UA125895C2 - КОН'ЮГАТ, ЩО МІСТИТЬ ПОХІДНУ ОКСИНТОМОДУЛІНУ ТА Fc-ДІЛЯНКУ ІМУНОГЛОБУЛІНУ, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ - Google Patents

КОН'ЮГАТ, ЩО МІСТИТЬ ПОХІДНУ ОКСИНТОМОДУЛІНУ ТА Fc-ДІЛЯНКУ ІМУНОГЛОБУЛІНУ, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ Download PDF

Info

Publication number
UA125895C2
UA125895C2 UAA201702255A UAA201702255A UA125895C2 UA 125895 C2 UA125895 C2 UA 125895C2 UA A201702255 A UAA201702255 A UA A201702255A UA A201702255 A UAA201702255 A UA A201702255A UA 125895 C2 UA125895 C2 UA 125895C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
oxyntomodulin
immunoglobulin
derivative
shi
still
Prior art date
Application number
UAA201702255A
Other languages
English (en)
Inventor
Сун Юб Чун
Те Чін Кім
Сун Хее Парк
Йон Юн Ву
Ін Йон Чхой
Се Чхан Квон
Original Assignee
Ханмі Сайенс Ко., Лтд.
Ханми Сайенс Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47357296&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA125895(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ханмі Сайенс Ко., Лтд., Ханми Сайенс Ко., Лтд. filed Critical Ханмі Сайенс Ко., Лтд.
Publication of UA125895C2 publication Critical patent/UA125895C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Винахід стосується кон'югата, який містить похідну оксинтомодуліну, Fc-ділянку імуноглобуліну та непептидильний полімер, де цей непептидильний полімер ковалентно зв'язує похідну оксинтомодуліну та Fc-ділянку імуноглобуліну. Винахід також стосується фармацевтичної композиції, способу запобігання або лікування ожиріння у пацієнта та застосування кон’югата у отриманні лікарського засобу для запобігання або лікування ожиріння.

Description

Заявлений винахід стосується кон'югата, що містить оксинтомодулін та фрагмент імуноглобуліну та його застосування. Більш докладно, заявлений винахід стосується кон'югата, що містить оксинтомодулін, Ес-ділянку імуноглобуліну та непептидильний полімер, де кон'югат отримано шляхом ковалентного зв'язування оксинтомодуліну з Ес-ділянкою імуноглобуліну через непептидильний полімер та фармацевтичної композиції для запобігання або лікування ожиріння, що містить кон'югат.
Останнім часом економічне зростання та змінення у способі життя також ведуть до змінень звичок харчування. Головними причинами зростання випадків надмірної ваги та показників ожиріння у сучасних людей є споживання висококалорійних продуктів, як-то їжі з фаст-фудів та бракування фізичних вправ. Всесвітня організація охорони здоров'я (ВООЗ) вважає, що більше 1 мільярда людей у всьому світі мають надмірну вагу та щонайменше 300 мільйонів з них страждають ожирінням. Зокрема, в Європі щороку в результаті надмірної ваги помирає біля 250 тисяч осіб та у всьому світі через цю недугу щорічно гине більше 2,5 млн. людей (Всесвітня організація охорони здоров'я, глобальна стратегія з харчування, фізичної активності та здоров'ю, 2004). Надмірна вага та ожиріння збільшує кров'яний тиск та рівень холестерину, викликаючи виникнення або загострення різних захворювань, як-то серцево-судинні захворювання, діабет та артрит, а також є головними причинами зростання коефіцієнту частоти захворювань на атеросклероз, гіпертонію, гіперліпідемію або серцево-судинних захворювань у дорослих, дітей або підлітків.
Ожиріння є серйозним станом, який викликає різні захворювання у всьому світі. Вважають, що воно може бути подолано шляхом індивідуальних зусиль, однак також вважають, що пацієнтам, що страждають цією хворобою не вистачає самовладання. Проте лікувати ожиріння дуже важко, тому що воно є складним захворюванням, до якого залучені регуляція апетиту та енергетичний обмін. Для лікування ожиріння треба розглядати аномальні дії, пов'язані з регуляцією апетиту та енергетичним обміном спільно з зусиллями пацієнтів, що страждають на цю хворобу. Було здійснено багато спроб розробки медичних препаратів, здатних до лікування цих аномальних дій, в ході яких були отримані наступні ліки, як-то римонабант (Запоїї-Амепіїв), сибутрамін (Аррой), контрав (ТаКеда) та ористат (Коспе), але вони мають ряд недоліків, що полягають у серйозних несприятливих наслідках або у дуже слабкої ефективності лікування
Зо ожиріння. Наприклад, було повідомлено, що препарат римонабант (Запоїї-Амепії5) має побічний вплив на центральну нервову систему, побічні дії препаратів сибутрамін (АБрой) та контрав (Такеда) зачіпають серцево-судинну систему та вживання протягом року препарату ористат (Коспе) призвело до втрати ваги лише на 4 кг. На жаль, досі немає жодних терапевтичних засобів для лікування ожиріння, що можуть бути безпечно призначені пацієнтам з цією
З5 хворобою.
Багато досліджень було спрямовано на розвиток терапевтичних агентів для лікування ожиріння, що були б позбавлені проблем, притаманних звичайним лікам проти цієї недуги.
Нещодавно багато уваги отримали похідні глюкагону. Глюкагон виробляється підшлунковою залозою, коли рівень глюкози в крові падає в результаті дії інших ліків або захворювань чи гормональних або ферментних нестач. Глюкагон стимулює розщеплення глікогену в печінці та сприяє вивільненню глюкози для підйому рівня глюкози у крові до нормального значення. Крім підвищення рівня глюкози у крові, глюкагон також пригнічує апетит та активує чутливу до гормонів ліпазу (Н5І) адипоцитів для полегшення ліполізу та тим самим демонструє дії, що спрямовані проти ожиріння. Одну з похідних глюкагону, глюкагоноподібний пептид -1 (СІ Р-1) зараз досліджують у якості розробки можливого терапевтичного агенту для лікування гіперглікемії у пацієнтів з діабетом. Дія І Р-1 полягає у стимулюванні синтезу та секреції інсуліну, пригніченні секреції глюкагону, уповільненні спорожнення шлунка, підвищенні засвоювання глюкози та у пригніченні прийому їжі. Ексендин-4, виділений з отрути ящірки має приблизно 5095 амінокислотної тотожності до (І Р-1 та, як також повідомляють, здатен активувати рецептор СІ Р-1, тим самим зменшуючи гіперглікемію у пацієнтів з цукровим діабетом. Однак було повідомлено, що ліки, спрямовані проти ожиріння, в тому числі СІ Р-1 демонструють також побічні прояви, як-то блювання та нудоту.
Отже, в якості альтернативи СІ Р-1, велику увагу було зосереджено на оксінтомодуліні, який являє собою пептид, отриманий з пре-глюкагону (попередника глюкагону) та зв'язується з рецепторами двох інших пептидів - СІ Р-1 та глюкагону. Оксінтомодулін демонструє потужну терапевтичну дію, спрямовану проти ожиріння завдяки тому, що він, подібно до ОЇ Р-1, також пригнічує прийом їжі, сприяє ситості та на додачу, подібно глюкагону, ще має ліполітичну активність.
Завдяки своєї подвійній функції оксинтомодуліновий пептид активно досліджують для бо можливого застосування у якості ліків для лікування ожиріння. Наприклад, Когеап Раїепі Мо.
925017 присвячений фармацевтичній композиції, що містить оксинтомодулін у якості активного інгредієнту для лікування надлишкової маси тіла людини та яку вводять пероральним, парентеральним, трансмукозальним, ректальним, підшкірним або трансдермальним шляхом.
Однак, повідомляється, що ці ліки проти ожиріння, в тому числі оксинтомодулін, мають короткий час напівжиття іп мімо та слабку терапевтичну ефективність навіть при триразовому введенні протягом дня з високою дозою. Отже, було зроблено багато спроб покращення часу напівжиття іп мімо або поліпшення терапевтичної дії оксинтомодуліну щодо лікування ожиріння шляхом його модифікації.
Наприклад, шляхом заміщення І-серину на Ю-серин у положенні 2 оксинтомодуліну для підвищення його стійкості до дипептидилпептидази-ІМ був отриманий його подвійний агоніст (Мегск) (ОРР-ІМ). Приєднання холестеринової функціональної групи до С-кінця водночас дозволило підвищити час напівжиття цієї сполуки у крові. Сполука 2Р2929 (7еаіапа) була отримана шляхом заміщення І- серину на Ю-серин у положенні 2 для посилення стійкості до
ОРРА-ЇМ, заміщення аргініну на аланін у положенні 17 для посилення стійкості до протеази, заміщення метіоніну на лізин у положенні 27 для посилення оксидативної стійкості та заміщення глютаміну на аспарагінову кислоту та аланін у положеннях 20 та 24 та аспарагіну на серии у положенні 28 для посилення стійкості дезамінування. Однак, навіть при збільшенні часу напівжиття подвійного агоністу оксинтомодуліну (МегсК), що став на 8-12 хвилин довшим, ніж у нативного оксинтомодуліну, він також залишається дуже коротким, дорівнює 1.7 годин та потребує введення дози розміром аж до декількох міліграмів на кілограм. На жаль, оксинтомодулін або його похідні мають недоліки, пов'язані з щоденним введенням великої дози через короткий час напівжиття та низьку ефективність.
Винахідники здійснили багато спроб з метою отримання способу підвищення часу напівжиття оксинтомодуліну у крові разом зі збереженням його активності іп мімо. В результаті вони знайшли, що кон'югат, отриманий шляхом зв'язування носія з оксинтомодуліном з застосуванням непептидильного полімеру демонструє покращений час напівжиття у крові разом зі збереженням його активності іп мімо, отже демонструє відмінну дію, спрямовану проти ожиріння, що тим самим довело заявлений винахід до завершення.
Предметом заявленого винаходу є отримання кон'югата, що містить оксинтомодулін, Ес-
Зо ділянку імуноглобуліну та непептидильний полімер, де кон'югат отримано шляхом ковалентного зв'язування оксинтомодуліну з Ес-ділянкою імуноглобуліну через непептидильний полімер.
Іншим предметом заявленого винаходу є отримання фармацевтичної композиції для запобігання або лікування ожиріння, що містить кон'югати.
Також іншим предметом заявленого винаходу є отримання способу запобігання або лікування ожиріння, що, зокрема, полягає у введенні суб'єкту кон'югата або композиції.
Іншим предметом заявленого винаходу є отримання способу застосування кон'югата або композиції для отримання лікарських препаратів для запобігання або лікування ожиріння.
На відміну від нативного оксинтомодуліну, кон'югат, що містить оксинтомодулін та Ес- імуноглобулін заявленого винаходу зменшує прийом їжі, пригнічує спорожнення шлунка, полегшує ліполіз без побічних ефектів, а також демонструє, у порівнянні з оксинтомодуліном, відмінну дію, спрямовану на активування рецептора та довготривалу стійкість, отже, його можна широко застосувати у лікуванні ожиріння з безпечністю та ефективністю. На відміну від нативного оксинтомодуліну, новий пептид заявленого винаходу також зменшує прийом їжі, пригнічує спорожнення шлунка, полегшує ліполіз без побічних ефектів та демонструє відмінну дію, спрямовану на активування рецептору, отже, його також можна широко застосувати у лікуванні ожиріння з безпечністю та ефективністю.
Опис малюнків.
Фіг. 1 є графіком, де наведені змінення у прийом їжі відповідно до введення дози оксинтомодуліну або похідної оксинтомодуліну.
Фіг. 2а є графіком, де наведено результат очищення моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ 5.
Фіг. 25 є графіком, де наведено результат пептидного картування очищеного моно-
ПЕГілованого оксинтомодуліну.
Фіг. 2с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, в тому числі оксинтомодуліну та Ес-імуноглобуліну за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 150.
Фіг. За є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (5ЕО ІЮО МО. 29) за допомогою очисної колонки БООКСЕ 5.
Фіг. За є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 29) та Ес-імуноглобуліну за допомогою очисної колонки БХОШКСЕ (510) 150.
Фіг. 4а є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (5ЕО ІО МО. 30) за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5.
Фіг. 46 є графіком, де наведено результат пептидного картування очищеної похідної моно-
ПЕГілованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 30).
Фіг. 4с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 30) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ 150.
Фіг. Ба є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (5ЕО ІО МО. 31) за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5.
Фіг. 550 є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 31) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ 150.
Фіг. ба є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (5ЕО ІО МО. 2) за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5.
Фіг. 65 є графіком, де наведено результат пептидного картування очищеної похідної моно-
ПЕПлованого оксинтомодуліну (5ЕО 10 МО. г).
Фіг. бс є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 2) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОЕСЕ 150.
Фіг. ба є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 2) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОЕСЕ
ІБО.
Фіг. 7а є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (5ЕО ІО МО. 3), допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5.
Фіг. 76 є графіком, де наведено результат пептидного картування очищеної похідної моно-
ПЕПлованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 3).
Фіг. 7с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 3) та Ес-імуноглобулін за допомогою бутилової високошвидкісної очисної колонки.
Зо Фіг. 74 є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 3) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОЕСЕ 150.
Фіг. ва є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (5ЕО ІО МО. 23) за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5;
Фіг. 860 є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 23) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ 150;
Фіг. 8с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 23) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ
ІБО;
Фіг. За є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (5ЕО ІО МО. 24) за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5;
Фіг. 90 є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 24) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки ЗОСКСЕ 150;
Фіг. Ус є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 24) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ
ІБО;
Фіг. ї1б0а є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (5ЕО ІО МО. 25) за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5;
Фіг. 105 є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 25) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки ЗОСКСЕ 150;
Фіг. 10с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 25) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ
ІБО;
Фіг. 11а є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕПлованого оксинтомодуліну (5ЕО ІО МО. 28) за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5;
Фіг. 115 є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 28) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки ЗООКСЕ 1509;
Фіг. 11с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 28) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ
ІБО;
Фіг. 12 є графіком, де наведені змінення маси тіла мишей відповідно від дози та типу введення кон'югатів похідної оксинтомодуліну з Ес- імуноглобуліном.
Фіг. 13 є графіком, де наведені змінення маси тіла мишей відповідно від дози та типу введення кон'югатів похідної оксинтомодуліну з Ес- імуноглобуліном.
У одному аспекті, для досягнення вищезазначеної мети, заявленим винаходом передбачено кон'югат, що містить оксинтомодулін, Ес-ділянку імуноглобуліну та непептидильний полімер, де означений кон'югат можна отримати шляхом ковалентного зв'язування оксинтомодуліну з Ес- ділянкою імуноглобуліну через непептидильний полімер.
Як тут застосовано, термін "кон'югат" має відношення до кон'югата, що містить оксинтомодулін та інші фактори. Ці інші фактори можуть бути будь-якою речовиною, яка може викликати підвищену стійкість у крові, призупиняти виділення через нирки або мати інші корисні ефекти. До таких факторів у заявленому винаході може бути віднесено РЕс-ділянку імуноглобуліну. Переважним чином, кон'югат може складатися з оксинтомодуліну та Ес-ділянки імуноглобуліну, зв'язаних непептидильним полімером.
Непептидильний полімер може зв'язувати оксинтомодулін та Ес-ділянку імуноглобуліну за допомогою ковалентних зв'язків. Два кінця непептидильного полімеру можуть бути відповідно зв'язані з аміногрупою або тіоловою групою Ес-ділянки імуноглобуліну та похідних оксинтомодуліну.
Передбачається, що кон'югат заявленого винаходу буде мати покращену тривалість ефективної дії іп-мімо у порівнянні з нативним оксинтомодуліном та кон'югат тривалої дії може охоплювати, але без обмеження по типу, оксинтомодулін, отриманий шляхом модифікації, заміщення, додавання або делеції амінокислотної послідовності нативного оксинтомодуліну, оксинтомодулін, кон'югований з біорозкладаним полімером, як-то поліетиленгліколь (ПЕГ),
Ко) оксинтомодулін, кон'югований з білком тривалої дії, як-то альбумін або імуноглобулін, оксинтомодулін, кон'югований з жирною кислотою, що має здатність зв'язуватися з альбуміном у організмі або оксинтомодулін, інкапсульований у біорозкладаних наночастинках.
Як тут застосовано, термін " оксинтомодулін " має відношення до пептиду, що походить від пре-глюкагону (білка-попередника глюкагону) та охоплює нативний оксинтомодулін та його попередники, похідні, фрагменти та варіанти. Переважним чином, він може мати амінокислотну послідовність, зазначену, як ЗЕО ІО МО.1 (но
ТЕТБОУЗКМІ ОБАВАОВЕМОУМІ ММ ТКАМАММІА).
Термін " варіант оксинтомодуліну " має відношення до пептиду, що має одну або декілька амінокислотних послідовностей, які відрізняються від амінокислотних послідовностей нативного оксинтомодуліну, зберігає функцію активування рецепторів СІ Р-1 та глюкагону та може бути отриманий шляхом будь-якого заміщення, додавання, делеції та модифікації або шляхом комбінації означених змінень у частині амінокислотної послідовності нативного оксинтомодуліну.
Термін " похідна оксинтомодуліну " охоплює пептиди, похідні або міметики пептидів, отримані шляхом додавання, делеції або заміщення амінокислот оксинтомодуліну за умови отримання більш високого, у порівнянні з нативним оксинтомодуліном, рівня активування рецепторів СІ Р-1 та глюкагону.
Термін " фрагмент оксинтомодуліну " має відношення до фрагменту, що має додавання (при якому можуть бути додані амінокислоти, що не зустрічаються у природі (наприклад, амінокислоти Ю-типу)) або делецію однієї або декількох амінокислот до М-або С- кінця нативного оксинтомодуліну та який має функцію активування рецепторів СІ Р-1 та глюкагону .
Кожен спосіб отримання варіантів, похідних та фрагментів оксинтомодуліну можна застосувати окремо або у комбінації. Наприклад, заявлений винахід передбачає пептид, який має одну або декілька амінокислот, що відрізняються від амінокислот нативного пептиду та дезамінування М- кінцевого амінокислотного залишку та здатен до активування рецепторів СІ Р- 1 та глюкагону.
Зазначені ту амінокислоти мають наступну абревіатуру згідно з правилом номенклатури
ІОРАС-ІШОВ: аланін - А, аргінін - К, аспарагін - М, аспарагінова кислота - О, цистеїн - С, глютамінова кислота - Е, глютамін - 0), гліцин - б, гістидин - Н, ізолейцин - І, лейцин - Ї., лізин -
К, метіонін - М, фенілаланін - Е, пролін - Р, серин - 5, треонін - Т, триптофан - МУ, тирозин-у, валін - М.
Похідна оксинтомодуліну у заявленому винаході охоплює будь-який пептид, отриманий шляхом заміщень, додавань, делецій або пост-трансляційних модифікацій (наприклад, метилування, ацилування, убиквитинилування, внутрішньомолекулярного ковалентного зв'язування) у амінокислотній послідовності оксинтомодуліну (НЗОСТЕТ5 рУЗКИ ОБККАООЕМОУМ.ММТКАМАММІА, ЗЕО ІО МО.1) за умови одночасного активування ним рецепторів глюкагону та СІ Р-1. Для зазначеного заміщення або додавання може бути застосована будь-яка з 20 амінокислот, яких звичайно можна зустріти у білках людини, а також атипові та штучні амінокислоти. Атипові амінокислоти можна придбати від відомих виробників, як-то Зідта-Аїагісй, СпетРер Іпс. та Сеплуте РВагтасешісаІ5. Пептиди, які містять ці амінокислоти та атипові пептидні послідовності можна синтезувати та придбати від промислових постачальників, наприклад, від Атегісап Реріїде Сотрапу або Васпет (США) або
Апудеп (Корея).
У одному особливому втіленні, похідна оксинтомодуліну заявленого винаходу є новим пептидом, що містить амінокислоти за наступною Формулою 1.
В1-Х1-Х2-А4ТЕТ50-Х3-Х4-Х5-Х6-Х7-Х8-Х9-Х10-Х11-Х12-Х13-Х14-Х15-Х16-Х17-Х18-Х19-Х20-
Х21-Х22-Х23-Х24-Н2 (Формула 1). де КІ1 є гістидином, дезаміно-гістидилом, диметил-гістидилом (М-диметил-гістидил), бета- гідроксиімідазопропіонілом, 4-імідазоацетилом, бета-карбокси імідазопропіонілом або тирозином;
Х1 є АЇБ (аміноїзомасляною кислотою), й - аланіном, гліцином, баг (М-метилгліцином), серином або а - серином;
Х2 є глютаміновою кислотою або глютаміном;
ХЗ є лейцином або тирозином;
ХА є серином або аланіном;
Х5 є лізином або аргініном;
Хб є глютаміном або тирозином;
Х7 є лейцином або метіоніном;
ХВ є аспарагіновою кислотою або глютаміновою кислотою;
ХУ є глютаміновою кислотою, серином, альфа-метил-глютаміновою кислотою або видалено;
Х10 є глютаміном, глютаміновою кислотою, лізином, аргініном, серином або видалено;
Х11 є аланіном, аргініном, валіном або видалено;
Х12 є аланіном,, аргініном, серином, валіном або видалено;
Х13 є лізином, глютаміном, аргініном, альфа-метил-глютаміновою кислотою або видалено;
Х14 є аспарагіновою кислотою, глютаміновою кислотою, лейцином або видалено
Х15 є фенілаланіном або видалено;
Х16 є ізолейцином, валіном або видалено;
Х17 є аланіном, цистеїном, глютаміновою кислотою, лізином, глютаміном, альфа-метил- глютаміновою кислотою або видалено;
Х18 є триптофаном або видалено;
Х19 є аланіном , ізолейцином, лейцином, серином, валіном або видалено;
Х20 є аланіном, лізином, метіоніном, глютаміном, аргініном або видалено;
Х21 є аспарагіном або видалено;
Х22 є апланіном, гліцином, треоніном або видалено;
Х23 є цистеїном, лізином або видалено;
Х24 є пептидом, що має 2-10 амінокислот та складається з комбінацій аланіну, гліцину та серину або видалено; та
К2 є послідовністю КАКМАКММІА (ЗЕБЕО 10 МО. 35), ОРБ5БОАРРРЗ (5БО ІЮ МО. 36),
СРБОБОАРРРБК (5ЕО ІЮ МО. 37), НБОСТЕТЗОУ5КМІ О (ЗЕО І МО. 38), НВОСТЕТЗОМАМІ ОК (ЗЕО ІО МО. 39), НаЕСТЕТ5ОЇ ЗКОМЕЕЕАМК (5ЕО ІО МО. 40) або видалено (за виключенням випадку, якщо амінокислотна послідовність за Формулою 1 є ідентичною до амінокислотній послідовності БЕО ІЮ МО. 1).
З метою підсилення активності оксинтомодуліну дикого типу до глюкагонового рецептора та рецептора СІ Р-1, пептид заявленого винаходу може бути заміщено 4-імідазоацетилом, де видалено альфа-карбон гістидину у положенні 1 амінокислотної послідовності, позначеної тут, як 5ЕО ІО МО. 1; дезаміно-гістидилом, у якому видалено М-кінцеву аміногрупу; диметил- гістидилом (М-диметил-гістидил), у якому М-кінцеву аміногрупу модифіковано двома метильними групами; бета-гідрокси-імідазопропіонілом, у якому М-кінцеву аміногрупу заміщено 60 гідроксильною групою або бета-карбокси-імідазопропіонілом, у якому М-кінцеву аміногрупу заміщено карбоксильною групою. Крім того, ділянка зв'язування рецептора СІ Р-1 також може бути заміщена амінокислотами, що підсилюють гідрофобні та іонні зв'язки або їх комбінації. Для підсилення активності до рецептора СІ Р-1, частину послідовності оксинтомодуліну може бути заміщено амінокислотною послідовністю сі Р-1 або ексендину-4.
Крім того, частину послідовності оксинтомодуліну може бути заміщено послідовністю, що стабілізує альфа-спіраль. Переважним чином, амінокислоти у положеннях 10, 14, 16, 20, 24 та 28 амінокислотної послідовності за Формулою 1 можуть бути заміщені амінокислотами або похідними амінокислот, що охоплюють Туг(4-Ме), Рпе, Рпе(4-Ме), Рне(4-СІ), Рне(4-СМ), РНе(4-
МО»), Рпе(4-МН»г), Рід, Раї, Маї, АїІа(2-тіеніл) та АІа(бензотієеніл) та, як відомо, стабілізують альфа-спіраль без обмежень по типу чи по кількості амінокислот або їх похідних, що стабілізують альфа-спіраль та можуть бути вставленими. Переважним чином, амінокислоти у положеннях 10 та 14, 12 та 16, 16 та 20, 20 та 24 та 24 та 28 також можуть бути заміщені на глютамінову кислоту або лізин, відповідно щоб утворювати кільця, але також не існує обмежень по кількості кілець, що буде вставлена. Найбільш переважніше, пептид може мати амінокислотну послідовність, вибрану з наступних Формул 1-6.
У одному особливому втіленні, похідна оксинтомодуліну заявленого винаходу є новим пептидом, що містить амінокислотну послідовність за наступною Формулою 2, де амінокислотну послідовність оксинтомодуліну заміщено амінокислотною послідовністю ексендину або СІ Р-1.
В1-А-КЗ (Формула 2).
У іншому особливому втіленні, похідна оксинтомодуліну заявленого винаходу є новим пептидом, що містить амінокислотну послідовність за наступною Формулою 3, отриманим шляхом з'єднання частини амінокислотної послідовності оксинтомодуліну та частини амінокислотної послідовності ексендину або сі Р-1 через прийнятний амінокислотний лінкер.
В1-В-С-К4 (Формула 3).
У іншому особливому втіленні, похідна оксинтомодуліну заявленого винаходу є новим пептидом, що містить амінокислотну послідовність за наступною Формулою 4, у якої частину амінокислотної послідовності оксинтомодуліну заміщено амінокислотою, здатною до підсилення спорідненості зв'язування до рецептора СІ Р- 1, наприклад, амінокислоту Геи у положенні 26, яка зв'язується з рецептором СІ Р-1ї шляхом гідрофобної взаємодії заміщено гідрофобним
Ко) залишком, Не або Маї. в1-50аТЕТ5ОУБКМІ 0-01-02-03-04-05- ЕМОМУ/-06-07-М-О08-К3 (Формула 4).
У іншому особливому втіленні, похідна оксинтомодуліну заявленого винаходу є новим пептидом, в тому числі пептидом за наступною Формулою 5, де частина амінокислотної послідовності є видаленою, доданою, або заміщеною іншими амінокислотами для підсилення активних властивостей нативного оксинтомодуліну до рецепторів СІ Р-1 та глюкагону.
В1-Е1-ОСТЕТ5ОМ5КМІ 0-Е2-ЕЗ-ВА-Е4-Е5-ЕМ-Е6-М ММТ-Е7-К5 (Формула 5).
Радикал КІ, наведений у Формулах 2 - 5 відповідає опису за Формулою 1;
А вибрано з групи, що охоплює послідовності ХОСТЕТЗОМУБКМІ О5ЕКАООЕМО УМ ММ (ЗЕБЕО 10 МО. 41) БОСТЕТ5ОМ5КМІОЕЕАМВІ РІЕММІММТ (5ЕБО 10 МО. 42), 50
СТЕТБОУЗКМІ ОЕВВАООЕМАМІ КМТ (ЗЕО І МО. 43), ФОСТЕТЗОУЗАМІ ЕЕЕАМВІ. РІЕУМІ КМО (ЗБЕО 10 МО. 44) аОсСТЕТ5ОУ5ВОМЕЕБЕЕАМВІРІЕУМІ КМ (5БО 10 МО. (45),
СЕСТЕТ5ОЇ ЗКОМЕБЕЕБЕА МКІРІЕММАА (5БО 10 МО. 46) та 5ОСТЕТ5ОУ5КОМЕЕЕАМК
ГРЕМ Ма (5ЕО ІЮ МО. 47);
В вибрано з групи, що охоплює послідовності 5БОСТЕТЗОУБКМІ О5АВАООЕМ СОУ ММ (ЗЕБЕО 10 МО. 41) 5ОСТЕТЗОУ5КМІОБЕЕАМВІРІЕУММІ ММ (ЗЕБО 10 МО. 42),
ЗОСТЕТ5ОМЗКМІОЕНВАООЕМАМЛІ КМТ (5ЕБО 0 МО. 43) аОСаТЕТ5ОМУЗВАМІ ЕЕЕАУВА
ІРІЕМІКМа (5ЕО 10 МО. 44), БОСТЕТЗОУЗВОМЕЕЕАМВІ РІЕУМІ КМ (5ЕБО 10 МО. 45),
СЕСТЕТ5ОЇ ЗВОМЕЕЕАМВІ РІЕМ/АА (5ЕО І МО. 46), БОСТЕТЗОМЗАОМЕЕЕАМ ВІ РІЕММІ ММС (ЗЕО ІО МО. 47), СЕСТЕТ5ЗОІЇ ЗКОМЕЕЕАМНКІ РІЕМУ (5ЕО ІЮО МО. 48) та ЗОСТЕТЗОУЗЕМІ О (ЗЕО І МО. 49);
С є пептидом, який має 2-10 амінокислот та складається з комбінацій аланіну, гліцину та серину; р1 є серином, глютаміновою кислотою або аргініном; ра є аргініном, глютаміновою кислотою або серином; р3З є аргініном, аланіном або валіном; раА є аргініном, валіном або серином; р5 є глютаміном,, аргініном або лізином; рб є ізолейцином, валіном або серином; 60 р7 є метіоніном, аргініном або глютаміном;
ра є треоніном, гліцином або аланіном;
Е1 є серином, АБ, Заг, а-аланіном або а-серином;
Е2 є серином або глютаміновою кислотою;
ЕЗ є аргініном або лізином;
Е4 є глютаміном або лізином;
Е5 є аспарагіновою кислотою або глютаміновою кислотою;
ЕЄ є глютаміном, цистеїном або лізином;
Е7 є цистеїном, лізином або видалено;
КЗ є послідовністю КАКЕМАММІА (ЗЕБЕО ІО МО. 35), СОРЗБ5БОАРРРЗ (5ЕБО ІЮО МО. 36) або
СРБОБОАРРРБК (ЗЕО І МО. 37);
К4 є послідовністю НЗОСТЕТЗОУЗКМІ О (5ЕО ІЮ МО. 38), НБОСТЕТЗОМАМІ ОК (5ЕО І
МО. 39) або НСЕСТЕТ50ОІ БКОМЕЕЕАМК (5ЕО ІО МО. 40); та
КО є послідовністю КАКМАКММІА (ЗЕБЕО 10 МО. 35), ОРБ5БОАРРРЗ (5БО ІЮ МО. 36),
СРБ5БЗСОСАРРРБК (5ЕО ІЮ МО. 37) або видалено (за виключенням випадку, коли амінокислотні послідовності за Формулою 2 - 5 є ідентичними до послідовності 5ЕО ІЮ МО. 1).
Переважним чином, похідна оксинтомодуліну заявленого винаходу може бути новим пептидом за наступною Формулою 6.
В1-Х1-Х2-А4ТЕТ50-Х3-Х4-Х5-Х6-Х7-Х8-Х9-Х10-Х11-Х12-Х13-Х14-Х15-Х16-Х17-Х18-Х19-Х20-
Х21-Х22-Х23-Х24-НК2 (Формула 6).
Де КІ є гістидином, дезаміно-гістидилом, 4-імідазоацетилом або тирозином;
ХІ1 є Аїр (аміноїзомасляною кислотою), гліцином або серином;
Х2 є глютаміновою кислотою або глютаміном;
ХЗ є лейцином або тирозином;
ХА є серином або аланіном;
Х5 є лізином або аргініном;
Хб є глютаміном або тирозином;
Х7 є лейцином або метіоніном;
ХВ є аспарагіновою кислотою або глютаміновою кислотою;
ХУ є глютаміновою кислотою, альфа-метил-глютаміновою кислотою або видалено;
Х10 є глютаміном, глютаміновою кислотою, лізином, аргініном або видалено;
Х11 є аланіном, аргініном або видалено;
Х12 є аланіном, валіном або видалено;
Х13 є лізином, глютаміном, аргініном, альфа-метил-глютаміновою кислотою або видалено;
Х14 є аспарагіновою кислотою, глютаміновою кислотою, лейцином або видалено;
Х15 є фенілаланіном або видалено;
Х16 є ізолейцином, валіном або видалено;
Х17 Є аланіном, цистеїном, глютаміновою кислотою, глютаміном, альфа-метил- глютаміновою кислотою або видалено;
Х18 є триптофаном або видалено;
Х19 є аланіном, ізолейцином, лейцином, валіном або видалено;
Х20 є аланіном, лізином, метіоніном, аргініном або видалено;
Х21 є аспарагіном або видалено;
Х22 є треоніном або видалено;
Х23 є цистеїном, лізином або видалено;
Х24 є пептидом, що має 2-10 амінокислот, які є гліцином або видалено; та
К2 є послідовністю КАКМАКММІА (ЗЕБЕО 10 МО. 35), ОРБ5БОАРРРЗ (5БО ІЮ МО. 36),
СРОБОАРРРОК (5ЕО 10 МО. 37), НЗОСТЕТ5ОМБКМІО (5БО І МО. 38), НЗОСТЕТ5О
МАМІ ОК (5ЕО І МО. 39), НСЕСТЕТ50ОІ ЗКОМЕЕЕАМК (5ЕО ІО МО. 40) або видалено (за виключенням випадку, коли амінокислотна послідовність за Формулою б є ідентичною
БО послідовності БЕО ІЮ МО. 1).
Більш переважним чином, похідна оксинтомодуліну заявленого винаходу може бути вибраною з групи, що охоплює пептиди ЗЕО ІО МО. 2 - 34. Ще переважніше, похідна оксинтомодуліну заявленого винаходу може бути похідною оксинтомодуліну, описаною у
Таблиці 1 Прикладу 2-1.
Оксинтомодулін має активні властивості двох пептидів, СІ Р-1 та глюкагону. СІ Р-1 зменшує рівень глюкози у крові, зменшує прийом їжі та пригнічує спорожнення шлунка та глюкагон підвищує рівень глюкози у крові, полегшує ліполіз та зменшує масу тіла шляхом підвищення енергетичних метаболізмів. Різні біологічні дії двох пептидів можуть викликати різні небажані ефекти, як-то підвищення рівня глюкози у крові, якщо глюкагон демонструє більш домінантний 60 ефект, ніж СІ Р-1, або викликання нудоти та блювання, якщо СІ Р-1 демонструє більш домінантний ефект, ніж глюкагон. Наприклад, кон'югат, отриманий у наведеному нижче
Прикладі 10 демонструє більш сильну спорідненість до рецептора СІ Р-1, ніж кон'югат, отриманий у Приклад 12, але в результаті експерименту іп мімо, наведеного у Прикладі 18 було показано, що ефективність першого з них була нижчою, ніж ефективність другого, що могло бути пов'язано з підвищенням ефективності кон'югатів по відношенню до рецептора глюкагону в прикладі 12, незважаючи на його низьку ефективність по відношенню до рецептора СІ Р-1.
Отже, похідні оксинтомодуліну та їх кон'югати, що охоплюються заявленим винаходом не обмежуються тільки тими похідними, що демонструють безумовне покращення активних функцій. Наприклад, для контролю співвідношення активності глюкагону та сі Р-1, амінокислоти можуть бути модифіковані у положеннях 1 та 11 оксинтомодуліну, що, як відомо, пригнічує активність глюкагону .
Кон'югати заявленого винаходу можуть викликати підвищену стійкість у крові, подовжене вивільнення з нирок та змінення спорідненості до рецепторів шляхом ковалентного зв'язування носія з оксинтомодуліном або шляхом утворення мікросфер. Носій, здатний утворювати кон'югат, що містить оксинтомодулін може бути вибраним з групи, що охоплює альбумін, трансферин, антитіла, фрагменти антитіл, еластин, гепарин, полісахариди, як-то хітин, фібронектин та, ще більш бажано, Ес-ділянку імуноглобуліну, де кожна з вищеозначених сполук може підвищити час напівжиття кон'югатів у крові при зв'язуванні з оксинтомодуліном.
Термін " Ес-ділянка імуноглобуліну " як тут застосовано, має відношення до білка, що містить важколанцюгову сталу ділянку 2 (СН2) та важколанцюгову сталу ділянку З (СНЗ) імуноглобуліну, за винятком його змінних ділянок важкого та легкого ланцюгів, важколанцюгової сталої ділянки 1 (СНІ) та легколанцюгової сталої ділянки 1 (СІ 1). Також він може додатково містити петельну ділянку у важколанцюговій сталій ділянці та частину або всі Ес-ділянки, в тому числі важколанцюгову сталу ділянку 1 (СНІ) та/або легколанцюгову сталу ділянку 1 (СІ 1), за винятком змінних ділянок важкого та легкого ланцюгів, за умови, що він має фізіологічні функції суттєво схожі або кращі, ніж у нативного білка. Також Ес-ділянка імуноглобуліну може бути фрагментом з делецією відносно великої частини амінокислотної послідовності СН2 та/або
СНЗ. Отже, Ес-ділянка імуноглобуліну заявленого винаходу може містити 1) домен СНІ, домен
СН2, домен СНЗ та домен СНА, 2) домен СНІ та домен СНІ, 3) домен СНІ та домен СНЗ, 4)
Ко) домен СН2 та домен СНЗ, 5) комбінацію одного або декількох доменів та петельної ділянки (або частини петельної ділянки) імуноглобуліну та 6) димер кожного домену важколанцюгових та легколанцюгових сталих ділянок.
Ес-ділянка імуноглобуліну заявленого винаходу містить нативну амінокислотну послідовність та послідовність, яка походить від неї (мутантну). Такою похідною амінокислотної послідовності є послідовність, що відрізняється від нативної амінокислотної послідовності завдяки наявності делецій, вставок, неконсервативних або консервативних заміщень одного або декількох амінокислотних залишків або комбінацій таких змінень. Наприклад, у Ес - ділянці антитіл (дб, прийнятною метою для модифікації можуть бути амінокислотні залишки, що, як відомо, відіграють важливу роль у зв'язуванні та знаходяться у положеннях 214 - 238, 297 - 299, 318 - 322 або 327 - 331.
Також можна застосувати різні інші похідні, в тому числі похідні, у яких видалено ділянку, здатну утворювати дисульфідний зв'язок або видалено певні амінокислотні залишки на М-кінці нативної Ес-ділянки або додано метіоніновий залишок. Крім того, для видалення ефекторних функцій також можна внести делецію у сайт зв'язування з комплементом, як-то у сайт зв'язування Сід та у сайт АОСС (залежної від антитіл клітинно-опосередкованої цитотоксичності). Способи отримання таких похідних послідовності Ес-ділянки імуноглобуліну наведені у УМО 97/34631 та УМО 96/32478.
У цій галузі також відомі заміни амінокислот у складі білків та пептидів, що суттєво не змінюють їх активності (Н. Меигай, К. г. НІіЇЇ, Тпе Ргоїеіп5, Асадетіс Ргеб55, Мем/ МогК, 1979).
Найбільш часто зустрічаються наступні заміни у обох напрямках, як-то АйІа/5ег, Маййіе, Авзр/сІм,
Тиг/зег, АїІа/Счу, Аїа"пг, Зегп/Азп, АїЇа/Ма!ї, Зег/Суту, Тну/РНе, АПа/Рго, ГГ увз/Аг9, Авр/Азп, І ешліє,
І еим/маїЇ, Аіа/сІш та Авр/сіІу. Крім того, по бажанню можна модифікувати Ес-ділянку шляхом фосфорилювання, сульфатування, акрилування, глікозилювання, метилювання, фарнезилювання, ацетилювання, амідування тощо.
Вище згадані Ес - похідні є похідними, що мають біологічну активність, ідентичну біологічній активності Ес-ділянки заявленого винаходу або покращену структурну стійкість, наприклад, проти нагрівання, рн, тощо.
Крім того, ці Ес-ділянки також можна отримати з нативних форм, отриманих від людини та інших тварин, в тому числі корів, кіз, свиней, мишей, кроликів, хом'яків, щурів та морських 60 свинок або можуть бути рекомбінантними конструкціями або їх похідними, отриманими з трансформованих тваринних клітин або мікроорганізмів. У даному випадку вони можуть бути отримані з нативного імуноглобуліну шляхом виділення цілих імуноглобулінових молекул з організму людини або тварин та їх обробки протеолітичним ферментом. Папаїн розщеплює нативний імуноглобулін на Бар та Ес-ділянки та обробка пепсином веде до отримання фрагментів рЕ"с та Е(ав)2. Для виділення фрагментів Ес або рЕ'с ці фрагменти можна піддати ексклюзійній хроматографії Переважним чином, Ес-ділянка людського походження є рекомбінантною імуноглобуліновою Ес-ділянкою, отриманою з мікроорганізмів.
На додачу, Ес-ділянка імуноглобуліну заявленого винаходу може мати нативні цукрові ланцюги, які є збільшеними або зменшеними порівняно з нативною формою або може знаходитися у деглікозилованій формі. Збільшення, зниження або усунення /Ес- імуноглобулінових цукрових ланцюгів може бути здійснено за допомогою відомих у цій галузі способів, як-то хімічного, ферментативного та генно-інженерного способу з застосуванням мікроорганізмів. Усунення цукрових ланцюгів Ес-ділянки веде до різкого зниження спорідненості зв'язування до частини Сід першого комплементарного компоненту С1 та до зниження або взагалі до втрати залежної від антитіл клітинно-опосередкованої цитотоксичності або залежної від комплементу цитотоксичності, тим самим не викликаючи небажаної імунної відповіді іп-мімо.
У зв'язку з цим, для заявленого винаходу більш прийнятним буде застосування Ес-ділянки імуноглобуліну у деглікозилованій або аглікозилованій формі у якості носія ліків.
Як тут застосовано, термін " деглікозилування " має відношення до ферментного видалення цукрових функціональних груп з Ес-ділянки та термін " аглікозилування " має відношення до Ес- ділянки, отриманої з прокаріот, переважно Е. Соїї у неглікозилованій формі.
В той же час Ес-ділянку імуноглобуліну можна отримати від людини та інших тварин, в тому числі корів, кіз, свиней, мишей, кроликів, хом'яків, щурів та морських свинок та переважно від людини.
На додачу, Ес-ділянка імуноглобуліну може бути Ес-ділянкою, отриманою з антитіл Ідс, ІдА,
ІЧО, ЧЕ та ІдМ або з застосуванням їх комбінацій або гібридів. Переважним чином, її отримують з антитіл (ДС або ІДМ, які є одними з найпоширеніших білків у крові людини та, найбільш переважніше, її отримують з антитіл Їдс, що, як відомо, підсилюють час напівжиття білків, що зв'язуються з лігандом.
З іншого боку, термін " комбінація ", як тут застосовано, має відношення до поліпептидів, що кодують одноланцюгові Ес-ділянки імуноглобуліну однакового походження, приєднані до одноланцюгового поліпептиду іншого походження з утворенням димеру або мультимеру. Інакше кажучи, можна отримати димер або мультимер, що складається з двох або більше фрагментів, вибраних з групи, що охоплює Ес - фрагменти Ідс Ес, ІдА Ес, І9М Ес, ІдО Ес та ЧЕ.
Термін " непептидильний полімер " має відношення до біосумісного полімеру, що містить дві або більше одиниць, що повторюються, зв'язаних між собою будь-яким ковалентним зв'яком за винятком пептидного. У заявленому винаході, непептидильний полімер може бути взаємозамінне застосовано з непептидильним лінкером.
Корисний для заявленого винаходу непептидильний полімер може бути вибраний з групи, що охоплює біорозкладаний полімер, ліпідний полімер, хітин, гіалуронову кислоту та їх комбінації та, переважним чином, біорозкладаний полімер може бути поліетиленгліколем, поліпропіленгліколем, етиленгліколь пропіленгліколевим співполімером, поліоксіетильованим поліолом, полівініловим спиртом, полісахаридом, декстраном, поливиниловим етиловим ефіром, полімолочною кислотою (РІ А) або полімолочно-гліколевою кислотою (РІ СА) та, більш переважно, він є поліетиленгліколем (РЕС; ПЕГ). На додачу, до обсягу заявленого винаходу також можна включити відомі у цій галузі похідні цих речовин, що можуть бути легко отримані за допомогою добре відомих у цей галузі способів.
Пептидний лінкер, застосований у злитому (гібридному) білку, отриманому за допомогою загальноприйнятного способу злиття у межах рамки зчитування має певні недоліки через те, що він легко розщеплюється протеолітичним ферментом іп-мімо, отже, у цьому випадку не варто очікувати на достатній ефект підвищення сивороткового часу напівжиття введених за допомогою носія активних ліків. Однак, у заявленому винаході, для підтримання сироваткового часу напівжиття пептиду, подібного до пептиду носія, може бути застосовано полімер, що має стійкість до протеолітичного ферменту. Отже, тут може бути застосовано будь-який непептидильний полімер без обмеження за умови, що цьому полімеру буде притаманна функція стійкості іп-мімо до протеолітичного ферменту. Непептидильний полімер має молекулярну масу у межах 1 -100 кДа, переважно 1-20 кДа. Приєднаний до Ес-ділянки імуноглобуліну непептидильний полімер заявленого винаходу може бути або одним полімером або комбінацією різних типів полімерів.
Застосований у заявленому винаході непептидильний полімер має хімічно активну групу, здатну до зв'язування з Есо-ділянкою муноглобуліну та білковими ліками. Непептидильний полімер має хімічно активну групу на обох кінцях, яка переважно є вибраною з групи, що містить хімічно активний альдегід, як-то пропіональдегід, бутіральдегід, малеїмід та похідну сукциніміду.
Похідна сукциніміду може бути сукциніміділ-пропіонатом, гідрокси-сукциніміділом, сукциніміділ- карбоксиметилом або сукциніміділ-карбонатом. Зокрема, коли непептидильний полімер на обох своїх кінцях має хімічно активну альдегідну групу, він також на обох кінцях є ефективним щодо зв'язування фізіологічно активного поліпептиду та імуноглобуліну з мінімальними неспецифічними реакціями. Кінцевий продукт, отриманий шляхом відновного алкілування через альдегідний зв'язок є набагато більш стійким, ніж продукт, зв'язаний шляхом амідного зв'язку.
Альдегідна хімічно активна група вибірково зв'язується з М-кінцем при низьких значеннях рнН та зв'язується з лізисюовим залишком при високих значеннях рН, як-то рН 9.0, з утворенням ковалентного зв'язку.
Хімічно активні групи на обох кінцях непептидильного полімеру можуть бути однаковими або різними. Наприклад, непептидильний полімер може мати малеїімідну групу на одному кінці та альдегідну групу, пропіональдегідну групу або бутиральдегідну групу на іншому кінці. При застосуванні поліетиленгліколя з хімічно активними гідрокси-групами на обох кінцях у якості непептидильного полімеру, подібну гідрокси- групу можна активувати до різних хімічно активних груп шляхом відомих хімічних реакцій або для отримання кон'югата заявленого винаходу тривалої дії можна застосувати наявний у продажу поліетиленгліколь з модифікованою хімічно активною групою.
Кон'югат заявленого винаходу може бути таким, у якому обидва кінця непептидильного полімеру з двома хімічно активними кінцевими групами є приєднаними до аміногрупи або тіолової групи Ес-ділянки імуноглобуліну та похідних оксинтомодуліну, відповідно.
Хімічно активна група на обох кінцях непептидильного полімеру переважно є вибраною з групи, що охоплює хімічно активну альдегідну групу, пропіональдегідну групу, бутиральдегідну групу, малеіїмідну групу та сукцинімідну похідну. Сукцинімідна похідна може бути сукцинімідилпропіонатом, гідрокси-сукцинімідилом, сукцинімідил карбоксиметилом або сукцинімідилкарбонатом.
Зо Дві хімічно активні кінцеві групи непептидильного полімеру можуть бути однаковими або відрізнятися між собою. Наприклад, непептидний полімер може мати малеїіїмідну групу на одному кінці та альдегідну групу, пропіональдегідну групу або бутиральдегідну групу на іншому кінці. Наприклад, коли непептидильний полімер має хімічно активну альдегідну групу на одному кінці та малеїмідну групу на іншому кінці, тоді він є ефективним на обох кінцях до зв'язування з фізіологічно активним поліпептидом та імуноглобуліном з мінімальними неспецифічними реакціями. Згідно з Прикладами заявленого винаходу, кон'югати були отримані шляхом ковалентного зв'язування оксинтомодуліну або його похідної та Ес-ділянки імуноглобуліну з застосуванням ПЕГ, тобто непептидильного полімеру, що містив виключно пропіональдегідну групу або малеїімідну та альдегідну групи разом.
У порівнянні з нативним оксинтомодуліном, кон'югати заявленого винаходу демонструють відмінну активність відносно рецепторів Сі Р-1 та глюкагону та, завдяки з'єднанню з Ес- ділянкою, також мають підвищений час напівжиття у крові зі збереженням таким чином активності іп мімо протягом тривалого часу.
У іншому аспекті, заявлений винахід стосується фармацевтичної композиції для запобігання або лікування ожиріння, що містить пептид.
Як тут застосовано, термін " запобігання " має відношення до всіх дій, завдяки яким можна затримати або загальмувати виникнення захворювання. Термін " запобігання " у заявленому винаході означає, що виникнення ожиріння завдяки таким факторам, як-то підвищення маси тіла або жиру в організмі затримується або загальмовується шляхом введення кон'югатів заявленого винаходу.
Як тут застосовано, термін " лікування " має відношення до всіх дій, завдяки яким можуть бути пом'якшені, покращені або послаблені симптоми захворювання. Термін " лікування " у заявленому винаході має відношення до пом'якшення, покращення або послаблення симптомів ожиріння шляхом введення кон'югатів заявленого винаходу, що веде до зменшення маси тіла або жиру в організмі.
Як тут застосовано, термін " ожиріння " припускає накопичення надмірної кількості жирової тканини в організмі та індекс маси тіла (маса тіла (кг), поділена на зріст у квадраті (м)) вищий, ніж 25, слід розглядати як ожиріння. Звичайно ожиріння виникає внаслідок дисбалансу енергії, коли кількість харчового раціону перевищує кількість енергії, що витрачається протягом бо тривалого періоду часу. Ожиріння є метаболічним захворюванням, що впливає на весь організм та підвищує ризик розвитку діабету, гіперліпідемії, сексуальної дисфункції, артриту та серцево- судинних захворювань та в деяких випадках воно пов'язане з захворюваністю на рак.
Кон'югати заявленого винаходу, отримані шляхом зв'язування оксинтомодуліну або його похідних з Ес-ділянкою імуноглобуліну демонструють відмінну зв'язувальну спорідненість до рецепторів глюкагону та СІ Р-1 (Таблиця 3) та відмінну стійкість іп-мімо до протеолітичних ферментів, а також зберігають активність іп-мімо протягом тривалого періоду, отже демонструють відмінні ефекти, спрямовані проти ожиріння, як-то зменшення маси тіла (Фіг. 12).
Фармацевтична композиція заявленого винаходу може додатково містити фармацевтично прийнятний носій, наповнювач або розчинник. Як тут застосовано, термін " фармацевтично прийнятний " має відношення до такої композиції, якої буде достатньо для досягнення терапевтичного ефекту без наявності шкідливих побічних проявів та яку можна буде легко визначити в залежності від типу захворювань, віку, маси тіла та стану здоров'я пацієнта, тендерної чутливості та чутливості до ліків, шляху, способу та частоти введення, тривалості лікування, ліків, застосованих у комбінації або співпадаючих з композицією цього винаходу та від інших відомих у медицині факторів.
Фармацевтична композиція, в тому числі похідна заявленого винаходу може додатково містити фармацевтично прийнятний носій. Для перорального введення, носій може містити, але без обмеження, зв'язуючу речовину, змащувач, розпушувач, наповнювач, розчинник, диспергуючий агент, стабілізатор, суспендуючий агент, барвник та ароматизатор. Для ін'єкційних препаратів, носій може містити буферизуючий агент, консервант, анальгетик, розчинник, ізотонічний агент та стабілізатор. Для препаратів для місцевого введення, носій може містити основу, наповнювач, змащувач та консервант.
Композицію заявленого винаходу можна отримати у вигляді різних лікарських форм у комбінації з вищезазначеними фармацевтично прийнятними носіями. Наприклад, для перорального введення, фармацевтичну композицію можна отримати у вигляді таблеток, пластинок, пастилок, капсул, еліксирів, суспензій або сиропів. Для ін'єкційних препаратів, фармацевтичну композицію можна отримати у вигляді одиничних стандартних лікарських форм в ампулах або у мультидозовому контейнері. Фармацевтичну композицію також можна отримати у вигляді розчинів, суспензій, таблеток, пігулок, капсул та препаратів довготривалої дії.
З іншого боку, приклади прийнятних для фармацевтичних препаратів носіїв, наповнювачів та розчинників охоплюють лактозу, декстрозу, цукрозу, сорбіт, маніт, ксиліт, еритрит, мальтит, крохмаль, гуміарабік, каучук, альгінат, желатин, фосфат кальцію, силікат кальцію, целюлозу, метилцелюлозу, мікрокристалічну целюлозу, полівінілпіролідон, воду, метилгідроксибензоат, пропілгідроксибензоат, тальк, стеарат магнію та мінеральні оливи. Крім того, фармацевтичні препарати додатково можуть містити наповнювачі, антикоагулянти, змащувані, зволожувачі, ароматизатори та антисептики.
Фармацевтичну композицію заявленого винаходу також може мати будь-який препарат, вибраний з групи, що охоплює таблетки, пігулки, порошки, гранули, капсули, суспензії, розчини для внутрішнього застосування, емульсії, сиропи, стерильні водні розчини, безводні розчинники, ліофілізовані препарати та супозиторії.
Композиції також можуть бути отримані у вигляді прийнятних для організму пацієнта одиничних стандартних лікарських форм та переважно у вигляді препарату, корисного для пептидних ліків відповідно за типовим прийнятним у фармацевтичній галузі способом за умови введення пероральним або парентеральним шляхом, як-то, але без обмеження, шляхом черезшкірного, внутрішньовенного, внутрішньом'язевого, внутриартериального, інтрамедулярного, інтравентрикулярного, трансдермального, легеневого, підшкірного, внутрішньочеревного, інтраназального, внутрикишечного, місцевого, сублінгвального, вагінального або ректального введення.
Композицію також можна застосувати шляхом змішування з різними фармацевтично прийнятними носіями, як-то фізіологічний розчин або органічні розчинники. Для підвищення стійкості або поглинальної здатності можуть бути застосовані вуглеводи, як-то глюкоза, цукроза або декстрани, антиоксиданти, як-то аскорбінова кислота або глутатіон, хелатуючі агенти, низькомолекулярні білки або інші стабілізатори.
Доза та частота введення фармацевтичної композиції заявленого винаходу визначаються типом активного інгредієнту разом з різними факто рами, як - то типом захворювання, що підлягає лікуванню, шляхом введення, віком пацієнта, статтю та масою тіла та ступенем тяжкості хвороби.
Загальна ефективна доза композиції заявленого винаходу може бути введена пацієнту у 60 вигляді одиничної дози або може бути введена протягом тривалого часу у багатьох дозах згідно з розділеним протоколом лікування. Вміст активного інгредієнту у фармацевтичній композиції заявленого винаходу може змінюватися в залежності від тяжкості захворювання. Переважним чином, загальна щоденна доза пептиду заявленого винаходу може приблизно дорівнювати 0.0001 мкг - 500 мг/кг маси тіла пацієнта. Переважним чином, ефективну дозу пептиду визначають з урахуванням різних факторів, в тому числі віку, маси тіла, статі та стану здоров'я пацієнта, тяжкості захворювання, харчування та швидкості секреції на додачу до урахування шляху введення фармацевтичної композиції та частоти лікування. У зв'язку з цим, фахівець у даній галузі може легко визначити ефективну дозу, відповідну для конкретного застосування фармацевтичної композиції заявленого винаходу. Фармацевтична композиція відповідно до заявленого винаходу особливо не обмежується препаратом, а також шляхом та типом введення за умови, що вона демонструє ефекти заявленого винаходу.
Фармацевтична композиція заявленого винаходу демонструє відмінну тривалість ефективної дії іп-мімо та титр, що дозволяє значно зменшити її кількість та частоту введення.
Крім того, фармацевтичну композицію може бути введено окремо або у комбінації або її введення може співпадати з введенням інших фармацевтичних препаратів, що демонструють профілактичні або терапевтичні ефекти, спрямовані проти ожиріння. Такі фармацевтичні препарати не є певним чином обмеженими та можуть охоплювати агоніст рецептора СІ Р-1, агоніст рецептора лептину, інгібітор ОРР-ЇМ, антагоніст рецептора У5, антагоніст рецептора меланіноконцентруючого гормону (МОН), агоніст рецептора У2/3, агоніст рецептора МСОЗ/4, інгібітор шлункової / підшлункової ліпази, агоніст 5НТ2с, агоніст рецептора рзЗА, агоніст рецептора аміліну, антагоніст греліну та/або антагоніст рецептора греліну.
У іншому аспекті, заявлений винахід стосується способу запобігання або лікування ожиріння, що, зокрема, полягає у введенні суб'єкту кон'югата або фармацевтичної композиції, яка містить кон'югат.
Як тут застосовано, термін " введення " має відношення до введення пацієнту кількості заздалегідь визначеної речовини шляхом певного прийнятного способу. Композицію заявленого винаходу може бути введено за допомогою будь-якого з загальноприйнятних шляхів за умови його здатності досягати до бажаної тканини, наприклад, але без обмеження, шляхом внутрішньочеревинного, внутрішньовенного, внутрішньом'язового, підшкірного,
Зо внутрішньошкірного, перорального, місцевого, інтраназального, внутрішньолегеневого або ректального введення. Однак, оскільки при пероральному введенні виникає розчинення пептидів, то активні інгредієнти композиції для перорального введення повинні бути вкриті оболонкою або отримані у захищеному проти деградації у шлунка стані.
Термін " суб'єкт " у заявленому винаході має відношення до особи, у якої є підозра на наявність ожиріння та яка є ссавцем, в тому числі людиною, мишею та хатньою худобою з ожирінням або з можливістю його виникнення, однак, це може бути будь-який без обмеження суб'єкт, що може підлягати лікуванню з пептидом або фармацевтичною композицією заявленого винаходу. Фармацевтичну композицію, що містить пептид заявленого винаходу вводять суб'єкту з підозрою на ожиріння, забезпечуючи тим самим його ефективне лікування. Термін " ожиріння " розкрито вище.
Терапевтичний спосіб заявленого винаходу може, зокрема, полягати у введенні композиції, що містить фармацевтично ефективну кількість пептиду. Загальна добова доза повинна бути визначена лікарем шляхом відповідного медичного висновку та її вводять один або кілька разів.
По відношення до об'єктів заявленого винаходу, певний рівень терапевтично ефективної дози для будь-якого певного пацієнта може варіювати в залежності від різних факторів, добре відомих у цій галузі медицини, в тому числі від виду та ступеню очікуваної відповіді, певних композицій відповідно до наявності чи відсутності застосування з ними інших агентів, а також від віку, маси тіла, статі та стану здоров'я пацієнта, харчування та шляху введення, швидкості секреції композиції, часу тривалості терапії, застосованих у комбінації інших ліків або ліків, застосування яких співпадає з застосуванням композиції цього винаходу та від подібних добре відомих у медицині факторів.
У іншому аспекті, заявлений винахід передбачає застосування кон'югата або фармацевтичної композиції, що його містить у лікарському препараті для запобігання або лікування ожиріння.
Надалі заявлений винахід буде більш детально описано з посиланням на наступні приклади. Однак ці приклади наведені тут лише з ілюстративною метою без обмеження заявленого винаходу.
Приклад 1. Отримання активованої клітинної лінії іп міго.
Приклад 1-1. Отримання клітинної лінії що демонструє відповідь циклічного бо аденозинмонофосфату (ЦАМФ) до СГ Р-1.
Реакцію ПЛР проводили з застосуванням ділянки, відповідної до ОКЕ (відкритої рамки зчитування) кКДНК (Огібепе ТесппоЇодіе5, Іпс. БА) гена рецептора СІ Р-1 людини у якості матриці та наступних прямих та зворотних праймерів, що містили кожен з сайтів рестрикції Ніпаї 11 та ЕсоКіІ для отримання продукту ПЛР.
Прямий праймер: 5-ССсССООоСсоСсСсаса,аасСасТтАТТССИААДАТАС-3'ЇЗЕО ІО МО. 47)
Зворотній праймер: 5-СААСсСссСтоС,садааАСатСсадсСтсТТААСАТАС-3'ЗЕО ІО МО. 48)
Для отримання рекомбінантного вектора хоссС/с5І РІК продукт ПЛР клонували у відомий вектор експресії тваринних клітин хосс/апніт.
Клітинну лінію СНО 0044 культивували у середовищі ОМЕМ/Е12 (10 95 ЕВ5). Середовище трансфікували рекомбінантним вектором хООсС/З|РІК з застосуванням ліпофектаміну (Іпмігодеп, ОБА) та проводили культивування у селективному середовищі, що містило 1 мг/ мл 0418 та 10 нМ метотрексату з наступним відбором з нього одиничних клональних клітинних ліній за допомогою способу граничного розбавлення, звідки зрештою була відібрана така клітинна лінія, що демонструє відмінну та залежну від концентрації відповідь ЦАМФ до СІ Р-1.
Приклад 1-2. Отримання клітинної лінії, що демонструє відповідь ЦАМФ до глюкагону.
Реакцію ПЛР проводили з застосуванням ділянки, відповідної до ОКЕ (відкритої рамки зчитування) кКДНК (Огібсепе ТесппоїЇодіе5, Іпс. О5А) гена рецептора глюкагону людини у якості матриці та наступних прямих та зворотних праймерів, що містили кожен з сайтів рестрикції Хпої та ЕсокКіІІ, розташовані належним чином для отримання продукту ПЛР.
Прямий праймер: 5-СДаСОСАСАСсСсОАсСсатосссССатАСТТААСаИсСо-3'Є5ЕО І МО. 49)
Зворотній праймер: 5-СТААССОСАСТо тосасааспААаАСстТадасСТСасо-3'ЄЗЕО І МО. 50).
Для отримання рекомбінантного вектора хоссС/зЗСОК продукт ПЛР клонували у відомий вектор експресії тваринних клітин хосс/анпіт.
Клітинну ліню СНО 0044 культивували у середовищі ОМЕМ/Е12 (1095 ЕВ5) Середовище трансфікували рекомбінантним вектором хОссС/5ЗСОК з застосуванням ліпофектаміну та проводили культивування у селективному середовищі, що містило 1 мг/ мл (3418 та 10 нм метотрексату з наступним відбором з нього одиничних клональних клітинних ліній за допомогою способу граничного розбавлення, звідки зрештою була відібрана така клітинна лінія, що
Зо демонструє відмінну та залежну від концентрації відповідь ЦАМФ на глюкагон.
Приклад 2. Перевірка активності похідних оксинтомодуліну іп міїго.
Приклад 2-1. Синтез похідних оксинтомодуліну.
Для вимірювання активних властивостей похідних оксинтомодуліну іп міго був проведений синтез похідних оксинтомодуліну з наступними амінокислотними послідовностями (Таблиця 1).
Таблиця 1.
Оксинтомодулін та похідні оксинтомодуліну.
Для вимірювання спрямованої проти ожиріння ефективності синтезованих у Прикладі 2-1 похідних оксинтомодуліну була виміряна клітинна активність іп міго з застосуванням отриманих у Прикладах 1-1 та 1-2 клітинних ліній.
Для експресії гена рецептора СГР-1 людини та гена рецептора глюкагону шляхом трансфікування клітин СНО (клітин яєчників китайського хом'яка) були отримані відповідні клітинні лінії, прийнятні для вимірювання активних властивостей СІ Р-1 та глюкагону.
Отже, активність кожної похідної оксинтомодуліну вимірювали з застосуванням кожної трансформованої клітинної лінії. Точніше кажучи, кожну клітинну лінію пересівали двічі або тричі на тиждень та нанесли аліквоти у кожну з лунок 96-лункового планшету зі щільністю у 1 х 1095 клітин та наступним 24-годинним культивуванням.
Культивовані клітини промили буфером КЕКВ та суспендували у 40 мл буферу КЕВ, що містив 1 мМ ІВМХ та залишили на 5 хвилин при кімнатній температурі. Оксинтомодулін (ЗЕО 10
МО.1) та похідні оксинтомодуліну (відображені, як послідовності БЕО ІЮ МО. 2-6, 8, 10-13, 17, 18, 23-25, 27, 28 та 32-34) розвели шляхом 5 - разового серійного розведення до 1000 нМ - 0.02 нм та кожний зразок (40 мл) цих розведень додали до клітин та культивували при 37 "С протягом години у інкубаторі з СО». Потім, для лізису клітин до них додали 20 мл клітинного лізуючого буферу та клітинні лізати застосували для вимірювання концентрацій цАМФ за допомогою набору САМР аззау КИ (МоїІесшаг ЮОемісе, ОБА). На підставі отриманих результатів було проведено обчислення значень ЕСзо з порівнянням їх між собою. Значення ЕСзо наведені у наступній Таблиці 2.
Таблиця 2
Порівняння активних властивостей іп міго оксинтомодуліну та похідних оксинтомодуліну відносно рецепторів СІ Р-1 та глюкагону. 11111111 снОйіРЯЧА | сносов
Як наведено у Таблиці 2, існують похідні оксинтомодуліну, що демонструють відмінні активні властивості іп мійго та інші, порівняно з нативним оксинтомодуліном (ЗЕО ІЮ МО. 1), співвідношення активних властивостей, спрямованих до рецептора СІР-1 та рецептора глюкагону.
Відомо, що оксинтомодулін активує обидва рецептори - рецептор СІ Р-1 та рецептор глюкагону для пригнічення апетиту, полегшення ліполізу та сприяння безпечності, що таким чином демонструє ефекти, спрямовані проти ожиріння. Похідні оксинтомодуліну згідно з заявленим винаходом демонструють сильніші, ніж оксинтомодулін дикого типу активні властивості іп міго, спрямовані до обох цих рецепторів, отже їх можна застосувати в якості терапевтичного агенту для лікування ожиріння з більшою ефективністю, ніж відомий дослідникам оксинтомодулін .
Приклад 3. Перевірка активності похідних оксинтомодуліну іп мімо.
Для вимірювання іп мімо терапевтичної активності похідних оксинтомодуліну, дослідники перевірили змінення у прийом їжі, що виникли в результаті введення похідних оксинтомодуліну у мишах ор/оБ з застосуванням нативного оксинтомодуліну в якості контролю.
Точніше кажучи, діабетичних мишей з ожирінням оБ/о0р, яких звичайно застосовують для перевірки ефективних властивостей терапевтичних агентів для лікування ожиріння та діабету спочатку утримували від прийому їжі протягом 16 годин з наступним введенням 1 або 10 мг/кг оксинтомодуліну або 0.02, 0.1, 1 або 10 мг/кг похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 2), після чого дослідники перевіряли прийом їжі тваринами протягом двох годин (Фіг. 1). Фіг. 1 є графіком, де наведені змінення у прийом їжі відповідно до введення дози оксинтомодуліну або похідної оксинтомодуліну.
Як видно з Фіг. 1, введення 1 мг/кг похідної оксинтомодуліну призвело до покращених ефектів пригнічення прийому їжі, ніж введення 10 мг/кг оксинтомодуліну .
Взяті разом, похідні оксинтомодуліну заявленого винаходу мають сильніші ефективні властивості, спрямовані проти ожиріння, ніж оксинтомодулін дикого типу навіть незважаючи на меншу дозу введення, що свідчить про покращення проблем, пов'язаних з оксинтомодуліном дикого типу, який демонструє низькі спрямовані проти ожиріння ефективні властивості та який треба вводити тричі на день з великою дозою.
Приклад 4. Отримання кон'югатів, які містять оксинтомодулін та Ес-імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування лізинового залишку у положенні 30 амінокислотної послідовності оксинтомодуліну (5ЕО ІЮ МО. 1) 3.4 К пропіонАЮ(2) ПЕГом (ПЕГ з двома пропіл альдегідними групами, МОРЕ, дарап), була проведена реакція між оксинтомодуліном та 3.4 К пропіон АГ О(2)
ПЕГом з молярним співвідношенням 1:12 та концентрацією білка 5 мг/мл, яка тривала при температурі 4 С протягом 4.5 годин. Весь цей час реакція відбувалася у суміші для розчинення, що містила 100 мМ Ма-боратний буфер (рН 9.0) та 4595 ізопропанол, до якої додали 20 мМ ціаноборогідриду натрію (ціаноборогідрид (ЗСВ, МасМВнНз), МасмВнНЗз) у якості агента - відновника. Після завершення реакції, реакційну суміш нанесли на колонку ЗООКСЕ 5 (ХК16, Атегепат Віозсіепсе5) для очищення оксинтомодуліну, що має моно-ПЕГілованого лізин (колонка: БОСКСЕ 5 (ХК16, Атегепат Віозсіепсе5), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -3
Фо 1 хв. В -» 40 Фо 222 хв. В (А: 20 мм цитрат натрію, рН 3.0 ж 45 95 етанол, В: ж 1М КСІ)) (Фіг. 2а). Фіг. 2а є графіком, де наведено результат очищення моно-ПЕПлованого оксинтомодуліну за допомогою очисної колонки ФБОШКСЕ 5. Моно-ПЕГілованого елюйованих піків перевіряли за допомогою 505-РАСЕ (електрофорез в поліакриламідному гелі в присутності додецилсульфату натрію по Лемлі) та вибірковість лізину перевіряли шляхом пептидного картування з застосуванням протеази Азр-М (Фіг. 25). Фіг.25 є графіком, де наведено результат пептидного картування очищеного моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну .
Потім була проведена реакція між очищеним моно-ПЕГілованою оксинтомодуліном та Ес- імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1:10 та концентрацією білка 20 мг/ мл, яка тривала 16 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рН 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Після завершення реакції реакційну суміш нанесли на колонку БОШКСЕ 150 очисної колонки для очищення кон'югатів, які містять оксинтомодулін та Ес-імуноглобулін (
колонка: БОШКСЕ 150) (ХК16, Атегепат Віозсіепсе5), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -20 95 100 хв. В (А: 20мМ Тті5-НСІ, рН 7.5, В: ї- 1М Масі)) (Фіг.2с). Фіг. 2с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять оксинтомодулін та Ес - імуноглобулін .
Приклад 5. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮО МО. 29) та Ес - імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування лізинового залишку у положенні 30 амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (5ЕО ІЮ МО. 29) 3.4 К пропіон АІ 0(2) ПЕГом, була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (5ЕСО ІЮ МО. 29) та 3.4 К пропіон АГО(2)ПЕГом з молярним співвідношенням 1:12 та концентрацією білка 5 мг/ мл, яка тривала 4.5 годин з температурою 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у суміші для розчинення, що містила 100 мМ натрій - боратного буферу (рН 9.0) та 45 95 ізопропанолу з додаванням до реакційної суміші 20 мМ 5СВ у якості агента - відновника. Після завершення реакції, реакційну суміш нанесли на колонку
ЗОШКСЕ 5 для очищення похідної оксинтомодуліну, що мала моно-ПЕГілованого лізин (колонка: ЗОШКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» З 95 1 хв. В -» 40 95 222 хв. В (А: 20 мМ цитрат натрію, рН 3.0 ї- 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)) (Фіг.За). Фіг. За є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 29) за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ 5.
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 29) та Ес-імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1:10 та концентрацією білка 20 мг/мл, яка тривала 16 годин з температурою 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рН 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ 5СВ у якості агента - відновника. Після завершення реакції, реакційну суміш нанесли на колонку ЗООКСЕ 150 для очищення кон'югатів, що містили похідну оксинтомодуліну (ЗЕ ІЮ МО. 29) та Ес- імуноглобулін (колонка: БОШКСЕ 150, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 2095 100 хв. В (А: 20мМ Ттгіз-НСІ, рН 7.5, В: ї- 1М Масі)) (Фіг.3Б5). Фіг. 30 є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 29) та Ес - імуноглобулін.
Приклад 6. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 30) та
Ес-імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування лізинового залишку у положенні ЗО амінокислотної послідовності
Зо похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 30) 3.4 К пропіон АІ (2) ПЕГом була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (ЗЕСО ІЮ МО. 30) та 3.4 К пропіон АГО(2)ПЕГом з молярним співвідношенням 1:15 та концентрацією білка З мг/ мл, яка тривала 4.5 годин при температурі 4 "б. Весь цей час реакція відбувалася у суміші для розчинення, що містила 100 мМ буфер
НЕРЕЗ (рН 7.5) та 45 95 ізопропанол з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Після завершення реакції, реакційну суміш нанесли на колонку БООКСЕ 5 для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-»ПЕГілованим лізином (колонка: ЗОШКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -»390 1 хв. В -» 40905 222 хв. В (А: 20мМ цитрат натрію, рН 3.0 ї- 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)) (Фіг.4а2). Фіг. 4а є графіком, де наведено результат очищення похідної моно- ПЕПлованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 30) за допомогою очисної колонки ЗОШШКСЕ 5. Моно-ПЕГілування елюйованих піків перевіряли за допомогою ЗО5-РАСЕ та вибірковість лізину перевіряли шляхом пептидного картування з застосуванням протеази
Авр-М (Фіг.46). Фіг. 465 є графіком, де наведено результат пептидного картування очищеної похідної моно-ПЕПлованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 30).
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 30) та Ес- імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1:10 з концентрацією білка, що дорівнювала 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рн 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 30) та Ес-імуноглобулін, реакційну суміш після завершення реакції
БО нанесли на колонку БОШКСЕ 150 (колонка: БОШКСЕ 150), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 2095 100 хв. В (А: 20мМ Ттгі5-НСЇІ, рН 7.5, В: ї- 1М Масі)) (Фіг.4с). Фіг. 4с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 30) та Ес - імуноглобуліну .
Приклад 7. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 31) та
Ес- імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування лізинового залишку у положенні ЗО амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (5ЕО ІЮ МО. 31) 3.4 К пропіон АІ Д(2) ПЕГом, була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (ЗЕ ІЮ МО. 31) та 3.4 К пропі0НАСГО(2) ПЕГом з молярним співвідношенням 1:15 та концентрацією білка З мг/ мл, яка тривала 4.5 годин при температурі бо 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у суміші для розчинення, що містила 100 мМ буфер
НЕРЕЗ (рН 7.5) та 4595 ізопропанол з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-ПЕПлованим лізином, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку ЗОШКСЕ 5 (колонка: БООКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: О -» З 905 1 хв. В -» 40 95 222 хв. В (А: 20мМ цитрат натрію, рН 3.0 ж 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)) (Фіг.ба). Фіг. ба є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕПлованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 31) за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5.
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 31) та Ес -імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1: 10 та концентрацією білка 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рН 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ
ЗСВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, що містили похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 31) та Ес-імуноглобулін, після завершення реакції реакційну суміш нанесли на колонку БОШКСЕ150). (колонка: БООКСЕ 150), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 20 95 100 хв. В (А: 20мМ Тгтгі5-НСІ, рН 7.5, В: ї- 1М Масі)) (Фіг.5р). Фіг. 50 є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (5ЕО ІЮ МО. 31) та Ес - імуноглобулін.
Приклад 8. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮО МО. 2) та Ес- імуноглобуліну.
Спочатку для ПЕГілування лізинового залишку у положенні ЗО амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 2) 3.4 К пропіон А 0(2) ПЕГом, була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (ЗЕ ІО МО. 2) та 3.4 К пропіоНнАСГО(2) ПЕГом з молярним співвідношенням 1:10 та концентрацією білка З мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у суміші для розчинення, що містила 100
ММ буфер НЕРЕЗ (рН 7.5) та 45 95 ізопропанол з додаванням до реакційної суміші 20 мМ ЗОВ у якості агента - відновника. Для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-ПЕГілованим лізином, після завершення реакції реакційну суміш нанесли на колонку БОШКСЕ 5 (колонка:
ЗОИШКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -и3 95 1 хв. В -» 40 95 222 хв. В (А: 20 мМ цитрат натрію , рН 3.0 ї- 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)) (Фіг.ба). Фіг. ба є графіком, де наведено
Зо результат очищення похідної моно-ПЕПлованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 2) за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5. Моно-ПЕГілування елюйованих піків перевіряли за допомогою
ЗО5-РАСЕ та вибірковість лізину перевіряли шляхом пептидного картування з застосуванням протеази А5р-М (Фіг.6р). Фіг. 60 є графіком, де наведено результат пептидного картування очищеної похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮО МО. 2).
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 2) та Ес-імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1:8 та концентрацією білка 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рн 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 2) та Ес-імуноглобулін, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку ЗООКСЕ 150 (колонка: БОШЕСЕ 150, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 4 95 1 хв. В -» 20 95 80 хв. В (А: 20мМ Тті5-НСЇІ, рН 7.5, В: ї- 1М Масі)) (Фіг.бс) та Зоигсе ІЗО (колонка: БОШЕСЕ ІБО (ХК16, Атегопат Віозсіепсев5), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 10095 100 хв. В, (А: 20мММ Ттгі5-НСІЇ, рн 7.5, В: ї- 1.3М А5Б))(Фіг.ба). Фіг. бс є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (5ЕО ІЮ МО. 2) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки ЗОШКСЕ БО та Фігба є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 2) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ 1І5О.
Приклад 9. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 3) та Ес- імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування лізинового залишку у положенні 27 амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮО МО. 3) 3.4 К пропіон АІ Д(2) ПЕГом була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (ЗЕСО ІЮ МО. 3) та 3.4 К пропіон АГО(2)ПЕГгГом з молярним співвідношенням 1:10 та концентрацією білка З мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у суміші для розчинення, що містила 100
ММ буфер НЕРЕЗ (рН 7.5) та 45 95 ізопропанол з додаванням до реакційної суміші 20 мМ 5СВ у якості агента - відновника. Для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-ПЕПлованим лізином, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку ФБОШКСЕ 5 (колонка:
ЗОИШКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -»2395 1 хв. В -» 4095 222 хв. В (А: 20 мМ бо цитрат натрію, рН 3.0 ї- 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)) (Фіг.7а). Фіг. 7а є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 3) за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 5. Моно-ПЕГілування елюйованих піків перевіряли за допомогою
ЗО5-РАСЕ та вибірковість лізину перевіряли шляхом пептидного картування з застосуванням протеази А5р-М (Фіг.7р). Фіг. 70 є графіком, де наведено результат пептидного картування очищеної похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 3).
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 3) та Ес-імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1: 8 та концентрацією білка 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рн 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 3) та Ес - імуноглобулін, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на бутилову високошвидкісну очисну колонку (колонка: Вшу! ЕЕ(ХК16, Атег5зпат Віозсіепсе5), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: В 0 -» 100 Фо 5 хв. А(А: 20мМ Ттгіз-НСІ, рН 7.5, В: ї- 1.5М Масі)) (Фіг.7с) та на очисну колонку БООКСЕ 150 (колонка: БООКСЕ 150, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 4905 1 хв. В -» 20 9о 80 хв. В(А: 20мМ Ттгі5-НСЇ, рН 7.5, В: 4 1М Масі)) (Оїгод).
Фіг. 7с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 3) та Ес - імуноглобулін за допомогою бутилової високошвидкісної очисної колонки та Фіг. 7а є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 3) та Ес -імуноглобулін за допомогою очисної колонки
ЗОШАСЕ 150.
Приклад 10. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 23) та
Ес-імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування цистегнового залишку у положенні 24 амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 23) МАС-10К-АГО ПЕГом (МОР., дарап) була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 23) та МАІ -10К-АГО ПЕГом з молярним співвідношенням 1: З та концентрацією білка З мг/мл, яка тривала протягом З годин при кімнатній температурі. Весь цей час реакція відбувалася у 50 мМ буфері Ттгі5 (рН 8.0) з додаванням до реакційної суміші 4595 ізопропанолу та 1М гуанідину. Для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-ПЕГілованим цистеїном, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку БОШКСЕ 5 (колонка: БОШКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -7100 95 50 хв. В (А: 20мМ цитрат натрію, рН 3.0 ж 4595 етанол, В: ї- 1М КСІ)) (Фіг.ва). Фіг.ва є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (ЗЕО
ІО МО.23) за допомогою очисної колонки ФБОШКСЕ 5.
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 23) та Ес-імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1: 5 та концентрацією білка 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рн 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 23) та Ес - імуноглобулін, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку
ЗОИШКСЕ 150 ( колонка: БОШКСЕ 150), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 4 95 1 хв. В -» 20 95 80 хв. В(А: 20мМ Тті5-НСЇІ, рН 7.5, В: 4 1М Масі)) (Фіг.8Б5) та Зошигсе ІЗО ( колонка: ЗООКСЕ
ІБО, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: В 0 -» 100 95 100 хв. А, (А: 20мМ Тті5-НСЇІ, рН 7.5, В: ж 1.1М АЗБ)) (Фіг.вс). Фіг. 8р є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 23) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки
ЗОШКСЕ 150. Фіг. 8с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 23) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки
ЗОШНАСЕ ІБО.
Приклад 11. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 24) та
Ес-імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування цистеїнового залишку у положенні 30 амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 24) МАГ -10К-АГО ПЕГом була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (ЗЕ ІЮ МО. 24) та МАС-10К-АГО ПЕГом з молярним співвідношенням 1: З та концентрацією білка З мг/мл, яка тривала протягом З годин при кімнатній температурі. Весь цей час реакція відбувалася у 50 мМ буфері Ттгіз (рН 8.0) з додаванням до реакційної суміші 45 90 ізопропанолу та 1М гуанідину. Для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-ПЕПлованим цистеїном, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку ЗОШКСЕ 5 (колонка: ФОШКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 10095 50 хв. В (А: 20 мм цитрат натрію , рН 3.0 я 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)) (Фіг.ба). Фіг. За є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕПлованого оксинтомодуліну (ЗЕО 60 ІО МО. 24) за допомогою очисної колонки ФБОШКСЕ 5.
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 24) та Ес-імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1: 5 та концентрацією білка 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рн 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 24) та Ес-імуноглобулін, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку ЗОСЕСЕ 150 (колонка: БОШЕСЕ 150, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 4 95 1 хв. В -» 20 95 80 хв. В(А: 20мММ Тгі5-НСІЇ, рН 7.5, В: ї- 1М Масі)) (Фіг.9 Б) та на колонку Зошигсе ІБО (колонка:
ЗОШЕКСЕ І5БО, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: В 0 -» 100 95 100 хв. А, (А: 20мМ Тті5-НСОЇ, рН 7.5, В: - 1.1М А5)) (Фіг.9с) Фіг. 9р є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 24) та ЕРс-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 150). Фіг. 9с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 24) та Ес-імуноглобуліну за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 1ІЗО.
Приклад 12. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 25) та
Ес-імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування цистеїнового залишку у положенні 30 амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 25) з МАГ -10К-АІ О ПЕГом була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (ЗЕ ІЮ МО. 25) та МАС-10К-АГО ПЕГом з молярним співвідношенням 1:3 та концентрацією білка З мг/мл, яка тривала протягом З годин при кімнатній температурі. Весь цей час реакція відбувалася у 50 мМ буфері Ттгі5 (рН 8.0) з додаванням до реакційної суміші 1М гуанідину. Для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-
ПЕПлованим цистеїном, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку
ЗОИШКСЕ 5 (колонка: БОШКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -МО0095 50 хв. В (А: 20
ММ цитрат натрію , рН 3.0 ї- 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)) (Фіг. 10а). Фіг. 1ба є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕгілованого оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 25) за допомогою очисної колонки БОШЕСЕ 5.
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 25) та Ес-імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1:5 та концентрацією білка
Зо 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рн 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 25) та Ес - імуноглобуліну, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку
ЗОИШКСЕ 150 (колонка: ФОШКСЕ 150), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 4 95 1 хв. В --» 20 95 80 хв. В(А: 20мМ Ттгі5-НСІ, рН 7.5, В: 4 1М Масі)) (Фіг. 105) та на колонку Бошигсе ІЗО (колонка: БОШКСЕ ІЗО, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: В 0 -» 10095 100 хв. А, (А: 20мММ
Тиів-НСІ, рН 7.5, В: ї- 1.1М АБ)) (Фіг.1О0с). Фіг. 10Ь є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 25) та Ес -імуноглобулін за допомогою очисної колонки ЗОШКСЕ 150. Фіг. 10с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 25) та Ес - імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШЕКСЕ 150.
Приклад 13. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 28) та
Ес - імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування цистеїнового залишку у положенні 30 амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 28) 3.4 К пропіон АГ О0(2) ПЕГом була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (5ЕО І МО. 28) та МАІГ-10К-АГО ПЕГОом з молярним співвідношенням 1:3 та концентрацією білка З мг/мл, яка тривала протягом З годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 50 мМ натрій -боратному буфері (рн 9.0) з додаванням до реакційної суміші 2М гуанідину. Для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-ПЕГілованим лізином, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку
ЗОИШКСЕ 5 (колонка: БОШКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -53 95 1 хв. В -» 40 95 222 хв. В (А: 20мМ цитрат натрію, рН 3.0 я 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)) (Фіг. 11 а). Фіг. 11а є графіком, де наведено результат очищення похідної моно-ПЕГілованого оксинтомодуліну (ЗЕО
ІО МО. 28) за допомогою очисної колонки ФБОШКСЕ 5.
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО І МО. 28) та Ес-імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1: 10 та концентрацією білка 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рН 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ
ЗСВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну бо (ЗЕО ІО МО. 28) та Ес-імуноглобулін, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку ФОШКСЕ 150 ( колонка: ФОШКСЕ 150), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 4 95 1 хв. В -» 20 95 80 хв. В(А: 20мМ Ттгі5-НСЇІ, рН 7.5, В: ї- 1М Масі)) (Фіг. 115) та на колонку Бо!йгсе
ІБО ( колонка: ФБОШКСЕ ІБО, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: ВО" 10095 100 хв. А, (А: 20мММ Ттгі5-НСІ, рН 7.5, В: ї- 1.1М А5Б)) (Фіг. 11с). Фіг. 11 р є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 28) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШКСЕ 150 та Фіг. 11с є графіком, де наведено результат очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 28) та Ес-імуноглобулін за допомогою очисної колонки БОШКСЕ І5О.
Приклад 14. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 32) та
Ес-імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування цистеїнового залишку у положенні 30 амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 32) з МАГ -10К-АІ О ПЕГом була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (ЗЕ ІЮ МО. 32) та МАС-10К-АГО ПЕГом з молярним співвідношенням 1: З та концентрацією білка 1 мг/мл, яка тривала протягом З годин при кімнатній температурі. Весь цей час реакція відбувалася у 50 мМ буфері Тгі5 (рН 8.0) з додаванням до реакційної суміші 2М гуанідину. Для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-
ПЕГілованим цистеїном, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку
ЗОИШКСЕ 5 (колонка: БОШСКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -100905 50 хв. В (А: 20
ММ цитрат натрію, рН 3.0 я 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)).
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 32) та Ес-імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1:8 та концентрацією білка 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рн 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 32) та Ес - імуноглобулін, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку
ЗОШЕКСЕ 150 (колонка: БОШСЕСЕ 150), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 4 95 1 хв. В --» 20 95 80 хв. В(А: 20мМ Ттгі5-НСІ, рН 7.5, В: ї- 1М Масі)) та Зошигсе ІБО (колонка: ЗОШСКСЕ ІЗО, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: В 0 -» 100 95 100 хв. А, (А: 20мМ Ттгі5-НСІ, рН 7.5, В: Ж 11М АБ)).
Зо Приклад 15. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 33) та
Ес-імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування цистеїнового залишку у положенні 30 амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 33) з МАЇІ-10К-АІ О ПЕГом була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (ЗЕ ІЮ МО. 33) та МАС-10К-АГО ПЕГом з молярним співвідношенням 1:1 та концентрацією білка 1 мг/мл, яка тривала протягом З годин при кімнатній температурі. Весь цей час реакція відбувалася у 50 мМ буфері Тгі5 (рН 8.0) з додаванням до реакційної суміші 2М гуанідину. Для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-
ПЕГілованим цистеїном, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку
ЗОИШКСЕ 5 (колонка: БОШКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -100 95 50 хв. В (А: 20 мМ цитрат натрію, рН 3.0 я 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)).
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 33) та Ес-імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1: 5 та концентрацією білка 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рн 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 33) та Ес - імуноглобулін, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку
ЗОИШКСЕ 150 (колонка: БОЮКСЕ 150), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 4 95 1 хв. В -» 20 95 80 хв. В(А: 20 мМ Ттгі5-НСЇІ, рН 7.5, В: ї- 1М Ммасі)) та на колонку Бошигсе ІБЗО (колонка:
ЗОШЕКСЕ І5БО, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: В 0 -» 100 95 100 хв. А, (А: 20мМ Тті5-НСОЇ,
РН 7.5, В: ж 1.1М АБ)).
Приклад 16. Отримання кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮО МО. 34) та
Ес-імуноглобулін.
Спочатку для ПЕГілування цистеїнового залишку у положенні 30 амінокислотної послідовності похідної оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 34) з МАГ -10К-АІ О ПЕГом була проведена реакція між похідною оксинтомодуліну (ЗЕ ІЮ МО. 34) та МАС-10К-АГО ПЕГом з молярним співвідношенням 1:1 та концентрацією білка З мг/мл, яка тривала протягом 3 годин при кімнатній температурі. Весь цей час реакція відбувалася у 50 мМ буфері Ттгі5 (рН 8.0) з додаванням до реакційної суміші 1М гуанідину. Для очищення похідної оксинтомодуліну з моно-
ПЕГілованим цистеїном, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку
ЗОИШКСЕ 5 (колонка: БОШСКСЕ 5, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: 0 -» 100 95 50 хв. В (А: 20мМ цитрат натрію, рН 3.0 я 45 95 етанол, В: ї- 1М КСІ)).
Потім була проведена реакція між очищеною моно-ПЕГілованою похідною оксинтомодуліну (ЗЕО ІО МО. 34) та Ес-імуноглобуліном з молярним співвідношенням 1: 5 та концентрацією білка 20 мг/ мл, яка тривала протягом 4 годин при температурі 4 "С. Весь цей час реакція відбувалася у 100 мМ буфері фосфату калію (рн 6.0) з додаванням до реакційної суміші 20 мМ СВ у якості агента - відновника. Для очищення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 34) та Ес - імуноглобулін, реакційну суміш після завершення реакції нанесли на колонку
ЗОИШКСЕ 150 ( колонка: БОШКСЕ 150), швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: О -» 4 95 1 хв. В - -2095 80 хв. В(А: 20мМ Тгтгі5-НСЇІ, рН 7.5, В: ї- 1М Масі))) та на колонку 5ошгсе ІБО (колонка:
ЗОШЕКСЕ І5БО, швидкість потоку: 2.0 мл/хв., градієнт: В 0 -» 100 95 100 хв. А, (А: 20мМ Тті5-НСОЇ, рН 7.5, В: Ж 1.1 МА5Б)).
Приклад 17: Активність іп міго кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну та Егс- імуноглобулін.
Для вимірювання ефективних властивостей, спрямованих проти ожиріння, притаманних отриманим у вищенаведених Прикладах кон'югатам, що містять оксинтомодулін або його похідну та Ес-імуноглобулін, були проведені експерименти таким саме чином, як і у Прикладі 2- 2.
Точніше кажучи, кожен з отриманих у Прикладах 1-1 та 1-2 трансформантів пересівали два або три рази на тиждень з нанесенням аліквот у кожну з лунок 9б-лункового планшету зі щільністю у 1 х 105 клітин та наступним 24-годинним культивуванням. Потім кожен зразок культивованих трансформантів промили буфером КЕВ, суспендували у 40 мл буферу КЕКВ, що містив 1 мМ ІВМХ та залишили на 5 хвилин при кімнатній температурі. СІ Р-1, глюкагон та кон'югати, що містили похідну оксинтомодуліну (5ЕО ІЮ МО. 23, 24, 25, 32, 33 або 34) та Ес - імуноглобулін розвели шляхом 5 - разового серійного розведення до 1000 нМ - 0.02 нМ, кожний зразок (40 мл) цих розведень додали до кожного трансформанту та культивували при 37 "С протягом години у інкубаторі з СО». Потім для лізису клітин до них додали 20 мл клітинного лізуючого буферу та клітинні лізати застосували для вимірювання концентрацій цАМФ за допомогою набору САМР аззау КИ (МоІесшаг Оемісе, ОБА) з застосуванням скануючого
Зо планшет-рідера Місіог (Регкіп ЕІтег, ОА). На підставі отриманих результатів було проведено обчислення значень ЕсСобо з порівнянням їх між собою (Таблиця 3).
Таблиця 3.
Активність іп міїго кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну та Ес-імуноглобулін.
БЕОЮМО. 77777711 111111ЕСюфМ) 11111111 11111111 снОбІРяЛв 07 снНнОоссовВшщ (кон'югати ЗЕОІО МО. 34-РС 77777 | 77777771 16807777 17777771 80с1
Як видно з Таблиці 3, було виявлено, що кон'югати, які містять похідну оксинтомодуліну та
Ес -імуноглобулін демонструють активність іп міго до рецепторів СІ Р-1 та глюкагону.
Приклад 18: Активність іп мімо кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну та імуноглобулін.
У цих дослідженнях була перевірена здатність кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну та Ес - імуноглобулін проявляти відмінні ефективні властивості, спрямовані на зменшення маси тіла іп мімо.
Більш докладно кажучи, піддослідних нормальних мишей С57ВІ/6 віком 6 тижнів протягом 24 тижнів годували їжею з підвищеним вмістом жиру (60 ккал) для підвищення їх маси тіла в середньому на приблизно 50 г. Протягом трьох тижнів тваринам підшкірно вводили кон'югати, що містили похідну оксинтомодуліну (ЗЕО ІЮ МО. 23, 24 або 25) та імуноглобулін Ес з дозою, що дорівнювала 0.03 або 0.06 мг/кг/гиждень, після чого були проведені вимірювання змінення маси тіла мишей (Фіг.12 та Фіг. 13). Фіг. 12 та Фіг. 13 є графіками, що демонструють змінення маси тіла мишей відповідно до типу та дози введення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну та Ес - імуноглобулін. Як видно з Фіг. 12 та Фіг. 13, при підвищенні дози введення кон'югатів, які містять похідну оксинтомодуліну та Ес - імуноглобулін, маса тіла прямо пропорційно зменшується навіть при існуванні відмінностей між такими кон'югатами, що свідчить про те, що ці кон'югати зменшують масу тіла дозозалежним чином. «110» ХАНМІ САЙЕНС КО., ЛТД. «120» Кон'югат, що містить оксинтомодулін та фрагмент імуноглобуліну та його застосування. «130» ОРА12063 -1505 КА 10-2011-0058852 «1515» 2011-06-17 -1605 53 «170» Кораїепіп 2.0 «21051 «2115 37 «212» білок «213» оксинтомодулін «4005 1
Ніз Бак Сів Су Ту вне Тег бе Ахр Тут Заг ух Туг іа Авр бог к: 5 1о 15
АтЕ Агв Ав бій Азр Ре Ма! дій Тгріви Ме Аби Те ух Аге деп
КО
Ат Ав Ази Не Аа 20 «21052 «2115 37 «212» білок 25 -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою "Н" позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину
Зо «40052
Нів заг бів у Тв вне ТНе баг Або Тут 5ег Гуз Тут меш Ар СИ 1 5 10 15
Сів Аа Ма! Ав це Ре Це біб Тгтр ей Ме Ап Те (уз Аге Ази 20 25 ЗО
Ате Азп Азп Не Ага 35 «2105 3 «2115 39 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою "Н" позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «4005 З
Ніх бек іп БУ Те ее Тег б5еє Дер Тут Зег у Тут Гец Ахр бін 1 5 10 15
Аге Аге Ав Сі Ар Рне Уві Ав Тир ему Гу Ази Те бу Рго баг 2а 75 БІ
Заг Су Діва Рго Рго Рго 5ег 35 «2105» 4 «2115 39 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «4005» 4
Ні Фу бів у Те Рве Так бах Або Туг Бег Акт Туг ец І о 1 5 ї0 15 ін Аа Ма! Агя ви Ре Це Си Тер Це ух Ави ЗУ Оу Рго баг а) 25 зо
Зег Су Аа го Рго Рго 5ег 35 «21055 «2115 39 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «4005 5
Ні Су бій біу Тит Ре ТНг бег Авро Туг бег Аг бій Ме сі біс 1 5 10 15
Сім Ага Уві Агр це Ре Не 5Іо Терієц ув Ап бу у Рго 5ег 20 25 ЗО
Зег БІу Аа Рг Бгто Рго баг 35 «210556 «2115 42 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «4005 6
Ні біу сі) Бу Тв Рве Тнг Зег Азр Ге 5ег Аге біп Мей СІ сін 1 а 10 15 оо Аз Ма! Агро Се пе Пе іш Тер Аїз Аз Ні бек бій Бім ТВ 20 25 30
РН Ту бек Ар Туг Зег (ух Туг ви АБр зх 40 «2105 7 «2115» 30 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «400» 7
Нів Зег Сп бі ТНе Рне ТНг Бех Азр Туг Баг Аг Туг ем Ар бі 1 5 10 15 сш Аа Узі Атв ем Ре Пе и Тер Гей Ме Авп ТНг у 20 275 30 2105» 8 «2115» 29 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «400» 8
Ні бек Сіп бу Тит Ре Тнг 5ег Авр Се бег Агро Сіп Ге сів бі 1 5 10 15 сім Аа Уа! Аге їв Рне Пе Оіц Ттр беи Меї Деп ух 20 25 «2105 9 «2115 37 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну
«221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «220» «221» варіант «222» (20) «223» Хаа - аміноізомасляна кислота «4005» 9
Ніх Сіу віп Оу ТНг Рне Тв 5ег Ахр Туг 5ег Аге Туг ее Азр бів 1 5 КІ) 15 ою Ага ма! Хаз Ме Ре Пе бо Тр бе Ме Акп Тг бу АгеЕ Авл 20 25 30
Ате Ап Ап Пе Аа 35 «210510 «2115» 40 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «4005 10
Ні зег Со бу Тег Не Тк ех Абр Тут 5ег Аге ій Меї Он бю 1 В 10 15
СЮ Ага Ма! Аг Ге) Ре Це іш Ттрівц Мес Ав спу Су Рго бег 75 30
Зег Сіх Аа Рго Рго Рго 5ег ух 35 40 20 «2105 11 «2115» 43 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1)
«223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «400» 11
Ніз Сі біо Су Тве ве Тит бег Азр Гец бег Аги біп Меї бів біц 1 5 10 15
Си Аа Ма! Ат їв Ре Це біо тр Аа Дів Нів бег бій БУТ 20 25 зо
Рие ТВ бег Ахр Туг Зег Аге Тут Гец Азр ух 35 40 «210512 «2115 38 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «400» 12
Нів 5ег Сп сх Тне Ре тн Зег Ар Туг 5ег Аге Туг (ео А5р Оу н 5 10 15 сіУ бім Ніх У СТ Су Тк вне ТВг бег Ахр ги баг у5 бій Ма 20 25 з0 сів сій Си Аз Ма 1ув 35 «210513 «2115 30 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «220» «221» варіант «222» (16) «223» Хаа - аміноізомасляна кислота «220» «221» варіант
«222» (20) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «4005» 13
Нів бес (іл Су Тк не Ту бег Авр Тук Зег Аги Тугіви Ар Хза 1 а юю 15 сі дів Уаі Хаа це Ре Пе Си Тер Се Мет Аби ТАК ух 20 25 Зо «-2105» 14 «2115 37 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «020» «221» варіант «222» (20) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «020» «221» варіант «222» (24) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «400» 14
Ні Су біп біу ТНг Ре Тиг бек Ар Тут ет Аг Тут ем Азр СИ 1 5 10 15
Со Аа Мазі Хва Геци вне Не Хаа Тр Гео Меї А5п ТАг у Аге Ап 29 25 30
Аге Авп Абп Не Аа 35 «210515 «2115 37 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант
Зо «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «020» «221» варіант «222» (24) «223» Хаа - аміноізомасляна кислота «4005» 15
Ні Сім Сів біу ТАС РНе Тв 5ег Абр Ту 5ег Агв Туг ец Ар ою 1 5 і 15 сію Дів Маї Аг це Ре пе Хаа Ттрієеи Меї Абп Тл ух Атв Ап 20 25 зо
АгеЕ Аза Авп Не Аа 35 «210516 «2115» 34 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «4005 16
Ні 5ег Сів (у Тк РБе Тит бе лзр ев бег Аге бій бец бі Оу 1 З 10 15
Сіх бу Ні бег бій Оу Тиг Ре Тнг бек Азр ен Зег Агу біпівц 20 25 30
Сід ух «210517 «2115 37 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «400» 17
НЕ Бе бівй СУ Те Рве Тег 5ег Ар Туг Зак Ага Туг Геч Або 01 1 5 10 15 бін Аа Ма! Аге Гец Рпе Пе СТО Тгр Пе Аг Ап Тік (у Аге Або 20 25 30
Аге А5п Ап Не Дів 35 «2105 18 «2115 40 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «4005 18
Ніє бег Сіп біу Тиг Ре Тег бег Дер Тут 5ег Аге Тут Тец Азр ОЇ 1 5 10 15
Оіш Аз Уві Атр Се Ре Не Сіс Тгр Не Аг Ап біу бу Рго бег 20 25 30 5ег біу Аіз Рго Рго Рго 5ег 1у5 35 40 «2105 19 «2115 37 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «4005 19
Зо
Ні баг біл су Тне рве Тит ет Азр Туг бег Аги Тук ви Ар 1 КІ ю 15
І: Аа Уа Гуз Се Ре Це Зіц Тур Пе Аг Ап ТНг ух Аге Ахп 20 ке 30
АгЕ Аз Аг Не Айа 35 «210» 20 «2115» 40 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «400» 20
Ні 5ег біп Сіу Тит Ре ТАк Зет Азр Тук бег Аге Туг Гец Ар бій 1 5 10 15 сім Аа Майіу«іви РНе Не сію Тгр Пе Аг Авп Су бім Рго Зег 20 5 зо
Бек Су Аа Рго Рго Рго бек (у; 35 40 «2105» 21 «2115 37 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «400» 21
Ні бег біп Сіу ТНт Ре ТНг 5ег Ахр Тут Зег Аге біпіви ОВ Бу і 5 10 15
ОВ Аа Мав! Агр ве рве Це Со Тур Ма! Аг Абті Тег Туз Аг Ап 20 75 Зо
АтЕ Ап Ап Пе Ав 35 «-2105» 22 «-2115 30 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено дезаміно-гістидил, що являє собою похідну гістидину «4005» 22 іх баг бій біу Те ве Та Заг Дер Тук Зег ух Тук уви Абр Зі 1 5 10 15
Гуз Ага Аа Гуз Сі Не Ма! Сів Тер еу Ме Ап Тв ух 20 25 30 «-2105» 23 «2115 29 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант «222» (2) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «400» 23
Ніз Хаа біп Бу ТНг Ре Тнг 5ег Ахр Тут Зег ух Тут Ге Ар ЇЙ 1 5 10 15
Му5 Агр Аз Ту Си РНе Ма! Суб Тто бе Ме Ап ТвНг 20 25 «-210» 24 «-2115 30 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну
«020» «221» варіант «222» (2) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «400» 24
Ні Хаа біп су Тв Ре Те 5ег Ар Туг бег у Тугбеи Авр Оу 1 5 19 15
Ку Агв Аа (ув и Ре Уві іп Тр їеи Меї Ап Тне Су» 0 25 30 «-2105 25 «-2115 30 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант «222» (2) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «4005» 25
Ніз Хав сіл сім тн Ре ТНт бет Ар Туг бег ув Тугіви Дер біо 1 5 10 15 ух Аг Ага (ув Ом Ре Ма (ій Тер іеч Меє Ап Тве Су» 5 30 «-2105» 26 «-2115 30 20 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант «222» (2) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «400» 26
Ні Хаа біп су ТНг Ре ТВ 5ег Авр Тут бе Гуз Тут Гео Ар Оу 1 5 10 15 ув Агр Аів бух Си Не Уві бій Ткрієеи Меї Авп ТВ Су 20 25 БІ, «-2105 27 «2115 29
Зо «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант
«222» (2) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «4005» 27
Нів Хва сна СБ, Те РБе Тв ет Абр Тут бег ух Тук Кен Ар Ой 1 і) 10 15
Цій Ага Аз у бію вне Не Сух Тер ївеи Меє Акп ТА 20 25 «-210» 28 «2115 29 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант «222» (2) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «400» 28
Ніх Хав бій у Ти РБе Тіт Зег Ар Туг Заг Гу« Тут ів АБр о 1 5 10 15
Гуз Ага Аа цу Щи РАе Мві біп Тр ец Ме Аа ТАг 20 75 «-210» 29 «2115 37 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант «222» (2) «223» Цією літерою «5» позначено дезаміно-гістидил, що являє собою похідну гістидину. «400» 29
Ніх Бек сна біу Тін вне Ту бек Абр Тут бегі ух Тут Тем Ар бе 1 5 10 15
Аге Атв Аа бів Азр Ре уві іп їтріеи Меї А5п ТАК ух Аги Ахп за 25 30
Аге Ап Дей Не Аїз 35 -2105 30
«2115 37 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4 - імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину. «4005» 30
Нів ет Ді су ТНе Рае Те бег Ар Туг бегіух Тугівци Ар 5ег 1 5 юЮ 15
АгЕ Аге Ах біп Ар Ре ма! ва Ттріеи Меї Ап ТАг ух Аги А5п 20 25 ЗО
Агр Ап Авп Не Ав 35 -2105 31 «2115 37 «212» білок -213» похідна оксинтомодуліну «220» «221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину. «220» «221» варіант «222» (2) «223» Цією літерою «5» позначено а-серин, що являє собою варіант серину. «400» 31
Ні бек бін іУ Ті вве Тіт 5ег А5р Тут зе ух Туг у еу Ар 5ег 1 5 10 15
Ате Аг Ав бій Ахо Рне Ма! Со Тир Гео Ме Аби ТНт цу АДге Ази 20 25 30
АгВ Аза Ах Не Аа «2105 32 «2115 30 «212» білок -213» штучна послідовність «220» «223» похідна оксинтомодуліну
Зо «220»
«221» варіант «222» (1) «223» Цією літерою «Н» позначено 4-імідазоацетил, що являє собою похідну гістидину «020» «221» варіант «222» (2) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «4005» 32
Ніх Хаа бів бу Те РНе Тег бек Ар Тук баг уз Тук ву Абр ів 1 5 іа 15
Гук Ат Аа (у Си Ре Уві Оп Ттр без Ме Аби Тит Суз 20 а 30 -2105 33 «-2115 30 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант «222» (2) «223» Хаа - аміноїзомасляна кислота «400» ЗЗ3
Ні Хваа бік су Те ВвВе Тв Зег Ар Туг Аа Ку Туг ву Авр Со 1 5 10 15 мух Аг Аіз Гух 1 Ре Уа! Сів Тр ен Мет Ап Тих Сух 20 25 за «-210» 34 «-2115 30 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» похідна оксинтомодуліну «020» «221» варіант
Зо «222» (2) «223» Хаа в аміноїзомасляна кислота «400» 34
Туг Хав біп СЯу Тег вне ТЬг бек Ар Туг бег ух Туг ец Ар бін 1 5 10 15 ух Ате Аа (ух Со Рне Узі Сп Тер ес Меї Ап тт Су 20 25 зо «210» 35 «-2115 8 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група К2 «400» 35 ух Агр Абп Ав Ав Ази Не Дів 1 в «210» 36 -211510 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група К2 «400» 36
Су Рго б5ег 5ег СПу Аїз Рго Рго Рго 5ег 1 5 10 «-2105» 37 «2115 11 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група К2 «400» 37 біу Рго Зег зег БУ Аа Рго Рго Рго 5ег ух 1 5 10 «210» 38 «-211515 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група К2 «400» 38
Ні 5ег сів су ТВг вве Тк бег Ар Тук зегі ух Тук Ген Ар 1 5 ій 13 «210» 39 -211516 «212» білок «213» штучна послідовність «020»
«223» група К2 «400» 39
Мі: Бех біп св; Тв вве Тк 5ег Ар Тук ех АтВ Тугіво Абр ук 1 5 10 15 «210» 40 «2115» 20 «212» білок -213» штучна послідовність «220» «223» група К2 «400» 40
Ніх су Сію Су Тег Не Тнг 5ег Ар Гец б5ег ух Сій Меї ОЇ сш 1 а юю 15 бі А Узі ув 20 «2105» 41 «2115» 28 «212» білок -213» штучна послідовність «220» «223» група А або В «400» 41 баг сп СУ ТНг Ре ТВ 5ег Ар Туг Зег уз Туг ке Ар бег Аг 1 5 10 15
Атге Аіз біп Азр Ре Ма! Зі Тго ев Ме Або Те 20 «2105» 42 «2115» 28 «212» білок -213» штучна послідовність «220» 25 «223» група А або В «400» 42 бег біп біу Тье Ре Тог 5ег Азр Тут 5ег (ух Тугіви Ахр Він ОЇ 1 5 юю 15
Аа УвЕАгр во Ре Пе Сію Ттр ей Ме Ап Тит 20 25
«210» 43 «2115 28 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група А або В «400» 43
Зег віп Су Твг Рене ТНг бе Азр Туг 5ег Гуз Туг бео Ар со Аге 1 5 10 15
АтеЕ Аїв ій Або Ре Уа Аа Ттр бе у Ази Те 29 БО «210» 44 «2115 28 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група А або В «400» 44
Оу бів су Тег Ре тТву бег Аво Тут Баг Ага Тут Гви Оо Со бів 1 5 10 15
Ав Ма! Агро Ре йе За Тор цен Туб Ап су
Кі) 25 «2105» 45 «2115 28 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група А або В «400» 45
Су бів су Твена тве баг Ар Тут ет Агя біп Меї бід ти си 1 5 10 15
Аз Уві Агр Геи Ре Пе ід Тгр ей ух Ахп оіу 20 25 «-210» 46 «2115 26 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група А або В «400» 46
Зіу сій сту Твг Ре Тег баг Авр ео 5ег Агв біп Меї Оу Сів 01 1 5 10 15
Ав Маг Агв Сей Ре Не бід Тео Ав Ага 20 25 «-2105» 47 «2115 28 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група А або В «400» 47 бег бів СІМ Те рве Ти Хек Азо Тут Бек Аге сій Меї Бі с СИ і 5 10 15
Ма ма! Аге беи РНе Не бід Тр мем Меї Ап Оу 20 25 «210» А8 «2115 24 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група В «400» 48
СІМ Он біу Те Рпе Ти Зег Ар ї.ео 5ег Аге Оп Ме сш со о 1 5 10 15 діз Уві Агв Кео не пе 1 їтр «210» 49 «2115 14 20 «212» білок -213» штучна послідовність «020» «223» група В «400» 49 5еєбіп Сіу Тк Бе Тіт бег Ар Туг 5ег Аге Туг їв Ар 1 5 10 «2105 50 «-2115 30 -212» ДНК -213» штучна послідовність
«223» праймер «4005» 50 соесевссссс всрЕссвста сразатає 30 -2105 51 «2115 33 «212» ДНК -213» штучна послідовність «220» «223» праймер «4005» 51
ЕазсевіссвЕ рарвасріся айсизава гар за «2105 52 «2115» 34 «212» ДНК -213» штучна послідовність «220» «223» праймер «4005 52 сарсвасаєс пассвісссс севізсая вес 34 -2105 53 «2115 32 «212» ДНК -213» штучна послідовність «220» «223» праймер «4005 53 сізассваєії стсвриразр астрарвстсв сс 32
Коо)

Claims (1)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Кон'югат, який містить: похідну оксинтомодуліну, причому ця похідна оксинтомодуліну містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 28; Ес-ділянку імуноглобуліну; непептидильний полімер, причому цей непептидильний полімер є поліетиленгліколем, поліпропіленгліколем, співполімерами етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксіетилованими поліолами, полівініловим спиртом, полівініллвим етиловим етером, полімолочною кислотою (РГА), полімолочно-гліколевою кислотою (РІ СА), ліпідними полімерами, гіалуроновою кислотою або їх комбінаціями та цей непептидильний полімер ковалентно зв'язує похідну оксинтомодуліну та Ес-ділянку імуноглобуліну.
2. Кон'югат за п. 1, причому зазначений непептидильний полімер є поліетиленгліколем.
3. Кон'югат за п. 1 або 2 для запобігання або лікування ожиріння.
4. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, причому зазначена похідна оксинтомодуліну є здатною до активування рецептора СІ Р-1 та рецептора глюкагону.
5. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, причому один кінець зазначеного непептидильного полімеру приєднано до аміногрупи або тіолової групи Ес-ділянки імуноглобуліну та інший кінець цього непептидильного полімеру приєднано до аміногрупи або тіолової групи похідної оксинтомодуліну.
6. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, причому зазначений непептидильний полімер має реакційні групи, здатні до зв'язування з Бо-ділянкою імуноглобуліну та похідною оксинтомодуліну.
7. Кон'югат за п. 6, причому зазначені реакційні групи є альдегідною групою, пропіональдегідною групою, бутиральдегідною групою, малеімідною групою або сукцинімідною похідною.
8. Кон'югат за п. 6, причому зазначені реакційні групи на обох кінцях є однаковими або відрізняються між собою.
9. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, причому зазначена Ес-ділянка імуноглобуліну є неглікозилованою Ес-ділянкою.
10. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, причому зазначена Ес-ділянка імуноглобуліну є доменом СНІ, доменом СН2, доменом СНЗ та доменом СН4; доменом СНІ та доменом СН2; доменом СНІ та доменом СНЗ; доменом СН2 та доменом СНЗ; комбінацією одного або кількох доменів та шарнірної ділянки імуноглобуліну (або частини цієї шарнірної ділянки) або димером кожного домену сталих ділянок важкого ланцюга та сталої ділянки легкого ланцюга.
11. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, причому зазначена Ес-ділянка імуноглобуліну є похідною з делецією ділянки, здатної утворювати дисульфідний зв'язок, з видаленням певних амінокислотних залишків, розташованих на М-кінці природної форми Ес-ділянки, з додаванням метіонінового залишку до М-кінця природної форми Ес-ділянки, з видаленням комплементзв'язуючого сайта або з видаленням сайта залежної від антитіл клітинно- опосередкованої цитотоксичності (АЮОСС).
12. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, причому зазначеною Ес-ділянкою імуноглобуліну є Ес-ділянка, отримана з імуноглобуліну, вибраного з групи, яка складається з Ідс, ІдА, дО, ЧЕ та ІЗМ.
13. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, причому зазначеною Ес-ділянкою імуноглобуліну є Ес-ділянка імуноглобуліну Ідса4.
14. Кон'югат за будь-яким з попередніх пунктів, причому зазначеною Ес-ділянкою імуноглобуліну є неглікозилована Ес-ділянка, яка походить від людського імуноглобуліну Ід.
15. Фармацевтична композиція для запобігання або лікування ожиріння, яка містить кон'югат оксинтомодуліну за будь-яким з пп. 1-14.
16. Фармацевтична композиція за п. 15, яка додатково містить фармацевтично прийнятний носій.
17. Спосіб запобігання або лікування ожиріння у пацієнта, який полягає у введенні пацієнту кон'югата за будь-яким з пп. 1-14 або фармацевтичної композиції за п. 15 або 16, причому цю композицію вводять окремо або в поєднанні або одночасно з іншими фармацевтичними Зо препаратами, які виявляють профілактичні або лікувальні дії, спрямовані проти ожиріння.
18. Спосіб за п. 17, причому зазначеним фармацевтичним препаратом є агоніст рецептора СІ Р- 1, агоніст лептинового рецептора, інгібітор ОРР-ЇМ, антагоніст рецептора У5, антагоніст рецептора меланінконцентруючого гормону (МУСН), агоніст рецептора У2/3, агоніст рецептора МСЗ3/4, інгібітор ліпази шлунка/підшлункової залози, агоніст 5НТ2с, агоніст рецептора ВЗА, агоніст амілінового рецептора, антагоніст греліну або антагоніст рецептора греліну.
19. Застосування кон'югата за будь-яким з пп. 1-14 або композиції за п. 15 або 16 у отриманні лікарського засобу для запобігання або лікування ожиріння.
о а носій у якості контролю в БФЯ ОХ мок це ОХМ'Ю мкг НЕ ОХМА 000 мк зя ФК сооююювня Ж ВКЖ й зт! НИ ОХМ-Ї Ол мике Х що | НИМ ОХМАЯ Я мкг х о 4 НМ ОХМА ТО мгке ще ко я й Х 4 ш: й МЕ -Шхе -й Ж о ка Ще 14 й Ж й ХЕ и ща о п м ще «ЯН ж В песоесюктюскюкютючк ххх» ОП год. 0-2 год.
Фіг. З за ко. ) ш рі НН Н Н З ; ВІ і Гі НК і ! В ї ОО и ШИ й ра що шк | , й р Не. ЕН ! Її р Фігдгаї 1 ; : р во БР ок І 8 ! кт ія рі й 1 58 ! Е дк ; Іо їі НК. 5 БЕ Н Б і роя ДНК ї 72 РІ | ; І ШИН йо й і вк ЩЕ ав ЩІ І ів: в щи и ! шо НУ Н ік ШЕ ШЕ ї ї 1 ві В Й ої МК тА М І; ІБ ві 9 й зав й а Ки м щу В ЕН. ї КК: 7 з: Є я я З В : їх и Ї маки кА А Я і іа ві :К и | ! і | і Е 5 У Н ; і ЕЕ іх ! Ї дент | НН 13. аа щ-- іа , Кк ла | і2.о з і | ока і дові 00 ТЕЕОК ОНКО жим кто ци дя вв ска мм наяв й нин КИ ЕК В ЗЕ І ОКО А ІНН зай ЗО ЩО А «0 «85 5 885 53 КМ ЗЕ ВЕ В З ВЕ В З: В ен ВН Он с с с о КУКА хе Ол ОМ оо ХК КК ОКО У Б оксинтомодулій ; Е КО 1; І Я АР -Мпрадійня В. Е ЩО х : ! й У цю джен зеніті х і с мо чо КО в В КА и и КО сенс с п ОО с ОМ ОБ Й, шу СКАН КК ОКХ сс М а КМ ВК ОВК ЕК СУК ОКХ п ОК ОКА її що моно-пеіловнанив зксинтомедувін Со АВР-Мприсіанм Е Фів наши ши. не чи ОКО В КО КВ КК КК В В Ко В о ЕВ
; о. с а о о ос ще г
«щі ; і ; ; -- ВИНІ рі хроматодхиврізні фракцї деськем, : рот ВНТ ЦЯ оббнах і і й І Н я ВПО ІЯІ, ужови хрожетоуразнії й і ! ! | і ; а во; | | ' і ' шщ Е Е і Я і» х | | ро й ; і ш во Ї ше ще і Рі і ! ві Ю.О і Кі ї х Н І! і і і і і Ї вві ЩО Е ! і як Н і Н ті В З НЕ : і КІ! Бо Н рі Н Н хі І Ще ! І ГА і ЩІ ! : Н й
0.0, р і | НЕ мо ! і ! і НЕ і Н ті : НЯ ше і М її Н 11 Н у ї іх і 1: В у НІ БУ
20.0 |. Н х | і ще ! і / і : Й Н М НУ Ге і НИ і М К хо. ки ну: : і ІВ і
1.91 ! їх ! іч ре НЕ і , Н ; ї аа днини . і. Фіг2с і ди ЩЕ о і діння фр ТУ . ЩЕ дою ТТ дод пяти ожіднт тя м нн і отв тв тя о вв в ВІ Ні в БІ НО БВ Шо Ві з 0: 1: во Ка -к а БЕХ сЗж ЖОВ ОО Й мн, вай; ро ВООЗ ху два ДАМ ДВдном посвнокх Ж А пок з Пів ШИ В Н їЕ і ї От ВНООСОВа ху ЛОваК, хроматографічні а ! Й дохо : Го ді їі ! Ї Н о Її | не ' В ро і ІЩЕ хі у ! Н НН ці | 3! ; А рі і ЕН І в.о рі А НШ ї із г Н і ї Ко. рі ЩО | НУ і ГИ і хх А. ї і , В Не ді | ! 4 І ше гі І, ! бе НИ ВН Її Н НІШ 181 В ІВ щи м ан МИ | ГТЕТІ В а Н ІНН ПЕ 1 в ПИ НЕ У: ЩІ і і ПН Я МЕН їй ни Я ИН НІ і пиши ни нн чн и нн п ин й ше 51, і 1. 15 НІ ї і с НИ ЧИ МЕ ШЕ 117 ро у . що Н 13 і НН 11 хі М І НЯ ГУ і ум у Її КО НЕ) й Її г в вору У і ше Ши м ни ши ї рр ! : Е к-і і пкт ! і і ГИ Кон вив 11 Н с, й дня Її ва Сея ШИЯ Шин: знав нн М і : Фіза | нн х т ігзЗа!ї ; в кн, ЩЕ і Б А во ф-т ) ей і од що і Н Н їй ; вторнивий | ! ІТТРБрізіЗ щі й ВІЗУ діТа В ним ву пи око улов хо акі ду хв й А ння СТЕК УВІ оовоНиапВаНО ллолує 7 Юо ко що АЮ ЕК А ве ми.
в, пня ВИОВКНО ОхуЗі ЗБ ВД ДМА, 8днм | і ре. 10: СТВ ФЮвоєя Сну Зі ЗБ БК уеони кровати у і і ! спунтчнтттннтя дк с . ВОЗААТО уакф п і ! ВОІВ ОКУ ТІ В З фрак з Е Й | ! І і гі ! що й І : 20.0 щ ше щі НИ і Н он і і і Ще що; | | Гб.о ! їі Е : і Н ї і в і | щи
Фіг.ЗБ | рон ! і В зни З ІЙ і Н ЗЕ пан З | Н Н Н дження Н Я х ! ї : ен і Х ! Ба а НИ Н 4 х : і : ї і: Я і і пон М. 0 Н ж ок й р ший і Ото нення пон ВВ оннн нн ВВІВ В 0 ТОВ 1 гі Та т гів 2 мл. і сен ВНООІОТЗ КА двоє : смію, Н ТЕТ ВИВИХ, умови хроматографії А Н Н МАЕ т ТВОЯ, хремуннохфічні франції НІ : : І ше ! Щі р 69; р : Нд і ше І ше жо ізн і ! Н і Н : і і : : Е Н ! 15.б
«0.3 р і Я во І ще ше я ще ше: я їі іі ІНШЕ Шен Е : Грн : в й ПІ ни ЕН ГГ НІ ва І ту дент і у НИ ЕН Н п Н ї Н шт НИ : БО ра НИ і
Фіг.да ре плн и, | . Оз й ; Ам - БВ ; г фотттнрннттиннямт тн тт і ота 000000 увжлововжя ИН НИ І «о о що мл
3 т 2 а ОВК КК КК КК ОК о ВОВК ке і. кН М КК А те й й х ща І К ,; ї х ще Е ЗЕ вс ії ХЕ х р ї Її МО но п ою песто есте І ОО КК Я о З КК ОКХ о. мЕюмМмннМмМ НМ А ЛФ Ж М М А М М М - а ОО 5 БО УМО ик Фігаро о і В с М Х МЕ Ще Н я Го З і ! х ншшини ши шшшиииннни МОЯ Оки А НК г. попе Ан в нн, М: їх ряд Я ря : і" місм. птн ВИНО СА ху ДА, 2вбям ! Е ї т ВА оку І : ї ле "хроматографії 1 1 ! я- «ВО СА ремлотурорнни я і г Д й ! ї шщ ! г і і зв! НЕ і Бо ! рі і Е г ! ще вд! НИ і по : Ди бан і : і 4 рн Й 4 Ден : ї І З Мо: дент Н Й і 15.0 і мит і і і Е ; Б Я Я !
Фіг.4с: Н У : І І З х і і й Божок спини сип В ВИ ді ВУ АК ПЕВ В до
8.0 85. що 55.0 10. хв. ТИН кн . Я ! ї і мом, вд пт т ВНКОВІ ОМ, одн» | і і Пт ВНЖКФЮННЯ умови хроматографії і й і ше Н я 7 ВІНИК, мроазуюграюні фракції ШН: рі Н я во, ПІ ще : ШИ та : ши НИ що І щ не ще Я рі і Н.Й ва ЩЕ ше ! д рі З : І рі ; і : Н ще ше Б іі НИ її й ще ма ЩІ А і і : р і о
20.0; І і НІШ дян | Е ! ще НЕ НУ і
Фіг.за | рр рі ! Юре ще ше НО: Др Р їі т в.о : ше шиті ві ! ї ІНШ Н шт т г г, ц ;. и Н : і 3 : Мч р. : /й ї ях ї чи / к/ ванн г. | ! Е ї Я кл 77 ; ОД ЯН Б с шен Мен | | шо І Ши ії Н жи О.О 18 о Зю.0 хв.
там Щ ; сн ддО ОО ВНОВИНЧЯ СА Оху зро ДР. забни ! Я і рот Во1обо те ОА бкудозеуй умови хроватографя і і рот ВЛ САОКУ Даня хроматотрафн зкракції а і : і І її і Н г і : івл ях 7 й : то щі Гі : і 2081 1 | і ! ще ше 15) і і Н і | і 105 р п нин ; і денти Кі ї Н Н
Фі. дн і у ! іа Вар ! У ! : : З х і і : А о і і
Н . Й й що Ка Н Й Босссосоо В озсоссстт пит 15 КН Я В ВК ЕЕ Не нм 16 То НН НО на іо мл. мА ккал вія жі З г: іибюмдом Ше: АРОНИІ ІЛЯ Дани її НИ і и ДЖЕННЯ умови хренавтограій І. Я Н ! но Е у ТАКОЮ хроевтоградійчні фракції! 1 | і : : і Н і : Її : БО ! | | в ; і 11 ет ї і і -7 ї : 11 нт ка і ЩЕ ко Ше ої кт НН: х о Ш: т НЕ . Н р : і ї Н ? шк рин д ї її її ії ж Фігба. - АХ у ЦД я сша шши ше ! Я ра ; її ї З ї и її; х Ї З : і у Менні А ї 3 І: І Пов Дн ЧИН - ен ; Їх 7 у Е дення птн ня ря ПОН Пи пи Я ПЕ А НН МК МЕНА: ШИСЯЕС НИНННОВНлоя с: ЗМИННК НЕ ОО щоб 335 1506 150 168.5 НЕК мл.
ж гі зу зано АДМ А, о тека зо сенат ові я ШИ: що ! ШИ. іхЗЯу і чо | ! . 294 ! ж ! щі помнваннни пня ше г їй пня ФІ б г збе г Бо Ей щі хв, вд, МОЗ ку Еш на ев веро (пл натОвО ТО Зо) шк щро ще що ще хо | ще юо і й аа дя ИН тт пен ТВ, тп 20 30 40 5 Бо ха. з мамами У 0 імОмку, 5 Н я КЕНІЇ УЗ вд | ; м фен КИ І І лмови хро З : і гоед і ! | і р ПВА ООВА В, хроматографічнівраенмя З | г ! ' | і т пе зо. ! : 7 но ща кт о | ; | ' Ко і і ; яиХ ї Б і І ж 4 ї ше М . є ! ! У Н г
Фіг.бс. ! | І р й | і чн п б спсетсвті вв М ю о ві вові новою БО СТ Я А Тож» Зо 3.6 З. ЗО яка мл.
я пе КОВО ОМ, дбдям меськом, их тт ККІООВОвд убозихроматуйи ! м Мо ЖК КІОФВВЯІВ хроматосрафнен фра Шин е
З.о й не шЕ я НЕ : о щ : ! Бі : ї о Р і ! ШЕ не ше : Ї НЕ : А НИ : и Д ше Б 8 і Й і і і пиши ОТ і ! СЛ Я Я Ще
Фіг.ба; Кк Я це і ї Мч, ння днясстеннтюжтнчннимй Н Е НН нив вив НІМИЙ НИ НЕ НС НН НН ке ще о ЩО ми. і пт ВИЗООВІБИ. ЦЯ, вони ; нснісн. І тт АКНКЮВіВі укови хроматографії НН : т и КОВІ хроматографічні франції ; 40: : І т НИ: А ов й і Во т. і ще й г і ) ! ;
мо. ! Н дж і ї; 84 і рі й І | | Ше .. ет ча в кот ш і я ще А шт Ал ше г а го т г ГЕ ! М щі я ! рт ГИ ГЕ ХиИХ : м Фігта | шт на ча М Ко | Ух Н І) ЖЕД щ-й ; і т, : і ЩЕ пишно нн я пи пи пи в НЕ НИ т. 81 61 нію | втву те до 204 250.0 250.0 20.0 250.0 мя.
"3 ті 2 ТЯ МАМО А, Вірно 16 КЕ ЗВО МОЮ (5УНЗИ ОБ й 1204 ! ! юю | й Во с Я во 4 «ої ! хо б нрттттттттр рнтт : С -ш- е м ро | 30 Кн З хв. Фі я | | і з МАК А, ЗМ 16 Кер ЗБВ,10О УНІВ Ов У 70 З І: : що ! | А хо | : ці шо ВІ ї У шшш спон - - ЇХ нт Ю ге) Х що щ хв. я АК НЯ Я оВОна 3 - АКОТ Ума отрафії АКІЙЛИ1 хроматографічні фракції Кс місм. п вас у ї и Ні і й | ; / і : | го ! | : й Ї ! ! НЕ ! | у і І сю гі . Ї | Й б ! | й . : І ЕЕ З ; ЧІ ! і І е ' ве | І що іх ' ! | І ; Фігтс і ! М щ / вн ; й швшва азарт етрт дебют що 5 що йо вх ще ТО мл. в я КОЮ ДАЛІ. Вони | ; Інфбмісм, ні тт 7 АКТЮДЛИЗИ, умови хромазтограції А : - ТТ АКІОМИЗ 1 хроматографічні фра що; | і : ! г ; щі !
що. Гі ОБО дит ши : Н 1 : Н НЕ 5.
2. ! г | і ! . Н Н -кй і і ФіІНЯ / Х шд- . х Й о полловонаня як ЛЕН ЗНА ПИ ХАН КЯ ЧАННЯ СИЛА ЗНОВ зон зо ВА КАК ітя Ей ще 5 о й о Тов мая.
ВОНА Я дв Овес ручний режим 007 Шк месміюм, ЩО; -- вн Сус, ручний режим 007 : : й во! -- ую Сун. ручний режим 007 : | 19.5 Іво | і 18,5 тк 1Ю В ї і 5 о Ї | ня і Н . : і ! 15.5 і 1 х Я о В ! а що; ще ! я во | | : пе Ї х і «хк 1Ю | | і 11,5 ко) | і і 5 т од тя в. еВ я й нн 55 сгви пд ! х ж ШИ Фігба зі Шини | й Е 5 35 я. - д ЩЕ її : в Ки ран их хз МАХ под зму фс і г. ох х Ж кт У е ея иутн пн НН ВН Я 5 дк МО БО 385 ОО аебо о ЖОФФ 45 59 955 80 5 РО 15 ЗО 85 ду вемие Седісм. ВКО МК ла Сівовм лом 1вад1Яковюгат. коло чуть й НК -- бор Сният.3403103334 кож югат, колонка ДОШАСЕ БО д т пт Е ние Ввойвп СО о ЗДА кон'ютат, конснка ЗОЦВСЕ ЗО і | Е | : і Н Я Фю ! що. щ і з вв | ! ' й Щі 7 щ щі во щ г І ши хо. Не і Ів Н | і 1 ї Н | ! яої | : і І : : І ' шк І | і т ше ! ї Кордон є іно ко, дн ї ! де-то і | ! 3 Е рай і А з щі 2 / щи І Е | І ї Ї шк ВИШ ої - ре У т в Ї У я г ЩО НО 120 146 360 180 206 220 40 200 СВО 00 ЗА) Зо Зо ЗВ о «25 0 Бо ВО ХО
«й «нн МУЗ, 200 пікові ДЗ ідлоюють колонка ЗОСЖеЄНВО меміст,
хо. пен Кі Сом ОТ хенютоз, коложки ЗОШБНСЕ ЩО Ів -- ВО ово ОІД дов ютат, колонка БОЧНСВ ВО Є х й ; х І. І Ши | й Не Бо Ши ши не і Ши | і і їн і Шия і і Ек пе во хо плЕ-/ | Не Ши п Е | 1 - о і ! І | і по З ; І І КЕ.
во. ще т ши | є і і і Н їв і Н Н Р що і І і (я ше ! і ! Н і - ю і 5 5 і і 5 хх т і | і. | ГЕ Я Е 5 і у ро НА 1 "х - 7 х іще: ї Фіг8с! Ї Е ; ї ія 1 т ях ї ті вч ше 5 зу мо Дн см юю з фе мм 5 кі - георх пк ок ог вк ВЕ зом ДЮ КУЄ о ка да ж Кк ка А ках кр ен Енн ик ан жен нки ЗМУ МН Я ВН стеня в Я о сю 25 20 30 50 Ж 5 МОЮ ЗК 55 35 ОО У ру й мсмісм. ! і | т хо | ! 6 і ! Гр Ох й Е | З НИ рік то не шт В мо | | т не Її НЕ реа 4 і | | ра н ї о -о рі рай ю . | | кт із ї Н Н я що і | ра 5 У й в ща з Е м в Е | Й 9 т | у 5 що - т Я у в , і кт З з Фіг! ш- : у ! ще рай Й к Х і: Н нт НЯ
Кк. до р ач Я ін й З Й А Н Ге шо ВО аю ОО 0 Ж 2000 ми
-- Аза іноді В МАМА д ее ВЕ --- Сак ков ЗОВ обом ВО --- Ківадіох, ОфУЛ ЛИ МооЗІ дюн колонюз БОСяЮЕ 5 й Ся якою, що п го і і ї ма г і і Гі і в це і І і і І і і ! Є ко шк | й ! шо: ! ї вк. шк ' тв во ще ще і і ! ре жо ! і і і і і; і і і зві й і Кн ж : А в ння ШИ Б хв Ми ве: сити Н 3 ше з , р Н і ! Х х ї ФО: Я НА і й ЕН ке ї ох і Х ЕЕ їі и о НК ха Б - Е 1 дісннтнттнннн К нь Мен 00000200 МІВ ! НОВО 26 2900 оо оо 3ю» 35 Зо 59 0 4040 «і -Х3 0 Сіхоль і й ідддідхою югат, колоння ЗОКНЕСЕ ІВ 1ромем. я -О055 СМОЛ СІ ОЗЗ ів кон'югит, колонкя ЗОШНСЕ ВО | і і Х -Еробов Сн ПО ПОЗІ хов'юхзт, колоняз ВОШНСЕІВО | г 1503 | ї шк ши ! Ши Е А Ї ря що ши | і І : пе ! Ши і | чу ще пр ! і | ! ї Шин ня і ! ! прн- ; пжнт (яй ІК і | і Що пе і | ше ор ше | | ! , о й : | / І ! Й " | ше в ї і ! і І НИЙ й і І ОК Е | і 3 ши са Ї і і щі « : Н у і в і х З НЕ
Фіг.9с. В о. хі І в ! КЗ Н х х ЦЕ Н я Ез і / Х і т о ЕЗ Я че: БІ І а 7 шик хх й 5 3 Би о / Ме о НО ен ная слив є м Ьеаловсввоговвовосо о «ІН хи т то ще а тв їх т жо 8 ми. ЩА | ! сміх
ЗІ. др ак ові нлювізі охмає РЕ Я і Ів і-ї 3 сінодьі ОБ ОХМОБ РЕ 38. Н ке заві-- т оба вет ана Охмов еко ЗБ і і зі : ! 1 зі ! в і ; Я ІБ зо! ї ! і Не що. | | й ві , ! но) о ЩІ | і зві і і Н т й ! п яв) | і І по щі й | з їв; ЩІ / в м гі ше ; щої р шт Ці 1 Е шк дд-тт ів Мета: | Я ІВ в. вн Бон
З. пон : Н А ї Н і диня ше ДА у ко ра ши п ІН в. ра - те «з - чу сі - У с - Г- «і | ї й піп К 23 ок Е, - оф З ж У шву Н Фіглба от все твветт пт бннннн П Ви як ОБО 390005 0010515 ЩО ОБ рру ми.
45 ї й! комка. ох ко нен і ПОЗІ НВ окяв дО і Ї Гай ву вазі, воль іо с На яен | і Н зв ! р і і й | п і в Зк ! Бі ! не і ї і І ! в Зк ! ще ! їв і ! ; зо ! ГО ів і і ри З ЯК: і А ре Щ і і ще : 15 й ЕЕ й в м ши НН їх ко, 41 їз ЩЕ р 5 В х і г; її у ж ЕУНУ Б інн ких Ек х » фіг 06 ни о пеня ЕН ГЕ он Неон зоні кас ши Ж г я 4 6 Комо 0 ово мб яю ою ром) яю б зм З М З ЗО ще 4 о ж нен МУ ї дво Спа До ОВ МОХ соцо 5.3О ск : т ОО і НА 2 МОНО поио ЗБОЮ 180 Н-- «т Евиовов сот. СОЛО НИКОМ коза З 25 | , і ше іо і м пад що Шин я не Із ' пуд А У - НА) г -- і 200 і | Ше п і | З ко Н Н і щі ши о РЕ і їв шк | ! з ! г і рі Е Ї в то і | | т Б / | ! | ва Й | А | 40 Е 1 НИ й й хі 3 с Кк ЩІ п,
фіг. Лос М чи АВ ЕЙ Н х І; мак м те РЕ ех ; ю пісня пн ; - |З іч Тонік п Мн сю ен а ко Плаче Ой 2 290 230 20 20 95) 273 283 295 3ю 3Ю 35 З мо м.
ве момею. Її вишнева ва ! пе Й шо я Я) нен йові повстало. Ву дн І ів щт-е-то ВЕДЕННЯ і п ЩІ ОВ Му сен ЕуВоол, МВот а НЯ КАК ЕН Н тї «1 вімвЕВя: Е и ! В т. що 1 ще : о. о і Сов і : о Рі ов ша: ї а с ЩО і і ї о о. і рова Ш шо й Се З КЕ ЕМО КК і Н : і ІН КАН Род т ше д-- з 1 ІН ОО Вес МН й в! й о с р тя ' р п о ше і Ж: і І ОК Ой і ярі НІ ОО г ї ї п | є 1 Ії и НКУ для Н Н Я І и о. ще я я дет З ее г В і 7 че о. 3 і 5 й й Где і | ЕЕ НИ ; рр : 3 БІ 1 7 - 2 Кос Мо до о с чо ре яв коту мок «еВ і 1 ; я Ук 5 Сир ДК Ти кв У З СІ жк й Фігіїа БО оо ооо 08 ой о 200 20 2 5ю ою БО о сю жо ою 3ю 3ю9 ую М в! замок. То; МА й сіно яав ВОгіссвій 59. | тт о ч й Н Н Е : -- бані сікотьза ного водіюсв ва Щ 1 ід 1 ---Вівовов спол н Лов Видотосов во | її і . ! ! Го В Н ! з ЕД по ше Ив Те ів Ї | Но в шщ й м ' її 12 і ої ї, в | ! . ці Н В Не М НІ і В і Є Н її я пешш В в Дн ів --р Н і їх ЕН дент 7 Ж ГЕ 1! - нини ше 4 й НВ щ Н 7 ГУ рі 15 ю і ж Я е | НІ : й і що. ТБ із д і ! і г Ж Н Е Ї і і А 2 ; Ки р а о и : Ї ЕН і ФІЛ поо-жредо фіаско В і ВЕ Гени нижчі ку й і о ВН пана нн Я ЗХ пютнтеттннян ОБ 200 Об 270 РЕ б СБ ЖЮ б ЯЮ 35 З ЗіБ 30 до ЖЮ 35 ЗО ЗБ З З Я
А мсмісм. і стик . - Но ру то Я . | ги
5. ---МЕЗ ДЮ СвонаоМн лого Вдоои ввю пе і й ЗТ Го бові свт ЕС НОвОв Вб сопів біо Ши й 1 Но РО -Ерасдов Ср 4.)3 302597 ВІЛ СолНи ідо т Д х. ні ча 3 Гн ! З о і ! Ге і рі ! 1 ї че ю) щ | го 1 НІ І | Н їв! НИ і і | ЕВ чі РІ | х і М Ж і и і "І виш ше ши м Е щі ши Пе гя Н Х Н
5. і 1. х 9 іх фі і М Ні ух й Н Їх є Е ' Іс х Ї М І -7 і ї 8 Ей і пи , Ко р ШЕ: пен опаннйнии п янв ет 5-- Гея т ожому мєфе собою -йй ВОЮ м нина і ЙДЕ БЕ МЕ і м БВ І ж ши шик ми и пи пе и и вет я о Вин 105 2 4 6 8 0 13 4 16 158 20 25 ши: обу ха ж й ж ук ву сив Мч Я Я, ме Ко зе й о и З Б й о ох Я В ай р ее ЖК | ЇЇ о Хеедуці ! роя оо чне «Ве носій «й канзогат Бе - імуноглобуліну та похідної оксннтомодуліну (ЗБОЮ МО, 23) (От ме) «і кен'ютат Бе - імуноглобувпіну ха похідної окомнтемодуліну (ЗБОЮ МО. 23) (006микИ «фе кон'ютат Ке з імуноглобуліну та похідної оксинтомодуліну (ЗЕОТЮ МО, 54) 0.03атіке) «Шоу» ком'ютат Ре - імуногпобувінута похідної окосннтомодуліву (ЗБОЮ) МО. 26) (0обмеїку)
Фіг. 12
1 1 27 3856789 юні . Мс чм шк ох ох я У 1 ту Я чо Кк о, ке ва . З «Не, чай. зма х Шо ів ж ке і ж сх ї ож а Ї і й. х к чо. ун І Б сх Бефнеесооі І о, що хбх й им Я Ї 5 о ні «В «я носій ше» Бе-імунотловую - похідна окоюнтвемуніу й БО вилки «ЙДЕ. Бо-ікуветвбувів о- пекідної сжовнтоновулну 23 ОЗ мкА де не ВуМОТНОВУЛИ он похідної оксннтсвезаучну Я (ЛЯ вилки) зн Бесімувогтювбувін - позідної оксавтомодуніву 23 0.05 мг) «ШО Бо інуненувихує - пехіднеї скеннтомодутну 23 0.06 мілкі
Фіг. 13
UAA201702255A 2011-06-17 2012-06-15 КОН'ЮГАТ, ЩО МІСТИТЬ ПОХІДНУ ОКСИНТОМОДУЛІНУ ТА Fc-ДІЛЯНКУ ІМУНОГЛОБУЛІНУ, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ UA125895C2 (uk)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20110058852 2011-06-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA125895C2 true UA125895C2 (uk) 2022-07-06

Family

ID=47357296

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201314024A UA114709C2 (uk) 2011-06-17 2012-06-15 Кон'югат, що містить похідну оксинтомодуліну, fc-ділянку імуноглобуліну та непептидильний полімер, та його застосування
UAA201702255A UA125895C2 (uk) 2011-06-17 2012-06-15 КОН'ЮГАТ, ЩО МІСТИТЬ ПОХІДНУ ОКСИНТОМОДУЛІНУ ТА Fc-ДІЛЯНКУ ІМУНОГЛОБУЛІНУ, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201314024A UA114709C2 (uk) 2011-06-17 2012-06-15 Кон'югат, що містить похідну оксинтомодуліну, fc-ділянку імуноглобуліну та непептидильний полімер, та його застосування

Country Status (32)

Country Link
US (3) US9731031B2 (uk)
EP (2) EP2721062B1 (uk)
JP (2) JP6038905B2 (uk)
KR (2) KR101577734B1 (uk)
CN (2) CN103732616B (uk)
AR (2) AR086969A1 (uk)
AU (3) AU2012270366C1 (uk)
BR (1) BR112013032375B1 (uk)
CA (2) CA3080189C (uk)
CL (1) CL2013003619A1 (uk)
CY (1) CY1121255T1 (uk)
DK (2) DK2721062T3 (uk)
ES (2) ES2882520T3 (uk)
HR (1) HRP20190265T1 (uk)
HU (1) HUE042585T2 (uk)
IL (4) IL229759A (uk)
LT (1) LT2721062T (uk)
MX (1) MX353402B (uk)
MY (1) MY164680A (uk)
PE (3) PE20230404A1 (uk)
PH (1) PH12018501119A1 (uk)
PL (1) PL2721062T3 (uk)
PT (1) PT2721062T (uk)
RS (1) RS58606B1 (uk)
RU (2) RU2607365C2 (uk)
SG (2) SG10201605006XA (uk)
SI (1) SI2721062T1 (uk)
TR (1) TR201901402T4 (uk)
TW (2) TWI601744B (uk)
UA (2) UA114709C2 (uk)
WO (1) WO2012173422A1 (uk)
ZA (1) ZA201309013B (uk)

Families Citing this family (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US10166295B2 (en) 2011-06-02 2019-01-01 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
CA2838503C (en) 2011-06-10 2020-02-18 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
PH12018501119A1 (en) 2011-06-17 2019-02-04 Hanmi Science Co Ltd A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
AU2013273135B2 (en) 2012-06-04 2017-12-07 Opko Biologics Ltd. Pegylated OXM variants
KR101968344B1 (ko) * 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
EA031852B1 (ru) 2012-11-06 2019-03-29 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина
KR101993393B1 (ko) * 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
BR112015014510A2 (pt) 2012-12-21 2017-11-21 Sanofi Sa agonistas de glp1/gip duais ou de glp1/gip/glucagon trigonais
AR096891A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugado de monómero polipéptido biológicamente activo y conjugado de fragmento fc de inmunoglobulina, que muestra aclaramiento mediado por receptor reducido, y el método para la preparación del mismo
AR096890A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugando fc de inmunoglobulina, que mantiene la afinidad de unión del fragmento fc de la inmunoglobulina a fcrn
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
TW201609795A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 作為雙重ｇｌｐ－１／ｇｉｐ受體促效劑的艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
EP3080149A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
WO2015086729A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/gip receptor agonists
WO2015086730A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Non-acylated exendin-4 peptide analogues
PE20161153A1 (es) 2014-01-20 2016-10-27 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insulina de accion prolongada y uso de la misma
WO2015152618A1 (ko) * 2014-03-31 2015-10-08 한미약품 주식회사 면역글로불린 fc 단편 결합을 이용한 단백질 및 펩타이드의 용해도를 개선시키는 방법
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
TWI684458B (zh) * 2014-05-30 2020-02-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 包含胰島素及ｇｌｐ-１/昇糖素雙重促效劑之治療糖尿病之組成物
KR20150140177A (ko) 2014-06-05 2015-12-15 한미약품 주식회사 단백질 및 펩타이드의 면역원성을 감소시키는 방법
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
PE20171154A1 (es) 2014-12-30 2017-08-16 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Derivados de glucagon con estabilidad mejorada
KR102418477B1 (ko) 2014-12-30 2022-07-08 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
IL301728A (en) 2015-06-19 2023-05-01 Opko Biologics Ltd Long-term coagulation factors and methods for their preparation
MX2017016845A (es) 2015-06-30 2018-08-01 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Derivado de glucagón y una composición que comprende un conjugado de acción prolongada del mismo.
AR105284A1 (es) 2015-07-10 2017-09-20 Sanofi Sa Derivados de exendina-4 como agonistas peptídicos duales específicos de los receptores de glp-1 / glucagón
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
JP7222710B2 (ja) * 2015-09-24 2023-02-15 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド 免疫グロブリン断片の特定位置を連結部位として用いたタンパク質結合体
CN108699125B (zh) 2015-12-31 2022-10-28 韩美药品株式会社 胰高血糖素/glp-1/gip受体三重激动剂
UA126662C2 (uk) * 2016-06-29 2023-01-11 Ханмі Фарм. Ко., Лтд. Похідна глюкагону, її кон'югат, композиція, яка її містить, та її терапевтичне застосування
BR112019000610A2 (pt) 2016-07-11 2019-07-02 Opko Biologics Ltd fator vii de coagulação de longa ação e métodos de produção do mesmo
KR20180033105A (ko) 2016-09-23 2018-04-02 한미약품 주식회사 인슐린 수용체와의 결합력이 감소된, 인슐린 아날로그 및 이의 용도
JOP20190095A1 (ar) * 2016-10-27 2019-04-28 Janssen Pharmaceutica Nv مركبات ببتيد تيروسين-تيروسين الحلقية كمعدلات لمستقبلات الببتيد العصبي y
TW201832783A (zh) 2016-12-02 2018-09-16 法商賽諾菲公司 包含ｇｌｐ－１／胰高血糖素雙重激動劑、連接子和透明質酸的接合物
CN108299553B (zh) * 2017-01-13 2021-07-16 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 胃泌酸调节素修饰物
WO2018143729A1 (ko) 2017-02-03 2018-08-09 한미약품 주식회사 지속성이 증가된 생리활성 물질의 결합체 및 이의 용도
AU2018239037B2 (en) 2017-03-23 2022-05-26 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Insulin analog complex with reduced affinity for insulin receptor and use thereof
HRP20240371T1 (hr) 2017-08-16 2024-06-07 Dong-A St Co., Ltd Peptidni analog aciliranog oksintomodulina
WO2019035672A1 (ko) 2017-08-16 2019-02-21 동아에스티 주식회사 아실화 옥신토모듈린 펩타이드 유사체
WO2019171352A2 (en) * 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity
UY38249A (es) 2018-05-30 2019-12-31 Sanofi Sa Productos conjugados que comprenden un agonista del receptor triple de glp-1/glucagón/gip, un conector y ácido hialurónico
BR112021000933A2 (pt) * 2018-07-19 2021-04-27 D&D Pharmatech Inc. polipeptídeo, composição farmacêutica, método de preparação dela e método de prevenção ou tratamento de doenças
KR20200135618A (ko) * 2019-05-23 2020-12-03 ㈜ 디앤디파마텍 폴리펩티드를 포함하는 비알코올성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
CN110964116A (zh) * 2018-09-26 2020-04-07 北京辅仁瑞辉生物医药研究院有限公司 GLP1-Fc融合蛋白及其缀合物
WO2020128967A2 (en) * 2018-12-19 2020-06-25 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity
CN114853908B (zh) * 2019-05-16 2024-06-07 浙江道尔生物科技有限公司 一种治疗代谢疾病的融合蛋白
BR112022023738A2 (pt) * 2020-05-22 2023-01-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulação líquida

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
CA2249195A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
AU749815B2 (en) 1998-03-06 2002-07-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Protein-free preparations
US6660843B1 (en) 1998-10-23 2003-12-09 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
US6677136B2 (en) * 2000-05-03 2004-01-13 Amgen Inc. Glucagon antagonists
GB0121709D0 (en) * 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
US7217845B2 (en) * 2002-11-25 2007-05-15 Sun Bio, Inc. Bifunctional polyethylene glycol derivatives
GB0300571D0 (en) 2003-01-10 2003-02-12 Imp College Innovations Ltd Modification of feeding behaviour
EP1594530A4 (en) 2003-01-22 2006-10-11 Human Genome Sciences Inc HYBRID PROTEINS OF ALBUMIN
US7772188B2 (en) 2003-01-28 2010-08-10 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of gastrointestinal disorders
WO2005035761A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
US8263084B2 (en) 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
KR101135244B1 (ko) * 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
US20090238838A1 (en) 2003-11-13 2009-09-24 Hanmi Pharm. Ind. Co. Ltd. Insulinotropic peptide conjugate using an immunoglobulin fc
CN103212084B (zh) * 2003-11-13 2018-07-13 韩美科学株式会社 含有免疫球蛋白fc区作为载体的药物组合物
CA2589800A1 (en) 2004-12-02 2006-06-08 Domantis Limited Bispecific domain antibodies targeting serum albumin and glp-1 or pyy
US8404637B2 (en) 2005-02-11 2013-03-26 Amylin Pharmaceuticals, Llc GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties
AU2006230420B2 (en) * 2005-03-31 2011-11-24 Amylin Pharmaceuticals, Llc Compositions and methods for the control, prevention, and treatment of obesity and eating disorders
KR100754667B1 (ko) 2005-04-08 2007-09-03 한미약품 주식회사 비펩타이드성 중합체로 개질된 면역글로불린 Ｆｃ 단편 및이를 포함하는 약제학적 조성물
WO2006134340A2 (en) 2005-06-13 2006-12-21 Imperial Innovations Limited Oxyntomodulin analogues and their effects on feeding behaviour
GB0511986D0 (en) 2005-06-13 2005-07-20 Imp College Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
EP2330124B1 (en) 2005-08-11 2015-02-25 Amylin Pharmaceuticals, LLC Hybrid polypeptides with selectable properties
US20090297496A1 (en) 2005-09-08 2009-12-03 Childrens Hospital Medical Center Lysosomal Acid Lipase Therapy for NAFLD and Related Diseases
CA2638800A1 (en) 2006-02-22 2007-09-07 Merck & Co., Inc. Oxyntomodulin derivatives
EP2046367A4 (en) 2006-06-07 2009-11-11 Human Genome Sciences Inc ALBUM INFUSION PROTEINS
KR100880509B1 (ko) 2006-10-16 2009-01-28 한미약품 주식회사 재조합 단백질의 대량 생산을 위한 신규한 벡터, 발현세포주 및 이를 이용한 재조합 단백질의 생산 방법
TWI428346B (zh) 2006-12-13 2014-03-01 Imp Innovations Ltd 新穎化合物及其等對進食行為影響
GB0624868D0 (en) * 2006-12-13 2007-01-24 Imp Innovations Ltd Novel compounds and their effects on feeding behaviour
JP2008169195A (ja) 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
US20090098130A1 (en) 2007-01-05 2009-04-16 Bradshaw Curt W Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds
KR20150116465A (ko) * 2007-02-15 2015-10-15 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 글루카곤/ｇｌｐ-1 수용체 공동-항진물질
EA201070121A1 (ru) 2007-07-10 2010-06-30 Эли Лилли Энд Компани Лекарственная форма, содержащая слитый белок glp-1-fc
CN101765372B (zh) 2007-07-27 2013-09-04 拜尔农作物科学股份公司 三元活性化合物结合物
KR20100061679A (ko) 2007-09-11 2010-06-08 몬도바이오테크 래보래토리즈 아게 치료적 적용을 위한 티로트로핀 방출 호르몬
CA2702289A1 (en) 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Compounds exhibiting glucagon antagonist and glp-1 agonist activity
WO2009099763A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Indiana University Research And Technology Corporation Ester-based peptide prodrugs
NZ589847A (en) 2008-06-17 2013-01-25 Univ Indiana Res & Tech Corp Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
JP5753779B2 (ja) * 2008-06-17 2015-07-22 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 生理学的ｐＨの緩衝液中で向上した溶解性及び安定性を示すグルカゴン類縁体
WO2010013012A2 (en) 2008-08-01 2010-02-04 Lund University Bioscience Ab Novel polypeptides and uses thereof
WO2010033207A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of therapeutic peptides
US20110171312A1 (en) 2008-09-19 2011-07-14 Nektar Therapeutics Modified therapeutic peptides, methods of their preparation and use
JP5635531B2 (ja) 2008-12-15 2014-12-03 ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ グルカゴン類似体
AR074811A1 (es) 2008-12-19 2011-02-16 Univ Indiana Res & Tech Corp Profarmaco de peptido de la superfamilia de glucagon basados en amida
MX362028B (es) 2009-02-03 2019-01-04 Amunix Pharmaceuticals Inc Polipeptidos recombinantes extendidos y composiciones que comprenden los mismos.
WO2010096052A1 (en) * 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
EP2408800B1 (en) 2009-03-20 2016-05-25 Hanmi Science Co., Ltd. Method for preparing a site-specific conjugate of a physiologically active polypeptide
EP3385279B1 (en) 2009-03-20 2020-02-26 Amgen Inc. Carrier immunoglobulins and uses thereof
KR20120087875A (ko) 2009-06-16 2012-08-07 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 Ｇｉｐ 수용체-활성 글루카곤 화합물
ME02220B (me) * 2009-07-13 2016-02-20 Zealand Pharma As Analozi acilovanog glukagona
US20120294855A1 (en) 2009-11-03 2012-11-22 Eli Lilly & Company Glp-1 receptor agonist compounds for obstructive sleep apnea
EP2509997B1 (en) 2009-12-07 2017-08-30 i2 Pharmaceuticals, Inc. Conjugates comprising an antibody surrogate scaffold with improved pharmacokinetic properties
EP2512503A4 (en) 2009-12-18 2013-08-21 Univ Indiana Res & Tech Corp COAGONISTS OF GLUCAGON / GLP-1 RECEPTOR
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
JO2976B1 (en) 2009-12-22 2016-03-15 ايلي ليلي اند كومباني Axentomodulin polypeptide
US20130143798A1 (en) 2010-03-26 2013-06-06 Novo Nordisk A/S Novel glucagon analogues
CA2797089A1 (en) 2010-05-13 2011-11-17 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon superfamily peptides exhibiting g protein-coupled receptor activity
WO2011163012A2 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
KR101337797B1 (ko) 2010-07-14 2013-12-06 한미사이언스 주식회사 지속형 인간 성장 호르몬 결합체 액상 제제
KR101382593B1 (ko) 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
WO2012032567A1 (ja) 2010-09-06 2012-03-15 パナソニック株式会社 表示装置及びその制御方法
CN101974077A (zh) 2010-09-15 2011-02-16 南京瑞年天平医药科技有限公司 一种新颖的多肽化合物
KR101303388B1 (ko) 2010-10-26 2013-09-03 한미사이언스 주식회사 지속형 인터페론 알파 결합체의 액상 제제
KR101767570B1 (ko) 2010-10-26 2017-08-14 한미사이언스 주식회사 항 비만 펩타이드의 지속형 결합체
CN102010473A (zh) 2010-11-10 2011-04-13 曹鹏 重组胃泌酸调节素融合蛋白及其制备和应用
US8975223B2 (en) 2010-12-22 2015-03-10 Marcadia Biotech, Inc. Methods for treating metabolic disorders and obesity with a peptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID No. 146
JP6118500B2 (ja) 2011-02-28 2017-04-19 ローム アンド ハース エレクトロニック マテリアルズ エルエルシーＲｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａｓ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ＬＬＣ フォトレジスト組成物、およびフォトリソグラフィパターンを形成する方法
KR101161526B1 (ko) 2011-05-16 2012-07-02 숭실대학교산학협력단 연료전지용 촉매전극을 위한 코어/쉘 구조의 나노 지지체 및 그 제조방법
CA2838503C (en) 2011-06-10 2020-02-18 Hanmi Science Co., Ltd. Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
PH12018501119A1 (en) 2011-06-17 2019-02-04 Hanmi Science Co Ltd A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
RU2014101697A (ru) 2011-06-22 2015-07-27 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Коагонисты рецепторов глюкагона/glp-1
KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2016-10-11 한미사이언스 주식회사 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
SG11201406671RA (en) 2012-04-19 2014-11-27 Opko Biolog Ltd Long-acting oxyntomodulin variants and methods of producing same
EP2864351B1 (en) 2012-06-21 2016-08-10 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting gip receptor activity
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
KR101373563B1 (ko) 2012-07-25 2014-03-12 전북대학교산학협력단 Ｔｏｆ-ｍｒａ를 이용한 혈류특성 및 ｍｒ-신호강도구배(전단율) 유도방법
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
KR101993393B1 (ko) 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
EA031852B1 (ru) 2012-11-06 2019-03-29 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Жидкая композиция белкового конъюгата, содержащего оксинтомодулин и фрагмент иммуноглобулина
JP6137046B2 (ja) 2014-05-09 2017-05-31 信越化学工業株式会社 単量体、高分子化合物、レジスト材料及びパターン形成方法
TWI802396B (zh) 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
WO2019171352A2 (en) 2018-03-08 2019-09-12 Janssen Pharmaceutica Nv Methods of treating severe non-diabetic obesity

Also Published As

Publication number Publication date
PL2721062T3 (pl) 2019-05-31
WO2012173422A1 (en) 2012-12-20
CA2838504C (en) 2020-07-21
IL272345B (en) 2021-01-31
BR112013032375B1 (pt) 2022-09-20
NZ718999A (en) 2017-07-28
JP2014518209A (ja) 2014-07-28
ES2710356T3 (es) 2019-04-24
JP6345216B2 (ja) 2018-06-20
IL245556A0 (en) 2016-06-30
PT2721062T (pt) 2019-02-12
PH12018501119A1 (en) 2019-02-04
EP2721062A1 (en) 2014-04-23
PE20181268A1 (es) 2018-08-03
SG195275A1 (en) 2013-12-30
WO2012173422A9 (en) 2013-03-14
AU2012270366C1 (en) 2017-07-13
MX353402B (es) 2018-01-11
EP3502129A1 (en) 2019-06-26
BR112013032375A2 (pt) 2016-11-22
EP2721062B1 (en) 2018-11-14
US10363320B2 (en) 2019-07-30
NZ733478A (en) 2020-06-26
IL229759A (en) 2017-08-31
NZ618811A (en) 2016-05-27
IL272345A (en) 2020-03-31
JP2017071609A (ja) 2017-04-13
RU2607365C2 (ru) 2017-01-10
KR101577734B1 (ko) 2015-12-29
US20170340753A1 (en) 2017-11-30
AU2018282298B2 (en) 2020-06-18
KR101591411B1 (ko) 2016-02-05
US11872283B2 (en) 2024-01-16
CN109306015A (zh) 2019-02-05
AU2017202672B2 (en) 2019-01-17
SI2721062T1 (sl) 2019-03-29
IL245556B (en) 2018-03-29
RU2733544C2 (ru) 2020-10-05
US20140212440A1 (en) 2014-07-31
IL257928A (en) 2018-06-28
AU2012270366A1 (en) 2014-01-16
JP6038905B2 (ja) 2016-12-07
CA3080189C (en) 2023-01-17
PE20141178A1 (es) 2014-09-12
RU2013153198A (ru) 2015-07-27
HUE042585T2 (hu) 2019-07-29
TWI601744B (zh) 2017-10-11
RS58606B1 (sr) 2019-05-31
EP2721062A4 (en) 2014-11-12
TR201901402T4 (tr) 2019-02-21
RU2016147505A3 (uk) 2020-04-08
AR086969A1 (es) 2014-02-05
AR125914A2 (es) 2023-08-23
AU2017202672A1 (en) 2017-05-11
CN103732616A (zh) 2014-04-16
MY164680A (en) 2018-01-30
AU2012270366B2 (en) 2017-02-02
RU2016147505A (ru) 2018-10-24
IL257928B (en) 2020-02-27
CL2013003619A1 (es) 2014-05-30
LT2721062T (lt) 2019-02-11
CN109306015B (zh) 2022-04-26
US9731031B2 (en) 2017-08-15
DK3502129T3 (da) 2021-07-12
ZA201309013B (en) 2014-11-26
KR20140133493A (ko) 2014-11-19
UA114709C2 (uk) 2017-07-25
CN103732616B (zh) 2018-08-17
TW201305195A (zh) 2013-02-01
HRP20190265T1 (hr) 2019-04-05
IL229759A0 (en) 2014-01-30
KR20120139579A (ko) 2012-12-27
TW201506037A (zh) 2015-02-16
MX2013014779A (es) 2014-06-23
AU2018282298A1 (en) 2019-01-17
TWI519541B (zh) 2016-02-01
US20190321485A1 (en) 2019-10-24
SG10201605006XA (en) 2016-08-30
PE20230404A1 (es) 2023-03-07
DK2721062T3 (en) 2019-02-25
CA3080189A1 (en) 2012-12-20
CA2838504A1 (en) 2012-12-20
CY1121255T1 (el) 2020-05-29
NZ742400A (en) 2021-05-28
ES2882520T3 (es) 2021-12-02
EP3502129B1 (en) 2021-04-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA125895C2 (uk) КОН'ЮГАТ, ЩО МІСТИТЬ ПОХІДНУ ОКСИНТОМОДУЛІНУ ТА Fc-ДІЛЯНКУ ІМУНОГЛОБУЛІНУ, ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
UA126465C2 (uk) Пептид, що має активність оксинтомодуліну, та фармацевтична композиція для лікування ожиріння, яка його містить
JP2018090595A (ja) オキシントモジュリン誘導体を含む高脂血症の治療のための組成物
UA127445C2 (uk) Комбінація для лікування або профілактики метаболічного синдрому
KR20220092446A (ko) 단장증후군의 예방 또는 치료를 위한 인슐린 분비 펩타이드 및 glp-2의 병용 요법
NZ718999B2 (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
NZ618811B2 (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
NZ742400B2 (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
NZ733478B2 (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof