ES2743789T3 - Líneas de algodón transgénico Cry1F y Cry1Ac y su identificación específica de evento - Google Patents
Líneas de algodón transgénico Cry1F y Cry1Ac y su identificación específica de evento Download PDFInfo
- Publication number
- ES2743789T3 ES2743789T3 ES14198791T ES14198791T ES2743789T3 ES 2743789 T3 ES2743789 T3 ES 2743789T3 ES 14198791 T ES14198791 T ES 14198791T ES 14198791 T ES14198791 T ES 14198791T ES 2743789 T3 ES2743789 T3 ES 2743789T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- seq
- dna
- sequence
- residues
- cotton
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 title claims abstract description 94
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 title description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 77
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 40
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 31
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 111
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 claims description 58
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 37
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 31
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 24
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 23
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 23
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 21
- 101100497219 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki cry1Ac gene Proteins 0.000 claims description 18
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 100
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 82
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 51
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 42
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 40
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 37
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 35
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 32
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 32
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 26
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- 240000002024 Gossypium herbaceum Species 0.000 description 19
- 235000004341 Gossypium herbaceum Nutrition 0.000 description 19
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 10
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 8
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 description 8
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 7
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 108010082527 phosphinothricin N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 101710115267 ATP synthase protein MI25 Proteins 0.000 description 4
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 4
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 101710134973 Uncharacterized 9.7 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 3
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 3
- 244000299507 Gossypium hirsutum Species 0.000 description 3
- 235000009432 Gossypium hirsutum Nutrition 0.000 description 3
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 3
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 3
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 3
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 3
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 101150113864 pat gene Proteins 0.000 description 3
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 3
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 2
- 108700003918 Bacillus Thuringiensis insecticidal crystal Proteins 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 2
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 241000187191 Streptomyces viridochromogenes Species 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102000007347 Apyrase Human genes 0.000 description 1
- 108010007730 Apyrase Proteins 0.000 description 1
- 241000193363 Bacillus thuringiensis serovar aizawai Species 0.000 description 1
- 241001147758 Bacillus thuringiensis serovar kurstaki Species 0.000 description 1
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 description 1
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 1
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 description 1
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 108010066133 D-octopine dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 235000009438 Gossypium Nutrition 0.000 description 1
- 240000000047 Gossypium barbadense Species 0.000 description 1
- 235000009429 Gossypium barbadense Nutrition 0.000 description 1
- 108010034791 Heterochromatin Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 108020004518 RNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003391 RNA probe Substances 0.000 description 1
- 102000004523 Sulfate Adenylyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010022348 Sulfate adenylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000005652 acute fatty liver of pregnancy Diseases 0.000 description 1
- IRLPACMLTUPBCL-FCIPNVEPSA-N adenosine-5'-phosphosulfate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@@H](CO[P@](O)(=O)OS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O IRLPACMLTUPBCL-FCIPNVEPSA-N 0.000 description 1
- 230000010165 autogamy Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012832 cell culture technique Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000005081 chemiluminescent agent Substances 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 1
- 210000004458 heterochromatin Anatomy 0.000 description 1
- 108091006086 inhibitor proteins Proteins 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N parathion Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012175 pyrosequencing Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000010153 self-pollination Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 244000000000 soil microbiome Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012090 tissue culture technique Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- UONOETXJSWQNOL-UHFFFAOYSA-N tungsten carbide Chemical compound [W+]#[C-] UONOETXJSWQNOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001478887 unidentified soil bacteria Species 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/32—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
- C07K14/325—Bacillus thuringiensis crystal peptides, i.e. delta-endotoxins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
- Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Un método para detectar la presencia del evento de algodón cry1F 281-24-236 en una muestra que comprende ADN de algodón, en donde dicho método comprende poner en contacto dicha muestra con al menos un polinucleótido que es diagnóstico para el evento de algodón cry1F 281-24-236, en donde el evento de algodón 281- 24-236 es una secuencia de polinucleótidos de inserto Cry1F que consta de los nucleótidos 2.075-12.748 de SEQ ID NO: 1 y al menos 20 nucleótidos flanqueantes contiguos en ambos lados de dicha secuencia de inserto, en donde los nucleótidos flanqueantes 5' son los restos de nucleótidos 1-2.074 de SEQ ID NO: 1 y los nucleótidos flanqueantes 3' son los restos de nucleótidos 12.749-15.490 de SEQ ID NO: 1.
Description
DESCRIPCIÓN
Líneas de algodón transgénico Cry1F y CrylAc y su identificación específica de evento
Antecedentes de la invención
El algodón es un importante cultivo para la obtención de fibras. Se ha aplicado el cruzamiento y la biotecnología al algodón para mejorar sus rasgos agronómicos y la calidad del producto. Uno de estos rasgos agronómicos es la resistencia a insectos, cuyas ventajas son claramente evidentes. Se han introducido genes que codifican proteínas insecticidas en plantas de algodón. Para mitigar la inquietud de que un tipo conceto de insecto pueda desarrollar resistencia a un único tipo de proteína insecticida, a menudo se desarrollan plantas que producen dos tipos diferentes de proteínas insecticidas. Así, la probabilidad de que un insecto sea capaz hipotéticamente de desarrollar resistencia a dos proteínas insecticidas diferentes es extremadamente baja.
En la técnica se conocen los genes y las proteínas insecticidas Cry1Ac. Véanse, por ejemplo, las patentes de EEUU núms. 6.114.138; 5.710.020; 6.251.656; y 6.229.004. En la técnica también se conocen los genes y las proteínas insecticidas Cry1F. Veánse, por ejemplo, las patentes de EEUU núms.5.188.960; 5.691.308; 6.096.708; y 6.573.240. La expresión de genes extraños en plantas se ve influida por el lugar en que se inserta el gen extraño en el cromosoma. Esto puede ser debido a la estructura de la cromatina (por ejemplo, heterocromatina) o a la proximidad de elementos de regulación transcripcional (por ejemplo, potenciadores) cercanos al sitio de integración (Weising et al., Ann. Rev. Genet., 22:421-477, 1988). Por ejemplo, el mismo gen en el mismo tipo de planta transgénica (u otro organismo) puede mostrar una amplia variación en el nivel de expresión entre diferentes eventos. También pueden existir diferencias en los patrones de expresión espacial o temporal. Por ejemplo, las diferencias en la expresión relativa de un transgén en diversos tejidos vegetales pueden no corresponderse con los patrones esperados a partir de los elementos reguladores transcripcionales presentes en la construcción del gen introducido.
Así, es necesario crear y seleccionar un gran número de eventos para identificar un evento que exprese óptimamente un gen de interés introducido. Para fines comerciales, es habitual producir de cientos a miles de eventos diferentes y seleccionar los eventos para un único evento que tenga los patrones y niveles de expresión del transgén deseados. Un evento que tenga los patrones y niveles de expresión del transgén deseados es útil para introgresar el transgén en otros entornos genéticos mediante cruzamiento exogámico sexual empleando métodos de cruzamiento convencionales. La progenie de estos cruzamientos mantiene las características de expresión del transgén del transformante original. Esta estrategia se emplea para asegurar la expresión fiable de genes en una serie de variedades que están bien adaptadas a las condiciones de crecimiento locales.
Sería ventajoso poder detectar la presencia de un evento concreto para determinar si la progenie de un cruzamiento sexual contiene un transgén de interés. Además, un método para detectar un evento concreto sería útil para cumplir con las normas que requieren de una aprobación antes de la comercialización y el etiquetado de alimentos derivados de plantas de cultivos recombinantes, por ejemplo. Es posible detectar la presencia de un transgén mediante cualquier método de detección de ácidos nucleicos conocido, tal como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) o la hibridación de ADN empleando sondas de ácidos nucleicos. Estos métodos de detección general se centran en elementos genéticos empleados con frecuencia, tales como promotores, terminadores, genes marcadores y similares. Como resultado, estos métodos pueden no ser útiles para discriminar entre diferentes eventos, en particular los producidos empleando la misma construcción de ADN, a menos que se conozca la secuencia del ADN cromosómico adyacente al ADN insertado (“ADN flanqueante”). Un ensayo de PCR específico de evento se analiza, por ejemplo, en Windels et al. (Med. Fac. Landbouww, Univ. Gent., 64/5b:459462, 1999). Esto se relaciona con la identificación del evento de soja tolerante al glifosato 40-3-2 mediante PCR empleando un conjunto de cebadores que abarca la unión entre el inserto y el ADN flanqueante, más concretamente, un cebador incluye una secuencia del inserto y un segundo cebador incluye una secuencia del ADN flanqueante.
Las solicitudes de patente de EEUU 20020120964 A1 y 20040009504 A1 se refieren al evento del algodón PV-GHGT07(1445) y a composiciones y métodos para su detección. El documento WO 02/100163 se refiere al evento del algodón MONI5985 y a composiciones y métodos para su detección. El documento WO 2004/011601 se refiere a plantas con el evento del maíz MON863 y a composiciones y métodos para su detección. El documento WO 2004/072235 se refiere al evento del algodón MON 88913 y a composiciones y métodos para su detección.
Sin embargo, hasta la fecha no se conocen específicamente procedimientos y materiales que puedan utilizarse para identificar específicamente el algodón apilado Cry1F y/o Cry1Ac, según se analiza a continuación.
Breve sumario de la invención
Esta invención proporciona ensayos para detectar la presencia de uno o más de los presentes eventos en una muestra. La presente invención proporciona ADN y ensayos relacionados para detectar la presencia de ciertos eventos de resistencia a insectos en el algodón. Los ensayos se basan en las secuencias de ADN de construcciones recombinantes insertadas en el genoma del algodón y de las secuencias genómicas que flanquean los sitios de inserción. También se proporcionan kits y condiciones útiles para realizar los ensayos.
Así, la presente invención se refiere, en parte, al análisis de las secuencias de ADN de un inserto crylF completo, y opcionalmente insertos cry1Ac completos, y sus regiones limítrofes (en líneas de algodón transgénico). Estas secuencias son exclusivas. Basándose en estas secuencias de insertos y limítrofes, se generaron cebadores específicos de evento. Un análisis de PCR demuestra que estos eventos pueden identificarse mediante el análisis de los amplicones de PCR generados con estos conjuntos de cebadores específicos de evento. Así, pueden emplearse estos y otros procedimientos relacionados para identificar con exclusividad líneas de algodón que comprenden uno o más eventos de la presente invención.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 ilustra el transgén cry1F insertado y las secuencias flanqueantes para el evento del algodón 281-24-236. Esta figura también muestra los amplicones y los cebadores descritos en la presente.
La figura 2 ilustra el transgén cry1Ac insertado y las secuencias flanqueantes para el evento del algodón 3006-210 23. Esta figura también muestra los amplicones y los cebadores descritos en la presente.
Breve descripción de las secuencias
SEQ ID NO:1 es la secuencia de ADN para el inserto del evento cry1F de 281-24-236 y sus secuencias limítrofes. SEQ ID NO:2 es la secuencia de ADN para el inserto del evento cry1Ac de 3006-210-23 y sus secuencias limítrofes. SEQ ID NO:3 es la secuencia del cebador directo “281-14” empleado con el cebador inverso “281-15” para amplificar un amplicón de 603 pb que abarca la unión 5' entre las regiones flanqueantes y del inserto del evento cry1F de 281 24-236.
SEQ ID NO:4 es la secuencia del cebador inverso “281-15” empleado con el cebador directo “281-14” para amplificar un amplicón de 603 pb que abarca la unión 5' entre las regiones flanqueantes y del inserto del evento cry1F de 281 24-236.
SEQ ID NO:5 es la secuencia de 603 pb del amplicón producido empleando los cebadores de SEQ ID NO:3 y 4. SEQ ID NO:6 es la secuencia del cebador directo “281-9” empleado con el cebador inverso “281-10” para amplificar un amplicón de 562 pb que abarca la unión 3' entre las regiones flanqueantes y del inserto del evento cry1F de 281 24-236.
SEQ ID NO:7 es la secuencia del cebador inverso “281-10” empleado con el cebador directo “281-9” para amplificar un amplicón de 562 pb que abarca la unión 3' entre las regiones flanqueantes y del inserto del evento cry1F de 281 24-236.
SEQ ID NO:8 es la secuencia de 562 pb del amplicón producido empleando los cebadores de SEQ ID NO:6 y 7.
SEQ ID NO:9 es la secuencia del cebador directo “3006-20” empleado con el cebador inverso “3006-22” para amplificar un amplicón de 614 pb que abarca la unión 5' entre las regiones flanqueantes y del inserto del evento cry1Ac de 3006-210-23.
SEQ ID NO:10 es la secuencia del cebador inverso “3006-22” empleado con el cebador directo “3006-20” para amplificar un amplicón de 614 pb que abarca la unión 5' entre las regiones flanqueantes y del inserto del evento cry1Ac de 3006-210-23.
SEQ ID NO:11 es la secuencia de 614 pb del amplicón producido empleando los cebadores de SEQ ID NO:9 y 10.
SEQ ID NO:12 es la secuencia del cebador directo “3006-9” empleado con el cebador inverso “3006-12” para amplificar un amplicón de 662 pb que abarca la unión 3' entre las regiones flanqueantes y del inserto del evento cry1Ac de 3006-210-23.
SEQ ID NO:13 es la secuencia del cebador inverso “3006-12” empleado con el cebador directo “3006-9” para amplificar un amplicón de 662 pb que abarca la unión 3' entre las regiones flanqueantes y del inserto del evento cry1Ac de 3006-210-23.
SEQ ID NO:14 es la secuencia de 662 pb del amplicón producido empleando los cebadores de SEQ ID NO:12 y 13. SEQ ID NO:15 es un segmento de ADN genómico del algodón para el evento de 281-24-236 (faltan 53 bases).
SEQ ID NO:16 es un segmento de ADN genómico del algodón para el evento de 3006-210-23 (faltan 16 bases).
Descripción detallada de la invención
Se describen aquí el cruzamiento de plantas y la protección de plantas frente a insectos. Más concretamente, nuevos eventos de transformación en plantas de algodón (por ejemplo, Gossypium hirsutum y Gossypium
barbadense), que comprenden una o más secuencias polinucleotídicas, según se describen en la presente, insertadas en un sitio o sitios específicos dentro del genoma de una célula de algodón. Dichas secuencias polinucleotídicas pueden codificar las proteínas inhibidoras de insectos lepidópteros Cry1F y Cry1Ac “apiladas”. Sin embargo, también se describen aquí plantas que presentan únicos eventos Cry1F o Cry1Ac.
La presente invención proporciona ensayos para detectar la presencia de uno o más de los presentes eventos en una muestra. Los aspectos de la presente invención incluyen métodos para diseñar y/o producir cualquiera de las moléculas de ácidos nucleicos de diagnóstico ejemplificadas o sugeridas en la presente, en particular las que se basan, total o parcialmente, en las presentes secuencias flanqueantes.
De modo más específico, la presente invención se refiere, en parte, a un método para detectar dos eventos del algodón transgénico (cry1F de 281-24-236 y cry1Ac de 3006-210-23), este inserto cry1F, y opcionalmente estos insertos de cry1Ac, y/o sus regiones limítrofes. Las líneas de plantas pueden detectarse empleando las secuencias descritas y sugeridas en la presente.
En realizaciones preferidas, el método se refiere a líneas de algodón resistentes a insectos y a su identificación, que produce dos proteínas insecticidas “apiladas” conocidas como Cry1F y Cry1Ac (el evento cry1F de 281-24-236 y el evento cry1Ac de 3006-210-23). Sin embargo, las plantas pueden comprender el evento Cry1F o, preferiblemente, ambos eventos analizados en la presente.
Tal como se aludió anteriormente en la sección de antecedentes, la introducción y la integración de un transgén en el genoma de una planta implica algunos eventos aleatorios (de ahí el nombre “evento” para una inserción concreta que se expresa). Es decir, con muchas técnicas de transformación, tales como la transformación con Agrobacterium, la “pistola de genes”, y WHISKERS, es imposible predecir dónde se va a insertar el transgén en el genoma. Así, la identificación del ADN genómico vegetal flanqueante en ambos lados del inserto puede ser importante para identificar una planta que presenta un evento de inserción concreto. Por ejemplo, pueden diseñarse cebadores de PCR que generen un amplicón de PCR que abarque la región de unión del inserto y el genoma del hospedante. Este amplicón de PCR puede emplearse para identificar un tipo exclusivo o diferenciado de evento de inserción.
Puesto que los “eventos” son eventos aleatorios y, en general, no pueden duplicarse, como parte de esta descripción se han depositado al menos 2500 semillas de una línea de algodón, que comprende el evento cry1F de 281-24-236 y el evento cry1Ac de 3006-210-23, y están disponibles al público sin restricciones (pero sometidas a derechos de patente), en the American Type Culture Collection (ATCC), Rockville, Md. 20852. El depósito se ha denominado ATCC n.° de depósito PTA-6233. El depósito se mantendrá sin restricciones en el depósito del ATCC, que es un depósito público, durante un periodo de 30 años, o cinco años después de la petición más reciente, o durante la vida efectiva de la patente, lo que abarque más tiempo, y será reemplazado si se convierte en no viable durante ese periodo.
Evidentemente, pueden cultivarse plantas de algodón a partir de estas semillas. La presente invención también se refiere a secuencias de ADN contenidas en estas plantas de algodón que son útiles para detectar estas plantas y su progenie. Los métodos de detección y kits de la presente invención pueden estar dirigidos a identificar uno, dos o incluso los tres eventos, dependiendo del objetivo final del ensayo.
En la presente se proporcionan definiciones y ejemplos para ayudar a describir la presente invención y para guiar a los expertos en la técnica para practicar la invención. A menos que se indique lo contrario, los términos y las expresiones deben entenderse según su utilización convencional por los expertos en la técnica pertinente. Se emplea la nomenclatura para las bases de ADN indicada en 37 CFR §1.822.
Un “evento” transgénico se produce por medio de la transformación de células vegetales con ADN heterólogo, es decir, una construcción de ácido nucleico que incluye un transgén de interés, la regeneración de una población de plantas que resultan de la inserción del transgén en el genoma de la planta, y la selección de una planta concreta que se caracteriza por la inserción en una localización genómica concreta. El término “evento” se refiere al transformante original y a la progenie del transformante que incluyen el ADN heterólogo. El término “evento” también se refiere a la progenie producida por el cruzamiento exogámico sexual entre el transformante y otra variedad que incluya el ADN genómico/del transgén. Incluso después de retrocruzamientos repetidos hasta un progenitor recurrente, el ADN del transgén insertado y el ADN genómico flanqueante (ADN genómico/del transgén) del progenitor transformado sigue estando presente en la progenie del cruzamiento en la misma localización cromosómica. El termino “evento” también se refiere a ADN del transformante original y su progenie que comprende el ADN insertado y la secuencia genómica flanqueante inmediatamente adyacente al ADN insertado que se espera que va a transferirse a una progenie que recibe el ADN insertado que incluye el transgén de interés como resultado de un cruzamiento sexual de una línea parental que incluye el ADN insertado (por ejemplo, el transformante original y la progenie que resulta de la autofertilización) y una línea parental que no contiene el ADN insertado.
Una “secuencia de unión” abarca el punto en que el ADN insertado en el genoma está unido al ADN del genoma nativo del algodón que flanquea el sitio de inserción, siendo suficiente la identificación o la detección de una u otra de las secuencias de unión en el material genético de una planta para diagnosticar el evento. Se incluyen las secuencias de ADN que abarcan las inserciones en los eventos del algodón descritos en la presente y longitudes
similares del ADN flanqueante. En la presente se proporcionan ejemplos específicos de estas secuencias de diagnóstico; sin embargo, otras secuencias que se solapan con las uniones de las inserciones, o las uniones de las inserciones y la secuencia genómica, también son diagnósticas y pueden utilizarse según la presente invención. La presente invención se refiere a la identificación de estas secuencias flanqueantes, de unión y del inserto. Los amplicones y cebadores PCR relacionados están incluidos en la presente invención. Según la presente invención, pueden emplearse métodos de análisis de PCR que emplean amplicones que abarcan el a Dn insertado y sus límites (de cry1F de 281-24-236 y opcionalmente cry1Ac de 3006-210-23) para detectar o identificar líneas o variedades de algodón transgénico comercializadas derivadas de las presentes líneas de algodón transgénico patentadas.
Las secuencias completas de cada uno de estos insertos, junto con las respectivas secuencias flanqueantes, se proporcionan en la presente como SEQ ID NO:1 (cry1F de 281-24-236) y SEQ ID NO:2 (cry1Ac de 3006-210-23). La tabla I proporciona las coordenadas de las secuencias del inserto y flanqueantes para estos eventos.
Tabla I
Estos eventos de inserción, y otros componentes de estos, se ilustran más a fondo en las figuras 1 y 2. Estas secuencias (en particular, las secuencias flanqueantes) son exclusivas. Basándose en estas secuencias del inserto y limítrofes, se generaron cebadores específicos de evento. Un análisis de PCR demostró que estas líneas de algodón pueden identificarse en diferentes genotipos de algodón mediante el análisis de los amplicones de PCR generados con estos conjuntos de cebadores específicos de evento. Por tanto, estos y otros procedimientos relacionados pueden utilizarse para identificar estas líneas de algodón. Las secuencias identificadas en la presente son exclusivas. Por ejemplo, las selecciones con BLAST en las bases de datos de GENBANK no revelaron ninguna homología significativa entre las secuencias limítrofes clonadas y las secuencias en la base de datos.
Las técnicas de detección de la presente invención son especialmente útiles junto con el cruzamiento de plantas, para determinar cuáles son las plantas de la progenie que comprenden un evento concreto, después de que una planta progenitora que comprende un evento de interés se cruce con otra línea de plantas para intentar impartir uno o más rasgos de interés adicionales a la progenie. Estos métodos de análisis de PCR aprovechan los programas de cruzamiento del algodón, así como el control de calidad, en especial para semillas de algodón transgénicas comercializadas. Ahora también se pueden fabricar y utilizar kits de detección de PCR para estas líneas de algodón transgénico. Esto también puede beneficiar el registro del producto y la gestión ambiental del producto.
Además, las secuencias de algodón flanqueantes pueden utilizarse para identificar específicamente la localización genómica de cada inserto. Esta información puede emplearse para fabricar sistemas de marcadores moleculares específicos para cada evento. Estos pueden utilizarse para acelerar estrategias de cruzamiento y para establecer datos de vinculaciones.
Además, la información de las secuencias flanqueantes puede emplearse para estudiar y caracterizar procesos de integración de transgenes, características del sitio de integración genómico, clasificaciones de eventos, estabilidad de los transgenes y sus secuencias flanqueantes, y expresión de genes (en especial relacionados con el silenciamiento de genes, patrones de metilación de transgenes, efectos de posición, y elementos relacionados con la expresión potenciales, tales como MARS (regiones de unión a la matriz) y similares).
Tal como se emplea en la presente, el término “algodón” significa Gossypium hirsutum, e incluye todas las variedades de plantas que pueden cruzarse con el algodón, que incluyen Gossypium barbadense.
Las moléculas de ADN de la presente invención pueden emplearse como marcadores moleculares en un método de cruzamiento asistido por marcadores (MAB). Las moléculas de ADN de la presente invención pueden utilizarse en métodos (tales como marcadores AFLP, marcadores RFLP, marcadores RAPD, SNP, y SSR) que identifican rasgos útiles desde el punto de vista agronómico que estén genéticamente conectados, tal como se conoce en la técnica. El rasgo de resistencia a insectos puede ser rastreado en la progenie de un cruzamiento con una planta de algodón de la presente invención (o su progenie y cualquier otra variedad o cultivar de algodón) empleando los métodos MAB. Las moléculas de ADN son marcadores para este rasgo, y pueden emplearse los métodos MAB, que son muy conocidos en la técnica, para rastrear el rasgo o rasgos de resistencia a insectos en plantas de algodón, para las cuales al menos una línea de algodón de la presente invención, o su progenie, ha sido un progenitor o ancestro. Los
métodos de la presente invención pueden emplearse para identificar cualquier variedad de algodón que presente el evento de resistencia a insectos de la línea de algodón 281-24-236 (crylF) y opcionalmente 3006-210-23 (cry1Ac). Una planta preferida, o una semilla, relacionada con la presente invención comprende en su genoma al menos una de las secuencias del inserto, según se identifica en la tabla I, junto con al menos 20-500 o más nucleótidos flanqueantes contiguos en ambos lados del inserto, según se identifica en la tabla I. A menos que se indique lo contrario, “el evento cry1Ac del algodón 3006-210-23” se refiere a un ADN de SEQ ID NO:1 que incluye el ADN heterólogo insertado en el transformante original (nucleótidos 2075-12.748 de SEQ ID NO:1) y todas o parte de ambas secuencias genómicas flanqueantes de SEQ ID NO:1 (restos nucleótidos 1-2074 y 12.749-15.490) inmediatamente adyacentes al ADN insertado que se espera que se transfiera a la progenie, que recibe el ADN insertado como resultado de un cruzamiento sexual de una línea parental que incluye el evento. De modo similar, a menos que se indique lo contrario, “el evento cry1Ac del algodón 3006-210-23” se refiere a un ADN de SEQ ID NO:2 que incluye el ADN heterólogo insertado en el transformante original (nucleótidos 528-8900 de SEQ ID NO:2) y todas o parte de ambas secuencias genómicas flanqueantes de SEQ ID NO:2 (restos nucleótidos 1-527 y 8901 93821) inmediatamente adyacentes al ADN insertado que se espera que se transfiera a la progenie, que recibe el ADN insertado como resultado de un cruzamiento sexual de una línea parental que incluye el evento.
Las manipulaciones (tales como mutaciones, transfecciones posteriores, y cruzamientos posteriores) de plantas o semillas, o sus partes, pueden conducir a la creación de lo que se puede denominar variedades “fundamentalmente derivadas”. The International Union for the Protection of New Varieties of Plantas (UPOV) ha proporcionado las siguientes directrices para determinar si una variedad se ha derivado fundamentalmente de una variedad protegida:
[A] Se considera que una variedad se deriva fundamentalmente de otra variedad (“la variedad inicial”) cuando: (i) se deriva predominantemente de la variedad inicial, o de una variedad que, en sí misma, se deriva predominantemente de la variedad inicial, pero mantiene la expresión de las características esenciales que surgen del genotipo o combinación de genotipos de la variedad inicial;
(ii) es claramente distinguible de la variedad inicial; y
(iii) excepto por las diferencias que resultan del acto de la derivación, se ajusta a la variedad inicial en la expresión de las características esenciales que surgen del genotipo o combinación de genotipos de la variedad inicial.
UPOV, 6a reunión con organizaciones internacionales, Ginebra, 30 de octubre, 1992, documento preparado por la Oficina de la Unión.
Tal como se emplea en la presente, una “línea” es un grupo de plantas que muestran poca o ninguna variación genética entre individuos para al menos un rasgo. Estas líneas pueden crearse mediante varias generaciones de autopolinización y selección, o mediante propagación vegetativa a partir de un único progenitor empleando técnicas de cultivos de tejidos o células.
Tal como se emplea en la presente, los términos “cultivar” y “variedad” son sinónimos y se refieren a una línea que se emplea para la producción comercial.
“Estabilidad” o “estable” significa que, con respecto a un componente dado, el componente se mantiene de generación en generación y, preferiblemente, al menos tres generaciones sustancialmente al mismo nivel, por ejemplo, preferiblemente 15%, más preferiblemente 10%, lo más preferiblemente ±5%. La estabilidad puede verse afectada por la temperatura, la localización, el estrés y el momento de la plantación. La comparación de las posteriores generaciones en condiciones de campo debería producir el componente de una manera similar.
La “utilidad comercial” se define como que la planta tiene buen vigor y alta fertilidad, de modo que el cultivo puede ser producido por agricultores empleando un equipo agrícola convencional, y el aceite puede extraerse de las semillas con los compuestos descritos empleando un equipo de prensado y extracción convencional. Para que sea comercialmente útil, el rendimiento, según se mide mediante el peso de la semilla, el contenido en aceite, y el aceite total producido por hacer, estará dentro del 15% del rendimiento medio de una variedad de canola comercial comparable sin los rasgos de valor de calidad superior, que se cultive en la misma región.
“Agronómicamente elitaria” significa que una línea tiene características agronómicas deseables, tales como rendimiento, madurez, resistencia a enfermedades, y similares, además de la resistencia a insectos debida al evento o eventos de la presente.
Tal como reconocerán los expertos en la técnica a la luz de esta descripción, los kits de detección incluyen sondas y/o cebadores dirigidos a y/o que comprenden “secuencias de unión” o “secuencias de transición” (en las que la secuencia flanqueante genómica del algodón se une con la secuencia del inserto). Por ejemplo, esto incluye una sonda, un cebador o un amplicón polinucleotídico que comprende una secuencia que incluye los restos 2074-2075 o 12.748-12.749 de SEQ ID NO:1, y opcionalmente los restos 527-528 o 8.900-8.901 de SEQ ID NO:2, según se indica en la tabla I. Para que sean diagnósticos para estos eventos concretos, los “cebadores de unión” preferidos
deben incluir al menos aproximadamente 15 restos e la secuencia flanqueante adyacente y al menos aproximadamente 15 restos de la secuencia del inserto adyacente. Con esta disposición, puede emplearse otro cebador en la región flanqueante o en la región del inserto para generar un amplicón detectable que indique la presencia de un evento de la presente invención. Sin embargo, en realizaciones preferidas, un cebador se une a la región flanqueante y otro se une en el inserto, y estos cebadores pueden emplearse para generar un amplicón que abarque (e incluya) una secuencia de unión, según se indicó anteriormente.
Los expertos en la técnica también reconocerán que pueden diseñarse cebadores y sondas para hibridarse, bajo una serie de condiciones de hibridación y/o PCR convencionales, con un segmento de SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 y sus complementos, en los que el cebador y la sonda no son perfectamente complementarios con la secuencia ejemplificada. Es decir, puede tolerarse algún grado de desapareamiento. Para un cebador de aproximadamente 20 nucleótidos, por ejemplo, generalmente no es necesario que uno o dos o unos cuantos nucleótidos se unan a la hebra opuesta si la base desapareada es interna o está en el extremo del cebador opuesto al amplicón. A continuación se proporcionan diversas condiciones de hibridación apropiadas. También pueden utilizarse análogos de nucleótidos sintéticos, tales como inosina, en las sondas. También pueden emplearse sondas de ácidos nucleicos peptídicos (PNA), así como sondas de ADN y ARN. Lo importante es que dichas sondas y cebadores sean diagnósticas (sean capaces de identificar y distinguir de forma exclusiva) de la presencia de un evento de la presente invención.
También debe advertirse que pueden producirse errores en la amplificación con PCR que pueden producir pequeños errores de secuenciación, por ejemplo. Es decir, a menos que se indique lo contrario, las secuencias listadas en la presente se determinaron generando amplicones largos a partir de ADN genómicos de algodón, y después clonando y secuenciando los amplicones. No es raro encontrar ligeras diferencias y pequeñas discrepancias en las secuencias generadas y determinadas de esta manera, debido a las muchas rondas de amplificación que son necesarias para generar los amplicones suficientes para la secuenciación a partir de ADN genómico. Por ejemplo, se indican las siguientes diferencias entre las secuencias determinadas de los ADN flanqueantes del evento y los correspondientes ADN conocidos/de tipo salvaje/genómicos. En el flanco 50 para el presente evento cry1F, se determinó que el resto 2037 de SEQ ID NO: 1 se lista como “G”, mientras que el correspondiente resto del locus de 281-24-236 de la secuencia genómica conocida es “A” (R puede emplearse en una secuencia consenso, según las convenciones de la IUPAC-IUB convencionales). En el flanco 3' de este evento, el resto 12.781 de SEQ ID NO:1 se lista en la presente como T, mientras que en la secuencia genómica publicada se proporciona C en la correspondiente localización (Y es el código consenso). La posición 12.811 de SEQ ID NO:1 es C, mientras que se proporciona T para el genoma (Y sería el consenso). La posición 12.866 se lista como C en SEQ ID NO:1, mientras que aparece T en el genoma (Y es el consenso). La posición 12.882 se lista como G en SEQ ID NO:1, mientras que aparece A en el genoma (R es el consenso). La posición 12.918 se lista como A en SEQ ID NO:1, mientras que aparece G en el genoma (R es el consenso). El resto 13.129 se lista como G en SEQ ID NO:1, mientras que aparece A en el genoma (R es el consenso). El resto 13.222 se lista como C en SEQ ID NO:1, mientras que aparece T en la secuencia genómica (Y es el consenso). En la posición 13.441 en SEQ ID NO:1 aparece T, mientras que no existe un resto correspondiente en el listado genómico. Así, esta aparente inserción desplazaría cadena abajo la numeración de SEQ ID NO:1 en consecuencia, comparado con la secuencia genómica. Los expertos en la técnica deberían reconocer y advertir que cualquier ajuste necesario debido a este tipo de errores de secuenciación o discrepancias comunes está dentro del alcance de la presente invención.
También aparecen diferencias similares en el flanco 5' para el presente evento cry1A. En las posiciones 149, 153, 159, 165 y 244 de SEQ ID NO:2 se listan los siguientes restos, respectivamente: C, G, C, C, y C. En la secuencia genómica en el locus de 3006-210-23 aparecen los siguientes restos, respectivamente, en las correspondientes localizaciones: A, A, A, A, y A. Los códigos consenso para estas sustituciones son, respectivamente: M, R, M, M, y M. Pueden realizarse ajustes en consecuencia en las sondas y los cebadores, y las correspondientes diferencias pueden notarse en los amplicones que abarcan o incluyen cualquiera de los restos anteriores.
También debe advertirse que no es raro que una parte de la secuencia genómica se delecione cuando una secuencia se inserta durante la creación de un evento. Este es el caso para ambos eventos de la presente invención. Es decir, SEQ ID NO:1 proporciona un segmento de 53 bases de ADN genómico del algodón para el evento de 281-24-236 que se deleciona durante la inserción. Este “segmento interior” aparece entre los restos 2074 y 12.749 de SEQ ID NO:1 en el genoma del algodón no transformado. De modo similar, SEQ ID NO:2 proporciona un segmento de 16 bases del ADN genómico del algodón para el evento de 3006-210-23 que se deleciona durante la inserción. Este “segmento interior” aparece entre los restos 527 y 8.901 de SEQ ID NO:2 en el genoma del algodón no transformado.
Tal como se ilustra en las figuras 1 y 2, los componentes de cada uno de los “insertos” son los siguientes. Las moléculas de ADN del elemento genético del transgén contenidas en el presente evento Cry1F de 281-24-236 consisten en el promotor 1 de ubiquitina de maíz, conectado operablemente con fosfinotricina N-acetiltransferasa (PAT) de Streptomyces viridochromogenes, conectado operablemente con las secuencias de poliadenilación ORF25 (Baker et al., Plant Molecular Biology, 2:335-350, 1983); el promotor quimérico [(4OCS)8MAS] que contiene un promotor de manopinas sintasa parcialmente delecionado con 4 elementos potenciadores del promotor de octopina sintasa, conectado operablemente con el Cry1F(synpro) de Bacillus thuringiensis var. aizawai, conectado operablemente con las secuencias de poliadenilación ORF25 (Baker et al., Plant Molecular Biology, 2:335-350,
1983); y el promotor 1 de ubiquitina de maíz no conectado operablemente con una secuencia pat parcial. Las secuencias polinucleotídicas del ADN, o fragmentos de estos componentes, pueden emplearse como cebadores o sondas de ADN en los métodos de la presente invención.
Las moléculas de ADN del elemento genético del transgén contenidas en el presente evento Cry1Ac de 3006-210-23 consisten en el promotor (4OCS)8MAS conectado operablemente con PAT (según se describió anteriormente), conectado operablemente con ORF25; y el promotor 1 de ubiquitina de maíz conectado operablemente con Cry1Ac (synpro) de Bacillus thuringiensis var. kurstaki, conectado operablemente con las secuencias de poliadenilación ORF25. Las secuencias polinucleotídicas del ADN de estos componentes, o sus fragmentos, pueden emplearse como cebadores o sondas de ADN en los métodos de la presente invención.
En algunas realizaciones de la invención, se proporcionan composiciones y métodos para detectar la presencia de la región de inserción del transgén/genómica en plantas y semillas y similares, en una planta de algodón diseñada con WIDESTRIKE que comprende el evento Cry1F del algodón 281-24-236 y el evento Cry1Ac del algodón 3006-210 23. Se proporcionan secuencias de ADN que comprenden al menos un secuencia de unión de la región de inserción del transgén/genómica proporcionada en la presente en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, sus segmentos y complementos de las secuencias ejemplificadas y cualquiera de sus segmentos. La secuencia de unión de la región de inserción abarca la unión entre el ADN heterólogo insertado en el genoma y el ADN de la célula de algodón que flanquea el sitio de inserción. Esta secuencia es diagnóstica para uno o más de los eventos indicados.
Basándose en estas secuencias del inserto y limítrofes, se generaron cebadores específicos de evento. Un análisis de PCR demostró que estas líneas de algodón (Cry1F de 281-24-236 y Cry1Ac de 3006-210-23) pueden identificarse en diferentes genotipos de algodón mediante el análisis de los amplicones de PCR generados con estos conjuntos de cebadores específicos de evento. Estos y otros procedimientos relacionados pueden emplearse para identificar exclusivamente estas líneas de algodón. Por tanto, los amplicones de PCR derivados de estas parejas de cebadores son exclusivos y pueden emplearse para identificar estas líneas de algodón.
En algunas realizaciones, las secuencias de ADN que comprenden al menos una de las nuevas regiones de inserción genómica/del transgén son un aspecto de esta invención. Se incluyen secuencias de ADN que comprenden una longitud suficiente de polinucleótidos de la secuencia del inserto del transgén y una longitud suficiente de polinucleótidos de la secuencia genómica del algodón procedente de una o más de las tres plantas de algodón mencionadas anteriormente y/o secuencias que son útiles como secuencias de cebadores para la producción de un producto de amplicón diagnóstico para una o más de estas plantas de algodón.
Realizaciones relacionadas se refieren a secuencias de ADN que comprenden al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, o más nucleótidos contiguos de una porción del transgén de una secuencia de ADN seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1 y SEQ ID NO:2, o sus complementos, y una longitud similar de una secuencia de ADN de algodón flanqueante de estas secuencias, o sus complementos. Estas secuencias son útiles como cebadores de ADN en métodos de amplificación del ADN. Los amplicones producidos empleando estos cebadores son diagnósticos para cualquiera de los eventos del algodón indicados en la presente.
A continuación aparece una tabla que resume algunas realizaciones específicas de la presente invención.
Tabla II. Lista de cebadores y sus secuencias empleados en la amplificación por PCR específica de evento
Esta invención detecta la presencia de ADN en una muestra, que se corresponde con al menos los eventos Cry1Fdel algodón indicados en la presente. Estos métodos pueden comprender: (a) poner en contacto la muestra que comprende ADN con un conjunto de cebadores que, cuando se emplea en una reacción de amplificación de ácidos nucleicos con un ADN procedente de al menos uno de estos eventos del algodón, produce un amplicón que es diagnóstico para dicho evento o eventos; (b) realizar una reacción de amplificación de ácidos nucleicos,
produciendo con ello el amplicón; y (c) detectar el amplicón.
Otros métodos de detección incluyen detectar la presencia de un ADN en una muestra, que se corresponde con al menos los eventos Cry1F, en el que dicho método comprende: (a) poner en contacto la muestra que comprende ADN con una sonda que se hibrida bajo condiciones de hibridación rigurosas con el ADN procedente de al menos uno de dichos eventos del algodón, y que no se hibrida bajo condiciones de hibridación rigurosas con una planta de algodón control (ADN sin el evento de interés); (b) someter la muestra y la sonda a condiciones de hibridación rigurosas; y (c) detectar la hibridación de la sonda con el ADN.
También se consideran métodos para determinar la cigosidad de la progenie de un cruzamiento con uno cualquiera (o más) de dichos tres eventos. Dichos métodos pueden comprender poner en contacto una muestra, que comprende ADN de algodón, con un conjunto de cebadores de la presente invención. Dichos cebadores, cuando se emplean en una reacción de amplificación de ácidos nucleicos con el ADN genómico procedente de al menos uno de dichos eventos del algodón, produce un primer amplicón que es diagnóstico para al menos uno de dichos eventos del algodón. Estos métodos comprenden también realizar una reacción de amplificación de ácidos nucleicos, produciendo con ello el primer amplicón; detectar el primer amplicón; y poner en contacto la muestra que comprende ADN de algodón con dicho conjunto de cebadores (dicho conjunto de cebadores, cuando se emplea en una reacción de amplificación de ácidos nucleicos con ADN genómico procedente de plantas de algodón, produce un segundo amplicón que comprende el ADN genómico del algodón nativo homólogo con la región genómica del algodón de una inserción del transgén identificada como uno de dichos eventos del algodón); y realizar una reacción de amplificación de ácidos nucleicos, produciendo con ello el segundo amplicón. Los métodos comprenden también detectar el segundo amplicón, y comparar el primer y el segundo amplicón en una muestra, en la que la presencia de ambos amplicones indica que la muestra es heterocigótica para la inserción del transgén.
Pueden desarrollarse kits de detección de ADN empleando las composiciones descritas en la presente y métodos bien conocidos en la técnica de la detección de ADN. Los kits son útiles para la identificación del ADN del presente evento del algodón en una muestra, y pueden aplicarse a métodos para el cruzamiento de plantas de algodón que contienen este ADN. Los kits contienen secuencias de ADN homólogas o complementarias con los amplicones, por ejemplo, los descritos en la presente, o con secuencias de ADN homólogas o complementarias con el ADN contenido en los elementos genéticos del transgén de los presentes eventos. Estas secuencias de ADN pueden utilizarse en reacciones de amplificación de ADN o como sondas en un método de hibridación de ADN. Los kits también pueden contener los reactivos y los materiales necesarios para realizar el método de detección.
Una “sonda” es una molécula de ácido nucleico aislada a la cual está unido un marcador detectable o una molécula indicadora convencional (tal como un isótopo radiactivo, ligando, agente quimioluminiscente, o enzima). Esta sonda es complementaria con una hebra de un ácido nucleico diana, en el caso de la presente invención con una hebra del ADN genómico procedente de uno de dichos eventos del algodón, tanto de una planta de algodón como de una muestra que incluye ADN del evento. Las sondas de acuerdo con la presente invención incluyen no solo ácidos desoxirribonucleicos o ribonucleicos, sino también poliamidas y otros materiales de sondas que se unen específicamente a una secuencia de ADN diana y que pueden utilizarse para detectar la presencia de esa secuencia de ADN diana.
Los “cebadores” son ácidos nucleicos aislados que se asocian a una hebra del ADN diana complementaria mediante hibridación de ácidos nucleicos para formar un híbrido entre el cebador y la hebra de ADN diana, y después se extienden a lo largo de la hebra del ADN diana por medio de una polimerasa, por ejemplo, una ADN polimerasa. Las parejas de cebadores de la presente invención se remiten a su uso para la amplificación de una secuencia de ácido nucleico diana, por ejemplo, mediante una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) u otros métodos de amplificación de ácidos nucleicos convencionales.
Las sondas y los cebadores generalmente tienen una longitud de 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18¡, 19, 20, 21, 22 , 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65 , 66, 67, 68, 69 , 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81 82, 83, 84, 85 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154.
155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177.
178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218 219, 220, 221 222, 223 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241 242, 243, 244 245, 246 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264 265, 266, 267 268, 269 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287 288, 289, 290 291, 292 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310 311, 312, 313 314, 315.
316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333 334, 335, 336 337, 338 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356 357, 358, 359 360, 361 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379 380, 381, 382 383, 384 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402 403, 404, 405 406, 407 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425 426, 427, 428 429, 430
431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491,492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, o 500 polinucleótidos o más. Estas sondas y cebadores se hibridan específicamente con una secuencia diana bajo condiciones de hibridación de alta rigurosidad. Preferiblemente, las sondas y los cebadores según la presente invención tienen una similitud de secuencia completa con la secuencia diana, aunque pueden diseñarse sondas que se diferencian de la secuencia diana y que conservan la capacidad para hibridarse con las secuencias diana mediante métodos convencionales.
Los métodos para preparar y emplear sondas y cebadores se describen, por ejemplo, en Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a ed., vol. 1-3, ed. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989. Las parejas de PCR-cebador pueden derivarse de una secuencia conocida, por ejemplo, empleando programas informáticos previstos para este fin.
Los cebadores y las sondas basadas en las secuencias del inserto y el ADN flanquente descritas en la presente pueden emplearse para confirmar (y si es necesario, para corregir) las secuencias descritas mediante métodos convencionales, por ejemplo, mediante reclonación y secuenciación de dichas secuencias.
Las sondas y los cebadores de ácidos nucleicos de la presente invención se hibridan bajo condiciones rigurosas con una secuencia de ADN diana. Puede emplearse cualquier método de amplificación o hibridación de ácidos nucleicos convencional para identificar las presencia de ADN de un evento transgénico en una muestra. Las moléculas de ácidos nucleicos, o sus fragmentos, son capaces de hibridarse específicamente con otras moléculas de ácidos nucleicos bajo ciertas circunstancias. Tal como se emplea en la presente, se dice que dos moléculas de ácidos nucleicos son capaces de hibridarse específicamente entre sí si las dos moléculas sn capaces de formar una estructura de ácido nucleico bicatenario antiparalela. Se dice que una molécula de ácido nucleico es el “complemento” de otra molécula de ácido nucleico si muestra una complementariedad completa. Tal como se emplea en la presente, se dice que las moléculas muestran “complementariedad completa” cuando cada nucleótido de una de las moléculas es complementario con un nucleótido de la otra. Se dice que dos moléculas son “mínimamente complementarias” si pueden hibridarse entre sí con una estabilidad suficiente como para que puedan permanecer asociadas entre sí al menos bajo condiciones de “baja rigurosidad” convencionales. De modo similar, se dice que las moléculas son “complementarias” si pueden hibridarse entre sí con una estabilidad suficiente como para que puedan seguir asociadas entre sí bajo condiciones de “alta rigurosidad” convencionales. Las condiciones de rigurosidad convencionales se describen en Sambrook et al., 1989. Por tanto, son lícitas las desviaciones de la complementariedad completa, con la condición de que dichas desviaciones no impidan completamente la capacidad de las moléculas para formar una estructura bicatenaria. Para que una molécula de ácido nucleico actúe como cebador o sonda, solo debe ser suficientemente complementaria en su secuencia para ser capaz de formar una estructura bicatenaria estable con el disolvente y las concentraciones salinas concretos empleados.
Tal como se emplea en la presente, una secuencia sustancialmente homóloga es una secuencia de un ácido nucleico que se hibridará específicamente con el complemento de la secuencia del ácido nucleico con el cual se está comparando bajo condiciones de alta rigurosidad. La expresión “condiciones rigurosas” se define desde el punto de vista funcional con respecto a la hibridación de una sonda de ácido nucleico con un ácido nucleico diana (es decir, con una secuencia de ácido nucleico concreta de interés) mediante el procedimiento de hibridación específico analizado en Sambrook et al., 1989, en 9.52-9.55. Véase también, Sambrook et al., 1989, en 9.47-9.52 y 9.56-9.58. Por consiguiente, las secuencias de nucleótidos de la invención pueden emplearse por su capacidad para formar selectivamente moléculas dúplex con tramos complementarios de fragmentos de ADN.
Dependiendo de la aplicación prevista, se pueden emplear diversas condiciones de hibridación para lograr diversos grados de selectividad de la sonda hacia la secuencia diana. Para aplicaciones que requieren una alta selectividad, se emplearán generalmente condiciones relativamente reigurosas para formar los híbridos, por ejemplo, se seleccionarán unas condiciones de concentraciones salinas relativamente bajasy/o temperatura relativamente alta, tales como las proporcionadas por NaCl de aproximadamente 0,02 M a aproximadamente 0,15 M a unas temperaturas de aproximadamente 50 °C a aproximadamente 70 °C. Las condiciones rigurosas implican, por ejemplo, lavar el filtro de hibridación al menos dos veces con tampón de lavado de alta rigurosidad (0,2x SSC, SDS al 0,1%, 65 °C). Las condiciones de rigurosidad apropiadas que favorecen la hibridación del ADN, por ejemplo, 6,0x cloruro de sodio/citrato de sodio (SSC) a aproximadamente 45 °C, seguido de un lavado con 2,0x SSC a 50 °C, son conocidas por los expertos en la técnica, 6.3.1-6.3.6. Por ejemplo, la concentración salina en la etapa de lavado puede seleccionarse desde una baja rigurosidad de aproximadamente 2,0x SSC a 50 °C, hasta una alta rigurosidad de aproximadamente 0,2x SSC a 50 °C. Además, la temperatura en la etapa de lavado puede aumentar desde unas condiciones de baja rigurosidad a la temperatura ambiente, aproximadamente 22 °C, hasta unas condiciones de alta rigurosidad a aproximadamente 65 °C. La temperatura y las sales pueden variar, o la temperatura o la concentración salina puede mantenerse constante mientras que se cambia la otra variable. Estas condiciones selectivas toleran poco o ningún deseapareamiento entre la sonda y el molde o hebra diana. La detección de las secuencias de ADN mediante hibridación es muy conocida por los expertos en la técnica, y las indicaciones de las patentes de EEUU núms.4.965.188 y 5.176.995 son ejemplos de los métodos de análisis de hibridación.
En una realización particularmente preferida, un ácido nucleico de la presente invención se hibridará
específicamente con uno o más de los cebadores (o amplicones u otras secuencias) ejemplificados o sugeridos en
la presente, que incluyen sus complementos y fragmentos, bajo condiciones de alta rigurosidad. En un aspecto de la
presente invención, una molécula de ácido nucleico marcadora tiene la secuencia de ácido nucleico indicada en
SEQ ID NO:3-14, o sus complementos y/o fragmentos.
En otro aspecto de la presente invención, una molécula de ácido nucleico marcadora comparte entre 80% y 100% o
90% y 100% de identidad de secuencia con dichas secuencias de ácidos nucleicos. En otro aspecto de la presente
invención, una molécula de ácido nucleico marcadora comparte entre 95% y 100% de identidad de secuencia con
dicha secuencia. Estas secuencias pueden utilizarse como marcadores en métodos de cruzamiento de plantas para
identificar la progenie de los cruzamientos genéticos. La hibridación de la sonda con la molécula de ADN diana
puede detectarse mediante cualquiera de una serie de métodos conocidos por los expertos en la técnica, y estos
incluyen, pero no se limitan a marcadores fluorescentes, marcadores radiactivos, marcadores basados en
anticuerpos, y marcadores quimioluminiscentes.
Con respecto a la amplificación de una secuencia de ácido nucleico diana (por ejemplo, mediante PCR) empleando
una pareja de cebadores de la amplificación concreta, las “condiciones rigurosas” son condiciones que permiten que
la pareja de cebadores se hibride solo con la secuencia del ácido nucleico diana con la que un cebador que tenga la
correspondiente secuencia de tipo salvaje (o sus complementos) se uniría, y preferiblemente se produce un producto
de la amplificación exclusivo, el amplicón.
La expresión “específico para (una secuencia diana)” indica que una sonda o un cebador se hibrida bajo condiciones
de hibridación rigurosas solo con la secuencia diana en una muestra que comprende la secuencia diana.
Tal como se emplea en la presente, “ADN amplificado” o “amplicón” se refiere al producto de la amplificación de un
ácido nucleico de una secuencia de ácido nucleico diana que es parte de un molde de ácido nucleico. Por ejemplo,
para determinar si la planta de algodón resultante de un cruzamiento sexual contiene ADN genómico del evento
transgénico procedente de la planta de algodón de la presente invención, el ADN extraído de una muestra de tejido
de una planta de algodón puede someterse a un método de amplificación de ácidos nucleicos empleando una pareja
de cebadores que incluye un cebador derivados de la secuencia flanqueante en el genoma de la planta, adyacente
al sitio de inserción del ADN heterólogo insertado, y un segundo cebador derivado del ADN heterólogo insertado,
para producir un amplicón que es diagnóstico de la presencia del ADN del evento. El amplicón tiene una longitud y
una secuencia que también son diagnósticas para el evento. El amplicón puede variar en longitud de la longitud
combinada de las parejas de cebadores más un par de bases nucleotídicas y/o la longitud combinada de las parejas
de cebadores más aproximadamente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24,
25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 5 56, 57, 58, 59, 60, 61,62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 8 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94 95, , 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112,
113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135,
136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158.
159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181
182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204
205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227
228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250
251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273
274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296
297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319.
320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342
343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365
366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388
389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411
412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434
435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457
458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480
481, 482, 483, 484 , 488 , 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, o 500, 750, 1000.
1250, 1500, 1750, 2000 o más pares de bases nucleotídicas (más o menos cualquiera de los incrementos listados
anteriormente). Como alternativa, una pareja de cebadores puede derivarse de la secuencia flanqueante en ambos
lados del ADN insertado para producir un amplicón que incluya la secuencia de nucleótidos del inserto completa. Un
miembro de una pareja de cebadores derivada de la secuencia genómica de la planta puede localizarse a una
distancia de la secuencia de ADN insertada. Esta distancia puede variar desde un par de bases nucleotídicas hasta
aproximadamente 20.000 pares de bases nucleotídicas. El uso del término “amplicón” excluye específicamente los
dímeros de cebadores que pueden formarse en la reacción de amplificación térmica del ADN.
La amplificación de ácidos nucleicos puede acompañarse de cualquiera de los diversos métodos de amplificación de
ácidos nucleicos conocidos en la técnica, que incluyen la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En la técnica
se conoce una diversidad de métodos de amplificación y se describen, entre otros, en la patente de EEUU n.°
4.683.195 y la patente de EEUU n.° 4.683.202. Los métodos de amplificación mediante PCR se han desarrollado
para amplificar hasta 22 kb de ADN genómico. Estos métodos, así como otros métodos conocidos en la técnica de la
amplificación del ADN, pueden utilizarse en la práctica de la presente invención. La secuencia del inserto de ADN del transgén heterólogo o la secuencia genómica flanqueante de un evento del algodón de la presente pueden verificarse (y corregirse si es necesario) amplificando dichas secuencias a partir del evento empleando cebadores derivados de las secuencias proporcionadas en la presente, seguido por una secuenciación de ADN convencional del amplicón de PCR o del ADN clonado.
El amplicón producido mediante estos métodos puede detectarse mediante una pluralidad de técnicas. La electroforesis en gel de agarosa y tinción con bromuro de etidio es un método muy conocido y habitual para detectar amplicones de ADN. Otro de estos métodos en el análisis de bits genéticos, en el que se diseña un oligonucleótido de ADN que se solapa con la secuencia de ADN genómico flanqueante adyacente y con la secuencia de ADN insertada. El oligonucleótido se inmoviliza en pocillos de una placa de micropocillos. Después de una PCR de la región de interés (empleando un cebador en la secuencia insertada y otro en la secuencia genómica flanqueante adyacente), un producto de la PCR monocatenario puede hibridarse con el oligonucleótido inmovilizado y actuar como molde para una reacción de extensión de una sola base empleando una ADN polimerasa y ddNTP marcados específicos para la siguiente base esperada. La lectura puede ser fluorescente o estar basada en ELISA. Una señal indica la presencia de la secuencia del inserto/flanqueante debido a una amplificación, hibridación y extensión de una sola base exitosas.
Otro método es la técnica de pirosecuenciación descrita por Winge (Innov. Pharma. Tech., 00:18-24, 2000). En este método se diseña un oligonucleótido que se solapa con la unión entre el ADN genómico adyacente y el ADN insertado. El oligonucleótido se hibrida con un producto de la PCR monocatenario procedente de la región de interés (un cebador en la secuencia insertada y otro en la secuencia genómica flanqueante) y se incuba en presencia de una ADN polimerasa, ATP, sulfurilasa, luciferasa, apirasa, adenosina-5'-fosfosulfato y luciferina. Se añaden dNTP individualmente y la incorporación produce una señal luminosa que se mide. Una señal luminosa indica la presencia de la secuencia flanqueante/del inserto del transgén debido a una amplificación, hibridación y extensión de una sola base o de múltiples bases exitosas.
La polarización fluorescente es otro método que puede utilizarse para detectar un amplicón de la presente invención. Según este método, se diseña un oligonucleótido que se solapa con la unión del ADN insertado y flanqueante genómico. El oligonucleótido se hibrida con un producto de la PCR monocatenario procedente de la región de interés (un cebador en el ADN insertado y otro en la secuencia de ADN genómico flanqueante) y se incuba en presencia de una ADN polimerasa y un ddNTP marcado de modo fluorescente. La extensión de una sola base provoca la incorporación del ddNTP. La incorporación puede medirse como un cambio en la polarización empleando un fluorómetro. Un cambio en la polarización indica la presencia de la secuencia flanqueante/del inserto del transgén debido a una amplificación, hibridación y extensión de una sola base exitosas.
TAQMAN (PE Applied Biosystems, Foster City, Calif.) es un método para detectar y cuantificar la presencia de una secuencia de ADN. Brevemente, se diseña una sonda oligonucleotídica FRET que se solapa con la unión del ADN insertado y flanqueante genómico. La sonda FRET y los cebadores de la PCR (un cebador en la secuencia del ADN insertado y otro en la secuencia genómica flanqueante) se ciclan en presencia de una polimerasa termoestable y dNTP. La hibridación de la sonda FRET provoca la ruptura y la liberación del resto fluorescente, alejándolo del resto extintor sobre la sonda FRET. Una señal fluorescente indica la presencia de la secuencia flanqueante/del inserto del transgén debido a una amplificación y una hibridación exitosas.
Se han descrito balizas moleculares para su uso en la detección de secuencias. Brevemente, se diseña una sonda oligonucletídica FRET que se solapa con la unión del ADN insertado y flanqueante genómico. La estructura exclusiva de la sonda FRET hace que contenga una estructura secundaria que mantiene los restos fluorescentes y extintores en proximidad cercana. La sonda FRET y los cebadores de la PCR (un cebador en la secuencia del ADN insertado y otro en la secuencia genómica flanqueante) se ciclan en presencia de una polimerasa termoestable y dNTP. Tras haber realizado con éxito una amplificación con PCR, la hibridación de la sonda FRET con la secuencia diana provoca la eliminación de la estructura secundaria de la sonda y la separación espacial de los restos fluorescente y extintor. Se produce una señal fluorescente. Una señal fluorescente indica la presencia de la secuencia flanqueante/del inserto del transgén debido a una amplificación y una hibridación exitosas.
Los siguientes ejemplos se incluyen para ilustrar procedimientos para practicar la invención y para demostrar ciertas realizaciones preferidas de la invención. A menos que se indique lo contrario, todos los porcentajes son en peso y todas las proporciones de mezcla de los disolventes son en volumen.
Ejemplo 1: Producción de la semilla depositada
La resistencia a insectos de marca WideStrike™ para el algodón es un rasgo transgénico desarrollado por Dow AgroSciences que proporciona una resistencia a insectos en la planta contra lepidópteros. Contiene dos genes de tolerancia a los insectos, crylAc y crylF, que se derivan de Bacillus thuringiensis subespecie kurstaki y Bacillus thuringiensis subespecie aizawai, respectivamente. Bacillus thuringiensis (B.t.) es una bacteria del suelo grampositiva común. En su estadio de formación de esporas produce varios cristales de proteínas insecticidas (conocidas como delta-endotoxinas) que incluyen Cry1Ac y Cry1F. Estas proteínas son tóxicas para ciertos insectos lepidópteros. En insectos susceptibles, se unen a receptores específicos presentes sobre las células epiteliales del
intestino medio, formando poros que alteran el equilibrio osmótico y finalmente provocan la lisis y muerte celular. Se ha demostrado que Cry1Ac y Cry1F no son tóxicos para seres humanos, ganado o insectos beneficiosos, que no tienen sitios de unión para la delta-endotoxina. Empleando dos delta-endotoxinas, en lugar de una, se proporciona mayor resistencia a insectos, porque las dos proteínas Cry proporcionan un mayor espectro de control que cualquiera de ellas por sí sola y presentan actividad diferenciada contra las plagas de lepidópteros contra las que son eficaces. De modo más importante, pueden ayudar a retrasar el desarrollo de insectos resistentes.
Los genes crylAc y crylF en WideStrike se introducen empleando una transformación mediada por Agrobacterium en plantas de algodón GC-510 (Gossypium hirsutum L.) en dos eventos de transformación distintos, 3006-210-23 y 281-24-236. Después del cruzamiento en una variedad de algodón elitaria, estos eventos se combinan mediante cruzamiento convencional para producir un algodón que porta el rasgo de resistencia a los insectos WideStrike. WideStrike también contiene el gen pat de Streptomyces viridochromogenes, una bacteria del suelo aerobia común. El gen pat codifica la enzima fosfinotricina acetil transferasa (PAT), que desintoxica el gufosinato amonio en un compuesto inactivo mediante acetilación. El gen pat se incluye para permitir la selección de las plantas de algodón transformadas.
Ejemplo 2: Ensayo de diagnóstico para el evento CrylF del algodón 281-24-236
El ADN del evento Cry1F de 281-24-236 y del evento Cry1Ac de 3006-210-23 y el algodón no transgénico PCS355 se extrajeron de hojas de algodón empleando el kit Plant DNeasy de QIAGEn (n.° de catálogo 69181, Qiagen, Valencia, CA, EEUU). Se siguió el protocolo sugerido por el fabricante. Brevemente, se rompieron discos de hojas en un tampón precalentado suplementado con ARNasa empleando una esfera de carburo de wolframio (diámetro de 0,125 mm) y un molino mezclador Retsch MM3000. La mezcla se centrifugó a temperatura ambiente, y después el sobrenadante se capturó haciéndolo pasar a través de una placa DNeasy 96. El ADN se eluyó en un tampón de elución y se conservó congelado hasta su utilización.
El ADN extraído del tejido de hoja de algodón se empleó en una amplificación de ADN mediante PCR de las secuencias del inserto del transgén/genómica 5' en el evento Cry1F de 281-24-236 empleando el cebador 281-14 (SEQ ID NO:3, 5'TGTCGGCTGAAGGTAGGGAGG3') y el cebador 281-15 (SEQ ID NO:4, 5'CCGGACATGAAGCCATTTAC3'), y las secuencias del inserto del transgén/genómicas 3' flanqueantes empleando el cebador 281-9 (SEQ ID NO:6, 5'TCTCTAGAGAGGGGCACGACC3') y el cebador 281-10 (SEQ ID NO:7, 5'CGAGCTGGAGa Ga CCGGTGAC3'). Se realizaron análisis de amplificación del ADN de la PCR empleando ADN genómico extraído del evento Cry1F del algodón 281-24-236 y la línea de algodón no transgénica PCS355. La reacción de amplificación para la secuencia genómica flanqueante 5' se realizó empleando el kit de PCR QIAGEN HotStarTaq (n.° de catálogo 203203 o 203205, QIAGEN, Valencia, Calif., EEUU) con una concentración final de 0,4 |iM para el cebador 281-14 y el cebador 281-15 en un volumen de reacción de 50 |il. Las reacciones se realizaron empleando un GenAmp PCR System 9600 (Applied Biosystem, Foster City, CA) bajo las siguientes condiciones de ciclación: 1 ciclo a 95 °C durante 15 minutos; 35 ciclos de 94 °C durante 30 segundos, 57 °C durante 30 segundos, 72 °C durante 60 segundos; 1 ciclo a 72 °C durante 10 minutos. La PCR para la secuencia genómica flanqueante 3' se realizó empleando el kit de PCR Takara ExTaq (n.° de catálogo RR001A, Panvera, Madison, WI) en un volumen de reacción de 50 |il que contiene una concentración final de 0,4 |iM del cebador 281-9 y el cebador 281-10. Las reacciones se realizaron empleando un GenAmp PCR System 9600 (Applied Biosystem, Foster City, CA) bajo las siguientes condiciones de ciclación: 1 ciclo a 95 °C durante 5 minutos; 35 ciclos de 94 °C durante 30 segundos, 60 °C durante 30 segundos, 72 °C durante 60 segundos; 1 ciclo a 72 °C durante 10 minutos. Los productos de la PCR se separaron utilizando una electroforesis en gel de agarosa al 1,0% a 100 V durante aproximadamente 1 hora y se visualizaron con tinción con bromuro de etidio.
Se determinó la secuencia de ADN producto de la PCR 5' y resultó una secuencia de 603 pares de bases nucleotídicas que representa la secuencia del inserto del transgén/genómica 5' del evento Cry1F del algodón 281 24-236, y se identificó como SEQ ID NO:5. Se determinó la secuencia de ADN producto de la PCR 3' y resultó una secuencia de 562 pares de bases nucleotídicas que representa la secuencia del inserto del transgén/genómica 3' del evento Cry1F del algodón 281-24-236, y se identificó como SEQ ID NO:8.
Las secuencias de unión del transgén/genómica, SEQ ID NO:5 y SEQ ID NO:8, son nuevas secuencias de ADN en el evento Cry1F de 281-24-236 que son diagnósticas para el evento Cry1F de la planta de algodón 281-24-236 y su progenie.
Ejemplo 3: Ensayo de diagnóstico para el evento Cry1Ac del algodón 3006-210-23
El ADN extraído del tejido de hoja de algodón se empleó en una amplificación de ADN mediante PCR de las secuencias del inserto del transgén/genómica 5' en el evento Cry1Ac de 3006-210-23 empleando el cebador 3006 20 (SEQ ID NO:9, 5'TTCCAACCTTTAACTATTATCCTGC3') y el cebador 3006-22 (SEQ ID NO:10, 5'GCTGCGGACATCTACATTTT3'), y las secuencias del inserto del transgén/genómicas 3' flanqueantes empleando el cebador 3006-9 (SEQ ID NO:12, 5'GACATGCAATGCTCATTATCTCTA3') y el cebador 3006-12 (SEQ ID NO:13, 5'AAGTCTCTGCCTTCTACCCTGG3'). Se realizaron análisis de amplificación del ADN de la PCR empleando ADN genómico extraído del evento Cry1Ac del algodón 3006-210-23 y la línea de algodón no transgénico PCS355. La reacción de amplificación para la secuencia genómica flanqueante 5' se realizó empleando el kit de PCR QIAGEN
Claims (12)
1. - Un método para detectar la presencia del evento de algodón crylF 281-24-236 en una muestra que comprende ADN de algodón, en donde dicho método comprende poner en contacto dicha muestra con al menos un polinucleótido que es diagnóstico para el evento de algodón cry1F 281-24-236, en donde el evento de algodón 281 24-236 es una secuencia de polinucleótidos de inserto Cry1F que consta de los nucleótidos 2.075-12.748 de SEQ ID NO: 1 y al menos 20 nucleótidos flanqueantes contiguos en ambos lados de dicha secuencia de inserto, en donde los nucleótidos flanqueantes 5' son los restos de nucleótidos 1-2.074 de SEQ ID NO: 1 y los nucleótidos flanqueantes 3' son los restos de nucleótidos 12.749-15.490 de SEQ ID NO: 1.
2. - El método de la reivindicación 1, en donde dicho método comprende poner en contacto dicha muestra con a. un primer cebador que se une a una secuencia flanqueante seleccionada del grupo que consiste en los restos 1 2.074 de la SEQ ID nO: 1, los restos 12.749-15.490 de la SEQ ID NO: 1 y sus complementos; y
b. un segundo cebador que se une a una secuencia de inserto seleccionada del grupo que consiste en los restos 2,075-12,748 de SEQ ID NO: 1 y sus complementos; y
someter dicha muestra a una reacción en cadena de la polimerasa; y analizar un amplicón, que se extiende por la unión entre dicha secuencia de flanqueo y dicha secuencia de inserción, generada entre dichos cebadores.
3. - El método de la reivindicación 2, en el que dicho segundo cebador se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 6.
4. - El método de la reivindicación 1, en el que dicho método comprende poner en contacto dicha muestra con al menos un polinucleótido, dicho polinucleótido comprende al menos 30 nucleótidos que se hibrida en condiciones rigurosas con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los restos 2.060 a 2.090 de la SEQ ID NO: 1, restos 12.733 a 12.765 de SEQ ID NO: 1, y sus complementos; y en el que dicho método comprende además someter dicha muestra y dicho polinucleótido a condiciones de hibridación rigurosas; y analizar en dicha muestra la hibridación de dicho polinucleótido a dicho ADN.
5. - El método de la reivindicación 1, que comprende además detectar la presencia del evento de algodón cry1Ac 3006-210-23 en dicha muestra que comprende ADN de algodón, en donde dicho método comprende poner en contacto dicha muestra con al menos un polinucleótido que es diagnóstico para el evento de algodón cry1Ac 3006 210 -23, en el que el evento de algodón 3006-210-23 es una secuencia de polinucleótidos inserto Cry1Ac que consiste en los nucleótidos 528-8.900 de la SEQ ID NO: 2 y al menos 20 nucleótidos flanqueantes contiguos a ambos lados de dicha secuencia de inserción, en el que el los nucleótidos flanqueantes en 5' son los restos de nucleótidos 1-527 de SEQ ID NO: 2 y los nucleótidos flanqueantes en 3' son los restos de nucleótidos 8.901-9.382 de la SEQ ID NO: 2.
6. - El método de la reivindicación 5, en donde dicho método comprende poner en contacto dicha muestra con a. un primer cebador que se une a una secuencia flanqueante seleccionada del grupo que consiste en los restos 1 527 de SEQ ID NO: 2, los restos 8.901-9.382 de SEQ ID NO: 2 y sus complementos; y
b. un segundo cebador que se une a una secuencia de inserto seleccionada del grupo que consiste en los restos 528-8.900 de la SEQ ID No : 2, y sus complementos; y
someter dicha muestra a una reacción en cadena de la polimerasa; y determinar un amplicón, que abarca la unión entre dicha secuencia flanqueante y dicha secuencia de inserción, generada entre dichos cebadores.
7. - El método de la reivindicación 6, en el que dicho segundo cebador se selecciona del grupo que consiste en SEQ ID NO: 10 y SEQ ID NO: 12.
8. - El método de la reivindicación 5, en el que dicho método comprende poner en contacto dicha muestra con al menos un polinucleótido, comprendiendo dicho polinucleótido al menos 30 nucleótidos que hibrida en condiciones rigurosas con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los restos 512-543 de la SEQ ID NO: 2, restos 8,885 a 8,916 de SEQ ID NO: 2, y sus complementos; y en el que dicho método comprende además someter dicha muestra y dicho polinucleótido a condiciones de hibridación rigurosas; y determinar en dicha muestra la hibridación de dicho polinucleótido con dicho ADN.
9. - Un kit de detección de ADN que comprende un primer cebador que se une a una secuencia flanqueante seleccionada del grupo que consiste en los restos 1-2.074 de la SEQ ID NO: 1, los restos 12.749-15.490 de la SEQ ID NO: 1 y sus complementos; y un segundo cebador que se une a una secuencia de inserto seleccionada del grupo que consiste en los restos 2.075-12.748 de SEQ ID NO: 1 y sus complementos.
10. - El kit de detección de ADN de la reivindicación 9, que comprende además un primer cebador que se une a una secuencia flanqueante seleccionada del grupo que consiste en los restos 1-527 de SEQ ID NO: 2, los restos 8,901 9,382 de SEQ ID NO: 2, y complementos de los mismos; y un segundo cebador que se une a una secuencia de
inserto seleccionada del grupo que consiste en los restos 528-8.900 de la SEQ ID NO: 2, y sus complementos.
11.- Un kit de detección de ADN que comprende un polinucleótido que comprende al menos 30 nucleótidos que híbrida en condiciones rigurosas con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los restos 2.060 a 2.090 de la SEQ ID NO: 1, los restos 12.733 a 12.765 de la SEQ ID NO: 1, y sus complementos.
12.- El kit de detección de ADN de la reivindicación 11, que comprende además un polinucleótido que comprende al menos 30 nucleótidos que se hibrida en condiciones rigurosas con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los restos 512-543 de SEQ ID NO: 2, restos 8,885 a 8,916 de SEQ ID NO: 2, y sus complementos.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US55658604P | 2004-03-26 | 2004-03-26 | |
| US61385104P | 2004-09-27 | 2004-09-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2743789T3 true ES2743789T3 (es) | 2020-02-20 |
Family
ID=34959539
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES14198791T Expired - Lifetime ES2743789T3 (es) | 2004-03-26 | 2004-10-13 | Líneas de algodón transgénico Cry1F y Cry1Ac y su identificación específica de evento |
| ES10015576.1T Expired - Lifetime ES2531980T3 (es) | 2004-03-26 | 2004-10-13 | Líneas de algodón transgénico Cry1F y Cry1Ac y su identificación específica de evento |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES10015576.1T Expired - Lifetime ES2531980T3 (es) | 2004-03-26 | 2004-10-13 | Líneas de algodón transgénico Cry1F y Cry1Ac y su identificación específica de evento |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US7179965B2 (es) |
| EP (3) | EP1737964A1 (es) |
| CN (1) | CN101027396B (es) |
| AR (1) | AR046599A1 (es) |
| AU (1) | AU2004318788B2 (es) |
| BR (2) | BR122015009611B8 (es) |
| ES (2) | ES2743789T3 (es) |
| HU (1) | HUE047016T2 (es) |
| WO (1) | WO2005103266A1 (es) |
Families Citing this family (361)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EG26529A (en) * | 2001-06-11 | 2014-01-27 | مونسانتو تكنولوجى ل ل سى | Prefixes for detection of DNA molecule in cotton plant MON15985 which gives resistance to damage caused by insect of squamous lepidoptera |
| BRPI0618025B1 (pt) | 2005-10-28 | 2016-12-27 | Dow Agrosciences Llc | método para controlar ervas daninhas em uma área, polinucleotídeo isolado, célula de planta e planta resistente a herbicida |
| MX2009005285A (es) * | 2006-12-22 | 2009-05-28 | Pioneer Hi Bred Int | Estrategias de manejo de resistencia. |
| BRPI0811294B8 (pt) | 2007-05-09 | 2022-06-28 | Dow Agrosciences Llc | Polinucleotídeo isolado, e método para controle de ervas daninhas em uma área |
| US8273535B2 (en) | 2008-02-08 | 2012-09-25 | Dow Agrosciences, Llc | Methods for detection of corn event DAS-59132 |
| US20110047646A1 (en) * | 2008-05-01 | 2011-02-24 | Juan Ferre Manzanero | Armyworm Insect Resistance Management in Transgenic Plants |
| EP2512219B1 (en) * | 2009-12-16 | 2018-10-03 | Dow AgroSciences, LLC | Combined use of vip3ab and cry1fa for management of resistant insects |
| KR101841297B1 (ko) | 2009-12-16 | 2018-03-22 | 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 | 곤충 내성 관리를 위한 ｃｒｙ1ｂｅ와 조합된 ｃｒｙ1ａｂ의 용도 |
| AU2010330919B2 (en) * | 2009-12-16 | 2016-05-12 | Dow Agrosciences Llc | Insecticidal protein combination comprising Cry1Ab and Cry2Aa for controlling European corn borer, and methods for insect resistance management |
| ES2704652T3 (es) * | 2009-12-16 | 2019-03-19 | Dow Agrosciences Llc | Uso combinado de las proteínas de CRY1Da y CRY1Fa para gestionar la resistencia de los insectos |
| AR079501A1 (es) * | 2009-12-16 | 2012-02-01 | Dow Agrosciences Llc | Uso combinado de las proteinas cry1ca y cry1ab para el control de la resistencia a los insectos |
| RS57105B1 (sr) * | 2009-12-16 | 2018-06-29 | Dow Agrosciences Llc | Kombinovana upotreba cry1ca i cry1fa proteina za upravljanje rezistencijom kod insekta |
| BR112012018108A2 (pt) | 2010-01-22 | 2015-10-20 | Bayer Ip Gmbh | combinações acaricidas e/ou inseticidas de ingredientes ativos |
| CN101838655B (zh) * | 2010-04-08 | 2012-02-29 | 华中师范大学 | 一个新的棉花基因psp231及其启动子 |
| WO2012048136A1 (en) * | 2010-10-07 | 2012-04-12 | Dow Agrosciences Llc | Endpoint taqman methods for determining zygosity of cotton comprising cry1ac event 3006-210-23 |
| BR112013008508A2 (pt) * | 2010-10-07 | 2016-07-05 | Dow Agrosciences Llc | métodos ''endpoint'' de taqman para determinação de zigosidade de algodão compreendendo evento 281-24-236 de cry1f |
| US9206137B2 (en) | 2010-11-15 | 2015-12-08 | Bayer Intellectual Property Gmbh | N-Aryl pyrazole(thio)carboxamides |
| MX2013005643A (es) | 2010-11-29 | 2013-07-03 | Bayer Ip Gmbh | Iminas alfa, beta-insaturadas. |
| JP6412311B2 (ja) | 2010-12-01 | 2018-10-24 | バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ | 作物において線虫類を防除するための、及び、収量を増加させるための、フルオピラムの使用 |
| EP2460407A1 (de) | 2010-12-01 | 2012-06-06 | Bayer CropScience AG | Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe |
| CN103561564B (zh) | 2010-12-03 | 2016-11-16 | 陶氏益农公司 | 叠加的除草剂耐受性事件8264.44.06.1、相关转基因大豆系、及其检测 |
| US9540656B2 (en) | 2010-12-03 | 2017-01-10 | Dow Agrosciences Llc | Stacked herbicide tolerance event 8291.45.36.2, related transgenic soybean lines, and detection thereof |
| CN102108399B (zh) * | 2010-12-06 | 2013-06-05 | 中国检验检疫科学研究院 | 转基因棉花检测芯片、试剂盒及应用 |
| UY33813A (es) | 2010-12-16 | 2013-09-02 | Dow Agrosciences | ?métodos para manejar el desarrollo de resistencia en insectos, construcción de polinucleótidos, método para producir una proteína insecticida y composiciones?. |
| CA2823999C (en) | 2011-03-10 | 2020-03-24 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds |
| MX345551B (es) | 2011-03-23 | 2017-02-03 | Bayer Ip Gmbh | Combinaciones de compuestos activos. |
| US20140051575A1 (en) | 2011-04-08 | 2014-02-20 | Juergen Benting | Fungicide hydroximoyl-tetrazole derivatives |
| CA2833749C (en) | 2011-04-22 | 2019-06-04 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Active compound combinations comprising a (thio)carboxamide derivative and a fungicidal compound |
| EP2720543B1 (en) | 2011-06-14 | 2018-08-22 | Bayer CropScience AG | Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent |
| AR087185A1 (es) | 2011-07-13 | 2014-02-26 | Dow Agrosciences Llc | Evento 8264.42.32.1 de tolerancia apilada a los herbicidas, lineas de soja transgenicas relacionadas y su deteccion |
| BR102012019434B1 (pt) | 2011-07-26 | 2021-11-09 | Dow Agrosciences Llc | Métodos de controle de pestes, de insetos, molécula e sequência de dna diagnóstica para o evento de soja 9582.814.19.1 |
| BR102012019436B8 (pt) * | 2011-07-26 | 2022-10-11 | Dow Agrosciences Llc | Método de detecção do evento de soja pdab9582.814.19.1 |
| CN103717076B (zh) | 2011-08-10 | 2016-04-13 | 拜耳知识产权股份有限公司 | 含有特定特特拉姆酸衍生物的活性化合物组合物 |
| CN103890181A (zh) | 2011-08-22 | 2014-06-25 | 拜尔作物科学公司 | 修饰植物基因组的方法和手段 |
| EP2561759A1 (en) | 2011-08-26 | 2013-02-27 | Bayer Cropscience AG | Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth |
| CN103874681B (zh) | 2011-09-12 | 2017-01-18 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 杀真菌性4‑取代的‑3‑{苯基[(杂环基甲氧基)亚氨基]甲基}‑1,2,4‑噁二唑‑5(4h)‑酮衍生物 |
| US10301257B2 (en) | 2011-09-16 | 2019-05-28 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of acylsulfonamides for improving plant yield |
| US20140378306A1 (en) | 2011-09-16 | 2014-12-25 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Use of 5-phenyl- or 5-benzyl-2 isoxazoline-3 carboxylates for improving plant yield |
| MX362112B (es) | 2011-09-16 | 2019-01-07 | Bayer Ip Gmbh | Uso de fenilpirazolin-3-carboxilatos para mejorar el rendimiento de las plantas. |
| AR088113A1 (es) | 2011-10-04 | 2014-05-07 | Bayer Ip Gmbh | ARN DE INTERFERENCIA (ARNi) PARA EL CONTROL DE HONGOS Y OOMICETOS POR LA INHIBICION DEL GEN DE SACAROPINA DESHIDROGENASA |
| RU2014125077A (ru) | 2011-11-21 | 2015-12-27 | Байер Интеллекчуал Проперти Гмбх | Фунгицидные n-[(тризамещенный силил)этил]-карбоксамидные производные |
| JP2015504442A (ja) | 2011-11-30 | 2015-02-12 | バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー | 殺菌性ｎ−ビシクロアルキルおよびｎ−トリシクロアルキル（チオ）カルボキサミド誘導体 |
| CA2859467C (en) | 2011-12-19 | 2019-10-01 | Bayer Cropscience Ag | Use of anthranilic acid diamide derivatives for pest control in transgenic crops |
| CN104039769B (zh) | 2011-12-29 | 2016-10-19 | 拜耳知识产权有限责任公司 | 杀真菌的3-[(1,3-噻唑-4-基甲氧基亚氨基)(苯基)甲基]-2-取代的-1,2,4-噁二唑-5(2h)-酮衍生物 |
| TWI557120B (zh) | 2011-12-29 | 2016-11-11 | 拜耳知識產權公司 | 殺真菌之３－［（吡啶－２－基甲氧基亞胺）（苯基）甲基］－２－經取代之－１，２，４－二唑－５（２ｈ）－酮衍生物 |
| WO2013112568A1 (en) * | 2012-01-23 | 2013-08-01 | Dow Agrosciences Llc | Cotton event pdab4468.18.07.1 detection method |
| EP2806740B1 (en) | 2012-01-25 | 2018-01-10 | Bayer Intellectual Property GmbH | Active compounds combination containing fluopyram bacillus and biologically control agent |
| WO2013110594A1 (en) | 2012-01-25 | 2013-08-01 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent |
| BR112014020898B1 (pt) | 2012-02-27 | 2020-08-11 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Combinação, método para controle de fungos fitopatogênicos prejudiciais compreendendo a referida combinação e seu uso |
| WO2013139949A1 (en) | 2012-03-23 | 2013-09-26 | Bayer Intellectual Property Gmbh | Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield |
| WO2013153143A1 (en) | 2012-04-12 | 2013-10-17 | Bayer Cropscience Ag | N-acyl- 2 - (cyclo) alkylpyrrolidines and piperidines useful as fungicides |
| WO2013156560A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Bayer Cropscience Ag | N-cycloalkyl-n-[(trisubstitutedsilylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| JP6109295B2 (ja) | 2012-04-20 | 2017-04-05 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | Ｎ−シクロアルキル−ｎ−［（ヘテロシクリルフェニル）メチレン］−（チオ）カルボキサミド誘導体 |
| EP2662361A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazol indanyl carboxamides |
| EP2662362A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazole indanyl carboxamides |
| BR112014027644A2 (pt) | 2012-05-09 | 2017-06-27 | Bayer Cropscience Ag | 5-halogenopirazol-indanil-carboxamidas |
| EP2662370A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides |
| EP2662363A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides |
| EP2662360A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides |
| EP2662364A1 (en) | 2012-05-09 | 2013-11-13 | Bayer CropScience AG | Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides |
| MX2014013497A (es) | 2012-05-09 | 2015-02-10 | Bayer Cropscience Ag | Pirazol indanil carboxamidas. |
| WO2013170399A1 (zh) * | 2012-05-16 | 2013-11-21 | 创世纪转基因技术有限公司 | 棉花植物事件a2-6以及用于其检测的引物和方法 |
| AR091104A1 (es) | 2012-05-22 | 2015-01-14 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida |
| US9386773B2 (en) | 2012-05-30 | 2016-07-12 | Bayer Cropscience Ag | Compositions comprising a biological control agent and a fungicide from the group consisting of inhibitors of the respiratory chain at complex I or II |
| TR201816257T4 (tr) | 2012-05-30 | 2018-11-21 | Bayer Cropscience Ag | Bir biyolojik kontrol ajanı ve trifloksistrobin içeren bileşim. |
| PL2854552T3 (pl) | 2012-05-30 | 2019-11-29 | Bayer Cropscience Ag | Kompozycja zawierająca środek kontroli biologicznej i środek grzybobójczy wybrany spośród inhibitorów biosyntezy aminokwasów lub białek, inhibitorów wytwarzania ATP i inhibitorów syntezy ściany komórkowej |
| MX362859B (es) | 2012-05-30 | 2019-02-20 | Bayer Cropscience Ag | Composiciones que comprenden un agente de control biologico y un insecticida. |
| TR201816247T4 (tr) | 2012-05-30 | 2018-11-21 | Bayer Cropscience Ag | Metalaksil ve metalaksil-m'den seçilen bir fungisit ve bir biyolojik kontrol ajanı içeren bileşim. |
| WO2013178651A1 (en) | 2012-05-30 | 2013-12-05 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of the mitosis and cell division or compounds having a multi-site action |
| EP3488700B1 (en) | 2012-05-30 | 2020-12-16 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| AU2013269725B2 (en) | 2012-05-30 | 2016-10-13 | Bayer Cropscience Ag | Compositions comprising a biological control agent and an insecticide |
| BR112014031900B8 (pt) * | 2012-06-25 | 2023-05-16 | Dow Agrosciences Llc | Sequência de dna isolada, método de controlar insetos, de aumentar o rendimento de uma cultura de soja e uso do evento de soja 9582.816.151 |
| US9863008B2 (en) | 2012-06-25 | 2018-01-09 | Dow Agrosciences Llc | Soybean event pDAB9582.816.15.1 detection method |
| WO2014019983A1 (en) | 2012-07-31 | 2014-02-06 | Bayer Cropscience Ag | Compositions comprising a pesticidal terpene mixture and an insecticide |
| AR092482A1 (es) | 2012-09-07 | 2015-04-22 | Dow Agrosciences Llc | Enriquecimiento de la clasificacion de las celulas activadas por fluorescencia (facs) para generar plantas |
| MY196630A (en) | 2012-09-14 | 2023-04-23 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Hppd Variants and Methods of use |
| EP2719280A1 (en) | 2012-10-11 | 2014-04-16 | Bayer CropScience AG | Use of N-phenylethylpyrazole carboxamide derivatives or salts thereof for resistance management of phytopathogenic fungi |
| DK2908641T3 (da) | 2012-10-19 | 2018-04-23 | Bayer Cropscience Ag | Fremgangsmåde til behandling af planter mod svampe, der er resistente over for fungicider, ved anvendelse af carboxamid- eller thiocarboxamidderivater |
| US9801374B2 (en) | 2012-10-19 | 2017-10-31 | Bayer Cropscience Ag | Active compound combinations comprising carboxamide derivatives |
| PL2908640T3 (pl) | 2012-10-19 | 2020-06-29 | Bayer Cropscience Ag | Sposób stymulowania wzrostu roślin przy pomocy pochodnych karboksamidu |
| CA2888559C (en) | 2012-10-19 | 2021-03-02 | Bayer Cropscience Ag | Method for enhancing tolerance to abiotic stress in plants using carboxamide or thiocarboxamide derivatives |
| EP2735231A1 (en) | 2012-11-23 | 2014-05-28 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations |
| EP2925136A2 (en) | 2012-11-30 | 2015-10-07 | Bayer CropScience AG | Binary fungicidal mixtures |
| EP2925137A1 (en) | 2012-11-30 | 2015-10-07 | Bayer CropScience AG | Binary fungicidal or pesticidal mixture |
| UA117819C2 (uk) | 2012-11-30 | 2018-10-10 | Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт | Подвійні пестицидні і фунгіцидні суміші |
| JP6359551B2 (ja) | 2012-11-30 | 2018-07-18 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | 三元殺菌剤混合物 |
| EA201890495A3 (ru) | 2012-11-30 | 2019-01-31 | Байер Кропсайенс Акциенгезельшафт | Тройные фунгицидные и пестицидные смеси |
| WO2014086753A2 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising biological control agents |
| US20150305348A1 (en) | 2012-12-03 | 2015-10-29 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising biological control agents |
| EP2925144A2 (en) | 2012-12-03 | 2015-10-07 | Bayer CropScience AG | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| CN105163589A (zh) | 2012-12-03 | 2015-12-16 | 拜耳作物科学股份公司 | 包括生物防治剂及杀真菌剂的组合物 |
| MX352629B (es) | 2012-12-03 | 2017-12-01 | Bayer Cropscience Ag | Composición que comprende un agente de control biológico y un insecticida. |
| WO2014086750A2 (en) | 2012-12-03 | 2014-06-12 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| MX2015006500A (es) | 2012-12-03 | 2015-08-14 | Bayer Cropsciense Ag | Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida. |
| EP2925146A2 (en) | 2012-12-03 | 2015-10-07 | Bayer CropScience AG | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
| CN103014159B (zh) * | 2012-12-07 | 2014-07-02 | 南京农业大学 | 棉铃虫对Cry1Ac 毒素非隐性抗性钙粘蛋白胞质区缺失突变的分子检测方法 |
| AR093909A1 (es) | 2012-12-12 | 2015-06-24 | Bayer Cropscience Ag | Uso de ingredientes activos para controlar nematodos en cultivos resistentes a nematodos |
| AR093996A1 (es) | 2012-12-18 | 2015-07-01 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias |
| EP2935218A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-10-28 | Bayer CropScience AG | Difluoromethyl-nicotinic- tetrahydronaphtyl carboxamides |
| US20140189907A1 (en) * | 2012-12-28 | 2014-07-03 | Dow Agrosciences Llc | Transgenic cotton plants related to event 281-24-236 and to event 3006-210-23 |
| KR20150119032A (ko) | 2013-02-11 | 2015-10-23 | 바이엘 크롭사이언스 엘피 | 스트렙토미세스-기반 생물학적 방제제 및 살진균제를 포함하는 조성물 |
| BR112015018704A2 (pt) | 2013-02-11 | 2017-07-18 | Bayer Cropscience Lp | composições compreendendo gougerotina e um inseticida |
| BR112015018419A2 (pt) | 2013-02-11 | 2017-07-18 | Bayer Cropscience Lp | composições compreendendo um agente de controle biológico à base de streptomyces e um outro agente de controle biológico |
| US10221429B2 (en) | 2013-03-07 | 2019-03-05 | Bayer Cropscience Lp | Toxin genes and methods for their use |
| US9713332B2 (en) | 2013-03-13 | 2017-07-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Glyphosate application for weed control in Brassica |
| UA121847C2 (uk) | 2013-03-14 | 2020-08-10 | Піонір Хай-Бред Інтернешнл Інк. | Полінуклеотид, що кодує елемент сайленсингу з інсектицидною активністю проти шкідника рослин із ряду coleoptera, та спосіб його застосування |
| BR112015023709A2 (pt) | 2013-03-15 | 2017-07-18 | Pioneer Hi Bred Int | polipeptídeo phi-4, polinucleotídeo, composição, método para inibir o crescimento, método para controlar uma população, planta, semente, cassete de expressão, método para expressar em uma planta um polinucleotídeo, método para proteger uma planta, proteína de fusão |
| JP2016519687A (ja) | 2013-04-19 | 2016-07-07 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | バイナリー殺虫または農薬混合物 |
| CA2909725A1 (en) | 2013-04-19 | 2014-10-23 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants |
| TW201507722A (zh) | 2013-04-30 | 2015-03-01 | Bayer Cropscience Ag | 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類 |
| WO2014177514A1 (en) | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Bayer Cropscience Ag | Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides |
| EP3013802B1 (en) | 2013-06-26 | 2019-08-14 | Bayer Cropscience AG | N-cycloalkyl-n-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| US10006045B2 (en) | 2013-08-16 | 2018-06-26 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CA3175984A1 (en) | 2013-09-13 | 2015-03-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| WO2015082587A1 (en) | 2013-12-05 | 2015-06-11 | Bayer Cropscience Ag | N-cycloalkyl-n-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives |
| AU2014359208B2 (en) | 2013-12-05 | 2018-10-04 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | N-cycloalkyl-N-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives |
| EP2885970A1 (en) | 2013-12-21 | 2015-06-24 | Bayer CropScience AG | Fungicide compositions comprising compound I, at least one succinate dehydrogenase (SDH) inhibitor and at least one triazole fungicide |
| CA2939156A1 (en) | 2014-02-07 | 2015-08-13 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| CN106232620B (zh) | 2014-02-07 | 2022-05-13 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| CN106459986B (zh) | 2014-03-11 | 2020-06-30 | 拜耳作物科学有限合伙公司 | Hppd变体和使用方法 |
| CN103884848B (zh) * | 2014-04-02 | 2015-08-05 | 江苏省农业科学院 | 一种预测转Bt基因棉花抗虫性强度的方法 |
| WO2015160618A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent |
| WO2015160619A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide |
| WO2015160620A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide |
| CA2961733A1 (en) | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| CA2963558C (en) | 2014-10-16 | 2023-04-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| PE20221408A1 (es) | 2014-11-20 | 2022-09-20 | Monsanto Technology Llc | Nuevas proteinas inhibidoras de insectos |
| US11130964B2 (en) | 2014-11-20 | 2021-09-28 | Monsanto Technology Llc | Insect inhibitory proteins |
| US20170359965A1 (en) | 2014-12-19 | 2017-12-21 | E I Du Pont De Nemours And Company | Polylactic acid compositions with accelerated degradation rate and increased heat stability |
| US10570182B2 (en) | 2014-12-30 | 2020-02-25 | Dow Agrosciences Llc | Modified Cry1Ca toxins useful for control of insect pests |
| EP3081085A1 (en) | 2015-04-14 | 2016-10-19 | Bayer CropScience AG | Method for improving earliness in cotton |
| WO2016166077A1 (en) | 2015-04-13 | 2016-10-20 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | N-cycloalkyl-n-(biheterocyclyethylene)-(thio)carboxamide derivatives |
| BR112017024948A2 (pt) | 2015-05-19 | 2018-07-31 | Pioneer Hi Bred Int | proteínas inseticidas e métodos para uso das mesmas |
| EP3097782A1 (en) | 2015-05-29 | 2016-11-30 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents |
| CN107771181A (zh) | 2015-06-16 | 2018-03-06 | 先锋国际良种公司 | 用以防治昆虫有害生物的组合物和方法 |
| EP3331352B1 (en) | 2015-08-06 | 2022-07-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant derived insecticidal proteins and methods for their use |
| EP3341483B1 (en) | 2015-08-28 | 2019-12-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Ochrobactrum-mediated transformation of plants |
| MX2018003044A (es) | 2015-09-11 | 2018-04-11 | Bayer Cropscience Ag | Variantes de hppd y metodos de uso. |
| ES2961522T3 (es) | 2015-11-02 | 2024-03-12 | Monsanto Technology Llc | Evento transgénico de algodón MON 88702 y procedimientos para su detección y usos |
| CN105483237A (zh) * | 2015-12-26 | 2016-04-13 | 吉林省农业科学院 | 转基因植物中aad1基因的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法 |
| CN105483235A (zh) * | 2015-12-26 | 2016-04-13 | 吉林省农业科学院 | 转基因植物中cry1F基因的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法 |
| CN105483236A (zh) * | 2015-12-26 | 2016-04-13 | 吉林省农业科学院 | 转基因植物中cry1C基因的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法 |
| CN105483238A (zh) * | 2015-12-26 | 2016-04-13 | 吉林省农业科学院 | 转基因植物中vip3A基因的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法 |
| EP3445861B1 (en) | 2016-04-19 | 2021-12-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal combinations of polypeptides having improved activity spectrum and uses thereof |
| WO2017182420A1 (en) | 2016-04-20 | 2017-10-26 | Bayer Cropscience Nv | Elite event ee-gh7 and methods and kits for identifying such event in biological samples |
| MX2018013249A (es) | 2016-05-04 | 2019-02-13 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos para sus usos. |
| WO2017218207A1 (en) | 2016-06-16 | 2017-12-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| CN109642237B (zh) | 2016-06-24 | 2022-09-30 | 先锋国际良种公司 | 植物调节元件及其使用方法 |
| MX2018015906A (es) | 2016-07-01 | 2019-04-04 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas de plantas y metodos para sus usos. |
| US20210292778A1 (en) | 2016-07-12 | 2021-09-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods to control insect pests |
| WO2018019676A1 (en) | 2016-07-29 | 2018-02-01 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Active compound combinations and methods to protect the propagation material of plants |
| EP3535285B1 (en) | 2016-11-01 | 2022-04-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| MX2019005835A (es) | 2016-11-23 | 2019-10-30 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Genes de toxinas axmi669 y axmi991 y metodos para su uso. |
| WO2018111551A1 (en) | 2016-12-14 | 2018-06-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| BR112019011293A2 (pt) | 2016-12-19 | 2019-10-08 | Basf Se | compostos de fórmula i, intermediários, composição agroquímica, uso e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos |
| WO2018118811A1 (en) | 2016-12-22 | 2018-06-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| UY37570A (es) | 2017-01-18 | 2018-08-31 | Bayer Cropscience Lp | Uso de bp005 para el control de patógenos de planta |
| CN110431234B (zh) | 2017-01-18 | 2024-04-16 | 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 | Bp005毒素基因及其使用方法 |
| WO2018140214A1 (en) | 2017-01-24 | 2018-08-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Nematicidal protein from pseudomonas |
| WO2018148001A1 (en) | 2017-02-08 | 2018-08-16 | Pioneer Hi-Bred International Inc | Insecticidal combinations of plant derived insecticidal proteins and methods for their use |
| WO2018153730A1 (en) | 2017-02-21 | 2018-08-30 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| CA3055317A1 (en) | 2017-03-07 | 2018-09-13 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Hppd variants and methods of use |
| US20200045974A1 (en) | 2017-04-07 | 2020-02-13 | Basf Se | Substituted Oxadiazoles for Combating Phytopathogenic Fungi |
| WO2018188962A1 (en) | 2017-04-11 | 2018-10-18 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| EP3612029A1 (en) | 2017-04-21 | 2020-02-26 | Bayer CropScience LP | Method of improving crop safety |
| CN110621669A (zh) | 2017-05-04 | 2019-12-27 | 巴斯夫欧洲公司 | 防除植物病原性真菌的取代5-卤代烷基-5-羟基异噁唑类 |
| WO2018202491A1 (en) | 2017-05-04 | 2018-11-08 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| CN110621780B (zh) | 2017-05-11 | 2024-03-19 | 先锋国际良种公司 | 杀昆虫蛋白及其使用方法 |
| WO2018219797A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| US20200190043A1 (en) | 2017-06-19 | 2020-06-18 | Basf Se | 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazol-3-yl]aryloxy](thio)acetamides for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019020283A1 (en) | 2017-07-27 | 2019-01-31 | Basf Se | USE OF HERBICIDE COMPOSITIONS BASED ON L-GLUFOSINATE IN TOLERANT FIELD CROPS |
| WO2019025250A1 (en) | 2017-08-04 | 2019-02-07 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| WO2019038042A1 (en) | 2017-08-21 | 2019-02-28 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| US11076596B2 (en) | 2017-09-18 | 2021-08-03 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019068811A1 (en) | 2017-10-06 | 2019-04-11 | Bayer Aktiengesellschaft | COMPOSITIONS COMPRISING FLUOPYRAM AND TIOXAZAFENE |
| WO2019074598A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | VIRUS-INDUCED GENETIC SILENCING TECHNOLOGY FOR THE CONTROL OF INSECTS IN MAIZE |
| BR112020008096A2 (pt) | 2017-10-24 | 2020-11-03 | Basf Se | método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica |
| BR112020008092A2 (pt) | 2017-10-24 | 2020-09-15 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica |
| US11147275B2 (en) | 2017-11-23 | 2021-10-19 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| CA3120976A1 (en) | 2017-11-30 | 2019-06-06 | Boragen, Inc. | Benzoxaborole compounds and formulations thereof |
| WO2019121143A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Basf Se | Substituted cyclopropyl derivatives |
| WO2019137995A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Basf Se | Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests |
| BR112020013680A2 (pt) | 2018-01-29 | 2020-12-01 | BASF Agro B.V. | formulações agroquímicas, uso de formulações e método para controlar insetos |
| BR112020014817A2 (pt) | 2018-02-07 | 2020-12-08 | Basf Se | Uso dos compostos de fórmula i, compostos de fórmula i, composição, uso de um composto de fórmula i, método para o combate de fungos fitopatogênicos e semente |
| WO2019154665A1 (en) | 2018-02-07 | 2019-08-15 | Basf Se | New pyridine carboxamides |
| US11917995B2 (en) | 2018-03-01 | 2024-03-05 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions of mefentrifluconazole |
| WO2019169150A1 (en) | 2018-03-02 | 2019-09-06 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant health assay |
| US11820791B2 (en) | 2018-03-14 | 2023-11-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
| WO2019178042A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins from plants and methods for their use |
| WO2019219464A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019224092A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Basf Se | Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides |
| CA3096516A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
| CN112513033A (zh) | 2018-06-04 | 2021-03-16 | 拜耳公司 | 除草活性的双环苯甲酰基吡唑 |
| BR112021003037A2 (pt) | 2018-08-18 | 2021-05-11 | Boragen, Inc. | formas sólidas de benzoxaborol substituído e composições do mesmo |
| EP3613736A1 (en) | 2018-08-22 | 2020-02-26 | Basf Se | Substituted glutarimide derivatives |
| MX2021002290A (es) | 2018-08-29 | 2021-04-28 | Pioneer Hi Bred Int | Proteinas insecticidas y metodos para su uso. |
| EP3628158A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-01 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide |
| ES2955718T3 (es) | 2018-10-23 | 2023-12-05 | Basf Se | Compuestos pesticidas tricíclicos |
| EP3643705A1 (en) | 2018-10-24 | 2020-04-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| CN110106198B (zh) * | 2018-11-26 | 2023-03-31 | 中国农业科学院棉花研究所 | 陆地棉转化事件c006-10-13及其特异性鉴定方法 |
| EP3670501A1 (en) | 2018-12-17 | 2020-06-24 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| EA202191859A1 (ru) | 2019-01-11 | 2021-11-17 | Басф Се | Кристаллические формы 1-(1,2-диметилпропил)-n-этил-5-метил-n-пиридазин-4-ил-пиразол-4-карбоксамида |
| EP3696177A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-19 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| CN110229823B (zh) * | 2019-04-17 | 2023-02-28 | 中国农业科学院棉花研究所 | 陆地棉转化事件19c006-59-11及其特异性鉴定方法 |
| EP3965575A1 (en) | 2019-05-10 | 2022-03-16 | Bayer CropScience LP | Active compound combinations |
| EP3769623A1 (en) | 2019-07-22 | 2021-01-27 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| WO2020239517A1 (en) | 2019-05-29 | 2020-12-03 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| WO2020244969A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | Pyridine derivatives and their use as fungicides |
| WO2020244970A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | New carbocyclic pyridine carboxamides |
| CR20210605A (es) | 2019-06-06 | 2022-01-07 | Basf Se | N-(prid-3-il)carboxamidas fungicidas |
| EP3766879A1 (en) | 2019-07-19 | 2021-01-20 | Basf Se | Pesticidal pyrazole derivatives |
| MX2022000950A (es) | 2019-07-22 | 2022-02-14 | Bayer Ag | 5-amino pirazoles y triazoles como plaguicidas. |
| MX2022000951A (es) | 2019-07-23 | 2022-02-14 | Bayer Ag | Novedosos compuestos de heteroaril-triazol como plaguicidas. |
| US20220274947A1 (en) | 2019-07-23 | 2022-09-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| EP4007494A1 (en) | 2019-08-01 | 2022-06-08 | Bayer CropScience LP | Method of improving cold stress tolerance and crop safety |
| EP3701796A1 (en) | 2019-08-08 | 2020-09-02 | Bayer AG | Active compound combinations |
| US20220403410A1 (en) | 2019-09-26 | 2022-12-22 | Bayer Aktiengesellschaft | Rnai-mediated pest control |
| WO2021063736A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | Bicyclic pyridine derivatives |
| WO2021063735A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | New bicyclic pyridine derivatives |
| MX2022003964A (es) | 2019-10-02 | 2022-04-25 | Bayer Ag | Combinaciones de compuestos activos que comprenden acidos grasos. |
| KR20220079905A (ko) | 2019-10-09 | 2022-06-14 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | 살충제로서의 신규 헤테로아릴-트리아졸 화합물 |
| AU2020363864A1 (en) | 2019-10-09 | 2022-04-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| EP4055010A1 (de) | 2019-11-07 | 2022-09-14 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituierte sulfonylamide zur bekämpfung tierischer schädlinge |
| WO2021097162A1 (en) | 2019-11-13 | 2021-05-20 | Bayer Cropscience Lp | Beneficial combinations with paenibacillus |
| US20220408727A1 (en) | 2019-11-18 | 2022-12-29 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations comprising fatty acids |
| TW202134226A (zh) | 2019-11-18 | 2021-09-16 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物 |
| TW202136248A (zh) | 2019-11-25 | 2021-10-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物 |
| CN111197056B (zh) * | 2020-01-09 | 2022-07-22 | 中国科学院华南植物园 | 棉花基因叠加目标系的建立及其应用 |
| WO2021155084A1 (en) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Suppression of shade avoidance response in plants |
| TW202142114A (zh) | 2020-02-04 | 2021-11-16 | 美商陶氏農業科學公司 | 具有殺有害生物效用之組成物及與其相關之方法 |
| WO2021165195A1 (en) | 2020-02-18 | 2021-08-26 | Bayer Aktiengesellschaft | Heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| EP3708565A1 (en) | 2020-03-04 | 2020-09-16 | Bayer AG | Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides |
| CA3180157A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2021209490A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides |
| AU2021260029A1 (en) | 2020-04-21 | 2022-11-24 | Bayer Aktiengesellschaft | 2-(het)aryl-substituted condensed heterocyclic derivatives as pest control agents |
| EP3903584A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv |
| EP3903581A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i |
| CN115443267A (zh) | 2020-04-28 | 2022-12-06 | 巴斯夫欧洲公司 | 杀害虫化合物 |
| EP3903583A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii |
| EP3903582A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii |
| JP2023538713A (ja) | 2020-05-06 | 2023-09-11 | バイエル、アクチエンゲゼルシャフト | 殺真菌性化合物としてのピリジン（チオ）アミド |
| TW202208347A (zh) | 2020-05-06 | 2022-03-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物 |
| JP2023525349A (ja) | 2020-05-12 | 2023-06-15 | バイエル、アクチエンゲゼルシャフト | 殺真菌性化合物としてのトリアジンおよびピリミジン（チオ）アミド化合物 |
| EP3909950A1 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-17 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| BR112022023550A2 (pt) | 2020-05-19 | 2023-01-03 | Bayer Cropscience Ag | (tio)amidas azabicíclicas como compostos fungicidas |
| WO2021247477A1 (en) | 2020-06-02 | 2021-12-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| CN115803320A (zh) | 2020-06-04 | 2023-03-14 | 拜耳公司 | 作为新的杀真菌剂的杂环基嘧啶类和杂环基三嗪类 |
| EP3945089A1 (en) | 2020-07-31 | 2022-02-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v |
| WO2021249800A1 (en) | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| WO2021249995A1 (en) | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Bayer Aktiengesellschaft | Azabicyclyl-substituted heterocycles as fungicides |
| CA3186972A1 (en) | 2020-06-17 | 2021-12-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| KR20230026388A (ko) | 2020-06-18 | 2023-02-24 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | 작물 보호를 위한 살진균제로서의 3-(피리다진-4-일)-5,6-디히드로-4h-1,2,4-옥사디아진 유도체 |
| EP4167738A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-04-26 | Bayer Aktiengesellschaft | Composition for use in agriculture |
| WO2021255091A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,3,4-oxadiazoles and their derivatives as fungicides |
| UY39275A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos |
| BR112022025710A2 (pt) | 2020-06-19 | 2023-03-07 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazol pirimidinas e 1,3,4-oxadiazol piridinas como fungicidas |
| UY39276A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones. |
| EP3929189A1 (en) | 2020-06-25 | 2021-12-29 | Bayer Animal Health GmbH | Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides |
| JP2023532548A (ja) | 2020-07-02 | 2023-07-28 | バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト | 有害生物防除剤としてのヘテロサイクレン誘導体 |
| EP3960727A1 (en) | 2020-08-28 | 2022-03-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi |
| WO2022015619A2 (en) | 2020-07-14 | 2022-01-20 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Insecticidal proteins and methods for their use |
| EP3939961A1 (en) | 2020-07-16 | 2022-01-19 | Basf Se | Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi |
| WO2022017836A1 (en) | 2020-07-20 | 2022-01-27 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol |
| WO2022035649A1 (en) | 2020-08-10 | 2022-02-17 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Plant regulatory elements and methods of use thereof |
| EP3970494A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-23 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii |
| WO2022033991A1 (de) | 2020-08-13 | 2022-02-17 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022053453A1 (de) | 2020-09-09 | 2022-03-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022058327A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents |
| EP3974414A1 (de) | 2020-09-25 | 2022-03-30 | Bayer AG | 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| EP4236691A1 (en) | 2020-10-27 | 2023-09-06 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| WO2022090069A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Compositions comprising mefenpyr-diethyl |
| WO2022090071A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi |
| WO2022106304A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| US20240043431A1 (en) | 2020-12-14 | 2024-02-08 | Basf Se | Sulfoximine Pesticides |
| EP3915971A1 (en) | 2020-12-16 | 2021-12-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides |
| WO2022129188A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides |
| WO2022129196A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| MX2023007290A (es) | 2020-12-18 | 2023-07-04 | Bayer Ag | Uso del inhibidor de dhodh para el control de hongos fitopatogenicos resistentes en cultivos. |
| WO2022129190A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| EP4036083A1 (de) | 2021-02-02 | 2022-08-03 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel |
| US20220259612A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-18 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin oxidase levels in plants |
| EP4043444A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-17 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| US20220380792A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-12-01 | Pairwise Plants Services, Inc | Methods and compositions for modifying root architecture in plants |
| WO2022207494A1 (en) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2022207496A1 (en) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| EP4333616A1 (en) | 2021-05-03 | 2024-03-13 | Basf Se | Additives for enhancing the pesticidal effectiveness of pesticidal microorganisms |
| CN117597344A (zh) | 2021-05-06 | 2024-02-23 | 拜耳公司 | 烷基酰胺取代的环状咪唑及其作为杀虫剂的用途 |
| EP4337661A1 (de) | 2021-05-12 | 2024-03-20 | Bayer Aktiengesellschaft | 2-(het)aryl-substituierte kondensierte heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel |
| EP4091451A1 (en) | 2021-05-17 | 2022-11-23 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| BR112023023989A2 (pt) | 2021-05-18 | 2024-01-30 | Basf Se | Compostos, composição, método para combater fungos fitopatogênicos e semente |
| AU2022279357A1 (en) | 2021-05-18 | 2023-11-30 | Basf Se | New substituted pyridines as fungicides |
| KR20240008857A (ko) | 2021-05-18 | 2024-01-19 | 바스프 에스이 | 살진균제로서의 신규한 치환된 피리딘 |
| UY39822A (es) | 2021-06-17 | 2022-12-30 | Pairwise Plants Services Inc | Modificación de factores de transcripción de la familia de factores reguladores del crecimiento en s |
| UY39827A (es) | 2021-06-24 | 2023-01-31 | Pairwise Plants Services Inc | Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento |
| US20230027468A1 (en) | 2021-07-01 | 2023-01-26 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for enhancing root system development |
| EP4119547A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-18 | Basf Se | Triazole compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4380927A1 (en) | 2021-08-02 | 2024-06-12 | Basf Se | (3-pirydyl)-quinazoline |
| JP2024528936A (ja) | 2021-08-02 | 2024-08-01 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | （３－キノリル）－キナゾリン |
| CN118076742A (zh) | 2021-08-12 | 2024-05-24 | 成对植物服务股份有限公司 | 修饰油菜素内酯受体基因以改善产量性状 |
| JP2024529148A (ja) | 2021-08-13 | 2024-08-01 | バイエル、アクチエンゲゼルシャフト | 活性化合物組合せおよびこれらを含む抗真菌剤組成物 |
| CA3229224A1 (en) | 2021-08-17 | 2023-02-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants |
| EP4140986A1 (en) | 2021-08-23 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| CN118103364A (zh) | 2021-08-25 | 2024-05-28 | 拜耳公司 | 作为农药的新的吡嗪基-三唑化合物 |
| EP4140995A1 (en) | 2021-08-27 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| CA3230167A1 (en) | 2021-08-30 | 2023-03-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of ubiquitin binding peptidase genes in plants for yield trait improvement |
| EP4144739A1 (de) | 2021-09-02 | 2023-03-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| AR126938A1 (es) | 2021-09-02 | 2023-11-29 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento |
| EP4151631A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-22 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| CN118382634A (zh) | 2021-09-21 | 2024-07-23 | 成对植物服务股份有限公司 | 用于减少油菜荚果开裂的方法和组合物 |
| MX2024004057A (es) | 2021-10-04 | 2024-04-25 | Pairwise Plants Services Inc | Metodos para mejorar la fertilidad de la flor y el rendimiento de semillas. |
| CN118302434A (zh) | 2021-10-07 | 2024-07-05 | 成对植物服务股份有限公司 | 用于改善小花育性和种子产量的方法 |
| WO2023072670A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x |
| WO2023072671A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix |
| WO2023078915A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds |
| WO2023099445A1 (en) | 2021-11-30 | 2023-06-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds |
| EP4194453A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| AR127904A1 (es) | 2021-12-09 | 2024-03-06 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas |
| EP4198033A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-21 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198023A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-21 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| AR128372A1 (es) | 2022-01-31 | 2024-04-24 | Pairwise Plants Services Inc | Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas |
| AU2023216389A1 (en) | 2022-02-01 | 2024-08-08 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests in cotton |
| WO2023148028A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests |
| WO2023156402A1 (en) | 2022-02-17 | 2023-08-24 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| EP4238971A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-06 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| WO2023168217A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-07 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| CN114774566B (zh) * | 2022-03-04 | 2023-07-07 | 江汉大学 | 检测棉花转基因成分的引物对组合、试剂盒及检测方法 |
| WO2023192838A1 (en) | 2022-03-31 | 2023-10-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Early flowering rosaceae plants with improved characteristics |
| AU2023251095A1 (en) | 2022-04-07 | 2024-10-17 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight |
| WO2023205714A1 (en) | 2022-04-21 | 2023-10-26 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| WO2023215704A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance |
| WO2023213670A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine |
| WO2023213626A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms |
| US20230416767A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-12-28 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits |
| TW202345696A (zh) | 2022-05-18 | 2023-12-01 | 美商科迪華農業科技有限責任公司 | 具有殺有害生物效用之組成物及與其相關的方法 |
| AR129709A1 (es) | 2022-06-27 | 2024-09-18 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos y composiciones para modificar el escape a la sombra en plantas |
| WO2024006792A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024006791A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024028243A1 (en) | 2022-08-02 | 2024-02-08 | Basf Se | Pyrazolo pesticidal compounds |
| WO2024030984A1 (en) | 2022-08-04 | 2024-02-08 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| US20240060081A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024054880A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-14 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield characteristics in plants |
| EP4342885A1 (en) | 2022-09-20 | 2024-03-27 | Basf Se | N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides |
| EP4295688A1 (en) | 2022-09-28 | 2023-12-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combination |
| WO2024068518A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068519A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068517A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068520A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| EP4361126A1 (en) | 2022-10-24 | 2024-05-01 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv |
| WO2024104815A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
| WO2024104818A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
| WO2024104823A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | New substituted tetrahydrobenzoxazepine |
| WO2024104822A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides |
| EP4385326A1 (en) | 2022-12-15 | 2024-06-19 | Kimitec Biogorup | Biopesticide composition and method for controlling and treating broad spectrum of pests and diseases in plants |
| WO2024137438A2 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Insect toxin genes and methods for their use |
| EP4389210A1 (en) | 2022-12-21 | 2024-06-26 | Basf Se | Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2024165343A1 (en) | 2023-02-08 | 2024-08-15 | Basf Se | New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi |
| US20240279673A1 (en) | 2023-02-16 | 2024-08-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants |
| WO2024182658A1 (en) | 2023-03-02 | 2024-09-06 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants |
| WO2024186950A1 (en) | 2023-03-09 | 2024-09-12 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid signaling pathway genes for improving yield traits in plants |
| WO2024194038A1 (en) | 2023-03-17 | 2024-09-26 | Basf Se | Substituted pyridyl/pyrazidyl dihydrobenzothiazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi |
| EP4455137A1 (en) | 2023-04-24 | 2024-10-30 | Basf Se | Pyrimidine compounds for the control of invertebrate pests |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6114138A (en) | 1984-06-04 | 2000-09-05 | Mycogen Plant Science, Inc. | Insecticidal protein fragments |
| US4965188A (en) | 1986-08-22 | 1990-10-23 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme |
| US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| US5176995A (en) | 1985-03-28 | 1993-01-05 | Hoffmann-La Roche Inc. | Detection of viruses by amplification and hybridization |
| US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
| US6040504A (en) * | 1987-11-18 | 2000-03-21 | Novartis Finance Corporation | Cotton promoter |
| US5188960A (en) | 1989-06-27 | 1993-02-23 | Mycogen Corporation | Bacillus thuringiensis isolate active against lepidopteran pests, and genes encoding novel lepidopteran-active toxins |
| US5571937A (en) * | 1994-05-13 | 1996-11-05 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Complementary DNA and toxins |
| US5477263A (en) * | 1994-05-26 | 1995-12-19 | Bell Atlantic Network Services, Inc. | Method and apparatus for video on demand with fast forward, reverse and channel pause |
| ATE276367T1 (de) * | 1996-11-20 | 2004-10-15 | Monsanto Technology Llc | Delta-endotoxine mit breitem spektrum |
| US6162965A (en) * | 1997-06-02 | 2000-12-19 | Novartis Ag | Plant transformation methods |
| US6218188B1 (en) | 1997-11-12 | 2001-04-17 | Mycogen Corporation | Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins |
| AR025349A1 (es) * | 1999-08-23 | 2002-11-20 | Mycogen Corp | Metodos para controlar las plagas del gusano gris |
| US20040123340A1 (en) * | 2000-12-14 | 2004-06-24 | Jill Deikman | Nucleic acid molecules and other molecules associated with plants |
| AU2002215363B2 (en) | 2000-10-25 | 2006-10-12 | Monsanto Technology Llc | Cotton event PV-GHGT07(1445) and compositions and methods for detection thereof |
| WO2002040677A2 (en) * | 2000-11-20 | 2002-05-23 | Monsanto Technology Llc | Cotton event pv-ghbk04 (531) and compositions and methods for detection thereof |
| EG26529A (en) | 2001-06-11 | 2014-01-27 | مونسانتو تكنولوجى ل ل سى | Prefixes for detection of DNA molecule in cotton plant MON15985 which gives resistance to damage caused by insect of squamous lepidoptera |
| US6818807B2 (en) * | 2001-08-06 | 2004-11-16 | Bayer Bioscience N.V. | Herbicide tolerant cotton plants having event EE-GH1 |
| US20040009504A1 (en) | 2001-10-17 | 2004-01-15 | Rangwala Tasneem S. | Cotton event pv-ghgto7(1445) and compositions and methods for detection thereof |
| US20030232410A1 (en) | 2002-03-21 | 2003-12-18 | Monika Liljedahl | Methods and compositions for using zinc finger endonucleases to enhance homologous recombination |
| US7705216B2 (en) | 2002-07-29 | 2010-04-27 | Monsanto Technology Llc | Corn event PV-ZMIR13 (MON863) plants and compositions and methods for detection thereof |
| ES2382804T3 (es) | 2003-02-12 | 2012-06-13 | Monsanto Technology Llc | Evento de algodón MON 88913 y composiciones y procedimientos para su detección |
-
2004
- 2004-10-13 ES ES14198791T patent/ES2743789T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-10-13 AU AU2004318788A patent/AU2004318788B2/en not_active Expired
- 2004-10-13 WO PCT/US2004/033844 patent/WO2005103266A1/en not_active Application Discontinuation
- 2004-10-13 BR BR122015009611A patent/BR122015009611B8/pt active IP Right Grant
- 2004-10-13 EP EP04809955A patent/EP1737964A1/en not_active Ceased
- 2004-10-13 ES ES10015576.1T patent/ES2531980T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-10-13 CN CN2004800425716A patent/CN101027396B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2004-10-13 HU HUE14198791A patent/HUE047016T2/hu unknown
- 2004-10-13 EP EP10015576.1A patent/EP2333082B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-10-13 BR BRPI0418683A patent/BRPI0418683B8/pt active IP Right Grant
- 2004-10-13 US US10/964,838 patent/US7179965B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-10-13 EP EP14198791.7A patent/EP2862934B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-10-22 AR ARP040103858A patent/AR046599A1/es not_active Application Discontinuation
-
2007
- 2007-02-09 US US11/704,418 patent/US7883850B2/en active Active
-
2011
- 2011-02-04 US US13/021,410 patent/US20110191900A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2005103266A1 (en) | 2005-11-03 |
| EP2862934A3 (en) | 2015-07-29 |
| US7883850B2 (en) | 2011-02-08 |
| AU2004318788A1 (en) | 2005-11-03 |
| CN101027396A (zh) | 2007-08-29 |
| BRPI0418683B1 (pt) | 2016-05-17 |
| US20110191900A1 (en) | 2011-08-04 |
| BR122015009611B1 (pt) | 2016-09-06 |
| HUE047016T2 (hu) | 2020-04-28 |
| AU2004318788B2 (en) | 2011-12-22 |
| CN101027396B (zh) | 2011-08-03 |
| BRPI0418683A (pt) | 2007-06-12 |
| EP2333082B1 (en) | 2015-01-07 |
| EP2862934B1 (en) | 2019-05-29 |
| US20050216969A1 (en) | 2005-09-29 |
| EP2862934A2 (en) | 2015-04-22 |
| US20070143876A1 (en) | 2007-06-21 |
| BRPI0418683B8 (pt) | 2022-06-28 |
| ES2531980T3 (es) | 2015-03-23 |
| BR122015009611B8 (pt) | 2022-06-28 |
| AR046599A1 (es) | 2005-12-14 |
| EP1737964A1 (en) | 2007-01-03 |
| US7179965B2 (en) | 2007-02-20 |
| EP2333082A1 (en) | 2011-06-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2743789T3 (es) | Líneas de algodón transgénico Cry1F y Cry1Ac y su identificación específica de evento | |
| US9353381B2 (en) | Cotton event pDAB4468.19.10.3 detection method | |
| ES2903185T3 (es) | Evento de maíz MON 87411 | |
| ES2714432T3 (es) | Evento de soja 9582.814.19.1 resistente a insectos y tolerante a herbicidas | |
| US7642403B2 (en) | Marker mapping and resistance gene associations in soybean | |
| BR102012019436B1 (pt) | método de detecção do evento de soja pdab9582.814.19.1 | |
| AU2013205609B8 (en) | Cotton event pDAB4468.18.07.1 detection method | |
| BR112020021400A2 (pt) | Genes, construtos e evento dp-202216-6 de milho | |
| AU2013205609A1 (en) | Cotton event pDAB4468.18.07.1 detection method | |
| US10561084B2 (en) | Molecular markers for blackleg resistance gene rlm2 in brassica napus and methods of using the same | |
| US10793918B2 (en) | Molecular markers for blackleg resistance in canola and methods of using the same | |
| AU2012201287B2 (en) | Cry1F and CrylAc Transgenic Cotton Lines and Event-Specific Identification Thereof | |
| US20140189907A1 (en) | Transgenic cotton plants related to event 281-24-236 and to event 3006-210-23 | |
| MXPA06011082A (es) | Lineas transgenicas de algodon cry1f y cry1ac e identificacion de las mismas de eventos especificos |