BG62655B1 - Пептиди, способни да освобождават растежен хормон - Google Patents

Пептиди, способни да освобождават растежен хормон Download PDF

Info

Publication number
BG62655B1
BG62655B1 BG98489A BG9848994A BG62655B1 BG 62655 B1 BG62655 B1 BG 62655B1 BG 98489 A BG98489 A BG 98489A BG 9848994 A BG9848994 A BG 9848994A BG 62655 B1 BG62655 B1 BG 62655B1
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
ala
dphe
trp
phe
growth hormone
Prior art date
Application number
BG98489A
Other languages
English (en)
Other versions
BG98489A (bg
Inventor
Cyril Y. Bowers
David Coy
Original Assignee
Administrators Of The Tulane Educational Fund
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Administrators Of The Tulane Educational Fund filed Critical Administrators Of The Tulane Educational Fund
Publication of BG98489A publication Critical patent/BG98489A/bg
Publication of BG62655B1 publication Critical patent/BG62655B1/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • A61P5/08—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH for decreasing, blocking or antagonising the activity of the anterior pituitary hormones

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Област на техниката
Изобретението се отнася до полипептидни съединения, стимулиращи освобождаването на растежен хормон, когато са приети от бозайници, за предпочитане - хора. В друг аспект, изобретението се отнася до методи, стимулиращи освобождаването на растежен хормон и повишаващи нивото му в животни чрез приемане на специфични полипептидни съединения, освобождаващи растежен хормон.
Предшестващо състояние на техниката
Повишаване нивото на растежния хормон (РХ) в животни, напр. бозайници, включително хора, при приемане на съединения, освобождаващи растежен хормон, може да доведе до увеличаване на теглото и до повишено производство на мляко, ако при приемането му се достигнат достатъчно високи нива на растежния хормон. Освен това, известно е, че повишаването на нивото на растежния хормон при бозайниците и хората може да бъде постигнато и чрез прилагането на известни освобождаващи хормона агенти като естествено срещащите се хормони, освобождаващи растежен хормон.
Повишаването на нивото на растежния хормон в бозайниците може да се постигне също така чрез прилагането на пептиди, освобождаващи растежен хормон, някои от които са описани по-рано, например в US №№ 4223019, 4223020, 4223021,4224316,4226857, 4228155, 4228156, 4228157, 4228158,4410512 и 4410513.
Антитела на ендогенния инхибитор за освобождаване на растежен хормон соматостатин (SRIF) също така са били използвани, за да предизвикат повишени РХ-нива. В последния пример нивата на растежния хормон са повишени чрез отстраняване на ендогенния инхибитор за освобождаване на растежен хормон (SRIF) преди той да достигне хипофизата, където инхибира освобождаването на растежния хормон.
Всеки един от тези методи, стимулиращи повишаването на нивата на растежния хормон включва материали, които са скъпи за синтезиране и/или изолиране с достатъчно висока чистота за приемането им от набелязаното животно. Желателни са относително прости полипептиди с къса верига и ниско молекулно тегло, които са относително евтини за получаване и притежават способността да стимулират отделянето на растежен хормон, защото трябва да се получават лесно и евтино, да се променят лесно химично и/или физично, както и лесно да се пречистват и формулират. Те трябва да притежават и отлични транспортни свойства.
Въпреки че са известни някои полипептиди с къси вериги, които могат да стимулират освобождаването и повишаването на нивата на растежния хормон в кръвта, важно е полипептидите да могат да се “скроят” към различни изисквания като доставяне, биоабсорбция, повишено време на задържане и др. Обаче промените на аминокиселините в някои позиции могат да доведат до драстичен ефект върху способността на пептидите с къси вериги за стимулиране отделянето на растежен хормон.
Би било желателно да се разполага с различни полипептиди с къса верига, които могат да стимулират освобождаването и повишаването на нивата на растежния хормон в кръвта на животните и по-специално при хората. Би било също така полезно тези пептиди да могат да се използват за стимулиране освобождаването и/или повишаването на нивата на растежния хормон в кръвта на животни и хора.
Също така е желателно да се дадат методи за стимулиране освобождаването и/или повишаването нивата на растежния хормон в кръвта на животните, като се използват такива полипептиди с къси вериги.
Техническа същност на изобретението
Полипептидите са дефинирани със следната формула:
Aj - А2 - С, - С2 - С3 - А3, в която
А1 е Gly, Dala, β-Ala, His, Ser, Met, Pro, Sar, Ava, Aib, N-нисш алкил-аминокарбонова киселина, Ν,Ν-бис-нисш алкил-аминокарбоксилна киселина, азол-карбоксилна киселина или нисш алкил-аминокарбоксилна киселина, при което нисшата алкилна група включва 2 до около 10 въглеродни атома с неразклонена верига. За предпочитане е А1 да бъде DAla.
А2 е DTrp, ΩβΝΦ, D-4-Y-Phe или 5-Y-DТгр, където Υ е OH, Cl, Br, F или Н. За предпочитане е А, да бъде Οβ№1.
А5 е А3-А4-А3„ А3-А3„ А4-А5, или А3.. За предпочитане е А3 да бъде А3„
А3 е Ala, Gly, Dala, Pro или desAla.
A4 e Ala, Gly, Dala, Pro, линеен нисш алкил-аминокарбоксилна киселина или desAla. А3. е Lys^-Rp R2)-Z, Orn(5-R1, R2)-Z, NH(CH2)xN(R3, R4). A3. може да бъде също така Lys-Z, Om-Z или Arg-Z, когато At не е His.
R] е линейна нисша алкилна група или Н-атом. Когато Rj е Н, R2 не е Н; по същия начин - когато R2 е Н, R1 не е Н.
R3 е линейна нисша алкилна група или Н-атом.
R4 е линейна нисша алкилна група или Н-атом. Нисшата алкилна група включва 2 до около 10 въглеродни атома с неразклонена верига. Z е NH (линейна нисша алкилна група), N (линейна нисша алкилна група) 2, О-(линейна нисша алкилна група), NH2 или ОН, при което линейната нисша алкилна група е както дефинираната по-горе.
х е от 2 до 15.
Cf е Ala.
С2 е Trp, Phe или ChxAla. За предпочитане е С2 да бъде Тгр или Phe. Още попрепоръчително е С2 да бъде Trp. С3 е DPhe, DPal или DChxAla. Предпочита се С3 да бъде DPhe.
И присъединителните (адитивни) соли на органични и неорганични киселини на всеки от споменатите полипептиди. Предпочетен полипептид е A^Aj-Ala-Cj-DPhe-A^, а още попредпочетен е полипептида A,-A2-Ala-TrpDPhe-Aj.
Кратко описание на фигурите
На фиг. 1 са представени серия от графики, показващи нивата на човешки растежен хормон в серум в зависимост от времето.
Бяха открити няколко нови полипептиди с къси вериги, които стимулират освобождаването и повишаването нивата на растежния хормон в кръвта на животните. Полипептидите са дефинирани от следната формула:
A1-A2-Ala-TrpDPhe-AJ, където:
AI е Gly, Dala, β-Ala, His, Ser, Met, Pro, Sar, Ava, Aib, имидазол оцетна киселина, Nнисш алкил-аминокарбоксилна киселина, Ν,Νбис-нисш алкил-аминокарбоксилна киселина, азол-карбонова киселина или нисш алкил-аминокарбоксилна киселина, в която нисшата алкилна група включва от 2 до около 6 въглеродни атома в неразклонена верига. Нисшата алкилна група може да бъде заместена или незаместена. Предпочетените заместители са О, N или Si. За предпочитане е нисшата алкилна група да бъде незаместена. Предпочетената азол-карбонова киселина е Να 4-имидазолоцетна киселина (2МА). За предпочитане е At да бъде Gly, DAla или His. Още по-препоръчително е А1 да бъде His или DAla. Найдобре е А1 да бъде DAla.
А2 е DTrp, ϋβΝΒΐ, D-4-Y-Phe или 5-Y-DТгр, където Υ е OH, Cl, Br, F или Н. За предпочитане е А2 да бъде ϋβΝΒΐ, D-4-Y-Phe или 5Y-D-Trp. Най-добре е А2 да бъде DpNal. Y е препоръчително да бъде ОН или Н.
А, е А,-А-А,., А-А,„ А-А„ или А... За предпочитане е А3 да бъде А3„ А3 е Ala, Gly, DAla, Pro или desAla. A4 e Ala, Gly, Dala, Pro, линеен нисш алкил-аминокарбоксилна киселина или desAla. А3. е Lys^-R,,R2)-Z, Omid-R^Rp-Z, LArg (g-R3-R6), NH(CH2)xN(R3,R4). A3. може също така да бъде Lys-Z, Orn-Z или Arg-Z, когато А] не е His. R! е линейна нисша алкилна група или водороден атом. R2 е линейна нисша алкилна група или водороден атом. Когато Rt е Н, R2 не е Н; по подобен начин - когато R2 е Н, Rj не е Н. R3 е линейна нисша алкилна група или Н-атом. R4 е линейна нисша алкилна група или Н-атом. R3 и R6 са линейни нисши алкидни групи. Нисшата алкилна група включва от 2 до около 10 въглеродни атома в неразклонена верига. За предпочитане е нисшата алкилна група да бъде от 2 до 6 въглеродни атома в неразклонена верига. Нисшата алкилна група може да бъде заместена или незаместена. Предпочетени заместители могат да бъдат Ο, N или Si. За предпочитане е нисшата алкилна група да бъде незаместена. g означава гванидино. Z е NH (линейна нисша алкилна група), N (линейна нисша алкилна група) 2, О-(линейна нисша алкилна група) р NH2 или ОН, където линейната нисша алкилна група е както дефинираната по-горе, х е за предпочитане от 2 до 6. А3 е за предпочитане Lys-NH2.
И присъединителни соли с органични или неорганични киселини на споменатите полипептиди.
Използваните съкращения за аминокиселинни остатъци са съгласно стандартната пеп тидна номенклатура:
Gly - глицин
Туг - L-тирозин
Пе - L-изолевцин
Glu - L-глутаминова киселина
Thr - L-треонин
Phe - L-фенилаланин
Ala - L-аланин
Lys - L-лизин
Asp - L-аспартова киселина
Cys - L-цистеин
Arg - L-аргинин
Ava - Аминовалерианова киселина
Aib - Аминоизомаслена киселина
Gin - L-глутамин
Pro - L-пролин
Leu - L-левцин
Met - L-метионин
Ser - L-серин
Asn - L-аспарагин
His - L-хистидин
Trp - L-триптофан
Vai - L-валин
DOPA - 3,4-дихидроксифенилаланин
Met(O) - Метионин сулфоксид
Abu -α-аминомаслена киселина iLys - Ь^-изопропил-Ь-лизин 4-Abu - 4-аминомаслена киселина Orn - L-орнитин
D Nal -а-нафтил-О-аланин
D Nal -β-нафтил-О-аланин
Sar- Саркозин
LArg - хомоаргинин
Chx - циклохексил
ChxAla - L-циклохексилаланин
DChxAla - D-циклохексилаланин
IMA - Να-имидазол оцетна киселина
Tcc - 1,2,3,4-тетрахидро-7-каролин-3карбонова киселина
Tic - 1,2,3,4-тетрахидроизохинолин-Зкарбонова киселина
Tip - 4,5,6,7-тетрахидро-1Н-имидазол-6карбонова киселина α,γΑΒυ - алфа, гама аминомаслена киселина
DPal - D-3-пиридил аланин
Всички трибуквени съкращения на аминокиселините, предшествани от буквата “D”, означават D-конфигурация на аминокиселинния остатък, а глицинът се смята като включен в термина “природно срещащи се L-аминокиселини”.
В полипептидите с къси вериги някои позиции са по-склонни за промени, отколкото други, без да повлияват неблагоприятно на пептидната способност, стимулираща освобождаване и/или повишаване на нивата на растежния хормон в кръвта на животните. Например А5 позицията (мястото). Други позиции са помалко толерантни към такива промени. Например средните аминокиселинни остатъци Ala, Trp, DPhe, означени съответно с Ср С2 и С3. Например по-рано е установено, че А] и А2 трябва да бъдат в L и D форма, създаващи последователност LD LD. Сега е установено, че последователността LD LD може да бъде DD LD. По такъв начин изненадващо е установено, че полипептид с формула Α^Α^^С,-С3-А3, в която Ар А2, А5 са както описаните по-горе и С( е Ala, С2 е Trp, Phe и ChxAla и С3 е DPhe, DPal или DChxAla, ще способства за отделянето на и/или повишаване на нивата на растежния хормон при животните.
За предпочитане е С2 да бъде Тгр или Phe, препоръчително е С2 да бъде Тгр.
За предпочитане е С3 да бъде DPhe. За предпочитане е когато С2 е ChxAla, С3 да бъде DPhe. Когато С3 е DPal за предпочитане е Z да бъде ОН.
Повишената гъвкавост, свързана с избора на основни, неутрални или кисели аминокиселинни остатъци и L и D форми, които могат да бъдат избирани за аминокиселините Ар А2, А3, А4, А5, С2 и С3 осигуряват голяма степен на контрол върху физико-химичните свойства на желаните пептиди.
Въпреки че DAla-D Nal-Ala-Trp-DPheLys-NH2 и DALa-D Nal-Ala-Phe-DPhe-Lys-NH2 притежават подобна активност по отношение освобождаването на растежен хормон, заместването на Trp с Phe може да повиши химичната стабилност на DAla-DpNal-Ala-Phe-DPhe-LysNHj, тъй като Тгр е по-чувствителен към окисление от Phe. Също така заместването на Тгр с Phe придава по-голяма хидрофобност на пептида и това физико-химично свойство, така както е описано по-долу, може да се окаже благоприятно по отношение повишената орална, трансдермална и/или назална абсорбция, както и за приготвяне рецептурите на полипептида. Освен това ED50 (50%-ната ефективна доза) при хистаминов тест с клетки от плъх на DAla-DβNal-Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2 и DAlaDβNal-Ala-Phe-DPhe-Lys-NH2 са почти еднак ви, т.е. 30,5 +/- 0,5 и 30,8 +/- 0,3 pg/ml и двата са по-добри по отношение на хистаминната активност в сравнение с ΑΙβ-ΗίΒ-ΟβΝπΙAla-Trp-DPhe-Lys-NH2, която тук е 11,0 +/1,0 pg/ml. Пептидите с по-слаба активност за освобождаване на хистамин (по-високи стойности на ED50) клинически могат да бъдат по-ефективни, тъй като биха предизвикали помалко странични локални реакции в мястото на инжектиране на пептида и/или биха били по-слаби в предизвикването на странични системни антигенни клинични ефекти.
Тази гъвкавост осигурява също така важни предимства при приготвяне на рецептурите и подаване на желания пептид до всеки даден вид. Тези промени могат също така да подобрят оралното приемане, както и метаболизма и отделянето на пептидите. Например Ala-His-D Nal-Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2 (Пептид, освобождаващ растежен хормон 1 = ПОРХ-1) е много по-ефективен от Ala-His-DTrp-Ala-Trp-DPheLys-NH2 по отношение способността за освобождаване на растежен хормон при хората. Обаче DAla-DPNal-Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2 (ПОРХ-2) е много по-ефективен от ПОРХ-1 (GHRP-1), когато се приема орално. На фигура 1 са показани нивата на растежен хормон в серум при нормални млади хора в зависимост от времето след приемането на 300 pg/kg ПОРХ1 от 40 субекта в графата вляво (о), 600 pg/ kg ПОРХ-1 от 39 субекта в графата в средата (А) и 100 pg/kg ПОРХ-2 от 11 субекта в графата вдясно (□). При тези изследвания ПОРХ е даден първо в 20 ml вода, последвано веднага от 100 ml вода на нормални младежи със средна възраст около 25 години. Кръвта е взета, както е записано на картата. Растежният хормон е измерен радиоимунологично.
Освен това се очаква поради това, че в тези пептиди ароматните странични вериги могат да бъдат елиминирани на определени позиции, където предварително са били смятани за необходими, и поради факта, че D-аминокиселинните остатъци би трябвало да бъдат биологично по-защитени от L-формата, че може да се използва по-добра защита и по-малко тегло при някои от пептидите, които по-нататък да бъдат използвани за скрояване на полипептида, за да се променят някои от свойствата им като тяхното назално, орално и трансдермално приемане, стабилността им in vivo и др.
Частите Rp R2, R3, R4 и Z могат също така да бъдат променяни, при което се създава допълнителен контрол върху физиологохимичните свойства на желаното съединение. В резултат на това може да се получи засилено подаване на пептид до специфичен рецептор и при специфични видове.
Предпочетените съединения, освобождаващи растежен хормон, използвани в практиката на представеното изобретение са:
Aj-A^Ala-Trp-DPhe-Aj, или органични или неорганични адитивни соли на някои полипептиди; където А2, А2 и А5 са както дефинираните по-горе.
В предпочитан вариант на изпълнение пептидът, освобождаващ растежен хормон, използван в практиката на представеното изобретение, има следната формула:
DAla-A2-Ala-Trp-DPhe-A5, и органичните му и неорганични адитивни соли. Предпочетени представители на тази група съединения имат формули:
DAla-DpNal-Ala-Trp-DPhe-LysNH2 DAla-DpNal-Ala-Trp-DPhe-Lys^-iPr(NH2) DAla-DTrp-Ala-Trp-DPhe-LysNH2
D Ala-DpNal-Ala-Trp-DPhe-NH (CH2) 5NH2 NH2(CH2)5CO-DpNal-Ala-Trp-DPheNH(CH2)5NH2, както и органичните им и неорганични адитивни соли.
Понастоящем тези съединения са найпредпочетени, защото полипептидите с по-къси вериги са по-евтини за синтез и специфичните съединения са показали, че са с по-висока степен при спомагането за повишаване на растежния хормон в серума.
Други предпочетени пептиди, освобождаващи растежен хормон, са с формула A^AjAla-Phe-DPhe-A5. Предпочетени представители на тази група съединения са тези, в които А( е Να-ΙΜΑ, α,γΑΒυ, DAla, His или a,yABU, A2 e DpNal или DPhe, a A5 e LysNH2, Arg-NH2, NHChe-NH2(1,4 Che-диамин) или Lys EA. Например:
N -IMA-DpNal-Ala-Phe-DPhe-LysNH2, a,yABU-DpNal-Ala-Phe-DPhe-LysNH2, DAla-DPhe-Ala-Phe-DPhe-LysNH2, Ala-His-DpNal-Ala-Phe-DPhe-LysNH2, N IMA-DpNal-Ala-Phe-DPhe-LysNH2, a,YABU-DpNal-Ala-Phe-DPhe-NH-Chxnh2,
DAla-DpNal-Ala-Phe-DPhe-Lys EA, a,YABU-DpNal-Ala-Phe-DPhe-LysNH2,
DAla-DpNal-Ala-Phe-DPhe-DArgNH2, както и органичните им и неорганични адитивни соли.
Друго изпълнение на изобретението включва полипептиди с формула: А1-А2-С1-С2Cj-A5, в която С, е Ala, С2 е Trp, Phe или CHxAla, С3 е DPhe или DChxAla, At е за предпочитане DAla. А2 е за предпочитане DpNal. Например:
DAla-D₽Nal-Ala-ChxAla-DPhe-LysNH2, DAla-D₽Nal-Ala-Phe-DChxAla-LysNH2, DAla-DpNal-Ala-ChxAla-DChxAla-LysNH2, както и органичните им и неорганични адитивни соли.
Съединенията, описани по-горе, са лесни за синтез, ефикасни при повишаване нивата на растежния хормон в серум и са желани за производство и приложение. За съединенията могат да се посочат и предимствата, че притежават физиолого-химични свойства, които са желателни за ефективно приемане на полипептидни съединения при голямо разнообразие от животински видове поради гъвкавостта им, получена от различните заместители на различните позиции на полипептидните съединения; чрез подбиране на полярна, неутрална или неполярна природа на С-крайната и централните части на тези полипептиди, така че да бъдат съвместими с желания метод за приемане при орално, назално и непрекъснато приемане, като се използват специални химични/механични начини на приемане.
Пептидите могат да бъдат използвани в терапията за всякакво приложение, при което може да се приложи растежен хормон като лечение на хипоталамусно-хипофизно недоразвитие (джуджета), остеопороза, изгаряния, при акутни носни заболявания, при счупване на костите и стимулиране заздравяването на рани. В допълнение те могат да бъдат използвани за стимулиране на възстановяване след операции и след акутни или хронични изтощаващи заболявания. Наблюдават се благоприятни анаболни ефекти върху кожата, мускулите и костите във връзка с процесите на стареене със значително понижаване на затлъстяването. Пептидите могат да се приемат и от пациенти, болни от рак, например за предпазване и/или намаляване на хроничното умствено изтощение. Тези терапевтични приложения са свързани с използването на терапевтично ефективно количество от пептида. Това е количеството, необходимо за да се стимулира in vivo повишаване нивото на растежния хормон.
Съединенията от това изобретение могат да се използват за повишаване на нивото на растежния хормон в кръвта на животни, за повишаване млеконадоя при крави, за повишаване на теглото при бозайници (например хора, овце, едър рогат добитък и свине), както и при риби, птици, други гръбначни и безгръбначни, както и за повишаване добива на вълна и/или кожи при бозайниците. Степента на растеж на тялото зависи от пола и възрастта на животинските видове, количеството и вида на освобождаващото растежния хормон съединение, което се поема, както и от начина на приемане и др. Също така съединенията съгласно изобретението повишават нивото на растежния хормон в серума при хората; увеличават нарастването на теглото при зле развити деца; понижават затлъстяването и подобряват метаболизма на протеините при подбрани деца, подобряват метаболизма на протеините на кожата, мускулите, костите, като същевременно понижават затлъстяването при по-възрастните, особено, когато е налице недостатък на растежен хормон.
Пептидите са също така полезни за подобряване картината на серумните липиди при хората чрез понижаване количеството на серумния холестерол и на липопротеина с ниска плътност и повишаване количеството на липопротеина с висока плътност в серума.
Новите полипептидни съединения съгласно изобретението могат да бъдат синтезирани по познати методи в пептидната химия в разтвор и твърда фаза или по класическите методи, известни в химията.
За пептидните амиди твърдофазният синтез е за предпочитане, като се започне от С-края на пептида. Например подходящ изходен материал може да се получи чрез свързване на желаната защитена α-аминокиселина към хлорметилирана смола, бензхидриламинна смола или пара-метилбензхидриламинна смола. Един вид такава смола се продава под търговската марка BIOBEADS SX-1, произведена от Bio Rad Laboratories, Richmond, щат Калифорния. Получаването на хидроксиметилова смола е описано от Bodansky et al., Chem. Ind. (London) 38, 1597 (1966). Бензхидриламинната смола е описана от Pietta and Marshall, Chem. Comm., 650 (1970) и е достъпна в търговията от фирмата Peninsula Laboratories, Inc., Belmont, Калифорния.
След първоначалното свързване α-аминозащитната група може да се отстрани чрез богат избор от киселинни реагенти, включващи разтвори на трифлуороцетна киселина или солна киселина в органични разтворители при стайна температура. След отстраняване на ааминозащитната група, останалите защитени аминокиселини могат да се свържат постепенно в желан порядък. Всяка защитена аминокиселина може да реагира в приблизително трикратен излишък, като се използва съответния активатор на карбоксилна група като дициклохексил-карбодиимид или диизопропил карбодиимид в разтвор, например на метиленхлорид (СН2С12) или диметилформамид (ДМФ) или в смес от тях.
След като е завършена желаната последователност от аминокиселини, желаният пептид може да бъде отцепен от бензилхидрил-аминната смола чрез обработка с реагент, например флуороводород (HF), който не само отцепва пептида от смолата, но също така отцепва найшироко използваните защитни групи на страничната верига. Когато се използва хлорометилова или хидроксиметилова смола, обработката с флуороводород води до образуването на свободна пептидна киселина. Обаче пептидните алкиламиди и естери могат да бъдат получени лесно от тези пептидни смоли чрез отцепване с подходящ алкиламин, диалкиламин или диаминоалкан или чрез трансестерификация с алкохол при високи стойности на pH на средата.
Процедурата твърдофазен синтез, разгледана по-горе, е добре известна в практиката и е описана от Steward and Young, Solid Phase Peptide Synthesis: Second Edition (Pierce Chemical Co., Rockford, IL 1984).
Някои от добре известните методи в разтвор, които могат да бъдат използвани за синтез на пептидните части от това изобретение, са дадени от Bodansky et al., Peptide Synthesis 2nd Edition, John Wiley and Sons, New York, N.Y. 1976.
Смята се, че ще бъде по-препоръчително, ако пептидите се синтезират по метода в разтвор, който включва кондензационна реакция на най-малко два пептидни фрагмента.
Този метод включва кондензиране на пептидния фрагмент X-A(-Y с пептидния фраг мент U-V-W, при което всички аминокисели странични вериги, с изключение на Aj са неутрални или защитени и където X е Prot., при което Prot. Означава защитна група на N-края; Y е A2-Q, Ala-A2-Q, Ala-A2-Ala-Q, А2Ala-Trp-Q, Ala-A2-Ala-Trp-Q, Ala-Q или -Q, където Y e Q, U e J-A2-Ala-Trp или J-AIa-A2Ala-Trp. Когато Y е Ala-Q, U e J-A2-Ala-Trp. Когато Y е Α,-Q или Ala-A2-Q, Ό e J-Ala-Trp. Когато Y e A2-Ala-Q или Ala-A2-A3-Q, U e JTrp. Когато Y e A2-Ala-Trp-Q или Ala-A2-AlaTrp-Q, UeJ, VeAj или Z. Когато VeA3, We Z. Когато V e Z, W липсва. Ap A2, А3 и Zea както дефинираните по-горе.
Q е карбоксикрая на пептден фрагмент и е -OR3 или -М, където М е частта, способна да бъде изместена от азотсъдържащ нуклеофил, и R3 е Н, алкилова група, съдържаща един до около 10 въглеродни атома, арилова група, притежаваща от 6 до около 12 въглеродни атома или арилалкилова група, притежаваща от 7 до около 12 въглеродни атома; J означава аминокрая на даден фрагмент и е Н или защитна група, която не пречи на свързващата реакция, например, бензил.
След което защитните групи се отстраняват.
Така полученият защитен пептид може да се използва за по-нататъшни кондензации, за да се получи по-голям пептид.
Този предпочетен метод е описан поподробно в U.S. Patent Application Serial Number 558,121, изпълнен на 24.07.1990 от John С. Hubbs и S.W.Parker, озаглавен “Process for Synthesizing Peptides” (Метод за синтез на пептиди), който е включен тук и е публикуван като W09201709.
Съгласно друго изпълнение на представеното изобретение по метода се стимулира освобождаването и/или повишаването на нивото на растежния хормон в кръвта на животно. Този метод за стимулиране освобождаването и/или повишаването нивото на растежния хормон може да бъде използван също така в терапията на споменатите заболявания. Посочените методи включват приемането от животните на ефективна доза от поне един от споменатите по-горе полипептиди. В едно от изпълненията този метод е използван при животни, а не при хора.
Съединенията от представеното изобретение могат да бъдат приемани орално, парен терално (като мускулна (i.m.), интраперитонеална (i.p.), венозна (i.v.) или подкожна (s.c.) инжекция); назално, вагинално, ректално или подезично, както и чрез белодробни инхалации, и могат да бъдат приготвени в такива дози и форми, които да отговарят на предпочетения начин на приемане.
Твърдите форми за орално приемане включват капсули, таблети, хапчета, прахове и гранули. В тези твърди форми активната съставка се смесва с най-малко един инертен носител като захароза, лактоза или скорбяла. Тези форми често включват, както е прието в нормалната практика, допълнителни субстанции освен инертните разредители, т.е. смазващи агенти като магнезиев стеарат. В капсули, таблети и хапчета могат да се включат също и буферни агенти. Таблетите и хапчетата могат да бъдат допълнително покрити за по-лесно приемане.
Течните форми за орално приемане включват емулсии, разтвори, суспензии, сиропи, еликсири, съдържащи широко използвани инертни разредители, например вода. Освен тези инертни разредители съставите могат да включват също така и други добавки като омокрящи агенти, емулгатори и суспендиращи агенти и подсладители, ароматизиращи и парфюмиращи агенти.
Препаратите съгласно представеното изобретение, предназначени за парентерално приемане, включват стерилни водни или неводни разтвори, суспензии или емулсии. Примери за неводни разтворители или носители са пропиленгликол, полиетиленгликол, растителни масла като маслиново или царевично масло, желатин и инжектируеми органични естери като етилолеат. Тези състави могат също така да съдържат и други добавки като консерванти, омокрящи, емулгиращи и диспергиращи агенти. Те могат да бъдат стерилизирани чрез филтруване през филтър, задържащ бактериите, чрез включване на стерилизиращи агенти в съставите или чрез нагряването им. Те могат да бъдат приготвяни непосредствено преди приложението им със стерилна вода или с някои други стерилни среди.
Новите съединения съгласно изобретението са също така полезни при комбинираното им приемане с хормон, освобождаващ растежен хормон (т.е. естествен хормон, осво бождаващ растежен хормон, както и неговите аналози и функционални еквиваленти), както и в комбинация с други съединения, които спомагат за освобождаването на растежен хормон, напр. пептиди, освобождаващи растежен хормон (виж US № 4880778), например инхибитори на ацетилхолинестераза, β-адренергични блокиращи агенти, а-адренергични блокиращи агенти и др. Тези комбинации представляват специално предпочитани средства за поемане на пептидите съгласно изобретението, освобождаващи растежен хормон, защото комбинацията спомага освобождаването на много повече растежен хормон, отколкото е предсказано от сумирането на индивидуалните отговори за всеки компонент от комбинацията, т.е. комбинацията осигурява синергичен отговор спрямо отделните компоненти. Повече подробности за приемането на комбинации от пептиди, освобождаващи растежен хормон, са описани в посочения патент. Такива синергисти са за предпочитане съединенията, които действат като агонисти върху рецептора на хормона, освобождаващ растежен хормон, или инхибират ефекта на соматостатина. Синергизмът може да бъде двоен, т.е. съединението на изобретението и едно от синергично действащите съединения, или да включва повече от едно синергично действащо съединение.
Комбинациите, които могат да предизвикат освобождаването и повишаването нивото на растежния хормон в кръвта на животински видове, каквито са хората, включват ефективно количество полипептиди, подбрани от заявените в представеното изобретение полипептиди и най-малко един от следните групи: полипептиди група 1 или съединение, което спомага за освобождаване на растежен хормон, т.е. група 2 полипептиди, като полипептидите от група 1 са подбрани от някои срещащи се в природата хормони, освобождаващи растежен хормон и функционалните му еквиваленти, при което споменатите полипептиди действат върху рецептора на хормона, освобождаващ растежен хормон при бозайниците и другите гръбначни и безгръбначни.
Полипептидите от група 2 са подбрани от някои от полипептидите със следната структура:
Tyr-DArg-Phe-NH2;
Tyr-DAIa-Phe-NH2;
Tyr-DArg (NO2)-Phe-NH21
Tyr-DMet (0)-Phe-NH2;
Tyr-DAIa-Phe-Gly-NH#
Tyr-DArg-Phe-Gly-NH2I
Tyr-DThr-Phe-Gly-NH^
Phe-DArg-Phe-Gly-NH2',
Tyr-DArg-Phe-Sar-NH2;
Tyr-DAIa-Gly-Phe-NH2;
Ty r-DArg-Gly-T rp-NH#
Tyr-DArg(NO2)-Phe-Gly-NH2;
Tyr-DMet (0)-Phe-Gly-NH2; (NMe)Tyr-DArg-Phe-Sar-NH2; T y r-DArg-Phe-Gly-ол;
Tyr-DArg-Gly-(NMe)Phe-NH2;
Tyr-DArg-Phe-Sar-ол;
T y r-DAIa-Phe-Sar-ол;
Tyr-DAIa-Phe-Gly-Tyr-NH2!
Tyr-DAIa-(NMe)Phe-Gly-Met(O)-QA;
Tyr-DArg-(NMe)Phe-Gly-Met(O)-OA;
Gly-Tyr-Darg-Phe-Gly-NH2;
Tyr-DThr-Gly-Phe-Thz-NH2;
Gly-Tyr-DAIa-Phe-Gly-NH2;
Ty r-DAIa-P he-Gly-ол;
Tyr-DAIa-Gly-(NMe)Phe-Gly-OA;
Tyr-DArg-Phe-Sar-NH2;
T y r-DAIa-P he-Sar-NH#
Tyr-DAIa-Gly-(NMe)Phe-NH2;
Sar-Tyr-DArg-Phe-Sar-NH2;
Tyr-DCys-Phe-Gly-DCys-NH2 (цикличен дисулфид);
Tyr-DCys-Phe-Gly-DCys-NH2 (свободен дитиол);
Tyr-DCys-Gly-Phe-DCys-NH2 (цикличен дисулфид); Tyr-DCys-Gly-Phe-DCys-NH2 (свободен дитиол);
Tyr-DAIa-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH2;
Tyr-DAIa-Phe-Sar-Tyr-Pro-Ser-NH2;
Т yr-DAIa-P he-Sar-Phe-Pro-Ser-NH2!
Tyr-DAIa-Phe-Gly-Tyr-Hyp-Ser-NH2;
Tyr-DAIa-Phe-Sar-Tyr-Hyp-Ser-NH#
Tyr-DAIa-Phe-Sar-Phe-Hyp-Ser-NH2;
Tyr-DArg-Phe-Gly-Tyr-Hyp-Ser-NH2;
Tyr-DArg-Phe-Sar-Tyr-Pro-Ser-NH#
Tyr-DArg-Phe-Sar-Tyr-Hyp-Ser-NH2; Tyr-DArg-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH# както и адитивните им соли с органични или неорганични киселини на полипептидите от група 2, при което комбинацията се приема в такова съотношение, че да бъде ефективно за получаването на синергичното освобождаване на растежен хормон, както и за повишаване нивото му в кръвта на съответния животински вид.
На специалистите в тази област са известни и други съединения, които спомагат за освобождаването на растежни хормони и те включват инхибитори на ацетилхолинестераза, β-адренергични блокиращи агенти и а2-адренергични блокиращи агонисти.
В един от предпочетените варианти за изпълнение се използват естествени хормони, освобождаващи растежния хормон, и техните функционални еквиваленти заедно със съединения, които спомагат за освобождаване на растежни хормони, заедно с представените пептиди. Например съединенията от група 1 и група 2 заедно с представените пептиди. Друг пример е съединенията от група 1 или β-адренергични блокиращи агенти заедно с представените пептиди.
Количеството на приетия полипептид или на комбинацията от полипептиди на представеното изобретение ще зависи от голям брой фактори, напр. желания терапевтичен ефект, пътя на приемане и какъв полипептид или комбинация от полипептиди ще се използва. Във всички случаи трябва да се поеме ефективна доза (терапевтично ефективно количество), предизвикващо освобождаването на растежен хормон или повишаването му в кръвта на приемащото животно. Обикновено тази доза се намира в диапазона между около 0,1 pg до 10 mg общо количество полипептид на килограм телесно тегло. Предпочетеното количество може да се определи лесно емпирично от специалистите в тази област на базата на представеното описание.
Например при хора и венозно приемане препоръчителната доза е в интервала от около 0,1 pg до 10 pg полипептид за kg телесно тегло, по-препоръчително - около 0,5 pg до 5 pg общо количество полипептид на kg телесно тегло и още по-препоръчително - около 0,7 pg до около 3,0 pg за kg телесно тегло. Когато се използва комбинация от пептиди, освобождаващи растежен хормон, могат да се използват по-малки количества от дадените в представеното описание пептиди. Например комбинирайки описаните тук пептиди с например синергично съединение от група 1 на US № 4880778, като например ПОРХ, препоръчителният дапазон е около 0,1 pg до около 5 pg от описаното тук съединение за kg телесно тегло и около 0,5 pg до около 15 pg синергично съединение (напр. ПОРХ) и по-препоръчително - около 0,1 pg до около 3 pg от представеното съединение с около 1,0 pg до около 3,0 pg от синергичното съединение за kg телесно тегло.
Когато пътят на приемане е орален, обикновено са необходими по-големи дози. Например при хора за орално приемане нивото на дозировката е типично около 30 pg до около 1200 pg полипептид за kg телесно тегло, попрепоръчително - около 70 pg до около 600 pg полипептид за kg телесно тегло и още по-препоръчително - около 200 pg до около 600 pg общо количество полипептид за kg телесно тегло. Кравите и прасетата изискват приблизително същите дози, както и хората, докато плъховете изискват по-високи дозировки. Точното количество може да се определи лесно емпирично на базата на представеното описание.
В общи линии, както беше посочено погоре, приемането на комбинация от пептиди, освобождаващи растежни хормони, позволява понижаване на дозировката на отделните съединения, които ще се използват, поради синергичния ефект на комбинацията.
Включени в представеното изобретение са също така и състави, включващи като активна съставка органични и неорганични адитивни соли на описаните полипептиди и техните комбинации, обикновено свързани с носител, разредител, свързващо вещество за бавно отделяне или покритие.
Органичните или неорганични адитивни соли на съединенията, освобождаващи растежен хормон или на комбинацията им, замислени като част от представеното изобретение, включват органични соли като ацетат, трифлуорацетат, оксалат, валерат, олеат, лаурат, бензоат, лактат, тозилат, цитрат, малеат, фумарат, сукцинат, тартарат, нафталат и др. и такива неорганични соли като солите на алкални и алкалоземни метали, амониеви и протаминови соли, цинк, желязо и други с противойоните им като хлорид, бромид, сулфат, фосфат и др., както и органичните части, посочени по-горе.
Когато съставите са предназначени за приемане от хора, за предпочитане са фармацевтично приемливи соли. Тези соли включват нетоксичен алкален метал, алкалоземен метал и амониеви соли, използвани широко във фармацевтичната практика, например натрий, калий, литий, калций, магнезий, барий, амониев хидроокис и др., които се получават по известни методи. Терминът включва също така нетоксични киселинни адитивни соли, които обикновено се получават при взаимодействието на съединенията от представеното изобретение с подходяща органична или неорганична киселина. Представители на тези соли включват хидрохлорид, хидробромид, сулфат, бисулфат, ацетат, оксалат, валерат, олеат, лаурат, борат, бензоат, лактат, фосфат, тозилат, цитрат, малеат, фумарат, сукцинат, тартарат, нафтилат и др.
Изобретението ще бъде илюстрирано понататък със следните примери, които не го ограничават.
Примери за изпълнение на изобретението
Пример 1.
Синтез на пептиди, освобождаващи растежен хормон
В реакционния съд на търговски достъпен пептиден синтезатор се поставя параметил-бензхидриламин-хидрохлоридна смола (рМе-BHA-HCl). Смолата се замества със свободен амин до натоварване от около 5 mmol за грам. Съединенията се получават чрез свързване на отделните аминокиселини, като се започне от С-края на пептидната последователност, като се използва подходящо активиращо средство, например Ν,Ν’-дициклохексилкарбодиимид (DCC). α-аминът на отделните аминокиселини се защитават като t-бутилоксикарбонилно производно (t-Boc), а реактивните функционални групи на страничната верига се защитават, както е показано на таблица 1.
Таблица 1.
Защитни групи на страничната верига, подходящи за твърдофазен синтез на пептиди
Аргинин: Ν9-ΤΟ3ΜΛ (толулолсулфонил)
Аспартатова киселина: О-бензил
Цистеин: S-пара-метилбензил
Глутаминова киселина: О-бензил
Хистидин: №т-тозил
Лизин: М^-2,4-дихлоробензилоксикарбонил
Метионин: S-сулфоксид
Серин: О-бензил
Треонин: О-бензил
Триптофан: №п-формил
Тирозин: 0-2,6-дихлоробензил
Преди включването на началната аминокиселина смолата се разбърква трикратно (около 1 min всяко разбъркване) с дихлорметан (СН2С12; около 10 ml/g смола), неутрализира се с три разбърквания (около 2 min всяко) с N.N’-диизопропилетиламин (DIEA) в дихлорметан (10:90; около 10 ml/g смола) и се разбърква трикратно (около 1 min всяко) с дихлорметан (около 10 ml/g смола). Началната и всяка следваща аминокиселина се свързва със смолата, като се използва предварително формиран симетричен анхидрид на подходящо защитена киселина, при използване около 6,0 пъти общото количество от реакционния капацитет на смолата и около 2,0 пъти тоталния свързващ капацитет на смолата на диизопропилкарбодиимид в подходящо количество дихлорметан. За аминокиселини с ниска разтворимост в дихлорметан се прибавя Ν,Ν’-диметилформамид за постигане на хомогенен разтвор. Симетричният анхидрид се приготвя до 30 min преди въвеждането му в реакционния съд при стайна или под стайна температура. Дициклохексилкарбамидът, който се получава по време на образуването на синтетичния 50 анхидрид, се отстранява чрез декантиране и филтруване на разтвора в реакционния съд.
Степента на свързване на аминокиселината със смолата обикновено се следи чрез цветна реакция, като се използва някакъв реагент, например нинхидрин (който реагира с първичните и 30 вторични амини). При завършване на свързването на защитената аминокиселина със смолата (> 99%), α-аминозащитната група се отстранява чрез обработка с киселинен реагент (и). Широкоизползваният реагент се състои 35 от разтвор на трифлуороцетна киселина в дихлорметан (33:66).
След като е завършена желаната последователност от аминокиселини, желаният пептид може да бъде отцепен от смолата-носител чрез 40 обработка с някакъв реагент, например флуороводород (HF), който не само отцепва пептида от смолата, но също отцепва и най-често използваните защитни групи на страничната верига. Когато е използвана ВНА или р-Ме45 ВНА смола, обработката с HF води директно до получаването на свободни пептидни амиди. Когато се работи по метода на Merrifield свободните пептидни алкиламиди се отцепват чрез обработка със съответен амин (в този случай използването на Boc-Ne-FMOC-Lys ще позволи едновременното отстраняване на групата FMOC).
Пълната процедура на включване на всеки отделен аминокиселинен остатък в смолата е показана на таблица 2.
Серумът се запазва замразен до деня на вземане на проба за радиоимунологичен анализ (РИА)
Таблица 2
Процедура на включване на отделните аминокиселини в смолата
Реагент Разбърквания
Време/Разбъркване
1. Дихлорметан 3 1 мин
2. TFA - Дихлорметан 1 2 мин
(33:66) 3. TFA - Дихлорметан 1 20 мин
(33:66)
4. Дихлорметан 3 1 мин
5. D1EA, DMF 2 2 мин
6. Дихлорметан 3 1 мин
7. Вос аминок-на/DIC 1 15-120 мин*
8. Дихлорметан 3 1 мин
10. Следене хода на реакцията**
11. Повторете етапи 1-12 за всяка отделна аминокиселина •Времето на свързване варира в зависимост от отделната аминокиселина **В общи линии степента на свързване може да се проследява с цветна реакция. Ако свързването не е завършило, същата киселина може да бъде свързана с друг реагент, напр. HOBt активен естер. Ако свързването е завършило, след това може да свърже следващата аминокиселина.
Като се използва тази процедура, бяха получени съединенията, описани в таблици 3, 4, 5 и 6.
Пример 2.
Освобождаване in vivo на растежен хормон при плъхове
Недоразвити женски плъхове SpragueDawley са получени от Charles River Laboratories (Wilmington, МА). След пристигането те бяха хоспитализирани при 250С с цикъл светло:тъмно 14:10 h. Вода и храна за плъхове Пурина по лучават в изобилие. Малките са държани при майките им до 21 ден.
26-дневни плъхове, по 6 за всяка група, са анестезирани интерперитониално с 50 mg/ kg пентобарбитал 20 min преди венозната обработка с пептид. Нормален физиологичен разтвор с 0,1 % желатин е носителят за венозните инжекции на пептидите. Анестезираните плъхове, тежащи 55-65 g се инжектират венозно с определено количество от съединенията, освобождаващи растежен хормон, както е дадено в таблица 3. Инжектира се 0,1 ml разтвор от югуларната (шийна) вена.
Всички животни се умъртвяват чрез обезглавяване 10 min след последната инжекция (таблица 3). След обезглавяването се събира артериалната кръв за определяне на нивото на растежния хормон. След като се остави кръвта да се съсири, тя се центрофугира и серумът се отделя от съсирената част.
на нивото на растежния хормон съгласно дадената по-долу процедура, разработена от Националния институт по артрит, диабет и заболявания на храносмилателната система и бъбреците (NIADDK).
Реагентите обикновено се поставят в епруветките за РИА анализ при температура около 40С в следната последователност:
(а) буфер, (б) “студен” (т.е. нерадиоактивен) стандарт или неизвестен серум, който ще се анализира, (в) радио-йодиран антиген на растежен хормон и (г) антисерум на растежен хормон.
Прибавянето на реагентите се извършва така, че да се получи крайно разреждане в РИА епруветката около 1:30 000 (антисерум към общия обем течност; обем:обем). След това смесените реагенти се инкубират при стайна температура (около 25Ό в продължение на 24 h преди прибавянето на второ антитяло (напр. кози или заешки анти-маймунски гама глобулинов серум), който се свързва и предизвиква утаяване на свързания в комплекс антисерум на растежния хормон. Утаените съдържания на епруветките от РИА след това се анализират за броя на импулсите за определен период от време в γ-сцинтилационен брояч. Приготвя се стандартна крива чрез нанасяне на броя на радиоактивните импулси спрямо нивото на растежния хормон. След това нивата на растежния хормон в неизвестните проби се определят чрез сравняване със стандартната крива.
Серумният растежен хормон се измерва чрез РИА с реагенти, доставени от Националната програма по хормони и хипофиза.
Серумните нива в таблица 3 са дадени в ng/ml, преизчислени за стандарт растежен хормон при плъх 0,61 международни единици/ mg (IU/mg). Данните са дадени като средни +/- средна стандартна грешка. Статистическият анализ е направен със студентски t-тест. В таблица 3 са дадени средните изследвания от шест плъха.
В таблица 3 съединенията от изобретението са сравнени със съединения, които са извън представената обща формула и е показано, че стимулират освобождаването на растежен хормон и повишават съдържанието му в кръвта на плъхове, на които тези съединения са дадени по гореописания начин. Изненадващата активност за отделяне на растежен хормон от предпочетените съединения е с твърде висока стойност, тъй като полипептиди с покъса верига и с по-ниско молекулно тегло, със сравнително устойчивата и евтина аминокиселина D-аланин в амино-края и пентандиамин вместо Lys в С-края доказват, че са по-евтини средства за повишаване нивото на растежния хормон при животните и човека.
Пример 3.
Освобождаване in vivo на растежен хормон при плъхове след орално приемане
Повторена е процедурата от пример 2, с изключение на това, че на плъховете са дадени посочените дози от съединенията чрез стомашни сонди. Приетите съединения, използваните дози и резултатите са дадени в таблица 4.
Съединенията от изобретението запазват полезно ниво на активността за освобождаване на растежен хормон, както е показано при орално приемане от плъхове. Това е от значение, тъй като терапевтичната полза от пептидите се засилва по този начин на прилагане.
Таблица 3
Освобождаване на РХ in vivo, стимулирано от съединения, освобождаващи растежен хормон в плъхове, анестезирани с пентобарбитал (животните са умъртвени 10 min след последната инжекция, брой на опитите = 6)
Пептид, осв. РХ Обща доза“ Контрол РХ освободен
(pg/eeH.) серум PX ng/ml серумен PX ng/ml
± SEM (Ν = 6) ± SEM (N = 6)
Ala-His · D/3Nal · . 1 337 + 51 610 + 90
Al a-Trp-DPhe-Lys·ΝΗ2 .3 337 + 51 1140 + 187
1.0 337 + 51 2909 + 257
3.0 337 + 51 3686 ± 436
His-DTrp-Ala-Trp- . 1 131 + 43 540 + 148
DPhe-Lys-NH2 .3 131 + 43 751 + 88
1.0 131 + 43 1790 + 252
3.0 131 + 43 2481 ± 209
DAla-D/JNal-Ala- . 1 337 + 51 · 1381 t 222
Trp·DPhe-Lys-NH2 .3 337 + 51 2831 ± 304 ,
1.0 337 + 51 2886 + 179
3.0 337 + 51 3678 + 287
Ala -D0NalAla ·
Trp·DPhe·Lys-NH2 0.3 167 + 46 363 + 73
1.0 167 + 46 1450 + 294
3.0 167 + 46 2072 ± 208
10.0 167 + 46 2698 + 369
DAla-L0Nal-Ala·
Trp-DPhe - Lys-ΝΗζ) .1 263 ± 45
.3 160 ± 151 315 + 85
1.0 160 + 151 426 ± 41
DAla-DTrp-Ala-Trp
DPhe·Lys-NH2 .1 111 ± 24 526 ± 86
.3 111 + 24 1608 + 204
1.0 111 ± 24 2820 + 346
3.0 111 + 24 2437 ± 214
Ala-D^Nal-Ala-
NMeTrp-DPhe·Lys-NH2 .1 167 + 46 144 + 20
0.3 167 + 46 258 + 28
1.0 167 + 46 261 + 24
3.0 167 + 46 277 + 85
Таблица 3 (продължение)
D - Leu - D/3Na 1
Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2 .1 160 + 51 256 ± 94
.3 160 ± 51 452 + 49
1.0 160 ± 51 355 ± 94
D-Trp·D^Nal-Ala- Trp-DPhe-Lys-NH2 . 1 160 + 51 226 + 61
.3 160 + 51 245 + 27
1.0 160 ± 51 437 + 62
Ala-His-D0Nal-Ala- Trp-DPhe-Lys-NH2 b .3 160 + 51 1418 + 302
1.0 160 + 51 ' 2201 + 269
His-DTrp-Ala-Trp DPhe-Lys-NH2 b .1 140 + 10 200 + 40
.3 140 + 10 505 + 50
1.0 140 ± 10 1640 + 215
DAsn-D0Nal-Ala- Trp-DPhe-Lys-NH2 .1 228 + 23 122 ± 38
.3 228 + 23 195 + 21
1.0 228 + 23 197 + 47
DHis-D^Nal-Ala- Trp-DPhe-Lys-NH2 .1 228 + 23 386 + 81
.3 228 + 23 605 + 82
1.0 228 + 23 930 + 96
DLys-D^Nal-Ala- Trp-DPhe-Lys-NH2 . 1 228 + 23 262 ± 31
.3 228 ± 23 340 + 86
1.0 228 + 23 335 + 56
DSerD0Nal-Ala· Trp-DPhe-Lys-NH2 . 1 228 + 23 226 + 11
.3 228 + 23 171 + 48
1.0 228 ± 23 212 ± 43
Ala-His-D^Nal-Ala- Trp-DPhe-Lys-NH2 b .3 228 + 23 1746 + 318
1.0 228 + 23 2610 ± 176
Таблица 3 (продължение)
Gly-D0Nal-Ala-Trp- DPhe-Lys-NH2 .3 1.0 3.0 10.0 160 + 36 160 + 36 160 + 36 160 ± 36
1237 + 249
2325 + 46
2694 + 370
3454 + 159
Ser-D^Nal-Ala- Trp-DPhe-Lys-NH2 .3 160 + 36 227 + 39
1.0 160 ± 36 . 595 + 112
3.0 160 + 36 1303 + 281
10.0 160 + 36 2919 + 320
Mec-D^Nal-AlaTrp·DPhe-Lys-NH2 .3 160 + 36 181 + 48
1.0 160 + 36 226 + 58
3.0 160 + 36 316 + 66
10.0 160 ± 36 1010 + 236
Ala-His-D/SNal-AlaТгр-DPhe-Lys-NH2b 0.1 160 + 36 822 + 243
0.3 160 + 36 1594 + 292
1.0 160 + 36 2180 ± 284
Gln-D0Nal-Ala·Trp· DPhe-Lys-NH, 0.3 131 + 43 124 + 15
1.0 131 + 43 340 ± 66
3.0 131 + 43 476 + 109
10.0 131 + 43 673 ± 228
Pro-D^Nal-Ala-Trp· DPhe-Lys-NH2 0.3 135 + 32 264 + 31
1.0 135 + 32 513 + 123
3.0 135 + 32 1690 + 103
Gly-D0Nal-Ala-Trp- DPhe-Lys-NH2 0.3 215 + 33 1301 ± 260
1.0 215 i 33 2211 + 146
3.0 215 + 33 2364 + 365
NaAcecyl-Gly· D^Nal-Ala-Trp-DPhe- Lys-NH2 ' 0.3 262 + 53* 268 + 21*
1.0 262 + 53 599 + 219
3.0 262 + 53* 626 ± 210*
Таблица 3 (продължение)
Ava'“ -D/3Nal -Ala ·
Trp-DPhe-Lvs-NHj
0.3 135 +32
1.0 135 ±32
3.0 135 +32
2469 ± 185
4034 + 680
3142 ± 392
Ala-D0Nal-Ala-TrpDPhe-NHCH2CH2NH2
0.3 208 + 148* 211 27
1.0 208 + 148* 468 + 127
3.0 208 + 148* 877 + 325
30.0 208 + 148* 2325 + 477
Ala-D0Nal-Ala-Trp-DPhenhch2ch2ch2ch2ch2nh2
0.3
1.0
3.0 30;0
208 + 148
208 ± 148*
208 + 148*
208 + 148*
284 ± 132*
527 + 166
816 ± 289* 3650 ± 772*
D-Ala-D^Nal-Ala-Trp-DPhe-
nhch2ch2ch2ch2ch2nh2
0.3 111 ± 24 180 + 37
1.0 111 + 24 686 + 135
3.0 111 ± 24 1490 ± 179
10.0 111 + 24 2248 + 70
Ala-DflNal-Ala-Trp-
DPhe-OMe 0.3 208 ± 148 211 + 48
1.0 3.0 208 + 148* 208 + 148* 157 + 35* 492 + 147*
30.0 208 + 148* 554 + 127*
D-Ala-DTrp-Ala- Trp-0Phe-Lys-NH2 0.1 111 + 24 526 ± 86
0.3 111 + 24 1608 + 204
1.0 111 ± 24 2820 + 346
3.0 111 ± 24 2437 + 214
Alb-D0Nal-Ala-Trp-
DPhe-Lys-NH2 0.1 208 + 148 26r + 58
0.3 208 + 148* 331 + 108
1.0 208 + 148* 368 + 133*
3.0 208 + 148* 1090 ± 176*
D-Ala-Dj3Nal - Ala -Trp- •OPhe- •
Lys(LPr)-NH2 0. 1 215 + 49 608 ± 115
0.3 215 + 49 1753 ± 419
1.0 215 ± 49 1817 ± 297
3.0 215 ± 49 2336 ± 196
♦Разтворен в диметилсулфоксид, **Разтворен в аминовалерианова киселина (Ava) а Така посочените дози са приети от 29-дневни женски плъхове b Контролни ОРХП
Таблица 4
Освобождаване на РХ in vivo, стимулирано от съединения, освобождаващи растежен хормон в плъхове, анестезирани с пентобарбитал (Плъховете са умъртвени в различни времена след последното поглъщане на пептида)
Пептид, осв. РХ Ala - His - D/JNal · Ala · Trp-DPhe-Lys-NH2 a Обща доза mg/kg 10 30 Серумен PX ng/ml ± SEM (N = 6) 247 + 32 247 + 32 Серумен PX ng/ml ± SEM 6 жив. на 15’ 20' 30' 786 + 244 1914 + 294
DAla-DjSNa-l-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 10* 247 + 32 116 + 298
30 247 + 32 2038 + 444
Ava-D^Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 30 322 +145* 2135 + 586*
Gly-D^Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 30 247 + 32 1072 + 137
His-DTrp-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 a 30 247 + 32 1810 + 437
Ala-His-D0Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 a 10 196 + 49(15’) 1421 + 363
147 + 30(20) 1605 + 621 (20’)
133 + 18(30’) 752 + 81 (30’)
DAla-D0Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NHj 10 196 + 49(15') 706 + 133 (15’)
147 + 30(20’) 1062 + 254 (20’)
Gly-DjSNal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 10 196 + 49(15’) 957 + 188 (15’)
147 + 30(20’) 1685 + 524 (20’)
His·DTrp-Ala-
Trp-DPhe-Lysa 10 196 + 49(15') 1131 + 189 (15’)
147 + 30(20’) 686 + 149 (20’)
0Ala-D0Nal-Ala
Trp-DPhe-Lys-NH2 10 196 + 49(15’) 1202 + 429 (15’)
147 + 30(20’) 1217 + 239 (20’)
Ava-D£Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 10 196 + 49(15’) 1407 + 204 (15’)
147 + 30(20’) 1251 + 351 (20’)
* Прибавена суспензия (лека* или тежка**)-оцетна киселина а Контролни пептиди
Таблица 5
Освобождаване на РХ in vivo на РХ, стимулирано от синтетични пептиди, освобождаващи растежен хормон в плъхове, анестезирани с пентобарбитал (Животните са умъртвени 10 min след последната инжекция)
Пептид, осв. РХ
Обща доза mg/kg ± SEM 6 жив. на
15' 20’ 30'
Серумен РХ ng/ml Серумен РХ ng/ml ± SEM (N = 6)
DAla-D^Nal· 0.30 216 + 27 340 + 38
Ala-Trp-DPhe-NH2 1.00 216 + 27 1205 ± 335
3.00 216 i 27 1703 + 182
10.00 216 + 27 2741 + 484
DAla-D0Nal-Ala*Trp-
DPhe-Ala-NH2 0.30 216 + 27 611 + 68
1.00 216 + 27 929 + 209
3.00 216 + 27 1765 + 320
10.00 216 + 27 2644 + 358
Lys-DAla-D4Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 0.10 216 + 27 216 ± 40
0.30 216 + 27 269 + 31
1.00 216 + 27 432 + 143
3.00 216 + 27 771 + 134
DAla-D/JNal-Ala-
Trp-DPhe-NH-Chx-NH2 0.03 216 ± 27 517 + 135
0.10 216 + 27 1078 + 174
0.30 216 + 27 1831 ± 436
1.00 216 + 27 3120 + 761
DAla-D0Nal-Ala-
Trp-DAla-Lys-NH2 0.10 187 + 36 220 ± 34
0.30 187 + 36 167 + 48
1.00 187 ± 36 339 + 61
3.00 187 + 36 778 ± 174
10.00 187 ± 36 1676 ± 470
30.00 187 + 36 1791 ± 384
DAla-D^Nal-Ala- 0.03 153 + 27 409 + 97
Trp-DPhe-LysNH2 0.10 153 + 27 1469 + 152
0.30 153 + 27 2322 + 265
1.00 153 + 27 2765 ± 352
DAla-D0Nal-Ala-
Trp-DPhe-Ala· 98
NH(CH2)5NH2 0.03 177 + 45 542 +
0.10 177 + 45 932 + 84
0.30 177 + 45 1121 + 212
1.00 177 ± 45 2599 + 144
Таблица 5 (продължение)
NalMA-DjSNal-Ala-
Trp-DPhe-LysNH2 0.03 192 + 61 696 + 108
0.10 192 + 41 1049 + 198
0.30 192 + 41 2567 + 419
1.00 192 + 41 2001 + 341
DAla-D^Nal-Ala-Trp-
DPhe-NH-Chx-NH2 0.10 192 + 41 846 + 105
0.30 192 + 41 1886 + 493
1.00 192 + 41 2209 + 187
3.00 192 + 41 3359 + 433
DAla-Tcc-Ala-Trp-
DPhe-Lys-NH2 0.30 93 + 22 149 + 20
3.00 93 + 22 142 + 35
DAla-Gly-Gly-Trp-DPhe-
Lys-NH2 0.30 93 + 22 107 + 14
3.00 93 + 22 89 + 15
DAla-D^Nal-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 0.03 93 + 22 230 + 23
0.10 93 + 22 1006 + 204
0.30 93 + 22 2110 + 260
1.00 93 + 22 1825 + 328
DAla-D0Nal-Ala-Trp-
DTic-Lys-NHn 0.03 93 + 22 141 + 26
0.10 93 + 22 156 + 62
0.30 93 + 22 124 + 31
1.00 93 + 22 151 + 24
DAla-Dj9Nal -Ala-
Trp-DPhe-Lys-OH 0.10 93 + 22 558 + 162
0.30 93 + 22 1730 + 306
DAla*D0Nal-Ala-
Tcc-DPhe-Lys-NH2 3.00 145 + 17 537 + 43
10.00 L45 + 17 746 + 92
DfiNal-Gly-Gly-Trp-
DPhe-Lys-NH, 3.00 145 + 17 417 + 37
10.00 145 + 17 397 + 114
Таблица 5 (продължение)
DAla-D^Nal-Ala-Trp-
DPal-Lys-NH2 0.10 0.30 145 + 17 145 + 17 365 ± 42 584 + 148
DA la - DjSNal - Ala-Trp-
DPal-Lys-OH 0.10 145 + 17 928 + 184
0.30 145 ± 17 1782 + 241
3Me-His-D/3Nal-ALa-Trp-
DPhe-Lys-NH2 0.03 87 + 11 122 + 11
0.10 87 + 11 185 + 27
.. 0.30 87 + 11 101 + 12
0.10 87 ± 11 112 ± 13
3Me-His - D/JNal - Ala-Trp-
DPhe-Lys-NH2 0.03 87 + 11 134 + 28
0.10 87 + 11 159 ± 30
0.30 87 + 11 78 ± 19
1.00 87 + 11 134 + . 27
Tip - Ala -D0Nal-Ala-Trp· DPhe-Lys-NH2 0.10 87 ± 11 168 + 27
0.30 87 + 11 167 + 28
1.00 87 + 11 152 ± 74
3.00 87 + 11 272 + 63
DAla-D/JNal-Ala-Trp-
DPhe-Lys-NH2 0.03 247 + 53 870 + 136
0.10 247 + 53 1440 ± 267
0.30 247 + 53 2420 + 456
1.00 247 + 53 2855 + 347
3.00 247 + 53 3421 ± 377
DAla-DTcc-Ala-Trp-
DPhe-Lys-NH2 0.10 247 + 53 165 ± 26
0.30 247 + 53 183 + 9
1.00 247 + 53 207 ± 38
3.00 247 + 53 153 + 22
10.00 247 + 53 269 ± 47
Ava-Trp-DTrp-Lys-NH2 0.10 247 + 53 153 ± 30
0.30 247 + 53 144 + 14
1.00 247 + 53 117 + 9
3.00 247 + 53 205 + 59
10.00 247 ± 53 214 + 48
Таблица 5 (продължение)
DAla-D/9Nal-Ala-Trp-
DPal-Lys-NH2 0.03 228 + 68 203 + 20
0.10 228 + 48 772 + 142
0.30 228 + 48 979 + 182
1.00 228 + 48 1691 + 139
3.00 228 + 48 3249 + 526
Tyr -DAla-DjSNal-Ala-Trp-
DPhe·Lys-NHj 0.03 228 + 48 164 + 52
0.10 228 ± 48 247 + 51
0.30 228 + 48 196 + 39
1.00 228 ± 48 329 + 57
3.00 228 + 48 878 + 170
Ala-His-D0Nal-Ala-Trp- .
DPhe-Lys-NHj 0.10 228 + 48 894 + 112
0.30 228 ± 48 1128 + 274
1.00 228 + 48 1362 + 198
DAla-D^Nal-Ala-Trp-
DPhe-Lys-OH 0.03 228 + 48 300 + 82
0.10 228 + 48 585 + 141
0.30 228 + 48 1202 + 236
1.00 228 + 48 t 2610 + 355
DAla-D^Nal-Ala-Trp-
NMe-DPhe-Lys-NH2 0.03 167 + 29 123 + 17
0.10 167 + 29 132 + 30
0.30 167 + 29 232 ± 49
1.00 167 + 29 233 + 41
His-Trp-Ala-Trp·Phe-
Lys-NH, 1.00 167 + 29 125 + 24
3.00 167 ± 29 201 + 19
10.00 167 + 29 130 + 25
30.00 167 + 29 182 + 36
Ava-DAla-D^Nal-
Al a-Trp-DPhe-Lys -N^ 0.03 167 + 29 209 + 33
0.10 167 + 29 144 + 42
0.30 167 + .29 185 + 47
1.00 167 + 29 499 + 110
Таблица 5 (продължение) /JAla-DflNal-
Ala·Trp-DPhe-Lys-NHj 0.03 0.10 0.30 1.00 167 i 29 167 + 29 167 + 29 167 + 29 489 ± 71 1112 ± 194 1993 ± 259 3061 + 238
DAla-D^Nal-Gly-Trp-
DPhe-Lys-NH2 0.10 121 + U 226 + 26
0.30 121 + 14 170 ± 31
1.00 121 + 14 414 + 101
3.00 121 + 14 713 + 126
DAla-D0Nal-Gly-Gly-
Trp-DPhe-Lys-NH2 0.10 121 + 14 95 + 15
0.30 121 + 14 ' 82 + 16
1.00 121 + 14 177 + 43
3.00 121 + 14 223 + 58
Asp-DAla-D^Nal-Ala-
Trp’DPhe-Lys-NH2 0.03 121 + 14 210 + 53
0.10 121 + 14 322 + 48
0.30 121 ± 14 557 + 181
1.00 121 + 14 821 + 173
DAla- D/JNal-Ala-Trp- DPhe-NH-Chx-NH2 0.03 121 + 14 335 + 106
0.10 121 + 14 652 + 129
0.30 121 + 14 1528 + 252
1.00 121 + 14 2410 + 370
DAla-D^Nal-DAla-Trp-
DPhe-Lys-NH2 0.10 200 + 45 166 + 36
0.30 200 ± 45 197 + 33
1.00 200 + 45 343 + 73
3.00 200 ± 45 531 ± 121
DAla-D^Nal-Ala-Ala-
Trp-DPhe-Lys-NH2 0.10 200 + 45 147 + 21
0.30 200 + 45 184 + 45
1.00 200 + 45 206 + 66
3.00 200 + .45 143 + 9
Таблица 5 (продължение)
DAla-D5Nal-Ala-Trp-
DPhe-NH-Chx-NH, 0.10 200 ± 45 1246 + 189
0.30 200 ± 45 1616 + 250
1.00 200 ± 45 2574 + 467
3,00 200+ 45 2789 + 130
DAla-D^Nal-Ala- 0.03 200 + 45 608 + 140
Trp·DPhe-Lys-NI^ 0.30 200 ± 45 920 + 225
1.00 200 + 45 1755 + 291
3.00 200 + 45 2527 + 196
DAla·D0Nal-Ala-Trp-
Pro-Lys-Nl·^ 0.03 157 + 40 113 + 14
1.00 157 + 40 136 + 40
3.00 157 + 40 195 + 35
10.00 157 + 40 226 + 42
DAla-D0Nal-Ala-Trp- >
DPro-Lys-NHj 0.30 157 ± 40 234 + 36
1.00 157 + 40 358 + 48
3.00, 157 + 40 576 + 77
10.00 157 + 40 1624 + 241
DAla-D0Nal-Ala-Trp-
DLeu-Lys-NHj 0.30 157 + 40 202 + 27
1.00 157 + 40 ' 165 ± 12
3.00 157 + 40 307 + 51
10.00 157 + 40 1591 + 568
Ava-D0Nal-Ala-Trp-
DPhe-Lys-NH, 0.03 157 + 40 768 + 191
0.10 157 + 40 1277 + 61
0.30 157 ± 40 1733 + 254
1.00 157 + 40 2418 + 162
Таблица 6
Освобождаване на РХ in vivo на РХ, стимулирано от синтетични пептиди, освобождаващи растежен хормон в плъхове, анестезирани с пентобарбитал (Животните са умъртвени 10 min след последната инжекция)
Пептид, осв. РХ Обща доза Серумен PX ng/ml Серумен PX ng/ml
mg/kg ± SEM (N = 6) ± SEM 6 жив. на
15' 20' 30'
DAla-D0Nal-Ala- 0.03 186. £ 34 412 £ 84
2rp-DPhe-iLysNH2 0.10 186 £ 34 630 £ 124
0.30 186 £ 34 1877 £ 195
1.00 186 £ 34 3008 £ 417
DAla-D0Nal-Ala-homo
Phe-DPhe·LysNHj 0.03 93 ± 13 214 £ 71
0.10 93 £ 13 214 £ 58
0.30 93 + 13 406 £ 121
1.00 93 £ 13 1189 £ 120
DAla -D0Nal-Ala-Trp·
DPhe-Ala -1,3 -
diaminopropane 0.03 93 £ 13 444 £ 60
0.10 93 £ 13 517 £ 109
0.30 ’ 93 £ 13 2341 £ 479
1.00 93 £ 13 2468 £ 276
DAla-D5NaL-Ala-Trp·
DPhe-LysNH2 0.03 93 £ 13 362 £ 64
0.10 93 + 13 800 £ 192
0.30 93 £ 13, 2674 £ 486
• 1.00 93 £ 13 3658 £ 610
DAla-D^Nal-Ala-Trp-
DPhe-Ala -1,6, 0.03 85 £ 16 395 £ 91
hexyldiamine 0.10 85 + 16 905 £ 113
0.30 85 £ 16 735 £ 166
1.00 85 £ 16 2708 £ 310
IMA-D0Nal-Ala-Trp·
DPhe-Ala-1,3, 0.03 85 £ 16 566 £ 157
dlamlnopropane 0.10 85 £ 16 645 £ 167
0.30 85 + 16 1428 £ 271
1.00 85 £ 16 2972 + 365
DAla-D0Nal-Ala-Trp-
DPhe-ArgNH2 0.03 125 £ 12 252 £ 29
0.10 125 £ 12 645 £ 90
0.30 125 £ 12 1180 £ 318
1.00 125 £ 12 2197 £ 285
Таблица 6 (продължение)
Arg:DAla-DflNal-Ala-Trp-
DPhe-ArgNH2 0.10 125 ± 12 155 + 43
0.30 125 + 12 247 + 70
1.00 125 + 12 276 + 16
IMA-D0Nal-Ala-Trp-
DPhe-Ala-1,6 0.03 125 + 12 332 + 59
hexyldlamine 0.10 125 + 12 609 + 165
0.30 125 + 12 1139 + 232
1.00 125 + 12 1996 + 372
DA1a -D0Na1·Ala -Trp-
LysNH2 0.30 160 + 33 187 + 44
1.00 160 + 33 257 + 18
3.00 160 + 33 .198 + 31
10.00 160 + 33 193 + 33
30.00 160 ± 33 236 + 23
DAla-D^Nal-Ala-
TrpNH2 0.30 160 + 33 115 + 22
1.00 160 + 33 107 + 23
3.00 160 ± 33 101 + 13
10.00 160 + 33 199 + 40
• 30.00 160 + 33 232 + 69
DAla -DdNal-Ala-Trp·
DPhe-Ala-NH(CH9)e
nh2 0.03 160 ± 33 517 + 89
0.10 160 + 33 1164 + 255
0.30 160 + 33 2023 + 242
1.00 160 ± 33 3441 + 435
DAIa-D0Nal- Ala-Trp
Pro-LysNHn 0.30 157 + 40 113 + 14
1.00 157 + 40 136 + 40
3.00 157 + 40 195 + 35
10.00 157 + 40 226 ± 42
DAla-D^Nal-Ala-
Trp-DPro-LysNH2 0.30 157 + 40 2*4 + 36
1.00 157 + 40 3^3 + 48
3.00 157 + 40 576 + 77
10.00 157 + 40 1624 + 241
Таблица 6 (продължение)
DAla·DtfNal-Ala-Trp·
DLeu-LysNH, 0.30 157 + 60 157 ± 40 157 + 60 157+ 60 202 + 27 165 ± 12 307 ± 51 1591 + 568
1.00 3.00 10.00
Ava-D^Nal-Ala-Trp
DPhe-LysNH2 0.03 157 + 40 768 + 191
0.10 157 + 40 1277 + 61
0.30 157 + 40 1733 + 254
1.00 157 ± 40 2418 + 162
α,tABU-D0Nal·Ala
Trp-DPhe·LysNH2 0.03 108 + 20 621 * 85
0.10 108 + 20 1230 ± 317
0.30 108 + 20 2385 + 182
1.00 108 ± 20 3011 + 380
DAla-D^Nal-Ala-Trp· DPhe-HisNH2 0.03 108 + 20 246 + 22
0.10 108 + 20 199 + 34
0.30 108 + 20 370 ± 67
• 1.00 108 + 20 1419 + 230
DAla-D^Nal-Ala-Phe·
DPhe-LysNH2 0.03 108 ± 20 366 + 81
0.10 108 + 20 1011 + 175
0.30 108 ± 20 2361 + 233
1.00 108 + 20 3057 + 472
DAla-D^Nal-Ala-Trp-
NH-Chx-NH0 0.10 108 + 20 151 + 35
0.30 108 + 20 251 + 43
1.00 108 + 20 227 + 55
3.00 108 + 20 349 ± 72
DAla-D^Nal-Ala-Trp·
DPhe-OrnNH, 0.03 200 + 33 515 ± 92
0.10 200 ± 33 787 + 71
0.30 200 + 33 1288 + 365
1.00 200 + 33 1888 + 615
DAla·D^Nal·Ala-Trp· DHis·LysNH7 0.03 200 + 33 287 + 48
0.10 200 ± 33 131 + 37
0.30 200 ± 33 337 ± 78
1.00 200 + 33 457 + 124
Пример 4.
Освобождаване In Vivo на растежен хормон при плъхове
Повтаря се процедурата от пример 2. Приетите съединения, използваните дози и постигнатите резултати са дадени в таблици 5 и 6.
Таблици 5 и 6 показват, че съединенията, отговарящи на представената формула, стимулират отделянето на растежен хормон и повишаване нивото му в кръвта в по-голяма степен от съединенията, не принадлежащи на тази формула.
Пример 5.
Освобождаване In Vivo на растежен хормон при хора
Нормални човешки субекти, мъжки, със средна възраст около 25 години, приемат пептида Ala-His-D Nal-Ala-Trp-DPhe-Lys-NH2 (пептид, освобождаващ растежен хормон I (ПОРХ1) или пептида DAla-D Nal-Ala-Trp-DPhe-LysNH 2 (ПОРХ-2) орално. 40 субекта получават
300 pg/kg ПОРХ-1 в 20 ml вода, последвано от 100 ml чиста вода, 39 субекта получават 600 pg/kg ПОРХ-1 в 20 ml вода, последвано от 100 ml вода, и 11 субекта получават 100 5 pg/kg ПОРХ-2 в 20 ml вода, последвано от 100 ml вода. На определени интервали се взема кръв, както е показано на фиг.1, и се измерва радиоимунологично за нивата на растежния хормон по процедурата, описана в пример 2. 10 Резултатите са дадени на фиг.1. Оралното приемане на 100 pg/kg ПОРХ-2 дава по-високи нива на растежния хормон от оралното приемане на 300 pg/kg ПОРХ-1.
Пример 6.
Освобождаване In Vivo на растежен хормон при плъхове
Приложена е общата процедура от пример 2, с изключение на това, че пептидите са инжектирани подкожно, а не венозно и времето 20 на умъртвяване е + 15 min, а не + 10 min. Приетите съединения, дозировката им и резултатите са дадени в таблица 7.
Таблица 7
Пептид, осв. РХ
Обща доза mg/kg
Серумен РХ ng/ml ± SEM (N = 6)
Серумен РХ ng/ml ± SEM 6 жив. на 15' 20' 30'
IMA-DjSNal Ά1β·
Phe-DPhe-Lys·ΝΗ2 .03 167 + 21 181 + 36
, 10 147 ± 21 399 + 40
.30 167 i 21 808 + 187
1.00 167 ± 21 2396 + 475
α-yABU-
D0Nal-Ala·Phe·
DPhe-Lys-NH2 .03 167 ± 21 192 + 29
.10 167 ± 21 288 ± 62
. 30 167 ± 21 661 i 90
• 1.00 167 ± 21 1661 + 203
IMA-DjSNal-Ala-
Trp*DPhe-Ala-1,5-
pencadiamine .03 167 ± 21 475 + 96
. 10 167 + 21 916 + 169
. 30 167 + 21 1118 ± 243
1.00 167 ± 21 2660 + 599
Hls-D0Nal-Ala-Phe
DPhe-Lys-NH2 .03 217 + 33 317 + 55
.10 217 + 33 368 ± 65
.30 217 ± 33 1283 + 258
1.00 217 ± 33 1374 + 107
Таблица 7 (продължение)
Ala-HLs-D0Nal· Ala-Phe-DPhe-Lys·
NH, .03 217 + 33 341 + 35
.10 217 + 33 516 + 118
.30 217 + 33 1060 + 151
1.00 217 33 1467 + 208
7AttU-D0Nal·
Ala·Phe·DPhe· Lys ·
nh2 .03 217 + 33 197 + 31
.10 217 + 33 182 20
.30 217 + 33 524 + 116
1.00 217 33 1127 110
DAla-D^Nal-Ala·
Phe·DPhe·Lys· .03 217 + 33 287 + 62
nh2 .10 217 + 33 1084 + 162
.30 217 + 33 1982 + 345
1.00 217 + 33 2887 ± 275
DAla-Phe-ALa-Phe· .03 132 18 167 29
DPhe·Lys-NH2 .10 132 + 18 499 + 62
.30 132 + 18 1132 145
1.00 132 18 2147 + 268
DAla-D0Nal-Ala-
Phe-DPhe-Lys-NH2 .03 132 + 18 356 77
. 10 132 + 18 795 + 132
.30 132 + 18 1564 + 224
1.00 132 + 18 2272 ± 406
Пример 7.
Реакция на кондензация на пептидните фрагменти за получаване на пептид
Основни процедури
Точките на топене могат да се определят, като се използва апаратурата за точка на топене с капиляра на Thomas Hoover. Инфрачервените спектри могат да бъдат записани на спектрофотометър Perkin Elmer 137 или на Nikolet 5DX и представени с вълновото число (cm1)· Масспектрите могат да бъдат получени като се използва масспектрометър на фирмата VG Analytical Ltd. Модел YAB-1F и представени като EI (електронен импулс), полева десорбция или бърза атомна бомбардировка. Газхроматограмите могат да бъдат получени като се използва газов хроматограф на фирмата Finnigan 4023, съоръжен с 30 м капиляра при носител хелий. Оптичното въртене може да се измери, като се използва поляриметър Autopol
III, изработен от Rudolph Research.
1Н ЯМР спектрите могат да се получат на прибор JEOL GX-400 ЯМР, работещ при 400 MHz или на JEOL GX-270, работещ при 270 MHz. Тези прибори притежават разрешителна способност по-малка от 0,7 Hz. Химичните измествания са изразени в ррм (части на милион) спрямо вътрешния З-(триметилсилил)тетрадеутеро натриев пропионат.
Високоефективната течна хроматография (HPLC) може да се проведе като се използва система Хитачи, състояща се от L-5000 контролер на градиента и помпа 655А, свързана към полупрепаративна колона Vidac 201ТР1010 или 218ТР1010. Комбинации от вода, съдържаща 0,2% трифлуороцетна киселина и метанол, могат да бъдат използвани като елюенти. Характерно е, че съединенията, представляващи интерес, се елюират при скорост на потока 6 ml/ min с градиент, увеличаващ органичната ком понента със скорост от около 1-2% за минута. След това съединенията се откриват при съответните дължини на вълните, като се използва диоден детектор LKB 2140 детектор LKB 2140 в диапазона на (UV) (ултравиолетовата област). Интегрирането може да се довърши със софтуер на Nelson Analitical (версия 3.6).
Реакциите могат да бъдат проведени под инертна атмосфера от азот или аргон, ако не е посочено друго. Безводен тетрахидрофуран (UV-степен на чистота) и диметилформамид могат да бъдат доставени от фирмата Burdik and Jackson и използвани директно от бутилката.
А. Получаване на трипептидния фрагмент - H2N-Trp-DPhe-Lys(Boc)-NH2-Na-6eH3miоксикарбонил-(НМ-бутоксикарбонил)лизин амид (4)
Към 10°С разтвор на карбонилдиимидазол (2) 88,24 g; 0,544 mol) и сух тетрахидрофуран (ТХФ) (1500 ml) се прибавя бавно №-бензилоксикарбонил (NM-бутоксикарбонил)лизин (1) (180 g; 0,474 mol). По време на прибавянето се наблюдава отделяне на газове. Докато се получава междинното съединение №-бензилоксикаробнил- (NM-бутоксикарбонил) лизин имидазолид (3), се приготвя наситен разтвор на амоняк в тетрахидрофуан (2000 ml) (безводен NH3 се прекарва през тетрахидрофуран при температура 5-10°С). След като се установи, че получаването на междинното съединение (3) е приключило (прекратяване отделянето на газ, приблизително около 2 h), половината от разтвора на ТХФ, съдържащ съединението (3), се прибавя към амонячния разтвор. Останалата част от разтвора, съдържащ (3), се прибавя 30 min покъсно. По време на смесванията се поддържа непрекъснат поток от амоняк, който продължава още 45 min след това. При прибавянето на двата разтвора, съдържащи (3), се отделя бяла утайка. Реакционната смес се оставя да се темперира до стайна температура и се разбърква в продължение на 15 min. Разтворителят се отстранява от суспензията под вакуум. Остатъкът се суспендира във вода и полученият твърд остатък се събира с филтруване под вакуум.
№М-бутоксикарбонил-лизинамид (5)
Разтвор нализинамид (4) (181,48 g; 0,479 mol) метанол (МеОН, 1000 ml) се прибавя към суспензия, съдържаща катализатор 5 % Pd/C (5
g) в метанол (250 ml) под аргон. През реакционната смес барботира водород (около 15 min), след което реакционната смес се разбърква под водородна атмосфера, докато HPLC не покаже, че реакцията е приключила (36 h). След това водородната атмосфера се сменя с аргон. Реакционният разтвор се избистря през слой от Celite и разтворителят се отстранява под вакуум за получаването на твърд остатък.
№-бензилоксикарбонил-0-фенилаланил(ММ-бутоксикарбонил) лизинамид (8) №-бензилаксикарбонил-О-фенилаланин (6) (126,39 g; 0,423 mol) се прибавя бавно към 10°С разтвор на карбонилдиимидазол (2) (66,03 g; 0,409 mol) в ТХФ (500 mi). По време на прибавянето с наблюдава отделяне на газ. Когато престане отделянето на газ, към реакционната смес се прибавя лизинамид (5) (110,75 g; 0,452 mol) в разтвор на ТХФ (500 ml). След около 48 h сместа се филтрува за отстраняване на твърдите съставки. Филтратът се концентрира под вакуум.
Полученият остатък се улавя в етлацетат (EtOAc, 500 ml) и след това се промива по следния начин в делителна фуния:
1. солна киселина (1N, 3 х 500 ml), pH на първото измиване - около 8; последователите pH -1;
2. вода (500 ml);
3. Воден р-р на Na2CO3 (наситен, 2 х 500 ml), филтрува се, за да се съберат образуваните твърди кристали (8);
4. Вода (3 х 500 ml).
Органичният слой се суши върху магнезиев сулфат. След избистряне разтворителят се отстарнява под вакуум. Полученият остатък може да се прекристализира из EtOAc, за да се получи втора проба от (8).
П-фенилаланил-(№-ибутоксикарбонил) лизинамид (9)
Метанолов разтвор (1500 ml) на амид (8) (120,53 g; 0,229 mol) се прибавя към катализаторна суспензия от 5% Pd/C (50 g) в МеОН (200 ml). Аргонната атмосфера се заменя с водородна. Когато HPLC-анализът покаже, че реакцията е завършила (около 4 h), водородната атмосфера се заменя с аргон. След това реакционният разтвор се избистря през слой от Celite и филтратът се превръща в остатък под вакуум. Този дипептиден продукт може да се използва директно при получаването на трипептид (12).
№-бензилоксикарбонил-триптофил-Офенилаланил-(Ь1М-бутоксикарбонил)лизинамид (12) о разтвор на N -бензилоксикаробнилтриптофан (10) (67,60 g; 0,200 mol), ТХФ (50 ml) и карбонилдиимидазол (2) (33,05 g; 0,204 mol) се разбърква, докато престане отделянето на газ. След това към реакционната смес се прибавя разтвор на (9) (40,8 g; 0,103 ml) в ТХФ (ок. 200 ml). Полученият разтвор се оставя около 15 h, за да протече напълно реакцията, като се темперира до стайна температура. Твърдото вещество, което се получава, се събира с филтруване под вакуум. Филтратът се довежда до остатък чрез концентриране под вакуум. Полученият остатък и твърдото вещество се събират и улавят в EtOAc (4000 ml) с леко затопляне. След охлаждане на разтвора до стайна температура, се образува твърдо вещество. То се събира чрез вакуумно филтруване. Прекристализира се из горещ метанол, за да се пречисти трипептида (12). Филтратът EtOAc (от първата кристализация) се промива в делителна фуния по следния начин:
1. солна киселина (1N, 2х 500 ml),
2. вода (1 х 500 ml),
3. воден Na2CO3 (наситен, 2 х 500 ml)
3. воден NaCl (1 х 500 ml).
Органичният слой се суши върху MgSO4 и се избистря чрез вакуумно филтруване. Разтворителят се отделя от филтрата под вакуум. Полученият остатък се улавя в EtOAc, за да се получи сухо твърдо вещество. То може да се подложи на втора прекристализация из горещ метанол, за да се получи втори добив от (12) под формата на бяло твърдо вещество.
Триптофил-О-фенилаланил- (NM-бутилоксикаробнил)лизин-амид (13)
Метанолов разтвор (1500 ml) на трипептид (12) (64,59 g; 0,091 mol) се прибавя към суспензия от катализатор 5% pd/C (5 g) и МеОН (2250 ml) под атмосфера на аргон. Прибавя се допълнително количество МеОН )250 mi). Аргоновата атмосфера се заменя с водород и реакционната смес се оставя да реагира (около 24 h). След приключване на реакцията водородната атмосфера се заменя с аргонова. Разтворът се избистря през слой от Ceiite и филтратът се концентрира под вакуум за получаването на трипептид (13) под формата на твърдо бяло вещество.
Б. Получаване на трипептидния фраг мент -К- DpNal-Ala-Ome-Na-6eH3miokcHkap6oнил-Ор-нафтил аланин метил естер (25).
Разтвор на EtOAc (400 ml) и хидрохлорид на D-Рнафтилаланин метил естер (22) (0,62 mol) с промива с разтвор на наситен натриев карбонат (400 ml) и 0,8 N воден разтвор на натриев хидроокис (ок.500 ml). Получената водна фаза се отстранява (pH 8,5) и органичната фаза се промива последователно с полунаситен разтвор на Na2CO3 (150 ml) и след това с вода (50 ml).
Свободната базична форма на (22) се изолира при концентриране на слоя етилацетат под вакуум.
Дициклохексилкарбодиимид (около 95 g; 0,46 mol) се прибавя към охладен до -5°С (ледетанолова баня) разтвор на №-бензилоксикарбонил-О-аланин (19) (143,5 g ;0,50 mol), Nхидроксисукцинимид (HONS и (23) 0,62 mol) и свежо приготвена свободна база (22) (около 0,52 mol) в диметилформамид (около 3 1). Получената реакционна смес се разбърква в продължение на 24 h, като се темперира до стайна температура. Трябва да се използва HPLC-анализ, за да се види дали реакцията е завършила. Ако не е, реакционният разтвор се охлажда до около -5°С и се прибавя допълнително количество дициклохексилкарбодиимид (ок.0,17 mol). След това реакционната смес се разбърква отново 24 h, като се оставя да се темперира до стайна температура. Накрая сместа се филтрува, за да се отстрани образувалият се дициклохексилкарбамид. Към филтрата се прибавя вода (1 1) и полученият разтвор се конецнтрира под вакуум. Полученият остатък се улавя във воден 1N НС1 (около 1 1, докато pH на водната фаза достигне 1). След това водната фаза се екстрахира с две порции етилацетат (по 1 1 всяка). Слоевете етилацетат се отделят. РН на водната фаза се настройва с прибавяне на 2N NaOH (500 ml) и гранули натриев хидроокис. По време на тази неутрализация разтворът се поддържа охладен чрез прибавянето на студен етилацетат (1). Когато pH на водната фаза достигне приблизително 7, обикновено се отделя обилна утайка от бяло твърдо вещество или масло. Тази утайка се събира чрез филтруване под вакуум или декантиране и се промива последователно с полунаситен разтвор на натриев карбонат (2 х 1500 ml), вода (6 х 1500 ml) и етилацетат (3 х 1500 ml). Полученият материал се суши под висок вакуум до постоянно тегло. Този материал може да се хидролизира директно без по-нататъшно пречистване.
№-бензилоксикарбонил-О-аланил-3-нафтил-О-аланин (26)
Воден разтвор на натриев хидроокис (192 ml; 0,08 g/1; 0,38 mol) се пирбавя към разтвор на дипептид (25) (около 0,38 mol), вода (360 ml) и MeOH (ок. 6 1). Разтворът се разбърква при стайна температура до завършване на хидролизата (около 24 h). Изчезването на изходния пептид се следи с HPLC-анализ. Разтворът се концентрира под вакуум до остатък, който се разтваря във вода (ок.1 ). Водният слой (pH около 10) след това се екстрахира с EtOАс (2 х 500 ml) в делителна фуния. Етилацетатните слоеве се отстраняват. Получената водна фаза се довежда до pH приблизително 5 с конц. НС1, при този пункт обикновено се утаява бяла маса или масло. Продуктът се събира и се суши под вакуум.
Иа-бензилоксикарбонил-О-аланил-О-рнафтил аланил-аланин метилестер (20)
Дипептид №-бензилоксикарбонил-О-аланил-О-рнафтил аланин (26) (0,253 mol) се прибавя към разтвор на HONSu (23) (0,505 mol) в диметилформамид (800 ml) под аргонова атмосфера. Към този разтвор се прибавя смес от хидрохлорид на аланин метилестер (15) (0,303 mol), N-метилморфолин (16) (0,303 mol) и диметилформамид (200 ml). Полученият разтвор се охлажда до 10°С, през това време се прибавя дицикло-хексилкародиимид (24) (0,265 mol) в метилен хлорид (273 ml). Реакцията се следи с HPLC, като реакционната температура се поддържа 10°С, докато реакцията приключи. Ако след няколко дни (около
4) реакцията не приключва, се прибавя допълнително количество от (24) (0,080 mol) и реакционната смес се разбърква в продължение на още един ден при 10“С. Реакцията отново се следи с HPLC-анализ до пълното й завършване (около 5 дни). Твърдите вещества, които се образуват по време на реакцията, се събират чрез филтруване под вакуум. След това филтратът се концентрира под вакуум до получаване на остатък. Последният се улавя в етилацетат и се екстрахира с полунаситен воден разтвор на N2CO3(2 х 500 ml). Етилацетатната фаза се суши върху MgSO4. Полученият разтвор се избистря и се концентрира под вакуум до остатък.
2N воден разтвор на натриев хидроокис (7,5 ml; 15 mmol) се прибавя към метанол (500 ml) и към воден разтвор (200 ml), съдържащ №-бензилоксикарбонил-ОА1а-ОЗМа1-А1а-ОМе (13,7 mmol). След като реакционната смес се разбърква в продължение на една нощ при стайна температура, HPLC-анализът показва количеството останал изходен материал. Когато реакцията приключи напълно (около 1 нощ), полученият разтвор се концентрира под вакуум до обем около 200 ml. Прибавя се вода (100 ml) и pH се довежда до около 12 чрез прибавянето на 2N натриев хидроокис (1 ml). Полученият разтвор се екстрахира с етилацетат (2 х 500 ml). Етилацетатните слоеве се отстраняват. pH на водната фаза се довежда до около 5 с прибавянето на воден НС1, което обикновено води до утаяването на продукта. От значение е обема на водната фаза да се сведе да минимум, за да се стимулира утаяването. Водната фаза се отдекантира от продукта, който след това се промива с вода (2 х 50 ml). Изолираният продукт се суши под вакуум до постоянно тегло.
В. Кондензационна реакция на пептидните фрагменти за получаването на хексапептид
Двата пептида DAla-Dp-Nal-Ala-OH (33) (2,6 mmol) и Trp-D-Phe-Lys(Boc)-NH2(13) (2,8 mmol) се разтварят в безводен диметилформамид и полученият разтвор се концентрира под вакуум. Това предварително концентриране се провежда като опит да се отстранят всякакви следи от метанол, който може да присъства. Получената в резултат на това смес от пептиди се разтваря отново в диметилформамид и се прибавя N-хидроксисукцинимид (5,1 mmol). Полученият разтвор след това се охлажда до температурата на разтвора -2°С и се прибавя дициклохексилкарбодиимид (3,4 mmol), разтворен в метиленхлорид (3,5 ml). Получената смес се разбърква при -2°С в продължение на 3 дни. За определяне края на реакцията се използва HPLC-анализ. След този период от време, ако реакцията не е привършила, може да се прибави допълнително дициклохексилкарбодиимид и получената нова реакционна смес да се разбърква допълнително още един ден при -2°С. Ако на следващия ден (общо 4 дни) HPLC-анализът отново покаже незавършена реакция, охлаждането на реакционната смес трябва да се преустанови. Реакционният разтвор се оставя бавно да се темперира до стайна температура (25°С) за период от около 8 h. Така получената реакционна смес се разбърква в продължение на една нощ при стайна температура. Процедурата се повтаря, докато реакцията завърши напълно. След това се прибавя вода (50 ml) и получената смес се разбърква още един ден. Реакционният разтвор се филтрува, за да се отстрани дициклохексилкарбамида, и полученият филтрат се концентрира под вакуум до вискозно масло. Към така полученият остатък се прибавя етилацетат и полунаситен воден разтвор на натриев карбонат (200 ml). Двуфазната смес се завихря енергично в ротационен изпарител в продължение на около 1 h. Всички получени твърди съставки се събират за получаване на продукта върху шотов филтър (синтерована стъклена фуния). Органичната фаза се промива с вода и се суши под вакуум до постоянно тегло за получаването на продукта.
DAla-D₽Nal-Aia-Trp-D-Phe-Lys-NH2(35)
Хексапептид
Бензилоксикарбонил-ОА1а-О^а1-А1аTrp-D-Phe-Lys(Boc)-NH2 (34) (1,02 mmol) се прибавят при стайна температура към разтвор на трифлуороцетна киселина (30 ml), диметилсулфид (14 ml), 1,2-етандитиол (7 ml) и анизол (2,2 ml) в метиленхлорид (15 ml). Хомогенната реакционна смес се разбърква в продължение на 15 min. След този период от време се прибавя безводен етер (450 ml), за да предизвика утаяване на суровия биологичноактивен пептиден продукт (35). Този продукт се изолира посредством филтруване върху шотов филтър или с декантиране. Полученият продукт се разтваря във вода и се лиофилизира. Лиофилизпраният продукт може да бъде пречистен по-нататък чрез хроматографиране при средно налягане върху стъклена колона 26 х 460 mm, съдържаща LichroprepTM RP-18 материал за пълнеж (С-18, 25-50 nm, нехомогенен). След инжектирането на пептида, разтворен във вода, колоната се елюира при скорост на потока 9 ml/min с повърхностен градиент 0 до 25% метанол в продължение на 5-20 h и след това с градиент 25 до 55% метанол за около 48 h. След това метаноловота концентрация на градиента се повишава с около 2% на час. По време на елюирането остатъкът от разтворителя на състава се обработва с вода, съдър жаща 0,2% трифлуороцетна киселина. Продуктът (35) се идентифицира с HPLC и се изолира чрез концентриране на съответните обеми елюент.
Изобретението е описано в подробности с оглед на предпочетените изпълнения. За специалистите е ясно при разглеждане на описанието, че са възможни варианти и модификации в духа и обхвата на изобретението.

Claims (22)

  1. Патентни претенции
    1. Пептид с формула:
    Aj-Aj-Cj-Cj-Cj-Aj, в която
    А, е Gly, DAla, PAla, His, Ser, Met, Pro, Sar, Ava, Aib, N-нисш алкил-аминокарбонова киселина, Ν,Ν’-бис-нисш алкил-аминокарбонова киселина, азол-карбонова киселина или нисш алкил-аминокарбонова киселина, в която нисшата алкилна група включва неразклонена въглеродна верига с 2 до 10 въглеродни атома;
    А2 е DTrp, D₽Nal, D-4-Y-Phe или 5-Y-DТгр, където Y е OH, Cl, Br, F или Н;
    А, е А-А-Ас, А-А„ А-А, или А,,
    5 345'35’45 5' където (а) А3 е Dla, Gly, DALa, Pro или desAla;
    (б) A4 e Ala, Gly, DAla, Pro линеен нисш алкил-аминокарбонова киселина или desAla и (в) А5 е Lys^-R,,R2)-Z, OmiS-R^Rp-Z, NH(CH2)xN(R3,R4) и когато А, не е His, А3 може да бъде също така Lys-Z, Om-Z; при което R, е линейна нисша алкилна група или Н-атом; R2 е линейна нисша алкилна група или Н-атом; но когато R1 е Н, R2 не е Н; а когато R2 е Н, R1 не е Н;
    R3 е линейна нисша алкилна група или Н-атом;
    R4 е линейна нисша алкилна група или Н-атом;
    Z е NH (линейна нисша алкилна група), N (линейна нисша алкилна група) 2, О- (линейна нисша алкилна група), NH2 или ОН, където линейната нисша алкилна група е както дефинираното за нисша алкилна група;
    х е от 2 до 15;
    С, е Ala,
    С2 е Trp, Phe или ChxAla,
    С3 е DPhe, DPal или DChxAla, както и органичните им или неорганични адитивни соли.
  2. 2. Пептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че А] е Gly, DAla или
    His.
  3. 3. Пептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че е DAla.
  4. 4. Пептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че А2 е DTrp или DpNal.
  5. 5. Пептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че А2 е DpNal.
  6. 6. Пептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че А3 е А3-А4-А5.
  7. 7. Пептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че А5 е А3-Аг
  8. 8. Пептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че А3 е А4-А3.
  9. 9. Пептид съгласно претенции 1, 2, 3, 4 или 5, характеризиращ се с това, че А5 е А3.
  10. 10. Пептиди съгласно претенции 1, 2, 3, 4 и 5, характеризиращи се с това, че С2 е Тгр или Phe.
  11. 11. Пептиди съгласно претенции 1, 2, 3, 4, 5, 9 или 10, характеризиращи се с това, че С3 е DPhe.
  12. 12. Пептиди съгласно претенция 10, характеризиращи се с това, че С2 е Тгр.
  13. 13. Пептиди съгласно претенция 12, характеризиращи се с това, че С3 е DPhe.
  14. 14. Пептид съгласно претенция 1, характеризиращ се с това, че притежава формула:
    DAIa-D₽Nal-Ala-Trp-DPhe-LysNH2,
    DAla-D₽Nal-Ala-Trp-DPhe-Lys(£-iPr)NH2,
    DAIa-DT гр-А1а-Т rp-DPhe-Lys(£-iPr)NH2,
    DAIa-DT rp-Ala-T rp-DPhe-LysNI-12, DAIa-D₽Nal-Ala-Trp-DPhe-NH(CH2)5NH2, NH2(CH2)5CO-D₽Nal-Ala-Trp-DPhe-NH(CH2)5NH2, NalMA-D₽Nal-Ala-Phe-LysNH2, a,yABU-DPNal-Ala-Ph6-DPhe-LysNH2,
    DAIa-DPhe-Ala-Phe-DPhe-LysNH2, Ala-His-D₽Nai-Ata-Phe-DPhe-LysNH2,
    NalMA-D₽Nal-Ala-Phe-DPhe-NH NH2, a,yABU-D₽Nal-Ala-Phe-DPhe-NH NH2,
    DAIa-DPNal-Ala-Phe-DPhe-Lys EA, a,yABU-DPNal-Aia-Phe-DPhe-LysNH2,
    DAIa-DPNal-Ala-Phe-DPhe-DArgNH2,
    DAIa-DPNal-Ala-ChxAla-DPhe-LysNH2,
    DAIa-DPNal-AIa-Phe-DChxAla-LysNH2 или
    DAla-DpNal-Ala-ChxAla-DChxAla-LysNH2 и органичните им и неорганични адитивни соли.
  15. 15. Метод за стимулиране освобождаването на растежен хормон в животно, характеризиращ се с приемането от животното на ефективно количество на най-малко един от пептидите от претенции 1,9, 10, 11, 12 или 14.
  16. 16. Метод съгласно претенция 15, характеризиращ се с това, че животното е бозайник.
  17. 17. Метод съгласно претенция 15, характеризиращ се с това, че живото същество е човек.
  18. 18. Фармацевтичен състав за стимулиране освобождаването на растежен хормон при животни, характеризиращ се с това, че включва ефективно количество от най-малко един от пептидите от претенции 1,9, 10, 11, 12 или 14 и фармацевтично приемлив носител или разредител.
  19. 19. Метод за стимулиране освобождаването и повишаването на нивата на растежен хормон, характеризиращ се с това, че включва приемането на пептида от претенция 1 в синергично количество с второ съединение, при което второто съединение е съединение, което играе ролята на агонист спрямо хормонния рецептор за освобождаване на растежния хормон или инхибира освобождаването на соматостатин.
  20. 20. Фармацевтичен състав съгласно претенция 18, характеризиращ се с това, че включва освен това второ съединение, което служи като агонист при хормоналния рецептор, освобождаващ растежния хормон, или инхибира ефектите на соматостатина.
  21. 21. Метод за стимулиране освобождаването и повишаването на кръвните нива на хормони, характеризиращ се с това, че включва приемането на пептида от претенция 1 заедно с най-малко един естествено срещащ се хормон, освобождаващ растежен хормон и функционално еквивалентен нему, или съединение, което стимулира освобождаването на растежен хормон.
  22. 22. Метод за стимулиране освобождаването и повишаването на нивата на кръвен растежен хормон, характеризиращ се с това, че включва приемането на пептида от претенция 1 в синергично количество с най-малко един полипептид от група 1 или група 2, при което полипептидът от група 1 е подбран от някои от естествено срещащите се хормони, освобождаващи растежен хормон и функционално еквивалентни на тях, а полипептидът от група 2 е подбран от групата на полипептидите, включваща:
BG98489A 1991-08-22 1994-02-18 Пептиди, способни да освобождават растежен хормон BG62655B1 (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US07/748,350 US5663146A (en) 1991-08-22 1991-08-22 Polypeptide analogues having growth hormone releasing activity
PCT/US1992/007026 WO1993004081A1 (en) 1991-08-22 1992-08-20 Peptides having growth hormone releasing activity

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG98489A BG98489A (bg) 1995-02-28
BG62655B1 true BG62655B1 (bg) 2000-04-28

Family

ID=25009088

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG98489A BG62655B1 (bg) 1991-08-22 1994-02-18 Пептиди, способни да освобождават растежен хормон

Country Status (26)

Country Link
US (2) US5663146A (bg)
EP (1) EP0605484B1 (bg)
JP (1) JP3179489B2 (bg)
KR (1) KR100247212B1 (bg)
CN (1) CN1035256C (bg)
AT (1) ATE172742T1 (bg)
AU (1) AU666673B2 (bg)
BG (1) BG62655B1 (bg)
BR (2) BR9206398A (bg)
CA (1) CA2116120C (bg)
CZ (1) CZ293281B6 (bg)
DE (1) DE69227462T2 (bg)
DK (1) DK0605484T3 (bg)
ES (1) ES2124263T3 (bg)
FI (2) FI120095B (bg)
HU (1) HU223664B1 (bg)
IL (1) IL102848A (bg)
MX (1) MX9204861A (bg)
NO (1) NO314695B1 (bg)
NZ (1) NZ244034A (bg)
PL (1) PL169562B1 (bg)
RO (1) RO112507B1 (bg)
RU (1) RU2126014C1 (bg)
SK (1) SK282895B6 (bg)
WO (1) WO1993004081A1 (bg)
ZA (1) ZA926337B (bg)

Families Citing this family (105)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0763537A3 (en) 1993-05-14 1997-10-22 Genentech Inc Non-peptides farnesyl transfer inhibitors
US5767085A (en) * 1993-12-23 1998-06-16 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
AU683121B2 (en) * 1993-12-23 1997-10-30 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US20020111461A1 (en) * 1999-05-21 2002-08-15 Todd C. Somers Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues
US5798337A (en) * 1994-11-16 1998-08-25 Genentech, Inc. Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues
WO1997000894A1 (en) * 1995-06-22 1997-01-09 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
AU722421B2 (en) * 1996-04-24 2000-08-03 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
AU7906998A (en) 1997-06-20 1999-01-04 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6127341A (en) * 1997-06-20 2000-10-03 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6329342B1 (en) 1997-08-19 2001-12-11 Eli Lilly And Company Treatment of congestive heart failure with growth hormone secretagogues
ZA987383B (en) * 1997-08-19 2000-02-17 Lilly Co Eli Treatment of congestive heart failure with growth hormone secretagogues.
ATE281467T1 (de) 1998-01-16 2004-11-15 Novo Nordisk As Verbindungen mit wachstumshormon-freisetzenden eigenschaften
WO1999039730A1 (fr) * 1998-02-09 1999-08-12 Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. Preparation a administration orale contenant des peptides favorisant la secretion d'hormone de croissance
US6919315B1 (en) 1998-06-30 2005-07-19 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6682908B1 (en) 1998-07-10 2004-01-27 Merck & Co., Inc. Mouse growth hormone secretagogue receptor
EP1097170A1 (en) 1998-07-13 2001-05-09 Merck & Co., Inc. Growth hormone secretagogue related receptors and nucleic acids
US6645726B1 (en) 1998-08-10 2003-11-11 Merck & Co., Inc. Canine growth hormone secretagogue receptor
AU5671099A (en) * 1998-08-14 2000-03-06 The Administrators Of The Tulane Eductional Fund Compounds having growth hormone releasing activity
US6639076B1 (en) 1998-08-18 2003-10-28 Eli Lilly And Company Growth hormone secretagogues
US6696063B1 (en) * 1998-12-30 2004-02-24 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Treatment of HIV-associated dysmorphia/dysmetabolic syndrome (HADDS) with or without lipodystrophy
KR100699404B1 (ko) * 1999-02-18 2007-03-23 가켄 세야쿠 가부시키가이샤 성장 호르몬 분비촉진제로서의 신규 아미드 유도체
US7022677B1 (en) 1999-02-18 2006-04-04 Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. Amide derivatives as growth hormone secretagogues
US6828331B1 (en) * 1999-02-19 2004-12-07 Eli Lilly And Company Growth hormone secretagogues
US6551996B1 (en) * 1999-07-26 2003-04-22 Baylor College Of Medicine Super-active porcine growth hormone releasing hormone analog
US20040192593A1 (en) 1999-07-26 2004-09-30 Baylor College Of Medicine Protease resistant ti-growth hormone releasing hormone
EP1238661A1 (en) * 1999-10-12 2002-09-11 Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. Powdery inhalational preparations and process for producing the same
UA73530C2 (uk) 1999-11-10 2005-08-15 Ново Нордіск А/С Сполука з властивостями вивільнювати гормон росту
JP3498041B2 (ja) * 2000-05-29 2004-02-16 科研製薬株式会社 プラルモレリン含有点鼻用製剤
EP1159964B1 (en) 2000-05-31 2009-10-28 Pfizer Products Inc. Use of growth hormone secretagogues for stimulating gastrointestinal motility
US7919647B2 (en) 2000-08-24 2011-04-05 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators and methods of use thereof
US7622503B2 (en) 2000-08-24 2009-11-24 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators and methods of use thereof
US7645898B2 (en) 2000-08-24 2010-01-12 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators and method of use thereof
US7855229B2 (en) 2000-08-24 2010-12-21 University Of Tennessee Research Foundation Treating wasting disorders with selective androgen receptor modulators
AU2002233082B2 (en) 2001-02-02 2005-11-10 Conjuchem Biotechnologies Inc. Long lasting growth hormone releasing factor derivatives
US7125840B2 (en) * 2001-10-09 2006-10-24 Eli Lilly And Company Substituted dipeptides as growth hormone secretagogues
AR037038A1 (es) 2001-10-26 2004-10-20 Baylor College Medicine Una composicion y metodo para alterar la masa corporal magra y las propiedades oseas en un sujeto
US8853266B2 (en) 2001-12-06 2014-10-07 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulators for treating diabetes
US6831102B2 (en) 2001-12-07 2004-12-14 Bristol-Myers Squibb Company Phenyl naphthol ligands for thyroid hormone receptor
CA2469310C (en) 2001-12-11 2013-01-29 Advisys, Inc. Plasmid mediated supplementation for treating chronically ill subjects
US7015219B2 (en) 2001-12-19 2006-03-21 Bristol-Myers Squibb Company 3-aryl-hydroxybenzoxazines and 3, 4-dihydro-3-aryl-hydroxybenzoxazines as selective estrogen receptor beta modulators
WO2003066825A2 (en) * 2002-02-07 2003-08-14 Baylor College Of Medicine Modified pituitary gland development in offspring from expectant mother animals treated with growth hormone releasing hormone therapy
US7772433B2 (en) 2002-02-28 2010-08-10 University Of Tennessee Research Foundation SARMS and method of use thereof
US7381730B2 (en) 2002-03-15 2008-06-03 Bristol-Myers Squibb Company 3-arylquinazoline derivatives as selective estrogen receptor beta modulators
US20060167268A1 (en) * 2002-04-09 2006-07-27 Eli Lilly And Company, Patent Division, Growth hormone secretagogues
ES2266798T3 (es) * 2002-04-09 2007-03-01 Eli Lilly And Company Secretagodos de hormona de crecimiento.
AU2003225305A1 (en) 2002-05-08 2003-11-11 Bristol-Myers Squibb Company Pyridine-based thyroid receptor ligands
US7405234B2 (en) 2002-05-17 2008-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Bicyclic modulators of androgen receptor function
AU2003259340A1 (en) 2002-08-23 2004-03-11 Gestion Univalor Societe En Commandite Growth hormone-releasing peptides in the treatment of prevention of atherosclerosis and hypercholesterolemia
EP1567487A4 (en) 2002-11-15 2005-11-16 Bristol Myers Squibb Co OPEN-CHAINED, PROLYL-FROSTED MODULATORS OF ANDROGEN RECEPTOR FUNCTION
US8309603B2 (en) 2004-06-07 2012-11-13 University Of Tennessee Research Foundation SARMs and method of use thereof
TW200504021A (en) 2003-01-24 2005-02-01 Bristol Myers Squibb Co Substituted anilide ligands for the thyroid receptor
CA2513743C (en) * 2003-01-28 2013-06-25 Advisys, Inc. Reducing culling in herd animals growth hormone releasing hormone (ghrh)
WO2004069793A2 (en) 2003-01-28 2004-08-19 Bristol-Myers Squibb Company Novel 2-substituted cyclic amines as calcium sensing receptor modulators
US7205322B2 (en) 2003-02-12 2007-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Thiazolidine compounds as calcium sensing receptor modulators
US7557143B2 (en) 2003-04-18 2009-07-07 Bristol-Myers Squibb Company Thyroid receptor ligands
TW200424214A (en) * 2003-04-21 2004-11-16 Advisys Inc Plasmid mediated GHRH supplementation for renal failures
US7265145B2 (en) 2003-05-28 2007-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Substituted piperidines and pyrrolidines as calcium sensing receptor modulators and method
US7459460B2 (en) 2003-05-28 2008-12-02 Bristol-Myers Squibb Company Trisubstituted heteroaromatic compounds as calcium sensing receptor modulators
US7476653B2 (en) 2003-06-18 2009-01-13 Tranzyme Pharma, Inc. Macrocyclic modulators of the ghrelin receptor
CA2575926C (en) * 2003-08-04 2014-02-25 Advisys, Inc. Canine specific growth hormone releasing hormone
WO2005041998A1 (en) 2003-10-02 2005-05-12 Ali Sadat M Peptide for promoting healing of fractures
CA2592891C (en) * 2003-12-31 2013-05-28 Advisys, Inc. Reducing arthritis and lameness in subjects by growth hormone releasing hormone (ghrh) supplementation
WO2005073371A2 (en) * 2004-01-20 2005-08-11 Advisys, Inc. Enhanced secretion/retention of growth hormone releasing hormone (ghrh) from muscle cells by species-specific signal peptide
US20050164952A1 (en) * 2004-01-23 2005-07-28 Vital Pharmaceuticals, Inc. Delivery system for growth hormone releasing peptides
US7820702B2 (en) 2004-02-04 2010-10-26 Bristol-Myers Squibb Company Sulfonylpyrrolidine modulators of androgen receptor function and method
US7378426B2 (en) 2004-03-01 2008-05-27 Bristol-Myers Squibb Company Fused heterotricyclic compounds as inhibitors of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase 3
US7625923B2 (en) 2004-03-04 2009-12-01 Bristol-Myers Squibb Company Bicyclic modulators of androgen receptor function
US7696241B2 (en) 2004-03-04 2010-04-13 Bristol-Myers Squibb Company Bicyclic compounds as modulators of androgen receptor function and method
US9884038B2 (en) 2004-06-07 2018-02-06 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulator and methods of use thereof
US9889110B2 (en) 2004-06-07 2018-02-13 University Of Tennessee Research Foundation Selective androgen receptor modulator for treating hormone-related conditions
WO2006014737A2 (en) * 2004-07-23 2006-02-09 Advisys, Inc. Growth hormone releasing hormone enhances the immune response induced by vaccination
WO2006023608A2 (en) 2004-08-18 2006-03-02 Elixir Pharmaceuticals, Inc. Growth-hormone secretagogues
US7456188B1 (en) 2005-04-28 2008-11-25 Bristol-Myers Squibb Company C-5 substituted quinazolinone derivatives as selective estrogen receptor beta modulators
ES2453981T3 (es) 2005-08-31 2014-04-09 University Of Tennessee Research Foundation Tratamiento de síntomas de enfermedad renal con moduladores selectivos de receptor de andrógenos (SARM)
CU23558A1 (es) 2006-02-28 2010-07-20 Ct Ingenieria Genetica Biotech Compuestos análogos a los secretagogos peptidicos de la hormona de crecimiento
WO2008006019A2 (en) * 2006-07-06 2008-01-10 Advisys Inc. Growth hormone releasing hormone treatment to decrease cholesterol levels
KR101460999B1 (ko) 2006-07-12 2014-11-17 유니버시티 오브 테네시 리서치 파운데이션 치환된 아실아닐리드 및 그의 사용 방법
ES2439590T3 (es) 2006-08-02 2014-01-23 Cytokinetics, Inc. Ciertas entidades químicas, composiciones y métodos
US8299248B2 (en) 2006-08-02 2012-10-30 Cytokinetics, Incorporated Certain 1H-imidazo[4,5-b]pyrazin-2(3H)-ones and 1H-imidazo[4,5-b]pyrazin-2-ols and methods for their use
US9730908B2 (en) 2006-08-24 2017-08-15 University Of Tennessee Research Foundation SARMs and method of use thereof
BRPI0714526A2 (pt) 2006-08-24 2013-04-30 Univ Tennessee Res Foundation acilanilidas substituÍdas e seus mÉtodos de uso
US10010521B2 (en) 2006-08-24 2018-07-03 University Of Tennessee Research Foundation SARMs and method of use thereof
US9844528B2 (en) 2006-08-24 2017-12-19 University Of Tennessee Research Foundation SARMs and method of use thereof
AU2008241532A1 (en) 2007-02-09 2008-10-30 Tranzyme Pharma, Inc. Macrocyclic ghrelin receptor modulators and methods of using the same
EP2155769B1 (en) 2007-05-04 2012-06-27 Katholieke Universiteit Leuven KU Leuven Research & Development Tissue degeneration protection
US7968603B2 (en) 2007-09-11 2011-06-28 University Of Tennessee Research Foundation Solid forms of selective androgen receptor modulators
WO2009155481A1 (en) 2008-06-20 2009-12-23 Gtx, Inc. Metabolites of selective androgen receptor modulators and methods of use thereof
AR081626A1 (es) 2010-04-23 2012-10-10 Cytokinetics Inc Compuestos amino-piridazinicos, composiciones farmaceuticas que los contienen y uso de los mismos para tratar trastornos musculares cardiacos y esqueleticos
AR081331A1 (es) 2010-04-23 2012-08-08 Cytokinetics Inc Amino- pirimidinas composiciones de las mismas y metodos para el uso de los mismos
EP2560488B1 (en) 2010-04-23 2015-10-28 Cytokinetics, Inc. Certain amino-pyridines and amino-triazines, compositions thereof, and methods for their use
WO2013190520A2 (en) 2012-06-22 2013-12-27 The General Hospital Corporation Gh-releasing agents in the treatment of vascular stenosis and associated conditions
US9969683B2 (en) 2012-07-13 2018-05-15 Gtx, Inc. Method of treating estrogen receptor (ER)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMS)
US10258596B2 (en) 2012-07-13 2019-04-16 Gtx, Inc. Method of treating HER2-positive breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMS)
US10987334B2 (en) 2012-07-13 2021-04-27 University Of Tennessee Research Foundation Method of treating ER mutant expressing breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMs)
US10314807B2 (en) 2012-07-13 2019-06-11 Gtx, Inc. Method of treating HER2-positive breast cancers with selective androgen receptor modulators (SARMS)
KR102122941B1 (ko) 2012-07-13 2020-06-15 지티엑스, 인코포레이티드 선택적 안드로겐 수용체 조절자(sarms)를 이용한 안드로겐 수용체(ar) 양성 유방암의 치료 방법
US9744149B2 (en) 2012-07-13 2017-08-29 Gtx, Inc. Method of treating androgen receptor (AR)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMs)
US9622992B2 (en) 2012-07-13 2017-04-18 Gtx, Inc. Method of treating androgen receptor (AR)-positive breast cancers with selective androgen receptor modulator (SARMs)
CN104853778A (zh) 2012-10-24 2015-08-19 第一三共株式会社 用于肌萎缩性侧索硬化的治疗剂
JP2016518357A (ja) 2013-04-08 2016-06-23 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 骨格筋幹細胞を若返らせる方法および組成物
US9119832B2 (en) 2014-02-05 2015-09-01 The Regents Of The University Of California Methods of treating mild brain injury
SG11201609050UA (en) 2014-05-30 2016-12-29 Pfizer Carbonitrile derivatives as selective androgen receptor modulators
US20170121385A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Oxeia Biopharmaceuticals, Inc. Methods of treating neurodegenerative conditions
KR20220079512A (ko) 2019-06-27 2022-06-13 싸이토키네틱스, 인코포레이티드 1-(2-((((트랜스)-3-플루오로-1-(3-플루오로피리딘-2-일)시클로부틸)메틸)아미노)피리미딘-5-일)-1h-피르롤-3-카르복사미드의 다형체들
WO2023275715A1 (en) 2021-06-30 2023-01-05 Pfizer Inc. Metabolites of selective androgen receptor modulators

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4228155A (en) * 1979-03-30 1980-10-14 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4223019A (en) * 1979-03-30 1980-09-16 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4228158A (en) * 1979-03-30 1980-10-14 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
CA1175810A (en) * 1979-03-30 1984-10-09 Frank A. Momany Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4223020A (en) * 1979-03-30 1980-09-16 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4223021A (en) * 1979-03-30 1980-09-16 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4228156A (en) * 1979-03-30 1980-10-14 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4228157A (en) * 1979-03-30 1980-10-14 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4226857A (en) * 1979-03-30 1980-10-07 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4224316A (en) * 1979-03-30 1980-09-23 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4410512A (en) * 1981-12-28 1983-10-18 Beckman Instruments, Inc. Combinations having synergistic pituitary growth hormone releasing activity
JPS58501861A (ja) * 1981-12-28 1983-11-04 ベツクマン・インストルメンツ・インコ−ポレ−テツド 下垂体成長ホルモン放出活性を有する合成ペプチド
US4410513A (en) * 1981-12-28 1983-10-18 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4880778A (en) * 1986-05-12 1989-11-14 Eastman Kodak Company Combinations having synergistic growth hormone releasing activity and methods for use thereof
US4839344A (en) * 1987-06-12 1989-06-13 Eastman Kodak Company Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity
US4880777A (en) * 1987-09-01 1989-11-14 Eastman Kodak Company Synthetic peptides having growth hormone releasing activity
DE68919213T2 (de) * 1988-01-28 1995-05-11 Polygen Holding Corp Polypeptidverbindungen mit wachstumshormonfreisetzender aktivität.
AU637316B2 (en) * 1988-01-28 1993-05-27 Eastman Kodak Company Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity
DE68912775T2 (de) * 1988-05-11 1994-06-30 Polygen Holding Corp Polypeptid-verbindungen mit hormonwachstumsbefreiender wirkung.
IL98910A0 (en) * 1990-07-24 1992-07-15 Polygen Holding Corp Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity and pharmaceutical compositions containing them
WO1992001709A1 (en) 1990-07-24 1992-02-06 Eastman Kodak Company Process for synthesizing peptides
US5486505A (en) * 1990-07-24 1996-01-23 Polygen Holding Corporation Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity

Also Published As

Publication number Publication date
RO112507B1 (ro) 1997-10-30
PL169562B1 (pl) 1996-08-30
DK0605484T3 (da) 1999-07-05
EP0605484B1 (en) 1998-10-28
CA2116120A1 (en) 1993-02-23
ZA926337B (en) 1993-04-22
ES2124263T3 (es) 1999-02-01
BR9206398A (pt) 1994-12-27
SK20494A3 (en) 1994-10-05
US5776901A (en) 1998-07-07
EP0605484A1 (en) 1994-07-13
NZ244034A (en) 1995-08-28
IL102848A0 (en) 1993-01-31
HU9400495D0 (en) 1994-05-30
CZ293281B6 (cs) 2004-03-17
SK282895B6 (sk) 2003-01-09
NO940592L (no) 1994-04-14
CZ40094A3 (en) 1994-11-16
CN1073684A (zh) 1993-06-30
DE69227462T2 (de) 1999-04-08
AU666673B2 (en) 1996-02-22
MX9204861A (es) 1994-06-30
AU2541692A (en) 1993-03-16
DE69227462D1 (de) 1998-12-03
FI120095B (fi) 2009-06-30
JP3179489B2 (ja) 2001-06-25
WO1993004081A1 (en) 1993-03-04
ATE172742T1 (de) 1998-11-15
JPH07507039A (ja) 1995-08-03
CA2116120C (en) 2002-12-03
BR1100309A (pt) 2000-08-01
NO940592D0 (no) 1994-02-21
CN1035256C (zh) 1997-06-25
FI120691B (fi) 2010-01-29
IL102848A (en) 1998-04-05
US5663146A (en) 1997-09-02
BG98489A (bg) 1995-02-28
KR100247212B1 (ko) 2000-03-15
HUT69178A (en) 1995-08-28
NO314695B1 (no) 2003-05-05
FI940807A0 (fi) 1994-02-21
FI940807A (fi) 1994-02-21
FI20050467A (fi) 2005-05-02
HU223664B1 (hu) 2004-11-29
RU2126014C1 (ru) 1999-02-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG62655B1 (bg) Пептиди, способни да освобождават растежен хормон
US5534494A (en) Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity
US5486505A (en) Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity
EP0647656B1 (en) Motilin-like polypeptides that inhibit gastrointestinal motor activity
EP0417165B1 (en) Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity
EP0540676B1 (en) Peptide compounds having growth hormone releasing activity
US7250399B2 (en) Compounds having growth hormone releasing activity
US5422341A (en) Motilin-like polypeptides with gastrointestinal motor stimulating activity