DK171682B1 - Væksthormon-frigørende peptid og pharmaceutisk acceptable salte deraf, sammensætning med indhold deraf samt fremgangsmåde til fremstilling af peptider - Google Patents
Væksthormon-frigørende peptid og pharmaceutisk acceptable salte deraf, sammensætning med indhold deraf samt fremgangsmåde til fremstilling af peptider Download PDFInfo
- Publication number
- DK171682B1 DK171682B1 DK018086A DK18086A DK171682B1 DK 171682 B1 DK171682 B1 DK 171682B1 DK 018086 A DK018086 A DK 018086A DK 18086 A DK18086 A DK 18086A DK 171682 B1 DK171682 B1 DK 171682B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- arg
- leu
- ala
- ser
- gln
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 72
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 13
- 102100033367 Appetite-regulating hormone Human genes 0.000 title description 3
- 108010077689 gamma-aminobutyryl-2-methyltryptophyl-2-methyltryptophyl-2-methyltryptophyl-lysinamide Proteins 0.000 title 1
- -1 aspartyl Chemical group 0.000 claims description 153
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 69
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 69
- 125000000240 D-tyrosyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC1=CC=C(C=C1)O 0.000 claims description 27
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims description 27
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 23
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 23
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 23
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 18
- 125000000722 D-seryl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CO 0.000 claims description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 14
- 125000002072 seryl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000000030 D-alanine group Chemical group [H]N([H])[C@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 claims description 12
- 125000002237 D-aspartyl group Chemical group [H]OC(=O)[C@]([H])(N([H])[H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 12
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 12
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 125000000170 D-asparaginyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC(=O)N 0.000 claims description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 9
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 9
- 125000000405 phenylalanyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 230000003578 releasing effect Effects 0.000 claims description 9
- 125000002436 D-phenylalanyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC1=CC=CC=C1 0.000 claims description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 8
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 7
- 125000002716 D-tryptophyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC1=CNC2=CC=CC=C12 0.000 claims description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 claims description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000003301 D-leucyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC(C)C 0.000 claims description 6
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000002437 D-histidyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC=1N=CNC1 0.000 claims description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 4
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 4
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 claims description 2
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 125000001980 alanyl group Chemical group 0.000 claims 4
- 125000001942 asparaginyl group Chemical group 0.000 claims 4
- 125000001288 lysyl group Chemical group 0.000 claims 4
- 125000002073 methionyl group Chemical group 0.000 claims 4
- 125000001982 tryptophyl group Chemical group 0.000 claims 4
- 125000001998 leucyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000002861 (C1-C4) alkanoyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000001255 4-fluorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1F 0.000 claims 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 10
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 9
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 8
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 8
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N (2s)-3-hydroxy-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FHOAKXBXYSJBGX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 6
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 6
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 5
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 108010056001 somatotropin releasing hormone (1-29) Proteins 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N (2s,3s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C QJCNLJWUIOIMMF-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 4
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- WGWPRVFKDLAUQJ-MITYVQBRSA-N sermorelin Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WGWPRVFKDLAUQJ-MITYVQBRSA-N 0.000 description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 4
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 125000002707 L-tryptophyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(C([C@](N([H])[H])(C(=O)[*])[H])([H])[H])=C([H])N([H])C2=C1[H] 0.000 description 3
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine group Chemical group N[C@H](CCCCN)C(=O)O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 2
- 102000038461 Growth Hormone-Releasing Hormone Human genes 0.000 description 2
- 101800000736 Growth hormone-releasing factor Proteins 0.000 description 2
- 101710119601 Growth hormone-releasing peptides Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229940013361 cresol Drugs 0.000 description 2
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 108010048138 somatotropin releasing hormone (1-44)amide Proteins 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 2
- MOMFXATYAINJML-UHFFFAOYSA-N 2-Acetylthiazole Chemical group CC(=O)C1=NC=CS1 MOMFXATYAINJML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DXCXWVLIDGPHEA-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-3-[(4-ethylpiperazin-1-yl)methyl]pyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C(=NN(C=1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2)CN1CCN(CC1)CC DXCXWVLIDGPHEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical group [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195711 D-Serine Natural products 0.000 description 1
- 206010056438 Growth hormone deficiency Diseases 0.000 description 1
- 229910004373 HOAc Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001622557 Hesperia Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000002061 L-isoleucyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001176 L-lysyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002435 L-phenylalanyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNEIUMQYRCDYCH-LURJTMIESA-N N(alpha)-acetyl-L-arginine Chemical compound CC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N SNEIUMQYRCDYCH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-O Piperidinium(1+) Chemical compound C1CC[NH2+]CC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710202113 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-O Pyrrolidinium ion Chemical compound C1CC[NH2+]C1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-O benzylaminium Chemical compound [NH3+]CC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- KFGRVLINLVVMJA-MITYVQBRSA-N chembl440262 Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 KFGRVLINLVVMJA-MITYVQBRSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000005265 dialkylamine group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005131 dialkylammonium group Chemical group 0.000 description 1
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-O morpholinium Chemical compound [H+].C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- OIBISEAEGMVEPG-UHFFFAOYSA-N n-[(4-methylphenyl)methyl]hydroxylamine Chemical compound CC1=CC=C(CNO)C=C1 OIBISEAEGMVEPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940105631 nembutal Drugs 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 125000005207 tetraalkylammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 125000005208 trialkylammonium group Chemical group 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical class CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 171682 B1
Den foreliggende opfindelse angår nye væksthormon-frigørende peptider samt pharmaceutisk acceptable salte deraf, en sammensætning med indhold deraf samt en fremgangsmåde til fremstilling af peptiderne.
5 For nylig har man isoleret væksthormon-frigø rende faktorer (GRF) af human biigspytkirtel-tumoroprin-delse (hpGRF), karakteriseret ved og påvist at indeholde væksthormon(GH)-frigørende aktivitet i rotteforhypofyse in vitro og in vivo af (1) Guillemin, P. Brazeau, P.
10 Bohlen, F. Esch, N. Ling og W.B. Wehrenberg [Science 218, 585 (1982)] og (2) J. Spiess, J. Rivier, M. Thorner og W. Vale [Biochemistry 21, 6037 (1982)]. Endvidere rapporteres det, at eii syntetisk hp GRF (1-29)-NH2, et ami-deret fragment af den naturlige hp GRF, har fuld intrin-15 sisk biologisk aktivitet [Spiess m.fl., (2) ovenfor].
Eftersom disse hpGRF-peptider indeholder 29-44 aminosyreenheder med molekylevægte fra 3.085 til 5.035 dalton, er det ønskeligt at forøge deres styrke, så at de doser, der indgives, af praktiske grunde kan reduce-20 res for at udløse frigørelse af passende GH-niveauer hos pattedyr. Det er således den foreliggende opfindelses formål at tilvejebringe kraftigere peptider, som efterligner hpGRF og er effektive til at forøge frigørelsen af væksthormon til passende niveauer i pattedyr.
25 30 35 2 DK 171682 B1 li i — i 00 cq ofl cq O 00
P hh P I—I P
< < < < <
II III
tQ <0 >» tu rS i—f P—i < o < O <
II III
P 00 P 00 P
<u p di p tu oo < tn < tn
II III
S3 3 3 3 <U r-1 dl i-H dl
►JO J O J
II III
C C c c c i-H i-H r—I i-H »—4 o O o o o
II III
:s C >N C >» i—I tO i—I CO i-1 o < o < o
II III
3 P 3 P 3 dj a) «o o) tu
J CO nJ CO kJ
II III
p 1—4 3 rP 3 i—I
m CB i—( tU i-H CU
tJ > O > O > •Η · I '1 i +) to tn >* to CL >\ t"H >s «-Η
tU J O JO J
Cl, * * «I « oo C OO c oo m P γη P i-η p Ό <C O < O < d) i i II i tn p C PC p cm
fl) >\ i—I >\ r—I >\ X
Ci E-* O Ep O Ep Z
T3 i * 11 11 3 P 00 O' P 00 O' p oo O'
<U p CM dl p CM dl pCM
-H CO < CO < CO <
II II II
to C P C P C P
c CO 0) tO 0) to d) Q) < CO < CO < co
>11 II II
P p 4J p 4J p -U
tu JZ d> JS (U JZ tu
to Ep S Ep S HZ
<u I I II II
£ d) CO tu (U dl dl
>, JC Hi JZ I-H JZ hH
OJ Qh HP Cu I—I Cl t—l
O I I II II
PdICuCM dl O. tU CL
.p hh en X i—icn i-h « C HH <C 2 HH < HH <
S3 I I I II II
CU C 3 MT tu C tue
l-H l-H tU -O ι-H f-H l-H l-H
< o j <: o < o
III II II
0- 3 00 Q. 3 CL. 3 en dl p tn αι en dl
< J < < J < J
III II II
CU 3 tu tu 3 tu 3 HH dl l-H l-H dl 1-H dl
< J < . < J < J
III II II
p tn oo p en p en
Os HH1 >> P >» HH 5s >\ l-H >,
CmEp J < Ep J CM Ep J
S X
z z
/s /S
-i /—s o -T c <r cm
I *|H I I
rP g ι-H i-H
' dl N-^ '
1- H f—N
pH ι-H (b Cl pH
oi ·ρ oZ HH oZ
0 3 O <0 O
CU O CL > CL
x w -C w JZ
3· DK 171682 B1 é p . >1 v c C «
c HH iH C
•H £ O *H
S O 3 S
M <0 hh 0) «1
tn 4J X ι-H JJ
-H 3 P O 3 6 r—t tu tn i-h (U — U Σ Η ϋ
M <N
O r~ II n II II
•H O
Λ Ή C P <U 3
^ r—1 t) Η H
tu O S hh o
Ό CN
C ro <U r~ P i—f
Sl I
P co C
Ό CN IH
a> ce υ i> iH HH hH c 3 CD c HH C 0)
C O HH o HH i—I
(U Ή P 60 3 CO P
C -H ►, IH (U SS O
O H < j J z j ^ tn p il il il il il
t n -P
-H tn p 60 3 t n 0) E Ή >% P <U ►» ·—i
g ε Eh < J J Z
0 tu * x: 1 u m o
D -H
M W
i ; o c
<C Μ HH
(¾ 3 C
D -P co . G
M CO r-H 3 HH
iH CO “H 60 tu υ , .-η c co
tu fi C >> O P
H tu HH c tu co «i ε hh tu p o*
lp O CO JO XI CD
•H. G > <P E- <
tU II II II R
P
> I-H tu P C
tn co jz pC co 0 > Cl, E- < c •H 1 2
XI (U
P
P >1 O in
m C
C Ή <U HH lp ,
Ό Ό (0 C C
O HH C P HH hH
« P HH CO C <J
CO p O- CO >.
HH 0) CD H H
X cn < < o 2
II II II II
co p P- co >n
•Η (X) CO r-H r-H
x co < < o 4 DK 171682 B1
Det har overraskende vist sig, at dette formål opnås ved at udskifte de naturlige aminosyrerester i stillingerne 1, 2, 3, 8, 9, 10, 12, 21 og 27 samt derivatise-re den N-endestillede aminosyrerest i hpGRF 1-29, 1-40 5 og 1-44 som udtrykt nedenfor i strukturformlerne hhv. I,
II og III, forudsat at mindst én af to naturlige amin rerester i stillingerne 2, 9, 10, 12 eller 21 i hpGRF
1-29, 1-40 eller 1-44 i 2 stillingen udskiftes med N-me-thylalanyl eller N-methyl-D-alanyl, i 9-stillingen med 10 D-seryl, i 10-stillingen med D-tyrosyl eller i 12- og 21 stillingerne med arginyl. Dette er overraskende, især i betragtninger af N. Ling og P. Brazeau's rapport [The Endocrine Society Program and Abstracts, 65. årsmøde, nr. 295, 8.-10. juni 1983, i San Antonio, Texas], hvor 15 det anføres, at AC-Tyr^- og D-Tyr^-hpGRF-analoge har lav styrke i forhold til det naturlige peptid, og af J. Rivier m.fl. [Abstract, 8. American Peptide Symposium, 22,- 27. maj 1983, bilag 10-B], der anfører for hpGRF (1-27), at "en vis manipulation med Tyr-resten kan ske, når blot 20 der bevares en fri aminoendestilling."
Polypeptidet ifølge den foreliggende opfindelse er ejendommeligt ved, at det har formlen
Rl-A-B-C-Ala-Ile-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-Val-Leu-Gly-Gln-25 Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-R2; (I) eller
Ri-A-B-C-Ala-Ile-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-Gln-30 Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-R2 (II) eller
Rl-A-B-C-Ala-Ile-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-VAL-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gin-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-Gln-35 Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Glu-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-Rl; (III) 5
O
DK 171682 B1 hvor R er hydrogen eller ligekædet eller forgrenet C, _<--alkanoyl, 2 34 3 R er NRJR4 eller OR , 3 4 hvor R og R er hydrogen eller en ligekædet 5 eller forgrenet C^_g-alkylgruppe, A er valgt blandt tyrosyl, D-tyrosyl, histidyl, D-histidyl, phenyl-alanyl, D-phenylalanyl, 4-chlor-phenylalanyl, D-4-chlor phenylalanyl, 47broc:-phenylalanyl, D-4-brom-alanyl, 10 4-fluor-phenylalanyl, D-4-fluor-phenylalanyl, 4-methoxy- phenylalanyl, D-4- methoxyphenylalanyl, 4-benzyloxy-phenylalanyl, D-4- benzyloxyphenylalanyl, trytophyl, D-tryptophyl, 5-f luor-'tryptophyl, D-5-fluor-tryptophyl, 5-chlor-*tryptophyl, D-5-chlor-tryptophyl, 5-brom-try-15 ptophyl, D-5-brom-tryptophyl, 5-methoxytryptophyl, D-5-methoxytryptophyl, 5-methyltryptophyl, D-5-methyl-Cryptophyl eller π
CH 2—CH—CO
20 S I
NH
B er valgt blandt alanyl, D-alanyl, N-methylalanyl, N-methyl-D-alanyl, leucyl, D-leucyl, 25 phenylalanyl, D-phenylalanyl, 4-chlor-phenylalanyl·, D-4-chlor-phenylalanyl, 4-brom-phenylalanyl, D-4-brom-phenylalanyl, 4-f luor-»phenylalanyl, D-4-f luor-phenylalanyl, 4-methoxyphenylalanyl, D-4-methoxyphenylalanyl, 4- benzyloxyphenylalanyl, D-4-benzyloxyphenylalanyl, 30 trypCophyl, D-tryptophyl, 5-fluor •►tryptophyl, D-5-fluor- tryptophyl, 5-chlor-tryptophyl, D-5-chlor “-tryptophyl, 5- bromr-tryptophyl, D-S-brom^-tryptophyl, 5-methoxy-tryptophyl, D-5-methoxytryptophyl ej.ler 35 Π \ /—CH2——CO ;
S NH
6 DK 171682 B1 C er D-aspartyl, Q er seryl eller D-seryl, X er asparaginyl eller D-asparaginyl, 5 Y er norleucyl eller methionyl, Z er tyrosyl eller D-tyrosyl, U er lysyl eller arginyl, og W er lysyl eller arginyl, forudsat at mindst én af følgende betingelser gælder: 10 Q er D-seryl, og/eller Z er D-tyrosylf og/eller U og W hver er arginyl, eller er pharmaceutisk acceptable salt deraf.
Foretrukne forbindelser ifølge opfindelsen er 12 3
sådanne med formlerne I, II eller III, hvor R , R , R
4 15 og R er som defineret ovenfor, og A er valgt blandt tyrosyl, D-tyrosyl, histidyl, D-histidyl, B er valgt blandt alanyl, D-alanyl, N-methylalanyl, N-methyl-D-alanyl, leu-cyl, D-leucyl, C er D-aspartyl, Q er seryl eller D-seryl, X er valgt blandt asparaginyl eller D-asparginyl, Y er nor-20 leucyl eller methionyl, U er lysyl eller arginyl, og W er lysyl eller arginyl, Z er tyrosyl eller D-tyrosyl, med de ovennævnte forudsætninger, samt pharmaceutisk acceptable salte deraf.
Endnu en gruppe fortrukne forbindelser ifølge 25 opfindelsen har formlen I, hvor R^ er hydrogen eller 2 C^_2-alkanoyl, R er NH2 eller OH, A er valgt blandt tyrosyl, D-tyrosyl eller histidyl, B er alanyl eller D-alanyl, C er D-aspartyl, Q er seryl eller D-seryl, U er arginyl, W er arginyl, X er asparaginyl eller D-asparaginyl, 30 Y er norleucyl eller methionyl, og Z er tyrosyl eller D-tyrosyl, samt pharmaceutisk acceptable salte deraf.
Den mest foretrukne gruppe forbindelser ifølge opfindelsen har formlen I, hvor R^" er hydrogen eller 2 acetyl, R er NH2 eller OH, A er valgt blandt tyrosyl, 35 D-tyrosyl eller histidyl, B er alanyl eller D-alanyl,
C er D-aspartyl, Q er seryl eller D-seryl, U er arginyl, W
7 DK 171682 B1 er arginyl, X er asparaginyl eller D-asparaginyl, og Y er norleucyl eller methionyl, og Z er tyrosyl eller D-tyrosyl, samt pharmaceutisk acceptable salte deraf.
Udtrykket "pharmaceutisk acceptable salte" re-5 fererer, som det anvendes her, til ikke-toksiske alkalimetal-, jordalkalimetal-, ammonium-, organoammonium- og metalsalte, der er almindelig brugt i medicinindustrien.
Disse salte omfatter, men er ikke begrænset til natrium-7 kalium-, lithium-, calcium-, magnesium-, zink·/, ammonium-10 og trimethylammoniumsaltene, som fremstilles ved velkendte metoder. Udtrykket omfatter også ikkke-toksiske syreadditionssalte, såsom hydrochlorid, hydrobromid, acetat, phosphat, sulfat, citrat, laurat, stearat, palmo-at og oleat, men er ikke begrænset hertil. Disse syread-15 ditionssalte fremstilles ved velkendte metoder.
Desuden kan udtrykket "organoammonium" defineres som en gruppe bestående af et positivt ladet nitrogenatom forbundet med 1-4 aliphatiske grupper, hver indeholdende 1-20 carbonatomer. Blandt de organiske ammoni-20 umgrupper, som er eksempler ved fremstillingen af de aliphatiske ammoniumsalte ifølge opfindelsen, kan nævnes: monoalkylammonium, dialkylammonium, trialkylammonium, te-traalkylammonium, monoalkenylammonium, dialkenylammoni-ym, trialkenylammonium, monoalkynylammonium, dialkynyl-25 ammonium, trialkanolammonium, C^_g-cycloalkylammonium, pi-peridinium, morpholinium, pyrrolidinium og benzylammonium.
I overensstemmelse med standard-nomenclaturen anvendes følgende forkortelser for chirale aminosyrere- ster i den foreliggende beskrivelse med krav: 30
Forkortelse Navn
His L-histidyl
Ser L-seryl D-Ser D-Seryl 35 Asp L-aspartyl D-Asp D-aspartyl 8
O
DK 171682 B1
Forkortelse Navn
Ala L-alanyl D-Ala D-alanyl
Val L-valinyl 5 Phe L-phenylalanyl
Thr L-threonyl
Asn L-asparaginyl D-Asn D-asparaginyl
Tyr L-tyrosyl 10 Arg L-arginyl
Leu L-leucyl D-Leu D-leucyl
Nle L-norleucyl
Lys L-lysy 1 15 Gin L-glutaminyl
Met L-methionyl
Ile L-isoleucyl
Glu L-glutamyl D-Glu D-glutamyl 20 D-Tyr D-tyrosyl D-His D-histidyl D-Phe D-phenylaianyi (4-Cl)Phe L-4-chlor'phenylalanyl D-(4-Cl)Phe D-4-chlor-phenylalany1 25 (4-Br)Phe L-4-brom^phenylalanyl D-(4-Br)Phe D-4-brom-phenylalanyl (4-F)Phe L-4-fluor-phenylalanyl D-(4-F)Phe D-4-f luor-rphenylalanyl (4-MeO)Phe L-4-methoxyphenylalanyl 30 D-(4-MeO)Phe D-4-methoxyphenylalanyl (4-ØCH20)Phe L-4-benzloxyphenylalanyl D_(4_øCH20)Phe D-4-benzloxyphenylalanyl
Trp L-tryptophyl D-Trp D-tryptophyl 35 “ (5-F)Trp L-5-fluor-tryptophyl
O
9 DK 171682 B1
Forkortelse Navn D-(5-F)Trp D-5-fluor-tryptophyl (5-Cl)Trp L-5-chlor-i-tryptophyl D-(5-Cl)Trp D-5-chlor-tryptophyl 5 (5-Br)Trp L-5-brom-tryptophyl D-(5-Br)Trp D-5-brom>rtryp tophyl (5-MeO)Trp L-5-metboxytryptophyl D-(5-MeO)Trp D-5-methoxytryptophyl (5-Me)Trp L-5-methyltryptophyl 10 D-(5-Me)Trp D-5-methyltryptophyl
Medmindre andet er anført refererer de amino-syrerester, der her nævnes uden forbogstavet L, til den na-15 turligt forekommende absolutte konfiguration L. R^-grup-pen refererer til substituenten på den N-endestillede aminosyre (stilling 1 i peptidet ifølge standardnomenclatur).
Ander forkortelser, der anvendes i den foreliggende beskrivelse, er følgende: 20
Fmoc = Fluorenylmethyloxycarbonyl
Boc = t-Butyloxycarbonyl
Tos = p-Toluensulfonyl hplc = Højtydende væskechromatografi 25 tic = Tyndtlagschromatografi TFA = Trifluoreddikesyre
Ac = Acetyl Z = Benzyloxycarbonyl 30 Fastfasesyntese af peptiderne med formlerne I, II og III kan udføres på en "Beckman" 999 automatisk pep-tidsyntetisator. Præparativ hplc kan udføres på en tykvægge t glaskolonne (2,5 x 45 cm) indeholdende "Whatman LRP-l" omvendt fase-pakkemateriale (C^g-siliciumoxid 13-35 22yUm) pumpet med "Fluid Metering Company" pumpe og pulsdæmper. Aminosyreanalyser kan foretages på en "Beckman 10 DK 171682 B1 119 CL"-analysator og bearbejdes i en "System AA" computer-integrator .
De aminosyrederivater, der anvendes til fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen, fås hos flere 5 kemikalieleverandører, herunder Bachem, Inc., Torrance, Californien, og Chemical Dyanamics, Inc., Plainfield,
New Jersey.
Peptiderne med formlerne I, II og III kan bedst fremstilles ved fast-fase-standardmetoder; således kan 10 den C-endestillede beskyttede aminosyre fastgøres til en chlormethylharpiks, en hydroxymethylharpiks, en benzhy-drylamin-(BHA)-harpiks eller en p-methylbenzylhydroxylamin-(p-Me-BHA)-harpiks. En af disse chlormethylharpikser forhandles under navnet "Bio-Beads SX-1" af Bio Rad Labo-15 ratories, Richmond, Californien. Fremstillingen af hy- droxymethylharpiksen er beskrevet af Bodansky m.fl., Chem.
Ind. (london) 38, 1597 (1966). BHA-harpiksen er blevet beskrevet af Pietta og Marchall, Chem. Commun. 650 (1970) og forhandles af Bachem, Inc., Torrance, Californien.
20 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af peptiderne med formlen (I), (II) eller (III) er ejendommelig ved, at en C-endestillet beskyttet aminosyre fastgøres til en harpiks i nærvær af et koblingsmiddel, vask med et inaktivt opløsningsmiddel, fjernelse af beskyttelsen i nærvær 25 af en syre, gentagelse af denne sekvens med de følgende beskyttede aminosyrer, defineret i formlerne I, II og III, trinvis fra peptidets C-endestilling, og endelig løsgørelse af peptidet fra harpiksen i nærvær af en syre, hvilket giver et peptid med formlen I, II eller III, hvor R2 er NH2, hvor 30 harpiksen er BHA eller p-ME-BHA, eller fjernelse af peptidet fra harpiksen med ammoniak, alkylamin eller dialkylamin og fjernelse af beskyttelsen med en syre, hvilket giver et peptid med formlen I, II eller III, hvor R2 er NR3, R4, hvor harpiksen er en chlormethyleret eller hydroxymethyleret 35 harpiks, eller fjernelse af peptidet fra harpiksen i nærvær af en syre, hvilket giver et peptid med formlen I, II eller 11 DK 171682 B1 III, hvor R2 er OH, hvor harpiksen er en chlormethyleret eller hydroxymethyleret harpiks, eller fjernelse fra peptidet fra harpiksen i nærvær af en base og en R3OH-alkohol efterfulgt af syrebehandling, hvilket giver et peptid med formlen 5 I, II eller III, hvor R2 er OR3, hvor R3 er en ligekædet eller forgrenet C^.g-alkylgruppe, og harpiksen er en chlormethyleret eller hydroxymethyleret harpiks.
Ifølge en udførelsesform for opfindelsen fremstilles peptiderne med formlerne I, II og III ved hjælp 10 af fastfase-peptidsyntese ved standardmetoder, men den kan også fremstilles ved at behandle peptidharpiksen med ammoniak, hvilket giver det ønskede sidekæde-beskyt-tede amid, eller med en alkylamin, hvilket giver et side-kæde-beskyttet alkylamid eller dialkylamid.
15 Den α-amino-beskyttende gruppe er Fmoc til ami nosyren i stilling 1, og den sidekæde-beskyttende gruppe er Boc i stedet for Z til den rigtige forudgående aminosyre, når der anvendes chlormethyl- eller hydroxymethyl-harpiks.
20 Sidekædebeskytteisen kan så fjernes på sædvan lig måde ved behandling med HF, hvilket giver de frie peptidaminer, alkylamider eller dialkylamider.
Ved fremstilling af eéterne ifølge opfindelsen kan der anvendes de harpikser, der anvendes til at frem- Λ 25 stille syrerne med formlen I, II og III (R = OH), og det sidekæde-beskyttede peptid kan spaltes med en base og en passende alkohol, dvs. methanol. Sidekædebeskyt-tende grupper kan så fjernes på sædvanlig måde ved behandling med HF, så at der fås den ønskede ester.
30 Fastfase-metoden, der er omtalt ovenfor, er kendt og er hovedsagelig beskrevet af Steart og Young,
Solid Phase Peptide Synthesis, Freeman and Company, San Francisco, Californien (1969).
35 12 DK 171682 B1
Reaktlonsskema I
^ Fremstilling af [D-Ala^J-hpGRF(l-29)-NH2 BHA-harpiks + Boc-Arg(Tos)
(CH3)2CH-N=*C=N-CH(CH3)2 > A
CH2CI2 ' * 10
Boc-Arg(Tos-BHA-harpiks (a) CH2CI2 vask (b) 33% TFA/CH2CI2, 2 x-.i.
(c) CH2CI2 vask
15 (d) EtOH vask > B
(e) CH2CI2 vask (f) Et3N/CHCl3, 2 gange (g) CH2C12 vask 20
Boc-Arg(Tos)-BHA - harpiks
(1) Boc-Ser(ØCH2), A, B
(2) Boc-Met, A, B
(3) Boc-Ile, A, B
25 (4) Boc-Asp(ØCH2), A, B
(5) Boc-Gln, A, B
(6) Boc-Leu , A, B
(7) Boc-Leu, A, B
(8) Boc-Arg (Tos), A, B
(9) Boc-Arg(Tos), A, B
(10) Boc-Ala, A, B
(11) Boc-Ser(/CH2), A, B
(12) Boc-Leu, A, B
(13) Boc-Gln, A, B
(14) Boc-Gly, A, B
(15) Boc-Leu, A, B
* 13 DK 171682 B1
Reaktionsskema I (forts.)
5 (16) Boc-Val, A, B
(17) Boc-Arg (Tos), k, B
(18) Boc-Arg(Tos), A, B
(19) Boc-Tyr(4-Br/CH2OCO), A, B
(20) Boc-Ser(ØCH2), A, B,
10 MeOH vask, cyklus S
(21) Boc-Asn, A, B
(22) Boc-Thr(OCH2), A, B
(23) Boc-Phe, A, B
(24) Boc-Ile, A, B
15 (25) Boc-Ala, A, B
(26) Boc-Asp(ØCH2), A, B
(27) Boc-D-Ala, A, B
(28) Boc-Tyr, A, B
« » 20 0 D-Al a2hpGRF (1-29) -BHA-;:arpiks (a) HF, dimethylsulfid , £-cresol 2^ (b) Et20 vask (c) HOAc,"Sephadex G-50" søjlechromatografi (d) Lyofilisering (e) Chromatografi roctadecyl-silan-siliciumoxid, 15-50% 30 2 CH3CN/H2O/0.17o TFA/5,6 kg/cm (f) Lyofilisering [D-Ala2]-hpGRF(l-29)-NH2 35 14 DK 171682 B1 Når man skal fremstille formel Il-analoge, bin·^ des den C-endestillede beskyttede aminosyre Boc-alanin til den ønskede harpiks som beskrevet ved fremstilling af peptider med formlen Ij ligeledes, når man skal frem-5 stille formel III-analoge, bindes den C-endestillede be-skyttéde aminosyre Boc-leucin til den ønskede harpiks.
De efterfølgende aminosyregrupper kobles derpå i rækkefølge til den faste fase på den måde, der er beskrevet i reaktionsskema I.
10 Når man skal fremstillede et N-endestillet al- kanoyl-peptid (R^ i peptid med formlen I, II og III), omrøres peptidet bundet til harpiksen i 5-20%'s opløsninger af et passende syreanhydrid i CI^C^ indeholdende triethylamin eller vandre standardsyre-accepterende 15 baser i 20-120 minutter ved stuetemperatur. Derpå anvendes der standardreagenser til at spalte peptidet fra harpiksen, så at der fås det ønskede peptid med formlen I, II eller III.
Således fremstilles ved ovennævnte metode føl-20 gende peptider: [D-Tyr10]-hpGRF(l-29)NH2 [D-Ala2,D-Tyr10]-hpGRF(l-29)NH2 [D-Ser9]-hpGRF(l-29)NH2 25 IArg12 > 21]-hpGRF(l-29)-NH2 [N-Acetyl,Tyrl,Argl2, 21]-hpGRF(l-29)-NH2 [D-Ala2,Argl2,21]_hpGRF(l-29)-NH2 [D-Ala2,Argl2,21]_hpGRF(l-40)-NH2 [N-Acetyl,D-Ala2,Argi2,21]-hpGRF(1-40)-NH2 30 [D-Ala2,Argl2,21]_hpGRF(l-44)-NH2 [N-Acetyl,Agr12,21].hpGRF(1-44)-NH2
Sammensætningen ifølge den foreliggende opfindelse til forøgelse af frigørelsen af væksthormon hos pattedyr er ejendommelig ved, at den som aktivt stof omfatter en effektiv 35 dosis på 0,000001-0,1 mg/kg af pattedyrets kropsvægt/dag af et peptid med formlen
O
15 DK 171682 B1
Rl-A-B-C-Ala-Ile-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-Val-Leu-Gly-Gln-
Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Y-Set-Arg-R2; (I) eller ..
5 R^-A-B-C-Ala-lle-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-Gln-
Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-R^ (II) eller 10 Rl-A-B-C-Ala-Ile-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-VAL-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Glu-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-
Leu-Rl; (III) 15 1 hvor R er hydrogen eller llgekædet eller forgrenet C,,-alkanoyl, 2 34 3 R er NRJR* eller OR , 3 4 hvor R og R er hydrogen eller en llgekædet 20 eller forgrenet Cj_g-alkylgruppe, A er valgt blåndt tyrosyl, D-tyrosyl, histidyl, D-histidyl, phenyl· alanyl, D-phenylalanyl, A'-chlor-pheny lalanyl, D-A-chlor· phenylalanyl, A^brom-phenylalanylf D-A-brom-alanyl, 25 A-fluor-phenylalanyl, D-A-fluor-phenylalanyl, A-methoxy-phenylalanyl, D-A- methpxyphenylalanyl, A-benzyloxy-phenylalanyl, D-A- benzyloxyphenylalanyl, trytophyl, D-tryptophyl, 5-fluor-tryptophylf D-5-fluor-tryptophyl, 5-chlor-tryptophyl, D-5-chlor-rtryptophyl, 5-brom-try-30 ptophyl, D-5-brom-tryptophyl, 5-methoxytryptophyl, D-5-methoxytryptophyl, 5-methyltryptophyl, D-5-methyl-tryptophyl eller n_
^ >—CH2—CH—CO 35 s I
NH
16 DK 171682 B1 B er valgt blandt alanyl, D-alanyl, N-methylalanyl, N-methyl-D-alanyl, leucyl, D-leucyl, phenylalanyl, D-phenylalanyl, 4-chlor-phenylalanyl·, 5 D-4-chlor-phenylalanyl, 4-brom-phenylalanyl, D-4-brom-phenylalanyl, 4-f luomphenylalanyl> D-4-fluor-phenylalanyl, 4-methoxyphenylalanyl, D-4-methoxyphenylalanyl, 4- benzyloxyphenylalaryl, D-4-benzyloxyphenylalanyl, tryptophyl, D-tryptophyl, 5-fluor‘►tryptophyl, D-5-fluor- 10 tryptophyl, 5-chlor-tryptophyl, D-5-chlor^tryptophyl, 5- brom:-tryptophyl, D-5-brom-tryptophyl, 5-methoxy-tryptophyl, P-5-methoxytryptophyl eller π 15 /“CH2—<^H—CO ;
$ NH
C er D-aspartyl, q er seryl eller D-s^ryl, X er asparaginyl eller D-asparaglnyl, 20 Y et norleucyl eller methionyl, Z er tyrosyl eller D-tyrosyl, i U er lysyl eller arginyl, og W er lysyl eller arginyl, forudsat at mindst én af følgende betingelser gælder: Q er 25 D-seryl, og/eller Z er D-tyrosyl, og/eller U og W hver er arginyl, eller pharmaceutisk acceptable salte heraf.
Foretrukne peptider til forøgelse af frigørelse af væksthormon hos pattedyr har en struktur valgt 30 blandt formlerne I, II eller III ovenfor, hvor R1, R2, 3 4 R og R er som beskrevet ovenfor, A er tyrosyl, D-tyrosyl, histidyl, D-histidyl, B er alanyl, D-alanyl, leucyl eller D-leucyl, C er D-aspartyl, Q er seryl eller D-seryl, X er asparginyl eller D-asparginyl, Y er norleucyl eller 3 5 methionyl, og Z er tyrosyl eller D-tyrosyl, og U og W er lysyl eller arginyl med de ovennævnte forudsætninger, samt 17 DK 171682 B1 pharmaceutisk acceptable salte deraf.
En anden foretrukket gruppe forbindelser ifølge forbindelsen, der er effektive til at forøge væksthormonfrigørelsen hos pattedyr, har den i formlen I vi-5 ste struktur, hvor R1 er hydrogen eller C-^g-alkanoyl, R2 er NH2 eller OH, A er tyrosyl, D-tyrosyl eller histidyl, B er alanyl eller D-alanyl, C er D-aspartyl, Q er seryl eller D-seryl, U er arginyl, W er arginyl, X er asparaginyl eller D-asparaginyl, Y er norleucyl eller methionyl, og Z 10 er tyrosyl eller D-tyrosyl, samt pharmaceutisk acceptable salte heraf.
Den mest foretrukne gruppe forbindelser ifølge opfindelsen har formlen I, hvor R1 er hydrogen eller acetyl, R2 er NH2, A er tyrosyl, D-tyrosyl eller histi- 15 dyl, B er alanyl eller D-alanyl, C er D-aspartyl, Q er seryl eller D-seryl, U er arginyl, W er arginyl, X er sparaginyl eller D-asparaginyl, og Y er norleucyl eller methionyl, samt pharmaceutisk acceptable salte deraf.
Disse peptider er anvendelige til behandling 20 af symptomer, der er beslægtet med mangel på væksthormon, f.eks. til forøgelse af uldvækst, til forøgelse af vækstraten hos kødproducerende dyr, til forbedring slagtekropskvaliteten hos kødproducerende dyr (dvs. mere protein og mindre fedt), til forbedre af foderudnyt-25 teisen hos kødproducerende dyr og mejerikvæg, til forøgelse af mælkeproduktionen hos mejeribesætninger og til opheling af sår.
Opfindelsen vil i det følgende blive nærmere forklaret ved hjælp af eksempler, der vil belyse visse 30 særlige detaljer herved.
35
O
18 DK 171682 B1
Eksempel 1
Beskyttet D-tyrosin-10, human-pancreasvæksthormon-frigø-rende faktor(9-29)-benzhydrylamlnharpiks 6,0 g (3/00 mmol) benzhydrylaminpolystyrenhar-5 piks (forhandles af Bachem, Inc., Torrance, Californien) i chloridionform anbringes i reaktionsbeholderen på en "Beckmann 990" automatisk peptidsyntetisator, der er programmeret til at udføre følgende arbejds/vaske-cyklus: (a) CH2C12, (b) 33% trifluoreddikesyre i CI^Cl^ (to gange 10 på hver 1 og 25 minutter), (c) CH2C12, (d) C2H5OH, (e) CH2C12, (f) 10% (C2Hg)gN i CHCI3 (to gange i to minutter hver) og (g) CH2C12·
Den neutraliserede harpiks omrøreé med tert.-butyloxycarbonyl(Boc)-N-tosyl-l-arginin [Boc-Arg(TOs)] 15 og 6 mmol diisopropylcarbodiimid i CH2C12 i en time, og den fremkomne aminosyreharpiks cirkuleres derpå gennem trin (a)-(g) i ovennævnte vaskeprogram. De følgende L--aminosyrer (3 mmol) kobles derpå i rækkefølge ved hjælp af samme reaktionscyklus: Boc-Ser(benzyl), Boc-Met, 20 Boc-Ile, Boc-Asp(benzyl), Boc-Gln, Boc-Leu, Boc-Leu,
Boc-Lys(4-chlorcarbenzoxy), Boc-Arg(Tos), Boc-Ala, Boc-Ser(benzyl), Boc-Leu, Boc-Gln, Boc-Gly, Boc-Leu, Boc-Val, Boc-Lys(4-chlorcarbenzoxy), Boc-Arg(tosyl), Boc-D-Tyr(4--bromcarbenzoxy) og Boc-Ser(benzyl), med undtagelse af 25 at Boc-Gln kobles i nærvær af 1-hydroxybenzotriazol (6 mmol) i dimethylformamidopløsning.
Den færdige peptid-benzhydrylaminharpiks, hvor den N-'endestillede Boc-gruppe er fjernet, vaskes derpå med CH^OH og lufttørres, hvilket giver 11,79 g materiale.
30
Eksempel 2
Fremstilling af beskyttet D-tyrosin-10-human-pancreas--væksthormonfrigørende faktor(1-29)-benzhydrylaminharpiks 0,98 g (0,25 mmol) peptidbenzhydrylaminharpiks 35 indeholdende 9-29-resterne af peptidet, der er beskrevet i eksempel 1, underkastes arbejds/vaske-cyklen, der li-
O
19 DK 171682 B1 geledes er beskrevet i eksempel 1. Den neutraliserede harpiks omrøres med Boc-L-asparagin (0,75 mmol), 0,75 mmol diisopropylcarbodiimid og 0,75 mmol 1-hydroxybenzo-triazol i dimethylformamid.
5 De heraf følgende arainosyrederivater (0,75 mmol) kobles derpå i rækkefølge ved samme behandlingscyklus som beskrevet i eksempel 1: Boc-Thr(benzyl), Boc-Phe,
Boc-Ile, Boc-Ala, Boc-Asp(benzyl), Boc-Ala og Boc-Tyr.
Den færdige 1-29-peptidharpiks cirkuleres derpå gennem 10 standard-arbejds/vaske-programmet, der er beskrevet i ek sempel 17, for at fjerne den N-endestillede Boc-gruppe.
Eksempel 3
Fremstilling af D-tyrosin-10-human-pancreas-væksthormon-15 friqørende(1-29)amin [(D-Tyr10)hpGRF(1-29)-NH2]
En blanding af 1-29-peptidharpiksen, der er beskrevet i ekseppel 18 (0,25 mmol) og en opløsning af 10 ml hydrogenfluorid, 26 ml dimethylsulfid og 4 ml p-cre-sol omrøres ved 0°C i 75 minutter. Overskydende reagen-20 ser afdampes derpå hurtigt under en strøm af tør nitrogen, og der tilsættes 35 ml hydrogenfluorid, og blandingen omrøres i yderligere 45 minutter ved 0°C. Overskydende hydrogenfluorid afdampes under nitrogen, og harpiksen plus frit peptid vaskes fri for p-cresol med et stort volumen 25 diethylether.
Peptidet ekstraheres over i 50% eddikesyreopløsning og påføres på en kolonne (2,5 x 95 cm) af "Sepha-dex" G-50, som elueres med 2 mol eddikesyre. Eluatet overvåges ved 280 n il> og fraktioner, der indeholder en 30 større UV-absorberende spids, slås sammen og lyophilise- res. En opløsning af det lyophiliserede pulver elueres på en kolonne (1,5 x 45 cm) af octadecylsilan-silicium-oxid med en maskestørrelse på 15-20 M og en porestørrelse på 300 Å (forhandles af Vydac, Hesperia, Californien).
35 En lineær elueringsgradient af 15-50% acetonitril i 0,1% trifluoreddikesyreopløsning anvendes ved et pumpetryk på
O
20 DK 171682 B1 2 5,6 kg/cm . Fremkomne fraktioner overvåges ved 280 nm og undersøges hver ved analytisk hplc ved en bølgelængde på 215 nm for at sikre maksimal homogeneitet hos de kombinerede fraktioner. Lyophilisering af disse giver pepti-5 det i overskriften som 32 mg hvidt pulver.
Dette materiale giver en spids, der fremkommer ved 38 minutter ved hjælp af analytisk hplc på en kolonne (0,4 x 25 cm) af "Vydac" octadecylsilansiliciumoxid (5 M maskestørrelse, 300 Å), som pumpes med 2 ml/minut 10 med en lineær gradient af 20-40% acetonitril i 0,1% tri-fluoreddikesyre. Produktudbyttet er 75 mg ud fra 0,25 mmol udgangsmateriale.
Hplc-elueringstid = 27,9 minutter.
Aminosyreanalyse giver: Asp 31,0; Thr 0,97; 15 Ser 2,81; Glu 2,21; Gly 105; Ala 3,11; Val 0,78; Met 0,94; Ile 1,70; Tyr 2,00; Phe 0,95; Lys 1,85; Arg 2,90.
Eksempel 4
Fremstilling af beskyttet N-acetyl-tosyl-L-histidin-1,D-20 alanin-2 ,L-norleucin^· 2 7-human-pancreas-væksthormonf rigø rende faktor(1-29)-benzhydrylaminharpiks
Beskyttet N-acetyl-tosyl-L-histidin-1,D-alanin-2,L-norleucin-27-human-pancreas-væksthormonfrigørende faktor (1-29) benzhydrylaminharpiks fremstilles og foruden at 25 anbringe L-tosyl-histidin i stilling 1 og D-alanin i stilling 2, anvendes L-norleucin i stedet for methionin i stilling 27, hvilket giver den ovennævnte benzhydrylaminharpiks .
30 Eksempel 5
Fremstilling af N-acetyl-L-hlstidln-1,D-alanin-2,L-nor-leucin-27-human-pancreas-væksthormonfrigørende(1-29)amin N-Acetyl-tosyl-L.-histidin-l ,D-alanin-2 »L^nor-leucin-27-humam-pancreas-væksthormonfrigørende faktor-35 (1-29)benzhydrylaminharpisk behandles med hydrogenfluo rid, dimethylsulfid og p-cresol. Overskydende reagenser
O
21 DK 171682 B1 fjernes fra blandingen ved afdampning under en strøm af tørt nitrogen. Blandingen behandles med hydrogenfluorid, og overskydende hydrogenfluorid fjernes også ved afdampning under nitrogen. Der anvendes diethylether til at 5 vaske eventuelt fri p-cresol fra harpiksen og frit peptid. Rensning ved hjælp af metoden i eksempel 3 giver: [(N-acetyl-His1, D-Ala2, Nle27)-hpGRF(1-29)NH2]. Produktudbytte er 124 mg ud fra 0,25 mmol udgangsmateriale. Hplc-elueringstid (strømningshastighed 1,5 ml/minut) 10 er 31,2 minutter. Aminosyreanalyse giver: Asp 3,24*
Thr 1,01* Ser 2,97* Glu 2,40* Gly 1,11, Ala 3,18* Val 0,76* Ile 1,63* Tyr 1,03* Phe 0,93; His 1,08* Lys 1,78*
Arg 2,99* Nle 0,85.
15 Eksempel 6
Fremstilling af D-alanin-2,D-tyrosin-10-human-pancreas-vaksthorinomfrigørende faktor (1-29) -benzhydrylaminharpiks 0,25 mol af den i eksempel 1 fremstillede pep-tid-benzhydrylaminharpiks underkastes de i eksempel 2 20 beskrevne koblingscykler med undtagelse af, at der anvendes D-alanin i stedet for L-alanin i stilling 2.
Eksempel 7
Fremstilling af D-alanin-2,D-tyrosin-10-human-pancreas-25 væksthormonfrigørende(1-29)-amin [(D-Ala ,D-Tyr )- -hpGRF(1-29)-NH ^] 0,25 mmol of den peptidharpiks, der er beskrevet i eksempel 6, behandles med hydrogenfluoridblandin-ger og renses som beskrevet i eksempel 3. Det rensede 30 lyophiliserede peptid vejer 130 mg. Hplc-elueringstiden er 28,3 minutter ved anvendelse af de analytiske Hplc-be-tingelser, der er beskrevet i eksempel 19. Aminosyreanalyse af et 6 molær HCl-hydrolysat giver følgende aminosy-reforhold: Asp 2,91; Thr 0,97; Ser 2,84; Glu 2,20; Gly 35 1,07; Ala 3,00* Val 0,96; Met 0,59; Ile 1,86; Leu 4,08*
Tyr 1,86; Phe 0,93* Lys 1,99; Arg 3,07.
O
22 DK 171682 B1
Eksempel 8
Fremstilling af D-serin-9-human-pancreas-væksthonnonfri-gørende faktor(1-29)-benzhydrylaminharplks 0,25 mmol peptid-benzhydrylaminharpiks fremstil-5 let som i eksempel med undtagelse af, at der anvendes D--serin i stedet for L-serin i stilling 9, underkastes de i eksempel 2 beskrevne koblingscykler.
Eksempel 9 10 Fremstilling af D-serln-9-human-pancreas-væksthormonfri-gørende 'faktor (1-29)-amin [ (D-Ser^)-hpGRF(1—29) —] 0,25 mmol af den i eksempel 8 beskrevne peptidharpiks behandles med hydrogenfluoridblandinger og renses som beskrevet i eksempel 3. Det rensede lyophilise-15 rede peptid vejer 108 mg. Dette materialer giver én spids, der fremkommer efter 28,5 minutter ved hjælp af de analytiske Hplc-betingelser, der er beskrevet i eksempel 3. Aminosyreanalyseforhold; Thr 0,95} Ser 2,80;
Glu 2,16} Gly 1,02} Ala 3,04} Val 0,90; Ile 1,75; Leu 20 4,00} Tyr 1,91} Phe 0,92; Lys 2,06; Arg 3,85; Met 0,90.
Eksempel 10
Bedømmelse af peptidvirkninger på væksthormonf frigørelse hos pattedyr ved hjælp af rotter som forsøgsdyr 25 Ved denne bedømmelse anvendes der metoder, der er beskrevet af W.A. Murphy m.fl., Endocrinology 109, 491-495 (1980).
Ved væksthormon-(GH)-eksperimenter bedøves /g) hanrotter (Charles Rivers) med "Nembutal"^ (6 mg pr. 100 30 g legemsvægt), hvilket også tjener til at opretholde stimulerede plasma-GH-niveauer. Nøjagtig 30 minutter efter, at rotterne er blevet bedøvet, indgives 0,5 ml saltvandsopløsning eller prøvepeptidet i saltvandsopløsning som en stor SC-pille. Der tages en 1 ml-blodprøve 35 fra halsvenen 15 minutter efter injektion af peptidet i saltvandsopløsning. GH-niveauer bestemmes ved hjælp af NIADDKD-rotte-GH-RIA-komponenter.
23 DK 171682 B1 να
CM
«« «
-—. .—I CM
ι-t tn I
<D «η tn cm Μ »H I «Η
U I Γ** »H
>i in iH
-P r» cm — ω co ao r* dP O CM in
iH CM rH
να να ·α in να vo cm o vo in nn ftj H P* 30 η o £ cn cn in« iH να ø§ +1+1 +1+1' +.1+1
H
pu "»cm "vr vn vo p* o m r·* r- » o co να να av i—i <tv ih tn h n H ri tn m ή in cm tn vo o oo o *· »
O ι-t M· CN OH
a r* r*
CM CM
ø ø i—4 1—4 Z z
CM CM
_ 0 0
Dl Η H
O < <
«Η I I
ø o α c
< * -> iH rH
oo tn n
OVOV HH *H *H
bit bi bi S X
0 0 >. ·>, o o enen ti t· < <
1 I II II
oo o o z z
O
24 DK 171682 B1 hpGRF(l-29)-NH2 fetruktur-aktivitetsundersøgelser
Dosis Plasma GH
Analog (μ/100 g BW) . (Ng/mL) 5
Saltvandsopløsning - 27% + 54 (11)* [Arg12*21]_hpGRF(l-29)-NH2 10 688 + 84 (8) 10 25 1613 + 302 (8) [N-Ac-Tyr,Argl2,21]-hpGRF 1 796 + 88 (8) (1-29)-NH2 2.5 1649+167(8) 15 Saline - 309 + 20 (6)* [D-Ala2,Arg12,21]_hpGRF 0,4 755 + 131 (6) (1-29)-NH2 1Ό 1752 + 289 (6) 20 * Antallet af rotter i parentes.
Eksempel 11 12 21
Fremstilling af arginin ' -human-pancreas-væksthormon-25 frigørende(1-29)-amid [Arg12/21-hpGRF (1-29)-NH.J
Der fremstilles peptidharpiks som ovenfor med L-arginin i stedet for D-lysin i stillingerne 12 og 21 i koblingscyklen. Dette materiale kobles derpå som beskrevet i reaktionsskema I. Det i overskriften nævnte 30 produkt isoleres derpå på sædvanlig måde.
Peptidharpiksen fremstilles som i eksempel 1 med L-arginin i stedet for D-lysin i stillingerne 12 og 21 i koblingscyklen. Dette materiale kobles derpå den i eksempel 2 beskrevne måde. Det i overskriften nævnte 35 produkt isoleres derpå på sædvanlig måde.
O
25 DK 171682 B1
Eksempel 12 12 21
Fremstilling af beskyttet N-acetyl-arginin ' -human-pancreas-væksthormonfrigørense faktor(1-29)-amid [N-AcTyr/Arg12 y21-hpGRF(1-20)-NH.J 5 Den i overskriften nævnte forbindelse frem stilles ved den fremgangsmåde, der er beskrevet i reaktionsskemaet I og renses ved hjælp af standardmetoder.
Eksempel 13 2 12 21 10 Fremstilling af D-alanin #arginin ' -human-pancreas- 2 12 21 væksthormonfrigørense(1-29)-amid [(D-Ala ,Arg ' )- -hpGRF (1-29) -NH^,]
Peptid-benzhydrylharpiksen fremstilles som beskrevet i reaktionsskema I, idet L-arginin anvendes i 15 stedet før Lr-lysin i stillingerne 12 og 21 i koblingscyklen. Dette materiale kobles med D-alanin i stedet for L-alanin i stilling 2. Det i overskriften nævnte peptid isoleres og renses på sædvanlig måde.
20 Eksempel 14
Fremstilling af D-alanin-2-human-pancreas-væksthormon-frigørende(1-29)-carboxylsyre (D-Ala2)-hpGRF(1-29)-OH Boc-Arg (Tos) (3 mmol) kobles til Merrifield hydroxymethylharpiks ved at omrøre 1,1'-carbonyldiimi-25 azol (3 mmol) i en blanding af DMF og CH2C12 (10 ml) med det blokerede Arg ved -5°C i en halv time, hvorpå der tilsættes 1,5 mmol harpiks. Blandingen omrøres i 20 timer ved stuetemperatur, og harpiksen opsamles ved filtrering, vaskes med CH2C12, DMF, CH2C12, EtOH og 30 CH2C12 og tørres. Den koblede harpiksblanding acetyleres yderligere med en blanding af pyridin og Ac20 [20 ml, 1:1 (vo/vo)] i en halv time for at esterifice-re eventuelt fri hydroxymethylharpiks og vaskes som før. Boc-Arg(Tos)-harpiksen kobles derpå til resten af de 35 nødvendige aminosyrer og behandles yderligere med HF og renses, hvilket giver den i overskriften nævnte forbindelse.
DK 171682 B1 26 o
Eksempel 15 2 12 21
Fremstilling af D-alanln ,arginin ' -human-pancreas- 2 12 21 væksthormonfrigørende(1-29)-carboxylsyre (D-Ala ,Arg ’ )-
-hpGRF(1-29)-OH
5 På samme måde som beskrevet i eksempel 14 frem stilles den i overskriften nævnte forbindelse med L-ar-ginin i stedet for L-lysin i stillingerne 12 og 21 i koblingscyklen. Derpå renses peptidet på sædvanlig måde.
10 Eksempel 16
Virkningen af D-Ala^-GRF(l-29)-NH^ på mælkeproduktion hos malkekvæg (behandlingerne gives subcutant)
Ved denne prøve indgives behandlingerne ved hjælp af en "Latin Square"-plan, hvor der anvendes 4 køer.
15 Hver behandlingsperiode er på 10 dage, og perioderne mellem behandlingerne er på 4 dage.
Der er en for-behandlingsperiode på en uge, og i slutningen af denne får hver ko indlagt et fast halskateter. Kateterne skylles daglig med hepariniseret 20 (500-1000 enh./ml) steril saltvandsopløsning for at støtte opretholdelsen af styrken og udskiftes efter behov.
Medikamenterne opløses i steril saltvandsopløsning og injiceres subcutant hver dag i en dosis baseret 25 på koens vægt. Dosisingerval fra 0,06 mg/kg dyr/dag til 60 mg/kg dyr/dag, fortrinsvis 0,10 mg/kg dyr/dag til 50 mg/kg/dag.
På første og sidste behandlingsdag i hver periode tages blod med 15 minutter mellemrum i en time før 30 og 1,5 time efter behandlingen; der tages fortsat blodprøver med 30 minutters mellemrum i yderligere 3,5 timer.
Der tages mælkeprøver aftenen før hver blodtapningsdag, om morgenen på hver blodtapningdag og de kombineres (50% hver).
35 Foderindtagelse og -afvisning og mælkeproduk tion overvåges for alle dyrene.
O
27 DK 171682 B1
De opnåede resultater rapporteres som gennemsnitlig mælkeproduktion i kg/dag for hver behandling og sammenlignes med en saltvandsopløsningskontrol.
D-Ala2-GRF(1-29)NH2 D-Ala2-GRF(1-29)NH2 Saltv.opl.
5 0,4 mq/kq/dag 0,8 mq/kg/dag kontrol Mælkeproduktion kg/dag 23,9 23,8 22,2 % stigning i.f.t.
kontrol +7,6% +7,2% 10
Disse resultater viser, at de væksthormonfrigørende peptider ifølge opfindelsen ikke blot øger væksthormonfrigørelse, men at der iagttages en biologisk aktivitet ved forøgelse af mælkeproduktion i de pågældende 15 dyr. Dette viser naturligvis, at der fremkommer andre biologiske reaktioner, såsom forøget kødprodukt, forøget vækstrate, forøget uldproduktion etc. på grund af indgift af de her omhandlede peptider til dyrene.
20 25 30 35
Claims (11)
1. Peptid, kendetegnet ved, at det har formlen
2. Peptid ifølge krav 1, kendetegnet 1. ved, at R er hydrogen eller C^^-alkanoyl, R er eller OH/ A er tyrosyl, D-tyrosyl eller histidyl, B er a-lanyl eller D-alanyl, C er aspartyl eller D-aspartyl, 5. er seryl eller D-seryl, U er arginyl, W er arginyl, X er asparaginyl eller D-asparaginyl, Y er norleucyl eller methionyl, og Z er tyrosyl eller D-tyrosyl, samt phar-maceutisk acceptable salte deraf.
3. Peptid ifølge krav 1, kendetegnet 10 ved, at det har formlen I, hvor R^ er hydrogen eller ace-2 tyl, R er eller OH, A er tyrosyl, D-tyrosyl eller histidyl, B er alanyl eller D-alkanyl, C er aspartyl eller D-aspartyl, Q er seryl eller D-seryl, U og W er hver arginyl, X er asparaginyl eller D-asparaginyl, Y er norleu-15 cyl eller methionyl, og Z er tyrosyl eller D-tyrosyl, samt pharmaceutisk acceptable salte deraf.
4. Peptid ifølge krav 1, kendetegnet ved sekvensen Ac-His-D-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-D-Tyr-Arg-2 0 -Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gly-Asp--Ile-Nle-Ser-Arg-NH2 i Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser--D-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu--Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2, Tyr-D-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe--Thr-Asn-Ser-D-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-25 -Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2; Tyr-Ala-Asp-Ala--Ile-Phe-Thr-Asn-D-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser--Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2 ? Tyr-D--Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Arg-Val-Leu-Gly--Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Arg-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-30 -NH2 samt pharmaceutisk acceptable salte deraf; Tyr-Ala-D-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Arg--Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Arg-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile--Met-Ser-Arg-NH2 samt pharmaceutisk acceptable salte deraf; D-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Arg-35 -Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Arg-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile--Met-Ser-Arg-NH2 samt pharmaceutisk acceptable salte deraf; DK 171682 B1 Ac-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Arg--Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Arg-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile--Met-Ser-Arg-NH2 samt pharmaceutisk acceptable salte deraf; Ac-D-Tyr-D-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-5 -Arg-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Arg-Leu-Leu-Gln-Asp--Ile-Met-Ser-Arg-NH2 samt pharmaceutisk acceptable salte deraf; Tyr-D-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Arg--Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Arg-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-10 -Met-Ser-Arg-OH samt pharmaceutisk acceptable salte deraf, eller Tyr-D-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys--Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile--Met-Ser-Arg-OH samt pharmaceutisk acceptable salte deraf.
5. Sammensætning til forøgelse af frigørelsen af væksthormon hos pattedyr, kendetegnet ved, at den som aktivt stof omfatter en effektiv dosis på 0,000001-0,1 mg/kg af pattedyrets kropsvægt/dag af et peptid med formlen
20 R1-A-B-C-Ala-Ile-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-R.2; (I) eller R1-A-B-C-Ala-Ile-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-Val-Leu-Gly-Gln-25 Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-R.2 (II) eller R1-A-B-C-Ala-Ile-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-VAL-Leu-Gly-Gln-30 Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Glu-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-Rl; (III) 35 hvor R1 er hydrogen eller ligekædet eller forgrenet O DK 171682 B1 C, fi-alkanoyl, 2 1-0 343 R er NR R eller OR , 3 4 hvor R og R er hydrogen eller en ligekædet eller forgrenet C^_g-alkylgruppe, 5. er valgt blåndt i tyrosyl, D-tyrosyl, histidyl, D-histidyl, phenylalanyl, D-phenylalanyl, 4-chlor-phenylalanyl, D-4-chlor-phenylalanyl, 47brom-phenylalanyl, D-4-brom-alanyl, 4- fluor-phenylalanyl, D-4-fluor-phenylalanyl, 4-methoxy- 10 phenylalanyl, D-4- methoxyphenylalanyl, 4-benzyloxy- phenylalanyl, D-4- benzyloxyphenylalanyl, trytophyl, D-tryptophyl, 5-f luor-*tryptophyl, D-5-fluor-tryptophyl, 5- chlor-tryptophyl, D-5-chlor-rtryptophyl, 5-brom-try-ptophyl, D-5-broæ-tryptophyl, 5-methoxytryptophyl,
15 D-5-methoxytryptophyl, 5-meChylCrypCophyl, D-5-methyl- tryptophyl eller Π ^ }—CH2——CO S NH 20 B er valgt blandt alanyl, D-alanyl, N-methylalanyl, N-methyl-D-alanyl, leucyl, D-leucyl, phenylalanyl, D-phenylalanyl, 4-chlor-phenylalanyl·,
25 D-4-chlor~phenylalanyl, 4-brom-phenylalanyl, D-4-brom- phenylalanyl, 4-f luor->phenylalanyl, D-4-fluor-phenyl-alanyl, 4-methoxyphenylalanyl, D-4-methoxyphenylalanyl, 4- benzyloxyphenylalanyl, D-4-benzyloxyphenylalanyl, tryptophyl, D-tryptophyl, 5-fluor-tryptophyl, D-5-fluor- 30 tryptophyl, 5-chlor-tryptophyl, D-5-chlor-tryptophyl, 5- broia-tryptophyl, D-S-brora^-tryptophyl, 5-methoxytryptophyl, D-5-methoxytryptophyl eller I i
35. J—CH2—<j)H—CO; $ NH DK 171682 B1 C er D-aspartyl, Q er seryl eller D-seryl, X er asparaginyl eller D-asparaginyl, Y er norleucyl eller methionyl, 5. er tyrosyl eller D-tyrosyl, U er lysyl eller arginyl, og W er lysyl eller arginyl, forudsat at mindst én af følgende betingelser gælder: Q er D-seryl, og/eller Z er D-tyrosyl, og/eller U og W hver er 10 arginyl, eller pharmaceutisk acceptable salte heraf.
5 Ri-A-B-C-Ala-Ile-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-Val-Leu-Gly-Gln- Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gin-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-R2 ; <I) eller Rl-A-B-C-Ala-Ile-Phe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-Val-Leu-Gly-Gln-
6. Sammensætning ifølge krav 5, kendetegnet ved, at peptidet har formlen I, hvor symbolerne har den i krav 2 anførte betydning.
7. Sammensætning ifølge krav 5, kende tegnet ved, at peptidet har formlen I, hvor symbolerne har den i krav 3 anførte betydning
8. Sammensætning ifølge krav 5, kendetegnet ved, at peptidet er ifølge krav 4.
9. Fremgangsmåde til fremstilling af et peptid ifølge krav 1, kendetegnet ved, at en C-ende-stillet beskyttet aminosyre fastgøres til en harpiks i nærvær af et koblingsmiddel, vask med et inaktivt opløsningsmiddel, fjernelse af beskyttelsen i nærvær af en syre, 25 gentagelse af denne sekvens med de følgende beskyttede aminosyrer, defineret i formlerne I, II og III, trinvis fra peptidets C-endestilling, og endelig løsgørelse af peptidet fra harpiksen i nærvær af en syre, hvilket giver 2 et peptid med formlen I, libeller III, hvor R er NI^, 30 hvor harpiksen er BHA eller p-ME-BHA, eller fjernelse af peptidet fra harpiksen med ammoniak, alkylamin eller di'-» alkylamin og fjernelse af beskyttelsen med en syre, hvil- 2 ket giver et peptid med formlen I, II eller III, hvor R 3 4 er NR ,R , hvor harpiksen er en chlormethyleret eller hy-35 droxymethyleret harpiks, eller fjernelse af peptidet fra DK 171682 Bl harpiksen i nærvær af en syre, hvilket giver et peptid 2 med formlen I, II eller III/ hvor R er OH, hvor harpiksen er en chlormethyleret eller hydroxymethyleret harpiks, eller fjernelse fra peptidet fra harpiksen i nærvær af en 3 5 base og en R OH-alkohol efterfulgt af syrebehandling, hvil- 2 ket giver et peptid med formlen I, II eller III, hvor R 3 3 er OR , hvor R er en ligekædet eller forgrenet C^_g-alkyl-gruppe, og harpiksen er en chlormethyleret eller hydroxymethyleret harpiks.
10. Sammensætning ifølge krav 5 til forøgelse af mælkeproduktionen hos malkekøer, kendetegnet ved, at den som aktivt stof omfatter en mængde peptid ifølge krav 1, der er tilstrækkelig til at forøge mælkeproduktionen hos disse køer, eller pharmaceutisk acceptable salte deraf.
10 Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-Gln- Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-R2 (II) eller R1-A-B-C-Ala-Ile-Pbe-Thr-X-Q-Z-Arg-U-VAL-Leu-Gly-Gln-15 Leu-Ser-Ala-Arg-W-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Y-Ser-Arg-Gln- Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Glu-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg- Leu-Rl; (III) 20 hvor R1 er hydrogen eller ligekædet eller forgrenet C. ,-alkanoyl, 2 34 3 R er NRJR1 2 eller OR , 4 hvor R og R er hydrogen eller en ligekædet eller forgrenet C1_g-alkylgruppe, 25. er valgt blandt 2 Cyrosyl, D-tyrosyl, histidyl, D-histidyl, phenylalanyl, D-phenylalanyl, 4-chlor-phenylalanyl, D-4-chlor· · phenylalanyl, 47brom-phenylalanyl, D-4-brom~alanyl, 4- fluor-phenylalanyl, D-4-fluor-phenylalanyl, 4-methoxy- i 30 phenylalanyl, D-4- methoxyphenylalanyl, 4-benzyloxy- phenylalanyl, D-4- benzyloxyphenylalanyl, trytophyl, D-tryptophyl, 5-fluor-tryptophyl, D-5-fluor-tryptophyl, 5- chlor-tryptophyl, D-5-chlor-tryptophyl, 5-brom-try-ptophyl, D-5-brom-tryptophyl, 5-methoxytryptophyl,
35 D-5-methoxytryptophyl, 5-methyltryptophyl, D-5-methyl- tryptophyl eller O DK 171682 B1 Π k, ^ ^—ch2—<j:h—co NH 5. er valgt blandt alanyl, D-alanyl, N-methylalanyl, N-methyl-D-alanyl, leucyl, D-leucyl, phenylalanyl, D-phenylalanyl, 4-chlor-phenylalanyl·, D-4-chlor-phenylalanyl, 4-brom-phenylalanyl, D-4-brom^ 10 phenylalanyl, 4-fluor-»phenyl alanyl, D-A-fluor-'phenyl- alanyl, 4-methoxyphenylalanyl, D-4-methoxyphenylalanyl, 4-benzyloxyphenylalanyl, D-4-benzyloxyphenylalanyl, tryptophyl, D-tryptophyl, 5-fluor^tryptophyl, D-5-fluor-tryptophyl, 5-chlor-tryptophyl, D-5-chlor^tryptophyl, !5 5-brom.-tryptophyl, D-S-brom^tryptophyl, 5-methoxy- tryptophyl, D-5-methoxytryptophyl e^ler i il ^ >-CH2—CH—CO;
20. I zu NH C er D-aspartyl, 2® Q er seryl eller D-seryl, X er asparaginyl eller D-asparaginyl, Y er norleucyl eller methionvl Z er tyrosyl eller D-tyrosyl, % U er lysyl eller arginyl, og 30. er lysyl eller arginyl, forudsat at mindst én af følgende betingelser gælder: Q er D-seryl, og/eller Z er D-tyrosyl, og/eller U og W hver er arginyl, samt pharmaceutisk acceptable salte heraf. 35 DK 171682 B1
11. Sammensætning ifølge krav 5 til forøgelse af dyrs vækstrate, kendetegnet ved, at den som aktivt stof omfatter en vækstfremmende mængde af et peptid ifølge krav 1 eller pharmaceutisk acceptable salte deraf. 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US69208285A | 1985-01-17 | 1985-01-17 | |
| US69208285 | 1985-01-17 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK18086D0 DK18086D0 (da) | 1986-01-15 |
| DK18086A DK18086A (da) | 1986-07-18 |
| DK171682B1 true DK171682B1 (da) | 1997-03-10 |
Family
ID=24779183
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK018086A DK171682B1 (da) | 1985-01-17 | 1986-01-15 | Væksthormon-frigørende peptid og pharmaceutisk acceptable salte deraf, sammensætning med indhold deraf samt fremgangsmåde til fremstilling af peptider |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0188214A3 (da) |
| JP (1) | JPS61210099A (da) |
| AU (1) | AU590738B2 (da) |
| CA (1) | CA1271600A (da) |
| DK (1) | DK171682B1 (da) |
| ES (1) | ES8703894A1 (da) |
| FI (1) | FI860200A (da) |
| IE (1) | IE860131L (da) |
| IL (1) | IL77534A (da) |
| NO (1) | NO169173C (da) |
| NZ (1) | NZ214792A (da) |
| PT (1) | PT81845B (da) |
| ZA (1) | ZA86338B (da) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5565606A (en) * | 1986-10-21 | 1996-10-15 | Hoechst Aktiengesellschaft | Synthesis of peptide aminoalkylamides and peptide hydrazides by the solid-phase method |
| DE3742633A1 (de) * | 1987-12-16 | 1989-06-29 | Hoechst Ag | Peptide mit beeinflussender wirkung auf die hypophyse von saeugern |
| IL86102A (en) * | 1987-05-11 | 1994-04-12 | Univ Tulane | Alkylated peptides that release growth hormone and their use |
| US5002931A (en) * | 1987-05-22 | 1991-03-26 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs VII |
| US4959352A (en) * | 1987-09-18 | 1990-09-25 | Hoffmann-La Roche Inc. | Cyclic growth hormone releasing factor analogs and method for the manufacture thereof |
| EP0307860B1 (en) * | 1987-09-18 | 1994-06-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Cyclic GRF-analogs |
| US5084442A (en) * | 1988-09-06 | 1992-01-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Cyclic growth hormone releasing factor analogs and method for the manufacture thereof |
| US5756458A (en) * | 1989-06-16 | 1998-05-26 | Pharmacia & Upjohn Company | Stabilized potent GRF analogs |
| CA2085362A1 (en) * | 1990-06-29 | 1991-12-30 | Arthur M. Felix | Histidine substituted growth hormone releasing factor analogs |
| ZA922746B (en) * | 1991-04-26 | 1992-12-30 | Lilly Co Eli | Superactive grf analogs |
| US5550212A (en) * | 1993-12-17 | 1996-08-27 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Analogues of hGH-RH(1-29)NH2 having antagonistic activity |
| WO1996032126A1 (en) * | 1995-04-14 | 1996-10-17 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Analogs of growth hormone-releasing factor |
| EP0828758B1 (en) * | 1995-05-26 | 2001-08-29 | Theratechnologies Inc. | Chimeric fatty body-pro-grf analogs with increased biological potency |
| EP1355941A2 (en) | 2001-02-02 | 2003-10-29 | ConjuChem, Inc. | Long lasting growth hormone releasing factor derivatives |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4517181A (en) * | 1982-09-15 | 1985-05-14 | The Salk Institute For Biological Studies | Mammalian PGRF |
| NZ204456A (en) * | 1982-06-16 | 1987-05-29 | Salk Inst For Biological Studi | Synthetic pancreatic growth-hormone releasing factor |
| US4518586A (en) * | 1983-01-13 | 1985-05-21 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF Analogs III |
| IL70530A (en) * | 1983-01-13 | 1986-09-30 | Salk Inst For Biological Studi | Synthetic peptides having growth hormone releasing factor activity and compositions containing them |
| AU575843B2 (en) * | 1983-08-10 | 1988-08-11 | The Administrators Of The Tulane Eductional Fund | Growth hormone releasing peptides |
| US4528190A (en) * | 1983-10-25 | 1985-07-09 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF Analogs IV |
| US4649131A (en) * | 1984-09-24 | 1987-03-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Growth hormone releasing factor analogs |
-
1986
- 1986-01-06 CA CA000499013A patent/CA1271600A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-01-07 EP EP86100127A patent/EP0188214A3/en not_active Withdrawn
- 1986-01-07 IL IL77534A patent/IL77534A/xx not_active IP Right Cessation
- 1986-01-10 NZ NZ214792A patent/NZ214792A/xx unknown
- 1986-01-15 PT PT81845A patent/PT81845B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-01-15 DK DK018086A patent/DK171682B1/da active
- 1986-01-16 AU AU52299/86A patent/AU590738B2/en not_active Ceased
- 1986-01-16 NO NO860149A patent/NO169173C/no unknown
- 1986-01-16 ZA ZA86338A patent/ZA86338B/xx unknown
- 1986-01-16 FI FI860200A patent/FI860200A/fi not_active Application Discontinuation
- 1986-01-16 IE IE860131A patent/IE860131L/xx unknown
- 1986-01-17 JP JP61006591A patent/JPS61210099A/ja active Pending
- 1986-01-17 ES ES550989A patent/ES8703894A1/es not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES550989A0 (es) | 1987-03-16 |
| FI860200A0 (fi) | 1986-01-16 |
| AU590738B2 (en) | 1989-11-16 |
| NO169173B (no) | 1992-02-10 |
| DK18086A (da) | 1986-07-18 |
| IE860131L (en) | 1986-07-17 |
| EP0188214A2 (en) | 1986-07-23 |
| IL77534A (en) | 1991-01-31 |
| ZA86338B (en) | 1987-08-26 |
| AU5229986A (en) | 1986-07-24 |
| DK18086D0 (da) | 1986-01-15 |
| PT81845B (pt) | 1987-11-30 |
| ES8703894A1 (es) | 1987-03-16 |
| NO169173C (no) | 1992-05-20 |
| CA1271600A (en) | 1990-07-10 |
| PT81845A (en) | 1986-02-01 |
| EP0188214A3 (en) | 1989-05-24 |
| FI860200A (fi) | 1986-07-18 |
| NZ214792A (en) | 1989-01-27 |
| NO860149L (no) | 1986-07-18 |
| JPS61210099A (ja) | 1986-09-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4411890A (en) | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity | |
| US5847066A (en) | Analogs of growth hormone-releasing factor | |
| US5084555A (en) | An octapeptide bombesin analog | |
| US5877277A (en) | Octapeptide bombesin analogs | |
| DK167361B1 (da) | Grf-analoge peptider, farmaceutisk acceptable salte heraf og fremgangsmaader til fremstilling af disse | |
| AU636301B2 (en) | Cyclic grf-analogs ii | |
| IL101452A (en) | Analogs of the factor that releases the growth hormone, their preparation and the pharmaceutical preparations that contain them | |
| US5416073A (en) | Growth hormone-releasing peptides and method of treating animals, therewith | |
| EP1405861A2 (en) | Analogs of parathyroid hormone | |
| DK171682B1 (da) | Væksthormon-frigørende peptid og pharmaceutisk acceptable salte deraf, sammensætning med indhold deraf samt fremgangsmåde til fremstilling af peptider | |
| EP0083864B1 (en) | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity | |
| EP0018072B1 (en) | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity | |
| AU1154783A (en) | Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity | |
| AU757222B2 (en) | Antagonistic analogs of GH-RH inhibiting IGF-I and -II | |
| US5112808A (en) | Alkylated hormone-releasing peptides and method of treatig mammals therewith | |
| EP0307860B1 (en) | Cyclic GRF-analogs | |
| AU613364B2 (en) | Novel alkylated growth hormone-releasing peptides and method of treating mammals therewith | |
| US4959352A (en) | Cyclic growth hormone releasing factor analogs and method for the manufacture thereof | |
| FI101884B (fi) | Luteinisoivaa hormonia vapauttavan hormonin (LHRH) antagonistipeptidej ä |