ES2710356T3 - Conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y uso del mismo - Google Patents

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Sung Hee Park
Young Eun Woo
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Abstract

Un conjugado que comprende un derivado de oxintomodulina que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 24, 25 o 26, una región Fc de inmunoglobulina y un polímero no peptidilo, en el que el polímero no peptidilo une covalentemente el derivado de oxintomodulina y la región Fc de inmunoglobulina

Description

DESCRIPCION
Conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y uso del mismo
Campo de la tecnica
La presente invencion se refiere a un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y al uso del mismo. Mas particularmente, la presente invencion se refiere a un conjugado que comprenden oxintomodulina, una region Fc de inmunoglobulina y un polfmero no peptidilo, en el que el conjugado se puede obtener mediante union covalente de la oxintomodulina a la region Fc de inmunoglobulina a traves de un polfmero no peptidilo, y a una composicion farmaceutica para la prevencion o tratamiento de la obesidad que comprende el conjugado.
Antecedentes de la tecnica
Recientemente, el crecimiento economico y los cambios en el estilo de vida estan llevando a cambios en los habitos alimenticios. Las principales causas del aumento de las tasas de sobrepeso y obesidad en las personas contemporaneas son el consumo de alimentos ricos en calonas, como las comidas rapidas, y la falta de ejercicio. La Organizacion Mundial de la Salud (OMS) estima que mas de mil millones de personas en todo el mundo tienen sobrepeso y al menos 300 millones de ellas son clmicamente obesas. En particular, 250.000 personas mueren cada ano en Europa y mas de 2,5 millones de personas en todo el mundo mueren cada ano como resultado del sobrepeso (Organizacion Mundial de la Salud, Estrategia Global sobre la Dieta, Physical Activity and Health, 2004). El sobrepeso y la obesidad aumentan la presion arterial y los niveles de colesterol, lo que provoca la aparicion o exacerbacion de diversas enfermedades, tal como la enfermedad cardiovascular, la diabetes y la artritis, y tambien son las principales causas del aumento de las tasas de incidencia de arteriosclerosis, hipertension, hiperlipidemia o enfermedad cardiovascular en ninos o adolescentes, asf como en adultos.
La obesidad es una afeccion grave que causa diversas enfermedades en todo el mundo. Se piensa que es superada mediante esfuerzos individuales, y tambien se cree que los pacientes obesos carecen de autocontrol. Sin embargo, es diffcil tratar la obesidad, porque la obesidad es un trastorno complejo que implica la regulacion del apetito y el metabolismo energetico. Para el tratamiento de la obesidad, las acciones anormales asociadas con la regulacion del apetito y el metabolismo energetico deben tratarse junto con los esfuerzos de los pacientes obesos. Se han realizado muchos intentos para desarrollar farmacos capaces de tratar las acciones anormales. Como resultado de estos esfuerzos, se han desarrollado farmacos tales como Rimonabant (Sanofi-Aventis), Sibutramin (Abbott), Contrave (Takeda) y Orlistat (Roche), pero tienen las desventajas de efectos indeseables serios o efectos antiobesidad muy debiles. Por ejemplo, se ha notificado que Rimonabant (Sanofi-Aventis) muestra un efecto secundario de trastorno del nervio central, Sibutramine (Abbott) y Contrave (Takeda) muestran efectos secundarios cardiovasculares y Orlistat (Roche) muestra solo 4 kg de perdida de peso cuando se toma durante 1 ano. Desafortunadamente, no hay agentes terapeuticos para la obesidad que puedan prescribirse de forma segura para pacientes obesos.
Se han realizado muchos estudios para desarrollar agentes terapeuticos para la obesidad que no tienen los problemas de los medicamentos convencionales contra la obesidad. Recientemente, se le ha prestado mucha atencion a los derivados del glucagon. El glucagon es producido por el pancreas cuando el nivel de glucosa en la sangre disminuye como resultado de otros medicamentos o enfermedades, deficiencias hormonales o enzimaticas. El glucagon estimula la degradacion del glucogeno en el hngado y facilita la liberacion de glucosa para elevar los niveles de glucosa en sangre a un rango normal. Ademas del efecto de aumentar los niveles de glucosa en sangre, el glucagon suprime el apetito y activa la lipasa sensible a hormonas (HSL) de los adipocitos para facilitar la lipolisis, mostrando de este modo un efecto antiobesidad. Uno de los derivados del glucagon, el peptido 1 similar al glucagon (GLP-1) se esta desarrollando como agente terapeutico para la hiperglucemia en pacientes con diabetes y funciona estimulando la smtesis y secrecion de insulina, inhibiendo la secrecion de glucagon, ralentizando el vaciamiento gastrico, incrementando la utilizacion de la glucosa e inhibiendo la ingesta de alimentos. La exendina-4 se afsla del veneno de lagarto que comparte aproximadamente un 50 % de homologfa de aminoacidos con GLP-1 y tambien se informa que activa el receptor de GLP-1, reduciendo de este modo la hiperglucemia en pacientes con diabetes. Sin embargo, se ha comunicado que los farmacos antiobesidad que contienen GLP-1 presentan efectos secundarios tales como vomitos y nauseas.
Como una alternativa al GLP-1, por lo tanto, se ha prestado mucha atencion a la oxintomodulina, un peptido derivado de un precursor de glucagon, pre-glucagon, que se une a los receptores de dos peptidos, GLP-1 y glucagon. La oxintomodulina representa una potente terapia antiobesidad, porque inhibe la ingesta de alimentos como GLP-1, promueve la saciedad y tiene una actividad lipolftica como el glucagon.
Basado en la funcion dual del peptido oxintomodulina, se ha estudiado activamente como farmaco para el tratamiento de la obesidad. Por ejemplo, la patente coreana n.° 925017 desvela una composicion farmaceutica que incluye oxintomodulina como principio activo para el tratamiento del sobrepeso humano, que se administra por via oral, parenteral, mucosa, rectal, subcutanea o transdermica. Sin embargo, se ha notificado que este farmaco antiobesidad que incluye oxintomodulina, tiene una semivida corta in vivo y una eficacia terapeutica debil, aunque se administre a una dosis alta tres veces al dfa. Por lo tanto, se han realizado muchos esfuerzos para mejorar la semivida in vivo o el efecto terapeutico de la oxintomodulina sobre la obesidad mediante su modificacion.
Por ejemplo, se prepara una oxintomodulina agonista doble (Merck) sustituyendo la L-serina por D-serina en la posicion 2 de la oxintomodulina para aumentar la resistencia a la dipeptidil peptidasa-IV (DPP-IV) y uniendo un resto de colesterol en el extremo C-terminal para aumentar la semivida en sangre al mismo tiempo. ZP2929 (Zealand) se prepara sustituyendo L-serina con D-serina en la posicion 2 para mejorar la resistencia a DPP-IV, sustituyendo la arginina con alanina en la posicion 17 para mejorar la resistencia a la proteasa, sustituyendo metionina con lisina en la posicion 27 para mejorar la estabilidad oxidativa, y sustituyendo glutamina con acido aspartico y alanina en las posiciones 20 y 24 y asparagina con serina en la posicion 28 para mejorar la estabilidad de la desamidacion. Sin embargo, a pesar de que la semivida de la oxintomodulina agonista doble (Merck) se mejoro para mostrar una semivida de 8-12 minutos mas que la de la oxintomodulina nativa, todavfa tiene una semivida in vivo muy corta de 1,7 horas y su dosis de administracion tambien es tan alta como de varios mg/kg. Tambien se han propuesto Otros procedimientos para aumentar la semivida de los farmacos peptfdicos, tales COMO conjugados de PEG o conjugados de PEG-Fc de inmunoglobulina (documento WO 2010/107256 A2). Otros derivados de oxintomodulina para tratar la diabetes y la obesidad se desvelan en el documento WO 2007/100535 A2). Desafortunadamente, La oxintomodulina o sus derivados tienen desventajas en la administracion diaria de dosis altas debido a su corta semivida y baja eficacia.
Divulgacion de la invencion
Problema tecnico
En consecuencia, los presentes inventores han hecho muchos esfuerzos para desarrollar un procedimiento para aumentar la semivida en sangre de la oxintomodulina mientras mantienen su actividad in vivo. Como resultado, descubrieron que un conjugado preparado mediante la union de un vehfculo a la oxintomodulina utilizando un polfmero no peptidilo muestra una semivida en sangre mejorada, al tiempo que mantiene la actividad in vivo para mostrar excelentes efectos antiobesidad, completando de esta forma la presente invencion.
Solucion al problema
Un objeto de la presente invencion es proporcionar un conjugado que comprende un derivado de oxintomodulina que comprende la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 24, 25 o 26, una region Fc de inmunoglobulina y un polfmero no peptidilo en el que el polfmero no peptidilo se une covalentemente al derivado de oxintomodulina y a la region Fc de inmunoglobulina.
Otro objeto de la presente invencion es proporcionar una composicion farmaceutica para la prevencion o el tratamiento de la obesidad, que comprende los conjugados.
Aun otro objeto de la presente invencion es proporcionar dicho conjugado o dicha composicion farmaceutica para su uso en la prevencion o el tratamiento de la obesidad.
Los objetos adicionales de la presente invencion se encuentran en las reivindicaciones dependientes.
Efectos ventajosos de la invencion
El conjugado que comprende oxintomodulina y la Fc de inmunoglobulina de la presente invencion reduce la ingesta de alimentos, suprime el vaciamiento gastrico y facilita la lipolisis sin efectos secundarios, a diferencia de la oxintomodulina nativa, y tambien muestra excelentes efectos activadores de receptores y sostenibilidad a largo plazo, en comparacion con oxintomodulina. Por lo tanto, puede utilizarse ampliamente en el tratamiento de la obesidad con seguridad y eficacia. A diferencia de la oxintomodulina nativa, el nuevo peptido de la presente invencion reduce la ingesta de alimentos, suprime el vaciamiento gastrico y facilita la lipolisis sin efectos secundarios, y tambien muestra excelentes efectos de activacion del receptor. Por lo tanto, puede utilizarse ampliamente en el tratamiento de la obesidad con seguridad y eficacia. Los conjugados que comprenden derivados de oxintomodulina de acuerdo con la presente invencion son los que se refieren a las SEQ ID NO: 24, 25 y 26. Otros derivados o variantes de oxintomodulina que se presentan son solo por referencia.
Breve descripcion de los dibujos
La figura 1 es una grafica que muestra los cambios en la ingesta de alimentos de acuerdo con la administracion de la dosis de oxintomodulina o de un derivado de oxintomodulina.
La figura 2a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de oxintomodulina mono-PEGilada a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
La figura 2b es una grafica que muestra el resultado del mapeo de peptidos de oxintomodulina mono-PEGilada purificada.
La figura 2c es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen oxintomodulina y Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE 15Q.
La figura 3a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina monoPEGilada (SEQ ID NO. 29) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
La figura 3b es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE 15Q.
La figura 4a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 30) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
La figura 4b es una grafica que muestra el resultado del mapeo de peptidos de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 30).
La figura 4c es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE 15Q.
La figura 5a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 31) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
La figura 5b es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE 15Q.
La figura 6a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 2) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
La figura 6b es una grafica que muestra el resultado del mapeo de peptidos de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 2).
La figura 6c es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE 15Q.
La figura 6d es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion Source ISO.
La figura 7a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 3) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
La figura 7b es una grafica que muestra el resultado del mapeo de peptidos de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 3).
La figura 7c es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion Butilo FF.
La figura 7d es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y una region Fc de inmunoglobulina mediante una columna de purificacion Source 15Q.
La figura 8a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO 23) a traves de una columna de purificacion SOURCE S;
La figura 8b es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y una region Fc de inmunoglobulina mediante una columna de purificacion Source 15Q;
La figura 8c es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE ISO;
La figura 9a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO 24) a traves de una columna de purificacion SOURCE S;
La figura 9b es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y una region Fc de inmunoglobulina mediante una columna de purificacion Source 15Q;
La figura 9c es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE ISO;
La figura 10a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO 25) a traves de una columna de purificacion SOURCE S;
La figura 10b es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y una region Fc de inmunoglobulina mediante una columna de purificacion Source 15Q;
La figura 10c es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE ISO;
La figura 11a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO 28) a traves de una columna de purificacion SOURCE S;
La figura 11b es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y una region Fc de inmunoglobulina mediante una columna de purificacion Source 15Q;
La figura 11c es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE ISO;
La figura 12 es una grafica que muestra los cambios en el peso corporal de los ratones de acuerdo con el tipo y la dosis de administracion de los conjugados derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina.
La figura 13 es una grafica que muestra los cambios en el peso corporal de los ratones de acuerdo con el tipo y la dosis de administracion de los conjugados derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina.
Mejor modo para llevar a cabo la invencion
En un aspecto para lograr los objetos anteriores, la presente invencion proporciona un conjugado que comprende oxintomodulina, una region Fc de inmunoglobulina y un polfmero no peptidilo, en el que el conjugado se puede obtener mediante union covalente de la oxintomodulina a la region Fc de inmunoglobulina a traves de un polfmero no peptidilo.
Como se utiliza en el presente documento, el termino "conjugado" significa un conjugado que comprende oxintomodulina y otros factores. Otros factores pueden ser cualquier sustancia que pueda inducir una mayor estabilidad en la sangre, suspender la emision a traves del rinon u otros efectos utiles. En la presente invencion, los factores pueden ser la region Fc de inmunoglobulina. Preferentemente, el conjugado puede estar compuesto por una oxintomodulina y una region Fc de inmunoglobulina, que estan unidas por un polfmero no peptidilo. El polfmero no peptidilo puede enlazar una oxintomodulina y una region Fc de inmunoglobulina a traves de enlaces covalentes. Dos extremos terminales del polfmero no peptidilo se pueden unir a un grupo amina o grupo tiol de la region Fc de inmunoglobulina y derivados de oxintomodulina, respectivamente.
El conjugado de la presente invencion significa tener una duracion mejorada in vivo de la eficacia, en comparacion con la oxintomodulina nativa, y el conjugado de accion prolongada puede incluir oxintomodulina preparada mediante modificacion, sustitucion, adicion o delecion de las secuencias de aminoacidos de la oxintomodulina nativa, oxintomodulina conjugada con un polfmero biodegradable, tal como polietilenglicol (PEG), oxintomodulina conjugada con una protema de accion prolongada, tal como albumina o inmunoglobulina, oxintomodulina conjugada a acido graso que tiene la capacidad de unirse a la albumina en el cuerpo u oxintomodulina encapsulada en nanopartfculas biodegradables, pero el tipo de conjugado de accion prolongada no esta limitado al mismo.
El termino "oxintomodulina" significa un peptido derivado de un precursor de glucagon, pre-glucagon, e incluye una oxintomodulina nativa, precursores, derivados, fragmentos de los mismos y variantes de los mismos. Por ejemplo, puede tener la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO. 1 (HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA).
La expresion, "variante de oxintomodulina" es un peptido que tiene una o mas secuencias de aminoacidos diferentes de las de la oxintomodulina nativa y significa un peptido que conserva la funcion de activar los receptores de GLP-1 y glucagon, y puede prepararse mediante uno de sustitucion, adicion, delecion y modificacion o por una combinacion de los mismos en una parte de las secuencias de aminoacidos de la oxintomodulina nativa.
La expresion, "derivado de oxintomodulina" incluye peptidos, derivados peptfdicos o mimeticos de peptidos que se preparan mediante adicion, delecion o sustitucion de aminoacidos de oxintomodulina para activar tanto el receptor de GLP-1 como el receptor de glucagon en un nivel alto, en comparacion con la oxintomodulina nativa.
La expresion, "fragmento de oxintomodulina" significa un fragmento que tiene uno o mas aminoacidos anadidos o delecionados en el extremo N-terminal o el extremo C-terminal de la oxintomodulina nativa, a la que se pueden anadir aminoacidos no naturales (por ejemplo, aminoacidos de tipo D) y tiene la funcion de activar tanto el receptor de GLP-1 como el receptor de glucagon.
Cada uno de los procedimientos de preparacion para las variantes, derivados y fragmentos de oxintomodulina se pueden usar individualmente o en combinacion. Por ejemplo, la presente invencion incluye un peptido que tiene uno o mas aminoacidos diferentes de los del peptido nativo y la desaminacion del resto de aminoacido N-terminal y tiene la funcion de activar tanto el receptor de GLP-1 como el receptor de glucagon.
Los aminoacidos mencionados en el presente documento se abrevian de acuerdo con las normas de la IUPAC-IUB tal como sigue:
Alanina A Arginina R
Asparagina N Acido Aspartico D
Cistema C Acido Glutamico E
Glutamina Q Glicina G
Histidina H Isoleucina I
Leucina L Lisina K
Metionina M Fenilalanina F
Prolina P Serina S
Treonina T Triptofano W
Tirosina Y Valina V
Se muestran peptidos de oxintomodulina que se preparan mediante sustituciones, adiciones, deleciones o modificaciones postraduccionales (por ejemplo, metilacion, acilacion, ubiquitinacion, enlace covalente intramolecular) en la secuencia de (HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA, SEQ ID NO. 1) para activar los receptores de glucagon y de GLP-1 al mismo tiempo. Tras la sustitucion o adicion de aminoacidos, puede usarse cualquiera de los 20 aminoacidos que se encuentran habitualmente en las protemas humanas, as ^ como aminoacidos atipicos o no naturales. Las fuentes de aminoacidos atfpicos disponibles comercialmente incluyen Sigma-Aldrich, ChemPep Inc. y Genzyme Pharmaceuticals. Los peptidos que incluyen estos aminoacidos y secuencias peptfdicas atfpicas se pueden sintetizar y comprar a proveedores comerciales, por ejemplo, American Peptide Company o Bachem (EE.UU.) o Anygen (Corea).
Por ejemplo, El derivado de oxintomodulina incluye los aminoacidos de la siguiente formula 1.
R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2 (Formula 1)
en la que R1 es histidina, desamino-histidilo, dimetil-histidilo (N-dimetil-histidilo), beta-hidroxiimidazopropionilo, 4-imidazoacetilo, beta-carboxi imidazopropionilo o tirosina;
XI es Aib (acido aminoisobutmco), D-alanina, glicina, Sar(N-metilglicina), serina o D-serina;
X2 es acido glutamico o glutamina;
X3 es leucina o tirosina;
X4 es serina o alanina;
X5 es lisina o arginina;
X6 es glutamina o tirosina;
X7 es leucina o metionina;
X8 es acido aspartico o acido glutamico;
X9 es acido glutamico, serina, acido alfa-metil-glutamico o se deleciona;
X10 es glutamina, acido glutamico, lisina, arginina, serina o se deleciona;
X II es alanina, arginina, valina o se deleciona;
X12 es alanina, arginina, serina, valina o se deleciona;
X13 es lisina, glutamina, arginina, acido alfa-metil-glutamico o se deleciona;
X14 es acido aspartico, acido glutamico, leucina o se deleciona;
X15 es fenilalanina o se deleciona;
X16 es isoleucina, valina o se deleciona;
X17 es alanina, cistema, acido glutamico, lisina, glutamina, acido alfa-metil-glutamico o se deleciona;
X18 es triptofano o se deleciona;
X19 es alanina, isoleucina, leucina, serina, valina o se deleciona;
X20 es alanina, lisina, metionina, glutamina, arginina o se deleciona;
X21 es asparagina o se deleciona;
X22 es alanina, glicina, treonina o se deleciona;
X23 es cistema, lisina o se deleciona;
X24 es un peptido que tiene de 2 a 10 aminoacidos que consiste en combinaciones de alanina, glicina y serina, o se deleciona; y
R2 es KRNRNNIA (SEQ ID NO. 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO. 36), GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO. 37), HSQGTFTSDYSKYLD (SEQ ID NO. 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEQ ID NO. 39), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID NO. 40) o se deleciona (se excluye si la secuencia de aminoacidos de Formula 1 es identica a la de la SEQ ID NO. 1).
Con el fin de mejorar la actividad de la oxintomodulina de tipo salvaje para el receptor de glucagon y el receptor de GLP-1, el peptido puede estar sustituido con 4-imidazoacetilo, en el que el carbono alfa de la histidina en la posicion 1 de la secuencia de aminoacidos representada por la SEQ ID NO. 1 se deleciona, desamino-histidilo en el que se deleciona el grupo amino N-terminal, dimetil-histidilo (N-dimetil-histidilo) donde el grupo amino N-terminal se modifica con dos grupos metilo, beta-hidroxi imidazopropionilo en el que el grupo amino N-terminal esta sustituido con un grupo hidroxilo, o beta-carboxi imidazopropionilo en el que el grupo amino N-terminal esta sustituido con un grupo carboxilo. Ademas, la region de union al receptor de GLP-1 puede estar sustituida con aminoacidos que mejoran los enlaces hidrofobos e ionicos o combinaciones de los mismos. Una parte de la secuencia de oxintomodulina puede estar sustituida con la secuencia de aminoacidos de GLP-1 o exendina-4 para mejorar la actividad en el receptor de GLP-1.
Ademas, una parte de la secuencia de oxintomodulina puede estar sustituida por una secuencia que estabiliza la helice alfa. Los aminoacidos en las posiciones 10, 14, 16, 20, 24 y 28 de la secuencia de aminoacidos de la Formula 1 pueden estar sustituidos con aminoacidos o derivados de aminoacidos que consisten en Tyr (4-Me), Phe, Phe(4-Me), Phe(4-Cl), Phe(4-CN), Phe(4-NO2), Phe(4-NH2), Phg, Pal, Nal, Ala (2-tienilo) y Ala (benzotienilo) que se sabe que estabilizan la helice alfa, y no hay limitaciones en cuanto al tipo y numero de aminoacidos estabilizantes de la alfa-helice o derivados de aminoacidos que van a insertar. Asimismo, los aminoacidos en las posiciones 10 y 14, 12 y 16, 16 y 20, 20 y 24, y 24 y 28 tambien pueden estar sustituidos con acido glutamico o lisina, respectivamente, para formar anillos, y no hay limitacion en el numero de anillos que se van a insertar. Se muestran los peptidos que tienen una secuencia de aminoacidos seleccionada de las siguientes formulas 1 a 6.
Tambien se muestra un derivado de oxintomodulina que incluye la secuencia de aminoacidos de la siguiente Formula 2, en la que la secuencia de aminoacidos de oxintomodulina esta sustituida con la de exendina o GLP-1.
R1-A-R3 (Formula 2)
Tambien se describe un peptido que incluye la secuencia de aminoacidos de la siguiente Formula 3, que se prepara uniendo una parte de la secuencia de aminoacidos de la oxintomodulina y una parte de la secuencia de aminoacidos de la exendina o GLP-1 a traves de un enlazador de aminoacidos adecuado.
R1-B-C-R4 (Formula 3)
Un derivado de oxintomodulina adicional incluye la secuencia de aminoacidos de la siguiente formula 4, en la que una parte de la secuencia de aminoacidos de la oxintomodulina esta sustituida con un aminoacido capaz de mejorar la afinidad de union al receptor de GLP-1, por ejemplo, Leu en la posicion 26 que se une con el receptor de GLP-1 por interaccion hidrofoba se sustituye por el residuo hidrofobo, Ile o Val.
R1-SQGTFTSDYSKYLD-D1-D2-D3-D4-D5-LFVQW-D6-D7-N-D8-R3 (Formula 4) Tambien se describe un derivado de oxintomodulina que incluye la siguiente formula 5, en la que una parte de la secuencia de aminoacidos se deleciona, se anade o se sustituye por otro aminoacido para mejorar las actividades de la oxintomodulina nativa en el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagon.
R1-E1-QGTFTSDYSKYLD-E2-E3-RA-E4-E5-FV-E6-WLMNT-E7-R5 (Formula 5)
En las formulas 2 a 5, R1 es el mismo que en la descripcion de la Formula 1;
A se selecciona del grupo que consiste en SQGTFTSDYSKYLDSRRAQD-FVQWLMNT (SEQ ID NO. 41), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT (SEQ ID NO. 42), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT (SEQ ID NO. 43), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO. 44), GQGTFTSDYS-RQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO. 45), GEGTFTSDL-SRQMEEEAVRLFIEWAA (SEQ ID NO. 46) y SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG (SEQ ID NO. 47);
B se selecciona del grupo que consiste en SQGTFTSDYSKYLDSRRAQD-FVQWLMNT (SEQ ID NO. 41), SQGTFTSDYSKYLDEEAVRLFIEWLMNT (SEQ ID NO. 42), SQGTFTSDYSKYLDERRAQDFVAWLKNT (SEQ ID NO. 43), GQGTFTSDYSRYLEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO. 44), GQGTFTSDYS-RQMEEEAVRLFIEWLKNG (SEQ ID NO. 45), GEGTFTSDL-SRQMEEEAVRLFIEWAA (SEQ ID NO. 46), SQGTFTSDYSRQMEEEAVRLFIEWLMNG (SEQ ID NO. 47), GEGTFTSDLSRQMEEEAVRLFIEW (SEQ ID NO. 48) y SQGTFTSDYSRYLD (SEQ ID NO. 49);
C es un peptido que tiene de 2 a 10 aminoacidos que consiste en combinaciones de alanina, glicina y serina;
D1 es serina, acido glutamico o arginina;
D2 es arginina, acido glutamico o serina;
D3 es arginina, alanina o valina;
D4 es arginina, valina o serina;
D5 es glutamina, arginina o lisina;
D6 es isoleucina, valina o serina;
D7 es metionina, arginina o glutamina;
D8 es treonina, glicina o alanina;
E1 es serina, Aib, Sar, d-alanina o d-serina;
E2 es serina o acido glutamico;
E3 es arginina o lisina;
E4 es glutamina o lisina;
E5 es acido aspartico o acido glutamico;
E6 es glutamina, cistema o lisina;
E7 es cistema, lisina o se deleciona;
R3 es KRNRNNIA (SEQ ID NO. 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO. 36) o GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO. 37);
R4 es HSQGTFTSDYSKYLD (SEQ ID NO. 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEQ ID NO. 39) o HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID NO. 40); y,
R5 es KRNRNNIA (SEQ ID NO. 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO. 36), GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO. 37) o se deleciona (se excluye si la secuencia de aminoacidos de las Formulas 2 a 5 es identica a la de la SEQ ID NO. 1). Otro derivado de oxintomodulina descrito es de la siguiente Formula 6.
R1-X1-X2-GTFTSD-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-R2 (Formula 6)
en la que R1 es histidina, desamino-histidilo, 4-imidazoacetilo o tirosina;
X1 es Aib (acido aminoisobutmco), glicina o serina;
X2 es acido glutamico o glutamina;
X3 es leucina o tirosina;
X4 es serina o alanina;
X5 es lisina o arginina;
X6 es glutamina o tirosina;
X7 es leucina o metionina;
X8 es acido aspartico o acido glutamico;
X9 es acido glutamico, acido alfa-metil-glutamico o se deleciona;
X10 es glutamina, acido glutamico, lisina, arginina o se deleciona;
X11 es alanina, arginina o se deleciona;
X12 es alanina, valina o se deleciona;
X13 es lisina, glutamina, arginina, acido alfa-metil-glutamico o se deleciona;
X14 es acido aspartico, acido glutamico, leucina o se deleciona;
X15 es fenilalanina o se deleciona;
X16 es isoleucina, valina o se deleciona;
X17 es alanina, cistema, acido glutamico, glutamina, acido alfa-metil-glutamico o se deleciona;
X18 es triptofano o se deleciona;
X19 es alanina, isoleucina, leucina, valina o se deleciona;
X20 es alanina, lisina, metionina, arginina o se deleciona;
X21 es asparagina o se deleciona;
X22 es treonina o se deleciona;
X23 es cistema, lisina o se deleciona;
X24 es un peptido que tiene de 2 a 10 aminoacidos que consisten en glicina o se deleciona; y
R2 es KRNRNNIA (SEQ ID NO. 35), GPSSGAPPPS (SEQ ID NO. 36), GPSSGAPPPSK (SEQ ID NO. 37), HSQGTFTSDYSKYLD (SEQ ID NO. 38), HSQGTFTSDYSRYLDK (SEQ ID NO. 39), HGEGTFTSDLSKQMEEEAVK (SEQ ID NO. 40) o se deleciona (se excluye si la secuencia de aminoacidos de Formula 6 es identica a la de la SEQ ID NO. 1)
El derivado de oxintomodulina descrito en el presente documento tambien es uno de los peptidos de las SEQ ID NO.
2 a 34. Esto se detalla adicionalmente en la Tabla 1 del Ejemplo 2-1. De estos ultimos derivados de oxintomodulina, los de las SEQ ID NO: 24, 25 y 26 son parte de la invencion.
La oxintomodulina tiene las actividades de dos peptidos, GLP-1 y glucagon. GLP-1 disminuye el nivel de glucosa en sangre, reduce la ingesta de alimentos y suprime el vaciamiento gastrico, y el glucagon aumenta el nivel de glucosa en sangre, facilita la lipolisis y disminuye el peso corporal al aumentar los metabolismos energeticos. Los diferentes efectos biologicos de los dos peptidos pueden causar efectos no deseados como aumentar la glucosa en sangre si el glucagon muestra un efecto mas dominante que el GLP-1, o causar nauseas y vomitos si el GLP-1 muestra un efecto mas dominante que el glucagon. Por ejemplo, el conjugado que se produjo en el Ejemplo 10 a continuacion mostro una mayor afinidad por el receptor de GLP-1 que el producido en el Ejemplo 12, pero la eficacia del primero fue menor que la del ultimo, como se muestra en el experimento in vivo en el Ejemplo 18. Esto podna deberse a la mayor eficacia de los conjugados en relacion con el receptor de glucagon en el Ejemplo 12 a pesar de su baja eficacia en relacion con el receptor de GLP-1. Por lo tanto, los derivados de oxintomodulina y sus conjugados de la presente invencion no estan limitados a aquellos derivados que muestran un aumento incondicional de las actividades. Por ejemplo, los aminoacidos pueden modificarse en las posiciones 1 y 11 de la oxintomodulina, que se sabe que suprimen la actividad del glucagon, que controlan la relacion de actividad entre el glucagon y el GLP-1.
Los conjugados de la presente invencion pueden inducir una mayor estabilidad en sangre, suspender la emision a traves del rinon y cambiar la afinidad a los receptores uniendo un vetnculo a la oxintomodulina a traves de un enlace covalente o formando una microesfera. El vetnculo que puede formar un conjugado que contiene oxintomodulina se puede seleccionar del grupo que consiste en albumina, transferrina, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, elastina, heparina, polisacarido, tal como quitina, fibronectina y, mas favorablemente, la region Fc de inmunoglobulina, todo lo cual puede aumentar la semivida en sangre de los conjugados cuando se unen a la oxintomodulina.
La expresion "region Fc de inmunoglobulina" como se utiliza en el presente documento, se refiere a una protema que contiene la region constante 2 de la cadena pesada (CH2) y a la region constante 3 de la cadena pesada (CH3) de una inmunoglobulina, excluyendo las regiones variables de las cadenas pesada y ligera, la region constante 1 de la cadena pesada (CH1) y la region constante 1 de la cadena ligera (CL1) de la inmunoglobulina. Puede incluir ademas una region de bisagra en la region constante de la cadena pesada. Asimismo, la region Fc de inmunoglobulina de la presente invencion puede contener una parte o la totalidad de la region Fc, incluida la region constante de la cadena pesada 1 (CH1) y/o la region constante de la cadena ligera 1 (CL1), excepto las regiones variables de la cadenas pesadas y ligeras, siempre que tenga una funcion fisiologica sustancialmente similar o mejor que el de la protema nativa. Asimismo, la region Fc de inmunoglobulina puede ser un fragmento que tiene una delecion en una parte relativamente larga de la secuencia de aminoacidos de CH2 y/o CH3. Es decir, la region Fc de inmunoglobulina de la presente invencion puede comprender 1) un dominio CH1, un dominio CH2, un dominio CH3 y un dominio CH4, 2) un dominio CH1 y un dominio CH2, 3) un dominio CH1 y un dominio CH3, 4) un dominio CH2 y un dominio CH3, 5) una combinacion de uno o mas dominios y una region de bisagra de inmunoglobulina (o una parte de la region de bisagra) y 6 ) un dfmero de cada dominio de las regiones constantes de la cadena pesada y la region constante de la cadena ligera.
La region Fc de inmunoglobulina de la presente invencion incluye una secuencia de aminoacidos nativa y un derivado de secuencia (mutante) de la misma. Un derivado de la secuencia de aminoacidos tiene una secuencia que es diferente de la secuencia de aminoacidos nativa debido a una delecion, una insercion, una sustitucion no conservadora o conservadora o combinaciones de las mismas de uno o mas restos de aminoacidos. Por ejemplo, en una Fc de IgG, los restos de aminoacidos conocidos por ser importantes en la union, en las posiciones 214 a 238, 297 a 299, 318 a 322 o 327 a 331, se pueden usar como una diana adecuada para la modificacion.
Asimismo, son posibles otros varios derivados, incluyendo uno en el que se deleciona una region capaz de formar un enlace disulfuro, o se eliminan ciertos to en el extremo N-terminal de una forma de Fc nativa o se anade un residuo de metionina a la misma. Ademas, para eliminar las funciones efectoras, se puede producir una delecion en un sitio de union del complemento, tal como un sitio de union a C1q y un sitio de CDDA (citotoxicidad mediada por celulas dependiente de anticuerpos). Las tecnicas para preparar dichos derivados de la secuencia de la region Fc de inmunoglobulina se desvelan en los documentos WO 97/34631 y WO 96/32478.
En la materia se conocen intercambios de aminoacidos en protemas y peptidos, que generalmente no alteran la actividad de las protemas o peptidos (H. Neurath, R. L. Hill, The Proteins, Academic Press, Nueva York, 1979). Los intercambios que se producen mas habitualmente son Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu y Asp/Gly, en ambas direcciones. Ademas, la region Fc, si se desea, se puede modificar mediante fosforilacion, sulfatacion, acrilacion, glucosilacion, metilacion, farnesilacion, acetilacion, amidacion, y similares.
Los derivados de Fc mencionados anteriormente son derivados que tienen una actividad biologica identica a la de la region Fc de la presente divulgacion o una mejor estabilidad estructural, por ejemplo, contra el calor, pH o similares. Ademas, estas regiones Fc se pueden obtener a partir de formas nativas aisladas de seres humanos y otros animales, incluyendo vacas, cabras, cerdos, ratones, conejos, hamsteres, ratas y cobayas, o pueden ser recombinantes o derivados de los mismos, obtenidos de celulas animales transformadas o microorganismos. En el presente documento, se pueden obtener a partir de una inmunoglobulina nativa mediante el aislamiento de las inmunoglobulinas enteras de los organismos humanos o animales y, despues, el tratamiento de los mismos con una enzima proteolftica. La papama digiere la inmunoglobulina nativa en las regiones Fab y Fc, y el tratamiento con pepsina da como resultado la produccion de fragmentos pF'c y F (ab)2. Estos fragmentos pueden someterse a, por ejemplo, cromatograffa de exclusion por tamano para aislar los fragmentos Fc o pF'c'. Preferentemente, una region Fc derivada de ser humano es una region Fc de inmunoglobulina recombinante que se obtiene a partir de un microorganismo.
Ademas, la region Fc de inmunoglobulina de la presente invencion puede estar en forma de tener cadenas de azucar nativas, aumento de cadenas de azucar en comparacion con una forma nativa o disminucion de las cadenas de azucar en comparacion con la forma nativa, o pueden estar en una forma desglicosilada. El aumento, disminucion o eliminacion de las cadenas de azucar de la Fc de inmunoglobulina puede conseguirse mediante procedimientos convencionales usados en la tecnica, tales como un procedimiento qmmico, un procedimiento enzimatico, y un procedimiento de ingeniena genetica utilizando un microorganismo. La eliminacion de las cadenas de azucar de una region Fc produce una fuerte disminucion de la afinidad de union a la parte C1q del primer componente del complemento C1 y una disminucion o perdida de la citotoxicidad mediada por celulas dependiente de anticuerpos o la citotoxicidad dependiente del complemento, con lo que no se incluyen respuestas inmunitarias innecesarias in vivo. En este aspecto, una region Fc de inmunoglobulina en una forma desglicosilada o aglicosilada puede ser mas adecuada para el objeto de la presente invencion como vehmulo de farmacos.
Como se utiliza en el presente documento, el termino "desglicosilacion" se refiere a eliminar enzimaticamente restos de azucar de una region Fc y el termino "aglicosilacion" significa que una region Fc se produce en una forma no glicosilada en un procariota, preferentemente E. coli.
Mientras tanto, la region Fc de inmunoglobulina puede derivar de seres humanos u otros animales, incluidas vacas, cabras, cerdos, ratones, conejos, hamsteres, ratas y cobayas, y, preferentemente, de seres humanos.
Ademas, la region Fc de inmunoglobulina puede ser una region Fc que deriva de IgG, IgA, IgD, IgE e IgM, o que se hace por combinaciones de los mismos o sus hubridos. Preferentemente, deriva de IgG o IgM, que estan entre las protemas mas abundantes en la sangre humana y, de la forma mas preferente, de IgG, que se sabe que potencia la semivida de las protemas de union a ligando.
Por otro lado, el termino "combinacion", como se utiliza en el presente documento, significa que los polipeptidos que codifican regiones Fc de inmunoglobulina de cadena sencilla del mismo origen estan unidos a un polipeptido de cadena simple de un origen diferente para formar un dfmero o multimero. Es decir, se puede formar un dfmero o multimero a partir de dos o mas fragmentos seleccionados del grupo que consiste en los fragmentos Fc de IgG, Fc de IgA, Fc de IgM, Fc de IgM, Fc de IgD Fc y Fc de IgE.
La expresion "polfmero no peptidilo", se refiere a un polfmero biocompatible que incluye dos o mas unidades que se repiten unidas entre sf mediante cualquier enlace covalente con exclusion de un enlace peptfdico. En la presente invencion, el polfmero no peptidilo se puede usar indistintamente con el enlazador no peptidilo.
El poftmero no peptidilo util en la presente invencion puede seleccionarse del grupo que consiste en un poftmero biodegradable, un poftmero lipfdico, quitina, acido hialuronico y una combinacion de los mismos, y preferentemente, el poftmero biodegradable puede ser polietilenglicol, polipropilenglicol, un copoftmero de etilenglicol-propilenglicol, poliol polioxietilado, alcohol polivimlico, polisacarido, dextrano, eter poliviniletflico, acido polilactico (PLA) o acido polilactico-glicolico (PLGA) y, mas preferentemente, es polietilenglicol (PEG). Ademas, los derivados de los mismos conocidos en la tecnica y los derivados que se preparan facilmente mediante un procedimiento conocido en la tecnica pueden incluirse en el ambito de la presente invencion.
El enlazador pepftdico que se utiliza en la protema de fusion obtenida mediante un procedimiento de fusion dentro del marco convencional tiene inconvenientes en cuanto a que se puede escindir facilmente in vivo mediante una enzima proteolftica y, por lo tanto, no se puede obtener un efecto suficiente de aumentar la semivida en suero del farmaco activo por una vehftculo como se esperaba. Sin embargo, en la presente invencion, el poftmero que tiene resistencia a la enzima proteolftica puede usarse para mantener la semivida en suero del peptido similar a la del vehftculo. Por lo tanto, se puede usar cualquier poftmero no peptidilo sin limitaciones, siempre que se trate de un poftmero que tenga la funcion mencionada anteriormente, es decir, un poftmero con resistencia a la enzima proteolftica in vivo. El poftmero no peptidilo tiene un peso molecular en el intervalo de 1 a 100 kDa y, preferentemente, de 1 a 20 kDa. El poftmero no peptidilo de la presente invencion, unido a la region Fc de inmunoglobulina, puede ser un poftmero o una combinacion de diferentes tipos de poftmeros.
El poftmero no peptidilo usado en la presente invencion tiene un grupo reactivo capaz de unirse a la region Fc de inmunoglobulina y al farmaco proteico. El poftmero no peptidilo tiene un grupo reactivo en ambos extremos, que se selecciona, preferentemente, del grupo que consiste en un grupo aldehftdo reactivo, un propionaldehftdo, un butiraldehftdo, una maleimida y un derivado de succinimida. El derivado de succinimida puede ser propionato de succinimidilo, carbonato de hidroxisuccinimidilo, de succinimidilcarboximetilo o de succinimidilo. En particular, cuando el poftmero no peptidilo tiene un grupo reactivo en ambos extremos, es eficaz en la union en ambos extremos con un polipeptido activo y una inmunoglobulina con las reacciones no espedficas mmimas. Un producto final generado mediante alquilacion reductora por un enlace aldetftdo es mucho mas estable que el unido por un enlace amida. El grupo reactivo aldetftdo se une de forma selectiva a un extremo N-terminal a un pH bajo y se une a un residuo de lisina para formar un enlace covalente a un pH alto, tal como un pH de 9,0. Los grupos reactivos en ambos extremos del poftmero no peptidilo pueden ser iguales o diferentes. Por ejemplo, el poftmero no peptidilo puede poseer un grupo maleimida en un extremo y un grupo aldehftdo, un grupo propionaldehftdo o un grupo butiraldehftdo en el otro extremo. Cuando un polietilenglicol que tiene un grupo hidroxi reactivo en ambos extremos del mismo se usa como el poftmero no peptidilo, el grupo hidroxi puede activarse para diversos grupos reactivos mediante reacciones qrnmicas conocidas, o un polietilenglicol que tiene un grupo reactivo modificado disponible en el mercado puede usarse para preparar el conjugado de accion larga de la presente invencion.
El conjugado de la presente invencion, puede ser aquel en el que los dos extremos del poftmero no peptidilo que tiene dos grupos terminales reactivos estan unidos a un grupo amina o grupo tiol de la region Fc de inmunoglobulina y derivados de oxintomodulina, respectivamente.
El poftmero no peptidilo tiene un grupo reactivo en ambos extremos, que se selecciona, preferentemente, del grupo que consiste en un grupo reactivo aldehftdo, un grupo propionaldehftdo, un grupo butiraldehftdo, un grupo maleimida, y un derivado de succinimida. El derivado de succinimida puede ser propionato de succinimidilo, carbonato de hidroxisuccinimidilo, de succinimidilcarboximetilo o de succinimidilo.
Los dos grupos terminales reactivos del poftmero no peptidilo pueden ser iguales o diferentes entre sft Por ejemplo, el poftmero no pepftdico puede poseer un grupo maleimida en un extremo y un grupo aldehftdo, un grupo propionaldehftdo o un grupo butiraldehftdo en el otro extremo. Por ejemplo, cuando el poftmero no peptidilo tiene un grupo aldehftdo reactivo en un grupo terminal y un grupo maleimida en el otro grupo terminal, es eficaz en la union en ambos extremos con un polipeptido activo y una inmunoglobulina con las reacciones no espedficas mmimas. Segun ejemplos de la presente invencion, los conjugados se prepararon uniendo la oxintomodulina o derivado de la misma y la region Fc de inmunoglobulina mediante un enlace covalente utilizando PEG, que es un poftmero no peptidilo que incluye el grupo propionaldehftdo solo o el grupo maleimida y el grupo aldehftdo.
Los conjugados de la presente invencion muestran una excelente actividad sobre el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagon, en comparacion con la oxintomodulina nativa, y la semivida en sangre aumenta al unirse con la region
Fc para mantener la actividad in vivo durante un largo penodo de tiempo.
En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona una composicion farmaceutica para la prevencion o el tratamiento de la obesidad, que comprende el peptido.
Como se utiliza en el presente documento, el termino "prevencion" significa todas las acciones por las cuales se restringe o retrasa la aparicion de la enfermedad. En la presente invencion, "prevencion" significa que la aparicion de obesidad por factores tales como un aumento en el peso corporal o la grasa corporal se ve restringida o retardada por la administracion de los conjugados de la presente invencion.
Como se utiliza en el presente documento, el termino "tratamiento" significa todas las acciones por las cuales los smtomas de la enfermedad se han aliviado, mejorado o recuperado. En la presente invencion, "tratamiento" significa que los smtomas de la obesidad se alivian, mejoran o recuperan mediante la administracion de los conjugados de la presente invencion, dando como resultado una reduccion del peso corporal o la grasa corporal.
Como se utiliza en el presente documento, el termino "obesidad" implica la acumulacion de una cantidad excesiva de tejido adiposo en el cuerpo, y un mdice de masa corporal (peso corporal (kg) dividido por el cuadrado de la altura (m)) por encima de 25 debe considerarse obesidad. La obesidad esta causada generalmente por un desequilibrio de energfa, cuando la cantidad de ingesta en la dieta excede la cantidad de energfa gastada durante un largo penodo de tiempo. La obesidad es una enfermedad metabolica que afecta a todo el cuerpo y aumenta el riesgo de diabetes, hiperlipidemia, disfuncion sexual, artritis y enfermedades cardiovasculares, y, en algunos casos, se asocia con incidencia de cancer.
Los conjugados de la presente invencion, que se preparan mediante la union de derivados de oxintomodulina de las SEQ ID NO: 24, 25 y 26 con la region Fc de inmunoglobulina, muestran una excelente afinidad de union a los receptores de glucagon y GLP-1 (Tabla 3) y una excelente resistencia a las enzimas proteoltticas in vivo para exhibir la actividad in vivo durante un largo penodo de tiempo, de modo que muestran excelentes efectos antiobesidad, tales como reducciones del peso corporal )FIG. 12).
La composicion farmaceutica de la presente invencion puede incluir ademas un vehmulo farmaceuticamente aceptable, excipiente o diluyente. Como se utiliza en el presente documento, la expresion "farmaceuticamente aceptable" significa que la composicion es suficiente para lograr los efectos terapeuticos sin efectos secundarios perjudiciales, y puede determinarse facilmente dependiendo del tipo de enfermedad, la edad del paciente, el peso corporal, las afecciones en la salud, el sexo y la sensibilidad a los farmacos, la via de administracion, el modo de administracion, la frecuencia de administracion, la duracion del tratamiento, los farmacos utilizados en combinacion o junto con la composicion de la presente invencion, y otros factores conocidos en medicina.
La composicion farmaceutica que incluye el derivado de la presente invencion puede incluir ademas un vehmulo farmaceuticamente aceptable. Para administracion oral, el vehmulo puede incluir, pero sin limitacion, un aglutinante, un lubricante, un disgregante, un excipiente, un solubilizante, un agente dispersante, un estabilizante, un agente de suspension, un colorante y un saborizante. Para preparaciones inyectables, el vehmulo puede incluir un agente de tamponamiento, un agente conservante, un analgesico, un solubilizante, un agente isotonico, y un estabilizante. Para las preparaciones para administracion topica, el vehmulo puede incluir una base, un excipiente, un lubricante, y un agente conservante.
La composicion de la presente invencion puede formularse en diversas formas de dosificacion en combinacion con los vehmulos farmaceuticamente aceptables mencionados anteriormente. Por ejemplo, para administracion oral, la composicion puede formularse en comprimidos, trociscos, capsulas, elixires, suspensiones, jarabes u obleas. Para preparaciones inyectables, la composicion farmaceutica puede formularse en una ampolla como una forma de dosificacion unica o un recipiente multidosis. La composicion tambien puede formularse en soluciones, suspensiones, comprimidos, pfldoras, capsulas y preparados de accion prolongada.
Por otro lado, ejemplos del vehmulo, el excipiente y el diluyente adecuados para las formulaciones farmaceuticas incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, xilitol, eritritol, maltitol, almidon, caucho de acacia, alginato, gelatina, fosfato calcico, silicato calcico, celulosa, metilcelulosa, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, agua, metilhidroxibenzoato, propilhidroxibenzoato, talco, estearato de magnesio y aceites minerales. Ademas, las formulaciones farmaceuticas pueden incluir ademas cargas, agentes anticoagulantes, lubricantes, humectantes, saborizantes y antisepticos.
Ademas, la composicion farmaceutica de la presente invencion puede tener cualquier formulacion seleccionada del grupo que consiste en comprimidos, pfldoras, polvos, granulos, capsulas, suspensiones, lfquidos para uso interno, emulsiones, jarabes, soluciones acuosas esteriles, disolventes no acuosos, formulaciones liofilizadas y supositorios. Ademas, la composicion puede formularse en una forma de dosificacion unitaria adecuada para el cuerpo del paciente, y se formula, preferentemente, en una preparacion util para farmacos peptfdicos de acuerdo con el procedimiento tfpico en el campo farmaceutico para administrarse por via oral o parenteral, tal como a traves de la piel, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intramedular, intramedular, intraventricular, pulmonar, transdermica, subcutanea, intraperitoneal, intranasal, intracolonico, topica, sublingual, administracion vaginal o rectal, pero sin limitacion a las mismas.
La composicion se puede usar mediante la mezcla con diversos vehmulos farmaceuticamente aceptables, tales como solucion salina fisiologica o disolventes organicos. Con el fin de aumentar la estabilidad o la absorcion, se pueden usar carbohidratos tales como glucosa, sacarosa o dextranos, antioxidantes tales como acido ascorbico o glutation, agentes quelantes, protemas de bajo peso molecular u otros estabilizantes.
La dosis y la frecuencia de administracion de la composicion farmaceutica de la presente invencion se determinan mediante el tipo de principio activo, junto con diversos factores, tales como la enfermedad a tratar, la via de administracion, la edad del paciente, el sexo y el peso corporal, y la gravedad de la enfermedad.
La dosis eficaz total de la composicion de la presente invencion se puede administrar a un paciente en una sola dosis o se puede administrar durante un penodo de tiempo prolongado en dosis multiples de acuerdo con un protocolo de tratamiento fraccionado. En la composicion farmaceutica de la presente invencion, el contenido del principio activo puede variar dependiendo de la gravedad de la enfermedad. Preferentemente, la dosis diaria total del peptido de la presente invencion puede ser de aproximadamente 0,0001 |jg a 500 mg por 1 kg de peso corporal de un paciente. Sin embargo, la dosis eficaz del conjugado se determina considerando diversos factores, que incluyen la edad del paciente, el peso corporal, las afecciones en la salud, el sexo, la gravedad de la enfermedad, la dieta y la tasa de secrecion, ademas de la via de administracion y la frecuencia del tratamiento de la composicion farmaceutica. En vista de esto, los expertos en la tecnica pueden determinar facilmente una dosis eficaz adecuada para el uso particular de la composicion farmaceutica de la presente invencion. La composicion farmaceutica de acuerdo con la presente invencion no esta particularmente limitada a la formulacion y la via y modo de administracion, siempre que presente los efectos de la presente invencion.
La composicion farmaceutica de la presente invencion muestra una excelente duracion in vivo de la eficacia y tttulo, reduciendo de este modo de manera remarcada el numero y la frecuencia de administracion de la misma.
Ademas, la composicion farmaceutica puede administrarse sola o en combinacion o junto con otras formulaciones farmaceuticas que presentan efectos profilacticos o terapeuticos en la obesidad. Las formulaciones farmaceuticas que muestran efectos profilacticos o terapeuticos sobre la obesidad no estan particularmente limitadas y pueden incluir un agonista del receptor de GLP-1, un agonista del receptor de leptina, un inhibidor de DPP-IV, un antagonista del receptor Y5, un antagonista del receptor de hormona concentradora de melanina (MCH), un agonista del receptor Y2/3, un agonista del receptor MC3/4, un inhibidor de lipasa gastrica/pancreatica, un agonista de 5HT2c, un agonista del receptor p3A, un agonista del receptor de amilina, un antagonista de ghrelina y un antagonista del receptor de ghrelina.
En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un procedimiento para la prevencion o el tratamiento de la obesidad, que comprende la etapa de administrar a un sujeto el conjugado o la composicion farmaceutica que incluye el mismo.
Como se utiliza en el presente documento, el termino "administracion" significa la introduccion de una cantidad de una sustancia predeterminada en un paciente mediante un determinado procedimiento adecuado. La composicion de la presente invencion se puede administrar a traves de cualquiera de las rutas comunes, siempre que pueda llegar a un tejido deseado, por ejemplo, pero sin limitacion, intraperitoneal, intravenosa, intramuscular, subcutanea, intradermica, oral, topica, intranasal, intrapulmonar o intrarrectal. Sin embargo, ya que los peptidos son digeridos despues de la administracion oral, los principios activos de una composicion para administracion oral deben estar recubiertos o formularse para la proteccion contra la degradacion en el estomago.
En la presente invencion, el termino "sujeto" son aquellos sospechosos de tener obesidad, lo que significa mairnferos, incluyendo seres humanos, raton, y ganado con obesidad o con posibilidad de obesidad. Sin embargo, cualquier sujeto que se va a tratar con la composicion farmaceutica de la presente invencion se incluye sin limitacion. La composicion farmaceutica que incluye el peptido de la presente invencion se administra a un sujeto sospechoso de tener obesidad, tratando de este modo al sujeto de manera eficaz. La obesidad es como se ha descrito anteriormente.
El procedimiento terapeutico de la presente invencion puede incluir la etapa de administrar la composicion que incluye el peptido a una cantidad farmaceuticamente eficaz. La dosis diaria total se debe determinar segun el juicio medico apropiado mediante un medico y administrandola una vez o varias veces. Con respecto a los objetos de la presente invencion, el nivel de dosis terapeuticamente eficaz espedfico para cualquier paciente particular puede variar dependiendo de varios factores bien conocidos en la tecnica medica, incluyendo el tipo y el grado de la respuesta que se desea conseguir, las composiciones concretas segun se utilicen o no otros agentes con las mismas, la edad del paciente, el peso corporal, las afecciones en la salud, el sexo y la dieta, el tiempo y la via de administracion, la tasa de eliminacion de la composicion, el penodo de tiempo de la terapia, otros farmacos utilizados en combinacion o junto con la composicion de la presente invencion, y factores similares bien conocidos en la tecnica medica.
En aun otro aspecto, la presente invencion proporciona un uso del conjugado o la composicion farmaceutica que incluye el mismo en la preparacion de farmacos para la prevencion o el tratamiento de la obesidad.
Modo para la invencion
En lo sucesivo en el presente documento, la presente invencion se describira con mas detalle en referencia a los siguientes Ejemplos.
De este modo, los derivados y conjugados de oxintomodulina que comprenden secuencias de aminoacidos de las SEQ ID NO: 24, 25 y 26 son de acuerdo con la invencion. Los derivados y conjugados que comprenden secuencias de aminoacidos de las otras SEQ ID NO se proporcionan con fines ilustrativos.
Ejemplo 1. Produccion de una lrnea celular activada in vitro
Ejemplo 1-1: Produccion de una lrnea celular que muestra respuesta de AMPc a GLP-1
La PCR se realizo utilizando una region correspondiente al ORF (marco de lectura abierto) en el ADNc (OriGene Technologies, Inc. USA) del gen del receptor de GLP-1 humano como molde, y los siguientes cebadores directos e inversos incluyen cada uno de los sitios de restriccion HindIII y EcoRI para obtener un producto de la PCR.
Cebador directo: 5'-CCCGGCCCCCGCGGCCGCTATTCGAAATAC-3'(SEQ ID NO. 47)
Cebador inverso: 5'-GAACGGTCCGGAGGACGTCGACTCTTAAGATAG-3'(SEQ ID NO. 48)
El producto de la PCR se clono en el vector de expresion de celulas animales conocidas xOGC/dhfr para preparar un vector recombinante x0GC/GLP1R.
La lrnea celular CHO DG44 cultivada en medio DMEM/F12 (FBS al 10 %) se transfecto con el vector recombinante x0GC/GLP1R usando Lipofectamine (Invitrogen, EE.UU.) y se cultivo en un medio de seleccion que contema 1 mg/ml de G418 y metotrexato10 nM. Se seleccionaron lmeas celulares de un solo clon mediante una tecnica de dilucion Kmite y finalmente se selecciono una lrnea celular que mostraba una excelente respuesta de AMPc a GLP-1 de una manera dependiente de la concentracion.
Ejemplo 1-2: Produccion de una linea celular que muestra respuesta de AMPc a glucagon
La PCR se realizo utilizando una region correspondiente al ORF en el ADNc (OriGene Technologies, Inc. USA) del gen del receptor de glucagon humano como molde, y los siguientes cebadores directos e inversos incluyen cada uno de los sitios de restriccion EcoRI and XhoI para obtener un producto de la PCR.
Cebador directo: 5'-CAGCGACACCGACCGTCCCCCCGTACTTAAGGCC-3'(SEQ ID NO. 49)
Cebador inverso: 5'-CTAACCGACTCTCGGGGAAGACTGAGCTCGCC-3'(SEQ ID NO. 50)
El producto de la PCR se clono en el vector de expresion de celulas animales conocidas xOGC/dhfr para preparar un vector recombinante xOGC/GCGR.
La lrnea celular CHO DG44 cultivada en medio DMEM/F12 (FBS al 10 %) se transfecto con el vector recombinante xOGC/GCGR usando Lipofectamine y se cultivo en un medio de seleccion que contema 1 mg/ml de G418 y metotrexato10 nM. Se seleccionaron lmeas celulares de un solo clon mediante una tecnica de dilucion lfmite y finalmente se selecciono una lrnea celular que mostraba una excelente respuesta de AMPc a glucagon de una manera dependiente de la concentracion.
Ejemplo 2. Ensayo sobre la actividad in vitro de derivados de oxintomodulina
Ejemplo 2-1: Smtesis de derivados de oxintomodulina
Con el fin de medir las actividades in vitro de los derivados de oxintomodulina, se sintetizaron derivados de oxintomodulina que tienen las siguientes secuencias de aminoacidos (Tabla 1).
Tabla 1
T l 11
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(continuacion)
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En la Tabla 1, los aminoacidos en negrita y subrayados representan la formacion de anillos y los aminoacidos representados por X significan un aminoacido no nativo, acido alfa-metil-glutamico. Ademas, CA representa 4-imidazoacetilo y DA representa desamino-histidilo.
Ejemplo 2-2: Ensayo sobre la actividad in vitro de derivados de oxintomodulina
Con el fin de medir las eficacias antiobesidad de los derivados de oxintomodulina sintetizados en el Ejemplo 2-1, la actividad celular se midio in vitro utilizando las lmeas celulares preparadas en los Ejemplos 1-1 y 1-2.
Las lmeas celulares fueron las preparadas mediante la transfeccion de CHO (ovario de hamster chino) para expresar el gen del receptor de GLP-1 humano y el gen del receptor de glucagon, respectivamente. Por lo tanto, son adecuados para medir las actividades de GLP-1 y glucagon. Por lo tanto, la actividad de cada derivado de oxintomodulina se midio utilizando cada lmea celular transformada.
Espedficamente, cada lmea celular se subcultivo dos o tres veces por semana, y se dividio en almuotas en cada pocillo de una placa de 96 pocillos con una densidad de 1 X 105 ,, seguido de cultivo durante 24 horas.
Las celulas cultivadas se lavaron con tampon KRB y se suspendieron en 40 ml de tampon KRB que contema IBMX 1 mM, y se dejaron a temperatura ambiente durante 5 minutos. Oxintomodulina (SEQ ID NO.1) y derivados de oxintomodulina (representados por las SEQ ID NO. 2-6, 8, 10-13, 17, 18, 23-25, 27, 28 y 32-34) se diluyeron de 1000 nM a 0,02 nM por dilucion en serie 5 veces, y cada 40 ml de los mismos se anadieron a la celulas y se cultivaron a 37 °C durante 1 hora en una incubadora de CO2. Despues, se agregaron 20 ml de tampon de lisis celular para la lisis celular y los lisados celulares se aplicaron a un kit de ensayo de AMPc (Molecular Device, EE.UU) para medir las concentraciones de AMPc. Los valores de CE50 se calcularon a partir de ellos, y se compararon entre sf. Los valores de CE50 se muestran en la siguiente Tabla 2.
Tabla 2
T l 21
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(continuacion)
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Tal como se muestra en la Tabla 2, hubo derivados de oxintomodulina que mostraron excelentes actividades in vitro y diferentes proporciones de actividades en el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagon, en comparacion con la oxintomodulina nativa de SEQ ID NO. 1.
Se sabe que la oxintomodulina activa tanto el receptor DE GLP-1 como el receptor de glucagon para suprimir el apetito, Facilitar la lipolisis y promover la saciedad, mostrando de este modo un efecto antiobesidad. Los derivados de oxintomodulina de acuerdo con la presente invencion muestran mayores actividades in vitro tanto en el receptor de GLP-1 como en el receptor de glucagon que la oxintomodulina de tipo salvaje y, por lo tanto, se pueden usar como agente terapeutico para la obesidad con eficacias mas altas que la oxintomodulina conocida.
Ejemplo 3. Ensayo sobre la actividad in vivo de derivados de oxintomodulina
Con el fin de medir la actividad terapeutica in vivo de los derivados de oxintomodulina, los cambios en la ingesta de alimentos mediante la administracion de derivados de oxintomodulina se examinaron en un raton ob/ob usando oxintomodulina nativa como control.
Espedficamente, se mantuvo en ayunas a ratones ob/ob obesos diabeticos utilizados habitualmente para probar la eficacia de los agentes terapeuticos para la obesidad y la diabetes durante 16 horas y se les administro 1 o 10 mg/kg de oxintomodulina, o 0,02, 0,1, 1 o 10 mg/kg del derivado de oxintomodulina de la SEQ ID NO. 2. Despues, la ingesta de alimentos se examino durante 2 horas (figura 1). La figura 1 es una grafica que muestra los cambios en la ingesta de alimentos de acuerdo con la administracion de la dosis de oxintomodulina o de un derivado de oxintomodulina. Tal como se muestra en la figura 1, la administracion de 1 mg/kg de derivado de oxintomodulina mostro efectos inhibidores mas excelentes en la ingesta de alimentos que la administracion de 10 mg/kg de oxintomodulina.
En conjunto, los derivados de oxintomodulina de la presente invencion tienen efectos antiobesidad mucho mas altos que la oxintomodulina de tipo salvaje, aunque se administren a una dosis mas baja, lo que indica una mejona en los problemas de la oxintomodulina de tipo salvaje que muestra menores efectos antiobesidad y debe administrarse A una dosis alta tres veces al dfa.
Ejemplo 4: Preparacion de conjugados que incluyen oxintomodulina y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de lisina en la posicion 30 de la secuencia de aminoacidos de la oxintomodulina (SEQ ID NO. 1) con 3.4 K PropionALD (2) PEG (PEG con dos grupos propilaldeddo, NOF, Japon), se hicieron reaccionar la oxintomodulina y 3.4 K PropionALD(2) PEG a una proporcion molar de 1:12 con la concentracion de protema de 5 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En este momento, la reaccion se realizo en una mezcla de disolventes de tampon de borato de sodio 100 mM (pH 9,0) e isopropanol al 45 % y a la misma se anadio cianoborohidruro de sodio 20 mM (cianoborohidruro (SCB, NaCNBH3), NaCNBHa) como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna SOURCE S (XK16, Amersham Biosciences) para purificar la oxintomodulina que tiene lisina mono-pegilada (columna: SOURCE S (XK16, Amersham Biosciences), caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3% 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: Citrato Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1M)) (FIG. 2a). La figura 2a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de oxintomodulina mono-PEGilada a traves de una columna de purificacion SOURCE S. La mono-PEGilacion de los picos eluidos se examino mediante SDS-PAGE y la selectividad de lisina se examino mediante mapeo de peptidos usando Asp-N proteasa (Figura 2b). La figura 2b es una grafica que muestra el resultado del mapeo de peptidos de oxintomodulina mono-PEGilada purificada.
A continuacion, se hicieron reaccionar oxintomodulina mono-PEGilada purificada y Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:10 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q para purificar conjugados que incluyen oxintomodulina y Fc de inmunoglobulina (columna: SOURCE 15Q (XK16, Amersham Biosciences), caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ - 20 % 100 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 2c). La figura 2c es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen oxintomodulina y Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 5: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de lisina en la posicion 30 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) con 3.4 K PropionALD(2) PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) y 3.4 K PropionALD(2) PEG a una proporcion molar de 1:12 con la concentracion de protema de 5 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en una mezcla de disolventes de tampon de borato de sodio 100 mM (pH 9,0) e isopropanol al 45% y se anadio SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina mono-pegilada (Columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3% 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1M)) (FIG. 3a). La figura 3a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 29) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 29) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:10 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q para purificar conjugados que incluyen oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) y Fc de inmunoglobulina (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 20 % 100 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 3b). La figura 3b es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 29) y Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 6: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de lisina en la posicion 30 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) con 3.4 K PropionALD(2) PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) y 3.4 K PropionALD(2) PEG a una proporcion molar de 1:15 con la concentracion de protema de 3 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en una mezcla de disolventes de tampon HEPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 % y se anadio SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina mono-pegilada (Columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3% 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1M)) (FIG. 4a). La figura 4a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 30) a traves de una columna de purificacion SOURCE S. La mono-PEGilacion de los picos eluidos se examino mediante SDS-PAGE y la selectividad de lisina se examino mediante mapeo de peptidos usando Asp-N proteasa (Figura 4b). La figura 4b es una grafica que muestra el resultado del mapeo de peptidos de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 30).
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 30) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:10 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q para purificar conjugados que incluyen oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) y Fc de inmunoglobulina (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 20 % 100 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 4c). La figura 4c es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 30) y Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 7: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de lisina en la posicion 30 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) con 3.4 K PropionALD(2) PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) y 3.4 K PropionALD(2) PEG a una proporcion molar de 1:15 con la concentracion de protema de 3 mg/ml a 4 °C durante 4,5 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en una mezcla de disolventes de tampon HEPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 % y se anadio SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina mono-pegilada (Columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3% 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1M)) (FIG. 5a). La figura 5a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 31) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 31) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:10 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q para purificar conjugados que incluyen oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) y Fc de inmunoglobulina (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 20 % 100 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 5b). La figura 5b es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 31) y Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 8: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de lisina en la posicion 30 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) con 3.4 K PropionALD(2) PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y 3.4 K PropionALD(2) PEG a una proporcion molar de 1:10 con la concentracion de protema de 3 mg/ml a 4 °C durante 4 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en una mezcla de disolventes de tampon HEPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 % y se anadio SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina mono-pegilada (Columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3% 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1M)) (FIG. 6a). La figura 6a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 2) a traves de una columna de purificacion SOURCE S. La mono-PEGilacion de los picos eluidos se examino mediante SDS-PAGE y la selectividad de lisina se examino mediante mapeo de peptidos usando Asp-N proteasa (Figura 6b). La figura 6b es una grafica que muestra el resultado del mapeo de peptidos de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 2).
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 2) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:8 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q (Columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A 1 M NaCl)) (Figura 6c) y una columna de purificacion SOURCE ISO (Columna: SOURCE ISO (XK16, Amersham Biosciences), caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100 % 100 min B, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A 1,3M AS) (FIG. 6d) para purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y la Fc de inmunoglobulina. La figura 6c es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion Source ISO y la figura 6d es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 2) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion Source ISO.
Ejemplo 9: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de lisina en la posicion 27 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) con 3.4 K PropionALD(2) PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y 3.4 K PropionALD(2) PEG a una proporcion molar de 1:10 con la concentracion de protema de 3 mg/ml a 4 °C durante 4 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en una mezcla de disolventes de tampon HEPES 100 mM (pH 7,5) e isopropanol al 45 % y se anadio SCB 20 mM a la misma como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina mono-pegilada (Columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3% 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1M)) (FIG. 7a). La figura 7a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 3) a traves de una columna de purificacion SOURCE S. La mono-PEGilacion de los picos eluidos se examino mediante SDS-PAGE y la selectividad de lisina se examino mediante mapeo de peptidos usando Asp-N proteasa (Figura 7b). La figura 7b es una grafica que muestra el resultado del mapeo de peptidos de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 3).
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 3) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:8 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion Butilo FF (Columna: Butilo FF (XK16, Amersham Biosciences), caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 5 min A (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1,5 M)) (Figura 7c) y una columna de purificacion SOURCE 15Q (Columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B(A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1M) (FIG. 7d) para purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y la Fc de inmunoglobulina. La figura 7c es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion Source Butilo FF y la figura 7d es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 3) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE 15Q.
Ejemplo 10: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de cistema en la posicion 24 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) con MAL-10K-ALD PEG (NOF., Japon), se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y MAL-10K-ALD PEG a una proporcion molar de 1:3 con la concentracion de protema de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon Tris 50 mM (pH 8,0) e isopropanol al 45 % y se anadio guanidina 1 mM a la misma. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene cistema mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100% 50 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1M)) (FIG. 8a). La figura 8a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 23) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 23) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:5 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, La mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B(A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 8b) y una columna de purificacion Source ISO (columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) (FIG. 8c) para purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y la Fc de inmunoglobulina. La figura 8b es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID No . 23) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE 15Q y la figura 8c es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion Source ISO.
Ejemplo 11: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de cistema en la posicion 30 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) con MAL-10K-ALD PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y MAL-10K-ALD PEG a una proporcion molar de 1:3 con la concentracion de protema de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon Tris 50 mM (pH 8,0) e isopropanol al 45 % y se anadio guanidina 1 mM a la misma. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene cistema mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100% 50 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1M)) (FIG. 9a). La figura 9a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 24) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 24) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:5 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, La mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B(A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 9b) y una columna de purificacion Source ISO (columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) (FIG. 9c) para purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y la Fc de inmunoglobulina. La figura 9b es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID No . 24) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE 15Q y la figura 9c es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 24) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion Source ISO.
Ejemplo 12: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de cistema en la posicion 30 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) con MAL-10K-ALD PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y MAL-10K-ALD PEG a una proporcion molar de 1:3 con la concentracion de protema de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon Tris 50 mM (pH 8,0) y se le anadio guanidina 1 M a la misma. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene cistema mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100% 50 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1M)) (FIG. 10a). La figura 10a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 25) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 25) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:5 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, La mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B(A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 10b) y una columna de purificacion Source ISO (columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) (FIG. 10c) para purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y la Fc de inmunoglobulina. La figura 10b es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID No . 25) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE 15Q y la figura 10c es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 25) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion Source ISO.
Ejemplo 13: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de lisina en la posicion 20 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) con 3.4 K PropionALD(2) PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y MAL-10K-ALD PEG a una proporcion molar de 1:5 con la concentracion de protema de 3 mg/ml a 4°C durante 3 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon borato de Na, 50 mM (pH 9,0) y se anadio guanidina 2 M a la misma. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene lisina mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 3% 1 min B ^ 40 % 222 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1M)) (FIG. 11a). La figura 11a es una grafica que muestra el resultado de la purificacion de un derivado de oxintomodulina mono-PEGilada (SEQ ID NO. 28) a traves de una columna de purificacion SOURCE S.
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 28) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:10 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, La mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B(A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) (Figura 11b) y una columna de purificacion Source ISO (columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A AS 1,1 M)) (FIG. 11c) para purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y la Fc de inmunoglobulina. La figura 11b es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID No . 28) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion SOURCE 15Q y la figura 11c es grafica que muestra el resultado de la purificacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 28) y una region Fc de inmunoglobulina a traves de una columna de purificacion Source ISO.
Ejemplo 14: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 32) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de cistema en la posicion 30 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 32) con MAL-10K-ALD PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 32) y MAL-10K-ALD PEG a una proporcion molar de 1:3 con la concentracion de protema de 1 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon Tris 50 mM (pH 8,0) y se anadio guanidina 2 M a la misma. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene cistema mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100% 50 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1 M)).
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 32) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:8 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, La mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B(A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) y una columna de purificacion Source ISO (columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: TrisHCl 20 mM, pH 7,5, B: A 1.1M AS) para purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 32) y la Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 15: Preparacion de conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 33) y la Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de cistema en la posicion 30 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 33) con MAL-10K-ALD PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 33) y MAL-10K-ALD PEG a una proporcion molar de 1:1 con la concentracion de protema de 1 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon Tris 50 mM (pH 8,0) y se anadio guanidina 2 M a la misma. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene cistema mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100% 50 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1 M)).
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 33) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:5 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, La mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B(A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) y una columna de purificacion Source ISO (columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A 1.1M AS) para purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 33) y la Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 16: Preparacion de conjugados que incluyen derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 34) y Fc de inmunoglobulina
En primer lugar, para la PEGilacion del residuo de cistema en la posicion 30 de la secuencia de aminoacidos del derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 34) con MAL-10K-ALD PEG, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 34) y MAL-10K-ALD PEG a una proporcion molar de 1:1 con la concentracion de protema de 3 mg/ml a temperatura ambiente durante 3 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon Tris 50 mM (pH 8,0) y se le anadio guanidina 1 M a la misma. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE S para purificar el derivado de oxintomodulina que tiene cistema mono-pegilada (columna: SOURCE S, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 100% 50 min B (A: Citrato de Na 20 mM, pH 3,0 45 % de etanol, B: A KCl 1 M)).
A continuacion, se hicieron reaccionar el derivado de oxintomodulina mono-PEGilada purificada (SEQ ID NO. 34) y la Fc de inmunoglobulina a una proporcion molar de 1:5 con la concentracion de protema de 20 mg/ml a 4 °C durante 16 horas. En este momento, la reaccion se llevo a cabo en tampon de fosfato de potasio 100 mM (pH 6,0) y se anadio a la misma SCB 20 mM como agente reductor. Despues de completarse la reaccion, La mezcla de reaccion se aplico a una columna de purificacion SOURCE 15Q (columna: SOURCE 15Q, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: A 0 ^ 4 % 1 min B ^ 20 % 80 min B(A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A NaCl 1 M)) y una columna de purificacion Source ISO (columna: SOURCE ISO, caudal: 2,0 ml/min, gradiente: B 0 ^ 100 % 100 min A, (A: Tris-HCl 20 mM, pH 7,5, B: A 1.1M AS) para purificar conjugados que incluyen el derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 34) y la Fc de inmunoglobulina.
Ejemplo 17: Actividad in vitro de conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina Con el fin de medir las eficacias antiobesidad de los conjugados que incluyen la oxintomodulina o el derivado de oxintomodulina y la Fc de inmunoglobulina que se prepararon en los ejemplos anteriores, se realizaron experimentos de la misma forma que en el ejemplo 2-2.
Espedficamente, cada uno de los transformantes preparados en los ejemplos 1-1 y 1-2 se subcultivo dos o tres veces a la semana, y se dividio en almuotas en cada pocillo de una placa de 96 pocillos con una densidad de 1 X 105 , seguido de cultivo durante 24 horas. Cada uno de los transformantes cultivados se lavo con tampon KRB y se suspendio en 40 ml de tampon KRB que contema IBMX 1 mM y se dejo a temperatura ambiente durante 5 minutos. los conjugados de GLP-1, glucagon y derivado de oxintomodulina (SeQ ID NO. 23, 24, 25, 32, 33 o 34)-FC de inmunoglobulina se diluyeron de 1000 nM a 0,02 nM mediante dilucion en serie por 5 y cada 40 ml del mismo se anadio a cada transformante y se cultivo a 37 °C durante 1 hora en un incubador de CO2. Despues, se anadieron 20 ml de tampon de lisis celular para la lisis celular y los lisados celulares se aplicaron a un kit de ensayo de AMPc (Molecular Device, EE.UU.) para medir las concentraciones de AMPc usando un Victor (Perkin Elmer, Ee .UU.). Los valores de CE50 se calcularon a partir de ellos, y se compararon entre sf ( Tabla 3).
Tabla 3
T l
Figure imgf000022_0001
Tal como se muestra en la Tabla 3, se descubrio que los conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina muestran la actividad in vitro de los receptores de GLP-1 y glucagon.
Ejemplo 18: Actividad in vivo de conjugados de derivado de oxintomodulina-inmunoglobulina
Se examino si los conjugados de derivados de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina muestran excelentes efectos de reduccion de peso corporal in vivo.
Espedficamente, se alimentaron ratones C57BL/6 normales de 6 semanas de edad con una dieta rica en grasas de 60 kcal durante 24 semanas para aumentar su peso corporal en un promedio de aproximadamente 50 g y se les administro por via subcutanea conjugados de derivado de oxintomodulina (SEQ ID NO. 23, 24 o 25)-Fc de inmunoglobulina a una dosis de 0,03 o 0,06 mg/kg/semana durante 3 semanas. Posteriormente, se midieron los cambios en el peso corporal de los ratones (FIG. 12 y FIG. 13). La figura 12 y la figura 13 son graficos que muestran los cambios en el peso corporal de los ratones de acuerdo con el tipo y la dosis de administracion de los conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina. Como se muestra en la FIG. 12 y FIG. 13, a medida que aumentaba la dosis de administracion de los conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina, el peso corporal se redujo en proporcion directa, a pesar de que hubo diferencias entre los tipos de conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina, lo que sugiere que los conjugados de derivado de oxintomodulina-Fc de inmunoglobulina reducen el peso corporal de una manera dependiente de la dosis.
<110> HANMI SCIENCE CO., LTD.
<120> UN CONJUGADO QUE COMPRENDE OXINTOMODULINA Y UN FRAGMENTO DE INMUNOGLOBULINA, Y USO DE LAS MISMAS
<130> OPA12063/PCT
<150> KR 10-2011-0058852
<151> 17/06/2011
<160> 53
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 37
<212> PRT
<213> oxintomodulina
<400> 1
Figure imgf000023_0001
<210>2
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400>2
Figure imgf000023_0002
<210> 3
<211> 39
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 3
Figure imgf000023_0003
<210> 4
<211> 39
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 4
Figure imgf000024_0001
<210> 5
<211> 39
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400>5
Figure imgf000024_0002
<210>6
<211> 42
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 6
Figure imgf000024_0003
<210> 7
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 7
Figure imgf000025_0001
<210>8
<211> 29
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400>8
Figure imgf000025_0002
<210> 9 <211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<220>
<221> VARIANTE
<222> (20)
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<400> 9
Figure imgf000025_0003
<210> 10
<211> 40
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 10
Figure imgf000026_0001
<210> 11
<211> 43
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 11
Figure imgf000026_0002
<210> 12
<211> 38
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 12
Figure imgf000026_0003
<210> 13
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<220>
<221> VARIANTE
<222> (16)
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<221> VARIANTE
<222> (20)
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<400> 13
Figure imgf000027_0001
<210> 14
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<220>
<221> VARIANTE
<222> (20)
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<220>
<221> VARIANTE
<222> (24)
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<400> 14
Figure imgf000027_0002
<210> 15
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<220>
<221> VARIANTE
<222> (24)
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<400> 15
Figure imgf000028_0001
<210> 16
<211> 34
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 16
Figure imgf000028_0002
<210> 17
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 17
Figure imgf000028_0003
<210> 18
<211> 40
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 18
Figure imgf000029_0001
<210> 19
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 19
Figure imgf000029_0002
<210> 20
<211> 40
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400> 20
Figure imgf000029_0003
<210> 21
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<400>21
Figure imgf000030_0001
<210> 22
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, desamino-histidilo.
<400> 22
Figure imgf000030_0002
<210> 23
<211> 29
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<400> 23
Figure imgf000030_0003
<210> 24
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<400> 24
Figure imgf000030_0004
<210> 25
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2 )
<223> Xaa = acido aminoisobutrnco
<400> 25
Figure imgf000031_0001
<210> 26
<211> 30
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2 )
<223> Xaa = acido aminoisobutrnco
<400> 26
Figure imgf000031_0002
<210> 27
<211> 29
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina'
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2 )
<223> Xaa = acido aminoisobutrnco
<400> 27
Figure imgf000031_0003
<210> 28
<211> 29
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2 )
<223> Xaa = acido aminoisobutrnco
<400> 28
Figure imgf000032_0001
<210> 29
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Esta "S" se refiere un variante de serina, d-serina.
<400> 29
Figure imgf000032_0002
<210> 30
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo
<400> 30
Figure imgf000032_0003
<210> 31
<211> 37
<212> PRT
<213> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Esta "S" se refiere un variante de serina, d-serina.
<400>31
Figure imgf000033_0001
<210> 32
<211> 30
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (1)
<223> Este "H" se refiere a un derivado de histidina, 4-imidazoacetilo.
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2 )
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<400> 32
Figure imgf000033_0002
<210> 33
<211> 30
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<400> 33
Figure imgf000033_0003
<210> 34
<211> 30
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> derivado de oxintomodulina
<220>
<221> VARIANTE
<222> (2)
<223> Xaa = acido aminoisobutmco
<400> 34
Figure imgf000034_0001
<210> 35
<211>8
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 35
Figure imgf000034_0002
<210> 36
<211> 10
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 36
Figure imgf000034_0003
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 37
Figure imgf000034_0004
<210> 38
<211> 15
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 38
Figure imgf000034_0005
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 39
Figure imgf000035_0001
<210> 40 <211> 20
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo R2
<400> 40
Figure imgf000035_0002
<210> 41
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 41
Figure imgf000035_0003
<210> 42
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 42
Figure imgf000035_0004
<210> 43
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 43
Figure imgf000036_0001
<210> 44
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 44
Figure imgf000036_0002
<210> 45
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 45
Figure imgf000036_0003
<210> 46
<211> 26
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 46
Figure imgf000036_0004
<210> 47
<211> 28
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo A o B
<400> 47
Figure imgf000037_0001
<210> 48
<211> 24
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo B
<400> 48
Figure imgf000037_0002
<210> 49
<211> 14
<212> PRT
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> grupo B
<400> 49
Figure imgf000037_0003
<210> 50
<211> 30
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> cebador
<400> 50
cccggccccc gcggccgcta ttcgaaatac 30
<210> 51
<211> 33
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> cebador
<400>51
gaacggtccg gaggacgtcg actcttaaga tag 33
<210> 52
<211> 34
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> cebador
<400> 52
cagcgacacc gaccgtcccc ccgtacttaa ggcc 34
<210> 53
<211> 32
<212> ADN
<213> Secuencia artificial
<220>
<223> cebador
<400> 53
ctaaccgact ctcggggaag actgagctcg cc 32

Claims (25)

REIVINDICACIONES
1. Un conjugado que comprende un derivado de oxintomodulina que comprende la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 24, 25 o 26, una region Fc de inmunoglobulina y un polfmero no peptidilo, en el que el polfmero no peptidilo une covalentemente el derivado de oxintomodulina y la region Fc de inmunoglobulina.
2. El conjugado de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el derivado de oxintomodulina comprende la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 24.
3. El conjugado de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que los aminoacidos en las posiciones 12 y 16 o 16 y 20 del derivado de oxintomodulina forman un anillo.
4. El conjugado de acuerdo con la reivindicacion 3, en el que el derivado de oxintomodulina comprende la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 25.
5. El conjugado de acuerdo con la reivindicacion 3, en el que el derivado de oxintomodulina comprende la secuencia de aminoacidos de la SEQ ID NO: 26.
6. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el derivado de oxintomodulina es capaz de activar el receptor de GLP-1 y el receptor de glucagon.
7. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el conjugado tiene efectos antiobesidad.
8. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el polfmero no peptidilo es polietilenglicol, polipropilenglicol, un copolfmero de etilenglicol-propilenglicol, un poliol polioxietilado, alcohol polivimlico, un polisacarido, eter poliviniletilico, poli(acido lactico) (PLA), acido polilactico-glicolico (PGA), un polfmero iipfdico, acido hialuronico o una combinacion de los mismos.
9. El conjugado de acuerdo con la reivindicacion 8, en el que el polfmero no peptidilo es polietilenglicol.
10. El conjugado de acuerdo con la reivindicacion 8, en el que el polisacarido es dextrano, una quitina o una combinacion de los mismos.
11. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que un extremo del polfmero no peptidilo esta unido a un grupo amina o un grupo tiol de la region Fc de inmunoglobulina y el otro extremo del pokmero no peptidilo esta unido a un grupo amina o un grupo tiol del derivado de oxintomodulina.
12. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que el polfmero no peptidilo tiene grupos reactivos capaces de unirse con la region Fc de inmunoglobulina y el derivado de oxintomodulina en ambos extremos.
13. El conjugado de acuerdo con la reivindicacion 12, en el que el grupo reactivo se selecciona de un grupo aldehfdo, un grupo propionaldehndo, un grupo butiraldehfdo, un grupo maleimida o un derivado de succinimida.
14. El conjugado de acuerdo con la reivindicacion 12, en el que los grupos reactivos en ambos extremos son iguales o diferentes entre sf.
15. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que la region Fc de inmunoglobulina es una region Fc no glicosilada.
16. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que la region Fc de inmunoglobulina es un dominio H1, un dominio CH2, un dominio CH3 y un dominio CH4; un dominio CH1 y un dominio CH2; un dominio CH1 y un dominio CH3; un dominio CH2 y un dominio CH3; una combinacion de uno o mas dominios y una region bisagra de inmunoglobulina o una porcion de la misma; o un dfmero de cada dominio de las regiones constantes de la cadena pesada y la region constante de la cadena ligera.
17. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, en el que la region Fc de inmunoglobulina es un derivado en el que se deleciona una region capaz de formar un enlace disulfuro, se eliminan ciertos restos de aminoacidos en el extremo N-terminal de una forma Fc nativa, se anade un residuo de metionina en el extremo N-terminal de una forma Fc nativa, se deleciona un sitio de union al complemento, o se deleciona un sitio de citotoxicidad mediada por celulas dependiente de anticuerpos (CCDA).
18. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17, en el que la region Fc de inmunoglobulina es una region Fc derivada de IgG, IgA, IgD, IgE o IgM.
19. El conjugado de acuerdo con la reivindicacion 18, en el que la region Fc de inmunoglobulina es una region Fc de IgG4.
20. El conjugado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19, en el que la region Fc de inmunoglobulina es la region Fc aglicosilada derivada de IgG4 humana.
21. Una composicion farmaceutica para la prevencion o el tratamiento de la obesidad, que comprende el conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20.
22. La composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 21, que comprende adicionalmente un vehnculo farmaceuticamente aceptable.
23. La composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 21 o 22, en la que la composicion se administra sola o en combinacion con otras formulaciones farmaceuticas que presentan efectos profilacticos o terapeuticos en la obesidad.
24. La composicion farmaceutica de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 23, en la que la formulacion farmaceutica es un agonista del receptor de GLP-1, un agonista del receptor de leptina, un inhibidor de DPP-IV, un antagonista del receptor Y5, un antagonista del receptor de hormona concentradora de melanina (MCH), un agonista del receptor Y2/3, un agonista del receptor MC3/4, un inhibidor de lipasa gastrica/pancreatica, un agonista de 5HT2c, un agonista del receptor p3A, un agonista del receptor de amilina, un antagonista de ghrelina o un antagonista del receptor de ghrelina.
25. El conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 20 o la composicion farmaceutica de una cualquiera de las reivindicaciones 21 a 24, para su uso en la prevencion tratamiento de la obesidad.
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Families Citing this family (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US10166295B2 (en) 2011-06-02 2019-01-01 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
CA2838503C (en) 2011-06-10 2020-02-18 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
PH12018501119A1 (en) 2011-06-17 2019-02-04 Hanmi Science Co Ltd A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
AU2013273135B2 (en) 2012-06-04 2017-12-07 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
KR101968344B1 (ko) * 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
EA031852B1 (ru) 2012-11-06 2019-03-29 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина
KR101993393B1 (ko) * 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
BR112015014510A2 (pt) 2012-12-21 2017-11-21 Sanofi Sa agonistas de glp1/gip duais ou de glp1/gip/glucagon trigonais
AR096891A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugado de monómero polipéptido biológicamente activo y conjugado de fragmento fc de inmunoglobulina, que muestra aclaramiento mediado por receptor reducido, y el método para la preparación del mismo
AR096890A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugando fc de inmunoglobulina, que mantiene la afinidad de unión del fragmento fc de la inmunoglobulina a fcrn
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
TW201609795A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 作為雙重ｇｌｐ－１／ｇｉｐ受體促效劑的艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
EP3080149A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
WO2015086730A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
PE20161153A1 (es) 2014-01-20 2016-10-27 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insulina de accion prolongada y uso de la misma
WO2015152618A1 (ko) * 2014-03-31 2015-10-08 한미약품 주식회사 면역글로불린 fc 단편 결합을 이용한 단백질 및 펩타이드의 용해도를 개선시키는 방법
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
TWI684458B (zh) * 2014-05-30 2020-02-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 包含胰島素及ｇｌｐ-１/昇糖素雙重促效劑之治療糖尿病之組成物
KR20150140177A (ko) 2014-06-05 2015-12-15 한미약품 주식회사 단백질 및 펩타이드의 면역원성을 감소시키는 방법
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
PE20171154A1 (es) 2014-12-30 2017-08-16 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Derivados de glucagon con estabilidad mejorada
KR102418477B1 (ko) 2014-12-30 2022-07-08 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
IL301728A (en) 2015-06-19 2023-05-01 Opko Biologics Ltd Long-term coagulation factors and methods for their preparation
MX2017016845A (es) 2015-06-30 2018-08-01 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Derivado de glucagón y una composición que comprende un conjugado de acción prolongada del mismo.
AR105284A1 (es) 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
JP7222710B2 (ja) * 2015-09-24 2023-02-15 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 免疫グロブリン断片の特定位置を連結部位として用いたタンパク質結合体
CN108699125B (zh) 2015-12-31 2022-10-28 韩美药品株式会社 胰高血糖素/glp-1/gip受体三重激动剂
UA126662C2 (uk) * 2016-06-29 2023-01-11 Ханмі Фарм. Ко., Лтд. Похідна глюкагону, її кон'югат, композиція, яка її містить, та її терапевтичне застосування
BR112019000610A2 (pt) 2016-07-11 2019-07-02 Opko Biologics Ltd fator vii de coagulação de longa ação e métodos de produção do mesmo
KR20180033105A (ko) 2016-09-23 2018-04-02 한미약품 주식회사 인슐린 수용체와의 결합력이 감소된, 인슐린 아날로그 및 이의 용도
JOP20190095A1 (ar) * 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات ببتيد تيروسين-تيروسين الحلقية كمعدلات لمستقبلات الببتيد العصبي y
TW201832783A (zh) 2016-12-02 2018-09-16 法商賽諾菲公司 包含ｇｌｐ－１／胰高血糖素雙重激動劑、連接子和透明質酸的接合物
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
WO2018143729A1 (ko) 2017-02-03 2018-08-09 한미약품 주식회사 지속성이 증가된 생리활성 물질의 결합체 및 이의 용도
AU2018239037B2 (en) 2017-03-23 2022-05-26 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof
HRP20240371T1 (hr) 2017-08-16 2024-06-07 Dong-A St Co., Ltd Peptidni analog aciliranog oksintomodulina
WO2019035672A1 (ko) 2017-08-16 2019-02-21 동아에스티 주식회사 아실화 옥신토모듈린 펩타이드 유사체
WO2019171352A2 (en) * 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity
UY38249A (es) 2018-05-30 2019-12-31 Sanofi Sa Productos conjugados que comprenden un agonista del receptor triple de glp-1/glucagón/gip, un conector y ácido hialurónico
BR112021000933A2 (pt) * 2018-07-19 2021-04-27 D&D Pharmatech Inc. polipeptídeo, composição farmacêutica, método de preparação dela e método de prevenção ou tratamento de doenças
KR20200135618A (ko) * 2019-05-23 2020-12-03 ㈜ 디앤디파마텍 폴리펩티드를 포함하는 비알코올성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
CN110964116A (zh) * 2018-09-26 2020-04-07 北京辅仁瑞辉生物医药研究院有限公司 GLP1-Fc融合蛋白及其缀合物
WO2020128967A2 (en) * 2018-12-19 2020-06-25 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity
CN114853908B (zh) * 2019-05-16 2024-06-07 浙江道尔生物科技有限公司 一种治疗代谢疾病的融合蛋白
BR112022023738A2 (pt) * 2020-05-22 2023-01-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulação líquida

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
CA2249195A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
AU749815B2 (en) 1998-03-06 2002-07-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Protein-free preparations
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6677136B2 (en) * 2000-05-03 2004-01-13 Amgen Inc. Glucagon antagonists
GB0121709D0 (en) * 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
US7217845B2 (en) * 2002-11-25 2007-05-15 Sun Bio, Inc. Bifunctional polyethylene glycol derivatives
GB0300571D0 (en) 2003-01-10 2003-02-12 Imp College Innovations Ltd Modification of feeding behaviour
EP1594530A4 (en) 2003-01-22 2006-10-11 Human Genome Sciences Inc HYBRID PROTEINS OF ALBUMIN
US7772188B2 (en) 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
WO2005035761A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
US8263084B2 (en) 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
KR101135244B1 (ko) * 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
US20090238838A1 (en) 2003-11-13 2009-09-24 Hanmi Pharm. Ind. Co. Ltd. Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc
CN103212084B (zh) * 2003-11-13 2018-07-13 韩美科学株式会社 含有免疫球蛋白fc区作为载体的药物组合物
CA2589800A1 (en) 2004-12-02 2006-06-08 Domantis Limited Bispecific domain antibodies targeting serum albumin and glp-1 or pyy
US8404637B2 (en) 2005-02-11 2013-03-26 Amylin Pharmaceuticals, Llc GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties
AU2006230420B2 (en) * 2005-03-31 2011-11-24 Amylin Pharmaceuticals, Llc Compositions and methods for the control, prevention, and treatment of obesity and eating disorders
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
WO2006134340A2 (en) 2005-06-13 2006-12-21 Imperial Innovations Limited Oxyntomodulin analogues and their effects on feeding behaviour
GB0511986D0 (en) 2005-06-13 2005-07-20 Imp College Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
EP2330124B1 (en) 2005-08-11 2015-02-25 Amylin Pharmaceuticals, LLC Hybrid polypeptides with selectable properties
US20090297496A1 (en) 2005-09-08 2009-12-03 Childrens Hospital Medical Center Lysosomal Acid Lipase Therapy for NAFLD and Related Diseases
CA2638800A1 (en) 2006-02-22 2007-09-07 Merck & Co., Inc. Oxyntomodulin derivatives
EP2046367A4 (en) 2006-06-07 2009-11-11 Human Genome Sciences Inc ALBUM INFUSION PROTEINS
KR100880509B1 (ko) 2006-10-16 2009-01-28 한미약품 주식회사 재조합 단백질의 대량 생산을 위한 신규한 벡터, 발현세포주 및 이를 이용한 재조합 단백질의 생산 방법
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
GB0624868D0 (en) * 2006-12-13 2007-01-24 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
JP2008169195A (ja) 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
US20090098130A1 (en) 2007-01-05 2009-04-16 Bradshaw Curt W Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds
KR20150116465A (ko) * 2007-02-15 2015-10-15 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 글루카곤/ｇｌｐ-1 수용체 공동-항진물질
EA201070121A1 (ru) 2007-07-10 2010-06-30 Эли Лилли Энд Компани Лекарственная форма, содержащая слитый белок glp-1-fc
CN101765372B (zh) 2007-07-27 2013-09-04 拜尔农作物科学股份公司 三元活性化合物结合物
KR20100061679A (ko) 2007-09-11 2010-06-08 몬도바이오테크 래보래토리즈 아게 치료적 적용을 위한 티로트로핀 방출 호르몬
CA2702289A1 (en) 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Compounds exhibiting glucagon antagonist and glp-1 agonist activity
WO2009099763A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Indiana University Research And Technology Corporation Ester-based peptide prodrugs
NZ589847A (en) 2008-06-17 2013-01-25 Univ Indiana Res & Tech Corp Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
JP5753779B2 (ja) * 2008-06-17 2015-07-22 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 生理学的ｐＨの緩衝液中で向上した溶解性及び安定性を示すグルカゴン類縁体
WO2010013012A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lund University Bioscience Ab Novel polypeptides and uses thereof
WO2010033207A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of therapeutic peptides
US20110171312A1 (en) 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Modified therapeutic peptides, methods of their preparation and use
JP5635531B2 (ja) 2008-12-15 2014-12-03 ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ グルカゴン類似体
AR074811A1 (es) 2008-12-19 2011-02-16 Univ Indiana Res & Tech Corp Profarmaco de peptido de la superfamilia de glucagon basados en amida
MX362028B (es) 2009-02-03 2019-01-04 Amunix Pharmaceuticals Inc Polipeptidos recombinantes extendidos y composiciones que comprenden los mismos.
WO2010096052A1 (en) * 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
EP2408800B1 (en) 2009-03-20 2016-05-25 Hanmi Science Co., Ltd. Method for preparing a site-specific conjugate of a physiologically active polypeptide
EP3385279B1 (en) 2009-03-20 2020-02-26 Amgen Inc. Carrier immunoglobulins and uses thereof
KR20120087875A (ko) 2009-06-16 2012-08-07 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 Ｇｉｐ 수용체-활성 글루카곤 화합물
ME02220B (me) * 2009-07-13 2016-02-20 Zealand Pharma As Analozi acilovanog glukagona
US20120294855A1 (en) 2009-11-03 2012-11-22 Eli Lilly & Company Glp-1 receptor agonist compounds for obstructive sleep apnea
EP2509997B1 (en) 2009-12-07 2017-08-30 i2 Pharmaceuticals, Inc. Conjugates comprising an antibody surrogate scaffold with improved pharmacokinetic properties
EP2512503A4 (en) 2009-12-18 2013-08-21 Univ Indiana Res & Tech Corp COAGONISTS OF GLUCAGON / GLP-1 RECEPTOR
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
JO2976B1 (en) 2009-12-22 2016-03-15 ايلي ليلي اند كومباني Axentomodulin polypeptide
US20130143798A1 (en) 2010-03-26 2013-06-06 Novo Nordisk A/S Novel glucagon analogues
CA2797089A1 (en) 2010-05-13 2011-11-17 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon superfamily peptides exhibiting g protein-coupled receptor activity
WO2011163012A2 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
KR101337797B1 (ko) 2010-07-14 2013-12-06 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 결합체 액상 제제
KR101382593B1 (ko) 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
WO2012032567A1 (ja) 2010-09-06 2012-03-15 パナソニック株式会社 表示装置及びその制御方法
CN101974077A (zh) 2010-09-15 2011-02-16 南京瑞年天平医药科技有限公司 一种新颖的多肽化合物
KR101303388B1 (ko) 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제
KR101767570B1 (ko) 2010-10-26 2017-08-14 한미사이언스 주식회사 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체
CN102010473A (zh) 2010-11-10 2011-04-13 曹鹏 重组胃泌酸调节素融合蛋白及其制备和应用
US8975223B2 (en) 2010-12-22 2015-03-10 Marcadia Biotech, Inc. Methods for treating metabolic disorders and obesity with a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID No. 146
JP6118500B2 (ja) 2011-02-28 2017-04-19 ローム アンド ハース エレクトロニック マテリアルズ エルエルシーＲｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａｓ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ＬＬＣ フォトレジスト組成物、およびフォトリソグラフィパターンを形成する方法
KR101161526B1 (ko) 2011-05-16 2012-07-02 숭실대학교산학협력단 연료전지용 촉매전극을 위한 코어/쉘 구조의 나노 지지체 및 그 제조방법
CA2838503C (en) 2011-06-10 2020-02-18 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
PH12018501119A1 (en) 2011-06-17 2019-02-04 Hanmi Science Co Ltd A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
RU2014101697A (ru) 2011-06-22 2015-07-27 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Коагонисты рецепторов глюкагона/glp-1
KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
SG11201406671RA (en) 2012-04-19 2014-11-27 Opko Biolog Ltd Long-acting oxyntomodulin variants and methods of producing same
EP2864351B1 (en) 2012-06-21 2016-08-10 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting gip receptor activity
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
KR101373563B1 (ko) 2012-07-25 2014-03-12 전북대학교산학협력단 Ｔｏｆ-ｍｒａ를 이용한 혈류특성 및 ｍｒ-신호강도구배(전단율) 유도방법
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
EA031852B1 (ru) 2012-11-06 2019-03-29 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина
JP6137046B2 (ja) 2014-05-09 2017-05-31 信越化学工業株式会社 単量体、高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
WO2019171352A2 (en) 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity

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