KR20140097151A - 글루코코르티코이드 수용체 활성을 나타내는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 - Google Patents

글루코코르티코이드 수용체 활성을 나타내는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 Download PDF

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Abstract

본 명세서에서는 글루코코르티코이드 수용체에 작용할 수 있는 GR 리간드와 접합된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드가 제시된다. 또한, 본 명세서에서는 본 발명의 접합체의 제약학적 조성물과 키트가 제시된다. 더 나아가, 본 명세서에서는 본 발명의 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 질환, 예를 들면, 당뇨병과 비만과 같은 대사 이상을 치료하는 방법이 제시된다.

Description

글루코코르티코이드 수용체 활성을 나타내는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드{GLUCAGON SUPERFAMILY PEPTIDES EXHIBITING GLUCOCORTICOID RECEPTOR ACTIVITY}
전자적으로 제출된 자료의 참고문헌으로서 편입
본 출원과 동시에 제출되고 하기와 같이 확인되는 컴퓨터-판독가능 아미노산 서열 목록은 전체로서 참고문헌으로 편입된다: 2012년 11월 8일자 작성된 "46628A_SeqListing.txt"으로 명명된 894,620 바이트 ASCII (Text) 파일.
관련된 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2011년 11월 17일자 제출된 미국 특허 가출원 제61/561,094호에 우선권을 주장하며, 이는 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입된다.
본 발명의 배경
본 발명의 기술 분야
본 발명에서는 글루코코르티코이드 수용체에서 기능할 수 있는 글루코코르티코이드 수용체 리간드에 접합된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드를 제시한다.
관련된 기술의 간단한 설명
핵 호르몬 수용체 단백질은 DNA의 특정 서열에 결합될 때, 세포 핵 내에서 전사에 대한 온-오프 스위치 (on-off switch)로서 기능하는 한 부류의 리간드 활성화된 단백질을 형성한다. 이들 스위치는 뇌에서 피부, 뼈와 행동 센터 (behavioral center)의 발달과 분화, 그리고 생식 조직 (reproductive tissue)의 연속 조절을 제어한다.
핵 호르몬 수용체 리간드, 예를 들면, 스테로이드, 스테롤, 레티노이드, 갑상선 호르몬, 그리고 비타민 D는 핵 호르몬 수용체를 활성화시키는 기능을 한다. 호르몬과 수용체의 상호작용은 수용체에서 입체형태적 변화를 유인하고, 이것은 유전자 발현의 상향 조절을 유발한다. 리간드와 핵 호르몬 수용체의 상호작용에 의해 활성화된 세포 신호 전달의 수준은 결합에 가용한 다수의 리간드와 수용체에 의해, 그리고 리간드와 수용체 사이에 결합 친화성 (binding affinity)에 의해 결정된다. 핵 호르몬 수용체에 결합하는 많은 리간드 및 상응하는 유사체는 예로써, 파킨슨병 (NURR1), 수면 장애 (RZRβ), 관절염과 소뇌성 운동실조 (RORα), 중추신경계 질환 (NOR-1, Rev-ErbAβ, T1x, NGFI-Bβ, HZF-2α, COUP-TFα, COUP-TFβ, COUR-TFγ, NUR77), 과콜레스테롤혈증 (LXRα, COR), 비만 (Rev-ErbAα), 당뇨병 (HNF4α), 면역 질환 (TOR), 대사 이상 (MB67α, SHP, FXR, SF-1, LXRβ), 그리고 불임과 피임 (GCNF, TR2-11α,β, TR4, ERα,β ERRα,β)을 치료하기 위한 약제로서 이용된다.
프리-프로 (pre-pro)글루카곤은 158개 아미노산 전구체 폴리펩티드이고, 이것은 상이한 조직에서 처리되어 글루카곤, 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1), 글루카곤-유사 펩티드-2 (GLP-2) 및 옥신토모듈린 (OXM)을 비롯한 다수의 상이한 프로글루카곤-유래된 펩티드를 형성하고, 이들은 글루코오스 항상성 (glucose homeostasis), 인슐린 분비, 위 배출, 장 성장, 그리고 음식물 섭취의 조절을 비롯한 매우 다양한 생리학적 기능에 관여한다. 글루카곤은 프리-프로글루카곤의 아미노산 33 내지 61에 상응하는 29-아미노산 펩티드인 반면, GLP-1은 프리-프로글루카곤의 아미노산 72 내지 108에 상응하는 37-아미노산 펩티드로서 생산된다. GLP-1(7-36) 아미드 또는 GLP-1(7-37) 산은 GLP-1 수용체에서 본질적으로 동등한 활성을 나타내는, GLP-1의 생물학적으로 강력한 형태이다.
글루카곤은 심각한 저혈당증의 급성 치료에 이용된다. 옥신토모듈린은 식욕을 억제하고 체중을 감소시키는 약리학적 활성을 갖는 것으로 보고되었다. GLP-1과 GLP-1 수용체 작동약은 타입 II 당뇨병에 대한 치료제로서 이용된다. 엑센딘-4는 구조에서 GLP-1과 유사하고, 그리고 글루카곤과 GLP-1과 유사하게, 인슐린 방출을 증가시키는 독 있는 큰도마뱀 (Gila monster)의 타액 내에 존재하는 펩티드이다.
위 저해 폴리펩티드 (GIP) 역시 글루코오스-의존성 인슐리노트로픽 펩티드로 알려져 있고, 그리고 호르몬의 세크레틴 패밀리의 구성원이다. GIP는 GIP 유전자에 의해 인코딩된 153-아미노산 프로단백질로부터 유래되고 생물학적 활성 42-아미노산 펩티드로서 순환한다. GIP 유전자는 타액선뿐만 아니라 소장에서 발현되고 위산 분비의 약한 저해물질이다. 위에서 저해 효과 이외에, 글루코오스의 존재에서, GIP는 생리학적 복용량으로 투여될 때, 췌장 베타 섬 세포에 의한 인슐린 방출을 증강시킨다. GIP는 췌장 인슐린의 방출을 자극하고 글루코오스 항상성을 유지하는데 생리학적 역할을 수행할 수 있는 장용 인자로서 기능하는 것으로 생각된다.
오스테오칼신은 뼈와 상아질에서 발견되는 비-아교질 단백질이다. 이것은 골아세포에 의해 분비되고 무기화 (mineralization) 및 칼슘 이온 항상성에서 일정한 역할을 하는 것으로 생각된다. 오스테오칼신은 또한, 체내에서 호르몬으로서 기능하여 췌장 내에 베타 세포가 더욱 많은 인슐린을 방출하도록 하고, 이와 동시에, 지방 세포가 인슐린에 대한 민감성을 증가시키는 호르몬 아디포넥틴을 방출하도록 하는 것으로 보고되었다.
본 발명의 요약
본 명세서에는 글루코코르티코이드 수용체를 활성화하는 리간드 ("GR 리간드")에 접합된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드가 제시된다. 복수 활성을 갖는 이들 접합체는 다양한 질환의 치료에 유용하다.
본 발명의 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 접합체는 하기 화학식으로 표시될 수 있다:
Q-L-Y
여기서 Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드이고, Y는 GR 리간드이고, 그리고 L은 연결 기 또는 단일 결합이다. 예를 들어, GR 리간드는 GR 리간드의 위치 3 또는 17에서 Q 또는 L에 접합된다.
글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)는 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 작동약 활성, GLP-1 수용체에서 작동약 활성, GIP 수용체에서 작동약 활성, 글루카곤과 GLP-1 수용체에서 공동-작동약 활성, 글루카곤과 GIP 수용체에서 공동-작동약 활성, GLP-1과 GIP 수용체에서 공동-작동약 활성, 또는 글루카곤, GIP, 그리고 GLP-1 수용체에서 트리-작동약 활성을 나타내는 글루카곤 관련된 펩티드일 수 있다. 일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤, GLP-1 또는 GIP 수용체에서 길항약 활성을 나타낸다. 글루카곤 수용체에서, GLP-1 수용체에서, 또는 GIP 수용체에서 글루카곤 관련된 펩티드의 활성은 본 명세서에서 진술된 임의의 교시에 따를 수 있다. 일부 특정한 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 최소한 0.1% 활성, GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 최소한 0.1% 활성, 또는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 최소한 0.1% 활성을 나타낸다.
GR 리간드 (Y)는 완전하게 또는 부분적으로 비-펩티드성이고, 그리고 본 명세서에서 진술된 임의의 교시에 따른 활성을 갖는 글루코코르티코이드 수용체로서 기능한다. 일부 구체예에서, GR 리간드는 약 1 mM 이하, 또는 100 μM 이하, 또는 10 μM 이하, 또는 1 μM 이하의 EC50 또는 IC50을 갖는다. 일부 구체예에서, GR 리간드는 약 5000 달톤까지, 또는 약 2000 달톤까지, 또는 약 1000 달톤까지, 또는 약 500 달톤까지의 분자량을 갖는다. GR 리간드는 본 명세서에서 기술된 임의의 글루코코르티코이드 수용체에 작용하거나, 또는 본 명세서에서 기술된 임의의 구조를 가질 수 있다.
일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 글루코코르티코이드 수용체에서 GR 리간드의 EC50 또는 IC50의 약 2000-배, 1000-배, 100-배 내에, 또는 약 75-배 내에, 또는 약 50-배 내에, 또는 약 40-, 30-, 25-, 20-, 15-, 10- 또는 5-배 내에, 글루카곤 수용체에서 EC50 (또는 IC50)을 갖는다. 일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 글루코코르티코이드 수용체에서 GR 리간드의 EC50 또는 IC50의 약 2000-배, 1000-배, 100-배 내에, 또는 약 75-배 내에, 또는 약 50-배 내에, 또는 약 40-, 30-, 25-, 20-, 15-, 10- 또는 5-배 내에, GLP-1 수용체에서 EC50 (또는 IC50)을 갖는다. 일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 글루코코르티코이드 수용체에서 GR 리간드의 EC50 또는 IC50의 약 2000-배, 1000-배, 100-배 내에, 또는 약 75-배 내에, 또는 약 50-배 내에, 또는 약 40-, 30-, 25-, 20-, 15-, 10- 또는 5-배 내에, GIP 수용체에서 EC50 (또는 IC50)을 갖는다.
본 발명의 일부 양상에서, Q-L-Y의 프로드러그가 제시되고, 여기서 상기 프로드러그는 아미드 연쇄를 거쳐 Q의 활성 부위에 공유 연결된 디펩티드 프로드러그 요소 (A-B)를 포함한다. 생리학적 조건 하에 및 효소 활성의 부재에서 디펩티드의 차후 제거는 Q-L-Y 접합체에 완전한 활성을 복원시킨다.
본 발명의 일부 양상에서, Q-L-Y 접합체 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물 역시 제시된다.
본 발명의 다른 양상에서, 환자에서 질환 또는 의학적 장애를 치료하기 위한 본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체의 치료 효과량을 투여하는 방법이 제시된다. 일부 구체예에서, 질환 또는 의학적 장애는 신진대사장애, 당뇨병, 비만, 간 지방증, 그리고 신경퇴행성 질환으로 구성된 군에서 선택된다.
GR 리간드는 코르티솔 및 이의 유도체를 포함하고, 그리고 화학식 C의 자연 발생하거나 합성된 화합물을 지칭한다:
Figure pct00001
화학식 C
여기서, R2, R3, R6, R7, R8, R9, 및 R10은 각각 독립적으로, 핵 호르몬 수용체 또는 글루코코르티코이드 수용체에 화학식 C의 화합물의 결합시 작동약 또는 길항약 활성을 허용하거나 촉진하는 모이어티이고; 그리고 각 파선은 임의적 이중 결합을 나타낸다. 일부 구체예에서, 화학식 C의 구조는 사중환상 고리의 하나 이상의 위치, 예를 들면, 위치 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 11, 12, 14, 및 15에서 하나 이상의 치환기로 치환된다. 코르티솔 및 이의 유도체의 특정한 무제한적 실례에는 코르티솔, 코르티손 아세테이트, 베클로메타손, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 트리암시놀론, 그리고 덱사메타손이 포함된다.
도면의 간단한 설명
도 1에서는 다양한 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 또는 관련된 이들의 단편의 아미노산 서열의 정렬을 도시한다. 도시된 아미노산 서열은 GHRH (서열 번호: 1619), PHI (서열 번호: 1622), VIP (서열 번호: 1620), PACAP-27 (서열 번호: 1621), 엑센딘-4 (서열 번호: 1618), GLP-1 (서열 번호: 1603), 글루카곤 (서열 번호: 1601), 옥신토모듈린 (서열 번호: 1606), GIP (서열 번호: 1607), GLP-2 (서열 번호: 1608) 및 세크레틴 (서열 번호: 1624)이다. 상기 정렬은 글루카곤의 아미노산 위치가 다른 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드에서 아미노산 위치에 어떻게 상응할 수 있는 지를 보여준다.
도 2에서는 db/db 생쥐에서 체중과 혈당 수준에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 도 2a에서는 높은 복용량의 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐가 GLP-1 단독이 투여된 생쥐보다 체중에서 약간 더 많은 감소를 경험하지만 운반제에서와 유사하다는 것을 보여준다. 도 2b와 2c에서는 높은 복용량의 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐가 제0일 내지 제14일 사이에 혈당 수준에서 최대 감소를 경험한다는 것을 보여주고, 체중에서 변화와 무관하게 글루코오스를 향상시키는 증강된 능력을 증명한다.
도 3에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 혈당, 체중, 체지방량 (fat mass), 그리고 제지방근육량 (lean muscle mass)에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 도 3a에서는 제21일에서 ipGTT 검사의 결과를 보여준다. 도 3b-d에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 체중에서 변화 (도 3b), 체지방량에서 변화 (도 3c), 그리고 제지방근육량에서 변화 (도 3d)에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 높은 복용량의 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 체중과 체지방량에서 최대 감소, 그리고 제지방근육량에서 최소량의 변화를 경험하였다. 도 3e에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 혈당에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 높은 복용량의 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 제0일 내지 제14일 사이에 혈당 수준에서 최대 감소를 경험하였다. 이들 결과는 약한 A22-기초된 GLP-1 작동약에 에스트로겐을 첨가하는 추가된 복용량 의존성 효능을 증명한다.
도 4에서는 혈당 수준, 체중에서 변화, 체지방량에서 변화, 그리고 혈당에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 도 4a에서는 14일간 매일 투약 후, 식이 유도된 비만 생쥐에서 혈당 수준에 대한 복막내 내당 검사에서 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 도 4b-c에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 체중에서 변화 및 체지방량에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 높은 복용량의 GLP-1/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 총 체중에서 최대 감소를 경험하였다 (도 4b). 체지방량은 운반제-치료된 동물에 비하여 높은 복용량 에스트로겐 에테르 접합체-치료된 동물에서 감소하였다 (도 4c). 도 4d에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 혈당에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 높은 복용량에서, 어느 한쪽 GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 GLP-1(Aib2E16Cex K40) 단독이 투여된 생쥐보다 제0일 내지 제21일 사이에 혈당 수준에서 더욱 큰 변화를 경험하였다.
도 5에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 체중에서 변화 및 혈당에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 높은 복용량의 GLP-1/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 체중에서 최대 감소를 경험하였다 (도 5a). 높은 또는 낮은 복용량의 GLP-1(Aib2E16K40Cex)이 투여된 생쥐는 높은 복용량 GLP-1(Aib2E16K40Cex)/에스트로겐(3-에테르)에서와 마찬가지로, 혈당에서 최대 변화를 경험하였다 (도 5b).
도 6에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 체중에서 변화, 체지방량, 그리고 혈당에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 어느 한쪽 에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 총 체중에서 최대 감소를 경험하였다 (도 6a). 체지방량의 분석 결과 (도 6b)는 체중에서 총 손실 (total loss)로 상대적으로 일정하였다. GLP-1(Aib2E16K40Cex)/에스트로겐(3-에테르) 또는 GLP-1(Aib2E16K40Cex)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 제0일 내지 제7일 사이에 혈당 수준에서 최대 변화를 경험하였다 (도 6c).
도 7에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 체중과 혈당에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. GLP-1(Aib2E16K40Cex)/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 7일의 기간에 걸쳐 총 체중 (도 7a)과 혈당 수준 (도 7b)에서 최대 감소를 경험하였다. A22와 d-아미노산 내포 펩티드 둘 모두 GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐 접합체에 비하여 많은 저하를 나타내지 않았다. 부가적으로, GLP-1(Aib2E16Cex K40)의 에스트로겐 접합체는 동일한 펩티드의 비-에스트로겐 형태보다 명백하게 훨씬 효과적이었다.
도 8에서는 체중, 혈당, 그리고 체지방량에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. d-아미노산 내포 펩티드는 효능의 모든 척도에서, l-아미노산 내포 펩티드보다 명백하게 열등하였다. 도 8a에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 체중 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 에스트로겐과 함께 및 에스트로겐 없이 이들 펩티드에 대한 이들 복용량에서 체중 저하에서 명백한 차이가 없었다. 그럼에도 불구하고, 도 8b에서 식이 유도된 비만 생쥐에서 혈당에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과가 도시된다. GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 에스트로겐이 없는 동일한 펩티드로 치료된 동물보다 훨씬 많이, 생체 내에서 제0일 내지 제7일 사이에 혈당 수준에서 최대 변화를 경험하였다. 이것은 체중에서 차이와 무관하게 혈당에서 직접적인 향상을 증명하였다. 도 8c에서는 체지방량에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다.
도 9에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 체중에서 변화, 체지방량의 총계, 그리고 혈당에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 대조 l-내포 아미노산에 비하여 상승된 복용량에서 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 체중에서 최대 감소를 경험하고 (도 9a), 그리고 최소량의 체지방량을 가졌다 (도 9b). 제0일 내지 제7일 사이에 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체에서 명백한 복용량 의존성 글루코오스 저하가 있었고, 그리고 GLP-1 단독이 투여된 생쥐에 비하여 최대 복용량에서 증강되었다 (도 9c).
도 10에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 체중에서 변화 및 혈당 수준에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 생쥐는 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐 접합체가 투여되었는데, 여기서 에스트로겐은 생체 내에서 불안정한 안정된 아미드 또는 에스테르로서 공유 연결되었다. 불안정한 에스테르 접합체로 치료된 동물은 총 체중에서 최대 감소를 경험하였다 (도 10a). 도 10b에서는 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐 에스테르 접합체가 투여된 생쥐가 안정된 에스트로겐 접합체를 갖는 필적하는 d-아미노산 내포 펩티드가 투여된 생쥐보다 제0일 내지 제7일 사이에 혈당 수준에서 더욱 큰 변화를 경험한다는 것을 보여준다.
도 11에서는 GLP-1 수용체 및 에스트로겐 수용체에서 지시된 접합체의 활성을 보여준다. 활성, 준안정한 GLP-1/에스트로겐 접합체는 GLP-1 수용체에서 동등한 활성을 갖고 (도 11a), 그리고 에스트로겐 수용체에서 가변적 활성을 가졌다 (도 11b).
도 12에서는 식이 유도된 비만 생쥐에서 체중, 음식물 섭취, 혈당, 간 무게, 그리고 자궁 무게에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 체중에서 최대 감소를 경험하였는데, 이러한 효과는 높은 복용량에서 더욱 현저하였다 (도 12a). 도 12b에서는 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐가 비활성 d-아미노산 내포 GLP-1 단독 또는 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 훨씬 적은 음식물을 소비한다는 것을 보여주는데, 이러한 효과는 높은 복용량에서 더욱 현저하였다. 도 12c에서는 높은 복용량의 에스트로겐-불안정성, 비활성 d-아미노산 내포 GLP-1/ 에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 운반제 치료된 동물에 비하여 혈당 수준을 낮춘다는 것을 보여준다. 도 12d에서는 에스트로겐-불안정성, 비활성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐가 에스트로겐-안정된, 비활성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 간 무게에서 미묘하지만 더욱 큰 감소를 경험한다는 것을 보여준다. 도 12e에서는 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐가 비활성 GLP-1 단독 또는 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 자궁 무게에서 훨씬 큰 증가를 경험한다는 것을 보여준다.
도 13에서는 난소절제된 생쥐의 체중, 체지방량, 음식물 섭취, 혈당 수준, 그리고 자궁 무게에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 도 13a에서는 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐가 활성, GLP-1 작동약 단독, 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체, 또는 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 체중에서 더욱 큰 감소를 경험한다는 것을 보여준다. 도 13b에서는 GLP-1 작동약, 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체, 그리고 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐가 체지방량에서 감소를 나타낸다는 것을 보여준다. 도 13c에서는 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐가 활성, GLP-1 작동약 단독, 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체, 또는 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 적은 음식물을 소비한다는 것을 보여준다. 도 13d에서는 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체, 또는 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체, 또는 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐가 운반제에서보다 혈당 수준에서 감소를 경험하고, 그리고 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐가 혈당 수준에서 감소를 나타내지 않는다는 것을 보여준다. 도 13e에서는 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐가 GLP-1 단독, 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체, 또는 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 자궁 무게에서 훨씬 큰 증가를 경험한다는 것을 보여준다.
도 14에서는 난소절제된 생쥐의 체중, 체지방량, 혈당, 그리고 자궁 무게에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 준안정한 GLP-1 작동약/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 활성, GLP-1 작동약 단독 또는 활성, 에스트로겐-불안정성 GLP-1 작동약/에스트론(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 체중과 체지방량에서 더욱 큰 감소를 경험하였다 (도 14a와 14b). 각각, 준안정한 효소-와 산-불안정성 접합체, GLP-1 작동약/에스트로겐(17-카텝신) 및 GLP-1 작동약/에스트로겐(17-히드라존)이 초기에 투여된 생쥐는 체중에서 최대 감소를 갖는 반면, 준안정한 티올 환원-불안정성 접합체, GLP-1 작동약/에스트로겐(17-카바메이트 이황화물)은 체중에서 전반적인 최대 감소를 나타냈다. 도 14c에서는 각각, 준안정한 티올 환원-과 산-불안정성 접합체, GLP-1 작동약/에스트로겐(17-카바메이트 이황화물) 및 GLP-1 작동약/에스트로겐(17-히드라존)이 투여된 생쥐가 에스트로겐-불안정성 GLP-1 작동약/에스트론(3-에스테르) 접합체에서보다 혈당 수준에서 더욱 큰 감소를 경험한다는 것을 보여준다. 도 14d에서는 에스트로겐-불안정성 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐가 세 가지 준안정한 GLP-1/에스트로겐 접합체 중에서 한 가지가 투여된 생쥐보다 자궁 무게에서 훨씬 큰 증가를 경험한다는 것을 보여준다.
도 15에서는 체중과 누적 음식물 섭취에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다. 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 활성, GLP-1 작동약 단독 또는 활성, 에스트로겐-불안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 체중에서 훨씬 큰 감소를 경험하였다 (도 15a). 도 15b에서는 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐가 활성, GLP-1 작동약 단독 또는 활성, 에스트로겐-불안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 훨씬 적은 음식물을 소비한다는 것을 보여준다.
도 16a-e에서는 37℃에서 인간 혈장에서 지정된 GLP-1/에스트로겐 접합체의 안정성을 보여주는 HPLC 프로필을 도시한다. 에스트로겐-안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체는 72시간에 걸쳐 에스트로겐 방출 없음을 나타내는 반면, 에스트로겐-불안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체는 3시간 후 실질적인 에스트로겐 방출 및 6시간 이내에 완전한 에스트로겐 방출을 나타냈다.
도 17a-c에서는 식이-유도된 비만 생쥐의 체중 비율, 누적 음식물 섭취, 그리고 혈당 수준에서 변화에 대한 지시된 접합체의 투여의 효과를 보여준다.
도 18a-c에서는 식이-유도된 비만 야생형 생쥐, 에스트로겐 수용체 베타 녹-아웃 (ERβ KO) 생쥐, 그리고 에스트로겐 수용체 알파 녹-아웃 (ERα KO) 생쥐에서 체중 비율, 누적 음식물 섭취, 그리고 혈당 수준에서 변화에 대한 지시된 접합체의 투여의 효과를 보여준다.
도 19에서는 시간의 흐름에서 혈당 수준에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 효과를 보여준다. GLP-1 작동약이 투여된 생쥐 (운반제 제외)는 48시간에 걸쳐 혈당의 최소 효과적 저하를 나타내는 반면, 에스트로겐-안정성 GLP-1작동약/에스트로겐 (3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 48시간에 걸쳐 혈당에서 최대 효과적 감소를 나타냈다.
도 20에서는 카바메이트-β-알리닌 링커와의 GLP-1 작동약/덱사메타손 접합체를 발생시키기 위한 합성 계획을 보여준다.
도 21에서는 도 20에서 보여준 계획에 따라 합성된 GLP-1 작동약/덱사메타손 접합체를 보여준다.
도 22에서는 히드라진 접합을 통해 GLP-1 작동약/덱사메타손 접합체를 발생시키기 위한 합성 계획을 보여준다.
도 23에서는 도 22에서 보여준 계획에 따라 합성된 GLP-1 작동약/덱사메타손 접합체를 보여준다.
도 24에서는 글루코코르티코이드 수용체-매개된 루시페라아제 유도 상에서 지정된 GLP-1 접합체의 효과를 보여준다.
도 25에서는 지정된 GLP-1 접합체를 이용한 GLP-1 (도 25a) 및 글루코코르티코이드 (도 25b) 수용체 활성 분석평가를 보여준다.
도 26에서는 지정된 GLP-1 접합체를 이용한 GLP-1 (도 25a) 및 글루코코르티코이드 (도 25b) 수용체 활성 분석평가를 보여준다.
본 발명의 상세한 설명
정의
본 발명을 기술하고 청구함에 있어서, 다음 용어가 하기에 진술된 정의에 따라 이용될 것이다.
본 명세서에서, 용어 "약"은 언급된 값 또는 값의 범위보다 10 퍼센트 크거나 작은 것을 의미하지만, 단지 이러한 더욱 넓은 정의까지 임의의 값 또는 값의 범위를 표시하는 것으로 의도되지 않는다. 용어 "약"이 선행하는 각 값 또는 값의 범위는 또한, 언급된 절대 값 또는 값의 범위의 구체예를 포함하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서, 용어 "제약학적으로 허용되는 담체"에는 표준 제약학적 담체 중에서 한 가지, 예를 들면, 인산염 완충된 염 용액, 물, 오일/물 또는 물/오일 에멀젼과 같은 에멀젼 및 다양한 유형의 습윤제 등이 포함된다. 상기 용어에는 또한, 미국 정부의 규제 관청에서 승인한 임의의 물질 또는 인간을 비롯한 동물에 사용하기 위한 미국 약전에 열거된 임의의 물질이 포함된다.
본 명세서에서, 용어 "제약학적으로 허용되는 염"은 모 화합물의 생물학적 활성을 유지하지만, 생물학적으로 또는 달리 바람직한 화합물의 염을 지칭한다. 본 명세서에서 설명된 화합물 중에서 다수는 아미노 및/또는 카르복실 기 또는 이들에 유사한 기의 존재에 의해 산 및/또는 염기성 염을 형성할 수 있다.
제약학적으로 허용되는 염기 첨가 염은 무기 및 유기 염기로부터 제조될 수 있다. 무기 염기로부터 유도된 염에는 단지 예로써, 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘 및 마그네슘 염이 포함된다. 유기 염기로부터 유도된 염에는 1차, 2차 및 3차 아민이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 무기 산으로부터 유도된 염에는 염화수소산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등이 포함된다. 유기 산으로부터 유도된 염에는 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말론산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 시나민산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔-설폰산, 살리실산 등이 포함된다.
본 명세서에서, 용어 "치료하는(treating)"은 특정 질환 또는 장애의 예방, 또는 특정 질환 또는 장애와 연관된 증상의 완화 및/또는 이들 증상의 예방 또는 제거를 포함한다. 가령, 본 명세서에서, 용어 "당뇨병의 치료"는 일반적으로, 정상적인 수준의 방향으로 혈당 수준을 변경하는 것을 지칭하며, 소정의 상황에 따라 혈당 수준을 증가 또는 감소시키는 것을 포함할 수도 있다.
본 명세서에서, 글루카곤 펩티드의 "효과적인" 양 또는 "치료 효과량"은 원하는 효과를 제공하기 위한 펩티드의 비독성이지만 충분한 양을 지칭한다. 가령, 한 가지 바람직한 효과는 예로써, 혈당 수준의 증가에 의한 측정에서, 저혈당의 예방 또는 치료일 것이다. 본 발명의 글루카곤 펩티드의 다른 바람직한 효과는 예로써, 정상 수준에 더욱 가깝게 혈당 수준의 변화에 의한 측정에서, 고혈당증의 치료, 또는 예로써, 체중의 감소 또는 체중 증가의 예방 또는 감소에 의한 측정에서, 체중 감소의 유도/체중 증가의 예방, 또는 체지방 분포의 정상화를 포함할 것이다. "효과적인" 양은 개체의 연령과 전반적인 상태, 투여 방법 등에 따라 개체마다 달라질 것이다. 따라서 정확한 "효과량"을 명시하는 것이 항상 가능한 것은 아니다. 하지만, 임의의 개별 사례에서 적절한 "효과량"은 일과적인 실험을 이용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.
용어 "비경구 (parenteral)"는 소화관이 아닌 피하, 근육내, 척수내 또는 정맥내와 같은 일부 다른 경로를 통한다는 것을 의미한다.
본 명세서에서, 용어 "환자"는 추가 지정이 없다 하더라도, 길들여진 임의의 온혈 척추동물 (예로써, 가축, 말, 고양이, 개 및 기타 반려 동물이 포함되지만 이들에 국한되지 않음), 포유동물, 그리고 인간을 포함하는 것으로 의도된다.
본 명세서에서, 용어 "단리된 (isolated)"은 자연 환경으로부터 제거되었다는 것을 의미한다. 일부 구체예에서, 유사체는 재조합 방법을 통해 만들어지고, 그리고 유사체는 숙주 세포로부터 단리된다.
본 명세서에서, 용어 "정제된 (purified)"은 고유 또는 자연 환경에서 분자 또는 화합물과 정상적으로 연관된 오염물질이 실질적으로 없는 형태의 분자 또는 화합물의 분리를 지칭하고, 그리고 본래 조성물의 다른 성분으로부터 분리된 결과로써 순도가 증가되었다는 것을 의미한다. 본 명세서에서, "정제된 폴리펩티드"는 핵산 분자, 지질 및 탄수화물이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 기타 화합물로부터 분리된 폴리펩티드를 기술하는데 이용된다.
본 명세서에서, 용어 "펩티드"는 2개 이상의 아미노산, 전형적으로 50개 미만의 아미노산의 서열을 포함하고, 여기서 아미노산은 자연 발생하는 또는 코딩된 또는 비-자연 발생하는 또는 비-코딩된 아미노산이다. 비-자연 발생 아미노산은 생체 내에서 자연적으로 발생하지 않지만, 그럼에도 불구하고, 본 명세서에서 설명된 펩티드 구조 내로 통합될 수 있는 아미노산을 지칭한다. 본 명세서에서 "비-코딩된"은 다음의 20개 아미노산 중에서 한 가지의 L-이성체가 아닌 아미노산을 지칭한다: Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr.
본 명세서에서, "부분적으로 비-펩티드성"은 분자의 일부가 생물학적 활성을 갖고 아미노산의 서열을 포함하지 않는 화학적 화합물 또는 치환기인 분자를 지칭한다.
본 명세서에서, "비-펩티드성"은 생물학적 활성을 갖고 아미노산의 서열을 포함하지 않는 분자를 지칭한다.
본 명세서에서, 용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 중합체의 길이와 무관하게 아미노산의 중합체를 지칭하는 호환되는 용어다. 전형적으로, 폴리펩티드 및 단백질은 펩티드의 길이보다는 큰 중합체 길이를 가진다. 일부 경우에서, 단백질은 서로 공유적으로 또는 비공유적으로 부착된 하나 이상의 폴리펩티드 쇄를 포함한다.
본 출원 전반에서, 숫자 (가령, 위치 28)에 의한 특정 아미노산 위치에 대한 모든 언급은 고유 글루카곤 (서열 번호: 1601)에서 그 위치의 아미노산, 또는 이의 임의의 유사체에서 상응하는 아미노산 위치를 지칭한다. 가령, "위치 28" 에 대한 언급은 서열 번호: 1601의 제 1 아미노산이 결실된 글루카곤 유사체의 경우에 상응하는 위치 27을 의미할 것이다. 유사하게, "위치 28에 대한 언급은 서열 번호: 1601의 N 말단 앞에 1개 아미노산이 부가된 글루카곤 유사체의 경우에 상응하는 위치 29를 의미할 것이다.
본 명세서에서, "아미노산 변형 (modification)"은 (i) 참고 펩티드 (가령, 서열 번호: 1601, 1603, 1607)의 아미노산의 상이한 아미노산 (자연 발생하는 또는 코딩된 또는 비-코딩된 또는 비-자연 발생 아미노산)으로 치환 또는 대체, (ii) 참고 펩티드 (가령, 서열 번호: 1601, 1603, 1607)에 아미노산 (자연 발생하는 또는 코딩된 또는 비-코딩된 또는 비-자연 발생 아미노산)의 부가 또는 (iii) 참고 펩티드 (가령, 서열 번호: 1601, 1603, 1607)로부터 하나 이상의 아미노산의 결실을 지칭한다.
일부 구체예에서, 아미노산 치환 또는 대체는 보존성 아미노산 치환, 예를 들면, 위치 1, 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 또는 29 중에서 하나 이상에서 아미노산의 보존성 치환이다. 본 명세서에서, 용어 "보존성 아미노산 치환"은 하나의 아미노산을 유사한 성질, 예를 들면, 크기, 전하, 소수성, 친수성, 및/또는 방향족성을 가진 다른 아미노산으로 대체하는 것이고, 그리고 다음의 5가지 군 중에서 한 가지 내에서 교환을 포함한다:
I. 작은 지방족, 비극성 또는 약간 극성 잔기:
Ala, Ser, Thr, Pro, Gly;
II. 극성, 음성-하전된 잔기 및 이들의 아미드 및 에스테르:
Asp, Asn, Glu, Gln, 시스테산 및 호모시스테산;
III. 극성, 양성-하전된 잔기:
His, Arg, Lys; 오르니틴 (Orn)
IV. 큰, 지방족, 비극성 잔기:
Met, Leu, Ile, Val, Cys, 노르류신 (Nle), 호모시스테인
V. 큰 방향족 잔기:
Phe, Tyr, Trp, 아세틸 페닐알라닌
일부 구체예에서, 아미노산 치환은 보존성 아미노산 치환이 아니다, 예를 들면, 비-보존성 아미노산 치환이다.
본 명세서에서, 용어 "아미노산"은 아미노와 카르복실 기능 기 둘 모두를 내포하는 임의의 분자를 포함하고, 여기서 아미노와 카르복실 기는 동일한 탄소 (알파 탄소)에 부착된다. 알파 탄소는 임의적으로, 1개 또는 2개의 추가 유기 치환기를 가질 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 입체화학이 명시되지 않은 아미노산의 지정은 아미노산의 L 또는 D 형태, 또는 라세미 혼합물을 포함하는 것으로 의도된다. 하지만, 아미노산이 3문자 코드 (three letter code)에 의해 지정되고 위첨자 번호 (즉, Lys-1)를 포함하는 경우에, 이런 지정은 아미노산의 고유 L 형태를 명시하는 것으로 의도되고, 반면 D 형태는 3문자 코드와 위첨자 번호 앞에 소문자 d의 포함에 의해 명시될 것이다 (즉, dLys-1).
본 명세서에서, 용어 "히드록실 산"은 알파 탄소 아미노 기를 히드록실 기로 대체하기 위해 변형된 아미노산을 지칭한다.
본 명세서에서, 용어 "하전된 아미노산"은 생리학적 pH의 수용액에서 음성 전하 (즉, 탈양성자화) 또는 양성 전하 (즉, 양성자화)를 갖는 측쇄를 포함하는 아미노산을 지칭한다. 가령, 음성-하전된 아미노산에는 아스파르트산, 글루타민산, 시스테산, 호모시스테산, 그리고 호모글루타민산이 포함되고, 양성-하전된 아미노산에는 아르기닌, 리신 및 히스티딘이 포함된다. 하전된 아미노산은 20개의 코딩된 아미노산 사이에 하전된 아미노산뿐만 아니라, 비전형적 또는 비-자연 발생하는 또는 비-코딩된 아미노산을 포함한다.
본 명세서에서, 용어 "산성 아미노산"은 두 번째 산성 모이어티 (아미노산의 알파 카르복실산 이외에), 예를 들면, 측쇄 카르복실산 또는 설폰산 기를 포함하는 아미노산을 지칭한다.
본 명세서에서, "아실화된" 아미노산은 생산되는 수단에 상관없이, 자연 발생 아미노산에 비-고유인 아실 기를 포함하는 아미노산이다. 아실화된 아미노산 및 아실화된 펩티드를 생산하는 예시적인 방법은 당분야에 공지되어 있고, 그리고 펩티드 내에 포함 또는 펩티드 합성, 그 이후에 펩티드의 화학적 아실화에 앞서 아미노산을 아실화시키는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 아실 기는 펩티드가 (i) 순환 동안 연장된 반감기, (ii) 작용의 지연된 개시, (iii) 작용의 확대된 지속 기간, (iv) 프로테아제, 예를 들면, DPP-IV에 대한 향상된 내성, 그리고 (v) 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 수용체에서 증가된 효능 중에서 하나 이상을 가질 수 있도록 한다.
본 명세서에서, "알킬화된" 아미노산은 생산되는 수단에 상관없이, 자연 발생 아미노산에 비-고유인 알킬 기를 포함하는 아미노산이다. 알킬화된 아미노산 및 알킬화된 펩티드를 생산하는 예시적인 방법은 당분야에 공지되어 있고, 그리고 펩티드 내에 포함 또는 펩티드 합성, 그 이후에 펩티드의 화학적 알킬화에 앞서 아미노산을 알킬화시키는 것을 포함한다. 이론에 한정됨 없이, 펩티드의 알킬화는 펩티드의 아실화와 동일하진 않지만 유사한 효과, 예를 들면, 순환 동안 연장된 반감기, 작용의 지연된 개시, 작용의 확대된 지속 기간, 프로테아제, 예를 들면, DPP-IV에 대한 향상된 내성, 그리고 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 수용체에서 증가된 효능을 달성하는 것으로 생각된다.
본 명세서에서, 용어 "C1-Cn 알킬" (여기서 n은 1 내지 18일 수 있다)은 1개 내지 명시된 숫자의 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 선형 알킬 기를 의미한다. 가령, C1-C6 알킬은 1개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 선형 알킬 기를 의미한다. 전형적인 C1-C18 알킬 기에는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, 부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실 등이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 알킬 기는 임의적으로, 예로써 히드록시 (OH), 할로, 아릴, 카르복실, 티오, C3-C8 시클로알킬, 그리고 아미노로 치환될 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "C0-Cn 알킬" (여기서 n은 1-18일 수 있다)은 18개까지의 탄소 원자를 갖는 가지형 또는 선형 알킬 기를 의미한다. 가령, 용어 "(C0-C6 알킬)OH"는 6개까지의 탄소 원자를 갖는 알킬 치환기 (가령, -OH, -CH2OH, -C2H4OH, -C3H6OH, -C4H8OH, -C5H10OH, -C6H12OH)에 부착된 히드록실 부모 모이어티를 의미한다.
본 명세서에서, 용어 "C2-Cn 알케닐" (여기서 n은 2 내지 18일 수 있다)은 2개 내지 명시된 숫자의 탄소 원자 및 최소한 하나의 이중 결합을 갖는 불포화된 가지형 또는 선형 기를 의미한다. 이런 기의 실례에는 1-프로페닐, 2-프로페닐 (-CH2-CH=CH2), 1,3-부타디에닐, (-CH=CHCH=CH2), 1-부테닐 (-CH=CHCH2CH3), 헥세닐, 펜테닐 등이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 알케닐 기는 임의적으로, 예로써 히드록시 (OH), 할로, 아릴, 카르복실, 티오, C3-C8 시클로알킬, 그리고 아미노로 치환될 수 있다.
용어 "C2-Cn 알키닐" (여기서 n은 2 내지 18일 수 있다)은 2개 내지 n개의 탄소 원자 및 최소한 하나의 삼중 결합을 갖는 불포화된 가지형 또는 선형 기를 지칭한다. 이런 기의 실례에는 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 1-펜티닐 등이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 알키닐 기는 임의적으로, 예로써 히드록시 (OH), 할로, 아릴, 카르복실, 티오, C3-C8 시클로알킬, 그리고 아미노로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 용어 "아릴"은 단일환상 또는 다중환상 (가령, 이중환상, 삼중환상, 또는 사중환상) 방향족 기를 지칭한다. 아릴 고리 또는 고리들의 크기는 존재하는 탄소의 숫자를 지정함으로써 표시된다. 가령, 용어 "(C1-C3 알킬)(C6-C10 아릴)"은 1 내지 3 원 알킬 사슬을 거쳐 부모 모이어티에 부착되는 6 내지 10 원 아릴을 지칭한다. 달리 지시되지 않으면, 아릴 기는 치환되지 않거나, 또는 예로써, 할로, 알킬, 알케닐, OCF3, NO2, CN, NC, OH, 알콕시, 아미노, CO2H, C3-C8 시클로알킬, C(O)O알킬, 아릴, 그리고 헤테로아릴에서 독립적으로 선택되는 1개 이상, 특히 1개 내지 5개 군으로 치환될 수 있다. 예시적인 아릴 기에는 페닐, 나프틸, 테트라히드로나프틸, 클로로페닐, 인다닐, 인데닐, 메틸페닐, 메톡시페닐, 트리플루오르메틸페닐, 니트로페닐, 2,4-메톡시클로로페닐 등이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
본 명세서에서, 용어 "헤테로아릴"은 하나 이상의 방향족 고리를 내포하고 방향족 고리 내에 최소한 하나의 질소, 산소, 또는 황 원자를 내포하는 단일환상 또는 다중환상 고리 시스템을 지칭한다. 헤테로아릴 고리의 크기 및 치환기 또는 연결 기의 존재는 존재하는 탄소의 숫자를 지정함으로써 지시된다. 가령, 용어 "(C1-C6 알킬)(C5-C6 헤테로아릴)"은 1 내지 6 원 알킬 사슬을 거쳐 부모 모이어티에 부착되는 5 또는 6 원 헤테로아릴을 지칭한다. 달리 지시되지 않으면, 헤테로아릴 기는 치환되지 않거나, 또는 예로써, 할로, 알킬, 알케닐, OCF3, NO2, CN, NC, OH, 알콕시, 아미노, CO2H, C3-C8 시클로알킬, C(O)O알킬, 아릴, 그리고 헤테로아릴에서 독립적으로 선택되는 1개 이상, 특히 1개 내지 5개 군으로 치환될 수 있다. 헤테로아릴 기의 실례에는 티에닐, 푸릴, 피리딜, 옥사졸릴, 퀴놀릴, 티오페닐, 이소퀴놀릴, 인돌릴, 트리아지닐, 트리아졸릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 피라지닐, 피리미디닐, 티아졸릴, 그리고 티아디아졸릴이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
본 명세서에서, 용어 "헤테로알킬"은 구조의 골격 내에 지정된 숫자의 탄소 원자 및 최소한 하나의 헤테로원자를 내포하는 선형 또는 가지형 탄화수소를 지칭한다. 본 발명에 적합한 헤테로원자에는 N, S, 그리고 O가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 헤테로알킬 기는 임의적으로, 예로써 히드록시 (OH), 할로, 아릴, 카르복실, 그리고 아미노로 치환될 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "할로겐" 또는 "할로"는 플루오르, 클로르, 브롬, 그리고 요오드로 구성되는 군의 하나 이상의 구성원을 지칭한다.
본 명세서에서, 용어 "글루카곤 관련된 펩티드"는 하나 이상의 글루카곤, GLP-1, GLP-2, 그리고 GIP 수용체에서 생물학적 활성 (작동약 또는 길항약으로서)을 갖고, 그리고 고유 글루카곤, 고유 옥신토모듈린, 고유 엑센딘-4, 고유 GLP-1, 고유 GLP-2, 또는 고유 GIP 중에서 최소한 하나와 최소한 40% 서열 동일성 (가령, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%)을 공유하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 지칭한다. 달리 규정되지 않으면, 글루카곤 관련된 펩티드 내에 아미노산 위치 (가령, GR 리간드, 접합체 모이어티, 친수성 중합체, 아실화 또는 알킬화의 연쇄를 위한)에 대한 언급은 고유 글루카곤 아미노산 서열 (서열 번호: 1601)에 관하여 상응하는 위치를 지칭한다.
본 명세서에서, 제2 수용체에 비하여 제1 수용체에 대한 분자의 "선택성"은 다음의 비율을 지칭한다: 제2 수용체에서 분자의 EC50을 제1 수용체에서 분자의 EC50으로 나눈다. 가령, 제1 수용체에서 1nM의 EC50을 갖고 제2 수용체에서 100nM의 EC50을 갖는 분자는 제2 수용체에 비하여 제1 수용체에 대한 100-배 선택성을 가진다.
본 명세서에서, 용어 "동일성"은 2개 이상의 서열 사이에 유사성을 지칭한다. 동일성은 동일한 잔기의 수를 잔기의 총수로 나누고 백분율을 획득하기 위해 그 결과에 100을 곱함으로써 측정된다. 따라서 정확하게 동일한 서열의 두 사본은 100% 동일성을 갖는 반면, 서로에 대하여 아미노산 결실, 부가, 또는 치환을 갖는 두 서열은 더욱 낮은 정도의 동일성을 갖는다. 당업자는 여러 컴퓨터 프로그램, 예를 들면, BLAST (Basic Local Alignment Search Tool, Altschul et al. (1993) J. Mol. Biol. 215:403-410)와 같은 알고리즘을 이용하는 것들이 서열 동일성을 결정하는데 가용하다는 것을 인지할 것이다.
본 명세서에서, 용어 "글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드"는 그들의 N-말단과 C-말단 영역 내에서 구조적으로 관련된 일군의 펩티드를 지칭한다 (참고: Sherwood et al., Endocrine Reviews 21: 619-670 (2000)). 이러한 군의 구성원에는 모든 글루카곤 관련된 펩티드뿐만 아니라 성장 호르몬 방출 호르몬 (GHRH; 서열 번호: 1619), 혈관작동성 장 펩티드 (VIP; 서열 번호: 1620), 뇌하수체 아데닐레이트 시클라아제-활성화 폴리펩티드 27 (PACAP-27; 서열 번호: 1621), 펩티드 히스티딘 이소류신 (PHI; 서열 번호: 1642), 펩티드 히스티딘 메티오닌 (PHM; 서열 번호: 1622), 세크레틴 (서열 번호: 1623), 그리고 고유 펩티드에 비하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개까지의 아미노산 변형을 갖는 유사체, 유도체 또는 접합체가 포함된다. 이런 펩티드는 바람직하게는, 글루카곤 수용체 슈퍼패밀리의 수용체와 상호작용 (작동약 또는 길항약)하는 능력을 유지한다. 달리 규정되지 않으면, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 내에 아미노산 위치 (가령, GR 리간드, 접합체 모이어티, 친수성 중합체, 아실화 또는 알킬화의 연쇄를 위한)에 대한 언급은 고유 글루카곤 아미노산 서열 (서열 번호: 1601)에 관하여 상응하는 위치를 지칭한다. 대표적인 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 정렬을 위해 도 1을 참고한다.
용어 "글루카곤 작동약 펩티드"는 글루카곤 수용체에 결합하여 글루카곤 수용체의 하류 신호전달 (downstream signaling)을 활성화시키는 화합물을 지칭한다. 하지만 상기 용어는 이 화합물이 글루카곤 수용체에서만 활성을 갖는 것으로 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 본 발명의 글루카곤 작동약 펩티드는 본 명세서에서 더욱 논의된 바와 같이, 다른 수용체에서 추가 활성을 나타낼 수도 있다. 가령, 글루카곤 작동약 펩티드는 GLP-1 수용체 및/또는 GIP 수용체에서 활성 (가령, 작동약 활성)을 나타낼 수도 있다. 또한, 용어 "글루카곤 작동약 펩티드"는 이 화합물을 펩티드로만 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 펩티드 이외의 화합물도 이 용어에 포함된다. 따라서 일부 양상에서, 글루카곤 작동약 펩티드는 접합체 형태의 펩티드 (헤테로이합체, 다합체, 융합 펩티드), 화학적으로-유도체화된 펩티드, 펩티드의 제약학적 염, 펩티드모방체 등이다.
용어 "GLP-1 작동약 펩티드"는 GLP-1 수용체에 결합하여 GLP-1 수용체의 하류 신호전달을 활성화시키는 화합물을 지칭한다. 하지만 상기 용어는 이 화합물이 GLP-1 수용체에서만 활성을 갖는 것으로 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 본 발명의 GLP-1 작동약 펩티드는 본 명세서에서 더욱 논의된 바와 같이, 다른 수용체에서 추가 활성을 나타낼 수도 있다. 가령, GLP-1 작동약 펩티드는 글루카곤 수용체 및/또는 GIP 수용체에서 활성 (가령, 작동약 활성)을 나타낼 수도 있다. 또한, 용어 "GLP-1 작동약 펩티드"는 이 화합물을 펩티드로만 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 펩티드 이외의 화합물도 이 용어에 포함된다. 따라서 일부 양상에서, GLP-1 작동약 펩티드는 접합체 형태의 펩티드 (헤테로이합체, 다합체, 융합 펩티드), 화학적으로-유도체화된 펩티드, 펩티드의 제약학적 염, 펩티드모방체 등이다.
용어 "GIP 작동약 펩티드"는 GIP 수용체에 결합하여 GIP 수용체의 하류 신호전달을 활성화시키는 화합물을 지칭한다. 하지만 상기 용어는 이 화합물이 GIP 수용체에서만 활성을 갖는 것으로 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 본 발명의 GIP 작동약 펩티드는 본 명세서에서 더욱 논의된 바와 같이, 다른 수용체에서 추가 활성을 나타낼 수도 있다. 가령, GIP 작동약 펩티드는 GLP-1 수용체에서 활성 (가령, 작동약 활성)을 나타낼 수도 있다. 또한, 용어 "GIP 작동약 펩티드"는 이 화합물을 펩티드로만 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 펩티드 이외의 화합물도 이 용어에 포함된다. 따라서 일부 양상에서, GIP 작동약 펩티드는 접합체 형태의 펩티드 (헤테로이합체, 다합체, 융합 펩티드), 화학적으로-유도체화된 펩티드, 펩티드의 제약학적 염, 펩티드모방체 등이다.
용어 "글루카곤 길항약 펩티드"는 글루카곤 활성을 상쇄시키거나 글루카곤 기능을 예방하는 화합물을 지칭한다. 가령, 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체에서 글루카곤에 의해 달성된 최대 반응의 최소한 60% 저해 (가령, 최소한 70%, 80%, 90% 이상의 저해)를 나타낸다. 특정한 구체예에서, 약 1 μM의 농도에서 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체에서 글루카곤에 의해 달성된 최대 작동약 활성의 약 20% 미만 (가령, 약 10% 또는 5% 미만)을 나타낸다. 상기 용어는 이 화합물이 글루카곤 수용체에서만 활성을 갖는 것으로 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 본 발명의 글루카곤 길항약 펩티드는 글루카곤 수용체 (가령, 부분적 효현작용 (agonism))에서 또는 다른 수용체에서 추가 활성을 나타낼 수도 있다. 가령, 글루카곤 길항약 펩티드는 GLP-1 수용체에서 활성 (가령, 작동약 활성)을 나타낼 수도 있다. 또한 용어 "글루카곤 길항약 펩티드"는 이 화합물을 펩티드로만 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 펩티드 이외의 화합물도 이 용어에 포함된다. 따라서 일부 양상에서, 글루카곤 길항약 펩티드는 접합체 형태의 펩티드, 화학적으로-유도체화된 펩티드, 펩티드의 제약학적 염, 펩티드모방체 등이다.
용어 "GLP-1 길항약 펩티드"는 GLP-1 활성을 상쇄시키거나 GLP-1 기능을 예방하는 화합물을 지칭한다. 가령, GLP-1 길항약은 GLP-1 수용체에서 GLP-1에 의해 달성된 최대 반응의 최소한 60% 저해 (가령, 최소한 70%, 80%, 90% 이상의 저해)를 나타낸다. 특정한 구체예에서, 약 1 μM의 농도에서 GLP-1 길항약은 GLP-1 수용체에서 GLP-1에 의해 달성된 최대 작동약 활성의 약 20% 미만 (가령, 약 10% 또는 5% 미만)을 나타낸다. 상기 용어는 이 화합물이 GLP-1 수용체에서만 활성을 갖는 것으로 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 본 발명의 GLP-1 길항약 펩티드는 GLP-1 수용체 (가령, 부분적 효현작용)에서 또는 다른 수용체에서 추가 활성을 나타낼 수도 있다. 가령, GLP-1 길항약 펩티드는 글루카곤 수용체에서 활성 (가령, 작동약 활성)을 나타낼 수도 있다. 또한 용어 "GLP-1 길항약 펩티드"는 이 화합물을 펩티드로만 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 펩티드 이외의 화합물도 이 용어에 포함된다. 따라서 일부 양상에서, GLP-1 길항약 펩티드는 접합체 형태의 펩티드, 화학적으로-유도체화된 펩티드, 펩티드의 제약학적 염, 펩티드모방체 등이다.
용어 "GIP 길항약 펩티드"는 GIP 활성을 상쇄시키거나 GIP 기능을 예방하는 화합물을 지칭한다. 가령, GIP 길항약은 GIP 수용체에서 GIP에 의해 달성된 최대 반응의 최소한 60% 저해 (가령, 최소한 70%, 80%, 90% 이상의 저해)를 나타낸다. 특정한 구체예에서, 약 1 μM의 농도에서 GIP 길항약은 GIP 수용체에서 GIP에 의해 달성된 최대 작동약 활성의 약 20% 미만 (가령, 약 10% 또는 5% 미만)을 나타낸다. 상기 용어는 이 화합물이 GIP 수용체에서만 활성을 갖는 것으로 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 본 발명의 GIP 길항약 펩티드는 GIP 수용체 (가령, 부분적 효현작용)에서 또는 다른 수용체에서 추가 활성을 나타낼 수도 있다. 가령, GIP 길항약 펩티드는 글루카곤 수용체에서 활성 (가령, 작동약 활성)을 나타낼 수도 있다. 또한 용어 "GIP 길항약 펩티드"는 이 화합물을 펩티드로만 한정하는 것으로 간주되지 않는다. 오히려, 펩티드 이외의 화합물도 이 용어에 포함된다. 따라서 일부 양상에서, GIP 길항약 펩티드는 접합체 형태의 펩티드, 화학적으로-유도체화된 펩티드, 펩티드의 제약학적 염, 펩티드모방체 등이다.
본 명세서에서, 용어 "글루카곤 유사체" 및 "글루카곤 펩티드"는 글루카곤 관련된 펩티드 수용체에서 지정된 활성을 갖는 글루카곤의 유사체를 지칭하는데 교체가능하게 이용될 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "고유 글루카곤"은 서열 번호: 1601의 서열로 구성되는 펩티드를 지칭한다.
본 명세서에서, 용어 "고유 GLP-1"은 GLP-1(7-36) 아미드 (서열 번호: 1603), GLP-1(7-37) 산 (서열 번호: 1604) 또는 이들 두 화합물의 혼합물을 지정하는 포괄적 용어다.
본 명세서에서, 용어 "고유 GIP"는 서열 번호: 1607로 구성되는 펩티드를 지칭한다.
본 명세서에서, 분자의 "글루카곤 효능" 또는 "고유 글루카곤에 대한 비교 효능"은 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 EC50에 의해 나눗셈된 글루카곤 수용체에서 분자의 EC50의 비율을 지칭한다.
본 명세서에서, 분자의 "GLP-1 효능" 또는 "고유 GLP-1에 대한 비교 효능"은 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 EC50에 의해 나눗셈된 GLP-1 수용체에서 분자의 EC50의 비율을 지칭한다.
본 명세서에서, 분자의 "GIP 효능" 또는 "고유 GIP에 대한 비교 효능"은 GIP 수용체에서 고유 GIP의 EC50에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 분자의 EC50의 비율을 지칭한다.
본 명세서에서, "NHR 리간드"는 핵 호르몬 수용체 (NHR)에서 생물학적 활성 (작동약 또는 길항약)을 갖는 소수성 또는 친유성 모이어티를 지칭한다. NHR 리간드는 완전하게 또는 부분적으로 비-펩티드성이다. 일부 구체예에서, NHR 리간드는 NHR에 결합하고 NHR을 활성화시키는 작동약이다. 다른 구체예에서, NHR 리간드는 길항약이다. 일부 구체예에서, NHR 리간드는 활성 부위에 대한 고유 리간드의 결합을 완전하게 또는 부분적으로 차단함으로써 기능하는 길항약이다. 다른 구체예에서, NHR 리간드는 활성 부위 또는 알로스테릭 (allosteric) 부위에 결합하고 NHR의 활성화를 예방하거나 비활성화시킴으로써 기능하는 길항약이다.
본 명세서에서, "GR 리간드"는 글루코코르티코이드 수용체 (GR)에서 생물학적 활성 (작동약 또는 길항약)을 갖는 소수성 또는 친유성 모이어티를 지칭한다. GR 리간드는 완전하게 또는 부분적으로 비-펩티드성이다. 일부 구체예에서, GR 리간드는 GR에 결합하고 GR을 활성화시키는 작동약이다. 다른 구체예에서, GR 리간드는 길항약이다. 일부 구체예에서, GR 리간드는 활성 부위에 대한 고유 리간드의 결합을 완전하게 또는 부분적으로 차단함으로써 기능하는 길항약이다. 다른 구체예에서, GR 리간드는 활성 부위 또는 알로스테릭 부위에 결합하고 GR의 활성화를 예방하거나 비활성화시킴으로써 기능하는 길항약이다.
본 명세서에서, "핵 호르몬 수용체" (NHR)는 때때로, 다른 보조-활성자 (co-activator)와 보조-억제자 (co-repressor)와 협력하여, 세포 핵 내에서 유전자 발현을 조절하는 리간드-활성화된 단백질을 지칭한다.
본 명세서에서, "코르티솔과 이의 유도체"는 화학식 C의 자연 발생하거나 합성된 화합물을 지칭한다:
Figure pct00002

화학식 C
여기서 R2, R3, R6, R7, R8, R9, 그리고 R10은 각각 독립적으로, 글루코코르티코이드 수용체에 화학식 C의 화합물의 결합 시에 작동약 또는 길항약 활성을 허용하거나 촉진하는 모이어티이고; 그리고 각 파선은 임의적 이중 결합을 나타낸다. 일부 구체예에서, 화학식 C의 구조는 사중환상 고리의 하나 이상의 위치, 예를 들면, 위치 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 11, 12, 14, 그리고 15에서 하나 이상의 치환기로 치환된다. 코르티솔 및 이의 유도체의 특정한 무제한적 실례에는 코르티솔, 코르티손 아세테이트, 베클로메타손, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 트리암시놀론, 그리고 덱사메타손이 포함된다.
본 명세서에서, "연결 기"는 2개의 별개의 존재를 서로 결합시키는 분자 또는 분자 군이다. 연결 기는 이들 두 존재의 최적 간격 (spacing)을 제공하거나, 또는 이들 두 존재가 서로 분리될 수 있도록 하는 불안정한 연쇄를 더욱 제공할 수 있다. 불안정한 연쇄에는 가수분해가능 기, 광절단가능 기, 산-불안정성 모이어티, 염기-불안정성 모이어티 및 효소 절단가능 기가 포함된다.
본 명세서에서, 용어 "프로드러그"는 완전한 약리학적 효과를 나타내기에 앞서, 화학적 변형을 겪는 임의의 화합물로서 정의된다.
본 명세서에서, "디펩티드"는 펩티드 결합을 통한, α-아미노산 또는 α-히드록실 산의 다른 아미노산에 연쇄의 결과이다.
본 명세서에서, 임의의 추가 지정이 없는 용어 "화학적 절단"은 공유 화학 결합의 파괴를 유발하는 비-효소적 반응을 포괄한다.
구체예
본 발명에서는 GR 리간드와 접합된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드를 제시한다. 일부 양상에서, GR 리간드는 신진대사 또는 글루코오스 항상성에 관여하는 글루코코르티코이드 수용체에서 작용할 수 있고, 그리고 이러한 접합체는 펩티드 단독 또는 GR 리간드 단독과 비교하여 신진대사 또는 글루코오스 항상성에 대한 우수한 생물학적 효과를 제공한다. 본 발명의 이론에 한정됨 없이, GR 리간드는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드를 특정 유형의 세포 또는 조직으로 표적화시키는 역할을 할 수 있다; 또는 대안으로, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드는 GR 리간드를 표적으로 하거나, 또는 예로써, 접합체를 내재화하는 수용체에 펩티드의 결합을 통해 세포 내로 이의 수송을 증강시키는 역할을 할 수 있다.
본 발명의 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 접합체는 하기 화학식으로 표시될 수 있다:
Q-L-Y
여기서 Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드이고, Y는 GR 리간드이고, 그리고 L은 연결 기 또는 단일 결합이다.
글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)는 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 작동약 활성, GLP-1 수용체에서 작동약 활성, GIP 수용체에서 작동약 활성, 글루카곤과 GLP-1 수용체에서 공동-작동약 활성, 글루카곤과 GIP 수용체에서 공동-작동약 활성, GLP-1과 GIP 수용체에서 공동-작동약 활성, 또는 글루카곤, GIP, 그리고 GLP-1 수용체에서 트리-작동약 활성을 나타내는 글루카곤 관련된 펩티드일 수 있다. 일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤, GLP-1 또는 GIP 수용체에서 길항약 활성을 나타낸다.
글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)는 일부 구체예에서, 글루카곤-관련된 펩티드, 성장 호르몬 방출 호르몬 (GHRH; 서열 번호: 1619), 혈관작동성 장 펩티드 (VIP; 서열 번호: 1620), 뇌하수체 아데닐레이트 시클라아제-활성화 폴리펩티드 27 (PACAP-27; 서열 번호: 1621), 펩티드 히스티딘 메티오닌 (PHM; 서열 번호: 1622), 또는 세크레틴 (서열 번호: 1623), 및/또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체일 수 있다. 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드는 N-말단 아미노산 내에 상동성 및/또는 C-말단 일부분 내에 알파-나선 구조가 포함되지만 이들에 국한되지 않는 공통의 구조 특징을 가질 수 있다. C-말단은 일반적으로, 수용체 결합에서 기능하고, 그리고 N-말단은 일반적으로, 수용체 신호전달에서 기능하는 것으로 생각된다. N-말단 일부분과 C-말단 일부분에서 몇몇 아미노산, 예를 들면, His1, Gly4, Phe6, Phe22, Val23, Trp25, 그리고 Leu26은 글루카곤 슈퍼패밀리의 구성원 사이에 고도로 보존되고, 이들 위치에서 아미노산은 아미노산 측쇄 내에서 동일성, 보존성 치환 또는 유사성을 보인다. 일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드 Q는 글루카곤 (서열 번호: 1601), 옥신토모듈린 (서열 번호: 1606), 엑센딘-4 (서열 번호: 1618), 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1) (서열 번호: 1603과 서열 번호: 1604로서 제공된 아미노산 7-37), 글루카곤-유사 펩티드-2 (GLP-2, 서열 번호: 1608), GIP (서열 번호: 1607) 또는 이들의 유사체, 유도체와 접합체이다. 일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드로서 Q는 고유 펩티드의 길이에 걸쳐 (또는 글루카곤에 상응하는 위치에 걸쳐, 예로써 도 1 참고) 고유 글루카곤, 고유 옥신토모듈린, 고유 엑센딘-4, 고유 GLP-1(7-37), 고유 GLP-2, 또는 고유 GIP의 상응하는 서열에 최소한 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10까지의 아미노산 변형을 갖는 고유 글루카곤, 고유 엑센딘-4, 고유 (7-37)GLP-1, 고유 GLP-2, 고유 GHRH, 고유 VIP, 고유 PACAP-27, 고유 PHM, 고유 옥신토모듈린, 고유 세크레틴, 또는 고유 GIP의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구체예에서, Q는 2개 이상의 고유 글루카곤 관련된 펩티드 서열의 키메라인 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, Q는 아미노산 12-29에 상응하는 아미노산의 알파-나선 입체형태를 유지하는 고유 글루카곤 (서열 번호: 1601)에 최소한 약 50% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
관련된 측면에서, 본 발명에서는 하기 화학식으로 표시되는 펩티드 접합체를 제시한다:
Q-L-Y
여기서 Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드가 아닌 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이의 유사체, 유도체 또는 접합체이고; Y는 GR 리간드이고; 그리고 L은 연결 기 또는 단일 결합이다. 일부 구체예에서, Q는 오스테오칼신 (서열 번호: 1644), 또는 고유 펩티드의 길이에 걸쳐 고유 오스테오칼신에 최소한 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. Q는 고유 오스테오칼신에 비하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개까지의 아미노산 변형을 갖는 오스테오칼신의 유사체, 또는 고유 절두된 오스테오칼신에 비하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10까지의 아미노산 변형을 갖는 오스테오칼신의 절두된 유사체 (가령, 아미노산 70-84)를 포함할 수도 있다. 일부 구체예에서, Q는 칼시토닌 (서열 번호: 1645), 또는 고유 펩티드의 길이에 걸쳐 고유 칼시토닌에 최소한 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. Q는 고유 칼시토닌에 비하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개까지의 아미노산 변형을 갖는 칼시토닌의 유사체를 포함할 수도 있다. 일부 구체예에서, Q는 아밀린 (서열 번호: 1646), 또는 고유 펩티드의 길이에 걸쳐 고유 아밀린에 최소한 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. Q는 고유 아밀린에 비하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개까지의 아미노산 변형을 갖는 아밀린의 유사체를 포함할 수도 있다.
GR 리간드 (Y)
Q-L-Y 접합체에 관한 본 발명에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 작용하는 리간드이다. 핵 호르몬 수용체, 가령 GR은 일반적으로, C4-타입 아연 핑거 DNA-결합 도메인 (DBD) 및/또는 리간드 결합 도메인 (LBD) 중에서 최소한 하나를 포함한다. DBD는 표적 유전자의 인근에서 DNA에 결합하는 기능을 하고, 그리고 LBD는 동계 호르몬 (cognate hormone)에 결합하고 여기에 반응한다. "고전적 핵 호르몬 수용체"는 DBD와 LBD를 모두 갖고 (가령, 에스트로겐 수용체 알파), 반면 다른 핵 호르몬 수용체는 DBD 단독 (가령, Knirps, ORD) 또는 LBD 단독 (가령, Short Heterodimer Partner (SHP))을 갖는다.
핵 호르몬 수용체는 4가지 기계학적 부류로 분류될 수 있다: 타입 I, 타입 II, 타입 III, 그리고 타입 IV. 타입 I 수용체 (NR3 군)에 리간드 결합은 수용체로부터 열 충격 단백질 (heat shock protein, HSP)의 해리, 수용체의 동종이합체화 (homodimerization), 세포질로부터 세포 핵 내로 전위, 그리고 DNA의 역반복 호르몬 반응 요소 (inverted repeat hormone response element, HRE)에 결합을 유발한다. 핵 수용체/DNA 복합체는 이후, HRE로부터 하류의 DNA를 메신저 RNA로 전사하는 다른 단백질을 동원한다. 타입 II 수용체 (NR1 군)는 핵 내에 유지되고, 그리고 통상적으로 레티노이드 X 수용체 (RXR)와의 이형이합체로서 DNA에 결합한다. 타입 II 핵 호르몬 수용체는 종종, 보조억제자 단백질과 복합된다. 타입 II 수용체에 리간드 결합은 보조억제자의 해리 및 보조활성자 단백질의 동원을 유발한다. 추가의 단백질이 핵 수용체/DNA 복합체에 동원되고, 이들은 DNA를 메신저 RNA로 전사한다. 타입 III 핵 호르몬 수용체 (NR2 군)는 동종이합체로서 DNA의 직접 반복 HRE에 결합하는 고아 수용체이다. 타입 IV 핵 호르몬 수용체는 단위체 또는 이합체로서 DNA에 결합한다. 타입 IV 수용체는 독특한데, 그 이유는 상기 수용체의 단일 DNA 결합 도메인이 단일 절반 부위 HRE에 결합하기 때문이다. NHR 리간드는 타입 I, 타입 II, 타입 III 또는 타입 IV 핵 호르몬 수용체 중에서 하나 이상에서 작용하는 (가령, 작동약 또는 길항약으로서) 리간드일 수 있다.
[표 1]
Figure pct00003

Figure pct00004

표 데이터는 Laudet and Gronemeyer "The Nuclear Receptor Facts Book", Academic Press로부터 발췌된다. 부류 ID는 각 구성원에 대한 부류 코드를 지칭하고, 그리고 수납 번호는 NCBI GenBank 뉴클레오티드 수납 번호 코드를 지칭한다.
GR 리간드 (Y)의 활성
일부 구체예에서, Y는 약 10 mM 이하, 또는 1 mM (1000 μM) 이하 (가령, 약 750 μM 이하, 약 500 μM 이하, 약 250 μM 이하, 약 100 μM 이하, 약 75 μM 이하, 약 50 μM 이하, 약 25 μM 이하, 약 10 μM 이하, 약 7.5 μM 이하, 약 6 μM 이하, 약 5 μM 이하, 약 4 μM 이하, 약 3 μM 이하, 약 2 μM 이하 또는 약 1 μM 이하)의 GR 활성화에 대한 EC50 (또는 길항약의 경우에, IC50)을 나타낸다. 일부 구체예에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 약 1000 nM 이하 (가령, 약 750 nM 이하, 약 500 nM 이하, 약 250 nM 이하, 약 100 nM 이하, 약 75 nM 이하, 약 50 nM 이하, 약 25 nM 이하, 약 10 nM 이하, 약 7.5 nM 이하, 약 6 nM 이하, 약 5 nM 이하, 약 4 nM 이하, 약 3 nM 이하, 약 2 nM 이하 또는 약 1 nM 이하)의 EC50 또는 IC50을 갖는다. 일부 구체예에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 피코몰 (picomolar) 범위의 EC50 또는 IC50을 갖는다. 따라서 일부 구체예에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 약 1000 pM 이하 (가령, 약 750 pM 이하, 약 500 pM 이하, 약 250 pM 이하, 약 100 pM 이하, 약 75 pM 이하, 약 50 pM 이하, 약 25 pM 이하, 약 10 pM 이하, 약 7.5 pM 이하, 약 6 pM 이하, 약 5 pM 이하, 약 4 pM 이하, 약 3 pM 이하, 약 2 pM 이하 또는 약 1 pM 이하)의 EC50 또는 IC50을 나타낸다.
일부 구체예에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 약 0.001 pM 이상, 약 0.01 pM 이상, 또는 약 0.1 pM 이상의 EC50 또는 IC50을 나타낸다. 글루코코르티코이드 수용체 활성화 (글루코코르티코이드 수용체 활성)는 당분야에 공지된 임의의 분석평가에 의해 시험관내에서 측정될 수 있다. 가령, 글루코코르티코이드 수용체에서 활성은 호르몬-반응성 프로모터의 제어 하에 리포터 유전자 (가령, β-갈락토시다아제를 인코딩하는 lacZ)를 또한 보유하는 효모 세포에서 수용체를 발현함으로써 측정될 수 있다. 따라서 수용체에서 작용하는 리간드의 존재에서, 리포터 유전자가 발현되고, 그리고 리포터 유전자 산물의 활성이 측정될 수 있다 (가령, 초기에 황색인 발색성 기질 (chromogenic substrate), 예를 들면, 클로로페놀 레드-β-D-갈락토피라노시드 (CPRG)를 흡광도에 의해 측정될 수 있는 적색 산물로 파괴하는 β-갈락토시다아제의 활성을 측정함으로써). 예로써, Jungbauer and Beck, J. Chromatog. B, 77: 167-178 (2002); Routledge and Sumpter, J. Biol. Chem, 272: 3280-3288 (1997); Liu et al., J. Biol. Chem., 274: 26654-26660 (1999)를 참고한다. 글루코코르티코이드 수용체에 GR 리간드의 결합은 당분야에 공지된 임의의 결합 분석평가, 예를 들면, 형광 편광 (fluorescence polarization) 또는 방사능 검사법 (radioactive assay)을 이용하여 결정될 수 있다. 예로써, Ranamoorthy et al., 138(4): 1520-1527 (1997)을 참고한다.
일부 구체예에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 고유 글루코코르티코이드 (글루코코르티코이드 효능)에 비하여 약 0.001% 이상, 약 0.01% 이상, 약 0.1% 이상, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 75% 이상, 약 100% 이상, 약 125% 이상, 약 150% 이상, 약 175% 이상, 약 200% 이상, 약 250% 이상, 약 300% 이상, 약 350% 이상, 약 400% 이상, 약 450% 이상, 또는 약 500% 이상의 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 고유 글루코코르티코이드에 비하여 약 5000% 이하 또는 약 10,000% 이하의 활성을 나타낸다. 수용체의 고유 리간드에 비하여 수용체에서 Y의 활성은 고유 리간드와 대비하여 Y에 대한 EC50의 역비 (inverse ratio)로서 계산된다. 일부 구체예에서, Y는 수용체의 고유 리간드이다.
GR 리간드 (Y)의 구조
본 발명의 GR 리간드 (Y)는 부분적으로 또는 완전하게 비-펩티드성이고 소수성 또는 친유성이다. 일부 구체예에서, GR 리간드는 약 5000 달톤 이하, 또는 약 4000 달톤 이하, 또는 약 3000 달톤 이하, 또는 약 2000 달톤 이하, 또는 약 1750 달톤 이하, 또는 약 1500 달톤 이하, 또는 약 1250 달톤 이하, 또는 약 1000 달톤 이하, 또는 약 750 달톤 이하, 또는 약 500 달톤 이하, 또는 약 250 달톤 이하의 분자량을 갖는다. Y의 구조는 본 명세서에서 개시된 임의의 교시에 부합할 수 있다.
본 명세서에서 기술된 구체예에서, Y는 Q 또는 L과 반응할 수 있는 Y의 임의의 위치에서 L (가령, L이 연결 기일 때) 또는 Q (가령, L이 단일 결합일 때)에 접합된다. 당업자는 일반적인 지식 및 본 명세서에서 제공된 내용에 비추어, 접합의 위치와 수단을 쉽게 결정할 수 있을 것이다.
Y가 1개의 5-원 고리에 결합된 3개의 6-원 고리를 갖는 사중환상 뼈대 또는 이의 변형을 포함하는 본 명세서에서 기술된 임의의 구체예 (가령, 비타민 D 수용체에서 작용하는 Y)에서, 뼈대의 탄소 원자는 하기에 도시된 바와 같이, 위치 번호에 의해 지칭된다:
Figure pct00005
.
가령, 위치-6에서 케톤을 갖는 변형은 하기 구조를 지칭한다:
Figure pct00006
.
모든 구체예에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체 (GR)에서 작용한다. 일부 구체예에서, Y는 GR에서 작동약 활성을 허용하거나 촉진하는 임의의 구조를 포함하고, 다른 구체예에서, Y는 GR의 길항약이다. 예시적인 구체예에서, Y는 화학식 C의 구조를 포함한다:
Figure pct00007

화학식 C
여기서 R2, R3, R6, R7, R8, R9, 그리고 R10은 각각 독립적으로 GR에 화학식 C의 화합물에 결합 시에 작동약 또는 길항약 활성을 허용하거나 촉진하는 모이어티이고; 그리고 각 파선은 임의적 이중 결합을 나타낸다. 일부 구체예에서, 화학식 C는 위치 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12, 14, 그리고 15 중에서 하나 이상에서 하나 이상의 치환기 (가령, 위치-11에서 히드록실 또는 케톤)를 더욱 포함한다.
일부 구체예에서, Y는 화학식 C의 구조를 포함하고, 여기서
R2는 수소, (C0-C8 알킬)할로, C1-C18 알킬, C2-C18 알케닐, C2-C18 알키닐, 헤테로알킬, (C0-C8 알킬)아릴, (C0-C8 알킬)헤테로아릴, (C0-C8 알킬)OC1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)OC2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)OC2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)OH, (C0-C8 알킬)SH, (C0-C8 알킬)NR24C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)NR24C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)NR24C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)NR24H2, (C0-C8 알킬)C(O)C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)H, (C0-C8 알킬)C(O)아릴, (C0-C8 알킬)C(O)헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)OC1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)OC2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)OC2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)OH, (C0-C8 알킬)C(O)O 아릴, (C0-C8 알킬)C(O)O 헤테로아릴, (C0-C8 알킬)OC(O)C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)OC(O)C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)OC(O)C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24H2, (C0-C8 알킬)C(O)NR24아릴, (C0-C8 알킬)C(O)NR24헤테로아릴, (C0-C8 알킬)NR24C(O)C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)NR24C(O)C2-C8 알케닐, 또는 (C0-C8 알킬)NR24C(O)C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)NR24C(O)OH, (C0-C8 알킬)OC(O)OC1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)OC(O)OC2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)OC(O)OC2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)OC(O)OH, (C0-C8 알킬)OC(O)NR24C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)OC(O)NR24C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)OC(O)NR24C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)OC(O)NR24H2, (C0-C8 알킬)NR24(O)OC1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)NR24(O)OC2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)NR24(O)OC2-C18 알키닐, 또는 (C0-C8 알킬)NR24(O)OH이고;
R3은 수소, (C0-C8 알킬)할로, C1-C18 알킬, C2-C18 알케닐, C2-C18 알키닐, 헤테로알킬, (C0-C8 알킬)아릴, (C0-C8 알킬)헤테로아릴, (C0-C8 알킬)OC1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)OC2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)OC2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)OH, (C0-C8 알킬)SH, (C0-C8 알킬)NR24C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)NR24C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)NR24C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)NR24H2, (C0-C8 알킬)C(O)C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)H, (C0-C8 알킬)C(O)아릴, (C0-C8 알킬)C(O)헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)OC1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)OC2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)OC2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)OH, (C0-C8 알킬)C(O)O 아릴, (C0-C8 알킬)C(O)O 헤테로아릴, (C0-C8 알킬)OC(O)C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)OC(O)C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)OC(O)C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24H2, (C0-C8 알킬)C(O)NR24아릴, (C0-C8 알킬)C(O)NR24헤테로아릴, (C0-C8 알킬)NR24C(O)C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)NR24C(O)C2-C8 알케닐, 또는 (C0-C8 알킬)NR24C(O)C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)NR24C(O)OH, (C0-C8 알킬)OC(O)OC1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)OC(O)OC2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)OC(O)OC2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)OC(O)OH, (C0-C8 알킬)OC(O)NR24C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)OC(O)NR24C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)OC(O)NR24C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)OC(O)NR24H2, (C0-C8 알킬)NR24(O)OC1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)NR24(O)OC2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)NR24(O)OC2-C18 알키닐, 또는 (C0-C8 알킬)NR24(O)OH이고;
R6은 수소, C1-C18 알킬, C2-C18 알케닐, C2-C18 알키닐, 헤테로알킬, (C0-C8 알킬)아릴, (C0-C8 알킬)헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)H, (C0-C8 알킬)C(O)아릴, (C0-C8 알킬)C(O)헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)OC1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)OC2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)OC2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)OH, C0-C8 알킬)C(O)O 아릴, (C0-C8 알킬)C(O)O 헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24H2, (C0-C8 알킬)C(O)NR24아릴, 또는 (C0-C8 알킬)C(O)NR24헤테로아릴이고;
R7은 수소, C1-C18 알킬, C2-C18 알케닐, C2-C18 알키닐, 헤테로알킬, (C0-C8 알킬)아릴, (C0-C8 알킬)헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)H, (C0-C8 알킬)C(O)아릴, (C0-C8 알킬)C(O)헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)OC1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)OC2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)OC2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)OH, C0-C8 알킬)C(O)O 아릴, (C0-C8 알킬)C(O)O 헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C1-C18 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C2-C18 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C2-C18 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24H2, (C0-C8 알킬)C(O)NR24아릴, 또는 (C0-C8 알킬)C(O)NR24헤테로아릴이고;
R8은 수소, (C0-C8 알킬)할로, C1-C18 알킬, C2-C18 알케닐, C2-C18 알키닐, 헤테로알킬, (C0-C8 알킬)아릴, (C0-C8 알킬)헤테로아릴이고;
R9는 수소, (C0-C8 알킬)할로, C1-C18 알킬, C2-C18 알케닐, C2-C18 알키닐, 헤테로알킬, (C0-C8 알킬)아릴, (C0-C8 알킬)헤테로아릴이고;
R10은 수소, (C0-C8 알킬)할로, C1-C18 알킬, 또는 (C0-C8 알킬)OH이고; 그리고
R24는 수소 또는 C1-C18 알킬이다.
일부 구체예에서, Y는 화학식 C의 구조를 포함하고, 여기서
R2는 수소, 할로, OH, 또는 C1-C7 알킬이고;
R3은 수소, 할로, OH, 또는 C1-C7 알킬이고;
R6은 수소, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 헤테로알킬, (C0-C8 알킬)아릴, (C0-C8 알킬)헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)C1-C8 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)C2-C8 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)C2-C8 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)H, (C0-C8 알킬)C(O)아릴, (C0-C8 알킬)C(O)헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)OC1-C8 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)OC2-C8 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)OC2-C8 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)OH, C0-C8 알킬)C(O)O 아릴, (C0-C8 알킬)C(O)O 헤테로아릴, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C1-C8 알킬, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C2-C8 알케닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24C2-C8 알키닐, (C0-C8 알킬)C(O)NR24H2, (C0-C8 알킬)C(O)NR24아릴, 또는 (C0-C8 알킬)C(O)NR24헤테로아릴이고;
R7은 수소, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, 헤테로알킬, (C0-C8 알킬)아릴, (C0-C8 알킬)헤테로아릴, (C0 알킬)C(O)C1-C8 알킬, (C0 알킬)C(O)C2-C8 알케닐, (C0 알킬)C(O)C2-C8 알키닐, (C0)C(O)아릴, (C0)C(O)헤테로아릴, (C0)C(O)OC1-C8 알킬, (C0 알킬)C(O)OC2-C8 알케닐, (C0 알킬)C(O)OC2-C8 알키닐, 또는 (C0 알킬)C(O)OH이고;
R8은 수소 또는 C1-C7 알킬이고;
R9는 수소 또는 C1-C7 알킬이고;
R10은 수소 또는 OH이고; 그리고
R24는 수소 또는 C1-C7 알킬이다.
가령, R2는 수소 또는 메틸이고; R3은 수소, 플루오르, 클로로, 또는 메틸이고; R6은 수소 또는 C(O) C1-C7 알킬이고; R7은 수소, C(O)CH3, 또는 C(O)CH2CH3이고; R8은 수소 또는 메틸이고; R9는 수소 또는 메틸이고; 그리고 R10은 히드록실이다.
화학식 C의 구조의 무제한적 실례에는 하기가 포함된다:
Figure pct00008

및 이들의 유도체.
Y가 화학식 C의 구조를 포함하는 구체예에서, Y는 Q 또는 L과 반응할 수 있는 화학식 C의 임의의 위치에서 L (가령, L이 연결 기일 때) 또는 Q (가령, L이 단일 결합일 때)에 접합된다. 당업자는 일반적인 지식 및 본 명세서에서 제공된 내용에 비추어, 화학식 C 상에서 접합의 위치 및 Q 또는 L에 화학식 C의 접합의 수단을 쉽게 결정할 수 있을 것이다. 일부 구체예에서, 화학식 C는 화학식 C의 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23 중에서 임의의 하나에서 L 또는 Q에 접합된다. 일부 구체예에서, 화학식 C는 화학식 C의 위치 3, 10, 16 또는 17에서 L 또는 Q에 접합된다. 바람직한 구체예에서, 화학식 C는 화학식 C의 위치 3 또는 17에서 L또는 Q에 접합된다.
GR 리간드 (Y)의 변형
일부 구체예에서, GR 리간드는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q) 또는 연결 기 (L)와 상호작용할 수 있는 반응성 모이어티를 포함하도록 유도체화되거나, 또는 달리 화학적으로 변형된다. 본 명세서에서 기술된 구체예에서, Y는 Q 또는 L과 반응할 수 있는 Y의 임의의 위치에서 유도체화된다. Y 상에서 유도체화의 위치는 당업자에게 명백하고, 그리고 이용된 GR 리간드의 유형 및 원하는 활성에 좌우된다. 가령, Y가 1개의 5-원 고리에 결합된 3개의 6-원 고리를 갖는 사중환상 뼈대 또는 이의 변형을 포함하는 구조를 갖는 구체예에서, Y는 위치 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25 중에서 임의의 하나에서 유도체화될 수 있다. 유도체화의 다른 위치는 본 명세서에서 앞서 기술된 바와 같을 수 있다.
GR 리간드는 당업자에게 공지되거나, 또는 본 명세서에서 기술된 임의의 작용제를 이용하여 유도체화될 수 있다 (예로써, 연결 기 섹션 및 Q 및/또는 Y 의 화학적 변형 하위섹션을 참고한다). 가령, 에스트라디올은 Q 또는 L에 접합할 수 있는 에스트라디올의 하기 유도체를 형성하기 위해 숙신산, 숙신산 무수물, 벤조산, 에틸 2-브로모아세테이트, 또는 요오드아세트산으로 유도체화될 수 있다.
Figure pct00009

유사하게, 임의의 전술한 GR 리간드는 당분야에 공지된 방법에 의해 유도체화될 수 있다. 부가적으로, 일정한 유도체화된 리간드는 상업적으로 가용하고 화학 기업, 예를 들면, Sigma-Aldrich로부터 구입될 수 있다.
글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)
본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체에서, Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드이다. 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드는 그들의 N-말단 및/또는 C-말단 영역에서 구조적으로 관련된 일군의 펩티드를 지칭한다 (참고: Sherwood et al., Endocrine Reviews 21: 619-670 (2000)). C-말단은 일반적으로, 수용체 결합에서 기능하고, 그리고 N-말단은 일반적으로, 수용체 신호전달에서 기능하는 것으로 생각된다. N-말단과 C-말단 영역에서 몇몇 아미노산은 글루카곤 슈퍼패밀리의 구성원 사이에 고도로 보존된다. 이들 보존된 아미노산에는 예로써, His1, Gly4, Phe6, Phe22, Val23, Trp25, 그리고 Leu26이 포함되고, 이들 위치에서 아미노산은 그들의 아미노산 측쇄의 구조 내에서 동일성, 보존성 치환 또는 유사성을 보인다.
글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드에는 글루카곤 관련된 펩티드, 성장 호르몬 방출 호르몬 (GHRH; 서열 번호: 1619), 혈관작동성 장 펩티드 (VIP; 서열 번호: 1620), 뇌하수체 아데닐레이트 시클라아제-활성화 폴리펩티드 27 (PACAP-27; 서열 번호: 1621), 펩티드 히스티딘 이소류신 (PHI; 서열 번호: 1542), 펩티드 히스티딘 메티오닌 (PHM; 서열 번호: 1622), 세크레틴 (서열 번호: 1623), 및/또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체가 포함된다. 일부 구체예에서, Q는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개까지의 아미노산 변형을 갖는 고유 글루카곤, 고유 엑센딘-4, 고유 GLP-1(7-37), 고유 GLP-2, 고유 GHRH, 고유 VIP, 고유 PACAP-27, 고유 PHM, 고유 옥신토모듈린, 고유 세크레틴, 또는 고유 GIP의 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 일부 양상에서, Q는 글루카곤 관련된 펩티드, 예를 들면, 글루카곤 (서열 번호: 1601), 옥신토모듈린 (서열 번호: 1606), 엑센딘-4 (서열 번호: 1618), 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1) (서열 번호: 1603으로서 제공된 아미노산 7-36; 아미노산 7-37은 서열 번호: 1604로서 제공된다), 글루카곤-유사 펩티드-2 (GLP-2, 서열 번호: 1608), 위 저해 펩티드 (GIP, 서열 번호: 1607) 또는 이들의 유사체, 유도체와 접합체이다. 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤, GLP-1, GLP-2, 그리고 GIP 수용체 중에서 하나 이상에서 생물학적 활성 (작동약 또는 길항약으로서)을 갖고, 그리고 펩티드의 길이에 걸쳐 (또는 글루카곤에 상응하는 위치에 걸쳐, 예로써 도 1 참고) 고유 글루카곤, 고유 옥신토모듈린, 고유 엑센딘-4, 고유 GLP-1(7-37), 고유 GLP-2, 또는 고유 GIP 중에서 최소한 하나와 최소한 20% 서열 동일성 (가령, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%)을 공유하는 아미노산 서열을 포함한다.
각 열거된 고유 펩티드에 서열 동일성의 모든 가능한 부분집합, 예를 들면, 고유 GLP-1의 길이에 걸쳐 고유 GLP-1과 최소한 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 서열 동일성을 공유하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드와 함께, 글루카곤 관련된 펩티드의 모든 가능한 활성 부분집합, 예를 들면, 글루카곤 또는 GLP-1 또는 GIP 수용체 중에서 하나 이상에서 생물학적 활성 (작동약 또는 길항약으로서)을 갖는 펩티드가 예기되는 것으로 이해된다. 본 발명의 일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체 작동약 활성, GLP-1 수용체 작동약 활성, GIP 수용체 작동약 활성, 글루카곤 수용체/GLP-1 수용체 공동-작동약 활성, 글루카곤 수용체/GIP 수용체 공동-작동약 활성, GLP-1 수용체/GIP 수용체 공동-작동약 활성, 글루카곤 수용체/GLP-1 수용체/GIP 수용체 트리-작동약 활성, 글루카곤 수용체 길항약 활성, 또는 글루카곤 수용체 길항약/GLP-1 수용체 작동약 활성을 갖는 펩티드이다. 일부 구체예에서, 펩티드는 분자의 C-말단 절반에서 알파-나선 입체형태를 유지한다. 일부 구체예에서, 펩티드는 수용체 상호작용 또는 신호전달에 관여하는 위치, 예를 들면, 글루카곤의 위치 3, 또는 GLP-1(7-37)의 위치 7, 10, 12, 13, 15 또는 17을 유지한다. 따라서 글루카곤 관련된 펩티드는 부류 1, 부류 2, 부류 3, 부류 4, 및/또는 부류 5의 펩티드일 수 있고, 이들 각각은 본 명세서에서 더욱 기술된다.
Q는 또한, 당분야에 공지된 임의의 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드일 수도 있는데, 이들 중에서 일부는 본 명세서에서 무제한적 실례로서 개시된다. 다양한 GLP-1 유사체는 당분야에 공지되어 있고, 그리고 본 발명에 따른 글루카곤-관련된 펩티드이다. 예로써, WO 2008023050, WO 2007030519, WO 2005058954, WO 2003011892, WO 2007046834, WO 2006134340, WO 2006124529, WO 2004022004, WO 2003018516, WO 2007124461을 참고하고, 이들 각각은 GLP-1 유사체 또는 유도체의 각 서열 또는 화학식 개시를 위해 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입된다. 임의의 구체예에서, Q는 WO 2007/056362, WO 2008/086086, WO 2009/155527, WO 2008/101017, WO 2009/155258, WO 2009/058662, WO 2009/058734, WO 2009/099763, WO 2010/011439, PCT 특허 출원 번호 제US09/68745호, 그리고 미국 특허 출원 번호 제61/187,578호에서 개시된 글루카곤 관련된 펩티드일 수 있고, 이들 각각은 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입된다. 일정한 구체예에서, Q는 본 명세서에서 상술된 바와 같은 부류 1, 부류 2, 부류 3, 부류 4, 또는 부류 5 글루카곤 관련된 펩티드이다. 본 명세서에서 기술된 임의의 구체예에서, Q는 서열 번호: 1-760, 801-919, 1001-1275, 1301-1371, 1401-1518, 1601-1650 중에서 한 가지이다. 일부 구체예에서, Q는 서열 번호: 1647-1650 중에서 한 가지이다.
글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)의 활성
글루카곤 수용체에서 활성
일부 구체예에서, Q는 약 10 mM 이하, 또는 약 1 mM (1000 μM) 이하 (가령, 약 750 μM 이하, 약 500 μM 이하, 약 250 μM 이하, 약 100 μM 이하, 약 75 μM 이하, 약 50 μM 이하, 약 25 μM 이하, 약 10 μM 이하, 약 7.5 μM 이하, 약 6 μM 이하, 약 5 μM 이하, 약 4 μM 이하, 약 3 μM 이하, 약 2 μM 이하 또는 약 1 μM 이하)의 글루카곤 수용체 활성화에 대한 EC50 (또는 글루카곤 수용체 길항작용에 대한 IC50)을 나타낸다. 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 약 1000 nM 이하 (가령, 약 750 nM 이하, 약 500 nM 이하, 약 250 nM 이하, 약 100 nM 이하, 약 75 nM 이하, 약 50 nM 이하, 약 25 nM 이하, 약 10 nM 이하, 약 7.5 nM 이하, 약 6 nM 이하, 약 5 nM 이하, 약 4 nM 이하, 약 3 nM 이하, 약 2 nM 이하 또는 약 1 nM 이하)의 EC50 또는 IC50을 나타낸다. 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 피코몰 범위의 EC50 또는 IC50을 갖는다. 따라서 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 약 1000 pM 이하 (가령, 약 750 pM 이하, 약 500 pM 이하, 약 250 pM 이하, 약 100 pM 이하, 약 75 pM 이하, 약 50 pM 이하, 약 25 pM 이하, 약 10 pM 이하, 약 7.5 pM 이하, 약 6 pM 이하, 약 5 pM 이하, 약 4 pM 이하, 약 3 pM 이하, 약 2 pM 이하 또는 약 1 pM 이하)의 EC50 또는 IC50을 나타낸다.
일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 약 0.001 pM 이상, 약 0.01 pM 이상, 또는 약 0.1 pM 이상의 EC50 또는 IC50을 나타낸다. 글루카곤 수용체 활성화 (글루카곤 수용체 활성)은 글루카곤 수용체를 과다-발현하는 HEK293 세포에서 cAMP 유도를 측정하는, 예를 들면, 실시예 2에서 기술된 바와 같이, 글루카곤 수용체를 인코딩하는 DNA 및 cAMP 반응 요소에 연결된 루시페라아제 유전자로 공동-형질감염된 HEK293 세포를 평가하는 시험관내 분석평가에 의해 측정될 수 있다.
일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤 (글루카곤 효능)에 비하여 약 0.001% 이상, 약 0.01% 이상, 약 0.1% 이상, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 75% 이상, 약 100% 이상, 약 125% 이상, 약 150% 이상, 약 175% 이상, 약 200% 이상, 약 250% 이상, 약 300% 이상, 약 350% 이상, 약 400% 이상, 약 450% 이상, 또는 약 500% 이상의 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤에 비하여 약 5000% 이하 또는 약 10,000% 이하의 활성을 나타낸다. 수용체의 고유 리간드에 비하여 수용체에서 Q의 활성은 고유 리간드와 대비하여 Q에 대한 EC50의 역비로서 계산된다.
일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서만 실질적인 활성 (효능)을 나타내고 GLP-1 수용체 또는 GIP 수용체에서 활성을 거의 또는 전혀 나타내지 않는다. 일부 구체예에서, Q는 "순수한 글루카곤 수용체 작동약"으로서 간주되거나, 또는 "글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약" 또는 "글루카곤/GIP 수용체 공동-작동약"으로서 간주되지 않는다. 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 본 명세서에서 기술된 활성 또는 효능의 임의의 수준을 나타내지만 GLP-1 수용체에서 또는 GIP 수용체에서 훨씬 적은 활성 (효능)을 갖는다. 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 EC50보다 100-배 이상인 GLP-1 수용체에서 EC50을 나타낸다. 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 EC50보다 100-배 이상인 GIP 수용체에서 EC50을 나타낸다.
GLP-1 수용체에서 활성
일부 구체예에서, Q는 약 10 mM 이하, 또는 약 1 mM (1000 μM) 이하 (가령, 약 750 μM 이하, 약 500 μM 이하, 약 250 μM 이하, 약 100 μM 이하, 약 75 μM 이하, 약 50 μM 이하, 약 25 μM 이하, 약 10 μM 이하, 약 7.5 μM 이하, 약 6 μM 이하, 약 5 μM 이하, 약 4 μM 이하, 약 3 μM 이하, 약 2 μM 이하 또는 약 1 μM 이하)의 GLP-1 수용체 활성화에 대한 EC50 (또는 GLP-1 수용체 길항작용에 대한 IC50)을 나타낸다. 일부 구체예에서, Q는 약 1000 nM 이하 (가령, 약 750 nM 이하, 약 500 nM 이하, 약 250 nM 이하, 약 100 nM 이하, 약 75 nM 이하, 약 50 nM 이하, 약 25 nM 이하, 약 10 nM 이하, 약 7.5 nM 이하, 약 6 nM 이하, 약 5 nM 이하, 약 4 nM 이하, 약 3 nM 이하, 약 2 nM 이하 또는 약 1 nM 이하)의 GLP-1 수용체 활성화에 대한 EC50 또는 IC50을 나타낸다. 일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 피코몰 범위의 EC50 또는 IC50을 갖는다. 따라서 일부 구체예에서, Q는 약 1000 pM 이하 (가령, 약 750 pM 이하, 약 500 pM 이하, 약 250 pM 이하, 약 100 pM 이하, 약 75 pM 이하, 약 50 pM 이하, 약 25 pM 이하, 약 10 pM 이하, 약 7.5 pM 이하, 약 6 pM 이하, 약 5 pM 이하, 약 4 pM 이하, 약 3 pM 이하, 약 2 pM 이하 또는 약 1 pM 이하)의 GLP-1 수용체 활성화에 대한 EC50 또는 IC50을 나타낸다.
일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 약 0.001 pM 이상, 약 0.01 pM 이상, 또는 약 0.1 pM 이상의 EC50 또는 IC50을 나타낸다. GLP-1 수용체 활성화 (GLP-1 수용체 활성)는 GLP-1 수용체를 과다-발현하는 HEK293 세포에서 cAMP 유도를 측정하는, 예를 들면, 실시예 2에서 기술된 바와 같이, GLP-1 수용체를 인코딩하는 DNA 및 cAMP 반응 요소에 연결된 루시페라아제 유전자로 공동-형질감염된 HEK293 세포를 평가하는 시험관내 분석평가에 의해 측정될 수 있다.
일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1 (GLP-1 효능)에 비하여 약 0.001% 이상, 약 0.01% 이상, 약 0.1% 이상, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상, 약 20% 이상, 약 30% 이상, 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 75% 이상, 약 100% 이상, 약 125% 이상, 약 150% 이상, 약 175% 이상, 약 200% 이상, 약 250% 이상, 약 300% 이상, 약 350% 이상, 약 400% 이상, 약 450% 이상, 또는 약 500% 이상의 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1 (GLP-1 효능)에 비하여 약 5000% 이하 또는 약 10,000% 이하의 활성을 나타낸다.
일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서만 실질적인 활성 (효능)을 나타내고 글루카곤 수용체 또는 GIP 수용체에서 활성을 거의 또는 전혀 나타내지 않는다. 일부 구체예에서, Q는 "순수한 GLP-1 수용체 작동약"으로서 간주되거나, 또는 "글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약" 또는 "GLP-1/GIP 공동-작동약"으로서 간주되지 않는다. 일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 본 명세서에서 기술된 활성 또는 효능의 임의의 수준을 나타내지만 글루카곤 수용체에서 또는 GIP 수용체에서 훨씬 적은 활성 (효능)을 갖는다. 일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 EC50보다 100-배 이상인 글루카곤 수용체에서 EC50을 나타낸다. 일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 EC50보다 100-배 이상인 GIP 수용체에서 EC50을 나타낸다.
GIP 수용체에서 활성
일부 구체예에서, Q는 약 10 mM 이하, 또는 약 1 mM (1000 μM) 이하 (가령, 약 750 μM 이하, 약 500 μM 이하, 약 250 μM 이하, 약 100 μM 이하, 약 75 μM 이하, 약 50 μM 이하, 약 25 μM 이하, 약 10 μM 이하, 약 7.5 μM 이하, 약 6 μM 이하, 약 5 μM 이하, 약 4 μM 이하, 약 3 μM 이하, 약 2 μM 이하 또는 약 1 μM 이하)의 GIP 수용체 활성화에 대한 EC50 (또는 GIP 수용체 길항작용에 대한 IC50)을 나타낸다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 EC50 또는 IC50은 1000 nM 미만, 900 nM 미만, 800 nM 미만, 700 nM 미만, 600 nM 미만, 500 nM 미만, 400 nM 미만, 300 nM 미만, 또는 200 nM 미만이다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 EC50 또는 IC50은 약 100 nM 이하, 예를 들면, 약 75 nM 이하, 약 50 nM 이하, 약 25 nM 이하, 약 10 nM 이하, 약 8 nM 이하, 약 6 nM 이하, 약 5 nM 이하, 약 4 nM 이하, 약 3 nM 이하, 약 2 nM 이하, 또는 약 1 nM 이하이다. 일부 구체예에서, Q는 피코몰 범위에서 GIP 수용체 활성화에 대한 EC50 또는 IC50을 나타낸다. 예시적인 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 EC50 또는 IC50은 1000 pM 미만, 900 pM 미만, 800 pM 미만, 700 pM 미만, 600 pM 미만, 500 pM 미만, 400 pM 미만, 300 pM 미만, 200 pM 미만이다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 EC50 또는 IC50은 약 100 pM 이하, 예를 들면, 약 75 pM 이하, 약 50 pM 이하, 약 25 pM 이하, 약 10 pM 이하, 약 8 pM 이하, 약 6 pM 이하, 약 5 pM 이하, 약 4 pM 이하, 약 3 pM 이하, 약 2 pM 이하, 또는 약 1 pM 이하이다. 수용체 활성화는 GIP 수용체를 과다-발현하는 HEK293 세포에서 cAMP 유도를 측정하는, 예를 들면, 실시예 2에서 기술된 바와 같이, 수용체를 인코딩하는 DNA 및 cAMP 반응 요소에 연결된 루시페라아제 유전자로 공동-형질감염된 HEK293 세포를 평가하는 시험관내 분석평가에 의해 측정될 수 있다.
본 발명의 일부 구체예에서, Q는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 최소한 또는 약 0.1% 활성을 나타낸다. 예시적인 구체예에서, Q는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성의 최소한 또는 약 0.2%, 최소한 또는 약 0.3%, 최소한 또는 약 0.4%, 최소한 또는 약 0.5%, 최소한 또는 약 0.6%, 최소한 또는 약 0.7%, 최소한 또는 약 0.8%, 최소한 또는 약 0.9%, 최소한 또는 약 1%, 최소한 또는 약 5%, 최소한 또는 약 10%, 최소한 또는 약 20%, 최소한 또는 약 30%, 최소한 또는 약 40%, 최소한 또는 약 50%, 최소한 또는 약 60%, 최소한 또는 약 70%, 최소한 또는 약 75%, 최소한 또는 약 80%, 최소한 또는 약 90%, 최소한 또는 약 95%, 또는 최소한 또는 약 100%를 나타낸다.
본 발명의 일부 구체예에서, Q는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성보다 큰 활성을 나타낸다. 예시적인 구체예에서, Q는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성의 최소한 또는 약 101%, 최소한 또는 약 105%, 최소한 또는 약 110%, 최소한 또는 약 125%, 최소한 또는 약 150%, 최소한 또는 약 175%, 최소한 또는 약 200%, 최소한 또는 약 300%, 최소한 또는 약 400%, 최소한 또는 약 500% 또는 이 보다 더 높은 %를 나타낸다. 일부 구체예에서, Q는 GIP 수용체에서 고유 GIP에 비하여 단지 1000%, 10,000%, 100,000%, 또는 1,000,000% 활성을 나타낸다. GIP 수용체에서 고유 GIP에 비하여 펩티드의 활성은 고유 GIP와 대비하여 GIP 작동약 펩티드에 대한 EC50의 역비로서 계산된다.
일부 구체예에서, Q는 GIP 수용체에서만 실질적인 활성 (효능)을 나타내고 글루카곤 수용체 또는 GLP-1 수용체에서 활성을 거의 또는 전혀 나타내지 않는다. 일부 구체예에서, Q는 "순수한 GIP 수용체 작동약"으로서 간주되거나, 또는 "글루카곤/GIP 수용체 공동-작동약" 또는 "GLP-1/GIP 공동-작동약"으로서 간주되지 않는다. 일부 구체예에서, Q는 GIP 수용체에서 본 명세서에서 기술된 활성 또는 효능의 임의의 수준을 나타내지만 글루카곤 수용체에서 또는 GLP-1 수용체에서 훨씬 적은 활성 (효능)을 갖는다. 일부 구체예에서, Q는 GIP 수용체에서 EC50보다 100-배 이상인 글루카곤 수용체에서 EC50을 나타내고, 그리고 GIP 수용체에서 EC50보다 100-배 이상인 GLP-1 수용체에서 EC50을 나타낸다.
GLP-1 수용체 및 글루카곤 수용체에서 활성
일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체 둘 모두에서 활성을 나타낸다 ("글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약"). 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 Q의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)은 GLP-1 수용체에서 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)으로부터 약 50-배, 약 40-배, 약 30-배, 약 20-배, 약 10-배, 또는 약 5배의 차이 (더욱 높거나 또는 더욱 낮은) 내에 있다. 일부 구체예에서, Q의 글루카곤 효능은 GLP-1 효능으로부터 약 25-, 약 20-, 약 15-, 약 10-, 또는 약 5-배의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다.
일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능에 의해 나눗셈된 글루카곤 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능의 비율은 X 미만 또는 약 X이고, 여기서 X는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 글루카곤 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 약 1 내지 5 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q의 GLP-1 효능과 비교하여 Q의 글루카곤 효능의 비율은 Z 미만 또는 약 Z이고, 여기서 Z는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Q의 GLP-1 효능과 비교하여 Q의 글루카곤 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 EC50보다 2- 내지 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 글루카곤 수용체에서에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 글루카곤 유사체의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50에 의해 나눗셈된 GLP-1 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50의 비율은 V 미만 또는 약 V이고, 여기서 V는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 GLP-1 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q의 글루카곤 효능과 비교하여 Q의 GLP-1 효능의 비율은 W 미만 또는 약 W이고, 여기서 W는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Q의 글루카곤 효능과 비교하여 Q의 GLP-1 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 EC50보다 약 2- 내지 약 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 GLP-1 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성 (GLP-1 효능)의 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)를 나타내고, 그리고 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성 (글루카곤 효능)의 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)을 나타낸다.
GLP-1 수용체와 대비하여 글루카곤 수용체에 대한 Q의 선택성은 글루카곤/GLP-1 활성의 상대적 비율 (GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1에 비하여 유사체의 활성에 의해 나눗셈된, 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤에 비하여 Q의 활성)로서 기술될 수 있다. 가령, 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 60% 및 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 60%를 나타내는 Q는 1:1 비율의 글루카곤/GLP-1 활성을 갖는다. 글루카곤/GLP-1 활성의 예시적인 비율은 약 1:1, 1.5:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1, 또는 약 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 또는 1:1.5를 포함한다. 실례로써, 10:1의 글루카곤/GLP-1 활성 비율은 GLP-1 수용체와 대비하여 글루카곤 수용체에 대한 10-배 선택성을 지시한다. 유사하게, 10:1의 GLP-1/글루카곤 활성 비율은 글루카곤 수용체와 대비하여 GLP-1 수용체에 대한 10-배 선택성을 지시한다.
일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체와 GLP-1 수용체에서 실질적인 활성 (효능)을 나타내고, 그리고 GIP 수용체에서 활성을 거의 또는 전혀 나타내지 않는다. 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체와 GLP-1 수용체에서 본 명세서에서 기술된 활성 또는 효능의 임의의 수준을 나타내지만 GIP 수용체에서 훨씬 적은 활성 (효능)을 갖는다. 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 EC50 및 GLP-1 수용체에서 EC50보다 100-배 이상인 GIP 수용체에서 EC50을 나타낸다.
GLP-1 수용체 및 GIP 수용체에서 활성
일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체와 GIP 수용체 둘 모두에서 활성을 나타낸다 ("GIP/GLP-1 수용체 공동-작동약"). 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)은 GLP-1 수용체에서 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)으로부터 약 50-배, 약 40-배, 약 30-배, 약 20-배, 약 10-배, 또는 약 5배의 차이 (더욱 높거나 또는 더욱 낮은) 내에 있다. 일부 구체예에서, Q의 GIP 효능은 GLP-1 효능으로부터 약 25-, 약 20-, 약 15-, 약 10-, 또는 약 5-배의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다.
일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능의 비율은 X 미만 또는 약 X이고, 여기서 X는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 약 1 내지 5 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q의 GLP-1 효능과 비교하여 Q의 GIP 효능의 비율은 Z 미만 또는 약 Z이고, 여기서 Z는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Q의 GLP-1 효능과 비교하여 Q의 GIP 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 EC50보다 2- 내지 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 GIP 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50에 의해 나눗셈된 GLP-1 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50의 비율은 V 미만 또는 약 V이고, 여기서 V는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 GLP-1 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q의 GIP 효능과 비교하여 Q의 GLP-1 효능의 비율은 W 미만 또는 약 W이고, 여기서 W는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Q의 GIP 효능과 비교하여 Q의 GLP-1 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q는 GIP 수용체에서 EC50보다 약 2- 내지 약 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 GLP-1 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, Q는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성 (GLP-1 효능)의 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)를 나타내고, 그리고 GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성 (GIP 효능)의 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)을 나타낸다.
GLP-1 수용체와 대비하여 GIP 수용체에 대한 Q의 선택성은 GIP/GLP-1 활성의 상대적 비율 (GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1에 비하여 유사체의 활성에 의해 나눗셈된, GIP 수용체에서 고유 GIP에 비하여 Q의 활성)로서 기술될 수 있다. 가령, GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성의 60% 및 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 60%를 나타내는 Q는 1:1 비율의 GIP/GLP-1 활성을 갖는다. GIP/GLP-1 활성의 예시적인 비율은 약 1:1, 1.5:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1, 또는 약 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 또는 1:1.5를 포함한다. 실례로써, 10:1의 GIP/GLP-1 활성 비율은 GLP-1 수용체와 대비하여 GIP 수용체에 대한 10-배 선택성을 지시한다. 유사하게, 10:1의 GLP-1/GIP 활성 비율은 GIP 수용체와 대비하여 GLP-1 수용체에 대한 10-배 선택성을 지시한다.
글루카곤 수용체 및 GIP 수용체에서 활성
일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체와 GIP 수용체 둘 모두에서 활성을 나타낸다 ("GIP/글루카곤 수용체 공동-작동약"). 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)은 글루카곤 수용체에서 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)으로부터 약 50-배, 약 40-배, 약 30-배, 약 20-배, 약 10-배, 또는 약 5배의 차이 (더욱 높거나 또는 더욱 낮은) 내에 있다. 일부 구체예에서, Q의 GIP 효능은 글루카곤 효능으로부터 약 25-, 약 20-, 약 15-, 약 10-, 또는 약 5-배의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다.
일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능의 비율은 X 미만 또는 약 X이고, 여기서 X는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 약 1 내지 5 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q의 글루카곤 효능과 비교하여 Q의 GIP 효능의 비율은 Z 미만 또는 약 Z이고, 여기서 Z는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Q의 글루카곤 효능과 비교하여 Q의 GIP 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 EC50보다 2- 내지 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 GIP 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50에 의해 나눗셈된 글루카곤 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50의 비율은 V 미만 또는 약 V이고, 여기서 V는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 글루카곤 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q의 GIP 효능과 비교하여 Q의 글루카곤 효능의 비율은 W 미만 또는 약 W이고, 여기서 W는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Q의 GIP 효능과 비교하여 Q의 글루카곤 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q는 GIP 수용체에서 EC50보다 약 2- 내지 약 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 글루카곤 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성 (글루카곤 효능)의 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)를 나타내고, 그리고 GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성 (GIP 효능)의 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)을 나타낸다.
글루카곤 수용체와 대비하여 GIP 수용체에 대한 Q의 선택성은 GIP/글루카곤 활성의 상대적 비율 (글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤에 비하여 유사체의 활성에 의해 나눗셈된, GIP 수용체에서 고유 GIP에 비하여 Q의 활성)로서 기술될 수 있다. 가령, GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성의 60% 및 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 60%를 나타내는 Q는 1:1 비율의 GIP/글루카곤 활성을 갖는다. GIP/글루카곤 활성의 예시적인 비율은 약 1:1, 1.5:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1, 또는 약 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 또는 1:1.5를 포함한다. 실례로써, 10:1의 GIP/글루카곤 활성 비율은 글루카곤 수용체와 대비하여 GIP 수용체에 대한 10-배 선택성을 지시한다. 유사하게, 10:1의 글루카곤/GIP 활성 비율은 GIP 수용체와 대비하여 글루카곤 수용체에 대한 10-배 선택성을 지시한다.
글루카곤 수용체, GLP-1 수용체, 그리고 GIP 수용체에서 활성
일부 구체예에서, Q는 글루카곤 수용체, GLP-1 수용체, 그리고 GIP 수용체 모두에서 활성을 나타낸다 ("글루카곤/GLP-1/GIP 수용체 트리-작동약"). 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 Q의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)은 GLP-1 수용체와 GIP 수용체 둘 모두에서 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)으로부터 약 100-배, 약 75-배, 약 60-배, 50-배, 약 40-배, 약 30-배, 약 20-배, 약 10-배, 또는 약 5-배의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다. 일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 Q의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)은 글루카곤 수용체와 GIP 수용체 둘 모두에서 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)으로부터 약 100-배, 약 75-배, 약 60-배, 50-배, 약 40-배, 약 30-배, 약 20-배, 약 10-배, 또는 약 5-배의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)은 글루카곤 수용체와 GLP-1 수용체 둘 모두에서 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)으로부터 약 100-배, 약 75-배, 약 60-배, 50-배, 약 40-배, 약 30-배, 약 20-배, 약 10-배, 또는 약 5-배의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다. 이러한 배수적 차이는 대안으로, 전술한 바와 같은 글루카곤/GLP-1, 또는 GLP-1/GIP, 또는 글루카곤/GLP-1의 비율로서 표시될 수 있다.
글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)의 구조
본 명세서에서 기술된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)는 고유 인간 글루카곤 (서열 번호: 1601), 고유 인간 GLP-1 (서열 번호: 1603 또는 1604), 또는 고유 인간 GIP (서열 번호: 1607)의 아미노산 서열에 기초된 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
고유 인간 글루카곤에 기초
본 발명의 일부 양상에서, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)는 고유 인간 글루카곤 (서열 번호: 1601)의 아미노산 서열에 기초된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상에서, Q는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 그리고 일부 경우에, 16개 이상 (가령, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개 등)의 아미노산 변형을 포함하는 서열 번호: 1601의 변형된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, Q는 고유 인간 글루카곤 서열 (서열 번호: 1601)에 비하여 총 1개, 2개까지, 3개까지, 4개까지, 5개까지, 6개까지, 7개까지, 8개까지, 9개까지, 또는 10개까지의 아미노산 변형을 포함한다. 일부 구체예에서, 이들 변형은 본 명세서에서 기술된 임의의 것들, 예를 들면, 아실화, 알킬화, 페길화, C-말단에서 절두, 위치 1, 2, 3, 7, 10, 12, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 23, 24, 27, 28과 29 중에서 하나 이상에서 아미노산의 치환이다.
일부 구체예에서, Q는 고유 인간 글루카곤 (서열 번호: 1601)의 아미노산 서열에 최소한 25% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, Q는 서열 번호: 1601에 최소한 30%, 최소한 40%, 최소한 50%, 최소한 60%, 최소한 70%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90% 또는 90% 초과의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 전술한 서열 동일성 %을 갖는 Q의 아미노산 서열은 Q의 전장 아미노산 서열이다. 일부 구체예에서, 전술한 서열 동일성 %을 갖는 Q의 아미노산 서열은 Q의 아미노산 서열의 단지 일부이다. 일부 구체예에서, Q는 서열 번호: 1601의 최소한 5개 인접 아미노산 (가령, 최소한 6개, 최소한 7개, 최소한 8개, 최소한 9개, 최소한 10개 아미노산)의 참고 아미노산 서열에 약 A% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 참고 아미노산 서열은 서열 번호: 1601의 위치 C에서 아미노산으로 시작되고 서열 번호: 1601의 위치 D에서 아미노산으로 종결되고, 여기서 A는 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99이고; C는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28이고, 그리고 D는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 또는 29이다. 상기 파라미터의 임의의 모든 가능한 조합이 기대되는데, 예로써 A는 90%이고, C와 D는 1과 27, 또는 6과 27, 또는 8과 27, 또는 10과 27, 또는 12와 27, 또는 16과 27이다.
고유 인간 GLP-1에 기초
본 발명의 일부 양상에서, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)는 고유 인간 GLP-1 (서열 번호: 1603)의 아미노산 서열에 기초된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상에서, Q는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 그리고 일부 경우에, 16개 이상 (가령, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개 등)의 아미노산 변형을 포함하는 서열 번호: 1603의 변형된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, Q는 고유 인간 GLP-1 서열 (서열 번호: 1603)에 비하여 총 1개, 2개까지, 3개까지, 4개까지, 5개까지, 6개까지, 7개까지, 8개까지, 9개까지, 또는 10개까지의 아미노산 변형을 포함한다. 일부 구체예에서, 이들 변형은 본 명세서에서 기술된 임의의 것들, 예를 들면, 아실화, 알킬화, 페길화, C-말단에서 절두, 위치 1, 2, 3, 7, 10, 12, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 23, 24, 27, 28과 29 중에서 하나 이상에서 아미노산의 치환이다.
일부 구체예에서, Q는 고유 인간 GLP-1 (서열 번호: 1603)의 아미노산 서열에 최소한 25% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, Q는 서열 번호: 1603에 최소한 30%, 최소한 40%, 최소한 50%, 최소한 60%, 최소한 70%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90% 또는 90% 초과의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 전술한 서열 동일성 %을 갖는 Q의 아미노산 서열은 Q의 전장 아미노산 서열이다. 일부 구체예에서, 전술한 서열 동일성 %을 갖는 Q의 아미노산 서열은 Q의 아미노산 서열의 단지 일부이다. 일부 구체예에서, Q는 서열 번호: 1603의 최소한 5개 인접 아미노산 (가령, 최소한 6개, 최소한 7개, 최소한 8개, 최소한 9개, 최소한 10개 아미노산)의 참고 아미노산 서열에 약 A% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 참고 아미노산 서열은 서열 번호: 1603의 위치 C에서 아미노산으로 시작되고 서열 번호: 1603의 위치 D에서 아미노산으로 종결되고, 여기서 A는 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99이고; C는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28이고, 그리고 D는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 또는 29이다. 상기 파라미터의 임의의 모든 가능한 조합이 기대되는데, 예로써 A는 90%이고, C와 D는 1과 27, 또는 6과 27, 또는 8과 27, 또는 10과 27, 또는 12와 27, 또는 16과 27이다.
고유 인간 GIP에 기초
본 발명의 일부 구체예에서, Q는 고유 인간 GIP의 유사체이고, 이의 아미노산 서열은 본 명세서에서 서열 번호: 1607로서 제공된다. 따라서 일부 구체예에서, Q는 서열 번호: 1607의 아미노산 서열에 기초된 아미노산 서열을 포함하지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 그리고 일부 경우에, 16개 이상 (가령, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개 등)의 아미노산 변형으로 변형된다. 일부 구체예에서, Q는 고유 인간 GIP 서열 (서열 번호: 1607)에 비하여 총 1개, 2개까지, 3개까지, 4개까지, 5개까지, 6개까지, 7개까지, 8개까지, 9개까지, 또는 10개까지의 아미노산 변형을 포함한다. 일부 구체예에서, 이들 변형은 본 명세서에서 기술된 임의의 것들, 예를 들면, 아실화, 알킬화, 페길화, C-말단에서 절두, 위치 1, 2, 3, 7, 10, 12, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 23, 24, 27, 28과 29 중에서 하나 이상에서 아미노산의 치환이다. 예시적인 GIP 수용체 작동약은 당분야에 공지되어 있다. 예로써, Irwin et al., J Pharm and Expmt Ther 314(3): 1187-1194 (2005); Salhanick et al., Bioorg Med Chem Lett 15(18): 4114-4117 (2005); Green et al., Dibetes 7(5): 595-604 (2005); O'Harte et al., J Endocrinol 165(3): 639-648 (2000); O'Harte et al., Diabetologia 45(9): 1281-1291 (2002); Gault et al., Biochem J 367 (Pt3): 913-920 (2002); Gault et al., J Endocrin 176: 133-141 (2003); Irwin et al., Diabetes Obes Metab. 11(6): 603-610 (epub 2009)을 참고한다.
일부 구체예에서, Q는 고유 인간 GIP (서열 번호: 1607)의 아미노산 서열에 최소한 25% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, Q는 서열 번호: 1607에 최소한 30%, 최소한 40%, 최소한 50%, 최소한 60%, 최소한 70%, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90% 또는 90% 초과의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 전술한 서열 동일성 %을 갖는 Q의 아미노산 서열은 Q의 전장 아미노산 서열이다. 일부 구체예에서, 전술한 서열 동일성 %을 갖는 Q의 아미노산 서열은 Q의 아미노산 서열의 단지 일부이다. 일부 구체예에서, Q는 서열 번호: 1607의 최소한 5개 인접 아미노산 (가령, 최소한 6개, 최소한 7개, 최소한 8개, 최소한 9개, 최소한 10개 아미노산)의 참고 아미노산 서열에 약 A% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 참고 아미노산 서열은 서열 번호: 1607의 위치 C에서 아미노산으로 시작되고 서열 번호: 1607의 위치 D에서 아미노산으로 종결되고, 여기서 A는 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99이고; C는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28이고, 그리고 D는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 또는 29이다. 상기 파라미터의 임의의 모든 가능한 조합이 기대되는데, 예로써 A는 90%이고, C와 D는 1과 27, 또는 6과 27, 또는 8과 27, 또는 10과 27, 또는 12와 27, 또는 16과 27이다.
변형
Q가 글루카곤 관련된 펩티드일 때, Q는 변형을 갖는 고유 글루카곤 아미노산 서열 (서열 번호: 1601)을 포함할 수 있다. 예시적인 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 고유 글루카곤 서열에 비하여 총 1개, 2개까지, 3개까지, 4개까지, 5개까지, 6개까지, 7개까지, 8개까지, 9개까지, 또는 10개까지의 아미노산 변형, 예를 들면, 보존성 또는 비-보존성 치환을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 기술된 변형과 치환은 일정한 양상에서, Q 내에 특정한 위치에서 만들어지고, 여기서 위치의 넘버링은 글루카곤 (서열 번호: 1601)의 넘버링에 상응한다. 일부 구체예에서, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 비-보존성 치환이 위치 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 또는 29 중에서 하나에서 수행되고, 그리고 5개까지의 추가 보존성 치환이 이들 위치 중에서 하나에서 수행된다. 일부 구체예에서, 1, 2, 또는 3개의 아미노산 변형이 아미노산 내에서 위치 1-16에서 수행되고, 그리고 1, 2 또는 3개의 아미노산 변형이 아미노산 내에서 위치 17-26에서 수행된다. 일부 구체예에서, Q는 고유 글루카곤 내에 상응하는 위치에서 최소한 22, 23, 24, 25, 26, 27 또는 28의 자연 발생 아미노산을 유지한다 (가령, 자연 발생 글루카곤에 비하여 1-7, 1-5 또는 1-3 변형을 갖는다).
DPP-IV 내성
일부 구체예에서, Q가 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드인 경우에, Q는 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-IV)에 의한 절단에 대한 감수성을 감소시키기 위해 위치 1 또는 2에서 변형을 포함한다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, Q의 위치 1 (가령, 도 1에서 도시된 것들에서 선택됨)은 D-히스티딘, 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA), N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘 및 호모-히스티딘으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, Q의 위치 2는 D-세린, D-알라닌, 발린, 글리신, N-메틸 세린, 그리고 아미노이소부티르산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드의 위치 2는 D-세린이 아니다.
위치 3에서 글루카곤 변형
본 명세서에서 기술된 부류 1개 내지 3의 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 활성을 유지하거나 증가시키기 위해 위치 3에서 변형될 수 있다 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름).
Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서에서 유지되거나 증강된 활성은 위치 3에서 글루타민 유사체로 Gln을 변형함으로써 달성될 수 있다. 가령, 위치 3에서 글루타민 유사체를 포함하는 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤 (서열 번호: 1601)의 활성의 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 50%, 또는 약 85% 이상을 나타낼 수 있다. 일부 구체예에서, 위치 3에서 글루타민 유사체를 포함하는 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 위치 3에서 변형된 아미노산을 제외하고 글루타민 유사체를 포함하는 펩티드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 상응하는 글루카곤 펩티드의 활성의 약 20%, 약 50%, 약 75%, 약 100%, 약 200% 또는 약 500% 이상을 나타낼 수 있다. 일부 구체예에서, 위치 3에서 글루타민 유사체를 포함하는 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 증강된 활성을 나타내지만, 증강된 활성은 위치 3에서 변형된 아미노산을 제외하고 글루타민 유사체를 포함하는 펩티드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 고유 글루카곤 또는 상응하는 글루카곤 관련된 펩티드의 활성의 단지 1000%, 10,000%, 100,000%, 또는 1,000,000%이다.
일부 구체예에서, 글루타민 유사체는 구조 I, II 또는 III의 측쇄를 포함하는 자연 발생 또는 비-자연 발생 아미노산이다:
Figure pct00010

구조 I
Figure pct00011

구조 II
Figure pct00012

구조 III
여기서 R1은 C0-3 알킬 또는 C0-3 헤테로알킬이고; R2는 NHR4 또는 C1-3 알킬이고; R3은 C1-3 알킬이고; R4는 H 또는 C1-3 알킬이고; X는 NH, O, 또는 S이고; 그리고 Y는 NHR4, SR3, 또는 OR3이다. 일부 구체예에서, X는 NH이고, 또는 Y는 NHR4이다. 일부 구체예에서, R1은 C0-2 알킬 또는 C1 헤테로알킬이다. 일부 구체예에서, R2는 NHR4 또는 C1 알킬이다. 일부 구체예에서, R4는 H 또는 C1 알킬이다. Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 예시적인 구체예에서, 구조 I의 측쇄를 포함하는 아미노산이 제시되고, 여기서 R1은 CH2-S이고, X는 NH이고, 그리고 R2는 CH3 (아세트아미도메틸-시스테인, C(Acm))이다; R1은 CH2이고, X는 NH이고, 그리고 R2는 CH3 (아세틸디아미노부탄산, Dab(Ac))이다; R1은 C0 알킬이고, X는 NH이고, R2는 NHR4이고, 그리고 R4는 H (카르바모일디아미노프로판산, Dap(요소))이다; 또는 R1은 CH2-CH2이고, X는 NH이고, 그리고 R2는 CH3 (아세틸오르니틴, Orn(Ac))이다. 예시적인 구체예에서, 구조 II의 측쇄를 포함하는 아미노산이 제시되고, 여기서 R1은 CH2이고, Y는 NHR4이고, 그리고 R4는 CH3 (메틸글루타민, Q(Me))이다; 예시적인 구체예에서, 구조 III의 측쇄를 포함하는 아미노산이 제시되고, 여기서 R1은 CH2이고 R4는 H (메티오닌-설폭시드, M(O))이다; 특정 구체예에서, 위치 3에서 아미노산은 Dab(Ac)로 치환된다.
Q의 아실화
일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드 (가령, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드, 부류 4 글루카곤 관련된 펩티드, 부류 4 글루카곤 관련된 펩티드 또는 부류 5 글루카곤 관련된 펩티드), Q는 아실 기를 포함하도록 변형된다. 아실 기는 펩티드 Q의 아미노산에 직접적으로, 또는 스페이서를 거쳐 Q의 아미노산에 간접적으로 공유 결합될 수 있고, 여기서 스페이서는 Q의 아미노산 및 아실 기 사이에 배치된다. Q는 친수성 모이어티가 연결되는 동일한 아미노산 위치에서, 또는 상이한 아미노산 위치에서 아실화될 수 있다. 본 명세서에서 기술된 바와 같이, Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드; 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드를 비롯한 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체일 수 있다. 가령, Q는 부류 1, 부류 2, 부류 3, 부류 4 또는 부류 5 중에서 한 가지일 수 있고, 그리고 자연 발생 아미노산에 비-고유인 아실 기를 포함할 수 있다. 아실화는 Q 내에 임의의 위치에서 수행될 수 있다. Q가 글루카곤 관련된 펩티드인 경우에, 아실화는 위치 1-29, C-말단 확장 내에 위치, 또는 C-말단 아미노산 중에서 한 가지를 비롯한 임의의 위치에서 일어날 수 있고, 단서로써 비-아실화된 글루카곤 관련된 펩티드에 의해 전시되는 활성이 아실화 시에 유지되어야 한다. 가령, 비아실화된 펩티드가 글루카곤 작동약 활성을 가지면, 아실화된 펩티드는 글루카곤 작동약 활성을 유지한다. 또한 예로써, 비아실화된 펩티드가 글루카곤 길항약 활성을 가지면, 아실화된 펩티드는 글루카곤 길항약 활성을 유지한다. 가령, 비아실화된 펩티드가 GLP-1 작동약 활성을 가지면, 아실화된 펩티드는 GLP-1 작동약 활성을 유지한다. 무제한적 실례에는 위치 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28, 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 아실화를 포함한다. 부류 1, 부류 2, 그리고 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여, 아실화는 위치 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28, 29, 30, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 중에서 하나에서 일어날 수 있다. 글루카곤 관련된 펩티드 (가령, 부류 1, 2, 3, 4, 또는 5)에 관한 다른 무제한적 실례는 위치 10 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 아실화 및 글루카곤 펩티드의 C-말단 부분, 예를 들면, 위치 24, 28 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 내에, C-말단 확장 내에, 또는 C-말단에서 하나 이상의 위치에서 페길화 (가령, C-말단 Cys의 첨가를 통해)를 포함한다.
본 발명의 특정한 양상에서, 펩티드 Q (가령, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드, 글루카곤 관련된 펩티드, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체)는 Q의 아미노산의 측쇄의 아민, 히드록실, 또는 티올의 직접적인 아실화에 의해 아실 기를 포함하도록 변형된다. 일부 구체예에서, Q는 아미노산의 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 통해 직접적으로 아실화된다. Q가 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 아실화는 위치 10, 20, 24, 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 일어난다. 이와 관련하여, 아실화된 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 1601의 아미노산 서열, 또는 하나 이상의 본 명세서에서 기술된 아미노산 변형을 포함하고 위치 10, 20, 24, 그리고 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 최소한 하나의 아미노산이 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 임의의 아미노산으로 변형된 이의 변형된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. Q가 글루카곤 관련된 펩티드인 본 발명의 일부 특정한 구체예에서, Q의 직접적인 아실화는 위치 10 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 아미노산의 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 통해 일어난다.
일부 구체예에서, 측쇄 아민을 포함하는 펩티드 Q (가령, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드, 글루카곤 관련된 펩티드, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체)의 아미노산은 화학식 I의 아미노산이다:

Figure pct00013

여기서 n = 1 내지 4
[화학식 I]
일부 예시적인 구체예에서, 화학식 I의 아미노산은 n이 4인 아미노산 (Lys) 또는 n이 3인 아미노산 (Orn)이다.
다른 구체예에서, 측쇄 히드록실을 포함하는 펩티드 Q의 아미노산은 화학식 II의 아미노산이다:
Figure pct00014

여기서 n = 1 내지 4
[화학식 II]
일부 예시적인 구체예에서, 화학식 II의 아미노산은 n이 1인 아미노산 (Ser)이다.
또 다른 구체예에서, 측쇄 티올을 포함하는 펩티드 Q의 아미노산은 화학식 III의 아미노산이다:

Figure pct00015

여기서 n = 1 내지 4
[화학식 III]
일부 예시적인 구체예에서, 화학식 III의 아미노산은 n이 1인 아미노산 (Cys)이다.
또 다른 구체예에서, 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 펩티드 Q의 아미노산은 화학식 I, 화학식 II, 또는 화학식 III의 아미노산의 알파 탄소에 결합된 수소가 두 번째 측쇄로 치환되는 점을 제외하고, 화학식 I, 화학식 II, 또는 화학식 III의 동일한 구조를 포함하는 이중치환된 아미노산이다.
본 발명의 일부 구체예에서, 아실화된 펩티드 Q (가령, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드, 글루카곤 관련된 펩티드, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체)는 펩티드와 아실 기 사이에 스페이서를 포함한다. 일부 구체예에서, Q는 스페이서에 공유 결합되고, 이것은 아실 기에 공유 결합된다. 일부 예시적인 구체예에서, Q는 스페이서의 아민, 히드록실, 또는 티올의 아실화에 의해 아실 기를 포함하도록 변형되고, 상기 스페이서 (여기서 Q는 글루카곤 관련된 펩티드, 예를 들면, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5이다)는 위치 10, 20, 24, 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서, 또는 글루카곤 관련된 펩티드의 C-말단 아미노산에서 아미노산의 측쇄에 부착된다. 스페이서가 부착되는 펩티드 Q의 아미노산은 스페이서에 연쇄를 허용하는 모이어티를 포함하는 임의의 아미노산일 수 있다. 가령, 측쇄 -NH2, -OH, 또는 -COOH를 포함하는 아미노산 (가령, Lys, Orn, Ser, Asp, 또는 Glu)이 적합하다. 측쇄 -NH2, -OH, 또는 -COOH (가령, Lys, Orn, Ser, Asp, 또는 Glu)를 포함하는 펩티드 Q의 아미노산 (가령, 단일 또는 이중 α-치환된 아미노산) 역시 적합하다. Q가 글루카곤 관련된 펩티드 (가령, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5)인 일부 구체예에서, 아실화된 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 1601의 아미노산 서열, 또는 하나 이상의 본 명세서에서 기술된 아미노산 변형을 포함하고 위치 10, 20, 24, 그리고 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 최소한 하나의 아미노산이 측쇄 아민, 히드록실, 또는 카르복실레이트를 포함하는 임의의 아미노산으로 변형된 이의 변형된 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 구체예에서, 펩티드 Q와 아실 기 사이에 스페이서는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산, 또는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산을 포함하는 디펩티드 또는 트리펩티드이다. 일부 구체예에서, 아미노산 스페이서는 γ-Glu가 아니다. 일부 구체예에서, 디펩티드 스페이서는 γ-Glu-γ-Glu가 아니다.
아실화가 스페이서의 아미노산의 아민 기를 통해 일어날 때, 아실화는 아미노산의 알파 아민 또는 측쇄 아민을 통해 일어날 수 있다. 알파 아민이 아실화되는 경우에, 스페이서 아미노산은 임의의 아미노산일 수 있다. 가령, 스페이서 아미노산은 소수성 아미노산, 예를 들면, Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Trp, Met, Phe, Tyr일 수 있다. 일부 구체예에서, 스페이서 아미노산은 예로써, 소수성 아미노산, 예를 들면, Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Trp, Met, Phe, Tyr, 6-아미노 헥사노익산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 8-아미노옥탄산일 수 있다. 대안으로, 스페이서 아미노산은 산성 잔기, 예를 들면, Asp와 Glu일 수 있다. 스페이서 아미노산의 측쇄 아민이 아실화되는 경우에, 스페이서 아미노산은 측쇄 아민을 포함하는 아미노산, 예를 들면, 화학식 I의 아미노산 (가령, Lys 또는 Orn)이다. 이러한 경우에, 스페이서 아미노산의 알파 아민과 측쇄 아민 둘 모두 아실화되는 것이 가능하고, 따라서 펩티드는 디아실화된다. 본 발명의 구체예는 이런 디아실화된 분자를 포함한다.
아실화가 스페이서의 아미노산의 히드록실 기를 통해 일어날 때, 디펩티드 또는 트리펩티드의 아미노산 또는 아미노산 중에서 하나는 화학식 II의 아미노산일 수 있다. 특정한 예시적인 구체예에서, 아미노산은 Ser이다.
아실화가 스페이서의 아미노산의 티올 기를 통해 일어날 때, 디펩티드 또는 트리펩티드의 아미노산 또는 아미노산 중에서 하나는 화학식 III의 아미노산일 수 있다. 특정한 예시적인 구체예에서, 아미노산은 Cys이다.
일부 구체예에서, 스페이서는 친수성 이중기능성 스페이서를 포함한다. 특정한 구체예에서, 스페이서는 아미노 폴리(알킬옥시)카르복실레이트를 포함한다. 이와 관련하여, 스페이서는 예로써, NH2(CH2CH2O)n(CH2)mCOOH를 포함할 수 있고, 여기서 m은 1 내지 6의 임의의 정수이고, 그리고 n은 2 내지 12의 정수이고, 예를 들면, Peptides International, Inc. (Louisville, KY)로부터 상업적으로 구입가능한 8-아미노-3,6-디옥사옥탄산이다.
일부 구체예에서, 펩티드 Q와 아실 기 사이에 스페이서는 친수성 이중기능성 스페이서를 포함한다. 일정한 구체예에서, 친수성 이중기능성 스페이서는 2개 이상의 반응 기, 예를 들면, 아민, 히드록실, 티올, 그리고 카르복실 기 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일정한 구체예에서, 친수성 이중기능성 스페이서는 히드록실 기와 카르복실레이트를 포함한다. 다른 구체예에서, 친수성 이중기능성 스페이서는 아민 기와 카르복실레이트를 포함한다. 다른 구체예에서, 친수성 이중기능성 스페이서는 티올 기와 카르복실레이트를 포함한다.
일부 구체예에서, 펩티드 Q와 아실 기 사이에 스페이서는 소수성 이중기능성 스페이서이다. 소수성 이중기능성 스페이서는 당분야에 공지되어 있다. 예로써, Bioconjugate Techniques, G. T. Hermanson (Academic Press, San Diego, CA, 1996)을 참고하고, 이는 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입된다. 일정한 구체예에서, 소수성 이중기능성 스페이서는 2개 이상의 반응 기, 예를 들면, 아민, 히드록실, 티올, 그리고 카르복실 기 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일정한 구체예에서, 소수성 이중기능성 스페이서는 히드록실 기와 카르복실레이트를 포함한다. 다른 구체예에서, 소수성 이중기능성 스페이서는 아민 기와 카르복실레이트를 포함한다. 다른 구체예에서, 소수성 이중기능성 스페이서는 티올 기와 카르복실레이트를 포함한다. 카르복실레이트와 히드록실 기 또는 티올 기를 포함하는 적절한 소수성 이중기능성 스페이서는 당분야에 공지되어 있고, 예로써 8-히드록시옥탄산과 8-메르캅토옥탄산을 포함한다.
일부 구체예에서, 이중기능성 스페이서는 카르복실레이트 기 사이에 1개 내지 7개의 탄소 원자의 가지 없는, 메틸렌을 포함하는 디카르복실산이 아니다. 일부 구체예에서, 이중기능성 스페이서는 카르복실레이트 기 사이에 1-7개 탄소 원자의 가지 없는, 메틸렌을 포함하는 디카르복실산이다.
Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 특정 구체예에서, 스페이서 (가령, 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이중기능성 스페이서, 또는 소수성 이중기능성 스페이서)는 3개 내지 10개의 원자 (가령, 6개 내지 10개의 원자 (가령, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 원자)) 길이를 갖는다. Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 더욱 특정한 구체예에서, 스페이서는 약 3개 내지 10개의 원자 (가령, 6개 내지 10개의 원자) 길이를 갖고, 그리고 아실 기는 C12 내지 C18 지방 아실 기, 예를 들면, C14 지방 아실 기, C16 지방 아실 기이고, 따라서 스페이서와 아실 기의 총 길이는 14 내지 28개의 원자, 예를 들면, 약 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28개의 원자이다. Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 스페이서와 아실 기의 길이는 17 내지 28개 (가령, 19 내지 26개, 19 내지 21개)의 원자이다.
Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일정한 구체예에 따라서, 이중기능성 스페이서는 3개 내지 10개의 원자 길이를 갖는 아미노산 중추 (가령, 6-아미노 헥사노익산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 그리고 8-아미노옥탄산)를 포함하는 합성 또는 자연 발생 아미노산 (본 명세서에서 기술된 임의의 것들이 포함되지만 이에 국한되지 않음)일 수 있다. 대안으로, 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 부착된 스페이서는 3개 내지 10개의 원자 (가령, 6개 내지 10개의 원자) 길이를 갖는 펩티드 중추를 갖는 디펩티드 또는 트리펩티드 스페이서일 수 있다. 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 부착된 디펩티드 또는 트리펩티드 스페이서의 각 아미노산은 디펩티드 또는 트리펩티드의 다른 아미노산(들)과 동일하거나 상이할 수 있고, 그리고 독립적으로 하기와 같이 구성된 군에서 선택될 수 있다: 예로써, 자연 발생 아미노산 (Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, Ser, Thr, Val, Trp, Tyr)의 임의의 D 또는 L 이성질체, 또는 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 비-자연 발생 아미노산의 임의의 D 또는 L 이성질체: β-알라닌 (β-Ala), N-α-메틸-알라닌 (Me-Ala), 아미노부티르산 (Abu), α-아미노부티르산 (γ-Abu), 아미노헥사노익산 (ε-Ahx), 아미노이소부티르산 (Aib), 아미노메틸피롤 카르복실산, 아미노피페리딘카르복실산, 아미노세린 (Ams), 아미노테트라히드로피란-4-카르복실산, 아르기닌 N-메톡시-N-메틸 아미드, β-아스파르트산 (β-Asp), 아제티딘 카르복실산, 3-(2-벤조티아졸릴)알라닌, α-tert-부틸글리신, 2-아미노-5-우레이도-n-발레르산 (시트룰린, Cit), β-시클로헥실알라닌 (Cha), 아세트아미도메틸-시스테인, 디아미노부탄산 (Dab), 디아미노프로피온산 (Dpr), 디히드록시페닐알라닌 (DOPA), 디메틸티아졸리딘 (DMTA), γ-글루타민산 (γ-Glu), 호모세린 (Hse), 히드록시프롤린 (Hyp), 이소류신 N-메톡시-N-메틸 아미드, 메틸-이소류신 (MeIle), 이소니페코트산 (Isn), 메틸-류신 (MeLeu), 메틸-리신, 디메틸-리신, 트리메틸-리신, 메타노프롤린, 메티오닌-설폭시드 (Met(O)), 메티오닌-설폰 (Met(O2)), 노르류신 (Nle), 메틸-노르류신 (Me-Nle), 노르발린 (Nva), 오르니틴 (Orn), 파라-아미노벤조산 (PABA), 페니실라민 (Pen), 메틸페닐알라닌 (MePhe), 4-클로로페닐알라닌 (Phe(4-Cl)), 4-플루오르페닐알라닌 (Phe(4-F)), 4-니트로페닐알라닌 (Phe(4-NO2)), 4-시아노페닐알라닌 ((Phe(4-CN)), 페닐글리신 (Phg), 피페리디닐알라닌, 피페리디닐글리신, 3,4-데히드로프롤린, 피롤리디닐알라닌, 사르코신 (Sar), 셀레노시스테인 (Sec), O-벤질-포스포세린, 4-아미노-3-히드록시-6-메틸헵탄산 (Sta), 4-아미노-5-시클로헥실-3-히드록시펜탄산 (ACHPA), 4-아미노-3-히드록시-5-페닐펜탄산 (AHPPA), 1,2,3,4,-테트라히드로-이소퀴놀린-3-카르복실산 (Tic), 테트라히드로피란글리신, 티에닐알라닌 (Thi), O-벤질-포스포티로신, O-포스포티로신, 메톡시티로신, 에톡시티로신, O-(비스-디메틸아미노-포스포노)-티로신, 티로신 설페이트 테트라부틸아민, 메틸-발린 (MeVal), 1-아미노-1-시클로헥산 카르복실산 (Acx), 아미노발레르산, 베타-시클로프로필-알라닌 (Cpa), 프로파르길글리신 (Prg), 알릴글리신 (Alg), 2-아미노-2-시클로헥실-프로판산 (2-Cha), tert부틸글리신 (Tbg), 비닐글리신 (Vg), 1-아미노-1-시클로프로판 카르복실산 (Acp), 1-아미노-1-시클로펜탄 카르복실산 (Acpe), 알킬화된 3-메르캅토프로피온산, 1-아미노-1-시클로부탄 카르복실산 (Acb)을 비롯한 자연 발생 및/또는 비-자연 발생 아미노산.
Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 스페이서는 전체적으로 음의 전하를 포함한다, 예를 들면, 1개 또는 2개의 음으로 하전된 아미노산을 포함한다. Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 디펩티드는 일반 구조 A-B의 임의의 디펩티드가 아니고, 여기서 A는 Gly, Gln, Ala, Arg, Asp, Asn, Ile, Leu, Val, Phe, 그리고 Pro로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 B는 Lys, His, Trp로 구성된 군에서 선택된다. Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 디펩티드 스페이서는 Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro, γ-아미노부티르산-γ-아미노부티르산, 그리고 γ-Glu-γ-Glu로 구성된 군에서 선택된다.
펩티드 Q는 긴 사슬 알칸의 아실화에 의해 아실 기를 포함하도록 변형될 수 있다. 특정한 양상에서, 긴 사슬 알칸은 펩티드 Q의 카르복실 기, 또는 이의 활성화된 형태와 반응하는 아민, 히드록실, 또는 티올 기 (가령, 옥타데실아민, 테트라데칸올, 그리고 헥사데칸티올)를 포함한다. Q의 카르복실 기, 또는 이의 활성화된 형태는 Q의 아미노산 (가령, 글루타민산, 아스파르트산)의 측쇄의 일부이거나, 또는 펩티드 중추의 일부일 수 있다.
일정한 구체예에서, 펩티드 Q는 Q에 부착되는 스페이서에 의한 긴 사슬 알칸의 아실화에 의해 아실 기를 포함하도록 변형된다. 특정한 양상에서, 긴 사슬 알칸은 스페이서의 카르복실 기, 또는 이의 활성화된 형태와 반응하는 아민, 히드록실, 또는 티올 기를 포함한다. 카르복실 기, 또는 이의 활성화된 형태를 포함하는 적절한 스페이서는 본 명세서에서 기술되고, 예로써 이중기능성 스페이서, 예를 들면, 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이중기능성 스페이서 및 소수성 이중기능성 스페이서를 포함한다.
본 명세서에서, 용어 "카르복실 기의 활성화된 형태"는 일반식 R(C=O)X를 갖는 카르복실 기를 지칭하고, 여기서 X는 이탈 기 (leaving group)이고 R은 Q 또는 스페이서이다. 가령, 카르복실 기의 활성화된 형태에는 아실 염화물, 무수물, 그리고 에스테르가 포함될 수 있지만 이들에 국한되지 않는다. 일부 구체예에서, 활성화된 카르복실 기는 N-히드록시숙신이미드 (NHS) 이탈 기를 갖는 에스테르이다.
긴 사슬 알칸이 펩티드 Q 또는 스페이서에 의해 아실화되는 본 발명의 이들 양상에 관하여, 긴 사슬 알칸은 임의의 크기일 수 있고, 그리고 임의의 길이의 탄소 사슬을 포함할 수 있다. 긴 사슬 알칸은 선형 또는 가지형일 수 있다. 일정한 양상에서, 긴 사슬 알칸은 C4 내지 C30 알칸이다. 가령, 긴 사슬 알칸은 C4 알칸, C6 알칸, C8 알칸, C10 알칸, C12 알칸, C14 알칸, C16 알칸, C18 알칸, C20 알칸, C22 알칸, C24 알칸, C26 알칸, C28 알칸, 또는 C30 알칸 중에서 한 가지일 수 있다. 일부 구체예에서, 긴 사슬 알칸은 C8 내지 C20 알칸, 예를 들면, C14 알칸, C16 알칸, 또는 C18 알칸을 포함한다.
일부 구체예에서, Q의 아민, 히드록실, 또는 티올 기는 콜레스테롤 산으로 아실화된다. 특정한 구체예에서, 펩티드는 알킬화된 데스-아미노 Cys 스페이서, 다시 말하면, 알킬화된 3-메르캅토프로피온산 스페이서를 통해 콜레스테롤 산에 연결된다.
아민, 히드록실, 그리고 티올을 통한 펩티드 아실화의 적절한 방법은 당분야에 공지되어 있다. 예로써, Miller, Biochem Biophys Res Commun 218: 377-382 (1996); Shimohigashi and Stammer, Int J Pept Protein Res 19: 54-62 (1982); 그리고 Previero et al., Biochim Biophys Acta 263: 7-13 (1972) (히드록실을 통한 아실화 방법의 경우에); 그리고 San and Silvius, J Pept Res 66: 169-180 (2005) (티올을 통한 아실화 방법의 경우에); Bioconjugate Chem. "Chemical Modification of Proteins: History and Applications" pages 1, 2-12 (1990); Hashimoto et al., Pharmacuetical Res. "Synthesis of Palmitoyl Derivatives of Insulin and their Biological Activity" Vol. 6, No: 2 pp.171-176 (1989)을 참고한다.
아실화된 펩티드 Q의 아실 기는 임의의 크기, 예를 들면, 임의의 길이의 탄소 사슬일 수 있고, 그리고 선형 또는 가지형일 수 있다. 본 발명의 일부 특정한 구체예에서, 아실 기는 C4 내지 C30 지방산이다. 가령, 아실 기는 C4 지방산, C6 지방산, C8 지방산, C10 지방산, C12 지방산, C14 지방산, C16 지방산, C18 지방산, C20 지방산, C22 지방산, C24 지방산, C26 지방산, C28 지방산, 또는 C30 지방산 중에서 한 가지일 수 있다. 일부 구체예에서, 아실 기는 C8 내지 C20 지방산, 예를 들면, C14 지방산 또는 C16 지방산이다.
대안적 구체예에서, 아실 기는 담즙산이다. 담즙산은 콜산, 체노데옥시콜산, 데옥시콜산, 리토콜산, 타우로콜산, 글리코콜산, 그리고 콜레스테롤 산이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 임의의 적절한 담즙산일 수 있다.
본 명세서에서 기술된 아실화된 펩티드 Q는 친수성 모이어티를 포함하도록 더욱 변형될 수 있다. 일부 특정한 구체예에서, 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사슬을 포함할 수 있다. 친수성 모이어티의 합동은 임의의 적절한 수단, 예를 들면, 본 명세서에서 기술된 임의의 방법을 통해 달성될 수 있다. 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드에 관련된 일부 구체예에서, 아실화된 글루카곤 관련된 펩티드는 본 명세서에서 기술된 임의의 변형을 비롯하여 서열 번호: 1601을 포함할 수 있고, 여기서 위치 10, 20, 24, 그리고 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 최소한 하나의 아미노산이 아실 기를 포함하고, 그리고 위치 16, 17, 21, 24, 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름), C-말단 확장 내에 위치, 또는 C-말단 아미노산에서 최소한 하나의 아미노산이 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe로 변형되고, 그리고 아미노산의 측쇄가 친수성 모이어티 (가령, PEG)에 공유 결합된다. 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드에 관련된 일부 구체예에서, 아실 기는 임의적으로 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe를 포함하는 스페이서를 거쳐 위치 10 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에 부착되고, 그리고 친수성 모이어티가 위치 24에서 Cys 잔기에서 합동된다.
대안으로, 아실화된 펩티드 (Q)는 스페이서를 포함할 수 있고, 여기서 스페이서는 아실화될 뿐만 아니라 친수성 모이어티를 포함하도록 변형된다. 적절한 스페이서의 무제한적 실례에는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 그리고 Ac-Phe로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산을 포함하는 스페이서를 포함한다.
Q의 알킬화
일부 구체예에서, Q는 알킬 기를 포함하도록 변형된다. 알킬 기는 펩티드 Q의 아미노산에 직접적으로, 또는 스페이서를 거쳐 Q의 아미노산에 간접적으로 공유 연결될 수 있고, 여기서 스페이서는 Q와 알킬 기의 아미노산 사이에 배치된다. 알킬 기는 예로써, 에테르, 티오에테르, 또는 아미노 연쇄를 거쳐 Q에 부착될 수 있다. Q는 친수성 모이어티가 연결되는 동일한 아미노산 위치에서, 또는 상이한 아미노산 위치에서 알킬화될 수 있다. 본 명세서에서 기술된 바와 같이, Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드; 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드를 비롯한 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체일 수 있다. 가령, Q는 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드일 수 있고, 그리고 자연 발생 아미노산에 비-고유인 알킬 기를 포함할 수 있다.
알킬화는 Q 내에 임의의 위치에서 수행될 수 있다. Q가 글루카곤 관련된 펩티드인 경우에, 알킬화는 위치 1-29, C-말단 확장 내에 위치, 또는 C-말단 아미노산 중에서 한 가지를 비롯한 임의의 위치에서 일어날 수 있고, 단서로써 글루카곤, GLP-1, GIP 또는 기타 글루카곤-관련된 펩티드 수용체에 대하여 비-알킬화된 펩티드의 작동약 활성이 알킬화 시에 유지되어야 한다. 일부 구체예에서, 비알킬화된 펩티드가 글루카곤 작동약 활성을 가지면, 알킬화된 펩티드는 글루카곤 작동약 활성을 유지한다. 일부 구체예에서, 비알킬화된 펩티드가 GLP-1 작동약 활성을 가지면, 알킬화된 펩티드는 GLP-1 작동약 활성을 유지한다. 무제한적 실례에는 위치 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28, 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 알킬화를 포함한다. 부류 1, 부류 2, 그리고 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여, 알킬화는 위치 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28, 29, 30, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 일어날 수 있다. 글루카곤 관련된 펩티드 (가령, 부류 1, 2, 3, 4, 또는 5)에 관한 다른 무제한적 실례는 위치 10 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 알킬화 및 글루카곤 관련된 펩티드의 C-말단 부분, 예를 들면, 위치 24, 28 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 내에, C-말단 확장 내에, 또는 C-말단에서 하나 이상의 위치에서 페길화 (가령, C-말단 Cys의 첨가를 통해)를 포함한다.
본 발명의 특정한 양상에서, 펩티드 Q (가령, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드, 글루카곤 관련된 펩티드, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체)는 Q의 아미노산의 측쇄의 아민, 히드록실, 또는 티올의 직접적인 알킬화에 의해 알킬 기를 포함하도록 변형된다. 일부 구체예에서, Q는 아미노산의 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 통해 직접적으로 알킬화된다. Q가 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 알킬화는 위치 10, 20, 24, 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 일어난다. 이와 관련하여, 알킬화된 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 1601의 아미노산 서열, 또는 하나 이상의 본 명세서에서 기술된 아미노산 변형을 포함하고 위치 10, 20, 24, 그리고 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 최소한 하나의 아미노산이 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 임의의 아미노산으로 변형된 이의 변형된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. Q가 글루카곤 관련된 펩티드인 본 발명의 일부 특정한 구체예에서, Q의 직접적인 알킬화는 위치 10 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 아미노산의 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 통해 일어난다.
일부 구체예에서, 측쇄 아민을 포함하는 펩티드 Q (가령, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드, 글루카곤 관련된 펩티드, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체)의 아미노산은 화학식 I의 아미노산이다. 일부 예시적인 구체예에서, 화학식 I의 아미노산은 n이 4인 아미노산 (Lys) 또는 n이 3인 아미노산 (Orn)이다.
다른 구체예에서, 측쇄 히드록실을 포함하는 펩티드 Q의 아미노산은 화학식 II의 아미노산이다. 일부 예시적인 구체예에서, 화학식 II의 아미노산은 n이 1인 아미노산 (Ser)이다.
또 다른 구체예에서, 측쇄 티올을 포함하는 펩티드 Q의 아미노산은 화학식 III의 아미노산이다. 일부 예시적인 구체예에서, 화학식 III의 아미노산은 n이 1인 아미노산 (Cys)이다.
또 다른 구체예에서, 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 펩티드 Q의 아미노산은 화학식 I, 화학식 II, 또는 화학식 III의 아미노산의 알파 탄소에 결합된 수소가 두 번째 측쇄로 치환되는 점을 제외하고, 화학식 I, 화학식 II, 또는 화학식 III의 동일한 구조를 포함하는 이중치환된 아미노산이다.
본 발명의 일부 구체예에서, 알킬화된 펩티드 Q (가령, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드, 글루카곤 관련된 펩티드, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체)는 펩티드와 알킬 기 사이에 스페이서를 포함한다. 일부 구체예에서, Q는 스페이서에 공유 결합되고, 이것은 알킬 기에 공유 결합된다. 일부 예시적인 구체예에서, 펩티드 Q는 스페이서의 아민, 히드록실, 또는 티올의 알킬화에 의해 알킬 기를 포함하도록 변형되고, 상기 스페이서 (여기서 Q는 글루카곤 관련된 펩티드, 예를 들면, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5이다)는 위치 10, 20, 24, 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 Q의 아미노산의 측쇄에 부착된다. 스페이서가 부착되는 펩티드 Q의 아미노산은 스페이서에 연쇄를 허용하는 모이어티를 포함하는 임의의 아미노산일 수 있다. 스페이서가 부착되는 펩티드 Q의 아미노산은 스페이서에 연쇄를 허용하는 모이어티를 포함하는 임의의 아미노산 (단일 α-치환된 아미노산 또는 α,α-이중치환된 아미노산)일 수 있다. 측쇄 -NH2, -OH, 또는 -COOH를 포함하는 펩티드 Q의 아미노산 (가령, Lys, Orn, Ser, Asp, 또는 Glu)이 적합하다. Q가 글루카곤 관련된 펩티드 (가령, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5)인 일부 구체예에서, 알킬화된 Q는 서열 번호: 1601의 아미노산 서열, 또는 하나 이상의 본 명세서에서 기술된 아미노산 변형을 포함하고 위치 10, 20, 24, 그리고 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 최소한 하나의 아미노산이 측쇄 아민, 히드록실, 또는 카르복실레이트를 포함하는 임의의 아미노산으로 변형된 이의 변형된 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 구체예에서, 펩티드 Q와 알킬 기 사이에 스페이서는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산, 또는 측쇄 아민, 히드록실, 또는 티올을 포함하는 아미노산을 포함하는 디펩티드 또는 트리펩티드이다. 일부 구체예에서, 아미노산 스페이서는 γ-Glu가 아니다. 일부 구체예에서, 디펩티드 스페이서는 γ-Glu-γ-Glu가 아니다.
알킬화가 스페이서의 아미노산의 아민 기를 통해 일어날 때, 알킬화는 아미노산의 알파 아민 또는 측쇄 아민을 통해 일어날 수 있다. 알파 아민이 알킬화되는 경우에, 스페이서 아미노산은 임의의 아미노산일 수 있다. 가령, 스페이서 아미노산은 소수성 아미노산, 예를 들면, Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Trp, Met, Phe, Tyr일 수 있다. 대안으로, 스페이서 아미노산은 산성 잔기, 예를 들면, Asp와 Glu일 수 있다. 예시적인 구체예에서, 스페이서 아미노산은 소수성 아미노산, 예를 들면, Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Trp, Met, Phe, Tyr, 6-아미노 헥사노익산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 8-아미노옥탄산일 수 있다. 대안으로, 스페이서 아미노산은 산성 잔기, 예를 들면, Asp와 Glu일 수 있고, 단서로써 알킬화는 산성 잔기의 알파 아민에서 일어난다. 스페이서 아미노산의 측쇄 아민이 알킬화되는 경우에, 스페이서 아미노산은 측쇄 아민을 포함하는 아미노산, 예를 들면, 화학식 I의 아미노산 (가령, Lys 또는 Orn)이다. 이러한 경우에, 스페이서 아미노산의 알파 아민과 측쇄 아민 둘 모두 알킬화되는 것이 가능하고, 따라서 펩티드는 디알킬화된다. 본 발명의 구체예는 이런 디알킬화된 분자를 포함한다.
알킬화가 스페이서의 아미노산의 히드록실 기를 통해 일어날 때, 스페이서의 아미노산 또는 아미노산 중에서 하나는 화학식 II의 아미노산일 수 있다. 특정한 예시적인 구체예에서, 아미노산은 Ser이다.
알킬화가 스페이서의 아미노산의 티올 기를 통해 일어날 때, 스페이서의 아미노산 또는 아미노산 중에서 하나는 화학식 III의 아미노산일 수 있다. 특정한 예시적인 구체예에서, 아미노산은 Cys이다.
일부 구체예에서, 스페이서는 친수성 이중기능성 스페이서를 포함한다. 특정한 구체예에서, 스페이서는 아미노 폴리(알킬옥시)카르복실레이트를 포함한다. 이와 관련하여, 스페이서는 예로써, NH2(CH2CH2O)n(CH2)mCOOH를 포함할 수 있고, 여기서 m은 1 내지 6의 임의의 정수이고, 그리고 n은 2 내지 12의 정수이고, 예를 들면, Peptides International, Inc. (Louisville, KY)로부터 상업적으로 구입가능한 8-아미노-3,6-디옥사옥탄산이다.
일부 구체예에서, 펩티드 Q와 알킬 기 사이에 스페이서는 친수성 이중기능성 스페이서이다. 일정한 구체예에서, 친수성 이중기능성 스페이서는 2개 이상의 반응 기, 예를 들면, 아민, 히드록실, 티올, 그리고 카르복실 기 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일정한 구체예에서, 친수성 이중기능성 스페이서는 히드록실 기와 카르복실레이트를 포함한다. 다른 구체예에서, 친수성 이중기능성 스페이서는 아민 기와 카르복실레이트를 포함한다. 다른 구체예에서, 친수성 이중기능성 스페이서는 티올 기와 카르복실레이트를 포함한다.
일부 구체예에서, 펩티드 Q와 알킬 기 사이에 스페이서는 소수성 이중기능성 스페이서이다. 일정한 구체예에서, 소수성 이중기능성 스페이서는 2개 이상의 반응 기, 예를 들면, 아민, 히드록실, 티올, 그리고 카르복실 기 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일정한 구체예에서, 소수성 이중기능성 스페이서는 히드록실 기와 카르복실레이트를 포함한다. 다른 구체예에서, 소수성 이중기능성 스페이서는 아민 기와 카르복실레이트를 포함한다. 다른 구체예에서, 소수성 이중기능성 스페이서는 티올 기와 카르복실레이트를 포함한다. 카르복실레이트와 히드록실 기 또는 티올 기를 포함하는 적절한 소수성 이중기능성 스페이서는 당분야에 공지되어 있고, 예로써 8-히드록시옥탄산과 8-메르캅토옥탄산을 포함한다.
Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 특정 구체예에서, 스페이서 (가령, 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이중기능성 스페이서, 또는 소수성 이중기능성 스페이서)는 3개 내지 10개의 원자 (가령, 6개 내지 10개의 원자 (가령, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 원자)) 길이를 갖는다. 더욱 특정한 구체예에서, 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 부착된 스페이서는 약 3개 내지 10개의 원자 (가령, 6개 내지 10개의 원자) 길이를 갖고, 그리고 알킬 기는 C12 내지 C18 알킬 기, 예를 들면, C14 알킬 기, C16 알킬 기이고, 따라서 스페이서와 알킬 기의 총 길이는 14 내지 28개의 원자, 예를 들면, 약 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 또는 28개의 원자이다. Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 스페이서와 알킬 기의 길이는 17 내지 28개 (가령, 19 내지 26개, 19 내지 21개)의 원자이다.
Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일정한 전술한 구체예에 따라서, 이중기능성 스페이서는 3개 내지 10개의 원자 길이를 갖는 아미노산 중추 (가령, 6-아미노 헥사노익산, 5-아미노발레르산, 7-아미노헵탄산, 그리고 8-아미노옥탄산)을 포함하는 합성 또는 자연 발생 아미노산일 수 있다. 대안으로, 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 부착된 스페이서는 3개 내지 10개의 원자 (가령, 6개 내지 10개의 원자) 길이를 갖는 펩티드 중추를 갖는 디펩티드 또는 트리펩티드 스페이서일 수 있다. 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 부착된 디펩티드 또는 트리펩티드 스페이서는 예로써, 본 명세서에서 교시된 임의의 아미노산을 비롯한 자연-발생 및/또는 비-자연 발생 아미노산으로 구성될 수 있다. Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 스페이서는 전체적으로 음의 전하를 포함한다, 예를 들면, 1개 또는 2개의 음으로 하전된 아미노산을 포함한다. Q가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 디펩티드 스페이서는 Ala-Ala, β-Ala-β-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro, γ-아미노부티르산-γ-아미노부티르산, 그리고 γ-Glu-γ-Glu로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 디펩티드 스페이서는 γ-Glu-γ-Glu가 아니다.
아민, 히드록실, 그리고 티올을 통한 펩티드 알킬화의 적절한 방법은 당분야에 공지되어 있다. 가령, 글루카곤 관련된 펩티드 및 알킬 기 사이에 에테르 연쇄를 형성하기 위해 Williamson 에테르 합성이 이용될 수 있다. 또한, 알킬 할로겐화물으로 펩티드의 친핵성 치환 반응은 에테르, 티오에테르, 또는 아미노 연쇄 중에서 한 가지를 결과할 수 있다.
알킬화된 펩티드 Q의 알킬 기는 임의의 크기, 예를 들면, 임의의 길이의 탄소 사슬일 수 있고, 그리고 선형 또는 가지형일 수 있다. 본 발명의 일부 구체예에서, 알킬 기는 C4 내지 C30 알킬이다. 가령, 알킬 기는 C4 알킬, C6 알킬, C8 알킬, C10 알킬, C12 알킬, C14 알킬, C16 알킬, C18 알킬, C20 알킬, C22 알킬, C24 알킬, C26 알킬, C28 알킬, 또는 C30 알킬 중에서 한 가지일 수 있다. 일부 구체예에서, 알킬 기는 C8 내지 C20 알킬, 예를 들면, C14 알킬 또는 C16 알킬이다.
일부 특정한 구체예에서, 알킬 기는 담즙산의 스테로이드 모이어티, 예를 들면, 콜산, 체노데옥시콜산, 데옥시콜산, 리토콜산, 타우로콜산, 글리코콜산, 그리고 콜레스테롤 산을 포함한다.
본 발명의 일부 구체예에서, 펩티드 Q는 친핵성, 긴 사슬 알칸을 Q와 반응시킴으로써 알킬 기를 포함하도록 변형되고, 여기서 Q는 친핵성 치환에 적합한 이탈 기를 포함한다. 특정한 양상에서, 긴 사슬 알칸의 친핵성 기는 아민, 히드록실, 또는 티올 기 (가령, 옥타데실아민, 테트라데칸올, 그리고 헥사데칸티올)를 포함한다. Q의 이탈 기는 아미노산의 측쇄의 일부이거나, 또는 펩티드 중추의 일부일 수 있다. 적절한 이탈 기에는 예로써, N-히드록시숙신이미드, 할로겐, 그리고 설포네이트 에스테르가 포함된다.
일정한 구체예에서, 펩티드 Q는 친핵성, 긴 사슬 알칸을 Q에 부착되는 스페이서와 반응시킴으로써 알킬 기를 포함하도록 변형되고, 여기서 스페이서는 이탈 기를 포함한다. 특정한 양상에서, 긴 사슬 알칸은 아민, 히드록실, 또는 티올 기를 포함한다. 일정한 구체예에서, 이탈 기를 포함하는 스페이서는 적절한 이탈 기를 더욱 포함하는 본 명세서에서 논의된 임의의 스페이서, 예를 들면, 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이중기능성 스페이서 및 소수성 이중기능성 스페이서일 수 있다.
긴 사슬 알칸이 펩티드 Q 또는 스페이서에 의해 알킬화되는 본 발명의 이들 양상에 관하여, 긴 사슬 알칸은 임의의 크기일 수 있고, 그리고 임의의 길이의 탄소 사슬을 포함할 수 있다. 긴 사슬 알칸은 선형 또는 가지형일 수 있다. 일정한 양상에서, 긴 사슬 알칸은 C4 내지 C30 알칸이다. 가령, 긴 사슬 알칸은 C4 알칸, C6 알칸, C8 알칸, C10 알칸, C12 알칸, C14 알칸, C16 알칸, C18 알칸, C20 알칸, C22 알칸, C24 알칸, C26 알칸, C28 알칸, 또는 C30 알칸 중에서 한 가지일 수 있다. 글루카곤 관련된 펩티드가 부류 1, 부류 2, 또는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 긴 사슬 알칸은 C8 내지 C20 알칸, 예를 들면, C14 알칸, C16 알칸, 또는 C18 알칸을 포함한다.
또한, 일부 구체예에서, 알킬화는 Q와 콜레스테롤 모이어티 사이에서 일어날 수 있다. 가령, 콜레스테롤의 히드록실 기는 긴 사슬 알칸 상에서 이탈 기를 대체하여 콜레스테롤-글루카곤 펩티드 산물을 형성할 수 있다.
본 명세서에서 기술된 알킬화된 펩티드 (Q)는 친수성 모이어티를 포함하도록 더욱 변형될 수 있다. 일부 특정한 구체예에서, 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사슬을 포함할 수 있다. 친수성 모이어티의 합동은 임의의 적절한 수단, 예를 들면, 본 명세서에서 기술된 임의의 방법을 통해 달성될 수 있다. 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드에 관련된 일부 구체예에서, 알킬화된 Q는 서열 번호: 1601, 또는 본 명세서에서 기술된 하나 또는 이상의 아미노산 변형을 포함하는 이의 변형된 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 여기서 위치 10, 20, 24, 그리고 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 최소한 하나의 아미노산이 알킬 기를 포함하고, 그리고 위치 16, 17, 21, 24, 또는 29, C-말단 확장 내에 위치, 또는 C-말단 아미노산에서 최소한 하나의 아미노산이 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe로 변형되고, 그리고 아미노산의 측쇄가 친수성 모이어티 (가령, PEG)에 공유 결합된다. 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드에 관련된 일부 구체예에서, 알킬 기는 임의적으로 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe를 포함하는 스페이서를 거쳐 위치 10 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에 부착되고, 그리고 친수성 모이어티가 위치 24에서 Cys 잔기에서 합동된다.
대안으로, 알킬화된 펩티드 (Q)는 스페이서를 포함할 수 있고, 여기서 스페이서는 알킬화될 뿐만 아니라 친수성 모이어티를 포함하도록 변형된다. 적절한 스페이서의 무제한적 실례에는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 그리고 Ac-Phe로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산을 포함하는 스페이서를 포함한다.
알파-나선 구조의 안정화
일부 구체예에서, 부류 1, 2, 3, 4, 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드 Q의 카르복시 말단 부분 (가령, 아미노산 12-29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)의 3차원 구조를 안정시키는 2개의 아미노산 측쇄 사이에 분자내 가교 (intramolecular bridge)가 형성된다. 이들 2개의 아미노산 측쇄는 수소-결합, 이온 상호작용, 예를 들면, 염 가교 (salt bridge)의 형성, 또는 공유 결합을 통해 서로 연결될 수 있다.
일부 구체예에서, 분자내 가교는 3개 아미노산 이격된 2개의 아미노산, 예를 들면, 위치 i와 i+4에서 아미노산 사이에 형성되고, 여기서 i는 야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따라 12 내지 25 사이에 임의의 정수 (가령, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 그리고 25)이다. 더욱 구체적으로, 야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따라 아미노산 쌍 12와 16, 16과 20, 20과 24 또는 24와 28 (i = 12, 16, 20, 또는 24인 아미노산 쌍)의 측쇄는 서로 연결되고, 따라서 글루카곤 알파 나선을 안정시킨다. 대안으로, i는 17일 수 있다.
위치 i와 i+4에서 아미노산이 분자내 가교에 의해 연결되는 일부 특정한 구체예에서, 링커의 크기는 약 8개의 원자, 또는 약 7-9개의 원자이다.
다른 구체예에서, 분자내 가교는 2개 아미노산 이격된 2개의 아미노산, 예를 들면, 위치 j와 j+3에서 아미노산 사이에 형성되고, 여기서 j는 야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따라 12 내지 26 사이에 임의의 정수 (가령, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 그리고 26)이다. 일부 특정한 구체예에서, j는 17이다.
위치 j와 j+3에서 아미노산이 분자내 가교에 의해 연결되는 일부 특정한 구체예에서, 링커의 크기는 약 6개의 원자, 또는 약 5 내지 7개의 원자이다.
또 다른 구체예에서, 분자내 가교는 6개 아미노산 이격된 2개의 아미노산, 예를 들면, 위치 k와 k+7에서 아미노산 사이에 형성되고, 여기서 k는 야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따라 12 내지 22 사이에 임의의 정수 (가령, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 그리고 22)이다. 일부 특정한 구체예에서, k는 12, 13, 또는 17이다. 예시적인 구체예에서, k는 17이다.
공유 결합하여 6-원자 연결 가교 (linking bridge)를 형성할 수 있는 아미노산 대합의 실례에는 Orn과 Asp, Glu와 화학식 I (여기서 n은 2)의 아미노산, 그리고 호모글루타민산과 화학식 I (여기서 n은 1)의 아미노산이 포함되고, 여기서 화학식 I은 하기와 같다:
Figure pct00016

여기서 n = 1 내지 4
[화학식 I]
공유 결합하여 7-원자 연결 가교 (linking bridge)를 형성할 수 있는 아미노산 대합의 실례에는 Orn-Glu (락탐 고리); Lys-Asp (락탐); 또는 Homoser-Homoglu (락톤)이 포함된다. 8-원자 링커를 형성할 수 있는 아미노산 대합의 실례에는 Lys-Glu (락탐); Homolys-Asp (락탐); Orn-Homoglu (락탐); 4-아미노Phe-Asp (락탐); 또는 Tyr-Asp (락톤). 9-원자 링커를 형성할 수 있는 아미노산 대합의 실례에는 Homolys-Glu (락탐); Lys-Homoglu (락탐); 4-아미노Phe-Glu (락탐); 또는 Tyr-Glu (락톤)이 포함된다. 이들 아미노산 상에서 임의의 측쇄는 알파-나선의 3차원 구조가 파괴되지 않기만 하면, 추가의 화학 기로 부가적으로 치환될 수 있다. 당업자는 유사한 크기와 원하는 효과의 안정화 구조를 산출하는 화학적으로 변형된 유도체를 비롯한 대안적 대합 또는 대안적 아미노산 유사체를 기대할 수 있다. 가령, 호모시스테인-호모시스테인 이황화 가교는 6개의 원자 길이를 갖고 원하는 효과를 제공하기 위해 더욱 변형될 수 있다. 공유 연쇄가 없음에도 불구하고, 앞서 기술된 아미노산 대합 또는 당업자가 기대할 수 있는 유사한 대합은 또한, 비-공유 결합, 예를 들면, 염 가교의 형성 또는 수소-결합 상호작용을 통해 알파-나선에 부가된 안정성을 제공할 수도 있다.
락탐 고리의 크기는 아미노산 측쇄의 길이에 따라 변할 수 있고, 그리고 일부 구체예에서, 락탐은 리신 아미노산의 측쇄를 글루타민산 측쇄에 연결함으로써 형성된다. 추가의 예시적인 구체예 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)는 임의적으로 락탐 가교와 함께, 하기 대합을 포함한다: 위치 12에서 Glu와 위치 16에서 Lys; 위치 12에서 고유 Lys와 위치 16에서 Glu; 위치 16에서 Glu와 위치 20에서 Lys; 위치 16에서 Lys와 위치 20에서 Glu; 위치 20에서 Glu와 위치 24에서 Lys; 위치 20에서 Lys와 위치 24에서 Glu; 위치 24에서 Glu와 위치 28에서 Lys; 위치 24에서 Lys와 위치 28에서 Glu. 대안으로, 락탐 고리 내에 아미드 결합의 순서는 역전될 수 있다 (가령, 락탐 고리가 Lys12와 Glu16의 측쇄 사이에, 또는 대안으로 Glu12와 Lys16 사이에 형성될 수 있다).
Q의 알파 나선을 안정시키기 위해 락탐 가교 이외의 분자내 가교가 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 분자내 가교는 소수성 가교이다. 이러한 경우에, 분자내 가교는 임의적으로, Q의 알파 나선의 소수성 면 (hydrophobic face)의 일부인 2개 아미노산의 측쇄 사이에 있다. 가령, 소수성 가교에 의해 연결된 아미노산 중에서 하나는 위치 10, 14, 그리고 18 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 아미노산일 수 있다.
특정한 양상에서, 올레핀 복분해는 전체-탄화수소 교차-연결 시스템을 이용하여 Q의 알파 나선의 1개 또는 2개 턴 (turn)을 가교-연결하는데 이용된다. 이러한 경우에, Q는 변하는 길이의 올레핀성 측쇄를 보유하고, 그리고 i와 i+4 또는 i+7 위치에서 R 또는 S 입체화학으로 배열된 α-메틸화된 아미노산을 포함할 수 있다. 가령, 올레핀성 측면은 (CH2)n을 포함할 수 있고, 여기서 n은 1 내지 6 사이에 임의의 정수이다. 일부 구체예에서, n은 8개 원자의 가교-연결 길이 (cross-link length)의 경우에 3이다. 이런 분자내 가교를 형성하는데 적절한 방법은 당분야에서 기술된다. 예로써, Schafmeister et al., J. Am. Chem. Soc. 122: 5891-5892 (2000) 및 Walensky et al., Science 305: 1466-1470 (2004)을 참고한다. 대안으로, Q는 인접한 나선 턴 상에 위치되는 O-알릴 Ser 잔기를 포함하고, 이들은 루테늄-촉매된 고리 닫힘 복분해를 거쳐 서로 가교된다. 이런 교차-연결 절차는 예로써, Blackwell et al., Angew, Chem., Int. Ed. 37: 3281-3284 (1998)에서 기술된다.
다른 특정한 양상에서, 시스틴의 펩티드모방체로서 폭넓게 채택되는 비자연 티오-디알라닌 아미노산, 란티오닌의 이용은 알파 나선의 1개 턴을 가교-연결하는데 이용된다. 란티오닌-기초된 고리화의 적절한 방법은 당분야에 공지되어 있다. 예로써, Matteucci et al., Tetrahedron Letters 45: 1399-1401 (2004); Mayer et al., J. Peptide Res. 51: 432-436 (1998); Polinsky et al., J. Med. Chem. 35: 4185-4194 (1992); Osapay et al., J. Med. Chem. 40: 2241-2251 (1997); Fukase et al., Bull. Chem. Soc. Jpn. 65: 2227-2240 (1992); Harpp et al., J. Org. Chem. 36: 73-80 (1971); Goodman and Shao, Pure Appl. Chem. 68: 1303-1308 (1996); 그리고 Osapay and Goodman, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1599-1600 (1993)을 참고한다.
일부 구체예에서, 위치 i와 i+7에서 2개 Glu 잔기 사이에 α,ω-디아미노알칸 테더, 예를 들면, 1,4-디아미노프로판과 1,5-디아미노펜탄이 Q의 알파 나선을 안정시키는데 이용된다. 이런 테더는 디아미노알칸 테더의 길이에 따라, 9-원자 이상의 길이의 가교의 형성을 유발한다. 이런 테더와 가교-연결된 펩티드를 생산하는데 적절한 방법은 당분야에서 기술된다. 예로써, Phelan et al., J. Am. Chem. Soc. 119: 455-460 (1997)을 참고한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 이황화 가교가 Q의 알파 나선의 1개 또는 2개 턴을 가교-연결하는데 이용된다. 대안으로, 한쪽 또는 양쪽 황 원자가 메틸렌 기로 대체되어 등전자 거대고리화가 발생하는 변형된 이황화 가교가 Q의 알파 나선을 안정시키는데 이용된다. 이황화 가교 또는 황-기초된 고리화로 펩티드를 변형하는데 적절한 방법은 예로써, Jackson et al., J. Am. Chem. Soc. 113: 9391-9392 (1991) 및 Rudinger and Jost, Experientia 20: 570-571 (1964)에서 기술된다.
또 다른 구체예에서, Q의 알파 나선은 i와 i+4에 배치된 2개의 His 잔기 또는 His와 Cys 쌍에 의한 금속 원자의 결합을 거쳐 안정화된다. 금속 원자는 예로써, Ru(III), Cu(II), Zn(II), 또는 Cd(II)일 수 있다. 금속 결합-기초된 알파 나선 안정화의 이런 방법은 당분야에 공지되어 있다. 예로써, Andrews and Tabor, Tetrahedron 55: 11711-11743 (1999); Ghadiri et al., J. Am. Chem. Soc. 112: 1630-1632 (1990); 그리고 Ghadiri et al., J. Am. Chem. Soc. 119: 9063-9064 (1997)를 참고한다.
대안으로, Q의 알파 나선은 펩티드 고리화의 다른 수단을 통해 안정될 수 있는데, 이들 수단은 Davies, J. Peptide. Sci. 9: 471-501 (2003)에서 재검토된다. 알파 나선은 아미드 가교, 티오에테르 가교, 티오에스테르 가교, 요소 가교, 카바메이트 가교, 설폰아미드 가교 등의 형성을 거쳐 안정화될 수 있다. 가령, 티오에스테르 가교는 C-말단 및 Cys 잔기의 측쇄 사이에 형성될 수 있다. 대안으로, 티오에스테르는 티올을 갖는 아미노산 (Cys) 및 카르복실산을 갖는 아미노산 (가령, Asp, Glu)의 측쇄를 거쳐 형성될 수 있다. 또 다른 방법에서, 교차-연결제, 예를 들면, 수베르산 (octanedioic acid) 등과 같은 디카르복실산은 아미노산 측쇄의 2가지 기능 기, 예를 들면, 유리 아미노, 히드록실, 티올 기, 그리고 이들의 조합 사이에 링크를 도입할 수 있다.
일부 구체예에 따라서, Q의 알파 나선은 위치 i와 i+4에서 소수성 아미노산의 합동을 통해 안정화된다. 가령, i는 Tyr일 수 있고 i+4는 Val 또는 Leu일 수 있다; i는 Phe일 수 있고 i+4는 Cys 또는 Met일 수 있다; i는 Cys일 수 있고 i+4는 Met일 수 있다; 또는 i는 Phe일 수 있고 i+4는 Ile일 수 있다. 본 발명에서, 상기 아미노산 대합은 역전될 수 있고, 따라서 위치 i에서 지정된 아미노산은 대안으로 i+4에 위치될 수 있고, 반면 i+4 아미노산은 i 위치에 위치될 수 있는 것으로 이해된다.
Q가 글루카곤 관련된 펩티드인 본 발명의 다른 구체예에 따라서, 알파 나선은 Q의 C-말단 부분 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링의 넘버링에 따라 대략 아미노산 12-29)에서 하나 이상의 알파 나선-안정화 아미노산의 합동 (아미노산 치환 또는 삽입에 의해)을 통해 안정화된다. 특정한 구체예에서, 알파 나선-안정화 아미노산은 메틸, 에틸, 프로필, 그리고 n-부틸에서 선택되는 동일한 또는 상이한 기, 또는 시클로옥탄 또는 시클로헵탄으로 이중치환된 아미노산 (가령, 1-아미노시클로옥탄-1-카르복실산)인 임의의 아미노 이소-부티르산 (Aib)이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 α,α-이중치환된 아미노산이다. 일부 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드의 위치 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24 또는 29 중에서 1개, 2개, 3개, 4개 이상이 α,α-이중치환된 아미노산으로 치환된다. 특정한 구체예에서, 위치 16, 20, 21, 그리고 24 중에서 1개, 2개, 3개 또는 전부가 Aib로 치환된다.
접합체
일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 펩티드 (Q)는 당화되고, 아미드화되고, 카르복실화되고, 포스포릴화되고, 에스테르화되고, N-아실화되고, 예로써 이황화 가교를 거쳐 고리화되고, 또는 염 (가령, 산 첨가 염, 염기 첨가 염)으로 전환되고, 및/또는 임의적으로 이합체되거나, 다합체되거나, 또는 중합체화거나, 또는 접합된다. 본 명세서에서 기술된 바와 같이, Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드; 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드를 비롯한 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체일 수 있다.
본 발명은 또한, Q-L-Y의 Q가 이형 모이어티에 더욱 연결되는 접합체를 포함한다. Q와 이형 모이어티 사이에 접합 (conjugation)은 공유 결합, 비-공유 결합 (가령, 정전 상호작용, 수소 결합, 반 데르 발스 상호작용, 염 가교, 소수성 상호작용 등), 또는 양쪽 유형의 결합을 통해 달성될 수 있다. 비오틴-아비딘, 리간드/수용체, 효소/기질, 핵산/핵산 결합 단백질, 지질/지질 결합 단백질, 세포 유착 분자 파트너; 또는 서로에 대해 친화성을 갖는 임의의 결합 파트너 또는 이들의 단편을 비롯한 다양한 비-공유 커플링 시스템이 이용될 수 있다. 일부 양상에서, 공유 결합은 펩티드 결합이다. 이형 모이어티에 Q의 접합은 간접 또는 직접 접합일 수 있고, 이들 중에서 전자는 링커 또는 스페이서를 필요로 할지도 모른다. 적절한 링커와 스페이서는 당분야에 공지되어 있고 여기에는 섹션 "아실화와 알킬화" 및 "연결 기", 그리고 하위 섹션 "Q 및/또는 L의 화학적 변형" 하에 본 명세서에서 기술된 임의의 링커 또는 스페이서가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
본 명세서에서, 용어 "이형 모이어티"는 용어 "접합체 모이어티"와 동의어이고, 그리고 자신이 부착되는 Q와 상이한 임의의 분자 (화학적 또는 생물화학적, 자연 발생하는 또는 비-코팅된)를 지칭한다. Q에 연결될 수 있는 예시적인 접합체 모이어티에는 이형 펩티드 또는 폴리펩티드 (예로써, 혈장 단백질 포함), 표적화 작용제, 면역글로불린 또는 이의 일부분 (가령, 가변 영역, CDR, 또는 Fc 영역), 진단 라벨, 예를 들면, 방사성동위원소, 형광단 또는 효소 라벨, 물 용해성 중합체를 비롯한 중합체, 또는 기타 치료제 또는 진단제가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 일부 구체예에서, Q와 혈장 단백질을 포함하는 접합체가 제시되고, 여기서 혈장 단백질은 알부민, 트랜스페린, 피브리노겐과 글로불린으로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 접합체의 혈장 단백질 모이어티는 알부민 또는 트랜스페린이다. 일부 구체예에서, 접합체는 Q 및 폴리펩티드, 핵산 분자, 항체 또는 이의 단편, 중합체, 양자점, 소형 분자, 독소, 진단제, 탄수화물, 아미노산 중에서 하나 이상을 포함한다.
C-말단 이형 모이어티
일부 구체예에서, Q에 접합된 이형 모이어티는 Q와 상이한 펩티드이고, 그리고 접합체는 융합 펩티드 또는 키메라 펩티드이다. Q가 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드인 일부 구체예에서, 이형 모이어티는 1-21개 아미노산의 펩티드 확장이다. Q가 글루카곤 관련된 펩티드 (가령, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드)인 특정 구체예에서, 확장은 Q의 C-말단에, 예를 들면, 위치 29에서 아미노산에 부착된다. 일부 구체예에서, 확장은 서열 번호: 1610 (GPSSGAPPPS), 서열 번호: 1611 (GGPSSGAPPPS-CONH2), 서열 번호: 1614 (KRNRNNIA), 서열 번호: 1643 (KRNR), 또는 KGKKNDWKHNITQ (서열 번호: 1613)의 아미노산 서열을 포함한다. 특정한 양상에서, 아미노산 서열은 Q의 C-말단 아미노산, 예를 들면, 위치 29에서 아미노산을 통해 부착된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1610, 1611, 1613, 1614와 1643의 아미노산 서열은 펩티드 결합을 통해 펩티드의 아미노산 29에 결합된다. 일부 특정한 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드 (가령, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드)의 위치 29에서 아미노산은 Gly이고, 그리고 상기 Gly는 서열 번호: 1610, 1611, 1613, 1614와 1643의 아미노산 서열 중에서 하나에 융합된다.
중합체 이형 모이어티
일부 구체예에서, Q에 접합된 이형 모이어티는 중합체이다. 일부 구체예에서, 중합체는 하기와 같이 구성된 군에서 선택된다: 폴리아미드, 폴리카보네이트, 폴리알킬렌 및 폴리알킬렌 글리콜, 폴리알킬렌 산화물, 폴리알킬렌 테레프탈레이트를 비롯한 이들의 유도체, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 그리고 폴리(옥타데실 아크릴레이트)를 비롯한 아크릴과 메타크릴 에스테르의 중합체, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르, 폴리비닐 할로겐화물, 폴리(비닐 아세테이트), 그리고 폴리비닐피롤리돈을 비롯한 폴리비닐 중합체, 폴리글리콜리드, 폴리실록산, 폴리우레탄과 이의 공중합체, 알킬 셀룰로오스, 히드록시알킬 셀룰로오스, 셀룰로오스 에테르, 셀룰로오스 에스테르, 니트로 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 셀룰로오스, 히드록시-프로필 메틸 셀룰로오스, 히드록시부틸 메틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트, 셀룰로오스 프로피오네이트, 셀룰로오스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 카르복실에틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 트리아세테이트, 그리고 셀룰로오스 설페이트 나트륨 염을 비롯한 셀룰로오스, 폴리프로필렌, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 산화물), 그리고 폴리(에틸렌 테레프탈레이트)를 비롯한 폴리에틸렌, 그리고 폴리스티렌.
일부 양상에서, 중합체는 합성 생물분해성 중합체 (가령, 젖산과 글리콜산의 중합체, 폴리무수물, 폴리(오르토)에스테르, 폴리우레탄, 폴리(부틱산), 폴리(발레르산), 그리고 폴리(락티드-카프로락톤)), 그리고 자연 생물분해성 중합체 (가령, 알기네이트 및 덱스트란과 셀룰로오스를 비롯한 다른 다당류, 콜라겐, 이들의 화학적 유도체 (치환, 화학적 기, 예를 들면, 알킬, 알킬렌의 부가, 히드록실화, 산화, 그리고 당업자에 의해 일과적으로 만들어지는 기타 변형), 알부민 및 다른 친수성 단백질 (가령, 제인과 기타 프롤라민 및 소수성 단백질))를 비롯한 생물분해성 중합체 뿐만 아니라 이들의 임의의 공중합체 또는 혼합물이다. 일반적으로, 이들 물질은 생체내에서 효소적 가수분해 또는 물에 노출에 의해, 또는 표면 또는 벌크 부식에 의해 분해된다.
일부 양상에서, 중합체는 생물접합성 중합체, 예를 들면, H. S. Sawhney, C. P. Pathak and J. A. Hubbell in Macromolecules, 1993, 26, 581-587 (이의 교시는 본 발명에 참고문헌으로 편입된다)에 의해 기술된 생물부식성 히드로겔, 폴리히알루론산, 카제인, 젤라틴, 글루틴, 폴리무수물, 폴리아크릴산, 알기네이트, 키토산, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 그리고 폴리(옥타데실 아크릴레이트)이다.
일부 구체예에서, 중합체는 물-용해성 중합체 또는 친수성 중합체이다. 친수성 중합체는 "친수성 이형 모이어티" 하에 본 명세서에서 더욱 기술된다. 적절한 물-용해성 중합체는 당분야에 공지되어 있고, 여기에는 예로써 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로오스 (HPC; Klucel), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC; Methocel), 니트로셀룰로오스, 히드록시프로필 에틸셀룰로오스, 히드록시프로필 부틸셀룰로오스, 히드록시프로필 펜틸셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스 (Ethocel), 히드록시에틸 셀룰로오스, 다양한 알킬 셀룰로오스와 히드록시알킬 셀룰로오스, 다양한 셀룰로오스 에테르, 셀룰로오스 아세테이트, 카르복시메틸 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 칼슘 카르복시메틸 셀룰로오스, 비닐 아세테이트/크로톤산 공중합체, 폴리-히드록시알킬 메타크릴레이트, 히드록시메틸 메타크릴레이트, 메타크릴산 공중합체, 폴리메타크릴산, 폴리메틸메타크릴레이트, 말레산 무수물/메틸 비닐 에테르 공중합체, 폴리 비닐 알코올, 나트륨과 칼슘 폴리아크릴산, 폴리아크릴산, 산성 카르복시 중합체, 카르복시폴리메틸렌, 카르복시비닐 중합체, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 공중합체, 폴리메틸비닐에테르-말레산 무수물, 카르복시메틸아미드, 칼륨 메타크릴레이트 디비닐벤젠 공중합체, 폴리옥시에틸렌글리콜, 폴리에틸렌 산화물, 그리고 이들의 유도체, 염, 그리고 조합이 포함된다.
특정 구체예에서, 중합체는 예로써, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 비롯한 폴리알킬렌 글리콜이다.
일부 구체예에서, 이형 모이어티는 탄수화물이다. 일부 구체예에서, 탄수화물은 단당류 (가령, 글루코오스, 갈락토오스, 프럭토오스), 이당류 (가령, 수크로오스, 락토오스, 말토오스), 올리고당류 (가령, 라피노오스, 스타키오스), 다당류 (전분, 아밀라아제, 아밀로펙틴, 셀룰로오스, 키틴, 칼로오스, 라미나린, 크실란, 만난, 후코이단, 갈락토만난이다.
일부 구체예에서, 이형 모이어티는 지질이다. 일부 구체예에서, 지질은 지방산, 에이코사노이드, 프로스타글란딘, 류코트리엔, 트롬복산, N-아실 에탄올아민), 글리세롤지질 (가령, 단일-, 이중-, 삼중-치환된 글리세롤), 글리세로포스포지질 (가령, 포스파티딜콜린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린), 스핑고지질 (가령, 스핑고신, 세라미드), 스테롤 지질 (가령, 스테로이드, 콜레스테롤), 프레놀 지질, 사카로지질, 또는 폴리케티드, 오일, 왁스, 콜레스테롤, 스테롤, 지용성 비타민, 모노글리세리드, 디글리세리드, 트리글리세리드, 포스포지질이다.
Fc 융합 이형 모이어티
앞서 언급된 바와 같이, 일부 구체예에서, Q는 접합된다, 예를 들면, 면역글로불린 또는 이의 일부분 (가령, 가변 영역, CDR, 또는 Fc 영역)에 융합된다. 본 명세서에서 기술된 바와 같이, Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드를 비롯한 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체이다. 공지된 유형의 면역글로불린 (Ig)에는 IgG, IgA, IgE, IgD 또는 IgM이 포함된다. Fc 영역은 Ig 중쇄의 C-말단 영역이고, 이것은 활성, 예를 들면, 재생 (이는 연장된 반감기를 결과한다), 항체 의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC), 그리고 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 수행하는 Fc 수용체에 대한 결합을 담당한다.
가령, 일부 정의에 따라 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 중쇄의 Cys226에서부터 C-말단까지 걸친다. "힌지 영역"은 일반적으로, 인간 IgG1의 Glu216에서부터 Pro230까지 걸친다 (다른 IgG 아이소타입의 힌지 영역은 시스테인 결합에 관여하는 시스테인을 정렬함으로써 IgG1 서열과 함께 정렬될 수 있다). IgG의 Fc 영역은 2개의 불변 도메인, CH2 및 CH3을 포함한다. 인간 IgG Fc 영역의 CH2 도메인은 통상적으로, 아미노산 231에서부터 아미노산 341까지 걸친다. 인간 IgG Fc 영역의 CH3 도메인은 통상적으로, 아미노산 342에서부터 447까지 걸친다. 면역글로불린 또는 면역글로불린 단편, 또는 영역의 아미노산 넘버링에 대한 모든 언급은 Kabat et al. 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Public Health, Bethesda, Md에 기초된다. 관련된 구체예에서, Fc 영역은 CH1을 제외한 면역글로불린 중쇄로부터 하나 이상의 고유 또는 변형된 불변 영역, 예를 들면, IgG와 IgA의 CH2와 CH3 영역, 또는 IgE의 CH3과 CH4 영역을 포함할 수 있다.
적절한 접합체 모이어티에는 FcRn 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 서열의 일부가 포함된다. 구조 수용체인 FcRn은 면역글로불린을 재생하고 이들을 혈액 내에 순환으로 동원하는 것을 담당한다. FcRn 수용체에 결합하는 IgG의 Fc 부분의 영역은 X-선 결정학에 기초하여 보고되었다 (Burmeister et al. 1994, Nature 372:379). Fc와 FcRn의 주요 접촉 부위는 CH2와 CH3 도메인의 접합점 근처이다. Fc-FcRn 접촉은 모두 단일 Ig 중쇄 내에 있다. 주요 접촉 부위는 CH2 도메인의 아미노산 잔기 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311과 314, 그리고 CH3 도메인의 아미노산 잔기 385-387, 428과 433-436을 포함한다.
일부 접합체 모이어티는 FcγR 결합 부위(들)를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. FcγR은 ADCC 및 CDC를 담당한다. FcγR과 직접적으로 접촉하는 Fc 영역 내에 위치의 실례는 아미노산 234-239 (아래쪽 힌지 영역), 아미노산 265-269 (B/C 루프), 아미노산 297-299 (C'/E 루프), 그리고 아미노산 327-332 (F/G) 루프이다 (Sondermann et al., Nature 406: 267-273, 2000). IgE의 아래쪽 힌지 영역은 또한, FcγRI 결합에도 관여한다 (Henry, et al., Biochemistry 36, 15568-15578, 1997). IgA 수용체 결합에 관여하는 잔기는 Lewis et al., (J Immunol. 175:6694-701, 2005)에서 기술된다. IgE 수용체 결합에 관여하는 아미노산 잔기는 Sayers et al. (J Biol Chem. 279(34):35320-5, 2004)에서 기술된다.
면역글로불린의 Fc 영역에 아미노산 변형이 만들어질 수 있다. 이런 변이체 Fc 영역은 Fc 영역 (잔기 342-447)의 CH3 도메인 내에 최소한 하나의 아미노산 변형 및/또는 Fc 영역 (잔기 231-341)의 CH2 도메인 내에 최소한 하나의 아미노산 변형을 포함한다. FcRn에 대한 증가된 친화성을 부여하는 것으로 생각되는 돌연변이에는 T256A, T307A, E380A, 그리고 N434A가 포함된다 (Shields et al. 2001, J. Biol. Chem. 276:6591). 다른 돌연변이는 FcRn에 대한 친화성을 유의미하게 감소시키지 않으면서 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, 및/또는 FcγRIIIA에 대한 Fc 영역의 결합을 감소시킬 수 있다. 가령, Fc 영역의 위치 297에서 Asn의 Ala 또는 다른 아미노산으로의 치환은 고도로 보존된 N-당화 부위를 제거하고, 그리고 Fc 영역의 부수하는 연장된 반감기로 감소된 면역원성뿐만 아니라 FcγR에 대한 감소된 결합을 결과할 수 있다 (Routledge et al. 1995, Transplantation 60:847; Friend et al. 1999, Transplantation 68:1632; Shields et al. 1995, J. Biol. Chem. 276:6591). FcγR에 대한 결합을 감소시키는, IgG1의 위치 233-236에서 아미노산 변형이 만들어졌다 (Ward and Ghetie 1995, Therapeutic Immunology 2:77 및 Armour et al. 1999, Eur. J. Immunol. 29:2613). 일부 예시적인 아미노산 치환은 미국 특허 7,355,008과 7,381,408에서 기술되고, 이들 각각은 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입된다.
친수성 이형 모이어티
일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 Q는 친수성 모이어티에 공유 결합된다. 본 명세서에서 기술된 바와 같이, Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드, 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤 관련된 펩티드를 비롯한 글루카곤 관련된 펩티드, 또는 오스테오칼신, 칼시토닌, 아밀린, 또는 이들의 유사체, 유도체 또는 접합체일 수 있다. 친수성 모이어티는 단백질을 활성화된 중합체 분자와 반응시키는데 이용되는 임의의 적절한 조건 하에 Q에 부착될 수 있다. 아실화, 환원성 알킬화, 마이클 첨가 (Michael addition), 티올 알킬화 또는 표적 화합물 상에 반응 기 (가령, 알데히드, 아미노, 에스테르, 티올, α-할로아세틸, 말레이미도 또는 히드라지노 기)에 PEG 모이어티 상에서 반응 기 (가령, 알데히드, 아미노, 에스테르, 티올, α-할로아세틸, 말레이미도 또는 히드라지노 기)를 통한 다른 화학선택적 접합/결찰 방법을 비롯한 당분야에 공지된 임의의 수단이 이용될 수 있다. 물 용해성 중합체를 하나 이상의 단백질에 연결하는데 이용될 수 있는 활성화 기에는 제한 없이, 설폰, 말레이미드, 설피드릴, 티올, 트리플레이트, 트레실레이트, 아지디린, 옥시란, 5-피리딜, 그리고 알파-할로겐화된 아실 기 (가령, 알파-요오드 아세트산, 알파-브로모아세트산, 알파-클로로아세트산)이 포함된다. 환원성 알킬화에 의해 펩티드에 부착되면, 선택된 중합체는 중합화의 정도가 제어되도록 단일 반응성 알데히드를 가질 것이다. 예로써, Kinstler et al., Adv. Drug. Delivery Rev. 54: 477-485 (2002); Roberts et al., Adv. Drug Delivery Rev. 54: 459-476 (2002); 그리고 Zalipsky et al., Adv. Drug Delivery Rev. 16: 157-182 (1995)를 참고한다.
친수성 모이어티 (물 용해성 중합체)를 단백질에 연결하는데 이용될 수 있는 추가의 활성화 기에는 알파-할로겐화된 아실 기 (가령, 알파-요오드 아세트산, 알파-브로모아세트산, 알파-클로로아세트산)가 포함된다. 특정한 양상에서, 티올을 갖는 펩티드의 아미노산 잔기는 친수성 모이어티, 예를 들면, PEG로 변형된다. 일부 구체예에서, 티올을 포함하는 Q 상에서 아미노산은 마이클 첨가 반응에서 말레이미드-활성화된 PEG로 변형되어 하기에 도시된 티오에테르 연쇄를 포함하는 페길화된 펩티드가 산출된다:
Figure pct00017
.
일부 구체예에서, Q의 아미노산의 티올은 친핵성 치환 반응에서 할로아세틸-활성화된 PEG로 변형되어 하기에 도시된 티오에테르 연쇄를 포함하는 페길화된 펩티드가 산출된다:
Figure pct00018
.
적절한 친수성 모이어티에는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸화된 폴리올 (가령, POG), 폴리옥시에틸화된 소르비톨, 폴리옥시에틸화된 글루코오스, 폴리옥시에틸화된 글리세롤 (POG), 폴리옥시알킬렌, 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드, 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 모노메톡시-폴리에틸렌 글리콜, 모노-(C1-C10) 알콕시- 또는 아릴옥시-폴리에틸렌 글리콜, 카르복시메틸셀룰로오스, 폴리아세탈, 폴리비닐 알코올 (PVA), 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리 (.베타.-아미노산) (동종중합체 또는 무작위 공중합체), 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 동종중합체 (PPG)와 기타 폴리알킬렌 산화물, 폴리프로필렌 산화물/에틸렌 산화물 공중합체, 콜론산 또는 기타 다당류 중합체, Ficoll 또는 덱스트란 및 이들의 혼합물이 포함된다. 덱스트란은 주로 α1-6 연쇄에 의해 연결된 글루코오스 아단위의 다당류 중합체이다. 덱스트란은 많은 분자량 범위, 예를 들면, 약 1 kD 내지 약 100 kD, 또는 약 5, 10, 15 또는 20 kD 내지 약 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 90 kD에서 가용하다.
일부 구체예에 따라서, 친수성 모이어티, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 500 내지 약 40,000 달톤의 범위에서 선택되는 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 500 내지 약 5,000 달톤, 또는 약 1,000 내지 약 5,000 달톤의 범위에서 선택되는 분자량을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 친수성 모이어티, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 10,000 내지 약 20,000 달톤의 분자량을 갖는다. 또 다른 예시적인 구체예에서, 친수성 모이어티, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 20,000 내지 약 40,000 달톤의 분자량을 갖는다.
선형 또는 가지형 친수성 중합체가 예기된다. 접합체의 결과의 제조물은 본질적으로 단분산 (monodisperse) 또는 다분산 (polydisperse)일 수 있고, 그리고 펩티드당 약 0.5, 0.7, 1, 1.2, 1.5 또는 2개의 중합체 모이어티를 가질 수 있다.
일부 구체예에서, 펩티드의 고유 아미노산은 펩티드에 친수성 모이어티의 연쇄를 조장하는 친수성 모이어티와의 가교연결에 적합한 측쇄를 갖는 아미노산으로 치환된다. 예시적인 아미노산에는 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 아세틸 페닐알라닌 (Ac-Phe)이 포함된다. 다른 구체예에서, 친수성 기를 포함하도록 변형된 아미노산은 C-말단에서 펩티드에 부가된다.
일부 구체예에서, 접합체의 펩티드는 펩티드의 아미노산의 측쇄 및 친수성 모이어티 사이에 공유 연쇄를 거쳐 친수성 모이어티, 예를 들면, PEG에 접합된다. Q가 부류 1, 2, 3, 4 또는 5 글루카곤-관련된 펩티드인 일부 구체예에서, 펩티드는 위치 16, 17, 21, 24, 29, 40, C-말단 확장 내에 위치, 또는 C-말단 아미노산, 또는 이들 위치의 조합에서 아미노산의 측쇄를 거쳐 친수성 모이어티에 접합된다. 일부 양상에서, 친수성 모이어티에 공유 연결된 아미노산 (가령, 친수성 모이어티를 포함하는 아미노산)은 Cys, Lys, Orn, 호모-Cys, 또는 Ac-Phe이고, 그리고 아미노산의 측쇄는 친수성 모이어티 (가령, PEG)에 공유 결합된다.
rPEG 이형 모이어티
일부 구체예에서, 본 발명의 접합체는 화학적 PEG (가령, 재조합 PEG (rPEG) 분자)와 유사한 확장된 입체형태, 예를 들면, 국제 특허 출원 공개공보 번호 제WO2009/023270호 및 미국 특허 출원 공개공보 번호 제US2008/0286808호에서 기술된 것들을 형성할 수 있는 보조 펩티드에 융합된 Q를 포함한다. rPEG 분자는 폴리에틸렌 글리콜이 아니다. 일부 양상에서, rPEG 분자는 글리신, 세린, 글루타민산, 아스파르트산, 알라닌, 또는 프롤린 중에서 하나 이상을 포함하는 폴리펩티드이다. 일부 양상에서, rPEG는 동종중합체, 예를 들면, 폴리-글리신, 폴리-세린, 폴리-글루타민산, 폴리-아스파르트산, 폴리-알라닌, 또는 폴리-프롤린이다. 다른 구체예에서, rPEG는 2가지 유형의 아미노산 반복, 예를 들면, 폴리(Gly-Ser), 폴리(Gly-Glu), 폴리(Gly-Ala), 폴리(Gly-Asp), 폴리(Gly-Pro), 폴리(Ser-Glu) 등을 포함한다. 일부 양상에서, rPEG는 세 가지 상이한 유형의 아미노산, 예를 들면, 폴리(Gly-Ser-Glu)를 포함한다. 특정한 양상에서, rPEG는 Q의 반감기를 증가시킨다. 일부 양상에서, rPEG는 순 양성 전하 (net positive charge) 또는 순 음성 전하 (net negative charge)를 포함한다. 일부 양상에서, rPEG는 이차 구조가 없다. 일부 구체예에서, rPEG는 10개 이상의 아미노산 길이를 갖고, 그리고 일부 구체예에서, 약 40 내지 약 50개의 아미노산 길이를 갖는다. 일부 양상에서, 보조 펩티드는 펩티드 결합 또는 프로테이나아제 절단 부위를 통해 본 발명의 펩티드의 N- 또는 C-말단에 융합되거나, 또는 본 발명의 펩티드의 루프 내로 삽입된다. 일부 양상에서, rPEG는 친화성 태그를 포함하거나, 또는 5 kDa 초과인 PEG에 연결된다. 일부 구체예에서, rPEG는 본 발명의 접합체에 증가된 유체역학적 반경, 혈청 반감기, 프로테아제 내성, 또는 용해성을 공여하고, 그리고 일부 양상에서, 접합체에 감소된 면역원성을 공여한다.
Q는 펩티드의 표적화된 아미노산 잔기를 이들 표적화된 아미노산의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시킴으로써 직접적인 공유 연쇄를 거쳐 접합체 모이어티에 연결될 수 있다. 펩티드 또는 접합체 모이어티 상에서 반응 기에는 예로써, 알데히드, 아미노, 에스테르, 티올, α-할로아세틸, 말레이미도 또는 히드라지노 기가 포함된다. 유도체화제에는 예로써, 말레이미도벤조일 설포숙신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통한 접합), N-히드록시숙신이미드 (리신 잔기를 통해), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물 또는 당분야에 공지된 기타 작용제가 포함된다. 대안으로, 접합체 모이어티는 중간 담체, 예를 들면, 다당류 또는 폴리펩티드 담체를 통해 간접적으로 펩티드에 연결될 수 있다. 다당류 담체의 실례에는 아미노덱스트란이 포함된다. 적절한 폴리펩티드 담체의 실례에는 폴리리신, 폴리글루타민산, 폴리아스파르트산, 이들의 공중합체, 그리고 이들 아미노산의 혼성 중합체 및 결과의 적하된 담체에 바람직한 용해성 성질을 공여하는 다른 것들, 예를 들면, 세린이 포함된다.
다합체
부류 1, 부류 2, 그리고 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여, Q는 링커를 거쳐 결합된 최소한 2개, 3개 이상의 펩티드를 포함하는 이합체, 삼합체 이상의 순서 다합체의 일부일 수 있고, 여기서 최소한 한쪽 또는 양쪽 펩티드는 글루카곤 관련된 펩티드이다. 이합체는 동종이합체 또는 헤테로이합체일 수 있다. 일부 구체예에서, 링커는 이중기능성 티올 가교링커 및 이중-기능성 아민 가교링커로 구성된 군에서 선택된다. 일정한 구체예에서, 링커는 PEG, 예를 들면, 5 kDa PEG, 20 kDa PEG이다. 일부 구체예에서, 링커는 이황화 결합이다. 가령, 이합체의 각 단위체는 Cys 잔기 (가령, 말단 또는 내부 배치된 Cys)를 포함할 수 있고, 그리고 각 Cys 잔기의 황 원자는 이황화 결합의 형성에 참여한다. 본 발명의 일부 양상에서, 이들 단위체는 말단 아미노산 (가령, N-말단 또는 C-말단), 내부 아미노산, 또는 최소한 하나의 단위체 말단 아미노산과 최소한 하나의 다른 단위체의 내부 아미노산을 거쳐 연결된다. 특정한 양상에서, 이들 단위체는 N-말단 아미노산을 거쳐 연결되지 않는다. 일부 양상에서, 다합체의 이들 단위체는 "꼬리-꼬리" 방향으로 서로 부착되고, 여기서 각 단위체의 C-말단 아미노산은 서로 부착된다. 접합체 모이어티는 이합체, 삼합체 이상의 순서 다합체를 비롯하여, 본 명세서에서 기술된 임의의 글루카곤 관련된 펩티드에 공유 연결될 수 있다.
Q에 이형 모이어티의 접합
이형 모이어티는 "연결 기" 섹션 및 " Q 및/또는 Y 의 화학적 변형" 하위섹션에서 기술된 연쇄와 접합 방법에 따라 펩티드 (Q)에 접합된다.
Q를 만드는 방법
본 명세서에서 개시된 펩티드 (Q)는 표준 합성 방법, 재조합 DNA 기술, 또는 펩티드와 융합 단백질을 제조하는 임의의 다른 방법에 의해 제조될 수 있다. 비록 일정한 비-자연 아미노산은 표준 재조합 DNA 기술에 발현될 수 없긴 하지만, 그들의 제조 기술은 당분야에 공지되어 있다. 비-펩티드 부분을 포함하는 본 발명의 화합물은 적용가능할 때 표준 펩티드 화학 반응에 더하여, 표준 유기 화학 반응에 의해 합성될 수 있다.
본 발명의 펩티드는 당분야에 공지된 방법에 의해 획득될 수 있다. 펩티드를 데 노보(de novo) 합성하는 적절한 방법은 예로써, Chan et al., Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2005; Peptide and Protein Drug Analysis, ed. Reid, R., Marcel Dekker, Inc., 2000; Epitope Mapping, ed. Westwood et al., Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2000; 그리고 미국 특허 번호 제5,449,752호에서 기술된다.
또한, 본 발명의 펩티드가 임의의 비-코팅된 또는 비-자연 아미노산을 포함하지 않는 경우에, 상기 펩티드는 표준 재조합 방법에 의해 펩티드의 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 이용하여 재조합 방식으로 생산될 수 있다. 예로써, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3rd ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY 2001; 그리고 Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994를 참고한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 단리된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 정제된다. "순도"는 상대적 용어이고, 그리고 반드시 절대 순도 또는 절대 농축 또는 절대 선별로서 간주되지는 않는 것으로 이해된다. 일부 양상에서, 순도는 최소한 또는 약 50%, 최소한 또는 약 60%, 최소한 또는 약 70%, 최소한 또는 약 80%, 또는 최소한 또는 약 90% (가령, 최소한 또는 약 91%, 최소한 또는 약 92%, 최소한 또는 약 93%, 최소한 또는 약 94%, 최소한 또는 약 95%, 최소한 또는 약 96%, 최소한 또는 약 97%, 최소한 또는 약 98%, 최소한 또는 약 99% 또는 대략 100%이다.
일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 펩티드는 기업, 예를 들면, Synpep (Dublin, CA), Peptide Technologies Corp. (Gaithersburg, MD), 그리고 Multiple Peptide Systems (San Diego, CA)에 의해 상업적으로 합성된다. 이와 관련하여, 펩티드는 합성, 재조합, 단리, 및/또는 정제될 수 있다.
글루카곤 관련된 펩티드 (Q)의 부류는 하기에 상세하게 기술된다. 부류 1, 부류 2, 부류 3, 부류 4, 그리고 부류 5 글루카곤 관련된 펩티드에 관한 개시의 각 섹션에 대하여, 앞서 상술된 Q-L-Y 접합체의 글루카곤 관련된 펩티드 부분 (Q)에 관한 변형이 기술된다. 따라서 글루카곤 관련된 펩티드의 부류에 관해 기술된 구조 요소는 앞서 기술된 바와 같은 Q-L-Y 접합체를 산출하기 위해 더욱 변형되는 Q의 구조 요소이다.
부류 1 글루카곤 관련된 펩티드
일정한 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드이고, 이것은 본 명세서 및 국제 특허 공개공보 번호 제WO 2009/155257호 (2009년 12월 23일자 공개됨), 국제 특허 출원 공개공보 번호 제WO 2008/086086호 (2008년 7월 17일자 공개됨), 그리고 국제 특허 출원 공개공보 번호 제WO 2007/056362호 (2007년 5월 18일자 공개됨)에서 기술되고, 이들의 내용은 전체로서 참고문헌으로 편입된다.
부류 1 글루카곤 관련된 펩티드에 관해 하기 섹션에서 언급된 생물학적 서열 (서열 번호: 801-915)은 국제 특허 공개공보 번호 제WO 2009/155257호에서 서열 번호: 1-115에 상응한다.
활성
부류 1 글루카곤 펩티드는 고유 글루카곤 펩티드 (서열 번호: 801)에 비하여 글루카곤 수용체 활성을 유지한다. 가령, 글루카곤 펩티드는 고유 글루카곤의 활성 (실시예 2에서 전반적으로 기술된 분석평가를 이용한 cAMP 생산에 의한 측정에서, 글루카곤과 대비하여 글루카곤 펩티드에 대한 EC50의 역비로서 계산됨)의 최소한 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75% 활성, 80% 활성, 85% 활성, 또는 90%를 유지할 수 있다. 일부 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤과 동일하거나 이보다 큰 활성 (본 명세서에서, 용어 "효능"과 동의어로서 이용됨)을 갖는다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 글루카곤 펩티드는 고유 글루카곤 펩티드의 활성의 단지 약 100%, 1000%, 10,000%, 100,000%, 또는 1,000,000%를 나타낸다.
본 명세서에서 기술된 임의의 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 예로써, 실시예 2의 분석평가를 이용하여 글루카곤 수용체를 과다발현하는 HEK293 세포에서 cAMP 유도에 대해 조사될 때, 인간 글루카곤 수용체에서 약 100 nM, 75 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 10 nM, 5 nM, 1 nM 이하의 EC50을 나타낼 수 있다. 전형적으로 페길화된 펩티드는 페길화되지 않은 펩티드와 비교하여 더욱 높은 EC50을 나타낼 것이다. 가령, 본 명세서에서 기술된 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 페길화되지 않을 때, 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤 (서열 번호: 801)의 활성의 최소한 20% (가령, 최소한 30%, 최소한 40%, 최소한 50%, 최소한 60%, 최소한 75%, 최소한 80%, 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98%, 최소한 99%, 100%, 150%, 200%, 400%, 500% 이상)인 글루카곤 수용체에서 활성을 나타낼 수 있다. 일정한 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 친수성 모이어티가 결여될 때 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 지시된 % 활성을 나타내지만, 친수성 모이어티를 포함할 때 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 감소된 % 활성을 나타낸다. 가령, 본 명세서에서 기술된 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 페길화될 때, 고유 글루카곤의 활성의 최소한 2% (가령, 최소한 3%, 최소한 4%, 최소한 5%, 최소한 6%, 최소한 7%, 최소한 8%, 최소한 9%, 또는 최소한 10%인 글루카곤 수용체에서 활성을 나타낼 수 있다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 상기 지시된 활성 중에서 한 가지를 나타내지만 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 단지 1000%, 10,000%, 100,000%, 또는 1,000,000%를 나타낸다.
일부 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 약 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만 및/또는 GLP-1 수용체와 비교하여 글루카곤 수용체에 대한 약 5-배, 10-배, 또는 15-배 초과의 선택성을 나타낸다. 가령, 일부 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 5% 미만을 나타내고, 그리고 GLP-1 수용체와 비교하여 글루카곤 수용체에 대한 5-배 초과의 선택성을 나타낸다.
향상된 용해성
고유 글루카곤은 수성 용액에서, 특히 생리학적 pH에서 시간의 흐름에서 집합하고 침전되는 경향으로 불량한 용해성을 나타낸다. 대조적으로, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 일부 구체예에서, 25℃에서 24시간 후 6과 8 사이, 또는 6과 9 사이의 pH, 예를 들면, pH 7에서 고유 글루카곤과 비교하여 최소한 2-배, 5-배, 또는 더욱 높은 용해성을 나타낸다.
따라서 일부 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 고유 펩티드의 생물학적 활성을 유지하면서 수성 용액에서, 특히 약 5.5 내지 약 8.0 범위의 pH에서 펩티드의 용해성을 향상시키기 위해, His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr (서열 번호: 801)의 야생형 펩티드에 비하여 변형된다.
가령, 본 명세서에서 기술된 임의의 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드의 용해성은 친수성 모이어티를 펩티드에 부착함으로써 더욱 향상될 수 있다. 이런 기의 도입은 또한, 예로써 순환 동안 연장된 반감기에 의한 측정에서 작용의 지속 기간을 증가시킨다. 친수성 모이어티는 본 명세서에서 더욱 기술된다.
하전된 잔기로 변형
일부 구체예에서, 용해성은 리신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르트산 및 글루타민산으로 구성된 군에서 선택되는 하전된 아미노산으로 고유 비-하전된 아미노산의 치환에 의해, 또는 펩티드의 아미노 또는 카르복시 말단에 하전된 아미노산의 부가에 의해 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드에 전하를 추가함으로써 향상된다.
일부 구체예에 따라서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 상기 펩티드가 펩티드의 C-말단 부분 내로, 그리고 일부 구체예에서, 서열 번호: 801의 위치 27에 C-말단 위치에서 하전된 아미노산을 도입하는 아미노산 치환 및/또는 부가에 의해 변형된다는 사실로 인하여, 향상된 용해성을 갖는다. 임의적으로, 1개, 2개 또는 3개의 하전된 아미노산이 C-말단 부분 내에, 그리고 일부 구체예에서, 위치 27의 C-말단에 도입될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 위치 28 및/또는 29에서 고유 아미노산(들)은 하전된 아미노산으로 치환되고, 및/또는 1개 내지 3개의 하전된 아미노산이 펩티드의 C-말단에, 예를 들면, 위치 27, 28 또는 29 뒤에 부가된다. 예시적인 구체예에서, 하전된 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개 또는 전부가 음으로 하전된다. 다른 구체예에서, 하전된 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개 또는 전부가 양으로 하전된다.
특정한 예시적인 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 하기 변형 중에서 임의의 한 가지 또는 두 가지를 포함할 수 있다: N28의 E로의 치환; N28의 D로의 치환; T29의 D로의 치환; T29의 E로의 치환; 위치 27, 28 또는 29 뒤에 E의 삽입; 위치 27, 28 또는 29 뒤에 D의 삽입. 가령, D28E29, E28E29, E29E30, E28E30, D28E30.
한 가지 예시적인 구체예에 따르면, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 811의 아미노산 서열, 또는 고유 글루카곤에 비하여 1개 내지 3개의 추가적인 아미노산 변형 (글루카곤 작동약에 관하여 본 명세서에서 기술됨)을 내포하는 이의 유사체, 또는 이의 글루카곤 작동약 유사체를 포함한다. 서열 번호: 811은 변형된 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드를 대표하고, 여기서 고유 단백질의 위치 28에서 아스파라긴 잔기가 아스파르트산으로 치환된다. 또 다른 예시적인 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 838의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 고유 단백질의 위치 28에서 아스파라긴 잔기가 글루타민산으로 치환된다. 다른 예시적인 구체예에는 서열 번호: 824, 825, 826, 833, 835, 836과 837의 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드가 포함된다.
위치 28 및/또는 29에서 정상적으로 발생하는 아미노산의 하전된 아미노산으로의 치환, 및/또는 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드의 카르복시 말단에서 1개 내지 2개의 하전된 아미노산의 부가는 수성 용액에서 생리학적으로 관련된 pH (즉, 약 6.5 내지 약 7.5의 pH)에서 글루카곤 펩티드의 용해성과 안정성을 최소한 5-배, 그리고 많게는 30-배 증강시킨다. 따라서 일부 구체예 중에서 부류 1 글루카곤 펩티드는 글루카곤 활성을 유지하고 25℃에서 24시간 후 측정될 때 약 5.5와 8 사이에 소정의 pH, 예를 들면, pH 7에서 고유 글루카곤에 비하여 최소한 2-배, 5-배, 10-배, 15-배, 25-배, 30-배 이상의 용해성을 나타낸다.
글루카곤 활성을 여전히 유지할 수 있도록 하는, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드에 대한 추가의 변형, 예를 들면, 보존성 치환이 만들어질 수 있고, 이들 변형은 본 명세서에서 더욱 기술된다.
향상된 안정성
임의의 부류 1 글루카곤 펩티드는 향상된 안정성 및/또는 감소된 분해를 부가적으로 나타낼 수 있다, 예를 들면, 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 95%를 유지한다. 본 명세서에서 개시된 임의의 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 5.5 내지 8의 범위 내에 pH에서 향상된 안정성을 부가적으로 나타낼 수 있다, 예를 들면, 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 75%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 유지한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 향상된 안정성을 나타내고, 따라서 용해 상태에서 최소한 20℃ (가령, 21℃, 22℃, 23℃, 24℃, 25℃, 26℃, 최소한 27.5℃, 최소한 30℃, 최소한 35℃, 최소한 40℃, 최소한 50℃) 및 100℃ 미만, 85℃ 미만, 75℃ 미만, 또는 70℃ 미만의 온도에서 약 1 이상의 주 (가령, 약 2주, 약 4주, 약 1개월, 약 2개월, 약 4개월, 약 6개월, 약 8개월, 약 10개월, 약 12개월) 이후에, 펩티드 농도의 최소한 75% (가령, 최소한 80%, 최소한 85%, 최소한 90%, 최소한 95%, 95% 초과, 100%까지) 또는 분해된 펩티드의 약 25% 미만 (가령, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 1% 미만, 0%까지)가 280 nm에서 자외선 (UV) 검출기에 의해 검출가능하다. 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 제약학적 성질을 변화시키는 추가적인 변형, 예를 들면, 증가된 효능, 순환 동안 연장된 반감기, 증가된 보관 수명, 감소된 침전 또는 집합, 및/또는 감소된 분해, 예를 들면, 보관 후 절단 또는 화학적 변형의 감소된 발생을 포함할 수도 있다.
또 다른 예시적인 구체예에서, 임의의 전술한 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 801의 위치 15에서 아미노산을 변형함에 의해 안정성을 향상시켜 특히 산성 또는 알칼리성 완충액에서 시간의 흐름에서 펩티드의 분해를 감소시키기 위해 더욱 변형될 수 있다. 예시적인 구체예에서, 위치 15에서 Asp는 Glu, 호모-Glu, 시스테산, 또는 호모-시스테산으로 치환된다.
대안으로, 본 명세서에서 기술된 임의의 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 801의 위치 16에서 아미노산을 변형함에 의해 안정성을 향상시키기 위해 더욱 변형될 수 있다. 예시적인 구체예에서, 위치 16에서 Ser은 Thr 또는 Aib로 치환되거나, 또는 글루카곤 수용체에서 효능을 증강시키는 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 본 명세서에서 기술된 임의의 아미노산 치환으로 치환된다. 이런 변형은 Asp15-Ser16 사이에 펩티드 결합의 절단을 감소시킨다.
일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 임의의 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 위치 20, 21, 24, 또는 27 중에서 1개, 2개, 3개, 또는 4개 모두를 변형함에 의해 다양한 아미노산 위치에서 분해를 감소시키기 위해 더욱 변형될 수 있다. 예시적인 구체예에는 위치 20에서 Gln의 Ser, Thr, Ala 또는 Aib로의 치환, 위치 21에서 Asp의 Glu로의 치환, 위치 24에서 Gln의 Ala 또는 Aib로의 치환, 위치 27에서 Met의 Leu 또는 Nle로의 치환이 포함된다. 메티오닌의 제거 또는 치환은 메티오닌의 산화에 기인한 분해를 감소시킨다. Gln 또는 Asn의 제거 또는 치환은 Gln 또는 Asn의 탈아미드화에 기인한 분해를 감소시킨다. Asp의 제거 또는 치환은 환상 숙신이미드 중간물질을 형성하는 Asp의 탈수, 그 이후에 이소-아스파르테이트로의 이성질화를 통해 발생하는 분해를 감소시킨다.
증강된 효능
다른 구체예에 따라서, 글루카곤 수용체에서 증강된 효능을 갖는 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 위치 16에서 고유 글루카곤 (서열 번호: 801)의 아미노산 변형을 포함한다. 무제한적 실례로써, 이런 증강된 효능은 위치 16에서 자연 발생 세린을 글루타민산 또는 4개 원자 길이의 측쇄를 갖는 다른 음으로 하전된 아미노산으로, 또는 대안으로, 글루타민, 호모글루타민산, 또는 호모시스테산, 또는 최소한 하나의 헤테로원자 (가령, N, O, S, P)를 내포하는 약 4 (또는 3-5)개 원자 측쇄 길이의 측쇄를 갖는 하전된 아미노산 중에서 한 가지로 치환함으로써 제공될 수 있다. 위치 16에서 세린의 글루타민산으로의 치환은 글루카곤 수용체에서 글루카곤 활성을 최소한 2-배, 4-배, 5-배 및 10-배 초과까지 증강시킨다. 일부 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1 수용체에 비하여 글루카곤 수용체에 대한 선택성, 예를 들면, 최소한 5-배, 10-배, 또는 15-배 선택성을 유지한다.
DPP-IV 내성
일부 구체예에서, 본 명세서에서 개시된 부류 1 글루카곤 펩티드는 디펩티딜 펩티다아제 IV에 의한 절단에 대한 감수성을 감소시키기 위해 위치 1 또는 2에서 더욱 변형된다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드의 위치 1 및/또는 위치 2는 본 명세서에서 기술된 DPP-IV 내성 아미노산(들)으로 치환된다. 일부 구체예에서, 유사체 펩티드의 위치는 아미노 이소부티르산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 유사체 펩티드의 위치 2는 D-세린, D-알라닌, 글리신, N-메틸 세린, 그리고 ε-아미노 부티르산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 또 다른 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드의 위치 2는 D-세린, 글리신, 그리고 아미노이소부티르산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 위치 2에서 아미노산은 D-세린이 아니다.
글루카곤 펩티드의 위치 1 및/또는 위치 2에서 아미노산의 변형 시에 글루카곤 활성에서 감소는 글루카곤 펩티드의 C-말단 부분 (아미노산 12-29 주변)에서 알파-나선 구조의 안정화에 의해 회복될 수 있다. 알파 나선 구조는 예로써, 본 명세서에서 더욱 기술된 바와 같은 공유 또는 비-공유 분자내 가교 (가령, 위치 "i"와 "i+4"에서 아미노산의 측쇄 사이에 락탐 가교, 여기서 i는 12 내지 25의 정수이다)의 형성, 알파 나선-안정화 아미노산 (가령, α,α-이중치환된 아미노산)으로 위치 12-29 주변에 아미노산의 치환 및/또는 삽입에 의해 안정화될 수 있다.
위치 3에서 변형
글루카곤 수용체 활성은 위치 3 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)에서 아미노산 변형, 예를 들면, 위치 3에서 자연 발생 글루타민의 산성, 염기성, 또는 소수성 아미노산으로의 치환에 의해 감소될 수 있다. 가령, 위치 3에서 글루타민산, 오르니틴, 또는 노르류신으로 치환은 글루카곤 수용체 활성을 실질적으로 감소시키거나 파괴한다.
글루카곤 수용체에서 유지된 또는 증강된 활성은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 위치 3에서 Gln을 글루타민 유사체로 변형함으로써 달성될 수 있다. 가령, 글루카곤 작동약은 서열 번호: 863, 서열 번호: 869, 서열 번호: 870, 서열 번호: 871, 서열 번호: 872, 서열 번호: 873, 그리고 서열 번호: 874의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
C-말단 아미드와 에스테르로 GLP-1 활성의 증강
GLP-1 수용체에서 증강된 활성은 C-말단 아미노산의 카르복실산을 전하-중성 기 (charge-neutral group), 예를 들면, 아미드 또는 에스테르로 대체함으로써 제공된다. 역으로, 펩티드의 C-말단에서 고유 카르복실산을 유지하는 것은 GLP-1 수용체와 대비하여 글루카곤 수용체에 대한 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드의 상대적으로 더욱 큰 선택성 (가령, 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20-배 초과)을 지속시킨다.
추가 변형 및 조합
부류 1 글루카곤 관련된 펩티드에 추가 변형이 만들어질 수 있는데, 이들은 용해성 및/또는 안정성 및/또는 글루카곤 활성을 더욱 증가시킨다. 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 대안으로, 용해성 또는 안정성에 실질적으로 영향을 주지 않고, 그리고 글루카곤 활성을 실질적으로 감소시키지 않는 다른 변형을 포함한다. 예시적인 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 고유 글루카곤 서열에 비하여 총 11개까지, 또는 12개까지, 또는 13개까지, 또는 14개까지의 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 가령, 보존성 또는 비-보존성 치환, 부가 또는 결실은 위치 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 또는 29 중에서 하나에서 수행될 수 있다.
부류 1 글루카곤 관련된 펩티드의 예시적인 변형에는 하기가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다:
(a) 최소한 부분 글루카곤 작동약 활성을 유지하면서 비-보존성 치환, 보존성 치환, 부가 또는 결실, 예를 들면, 위치 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 또는 29 중에서 하나 이상에서 보존성 치환, 위치 10에서 Tyr의 Val 또는 Phe로의 치환, 위치 12에서 Lys의 Arg로의 치환, 이들 위치 중에서 하나 이상에서 Ala로 치환;
(b) 최소한 부분 글루카곤 작동약 활성을 유지하면서 위치 29 및/또는 28, 그리고 임의적으로 위치 27에서 아미노산의 결실;
(c) 예로써, 글루타민산, 호모글루타민산, 시스테산 또는 호모시스테산으로 치환에 의한 위치 15에서 아스파르트산의 변형, 이것은 분해를 감소시킬 수 있다; 또는 예로써, 트레오닌, Aib, 글루타민산 또는 4개 원자 길이의 측쇄를 갖는 다른 음으로 하전된 아미노산으로, 또는 대안으로, 글루타민, 호모글루타민산, 또는 호모시스테산 중에서 한 가지로 치환에 의한 위치 16에서 세린의 변형, 이것은 Asp15-Ser16 결합의 절단에 기인한 분해를 유사하게 감소시킬 수 있다;
(d) 예로써, 위치 16, 17, 20, 21, 24, 29, 40 또는 C-말단 아미노산에서 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 친수성 모이어티, 예를 들면, 물 용해성 중합체 폴리에틸렌 글리콜의 부가, 이것은 용해성 및/또는 반감기를 증가시킬 수 있다;
(e) 산화성 분해를 감소시키기 위한, 예로써 류신 또는 노르류신으로 치환에 의한 위치 27에서 메티오닌의 변형;
(f) Gln의 탈아미드화를 통해 일어나는 분해를 감소시키기 위해, 예로써 Ser, Thr, Ala 또는 Aib로 치환에 의한 위치 20 또는 24에서 Gln의 변형;
(g) 환상 숙신이미드 중간물질을 형성하는 Asp의 탈수, 그 이후에 이소-아스파르테이트로의 이성질화를 통해 발생하는 분해를 감소시키기 위해, 예로써 Glu로 치환에 의한 위치 21에서 Asp의 변형;
(h) 분자내 가교, 예를 들면, 위치 "i"와 "i+4" 사이에 락탐 가교와 임의적으로 공동으로, DPP-IV 절단에 대한 내성을 향상시키는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 위치 1 또는 2에서 변형, 여기서 i는 12 내지 25의 정수, 예를 들면, 12, 16, 20, 24이다;
(i) 친수성 모이어티의 부가와 임의적으로 복합된, 부가적으로 또는 대안으로, GLP-1 펩티드에서 활성을 선택적으로 감소시키는 변형, 예를 들면, 위치 7에서 Thr의 변형, 예를 들면, 히드록실 기가 결여된 아미노산, 예를 들면, Abu 또는 Ile로 위치 7에서 Thr의 치환; 위치 27에서 아미노산의 C-말단에 아미노산 결실 (가령, 27 또는 28개 아미노산 길이의 펩티드를 산출하는 위치 28과 29에서 아미노산 중에서 한쪽 또는 양쪽의 결실)과 임의적으로 복합된, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 글루카곤 펩티드의 아실화 또는 알킬화, 이것은 글루카곤 수용체에서 및/또는 GLP-1 수용체에서 활성을 증가시키고, 순환 동안 반감기를 증가시키고 및/또는 작용의 지속 기간을 연장하고 및/또는 작용의 개시를 자연시킨다;
(j) 본 명세서에서 기술된 바와 같은 C-말단 확장;
(k) 본 명세서에서 기술된 바와 같은 동종이합체화 또는 헤테로이합체화; 그리고
(a) 내지 (k)의 조합.
일부 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드의 예시적인 변형에는 군 A에서 선택되는 최소한 하나의 아미노산 변형 및 군 B 및/또는 군 C에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 변형이 포함된다;
여기서 군 A는 하기와 같고:
위치 28에서 Asn의 하전된 아미노산으로의 치환;
위치 28에서 Asn의 Lys, Arg, His, Asp, Glu, 시스테산, 그리고 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 하전된 아미노산으로의 치환;
위치 28에서 Asn, Asp, 또는 Glu로 치환;
위치 28에서 Asp로 치환;
위치 28에서 Glu로 치환;
위치 29에서 Thr의 하전된 아미노산으로의 치환;
위치 29에서 Thr의 Lys, Arg, His, Asp, Glu, 시스테산, 그리고 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 하전된 아미노산으로의 치환;
위치 29에서 Asp, Glu, 또는 Lys로 치환;
위치 29에서 Glu로 치환;
위치 29 뒤에 1-3개의 하전된 아미노산의 삽입;
위치 29 뒤에 Glu 또는 Lys의 삽입;
위치 29 뒤에 Gly-Lys 또는 Lys-Lys의 삽입;
또는 이들의 조합;
여기서 군 B는 하기와 같고:
위치 15에서 Asp의 Glu로의 치환;
위치 16에서 Ser의 Thr 또는 Aib로의 치환; 그리고
여기서 군 C는 하기와 같다:
위치 1에서 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-IV)에 의한 절단에 대한 글루카곤 펩티드의 감수성을 감소시키는 비-고유 아미노산으로 His의 치환,
위치 2에서 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-IV)에 의한 절단에 대한 글루카곤 펩티드의 감수성을 감소시키는 비-고유 아미노산으로 Ser의 치환,
위치 12에서 Lys의 Arg로의 치환;
위치 20에서 Gln의 Ser, Thr, Ala 또는 Aib로의 치환;
위치 21에서 Asp의 Glu로의 치환;
위치 24에서 Gln의 Ser, Thr,Ala 또는 Aib로의 치환;
위치 27에서 Met의 Leu 또는 Nle으로의 치환;
위치 27-29에서 아미노산의 결실;
위치 28-29에서 아미노산의 결실;
위치 29에서 아미노산의 결실;
또는 이들의 조합.
예시적인 구체예에서, 위치 12에서 Lys는 Arg로 치환된다. 다른 예시적인 구체예에서, 위치 29 및/또는 28, 그리고 임의적으로 위치 27에서 아미노산은 결실된다.
일부 특정한 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 (a) DPP-IV 내성을 공여하는 위치 1 및/또는 2에서 아미노산 변형, 예를 들면, 위치 1에서 DMIA, 또는 위치 2에서 Aib로 치환, (b) 위치 12-29 내에, 예를 들면, 위치 16과 20에서 분자내 가교, 또는 위치 16, 20, 21, 그리고 24에서 아미노산의 α,α-이중치환된 아미노산으로의 하나 이상의 치환, 임의적으로 (c) 예로써, 위치 24, 29 또는 C-말단 아미노산에서 Cys를 통한 친수성 모이어티, 예를 들면, PEG에 연결, 임의적으로 (d) Met를 예로써, Nle로 치환하는 위치 27에서 아미노산 변형, 임의적으로 (e) 분해를 감소시키는 위치 20, 21과 24에서 아미노산 변형, 그리고 임의적으로 (f) 서열 번호: 820에 연결을 포함한다. 글루카곤 펩티드가 서열 번호: 820에 연결될 때, 위치 29에서 아미노산은 일정한 구체예에서, Thr 또는 Gly이다. 다른 특정한 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 (a) Asp28Glu29, 또는 Glu28Glu29, 또는 Glu29Glu30, 또는 Glu28Glu30 또는 Asp28Glu30, 그리고 임의적으로 (b) Ser을 예로써, Thr 또는 Aib로 치환하는 위치 16에서 아미노산 변형, 그리고 임의적으로 (C) Met을 예로써, Nle로 치환하는 위치 27에서 아미노산 변형, 그리고 임의적으로 (d) 분해를 감소시키는 위치 20, 21과 24에서 아미노산 변형을 포함한다. 특정한 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 T16, A20, E21, A24, Nle27, D28, E29이다.
일부 구체예에서, 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함한다:
1개 내지 3개의 아미노산 변형을 갖는 X1-X2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Z (서열 번호: 839),
여기서 X1 및/또는 X2는 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-IV)에 의한 절단에 대한 글루카곤 펩티드의 감수성을 감소 (또는 내성을 증가)시키는 비-고유 아미노산이고, 여기서 Z는 -COOH (자연 발생 C-말단 카르복실레이트), -Asn-COOH, Asn-Thr-COOH, 그리고 Y-COOH로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 Y는 1 내지 2개의 아미노산이고, 그리고
여기서 분자내 가교, 바람직하게는 공유 결합은 위치 i에서 아미노산 및 위치 i+4에서 아미노산의 측쇄를 연결하고, 여기서 i는 12, 16, 20 또는 24이다.
일부 구체예에서, 분자내 가교는 락탐 가교이다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 839의 위치 i와 i+4에서 아미노산은 Lys과 Glu, 예를 들면, Glu16과 Lys20이다. 일부 구체예에서, X1은 하기와 같이 구성된 군에서 선택된다: D-His, N-메틸-His, 알파-메틸-His, 이미다졸 아세트산, 데스-아미노-His, 히드록실-His, 아세틸-His, 호모-His, 그리고 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA). 다른 구체예에서, X2는 하기와 같이 구성된 군에서 선택된다: D-Ser, D-Ala, Gly, N-메틸-Ser, Val, 그리고 알파, 아미노 이소부티르산 (Aib). 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 아미노산 위치 16, 17, 20, 21, 24, 29, 40 중에서 하나, C-말단 확장 내에, 또는 C-말단 아미노산에서 친수성 모이어티에 공유 연결된다. 예시적인 구체예에서, 이러한 친수성 모이어티는 이들 위치 중에서 하나에서 Lys, Cys, Orn, 호모시스테인, 또는 아세틸-페닐알라닌 잔기에 공유 연결된다. 예시적인 친수성 모이어티에는 예로써, 약 1,000 달톤 내지 약 40,000 달톤, 또는 약 20,000 달톤 내지 약 40,000 달톤의 분자량의 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이 포함된다.
다른 구체예에서, 부류 I 글루카곤 관련된 펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함한다:
X1-X2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Z (서열 번호: 839),
여기서 X1 및/또는 X2는 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-IV)에 의한 절단에 대한 글루카곤 펩티드의 감수성을 감소 (또는 내성을 증가)시키는 비-고유 아미노산이고,
여기서 글루카곤 펩티드의 위치 16, 20, 21, 그리고 24 중에서 1개, 2개, 3개, 4개 이상이 α,α-이중치환된 아미노산으로 치환되고, 그리고
여기서 Z는 -COOH (자연 발생 C-말단 카르복실레이트), -Asn-COOH, Asn-Thr-COOH, 그리고 Y-COOH로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 Y는 1 내지 2개의 아미노산이다.
상기 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드 또는 유사체에 예시적인 추가의 아미노산 변형에는 임의적으로, 아실 또는 알킬 기 (여기서 아실 또는 알킬 기는 자연 발생 아미노산에 비-고유이다)에 공유 부착된(임의적으로, 스페이서를 통해) 측쇄를 포함하는 아미노산의 치환 또는 부가와 공동으로, 위치 7에서 히드록실 기가 없는 아미노산, 예를 들면, 아미노부티르산 (Abu), Ile로 Thr의 치환, 위치 12에서 Lys의 Arg로의 치환; 위치 15에서 Asp의 Glu로의 치환; 위치 16에서 Ser의 Thr 또는 Aib로의 치환; 위치 20에서 Gln의 Ser, Thr, Ala 또는 Aib로의 치환; 위치 21에서 Asp의 Glu로의 치환; 위치 24에서 Gln의 Ser, Thr, Ala 또는 Aib로의 치환; 위치 27에서 Met의 Leu 또는 Nle로의 치환; 위치 28에서 Asn의 하전된 아미노산으로의 치환; 위치 28에서 Asn의 Lys, Arg, His, Asp, Glu, 시스테산, 그리고 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 하전된 아미노산으로의 치환; 위치 28에서 Asn, Asp, 또는 Glu로 치환; 위치 28에서 Asp로 치환; 위치 28에서 Glu로 치환; 위치 29에서 Thr의 하전된 아미노산으로의 치환; 위치 29에서 Thr의 Lys, Arg, His, Asp, Glu, 시스테산, 그리고 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 하전된 아미노산으로의 치환; 위치 29에서 Asp, Glu, 또는 Lys로 치환; 위치 29에서 Glu로 치환; 위치 29 뒤에 1-3개의 하전된 아미노산의 삽입; 위치 30에서 (즉, 위치 29 뒤에) Glu 또는 Lys의 삽입; 임의적으로, 위치 31에서 Lys의 삽입; 임의적으로, C-말단에 서열 번호: 820의 부가, 여기서 위치 29에서 아미노산은 Thr 또는 Gly이다; 친수성 모이어티에 공유 부착된 아미노산의 치환 또는 부가; 또는 이들의 조합이 포함된다.
글루카곤 수용체 활성을 증가시키거나, 부분 글루카곤 수용체 활성을 유지하거나, 용해성을 향상시키거나, 안정성을 증가시키거나, 또는 분해를 감소시키는 부류 1 글루카곤 작동약과 관련하여 앞서 기술된 임의의 변형은 개별적으로 또는 공동으로, 부류 1 글루카곤 펩티드에 적용될 수 있다. 따라서 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 최소한 20%를 유지하는 부류 1 글루카곤 관련된 펩티드가 제조될 수 있고, 이들은 6과 8 또는 6과 9 사이의 pH (가령, pH 7)에서 최소한 1 mg/mL의 농도에서 가용성이고, 그리고 임의적으로, 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 95%를 유지한다 (가령, 본래 펩티드의 5% 이하가 분해되거나 절단된다). 대안으로, 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 최소한 약 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 350%, 400%, 450%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900% 또는 10-배 이상을 나타내고, 그리고 임의적으로, 6과 8 또는 6과 9 사이의 pH (가령, pH 7)에서 최소한 1 mg/mL의 농도에서 가용성이고, 그리고 임의적으로, 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 95%를 유지 (가령, 본래 펩티드의 5% 이하가 분해되거나 절단)하는 높은 효능 부류 1 글루카곤 펩티드가 제조될 수 있다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 부류 1 글루카곤 펩티드는 글루카곤 수용체에서 활성의 상기 지시된 상대적 수준 중에서 최소한 한 가지, 하지만 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 단지 1,000%, 5,000% 또는 10,000%를 나타낼 수 있다.
부류 1 글루카곤 관련된 펩티드의 구체예의 실례
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 801의 고유 글루카곤 펩티드는 위치 28 및/또는 29에서 고유 아미노산의 음으로 하전된 아미노산 (가령, 아스파르트산 또는 글루타민산)으로의 치환 및 임의적으로, 상기 펩티드의 카르복시 말단에 음으로 하전된 아미노산 (가령, 아스파르트산 또는 글루타민산)의 부가에 의해 변형된다. 대안적 구체예에서, 서열 번호: 801의 고유 글루카곤 펩티드는 위치 29에서 고유 아미노산의 양으로 하전된 아미노산 (가령, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘)으로의 치환 및 임의적으로, 상기 펩티드의 카르복시 말단 상에서 1개 또는 2개 양으로 하전된 아미노산 (가령, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘)의 부가에 의해 변형된다. 일부 구체예에 따라서, 향상된 용해성과 안정성을 갖는 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체는 서열 번호: 834의 아미노산 서열을 포함하고, 단서로써 위치 28 또는 29에서 최소한 하나의 아미노산이 산성 아미노산으로 치환되고 및/또는 추가의 산성 아미노산이 서열 번호: 834의 카르복시 말단에 첨가된다. 일부 구체예에서, 산성 아미노산은 독립적으로 Asp, Glu, 시스테산 및 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예에 따라서, 향상된 용해성과 안정성을 갖는 글루카곤 작동약이 제시되고, 여기서 작동약은 서열 번호: 833의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 위치 27, 28 또는 29에서 최소한 하나의 아미노산은 비-고유 아미노산 잔기로 치환된다 (즉, 상기 유사체의 위치 27, 28 또는 29에 존재하는 최소한 하나의 아미노산은 서열 번호: 801 내에 상응하는 위치에 존재하는 아미노산으로부터 상이한 산성 아미노산이다). 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 833의 서열을 포함하는 글루카곤 작동약이 제시되고, 단서로써 위치 28에서 아미노산이 아스파라긴이고, 그리고 위치 29에서 아미노산이 트레오닌일 때, 상기 펩티드는 글루카곤 펩티드의 카르복시 말단에 부가된, Lys, Arg, His, Asp 또는 Glu로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 1개 내지 2개의 아미노산을 더욱 포함한다.
고유 글루카곤 펩티드의 일정한 위치는 부모 펩티드의 활성 중에서 최소한 일부를 유지하면서 변형될 수 있는 것으로 보고되었다. 따라서 본 발명자들은 서열 번호: 811의 펩티드의 위치 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 또는 29에 위치되는 아미노산 중에서 하나 이상이 고유 글루카곤 펩티드 내에 존재하는 아미노산과 상이한 아미노산으로 치환될 수 있고, 그리고 부모 글루카곤 펩티드의 증강된 효능, 생리학적 pH 안정성 및 생물학적 활성을 여전히 유지하는 것으로 기대한다. 가령, 일부 구체예에 따라서, 고유 펩티드의 위치 27에 존재하는 메티오닌 잔기는 펩티드의 산화성 분해를 예방하기 위해 류신 또는 노르류신으로 교체된다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 833의 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체의 위치 1, 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21 또는 24에서 선택되는 1개 내지 6개의 아미노산은 서열 번호: 801의 상응하는 아미노산과 상이하다. 또 다른 구체예에 따라서, 서열 번호: 833의 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체의 위치 1, 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21 또는 24에서 선택되는 1개 내지 3개의 아미노산은 서열 번호: 801의 상응하는 아미노산과 상이하다. 또 다른 구체예에서, 서열 번호: 807, 서열 번호: 808 또는 서열 번호: 834의 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체의 위치 1, 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21 또는 24에서 선택되는 1개 내지 2개의 아미노산은 서열 번호: 801의 상응하는 아미노산과 상이하고, 그리고 추가의 구체예에서, 이들 1개 내지 2개의 상이한 아미노산은 고유 서열 (서열 번호: 801) 내에 존재하는 아미노산에 비하여 보존성 아미노산 치환을 나타낸다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 811 또는 서열 번호: 813의 글루카곤 펩티드가 제시되고, 여기서 글루카곤 펩티드는 위치 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27 또는 29에서 선택되는 위치에서 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 치환을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 위치 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 27 또는 29에서 치환은 보존성 아미노산 치환이다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 801의 유사체 펩티드를 포함하는 글루카곤 작동약이 제시되고, 여기서 유사체는 위치 2에서 세린 이외의 아미노산을 갖고, 그리고 위치 28 또는 29에서 고유 아미노산에 대해 치환된 산성 아미노산 또는 서열 번호: 801의 펩티드의 카르복시 말단에 첨가된 산성 아미노산을 가짐으로써 서열 번호: 801과 상이하다. 일부 구체예에서, 산성 아미노산은 아스파르트산 또는 글루타민산이다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 809, 서열 번호: 812, 서열 번호: 813 또는 서열 번호: 832의 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체는 위치 2에서 치환에 의해 부모 분자와 상이하다. 더욱 구체적으로, 유사체 펩티드의 위치 2는 D-세린, 알라닌, D-알라닌, 글리신, n-메틸 세린 및 아미노 이소부티르산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다.
다른 구체예에서, 서열 번호: 801의 유사체 펩티드를 포함하는 글루카곤 작동약이 제시되고, 여기서 상기 유사체는 위치 1에서 히스티딘 이외의 아미노산을 갖고, 그리고 위치 28 또는 29에서 고유 아미노산에 대해 치환된 산성 아미노산 또는 서열 번호: 801의 펩티드의 카르복시 말단에 첨가된 산성 아미노산을 가짐으로써 서열 번호: 801과 상이하다. 일부 구체예에서, 산성 아미노산은 아스파르트산 또는 글루타민산이다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 809, 서열 번호: 812, 서열 번호: 813 또는 서열 번호: 832의 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체는 위치 1에서 치환에 의해 부모 분자와 상이하다. 더욱 구체적으로, 유사체 펩티드의 위치 1은 DMIA, D-히스티딘, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘 및 호모-히스티딘으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다.
일부 구체예에 따라서, 변형된 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 809, 서열 번호: 812, 서열 번호: 813 및 서열 번호: 832로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함한다. 추가의 구체예에서, 서열 번호: 809, 서열 번호: 812, 서열 번호: 813 또는 서열 번호: 832의 서열을 포함하고 서열 번호: 809, 서열 번호: 812, 서열 번호: 813 또는 서열 번호: 832의 C-말단에 부가된 1개 내지 2개의 아미노산을 더욱 포함하는 글루카곤 펩티드가 제시되고, 여기서 이들 추가적인 아미노산은 Lys, Arg, His, Asp Glu, 시스테산 또는 호모시스테산으로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다. 일부 구체예에서, 카르복시 말단에 부가된 추가적인 아미노산은 Lys, Arg, His, Asp 또는 Glu로 구성된 군에서 선택되고, 또는 추가의 구체예에서, 추가적인 아미노산은 Asp 또는 Glu이다.
또 다른 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 807의 서열 또는 이의 글루카곤 작동약 유사체를 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 펩티드는 서열 번호: 808, 서열 번호: 810, 서열 번호: 811, 서열 번호: 812 및 서열 번호: 813로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 상기 펩티드는 서열 번호: 808, 서열 번호: 810 및 서열 번호: 811로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 808, 서열 번호: 810 및 서열 번호: 811의 서열을 포함하고 글루카곤 펩티드의 C-말단에 부가된 Asp와 Glu로 구성된 군에서 선택되는 추가적인 아미노산을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 811 또는 서열 번호: 813의 서열을 포함하고, 그리고 추가의 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 811의 서열을 포함한다.
일부 구체예에 따라서, 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 변형된 글루카곤 펩티드를 포함하는 글루카곤 작동약이 제시된다:
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-R (서열 번호: 834),
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser- Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu- Met-Asp-Thr-R (서열 번호: 811) 및
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Xaa-Tyr-Leu-Glu-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asp-Thr-R (서열 번호: 813)
여기서 위치 15에서 Xaa는 Asp, Glu, 시스테산, 호모글루타민산 또는 호모시스테산이고, 위치 28에서 Xaa는 Asn 또는 산성 아미노산이고, 위치 29에서 Xaa는 Thr 또는 산성 아미노산이고, 그리고 R은 산성 아미노산, COOH 또는 CONH2이고, 단서로써 산성 산 잔기가 위치 28, 29 또는 30 중에서 하나에 존재한다. 일부 구체예에서, R은 COOH이고, 그리고 다른 구체예에서, R은 CONH2이다.
본 발명은 또한, 글루카곤 융합 펩티드를 포함하고, 여기서 글루카곤 펩티드의 안정성과 용해성을 향상시키기 위해 글루카곤 펩티드의 C-말단에 두 번째 펩티드가 융합되었다. 더욱 구체적으로, 융합 글루카곤 펩티드는 글루카곤 펩티드 NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Xaa-Xaa-Xaa-R (서열 번호: 834)을 포함하는 글루카곤 작동약 유사체를 포함할 수 있고, 여기서 R은 산성 아미노산 또는 단일 결합이고, 그리고 서열 번호: 820 (GPSSGAPPPS), 서열 번호: 821 (KRNRNNIA) 또는 서열 번호: 822 (KRNR)의 아미노산 서열이 글루카곤 펩티드의 카르복시 말단 아미노산에 연결된다. 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 833, 서열 번호: 807 또는 서열 번호: 808로 구성된 군에서 선택되고 글루카곤 펩티드의 카르복시 말단 아미노산에 연결된 서열 번호: 820 (GPSSGAPPPS), 서열 번호: 821 (KRNRNNIA) 또는 서열 번호: 822 (KRNR)의 아미노산 서열을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 글루카곤 융합 펩티드는 서열 번호: 802, 서열 번호: 803, 서열 번호: 804, 서열 번호: 805 및 서열 번호: 806 또는 이들의 글루카곤 작동약 유사체를 포함하고, 글루카곤 펩티드의 아미노산 29에 연결된 서열 번호: 820 (GPSSGAPPPS), 서열 번호: 821 (KRNRNNIA) 또는 서열 번호: 822 (KRNR)의 아미노산 서열을 더욱 포함한다. 일부 구체예에 따라서, 융합 펩티드는 위치 16, 17, 21, 24, 29에서, C-말단 확장 내에서, 또는 C-말단 아미노산에서 아미노산에 연결된 PEG 사슬을 더욱 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 500 내지 40,000 달톤의 범위에서 선택된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 820 (GPSSGAPPPS), 서열 번호: 821 (KRNRNNIA) 또는 서열 번호: 822 (KRNR)의 아미노산 서열은 펩티드 결합을 통해 글루카곤 펩티드의 아미노산 29에 결합된다. 일부 구체예에서, 글루카곤 융합 펩티드의 글루카곤 펩티드 부분은 서열 번호: 810, 서열 번호: 811 및 서열 번호: 813으로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 글루카곤 융합 펩티드의 글루카곤 펩티드 부분은 서열 번호: 811 또는 서열 번호: 813의 서열을 포함하고, 여기서 PEG 사슬이 각각, 위치 21, 24, 29에서, C-말단 확장 내에서 또는 C-말단 아미노산에서 연결된다.
다른 구체예에서, 융합 펩티드의 글루카곤 펩티드 서열은 서열 번호: 811의 서열을 포함하고, 글루카곤 펩티드의 아미노산 29에 연결된 서열 번호: 820 (GPSSGAPPPS), 서열 번호: 821 (KRNRNNIA) 또는 서열 번호: 822 (KRNR)의 아미노산 서열을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 글루카곤 융합 펩티드는 서열 번호: 824, 서열 번호: 825 및 서열 번호: 826로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함한다. 전형적으로, 본 발명의 융합 펩티드는 표준 카르복실산 기를 갖는 C-말단 아미노산을 포함할 것이다. 하지만, C-말단 아미노산이 카르복실산에 대해 치환된 아미드를 갖는 이들 서열의 유사체 역시 구체예로서 포함된다. 일부 구체예에 따라서, 융합 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 810, 서열 번호: 811 및 서열 번호: 813로 구성된 군에서 선택되는 글루카곤 작동약 유사체를 포함하고, 글루카곤 펩티드의 아미노산 29에 연결된 서열 번호: 823 (GPSSGAPPPS-CONH2)의 아미노산 서열을 더욱 포함한다.
본 발명의 글루카곤 작동약은 글루카곤 펩티드의 생물학적 활성을 유지하면서 수성 용액에서 펩티드의 용해성과 안정성을 향상시키기 위해 더욱 변형될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 811의 펩티드, 또는 이의 글루카곤 작동약 유사체의 위치 16, 17, 20, 21, 24와 29에서 선택되는 하나 이상의 위치에서 친수성 기의 도입은 pH 안정화 글루카곤 유사체의 용해성과 안정성을 향상시킬 것으로 기대된다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 서열 번호: 810, 서열 번호: 811, 서열 번호: 813, 또는 서열 번호: 832의 글루카곤 펩티드는 글루카곤 펩티드의 위치 21와 24에 존재하는 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 하나 이상의 친수성 기를 포함하도록 변형된다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 811의 글루카곤 펩티드는 위치 16, 17, 20, 21, 24 및/또는 29에서 하나 이상의 아미노산 치환을 내포하도록 변형되는데, 여기서 고유 아미노산은 예로써, PEG를 비롯한 친수성 모이어티와의 가교 연결에 적합한 측쇄를 갖는 아미노산으로 치환된다. 고유 펩티드는 자연 발생 아미노산 또는 합성 (비-자연 발생) 아미노산으로 치환될 수 있다. 합성 또는 비-자연 발생 아미노산은 생체내에서 자연적으로 발생하지 않지만 그럼에도 불구하고, 본 명세서에서 기술된 펩티드 구조 내로 통합될 수 있는 아미노산을 지칭한다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 810, 서열 번호: 811 또는 서열 번호: 813의 글루카곤 작동약이 제시되고, 여기서 고유 글루카곤 펩티드 서열은 고유 서열의 위치 16, 17, 21, 24, 29 중에서 최소한 하나, C-말단 확장 내에 또는 C-말단 아미노산에서 자연 발생 또는 합성 아미노산을 내포하도록 변형되고, 여기서 아미노산 대체물은 친수성 모이어티를 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 치환은 위치 21 또는 24에서 일어나고, 그리고 추가의 구체예에서, 친수성 모이어티는 PEG 사슬이다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 811의 글루카곤 펩티드는 최소한 하나의 시스테인 잔기로 치환되고, 여기서 시스테인 잔기의 측쇄는 예로써, 말레이미도, 비닐 설폰, 2-피리딜티오, 할로알킬, 그리고 할로아실을 비롯한 티올 반응성 시약으로 더욱 변형된다. 이들 티올 반응성 시약은 카르복시, 케토, 히드록실, 그리고 에테르 기뿐만 아니라 다른 친수성 모이어티, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 단위를 내포할 수 있다. 대안적 구체예에서, 고유 글루카곤 펩티드는 리신으로 치환되고, 그리고 치환 리신 잔기의 측쇄는 아민 반응성 시약, 예를 들면, 친수성 모이어티, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜의 카르복실산 또는 알데히드의 활성 에스테르 (숙신이미도, 무수물 등)를 이용하여 더욱 변형된다. 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 814, 서열 번호: 815, 서열 번호: 816, 서열 번호: 817, 서열 번호: 818 및 서열 번호: 819로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예에 따라서, 페길화되는 글루카곤 펩티드는 글루카곤 펩티드에 공유 결합된 2개 이상의 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 포함하고, 여기서 글루카곤 사슬의 총 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다. 일부 구체예에서, 페길화되는 글루카곤 작동약은 서열 번호: 806의 펩티드를 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 위치 21과 위치 24에서 아미노산 잔기에 공유 연결되고, 그리고 여기서 2개의 PEG 사슬의 통합 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다. 또 다른 구체예에서, 페길화되는 글루카곤 작동약은 서열 번호: 806의 펩티드를 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 위치 21과 위치 24에서 아미노산 잔기에 공유 연결되고, 그리고 여기서 이들 두 PEG 사슬의 통합 분자량은 약 5,000 내지 약 20,000 달톤이다.
폴리에틸렌 글리콜 사슬은 직쇄의 형태이거나, 또는 가지형일 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 500 내지 약 40,000 달톤의 범위에서 선택되는 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 500 내지 약 5,000 달톤의 범위에서 선택되는 분자량을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 20,000 내지 약 40,000 달톤의 분자량을 갖는다.
앞서 기술된 임의의 글루카곤 펩티드는 글루카곤 펩티드의 C-말단 부분 (아미노산 위치 12-29) 내에서 공유 또는 비-공유 분자내 가교 또는 알파 나선-안정화 아미노산을 포함하도록 더욱 변형될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 글루카곤 펩티드는 위치 16, 20, 21, 또는 24 (또는 이들의 조합)에서 α,α-이중치환된 아미노산, 예를 들면, Aib로 아미노산 치환 이외에 앞서 언급된 변형 중에서 하나 이상을 포함한다. 또 다른 구체예에 따라서, 글루카곤 펩티드는 글루카곤 펩티드의 위치 16과 20에서 아미노산의 측쇄 사이에 분자내 가교, 예를 들면, 락탐에 더하여, 앞서 언급된 임의의 하나 이상의 변형을 포함한다.
일부 구체예에 따라서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 877의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 위치 3에서 Xaa는 구조 I, II, 또는 III의 측쇄를 포함하는 아미노산이다:

구조 I
Figure pct00020

구조 II
Figure pct00021

구조 III
여기서 R1은 C0-3 알킬 또는 C0-3 헤테로알킬이고; R2는 NHR4 또는 C1-3 알킬이고; R3은 C1-3 알킬이고; R4는 H 또는 C1-3 알킬이고; X는 NH, O, 또는 S이고; 그리고 Y는 NHR4, SR3, 또는 OR3이다. 일부 구체예에서, X는 NH이고, 또는 Y는 NHR4이다. 일부 구체예에서, R1은 C0-2 알킬 또는 C1 헤테로알킬이다. 일부 구체예에서, R2는 NHR4 또는 C1 알킬이다. 일부 구체예에서, R4는 H 또는 C1 알킬이다. 예시적인 구체예에서, 구조 I의 측쇄를 포함하는 아미노산이 제시되고, 여기서 R1은 CH2-S이고, X는 NH이고, 그리고 R2는 CH3 (아세트아미도메틸-시스테인, C(Acm))이고; R1은 CH2이고, X는 NH이고, 그리고 R2는 CH3 (아세틸디아미노부탄산, Dab(Ac))이고; R1은 C0 알킬이고, X는 NH이고, R2는 NHR4이고, 그리고 R4는 H (카르바모일디아미노프로판산, Dap(요소))이고; 또는 R1은 CH2-CH2이고, X는 NH이고, 그리고 R2는 CH3 (아세틸오르니틴, Orn(Ac))이다. 예시적인 구체예에서, 구조 II의 측쇄를 포함하는 아미노산이 제시되고, 여기서 R1은 CH2이고, Y는 NHR4이고, 그리고 R4는 CH3 (메틸글루타민, Q(Me))이다; 예시적인 구체예에서, 구조 III의 측쇄를 포함하는 아미노산이 제시되고, 여기서 R1은 CH2이고 R4는 H (메티오닌-설폭시드, M(O))이다; 특정 구체예에서, 위치 3에서 아미노산은 Dab(Ac)로 치환된다. 가령, 글루카곤 작동약은 서열 번호: 863, 서열 번호: 869, 서열 번호: 871, 서열 번호: 872, 서열 번호: 873, 그리고 서열 번호: 874의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일정한 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 877의 글루카곤 펩티드의 유사체이다. 특정한 양상에서, 유사체는 위치 28에서 Asn의 하전된 아미노산으로의 치환; 위치 28에서 Asn의 Lys, Arg, His, Asp, Glu, 시스테산, 그리고 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 하전된 아미노산으로의 치환; 위치 28에서 Asn, Asp, 또는 Glu로 치환; 위치 28에서 Asp로 치환; 위치 28에서 Glu로 치환; 위치 29에서 Thr의 하전된 아미노산으로의 치환; 위치 29에서 Thr의 Lys, Arg, His, Asp, Glu, 시스테산, 그리고 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 하전된 아미노산으로의 치환; 위치 29에서 Asp, Glu, 또는 Lys로 치환; 위치 29에서 Glu로 치환; 위치 29 뒤에 1-3개의 하전된 아미노산의 삽입; 위치 29 뒤에 Glu 또는 Lys의 삽입; 위치 29 뒤에 Gly-Lys 또는 Lys-Lys의 삽입; 그리고 이들의 조합이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 본 명세서에서 기술된 임의의 아미노산 변형을 포함한다.
일정한 구체예에서, 서열 번호: 877의 글루카곤 펩티드의 유사체는 위치 16, 20, 21, 그리고 24 중에서 1개, 2개, 3개, 또는 모두에서 α,α-이중치환된 아미노산, 예를 들면, Aib를 포함한다.
일정한 구체예에서, 서열 번호: 877의 글루카곤 펩티드의 유사체는 하기 중에서 하나 이상을 포함한다: 위치 1에서 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-IV)에 의한 절단에 대한 글루카곤 펩티드의 감수성을 감소시키는 비-고유 아미노산으로 His의 치환, 위치 2에서 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-IV)에 의한 절단에 대한 글루카곤 펩티드의 감수성을 감소시키는 비-고유 아미노산으로 Ser의 치환, 위치 7에서 히드록실 기가 없는 아미노산, 예를 들면, Abu 또는 Ile로 Thr의 치환; 위치 10에서 Tyr의 Phe 또는 Val로의 치환; 위치 12에서 Lys의 Arg로의 치환; 위치 15에서 Asp의 Glu로의 치환, 위치 16에서 Ser의 Thr 또는 Aib로의 치환; 위치 20에서 Gln의 Ala 또는 Aib로의 치환; 위치 21에서 Asp의 Glu로의 치환; 위치 24에서 Gln의 Ala 또는 Aib로의 치환; 위치 27에서 Met의 Leu 또는 Nle로의 치환; 위치 27-29에서 아미노산의 결실; 위치 28-29에서 아미노산의 결실; 위치 29에서 아미노산의 결실; C-말단에 서열 번호: 820의 아미노산 서열의 부가, 여기서 위치 29에서 아미노산은 Thr 또는 Gly, 또는 이들의 조합.
특정한 구체예에 따라서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 862-867과 869-874 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함한다.
일정한 구체예에서, 서열 번호: 877을 포함하는 글루카곤 펩티드의 유사체는 위치 16, 17, 20, 21, 24, 그리고 29 중에서 하나에서 또는 C-말단 아미노산에서 아미노산에 공유 연결된 친수성 모이어티, 예를 들면, PEG를 포함한다.
일정한 구체예에서, 서열 번호: 877을 포함하는 글루카곤 펩티드의 유사체는 임의적으로, 아실 기 또는 알킬 기 (여기서 아실 기 또는 알킬 기는 자연 발생 아미노산에 비-고유이다)에 스페이서를 통해 공유 부착된 측쇄를 포함하는 아미노산을 포함한다. 일부 구체예에서, 아실 기는 C4 내지 C30 지방 아실 기이다. 다른 구체예에서, 알킬 기는 C4 내지 C30 알킬이다. 특정한 양상에서, 아실 기 또는 알킬 기는 위치 10에서 아미노산의 측쇄에 공유 부착된다. 일부 구체예에서, 위치 7에서 아미노산은 Ile 또는 Abu이다.
글루카곤 작동약은 임의적으로, 글루카곤 작동약 활성을 유지하는 1, 2, 3, 4, 또는 5개까지의 추가 변형을 갖는 서열 번호: 801-919 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드일 수 있다. 일정한 구체예에서, 글루카곤 작동약은 서열 번호: 859-919 중에서 한 가지의 아미노산을 포함한다.
부류 2 글루카곤 관련된 펩티드
일정한 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드이고, 이것은 본 명세서에서 및 국제 특허 공개공보 번호 제WO 2010/011439호, 그리고 미국 출원 번호 제61/187,578호 (2009년 6월 16일자 제출됨)에서 기술되고, 이들의 내용은 전체로서 참고문헌으로 편입된다.
부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관한 하기 섹션에서 언급된 생물학적 서열 (서열 번호: 1001-1262)은 국제 특허 공개공보 번호 제WO 2010/011439호에서 서열 번호: 1-262에 상응한다. 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관한 서열 번호: 1263 내지 1275는 미국 출원 번호 제61/187,578호에서 서열 번호: 657 내지 669에 상응한다.
활성
고유 글루카곤은 GIP 수용체를 활성화시키지 못하고, 그리고 정상적으로, GLP-1 수용체에서 고유-GLP-1의 활성의 약 1%를 갖는다. 본 명세서에서 기술된 고유 글루카곤 서열에 변형은 고유 글루카곤 (서열 번호: 1001)의 활성에 동등하거나 이보다 우수한 강력한 글루카곤 활성, 고유 GIP (서열 번호: 1004)의 활성에 동등하거나 이보다 우수한 강력한 GIP 활성, 및/또는 고유 GLP-1의 활성에 동등하거나 이보다 우수한 강력한 GLP-1 활성을 나타낼 수 있는 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드를 생산한다. 이와 관련하여, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 본 명세서에서 더욱 기술된 바와 같이, 글루카곤/GIP 공동-작동약, 글루카곤/GIP/GLP-1 트리-작동약, GIP/GLP-1 공동-작동약, 또는 GIP 작동약 글루카곤 펩티드 중에서 한 가지일 수 있다.
일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 약 100 nM 이하, 또는 약 75, 50, 25, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1 nM 이하의 GIP 수용체 활성화 활성에 대한 EC50을 나타낸다. 일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 약 100 nM 이하, 또는 약 75, 50, 25, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1 nM 이하의 글루카곤 수용체 활성화에 대한 EC50을 나타낸다. 일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 약 100 nM 이하, 또는 약 75, 50, 25, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1 nM 이하의 GLP-1 수용체 활성화에 대한 EC50을 나타낸다. 수용체 활성화는 수용체를 과다-발현하는 HEK293 세포에서 cAMP 유도를 측정하는, 예를 들면, 실시예 2에서 기술된 바와 같이, 상기 수용체를 인코딩하는 DNA 및 cAMP 반응 요소에 연결된 루시페라아제 유전자로 공동-형질감염된 HEK293 세포를 시험하는 시험관내 분석평가에 의해 측정될 수 있다.
일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 고유 GIP (GIP 효능)에 비하여 GIP 수용체에서 최소한 약 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 100%, 125%, 150%, 175% 또는 200% 이상 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 글루카곤 펩티드는 고유 GIP에 비하여 GIP 수용체에서 단지 1000%, 10,000%, 100,000%, 또는 1,000,000% 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 고유 글루카곤 (글루카곤 효능)에 비하여 글루카곤 수용체에서 최소한 약 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 350%, 400%, 450%, 또는 500% 이상 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 글루카곤 펩티드는 고유 글루카곤에 비하여 글루카곤 수용체에서 단지 1000%, 10,000%, 100,000%, 또는 1,000,000% 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 고유 GLP-1 (GLP-1 효능)에 비하여 GLP-1 수용체에서 최소한 약 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 100%, 125%, 150%, 175% 또는 200% 이상 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 글루카곤 펩티드는 고유 GLP-1에 비하여 GLP-1 수용체에서 단지 1000%, 10,000%, 100,000%, 또는 1,000,000% 활성을 나타낸다. 수용체의 고유 리간드에 비하여 수용체에서 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 활성은 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드 대(對) 고유 리간드에 대한 EC50의 역비로서 계산된다.
일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체 및 GIP 수용체 둘 모두에서 활성을 나타낸다 ("글루카곤/GIP 공동-작동약"). 이들 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 GIP 수용체와 비교하여 글루카곤 수용체에 대한 고유 글루카곤의 선택성을 상실한다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50은 글루카곤 수용체에서 EC50보다 약 50-배, 40-배, 30-배 또는 20-배 미만의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은)이다. 일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 GIP 효능은 글루카곤 효능으로부터 약 500-, 450-, 400-, 350-, 300-, 250-, 200-, 150-, 100-, 75-, 50-, 25-, 20-, 15-, 10-, 또는 5-배 미만의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은)이다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50의 비율은 약 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5 미만이다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 EC50에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 EC50의 비율은 약 1 또는 약 1 미만 (가령, 약 0.01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0.067, 0.1, 0.2)이다. 일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 글루카곤 효능과 비교하여 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 GIP 효능의 비율은 약 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5 미만이다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 효능에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 효능의 비율은 약 1 또는 약 1 미만 (가령, 약 0.01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0.067, 0.1, 0.2)이다. 일부 구체예에서, GLP-1 활성은 예로써, 위치 7에서 아미노산 변형, 27- 또는 28-아미노산 펩티드를 산출하는 위치 27 또는 28에서 아미노산의 C-말단에 아미노산(들)의 결실, 또는 이들의 조합에 의해 유의미하게 감소되거나 파괴된다.
다른 양상에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤, GIP와 GLP-1 수용체에서 활성을 나타낸다 ("글루카곤/GIP/GLP-1 트리-작동약"). 이들 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1과 GIP 수용체와 비교하여 글루카곤 수용체에 대한 고유 글루카곤의 선택성을 상실한다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50은 글루카곤과 GLP-1 수용체에서 개별 EC50으로부터 약 50-배, 40-배, 30-배 또는 20-배 미만의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은)이다. 일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 GIP 효능은 글루카곤과 GLP-1 효능으로부터 약 500-, 450-, 400-, 350-, 300-, 250-, 200-, 150-, 100-, 75-, 50-, 25-, 20-, 15-, 10-, 또는 5-배 미만의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은)이다. 일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 트리-작동약의 EC50에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 트리-작동약의 EC50의 비율은 약 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5 미만이다. 일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 EC50에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 EC50의 비율은 약 1 또는 약 1 미만 (가령, 약 0.01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0.067, 0.1, 0.2)이다. 일부 구체예에서, 트리-작동약의 GLP-1 효능과 비교하여 트리-작동약의 GIP 효능의 비율은 약 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5 미만이다. 일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 효능에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 효능의 비율은 약 1 또는 약 1 미만 (가령, 약 0.01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0.067, 0.1, 0.2)이다. 관련된 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 트리-작동약의 EC50에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 트리-작동약의 EC50의 비율은 약 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5 미만이다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 EC50에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 EC50의 비율은 약 1 또는 약 1 미만 (가령, 약 0.01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0.067, 0.1, 0.2)이다. 일부 구체예에서, 트리-작동약의 글루카곤 효능과 비교하여 트리-작동약의 GIP 효능의 비율은 약 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5 미만이다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 효능에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 효능의 비율은 약 1 또는 약 1 미만 (가령, 약 0.01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0.067, 0.1, 0.2)이다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 트리-작동약의 EC50에 의해 나눗셈된 GLP-1 수용체에서 트리-작동약의 EC50의 비율은 약 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5 미만이다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 EC50에 의해 나눗셈된 GLP-1 수용체에서 EC50의 비율은 약 1 또는 약 1 미만 (가령, 약 0.01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0.067, 0.1, 0.2)이다. 일부 구체예에서, 트리-작동약의 글루카곤 효능과 비교하여 트리-작동약의 GLP-1 효능의 비율은 약 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5 미만이다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 효능에 의해 나눗셈된 GLP-1 수용체에서 효능의 비율은 약 1 또는 약 1 미만 (가령, 약 0.01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0.067, 0.1, 0.2)이다.
또 다른 양상에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1과 GIP 수용체에서 활성을 나타내지만, 글루카곤 활성이 예로써, 위치 3에서 아미노산 변형에 의해 유의미하게 감소되거나 파괴된다 ("GIP/GLP-1 공동-작동약"). 가령, 상기 위치에서 산성, 염기성, 또는 소수성 아미노산 (글루타민산, 오르니틴, 노르류신)으로 치환은 글루카곤 활성을 감소시킨다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 글루카곤 펩티드의 EC50은 GLP-1 수용체에서 EC50으로부터 약 50-배, 40-배, 30-배 또는 20-배 미만의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은)이다. 일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 GIP 효능은 GLP-1 효능으로부터 약 25-, 20-, 15-, 10-, 또는 5-배 미만의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은)이다. 일부 구체예에서, 이들 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 10% 이하, 예를 들면, 약 1-10%, 또는 약 0.1-10%, 또는 약 0.1% 미만, 하지만 약 10% 미만을 갖는다. 일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50의 비율은 약 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5 미만이고, 그리고 1 만큼이다. 일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 GLP-1 효능과 비교하여 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 GIP 효능의 비율은 약 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5 미만이고, 그리고 1 만큼이다.
추가의 양상에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 GIP 수용체에서 활성을 나타내고, 여기서 글루카곤과 GLP-1 활성은 예로써, 위치 3에서 Glu와 위치 7에서 Ile로 아미노산 변형에 의해 유의미하게 감소되거나 파괴된다 ("GIP 작동약 글루카곤 펩티드"). 일부 구체예에서, 이들 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 10% 이하, 예를 들면, 약 1-10%, 또는 약 0.1-10%, 또는 약 0.1%, 0.5%, 또는 1% 초과, 하지만 약 1%, 5%, 또는 10% 미만을 갖는다. 일부 구체예에서, 이들 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 또한, GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 약 10% 이하, 예를 들면, 약 1-10%, 또는 약 0.1-10%, 또는 약 0.1%, 0.5%, 또는 1% 초과, 하지만 약 1%, 5%, 또는 10% 미만을 갖는다.
일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드가 페길화되지 않을 때, GIP 수용체 활성화에 대한 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50은 약 4, 2, 1 nM 이하이거나, 또는 유사체는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성의 최소한 약 1%, 2%, 3%, 4% 또는 5%를 갖는다. 관련된 구체예에서, GLP-1 수용체 활성화에 대한 페길화되지 않은 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50은 약 4, 2, 1 nM 이하이거나, 또는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 약 1%, 2%, 3%, 4% 또는 5%를 갖는다. 또 다른 관련된 구체예에서, 글루카곤 수용체 활성화에 대한 페길화되지 않은 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50은 약 4, 2, 1 nM 이하, 또는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 최소한 약 5%, 10%, 15% 또는 20%이다. 일부 구체예에서, 페길화되지 않은 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 1% 미만을 갖는다. 다른 구체예에서, 페길화되지 않은 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 약 10%, 5% 또는 1% 미만을 갖는다.
부류 2 글루카곤 관련된 펩티드가 친수성 모이어티, 예를 들면, PEG에 연결되는 구체예에서, 하나 이상의 수용체에서 상대적 EC50은 더욱 높을 수 있다, 예를 들면, 약 10-배 높을 수 있다. 가령, GIP 수용체 활성화에 대한 페길화되는 유사체의 EC50은 약 10 nM 이하이고, 또는 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성의 최소한 약 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4% 또는 0.5%를 갖는다. 관련된 구체예에서, GLP-1 수용체 활성화에 대한 페길화되는 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50은 약 10 nM 이하이거나, 또는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 약 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4% 또는 0.5%를 갖는다. 또 다른 관련된 구체예에서, 글루카곤 수용체 활성화에 대한 페길화되는 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 EC50은 약 10 nM 이하, 또는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 최소한 약 0.5%, 1%, 1.5% 또는 2%이다. 일부 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 1% 미만을 갖는다. 다른 구체예에서, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 약 10%, 5% 또는 1% 미만을 갖는다.
변형
부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관한 본 명세서에서 개시된 변형은 증가된 GIP 활성, 글루카곤 활성, 및/또는 GLP-1 활성을 나타내는 글루카곤 펩티드를 산출하기 위한 글루카곤 (서열 번호: 1001)의 조작을 가능하게 한다. 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 본 명세서에서 개시된 다른 변형은 결과의 펩티드의 반감기를 연장하거나, 용해성을 증가시키거나, 또는 안정성을 증가시킨다. 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 본 명세서에서 개시된 또 다른 변형은 활성에 대한 영향이 없거나, 또는 원하는 활성 또는 활성들을 파괴하지 않으면서 만들어질 수 있다. 동일한 목적 (가령, GIP 활성 증가)을 수행하는 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관한 임의의 조합이 개별적으로 또는 공동으로 적용될 수 있다. 증강된 성질을 공여하는 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관한 임의의 단일 또는 세트의 조합이 개별적으로 또는 공동으로 적용될 수 있다, 예를 들면, 증가된 GIP 및/또는 GLP-1 활성이 증가된 반감기와 합동될 수 있다. 관련된 구체예에서, 아미노산 변형 중에서 1, 2, 3, 4, 5, 6개 이상은 비-보존성 치환, 부가 또는 결실일 수 있다. 일부 구체예에서, 아미노산 변형 중에서 1, 2, 3, 4, 5, 6개 이상은 보존성 치환일 수 있다.
GIP 활성에 영향을 주는 변형
GIP 수용체에서 증강된 활성은 위치 1에서 아미노산 변형에 의해 제공된다. 가령, 위치 1에서 His는 큰 방향족 아미노산, 임의적으로 Tyr, Phe, Trp, 아미노-Phe, 니트로-Phe, 클로로-Phe, 설포-Phe, 4-피리딜-Ala, 메틸-Tyr, 또는 3-아미노 Tyr로 치환된다. 아미노산 12-29에 상응하는 영역 내에서 알파 나선의 안정화와 위치 1에서 Tyr의 조합은 GIP 수용체뿐만 아니라 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체를 활성화시키는 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드를 제공하였다. 알파 나선 구조는 예로써, 공유 또는 비-공유 분자내 가교의 형성, 또는 위치 12-29 주변에서 알파 나선-안정화 아미노산 (가령, α,α-이중치환된 아미노산)으로 아미노산의 치환 및/또는 삽입에 의해 안정화될 수 있다.
GIP 수용체에서 증강된 활성은 또한, 위치 27 및/또는 28에서, 그리고 임의적으로 위치 29에서 아미노산 변형에 의해 제공된다. 가령, 위치 27에서 Met는 큰 지방족 아미노산, 임의적으로 Leu로 치환되고, 위치 28에서 Asn은 작은 지방족 아미노산, 임의적으로 Ala로 치환되고, 그리고 위치 29에서 Thr은 작은 지방족 아미노산, 임의적으로 Gly로 치환된다. 위치 27-29에서 LAG로 치환은 이들 위치에서 고유 MNT 서열에 비하여 증가된 GIP 활성을 제공한다.
GIP 수용체에서 증강된 활성은 또한, 위치 12에서 아미노산 변형에 의해 제공된다. 가령, 위치 12는 큰, 지방족, 비극성 아미노산, 임의적으로 Ile로 치환된다.
GIP 수용체에서 증강된 활성은 또한, 위치 17 및/또는 18에서 아미노산 변형에 의해 제공된다. 가령, 위치 17은 극성 잔기, 임의적으로 Gln으로 치환되고, 그리고 위치 18은 작은 지방족 아미노산, 임의적으로 Ala로 치환된다. 위치 17과 18에서 QA로 치환은 이들 위치에서 고유 RR 서열에 비하여 증가된 GIP 활성을 제공한다.
GIP 수용체에서 증가된 활성은 위치 12 내지 29에서 아미노산 측쇄 사이에 분자내 가교의 형성을 가능하게 하는 변형에 의해 제공된다. 가령, 분자내 가교는 위치 i와 i+4에서 또는 위치 j와 j+3 사이에, 또는 위치 k와 k+7 사이에 2개의 아미노산의 측쇄 사이에 공유 결합에 의해 형성될 수 있다. 예시적인 구체예에서, 가교는 위치 12와 16, 16과 20, 20과 24, 24와 28, 또는 17과 20 사이에 존재한다. 다른 구체예에서, 비-공유 상호작용, 예를 들면, 염 가교가 이들 위치에서 양으로 하전된 아미노산과 음으로 하전된 아미노산 사이에 형성될 수 있다.
GIP 수용체 활성을 증가시키는 앞서 기술된 임의의 변형은 개별적으로 또는 공동으로 적용될 수 있다. GIP 수용체 활성을 증가시키는 변형의 조합은 일반적으로, 단독으로 취해진 임의의 이런 변형보다 더욱 높은 GIP 활성을 제공한다.
글루카곤 활성에 영향을 주는 변형
일부 구체예에서, 증강된 글루카곤 효능은 고유 글루카곤 (서열 번호: 1001)의 위치 16에서 아미노산 변형에 의해 제공된다. 무제한적 실례로써, 이런 증강된 효능은 위치 16에서 자연 발생 세린을 글루타민산 또는 4개 원자 길이의 측쇄를 갖는 다른 음으로 하전된 아미노산으로, 또는 대안으로 글루타민, 호모글루타민산, 또는 호모시스테산, 또는 최소한 하나의 헤테로원자 (가령, N, O, S, P)를 내포하는 약 4 (또는 3-5)개 원자 측쇄 길이의 측쇄를 갖는 하전된 아미노산 중에서 한 가지로 치환함으로써 제공될 수 있다. 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 GLP-1 수용체에 비하여 글루카곤 수용체에 대한 본래 선택성을 유지한다.
글루카곤 수용체 활성은 위치 3에서 아미노산 변형, 예를 들면, 위치 3에서 자연 발생 글루타민의 산성, 염기성, 또는 소수성 아미노산으로의 치환에 의해 감소될 수 있다. 가령, 위치 3에서 글루타민산, 오르니틴, 또는 노르류신으로 치환은 글루카곤 수용체 활성을 실질적으로 감소시키거나 파괴한다.
글루카곤 수용체에서 지속된 또는 증강된 활성은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 위치 3에서 Gln을 글루타민 유사체로 변형함으로써 달성될 수 있다. 가령, 글루카곤 작동약은 서열 번호: 1243-1248, 1250, 1251, 그리고 1253-1256 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
위치 1과 2에서 아미노산 변형에 의해 감소된 글루카곤 활성의 복원은 글루카곤 펩티드 또는 이의 유사체의 C-말단 부분 (아미노산 12-29)의 알파 나선 구조를 안정시키는 변형에 의해 제공된다. 가령, 분자내 가교는 위치 i와 i+4에서 또는 위치 j와 j+3 사이에, 또는 위치 k와 k+7 사이에 2개의 아미노산의 측쇄 사이에 공유 결합에 의해 형성될 수 있다. 다른 구체예에서, 이들 위치에서 양으로 하전된 아미노산과 음으로 하전된 아미노산 사이에 비-공유 상호작용, 예를 들면, 염 가교가 형성될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 하나 이상의 α,α-이중치환된 아미노산이 원하는 활성을 유지하는 위치에서 C-말단 부분 (아미노산 12-29) 내로 삽입되거나 치환된다. 가령, 위치 16, 20, 21 또는 24 중에서 1개, 2개, 3개 또는 모두 α,α-이중치환된 아미노산, 예를 들면, Aib로 치환된다.
GLP-1 활성에 영향을 주는 변형
C-말단 아미노산의 카르복실산을 전하-중성 기 (charge-neutral group), 예를 들면, 아미드 또는 에스테르로 대체함으로써 GLP-1 수용체에서 증강된 활성이 제공된다.
GLP-1 수용체에서 증강된 활성은 또한, 예로써 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 2개의 아미노산의 측쇄 사이에 분자내 가교의 형성, 또는 위치 12-29 주변에서 아미노산의 알파 나선-안정화 아미노산 (가령, α,α-이중치환된 아미노산)으로의 치환 및/또는 삽입을 통해 글루카곤의 C-말단 부분 (아미노산 12-29 주변)에서 알파-나선 구조를 안정시킴으로써 제공된다. 예시적인 구체예에서, 아미노산 쌍 12와 16, 13과 17, 16과 20, 17과 21, 20과 24 또는 24와 28 (i = 12, 16, 20, 또는 24인 아미노산 쌍)의 측쇄는 서로 연결되고, 따라서 글루카곤 알파 나선을 안정시킨다. 일부 구체예에서, 가교 또는 링커는 특히, 가교가 위치 i와 i+4 사이에 있을 때, 약 8 (또는 약 7-9)개 원자 길이를 갖는다. 일부 구체예에서, 가교 또는 링커는 특히, 가교가 위치 j와 j+3 사이에 있을 때, 약 6 (또는 약 5-7)개 원자 길이를 갖는다.
일부 구체예에서, 분자내 가교는 (a) 위치 16에서 자연 발생 세린을 글루타민산 또는 4개 원자 길이의 측쇄를 갖는 다른 음으로 하전된 아미노산으로, 또는 대안으로 글루타민, 호모글루타민산, 또는 호모시스테산, 또는 최소한 하나의 헤테로원자 (가령, N, O, S, P)를 내포하는 약 4 (또는 3-5)개 원자 측쇄 길이의 측쇄를 갖는 하전된 아미노산 중에서 한 가지로 치환하고, 그리고 (b) 위치 20에서 자연 발생 글루타민을 하전되거나 수소-결합하는 능력을 갖는 최소한 약 5 (또는 약 4-6)개 원자 길이의 측쇄를 갖는 다른 친수성 아미노산, 예를 들면, 리신, 시트룰린, 아르기닌, 또는 오르니틴으로 치환함으로써 형성된다. 위치 16과 20에서 이런 아미노산의 측쇄는 염 가교를 형성하거나, 또는 공유 연결될 수 있다. 일부 구체예에서, 이들 2개의 아미노산은 서로 결합하여 락탐 고리를 형성한다.
일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드의 C-말단 부분에서 알파 나선 구조의 안정화는 락탐 가교 이외의 분자내 가교의 형성을 통해 달성된다. 가령, 적절한 공유 결합 방법에는 올레핀 복분해, 란티오닌-기초된 고리화, 이황화 가교 또는 변형된 황-내포 가교 형성, α,ω-디아미노알칸 테더의 이용, 금속-원자 가교의 형성, 그리고 알파 나선을 안정시키는데 이용되는 다른 펩티드 고리화 수단 중에서 한 가지 이상이 포함된다.
또 다른 구체예에서, 하나 이상의 α,α-이중치환된 아미노산은 원하는 활성을 유지하는 위치에서 C-말단 부분 (아미노산 12-29) 내로 삽입되거나 치환된다. 가령, 위치 16, 20, 21 또는 24 중에서 1개, 2개, 3개 또는 모두 α,α-이중치환된 아미노산, 예를 들면, Aib로 치환된다.
GLP-1 수용체에서 증가된 활성은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 위치 20에서 아미노산 변형에 의해 제공된다.
GLP-1 수용체에서 증가된 활성은 C-말단에 GPSSGAPPPS (서열 번호: 1095) 또는 XGPSSGAPPPS (서열 번호: 1096)를 부가함으로써 제공된다. 이런 유사체에서 GLP-1 활성은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 위치 18, 28 또는 29에서, 또는 위치 18과 29에서 아미노산을 변형함으로써 더욱 증가될 수 있다.
GLP-1 효능에서 더욱 온건한 증가는 위치 10에서 아미노산을 큰 방향족 아미노산 잔기, 임의적으로 Trp가 되도록 변형함으로써 제공된다.
GLP-1 수용체에서 감소된 활성은 예로써, 본 명세서에서 기술된 같이 위치 7에서 아미노산 변형에 의해 제공된다.
GLP-1 수용체에서 효능은 위치 18에서 고유 아르기닌에 대한 알라닌 치환에 의해 더욱 증강될 수 있다.
GLP-1 수용체 활성을 증가시키는 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 앞서 기술된 임의의 변형이 개별적으로 또는 공동으로 적용될 수 있다. GLP-1 수용체 활성을 증가시키는 변형의 조합은 일반적으로, 단독으로 취해진 임의의 이런 변형보다 더욱 높은 GLP-1 활성을 제공한다. 가령, 본 발명에서는 임의적으로 위치 16과 20에서 아미노산 사이에 공유 결합과 함께, 위치 16, 위치 20, 그리고 C-말단 카르복실산 기에서 변형을 포함하는 글루카곤 펩티드; 위치 16에서 및 C-말단 카르복실산 기에서 변형을 포함하는 글루카곤 펩티드; 임의적으로 위치 16과 20에서 아미노산 사이에 공유 결합과 함께, 위치 16과 20에서 변형을 포함하는 글루카곤 펩티드; 그리고 위치 20에서 및 C-말단 카르복실산 기에서 변형을 포함하는 글루카곤 펩티드를 제시한다.
DPP-IV 내성을 향상시키는 변형
위치 1 및/또는 2에서 변형은 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP IV) 절단에 대한 펩티드의 내성을 증가시킬 수 있다. 가령, 위치 1 및/또는 위치 2는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 DPP-IV 내성 아미노산으로 치환될 수 있다. 일부 구체예에서, 위치 2에서 아미노산은 N-메틸 알라닌으로 치환된다.
위치 2에서 변형(가령, 위치 2에서 Aib) 및 일부 경우에, 위치 1에서 변형 (가령, 위치 1에서 DMIA)은 때때로 유의미하게 글루카곤 활성을 감소시킬 수 있는 것으로 관찰되었다; 놀랍게도, 글루카곤 활성에서 이러한 감소는 예로써, 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 2개의 아미노산의 측쇄 사이에 공유 결합의 형성을 통해 글루카곤의 C-말단 부분 (아미노산 12-29 주변)에서 알파-나선 구조를 안정시킴으로써 복원될 수 있다. 일부 구체예에서, 공유 결합은 위치 "i"와 "i+4", 또는 위치 "j"와 "j+3"에서 아미노산 사이에, 예를 들면, 위치 12와 16, 16과 20, 20과 24, 24와 28, 또는 17과 20 사이에 존재한다. 예시적인 구체예에서, 이러한 공유 결합은 위치 16에서 글루타민산 및 위치 20에서 리신 사이에 락탐 가교이다. 일부 구체예에서, 이러한 공유 결합은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 락탐 가교 이외의 분자내 가교이다.
분해를 감소시키는 변형
또 다른 예시적인 구체예에서, 임의의 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 시간의 흐름에서, 특히 산성 또는 알칼리성 완충액에서 펩티드의 분해가 감소하도록 서열 번호: 1001의 위치 15 및/또는 16에서 아미노산을 변형함으로써 안정성을 향상시키기 위해 더욱 변형될 수 있다. 이런 변형은 Asp15-Ser16 펩티드 결합의 절단을 감소시킨다. 예시적인 구체예에서, 위치 15에서 아미노산 변형은 Asp의 글루타민산, 호모글루타민산, 시스테산 또는 호모시스테산으로의 결실 또는 치환이다. 다른 예시적인 구체예에서, 위치 16에서 아미노산 변형은 Ser의 결실 또는 Ser의 Thr 또는 Aib로의 치환이다. 다른 예시적인 구체예에서, 위치 16에서 Ser은 글루타민산 또는 4개 원자 길이의 측쇄를 갖는 다른 음으로 하전된 아미노산으로, 또는 대안으로 글루타민, 호모글루타민산, 또는 호모시스테산 중에서 한 가지로 치환된다.
일부 구체예에서, 고유 펩티드의 위치 27에 존재하는 메티오닌 잔기는 예로써, 결실 또는 치환에 의해 변형된다. 이런 변형은 펩티드의 산화성 분해를 예방할 수 있다. 일부 구체예에서, 위치 27에서 Met는 류신, 이소류신 또는 노르류신으로 치환된다. 일부 특정한 구체예에서, 위치 27에서 Met는 류신 또는 노르류신으로 치환된다.
일부 구체예에서, 위치 20 및/또는 24에서 Gln은 예로써, 결실 또는 치환에 의해 변형된다. 이런 변형은 Gln의 탈아미드화를 통해 일어나는 분해를 감소시킬 수 있다. 일부 구체예에서, 위치 20 및/또는 24에서 Gln은 Ser, Thr, Ala 또는 Aib로 치환된다. 일부 구체예에서, 위치 20 및/또는 24에서 Gln은 Lys, Arg, Orn, 또는 시트룰린으로 치환된다.
일부 구체예에서, 위치 21에서 Asp는 예로써, 결실 또는 치환에 의해 변형된다. 이런 변형은 환상 숙신이미드 중간물질을 형성하는 Asp의 탈수, 그 이후에 이소-아스파르테이트로의 이성질화를 통해 일어나는 분해를 감소시킬 수 있다. 일부 구체예에서, 위치 21은 Glu, 호모글루타민산 또는 호모시스테산으로 치환된다. 일부 특정한 구체예에서, 위치 21은 Glu로 치환된다.
알파 나선 구조의 안정화
부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 C-말단 부분 (아미노산 12-29 주변)에서 알파-나선 구조의 안정화는 증강된 GLP-1 및/또는 GIP 활성을 제공하고, 그리고 위치 1 및/또는 2에서 아미노산 변형에 의해 감소된 글루카곤 활성을 복원한다. 알파 나선 구조는 예로써, 공유 또는 비-공유 분자내 가교의 형성, 또는 위치 12-29 주변에서 아미노산의 알파 나선-안정화 아미노산 (가령, α,α-이중치환된 아미노산)으로의 치환 및/또는 삽입에 의해 안정화될 수 있다. GIP 작동약의 알파-나선 구조의 안정화는 본 명세서에서 기술된 바와 같이 달성될 수 있다.
아실화와 알킬화
일부 구체예에 따라서, 본 명세서에서 개시된 글루카곤 펩티드는 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 아실 기 또는 알킬 기, 예를 들면, 자연 발생 아미노산에 비-고유인 아실 또는 알킬 기를 포함하도록 변형된다. 아실화 또는 알킬화는 순환 동안 글루카곤 펩티드의 반감기를 증가시킬 수 있다. 아실화 또는 알킬화는 유리하게는, 작용의 개시를 지연시키고 및/또는 글루카곤 및/또는 GLP-1 수용체에서 작용의 지속 기간을 연장시키고 및/또는 프로테아제, 예를 들면, DPP-IV에 대한 내성을 향상시키고 및/또는 용해성을 향상시킬 수 있다. 글루카곤 펩티드의 글루카곤 및/또는 GLP-1 및/또는 GIP 수용체에서 활성은 아실화 이후에 지속될 수 있다. 일부 구체예에서, 아실화된 글루카곤 펩티드의 효능은 글루카곤 펩티드의 비아실화된 이형에 필적한다. 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 동일한 아미노산 위치에서 아실화되거나 알킬화될 수 있는데, 여기서 친수성 모이어티는 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 연결되거나, 또는 상이한 아미노산 위치에 있다.
일부 구체예에서, 본 발명에서는 글루카곤 펩티드의 위치 10에서 아미노산에 공유 연결된 아실 기 또는 알킬 기를 포함하도록 변형된 글루카곤 펩티드를 제시한다. 글루카곤 펩티드는 글루카곤 펩티드의 위치 10에서 아미노산 및 아실 기 또는 알킬 기 사이에 스페이서를 더욱 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 아실 기는 지방산 또는 담즙산, 또는 이의 염, 예를 들면, C4 내지 C30 지방산, C8 내지 C24 지방산, 콜산, C4 내지 C30 알킬, C8 내지 C24 알킬, 또는 담즙산의 스테로이드 모이어티를 포함하는 알킬이다. 스페이서는 아실 또는 알킬 기를 부착하는데 적합한 반응 기를 갖는 임의의 모이어티이다. 예시적인 구체예에서, 스페이서는 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이중기능성, 또는 소수성 이중기능성 스페이서를 포함한다. 일부 구체예에서, 스페이서는 하기와 같이 구성된 군에서 선택된다: Trp, Glu, Asp, Cys 및 NH2(CH2CH2O)n(CH2)mCOOH를 포함하는 스페이서, 여기서 m은 1 내지 6의 임의의 정수이고, 그리고 n은 2 내지 12의 임의의 정수이다. 이런 아실화된 또는 알킬화된 글루카곤 펩티드는 또한, 친수성 모이어티, 임의적으로 폴리에틸렌 글리콜을 더욱 포함한다. 전술한 임의의 글루카곤 펩티드는 2개의 아실 기 또는 2개의 알킬 기, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
접합체와 융합
GIP 작동약은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 접합체 모이어티에 임의적으로 공유 결합을 거쳐 및 임의적으로 링커를 거쳐 연결될 수 있다.
다른 구체예에서, 두 번째 펩티드는 XGPSSGAPPPS (서열 번호: 1096)이고, 여기서 X는 20개의 공통 아미노산, 예를 들면, 글루타민산, 아스파르트산 또는 글리신 중에서 선택된다. 일부 구체예에서, X는 아미노산, 예를 들면, Cys를 나타내고, 이것은 상기 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 친수성 모이어티를 더욱 포함한다. 이런 C-말단 확장은 용해성을 향상시키고, 또한 GIP 또는 GLP-1 활성을 향상시킬 수 있다. 글루카곤 펩티드가 카르복시 말단 확장을 더욱 포함하는 일부 구체예에서, 확장의 카르복시 말단 아미노산은 카르복실산이 아닌 아미드 기 또는 에스테르 기로 종결한다.
일부 구체예에서, 예를 들면, C-말단 확장을 포함하는 글루카곤 펩티드에서, 고유 글루카곤 펩티드의 위치 29에서 트레오닌은 글리신으로 대체된다. 가령, 위치 29에서 트레오닌에 대한 글리신 치환을 갖고 GPSSGAPPPS (서열 번호: 1095)의 C-말단 확장을 포함하는 글루카곤 펩티드는 동일한 C-말단 확장을 포함하도록 변형된 고유 글루카곤보다 GLP-1 수용체에서에서 4배 강력하다. 이러한 T29G 치환은 GLP-1 수용체에 대한 글루카곤 펩티드의 친화성을 증가시키기 위해 본 명세서에서 개시된 다른 변형과 공동으로 이용될 수 있다. 가령, T29G 치환은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 임의적으로 아미노산 16과 20 사이에 락탐 가교와 함께, 그리고 임의적으로 PEG 사슬의 부가와 함께, S16E와 N20K 아미노산 치환과 합동될 수 있다.
일부 구체예에서, 아미노산은 C-말단에 부가되고, 그리고 상기 추가적인 아미노산은 글루타민산, 아스파르트산과 글리신으로 구성된 군에서 선택된다.
용해성을 증강시키는 변형
다른 구체예에서, 임의의 글루카곤 펩티드의 용해성은 펩티드의 C-말단 부분 내로, 바람직하게는 서열 번호: 1001의 위치 27에 C-말단 위치에서 하전된 아미노산을 도입하는 아미노산 치환 및/또는 부가에 의해 향상될 수 있다. 임의적으로, 1개, 2개 또는 3개의 하전된 아미노산이 C-말단 부분 내에, 바람직하게는 위치 27의 C-말단에 도입될 수 있다. 일부 구체예에서, 위치 28 및/또는 29에서 고유 아미노산(들)은 1개 또는 2개의 하전된 아미노산으로 치환되고, 및/또는 추가의 구체예에서, 1개 내지 3개의 하전된 아미노산이 또한, 펩티드의 C-말단에 부가된다. 예시적인 구체예에서, 하전된 아미노산 중에서 1개, 2개 또는 모두 음으로 하전된다. 일부 구체예에서, 음으로 하전된 (산성) 아미노산은 아스파르트산 또는 글루타민산이다.
추가적인 변형, 예를 들면, 보존성 치환이 글루카곤 펩티드에 만들어질 수 있고, 이들은 글루카곤 펩티드가 GIP 활성 (그리고, 임의적으로 GLP-1 활성 및/또는 글루카곤 활성)을 여전히 유지하도록 할 수 있다.
다른 변형
GIP 활성을 증가 또는 감소시키는 부류 2 펩티드, 글루카곤 수용체 활성을 증가 또는 감소시키는 부류 2 펩티드, 그리고 GLP-1 수용체 활성을 증가시키는 부류 2 펩티드에 관하여 앞서 기술된 임의의 변형은 개별적으로 또는 공동으로 적용될 수 있다. 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 앞서 기술된 임의의 변형은 또한, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 대하여 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 다른 바람직한 성질, 예를 들면, 증가된 용해성 및/또는 안정성 및/또는 작용의 지속 기간을 공여하는 다른 변형과 합동될 수 있다. 대안으로, 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 앞서 기술된 임의의 변형은 용해성 또는 안정성 또는 활성에 실질적인 영향을 주지 않는 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 본 명세서에서 기술된 다른 변형과 합동될 수 있다. 예시적인 변형에는 하기가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다:
(A) 예로써, 고유 글루카곤의 C-말단 부분에, 바람직하게는 위치 27에 C-말단 위치에서 1개, 2개, 3개 이상의 하전된 아미노산(들)을 도입함으로써 용해성 향상. 이런 하전된 아미노산은 예로써, 위치 28 또는 29에서 고유 아미노산을 하전된 아미노산으로 치환함으로써, 또는 대안으로, 예로써 위치 27, 28 또는 29 뒤에 하전된 아미노산을 부가함으로써 도입될 수 있다. 예시적인 구체예에서, 하전된 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개 또는 모두는 음으로 하전된다. 다른 구체예에서, 하전된 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개 또는 모두는 양으로 하전된다. 이런 변형은 용해성을 증가시킨다, 예를 들면, 25℃에서 24시간 후 측정될 때, 약 5.5와 8 사이의 소정의 pH, 예를 들면, pH 7에서 고유 글루카곤에 비하여 최소한 2-배, 5-배, 10-배, 15-배, 25-배, 30-배 또는 더욱 큰 용해성을 제공한다.
(B) 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 예로써 펩티드의 위치 16, 17, 20, 21, 24 또는 29에서, C-말단 확장 내에서, 또는 C-말단 아미노산에서 친수성 모이어티, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 사슬의 부가에 의한 용해성 및 작용의 지속 기간 또는 순환 동안 반감기 증가.
(C) 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 글루카곤 펩티드의 아실화 또는 알킬화에 의한 용해성 및/또는 작용의 지속 기간 또는 순환 동안 반감기 증가 및/또는 작용의 개시 지연;
(D) 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 위치 1 또는 2에서 아미노산의 변형에 의한 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP IV) 절단에 내성의 도입을 통한 작용의 지속 기간 또는 순환 동안 반감기 증가.
(E) 예로써, 글루타민산, 호모글루타민산, 시스테산 또는 호모시스테산으로 결실 또는 치환에 의한 위치 15에서 Asp의 변형에 의한 안정성 증가. 이런 변형은 5.5 내지 8의 범위 내에 pH에서 분해 또는 절단을 감소시키고, 예로써 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 75%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%, 100%까지 유지할 수 있다. 이런 변형은 Asp15-Ser16 사이에 펩티드 결합의 절단을 감소시킨다.
(F) 예로써, Thr 또는 Aib로 치환에 의한 위치 16에서 Ser의 변형에 의한 안정성 증가. 이런 변형은 또한, Asp15-Ser16 사이에 펩티드 결합의 절단을 감소시킨다.
(G) 예로써, 류신 또는 노르류신으로 치환에 의한 위치 27에서 메티오닌의 변형에 의한 안정성 증가. 이런 변형은 산화성 분해를 감소시킬 수 있다. 안정성은 또한, 예로써 Ser, Thr, Ala 또는 Aib로 치환에 의한 위치 20 또는 24에서 Gln의 변형에 의해 증가될 수 있다. 이런 변형은 Gln의 탈아미드화를 통해 일어나는 분해를 감소시킬 수 있다. 안정성은 위치 21에서 Asp의 변형, 예를 들면, Glu로 치환에 의해 증가될 수 있다. 이런 변형은 환상 숙신이미드 중간물질을 형성하는 Asp의 탈수, 그 이후에 이소-아스파르테이트로의 이성질화를 통해 일어나는 분해를 감소시킬 수 있다.
(H) 활성에 실질적인 영향을 주지 않는 비-보존성 또는 보존성 치환, 부가 또는 결실, 예를 들면, 위치 2, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 또는 29 중에서 하나 이상에서 보존성 치환; 이들 위치 중에서 하나 이상의 Ala으로의 치환; 위치 27, 28 또는 29 중에서 하나 이상에서 아미노산의 결실; 또는 C-말단 카르복실산 기 대신에 임의적으로 C-말단 아미드 또는 에스테르와 합동된 아미노산 29의 결실; 위치 12에서 Lys의 Arg로의 치환; 위치 10에서 Tyr의 Val 또는 Phe로의 치환;
페길화 후 활성의 보존은 C-말단에 GPSSGAPPPS (서열 번호: 1095)의 부가에 의해 제공된다.
고유 글루카곤 펩티드의 일부 위치는 부모 펩티드의 활성 중에서 최소한 일부를 유지하면서 변형될 수 있다. 따라서 본 발명자들은 위치 2, 5, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 또는 29에 위치되는 아미노산 중에서 하나 이상이 고유 글루카곤 펩티드 내에 존재하는 것과 상이한 아미노산으로 치환될 수 있고, 그리고 글루카곤 수용체에서 활성을 여전히 유지할 것으로 기대한다.
일부 구체예에서, 위치 18은 Ala, Ser, 또는 Thr로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 위치 20에서 아미노산은 Ser, Thr, Lys, Arg, Orn, 시트룰린 또는 Aib로 치환된다. 일부 구체예에서, 위치 21은 Glu, 호모글루타민산 또는 호모시스테산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 위치 16, 17, 18, 20, 21, 23, 24, 27, 28와 29에서 선택되는 1개 내지 10개의 아미노산 변형을 포함한다. 예시적인 구체예에서, 이들 변형은 Gln17, Ala18, Glu21, Ile23, Ala24, Val27과 Gly29로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 치환이다. 일부 구체예에서, 위치 17-26에서 선택되는 1개 내지 2개의 아미노산은 부모 펩티드와 상이하다. 다른 구체예에서, 위치 17-22에서 선택되는 1개 내지 2개의 아미노산은 부모 펩티드와 상이하다. 또 다른 구체예에서, 이들 변형은 Gln17, Ala18, Glu21, Ile23과 Ala24이다.
일부 구체예에서, 하나 이상의 아미노산이 글루카곤 펩티드의 카르복시 말단에 부가된다. 아미노산은 전형적으로, 20개의 공통 아미노산에서 선택되고, 그리고 일부 구체예에서, 아미노산은 고유 아미노산의 카르복실산 대신에 아미드 기를 갖는다. 예시적인 구체예에서, 부가된 아미노산은 글루타민산, 아스파르트산과 글리신으로 구성된 군에서 선택된다.
활성을 파괴하지 않는 다른 변형은 W10 또는 R20을 포함한다.
일부 구체예에서, 본 명세서에서 개시된 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드는 C-말단의 절두에 의해 1개 또는 2개의 아미노산 잔기로 변형되지만 글루카곤, GLP-1 및/또는 GIP 수용체에서 유사한 활성과 효능을 유지한다. 이와 관련하여, 위치 29 및/또는 28에서 아미노산이 결실될 수 있다.
예시적인 구체예
본 발명의 일부 구체예에 따라서, GIP 작동약 활성을 갖는 글루카곤 (서열 번호: 1001)의 유사체는 (a) GIP 작동약 활성을 공여하는 위치 1에서 아미노산 변형, (b) 유사체의 C-말단 부분 (아미노산 12-29)의 알파 나선 구조를 안정시키는 변형, 그리고 (c) 임의적으로, 1 내지 10 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10)개의 추가적인 아미노산 변형을 갖는 서열 번호: 1001을 포함한다. 일부 구체예에서, 유사체는 본 명세서에서 기술된 바와 같이, GIP 수용체에서 고유 GIP 또는 GIP 수용체에서 임의의 다른 활성 수준의 최소한 약 1% 활성을 나타낸다.
일정한 구체예에서, 알파 나선 구조를 안정시키는 변형은 예로써, 본 명세서에서 기술된 것들과 같은 공유 분자내 가교를 비롯한 분자내 가교를 제공하거나 도입하는 변형이다. 일부 구체예에서, 공유 분자내 가교는 락탐 가교이다. 이들 구체예의 락탐 가교는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 락탐 가교일 수 있다. 예로써, 섹션 "알파 나선 구조의 안정화" 하에 락탐 가교의 교시를 참고한다. 가령, 락탐 가교는 위치 i와 i+4에서 아미노산의 측쇄 사이에 또는 위치 j와 j+3에서 아미노산의 측쇄 사이에 있는 락탐 가교일 수 있고, 여기서 i는 12, 13, 16, 17, 20 또는 24이고, 그리고 여기서 j는 17이다. 일정한 구체예에서, 락탐 가교는 위치 16과 20에서 아미노산 사이에 있을 수 있고, 여기서 위치 16과 20에서 아미노산 중에서 하나는 Glu로 치환되고, 그리고 위치 16과 20에서 아미노산 중에서 다른 하나는 Lys로 치환된다.
대안적 구체예에서, 알파 나선 구조를 안정시키는 변형은 유사체의 위치(들) 16, 20, 21, 그리고 24 중에서 1개, 2개, 3개, 또는 4개 α,α-이중치환된 아미노산의 도입이다. 일부 구체예에서, α,α-이중치환된 아미노산은 Aib이다. 일정한 양상에서, α,α-이중치환된 아미노산 (가령, Aib)은 위치 20에 있고, 그리고 위치 16에서 아미노산은 양으로 하전된 아미노산, 예를 들면, 화학식 IV의 아미노산으로 치환되고, 이것은 본 명세서에서 기술된다. 화학식 IV의 아미노산은 homoLys, Lys, Orn, 또는 2,4-디아미노부티르산 (Dab)일 수 있다.
본 발명의 특정한 양상에서, 위치 1에서 아미노산 변형은 이미다졸 측쇄가 없는 아미노산, 예를 들면, 큰 방향족 아미노산 (가령, Tyr)으로 His의 치환이다.
일정한 양상에서, 글루카곤의 유사체는 위치 27, 28과 29 중에서 1개, 2개 또는 모두에서 아미노산 변형을 포함한다. 가령, 위치 27에서 Met는 큰 지방족 아미노산, 임의적으로 Leu로 치환될 수 있고, 위치 28에서 Asn은 작은 지방족 아미노산, 임의적으로 Ala로 치환될 수 있고, 위치 29에서 Thr은 작은 지방족 아미노산, 임의적으로 Gly로 치환될 수 있고, 또는 이들 중에서 2개 또는 3개의 조합일 수 있다. 특정 구체예에서, 글루카곤의 유사체는 위치 27에서 Leu, 위치 28에서 Ala, 그리고 위치 29에서 Gly 또는 Thr을 포함한다.
본 발명의 일정한 구체예에서, 글루카곤의 유사체는 위치 29에서 아미노산의 C-말단에 1개 내지 21개의 아미노산의 확장을 포함한다. 이러한 확장은 예로써, 서열 번호: 1095 또는 1096의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 부가적으로 또는 대안으로, 글루카곤의 유사체는 확장을 포함할 수 있고, 이러한 확장 중에서 1-6개 아미노산은 양으로 하전된 아미노산이다. 양으로 하전된 아미노산은 Lys, homoLys, Orn, 그리고 Dab가 포함되지만 이들에 국한되지 않는 화학식 IV의 아미노산일 수 있다.
일부 구체예에서, 글루카곤의 유사체는 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 아실화 또는 알킬화된다. 가령, 아실 또는 알킬 기는 본 명세서에서 기술된 더욱 기술된 바와 같이, 유사체의 위치 10 또는 40에서, 스페이서를 통해 또는 스페이서 없이 글루카곤의 유사체에 부착될 수 있다. 유사체는 부가적으로 또는 대안으로, 본 명세서에서 기술된 더욱 기술된 바와 같이, 친수성 모이어티를 포함하도록 변형될 수도 있다. 게다가, 일부 구체예에서, 유사체는 하기 변형 중에서 임의의 한 가지 또는 조합을 포함한다:
(a) 위치 2에서 Ser이 D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-메틸-Ser, Aib, Val, 또는 α-아미노-N-부티르산으로 치환됨;
(b) 위치 10에서 Tyr이 Trp, Lys, Orn, Glu, Phe, 또는 Val로 치환됨:
(c) 위치 10에서 Lys에 아실 기의 연쇄;
(d) 위치 12에서 Lys가 Arg 또는 Ile로 치환됨;
(e) 위치 16에서 Ser이 Glu, Gln, 호모글루타민산, 호모시스테산, Thr, Gly, 또는 Aib로 치환됨;
(f) 위치 17에서 Arg가 Gln으로 치환됨;
(g) 위치 18에서 Arg가 Ala, Ser, Thr, 또는 Gly로 치환됨;
(h) 위치 20에서 Gln이 Ser, Thr, Ala, Lys, 시트룰린, Arg, Orn, 또는 Aib로 치환됨;
(i) 위치 21에서 Asp가 Glu, 호모글루타민산, 호모시스테산으로 치환됨;
(j) 위치 23에서 Val이 Ile로 치환됨;
(k) 위치 24에서 Gln이 Asn, Ser, Thr, Ala, 또는 Aib로 치환됨;
(l) 그리고 위치 2 5, 9, 10, 11, 12. 13, 14, 15, 16, 8 19 20, 21. 24, 27, 28과 29 중에서 하나에서 보존성 치환.
예시적인 구체예에서, GIP 작동약 활성을 갖는 글루카곤 (서열 번호: 1001)의 유사체는 하기 변형을 포함한다:
(a) GIP 작동약 활성을 공여하는 위치 1에서 아미노산 변형,
(b) 위치 i와 i+4에서 아미노산의 측쇄 사이에 또는 위치 j와 j+3에서 아미노산의 측쇄 사이에 락탐 가교, 여기서 i는 12, 13, 16, 17, 20 또는 24이고, 그리고 여기서 j는 17이다,
(c) 위치 27, 28과 29 중에서 1개, 2개 또는 모두에서 아미노산 변형, 예를 들면, 위치 27 및/또는 28에서 아미노산 변형, 그리고
(d) 1-9개 또는 1-6개의 추가적인 아미노산 변형, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 추가적인 아미노산 변형,
그리고 GIP 수용체 활성화에 대한 유사체의 EC50은 약 10 nM 이하이다.
이들 구체예의 유사체의 락탐 가교는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 락탐 가교일 수 있다. 예로써, 섹션 "알파 나선 구조의 안정화" 하에 락탐 가교의 교시를 참고한다. 가령, 락탐 가교는 위치 16과 20에서 아미노산 사이에 있을 수 있고, 여기서 위치 16과 20에서 아미노산 중에서 하나는 Glu로 치환되고, 그리고 위치 16과 20에서 아미노산 중에서 다른 하나는 Lys로 치환된다.
이들 구체예에 따라서, 유사체는 예로써, 서열 번호: 1005-1094 중에서 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
다른 예시적인 구체예에서, GIP 작동약 활성을 갖는 글루카곤 (서열 번호: 1001)의 유사체는 하기 변형을 포함한다:
(a) GIP 작동약 활성을 공여하는 위치 1에서 아미노산 변형,
(b) 유사체의 위치 16, 20, 21, 그리고 24에서 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개, 또는 모두가 α,α-이중치환된 아미노산으로 치환된다,
(c) 위치 27, 28과 29 중에서 1개, 2개 또는 모두에서 아미노산 변형, 예를 들면, 위치 27 및/또는 28에서 아미노산 변형, 그리고
(d) 1-9개 또는 1-6개의 추가적인 아미노산 변형, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 추가적인 아미노산 변형,
그리고 GIP 수용체 활성화에 대한 유사체의 EC50은 약 10 nM 이하이다.
이들 구체예의 유사체의 α,α-이중치환된 아미노산은 아미노 이소-부티르산 (Aib), 메틸, 에틸, 프로필, 그리고 n-부틸에서 선택되는 동일하거나 상이한 기, 또는 시클로옥탄 또는 시클로헵탄으로 이중치환된 아미노산 (가령, 1-아미노시클로옥탄-1-카르복실산)이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 임의의 α,α-이중치환된 아미노산일 수 있다. 일정한 구체예에서, α,α-이중치환된 아미노산은 Aib이다. 일정한 구체예에서, 위치 20에서 아미노산은 α,α-이중치환된 아미노산, 예를 들면, Aib로 치환된다.
이들 구체예에 따라서, 유사체는 예로써, 서열 번호: 1099-1141, 1144-1164, 1166-1169, 그리고 1173-1178 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예시적인 구체예에서, GIP 작동약 활성을 갖는 글루카곤 (서열 번호: 1001)의 유사체는 하기 변형을 포함한다:
(a) GIP 작동약 활성을 공여하는 위치 1에서 아미노산 변형,
(b) 위치 16에서 Ser의 화학식 IV의 아미노산으로의 아미노산 치환:
Figure pct00022

[화학식 IV],
여기서 n은 1 내지 16, 또는 1 내지 10, 또는 1 내지 7, 또는 1 내지 6, 또는 2 내지 6이고, R1과 R2는 각각 독립적으로, H, C1-C18 알킬, (C1-C18 알킬)OH, (C1-C18 알킬)NH2, (C1-C18 알킬)SH, (C0-C4 알킬)(C3-C6)시클로알킬, (C0-C4 알킬)(C2-C5 헤테로환상), (C0-C4 알킬)(C6-C10 아릴)R7, 그리고 (C1-C4 알킬)(C3-C9 헤테로아릴)로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 R7은 H 또는 OH이고, 그리고 화학식 IV의 아미노산의 측쇄는 유리 아미노 기를 포함한다,
(c) 위치 20에서 Gln의 알파, 알파-이중치환된 아미노산으로의 아미노산 치환,
(d) 위치 27, 28과 29 중에서 1개, 2개 또는 모두에서 아미노산 변형, 예를 들면, 위치 27 및/또는 28에서 아미노산 변형, 그리고
(e) 1-9개 또는 1-6개의 추가적인 아미노산 변형, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 추가적인 아미노산 변형,
그리고 GIP 수용체 활성화에 대한 유사체의 EC50은 약 10 nM 이하이다.
이들 구체예의 유사체의 화학식 IV의 아미노산은 임의의 아미노산, 예를 들면, 화학식 IV의 아미노산일 수 있고, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16이다. 일정한 구체예에서, n은 2, 3, 4, 또는 5이고, 이러한 경우에, 아미노산은 각각, Dab, Orn, Lys, 또는 homoLys이다.
이들 구체예의 유사체의 알파, 알파-이중치환된 아미노산은 아미노 이소-부티르산 (Aib), 메틸, 에틸, 프로필, 그리고 n-부틸에서 선택되는 동일하거나 상이한 기, 또는 시클로옥탄 또는 시클로헵탄으로 이중치환된 아미노산 (가령, 1-아미노시클로옥탄-1-카르복실산)이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 임의의 알파, 알파-이중치환된 아미노산일 수 있다. 일정한 구체예에서, 알파, 알파-이중치환된 아미노산은 Aib이다.
이들 구체예에 따라서, 유사체는 예로써, 서열 번호: 1099-1165 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또 다른 예시적인 구체예에서, GIP 작동약 활성을 갖는 글루카곤 (서열 번호: 1001)의 유사체는 하기를 포함한다:
(a) GIP 작동약 활성을 공여하는 위치 1에서 아미노산 변형, 그리고
(b) 위치 29에서 아미노산의 C-말단에 약 1개 내지 약 21개의 아미노산의 확장, 여기서 이러한 확장의 아미노산 중에서 최소한 하나는 아실화 또는 알킬화된다,
여기서 GIP 수용체 활성화에 대한 유사체의 EC50은 약 10 nM 이하이다.
일부 구체예에서, 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 화학식 I, II, 또는 III의 아미노산이다. 더욱 특정한 구체예에서, 화학식 I의 아미노산은 Dab, Orn, Lys, 또는 homoLys이다. 또한, 일부 구체예에서, 약 1개 내지 약 21개 아미노산의 확장은 GPSSGAPPPS (서열 번호: 1095) 또는 XGPSSGAPPPS (서열 번호: 1096)의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X는 임의의 아미노산, 또는 GPSSGAPPPK (서열 번호: 1170) 또는 XGPSSGAPPPK (서열 번호: 1171) 또는 XGPSSGAPPPSK (서열 번호: 1172)이고, 여기서 X는 Gly 또는 작은, 지방족 또는 비-극성 또는 약한 극성 아미노산이다. 일부 구체예에서, 약 1개 내지 약 21개의 아미노산은 서열 번호: 1095, 1096, 1170, 1171 또는 1172에 비하여 하나 이상의 보존성 치환을 내포하는 서열을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 C-말단-확장된 유사체의 위치 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43에 위치한다. 일정한 구체예에서, 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 C-말단 확장된 유사체의 위치 40에 위치한다.
일부 구체예에서, GIP 작동약 활성을 갖는 유사체는 위치 27, 28와 29 중에서 1개, 2개 또는 모두에서 아미노산 변형, 예를 들면, 위치 27 및/또는 28에서 아미노산 변형을 더욱 포함한다.
상기 예시적인 임의의 구체예에서, GIP 작동약 활성을 공여하는 위치 1에서 아미노산 변형은 이미다졸 측쇄가 없는 아미노산으로 His의 치환일 수 있다. 위치 1에서 아미노산 변형은 예로써, His의 큰 방향족 아미노산으로의 치환일 수 있다. 일부 구체예에서, 큰 방향족 아미노산은 예로써, Tyr을 비롯한 본 명세서에서 기술된 것들 중에서 하나이다.
일정한 양상에서, 유사체는 GIP 작동약 활성을 공여하는 아미노산 변형을 위치 1에서 포함하지 않는다. 일부 양상에서, 위치 1에서 아미노산은 큰 방향족 아미노산, 예를 들면, Tyr이 아니다. 일부 구체예에서, 위치 1에서 아미노산은 이미다졸 고리를 포함하는 아미노산, 예를 들면, His, His의 유사체이다. 일정한 구체예에서, 유사체는 국제 특허 출원 공개공보 번호 제WO 2010/011439호에서 개시된 임의의 화합물이 아니다. 일정한 양상에서, 유사체는 서열 번호: 1263-1275 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 이들 예시적인 구체예에 대하여, 위치 27, 28과 29 중에서 1개, 2개, 또는 모두에서 아미노산 변형은 이들 위치에서 본 명세서에서 기술된 임의의 변형일 수 있다. 가령, 위치 27에서 Met는 큰 지방족 아미노산, 임의적으로 Leu로 치환될 수 있고, 위치 28에서 Asn은 작은 지방족 아미노산, 임의적으로 Ala로 치환될 수 있고, 및/또는 위치 29에서 Thr은 작은 지방족 아미노산, 임의적으로 Gly로 치환될 수 있다. 대안으로, 유사체는 위치 27 및/또는 28에서 이런 아미노산 변형을 포함할 수 있다.
이들 예시적인 구체예의 유사체는 1-9개 또는 1-6개의 추가적인 아미노산 변형, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 추가적인 아미노산 변형, 예를 들면, GIP, GLP-1과 글루카곤 수용체 중에서 하나에서 활성을 증가 또는 감소시키거나, 용해성을 향상시키거나, 작용의 지속 기간 또는 순환 동안 반감기를 향상시키거나, 작용의 개시를 지연시키거나, 또는 안정성을 증가시키는 본 명세서에서 기술된 임의의 변형을 더욱 포함할 수 있다. 유사체는 예로써, 위치 12에서 아미노산 변형, 임의적으로 Ile로 치환, 및/또는 위치 17과 18에서 아미노산 변형, 임의적으로 위치 17에서 Q와 위치 18에서 A로 치환, 및/또는 C-말단에 GPSSGAPPPS (서열 번호: 1095) 또는 XGPSSGAPPPS (서열 번호: 1096), 또는 서열 번호: 1095 또는 1096에 비하여 하나 이상의 보존성 치환을 내포하는 서열의 부가를 더욱 포함할 수 있다. 유사체는 하기 변형 중에서 하나 이상을 포함할 수 있다:
(i) 위치 2에서 Ser이 D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-메틸-Ser, Aib, Val, 또는 α-아미노-N-부티르산으로 치환됨;
(ii) 위치 10에서 Tyr이 Trp, Lys, Orn, Glu, Phe, 또는 Val로 치환됨;
(iii) 위치 10에서 Lys에 아실 기의 연쇄;
(iv) 위치 12에서 Lys가 Arg로 치환됨;
(v) 위치 16에서 Ser이 Glu, Gln, 호모글루타민산, 호모시스테산, Thr, Gly, 또는 Aib로 치환됨;
(vi) 위치 17에서 Arg가 Gln로 치환됨;
(vii) 위치 18에서 Arg가 Ala, Ser, Thr, 또는 Gly로 치환됨;
(viii) 위치 20에서 Gln이 Ala, Ser, Thr, Lys, 시트룰린, Arg, Orn, 또는 Aib로 치환됨;
(ix) 위치 21에서 Asp가 Glu, 호모글루타민산, 호모시스테산으로 치환됨;
(x) 위치 23에서 Val이 Ile로 치환됨;
(xi) 위치 24에서 Gln이 Asn, Ala, Ser, Thr, 또는 Aib로 치환됨; 그리고
(xii) 위치 2, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28과 29 중에서 하나에서 보존성 치환.
일부 구체예에서, 유사체는 변형 (i) 내지 (xii)의 조합을 포함한다. 대안으로 또는 부가적으로, 유사체는 위치 3에서 아미노산 변형 (가령, Gln의 Glu로의 아미노산 치환)을 포함할 수 있고, 여기서 상기 유사체는 글루카곤 수용체에서 글루카곤의 활성의 1% 미만을 갖는다. 대안으로 또는 부가적으로, 유사체는 위치 7에서 아미노산 변형 (가령, 히드록실 기가 없는 아미노산, 예를 들면, Abu 또는 Ile로 Thr의 아미노산 치환)을 포함할 수 있고, 여기서 상기 유사체는 GLP-1 수용체에서 GLP-1의 활성의 약 10% 미만을 갖는다.
이들 예시적인 구체예에 대하여, 유사체는 친수성 모이어티에 공유 연결될 수 있다. 일부 구체예에서, 유사체는 아미노산 위치 16, 17, 20, 21, 24, 29, 40, 또는 C-말단 중에서 하나에서 친수성 모이어티에 공유 연결된다. 일정한 구체예에서, 유사체는 C-말단 확장 (가령, 서열 번호: 1095의 아미노산 서열) 및 친수성 모이어티를 포함하는 아미노산의 부가를 포함하고, 따라서 친수성 모이어티는 위치 40에서 유사체에 공유 연결된다.
일부 구체예에서, 친수성 모이어티는 유사체의 Lys, Cys, Orn, 호모시스테인, 또는 아세틸-페닐알라닌에 공유 연결된다. Lys, Cys, Orn, 호모시스테인, 또는 아세틸-페닐알라닌은 글루카곤 서열 (서열 번호: 1001)에 고유한 아미노산이거나, 또는 서열 번호: 1001의 고유 아미노산을 대체하는 아미노산일 수 있다. 친수성 모이어티가 Cys에 부착되는 일부 구체예에서, 친수성 모이어티에 연쇄는 하기 구조를 포함할 수 있다:
Figure pct00023
.
친수성 모이어티를 포함하는 유사체에 대하여, 친수성 모이어티는 본 명세서에서 기술된 것들 중에서 한 가지일 수 있다. 예로써, 섹션 "친수성 모이어티의 연쇄" 하에 교시를 참고한다. 일부 구체예에서, 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이다. 일정한 구체예에서, PEG는 약 1,000 달톤 내지 약 40,000 달톤, 예를 들면, 약 20,000 달톤 내지 약 40,000 달톤의 분자량을 갖는다.
이들 예시적인 구체예에 대하여, 유사체는 측쇄가 아실 또는 알킬 기 (가령, 자연 발생 아미노산에 비-고유인 아실 또는 알킬 기)에 공유 연결되는 변형된 아미노산을 포함할 수 있다. 아실화된 또는 알킬화된 유사체는 섹션 "아실화와 알킬화"에서 기술된 아실화된 또는 알킬화된 펩티드에 부합될 수 있다. 일부 구체예에서, 아실 기는 C4 내지 C30 지방 아실 기, 예를 들면, C10 지방 아실 또는 알킬 기, C12 지방 아실 또는 알킬 기, C14 지방 아실 또는 알킬 기, C16 지방 아실 또는 알킬 기, C18 지방 아실 또는 알킬 기, C20 아실 또는 알킬 기, 또는 C22 아실 또는 알킬 기이다. 아실 또는 알킬 기는 위치 10 또는 40에서 아미노산, 또는 C-말단 아미노산이 포함되지만 이들에 국한되지 않는, 유사체의 임의의 아미노산에 공유 부착될 수 있다. 일정한 구체예에서, 유사체는 C-말단 확장 (가령, 서열 번호: 1095의 아미노산 서열) 및 아실 또는 알킬 기를 포함하는 아미노산의 부가를 포함하고, 따라서 아실 또는 알킬 기는 위치 40에서 상기 유사체에 공유 연결된다. 일부 구체예에서, 아실 또는 알킬 기는 화학식 I, II, 또는 III의 아미노산, 예를 들면, Lys 잔기의 측쇄에 공유 연결된다. 아실 또는 알킬 기는 글루카곤 서열 (서열 번호: 1001)에 고유인 아미노산에 공유 연결되거나, 또는 서열 번호: 1001의 서열 또는 서열 번호: 1001, 그 이후에 서열 번호: 1095 (N- 또는 C-말단에서)의 서열에 부가되는 아미노산에 연결되거나, 또는 서열 번호: 1001의 위치 10에서 고유 아미노산, 예를 들면, Tyr을 대체하는 아미노산에 연결될 수 있다.
유사체가 아실 또는 알킬 기를 포함하는 이들 예시적인 구체예에서, 상기 유사체는 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 스페이서를 거쳐 아실 또는 알킬 기에 부착될 수 있다. 스페이서는 예로써, 3개 내지 10개의 원자 길이를 갖고, 그리고 예로써, 아미노산 (가령, 6-아미노 헥사노익산, 본 명세서에서 기술된 임의의 아미노산), 디펩티드 (가령, Ala-Ala, βAla-βAla, Leu-Leu, Pro-Pro, γ-Glu-γ-Glu), 트리펩티드, 또는 친수성 또는 소수성 이중기능성 스페이서일 수 있다. 일정한 양상에서, 스페이서 및 아실 또는 알킬 기의 총 길이는 약 14개 내지 약 28개의 원자이다. 일부 구체예에서, 아미노산 스페이서는 γ-Glu가 아니다. 일부 구체예에서, 디펩티드 스페이서는 γ-Glu-γ-Glu가 아니다.
또 다른 예시적인 구체예, GIP 작동약 활성을 갖는 글루카곤의 유사체는 하기 변형을 더욱 포함하는 서열 번호: 1227, 1228, 1229 또는 1230 중에서 한 가지에 따른 아미노산 서열을 포함한다:
(a) 임의적으로, GIP 작동약 활성을 공여하는 위치 1에서 아미노산 변형,
(b) 위치 29에서 아미노산에 약 1개 내지 약 21개의 아미노산 C-말단의 확장, 여기서 확장의 아미노산 중에서 최소한 하나는 아실화 또는 알킬화되고, 그리고
(d) 6개까지의 추가적인 아미노산 변형,
여기서 GIP 수용체 활성화에 대한 유사체의 EC50은 약 10 nM 이하이다.
일부 양상에서, 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 화학식 I, II, 또는 III의 아미노산이다. 더욱 특정한 구체예에서, 화학식 I의 아미노산은 Dab, Orn, Lys, 또는 homoLys이다. 또한, 일부 구체예에서, 약 1개 내지 약 21개의 아미노산은 GPSSGAPPPS (서열 번호: 1095) 또는 XGPSSGAPPPS (서열 번호: 1096)의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X는 임의의 아미노산, 또는 GPSSGAPPPK (서열 번호: 1170) 또는 XGPSSGAPPPK (서열 번호: 1171) 또는 XGPSSGAPPPSK (서열 번호: 1172)이고, 여기서 X는 Gly 또는 작은 지방족 또는 비-극성 또는 약한 극성 아미노산이다. 일부 구체예에서, 약 1개 내지 약 21개의 아미노산은 서열 번호: 1095, 1096, 1170, 1171 또는 1172에 비하여 하나 이상의 보존성 치환을 내포하는 서열을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 C-말단-확장된 유사체의 위치 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43에 위치한다. 일정한 구체예에서, 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 C-말단 확장된 유사체의 위치 40에 위치한다.
이들 예시적인 구체예에서, GIP 작동약 활성을 공여하는 위치 1에서 아미노산은 이미다졸 측쇄가 없는 아미노산일 수 있다. 위치 1에서 아미노산은 예로써, 큰 방향족 아미노산일 수 있다. 일부 구체예에서, 큰 방향족 아미노산은 예로써, Tyr을 비롯하여, 본 명세서에서 기술된 것들 중에서 한 가지이다.
이들 예시적인 구체예의 유사체는 1-6개의 추가적인 아미노산 변형, 예를 들면, GIP, GLP-1과 글루카곤 수용체 중에서 한 가지에서 활성을 증가 또는 감소시키거나, 용해성을 향상시키거나, 작용의 지속 기간 또는 순환 동안 반감기를 향상시키거나, 작용의 개시를 지연시키거나, 또는 안정성을 증가시키는 본 명세서에서 기술된 임의의 변형을 더욱 포함할 수 있다.
일정한 양상에서, 상기 예시적인 구체예에서 기술된 글루카곤 유사체는 위치 27, 28과 29 중에서 1개, 2개 또는 모두에서 추가의 아미노산 변형을 포함한다. 이들 위치에서 변형은 이들 위치에 관해 본 명세서에서 기술된 임의의 변형일 수 있다. 가령, 서열 번호: 1227, 1228, 1229 또는 1230에 비하여, 위치 27은 큰 지방족 아미노산 (가령, Leu, Ile 또는 노르류신) 또는 Met로 치환될 수 있고, 위치 28은 다른 작은 지방족 아미노산 (가령, Gly 또는 Ala) 또는 Asn으로 치환될 수 있고, 및/또는 위치 29는 다른 작은 지방족 아미노산 (가령, Ala 또는 Gly) 또는 Thr로 치환될 수 있다. 대안으로, 유사체는 위치 27 및/또는 28에서 이런 아미노산 변형을 포함할 수 있다.
유사체는 하기 추가적인 변형 중에서 하나 이상을 더욱 포함할 수 있다:
(i) 위치 2에서 아미노산이 D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-메틸-Ser, Aib, Val, 또는 α-아미노-N-부티르산 중에서 하나이다;
(ii) 위치 10에서 아미노산이 Tyr, Trp, Lys, Orn, Glu, Phe, 또는 Val이다;
(iii) 위치 10에서 Lys에 아실 기의 연쇄;
(iv) 위치 12에서 아미노산이 Ile, Lys 또는 Arg이다;
(v) 위치 16에서 아미노산이 Ser, Glu, Gln, 호모글루타민산, 호모시스테산, Thr, Gly, 또는 Aib 중에서 하나이다;
(vi) 위치 17에서 아미노산이 Gln 또는 Arg이다;
(vii) 위치 18에서 아미노산이 Ala, Arg, Ser, Thr, 또는 Gly 중에서 하나이다;
(viii) 위치 20에서 아미노산이 Ala, Ser, Thr, Lys, 시트룰린, Arg, Orn, 또는 Aib 또는 또 다른 알파, 알파-이중치환된 아미노산 중에서 하나이다;
(ix) 위치 21에서 아미노산이 Glu, Asp, 호모글루타민산, 호모시스테산 중에서 하나이다;
(x) 위치 23에서 아미노산이 Val 또는 Ile이다;
(xi) 위치 24에서 아미노산이 Gln, Asn, Ala, Ser, Thr, 또는 Aib 중에서 하나이다; 그리고
(xii) 위치 2, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28과 29 중에서 하나에서 하나 이상의 보존성 치환.
일부 구체예에서, 유사체는 변형 (i) 내지 (xii)의 조합을 포함한다. 대안으로 또는 부가적으로, 유사체는 위치 3에서 아미노산 변형 (가령, Gln의 Glu로의 아미노산 치환)을 포함할 수 있고, 여기서 상기 유사체는 글루카곤 수용체에서 글루카곤의 활성의 1% 미만을 갖는다. 대안으로 또는 부가적으로, 유사체는 위치 7에서 아미노산 변형 (가령, 히드록실 기가 없는 아미노산, 예를 들면, Abu 또는 Ile로 Thr의 아미노산 치환)을 포함할 수 있고, 여기서 상기 유사체는 GLP-1 수용체에서 GLP-1의 활성의 약 10% 미만을 갖는다.
이들 예시적인 구체예에 대하여, 유사체는 친수성 모이어티에 공유 연결될 수 있다. 일부 구체예에서, 유사체는 아미노산 위치 16, 17, 20, 21, 24, 29, 40, 또는 C-말단 중에서 하나에서 친수성 모이어티에 공유 연결된다. 일정한 구체예에서, 유사체는 위치 24에서 유사체에 공유 연결된 친수성 모이어티를 포함한다.
일부 구체예에서, 친수성 모이어티는 유사체의 Lys, Cys, Orn, 호모시스테인, 또는 아세틸-페닐알라닌에 공유 연결된다. Lys, Cys, Orn, 호모시스테인, 또는 아세틸-페닐알라닌은 서열 번호: 1001, 1227, 1228, 1229 또는 1230에 고유인 아미노산이거나, 또는 치환된 아미노산일 수 있다. 친수성 모이어티가 Cys에 연결되는 일부 구체예에서, 연쇄는 하기 구조를 포함할 수 있다:
Figure pct00024
.
친수성 모이어티를 포함하는 유사체에 대하여, 친수성 모이어티는 본 명세서에서 기술된 것들 중에서 한 가지일 수 있다. 예로써, 섹션 "친수성 모이어티의 연쇄" 하에 교시를 참고한다. 일부 구체예에서, 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이다. 일정한 구체예에서, PEG는 약 1,000 달톤 내지 약 40,000 달톤, 예를 들면, 약 20,000 달톤 내지 약 40,000 달톤의 분자량을 갖는다.
이들 예시적인 구체예에 대하여, 유사체는 측쇄가 아실 또는 알킬 기에 공유 연결되는 C-말단 확장 내에 변형된 아미노산을 포함할 수 있다. 아실화된 또는 알킬화된 유사체는 섹션 "아실화와 알킬화"에서 기술된 아실화된 또는 알킬화된 펩티드에 부합될 수 있다. 일부 구체예에서, 아실 기는 C4 내지 C30 지방 아실 기, 예를 들면, C10 지방 아실 또는 알킬 기, C12 지방 아실 또는 알킬 기, C14 지방 아실 또는 알킬 기, C16 지방 아실 또는 알킬 기, C18 지방 아실 또는 알킬 기, C20 아실 또는 알킬 기, 또는 C22 아실 또는 알킬 기이다. 아실 또는 알킬 기는 위치 10 또는 40에서 아미노산, 또는 C-말단 아미노산이 포함되지만 이들에 국한되지 않는, 유사체의 임의의 아미노산에 공유 부착될 수 있다. 일부 구체예에서, 아실 또는 알킬 기는 화학식 I, II, 또는 III의 아미노산, 예를 들면, Lys 잔기의 측쇄에 공유 연결된다. 아실 또는 알킬 기는 서열 번호: 1001, 1227, 1228, 1229 또는 1230에 고유인 아미노산에 공유 연결되거나, 또는 치환된 아미노산에 연결될 수 있다. 아실 또는 알킬 기는 서열 번호: 1095, 1096, 1171 또는 1172에 고유인 아미노산에 공유 연결되거나, 또는 치환된 아미노산에 연결될 수 있다.
유사체가 아실 또는 알킬 기를 포함하는 이들 예시적인 구체예에서, 상기 유사체는 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 스페이서를 거쳐 아실 또는 알킬 기에 부착될 수 있다. 스페이서는 예로써, 3개 내지 10개의 원자 길이를 갖고, 그리고 예로써, 아미노산 (가령, 6-아미노 헥사노익산, 본 명세서에서 기술된 임의의 아미노산), 디펩티드 (가령, Ala-Ala, βAla-βAla, Leu-Leu, Pro-Pro, γ-Glu-γ-Glu), 트리펩티드, 또는 친수성 또는 소수성 이중기능성 스페이서일 수 있다. 일정한 양상에서, 스페이서 및 아실 또는 알킬 기의 총 길이는 약 14개 내지 약 28개의 원자이다. 일부 구체예에서, 아미노산 스페이서는 γ-Glu가 아니다. 일부 구체예에서, 디펩티드 스페이서는 γ-Glu-γ-Glu가 아니다.
매우 특정한 일부 구체예에서, 본 발명의 유사체는 서열 번호: 1099-1141, 1144-1164, 1166, 1192-1207, 1209-1221과 1223으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 서열 번호: 1167-1169, 1173-1178과 1225로 구성된 군에서 선택된다.
더 나아가, 본 발명의 유사체의 특정한 실례에는 표 1-3에서 언급된 것들이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
또 다른 예시적인 구체예에서, GIP 작동약 활성을 갖는 글루카곤의 유사체는 아실 또는 알킬 기 (가령, 자연 발생 아미노산에 비-고유인 아실 또는 알킬 기)를 포함하고, 여기서 아실 또는 알킬 기는 스페이서에 부착되고, 여기서 (i) 스페이서는 유사체의 위치 10에서 아미노산의 측쇄에 부착되고; 또는 (ii) 유사체는 위치 29에서 아미노산의 C-말단에 1개 내지 21개의 아미노산의 확장을 포함하고, 그리고 스페이서는 서열 번호: 1001에 비하여 위치 37-43 중에서 하나에 상응하는 아미노산의 측쇄에 부착되고, 여기서 GIP 수용체 활성화에 대한 유사체의 EC50은 약 10 nM 이하이다.
이런 구체예에서, 유사체는 (i) GIP 작동약 활성을 공여하는 위치 1에서 아미노산 변형, (ii) 위치 27, 28과 29 중에서 1개, 2개, 또는 모두에서 아미노산 변형, (iii) 하기 중에서 최소한 한 가지를 갖는 서열 번호: 1001의 아미노산 서열을 포함할 수 있다:
(A) 유사체는 위치 i와 i+4에서 아미노산의 측쇄 사이에 또는 위치 j와 j+3에서 아미노산의 측쇄 사이에 락탐 가교를 포함하고, 여기서 i는 12, 13, 16, 17, 20 또는 24이고, 그리고 여기서 j는 17이다;
(B) 유사체의 위치 16, 20, 21, 그리고 24에서 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개, 또는 모두가 α,α-이중치환된 아미노산으로 치환된다; 또는
(C) 유사체는 하기를 포함한다: (i) 위치 16에서 Ser의 화학식 IV의 아미노산으로의 아미노산 치환:
Figure pct00025

[화학식 IV],
여기서 n은 1 내지 7이고, 여기서 R1과 R2는 각각 독립적으로, H, C1-C18 알킬, (C1-C18 알킬)OH, (C1-C18 알킬)NH2, (C1-C18 알킬)SH, (C0-C4 알킬)(C3-C6)시클로알킬, (C0-C4 알킬)(C2-C5 헤테로환상), (C0-C4 알킬)(C6-C10 아릴)R7, 그리고 (C1-C4 알킬)(C3-C9 헤테로아릴)로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 R7은 H 또는 OH이고, 그리고 화학식 IV의 아미노산의 측쇄는 유리 아미노 기를 포함하고; 그리고 (ii) 위치 20에서 Gln의 알파, 알파-이중치환된 아미노산으로의 아미노산 치환,
그리고 (iv) 6개까지의 추가적인 아미노산 변형.
이들 구체예의 유사체의 알파, 알파-이중치환된 아미노산은 아미노 이소-부티르산 (Aib), 메틸, 에틸, 프로필, 그리고 n-부틸에서 선택되는 동일하거나 상이한 기, 또는 시클로옥탄 또는 시클로헵탄으로 이중치환된 아미노산 (가령, 1-아미노시클로옥탄-1-카르복실산)이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 임의의 알파, 알파-이중치환된 아미노산일 수 있다. 일정한 구체예에서, 알파, 알파-이중치환된 아미노산은 Aib이다.
이들 구체예의 유사체의 화학식 IV의 아미노산은 임의의 아미노산, 예를 들면, 화학식 IV의 아미노산일 수 있고, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 16이다. 일정한 구체예에서, n은 2, 3, 4, 또는 5이고, 이러한 경우에, 아미노산은 각각, Dab, Orn, Lys, 또는 homoLys이다.
이들 예시적인 구체예에서, GIP 작동약 활성을 공여하는 위치 1에서 아미노산 변형은 이미다졸 측쇄가 없는 아미노산으로 His의 치환일 수 있다. 위치 1에서 아미노산 변형은 예로써, His의 큰 방향족 아미노산으로의 치환일 수 있다. 일부 구체예에서, 큰 방향족 아미노산은 예로써, Tyr을 비롯한 본 명세서에서 기술된 것들 중에서 한 가지이다.
또한, 이들 예시적인 구체예에 대하여, 위치 27, 28과 29 중에서 1개, 2개, 또는 모두에서 아미노산 변형은 본 명세서에서 기술된 이들 위치에서 임의의 변형일 수 있다. 가령, 위치 27에서 Met는 큰 지방족 아미노산, 임의적으로 Leu로 치환될 수 있고, 위치 28에서 Asn은 작은 지방족 아미노산, 임의적으로 Ala로 치환될 수 있고, 및/또는 위치 29에서 Thr은 작은 지방족 아미노산, 임의적으로 Gly로 치환될 수 있다. 대안으로, 유사체는 위치 27 및/또는 28에서 이런 아미노산 변형을 포함할 수 있다.
이들 예시적인 구체예의 유사체는 1-9개 또는 1-6개의 추가적인 아미노산 변형, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 추가적인 아미노산 변형, 예를 들면, GIP, GLP-1과 글루카곤 수용체 중에서 하나에서 활성을 증가 또는 감소시키거나, 용해성을 향상시키거나, 작용의 지속 기간 또는 순환 동안 반감기를 향상시키거나, 작용의 개시를 지연시키거나, 또는 안정성을 증가시키는 본 명세서에서 기술된 임의의 변형을 더욱 포함할 수 있다. 유사체는 예로써, 위치 12에서 아미노산 변형, 임의적으로 Ile로 치환, 및/또는 위치 17과 18에서 아미노산 변형, 임의적으로 위치 17에서 Q와 위치 18에서 A로 치환, 및/또는 C-말단에 GPSSGAPPPS (서열 번호: 1095) 또는 XGPSSGAPPPS (서열 번호: 1096), 또는 서열 번호: 1095 또는 1096에 비하여 하나 이상의 보존성 치환을 내포하는 서열의 부가를 더욱 포함할 수 있다. 유사체는 하기 변형 중에서 하나 이상을 포함할 수 있다:
(i) 위치 2에서 Ser이 D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-메틸-Ser, Aib, Val, 또는 α-아미노-N-부티르산으로 치환됨;
(ii) 위치 10에서 Tyr이 Trp, Lys, Orn, Glu, Phe, 또는 Val로 치환됨;
(iii) 위치 10에서 Lys에 아실 기의 연쇄;
(iv) 위치 12에서 Lys가 Arg로 치환됨;
(v) 위치 16에서 Ser이 Glu, Gln, 호모글루타민산, 호모시스테산, Thr, Gly, Lys 또는 Aib로 치환됨;
(vi) 위치 17에서 Arg가 Gln로 치환됨;
(vii) 위치 18에서 Arg가 Ala, Ser, Thr, 또는 Gly로 치환됨;
(viii) 위치 20에서 Gln이 Ala, Ser, Thr, Lys, 시트룰린, Arg, Orn, 또는 Aib로 치환됨;
(ix) 위치 21에서 Asp가 Glu, 호모글루타민산, 호모시스테산으로 치환됨;
(x) 위치 23에서 Val이 Ile로 치환됨;
(xi) 위치 24에서 Gln이 Asn, Ala, Ser, Thr, 또는 Aib로 치환됨; 그리고
(xii) 위치 2, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28과 29 중에서 하나에서 보존성 치환.
일부 구체예에서, 유사체는 변형 (i) 내지 (xii)의 조합을 포함한다. 대안으로 또는 부가적으로, 유사체는 위치 3에서 아미노산 변형 (가령, Gln의 Glu로의 아미노산 치환)을 포함할 수 있고, 여기서 상기 유사체는 글루카곤 수용체에서 글루카곤의 활성의 1% 미만을 갖는다. 대안으로 또는 부가적으로, 유사체는 위치 7에서 아미노산 변형 (가령, 히드록실 기가 없는 아미노산, 예를 들면, Abu 또는 Ile로 Thr의 아미노산 치환), 27개 또는 28개 아미노산 펩티드를 산출하는 위치 27 또는 28에서 아미노산의 C-말단에 아미노산(들)의 결실, EH는 이들의 조합을 포함할 수 있고, 여기서 상기 유사체는 GLP-1 수용체에서 GLP-1의 활성의 약 10% 미만을 갖는다.
이들 예시적인 구체예에 대하여, 유사체는 친수성 모이어티에 공유 연결될 수 있다. 일부 구체예에서, 유사체는 아미노산 위치 16, 17, 20, 21, 24, 29, 40, 또는 C-말단 중에서 하나에서 친수성 모이어티에 공유 연결된다. 일정한 구체예에서, 유사체는 C-말단 확장 (가령, 서열 번호: 1095의 아미노산 서열) 및 친수성 모이어티를 포함하는 아미노산의 부가를 포함하고, 따라서 친수성 모이어티는 위치 40에서 유사체에 공유 연결된다.
일부 구체예에서, 친수성 모이어티는 유사체의 Lys, Cys, Orn, 호모시스테인, 또는 아세틸-페닐알라닌에 공유 연결된다. Lys, Cys, Orn, 호모시스테인, 또는 아세틸-페닐알라닌은 글루카곤 서열 (서열 번호: 1001)에 고유한 아미노산이거나, 또는 서열 번호: 1001의 고유 아미노산을 대체하는 아미노산일 수 있다. 친수성 모이어티가 Cys에 부착되는 일부 구체예에서, 친수성 모이어티에 연쇄는 하기 구조를 포함할 수 있다:
Figure pct00026
.
친수성 모이어티를 포함하는 유사체에 대하여, 친수성 모이어티는 본 명세서에서 기술된 것들 중에서 한 가지일 수 있다. 예로써, 섹션 "친수성 모이어티의 연쇄" 하에 교시를 참고한다. 일부 구체예에서, 친수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이다. 일정한 구체예에서, PEG는 약 1,000 달톤 내지 약 40,000 달톤, 예를 들면, 약 20,000 달톤 내지 약 40,000 달톤의 분자량을 갖는다.
유사체가 아실 또는 알킬 기를 포함하는 이들 예시적인 구체예에서, 상기 기는 스페이서를 거쳐 유사체에 부착되고, 상기 스페이서는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 임의의 스페이서일 수 있다. 스페이서는 예로써, 3개 내지 10개의 원자 길이를 갖고, 그리고 예로써, 아미노산 (가령, 6-아미노 헥사노익산, 본 명세서에서 기술된 임의의 아미노산), 디펩티드 (가령, Ala-Ala, βAla-βAla, Leu-Leu, Pro-Pro, γ-Glu-γ-Glu), 트리펩티드, 또는 친수성 또는 소수성 이중기능성 스페이서일 수 있다. 일정한 양상에서, 스페이서 및 아실 또는 알킬 기의 총 길이는 약 14개 내지 약 28개의 원자이다. 일부 구체예에서, 아미노산 스페이서는 γ-Glu가 아니다. 일부 구체예에서, 디펩티드 스페이서는 γ-Glu-γ-Glu가 아니다.
아실 또는 알킬 기는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 임의의 아실 또는 알킬 기, 예를 들면, 자연 발생 아미노산에 비-고유인 아실 또는 알킬 기이다. 일부 구체예에서, 아실 또는 알킬 기는 C4 내지 C30 지방 아실 기, 예를 들면, C10 지방 아실 또는 알킬 기, C12 지방 아실 또는 알킬 기, C14 지방 아실 또는 알킬 기, C16 지방 아실 또는 알킬 기, C18 지방 아실 또는 알킬 기, C20 아실 또는 알킬 기, 또는 C22 아실 또는 알킬 기, 또는 C4 내지 C30 알킬 기이다. 특정 구체예에서, 아실 기는 C12 내지 C18 지방 아실 기 (가령, C14 또는 C16 지방 아실 기)이다.
일부 구체예에서, 유사체의 위치 29에서 아미노산의 C-말단에 약 1개 내지 약 21개의 아미노산의 확장은 GPSSGAPPPS (서열 번호: 1095) 또는 XGPSSGAPPPS (서열 번호: 1096)의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X는 임의의 아미노산, 또는 GPSSGAPPPK (서열 번호: 1170) 또는 XGPSSGAPPPK (서열 번호: 1171) 또는 XGPSSGAPPPSK (서열 번호: 1172)이고, 여기서 X는 Gly 또는 작은 지방족 또는 비-극성 또는 약한 극성 아미노산이다. 일부 구체예에서, 약 1개 내지 약 21개의 아미노산은 서열 번호: 1095, 1096, 1170, 1171 또는 1172에 비하여 하나 이상의 보존성 치환을 내포하는 서열을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 C-말단 확장된 유사체의 위치 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43에 위치한다. 일정한 구체예에서, 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 C-말단 확장된 유사체의 위치 40에 위치한다.
GIP 작동약은 임의적으로, GIP 작동약 활성을 유지하는 1, 2, 3, 4, 또는 5개까지의 추가 변형을 갖는 아미노산 서열, 예를 들면, 서열 번호: 1005-1094 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드일 수 있다. 일정한 구체예에서, GIP 작동약은 서열 번호: 1099-1275 중에서 한 가지의 아미노산을 포함한다.
부류 3 글루카곤 관련된 펩티드
일정한 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드이고, 이것은 본 명세서에서 및 국제 특허 출원 공개공보 번호 제2009/155258호, 제WO 2008/101017호, 그리고 미국 가출원 번호 제61/288,248호 (2009년 12월 18일자 제출됨)에서 기술되고, 이들의 내용은 전체로서 참고문헌으로 편입된다.
부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 관련하여 하기 섹션에서 언급된 생물학적 서열 (서열 번호: 1-656) 중에서 일부는 국제 특허 출원 공개공보 번호 제WO 2009/155258호에서 서열 번호: 1-656에 상응한다.
활성
부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 증가된 활성을 나타내고, 그리고 추가의 구체예에서, 증강된 생물물리학적 안정성 및/또는 수성 용해성을 나타내는 펩티드일 수 있다. 이에 더하여, 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1 수용체와 대비하여 글루카곤 수용체에 대한 고유 글루카곤의 선택성을 상실하고, 따라서 이들 두 수용체의 공동-작동약을 대표한다. 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드 내에서 선별된 아미노산 변형은 글루카곤 수용체와 대비하여 GLP-1 수용체에서 상기 펩티드의 상대적 활성을 제어할 수 있다. 따라서 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1 수용체와 대비하여 글루카곤 수용체에서 더욱 높은 활성을 갖는 글루카곤/GLP-1 공동-작동약, 양쪽 수용체에서 거의 동등한 활성을 갖는 글루카곤/GLP-1 공동-작동약, 또는 글루카곤 수용체와 대비하여 GLP-1 수용체에서 더욱 높은 활성을 갖는 글루카곤/GLP-1 공동-작동약일 수 있다. 공동-작동약의 후자 범주는 글루카곤 수용체에서 활성을 거의 또는 전혀 나타내지 않지만, 고유 GLP-1와 동등한 또는 이보다 우수한 효능으로 GLP-1 수용체를 활성하시키는 능력을 유지하도록 조작될 수 있다. 이들 공동-작동약은 또한, 증강된 생물물리학적 안정성 및/또는 수성 용해성을 공여하는 변형을 포함할 수 있다.
부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 변형은 고유 GLP-1에 비하여 GLP-1 수용체에서 최소한 약 1% (최소한 약 1.5%, 2%, 5%, 7%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 100%, 125%, 150%, 175% 포함) 내지 약 200% 이상 활성, 그리고 고유 글루카곤에 비하여 글루카곤 수용체에서 최소한 약 1% (약 1.5%, 2%, 5%, 7%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 250%, 300%, 350%, 400%, 450% 포함) 내지 약 500% 이상 활성을 갖는 글루카곤 펩티드를 생산하도록 만들어질 수 있다. 고유 글루카곤의 아미노산 서열은 서열 번호: 1이고, GLP-1(7-36)아미드의 아미노산 서열은 서열 번호: 52이고, 그리고 GLP-1(7-37)산의 아미노산 서열은 서열 번호: 50이다. 예시적인 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 최소한 10% 및 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 50%, 또는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 최소한 40% 및 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 40%, 또는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 최소한 60% 및 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 60%를 나타낼 수 있다.
GLP-1 수용체와 대비하여 글루카곤 수용체에 대한 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 선택성은 글루카곤/GLP-1 활성의 상대적 비율 (고유 GLP-1에 비하여 GLP-1 수용체에서 펩티드의 활성에 의해 나눗셈된, 고유 글루카곤에 비하여 글루카곤 수용체에서 펩티드의 활성)로서 기술될 수 있다. 가령, 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 60% 및 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 60%를 나타내는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤/GLP-1 활성의 1:1 비율을 갖는다. 글루카곤/GLP-1 활성의 예시적인 비율은 약 1:1, 1.5:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 또는 10:1, 또는 약 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 또는 1:1.5를 포함한다. 실례로써, 10:1의 글루카곤/GLP-1 활성 비율은 GLP-1 수용체와 대비하여 글루카곤 수용체에 대한 10-배 선택성을 지시한다. 유사하게, 10:1의 GLP-1/글루카곤 활성 비율은 글루카곤 수용체와 대비하여 GLP-1 수용체에 대한 10-배 선택성을 지시한다.
일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1 수용체에서 GLP-1의 활성의 최소한 20%를 나타내면서, 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 10% 이하, 예를 들면, 약 1-10%, 또는 약 0.1-10%, 또는 약 0.1% 초과, 하지만 약 10% 미만을 갖는다. 가령, 본 명세서에서 기술된 예시적인 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1 수용체에서 GLP-1의 활성을 최소한 20%를 나타내지만, 고유 글루카곤의 활성의 약 0.5%, 약 1% 또는 약 7%를 갖는다.
부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체, 또는 GLP-1 수용체, 또는 둘 모두에서 증가된 또는 감소된 활성을 갖는 글루카곤 펩티드일 수 있다. 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 GLP-1 수용체와 대비하여 글루카곤 수용체에 대한 변경된 선택성을 갖는 글루카곤 펩티드일 수 있다.
따라서 본 명세서에서 개시된 바와 같이, 향상된 용해성 및/또는 안정성을 또한 나타내는 높은 효능 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드가 제시된다. 예시적인 높은 효능 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 최소한 약 200%을 나타내고, 그리고 임의적으로, 최소한 1 mg/mL의 농도에서 6과 8 사이, 6과 9 사이, 또는 7과 9 사이의 pH (가령, pH 7)에서 가용성이고, 그리고 임의적으로, 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 95%를 유지한다 (가령, 본래 펩티드의 5% 이하가 분해되거나 절단된다). 또 다른 실례로써, 예시적인 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤과 GLP-1 수용체 둘 모두에서 약 40% 초과 또는 약 60% 초과의 활성 (약 1:3 내지 3:1, 또는 약 1:2 내지 2:1의 비율에서)을 나타내고, 임의적으로 최소한 1 mg/mL의 농도에서 6과 8 사이, 6과 9 사이, 또는 7과 9 사이의 pH (가령, pH 7)에서 가용성이고, 그리고 임의적으로, 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 95%를 유지한다. 또 다른 예시적인 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 175% 이상 및 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 약 20% 이하를 나타내고, 임의적으로 최소한 1 mg/mL의 농도에서 6과 8 사이, 6과 9 사이, 또는 7과 9 사이의 pH (가령, pH 7)에서 가용성이고, 그리고 임의적으로, 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 95%를 유지한다. 또 다른 예시적인 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 10% 이하 및 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 약 20%를 나타내고, 임의적으로 최소한 1 mg/mL의 농도에서 6과 8 사이, 6과 9 사이, 또는 7과 9 사이의 pH (가령, pH 7)에서 가용성이고, 그리고 임의적으로, 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 95%를 유지한다. 또 다른 예시적인 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 10% 이하, 하지만 0.1%, 0.5% 또는 1% 초과 및 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 이상을 나타내고, 임의적으로 최소한 1 mg/mL의 농도에서 6과 8 사이, 6과 9 사이, 또는 7과 9 사이의 pH (가령, pH 7)에서 가용성이고, 그리고 임의적으로, 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 95%를 유지한다. 일부 구체예에서, 이런 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 고유 글루카곤 내에 상응하는 위치에서 자연 발생 아미노산 중에서 최소한 22, 23, 24, 25, 26, 27 또는 28개를 유지한다 (가령, 자연 발생 글루카곤에 비하여 1-7개, 1-5개 또는 1-3개의 변형을 갖는다).
글루카곤 활성에 영향을 주는 변형
글루카곤 수용체에서 증가된 활성은 고유 글루카곤 (서열 번호: 1)의 위치 16에서 아미노산 변형에 의해 제공된다. 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에서 펩티드의 효능을 증강시키기 위해 야생형 펩티드 His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser- Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu- Met-Asn-Thr (서열 번호: 1)에 비하여 변형된 글루카곤 작동약이다. 고유 글루카곤 (서열 번호: 1)의 위치 16에서 정상적으로 발생하는 세린은 검증된 시험관내 모델 분석평가에서 cAMP 합성을 자극하는 능력의 관점에서, 글루카곤의 효능을 증가시키기 위해 선별된 산성 아미노산으로 치환될 수 있다 (실시예 2 참고). 더욱 구체적으로, 이러한 치환은 글루카곤 수용체에서 유사체의 효능을 최소한 2-배, 4-배, 5-배, 그리고 10-배 그 이상까지 증강시킨다. 이러한 치환은 또한, 고유 글루카곤에 비하여 GLP-1 수용체에서 유사체의 활성을 최소한 5-배, 10-배, 또는 15-배 증강시키지만, 선택성은 GLP-1 수용체에 비하여 글루카곤 수용체에 대해 지속된다.
무제한적 실례로써, 이런 증강된 효능은 위치 16에서 자연 발생 세린을 글루타민산 또는 4개 원자 길이의 측쇄를 갖는 다른 음으로 하전된 아미노산으로, 또는 대안으로, 글루타민, 호모글루타민산, 또는 호모시스테산, 또는 최소한 하나의 헤테로원자 (가령, N, O, S, P)를 내포하는 약 4 (또는 3-5)개 원자 측쇄 길이의 측쇄를 갖는 하전된 아미노산 중에서 한 가지로 치환함으로써 제공될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 고유 글루카곤의 위치 16에서 세린 잔기는 글루타민산, 글루타민, 호모글루타민산, 호모시스테산, 트레오닌, 또는 글리신으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 일부 구체예에 따라서, 고유 글루카곤의 위치 16에서 세린 잔기는 글루타민산, 글루타민, 호모글루타민산과 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환되고, 그리고 일부 구체예에서, 세린 잔기는 글루타민산으로 치환된다.
일부 구체예에서, 증강된 효능 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 2, 서열 번호: 3, 서열 번호: 4, 서열 번호: 5, 서열 번호: 6, 서열 번호: 7, 또는 서열 번호: 5의 글루카곤 작동약 유사체의 펩티드를 포함한다. 일부 구체예에 따라서, 야생형 글루카곤에 비하여 글루카곤 수용체에서 증강된 효능을 갖는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 7, 서열 번호: 8, 서열 번호: 9 또는 서열 번호: 10의 서열을 포함하고, 여기서 상기 글루카곤 펩티드는 GLP-1 수용체에 비하여 글루카곤 수용체에 대한 선택성을 유지한다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에 대해 증강된 특이성을 갖는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 8, 서열 번호: 9, 서열 번호: 10 또는 이들의 글루카곤 작동약 유사체의 펩티드를 포함하고, 여기서 카르복시 말단 아미노산은 고유 카르복실산 기를 유지한다. 일부 구체예에 따라서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-Arg- Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-COOH (서열 번호: 10)의 서열을 포함하고, 여기서 상기 펩티드는 실시예 2의 시험관내 cAMP 분석평가에 의한 측정에서, 고유 글루카곤에 비하여 글루카곤 수용체에서 거의 5배 증강된 효능을 나타낸다.
글루카곤 수용체 활성은 위치 3에서 아미노산 변형, 예를 들면, 위치 3에서 자연 발생 글루타민의 치환에 의해 감소되거나, 지속되거나, 또는 증강될 수 있다. 일부 구체예에서, 위치 3에서 산성, 염기성, 또는 소수성 아미노산 (글루타민산, 오르니틴, 노르류신)으로 아미노산의 치환은 글루카곤 수용체 활성을 실질적으로 감소시키거나 파괴하는 것으로 밝혀졌다. 예로써, 글루타민산, 오르니틴, 또는 노르류신으로 치환되는 유사체는 GLP-1 수용체에서 GLP-1의 활성의 최소한 20%를 나타내지만, 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 10% 이하, 예를 들면, 약 1-10%, 또는 약 0.1-10%, 또는 약 0.1% 초과, 하지만 약 10% 미만을 갖는다. 가령, 본 명세서에서 기술된 예시적인 유사체는 GLP-1 수용체에서 GLP-1의 활성의 최소한 20%를 나타내면서, 고유 글루카곤의 활성의 약 0.5%, 약 1% 또는 약 7%를 갖는다. 특히, 본 명세서에서 기술된 글루카곤 유사체, 글루카곤 작동약 유사체, 글루카곤 공동-작동약, 그리고 글루카곤/GLP-1 공동-작동약 분자를 비롯한 임의의 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 수용체에 대한 선택성과 비교하여 GLP-1 수용체에 대한 높은 선택성, 예를 들면, 10배 선택성을 갖는 펩티드를 생산하기 위해, 위치 3에서 변형, 예를 들면, Gln의 Glu로의 치환을 내포하도록 변형될 수 있다.
다른 구체예에서, 임의의 부류 3 글루카곤 펩티드의 위치 3에서 자연 발생 글루타민은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 글루카곤 수용체에서 활성의 실질적인 상실 없이, 그리고 일부 경우에, 글루카곤 수용체 활성이 증강되도록 글루타민 유사체로 치환될 수 있다. 특정 구체예에서, 위치 3에서 아미노산은 Dab(Ac)로 치환된다. 가령, 글루카곤 작동약은 서열 번호: 595, 서열 번호: 601, 서열 번호: 603, 서열 번호: 604, 서열 번호: 605, 그리고 서열 번호: 606의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
위치 2에서 변형 (가령, 위치 2에서 Aib) 및 일부 경우에, 위치 1에서 변형은 글루카곤 활성을 감소시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다. 글루카곤 활성에서 이러한 감소는 예로써, 본 명세서에서 기술된 수단, 예를 들면, 위치 "i"와 "i+4", 예를 들면, 12와 16, 16과 20, 또는 20과 24에서 아미노산의 측쇄 사이에 공유 결합을 통해 글루카곤의 C-말단 부분에서 알파-나선을 안정시킴으로써 복원될 수 있다. 일부 구체예에서, 이러한 공유 결합은 위치 16에서 글루타민산 및 위치 20에서 리신 사이에 락탐 가교이다. 일부 구체예에서, 이러한 공유 결합은 락탐 가교가 아닌 분자내 가교이다. 가령, 적절한 공유 결합 방법은 올레핀 복분해, 란티오닌-기초된 고리화, 이황화 가교 또는 변형된 황-내포 가교 형성, α,ω-디아미노알칸 테더의 이용, 금속-원자 가교의 형성, 그리고 다른 펩티드 고리화 수단 중에서 한 가지 이상을 포함한다.
GLP-1 활성에 영향을 주는 변형
GLP-1 수용체에서 증강된 활성은 C-말단 아미노산의 카르복실산을 전하-중성 기, 예를 들면, 아미드 또는 에스테르로 대체함으로써 제공된다. 일부 구체예에서, 이들 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 20의 서열을 포함하고, 여기서 카르복시 말단 아미노산은 고유 아미노산에서 발견되는 카르복실산 기 대신에 아미드 기를 갖는다. 이들 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤과 GLP-1 수용체 둘 모두에서 강한 활성을 갖고, 따라서 양쪽 수용체에서 공동-작동약으로서 기능한다. 일부 구체예에 따라서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤과 GLP-1 수용체 공동-작동약이고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 20의 서열을 포함하고, 여기서 위치 28에서 아미노산은 Asn 또는 Lys이고, 그리고 위치 29에서 아미노산은 Thr-아미드이다.
GLP-1 수용체에서 증가된 활성은 글루카곤의 C-말단 부분 (가령, 잔기 12-29 주변)에서 알파 나선을 안정시키는 변형에 의해 제공된다.
일부 구체예에서, 이런 변형은 3개의 개재성 아미노산에 의해 분리되는 2개의 아미노산 (즉, 위치 "i"에서 아미노산 및 위치 "i+4"에서 아미노산, 여기서 i는 12 내지 25 사이에 임의의 정수), 2개의 개재성 아미노산에 의해 분리되는 2개의 아미노산 (즉, 위치 "j"에서 아미노산 및 위치 "j+3"에서 아미노산, 여기서 j는 12 내지 27 사이에 임의의 정수), 또는 6개의 개재성 아미노산에 의해 분리되는 2개의 아미노산 (즉, 위치 "k"에서 아미노산 및 위치 "k+7"에서 아미노산, 여기서 k는 12 내지 22 사이에 정수)의 측쇄 사이에 분자내 가교의 형성을 가능하게 한다. 예시적인 구체예에서, 가교 또는 링커는 약 8개 (또는 약 7-9개)의 원자 길이를 갖고 위치 12와 16에서, 또는 위치 16과 20에서, 또는 위치 20와 24에서, 또는 위치 24와 28에서 아미노산의 측쇄 사이에 형성된다. 이들 두 아미노산 측쇄는 비-공유 결합, 예를 들면, 수소-결합, 이온 상호작용, 예를 들면, 염 가교의 형성, 또는 공유 결합을 통해 서로 연결될 수 있다.
일부 구체예에 따라서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약 활성을 나타내고, 그리고 서열 번호: 11, 47, 48과 49로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 이들 측쇄는 서로 공유 결합되고, 그리고 일부 구체예에서, 이들 두 아미노산은 서로 결합되어 락탐 고리를 형성한다.
일부 구체예에 따라서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 45를 포함하고, 여기서 아미노산 쌍 12와 16, 16과 20, 20과 24 또는 24와 28로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 쌍의 측쇄 사이에 최소한 하나의 락탐 고리가 형성된다. 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 20의 글루카곤 펩티드 유사체를 포함하고, 여기서 상기 펩티드는 아미노산 위치 12와 16 사이에 또는 아미노산 위치 16과 20 사이에 형성되는 분자내 락탐 가교를 포함한다. 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 20의 서열을 포함하고, 여기서 아미노산 위치 12와 16 사이에, 아미노산 위치 16과 20 사이에, 또는 아미노산 위치 20과 24 사이에 분자내 락탐 가교가 형성되고, 그리고 위치 29에서 아미노산이 글리신이고, 여기서 서열 번호: 29의 서열이 서열 번호: 20의 C-말단 아미노산에 연결된다. 추가의 구체예에서, 위치 28에서 아미노산은 아스파르트산이다.
일부 특정한 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 C-말단 부분에서 알파 나선 구조의 안정화는 락탐 가교 이외의 분자내 가교의 형성을 통해 달성된다. 가령, 적절한 공유 결합 방법에는 올레핀 복분해, 란티오닌-기초된 고리화, 이황화 가교 또는 변형된 황-내포 가교 형성, α,ω-디아미노알칸 테더의 이용, 금속-원자 가교의 형성, 그리고 알파 나선을 안정시키는데 이용되는 다른 펩티드 고리화 수단 중에서 한 가지 이상이 포함된다.
게다가, GLP-1 수용체에서 증강된 활성은 원하는 활성을 유지하는 위치에서 하나 이상의 α,α-이중치환된 아미노산의 의도적 도입을 통해 글루카곤 펩티드의 C-말단 부분 (아미노산 12-29 주변)에서 알파-나선 구조를 안정시킴으로써 달성될 수 있다. 이런 펩티드는 본 발명에서, 분자내 가교가 없는 펩티드로서 간주될 수 있다. 일부 양상에서, 알파-나선의 안정화는 분자내 가교, 예를 들면, 염 가교 또는 공유 결합의 도입 없이 이러한 방식으로 달성될 수 있다. 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드의 위치 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24 또는 29 중에서 1개, 2개, 3개, 4개 이상이 α,α-이중치환된 아미노산으로 치환된다. 가령, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 위치 16에서 아미노 이소-부티르산 (Aib)으로의 치환은 염 가교 또는 락탐의 부재에서 GLP-1 활성을 증강시킨다. 일부 구체예에서, 위치 16, 20, 21 또는 24 중에서 1개, 2개, 3개 이상이 Aib로 치환된다.
GLP-1 수용체에서 증강된 활성은 위치 20에서 아미노산 변형에 의해 달성될 수 있다. 일부 구체예에서, 위치 20에서 글루타민은 하전되거나 수소-결합 능력을 갖는 최소한 약 5개 (또는 약 4-6개)의 원자 길이의 측쇄를 갖는 다른 친수성 아미노산, 예를 들면, 리신, 시트룰린, 아르기닌, 또는 오르니틴으로 대체된다.
GLP-1 수용체에서 증가된 활성은 서열 번호: 26의 C-말단 확장을 포함하는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에서 증명된다. 서열 번호: 26을 포함하는 이런 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에서 GLP-1 활성은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 위치 18, 28 또는 29에서, 또는 위치 18과 29에서 아미노산을 변형함으로써 더욱 증가될 수 있다.
GLP-1 효능에서 더욱 온건한 증가는 위치 10에서 아미노산을 Trp가 되도록 변형함으로써 달성될 수 있다.
GLP-1 수용체 활성을 증가시키는 변형의 조합은 단독으로 취해진 임의의 이런 변형보다 더욱 높은 GLP-1 활성을 제공할 수 있다. 가령, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 임의적으로, 위치 16과 20에서 아미노산 사이에 공유 결합과 함께, 위치 16에서, 위치 20에서, 그리고 C-말단 카르복실산 기에서 변형을 포함할 수 있고; 위치 16에서 및 C-말단 카르복실산 기에서 변형을 포함할 수 있고; 임의적으로, 위치 16과 20에서 아미노산 사이에 공유 결합과 함께, 위치 16과 20에서 변형을 포함할 수 있고; 또는 위치 20에서 및 C-말단 카르복실산 기에서 변형을 포함할 수 있고; 임의적으로, 단서로써 위치 12에서 아미노산은 Arg가 아니고; 또는 임의적으로, 단서로써 위치 9에서 아미노산은 Glu가 아니다.
용해성에 영향을 주는 변형
친수성 모이어티의 부가
부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 고유 글루카곤에 비하여 높은 생물학적 활성을 유지하면서, 수성 용액에서 생리학적 pH에서 펩티드의 용해성과 안정성이 향상되도록 더욱 변형될 수 있다. 본 명세서에서 논의된 바와 같은 친수성 모이어티는 본 명세서에서 더욱 논의된 바와 같이, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 부착될 수 있다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 9 또는 서열 번호: 10을 포함하는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 위치 17, 21, 그리고 24에서 친수성 기의 도입은 생리학적 pH를 갖는 용액에서 높은 효능 글루카곤 유사체의 용해성과 안정성을 향상시킬 것으로 기대된다. 이런 기의 도입은 또한, 예로써 순환 동안 연장된 반감기에 의한 측정에서 작용의 지속 기간을 증가시킨다.
일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 서열 번호: 17, 서열 번호: 18 및 서열 번호: 19로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하고, 여기서 상기 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 위치 16, 17, 21 또는 24 중에서 하나에서 아미노산 잔기의 측쇄는 약 500 내지 약 40,000 달톤의 범위에서 선택되는 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 500 내지 약 5,000 달톤의 범위에서 선택되는 분자량을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 10,000 내지 약 20,000 달톤의 분자량을 갖는다. 또 다른 예시적인 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 20,000 내지 약 40,000 달톤의 분자량을 갖는다.
적절한 친수성 모이어티는 본 명세서에서 기술된 친수성 모이어티, PEG의 호모- 또는 공중합체, 그리고 PEG의 모노메틸-치환된 중합체 (mPEG)를 비롯하여, 당분야에서 공지된 임의의 물 용해성 중합체를 포함한다. 일부 구체예에 따라서, 친수성 기는 폴리에틸렌 (PEG) 사슬을 포함한다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 6 또는 서열 번호: 7의 서열을 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 위치 21과 24에 존재하는 아미노산의 측쇄에 공유 연결되고, 그리고 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 카르복시 말단 아미노산은 카르복실산 기를 갖는다. 일부 구체예에 따라서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 500 내지 약 10,000 달톤의 범위에서 선택되는 평균 분자량을 갖는다.
일부 구체예에 따라서, 페길화되는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 공유 결합된 2개 이상의 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 포함하고, 여기서 글루카곤 사슬의 총 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다. 일부 구체예에서, 페길화되는 글루카곤 작동약은 서열 번호: 5 또는 서열 번호: 5의 글루카곤 작동약 유사체로 구성되는 펩티드를 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 위치 21과 위치 24에서 아미노산 잔기에 공유 연결되고, 그리고 여기서 이들 두 PEG 사슬의 통합 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다.
하전된 C-말단
서열 번호: 20을 포함하는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 용해성은 예로써, 서열 번호: 20의 글루카곤 펩티드의 C-말단 부분에, 바람직하게는 위치 27의 C-말단 위치에서 1개, 2개, 3개 이상의 하전된 아미노산(들)을 도입함으로써 더욱 향상될 수 있다. 이런 하전된 아미노산은 예로써, 위치 28 또는 29에서 고유 아미노산을 하전된 아미노산 치환함으로써, 또는 대안으로, 예로써 위치 27, 28 또는 29 뒤에 하전된 아미노산을 부가함으로써 도입될 수 있다. 예시적인 구체예에서, 이들 하전된 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개 또는 모두 음으로 하전된다. 추가적인 변형, 예를 들면, 보존성 치환이 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 만들어질 수 있는데, 이것은 상기 펩티드가 글루카곤 활성을 여전히 유지할 수 있도록 한다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 20의 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 유사체가 제시되는데, 여기서 상기 유사체는 위치 17-26에서 1개 내지 2개의 아미노산 치환에 의해 서열 번호: 20과 상이하고, 그리고 일부 구체예에서, 상기 유사체는 위치 20에서 아미노산 치환에 의해 서열 번호: 20의 펩티드와 상이하다.
아실화/알킬화
일부 구체예에 따라서, 글루카곤 펩티드는 아실 또는 알킬 기, 예를 들면, C4 내지 C30 아실 또는 알킬 기를 포함하도록 변형된다. 일부 양상에서, 아실 기 또는 알킬 기는 아미노산에서 자연 발생하지 않는다. 특정한 양상에서, 아실 또는 알킬 기는 임의의 자연 발생 아미노산에 비-고유이다. 아실화 또는 알킬화는 순환 동안 반감기를 증가시키고 및/또는 작용의 개시를 지연시키고 및/또는 작용의 지속 기간을 연장시키고 및/또는 프로테아제, 예를 들면, DPP-IV에 대한 내성을 향상시킨다. 글루카곤 수용체와 GLP-1 수용체에서 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 활성은 아실화 후 실질적으로 증강되진 않지만, 지속된다. 게다가, 아실화된 유사체의 효능은 실질적으로 증가되진 않지만, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 비아실화된 이형에 필적한다.
일부 구체예에서, 본 발명에서는 글루카곤 펩티드의 위치 10에서 아미노산에 공유 연결된 아실 기 또는 알킬 기를 포함하도록 변형된 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드를 제시한다. 글루카곤 펩티드는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 위치 10에서 아미노산 및 아실 기 또는 알킬 기 사이에 스페이서를 더욱 포함할 수 있다. 임의의 전술한 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 2개의 아실 기 또는 2개의 알킬 기, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
본 발명의 특정한 양상에서, 아실화된 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 534-544와 546-549 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함한다.
C-말단 절두
일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤과 GLP-1 수용체에서 활성 및/또는 효능에 영향을 주지 않으면서 글루카곤 펩티드 (즉, 위치 29 및/또는 28)의 C-말단의 1개 또는 2개의 아미노산의 절두 또는 결실에 의해 더욱 변형된다. 이와 관련하여, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 임의적으로, 본 명세서에서 기술된 하나 이상의 변형과 함께, 고유 글루카곤 펩티드 (서열 번호: 1)의 아미노산 1-27 또는 1-28을 포함할 수 있다.
일부 구체예에서, 절두된 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 550 또는 서열 번호: 551을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 절두된 글루카곤 작동약 펩티드는 서열 번호: 552 또는 서열 번호: 553을 포함한다.
C-말단 확장
일부 구체예에 따라서, 본 명세서에서 개시된 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 펩티드의 카르복시 말단에 두 번째 펩티드, 예를 들면, 서열 번호: 26, 서열 번호: 27 또는 서열 번호: 28의 부가에 의해 변형된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 서열 번호: 17, 서열 번호: 18, 서열 번호: 19, 서열 번호: 66, 서열 번호: 67, 서열 번호: 68, 그리고 서열 번호: 69로 구성된 군에서 선택되는 서열을 갖는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 두 번째 펩티드에 펩티드 결합을 통해 공유 결합되고, 여기서 두 번째 펩티드는 서열 번호: 26, 서열 번호: 27 및 서열 번호: 28로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함한다. 추가의 구체예에서, C-말단 확장을 포함하는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에서, 고유 글루카곤 펩티드의 위치 29에서 트레오닌은 글리신으로 대체된다. 위치 29에서 트레오닌에 대한 글리신 치환을 갖고 서열 번호: 26의 카르복시 말단 확장을 포함하는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 26의 카르복시 말단 확장을 포함하도록 변형된 고유 글루카곤보다 GLP-1 수용체에서 4배 강력하다. GLP-1 수용체에서 효능은 위치 18에서 고유 아르기닌에 대한 알라닌 치환에 의해 더욱 증강될 수 있다.
따라서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 27 (KRNRNNIA) 또는 서열 번호: 28의 카르복시 말단 확장을 가질 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 33 또는 서열 번호: 20을 포함하는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 펩티드의 아미노산 29에 연결된 서열 번호: 27 (KRNRNNIA) 또는 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 더욱 포함한다. 더욱 구체적으로, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 10, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13 서열 번호: 14 및 서열 번호: 15로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하고, 글루카곤 펩티드의 아미노산 29에 연결된 서열 번호: 27 (KRNRNNIA) 또는 서열 번호: 28의 아미노산 서열을 더욱 포함한다. 더욱 구체적으로, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 10, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 서열 번호: 17, 서열 번호: 18, 서열 번호: 66, 서열 번호: 67, 서열 번호: 68, 서열 번호: 69, 서열 번호: 55 및 서열 번호: 56으로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하고, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 아미노산 29에 연결된 서열 번호: 26 (GPSSGAPPPS) 또는 서열 번호: 29의 아미노산 서열을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 64의 서열을 포함한다.
기타 변형
글루카곤 수용체 활성을 증가 또는 감소시키고 GLP-1 수용체 활성을 증가시키는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 앞서 기술된 임의의 변형은 개별적으로 또는 공동으로 적용될 수 있다. GLP-1 수용체 활성을 증가시키는 변형의 조합은 일반적으로, 단독으로 취해진 임의의 이런 변형보다 더욱 높은 GLP-1 활성을 제공한다. 앞서 기술된 임의의 변형은 또한, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 다른 바람직한 성질, 예를 들면, 증가된 용해성 및/또는 안정성 및/또는 작용의 지속 기간을 공여하는 다른 변형과 합동될 수 있다. 대안으로, 앞서 기술된 임의의 변형은 용해성 또는 안정성 또는 활성에 실질적인 영향을 주지 않는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 본 명세서에서 기술된 다른 변형과 합동될 수 있다. 예시적인 변형에는 하기가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다:
(A) 예로써, 고유 글루카곤의 C-말단 부분에, 바람직하게는 위치 27에 C-말단 위치에서 1개, 2개, 3개 이상의 하전된 아미노산(들)을 도입함으로써 용해성 향상. 이런 하전된 아미노산은 예로써, 위치 28 또는 29에서 고유 아미노산을 하전된 아미노산으로 치환함으로써, 또는 대안으로, 예로써 위치 27, 28 또는 29 뒤에 하전된 아미노산을 부가함으로써 도입될 수 있다. 예시적인 구체예에서, 하전된 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개 또는 모두는 음으로 하전된다. 다른 구체예에서, 하전된 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개 또는 모두는 양으로 하전된다. 이런 변형은 용해성을 증가시킨다, 예를 들면, 25℃에서 24시간 후 측정될 때, 약 5.5와 8 사이의 소정의 pH, 예를 들면, pH 7에서 고유 글루카곤에 비하여 최소한 2-배, 5-배, 10-배, 15-배, 25-배, 30-배 또는 더욱 큰 용해성을 제공한다.
(B) 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 예로써 펩티드의 위치 16, 17, 20, 21, 24 또는 29에서, 또는 C-말단 아미노산에서 친수성 모이어티, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 사슬의 부가에 의한 용해성 및 작용의 지속 기간 또는 순환 동안 반감기 증가.
(C) 예로써, 글루타민산, 호모글루타민산, 시스테산 또는 호모시스테산으로 결실 또는 치환에 의한 위치 15에서 아스파르트산의 변형에 의한 안정성 증가. 이런 변형은 5.5 내지 8의 범위 내에 pH에서, 특히 산성 또는 알칼리성 완충액에서 분해 또는 절단을 감소시키고, 예로써 25℃에서 24시간 후 본래 펩티드의 최소한 75%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 유지할 수 있다.
(D) 예로써, 류신 또는 노르류신으로 치환에 의한 위치 27에서 메티오닌의 변형에 의한 안정성 증가. 이런 변형은 산화성 분해를 감소시킬 수 있다. 안정성은 또한, 예로써 Ser, Thr, Ala 또는 Aib로 치환에 의한 위치 20 또는 24에서 Gln의 변형에 의해 증가될 수 있다. 이런 변형은 Gln의 탈아미드화를 통해 일어나는 분해를 감소시킬 수 있다. 안정성은 위치 21에서 Asp의 변형, 예를 들면, Glu로 치환에 의해 증가될 수 있다. 이런 변형은 환상 숙신이미드 중간물질을 형성하는 Asp의 탈수, 그 이후에 이소-아스파르테이트로의 이성질화를 통해 일어나는 분해를 감소시킬 수 있다.
(E) 위치 1 또는 2에서 아미노산의 본 명세서에서 기술된 DPP-IV 내성 아미노산으로의 변형, 그리고 위치 2에서 아미노산의 N-메틸-알라닌으로의 변형에 의한 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP IV) 절단에 대한 내성 증가.
(F) 활성에 영향을 주지 않는 보존성 또는 비-보존성 치환, 부가 또는 결실, 예를 들면, 위치 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 또는 29 중에서 하나 이상에서 보존성 치환; 위치 27, 28 또는 29 중에서 하나 이상에서 결실; 또는 C-말단 카르복실산 기 대신에 임의적으로 C-말단 아미드 또는 에스테르와 합동된 아미노산 29의 결실;
(G) 본 명세서에서 기술된 바와 같이, C-말단 확장의 부가;
(H) 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 예로써 글루카곤 펩티드의 아실화 또는 알킬화에 의한 순환 동안 반감기 증가 및/또는 작용의 지속 기간 연장 및/또는 작용의 개시 지연;
(I) 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 동종이합체화 또는 헤테로이합체화.
다른 변형에는 위치 1에서 His의 큰 방향족 아미노산 (가령, Tyr, Phe, Trp 또는 아미노-Phe)으로의 치환; 위치 2에서 Ser의 Ala로의 치환; 위치 10에서 Tyr의 Val 또는 Phe로의 치환; 위치 12에서 Lys의 Arg로의 치환; 위치 15에서 Asp의 Glu로의 치환; 위치 16에서 Ser의 Thr 또는 Aib로의 치환이 포함된다.
위치 1에서 His의 큰 방향족 아미노산 (가령, Tyr)으로의 비-보존성 치환을 내포하고 GLP-1 활성을 갖는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 알파-나선이 분자내 가교, 예를 들면, 본 명세서에서 기술된 임의의 것들을 거쳐 안정화된다면, GLP-1 활성을 유지할 수 있다.
접합체와 융합
부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 접합체 모이어티에 임의적으로 공유 결합을 거쳐, 그리고 임의적으로 링커를 거쳐 연결될 수 있다.
부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 또한, 융합 펩티드 또는 단백질의 일부일 수 있고, 여기서 두 번째 펩티드 또는 폴리펩티드는 말단, 예를 들면, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 카르복시 말단에 융합되었다.
더욱 구체적으로, 융합 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 55, 서열 번호: 9 또는 서열 번호: 10의 글루카곤 작동약을 포함하고, 글루카곤 펩티드의 아미노산 29에 연결된 서열 번호: 26 (GPSSGAPPPS), 서열 번호: 27 (KRNRNNIA) 또는 서열 번호: 28 (KRNR)의 아미노산 서열을 더욱 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 26 (GPSSGAPPPS), 서열 번호: 27 (KRNRNNIA) 또는 서열 번호: 28 (KRNR)의 아미노산 서열은 펩티드 결합을 통해 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 아미노산 29에 결합된다. 본 발명자들은 엑센딘-4 (가령, 서열 번호: 26 또는 서열 번호: 29)의 C-말단 확장 펩티드를 포함하는 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드 융합 펩티드에서, 위치 29에서 고유 트레오닌 잔기의 글리신으로의 치환은 GLP-1 수용체 활성을 극적으로 증가시킨다는 것을 발견하였다. 이러한 아미노산 치환은 GLP-1 수용체에 대한 글루카곤 유사체의 친화성을 증강시키기 위해 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 관하여 본 명세서에서 개시된 다른 변형과 공동으로 이용될 수 있다. 가령, T29G 치환은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, S16E와 N20K 아미노산 치환, 임의적으로 아미노산 16과 20 사이에 락탐 가교, 그리고 임의적으로, PEG 사슬의 부가와 합동될 수 있다. 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 64의 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 글루카곤 융합 펩티드의 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드 부분은 서열 번호: 55, 서열 번호: 2, 서열 번호: 3, 서열 번호: 4, 그리고 서열 번호: 5로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 PEG 사슬은 위치 17, 21, 24, 또는 C-말단 아미노산, 또는 21과 24 둘 모두에 존재할 때, 500 내지 40,000 달톤의 범위에서 선택된다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드 분절은 서열 번호: 7, 서열 번호: 8, 그리고 서열 번호: 63으로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 PEG 사슬은 500 내지 5,000의 범위에서 선택된다. 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 55 및 서열 번호: 65의 서열을 포함하는 융합 펩티드이고, 여기서 서열 번호: 65의 펩티드는 서열 번호: 55의 카르복시 말단에 연결된다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 10의 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 추가의 화학적 변형은 글루카곤과 GLP-1 수용체에서 상대적 활성이 사실상 동등한 지점까지 증가된 GLP-1 수용체 효능을 부여한다. 따라서 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 고유 아미노산 상에 존재하는 카르복실산 기 대신에 아미드 기를 포함하는 말단 아미노산을 포함한다. 개별 글루카곤과 GLP-1 수용체에서 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 상대적 활성은 GLP-1 수용체에서 글루카곤의 정상 활성에 비하여, 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 40% 내지 약 500% 이상 및 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 약 20% 내지 약 200% 이상, 예를 들면, 50-배, 100-배 이상 증가를 나타내는 유사체를 생산하기 위한, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드에 더욱 변형에 의해 조정될 수 있다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 글루카곤 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 약 100%, 1000%, 10,000%, 100,000%, 또는 1,000,000%까지 나타낸다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 글루카곤 펩티드는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 약 100%, 1000%, 10,000%, 100,000%, 또는 1,000,000%까지 나타낸다.
예시적인 구체예
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 55의 서열을 포함하는 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체는 위치 1, 2, 3, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 21, 24, 27, 28과 29에서 선택되는 1개 내지 3개의 아미노산에 의해 서열 번호: 55와 상이하고, 여기서 상기 글루카곤 펩티드는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 20%를 나타낸다.
일부 구체예에 따라서, 하기 서열을 포함하는 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약이 제시된다:
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa-Xaa -Arg-Arg-Ala-Xaa-Asp-Phe-Val-Xaa-Trp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (서열 번호: 33), 여기서 위치 15에서 Xaa는 Asp, Glu, 시스테산, 호모글루타민산과 호모시스테산으로 구성된 아미노산의 군에서 선택되고, 위치 16에서 Xaa는 Ser, Glu, Gln, 호모글루타민산과 호모시스테산으로 구성된 아미노산의 군에서 선택되고, 위치 20에서 Xaa는 Gln 또는 Lys이고, 위치 24에서 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 28에서 Xaa는 Asn, Lys 또는 산성 아미노산이고, 위치 29에서 Xaa는 Thr, Gly 또는 산성 아미노산이고, 그리고 R은 COOH 또는 CONH2이고, 단서로써 위치 16이 세린일 때, 위치 20은 Lys이고, 또는 대안으로, 위치 16이 세린일 때, 위치 24는 Glu이고 위치 20 또는 위치 28은 Lys이다. 일부 구체예에서, 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약은 서열 번호: 33의 서열을 포함하고, 여기서 위치 28에서 아미노산은 아스파르트산이고 위치 29에서 아미노산은 글루타민산이다. 또 다른 구체예에서, 위치 28에서 아미노산은 고유 아스파라긴이고, 위치 29에서 아미노산은 글리신이고, 그리고 서열 번호: 29 또는 서열 번호: 65의 아미노산 서열은 서열 번호: 33의 카르복시 말단에 공유 연결된다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 33의 서열을 포함하는 공동-작동약이 제시되고, 여기서 추가의 산성 아미노산이 상기 펩티드의 카르복시 말단에 부가된다. 추가의 구체예에서, 글루카곤 유사체의 카르복시 말단 아미노산은 자연 아미노산의 카르복실산 기 대신에 아미드를 갖는다. 일부 구체예에서, 글루카곤 유사체는 서열 번호: 40, 서열 번호: 41, 서열 번호: 42, 서열 번호: 43 및 서열 번호: 44로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함한다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 33의 글루카곤 펩티드 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체는 위치 1, 2, 3, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 21과 27에서 선택되는 1개 내지 3개의 아미노산에 의해 서열 번호: 33과 상이하고, 단서로써 위치 16에서 아미노산이 세린일 때, 위치 20은 리신이거나, 또는 위치 24에서 아미노산 및 위치 20 또는 위치 28에서 아미노산 사이에 락탐 가교가 형성된다. 일부 구체예에 따라서, 유사체는 위치 1, 2, 3, 21과 27에서 선택되는 1개 내지 3개의 아미노산에 의해 서열 번호: 33과 상이하다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 33의 글루카곤 펩티드 유사체는 위치 1, 2, 3, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 21과 27에서 선택되는 1개 내지 2개의 아미노산, 또는 일부 구체예에서, 단일 아미노산에 의해 상기 서열과 상이하고, 단서로써 위치 16에서 아미노산은 세린이고, 위치 20은 리신이거나, 또는 위치 24에서 아미노산 및 위치 20 또는 위치 28에서 아미노산 사이에 락탐 가교가 형성된다.
다른 구체예에 따라서, 서열 NH2-His-Ser-Xaa-Gly-Thr-Phe- Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa-Xaa-Arg-Arg-Ala-Xaa-Asp-Phe-Val-Xaa-Trp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (서열 번호: 53)을 포함하는 상대적으로 선택적인 GLP-1 수용체 작동약이 제시되고, 여기서 위치 3에서 Xaa는 Glu, Orn 또는 Nle로 구성된 아미노산의 군에서 선택되고, 위치 15에서 Xaa는 Asp, Glu, 시스테산, 호모글루타민산과 호모시스테산으로 구성된 아미노산의 군에서 선택되고, 위치 16에서 Xaa는 Ser, Glu, Gln, 호모글루타민산과 호모시스테산으로 구성된 아미노산의 군에서 선택되고, 위치 20에서 Xaa는 Gln 또는 Lys이고, 위치 24에서 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 28에서 Xaa는 Asn, Lys 또는 산성 아미노산이고, 위치 29에서 Xaa는 Thr, Gly 또는 산성 아미노산이고, 그리고 R은 COOH, CONH2, 서열 번호: 26 또는 서열 번호: 29이고, 단서로써 위치 16이 세린일 때, 위치 20은 Lys이고, 또는 대안으로, 위치 16이 세린일 때, 위치 24는 Glu이고 위치 20 또는 위치 28은 Lys이다. 일부 구체예에서, 위치 3에서 아미노산은 글루타민산이다. 일부 구체예에서, 위치 28 및/또는 29에서 치환된 산성 아미노산은 아스파르트산 또는 글루타민산이다. 일부 구체예에서, 공동-작동약 펩티드를 비롯한 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 33의 서열을 포함하고, 상기 펩티드의 카르복시 말단에 부가된 추가의 산성 아미노산을 더욱 포함한다. 추가의 구체예에서, 글루카곤 유사체의 카르복시 말단 아미노산은 자연 아미노산의 카르복실산 기 대신에 아미드를 갖는다.
일부 구체예에 따라서, 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 변형된 글루카곤 펩티드를 포함하는 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약이 제시된다:
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa-Xaa-Arg-Arg-Ala-Xaa-Asp-Phe-Val-Xaa-Trp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (서열 번호: 34), 여기서 위치 15에서 Xaa는 Asp, Glu, 시스테산, 호모글루타민산과 호모시스테산으로 구성된 아미노산의 군에서 선택되고, 위치 16에서 Xaa는 Ser, Glu, Gln, 호모글루타민산과 호모시스테산으로 구성된 아미노산의 군에서 선택되고, 위치 20에서 Xaa는 Gln 또는 Lys이고, 위치 24에서 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 28에서 Xaa는 Asn, Asp 또는 Lys이고, R은 COOH 또는 CONH2이고, 위치 29에서 Xaa는 Thr 또는 Gly이고, 그리고 R은 COOH, CONH2, 서열 번호: 26 또는 서열 번호: 29이고, 단서로써 위치 16이 세린일 때, 위치 20은 Lys이고, 또는 대안으로, 위치 16이 세린일 때, 위치 24는 Glu이고 위치 20 또는 위치 28은 Lys이다. 일부 구체예에서, R은 CONH2이고, 위치 15에서 Xaa는 Asp이고, 위치 16에서 Xaa는 Glu, Gln, 호모글루타민산과 호모시스테산으로 구성된 아미노산의 군에서 선택되고, 위치 20과 24에서 Xaa는 각각 Gln이고, 위치 28에서 Xaa는 Asn 또는 Asp이고, 위치 29에서 Xaa는 Thr이다. 일부 구체예에서, 위치 15와 16에서 Xaa는 각각 Glu이고, 위치 20과 24에서 Xaa는 각각 Gln이고, 위치 28에서 Xaa는 Asn 또는 Asp이고, 위치 29에서 Xaa는 Thr이고, R은 CONH2이다.
고유 글루카곤 펩티드의 일정한 위치는 부모 펩티드의 활성 중에서 최소한 일부를 유지하면서 변형될 수 있는 것으로 보고되었다. 따라서 본 발명자들은 서열 번호: 11의 펩티드의 위치 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 또는 29에 위치되는 하나 이상의 아미노산이 고유 글루카곤 펩티드 내에 존재하는 것과 상이한 아미노산으로 치환될 수 있고, 그리고 글루카곤 수용체에서 활성을 여전히 유지할 것으로 기대한다. 일부 구체예에서, 고유 펩티드의 위치 27에 존재하는 메티오닌 잔기는 펩티드의 산화성 분해를 예방하기 위해 류신 또는 노르류신으로 변경된다. 또 다른 구체예에서, 위치 20에서 아미노산은 Lys, Arg, Orn 또는 Citrullene으로 치환되고 및/또는 위치 21은 Glu, 호모글루타민산 또는 호모시스테산으로 치환된다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 20의 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체의 위치 1, 2, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 21, 27, 28 또는 29에서 선택되는 1개 내지 6개의 아미노산은 서열 번호: 1의 상응하는 아미노산과 상이하고, 단서로써 위치 16에서 아미노산이 세린일 때, 위치 20은 Lys이고, 또는 대안으로, 위치 16이 세린일 때, 위치 24는 Glu이고 위치 20 또는 위치 28은 Lys이다. 또 다른 구체예에 따라서, 서열 번호: 20의 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체의 위치 1, 2, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 27, 28 또는 29에서 선택되는 1개 내지 3개의 아미노산이 서열 번호: 1의 상응하는 아미노산과 상이하다. 또 다른 구체예에서, 서열 번호: 8, 서열 번호: 9 또는 서열 번호: 11의 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체의 위치 1, 2, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 20 또는 21에서 선택되는 1개 내지 2개의 아미노산이 서열 번호: 1의 상응하는 아미노산과 상이하고, 그리고 추가의 구체예에서, 1개 내지 2개의 상이한 아미노산은 고유 글루카곤 서열 (서열 번호: 1) 내에 존재하는 아미노산에 비하여 보존성 아미노산 치환을 나타낸다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14 또는 서열 번호: 15의 글루카곤 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 글루카곤 펩티드는 위치 2, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 27 또는 29에서 선택되는 위치에서 1개, 2개 또는 3개의 아미노산 치환을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 위치 2, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 27 또는 29에서 치환은 보존성 아미노산 치환이다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 33의 서열의 변이체를 포함하는 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약이 제시되고, 여기서 상기 변이체의 위치 16, 17, 18, 20, 21, 23, 24, 27, 28과 29 각각에서 선택되는 1개 내지 10개의 아미노산이 서열 번호: 1의 상응하는 아미노산과 상이하다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 33의 서열의 변이체가 제시되고, 여기서 상기 변이체는 Gln17, Ala18, Glu21, Ile23, Ala24, Val27 및 Gly29로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 서열 번호: 33과 상이하다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 33의 서열의 변이체를 포함하는 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약이 제시되고, 여기서 상기 변이체의 위치 17-26에서 선택되는 1개 내지 2개의 아미노산이 서열 번호: 1의 상응하는 아미노산과 상이하다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 33의 서열의 변이체가 제시되고, 여기서 상기 변이체는 Gln17, Ala18, Glu21, Ile23 및 Ala24로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 치환에 의해 서열 번호: 33과 상이하다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 33의 서열의 변이체가 제시되고, 여기서 상기 변이체는 위치 18에서 아미노산 치환에 의해 서열 번호: 33과 상이하고, 여기서 치환된 아미노산은 Ala, Ser, Thr, 그리고 Gly로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 33의 서열의 변이체가 제시되고, 여기서 상기 변이체는 위치 18에서 Ala의 아미노산 치환에 의해 서열 번호: 33과 상이하다. 이런 변형은 서열 번호: 55에 의해 포함된다. 또 다른 구체예에서, 서열 번호: 33의 서열의 변이체를 포함하는 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약이 제시되고, 여기서 상기 변이체의 위치 17-22에서 선택되는 1개 내지 2개의 아미노산이 서열 번호: 1의 상응하는 아미노산과 상이하고, 그리고 추가의 구체예에서, 서열 번호: 33의 변이체가 제시되고, 여기서 상기 변이체는 위치 20과 21에서 1개 또는 2개의 아미노산 치환에 의해 서열 번호: 33과 상이하다. 일부 구체예에 따라서, 하기 서열을 포함하는 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약이 제시된다:
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa-Xaa-Arg-Arg-Ala-Xaa-Xaa-Phe-Val-Xaa-Trp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (서열 번호: 51), 여기서 위치 15에서 Xaa는 Asp, Glu, 시스테산, 호모글루타민산 또는 호모시스테산이고, 위치 16에서 Xaa는 Ser, Glu, Gln, 호모글루타민산 또는 호모시스테산이고, 위치 20에서 Xaa는 Gln, Lys, Arg, Orn 또는 시트룰린이고, 위치 21에서 Xaa는 Asp, Glu, 호모글루타민산 또는 호모시스테산이고, 위치 24에서 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 28에서 Xaa는 Asn, Lys 또는 산성 아미노산이고, 위치 29에서 Xaa는 Thr 또는 산성 아미노산이고, R은 COOH 또는 CONH2이다. 일부 구체예에서, R은 CONH2이다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 47, 서열 번호: 48 또는 서열 번호: 49의 변이체를 포함하는 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약이 제시되고, 여기서 상기 변이체는 위치 20에서 아미노산 치환에 의해 상기 서열과 상이하다. 일부 구체예에서, 위치 20에 대한 아미노산 치환은 Lys, Arg, Orn 또는 시트룰린으로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 34의 유사체 펩티드를 포함하는 글루카곤 작동약이 제시되고, 여기서 상기 유사체는 위치 2에서 세린 이외의 아미노산을 가짐으로써 서열 번호: 34와 상이하다. 일부 구체예에서, 세린 잔기는 아미노이소부티르산, D-알라닌으로 치환되고, 그리고 일부 구체예에서, 세린 잔기는 아미노이소부티르산으로 치환된다. 이런 변형은 부모 화합물의 내재성 효능 (가령, 부모 화합물의 효능의 최소한 75, 80, 85, 90, 95% 이상)을 유지하면서, 디펩티딜 펩티다아제 IV에 의한 절단을 억제한다. 일부 구체예에서, 유사체의 용해성은 예로써, 고유 글루카곤의 C-말단 부분에, 바람직하게는 위치 27에 C-말단 위치에서 1개, 2개, 3개 이상 하전된 아미노산(들)을 도입함으로써 증가된다. 예시적인 구체예에서, 이들 하전된 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개 또는 모두는 음으로 하전된다. 또 다른 구체예에서, 유사체는 위치 28 또는 29에서 고유 아미노산에 대해 치환된 산성 아미노산 또는 서열 번호: 34의 펩티드의 카르복시 말단에 부가된 산성 아미노산을 더욱 포함한다.
일부 구체예에서, 본 명세서에서 개시된 글루카곤 유사체는 디펩티딜 펩티다아제 IV에 의한 절단에 대한 감수성을 감소시키기 위해 위치 1 또는 2에서 더욱 변형된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 9, 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14 또는 서열 번호: 15의 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체는 위치 2에서 치환에 의해 부모 분자와 상이하고, 그리고 디펩티딜 펩티다아제 IV에 의한 절단에 대한 감소된 감수성 (즉, 내성)을 나타낸다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 유사체 펩티드의 위치 2는 D-세린, D-알라닌, 발린, 아미노 n-부티르산, 글리신, N-메틸 세린 및 아미노이소부티르산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 유사체 펩티드의 위치 2는 D-세린, D-알라닌, 글리신, N-메틸 세린 및 아미노이소부티르산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 또 다른 구체예에서, 유사체 펩티드의 위치 2는 D-세린, 글리신, N-메틸 세린 및 아미노이소부티르산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 위치 2에서 아미노산은 D-세린이 아니다. 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 21 또는 서열 번호: 22의 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 9, 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14 또는 서열 번호: 15의 글루카곤 유사체가 제시되고, 여기서 상기 유사체는 위치 1에서 치환에 의해 부모 분자와 상이하고, 그리고 디펩티딜 펩티다아제 IV에 의한 절단에 대한 감소된 감수성 (즉, 내성)을 나타낸다. 더욱 구체적으로, 유사체 펩티드의 위치 1은 D-히스티딘, 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA), N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘 및 호모-히스티딘으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 또 다른 구체예에서, 서열 번호: 34의 유사체 펩티드를 포함하는 글루카곤 작동약이 제시되고, 여기서 상기 유사체는 위치 1에서 히스티딘 이외의 아미노산을 가짐으로써 서열 번호: 34와 상이하다. 일부 구체예에서, 유사체의 용해성은 예로써, 고유 글루카곤의 C-말단 부분에, 바람직하게는 위치 27에 C-말단 위치에서 1개, 2개, 3개 이상의 하전된 아미노산(들)을 도입함으로써 증가된다. 예시적인 구체예에서, 이들 하전된 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개 또는 모두는 음으로 하전된다. 또 다른 구체예에서, 유사체는 위치 28 또는 29에서 고유 아미노산에 대해 치환된 산성 아미노산 또는 서열 번호: 34의 펩티드의 카르복시 말단에 부가된 산성 아미노산을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 산성 아미노산은 아스파르트산 또는 글루타민산이다.
일부 구체예에서, 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약은 서열 번호: 20의 서열을 포함하고, 1개 아미노산 또는 서열 번호: 26, 서열 번호: 27 및 서열 번호: 28로 구성된 군에서 선택되는 펩티드의 추가적인 카르복시 말단 확장을 더욱 포함한다. 단일 아미노산이 서열 번호: 20의 카르복시 말단에 부가되는 구체예에서, 상기 아미노산은 전형적으로, 20개의 공통 아미노산에서 선택되고, 그리고 일부 구체예에서, 추가적인 카르복시 말단 아미노산은 고유 아미노산의 카르복실산 대신에 아미드 기를 갖는다. 일부 구체예에서, 추가적인 아미노산은 글루타민산, 아스파르트산 및 글리신으로 구성된 군에서 선택된다.
대안적 구체예에서, 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약이 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 글루타민산 잔기와 리신 잔기의 측쇄 사이에 형성된 최소한 하나의 락탐 고리를 포함하고, 여기서 글루타민산 잔기와 리신 잔기는 3개의 아미노산에 의해 분리된다. 일부 구체예에서, 락탐 보유 글루카곤 펩티드의 카르복시 말단 아미노산은 고유 아미노산의 카르복실산 대신에 아미드 기를 갖는다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 변형된 글루카곤 펩티드를 포함하는 글루카곤과 GLP-1 공동-작동약이 제시된다:
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu- Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (서열 번호: 66)
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu- Arg-Arg-Ala-Lys-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (서열 번호: 67)
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser- Arg-Arg-Ala-Lys-Asp-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (서열 번호: 68)
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser- Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Met-Lys-Xaa-R (서열 번호: 69)
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu- Arg-Arg-Ala-Lys-Asp-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-R (서열 번호: 16)
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu- Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Met-Lys-Thr-R (서열 번호: 17)
NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu- Arg-Arg-Ala-Lys-Asp-Phe-Val-Glu-Trp-Leu-Met-Lys-Thr-R (서열 번호: 18)
여기서 위치 28에서 Xaa는 Asp, 또는 Asn이고, 위치 29에서 Xaa는 Thr 또는 Gly이고, R은 COOH, CONH2, 글루타민산, 아스파르트산, 글리신, 서열 번호: 26, 서열 번호: 27 및 서열 번호: 28로 구성된 군에서 선택되고, 그리고 락탐 가교는 서열 번호: 66의 경우에 위치 12에서 Lys과 위치 16에서 Glu 사이에, 서열 번호: 67의 경우에 위치 16에서 Glu과 위치 20에서 Lys 사이에, 서열 번호: 68의 경우에 위치 20에서 Lys과 위치 24에서 Glu 사이에, 서열 번호: 69의 경우에 위치 24에서 Glu와 위치 28에서 Lys 사이에, 서열 번호: 16의 경우에 위치 12에서 Lys과 위치 16에서 Glu 사이에 및 위치 20에서 Lys과 위치 24에서 Glu 사이에, 서열 번호: 17의 경우에 위치 12에서 Lys와 위치 16에서 Glu 사이에 및 위치 24에서 Glu와 위치 28에서 Lys 사이에, 그리고 서열 번호: 18의 경우에 위치 16에서 Glu와 위치 20에서 Lys 사이에 및 위치 24에서 Glu와 위치 28에서 Lys 사이에 형성된다. 일부 구체예에서, R은 COOH, CONH2, 글루타민산, 아스파르트산, 글리신으로 구성된 군에서 선택되고, 위치 28에서 아미노산은 Asn이고, 그리고 위치 29에서 아미노산은 트레오닌이다. 일부 구체예에서, R은 CONH2이고, 위치 28에서 아미노산은 Asn이고, 그리고 위치 29에서 아미노산은 트레오닌이다. 또 다른 구체예에서, R은 서열 번호: 26, 서열 번호: 29 및 서열 번호: 65로 구성된 군에서 선택되고, 그리고 위치 29에서 아미노산은 글리신이다.
추가의 구체예에서, 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약은 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 서열 번호: 17 및 서열 번호: 18로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 상기 펩티드는 1개 아미노산 또는 서열 번호: 26, 서열 번호: 27 및 서열 번호: 28로 구성된 군에서 선택되는 펩티드의 추가적인 카르복시 말단 확장을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 말단 확장은 서열 번호: 26, 서열 번호: 29 또는 서열 번호: 65의 서열을 포함하고, 그리고 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 55의 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약은 서열 번호: 33의 서열을 포함하고, 여기서 위치 16에서 아미노산은 글루타민산이고, 위치 20에서 아미노산은 리신이고, 위치 28에서 아미노산은 아스파라긴이고, 그리고 서열 번호: 26 또는 서열 번호: 29의 아미노산 서열은 서열 번호: 33의 카르복시 말단에 연결된다.
단일 아미노산이 서열 번호: 20의 카르복시 말단에 부가되는 구체예에서, 상기 아미노산은 전형적으로, 20개의 공통 아미노산에서 선택되고, 그리고 일부 구체예에서, 상기 아미노산은 고유 아미노산의 카르복실산 대신에 아미드 기를 갖는다. 일부 구체예에서, 추가적인 아미노산은 글루타민산, 아스파르트산 및 글리신으로 구성된 군에서 선택된다. 글루카곤 작동약 유사체가 카르복시 말단 확장을 더욱 포함하는 구체예에서, 확장의 카르복시 말단 아미노산은 일부 구체예에서, 카르복실산이 아닌 아미드 기 또는 에스테르 기로 종결된다.
또 다른 구체예에서, 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약은 하기 서열을 포함한다: NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg- Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Xaa-CONH2 (서열 번호: 19), 여기서 위치 30에서 Xaa는 임의의 아미노산을 나타낸다. 일부 구체예에서, Xaa는 20개의 공통 아미노산에서 선택되고, 그리고 일부 구체예에서, 아미노산은 글루타민산, 아스파르트산 또는 글리신이다. 이러한 펩티드의 용해성은 서열 번호: 19의 위치 17, 21, 24 또는 30에서 아미노산의 측쇄에 PEG 사슬을 공유 연결함으로써 더욱 향상될 수 있다. 추가의 구체예에서, 상기 펩티드는 서열 번호: 26, 서열 번호: 27 및 서열 번호: 28로 구성된 군에서 선택되는 펩티드의 추가적인 카르복시 말단 확장을 포함한다. 일부 구체예에 따라서 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약은 서열 번호: 30, 서열 번호: 31 및 서열 번호: 32의 서열을 포함한다.
서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 서열 번호: 17, 서열 번호: 18, 서열 번호: 19 및 서열 번호: 64의 글루카곤 서열의 내부에 추가의 부위 특이적 변형은 가변적인 정도의 GLP-1 효현작용을 갖는 일단의 글루카곤 작동약을 산출하기 위해 만들어질 수 있다. 따라서 각 수용체에서 사실상 동등한 시험관내 효능을 갖는 펩티드가 제조되고 특성화되었다. 유사하게, 이들 두 수용체 각각에서 10배의 선택적으로 증강된 효능을 갖는 펩티드가 확인되고 특성화되었다. 앞서 언급된 바와 같이, 위치 16에서 세린 잔기의 글루타민산으로의 치환은 글루카곤과 GLP-1 수용체 둘 모두에서 고유 글루카곤의 효능을 증강시키지만, 글루카곤 수용체에 대한 거의 10배의 선택성을 지속시킨다. 이에 더하여, 위치 3에서 고유 글루타민을 글루타민산 (서열 번호: 22)으로 치환하면, GLP-1 수용체에 대해 거의 10배 선택성을 나타내는 글루카곤 유사체가 산출된다.
글루카곤/GLP-1 공동-작동약 펩티드의 용해성은 펩티드의 위치 16, 17, 21, 그리고 24에서 친수성 기의 도입에 의해, 또는 글루카곤/GLP-1 공동-작동약 펩티드의 카르복시 말단에서 단일 변형된 아미노산 (즉, 친수성 기를 포함하도록 변형된 아미노산)의 부가에 의해, 고유 글루카곤에 비하여 높은 생물학적 활성을 유지하면서 수성 용액에서 생리학적 pH에서 더욱 증강될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 친수성 기는 폴리에틸렌 (PEG) 사슬을 포함한다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 10, 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 서열 번호: 17 또는 서열 번호: 18의 서열을 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 글루카곤 펩티드의 위치 16, 17, 21, 24, 29에서 아미노산 또는 C-말단 아미노산의 측쇄에 공유 연결되고, 단서로써 상기 펩티드가 서열 번호: 10, 서열 번호: 11, 서열 번호: 12 또는 서열 번호: 13을 포함할 때, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 위치 17, 21 또는 24에서 아미노산 잔기에 공유 결합되고, 상기 펩티드가 서열 번호: 14 또는 서열 번호: 15를 포함할 때, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 위치 16, 17 또는 21에서 아미노산 잔기에 공유 결합되고, 그리고 상기 펩티드가 서열 번호: 16, 서열 번호: 17 또는 서열 번호: 18을 포함할 때, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 위치 17 또는 21에서 아미노산 잔기에 공유 결합된다.
일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 11, 서열 번호: 12 또는 서열 번호: 13의 서열을 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 글루카곤 펩티드의 위치 17, 21, 24에서 아미노산, 또는 C-말단 아미노산의 측쇄에 공유 연결되고, 그리고 상기 펩티드의 카르복시 말단 아미노산은 고유 아미노산의 카르복실산 기 대신에 아미드 기를 갖는다. 일부 구체예에서, 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약 펩티드는 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 서열 번호: 17, 서열 번호: 18 및 서열 번호: 19로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 글루카곤 펩티드의 서열 번호: 12, 서열 번호: 13 및 서열 번호: 19의 위치 17, 21 또는 24에서, 또는 글루카곤 펩티드의 서열 번호: 14 및 서열 번호: 15의 위치 16, 17 또는 21에서, 또는 글루카곤 펩티드의 서열 번호: 16, 서열 번호: 17 및 서열 번호: 18의 위치 17 또는 21에서 아미노산의 측쇄에 공유 연결된다. 또 다른 구체예에서, 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약 펩티드는 서열 번호: 11 또는 서열 번호: 19의 서열을 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 상기 글루카곤 펩티드의 위치 17, 21 또는 24에서 아미노산 또는 C-말단 아미노산의 측쇄에 공유 연결된다.
일부 구체예, 그리고 앞선 단락에서 기술된 단서 제약에 따라서, 글루카곤 공동-작동약 펩티드는 위치 16, 17, 21, 24, 또는 29에서 또는 C-말단 아미노산에서 하나 이상의 아미노산 치환을 내포하도록 변형되고, 여기서 고유 아미노산은 예로써, PEG를 비롯한 친수성 모이어티와의 가교 연결에 적합한 측쇄를 갖는 아미노산으로 치환된다. 고유 펩티드는 자연 발생 아미노산 또는 합성 (비-자연 발생) 아미노산으로 치환될 수 있다. 합성 또는 비-자연 발생 아미노산은 생체내에서 자연적으로 발생하지 않지만 그럼에도 불구하고, 본 명세서에서 기술된 펩티드 구조 내로 통합될 수 있는 아미노산을 지칭한다. 대안으로, 예로써 PEG를 비롯한 친수성 모이어티와의 가교 연결에 적합한 측쇄를 갖는 아미노산은 본 명세서에서 개시된 임의의 글루카곤 유사체의 카르복시 말단에 부가될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 아미노산 치환은 16, 17, 21, 24, 또는 29로 구성된 군에서 선택되는 위치에서 고유 아미노산을 리신, 시스테인, 오르니틴, 호모시스테인 및 아세틸 페닐알라닌으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 대체함으로써 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약 펩티드에서 만들어지고, 여기서 치환 아미노산은 아미노산의 측쇄에 공유 결합된 PEG 사슬을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 서열 번호: 17, 서열 번호: 18, 그리고 서열 번호: 19로 구성된 군에서 선택되는 글루카곤 펩티드는 글루카곤 펩티드의 위치 17 또는 21에서 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 PEG 사슬을 포함하도록 더욱 변형된다. 일부 구체예에서, 페길화되는 글루카곤/GLP-1 수용체 공동-작동약은 서열 번호: 26, 서열 번호: 27 또는 서열 번호: 29의 서열을 더욱 포함한다.
또 다른 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 55 또는 서열 번호: 56의 서열을 포함하고, 서열 번호: 55 또는 서열 번호: 56의 C-말단 아미노산에 연결된 서열 번호: 26, 서열 번호: 29 또는 서열 번호: 65의 C-말단 확장을 더욱 포함하고, 그리고 임의적으로, 상기 펩티드의 위치 17, 18, 21, 24 또는 29에서 아미노산 또는 C-말단 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 PEG 사슬을 더욱 포함한다. 또 다른 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 55 또는 서열 번호: 56의 서열을 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 글루카곤 펩티드의 위치 21 또는 24에서 아미노산의 측쇄에 공유 연결되고, 그리고 상기 펩티드는 서열 번호: 26, 또는 서열 번호: 29의 C-말단 확장을 더욱 포함한다.
또 다른 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 55, 또는 서열 번호: 33 또는 서열 번호: 34의 서열을 포함하고, 여기서 추가적인 아미노산이 서열 번호: 33 또는 서열 번호: 34의 카르복시 말단에 부가되고, 그리고 PEG 사슬이 부가된 아미노산의 측쇄에 공유 연결된다. 추가의 구체예에서, 페길화되는 글루카곤 유사체는 서열 번호: 33 또는 서열 번호: 34의 C-말단 아미노산에 연결된 서열 번호: 26 또는 서열 번호: 29의 C-말단 확장을 더욱 포함한다. 또 다른 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 19의 서열을 포함하고, 여기서 PEG 사슬이 글루카곤 펩티드의 위치 30에서 아미노산의 측쇄에 공유 연결되고, 그리고 상기 펩티드는 서열 번호: 19의 C-말단 아미노산에 연결된 서열 번호: 26 또는 서열 번호: 29의 C-말단 확장을 더욱 포함한다.
폴리에틸렌 글리콜 사슬은 직쇄의 형태이거나, 또는 가지형일 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 500 내지 약 10,000 달톤의 범위에서 선택되는 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤의 범위에서 선택되는 평균 분자량을 갖는다. 대안적 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 10,000 내지 약 20,000 달톤의 범위에서 선택되는 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에 따라서, 페길화되는 글루카곤 펩티드는 상기 글루카곤 펩티드에 공유 결합된 2개 이상의 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 포함하고, 여기서 글루카곤 사슬의 총 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다. 일부 구체예에서, 페길화되는 글루카곤 작동약은 서열 번호: 5 또는 서열 번호: 5의 글루카곤 작동약 유사체로 구성되는 펩티드를 포함하고, 여기서 PEG 사슬은 위치 21과 위치 24에서 아미노산 잔기에 공유 연결되고, 그리고 여기서 이들 두 PEG 사슬의 통합 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다.
일정한 예시적인 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 10개까지의 아미노산 변형을 갖는 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 위치 10에서 아실화 또는 알킬화되는 아미노산을 포함한다. 일부 구체예에서, 위치 10에서 아미노산은 C4 내지 C30 지방산으로 아실화 또는 알킬화된다. 일정한 양상에서, 위치 10에서 아미노산은 자연 발생 아미노산에 비-고유인 아실 기 또는 알킬 기를 포함한다.
일정한 구체예에서, 위치 10에서 아실화 또는 알킬화되는 아미노산을 포함하는 글루카곤 펩티드는 안정화된 알파 나선을 포함한다. 따라서 일정한 양상에서, 글루카곤 펩티드는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 아실 또는 알킬 기, 그리고 분자내 가교, 예를 들면, 위치 i에서 아미노산 및 위치 i+4에서 아미노산 (여기서 i는 12, 16, 20, 또는 24)의 측쇄 사이에 공유 분자내 가교 (가령, 락탐 가교)를 포함한다. 대안으로 또는 부가적으로, 글루카곤 펩티드는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 아실 또는 알킬 기를 포함하고, 그리고 글루카곤 펩티드의 위치 16, 20, 21 및/또는 24 중에서 1개, 2개, 3개 이상이 α,α-이중치환된 아미노산, 예를 들면, Aib로 치환된다. 일부 경우에, 비-고유 글루카곤 펩티드는 위치 16에서 Glu 및 위치 20에서 Lys를 포함하고, 여기서 임의적으로 락탐 가교는 Glu와 Lys를 연결하고, 그리고 임의적으로, 글루카곤 펩티드는 위치 17에서 Gln, 위치 18에서 Ala, 위치 21에서 Glu, 위치 23에서 Ile, 그리고 위치 24에서 Ala로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 변형을 더욱 포함한다.
또한, 임의의 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 위치 10에서 아실화 또는 알킬화되는 아미노산을 포함하고, 상기 글루카곤 펩티드는 C-말단 알파 카르복실레이트 대신에 C-말단 아미드를 더욱 포함할 수 있다.
일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 아실 또는 알킬 기를 포함하는 글루카곤 펩티드는 위치 1에서, 위치 2에서, 또는 위치 1과 2에서 아미노산 치환을 더욱 포함하고, 여기서 아미노산 치환(들)은 DPP-IV 프로테아제 내성을 달성한다. 가령, 위치 1에서 His는 D-히스티딘, 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA), N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘 및 호모-히스티딘으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환될 수 있다. 대안으로 또는 부가적으로, 위치 2에서 Ser은 D-세린, 알라닌, D-알라닌, 발린, 글리신, N-메틸 세린, N-메틸 알라닌, 그리고 아미노 이소부티르산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 위치 2에서 아미노산은 D-세린이 아니다.
위치 10에서 본 명세서에서 기술된 바와 같이 아실화 또는 알킬화되는 아미노산을 포함하는 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 1에 실질적으로 관련된 임의의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 가령, 글루카곤 펩티드는 10개까지의 아미노산 변형 (가령, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 변형)을 갖는 서열 번호: 1을 포함한다. 일정한 구체예에서, 아실화된 또는 알킬화된 글루카곤 펩티드의 아미노산 서열은 서열 번호: 1에 25%보다 크게 동일하다 (가령, 서열 번호: 1에 30%, 35%, 40%, 50%, 60%, 70% 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 초과, 또는 거의 100% 동일하다). 일정한 특정 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 위치 10에서 본 명세서에서 기술된 바와 같이 아실화된 또는 알킬화된 아미노산을 갖는 서열 번호: 55을 포함하는 것이다. 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 55, 1개 또는 2개의 아미노산 변형을 갖는 55, 2-4, 9-18, 20, 23-25, 33, 40-44, 53, 56, 61, 62, 64, 66-514, 그리고 534 중에서 한 가지일 수 있다.
이들 구체예의 아실 또는 알킬 기는 본 명세서에서 기술된 임의의 아실 또는 알킬 기일 수 있다. 가령, 아실 기는 C4 내지 C30 (가령, C8 내지 C24) 지방 아실 기일 수 있고, 그리고 알킬 기는 C4 내지 C30 (가령, C8 내지 C24) 알킬 기일 수 있다.
아실 또는 알킬 기가 부착되는 아미노산은 본 명세서에서 기술된 임의의 아미노산, 예를 들면, 화학식 I (가령, Lys), 화학식 II, 그리고 화학식 III 중에서 한 가지의 아미노산일 수 있다.
일부 구체예에서, 아실 기 또는 알킬 기는 위치 10에서 아미노산에 직접적으로 부탁된다. 일부 구체예에서, 아실 또는 알킬 기는 스페이서, 예를 들면, 3개 내지 10개의 원자 길이를 갖는 스페이서, 예를 들면, 아미노산 또는 디펩티드를 거쳐 위치 10에서 아미노산에 부착된다. 아실 또는 알킬 기를 부착하는 목적에 적합한 스페이서는 본 명세서에서 기술된다.
일부 구체예에 따라서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 임의의 전술한 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드의 유사체일 수 있고, 상기 유사체는 GIP 수용체에서 작동약 활성을 나타낸다. 글루카곤 수용체, GLP-1 수용체, 그리고 GIP 수용체에서 유사체의 활성 수준, 이들 수용체 각각의 효능, 그리고 이들 수용체 각각에 대한 선택성은 본 명세서에서 기술된 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드의 교시에 부합할 수 있다. 예로써, "활성"으로 이름 붙여진 부류 2 글루카곤 관련된 펩티드 섹션의 하위 섹션 하에 교시를 참고한다.
본 발명의 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드의 유사체가 제시되고, 상기 유사체는 GIP 수용체에서 작동약 활성을 나타낸다. 유사체는 일정한 구체예에서, 최소한 하나의 아미노산 변형 (임의적으로, 15개까지의 아미노산 변형), 그리고 상기 유사체의 위치 29에서 아미노산의 C-말단에 1개 내지 21개의 아미노산의 확장을 갖는 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함한다.
일정한 양상에서, 유사체는 최소한 하나의 아미노산 변형 및 15개까지의 아미노산 변형 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개의 아미노산 변형, 10개까지의 아미노산 변형)을 포함한다. 일정한 구체예에서, 유사체는 10까지의 아미노산 변형에서 최소한 하나의 아미노산 변형 및 추가적인 보존성 아미노산 변형을 포함한다. 보존성 아미노산 변형은 본 명세서에서 기술된다.
일부 양상에서, 아미노산 변형 중에서 최소한 하나는 유사체의 C-말단 부분에서 안정화된 알파 나선 구조를 공여한다. 안정화된 알파 나선 구조를 달성하는 변형은 본 명세서에서 기술된다. 예로써, "알파 나선/분자내 가교의 안정화"로 이름 붙여진 섹션 하에 교시를 참고한다. 일부 양상에서, 유사체는 이러한 유사체의 2개의 아미노산의 측쇄 사이에 분자내 가교 (가령, 공유 분자내 가교, 비-공유 분자내 가교)를 포함한다. 일정한 양상에서, 분자내 가교는 위치 i와 i+4에서 아미노산의 측쇄를 연결하고, 여기서 i는 12, 13, 16, 17, 20, 또는 24이다. 다른 양상에서, 분자내 가교는 위치 j와 j+3에서 아미노산의 측쇄를 연결하고, 여기서 j는 17이고, 또는 위치 k와 k+7에서 아미노산의 측쇄를 연결하고, 여기서 k는 12와 22 사이에 임의의 정수이다. 일정한 구체예에서, 분자내 가교는 공유 분자내 가교, 예를 들면, 락탐 가교이다. 특정한 양상에서, 락탐 가교는 위치 16과 20에서 아미노산의 측쇄를 연결한다. 특정한 양상에서, 위치 16과 20에서 아미노산 중에서 하나는 양으로 하전된 아미노산이고, 그리고 다른 하나는 음으로 하전된 아미노산이다. 가령, 유사체는 위치 16에서 Glu와 위치 20에서 Lys의 측쇄를 연결하는 락탐 가교를 포함할 수 있다. 다른 양상에서, 음으로 하전된 아미노산 및 양으로 하전된 아미노산은 염 가교를 형성한다. 이러한 경우에, 분자내 가교는 비-공유 분자내 가교이다.
특정한 양상에서, 안정화된 알파 나선을 공여하는 아미노산 변형은 서열 번호: 1의 아미노산의 α,α-이중치환된 아미노산으로의 삽입 또는 치환이다. 알파 나선을 안정시키는데 목적에 적합한 α,α-이중치환된 아미노산은 본 명세서에서 기술되고, 여기에는 예로써, Aib가 포함된다. 일부 양상에서, 서열 번호: 1의 위치 16, 20, 21, 그리고 24에서 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개 이상이 α,α-이중치환된 아미노산, 예를 들면, Aib로 치환된다. 특정 구체예에서, 위치 16에서 아미노산은 Aib이다.
GIP 수용체에서 작동약 활성을 나타내는 유사체는 추가적인 변형, 예를 들면, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 임의의 것들을 포함할 수 있다. 가령, 아미노산 변형은 GLP-1 수용체와 글루카곤 수용체 중에서 한쪽 또는 양쪽에서 활성을 증가 또는 감소시킬 수 있다. 아미노산 변형은 펩티드의 안정성을 증가시킬 수 있다, 예를 들면, DPP-IV 프로테아제 분해에 대한 내성을 증가시키고 아미노산 15와 16 사이에 결합을 안정시킬 수 있다. 아미노산 변형은 펩티드의 용해성을 증가시키고 및/또는 GIP, 글루카곤, 그리고 GLP-1 수용체 중에서 하나에서 유사체의 작용 기간을 변화시킬 수 있다. 이들 유형의 변형의 조합은 GIP 수용체에서 작동약 활성을 나타내는 유사체 내에 존재할 수 있다.
따라서 일부 양상에서, 유사체는 위치 17에서 Gln, 위치 18에서 Ala, 위치 21에서 Glu, 위치 23에서 Ile, 그리고 위치 24에서 Ala 또는 Cys, 또는 이들의 보존성 아미노산 치환 중에서 하나 이상을 갖는 서열 번호: 1의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상에서, 유사체는 C-말단 알파 카르복실레이트 대신에 C-말단 아미드를 포함한다. 일정한 구체예에서, 유사체는 위치 1, 위치 2, 또는 위치 1과 2에서 아미노산 치환을 포함하고, 이러한 치환(들)은 DPP-IV 프로테아제 내성을 달성한다. 적절한 아미노산 치환은 본 명세서에서 기술된다. 가령, 위치 1에서 DMIA 및/또는 위치 2에서 d-Ser 또는 Aib. 일부 구체예에서, 위치 2에서 아미노산은 D-세린이 아니다.
부가적으로 또는 대안으로, 유사체는 하기 중에서 한 가지 또는 조합을 포함할 수 있다: (a) 위치 2에서 Ser의 Ala로의 치환; (b) 위치 3에서 Gln의 Glu 또는 글루타민 유사체로의 치환; (c) 위치 7에서 Thr의 Ile로의 치환; (d) 위치 10에서 Tyr의 Trp, 또는 자연 발생 아미노산에 비-고유인 아실 또는 알킬 기를 포함하는 아미노산으로의 치환; (e) 위치 12에서 Lys의 Ile로의 치환; (f) 위치 15에서 Asp의 Glu로의 치환; (g) 위치 16에서 Ser의 Glu로의 치환; (h) 위치 20에서 Gln의 Ser, Thr, Ala, Aib로의 치환; (i) 위치 24에서 Gln의 Ser, Thr, Ala, Aib로의 치환; (j) 위치 27에서 Met의 Leu 또는 Nle로의 치환; (k) 위치 29에서 Asn의 하전된 아미노산, 임의적으로 Asp 또는 Glu로의 치환; 그리고 (l) 위치 29에서 Thr의 Gly 또는 하전된 아미노산, 임의적으로 Asp 또는 Glu로의 치환.
GIP 수용체에서 작동약 활성을 나타내는 유사체에 대하여, 유사체는 1-21개의 아미노산 (가령, 5-19, 7-15, 9-12개의 아미노산)의 확장을 포함한다. 유사체의 확장은 이러한 확장이 1개 내지 21개의 아미노산이면, 임의의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 양상에서, 확장은 7개 내지 15개의 아미노산이고, 그리고 다른 양상에서, 확장은 9개 내지 12개의 아미노산이다. 일부 구체예에서, 확장은 (i) 서열 번호: 26 또는 674의 아미노산 서열, (ii) 서열 번호: 26 또는 674의 아미노산 서열과 높은 서열 동일성 (가령, 최소한 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%)을 갖는 아미노산 서열, 또는 (iii) 하나 이상의 보존성 아미노산 변형을 갖는 (i) 또는 (ii)의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 확장의 아미노산 중에서 최소한 하나는 아실화 또는 알킬화된다. 아실 또는 알킬 기를 포함하는 아미노산은 유사체의 확장의 임의의 위치에서 위치될 수 있다. 일정한 구체예에서, 확장의 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 유사체의 위치 37, 38, 39, 40, 41, 또는 42 (서열 번호: 1의 넘버링에 따름) 중에서 하나에 위치된다. 일정한 구체예에서, 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 유사체의 위치 40에 위치된다.
예시적인 구체예에서, 아실 또는 알킬 기는 자연 발생 아미노산에 비-고유인 아실 또는 알킬 기이다. 가령, 아실 또는 알킬 기는 C4 내지 C30 (가령, C12 내지 C18) 지방 아실 기 또는 C4 내지 C30 (가령, C12 내지 C18) 알킬일 수 있다. 아실 또는 알킬 기는 본 명세서에서 논의된 것들 중에서 하나일 수 있다.
일부 구체예에서, 아실 또는 알킬 기는 예로써, 아미노산의 측쇄를 거쳐 아미노산에 직접적으로 부착된다. 다른 구체예에서, 아실 또는 알킬 기는 스페이서 (가령, 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이중기능성 스페이서, 소수성 이중기능성 스페이서)를 거쳐 아미노산에 부착된다. 일정한 양상에서, 스페이서는 3개 내지 10개의 원자 길이를 갖는다. 일부 구체예에서, 아미노산 스페이서는 γ-Glu가 아니다. 일부 구체예에서, 디펩티드 스페이서는 γ-Glu-γ-Glu가 아니다.
또한, 예시적인 구체예에서, 아실 또는 알킬 기가 부착되는 아미노산은 예로써, 화학식 I, II, 또는 III의 아미노산을 비롯하여, 본 명세서에서 기술된 것들 중에서 한 가지일 수 있다. 아실화된 또는 알킬화된 아미노산은 예로써, Lys일 수 있다. 적절한 아실 기와 알킬 기뿐만 아니라, 아실 또는 알킬 기를 포함하는 적절한 아미노산은 본 명세서에서 기술된다. 예로써, 아실화와 알킬화로 이름 붙여진 섹션 하에 교시를 참고한다.
다른 구체예에서, 확장의 1-6개의 아미노산 (가령, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5개의 아미노산)은 양으로 하전된 아미노산, 예를 들면, 화학식 IV의 아미노산, 예를 들면, Lys이다. 본 명세서에서, 용어 "양으로 하전된 아미노산"은 생리학적 pH에서 측쇄의 원자 상에 양전하 (positive charge)를 포함하는, 임의의 자연 발생 또는 비-자연 발생 아미노산을 지칭한다. 일정한 양상에서, 양으로 하전된 아미노산은 위치 37, 38, 39, 40, 41, 42, 그리고 43 중에서 하나에서 위치된다. 특정 구체예에서, 양으로 하전된 아미노산은 위치 40에 위치된다.
다른 경우에, 확장은 본 명세서에서 기술된 바와 같이 아실화 또는 알킬화되고, 그리고 본 명세서에서 기술된 바와 같은 1-6개의 양으로 하전된 아미노산을 포함한다.
또 다른 구체예에서, GIP 수용체에서 작동약 활성을 나타내는 유사체는 (i) 최소한 하나의 아미노산 변형을 갖는 서열 번호: 1, (ii) 유사체의 위치 29에서 아미노산의 C-말단에 1개 내지 21개의 아미노산 (가령, 5 내지 18, 7 내지 15, 9 내지 12개의 아미노산)의 확장, 그리고 (iii) C-말단 확장의 외부 (가령, 위치 1-29 중에서 하나)에 위치되는 자연 발생 아미노산에 비-고유인 아실 또는 알킬 기를 포함하는 아미노산을 포함한다. 일부 구체예에서, 유사체는 위치 10에서 아실화된 또는 알킬화된 아미노산을 포함한다. 특정한 양상에서, 아실 또는 알킬 기는 C4 내지 C30 지방 아실 또는 C4 내지 C30 알킬 기이다. 일부 구체예에서, 아실 또는 알킬 기는 스페이서, 예를 들면, 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 친수성 이중기능성 스페이서, 소수성 이중기능성 스페이서)를 거쳐 부착된다. 일정한 양상에서, 유사체는 알파 나선을 안정시키는 아미노산 변형, 예를 들면, 위치 16에서 Glu와 위치 20에서 Lys 사이에 염 가교, 또는 위치 16, 20, 21, 그리고 24 중에서 1개, 2개, 3개 이상에서 알파, 알파-이중치환된 아미노산을 포함한다. 특정한 양상에서, 유사체는 DPP-IV 프로테아제 내성을 공여하는 아미노산 변형, 예를 들면, 위치 1에서 DMIA, 위치 2에서 Aib를 부가적으로 포함한다. 추가의 아미노산 변형을 포함하는 유사체가 본 발명에서 예기된다.
일정한 구체예에서, GIP 수용체 활성을 갖는 유사체는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 최소한 0.1% (가령, 최소한 0.5%, 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 또는 20%) 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, 유사체는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 20% 초과 (가령, 50% 초과, 75% 초과, 100% 초과, 200% 초과, 300% 초과, 500% 초과)의 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, 유사체는 GLP-1과 글루카곤 수용체 중에서 한쪽 또는 양쪽에서 인지가능한 작동약 활성을 나타낸다. 일부 양상에서, 이들 수용체 (GIP 수용체 및 GLP-1 수용체 및/또는 글루카곤 수용체)에 대한 선택성은 1000-배 내에 있다. 가령, GIP 수용체 활성을 갖는 유사체의 GLP-1 수용체에 대한 선택성은 GIP 수용체 및/또는 글루카곤 수용체에 대한 선택성의 500-배 미만 (100-배 이내, 50-배 이내, 25배 이내, 15배 이내, 10배 이내) 일 수 있다.
일부 구체예에 따라서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 하기 변형을 포함하는 고유 글루카곤 (서열 번호: 1)의 아미노산 서열을 포함한다: 위치 2에서 Aib, 위치 3에서 Glu, 위치 10에서 Lys, 위치 16에서 Glu, 위치 17에서 Gln, 위치 18에서 Ala, 위치 20에서 Lys, 위치 21에서 Glu, 위치 23에서 Ile, 위치 24에서 Ala; 여기서 위치 10에서 Lys는 C14 또는 C16 지방산으로 아실화되고, 그리고 여기서 C-말단 카르복실레이트는 아미드로 대체된다. 특정한 구체예에서, 이러한 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 링커 (L)를 거쳐 GR 리간드 (Y)에 부착된다.
일부 구체예에 따라서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 임의적으로, GLP-1 작동약 및/또는 글루카곤 작동약 활성을 유지하는 1, 2, 3, 4, 또는 5개까지의 추가 변형을 갖는, 서열 번호: 70-514, 517-534, 또는 554 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함하거나, 이러한 서열로 본질적으로 구성되거나, 또는 이러한 서열로 구성된다. 일정한 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 562-760 중에서 한 가지의 아미노산을 포함한다. 일부 구체예에서, 부류 3 글루카곤 관련된 펩티드는 서열 번호: 1301-1421 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함한다.
부류 4 글루카곤 관련된 펩티드
일정한 구체예에서, Q는 부류 4 글루카곤 관련된 펩티드이다 (예로써, 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입되는 국제 (PCT) 특허 출원 공개공보 번호 제WO 2009/058662호를 참고한다).
하기 섹션에서 언급된 모든 생물학적 서열 (서열 번호: 1301-1371)은 WO 2009/058662에서 서열 번호: 1-71에 상응한다.
활성
일부 구체예에 따라서, 부류 4 글루카곤 관련된 펩티드 (이후, "부류 4 펩티드"로 지칭됨)가 제시된다. 일정한 양상에서 글루카곤 길항약 활성을 갖는 부류 4 펩티드가 제시된다. 글루카곤 길항약은 글루카곤 효현작용의 억제가 요망되는 임의의 설정에서 이용될 것이다. 가장 직접적이고 명백한 효용은 당뇨병의 치료인데, 여기서 글루카곤 길항작용은 고혈당증의 전임상 모델에서 혈당 저하를 산출하는 것으로 증명되었다. 글루카곤 길항약은 부모 화합물의 길항약 활성을 유지하면서 화합물의 생물물리학적 안정성 및/또는 수성 용해성을 향상시키기 위해 더욱 변형될 수 있다. 일정한 양상에서 부류 4 펩티드는 순수한 글루카곤 길항약으로서 정의된다.
용어 "글루카곤 길항약"은 글루카곤 활성을 상쇄시키거나, 또는 글루카곤 기능을 방해하는 화합물을 지칭한다. 가령, 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체에서 글루카곤에 의해 달성되는 최대 반응의 최소한 60% 저해 (가령, 최소한 70% 저해), 바람직하게는 최소한 80% 저해를 나타낸다. 일부 구체예에서, 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체에서 글루카곤에 의해 달성되는 최대 반응의 최소한 90% 저해를 나타낸다. 특정한 구체예에서, 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체에서 글루카곤에 의해 달성되는 최대 반응의 100% 저해를 나타낸다. 부가적으로, 약 1 μM의 농도에서 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체에서 글루카곤에 의해 달성되는 최대 작동약 활성의 약 20% 미만을 나타낸다. 일부 구체예에서, 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체에서 글루카곤에 의해 달성되는 최대 작동약 활성의 약 10% 미만을 나타낸다. 특정한 구체예에서, 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체에서 글루카곤에 의해 달성되는 최대 작동약 활성의 약 5% 미만을 나타낸다. 또 다른 특정한 구체예에서, 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체에서 글루카곤에 의해 달성되는 최대 작동약 활성의 0%를 나타낸다.
"순수한 글루카곤 길항약"은 검증된 시험관내 모델 분석평가를 이용하여 cAMP 생산에 의한 측정에서, 글루카곤 또는 GLP-1 수용체 활성의 검출된 자극을 발생시키지 않는 글루카곤 길항약이다 (예로써, WO 2009/058662를 참고한다). 가령, 순수한 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체에서 글루카곤에 의해 달성되는 최대 작동약 활성의 약 5% 미만 (가령, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만, 약 1% 미만, 약 0%)를 나타내고, 그리고 GLP-1 수용체에서 GLP-1에 의해 달성되는 최대 작동약 활성의 약 5% 미만 (가령, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만, 약 1% 미만, 약 0%)를 나타낸다.
따라서 일부 양상에서, 순수한 글루카곤 길항약 활성을 나타내는 부류 4 펩티드가 제시된다. 일부 구체예에 따라서, 글루카곤 길항약은 시험관내 분석평가에서 cAMP 생산에 의한 측정에서, 글루카곤 수용체가 0.8 nM의 글루카곤 및 글루카곤 길항약과 동시에 접촉될 때, 글루카곤 수용체 글루카곤-유도된 cAMP 생산을 최소한 50%의 최대한으로 감소시키는 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, 글루카곤 길항약은 글루카곤 수용체 글루카곤-유도된 cAMP 생산을 최소한 80%의 최대량으로 감소시킨다.
부류 4 펩티드는 글루카곤 길항약에 대하여 이전에 기술되었던 임의의 용도에 적합할 것으로 생각된다. 따라서, 본 명세서에서 기술된 부류 4 펩티드는 고혈당증을 치료하거나, 또는 글루카곤의 높은 혈액 수준 또는 높은 혈당 수준에 기인하는 다른 대사 질환을 치료하는데 이용될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드를 이용하여 치료되는 환자는 가축이고, 그리고 다른 구체예에서, 치료되는 환자는 인간이다. 여러 연구에서 당뇨병 환자에서의 글루카곤 억제의 결여는 부분적으로, 가속화된 글리코겐분해에 의한 식후 고혈당증의 원인이 되는 것으로 암시된다. 경구 내당 검사 (OGTT) 동안, 그리고 소마토스타틴-유도된 글루카곤 억제의 존재 또는 부재에서 혈당의 분석은 더욱 높은 글루카곤 수준을 갖는 개체에서 글루코오스의 유의미한 증가를 증명하였다. 따라서, 본 발명의 부류 4 펩티드는 고혈당증을 치료하는데 이용될 수 있고, 그리고 인슐린-의존성 또는 비-인슐린-의존성의 타입 I 진성 당뇨병, 타입 II 진성 당뇨병, 또는 임신 당뇨병을 비롯한 다양한 유형의 당뇨병을 치료하고, 그리고 신증, 망막병증 및 혈관 질환을 비롯한 당뇨 합병증을 감소시키는데 유용할 것으로 예상된다.
일부 구체예에서, 엑센딘-4의 말단 10개의 아미노산 (즉, 서열 번호: 1319의 서열 (GPSSGAPPPS))은 부류 4 펩티드의 카르복시 말단에 연결된다. 이들 융합 단백질은 식욕을 억제하고 체중 감소/체중 유지를 유도하는 약리학적 활성을 가질 것으로 기대된다. 일부 구체예에 따라서, 본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1342의 부류 4 펩티드의 아미노산 24에 연결된 서열 번호: 1319 (GPSSGAPPPS)의 아미노산 서열을 포함하도록 더욱 변형되고, 그리고 체중 감소를 유도하거나 체중 유지를 보조하기 위해 개체에 투여될 수 있다. 더욱 구체적으로, 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1302, 서열 번호: 1303, 서열 번호: 1304 서열 번호: 1305, 서열 번호: 1306, 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1308, 서열 번호: 1336, 서열 번호: 1339, 서열 번호: 1340, 서열 번호: 1341, 서열 번호: 1342, 서열 번호: 1343 및 서열 번호: 1344로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하고, 그리고 식욕을 억제하고 체중 감소/체중 유지를 유도하는데 이용되는, 부류 4 펩티드의 아미노산 24에 연결된 서열 번호: 1319 (GPSSGAPPPS)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 투여된 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1346 또는 서열 번호: 1347의 서열을 포함한다.
식욕을 감소시키거나, 또는 체중 감소를 촉진하기 위한 이런 방법은 체중을 감소시키거나, 체중 증가를 예방하거나, 또는 약물-유도된 비만을 비롯한 다양한 원인의 비만을 치료하고, 그리고 혈관 질환 (관상 동맥 질환, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 허혈성 재관류 등), 고혈압, 타입 II 당뇨병의 발병, 고지질혈증 및 근골격 질환을 비롯한 비만과 연관된 합병증을 감소시키는데 유용할 것으로 예상된다.
본 발명의 부류 4 펩티드는 단독으로, 또는 다른 항-당뇨성 또는 항-비만 작용제와 공동으로 투여될 수 있다. 당분야에 공지되거나 현재 연구 중인 항-당뇨성 작용제에는 인슐린, 설포닐요소, 예를 들면, 톨부타미드 (Orinase), 아세토헥사미드 (Dymelor), 톨라자미드 (Tolinase), 클로르프로파미드 (Diabinese), 글리피지드(Glucotrol), 글리부리드 (Diabeta, Micronase, Glynase), 글리메피리드 (Amaryl), 또는 글리클라지드 (Diamicron); 메글리티니드, 예를 들면, 레파글리니드 (Prandin) 또는 나테글리니드 (Starlix); 비구아니드, 예를 들면, 메트포르민 (Glucophage) 또는 펜포르민; 티아졸리딘디온, 예를 들면, 로시글리타존 (Avandia), 피오글리타존 (Actos), 또는 트로글리타존 (Rezulin), 또는 기타 PPARγ 저해제; 탄수화물 소화를 저해하는 알파 글루코시다아제 저해제, 예를 들면, 미글리톨 (Glyset), 아카르보스 (Precose/Glucobay); 엑세나티드 (Byetta) 또는 프람린티드; 디펩티딜 펩티다아제-4 (DPP-4) 저해제, 예를 들면, 빌다글립틴 또는 시타글립틴; SGLT (나트륨-의존성 글루코오스 트랜스포터 저해제; 또는 FBPase (프럭토오스 1,6-비스포스포파타아제) 저해제가 포함된다.
당분야에 공지되거나 현재 연구 중인 항-비만 작용제에는 펜에틸아민 타입 자극제, 펜테르민 (임의적으로, 펜플루라민 또는 덱스펜플루라민과 함께), 디에틸프로피온 (Tenuate®), 펜디메트라진 (Prelu-2®, Bontril®), 벤즈페타민 (Didrex®), 시부트라민 (Meridia®, Reductil®)을 비롯한 식욕 억제제; 리모나반트 (Acomplia®), 기타 카나비노이드 수용체 길항약; 옥신토모듈린; 플루옥세틴 염산 염 (Prozac); Qnexa (토피라메이트와 펜테르민), Excalia (부프로피온과 조니사미드) 또는 Contrave (부프로피온과 날트렉손); 또는 제니칼 (Orlistat) 또는 Cetilistat (일명, ATL-962)와 같은 리파아제 저해제, 또는 GT 389-255가 포함된다.
본 발명의 부류 4 펩티드는 또한, 이화 소모증 (catabolic wasting)을 앓는 환자에 투여될 수 있다. 암 환자의 절반 이상이 의도하지 않은 진행성 체중 감소, 약화, 그리고 적은 체지방과 근육으로 특징되는 이화 소모증을 경험하는 것으로 추정된다. 상기 증상은 AIDS 환자에서 동등하게 일반적이고, 그리고 또한, 박테리아와 기생충 질환, 류머티스성 관절염, 그리고 장, 간, 폐, 그리고 심장의 만성 질환에서 존재할 수 있다. 이것은 통상적으로, 식욕부진과 연관되고, 그리고 노화에서 장애로서 또는 물리적 외상의 결과로서 나타날 수 있다. 이화 소모증은 삶의 질을 떨어뜨리고, 기초 상태 (underlying condition)를 악화시키고, 그리고 사망의 주요 원인인 증상이다. 본 발명자들은 본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드가 이화 소모증을 치료하기 위해 환자에 투여될 수 있을 것으로 기대한다.
본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드를 포함하는 제약학적 조성물은 당업자에게 공지된 표준 제약학적으로 허용되는 담체와 투여 루트를 이용하여 조제되고 환자에 투여될 수 있다. 따라서 본 발명은 또한, 제약학적으로 허용되는 담체와 공동으로 본 명세서에서 개시된 하나 이상의 부류 4 펩티드를 포함하는 제약학적 조성물을 포함한다. 제약학적 조성물은 유일한 제약학적 활성 성분으로서 부류 4 펩티드를 포함하거나, 또는 부류 4 펩티드는 하나 이상의 추가적인 활성제와 복합될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 본 발명의 부류 4 펩티드 및 GLP-1 수용체를 활성화시키는 화합물 (가령, GLP-1, GLP-1 유사체, 엑센딘-4 유사체, 또는 이들의 유도체)을 포함하는 조성물이 제시된다. 일부 구체예에 따라서, 본 발명의 부류 4 펩티드 및 인슐린 또는 인슐린 유사체를 포함하는 조성물이 제시된다. 대안으로, 체중 감소를 유도하거나 체중 증가를 예방하기 위한 제시된 조성물은 서열 번호: 1342의 서열을 포함하고 서열 번호: 1342의 아미노산 24에 연결된 서열 번호: 1319 (GPSSGAPPPS)의 아미노산 서열, 그리고 항-비만 펩티드를 더욱 포함할 수 있다. 적절한 항-비만 펩티드에는 미국 특허 5,691,309, 6,436,435 또는 미국 특허 출원 20050176643에서 개시된 것들이 포함되고, 그리고 GLP-1, GIP (위 저해 폴리펩티드), MP1, PYY, MC-4, 렙틴이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
부류 4 펩티드 구조
일부 구체예에서, 위치 9 (글루카곤, 서열 번호: 1301)에서 정상적으로 발생하는 아스파르트산이 글루타민산 또는 시스테산-기초된 유도체로 치환되는 부류 4 글루카곤 관련된 펩티드가 제시된다. 더욱 구체적으로, 첫 번째 아미노산 (des-His)의 결실 및 위치 9에서 글루타민산으로 아스파르트산의 치환은 일부 양상에서, 부류 4 펩티드를 생산한다. 글루카곤의 아미노산 위치 9에서 설폰산 치환기가 치환된 부류 4 글루카곤 관련된 펩티드는 카르복실산-기초된 아미노산과 유사하게 행동하지만 물리학적 성질, 예를 들면, 용해성에 대하여 몇몇 중요한 차이점을 갖는다. 전통적인 데스-His, G1u9 부류 4 펩티드 내에 위치 9에서 등전자 글루타민산에 대해 치환될 때 호모시스테산 (hCysSO3)은 부분 길항약 및 약한 작동약을 유지한다.
일부 구체예에서, 첫 2개 내지 5개의 아미노산이 제거되고, 그리고 위치 9 (서열 번호: 1301의 넘버링에 따름)가 hCys(SO3), 호모글루타민산, β-호모글루타민산, 또는 하기 구조를 갖는 시스테인의 알킬카르복실레이트 유도체로 대체되어, 고도로 특이적이고, 유효하고, 작동약 성질을 오염시키지 않는 호르몬 길항약으로서 기능하는 화합물을 제공하는 부류 4 펩티드가 제시된다:
Figure pct00027
,
여기서 X5는 C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐, 또는 C2-C4 알키닐이다.
일부 구체예에 따라서, N-말단으로부터 2개 내지 5개 아미노산 잔기의 결실, 그리고 고유 단백질의 위치 9에서 아스파르트산 잔기의 글루타민산, 호모글루타민산, β-호모글루타민산, 시스테인의 설폰산 유도체, 또는 하기 구조를 갖는 시스테인의 알킬카르복실레이트 유도체로의 치환에 의해, 서열 번호: 1301의 야생형 서열에 비하여 변형된 글루카곤 펩티드를 포함하는 부류 4 펩티드가 제시된다:
Figure pct00028
,
여기서 X5는 C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐, 또는 C2-C4 알키닐이다.
특정한 구체예에서, N-말단으로부터 2개 내지 5개의 아미노산 잔기의 결실 및 고유 글루카곤의 위치 9에서 Asp의 치환을 포함하는 부류 4 펩티드는 3개까지의 아미노산 변형에 의해 더욱 변형된다. 가령, 부류 4 펩티드는 1개, 2개, 또는 3개의 보존성 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 대안으로 또는 부가적으로, 부류 4 펩티드는 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 변형을 포함할 수도 있다:
A. 에스테르, 에테르, 티오에테르, 아미드, 또는 알킬 아민 연쇄를 거쳐 아실 기 또는 알킬 기에 공유 부착된 아미노산으로 위치 10, 20, 그리고 24 (서열 번호: 1301의 아미노산 넘버링에 따름)에서 1개 또는 2개 아미노산, 또는 부류 4 펩티드의 N- 또는 C-말단 아미노산의 치환;
B. Cys, Lys, 오르니틴, 호모시스테인, 그리고 아세틸-페닐알라닌 (Ac-Phe)으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 위치 16, 17, 20, 21, 그리고 24 (서열 번호: 1301의 아미노산 넘버링에 따름)에서 1개 또는 2개 아미노산, 또는 부류 4 펩티드의 N- 또는 C-말단 아미노산의 치환, 여기서 상기 군의 아미노산은 친수성 모이어티에 공유 결합된다;
C. 부류 4 펩티드의 N- 또는 C-말단에 대한 친수성 모이어티에 공유 결합된 아미노산의 부가;
D. 위치 15 (서열 번호: 1301의 넘버링에 따름)에서 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산, 그리고 호모시스테산으로 Asp의 치환;
E. 위치 16 (서열 번호: 1301의 넘버링에 따름)에서 Ser의 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산, 그리고 호모시스테산으로의 치환;
F. 서열 번호: 1301의 아미노산 넘버링에 따른 위치 16, 20, 21, 그리고 24 중에서 하나 이상에서 Aib로 치환;
G. 서열 번호: 1301의 넘버링에 따른 위치 29에서 아미노산 또는 위치 28과 29에서 아미노산의 결실;
H. 하전된 아미노산으로 위치 28에서 Asn 및 위치 29에서 Thr (서열 번호: 1301의 아미노산 넘버링에 따름) 각각 또는 둘 모두의 치환; 및/또는 서열 번호: 1301의 C-말단에서 1개 내지 2개의 하전된 아미노산의 부가;
I. 위치 27 (서열 번호: 1301의 넘버링에 따름)에서 Met의 Leu 또는 노르류신으로의 치환;
J. 서열 번호: 1301의 C-말단에 대한 서열 번호: 19-21과 53 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 갖는 펩티드의 부가; 여기서 위치 29 (서열 번호: 1301의 넘버링에 따름)에서 Thr은 Thr 또는 Gly이다; 그리고
K. 아미드 또는 에스테르로 C-말단 카르복실레이트의 대체.
특정한 구체예에서, 부류 4 펩티드는 앞서 기술된 바와 같은 A, B, 또는 C의 아미노산 변형, 또는 이들의 조합을 포함한다. 또 다른 특정한 구체예에서, 부류 4 펩티드는 A, B, 및/또는 C의 아미노산 변형(들)에 더하여, 앞서 기술된 바와 같은 D 내지 K 중에서 한 가지의 아미노산 변형, 또는 이들의 조합을 더욱 포함한다.
일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 글루카곤 펩티드를 포함하고, 여기서 첫 5개의 아미노산은 N-말단으로부터 제거되고, 그리고 나머지 N-말단 아미노 기는 히드록실 기 ("PLA6 유사체")로 대체되어 서열 번호: 1339의 펩티드가 생산된다. 본 발명자들은 첫 5개 아미노산이 결실된 부류 4 펩티드 유사체에서 페닐알라닌에 대한 페닐-젖산의 치환 및 위치 9에서 글루타민산의 치환 (고유 글루카곤에 비하여) 이들 부류 4 펩티드 유사체의 효능을 더욱 증강시킨다는 것을 발견하였다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 1339의 부류 4 펩티드는 위치 4 (고유 글루카곤의 위치 9)에서 아스파르트산 잔기를 하기 일반 구조의 아미노산으로 치환함으로써 더욱 변형된다:
Figure pct00029

여기서 X6은 C1-C3 알킬, C2-C3 알켄 또는 C2-C3 알키닐이고, 그리고 일부 구체예에서 X6은 C1-C3 알킬이고, 그리고 다른 구체예에서 X6은 C2 알킬이다. 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 글루카곤 펩티드를 포함하고, 여기서 첫 5개의 아미노산이 N-말단으로부터 제거되고, 그리고 위치 4 (고유 글루카곤의 위치 9)에서 아스파르트산 잔기가 시스테산 또는 호모시스테산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1339, 서열 번호: 1307과 서열 번호: 1308로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 글루카곤 펩티드를 포함한다. 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1308로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 위치 4에서 아미노산은 호모시스테산이다.
다른 구체예에서, 서열 번호: 1339의 부류 4 펩티드는 위치 4 (고유 글루카곤의 위치 9)에서 아스파르트산 잔기를 글루타민산, 호모글루타민산, β-호모글루타민산, 또는 하기 구조를 갖는 시스테인의 알킬카르복실레이트 유도체로 치환함으로써 더욱 변형된다:
Figure pct00030
,
여기서 X5는 C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐, 또는 C2-C4 알키닐이다. 특정한 구체예에서, X5는 C1 또는 C2 알킬이다.
하지만, 본 발명자들은 des1-5 글루카곤 유사체 (즉, 첫 5개의 아미노산이 결실된 글루카곤 유사체)에서 PLA로 N-말단 페닐알라닌의 치환에 의해, 순수한 길항작용을 나타내는 유사체를 생산하기 위해 위치 4 (고유 글루카곤의 위치 9)에서 고유 아스파르트산 잔기의 추가 치환이 요구되지 않는다는 것을 발견하였다. 이러한 결과는 글루카곤 (2-29) 유사체의 높은 친화성 유효 길항약을 생산하기 위해 위치 4에서 고유 아스파르트산 잔기가 치환되어야 한다는 기존 교시에 비추어 놀라운 것이다. PLA 치환의 이용은 Asp9 유사체의 상대적 효능을 Glu9와 hCys(SO3H)9 유사체의 효능에 필적하는 지점까지 향상시킨다.
3,4-2F-페닐알라닌 (3,4-2F-Phe), 2-나프티알라닌 (2-Nal), N-아실-페닐알라닌 (Ac-Phe), 알파-메틸히드로신남산 (MCA) 및 벤질말론산 (BMA)을 비롯한 다른 페닐알라닌 유사체로 페닐알라닌 잔기의 치환은 PLA 치환만큼 강력하게 실행되지 않았다.
위치 4와 5를 비롯하여, 위치 6 (고유 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 이외의 위치에서 PLA의 치환은 PLA6 유사체가 약간 확장된 N-말단을 갖는 글루카곤 유사체보다 훨씬 강한 길항약이라는 것을 드러낸다. 본 발명은 또한, N-말단 아미노 기가 아실화되고 알킬화된 "O-말단" 펩티드로 치환되는 유사체를 포함한다.
더 나아가, PLA6 치환은 길항약의 효능을 증가시킬 뿐만 아니라 페길화에서 결정적인 역할을 수행한다. PLA6 유사체는 글루카곤 효현작용의 복구 없이 선택적으로 페길화될 수 있다. PLA 치환의 부재에서, 유사체의 페길화는 놀랍게도, 글루카곤 효현작용을 유도한다. 이러한 글루카곤 효현작용은 페길화되는 PLA6 유사체에서 관찰되지 않는다. 위치 3, 6과 19 (고유 글루카곤의 위치 8, 11과 19) 및 N-말단 아미노산 잔기를 비롯하여, 페길화를 위한 몇몇 부위가 조사되었다. 일부 구체예에서, 페길화는 위치 19 (고유 글루카곤의 위치 24)에서 일어나는데, 그 이유는 상기 부위가 가장 강력하고 선택적인 글루카곤 길항작용을 나타내기 때문이다.
일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 A-B-C의 일반 구조를 포함하고, 여기서 A는 하기와 같이 구성된 군에서 선택된다:
(i) 페닐 젖산 (PLA);
(ii) PLA의 옥시 유도체;
(iii) 펩티드의 2개의 구조성 아미노산이 에스테르 또는 에테르 결합을 거쳐 연결되는 2개 내지 6개의 아미노산의 펩티드;
B는 서열 번호: 1301의 아미노산 i 내지 26을 나타내고, 여기서 i는 3, 4, 5, 6, 또는 7이고, 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 변형을 임의적으로 포함한다:
(iv) 위치 9 (서열 번호: 1301의 아미노산 넘버링에 따름)에서 Asp가 Glu, Cys의 설폰산 유도체, 호모글루타민산, β-호모글루타민산, 또는 하기 구조를 갖는 시스테인의 알킬카르복실레이트 유도체로 치환된다:
Figure pct00031
,
여기서 X5는 C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐, 또는 C2-C4 알키닐이다;
(v) 위치 10, 20, 그리고 24 (서열 번호: 1301의 아미노산 넘버링에 따름)에서, 에스테르, 에테르, 티오에테르, 아미드, 또는 알킬 아민 연쇄를 거쳐 아실 또는 알킬 기에 공유 부착된 아미노산으로 1개 또는 2개 아미노산의 치환;
(vi) 위치 16, 17, 20, 21, 그리고 24 (서열 번호: 1301의 아미노산 넘버링에 따름)에서, Cys, Lys, 오르니틴, 호모시스테인, 그리고 아세틸-페닐알라닌 (Ac-Phe)으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 1개 또는 2개 아미노산의 치환, 여기서 상기 군의 아미노산은 친수성 모이어티에 공유 부착된다;
(vii) 위치 15 (서열 번호: 1301의 넘버링에 따름)에서 Asp는 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산, 그리고 호모시스테산으로 치환된다;
(viii) 위치 16 (서열 번호: 1301의 넘버링에 따름)에서 Ser은 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산, 그리고 호모시스테산으로 치환된다;
(ix) 서열 번호: 1301의 아미노산 넘버링에 따른 위치 16, 20, 21, 그리고 24 중에서 하나 이상에서 Aib로 치환;
그리고 C는 하기와 같이 구성된 군에서 선택되고:
(x) X;
(xi) X-Y;
(xii) X-Y-Z; 그리고
(xiii) X-Y-Z-R10,
여기서 X는 Met, Leu, 또는 Nle이고; Y는 Asn 또는 하전된 아미노산이고; Z는 Thr, Gly, Cys, Lys, 오르니틴 (Orn), 호모시스테인, 아세틸 페닐알라닌 (Ac-Phe), 또는 하전된 아미노산이고; 여기서 R10은 서열 번호: 1319-1321과 1353로 구성된 군에서 선택되고; 그리고
(xiv) C-말단 카르복실레이트가 아미드로 대체되는 (x) 내지 (xiii) 중에서 한 가지.
특정한 양상에서, 부류 4 펩티드는 PLA의 옥시 유도체를 포함한다. 본 명세서에서 "PLA의 옥시 유도체"는 히드록실 기가 O-R11로 대체되는 PLA의 변형된 구조를 포함하는 화합물을 지칭하고, 여기서 R11은 화학적 모이어티이다. 이와 관련하여, PLA의 옥시 유도체는 예로써, PLA의 에스테르 또는 PLA의 에테르일 수 있다.
PLA의 옥시 유도체를 만드는 방법은 당분야에 공지되어 있다. 가령, 옥시 유도체가 PLA의 에스테르일 때, 에스테르는 PLA의 히드록실 및 구핵 원자(nucleophile)를 보유하는 카르보닐의 반응에 의해 형성될 수 있다. 구핵 원자는 아민 또는 히드록실이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 임의의 적절한 구핵 원자일 수 있다. 따라서, PLA의 에스테르는 화학식 IV의 구조를 포함할 수 있다:
Figure pct00032

화학식 IV
여기서 R7은 PLA의 히드록실 및 구핵 원자를 보유하는 카르보닐의 반응 시에 형성된 에스테르이다.
구핵 원자를 보유하는 카르보닐 (이것은 PLA의 히드록실과 반응하여 에스테르를 형성한다)은 예로써, 카르복실산, 카르복실산 유도체, 또는 카르복실산의 활성화된 에스테르일 수 있다. 카르복실산 유도체는 아실 염화물, 산 무수물, 아미드, 에스테르, 또는 니트릴일 수 있지만 이들에 국한되지 않는다. 카르복실산의 활성화된 에스테르는 예로써, N-히드록시숙신이미드 (NHS), 토실레이트 (Tos), 카르보디이미드, 또는 헥사플루오르포스페이트일 수 있다. 일부 구체예에서, 카르보디이미드는 1,3-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC), 1,1'-카르보닐디이미다졸 (CDI), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 (EDC), 또는 1,3-디이소프로필카르보디이미드 (DICD)이다. 일부 구체예에서, 헥사플루오르포스페이트는 헥사플루오르포스페이트 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오르포스페이트 (BOP), 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오르포스페이트 (PyBOP), 2-(1H-7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸 우로늄 헥사플루오르포스페이트 (HATU), 그리고 o-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸-우로늄-헥사플루오르-포스페이트 (HBTU)로 구성된 군에서 선택된다.
히드록실 기 (가령, PLA의 히드록실)와의 반응으로부터 에테르를 만드는 방법 역시 당분야에 공지되어 있다. 가령, PLA의 히드록실 기는 할로겐화된 알킬 또는 토실화된 알킬 알코올과 반응하여 에테르 결합이 형성될 수 있다.
일반적으로, R11의 화학적 모이어티는 부류 4 펩티드의 활성을 감소시키지 않는 것이다. 일부 구체예에서, 화학적 모이어티는 부류 4 펩티드의 활성, 안정성, 및/또는 용해성을 증강시킨다.
특정한 구체예에서, 산소-내포 결합 (가령, 에스테르 또는 에테르 결합)을 거쳐 PLA에 결합된 화학적 모이어티는 중합체 (가령, 폴리알킬렌 글리콜), 탄수화물, 아미노산, 펩티드, 또는 지질, 예를 들면, 지방산 또는 스테로이드이다.
특정한 구체예에서, 화학적 모이어티는 아미노산이고, 이것은 임의적으로, 펩티드의 일부이고, 따라서 화학식 IV는 뎁시펩티드(depsipeptide)이다. 이와 관련하여, PLA는 부류 4 펩티드의 N-말단 아미노산 잔기 이외의 위치에 있을 수 있고, 따라서 부류 4 펩티드는 PLA 잔기의 N-말단에 하나 이상 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6개 이상)의 아미노산을 포함한다. 가령, 부류 4 펩티드는 위치 n에서 PLA를 포함할 수 있고, 여기서 n은 부류 4 펩티드의 2, 3, 4, 5, 또는 6이다.
PLA 잔기에 N-말단의 아미노산은 합성 또는 자연 발생일 수 있다. 특정한 구체예에서, PLA에 N-말단인 아미노산은 자연 발생 아미노산이다. 일부 구체예에서, PLA에 N-말단인 아미노산은 고유 글루카곤의 N-말단 아미노산이다. 가령, 부류 4 펩티드는 N-말단에서 서열 번호: 1354-1358 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 여기서 PLA는 에스테르 결합을 거쳐 트레오닌에 연결된다:
서열 번호: 1354 His-Ser-Gln-Gly-Thr-PLA
서열 번호: 1355 Ser-Gln-Gly-Thr-PLA
서열 번호: 1356 Gln-Gly-Thr-PLA
서열 번호: 1357 Gly-Thr-PLA
서열 번호: 1358 Thr-PLA
대안적 구체예에서, 하나 이상의 N-말단 아미노산은 고유 글루카곤의 아미노산 이외의 아미노산으로 치환될 수 있다. 가령, 부류 4 펩티드가 위치 5 또는 6에서 아미노산으로서 PLA를 포함할 때, 위치 1 및/또는 위치 2에서 아미노산은 디펩티딜 펩티다아제 IV에 의한 절단에 대한 감수성을 감소시키는 아미노산이다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드의 위치 1은 D-히스티딘, 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA), N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘 및 호모-히스티딘으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산이다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 길항약 펩티드의 위치 2는 D-세린, D-알라닌, 발린, 글리신, N-메틸 세린, N-메틸 알라닌, 그리고 아미노이소부티르산 (Aib)으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산이다. 또한, 예로써 부류 4 펩티드가 위치 4, 5, 또는 6에서 아미노산으로서 PLA를 포함할 때, 부류 4 펩티드의 위치 3의 아미노산은 고유 글루카곤의 고유 글루타민 잔기와는 대조적으로 글루타민산일 수 있다. 본 발명의 예시적인 구체예에서, 부류 4 펩티드는 N-말단에서 서열 번호: 1359-1361 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함한다.
화학식 IV의 화합물을 포함하는 부류 4 펩티드에 관하여, 중합체는 임의의 중합체일 수 있고, 단서로써 이것은 PLA의 히드록실 기와 반응할 수 있다. 중합체는 구핵 원자를 보유하는 카르보닐을 자연적으로 또는 정상적으로 포함하는 것일 수 있다. 대안으로, 중합체는 카르보닐을 보유하는 카르보닐을 포함하도록 유도체화된 것일 수 있다. 중합체는 하기 중에서 한 가지의 유도체화된 중합체일 수 있다: 폴리아미드, 폴리카보네이트, 폴리알킬렌 및 폴리알킬렌 글리콜, 폴리알킬렌 산화물, 폴리알킬렌 테레프탈레이트를 비롯한 이들의 유도체, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 그리고 폴리(옥타데실 아크릴레이트)를 비롯한 아크릴과 메타크릴 에스테르의 중합체, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르, 폴리비닐 할로겐화물, 폴리(비닐 아세테이트), 그리고 폴리비닐피롤리돈을 비롯한 폴리비닐 중합체, 폴리글리콜리드, 폴리실록산, 폴리우레탄과 이의 공중합체, 알킬 셀룰로오스, 히드록시알킬 셀룰로오스, 셀룰로오스 에테르, 셀룰로오스 에스테르, 니트로 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 셀룰로오스, 히드록시-프로필 메틸 셀룰로오스, 히드록시부틸 메틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트, 셀룰로오스 프로피오네이트, 셀룰로오스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 카르복실에틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 트리아세테이트, 그리고 셀룰로오스 설페이트 나트륨 염을 비롯한 셀룰로오스, 폴리프로필렌, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 산화물), 그리고 폴리(에틸렌 테레프탈레이트)를 비롯한 폴리에틸렌, 그리고 폴리스티렌.
중합체는 합성 생물분해성 중합체 (가령, 젖산과 글리콜산의 중합체, 폴리무수물, 폴리(오르토)에스테르, 폴리우레탄, 폴리(부틱산), 폴리(발레르산), 그리고 폴리(락티드-카프로락톤)), 그리고 자연 생물분해성 중합체 (가령, 알기네이트 및 덱스트란과 셀룰로오스를 비롯한 다른 다당류, 콜라겐, 이들의 화학적 유도체 (치환, 화학적 기, 예를 들면, 알킬, 알킬렌의 부가, 히드록실화, 산화, 그리고 당업자에 의해 일과적으로 만들어지는 기타 변형)를 비롯한 생물분해성 중합체, 알부민 및 다른 친수성 단백질 (가령, 제인과 기타 프롤라민 및 소수성 단백질))뿐만 아니라 이들의 임의의 공중합체 또는 혼합물일 수 있다. 일반적으로, 이들 물질은 생체내에서 효소적 가수분해 또는 물에 노출에 의해, 또는 표면 또는 벌크 부식에 의해 분해된다.
중합체는 생물접합성 중합체, 예를 들면, H. S. Sawhney, C. P. Pathak and J. A. Hubbell in Macromolecules, 1993, 26, 581-587 (이의 교시는 본 발명에 참고문헌으로 편입된다)에 의해 기술된 생물부식성 히드로겔, 폴리히알루론산, 카제인, 젤라틴, 글루틴, 폴리무수물, 폴리아크릴산, 알기네이트, 키토산, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 그리고 폴리(옥타데실 아크릴레이트)일 수 있다.
일부 구체예에서, 중합체는 물-용해성 중합체이다. 적절한 물-용해성 중합체는 당분야에 공지되어 있고, 여기에는 예로써 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로오스 (HPC; Klucel), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC; Methocel), 니트로셀룰로오스, 히드록시프로필 에틸셀룰로오스, 히드록시프로필 부틸셀룰로오스, 히드록시프로필 펜틸셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스 (Ethocel), 히드록시에틸 셀룰로오스, 다양한 알킬 셀룰로오스와 히드록시알킬 셀룰로오스, 다양한 셀룰로오스 에테르, 셀룰로오스 아세테이트, 카르복시메틸 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 칼슘 카르복시메틸 셀룰로오스, 비닐 아세테이트/크로톤산 공중합체, 폴리-히드록시알킬 메타크릴레이트, 히드록시메틸 메타크릴레이트, 메타크릴산 공중합체, 폴리메타크릴산, 폴리메틸메타크릴레이트, 말레산 무수물/메틸 비닐 에테르 공중합체, 폴리 비닐 알코올, 나트륨과 칼슘 폴리아크릴산, 폴리아크릴산, 산성 카르복시 중합체, 카르복시폴리메틸렌, 카르복시비닐 중합체, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 공중합체, 폴리메틸비닐에테르-말레산 무수물, 카르복시메틸아미드, 칼륨 메타크릴레이트 디비닐벤젠 공중합체, 폴리옥시에틸렌글리콜, 폴리에틸렌 산화물, 그리고 이들의 유도체, 염, 그리고 조합이 포함된다.
특정 구체예에서, 중합체는 예로써, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 비롯한 폴리알킬렌 글리콜이다.
탄수화물은 임의의 탄수화물일 수 있고, 단서로써 이것은 알파 이탈 기를 갖는 카르보닐을 포함하거나 포함하도록 만들어진다. 탄수화물은 예로써, 알파 이탈 기를 갖는 카르보닐을 포함하도록 유도체화된 것일 수 있다. 이와 관련하여, 탄수화물은 단당류 (가령, 글루코오스, 갈락토오스, 프럭토오스), 이당류 (가령, 수크로오스, 락토오스, 말토오스), 올리고당류 (가령, 라피노오스, 스타키오스), 다당류 (전분, 아밀라아제, 아밀로펙틴, 셀룰로오스, 키틴, 칼로오스, 라미나린, 크실란, 만난, 후코이단, 갈락토만난의 유도체화된 형태일 수 있다
화학식 IV의 화합물을 포함하는 부류 4 펩티드에 관하여, 지질은 알파 이탈 기를 갖는 카르보닐을 포함하는 임의의 지질일 수 있다. 지질은 예로써, 카르보닐을 포함하도록 유도체화된 것일 수 있다. 이와 관련하여, 지질은 지방산 (가령, C4-C30 지방산, 에이코사노이드, 프로스타글란딘, 류코트리엔, 트롬복산, N-아실 에탄올아민), 글리세롤지질 (가령, 단일-, 이중-, 삼중-치환된 글리세롤), 글리세로포스포지질 (가령, 포스파티딜콜린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린), 스핑고지질 (가령, 스핑고신, 세라미드), 스테롤 지질 (가령, 스테로이드, 콜레스테롤), 프레놀 지질, 사카로지질, 또는 폴리케티드의 유도체일 수 있다. 일부 구체예에서, 지질은 오일, 왁스, 콜레스테롤, 스테롤, 지용성 비타민, 모노글리세리드, 디글리세리드, 트리글리세리드, 포스포지질이다.
일부 구체예에서, R7은 약 100 kDa 이하, 예를 들면, 약 90 kDa 이하, 약 80 kDa 이하, 약 70 kDa 이하, 약 60 kDa 이하, 약 50 kDa 이하, 약 40 kDa 이하의 분자량을 갖는다. 따라서, R7은 약 35 kDa 이하, 약 30 kDa 이하, 약 25 kDa 이하, 약 20 kDa 이하, 약 15 kDa 이하, 약 10 kDa 이하, 약 5 kDa 이하, 또는 약 1 kDa의 분자량을 가질 수 있다.
대안적 구체예에서, 부류 4 펩티드는 2개 내지 6개의 아미노산의 펩티드를 A로서 포함하고, 여기서 상기 펩티드의 2개의 구조성 아미노산은 에스테르 또는 에테르 결합을 거쳐 연결된다. 에스테르 또는 에테르 결합은 예로써, 아미노산 2와 3, 3과 4, 4와 5, 또는 5와 6 사이에 존재할 수 있다. 임의적으로, 펩티드는 중합체 (가령, 친수성 중합체)에 연쇄, 알킬화, 또는 아실화를 비롯하여, 또 다른 화학적 모이어티에 공유 연쇄에 의해 더욱 변형될 수 있다.
일반 구조 A-B-C를 포함하는 부류 4 펩티드에 관하여, B는 고유 글루카곤의 아미노산, 예를 들면, 서열 번호: 1301의 i 내지 26을 나타내고, 여기서 i는 3, 4, 5, 6, 또는 7이고, 하나 이상의 아미노산 변형을 임의적으로 포함한다. 특정한 구체예에서, B는 서열 번호: 1301의 아미노산 7 내지 26을 나타내고, 임의적으로 더욱 변형된다.
일부 구체예에서, B는 3개까지의 아미노산 변형에 의해 변형된다. 가령, 서열 번호: 1301의 고유 아미노산 서열을 나타내는 B는 하나 이상의 보존성 아미노산 변형에 의해 변형된다.
다른 구체예에서, B는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 (iv) 내지 (ix)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 변형을 포함한다. 특정한 구체예에서, B는 아미노산 변형 (v)와 (vi) 중에서 한쪽 또는 양쪽을 포함한다. 더욱 특정한 구체예에서, B는 (v)와 (vi)에 더하여, (iv), (vii), (viii), 그리고 (ix)로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 변형 중에서 한 가지 또는 조합을 포함한다.
다른 특정한 구체예에서, 부류 4 펩티드는 C-말단에서 하나 이상의 하전된 아미노산을 포함한다. 가령, Y 및/또는 Z는 하전된 아미노산, 예를 들면, Lys, Arg, His, Asp, 그리고 Glu일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 부류 4 펩티드는 Z의 C-말단에 1개 내지 2개의 하전된 아미노산 (가령, Lys, Arg, His, Asp, 그리고 Glu)을 포함한다. 특정한 양상에서, Z, 그 이후에 1개 내지 2개의 하전된 아미노산은 R10을 포함하지 않는다.
일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 본 명세서에서 기술된 바와 같이 부류 4 펩티드의 아미노산 잔기에 공유 결합된 친수성 모이어티를 포함한다. 가령, 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1301의 넘버링에 따른 위치 1, 16, 20, 21, 또는 24에서 아미노산에 공유 부착된 친수성 모이어티를 포함할 수 있다. 또 다른 구체예에서, 친수성 모이어티는 부류 4 펩티드의 C-말단 아미노산에 부착되고, 이것은 일부 경우에, Z의 C-말단에 1 또는 11개 아미노산이다. 또 다른 구체예에서, 친수성 모이어티는 PLA에 부착되고, 여기서 A는 PLA, PLA-Phe, 또는 PLA-Thr-Phe이고, 여기서 PLA는 친수성 모이어티를 포함하도록 변형된다. 또 다른 구체예에서, 친수성 모이어티를 포함하는 아미노산은 부류 4 펩티드의 N- 또는 C-말단에 부가된다. 또 다른 구체예에서, 부류 4 펩티드는 본 명세서에서 기술된 바와 같이 아실 기 또는 알킬 기를 포함한다. 가령, 아실화 또는 알킬화는 서열 번호: 1301의 넘버링에 따른 위치 10, 20, 또는 24에서 아미노산의 측쇄로부터 떨어져 일어날 수 있다. 대안적 구체예에서, 아실화 또는 알킬화는 부류 4 펩티드의 C-말단 아미노산의 측쇄로부터 떨어져 일어나고, 이것은 일부 경우에, Z의 C-말단에 1 또는 11개 아미노산이다. 또 다른 구체예에서, A가 PLA, PLA-Phe, 또는 PLA-Thr-Phe일 때, PLA는 아실 또는 알킬 기를 포함하도록 변형된다.
예시적인 구체예
부류 4 펩티드는 임의의 합성 또는 자연 발생 아미노산을 포함할 수 있고, 단서로써 상기 펩티드의 최소한 2개의 구조성 아미노산은 에스테르 또는 에테르 결합을 거쳐 연결된다. 특정한 구체예에서, 펩티드는 고유 글루카곤의 아미노산을 포함한다. 가령, 펩티드는 고유 글루카곤 (서열 번호: 1301)의 j 내지 6을 포함할 수 있고, 여기서 j는 1, 2, 3, 4, 또는 5이다. 대안으로, 펩티드는 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 서열 번호: 1301의 N-말단에 기초된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 위치 1 및/또는 위치 2에서 아미노산은 디펩티딜 펩티다아제 IV에 의한 절단에 대한 감수성을 감소시키는 아미노산일 수 있다. 가령, 펩티드는 부류 4 펩티드의 위치 1에서 D-히스티딘, 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA), N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘 및 호모-히스티딘으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산을 포함할 수 있다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 길항약 펩티드의 위치 2는 D-세린, D-알라닌, 발린, 글리신, N-메틸 세린, N-메틸 알라닌, 그리고 아미노이소부티르산 (Aib)으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산이다. 또한, 예로써 부류 4 펩티드의 위치 3에서 아미노산은 고유 글루카곤의 고유 글루타민 잔기와는 대조적으로 글루타민산일 수 있다. 따라서, 부류 4 펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함할 수 있다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Thr-Gly-Phe (서열 번호: 1368);
Xaa2-Xaa3-Thr-Gly-Phe (서열 번호: 1369); 또는
Xaa3-Thr-Gly-Phe (서열 번호: 1370);
여기서 Xaa1은 His, D-히스티딘, 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA), N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘 및 호모-히스티딘으로 구성된 군에서 선택되고; Xaa2는 Ser, D-세린, D-알라닌, 발린, 글리신, N-메틸 세린, N-메틸 알라닌, 그리고 아미노이소부티르산 (Aib)으로 구성된 군에서 선택되고; 그리고 Xaa3은 Gln 또는 Glu이다.
본 발명에서는 또한, 부류 4 펩티드의 C-말단 아미노산이 고유 아미노산 상에 존재하는 카르복실산 기를 치환하는 아미드 기를 갖는 구체예를 포함한다.
부류 4 펩티드가 페길화되는 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 단축된 글루카곤 펩티드, 구체적으로 6-29를 포함하고, 여기서 "N-말단" 아미노산은 PLA (페닐-젖산)이다. 이런 글루카곤 유도체는 독특한 효능을 나타낸다. 이들은 고유 N-말단 페닐알라닌을 갖는 펩티드보다 더욱 강력한 펩티드이고, 그리고 이들은 고유 페닐알라닌에서는 관찰되지 않는 페길화에 기인하는 임의의 글루카곤 효현작용을 억제한다. 최종적으로, 기존 문헌에서는 위치 9에서 고유 아스파르트산의 치환이 길항약 활성에 요구된다고 확립하지만, 본 발명자들은 이런 치환이 PLA6-(6-29) 글루카곤 유사체에서 더 이상 필요하지 않다는 놀라운 결과를 발견하였다.
일부 구체예에서, 부류 4 펩티드의 아미노산은 최소한 하나의 시스테인 잔기로 치환되고, 여기서 시스테인 잔기의 측쇄는 예로써, 말레이미도, 비닐 설폰, 2-피리딜티오, 할로알킬, 그리고 할로아실을 비롯한 티올 반응성 시약으로 더욱 변형된다. 이들 티올 반응성 시약은 카르복시, 케토, 히드록실, 그리고 에테르 기뿐만 아니라 다른 친수성 모이어티, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 단위를 내포할 수 있다. 대안적 구체예에서, 부류 4 펩티드의 아미노산은 리신으로 치환되고, 그리고 치환 리신 잔기의 측쇄는 아민 반응성 시약, 예를 들면, 카르복실산의 활성 에스테르 (숙신이미도, 무수물 등) 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 모이어티의 알데히드를 이용하여 더욱 변형된다. 일부 구체예에 따라서, 고유 펩티드의 위치 12에 상응하는 리신 잔기는 아르기닌으로 치환되고, 그리고 단일 리신 치환이 고유 펩티드의 위치 1, 16, 17, 20, 21, 24 또는 29에 상응하는 아미노산 중에서 하나에 대해 삽입되거나, 또는 리신이 부류 4 펩티드의 N- 또는 C-말단에 부가된다.
다른 구체예에서, 고유 펩티드의 위치 27에 상응하는 메티오닌 잔기는 펩티드의 산화성 분해 (oxidative degradation)를 예방하기 위해 류신 또는 노르류신으로 교체된다.
일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 부류 4 펩티드는 글루카곤 수용체에서 활성 및/또는 효능에 영향을 주지 않으면서 글루카곤 펩티드의 C-말단의 1개 또는 2개 아미노산의 절두 또는 결실 (즉, 고유 글루카곤의 위치 29 또는 위치 28과 29에서 아미노산의 절두)에 의해 더욱 변형된다. 이와 관련하여, 본 명세서에서 기술된 부류 4 펩티드는 예로써, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 부류 4 펩티드 활성을 야기하는 하나 이상의 변형을 갖는 고유 글루카곤 펩티드 (서열 번호: 1301)의 아미노산 1-27, 1-28, 2-27, 2-28, 3-27, 3-28, 4-27, 4-28, 5-27, 5-28, 6-27, 또는 6-28로 본질적으로 구성되거나, 또는 구성된다.
본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드는 또한, 글루카곤 펩티드의 기능에 중요하지 않은 것으로 알려져 있는 위치에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 구체예에서, 치환은 서열 번호: 1339의 2, 5, 6, 7, 8, 9, 12, 13, 14, 15, 16, 19, 22, 23 또는 24로 구성된 군에서 선택되는 1개, 2개 또는 3개의 위치에서 보존성 아미노산 치환이다. 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1342의 유도체 펩티드를 포함하고, 여기서 글루카곤 펩티드는 위치 2, 5, 6, 8, 9, 12, 13과 14에서 선택되는 1개 내지 3개의 아미노산 위치에서 서열 번호: 1342에 비하여 추가의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1342의 위치 2, 5, 6, 8, 9, 12, 13과 14에서 치환은 보존성 아미노산 치환이다. 일부 구체예에서, 고유 펩티드의 위치 16, 17, 20, 21, 24 또는 29에 상응하는 아미노산, 그리고 더욱 구체적으로, 위치 21 및/또는 24에서 아미노산은 시스테인 또는 리신으로 치환되고, 여기서 PEG 사슬이 치환된 시스테인 또는 리신 잔기에 공유 부착된다.
일부 구체예에 따라서, 변형된 부류 4 펩티드는 상기 펩티드에 공유 결합된 2개 이상의 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 포함하고, 여기서 글루카곤 사슬의 총 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다. 일부 구체예에서, 페길화된 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1312, 그리고 서열 번호: 1322로 구성된 군에서 선택되는 펩티드를 포함하고, 여기서 상기 펩티드는 위치 11과 19에서 아미노산에 연결된 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 포함하고, 그리고 이들 두 PEG 사슬의 통합 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다.
일부 구체예에 따라서, 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 변형된 글루카곤 펩티드를 포함하는 부류 4 펩티드가 제시된다:
R1-Phe-Thr-Ser-Xaa-Tyr-Ser-Xaa-Tyr-Leu-Xaa-Xaa-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu- Xaa-Asn-Thr-R2 (서열 번호: 1309),
R1-Phe-Thr-Ser-Xaa-Tyr-Ser-Xaa-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Xaa-Phe-Val-Gln-Trp-Leu- Xaa-Asn-Thr-R2 (서열 번호: 1310),
R1-Phe-Thr-Ser-Xaa-Tyr-Ser-Xaa-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Xaa-Trp-Leu-Xaa-Asn-Thr-R2 (서열 번호: 1311), 그리고
R1-Phe-Thr-Ser-Xaa-Tyr-Ser-Xaa-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Xaa-Phe- Val-Xaa-Trp-Leu-Xaa-Asn-Thr-R2 (서열 번호: 1312),
여기서 위치 4에서 Xaa = 아스파르트산, 글루타민산, 시스테산 또는 호모시스테산, 위치 7에서 Xaa = Lys 또는 Arg, 위치 10에서 Xaa = 아스파르트산, 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산 또는 호모시스테산; 위치 11에서 Xaa = Ser, Lys, Cys, Orn, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌, 위치 16에서 Xaa = Asp, Lys, Cys, Orn, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌, 위치 19에서 Xaa = Gln, Lys, Cys, Orn, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌, 위치 22에서 Xaa = Met, Leu 또는 Nle, R1 = OH 또는 NH2, 그리고 R2 = COOH 또는 CONH2이고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 1309의 경우에 위치 11, 서열 번호: 1310의 경우에 위치 16, 서열 번호: 1311의 경우에 위치 19, 그리고 서열 번호: 1312의 경우에 위치 16과 19에서 페길화되고, 단서로써 위치 4에서 Xaa = 아스파르트산일 때, R1은 OH이다. 일부 구체예에 따라서, 펩티드는 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1310 또는 서열 번호: 1311의 서열을 포함하고, 여기서 R1은 OH이고 R2는 CONH2이다. 일부 구체예에서, 펩티드는 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1310 또는 서열 번호: 1311의 서열을 포함하고, 여기서 R1은 OH이고, R2는 CONH2이고, 그리고 위치 4에서 아미노산은 아스파르트산이고, 그리고 추가의 구체예에서, 이런 펩티드는 서열 번호: 1319의 서열을 포함하는 카르복시 말단 확장을 포함한다.
일부 구체예에 따라서, 펩티드는 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1310, 서열 번호: 1313, 서열 번호: 1314, 그리고 서열 번호: 1316으로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 1309와 서열 번호: 1313의 경우에 위치 11에서 페길화되고, 서열 번호: 1310의 경우에 위치 16에서 페길화되고, 그리고 서열 번호: 1310과 서열 번호: 1314의 경우에 위치 19에서 페길화된다. 일부 구체예에서, 글루카곤 작동약은 서열 번호: 1313 또는 서열 번호: 1314의 펩티드를 포함한다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드의 C-말단 아미노산은 고유 아미노산 상에 존재하는 카르복실산 기 대신에 아미드 기를 갖는다. 일부 구체예에 따라서, 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1318의 서열을 포함한다.
일부 구체예에 따라서, 부류 4 펩티드가 제시되고, 여기서 글루카곤 펩티드의 용해성, 안정성 및/또는 약물동력학을 향상시키기 위해 혈장 단백질이 상기 펩티드의 아미노산 측쇄에 공유 연결된다. 가령, 혈청 알부민은 본 명세서에서 제공된 부류 4 펩티드에 공유 결합될 수 있다. 일부 구체예에서, 혈장 단백질은 고유 글루카곤 펩티드의 위치 16, 17, 20, 21, 24 또는 29에 상응하는 아미노산에 공유 결합된다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 혈장 단백질은 고유 글루카곤 펩티드의 위치 16 또는 24에 상응하는 아미노산에 결합되고, 여기서 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1303, 서열 번호: 1304, 서열 번호: 1305, 서열 번호: 1306, 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1308, 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1311, 서열 번호: 1312, 서열 번호: 1322, 서열 번호: 1323, 서열 번호: 1324, 서열 번호: 1325, 서열 번호: 1326, 서열 번호: 1327, 서열 번호: 1328, 서열 번호: 1336 및 서열 번호: 1339의 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1310, 서열 번호: 1311 및 서열 번호: 1312로 구성된 군에서 선택되는 펩티드를 포함한다.
일부 구체예에 따라서, 부류 4 펩티드가 제시되고, 여기서 글루카곤 펩티드의 용해성, 안정성 및/또는 약물동력학을 향상시키기 위해 면역글로불린 분자의 Fc 부분을 나타내는 선형 아미노산 서열이 본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드의 아미노산 측쇄에 공유 연결된다. 가령, 면역글로불린 분자의 Fc 부분을 나타내는 아미노산 서열은 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1339, 또는 이들의 글루카곤 유사체의 글루카곤 펩티드의 위치 11, 12, 15, 16, 19, 21 또는 24에 공유 결합될 수 있다. 일부 구체예에서, Fc 펩티드는 서열 번호: 1306, 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1308 또는 서열 번호: 1336의 부류 4 펩티드의 위치 11 또는 19에 공유 결합된다. Fc 부분은 통상적으로, IgG로부터 단리되지만, 임의의 면역글로불린으로부터 Fc 펩티드 단편은 동등하게 기능해야 한다. 일부 구체예에서, 글루카곤 펩티드는 서열 번호: 1303, 서열 번호: 1304, 서열 번호: 1305, 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1308, 그리고 서열 번호: 1339로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 Fc 부분은 고유 글루카곤 펩티드의 16, 17, 20, 21, 24 또는 29의 상응하는 위치에 연결된다. 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1310, 서열 번호: 1311 및 서열 번호: 1312로 구성된 군에서 선택되는 글루카곤 펩티드를 포함하고, 여기서 Fc 펩티드는 각각, 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1310, 서열 번호: 1311의 위치 11, 16 또는 19에서, 그리고 서열 번호: 1312의 경우에 위치 11과 19 둘 모두에서 위치되는 아미노산의 측쇄에 결합된다.
본 발명의 일정한 구체예에서, 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1362, 1364-1367, 그리고 1371 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함한다.
용해성을 향상시키기 위한 변형
부류 4 펩티드는 일부 양상에서 글루카곤 길항약 활성을 유지하면서 수성 용액에서 생리학적 pH에서 펩티드의 용해성을 향상시키기 위해 더욱 변형될 수 있다. 고유 펩티드의 위치 1, 16, 17, 20, 21, 24와 29에 상응하는 위치, 또는 C-말단에서 친수성 기의 도입은 부모 화합물 길항약 활성을 유지하면서 생리학적 pH를 갖는 용액에서 결과의 부류 4 펩티드의 용해성을 향상시킬 수 있다. 이런 이유로, 일부 구체예에서, 본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드는 고유 글루카곤 펩티드의 아미노산 위치 1, 16, 17, 20, 21, 24와 29에 상응하는 아미노산, 또는 N- 또는 C-말단 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 하나 이상의 친수성 기를 포함하도록 더욱 변형된다. 추가의 구체예에서, 고유 글루카곤 펩티드의 아미노산 위치 16과 24에 상응하는 아미노산의 측쇄는 친수성 기에 공유 결합되고, 그리고 일부 구체예에서, 친수성 기는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이다.
본 발명자들은 또한, 펩티드의 작동약 성질을 유지하면서 펩티드의 용해성을 증강시키기 위해 고유 글루카곤이 이의 카르복시 말단에서 전하를 도입함으로써 변형될 수 있다는 것을 발견하였다. 증강된 용해성은 거의 중성 pH에서 글루카곤 용액의 제조와 보관을 가능하게 한다. 상대적으로 중성 pH (가령, 약 6.0 내지 약 8.0의 pH)에서 글루카곤 용액의 조제는 부류 4 펩티드의 장기 안정성을 향상시킨다.
이번에도, 본 발명자들은 본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드가 부모 단백질의 길항약 성질을 유지하면서 수성 용액에서 상대적으로 중성 pH (가령, 약 6.0 내지 약 8.0의 pH)에서 그들의 용해성을 증강시키기 위해 유사하게 변형될 수 있을 것으로 기대한다. 따라서, 본 발명의 일부 구체예는 고유 비-하전된 아미노산의 하전된 아미노산으로의 치환, 또는 카르복시 말단에 하전된 아미노산의 부가에 의해 펩티드에 전하를 추가하기 위해 야생형 글루카곤 (서열 번호: 1301)의 위치 6-29에 존재하는 고유 아미노산에 비하여 더욱 변형된 서열 번호: 1339의 부류 4 펩티드에 관계한다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1339의 부류 4 펩티드의 1개 내지 3개의 비-하전된 고유 아미노산이 하전된 아미노산으로 대체된다. 일부 구체예에서, 하전된 아미노산은 리신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르트산 및 글루타민산으로 구성된 군에서 선택된다. 더욱 구체적으로, 본 발명자들은 고유 글루카곤에 비하여 상응하는 위치 28 및/또는 29에서 정상적으로 발생하는 아미노산의 하전된 아미노산으로의 치환 및/또는 부류 4 펩티드의 카르복시 말단에서 1개 내지 2개의 하전된 아미노산의 부가가 수성 용액에서 생리학적으로 관련된 pH (즉, 약 6.5 내지 약 7.5의 pH)에서 부류 4 펩티드의 용해성과 안정성을 증강시킨다는 것을 발견하였다. 따라서, 본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드의 이런 변형은 부모 펩티드의 생물학적 활성을 유지하면서 수성 용액에서, 특히 약 5.5 내지 약 8.0 범위의 pH에서 용해성에 대한 유사한 효과를 가질 것으로 기대된다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1339의 부류 4 펩티드는 고유 글루카곤에 비하여 상응하는 위치 28 및/또는 29에서 고유 아미노산의 음으로 하전된 아미노산 (가령, 아스파르트산 또는 글루타민산)으로의 치환, 그리고 임의적으로, 펩티드의 카르복시 말단에 음으로 하전된 아미노산 (가령, 아스파르트산 또는 글루타민산)의 부가에 의해 변형된다. 대안적 구체예에서, 서열 번호: 1339의 부류 4 펩티드는 고유 글루카곤에 비하여 상응하는 위치 29에서 고유 아미노산의 양으로 하전된 아미노산 (가령, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘)으로의 치환, 그리고 임의적으로, 펩티드의 카르복시 말단 상에서 1개 또는 2개 양으로 하전된 아미노산 (가령, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘)의 부가에 의해 변형된다. 일부 구체예에 따라서, 향상된 용해성과 안정성을 갖는 부류 4 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 1341의 아미노산 서열을 포함하고, 단서로써 서열 번호: 1341의 위치 23 또는 24에서 최소한 하나의 아미노산이 산성 아미노산으로 치환되고, 및/또는 추가의 산성 아미노산이 서열 번호: 1341의 카르복시 말단에서 부가된다. 일부 구체예에서, 산성 아미노산은 Asp, Glu, 시스테산 및 호모시스테산로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
일부 구체예에 따라서, 향상된 용해성과 안정성을 갖는 부류 4 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 길항약은 서열 번호: 1341, 서열 번호: 1342, 서열 번호: 1343 또는 서열 번호: 1344의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 위치 23 또는 24에서 최소한 하나의 아미노산은 비-고유 아미노산 잔기로 치환된다 (즉, 유사체의 위치 23 또는 24에 존재하는 최소한 하나의 아미노산은 서열 번호: 1307에서 상응하는 위치에 존재하는 아미노산과 상이한 산성 아미노산이다). 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1341 또는 1342의 서열을 포함하는 글루카곤 작동약이 제시되고, 단서로써 위치 23에서 아미노산이 아스파라긴이고 위치 24에서 아미노산이 트레오닌일 때, 상기 펩티드는 부류 4 펩티드의 카르복시 말단에 부가되는, Lys, Arg, His, Asp 또는 Glu로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 1개 내지 2개의 아미노산을 더욱 포함한다.
다른 구체예에서, 서열 번호: 1342의 부류 4 펩티드의 용해성은 친수성 모이어티를 위치 11, 12, 15, 16, 19 또는 24에서 아미노산 잔기에 공유 연결함으로써 향상될 수 있고, 그리고 일부 구체예에서, 친수성 모이어티는 위치 11, 16 또는 19에서 아미노산에 연결되고, 그리고 추가의 구체예에서, 친수성 모이어티는 아미노산 19에 연결된다. 일부 구체예에서, 친수성 모이어티는 혈장 단백질 또는 면역글로불린의 Fc 부분이고, 그리고 대안적 구체예에서, 친수성 모이어티는 친수성 탄화수소 사슬이다. 일부 구체예에서, 친수성 모이어티는 약 1,000 내지 약 5,000 달톤의 범위에서 선택되는 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜이다. 또 다른 구체예에서, 친수성 모이어티는 최소한 약 20,000 달톤의 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜이다. 일부 구체예에서, 폴리에틸렌 변형된 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1310, 서열 번호: 1311, 서열 번호: 1312, 서열 번호: 1343, 서열 번호: 1344 또는 서열 번호: 1345의 아미노산 서열을 포함한다.
안정성을 향상시키기 위한 변형
고유 글루카곤의 위치 15-16에서 Asp-Ser 서열은 수성 완충액에서 고유 호르몬의 화학적 조기 절단을 유발하는 독특한 불안정성 디펩티드로서 확인되었다. 가령, 37℃에서 2주 동안 0.01N HCl에서 유지될 때, 50% 초과의 고유 글루카곤이 단편으로 절단될 수 있다. 2개의 유리된 절단 펩티드 1-15와 16-29는 글루카곤-유사 생물학적 활성이 없고, 따라서 글루카곤 및 이의 관련된 유사체의 수성 전-제제에 대한 제약을 대표한다. 고유 글루카곤 펩티드의 위치 15에서 Asp의 Glu로의 선택적인 화학적 치환은 15-16 펩티드 결합의 화학적 절단을 사실상 소멸시키는 것으로 관찰되었다.
따라서, 본 발명의 부류 4 펩티드는 수성 완충액에서 화학적 조기 절단에 대한 그들의 감수성을 감소시키기 위해 유사하게 변형될 수 있을 것으로 예상된다. 일부 구체예에 따라서, 본 명세서에서 기술된 부류 4 펩티드는 고유 글루카곤 펩티드의 위치 15에 위치되는 고유 아스파르틱 아미노산을 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산 및 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 대체함으로써 수성 용액에서 그들의 안정성을 증강시키기 위해 더욱 변형될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1339의 부류 4 펩티드의 위치 10에서 아스파르트산 잔기는 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산 및 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환될 수 있고, 그리고 일부 구체예에서, 서열 번호: 1339의 위치 10에서 고유 아스파르트산은 글루타민산으로 대체된다. 일부 구체예에 따라서, 수성 용액에서 향상된 안정성을 갖는 부류 4 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 길항약은 서열 번호: 1336, 서열 번호: 1340 및 서열 번호: 1342로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함한다. 추가의 구체예에서, 부류 4 펩티드는 아미드화된다.
일부 구체예에 따라서, 본 명세서에서 기술된 부류 4 펩티드의 감소된 분해에 의한 증가된 안정성은 또한, 위치 16 (고유 글루카곤의 넘버링에 따름)에서 세린의 글루타민산, 시스테산, 호모-글루타민산, 또는 호모-시스테산으로의 치환에 의해 달성될 수도 있다. 특정한 구체예에서, 위치 16 (고유 글루카곤 서열 넘버링에 따름)에서 세린은 글루타민산으로 대체된다. 더욱 특정한 양상에서, 이런 변형을 포함하는 부류 4 펩티드는 C-말단 카르복실레이트를 포함하고 아미드화되지 않는다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1336, 서열 번호: 1339, 서열 번호: 1340, 서열 번호: 1341, 서열 번호: 1342, 서열 번호: 1343 및 서열 번호: 1344로 구성된 군에서 선택되는 글루카곤 펩티드를 포함하고, 고유 글루카곤 펩티드의 위치 11, 12, 15, 16, 19 및/또는 24에 상응하는 위치에서 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환에 의해 더욱 변형되는 부류 4 펩티드가 제시되고, 여기서 아미노산 치환은 예로써, PEG를 비롯한 친수성 모이어티와의 가교연결에 적합한 측쇄를 갖는 아미노산으로 치환을 포함한다. 펩티드는 자연 발생 아미노산 또는 합성 (비-자연 발생) 아미노산으로 치환될 수 있다. 합성 또는 비-자연 발생 아미노산은 생체내에서 자연적으로 발생하지 않지만 그럼에도 불구하고, 본 명세서에서 기술된 펩티드 구조 내로 통합될 수 있는 아미노산을 지칭한다. 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1336, 서열 번호: 1339, 서열 번호: 1340, 서열 번호: 1341, 서열 번호: 1342, 서열 번호: 1343 및 서열 번호: 1344의 서열을 포함하고, 그리고 고유 글루카곤 펩티드의 상응하는 위치 21 또는 24에 결합된 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 더욱 포함한다. 추가의 구체예에서, 부류 4 펩티드의 C-말단은 카르복실산 기를 아미드 기로 대체하기 위해 변형된다.
융합 펩티드와 접합체
본 발명에서는 또한, 두 번째 펩티드가 부류 4 펩티드의 C-말단에 융합된 부류 4 펩티드 융합 펩티드를 포함한다. 더욱 구체적으로, 융합 펩티드는 부류 4 펩티드의 C-말단 아미노산에 연결된 서열 번호: 1319 (GPSSGAPPPS), 서열 번호: 1320 (Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala) 또는 서열 번호: 1321 (Lys Arg Asn Arg)의 아미노산 서열을 더욱 포함하는 서열 번호: 1344의 부류 4 펩티드 펩티드를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1319 (GPSSGAPPPS)의 아미노산 서열은 펩티드 결합을 통해 서열 번호: 1342의 부류 4 펩티드의 아미노산 24에 결합된다. 또 다른 구체예에서, 융합 펩티드는 부류 4 펩티드의 아미노산 24에 연결된 서열 번호: 1319 (GPSSGAPPPS)의 아미노산 서열을 더욱 포함하는 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1336, 서열 번호: 1339, 서열 번호: 1340, 서열 번호: 1341 또는 서열 번호: 1343의 부류 4 펩티드 펩티드를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 융합 펩티드는 부류 4 펩티드의 아미노산 24에 연결된 서열 번호: 1320, 서열 번호: 1321 또는 서열 번호: 1353의 아미노산 서열을 더욱 포함하는 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1336, 서열 번호: 1337, 서열 번호: 1338, 서열 번호: 1339, 서열 번호: 1341 또는 서열 번호: 1343의 부류 4 펩티드 펩티드를 포함한다. 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드 융합 펩티드는 서열 번호: 1346 및 서열 번호 1347로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함한다. 추가의 구체예에서, 융합 펩티드의 C-말단은 카르복실산 기를 아미드 기로 대체하기 위해 변형된다.
일부 구체예에서, 부류 4 펩티드 융합 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 융합 펩티드 중에서 부류 4 펩티드 부분은 서열 번호: 1303, 서열 번호: 1304, 서열 번호: 1305, 서열 번호: 1306, 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1308, 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1311, 서열 번호: 1312, 서열 번호: 1313, 서열 번호: 1314, 서열 번호: 1315, 서열 번호: 1310, 서열 번호: 1316, 서열 번호: 1317, 서열 번호: 1318 및 서열 번호: 1339로 구성된 군에서 선택되고, 그리고 서열 번호: 1319의 서열은 상기 부류 4 펩티드 부분의 카르복시 말단에 융합되고, 그리고 여기서 PEG 사슬은 존재할 때, 500 내지 40,000 달톤의 범위에서 선택된다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드 분절은 서열 번호: 1313, 서열 번호: 1314, 서열 번호: 1315, 서열 번호: 1316, 서열 번호: 1346 및 서열 번호: 1347로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 PEG 사슬은 약 500 내지 약 5,000 달톤의 범위에서 선택되고, 그리고 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, PEG 사슬은 약 1,000 달톤이다. 추가의 구체예에서, C-말단은 카르복실산 기를 아미드 기로 대체하기 위해 변형된다.
부류 4 펩티드는 카르복시 말단에 부가된 1개 내지 2개의 하전된 아미노산을 더욱 포함할 수 있다. 1개 내지 2개의 하전된 아미노산이 서열 번호: 1344의 카르복시 말단에 부가되는 일부 구체예에서, 이들 아미노산은 예로써, 글루타민산과 아스파르트산을 비롯한 음으로 하전된 아미노산이다. 일부 구체예에서, 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1342의 서열을 포함하고, 여기서 고유 글루카곤 펩티드에 비하여 상응하는 위치 27과 28 중에서 최소한 하나는 아스파르트산과 글루타민산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산을 포함하고, 그리고 여기서 서열 번호: 1342는 카르복시 말단에 부가된 1개 내지 2개 음으로 하전된 아미노산의 부가를 포함하도록 임의적으로 변형된다. 일부 구체예에서, 음으로 하전된 아미노산은 글루타민산 또는 아스파르트산이다.
본 명세서에서 개시된 부류 4 펩티드는 과도한 글루카곤 활성으로 특징되는 질환 또는 장애를 치료하기 위해 예로써, 인슐린을 비롯한 다른 활성제와 복합될 수 있다. 일부 구체예에서, 10,000 달톤 초과의 분자량을 갖는 PEG 사슬에 공유 결합되도록 변형된 부류 4 펩티드는 당뇨병에서 안정된 혈당 수준을 유지하는 것을 돕기 위해 인슐린과 공동으로 투여될 수 있다. 본 발명의 부류 4 펩티드는 단일 조성물로서 인슐린과 공동-투여되거나, 별개의 용액으로서 동시 투여되거나, 또는 대안으로, 인슐린과 부류 4 펩티드는 서로에 대하여 상이한 시점에 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 인슐린을 포함하는 조성물 및 부류 4 펩티드를 포함하는 조성물이 서로 12시간 내에 투여된다. 투여된 인슐린에 대한 부류 4 펩티드의 정확한 비율은 부분적으로, 환자의 글루카곤 수준의 결정에 좌우되고, 그리고 일과적인 실험을 통해 결정될 수 있다.
이합체 펩티드
본 발명은 또한, 본 명세서에서 개시된 변형된 부류 4 펩티드의 다합체를 포함한다. 2개 이상의 변형된 부류 4 펩티드가 당업자에게 공지된 표준 연결 작용제와 절차를 이용하여 서로 연결될 수 있다. 가령, 이합체는 시스테인, 리신 오르니틴, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌 잔기로 치환된 (예로써, 위치 11, 16 또는 19에서) 부류 4 펩티드 (가령, 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1310, 서열 번호: 1311 및 서열 번호: 1312)에 대한 이중기능성 티올 가교링커 및 이중-기능성 아민 가교링커의 이용을 통해 2개의 변형된 부류 4 펩티드 사이에 형성될 수 있다. 이합체는 동종이합체이거나, 또는 대안으로 헤테로이합체일 수 있다. 일부 구체예에서, 이합체는 서열 번호: 1308, 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1310, 서열 번호: 1311, 서열 번호: 1312, 서열 번호: 1345, 서열 번호: 1346, 또는 서열 번호: 1347로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2개의 부류 4 펩티드 사이에 형성되고, 여기서 이들 두 펩티드는 각 펩티드의 위치 11, 각 펩티드의 16, 또는 각 펩티드의 위치 19 또는 이들의 임의의 조합에 부착된 링커를 거쳐 서로에 연결된다. 일부 구체예에서, 연쇄는 개별 부류 4 펩티드 펩티드의 Cys11과 Cys11 또는 Cys19과 Cys19 또는 Cys11과 Cys19 잔기 사이에 이황화 연쇄이다.
유사하게, 이합체는 서열 번호: 1303, 서열 번호: 1304, 서열 번호: 1305, 서열 번호: 1306, 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1308, 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1310, 서열 번호: 1311, 서열 번호: 1312, 서열 번호: 1336, 서열 번호: 1337, 서열 번호: 1338, 서열 번호: 1339 및 서열 번호: 1342로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 2개의 부류 4 펩티드 펩티드 사이에 형성될 수 있고, 여기서 연쇄는 고유 글루카곤 펩티드에 대하여 위치 16, 21과 24에서 독립적으로 선택되는 아미노산 위치 사이에 형성된다.
일부 구체예에 따라서, 각각 서열 번호: 1346의 서열을 포함하는 2개의 부류 4 펩티드를 포함하는 부류 4 펩티드 이합체가 제시되고, 여기서 이들 두 길항약은 아미노산 위치 25를 통해 이황화 결합에 의해 서로 연결된다. 또 다른 구체예에서, 각각 서열 번호: 1347의 서열을 포함하는 2개의 부류 4 펩티드를 포함하는 부류 4 펩티드 이합체가 제시되고, 여기서 이들 두 길항약은 아미노산 위치 35를 통해 이황화 결합에 의해 서로 연결된다. 일부 구체예에서, 이합체는 서열 번호: 1346 및 서열 번호: 1347의 부류 4 펩티드로부터 형성되고, 여기서 위치 10에서 아미노산은 글루타민산이다.
일부 구체예에서, 이합체는 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1308, 서열 번호: 1336, 서열 번호: 1337, 서열 번호: 1340, 서열 번호: 1339, 서열 번호: 1340, 서열 번호: 1341, 서열 번호: 1342 및 이들 부류 4 펩티드의 제약학적으로 허용되는 염으로 구성된 군에서 선택되는 부류 4 펩티드 융합 펩티드의 동종이합체를 포함한다. 일부 구체예에 따라서, 링커를 거쳐 두 번째 부류 4 펩티드에 결합된 첫 번째 부류 4 펩티드를 포함하는 이합체가 제시되고, 여기서 이합체의 첫 번째와 두 번째 펩티드는 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1308, 서열 번호: 1336, 서열 번호: 1337, 서열 번호: 1339, 서열 번호: 1340, 서열 번호: 1341, 서열 번호: 1342, 그리고 이들 글루카곤 폴리펩티드의 제약학적으로 허용되는 염으로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다. 또 다른 구체예에서, 이합체의 첫 번째와 두 번째 부류 4 펩티드는 서열 번호: 1307, 서열 번호: 1308, 서열 번호: 1336 및 서열 번호: 1339로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
또 다른 구체예에서, 이합체는 서열 번호: 1323, 서열 번호: 1324, 서열 번호: 1325, 서열 번호: 1326, 서열 번호: 1327, 서열 번호: 1328, 서열 번호: 1329, 서열 번호: 1330, 서열 번호: 1331로 구성된 군에서 선택되는 부류 4 펩티드의 동종이합체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 이합체의 첫 번째와 두 번째 펩티드가 서열 번호: 1323, 서열 번호: 1324, 서열 번호: 1325, 서열 번호: 1326, 서열 번호: 1327 및 서열 번호: 1328로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 부류 4 펩티드 이합체가 제시된다. 또 다른 구체예에서, 이합체는 서열 번호: 1309, 서열 번호: 1311 및 서열 번호: 1312로 구성된 군에서 선택되는 부류 4 펩티드의 동종이합체를 포함하고, 여기서 상기 펩티드는 글루카곤 펩티드의 위치 11 또는 19에 공유 결합된 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 더욱 포함한다.
부류 4 글루카곤 관련된 펩티드는 글루카곤 길항약 활성을 유지하는 1, 2, 3, 4, 또는 5개까지의 추가 변형을 임의적으로 갖는 서열 번호: 1301-1371 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함할 수도 있다.
부류 5 글루카곤 관련된 펩티드
일정한 구체예에서, 글루카곤 관련된 펩티드는 부류 5 글루카곤 관련된 펩티드이다 (예로써, 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입되는 국제 (PCT) 특허 출원 공개공보 번호 제WO 2009/058734호를 참고한다).
하기 섹션에서 언급된 모든 생물학적 서열 (서열 번호: 1401-1518)은 국제 특허 출원 공개공보 번호 제WO 2009/058734호에서 서열 번호: 1-118에 상응한다.
활성
일정한 양상에서, 부류 5 글루카곤 관련된 펩티드 (이후, "부류 5 펩티드"로 지칭됨)은 글루카곤 길항약/GLP-1 작동약일 수 있다. 글루카곤 길항약/GLP-1 작동약은 글루카곤 효현작용의 억제가 요망되고, 또한 GLP-1 활성의 동시 자극이 요망되는 임의의 설정에서 이용된다. 가령, GLP-1 자극과 공동으로 글루카곤 길항약 활성은 당뇨병의 치료에 이용될 수 있는데, 여기서 글루카곤 길항작용은 고혈당증의 전임상 모델에서 혈당 저하를 산출하는 것으로 증명되고, 그리고 GLP-1 활성은 인슐린 생산과 연관된다. GLP-1 활성을 나타내는 화합물은 또한, 비만을 치료하고 체중 증가를 예방하는데 유용한 것으로 알려져 있다.
일정한 양상에서, 부류 5 펩티드는 다른 글루카곤 길항약/GLP-1 작동약에 대하여 이전에 기술되었던 임의의 용도에 적합할 것으로 생각된다. 이들 2가지 활성은 신진대사장애, 구체적으로 당뇨병와 비만의 치료를 위한 매우 바람직한 성질인 것으로 개별적으로 밝혀졌다. 글루카곤 길항약 활성은 글루카곤 효현작용의 억제가 요망되는 임의의 설정에서 유용하다. GLP-1 효현작용의 존재는 인슐린 합성과 분비를 자극하면서 췌장으로부터 글루카곤의 내인성 분비를 더욱 억제한다. 이들 2가지 약리학적 작용은 상승적 방식으로 기능하여 대사 비정상을 정상화시킨다. 따라서, 부류 5 펩티드는 고혈당증을 치료하거나, 또는 글루카곤의 높은 혈액 수준 또는 높은 혈당 수준에 기인하는 다른 대사 질환을 치료하는데 이용될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 본 명세서에서 개시된 글루카곤 길항약/GLP-1 작동약, 예를 들면, 부류 5 펩티드를 이용하여 치료되는 환자는 가축이고, 그리고 다른 구체예에서, 치료되는 환자는 인간이다. 여러 연구에서 당뇨병 환자에서의 글루카곤 억제의 결여는 부분적으로, 가속화된 글리코겐분해에 의한 식후 고혈당증의 원인이 되는 것으로 암시된다. 경구 내당 검사 (OGTT) 동안, 그리고 소마토스타틴-유도된 글루카곤 억제의 존재 또는 부재에서 혈당의 분석은 더욱 높은 글루카곤 수준을 갖는 개체에서 글루코오스의 유의미한 증가를 증명하였다. 따라서, 본 명세서에서 기술된 글루카곤 길항약/GLP-1 작동약 또는 부류 5 펩티드는 고혈당증을 치료하는데 이용될 수 있고, 그리고 인슐린-의존성 또는 비-인슐린-의존성의 타입 I 진성 당뇨병, 타입 II 진성 당뇨병, 또는 임신 당뇨병을 비롯한 다양한 유형의 당뇨병을 치료하고, 그리고 신증, 망막병증 및 혈관 질환을 비롯한 당뇨 합병증을 감소시키는데 유용할 것으로 예상된다.
식욕을 감소시키거나, 또는 체중 감소를 촉진하기 위한 이런 방법은 체중을 감소시키거나, 체중 증가를 예방하거나, 또는 약물-유도된 비만을 비롯한 다양한 원인의 비만을 치료하고, 그리고 혈관 질환 (관상 동맥 질환, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 허혈성 재관류 등), 고혈압, 타입 II 당뇨병의 발병, 고지질혈증 및 근골격 질환을 비롯한 비만과 연관된 합병증을 감소시키는데 유용할 것으로 예상된다.
부류 5 펩티드를 포함하는 제약학적 조성물은 당업자에게 공지된 표준 제약학적으로 허용되는 담체와 투여 루트를 이용하여 조제되고 환자에 투여될 수 있다. 따라서 본 발명은 또한, 제약학적으로 허용되는 담체와 공동으로 본 명세서에서 개시된 하나 이상의 부류 5 펩티드를 포함하는 제약학적 조성물을 포함한다. 제약학적 조성물은 유일한 제약학적 활성 성분으로서 부류 5 펩티드를 포함하거나, 또는 부류 5 펩티드는 하나 이상의 추가적인 활성제와 복합될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 부류 5 펩티드 및 인슐린 또는 인슐린 유사체를 포함하는 조성물이 제시된다. 대안으로, 체중 감소를 유도하거나 체중 증가를 예방하기 위한 제시된 조성물은 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 서열을 포함하고 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 아미노산 24에 연결된 서열 번호: 1421 (GPSSGAPPPS) 또는 서열 번호: 1450의 아미노산 서열, 그리고 항-비만 펩티드를 더욱 포함할 수 있다. 적절한 항-비만 펩티드에는 미국 특허 5,691,309, 6,436,435 또는 미국 특허 출원 20050176643에서 개시된 것들이 포함된다.
부류 5 펩티드 구조
일부 구체예에 따라서, N-말단으로부터 첫 1개 내지 5개의 아미노산 잔기 (가령, 첫 번째 아미노산, 첫 2개의 아미노산, 첫 3개의 아미노산, 첫 4개의 아미노산, 첫 5개의 아미노산)의 결실, 그리고 예로써, 수소-결합 또는 이온 상호작용, 예를 들면, 염 가교의 형성을 통한 위치 12와 16, 16과 20, 20과 24, 그리고 24와 28 (고유 글루카곤 펩티드 서열에 비하여)에서 선택되는 아미노산의 측쇄 쌍의 서로에 대한 연쇄에 의한 화합물의 C-말단 부분 (야생형 글루카곤, 서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따른 아미노산 위치 12-29 주변)에서 알파-나선 구조의 안정화, 또는 공유 결합에 의해 변형된 글루카곤 펩티드를 포함하는 부류 5 펩티드가 제시된다. 대안으로, 잔기 12-29 주변에 알파-나선의 안정화는 원하는 활성을 유지하는 위치에서 하나 이상의 α,α-이중치환된 아미노산의 도입을 통해 달성된다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드 또는 이의 유사체의 위치 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 중에서 1개, 2개, 3개, 4개 이상은 α,α-이중치환된 아미노산으로 치환된다. 가령, 부류 5 펩티드 또는 이의 유사체의 위치 16 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)의 아미노 이소-부티르산 (Aib)으로의 치환은 염 가교 또는 락탐의 부재에서 안정화된 알파 나선을 제공한다. 일부 구체예에서, 위치 16, 20, 21 또는 24 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 중에서 1개, 2개, 3개 이상은 Aib로 치환된다.
일부 구체예에 따라서, 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1에 의해 달성되는 최대 효현작용의 최소한 80%를 나타내고, 그리고 시험관내 분석평가에서 cAMP 생산에 의한 측정에서, 글루카곤 수용체에서 최대 글루카곤-유도된 cAMP 생산을 최소한 약 50% 감소시키는 글루카곤 길항약 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 90%를 나타내고, 그리고 글루카곤 수용체에서 최대 글루카곤-유도된 cAMP 생산을 최소한 약 80% 감소시키는 글루카곤 길항약 활성을 나타낸다.
일부 구체예에 따라서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1402의 유도체 펩티드를 포함하고, 여기서 상기 펩티드는 위치 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 19, 22와 24에서 선택되는 1개 내지 3개의 아미노산 위치에서 서열 번호: 1402에 비하여 추가의 아미노산 치환을 포함하고, 그리고 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 90%를 나타내고, 그리고 글루카곤 수용체에서 최대 글루카곤-유도된 cAMP 생산을 최소한 약 80% 감소시키는 글루카곤 길항약 활성을 나타낸다.
일부 구체예에서, 부류 5 펩티드의 C-말단 부분에서 알파-나선 구조 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따른 아미노산 12-29 주변)는 예로써, 공유 또는 비-공유 분자내 가교의 형성, 또는 알파 나선-안정화 아미노산 (가령, α,α-이중치환된 아미노산)으로 위치 12-29 주변에 아미노산의 치환 및/또는 삽입에 의해 안정화된다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드 또는 이의 유사체의 위치 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 중에서 1개, 2개, 3개, 4개 이상은 α,α-이중치환된 아미노산, 예를 들면, 아미노 이소부티르산 (Aib)으로 치환된다. 가령, 부류 5 펩티드 또는 이의 유사체의 위치 16 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)의 아미노 이소-부티르산 (Aib)으로의 치환은 염 가교 또는 락탐의 부재에서 안정화된 알파 나선을 제공한다.
일부 구체예에서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451, 그리고 더욱 구체적으로, 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407, 서열 번호: 1408, 서열 번호: 1409, 서열 번호: 1416, 서열 번호: 1417, 서열 번호: 1418, 서열 번호: 1419, 서열 번호: 1422, 서열 번호: 1423, 서열 번호: 1424 및 서열 번호: 1425로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함한다. 추가의 구체예에서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 유도체 펩티드를 포함하고, 여기서 상기 펩티드는 위치 1, 2, 5, 6, 8, 9, 12, 13과 14에서 선택되는 1개 내지 3개의 아미노산 위치에서 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451에 비하여 추가의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 구체예에서, 위치 1, 2, 5, 6, 8, 9, 12, 13과 14에서 치환은 보존성 아미노산 치환이다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1405 또는 서열 번호: 1406의 위치 24에서 트레오닌은 글리신으로 치환된다.
일부 구체예에 따라서, 부류 5 펩티드는 N-말단 결실에 더하여, 위치 6에서 고유 글루카곤 펩티드의 페닐알라닌이 예로써, N-말단 아미노 기 대신에 히드록실 기를 포함하도록 변형된 상기 펩티드의 추가의 변형을 나타낸다. 추가의 구체예에서, C-말단 아미노산의 자연 카르복실산은 전하-중성 기, 예를 들면, 아미드 또는 에스테르로 대체된다.
일부 구체예에 따라서, 고유 글루카곤의 첫 3개 내지 5개의 아미노산이 결실되고, 고유 글루카곤 펩티드에 비하여 위치 9에서 아미노산이 글루타민산, 호모글루타민산, β-호모글루타민산, 시스테인의 설폰산 유도체, 또는 하기 구조를 갖는 시스테인의 알킬카르복실레이트 유도체로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환되는 부류 5 펩티드가 제조된다:
Figure pct00033
,
여기서 X5는 C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐, 또는 C2-C4 알키닐이고, 그리고 글루카곤의 C-말단 부분 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따른 아미노산 12-29 주변)에서 알파-나선 구조는 예로써, 고유 글루카곤 펩티드에 비하여 아미노산 12와 16의 측쇄 사이에 또는 아미노산 16과 20 사이에 형성된 락탐 가교에 의해 안정화된다. 공유 결합하여 7개-원자 연결 가교를 형성할 수 있는 아미노산 대합의 실례는 본 명세서 전반에서 상술된다. 일부 구체예에서, 시스테인의 설폰산 유도체는 시스테산 또는 호모시스테산이다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407, 또는 서열 번호: 1408로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 부류 5가 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 1405의 경우에 아미노산 7과 11의 측쇄 사이에, 서열 번호: 1406의 경우에 11과 15 사이에, 서열 번호: 1407의 경우에 위치 15와 19 사이에, 그리고 서열 번호: 1408의 경우에 위치 19과 24 사이에 형성된 락탐 고리를 포함하고, 이들 서열 각각은 상기 펩티드에 공유 결합된 친수성 모이어티를 포함하도록 더욱 변형된다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 락탐 보유 부류 5 펩티드 각각은 폴리에틸렌 글리콜 사슬의 공유 부착에 의해 변형된다. 가령, 서열 번호: 1405를 포함하는 부류 5 펩티드의 경우에, 상기 펩티드는 12, 15, 16, 19와 24로 구성된 군에서 선택되는 위치에서 페길화된다; 서열 번호: 1406을 포함하는 부류 5 펩티드의 경우에, 상기 펩티드는 12, 16, 19와 24로 구성된 군에서 선택되는 위치에서 페길화된다; 서열 번호: 1407을 포함하는 부류 5 펩티드의 경우에, 상기 펩티드는 11, 12, 16과 24로 구성된 군에서 선택되는 위치에서 페길화된다; 서열 번호: 1408을 포함하는 부류 5 펩티드의 경우에, 상기 펩티드는 11, 12, 15와 16으로 구성된 군에서 선택되는 위치에서 페길화된다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1447 또는 서열 번호: 1448을 포함하는 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 1447 또는 서열 번호: 1448 서열에 비하여, 12, 16, 19와 24로 구성된 군에서 선택되는 위치에서 페길화된다. 추가의 구체예에서, 서열 번호: 1447 또는 서열 번호: 1448의 펩티드는 상기 펩티드의 카르복시 말단에 서열 번호: 1421의 서열의 부가에 의해 더욱 변형된다.
앞서 상술된 바와 같이, 일정한 양상에서 고유 글루카곤의 첫 5개의 아미노산이 결실되고, N-말단 아미노산 (페닐알라닌)의 아미노 기가 히드록실 기로 대체되고 (즉, 첫 번째 아미노산이 페닐-젖산이다), 그리고 위치 12와 16, 16과 20, 20과 24, 그리고 24와 28에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 쌍의 측쇄가 서로에 연결되고, 따라서 부류 5 펩티드 알파 나선이 안정화되는 부류 5 펩티드가 제시된다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1402의 위치 11 (고유 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따른 위치 16)에서 세린 잔기의 글루타민산, 글루타민, 호모글루타민산, 호모시스테산, 트레오닌 또는 글리신으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로의 치환에 의해 변형되는 서열 번호: 1402의 서열을 포함하는 부류 5 펩티드가 제시된다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1402의 위치 11에서 세린 잔기는 글루타민산, 글루타민, 호모글루타민산 및 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환되고, 그리고 일부 구체예에서, 세린 잔기는 글루타민산으로 치환된다. 일부 구체예에 따라서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1438의 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 1402의 펩티드의 카르복시 말단의 3차원 구조를 안정시키기 위해 2개의 아미노산 측쇄 사이에 분자내 가교가 형성되는 부류 5 펩티드가 제시된다. 더욱 구체적으로, 서열 번호: 1402의 아미노산 쌍 7과 11, 11과 15, 15와 19 또는 19와 23에서 선택되는 하나 이상의 아미노산의 측쇄는 서로 연결되고, 따라서 C-말단 부분에서 알파 나선을 안정시킨다. 이들 2개의 측쇄는 수소-결합, 이온 상호작용 (가령, 염 가교의 형성), 또는 공유 결합에 의해 서로 연결될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 링커의 크기는 7-9개의 원자이고, 그리고 일부 구체예에서, 링커의 크기는 8개의 원자이다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407 및 서열 번호: 1408로 구성된 군에서 선택된다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드의 C-말단 아미노산은 고유 아미노산 상에 존재하는 카르복실산 기를 치환하는 아미드 기를 갖는다.
일부 구체예에 따라서, 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 유사체는 서열 번호: 1409의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1409의 펩티드의 카르복시 말단의 3차원 구조는 펩티드의 측쇄 사이에 공유 결합의 형성에 의해 안정화된다. 일부 구체예에서, 2개의 아미노산 측쇄는 서로 결합되어 락탐 고리를 형성한다. 락탐 고리의 크기는 아미노산 측쇄의 길이에 따라 변할 수 있고, 그리고 일부 구체예에서, 락탐은 리신 아미노산의 측쇄를 글루타민산 측쇄에 연결함으로써 형성된다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드의 C-말단 아미노산은 고유 아미노산 상에 존재하는 카르복실산 기를 치환하는 아미드 기를 갖는다.
락탐 고리 내에서 아미드 결합의 순서는 역전될 수 있다 (가령, 락탐 고리는 Lys12와 Glu16의 측쇄 사이에, 또는 대안으로 Glu 12와 Lys16 사이에 형성될 수 있다). 일부 구체예에 따라서, 최소한 하나의 락탐 고리가 서열 번호: 1409의 아미노산 쌍 7과 11, 11과 15, 15와 19 또는 19와 23으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 쌍의 측쇄 사이에 형성되는 서열 번호: 1409의 글루카곤 유사체가 제시된다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 1410의 서열을 포함하고, 상기 서열은 서열 번호: 1410의 아미노산 위치 7과 11 사이에, 또는 아미노산 위치 11와 15 사이에, 또는 아미노산 위치 15와 19 사이에 형성된 분자내 락탐 가교를 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 1411의 서열을 포함하고, 상기 서열은 서열 번호: 1411의 아미노산 위치 7과 11 사이에, 또는 아미노산 위치 11과 15 사이에 형성된 분자내 락탐 가교를 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1417의 서열을 포함한다.
서열 번호: 1405의 유도체를 포함하는 추가의 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 서열 번호: 1405의 위치 10 (고유 글루카곤의 위치 15)에서 아스파르트산은 글루타민산, 하기 일반 구조의 아미노산으로 치환된다:
Figure pct00034

여기서 X6은 C1-C3 알킬, C2-C3 알켄 또는 C2-C3 알키닐이고, 그리고 일부 구체예에서 X6은 C1-C3 알킬이고, 그리고 다른 구체예에서 X6은 C2 알킬이다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1409의 위치 10 (고유 글루카곤의 위치 15)이 글루타민산, 시스테산, 호모시스테산 및 호모글루타민산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환되는 서열 번호: 1409의 부류 5 펩티드 유도체가 제시된다. 추가의 구체예에서, 서열 번호: 1409의 위치 10은 시스테산 또는 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407 또는 서열 번호: 1408의 위치 10이 글루타민산, 시스테산, 호모시스테산 및 호모글루타민산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환되는 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407 또는 서열 번호: 1408의 부류 5 펩티드 유도체가 제시된다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드의 C-말단 아미노산은 고유 아미노산 상에 존재하는 카르복실산 기를 치환하는 아미드 기를 갖는다.
일부 구체예에서, 부류 5 펩티드의 아미노산은 최소한 하나의 시스테인 잔기로 치환되고, 여기서 시스테인 잔기의 측쇄는 예로써, 말레이미도, 비닐 설폰, 2-피리딜티오, 할로알킬, 그리고 할로아실을 비롯한 티올 반응성 시약으로 더욱 변형된다. 이들 티올 반응성 시약은 카르복시, 케토, 히드록실, 그리고 에테르 기뿐만 아니라 다른 친수성 모이어티, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 단위를 내포할 수 있다. 대안적 구체예에서, 부류 5 펩티드의 아미노산은 리신으로 치환되고, 그리고 치환 리신 잔기의 측쇄는 아민 반응성 시약, 예를 들면, 카르복실산의 활성 에스테르 (숙신이미도, 무수물 등) 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 친수성 모이어티의 알데히드를 이용하여 더욱 변형된다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1405의 펩티드의 위치 7에 상응하는 리신 잔기는 아르기닌으로 치환되고, 그리고 단일 리신 치환이 서열 번호: 1405의 위치 12, 15, 16, 19와 24에 상응하는 아미노산 중에서 하나에 대해 삽입된다.
다른 구체예에서, 본 명세서에서 개시된 부류 5 펩티드의 위치 22에 상응하는 메티오닌 잔기는 펩티드의 산화성 분해 (oxidative degradation)를 예방하기 위해 류신 또는 노르류신으로 교체된다.
게다가, 일부 양상에서, 부류 5 펩티드는 또한, 글루카곤 유사체의 기능에 중요하지 않은 것으로 알려져 있는 위치에서 아미노산 치환을 포함한다. 일부 구체예에서, 치환은 2, 5, 6, 7, 8, 9, 12, 13, 14, 15, 16, 19, 22, 23 또는 24로 구성된 군에서 선택되는 1개, 2개 또는 3개의 위치에서 보존성 아미노산 치환이다. 일부 구체예에서, 고유 글루카곤 펩티드의 위치 16, 17, 20, 21, 24 또는 29에 상응하는 아미노산, 그리고 더욱 구체적으로 고유 글루카곤에 비하여 위치 21 및/또는 24에서 아미노산이 시스테인 또는 리신으로 치환되고, 여기서 PEG 사슬이 치환된 시스테인 또는 리신 잔기에 공유 부착된다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1409로 구성되는 서열을 포함하고, 위치 11, 12, 15, 16, 19 및/또는 24에 상응하는 위치에서 하나 이상의 추가적인 아미노산 치환 (예로써, 시스테인으로 치환 포함)에 의해 더욱 변형되는 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 아미노산 치환은 예로써, PEG를 비롯한 친수성 모이어티와의 가교연결에 적합한 측쇄를 갖는 아미노산을 포함한다. 고유 글루카곤은 자연 발생 아미노산 또는 합성 (비-자연 발생) 아미노산으로 치환될 수 있다. 합성 또는 비-자연 발생 아미노산은 생체내에서 자연적으로 발생하지 않지만 그럼에도 불구하고, 본 명세서에서 기술된 펩티드 구조 내로 통합될 수 있는 아미노산을 지칭한다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 1409의 서열을 포함하고, 그리고 상기 펩티드의 위치 16 또는 19에 결합된 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 더욱 포함한다. 추가의 구체예에서, 글루카곤 유사체의 C-말단은 카르복실산 기를 아미드 기로 대체하기 위해 변형된다.
일부 구체예에 따라서, 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 글루카곤 유사체를 포함하는 부류 5 펩티드가 제시된다:
R1-Phe-Thr-Ser-Xaa-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa-Glu-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe- Val-Gln-Trp-Leu-Xaa-Asn-Thr-R2 (서열 번호: 1439)
R1-Phe-Thr-Ser-Xaa-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-Arg-Ala-Gln-Xaa-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Xaa-Asn-Thr-R2 (서열 번호: 1413),
R1-Phe-Thr-Ser-Xaa-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Xaa-Trp-Leu-Xaa-Asn-Thr-R2 (서열 번호: 1414), 그리고
R1-Phe-Thr-Ser-Xaa-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-Arg-Ala-Gln-Xaa- Phe-Val-Xaa-Trp-Leu-Xaa-Asn-Thr-R2 (서열 번호: 1412),
여기서 위치 4에서 Xaa = 아스파르트산, 글루타민산, 시스테산 또는 호모시스테산, 위치 10에서 Xaa = Asp, Glu, 시스테산, 호모글루타민산 또는 호모시스테산, 위치 16에서 Xaa는 Asp, Cys, Orn, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌, 그리고 위치 19에서 Xaa는 Gln, Cys, Orn, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌, 위치 22에서 Xaa = Met, Leu 또는 Nle, R1은 OH 또는 NH2, 그리고 R2는 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser (서열 번호: 1421), Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa (서열 번호: 1450; 여기서 Xaa는 Cys, Orn, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌), COOH 또는 CONH2이고, 여기서 상기 펩티드는 서열 번호: 1413의 위치 16, 서열 번호: 1414의 위치 19 및 서열 번호: 1412의 위치 16과 19에서 임의적으로 페길화된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1412-1414와 1439의 위치 24에서 Thr은 Gly로 치환된다. 일부 구체예에 따라서, 펩티드는 서열 번호: 13 또는 서열 번호: 1414의 서열을 포함하고, 여기서 R1은 OH이다. 일부 구체예에 따라서, 펩티드는 서열 번호: 1413 또는 서열 번호: 1414의 서열을 포함하고, 여기서 R1은 OH이고 R2는 CONH2이다. 일부 구체예에 따라서, 펩티드는 서열 번호: 1413 또는 서열 번호: 1414의 서열을 포함하고, 여기서 R1은 OH이고, R2는 CONH2이고, 그리고 위치 24에서 트레오닌은 글리신으로 치환된다.
일부 구체예에서, 부류 5 펩티드는 상응하는 아미노산 위치에서 고유 글루카곤 잔기(들)의 치환에 의해, 고유 GLP-1의 하나 이상의 아미노산을 포함하도록 더욱 변형된다. 가령, 부류 5 펩티드는 위치 2, 3, 17, 18, 21, 23, 그리고 24 (고유 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 중에서 하나에서 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 특정한 구체예에서, 부류 5 펩티드는 하기 아미노산 치환 중에서 하나 이상에 의해 변형된다: Ser2는 Ala로 대체되고, Gln3은 Glu로 대체되고, Arg17은 Gln으로 대체되고, 위치 18에서 Arg는 Ala로 대체되고, 위치 21에서 Asp는 Glu로 대체되고, 위치 23에서 Val은 Ile로 대체되고, 그리고 위치 24에서 Gln은 Ala로 대체된다 (아미노산 위치는 고유 글루카곤 서열에 따른다). 특정한 구체예에서, 부류 5 펩티드는 Ser2를 Ala으로, 그리고 Gln3을 Glu로 대체함으로써 변형된다 (고유 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름). 다른 특정한 구체예에서, 부류 5 펩티드는 하기 아미노산 치환 모두로 변형된다: Arg17은 Gln으로 대체되고, 위치 18에서 Arg는 Ala로 대체되고, 위치 21에서 Asp는 Glu로 대체되고, 위치 23에서 Val은 Ile로 대체되고, 그리고 위치 24에서 Gln은 Ala로 대체된다 (고유 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름). 또 다른 특정한 구체예에서, 부류 5 펩티드는 위치 21 (서열 번호: 1401의 넘버링에 따름)에서 정확히 Glu를 포함하도록 변형된다. 따라서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1460-1470, 1473-1478, 1480-1488, 1490-1496, 1503, 1504, 1506, 그리고 1514-1518 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에서는 (1) 본 명세서에서 기술된 수단 (가령, 분자내 가교, 또는 위치 16 (서열 번호 :1401의 넘버링에 따름)에서 하나 이상의 알파, 알파-이중-치환된 아미노산, 또는 산성 아미노산의 합동, 또는 이들의 조합)을 통해 안정화된 알파 나선; (2) C-말단 카르복실레이트 대신에 C-말단 아미드 또는 에스테르, 그리고 (3) A-B-C의 일반 구조를 포함하는 부류 5 펩티드 또는 이의 접합체가 제시되고,
여기서 A는 하기와 같이 구성된 군에서 선택된다:
(i) 페닐 젖산 (PLA);
(ii) PLA의 옥시 유도체; 그리고
(iii) 펩티드의 2개의 구조성 아미노산이 에스테르 또는 에테르 결합을 거쳐 연결되는 2개 내지 6개의 아미노산의 펩티드;
B는 서열 번호: 1401의 아미노산 p 내지 26을 나타내고, 여기서 p는 3, 4, 5, 6, 또는 7이고, 예로써 부류 5 펩티드에 대하여 기술된 임의의 변형을 비롯하여 본 명세서에서 기술된 바와 같은 하나 이상의 아미노산 변형을 임의적으로 포함한다:
(iv) 위치 9 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따름)에서 Asp가 Glu, Cys의 설폰산 유도체, 호모글루타민산, β-호모글루타민산, 또는 하기 구조를 갖는 시스테인의 알킬카르복실레이트 유도체로 치환된다:
Figure pct00035
,
여기서 X5는 C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐, 또는 C2-C4 알키닐이다;
(v) 위치 10, 20, 그리고 24 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따름)에서, 에스테르, 에테르, 티오에테르, 아미드, 또는 알킬 아민 연쇄를 거쳐 아실 또는 알킬 기에 공유 부착된 아미노산으로 1개 또는 2개 아미노산의 치환;
(vi) 위치 16, 17, 20, 21, 그리고 24 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따름)에서, Cys, Lys, 오르니틴, 호모시스테인, 그리고 아세틸-페닐알라닌 (Ac-Phe)으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 1개 또는 2개 아미노산의 치환, 여기서 상기 군의 아미노산은 친수성 모이어티에 공유 부착된다;
(vii) 위치 15 (서열 번호: 1401의 넘버링에 따름)에서 Asp는 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산, 그리고 호모시스테산으로 치환된다;
(viii) 위치 16 (서열 번호: 1401의 넘버링에 따름)에서 Ser은 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산, 그리고 호모시스테산으로 치환된다;
(ix) 위치 17에서 Arg은 Gln으로 대체되고, 위치 18에서 Arg는 Ala로 대체되고, 위치 21에서 Asp는 Glu로 대체되고, 위치 23에서 Val은 Ile로 대체되고, 그리고 위치 24에서 Gln은 Ala로 대체된다 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따름);
(x) 위치 16에서 Ser은 Glu로 대체되거나, 위치 20에서 Gln은 Glu로 대체되거나, 또는 위치 24에서 Gln은 Glu로 대체된다 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따름);
그리고 C (A-B-C의 일반 구조)는 하기와 같이 구성된 군에서 선택되고:
(vii) X;
(viii) X-Y;
(ix) X-Y-Z;
(x) X-Y-Z-R10;
여기서 X는 Met, Leu, 또는 Nle이고; Y는 Asn 또는 하전된 아미노산이고; Z는 Thr, Gly, Cys, Lys, 오르니틴 (Orn), 호모시스테인, 아세틸 페닐알라닌 (Ac-Phe), 또는 하전된 아미노산이고; 여기서 R10은 서열 번호: 1421, 1426, 1427, 그리고 1450으로 구성된 군에서 선택된다.
특정한 양상에서, 펩티드는 PLA의 옥시 유도체를 포함한다. 본 명세서에서 "PLA의 옥시 유도체"는 히드록실 기가 O-R11로 대체되는 PLA의 변형된 구조를 포함하는 화합물을 지칭하고, 여기서 R11은 화학적 모이어티이다. 이와 관련하여, PLA의 옥시 유도체는 예로써, PLA의 에스테르 또는 PLA의 에테르일 수 있다.
PLA의 옥시 유도체를 만드는 방법은 당분야에 공지되어 있다. 가령, 옥시 유도체가 PLA의 에스테르일 때, 에스테르는 PLA의 히드록실 및 구핵 원자를 보유하는 카르보닐의 반응에 의해 형성될 수 있다. 구핵 원자는 아민 또는 히드록실이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 임의의 적절한 구핵 원자일 수 있다. 따라서, PLA의 에스테르는 화학식 IV의 구조를 포함할 수 있다:
Figure pct00036

화학식 IV
여기서 R7은 PLA의 히드록실 및 구핵 원자를 보유하는 카르보닐의 반응 시에 형성된 에스테르이다.
구핵 원자를 보유하는 카르보닐 (이것은 PLA의 히드록실과 반응하여 에스테르를 형성한다)은 예로써, 카르복실산, 카르복실산 유도체, 또는 카르복실산의 활성화된 에스테르일 수 있다. 카르복실산 유도체는 아실 염화물, 산 무수물, 아미드, 에스테르, 또는 니트릴일 수 있지만 이들에 국한되지 않는다. 카르복실산의 활성화된 에스테르는 예로써, N-히드록시숙신이미드 (NHS), 토실레이트 (Tos), 카르보디이미드, 또는 헥사플루오르포스페이트일 수 있다. 일부 구체예에서, 카르보디이미드는 1,3-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC), 1,1'-카르보닐디이미다졸 (CDI), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 (EDC), 또는 1,3-디이소프로필카르보디이미드 (DICD)이다. 일부 구체예에서, 헥사플루오르포스페이트는 헥사플루오르포스페이트 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오르포스페이트 (BOP), 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오르포스페이트 (PyBOP), 2-(1H-7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸 우로늄 헥사플루오르포스페이트 (HATU), 그리고 o-벤조트리아졸-N,N,N',N'-테트라메틸-우로늄-헥사플루오르-포스페이트 (HBTU)로 구성된 군에서 선택된다.
히드록실 기 (가령, PLA의 히드록실)와의 반응으로부터 에테르를 만드는 방법 역시 당분야에 공지되어 있다. 가령, PLA의 히드록실 기는 할로겐화된 알킬 또는 토실화된 알킬 알코올과 반응하여 에테르 결합이 형성될 수 있다.
특정한 구체예에서, 산소-내포 결합 (가령, 에스테르 또는 에테르 결합)을 거쳐 PLA에 결합된 화학적 모이어티는 중합체 (가령, 폴리알킬렌 글리콜), 탄수화물, 아미노산, 펩티드, 또는 지질, 예를 들면, 지방산 또는 스테로이드이다.
특정한 구체예에서, 화학적 모이어티는 아미노산이고, 이것은 임의적으로, 펩티드의 일부이고, 따라서 화학식 IV는 뎁시펩티드이다. 이와 관련하여, PLA는 펩티드의 N-말단 아미노산 잔기 이외의 위치에 있을 수 있고, 따라서 상기 펩티드는 PLA 잔기의 N-말단에 하나 이상 (가령, 1, 2, 3, 4, 5, 6개 이상)의 아미노산을 포함한다. 가령, 펩티드는 위치 n에서 PLA를 포함할 수 있고, 여기서 n은 상기 펩티드의 2, 3, 4, 5, 또는 6이다.
PLA 잔기에 N-말단의 아미노산은 합성 또는 자연 발생일 수 있다. 특정한 구체예에서, PLA에 N-말단인 아미노산은 자연 발생 아미노산이다. 일부 구체예에서, PLA에 N-말단인 아미노산은 고유 글루카곤의 N-말단 아미노산이다. 가령, 펩티드는 N-말단에서 서열 번호: 1452-1456 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 여기서 PLA는 에스테르 결합을 거쳐 트레오닌에 연결된다:
서열 번호: 1452 His-Ser-Gln-Gly-Thr-PLA
서열 번호: 1453 Ser-Gln-Gly-Thr-PLA
서열 번호: 1454 Gln-Gly-Thr-PLA
서열 번호: 1455 Gly-Thr-PLA
서열 번호: 1456 Thr-PLA
대안적 구체예에서, 하나 이상의 N-말단 아미노산은 고유 글루카곤의 아미노산 이외의 아미노산으로 치환될 수 있다. 가령, 펩티드가 위치 5 또는 6에서 아미노산으로서 PLA를 포함할 때, 위치 1 및/또는 위치 2에서 아미노산은 디펩티딜 펩티다아제 IV에 의한 절단에 대한 감수성을 감소시키는 아미노산이다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 펩티드의 위치 1은 D-히스티딘, 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA), N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘 및 호모-히스티딘으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산이다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, 길항약/작동약 펩티드의 위치 2는 D-세린, D-알라닌, 발린, 글리신, N-메틸 세린, N-메틸 알라닌, 그리고 아미노이소부티르산 (Aib)으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산이다. 또한, 예로써 펩티드가 위치 4, 5, 또는 6에서 아미노산으로서 PLA를 포함할 때, 상기 펩티드의 위치 3의 아미노산은 고유 글루카곤의 고유 글루타민 잔기와는 대조적으로 글루타민산일 수 있다. 본 발명의 예시적인 구체예에서, 펩티드는 N-말단에서 서열 번호: 1457-1459 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함한다.
화학식 IV의 화합물을 포함하는 펩티드에 관하여, 중합체는 임의의 중합체일 수 있고, 단서로써 이것은 PLA의 히드록실 기와 반응할 수 있다. 중합체는 구핵 원자를 보유하는 카르보닐을 자연적으로 또는 정상적으로 포함하는 것일 수 있다. 대안으로, 중합체는 카르보닐을 보유하는 카르보닐을 포함하도록 유도체화된 것일 수 있다. 중합체는 하기 중에서 한 가지의 유도체화된 중합체일 수 있다: 폴리아미드, 폴리카보네이트, 폴리알킬렌 및 폴리알킬렌 글리콜, 폴리알킬렌 산화물, 폴리알킬렌 테레프탈레이트를 비롯한 이들의 유도체, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 그리고 폴리(옥타데실 아크릴레이트)를 비롯한 아크릴과 메타크릴 에스테르의 중합체, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 에스테르, 폴리비닐 할로겐화물, 폴리(비닐 아세테이트), 그리고 폴리비닐피롤리돈을 비롯한 폴리비닐 중합체, 폴리글리콜리드, 폴리실록산, 폴리우레탄과 이의 공중합체, 알킬 셀룰로오스, 히드록시알킬 셀룰로오스, 셀룰로오스 에테르, 셀룰로오스 에스테르, 니트로 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 셀룰로오스, 히드록시-프로필 메틸 셀룰로오스, 히드록시부틸 메틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 아세테이트, 셀룰로오스 프로피오네이트, 셀룰로오스 아세테이트 부티레이트, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 카르복실에틸 셀룰로오스, 셀룰로오스 트리아세테이트, 그리고 셀룰로오스 설페이트 나트륨 염을 비롯한 셀룰로오스, 폴리프로필렌, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리(에틸렌 산화물), 그리고 폴리(에틸렌 테레프탈레이트)를 비롯한 폴리에틸렌, 그리고 폴리스티렌.
중합체는 합성 생물분해성 중합체 (가령, 젖산과 글리콜산의 중합체, 폴리무수물, 폴리(오르토)에스테르, 폴리우레탄, 폴리(부틱산), 폴리(발레르산), 그리고 폴리(락티드-카프로락톤)), 그리고 자연 생물분해성 중합체 (가령, 알기네이트 및 덱스트란과 셀룰로오스를 비롯한 다른 다당류, 콜라겐, 이들의 화학적 유도체 (치환, 화학적 기, 예를 들면, 알킬, 알킬렌의 부가, 히드록실화, 산화, 그리고 당업자에 의해 일과적으로 만들어지는 기타 변형), 알부민 및 다른 친수성 단백질 (가령, 제인과 기타 프롤라민 및 소수성 단백질))를 비롯한 생물분해성 중합체 뿐만 아니라 이들의 임의의 공중합체 또는 혼합물일 수 있다. 일반적으로, 이들 물질은 생체내에서 효소적 가수분해 또는 물에 노출에 의해, 또는 표면 또는 벌크 부식에 의해 분해된다.
중합체는 생물접합성 중합체, 예를 들면, H. S. Sawhney, C. P. Pathak and J. A. Hubbell in Macromolecules, 1993, 26, 581-587 (이의 교시는 본 발명에 참고문헌으로 편입된다)에 의해 기술된 생물부식성 히드로겔, 폴리히알루론산, 카제인, 젤라틴, 글루틴, 폴리무수물, 폴리아크릴산, 알기네이트, 키토산, 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(에틸 메타크릴레이트), 폴리(부틸메타크릴레이트), 폴리(이소부틸 메타크릴레이트), 폴리(헥실메타크릴레이트), 폴리(이소데실 메타크릴레이트), 폴리(라우릴 메타크릴레이트), 폴리(페닐 메타크릴레이트), 폴리(메틸 아크릴레이트), 폴리(이소프로필 아크릴레이트), 폴리(이소부틸 아크릴레이트), 그리고 폴리(옥타데실 아크릴레이트)일 수 있다.
일부 구체예에서, 중합체는 물-용해성 중합체이다. 적절한 물-용해성 중합체는 당분야에 공지되어 있고, 여기에는 예로써 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로오스 (HPC; Klucel), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 (HPMC; Methocel), 니트로셀룰로오스, 히드록시프로필 에틸셀룰로오스, 히드록시프로필 부틸셀룰로오스, 히드록시프로필 펜틸셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸셀룰로오스 (Ethocel), 히드록시에틸 셀룰로오스, 다양한 알킬 셀룰로오스와 히드록시알킬 셀룰로오스, 다양한 셀룰로오스 에테르, 셀룰로오스 아세테이트, 카르복시메틸 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 칼슘 카르복시메틸 셀룰로오스, 비닐 아세테이트/크로톤산 공중합체, 폴리-히드록시알킬 메타크릴레이트, 히드록시메틸 메타크릴레이트, 메타크릴산 공중합체, 폴리메타크릴산, 폴리메틸메타크릴레이트, 말레산 무수물/메틸 비닐 에테르 공중합체, 폴리 비닐 알코올, 나트륨과 칼슘 폴리아크릴산, 폴리아크릴산, 산성 카르복시 중합체, 카르복시폴리메틸렌, 카르복시비닐 중합체, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 공중합체, 폴리메틸비닐에테르-말레산 무수물, 카르복시메틸아미드, 칼륨 메타크릴레이트 디비닐벤젠 공중합체, 폴리옥시에틸렌글리콜, 폴리에틸렌 산화물, 그리고 이들의 유도체, 염, 그리고 조합이 포함된다.
특정 구체예에서, 중합체는 예로써, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 비롯한 폴리알킬렌 글리콜이다.
탄수화물은 임의의 탄수화물일 수 있고, 단서로써 이것은 알파 이탈 기를 갖는 카르보닐을 포함하거나 포함하도록 만들어진다. 탄수화물은 예로써, 알파 이탈 기를 갖는 카르보닐을 포함하도록 유도체화된 것일 수 있다. 이와 관련하여, 탄수화물은 단당류 (가령, 글루코오스, 갈락토오스, 프럭토오스), 이당류 (가령, 수크로오스, 락토오스, 말토오스), 올리고당류 (가령, 라피노오스, 스타키오스), 다당류 (전분, 아밀라아제, 아밀로펙틴, 셀룰로오스, 키틴, 칼로오스, 라미나린, 크실란, 만난, 후코이단, 갈락토만난의 유도체화된 형태일 수 있다
지질은 알파 이탈 기를 갖는 카르보닐을 포함하는 임의의 지질일 수 있다. 지질은 예로써, 카르보닐을 포함하도록 유도체화된 것일 수 있다. 이와 관련하여, 지질은 지방산 (가령, C4-C30 지방산, 에이코사노이드, 프로스타글란딘, 류코트리엔, 트롬복산, N-아실 에탄올아민), 글리세롤지질 (가령, 단일-, 이중-, 삼중-치환된 글리세롤), 글리세로포스포지질 (가령, 포스파티딜콜린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린), 스핑고지질 (가령, 스핑고신, 세라미드), 스테롤 지질 (가령, 스테로이드, 콜레스테롤), 프레놀 지질, 사카로지질, 또는 폴리케티드의 유도체일 수 있다. 일부 구체예에서, 지질은 오일, 왁스, 콜레스테롤, 스테롤, 지용성 비타민, 모노글리세리드, 디글리세리드, 트리글리세리드, 포스포지질이다.
일부 구체예에서, R7은 약 100 kDa 이하, 예를 들면, 약 90 kDa 이하, 약 80 kDa 이하, 약 70 kDa 이하, 약 60 kDa 이하, 약 50 kDa 이하, 약 40 kDa 이하의 분자량을 갖는다. 따라서, R7은 약 35 kDa 이하, 약 30 kDa 이하, 약 25 kDa 이하, 약 20 kDa 이하, 약 15 kDa 이하, 약 10 kDa 이하, 약 5 kDa 이하, 또는 약 1 kDa의 분자량을 가질 수 있다.
대안적 구체예에서, A-B-C의 일반 구조를 포함하는 펩티드는 2개 내지 6개의 아미노산의 펩티드를 A로서 포함하고, 여기서 A의 펩티드의 2개의 구조성 아미노산은 에스테르 또는 에테르 결합을 거쳐 연결된다. 에스테르 또는 에테르 결합은 예로써, 아미노산 2와 3, 3과 4, 4와 5, 또는 5와 6 사이에 존재할 수 있다. 임의적으로, A의 펩티드는 중합체 (가령, 친수성 중합체)에 연쇄, 알킬화, 또는 아실화를 비롯하여, 또 다른 화학적 모이어티에 공유 연쇄에 의해 더욱 변형될 수 있다.
특정한 구체예에서, PLA를 포함하는 앞서 기술된 부류 5 펩티드는 PLA의 옥시 유도체, 예를 들면, PLA의 에스테르 또는 PLA의 에테르를 포함하도록 변형된다. 가령, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1402, 1405-1420, 1422-1425, 1432-1436, 1438, 1439, 1445, 1446, 그리고 1451 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함할 수 있고, 여기서 PLA는 에스테르 또는 에테르 결합을 거쳐 아미노산, 펩티드, 중합체, 아실 기, 또는 알킬 기에 연결된다. 아미노산, 펩티드, 중합체, 아실 기, 또는 알킬 기는 본 명세서에서 기술된 것들 중에서 한 가지일 수 있다. PLA가 에스테르 결합을 거쳐 아미노산 또는 펩티드에 연결되는 경우에, 부류 5 펩티드는 뎁시펩티드로서 간주될 수 있다.
또한, 다른 특정한 구체예에서, PLA가 없는 앞서 기술된 부류 5 펩티드는 위치 7 (고유 글루카곤의 넘버링에 따름)에서 아미노산에 N-말단인 2개의 구조성 아미노산 사이에 최소한 하나의 에스테르 결합 또는 에테르 결합을 포함하도록 변형된다. 특정한 구체예에서, 부류 5 펩티드는 이들 2개의 구조성 아미노산 사이에 최소한 하나의 에스테르 또는 에테르 결합을 포함한다. 더욱 특정한 구체예에서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1401의 N-말단 6개 아미노산을 포함하고, 그리고 이들 N-말단 6개 아미노산 중에서 2개의 구조성 아미노산은 에스테르 또는 에테르 결합을 거쳐 연결된다.
A의 펩티드는 임의의 합성 또는 자연 발생 아미노산을 포함할 수 있고, 단서로써 최소한 2개의 구조성 아미노산은 에스테르 또는 에테르 결합을 거쳐 연결된다. 특정한 구체예에서, A의 펩티드는 고유 글루카곤의 아미노산을 포함한다. 위치 1 및/또는 위치 2에서 아미노산은 디펩티딜 펩티다아제 IV에 의한 절단에 대한 감수성을 감소시키는 아미노산일 수 있다. 가령, A의 펩티드는 위치 1에서 D-히스티딘, 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA), N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘 및 호모-히스티딘으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산을 포함할 수 있다. 더욱 구체적으로, 일부 구체예에서, A의 펩티드의 위치 2는 D-세린, D-알라닌, 발린, 글리신, N-메틸 세린, N-메틸 알라닌, 그리고 아미노이소부티르산 (Aib)으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산이다. 또한, 예로써 A의 펩티드의 위치 3에서 아미노산은 고유 글루카곤의 고유 글루타민 잔기와는 대조적으로 글루타민산일 수 있다. 따라서, A-B-C의 일반 구조의 펩티드는 하기 아미노산 서열을 포함할 수 있다:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Thr-Gly-Phe (서열 번호: 1507);
Xaa2-Xaa3-Thr-Gly-Phe (서열 번호: 1508); 또는
Xaa3-Thr-Gly-Phe (서열 번호: 1509);
여기서 Xaa1은 His, D-히스티딘, 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA), N-메틸 히스티딘, 알파-메틸 히스티딘, 이미다졸 아세트산, 데스아미노히스티딘, 히드록실-히스티딘, 아세틸-히스티딘 및 호모-히스티딘으로 구성된 군에서 선택되고; Xaa2는 Ser, D-세린, D-알라닌, 발린, 글리신, N-메틸 세린, N-메틸 알라닌, 그리고 아미노이소부티르산 (Aib)으로 구성된 군에서 선택되고; 그리고 Xaa3은 Gln 또는 Glu이다.
일부 구체예에서, B는 3개까지의 아미노산 변형에 의해 변형된다. 가령, 서열 번호: 1401의 고유 아미노산 서열을 나타내는 B는 하나 이상의 보존성 아미노산 변형에 의해 변형된다.
또 다른 구체예에서, B는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 (iv) 내지 (x)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 아미노산 변형을 포함한다. 특정한 구체예에서, B는 아미노산 변형 (v)와 (vi) 중에서 한쪽 또는 양쪽을 포함한다. 더욱 특정한 구체예에서, B는 (v)와 (vi)에 더하여, (iv), (vii), (viii), (ix), 그리고 (x)로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 변형 중에서 한 가지 또는 조합을 포함한다.
본 명세서에서 기술된 바와 같이, 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드는 본 명세서에서 기술된 바와 같이, C-말단에서 하나 이상의 하전된 아미노산을 예로써, Y 및/또는 Z로서 포함할 수 있다. 대안으로 또는 부가적으로, 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드는 Z의 C-말단에 1개 내지 2개의 하전된 아미노산을 더욱 포함할 수 있고, 여기서 C는 X-Y-Z를 포함한다. 하전된 아미노산은 예로써, Lys, Arg, His, Asp, 그리고 Glu 중에서 한 가지일 수 있다. 특정한 구체예에서, Y는 Asp이다.
일부 구체예에서, 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드는 위치 1, 16, 20, 21, 또는 24 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따름)에서, 또는 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드의 N- 또는 C-말단 잔기에서 아미노산 잔기에 공유 결합된 친수성 모이어티를 포함한다. 특정한 구체예에서, 친수성 모이어티는 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드의 Cys 잔기에 부착된다. 이와 관련하여, 고유 글루카곤 (서열 번호: 1401)의 위치 16, 21, 24, 또는 29에서 아미노산은 Cys 잔기로 치환될 수 있다. 대안으로, 친수성 모이어티를 포함하는 Cys 잔기는 예로써, 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드가 C-말단 확장 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따른 위치)을 포함할 때, 위치 30 또는 위치 40으로서 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드의 C-말단에 부가될 수 있다. 대안으로, 친수성 모이어티가 PLA의 히드록실 모이어티를 거쳐, 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드의 PLA에 부착될 수도 있다. 친수성 모이어티는 예로써, 폴리에틸렌 글리콜을 비롯한 본 명세서에서 기술된 것들 중에서 한 가지일 수 있다.
특정한 양상에서, 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드는 분자내 가교의 합동에 의해 안정화된 알파 나선을 포함한다. 일부 구체예에서, 분자내 가교는 락탐 가교이다. 락탐 가교는 위치 9와 12에서 아미노산, 위치 12와 16에서 아미노산, 위치 16과 20에서 아미노산, 위치 20과 24에서 아미노산, 또는 위치 24와 28에서 아미노산 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따름) 사이에 있을 수 있다. 특정한 구체예에서, 위치 12와 16 또는 위치 16과 20 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따름)에서 아미노산은 락탐 가교를 거쳐 연결된다. 락탐 가교의 다른 위치가 예기된다.
부가적으로 또는 대안으로, 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드는 예로써, 위치 16, 20, 21, 또는 24 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따름) 중에서 하나에서 알파, 알파 이중-치환된 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 알파, 알파 이중-치환된 아미노산은 Aib이다. 특정한 양상에서, Aib는 위치 16 (서열 번호: 1401의 넘버링에 따름)에 존재한다.
대안으로 또는 부가적으로, 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드는 위치 16 (서열 번호: 1401의 넘버링에 따름)에서 산성 아미노산을 포함하도록 변형될 수 있고, 이러한 변형은 알파 나선의 안정성을 증강시킨다. 일부 구체예에서, 산성 아미노산은 측쇄 설폰산 또는 측쇄 카르복실산을 포함하는 아미노산이다. 더욱 특정한 구체예에서, 산성 아미노산은 Glu, Asp, 호모글루타민산, Cys의 설폰산 유도체, 시스테산, 호모시스테산, Asp, 그리고 하기 구조를 갖는 Cys의 알킬화된 유도체로 구성된 군에서 선택된다:
Figure pct00037
,
여기서 X5는 C1-C4 알킬, C2-C4 알케닐, 또는 C2-C4 알키닐이다.
특정한 구체예에서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1460-1470, 1473-1478, 1480-1488, 1490-1496, 1503, 1504, 1506, 그리고 1514-1518 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 표 13의 펩티드 2-6, 표 14의 펩티드 1-8, 그리고 표 15의 펩티드 2-6, 8, 그리고 9 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
[표 13]
Figure pct00038

[표 14]
Figure pct00039

[표 15]
Figure pct00040

일부 구체예에서, 일반 구조 A-B-C를 포함하는 펩티드는 부류 5 펩티드이다. 특정한 구체예에서, 상기 펩티드는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1에 의해 달성되는 최대 효현작용의 최소한 약 50% 및 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤에 의해 달성되는 최대 반응의 최소한 약 50% 저해를 나타낸다. 또 다른 특정한 구체예에서, 상기 펩티드는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1에 의해 달성되는 최대 효현작용의 최소한 약 55%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 80%, 최소한 약 90%, 최소한 약 95%, 또는 약 100%를 나타낸다. 대안으로 또는 부가적으로, 펩티드는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤에 의해 달성되는 최대 반응의 최소한 약 55%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 80%, 최소한 약 90%, 최소한 약 95%, 또는 약 100% 저해를 나타낼 수 있다.
일부 구체예에서, 하기를 포함하는, 부류 5 펩티드 또는 이의 접합체를 갖는 펩티드가 제시된다:
(1) 하기가 포함되지만 이들에 국한되지 않는, 글루카곤 길항약 활성을 공여하는 변형:
(a) 임의적으로, 야생형 글루카곤의 N-말단으로부터 1개 내지 5개의 아미노산의 결실과 함께, 위치 6에서 Phe의 PLA로의 치환 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름); 또는
(b) 야생형 글루카곤의 N-말단으로부터 2개 내지 5개의 아미노산의 결실; 임의적으로, 야생형 글루카곤의 위치 9에서 Asp의 글루타민산, 호모글루타민산 또는 시스테인의 설폰산 유도체 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름)로의 치환과 함께; 그리고
(2) 하기가 포함되지만 이들에 국한되지 않는, GLP-1 작동약 활성을 공여하는 변형:
(a) 예로써, 위치 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24 또는 29 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 중에서 1개, 2개, 3개, 4개 이상에서 야생형 글루카곤의 아미노산 12-29 내에 α,α-이중치환된 아미노산의 삽입 또는 치환; 또는
(b) 야생형 글루카곤의 아미노산 12-29 내에 분자내 가교, 예를 들면, 염 가교 또는 락탐 가교 또는 다른 유형의 공유 결합의 도입; 또는
(c) 위치 2, 3, 17, 18, 21, 23, 또는 24 (고유 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 중에서 하나 이상에서 아미노산의 GLP-1의 상응하는 아미노산으로의 치환, 예를 들면, Ser2는 Ala로 대체되고, Gln3은 Glu로 대체되고, Arg17은 Gln으로 대체되고, 위치 18에서 Arg는 Ala로 대체되고, 위치 21에서 Asp는 Glu로 대체되고, 위치 23에서 Val은 Ile로 대체되고, 및/또는 위치 24에서 Gln은 Ala로 대체된다; 또는
(d) 야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따라 아미노산 위치 12-29 주변에서 알파-나선 구조를 안정시키는 다른 변형; 그리고
(3) GLP-1 작동약 활성을 증강시키는 다른 변형, 예를 들면, C-말단 카르복실레이트 대신에 C-말단 아미드 또는 에스테르; 그리고 임의적으로
(4) 하기 변형 중에서 하나 이상:
(a) 예로써, N-말단에서, 또는 위치 6, 16, 17, 20, 21, 24, 29, 40에서 또는 C-말단 아미노산에서 친수성 모이어티, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜에 공유 부착; 및/또는
(b) 아실화 또는 알킬화; 그리고 임의적으로
(5) 하기의 추가적인 변형 중에서 하나 이상:
(a) 임의적으로, DPP-IV 절단에 대한 내성을 향상시키는, 예로써 본 명세서에서 기술된 바와 같은 위치 1 또는 2에서 변형과 함께, 임의적으로 위치 6 (야생형 글루카곤의 넘버링에 따름)에서 PLA에 에스테르 결합을 거쳐 N-말단에 아미노산, 예를 들면, N-말단에 1-5개 아미노산의 공유 연쇄;
(b) 위치 29 및/또는 28, 그리고 임의적으로 위치 27 (야생형 글루카곤의 넘버링에 따름)에서 아미노산의 결실;
(c) C-말단에 아미노산의 공유 연쇄;
(d) 원하는 활성을 유지하면서 비-보존성 치환, 보존성 치환, 부가 또는 결실, 예를 들면, 위치 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 또는 29 중에서 하나 이상에서 보존성 치환, 위치 10에서 Tyr의 Val 또는 Phe로의 치환, 위치 12에서 Lys의 Arg으로의 치환, 이들 위치 중에서 하나 이상의 Ala로의 치환;
(e) 예로써, 글루타민산, 호모글루타민산, 시스테산 또는 호모시스테산으로 치환에 의한 위치 15에서 아스파르트산의 변형, 이것은 분해를 감소시킬 수 있다; 또는 예로써, 트레오닌, Aib, 글루타민산 또는 4개 원자 길이의 측쇄를 갖는 다른 음으로 하전된 아미노산으로, 또는 대안으로 글루타민, 호모글루타민산, 또는 호모시스테산 중에서 하나로 치환에 의한 위치 16에서 세린의 변형, 이것은 동일하게, Asp15-Ser16 결합의 절단에 기인한 분해를 감소시킬 수 있다;
(f) 산화성 분해를 감소시키는, 예로써 류신 또는 노르류신으로 치환에 의한 위치 27에서 메티오닌의 변형;
(g) Gln의 탈아미드화를 통해 일어나는 분해를 감소시키는 예로써, Ala 또는 Aib로 치환에 의한 위치 20 또는 24에서 Gln의 변형,
(h) 환상 숙신이미드 중간물질을 형성하는 Asp의 탈수, 그 이후에 이소-아스파르테이트로의 이성질화를 통해 일어나는 분해를 감소시키는, 예로써, Glu로 치환에 의한 위치 21에서 Asp의 변형;
(j) 본 명세서에서 기술된 바와 같은 동종이합체화 또는 헤테로이합체화; 그리고
(k) 이들의 조합.
동일한 부류 내에 임의의 변형은 서로 합동될 수 있고 및/또는 상이한 부류의 변형은 합동되는 것으로 이해된다. 가령, (1)(a)의 변형은 (2)(a) 및 (3)과 합동될 수 있다; (1)(a)는 (2)(b), 예를 들면, 락탐 가교 또는 염 가교, 그리고 (3)과 합동될 수 있다; (1)(a)는 (2)(c) 및 (3)와 합동될 수 있다; (1)(b)는 (2)(a) 및 (3)과 합동될 수 있다; (1)(b)는 (2)(b), 예를 들면, 락탐 가교 또는 염 가교, 그리고 (3)과 합동될 수 있다; (1)(b)는 (2)(c) 및 (3)과 합동될 수 있다; 전술한 것들 중에서 임의의 한 가지는 (4)(a) 및/또는 (4)(b)와 합동될 수 있다; 그리고 전술한 것들 중에서 임의의 한 가지는 (5)(a) 내지 (5)(k) 중에서 한 가지와 합동될 수 있다.
예시적인 구체예에서, α,α-이중치환된 아미노산 Aib는 위치 16, 20, 21, 또는 24 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 중에서 1개, 2개, 3개 또는 모두에서 치환된다.
예시적인 구체예에서, 분자내 가교는 염 가교이다.
다른 예시적인 구체예에서, 분자내 가교는 공유 결합, 예를 들면, 락탐 가교이다. 일부 구체예에서, 락탐 가교는 위치 9과 12에서 아미노산, 위치 12와 16에서 아미노산, 위치 16과 20에서 아미노산, 위치 20과 24에서 아미노산, 또는 위치 24와 28에서 아미노산 사이에 존재한다 (서열 번호: 1401의 아미노산 넘버링에 따름).
예시적인 구체예에서, 아실화 또는 알킬화는 위치 6, 10, 20 또는 24 또는 N-말단 또는 C-말단 (야생형 글루카곤의 아미노산 넘버링에 따름) 서열 번호: 1401)에서 발생한다.
예시적인 구체예에서, 변형은 하기를 포함한다:
(i) 위치 15 (서열 번호: 1401의 넘버링에 따름)에서 Asp의 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산, 그리고 호모시스테산으로의 치환;
(ii) 위치 16 (서열 번호: 1401의 넘버링에 따름)에서 Ser의 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산, 그리고 호모시스테산으로의 치환;
(iii) 위치 28에서 Asn의 하전된 아미노산으로의 치환;
(iv) 위치 28에서 Asn의 Lys, Arg, His, Asp, Glu, 시스테산, 그리고 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 하전된 아미노산으로의 치환;
(v) 위치 28에서 Asn, Asp, 또는 Glu로 치환;
(vi) 위치 28에서 Asp로 치환;
(vii) 위치 28에서 Glu로 치환;
(viii) 위치 29에서 Thr의 하전된 아미노산으로의 치환;
(ix) 위치 29에서 Thr의 Lys, Arg, His, Asp, Glu, 시스테산, 그리고 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 하전된 아미노산으로의 치환;
(x) 위치 29에서 Asp, Glu, 또는 Lys로 치환;
(xi) 위치 29에서 Glu로 치환;
(xii) 위치 29 뒤에 1-3개의 하전된 아미노산의 삽입;
(xiii) 위치 29 뒤에 Glu 또는 Lys의 삽입;
(xiv) 위치 29 뒤에 Gly-Lys 또는 Lys-Lys의 삽입;
또는 이들의 조합.
GLP-1 수용체 작동약 활성, 글루카곤 수용체 길항약 활성, 펩티드 용해성, 및/또는 펩티드 안정성을 증가시키는 앞서 기술된 임의의 변형은 개별적으로 또는 공동으로 적용될 수 있다.
안정성을 향상시키는 변형
일부 구체예에 따라서, 본 명세서에서 개시된 부류 5 펩티드는 부류 5 펩티드의 카르복시 말단 아미노산 (위치 24)에 연결된 서열 번호: 1421 (GPSSGAPPPS), 또는 서열 번호: 1450의 아미노산 서열을 포함하도록 더욱 변형되고, 그리고 체중 감소를 유도하거나 체중 유지를 보조하기 위해 개체에 투여될 수 있다. 더욱 구체적으로, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407, 서열 번호: 1408, 서열 번호: 1409, 서열 번호: 1412, 서열 번호: 1413, 서열 번호: 1414, 서열 번호: 1416, 서열 번호: 1417, 서열 번호: 1418, 서열 번호: 1419, 서열 번호: 1422, 서열 번호: 1423, 서열 번호: 1424 및 서열 번호: 1425로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하고, 상기 펩티드 또는 부류 5 펩티드의 카르복시 말단 아미노산 (위치 24)에 연결된 서열 번호: 1421 (GPSSGAPPPS), 또는 서열 번호: 1450의 아미노산 서열을 더욱 포함하고, 그리고 식욕을 억제하고 체중 감소/체중 유지를 유도하는데 이용된다. 일부 구체예에서, 투여된 펩티드 또는 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1416, 서열 번호: 1417, 서열 번호: 1418 및 서열 번호: 1419로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하고, 부류 5 펩티드의 카르복시 말단 아미노산 (위치 24)에 연결된 서열 번호: 1421 (GPSSGAPPPS)의 아미노산 서열을 더욱 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 서열 번호: 1445 또는 서열 번호: 1446의 서열을 포함하는 펩티드 또는 부류 5 펩티드를 투여하는 단계를 포함한다.
따라서 본 명세서에서 개시된 부류 5 펩티드는 수성 완충액에서 화학적 조기 절단에 대한 감수성을 감소시키기 위해 유사하게 변형될 수 있을 것으로 예상된다. 일부 구체예에 따라서, 본 명세서에서 기술된 부류 5 펩티드는 고유 글루카곤의 상응하는 위치 15에 위치되는 고유 아스파르트 아미노산을 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산과 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 대체함으로써, 수성 용액에서 안정성을 증강시키기 위해 더욱 변형될 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407 또는 서열 번호: 1408의 부류 5 펩티드의 위치 10에서 아스파르트산 잔기는 시스테산, 글루타민산, 호모글루타민산과 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산으로 치환될 수 있고, 그리고 일부 구체예에서, 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407 또는 서열 번호: 1408의 위치 10에서 고유 아스파르트산은 글루타민산으로 대체된다. 일부 구체예에 따라서, 수성 용액에서 향상된 안정성을 갖는 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 길항약은 서열 번호: 1409의 변형된 서열을 포함하고, 여기서 상기 변형은 서열 번호: 1409의 위치 10에서 Asp의 Glu으로의 치환을 포함한다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1422, 서열 번호: 1423, 서열 번호: 1424 및 서열 번호: 1425로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 부류 5 펩티드가 제시된다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드는 아미드화된다.
고유 글루카곤의 위치 15-16에서 Asp-Ser 서열은 수성 완충액에서 고유 호르몬의 화학적 조기 절단을 유발하는 독특한 불안정성 디펩티드로서 확인되었다. 가령, 37℃에서 2주 동안 0.01N HCl에서 지속될 때, 고유 글루카곤 중에서 50% 초과가 단편으로 절단될 수 있다. 2개의 유리된 절단 펩티드 1-15와 16-29는 글루카곤-유사 생물학적 활성이 없고, 따라서 글루카곤과 이의 관련된 유사체의 수성 전-제제에 대한 제약을 대표한다. 고유 글루카곤의 위치 15에서 Asp의 Glu로의 선택적인 화학적 치환은 15-16 펩티드 결합의 화학적 절단을 사실상 소멸시키는 것으로 관찰되었다.
또 다른 예시적인 구체예에서, 임의의 전술한 화합물은 고유 글루카곤의 위치 15 또는 16에 상응하는 아미노산을 변형함에 의해 안정성을 향상시켜, 특히 산성 또는 알칼리성 완충액에서 시간의 흐름에서 펩티드의 분해가 감소하도록 더욱 변형될 수 있다.
용해성을 증강시키는 변형
부류 5 펩티드는 일정한 양상에서, 글루카곤 길항약 및 GLP-1 작동약 활성을 유지하면서, 수성 용액에서 생리학적 pH에서 펩티드의 용해성을 향상시키기 위해 더욱 변형될 수 있다. 서열 번호: 1405의 펩티드의 위치 12, 15, 16, 19와 24에 상응하는 위치에서, 또는 서열 번호: 1406의 펩티드의 위치 12, 16, 19 또는 24에서 친수성 기의 도입은 부모 화합물 글루카곤 길항약과 GLP 작동약 활성을 유지하면서, 생리학적 pH를 갖는 용액에서 결과의 펩티드의 용해성을 향상시킬 수 있다. 이런 이유로, 일부 구체예에서, 본 명세서에서 개시된 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1405 또는 서열 번호: 1406의 펩티드의 아미노산 위치 12, 15, 16, 19과 24에 상응하는 아미노산의 측쇄에 공유 연결된 하나 이상의 친수성 기를 포함하도록 더욱 변형된다. 추가의 구체예에서, 서열 번호: 1405 또는 서열 번호: 1406의 아미노산 위치 16과 19에 상응하는 아미노산의 측쇄는 친수성 기에 공유 결합되고, 그리고 일부 구체예에서, 친수성 기는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이다.
부류 5 글루카곤 관련된 펩티드는 펩티드의 작동약 성질을 유지하면서, 펩티드의 용해성을 향상시키기 위해 카르복시 말단에서 전하를 도입함으로써 변형될 수 있다. 증강된 용해성은 거의 중성 pH에서 글루카곤 용액의 제조와 보관을 가능하게 한다. 상대적으로 중성 pH (가령, 약 6.0 내지 약 8.0의 pH)에서 글루카곤 용액의 조제는 부류 5 펩티드의 장기 안정성을 향상시킨다.
본 발명자들은 글루카곤 길항약과 GLP-1 활성을 유지하면서, 일부 경우에 수성 용액에서 상대적으로 중성 pH (가령, 약 6.0 내지 약 8.0의 pH)에서 용해성을 향상시키기 위해, 본 명세서에서 개시된 부류 5 펩티드가 유사하게 변형될 수 있을 것으로 기대한다. 따라서 일부 구체예는 고유 비-하전된 아미노산의 하전된 아미노산으로의 치환, 또는 카르복시 말단에 하전된 아미노산의 부가에 의해 펩티드에 전하를 추가하기 위해 야생형 글루카곤 (서열 번호: 1401)의 위치 6-29에 존재하는 고유 아미노산에 비하여 더욱 변형된 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407 또는 서열 번호: 1408의 글루카곤 길항약/GLP-1에 관계한다. 일부 구체예에 따라서, 본 명세서에서 개시된 부류 5 펩티드의 비-하전된 고유 아미노산 중에서 1개 내지 3개가 하전된 아미노산으로 대체된다. 일부 구체예에서, 하전된 아미노산은 리신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르트산 및 글루타민산으로 구성된 군에서 선택된다. 더욱 구체적으로, 본 발명자들은 위치 28 및/또는 29 (고유 글루카곤에 비하여)에 상응하는 정상적으로 발생하는 아미노산의 하전된 아미노산으로의 치환, 및/또는 펩티드의 카르복시 말단에서 1개 내지 2개의 하전된 아미노산의 부가가 수성 용액에서 생리학적으로 관련된 pH (즉, 약 6.5 내지 약 7.5의 pH)에서 부류 5 펩티드의 용해성과 안정성을 향상시킨다는 것을 발견하였다. 따라서 부류 5 펩티드의 이런 변형은 부모 펩티드의 생물학적 활성을 유지하면서, 수성 용액에서, 특히 약 5.5 내지 약 8.0 범위의 pH에서 용해성에 대한 유사한 효과를 가질 것으로 기대된다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407 또는 서열 번호: 1408의 부류 5 펩티드는 이들 서열의 위치 23 및/또는 24에서 고유 아미노산의 음으로 하전된 아미노산 (가령, 아스파르트산 또는 글루타민산)으로의 치환, 그리고 임의적으로, 상기 펩티드의 카르복시 말단에 음으로 하전된 아미노산 (가령, 아스파르트산 또는 글루타민산)의 부가에 의해 변형된다. 대안적 구체예에서, 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407 또는 서열 번호: 1408을 포함하는 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407 또는 서열 번호: 1408의 위치 24에서 고유 아미노산의 양으로 하전된 아미노산 (가령, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘)으로의 치환, 그리고 임의적으로, 상기 펩티드의 카르복시 말단에 1개 또는 2개의 양으로 하전된 아미노산 (가령, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘)의 부가에 의해 변형된다. 일부 구체예에 따라서, 향상된 용해성과 안정성을 갖는 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 유사체는 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 아미노산 서열을 포함하고, 단서로써 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 위치 23 또는 24에서 최소한 하나의 아미노산이 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 카르복시 말단에서 부가된 산성 아미노산 및/또는 추가의 산성 아미노산으로 치환된다. 일부 구체예에서, 산성 아미노산은 Asp, Glu, 시스테산 및 호모시스테산으로 구성된 군에서 독립적으로 선택된다.
일부 구체예에 따라서, 향상된 용해성과 안정성을 갖는 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 상기 길항약은 서열 번호: 1416, 서열 번호: 1417, 서열 번호: 1418 또는 서열 번호: 1419의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1416 또는 서열 번호: 1417의 서열을 포함하는 글루카곤 작동약이 제시된다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1420의 서열을 포함한다.
일부 구체예에 따라서, 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 서열을 포함하는 부류 5 펩티드가 제시된다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 위치 4는 아스파르트산, 글루타민산, 호모글루타민산, 시스테산 또는 호모시스테산이고, 그리고 일부 구체예에서, 위치 4는 아스파르트산, 글루타민산, 시스테산 또는 호모시스테산이고, 그리고 추가의 구체예에서, 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 위치 4는 아스파르트산 또는 글루타민산이고, 그리고 일부 구체예에서, 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 위치 4는 아스파르트산이다. 일부 구체예에서, 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 서열을 포함하는 부류 5 펩티드가 제시되고, 여기서 서열 번호: 1415의 위치 4는 아스파르트산이고, 그리고 서열 번호: 1415의 위치 10은 글루타민산이다. 추가의 구체예에서, 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 C-말단 아미노산은 고유 카르복실산 기가 전하-중성 기, 예를 들면, 아미드 또는 에스테르로 대체되도록 변형된다.
부류 5 펩티드 융합
추가의 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 부류 5 펩티드의 카르복시 말단 아미노산은 서열 번호: 1421, 1426, 1427, 그리고 1450로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 두 번째 펩티드에 공유 결합된다. 가령, 일부 구체예에서, 서열 번호: 1415, 서열 번호: 1451, 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407, 서열 번호: 1408, 서열 번호: 1412, 서열 번호: 1413, 서열 번호: 1414, 서열 번호: 1416, 서열 번호: 1417, 서열 번호: 1418, 서열 번호: 1419, 서열 번호: 1422, 서열 번호: 1423, 서열 번호: 1424 및 서열 번호: 1425의 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1421 (GPSSGAPPPS), 서열 번호: 1426 (KRNRNNIA), 서열 번호: 1427 (KRNR) 및 서열 번호: 1450 (GPSSGAPPPSX)로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는 두 번째 펩티드에 공유 결합된다.
일부 구체예에서, 서열 번호: 1405, 서열 번호: 1406, 서열 번호: 1407, 서열 번호: 1408, 서열 번호: 1409, 서열 번호: 1422, 서열 번호: 1423, 서열 번호: 1424 및 서열 번호: 1425로 구성된 군에서 독립적으로 선택되는 두 서열을 포함하는 부류 5 펩티드 이합체가 제시되고, 이것은 부류 5 펩티드의 카르복시 말단 아미노산에 연결된 서열 번호: 1421 (GPSSGAPPPS)의 아미노산 서열을 더욱 포함한다.
일부 구체예에서, 부류 5 펩티드는 이러한 펩티드의 C-말단의 1개 또는 2개의 아미노산의 절두 또는 결실 (즉, 고유 글루카곤의 위치 29 또는 위치 28과 29에서 아미노산의 절두)에 의해 더욱 변형된다. 바람직하게는, 절두는 부류 5 펩티드의 활성 (가령, 글루카곤 길항작용/GLP-1 효현작용)에 영향을 주지 않는다.
부류 5 펩티드 접합체
부류 5 펩티드의 접합체 역시 제시되는데, 여기서 글루카곤 펩티드는 임의적으로 공유 결합을 거쳐, 그리고 임의적으로 링커를 거쳐 접합체 모이어티에 연결된다.
부류 5 펩티드가 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 포함하는 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 직쇄의 형태이거나, 또는 가지형일 수 있다. 일부 구체예에 따라서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 500 내지 약 10,000 달톤의 범위에서 선택되는 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤의 범위에서 선택되는 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤의 범위에서 선택되는 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 1,000 내지 약 2,000 달톤의 범위에서 선택되는 평균 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 약 1,000 달톤의 평균 분자량을 갖는다.
일부 구체예에서, 페길화되는 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 서열로 구성되는 펩티드를 포함하고, 여기서 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 위치 11, 12, 15, 16, 19와 24에서 선택되는 아미노산에 연결되고, 그리고 PEG 사슬의 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다. 일부 구체예에서, 페길화되는 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 서열로 구성되는 펩티드를 포함하고, 여기서 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 위치 16 또는 19에서 아미노산에 연결되고, 그리고 PEG 사슬의 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다. 추가의 구체예에서, 변형된 부류 5 펩티드는 상기 펩티드에 공유 결합된 2개 이상의 폴리에틸렌 글리콜 사슬을 포함하고, 여기서 글루카곤 사슬의 총 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다. 일부 구체예에서, 부류 5 펩티드는 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 서열을 포함하고, 여기서 폴리에틸렌 글리콜 사슬은 서열 번호: 1415 또는 서열 번호: 1451의 위치 16과 19에서 아미노산에 연결되고, 그리고 이들 두 PEG 사슬의 통합 분자량은 약 1,000 내지 약 5,000 달톤이다.
부류 5 글루카곤 관련된 펩티드는 임의적으로, 글루카곤 길항약과 GLP-1 작동약 활성을 유지하는 1, 2, 3, 4, 또는 5개까지의 추가 변형을 갖는, 서열 번호: 1401-1518 중에서 한 가지의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
연결 기 (L)
본 명세서에서 기술된 바와 같이, 본 발명에서는 화학식 Q-L-Y를 갖는 GR 리간드로 접합된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드를 제시하고, 여기서 L은 연결 기 또는 화학적 결합이다. 일부 구체예에서, L은 생체내에서 안정된다. 일부 구체예에서, L은 생체내에서 가수분해 가능하다. 일부 구체예에서, L은 생체내에서 준안정하다.
Q와 Y는 당업자에게 공지된 표준 연결제와 절차를 이용하여 L을 통해 함께 연결될 수 있다. 일부 양상에서, Q와 Y는 직접적으로 융합되고, 그리고 L은 단일 결합이다. 다른 양상에서, Q와 Y는 연결 기 L을 통해 융합된다. 가령, 일부 구체예에서, Q와 Y는 임의적으로 펩티드 또는 아미노산 스페이서를 통해, 펩티드 결합을 거쳐 함께 연결된다. 일부 구체예에서, Q와 Y는 임의적으로 연결 기 (L)을 통해, 화학적 접합을 통해 함께 연결된다. 일부 구체예에서, L은 Q와 Y 각각에 직접적으로 접합된다.
화학적 접합은 한 화합물의 친핵성 반응 기를 다른 화합물의 친전자성 반응 기에 반응시킴으로써 일어날 수 있다. 일부 구체예에서, L이 단일 결합일 때, Q는 Q 상에서 친핵성 반응성 모이어티를 Y 상에서 친전자성 반응성 모이어티와 반응시킴으로써, 또는 Q 상에서 친전자성 반응성 모이어티를 Y 상에서 친핵성 반응성 모이어티와 반응시킴으로써 Y에 접합된다. L이 Q와 Y를 함께 연결하는 기인 구체예에서, Q 및/또는 Y는 Q 및/또는 Y 상에서 친핵성 반응성 모이어티를 L 상에서 친전자성 반응성 모이어티와 반응시킴으로써, 또는 Q 및/또는 Y 상에서 친전자성 반응성 모이어티를 L 상에서 친핵성 반응성 모이어티와 반응시킴으로써 L에 접합될 수 있다. 친핵성 반응 기의 무제한적 실례에는 아미노, 티올, 그리고 히드록실이 포함된다. 친전자성 반응 기의 무제한적 실례에는 카르복실, 아실 염화물, 무수물, 에스테르, 숙신이미드 에스테르, 알킬 할로겐화물, 설포네이트 에스테르, 말레이미도, 할로아세틸, 그리고 이소시아네이트가 포함된다. Q와 Y가 카르복실산을 아민과 반응시킴으로써 함께 접합되는 구체예에서, 활성화제는 카르복실산의 활성화된 에스테르를 형성하는데 이용될 수 있다.
카르복실산의 활성화된 에스테르는 예로써, N-히드록시숙신이미드 (NHS), 토실레이트 (Tos), 트리플레이트, 카르보디이미드, 또는 헥사플루오르포스페이트일 수 있다. 일부 구체예에서, 카르보디이미드는 1,3-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC), 1,1'-카르보닐디이미다졸 (CDI), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 (EDC), 또는 1,3-디이소프로필카르보디이미드 (DICD)이다. 일부 구체예에서, 헥사플루오르포스페이트는 헥사플루오르포스페이트 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오르포스페이트 (BOP), 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오르포스페이트 (PyBOP), 2-(1H-7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸 우로늄 헥사플루오르포스페이트 (HATU), 그리고 o-벤조트리아졸-N,N,N,N-테트라메틸-우로늄-헥사플루오르-포스페이트 (HBTU)로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예에서, Q는 Y 또는 L 상에서 친전자성 반응 기에 접합할 수 있는 친핵성 반응 기 (가령, 리신, 시스테인 또는 세린의 측쇄의 아미노 기, 티올 기, 또는 히드록실 기)를 포함한다. 일부 구체예에서, Q는 Y 또는 L 상에서 친핵성 반응 기에 접합할 수 있는 친전자성 반응 기 (가령, Asp 또는 Glu의 측쇄의 카르복실레이트 기)를 포함한다. 일부 구체예에서, Q는 Y 또는 L에 직접적으로 접합할 수 있는 반응 기를 포함하도록 화학적으로 변형된다. 일부 구체예에서, Q는 본 명세서에서 앞서 기술된 바와 같이, 친핵성 측쇄를 갖는 자연 또는 비자연 아미노산, 예를 들면, 화학식 I, 화학식 II, 또는 화학식 III으로 표시되는 아미노산을 포함하도록 C-말단에서 변형된다 (아실화와 알킬화를 참고한다). 예시적인 구체예에서, Q의 C-말단 아미노산은 리신, 오르니틴, 세린, 시스테인, 그리고 호모시스테인으로 구성된 군에서 선택된다. 가령, Q의 C-말단 아미노산은 리신 잔기를 포함하도록 변형될 수 있다. 일부 구체예에서, Q는 친전자성 측쇄를 갖는 자연 또는 비자연 아미노산, 예를 들면, Asp와 Glu를 포함하도록 C-말단 아미노산에서 변형된다. 일부 구체예에서, Q의 내부 아미노산은 본 명세서에서 앞서 기술된 바와 같이, 친핵성 측쇄를 갖는 자연 또는 비자연 아미노산, 예를 들면, 화학식 I, 화학식 II, 또는 화학식 III으로 표시되는 아미노산으로 치환된다 (아실화와 알킬화를 참고한다). 예시적인 구체예에서, 치환되는 Q의 내부 아미노산은 리신, 오르니틴, 세린, 시스테인, 그리고 호모시스테인으로 구성된 군에서 선택된다. 가령, Q의 내부 아미노산은 리신 잔기로 치환될 수 있다. 일부 구체예에서, Q의 내부 아미노산은 친전자성 측쇄를 갖는 자연 또는 비자연 아미노산, 예를 들면, Asp와 Glu로 치환된다.
일부 구체예에서, Y는 Q 또는 L에 직접적으로 접합할 수 있는 반응 기를 포함한다. 일부 구체예에서, Y는 Q 또는 L 상에서 친전자성 반응 기에 접합할 수 있는 친핵성 반응 기 (가령, 아민, 티올, 히드록실)를 포함한다. 일부 구체예에서, Y는 Q 또는 L 상에서 친핵성 반응 기에 접합할 수 있는 친전자성 반응 기 (가령, 카르복실 기, 카르복실 기의 활성화된 형태, 이탈 기를 갖는 화합물)를 포함한다. 일부 구체예에서, Y는 Q 또는 L 상에서 친전자성 반응 기에 접합할 수 있는 친핵성 반응 기를 포함하도록 화학적으로 변형된다. 일부 구체예에서, Y는 Q 또는 L 상에서 친핵성 반응 기에 접합할 수 있는 친전자성 반응 기를 포함하도록 화학적으로 변형된다.
일부 구체예에서, 접합은 유기실란, 예를 들면, 글루타르알데히드로 처리된 아미노실란; 실라놀 기의 카르보닐디이미다졸 (CDI) 활성화; 또는 덴드리머 (dendrimer)의 이용을 통해 수행될 수 있다. 다양한 덴드리머는 당분야에 공지되어 있고, 그리고 여기에는 폴리 (아미도아민) (PAMAM) 덴드리머, 이들은 암모니아 또는 에틸렌디아민 개시자 코어 시약으로부터 출발하는 분기 방법 (divergent method)에 의해 합성된다; 트리스-아미노에틸렌-이민 코어에 기초된 PAMAM 덴드리머의 하위-부류; 방사상으로 층을 이루는 폴리(아미도아민-유기실리콘) 덴드리머 (PAMAMOS), 이들은 친수성, 친핵성 폴리아미도아민 (PAMAM) 내부 및 소수성 유기실리콘 (OS) 외부로 구성되는 역 단분자 미셀이다; 폴리 (프로필렌 이민) (PPI) 덴드리머, 이들은 일반적으로, 말단 기로서 일차 아민을 갖는 폴리-알킬 아민인 반면, 덴드리머 내부는 다수의 3차 트리스-프로필렌 아민으로 구성된다; 폴리 (프로필렌 아민) (POPAM) 덴드리머; 디아미노부탄 (DAB) 덴드리머; 친양쪽성 덴드리머; 물 용해성 하이퍼 가지형 폴리페닐렌의 단분자 미셀인 미셀 덴드리머; 폴리리신 덴드리머; 그리고 폴리-벤질 에테르 하이퍼 가지형 뼈대에 기초된 덴드리머가 포함된다.
일부 구체예에서, 접합은 올레핀 복분해를 통해 수행될 수 있다. 일부 구체예에서, Y와 Q, Y와 L, 또는 Q와 L은 둘 모두, 복분해를 겪을 수 있는 알켄 또는 알킨 모이어티를 포함한다. 일부 구체예에서, 복분해 반응을 가속화시키기 위해 적절한 촉매 (가령, 구리, 루테늄)가 이용된다. 올레핀 복분해 반응을 실행하는 적절한 방법은 당분야에서 기술된다. 예로써, Schafmeister et al., J. Am. Chem. Soc. 122: 5891-5892 (2000), Walensky et al., Science 305: 1466-1470 (2004), 그리고 Blackwell et al., Angew, Chem., Int. Ed. 37: 3281-3284 (1998)를 참고한다.
일부 구체예에서, 접합은 클릭 화학 (click chemistry)을 이용하여 실행될 수 있다. "클릭 반응"은 범위가 넓고, 실행이 용이하고, 쉽게 구입가능한 시약을 이용하고, 그리고 산소와 물에 둔감하다. 일부 구체예에서, 클릭 반응은 트리아졸릴 기를 형성하는, 알키닐 기와 아지도 기 사이에 시클로 부가 반응이다. 일부 구체예에서, 클릭 반응은 구리 또는 루테늄 촉매를 이용한다. 클릭 반응을 수행하는 적절한 방법은 당분야에서 기술된다. 예로써, Kolb et al., Drug Discovery Today 8:1128 (2003); Kolb et al., Angew. Chem. Int. Ed. 40:2004 (2001); Rostovtsev et al., Angew. Chem. Int. Ed. 41:2596 (2002); Tornoe et al., J. Org. Chem. 67:3057 (2002); Manetsch et al., J. Am. Chem. Soc. 126:12809 (2004); Lewis et al., Angew. Chem. Int. Ed. 41:1053 (2002); Speers, J. Am. Chem. Soc. 125:4686 (2003); Chan et al. Org. Lett. 6:2853 (2004); Zhang et al., J. Am. Chem. Soc. 127:15998 (2005); 그리고 Waser et al., J. Am. Chem. Soc. 127:8294 (2005)를 참고한다.
높은 친화성 특이적 결합 파트너, 예를 들면, 스트렙타비딘/비오틴 또는 아비딘/비오틴 또는 렉틴/탄수화물을 통한 간접적인 접합 역시 예기된다.
Q 및/또는 Y의 화학적 변형
일부 구체예에서, Q 및/또는 Y는 유기 유도체화제로, 친핵성 반응 기 또는 친전자성 반응 기를 포함하도록 기능화된다. 이러한 유도체화제는 Q 상에서 표적화된 아미노산 및 Y 상에서 기능 기의 선별된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있다. Q 및/또는 Y 상에서 반응 기에는 예로써, 알데히드, 아미노, 에스테르, 티올, α-할로아세틸, 말레이미도 또는 히드라지노 기가 포함된다. 유도체화제에는 예로써, 말레이미도벤조일 설포숙신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통한 접합), N-히드록시숙신이미드 (리신 잔기를 통해), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물 또는 당분야에 공지된 기타 작용제가 포함된다. 대안으로, Q 및/또는 Y는 중간물질 담체, 예를 들면, 다당류 또는 폴리펩티드 담체를 통해 간접적으로 서로 연결될 수 있다. 다당류 담체의 실례에는 아미노덱스트란이 포함된다. 적절한 폴리펩티드 담체의 실례에는 폴리리신, 폴리글루타민산, 폴리아스파르트산, 이들의 공중합체, 그리고 이들 아미노산 및 결과의 적하된 담체에 바람직한 용해성 성질을 공여하는 기타, 예를 들면, 세린의 혼성 중합체가 포함된다.
시스테이닐 잔기는 가장 빈번하게, α-할로아세테이트 (및 상응하는 아민), 예를 들면, 클로로아세트산 또는 클로로아세트아미드와 반응되어, 카르복시메틸 또는 카르복시아미도메틸 유도체가 제공된다. 시스테이닐 잔기는 또한, 브로모트리플루오르아세톤, 알파-브로모-β-(5-이미도조일)프로피온산, 클로로아세틸 포스페이트, N-알킬말레이미드, 3-니트로-2-피리딜 이황화물, 메틸 2-피리딜 이황화물, p-클로로머큐리벤조에이트, 2-클로로머큐리-4-니트로페놀, 또는 클로로-7-니트로벤조-2-옥사-1,3-디아졸과의 반응에 의해 유도체화된다.
히스티딜 잔기는 pH 5.5-7.0에서 디에틸피로카보네이트와의 반응에 의해 유도체화되는데, 그 이유는 상기 작용제가 히스티딜 측쇄에 상대적으로 특이적이기 때문이다. 파라-브로모펜아실 브롬화물 역시 유용하다; 반응은 바람직하게는, pH 6.0에서 0.1 M 나트륨 카코딜레이트에서 수행된다.
리시닐과 아미노-말단 잔기는 숙신산 또는 기타 카르복실산 무수물과 반응된다. 이들 작용제로 유도체화는 리시닐 잔기의 전하를 반전시키는 효과를 갖는다. 알파-아미노-내포 잔기를 유도체화시키는 다른 적절한 시약에는 이미도에스테르, 예를 들면, 메틸 피콜린이미데이트, 피리독살 포스페이트, 피리독살, 클로로보로하이드리드, 트리니트로벤젠설폰산, O-메틸이소우레아, 2,4-펜탄디온, 그리고 글리옥실레이트와의 트랜스아미나아제-촉매화된 반응이 포함된다.
아르기닐 잔기는 하나 또는 여러 개의 전통적인 시약, 그 중에서도 특히 페닐글리옥살, 2,3-부탄디온, 1,2-시클로헥산디온, 그리고 닌히드린과의 반응에 의해 변형된다. 아르기닌 잔기의 유도체화는 상기 반응이 구아니딘 기능 기의 높은 pKa로 인하여, 알칼리성 조건에서 수행되도록 요구한다. 게다가, 이들 시약은 리신의 기뿐만 아니라 아르기닌 엡실론-아미노 기와 반응할 수도 있다.
티로실 잔기의 특정한 변형은 방향족 디아조늄 화합물 또는 테트라니트로메탄과의 반응에 의해 티로실 잔기 내로 스펙트럼 라벨 (spectral label)을 도입하는데 특히 관심을 두고 만들어질 수 있다. 가장 일반적으로, O-아세틸 티로실 화학종과 3-니트로 유도체를 형성하기 위해, 각각 N-아세틸이미디졸과 테트라니트로메탄이 이용된다.
카르복실 측면 기 (아스파르틸 또는 글루타밀)는 카르보디이미드 (R-N=C=N-R')와의 반응에 의해 선택적으로 변형되고, 여기서 R과 R'는 상이한 알킬 기, 예를 들면, 1-시클로헥실-3-(2-모르폴리닐-4-에틸) 카르보디이미드 또는 1-에틸-3-(4-아조니아-4,4-디메틸펜틸) 카르보디이미드이다. 게다가, 아스파르틸과 글루타밀 잔기는 암모늄 이온과의 반응에 의해 아스파라기닐과 글루타미닐 잔기로 전환된다.
다른 변형에는 프롤린과 리신의 히드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 히드록실 기의 포스포릴화, 리신, 아르기닌과 히스티딘 측쇄의 알파-아미노 기의 메틸화 (T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)), 아스파라긴 또는 글루타민의 탈아미드화, N-말단 아민의 아세틸화, 및/또는 C-말단 카르복실산 기의 아미드화 또는 에스테르화가 포함된다.
다른 유형의 공유 변형은 펩티드에 글리코시드를 화학적으로 또는 효소적으로 커플링하는 것을 수반한다. 당(들)은 (a) 아르기닌과 히스티딘, (b) 유리 카르복실 기, (c) 유리 설피드릴 기, 예를 들면, 시스테인의 것들, (d) 유리 히드록실 기, 예를 들면, 세린, 트레오닌, 또는 히드록시프롤린의 것들, (e) 방향족 잔기, 예를 들면, 티로신, 또는 트립토판의 것들, 또는 (f) 글루타민의 아미드 기에 부착될 수 있다. 이들 방법은 1987년 9월 11일 공개된 WO87/05330, 그리고 Aplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981)에서 기술된다.
L의 구조
일부 구체예에서, L은 단일 결합이다. 이들 구체예에서, Q와 Y는 Q 상에서 친핵성 반응성 모이어티를 Y 상에서 친전자성 반응성 모이어티와 반응시킴으로써 함께 접합된다. 대안적 구체예에서, Q와 Y는 Q 상에서 친전자성 반응성 모이어티를 Y 상에서 친핵성 모이어티와 반응시킴으로써 함께 접합된다. 예시적인 구체예에서, L은 Q 상에서 아민 (가령, 리신 잔기의 ε-아민)과 Y 상에서 카르복실 기의 반응 시에 형성되는 아미드 결합이다. 대안적 구체예에서, Q 및/또는 Y는 접합에 앞서 유도체화제로 유도체화된다.
일부 구체예에서, L은 연결 기이다. 일부 구체예에서, L은 이중기능성 링커이고 Q와 Y에 접합에 앞서, 단지 2개의 반응 기를 포함한다. Q와 Y가 둘 모두 친전자성 반응 기를 갖는 구체예에서, L은 Q와 Y에 접합에 앞서, 2개의 동일한 또는 2개의 상이한 친핵성 기 (가령, 아민, 히드록실, 티올)를 포함한다. Q와 Y 둘 모두 친핵성 반응 기를 갖는 구체예에서, L은 Q와 Y에 접합에 앞서, 2개의 동일한 또는 2개의 상이한 친전자성 기 (가령, 카르복실 기, 카르복실 기의 활성화된 형태, 이탈 기를 갖는 화합물)를 포함한다. Q 또는 Y 중에서 하나가 친핵성 반응 기를 갖고, 그리고 Q 또는 Y 중에서 다른 하나가 친전자성 반응 기를 갖는 구체예에서, L은 Q와 Y에 접합에 앞서, 하나의 친핵성 반응 기 및 하나의 친전자성 기를 포함한다.
L은 Q와 Y와 각각 반응할 수 있는 최소한 2개의 반응 기 (Q와 Y에 접합에 앞서)를 갖는 임의의 분자일 수 있다. 일부 구체예에서, L은 단지 2개의 반응 기를 갖고 이중기능성이다. L (펩티드에 접합에 앞서)은 화학식 VI로 표시될 수 있다:
Figure pct00041

여기서 A와 B는 독립적으로 친핵성 또는 친전자성 반응 기이다. 일부 구체예에서, A와 B는 둘 모두 친핵성 기 또는 둘 모두 친전자성 기이다. 일부 구체예에서, A 또는 B 중에서 하나는 친핵성 기이고, 그리고 A 또는 B 중에서 다른 하나는 친전자성 기이다. A와 B의 무제한적 조합은 하기에 도시된다.
Figure pct00042

Figure pct00043

Figure pct00044

일부 구체예에서, A와 B는 올레핀 복분해 반응에 적합한 알켄 및/또는 알킨 기능 기를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, A와 B는 클릭 화학에 적합한 모이어티 (가령, 알켄, 알킨, 니트릴, 아지드)를 포함한다. 반응 기 (A와 B)의 다른 무제한적 실례에는 피리딜디티올, 아릴 아지드, 디아지린, 카르보디이미드, 그리고 히드라지드가 포함된다.
일부 구체예에서, L은 소수성이다. 소수성 링커는 당분야에 공지되어 있다. 예로써, Bioconjugate Techniques, G. T. Hermanson (Academic Press, San Diego, CA, 1996)를 참고하고, 이것은 전체로서 참고문헌으로 편입된다. 당분야에 공지된 적절한 소수성 연결 기에는 예로써, 8-히드록시옥탄산과 8-메르캅토옥탄산이 포함된다. 조성물의 펩티드에 접합에 앞서, 소수성 연결 기는 본 명세서에서 기술되고 하기에 도시된 바와 같이, 최소한 2개의 반응 기 (A와 B)를 포함한다:
Figure pct00045

일부 구체예에서, 소수성 연결 기는 말레이미도 또는 요오드아세틸 기 및 카르복실산 또는 활성화된 카르복실산 (가령, NHS 에스테르)을 반응 기로서 포함한다. 이들 구체예에서, 커플링 시약을 사용하거나 사용하지 않으면서, 말레이미도 또는 요오드아세틸 기는 Q 또는 Y 상에서 티올 모이어티에 커플링될 수 있고, 그리고 카르복실산 또는 활성화된 카르복실산은 Q 또는 Y 상에서 아민에 커플링될 수 있다. 당업자에게 공지된 임의의 커플링 작용제가 카르복실산을 유리 아민, 예를 들면, DCC, DIC, HATU, HBTU, TBTU, 그리고 본 명세서에서 기술된 다른 활성화제와 커플링하는데 이용될 수 있다. 특정 구체예에서, 친수성 연결 기는 2개 내지 100개의 메틸렌 기의 지방족 사슬을 포함하고, 여기서 A와 B는 카르복실 기 또는 이들의 유도체 (가령, 숙신산)이다. 다른 특정한 구체예에서 L은 요오드아세트산이다.
Figure pct00046

일부 구체예에서, 연결 기는 친수성 기, 예를 들면, 폴리알킬렌 글리콜이다. 조성물의 펩티드에 접합에 앞서, 친수성 연결 기는 본 명세서에서 기술되고 하기에 도시된 바와 같이, 최소한 2개의 반응 기 (A와 B)를 포함한다:
Figure pct00047

특정 구체예에서, 연결 기는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이다. 일정한 구체예에서, PEG는 약 100 달톤 내지 약 10,000 달톤, 예를 들면, 약 500 달톤 내지 약 5000 달톤의 분자량을 갖는다. 일부 구체예에서, PEG는 약 10,000 달톤 내지 약 40,000 달톤의 분자량을 갖는다.
일부 구체예에서, 친수성 연결 기는 말레이미도 또는 요오드아세틸 기 및 카르복실산 또는 활성화된 카르복실산 (가령, NHS 에스테르)을 반응 기로서 포함한다. 이들 구체예에서, 커플링 시약을 사용하거나 사용하지 않으면서, 말레이미도 또는 요오드아세틸 기는 Q 또는 Y 상에서 티올 모이어티에 커플링될 수 있고, 그리고 카르복실산 또는 활성화된 카르복실산은 Q 또는 Y 상에서 아민에 커플링될 수 있다. 당업자에게 공지된 임의의 적절한 커플링 작용제가 카르복실산을 아민, 예를 들면, DCC, DIC, HATU, HBTU, TBTU, 그리고 본 명세서에서 기술된 다른 활성화제와 커플링하는데 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 연결 기는 말레이미도-PEG(20 kDa)-COOH, 요오드아세틸-PEG(20 kDa)-COOH, 말레이미도-PEG(20 kDa)-NHS, 또는 요오드아세틸-PEG(20 kDa)-NHS이다.
일부 구체예에서, 연결 기는 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 또는 폴리펩티드로 구성되고, 여기서 아미노산, 디펩티드, 트리펩티드, 또는 폴리펩티드는 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 최소한 2개의 활성화 기를 포함한다. 일부 구체예에서, 연결 기 (L)은 아미노, 에테르, 티오에테르, 말레이미도, 이황화물, 아미드, 에스테르, 티오에스테르, 알켄, 시클로알켄, 알킨, 트리조일, 카바메이트, 카보네이트, 카텝신 B-절단가능, 그리고 히드라존으로 구성된 군에서 선택되는 모이어티를 포함한다.
일부 구체예에서, L은 1개 내지 약 60개, 또는 1개 내지 30개의 원자 이상, 2개 내지 5개의 원자, 2개 내지 10개의 원자, 5개 내지 10개의 원자, 또는 10개 내지 20개의 원자 길이의 원자 사슬을 포함한다. 일부 구체예에서, 사슬 원자는 모두 탄소 원자이다. 일부 구체예에서, 링커의 중추 내에 사슬 원자는 C, O, N, 그리고 S로 구성된 군에서 선택된다. 사슬 원자와 링커는 더욱 가용성 접합체를 제공하기 위해, 그들의 예상된 용해성 (친수성)에 따라 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, L은 표적 조직 또는 장기 또는 세포에서 발견되는 효소 또는 다른 촉매 또는 가수분해 조건에 의해 절단되기 쉬운 기능 기를 제공한다. 일부 구체예에서, L의 길이는 입체 장애 (steric hindrance)에 대한 가능성을 감소시킬 만큼 충분히 길다.
생체내에서 L의 안정성
일부 구체예에서, L은 생체내에서 안정하다. 일부 구체예에서, L은 혈액 혈청에서 최소한 5분 동안 안정하다, 예를 들면, 혈청에서 5분 동안 배양될 때 접합체 중에서 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5% 미만이 절단된다. 다른 구체예에서, L은 혈액 혈청에서 최소한 10, 또는 20, 또는 25, 또는 30, 또는 60, 또는 90, 또는 120분, 또는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 18 또는 24시간 동안 안정하다. 이들 구체예에서, L은 생체내에서 가수분해될 수 있는 기능 기를 포함하지 않는다. 일부 예시적인 구체예에서, L은 혈액 혈청에서 최소한 약 72시간 동안 안정하다. 생체내에서 유의미한 가수분해를 겪지 않는 기능 기의 무제한적 실례에는 아미드, 에테르, 그리고 티오에테르가 포함된다. 가령, 하기 화합물은 생체내에서 유의미한 가수분해를 겪지 않는다:
Figure pct00048
.
일부 구체예에서, L은 생체내에서 가수분해 가능하다. 이들 구체예에서, L은 생체내에서 가수분해를 겪을 수 있는 기능 기를 포함한다. 생체내에서 가수분해를 겪을 수 있는 기능 기의 무제한적 실례에는 에스테르, 무수물, 그리고 티오에스테르가 포함된다. 가령, 하기 화합물은 생체내에서 가수분해를 겪을 수 있는데, 그 이유는 이것이 에스테르 기를 포함하기 때문이다:
Figure pct00049
.
일부 예시적인 구체예에서, L은 불안정하고, 그리고 37℃에서 혈액 혈장에서 3시간 내에 실질적인 가수분해를 겪고, 6시간 내에 완전한 가수분해를 겪는다. 일부 예시적인 구체예에서, L은 불안정하지 않다.
일부 구체예에서, L은 생체내에서 준안정하다. 이들 구체예에서, L은 임의적으로 일정한 기간에 걸쳐, 생체내에서 화학적으로 또는 효소적으로 절단될 수 있는 기능 기 (가령, 산-불안정성, 환원-불안정성, 또는 효소-불안정성 기능 기)를 포함한다. 이들 구체예에서, L은 예로써, 히드라존 모이어티, 이황화물 모이어티, 또는 카텝신-절단가능 모이어티를 포함할 수 있다. L이 준안정할 때, 그리고 임의의 특정 이론에 한정됨 없이, Q-L-Y 접합체는 세포외 환경에서 안정하다, 예를 들면, 앞서 기술된 기간 동안 혈액 혈청에서 안정하지만, 세포내 환경 또는 세포내 환경을 모방하는 조건에서 불안정하고, 따라서 이것은 세포 내로 진입 시에 절단된다. 일부 구체예에서, L이 준안정할 때, L은 혈액 혈청에서 최소한 약 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 42, 또는 48시간, 예를 들면, 최소한 약 48, 54, 60, 66, 또는 72시간, 또는 약 24-48, 48-72, 24-60, 36-48, 36-72, 또는 48-72시간 동안 안정하다.
Q-L-Y 접합체
Q와 Y의 접합
L을 통한 Y에 Q의 접합은 위치 1-29 중에서 하나, C-말단 확장 내에 위치, 또는 C-말단 아미노산을 비롯한 Q 내에 임의의 위치에서 수행될 수 있고, 단서로써 Q의 활성이 비록 증강되지 않더라도, 유지되어야 한다. 무제한적 실례에는 위치 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28, 29, 30, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43 (서열 번호: 1601의 아미노산의 넘버링에 따름)가 포함된다. 일부 구체예에서, Y는 위치 10, 20, 24, 30, 37, 38, 39, 40, 41, 32, 또는 43 중에서 하나 이상에서 L을 통해 Q에 접합된다. 특정 구체예에서, Y는 Q의 위치 10 및/또는 40에서 L을 통해 Q에 접합된다.
활성
글루카곤 수용체와 글루코코르티코이드 수용체에서 활성
일부 구체예에서, Q-L-Y는 글루카곤 수용체와 글루코코르티코이드 수용체 둘 모두에서 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 Q의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)은 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)으로부터 약 2000-배, 약 1000-배, 약 100-배, 약 75-배, 약 60-배, 약 50-배, 약 40-배, 약 30-배, 약 20-배, 약 10-배, 또는 약 5배 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다. 일부 구체예에서, Q의 글루카곤 효능은 Y의 효능으로부터 약 25-, 약 20-, 약 15-, 약 10-, 또는 약 5-배의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다.
일부 구체예에서, 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능에 의해 나눗셈된 글루카곤 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능의 비율은 약 X 이하이고, 여기서 X는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 글루카곤 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 약 1 내지 5 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Y의 글루코코르티코이드의 효능과 비교하여 Q의 글루카곤 효능의 비율은 약 Z 이하이고, 여기서 Z는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Y의 글루코코르티코이드의 효능과 비교하여 Q의 글루카곤 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q는 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50보다 2- 내지 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 글루카곤 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50에 의해 나눗셈된 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50의 비율은 약 V 이하이고, 여기서 V는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, 글루카곤 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q의 글루카곤 효능과 비교하여 Y의 글루코코르티코이드 효능의 비율은 약 W 이하이고, 여기서 W는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Q의 글루카곤 효능과 비교하여 Y의 글루코코르티코이드 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Y는 글루카곤 수용체에서 Q의 EC50보다 약 2- 내지 약 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 글루코코르티코이드 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 내인성 리간드의 활성 (글루코코르티코이드 효능)의 최소한 0.001%, 최소한 0.01%, 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)를 나타내고, 그리고 Q는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성 (글루카곤 효능)의 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)를 나타낸다.
GLP-1 수용체와 글루코코르티코이드 수용체에서 활성
일부 구체예에서, Q-L-Y는 GLP-1 수용체와 글루코코르티코이드 수용체 둘 모두에서 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 Q의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)은 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)으로부터 약 2000-배, 약 1000-배, 약 100-배, 약 75-배, 약 60-배, 약 50-배, 약 40-배, 약 30-배, 약 20-배, 약 10-배, 또는 약 5배 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다. 일부 구체예에서, Q의 GLP-1 효능은 Y의 효능으로부터 약 25-, 약 20-, 약 15-, 약 10-, 또는 약 5-배의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다.
일부 구체예에서, 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능에 의해 나눗셈된 GLP-1 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능의 비율은 약 X 이하이고, 여기서 X는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 GLP-1 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 약 1 내지 5 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Y의 글루코코르티코이드 효능과 비교하여 Q의 GLP-1 효능의 비율은 약 Z 이하이고, 여기서 Z는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Y의 글루코코르티코이드 효능과 비교하여 Q의 GLP-1 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q는 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50보다 2- 내지 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 GLP-1 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50에 의해 나눗셈된 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50의 비율은 약 V 이하이고, 여기서 V는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, GLP-1 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q의 GLP-1 효능과 비교하여 Y의 글루코코르티코이드 효능의 비율은 약 W 이하이고, 여기서 W는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Q의 GLP-1 효능과 비교하여 Y의 글루코코르티코이드 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Y는 GLP-1 수용체에서 Q의 EC50보다 약 2- 내지 약 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 글루코코르티코이드 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 내인성 리간드의 활성 (글루코코르티코이드 효능)의 최소한 0.001%, 최소한 0.01%, 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)를 나타내고, 그리고 Q는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성 (GLP-1 효능)의 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)를 나타낸다.
GIP 수용체와 글루코코르티코이드 수용체에서 활성
일부 구체예에서, Q-L-Y는 GIP 수용체와 글루코코르티코이드 수용체 둘 모두에서 활성을 나타낸다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)은 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 활성 (가령, EC50 또는 상대적 활성 또는 효능)으로부터 약 2000-배, 약 1000-배, 약 100-배, 약 75-배, 약 60-배, 약 50-배, 약 40-배, 약 30-배, 약 20-배, 약 10-배, 또는 약 5배 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다. 일부 구체예에서, Q의 GIP 효능은 Y의 효능으로부터 약 25-, 약 20-, 약 15-, 약 10-, 또는 약 5-배의 차이 (더욱 높거나 더욱 낮은) 내에 있다.
일부 구체예에서, 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 EC50 또는 효능의 비율은 약 X 이하이고, 여기서 X는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 GIP 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 약 1 내지 5 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Y의 글루코코르티코이드과 비교하여 Q의 GIP 효능의 비율은 약 Z 이하이고, 여기서 Z는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Y의 글루코코르티코이드과 비교하여 Q의 GIP 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q는 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50보다 2- 내지 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 GIP 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50에 의해 나눗셈된 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 상대적 활성 또는 효능 또는 EC50의 비율은 약 V 이하이고, 여기서 V는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 또는 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, GIP 수용체에서 Q의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성에 의해 나눗셈된 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50 또는 효능 또는 상대적 활성의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Q의 GIP 효능과 비교하여 Y의 글루코코르티코이드 효능의 비율은 약 W 이하이고, 여기서 W는 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, 그리고 5에서 선택된다. 일부 구체예에서, Q의 GIP 효능과 비교하여 Y의 글루코코르티코이드 효능의 비율은 5 미만 (가령, 약 4, 약 3, 약 2, 약 1)이다. 일부 구체예에서, Y는 GIP 수용체에서 Q의 EC50보다 약 2- 내지 약 10-배 (가령, 2-배, 3-배, 4-배, 5-배, 6-배, 7-배, 8-배, 9-배, 10-배) 큰 글루코코르티코이드 수용체에서 EC50을 갖는다.
일부 구체예에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 내인성 리간드의 활성 (글루코코르티코이드 효능)의 최소한 0.001%, 최소한 0.01%, 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)를 나타내고, 그리고 Q는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성 (GIP 효능)의 최소한 0.1% (가령, 약 0.5% 이상, 약 1% 이상, 약 5% 이상, 약 10% 이상)를 나타낸다.
Q-L-Y의 프로드러그
본 발명의 일부 양상에서, Q-L-Y의 프로드러그가 제시되고, 여기서 상기 프로드러그는 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입되는 국제 특허 출원 번호 제PCT US09/68745호 (2009년 12월 18일자 제출됨)에서 개시된 바와 같이, 아미드 연쇄를 거쳐 Q의 활성 부위에 공유 연결된 디펩티드 프로드러그 요소 (A-B)를 포함한다. 생리학적 조건 하에, 그리고 효소적 활성의 부재에서 디펩티드의 차후 제거는 Q-L-Y 접합체의 전활성을 복원한다.
일부 구체예에서, A-B-Q-L-Y의 일반 구조를 갖는 Q-L-Y의 프로드러그가 제시된다. 이들 구체예에서, A는 아미노산 또는 히드록시산이고, 그리고 B는 B의 카르복실 (A-B에서)과 Q의 아민 사이에 아미드 결합의 형성을 통해 Q에 연결된 N-알킬화된 아미노산을 포함한다. 게다가, 일부 구체예에서, A, B, 또는 A-B가 연결되는 Q의 아미노산은 비-코팅된 아미노산이고, 그리고 Q로부터 A-B의 화학적 절단은 생리학적 조건 하에 PBS에서 약 1 내지 약 720시간 내에 최소한 약 90% 완결된다. 또 다른 구체예에서, Q로부터 A-B의 화학적 절단은 생리학적 조건 하에 PBS에서 약 1시간 또는 약 1주 내에 최소한 약 50% 완결된다.
일부 구체예에서, 디펩티드 프로드러그 요소 (A-B)는 하기 일반 구조를 갖는 화합물을 포함한다:
Figure pct00050

여기서
R1, R2, R4와 R8은 독립적으로 H, C1-C18 알킬, C2-C18 알케닐, (C1-C18 알킬)OH, (C1-C18 알킬)SH, (C2-C3 알킬)SCH3, (C1-C4 알킬)CONH2, (C1-C4 알킬)COOH, (C1-C4 알킬)NH2, (C1-C4 알킬)NHC(NH2 +)NH2, (C0-C4 알킬)(C3-C6 시클로알킬), (C0-C4 알킬)(C2-C5 헤테로환상), (C0-C4 알킬)(C6-C10 아릴)R7, (C1-C4 알킬)(C3-C9 헤테로아릴), 그리고 C1-C12 알킬(W1)C1-C12 알킬로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 W1은 N, S와 O로 구성된 군에서 선택되는 헤테로원자이고, 또는 R1과 R2는 그들이 부착된 원자와 서로 합쳐 C3-C12 시클로알킬을 형성하고; 또는 R4와 R8은 그들이 부착된 원자와 서로 합쳐 C3-C6 시클로알킬을 형성하고;
R3은 C1-C18 알킬, (C1-C18 알킬)OH, (C1-C18 알킬)NH2, (C1-C18 알킬)SH, (C0-C4 알킬)(C3-C6)시클로알킬, (C0-C4 알킬)(C2-C5 헤테로환상), (C0-C4 알킬)(C6-C10 아릴)R7, 그리고 (C1-C4 알킬)(C3-C9 헤테로아릴)로 구성된 군에서 선택되고, 또는 R4와 R3은 그들이 부착된 원자와 서로 합쳐 4, 5 또는 6 원 헤테로환상 고리를 형성하고;
R5는 NHR6 또는 OH이고;
R6은 H, C1-C8 알킬이고, 또는 R6과 R1은 그들이 부착된 원자와 서로 합쳐 4, 5 또는 6 원 헤테로환상 고리를 형성하고; 그리고
R7은 수소, C1-C18 알킬, C2-C18 알케닐, (C0-C4 알킬)CONH2, (C0-C4 알킬)COOH, (C0-C4 알킬)NH2, (C0-C4 알킬)OH, 그리고 할로로 구성된 군에서 선택된다.
일부 구체예에서, 디펩티드 프로드러그 요소는 Q의 아미노 말단에 연결된다. 다른 구체예에서, 디펩티드 프로드러그는 국제 특허 출원 번호 제PCT US09/68745호에서 기술된 바와 같이, Q의 내부 아미노산에 연결된다.
Q-L-Y의 예시적인 구체예
본 발명의 일부 구체예에서, 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 접합체는 하기 화학식으로 표시될 수 있다:
Q-L-Y
여기서 Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드이고, Y는 GR 리간드이고, 그리고 L은 연결 기 또는 단일 결합이다.
특정한 양상에서, Q는 고유 인간 GLP-1 (서열 번호: 1603)의 아미노산 서열에 기초된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양상에서, Q는 고유 인간 GLP-1 서열 (서열 번호: 1603)에 비하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15개, 그리고 일부 경우에, 16개 이상 (가령, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 등)의 아미노산 변형 및 1개까지, 2개까지, 3개까지, 4개까지, 5개까지, 6개까지, 7개까지, 8개까지, 9개까지, 또는 10개까지의 아미노산 변형 (가령, 아실화, 알킬화, 페길화, C-말단에서 절두, 치환)을 포함하는 서열 번호: 1603의 변형된 아미노산 서열을 포함한다. 가령, Q는 GLP-1(Aib2E16Cex K40) (서열 번호: 1647), GLP-1(Aib2A22Cex K40) (서열 번호: 1648), dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40) (서열 번호: 1649), GLP-1(Aib2E16C24(PEG-40kDa)Cex K40) (서열 번호: 1650)일 수 있다.
특정한 양상에서, Y는 스테로이드 또는 이의 유도체이고, 그리고 에스트로겐 수용체, 안드로겐 수용체, 글루코코르티코이드 수용체, 또는 RAR-관련된 고아 수용체로서 기능한다. 일부 구체예에서, Y는 에스트로겐 수용체, 안드로겐 수용체, 글루코코르티코이드 수용체, 또는 RAR-관련된 고아 수용체에서 작동약 활성을 허용하거나 촉진하는 구조를 포함하고, 다른 구체예에서, Y는 에스트로겐 수용체, 안드로겐 수용체, 글루코코르티코이드 수용체, 또는 RAR-관련된 고아 수용체의 길항약이다. 가령, Y는 에스트라디올, 에스트론, 또는 콜레스테롤일 수 있다.
특정한 양상에서, Y는 글루코코르티코이드 수용체에서 작용한다. 예를 들어, Y는 코르티솔, 코르티손 아세테이트, 베클로메타손, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 트리암시놀론, 또는 덱사메타손일 수 있다.
특정한 양상에서, L은 생체내에서 안정하다. 일부 구체예에서, L은 예로써, 아미드, 에테르, 카바메이트, 또는 티오에테르를 포함한다. 대안적 양상에서, L은 생체내에서 가수분해 가능하다. 일부 구체예에서, L은 에스테르, 무수물, 또는 티오에스테르를 포함한다. 다른 양상에서, L은 생체내에서 준안정하다. 일부 양상에서, L은 산-불안정성 (가령, 히드라존 모이어티를 포함), 환원-불안정성 (가령, 이황화물 모이어티를 포함), 또는 효소-불안정성 (가령, 카텝신 B-절단가능 모이어티를 포함)이다.
일부 구체예에서, Y는 덱사메타손이다. 이들 구체예에서, Q-L-Y의 구조는 하기를 포함한다:
Figure pct00051
;
여기서
B'는 Q의 아미노산의 아미노- 또는 티올-함유 측쇄이고, 여기서 B'는 임의적으로, 고유 글루카곤을 포함하는 서열의 10, 20, 24, 30, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43의 위치에 상응하는 아미노산의 측쇄이고;
L은 단일 결합,
Figure pct00052
,
Figure pct00053
, 또는
Figure pct00054
; 그리고,
X는 C1-C10 알킬렌 (가령, C1-C6 알킬렌), C1-C10 알케닐렌, 또는 C1-C10 알키닐렌임.
일부 구체예에서, B'는
Figure pct00055
, 또는
Figure pct00056
이다. 이들 구체예의 일부에서, z는 C1-C6 알킬렌이다. 예를 들어, B'는 리신, 시스테인, 호모시스테인, 또는 페니실라민의 측쇄를 포함할 수 있다.
일부 구체예에서, L은 단일 결합이다. 다른 구체예에서, L은
Figure pct00057
,
Figure pct00058
, 또는
Figure pct00059
이고, 그리고 x는 C1-C5 알킬렌이다. 예를 들어, L은
Figure pct00060
,
Figure pct00061
, 또는
Figure pct00062
를 포함한다.
일부 구체예에서, Q-L-Y의 구조는 예를 들어, 하기와 같을 수 있다:
Figure pct00063
,
Figure pct00064
,
Figure pct00065
, 또는
Figure pct00066
.
이들 구체예 중 일부에서, x는 C1-C4 알킬렌이다. 예를 들어, Q-L-Y의 구조는 하기를 포함할 수 있다:
Figure pct00067
,
Figure pct00068
, 또는
Figure pct00069
.
일부 예시적인 구체예에서, Q-L-Y의 구조는 하기와 같다:
Figure pct00070
,
Figure pct00071
,
Figure pct00072
,
Figure pct00073
,
Figure pct00074
, 또는
Figure pct00075
.
Y가 덱사메타손인 일부 구체예에서, Q-L-Y의 구조는 하기를 포함할 수 있다:
Figure pct00076
;
여기서
B''는 Q의 아미노산의 티올-함유 측쇄이고, 여기서 B''는 임의적으로, 고유 글루카곤을 포함하는 서열의 위치 10, 20, 24, 30, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43에 상응하는 아미노산의 측쇄이고, 그리고
y는 C1-C10 알킬렌 (가령, C1-6), C1-C10 알케닐렌, 또는 C1-C10 알키닐렌임.
일부 구체예에서, B''는
Figure pct00077
이다. 이들 구체예 중 일부에서, z는 C1-C6 알킬렌이다. 예를 들어, B''는 시스테인, 호모시스테인, 또는 페니실라민의 측쇄를 포함할 수 있다.
예를 들어, Q-L-Y의 구조는
Figure pct00078
일 수 있다.
일부 예시적인 구체예에서, L-Y의 구조 하기와 같다:
Figure pct00079
,
Figure pct00080
, 또는
Figure pct00081
.
안정된 연쇄를 통해 에스트라디올에 접합된 GLP-1 기초된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 무제한적 실례는 하기에 도시된다 (서열 번호: 1651-1654, 1667).
Figure pct00082

Figure pct00083

안정된 연쇄를 통해 콜레스테롤에 접합된 GLP-1 기초된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 무제한적 실례는 하기에 도시된다 (서열 번호: 1660-1661).
Figure pct00084

가수분해 가능한 연쇄를 통해 에스트라디올 또는 에스트론에 접합된 GLP-1 기초된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 무제한적 실례는 하기에 도시된다 (서열 번호: 1655-1659, 1666).
Figure pct00085

Figure pct00086

Figure pct00087

산-불안정성 연쇄를 통해 에스트라디올에 접합된 GLP-1 기초된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 무제한적 실례는 하기에 도시된다 (서열 번호: 1662).
Figure pct00088

환원-불안정성 연쇄를 통해 에스트라디올에 접합된 GLP-1 기초된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 무제한적 실례는 하기에 도시된다 (서열 번호: 1663-1664).
Figure pct00089

효소-불안정성 연쇄를 통해 에스트라디올에 접합된 GLP-1 기초된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 무제한적 실례는 하기에 도시된다 (서열 번호: 1665, 1668).
Figure pct00090

산-불안정성 연쇄를 통해 덱사메타손에 접합된 GLP-1 기초된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 무제한적 실례는 하기에 도시된다 (서열 번호: 1669).
Figure pct00091

안정된 연쇄를 통해 덱사메타손에 접합된 GLP-1 기초된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 무제한적 실례는 하기에 도시된다 (서열 번호: 1670 및 1671).
Figure pct00092

환원-불안정성 연쇄를 통해 덱사메타손에 접합된 GLP-1 기초된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 무제한적 실례는 하기에 도시된다 (서열 번호: 1672, 1673, 및 1674).
Figure pct00093

일부 구체예에서, 서열 번호: 1-760, 801-919, 1001-1275, 1301-1371, 1401-1518, 1601-1646 중에서 한 가지는 상기 예시적인 구체예에서 서열 번호: 1647-1650을 대체할 수 있다.
본 명세서에서 데이터는 본 발명의 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 (Q)와 에스트로겐 (Y)을 포함하는 접합체가 상승적 약리 (synergistic pharmacology)를 갖는다는 것을 확증한다. 이들 접합체의 Q 부분은 접합체의 에스트로겐 부분을 고전적인 부인과 조직 (gynecological tissue)이 아닌 원하는 작용의 표적으로 지향시켜 훨씬 증강된 치료 지수 (therapeutic index)에 의한 향상된 혈당 제어 및 에너지 항상성을 유발하는 기능을 할 수 있다.
췌장 β 세포 기능장애는 보상성 기능증대 (compensatory hyperfunction) (ER 스트레스)과 함께 만성 글루코오스 & 지질 산화 (glucolipotoxicity)로부터 발생하는 β 세포 아폽토시스에 기인한 기능적 질량 (functional mass)에서 감소와 공동으로 인슐린 생합성과 분비의 상실로 특징된다. 2형 당뇨병이 β 세포 기능장애의 결과로서 일어나기 때문에, 아폽토시스로부터 인슐린-생산 β 세포를 보호하거나, 또는 β 세포 기능적 질량을 복원하는 것을 목적으로 하는 전략은 2형 당뇨병의 치료에서 치료적 개입 (therapeutic intervention)을 위한 주요한 기회를 대표한다.
에스트로겐은 설치류와 인간 β 세포에서뿐만 아니라 신체 내에 다른 표적 조직에서 강력한 항-아폽토시스 효과 (anti-apoptotic effect)를 갖는다. 간에서 지방생성 (lipogenesis)을 억제하고 인슐린 민감성을 복원하는 에스트로겐의 췌장외 기능은 β 세포 기능을 간접적으로 향상시킬 수 있다. 이것은 또한, 시상하부에서, 음식물 섭취를 감소시키고 에너지 소비를 증가시키는 작용을 한다. 하지만, 이들 에스트로겐 효과는 부인과 표적 조직에서 유해할 수 있는데, 그 이유는 호르몬 대체 요법 (hormone replacement therapy)이 유방 암의 발생률을 증가시키는 것으로 밝혀졌기 때문이다. 임의의 특정 이론에 한정됨 없이, 에스트로겐 작용을 β 세포, 간, 및/또는 시상하부로 선별적으로 지향시키는 것은 유익할 수 있다.
에스트로겐의 임상적 적용은 잠재적 종양발생 및 부인과적 작용의 두려움으로 인하여 제한된다. 에스트로겐의 치료 지수를 증강시키기 위해, 본 발명의 인크레틴-기초된 접합체는 유방과 자궁내막 조직에서 작용을 최소화하면서 원하는 조직으로 에스트로겐의 선호적 표적화를 가능하게 한다. 본 실시예에서 데이터는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드와 에스트로겐의 접합체가 시상하부에서 식욕억제 효과 (anorectic effect)와 함께 췌장 베타 세포에 대한 합동된 인슐리노트로픽과 아나볼릭 활성에 의한, 혈당 제어 (가령, 감소된 글루코오스 수준에 의해 측정됨) 및 에너지 항상성 (가령, 감소된 체중 및/또는 체지방량에 의해 측정됨)에 대한 상승적이고 유익한 효과를 갖는다는 것을 증명한다.
혈당과 체중을 조절하기 위해 접합체의 각 개별 성분 (가령, GLP-1 부분과 에스트로겐 부분)의 능력을 탐구하기 위해, 일단의 펩티드-에스트로겐 접합체가 0.1% 미만 내지 100% 초과 범위의 시험관내 활성 및 혈장에서 차별적 에스트로겐 방출을 가능하게 하는 링커 화학 (안정한, 불안정한, 그리고 준안정한)을 갖는 완전한 GLP-1 효현작용을 갖도록 합성되었다. 에스트로겐의 특정한 방출은 안정한 화학적 형태에서부터 에스트로겐을 수 시간 내에 완전하게 방출하는 다른 형태까지 폭넓은 범위에서 변하는 것으로 결정되었다.
가령, 식이-유도된 비만 생쥐에서, 안정되게 연결된 에스트로겐을 갖는 완전 활성 GLP-1 작동약은 비교 GLP-1 대조보다 혈당과 체중을 감소시키는데 더욱 유효한 것으로 지속적으로 증명되었다. 안정된 에스트로겐-펩티드 접합체는 난소적출된 생쥐에서 자궁비대 활성의 결여에 의한 평가에서 고전적인 에스트로겐 활성이 결여되는 것으로 증명되는 반면, 불안정한 에스트로겐-펩티드 접합체는 자궁에서 영양 활성을 보였다. GLP-1 효현작용을 녹아웃시키고 및/또는 혈장에서 에스트로겐 불안정화된 화학적 유도체는 안정된 GLP-1/에스트로겐 접합체보다 낮은 효능을 나타내었고, 이것은 GLP-1과 표적화된 에스트로겐의 합동된 존재가 글루코오스와 체중에서 우수한 감소를 달성할 수 있다는 것을 지시하였다.
제조된 "준"-안정성 펩티드-에스트로겐 접합체는 혈장에서 안정하지만 세포 내재화 (cellular internalization) 시에 에스트로겐을 방출할 수 있다. 준안정한 연쇄를 갖는 이들 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드/에스트로겐 접합체는 유해한 자궁비대 활성이 없으면서, 불안정한 연쇄를 갖는 접합체보다 글루코오스 수준과 체중을 더욱 크게 낮출 수 있었다.
에스트로겐에 안정적으로 또는 준안정적으로 연결된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드는 적절한 대조와 비교할 때, 비만, 비-당뇨성 생쥐에서 체중, 음식물 섭취, 그리고 체지방량을 감소시키는데 증강된 효능을 지속으로 나타냈다. 이러한 증강된 효능은 에스트로겐이 약리학적으로 불안정한 접합체에서 부재하고, 그리고 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드가 의도적으로 불활성인 접합체에서 관찰되지 않는다. 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드에 에스트로겐의 안정한 부착과 준안정한 부착은 불안정한 접합체에 비하여 에스트로겐 활성이 차별적으로 결여되고, 그리고 불안정한 접합체와 대조적으로, 자궁 성장을 나타내지 않았다. 종합적으로, 이들 조사 결과는 에스트로겐의 의학적 용도를 제한하는 고전적인 에스트로겐 효과의 증거 없이, 대사 약화된 비만 생쥐에서 본 발명의 안정되게 및 준안정되게 연결된 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드/에스트로겐 접합체로부터 유래된 증강된 효능을 증명한다.
예시적인 구체예에서, 이들 접합체는 고혈당 질환, 비만, 신진대사장애, 그리고 NAFLD가 포함되지만 이들에 국한되지 않는 본 명세서에서 기술된 임의의 질환을 치료하는데 유용하다.
제약학적 조성물
염
일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체는 염, 예를 들면, 제약학적으로 허용되는 염의 형태이다. 본 명세서에서, 용어 "제약학적으로 허용되는 염"은 모 화합물의 생물학적 활성을 유지하지만, 생물학적으로 또는 달리 바람직한 화합물의 염을 지칭한다. 이런 염은 접합체의 최종 분리와 정제 동안 원 위치에(in situ) 제조되거나, 또는 유리 염기 기능 기를 적절한 산과 반응시킴으로써 별개로 제조될 수 있다. 본 명세서에서 설명된 화합물 중에서 다수는 아미노 및/또는 카르복실 기 또는 이들에 유사한 기의 존재에 의해 산 및/또는 염기성 염을 형성할 수 있다.
제약학적으로 허용되는 산 첨가 염은 무기와 유기 산으로부터 제조될 수 있다. 대표적인 산 첨가 염에는 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 비설페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포 설포네이트, 디글루코네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 푸마레이트, 염화수소산염, 브롬화수소산염, 요오드화수소산염, 2-히드록시에탄설포네이트 (이소티오네이트), 락테이트, 말리에이트, 메탄 설포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌 설포네이트, 옥살레이트, 팔미토에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 포스페이트, 글루타메이트, 비카르보네이트, p-톨루엔설포네이트, 그리고 운데카노에이트가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 무기 산으로부터 유래된 염에는 염화수소산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등이 포함된다. 유기 산으로부터 유래된 염에는 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말산, 말론산, 숙신산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔-설폰산, 살리실산 등이 포함된다. 제약학적으로 허용되는 산 첨가 염을 형성하는데 이용될 수 있는 산의 실례에는 예로써, 염화수소산, 브롬화수소산, 황산 및 인산과 같은 무기산, 그리고 옥살산, 말레산, 숙신산과 시트르산과 같은 유기 산이 포함된다.
염기성 첨가 염 역시 살리실산의 공급원의 최종 분리와 정제 동안 원 위치에 제조되거나, 또는 카르복실산-내포 모이어티를 적절한 염기, 예를 들면, 제약학적으로 허용되는 금속 양이온의 수산화물, 탄산염 또는 중탄산염과, 또는 암모니아 또는 유기 일차, 이차, 또는 삼차 아민과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 제약학적으로 허용되는 염에는 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 그리고 알루미늄 염 등과 같은 알칼리 금속 또는 알칼리 토류 금속에 기초된 양이온, 그리고 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸암모늄, 디메틸암모늄, 트리메틸암모늄, 트리에틸암모늄, 디에틸암모늄, 그리고 에틸암모늄을 비롯한 비독성 4가 암모니아와 아민 양이온이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 염기 첨가 염의 형성에 유용한 다른 대표적인 유기 아민에는 예로써, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페리딘, 피페라진 등이 포함된다. 유기 염기로부터 유래된 염에는 일차, 이차와 삼차 아민의 염이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
게다가, 염기성 질소-내포 기는 저급 알킬 할로겐화물, 예를 들면, 메틸, 에틸, 프로필과 부틸 염화물, 브롬화물, 그리고 요오드화물; 긴 사슬 할로겐화물, 예를 들면, 데실, 라우릴, 미리스틸, 그리고 스테아릴 염화물, 브롬화물, 그리고 요오드화물; 아릴알킬 할로겐화물, 예를 들면, 벤질과 펜에틸 브롬화물 등으로서, 본 발명의 접합체로 4가화될 수 있다. 따라서 물 또는 오일-용해성 또는 분산성 산물이 획득된다.
제제
일부 구체예에 따라서, 제약학적 조성물이 제시되고, 여기서 상기 조성물은 본 발명의 Q-L-Y 접합체, 또는 이의 제약학적으로 허용되는 염, 그리고 제약학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 제약학적 조성물은 산성화제, 첨가제, 흡수제, 에어로졸 추진제, 공기 치환제 (air displacement agent), 알칼리성화제, 고화방지제, 항응고제, 항균성 보존제, 항산화제, 방부제, 염기, 접합제, 완충제, 킬레이트화제, 코팅제, 착색제, 건조제, 세정제, 희석제, 살균제, 붕해제, 분산제, 용해 개선제, 염료, 연화제, 유화제, 에멀젼 안정제, 충전제, 필름 형성제, 풍미 증강제, 풍미제, 흐름 개선제 (flow enhancer), 겔화제, 과립화제, 습윤제, 윤활제, 점막접착제, 연고 기부, 연고, 유질성 운반제, 유질성 기부, 향정 기부, 색소, 가소제, 연마제, 보존제, 격리제, 피부 침투제, 용해제, 용매, 안정화제, 좌약 기부, 표면 활성제, 계면활성제, 현탁제, 감미료, 치료제, 농후제, 강장제, 독성제, 점성-증가제, 물-흡수제, 물-혼화성 보조용매, 연수제, 또는 습윤제를 비롯한 임의의 제약학적으로 허용되는 성분을 포함할 수 있다.
일부 구체예에서, 제약학적 조성물은 하기 성분 중에서 임의의 한 가지 또는 조합을 포함한다: 아카시아, 아세설팜 칼륨, 아세틸트리부틸 시트레이트, 아세틸트리에틸 시트레이트, 아가, 알부민, 알코올, 탈수된 알코올, 변성된 알코올, 희석 알코올, 알류이리트산 (aleuritic acid), 알긴산, 지방족 폴리에스테르, 알루미나, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 스테아레이트, 아밀로펙틴, α-아밀로오스, 아스코르브산, 아스코르빌 팔미테이트, 아스파테임, 주사를 위한 정균수 (bacteriostatic water), 벤토나이트, 벤토나이트 마그마, 벤잘코늄 염화물, 벤제토늄 염화물, 벤조산, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 브로노폴, 부틸화된 히드록시아니솔, 부틸화된 히드록시톨루엔, 부틸파라벤, 부틸파라벤 나트륨, 칼슘 알기네이트, 칼슘 아스코르베이트, 칼슘 카보네이트, 칼슘 시클라메이트, 이염기성 무수성 칼슘 포스페이트, 이염기성 디하이드레이트 칼슘 포스페이트, 삼염기성 칼슘 포스페이트, 칼슘 프로피오네이트, 칼슘 실리케이트, 칼슘 소르베이트, 칼슘 스테아레이트, 칼슘 설페이트, 칼슘 설페이트 헤미하이드레이트, 카놀라 오일, 카보머, 이산화탄소, 카르복시메틸 셀룰로오스 칼슘, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨, β-카로텐, 카라게닌, 피마자 오일, 수소첨가된 피마자 오일, 양이온성 유화 왁스, 셀룰로오스 아세테이트, 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트, 에틸 셀룰로오스, 미세결정성 셀룰로오스, 분말 셀룰로오스, 셀룰로오스, 규산화된 미세결정성 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 세토스테아릴 알코올, 세트리미드, 세틸 알코올, 클로르헥시딘, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 콜레스테롤, 클로르헥시딘 아세테이트, 클로르헥시딘 글루코네이트, 클로르헥시딘 염산염, 클로로디플루오르에탄 (HCFC), 클로로디플루오르메탄, 클로로플루오르카본 (CFC)클로로페녹시에탄올, 클로록시레놀, 옥수수 시럽 고형물, 무수성 시트르산, 시트르산 일수화물, 코코아 버터, 착색제, 옥수수 오일, 목화씨 오일, 크레졸, m-크레졸, o-크레졸, p-크레졸, 크로스카르멜로스 나트륨, 크로스포비돈, 시클람산, 시클로덱스트린, 덱스트레이트, 덱스트린, 덱스트로스, 덱스트로스 무수물, 디아졸리디닐 요소, 디부틸 프탈레이트, 디부틸 세바케이트, 디에탄올아민, 디에틸 프탈레이트, 디플루오르에탄 (HFC), 디메틸-β-시클로덱스트린, 시클로덱스트린-타입 화합물, 예를 들면, Captisol®, 디메틸 에테르, 디메틸 프탈레이트, 이칼륨 에덴테이트, 이나트륨 에덴테이트, 이나트륨 수소 포스페이트, 도쿠세이트 칼슘, 도쿠세이트 칼륨, 도쿠세이트 나트륨, 도데실 갈레이트, 도데실트리메틸암모늄 브롬화물, 에덴테이트 칼슘 이나트륨, 에드틱산 (edtic acid), 에글루민, 에틸 알코올, 에틸셀룰로오스, 에틸 갈레이트, 에틸 라우레이트, 에틸 말톨, 에틸 올리에이트, 에틸파라벤, 에틸파라벤 칼륨, 에틸파라벤 나트륨, 에틸 바닐린, 프럭토오스, 액상 프럭토오스, 프럭토오스 제분, 무-발열원 프럭토오스, 분말 프럭토오스, 푸마르산, 젤라틴, 글루코오스, 액상 글루코오스, 포화된 식물성 지방산의 글리세리드 혼합물, 글리세린, 글리세릴 베헤네이트, 글리세릴 모노올리에이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 자가-유화 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 팔미토스테아레이트, 글리신, 글리콜, 글리코푸롤, 구아 검, 헵타플루오르프로판 (HFC), 헥사데실트리메틸암모늄 브롬화물, 높은 프럭토오스 시럽, 인간 혈청 알부민, 탄화수소 (HC), 희석 염화수소산, 수소첨가된 식물성 오일, 타입 II, 히드록시에틸 셀룰로오스, 2-히드록시에틸-β-시클로덱스트린, 히드록시프로필 셀룰로오스, 저급-치환된 히드록시프로필 셀룰로오스, 2-히드록시프로필-β-시클로덱스트린, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 프탈레이트, 이미두레아, 인디고 카르민, 이온 교환기, 이온 산화물, 이소프로필 알코올, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 등장성 염수, 카올린, 젖산, 락티톨, 락토오스, 라놀린, 라놀린 알코올, 무수성 라놀린, 레시틴, 마그네슘 알루미늄실리케이트, 마그네슘 카보네이트, 정상 마그네슘 카보네이트, 마그네슘 카보네이트 무수물, 마그네슘 카보네이트 히드록시드, 마그네슘 히드록시드, 마그네슘 라우릴 설페이트, 마그네슘 산화물, 마그네슘 실리케이트, 마그네슘 스테아레이트, 마그네슘 트리실리케이트, 마그네슘 트리실리케이트 무수물, 말산, 맥아, 말티톨, 말티톨 용액, 말토덱스트린, 말톨, 말토오스, 만니톨, 중간 사슬 트리글리세리드, 메글루민, 멘톨, 메틸셀룰로오스, 메틸 메타크릴레이트, 메틸 올리에이트, 메틸파라벤, 메틸파라벤 칼륨, 메틸파라벤 나트륨, 미세결정성 셀룰로오스와 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨, 미네랄 오일, 경 미네랄 오일, 미네랄 오일과 라놀린 알코올, 오일, 올리브 오일, 모노에탄올아민, 몬모릴로나이트, 옥틸 갈레이트, 올레산, 팔미트산, 파라핀, 땅콩 오일, 바셀린, 바셀린과 라놀린 알코올, 제약학적 유약, 페놀, 액화된 페놀, 페녹시에탄올, 페녹시프로판올, 페닐에틸 알코올, 페닐머큐리 아세테이트, 페닐머큐리 보레이트, 페닐머큐리 니트레이트, 폴라크릴린, 폴라크릴린 칼륨, 폴록사머, 폴리덱스트로스, 폴리에틸레렌 글리콜, 폴리에틸레렌 산화물, 폴리아크릴레이트, 폴리에틸레렌-폴리옥시프로필렌-블록 공중합체, 폴리메타크릴레이트, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 폴리옥시에틸렌 피마자 오일 유도체, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 칼륨 알기네이트, 칼륨 벤조에이트, 칼륨 비카보네이트, 칼륨 비설피트, 칼륨 염화물, 칼륨 시트레이트, 칼륨 시트레이트 무수물, 칼륨 수소 포스페이트, 칼륨 메타비설피트, 일염기성 칼륨 포스페이트, 칼륨 프로피오네이트, 칼륨 소르베이트, 포비돈, 프로판올, 프로피온산, 프로필렌 카보네이트, 프로필렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 알기네이트, 프로필 갈레이트, 프로필파라벤, 프로필파라벤 칼륨, 프로필파라벤 나트륨, 프로타민 설페이트, 평지씨 오일, 링거액, 사카린, 사카린 암모늄, 사카린 칼슘, 사카린 나트륨, 잇꽃 오일, 동석, 혈청 단백질, 참깨 오일, 콜로이드성 실리카, 콜로이드성 이산화규소, 나트륨 알기네이트, 나트륨 아스코르베이트, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 비카보네이트, 나트륨 비설피트, 나트륨 염화물, 무수성 나트륨 시트레이트, 나트륨 시트레이트 디하이드레이트, 나트륨 염화물, 나트륨 시클라메이트, 나트륨 에덴테이트, 나트륨 도데실 설페이트, 나트륨 라우릴 설페이트, 나트륨 메타비설피트, 나트륨 포스페이트, 이염기성, 나트륨 포스페이트, 일염기성, 나트륨 포스페이트, 삼염기성, 무수성 나트륨 프로피오네이트, 나트륨 프로피오네이트, 나트륨 소르베이트, 나트륨 전분 글리콜레이트, 나트륨 스테아릴 푸마레이트, 나트륨 설피트, 소르브산, 소르비탄 에스테르 (소르비탄 지방 에스테르), 소르비톨, 소르비톨 용액 70%, 콩 오일, 경랍 왁스, 전분, 옥수수 전분, 감자 전분, 전호화 전분, 멸균가능 옥수수 전분, 스테아르산, 정제된 스테아르산, 스테아릴 알코올, 수크로오스, 당, 압축 당, 가루 설탕, 설탕 핵, 전화당, Sugartab, Sunset Yellow FCF, 합성 파라핀, 활석, 타르타르산, 타르트라진, 테트라플루오르에탄 (HFC), 코코아 오일, 티메로살, 이산화티타늄, 알파 토코페롤, 토코페릴 아세테이트, 알파 토코페릴 산 숙시네이트, 베타-토코페롤, 델타-토코페롤, 감마-토코페롤, 트래거캔스, 트리아세틴, 트리부틸 시트레이트, 트리에탄올아민, 트리에틸 시트레이트, 트리메틸-β-시클로덱스트린, 트리메틸테트라데실암모늄 브롬화물, 트리스 완충액, 트리나트륨 에덴테이트, 바닐린, 타입 I 수소첨가된 식물성 오일, 물, 단물, 센물, 무-이산화탄소 물, 무-발열원 물, 주사용수, 흡입용 무균수, 주사용 무균수, 관개용 무균수, 왁스, 음이온성 유화 왁스, 카르나우바 왁스, 양이온성 유화 왁스, 세틸 에스테르 왁스, 미세결정성 왁스, 비이온성 유화 왁스, 좌약 왁스, 백랍, 황납, 백색 바셀린, 양모지, 잔탄 검, 자일리톨, 제인, 아연 프로피오네이트, 아연 염, 아연 스테아레이트, 또는 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입되는 Handbook of Pharmaceutical Excipients, Third Edition, A. H. Kibbe (Pharmaceutical Press, London, UK, 2000)에서 임의의 부형제. 본 발명에 전체로서 참고문헌으로 편입되는 Remington's Pharmaceutical Sciences, Sixteenth Edition, E. W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980)에서는 제약학적으로 허용되는 조성물을 조제하는데 이용되는 다양한 성분 및 이의 제조를 위한 공지된 기술을 개시한다. 임의의 전통적인 작용제가 제약학적 조성물과 불화합성인 경우를 제외하고, 제약학적 조성물의 이의 이용이 예기된다. 보조 활성 성분 역시 조성물 내로 통합될 수 있다.
일부 구체예에서, 전술한 성분(들)은 임의의 농도, 예를 들면, 최소한 A로 제약학적 조성물 내에 존재할 수 있고, 여기서 A는 0.0001% w/v, 0.001% w/v, 0.01% w/v, 0.1% w/v, 1% w/v, 2% w/v, 5% w/v, 10% w/v, 20% w/v, 30% w/v, 40% w/v, 50% w/v, 60% w/v, 70% w/v, 80% w/v, 또는 90% w/v이다. 일부 구체예에서, 전술한 성분(들)은 제약학적 조성물 내에 임의의 농도, 예를 들면, 기껏해야 B로 존재할 수 있고, 여기서 B는 90% w/v, 80% w/v, 70% w/v, 60% w/v, 50% w/v, 40% w/v, 30% w/v, 20% w/v, 10% w/v, 5% w/v, 2% w/v, 1% w/v, 0.1% w/v, 0.001% w/v, 또는 0.0001%이다. 다른 구체예에서, 전술한 성분(들)은 제약학적 조성물 내에서 임의의 농도 범위, 예를 들면, 약 A 내지 약 B로 존재할 수 있다. 일부 구체예에서, A는 0.0001%이고 B는 90%이다.
제약학적 조성물은 생리학적으로 적합한 pH를 달성하도록 조제될 수 있다. 일부 구체예에서, 제약학적 조성물의 pH는 제제 및 투여 루트에 따라서, 최소한 5, 최소한 5.5, 최소한 6, 최소한 6.5, 최소한 7, 최소한 7.5, 최소한 8, 최소한 8.5, 최소한 9, 최소한 9.5, 최소한 10, 또는 최소한 10.5, 그리고 pH 11을 포함하는 pH 11까지일 수 있다. 일정한 구체예에서, 제약학적 조성물은 생리학적으로 적합한 pH를 달성하기 위해 완충제를 포함할 수도 있다. 완충제에는 원하는 pH에서 완충할 수 있는 임의의 화합물, 예를 들면, 인산염 완충액 (가령, PBS), 트리에탄올아민, Tris, 비신, TAPS, 트리신, HEPES, TES, MOPS, PIPES, 카코딜레이트, MES 등이 포함될 수 있다. 일정한 구체예에서, 완충제의 강도는 최소한 0.5 mM, 최소한 1 mM, 최소한 5 mM, 최소한 10 mM, 최소한 20 mM, 최소한 30 mM, 최소한 40 mM, 최소한 50 mM, 최소한 60 mM, 최소한 70 mM, 최소한 80 mM, 최소한 90 mM, 최소한 100 mM, 최소한 120 mM, 최소한 150 mM, 또는 최소한 200 mM이다. 일부 구체예에서, 완충제의 강도는 300 mM 이하 (가령, 기껏해야 200 mM, 기껏해야 100 mM, 기껏해야 90 mM, 기껏해야 80 mM, 기껏해야 70 mM, 기껏해야 60 mM, 기껏해야 50 mM, 기껏해야 40 mM, 기껏해야 30 mM, 기껏해야 20 mM, 기껏해야 10 mM, 기껏해야 5 mM, 기껏해야 1 mM)이다.
투여 루트
투여 루트에 관한 하기 논의는 단지 예시적인 구체예를 설명하기 위해 제공되고 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 결코 간주되지 않는다.
경구 투여에 적절한 제제는 (a) 액상 용액, 예를 들면, 희석제, 예를 들면, 물, 염수, 또는 오렌지 주스에 용해된 본 발명의 접합체의 효과량; (b) 고체 또는 과립으로서 미리 결정된 양의 활성 성분을 각각 내포하는 캡슐, 향낭, 정제, 마름모꼴정제, 그리고 트로키; (c) 분말; (d) 적절한 액체에서 현탁액; 그리고 (e) 적절한 에멀젼으로 구성될 수 있다. 액상 제제는 제약학적으로 허용되는 계면활성제가 첨가되거나 첨가되지 않고, 희석제, 예를 들면, 물, 그리고 알코올, 예를 들면, 에탄올, 벤질 알코올과 폴리에틸렌 알코올을 포함할 수 있다. 캡슐 형태는 예로써, 계면활성제, 윤활제, 그리고 비활성 충전제, 예를 들면, 락토오스, 수크로오스, 칼슘 포스페이트, 그리고 옥수수 전분을 내포하는 통상적인 경성- 또는 연성-껍질 젤라틴 유형일 수 있다. 정제 형태는 락토오스, 수크로오스, 만니톨, 옥수수 전분, 감자 전분, 알긴산, 미세결정성 셀룰로오스, 아카시아, 젤라틴, 구아 검, 콜로이드성 이산화규소, 크로스카르멜로스 나트륨, 활석, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 아연 스테아레이트, 스테아르산, 그리고 기타 부형제, 착색제, 희석제, 완충제, 붕해제, 습윤제, 보존제, 풍미제, 그리고 기타 약리학적으로 적합한 부형제 중에서 하나 이상을 포함할 수 있다. 마름모꼴정제 형태는 당분야에 공지된 부형제를 추가로 내포하는 비활성 기부, 예를 들면, 젤라틴과 글리세린, 또는 수크로오스와 아카시아, 에멀젼, 겔 등에서 본 발명의 접합체를 포함하는 향정뿐만 아니라, 풍미제, 통상적으로 수크로오스와 아카시아 또는 트래거캔스에서 본 발명의 접합체를 포함할 수 있다.
본 발명의 접합체는 단독으로, 또는 다른 적절한 성분과 공동으로, 폐 투여를 통해 전달될 수 있고, 흡입을 통해 투여될 수 있는 에어로졸 제제로 만들어질 수 있다. 이들 에어로졸 제제는 가압된 허용되는 추진제, 예를 들면, 디클로로디플루오르메탄, 프로판, 질소 등에 배치될 수 있다. 이들은 또한, 예로써 분무기에 담긴 비-가압된 제조물을 위한 약제로서 조제될 수 있다. 이런 스프레이 제제는 또한, 점막에 분사하는데 이용될 수 있다. 일부 구체예에서, 접합체는 분말 혼합물 또는 마이크로입자 또는 나노입자로 조제된다. 적절한 폐 제제는 당분야에 공지되어 있다. 예로써, Qian et al., Int J Pharm 366: 218-220 (2009); Adjei and Garren, Pharmaceutical Research, 7(6): 565-569 (1990); Kawashima et al., J Controlled Release 62(1-2): 279-287 (1999); Liu et al., Pharm Res 10(2): 228-232 (1993); 국제 특허 출원 공개공보 번호 제WO 2007/133747호 및 제WO 2007/141411호를 참고한다.
비경구 투여에 적절한 제제에는 수성과 비-수성, 등장성 무균 주사 용액이 포함되는데, 이들은 항산화제, 완충액, 세균 발육 저지제, 그리고 제제가 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 하는 용질, 그리고 현탁제, 용해제, 농후제, 안정제, 그리고 보존제를 포함할 수 있는 수성과 비-수성 무균 현탁액을 내포할 수 있다. 용어, "비경구"는 소화관 (alimentary canal)이 아닌 일부 다른 루트, 예를 들면, 피하, 근육내, 척수내, 또는 정맥내를 의미한다. 본 발명의 접합체는 제약학적으로 허용되는 계면활성제, 예를 들면, 비누 또는 세정제, 현탁제, 예를 들면, 펙틴, 카보머, 메틸셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 또는 카르복시메틸셀룰로오스, 또는 유화제 및 기타 제약학적 어쥬번트가 첨가되거나 첨가되지 않고, 제약학적 담체, 예를 들면, 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 관련된 당 용액, 알코올, 예를 들면, 에탄올 또는 헥사데실 알코올, 글리콜, 예를 들면, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜, 디메틸설폭시드, 글리세롤, 케탈, 예를 들면, 2,2-디메틸-l53-디옥솔란-4-메탄올, 에테르, 폴리(에틸렌글리콜) 400, 오일, 지방산, 지방산 에스테르 또는 글리세리드, 또는 아세틸화된 지방산 글리세리드를 비롯한 무균 액체 또는 액체의 혼합물에 담겨 생리학적으로 허용되는 희석제와 함께 투여될 수 있다.
비경구 제제에 이용될 수 있는 오일에는 바셀린, 동물성, 식물성, 또는 합성 오일이 포함된다. 오일의 특정한 실례에는 땅콩, 콩, 참깨, 목화씨, 옥수수, 올리브, 바셀린, 그리고 미네랄이 포함된다. 비경구 제제에 이용하기 적절한 지방산에는 올레산, 스테아르산, 그리고 이소스테아르산이 포함된다. 에틸 올리에이트와 이소프로필 미리스테이트는 적절한 지방산 에스테르의 실례이다.
비경구 제제에 이용하기 적절한 비누에는 지방 알칼리성 금속, 암모늄, 그리고 트리에탄올아민 염이 포함되고, 그리고 적절한 세정제에는 (a) 양이온성 세정제, 예를 들면, 디메틸 디알킬 암모늄 할로겐화물, 그리고 알킬 피리디늄 할로겐화물, (b) 음이온성 세정제, 예를 들면, 알킬, 아릴, 그리고 올레핀 설포네이트, 알킬, 올레핀, 에테르, 그리고 모노글리세리드 설페이트, 그리고 설포숙시네이트, (c) 비이온성 세정제, 예를 들면, 지방 아민 산화물, 지방산 알칸올아미드, 그리고 폴리옥시에틸렌폴리프로필렌 공중합체, (d) 양쪽성 세정제, 예를 들면, 알킬-β-아미노프로피오네이트, 그리고 2-알킬-이미다졸린 4가 암모늄 염, 그리고 (e) 이들의 혼합물이 포함된다.
비경구 제제는 전형적으로, 용해 상태에서 중량으로 약 0.5% 내지 약 25%의 본 발명의 Q-L-Y 접합체를 내포할 것이다. 보존제와 완충제가 이용될 수도 있다. 주사 부위에서 자극을 최소화 또는 제거하기 위해, 이런 조성물은 약 12 내지 약 17의 친수성-친지성 균형 (HLB)을 갖는 하나 이상의 비이온성 계면활성제를 내포할 수 있다. 이런 제제 내에 계면활성제의 양은 전형적으로, 중량으로 약 5% 내지 약 15% 범위일 것이다. 적절한 계면활성제에는 폴리에틸렌 글리콜 소르비탄 지방산 에스테르, 예를 들면, 소르비탄 모노올리에이트, 그리고 프로필렌 글리콜과 함께 프로필렌 산화물의 축합에 의해 형성된, 소수성 기부를 갖는 에틸렌 산화물의 고분자량 부가물이 포함된다. 비경구 제제는 단위-분량 또는 다중-분량 밀봉 용기, 예를 들면, 앰풀과 바이알에 담겨 제공될 수 있고, 그리고 사용 직전에, 단지 무균 액상 부형제, 예를 들면, 주사용수의 첨가만을 필요로 하는 동결-건조된 상태에서 보관될 수 있다. 즉시 주사 용액과 현탁액은 앞서 기술된 종류의 무균 분말, 과립, 그리고 정제로부터 제조될 수 있다.
주사가능 제제는 본 발명에 부합한다. 주사가능 조성물을 위한 효과적인 제약학적 담체에 대한 필요조건은 당업자에게 널리 공지되어 있다 (예로써, Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J. B. Lippincott Company, Philadelphia, PA, Banker and Chalmers, eds., pages 238-250 (1982), 그리고 ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pages 622-630 (1986)을 참고한다).
부가적으로, 본 발명의 접합체는 다양한 기부, 예를 들면, 유화 기부 또는 물-용해성 기부와 혼합함으로써 직장 투여를 위한 좌약으로 만들어질 수 있다. 질 투여에 적절한 제제는 활성 성분 이외에, 적절한 것으로 당분야에 공지된 담체를 내포하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 거품, 또는 스프레이 형태로서 제공될 수 있다.
당업자가 인지하는 바와 같이, 앞서 기술된 제약학적 조성물에 추가하여, 본 발명의 접합체는 포접 복합체 (inclusion complex), 예를 들면, 시클로덱스트린 포접 복합체, 또는 리포좀으로서 조제될 수 있다.
용량
본 발명의 Q-L-Y 접합체는 글루카곤 수용체 효현작용, GLP-1 수용체 효현작용, GIP 수용체 효현작용, 글루카곤 수용체/GLP-1 수용체 공동-효현작용, 글루카곤 수용체/GIP 수용체 공동-효현작용, GLP-1 수용체/GIP 수용체 공동-효현작용 또는 글루카곤 수용체/GLP-1 수용체/GIP 수용체 삼중-효현작용이 일정한 역할을 하는 질환 또는 의학적 장애를 치료하는 방법에서 유용할 것으로 생각된다. 본 발명에서, 투여되는 본 발명의 접합체의 양 또는 복용량은 합리적인 기간에 걸쳐 개체 또는 동물에서, 예로써 치료적 또는 예방적 반응을 달성할 만큼 충분해야 한다. 가령, 본 발명의 접합체의 복용량은 본 명세서에서 기술된 바와 같이, 세포로부터 cAMP 분비를 자극할 만큼, 또는 투여 시점으로부터 약 1 내지 4분, 1 내지 4시간 또는 1 내지 4주 이상, 예를 들면, 5 내지 20주 이상의 기간 동안 포유동물의 혈당 수준, 지방 수준, 음식물 섭취 수준, 또는 체중을 감소시킬 만큼 충분해야 한다. 일정한 구체예에서, 기간은 더욱 길어질 수 있다. 복용량은 본 발명의 특정 접합체의 효능, 동물 (가령, 인간)의 상태, 그리고 치료되는 동물 (가령, 인간)의 체중에 의해 결정될 것이다.
투여량을 결정하기 위한 많은 분석평가법은 당분야에 공지되어 있다. 본 명세서에서, 포유동물에 본 발명의 접합체의 소정의 복용량의 투여 시에 혈당 수준이 낮아지는 정도를 각각 상이한 복용량의 접합체가 제공되는 일단의 포유동물 사이에서 비교하는 단계를 포함하는 분석평가가 포유동물에 투여되는 출발 복용량을 결정하는데 이용될 수 있다. 일정한 복용량의 투여 시에 혈당 수준이 낮아지는 정도는 예로써, 본 명세서의 실시예 섹션에서 기술된 방법을 비롯한 당분야에 공지된 방법에 의해 평가될 수 있다.
본 발명의 접합체의 복용량은 또한, 본 발명의 특정 접합체의 투여에 동반될지도 모르는 임의의 부작용의 존재, 성격과 정도에 의해 결정될 것이다. 전형적으로, 담당 의사는 다양한 인자, 예를 들면, 연령, 체중, 전반적인 건강, 식이, 성별, 투여되는 본 발명의 접합체, 투여 루트, 그리고 치료되는 질환의 심각도를 고려하여, 각 개별 환자를 치료하기 위한 본 발명의 접합체의 용량을 결정할 것이다. 실례로서, 하지만 본 발명의 한정 없이, 본 발명의 접합체의 복용량은 치료되는 개체의 체중 kg당 약 0.0001 내지 약 1 g/일, 체중 kg당 약 0.0001 내지 약 0.001 g/일, 또는 체중 kg당 약 0.01 mg 내지 약 1 g/일일 수 있다.
일부 구체예에서, 제약학적 조성물은 환자에 투여하기 적절한 순도 수준에서 본 명세서에서 개시된 임의의 접합체를 포함한다. 일부 구체예에서, 접합체는 최소한 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99%의 순도 수준, 그리고 제약학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 갖는다. 일부 양상에서, 제약학적 조성물은 최소한 A의 농도에서 본 발명의 접합체를 포함하고, 여기서 A는 약 0.001 mg/ml, 약 0.01 mg/ml, 약 0.1 mg/ml, 약 0.5 mg/ml, 약 1 mg/ml, 약 2 mg/ml, 약 3 mg/ml, 약 4 mg/ml, 약 5 mg/ml, 약 6 mg/ml, 약 7 mg/ml, 약 8 mg/ml, 약 9 mg/ml, 약 10 mg/ml, 약 11 mg/ml, 약 12 mg/ml, 약 13 mg/ml, 약 14 mg/ml, 약 15 mg/ml, 약 16 mg/ml, 약 17 mg/ml, 약 18 mg/ml, 약 19 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 21 mg/ml, 약 22 mg/ml, 약 23 mg/ml, 약 24 mg/ml, 약 25 mg/ml 이상이다. 일부 구체예에서, 제약학적 조성물은 기껏해야 B의 농도에서 접합체를 포함하고, 여기서 B는 약 30 mg/ml, 약 25 mg/ml, 약 24 mg/ml, 약 23, mg/ml, 약 22 mg/ml, 약 21 mg/ml, 약 20 mg/ml, 약 19 mg/ml, 약 18 mg/ml, 약 17 mg/ml, 약 16 mg/ml, 약 15 mg/ml, 약 14 mg/ml, 약 13 mg/ml, 약 12 mg/ml, 약 11 mg/ml, 약 10 mg/ml, 약 9 mg/ml, 약 8 mg/ml, 약 7 mg/ml, 약 6 mg/ml, 약 5 mg/ml, 약 4 mg/ml, 약 3 mg/ml, 약 2 mg/ml, 약 1 mg/ml, 또는 약 0.1 mg/ml이다. 일부 구체예에서, 조성물은 A 내지 B mg/ml, 예를 들면, 약 0.001 내지 약 30.0 mg/ml의 농도 범위에서 접합체를 포함할 수 있다.
표적화된 형태
당업자가 인지하는 바와 같이, 본 발명의 Q-L-Y 접합체는 다수의 방법으로 변형될 수 있고, 따라서 본 발명의 접합체의 치료적 또는 예방적 효능이 이러한 변형을 통해 증가된다. 가령, 본 발명의 접합체는 표적화 모이어티에 링커를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 더욱 접합될 수 있다. 표적화 모이어티에 화합물, 예를 들면, 본 명세서에서 기술된 글루카곤 접합체를 접합하는 실시는 당분야에 공지되어 있다. 예로써, Wadhwa et al., J Drug Targeting, 3, 111-127 (1995) 및 미국 특허 번호 제5,087,616호를 참고한다. 본 명세서에서, 용어 "표적화 모이어티 (targeting moiety)"는 세포-표면 수용체를 특이적으로 인식하고 여기에 결합하는 임의의 분자 또는 작용제를 지칭하고, 따라서 표적화 모이어티는 표면 상에서 수용체 (글루카곤 수용체, GLP-1 수용체)가 발현되는 세포 집단에 본 발명의 접합체의 전달을 관리한다. 표적화 모이어티에는 항체, 또는 이들의 단편, 펩티드, 호르몬, 성장 인자, 사이토킨, 그리고 세포 표면 수용체 (가령, 상피 성장 인자 수용체 (EGFR), T-세포 수용체 (TCR), B-세포 수용체 (BCR), CD28, 혈소판-유래된 성장 인자 수용체 (PDGF), 니코틴성 아세틸콜린 수용체 (nAChR) 등)에 결합하는 임의의 다른 자연 또는 비-자연 리간드가 포함되지만 이들에 국한되지 않는다. 본 명세서에서 "링커"는 2개의 별개의 존재를 서로 결합시키는 단일 결합, 분자 또는 분자 군이다. 링커는 이들 두 존재의 최적 간격 (optimal spacing)을 제공하거나, 또는 이들 두 존재가 서로로부터 분리될 수 있도록 불안정한 연쇄를 더욱 제공할 수 있다. 불안정한 연쇄에는 광절단가능 기, 산-불안정성 모이어티, 염기-불안정성 모이어티, 가수분해가능 기, 그리고 효소-절단가능 기가 포함된다. 일부 구체예에서, 용어 "링커"는 본 발명의 접합체를 표적화 모이어티에 가교하는 임의의 작용제 또는 분자를 지칭한다. 당업자가 인지하는 바와 같이, 본 발명의 접합체의 기능에 필수적이지 않은, 본 발명의 접합체 상에서 부위는 링커 및/또는 표적화 모이어티를 부착하기 위한 이상적인 부위이고, 단서로써 링커 및/또는 표적화 모이어티는 본 발명의 접합체에 일단 부착되면, 본 발명의 접합체의 기능, 다시 말하면, 당뇨병 또는 비만을 치료하기 위해 세포로부터 cAMP 분비를 자극하는 능력을 간섭하지 않는다. 당업자가 인지하는 바와 같이, 본 발명의 펩티드 (Q) (가령, 글루카곤 작동약 펩티드, 글루카곤 길항약 펩티드, GLP-1 작동약 펩티드, GIP 작동약 펩티드, 또는 이들의 조합)의 기능에 필수적이지 않은, 본 발명의 펩티드 상에서 부위는 링커 및/또는 표적화 모이어티를 부착하기 위한 이상적인 부위이고, 단서로써 링커 및/또는 표적화 모이어티는 본 발명의 펩티드 (Q)에 일단 부착되면, 본 발명의 펩티드의 기능을 간섭하지 않는다.
제어된 방출 제제
대안으로, 본 명세서에서 기술된 글루카곤 접합체는 저장소 형태 (depot form)로 변형될 수 있고, 따라서 본 발명의 접합체가 투여된 체내로 방출되는 방식은 체내에서 시간과 위치에 대하여 제어된다 (예로써, 미국 특허 번호 제4,450,150호를 참고한다). 본 발명의 접합체의 저장소 형태는 예로써, 본 발명의 접합체 및 다공성 또는 비-다공성 물질, 예를 들면, 중합체를 포함하는 이식가능 조성물이고, 여기서 본 발명의 접합체는 상기 물질 및/또는 비-다공성 물질의 분해에 의해 피포되거나 전역에 확산된다. 저장소는 이후, 체내에 원하는 위치에 이식되고, 그리고 본 발명의 접합체는 미리 결정된 속도로 이식물로부터 방출된다.
일정한 양상에서, 제약학적 조성물은 임의의 유형의 생체내 방출 프로필을 갖도록 변형된다. 일부 양상에서, 제약학적 조성물은 즉시 방출, 제어된 방출, 지속된 방출, 확장된 방출, 지연된 방출, 또는 이중-상 방출 제제이다. 제어된 방출을 위한 펩티드 또는 접합체를 조제하는 방법은 당분야에 공지되어 있다. 예로써, Qian et al., J Pharm 374: 46-52 (2009) 및 국제 특허 출원 공개공보 번호 제WO 2008/130158호, 제WO2004/033036호; 제WO2000/032218호; 그리고 제WO 1999/040942호를 참고한다.
본 발명의 조성물은 예로써, 미셀 또는 리포좀, 또는 일부 다른 피포된 형태를 더욱 포함하거나, 또는 연장된 보관 및/또는 전달 효과를 제공하기 위해 확장된 방출 형태로 투여될 수 있다. 개시된 제약학적 제제는 예로써, 매일 (하루 1회, 하루 2회, 하루 3회, 하루 4회, 하루 5회, 하루 6회), 격일, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 매주, 격주, 3주마다, 매월, 또는 격월을 비롯한 임의의 섭생에 따라 투여될 수 있다.
용도
본 명세서에서 처음으로 제공된 정보에 기초하여, 본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체 및 관련된 제약학적 조성물은 예로써, 글루카곤 수용체, GLP-1 수용체, GIP 수용체 또는 이들의 임의의 조합에서 활성의 결여가 발생 및/또는 진행에서 인자가 되는 질환 또는 의학적 장애의 치료에 유용할 것으로 예기된다. 따라서 본 발명에서는 환자에서 질환 또는 의학적 장애를 치료하거나 예방하는 방법을 제시하고, 여기서 상기 질환 또는 의학적 장애는 GLP-1 수용체 활성화 및/또는 글루카곤 수용체 활성화 및/또는 GIP 활성화의 결여가 발생 및/또는 진행과 연관되는 질환 또는 의학적 장애이다. 상기 방법은 질환 또는 의학적 장애를 치료하거나 예방하는데 효과적인 양으로 본 명세서에서 기술된 것들에 따른 접합체를 환자에 제공하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서, 질환 또는 의학적 장애는 신진대사장애이다. 신진대사장애 X, 인슐린 내성 증후군 또는 리벤 증후군으로 알려져 있는 신진대사장애는 5천만 명 이상의 미국인이 앓고 있는 질환이다. 신진대사장애는 전형적으로, 하기 위험 인자 중에서 최소한 세 가지 이상의 군집으로 특징된다: (1) 복부 비만 (복부 내외에 과도한 지방 조직), (2) 죽상경화성 이상지질혈증 (atherogenic dyslipidemia) (동맥 벽에서 플라크의 축적을 증강시키는 높은 트리글리세리드, 저 HDL 콜레스테롤과 고 LDL 콜레스테롤을 비롯한 혈액 지방 질환), (3) 상승된 혈압, (4) 인슐린 내성 또는 내당성 장애, (5) 친혈전성 상태 (prothrombotic state) (가령, 혈액 내에 높은 피브리노겐 또는 플라스미노겐 활성자 저해제-1), 그리고 (6) 친염증성 상태 (가령, 혈액 내에 상승된 C-반응성 단백질). 다른 위험 인자에는 노화, 호르몬 불균형 및 유전적 소인이 포함될 수 있다.
신진대사장애는 관상동맥성 심장 질환 및 혈관 플라크 (vascular plaque)의 축적에 관련된 다른 질환, 예를 들면, 뇌졸중과 말초 혈관 질환 (죽상경화성 심혈관 질환 (ASCVD)으로 지칭됨)의 증가된 위험과 연관된다. 신진대사장애를 앓는 환자는 초기 단계에서 인슐린 내성 상태로부터 ASCVD의 더욱 증가된 위험을 갖는 완전히 발달한 타입 II 당뇨병으로 진행할 수 있다. 임의의 특정 이론에 한정됨 없이, 인슐린 내성, 신진대사장애와 혈관 질환 사이에 상관관계는 손상된 인슐린-자극된 혈관확장, 증강된 산화성 스트레스에 기인한 NO 이용가능성에서 인슐린 내성-연관된 감소, 그리고 지방세포-유래된 호르몬, 예를 들면, 에디포넥틴에서 비정상을 비롯한 하나 이상의 동시 병원성 기전을 수반할 수 있다 (Lteif and Mather, Can. J. Cardiol. 20 (suppl. B):66B-76B (2004)).
2001 National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel (ATP III)에 따르면, 동일한 개체에서 하기 속성 중에서 임의의 세 가지는 신진대사장애에 대한 기준을 충족한다: (a) 복부 비만 (남성에서 102 cm 이상 및 여성에서 88 cm 이상의 허리 둘레); (b) 혈청 트리글리세리드 (150 mg/dl 이상); (c) HDL 콜레스테롤 (남성에서 40 mg/dl 이하 및 여성에서 50 mg/dl 이하); (d) 혈압 (130/85 이상); 그리고 (e) 공복시 혈당 (110 mg/dl 이상). World Health Organization (WHO)에 따르면, 하기 기준 중에서 적어도 2가지를 갖는 높은 인슐린 수준 (상승된 공복시 혈당 또는 상승된 식후 혈당 단독)을 갖는 개체는 신진대사장애에 대한 기준을 충족한다: (a) 복부 비만 (0.9 초과의 허리 대(對) 엉덩이 비율, 최소한 30 kg/m2의 신체 용적 지수 (body mass index), 또는 37인치 이상의 허리 치수); (b) 최소한 150 mg/dl의 트리글리세리드 수준 또는 35 mg/dl 미만의 HDL 콜레스테롤을 보여주는 콜레스테롤 패널; (c) 140/90 이상의 혈압, 또는 고혈압으로 인한 치료). (Mathur, Ruchi, Metabolic Syndrome, ed. Shiel, Jr., William C., MedicineNet.com, May 11, 2009).
본 명세서에서, 개체가 2001 National Cholesterol Education Program Adult Treatment Panel 또는 WHO에 의해 설정된 기준 중에서 한쪽 또는 양쪽의 기준을 충족한다면, 상기 개체는 신진대사장애를 앓는 것으로 간주된다.
임의의 특정 이론에 한정됨 없이, 본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체는 신진대사장애를 치료하는데 유용하다. 따라서, 본 발명에서는 개체에서 신진대사장애를 예방하거나 치료하고, 또는 이의 한 가지, 두 가지, 세 가지 이상의 위험 인자를 감소시키는 방법을 제시하고, 상기 방법은 신진대사장애, 또는 이의 위험 인자를 예방하거나 치료하는데 효과적인 양으로 본 명세서에서 기술된 접합체를 개체에 제공하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서, 상기 방법은 고혈당성 의학적 장애를 치료한다. 일정한 양상에서, 고혈당성 의학적 장애는 당뇨병, 타입 I 진성 당뇨병, 타입 II 진성 당뇨병, 또는 인슐린-의존성 또는 비-인슐린-의존성의 임신 당뇨병이다. 일부 양상에서, 상기 방법은 신증, 망막병증 및 혈관 질환을 비롯하여, 당뇨병의 하나 이상의 합병증을 감소시킴으로써 고혈당성 의학적 장애를 치료한다.
일부 양상에서, 질환 또는 의학적 장애는 비만이다. 일부 양상에서, 비만은 약물-유도된 비만이다. 일부 양상에서, 상기 방법은 환자에서 체중 증가를 예방하거나 감소시킴으로써, 또는 체중 감소를 증가시킴으로써 비만을 치료한다. 일부 양상에서, 상기 방법은 식욕을 감소시키거나, 음식물 섭취를 줄이거나, 환자에서 지방의 수준을 저하시키거나, 또는 위장관계를 통한 음식물의 이동 속도를 감소시킴으로써 비만을 치료한다.
비만이 다른 질환의 발생 또는 진행과 연관되기 때문에, 비만을 치료하는 방법은 혈관 질환 (관상 동맥 질환, 뇌졸중, 말초 혈관 질환, 허혈성 재관류 등), 고혈압, 타입 II 당뇨병의 발병, 고지질혈증 및 근골격 질환을 비롯하여, 비만과 연관된 합병증을 감소시키는 방법에서 더욱 유용하다. 본 발명은 따라서, 이들 비만-연관된 합병증을 치료하거나 예방하는 방법을 제시한다.
일부 구체예에서, 질환 또는 의학적 장애는 비알코올성 지방간 질환 (NAFLD)이다. NAFLD는 단순한 지방간 (지방증)에서부터, 비알코올성 지방간염 (NASH), 경변증 (간의 비가역적, 진전된 흉터형성)까지 광범위한 스펙트럼의 간 질환을 지칭한다. NAFLD의 모든 단계는 공통적으로, 간세포 (hepatocyte)에서 지방의 축적 (지방 침윤)을 갖는다. 단순한 지방간은 염증 또는 흉터형성 없이, 간세포에서 일정한 유형의 지방, 트리글리세리드의 비정상적 축적이다. NASH에서, 지방 축적은 간의 다양한 정도의 염증 (간염)과 흉터발생 (섬유증)과 연관된다. 염증 세포는 간세포를 파괴할 수 있다 (간세포 괴사). 용어 "지방간염 (steatohepatitis)"과 "지방괴사 (steatonecrosis)"에서, steato는 지방 침윤을 지칭하고, hepatitis는 간에서 염증을 지칭하고, 그리고 necrosis는 파괴된 간세포를 지칭한다. NASH는 궁극적으로, 간의 흉터발생 (섬유증), 이후 비가역적, 진전된 흉터발생 (경변증)을 유발할 수 있다. NASH에 의해 유발되는 경변증은 NAFLD 스펙트럼에서 가장 심각한 최후 단계이다 (Mendler, Michel, "Fatty Liver: Nonalcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) and Nonalcoholic Steatohepatitis (NASH)", ed. Schoenfield, Leslie J., MedicineNet.com, August 29, 2005).
알코올성 간 질환, 또는 알코올-유도된 간 질환은 알코올의 과도한 소비에 관련되거나 이에 의해 유발되는 세 가지 병리학적으로 상이한 간 질환: 지방간 (지방증), 만성 또는 급성 간염, 그리고 경변증을 포함한다. 알코올성 간염은 경등도 감염 (비정상적인 실험 결과가 질환의 유일한 시도이다)에서부터 합병증을 갖는 중증도 간 기능장애, 예를 들면, 황달 (빌리루빈 정체에 의해 유발된 황색 피부), 간성 뇌증 (간 부전에 의해 유발된 신경학적 기능장애), 복수 (복부 내에 유체 축적), 출혈성 식도정맥류 (bleeding esophageal varices) (식도 내에 정맥류성 정맥), 비정상적인 혈액 응고와 혼수상태까지 다양할 수 있다. 조직학적으로, 알코올성 간염은 간세포의 풍선양 변성 (ballooning degeneration), 호중구와 때때로, 말로리 소체 (Mallory body)로 인한 염증 (세포 중간 사상체 단백질의 비정상적 집합)으로 특징되는 외관을 갖는다. 경변증은 해부학적으로, 섬유증과 합동되는 간 내에서 광범위한 혹으로 특징된다 (Worman, Howard J., "Alcoholic Liver Disease", Columbia University Medical Center website).
임의의 특정 이론에 한정됨 없이, 본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체는 예로써, 지방증, 지방간염, 간염, 간 염증, NASH, 경변증, 또는 이들의 합병증을 비롯하여, 알코올성 간 질환, NAFLD, 또는 이들의 임의의 단계의 치료에 유용하다. 따라서 본 발명에서는 개체에서 알코올성 간 질환, NAFLD, 또는 이들의 임의의 단계를 예방하거나 치료하는 방법을 제시하고, 상기 방법은 알코올성 간 질환, NAFLD, 또는 이들의 단계를 예방하거나 치료하는데 효과적인 양으로 본 명세서에서 기술된 접합체를 개체에 제공하는 단계를 포함하다. 이런 치료 방법은 하기 중에서 한 가지, 두 가지, 세 가지 이상에서 감소를 포함한다: 간 지방 함량, 경변증의 발생 또는 진행, 간세포 암종의 발생, 염증의 징후, 예를 들면, 비정상적인 간 효소 수준 (가령, 아스파르테이트 아미노전이효소 AST 및/또는 알라닌 아미노전이효소 ALT, 또는 LDH), 상승된 혈청 페리틴, 상승된 혈청 빌리루빈, 및/또는 섬유증의 징후, 예를 들면, 상승된 TGF-베타 수준. 바람직한 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체는 단순한 지방간 (지방증)을 넘어 진행되고 염증 또는 간염의 징후를 나타내는 환자를 치료하는데 이용된다. 이런 방법은 예로써, AST 및/또는 ALT 수준의 감소를 결과할 수 있다.
GLP-1과 엑센딘-4는 일부 신경보호 효과 (neuroprotective effect)를 갖는 것으로 밝혀졌다. 본 발명에서는 또한, 알츠하이머병, 파킨슨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 기타 탈수초화 관련된 질환, 노인성 치매, 피질하 치매, 동맥경화성 치매, AIDS-연관된 치매, 또는 기타 치매, 중추신경계 암, 외상성 뇌 손상, 척수 손상, 뇌졸중 또는 뇌 허혈, 뇌 혈관염, 간질, 헌팅턴병, 뚜렛 증후군, 길레인 바레 증후군, 윌슨 병, 픽 병, 신경염증성 질환, 뇌염, 바이러스, 진균 또는 세균 기원의 뇌척수염 또는 뇌막염, 또는 기타 중추신경계 감염, 프리온 질환, 소뇌성 운동실조, 소뇌 변성증, 척수소뇌 변성 증후군 (spinocerebellar degeneration syndrome), 프리드리히형 실조증 (Friedreichs ataxia), 모세혈관 확장성 운동 실조증 (ataxia telangiectasia), 척수성 근위축증 (spinal dysmyotrophy), 진행성 핵상 마비 (progressive supranuclear palsy), 실조증, 근육 경련, 진전, 망막색소상피 변성증 (retinitis pigmentosa), 줄무늬체흑질 변성 (striatonigral degeneration), 사립체성 뇌근병증 (mitochondrial encephalomyopathy), 신경 세로이드 리포푸스신증 (neuronal ceroid lipofuscinosis), 간 뇌증, 신장 뇌증, 대사성 뇌증, 독소-유도된 뇌증, 그리고 방사선-유도된 뇌 손상이 포함되지만 이들에 국한되지 않는 신경퇴행성 질환을 치료함에 있어서 본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체의 용도를 제시한다.
일부 구체예에서, 질환 또는 의학적 장애는 저혈당증이다. 일부 구체예에서, 환자는 당뇨병 환자이고, 그리고 저혈당증은 인슐린의 투여에 의해 유도된다. 특정한 양상에서, 상기 방법은 접합체가 인슐린의 일시주사 투여의 저혈당 효과를 완충하도록, 인슐린과 공동으로 본 발명의 접합체를 제공하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서, Q-L-Y 접합체는 병원 환경에서 비-당뇨성 환자, 예를 들면, 비경구 영양요법 또는 총 비경구 영양요법을 받는 환자에 영양제의 비경구 투여와 병용된다. 무제한적 실례에는 수술 환자, 혼수상태 환자, 소화관 질환 또는 비기능성 위장관 (가령, 외과적 제거, 차단 또는 손상된 흡수 능력, 크론병, 궤양성 대장염, 위장관 폐색, 위장관 누관, 급성 췌장염, 허혈성 장, 주요 위장 수술, 일정한 선천성 위장관 기형, 연장된 설사, 또는 수술에 따른 단장 증후군에 기인)을 앓는 환자, 쇼크 환자, 그리고 지질, 전해질, 미네랄, 비타민과 아미노산의 다양한 조합과 함께 탄수화물의 비경구 투여가 종종 제공되는 치유 과정을 받는 환자가 포함된다. Q-L-Y 접합체 및 비경구 영양 조성물은 동일한 시점에, 상이한 시점에, 서로 간에 전후로 투여될 수 있고, 단서로써 Q-L-Y 접합체는 비경구 영양 조성물이 소화되는 시점에 원하는 생물학적 효과를 발휘한다. 가령, 비경구 영양요법은 하루 1, 2 또는 3회 투여될 수 있고, 반면 글루카곤 접합체는 2일마다 1회, 주 3회, 주 2회, 주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 또는 월 1회 투여된다.
본 명세서에서, 용어 "치료한다"와 "예방한다", 그리고 이들로부터 파생하는 용어는 100% 또는 완전한 치료 또는 예방을 반드시 의미하는 것은 아니다. 오히려, 당업자가 잠재적 이점 또는 치료적 효과를 갖는 것으로 인지하는 다양한 정도의 치료 또는 예방이 존재한다. 이와 관련하여, 본 발명의 방법은 포유동물에서 질환 또는 의학적 장애의 임의의 수준의 치료 또는 예방을 제공할 수 있다. 게다가, 본 발명의 방법에 의해 제공된 치료 또는 예방은 질환 또는 의학적 장애의 하나 이상의 상태 또는 증상의 치료 또는 예방을 포함할 수 있다. 가령, 비만을 치료하는 방법에 대하여, 상기 방법은 일부 구체예에서, 환자에서 음식물 섭취 또는 지방 수준에서 감소를 달성한다. 또한, 본 명세서에서, "예방"은 질환, 또는 이의 증상 또는 상태의 발생을 지연시키는 것을 포함할 수 있다.
상기 치료 방법에 대하여, 환자는 임의의 호스트이다. 일부 구체예에서, 호스트는 포유동물이다. 본 명세서에서, 용어 "포유동물"은 단공류 (monotreme), 유대류 (marsupial), 그리고 태반류 (placental) 중에서 한 가지가 포함되지만 이들에 국한되지 않는 포유동물 강(綱)의 임의의 척추동물을 지칭한다. 일부 구체예에서, 포유동물은 쥐목 (Rodentia)의 포유동물, 예를 들면, 생쥐와 햄스터 중에서 한 가지이고, 그리고 토끼목 (Lagomorpha)의 포유동물, 예를 들면, 토끼이다. 일정한 구체예에서, 포유동물은 고양잇과와 갯과를 비롯한 육식류로부터 유래된다. 일정한 구체예에서, 포유동물은 소와 돼지를 비롯한 우제류 (Artiodactyla), 또는 말과를 비롯한 기제류 (Perissodactyla)로부터 유래된다. 일부 경우에, 포유동물은 영장류 (Primate), 세보이드 (Ceboid), 또는 시그모이드 (Simoid) (원숭이), 또는 유인원류 (Anthropoid) (인간과 유인원)으로부터 유래된다. 특정한 구체예에서, 포유동물은 인간이다.
복합
본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체는 단독으로, 또는 본 명세서에서 기술된 질환 또는 의학적 장애 중에서 한 가지를 치료하거나 예방하는 것을 목적으로 하는 다른 치료제와 공동으로 투여될 수 있다. 가령, 본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체는 항-당뇨성 또는 항-비만 작용제와 공동-투여될 수 있다 (동시에 또는 순차적으로). 당분야에 공지되거나 현재 연구 중인 항-당뇨성 작용제에는 인슐린, 렙틴, 펩티드 YY (PYY), 췌장 펩티드 (PP), 섬유아세포 성장 인자 21 (FGF21), Y2Y4 수용체 작동약, 설포닐요소, 예를 들면, 톨부타미드 (Orinase), 아세토헥사미드 (Dymelor), 톨라자미드 (Tolinase), 클로르프로파미드 (Diabinese), 글리피지드(Glucotrol), 글리부리드 (Diabeta, Micronase, Glynase), 글리메피리드 (Amaryl), 또는 글리클라지드 (Diamicron); 메글리티니드, 예를 들면, 레파글리니드 (Prandin) 또는 나테글리니드 (Starlix); 비구아니드, 예를 들면, 메트포르민 (Glucophage) 또는 펜포르민; 티아졸리딘디온, 예를 들면, 로시글리타존 (Avandia), 피오글리타존 (Actos), 또는 트로글리타존 (Rezulin), 또는 기타 PPARγ 저해제; 탄수화물 소화를 저해하는 알파 글루코시다아제 저해제, 예를 들면, 미글리톨 (Glyset), 아카르보스 (Precose/Glucobay); 엑세나티드 (Byetta) 또는 프람린티드; 디펩티딜 펩티다아제-4 (DPP-4) 저해제, 예를 들면, 빌다글립틴 또는 시타글립틴; SGLT (나트륨-의존성 글루코오스 트랜스포터 1) 저해제; 글루코키나아제 활성자 (GKA); 글루카곤 수용체 길항약 (GRA); 또는 FBPase (프럭토오스 1,6-비스포스포파타아제) 저해제가 포함된다.
당분야에 공지되거나 현재 연구 중인 항-비만 작용제에는 펜에틸아민 타입 자극제, 펜테르민 (임의적으로, 펜플루라민 또는 덱스펜플루라민과 함께), 디에틸프로피온 (Tenuate®), 펜디메트라진 (Prelu-2®, Bontril®), 벤즈페타민 (Didrex®), 시부트라민 (Meridia®, Reductil®)을 비롯한 식욕 억제제; 리모나반트 (Acomplia®), 기타 카나비노이드 수용체 길항약; 옥신토모듈린; 플루옥세틴 염산염 (Prozac); Qnexa (토피라메이트와 펜테르민), Excalia (부프로피온과 조니사미드) 또는 Contrave (부프로피온과 날트렉손); 또는 제니칼 (Orlistat) 또는 Cetilistat (일명, ATL-962)와 같은 리파아제 저해제, 또는 GT 389-255가 포함된다.
본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체는 일부 구체예에서, 비-알코올성 지방간 질환 또는 NASH의 치료를 위한 작용제와 공동-투여된다. 비-알코올성 지방간 질환을 치료하는데 이용되는 작용제에는 우르소데옥시담즙산 (a.k.a., Actigall, URSO, 그리고 Ursodiol), 메트포르민 (Glucophage), 로시글리타존 (Avandia), 클로피브레이트, 젬피브로질, 폴리믹신 B, 그리고 베타인이 포함된다.
본 명세서에서 기술된 Q-L-Y 접합체는 일부 구체예에서, 신경퇴행성 질환, 예를 들면, 파킨슨병의 치료를 위한 작용제와 공동-투여된다. 항-파킨슨병 작용제는 당분야에 공지되어 있고, 여기에는 레보도파 (levodopa), 카르비도파 (carbidopa), 항콜린제, 브로모크립틴 (bromocriptine), 프라미펙솔 (pramipexole), 그리고 로피니롤 (ropinirole), 아만타딘 (amantadine), 그리고 라사길린 (rasagiline)이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.
전술한 내용에 비추어, 본 발명에서는 이들 다른 치료제 중에서 한 가지를 추가로 포함하는 제약학적 조성물과 키트를 더욱 제시한다. 추가적인 치료제는 본 발명의 접합체와 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 일부 양상에서, 접합체는 추가적인 치료제 이전에 투여되고, 다른 양상에서, 접합체는 추가적인 치료제 이후에 투여된다.
키트
본 발명의 Q-L-Y 접합체는 한 구체예에 따라서, 키트의 일부로서 제공될 수 있다. 따라서 일부 구체예에서, Q-L-Y 접합체를 병든 환자에 투여하기 위한 키트가 제시되고, 여기서 상기 키트는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 Q-L-Y 접합체를 포함한다.
한 구체예에서, 키트는 Q-L-Y 접합체 조성물을 환자에 투여하기 위한 장치, 예를 들면, 주사기 바늘, 펜 장치, 제트 주입기 또는 다른 바늘-없는 주입기가 제공된다. 키트는 대안으로 또는 부가적으로, 하나 이상의 용기, 예를 들면, 바이알, 튜브, 병, 단일 또는 다중-챔버 미리-채워진 주사기, 카트리지, 주입 펌프 (외부 또는 이식가능), 제트 주입기, 미리-채워진 펜 장치 등을 포함하고, 임의적으로 동결 건조된 형태에서 또는 수성 용액에서 글루카곤 접합체를 내포한다. 키트는 일부 구체예에서, 사용설명서를 포함한다. 한 구체예에 따라서, 키트의 장치는 에어로졸 분배 장치이고, 여기서 조성물은 에어로졸 장치 내에 미리 포장된다. 또 다른 구체예에서, 키트는 주사기와 바늘을 포함하고, 그리고 한 구체예에서, 무균 글루카곤 조성물은 주사기 내에 미리 포장된다.
하기 실시예는 본 발명을 단지 예시하기 위해 제공되고 본 발명의 범위를 결코 한정하지 않는다.
실시예
실시예 1: 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드의 펩티드 단편의 합성
재료
본 명세서에서 기술된 모든 펩티드는 달리 명시되지 않으면, 아미드화되었다. MBHA (4-메틸벤즈히드릴아민 폴리스티렌) 수지가 펩티드 합성 동안 이용되었다. MBHA 수지, 100-180 그물망 (mesh), 1% 디비닐벤젠 (DVB) 가교-연결된 폴리스티렌; 0.7-1.0 mmol/g의 부하), Boc-보호된 (tert-부틸카바메이트) 아미노산 및 Fmoc 보호된 (9-플루오에닐메틸 카바메이트) 아미노산은 Midwest Biotech로부터 구입되었다. Boc-보호된 아미노산을 이용한 고형 상 펩티드 합성은 Applied Biosystem 430A 펩티드 합성장치에서 수행되었다. Fmoc 보호된 아미노산 합성은 Applied Biosystems Model 433 펩티드 합성장치를 이용하여 수행되었다. 특정 구체예에서, 하기 절차가 이용될 수 있다:
Boc-화학 전략을 이용한 전반적인 펩티드 합성 프로토콜
Boc 화학을 이용한 펩티드의 합성은 Applied Biosystem Model 430A 펩티드 합성장치에서 수행되었다. 합성 펩티드는 2 mmol의 Boc 보호된 아미노산을 내포하는 카트리지에 아미노산의 순차적 첨가에 의해 작제되었다. 구체적으로, 합성은 3-(디에톡시-포스포릴옥시)-3H-벤조[d][1,2,3] 트리아진-4-온 (DEPBT) 또는 HBTU를 커플링 작용제로 이용한 단일 커플링으로 수행되었다. 커플링 단계의 종결 시점에서, 펩티딜-수지는 N-말단 Boc 보호 기를 제거하기 위해 트리플루오르아세트산 (TFA)으로 처리되었다. 수지는 이후, 디메틸포름아미드 (DMF)로 반복적으로 세척되고, 그리고 이러한 반복 사이클은 원하는 횟수의 커플링 단계 동안 반복되었다. Boc 아미노산과 HBTU는 Midwest Biotech (Fishers, IN)로부터 구입되었다. 일반적인 측쇄 보호 기가 이용되었다: Arg(Tos), Asn(Xan), Asp(OcHex), Cys(pMeBzl), His(Bom), Lys(2Cl-Z), Ser(OBzl), Thr(OBzl), Tyr(2Br-Z), 그리고 Trp(CHO). Boc-Glu(OFm)-OH 및 Boc-Lys(Fmoc)-OH (Chem-Impex, Wood dale, IL)가 락탐-가교 형성 부위에 이용되었다.
펩티드의 조립후, Fmoc 보호된 측쇄는 20% 피페리딘 처리를 이용하여 탈보호되었다. 락탐화 (lactamization)를 위해, Glu와 Lys에 대한 직교 보호 기 (orthogonal protecting group)가 선택되었다 (가령, Glu(Fm), Lys(Fmoc)). 보호 기의 제거 이후 및 HF 절단 이전에, 고리화가 기존 문헌에서 기술된 바와 같이 수행되었다 (예로써, 국제 특허 출원 공개공보 번호 제WO2008/101017호를 참고한다). 펩티딜-수지의 HF 처리
펩티딜-수지는 p-크레졸과 디메틸 황화물의 존재에서 무수물 HF로 처리되었는데, 이것은 전형적으로, 대략 350 mg (약 50% 수율)의 가공되지 않은 탈보호된-펩티드를 산출하였다. 구체적으로, 펩티딜-수지 (30 mg 내지 200 mg)는 절단을 위해 수소 플루오르화물 (HF) 반응 용기에 배치되었다. 이후, 500 ㎕의 p-크레졸이 카르보 양이온 스캐빈저로서 용기에 첨가되었다. 용기는 HF 시스템에 부착되고 메탄올/드라이아이스 혼합물에 가라앉혀졌다. 용기는 진공 펌프로 비워지고, 그리고 10 mL의 HF가 반응 용기 내로 증류되었다. 펩티딜-수지와 HF의 이러한 반응 혼합물은 0℃에서 1시간 동안 교반되고, 그 이후 진공이 확립되고 HF가 빠르게 제거되었다 (10-15분). 용기는 조심스럽게 제거되고, 그리고 펩티드를 침전시키고 HF 처리로부터 발생하는 p-크레졸과 소형 분자 유기 보호 기를 추출하기 위해 대략 35 mL의 에테르로 채워졌다. 이러한 혼합물은 Teflon 필터를 이용하여 여과되고 모든 과잉의 크레졸을 제거하기 위해 2회 반복되었다. 이러한 여과액은 폐기되었다. 침전된 펩티드는 대략 20 mL의 10% 아세트산 (aq)에서 용해되었다. 원하는 펩티드를 내포하는 이러한 여과액은 수집되고 동결 건조되었다.
가공되지 않은 용해된 펩티드의 분석적 HPLC 분석이 하기 조건 하에 수행되었다 [4.6 X 30 mm Xterra C8, 1.50 mL/분, 220 nm, A 완충액 0.1% TFA/10% 아세토니트릴 (CH3CN), B 완충액 0.1% TFA/100% CH3CN, 15분에 걸쳐 농도 구배 5-95%B]. 추출물은 물로 2배 희석되고 2.2 X 25 cm Vydac C4 예비 역상 칼럼 위에 적재되고 Waters HPLC 시스템 (0.1% TFA/10% CH3CN의 완충액, 0.1% TFA/10% CH3CN의 B 완충액 및 15.00 mL/분의 유속에서 120분에 걸쳐 0-100% B의 농도 구배)에서 아세토니트릴 농도 구배를 이용하여 용리되었다. 정제된 펩티드의 HPLC 분석은 95% 초과의 순도를 증명하였고, 펩티드의 동일성을 확증하기 위해 전기분무 이온화 질량 분석이 이용되었다.
Fmoc-화학 전략을 이용한 전반적인 펩티드 합성 프로토콜:
펩티드는 DIC/HOBT를 커플링 시약으로서 이용하여, Rink MBHA 아미드 수지 또는 시초 아미노산 부착된 Wang 수지 (Novabiochem, San Diego, CA)에서 표준 Fmoc 화학을 이용한 ABI 433A 자동화 펩티드 합성장치에서 합성되었다. Nα-Fmoc [N-(9-플루오레닐)메톡시카르보닐] 아미노산의 측쇄 보호 기는 하기와 같았다: Arg, Pmc; Asp, OtBu; Cys, Trt; Gln, Trt; His, Trt; Lys, Boc; Ser, tBu, Tyr, tBu; 그리고 Trp, Boc (Pmc = 2,2,5,7,8-펜타메틸초만-6-설포닐, OtBu = tert-부틸 에스테르, Trt = 트리틸, Boc = tert-부틸옥시카르보닐, 그리고 tBu = tert-부틸 에스테르). Fmoc-Glu(O-2-PhiPr)-OH와 Fmoc-Lys(Mmt)-OH (Novabiochem, San Diego, CA)는 락탐-가교 형성 부위에 통합되었다.
고형 상 합성후, Glu 상에서 2-페닐이소프로필 (2-PhiPr) 기 및 Lys 상에 4-메톡시트리틸 (Mmt) 기는 펩티딜 수지를 통해 1%TFA/DCM을 부어넣음으로써 제거되었다. 락탐-가교 형성을 위해, 통상적으로 150mg (0.5mmole, 5-배) BEPBT가 10% DIEA/DMF에 첨가되고, 그리고 닌히드린 검사가 음성이 될 때까지 2 내지 4시간 동안 반응되었다.
펩티드는 85% TFA, 5% 페놀, 5% 물과 5% 티오아니솔을 내포하는 절단 칵테일로 수지로부터 절단되었다 (펩티드가 시스테인을 내포할 때 2.5% EDT가 첨가되었다). 가공되지 않은 펩티드는 에테르에서 침전되고, 원심분리되고, 그리고 동결 건조되었다. 펩티드는 이후, 분석적 HPLC에 의해 분석되고 ESI 또는 MALDI-TOF 질량 분석법에 의해 조사되었다. 펩티드는 일반적인 HPLC 정제 절차에 의해 정제되었다.
펩티드 아실화
아실화된 펩티드는 하기와 같이 준비되었다. 펩티드는 CS Bio 4886 펩티드 합성장치 또는 Applied Biosystems 430A 펩티드 합성장치를 이용하여 고형 서포트 수지에서 합성되었다. 원 위치(in situ) 중화 화학은 Schnolzer et al., Int. J. Peptide Protein Res. 40: 180-193 (1992)에서 기술된 바와 같이 이용되었다. 아실화된 펩티드의 경우에, 아실화되는 표적 아미노산 잔기 (가령, 위치 10, 서열 번호: 1601의 아미노산 위치 넘버링에 비하여)은 Nε-FMOC 리신 잔기로 치환되었다. 30분 동안 DMF에서 20% 피페리딘으로 완결된 N-말단 BOC 보호된 펩티드의 처리는 FMOC/포르밀 기를 제거하였다. 유리 ε-아미노 Lys 잔기에 커플링은 DMF/디이소프로필에틸아민 (DIEA)에서 10-배 몰 과잉의 FMOC-보호된 스페이서 아미노산 (가령, FMOC-Glu-OtBu) 또는 아실 사슬 (가령, CH3(CH2)14-COOH) 및 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오르포스페이트 (PyBOP), N,N' 디이소프로필카르보디이미드 (DIC), 또는 DEPBT 커플링 시약을 반응시킴으로써 달성되었다. 스페이서 아미노산의 FMOC 기의 차후 제거는 아실 사슬과의 커플링의 반복이 뒤따랐다. 100% TFA로 최종 처리는 임의의 측쇄 보호 기 및 N-말단 BOC 기의 제거를 결과하였다. 펩티드 수지는 5% DIEA/DMF로 중화되고, 건조되고, 이후 0℃에서 1시간 동안 HF/p-크레졸, 95:5를 이용하여 서포트로부터 절단되었다. 에테르 추출후, 5% 아세트산 (HOAc) 용액은 가공되지 않은 펩티드를 용매화시키는데 이용되었다. 용액의 샘플은 이후, ESI-MS에 의해 정확한 분자량 펩티드를 내포하는 것으로 확인되었다. 정확한 펩티드는 100% CH3CN에서 10% CH3CN/0.1% TFA 내지 0.1% TFA의 선형 농도 구배를 이용한 역상 (RP) HPLC에 의해 정제되었다. Vydac C18 22 mm x 250 mm 단백질 칼럼이 정제에 이용되었다. 아실화된 펩티드 접합체는 일반적으로, 20:80의 완충액 비율로 용리를 완결하였다. 부분들은 함께 모아지고 분석 RP-HPLC에서 순도에 대해 조사되었다. 순수한 분획물은 동결 건조되어 백색의 고형 펩티드가 산출되었다.
펩티드가 락탐 가교 및 아실화되는 표적 잔기를 포함하면, 펩티드 중추에 아미노산의 첨가 시에 아실화가 앞서 기술된 바와 같이 수행되었다.
티오에테르 연쇄를 형성하기 위한 펩티드 페길화
펩티드 페길화를 위해, 40 kDa 메톡시 폴리(에틸렌 글리콜) 요오도아세트아미드는 펩티드와 PEG 둘 모두를 투명한 용액 내로 용해시키는데 필요한 용매의 최소량 (일반적으로, 2 내지 3 mg 펩티드를 이용한 반응의 경우에 2 mL 미만)을 이용하여, 7M 요소, 50 mM Tris-HCl 완충액에서 몰 당량의 펩티드와 반응되었다. 실온에서 활발한 교반은 4 내지 6시간 동안 시작되고, 그리고 반응은 분석적 RP-HPLC에 의해 분석되었다. 페길화된 산물은 감소된 체류 시간을 갖는 출발 물질과 상이하게 나타났다. 정제는 최초 펩티드 정제에 이용된 것들과 유사한 조건에서 Vydac C4 칼럼에서 수행되었다. 용리는 대략 50:50의 완충액 비율에서 발생하였다. 순수한 페길화된 펩티드의 분획물은 확인되고 동결 건조되었다. 수율은 50% 초과이고, 반응마다 변하였다.
말레이미도 연쇄를 형성하기 위한 펩티드 페길화
펩티드 페길화를 위해, 시스테인을 내포하는 펩티드는 인산염 완충된 염수 (5- 내지 0 mg/mL)에서 용해되고 0.01 M 에틸렌디아민 테트라아세트산이 첨가되었다 (총 부피의 10-15%). 과잉 (2-배)의 말레이미도 메톡시PEG 시약 (Dow)이 첨가되고, 그리고 반응물은 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 반응 진행을 모니터링하면서 실온에서 교반되었다. 8-24시간 후, 반응 혼합물은 산성화되고, 그리고 농도 구배 양식으로 0.1% 테트라플루오르아세트산 (TFA)/아세토니트릴을 이용한 정제를 위해 예비 역상 칼럼 위에 적재되었다. 적절한 분획물은 합동되고 동결 건조되어 원하는 페길화된 유도체가 제공되었다.
질량 분석법을 이용한 분석
질량 스펙트럼 (mass spectrum)은 표준 ESI 이온 공급원을 갖는 Sciex API-III 전기분무 사극 질량 분석기를 이용하여 획득되었다. 이용된 이온화 조건은 하기와 같다: 양성-이온 양식에서 ESI; 이온 분무 전압, 3.9 kV; 오리피스 전위 (orifice potential), 60 V. 이용된 분무와 커튼 가스는 .9 L/분 유속의 질소이었다. 질량 스펙트럼은 단계마다 0.5시간 및 2 msec 거주 시간 (dwell time)에서 600-1800 Thompson으로부터 기록되었다. 샘플 (약 1mg/mL)은 1% 아세트산을 갖는 50% 수성 아세토니트릴에서 용해되고 외부 주사기 펌프에 의해 5 ㎕/분의 속도로 도입되었다.
펩티드가 PBS 용액에서 ESI MS에 의해 분석될 때, 이들은 먼저, 제조업체 (Millipore Corporation, Billerica, MA, millipore.com/catalogue.nsf/docs/C5737에서 월드 와이드 웹의 Millipore 웹사이트를 참고한다)에 의해 제공된 사용설명서에 따라, 0.6 ㎕ C4 수지를 내포하는 ZipTip 고형 상 추출 팁을 이용하여 탈염되었다.
고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 분석:
고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) 및 MALDI 분석을 이용하여 인산염 완충된 염수 (PBS) 완충액 (pH, 7.2)에서 상대적 전환 속도의 근사치를 얻기 위해, 이들 가공되지 않은 펩티드로 예비 분석이 수행되었다. 가공되지 않은 펩티드 샘플은 PBS 완충액에서 1 mg/mL의 농도로 용해되었다. 1 mL의 결과의 용액은 1.5 mL HPLC 바이알에 보관되고, 이것은 이후, 밀봉되고 37℃에서 항온 처리되었다. 100 ㎕의 분취량은 다양한 시간 간격에서 채취되고, 실온으로 냉각되고, HPLC에 의해 분석되었다.
HPLC 분석은 214 nm에서 UV 검출기를 이용한 Beckman System Gold Chromatography 시스템에 의해 수행되었다. HPLC 분석은 150 mm x 4.6 mm C18 Vydac 칼럼에서 수행되었다. 유속은 1 mL/분이었다. 용매 A는 증류수에서 0.1% TFA를 내포하고, 그리고 용매 B는 90% CH3CN에서 0.1% TFA를 내포하였다. 선형 농도 구배가 이용되었다 (15분 동안 40% 내지 70%B). 데이터는 수집되고 Peak Simple Chromatography 소프트웨어를 이용하여 분석되었다.
실시예 2
cAMP를 유도하는 각 펩티드의 능력은 반딧불이 루시페라아제-기초된 리포터 분석평가에서 측정되었다. 유도되는 cAMP 생산은 글루카곤 수용체 또는 GIP 수용체 또는 GLP-1 수용체에 결합하는 글루카곤 단편에 직접적으로 비례한다. 상기 수용체 및 cAMP 반응 요소에 연결된 루시페라아제 유전자로 공동-형질감염된 HEK293 세포가 생물검정에 이용되었다.
이들 세포는 0.25% 소 성장 혈청 (HyClone, Logan, UT)으로 보충된 Dulbecco-변형된 최소 필수 배지 (Invitrogen, Carlsbad, CA)에서 16시간 동안 배양함으로써 혈청-고갈되고, 이후 37℃, 5% CO2에서 96 웰 폴리-D-리신-코팅된 "Biocoat" 플레이트 (BD Biosciences, San Jose, CA)에서 5시간 동안 글루카곤 단편의 일련의 희석액과 함께 배양되었다. 배양의 종결 시점에서, 100 ㎕의 LucLite 발광 기질 시약 (Perkin Elmer, Wellesley, MA)이 각 웰에 첨가되었다. 플레이트는 짧게 진탕되고, 어둠에서 10분 동안 배양되고, 그리고 밝음 출력 (light output)이 MicroBeta-1450 액체 섬광 계수기 (Perkin-Elmer, Wellesley, MA)에서 측정되었다. 효과적인 50% 농도 (EC50) 및 저해 50% 농도 (IC50)는 Origin 소프트웨어 (OriginLab, Northampton, MA)를 이용하여 계산되었다. 모든 EC50과 IC50은 달리 지시되지 않으면, 하기 실시예에서 nM로 보고된다.
실시예 3: GLP-1/에스트로겐(3-에테르)의 제조
GLP-1 유사체는 Boc-Lys(Fmoc)-OH 잔기를 C-말단으로 하여, 실시예 1에서 개시된 Boc 프로토콜을 이용하여 합성되었다 (리신 잔기 상에서 측쇄 아민을 보호하는 Fmoc 기는 산물 4의 첨가에 앞서 30분 동안 20% 피페르딘/DMF로 제거되었다). 에스트라디올 17-아세테이트는 3-위치에서, 에틸 2-브로모아세트산과의 반응에 의해 유도체화되었다. 유도체화된 에스트라디올은 가수분해되고 GLP-1 유사체의 C-말단 리신과 반응되어 하기에 도시된 바와 같은 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 산출되었다:
Figure pct00094
구체적으로, 등몰량의 에스트라디올 17-아세테이트 (1) 및 에틸 2-브로모아세테이트 (2)은 디옥산/K2CO3에 용해되고, 그리고 반응물은 환류 조건 하에 16시간 동안 교반되었다. 반응 용매는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (3)은 디옥산에 재현탁되었다. NaOH (1N)가 천천히 첨가되고 2시간 동안 교반되었다. 반응 용매는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (4)은 3회 세척되고 디클로로메탄에서 재현탁되었다. 산물을 산성화시키기 위해 HCl (1N)이 천천히 첨가되었다. 산물 4 및 수지-결합된 펩티드는 HOBt/DIC/NMP에서 4시간 동안 혼합되고, 여과되고, 트리플루오르아세트산으로 처리되고, 그리고 플루오루화수소산으로 처리에 의해 수지로부터 절단되었다. 펩티드-에스트로겐 접합체는 역상 HPLC를 이용하여 정제되고 ESI 질량 분석법에 의해 특성화되었다.
실시예 4: GLP-1/에스트로겐(17-카바메이트)의 제조
GLP-1 유사체는 Boc-Lys(Fmoc)-OH 잔기를 C-말단으로 하여, 실시예 1에서 개시된 Boc 프로토콜을 이용하여 합성되었다 (리신 잔기 상에서 측쇄 아민을 보호하는 Fmoc 기는 에스트로겐 유도체의 접합에 앞서 30분 동안 20% 피페르딘/DMF로 제거되었다). β-에스트라디올 3-벤조에이트는 17-위치에서, 4-니트로페닐 클로로포르메이트와의 반응에 의해 유도체화되었다. 유도체화된 에스트라디올은 GLP-1 유사체의 C-말단 리신과 반응되어 하기에 도시된 바와 같은 GLP-1/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 산출되었다:
Figure pct00095
구체적으로, β-에스트라디올 3-벤조에이트 (1) 및 2-배 과잉의 4-니트로페닐 클로로포르메이트 (2)는 환류 조건 하에 24시간 동안 피리딘, 톨루엔, 그리고 DMAP에서 함께 교반되었다. 반응 용매는 진공에서 증발되고, 그리고 산물, β-에스트라디올 17-니트로페닐 에스테르 3-벤조에이트 (3)는 에틸 아세테이트에서 재현탁되었다. 반응 산물은 수성 HCl (0.01N)로 2회 세척되고, 그 이후에 물로 1회 세척되었다. 에틸 아세테이트는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (3)은 헥산으로 침전되었다. 산물 3 및 수지-결합된 펩티드는 NMP/5% DIEA에서 4시간 동안 혼합되고, 여과되고, TFA로 처리되고, 그리고 HF 처리에 의해 수지로부터 절단되었다. 펩티드-에스트로겐 접합체는 역상 HPLC를 이용하여 정제되고 ESI 질량 분석법에 의해 특성화되었다.
실시예 5: GLP-1/에스트로겐(17-에스테르)의 제조
GLP-1 유사체는 Boc-Lys(Fmoc)-OH 잔기를 C-말단으로 하여, 실시예 1에서 개시된 Boc 프로토콜을 이용하여 합성되었다 (리신 잔기 상에서 측쇄 아민을 보호하는 Fmoc 기는 에스트로겐 유도체의 접합에 앞서 30분 동안 20% 피페르딘/DMF로 제거되었다). 에스트라디올은 17-위치에서, 숙신산 무수물과의 반응에 의해 유도체화되었다. 유도체화된 에스트라디올은 GLP-1 유사체의 C-말단 리신과 반응되어 하기에 도시된 바와 같은 GLP-1/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 산출되었다:
Figure pct00096
구체적으로, β-에스트라디올 17-아세테이트 (1) 및 10-배 과잉의 숙신산 무수물 (2)은 실온에서 48시간 동안, 5% DIEA와 DMAP를 포함하는 DMF에서 함께 교반되었다. 48시간 후, 반응 용매는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (3)은 에틸 아세테이트에서 재현탁되었다. 반응 산물 (3)은 수성 HCl (0.01N)로 2회 세척되고, 그 이후에 물로 1회 세척되었다. 에틸 아세테이트는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (3)은 MeOH/아세토니트릴/물의 혼합물에서 재현탁되었다. 에스트로겐 유도체 산물 (3)은 역상 HPLC에 의해 정제되었다. 동결 건조된 산물 (3) 및 수지-결합된 펩티드는 HOBt/DIC/NMP에서 4시간 동안 혼합되고, 여과되고, TFA로 처리되고, 그리고 HF 처리에 의해 수지로부터 절단되었다. 펩티드-에스트로겐 접합체는 역상 HPLC를 이용하여 정제되고 ESI 질량 분석법에 의해 특성화되었다.
실시예 6: GLP-1/에스트로겐(3-에스테르)의 제조
GLP-1 유사체는 Boc-Lys(Fmoc)-OH 잔기를 C-말단으로 하여, 실시예 1에서 개시된 Boc 프로토콜을 이용하여 합성되었다 (리신 잔기 상에서 측쇄 아민을 보호하는 Fmoc 기는 에스트로겐 유도체의 접합에 앞서 30분 동안 20% 피페르딘/DMF로 제거되었다). 에스트라디올 17-아세테이트는 3-위치에서, 숙신산 무수물과의 반응에 의해 유도체화되었다. 유도체화된 에스트라디올은 GLP-1 유사체의 C-말단 리신과 반응되어 하기에 도시된 바와 같은 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 산출되었다:
Figure pct00097
구체적으로, β-에스트라디올 17-아세테이트 (1) 및 10-배 과잉의 숙신산 무수물 (2)은 실온에서 48시간 동안, 5% DIEA와 DMAP를 포함하는 DMF에서 함께 교반되었다. 48시간 후, 반응 용매는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (3)은 에틸 아세테이트에서 재현탁되었다. 반응 산물 (3)은 수성 HCl (0.01N)로 2회 세척되고, 그 이후에 물로 1회 세척되었다. 에틸 아세테이트는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (3)은 MeOH/아세토니트릴/물의 혼합물에서 재현탁되었다. 에스트로겐 유도체 산물 (3)은 역상 HPLC에 의해 정제되었다. 동결 건조된 산물 (3) 및 수지-결합된 펩티드는 HOBt/DIC/NMP에서 4시간 동안 혼합되고, 여과되고, TFA로 처리되고, 그리고 HF 처리에 의해 수지로부터 절단되었다. 펩티드-에스트로겐 접합체는 역상 HPLC를 이용하여 정제되고 ESI 질량 분석법에 의해 특성화되었다.
실시예 7: GLP-1/에스트론(3-에스테르)의 제조
GLP-1 유사체는 Boc-Lys(Fmoc)-OH 잔기를 C-말단으로 하여, 실시예 1에서 개시된 Boc 프로토콜을 이용하여 합성되었다 (리신 잔기 상에서 측쇄 아민을 보호하는 Fmoc 기는 에스트로겐 유도체의 접합에 앞서 30분 동안 20% 피페르딘/DMF로 제거되었다). 에스트론은 3-위치에서, 숙신산 무수물과의 반응에 의해 유도체화되었다. 유도체화된 에스트론은 GLP-1 유사체의 C-말단 리신과 반응되어 하기에 도시된 바와 같은 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체가 산출되었다:
Figure pct00098
구체적으로, 에스트론 (1) 및 10-배 과잉의 숙신산 무수물 (2)은 실온에서 48시간 동안, 5% DIEA와 DMAP를 포함하는 DMF에서 함께 교반되었다. 48시간 후, 반응 용매는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (3)은 에틸 아세테이트에서 재현탁되었다. 반응 산물 (3)은 수성 HCl (0.01N)로 2회 세척되고, 그 이후에 물로 1회 세척되었다. 에틸 아세테이트는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (3)은 MeOH/아세토니트릴/물의 혼합물에서 재현탁되었다. 에스트론 유도체 산물 (3)은 역상 HPLC에 의해 정제되었다. 동결 건조된 산물 (3) 및 수지-결합된 펩티드는 HOBt/DIC/NMP에서 4시간 동안 혼합되고, 여과되고, TFA로 처리되고, 그리고 HF 처리에 의해 수지로부터 절단되었다. 펩티드-에스트로겐 접합체는 역상 HPLC를 이용하여 정제되고 ESI 질량 분석법에 의해 특성화되었다.
실시예 8: GLP-1/에스트로겐(17-히드라존)의 제조
GLP-1 유사체는 실시예 1에서 개시된 Boc 프로토콜을 이용하여 합성되었다. 상기 펩티드는 에스트로겐의 첨가를 용이하게 하기 위해 Boc-Cys(4-MeBzl)-OH 잔기를 C-말단으로 하는 Boc-기초된 원 위치 중화 화학을 이용하여 합성되었다. 에스트론은 17-위치에서, 말레이미도카프로산 히드라지드와의 반응에 의해 유도체화되었다. 유도체화된 에스트론은 GLP-1 유사체의 C-말단 시스테인과 반응되어 하기에 도시된 바와 같은 GLP-1/에스트라디올(17-히드라존) 접합체가 산출되었다:
Figure pct00099
구체적으로, 등몰량의 에스트론 (1) 및 ε-말레이미도카프로산 히드라지드 (2)는 실온에서 4시간 동안, 0.1% TFA를 포함하는 MeOH에서 함께 교반되었다. 4시간 후, 반응 용매는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (3)은 차가운 에테르에서 침전되고 실리카 칼럼에서 정제되었다. 5-배 과잉의 산물 (3)은 펩티드-에스트로겐 접합체를 산출하기 위해 실온에서 24시간 동안, pH 7.5에서 DMF, ACN, Tris, 그리고 물의 혼합물에서 절단되고 정제된 펩티드와 혼합되었다. 펩티드-에스트로겐 접합체는 역상 HPLC를 이용하여 정제되고 ESI 질량 분석법에 의해 특성화되었다.
실시예 9: GLP-1/에스트로겐(17-카바메이트 이황화물) (방해됨 및 방해되지 않음)의 제조
GLP-1 유사체는 실시예 1에서 개시된 Boc 프로토콜을 이용하여 합성되었다. 상기 펩티드는 에스트로겐의 첨가를 용이하게 하기 위해 Boc-Cys(4-MeBzl)-OH 잔기 (방해되지 않은 이황화물 접합체를 산출) 또는 Boc-Pen(4-MeBzl)-OH 잔기 (방해된 이황화물 접합체를 산출)를 C-말단으로 하는 Boc-기초된 원 위치 중화 화학을 이용하여 합성된다. β-에스트라디올 3-벤조에이트는 17-위치에서, 4-니트로페닐 클로로포르메이트와의 반응에 의해 유도체화된다. 상기 중간물질은 이후, 피리딜디티오-에틸아민-HCl과 반응되고 GLP-1 유사체의 C-말단 시스테인과의 이황화물 교환 반응에 종속되어 하기에 도시된 바와 같은 GLP-1/에스트라디올(17-카바메이트 이황화물) 접합체가 산출된다:
Figure pct00100
먼저, 등몰량의 Aldrithiol-2 (1) 및 2-메르캅토에틸아민 HCl (2)은 실온에서 48시간 동안, 2% AcOH를 포함하는 MeOH에서 함께 교반되었다. 48시간 후, 반응 용매는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (3)은 차가운 에테르에서 침전되었다. 둘째, β-에스트라디올 3-벤조에이트 (4) 및 2-배 과잉의 4-니트로페닐 클로로포르메이트 (5)는 환류 조건 하에 4시간 동안, 피리딘, 톨루엔, 그리고 DMAP에서 함께 교반되었다. 반응 용매는 진공에서 증발되고, 그리고 산물, β-에스트라디올 17-니트로페닐 에스테르 3-벤조에이트 (6)는 에틸 아세테이트에서 재현탁되었다. 이러한 반응 산물은 수성 HCl (0.01N)로 2회 세척되고, 그 이후에 물로 1회 세척되고, 이것은 분별 깔때기에서 제거되었다. 에틸 아세테이트는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (6)은 헥산으로 침전되었다.
Figure pct00101
등몰량의 피리딜디티오-에틸아민 HCl (3) 및 β-에스트라디올 17-니트로페닐 에스테르 3-벤조에이트 (6)는 실온에서 48시간 동안, 5% DIEA와 DMAP를 포함하는 피리딘에서 함께 교반되었다. 48시간 후, 반응 용매는 진공에서 증발되고, 그리고 산물 (7)은 에틸 아세테이트에서 재현탁되었다. 이러한 반응 산물은 수성 HCl (0.01N)로 2회 세척되고, 그 이후에 물로 1회 세척되고, 그리고 에틸 아세테이트는 진공에서 증발되었다. 산물 (7)에서 3-벤조에이트 기는 산물 β-에스트라디올 17-카바메이트 S-S-NPy (8)을 산출하기 위해 실온에서 3시간 동안 디옥산과 메탄올에서 0.25% K2CO3으로 처리에 의해 제거되었고. 이것은 실리카 칼럼에서 정제되었다. 5-배 과잉의 산물 8은 펩티드-에스트로겐 접합체를 산출하기 위해 실온에서 48시간 동안 pH 7.5에서 NMP와 Tris에서, 절단되고 정제된 펩티드 (위치 40에서 시스테인 잔기 또는 페니실라민 잔기 보유)와 혼합되었다. 펩티드-에스트로겐 접합체는 역상 HPLC를 이용하여 정제되고 ESI 질량 분석법에 의해 특성화되었다.
실시예 10: GLP-1/에스트로겐(17-카텝신 디아미노에탄)의 제조
GLP-1 유사체는 실시예 1에서 개시된 Boc 프로토콜을 이용하여 합성되었다. 상기 펩티드는 디펩티드 스페이서와 에스트로겐의 첨가를 용이하게 하기 위해 Z-His(BOM)-OH 잔기를 N-말단으로, 그리고 Boc-Lys(Fmoc)-OH를 C-말단으로 하는 Boc-기초된 원 위치 중화 화학을 이용하여 합성되었다. β-에스트라디올 17-니트로페닐 에스테르 벤조에이트는 17-위치에서 유도체화되어 하기에 도시된 바와 같은 GLP-1/에스트라디올(17- 카텝신 디아미노에탄) 접합체가 산출되었다:
Figure pct00102
Fmoc-Phy-Lys(Cl-Z)-OH (1)는 Wang 수지에서 Fmoc-기초된 원 위치 중화 화학을 이용하여 합성되고, 그리고 TFA/DCM으로 수지로부터 절단되었다. 등몰량의 Fmoc-Phe-Lys(Cl-Z)-OH (1) 및 Boc-에틸렌디아민 (2)은 실온에서 4시간 동안 HOBt, DIC, 그리고 DCM에서 함께 교반되었다. 이러한 반응 산물은 수성 HCl (0.01N)로 2회 세척되고, 그 이후에 물로 1회 세척되고, 이것은 분별 깔때기에서 제거되고, 그리고 에틸 아세테이트는 진공에서 증발되었다. 세척 단계후, 반응 산물은 N-말단 Fmoc 기를 제거하여 NH2-Phe-Lys(Cl-Z)-EDA-Boc (3)를 산출하기 위해 30분 동안 DMF에서 20% 피페르딘으로 처리되고, 이것은 진공에서 피페르딘/DMF 용매의 제거후 차가운 에테르에서 침전되었다. NH2-Phe-Lys(Cl-Z)-EDA-Boc (3)는 실온에서 16시간 동안 DMF, 5% DIEA, 그리고 DMAP에서 2-배 과잉의 숙신산 무수물 (4)과 함께 교반되고, 그 이후 반응 용매는 진공에서 증발되고 MeOH, 아세토니트릴, 그리고 물에서 재현탁되었다. 반응 산물, 헤미숙시네이트-Phe-Lys(Cl-Z)-EDA-Boc (5)는 역상 HPLC에 의해 정제되었다. 5-배 과잉의 동결 건조된 산물 (5) 및 수지-결합된 펩티드는 HOBt/DIC/NMP에서 16시간 동안 혼합되고, 여과되고, 그리고 TFA로 처리되어 산물 GLP-1 + 헤미숙시네이트-Phe-Lys(Cl-Z)-EDA (6)가 산출되었다. 이러한 수지-결합된 산물 (6)은 NMP/5% DIEA에서 16시간 동안 5-배 과잉의 β-에스트라디올 17-니트로페닐 에스테르 3-벤조에이트 (7)와 혼합되고, 여과되고, 그리고 HF 처리에 의해 수지로부터 절단되어 최종 산물 (8)이 산출되었다. 펩티드-에스트로겐 접합체는 역상 HPLC를 이용하여 정제되고 ESI 질량 분석법에 의해 특성화되었다.
실시예 11: GLP-1/콜레스테롤(3-아미드)의 제조
GLP-1 유사체는 실시예 1에서 개시된 Boc 프로토콜을 이용하여 합성되었다. 상기 펩티드는 Boc-Lys(Fmoc)-OH 잔기를 C-말단으로 하는 Boc-기초된 원 위치 중화 화학을 이용하여 합성되었다. 콜레스테롤 3-카르복실산은 GLP-1 유사체의 C-말단 리신과 반응되어 하기에 도시된 바와 같은 GLP-1/콜레스테롤(3-아미드) 접합체가 산출된다:
Figure pct00103
구체적으로, 콜레스테롤 3-카르복실산 (1) 및 수지-결합된 펩티드는 HOBt/DIC/NMP에서 16시간 동안 혼합되고, 여과되고, TFA로 처리되고, 그리고 HF 처리에 의해 수지로부터 절단되었다. 리신 잔기 상에서 측쇄 아민을 보호하는 Fmoc 기는 산물 4의 첨가에 앞서 30분 동안 20% 피페르딘/DMF로 제거되었다. 펩티드-콜레스테롤 접합체 (2)는 역상 HPLC를 이용하여 정제되고 ESI 질량 분석법에 의해 특성화되었다. 펩티드 중추가 페길화되면, 시스테인 잔기가 PEG 모이어티의 첨가를 용이하게 하기 위해 서열 내에 위치 24에 부가되고, 이것은 pH 8.5에서 1시간 동안 등몰량의 요오드아세틸 40k PEG를 7M 요소/0.05 M Tris 완충액에서 접합체와 혼합함으로써 펩티드-콜레스테롤 접합체에 첨가되었다.
실시예 12: 에스트로겐 수용체 결합 분석평가
정제된 ERα & 미공 필터 플레이트를 이용한 포스포이미저 프로토콜
에스트로겐 수용체 결합 분석평가를 수행하기 위해 하기 시약이 이용되었다: 리간드 결합 완충액 (pH 7.6), 50 mM HEPES-나트륨 염, 1 mM CaCl2, 5 mM MgCl2, 0.5% BSA, 수크로오스 쿠션 (pH 7.6), 20% 수크로오스, 120 mM NaCl, 40 mM Tris-HCl, 0.4% BSA, 폴리에틸렌이민 (PEI), 그리고 0.25% PEI.
" 차가운" 에스트라디올의 적정
최대 요망 검사 농도보다 5-배 높은 농도에서 차가운 에스트라디올의 스톡 희석액 (stock dilution)이 제조되었다. 최대 검사 농도는 10 μM이다. 따라서 50 μM의 스톡은 500 ㎕의 총 부피로 제조되었다. 정확하게 40 ㎕의 결합 완충액이 칼럼 11과 12를 제외하고, 적정 플레이트의 각 웰에 첨가되었다. 정확하게 60 ㎕의 스톡 농도가 적정 플레이트의 칼럼 11의 각 웰에 첨가되었다. 3-배 적정은 칼럼 11에서 20 ㎕를 칼럼 10으로 이전하고 혼합함으로써 수행되었다. 칼럼 1까지 각 후속 칼럼이 적정되었다. 정확하게 20 ㎕가 적정 플레이트의 각 웰에서부터 검사 플레이트에서 상응하는 웰로 이전되었다. 정확하게 20 ㎕의 결합 완충액이 총 결합 웰 (웰 12(A-D))에 첨가되었다. 정확하게 20 ㎕의 100 μM의 차가운 에스트라디올이 비-특이적 결합 웰 (웰 12(E-H))에 첨가되었다.
" 뜨거운" 에스트라디올의 불변 농도
표지된 에스트라디올의 스톡 용액은 0.05 nM인 요망 검사 농도보다 5-배 높은 농도로 제조되었다. 따라서 0.25 nM 표지된 에스트라디올의 스톡은 최소한 2.3 mL의 총 부피로 제조되었다. 표지된 에스트라디올은 10 uCi에서 100 ㎕의 부피에서 용해 상태로 나타나고, 이것은 2200 Ci/mmol의 전환을 이용한 45.45 nM의 농도에 상관한다. 2.3 mL의 0.25 nM 스톡의 경우에, 12.65 ㎕의 표지된 에스트라디올이 2.29 ml의 결합 완충액에 첨가되었다. 정확하게 20 ㎕의 스톡 용액이 설계에 따라 검사 플레이트의 각 웰에 첨가되었다.
정제된 에스트로겐 수용체 알파의 적정
정제된 에스트로겐 수용체는 1.5 nM의 농도에서 조사되었다. 60 ㎕의 에스트로겐 수용체가 각 웰에 첨가되기 때문에, 1.667배 높은 스톡 농도가 준비되었다. 1.5 nM의 검사 농도의 경우에, 2.5 nM의 스톡 농도가 준비되었다. 7.0 mL 부피의 2.5 nM 수용체는 8.4 ㎕의 스톡을 6.99 mL의 결합 완충액에 첨가함으로써 준비되었다. 정확하게 60 ㎕의 수용체가 이후, 검사 플레이트 내에 적절한 웰에 이전되었다.
분석평가
검사 플레이트 (차가운 리간드, 뜨거운 리간드, 그리고 세포 용해물을 내포)는 실온에서 2시간 동안 항온 처리되었다. 정확하게 25 ㎕의 0.25% PEI가 필터 플레이트의 각 웰에 첨가되었다. 필터 플레이트는 웰을 진공으로 청소하기에 앞서 20분 동안 항온 처리되었다. 검사 플레이트 내에 정확하게 80 ㎕의 현탁액이 PEI-코팅된 필터 플레이트에 이전되었다. 이들 샘플은 진공 매니폴드 (vacuum manifold)를 이용하여 필터 플레이트를 통해 진공 청소되었다. 필터 플레이트는 결합 완충액으로 수회 세척되고, 이후 셀로판으로 싸였다. 이들 플레이트는 웰 바닥이 스크린에 가장 가깝도록, 형광체-이미징 스크린의 표면에서 고정되었다. 형광체-이미징 스크린 및 플레이트는 방사성 필름 백 (radio film bag)에 배치되고 48시간 동안 노출되었다. 이미징 스크린은 포스포이미저를 이용하여 주사(走査)되고, 그리고 노출 파일 (exposure file)은 수집되었다.
실시예 13
생쥐 (db/db, N = 6, 평균 최초 체중 = 54 g)는 4주 동안 하루 1회, 운반제 또는 40 또는 400 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1(Aib2A22CexK40) (400 ㎍/kg-일),
(b) GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) (40 ㎍/kg-일), 또는
(c) GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) (400 ㎍/kg-일).
체중이 23일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다 (도 2a). 높은 복용량의 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 GLP-1 단독이 투여된 생쥐보다 체중에서 더욱 큰 감소를 경험하였다.
23일의 기간에 걸쳐 누적 음식물 섭취에 대한 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체의 효과 역시 결정되었다. 높은 복용량의 GLP-1(17-에스테르)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 GLP-1 단독이 투여된 생쥐보다 적은 음식물을 소비하였다.
도 2b와 2c에서는 혈당 수준 (mg/dL)에 대한 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체의 효과를 도시한다. 높은 복용량의 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 제0일 내지 제14일 사이에 혈당 수준에서 최대 감소를 경험하였다.
실시예 14. GLP-1/에스트로겐 접합체의 생체내 효과
식이-유도된 비만 (DIO) 생쥐 (N = 8, 군당 6마리 생쥐, 평균 최초 체중 = 58 g)는 4주 동안 하루 1회, 운반제 또는 4, 40, 또는 400 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1(Aib2E16CexK40) (40 ㎍/kg-일),
(b) GLP-1(Aib2A22CexK40) (400 ㎍/kg-일), 또는
(c) GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) (4, 40, 또는 400 ㎍/kg-일).
25% (v/v) 글루코오스를 포함하는 염수 용액이 제7일과 제21일에 0분 시점에서 1.5 g/체중 kg의 복용량으로 주사되었다. 혈당은 제7일과 제21일에 0, 15, 30, 60, 그리고 120분 시점에 측정되었다 (도 3a).
체중이 23일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화, 체지방량에서 변화, 그리고 제지방근육량에서 변화가 결정되었다 (도 3b-d). 높은 복용량의 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 체중과 체지방량에서 최대 감소, 그리고 제지방근육량 상실의 최소량을 경험하였다.
23일의 기간에 걸쳐 누적 음식물 섭취에 대한 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체의 효과 역시 결정되었다. 높은 복용량의 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르)이 투여된 생쥐는 최소량의 음식물을 소비하였다.
도 3e에서는 혈당 변화에 대한 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체의 효과를 도시한다. 높은 복용량의 GLP-1(Aib2A22CexK40)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 제0일 내지 제14일 사이에 혈당 수준에서 최대 감소를 경험하였다. 이들 결과는 에스트로겐을 약한 A22-기초된 GLP-1 작동약에 부가하는 것의 추가된 복용량 의존성 효능을 증명한다.
실시예 15.
식이-유도된 비만 (DIO) 생쥐 (N = 8, 평균 최초 체중 = 59 g)는 4주 동안 하루 1회, 운반제 또는 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1(Aib2E16Cex K40) (40 또는 400 ㎍/kg-일),
(b) GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(17-에스테르) (40 또는 400 ㎍/kg-일), 또는
(c) GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(3-에테르) (40 또는 400 ㎍/kg-일).
25% (v/v) 글루코오스를 포함하는 염수 용액이 제14일에 0분 시점에서 1.5 g/체중 kg의 복용량으로 주사되었다. 혈당 수준은 0, 15, 30, 60, 그리고 120분 시점에서 측정되었다. 도 4a는 이러한 실험으로부터 데이터를 도시한다.
체중이 21일후 측정되고, 그리고 총 체중과 체지방량에서 변화가 결정되었다 (도 4b-c). 높은 복용량의 GLP-1/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 총 체중에서 최대 감소를 경험하였다 (도 4b). 체지방량은 운반제-치료된 동물에 비하여 높은 복용량 에스트로겐 에테르 접합체에서 감소되었다 (도 4c). 에스테르 접합체는 에테르 접합체보다 총 체중에 대한 더욱 큰 효과를 나타냈고, 그리고 에테르 접합체는 에스테르 접합체보다 체지방량에 대한 더욱 큰 효과를 나타냈다.
21일의 기간에 걸쳐 누적 음식물 섭취에 대한 GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐 접합체의 효과 역시 결정되었다. GLP-1/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 GLP-1(Aib2E16Cex K40) 단독이 투여된 생쥐보다 적은 음식물을 소비하였다.
도 4d에서는 혈당 수준 (mg/dL)에 대한 GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐 접합체의 효과를 도시한다. 높은 복용량에서, 어느 한쪽 GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 GLP-1(Aib2E16Cex K40) 단독이 투여된 생쥐보다 제0일 내지 제21일 사이에 혈당 수준에서 더욱 큰 변화를 경험하였다.
실시예 16.
9개월 동안 당뇨병 식이를 받은 생쥐 (N = 8, 11개월령, 평균 체중 60 g)는 운반제 또는 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1(Aib2E16Cex K40) (40 또는 400 ㎍/kg/day),
(b) GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(3-에테르) (40 또는 400 ㎍/kg-일),
(c) dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에테르) (40 또는 400 ㎍/kg-일),
(d) GLP-1(Aib2E16C24(PEG-40kDa)Cex K40)/에스트로겐 (3-에테르) (40, 400 ㎍/kg-일),
(e) GLP-1(Aib2E16C24(PEG-40kDa)Cex K40)/에스트로겐 (3-에테르) (40 ㎍/kg-주), 또는
(f) GLP-1(Aib2E16C24(PEG-40kDa)Cex K40) (40 ㎍/kg-주).
체중이 7일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다 (도 5a). 높은 복용량의 GLP-1/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 체중에서 최대 감소를 경험하지만, GLP-1/에스트로겐 접합체의 낮은 일일 복용량이 투여된 생쥐 역시 체중에서 유의미한 감소를 경험하였다.
7일의 기간에 걸쳐 누적 음식물 섭취에 대한 GLP-1(Aib2E16K40Cex)/에스트로겐(3-에테르), dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에테르), 그리고 GLP-1(Aib2E16C24(PEG-40kDa)Cex K40)/에스트로겐 (3-에테르) 접합체의 효과 역시 결정되었다. 높은 또는 낮은 복용량의 GLP-1(Aib2E16K40Cex)/에스트로겐(3-에테르)과 GLP-1(Aib2E16K40Cex), 또는 낮은 일일 복용량의 GLP-1(Aib2E16C24(PEG-40kDa)Cex K40)가 투여된 생쥐는 최소량의 음식물을 소비하였다.
도 5b에서는 혈당 수준 (mg/dL)에 대한 GLP-1(Aib2E16K40Cex)/에스트로겐(3-에테르), dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에테르), 그리고 GLP-1(Aib2E16C24(PEG-40kDa)Cex K40)/에스트로겐 (3-에테르) 접합체의 효과를 도시한다. 높은 또는 낮은 복용량의 GLP-1(Aib2E16K40Cex)이 투여된 생쥐는 높은 복용량의 GLP-1(Aib2E16K40Cex)/에스트로겐(3-에테르)이 투여된 생쥐와 함께, 혈당에서 최대 변화를 경험하였다.
실시예 17.
식이-유도된 비만 (DIO) 생쥐 (N = 8, 평균 최초 체중 = 65 g)는 1주 동안 하루 1회, 운반제 또는 40 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1(Aib2E16Cex K40),
(b) dGLP-1(A1Aib2A22 Cex K40),
(c) GLP-1(Aib2A22 Cex K40),
(d) GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(3-에테르),
(e) dGLP-1(A1Aib2A22 Cex K40)/에스트로겐(3-에테르),
(f) GLP-1(Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에테르),
(g) GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(17-에스테르)
(h) dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(17-에스테르), 또는
(i) GLP-1(Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(17-에스테르).
체중이 7일후 측정되고, 그리고 체중과 체지방량에서 변화가 결정되었다 (도 6a-b). 어느 한쪽 에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 총 체중에서 최대 감소를 경험하였다. 체지방량 (도 6b)의 분석은 체중에서 총 손실과 상대적으로 일정하였다.
도 6c에서는 혈당 (mg/dL)에서 변화에 대한 GLP-1/에스트로겐 접합체의 효과를 도시한다. GLP-1(Aib2E16K40Cex)/에스트로겐(3-에테르) 또는 GLP-1(Aib2E16K40Cex)/에스트로겐(17-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 제0일 내지 제7일 사이에 혈당에서 최대 변화를 경험하였다.
실시예 18.
9개월 동안 당뇨병 식이를 받은 생쥐 (N = 8, 11개월령, 평균 체중 60 g)는 1주 동안 하루 1회, 운반제 또는 400 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1(Aib2E16Cex K40),
(b) GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(3-에테르),
(c) GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(17-에스테르),
(d) dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40),
(e) dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에테르),
(f) dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(17-에스테르),
(g) GLP-1(Aib2A22Cex K40),
(h) GLP-1(Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에테르), 또는
(i) GLP-1(Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(17-에스테르)
체중이 7일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다 (도 7a). GLP-1(Aib2A22Cex K40)/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 총 체중에서 최대 감소를 경험하였다. GLP-1/에스트로겐 접합체는 에스트로겐에 접합되지 않은 상응하는 GLP-1 펩티드보다 생체내에서 더욱 큰 체중 감소를 보였다.
7일의 기간에 걸쳐 누적 음식물 섭취에 대한 GLP-1/에스트로겐 접합체의 효과 역시 결정되었다. GLP-1(Aib2A22Cex K40)/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 최소량의 음식물을 소비하였다.
도 7b에서는 혈당 (mg/dL)에서 변화에 대한 GLP-1/에스트로겐 접합체의 효과를 도시한다. GLP-1(Aib2A22Cex K40)/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 제0일 내지 제7일 사이에 혈당에서 최대 변화를 경험하였다.
A22 또는 d-아미노산 내포 펩티드 중에서 어느 것도 GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐 접합체에 비하여 높은 저하를 나타내지 않았다. 부가적으로, GLP-1(Aib2E16Cex K40)의 에스트로겐 접합체는 동일한 펩티드의 비-에스트로겐 형태보다 명확하게 더욱 효과적이었다.
실시예 19.
생쥐 (N = 8, 평균 체중 55 g)는 1주 동안 하루 1회, 운반제 또는 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1(Aib2E16Cex K40) (120 또는 400 ㎍/kg-일),
(b) GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(3-에스테르) (120 또는 400 ㎍/kg-일),
(c) dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40) (400 또는 1200 ㎍/kg-일), 또는
(d) dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에스테르) (400 또는 1200 ㎍/kg-일).
d-아미노산 내포 펩티드는 효능의 모든 적도에서, l-아미노산 내포 펩티드보다 명백하게 열등하였다. 체중이 7일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다 (도 8a). 이들 복용량에서 에스트로겐을 포함하는 펩티드 및 에스트로겐이 없는 펩티드에 대한 체중 저하에서 명백한 차이가 없었다.
도 8b에서는 혈당 수준 (mg/dL)에서 변화에 대한 다양한 GLP-1/에스트로겐 접합체의 효과를 도시한다. GLP-1(Aib2E16 Cex K40)/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 제0일 내지 제7일 사이에, 에스트로겐이 없는 동일한 펩티드로 치료된 동물보다 훨씬 큰, 생체내 혈당 수준에서 최대 변화를 경험하였다. 이것은 체중에서 차이와 독립적으로, 혈당에서 직접적인 향상을 증명하였다.
도 8c에서는 체지방량에서 변화에 대한 지정된 GLP-1 접합체의 투여의 효과를 보여준다.
실시예 20.
식이 유도된 비만 생쥐 (DIO) (N = 8, 평균 체중 61 g)는 1 또는 2주 동안 하루 1회, 운반제 또는 40, 400, 1200, 또는 4000 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(3-에테르) (40 ㎍/kg-일),
(b) dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40) (4000 ㎍/kg-일),
(c) dGLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에스테르) (400, 1200, 4000 ㎍/kg-일),
(d) GLP-1(Aib2E16C24(PEG-40kDa)Cex K40) (40 ㎍/kg-일),
(e) GLP-1(Aib2E16C24(PEG-40kDa)Cex K40)/에스트로겐(3-에테르) (40 ㎍/kg-일), 또는
(f) GLP-1(Aib2E16C24(PEG-40kDa)Cex K40)/콜레스테롤 (40 ㎍/kg-일).
체중이 7일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다. GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 체중에서 최대 감소 (도 9a) 및 최소량의 체지방량 (도 9b)을 경험하였다.
7일의 기간에 걸쳐 누적 음식물 섭취에 대한 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체의 효과 역시 결정되었다. GLP-1(Aib2E16Cex K40)/에스트로겐(3-에스테르) 접합체 (PEG 없음)가 투여된 생쥐는 GLP-1 단독이 투여된 생쥐보다 훨씬 적은 음식물을 소비하였다.
도 9c에서는 혈당에서 변화에 대한 GLP-1/ 에스트로겐(3-에스테르) 접합체의 효과를 도시한다. d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체에서 명백한 복용량 의존성 글루코오스 저하가 제0일 내지 제7일 사이에 있었고, 그리고 GLP-1 단독이 투여된 생쥐에 비하여 최대 복용량에서 증강되었다 (도 9c).
실시예 21.
당뇨병 식이를 받은 생쥐 (N = 8, 14개월령)는 1주 동안 하루 1회, 운반제 또는 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) d-GLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에스테르) (1200, 4000 ㎍/kg),
(b) d-GLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에테르) (1200, 4000 ㎍/kg), 또는
(c) d-GLP-1(Aib2E16K40Cex) (4000 ㎍/kg),
체중이 7일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다 (도 10a). 생쥐는 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐 접합체가 투여되고, 여기서 에스트로겐은 생체내에서 불안정한 안정된 아미드 또는 에스테르로서 공유 연결되었다. 불안정한 에스테르 접합체로 치료된 동물은 총 체중에서 최대 감소를 경험하였다.
7일의 기간에 걸쳐 누적 음식물 섭취에 대한 GLP-1/에스트로겐 접합체의 효과 역시 결정되었다. 불안정한 에스테르 접합체가 투여된 생쥐는 나머지 접합체가 투여된 생쥐보다 훨씬 적은 음식물을 소비하였다.
혈당 수준 (mg/dL)에서 변화에 대한 GLP-1/에스트로겐 접합체의 효과 역시 결정되었다. 도 10b에서는 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐 에스테르 접합체가 투여된 생쥐가 안정된 에스트로겐 접합체를 갖는 동등한 d-아미노산 내포 펩티드가 투여된 생쥐보다 제0일 내지 제7일 사이에 혈당 수준에서 더욱 큰 변화를 경험한다는 것을 보여준다.
실시예 22. 활성 GLP-1/에스트로겐 접합체의 시험관내 수용체 분석평가
하기 화합물의 연속 희석액이 제조되었다:
(i) 에스트라디올,
(ii) GLP-1,
(iii) 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체,
(iv) 활성, 에스트로겐-불안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체,
(v) 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1/에스트로겐(17-에스테르) 접합체,
(vi) 활성, 준안정한, 산-불안정성 GLP-1/에스트로겐(17-히드라존) 접합체,
(vii) 활성, 준안정한, 티올 환원-불안정성 GLP-1/에스트로겐(17-카바메이트 이황화물) 접합체, 그리고
(viii) 활성, 활성화된 에스트로겐-불안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르, 17-OAc).
GLP-1 활성 (cAMP 유도) - (ii), (iii), 그리고 (iv)의 연속 희석액은 GLP-1 수용체 및 cAMP 반응 요소 (CRE)에 융합된 루시페라아제 유전자로 공동-형질감염된 HEK293 세포와 함께 배양되었다. 발광은 세포 용해 (cell lysis) 및 루시페린과 함께 배양후 측정되었다. 하기 표에 도시된 결과는 에스트로겐에 GLP-1의 접합이 GLP-1 수용체에서 GLP-1의 내재성 활성에 영향을 주지 않는다는 것을 증명한다.
GLP-1 결합 - (ii), (iii), 그리고 (iv)의 연속 희석액은 섬광 측정 (scintillation measurement)에 앞서, GLP-1 수용체 세포 막 추출물, [I125]-GLP-1, 그리고 응집소-코팅된 SPA 구슬과 함께 배양되었다. 하기 표에 도시된 결과는 에스트로겐에 GLP-1의 접합이 GLP-1 수용체에서 GLP-1의 결합에 영향을 주지 않는다는 것을 증명한다.
Figure pct00104
에스트로겐 활성 - (i), (iii), 그리고 (iv)의 연속 희석액은 에스트로겐 반응 요소 (ERE)에 융합된 루시페라아제 유전자로 형질감염된 T47D 세포와 함게 배양되었다. 발광은 세포 용해 (cell lysis) 및 루시페린과 함께 배양후 측정되었다. 하기 표에 도시된 결과는 GLP-1에 에스트로겐의 안정된 부착이 에스트로겐의 세포내 에스트로겐 활성을 유의미하게 감소시키는 반면, 불안정한 접합체가 높은 정도의 세포내 에스트로겐 활성을 나타낸다는 것을 지시한다.
ERα 결합 - (i), (iii), 그리고 (iv)의 연속 희석액은 정제된 ERα 및 [I125]-에스트라디올과 함께 배양되었다. 여과후, 방사성 리간드 결합은 형광체-이미징에 의해 정량되었다. 하기 표에 도시된 결과는 GLP-1에 에스트로겐의 안정된 부착이 에스트로겐 수용체에 결합하는 에스트로겐의 능력을 유의미하게 감소시키는 반면, 불안정한 접합체가 에스트로겐 수용체 결합을 나타낸다는 것을 지시하고, 이것은 생물검정의 조건 하에 에스테르 접합체의 불안정성의 함수이다.
Figure pct00105
GLP-1 활성 (cAMP 유도) - (ii), (iii), (iv), (v), (vi), (vii), 그리고 (viii)의 연속 희석액은 GLP-1 수용체 및 cAMP 반응 요소 (CRE)에 융합된 루시페라아제 유전자로 공동-형질감염된 HEK293 세포와 함께 배양되었다. 발광은 세포 용해 및 루시페린과 함께 배양후 측정되었다. 이들 활성, 준안정한 GLP-1/에스트로겐 접합체는 GLP-1 수용체에서 동등한 활성을 가졌다 (도 11a).
에스트로겐 활성 - (i), (iii), (iv), (v), (vi), (vii), 그리고 (viii)의 연속 희석액은 에스트로겐 반응 요소 (ERE)에 융합된 루시페라아제 유전자로 형질감염된 T47D 세포와 함께 배양되었다. 발광은 세포 용해 및 루시페린과 함께 배양후 측정되었다. 활성, 준안정한 GLP-1/에스트로겐 접합체는 에스트로겐 수용체에서 가변 활성을 가졌다 (도 11b). 이들 활성, 준안정한 접합체가 예로써, 산, 티올, 또는 효소 (가령, 카텝신)로 의도적으로 처리될 때, 준안정한 GLP-1/에스트로겐 접합체는 거의 완전한 에스트로겐 효능이 복원된다. 따라서 활성, 준안정한 GLP-1/에스트로겐 접합체는 공유 접합체로서 감소된 에스트로겐 활성을 나타내고 활성화를 위해 방출이 요구된다.
실시예 23. 비활성 GLP-1/에스트로겐 접합체의 시험관내 수용체 분석평가
하기 화합물의 연속 희석액이 제조되었다:
(i) 비활성 GLP-1,
(ii) 비활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체, 그리고
(iii) 비활성, 에스트로겐-불안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체.
GLP-1 활성 (cAMP 유도) - (i), (ii), 그리고 (iii)의 연속 희석액은 GLP-1 수용체 및 cAMP 반응 요소 (CRE)에 융합된 루시페라아제 유전자로 공동-형질감염된 HEK293 세포와 함께 배양되었다. 발광은 세포 용해 및 루시페린과 함께 배양후 측정되었다. 결과는 하기 표에 도시된다.
Figure pct00106
실시예 24.
식이 유도된 비만 생쥐 (DIO) (N = 8, 평균 체중 51 g)는 2주 동안 하루 1회, 운반제 또는 400 또는 4000 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다 :
(a) d-아미노산 내포 GLP-1(A1Aib2E16K40Cex) (4000 ㎍/kg),
(b) d-아미노산 내포 GLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에스테르) (400, 4000 ㎍/kg), 또는
(c) d-아미노산 내포 GLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐 (3-에테르) (400, 4000 ㎍/kg).
체중이 15일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다. 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 체중에서 최대 감소를 경험하였는데, 이러한 효과는 높은 복용량에서 더욱 현저하였다 (도 12a).
15일의 기간에 걸쳐 누적 음식물 섭취에 대한 비활성 GLP-1과 비활성 GLP-1/에스트로겐 접합체의 효과 역시 결정되었다. 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 비활성 GLP-1 단독 또는 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 훨씬 적은 음식물을 소비하였고, 이러한 효과는 높은 복용량에서 더욱 현저하였다 (도 12b).
도 12c에서는 혈당에서 변화에 대한 비활성 GLP-1과 비활성 d-아미노산 내포 GLP-1/ 에스트로겐 접합체의 효과를 도시한다. 높은 복용량의 비활성 d-아미노산 내포 GLP-1/ 에스트로겐(3-에스테르) 접합체는 제0일 내지 제14일 사이에 혈당을 저하시켰다.
간 무게가 15일후 측정되고, 그리고 간 무게에서 변화가 결정되었다. 에스트로겐-불안정성, 비활성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 에스트로겐-안정된, 비활성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 간 무게에서 더욱 큰 감소를 경험하였다 (도 12d).
자궁 무게가 15일후 측정되고, 그리고 자궁 무게에서 변화가 결정되었다. 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 비활성 GLP-1 단독 또는 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 자궁 무게에서 훨씬 큰 증가를 경험하였다 (도 12e).
실시예 25.
표준 사료 식이를 받은 C57BI/6 생쥐 (N = 8, 평균 체중 19.6 g)는 난소절제되고, 그리고 7일 동안 하루 1회, 운반제 또는 4000 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지로 피하 주사에 앞서, 5일 동안 회복되었다:
(a) GLP-1작동약,
(b) d-아미노산 내포 GLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트론(3-에스테르),
(c) d-아미노산 내포 GLP-1(A1Aib2A22Cex K40)/에스트로겐(3-에테르), 또는
(d) GLP-1작동약/에스트로겐(3-에테르).
생쥐는 연구의 종결 시점에서 희생되고, 그리고 자궁이 수집되고 칭량되었다.
체중이 7일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다. 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 활성, GLP-1 작동약 단독, 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체, 또는 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 체중에서 더욱 큰 감소를 경험하였다 (도 13a). GLP-1 작동약, 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체, 그리고 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 체지방량에서 감소를 나타냈다 (도 13b).
7일의 기간에 걸쳐 누적 음식물 섭취에 대한 GLP-1 접합체의 효과 역시 결정되었다. 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 활성, GLP-1 작동약 단독, 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체, 또는 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 적은 음식물을 소비하였다 (도 13c).
도 13d에서는 혈당에서 변화에 대한 GLP-1 접합체의 효과를 도시한다. 비활성, 에스트로겐-불안정성 비활성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체 또는 활성, 안정된 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 운반제보다 혈당 수준에서 더욱 큰 감소를 경험하였다. 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 혈당 수준에서 감소를 나타내지 않았다.
자궁 무게가 7일후 측정되고, 그리고 자궁 무게에서 변화가 결정되었다. 비활성, 에스트로겐-불안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 GLP-1 단독, 비활성, 에스트로겐-안정성 d-아미노산 내포 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체, 또는 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 자궁 무게에서 훨씬 큰 증가를 경험하였다 (도 13e).
실시예 26.
표준 사료 식이를 받은 생쥐 (N = 8, 평균 체중 19.1 g)는 난소절제되고, 그리고 7일 동안 하루 1회, 운반제 또는 4000 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지로 피하 주사에 앞서, 5일 동안 회복되었다:
(a) GLP-1 작동약/에스트론(3-에스테르),
(b) GLP-1 작동약/에스트로겐(17-카바메이트 이황화물),
(c) GLP-1 작동약/에스트로겐(17-히드라존), 또는
(d) GLP-1 작동약/에스트로겐(17-카텝신).
생쥐는 연구의 종결 시점에서 희생되고, 그리고 자궁이 수집되고 칭량되었다.
체중이 7일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다. 준안정한 GLP-1 작동약/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 활성, GLP-1 작동약 단독 또는 활성, 에스트로겐-불안정성 GLP-1 작동약/에스트론(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 체중과 체지방량에서 더욱 큰 감소를 경험하였다 (도 14a와 14b). 각각, 준안정한 효소-와 산-불안정성 접합체, GLP-1 작동약/에스트로겐(17-카텝신) 및 GLP-1 작동약/에스트로겐(17-히드라존)이 투여된 생쥐는 초기에 체중에서 최대 감소를 갖는 반면, 준안정한 티올 환원-불안정성 접합체, GLP-1 작동약/에스트로겐(17-카바메이트 이황화물)은 7일 연구 기간 동안 체중에서 전체적으로 최대 감소를 나타냈다.
도 14c에서는 혈당에서 변화에 대한 준안정한 GLP-1 접합체의 효과를 도시한다. 각각, 준안정한 티올 환원-과 산-불안정성 접합체, GLP-1 작동약/에스트로겐(17-카바메이트 이황화물) 및 GLP-1 작동약/에스트로겐(17-히드라존)이 투여된 생쥐는 전체 연구 기간 동안, 불안정한 GLP-1 작동약/에스트론(3-에스테르) 접합체보다 혈당 수준에서 더욱 큰 감소를 경험하였다.
자궁 무게가 7일후 측정되고, 그리고 자궁 무게에서 변화가 결정되었다. 에스트로겐-불안정성 GLP-1/에스트론(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐는 준안정한 GLP-1/에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐보다 자궁 무게에서 훨씬 큰 증가를 경험하였다 (도 14d).
실시예 27.
식이 유도된 비만 생쥐는 2주 동안 하루 1회, 운반제 또는 40 또는 400 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1 작동약,
(b) GLP-1작동약/에스트로겐(3-에스테르), 또는
(c) GLP-1작동약/에스트로겐(3-에테르).
체중이 15일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다. 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 활성, GLP-1 작동약 단독 또는 활성, 에스트로겐-불안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 체중에서 훨씬 큰 감소를 경험하였다 (도 15a).
15일의 기간에 걸쳐 누적 음식물 섭취에 대한 활성 GLP-1과 활성 GLP-1/에스트로겐 접합체의 효과 역시 결정되었다. 활성, 에스트로겐-안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 활성, GLP-1 작동약 단독 또는 활성, 에스트로겐-불안정성 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 생쥐보다 훨씬 적은 음식물을 소비하였다 (도 15b).
실시예 28. GLP-1/에스트로겐 접합체의 안정성 분석
펩티드 접합체 (1 mg/mL)는 pH 7.4와 37℃에서 100% 인간 혈장에서 배양되었다. 분취량은 채취되고, 그리고 혈장 단백질은 침전되고 마이크로-원심분리에 의해 제거되었다. 이들 분취량은 실시예 1에서 기술된 바와 같이, HPLC와 MS에 의해 분석되었다. 활성 에스트로겐-안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에테르) 접합체 (가령, 실시예 3)는 72시간에 걸쳐 에스트로겐 방출을 나타내지 않는 반면, 활성 에스트로겐-불안정성 GLP-1/에스트로겐(3-에스테르) 접합체 (가령, 실시예 6)는 3시간 후 실질적인 에스트로겐 방출 및 6시간 내에 완전한 에스트로겐 방출을 보였다 (도 16a). 산-불안정성 접합체, GLP-1/에스트로겐(17-히드라존) (가령, 실시예 7)은 생리학적 pH에서 48시간에 걸쳐 혈장 내에 에스트로겐 방출을 나타내지 않지만, 산 (pH 5.0)에 노출 시에 3시간 내에 에스트로겐을 방출하고, 완전한 에스트로겐 방출이 6시간 내에 발생하였다 (도 16b). 방해되지 않은 티올 환원-불안정성 접합체 (가령, 실시예 9)는 24시간 후 실질적인 에스트로겐 방출 및 48시간 내에 완전한 에스트로겐 방출을 보이는 반면, 방해된 티올 환원-불안정성 접합체, GLP-1/에스트로겐(17-카바메이트 이황화물) (가령, 실시예 9)은 72시간에 걸쳐 혈장 내에 에스트로겐 방출을 나타내지 않았다 (도 16c). 이러한 방해된 티올 환원-불안정성 접합체는 또한, 세포외 농도의 글루타티온 (가령, 15 M)에서 에스트로겐 방출을 나타내지 않지만, 15 mM의 세포내 글루타티온 농도에서 6시간 내에 에스트로겐을 방출하였다 (도 16d). 효소-불안정성 GLP-1/에스트로겐(카텝신) 접합체 (가령, 실시예 10)는 72시간에 걸쳐 혈장 내에 에스트로겐 방출을 나타내지 않았다 (도 16e).
실시예 29.
식이-유도된 비만 생쥐는 7일 동안 하루 1회, 운반제 또는 400 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1 작동약,
(b) GLP-1작동약/에스트로겐(3-에테르),
(c) GIP 작동약,
(d) GIP 작동약/에스트로겐(3-에테르),
(e) 글루카곤 작동약, 또는
(f) 글루카곤 작동약/에스트로겐(3-에테르).
체중이 7일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다 (도 17a). GLP-1작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 체중에서 최대 감소, 그리고 GLP-1 작동약 단독이 투여된 생쥐보다 체중에서 훨씬 큰 감소를 경험하였다. GIP 작동약 단독 및 GIP 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 체중에서 유사한 감소를 보였다. GIP 작동약 및 GIP 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 운반제가 투여된 생쥐보다 체중에서 더욱 큰 감소를 나타냈다. 글루카곤 작동약 단독 및 글루카곤 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 체중에서 유사한 감소를 보였다. 글루카곤 작동약 또는 글루카곤 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐의 체중 감소는 운반제가 투여된 생쥐에서 체중 감소와 유사하였다. 임의의 특정 이론에 한정됨 없이, GLP-1 수용체를 표적하는 펩티드는 에스트로겐을 세포(들)에 표적화시키는 우월한 능력을 보이고, 여기서 이것은 체중에서 유의미한 차이를 만들 수 있다. 본 실험에서, GLP-1 활성 펩티드 (GLP-1 작동약)에 접합체는 GIP 또는 글루카곤 수용체를 일차적으로 표적으로 하는 펩티드 (GIP 작동약 또는 글루카곤 작동약)보다 체중을 감소시키는 것에 대하여 더욱 띄어난 성과를 보였다.
누적 음식물 섭취에 대한 접합체의 효과 역시 결정되었다 (도 17b). GLP-1, GIP, 그리고 글루카곤의 에스트로겐 접합체가 투여된 생쥐는 각각, GLP-1 작동약, GIP 작동약, 또는 글루카곤 작동약이 투여된 생쥐보다 적은 음식물을 소비하였다. GLP-1작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 7일의 기간에 걸쳐 최소량의 음식물을 소비하였다.
혈당에서 변화에 대한 접합체의 효과 역시 결정되었다. GLP-1 작동약 및 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 양쪽 모두 7일에 걸쳐 혈당 수준에서 감소를 보였고, 이러한 감소는 접합체가 투여된 생쥐에서 더욱 컸다. GIP 작동약 및 GIP 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐 역시 7일에 걸쳐 혈당 수준에서 감소를 보였다. 글루카곤 작동약이 투여된 생쥐는 7일에 걸쳐 혈당 수준에서 증가를 보이는 반면, 글루카곤 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 7일에 걸쳐 혈당 수준에서 감소를 보였다 (도 17c).
실시예 30
식이-유도된 비만 야생형 생쥐, 에스트로겐 수용체 베타 녹-아웃 (ERβ KO) 생쥐, 그리고 에스트로겐 수용체 알파 녹-아웃 (ERα KO) 생쥐는 2주 동안 하루 1회, 운반제 또는 400 ㎍/kg의 하기 중에서 한 가지가 피하 주사되었다:
(a) GLP-1 작동약, 또는
(b) GLP-1작동약/에스트로겐(3-에테르).
체중이 14일후 측정되고, 그리고 체중에서 변화가 결정되었다 (도 18a). GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 야생형 생쥐는 운반제 또는 GLP-1 작동약이 투여된 생쥐보다 체중에서 더욱 큰 감소를 보였다. 운반제가 투여된 야생형 생쥐는 2주 기간에 걸쳐 체중에서 약 10% 증가, GLP-1 작동약이 투여될 때 체중에서 약 3% 증가, 그리고 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여될 때 체중에서 약 10% 감소를 보였다. GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 ERα KO 생쥐는 운반제 또는 GLP-1 작동약이 투여될 때보다 체중에서 더욱 큰 감소를 보였다. ERα KO 생쥐는 운반제가 투여될 때 체중에서 변화 없음, GLP-1 작동약이 투여될 때 체중에서 약 10% 감소, 그리고 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여될 때 체중에서 약 20% 감소를 보였다. GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 ERβ KO 생쥐는 GLP-1 작동약이 투여된 생쥐와 유사한 체중 감소를 보였다. ERβ KO 생쥐는 운반제가 투여될 때 체중에서 약 2% 감소, 그리고 GLP-1 작동약 또는 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여될 때 체중에서 약 15% 감소를 보였다. 임의의 특정 이론에 한정됨 없이, 이들 데이터는 ERβ 수용체가 체중의 추가적인 저하를 책임진다는 것을 암시한다. ERβ 수용체가 녹아웃될 때, 생쥐는 GLP-1 작동약 및 GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체 사이에 체중 저하에서 차이를 보이지 않는다.
야생형 생쥐 및 녹-아웃 생쥐에서 누적 음식물 섭취에 대한 GLP-1 접합체의 효과 역시 결정되었다 (도 18b). GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 녹-아웃 생쥐는 최소량의 음식물을 소비하였다.
야생형 생쥐와 녹아웃 생쥐에서 혈당에서 변화에 대한 GLP-1 접합체의 효과 역시 결정되었다. GLP-1 작동약/에스트로겐(3-에스테르) 접합체가 투여된 ERα KO 생쥐는 혈당 수준에서 최대 감소를 보였다 (도 18c).
실시예 31
500 mg/dl의 혈당 수준을 갖는 수컷 db/db 생쥐는 운반제 또는 50 nmol/kg의 하기 중에서 한 가지의 피하 투약되었다:
(a) GLP-1 작동약,
(b) GLP-1작동약/에스트로겐(3-에테르), 또는
(c) GLP-1작동약/에스트로겐(3-에스테르).
GLP-1 작동약이 투여된 생쥐는 48시간에 거쳐 혈당의 최소 효과적 저하 (운반제 제외)를 보이는 반면, 에스트로겐-안정성 GLP-1작동약/에스트로겐(3-에테르) 접합체가 투여된 생쥐는 48시간에 걸쳐 혈당에서 최대 효과적 감소를 보였다 (도 19).
상기 실험의 결과는 I형 당뇨병의 모델인 스트렙토조토신 (STZ)-유도된 당뇨병 모델이 이용될 때 일치하였다.
실시예 32: GLP-1 작동약/덱사메타손 카바메이트-β-알라닌 접합체
이 실시예는 하기 그리고 도 20에서 도시된 바와 같이, 카바메이트-β-알라닌 링커로 GLP-1 작동약에 덱사메타손의 고형 상 커플링을 증명한다.
Figure pct00107
덱사메타손은 피리딘에서 4-니트로페닐 클로로포르메이트와 커플링되어 [21-(4-니트로페닐포르메이트)] 덱사메타손이 산출되었다. [21-(4-니트로페닐포르메이트)] 덱사메타손은 중간 정제 없이 β-알라닌의 tert-부틸 에스테르와 직접적으로 커플링되어 [21-(N-카르보닐-β-알라닌 tert-부틸 에스테르)] 덱사메타손을 얻었다. 이후 [21-(N-카르보닐-β-알라닌 tert-부틸 에스테르)] 덱사메타손은 디클로로메탄 (DCM)에서 70% TFA로 처리되어 [21-(N-카르보닐-β-알라닌)] 덱사메타손을 얻었으며, 이는 508.2 (M+H+)의 분자량을 가졌다 (ESI-MS에 의해 결정됨).
GLP-1 유사체 서열 (HaibEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGGPSSGAPPPSK)로 구성된 펩티딜 수지는 Rink MBHA 아미드 수지를 이용하여 Fmoc-화학에 의해 합성되었다. C-말단 Lys 잔기는 Fmoc-Lys(Mtt)-OH로서 커플링되었다. 1%TFA/Tis/DCM으로 Mtt를 제거한 후, 펩티딜 수지는 DMF/DIEA에서 DEPBT를 이용하여 [21-(N-카르보닐-β-알라닌)] 덱사메타손과 커플링되었다. 펩티드 덱사메타손 접합체는 85%TFA, 5% 페놀, 5% 물과 5% Tis로 구성된 절단-칵테일을 이용하여 수지로부터 절단되었다. 펩티드 접합체는 0.1%TFA/ 아세토니트릴/ 물로 RP-HPLC에 의해 정제되었다. 정제된 GLP-1 유사체 덱사메타손 접합체는 분석적 RP-HPLC에 의해 분석되고 4680.5의 분자량으로 (계산된 MW 4680.0에 상응함), MALDI-TOF 질량 분석법에 의해 특성화되었다. 결과의 펩티드 접합체는 40개 아미노산, 4680의 분자량, 그리고 4.96의 이론적 pI를 가졌다 (하기 그리고 도 21에서 도시됨).
Figure pct00108
실시예 33: GLP-1 작동약/덱사메타손 히드라진 접합체
덱사메타손은 하기 그리고 도 22에서 도시된 바와 같이, 1%TFA/메탄올에서 말레이미도카프로 산 히드라지드 모노하이드로클로라이드과 반응되어 ESI-MS내 600.3 (M-H+)의 분자량의 [3-(말레이미도카프로 산 히드라지드)-일리덴] 덱사메타손을 얻었다.
Figure pct00109
단일 유리 티올을 가진 GLP-1 유사체 서열은 Rink MBHA 아미드 수지 상에서 Fmoc-화학에 의해 합성되었다 (HaibEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGGPSSGAPPPSC). [말레이미도카프로 산 히드라지드-3-일리덴] 덱사메타손 (1.5 배 과잉)으로의 GLP-1 유사체 펩티드의 티올-말레이미도 알킬화는 8까지 pH가 조정된 1M Tris 염기로 50% 아세토니트릴 수성 용액에서 이루어졌다. 펩티드 접합체는 0.1%TFA/ 아세토니트릴/물로 RP-HPLC에 의해 정제되었다. 정제된 GLP-1 유사체 덱사메타손 접합체는 분석적 RP-HPLC에 의해 분석되고 ESI-MS에 의해 특성화되었다. 접합체의 분자량은 4764±1.5이었으며, 이는 계산된 MW 4766.5에 상응한다. 결과의 펩티드 접합체는 하기 그리고 도 23에서 도시된다. 펩티드는 40개 아미노산, 4766의 분자량, 그리고 4.96의 이론적 pI를 가졌다.
Figure pct00110
실시예 34
글루코코르티코이드 수용체에서 실시예 32와 33에서의 펩티드 접합체의 활성은 쥣과 포유류 종양 바이러스 긴 말단 반복-유도된 반딧불이 루시페라아제로 형질감염된 HeLa 세포 (ATCC #CCL-2)의 두 개의 클론을 이용하여 루시페라아제 리포터 유전자 분석평가에서 검사되었다. 결과는 도 24에서 도시된다. 둘 모두의 접합체는 둘 모두의 리포터 클론내 글루코코르티코이드 수용체에서 유의미한 양의 작동약 활성을 가졌지만, 비접합된 덱사메타손의 정도까지는 아니었다. 이 실시예는 덱사메타손이 GLP-1 유사체에 접합될 수 있고 글루코코르티코이드 수용체에서 유의미한 정도의 작동약 활성을 가질 수 있다는 점을 보여준다.
실시예 35: GLP-1 작동약/덱사메타손 카바메이트 접합체
이 실시예는 아래 도시된, 카바메이트 링커로 GLP-1 작동약 펩티드에 덱사메타손의 고형 상 커플링을 증명한다.
Figure pct00111
덱사메타손은 실온에서 2시간 내에 촉매성 DMAP로 피리딘내 4-니트로페닐 클로로포르메이트와 커플링되어 [21-(4-니트로페닐포르메이트)] 덱사메타손이 산출되었다. [21-(4-니트로페닐포르메이트)] 덱사메타손은 정제 없이 펩티딜 수지와 직접적으로 커플링되었다.
GLP-1 유사체 서열 (HaibEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGGPSSGAPPPSK)로 구성된 펩티딜 수지는 Rink MBHA 아미드 수지를 이용하여 Fmoc-화학에 의해 합성되었다. C-말단 Lys 잔기는 Fmoc-Lys(Mtt)-OH로서 커플링되었다. 1%TFA/Tis/DCM으로 Mtt를 제거한 후, 펩티딜 수지는 약 16시간 동안 피리딘/DMF에서 [21-(4-니트로페닐포르메이트)] 덱사메타손와 커플링되었다. 펩티드 덱사메타손 접합체는 85%TFA, 5% 페놀, 5% 물과 5% Tis로 구성된 절단-칵테일을 이용하여 수지로부터 절단되었다. 펩티드 접합체는 0.1%TFA/ 아세토니트릴/물 용리액으로 RP-HPLC에 의해 정제되었다. 정제된 GLP-1 유사체 덱사메타손 접합체는 분석적 RP-HPLC에 의해 분석되고 MALDI-TOF 질량 분석법에 의해 특성화되었다. 펩티드 접합체는 4608.2의 분자량을 가졌으며, 이는 계산된 MW 4609.0에 상응한다. GLP-1 작동약/덱사메타손 카바메이트 접합체는 하기에 도시된다.
Figure pct00112
실시예 36: GLP-1 작동약/덱사메타손 이황화물 접합체
이 실시예는 아래 도시된 바와 같이, 이황화물 링커를 통해 GLP-1 작동약 펩티드에 덱사메타손을 접합하는 방법을 증명한다.
Figure pct00113
덱사메타손은 피리딘에서 4-니트로페닐 클로로포르메이트와 커플링되어 [21-(4-니트로페닐포르메이트)] 덱사메타손이 산출되었다. [21-(4-니트로페닐포르메이트)] 덱사메타손은 중간 정제 없이 피리딘/DIEA에서 2-(2-피리딜디티오) 에틸아민 염산염과 직접적으로 커플링되어 [21-(N-카르보닐-2-(2-피리딜디티오) 에틸아민] 덱사메타손을 얻었다. 반응 완충액은 10%AcOH/10%ACN으로 희석되고 C8 역-상 칼럼내로 주사되어 0.1%TFA/ 아세토니트릴/물 용매로 산물을 정제하였다. [21-(N-카르보닐-2-(2-피리딜디티오) 에틸아민] 덱사메타손의 정제된 산물은 ESI-MS에 의해 특성화되었다. 산물은 605.22(M+H)+의 분자량을 가졌으며, 이는 계산된 MW 604.75에 상응한다.
단일 유리 티올을 가진 GLP-1 유사체 서열은 Rink MBHA 아미드 수지 상에서 Fmoc-화학에 의해 합성되었다 (HaibEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGGPSSGAPPPSC). 티올 펩티드 및 덱사메타손 중간체 사이에서 이황화물 형성의 절차를 위하여, 티올 펩티드는 8까지 pH가 조정된 1M Tris 염기로 70% 아세토니트릴 수성 용액에서 용해되고, DMF에서 용해된 2-배 과잉의 [21-(N-카르보닐-2-(2-피리딜디티오)에틸아민] 덱사메타손과 혼합되고, 그리고 약 4시간 동안 실온에서 교반되었다. 반응 완충액은 10%AcOH/10%CAN로 희석되고 0.1%TFA/ 아세토니트릴/물 용리액으로 RP-HPLC에 의해 정제되었다. 정제된 GLP-1 유사체 덱사메타손 접합체는 분석적 RP-HPLC에 의해 분석되고 MALDI-TOF 질량 분석법에 의해 특성화되었다. 접합체는 4658.1의 분자량을 가졌으며, 이는 계산된 MW 4658.5에 상응한다.
다른 이황화물 링커 접합체, 가령 [Aib2, E16]GLP-1-CEX-호모Cys40(S-SCH2CH2NHCO-O-DEX) 및 [Aib2, E16]GLP-1-CEX-Pen40(S-SCH2CH2NHCO-O-DEX)는 상기 기술된 바와 같이 합성되었다. 하지만, 단일, 유리 티올을 가진 GLP-1 펩티드를 이용하는 대신에, 위치 40에서 호모시스테인 또는 페니실라민 중 하나를 가진 펩티드가 이용되었다.
3가지 상이한 유형의 이황화물 링커 (시스테인, 페니실라민, 및 호모시스테인)을 가진 예시 GLP-1 작동약/덱사메타손 접합체가 하기에 도시된다.
Figure pct00114
실시예 37
GLP-1 수용체에서 그리고 글루코코르티코이드 수용체에서 실시예 35와 36에서의 펩티드 접합체의 활성은 실시예 34에서 기술된 바와 같이, 쥣과 포유류 종양 바이러스 긴 말단 반복-유도된 반딧불이 루시페라아제로 형질감염된 HeLa 세포 (ATCC #CCL-2)의 두 개의 클론을 이용하여 루시페라아제 리포터 유전자 분석평가에서 검사되었다. 결과는 도 25와 26에서 도시된다.
모든 접합체는 둘 모두의 리포터 클론내 글루코코르티코이드 수용체에서 유의미한 양의 작동약 활성을 가졌지만, 비접합된 덱사메타손의 정도까지는 아니었다. 검사된 접합체 중, [Aib2, E16]GLP-1-CEX-Lys40(NHCO-O-DEX) 접합체가 글루코코르티코이드 수용체에서 가장 큰 양의 활성을 가졌다. Aib2, E16]GLP-1-CEX-호모Cys40(S-SCH2CH2NHCO-O-DEX) 펩티드는 검사된 다른 펩티드와 비교하여 유사한 GLP-1 수용체 작동약 활성을 갖는 것으로 예상된다. 이 실시예는 덱사메타손이 GLP-1 유사체에 접합될 수 있고 글루코코르티코이드 수용체에서 유의미한 정도의 작동약 활성을 가질 수 있다는 점을 보여준다.
SEQUENCE LISTING <110> Richard D. DiMarchi et al. <120> Glucagon Superfamily Peptides Exhibiting Glucocorticoid Receptor Activity <130> 31135/46628A <150> US-61/561,094 <151> 2011-11-17 <160> 1674 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 2 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> Arg, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 2 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Xaa Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 3 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Asp, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 3 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Xaa Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 4 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 4 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 5 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Asp, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 5 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Xaa Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 6 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Asp, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 6 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Xaa Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 7 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 7 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 8 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <400> 8 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 9 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 9 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 10 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <400> 10 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 11 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <400> 11 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 12 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(16) <223> Lactam ring between side chains at position 12 and 16 <400> 12 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 13 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <400> 13 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 14 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(24) <223> Lactam ring between side chains at positions 22 and 24 <400> 14 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 15 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(28) <223> Lactam ring formed between side chains at positions 24 and 28 <400> 15 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Lys Thr 20 25 <210> 16 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(16) <223> Lactam ring between side chains at positions 12 and 16 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(24) <223> Lactam ring between side chains at positions 20 and 24 <400> 16 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 17 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(28) <223> Lactam ring between side chains at positions 24 and 28 <400> 17 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Asp Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Lys Thr 20 25 <210> 18 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <400> 18 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Lys Thr 20 25 <210> 19 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Variable amino acid <400> 19 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Xaa 20 25 30 <210> 20 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln, Lys, Arg, Orn or Citrulline <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Asp or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr or Gly <400> 20 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Xaa Xaa 20 25 <210> 21 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is D-Ser, Ala, Gly, N-methyl Ser or AIB <400> 21 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 22 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <400> 22 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 23 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 23 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Cys Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 24 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 24 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Cys Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 25 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 25 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 26 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids Exendin-4 <400> 26 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide fragment representing the carboxy terminal 8 amino acids of oxyntomodulin <400> 27 Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala 1 5 <210> 28 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 28 Lys Arg Asn Arg 1 <210> 29 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids of Exendin-4 <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <400> 29 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 30 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 30 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 31 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 31 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 32 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 32 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg <210> 33 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, homoglutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Lys or an acidic amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr, Gly or an acidic amino acid <400> 33 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Xaa Xaa 20 25 <210> 34 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Asp or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr or Gly <400> 34 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Xaa Xaa 20 25 <210> 35 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <400> 35 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Cys Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 36 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <400> 36 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 37 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> 2-butyrolactone bound through thiol group of Cys <400> 37 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 38 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Carboxymethyl group bound through thiol group of Cys <400> 38 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 39 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <400> 39 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 40 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Glu or Asp <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Glu or Asp <400> 40 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Xaa Thr 20 25 <210> 41 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation; lactam ring between side chains at positions 12 and 16 <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(16) <223> Lactam ring between side chains at positions 12 and 16 <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Glu or Asp <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Glu or Asp <400> 41 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Xaa Thr 20 25 <210> 42 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation; lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Glu or Asp <400> 42 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Xaa Thr 20 25 <210> 43 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(24) <223> Lactam ring between side chains at positions 20 and 24 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Glu or Asp <400> 43 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Xaa Thr 20 25 <210> 44 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(28) <223> Lactam ring between side chains at positions 24 and 28 <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Glu or Thr <400> 44 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Lys Xaa 20 25 <210> 45 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Lys or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, homoglutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Gln, Glu, Lys, homoglutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln, Glu or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln, Lys or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Lys or an acidic amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr, Gly or an acidic amino acid <400> 45 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Xaa Tyr Leu Xaa Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Xaa Xaa 20 25 <210> 46 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln or Glu <400> 46 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 47 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <400> 47 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 48 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <400> 48 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 49 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <400> 49 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Lys Thr 20 25 <210> 50 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 51 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, homoglutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln, Lys, Arg, Orn, or Citrulline <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Asp, Glu, homoglutamic acid, or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Lys or an acidic amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr, Gly or an acidic amino acid <400> 51 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Xaa Phe Val Xaa Trp Leu Met Xaa Xaa 20 25 <210> 52 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <400> 52 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 53 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Glu, Orn or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, homoglutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Lys or an acidic amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr or an acidic amino acid <400> 53 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Xaa Xaa 20 25 <210> 54 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> Arg or Gln <220> <221> MOD_RES <222> (18)..(18) <223> Arg or Ala <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Asp or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> Val or Ile <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln or Ala <400> 54 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Xaa Xaa Ala Lys Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 55 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> His, D-His, (Des-amino)His, hydroxyl-His, acetyl-His, homo-His or alpha, alpha-dimethyl imidiazole acetic acid (DMIA), N-methyl His, alpha-methyl His, or imidazole acetic acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ser, D-Ser, Ala, D-Ala, Val, Gly, N-methyl Ser, AIB or N-methyl Ala <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Gln, Glu, Orn or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Tyr or Trp <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> Lys, Citrulline, Orn or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid and homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> Arg, Gln, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (18)..(18) <223> Arg, Ala, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln, Lys, Arg, Orn or Citrulline <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Gln, Glu, Asp, Lys, Cys, Orn, homocystein or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> Val or Ile <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Ala, Gln, Glu, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Arg, Citrulline, Orn, Lys or Asp <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr, Gly, Lys, Cys, Orn, homocycsteine or acetyl phenyalanine <400> 55 Xaa Xaa Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Tyr Leu Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 56 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> His, D-His, (Des-amino)His, hydroxyl-His, acetyl-His, homo-His, DMIA, N-methyl His, alpha-methyl His, or imidazole acetic acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ser, D-Ser, Ala, D-Ala, Val, Gly, N-methyl Ser, AIB or N-methyl Ala <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Gln, Glu, Orn or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid and homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln, Lys, Arg, Orn or Citrulline <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Gln, Glu, Asp, Cys, Orn, homocycstein or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> Val or Ile <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Ala, Gln, Glu, Cys, Orn, homocycsteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Lys or Asp <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr, Gly, Lys, Cys, Orn, homocycsteine or acetyl phenyalanine <400> 56 Xaa Xaa Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 57 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> His, D-His, (Des-amino)His, hydroxyl-His, acetyl- His, homo-His, DMIA, N-methyl His, alpha-methyl His, or imidazole acetic acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ser, D-Ser, Ala, D-Ala, Val, Gly, N-methyl Ser, AIB or N-methyl Ala <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Gln, Glu, Orn or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(16) <223> Lactam ring between side changes at position 12 and 16 <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid and homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln, Lys, Arg, Orn or Citrulline <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Gln, Glu, Asp, Cys, Orn, homocycsteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> Val or Ile <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Ala, Gln, Glu, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl Phe <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Lys or Asp <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr, Gly, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <400> 57 Xaa Xaa Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 58 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> His, D-His, (Des-amino)His, hydroxyl-His, acetyl-His, homo-His, DMIA, N-methyl His, alpha-methyl His, or imidazole acetic acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ser, D-Ser, Ala, D-Ala, Val, Gly, N-methyl Ser, AIB or N-methyl Ala <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Gln, Glu, Orn or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Gln, Glu, Asp, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> Val or Ile <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Ala, Gln, Glu, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Lys or Asp <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr, Gly, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <400> 58 Xaa Xaa Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Xaa Phe Xaa Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 59 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> His, D-His, (Des-amino)His, hydroxyl-His, acetyl-His, homo-His, DMIA, N-methyl His, alpha-methyl His, or imidazole acetic acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ser, D-Ser, Ala, D-Ala, Val, Gly, N-methyl Ser, AIB, or N-methyl Ala <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Gln, Glu, Orn or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid and homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(24) <223> Lactam ring between side chains at position 20 and 24 <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Gln, Glu, Asp, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> Val or Ile <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Lys or Asp <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr, Gly, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl pheylalanine <400> 59 Xaa Xaa Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Xaa Phe Xaa Glu Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 60 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> His, D-His, (Des-amino)His, hydroxyl-His, acetyl-His, homo-His, DMIA, N-methyl His, alpha-methyl His, or imidazole acetic acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ser, D-Ser, Ala, D-Ala, Val, Gly, N-methyl Ser, AIB or N-methyl Ala <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Gln, Glu, Orn or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid and homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln, Lys, Arg, Orn, or Citrulline <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Gln, Glu, Asp, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> Val or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(28) <223> Lactam ring between side chains at position 24 and 28 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr, Gly, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <400> 60 Xaa Xaa Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Xaa Phe Xaa Glu Trp Leu Xaa Lys Xaa 20 25 <210> 61 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> positions 30 to 40 are present only if position 29 is Gly; see specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> His, D-His, (Des-amino)His, hydroxyl-His, acetyl-His, homo-His, DMIA, N-methyl His, alpha-methyl His, or imidazole acetic acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ser, D-Ser, Ala, Val, Gly, N-methyl Ser, Aib, N-methyl, Ala or D-Ala <220> <221> MOD_RES <222> (18)..(18) <223> Ala or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Ala, Gln or Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr-CONH2, Cys-PEG, or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Cys-PEG or not present <400> 61 Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Xaa Ala Lys Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Xaa Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 62 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <223> positions 30 to 40 are present only if position 29 is Gly; see specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> His, D-His, (Des-amino)His, hydroxyl-His, acetyl-His, homo-His, DMIA, N-methyl His, alpha-methyl His, or imidazole acetic acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Ser, D-Ser, Ala, Val, Gly, N-methyl Ser, AIB0, N-methyl Ala, or D-Ala <220> <221> MOD_RES <222> (18)..(18) <223> Ala or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Ala, Gln or Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr-CONH2, Cys-PEG, or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Cys-PEG or not present <400> 62 Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Xaa Ala Lys Glu Phe Ile Xaa Trp Leu Met Asn Xaa Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 63 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Asp, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phealanine <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln, Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phealanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met, Leu or Nle <400> 63 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Xaa Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 64 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Asp, Glu, homoglutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Gln or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Gln or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asn, Lys or Asp <400> 64 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Xaa Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Pro Pro Pro Ser 35 <210> 65 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids of Exdendin-4 <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Cys-PEG <400> 65 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 1 5 10 <210> 66 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(16) <223> Lactam ring between side chains at positions 12 and 16 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asp or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr or Gly <400> 66 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Xaa Xaa 20 25 <210> 67 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asp or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr or Gly <400> 67 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Xaa Xaa 20 25 <210> 68 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Glucagon Analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(24) <223> Lactam ring between side chains at positions 20 and 24 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Asp or Asn <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr or Gly <400> 68 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Xaa Xaa 20 25 <210> 69 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(28) <223> Lactam ring between side chains at positions 24 and 28 <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Thr or Gly <400> 69 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Glu Trp Leu Met Lys Xaa 20 25 <210> 70 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <400> 70 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 71 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <400> 71 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 72 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <400> 72 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 73 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(16) <223> Lactam ring between side chains at positions 12 and 16 <400> 73 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 74 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(16) <223> Lactam ring between side chains at positions 12 and 16 <400> 74 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 75 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <400> 75 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Arg Arg Ala Glu Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 76 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <400> 76 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 77 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <400> 77 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 78 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(16) <223> Lactam ring between side chains at positions 12 and 16 <400> 78 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 79 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(16) <223> Lactam ring between side chains at positions 12 and 16 <400> 79 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 80 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains at positions 16 and 20 <400> 80 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Arg Ala Ala Glu Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 81 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <400> 81 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 82 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<223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon E16 K20 K10-W-C16 Cys24-40K <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to Trp residue comprising a C16 fatty acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <400> 541 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 542 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon E16 K20 K10-C16 <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C16 fatty acid <400> 542 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 543 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon E16 K20 K10-C16 <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> 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Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon E16 K20 K10-W-C16 Cys 24-40K <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to Trp residue comprising C16 fatty acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <400> 546 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 547 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon E16 K20 K10-C18 Cys24-40K <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C18 fatty acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <400> 547 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 548 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon E16 K20 K10-C18 Cys24-40K <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to Trp residue comprising a C18 fatty acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <400> 548 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 549 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon E16 K20 K10-C16 amide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to Glu residue comprising a C16 fatty acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <400> 549 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 550 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Chimera 2 truncated by one amino acid <400> 550 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn 20 25 <210> 551 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Chimera 2 truncated by two amino acids <400> 551 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met 20 25 <210> 552 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> aa 1-28, E16 K20 C-terminal amide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <400> 552 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn 20 25 <210> 553 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> aa 1-27 E16 K20 C-terminal amide <220> <221> 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with AIB at 16 <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutyric acid <400> 556 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 557 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutyric acid <400> 557 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 558 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutyric acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to Trp residue comprising a C16 fatty acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <400> 558 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 559 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutric Acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to Trp residue comprising a C16 fatty acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutric Acid <400> 559 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 560 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutyric acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to Trp residue comprising a C16 fatty acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <400> 560 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 561 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutyric acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to Trp residue comprising a C16 fatty acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Aminoisobutyric acid <400> 561 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 562 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutyric acid <400> 562 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 563 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutyric Acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutyric Acid <400> 563 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 564 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutyric Acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via Ala-Ala spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutyric Acid <400> 564 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 565 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutryic Acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu-gamma-Glu spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutryic Acid <400> 565 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 566 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> 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<222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutryic Acid <400> 600 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 601 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutyric Acid <400> 601 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 602 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Methylglutamine <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutyric Acid <400> 602 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 603 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutryic Acid <400> 603 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210> 604 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutyric Acid <400> 604 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Leu Asp Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 605 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutryic Acid <400> 605 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ser Asp Phe Val Ser Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210> 606 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutryic Acid <400> 606 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Thr Asp Phe Val Thr Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210> 607 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <400> 607 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala 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Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is d-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C16 fatty acyl group <400> 614 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 615 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is d-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to a C18 fatty acyl group <400> 615 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 616 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutyric Acid <220> <221> MOD_RES 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to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with a maleimide-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 624 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 625 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Chimera-2 Aib2E16K20lactamC24Mal40KPEG <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of the amino acids at positions 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with a maleimide-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 625 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 626 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Aib2E16K20lactamC24amideMal40KPEG <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with a maleimide-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 626 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 627 <400> 627 000 <210> 628 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Dmia1E16K20lactamC24Mal40KPEG <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with a maleimide-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 628 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 629 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Dmia1E16K20lactamC24Mal40KPEG <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with a maleimide-activated PEG <400> 629 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 630 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Dmia1E16K20lactamC24thioether40KPEG <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at position 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with haloacetyl-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 630 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 631 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Chimera2 Aib2E3C24-Thioether40K PEG <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with haloacetyl-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 631 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 632 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 632 Xaa Ser Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 633 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Aib2Aib16C24K10(rErE-C16) C24PEG40K amide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C14 fatty acyl group via gamma-Glu-gamma-Glu spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with haloacetyl-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 633 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 634 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Aib2Aib16K10(AA-C14)C24PEG40K TE amide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C14 fatty acyl group via Ala-Ala spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with haloacetyl-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 634 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 635 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Aib2Aib16K10(AA-C16) amide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C16 fatty acyl group via Ala-Ala spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 635 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 636 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Aib2Aib16K10(rErE-C16) amide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C16 fatty acyl group via gamma-Glu-gamma-Glu spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 636 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 637 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 637 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 638 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic primer <400> 638 caaggtccag ggaggttgtg 20 <210> 639 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic primer <400> 639 ccaaaggtaa gctgtccata agga 24 <210> 640 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic primer <400> 640 ctctcccaag agtcacatgt cc 22 <210> 641 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic primer <400> 641 caataactcg gtcccctaca ac 22 <210> 642 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 642 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 643 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is d-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu spacer <400> 643 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 644 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is d-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu-gamma-Glu spacer <400> 644 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 645 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu spacer <400> 645 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 646 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu-gamma-Glu spacer <400> 646 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 647 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group <400> 647 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 648 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu-gamma-Glu spacer <400> 648 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 649 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu spacer <400> 649 His Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 650 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu-gamma-Glu spacer <400> 650 His Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 651 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <400> 651 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 652 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu-gamma-Glu spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <400> 652 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 653 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu spacer <400> 653 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Lys 20 25 <210> 654 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu-gamma-Glu spacer <400> 654 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Lys 20 25 <210> 655 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu-gamma-Glu spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 655 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 656 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via gamma-Glu spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 656 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 657 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutryic Acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutryic Acid <400> 657 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 658 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutyric Acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutyric Acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Pegylated <400> 658 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 659 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutryic Acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutryic Acid <400> 659 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 660 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutryic Acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutryic Acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Pegylated <400> 660 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 661 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <400> 661 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 662 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide dS2E16K20K30-C14 Gluc Amide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <400> 662 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys 20 25 30 <210> 663 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide dS2K10(C14)E16K20-Gluc Amide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <400> 663 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 664 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide dS2E16K20K30-C16 Gluc Amide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group <400> 664 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 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Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 667 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C16 fatty acyl group <400> 667 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 668 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to a C18 fatty acyl group <400> 668 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 669 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutryic Acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C14 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutryic Acid <400> 669 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 670 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Aib2Aib16C24K10(rErE-C16) C24PEG40K amide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C14 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with haloacetyl-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 670 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 671 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Aib2Aib16K10(rErE-C16) amide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 671 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 672 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via acidic amino acid spacer <400> 672 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 673 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <400> 673 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 674 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via acidic amino acid spacer <400> 674 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 675 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <400> 675 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 676 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <400> 676 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 677 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via acidic amino acid spacer <400> 677 His Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 678 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <400> 678 His Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 679 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via acidic amino acid spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <400> 679 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 680 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <400> 680 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 681 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via acidic amino acid spacer <400> 681 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Lys 20 25 <210> 682 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Dmia <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids at positions 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <400> 682 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Lys 20 25 <210> 683 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 683 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 684 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> c-term amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via acidic amino acid spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 684 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 685 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> misc_feature <222> (16)..(16) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (20)..(20) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 685 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Gly Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 686 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C16 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 686 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 687 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C14 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 687 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 688 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C18 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 688 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 689 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 689 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 690 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is AIB <400> 690 His Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 691 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 691 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 692 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> 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amidation <400> 694 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Ala Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 695 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 695 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Leu Asp Thr 20 25 <210> 696 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C16 fatty acyl group via gamma-Glu spacer <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 696 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu 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PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> PEGYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 753 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 754 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 754 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 755 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 755 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 756 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C16 fatty acyl group via acidic amino acid spacer <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 756 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 757 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Salt bridge <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(21) <223> Salt bridge <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> PEGYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 757 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 758 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is AIB <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Salt bridge <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(21) <223> Salt bridge <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> PEGYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 758 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 759 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Salt bridge <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(21) <223> Salt bridge <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 759 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 760 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with C16 fatty acyl group via acidic amino acid spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(20) <223> Salt bridge <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is AIB <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(21) <223> Salt bridge <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 760 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Lys Arg Ala Lys Glu Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 761 <400> 761 000 <210> 762 <400> 762 000 <210> 763 <400> 763 000 <210> 764 <400> 764 000 <210> 765 <400> 765 000 <210> 766 <400> 766 000 <210> 767 <400> 767 000 <210> 768 <400> 768 000 <210> 769 <400> 769 000 <210> 770 <400> 770 000 <210> 771 <400> 771 000 <210> 772 <400> 772 000 <210> 773 <400> 773 000 <210> 774 <400> 774 000 <210> 775 <400> 775 000 <210> 776 <400> 776 000 <210> 777 <400> 777 000 <210> 778 <400> 778 000 <210> 779 <400> 779 000 <210> 780 <400> 780 000 <210> 781 <400> 781 000 <210> 782 <400> 782 000 <210> 783 <400> 783 000 <210> 784 <400> 784 000 <210> 785 <400> 785 000 <210> 786 <400> 786 000 <210> 787 <400> 787 000 <210> 788 <400> 788 000 <210> 789 <400> 789 000 <210> 790 <400> 790 000 <210> 791 <400> 791 000 <210> 792 <400> 792 000 <210> 793 <400> 793 000 <210> 794 <400> 794 000 <210> 795 <400> 795 000 <210> 796 <400> 796 000 <210> 797 <400> 797 000 <210> 798 <400> 798 000 <210> 799 <400> 799 000 <210> 800 <400> 800 000 <210> 801 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 801 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 802 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Ser, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 802 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 803 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> Xaa is Arg, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 803 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Xaa Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 804 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Xaa is Asp, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 804 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Xaa Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 805 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Xaa is Gln, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 805 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 806 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Xaa is Asp, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Xaa is Gln, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 806 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Xaa Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 807 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Xaa is Lys, Arg, His, Asp, Glu, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Xaa is Thr, Lys, Arg, His, Asp, Glu, cysteic acid or homocysteic acid <400> 807 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 808 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Xaa is Asp or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Xaa is Thr, Asp or Glu <400> 808 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 809 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Xaa is Asp or Glu <400> 809 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Xaa 20 25 <210> 810 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 810 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 811 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <400> 811 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 812 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Xaa is Lys, Arg or His <400> 812 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Xaa 20 25 <210> 813 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <400> 813 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 814 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Pegylation <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 814 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Cys 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 815 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> Pegylation <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 815 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Cys Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 816 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Pegylation <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 816 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Cys Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 817 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Pegylation <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 817 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 818 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Pegylation <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 818 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Lys Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 819 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Pegylation <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 819 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Lys Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 820 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing carboxy terminal 10 amino acids of Exendin-4 <400> 820 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 821 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the carboxy terminal 8 amino acids of oxyntomodulin <400> 821 Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala 1 5 <210> 822 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the amino 4 amino acids of oxyntomodulin carboxy terminus of SEQ ID NO: 21 <400> 822 Lys Arg Asn Arg 1 <210> 823 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids of Exendin-4 <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> AMIDATION <400> 823 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 824 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <400> 824 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 825 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <400> 825 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 826 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <400> 826 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg <210> 827 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <400> 827 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Cys Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 828 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 828 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 829 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> 2-butyrolactone bound through Cys thiol group <400> 829 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 830 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Carboxymethyl group bound through Cys thiol group <400> 830 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 831 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <400> 831 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 832 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analog <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Xaa is Asp, Glu, Lys, Arg or His <400> 832 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr Xaa 20 25 30 <210> 833 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Xaa is Asn, Lys, Arg, His, Asp or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Xaa is Thr, Lys, Arg, His, Asp or Glu <400> 833 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 834 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Xaa is Asn or an acidic amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Xaa is Thr or an acidic amino acid <400> 834 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 835 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 835 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Glu Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 836 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <400> 836 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Glu Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 837 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <400> 837 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Glu Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg <210> 838 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <400> 838 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Glu Thr 20 25 <210> 839 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Met comprises Z <400> 839 Xaa Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met 20 25 <210> 840 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is alpha, alpha-dimethyl imidiazole acetic acid (DMIA) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Pegylation <400> 840 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 841 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is alpha, alpha-dimethyl imidiazole acetic acid (DMIA) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Glutamine to alanine mutation <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Pegylation <400> 841 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asn Cys 20 25 <210> 842 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is alpha, alpha-dimethyl imidiazole acetic acid (DMIA) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Pegylation <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle or Leu <400> 842 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Xaa Asn Thr 20 25 <210> 843 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is alpha, alpha-dimethyl imidiazole acetic acid (DMIA) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Glutamine to alanine mutation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle or Leu <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Pegylation <400> 843 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asn Cys 20 25 <210> 844 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Ala 24, Nle 27, and Asp 28 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 844 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 845 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Ala 24, Nle27 , Asp 28, and Glu 29 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 845 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 846 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Ala 24, Nle 27, Asp 28, and Glu 30 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 846 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Thr Glu 20 25 30 <210> 847 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Ala 24, Nle 27, Glu 28, and Glu 29 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 847 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Xaa Glu Glu 20 25 <210> 848 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Ala 24, Nle 27, Glu 28, and Glu 30 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 848 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Xaa Glu Thr Glu 20 25 30 <210> 849 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..(27) <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Ala 24, Nle 27, Glu 29, and Glu 30 <400> 849 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asn Glu Glu 20 25 30 <210> 850 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Glu 21, Ala 24, Nle 27, and Asp 28 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 850 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Thr 20 25 <210> 851 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Glu 21, Ala 24, Nle 27, Asp 28, and Glu 29 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 851 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 852 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Glu 21, Ala 24, Nle 27, Asp 28, and Glu 30 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 852 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 853 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO :1 with Ala 20, Glu 21, Ala 24, Nle 27, Glu 28, and Glu 29 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 853 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Glu Glu 20 25 <210> 854 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Glu 21, Ala 24, Nle 27, Glu 28, and Glu 30 <400> 854 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 855 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Ala 20, Glu 21, Ala 24, Nle 27, Glu 29, and Glu 30 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 855 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asn Glu Glu 20 25 30 <210> 856 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> SEQ ID NO: 1 with Thr 16, Ala 20, Glu 21, Ala 24, Nle 27, Asp 28, and Glu29 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 856 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 857 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 857 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 858 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> AMIDATION <400> 858 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 859 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Glutamine analog <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 859 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 860 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Glutamine analog <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutryic acid <400> 860 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 861 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 861 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 862 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetamidomethyl-cysteine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 862 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 863 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synethic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 863 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 864 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Carbamoyldiaminopropanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 864 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 865 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Methylglutamine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 865 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 866 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Methionine sulfoxide <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 866 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 867 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetylornithine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 867 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 868 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutryic acid <400> 868 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 869 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutryic acid <400> 869 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 870 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Methylglutamine <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 870 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 871 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 871 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210> 872 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Aminoisobutryic Acid <220> <221> MOD_RES <222> (39)..(39) <223> AMIDATION <400> 872 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Leu Asp Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 873 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutryric acid <400> 873 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ser Asp Phe Val Ser Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210> 874 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aminoisobutryic acid <400> 874 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Thr Asp Phe Val Thr Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210> 875 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 875 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 876 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 876 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 877 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 877 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 878 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 878 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 879 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is d-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> AMIDATION <400> 879 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys 20 25 30 <210> 880 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is d-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 880 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 881 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is d-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> AMIDATION <400> 881 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys 20 25 30 <210> 882 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is d-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 882 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 883 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutryic Acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C18 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 883 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 884 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Aminoisobutryic Acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Acylated with a C18 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> AMIDATION <400> 884 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr Lys 20 25 30 <210> 885 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Ser or alpha, alpha-disubstituted amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Gln or alpha, alpha-disubstituted amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Xaa is Asp or alpha, alpha-disubstituted amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Xaa is Gln or alpha, alpha-disubstituted amino acid <400> 885 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Xaa Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 886 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 886 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 887 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Xaa is Aib <400> 887 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Xaa Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 888 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <400> 888 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 889 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Xaa is Aib <400> 889 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Xaa Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 890 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Xaa is Aib <400> 890 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 891 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <400> 891 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 892 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Xaa is Aib <400> 892 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 893 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Xaa is Aib <400> 893 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 894 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Xaa is Aib <400> 894 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 895 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 895 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 896 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 896 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 897 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 897 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 898 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via Ala-Ala spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 898 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 899 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 899 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 900 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via beta-Ala-beta-Ala spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 900 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 901 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via 6-aminohexanoic acid spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 901 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 902 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via Leu-Leu spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 902 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 903 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via Pro-Pro spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 903 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 904 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 904 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 905 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 905 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 906 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 906 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 907 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group via Ala-Ala spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 907 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 908 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group via Ala-Ala spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 908 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 909 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via Ala-Ala spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 909 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 910 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys-PEG <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 910 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 911 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 911 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 912 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C14 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 912 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 913 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C14 fatty acyl group via Ala-Ala spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 913 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 914 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covalently bound to C16 fatty acyl group via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 914 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 915 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Covelently bound to C16 fatty acyl group via Ala-Ala spacer <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 915 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 916 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> AMIDATION <400> 916 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys 20 25 30 <210> 917 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 917 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 918 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> AMIDATION <400> 918 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys 20 25 30 <210> 919 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> D-serine, D-alanine, valine, amino n-butyric acid, glycine, N-methyl serine, aminoisobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 919 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 920 <400> 920 000 <210> 921 <400> 921 000 <210> 922 <400> 922 000 <210> 923 <400> 923 000 <210> 924 <400> 924 000 <210> 925 <400> 925 000 <210> 926 <400> 926 000 <210> 927 <400> 927 000 <210> 928 <400> 928 000 <210> 929 <400> 929 000 <210> 930 <400> 930 000 <210> 931 <400> 931 000 <210> 932 <400> 932 000 <210> 933 <400> 933 000 <210> 934 <400> 934 000 <210> 935 <400> 935 000 <210> 936 <400> 936 000 <210> 937 <400> 937 000 <210> 938 <400> 938 000 <210> 939 <400> 939 000 <210> 940 <400> 940 000 <210> 941 <400> 941 000 <210> 942 <400> 942 000 <210> 943 <400> 943 000 <210> 944 <400> 944 000 <210> 945 <400> 945 000 <210> 946 <400> 946 000 <210> 947 <400> 947 000 <210> 948 <400> 948 000 <210> 949 <400> 949 000 <210> 950 <400> 950 000 <210> 951 <400> 951 000 <210> 952 <400> 952 000 <210> 953 <400> 953 000 <210> 954 <400> 954 000 <210> 955 <400> 955 000 <210> 956 <400> 956 000 <210> 957 <400> 957 000 <210> 958 <400> 958 000 <210> 959 <400> 959 000 <210> 960 <400> 960 000 <210> 961 <400> 961 000 <210> 962 <400> 962 000 <210> 963 <400> 963 000 <210> 964 <400> 964 000 <210> 965 <400> 965 000 <210> 966 <400> 966 000 <210> 967 <400> 967 000 <210> 968 <400> 968 000 <210> 969 <400> 969 000 <210> 970 <400> 970 000 <210> 971 <400> 971 000 <210> 972 <400> 972 000 <210> 973 <400> 973 000 <210> 974 <400> 974 000 <210> 975 <400> 975 000 <210> 976 <400> 976 000 <210> 977 <400> 977 000 <210> 978 <400> 978 000 <210> 979 <400> 979 000 <210> 980 <400> 980 000 <210> 981 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<212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30) <223> GLP-1(7-36) amidated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> C-terminal amidation <400> 1003 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 1004 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> mat_peptide <222> (1)..(42) <223> gastric inhibitory polypeptide <400> 1004 Tyr Ala Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Lys 1 5 10 15 Ile His Gln Gln Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Gly Lys 20 25 30 Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr Gln 35 40 <210> 1005 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 61 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20. <400> 1005 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Ile His Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1006 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 62 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20. <400> 1006 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Ile His Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1007 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 63 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(16) <223> Lactam bridge between residues 12 and 16. <400> 1007 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Ile His Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1008 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 66 <400> 1008 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Ile His Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Leu Ala Gln 20 25 <210> 1009 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 68 <400> 1009 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Ile His Gln Glu Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1010 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 69 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1010 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Ile His Gln Glu Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1011 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 84 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1011 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Ile His Gln Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Leu Ala Gln 20 25 <210> 1012 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 85 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> PEG (20kDa) covalently attached to Cysteine <400> 1012 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Ile His Gln Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Leu Ala Gln 20 25 <210> 1013 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 92 <400> 1013 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys His Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Leu Ala Gln 20 25 <210> 1014 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 93 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(21) <223> Lactam bridge between residues 17 and 21 <400> 1014 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Lys His Gln Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Leu Ala Gln 20 25 <210> 1015 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 95 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1015 His Ala Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu 1 5 10 15 Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln 20 25 <210> 1016 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 96 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1016 Tyr Ala Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Glu 1 5 10 15 Ile His Gln Lys Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln 20 25 <210> 1017 <211> 29 <212> PRT <213> 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<223> Analog 158 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1060 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1061 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 162 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1061 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Tyr Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Val Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Ile Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1062 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 163 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1062 Tyr Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1063 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 164 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1063 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1064 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 165 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1064 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1065 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 166 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is d-alanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1065 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1066 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 167 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(20) <223> Lactam bridge between residues 17 and 20 <400> 1066 Tyr Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Glu Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1067 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 168 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(21) <223> Lactam bridge between residues 18 and 21 <400> 1067 Tyr Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Lys Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1068 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 169 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1068 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1069 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 170 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> 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Analog 176 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1073 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1074 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 177 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1074 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1075 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 178 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <400> 1075 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1076 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 179 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <400> 1076 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1077 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 182 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <400> 1077 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1078 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 186 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <400> 1078 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Gly 20 25 <210> 1079 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 191 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <400> 1079 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1080 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 192 <400> 1080 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu 1 5 10 15 Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1081 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 194 <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Aib <400> 1081 Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu Glu 1 5 10 15 Ala Val Arg Leu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser Ser 20 25 30 Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1082 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 197 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(17) <223> Lactam bridge between residues 13 and 17 <400> 1082 Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu Gln Ala Ala 1 5 10 15 Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1083 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 198 <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge between residues 15 and 19 <400> 1083 Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu Gln 1 5 10 15 Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1084 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 199 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1084 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(40)..(40) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <400> 1088 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Xaa Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1089 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 204 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1089 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Arg Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1090 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 205 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <400> 1090 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Arg Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1091 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 206 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1091 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Gly Lys 20 25 30 Lys Asn Trp Leu Lys His Asn Ile Thr Gln Cys 35 40 <210> 1092 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 207 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1092 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Gly Lys 20 25 30 Lys Asn Trp Leu Lys His Asn Ile Thr Gln Cys 35 40 <210> 1093 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 208 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <400> 1093 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Gly Lys 20 25 30 Lys Asn Trp Leu Lys His Asn Ile Thr Gln Cys 35 40 <210> 1094 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Analog 209 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(12) <223> Lactam bridge between residues 9 and 12 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <400> 1094 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1095 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> CEX <400> 1095 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 1096 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is any amino acid <400> 1096 Xaa Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 1097 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 1097 Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala 1 5 <210> 1098 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic 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Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 14 Carbon fatty acyl group covalently attached Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1102 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1103 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 18 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1103 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 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MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1105 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1106 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 18 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1106 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1107 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1107 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1108 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> PEG (40kDa) attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1108 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1109 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1109 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1110 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 1110 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1111 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1111 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe 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attached to Lysine <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> C-terminal amidation <400> 1119 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1120 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> C-terminal amidation <400> 1120 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1121 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Orn <220> <221> MOD_RES 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Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1147 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 3-SH-propionic acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1147 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1148 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 8 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1148 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1149 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1149 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Ser Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1150 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Xaa is 2-aminobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1150 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Xaa Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1151 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 8 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1151 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1152 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 8 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1152 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1153 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1153 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1154 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Xaa is d-Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 14 Carbon fatty acyl group covalently attached to d-Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1154 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1155 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Xaa is d-Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1155 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 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PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Xaa is d-Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1157 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1158 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> 14 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1158 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1159 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1159 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1160 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 14 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> C-terminal amidation <400> 1160 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Cys 35 40 <210> 1161 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> C-terminal amidation <400> 1161 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Cys 35 40 <210> 1162 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> 14 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> C-terminal amidation <400> 1162 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1163 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 14 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> C-terminal amidation <400> 1163 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Cys 35 40 <210> 1164 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> C-terminal amidation <400> 1164 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Cys 35 40 <210> 1165 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 14 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1165 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1166 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 14 Carbon fatty acyl group covalently attached to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1166 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1167 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1167 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1168 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1168 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1169 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(16) <223> Lactam bridge between residues 12 and 16 <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1169 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1170 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 1170 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Lys 1 5 10 <210> 1171 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Gly or a small, aliphatic or non-polar or slightly polar amino acid <400> 1171 Xaa Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Lys 1 5 10 <210> 1172 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Gly or a small, aliphatic or non-polar or slightly polar amino acid <400> 1172 Xaa Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 1 5 10 <210> 1173 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synethic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1173 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1174 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1174 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1175 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1175 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1176 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1176 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1177 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 1177 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1178 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> C-terminal amidation <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <400> 1178 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1179 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> PEG (40kDa) covalently attached to Cysteine <400> 1179 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 1180 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1180 Tyr Ala Pro Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Lys 1 5 10 15 Ile His Gln Gln Asp Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gln Lys Gly Lys 20 25 30 Lys Asn Trp Leu Lys His Asn Ile Thr Gln 35 40 <210> 1181 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalentaly linked to hydrophilic group <400> 1181 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1182 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> misc_feature <222> (29)..(29) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 1182 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Xaa 20 25 <210> 1183 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1183 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1184 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1184 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1185 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Sythetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1185 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1186 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1186 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1187 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1187 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Gly 20 25 <210> 1188 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substitute amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1188 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Val Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1189 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1189 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Xaa Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1190 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1190 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Arg Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1191 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge between residues 16 and 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (43)..(43) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1191 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Lys Gly Lys 20 25 30 Lys Asn Trp Leu Lys His Asn Ile Thr Gln Xaa 35 40 <210> 1192 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1192 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1193 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1193 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1194 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substitute amino acid covalently linked to an acyl or alkyl group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1194 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1195 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to an acyl or alkyl group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1195 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1196 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1196 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1197 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to acyl or alkyl group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> C-terminal amidation <400> 1197 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1198 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Substituted amino acid covalently linked to acyl or alkyl group <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> C-terminal amidation <400> 1198 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1199 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to acyl or alkyl group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1199 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1200 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 1200 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1201 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Substituted amino acid covalently linked to acyl or alkyl group <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 1201 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1202 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic 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Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1205 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1206 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to acyl or alkyl group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1206 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1207 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> 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(2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to acyl or alkyl group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1212 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Cys Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1213 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1213 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly 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acyl or alkyl group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1215 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1216 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1216 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1217 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib 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MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> C-terminal amidation <400> 1220 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa Xaa 35 40 <210> 1221 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> C-terminal amidation <400> 1221 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Xaa 35 40 <210> 1222 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence 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Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Xaa Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1224 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1224 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1225 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1225 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Gln Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1226 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Substituted amino acid covalently linked to hydrophilic group <400> 1226 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 1227 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 1227 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1228 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is D-Ser, D-Ala, Val, Gly, N-Methyl Ser, N-Methyl Ala, or Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Lys, Glu, Ser, Orn, Dab, Aib or any alpha, alpha-disubstituted amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is any alpha, alpha-disubstituted amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Ile, Leu, or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Xaa is Ala or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Xaa is Thr, Ala, or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 1228 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 1229 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 1229 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Leu Ala Gly 20 25 <210> 1230 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is D-Ser, DAla, Val, Gly, N-Methyl Ser, N-Methyl Ala, or Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Lys, Glu, Ser, Orn, Dab, Aib or any alpha, alpha-disubstituted amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is any alpha, alpha-disubstituted amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Ile, Leu, or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Xaa is Ala or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> Xaa is Thr, Ala, or Gly <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 1230 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Xaa Asp Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 1231 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Homodimer <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 14 Carbon fatty acyl group covalently bound to Lysine <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <220> <221> DISULFID <222> (41)..(41) <223> Disulfide bond formed with Cys residue of a second peptide having the same structure. <400> 1231 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Cys 35 40 <210> 1232 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1232 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1233 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1233 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1234 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 16 Carbon fatty acyl group covalently bound to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1234 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1235 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 16 Carbon fatty acyl group covalently bound to Lysine via a dipeptide spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1235 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1236 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 16 Carbon fatty acyl group covalently bound to Lysine via a dipeptide spacer <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1236 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1237 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> 16 Carbon fatty acyl group covalently bound to Lysine via dipeptide spacer <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1237 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1238 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Homodimer <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 14 Carbon fatty acyl group covelently bound to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> C-terminal amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> Cys residue covalently attached to 20 kDa PEG which is in turn covalently attached to a Cys residue of a second peptide having the same structure <400> 1238 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Cys 35 40 <210> 1239 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> homodimer <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> 14 Carbon fatty acyl group covalently bound to Lysine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> PEG (5kDa) covalently bound to Cysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> C-terminal amidation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..(41) <223> Cys residue covalently attached to 5 kDa PEG which is in turn covalently attached to a Cys residue of a second peptide having the same structure <400> 1239 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Lys 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Cys 35 40 <210> 1240 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is a Glutamine analog <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 1240 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 1241 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is a Glutamine analog <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 1241 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 1242 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 1242 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 1243 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetamidomethyl-cysteine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 1243 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 1244 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 1244 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 1245 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is carbamoyldiaminopropanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 1245 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 1246 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Methylglutamine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 1246 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 1247 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Methionine sulfoxide <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 1247 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 1248 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetylornithine <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> Xaa is Nle <400> 1248 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Thr 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Glu Phe Val Ala Trp Leu Xaa Asp Glu 20 25 <210> 1249 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 1249 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 1250 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 1250 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 1251 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Methylglutamine <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 1251 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Met Asp Glu 20 25 <210> 1252 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <400> 1252 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1253 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 1253 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210> 1254 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (39)..(39) <223> C-terminal amidation <400> 1254 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ala Asp Phe Val Ala Trp Leu Leu Asp Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1255 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 1255 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Ser Asp Phe Val Ser Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210> 1256 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is Acetyldiaminobutanoic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <400> 1256 His Ser Xaa Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Arg Arg Ala Thr Asp Phe Val Thr Trp Leu Leu Asp Glu 20 25 <210> 1257 <400> 1257 000 <210> 1258 <400> 1258 000 <210> 1259 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge links Glu16 and Lys20 <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Epsilon amine of Lys is attached to Ala-Ac-Cys(PEG), wherein the Ac-Cys(PEG) is a Cys residue comprising an alpha amino group capped with an acetyl group (CH3CO) and comprising a 40 kDa PEG covalently attached to its side chain <400> 1259 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1260 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge links Glu16 and Lys20 <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Epsilon amine of Lys is attached to Arg-Ac-Cys(PEG), wherein the Ac-Cys(PEG) is a Cys residue comprising an alpha amino group capped with an acetyl group (CH3CO) and comprising a 40 kDa PEG covalently attached to its side chain <400> 1260 Tyr Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1261 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge links Glu16 and Lys20 <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Cys-PEG covalently linked via thioether linkage <400> 1261 Tyr Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1262 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <400> 1262 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1263 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-345 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1263 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1264 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-346 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1264 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1265 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-347 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1265 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1266 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-348 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1266 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1267 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-349 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with haloacetyl-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1267 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1268 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-350 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with haloacetyl-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1268 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1269 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-351 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with haloacetyl-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Acylated with a C14 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1269 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1270 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-352 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether made by reaction of peptide with haloacetyl-activated PEG <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1270 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1271 <400> 1271 000 <210> 1272 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-361 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1272 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1273 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-362 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1273 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Ile Tyr Leu Asp Xaa 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Val Asn Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1274 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-363 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1274 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1275 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> MT-364 <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Aib <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Acylated with a C16 fatty acyl group <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> AMIDATION <400> 1275 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1276 <400> 1276 000 <210> 1277 <400> 1277 000 <210> 1278 <400> 1278 000 <210> 1279 <400> 1279 000 <210> 1280 <400> 1280 000 <210> 1281 <400> 1281 000 <210> 1282 <400> 1282 000 <210> 1283 <400> 1283 000 <210> 1284 <400> 1284 000 <210> 1285 <400> 1285 000 <210> 1286 <400> 1286 000 <210> 1287 <400> 1287 000 <210> 1288 <400> 1288 000 <210> 1289 <400> 1289 000 <210> 1290 <400> 1290 000 <210> 1291 <400> 1291 000 <210> 1292 <400> 1292 000 <210> 1293 <400> 1293 000 <210> 1294 <400> 1294 000 <210> 1295 <400> 1295 000 <210> 1296 <400> 1296 000 <210> 1297 <400> 1297 000 <210> 1298 <400> 1298 000 <210> 1299 <400> 1299 000 <210> 1300 <400> 1300 000 <210> 1301 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1301 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1302 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <400> 1302 Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg 1 5 10 15 Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1303 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <400> 1303 Gln Gly Thr Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg 1 5 10 15 Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1304 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <400> 1304 Gly Thr Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala 1 5 10 15 Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1305 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <400> 1305 Thr Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln 1 5 10 15 Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1306 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa at position 22 is Met, Leu or Nle <400> 1306 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1307 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1307 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1308 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1308 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1309 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1309 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1310 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1310 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Xaa 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1311 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypetide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1311 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1312 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1312 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1313 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1313 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Cys Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1314 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1314 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Cys Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1315 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Pegylated <400> 1315 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Cys 20 <210> 1316 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1316 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Lys Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1317 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1317 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Cys Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Cys Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1318 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1318 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Cys Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1319 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids of Exendin-4 <400> 1319 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 1320 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the carboxy terminal 8 amino acids of oxyntomodulin <400> 1320 Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala 1 5 <210> 1321 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the carboxy 4 amino acids of oxyntomodulin carboxy terminus <400> 1321 Lys Arg Asn Arg 1 <210> 1322 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocycstein or acetyl phenyalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocycstein or acetyl phenyalanine <400> 1322 Phe Thr Ser Arg Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1323 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1323 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Xaa 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1324 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1324 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala 20 25 30 <210> 1325 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1325 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1326 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Pegylation <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1326 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Xaa 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala 20 25 30 <210> 1327 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1327 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Xaa 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr Lys Arg Asn Arg 20 25 <210> 1328 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1328 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr Lys Arg Asn Arg 20 25 <210> 1329 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1329 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1330 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1330 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala 20 25 30 <210> 1331 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1331 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Cys 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr Lys Arg Asn Arg 20 25 <210> 1332 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <400> 1332 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Cys Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1333 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <400> 1333 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1334 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> 2-butyrolactone bound through thiol group of Cysteine <400> 1334 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Cys Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1335 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Carboxymethyl group bound through thiol group of Cysteine <400> 1335 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Cys Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1336 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1336 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1337 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1337 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1338 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1338 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Glu Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1339 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Asp, Glu, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa id Thr, Asp, Glu, cysteic acid or homocysteic acid <400> 1339 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 <210> 1340 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr or an acidic amino acid <400> 1340 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 <210> 1341 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Asp or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr, glu or Asp <400> 1341 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 <210> 1342 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr or an acidic amino acid <400> 1342 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 <210> 1343 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> 20kDa PEG group attached to Xaa at position 11 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr or an acidic amino acid <400> 1343 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Cys Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 <210> 1344 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> 20kDa PEG group attached to Xaa at position 16 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr or an acidic amino acid <400> 1344 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser Arg Arg Ala Gln Cys 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 <210> 1345 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr or an acidic amino acid <400> 1345 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Cys Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 <210> 1346 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocycstein or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (25)..(25) <223> Pegylated <400> 1346 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro 20 25 30 Pro Pro Ser 35 <210> 1347 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> Pegylated <400> 1347 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser Xaa 35 <210> 1348 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <400> 1348 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1349 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met , Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> Pegylated <400> 1349 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser Xaa 35 <210> 1350 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <400> 1350 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1351 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <400> 1351 Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp 1 5 10 15 Leu Met Asn Thr 20 <210> 1352 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Homocysteic acid <400> 1352 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1353 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids of Exendin-4 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <400> 1353 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 1 5 10 <210> 1354 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1354 His Ser Gln Gly Thr Xaa 1 5 <210> 1355 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1355 Ser Gln Gly Thr Xaa 1 5 <210> 1356 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1356 Gln Gly Thr Xaa 1 <210> 1357 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1357 Gly Thr Xaa 1 <210> 1358 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1358 Thr Xaa 1 <210> 1359 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of His, D-histidine, alpha, alpha-dimethyl imidiazole acetic acid (DMIA), N-methyl histidine, alpha-methyl histidine, imidazole acetic acid, desaminohistidine, hydroxyl-histidine, acetyl-histidine and <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from a group consisting of Ser, D-serine, D-alanine, Val, Gly, N-methyl serine, N-methyl alanine, and aminoisobutyric acid (AIB) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1359 Xaa Xaa Xaa Gly Thr Xaa 1 5 <210> 1360 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of Ser, D-serine, D-alanine, Val, Gly, N-methyl serine, N-methyl alanine, and aminoisobutyric acid (AIB) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1360 Xaa Xaa Gly Thr Xaa 1 5 <210> 1361 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu and Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1361 Xaa Gly Thr Xaa 1 <210> 1362 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate optionally replaced with amide <400> 1362 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1363 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate optionally replaced with amide <400> 1363 Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg 1 5 10 15 Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1364 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(5) <223> Threonine in position 4 and phenyl lactic acid in position 5 linked via ester bond <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is phenyl lactic acid <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> Optional C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate optionally replaced with amide <400> 1364 Ser Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg 1 5 10 15 Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1365 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(6) <223> Threonine in position 5 and phenyl lactic acid in position 6 linked via ester bond <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is phenyl lactic acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal alpha carboxylate optionally replaced with amide <400> 1365 His Ser Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1366 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is amino isobutyric acid <400> 1366 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1367 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <400> 1367 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1368 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of His, D-histidine, alpha, alpha-dimethyl imidiazole acetic acid (DMIA), N-methyl histidine, alpha-methyl histidine, imidazole acetic acid, desaminohistidine, hydroxyl-histidine, acetyl-histidine and <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from a group consisting of Ser, D-serine, D-alanine, Val, Gly, N-methyl serine, N-methyl alanine, and aminoisobutyric acid (AIB) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <400> 1368 Xaa Xaa Xaa Thr Gly Phe 1 5 <210> 1369 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of Ser, D-serine, D-alanine, Val, Gly, N-methyl serine, N-methyl alanine, and aminoisobutyric acid (AIB) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <400> 1369 Xaa Xaa Thr Gly Phe 1 5 <210> 1370 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <400> 1370 Xaa Thr Gly Phe 1 <210> 1371 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate optionally replaced with an amide <400> 1371 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1372 <400> 1372 000 <210> 1373 <400> 1373 000 <210> 1374 <400> 1374 000 <210> 1375 <400> 1375 000 <210> 1376 <400> 1376 000 <210> 1377 <400> 1377 000 <210> 1378 <400> 1378 000 <210> 1379 <400> 1379 000 <210> 1380 <400> 1380 000 <210> 1381 <400> 1381 000 <210> 1382 <400> 1382 000 <210> 1383 <400> 1383 000 <210> 1384 <400> 1384 000 <210> 1385 <400> 1385 000 <210> 1386 <400> 1386 000 <210> 1387 <400> 1387 000 <210> 1388 <400> 1388 000 <210> 1389 <400> 1389 000 <210> 1390 <400> 1390 000 <210> 1391 <400> 1391 000 <210> 1392 <400> 1392 000 <210> 1393 <400> 1393 000 <210> 1394 <400> 1394 000 <210> 1395 <400> 1395 000 <210> 1396 <400> 1396 000 <210> 1397 <400> 1397 000 <210> 1398 <400> 1398 000 <210> 1399 <400> 1399 000 <210> 1400 <400> 1400 000 <210> 1401 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1401 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1402 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <400> 1402 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1403 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1403 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 1404 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1404 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 1405 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <400> 1405 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1406 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <400> 1406 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1407 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ser or Glu <400> 1407 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Glu Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1408 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ser or Glu <400> 1408 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Glu Trp Leu Met Lys Thr 20 <210> 1409 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa at position 7 is Lys or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, homoglutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ala, Ser, Glu, Lys, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Gln, Glu or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Ala, Gln, Lys or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Lys or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr or an acidic amino acid <400> 1409 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Xaa Tyr Leu Xaa Xaa Arg Arg Ala Xaa Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Met Xaa Xaa 20 <210> 1410 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ala, Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Gln or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Ala, Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Lys or an acidic amino acid <400> 1410 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Xaa Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Met Xaa Thr 20 <210> 1411 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ala, Ser, Glu, Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Gln or Lys <400> 1411 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Xaa Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1412 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Lys or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Lys, Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1412 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Xaa Xaa 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1413 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Lys or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa is Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (16)..(16) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1413 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Xaa Xaa 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1414 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Lys or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1414 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Xaa Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1415 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ala, Ser, Glu, Lys Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Arg, Gln, Glu or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Ala, Gln, Lys or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Lys or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr or an acidic amino acid <400> 1415 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Xaa Xaa Arg Arg Ala Xaa Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 <210> 1416 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Asp or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1416 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Thr 20 <210> 1417 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Asp or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1417 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Thr 20 <210> 1418 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ser or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connecting residues 15 and 19 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Asp or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1418 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Xaa Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Glu Trp Leu Xaa Xaa Thr 20 <210> 1419 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ser or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(23) <223> Lactam bridge connecting residues 19 and 23 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1419 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Xaa Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Glu Trp Leu Xaa Lys Xaa 20 <210> 1420 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ala, Ser, Glu, Lys Gln, homoglutamic acid or homocysteine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Arg, Gln, Glu or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Ala, Gln, Lys or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Lys, Asp, Glu, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr, Asp, Glu, cysteic acid and homocysteic acid <400> 1420 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Xaa Xaa Arg Arg Ala Xaa Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 <210> 1421 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids of Exendin-4 <400> 1421 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 1422 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid and homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1422 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1423 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid and homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1423 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1424 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid and homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connecting residues 15 and 19 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1424 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Glu Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1425 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid and homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(24) <223> Lactam bridge connecting residues 19 and 24 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <400> 1425 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Glu Trp Leu Xaa Lys Thr 20 <210> 1426 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the carboxy terminal 8 amino acids of oxyntomodulin <400> 1426 Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala 1 5 <210> 1427 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the carboxy 4 amino acids of oxyntomodulin carboxy terminus <400> 1427 Lys Arg Asn Arg 1 <210> 1428 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <400> 1428 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1429 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <400> 1429 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1430 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <400> 1430 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1431 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <400> 1431 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1432 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <400> 1432 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1433 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <400> 1433 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1434 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <400> 1434 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1435 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <400> 1435 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1436 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <400> 1436 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1437 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <400> 1437 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ala Arg Tyr Leu Asp Ala 1 5 10 15 Arg Arg Ala Arg Glu Phe Ile Lys Trp Leu Val Arg Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 1438 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1438 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1439 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1439 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Asn Thr 20 <210> 1440 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <400> 1440 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Cys Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1441 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Analogue <400> 1441 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1442 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> 2-butyrolactone bound through thiol group of Cysteine <400> 1442 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Cys Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1443 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon Analogue <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Carboxymethyl group bound through thiol group of Cysteine <400> 1443 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Cys Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1444 <211> 39 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1444 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Arg Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Arg Asn Thr Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1445 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Lys, Asp, Glu, cysteic acid and homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr, Asp, Glu, cysteic acid and homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> Xaa is Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (25)..(25) <223> Pegylated <400> 1445 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro 20 25 30 Pro Pro Ser 35 <210> 1446 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Lys, Asp, Glu, cysteic acid and homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr, Asp, Glu, cysteic acid and homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Xaa is Cys, Orn, homocysteine or acetyl phenyalanine <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> Pegylated <400> 1446 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Xaa Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser Xaa 35 <210> 1447 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is glutamic acid, homoglutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Asp or Glu <400> 1447 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Thr 20 <210> 1448 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is glutamic acid, homoglutamic acid, cysteic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Asp or Glu <400> 1448 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Lys Tyr Leu Xaa Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Xaa Xaa Thr 20 <210> 1449 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <400> 1449 Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp Phe 1 5 10 15 Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1450 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids of Exendin-4 plus one additional amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is selected form the group consisting of Cys, Orn, Lys, homocysteine and acetyl phenyalanine <400> 1450 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 1 5 10 <210> 1451 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is aspartic acid, glutamic acid, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Lys or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Asp, Glu, cysteic acid, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Ala, Ser, Glu, Lys Gln, homoglutamic acid or homocysteic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Arg, Gln, Glu or Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa is Ala, Gln, Lys or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..(22) <223> Xaa is Met, Leu or Nle <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa is Asn, Lys or an acidic amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is Thr, Gly or an acidic amino acid <400> 1451 Phe Thr Ser Xaa Tyr Ser Xaa Tyr Leu Xaa Xaa Arg Arg Ala Xaa Asp 1 5 10 15 Phe Val Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa 20 <210> 1452 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1452 His Ser Gln Gly Thr Xaa 1 5 <210> 1453 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1453 Ser Gln Gly Thr Xaa 1 5 <210> 1454 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1454 Gln Gly Thr Xaa 1 <210> 1455 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1455 Gly Thr Xaa 1 <210> 1456 <211> 2 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1456 Thr Xaa 1 <210> 1457 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of His, D-histidine, alpha, alpha-dimethyl imidiazole acetic acid (DMIA), N-methyl histidine, alpha-methyl histidine, imidazole acetic acid, desaminohistidine, hydroxyl-histidine, acetyl-histidine and <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from a group consisting of Ser, D-serine, D-alanine, Val, Gly, N-methyl serine, N-methyl alanine, and aminoisobutyric acid (AIB) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1457 Xaa Xaa Xaa Gly Thr Xaa 1 5 <210> 1458 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of Ser, D-serine, D-alanine, Val, Gly, N-methyl serine, N-methyl alanine, and aminoisobutyric acid (AIB) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1458 Xaa Xaa Gly Thr Xaa 1 5 <210> 1459 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is phenyl lactic acid <400> 1459 Xaa Gly Thr Xaa 1 <210> 1460 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1460 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1461 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1461 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1462 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(7) <223> Lactam bridge connecting residues 4 and 7 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1462 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1463 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connecting residues 15 and 19 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1463 Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg 1 5 10 15 Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1464 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(5) <223> Threonine in position 4 and phenyl lactic acid in position 5 are linked via ester bond <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is phenyl lactic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connecting residues 15 and 19 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1464 Ala Glu Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg 1 5 10 15 Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1465 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connecting residues 15 and 19 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1465 Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg 1 5 10 15 Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1466 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(5) <223> Threonine in position 4 and phenyl lactic acid in position 5 are linked via ester bond <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is phenyl lactic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connecting residues 15 and 19 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1466 Ser Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg 1 5 10 15 Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1467 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Covalently linked to a cholesterol acid moiety <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 to 15 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1467 Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1468 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..(25) <223> Covalently linked to a cholesterol acid moiety <220> <221> MOD_RES <222> (25)..(25) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1468 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr Lys 20 25 <210> 1469 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connectiong residues 11 and 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..(35) <223> Covalently linked to a cholesterol acid moiety <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1469 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser Lys 35 <210> 1470 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is amino isobutyric acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(5) <223> Threonine in position 4 and phenyl lactic acid in position 5 are linked via ester bond <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is phenyl lactic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connectiong residues 15 and 19 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1470 Xaa Glu Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg 1 5 10 15 Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1471 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (34)..(34) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1471 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1472 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MOD_RES <222> (34)..(34) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1472 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1473 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (34)..(34) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1473 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1474 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (34)..(34) <223> C-termincal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1474 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1475 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1475 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1476 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1476 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1477 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connecting residues 15 and 19 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1477 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Glu Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1478 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(23) <223> Lactam bridge connecting residues 19 and 23 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1478 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Glu Trp Leu Met Lys Thr 20 <210> 1479 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1479 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Gln Ala Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Ile Ala Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1480 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1480 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu 1 5 10 15 Phe Ile Ala Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1481 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connecting residues 15 and 19 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1481 Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg 1 5 10 15 Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1482 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connecting residues 15 and 19 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1482 Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Gln 1 5 10 15 Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1483 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge connection residues 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1483 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1484 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge connecting bridges 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1484 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1485 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(17) <223> Lactam bridge connecting residues 13 and 17 <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1485 Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala 1 5 10 15 Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1486 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(6) <223> Threonine in position 5 and phenyl lactic acid in position 6 linked via ester bond <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(19) <223> Lactam bridge connecting residues 15 and 19 <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1486 Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg 1 5 10 15 Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1487 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(6) <223> Threonine at position 5 and phenyl lactic acid at position 6 linked via ester bond <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is phenyl lactic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam bridge connecting residues 16 and 20 <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1487 His Ala Glu Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 25 <210> 1488 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1488 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Cys Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1489 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(11) <223> Lactam bridge connecting residues 7 and 11 <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> Pegylated <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1489 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser Cys 35 <210> 1490 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1490 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Cys Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1491 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> Pegylated <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1491 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser Cys 35 <210> 1492 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Covalently attached to a C16 fatty acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connection residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1492 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1493 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Linked to a C16 fatty acid via Glu residue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Linked to a C16 fatty acid via Glu residue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1493 Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1494 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Linked to C16 fatty acid via Glu residue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1494 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1495 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Linked to a C16 fatty acid via Glu residue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1495 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Lys Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1496 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Linked to a C16 fatty acid via Glu residue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1496 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Lys 20 <210> 1497 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is amino isobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1497 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1498 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is alpha isobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1498 Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Xaa Asp 1 5 10 15 Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1499 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1499 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1500 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1500 Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1501 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(7) <223> Lactam bridge connecting residues 4 and 7 <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Xaa is alpha isobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal carboxylate replaced with amide <400> 1501 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1502 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(7) <223> Lactam bridge connecting residues 4 and 7 <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Xaa is alpha isobutyric acid <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal carboxylate replaced with amide <400> 1502 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Xaa Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1503 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1503 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Glu 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1504 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1504 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu 1 5 10 15 Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1505 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (34)..(34) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1505 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser <210> 1506 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Linked to a C16 fatty acid via Glu residue <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Linked to a C16 fatty acid via Glu residue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal carboxylate replaced with amide <400> 1506 Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1507 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa1 is selected from a group consisting of His, D-histidine, alpha, alpha-dimethyl imidiazole acetic acid (DMIA), N-methyl histidine, alpha-methyl histidine, imidazole acetic acid, desaminohistidine, hydroxyl-histidine, acetyl-histidine and <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from a group consisting of Ser, D-serine, D-alanine, valine, glycine, N-methyl serine, and aminoisobutyric acid (AIB) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <400> 1507 Xaa Xaa Xaa Thr Gly Phe 1 5 <210> 1508 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of Ser, D-serine, D-alanine, valine, glycine, N-methyl serine, and aminoisobutyric acid (AIB) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <400> 1508 Xaa Xaa Thr Gly Phe 1 5 <210> 1509 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from a group consisting of Glu or Gln <400> 1509 Xaa Thr Gly Phe 1 <210> 1510 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1510 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1511 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1511 Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg 1 5 10 15 Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1512 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(5) <223> Threonine at position 4 and phenyl lactic acid at position 5 linked via ester bond <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is phenyl lactic acid <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1512 Ser Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg 1 5 10 15 Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1513 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(6) <223> Threorine at position 5 and phenyl lactic acid at position 6 linked via ester bond <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is phenyl lactic acid <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1513 His Ser Gln Gly Thr Xaa Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1514 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1514 Phe Thr Ser Glu Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1515 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Pegylated via spacer <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1515 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Lys Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1516 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> Pegylated via rigid spacer <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1516 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Lys Trp Leu Met Asp Thr 20 <210> 1517 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> Pegylated <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> C-terminal alpha carboxylate replaced with amide <400> 1517 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr Gly Pro Gly Pro Gly Pro Gly Pro 20 25 30 Gly Pro Cys 35 <210> 1518 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(15) <223> Lactam bridge connecting residues 11 and 15 <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> Pegylated <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> C-terminal alpha carboxylate reaplaced with amide <400> 1518 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro 20 25 30 Pro Ser Cys 35 <210> 1519 <400> 1519 000 <210> 1520 <400> 1520 000 <210> 1521 <400> 1521 000 <210> 1522 <400> 1522 000 <210> 1523 <400> 1523 000 <210> 1524 <400> 1524 000 <210> 1525 <400> 1525 000 <210> 1526 <400> 1526 000 <210> 1527 <400> 1527 000 <210> 1528 <400> 1528 000 <210> 1529 <400> 1529 000 <210> 1530 <400> 1530 000 <210> 1531 <400> 1531 000 <210> 1532 <400> 1532 000 <210> 1533 <400> 1533 000 <210> 1534 <400> 1534 000 <210> 1535 <400> 1535 000 <210> 1536 <400> 1536 000 <210> 1537 <400> 1537 000 <210> 1538 <400> 1538 000 <210> 1539 <400> 1539 000 <210> 1540 <400> 1540 000 <210> 1541 <400> 1541 000 <210> 1542 <400> 1542 000 <210> 1543 <400> 1543 000 <210> 1544 <400> 1544 000 <210> 1545 <400> 1545 000 <210> 1546 <400> 1546 000 <210> 1547 <400> 1547 000 <210> 1548 <400> 1548 000 <210> 1549 <400> 1549 000 <210> 1550 <400> 1550 000 <210> 1551 <400> 1551 000 <210> 1552 <400> 1552 000 <210> 1553 <400> 1553 000 <210> 1554 <400> 1554 000 <210> 1555 <400> 1555 000 <210> 1556 <400> 1556 000 <210> 1557 <400> 1557 000 <210> 1558 <400> 1558 000 <210> 1559 <400> 1559 000 <210> 1560 <400> 1560 000 <210> 1561 <400> 1561 000 <210> 1562 <400> 1562 000 <210> 1563 <400> 1563 000 <210> 1564 <400> 1564 000 <210> 1565 <400> 1565 000 <210> 1566 <400> 1566 000 <210> 1567 <400> 1567 000 <210> 1568 <400> 1568 000 <210> 1569 <400> 1569 000 <210> 1570 <400> 1570 000 <210> 1571 <400> 1571 000 <210> 1572 <400> 1572 000 <210> 1573 <400> 1573 000 <210> 1574 <400> 1574 000 <210> 1575 <400> 1575 000 <210> 1576 <400> 1576 000 <210> 1577 <400> 1577 000 <210> 1578 <400> 1578 000 <210> 1579 <400> 1579 000 <210> 1580 <400> 1580 000 <210> 1581 <400> 1581 000 <210> 1582 <400> 1582 000 <210> 1583 <400> 1583 000 <210> 1584 <400> 1584 000 <210> 1585 <400> 1585 000 <210> 1586 <400> 1586 000 <210> 1587 <400> 1587 000 <210> 1588 <400> 1588 000 <210> 1589 <400> 1589 000 <210> 1590 <400> 1590 000 <210> 1591 <400> 1591 000 <210> 1592 <400> 1592 000 <210> 1593 <400> 1593 000 <210> 1594 <400> 1594 000 <210> 1595 <400> 1595 000 <210> 1596 <400> 1596 000 <210> 1597 <400> 1597 000 <210> 1598 <400> 1598 000 <210> 1599 <400> 1599 000 <210> 1600 <400> 1600 000 <210> 1601 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 1601 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Pro Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1602 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analog <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N-terminal amino group replaced with hydroxy group <400> 1602 Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser Arg Arg Ala Gln Asp 1 5 10 15 Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 <210> 1603 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1603 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 1604 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> AMIDATION <400> 1604 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 1605 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1605 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly 20 25 <210> 1606 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1606 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asp Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 1607 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1607 Tyr Ala Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Lys 1 5 10 15 Ile His Gln Gln Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Gly Lys 20 25 30 Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr Gln 35 40 <210> 1608 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1608 His Ala Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 1609 <211> 49 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1609 Tyr Leu Tyr Gln Trp Leu Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu 1 5 10 15 Glu Pro Arg Arg Glu Val Cys Glu Leu Asn Pro Asp Cys Asp Glu Leu 20 25 30 Ala Asp His Ile Gly Phe Gln Glu Ala Tyr Arg Arg Phe Tyr Gly Pro 35 40 45 Val <210> 1610 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids of Exendin-4 <400> 1610 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 1611 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids of Exendin-4 <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> AMIDATION <400> 1611 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 <210> 1612 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment representing the carboxy terminal 10 amino acids of Exendin-4 <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Pegylation <400> 1612 Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 1 5 10 <210> 1613 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment representing the carboxy terminal 13 amino acids of GIP peptide <400> 1613 Lys Gly Lys Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr Gln 1 5 10 <210> 1614 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide fragment representing the carboxy terminal 8 amino acids of oxyntomodulin <400> 1614 Lys Arg Asn Arg Asn Asn Ile Ala 1 5 <210> 1615 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> C-terminal amide <400> 1615 His Thr Arg Gly Thr Phe 1 5 <210> 1616 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-histidine <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> d-threonine <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> d-arginine <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> d-threonine <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> d-phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> C-terminal amidation <400> 1616 Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa 1 5 <210> 1617 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> glucagon analogue <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> pegylation <400> 1617 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 1618 <211> 39 <212> PRT <213> Heloderma suspectum <400> 1618 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 1619 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1619 Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Lys Val Leu Gly Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ala Arg Lys Leu Leu Gln Asp Ile Met Ser Arg 20 25 <210> 1620 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> AMIDATION <400> 1620 His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn 20 25 <210> 1621 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1621 His Ser Asp Gly Ile Phe Thr Asp Ser Tyr Ser Arg Tyr Arg Lys Gln 1 5 10 15 Met Ala Val Lys Lys Tyr Leu Ala Ala Val Leu 20 25 <210> 1622 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> AMIDATION <400> 1622 His Ala Asp Gly Val Phe Thr Ser Asp Phe Ser Lys Leu Leu Gly Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ala Lys Lys Tyr Leu Glu Ser Leu Met 20 25 <210> 1623 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> AMIDATION <400> 1623 His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Arg Leu Arg Glu Gly 1 5 10 15 Ala Arg Leu Gln Arg Leu Leu Gln Gly Leu Val 20 25 <210> 1624 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Cys residue linked to 40kDa PEG via maleimide <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> C-terminal amidation <400> 1624 His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr Asn 20 25 30 <210> 1625 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40K PEG via thioether <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> AMIDATION <400> 1625 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1626 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-lysine <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Sarcosine (N-methyl glycine) <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> AMIDATION <400> 1626 Lys Gly His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 1627 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-lysine <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> N-hexyl-glycine <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via maleimide <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> AMIDATION <400> 1627 Lys Gly His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 1628 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-lysine <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> N-methyl phenylalanine <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> AMIDATION <400> 1628 Lys Phe His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 1629 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40 kDa PEG via maleimide <400> 1629 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1630 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is DMIA <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(20) <223> Lactam ring between side chains of amino acids <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via maleimide <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(29) <223> C-terminal amidation <400> 1630 Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 <210> 1631 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (30)..(30) <223> C-terminal amidation <400> 1631 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Met Asn Thr Asn 20 25 30 <210> 1632 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Xaa is Phe, hydroxyl-Phe, Gly, hydroxyl-Gly, Ala, Cys, Ser, Lys, Glu, dehydro-Val, Pro, d-Pro, AIB, 1-aminocyclohexanecarboxylic acid, 1-aminocyclopropanecarboxylic acid, N-Me-AIB, alpha-alpha-diethyl-Gly, hydroxyl-AIB, or d-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Pro, d-Pro, N-methyl-Gly, N-hexyl-Gly, Azetidine-2-carboxylic acid, N-methyl-Ala, or N-methyl-Phe <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is His, d-His, Ala, or N-methyl-His <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> C-terminal amidation <400> 1632 Xaa Xaa Xaa Ser Arg Gly Thr Phe 1 5 <210> 1633 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Sar <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> Covalently bound to PEG via 40kDa maleimide <400> 1633 Lys Xaa His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 1634 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Sar <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> Cys residue linked to 40kDa PEG via maleimide <220> <221> MOD_RES <222> (32)..(32) <223> C-terminal amidation <400> 1634 Lys Xaa His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr Asn 20 25 30 <210> 1635 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is Sar <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is DMIA <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(22) <223> Lactam ring between side chains of amino acids <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via maleimide <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> C-terminal amidation <400> 1635 Lys Xaa Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 1636 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> N-hexyl-Gly <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is AIB <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> Covalently bound to 40K PEG via thioether <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> AMIDATION <400> 1636 Lys Gly His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 1637 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> N-hexyl-Gly <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> Cys residue linked to 40kDa PEG via maleimide <220> <221> MOD_RES <222> (32)..(32) <223> C-terminal amidation <400> 1637 Lys Gly His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr Asn 20 25 30 <210> 1638 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> N-hexyl-Gly <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is DMIA <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(22) <223> Lactam ring between side chains of amino acids <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via maleimide <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> C-terminal amidation <400> 1638 Lys Gly Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 1639 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> N-methyl-Phe <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via maleimide <400> 1639 Lys Phe His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 1640 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> N-methyl-Phe <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> Cys residue linked to 40kDa PEG via maleimide <220> <221> MOD_RES <222> (32)..(32) <223> C-terminal amidation <400> 1640 Lys Phe His Xaa Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Met Asn Thr Asn 20 25 30 <210> 1641 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> d-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> N-methyl-Phe <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Xaa is DMIA <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(22) <223> Lactam ring between side chains of amino acids <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via maleimide <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> C-terminal amidation <400> 1641 Lys Phe Xaa Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Lys Tyr Leu 1 5 10 15 Asp Glu Arg Arg Ala Lys Asp Phe Val Cys Trp Leu Met Asn Thr 20 25 30 <210> 1642 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 1642 His Ala Asp Gly Val Phe Thr Ser Asp Phe Ser Lys Leu Leu Gly Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ala Lys Lys Tyr Leu Glu Ser Leu Met 20 25 <210> 1643 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <400> 1643 Lys Arg Asn Arg 1 <210> 1644 <211> 100 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1644 Met Arg Ala Leu Thr Leu Leu Ala Leu Leu Ala Leu Ala Ala Leu Cys 1 5 10 15 Ile Ala Gly Gln Ala Gly Ala Lys Pro Ser Gly Ala Glu Ser Ser Lys 20 25 30 Gly Ala Ala Phe Val Ser Lys Gln Glu Gly Ser Glu Val Val Lys Arg 35 40 45 Pro Arg Arg Tyr Leu Tyr Gln Trp Leu Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro 50 55 60 Asp Pro Leu Glu Pro Arg Arg Glu Val Cys Glu Leu Asn Pro Asp Cys 65 70 75 80 Asp Glu Leu Ala Asp His Ile Gly Phe Gln Glu Ala Tyr Arg Arg Phe 85 90 95 Tyr Gly Pro Val 100 <210> 1645 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1645 Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe 1 5 10 15 Asn Lys Phe His Thr Phe Pro Gln Thr Ala Ile Gly Val Gly Ala Pro 20 25 30 <210> 1646 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1646 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 1647 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1647 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1648 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1648 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Ala Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1649 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> D-Ala <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-Glu <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> D-Thr <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> D-Phe <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-Thr <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> D-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-Asp <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> D-Val <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> D-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> D-Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (14)..(14) <223> D-Leu <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> D-Glu <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> D-Gln <220> <221> MOD_RES <222> (18)..(18) <223> D-Ala <220> <221> MOD_RES <222> (19)..(19) <223> D-Ala <220> <221> MOD_RES <222> (20)..(20) <223> D-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> D-Glu <220> <221> MOD_RES <222> (22)..(22) <223> D-Ala <220> <221> MOD_RES <222> (23)..(23) <223> D-Ile <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> D-Ala <220> <221> MOD_RES <222> (25)..(25) <223> D-Trp <220> <221> MOD_RES <222> (26)..(26) <223> D-Leu <220> <221> MOD_RES <222> (27)..(27) <223> D-Val <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> D-Lys <220> <221> MOD_RES <222> (31)..(31) <223> D-Pro <220> <221> MOD_RES <222> (32)..(32) <223> D-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (33)..(33) <223> D-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> D-Ala <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> D-Pro <220> <221> MOD_RES <222> (37)..(37) <223> D-Pro <220> <221> MOD_RES <222> (38)..(38) <223> D-Pro <220> <221> MOD_RES <222> (39)..(39) <223> D-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1649 Ala Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Ala Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1650 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1650 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1651 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Covalently bound to 3-position of beta-estradiol via ether linkage <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1651 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1652 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Covalently bound to 3-position of beta-estradiol via ether linkage <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1652 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Ala Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1653 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> D-Ala <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> D-Glu <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> D-Thr <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> D-Phe <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> D-Thr <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> D-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> D-Asp <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> D-Val <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> D-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> D-Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (14)..(14) <223> D-Leu <220> 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(39)..(39) <223> D-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Covalently bound to 3-position of beta-estradiol via ether linkage <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1653 Ala Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Ala Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1654 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Covalently bound to 40kDa PEG via thioether <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Covalently bound to 3-position of beta-estradiol via ether linkage <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1654 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Cys Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1655 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Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1670 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Covalently bound to 3-position of dexamethasone via carbamate linkage <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1670 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1671 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Covalently bound to 3-position of dexamethasone via carbamate linkage <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1671 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40 <210> 1672 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Covalently bound to 3-position of dexamethasone via disulfide linkage <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1672 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Cys 35 40 <210> 1673 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Xaa is Penicillamine <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Covalently bound to 3-position of dexamethasone via disulfide linkage <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1673 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40 <210> 1674 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Xaa is AIB <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Xaa is homocysteine <220> <221> MOD_RES <222> (40)..(40) <223> Covalently bound to 3-position of dexamethasone via disulfide linkage <220> <221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> C-terminal amidation <400> 1674 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40

Claims (49)

  1. 구조 Q-L-Y를 포함하는 화합물;
    여기서 Q는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드이고;
    Y는 약 1 μM 이하의 EC50으로 글루코코르티코이드 수용체를 활성화시키고 약 1000 달톤까지의 분자량을 갖는 GR 리간드, 임의적으로 화학식 C의 화합물이고; 그리고
    L은 연결 기 또는 단일 결합이고, 임의적으로 여기서 Q-L은 GR 리간드의 위치 3 또는 17에 부착된다.
  2. 제1항에 있어서, Q는 GLP-1 수용체에서 고유 GLP-1의 활성의 최소한 0.1%를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, Q는 글루카곤 수용체에서 고유 글루카곤의 활성의 최소한 0.1%를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  4. 제1항, 제2항, 또는 제3항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 GIP 수용체에서 고유 GIP의 활성의 최소한 0.1%를 나타내는 것을 특징으로 하는 화합물.
  5. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50의 10-배 내에서 GLP-1 수용체에서 EC50을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물.
  6. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50의 10-배 내에서 글루카곤 수용체에서 EC50을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물.
  7. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 글루코코르티코이드 수용체에서 Y의 EC50의 10-배 내에서 GIP 수용체에서 EC50을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물.
  8. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 화학식 C의 화합물인 것을 특징으로 하는 화합물.
  9. 제8항에 있어서, Y는 코르티솔 또는 이의 유도체인 것을 특징으로 하는 화합물.
  10. 제9항에 있어서, 코르티솔 또는 이의 유도체는 코르티솔, 코르티손 아세테이트, 베클로메타손, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 트리암시놀론, 그리고 덱사메타손으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  11. 제10항에 있어서, Y는 덱사메타손인 것을 특징으로 하는 화합물.
  12. 제8항, 제9항, 제10항 및 제11항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 Y의 위치 3 또는 17에서 L과 접합되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  13. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, L은 생체 내에서 안정한 것을 특징으로 하는 화합물.
  14. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, L은 생체 내에서 가수분해 가능한 것을 특징으로 하는 화합물.
  15. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, L은 생체 내에서 준안정한 것을 특징으로 하는 화합물.
  16. 제13항에 있어서, L은 에테르 모이어티 또는 아미드 모이어티를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  17. 제14항에 있어서, L은 에스테르 모이어티를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  18. 제15항에 있어서, L은 산-불안정성, 환원-불안정성, 또는 효소-불안정성 모이어티를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  19. 제18항에 있어서, L은 히드라존 모이어티, 이황화물 모이어티, 또는 카텝신-절단가능 모이어티를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  20. 제11항에 있어서, 화합물은 하기 구조를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00115
    ;
    여기서
    B'는 Q의 아미노산의 아미노- 또는 티올-함유 측쇄이고, 여기서 B'는 임의적으로, 고유 글루카곤을 포함한 서열의 위치 10, 20, 24, 30, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43에 상응하는 아미노산의 측쇄이고;
    L은 결합,
    Figure pct00116
    ,
    Figure pct00117
    , 또는
    Figure pct00118
    이고; 그리고,
    x는 C1-C10 알킬렌 (가령, C1-C6 알킬렌), C1-C10 알케닐렌, 또는 C1-C10 알키닐렌이다.
  21. 제20항에 있어서,
    x는 C1-C6 알킬렌이고;
    B'는
    Figure pct00119
    , 또는
    Figure pct00120
    이고; 그리고,
    z는 C1-C6 알킬렌인 것을 특징으로 하는 화합물.
  22. 제21항에 있어서, 화합물은 하기 구조를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00121
    ,
    Figure pct00122
    , 또는
    Figure pct00123
    .
  23. 제22항에 있어서, 화합물은 하기 구조를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00124
    ,
    Figure pct00125
    ,
    Figure pct00126
    ,
    Figure pct00127
    , 또는
    Figure pct00128
    .
  24. 제11항에 있어서, 화합물은 하기 구조를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00129
    ;
    여기서
    B''는 Q의 아미노산의 티올-함유 측쇄이고, 여기서 B''는 임의적으로, 고유 글루카곤을 포함하는 서열의 위치 10, 20, 24, 30, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43에 상응하는 아미노산의 측쇄이고, 그리고
    y는 C1-C10 알킬렌 (가령, C1-6), C1-C10 알케닐렌, 또는 C1-C10 알키닐렌이다.
  25. 제24항에 있어서 화합물은 하기 구조를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00130
    ,
    Figure pct00131
    , 또는
    Figure pct00132
    .
  26. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 고유 글루카곤 (서열 번호: 1601)의 아미노산 12-29에 상응하는 아미노산의 알파-나선 입체형태를 유지하는 고유 글루카곤에 최소한 50% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  27. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 고유 GLP-1 (서열 번호: 1603)의 아미노산 12-29에 상응하는 아미노산의 알파-나선 입체형태를 유지하는 고유 GLP-1에 최소한 50% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  28. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 하기 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    1개 내지 3개의 아미노산 변형을 갖는 X1-X2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Z (서열 번호: 839),
    (a) 여기서, X1 및/또는 X2는 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-IV)에 의한 절단에 대한 글루카곤 펩티드의 감수성을 감소시키는 비-고유 아미노산 (서열 번호: 1601에 비하여)이고,
    (b) 여기서, Z는 -COOH, -Asn-COOH, Asn-Thr-COOH, 그리고 W-COOH로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 W는 1개 내지 2개의 아미노산 또는 GPSSGAPPPS이고,
    (c) 여기서, Q는 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 변형을 포함하고:
    (i) 위치 i와 i + 4에서 아미노산의 측쇄 사이에 락탐 가교, 여기서 i는 12, 16, 20 또는 24이고, 그리고
    (ii) 글루카곤 펩티드의 위치 16, 20, 21, 그리고 24에서 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개, 또는 모두가 α,α-이중치환된 아미노산으로 치환되고;
    여기서, Q는 글루카곤 작동약 활성을 나타낸다.
  29. 제28항에 있어서, Q는 서열 번호: 1601의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 하기를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    (a) 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 최소한 하나의 아미노산 변형:
    (i) 위치 29에서 Thr의 하전된 아미노산으로 치환;
    (ii) 위치 29에서 Thr의 Lys, Arg, His, Asp, Glu, 시스테산, 그리고 호모시스테산으로 구성된 군에서 선택되는 하전된 아미노산으로의 치환;
    (iii) 위치 29에서 Asp, Glu, 또는 Lys로 치환;
    (iv) 위치 29에서 Glu로 치환;
    (v) 위치 29 뒤에 1개 내지 3개의 하전된 아미노산의 삽입;
    (vi) 위치 29 뒤에 Glu 또는 Lys의 삽입;
    (vii) 위치 29 뒤에 Gly-Lys, 또는 Lys-Lys의 삽입;
    (viii) 위치 3에서 구조 I, II, 또는 III의 측쇄를 포함하는 아미노산으로 Gln의 치환:
    Figure pct00133

    구조 I
    Figure pct00134

    구조 II
    Figure pct00135

    구조 III
    여기서, R1은 C0-3 알킬 또는 C0-3 헤테로알킬이고; R2는 NHR4 또는 C1-3 알킬이고; R3은 C1-3 알킬이고; R4는 H 또는 C1-3 알킬이고; X는 NH, O, 또는 S이고; 그리고 Y는 NHR4, SR3, 또는 OR3이고; 그리고
    (ix) 이들의 조합;
    (b) 위치 16에서 Ser의 Thr, Glu, 또는 Aib로의 치환; 그리고 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 최소한 하나의 아미노산 변형:
    (i) 위치 1에서 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-IV)에 의한 절단에 대한 글루카곤 펩티드의 감수성을 감소시키는 비-고유 아미노산으로 His의 치환,
    (ii) 위치 2에서 디펩티딜 펩티다아제 IV (DPP-IV)에 의한 절단에 대한 글루카곤 펩티드의 감수성을 감소시키는 비-고유 아미노산으로 Ser의 치환,
    (iii) 위치 7에서 Thr의 Ile, Abu, 또는 Val로의 치환;
    (iv) 위치 20에서 Gln의 Ser, Thr, Ala, Aib, Arg, 또는 Lys로의 치환;
    (v) 위치 27에서 Met의 Leu 또는 Nle로의 치환;
    (vi) 위치 28-29에서 아미노산의 결실;
    (vii) 위치 29에서 아미노산의 결실;
    (viii) C-말단에 아미노산 서열 GPSSGAPPPS의 부가; 그리고
    (ix) C-말단에 아미노산 서열 GPSSGAPPPSX의 부가, 여기서 X는 임의의 아미노산이고; 그리고
    (x) 이들의 조합;
    여기서, Q는 글루카곤 작동약 활성을 나타낸다.
  30. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 하기 변형을 갖는, 서열 번호: 1601의 글루카곤 관련된 펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    (a) 위치 1에서 GIP 작동약 활성을 공여하는 아미노산 변형.
    (b) 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 변형:
    (i) 위치 i와 i + 4에서 아미노산의 측쇄 사이에 또는 위치 j와 j + 3에서 아미노산의 측쇄 사이에 락탐 가교, 여기서 i는 12, 13, 16, 17, 20 또는 24이고, 그리고 여기서, j는 17이고, 그리고
    (ii) 유사체의 위치 16, 20, 21, 그리고 24에서 아미노산 중에서 1개, 2개, 3개, 또는 모두가 α,α-이중치환된 아미노산으로 치환되고,
    (c) 1-10개의 추가적인 아미노산 변형;
    여기서, Q는 GIP 수용체에서 활성을 나타낸다.
  31. 제30항에 있어서, 1-10개의 추가적인 아미노산 변형은 하기와 같이 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
    (i) 위치 2에서 세린의 D-Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-메틸-Ser, Aib, Val, 또는 ε-아미노-N-부티르산으로의 치환;
    (ii) 위치 16에서 세린의 Glu, Gln, 호모글루타민산, 호모시스테산, Thr, Gly, 또는 Aib로의 치환;
    (iii) 위치 20에서 글루타민의 Ser, Thr, Ala, Lys, 시트룰린, Arg, Orn, 또는 Aib로의 치환;
    (iv) 위치 27에서 메티오닌의 Leu로의 치환;
    (v) 위치 28에서 아르기닌의 Ala로의 치환;
    (vi) 위치 29에서 트레오닌의 Gly로의 치환;
    (vii) 위치 2, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 27, 28과 29 중에서 하나에서 보존성 치환;
    (viii) C-말단에 1-21개 아미노산의 부가
    (ix) C-말단에 아미노산 서열 GPSSGAPPPS의 부가,
    (x) C-말단에 아미노산 서열 GPSSGAPPPSX의 부가, 여기서 X는 임의의 아미노산이고,
    (xi) 아미드 또는 카르복실릭 에스테르로 C-말단 카르복실 기의 치환, 그리고
    (xii) 이들의 조합.
  32. 제 1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 하기 아미노산 서열을 포함하고:
    X1-X2-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X3-Ser-X4-Tyr-Leu-X5-X6-X7-X8-Ala-X9-X10-Phe-X11-X12-Trp-Leu-X13-X14-X15 (서열 번호: 55), 또는 이의 유사체, 여기서 상기 유사체는 위치 1, 2, 3, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 21, 그리고 25에서 선택되는 1개 내지 3개의 아미노산 변형에 의해 서열 번호: 55와 상이하고, 여기서:
    (a) X1은 His, D-His, (des-아미노)His, 히드록실-His, 아세틸-His, 호모-His, 또는 알파, 알파-디메틸 이미다졸 아세트산 (DMIA), N-메틸 His, 알파-메틸 His, 또는 이미다졸 아세트산이고;
    (b) X2는 Ser, D-Ser, Ala, D-Ala, Val, Gly, N-메틸 Ser, 아미노이소부티르산 (Aib) 또는 N-메틸 Ala이고;
    (c) X3, X4, X5, X10, X11, 그리고 X14는 개별적으로, 임의의 아미노산이고;
    (d) X6은 Ser, Glu, Gln, 호모글루타민산 또는 호모시스테산이고;
    (e) X7은 Arg, Gln, Lys, Cys, Orn, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌이고;
    (f) X8은 Arg, Ala, Lys, Cys, Orn, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌이고;
    (g) X9는 Gln, Lys, Arg, Orn 또는 시트룰린이고;
    (h) X12는 Ala, Gln, Glu, Lys, Cys, Orn, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌이고;
    (i) X13은 Met, Leu 또는 Nle이고;
    (j) X15는 Thr, Gly, Lys, Cys, Orn, 호모시스테인 또는 아세틸 페닐알라닌이고; 그리고
    하기 변형 중에서 한 가지를 임의적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    (a) 위치 28-29에서 아미노산의 결실;
    (b) 위치 29에서 아미노산의 결실;
    (c) C-말단에 아미노산 서열 GPSSGAPPPS의 부가; 그리고
    (d) C-말단에 아미노산 서열 GPSSGAPPPSX의 부가, 여기서 X는 임의의 아미노산이고; 그리고
    (e) 이들의 조합.
  33. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 하기를 포함하는 10개 이하의 아미노산 변형에 의해 서열 번호: 1601과 상이한 아미노산 서열을 포함하고:
    (a) 위치 16, 20, 21, 및/또는 24에서 Aib로 하나 이상의 아미노산 치환, 그리고
    (b) 위치 1 및/또는 2에서 디펩티딜 펩티다아제 IV에 의한 절단에 대한 감소된 감수성을 제공하는 아미노산 변형, 그리고
    하기 변형 중에서 하나 이상을 임의적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    (a) 위치 28과 29에서 아미노산의 결실,
    (b) 위치 29에서 아미노산의 결실,
    (c) C-말단에 아미노산 서열 GPSSGAPPPS의 부가,
    (d) C-말단에 아미노산 서열 GPSSGAPPPSX의 부가, 여기서 X는 임의의 아미노산이고,
    (e) 아미드 또는 카르복실릭 에스테르로 C-말단 카르복실 기의 치환, 그리고
    여기서, Q는 GLP-1 작동약 활성 및 글루카곤 작동약 활성을 나타낸다.
  34. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, L-Y는 Q의 N-말단, C-말단, 또는 아미노산 측쇄에 공유 접합되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  35. 제31항에 있어서, L-Y는 고유 글루카곤 (서열 번호: 1601)의 위치 10, 30, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 또는 43에 상응하는, Q의 아미노산 측쇄에 접합되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  36. 제32항에 있어서, L-Y는 고유 글루카곤 (서열 번호: 1601)을 포함하는 서열의 위치 10 및/또는 40에 상응하는 Q의 아미노산 측쇄에 접합되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  37. 구조 A-B를 포함하는 전술한 청구항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 프로드러그, 여기서
    A는 아미노산 또는 히드록시산이고;
    B는 B의 카르복실 모이어티 및 Q의 아민 사이에 아미드 결합을 통해 Q에 연결된 N-알킬화된 아미노산이고;
    A, B, 또는 A-B가 연결되는 Q의 아미노산은 비-코팅된 아미노산이고, 게다가 여기서, Q로부터 A-B의 화학적 절단 반감기 (t1/2)는 생리학적 조건 하에 PBS에서 최소한 약 1시간 내지 약 1주이다.
  38. 제37항에 있어서, A-B는 하기 구조를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물:
    Figure pct00136

    화학식 I
    여기서
    (a) R1, R2, R4와 R8은 독립적으로, H, C1-C18 알킬, C2-C18 알케닐, (C1-C18 알킬)OH, (C1-C18 알킬)SH, (C2-C3 알킬)SCH3, (C1-C4 알킬)CONH2, (C1-C4 알킬)COOH, (C1-C4 알킬)NH2, (C1-C4 알킬)NHC(NH2 +)NH2, (C0-C4 알킬)(C3-C6 시클로알킬), (C0-C4 알킬)(C2-C5 헤테로환상), (C0-C4 알킬)(C6-C10 아릴)R7, (C1-C4 알킬)(C3-C9 헤테로아릴), 그리고 C1-C12 알킬(W1)C1-C12 알킬로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 W1은 N, S와 O로 구성된 군에서 선택되는 헤테로원자이고, 또는
    (ii) R1과 R2는 그들이 부착된 원자와 서로 합쳐 C3-C12 시클로알킬 또는 아릴을 형성하고; 또는
    (iii) R4와 R8은 그들이 부착된 원자와 서로 합쳐 C3-C6 시클로알킬을 형성하고;
    (b) R3은 C1-C18 알킬, (C1-C18 알킬)OH, (C1-C18 알킬)NH2, (C1-C18 알킬)SH, (C0-C4 알킬)(C3-C6)시클로알킬, (C0-C4 알킬)(C2-C5 헤테로환상), (C0-C4 알킬)(C6-C10 아릴)R7, 그리고 (C1-C4 알킬)(C3-C9 헤테로아릴)로 구성된 군에서 선택되고, 또는 R4와 R3은 그들이 부착된 원자와 서로 합쳐 4, 5 또는 6 원 헤테로환상 고리를 형성하고;
    (c) R5는 NHR6 또는 OH이고;
    (d) R6은 H, C1-C8 알킬이고, 또는 R6과 R2는 그들이 부착된 원자와 서로 합쳐 4, 5 또는 6 원 헤테로환상 고리를 형성하고; 그리고
    (e) R7은 H와 OH로 구성된 군에서 선택된다.
  39. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 알킬 아민, 아미드, 에테르, 에스테르, 티오에테르, 또는 티오에스테르 연쇄를 거쳐 아실 기 또는 알킬 기에 공유 부착된 Q 상에서 아미노산 측쇄를 더욱 포함하고, 아실 기 또는 알킬 기는 자연 발생 아미노산에 대해 비-고유한 것을 특징으로 하는 화합물.
  40. 제39항에 있어서, 아실 또는 알킬 기가 부착되는 아미노산은 고유 글루카곤을 포함하는 서열의 위치 10, 20, 24, 30, 37, 38, 39, 40, 41, 32, 또는 43에 상응하는 위치, 또는 C-말단 아미노산에 있는 것을 특징으로 하는 화합물.
  41. 제40항에 있어서, 아실 또는 알킬 기가 부착되는 아미노산은 고유 글루카곤을 포함하는 서열의 위치 10 및/또는 40에 상응하는 위치에 있는 것을 특징으로 하는 화합물.
  42. 제41항에 있어서, 아실 기 또는 알킬 기는 스페이서를 통해 아미노산의 측쇄에 부착되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  43. 제42항에 있어서, 스페이서는 산성 아미노산 또는 산성 디펩티드인 것을 특징으로 하는 화합물.
  44. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 하나 이상의 이형 모이어티에 공유 부착되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  45. 제44항에 있어서, 하나 이상의 이형 모이어티는 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 분자, 이의 단편 항체, 중합체, 양자점, 소형 분자, 독소, 진단제, 그리고 이들의 임의의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  46. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, Q는 서열 번호: 1-564, 566-570, 573-575, 577, 579-580, 585-612, 616, 618-632, 634-642, 647, 657-692, 694-695, 715-718, 722, 724-725, 729, 731-760, 801-878, 883-919, 1001-1275, 1301-1371, 1401-1518, 그리고 1601-1650으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  47. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 이합체 또는 다합체.
  48. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 제47항의 이합체 또는 다합체, 또는 이들의 조합, 그리고 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물.
  49. 환자에서 질환 또는 의학적 장애를 치료하는 방법에 있어서, 질환 또는 의학적 장애는 신진대사장애, 당뇨병, 비만, 간 지방증, 그리고 신경퇴행성 질환으로 구성된 군에서 선택되고, 상기 질환 또는 의학적 장애를 치료하는데 효과적인 양으로 제48항의 제약학적 조성물을 환자에 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
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