 c6의 LCMS(ESI): 유지 시간: 17.22분, m/z=1076.38[M+H]+(LCMS 분석 조건 method 5)
환상 다이머 c7(c-Dimer)의 LCMS(ESI): 유지 시간: 21.85분, m/z=2151.42[M+H]+(LCMS 분석 조건 method 5)
환상 트라이머 c8의 LCMS(ESI): 유지 시간: 24.50분, m/z=1614.13[M+2H]2+(LCMS 분석 조건 method 5)
[화학식 132]
아래 표에 나타내는, 축합제, 및 용매를 이용하여, 실시예 61-1(축합제로서 PyAOP를 사용, 용매로서 2-MeTHF를 사용)의 실험과 마찬가지의 조작을 행하여, 출발 원료(SM, 화합물 c5)의 소비, 목적물(TM, 화합물 c6)의 생성, 및 부생성물(환상 다이머 c7(c-Dimer), 및 환상 트라이머 c8(c-Trimer))의 생성량을 측정하고, 바람직한 반응 조건을 검토했다. 표에는 출발 원료: 출발 원료인 프로필아마이드체(화합물 c9):목적물:환상 다이머:환상 트라이머의 에어리어%비를 정리했다.
[화학식 133]
실시예 61-5(실시예 61-4의 역적하법에 의한 제조)
바이알에 화합물 c5(45.0mg, 21.8wt%(8.97μmol))를 칭량하고, 농축 건고 후에 2-MeTHF(0.98mL(100v/w))를 가하고, 50℃에서 10분간 교반했다. 원료의 용해를 확인 후, DIPEA(7.21μL(41.2μmol))를 가하고, 반응액을 시린지로 빨아 올렸다. 다른 반응 용기에 PyAOP(17.8mg(34.1μmol))와 2-MeTHF(0.98mL(100v/w))를 가하고, 실온에서 교반하면서 상기 시린지 내의 용액을 3시간에 걸쳐서 적하했다. 적하 종료 후, 반응액(50μL)을 MeCN/프로필아민(9:1)의 혼합액(100μL)으로 희석하여, HPLC 분석용의 용액을 조제했다.
본 발명에 의해, 의약품으로서 유용한 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물을 제조하는 방법, 및 해당 환상 펩타이드 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 제조에 이용되는 펩타이드 화합물을 제조하는 방법이 제공된다.

Claims (25)

  1. 2-MeTHF, 탄산 다이메틸, 아니솔, 아세트산 아이소프로필, 아세트산 에틸, MTBE, CPME, 4-메틸테트라하이드로피란, 헵테인, 톨루엔, 아세토나이트릴, 프로피오나이트릴, THF, 1,4-다이옥세인, 1,3-다이옥세인, 및 다이메톡시에테인으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 또는 복수를 포함하는 용매 중, 직쇄 펩타이드 화합물의 N 말단의 아미노산 잔기와 C 말단의 아미노산 잔기를 아마이드 결합에 의해 연결하는 공정을 포함하는, 액상법에 의해, 하기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물을 제조하는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 직쇄 펩타이드 화합물의 C 말단의 아미노산 잔기 또는 N 말단의 아미노산 잔기의 한쪽이, 카복실기의 α위 탄소에 부제 탄소를 갖지 않는 아미노산 잔기인, 방법.
  3. 제 2 항에 있어서,
    상기 직쇄 펩타이드 화합물의 C 말단의 아미노산 잔기가, 카복실기의 α위 탄소에 부제 탄소를 갖지 않는 아미노산 잔기인, 방법.
  4. 제 3 항에 있어서,
    상기 직쇄 펩타이드 화합물이,

    인, 방법.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물의 용매화물인, 방법.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 식(1)로 표시되는 화합물의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물인, 방법.
  7. 제 4 항에 있어서,
    상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물인, 방법.
  8. 제 1 항에 있어서,
    상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물의 용매화물인, 방법.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 식(1)로 표시되는 화합물의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물의 수화물인, 방법.
  10. 제 1 항에 있어서,
    상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물이, 식(1)로 표시되는 화합물인, 방법.
  11. 제 1 항에 있어서,
    용매가, 2-MeTHF, THF, 4-메틸테트라하이드로피란, MTBE, CPME, 탄산 다이메틸, 아세트산 에틸, 아세트산 아이소프로필, 아니솔, 아세토나이트릴, 헵테인, 및 톨루엔으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 용매를 1개 이상 포함하는, 방법.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물을 정석에 의해 단리 및/또는 정제하여, 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 결정을 얻는 공정을 추가로 포함하는, 방법.
  13. 제 12 항에 있어서,
    상기 식(1)로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 결정이, 식(1)로 표시되는 화합물의 비용매화물 결정, 또는 용매화물 결정인, 방법.
  14. 제 13 항에 있어서,
    상기 식(1)로 표시되는 화합물의 비용매화물 결정, 또는 용매화물 결정이, 식(1)로 표시되는 화합물의 용매화물 결정인, 방법.
  15. 제 14 항에 있어서,
    상기 식(1)로 표시되는 화합물의 용매화물 결정이 수화물 결정인, 방법.
  16. 제 15 항에 있어서,
    수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 7개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 방법.
  17. 제 15 항에 있어서,
    수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 10개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 방법.
  18. 제 15 항에 있어서,
    수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)의 피크를 포함하는 C형 결정인, 방법.
  19. 하기 식(1):

    로 표시되는 화합물, 혹은 그의 염 또는 그들의 용매화물의 결정.
  20. 제 19 항에 있어서,
    결정이, 비용매화물 결정, 용매화물 결정, 염의 결정, 및 염의 용매화물 결정으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 결정.
  21. 제 20 항에 있어서,
    결정이, 용매화물 결정인, 결정.
  22. 제 21 항에 있어서,
    용매화물 결정이 수화물 결정인, 결정.
  23. 제 22 항에 있어서,
    수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 7개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 결정.
  24. 제 22 항에 있어서,
    수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 적어도 10개의 피크를 포함하는 C형 결정인, 결정.
  25. 제 22 항에 있어서,
    수화물 결정이, 분말 X선 회절에 의한 회절각(2θ값)으로서, 4.964°, 7.921°, 8.296°, 8.855°, 9.956°, 10.435°, 11.729°, 12.704°, 13.552°, 13.901°, 15.895°, 16.643°, 및 17.813°(±0.2°)의 피크를 포함하는 C형 결정인, 결정.
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