UA126662C2 - Похідна глюкагону, її кон'югат, композиція, яка її містить, та її терапевтичне застосування - Google Patents

Похідна глюкагону, її кон'югат, композиція, яка її містить, та її терапевтичне застосування Download PDF

Info

Publication number
UA126662C2
UA126662C2 UAA201900200A UAA201900200A UA126662C2 UA 126662 C2 UA126662 C2 UA 126662C2 UA A201900200 A UAA201900200 A UA A201900200A UA A201900200 A UAA201900200 A UA A201900200A UA 126662 C2 UA126662 C2 UA 126662C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
peptide
derivative
fragment
long
group
Prior art date
Application number
UAA201900200A
Other languages
English (en)
Inventor
Чун Кхук Кім
Чун Кхук Ким
Йон Чін Пак
Йон Чин Пак
Ін Юн Чхой
Ин Юн Чхой
Сон Йоп Чон
Original Assignee
Ханмі Фарм. Ко., Лтд.
Ханми Фарм. Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=60787387&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA126662(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ханмі Фарм. Ко., Лтд., Ханми Фарм. Ко., Лтд. filed Critical Ханмі Фарм. Ко., Лтд.
Publication of UA126662C2 publication Critical patent/UA126662C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Винахід стосується похідної глюкагону, кон'югата, композиції, що її містить, та її терапевтичного застосування для профілактики метаболічного синдрому, гіпоглікемії та вродженого гіперінсулінізму.

Description

а. : обов нн о ГЕО Оу ве 0 0 АН о с й В Ом нн ВА То : уяв По ТЕОЕ о Я ПЕКИ ЕЕ По Я ПЕ ї 0 фр рннннннннняи
ОО ока певаної де УКОСІВ КО То неольні
ТЯ певідне хрнваяві з екран яна З кове тю 0117 Перне харчраання се пос, яке візок похідну . 11 порнекорчуввння б руно, які вени нохани; 00 ПАНеНеВ ення зе
Винахід стосується похідної глюкагону, її кон'югату, та композиції, яка її містить, та її застосування, зокрема, терапевтичного застосування для лікування метаболічного синдрому, гіпоглікемії, та його вродженого гіперінсулінізму.
ІПопередній рівень техніки)
Завдяки економічному зростанню та змінам в харчових звичках, тощо, за останні роки швидко зростає частота захворювань, пов'язаних з метаболічним синдромом, включаючи різні захворювання, такі як ожиріння, гіперліпідемія, гіпертонія, артеріосклероз, гіперінсулінемія, діабет та захворювання печінки. Дані захворювання можуть зустрічатися незалежно, але в цілому вони в основному зустрічаються в тісному зв'язку один 3 одним, причому супроводжуються різними симптомами.
Надмірна вага та ожиріння є відповідальними за підвищення кров'яного тиску та рівня холестерину, та викликають або погіршують різні захворювання, такі як серцеві захворювання, діабет, артрит, тощо. Крім того, проблема ожиріння також стає основною причиною збільшення випадків артеріосклерозу, гіпертонії, гіперліпідемії або серцевих захворювань у дітей та підлітків, а також у дорослих.
Однак, ожиріння нелегко лікувати, тому що це складне захворювання, пов'язане з механізмами контролю апетиту та енергетичного обміну речовин. Відповідно, лікування ожиріння вимагає не лише власних зусиль пацієнта, але також способу, здатного лікувати аномальні механізми, пов'язані з контролем апетиту та енергетичного обміну речовин. Таким чином, були зроблені зусилля для розробки лікарських засобів для лікування аномальних механізмів.
В результаті цих зусиль були розроблені лікарські засоби, такі як РимонабантФ (Запоїі-
Амепіїв), СібутрамінФ (Арроїй), Контраве (ТаКеда), Орлістате (Коспе), тощо, але вони мають недоліки щодо серйозних побічних ефектів або дуже слабких ефектів проти ожиріння.
Наприклад, відповідно до повідомлень, Римонабант? показує побічний ефект щодо розладу центральної нервової системи, СібутрамінФ та КонтравФ показує серцево-судинні побічні ефекти, та Орлістатб показує тільки приблизно 4 кг втрати ваги, коли приймали протягом одного року.
Між тим, глюкагон виробляється підшлунковою залозою, коли рівень глюкози в крові падає
Зо внаслідок інших лікарських засобів або захворювань, або гормональних або ферментних дефіцитів. Глюкагон посилає сигнал на розпад глікогену в печінці та подальше вивільнення глюкози та відіграє роль у підвищенні рівня глюкози в крові до нормального діапазону. Крім того, було показано, що глюкагон є ефективним в лікуванні гіпоглікемії. Гіпоглікемічний терапевтичний ефект глюкагону є результатом стимулювання розкладання глікогену до глюкози (розпаду глікогену) або збільшення продукування глюкози (біосинтезу глюкози), яку отримують з амінокислотних попередників, що призводить до збільшення відтоку глюкози з печінки.
На додаток до ефекту підвищення рівнів глюкози в крові, глюкагон пригнічує апетит та активує гормоночутливу ліпазу адипоцитів для полегшення ліполізу, тим самим демонструючи ефект проти ожиріння. Проте, застосування глюкагону, як терапевтичного агента, було обмежено через його низьку розчинність та властивість осадження при нейтральному рн.
Відповідно, глюкагон з покращеними властивостями може бути ефективно використаний для лікування важкої гіпоглікемії, неалкогольного стеатогепатиту (МАБН), дисліпідемії, тощо, внаслідок своєї активності щодо розкладання жиру та р- окислення в печінці.
Одна з похідних глюкагону, глюкагону подібного до пептиду-! (СІ Р-1), розробляється як терапевтичний агент для лікування гіперглікемії у пацієнтів з цукровим діабетом. СІ Р-1 має функції стимулювання синтезу та секреції інсуліну, інгібування секреції глюкагону, уповільнення спорожнення шлунка, збільшення споживання глюкози та пригнічення споживання їжі.
Ексендин-4, отриманий з отрути ящірки та який має амінокислотну гомологію приблизно 5096 до СІ Р-1, також як повідомлялось, активує рецептор СІ Р-1, тим самим зменшуючи гіперглікемію у пацієнтів з цукровим діабетом (У Віої Снет. 1992 Арг 15; 267 (11): 7402-5). Однак, лікарські засоби проти ожиріння, що містять СІ Р-1, як повідомляється, показують побічні ефекти, такі як блювота та нудота.
Тому, як альтернатива СІ Р-1, велика увага була зосереджена на оксинтомодуліні, який може зв'язуватися з обома рецепторами двох пептидів, СІ Р-1 та глюкагону. Оксинтомодуліном є пептид, отриманий з попередника глюкагону, пре-глюкагону, та має функції пригнічення споживання їжі та підвищує насиченість С Р-1, та має ліполітичну активність, як глюкагон, тим самим підвищуючи його ефективність в терапії проти ожиріння.
Однак, оксінтомодулін або його похідні мають серйозний недолік, оскільки для лікування ожиріння слід щоденно вводити надмірну кількість лікарського засобу, оскільки вони мають бо низьку ефективність та короткий період напіввиведення іп мімо. Крім того, коли обидві активності
СІ Р-1 та глюкагону є присутніми в одному пептиді, співвідношення його активність стає фіксованим, та, таким чином, важко використовувати подвійний агоніст з різними співвідношеннями. Відповідно, комбінована терапія, здатна використовувати різні співвідношення активності шляхом регулювання вмісту СІ Р-1 та глюкагону, може бути більш ефективною. Проте для комбінованої терапії необхідним є покращити фізичні характеристики глюкагону, який агрегатується при нейтральному рнН та осідає з часом, таким чином, показуючи погану розчинність.
Тим часом, вроджений гіперінсулінізм є однією з найбільш поширених причин важкої та стійкої гіпоглікемії у новонароджених та дітей. Інсулін є гормоном, який регулює рівень глюкози в організмі людини. Він відіграє певну роль у зниженні рівня глюкози в крові, коли рівень глюкози в крові підвищується внаслідок прийому їжі, тощо. Однак при вродженому гіперінсулінізмі інсулін не відіграє такої ролі та підшлункова залоза продукує інсулін незалежно від рівня глюкози в крові. В результаті пацієнти стають гіпоглікемічними.
Коли відбувається гіпоглікемія, рівні глюкози, кетону, лактози, тощо, які головним чином використовуються клітинами мозку, не можуть підтримуватися, та енергія з протеїнів та жирів в організмі блокується, що призводить до пошкодження клітин мозку і тим самим викликає судоми, розлади навчання, церебральний параліч, сліпоту та навіть смерть у важких випадках.
Гіпоглікемія може відбуватися тимчасово через надлишкову секрецію інсуліну. Крім того, гіпоглікемія також зустрічається у дітей, які перенесли фетальний дистрес. Хоча причина секреції інсуліну є незрозумілою, в цьому випадку гіпоглікемія може бути покращена в межах від кількох днів до місяців. Немовлята, народжені матерями з цукровим діабетом, можуть мати перехідну гіпоглікемію, якщо рівень цукру добре не контролюється, але воне не повторюється, якщо годування відбувається добре, та гіпоглікемія зникає. Іншою причиною є стійкий гіперінсулінізмм, зумовлений низкою генетичних дефектів. Як повідомляється, причини гіперінсулінізму через генетичні дефекти включають мутацію гена ЗОВ або гена Кіб.2 на хромосомі 11р15.1 або мутацію гена глюкокінази (ЯК) на хромосомі 7р15-р13, підвищення активності СК, що збільшує. СаК- активність та мутацію гена глутаматдегідрогенази (СОН), яка активує СОН та тим самим підвищує АТФ в бета-острівкових клітинах, тощо.
Відповідно, негайне лікування гіпоглікемії важливо для запобігання пошкодження мозку.
Зо Гіпоглікемія може лікуватися, використовуючи напої, які містять вуглевод, але в важкому випадку необхідне введення глюкози або глюкагону у вену. Мета лікування полягає в тому, щоб дозволити дітям управляти нормальним дієтичним циклом з допомогою безпечного пристрою.
Наприклад, у випадку однорічних немовлят, їм може бути дозволено залишатися голодними протягом принаймні від 14 годин до 15 годин з лікарськими засобами, оскільки вони сплять без їжі протягом від 10 годин до 12 годин вночі.
Прикладами лікарських засобів, що підлягають використанню, можуть бути діазоксид, октреотид, глюкагон, тощо. Діазоксид вводять перорально два або три рази на день. Діазоксид інгібує секрецію інсуліну, діючи на АТФ - залежний К" (КАТР) канал, та, таким чином, він може бути ефективним для лікування гіперінсулінізму СК або гіперінсулінізму СОН, але він часто не реагує на аутосомно-рецесивний гіперінсулінізм, викликаний дефектом шляху КАТР. Октреотид вводять шляхом підшкірної ін'єкції. При введенні октреотиду спочатку проявляється ефект дії октреотиду, але іноді його ефект зменшується після певного періоду часу. Глюкагон сприяє вивільненню глюкози з печінки та вводиться шляхом підшкірної або внутрішньовенної ін'єкції, яка, як відомо, застосовується, коли пероральне введення є не доступним в надзвичайній ситуації.
Серед них глюкагон в даний час використовується як ліофілізована композиція через його низьку розчинність та осадження при нейтральному рН, що є незручним, оскільки він повинен бути розчиненим в розчиннику перед використанням. Крім того, коли глюкагон використовується як терапевтичний засіб для лікування вродженого гіперінсулінізму, який вимагає тривалого лікування внаслідок його короткого періоду напіввиведення, застосування глюкагону було обмеженим через часте введення.
Розкриття)
ІТехнічна проблема)
Завдання за винаходом є створення композиції, яка містить похідну глюкагону або кон'югат, який містить її, та, а саме, фармацевтичної композиції для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії або метаболічного синдрому, яка містить похідну глюкагону або кон'югат, який містить Її.
Ще одним завданням винаходу є отримання похідної глюкагону.
Ще одним іншим завданням винаходу є отримання виділенного полінуклеотиду, який кодує похідну глюкагону, вектора, який включає полінуклеотид, та виділенної клітини, яка включає полінуклеотид або вектор.
Ще одним іншим завданням винаходу є отримання виділенного кон'югату, який включає пептидний фрагмент та фрагмент біосумісного матеріалу, який є ковалентно зв'язаним з пептидним фрагментом. Ще одним іншим завданням винаходу є створення набору, який містить похідну глюкагону або кон'югату, який її містить, та, зокрема, набору для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, або метаболічного синдрому, який містить похідну глюкагону, або кон'югат, який її містить.
Ще одним іншим завданням винаходу є забезпечення способу профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, який включає введення похідної глюкагону або виділенного кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, суб'єкту, який цього потребує.
Ще одним іншим завданням винаходу є забезпечення застосування похідної глюкагону або виділенного кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, у виробництві лікарського засобу для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму.
Ще одним іншим завданням винаходу є забезпечення способу профілактики або лікування гіпоглікемії, який включає введення похідної глюкагону або виділенного кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, суб'єкту, який цього потребує.
Ще одним іншим завданням винаходу є забезпечення застосування похідної глюкагону або виділенного кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, у виробництві лікарського засобу для профілактики або лікування гіпоглікемії.
Ще одним іншим завданням винаходу є забезпечення способу профілактики або лікування метаболічного синдрому, який включає введення похідної глюкагону або виділенного кон'югату або композиції, які її містить суб'єкту, який цього потребує.
Ще одним іншим завданням винаходу є забезпечення застосування похідної глюкагону або виділенного кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, у виробництві лікарського засобу (або фармацевтичної композиції) для профілактики або лікування метаболічного синдрому. (Технічне рішення)
Аспект винаходу передбачає композицію, яка містить похідну глюкагону, або кон'югат, який її містить, та, зокрема, фармацевтичну композицію для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, або метаболічного синдрому, яка містить похідну глюкагону, або кон'югату, який її містить.
В конкретному варіанті здійснення, винахід стосується композиції, яка містить пептид похідної глюкагону, який включає амінокислотну послідовність наступної загальної Формули 1, та зокрема, фармацевтичної композиції для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, або метаболічного синдрому, яка містить пептид похідної глюкагону, який включає амінокислотну послідовність наступної загальної Формули 1: х1-Х2-ОатЕ-Х7-50-Х10-5-Х12-Х13-Х14-Х15-Х16-Х17-Х18-Х19-Х20-Х21-Е-Х23-Х24-М1-І-Х27- хХ28-Х29-Х30 (Загальна Формула 1, 5ЕО ІЮ МО: 45) де в загальній Формулі 1
Х1 - гістидин (Н), дезаміно-гістидил, М-диметил-гістидил, ДВ-гідрокси імідазопропіоніл, 4- імідазоацетил, р-карбоксіїмідазопропіоніл, триптофан (М/) або тирозин (У), або є відсутнім;
Хг-о-метил-глутамінову кислоту, аміноїзомасляна кислота (Аїр), О-аланін, гліцин (С), Заг (М- метилгліцин), серии (5) або Ю-серин;
Х7 - треонін (Т), валін (МУ) або цистеїн (С);
Х10 - тирозин (У) або цистеїн (С);
Х12 - лізин (К) або цистеїн (С);
Х13 - тирозин (У) або цистеїн (С);
Х14 - лейцин (І) або цистеїн (С);
Х15 - аспарагінова кислота (0), глутамінова кислота (Е) або цистеїн (С);
Х16 - глутамінова кислота (Е), аспарагінова кислота (0), серин (5), х-метил-глутамінова кислота або цистеїн (С), або є відсутнім;
Х17 - аспарагінова кислота (0), глутамін (0), глутамінова кислота (Е), лізин (К), аргінін (Р), серин (5), цистеїн (С) або валін (У), або є відсутнім;
Х18 - аланін (А), аспарагінова кислота (0), глутамінова кислота (Е), аргінін (Р), валін (У) або цистеїн (С), або є відсутнім;
Х19 - аланін (А), аргінін (Р), серин (5), валін (У) або цистеїн (С), або є відсутнім;
Х20 - лізин (К), гістидин (Н), глутамін (0), аспарагінова кислота (0), аргінін (А), о- 60 метилглутамінова кислота, або цистеїн (С), або є відсутнім;
Х21 - аспарагінова кислота (0), глутамінова кислота (Е), лейцин (І), валін (МУ) або цистеїн (С), або є відсутнім;
Х23 - ізолейцин (І), валін (У) або аргінін (Р), або є відсутнім;
Х24 - валін (М), аргінін (В), аланін (А), цистеїн (С), глутамінова кислота (Е), лізин (К), глутамін (0), о-метил-глутамінова кислота або лейцин (І), або є відсутнім;
Х27 - ізолейцин (І), валін (У), аланін (А), лізин (К), метіонін (М), глутамін (ОС) або аргінін (В), або є відсутнім;
Х28 - глутамін (С), лізин (К), аспарагін (М), або аргінін (Р) або є відсутнім;
Х29 - лізин (К), аланін (А), гліцин (С) або треонін (Т), або є відсутнім; та
ХЗ0 - цистеїн (С), або є відсутнім; за умови, що коли амінокислотна послідовність загальної Формули 1 є ідентичною до 5ЕО
ІО МО: 1, вона виключається.
Наступними є додаткові конкретні варіанти здійснення винаходу.
Зокрема, як фармацевтична композиція відповідно до попереднього конкретного варіанта здійснення: в загальній Формулі 1,
Х1 - гістидин (Н), триптофан (М/) або тирозин (У), або є відсутнім;
Х2 - серин (5) або аміноїзомасляна кислота (АБ);
Х7 - треонін (Т), валін (М) або цистеїн (С);
Х10 - тирозин (У) або цистеїн (С);
Х12 - лізин (К) або цистеїн (С);
Х13 - тирозин (У) або цистеїн (С);
Х14 - лейцин (І) або цистеїн (С);
Х15 - аспарагінова кислота (0) або цистеїн (С);
Х16 - глутамінова кислота (Е), серин (5) або цистеїн (С);
Х17 - аспарагінова кислота (0), глутамінова кислота (Е), лізин (К), аргінін (В), серин (5), цистеїн (С) або валін (М);
Х18 - аспарагінова кислота (0), глутамінова кислота (Е), аргінін (В) або цистеїн (С);
Х19 - аланін (А) або цистеїн (С);
Зо Х20 - глутамін (0), аспарагінова кислота (0), лізин (К) або цистеїн (С);
Х21 - аспарагінова кислота (0), глутамінова кислота (Е), лейцин (І), валін (МУ) або цистеїн (С);
Х23 - ізолейцин (І), валін (М) або аргінін (КЕ);
Х24 - валін (М), аргінін (Р), аланін (А), глутамінова кислота (Е), лізин (К), глутамін (0) або лейцин (І);
Х27 - ізолейцин (І), валін (У), аланін (А), метіонін (М), глутамін (СО) або аргінін (В);
Х28 - глутамін (С), лізин (К), аспарагін (М) або аргінін (Р);
Х29 - треонін (Т); та
ХЗ0 - цистеїн (С), або є відсутнім.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення: в загальній Формулі 1,
Х1 - гістидин (Н), триптофан (М/) або тирозин (У);
Х2 - серин (5) або аміноїзомасляна кислота (АБ);
Х7 - цистеїн (С), треонін (Т) або валін (М);
Х10 - тирозин (У) або цистеїн (С);
Х12 - лізин (К) або цистеїн (С);
Х13 - тирозин (У) або цистеїн (С);
Х14 - лейцин (І) або цистеїн (С);
Х15 - аспарагінова кислота (0) або цистеїн (С);
Х16 - глутамінова кислота (Е), серин (5) або цистеїн (С);
Х17 - глутамінова кислота (Е), лізин (К), аргінін (В), цистеїн (С) або валін (М);
Х18 - аргінін (В) або цистеїн (С);
Х19 - аланін (А) або цистеїн (С);
Х20 - глутамін (ОС) або лізин (К);
Х21 - аспарагінова кислота (0), глутамінова кислота (Е), валін (М) або цистеїн (С);
Х23 - валін (М);
Х24 - валін (М) або глутамін (0);
Х27 - метіонін (М);
Х28 - аспарагін (М) або аргінін (В); бо Х29 - треонін (Т); та
ХЗ0 - цистеїн (С), або є відсутнім.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення: в загальній Формулі 1
Х1 -тирозин (У);
Х2 - аміноізомасляна кислота (АБ);
Х7 - цистеїн (С), треонін (Т) або валін (М);
Х10 - тирозин (ХУ) або цистеїн (С);
Х12 - лізин (К);
Х13 - тирозин (У) або цистеїн (С);
Х14 - лейцин (І) або цистеїн (С);
Х15 - аспарагінова кислота (0) або цистеїн (С);
Х16 - глутамінова кислота (Е), серин (5) або цистеїн (С);
Х17 - лізин (К), аргінін (В), цистеїн (С) або валін (М);
Х18 - аргінін (В) або цистеїн (С);
Х19 - аланін (А) або цистеїн (С);
Х20 - глутамін (ОС) або лізин (К);
Х21 - аспарагінова кислота (0), глутамінова кислота (Е) або цистеїн (С);
Х23 - валін (М);
Х24 - глутамін (0);
Х27 - метіонін (М);
Х28 - аспарагін (М) або аргінін (В);
Х29 - треонін (Т); та
ХЗ0 - цистеїн (С), або є відсутнім.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення: в загальній Формулі 1,
Х1 - гістидин (Н), триптофан (М/) або тирозин (У), або є відсутнім;
Х2 - серин (5) або аміноїзомасляна кислота (АБ);
Зо Х7 - треонін (Т), валін (МУ) або цистеїн (С);
Х10 - тирозин (ХУ) або цистеїн (С);
Х12 - лізин (К) або цистеїн (С);
Х13 - тирозин (У) або цистеїн (С);
Х14 - лейцин (І) або цистеїн (С);
Х15 - аспарагінова кислота (0) або цистеїн (С);
Х16 - глутамінова кислота (Е), серин (5) або цистеїн (С);
Х17 - аспарагінова кислота (0), глутамінова кислота (Е), лізин (К), аргінін (В), серин (5), цистеїн (С) або валін (М);
Х18 - аспарагінова кислота (0), глутамінова кислота (Е), аргінін (В) або цистеїн (С);
Х19 - аланін (А) або цистеїн (С);
Х20 - глутамін (С), аспарагінова кислота (0) або лізин (К);
Х21 - аспарагінова кислота (0) або глутамінова кислотак (Е);
Х23 - валін (М);
Х24 - валін (М) або глутамін (0);
Х27 - ізолейцин (І) або метіонін (М);
Х28 - аспарагін (М) або аргінін (В);
Х29 - треонін (Т); та
ХЗ0 - цистеїн (С), або є відсутнім.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення: в загальній Формулі 1,
Х1 - тирозин (У);
Х2 - аміноізомасляна кислота (АБ);
Х7 - треонін (Т);
Х10 -тирозин (У);
Х12 - лізин (К);
Х13 - тирозин (У);
Х14 - лейцин (І);
Х15 - аспарагінова кислота (0) або цистеїн (С); 60 Х16 - глутамінова кислота (Е), серин (5) або цистеїн (С);
Х17 - лізин (К) або аргінін (В);
Х18 - аргінін (В);
Х19 - аланін (А);
Х20 - глутамін (0), цистеїн (С), або лізин (К);
Х21 - аспарагінова кислота (0), цистеїн (С), валін (МУ) або глутамінову кислоту (Е);
Х23 - валін (МУ) або аргінін (В);
Х24 - глутамін (С) або лейцин (І);
Х27 - метіонін (М);
Х28 - аспарагін (М) або аргінін (В);
Х29 - треонін (Т); та
ХЗО є відсутнім.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, пептид містить амінокислотну послідовність наступної загальної Формули 2:
У-Аір-ОСТЕ-Х7-50-Х10-5-Х12-У-І-Х15-Х16-Х17-8-А-Х20-Х21-Е-М-Х24-М-І -М-М-Т -Х3ЗО0 (Загальна Формула 2, 5ЕО ІЮ МО: 46) де в загальній Формулі 2
Х7 - треонін (Т), валін (МУ) або цистеїн (С);
Х10 - тирозин (У) або цистеїн (С);
Х12 - лізин (К) або цистеїн (С);
Х15 - аспарагінова кислота (0) або цистеїн (С);
Х16 - глутамінова кислота (Е) або серин (5);
Х17 - лізин (К) або аргінін (В);
Х20 - глутамін (ОС) або лізин (К);
Х21 - аспарагінова кислота (0) або глутамінова кислота (Е);
Х24 - валін (М) або глутамін (0); та
ХЗ0 - цистеїн (С), або є відсутнім.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, пептид має значення ізоелектричної точки (рі), яке відрізняється від
Зо значення нативного глюкагону (6,8), наприклад, рі-6,5 або менше, або рі 7,0 або вище.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, в конкретному варіанті здійснення винаходу, кожна амінокислота в щонайменше одній амінокислотній парі серед амінокислотних пар Х10 та Х14, Х12 та Х16, Х16 та Х20, Х17 та Х21, Х20 та Х24, та Х24 та Х28 в загальній Формулі 1 або 2 є заміщеною на глутамінову кислоту або лізин, який є здатним утворювати кільце, відповідно.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, в конкретному варіанті здійснення винаходу, кожна амінокислота в амінокислотній парі Х12 та Х167? або кожна амінокислота в амінокислотній парі Х16 та Х20? або кожна амінокислота в амінокислотній парі Х17 та Х21 в загальній Формулі 1 або 2 є відповідно заміщена глутамінової кислотою або лізином, який є здатним утворювати кільце.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, в конкретному варіанті здійснення винаходу, в загальній Формулі 1 або 2, кільце (наприклад, лактамне кільце) утворюється між кожною амінокислотою в щонайменше одній амінокислотній парі серед амінокислотних пар Х10 та Х14, Х12 та Х16, Х16 та Х20, Х17 та
Х21, Х20 та Х24, та Х24 та Х28.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, в конкретному варіанті здійснення винаходу, в загальній Формулі 1 або 2,
Х16 - глутамінова кислота, Х20 - лізин, та бічні ланцюги Х16 та Х20 утворюють лактамне кільце.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, С-кінець пептида є амідованим або немодифікованим.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, пептид є нативною похідною глюкагону, здатною активувати рецептор глюкагону.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, де пептид включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МОБ: 2-44.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, де пептид включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з БЕО ІЮ МОБ: 12, 13, 15, та 36-44.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, де пептид включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 37.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, де пептид знаходиться у формі кон'югату тривалої дії, в якому фрагмент біосумісного матеріалу є зв'язаним з пептидним фрагментом, та зокрема, з пептидним фрагментом, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1 або 2.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, де фрагмент біосумісного матеріалу є вибраним з групи, яка складається з полімеру, жирної кислоти, холестерину, альбуміну та його фрагмента, альбумін-зв'язуючого матеріалу, полімеру повторюваних одиниць конкретної амінокислотної послідовності, антитіла, фрагмента антитіла, ЕсАВп-зв'язуючого матеріалу, іп мімо сполучної тканини або її похідної, нуклеотиду, фібронектину, трансферину, сахариду, гепарину, та еластину.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, де полімер є вибраним з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронову кислоту, олігонуклеотиду, та їх комбінації.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, ЕсАп-зв'язуючим матеріалом є поліпептид, який містить Ес- ділянку імуноглобуліну.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, пептидний фрагмент та фрагмент біосумісного матеріалу є зв'язаними через лінкер.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, лінкер вибирають з групи, яка складається з пептиду, жирної кислоти, сахариду, полімеру, низькомолекулярної сполуки, нуклеотиду, та їх комбінації.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, полімер вибирають з групи, яка складається з поліетиленгліколю,
Зо поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетгилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронову кислоту, олігонуклеотиду, та їх комбінації.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, лінкером є поліетиленгліколь.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, Ес-ділянка імуноглобуліну є неглікозильованою.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, Ес- ділянку імуноглобуліну вибирають з групи, яка складається з: (а) СНІ домену, СН2 домену, СНЗ домену, та СНА домену; (р) СНІ домену та СН2 домену; (с) СНІ домену та СНЗ домену; (4) СН2 домену та СНЗ домену; (є) комбінації між одним або щонайменше двома доменами з СНІ домену, СН2 домену, СНЗ домену, та СН4А4 домену, та шарнірною ділянкою імуноглобуліну або частиною шарнірної ділянки; та (І) димер між кожним доменом константної ділянки важкого ланцюга та константної ділянки легкого ланцюга.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, поліпептид, який містить Ес-ділянку імуноглобуліну, знаходиться у формі димеру.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, Ес- ділянка імуноглобуліну є нативною Ес похідною, в якій ділянка, здатна утворювати дисульфідний зв'язок, є видаленою, нативну Ес похідну, в якій частина амінокислоти() на М- кінці є видаленою, нативну Ес похідну, в якій метіоніновий залишок є доданим на М- кінець, нативну Ес похідну, в якій сайт зв'язування комплемента є видаленим, або нативну Ес похідну, в якій сайт антитілозалежної клітинно опосередкованої цитотоксичності (АОСС) є видаленим.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, Ес- ділянку імуноглобуліну отримують з імуноглобуліну, вибраного з групи, яка складається з Ідс, ІДА, дО, ЧЕ, та ІДМ.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, Ес- ділянка імуноглобуліну є ІдДс24 Ес ділянкою.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, Ес- ділянку імуноглобуліну є неглікозильованою Ес ділянкою, отриманою з людського да.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, лінкер є зв'язаним з цистеїновим залишком пептида, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1 або 2.
Як фармацевтична композиція відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, в конкретному варіанті здійснення винаходу, лінкер кон'югату є відповідно зв'язаним з пептидним фрагментом та фрагментом біосумісного матеріалу через ковалентні зв'язки, які відповідним чином утворювалися, коли один кінець лінкера взаємодіяв з аміногрупою або тіольною групою фрагмента біосумісного матеріалу тоді як інший кінець лінкера взаємодіяв з аміногрупою або тіольною групою пептидного фрагмента, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1 або 2, відповідно.
Інший аспект винаходу передбачає похідна глюкагону.
В конкретному варіанті здійснення, винахід стосується виділеного пептида, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1, представлену 5ЕО ІЮ МО: 45.
В іншому конкретному варіанті здійснення, винахід стосується виділеного пептида, який включає амінокислотну послідовність наступної загальної Формули 2:
У-Аір-0ОС ТТ Е-Х7-50-Х10-5-Х12-Х-І-Х15-Х16-Х17-8-А-Х20-Х21-Е-М-Х24-МІ-І -М-М-Т -Х30 (Загальна Формула 2, 5ЕО ІЮ МО: 46) де, в загальній Формулі 2,
Х7 - треонін (Т), валін (МУ) або цистеїн (С);
Х10 - тирозин (У) або цистеїн (С);
Х12 - лізин (К) або цистеїн (С);
Зо Х15 - аспарагінова кислота (0) або цистеїн (С);
Х16 - глутамінова кислота (Е) або серин (5);
Х17 - лізин (К) або аргінін (В);
Х20 - глутамін (ОС) або лізин (К);
Х21 - аспарагінова кислота (0) або глутамінова кислота (Е);
Х24 - валін (М) або глутамін (0); та
ХЗ0 - цистеїн (С), або є відсутнім.
У виділеному пептиді відповідно до попереднього конкретного варіанта здійснення, пептиди, які відповідають 5ЕО І МО: 19, 33, 49, та 50 можуть бути виключені з виділених пептидів, включають амінокислотну послідовність загальної Формули 2.
У виділеному пептиді відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, в загальній Формулі 2, Х16 - глутамінова кислота, Х20 - лізин, та бічні ланцюги Х16 та Х20 утворюють лактамне кільце.
У виділеному пептиді відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, С-кінець пептида, який містить амінокислотну послідовність загальної Формули 2, є амідованим або немодифікованим.
У виділеному пептиді відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, пептид є похідною глюкагону, здатною активувати рецептор глюкагону.
У виділеному пептиді відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, пептид включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з
ЗЕО ІЮ МО: 12, 13, 15, та 36-44.
Ще один аспект винаходу передбачає виділений полінуклеотид, який кодує виділений пептид (зокрема, виділений пептид, який включає амінокислотну послідовність загальної
Формули 1 або 2), вектор, який включає виділений полінуклеотид, та виділену клітину, яка включає полінуклеотид або вектор.
Ще один аспект винаходу передбачає виділенний кон'югат, який включає пептидний фрагмент та фрагмент біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаний з пепгидним фрагментом, де пептидний фрагмент має таку саму амінокислотну послідовність загальної Формули 1 або 2 або включає її.
В конкретному варіанті здійснення, винахід стосується виділенного кон'югату, який включає бо пептидний фрагмент та фрагмент біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаний з пептидним фрагментом, де пептидний фрагмент має таку саму амінокислотну послідовність загальної
Формули 1 або включає її.
В конкретному варіанті здійснення, винахід стосується виділенного кон'югату, який включає пептидний фрагмент та фрагмент біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаний з пептидним фрагментом, де пептидний фрагмент має таку саму амінокислотну послідовність загальної
Формули 2 або включає її.
В кон'югаті відповідно до попереднього конкретного варіанта здійснення, фрагмент біосумісного матеріалу вибирають з групи, яка складається з полімеру, жирної кислоти, холестерину, альбуміну та його фрагмента, альбумін-зв'язуючого матеріалу, полімеру повторюваних одиниць конкретної амінокислотної послідовності, антитіла, фрагмента антитіла,
ЕсВп-зв'язуючого матеріалу, іп мімо сполучної тканини або її похідної, нуклеотиду, фібронектину, трансферину, сахариду, гепарину, та еластину.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, полімер вибирають з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронову кислоту, олігонуклеотиду, та їх комбінації.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення,
ЕсВп-зв'язуючим матеріалом є поліпептид, який містить Ес- ділянку імуноглобуліну.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, пептидна ділянка та фрагмент біосумісного матеріалу є зв'язаними через лінкер.
Як кон'югат відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, лінксер вибирають з групи, яка складається з пептиду, жирної кислоти, сахариду, полімеру, низькомолекулярної сполуки, нуклеотиду, та їх комбінації.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, лінкером є полімер, вибраний з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронову кислоту, олігонуклеотиду, та їх
Зо комбінації.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, фрагментом біосумісного матеріалу є ЕсВп-зв'язуючий матеріал, та фрагмент біосумісного матеріалу є зв'язаним з пептидним фрагментом через лінкер, вибраний з групи, яка складається з пептиду, жирної кислоти, сахариду, полімеру, низькомолекулярної сполуки, нуклеотиду, та їх комбінації.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, лінкером є поліетиленгліколь.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення,
Ес- ділянка імуноглобуліну є неглікозильованою.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення,
Ес- ділянку імуноглобуліну вибирають з групи, яка складається з: (а) СНІ домену, СН2 домену,
СНЗ домену, та СНА домену; (б) СНІ домену та СНІ домену; (с) СНІ домену та СНЗ домену; (й)
СНІ домену та СНЗ домену; (є) комбінації між одним або щонайменше двома доменами з СНІ домену, СН2 домену, СНЗ домену, та СНА домену, та шарнірною ділянкою імуноглобуліну або частиною шарнірної ділянки; та (ї) димеру між кожним доменом константної ділянки важкого ланцюга та константної ділянки легкого ланцюга.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, поліпептид, який включає Ес- ділянку імуноглобуліну знаходиться у формі димеру.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення,
Ес- ділянка імуноглобуліну є нативною Ес похідною, в якій ділянка, здатна утворювати дисульфідний зв'язок, є видаленою, нативну Ес похідну, в якій частина амінокислоти0) на М- кінці є видаленою, нативну Ес похідну, в якій метіоніновий залишок є доданим на М- кінець, нативну Ес похідну, в якій сайт зв'язування комплемента є видаленим, або нативну Ес похідну, в якій сайт антитілозалежної клітинно опосередкованої цитотоксичності (АОСС) є видаленим.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення,
Ес-ділянку імуноглобуліну отримують з імуноглобуліну, вибраного з групи, яка складається з
Іза, ІдА, ІдО, ІдЕ, та І9М.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення,
Ес-ділянка імуноглобуліну є Ідс4 Ес ділянкою.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення,
Ес- ділянка імуноглобуліну є неглікозильованою Ес ділянкою, отриманою з людського Ід.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, лінкер є зв'язаним з цистеїновим залишком пептида.
В кон'югаті відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, в конкретному варіанті здійснення винаходу, лінкер кон'югату є відповідно зв'язаним з пептидним фрагментом та фрагментом біосумісного матеріалу через ковалентні зв'язки, які відповідним чином утворювалися коли один кінець лінкера взаємодіяв з аміногрупою або тіольною групою фрагмента біосумісного матеріалу, тоді як інший кінець лінкера взаємодіяв з аміногрупою або тіольною групою пептидного фрагмента, який включає амінокислотну послідовність загальної
Формули 1 або 2, відповідно.
Ще один аспект винаходу передбачає фармацевтичну композиція для профілактики або лікування гіпоглікемії, яка містить похідну глюкагону, або кон'югат, який її містить, та фармацевтично прийнятний ексципієнт.
В конкретному варіанті здійснення, винахід стосується фармацевтичної композиції для профілактики або лікування гіпоглікемії, яка містить виділений пептид або виділенний кон'югат, який включає пептидний фрагмент, що має таку саму послідовність, як і виділений пептид, або включає послідовність, що включає її, та фрагмент біосумісного матеріалу ковалентно зв'язаний з пептгидним фрагментом.
Ще один аспект винаходу передбачає фармацевтичну композицію для профілактики або лікування метаболічного синдрому, яка містить похідну глюкагону, або кон'югату, який її містить, та фармацевтично прийнятний ексципієнт.
В конкретному варіанті здійснення, винахід стосується фармацевтичної композиції для профілактики або лікування метаболічного синдрому, яка містить виділений пептид; або виділенний кон'югат, який включає пептидний фрагмент, що має таку саму послідовність як і виділений пептид, або включає послідовність, яка її включає, та фрагмент біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаний з пептидним фрагментом.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, фармацевтична композиція додатково містить щонайменше одну сполуку
Зо або матеріал, який має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, сполуку або матеріал, який має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому, вибирають з групи, яка складається з інсулінотропного пептиду, агоніста рецептора глюкагон-подібного пептиду-!і (СІ Р-1), агоніста рецептора лептину, інгібітора дипептидилпептидази-ЇМ (ОРР-ІМ), антагоніста рецептора У5, антагоніста рецептора меланін-концентруючого гормону (МСН), антагоніста рецептора У2/4, антагоніста рецептора меланокортину3/4 (МС 3/4), інгібітора шлункової/панкреатичної ліпази, агоніста 5- гідрокситриптамінового рецептора 2С (5НТ2с, сполученого Сі-протеїна), агоніста рецептора рЗА, агоніста рецептора аміліну, антагоніста греліну, антагоніста рецептора греліну, агоніста альфа- рецептора, який активується проліфератором пероксисому (РРАКО), агоніста альфа-рецептора, який активується проліфератором пероксисому (РРАНб), агоніста фарнезоїдного Х-рецептора (ЕХЕ), інгібітора карбоксилази ацетил-СоОА, пептида МУ, холецистокініну (ССК), ксенину, гліцентину, обестатину, секретину, несфатину, інсуліну, та глюкозо-залежного інсулінотропного пептида (СР).
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, інсулінотропного пептид вибирають з групи, яка складається з СІ Р-1, ексендину-3, ексендину-4, їх агоніста, їх похідної, їх фрагмента, їх варіанта, та їх комбінації.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, інсулінотропний пептид є похідною інсулінотропного пептида, в якій М- термінальний гістидин інсулінотропного пептида є заміщеним одним з вибраних з групи, яка складається з дезаміногістидилу, М-диметилгістидилу, р-гідроксімідазопропіонілу, ш4- імідазоацетилу, та р-карбоксіїмідазопропіонілу.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, інсулінотропний пептид вибирають з групи, яка складається з нативного ексендина-4; похідної ексендина-4, в якій М- термінальна аміногрупа ексендина-4 є видаленою; похідної ексендина-4, в якій М- термінальна аміногрупа ексендина-4 є заміщеною на гідроксильну групу; похідної ексендина-4, в якій М- термінальна аміногрупа ексендина-4 є модифікованою диметильною групою; похідної ексендина-4, в якій о-карбон 197 амінокислоти ексендина-4, гістидин, є видаленим; похідної ексендина-4, в якій 1272 амінокислота ексендина-4,
лізин, є заміщеною на серин, та похідної ексендина-4, в якій 1272 амінокислота ексендина-4, лізин, є заміщеною на аргінін.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, інсулінотропний пептид знаходиться у формі кон'югату тривалої дії, який включає пептидний фрагмент, що включає таку саму амінокислотну послідовність як і інсулінотропний пептид, та фрагмент біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаний з пептидним фрагментом.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, фрагмент біосумісного матеріалу вибирають з групи, яка складається з полімеру, жирної кислоти, холестерину, альбуміну та його фрагмента, альбумін-зв'язуючого матеріалу, полімеру повторюваних одиниць конкретної амінокислотної послідовності, антитіла, фрагмента антитіла, ЕсАВп-зв'язуючого матеріалу, іп мімо сполучної тканини або її похідної, нуклеотиду, фібронектину, трансферину, сахариду, гепарину, та еластину.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, полімер вибирають з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетгилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронову кислоту, олігонуклеотиду, та їх комбінації.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, ЕсАп-зв'язуючим матеріалом єполіпептид, який включає Ес- ділянку імуноглобуліну.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, пептидний фрагмент, який включає амінокислотну послідовність інсулінотропного пептид є зв'язаним з фрагментом біосумісного матеріалу через лінкер.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, лінкер вибирають з групи, яка складається з пептиа, жирної кислоти, сахариду, полімеру, низькомолекулярної сполуки, нуклеотиду, та їх комбінації.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних
Зо варіантів здійснення, лінкером є полімер, вибраний з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронову кислоту, олігонуклеотиду, та їх комбінації.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, метаболічний синдром вибирають з групи, яка складається з порушеної толерантності до глюкози, гіперхолестеринемії, дисліпідемії, ожиріння, діабету, гіпертонії, неалкогольного стеатогепатиту (МАБН), атеросклерозу, викликаного дисліпідемією, атеросклерозу, артеріосклерозу, ішемічної хвороби серця, інсульту, тощо.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, інсулінотропний пептид є зв'язаним з фрагментом біосумісного матеріалу через лінкер, вибраний з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, такого як полімолочна кислота (РІ А) та полімолочна-гліколева кислота (РІ СА), ліпідного полімеру, хітинів, гіалуронової кислоти, жирної кислоти, полімеру, низькомолекулярної сполуки, нуклеотиду, та їх комбінації.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, фрагментом біосумісного матеріалу є ЕсВАп-зв'язуючий матеріал, та пептидний фрагмент, який включає амінокислотну послідовність інсулінотропного пептида, є зв'язаним з фрагментом біосумісного матеріалу через пептидний лінкер; або непептидний лінкер, вибраний з групи, яка складається з полієтиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, такого як полімолочна кислота (РІ А) та полімолочна-гліколева кислота (РІ СА), ліпідного полімеру, хітинів, гіалуронової кислоти, та їх комбінації.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, композиція може включати як (і) кон'югат, який включає пептидний фрагмент, який включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 37, та фрагмент біосумісного бо матеріалу, ковалентно зв'язаний з пепгидним фрагментом; так і (ії) кон'югат, який включає імідазо-ацетильний фрагмент ексендина-4, де а-карбон 121 амінокислоти ексендина-4 (тобто, гістидина) є видаленим, та фрагмент біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаний з імідазо- ацетильним фрагментом ексендина-4.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, пептидний фрагмент, який включає амінокислотну послідовність 5ЕО 10
МО: 37 та імідазо-ацетильний фрагмент ексендина-4, є зв'язаним з їх відповідними фрагментами біосумісного матеріалу через лінкер.
В фармацевтичній композиції відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, ЕсАп-зв'язуючим матеріалом є поліпептид, який включає Ес- ділянку імуноглобуліну.
Ще один аспект винаходу передбачає спосіб профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, який включає введення похідної глюкагону або кон'югату, який її містить або композиції, яка її містить суб'єкту, який цього потребує.
Ще один аспект винаходу передбачає застосування похідної глюкагону або кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, у виробництві лікарського засобу для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму.
Ще один аспект винаходу передбачає спосіб профілактики або лікування гіпоглікемії, який включає введення похідної глюкагону або кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, суб'єкту, який цього потребує.
Ще один аспект винаходу передбачає застосування похідної глюкагону або кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, у виробництві лікарського засобу для профілактики або лікування гіпоглікемії.
Ще один аспект винаходу передбачає спосіб профілактики або лікування метаболічного синдрому, який включає введення похідної глюкагону або кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, суб'єкту, який цього потребує.
В конкретному варіанті здійснення, спосіб додатково включає введення щонайменше однієї сполуки або матеріалу, який має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому.
В способі відповідно до будь-якого одного з попередніх конкретних варіантів здійснення, похідна глюкагону або кон'югат, який її містить, та сполука або матеріал, який має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому, вводяться одночасно, індивідуально, або послідовно.
Ще один аспект винаходу передбачає застосування похідної глюкагону або кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, у виробництві лікарського засобу (або фармацевтичної композиції) для профілактики або лікування метаболічного синдрому.
ІПереважні ефекти винаходу)
Похідні глюкагону за винаходом мають покращені фізичні властивості порівняно з нативним глюкагоном, та можуть ефективно використовуватися для профілактики та лікування метаболічного синдрому, такого як ожиріння, діабет, та неалкогольний стеатогепатит (МАБ5Н), та вроджений гіперінсулінізм.
ІКороткий опис креслень)
На Фіг. 1 показано графік, який ілюструє показує графік, який ілюструє зміни маси тіла тварин в моделі ожиріння (щури), які були отримані за рахунок дієти з високим вмістом жирів, під час одноразового або комбінованого введення кон'югату інсулінотропного пептиду тривалої дії (названого як похідна тривалої дії ексендина-4) та кон'югату похідної тривалої дії глюкагону (названої як похідна тривалої дії 5ЕО ОО МО: 12) зі скоригованою дозою щурам у З-денних інтервалах протягом 15 днів...
На Фіг. 2 показано результат, який ілюструє кількість мезентеріального жиру в тваринних моделях ожиріння (щури), які були отримані за рахунок дієти з високим вмістом жирів, що вимірювалась після одноразового або комбінованого введення кон'югату тривалої дії інсулінотропного пептида (названого як похідна тривалої дії ексендина-4) та кон'югату похідної тривалої дії глюкагону (названого як похідна тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 12) зі скоригованою дозою щурам протягом 15 днів (р « 0,05 в порівнянні з носієм, "р « 0,01 по відношенню до однофакторного дисперсійного аналізу АМОМА).
На Фіг. З показано результат, який ілюструє різницю в масі печінки тварин в моделях ожиріння (щури), які були отримані за рахунок дієти з високим вмістом жирів, яка вимірювалась після одноразового або комбінованого введення кон'югату тривалої дії інсулінотропного пептида (названого як похідна тривалої дії ексендина-4) та кон'югату похідної тривалої дії глюкагону (названого як похідна тривалої дії 5ЕО ІО МО: 12) зі скоригованою дозою щурам протягом 15 днів ("р « 0,01, "р « 0,001 в порівнянні з носієм по відношенню до однофакторного дисперсійного аналізу АМОМА).
На Фіг. 4 показано графік, який ілюструє зміни маси тіла (ВМ) у тварин в моделях ожиріння (миші), які були отримані за рахунок дієти з високим вмістом жирів, після одноразового або комбінованого введення кон'югату тривалої дії інсулінотропного пептида (названого як похідна тривалої дії ексендина-4) та кон'югату похідної тривалої дії глюкагону (названого як похідна тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 20) зі скоригованою дозою мишам протягом 22 днів.
На Фіг. 5 показано результат, який ілюструє зміни вмісту холестерину в крові тварин в моделях ожиріння (миші), які були отримані за рахунок дієти з високим вмістом жирів, після одноразового або комбінованого введення кон'югату тривалої дії інсулінотропного пептида (названого як похідна тривалої дії ексендина-4) та кон'югату похідної тривалої дії глюкагону (названого як похідна тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 20) зі скоригованою дозою мишам протягом 22 днів.
На Фіг. 6 показано результат, який ілюструє зміни маси тіла, рівнів холестерину в крові, маси жиру, та порушеної толерантності до глюкози у тварин в моделях ожиріння (миші), які були отримані за рахунок дієти з високим вмістом жирів, після одноразового введення ліраглутиду (Момо Могаї5К) та кон'югату тривалої дії інсулінотропного пептида (названого як похідна тривалої дії ексендина-4), або комбінованого введення кон'югату тривалої дії інсулінотропного пептида (названого як похідна тривалої дії ексендина-4) та кон'югату похідної тривалої дії глюкагону (названого як похідна тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 37) зі скоригованою дозою мишам протягом 28 днів. Показаними є ефекти в порівнянні з носієм (який водиться з ексципієнтом).
На Фіг. 7 показано результат, який ілюструє ефект покращення гіпоглікемії відповідно до введення кон'югату тривалої дії похідної глюкагону 5ЕО І МО: 37 в тваринних моделях з гострою гіпоглікемією (щури).
На Фіг. 8 показано результат, який ілюструє ефект покращення гіпоглікемії відповідно до введення кон'югату тривалої дії похідної глюкагону 5ЕО І МО: 37 в тваринних моделях із хронічною гіпоглікемією (щури).
ІКРАЩИЙ ВАРІАНТІ
ІДетальний опис переважних варіантів здійснення)
Конкретні деталі винаходу можуть бути пояснені наступним чином. Зокрема, пояснення та варіанти здійснення, розкриті у винаході, можуть бути застосовані до інших пояснень та варіантів здійснення, відповідно. Тобто, всі комбінації різних елементів, розкритих у винаході, належать до обсягу винаходу. Додатково, обсяг винаходу не повинен бути обмежений конкретними описами, описаними в даному доументі нижче.
Крім того, кваліфіковані фахівці в даній галузі можуть бути здатні розпізнавати або підтверджувати, використовуючи тільки звичайні експерименти, безліч еквівалентів конкретних аспектів винаходу, описаних в даній заявці. Крім того, передбачається також що дані еквіваленти будуть включені в винахід.
У всьому розкритті винаходу, використовуються не тільки звичайні 1-літерні коди та З-літерні коди для амінокислот, присутніх в природі, але та З-літерні коди, такого як АЇБ (о- аміноїзомасляну кислоту), Заг(М-метилгліцин), які зазвичай використовуються для інших амінокислот. Крім того, амінокислоти, згадані в скороченні у винаході, описано відповідно до номенклатури ІШРАС-ІШВ.
Аспект винаходу передбачає композицію, яка містить похідну глюкагону, або кон'югат, який її містить, та зокрема, фармацевтичну композицію для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, або метаболічного синдрому, яка містить похідну глюкагону або кон'югат, який її містить.
Похідна глюкагона відповідно до винаходу включає пептид, який має щонайменше одну відмінність в амінокислотну послідовність в порівнянні з нативного глюкагону, пептид, в якому послідовність нативного глюкагону Є модифікованим шляхом модифікації нативного глюкагону,
та миметика нативного глюкагону, який може активувати рецептори глюкагону, такого як нативний глюкагон.
Така похідна глюкагону може бути такою, яка має покращені фізичні властивості з використанням яких має змінену рі по відношенню до нативного глюкагону. Додатково, похідна глюкагону може бути такою, що має покращену розчинність, при цьому має активність активації глюкагонових рецепторів, але не обмежується цим.
Додатково, похідною глюкагону може бути штучний глюкагон.
Зокрема, нативний глюкагон може мати наступну амінокислотну послідовність:
Нібз-Зег-С1п-Сту- Гпіи-Рпе-Тиг-5ег-Авр-Туг-5еї-І уб-Туі-І еи-Авр-5ег-Агу-Ага-АІа-СИп-Авр-РНе-
МаІ-СИп-Ттр-Геш-Меї-Авп-ТНг (БЕО 10 МО: 1)
Як застосовано в даному документі, термін "ізоелектрична точка" або "рі" стосується значення рН, при якому молекула, така як поліпептид або пептид, не має чистого заряду (0). У випадку поліпептиду з різними зарядженими функціональними групами чистий заряд загального поліпептиду становить "0" в точці, де значення рн є таким самим, як і значення рі. Чистий заряд поліпептиду при рН більш високому, ніж рі буде негативним, тоді як чистий заряд поліпептиду при рН більш низькому, ніж рі, буде позитивним.
Значення рі можуть визначатися на іммобілізованому градієнтному гелі рН, який складається з поліакриламіду, крохмалю або агарози, застосовуючи ізоелектричний електрофорез, або, наприклад, можуть оцінюватися, наприклад, з амінокислотної послідовності, використовуючи інструмент рі/муу (пбр//ехразу.огалооів/рі їо0і.Ніті; Савзієїдег" єї а!., 2003) на сервері ЕХРАБУ.
Як застосовано в даному документі, термін "змінений рі" стосується рі, який відрізняється від нативного глюкагону за рахунок заміщення частини амінокислотної послідовності нативного глюкагону на амінокислотний залишок, який має негативний заряд або позитивний заряд, тобто, зменшене або збільшене значення рі. Пептид з таким зміненим рі може демонструвати покращену розчинність та/або високу стабільність при нейтральному рН як похідна глюкагону, але не особливо обмежується цим.
Більш конкретно, похідна глюкагону може мати змінене значення рі, а не значення рі (6,8) нативного глюкагону, та ще більш конкретно, значення рі менше, ніж 6,8, більш конкретно, 6,7
Зо або менше, більш конкретно 6,5 або менше, та крім того, значення рі що перевищує 6,8, 7 або вище, більш конкретно, 7,5 або вище, але не обмежується ними, та будь-яке значення рі, яке відрізняється від нативного глюкагону, буде належати до обсягу винаходу. Зокрема, коли значення рі відрізняється від нативного глюкагону та, таким чином, демонструє покращену розчинність при нейтральному рН в порівнянні з нативним глюкагоном, таким чином, демонструючи низький рівень агрегації, він буде, зокрема належати до обсягу винаходу.
Більш конкретно, похідна глюкагону може мати значення рі від 4 до 6,5 та/або від 7 до 9,5, зокрема, від 7,5 до 9,5, та більш конкретно, від 8,0 до 9,3, але значення рі не обмежується цим.
В даному випадку, внаслідок меншого або вищого значення рі в порівнянні зі значенням нативного глюкагону, продемонстрована може бути покращена розчинність та висока стабільність при нейтральному рН в порівнянні з нативним глюкагоном, але особливо не обмежується цим.
Зокрема, похідна нативного глюкагону може бути модифікована за будь-яким одним зі способів заміщення, додавання, делеції, та модифікації, або їх комбінації в частині амінокислоти нативного глюкагону.
Приклади похідних глюкагону, одержаних комбінацією вищезазначених способів, включають пептид, який відрізняється, щонайменше, одним амінокислотним залишком амінокислотної послідовності в порівнянні з нативним глюкагоном, та де М- термінальний амінокислотний залишок є дезамінованим, який має функцію активування рецептора глюкагону, але не обмежується цим, та нативні похідні глюкагону можуть бути отримані комбінацією різних способів одержання похідних.
Крім того, такі модифікації для одержання нативних похідних глюкагону можуть включати всі модифікації що використовують амінокислоти і-типу або О-типу, та/або амінокислоти ненативного типу; та/або модифікації нативної послідовності, наприклад, модифікацію функціональної групи, внутрішньо молекулярний ковалентний зв'язок (наприклад, утворення кільця між бічними ланцюгами), метилювання, ацилювання, убіквітинування, фосфорилювання, аміногексанування, біотинілювання, тощо Крім того, модифікація може також включати заміщення в ненативних сполуках.
Крім того, модифікація може також включати всі ті, де одну або більше амінокислот додають до аміно та/або карбокси термінального кінця нативного глюкагону.
Під час заміщення або додавання амінокислот можуть використовуватися не тільки 20 амінокислот, які зазвичай зустрічаються в протеїнах людини, але також атипові або не природні амінокислоти та їх похідні. Комерційні джерела атипових амінокислот можуть включати бідта-
Аідгісн, СпетРер Іпс., беплуте РНаптасеціїсаіє. Пептиди, включаючи дані амінокислоти та типові пептидні послідовності, можуть бути синтезовані та придбані у комерційних постачальників, наприклад, Атегісап Реріїде Сотрапу, Васнет (О5А), або Апудеп (Когеа).
Амінокислотні похідні також можуть бути отримані аналогічним чином, наприклад, може використовуватись 4-імідазооцтова кислота, тощо.
Оскільки глюкагон має рН приблизно 7, він є нерозчинним у розчині, який має фізіологічний рН (рН від 6 до 8) та має тенденцію до осадження при нейтральному рН. У водному розчині з рН
З або нижче глюкагон розчиняється на початковій стадії, але осаджується протягом однієї години, утворюючи гель. Оскільки желеподібний глюкагон переважно складається з фібрил рД- листів, введення таким чином осадженого глюкагону з використанням ін'єкційної голки або внутрішньовенної ін'єкції блокує кров'яні судини та, тому, не є прийнятним для використання як ін'єкційний агент. Для затримки процесу осадження, як правило, застосовують кислотні (рН від 2 до 4) композиції, та, таким чином, глюкагон може зберігатися в відносно не агрегованому стані протягом короткого періоду часу. Проте глюкагон може утворювати фібрили дуже швидко при низькому рН, та, таким чином, дані кислотні композиції слід ін'єкційно вводити одразу після приготування.
У зв'язку з цим, автори винаходу розробили похідні глюкагону з профілями розширеної дії шляхом модифікації рІ нативного глюкагону за рахунок заміщення амінокислотних залишків, які мають негативні заряди та позитивні заряди. Похідні глюкагону за винаходом, які мають змінену рі у порівнянні з нативним глюкагоном, характеризуються тим, що вони мають покращену розчинність та/або високу стабільність при нейтральному рН, в порівнянні з нативним глюкагоном.
В конкретному варіанті здійснення винаходу, похідною глюкагону може бути пептид, який включає амінокислотну послідовність наступної загальної Формули 1: х1-хХ2-даттве-х7-50-Х10-5-Х12-Х13-Х14-Х15-Х16-Х17-Х18-Х19-Х20-Х21-Е-Х23-Х24-Му-І-Х27- хХ28-Х29-Х30 (Загальна Формула 1, 5ЕО ІЮ МО: 45)
Зо В зазначеній вище Формулі,
Х1 - гістидин, дезаміно-гістидил, М-диметилгістидил, р-гідроксімідазопропіоніл, 4- імідазоацетил, р-карбоксіїмідазопропіоніл, триптофан або тирозин, або є відсутнім;
Х2-о-метилглутамінова кислота, аміноїзомасляна кислота (АЇб), ЮО-аланін, гліцин, Зак(М- метилгліцин), серин або О-серин;
Х7 - треонін, валін або цистеїн;
Х10 - тирозин або цистеїн;
Х12 - лізин або цистеїн;
Х13 - тирозин або цистеїн;
Х14 - лейцин або цистеїн;
Х15 - аспарагінова кислота, глутамінова кислота або цистеїн;
Х16 - глутамінова кислота, аспарагінова кислота, серин, о-метилглутамінова кислота або цистеїн, або є відсутнім;
Х17 - аспарагінова кислота, глутамін, глутамінова кислота, лізин, аргінін, серин, цистеїн або валін, або є відсутнім;
Х18 - аланін, аспарагінова кислота, глутамінова кислота, аргінін, валін або цистеїн, або є відсутнім;
Х19 - аланін, аргінін, серин, валін або цистеїн, або є відсутнім;
Х20 - лізин, гістидин, глутамін, аспарагінова кислота, аргінін, а-метил-глутамінова кислота або цистеїн, або є відсутнім;
Х21 - аспарагінова кислота, глутамінова кислота, лейцин, валін або цистеїн, або є відсутнім;
Х23 - ізолейцин, валін або аргінін, або є відсутнім;
Х24 - валін, аргінін, аланін, цистеїн, глутамінова кислота, лізин, глутамін, а- метилглутамінова кислота або лейцин, або є відсутнім;
Х27 - ізолейцин, валін, аланін, лізин, метіонін, глутамін або аргінін, або є відсутнім;
Х28 - глутамін, лізин, аспарагін або аргінін, або є відсутнім;
Хаг9 - лізин, аланін, гліцин або треонін, або є відсутнім; та
ХхЗ0 - цистеїн, або є відсутнім; за умови, що коли амінокислотна послідовність загальної Формули 1 є ідентичною до 5ЕО
ІО МО: 1, вона виключається. 60 Більш конкретно,
в загальній Формулі 1,
Х1 - гістидин, триптофан або тирозин, або є відсутнім;
Х2 - серин або аміноіїзомасляна кислота (АБ);
Х7 - треонін, валін або цистеїн;
Х10 - тирозин або цистеїн;
Х12 - лізин або цистеїн;
Х13 - тирозин або цистеїн;
Х14 - лейцин або цистеїн;
Х15 - аспарагінова кислота або цистеїн;
Х16 - глутамінова кислота, серин або цистеїн;
Х17 - аспарагінова кислота, глутамінова кислота, лізин, аргінін, серин, цистеїн або валін;
Х18 - аспарагінова кислота, глутамінова кислота, аргінін або цистеїн;
Х19 - аланін або цистеїн;
Х20 - глутамін, аспарагінова кислота, лізин або цистеїн;
Х21 - аспарагінова кислота, глутамінова кислота, лейцин, валін або цистеїн;
Х23 - ізолейцин, валін або аргінін;
Х24 - валін, аргінін, аланін, глутамінова кислота, лізин, глутамін або лейцин;
Х27 - ізолейцин, валін, аланін, метіонін, глутамін або аргінін;
Х28 - глутамін, лізин, аспарагін або аргінін;
Х29 - треонін; та хЗ0 - цистеїн, або є відсутнім за умови, що коли амінокислотна послідовність загальної Формули 1 є ідентичною до 5ЕО
ІО МО: 1, вона виключається.
Наприклад, пептидом може бути пептид, який включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 2-44, та зокрема, пептид, який (суттєво) складається з амінокислотної послідовності, вибраної з групи, яка складається з 5ЕО ІЮ МО: 2- 44, але не обмежується цим.
Крім того, хоча у винаході описується як "пептид, який складається з конкретної БЕО ІЮ МО", така експресія не виключає мутації в пептиді, яка може відбуватися не суттєвим додаванням
Зо послідовності проти ходу транскрипції або за ходом транскрипції амінокислотної послідовності відповідної ФЕО ІО МО, або мутації, яка зустрічається в природі в ньому, або мовчазної мутації в ньому, за умови, що пептид, який має таку мутацію, має активність, таку саму як або яка відповідає пептиду, який складається з амінокислотної послідовності відповідної 5ЕО ІЮ МО.
Навіть коли присутньою є послідовність або мутація, вона, очевидно, належить до обсягу винаходу.
Ті, які описані вище можуть також застосовуватися до інших конкретних варіантів здійснення або аспектів винаходу, але не обмежуються ними.
Зокрема в загальній Формулі 1 зазначені вище
Х1 може бути гістидин, триптофан або тирозин;
Х2 може бути серин або аміноізомасляна кислота (АЇБ);
Х7 може бути цистеїн, треонін або валін;
Х10 може бути тирозин або цистеїн;
Х12 може бути лізин або цистеїн;
Х13 може бути тирозин або цистеїн;
Х14 може бути лейцин або цистеїн;
Х15 може бути аспарагінова кислота або цистеїн;
Х16 може бути глутамінова кислота, серин або цистеїн;
Х17 може бути глутамінова кислота, лізин, аргінін, цистеїн або валін;
Х18 може бути аргінін або цистеїн;
Х19 може бути аланін або цистеїн;
Х20 може бути глутамін або лізин;
Х21 може бути аспарагінова кислота, глутамінова кислота, валін або цистеїн;
Х23 може бути валін;
Х24 може бути валін або глутамін;
Х27 може бути метіонін;
Х28 може бути аспарагін або аргінін;
Х29 може бути треонін; та
ХЗ0 може бути цистеїн або бути відсутнім.
Наприклад, пептидом може бути пептид, який включає амінокислотну послідовність, 60 вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО: 3, 11-17, 19-27, 29, 31, 33, та 35-44, та зокрема,
пептид, який (суттєво) складається з амінокислотної послідовності, вибраної з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 3, 11-17, 19-27, 29, 31, 33, та 35-44, але не обмежується цим.
Зокрема в загальній Формулі 1 зазначені вище
Х1 може бути тирозин;
Х2 може бути аміноїзомасляна кислота (АБ);
Х7 може бути цистеїн, треонін або валін;
Х10 може бути тирозин або цистеїн;
Х12 може бути лізин;
Х13 може бути тирозин або цистеїн;
Х14 може бути лейцин або цистеїн;
Х15 може бути аспарагінова кислота або цистеїн;
Х16 може бути глутамінова кислота, серин або цистеїн;
Х17 може бути лізин, аргінін, цистеїн або валін;
Х18 може бути аргінін або цистеїн;
Х19 може бути аланін або цистеїн;
Х20 може бути глутамін або лізин;
Х21 може бути аспарагінова кислота, глутамінова кислота або цистеїн;
Х23 може бути валін;
Х24 може бути глутамін;
Х27 може бути метіонін;
Х28 може бути аспарагін або аргінін;
Х29 може бути треонін; та
ХЗ0 може бути цистеїн або бути відсутнім, за умови, що коли амінокислотна послідовність загальної Формули 1 є ідентичною до 5ЕО
ІО МО: 1, вона виключається.
Наприклад, пептидом може бути пептид, який включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 12, 14, 17, 19-25, 27, 29, 33, 35-38, 40-42, та 44, та зокрема, пептид, який (суттєво) складається з амінокислотної послідовності, вибраної з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 12, 14, 17, 19-25, 27, 29, 33, 35-38, 40-42, та 44, але не
Зо обмежується цим.
Зокрема в загальній Формулі 1
ХІ1 може бути гістидин, триптофан або тирозин або бути відсутнім;
Х2 може бути серин або аміноізомасляна кислота (АЇБ);
Х7 може бути треонін, валін або цистеїн;
Х10 може бути тирозин або цистеїн;
Х12 може бути лізин або цистеїн;
Х13 може бути тирозин або цистеїн;
Х14 може бути лейцин або цистеїн;
Х15 може бути аспарагінова кислота або цистеїн;
Х16 може бути глутамінова кислота, серин або цистеїн;
Х17 може бути аспарагінова кислота, глутамінова кислота, лізин, аргінін, серин, цистеїн або валін;
Х18 може бути аспарагінова кислота, глутамінова кислота, аргінін або цистеїн;
Х19 може бути аланін або цистеїн;
Х20 може бути глутамін, аспарагінова кислота або лізин;
Х21 може бути аспарагінова кислота або глутамінова кислота;
Х23 може бути валін;
Х24 може бути валін або глутамін;
Х27 може бути ізолейцин або метіонін;
Х28 може бути аспарагін або аргінін;
Х29 може бути треонін; та
ХЗ0 може бути цистеїн або може бути відсутнім, за умови, що коли амінокислотна послідовність загальної Формули 1 є ідентичною до 5ЕО
ІО МО: 1, вона виключається.
Наприклад, пептидом може бути пептид, який включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 2-13, 15, 17, 20-24, 26-30, та 32-44, та зокрема, пептид, який (суттєво) складається з амінокислотної послідовності, вибраної з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 2-13, 15, 17, 20-24, 26-30, та 32-44, але не обмежується цим.
Зокрема в загальній Формулі 1 60 Х1 може бути тирозин;
Х2 може бути аміноїзомасляна кислота (АБ);
Х7 може бути треонін;
Х10 може бути тирозин;
Х12 може бути лізин;
Х13 може бути тирозин;
Х14 може бути лейцин;
Х15 може бути аспарагінова кислота або цистеїн;
Х16 може бути глутамінова кислота, серин або цистеїн;
Х17 може бути лізин або аргінін;
Х18 може бути аргінін;
Х19 може бути аланін;
Х20 може бути глутамін, цистеїн або лізин;
Х21 може бути аспарагінова кислота, цистеїн, валін або глутамінова кислота;
Х23 може бути валін або аргінін;
Х24 може бути глутамін або лейцин;
Х27 може бути метіонін;
Х28 може бути аспарагін або аргінін;
Х29 може бути треонін; та
ХЗ0 може бути відсутнім.
Наприклад, пептидом може бути пептид, який включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 14, 16, 18, 19, 25, та 31, та зокрема, пептид, який (суттєво) складається з амінокислотної послідовності, вибраної з групи, що складається з БЕ
ІО МО: 14, 16, 18, 19, 25, та 31, але не обмежується цим.
Більш конкретно, пептидом може бути пептид, який включає амінокислотну послідовність наступної загальної Формули 2:
У-Аір-ОСТЕ-Х7-50-Х10-5-Х12-У-І-Х15-Х16-Х17-8-А-Х20-Х21-Е-М-Х24-М-І -М-М-Т -Х30 (Загальна Формула 2, 5ЕО ІЮ МО: 46)
В загальній Формулі 2,
Х7 може бути треонін, валін або цистеїн;
Зо Х10 може бути тирозин або цистеїн;
Х12 може бути лізин або цистеїн;
Х15 може бути аспарагінова кислота або цистеїн;
Х16 може бути глутамінова кислота або серин;
Х17 може бути лізин або аргінін;
Х20 може бути глутамін або лізин;
Х21 може бути аспарагінова кислота або глутамінова кислота;
Х24 може бути валін або глутамін; та
ХЗ0 може бути цистеїн або може бути відсутнім.
Наприклад, пептидом може бути пептид, який включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 12, 13, 15, та 36-44, та зокрема, пептид, який (суттєво) складається з амінокислотної послідовності, вибраної з групи, що складається з БЕ
ІО МО: 12, 13, 15, та 36 44, але не обмежується цим. Більш конкретно, пептидом може бути пептид, який включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ МО: 12, 5ЕО ІО МО: 20, або 5ЕО І
МО: 37, або (суттєво) складається з відповідної амінокислотної послідовності, але не обмежується цим.
Зокрема в загальній Формулі 2
Х7 може бути треонін, валін або цистеїн;
Х10 може бути тирозин або цистеїн;
Х12 може бути лізин;
Х15 може бути аспарагінова кислота;
Х16 може бути глутамінова кислота або серин;
Х17 може бути лізин або аргінін;
Х20 може бути глутамін або лізин;
Х21 може бути аспарагінова кислота або глутамінова кислота;
Х24 може бути глутамін; та
ХЗ0 може бути цистеїн або може бути відсутнім, але особливо не обмежується цим.
Наприклад, пептидом може бути пептид, який включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 12, 36-38, 40-42, та 44, та зокрема, пептид, який (суттєво) складається з амінокислотної послідовності, вибраної з групи, що складається з БЕ 60 ІО МО: 12, 36-38, 40-42, та 44, але не обмежується цим.
Однак серед виділених пептидів, пептиди, які відповідають 5ЕО ІЮ МО: 2-11, 14, 16-35, 49, та 50, та зокрема, пептиди, які відповідають 5ЕСО ІО МО: 19, 33, 49, та 50 можуть бути виключеними і заявленого обсягу, але особливо не обмежується цим, та всі пептиди, описані в
Формулі винаходу, повинні належати до обсягу винаходу, якщо не вказано інше.
Похідна глюкагону, описана вище, може включати внутрішньомолекулярний місток (наприклад, ковалентне зшивання або нековалентное зшивання), та зокрема, може знаходитись у формі, яка включає кільце. Наприклад, похідна глюкагону може знаходитись у формі, де кільце утворюється між 1бою та 20сю амінокислотами похідної глюкагону, але не особливо обмежується цим.
Необмежуючі приклади кільця можуть включати лактамне перехресне зшивання (або лактамне кільце).
Крім того, похідна глюкагону включає всі ті, які є модифікованими, щоб включати амінокислоту, здатну утворювати кільце в бажаному місці таким чином, щоб включати кільце.
Кільце може бути утворено між бічними ланцюгами амінокислот в межах похідної глюкагону (наприклад, в формі утворення кільця між бічним ланцюгом лізину та бічним ланцюгом глутамінової кислоти), але особливо не обмежується цим.
Наприклад, пептидом, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1 або 2, може бути пептид, в якому кожна амінокислота в кожній амінокислотній парі серед амінокислотних пар Х10 та Х14, Х12 та Х16, Х16 та Х20, Х17 та Х21, Х20 та Х24, та Х24 та Х28 в загальній Формулі 1 або 2 можуть бути заміщені глутаміновою кислотою або лізином, відповідно, але не обмежується цим. В Хи (п є цілим числом), п стосується положення амінокислоти з М- кінця амінокислотної послідовності, яка надається.
Крім того, пептидом, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1 або 2, може бути пептид, в якому кожна амінокислота в кожній амінокислотній парі Х12 та Х16, або амінокислотній парі Х16 та Х20, або амінокислотній парі Х17 та Х21 є відповідно заміщеною глутаміновою кислотою або лізином, які є здатними утворювати кільце.
Крім того, в загальній Формулі 1 або 2, пептидом може бути пептид, в якому кільце (наприклад, лактамне кільце) утворюється між кожною амінокислотою в кожній амінокислотній парі серед амінокислотних пар Х10 та Х14, Х12 та Х16, Х16 та Х20, Х17 та Х21, Х20 та Х24, та
Х24 та Х28, але не обмежується цим.
Крім того, в загальній Формулі 1 або 2, Х16 може бути глутамінова кислота, Х20 може бути лізин, та бічні ланцюги Х1б та Х20 можуть утворювати лактамне кільце, але вони не обмежуються цим.
Крім того, пептид відповідно до винаходу може знаходитись в формі, де М- кінець та/або С- кінець не є модифікованим, однак, ті варіанти, де аміно кінець та/або карбокси кінець, тощо, пептида є хімічно модифікованим або захищеним органічними групами, або амінокислоти, додані до кінця пептида для його захисту від протеаз іп мімо, при цьому збільшуючи його стабільність, також можуть бути включені в обсяг пептидів за винаходом. У випадку, коли С- кінець не є модифікованим, кінець пептида відповідно до винаходу може мати карбоксильну групу, але особливо не обмежується цим.
Зокрема, у випадку хімічно синтезованого пептиду, його М- та С-кінці електрично зарядженими та, таким чином, М- та С-кінці пептиду можуть бути ацетильовані та/або амідованими, але пептид не є особливо обмеженим цим.
Якщо не вказано інше у винаході, опис в детальному описі або Формулі винаходу стосовно "пептида" відповідно до винаходу або "кон'югату", в якому такий пептид є ковалентно зв'язаним з біосумісним матеріалом, може застосовуватись до форм, які включають, не тільки включають, відповідний пептид або кон'югат, але також солі відповідного пептиду або кон'югату (наприклад, їх фармацевтично прийнятні солі), або його сольвати. Відповідно, навіть у випадку, коли "пептид" або "кон'югат" є описаним у винаході, опис може бути однаково застосовано до його конкретної солі, його конкретного сольвата, та його конкретного сольвата конкретної солі. Дані солі можуть знаходитись, наприклад, у формі, де використовуються будь-які фармацевтично прийнятні солі. Вид солі особливо не є обмеженим. Однак, сіль переважно є сіллю, яка є безпечною та ефективною для суб'єкта, наприклад, ссавця, але особливо не обмежується цим.
Термін "фармацевтично прийнятний" стосується матеріалу, який може бути ефективно використаний для призначеного використання в межах фармако-медичного рішення без індукування надмірної токсичності, подразнення, алергічних реакцій, тощо
Як застосовано в даному документі, термін "фармацевтично прийнятна сіль" стосується солі, отриманої з фармацевтично прийнятних неорганічних солей, органічних солей, або основ.
Приклади відповідних солей можуть включати гідрохлоридну кислоту, бромновату кислоту, 60 сульфатну кислоту, нітратну кислоту, хлорну кислоту, фумарову кислоту, малеїнову кислоту,
фосфорну кислоту, гліколеву кислоту, молочну кислоту, саліцилову кислоту, бурштинову кислоту, толуол-п-сульфонову кислоту, винну кислоту, оцтову кислоту, лимонну кислоту, метансульфонову кислоту, мурашинау кислоту, бензойнау кислоту, малонову кислоту, нафталін-2-сульфонову кислоту, бензолсульфонову кислоту, тощо. Приклади солей, отриманих з відповідних основ можуть включати лужні метали, такі як натрій, калій, тощо; лужноземельні метали, такі як магній; амоній, тощо.
Крім того, Як застосовано в даному документі, термін "сольват" стосується комплексу, утвореного між пептидом, кон'югатом або його сіллю відповідно до винаходу та молекулою розчинника.
Крім того, пептид за винаходом може бути синтезованим за способом добре відомим в даній галузі, відповідно до його довжини, наприклад, з допомогою автоматичного синтезатора пептидів, та може бути отриманий за технологією генної інженерії.
Зокрема, пептид за винаходом можуть отримувати, застосовуючи стандартний спосіб синтезу, рекомбінантну експресійну систему, або будь-який інший спосіб, відомий в даній галузі.
Відповідно, похідна глюкагону за винаходом може бути синтезованою різними способами, включаючи, наприклад, способи, описані нижче: (а) спосіб синтезу пептиду, застосовуючи стадію твердо-фазного або рідко-фазного способу або застосовуючи збирання фрагментів, з подальшим виділенням та очищенням кінцевого пептидного продукту; або (5) спосіб експресування конструкту нуклеїнової кислоти, який кодує пептид в клітині- господарі, та виділення продукту експресії з культури клітини-господаря; або (с) спосіб здійснення іп міо без клітинної експресії конструкта нуклеїнової кислоти, який кодує пептид, та виділення продукту експресії з нього; або спосіб одержання пептидних фрагментів будь-якою комбінацією способів (а), (Б), та (с), одержання пептиду шляхом зв'язування пептидних фрагментів, та потім відновлення пептиду.
В більш конкретному прикладі, бажана похідна глюкагону може бути отримана шляхом генетичної маніпуляції, яка включає отримання злитого гена, який кодує злитий протеїн, включаючи партнера злиття та похідно у глюкагону, трансформуючи отриману в результаті в клітину-господар, експресуючи у вигляді злитого протеїну, та відщеплення похідної глюкагону зі
Зо злитого протеїну з використанням протеази або сполуки, яка здатна до розщеплення протеїну з подальшим поділом. Для цієї мети, наприклад, послідовність ДНК, яка кодує амінокислотний залишок, яка може бути розщеплена протеазой, такою як фактор Ха або ентерокіназа, СМВг або сполукою, такою як сгідроксиламін, може бути вставлена між партнером злиття та полінуклеотидом, який кодує похідну глюкагону.
В більш конкретному варіанті здійснення, похідна глюкагону, наприклад, пептид, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1 або 2, може знаходитись в формі кон'югату тривалої дії, в якому фрагмент біосумісного матеріалу, здатний збільшувати іп мімо період напів-виведення пептида, є зв'язаним з пептидом, але не обмежується цим. Фрагмент біосумісного матеріалу може взаємозамінно використовуватись з носієм.
Зокрема, кон'югат включає пептидний фрагмент та фрагмент біосумісного матеріалу, який є ковалентно зв'язаним з пептидним фрагментом, та пептидний фрагмент може бути послідовністю, яка є такою ж самою як амінокислотна послідовність загальної Формули 1 або 2, або послідовністю, яка включає таку саму.
Як застосовано в даному документі, термін "кон'югат тривалої дії", перебуваючи у формі, в якій фрагмент біосумісного матеріалу або носій є зв'язаним з фізіологічно активним матеріалом (наприклад, похідною глюкагону, інсулінотропним пептидом, тощо), стосується кон'югату, який демонструє підвищену ефективність тривалості (наприклад, збільшення іп мімо періоду напів- виведення) в порівнянні з фізіологічно активним матеріалом, який не єзв'язаним з фрагментом біосумісного матеріалу або носієм. В кон'югаті тривалої дії, фрагмент біосумісного матеріалу або носій може бути таким, що є ковалентно зв'язаним з фізіологічно активним матеріалом, але особливо не обмежується цим.
В конкретному варіанті здійснення винаходу, тривалість ефективності зазначеного вище кон'югату похідної глюкагону може збільшуватися в порівнянні з нативним глюкагоном або його похідною глюкагону, що не є зв'язаним з носієм.
Як застосовано в даному документі, термін "фрагмент біосумісного матеріалу" стосується матеріалу, який може бути зв'язаним з фізіологічно активним матеріалом (наприклад, похідною глюкагону, інсулінотропним пептидом, тощо) та тим самим підвищувати ефективність тривалості в порівнянні з фізіологічно активним матеріалом, який не є зв'язаним з фрагментом біосумісного матеріалу або носієм. Фрагментом біосумісного матеріалу може бути фрагмент,
який є ковалентно зв'язаним з фізіологічно активним матеріалом, але особливо не обмежується цим.
Приклади фрагмента біосумісного матеріалу можуть включати полімер, жирну кислоту, холестерин, альбумін та його фрагмента, альбумін-зв'язуючий матеріал, полімер повторюваних одиниць конкретної амінокислотної послідовності, антитіло, фрагмент антитіла, ЕсВп- зв'язуючий матеріал, іп мімо сполучну тканину або її похідну, нуклеотид, фібронектин, трансферин, сахарид, гепарин, та еластин, але не обмежуються ними.
Приклади полімеру можуть бути вибрані з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти, олігонуклеотиду, та їх комбінації, але особливо не обмежується цим.
Поліетиленгліколь є загальним терміном, який включає всі форми гомополімерів етиленгліколю, ПЕГ співполімерів, та монометил-заміщених ПЕГ полімерів (мПЕГ), але особливо не обмежується цим.
Крім того, фрагмент біосумісного матеріалу може включати полі-амінокислоти, такі як полі- лізин, полі-аспарагінову кислоту, та полі-глутамінову кислоту, але не обмежується цим.
Крім того, жирна кислота може бути кислотою, яка має афінність зв'язування з альбуміном іп мімо, але особливо не обмежується цим.
В більш конкретному варіанті здійснення, ЕсАп-зв'язуючим матеріалом може бути Ес- ділянка імуноглобуліну, та більш конкретно, да Ес ділянка, але особливо не обмежується цим.
Щонайменше один амінокислотний бічний ланцюг в пептиді за винаходом може бути приєднаним до фрагмента біосумісного матеріалу для того, щоб збільшити іп мімо розчинність та/або період напів-виведення, та/або збільшити його біодоступність. Дані модифікації можуть знижувати кліренс терапевтичних протеїнів та пептидів.
Фрагмент біосумісного матеріалу може бути розчинним (амфіпатичним або гідрофільним) та/або нетоксичним та/або фармацевтично прийнятним.
Фахівцям в даній галузі техніки відомо, що таким чином модифікована похідна глюкагону може демонструвати кращий терапевтичний ефект в порівнянні з нативним глюкагоном.
Відповідно, варіанти похідної глюкагону, як описано вище, також належать обсягу винаходу.
Фрагмент біосумісного матеріалу може бути безпосередньо приєднаний до похідної глюкагону або зв'язаний з ним через лінкер. Коли фрагмент біосумісного матеріалу є зв'язаним з похідною глюкагону безпосередньо або через лінкер, зв'язком може бути ковалентний зв'язок.
Зокрема, лінкером може бути пептидний лінкер або непептидни лінкер.
Коли лінкером є пептидний лінкер, він може включати одну або декілька амінокислот, наприклад, від ї до 1000 амінокислот, але особливо не обмежується цим. У винаході, різні відомі пептидні линкери можуть використовуватися (наприклад, включаючи |С2е)Х лінкер, (пса )хХ лінкер, та (4с1005)Х лінкер, тощо, де х із натуральне число, щонайменше, 1), але пептидні лінкери не обмежуються ними.
Як застосовано в даному документі, "непептидний лінкер" включає біосумісний полімер, в якому щонайменше дві повторювані одиниці є зв'язаними. Повторювані одиниці є зв'язаними одна з одною будь-яким ковалентним зв'язком замість пептидного зв'язку. Непептидний лінкер може бути така конституція, яка встановлює фрагмент кон'югату тривалої дії за винаходом.
Як застосовано в даному документі, термін "непептидний лінкер" може використовуватись взаємозамінно з "непептидним полімером".
В конкретному варіанті здійснення, фрагмент біосумісного матеріалу та пептид може бути ковалентно зв'язаним через непептидний лінкер, який включає реакційноздатну группу, яка може бути зв'язаною з фрагментом біосумісного матеріалу (зокрема, Ес- ділянкою імуноглобуліну) та пептидом на обох його кінцях, відповідно.
Зокрема, непептидний лінкер може бути вибраним з групи, яка складається з жирної кислоти, сахариду, полімеру, низькомолекулярної сполуки, нуклеотиду, та їх комбінації.
Хоча це не є особливо обмеженим, молекулярна маса непептидного полімеру, який буде використовуватися у винаході, може знаходитись в діапазоні більше ніж від 0 кДа до приблизно 100 кДа або менше, зокрема, від приблизно 1 кДа до приблизно 100 кДа, та більш конкретно, від приблизно 1 кДа до приблизно 20 кДа, але не обмежується цим.
Хоча це не є особливо обмеженим, непептидний лінкер може бути вибраним з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь- пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру такого як полімолочна кислота
(РА) та полімолочна-гліколева кислота (РІСА), ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти, олігонуклеотиду, та їх комбінації.
В більш конкретному варіанті здійснення, непептидним полімером може бути полієтиленгліколь, але не обмежується цим. Крім того, похідні, які вже є відомими в даній галузі, та похідні, які можуть бути легко одержані на рівні технології в даній галузі належать до обсягу винаходу.
Непептидним лінкером, який буде застосовпано у винаході, може бути будь-який полімер, який має стійкість до протеаз іп мімо, без обмеження. Молекулярна маса непептидного полімеру може знаходитись в діапазоні від більше ніж 0 кДа до приблизно 100 кДа або менше, зокрема від приблизно 1 кДа до приблизно 100 кДа, та більш конкретно, від приблизно 1 кДа до приблизно 20 кДа, але не обмежується цим. Крім того, непептидний лінкер за винаходом, який є зв'язаним з поліпептидом, який включає Ес- ділянку імуноглобуліну, може включати не тільки один вид полімеру, але також комбінація різних видів полімерів.
Як застосовано в даному документі, термін "приблизно" стосується діапазону, що включає в себе всі 50,5, 0,4, 50,3, ж 0,2, ж 0,1, тощо, та він включає всі значення, еквівалентні до тих, які ідуть відразу після терміну "вище" або в аналогічному діапазоні.
Зокрема, лінкером може бути такий, який є відповідно зв'язаним з пептидним фрагментом та фрагментом біосумісного матеріалу через ковалентні зв'язки, які відповідним чином утворювалися, коли один кінець лінкера взаємодіяв з аміногрупою або тіольною групою фрагмента біосумісного матеріалу, тоді як інший кінець лінкера взаємодіяв з аміногрупою або тіольною групою пептидного фрагмента (тобто, пептидного фрагмента, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1 або 2).
В конкретному варіанті здійснення, один кінець непептидного лінкер може бути зв'язаним з аміногрупою або тіольною групою Ес- ділянки імуноглобуліну, тоді як інший кінець непептидного лінкера може бути зв'язаним з аміногрупою або тіольною групою похідною глюкагону. Зокрема, непептидний полімер може включати реакційноздатну групу на обох своїх кінцях, відповідно, яка може бути зв'язаною з фрагментом біосумісного матеріалу, зокрема РЕс- ділянкою імуноглобуліну, та похідною глюкагону; наприклад, реакційноздатна группа, яка може відповідно утворювати ковалентний зв'язок, який зв'язується з біосумісним матеріалом та похідною
Зо глюкагону шляхом взаємодії з аміногрупою М- кінця, або лізином похідної глюкагону, або тіольною групою цистеїну похідної глюкагону, аміногрупою М- кінця, або лізином біосумісного матеріалу, або тіольною групою цистеїну біосумісного матеріалу (наприклад, Ес- ділянкою імуноглобуліну), але не обмежується цим.
Крім того, реакційноздатна кінцева група непептидного полімеру, яка може бути зв'язаною з фрагментом біосумісного матеріалу, зокрема Ес- ділянкою імуноглобуліну, та похідною глюкагону, може бути вибрана з групи, яка складається з альдегідної групи, малеїмідної групи, та сукцинімідної похідної, але не обмежується цим.
В наведеному вище, приклади альдегідної групи можуть включати пропіональдегідну групу або бутиральдегідну групу, але не обмежуються ними.
В наведеному вище, як сукцинімідна похідна може використовуватись, але не обмежується цим, сукцинімідилвалерат, сукцинімідилметилбутаноат, сукцинімідилметилпропіонат, сукцинімідилбутаноат, сукцинімідилпропіонат, М-гідроксисукцинімід, гідроксисукцинімідил, сукцинімідилкарбоксиметил або сукцинімідил карбонат.
Крім того, кінцевий продукт, який отримують шляхом відновного амінування через альдегідний зв'язок, є більш стабільним, ніж той, який зв'язаний амідним зв'язком. Альдегідна реакційноздатна група селективно взаємодіє з М- кінцем в умовах низького рнН, тоді як вона може утворювати ковалентний зв'язок з лізиновим залишком при високому рН, наприклад, рн 9,0.
Реакційноздатні групи на обох кінцях непептидного лінкера можуть бути такими ж самими як відрізнятися одна від одної, наприклад, малеїмідна реакційноздатна групу може бути представлена на одному кінці, та альдегідна група, пропіональдегідна група, або бутиральдегідна група може бути представлена на іншому кінці. Однак, якщо Ес- ділянка імуноглобуліну та похідна глюкагону можуть бути кон'югованими на кожному кінці непептидного лінкера, це особливо не обмежується.
Наприклад, непептидний полімер може мати малеїмідну групу на одному кінці та альдегідну групу, пропіональдегідну групу, або бутиральдегідну групу на іншому кінці.
Коли поліетиленгліколь, який має реакційноздатну гідрокси групу на обох своїх кінцях, використовується як непептидний полімер, гідрокси групу може бути активованою до різних реакційноздатних груп відомими хімічними реакціями, або поліетиленгліколь, який має комерційно доступну модифіковану реакційноздатну группу, може використовуватись таким чином, щоб отримати тривалої дії протеїновий кон'югат за винаходом.
В конкретному варіанті здійснення, непептидним полімером може бути полімер, який може бути зв'язаним з цистеїновим залишком похідної глюкагону, та більш конкретно, з -5Н групою цистеїну, але не обмежується цим. Зокрема, непептидним полімером може бути поліетиленгліколь, але особливо не обмежується цим, та інші види непептидних полімерів, описаних раніше, також можуть бути включеними в них.
В конкретному варіанті здійснення, кон'югатом може бути кон'югат, в якому пептид, який включає амінокислотну послідовність 5ЕСО ІЮ МО: 12, 5БЕО ІО МО: 20, або 5ЕО ІО МО: 37 є зв'язаним з Ес- ділянкою імуноглобуліну через непептидний полімер, та зокрема, непептидним полімером може бути полімер, який є зв'язаним з цистеїновим залишком, розташованим Зої амінокислоті послідовності 5ЕО ІО МО: 12, цистеїновим залишком розташованим на 171й амінокислоті послідовності ФЕО ІЮО МО: 20, або цистеїновим залишком розташованим на Зо амінокислоті послідовності 5ЕО ІЮ МО: 37, але не обмежується цим. Зокрема, непептидним полімером може бути поліетиленгліколь, але особливо не обмежується цим, та інші види непептидних полімерів, описаних раніше, також можуть бути включеними в них.
Коли використовується малеїмід-ПЕГ-альдегід, малеїмідна група може бути зв'язаною з -5Н групою похідної глюкагону тіоетерним зв'язком, та альдегідна група може бути зв'язаною з -МН2
Ес імуноглобуліну за рахунок відновного амінування, але не обмежується цим, та зазначене вище є лише варіантом здійснення.
Крім того, в наведеному вище кон'югаті, реакційноздатна група непептидного полімеру може бути групою, яка є зв'язаною з МН», розташованим на М- кінці Ес- ділянки імуноглобуліну, але це є лише ілюстративним варіантом здійснення.
У винаході, "Ес- ділянка імуноглобуліну" стосується ділянки, яка включає константну ділянку важкого ланцюга 2 (СН2) та/або константну ділянку важкого ланцюга З (СНЗ), виключаючи варіабельні ділянки важкого ланцюга та легкого ланцюга імуноглобуліну. Ес- ділянка імуноглобуліну може бути конструктом ділянки, що встановлює фрагмент протеїнового кон'югату за винаходом.
Ес- ділянка імуноглобуліну може включати шарнірну ділянку в константній ділянці важкого
Зо ланцюга, але не обмежується цим. Крім того, Ес- ділянка імуноглобуліну за винаходом може бути розширеною Ес ділянкою, яка включає частину або всю константну ділянку важкого ланцюга 1 (СНІ), та/або константною ділянкою легкого ланцюга 1 (С11), виключаючи варіабельні ділянки важкого ланцюга та легкого ланцюга імуноглобуліну, за умови, що Ес- ділянка імуноглобуліну має ефект, практично такий самий як або покращений в порівнянні з нативним типом. Крім того, Ес- ділянка імуноглобуліну за винаходом може бути ділянкою, в якій достатньо довга частина амінокислотної послідовності, яка відповідає СНО та/або СНЗ, є видаленою.
Наприклад, Ес- ділянкою імуноглобуліну за винаходом може бути 1) СНІ домен, СН2 домен,
СНЗ домен, та СНА домен; 2) СНІ домен та СНО домен; 3) СНІ домен та СНЗ домен; 4) СН2 домен та СНЗ домен; 5) комбінація між одним, або двома, або більше доменами з СНІ домену,
СН2 домену, СНЗ домену, та СНА домену та шарнірною ділянкою імуноглобуліну (або частиною шарнірної ділянки); та 6) димер між кожним доменом константної ділянки важкого ланцюга та константної ділянки легкого ланцюга, але не обмежується цим.
Крім того, в конкретному варіанті здійснення, Ес- ділянка імуноглобуліну може бути в димерній формі, та одна молекула похідної глюкагону може бути ковалентно зв'язаною з Ес ділянкою в димерній формі, та зокрема, Ес імуноглобуліну та похідна глюкагону може бути взаємозв'язаною за рахунок непептидного полімеру. Крім того, дві молекули похідної глюкагону можуть бути, можливо, кон'югованими симетричним способом з однією Ес ділянкою в димерній формі. Зокрема, Ес імуноглобуліну та похідна глюкагону або інсулінотропний пептид можуть бути взаємозв'язаними непептидним лінкером, але не обмежується цим варіантом здійснення, описаним вище.
Крім того, Ес- ділянка імуноглобуліну за винаходом не тільки включає нативну амінокислотну послідовність, але також послідовність її похідної. Амінокислотна послідовність похідної стосується амінокислотної послідовності, яка має відмінність в щонайменше одному амінокислотному залишку внаслідок делеції, вставки, неконсервативного або консервативного заміщення, або їх комбінації.
Наприклад, амінокислотні залишки в положеннях 214-238, 297-299, 318-322, або 327-331, які, як відомо, є зв'язуванням Ес імуноглобуліну, можуть використовуватись як прийнятні сайти для модифікації.
Крім того, можливими є інші різні похідні, включаючи похідні, які мають делецію ділянки, здатної утворювати дисульфідний зв'язок, або делецію деяких амінокислотних залишків на М- кінці нативного Ес, або додавання метіонінового залишку на М- кінці нативного Ес. Крім того, для видалення ефекторних функцій, делеція може відбуватися в сайті зв'язування комплемента, такого як Сід-сайт зв'язування та сайт антитіло залежної клітинно опосередкованої цитотоксичності (А0СС). Методики одержання таких похідних послідовності Ес- ділянки імуноглобуліну є розкритими в Міжнародних заявках на патент МоМо МО 97/34631, МО 96/32478, тощо
Амінокислотні обміни в протеїнах та пептидах, які зазвичай не змінюють активності протеїнів або пептидів, є відомими в даній галузі (Н. Мешгайй, В. ГЇ. НІіЇ, ТНе Ргоїєїп5, Асадетіс Ргез55, Мемж/
УОїК, 1979). Обмінами, які найбільш часто зустрічаються, є АІа/5ег, Майіе, Авр/Сіи, Тиг/зег,
АІа/Спу, АІа/ТНг, Зег/Авп, АЇа/Маї, бЗег/Сіу, Тну/РНе, АїІа/Рго, І ув/Аг9, Авр/Азп, І еш/Іє, І ейц/маї,
АІа/Сій, та Авр/Сіу, в обох напрямках. Крім того, Рс ділянка може, за необхідності, бути модифікованою шляхом фосфорилювання, сульфатування, акрилювання, глікозилювання, метилювання, фарнезилювання, ацетилювання, амідування, тощо.
Вищеописані похідні Ес показують біологічну активність, ідентичну до тієї, що у Ес ділянки за винаходом та Вищеописані похідні Ес показують біологічну активність, ідентичну до покращену структурну стабільність щодо нагрівання, рН, тощо.
Додатково, Ес- ділянка імуноглобуліну може бути отримана з нативних форм, виділених іп мімо з людей або тварин, таких як корови, кози, свині, миші, кролики, хом'яки, щури, морські свинки, тощо, або може бути їх ракомбінантами або похідними, отриманими з трансформованих клітин тварин або мікроорганізмів. В даному документі, Ес ділянка може бути отриманою з нативного імуноглобуліну шляхом виділення цілого імуноглобуліну з живого організму людини або тварини та обробки виділеного імуноглобуліну протеазою. Коли цілий імуноглобулін обробляють папаїном, він розщеплюється на Бар та Ес ділянки, тоді як, коли цілий імуноглобулін обробляють пепсином, він розщеплюється на рЕбс та К(аб)2 фрагменти. Ес або рес можуть бути виділені з використанням гель-проникаючої хроматографії, тощо. В більш конкретному варіанті здійснення, Ес ділянка людського походження є рекомбінантною Ес- ділянку імуноглобуліну, отриманою з мікроорганізму.
Зо Крім того, Ес- ділянка імуноглобуліну може мати природні глікани, збільшені або знижені глікани в порівнянні з природним типом, або знаходитись в неглікозильованій формі.
Збільшення, зменшення або видалення гліканів з Ес імуноглобуліну може бути досягнуто звичайними способами, такими як хімічний спосіб, ферментативний спосіб, та спосіб генної інженерії з використанням мікроорганізму. Ес- ділянка імуноглобуліну, отримана шляхом видалення гліканів з Ес ділянки показує значне зниження афінності зв'язування з С1д частиною та зниження або втрату антитілозалежної цитотоксичності або комплемент-залежної цитотоксичності, та таким чином не викликає зайвих імунних відповідей іп мімо. В цьому зв'язку,
Ес- ділянка імуноглобуліну в деглікозильованій або неглікозильованою Ес- ділянці імуноглобуліну може бути більш прийнятної форми, щоб відповідати вихідному завданню винаходу, як носія лікарського засобу.
Як застосовано в даному документі, термін "дегллікозилювання" стосується ферментативного видалення цукрових фрагментів з ділянки Ес, та термін "агллікозилювання" стосується неглікозильованої ділянки Ес, отриманої в прокаріотах, більш конкретно, Е. сої.
Між тим, Ес- ділянка імуноглобуліну може бути отримана з людей або інших тварин, включаючи корів, кіз, свиней, мишей, кроликів, хом'яків, щурів та морських свинок. В більш конкретному варіанті здійснення, її отримують від людини.
Крім того, Ес ділянка імуноглобуліну (4) може бути похідною Ідс, ІдА, дО, ЧЕ, ІМ, або їх комбінацією, або гібридом. В більш конкретному варіанті здійснення, її отримують з ІЇдсе або ІЗ9М, що є одним з найбільш поширених протеїнів в крові людини, та в ще більш конкретному варіанті здійснення, її отримують з ІДС, який, як відомо, підвищує періоди напів-виведення ліганд- зв'язуючих протеїнів. В ще більш конкретному варіанті здійснення, Ес- ділянка імуноглобуліну є 904 с ділянкою, та в найбільш конкретному варіанті здійснення, ІдС4 Ес ділянка є неглікозильованою Ес ділянкою, отриману з людського Ідс4, але не обмежується цим.
Зокрема, Як застосовано в даному документі, термін "комбінація" означає, що поліпептиди, які кодують одноланцюгові Ес- ділянки імуноглобуліну такого ж самого походження є зв'язаними з одно ланцюговим поліпептидом різного походження, утворюючи димер або мультимер. Тобто димер або мультимер можуть бути утворені з двох або більше фрагментів, вибраних з групи, яка складається з Іде Ес, ІДА Ес, ІЗ9М Ес, ІдО Ес, та ІЗЕ Ес фрагментів.
Композиція за винаходом може використовуватись для профілактики або лікування бо вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, або метаболічного синдрому.
Як застосовано в даному документі, термін "профілактики" стосується всіх видів дій, пов'язаних з інгібуванням або затримкою виникнення цільового захворювання (наприклад, вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, або метаболічного синдрому) шляхом введення похідної глюкагону, кон'югату, який її містить, або композиції, та термін "лікування" стосується всіх видів дій, пов'язаних з покращенням або вигідними змінами симптомів цільового захворювання (наприклад, вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, або метаболічного синдрому) шляхом введення похідної глюкагону, кон'югату, який її містить, або композиції.
Як застосовано в даному документі, термін "введення" стосується введення певного матеріалу пацієнту відповідним чином. Композиція може вводитись загальним шляхом, який дозволяє доставку композиції в цільову тканину іп мімо, наприклад, за рахунок внутрішньочеревного, внутрішньовенного, внутрішньо м'язового, підшкірного, внутрішньо шкірного, перорального, місцевого, інтраназального, внутрішньо легеневого, та інтраректального введення, але особливо не обмежується цим.
Як застосовано в даному документі, термін "гіпоглікемія" стосується стану здоров'я, при якому рівні глюкози в крові нижче, ніж у нормальних людей, та в загальному випадку, стосується стану, коли рівні глюкози в крові становлять 50 мг/дл або менше, але особливо не обмежується цим. Гіпоглікемія часто викликається, коли людина, яка приймає пероральний гіпоглікемічний агент або інсулін, їла менше, ніж зазвичай, або проводила діяльність або мала фізичне навантаження більше, ніж зазвичай. Крім того, гіпоглікемія може виникати внаслідок вживання спиртів, застосування препаратів для зниження рівня глюкози, важких фізичних захворювань, дефіциту гормонів, таких як гормони кори наднирників та глюкагон, пухлини продукуючої інсулін підшлункової залози, інсулінового аутоїмунного захворювання, пацієнтів з гастректомією, вродженої вади розладу вуглеводневого обміну речовин, тощо.
У винаході, гіпоглікемія включає як гостру, так і хронічну гіпоглікемію.
Симптоми гіпоглікемії включають слабкість, тремтіння, блідість шкіри, холодний піт, запаморочення, збудження, занепокоєння, удари серця, порожній шлунок, головний біль, стомлюваність, тощо. У випадку персистуючої гіпоглікемії, це призводить до конвульсії або судом, та може викликати шок та, таким чином, непритомність.
Більш конкретно, гіпоглікемія може бути викликаною персистуючим гіперінсулінізммом
Зо внаслідок генетичного дефекту. Приклади відомих причин гіперінсулінізму внаслідок генетичного дефекту можуть включати мутацію гена ОВ або гена Кігб.2, локалізованого на хромосомі 11р15.1, або збільшення активності глюкокінази (СК) внаслідок мутації гена ОК, локалізованого на хромосомі 7р15-р13, збільшення АТФ в клітинах острівців внаслідок мутації гена глутаматдегідрогенази (СОН), тощо.
Тим часом, вроджений гіперінсулінізмм є однією з провідних причин важкої та стійкої гіпоглікемії у новонароджених та дітей. Це може бути викликано ненормальною функцією клітин підшлункової залози внаслідок тимчасового збільшення секреції інсуліну або генетичної мутації у новонароджених з низькою масою тіла при народженні або новонароджених від матерів з діабетом, тощо. Відомо, що глюкагон може використовуватись для лікування вродженого гіперінсулінізму.
Крім того, похідна глюкагону або кон'югат, який її містить, може використовуватись для профілактики або лікування гіпоглікемії.
Крім того, похідна глюкагону або кон'югат, який її містить, за винаходом може використовуватись як фармацевтичний лікарський засіб не тільки для профілактики збільшення маси тіла, сприяння зниженню маси тіла, зменшення надмірної ваги, та лікування ожиріння, включаючи патологічне ожиріння (наприклад, шляхом контролювання апетиту, прийома їжі, споживання їжі, споживання калорій, та/або витрати енергії), але також для лікування пов'язаного з ожирінням запалення, пов'язаного з ожирінням захворювання жовчного міхура, та індукованого ожирінням апное сну, але не обмежується цим, та може використовуватись для лікування пов'язаних з ним захворювань або станів здоров'я. Похідна глюкагону за винаходом або кон'югат, який її містить, також можуть використовуватись для лікування метаболічного синдрому іншого, ніж ожиріння, тобто, пов'язаного з ожирінням захворювання, такого як порушена толерантність до глюкози, гіперхолестеринемія, дисліпідемія, ожиріння, діабет, гіпертонія, неалкогольний стеатогепатит (неалкогольний стеатогепатит, МА5Н), атеросклероз викликаного дисліпідемією, атеросклероз, артеріосклероз, ішемічна хвороба серця, інсульт, тощо Однак, ефекти пептида відповідно до винаходу можуть бути опосередкованими повністю або частково ефектами, пов'язаними з вагою тіла, описаними вище, або може бути незалежними від них.
Як застосовано в даному документі, термін "метаболічний синдром" стосується симптому, бо коли різні захворювання, які виникають внаслідок хронічного метаболічного розладу, виникають самостійно або в комбінації. Зокрема, приклади захворювань, які належать до метаболічного синдрому, можуть включати порушену толерантність до глюкози, гіперхолестеринемію, дисліпідемію, ожиріння, діабет, гіпертонію, неалкогольний стеатогепатит (МАБ5Н), артеріосклероз внаслідок дисліпідемії, атеросклероз, артеріосклероз, ішемічну хворобу серця, інсульт, тощо, але не обмежуються ними.
Як застосовано в даному документі, термін "ожиріння" стосується медичного стану з надлишковим накопиченням жиру в організмі та люди, як правило, як визначається, страждають на ожиріння, коли їх індекс маси тіла (ВМІ; величина маси тіла (кг) по відношенню до росту в квадраті (м)) становить 25 або вище. Ожиріння найчастіше є викликаним енергетичним дисбалансом через надмірне споживання їжі в порівнянні з витратою енергії протягом тривалого періоду часу. Ожиріння, будучи метаболічним захворюванням, яке вражає все тіло, збільшує можливість розвитку діабет та гіперліпідемії, підвищує ризик захворюваності на сексуальну дисфункцію, артрит, та серцево-судинні захворювання, та в деяких випадках є пов'язаним з розвитком раку.
Похідна глюкагону відповідно до винаходу має змінений рі та, таким чином, може демонструвати покращену розчинність та більш високу стабільність в умовах нейтрального рН в порівнянні з нативним глюкагоном. Крім того, похідна глюкагону відповідно до винаходу може демонструвати активність щодо рецептора глюкагону та, таким чином, може ефективно використовуватись для профілактики або лікування цільових захворювань, включаючи гіпоглікемію, метаболічний синдром та вроджений гіперінсулінізмм.
Фармацевтична композиція за винаходом може містити фармацевтично прийнятний носій, ексципієнт або розріджувач. Як використовується в даному документі, термін "фармацевтично прийнятний" стосується властивостей, які мають достатню кількість, щоб продемонструвати терапевтичний ефект та не викликати несприятливих ефектів, та можуть бути легко визначені кваліфікованим фахівцем в даній галузі, грунтуючись на чинниках, добре відомих в медичній галузі, таких як вид захворювання, вік, маса тіла, стан здоров'я, стать, чутливість до лікарського засобу пацієнта, шлях введення, спосіб введення, частота введення, тривалість лікування, лікарський засіб, який потрібно змішувати або вводити одночасно в комбінації, тощо.
Фармацевтична композиція за винаходом, яка містить пептид або кон'югат, який його містить, за винаходом, може додатково містити фармацевтично прийнятний носій.
Фармацевтично прийнятний носій може включати, для перорального введення, зв'язуючу речовину, ковзну речовину, розпушувач, ексципієнт, солюбілізуючий агент, диспергуючий агент, стабілізуючий агент, суспендуючий агент, барвник, ароматизуючий агент, тощо; для ін'єкцій, буферний агент, консервант, анальгетик, солюбілізуючий агент, ізотонічний агент, стабілізуючий агент, тощо, які можуть бути об'єднані для використання; та для місцевого застосування, основу, ексципієнт, змащуючу речовину, консервант, тощо, хоча не обмежується цим.
Тип формуляції композиції відповідно до винаходу можуть отримувати по-різному шляхом комбінування з фармацевтично прийнятним носієм, як описано вище. Наприклад, для перорального введення композиція може бути сформульована в таблетки, пастилки, капсули, еліксири, суспензії, сиропи, пластинки, тощо. Для ін'єкцій композиція може бути сформульована в о однодозові ампули або багатодозові контейнери. Композиція може бути також сформульованою в розчинах, суспензіях, таблетках, капсулах та композиціях з уповільненим вивільненням.
Тим часом, приклади відповідних носіїв, ексципієнтів та розріджувачів можуть включати лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбіт, маніт, ксиліт, еритрит, мальтит, крохмаль, гуміарабік, альгінат, желатин, фосфат кальцію, силікат кальцію, целюлозу, метилцеллюлозу, микрокристалічну целюлозу, полівінілпіролідон, воду, метилгідроксибензоат, пропілгідроксибензоат, тальк, стеарат магнію, мінеральну олію, тощо. Крім того, композиція може додатково містити наповнювач, анти-коагулянт, змащуючу речовину, зволожувач, смаковий агент, консервант, тощо.
Крім того, фармацевтичну композицію за винаходом можуть отримувати в будь-якому типі препаратів, вибраному з групи, яка складається з таблеток, пігулок, порошків, гранул, капсул, суспензій, рідких лікарських засобів для внутрішнього застосування, емульсій, сиропів, стерильних ін'єкційних розчинів, неводних розчинів, ліофілізованих композицій та супозиторіїв.
Крім того, композиція може бути сформульована в одноразову лікарську форму, прийнятну для організму пацієнта, та, зокрема, формулюється в препарат, прийнятний для пептидних лікарських засобів відповідно до типового способу в фармацевтичній галузі для введення пероральним або парентеральним способом, таким як, включаючи, але не обмежуючись цим через шкіру, внутрішньовенно, внутрішньом'язово, внутрішньоартеріально, інтрамедулярно, 60 інтратекально, внутрішньошлуночково, легенево, трансдермально, підшкірно,
внутрішньочеревно, інтраназально, внутрішньошлунково, місцево, сублінгвально, вагінально або ректально, але не обмежується цим.
Крім того, пептид або кон'югат може застосовуватись шляхом змішування з різними фармацевтично прийнятними носіями, такими як фізіологічний сольовий розчин або органічні розчинники. Для того, щоб підвищити стабільність або всмоктування можуть використовуватись вуглеводи, такі як глюкоза, сахароза або декстрани; антиоксиданти, такі як аскорбінова кислота або глутатіон; хелатуючі агенти; низькомолекулярні протеїни або інші стабілізатори.
Доза та частота введення фармацевтичної композиції згідно з представленим винаходом визначаються за типом активного(их) інгредієнта(ів) разом з різними чинниками, такими як захворювання, яке лікують, спосіб введення, вік пацієнта, стать та маса тіла, а також тяжкість захворювання.
Хоча це не особливо обмежується цим, фармацевтична композиція за винаходом може містити наведений вище інгредієнт (активний інгредієнт) в кількості від 0,01 95 (мас/об.) до 99 95 (мас/об.).
Загальна ефективна доза композиції згідно за винаходом може бути введена пацієнту в одній дозі або може бути введена протягом тривалого періоду часу в декількох дозах відповідно до фракціонованого протоколу лікування. В фармацевтичній композиції за винаходом вміст активного інгредієнта(в) може варіювати в залежності від тяжкості захворювання. Зокрема, переважна загальна добова пептида або кон'югату за винаходом може становити від приблизно 0,0001 мкг до 500 мг на 1 кг маси тіла пацієнта. Однак, ефективна доза пептида або кон'югату визначається з урахуванням різних чинників, включаючи вік пацієнта, масу тіла, стан здоров'я, стать, тяжкість захворювання, дієту та показник екскреції, на додаток до способу введення та частоти лікування фармацевтичною композицією. У цьому відношенні кваліфіковані фахівці в даній галузі можуть легко визначити ефективну дозу, прийнятну для конкретного застосування фармацевтичної композиції за винаходом. Фармацевтична композиція відповідно до винаходу особливо не обмежується формулюванням та способом та режимом введення, за умови, що вона показує ефекти за винаходом.
Фармацевтична композиція за винаходом може демонструвати прекрасну тривалість ефективності та титру іп мімо, та, таким чином, кількість та частота її введення можуть бути
Зо значно зменшеними в порівнянні з іншими фармацевтичними препаратами, але особливо не обмежується цим.
Зокрема, оскільки фармацевтична композиція за винаходом містить як активний інгредієнт похідну глюкагону, що має змінену рі відмінну від тієї, що у нативного глюкагон, вона демонструє підвищену розчинність та/або високу стабільність відповідно до рН наданого розчину, та, таким чином, фармацевтична композиція за винаходом може ефективно використовуватись у виробництві стабільного препарату глюкагону для лікування цільового захворювання, включаючи вроджений гіперінсулінізмм, гіпоглікемію або метаболічний синдром.
Що стосується фармацевтичної композиції для профілактики або лікування метаболічного синдрому, або терапії для профілактики або лікування метаболічного синдрому, фармацевтична композиція може додатково містити сполуку або матеріал, який має терапевтичну активність по відношенню до метаболічного синдрому, та терапія може додатково включати застосування зазначеної вище сполуки або матеріалу.
Приклади сполуки або матеріал, який має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому, які повинні бути включені в комбіноване введення або композицію за винаходом, можуть включати інсулінотропний пептид, агоніст рецептора глюкагон-подібного пептида-1 (СІ Р-1), агоніст рецептора лептину, інгібітор дипептидилпептидази-ІМ (ОРР-ЇМ), антагоніст рецептора МУ5, антагоніст рецептора меланін-концентруючий гормон (МСН), антагоніст рецептора М2/4, антагоніст рецептора меланокортину 3/4 (МС 3/4), інгібітор шлункової/панкреатичної ліпази, агоніст 5-гідрокситриптамінового рецептора 2С (5НТ2С), агоніст рецептора рЗА, агоніст рецептора аміліну, антагоніст греліну, антагоніст рецептора греліну, агоніст альфа-рецептора, який активується проліфератором пероксисому (РРАНО), агоніст дельта-рецептора, який активується проліфератором пероксисому (РРАНб), агоніст фарнезоїдного Х-рецептора (ЕХА), інгібітор карбоксилази ацетил-СоА, пептид УУ, холецистокінін (ССК), ксенин, гліцентин, обестатин, секретин, несфатин, інсулін та глюкозо- залежний інсулінотропний пептид (СІР), але не обмежується цим. Крім того, всі лікарські засоби, які є ефективними для лікування ожиріння, та лікарські засоби здатні інгібувати запалення печінки та фіброз можуть бути включеними.
Зокрема, інсулінотропний пептид може бути вибраним з групи, яка складається з СІ Р-1, ексендину-3, ексендину-4, їх агоніста, їх похідної, його фрагмента, їх варіанта, та їх комбінації.
Більш конкретно, інсулінотропний пептид може бути похідною інсулінотропного пептида, в якій М- термінальний гістидиновий залишок інсулінотропного пептида є заміщеним одним з вибраного з групи, що складається з дезаміно-гістидилу, М-диметилгістидилу, р-гідрокси імідазопропіонілу, 4-імідазоацетилу та р-карбоксіімідазопропіонілу, але не обмежується цим.
Зокрема, інсулінотропним пептидом може бути СІ Р-1, ексендин-3 або ексендин-4.
Ще більш конкретно, інсулінотропний пептид може бути вибраним з групи, яка складається з нативного ексендина-4; похідної ексендина-4, в якій М- термінальна аміногрупа ексендина-4 є видаленою; похідної ексендина-4, в якій М-термінальна аміногрупа ексендина-4 є заміщеною на гідроксильну групу; похідної ексендина-4, в якій М-термінальна аміногрупа ексендина-4 є модифікованою диметильною групою; похідної ексендина-4, в якій о-карбон 197 амінокислоти ексендина-4, гістидин, є видаленим; похідної ексендина-4, в якій 1272 амінокислота ексендина-4, лізин, є заміщеною на серин, та похідної ексендина-4, в якій 1272 амінокислота ексендина-4, лізин, є заміщеною на аргінін, але не обмежується цим.
Тим часом, як приклад інсулінотропного пептида або його кон'югат тривалої дії, повне розкриття публікації заявки на патент США Мо 2010-0105877 є включеним в винахід як посилання, але не обмежується цим.
Крім того, інсулінотропний пептид може знаходитись в формі кон'югату, який включає пептидний фрагмент, який включає амінокислотну послідовність зазначеного вище інсулінотропного пептида, та фрагмент біосумісного матеріалу, зв'язаного з пептидним фрагментом, але не обмежується цим. Зокрема, пептидний фрагмент, який включає амінокислотну послідовність інсулінотропного пептида характеризується тим, що він знаходиться в формі кон'югату, ковалентно зв'язаного з фрагментом біосумісного матеріалу через лінкер, але особливо не обмежується цим. Кон'югат інсулінотропного пептида може бути кон'югатом тривалої дії, та визначення щодо типу тривалої дії є таким самим, як пояснено вище.
Для всіх ознак, які стосуються кон'югату, зокрема, фрагмента біосумісного матеріалу (Ес імуноглобуліну) та лінкера (наприклад, непептидного полімеру), будуть застосовані всі з описаних раніше. Наприклад, лінкер може бути таким, який є відповідним чином зв'язаним з пептидним фрагментом та фрагментом біосумісного матеріалу через ковалентні зв'язки, які відповідним чином утворювалися, коли один кінець лінкера взаємодіяв з аміногрупою або
Зо тіольною групою фрагмента біосумісного матеріалу, тоді як інший кінець лінкера взаємодіяв з аміногрупою або тіольною групою пептидного фрагмента.
В конкретному варіанті здійснення, один кінець непептидного лінкера може взаємодіяти з аміногрупою або тіольною групою Ес- ділянки імуноглобуліну, тоді як інший кінець лінкера може взаємодіяти з аміногрупою або тіольною групою інсулінотропного пептида та, тим самим, утворюють ковалентний зв'язок, відповідно.
В більш конкретному варіанті здійснення, композиція для профілактики або лікування зазначеного вище метаболічного синдрому або терапія може бути композицією або терапією, що включає або використовує пептид, який включає амінокислотну послідовність загальної
Формули 2 нижче або кон'югат фрагмента біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаний з пептидом, але особливо не обмежується цим.
У-Аір-ОСТЕ-Х7-50-Х10-5-Х12-У-І-Х15-Х16-Х17-8-А-Х20-Х21-Е-М-Х24-М-І -М-М-Т -Х30 (Загальна Формула 2, 5ЕО ІЮ МО: 46)
В загальній Формулі 2,
Х7 - треонін, валін або цистеїн;
Х10 - тирозин або цистеїн;
Х12 - лізин або цистеїн;
Х15 - аспарагінова кислота або цистеїн;
Х16 - глутамінова кислота або серин;
Х17 - лізин або аргінін;
БО Х20 - глутамін або лізин;
Х21 - аспарагінова кислота або глутамінова кислота;
Х24 - валін або глутамін; та хЗ0 - цистеїн, або є відсутнім.
Пептид відповідно до попереднього конкретного варіанта здійснення, коли амінокислотна послідовність загальної Формули 2 є ідентичною до будь-якої однієї з ФЕО 10 МОБ: 19, 33, 49, та 50, всі або частина пептидів можуть бути виключені.
Більш конкретно, композиція може включати як (ї) кон'югат, який включає пептидний фрагмент, який включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 37, та фрагмент біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаним з пептидним фрагментом; так і (ії) кон'югату, який включає 60 імідазо-ацетильний фрагмент ексендина-4, де а-карбон 12 амінокислоти ексендина-4 (тобто,
гістидин) є видаленим, та фрагмент біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаний з імідазо- ацетильним фрагментом ексендина-4. Ще більш конкретно, пептидний фрагмент, який включає амінокислотну послідовність 5ЕО ІО МО: 37 та імідазо-ацетильний фрагмент ексендина-4 може бути зв'язаним з їх відповідними фрагментами біосумісного матеріалу через лінкер, але особливо не обмежуються цим.
Введення доз сполуки або матеріалу який має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому, зокрема кон'югат, в якому інсулінотропний пептид є зв'язаним з фрагментом біосумісного матеріалу, може знаходитись в діапазоні від приблизно 0,0001 мкг до 500 мг на 1 кг маси тіла пацієнта, але особливо не обмежується цим.
Крім того, фармацевтична композиція за винаходом може містити наведені вище матеріали для комбінованого введення, тобто, сполука або матеріал, що має терапевтичну активність по відношенню до метаболічного синдрому, та похідна глюкагону або кон'югат, який її містить (або кожен інгредієнт зазначених вище матеріалів для комбінованого введення), в кількості від 0,01 95 (мас./об.) до 99 95 (мас./об.).
Між тим, в аспекті, сполука або матеріал, що має терапевтичну активність по відношенню до метаболічного синдрому, та похідна глюкагону або кон'югат, який її містить, зокрема кон'югат, в якому фрагмент біосумісного матеріалу є зв'язаним з інсулінотропним пептидом (наприклад, кон'югат інсулінотропний пептид-ПЕГ-ІДЕс) та кон'югат, в якому фрагмент біосумісного матеріалу є зв'язаним з похідною глюкагону, може використовуватись в молярному співвідношенні від 1: 0,01 до 1: 50, але особливо не обмежується цим.
В іншому аспекті винахід передбачає набір, який включає похідну глюкагону або кон'югат, який її містить, та зокрема, набір для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, або метаболічного синдрому, включаючи похідну глюкагону або кон'югат, який її містить.
Похідна глюкагону, або кон'югат, який її містить, для профілактики, або лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, метаболічного синдрому, є такими самими як пояснено вище. Види інгредієнтів, які можуть додатково міститися в наборі за винаходом може включати всі з тих, які можуть міститися в композиції, описаній вище.
Зокрема, коли набором є набір для профілактики або лікування метаболічного синдрому,
Зо який включає як (і) похідну глюкагону, зокрема пептид, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1 або 2, або кон'югат, який її містить, так і (ії) інсулінотропний пептид, зокрема СІ Р-1, ексендин-3, ексендин-4, або його похідну, або кон'югату, який його містить, але особливо не обмежується цим.
В іншому аспекті, винахід передбачає похідну глюкагону.
Похідна глюкагону є такою самою, як пояснено вище.
Більш конкретно, похідна характеризується тим, що є виділеним пептидом, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1, представлену 5ЕО ІЮ МО: 45, як описано вище. Для пояснення та комбінації по відношенню до виділеного пептида, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1, будуть застосовуватися всі з тих, які описані вище.
Похідна характеризується тим, що є виділеним пептидом, який включає амінокислотну послідовність наступної загальної Формули 2.
У-Аір-ОСТЕ-Х7-50-Х10-5-Х12-У-І-Х15-Х16-Х17-8-А-Х20-Х21-Е-М-Х24-М1-І -М-М-Т-Х30 (Загальна Формула 2, 5ЕО ІЮ МО: 46)
В загальній Формулі 2,
Х7 - треонін, валін або цистеїн;
Х10 - тирозин або цистеїн;
Х12 - лізин або цистеїн;
Х15 - аспарагінова кислота або цистеїн;
Х16 - глутамінова кислота або серин;
Х17 - лізин або аргінін;
Х20 - глутамін або лізин;
Х21 - аспарагінова кислота або глутамінова кислота;
Х24 - валін або глутамін;та
ХхЗ0 - цистеїн, або є відсутнім.
Коли амінокислотна послідовність загальної Формули 2 є ідентичною до будь-якої однієї з
ЗЕО ІО МОБ: 19, 33, 49, та 50, вона може бути виключена.
Більш конкретно, в пептиді, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 2,
Х16 може бути глутамінова кислота, Х20 може бути лізин, та бічні ланцюги Х16 та Х20 можуть 60 утворювати лактамне кільце, але не обмежується цим.
Крім того, С-кінець пептида, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 2, може бути амідованим або немодифікованим, але не обмежується цим.
Крім того, пептидом може бути похідна глюкагону, здатна активувати рецептор глюкагону, але не обмежується цим.
Більш конкретно, пептид може включати амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МОБ: 12, 13, 15, та 36-44, але не обмежується цим.
В ще одному аспекті, винахід передбачає виділений полінуклеотид, який кодує похідну глюкагону, вектор, який включає полінуклеотид, та виділену клітину, яка включає полінуклеотид або вектор.
Похідна глюкагону є такою самою як пояснено вище.
Зокрема, похідною може бути виділений пептид, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1, представлену 5ЕО ІЮО МО: 45, описану вище. Для пояснення та комбінації щодо виділеного пептиду, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1, всі з тих, які описані вище, будуть застосовуватися. Крім того, зокрема, похідною може бути виділений пептид, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 2, представлену 5ЕО ІЮО МО: 46, описану вище. Для пояснення та комбінація щодо виділеного пептиду, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 2, всі з тих, які описані вище, будуть застосовуватися.
Як застосовано в даному документі, термін "гомологія" вказує на подібність послідовності з немутантного типу амінокислотною послідовністю або немутантного типу нуклеотидою послідовністю, та порівняння гомологій може бути здійснено неозброєним оком або з використанням комерційно доступної програми порівняння. Використовуючи комерційно доступну комп'ютерну програму, гомологія між двома або більше послідовностями може бути виражена у відсотках (90), та може бути рохрахована сгомологія (95)між сусідніми послідовностями.
Як застосовано в даному документі, термін "рекомбінантний вектор" стосується конструкт
ДНК, який включає послідовність полінуклеотида, який кодує цільовий пептид, наприклад, похідна глюкагону, що є функціонально зв'язаним з відповідною регуляторною послідовністю для забезпечення експресії цільового пептиду, наприклад, похідна глюкагону, в клітині- господарі.
Регуляторна послідовність включає промотор, здатний ініціювати транскрипцію, будь-яку операторну послідовність для регулювання транскрипції, послідовність, яка кодує відповідний домен зв'язування мРНК рибосому, та послідовність яка регулює термінацію транскрипції та трансляції. Рекомбінантний вектор, після трансформування в прийнятну клітину-господар, може бути реплікованим або функціонувати незалежно від генома господаря, або може бути інтегрованим в сам геном господаря.
Рекомбінантний вектор, який використовується у винаході, не може особливо обмежуватись за умови, що вектор реплікується в клітині-осподар, та він може бути сконструйований з використанням будь-якого вектора, відомого в даній галузі. Приклади вектора, який традиційно використовується, можуть включати природні або рекомбінантні плазміди, косміди, віруси та бактеріофаги. Вектори, які будуть використовуватися у винаході, можуть бути будь-яким вектором експресії, відомим в даній галузі.
Рекомбінантний вектор використовується для трансформації клітинм-господаря для продукування похідних глюкагону за винаходом. Крім того, дані трансформовані клітини, як частина винаходу, можуть використовуватись для ампліфікації фрагментів нуклеїнової кислоту та векторів, або можуть бути культивованими клітинами або клітиннмим лініями, які використовуються, в рекомбінантному продукуванні похідних глюкагону за винаходом.
Як застосовано в даному документі, термін ""трансформація" стосується процесу введення рекомбінантного вектора, який включає полінуклеотид, який кодує цільовий протеїн в клітині- господарі, тим самим, забезпечуючи експресію протеїна, кодованого полінуклеотидом в клітині- господарі. Для трансформованого полінуклеотиду, не має значення, чи вводиться він в хромосому клітини-господаря та розташовується на ній або розташовується поза хромосомою, за умови, що він може бути експресований в клітині-господарі, та обидва випадки є включеними.
Крім того, полінуклеотид включає ДНК та РНК, які кодують цільовий протеїн. Полінуклеотид може бути вставленим в будь-якій формі, оскільки він може бути введеним в клітину-господар та експресуватися в ній. Наприклад, полінуклеотид може бути введеним в клітину-господар в формі касети експресії, який є генним конструктом, включаючи всі суттєві елементи, необхідні бо для само-експресії. Касета експресії звичайно може включати промотор, функціонально
Зо зв'язаний з полінуклеотидом, сигнал термінації транскрипції, домен зв'язування рибосоми, та сигнал термінації трансляції. Касета експресії може знаходитись в формі вектора експресії, здатного до самореплікації. Крім того, полінуклеотид може бути введений в клітину-господар, як він є та функціонально зв'язаним з послідовністю, необхідною для його експресії в клітині- господарі, але не обмежується цим.
Крім того, Як застосовано в даному документі, термін "функціонально зв'язаний" стосується функціонального зв'язування між промоторною послідовністю, яка ініціює та опосередковує транскрипцію полінуклеотида, який кодує цільовий пептид за винаходом, та вказану вище генну послідовність.
Відповідний господар, який буде використовуватися у винаході, може особливо не обмежуватись, за умови, що він може експресувати полінуклеотид за винаходом. Приклади відповідного господаря можуть включати бактерії, які належать до роду ЕзсПепспіа, такі як Е. соїї; бактерії, які належать до роду Васіїшв5, такі як Васіїїи5 зи,ибійів; бактерії, які належать до роду
Реєндотопав, такі як Рзепдотопа5 риїіда; дріжджі, такі як Рісніа равіогіз, Засспаготусев сегемівіає, та 5спігозасспаготусе5 ротре; клітини комах, такі як Зродорієга ігидірегда (519), та клітини тварин, такі як СНО, СО5, та В50.
В ще одному аспекті, винахід передбачає виділенний кон'югат, в якому похідна глюкагону є зв'язаною з фрагментом біосумісного матеріалу, який є здатним збільшувати період напів- виведення іп мімо похідної глюкагону. Кон'югат може бути кон'югатом тривалої дії.
Зокрема, винахід передбачає виділенний кон'югат, який включає пептидний фрагмент та фрагмент біосумісного матеріалу, та пептидний фрагмент є такою самоюпослідовністю як та, що загальної Формули 1 або 2, або послідовність, яка включає її.
Стосовно похідної глюкагону, застосовується амінокислотна послідовність загальної
Формули 1 або 2, біосумісний матеріал, та склад кон'югату, всі з тих, які описані вище.
Зокрема, похідною може бути виділений пептид, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1, представлену 5ЕО ІЮ МО: 45, описану вище. Для ознаки та комбінації щодо виділеного пептиду, який включає амінокислотну послідовність загальної Формули 1, застосовуються всі з тих, які описані вище.
Крім того, зокрема, похідною може бути виділений пептид, який включає амінокислотну
Зо послідовність загальної Формули 2, представлену 5ЕО ІО МО: 46, описану вище. Для ознаки та комбінації щодо виділеного пептиду, який включає амінокислотну послідовність загальної
Формули 2, застосовуються всі з тих, які описані вище.
Зокрема, фрагмент біосумісного матеріалу може бути вибраним з групи, яка складається з полімеру, жирної кислоти, холестерину, альбуміну та його фрагмента, альбумін-зв'язуючого матеріалу, полімеру повторюваних одиниць конкретної амінокислотної послідовності, антитіла, фрагмента антитіла, ЕсАВп-зв'язуючого матеріалу, іп мімо сполучної тканини або її похідної, нуклеотиду, фібронектину, трансферину, сахариду, гепарину, та еластину, але не обмежується цим. Зокрема, полімер може бути вибраним з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронову кислоту, олігонуклеотиду, та їх комбінації, але особливо не обмежується цим.
Більш конкретно, ЕсАп-зв'язуючим матеріалом може бути поліпептид, який включає Ес- ділянку імуноглобуліну, але особливо не обмежується цим. Таке саме пояснення щодо Ес- ділянки імуноглобуліну також застосовується в цьому аспекті.
Виділенний кон'югат може бути кон'югатом, в якому фрагмент похідної глюкагону, зокрема пептидний фрагмент, який включає амінокислотну послідовність пептида похідної глюкагону, та фрагмент біосумісного матеріалу є зв'язаними один з одним через лінкер. Таке саме пояснення щодо лінкер також застосовується в цьому аспекті.
Крім того, похідна глюкагону фрагмент, зокрема пептидний фрагмент, який включає амінокислотну послідовність пептида похідної глюкагону, може бути зв'язаним з фрагментом біосумісного матеріалу через лінкер, вибраний з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, такого як полімолочна кислота (РІА) та полімолочна-гліколева кислота (РІ СА), ліпідного полімеру, хітину, гіалуронову кислоту, жирної кислоти, полімеру, низькомолекулярної сполуки, нуклеотиду, та їх комбінації, але не обмежується цим.
Крім того, фрагментом біосумісного матеріалу може бути ЕсВАп-зв'язуючий матеріал, та виділений пептид може бути зв'язаним з фрагментом біосумісного матеріалу через пептидний 60 лінкер або непептидний лінкер, вибраний з групи, яка складається з поліетиленгліколю,
поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, такого як полімолочна кислота (РІА) та полімолочна-гліколева кислота (РІСА), ліпідного полімеру, хітину, гіалуронову кислоту, та їх комбінації, але не обмежується цим.
Зокрема, ЕсАп-зв'язуючим матеріалом може бути поліпептид, який включає Ес- ділянку імуноглобуліну, та лінкером може бути зокрема полієтиленгліколь, але не обмежується цим.
Крім того, лінкер може бути таким, який є зв'язаним з цистеїновим залишком похідної глюкагону, але особливо не обмежується цим.
Крім того, лінкер може бути таким, який є відповідним чином зв'язаним з похідною глюкагону та фрагментом біосумісного матеріалу через ковалентні зв'язки, які відповідним чином утворювалися, коли один кінець лінкера взаємодіяв з аміногрупою або тіольною групою фрагмента біосумісного матеріалу, тоді як інший кінець лінкера взаємодіяв з аміногрупою або тіольною групою пептидного фрагмента, але особливо не обмежується цим.
В ще одному аспекті, винахід передбачає спосіб профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії або метаболічного синдрому, включаючи введення похідної глюкагону, кон'югату, який її містить, або композиції, яка її містить, суб'єкту.
Похідна глюкагону, кон'югат, який її містить, композиція, яка її містить, призначені для профілактики та лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, метаболічного синдрому, є такими самими, як пояснено вище.
У винаході, термін "суб'єкт" стосується осіб, у яких підозрюється, що вони мають вроджений гіперінсулінізмм, гіпоглісемію або метаболічний синдром, які включають ссавців, включаючи людей, мишей та тварин, які мають вроджений гіперінсулінізмм, гіпоглікемію або метаболічний синдром або мають ризик вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії або метаболічного синдрому.
Однак, будь-який суб'єкт, який піддається лікуванню похідною глюкагону за винаходом або композицією, яка її містить, є включеними без обмеження. Крім того, суб'єкт, у якого підозрюється, що він має вроджений гіперінсулінізмм, гіпогліксемію або ожиріння, може ефективно лікуватися шляхом введення фармацевтичної композиції, яка містить похідну глюкагону за винаходом. Вроджений гіперінсулінізмм, гіпоглікемія та ожиріння є такими самими,
Зо як пояснено вище.
Спосіб за винаходом може включати введення фармацевтичної композиції, яка містить пептид у фармацевтично ефективній кількості. Загальну добову дозу повинна визначатися лікарем у відповідних медичних висновках та вводитися один або декілька разів в розділених дозах. Що стосується завдань винаходу, то специфічна терапевтично ефективна доза для будь- якого конкретного пацієнта може бути переважно застосована по-різному, в залежності від різних чинників, добре відомих в галузі медицини, включаючи вид та ступінь відповіді, яка повинна бути досягнута, конкретні композиції, які включають інші агенти іноді використовуються з ними чи ні, вік пацієнта, маса тіла, загальні стани здоров'я, стать та дієта, час та шлях введення, швидкість секреції композиції, тривалість лікування, інші лікарські засоби, які використовуються в комбінації або одночасно з композицією за винаходом, та подібні чинники, добре відомі в галузі медицини.
Між тим, спосіб профілактики або лікування метаболічного синдрому може бути терапією з комбінованним введенням, що додатково включає щонайменше одну сполуку або матеріал, який має терапевтичну активність по відношенню до метаболічного синдрому, хоча спосіб особливо не обмежується цим.
Як застосовано в даному доументі, термін "комбіноване введення" повинен розумітися як такий, що стосується одночасного, індивідуального або послідовного введення. Коли введення - послідовне або індивідуальне введення, інтервал введення другого інгредієнт повинен бути таким, щоб не втрачати переважний ефект від комбінованого введення.
В ще одному аспекті, винахід передбачає застосування похідної глюкагону, або виділенного кон'югату, або композиції у виробництві лікарського засобу (або фармацевтичної композиції) для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії, або метаболічного синдрому.
Похідна глюкагону, виділенний кон'югату, композиція для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, гіпоглікемії та метаболічного синдрому є такими самими, як пояснено вище.
Далі в данному документі, винахід буде описано більш детально з посиланням на наступні приклади та експериментальні приклади. Однак, наведені нижче приклади та експериментальні приклади наводяться тільки з метою ілюстрації, та обсяг винаходу не повинен обмежуватися 60 ними будь-яким чином.
Приклад 1: Отримання клітинної лінії, яка показує відповідь САМР на глюкагон
ПЛР здійснювали з використанням ділянки, яка відповідає відкритій рамці зчитування (ОВЕ) в КДНК (Огісепе Тесппоіодієв, Іпс., ОА) гену рецептора глюкагону людини як темплата, разом з наступними прямими та зворотними праймерами (ЗЕО ІО МО: 47 та 48, відповідно), які включають кожен з ЕсоВіІ та Хпо! сайтів рестрикції.
Зокрема, ПЛР здійснювали загалом за З0 циклів з використанням наступних умов: денатурація при 95 "С протягом 60 сек, ренатурація при 55 "С протягом 60 сек та полімеризація при 68 "С протягом 30 сек. Отриманий таким чином ПЛР продукт піддавали електрофорезу в 1,0 уо-вому агарозному гелі, та з нього шляхом елюювання отримали смугу розміром 450 пар основ.
Прямий праймер (ЗЕО ІО МО: 47): 5-сдаСспАСАсСсаАсСатооССССатАСТТААС,ИСО-3'
Зворотний праймер (ЗЕО І МО: 48): 5-СТААССсаАСсТотоаасаААсАСтадастоаоо-3"
Продукт ПЛР був клонований у відомому векторі експресії тваринної клітини, хбаС/аніт, для одержання рекомбінантного вектора храС/аСаВ.
Клітинна лінія СНО 0044, культивована в середовищі ЮМЕМ/Е12 (1095 ЕВ5), була трансфікована з рекомбінантним вектором хбсС/аСОВА з використанням І іроїесіатіпеФф, та селективно культивована в селекційному середовищі, яке містить (3418 (1 мг/мл) та метотраксат (10 нМ). Одиночні клітинні лінії клонів були відібрані з них з використанням способу обмеженого розбавлення, та остаточно було вибрано клітинну лінію, яка демонструє відмінну відповідь САМР на глюкагон за способом залежним від концентрації.
Приклад 2: Синтез похідної глюкагону
Для того, щоб отримати похідні глюкагону з покращеними фізичними властивостями, амінокислотна послідовність нативного глюкагону, представлена 5ЕО ІО МО: 1 була заміщена амінокислотними залишками, які містять позитивні та негативні заряди, та, таким чином, похідні глюкагону були синтезовані, як показано в таблиці 1 нижче. Відносні активності іп міо, описані нижче, вимірювалась за способом, описаним в прикладі 4.
Таблиця 1
Амінокислотні послідовності нативного глюкагону та похідних глюкагону
Іп міо активність
ЗЕО о Пептидна послідовність Утворення (відносна
МО кільця активність щодо
ЗЕО О МО: 1, 95
ЗБЕО І
МО: З нЗОоатТЕТОУЗКМІ О5АВАОБЕМОМІ ММ 100
МЕ | НВОСТЕТ5ОУВКМ ОСОВАООРУОМ ММТ тав ов мс 7|НВОСТЕТ5ОУВКМІ ОСЕНАООРУОМІ ММТ яв ви
Ме У нВостетвОУВКМ ОЗСОАООРУОМ ММ ам ям мс У нВОстЕТВОУВКМІ ОЗСЕАООРМОМ МАТ аа вв мс 7|НВОСтЕТ5ОУВКМ О5СЕАООРМОМ ММТ ав ям
МО УВОСТЕТВОУВКУ ОЗСЕАООРУОМ ММ тая! км
МС УХОСтЕТВОУВКУ ОБСОАООРУОМИ МТ ат! ям мс | УХОСТЕТВОУВКУ ОБСОАООРУУМИМТ ат! ям
МС 47 УХостЕтВрУВКУОЕКСАКЕРУОМ ММ тая 5ЕО ІШУХОСТЕТООУЗКУТОЕКВАКЕРМОУМІММТО кільце 0000 1620| 53.
мое! 77777771 дутворюєтьсяЇ/ | | Д ГК(КБм/СК
Моз остетврувомовявАовомимт 1652
Моє Хостетврувкт рокта,
Моз хостетврувксекнАоовуммт вим
Моє хостетврувкосявАомеюмМат 192
Мой, хостетврувкт осот 0016912
Мов хостетерувковвАсовнмМм 185,
Могоз остетврувк осот во юва
Мого ХОСТЕТерОВ КЕНЕ ворюється || 099
МО:37 |ММТО утворюється
МО:40 |ММТе утворюється
ЗБЕО І
КЕ осттсоекпнлоовисиі 11551 55 пою остов 2155115 пон Ше Гола
МО:44 |ММТС ' '
В амінокислотних послідовностях, описаних в таблиці 1, амінокислота, представлена Х, є ненативною амінокислотою, аміноїзомасляною кислотою (АБ), підкресленими амінокислотними залишками є утворення лактамного кільця між бічними ланцюгами відповідних амінокислот, та "" в амінокислотній послідовності вказує на те, що ніякий амінокислотний залишок не є присутнім у відповідному положенні. Крім того, в рядках щодо утворення кільця, "-" вказує, що не відбувається ніякого утворення кільця у відповідних послідовностях.
Приклад 3: Вимірювання рі похідних глюкагону
Для вимірювання покращених фізичних властивостей похідних глюкагону, синтезованих в прикладі 2, значення рі розраховували на основі амінокислотних послідовностей, використовуючи інструмент рі/Мм/ (пир:/ехразу.огоЛооів/рі їоої|.піті; Савієїдег єї аї., 2003) на сервері ЕХРАБУ.
Як показано в таблиці 1 вище, у той час як нативний глюкагон 5ЕО ІО МО: 1 мав рі 6,8, деякі похідні глюкагону відповідно до винаходу показали значення рі в діапазоні від приблизно 4 до приблизно 6. Оскільки похідні глюкагону відповідно до винаходу мають значення рі нижче або більше, ніж у нативного глюкагону, вони можуть демонструвати покращену розчинність та більш високу стабільність в умовах нейтрального рН в порівнянні з нативним глюкагоном.
Відповідно, коли похідні глюкагону відповідно до винаходу використовуються як терапевтичний агент для лікування цільового захворювання, такого як вроджений гіперінсулінізмм, гіпоглікемія, тощо, вони можуть покращити відповідність пацієнта, та також є прийнятними для введення в комбінації з іншими агентами проти ожиріння або агентами проти діабету, та, таким чином, похідні глюкагону за винаходом можуть ефективно використовуватися як терапевтичний агент для лікування гіпоглікемії та метаболічного синдрому, включаючи ожиріння, діабет, неалкогольний стеатогепатит (МА5Н), дисліпідемію та ішемічну хворобу серця.
Приклад 4: Вимірювання сАМР активності похідних глюкагону
Активності похідних глюкагону, синтезованих в прикладі 2 вимірювались в клітинних лініях, які мають людські рецептори глюкагону, отримані в прикладі 1. Зокрема, трансфіковану клітинну лінію пересівали 3-4 рази на тиждень, аликвотували в 384-лунковий планшет в кількості б х 103
Зо клітинних ліній/лунка, та культивували протягом 24 годин. Нативний глюкагон та похідні глюкагону суспендували в буферному збалансованому сольовому розчині Хенка (НВ55), який містить 0,5 мМ 3-ізобутил-1-метилксантина (ІВМХ), 0,1 95 бичачого сироваткового альбуміну (ВБА), та 5 мМ 4-(2-гідроксіетил)-1-піперазинетансульфонової кислоти (НЕРЕБ5) з культуральними клітинами, в концентраціях 200 нМ та 1600 нМ, відповідно, безперервно піддавали 4-кратному розведенню в 10 разів, застосовуючи набір для аналізу САМР (ГАМСЕ
СсАМР 384 Кії, РежЖжіпЕІте?!), та додавали до культивованих клітин, та вимірювали їх значення флуоресценції. При вимірюванні найвище значення флуоресценції встановлювалося як 100 95 та потім значення ЕС5хо похідної глюкагону обчислювали на підставі такого ж самого та порівнювали з таким, що належать до нативного глюкагону, відповідно. Результати наведені в таблиці 1 нижче.
Приклад 5: Отримання кон'югата, який включає похідну глюкагону та Ес імуноглобуліну (ЗЕО
ІО МО: 12 або 20-Ес-ділянку імуноглобулінового кон'югату)
Для ПЕГілювання 10кДа ПЕГ, який має малеїмідну групу та альдегідну групу, відповідно, на обох кінцях (названого як "малеїмід-ПЕГ-альдегід", 10 кДа, МОНЕ, дарап) в цистеїновому залишку похідної глюкагону (5ЕО І МО: 12 або 20), похідні глюкагону та малеїмід-ПЕГ-альдегід взаємодіяли при молярному співвідношенні від 1: 1 до 5, при концентрації протеїна від З мг/мл до 10 мг/мл при низькій температурі протягом від 1 до З годин. Зокрема, реакцію проводили в середовищі, в яке додавали від 20 95 до 60 95 ізопропанолу. Після завершення реакції реагенти наносили на 5Р сефарозу НР (СЕ Пеаййсаге, О5А) для очищення похідних глюкагону моно-
ПЕГильованого на цистеїні.
Потім очищені моно- ПЕГильовані похідні глюкагону та Ес імуноглобуліну взаємодіяли при молярному співвідношенні від 1: 2 до 10, при концентрації протеїна від 10 мг/мл до 50 мг/мл при від 4 "С до 8 "С протягом від 12 годин до 18 годин. Реакцію проводили в середовищі, в яке додавали натрію ціаноборгідрид (МасСМВНз) та від 1095 до 20 95 ізопропанолу до 100 мМ кальцій-фосфатного буфера (рн 6,0). Після завершення реакції, реагенти наносили на бутил- сефарозну ЕЕ колонку для очищення (СЕ Неаййсаге, БА) та колонку очищення боишгсе ІЗО (СЕ пеайнсаге, О5А) для очищення кон'югату, який включає похідні глюкагону та Ес імуноглобуліну.
Після отримання, чистоту аналізували, застосовуючи хроматографію з оберненою фазою, гель- проникаючу хроматографію, та іонообмінну хроматографію, яка показала, що чистота становить 95 95 або вище.
Зокрема, кон'югат, в якому похідна глюкагону 5ЕО ІО МО: 12 та Ес імуноглобуліну є зв'язаними через ПЕГ, було названо як " кон'югат, який включає похідну глюкагону БЕО ІЮО МО: 12 та Ес імуноглобуліну", " кон'югат тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 12", або "похідна тривалої дії ФЕО
ІО МО: 12", та вони можуть використовуватись взаємозамінно у винаході.
Зокрема, кон'югат, в якому похідна глюкагону 5ЕО ІО МО: 20 та Ес імуноглобуліну є зв'язаними через ПЕГ, було названо як " кон'югат, який включає похідну глюкагону БЕО ІЮО МО: 20 та імуноглобулін Ес", "кон'югат тривалої дії ФЕО 10 МО: 20", або " похідна тривалої дії ФЕО 10
МО: 20", та вони можуть використовуватись взаємозамінно у винаході.
Приклад 6: Отримання кон'югату, який включає похідну ексендина-4 та Ес імуноглобуліну
ПЕГ 3,4 кДа, який має пропіональдегідну групу на обох кінцях, тобто, 3,4К ПропіонА! О (2)
ПЕГ, взаємодіяв з І уз СА ексендина-4 з використанням імідазо-ацетилексендина-4, де альфа- карбон М- термінального гістидину був видалений (СА ексендин-4, АР, О5А), та відокремлювали пік ізомеру в крайній задній частині (Губ27) між двома піками Гувє, які є досить реакційно здатними та чітко відрізняються від М- термінального ізомера. Потім проводили сполучення з використанням ПЕГильованого пептидного ізомеру.
Сполучення проводили шляхом взаємодії зазначеного вище ПЕГильованого пептида імідазо-ацетильного ексендина-4 та Ес імуноглобуліну при молярному співвідношенні 1: 8, при загальній концентрації протейна 60 мг/мл при 4 "С протягом 20 годин. Реагентом були 100 мМ
К-Р (рН 6,0) та 20 мМ 5СВ, додавали відновлюючий агент. Реагенти сполучення чистили шляхом пропускання через дві колонки очищення. Спочатку велика кількість Ес імуноглобуліну, не залученого в реакцію сполучення, видаляли з використанням 5ОШАСЕ ОО (ХК-16 мл,
Атегїзпат Віозсіепсевз). При нанесенні градієнта солі з використанням 1 М Масі при 20 мМ Тті5 (рН 7,5) в результаті відбувається негайне елюювання Ес імуноглобуліну, який має відносно
Зо слабку афінність зв'язування, після чого відразу ж відбувається елюювання Ес-екзендин-4- імуноглобуліну. Ес імуноглобуліну є видаленим до певної міри первинним очищенням, однак, повне відокремлення не досягається з допомогою іонообмінної колонки через малу різницю в афінності зв'язування між Ес імуноглобуліну та Ес екзендин-4-імуноглобуліну. Відповідно, вторинне очищення здійснювали з використанням гідрофобності двох різних матеріалів. Зразок, який пройшов первинну очистку, був зв'язаний з БОСВСЕ І5ЗО (НА16 мл, Атегепат Віозсієпсев) з використанням 20 мМ Ттіз (рН 7,5) та 1,5 М сульфату амонію, та потім був елюйований, тоді як концентрація сульфату амонію поступово знижувалася. Як результат, Ес імуноглобуліну, який має слабку афінність зв'язування з колоною НІС, елюювався першим, з подальшим елююванням зразка Ес ексендин-4-імуноглобуліну, який має сильну афінність зв'язування, із задньою частиною. Розділення було більш легко здійснювати в порівнянні з іонообмінною колоною внаслідок більшої різниці в гідрофобності.
Колонка: ФБОСВСЕ О (ХК 16 мл, Атегенат Віозсіепсев)
Швидкість потоку: 2,0 мл/хв.
Градієнт: АО -» 25 95 70 хв. В (А: 20 мМ Ттів, рН 7,5, В: Аж 1 М Масі)
Колонка: БООАСЕ І5О (НА 16 мл, Атегепат Віозсієпсев)
Швидкість потоку: 7,0 мл/хв.
Градієнт: В 100 -» 0 95 60 хв. В (А: 20 мМ Тіїз (рН 7,5), В: А «ж 1,5 М сульфата амонію (МНл)2О))
Отриманий таким чином кон'югат, в якому похідна ексендина-4 та Ес-ділянка імуноглобуліну є зв'язаними через ПЕГ, було названо як "похідна тривалої дії ексендина-4". Крім того, такий термін може взаємозамінно використовуватись з " похідною тривалої дії ексендина" у винаході.
Приклад 7: Отримання кон'югату, який включає похідну глюкагону та Ес імуноглобуліну (кон'югат 5ЕО ІО МО: 37-Ес- ділянки імуноглобуліну)
Для ПЕГилювання 10 кДа, ПЕГ, який має малеїмідну групу та альдегідну групу, відповідно, на обох кінцях (названий як "малеїмід-ПЕГ-альдегід", 10 кДа, МОРЕ, дарап) в цистеїновому залишку похідної глюкагону (ЗЕО ІО МО: 37), похідні глюкагону та малеїмід-ПЕГ-альдегід взаємодіяли при молярному співвідношенні від 1: 1 до 5, при концентрації протеїна від З мг/мл до 10 мг/мл при низькій температурі протягом від 1 до З годин. Зокрема, реакцію проводили в середовищі, в яке додавали від 20 95 до 60 95 ізопропанолу. Після завершення реакції реагенти
Зб наносили на 5Р сефарозу НР (СЕ Пеаййсаге, О5А) для очищення похідних глюкагону моно-
ПЕГильованого на цистегїні.
Потім очищені моно-ПЕГильовані похідні глюкагону та імуноглобуліну Ес взаємодіяли при молярному співвідношенні від 1: 2 до 10, при концентрації протеїна від 10 мг/мл до 50 мг/мл при 4"С до 8"С протягом від 12 годин до 18 годин. Реакцію проводили в середовищі, в яке додавали від 10 мМ до 50 мМ натрію ціаноборгідриду (МасмМВнН»з), яким є відновлюючий агент, та від 10 95 до 20 95 ізопропанолу до 100 мМ кальцієво-фосфатного буфера (рН 6,0). Після завершення реакції реагенти застосовували до бутилсефарозної ЕЕ колонки для очищення (СЕ пеайнсаге, ОА) та колонки для очищення боцгсе ІЗО (СГ Неаййнсаге, ОБА) для очищення кон'югату, який включає похідні глюкагону та Ес імуноглобуліну.
Після отримання, чистоту аналізували, застосовуючи хроматографію з оберненою фазою, гель-проникаючу хроматографію та іонообмінну хроматографію, які показали, що чистота становить 95 95 або вище.
Зокрема, кон'югат, в якому похідна глюкагону 5ЕО ІЮ МО: 37 та Ес імуноглобуліну були зв'язаними через ПЕГ, був названим як "кон'югат, який включає похідну глюкагону 5ЕО ІЮ МО: 37 та Ес імуноглобуліну", "кон'югат тривалої дії ФЕО І МО: 37", або "похідна тривалої дії ФЕО ІЮ
МО: 37", та вони можуть взаємозамінно використовуватися у винаході.
Експериментальний приклад 1: Ефект зниження маси тіла у щурів з ожирінням, викликаним дієтою з високим вмістом жира
В даному експерименті використовувались щури з ожирінням, викликаним дієтою з високим вмістом жира, які широко використовувалися як тваринні моделі ожиріння. Зокрема, гризуни, індуковані дієтою з високим вмістом жирів є найбільш часто використовуваними тваринними моделями для доклінічної оцінки ефекта агентів для лікування ожиріння у зниженні маси тіла, та моделі були індуковані наступним чином. Коли нормальних щурів або мишей годували кормом з 60 95 вмістом жиру протягом 4 тижнів (щури) або 6 місяців (миші), маса тіла щурів показала збільшення маси тіла приблизно на 600 г, та миші показали збільшення маси тіла приблизно на 55 г в порівнянні з їхньою масою тіла до годівлі, та рівень ліпідів в крові також збільшився, виявляючи при цьому стан ожиріння, як у людей. Маса тіла щурів, використовуваних у даному експериментальному прикладі, до введення становила близько 600 г. Щурів розміщували індивідуально під час експерименту та давали без обмеження доступ до води. Освітлення не здійснювали з 6:00 вечора до 6:00 ранку.
До досліджуваних груп, які отримували жир з високим вмістом жирів, належать: Група 1, з ексципієнтом, яка не включає глюкагон тривалої дії (введення: 2 мл/кг; ін'єкція один раз кожні З дні) - носій; Група 2, похідна тривалої дії ексендина з приклада 6 в дозі 3,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні З дні); Група 3, похідна тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 12 в дозі 1,6 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні З дні); Група 4, похідна тривалої дії «ЕС ІЮО МО: 12 в дозі 3,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні З дні); Група 5, похідна тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 12 в дозі 6,6 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні З дні); Група 6, похідна тривалої дії ексендина з приклада 6 в дозі 3,3 нмоль/кг ж похідна тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 12 в дозі 1,6 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні З дні, відповідно);
Група 7, похідна тривалої дії ексендина з приклада 6 в дозі 3,3 нмоль/кг кт похідна тривалої дії
ЗЕО ІО МО: 12 в дозі 3,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні З дні, відповідно); Група 8, похідна тривалої дії ексендина з приклада 6 в дозі 3,3 нмоль/кг ї похідна тривалої дії 560 ІО МО: 12 в дозі 6,6 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні З дні, відповідно); Група 9, парне харчування з групою 4; та Група 10, парне харчування з групою 7.
Експеримент припиняли на 15-ту добу, та зміни маси тіла щурів у кожній групі вимірювали з інтервалами З дні під час проходження експерименту. Після закінчення експерименту вимірювали кількість брижового жиру та масу печінки, застосовуючи аутопсії. Статистичний аналізу здійснювали для порівняння між групою з ексципієнтом (носієм) та досліджуваними групами однофакторний дисперсійний аналіз АМОМА.
В результаті вимірювання зміни маси тіла, як може бути підтверджено на Фіг. 1, групи, яким вводили або тільки похідну тривалої дії ексендина, або тільки похідну тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 12 показали зниження маси тіла на -8 95 та -7 956 до -22 95, в порівнянні з результатами до введення, тоді як в групах з комбінованим введенням похідної тривалої дії ексендина та похідної тривалої дії ФЕО ІЮ МО: 12, ефект зниження маси тіла був покращеним додатково від - 22 Чо до -35 Фо.
Крім того, коли ефект зменшення маси тіла в групі, якій вводилась тільки похідна тривалої дії 5ЕО ІО МО: 12, та групі, якій вводилась комбінація з похідної тривалої дії ексендина та похідної тривалої дії 5ЕО ІО МО: 12, порівнювали з ефектом у групі з парним годуванням, відповідно, була показана відмінність у приблизно -11 95 та приблизно -17 95, відповідно, таким чином підтверджуючи, що демонструвався ефект зменшення маси тіла при введенні тільки похідної глюкагону або комбінованого введення, шляхом дій, відмінних від раціону харчування.
Тобто, було підтверджено, що похідна тривалої дії глюкагону за винаходом може відігравати додаткову роль у зниженні маси тіла на додаток до ефекту анорексії.
Крім того, в результаті вимірювання кількості мезентеріального жиру та маси печінки, як це може бути підтверджено на фіг. 2 та 3, комбіноване введення похідної тривалої дії ексендина та похідної тривалої дії 5ЕО ІЮ МО: 12 показало значне зниження жиру в організмі, а також зниження маси печінки в порівнянні з групою, якій вводили ексципієнт. Зокрема, збільшення/зменшення маси печінки є, як правило, викликаним збільшенням/зменшенням жиру, присутнього в печінці, та зазначений вище ефект зменшення маси печінки показує ефект зменшення жиру в печінці. Відповідно, зменшення жиру в печінці може вимірюватись як спосіб вимірювання терапевтичного ефекту метаболічного синдрому, такого як ожиріння, діабет, неалкогольного стеатогепатиту, тощо.
Експериментальний приклад 2: Ефект зниження маси тіла у мишей з ожирінням, викликаним дієтою з високим вмістом жира
В даному експерименті, використовувались миші з ожирінням, викликаним високим вмістом жирів, які широко використовуються як тваринні моделі ожиріння. Маса тіла мишей перед введенням становила приблизно 55 г. Мишей розміщували по 7 мишей на кожну групу під час експерименту та давали необмежений доступ до води. Освітлення не здійснювали з 6:00 вечора до 6:00 ранку.
До досліджуваних груп, які отримували дієту з високим вмістом жирів, належать: Група 1, з ексципієнтом, яка не включає глюкагон тривалої дії (введення: 5 мл/кг; ін'єкція один раз кожні 2 дні) - носій; Група 2, похідна тривалої дії ексендина з приклада 6 в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні); Група 3, похідна тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 20 в дозі 4,4 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні); Група 4, похідна тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 20 в дозі 8,8 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні); Група 5, похідна тривалої дії ексендина з приклада 6 в дозі 4,3 нмоль/кг ж похідна тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 20 в дозі 4,4 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні); Група 6, похідна тривалої дії ексендина з приклада 6 в дозі 2,1 нмоль/кг т похідна тривалої дії 5ЕО І
МО: 20 в дозі 6,6 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні); та Група 7, похідна тривалої дії
Зо ексендина з приклада 6 в дозі 0,8 нмоль/кг ї- похідна тривалої дії 5ЕО ІЮ МО: 20 в дозі 8,0 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні).
Експеримент припиняли на 22-й день, та зміни маси тіла мишей в кожній групі вимірювали в 2-денних інтервалах під час проходження експерименту. Після припинення експерименту масу печінки мишей вимірювали після аутопсії.
В результаті вимірювання зміни маси тіла, як може бути підтверджено на Фіг. 4, кожна з груп, яким вводили тільки похідну тривалої дії 5ЕО ІО МО: 20 (8,8 нмоль/кг, ін'єкція один раз кожні 2 дні), показала зменшення маси тіла на -25 95 та -29 95, відповідно, в порівнянні з тим, що до введення. Додатково було показано, що ефект зниження маси тіла далі зростає при введенні в комбінації з похідною тривалої дії ексендина. Також було підтверджено, що комбіноване введення похідної тривалої дії ексендина та похідної тривалої дії 5ЕО І МО: 20 у співвідношенні 1:1, 1:3, та 1:10 додатково збільшувало ефект зниження маси тіла на -50 95 або вище. Крім того, ефект зниження маси тіла відповідно до співвідношення між похідною тривалої дії ексендина та похідною тривалої дії 5ЕО ІЮО МО: 20 не був значним, однак, ефект анорексії став вище разом із збільшенням відсотка похідної тривалої дії ексендина, таким чином, підтверджуючи, що похідна глюкагону тривалої дії за винаходом може відігравати додаткову роль в зниженні маси тіла, на додаток до ефекту анорексії.
Крім того, як результат вимірювання загальних рівнів холестерину в крові, як може бути підтверджено на Фіг. 5, кожна з групп, якій вводили похідну тривалої дії ексендина (4,4 нмоль/кг, ін'єкція один раз кожні 2 дні) та похідну тривалої дії 5Е0) ІЮО МО: 20 (8,8 нмоль/кг, ін'єкція один раз кожні 2 дні), показала зменшення рівнів холестерину на -35 95 та -71 95, відповідно. З викладеного вище було підтверджено, що похідна глюкагону тривалої дії за винаходом може відігравати додаткову роль в зниженні холестерину в крові, на додаток до ефекту анорексії.
Статистичний аналіз здійснювали для порівняння між групою з ексципієнтом (носієм) та досліджуваними групами, застосовуючи однофакторний дисперсійний аналіз АМОМА.
Експериментальний приклад 3: Ефект комбінованого введення похідної тривалої дії ексендина та кон'югату тривалої дії 560 10 МО: 37 у мишей з ожирінням, викликаним дієтою з високим вмістом жира
В даному експерименті, використовувались миші з ожирінням, викликаним високим вмістом жирів, які широко використовуються як тваринні моделі ожиріння. Маса тіла мишей перед бо введенням становила приблизно 55 г. Мишей розміщували по 7 мишей на кожну групу під час експерименту та давали необмежений доступ до води. Освітлення не здійснювали з 6:00 вечора до 6:00 ранку.
До досліджуваних груп, які отримували дієту з високим вмістом жирів, належать: Група 1, з ексципієнтом, яка не включає глюкагон тривалої дії (введення: 5 мл/кг; ін'єкція один раз кожні 2 дні) - носій; Група 2, ліраглутид (Момо МогаївкК) в дозі 50 нмоль/кг (ін'єкція двічі на день); Група 3, похідна тривалої дії ексендина з приклада 6 в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні); та
Група 4, похідна тривалої дії ексендина з приклада 6 в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) т похідна тривалої дії ФЕО ІО МО: 37 в дозі 2,2 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні).
Експеримент припиняли на 28-й день, та проводили внутрішньочеревний тест на толерантність до глюкози (ІРСТТ). Зміни маси тіла мишей в кожній групі вимірювали в 2-денних інтервалах під час проходження експерименту. Після закінчення експерименту, вимірювалась рівні холестерину в крові та масса печінки у мишей після аутопсії.
В результаті вимірювання зміни маси тіла, як може бути підтверджено на Фіг. б, кожна з груп, яким вводили ліраглутид (Момо Могаї5К) в дозі 50 нмоль/кг (ін'єкція два рази на день) або тільки похідну тривалої дії ексендина з приклада 6 в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні), показала зменшення маси тіла на -22 95 та -32 95 в порівнянні з носієм, відповідно, та група з комбінованим введенням похідної тривалої дії ексендина в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) ж похідної тривалої дії «ЕС ІО МО: 37 в дозі 2,2 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) показала додатково зменшення маси тіла на від -32 95 до -62 95 в порівнянні з носієм.
Ефект зниження жирової маси також додатково збільшувався в групі з комбінованим введенням похідної тривалої дії ексендина в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) ж похідної тривалої дії ФЕО ІО МО: 37 в дозі 2,2 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) на від -62 95 до -88 95 в порівнянні з группою, якій вводили тільки похідну тривалої дії ексендина в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні).
Крім того, як результат вимірювання загальних рівнів холестерину в крові, як може бути підтверджено на Фіг. 6, кожна з груп, якій вводили ліраглутид (Момо Могаї5К) в дозі 50 нмоль/кг (ін'єкція двічі на день) або тільки похідну тривалої дії ексендина в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні), показала зменшення рівнів холестерину на -40 9о та -49 95 в порівнянні з носієм, відповідно, та група з комбінованим введенням похідної тривалої дії ексендина в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) т похідної тривалої дії ФЕО ІЮО МО: 37 в дозі 2,2 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) показала додатково зменшення рівнів холестерину на від -49 95 до -70 90 в порівнянні з носієм.
В результат проведення внутрішньочеревного тесту на толерантність до глюкози (ІРСТТ), як показано на Фіг. 6, группа, якій вводили тільки похідну тривалої дії ексендина в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні), та група з комбінованим введенням похідної тривалої дії ексендина в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) я похідної тривалої дії ФЕО ІО МО: 37 в дозі 2,2 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) показала подібні ефекти -61 95 та -67 95, відповідно.
З наведених вище результатів було підтверджено, що комбіноване введення похідної тривалої дії ексендина в дозі 4,3 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) ї- похідної тривалої дії
ЗЕО ІО МО: 37 в дозі 2,2 нмоль/кг (ін'єкція один раз кожні 2 дні) показала подібний ефект щодо регулювання рівнів глюкози в крові, при цьому показуючи більш чудовий ефект по відношенню до ефектів зниження маси тіла та рівнів холестерину в крові в порівнянні з ефектом їх відповідного введення.
Експериментальний приклад 4: Ефект покращення гострої гіпоглікемії кон'югату тривалої дії
ЗЕО І МО: 37
ЗО щури голодували протягом 4 годин та їм підшкірно вводили інсулін (0,65 Од./кг), щоб викликати гіпоглікемію. Через сорок п'ять хвилин після ін'єкції, щурів підтверджували щодо їх гіпоглікемії, підшкірно ін'єкційно вводили ексципієнт (2 мл/кг; одна ін'єкція, носій), внутрішньовенно ін'єкційно вводили кон'югат тривалої дії «ЕС ІЮО МО: 37 (в концентраціях 5,16 нмоль/кг, 10,31 нмоль/кг, та 20,63 нмоль/кг, відповідно), та підшкірно ін'єкційно вводили нативний глюкагон (60 нмоль/кг), та вимірювали зміни рівнів глюкози в крові.
В результаті було підтверджено, що кон'югат тривалої дії ЕС ІО МО: 37 при всіх дозах введення зменшував гіпоглікемію у щурів 50, індуковану інсуліном, як показано на Фіг. 7. З отриманих результатів було підтверджено, що кон'югат тривалої дії 5ЕО 10 МО: 37 має терапевтичний ефект на захворювання, пов'язані з гіпоглікемією.
Експериментальний приклад 5: Ефект покращення хронічної гіпоглікемії кон'югатом тривалої дії ФЕО ІО МО: 37
Оцінку ефекту кон'югату тривалої дії 5ЕО ОО МО: 37 як терапевтичного засобу щодо бо вродженого гіперінсулінізму проводили у гризунів, яким вводили інсуліновий насос. Модель захворювання вродженого гіперінсулінізму була індукована шляхом введення інсулінового насосу гризунам (щури або миші) з допомогою хірургічного втручання. Оскільки інсулін безперервно виділяється з вставленого насоса в гризунів, індукується стійка гіпоглікемія та модель таким чином переходить в стан, подібний до вродженого гіперінсулінізму у людей.
Зокрема, 50 щури піддавалися хірургічному втручанню щодо підшкірного вставка осмотичного насоса, заповненого інсуліном. Рівні глюкози в крові щурів 50 вимірювались протягом тижня, та тих щурів, які показали персистуючу гіпоглікемію, відбирали, та їм підшкірно ін'єкційно вводили ексципієнт (носій) та кон'югат тривалої дії «60 І МО: 37 (в концентрації З нмоль/кг або б нмоль/кг) з З-денними інтервалами (030) та зміни рівнів глюкози в крові вимірювали протягом 2 тижнів, та обчислювали площу під кривою глюкози в крові (АОСвсо).
Площа під кривою (АОС) стосується загального способу кількісного визначення зміни рівня глюкози в крові під час тривалого введення лікарського засобу. В результаті, було підтверджено, що щури 50, яким вводили кон'югат тривалої дії 560 ІО МО: 37 при всіх дозах введення постійно показували значне підвищення рівнів глюкози в крові в порівнянні з тими, яким вводили ексципієнт, що не включало тривалої дії глюкагон (2 мл/кг; один раз кожні З дні, носій), які були щурами з хронічною гіпоглікемією, як показано на Фіг. 8 ("р« 0,01, р «0,001 по відношенню до щурів з хронічною гіпоглікемією, яким вводили ексципієнт, використовуючи однофакторний дисперсійний аналіз АМОМА). З отриманих результатів було підтверджено, що кон'югат тривалої дії БЕО ІОЮО МО: 37 має терапевтичного ефект на хронічну гіпоглікемію, що виникає у пацієнтів з вродженим гіперінсулінізмом.
Кваліфіковані фахівці в даній галузі визнають, що винахід може бути втіленим в інших специфічних формах, не відходячи від його духу чи суттєвих характеристик. Описані варіанти здійснення повинні розглядатися в усіх аспектах тільки як ілюстративні, а не обмежувальні.
Таким чином, обсяг винаходу вказується Формулою винаходу, яка додається, а не наведеним вище описом. Всі зміни, які належать до значення та діапазону еквівалентності Формули винаходу, повинні бути охоплені межами обсягу винаходу. «110» ХАНМІ ФАРМ. КО., ЛТД. -1205 ПОХІДНА ГЛЮКАГОНУ, її КОН'ЮГАТ, КОМПОЗИЦІЯ ЯКА Її МІСТИТЬ, ТА Її
ТЕРАПЕВТИЧНЕ ЗАСТОСУВАННЯ
«130» ОРА17115 -1505 КА 10-2016-0081995 -1515» 2016-06-29 -1505 КА 10-2016-0182982 -1515 2016-12-29 -1505 КА 10-2017-0069217 -1515 2017-06-02 -1605 50 «170» КоРаїепіп 3.0 «21051 «2115 29 «2125» РАТ «213» пото з5зарієепв5 «4005 1
Нів Баг снт СПУ Тит ТОог Бе Ак Ту Зег і ув тугі ец дер Заг 4 5 10 18 а Аго Ав І Ар Не ча СМ То бе МЕ Ап Ту «21052 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «40052
Ніє Баг бій Су Тег Ре Тік Зег Авр Туг бегіув Туг Це Аво Сув 1 5 10 15 дво Ага Ав Оп Ав бле УВІ ЗВ тт ец МеєАви ТЕ а 25 «2105 З «2115» 29 «212» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «4005 З
Нв бебі СУ Тр еве Тіт Бет Авр Тут Бегі ув Тут Гви Авр був
З 5 30 15
Св Ага Ада п зро еве Уві ЗА то бе Ме Аза те ей ша «2105» 4 «2115» 29 «212» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «400» 4 ів бек Сп Ну ТЕ РНе тигБегАзо тугбегі у туги Аво БЗег 1 в 18 18
Су Аво Аа От Ав Рне Уві іп Тгрбен Ме Авп тт о «В «2105 5 «2115» 29 «212» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «4005 5
Нв Зегоій СНУ Твсеве Ті Баг Азо ТУгбегіув ТУс ви Або ще: 1 5 То ТВ
Су СО ЖМа сна Авр Рле ма Са тріо Ме Ави ТБ 20 25 «21056 «2115» 29
«212» РВТ 213» Штучна послідовність «2020» «223» похідна глюкагону «400» 6 нів бе Оп СНУ Ті бе тре Ав Гук бегіуз Тут без Або Бег 1 5 о 5
Сув Зв Аа Авр Або Ре Уві бій тр во МегАви тв 28 5 -2105 7 «2115 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «2020» «223» похідна глюкагону «4005» 7
Тугеег Са Зі ТЕ Ре Тег Берг Аво Тут Зег був Туг іви АвроБег 1 З ча 15 був З Ав Ар Авр Ре Уві ій Ттр во МебАви Те а а «2105» 8 «2115 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «2020» «223» похідна глюкагону «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «400» 8
ТугХва Зіп у Тиг РБе Те Бе Авр Туг бБег ує Туг і ец Авр Баг
З 5 Кто: 15
Су Авр Ав біп Або не Ма! стіп Тр бен йеАва ТАг «210» 9 «2115 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «2020» «223» похідна глюкагону «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр)
«400» 9
Ту Хаа сі у Ти ве Тр шегАвр Ту? Бегсув Тугіси вар зе ї З КІ 15
Сув'Аєу дів іп Азр впеЄ У У Тгріви бе Авп ТВ а М «-2105 10 «2115 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «2020» «223» похідна глюкагону «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «400» 10
ТуєгХва іп У Тг Ре тег бог Аво туго кує ТУугец Аво ког 1 5 19 15
Сув Азр Ав Авр Аа РНе уві Уві Ттр ен Пе деп ТА о 85 «-2105 11 «2115 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «2020» «223» похідна глюкагону «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «223» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (АБ) «4005 11
Ту Ха іп сну Пе Різ Тиг Заг Аяр тус егіув Ту ьо Аве ОО і 5 18 15 зу сук Аа ув с не уві сцп три МегаАза ТНЕ за 85 «-2105 12 «-2115 30 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «2020» «223» похідна глюкагону «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «223» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (АБ) «2020»
«221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 12
ТукрхХва сіл су Теле ТВі Бег А УС Баг і ув Тут Сей Ав 4 с та 15
Кук АВ АВ у С ре У ОЗ пріо МегАва Пе Су в о р: за «210513 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «223» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (АБ) «4005 13
ТугХаз іп су ТВі Рне Тіт баг Авр Тут Заг Суз Тут Гб ец Акр Зег 1 5 19 18
Ага Ага Ада іп Ар Ре Уві іп Тр бе Ме Ав Тег «2105» 14 «2115» 29 20 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» 25 «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «400» 14
ТуєХав Со Оу ТВ Рне Тег бог Аво Тук бекіув Тут Гей Ар Су 1 й 10 15 ух Ага Ача уз СТИ па мя Ми Тр Гео Ме АВи ТЕ що У5
Зо «210515 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА
«222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «4005» 15
Те Хва сі Оу Пере тн Зег Авр тут Бегіув Тук Це Су с ї 5 то 15 їх Аг лів сів Авр пе Уві маг тт сен МеєАяпй Пк а 5 «210516 «2115» 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «400» 16
ТусХаа Сіп Су г ейпе ТВг Заг Аво ТУ бог ув Тут ви яр Суз 1 5 ю 15
АтрАг АВ На УВІ Не Уві ет еи Ме Аг Аг 23 25 «210517 «2115» 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «400» 17
ТугХаз Сів СЛУ ТЕГ Ре Ту Зег Авр Туг Бегкув Туг с еи Авр був 1 З т 15
МагАго Ав З Ази на маса тр бе Меб Аг НЕ що 25 «210518
Зо «2115» 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА
«222» (2) «223» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (АБ) «4005 18
Ту Хва бій СУ Пе ве Тр Зег Авр Туг Баг уз Тут беу Авр Бег 1 5 10 15
Агу Ага Аа Сув Авр Рпе Ага мезо Тр Гео Ме Ав т 20 25 «2105 19 «2115 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «4005 19
ТУ Хаа сів ону Твебне Тиг Бег Авр Туг Бег був Туг Се бук й 1 в 15 15
Гу Аг Ав уз Ош Рне ма СНИ Ттр це МеБ Ав Тег м о «2105» 20 «2115 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 20
ТугХаз ла Су Три бе Те Бег Ар ТугЗег ув Тут Гец Авр Св 1 5 ча 15
Су Ага Аа Гуз СТІ Ре Уві Спи Турів Ме Авп ТЕ о 25
«2105 21 «2115» 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 21
ТЯ хва Сип му Тех Рае тег ек АЗИ туп Заг ьув туге) Аво СНИ 1 в то 15
Гук Сув Ада ув Си Єна ін Тр ей Ме Ава Тег «2105» 22 «2115» 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20)
Зо «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 22
Ти Хва ів Су ТіК Єне тт Бе Ар Туг Бег цу Туг і ес Аврв СЮ 1 5 10 т
Гуз Ага був ув Си Рпе ма! са Прі МесАва ТР 20 25 «210» 23 «2115» 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20)
«223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «4005» 23
ТУ Хав сип сву Те евпе ТВ Зег Або Гук БегКуз Туг був Авр и 1 5 то їб ув Ата Аа ув с твпе Уа Тер Ге Мер Аа ТНх 50 аа «210» 24 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 24
ТугХав М Су Терно Тнг Бег Аяр Тут бег і ух Суз Цец Авр іч 1 5 10 15
Ку Аг АВ був СПО Ре уві іп трі ец Меї Ав ТВг о 25 «2105 25 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр)
Зо «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «4005 25
ТУ Хаа спо Су тт РНе Тезе Азо уггі ув Туга Авро ! 1 5 19 їй
Був Ага Ав ув був ЄВе Ма! і тт ву Ме Ази Ту
ЗБ 2 25 «2105» 26 «2115» 29
«2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «223» Хаа є аміноізомасляною кислотою (АБ) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «4005» 26
ТпрХвасів Су Три еве У г Аво Па шег був Туг Гей Аврєно 1 а то 15
Су А Аа кув Ав евВе Марс то їей Ме Аа тиг 25 -5 «2105» 27 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 27 тя Ха Зі у ПЕ ве уві Бег Авр Туп Зегіув туги Аврсниа
З 5 1 15
Сув Ат Ав Сув Ар БнНе Марс Тр іє МебАви ТАНЕ зо 20 25 «210» 28 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце
«400» 28 тгоХаз Сп слу Прп Уві Зег Авр Туг бБег був Туг Цен Ар с
З 5 10 15
Суз Аа Аа ув Аве ба Мао Прави Ме Ави тн 20 28 «2105» 29 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «2215» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «223» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (АБ) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 29
Ти Хва сп Су Тнг пе Тнг Бег Ар Туг Зегіув су ек Ааріни
Я 5 та 15
АпрАгв АВ ув Азр Мне Уві си Тр еи МесАвА тн о т -2105» 30 «2115 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220»
Зо «2215» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «4005» 30
Те Хан са у Ті ре Тег бегАвр гуг Зегі ув був ви Авр ів 1 В 15 15
РО Аг Ав ув Ар пе уві ій Ттріви МегАвА ТНг о 25 -2105 31 «2115» 29 «2125» РАТ 5О0
213» Штучна послідовність «223» похідна глюкагону «220» «2215» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «2215» ІНША ОЗНАКА «222» (17)...(21) «223» амінокислоти в положеннях 17 та 21 утворюють кільце «4005 31
ТукХах ій Су Тіт Рпе ТіК ЗегбАвр туї Зег уз Туг і ес Авросбув 1 5 т 15
Гуз Агу Ав ув БЮ РНе Уві Сів тр Гео Ме Аво Тв 20 85 «2105 32 «2115» 28 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (15)...(19) «223» амінокислоти в положеннях 15 та 19 утворюють кільце «4005 32 дегонп Оу тн пе Те Заг Ар ТУг Зегіув Тугі ви Азр бі Сук 1 В 16 15
Аг Ав уз СО ЕН Ма Ой тові ей МегАва ТЕ а а
З 2 -2105» 33 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність
Зо «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «223» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (АБ) «4005» 33
Туг жав со іх Те Ре їг бЗег Авор Туг баг ув Тугі ви Авр Бег
З 5 10 15
Аа та яма а Аво вела ов Три Ме Ави ГВЕ що 5
«210» 34 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 34
Терр Хва іп Зіу Тіт Ре Трг Баг Авр Туг Вег уз Туг був Авр Су і 5 ю 15
Аг Агар Лія ув СІМ ле Уві Спо Прівео МесАят ТВг 75 2105 35 «2115» 29 20 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА
Зо «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «4005» 35
ТугХва бій СУ Тв Ре Тв баг Або Ту бегі ув Туг Суз Авр ОМ 1 5 10 15
Ага Аго АВ Гуз СЮ ре Має Тв ер МебАзи Тг 20 25 -2105» 36 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220»
«221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 36
ТугХва бій Су ТАг Ре Тиг Баг Авр Сув Баг ув Туг ви Ар Б 1 В Не 15
Ага Аго Ав ув Сію ЄНе Май Сів Тер бе Ме! Ав тн 20 25 -2105 37 «2115 30 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «4005» 37
Ти Хав І У Пе Ве Тег бБегАво Гу Зегі уз Туг бен Ав ОВ
З 5 15 15
Ага Аго Аз ув СНО Ре маг бів Тер беу Ме Ав Трг бує ща 25 ЗО -2105» 38 «2115 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону
Зо «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 38
ТугХавізв Су Тіт впе був нн Аяр Туг щег ув Туг сей Ар СНИ 1 5 10 15
Ага Аг Аа Був Си пе уро То гео МебАви Тг 2105» 39 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «2215» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «2215» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 39
Тут Хазв Сів чу лі РНа Уві Бег Аве Суз Бег ув Тут во Аар НИ
З 5 та ТЕ
АгО Ат АВ ув Акр Ве маг си Тр оеи Ме Аа Тве
ЖО 5 «210» 40 «2115» 30 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «2215» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА
Зо «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 40
Туг Хва (зп (ЗУ ТО бве ма Зеє Ар Тут Бек Гує Туг і ви Авр Си 1 5 10 15 ма Аг Аа і ув Ар бе мара трів Ме Ат Тк ССув
О У З
«2105» 41 «2115» 29 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220»
«223» похідна глюкагону «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (16)...(20) «223» амінокислоти в положеннях 16 та 20 утворюють кільце «400» 41 тТуг Хан ов СМ Ті Ре Су Бег Авр о ТугЗесгуз Тук Гео Ар оЮ 4 5 10 18
Ага Ага Аа ув Авро Рпе Уві св Тр во МегАва ТНг 20 з «2105» 42 «2115» 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «400» 42
ТугХав сій Су Те Бе сув бе лАер Ту бегіуч Туг сей Авр'Зег і 5 ча 15
Ага ймта Ав іп Ар рве ув с Тв ви Ме Ав ТВе
КО 25 : «210» 43 «2115» 29 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону
Зо «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «400» 43
ТугХав іп Сіу Твг не ТНг Бег Авр Сув бегіув Туг ви Авр Бег 1 в 18 18
Ага й Ав сій Азо рве УВО то ви Ме Аза Тег 20 5 «210» 44 «2115» 30 «212» РВТ
213» Штучна послідовність «223» похідна глюкагону «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «400» 44
ТуУгХза Сіп Му Тег ле Тиг баг Авр Туг Бегі ув Гуг сен Ар ет 1 5 18 15
Ага Ага Ада ів Ар бле Маг то Сец Меб Аа ТЕ Су о 25 3 «-2105» 45 «-2115 30 «212» РВТ 213» Штучна послідовність «2020» «223» похідна глюкагону «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (1) «223» Хаа є Фгістидином, дезаміно-гістидилом, М-диметил-гістидилом, бета-гідрокси імідазопропіонілом, 4-імідазоацетилом, бета-карбокси імідазопропіонілом, триптофаном, або тирзином, або є відсутнім «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «223» Хаа є альфа-метил-глутаміновою кислотою, аміноїзомасляною кислотою (АБ), О- аланіном, гліцином, Заг (М-метилгліцином), серином, або О-серином «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (17) «223» Хаа є треоніном, валіном, або цистеїном «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «гео» (10) «223» Хаа є тирзином або цистеїном «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (12) «223» Хаа є лізином або цистеїном «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (13) «223» Хаа є тирзином або цистеїном «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (14) «223» Хаа є лейцином або цистеїном «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (15) «223» Хаа є аспарагіновою кислотою, глутаміновою кислотою, або цистеїном «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «го» (16)
«223» Хаа є глутаміновою кислотою, аспарагіновою кислотою, серином, альфа-метил- глутаміновою кислотою, або цистеїном, або є відсутнім; «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (17) «223» Хаа є аспарагіновою кислотою, глутаміном, глутаміновою кислотою, лізином, аргініном, серином, цистеїном, або валіном, або є відсутнім «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (18) «223» Хаа є аланіном, аспарагіновою кислотою, глутаміновою кислотою, аргініном, валіном, або цистеїном, або є відсутнім «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (19) «223» Хаа є аланіном, аргініном, серином, валіном, або цистеїном, або є відсутнім «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (20) «223» Хаа є лізином, гістидином, глутаміном, аспарагіновою кислотою, лізином, аргініном, альфа-метил-глутаміновою кислотою, або цистеїном, або є відсутнім «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (21) «223» Хаа є аспарагіновою кислотою, глутаміновою кислотою, лейцином, валіном, або цистеїном, або є відсутнім «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (23)
Зо «223» Хаа є ізолейцином, валіном, або аргініном, або є відсутнім «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (24) «223» Хаа є валіном, аргініном, аланіном, цистеїном, глутаміновою кислотою, лізином, глутаміном, альфа-метил-глутаміновою кислотою, або лейцином, або є відсутнім; «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (27) «223» Хаа є ізолейцином, валіном, аланіном, лізином, метіоніном, глутаміном, або аргініном, або є відсутнім «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (28) «223» Хаа є глутаміном, лізином, аспарагіном, або аргініном, або є відсутнім «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (29) «223» Хаа є лізином, аланіном, гліцином, або треоніном, або є відсутнім «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (30) «223» Хаа є цистеїном, або є відсутнім «400» 45
Хва Хав іп Сіу Тіт Ре Хаа Зег Авр Хаа Бег Хав хав Хва Хаа Хва
З 5 10 15
Хва Хаа Хаз Ха Хаа Єпе Хаа Хаа Тріви Хва Хав Хва Хав
КІ 25 30 «210» 46 «2115» 30 «2125» РАТ 213» Штучна послідовність «220» «223» похідна глюкагону «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «г2З» Хаа є аміноїзомасляною кислотою (Аїр) «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (17) «223» Хаа є треоніном, валіном, або цистеїном «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (10) «223» Хаа є тирзином або цистеїном «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (12) «223» Хаа є лізином або цистеїном «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (15) «223» Хаа є аспарагіновою кислотою або цистеїном «220» «221» ІНША ОЗНАКА
Зо «222» (16) «223» Хаа є глутаміновою кислотою або серином «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (17) «223» Хаа є лізином або аргініном «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (20) «223» Хаа є глутаміном або лізином «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (21) «223» Хаа є аспарагіновою кислотою або глутаміновою кислотою «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (24) «223» Хаа є валіном або глютаміном «220» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (30) «223» Хаа є цистеїном або є відсутнім
«400» 46
ТУ Хаа св у ТВебпе Хав Бе Ар Хаа ем Ха їУусівц Хав каз з 5 10 те
Хва чо Ма хХаз Хав ре Уві хХав Троец МЕС Аза Тік хав 2 5 ЗО «-2105» 47 «-2115 34 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» прямий праймер «400» 47 садсдасаєєс зассцієссє ссоіаснаа дос За «-210» А8 «-2115 32 «212» ДНК 213» Штучна послідовність «2020» «223» зворотний праймер «400» 48 сюкзассдасі сісодудаво воюаасюо сс 32 «-210» 49 «2115 29 «212» РВАТ 213» Штучна послідовність «2020» «223» похідна глюкагону «2020» «2215» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «223» Хаа є аміноїзомасляною кислотою «400» 49
ТугХаа іп Су Тр Рне Таг Заг Авр Туг бек Суб Туг ви Авр ів
Я 5 10 15
Гу Ату Ав і ув Со Бра уві ів то сви МебАяа ТЕ зо о а «2105 50 «2115 29 «212» РВАТ 213» Штучна послідовність «2020» «223» похідна глюкагону «2020» «221» ІНША ОЗНАКА «222» (2) «223» Хаа є аміноїзомасляною кислотою «4005» 50
ТУ Хва зів сих Тег еве Трг Заг Авр Тут бБегіує Туг Ге Сув'Зій 1 5 10 То ув Аг Ав Сп Авро Єпае уві Сп го бе) Ме Ави Тег а ай

Claims (48)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Застосування фармацевтичної композиції для профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, яка містить пептид, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО5: 20, 22-24, 27, 29, 33, 37, 38 та 44.
2. Застосування за п. 1, де пептид має значення ізоелектричної точки (рі), яке відрізняється від нативного глюкагону (6,8).
3. Застосування за п. 1, де в пептиді амінокислоти в положеннях 16 і 20 утворюють кільце.
4. Застосування за п. 1, де С-кінець пептиду є амідованим.
5. Застосування за п. 1, де С-кінець пептиду є немодифікованим.
б. Застосування за п. 1, де пептид є похідним нативного глюкагону, здатним активувати рецептор глюкагону.
7. Застосування за п. 1, де пептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО5: 20, 22, 33, 37 та 38.
8. Застосування за п. 1, де пептид містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 37.
9. Застосування за будь-яким одним з пп. 1-8, де пептид представлений у вигляді кон'югата тривалої дії, в якому фрагмент біосумісного матеріалу зв'язано з пептидним фрагментом, де фрагмент біосумісного матеріалу вибрано з групи, що складається з полімеру, жирної кислоти, холестерину, альбуміну та його фрагмента, альбумінзв'язуючого матеріалу, полімеру повторюваних одиниць конкретної амінокислотної послідовності, антитіла, фрагмента антитіла, ЕсАп-зв'язуючого матеріалу, / у/мо сполучної тканини або її похідної, нуклеотиду, фібронектину, трансферину, сахариду, гепарину та еластину.
10. Застосування за п. 9, де полімер вибрано з групи, що складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти, олігонуклеотиду та їх комбінації.
11. Застосування за п. 9, де ЕсКп-зв'язуючим матеріалом є поліпептид, що містить Ес-ділянку імуноглобуліну.
12. Застосування за п. 9, де пептидний фрагмент та фрагмент біосумісного матеріалу зв'язано один з одним через лінкер.
13. Застосування за п. 12, де лінкер вибрано з групи, що складається з пептиду, жирної кислоти, сахариду, полімеру, низькомолекулярної сполуки, нуклеотиду та їх комбінації.
14. Застосування за п. 13, де полімер вибрано з групи, що складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти, олігонуклеотиду та їх комбінації.
15. Застосування за п. 12, де лінкером є поліетиленгліколь.
16. Застосування за п. 11, де Ес-ділянка імуноглобуліну є неглікозильованою.
17. Застосування за п.11, де Ес-ділянку імуноглобуліну вибрано з групи, що складається з: (а) СНІ домену, СН2 домену, СНЗ домену та СНА домену; (Б) СНІ домену та СН2 домену; (с) СНІ домену та СНЗ домену; (4) СН2 домену та СНЗ домену; (є) комбінації між одним або щонайменше двома доменами з СНІ домену, СН2 домену, СНЗ домену та СНА домену, та шарнірною ділянкою імуноглобуліну або частиною шарнірної ділянки; та () димеру між кожним доменом константної ділянки важкого ланцюга та константної ділянки легкого ланцюга.
18. Застосування за п. 11, де поліпептид, що містить Ес-ділянку імуноглобуліну, є у вигляді димеру.
19. Застосування за п. 11, де Ес-ділянка імуноглобуліну є похідним нативного Ес, в якому ділянка, здатна утворювати дисульфідний зв'язок, є видаленою, похідним нативного Ес, в якому частина амінокислот (и) на М-кінці є видаленою, похідним нативного Ес, в якому метіоніновий залишок є доданим на М-кінець, похідним нативного Ес, в якому сайт зв'язування комплемента видалений, або похідним нативного с, в якому сайт антитілозалежної клітинно- опосередкованої цитотоксичності (АОСС) видалений.
20. Застосування за п. 11, де Ес-ділянку імуноглобуліну отримано з імуноглобуліну, вибраного з групи, що складається з Ідс, ІдА, дО, ЧЕ та ІдМ.
21. Застосування за п. 20, де Ес-ділянка імуноглобуліну є Ід4 Ес ділянкою.
22. Застосування за п. 11, де Ес-ділянка імуноглобуліну є неглікозильованою Ес ділянкою, отриманою з людського Ідс4.
23. Застосування за п. 12, де лінкер зв'язано з цистеїновим залишком пептиду.
24. Застосування за п. 12, де лінкер відповідним чином зв'язано з пептгидним фрагментом та фрагментом біосумісного матеріалу через ковалентні зв'язки, які відповідно утворено взаємодією одного кінця лінкера з аміногрупою або тіольною групою фрагмента біосумісного матеріалу, та взаємодією іншого кінця лінкера з аміногрупою або тіольною групою пептидного фрагмента.
25. Виділений пептид, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮО МО5: 20, 22-24, 27, 29, 33, 37, 38 та 44, де пептид є похідним нативного глюкагону, здатним до активації рецептора глюкагону.
26. Пептид за п. 25, де в пептиді амінокислоти в положеннях1б та 20 утворюють лактамне кільце.
27. Пептид за п. 25, де С-кінець пептиду амідований.
28. Пептид за п. 25, де С-кінець пептиду немодифікований.
29. Пептид за п. 25, де пептид містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО5: 20, 22, 33, 37 та 38.
30. Виділений кон'югат, що містить пептидний фрагмент та фрагмент біосумісного матеріалу, Зо зв'язаний з пептидним фрагментом, причому пептидний фрагмент є такою самою послідовністю, як і амінокислотна послідовність, вибрана з групи, що містить ЗЕО ІЮ МО5: 20-24, 27,29, 33, 37, 38 та 44 або послідовність, що її включає, де пептид є похідним нативного глюкагону, здатним до активації рецептора глюкагону та: де фрагмент біосумісного матеріалу вибрано з групи, що складається з полімеру, жирної кислоти, холестерину, альбуміну та його фрагмента, альбумінзв'язуючого матеріалу, полімеру повторюваних одиниць конкретної амінокислотної послідовності, антитіла, фрагмента антитіла, ЕсАп-зв'язуючого матеріалу, / у/мо сполучної тканини або її похідної, нуклеотиду, фібронектину, трансферину, сахариду, гепарину та еластину.
31. Виділений кон'югат за п. 30, в якому полімер вибрано з групи, що складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти, олігонуклеотиду та їх комбінації.
32. Виділений кон'югат за п. 30, в якому ЕсКп-зв'язуючим матеріалом є поліпептид, що містить Ес-ділянку імуноглобуліну.
33. Виділений кон'югат за п. 30, в якому пептидний фрагмент та фрагмент біосумісного матеріалу ковалентно зв'язано один з одним через лінкер.
34. Виділений кон'югат за п. 33, в якому лінкер вибрано з групи, що складається з пептиду, жирної кислоти, сахариду, полімеру, низькомолекулярної сполуки, нуклеотиду та їх комбінації.
35. Виділений кон'югат за п. 34, в якому полімер вибрано з групи, що складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, співполімеру етиленгліколь-пропіленгліколь, поліоксіетильованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілетилового етеру, здатного до біорозкладання полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти, олігонуклеотиду та їх комбінації.
36. Застосування фармацевтичної композиції для профілактики або лікування гіпоглікемії, що містить: () виділений пептид за будь-яким одним з пп. 25-29 або виділений кон'югат за будь-яким одним з пп. 30-35; та (ї) фармацевтично прийнятний ексципієнт.
37. Застосування фармацевтичної композиції для профілактики або лікування метаболічного синдрому, що містить: () виділений пептид за будь-яким одним з пп. 25-29 або виділений кон'югат за будь-яким одним з пп. 30-35; та (ії) фармацевтично прийнятний ексципієнт.
38. Застосування за п. 37, де фармацевтична композиція додатково містить щонайменше одну сполуку або матеріал, що має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому.
39. Застосування за п. 37, де фармацевтичну композицію вводять в комбінації з щонайменше однією сполукою або матеріалом, що має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому.
40. Застосування за п. 38 або 39, де сполуку або матеріал, що має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому, вибрано з групи, що складається з інсулінотропного пептиду, глюкагонподібного пептида-ї1 (С Р-1) агоніста рецептора, агоніста рецептора лептину, інгібітора дипептидилпептидази-ЇМ (ОРР-ІМ), антагоніста рецептора У5, антагоніста рецептора меланін- концентруючого гормону (МУН), агоніста рецептора У2/4, агоніста рецептора меланокортину 3/4 (МС 3/4), інгібітора шлункової/панкреатичної ліпази, агоніста 5-гідрокситриптамінового рецептора 2С (5НТ2С, сполученого с-протеїну), агоніста рецептора ВЗА, агоніста рецептора аміліну, антагоніста греліну, антагоніста рецептора греліну, агоніста альфа-рецептора, активованого проліфератором пероксисоми (РРАКОа), агоніста дельта-рецептора, активованого проліфератором пероксисоми (РРАКб), агоніста фарнезоїдного Х-рецептора (ЕХК), інгібітора карбоксилази ацетил-СоОА, пептиду УУ, холецистокініну (ССК), ксенину, гліцентину, обестатину, секретину, несфатину, інсуліну та глюкозозалежного інсулінотропного пептиду (СР).
41. Застосування за п. 37, де метаболічний синдром вибрано з групи, що складається з порушеної толерантності до глюкози, гіперхолестеринемії, дисліпідемії, ожиріння, діабету, гіпертонії, неалкогольного стеатогепатиту (МАН), атеросклерозу, викликаного дисліпідемією, атеросклерозу, артеріосклерозу, ішемічної хвороби серця та інсульту.
42. Застосування за п. 37, де фармацевтична композиція містить: (ї) кон'югат, який містить пептидний фрагмент, що містить амінокислотну послідовність зЕО ІЮ МО: 37, та фрагмент біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаний з пептидним фрагментом; та Зо (і) кон'югат, який містить імідазо-ацетильний фрагмент ексендина-4, де а-карбон 1-ої амінокислоти ексендина-4 (яка є гістидином) видалено, та фрагмент біосумісного матеріалу, ковалентно зв'язаний з імідазо-ацетильним фрагментом ексендина-4.
43. Застосування за п. 42, де пептидний фрагмент, що містить амінокислотну послідовність БЗЕО ІО МО: 37, та імідазо-ацетильний фрагмент ексендина-4 є відповідним чином зв'язаними з їх відповідними фрагментами біосумісного матеріалу через лінкер.
44. Спосіб профілактики або лікування вродженого гіперінсулінізму, що полягає у введенні фармацевтичної композиції, що містить пептид, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МОБ: 20, 22-24, 27, 29, 33, 37, 38 та 44, суб'єкту, який цього потребує.
45. Спосіб профілактики або лікування гіпоглікемії, який полягає у введенні виділеного пептиду за будь-яким одним з пп. 25-29 або виділеного кон'югата за будь-яким одним з пп. 30-35 суб'єкту, який цього потребує.
46. Спосіб профілактики або лікування метаболічного синдрому, що полягає у введенні виділеного пептиду за будь-яким одним з пп. 25-29 або виділеного кон'югата за будь-яким одним з пп. 30-35 суб'єкту, який цього потребує.
47. Спосіб за п. 46, який додатково полягає у введенні щонайменше однієї сполуки або матеріалу, що має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому.
48. Спосіб за п. 47, який полягає у одночасному індивідуальному або послідовному введенні виділеного пептиду або виділеного кон'югата та щонайменше однієї сполуки або матеріалу, що має терапевтичну активність щодо метаболічного синдрому.
ско и ТА - вся Я Дроуехее сти зак кккжгее п Ж 7 м Се кт я лих я ОЗ ВДТ "ще бе Ж з рю. їх в ! Час ні
"як. ЕКЕЧУНЕНЕ як. Похідна привне ві: вховнаннан і ж нмонь кв "Як Похідна тривалої дії ЗБОЮ МО: ТУ б него т Похідна тома ді БО МОХ 15 С нуль че Дохідна тривало ДИ ЯВНО МО БЕ ЦБ наисльи і Пехіна травної де вковнамне Я З наомвьки я Тов тран Ді БО о МКК ТА 6 катки те Похідна тивної Де ексенденаня СЯ наолеьк я Пекіна трнаевло ай ВЕ ОО Те вель й Похідна трива дії вхсвндннай (С наольки є Пехідна пенал ДЛ а НЕ ОК За б кави
«в. Парне харчування (з прунсою, якій ввсдини гокідну тривалої ДЯ ЯКО ТО МОЄ У СКЗ нмоввО «Я Нарне каредененькя (з пров, якій вноджих похідну травам дій еевндинан 3,3 змольну та подану тривало ай ЗЕ МО ТА нмольи
Фіг.
їй | | ї де : Я Е 1 т 5 ВГ Щі я ОТ ня КЕ УК ВМ ЖЖ сю І Я Ф Ел щі г Мо ков й ЕТ ЖК и я 5 с Ек ЕК м шніх ЩО Евсуклієнт ССЗ Похідна тривалої дії вхевядинач 3 ниолько БУ Похідна триваної ді, ЗЕ НО: 5 Мб моль БО Похідна тривалої дії ВЕН МОХ 5 Я несли КУ Похідна тривалої дії ЗБОЮ МО: 19 (6 ямоньке ЕІ Нохідня тринанеї дії ехоендинан 3 нави ж Похідна трави ді ЕК У В наль Пекіна триванея ді екон 3 наольки Пажідна тран дя ЯКО ВАМ: 19 333 нагальної Похідна тривало: ді ексендинач (КЗ нмольнЕ я» Покідна триваної ді ЯеОТ КО: ТЕ Во нмельт БУХ Парне харчування с пилою, кН: вади чехдну триванаї ді ЗЕСНО МО: 123,3 воль Б Парне харчування З групою, якій вводив похідну триваної ді ековендина-я (З, наль та похідну твнваиві ДІ ЯЕОЮ МО ТЗ ямоньки
Фіг. 2
. п т ше то т ЕЕ ІЕЕ 1 що «же ен, о й я ЗЕ 4 С м в з Ж Я ТИ І СИ нок ОК о ва Б го Ії ЕЕ: м ж ВЕ 3-4 БЕ КК 5 фо ТО ше че й 3 М БО Ексцитені СУ Похідна триваної діє екенйнняня ЕХ наль Б Похідна триваної Ді ЗЕСНО МО: 421,6 нмовьки БО Похідна трислей дії ВЕСНОЮ НО: 19 3,3 нмомеаої ЩО Похідна траваної до БЕОНЮ МО: 15 (6,6 нео ЕХ Похідна тривалої дії вкевндинаЯ (3,3 кмельшкк Похідна тривалої дій ЗО Ю МО: 15 16 воль ОО Похідна тривалої дії висендиная З нмолько Похідна привал ДЕ ЗЕ ОС 15 33 воль Похідна тривалої дії ексенджначі (53 нмольйт я Похідна трат де ВЕСНОЮ ВО: ТЕ Об нмольни Парна харчування (з грумок, кім внодини похідну трива дл ЯСНО МО: 5 3,3 міголько ЇХ Парне харчування (З групою, якій вводмин похідну трявапо; Ді зковндинамя вх нмолькг та похідну тривалої дії ЗЕО НО МО: 12 3 ямальн
Фіг. З
Не Е І ! - 0 Он вва Ас у ЕЕ є Ж ш. вот вх хо фара шо Я Мен ЧЕ с Ще» їх г у о Бе ЧИН: хх -Ю4 от-я е | Шк. щеоВНЯ дн рентзотнроефрітонретокретонтортесонре 5 02:21:68 ЮМИвБниню Час дні ек Ексвнвієнт «ее Похідна триканої дії ексендинач 445 ямовькг "ан Похідна триваної дії БОЮ МО 20 Я нковвікк) за Дохідна понвалої дії ЗЕСИО МОХ 20 18.8 вольта "а Похідна триваної дії ексендина- (а нимольжо я Похідна тривалої дії ЗЕО ОО МОХ 20 (44 нюенль ко ж. Похідна тривалої дії ексендина о наольйг Похідна тривалої дії ЗЕСНО МО: Я (86 яжольне)
-в.. Похідна трнаалої дії ексендина я (0,8 кольо ж Пехідна тривалої ДЕ ЗО ЛЮ МО: 208,0 ниолько)
Фіг. 4
00 ОЗ одушяиюатяканиниткитжкя Ко в Ко о. МО йно г В Е шк 3 КО 5 З Я же ЩІ СОБКО МИ Я б вий ша. БК У ше БО КО Ву Еш К ЕС в нн не ЖК Скоунвікне ТЕуХХдва тричі щої вксенджняя СОУ нене Пекіжна зриравої ві ВЕС МКК 2 Я назхлньіви; ЖК Пекіна поквавої З БЕ КО: 298.Е нем Б Похідні Тризвї зкч емсамдюнані СБУ ники узкідна трива ду БЕМ ЕКО: Зб5 А немае ТД тренд ссання в ННЯ Тоохідня тривжня ді КО ШО: 046,6 нави ЩЕ Певажна тваеВА я ВБЕЯНДЕНІЯ Я 5 нак АВ я Пежідна триваної З; ЗВО ЦО МО: 0 5 ккон
Фіг. 5 джеріння айви обі Гіововя в нев «притік тіні тіні т так р ж ж ж ж жі між ж ж я ж ж ж ж ж я ж тити Ок ккжккю ик ких СКК юккккккккююю ки и жииижжєюу овал жа Ккзнскнмснияаюе 100 ХеКЛЕрНН кеВ : АМС биття ва рови ж і. СО ВЙ ОБОХ 0 ЕКЯ : СОЯ 5 ессс ВВ ГО 1 ОНИ: В Ж ї пос ВН В оте її о В рон к ВВІВ ко і А, са т В 1 Ес т ВЕН Я " ЩЕ р опер сВННй 000 БОВ 0 і-й А Ж | Е ж ї "ОО н- ВВ й М я ки : ще , ' я : кі : ще ! ! і ї ЕНВЕГТУТИ ща Одна трива ді вереднну 7 Б нееекг аВінеену Я вмюльях СМ Па ень х ПОДОНІ ТВ етно У МЕЛЕ І Пекона вивалої ді еесвдану є Покізна тонаало Ду БО ПО ВОК а нманМ СУ ух НЕО К ЧКМ ІА вени У ЖЕК Іа За ти жав х пЮЖЕНІ
Фіг. 6
-- ВІ ї75 они ие Жан ще ех - З т й бух дк й
Ж Ж. ж Ов
0. з , Ши ОО 783 С о Дон і 5 вач і об 85 1 15 ка 25 ке Час дні «а Екоципіснт -- Кон'ютат тривалої дії ОО КО: 3 (516 нмолькг -й- Кон'югат тривалої дії ЗБОЮ МО: ЗУ ПО наольке зе Кон'ютит тринаної ді ЗБОЮ МО: 37 СЕЗ нисльке -к- Метивний спюкаюн ОО нмомьки
Фіг. у ВО ж дк 5 ов. 7 дн ! МІ ме з НН Геснаня. ее Я о п - ! псскіянн що ща: ша ши. МН нія ННЯ. о «В ЕЕ Нормальнишщури, Єкоципене БЕК МЩШурн я хронічно піногліювею, Єкоцепівнт ЩО Шури з хронічном піпеглнемісю, кон'ютат тривалої ді 9сО МО: Я З нмолки З Шури з хронічною гіпеглемкю, кОоМм'югет тривалої ВЕС ТО ОК 7 (б нмолькг
Фіг. 8
UAA201900200A 2016-06-29 2017-06-29 Похідна глюкагону, її кон'югат, композиція, яка її містить, та її терапевтичне застосування UA126662C2 (uk)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20160081995 2016-06-29
KR20160182982 2016-12-29
KR20170069217 2017-06-02
PCT/KR2017/006922 WO2018004283A2 (ko) 2016-06-29 2017-06-29 글루카곤 유도체, 이의 결합체, 및 이를 포함하는 조성물, 및 이의 치료적 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA126662C2 true UA126662C2 (uk) 2023-01-11

Family

ID=60787387

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201900200A UA126662C2 (uk) 2016-06-29 2017-06-29 Похідна глюкагону, її кон'югат, композиція, яка її містить, та її терапевтичне застосування

Country Status (23)

Country Link
US (1) US11142559B2 (uk)
EP (1) EP3479841A4 (uk)
JP (2) JP7208020B2 (uk)
KR (2) KR102005457B1 (uk)
CN (1) CN109641035A (uk)
AU (1) AU2017289014B2 (uk)
BR (1) BR112018077457A2 (uk)
CA (1) CA3029518A1 (uk)
CL (1) CL2018003754A1 (uk)
CO (1) CO2019003182A2 (uk)
DO (1) DOP2018000297A (uk)
EC (1) ECSP19021223A (uk)
IL (1) IL263934B2 (uk)
MX (1) MX2019000019A (uk)
MY (1) MY190855A (uk)
PE (1) PE20190355A1 (uk)
PH (1) PH12018502742A1 (uk)
SG (1) SG11201811697SA (uk)
TN (1) TN2018000452A1 (uk)
TW (1) TWI757305B (uk)
UA (1) UA126662C2 (uk)
WO (1) WO2018004283A2 (uk)
ZA (1) ZA201900470B (uk)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20130049671A (ko) 2011-11-04 2013-05-14 한미사이언스 주식회사 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법
AR090281A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hanmi Science Co Ltd Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo
MY192248A (en) * 2014-03-31 2022-08-10 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Method for improving solubility of protein and peptide by using immunoglobulin fc fragment linkage
US10071079B2 (en) 2016-06-29 2018-09-11 Bristol-Myers Squibb Company [1,2,4]triazolo[1,5-a]pyridinyl substituted indole compounds
MX2019007339A (es) 2016-12-29 2019-09-06 Hoffmann La Roche Compuestos de pirazolopirimidina y metodos de uso de los mismos.
AU2018215840A1 (en) * 2017-02-03 2019-08-01 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Long-Acting Conjugate Of A Physiologically Active Material And Use Thereof
KR20200038878A (ko) * 2018-10-04 2020-04-14 한미약품 주식회사 글루카곤 및 이를 포함하는 조합물의 치료학적 용도
JP2022514835A (ja) * 2018-12-21 2022-02-16 ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド インスリン及びグルカゴンを含む薬学組成物
CN110551203B (zh) * 2019-09-25 2023-02-10 成都奥达生物科技有限公司 一种艾塞那肽类似物
WO2021066600A1 (ko) * 2019-10-04 2021-04-08 한미약품 주식회사 글루카곤, 및 glp-1 수용체 및 gip 수용체 이중 작용제를 포함하는 조성물 및 이의 치료학적 용도
CN110845601B (zh) * 2019-10-12 2021-01-19 广东药科大学 不同构型的glp-1类似肽修饰二聚体及其制备方法在治疗ii型糖尿病中的应用
AU2021248766A1 (en) * 2020-04-03 2022-12-01 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Pharmaceutical composition for preventing or treating mucositis induced by radiotherapy, chemotherapy, or combination thereof, comprising GLP-2 derivatives or long-acting conjugate of same
AU2021264869A1 (en) 2020-04-29 2022-12-01 Onegene Biotechnology Inc. Novel protein conjugate, and use thereof for preventing or treating nonalcoholic steatohepatitis, obesity and diabetes
JP2023533797A (ja) 2020-07-14 2023-08-04 ウニベルジテート ハイデルベルク 脂質複合体を含む経口医薬組成物
EP4183407A1 (en) * 2020-07-15 2023-05-24 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Therapeutic use of glucagon derivative or conjugate thereof for liver disease
EP4321170A1 (en) 2021-04-09 2024-02-14 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Pharmaceutical composition for preventing or treating chronic kidney disease containing glucagon derivative
KR20230095666A (ko) * 2021-12-22 2023-06-29 한미약품 주식회사 간 표적 물질 및 이의 용도

Family Cites Families (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5408037A (en) 1991-01-17 1995-04-18 Zymogenetics, Inc. Methods for detecting glucagon antagonists
GB9423277D0 (en) 1994-11-18 1995-01-11 Univ Nottingham Pulsed laser deposition of coatings
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
DE19618812C1 (de) 1996-05-10 1997-11-20 Karlsruhe Forschzent Sensor zum Nachweis von Proteinen und Verfahren zu dessen Herstellung
US6677136B2 (en) 2000-05-03 2004-01-13 Amgen Inc. Glucagon antagonists
AU2002317599B2 (en) 2001-07-31 2008-04-03 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services GLP-1 exendin-4 peptide analogs and uses thereof
WO2004093823A2 (en) 2003-03-19 2004-11-04 Eli Lilly And Company Polyethelene glycol link glp-1 compounds
US8263084B2 (en) * 2003-11-13 2012-09-11 Hanmi Science Co., Ltd Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
ATE522548T1 (de) 2003-11-13 2011-09-15 Hanmi Holdings Co Ltd Verfahren zur massenproduktion der konstanten region von immunglobulin
MX2008013304A (es) 2006-04-20 2008-10-27 Amgen Inc Compuestos de peptido 1 tipo glucagon.
JP2008169195A (ja) 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
EP2124974B1 (en) 2007-01-05 2017-03-15 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility in physiological ph buffers
US20090098130A1 (en) 2007-01-05 2009-04-16 Bradshaw Curt W Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonist compounds
EP2111414B1 (en) * 2007-02-15 2014-07-02 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
ATE520714T1 (de) * 2007-06-15 2011-09-15 Zealand Pharma As Glucagonanaloga
SG178797A1 (en) 2007-06-19 2012-03-29 Otsuka Chemical Co Ltd Oligosaccharide chain added glp-1 peptide
WO2009030738A1 (en) 2007-09-05 2009-03-12 Novo Nordisk A/S Glucagon-like peptide-1 derivatives and their pharmaceutical use
WO2009099763A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Indiana University Research And Technology Corporation Ester-based peptide prodrugs
KR20110039230A (ko) 2008-06-17 2011-04-15 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 생리학적 ｐＨ 완충액에서 강화된 용해도 및 안정성을 나타내는 글루카곤 유사체
EA019203B9 (ru) * 2008-06-17 2014-03-31 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Коагонисты глюкагонового рецептора/glp-1-рецептора
US9062124B2 (en) * 2008-06-17 2015-06-23 Indiana University Research And Technology Corporation GIP-based mixed agonists for treatment of metabolic disorders and obesity
WO2010096052A1 (en) 2009-02-19 2010-08-26 Merck Sharp & Dohme Corp. Oxyntomodulin analogs
MX2011013625A (es) 2009-06-16 2012-01-20 Univ Indiana Res & Tech Corp Compuestos glucagon activo de receptor de gip.
AU2010272944B2 (en) 2009-07-13 2015-11-19 Zealand Pharma A/S Acylated glucagon analogues
GB0917072D0 (en) 2009-09-29 2009-11-11 Univ Ulster Peptide analogues of glucagon for diabetes therapy
EP2512503A4 (en) * 2009-12-18 2013-08-21 Univ Indiana Res & Tech Corp COAGONISTS OF GLUCAGON / GLP-1 RECEPTOR
NZ601167A (en) 2010-01-20 2014-12-24 Zealand Pharma As Treatment of cardiac conditions
EP2552950A1 (en) * 2010-03-26 2013-02-06 Novo Nordisk A/S Novel glucagon analogues
EP2568993A4 (en) 2010-05-13 2014-02-19 Univ Indiana Res & Tech Corp GLUCAGON SUPERFAMILY PEPTIDES EXPRESSING G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR ACTIVITY
KR101382593B1 (ko) * 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
PE20140186A1 (es) 2010-12-22 2014-02-13 Univ Indiana Res & Tech Corp Analogos de glucagon que presentan actividad de receptor de gip
WO2012150503A2 (en) 2011-05-03 2012-11-08 Zealand Pharma A/S Glu-glp-1 dual agonist signaling-selective compounds
US10471127B2 (en) * 2011-05-18 2019-11-12 Mederis Diabetes, Llc Peptide pharmaceuticals for insulin resistance
SG195258A1 (en) 2011-06-10 2013-12-30 Hanmi Science Co Ltd Novel oxyntomodulin derivatives and pharmaceutical composition for treating obesity comprising the same
PE20181268A1 (es) 2011-06-17 2018-08-03 Hanmi Science Co Ltd Un conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y el uso del mismo
US9944687B2 (en) * 2011-07-04 2018-04-17 Imperial Innovations Limited Compounds and their effects on feeding behaviour
KR20140097151A (ko) 2011-11-17 2014-08-06 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 글루코코르티코이드 수용체 활성을 나타내는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드
CN107739409A (zh) 2012-05-18 2018-02-27 爱德迪安（北京）生物技术有限公司 用于糖尿病治疗的蛋白、蛋白缀合物及其应用
JP6311708B2 (ja) 2012-06-21 2018-04-18 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｇｉｐ受容体活性を示すグルカゴンアナローグ
CA2877127A1 (en) 2012-06-21 2013-12-27 Indiana University Research And Technology Corporation Analogs of glucagon exhibiting gip receptor activity
AR094821A1 (es) 2012-07-25 2015-09-02 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulación líquida de un conjugado de péptido insulinotrópico de acción prolongada
KR101968344B1 (ko) * 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
AR092873A1 (es) 2012-09-26 2015-05-06 Cadila Healthcare Ltd Peptidos como agonistas triples de los receptores de gip, glp-1 y glugagon
KR101993393B1 (ko) * 2012-11-06 2019-10-01 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 당뇨병 또는 비만성 당뇨병 치료용 조성물
AR093387A1 (es) * 2012-11-06 2015-06-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Formulacion liquida de un conjugado de proteina que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina
US11065304B2 (en) * 2012-11-20 2021-07-20 Mederis Diabetes, Llc Peptide pharmaceuticals for insulin resistance
ES2906975T3 (es) * 2012-11-20 2022-04-21 Eumederis Pharmaceuticals Inc Productos farmacéuticos de péptidos mejorados
JP2016503771A (ja) 2012-12-21 2016-02-08 サノフイ エキセンジン−４誘導体
AU2014255608B2 (en) 2013-04-18 2018-01-25 Novo Nordisk A/S Stable, protracted GLP-1/glucagon receptor co-agonists for medical use
EP3033355A1 (en) 2013-08-16 2016-06-22 Medimmune Limited Gip and glp-1 receptor dual-agonists for the treatment of diabetes
EP3080149A1 (en) 2013-12-13 2016-10-19 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
JP6572497B2 (ja) 2013-12-18 2019-09-11 ザ・スクリップス・リサーチ・インスティテュート 修飾された治療剤、ステープル留めされたペプチド脂質複合体、及びそれらの組成物
AR100639A1 (es) * 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
AR100695A1 (es) 2014-05-30 2016-10-26 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para el tratamiento de diabetes mellitus que comprende insulina y un agonista dual glp-1 / glucagón
TWI802396B (zh) * 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
US10232020B2 (en) 2014-09-24 2019-03-19 Indiana University Research And Technology Corporation Incretin-insulin conjugates
US11135271B2 (en) 2014-12-30 2021-10-05 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivatives with improved stability
US10696725B2 (en) * 2015-06-30 2020-06-30 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivative and a composition comprising a long acting conjugate of the same
TW201718629A (zh) 2015-09-25 2017-06-01 韓美藥品股份有限公司 包含多個生理多肽及免疫球蛋白Ｆｃ區之蛋白質接合物
WO2017095201A1 (ko) 2015-12-02 2017-06-08 한미약품 주식회사 지방산 유도체를 이용한 단백질 결합체 및 이의 제조방법
MX2018008027A (es) 2015-12-31 2018-11-29 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Activador triple que activa receptor de glucagon, glp-1 y gip.

Also Published As

Publication number Publication date
ZA201900470B (en) 2020-07-29
ECSP19021223A (es) 2019-04-30
CO2019003182A2 (es) 2019-06-11
JP7399212B2 (ja) 2023-12-15
US11142559B2 (en) 2021-10-12
KR102005457B1 (ko) 2019-07-30
TN2018000452A1 (en) 2020-06-15
NZ750267A (en) 2023-12-22
WO2018004283A3 (ko) 2018-02-22
IL263934B2 (en) 2023-10-01
EP3479841A2 (en) 2019-05-08
EP3479841A4 (en) 2020-03-04
TW201803894A (zh) 2018-02-01
DOP2018000297A (es) 2019-03-15
KR20190092344A (ko) 2019-08-07
MX2019000019A (es) 2019-05-06
MY190855A (en) 2022-05-12
KR102395856B1 (ko) 2022-05-10
AU2017289014A1 (en) 2019-02-14
KR20180002544A (ko) 2018-01-08
PH12018502742A1 (en) 2019-04-15
JP2019524675A (ja) 2019-09-05
CL2018003754A1 (es) 2019-02-08
JP2022107595A (ja) 2022-07-22
TWI757305B (zh) 2022-03-11
WO2018004283A2 (ko) 2018-01-04
US20190119347A1 (en) 2019-04-25
SG11201811697SA (en) 2019-01-30
IL263934B1 (en) 2023-06-01
AU2017289014B2 (en) 2019-12-05
IL263934A (en) 2019-02-03
PE20190355A1 (es) 2019-03-07
BR112018077457A2 (pt) 2019-04-02
CA3029518A1 (en) 2018-01-04
CN109641035A (zh) 2019-04-16
JP7208020B2 (ja) 2023-01-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA126662C2 (uk) Похідна глюкагону, її кон'югат, композиція, яка її містить, та її терапевтичне застосування
US11667688B2 (en) Glucagon derivative and a composition comprising a long acting conjugate of the same
US20210338779A1 (en) Therapeutic use of glucagon and combination including the same
KR20230095666A (ko) 간 표적 물질 및 이의 용도
NZ789486A (en) Glucagon derivative, conjugate thereof, composition comprising same and therapeutic use thereof
EA042163B1 (ru) Производное глюкагона, конъюгат на его основе, содержащая их композиция и их терапевтическое применение
NZ618811B2 (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof
NZ718999A (en) A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof