FI111462B - Menetelmä motiliinityyppisten polypeptidien valmistamiseksi, joilla on ruoansulatuskanavan motiliteettia stimuloivaa aktiivisuutta - Google Patents

Description

5 111462

Menetelmä motiliinityyppisten polypeptidien valmistamiseksi, joilla on ruoansulatuskanavan motiliteettia stimuloivaa aktiivisuutta Tämä keksintö koskee valmistusmenetelmää uusille polypep-tideille, joilla on voimakasta ruoansulatuskanavan motiliteettia stimuloivaa aktiivisuutta ja lisääntynyt meta-bolinen stabiilisuus, ja jotka ovat käyttökelpoisia hoi-10 dettaessa tiloja, joille on tunnusomaista ruoansulatuskanavan liikeaktiivisuuden alentunut perustaso, kuten dia-beettista mahalaukun osittaista halvausta, suoliston lihasten halvauksesta johtuvaa suolitukosta ja leikkauksen jälkeistä suolitukosta.

15

Motiliini on ruoansulatuskanavan suoraketjuinen polypeptidi-hormoni, joka stimuloi mahalaukkua, pohjukaissuolta ja paksusuolta. Vaikka motiliinin vaikutuksia ei täysin tunneta, on sillä merkitystä mahan motiliteetin lisäämisessä ja pep-20 siinin erittymisen stimuloinnissa, ja se voi myös olla tärkeä interdigestiivisen myoelektrisen kompleksin säätelyssä. Ihmisen motiliinia ei vielä ole puhdistettu, mutta sen immunologiset ominaisuudet viittaavat vahvasti siihen, että se on hyvin samanlainen kuin sian motiliini. Sian motiliini 25 sisältää 22 aminohappotähdettä, ja se voidaan esittää seu-raavalla kaavalla: 10 20

H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Mel-Gln-Glu-Lys-Clu-Arg-Asn-Lys-Gly-Gln-OH

30 Sian motiliinissa on hydrofobinen alue asemissa 1-5, hydrofiilinen alue asemissa 11 - 22, ja liitosalue ase-. . missä 6-10. Sian motiliinilla on myös a-helikaalinen , ·' - sekundäärinen rakenne primäärisen sekvenssin tähteestä 9 tähteeseen 20 [Khan et ai., Biochemistry 29 (1990) 5743-35 5751].

Motiliinin anto terveille ihmiskohteille nopeuttaa suolen läpikulkuaikaa ja nopeuttaa mahalaukun tyhjenemistä. In 2 111462 vitro motiliini stimuloi ihmisen ja kanin pohjukaissuolen lihassuikaleiden ja ruoansulatuskanavan eristettyjen sileiden lihasolujen supistuksia. Lisäksi motiliini ja jotkin sen johdannaisista kilpailevat radioleimatun motiliinin 5 kanssa sitoutumiskohdista ihmisen ja kanin antraaliseen kudokseen, mikä viittaa siihen, että spesifisten reseptorien stimulaatio ruoansulatuskanavassa on vastuussa hormonin fysiologisista vaikutuksista. Motiliinin infuusion on kuvattu stimuloivan kiinteiden aineiden ja nesteiden tyhjenemistä 10 potilailla, joilla on diabeettinen mahalaukun osittainen halvaus [Peeters et ai., Gastroenterology.100, (1991) A480].

Lisäksi motiliinia on käytetty hoitamaan potilaita, joilla on ruoansulatuskanavan karsinooman aiheuttama suoliston lihasten halvauksesta johtuva suolitukos [Meyer et ai., Med.

15 Klin. 86 (1991) 515-517].

Eräs tärkeä ongelma motiliinin kohdalla on sen suhteellisen lyhyt puoliintumisaika (tj 4,5 min ihmisillä [Christofides et ai., Gastroenterology 76 (1979) 903-907]. Tämä lyhyt puo-20 liintumisaika tekee välttämättömäksi antaa hormonia jatkuvalla infuusiolla terapeuttisen vaikutuksen aikaansaamiseksi .

Motiliinin N-terminaalinen aminohappojakso ja keskiosan mää-: 25 rätyt tähteet ovat välttämättömiä supistavalle vaikutukselle [Macielag et ai., Peptides 13 (1992) 565-569; Peeters et ai., Peptides 13 (1992) 1103-1107; Poitras et ai., Biochem. Biophys. Res. Commun. 183 (1992) 36-40]. Motiliinityyp-pisillä polypeptideillä, joissa on lyhyempi C-terminaalinen 30 pää, sisältävät 3-5 emäksistä aminohappoa, jotka on kyt- • » ketty asemasta 12, ja joissa on erilaisia aminohapposubs-tituutioita asemissa 1 - 11, on kuvattu olevan vähäisempi tai yhtä suuri aktiivisuus kuin motiliinilla. Millään motiliini tyyppisistä polypeptideistä ei kuvattu olevan lisäänty-35 nyttä metabolista stabiilisuutta [JP-patenttijulkaisu 2-311,495].

3 111462

Niinpä motiliinityyppiset polypeptid.it, joilla on voimakas ruoansulatuskanavan motiliteettia stimuloiva aktiivisuus ja kasvanut metabolinen stabiilisuus, olisivat käyttökelpoisia ruoansulatuskanavan liikeaktiivisuuden alentuneiden perus-5 tasojen hoitoon.

Tämä keksintö koskee menetelmää kaavan 1 mukaisten polypep-tidien valmistamiseksi, joilla on ruoansulatuskanavan liikettä stimuloivaa aktiivisuutta: 10 R2 (R.) N-*CHCO-A-B-D-E-Thr-F-G-H-Leu-I-J-NH-*CHR, (1)

II I

15 R3 CH2R4 CH2R5 mukaan lukien niiden optisesti aktiivisia isomeerisiä muotoja ja farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja, jossa: 20 A on lipofiilisen alifaattisen aminohapon L-stereoisomeeri; B on L-proliini tai L-alaniini; D on lipofiilisen alifaattisen aminohapon L-stereoisomeeri-nen muoto; E on aromaattisen, lipofiilisen alifaattisen, tai alisykli-25 sen aminohapon L-stereoisomeeri; : F on aromaattisen tai heteroaromaattisen aminohapon L-stere oisomeeri ; G on glysiini tai D-alaniini; H on L-glutamiinihappo tai L-glutamiini; 30 I on L-glutamiini, L-glutamiinihappo tai L-alaniini; J on suora sidos I:n ja ryhmän -NH- välillä, tai se on Z, Z-Leu, Z-Leu-Gln, Z-Leu-Gln-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn, Z Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys tai Z-Leu-35 Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly, jossa Z on D-arginiini, D-homoarginiini, D-lysiini, D-ornitiini, D-2,4-diaminovoihappo, D-glutamiini, D-asparagiini tai D-alaniini; R3 on alempi alkyyli tai allyyli; 4 111462 R2 on vety, alempi alkyyli, propargyyli tai allyyli; R3 on vety, alempi alkyyli tai allyyli; R4 on sykloalkyyli, substituoitu ja substituoimaton aryyli tai heteroaryyli, jossa aryyliryhmä voi olla substituoitu 5 yhdellä tai usealla substituentilla, joita ovat halogeeni, hydroksi ja alempi aikoksi; R5 on aminoalkyyliryhmä, jossa on 1 - 3 hiiliatomia tai gua-nidinoalkyyliryhmä, jossa on 2 tai 3 hiiliatomia tai on CH2CONH2 kun J on Z-leu tai Z-leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-10 Lys-Gly R6 on -COOH tai -CONH2; ja symboli * edustaa asymmetristä hiiliatomia, jolla voi olla D- tai L-konfiguraatio, ja kukin alempi alkyyliryhmä sisältää 1-4 hiiliatomia.

15 Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa .

Keksinnön mukaisesti saadut uudet polypeptidit sitoutuvat suurella affiniteetilla motiliinireseptoriin ja matkivat mo-20 tiliinin peristalttisia vaikutuksia ruoansulatuskanavan kudoksella. Uudet polypeptidit ovat myös tehokkaita prokineet-tisiä aineita in vivo, koska niillä on kasvanut stabiilisuus biohajoamista vastaan asiaankuuluvissa elinkudoshomogenaa-teissa. Motiliinityyppiset polypeptidit sisältävät leusiini-* 25 tähteen metioniinin sijasta asemassa 13 suurempaa kemiallis ta stabiilisuutta varten, D-arginiinitähteen L-arginiini-tähteen sijasta asemassa 12 suurempaa tehoa ja stabiili-suutta varten, ja alkyloidun fenyylialaniinitähteen asemassa 1 biohajoamisen vastaista suurempaa stabiilisuutta varten.

30 Sen vuoksi saadut polypeptidit ovat käyttökelpoisia hoidettaessa tiloja, joille on tunnusomaista ruoansulatuskanavan liikeaktiivisuuden alentunut perustaso, kuten diabeettista mahalaukun osittaista halvausta, suoliston lihasten halvauksesta johtuvaa suolitukosta ja leikkauksen jälkeistä suoli-35 tukosta.

Tämä keksintö koskee menetelmää uusien polypeptidien valmis- 5 111462 tamiseksi, joilla on voimakas ruoansulatuskanavan liikettä stimuloiva aktiivisuus. Hakemuksessa kuvataan myös menetelmiä ruoansulatuskanavan liikeaktiivisuuden perustason alenemisen tilan hoitamiseksi nisäkkäällä, edullisesti ihmisellä.

5 Menetelmissä nisäkkäälle annetaan tilan lievitykseen terapeuttisesti tehokas määrä kaavan 1 mukaista polypeptidiä: R2 10 (Rj) N-*CHCO-A-B-D-E-Thr-F-G-H-Leu-I-J-NH-*CHR6 (1) R3 ch2r4 ch2r5 mukaan lukien sen optisesti aktiivisia isomeerisiä muotoja 15 ja farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja. Kaavassa 1 symboli * edustaa asymmetristä hiiliatomia, jolla voi olla D- tai L-konfiguraatio, ja kukin alempi alkyyliryh-mä sisältää 1-4 hiiliatomia. Ryhmät A - J ja R, - R6 määritellään alla.

20

Keksinnön kaavan 1 mukaiset uudet yhdisteet ovat polypepti-dejä, jotka voivat olla 12 - 22 aminohapon pituisia, ja ovat edullisesti 12, 14, 16, 18, 20 tai 22 aminohapon pituisia. Uusien polypeptidien aminohappoainesosien stereokemia on 25 keksinnön oleellinen ominaispiirre. Yksittäisten aminohappo-: jen absoluuttinen stereokemia on L, ellei muuta mainita, paitsi asemassa 1 (aminoterminaalinen aminohappo, (R1)n(R2) (R3) N-*CH (CH2R4) CO-) , joka voi olla L tai D, asema 8 (ryhmä G), joka voi olla glysiini tai D-alaniini, asema 12, 30 joka voi olla L tai D, ja C-terminaalinen aminohappoasema, -NH-*CH (C2H5) R6, joka voi olla L tai D.

• I

Seuraavat lyhenteet, joita käytetään koko tässä selityksessä, määritellään alla esitetyllä tavalla:

Phe - fenyylialaniini Tyr - tyrosiini Nle - norleusiini 35 6 111462

Leu - leusiini

Cha - β-sykloheksyylialaniini Vai - väliini Ile - isoleusiini 5 Gly - glysiini Ala - alaniini Glu - glutamiinihappo Gin - glutamiini Arg - arginiini 10 h-Arg - homoarginiini Orn - ornitiini Dab - 2,4-diaminovoihappo Lys - lysiini Asn - asparagiini 15 Me - metyyli

Boc - butyylioksikarbonyyli Cbz - bentsyylioksikarbonyyli

Dhbt - 3,4-dihydro-4-oksobentstriatsin-3-yyli Fmoc - fluorenyylimetyylioksikarbonyyli 20 Mbh - 4,4'-dimetoksibentshydryyli

Mtr - 4-metoksi-2,3,6-trimetyylibentseenisulfonyyli Pfp - pentafluorifenyyli Trt - trityyli BOP - bentsotriatsolyylioksi-trisdimetyyliaminofosfoniumhek-: 25 safluorifosfaatti DCC - N,N’-disykloheksyylikarbodi-imidi DOM - dikloorimetaani DIC - di-isopropyylikarbodi-imidi DIEA - di-isopropyyiietyyliamiini 30 EDCC - N-dietyyliaminopropyyli-N1-sykloheksyylikarbodi-imidi HBTU - 2-(lH-bentsotriatsol-l-yyli)-1,1,3,3-tetrametyyliuro-niumheksafluorifosfaatti HEPES - (N-[2-hydroksietyyli]piperatsiini-N'-[2-etaanisulfo-fonihappo]) 35 HMPA - hydroksimetyylifenoksiasetoksi HOBt - 1-hydroksibentsotriatsoli MBHA - 4-metyylibentshydryyliamino 7 111462 PAM - hydroksimetyylifenyyliasetamidometyyli PyBrOP - bromi-tris-pyrrolidino-fosfoniumheksafluorifos-faatti DMF - N, N-dimetyyliformamidi 5 NMM - N-metyylimorfOliini NMP - N-metyylipyrrolidinoni TCA - trikloorietikkahappo TEA - trietyyliamiini TFA - trifluorietikkahappo 10 TFMSA - trifluorimetaanisulfonihappo

Asema 1. amino terminaalinen aminohappo. (Rt) (RJ (R^N-*CH(CH:R1)CO- 15 Aminohapolla polypeptidin aminoterminaalisessa osassa, (Rj) (R2) (R3)N-*CH(CH2R4) CO-, asemassa 1 voi olla L- tai D-konfiguraatio. R2 on alempi alkyyli tai allyyli; R2 voi olla vety, alempi alkyyli, propargyyli tai allyyli; ja R3 voi olla vety, alempi alkyyli tai allyyli. Käsite "alempi alkyyli" 20 viittaa tässä käytettäessä suoraketjuisiin ja haaroittu- neisiin hiilivetyradikaaleihin, jotka sisältävät 1-4 hiiliatomia. Esimerkkejä sopivista alemmista alkyyliryhmistä ryhmiä R4, R2 ja R, varten ovat metyyli, etyyli, propyyli, ;- isopropyyli, butyyli, isobutyyli ja sec-butyyli, edullisesti > 25 metyyli.

Aminotähde voi myös olla sekundäärinen amiini, tertiäärinen amiini tai kvaternäärinen ammoniumsuola, joka on substituoi-tu yhdellä, kahdella tai kolmella, vastaavasti, alemmalla 30 alkyyliryhmällä, joissa on 1 - 4 hiiliatomia, ja edullisesti metyylillä tai etyylillä. Aminotähde voi myös olla substitu-oitu yhdellä propargyyliryhmällä aikaansaamaan esimerkiksi N-propargyyli-, N-metyyli-N-propargyyli-, N,N-dimetyyli-N-propargyylisubstituoituja aminoryhmiä, tai jopa kolmella al-35 lyyliryhmällä. Edullisesti aminoterminaalinen aminohappo on N-substituoitu, ja edullisia substituentteja ovat 1-3 me- 8 111462 tyyliryhmää.

R, on sykloalkyyli, substituoitu tai substituoimaton aryyli tai heteroaryyli, jossa aryyliryhmä voi sisältää yhden tai 5 useita substituetteja, joita ovat halogeeni, hydroksi, ja alempi alkoksi. Edullisia substituoituja ja substituoimatto-mia aryyliryhmiä ovat fenyyli, p-fluorifenyyli, p-kloori-fenyyli, p-bromifenyyli, p-jodifenyyli, p-hydroksifenyyli, p-metoksifenyyli ja 1-naftyyli. Edullisia heteroaryyliryhmiä 10 ovat 3-indolyyli, 2-tienyyli ja 3-pyridyyli. Edullisia syk-loalkyyliryhmiä ovat syklopentyyli, sykloheksyyli ja syklo-pentyyli. Edullisesti R4 on metyyli, etyyli, n-propyyli, iso-propyyli, n-butyyli, sykloheksyyli, fenyyli, p-fluori-fenyyli, p-kloorifenyyli, p-bromifenyyli, p-jodifenyyli, p-15 hydroksifenyyli, p-metoksifenyyli, 1-naftyyli, 2-naftyyli, 3-indolyyli, 2-tienyyli tai 3-pyridyyli. Edullisemmin R4 on fenyyli tai sykloheksyyli. Esimerkkejä aminohappotähteistä, joista (Rj) (R2) (R3) N-*CH (CH2R4) CO- voi olla johdettu, ovat fe-nyylialaniini, p-fluorifenyylialaniini, p-kloorifenyyli-20 alaniini, p-bromifenyylialaniini, p-jodifenyylialaniini, ty-rosiini, p-metoksifenyylialaniini, 1-naftyylialaniini, 2-naftyylialaniini, tryptofaani, β-2-tienyylialaniini, β-3-pyridyylialaniini, α-aminovoihappo, norvaliini, norleusiini, leusiini ja sykloheksyylialaniini. Yhdisteitä varten, joilla l 25 on korkeampi gastrointestinaalinen peristalttinen aktiivi suus, edullisia aminoterminaalisia aminohappoja ovat L-fe-nyylialaniini, D-fenyylialaniini, L-sykloheksyylialaniini ja D-sykloheksyylialaniini.

3 0 Asema 2 , ryhmä A

* t

Ryhmä A polypeptidin asemassa 2 on aminohappo, joka on lipo-fiilisen alifaattisen tai alisyklisen aminohapon L-stereo-isomeeri. Esimerkkejä L-lipofiilisistä alifaattisista ja alisyklisistä aminohapoista ovat L-valiini, L-isoleusiini, 35 L-leusiini, L-L-norvaliini, L-norleusiini ja L-sykloheksyylialaniini. Edullisia ryhmän A aminohappoja ovat L-valiini, 9 111462 L-leusiini ja L-isoleusiini.

Asema 3, ryhmä B

Ryhmä B polypeptidin asemassa 3 on aminohappo, joka on L-5 proliini tai L-alaniini. Yhdisteitä varten, joilla on korkeat motiliinireseptoriagonistiaktiivisuuden tasot, edullinen ryhmän B aminohappo on L-proliini.

Asema 4. rvhmä D

10 Ryhmä D polypeptidin asemassa 4 on aminohappo, joka on lipo-fiilisen alifaattisen tai alisyklisen aminohapon L-stereo-isomeeri. Esimerkkejä L-lipofiilisista alifaattisista ja alisyklisistä aminohapoista ovat L-isoleusiini, L-valiini, L-leusiini, L-norvaliini, L-norleusiini ja L-sykloheksyy-15 lialaniini. Edullisia ryhmän D aminohappoja ovat L-isoleusiini, L-leusiini ja L-sykloheksyylialaniini.

Asema 5. rvhmä E

Ryhmä E polypeptidin asemassa 5 on aminohappo, joka on aro-20 maattisen, lipofiilisen alifaattisen tai alisyklisen aminohapon L-stereoisomeeri. Esimerkkejä L-aromaattisista, lipo-fiilisistä alifaattisista ja alisyklisistä aminohapoista : ovat tähteet, jotka ovat peräisin fenyylialaniinista, p- fluorifenyylialaniinista, p-kloorifenyylialaniinista, p-25 bromifenyylialaniinista, p-jodifenyylialaniinista, tyrosii-nista, p-metoksifenyylialaniinista, 1-naftyylialaniinista, 2-naftyylialaniinista, leusiinista tai sykloheksyylialanii-nista. Edullisia ryhmän E aminohappoja ovat L-fenyylialanii- * ni ja L-sykloheksyylialaniini.

30

Asema 6. L-treoniini

Aminohappo polypeptidin asemassa 6 on L-treoniini.

10 111462

Asema 7. rvhmä F

Ryhmä F polypeptidin asemassa 7 on aminohappo, joka on aromaattisen tai heteroaromaattisen aminohapon L-stereoisomee-ri. Esimerkkejä aromaattisista ja heteroaromaattisista ami-5 nohapoista ovat tyrosiini, fenyylialaniini, p-metoksifenyy-lialaniini, histidiini, tryptofaani, β-2-tienyylialaniini ja β-3-pyridyylialaniini. Edullisia ryhmän F aminohappoja ovat L-tyrosiini, L-histidiini ja L-fenyylialaniini.

10 Asema 8. rvhmä G

Ryhmä G polypeptidin asemassa 8 on aminohappo, joka on gly-siini tai D-alaniini, ja edullisesti se on glysiini.

Asema 9. rvhmä H

15 Ryhmä G polypeptidin asemassa 9 on aminohappo, joka on L-glutamiinihappo tai L-glutamiini, ja on edullisesti L-gluta-miinihappo.

Asema 10. L-leusiini 20 Aminohappo polypeptidin asemassa 10 on L-leusiini.

: Asema 11. rvhmä I

Ryhmä I polypeptidin asemassa 11 on aminohappo, joka on L-glutamiini, L-glutamiinihappo tai L-alaniini. Edullisia ryh-25 män I aminohappoja ovat L-glutamiini ja L-alaniini.

Rvhmä J

Ryhmä J polypeptidissä voi olla suora sidos ryhmän I ja ryhmän -NH- välillä, tai se voi olla Z, Z-Leu, Z-Leu-Gln, Z-30 Leu-Gln-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys tai Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly, ja edullisesti Z-Leu, Z-Leu-Gln-Glu, Z-Leu- 11 111462

Gln-Glu--Lys-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn tai Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly. Ryhmä Z on aminohappo, joka on D-arginiini, D-homoarginiini, D-lysiini, D-ornitiini, D- 2,4-diaminovoihappo, D-glutamiini, D-asparagiini tai D-5 alaniini, edullisesti se on arginiini, D-arginiini, D-glutamiini tai D-alaniini.

Asema 12

Kun ryhmä J polypeptidissä on suora sidos ryhmän I ja ryhmän 10 -NH- välillä, polypeptidi on dodekapeptidi, ja aminohappo asemassa 12 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH-*CH(C2H5)R6. Kun ryhmä J on suora sidos ja ryhmät R2 ja R3 polypeptidin asemassa 1 ovat vety, on aminohapolla asemassa 12 D-konfiguraatio. Ryhmä R5 on aminoalkyyliryhmä, joka si-15 sältää 1-3 hiiliatomia, tai guanidinoalkyyliryhmä, joka sisältää 2 tai 3 hiiliatomia, ja on edullisesti guanidinoalkyyliryhmä, jossa on 2 tai 3 hiiliatomia. Edullisia aminoal-kyyliryhmiä ovat aminometyyli, 2-aminoetyyli ja 3-amino-n-propyyli. Edullisia guanidinoalkyyliryhmiä ovat N-2-guani-20 dinoetyyli ja N-3-guanidino-n-propyyli. Ryhmä R6 on -COOH tai -CONH2, edullisesti -C0NH2. Edullisesti popypeptidin C-termimnaalisessa päässä oleva aminohappo, -NH*CH (C2H5) R6 tässä suoritusmuodossa on arginiini, D-arginiini, lysiini, D-lysiini, D-ornitiini, D-2,4-diaminovoihappo tai D-homoar-25 giniini, ja edullisemmin se on arginiini, D-arginiini tai lysiini.

Kun ryhmä J polypeptidissä ei ole suora sidos ryhmän I ja ryhmän -NH- välillä, aminohappo asemassa 12 on Z. Kuten edel-3 0 lä esitetään, ryhmä Z on aminohappo, joka on D-arginiini, D- • t t lii I | homoarginiim, D-lysuni, D-ornitnni, D-2,4-diammovoihappo, D-glutamiini, D-asparagiini tai D-alaniini. Edullisesti ryhmä Z on D-arginiini, D-glutamiini tai D-alaniini, edullisemmin ryhmä Z on D-arginiini. Kun ryhmät R2 ja R3 polypeptidin ase-35 massa 1 ovat vety, ryhmän Z aminohapolla on D-konfiguraatio.

12 111462

Asema 13

Kun keksinnön mukainen peptidi on tridekapeptidi, aminohappo asemassa 13 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH-*CH(C2H5) R6, sillä voi olla L- tai D-konf iguraatio, ja se voi 5 olla lysiini, ornitiini, 2,4-diaminovoihappo, arginiini tai homoarginiini, edullisesti L-lysiini tai D-lysiini.

Kun keksinnön mukainen polypeptidi on suurempi kuin tridekapeptidi, aminohappo asemassa 13 on L-leusiini.

10

Asema 14

Kun keksinnön mukainen peptidi on tetradekapeptidi, aminohappo asemassa 14 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH-*CH(C2H5)R6, sillä voi olla L- tai D-konf iguraatio, ja se voi 15 olla glutamiini, lysiini, ornitiini, 2,4-diaminovoihappo, arginiini tai homoarginiini, edullisesti se on L-lysiini, D-lysiini, L-glutamiini tai D-glutamiini.

Kun keksinnön mukainen polypeptidi on suurempi kuin tetrade-20 kapeptidi, aminohappo polypeptidin asemassa 14 on L-glutamiini .

Asema 15

Kun keksinnön mukainen peptidi on pentadekapeptidi, amino-25 happo asemassa 15 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH-*CH(C2H5)R6, sillä voi olla L- tai D-konf iguraatio, ja se voi olla lysiini, ornitiini, 2,4-diaminovoihappo, arginiini tai homoarginiini, edullisesti L-lysiini tai D-lysiini.

Kun keksinnön mukainen polypeptidi on suurempi kuin pentade-30 kapeptidi, aminohappo asemassa 15 on L-glutamiinihappo.

Asema 16

Kun keksinnön mukainen peptidi on heksadekapeptidi, aminohappo asemassa 16 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH- 13 111462 *CH(C2H5)R6, sillä voi olla L- tai D-konfiguraatio, ja se voi olla lysiini, ornitiini, 2,4-diaminovoihappo, arginiini tai homoarginiini, edullisesti L-lysiini tai D-lysiini.

5 Kun keksinnön mukainen polypeptidi on suurempi kuin heksade-kapeptidi, aminohappo asemassa 16 on L-lysiini.

Asema 17 10 Kun keksinnön mukainen peptidi on heptadekapeptidi, aminohappo asemassa 17 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH-*CH(C2HS)R6, sillä voi olla L- tai D-konfiguraatio, ja se voi olla lysiini, ornitiini, 2,4-diaminovoihappo, arginiini tai homoarginiini, edullisesti L-lysiini tai D-lysiini.

15

Kun keksinnön mukainen polypeptidi on suurempi kuin heptadekapeptidi, aminohappo asemassa 17 on L-glutamiinihappo.

Asema 18 20 Kun keksinnön mukainen peptidi on oktadekapeptidi, aminohappo asemassa 18 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH-*CH(C2H5)R6, sillä voi olla L- tai D-konfiguraatio, ja se voi olla lysiini, ornitiini, 2,4-diaminovoihappo, arginiini tai homoarginiini, edullisesti se on L-lysiini, D-lysiini, L-25 arginiini tai D-arginiini.

Kun keksinnön mukainen polypeptidi on suurempi kuin oktadekapeptidi, aminohappo asemassa 18 on L-arginiini.

30 Asema 19

Kun keksinnön mukainen peptidi on nonadekapeptidi, aminohappo asemassa 19 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH-*CH (C2H5) R6, sillä voi olla L- tai D-konfiguraatio, ja se voi olla lysiini, ornitiini, 2,4-diaminovoihappo, arginiini tai 35 homoarginiini, edullisesti L-lysiini tai D-lysiini.

14 111462

Kun keksinnön mukainen polypeptidi on suurempi kuin nonade-kapeptidi, aminohappo asemassa 19 on L-asparagiini.

5 Asema 20

Kun keksinnön mukainen peptidi koostuu 20 aminohaposta, aminohappo asemassa 20 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH-*CH (C2H5) R6, sillä voi olla L- tai D-konf iguraatio, ja se voi olla lysiini, ornitiini, 2,4-diaminovoihappo, arginiini 10 tai homoarginiini, edullisesti L-lysiini tai D-lysiini.

Kun keksinnön mukaisessa polypeptidi on useampia kuin 20 aminohappoa, aminohappo asemassa 20 on L-lysiini.

15 Asema 21

Kun keksinnön mukainen peptidi koostuu 21 aminohaposta, aminohappo asemassa 21 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH-*CH (C2H5) R6, sillä voi olla L- tai D-konf iguraatio, ja se voi olla lysiini, ornitiini, 2,4-diaminovoihappo, arginiini 20 tai homoarginiini, edullisesti L-lysiini tai D-lysiini.

Kun keksinnön mukaisessa polypeptidissä on useampia kuin 21 aminohappoa, aminohappo asemassa 21 on glysiini.

Asema 22 25 Aminohappo keksinnön mukaisten määrättyjen polypeptidien asemassa 22 on polypeptidin C-terminaalinen osa, -NH-*CH(C2H5)R6, sillä voi olla L- tai D-konf iguraatio, ja se voi olla glutamiini, lysiini, ornitiini, 2,4-diaminovoihappo, * , arginiini tai homoarginiini, ja on edullisesti L-lysiini, D-30 lysiini, L-glutamiini tai D-glutamiini.

C-terminaalinen aminohappo, -NH-*CH (C,H.) Rc Tähde keksinnön mukaisten polypeptidien C-terminaalisessa 15 111462 asemessa, -NH-*CH(C2H5)R6, on aminohappo, jossa on C-termi-naalinen karboksyylihappojohdannainen R6, jossa R6 on -COOK tai -CONH2, edullisesti -CONH2. Rs on edellä määritelty.

5 Käsite "sykloalkyyli" tarkoittaa tässä käytettäessä syklisiä hiilivetyradikaaleja, joissa on 5 - 7 hiiliatomia. Esimerkkejä sopivista syklisistä hiilivetyradikaaleista ovat syklo-pentyyli, sykloheksyyli ja sykloheptyyli. Käsite "halogeeni" sisältää tässä käytettäessä kaikki 4 halogeenia, jolloin 10 kloori on edullinen.

Eräässä edullisessa suoritusmuodossa keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat: H-Phe-Vtl-Pro-J le*Phe-Thr-Tyr-GlyGlu*Leu-Gln-D-Ars’Leu-Gln-ly*-GlU*Ar8'A*n'l-y*'GlVGln*0H» H-Fhe-V*l-Pro-Ile*Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Gln-D-Ar9-Leu-Gln-lyt-Glu-Are’Asn*Ly»‘Cly*Gln-WH2; H-Phe-V*l-Al»-Jle*Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu*leu-Gtn-D-Ar8-l.eu-Gln-lys*Glu*Are-A*n*».ys-Gly-Gln*0H; «-Phe-V*l*Al»-UfPhe-Thr-Tyr*eiy'Glu*L«i-Gln-D-Arfl-leu-Gln*Lys*6lu-Ar9*A*n-lys-Gly-Gln-IIH2; H-Phe-V*l*Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-Leu-Gln-D-Ar9'NH2; H*Phe-V«l-Pro-lle*Phe*Thr*Tyr*Gly*Glu-Leu*Gln-D*Ar9-Leu-Gln*0H; <M-Me>-Phe-Vil*Pro-Ilt-Phe-Thr-Tyr*Gly*Clu*Leu-Gln-C>-Arg-Leu-6ln-OH; M-Phe-V*l-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-Leu-Gln-D-h-Ar9-Leu-Gln-0H; H*Phe*V«t*Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly'Glu-Leu-Gln-P*Lys-Leu-Gln-OH; M*Phe-V*l-Pro-lle-Phe-Thr*Tyr-Gly*Glu*l*u-Gtn*P-Orn-l.eu-Gln*OH; H-Phe-V*l-Pro*Ile*Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-Leu*Gln-D-D8b-Leu*Gln*0H; H-Phe-V«l*Pre-Il«-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-Leu-Gln-D-Gln-Leu-Gtn-OH; M-Phe-V»t-Pro-Il*-Ptie-Thr-Tyr-Gly*Glu-L«j-Gln-D-Al**Leu-Gln-OH; H-Ph«-V«t-Al·-! le*Phe-Thr*Tyr*GlyGlu-Leu-Gln-0-Ar9'L*«*Gln-OH; M-Phe-V*l-Pro-Leu*Phe-Thr-Tyr*Gly*Glu-Leu*Gln-D-Ar9'L*u'Gln*0,,«' H-Phe-V*l*Pro-Il**Ch«*Thr*Tyr-Gly'Glu-L«ti-Gln-0"Ar9*L*u-Gln*OH; M-Ph»-V»l*Pro-n**Phe-Thr-Phe-Gly*Glu-L*u-Gln-D-Ar8*l-eu‘cln*OH»· M-Phe-Vil-Pre-Ile-Phe-Thr*Tyr*0*Ale-Glu-L*u-Gln-D'ArB-Le«-GtrT-0«; K*Ph**Vml-Pro-IU-Ph«*Thr-Tyr*Gly*Glu-L*u*AU-0-ArS'L*u‘clr'“OH<' H'Phe-L«u-Pro-Il**Ph**Thr-Tyr-Gly*Glu-Leu-Gln-0-Ar8'L*u*Gln'OH*' H*Phe-V«l-Pro-Il*-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-L*u-Gln-D-ArB'1-eu'clr'*,,H2.*

Cll-Me)-Phe*V«l-Pre*n*-Phe*Thr-Tyr*GlyGlu*Leu*Gln'I>'Ar9'>-*u*eift*HH2; 0»«2«)*Phe-V*l*Pro*lle*Phe-Thr-TyGtyClu-ley-Gln'D*Are-l-eu*Cln*>IH2; • <H*jK*)-Phe-V8l'Pro*Il**Phe-Thp-Tyr-GtyGlu-Leu-Gln-I>*Arg-leu-Gln-IIH2; 111462 16 »l-Pt\e-Vel-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-GlyGtu-leu-Gln-D-h-Arg-leu-Gln-IIH2; H-Phe-Vil-Pro-I te-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Lys-l.wj-Gln-«H2; H-Pha-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Gln-D-Orn-teu-Gln-NH2; H-Ph*-V*l-Pro-Ile-Phe-Thr*Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Dab-Leu*Gln'NH2; B-Pt»»-V«t*Pro-I l*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leo-Gln-D-Gtn-Leu-Gtn-NH2; N-Ph*'V»l-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-U*u-Gln-D-Ala-Leu-Gtn-WH2; B-Ph«-Val-Ala-ne-Pht-Thr-Tyr-GtyGlu-Leu-Gln-D-Arg-L«u-Gln-NH2; H-Phe-Val-Pro-l.au-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-NH2; H-Phe-Val-Pro-!le-Cha-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Gln-D-Arg-Leu-Gtn-NH2; H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Phe-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-leu-Gln-NH2; H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-D-Ala-Glu-Leu-Gln-D-Arg-I.eu-Gln-NH2; H-Phe-Vel-Pro-Ile-Phe*Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ata-0-Arg-leu-Gln-NH2; H-Phe-Leu-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-GtyGlu-leu-Gln-D-Arg-Leu-G(n-NH2; H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-Ht^; K-D-Phe-Val-Pro-Ila-Phe-Thr-Tyi-GtyGtu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH; H-Che-Val-Pro-Jle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-leu-Gln-OH; H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-Leu-Gln-D-Asn-Leu-Gln-OH; H-D-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-NH2; H-Cha-Val-Pro-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-leu-Gln-Ni^; H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Asn-leu-Gln-NH2; H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-GLn-D-Arg-leu-D-Gln-NH2; H-Phe-Val-Ala-Ilt-Phe-Thr-Tyr-Gly-GLu-Leu-Gln-D-Arg-NH2; H-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH; (N-Me)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-Leu-Gln-D-Arg-leu-Gln-OH; <He2V)'Phe-Val-Ala-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-l.eu-Gln-D-Arg-leu-Gln-OH; (Me3N+)-Phe-Val-Ala'Ila-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH; H-Phe-Val-Ala-leu-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-Oh; H-Ph*-Val-Ala-Jle-Cha-Thr-Tyr-GlyGlu-l.au-Gln-D-Arg-l.eu-Gtn-0«; H-Pht-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Phe-Gty-Glu-Leu-Ctn-D-Arg-Leu-Gln-ON; H-Phe-Val-Ala-Ila-Phe-Thr-Tyr-D-Ala-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH; H-Phe-Val-Ate-Ile-Pha-Thr-Tyr-ClyGtu-Leu-Ala-D-Arg-leu-Gln-OH; H-Phe-leu-Ala-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Lau-Gln-D-Arg-Leu-Gln-OH; H-Phe-Vel-Ale-ne-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-leu-Gln-WH2; (K-He)‘Ph*-Val-Ala-ll»-PH«-Thr*Tyr-GtyGlu-leu-Gln-D-Arg-leu-Gln*KH2; <M«2*0'Ph**Val-Ale-ne-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-HH2; (N«3t<*)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-Leu-Gln-D-Arg-leu-Gln-MH2; .· H-Phe-Val-Ala-Lau-Ph«-Thr-Tyr-ClyGlu*lau-Gln-D-Arg-leu-Gln-MH2; M-Phe-Val*Ala-Ile-Cha-Thr-Tyr-Gly-Glu-lau-Gln-D-Arg-leu-Gln-MH2; H-Ph*-Val-Ala-Ue-Phe-Thr-Phe-GlyGlu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-llH2; H-Phe-Val-Ala-Ile*Phe-Thr-Tyr-D-Ala-Glu-Leu-Gln-D-Arg-leu-Gln->IH2; 17 111462 H-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Ata-D-Arg-Leu-Gln-NH2; H-Phe-L«u-Al»-I te-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gtn-NH2; M-Phe-Vel-Ala-Ile-Phe*Thr*Tyr-Gly-Glu-l.eu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2; H-D-Pht-VaL-Ala-Jle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gtn-OH; M-Cha-Vat*Ale-ne-Phe-Thr*Tyr-Gty-Glu-Lau-Gln-D-Arg-l.eu-Gln-OH; H-Phe-Val'Pel-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Gln-OH; H-D*Phe-V»t-Al«-lle-Phe-Thr*Tyr*Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Gln-MH2; H-Cha-Vel-Ale-Ile-Pha-Thr-Tyr*Gly-Glu-Leu*Gln-D-Arg-leu-Gln-NH2; H-Pha-Val*Pal-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gtn-Arg-leu-Gln*NH2; M-Phe-Val*Ala*Ile*Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-XH2; (N-Me)-Phe-Val-Ala*lla*Phe-Thr-Tyr-Gly-Clu*itu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2; (He2tO-Phe-V*l-At»-Ile-Phe'Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-MH2; (He3K4)-Phe-V»l-Al*-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2; (N-Me)*Phe*V»l-Pro-J le-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-KH2; (He2»0*Phe*V«l*Pro-Ile*Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gtn-D-Arg-Leu-D*Gln-NH2; <Me3>l+)*Phe-Val-Pro*ne-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2; (N-M«)-Phe-V«t-Ata-1 le-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leii-Lys-HH2; <He2«)*Ph**V«l-Ala-Ue-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D'Arg-Leu-Ly*-»IK2; (Me3K4)*Phe-V«l*Al«-Ile*Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-teu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2; (N-He)-Phe-Val*Pro*I le-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-lya->IH2; (He2>l)-Phe-V*l-Pro-I le-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu*Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lyt-IIK2; 0<«3»l4)-Pti*-Val-Pro-ne-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Ly*-KH2; <N-Me)-Phe-V*l*Al*-Ite-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-leu-D-Ly»-NH2; (K*2*<)-Phe-V»l-Al»-I le-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-GlrvD-Arg-Leu-D-ly»-NH2; ! (He3H+)-Phe-V«l-Al»-Ile-Phe-Thr-Tyr*Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Ly*-NH2; (M-Me)*Ph«-Val-Pro-IlfPhe-Thr-Tyr*GlyGtu*Leo-Gln-D-Arg-Leu-D*Ly»-IIH2; <t*e2*0-W»e'Val-Pro-I le*Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-GLn-D-Arg-Leu-0-lya-NH2; <Me3K4)-Pt»e-Val-Pro-lle-Pha-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-D-Ly*-NH2; (M-Na)-Pha-Val-Ala-Ila-Phe-Thr*Tyr-Gly*Glu-Leu-Ale-D-Arg-Leu-Gln-NK2; <H«2tO*Pt*«*Val'Ala-Il*-Ph«-Thr*Tyr-Gty-Glu-leu-Ale-D-Arg-Leu-Gln-MH2; {He3K4>*Phe*Vat-Ata*!la-Phe-Thp*Tyr-Cly-Glu-Leu-Ata-D-Arg-Leu-Gln-NH2; <ll-Ha)-Pha-Vat*PPO*Ila-Phe-Thr-Tyr-Gly*Clu-Leo-Ala-D-Arg-Leu-Gln*llH2; (He2K>-Ph**Val-Pro-Ile*Phe-Thr-Tyr*Gly-Glu-leu-Ala-D-Arg-leu-Gln-KH2; (He3N+>-Phe-Val-Pro-I la-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Gln'>IH2; (M-(ie)*Pha*Val*Ala-I la-Pha-Thr-Tyr-Gly*Glu*leu-Ala-D*Arg-Leu-D-Cln-IIH2; (M«2N>*M>**Val-ALa-lle-Pha-Thr-Tyr*Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Gln-MH2; • « {He3»Tf)*Phe-Val-Ala-Ila-Pf»e-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-0*Arg-leu-D*Ctn-MH2; <K-Ke)*Phe-Vat*Pro*ne-Pt>e-Thr-Tyr*Gly-Glu*Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-ClrvNH2; (Me2>0-Phe-V*l-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Ale-D-Arg-Leu-D-Gln-MH2; 18 111462 (Me3H+)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe*Thr-Tyr-GtyGlu-l.eu-Ala-D-Arg-Leu-D-Gtn-WH2; (N-He)-Phe-V*l-Al*-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Al»-D-Arg-Leu-Ly«*HH2; (Me2W)-Phe'V«l-AlA-Il*-Phe-Thr*Tyr-Gly-Glu-Leu-Ale-D-Arg-Leu-ly«-MH2; <M«3N4)-Phe-Vat-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-leu-Ala-D-Arg-Leu-Ly*-HH2; (N-He)-Phe-Val-Pro-U*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Al*-D-Arg-Leu-Lyi-»IH2; (Ke2lO-Phe-Val-Pro-Il*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Ly«-MH2; (Me3H+)-Phe'V»l*Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-Leu-Ata-D-Arg-leu-ly*-MH2· (M-He)*Ph*-Val*Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leo-0-Lya-HH2; (H«2H)-Phe-Val-Ala-Il*-Phe*Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ata-D-Arg-Leu-D-t.ya-HH2; (He3H+)-Phe-Vel-Ala-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-Ltu-Ala-D-Arg-Leu-0-Lyt-MH2; (N-He)-Phc-Vel-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr*Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-0-Ly*-NH2; (Me2H)*Phe-Val-Pro-Ue-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-D-Lys-HH2; (Me3H*)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D*Arg-Leu-D-Ly»*NH2; («-Me)'Phe-Val-Ala-ne-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg'NH2; (Ke2H)-Phe-Val*Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2; <He3(i+)-Phe-Val-Ala*Ile-Phe-Thr*Tyr*Gly-Glu-Leu-Gtn-0-Arg-HH2; (W-Me)-Phe-Vat-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-Leu-Gln-D-Arg-NH2; (He2>0'Phe-Val-Pro-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-»iH2; (Ke3M*)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Gln-p-Arg-NH2; (N-Me)"Phe-Val-Pro*Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-KH2; (He2K)-Phe*Vat-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-0-Arg-WH2; <Ke3N+)-Phe-Val-Pro-Il*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Ale-D-Arg-NH2; D-Cha-Vat-Ata-lle-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-L«j-Ala-D-Arg-Leu-D-l.ys-HH2; <N-He)-Phe-Val-Pro'Ile*Phe'Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu*Gln-Arg-NH2; <He2W)-Phe-Val-Pro-IlfPhe*Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-G[n-Arg-HH2; (He3A*)-Phe-Vat-Pro*Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-NH2; (M-K«)-Ph*-Val-Pro-Il*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu'Gln-D-Arg-NH2; <Ke2M)-Phe-Vat-Pro-n*-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-Leu-GlivD-Arg-WH2; (H«3M*)-Phe-Vat'Pro-U#-Phe-Thr-Tyr-GlyGtu-leu-Gln-D-Arg-NH2; C«*Ne)-Phe-Val-Ala-ll*-Ph*-Thr-Tyr-GlyGlu-Leu-Gtn-Arg-MH2; <He2N)-Ph*-Val-Ala-Il*-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-L*u-Gln-Arg-HH2; <He3M+)-Phe-Val*Ala-Ila-Phe-Thr*Tyr-GlyGlu-Leu-Gtn-Arg-NK2; <K-N«)-Ptie-V#l-Ata'U*-Phe'Thr-Tyr-GlyGlu-Leu-Gln-p-Arp-KH2; <He2N)-Phe-Val-Ala-Il*-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-L«j-Gln-D-Arg-NH2; <H*3>l,f>-Phe*Val-Ala-Il**Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-leu-Gln-D-Arg-HH2; <M-Me)-PHe-Val-Ale-Il*-Pt»e'Thr-Tyr-CtyGlu-Leu-Ala*Arg-AH2; <He2*0'Pt>e-Val-Ala-Il»-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-Leu-Ata-Arg-NH2; (M«3i(+>-Pht-Val-Ala-ll*-Phe-Thr-Tyr-GlyGlu-Le(j-Ala-Arg-»IH2; 19 111462 (N-Me)*Phe-V«l-Pro-Il#-Phe-Thr*Tyr*Cly-Clu-Leu-Cln-Are"I-*u'Ly*-MH2; <Me2K)'PKe-V*l-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr*Cly-6tu-Leu-Gln-Arfl*Leu-Lys*NH2; (He3H+)-Phe-V*l-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-Leu-Gln-Arfl-Leu-lyt-KH2; 5 (N-Ke)'Phe-V»l-Al*-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arfl-Leu-ly«-IIH2;

Ote2lO'Phe-V«t-AU-Il*-Phe*Thr-Tyr-Gty-Gtu-Leu-Gln-Arfl-Leu-ty»*IIH2; <He3M‘f)-Phe-V«t-Al«-n**Phe*Thr*Tyr-Gly-Glu*Leu-Gln*Are-Leu-Ly»-NH2; CM*N«)*Ph**V*l-Pro-ll**Ph«'Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ale*Are'L*u'Ly»'HH2; (N«2»0*Ph«-V«l-Pro*lU*Phe*Thr*Tyr-Gly-Glu-leu-At**Are'L»J-Ly*->IH2; 10 <K«3M*)-Phe-V«l-Pro*l le'Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu*Leu-Ale*Are*Leu-Ly»-IIH2; <N-He)'Phe-Vil-Al*-It*-Phe-ThP-Tyr*Gly-Gtu-Leu-Ate*Ar0*Leu-Ly*-MH2; CHe2M)-Phe-Vil-Al«-Il*-Phe-Thr*Tyr'GtyGlu-Leu-Al«'Ar0*lew*Ly**IIH2; <He3N4)*Phe-Vil-Al«-Ile-Phe-Thr-Tyr-GlyGLu-Leu-Ale-Are*Leu-Ly»-IIH2i <«-Ne)-Phe-Vtt-Pro-Il*-Phe-Thr*Tyr-GtyGlu-Leu-Gln-Ar0'LeU'D-Gtn-NH2; 15 tM*2«>*Phe-V»l-Pro-JU*Phe-Thr-Tyr-GlyGlo-Leu-Gln-ArB'l-eu-D-Gln*»tH2; (•^M^-Phe-Vat-Pro-lle-Phe-Thp-Tyr-GlyGlu-Leu-Gln-Are^e^D^Gln-MIte; (N-He)*Phe-Vet-Al«-lle*Phe*Thr-Tyr-Gly-GLu-Leu-Gln*ArB*Leu"D"Gln-NH2; (Me2»O-Phe*Vil*Al*-He-Phe-Thr-Typ*GlyGlu-Leu'Gln-Ar0-Leu-D-Gln*tlH2; <H«3«+)*Ph**V*l*Al»-Ile-Phe-Thr-Tyr*GlyGlu'Leu-Gln-Are-Leu-D-Gln-MH2; 20 <N-Ke)*Phe-V«t-Pro*Ile-Phe-Thr-Typ-GlyGlu-Leu'Ala'Ar0-Leu-O-Gln-llH2; <Ne2M)*Phe-V*l-Pro-Ile-Wie-Thr-Tyr-GlyGtu-Leu-Ale-Ar0*Leu-D-Gtn-KH2; (He3«4)*Phe*V«l-Pro-Il*-Phe-Thr*Tyr-GlyGlu-Leu-Al»-Arg-teu-D-Gln-ltH2; (H-Ke)-Phe*V«l-Al«-Il*-Pt»e*Thr-Tyr'GtyGlu-Leu-Ala-Are-Leu-D-Cln*IIH2; <M«2»0-Phe-V«l-Al»-Jle-Phe-Thr-Tyr-GtyGlu-leu-Al*-Ar8'Leu-D-Gln-NK2; tai 25 (Ne3liVPhe-V«l-Ale-Ite-Phe-Thr*Tyr-GlyGlu-Leu-Als-Arfl-l.eu-D*Gln-IIH2, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditiosuolat. Kussakin tapauksessa aminohapoilla on L-konfiguraatio ellei muuta ole määritelty. Eräässä edullisemmassa suoritusmuodossa Eräässä edullimmassa suoritusmuodossa keksinnön mukaisia 30 yhdisteitä ovat: <K*M«)-PhyVel-Pro-:i**Ph*-Thr-Tyr-CtyClu-Leu-Gln*D*Arfl'l.eu-Gln-OH; (N-Ke)-Phe-V«t-Pro-IlfPhe-Thr-Tyr*GlyGlu-Leu-Gln-D-Ar0'Le«-Gln*IIH2; (He2«)*Phe*V«t-Pro-Il**Phe-Thr-Tyr»Gly-Clu-Leu-Gln-D*Ar0*Leu-Gln-IIH2; (Κ*3Ν+)-ΡΗ·-ν*1*ΡΓ0·Ι t»*Phe-Thr*YyP'Gty-Glu-Leu-Gln-0-Are*L«u*Cln'l(H2; 35 <N*»e)*Phe-V«l-Ale-Il*-Ph*-Thr-Tyr-GtyGlu-leu-Gln-D'Ar0-L«i*Gln-OH; <He2«)-Ph*-V»l*AlfU*-Ph*-Thr-Ty-GlyGlu*Leu-Gln-G-Are-L«»*Cln-Cm; (He3»<*)*W>e-V*l-Al«-Ile-Phe*Thp-Tyr'GlyGlu-Leu-Gln-D-Ar0-Leu-Gln*OH; («•MeJ'Pht'Vat-Alt-Il^Phe-Thp-Typ'ClyClu-leu-Cln-D'Are-^'Cln*^; O*e2»l>-Phe-Val*Ala-Il«*Phe-Thp-Typ-Cly-Ctu-l*u-Gln-D*Ar0'l-eu-Gln-BH2; 20 111462 (KejH'>)-F>he'V»l-Al*-ne-Phe-Thr*Tyr-Cly-Clu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Cln-NH2; (N-He)'Phe-Val-Ala-IIe-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-Leu-Gln-D-Ar0-Leu-D-Gln-HH2; <Me2*0-Phe-V»l-Al»-Ilt-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Are-Leu-D-Gtn-WH2; <He3N*)-Phe-Vil-Al*-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Gln-D-Ar0-Leu-D-Gln-NH2; (N'He)*Phe-V»l-Pro-Il*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-GLn-D-Arg-Leu-D-Gln-NH2; <M«2<0*Phe'V«t*Pro-He-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-Leu-Gtn-D-Are-Leu-D-Cln-MH2; (H«3»l+)-Phe-V«l-Pro*He-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln*D*Are-leu-D-Cln-NH2; <N-Me)-Phe-V«l-Al»-Ile*Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-leu-ly*-NH2; (H«2tO-Phe-V«t*Al»-Il*-Ph#-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leo-Gln-D-Ape-Leu-Lyt*NH2; <M*jN*)*Ph**V*l-Al*-Ilt-Ph*-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Gln-D-ArB-Leu-Ly»-NH2; (N-H«)*Phe*V»l*Ppo-Ue-Phe-Thr-Typ-Gly-Glu*Leu-Gln-D-ArB'Leu*Lyt*>IH2; <Ne2*l>-Phe-Val*Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gtn-D-Arfl-leu-Lys-NH2; <He3M+)-Phe-V*t-Pro-He-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-ArB-Leu-Lys-HH2; (N-He)-Phe-Val-Al«-Jle*Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Gln-D-Arfl-Leu-D-Ly*-NH2; (He2M)-Phe-Val-Al«-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu*Gln-D-ArB-l.eu-D-Ly»-HH2; (HesN^-Phe-Val-Ala-I te-Phe-Thr-Tyr*Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-leu-D'ly»-tlH2; (N-Me)-Phe-Vil-Pro-lle*Phe-Thr*Tyr*Gly-Glu-Leu-Gln-D-Are-Leu-D-ly»-NH2; (Me2H>-Phe-V«l-Pre-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-0-Are-Leu-D-Ly»-HH2; (Me3M'f)-Phe-V«l-Pro-I le-Phe-Thr-Tyr*Gly-Glu-Leu-Gtn-D-ArB-Leu-0-Ly*-MH2; (H-He)*Phe-V»l-Ala-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arg-Leu-Gln-WH2; <»4e2lO*Phe-Val-Ata-He-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Ala-D-ArB-Leu-Gtn-MH2; (He3N+)*Phe-Val*Ala*lle-Phe-Thp-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arfl-leu-Gln-WH2; (N-Me)-Phe-Vat*Pro*Il»-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Are-Leu-Gln-NH2; (Me2*l>-Phe*Vat *Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Are-Leu-Gln-tiH2.· <Me3«+>-Phe-Val-Pro-Il«*Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-Leu-Ala-D-ArB-Leu-Gln-NM2; (N-He)-Phe-Val-Ala-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-ArB-Leu-D-Gln-MH2; <Ke2*0-Phe-Vat-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Clu-Leu-Ata-D-ArB-Leu-D-Gin-MH2; <He3ti'f)-Ph«-Val-Ala-I l»-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-ArB-l-eu-D-Gln-IIH2; (N-ite)-Phe-Val-Pro-J la-Phe*Thr-Tyr-Gly-Glu*Leu-Ala-D-ArB-Le(j-0-Gln-IIH2; <H«2tO-Phe-Val*Pro-Il*-Ptte-Thr-Tyr-Gly-Glu-lHJ-Ala-D-ArB-Leu-D-Gln-MH2; (H«3l(*)*Pha'Val-Pro-na*Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu*I.etj-Ala-D-Arfl-leu-D-Gln-NH2; (K-Ke)-Phe-Vat-Ala-Il*-Ph«*Thr-Tyr*Gly-Glu-Letj-Ale-D'Are-Leu-Ly**l(H2; 0»«2*<)-Phe-Val-Ala-Ilt*Phe-Thp-Tyr*Gly-Clu-Lau-AlB-0-ArB*leo*Ly»-HH2; (He3N4)-Phe-Val-Ala-Ila-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu*leu-Ata-D-Arfl-Leu-Ly«-NH2; (M-He)-Pt*«-Val-Pro-n*-Ph**Thr'Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arfl-Leu-Lym*l(H2; (He2N)*Ph*-Val*Prc-Ila-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-l.etJ-Ala-D-ArB-Leu-Ly»-MM2; (Ke3N*)'Phe*Val’Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu*Ala-D-ArB-Leu-Ly»-IIH2; <N-He)-Ph*-Val*Ate-Ila-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Ala-D-Ar8-Leu-D-Lya-l(H2; CMe2«)-Ph**Vel-Ala-ll*-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-Leo-Ala-D-Arfl-ltu-D-Lya-IIH2; 21 111462 (H»3tl*)*Phe-V«l-Al«-Ilr'Phe-Thr-Tyr*Gly-Clu-Leo-Al»-D-Ar8-Leu-D-Ly*-NH2; {K-He)-Phe-Val-Pro-ll*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Ala-D-Arg-Leu-D-ly»-NH2; (Ke2H)*Phe*Val-Pro-I le-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Ala-D-AΓg-Leu-D-Ly*-IIH2; <H«3lf+)-Phe*yal-Pro-I te-Phe*Thr-Tyr-Gly-Glu*Leu-Ala-D*Arg-teu*D-Ly*-NH2; (*-He)-Phe-V»l-Ata-Ite*Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Gln-D-Arg-NH2; <He2<0-Phe*V«l-Ata-ne-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Gln-D-Ar8-HH2; <HejlTf)-Ph**Val-Ata-Il*-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-Leu-Gtn-D-Ar8-NH2; <N-N«)*Phe-V*l-Pro-Ilt-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Are-HH2; <Me2#)*Phe*Vel-Pro*Il*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Ctu-leu-Gln-D-Arg-NH2; <MejM4)-Phe*Val*Pro-Ile*Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Gln-0-Ar8'NH2; <M-Ne)-Phe-Val*Pro-Il*-Phe*Thr-Tyr*Gly-Glu-leu-Ata-D-Arg-NH2; <H«2»0-Phe-Vat*Pro-Ite*Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-teu-Ala-D-ArB-NH2; <He5N+>-Phe-Vat-Pro-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D*ArB-MH2; OI-He)-Phe-V4l-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-Leu-Gln'Ar8-NH2; (Ke2tO*Phe-V«l-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln'Arg-HH2; <He3N+)*Phe*Val*Pro-!le-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Gln-ArB-HH2; (M-Me)-Phe-Vat-Pro-It«-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Ar8-NH2; <t*e2H>*Phe-Val*Pro-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-Leu-Gtn-D-Are-NH2; (He3N*)-Phe-V«t*Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr*Gly-Gtu-Leu-Gtn-D-Ar8-NH2; <M-He)-Phe-Vat-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-ArB-HH2; <Me2*D-Phe-Val-Ata-Ile*Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-leu-Gln-Arg-HH2; <Ma3M+)-Phe-Val*Ala*Il*-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-leu-Gln-Are-NH2; <M-Ke)-P*ie-Vat-Ala-Il*-Phe-Thf"Tyr-Gty-Gtu-leu-Gln-D-Are-NH2; (N«2«)*Phe-V»l*Ala-Ile-Phe*Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gtn-D-ArB-NH2; <K«3A+>*Phe*Vel-Ata-Ite-Phe-Thr-Tyr*Gly-Glu-Leu-Gtn-D-Are*NH2; ! (M-He)-Phe-Vtl-Ala*It*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Are-NH2; <*4e2*D'Phe-Val*Ala*Ile*Phe-Thr*Tyr*Gly-Glu-leu-Ale-Arg-MH2; (He3M+)-Phe-Val-Al»-Il**Phe-Thr-Tyr*Gly-Glu-Leu-Ala-ArB-NH2; (K-H«)-Pha-Vat-Pro-Il«-Phe-Thr-Tyr-Gty*Glu-Leo-Gln-ArB-Leu-Ly»-MH2; CHe2*)*Ph«*V»l*Pro-l le-Ph**Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-Leu-Ly»-llH2; <Ae3K+)*Ph*-V4l*Pro*Il*-Phe-Thp-Tyr*Gly-Glu-leu-Gtn-ArB-Leu-Lya-MH2; <M-Me)-Ph»-Val-Al*'Il»-Phe*Thp-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Arg-leu-Lyt-MH2; <H«3X*)*Ph«-Vat-Ala*Il**Ptie-Thr*Tyr-Gly*Glu-Leu-Gln-Arg-t.eu-Ly**IIH2; (M-Me)-Ph*-Val-Pro-Il*-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-leu-Ala-ArB-l«J-Ly«-MH2; (He2*)*Phe*V«l*Pro-!l*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Are-leu*ly«*IIH2; {He3M+)-Pha-Val-Pre*Il*‘P»>**Thr-Tyr-Gly-Glu-Leij-Ala-Apg-Leu*Lyt-WH2; <4-M«)-Ptv*-V»l-Ala-Il**Ph*-Thr-Tyr-Gly-Glu-teu-Ala-Arg-Leo-l.y»*IIH2; <He2*0'Ph*-Vat-Al«*Il**Pt»e-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arg-Leu-Lyt-MH2; 22 111462 (Me3K4)-Phe-V«t-Al»-Ile-Wte-Thr*Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-Arfl-Leu-Lys-tlH2; (M-Me)-Phe-Val-Pro-I1*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-Ar9-Leu-D-Gln-NH2; (Me2K)-Phe-V»l-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gtn-ArB-Leu-D-Gln-MH2; <He3K*)-Phe-V«t-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-Leu-Gln-Are-Leu-D-Gln-MH2; (N*He)'Ph**V*l-Al*-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu*Leu-Gln-Arg-leu-D*Gln-NH2; <He2N)-Phe-Val-Al»-He-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-ArB-Leu-D-Gln-NH2; (Me3K4)-Phe-V«l*Alt-Ile-Phe-Thr'Tyr-Gly-Gtu*Leu-Gln-Arfl-leu-D-Gtn-«H2; (N-(te)-Phe-Vat-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-Leu-Ala-Arfl-Ley-D-Gln-MH2; (Me2tO-Phe-Val*Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-Leu-Ale-ArB'l.eu-0-Gln-MH2; 10 ♦ 0»«3« )-Phe*Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-GLy-Glu-Leu-Ala-Ar9-Leu-D-Gln-NH2; (N-He)-Phe-Vat-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Gtu-leu-Ala-ArB-Leu-D-Gln-MH2; (Me2N)-PKe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-ieu-Ala-Arfl-leu-D-Gln-NH2; (He3N+)-Phe*Vat-Al«-lle-Phe-Thr*Tyr-Gly-Glu-leu-Ala-Arg-Leu-D-Gln-NH2, 15 ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditiosuolat. Eräässä edullisimmassa suoritusmuodossa keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat: (N'He)-Ph*-Vtl-Pro-Ile*Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-leu-Gln-D-ArB-l-eu-Gln-OH; 2 g <Me3W+)*Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Ar8-Leu-Gln-NH2; (M-He)-Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-ArB*leu-Gln-NH2; («•He)-Phe-Vat-Pro-Ite-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-ArB-Leu-D-Gln-NH2; <M-Me)-Phe-Val-Ala-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-0-Ars-Leu-ly*-MH2; (He3M+)-Phe-Val*Ala-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arfl-Leu-Ly**NH2; * _ Oi*He)-Phe-V»l-Pro-ne-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arfl-Leu*Lys-»(H2; .25 ;· (He2>l)-Phe*Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glu-leu-Gtn-D-ArB-Leu-Lye-NH2; (H*3N+)-Phe-Vil-Pro-lte-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-ArB-LeiJ-Ly*-IIH2; (N-M«)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu*Leu-Ale-D-Ar8-Leu-Gln-«M2; (He3M4)-Ph*-Val-Pro-Il*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-ArB-Leu-Gln-MH2; 2 g <N*He)-Phe-Val-Pro-!l*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-ArB-l.eu-D-Gln-IIH2; (N-*e)-Phe-Val-Ali-Ile*Phe-'thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Arp-l.tu-Lyi-llH2; <H«2«)*Ph**Val-Ala-ll*-Ph*-Thr-Tyr-Gly*Glu-L*u-Ala-D-Arfl-Leu-Ly»-IIH2; <He3«+)-Phe-Val-Ala-U*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ata-D-ArB-Leu-Ly«-KH2; (M-He)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-D-Ar8-Leu-Ly«-IIH2; 25 <H*2lO*W>e-V*l-Pro-It*-Phe-Thr-Tyr-Gty-Glu-l.eu-Ale-D-Arfl-t.eu-Lyi-WH2; <H«3N4)-Phe-Val-Pro*Ile*Phe-ThcTyr-Gly-Glu*leu-Ala-D*Arfl-leu-Ly*-llH2; (M-H«)-Phe-Val-Ala-Ile-Ph*-Thr-Tyr-Gly-Glu-L*u-Ala-D-ArB-Leu-D-ly*-IIH2; • (H«3N+)-Phe-Vat-Ala-Ue-Phe-Thr*Tyr*Gly-Glii-leu-Ali-D-ArB-Leu-D-Ly*-NH2; (ite2tO-PH**Val-Pro-Il*-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Ala-0-Are*Leu-D-Ly**IIH2; 23 111462 (N-HeJ-Phe-Val-Pro-ne-Phe-Thr-Tyr-Gly-GluLeu-GIn-Arg-Leti-Lys-NH,.

(He,N*)-Phe-Va1-Pro-Ile-Phe-Thr-Tyr-Gly*Glg*leu-Gln-D-Arg-Leu-D-G1n-NH,: ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditiosuolat.

5

Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa tekniikan tasolla tunnetuilla erilaisilla menetelmillä, kuten kiinto-faasipeptidisynteesillä tai klassisella liuosfaasisynteesil-lä. Kiintofaasimenetelmässä peptidiketju konstruoidaan pe-10 räkkäin käyttämällä hartsikantajaa, tyypillisesti polysty-reenipohjäistä, "polyhipe"-pöhjäistä tai polyakryyliamidi/-piimaa-komposiittihartsia. Kasvava peptidiketju kiinnitetään hartsikantajaan sopivalla, happolabiililla molekyylilinkke-rillä, kuten hydroksimetyylifenyyliasetamidometyyli (PAM)-, 15 4-metyylibentshydryyliamino (MBHA)- tai hydroksimetyylife-noksiasetoksi (HMPA) -ryhmillä. Sitten peptidiketju voidaan lohkaista linkkeristä, ja siten hartsikantajasta, asidolyy-sillä käyttämällä vetyfluoridia, trifluorietikkahappoa (TFA), trifluorimetaanisulfonihappoa (TFMSA) tai vastaavia 20 reagensseja.

Riippumatta siitä valmistetaanko keksinnön mukaiset ruoansulatuskanavan liikettä stimuloivat polypeptidit kiintofaasi-vai liuosfaasimenetelmillä, liittyy synteettiseen peruslä- . 25 hestymistapaan aminohappoalayksiköiden kytkeminen yhden • < ' sopivasti suojatun aminohapon tai peptidifragmentin karbok- syyliryhmän reaktiolla toisen sopivasti suojatun aminohapon tai peptidifragmentin aminoryhmän kanssa, jolloin muodostuu uusi amidisidos. Kytkentäreaktion aikaansaamiseksi karbok-30 syyliryhmä on aktivoitava. Aktivointi suoritetaan käyttämällä standardikytkemisreagensseja kuten DCC, DIC, EDCC, BOP, HBTU tai PyBrOP. PyBrOP:n tapausta lukuunottamatta voidaan lisätä ekvimolaarinen määrä HOBtitä aktivoidun aminohappo-komponentin rasemisoitumisen estämiseksi. Niissä tapauksis-35 sa, joissa on välttämätöntä käyttää vastaavan aminohapon karboksylaattisuolaa aktivaatioon, voidaan käyttää emäksiä , kuten NMM, DIEA tai TEA.

24 111462

Vaihtoehtoisesti keksinnön mukaisesti peptidit voidaan syntetisoida kytkemällä komponenttiaminohappojen aktiivisia es-tereitä. Tällaisia aktiivisia estereitä ovat mm. pentakloo-5 rifenyyliesteri, pentafluorifenyyliesteri, p-nitrofenyyli-esteri ja vastaavat.

Keksinnön mukaisen peptidien valmistuksen aikana on amino-happokomponenttien muut funktionaalisuudet suojattava sopi-10 villa suojaryhmillä. Yleensä a-aminosuojaryhmän identiteetti määrää sen, minkä tyyppisiä sivuketjun suojaryhmiä on käytettävä. Esimerkiksi tapauksessa, jossa α-aminoryhmä suojataan Boc-johdannaisenaan, sivuketjun suojaus suoritetaan tavallisesti bentsyylialkoholin esteri-, eetteri- tai ure-15 taanijohdannaisella. Myös sykloheksanolin esteri- ja eetteri johdannaisia on käytetty jonkinlaisella menestyksellä. Vastakohtana, kun α-aminoryhmä suojataan Fmoc-johdannaisenaan, sivuketjufunktionaalisuus suojataan yleensä t-butano-lin esteri-, eetteri- tai uretaanijohdannaisena. Voidaan 20 tietysti käyttää vaihtoehtoisia suojaryhmien yhdistelmiä, erityisesti kun keksinnön mukaiset peptidit syntetisoidaan liuosfaasimetodologialla.

Fmoc-a-aminosuojaryhmän poistaminen voidaan suorittaa helpos-25 ti emäksellä, tyypillisesti piperidiinillä. Sivuketjusuo- jaryhmät voidaan poistaa helposti käsittelemällä TFA:lla sopivan karboniumioninpoistajan läsnä ollessa, joka TFA myös lohkaisee peptidin C-terminaalisen pään ja hartsilinkkerin välisen sidoksen. Boc-suojaryhmä poistetaan yleensä laimealla 30 TFA:11a käsittelemällä. TFA-lohkaisun jälkeen α-aminoryhmä on ’· kuitenkin läsnä TFA-suolanaan. Kasvavan peptidiketjun a- aminoryhmän tekemiseksi reaktiiviseksi seuraavaa aminohappo johdannaista kohtaan hartsiin sidottu peptidi neutraloidaan emäksellä kuten TEA tai DIEA. Sitten käytetään vahvaa happoa 35 kuten fluorivetyhappoa tai TFMSA:ta, joka sisältää sopivia poistajia, käytetään sitten aminohapposivuketjujen suojauk-senpoistoon ja lohkaisemaan peptidin hartsikantajasta.

25 111462 Tämän keksinnön mukaisesti aikaansaadaan menetelmä peptidien valmistamiseksi, jotka sisältävät aminoterminaalisen osan, (R1)m(R2) (R3) N-. Kun m = 0; R2 on vety tai alempi alkyyli; ja R3 on alempi alkyyli, menetelmässä saatetaan sopivasti suo-5 jatun, mahdollisesti liukenemattomaan kantajaan sopivalla linkkerillä sidotun peptidin N-terminaalinen aminoryhmä (NHj- (AA) n-) ja alkalimetallihydridipelkistysreagenssia reagoimaan. Aldehydi tai ketoni voi olla esimerkiksi formaldehydiä, asetaldehydiä tai asetonia. Alkalimetallihydridi voi 10 olla esimerkiksi alkalimetalliborohydridiä kuten natrium-syaaniborohydridiä. Menetelmä suoritetaan mukavasti sopivassa liuottimessa kuten DMF tai NMP, mahdollisesti yhdessä etikkahapon tai 1-hydroksietyylipiperatsiinietaanisulfoniha-pon (HEPES) kanssa, ympäristön lämpötilassa. Menetelmä kuva-15 taan täydellisemmin US-patenttijulkaisussa 4421744, jonka sisältö liitetään tähän viitteeksi.

Kun m = 1; Rj ja R3 ovat toisistaan riippumatta alempi alkyyli tai allyyli; ja R2 on alempi alkyyli, allyyli tai pro-20 pargyyli, menetelmässä sopivasti suojatun, mahdollisesti sopivan linkkerin kautta liukenemmattomaan kantajaan sidotun peptidin N-terminaalinen aminoryhmä (NR2R3-(AA) n-) saatetaan reagoimaan kaavan RjHal mukaisen yhdisteen kanssa, jossa R3 on edellä määritelty ja Hai on halogeeniatomi. Reaktio suo- : 25 ritetaan sopivassa liuottimessa kuten DMF tai NMP, sopivan happoa sitovan aineen kuten natriumkarbonaatin tai kalium-karbonaatin läsnä ollessa. Menetelmä kuvataan täydellisemmin julkaisussa: Benoiton-Chen; Proced. 14th Europ. Pept. Symp. (1976) s. 149, jonka sisältö liitetään tähän viitteeksi.

30 • · .* . Vaikka keksinnön mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita vapaan emäksen muodossa, ne voidaan formuloida ja antaa farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen muodossa stabii-lisuuden, kiteytysmukavuuden, lisääntyneen liukoisuuden ja 35 vastaaviin tarkoituksiin. Nämä happoadditiosuolat muodostetaan tavanomaisilla menetelmillä sopivista epäorgaanisista tai orgaanisista hapoista kuten suola-, rikki-, viini-, fu- 26 111462 määri-, bromivety-, glykoli-, sitruuna-, maleiini-, fosfori-, meripihka-, etikka-, typpi-, bentsoe-, askorbiini-, p-tolueenisulfoni-, bentseenisulfoni-, naftaleenisulfoni- ja propionihappo ja vastaavat hapot. Edullisesti happoadditio-5 suolat ovat suolahaposta, etikkahaposta tai meripihkahaposta valmistettuj a.

Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan yhdistää farmaseuttisesti hyväksyttävän väliaineen kanssa farmaseuttisen koostuit) muksen aikaansaamiseksi. Sopivia väliaineita vapaana emäksenä olevia kohdeyhdisteitä varten ovat mm. propyleeniglyko-li/alkoholi/vesi, isotooninen vesi, injektioon tarkoitettu steriili vesi (USP), emulphor™/alkoholi/vesi, cremophor-EL™ tai muut ammattimisten tuntemat sopivat väliaineet.

15

Sopivia väliaineita kohdeyhdisteiden happoadditiosuoloja varten ovat mm. isotoninen vesi, injektioon tarkoitettu steriili vesi (USP), yksinään tai yhdistelmänä muiden liuotusaineiden kuten etanolin, propyleeniglykolin tai muiden 20 ammattimisten tuntemien tavanomaisten liuotusaineiden kanssa. Erästä edullista väliainetta on keksinnön mukaisen yhdisteen isotooninen vesiliuos.

Keksinnön mukaisesti saatuja yhdisteitä voidaan antaa nisäk-: 25 käille, esimerkiksi eläimille tai ihmisille, tehokkaat mää rät halutun, ruoansulatuskanavan liikettä stimuloivan aktiivisuuden aikaansaamiseksi. Koska yhdisteiden aktiivisuus ja halutun terapeuttisen vaikutuksen aste vaihtelevat, myös käytetty yhdisteen annostelutaso vaihtelee. Annetun tosiasi-30 allisen annoksen määräävät myös sellaiset yleisesti tunnus-tetyut tekijät kuten potilaan kehonpaino ja erityisen potilaan yksilöllinen liikaherkkyys. Siten yksikköannos erityisellä potilaalla (ihmisellä) voi vaihdella niin alhaisesta kuin noin 0,1 pg/kg kehonpainoa, jonka lääkäri voi titrata 35 haluttuun vaikutukseen. Eräs edullinen minimiannos titrausta varten on 1 pg/kg kehonpainoa.

27 111462

Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan antaa tunnistettuja pa-renteraalisa reittejä, steriilien liuosten tai suspensioiden muodossa, aikaisemmin kuvatuissa väliaineissa. Näiden valmisteiden pitäisi sisältää ainakin noin 0,1 paino-% kek-5 sinnön mukaista yhdistettä, mutta tämä määrä voi vaihdella välillä noin 0,1 ja noin 50 paino-% keksinnön mukaista yhdistettä. Keksinnön mukaiset yhdisteet annetaan edullisesti laskimonsisäisesti, ja käytetty annostelu on yleensä alueella noin 0,1 pg - 500 mg, annos voidaan antaa 1-4 kertaa 10 päivässä.

Steriilit liuokset tai suspensiot voivat myös sisältää seu-raavia apuaineita: steriiliä laimennusainetta, kuten injektioon tarkoitettu vesi, suolaliuos, kovetetut öljyt, poly-15 etyleeniglykoli, glyseriini, propyleeniglykoli tai muu synteettinen liuotin; antibakteriaalisia aineita kuten bentsyy-lialkoholi tai metyyliparabeeni; hapetuksenestoaineet kuten askorbiinihappo tai natriummetabisulfiitti; kelatointiainei-ta kuten etyleenidiamiinitetraetikkahappo (EDTA); purkuroin-20 tiaineita kuten asetaatit, sitraatit ja fosfaatit; ja tooni-suuden säätöön tarkoitetut aineet, kuten natriumkloridi ja dekstroosi. Parenteraaliset valmisteet voidaan sulkea ampulleihin., kertakäyttöruiskuihin tai lasisiin tai muovisiin mo-niannospulloihin.

: 25

Koko tässä patenttihakemuksessa on viitattuy eri julkaisuihin. Näiden julkaisujen selitykset liitetään täten tähän viitteeksi tekniikan tason täydellisemmin kuvaamiseksi.

30 Tätä keksintöä kuvataan edelleen seuraavilla esimerkeillä, • « jotka esitetään keksinnön mukaisten yhdisteiden ja koostumusten valmistuksen kuvaamiseksi, muttei rajoittavasti.

35 28 1 11462

Esimerkki 1 ri2-D-arcriniini, 13-leusiinilmotiliini-(1-14) -peptidi (sika) Bis-trifluoriasetaattisuola H-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tvr-Glv-Glu-Leu-Gln-D-Arcr-Leu-Gln-5 OH.

Polypeptidi syntetisoitiin 2,0 g:lla Fmoc-L-Gln(Mbh)PepSyn KA-hartsia (0,097 mekv./g) jatkuvatoimisilla kiintofaasivir-taustekniikoilla MilliGen malli 9050-peptidisyntetisaattoria käyttäen. Kaikki tähteet kytkettiin Fmoc-aminohappojen Pfp-10 estereinä HOBt:n läsnä ollessa, paitsi Thr, joka oli ODhbt-esteri. Sivuketjun suojaus oli seuraavanlainen: D-Arg(Mtr), Glu(OtBu), Tyr(tBu) ja Thr(tBu). Gin jätettiin suojaamatta. Kytkemiseen käytettiin Fmoc-aminohappo OPfp/HOBt:n 4-ker-taista mooliylimäärää DMF:ssä. Kytkemistehokkuutta tarkkail-15 tiin Kaiserin testillä. Kytkemisajat olivat alueella 1-4 tuntia. Kunkin kytkemisen jälkeen Fmoc-a-aminosuojaryhmän poistaminen toteutettiin 20-%:isella piperidiinillä DMFrssä. Synteesin jälkeen hartsiin sidottu peptidi pestiin DCM:llä ja kuivattiin yön yli tyhjössä. Peptidin suojauksenpoisto ja 20 lohkaisu hartsista suoritettiin huoneenlämpötilassa ravistelemalla 8 tunnin ajan vedettömän TFA:n kanssa, joka sisälsi 5 % tioanisolia, 3 % etaanidiolia ja 2 % anisolia (yhteensä 20 ml). Sitten lohkaisuliuos lisättiin tipoittain 250 ml:aan ] ' kylmää eetteriä, ja saostunut peptidi kerättiin suodattamal- 25 la, jolloin saatiin 320 mg (85 %) otsikkopeptidiä valkoisena jauheena. Peptidin puhdistus suoritettiin kolmella ajolla (tyypillinen lisäysmäärä = 107 mg/ajo) HPLC:llä Waters Del-ta-Prep 3000:11a käyttämällä kahta C-18-kolonnia sarjassa (250 x 20 mm, 15 pm, Vydac). Liuotinjärjestelmä oli 0,1-“ 30 %:inen TFA 30 minuutin gradientilla seokseen 60 % asetonit- riiliä/40 % TFA:ta (0,l-%:ista) virtausnopeudella 20 ml/min UV-detektiolla 220 nm:llä. Yksittäisten fraktioiden puhtaus määritettiin analyyttisellä HPLC:llä (30 minuutin gradient-ti, 100 %:sta TFA:ta (0,l-%:ista) 100 %:iin asetonitriiliä, 35 1 ml/min, 214 nm; Rc = 17,37 min) ja kapilläärivyöhyke- elektroforeesilla. Puhtaat fraktiot (>95-%:iset) kerättiin 29 111462 yhteen ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 107 mg (28 %) ot-sikkopolypeptidiä höytälemäisenä valkoisena jauheena.

AAA: Thr 0,87 (1); Glx 3,02 (3), Gly 1,04 (1), Vai 1,02 (1), 5 Ile 0,92 (1), Leu 2,14 (2), Tyr 1,00 (1), Phe 1,93 (2), Arg 0,93 (1). FAB-MS: (M+H)+ laskettu 1712, saatu 1712.

Esimerkki 2 ri-N-metwlifenvvlialaniini. 3-alaniini, 11-alaniini. 12-D-10 arcriniini, 13-leusiini. 14-D-lvsiinilmotiliini-(1-14)-penti-diamidi (sika^

Tris-trifluoriasetaattisuola (N-Me) -Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tvr-Glv-Glu-Leu-Ala-D-Arcr-Leu-D-Lvs-NH..

15 Polypeptidi syntetisoitiin 0,85 g:11a PAL-hartsia (0,27 mekv./g) jatkuvatoimisilla kiintofaasivirtaustekniikoilla MilliGen malli 9050-peptidisyntetisaattoria käyttäen. Hartsi sekoitettiin 3,4 g:n kanssa lasihelmiä (hapolla pestyjä, 150 - 212 pm) , pakattiin kuivana jatkuvavirtauksiseen kolonniin, 20 ja turvotettiin DMFrllä 1 tunnin ajan ennen käyttöä. Fmoc-MePhe-OH kytkettiin esiaktivoimalla BOP:llä ja HOBt:llä (1:1:1) kun läsnä oli 0,6 M NMM DMF:ssä. Fmoc-L-Thr-OH kytkettiin ODhbt-esterinään HOBtrn läsnä ollessa. Kaikki muut tähteet kytkettiin Fmoc-aminohappojen Pfp-estereinä HPBt:n 25 läsnä ollessa. Sivuketjun suojaus oli seuraava: D-Arg(Mtr), Glu(OtBu), Tyr(tBu), Thr(tBu), D-Lys(Boc), Gln(Trt). Kytkemiseen käytettiin Fmoc-aminohappojohdannaisen 4-kertaista mooliylimäärää DMF:ssä. Kytkemistehokkuutta tarkkailtiin Kaiserin testillä. Tyypilliset kytkemisajat olivat alueella ·; 30 1 - 4 tuntia. Kunkin syklin jälkeen Fmoc-a-aminosuojaryhmän poistaminen toteutettiin 20-%:isella piperidiinillä DMF:ssä. Synteesin jälkeen hartsiin sidottu peptidi pestiin DCM:llä ja kuivattiin yön yli tyhjössä. Peptidin suojauksenpoisto ja lohkaisu hartsista suoritettiin huoneenlämpötilassa raviste-35 lemalla 8 tunnin ajan vedettömän TFA:n kanssa, joka sisälsi 5 % tioanisolia, 3 % etaanidiolia ja 2 % anisolia (yhteensä 30 111462 20 ml). Sitten lohkaisuliuos lisättiin tipoittain 250 ml:aan kylmää eetteriä, ja saostunut peptidi kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 210 mg (91 %) otsikkopeptidiä valkoisena jauheena. Peptidin puhdistus suoritettiin kolmella ajolla 5 (tyypillinen lisäysmäärä = 70 mg/ajo) HPLC:llä Waters Delta-Prep 3000:11a käyttämällä kahta C-18-kolonnia sarjassa (250 x 20 mm, 15 pm, Vydac). Liuotinjärjestelmä oli 0,l-%:inen TFA 30 minuutin gradientilla seokseen 60 % asetonitriiliä/40 % TFA:ta (0,l-%:ista) virtausnopeudella 20 ml/min UV-detek-10 tiolla 220 nm:llä. Yksittäisten fraktioiden puhtaus määritettiin analyyttisellä HPLC:llä (30 minuutin gradientti, 100 %:sta TFA:ta (0,l-%:ista) 100 %:iin asetonitriiliä, 1 ml/min, 214 nm; Rt = 17,06 min) ja kapilläärivyöhyke-elekt-roforeesilla. Puhtaat fraktiot (>95-%:iset) kerättiin yhteen 15 ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 82 mg (36 %) otsikkopoly-peptidiä höytälemäisenä valkoisena jauheena.

AAA: Thr 0,95 (1); Glx 1,04 (1), Gly 1,04 (1), Vai 0,74 (1), Ile 0,99 (1), Leu 2,11 (2), Tyr 1,01 (1), Phe 1,02 (1), Lys 20 1,03 (1), Arg 1,05 (1). FAB-MS: (M+H)+ laskettu 1641, saatu 1641.

Esimerkki 3 Γ1-N.N-dimetwlifenvvlialaniini, 13-leusiinilmotiliini-(1-:" 25 14)-peotidiamidi (sika)

Bis-trifluoriasetaattisuola (N-Me) -Phe-Val-Ala-Ile-Phe-Thr-Tvr-Glv-Glu-Leu-Ala-D-Arcr-Leu-D-Lvs-NK..

Polypeptidi syntetisoitiin NovaSynPR 500-hartsilla 0,2-mmol ·· 30 mittakaavassa jatkuvatoimisilla kiintofaasivirtausteknii- koilla MilliGen malli 9050-peptidisyntetisaattoria käyttäen. Kaikki tähteet kytkettiin Fmoc-aminohappojen Pfp-estereinä HOBt:n läsnä ollessa, paits Thr, joka oli ODhbt-esteri. Sivuketjun suojaus oli seuraava: Arg(Mtr), Gln(Trt), Glu(0t-35 Bu), Tyr(tBu) ja Thr(tBu). Kytkemiseen käytettiin Fmoc-ami-nohappo-OPfp/HOBt:n 4-kertaista mooliylimäärää DMF:ssä. Kyt- 31 111462 kemistehokkuutta tarkkailtiin Kaiserin testillä. Kytke-misajat olivat alueella 1-4 tuntia. Kunkin kytkemissyklin jälkeen Fmoc-a-aminosuojaryhmän poistaminen toteutettiin 2 0-%:isella piperidiinillä DMF:ssä. Synteesin jälkeen hartsiin 5 sidottu peptidi pestiin DCM:llä ja kuivattiin yön yli tyhjössä. Täysin kootun peptidin sisältävä hartsi siirrettiin pulloon, joka sisälsi 20 ml NMP-.tä. Tähän suspensioon lisättiin peräkkäin 5 ml 37-%:ista formaldehydin vesiliuosta (300 ekvivalenttia), 126 mg natriumsyaaniborohydriodiä (10 ekvi-10 valenttia) ja 200 μΐ jääetikkaa. Seosta sekoitettiin 7 tunnin ajan. Hartsi suodatettiin ja pestiin DMFrllä (5 x 50 ml) , DCM-.llä (5 x 50 ml) ja kuivattiin tyhjössä. Peptidin suojauksenpoisto ja lohkaisu hartsista suoritettiin huoneenlämpötilassa ravistelemalla 8 tunnin ajan vedettömän TFA:n 15 kanssa, joka sisälsi 5 % tioanisolia, 3 % etaanidiolia ja 2 % anisolia (yhteensä 20 ml). Sitten lohkaisuliuos lisättiin tipoittain 250 ml:aan kylmää eetteriä, ja saostunut peptidi kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin otsikkopeptidi valkoisena jauheena. Peptidin puhdistus suoritettiin kolmella 20 ajolla (tyypillinen lisäysmäärä = 70 mg/ajo) HPLCrllä Waters Delta-Prep 3000:11a käyttämällä kahta C-18-kolonnia sarjassa (250 x 20 mm, 15 pm, Vydac). Liuotinjärjestelmä oli 0,1-%:inen TFA 30 minuutin gradientilla seokseen 60 % asetonit-riiliä/40 % TFA:ta (0,l-%:ista) virtausnopeudella 20 ml/min 25 UV-detektiolla 220 nm:llä. Puhtaat fraktiot (>95-%:iset) kerättiin yhteen ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 111 mg ot-sikkopolypeptidiä höytälemäisenä valkoisena jauheena.

AAA: Thr 0,84 (1); Glx 2,88 (3), Pro 1,03 (1), Gly 1,04 (1), 30 Vai 0,47 (1), Ile 0,87 (1), Leu 1,88 (2), Tyr 0,90 (1), Phe / 0,97 (1), Arg 0,85 (1). FAB-MS: (M+H) * laskettu 1738, saatu 1738.

32 111462

Esimerkki 4 Γ1-N.N.N-trimetvvlifenvvlialaniini. 13-leusiinilmotiliini-(1-14)-peptidi (sika)

Bis-trifluoriasetaattisuola 5 (Me3N*)-Phe-Val-Pro-Ile-Phe-Thr-Tvr-Glv-Glu-Leu-Gln-Arq-Leu-

Gln-OH.

Polypeptidi syntetisoitiin FMOC-L-Gln-(Mbh) PepSynKA-hart-silla 0,2-mmol mittakaavassa jatkuvatoimisilla kiintofaasi-virtaustekniikoilla MilliGen malli 9050-peptidisyntetisaat-10 toria käyttäen. Kaikki tähteet kytkettiin Fmoc-aminohappojen Pfp-estereinä HPBt:n läsnä ollessa, paitsi Thr, joka oli ODhbt-esteri. Sivuketjun suojaus oli seuraava: Arg(Mtr), Gln(Trt), Glu(OtBu), Tyr(tBu) ja Thr(tBu). Kytkemiseen käytettiin Fmoc-aminohappo-OPfp/HOBt:n 4-kertaista mooliylimää-15 rää DMFrssä. Kytkemistehokkuutta tarkkailtiin Kaiserin testillä. Kytkemisajat olivat alueella 1-4 tuntia. Kunkin kytkemissyklin jälkeen Fmoc-a-aminosuojaryhmän poistaminen toteutettiin 20-%risella piperidiinillä DMFrssä. Synteesin jälkeen hartsiin sidottu peptidi pestiin DCMrllä ja kuivat-20 tiin yön yli tyhjössä. Täysin kootun peptidin sisältävä hartsi siirrettiin pulloon, joka sisälsi 20 ml DMFrää. Tähän suspensioon lisättiin 5 ml metyylijodidia (400 ekvivalenttia) , minkä jälkeen lisättiin 500 mg kaliumkarbonaattia (18 : ekvivalenttia). Seosta sekoitettiin 12 tunnin ajan. Hartsi 25 suodatettiin ja pestiin DMFrllä (5 x 50 ml), vedellä (2 x 25 ml), DMFrllä (5 x 50 ml) ja kuivattiin tyhjössä. Peptidin suojauksenpoisto ja lohkaisu hartsista suoritettiin huoneenlämpötilassa ravistelemalla 8 tunnin ajan vedettömän TFA:n kanssa, joka sisälsi 5 % tioanisolia, 3 % etaanidiolia ja 2 *· 30 % anisolia (yhteensä 20 ml). Sitten lohkaisuliuos lisättiin tipoittain 250 ml:aan kylmää eetteriä, ja saostunut peptidi kerättiin suodattamalla, jolloin otsikkopeptidi saatiin valkoisena jauheena. Peptidin puhdistus suoritettiin kolmella ajolla (tyypillinen lisäysmäärä = 70 mg/ajo) HPLCrllä Waters 35 Delta-Prep 3000:11a käyttämällä kahta C-18-kolonnia sarjassa (250 x 20 mm, 15 pm, Vydac) . Liuotinjärj es telinä oli 0,1- 33 111462 %:inen TFA 30 minuutin gradientilla seokseen 60 % asetonit-riiliä/40 % TFA:ta (0,l-%:ista) virtausnopeudella 20 ml/min UV-detektiolla 220 nmrllä. Puhtaat fraktiot (>95-%:iset) kerättiin yhteen ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 71 mg ot-5 sikkopolypeptidia höytälemäisenä valkoisena jauheena.

AAA: Thr 0,88 (1); Glx 3,25 (3), Pro 1,00 (1), Gly 1,00 (1),

Vai 0,30 (1), Ile 1,01 (1), Leu 2,30 (2), Tyr 1,10 (1), Phe 1,10 (1), Arg 1,10 (1). FAB-MS: (M+H)+ laskettu 1753, saatu 10 1753.

Esimerkki 5

Stabiilisuuden testaus in vitro 2-%:isessa sianmunuaishomo-crenaatissa 15 Kuten useimmat suoraketjuiset polypeptidit, motiliinin uskotaan metaboloituvan munuaistiehyeiden solujen ulokkeissa.

Sen vuoksi munuaishomogenaatti valittiin mallijärjestelmäksi keksinnön mukaisten peptidien suhteellisen in vivo-biosta-biilisuuden määrittämiseksi. Kaikkia tutkittavia peptidejä 20 inkuboitiin sian munuaisessa (Pel Freeze, Inc., Rogers, Arkansas) (2 % paino/tiolavuus, lopullinen tilavuus = 4 ml; puskuri = HEPES pH 7,0) 25 °C:ssa. Sekä alkuperäinen substraatin että sisäisen standardin (Fmoc-Gly) konsentraatio ; · olivat 0,5 mg/ml. Sopivien inkubointiaikojen ja näytteenot- 25 tovälien määrittämiseksi kullakin peptidillä suoritettiin kaksi koetta. Ensimmäistä ajoa käytettiin peptidin stabiilisuuden karkleaan arviointiin. Kaikki näytteenotot suoritettiin rinnakkaismäärityksin. Näytetilavuus oli 180 μΐ. 1 30 Näytteen puhdistus suoritettiin lisäämällä 100-%:ista TCA:ta (lopullinen tilavuus =200 μΐ; lopullinen TCA-konsentraatio = 10 %). Näytettä sekoitettiin pyörteellä 5-10 sekunnin ajan tasapainotuksen varmistamiseksi, sitten sentrifugoitiin saostuneiden proteiinien ulos pyörittämiseksi. Analyysi suo-35 ritettiin Waters HPLC-järjestelmällä WISP-autoinjektorilla, 5p'Vydac C-18-analyyttisellä kolonnilla ja Waters 481 UV- 34 111462 detektorilla, joka oli asetettu 214 nm:lie. Injektiotilavuus oli 80 μΐ. Alkuliuotinolosuhteet olivat 80 % asetonit-riiliä/20 % (0,1-%) TFA:ta Milli-Q-vedessä 35 minuutin gra-dientilla seokseen, jossa oli 63 % asetonitriiliä/37 % (0,1-5 %) TFA virtausnopeudella 1 ml/min.

Polypeptidisubstraatti- ja -metaboliittihuiput suhteutettiin sisäiseen standardiin, ja laskettiin rinnakkaisnäytesuhtei-den keskiarvot. Peptidisubstraatin keskimääräinen suhde il-10 maistiin %-osuutena ja piirrettiin ajan funktiona. Tietojen käsittelyssä otaksuttiin ensimmäisen kertaluokan kinetiikkaa. Substraatin katoamisen nopeus laskettiin Enzfitter-oh-jelmaa (Biosoft) käyttämällä. Suhteelliset puoliintumisajat määritettiin suhteesta: 15 tM = 0,693/k

Esimerkki 6

Motiliinireseotoriinsitoutumisaffiniteetti 20 Keksinnön mukaisten peptidien motiliinireseptoriinsitoutu-misaffiniteetti määritettiin käyttämällä yleistä menettelytapaa, joka on kuvattu julkaisussa: Bormans, Peeters ja Vantrappen; Regul. Pept. 15 (1986) 143-153. Peptidien kyky ;- syrjäyttää kanin vatsaontelon sileiden lihaksien membraanei- 25 hin sitoutunutta (sian) [125I-Tyr7, Nlen]motiliinia määritettiin testaamalla kahdesti, kummallakin kerralla rinnakkais-määrityksin, konsentraatioilla alueella 10 “ - 10"4 M. Kon-sentraatio, joka syrjäyttää 50 % leimasta (IC50) , määritettiin sovittamalla tiedot yhtälöön, joka kuvaa syrjäytystä, ·* 30 olettaen motiliinireseptorien yhden ainoan luokan, johon leimattu ja leimaamaton motiliini sitoutuvat samalla affiniteetilla ja ei-ko-operatiivisesti. Sovitus suoritettiin käyttämällä SAS-ohjelmistopakkauksen (SAS Institute, Inc., Cary, NC, USA) iteratiivista pienimmän neliösumman menette-35 lytapaa. Itse motiliinin dissosioitumisvakio laskettiin kontrollikokeiden suuresta sarjasta 0,75 nM (pKd = 9,12), ja 35 111462 tätä arvoa käytettiin kaikkiin laskelmiin. Konsentraatio, joka syrjäyttää 50 % leimasta, ilmaistaan käyttämällä sen negatiivista logaritmia (pICS0) .

5 Esimerkki 7

Kudoshaudemääritvs kanin pohjukaissuolen sileän lihaksen suikaleella

Kanin pohjukaissuolen segmenttien supistusvaste määritettiin isotoonisesti kudoshauteessa menettelytavalla, joka on kulo vattu julkaisussa: Depoortere et ai.; J. Gastrointestinal Motility 1 (1989) 150-159. Koeprotokolla koostui 1 tunnin tasapaino tusa jän jaksosta; altistuksesta 10"4 M asetyylikolii-nille, minkä jälkeen seurasi uloshuuhtoutumisajänjakso; yhdisteen kumulatiivinen annos/vaste-käyrä lisäten, lopussa, 15 10’7 M motiliinia; ja lopulta 10"4 M asetyylikoliinia. Jos lopullinen vaste 10‘4 M asetyylikoliinia kohtaan eroaa yli 5 %:lla alkuvasteesta, tulokset jätettiin huomiotta. Yhdisteet testattiin konsentraatioalueella 10'11 - 10 4 M. Piste, joka vastasi 50 %:ia maksimaalisesta vasteesta motiliinia kohtaan 20 (Emax) , määritettiin sovittamalla yhtälön E = Emax(l + EC50/[L]) arvopisteiden kautta. Heikosti aktiivisilla yhdisteillä Emax-arvona käytettiin 90 %-.ia vasteesta 10’7 M motiliinille. Annos, joka tuottaa 50 % vasteesta, ilmaistaan sen negatiivis-: - - ta logaritmia (pEC50) käyttäen.

25

Esimerkki 8

Supistusaktiivisuus koiran ruoansulatuskanavassa

Kumpaakin sukupuolta edustavia sekarotuisia koiria nukutet-tiin natriumpentobarbitaalilla 65 mg/kg laskimonsisäisesti.

. · - 3 0 Vatsaan tehtiin keskilinjan avanne. Paikallistettiin pohju kaissuolen segmentti, tunnistettiin tähän segmenttiin johtavat hiusvaltimot, ja mahdollisimman lähellä sopivaa kokoa oleva valtimo pyyhittiin puhtaaksi rasvasta ja peitonkalvos-ta. Sopivan halkaisijan omaava neula taivutettiin kulmalle, 35 ja kärki sijoitettiin puhdistettuun valtimoon. Neulaa pidet- 36 111462 tiin paikoillaan noin 30 sekunnin ajan kunnes verisuonikou-ristus oli relaksoitunut, ja sitten katetrikokoonpano sijoitettiin suoneen ja sidottiin paikoilleen 000 silkkiompeleil-la. Hieno polyetyleenikatetri (10 - 15 cm) leikattiin pis-5 teeseen toiseen päähän neulan ollessa sijoitettuna toiseen päähän. Neulan keskiöön sovitettiin 3-tiehana, ja katetrikokoonpano täytettiin heparinisoidulla Krebs Ringer-bikarbo-naatilla, joka sisälsi 10 mM glukoosia. Valtimokatetriin in-jisoitiin erä Krebsiä (ilmatonta), ja tarkkailtiin kalpeuden 10 jakaantumista segmentissä. Jos alue oli liian laaja, sivu-haarakevaltimoita voitiin sitoa sikäli kuin verenkierto alueelle ylläpidettiin. Sitten herakalvoon ommeltiin Bass-tyyppinen jännityslanka ja suunnattiin niin, että rengasli-haksen supistukset voidaan rekisteröidä Beckman R611-dyno-15 grafilla. Jännityslangan kummallekin puolelle sijoitettiin hopealankaelektrodit herakalvonalaisesti ja yhdistettiin stimulaationeristysyksikköjen (stimulus isolation units)

Grass S88-sähköstimulaattoriin. Sähkökenttästimulaatiota käytettiin jännitteellä 40 V, 0,5 ms ja 5 pps, ja kynäpiir-20 turin amplitudi säädettiin sisältämään supistusvasteen.

Kaikki injisoitavat liuokset liuotettiin Krebsin liuokseen, ja valmistettiin sarjalaimennokset niin, että kullakin kon-sentraatiolla injisoitava maksimitilavuus oli 1 ml. Kaikki : 25 liuokset paitsi Krebs-varastoliuos pidettiin jäissä koepäi vän ja heitettiin pois päivän lopussa. Annos/vaste-käyrän määritykseen kohtaan injisoitiin ensin noin 1-ml erä hepa-rinisoitua Krebsin liuosta huuhtoutumiskontrollin aikaansaamiseksi. Peptidiagonisteja (1-ml tilavuudet huuhdottuna 1 30 ml :11a Krebsin liuosta) injisoitiin logaritmisin lisäyksin • » kunnes saatiin vaste, jolla oli maksimaalinen amplitudi. Sitten injektiokohta huuhdottiin Krebsin liuoksella, joka sisälsi 0,1 % BSA:ta syrjäyttämään kaiken valtimolinjassa jäljellä olevan peptidin. Peptidien kohdalla, jotka vaikut-35 tavat motiliinireseptorilla, oltiin varovaisia, ettei in-jisoitu supramaksimaalisia annoksia, koska nämä aiheuttavat nopean immunisoitumisen. Sen vuoksi annosten tullessa sei- 37 111462 viksi käytettiin 0,3 - 0,5 log-yksikön lisäyksiä. Erästä kohtaa käytettiin annos/vaste-määritykseen vain joka puolesta yhteen tuntiin.

5 Kalibroinnin kenttästimuloinnille vasteen amplitudi kussakin kohdassa mitattiin ja käytettiin 100 %:ina tälle kohdalle. Määritettiin kullakin annoksella agonistille vasteen amplitudi, joka laskettiin %:na kalibrointivasteesta ja piirrettiin konsentraation funktiona. Vasteen ED50 edustaa agonis-10 timäärää, joka vaaditaan tuottamaan vasteen, joka oli 50 % kalibrointivasteesta. Se heijastaa sekä vasteen tehokkuutta että tehoa, eikä näiden välillä ole todella selvää eroa. 1 ·

Taulukko 1

Motiliinireseptoriagonistien tehokkuus sitoutumisessa ja supistuskokeissa 38 111462 5 Yhdiste pEC50 PIcso [ Leu131 pMOT (1-22 )_8,13_9,18 [Leu13] pMOT (1-14 )_ 7,55_8,36 [P-Arq12, Leu13] pMOT (1-14 ) 7,74_9,01 [P-Arq12, Leu13!pMOT( 1-14) amidi _7,50_8,61 fAla3, D-Arq12, Leu13]pMOT (1-14) amidi_7,76_8,71 [P-Arq12, Leu1’, Lysu]pMOT(1-14) amidi_7,13_8,89 ΓΡ-Orn12, Leu”lpMOT (1-14) 6,83_8,37 fP-Gln12, Leu13] pMOT (1-14)_7, 06_8,25 [P-Ala12, Leu13! pMOT (1-14)_7,29_8,05 [D-Arq12, Leu13! pMOT (1-22)_;_7,67_8,78 [P-Asn12, Leu13! pMOT (1-14)_6,82_8,12 fPhe1, P-Arcr12, Leu131 pMOT (1-14)_6,92_8,07 f P-Ala8, P-Arq12, Leul31pMOT (1-14)_7, 09_8,22 fCha1, D-Arq12, Leu13]pMOT (1-14 )_7,60_8,75 [Ala3, P-Arq12, Leu13!pMOT(1-14)_7,71_8,67 fAla11, P-Arq12, Leu13! pMOT (1-14 )_7, 63_8,78 [N-MePhe1, Ala3, Ala11, P-Arq12, Leu13, D-Lys1'1] pMOT (1-14) amidi_7,80_9,35 [D-Cha1, Ala3, Ala11, D-Arq12, Leu13, D-Lys11]pMOT(1-14) amidi_7,25_9 , 03 [N-MePhe1, P-Arq12, Leu13, D-Lys11] pMOT (1-14 ) amidi 7,74_9,10 39 111462

Taulukko 1 (jatkoa)

Motiliinireseptoriagonistien tehokkuus sitoutumisessa ja supistuskokeissa 5

Yhdiste pEC50 pIC50 ηκ-MePhe1, Leu13lpMOT(1-22)_7,74_9,32 ΓΝ-MePhe1, Ala11, D-Arq12, Leu13, LyslalpMOT (1-14) amidi_8,01_9,33 [N-MePhe1, Leu13, D-Gln“lpMOT(1-14) amidi_7,96_9,21 ΓΝ-MePhe1, D-Arq1:, Leu13, D-GlnulpMOT(1-14) amidi_7,77_9,07 iU-MePhe1, Ala11, D-Arql:, Leu13, D-Gln14! pMOT (1-14) amidi_7,97_9,07 fMejfPhe1. Leu13, D-Gln“lpMOT(1-14) amidi_7,64_8,71 iMejfPhe1, D-Arg”, Leu”, D-GlnlalpMOT(1-14) amidi_7,39_8,71 [MeJfl’Phe1, Ala11, D-Arq11, Leu13, D-Gln14lpMOT(1-14) amidi_7,25_8,61 ΓΝ-MePhe1, Ala3, Leu", Lvsia1pM0T (1-14) amidi _7,72_9,21 ΓΝ-MePhe1, P-Arq11, Leu”] pMOT (1-14)_7,71_8,72 fMedfPhe1, Ala3, Leu’3, Lvs14]pMOT(1-14) amidi_7,58_8,82 iMe-N'Phe1, D-Arq13, Leu” 1 pMOT (1-14)_7,52_8,45 [N-MePhe1, Ala3, D-Arq13, Leu13, Lyslal pMOT (1-14) amidi_7,72_9,20 fMe,N‘ Phe1, Ala3, D-Arq13, Leu”, Lys11! PMOT (1-14 ) amidi_7,32_8,72 ΓΝ-MePhe1, Ala3, D-Arq12. Leu13, D-Glnul pMOT (1-14) amidi_8,07_9,11 iMeJJ'Phe1, Ala3, D-Arg1:, Leu13, D-Gln11) pMOT (1-14 ) amidi_7,20_8,85 [M-MePhe1, Ala3, D-Arq13. Leu” 1 pMOT (1-14) amidi_7,79_9,23 f Me jf Phe1, Ala3, D-Arql;, Leu13] pMOT (1-14 ) amidi_7,32_8,79 « 40 111462

Taulukko 1 (jatkoa)

Motiliinireseptoriagonistien tehokkuus sitoutumisessa ja supistuskokeissa 5

Yhdiste pECs0 pICs0 TMe^M Phe1, Ala11, D-Arq12, Leu131 pMOT (1 -14) amidi_7,57_8,58 [N-MePhe1, D-Arq12, Leu13] pMOT (1-14) amidi_7,95_8,99 [Me^M’Phe1, D-Arq12, Leu131 pMOT (1 -14 ) amidi_7,73_8,67 fN-MePhe1, Alat Ala11, D-Arq12, Leu13] pMOT (1-14) amidi_7,77_9,14 [Me,I3'Phe! Ala3, D-Arq12, Leu”, Lysu] pMOT (1-14 ) amidi_7,59_8,72 fCha5, D-Arq12, Leu”!pMOT (1-14) amidi_7,30_8,17 ΓΝ-MePhe1, Leu13! pMOT (1-14 )_7,44_8,58 fMeJTPhe1, Leu”!pMOT(1-14) amidi_7,48_8,57 rMe-.M'Phe1, Leu13-] pMOT (1-14 )_7, 69_8,45 TEt-Phe1, Leu13!pMOT(1-14) amidi_7,54_8,41 fN.M-diMe-N-proparqyyliPhe1, Leu13] pMOT (1-14) amidi_7 , 65_8,67 [N-Me-N-proparqvvliPhe1, Leu131 pMOT (1-14) amidi 7,57 8,7 0 [N-allvvli-N, N-diMePhe1, Leu13! pMOT (1-14) amidi 7,47 8,76 ΓΝ-MePhe1, Ala11, D-Arq12, Leu13! pMOT (1-14) amidi_7,60_9,03 [N-MePhe1, Ala3, Ala11, D-Arq12, Leu13, D-GlnM] pMOT (1-14) amidi_7,32_9,14 [Me,N'Phe‘, Ala3, Ala11, D-Arq12, Leu1!, D-Glnt pMOT (1-14) amidi_7,22_8,84 [N-MePhe1, Ala3, Ala11, D-Arq12, Leu13] pMOT (1-14) amidi_7, 63_9,33 [Me,N'Phe‘, Leu13, D-Lysu]pMOT(1-14) amidi_7, 64_8,90 Ί11462 41

Taulukko 1 (jatkoa)

Motiliinireseptoriagonistien tehokkuus sitoutumisessa ja supistuskokeissa 5

Yhdiste pECs0 pICs0 fMe^N'Phe1, Ala3, Ala11, D-Arg12, Leu13, D-LysulpMOT (1-14 ) amidi_7,55_8,94 iMe-UPhe1, Ala11· D-Arg13, Leu13, D-Lys11!pMOT 11-14 ) amidi_7,64_8,91 [MeJIPhe1, Ala3, Ala11, D-Arg11, Leu13, Lvsu1pMOT(1-14) amidi_7 , 74_9,15 TMeJifPhe1, Ala3, Ala11, D-Arg11, Leu” 1 pMOT(1 -14) amidi_7,31_8,71 [MejTPhe1, D-Arg11, Leu13, Lvsu1pMOT(1-14) amidi_7,60_8,93 fMe,N1Phe‘, Ala11, D-Arg11, Leu”, Lvsu(pMOT(l-14) amidi_7,64,_8,89 rMeJTPhe1, Ala11, D-Arg11. Leu13, Lyslal pMOT ί 1-14) amidi_7,69_8,84 fMeJIPhe1, Ala3, Ala11, D-Arg1;, Leu13, D-LvsMlpMOT(1-14) amidi_7,73_8,39 rMeJJPhe1, D-Arg11, Leu131 pMOT (1-14) amidi_7,71_8,75 fMe-NPhe1, D-Arg11, Leu13, Lvb‘11 pMOT (1-14) amidi_7,73_8,93 [Me-NPhe1, Ala“, D-Arg11, Leu13! pMOT (1-14) amidi_7,76_8,71 * pMOT = sian motiliini 10 (

Taulukko 2

Motiliinireseptoriagonistien puoliintumisajat 2-%:isessa sianmunuaishomogenaatissa 42 111462 5 Yhdiste Tw (Leu13! pMOT i 1-22)_ 30,2_ [Leu131 pMOT (1-14)_L_5_ [N-MePhe‘, Leu131 pMOT (1-14)_12,8_ fN-MePhe1, Leu13, r,ys“ l pMQT (1 -14) amidi 20 [N-MePhe‘, D-Arq13, Lsu13]pMOT(1-14)_30_ [N-MePhe1, D-Arq13, Leu13, Lys^lDMOTtl-KO amidi_41_ [N-Me/Phe*. D-Arq13, Leu13, D-Gln“lpMOT (1-14) amidi_104_ [N-Me/Phe1, D-Arq11, Leu13] pMOT (1-14) amidi_95_ fN-MePhe1, Ala11, D-Arq13, Leu13, Lvs1*! pMOT (1-14) amidi_34,3_ [N-MePhe1, Ala11, D-Arq13, Leu33, D-Gln11] PMOT (1-14) amidi 32,6 [Me^Phe1, Ala11, D-Arq13, Leu13, D-Lys1*] pMOT (1-14) amidi 47_ [N-Me/Phe1, Ala“, D-Arq13, Leu13! pMOT (1-14) amidi_131,9_ [N-Me/Phe1, D-Arq13, Leu13, LvsulpMOT(l-14) amidi 162_ [N-Me.’Phe1, Ala11, D-Arq13, Leu13, Lys“)pMOT (1-14) amidi 125_

Taulukko 3

Motiliinireseptoriagonistien teho koiran ruoansulatuskanavassa 111462 43 5 Yhdiste ED50* Γ Leu13 ] pMOT (1-22 )_0,17_ fLeu13]pMOT (1-14)_20,4_ [N-MePhe1, Leu13, Lvsm1pMOT(1-14) amidi_0,025_ ΓΝ-MePhe1, D-Arq13, Leu331 pMOT(1-14) amidi_0,025_ fN-MePhe1, Ala11, D-Arq13. Leu13, Lvs141 pMOT(1-14) amidi 0,30_ ΓΝ-MePhe1, Ala3, D-Arq13, Leu13, LyslalpMOT(l-14) amidi_0,06 _ fMe,N*Phe‘, Ala3, D-Arq13, Leu13, LvsulpKOT (1-14) amidi 0,89_ ΓΝ-MePhe1, Ala3, D-Arq13. Leu13!pMOT(1-141 amidi_0,024_ [N-MePhe1, Ala11, D-Arq12, Leu13! pMOT (1-14) amidi_0,0018_ fMe-H'Phe1, Ala11, D-Arq13, Leu11!pMOT(1-14) amidi_0, 026_ fMe,N*Phe‘, D-Arq13, Leu13!pMOT(1-14) amidi_0,017_ [MejTPhe1, D-Arq13, Leu13, Lvsu!pMOT(1-14) amidi_0,15_ fMe,M*Phe3, Ala11, D-Arq12, Leu13, Lysu!pMOT(1-14) amidi_0, 12_ ΓΝ-MePhe1, Ala1, Ala11, D-Arq13, Leu13, Lvsla1 pMOT (1-14 ) amidi_0,001_ fMejTPhe1, Ala3, Ala11, D-Arq13, Leu”, Lys**! pMOT (1-14 ) amidi_0, 001_ TMe^MPhe1, Ala11, D-Arq12, Leu’3, Lvs’*l pMOT (1-14) amidi 0,003 fMeJTPhe1, Ma3, Ala", D-Arq12, Leu'3, Lvs1J!pMOT (1-14) amidi_0,003_ [Me.MPhe1, Ala11, D-Arq13, Leu13, Lys14! pMOT(1-14) amidi_0,35_ [N-MePhe1, D-Arq13, Leu13, D-Glnu]pMOT(1-14) amidi_0,0004_ 44 111462

Taulukko 3 (jatkoa)

Motiliinireseptoriagonistien teho koiran ruoansulatuskanavassa 5

Yhdiste EDS01 ΓΝ-MePhe1, Ala11, D-Arg-1;, Leu13, D-Glnlal pMOT (1-14) amidi 0,40_ fM-MePhe1, D-Arq1’, Leu”!pMOT(1-14)_0. AO_ [N-MePhe1, Ala3, Ala11, D-Arqu, Leu13, D-Lvs141pMOT(1-14) amidi_0,024_ fMeJfPhe1, Ala3, Ala11, D-Arcr”, Leu13, D-Lys“]PMOT(1-14) amidi 0,007_ [MeJIPhe1, D-Arq12, Leu”, Lvs“l pMOT (1-14) amidi_ 0,002_ 10 1 ED50 ilmaistaan yksikössä nmol

Vaikka on esitetty joukko keksinnön suoritusmuotoja, on ilmeistä, että peruskonstruktiota voidaan muuttaa aikaansaamaan muita suoritusmuotoja, jotka hyödyntävät keksintöä 15 keksinnön hengestä ja suoja-alasta poikkeamatta. Kaikki tällaiset modifikaatiot ja variaatiot on tarkoitettu oheisissa patenttivaatimuksissa määriteltyyn keksinnön suoja-alaan sisällytettäviksi, paremminkin kuin erityiset suoritusmuodot, : jotka on esitetty esimerkkinä.

20 <

Claims (12)

1. 45 111462
2. 1. Menetelmä polypeptidien valmistamiseksi, joilla on ruoansulatuskanavan liikettä stimuloivaa aktiivisuutta ja joilla on seuraava kaava: 5 R2 (R,) N-*CHCO-A-B-D-E-Thr-F-G-H-Leu-I-J-NH-*CHR, (1) I I I 10 r3 ch2r4 ch2r5 mukaan lukien niiden optisesti aktiiviset isomeeriset muodot ja farmaseuttisesti hyväksyttävät happoadditiosuolat, jossa: A on lipofiilisen alifaattisen aminohapon L-stereoisomeeri; 15. on L-proliini tai L-alaniini; D on lipofiilisen alifaattisen aminohapon L-stereoisomeeri; E on aromaattisen, lipofiilisen alifaattisen tai alisyklisen aminohapon L-stereoisomeeri; F on aromaattisen tai heteroaromaattisen aminohapon L-ste-20 reoisomeeri; G on glysiini tai D-alaniini; H on L-glutamiinihappo tai L-glutamiini; I on L-glutamiini, L-glutamiinihappo tai L-alaniini; J on suora sidos I:n ja ryhmän -NH- välillä, tai se on Z, Z-25 Leu, Z-Leu-Gln, Z-Leu-Gln-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys tai Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly, jossa Z on arginiini, D-arginiini, D-homoarginiini, D-lysiini, D-ornitiini, D-2,4-30 diaminovoihappo, D-glutamiini, D-asparagiini tai D-alaniini; Rj on alempi alkyyli tai allyyli; * - R2 on vety, alempi alkyyli, propargyyli tai allyyli; Ra on vety, alempi alkyyli tai allyyli; R4 on sykloalkyyli, substituoitu ja substituoimaton aryyli 35 tai heteroaryyli, jossa aryyliryhmä voi olla substituoitu yhdellä tai usealla substituentilla, joita ovat halogeeni, hydroksi ja alempi alkoksi; 46 111462 R5 on aminoalkyyliryhmä, jossa on 1 - 3 hiiliatomia, tai guanidinoalkyyliryhmä, jossa on 2 tai 3 hiiliatomia tai on CH2CONH2 kun J on Z-Leu tai Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly;
3. 5 R6 on -COOH tai -CONH2; ja symboli * edustaa asymmetristä hiiliatomia, jolla voi olla D- tai L-konfiguraatio, ja kukin alempi alkyyliryhmä sisältää 1-4 hiiliatomia, tunnettu siitä, että kaavan (1) mukainen polypeptidi, joka 10 on liitetty sopivaan hartsikantajaan ja joka sisältää suoja-ryhmiä aminohapoissa, joille ovat tunnusomaista reaktiiviset funktionaalisuudet, saatetaan reagoimaan vahvan hapon kanssa, jolloin samanaikaisesti lohkaistaan polypeptidi mainitulta hartsikantajalta ja poistetaan mainitut suojaryhmät 15 tai tämän kanssa analoginen menetelmä.
4. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että (Rt) (R2) (R3)N-*CH(CH2R4)CO- on L-fenyylialaniini, D-fenyylialaniini, L-sykloheksyylialaniini tai D-syklohek- 20 syylialaniini.
5. 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että A on L-valiini, L-isoleusiini, L-leusiini, L-norva-liini tai L-norleusiini. 25
6. 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että D on L-isoleusiini, L-valiini, L-leusiini, L-norva-liini tai L-norleusiini.
7. 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu sii- ·· tä, että E on fenyylialaniini, p-fluorifenyylialaniini, p- kloorifenyylialaniini, p-bromifenyylialaniini, p-jodife-nyylialaniini, tyrosiini, p-metoksifenyylialaniini, 1-naf-tyylialaniini, 2-naftyylialaniini, leusiini tai syklohek-35 syylialaniini.
8. 6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu sii- 47 111462 tä, että F on tyrosiini, fenyylialaniini, p-metoksifenyyli-alaniini, histidiini, tryptofaani, β-2-tienyylialaniini tai β-3-pyridyylialaniini.
9. 57. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että J on suora sidos Im ja ryhmän -NH- välillä, tai se on Z-Leu, Z-Leu-Gln-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn tai Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly ja Z on D-arginiini tai D-glutamiini. 10
10. 8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R„ on sykloheksyyli, fenyyli, p-fluorifenyyli, p-kloorifenyyli, p-bromifenyyli, p-jodifenyyli, p-hydroksi-fenyyli, p-metoksifenyyli, 1-naftyyli, 2-naftyyli, 3-indo- 15 lyyli, 2-tienyyli tai 3-pyridyyli.
11. 9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että Rs on -CH2CONH2, tai aminoalkyyliryhmä, jossa on 1 -3 hiiliatomia. 20
12. 10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ryhmä -NH*CH(CH2R5)-R6 on D-arginiini, lysiini, D-lysiini, glutamiini, D-glutamiini, D-ornitiini, D-2,4-diamx-novoihappo tai D-homoarginiini. : 25