JPH10508322A

JPH10508322A - ５βステロイドのリポソーム配合物

Info

Publication number: JPH10508322A
Application number: JP9515066A
Authority: JP
Inventors: ルビンフェルド，ジョゼフ; エル．ファインマン，エリオット
Original assignee: スーパーゲン，インコーポレイティド
Priority date: 1995-10-12
Filing date: 1996-09-27
Publication date: 1998-08-18
Also published as: ATE243998T1; IL121070A0; DE69628909T2; EP0801557A2; CN1173815A; CA2208215A1; HUP9801834A3; WO1997013500A2; HUP9801834A2; DE69628909D1; US6436435B1; IL121070A; EP0801557B1; WO1997013500A3

Abstract

(57)【要約】脂質、又は脂質様化合物、及び５βステロイド、DHEA、又は５βステロイド又はDHEAの有機酸誘導体を含んで成るリポソーム調製物が記載される。リポソームはまた、ob遺伝子の発現生成物をそこに溶解して成る閉じ込められた水性部分も包含する。リポソーム調製物を用いて、肥満症、高コルチコイド症及び糖尿病を包含する病状を処理するための方法がまた、記載される。

Description

【発明の詳細な説明】５βステロイドのリポソーム配合物発明の分野本発明は、肝臓へのDHEA及び５βステロイドの供給を増強することができるリポソーム調製物に関する。さらに、リポソーム調製物はまた、包含される水性相で抗−肥満症ペプチド又はタンパク質を輸送するためにも使用され得る。発明の背景リポソームは、閉じ込められた水性体積を含む完全に密封された脂質二重層膜である。リポソームは、単層小胞（単一の二層膜を有する）か又は多層小胞（次の層から水性層によりそれぞれ分離される、複数二層膜により特徴づけられるオニオン様構造体）であり得る。前記二層は、疎水性後端領域及び親水性先端領域を有する２つの脂質単層から構成される。前記二層膜の構造は、脂質単層の疎水性（非極性）後端が二層の中心の方に向き、そして親水性先端が水性相の方に向くように存在する。 Banghamなど.，J．Mol．Biol.，13，238-252(1965)により当初、調製されたリポソームは、有機溶媒にリン脂質を懸濁し、そして前記混合物を蒸発乾燥し、容器の表面上にリン脂質フィルムを残存せしめることによって製造された。水性相を添加し、その混合物を膨潤し、そして機械的手段により分散された。前記方法に起因するリポソームは、多層小胞(MLV)から成った。続いて、Papahadjopoalos など.，Biochim．Biophys．Acta.，13，624-638(1968)は、混合物を音波処理することによって小さな単層小胞を開発した。 LUVETS、すなわち膜フィルターを通して圧力下で押出された単層小胞が、1986 年１月16日に公開されたPCT出願番号WO86/00238（Cullisなど.,）に開示されている（これは引用により本明細書に組込まれる）。Luvetsは通常、約100NM〜約5 00NMの直径範囲である。実質的に等しい層−溶質分布を有するリポソームは、アメリカ特許第4,522,80 3号（Lenk、など.,）に定義されるように定定した多層小胞（SPLV）として命名される。単相小胞は、アメリカ特許第4,588,578号（Fountain、など.,）に記載されている。少なくとも１回の凍結及び融解サイクルに小胞を暴露することにって生成される、凍結及び融解された多層小胞（FATMLV）は、1987年１月15日に公開されたPCT公開番号87/00043（Bally、など.,）に記載されている。前記引例は、リポソームの調製技法及び種々の用途について、引用により本明細書に組込まれる。リポソームの形成に使用される脂質に関しては、一般的に、脂質単層の疎水性非極性頭域は二層の中心の方に向き、そして親水性領域は水性相の方に向いている。水性相に溶解されるいづれかの生成物を含む水性相は、二層膜により部分的に又は完全に密閉され得る。脂質の例は、単独で又は組合して、及び特に炭素鎖の水素化された又は飽和された形でのリン脂質、たとえばホスファチジルコリン（PG）、卵ホスファチジルコリン(EPG)、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン及び同様のものである。リン脂質は、合成のものでも、又は天然源からでも誘導され得る。合成リン脂質は、ジミリストイルホスファチジルコリン及びジミリストイルホスファチジルグリセロールを包含する。 αトコフェロール基材の二層小胞は、アメリカ特許第5,041,287号（Janoffなど.,）アメリカ特許第5,231,112号（Janoffなど.,）及びアメリカ特許第5,330,689号（Janoffなど.,）に開示されている（それらは、引用により本明細書に組込まれる）。それらの小胞は、水溶液において完全に密閉された二層を形成することができる、αトコフェロールの有機酸誘導体から形成される。コレステロールヘミスクシネートの塩形を用いて調製されるリポソームは、アメリカ特許第5,231,112号（Janoffなど.,）に開示される（前記特許は引用により本明細書に組込まれる）。哺乳類が肥満になり、そして通常よりも過剰に体重が増す傾向に対する衝撃を有するように思えるペプチド及びタンパク質は現在、知られている。マウスにおける組換え遺伝子obのタンパク質生成物及びそのヒト相同体は、Y．Zhangなど. ，Nature，372，425（1994）に開示されている。さらに、明らかに突然変異誘発を有さない、ラットにおける相同遺伝子は、T．Murakami and K．Shima，Bioche mical and Biophysical Research Communications，209(3)，944(1995)に開示されるようにクローン化されている。R．A．Considineなど.，Journal of Clinica l Investigation，95(6)，2986（1995）は、ヒト脂質細胞cDNAライブラリーからのob遺伝子の完全なコード領域の単離、及び正常タンパク質の予測されるアミノ酸配列を有するタンパク質をもたらすクローン化された配列の翻訳を開示する。 M．A．Pelleymaunterなど.，Science，269，540(1995)，J．L．Halaasなど.，Sc ience，269，543（1995）及びL．A．Campfield、など.，Science，269，546（19 95）は、このタンパク質が、ob ob突然変異を担持する、先天的に肥満のマウスに非経口投与される場合、体重低下の効果をもたらしたことを開示する。さらに、ob obマウスにおいて正常よりも著しく高められた、血清インスリン及びグルコースレベルは、有意に、用量依存性態様で減じられ、そして典型的には、試験された最高の用量（10mg／kg・日）で非変異マウスに見られるレベルに標準化された。M．A．Pelleymounterなどはさらに、タンパク質がpH7.4でリン酸緩衝溶液に溶解され、そして腹腔内注射され得ることを開示する。ステロイドデヒドロエピアンドロステロン（３−β−ヒドロキシ−アンドロステ−５−エン−17−オン、DHEA）及びその硫酸塩誘導体は、ヒトにおける主要なステロイド副腎分泌生成物である。DHEAは、テストステロン（17−β−ヒドロキシ−アンドロステ−４−エン−３−オン）及びエストラジオール（エラストラ −１，３，５−（10）−トリエン−３，17−ジオール）に代謝され、それらはヒトにおける主要な性ホルモンである。DHEAの他の代謝物は、α−ET及びβ−ETを包含する。それらは、グルクロニド又は硫酸塩として単に接合され、そして尿中に分泌される不活性代謝最終生成物であると思われる。α−ETはDHEAの主要な代謝物であり、そして正常な個人において、１日当たり約３〜５mgの量で尿に分泌され、そしてβ−ETはヒトにおける主要な代謝物である。肥満症及び糖尿病に対するそれらの化合物の効果は次の通りに要約される。Ye nなど.，Lipids，12，409（1977）は、種々の経路により投与されたDHEAが、遺伝子的に肥満のマウスの株における体重増加の速度を減じたことを開示した。DH EA処理は、遺伝子的に肥満の及び糖尿病のマウスにおける糖尿病の進行を著しく減じ、そして最大の効果が、DHEAが摂取される場合に観察された(Colemanなど. ，Diabetes，31 : 80(1982))。Colemanなど.，Endocrinology，115，239（1984 ）は、α−ET及びβ−ETが血液の糖を減じ、血漿インスリン濃度を高め、そしてランゲルハンス島β細胞の高められた顆粒化により示されるように膵臓に対して保護効果を付与したことを示した。さらに、アンドロステロン又はエピアンドロステロンではなくα−ET及びβ−ETは、C57BL／KsJ−db／db糖尿病マウスにおける糖尿病の進行の阻止においてDHEAよりも４倍、効果的であった。アメリカ特許第4,518,595号（Colemanなど.,）は、DHEAの経口投与が高血糖症を正常なレベルに回復せしめ、そして重度の糖尿病哺乳類においてさえグルコース耐性を改良したことを示した。アメリカ特許第4,507,289号において、Colemanは、糖尿病、肥満症候群及び関連する高コルチコイド症の処理のためへのα−ET及びβ−ET 並びにエストロゲンの使用を教援した。 Coleman，Endocrinology，117，2279（1985）は、節食において供給される場合、α−ET及びβ−ETは、抗−肥満性質を有し、そして肥満の進行を阻止し、又は止め、そして遺伝的肥満の糖尿病マウスにおいて、肥満症後の体重の低下を促進することを開示した。アメリカ特許第4,666,898号（Coleman and Applezweig ）は、肥満症、糖尿病及び高コルチコイド病の他の徴候の処理へのエチオコラノロンの使用を開示した。B．Zumoffなど.，Obesity Research，2，13（1994）は、１日当たり４ｇの用量で経口投与されたEDがヒト肥満対象において有意な脂肪損失をもたらしたことを開示した。20週間のランダム二重盲検クロスオーバー研究において、14の対象は、プラシーボ投与の間よりも経口投与による処理の間、有意に多くの体重及び体脂肪を失なった。ED投与の間の平均体重の低下は、2.8 ±5.5kgであり、これは100kgの体脂肪当たり0.5±0.91kg／週に相当した。体脂肪含有率の密度測定は、平均体重の低下が体脂肪含有率における平均低下とほとんど正確に同時に起ったことを示した。10週間のED投与にわたって、平均脂肪低下率は、初期体脂肪含有量の約５％であった。ED投与の有意な主観的及び客観的副作用は存在しなかった。アメリカ特許第5,006,517号（Bradlowなど.,）は、Prader−Willi症候群、すなわち染色体欠損により引き起こされる先天性疾病が、前記症候群を有する個人へのエチオコラノロン又はエチオコラノロンジオンの投与により処理され得、その処理された個人における体重低下又は体重増加の速度の低下をもたらしたことを開示した。５βステロイドのいくつかは、肥満症及び関連する糖尿病及び／又は高コルチコイド症候群の制御において活性的であることが知られているが、それらの化合物は、経口投与される場合にそれらの症状の処理のために効果的である。経口路によれば、５βステロイドの吸収は、種々のアッセイを用いて血液レベルにより測定される場合、わずか５％〜15％である。従って、投与される薬物の多くの量が血流中に決っして吸収されず、そして投与される薬物の最大部分は便に排泄される。高血清濃度の達成のためのより効果的な投与路は、薬物を非経口的に投与することが通例であるが、しかしながら、５βステロイドは、この路により投与される場合、それらの抗−肥満、抗−糖尿病又は抗−高コルチコイド活性のいづれも発揮するとは思われないことが観察された。従って、好ましくは静脈（iv）路による５βステロイドの非経口投与を可能にし、そしてそれらの化合物の抗−肥満、抗−糖尿病及び抗−高コルチコイド活性を保持する配合物を有することが所望される。与えられた応答のための活性薬物の費用における相当の節約が、それにより達成され得る。本発明の要約及び目的本発明の１つの観点は、５βステロイド又はDHEAの治療量の高められた肝利用能力を誘発するための組成物を供給することに向けられる。本発明のもう１つの観点は、肥満症、糖尿病症候群、糖尿病関連の高コルチコイド症及びそれらの組合せ、及び骨髄抑制疾患から成る群から選択された病状を処理するための方法に関し、ここで前記方法は、肥満症、糖尿病又は高コルチコイド症及びそれらの組合せ、及び骨髄抑制疾患を処理するのに有効な、５βステロイド又はDHEA、又はそれらの混合物の量を含んで成るリポソームを含んで成るリポソーム調製物をそのような処理の必要な哺乳類に投与することを含んで成る。本発明のさらにもう１つの観点は、抗−肥満症ペプチド又はタンパク質の血液レベルを高めるための組成物を供給することに向けられる。本発明のさらなる観点は、リポソームの脂質部分が肥満症、糖尿病又は高コルチコイド症及びそれらの組合せを処理するために有効な量の５βステロイド又はDHEA、又はそれらの組合せを含んで成り、そして前記リポソームの水性部分が肥満症及びそれに関連する糖尿病を処理するために有効な量の抗−肥満症ペプチド又はタンパク質を含んで成るリポソームを含んで成るリポソーム調製物を含んで成る、肥満症及びそれに関連する糖尿病の処理のための組成物を供給することに向けられる。発明の詳細な記載５βステロイドとは、３α−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−17−オン又はα−エチオコラノロン（この後、αETと称す）、３β−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−17−オン又はβエチオコラノロン（この後、βETと称す）及び５ β−アンドロスタン−３，17−ジオン又はエチオコランジオン（この後、EDと称す）を意味する。さらに、それらの５βステロイドの一定のアルキル化された誘導体がまた、この定義に包含される。たとえばアメリカ特許第4,602,008号（引用により本明細書に組込まれる）に開示される、16− アルキル化５βアンドロスタン−３−オール−17−オン及び16−アルキル化５β アンドロスタン−３，７−ジオール−17−オンは、哺乳類において抗−糖尿病、抗−肥満症及び赤血球生成剤として生物学的に効果的であることを示している。それらの化合物は、従来の手段によりステロイド環構造体の３又は７位でエステル化され得る。さらに、17ケト５−βステロイドの他のジオール類が市販されており、そして −OH成分が結合される炭素でエステル化され得る。従って、たとえば、５β−アンドロスタン−３α，11α−ジオール−17−オン、５β−アンドロスタン−３β ，11β−ジオール−17−オン、及び５β−アンドロスタン−３α，11β−ジオール−17−オン、５β−アンドロスタン−11α−オール−３，17−ジオン、５β− アンドロスタン−11β−オール−３，17−ジオン、５β−アンドロスタン−３α ，16α−ジオール−17−オンは市販されており(Research Plus．Inc，POB324，B ayonne，New Jersey 07002 USA)、そして５βステロイドの有機酸誘導体を生成するために従来の手段により11又は16位でエステル化され得る。その有機酸誘導体は、いづれかの適切な対応イオン、たとえばトリスを用いて塩に転換され得る。 “リポソームの脂質部分”とは、一般的に疎水性末端及び親水性末端を有する分子から構成されるリポソームの二層部分を意味し、ここで前記疎水性末端は一般的に、水性媒体の存在下で自己会合し、二層を形成する。本発明において、リポソームの脂質部分は、上記に開示されるいずれかの脂質、たとえばホスファチジルイノシトール及びフフィンゴミエリン、又は脂質様化合物、たとえば５βステロイド、αトコフェロール及びコレステロールのヘミスクシネートエステル及びそれらの対応する塩から成る。 “リポソームの水性部分”とは、リポソームの脂質部分を製造する一般的に完全に密閉された二層膜に封入される水性区画を意味する。リポソームは、それが多層である場合、多くの密閉された又は封入された区画を有し、又はそれが単層である場合、単一の封入された区画を有することができる。 “ob遺伝子の発現生成物”とは、組換え宿主細胞、たとえばＥ．コリを用いて、ob遺伝子又はそのフラグメントから一般的に生成されるタンパク質を意味する。一般的に、前記遺伝子は宿主細胞と適合できる発現ベクターに連結され、そして宿主細胞によりタンパク質に連続的に翻訳され、又は発現される、遺伝子のmR NA転写体を生成するであろう。ときおり、そのタンパク質は、クロマトグラフィー及び他の方法を用いて、さらに処理され、再生され、切断され、又は精製され、もしくは前述のすべてを実施される。ob遺伝子又は活性的であるその一部によりコードされる、そのような追加の処理され、再生され、切断され又は精製されたタンパク質はまた、この定義に包含される。 α及びβETが、肥満マウス中にim，ip又はiv注射される場合、抗−肥満症効果を付与しないが、ところがそれらのすべての３種の化合物が、経口投与される場合、抗−肥満症効果を付与することがColemanなどにより観察された。経口投与された薬物の実質的な部分が、経口投与の後、腸管の血管を通して血液中に吸収され、そして腸間膜静脈を通して小腸からの流出する血液の有意な部分が門静脈を通して肝臓に向けられることは知られている。従って、本発明者は、αET，β ET及びEDの経口投与に関連する生物学的活性（但し、iv又は他の非経口投与路に関連する活性ではない）、特に、５βステロイドの抗−肥満症及び抗−糖尿病活性が経口投与に続いて肝臓に循環する薬物の実質的な部分に基づく肝臓の活性に起因することを推論した。逆に言えば、非経口投与に続く５βステロイドの抗−肥満症及び抗 −糖尿病活性の不在は、非経口投与に続く肝循環に達する比較的少量の５βステロイドに起因すると思われる。本発明者は、非経口投与に続いて肝循環に達する５βステロイドの量は、リポソームの成分として化合物を投与することによって高められ得ることも発見した。本発明のリポソーム調製物は、肝臓の一部である網内細胞系により閉じ込められ、そして５βステロイドはリポソーム蓄積物として肝臓に濃縮される。類似する態様において、本発明者は、化合物DHEAはリポソームの成分として都合良く投与され得ることを発見した。本発明の５βステロイドは、リポソームの親油性エンベロープを製造する脂質と共に混合され得る。一般的に、そのような脂質は、疎水性及び少なくとも１つの親水性末端である親油性領域を有する化合物である。そのような脂質の例は、硬質脂質であり、ここで鎖は、その鎖が飽和されている約16個の炭素原子単位の長さのものである。そのような脂質は、ジプラミトイルホスファチジルコリン（ DPPC）であり、そしてジステアロイルホスファチジルコリンが典型である。また、コレステロールヘミスクシネートトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ CHSm）は硬質脂質であり、そして本発明のリポソームの成分として使用され得る。さらに、５βステロイド及び上記DHEAのヘミスクシネートトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン誘導体は、硬質脂質として挙動することが予測される。活性的である５βステロイドの他の誘導体はまた、リポソームの脂質部分と共に混合され得、又はリポソームの成分としても作用することができる。従って、たとえば、引用により本明細書に組込まれるアメリカ特許第4,602,008号に開示される16メチレンβET及び16メチレンβETパルミテートは、本発明のリポソームの脂質部分の成分として使用され得る。他方、αトコフェロールに基づく異なった形の小胞が本発明の配合物に使用され得る。αトコフェロール小胞は、αトコフェロールの有機酸誘導体を形成する従来の手段を用いて形成される。αトコフェロールを誘導体化するために使用され得る有機酸は、カルボン酸、ジカルボン酸、ポリカルボン酸、ヒドロキシ酸、アミノ酸及びポリアミン酸を包含する。前記誘導体は、前記酸のエステル又はヘミエステルであり得る。さらに、有機酸は、その対応する酸の塩として供給され得、又は塩に転換され得る。そのような塩形は、有機酸の水可溶性を高め、そして従って、リポソームの形成に必須である二層の形成を進めるよう強いグラジエントを提供する。水溶性有機酸は、αトコフェロール誘導体に関して有用である。それらの例として次のものを挙げることができる：水溶性脂肪族カルボン酸、たとえば酢酸、プロピオン酸、酪酸；吉草酸、及び同様のもの、水溶性脂肪族ジカルボン酸、たとえばマロン酸、琥珀酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、マレイン酸及び同様のもの、及び水溶性芳香族ジカルボン酸、たとえばヘミメリット酸、トリメシン酸、スクシンイミド及び同様のもの、水溶性ヒドロキシ酸、たとえばグリコール酸、乳酸、マンデリン酸、グリセル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸及び同様のもの、及びアミノ酸及びポリアミノ酸のいづれか。誘導体化されたαトコフェロールの塩形は、適切な揮発性溶媒に、αトコフェロールの有機酸誘導体及び塩のカウンターイオン、たとえば塩の遊離塩基を溶解し、続いて、有機酸の塩形から成る残基を残しながらの蒸発により前記溶媒を除去することによって調製され得る。使用され得るカウンターイオンは、たとえばトリス−２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール、２−アミノエタノール、ビス−トリスプロパン、トリエタノールアミン及び同様のものを包含する。従って、場合によっては、３αET、３βET又はDHEAが、ジカルボン酸、たとえばスクシネートによりステロイド環構造体の３位炭素でエステル化され得る。残りをエステル化する場合、カルボン酸成分は、遊離又はその塩として存在することができる。また、場合によっては、脂質二層を形成する成分に、上記のような５βステロイド及びDHEAの有機酸誘導体が含まれる。５βステロイド、DHEA及びそれらの誘導体は、水に実質的に不溶性であり、そして３βステロイドがα−トコフェロール二層中への分配が予測されるので、閉じ込めによりαトコフェロール又は他の脂質小胞中に組込まれ得る。５βステロイドは適切な有機溶媒に溶解され、次にその溶媒は蒸発され、化合物のフィルム又は残留物が残存する。前もって形成されたリポソームの水性懸濁液が前記残留物に添加される場合、その残留物はリポソームの脂質二層に閉じ込められるであろう。この状況においては、単層小胞又はリポソームが使用され；多層小胞又はリポソームが使用される場合、５βステロイドが外側の層にのみ閉じ込められ、そして脂質又はαトコフェロールの内部層はステロイドを含まない。脂質エンベロープ及びそこに組込まれる５βステロイド又はDHEAもしくはそれらの水不溶性誘導体のためのコレステロールヘミスクシネートのトリス塩を用いる発明の組成物は、αトコフェロール基材のリポソームについての上記の方法と同じ方法を用いて一般的には形成される。すべての従来技術のリポソームにおいては、ステロール誘導体又はαトコフェロール誘導体は、生物学的効果を付与する活性剤としてではなく、いくつかの他の、一般的には水不溶性ではあるが、生物学的には活性の化合物のための供給機構として機能する。従って、たとえば、アメリカ特許第5,041,278号及び第5,231,112号（両者とも、Janoffなどによる）の両者は、水不溶性抗菌剤、たとえばミコナゾール及びイトラコナゾールを供給するためにコレステロール誘導体及びαトコフェロール誘導体の使用を示す。本発明においては、有機酸のエステルとての治療用５βステロイドは、他の化合物を供給するためのビークルとしてよりもむしろ脂質エンベロープの構造部分である。リポソーム構造成分及び活性剤の両者として５βステロイド及びその誘導体の使用により、患者への追加のステロイド及びステロイド誘導体又は脂質のiv投与を排除することが可能である。５βステロイドは活性抗−肥満症剤であるので、供給ビークルの部分としての追加のステロイド及び脂質の使用を排除することにより、肥満患者は追加の循環脂質及びステロイドへの暴露の健康的な危険性を回避される。さらに、供給ビークルの部分としての追加の脂質及びステロイドを排除することにより、肥満患者における循環脂質レベルは人工的に高められず、それらの患者における脂質レベルのモニターをより容易且つより正確にする。上記リポソームは、多くの異なったアプローチを用いて、その中に、水溶性化合物、部分的水溶性化合物、又は水不溶性化合物を閉じ込めるために使用され得る。そこに記載される一般的な方法は、リポソームがαトコフェロール−有機酸（又はその塩）又はコレステロールヘミスクシネート（又はその塩）に基づいての従来の脂質二層型（このいづれかがそこに分配される５βステロイドを含むことができる）のものであろうとなかろうと有用である。同時に、その一般的な方法は、リポソームエンベロープが、５βステロイド又はその誘導体、たとえば二層を形成することが予測され得る、５βステロイドの有機酸エステルから生成される場合に有用である。（リポソーム又はリポソーム様構造体の二層エンベロープを形成する化合物についての説明のためには、従来のαトコフェロール（及び誘導体）−基材のコレステロールヘミスクシネート又は５βステロイド（及び誘導体）−基材のコレステロールヘミスクシネートが“二層”として言及される。）二層又は水溶性化合物中に分配する化合物は、水性相に添加され、この後、形成の間、小胞内に剤を閉じ込める小胞の形成が伴う。他方、水不溶性又は脂質可溶性である化合物は、小胞が形成された後、二層小胞の懸濁液に添加され得、この場合、化合物は二層中に分配する。もう１つの態様においては、水不溶性化合物、及び有機酸誘導体の塩形は、その両者が溶解されるような有機溶媒に添加され得る。次に、有機溶媒が蒸発され、二層に水不溶性化合物の均等な分布を含むフィルムが残存する。次に、水不溶性化合物又は化合物類を閉じ込める二層小胞が、水性緩衝液が撹拌を伴ってフィルムに添加される場合に形成される。次に、そのような小胞は音波処理され、単層小胞が形成され得る。本発明の小胞を形成する二層は、水不溶性生物活性剤又は水に少々溶解性の剤を閉じ込めるために使用される場合、好都合である。これに関して、５βステロイドの非誘導体形が二層に閉じ込められ得る。従って、αET，βET，ED，DHEAは、それぞれ個々に又は複数の混合物の形で、小胞が二層中に分配するよう形成された後、その二層小胞に添加され得る。他方、αET，βET，ED，DHEAは、それぞれ個々に又は複数のものの混合物の形で、二層を形成するであろう化合物を含む溶媒に添加され得る。溶媒がフィルムを形成するために蒸発又は他の手段により除去される場合、αET，βET，ED，DHEA又はそれらの混合物は、二層に、均等な分布で含まれる。水性緩衝液における撹拌及び／又は音波処理に続いて、小胞が形成される。このアプローチを用いれば、さらにαET，βET，ED，DHEA又は複数のそれらの５ βステロイドの混合物を個々に含んで成る、αトコフェロールヘミスクシネート又はコレステロールヘミスクシネート、又は従来の脂質が形成され得る。他方、５βステロイドの１又は複数の誘導体が本発明の小胞の二層を形成するために使用され得る。特に、有機酸及び５βステロイドのいづれかのエステルが上記のようにして、生成され、そして二層小胞がそれから形成され得る。そのような有機酸誘導体は、有機酸及び５β−アンドロスタン−３α，11α−ジオール −17−オン、５β−アンドロスタン−３β，11β−ジオール−17−オン、５β− アンドロスタン−３α，11β−ジオール−17−オン、５β−アンドロスタン−11 α−オール−３，17−ジオン、５β−アンドロスタン−11β−オール−３，17− ジオン、５β−アンドロスタン−３α，16α−ジオール−17−オンのエステルを包含するが、但しこれらだけには限定されず、ここでエステルは、有機酸と11又は16位のヒドロキシル基での炭素原子との間で形成される。さらに、16−メチル −７−ヒドロキシ−５β−アンドロスタン−３−オール−17−オンは、その反応する誘導体を生成するために７位のヒドロキシ基で有機酸によりエステル化され得る。さらに、類似するエステルが、有機酸とαET，βET又はDHEAの３位のヒドロキシ基での炭素原子との間で形成され得る。首機酸は上記に列挙される有機酸のいづれかであり得、たとえばジカルボン酸スクシネートが用いられ、その対応する、５βステロイドのヘミスクシネート誘導体が生成される。５βステロイドの有機酸誘導体のいくつかは市販されており、そしてそれらは５β−アンドロスタン−３α−オール−17−オン３−ヘミスクシネート及び５β−アンドロスタン −３β−オール−17−オン３−ヘミスクシネートを包含するが、但しこれらだけには限定されない。５βステロイドのエステル誘導体は、本発明の小胞の二層を形成するために使用される場合、５βステロイド及び他の脂質又はαトコフェロール又はコレステロールヘミスクシネートのエステル誘導体又はそのエステル誘導体の混合物から完全に形成され得る。同様に、５βステロイドのエステル誘導体のいづれかから形成される二層はさらに、その二層に閉じ込められ得る５βステロイドの非誘導体形を含み、そして供給するために使用され得る。従って、αET，βET，ED，DH EAは、それぞれ個々に又は複数のものの混合物の形で、小胞が二層中に分配するよう形成された後、５βステロイドのエステル誘導体から製造される二層小胞に添加され得る。他方、αET，βET，ED，DHEAは、それぞれ個々に、又は複数のものの混合物の形で、二層を形成するであろう５βステロイドのエステル誘導体を含む溶媒に添加され得る。溶媒がフィルムを形成するために蒸発又は他の手段により除去される場合、αET，βET，ED，DHEA又はそれらの混合物は、二層に均等な分布で含まれる。水性緩衝液における撹拌及び／又は音波処理に続いて、小胞が形成される。このアプローチを用いれば、個々にαET，βET，ED，DHEA、又はそれらの５βステロイドの複数のものの混合物をさらに含んで成る、５βステロイドのエステル誘導体から形成される二層が形成され得る。上記すべてのリポソームは、さらに、リポソーム内に水性相を包みそして含むために使用され得る。その水性相はまた、治療剤をそこに溶解し又は懸濁することができる。本発明においては、水性相はまた、水溶性である抗−肥満症効果的生成物を都合良く含むことができる。特に、リン酸緩衝溶液に可溶性である、マウスにおけるob遺伝子及びそのヒト同等物、又は抗−肥満症効果性のそのいづれかのフラグメントによりコードされるタンパク質生成物であるタンパク質が、本発明のリポソーム内の水性相に溶解され得る。ob遺伝子又はそのヒト同等物によりコードされるタンパク質生成物が使用される場合、7.4のpHが好ましい。前記タンパク質を含む水性相は、単層、多層、LUVET又は他のものにかかわらずリポソーム中に従来の手段により導入され得る。好ましくは、その方法は、高い獲得体積の水性相及びそこに溶解されるタンパク質を生成するであろう。次の例は、本発明を例示するものであって、限定するものではない。例Ｉ αETを含むリポソーム小胞の調製Ａ．αトコフェロールヘミスクシネート及びαETを含む小胞１．αトコフェロールヘミスクシネートのトリス塩の調製５ｇのαトコフェロール水素スクシネート(Sigma Chemical Co.，St．Louis， Mo)を、ジエチルエーテル100mlに溶解する。次に、約５mlの水に溶解されたトリス塩基（Fisher，Fair Lawn NJ.）（1.14ｇ）を、撹拌又は振盪しながら、前記エーテル溶液に0.5mlづつ添加した。その溶液を回転蒸発乾燥せしめ、そして次にさらに高い真空下で乾燥せしめ、αトコフェロールヘミスクシネートのトリス塩を生成した。２．コレステロールヘミスクシネートトリス塩の生成コレステロール水素スクシネート50.3ｇ（0.11モル）（１CN，Cleveland Ohio ）を、1.5ｌのジエチルエーテルに溶解し、トリス塩基（12.1ｇ，0.1モル(Fishe r，Fairlawn，N．J.)を水30mlに溶解した。そのトリス溶液をコレステロール溶液に添加し、そしてその得られる溶液を回転蒸発し、乳白色の湿った残留物を得た。この残留物を12時間、凍結乾燥せしめ、そしてそのコレステロールヘミスクシネートトリス塩生成物を、約５ｌの体積の煮沸酢酸エチルから３度、再循環した。前記煮沸酢酸エチル溶液を熱いまま濾過し、そして室温に冷却する。ゲル様コレステロールヘミスクシネートトリス塩が現われ、これを1000mlの焼結ガラス漏斗を通して濾過し、そして酢酸エチルを絞ることにより及び機械的圧縮により除去する。さらなる溶媒の除去を0.1mmHgの真空下で12時間、行ない、約23ｇの重量の硬くてもろい白色物質を得る。そのディスクを乳鉢及び乳棒により微粉砕し、そして微量の酢酸エチルを、50℃に加熱し、そして0.1mmHgの真空を適用することにより除去する。３．αETの可溶化 50mgのαトコフェロールヘミスクシネートトリス塩、50mgのコレステロールヘミスクシネートトリス塩（上記で調製された）及び20mgのαET（Research Plus ，Bayonne N．J.）を、過剰量のメタノールに添加し、そして丸底フラスコにおいて真空下で乾燥せしめる。次に、得られるフィルム状物を、10mMのトリス−HC l緩衝液1.0mlに、混合を高めるためにガラスビーズの存在下で撹拌しながら、ゲルが形成するまで懸濁する。ゲルを音波処理し、0.2〜0.4μの直径の小胞を得る。Ｂ．コレステロールヘミスクシネートトリス塩及びαETを含むリポソーム小胞コレステロールヘミスクシネートトリス塩100mg及びαET 20mgを過剰量のメタノールに添加し、そして丸底フラスコにおいて真空下で乾燥せしめる。得られるフィルム状物を、10mMのトリス−HCl緩衝液1.0mlに、混合を高めるためにガラスビーズの存在下で撹拌しながら、ゲルが形成するまで懸濁する。ゲルを音波処理し、１αETを含む0.2〜0.4μの直径の小胞を得る。例II βETを含むリポソーム小胞の調製Ａ．トコフェロールヘミスクシネート及びβETを含むリポソーム小胞 αトコフェロールヘミスクシネート及びβETを含むリポソーム小胞を、上記例Ｉ、段階Ａ１，Ａ２及びＡ３におけるようにして調製する。但し、20mgのβET（ Research Plus，Bayonne N．J.）を、αETの代わりに用いる。Ｂ．コレステロールヘミスクシネート及びβETを含むリポソーム小胞コレステロールヘミスクシネート及びβETを含むリポソーム小胞を、上記例Ｉ、段階Ｂにおけるようにして調製する。但し、20mgのβETを、αETの代わりに使用する。例III EDを含むリポソーム小胞の調製Ａ．αトコフェロールヘミスクシネートを含むリポソーム小胞 αトコフェロールヘミスクシネート及びEDを含むリポソーム小胞を、上記例Ｉ、段階Ａ１，Ａ２及びＡ３におけるようにして調製する。但し、20mgのED（Rese arch Plus，Bayonne N．J.）を、αETの代わりに用いる。Ｂ．コレステロールヘミスクシネート及びEDを含むリポソーム小胞コレステロールヘミスクシネート及びEDを含むリポソーム小胞を、上記例Ｉ、段階Ｂにおけるようにして調製する。但し、20mgのEDを、αETの代わりに使用する。例IV αETヘミスクシネートを含むリポソーム小胞の調製Ａ．αトコフェロールヘミスクシネート及びαETヘミスクシネートを含むリポソーム小胞の調製１．５βアンドロスタン−３α−オール−17−オン３ヘミスクシネートのトリス塩の調製 39ｇ（0.1モル）の５βアンドロスタン−３α−オール−17−オン３ヘミスクシネート（この後、５αET３−ヘミスクシネートと称する）(Research Plus，In c.)を、1.5ｌのジエチルエーテルに溶解し、トリス塩基（12.1ｇ，0.1モル）（F isher，Fairlawn，N．J.）を30mlの水に溶解する。そのトリス溶液を５αET３− ヘミスクシネート溶液に添加し、そしてその得られる溶液を回転蒸発し、乳白色の湿った残留物を得る。この残留物を12時間、凍結乾燥し、そして５αET３−ヘミスクシネートトリス塩生成物を約５ｌ体積の煮沸酢酸エチルから３度、再結晶化する。前記煮沸酢酸エチル溶液を熱いまま濾過し、そして室温に冷却する。ゲル様５ αET３−ヘミスクシネートトリス塩が現われ、これを1000mlの焼結ガラス漏斗を通して濾過し、そして酢酸エチルを絞ることにより及び機械的圧縮により除去する。さらなる溶媒の除去を0.1mmHgの真空下で12時間、行ない、約23ｇの重量の硬くてもろい白色物質を得る。そのディスクを乳鉢及び乳棒により微粉砕し、そして微量の酢酸エチルを、50℃に加熱し、そして0.1mmHgの真空を適用することにより除去する。２．αトコフェロールヘミスクシネートのトリス塩を、例Ｉ段階Ａ．１におけるようにして調製する。 50mgのαトコフェロールヘミスクシネートトリス塩、及び上記のようにして調製されたαETヘミスクシネートトリス塩55mgを、過剰量のメタノールに添加し、そして丸底フラスコにおいて真空下で乾燥せしめる。得られるフィルム状物を、 10mMのトリス−HCl緩衝液1.0mlに、混合を高めるためにガラスビーズの存在下で撹拌しながら、ゲルが形成するまで再懸濁する。ゲルを音波処理し、0.2〜0.4μの直径の小胞を得る。例Ｖ αトコフェロールヘミスクシネート及びβETヘミスクシネートを含むリポソーム小胞の調製Ａ．５βアンドロスタン−３β−オール−17−オン３ヘミスクシネート（この後、βＥＴ−ヘミスクシネートと称する）のトリス塩の調製 βETヘミスクシネートのトリス塩を、例IV，Ａ１におけるようにして調製する。但し、５βアンドロスタン−３β−オール−17−オン３ヘミスクシネートを、５βアンドロスタン−３α−オール−17−オン３ヘミスクシネートの代わりに使用する。Ｂ．αトコフェロールヘミスクシネートトリス塩及びβETヘミスクシネートトリス塩のリポソームの調製 αトコフェロールヘミスクシネートトリス塩及びβETヘミスクシネートトリス塩のリポソームを例IV，Ａ２に記載のようにして調製する。但し、βETヘミスクシネートのトリス塩を、ETヘミスクシネートのトリス塩の代わりに使用した。例VI αETヘミスクシネート及びβETヘミスクシネートを含むリポソーム小胞５βアンドロスタン−３α−オール−17−オン３ヘミスクシネートのトリス塩を、例IV，Ａ１におけるようにして調製する。５βアンドロスタン−３β−オール−17−オン３ヘミスクシネートのトリス塩を、例Ｖ，Ａにおけるようにして調製する。 αETヘミスクシネートのトリス塩及びβETヘミスクシネートのトリス塩を含むリポソーム小胞を例IV，Ａ２におけるようにして調製する。但し、βETヘミスクシネートのトリス塩を、αトコフェロールのトリス塩の代わりに使用する。例VII αETヘミスクシネート及びβETヘミスクシネート及びαET又はβETもしくはEDを含むリポソーム小胞の調製Ａ．αETヘミスクシネートトリス塩及びαET又はβET、もしくはEDを含むリポソーム小胞１．αETヘミスクシネートトリス塩及びαET αETヘミスクシネートトリス塩を上記のようにして調製する。100mgのαETヘミスクシネートトリス塩及び20mgのαETを過剰量のメタノールに添加し、そして丸底フラスコにおいて真空下で乾燥せしめる。次に、得られるフィルム状物を、 10mMのトリス−HCl緩衝液1.0mlに、混合を高めるために、ガラスビーズの存在下で撹拌しながら、ゲルが形成するまで再懸濁する。ゲルを音波処理し、αETを含む0.2〜0.4μの直径の小胞を得る。２．αETヘミスクシネートトリス塩及びβET 小胞を例VII，Ａ．１におけるようにして製造する。但し、βETをαETの代わりに使用する。３．αETヘミスクシネートトリス塩及びED 小胞を例VII，Ａ．１におけるようにして製造する。但し、EDをαETの代わりに使用する。Ｂ．βETヘミスクシネートトリス塩及びαET又はβET、もしくはEDを含むリポソーム小胞１．βETヘミスクシネートトリス塩及びαET βETヘミスクシネートトリス塩を上記のようにして調製する。100mgのβETヘミスクシネートトリス塩及び20mgのαETを過剰量のメタノールに添加し、そして丸底フラスコにおいて真空下で乾燥せしめる。次に、得られるフィルム状物を、10mMのトリス−HCl緩衝液1.0mlに、混合を高めるために、ガラスビーズの存在下で撹拌しながら、ゲルが形成するまで再懸濁する。ゲルを音波処理し、αETを含む0.2〜0.4μの直径の小胞を得る。２．βETヘミスクシネートトリス塩及びβET 小胞を例VII，Ｂ．１におけるようにして製造する。但し、βETをαETの代わりに使用する。３．βETヘミスクシネートトリス塩及びED 小胞を例VII，Ｂ．１におけるようにして製造する。但し、EDをαETの代わりに使用する。例VIII ５βステロイド、５βステロイドのトリス塩及びab遺伝子のタンパク質を含むリポソームの製造Ａ．ob遺伝子のタンパク質の生成 ob遺伝子のタンパク質を、M．A．Pellymonnter，など.，Science，269，540（ 1995）に記載のようにして生成する。手短に言及すれば、シグナル配列を末端に有するマウス及びヒトab遺伝子のOB−コード配列(nt 178−1612)を、適切な発現ベクター、たとえばPET 15ｂ中にサブクローン化し、そしてT7 RNAポリメラーゼシステムの使用を通して、Ｅ．コリ〔BL21（DE３）pIYsS〕において過剰発現せしめる。細胞を、595nmで0.7の吸光度まで30℃で増殖し、0.5mMのイソプロピル −β−Ｄ−チオガラクトピラノシドにより一晩、誘発し、そして低速遠心分離により集める。細胞を３回の凍結・融解サイクルにおいて溶解し、そしてデオキシリボヌクレアーゼＩにより消化する。膜を音波処理し、そして界面活性剤可溶化により抽出し、そして最終封入体沈殿物を６Ｍのグアニジン−HCl，20mM(pH8.4) に溶解する。組換えタンパク質を、Ni−イオン親和性カラムによる固定化された金属親和性クロマトグラフィー（IMAC）処理及び増量のイミダゾールによる溶離による変性により精製した。精製された変性OBタンパク質をグアニジン−HCl，10mMの酢酸ナトリウム(pH5.0)に貯蔵し、そして室温で１時間、１mMのジチオトレイトールにより還元した。還元されたタンパク質を、20％グリコール、５mMのCaCl₂，５mMの酢酸ナトリウム(pH5.0)と共に十分に混合し、そして室温で８〜12時間インキュベートすることにより再生する。再生の後、トリスの添加により10mMの濃度にすることによりpHを8.4に調整し、そしてヘキサヒスチジン標識をトロンビン切断により除去した。切断された再生タンパク質をIMACにより精製し、トロンビン及び切断されなかった融合タンパク質から生成物を分離した。切断された再生タンパク質は40 mMのイミダゾールでNi−イオン親和性カラムから溶離し、ところがトロンビンは保持されず、そして切断されなかった融合タンパク質は0.2Ｍのイミダゾールで溶離する。次に、生成物を濃縮し、100mMのEDTA及び10mMのフェリシアン化カリウムにより処理し、そしてPharmacia Superdex 7S16／80カラムによるゲル濾過によりさらに精製した。その精製されたタンパク質を、0.6mg／mlの濃度でリン酸緩衝液(pH7.4)に溶解した。リポソームの製造例Ｉ−VIに記載されるリポソームの個々を上記のようにして調製する。但し、 10mMのトリス−HCl緩衝液1.0mlの代わりに、0.6mg／mlのOBタンパク質を含むPBS （pH7.4）1.0mlを用いる。本発明のリポソーム用量形の投与においては、５βステロイドの毎日の平均用量は、約0.1〜約100mg／kg体重及び好ましくは、約0.1〜10mg／kg体重の広い範囲であろう。同様に、OBタンパク質の量は、0.01mg〜10mg／kgであろう。 OBタンパク質と共に又はそれを伴わないで５βステロイドを含んで成るリポソームのための特定の配合物が本明細書に記載されているが、適切な注射用ビークルに５βステロイド及びOBタンパク質を含む非経口リポソーム配合物が、２種の活性剤の異なった機構を最大の有益性で利用するために好ましいことが本発明者により信じられている。配合物の供給のためには、非経口路が好ましいが、懸濁液がまた、経口投与及び５βステロイドの高められた摂取のために適切である本発明の配合物を用いて製造され得る。リポソームの特定の配合物が本明細書に記載されて来たが、類似する及び異なった脂質又は脂質様成分を用いての他のリポソーム配合物が、本発明の範囲内で、５βステロイドを供給するために本発明の配合物に使用され得る。

Claims

【特許請求の範囲】１．リポソームを含んで成るリポソーム調製物であって、前記リポソームの脂質部分が、肥満症、糖尿病又は高コルチコイド症及びそれらの組合せを処理するために有効量の５−βステロイドを含んで成る、リポソームの調製物。２．前記５−βステロイドが５−β−アンドロスタン−３，17−ジオンである請求の範囲第１項記載のリポソーム調製物。３．前記５−βステロイドが３α−ヒドロキシ−５−β−アンドロスタン−17 −オンである請求の範囲第１項記載のリポソーム調製物。４．前記５−βステロイドが３β−ヒドロキシ−５−β−アンドロスタン−17 −オンである請求の範囲第１項記載のリポソーム調製物。５．前記リポソームの水性部分が抗−肥満症ペプチド又はタンパク質の抗−肥満症的有効量を含んで成る請求の範囲第１項記載のリポソーム調製物。６．前記５−βステロイドが５−β−アンドロスタン−３，17−ジオンである請求の範囲第５項記載のリポソーム調製物。７．前記５−βステロイドが３α−ヒドロキシ−５−β−アンドロスタン−17 −オンである請求の範囲第５項記載のリポソーム調製物。８．前記５−βステロイドが３β−ヒドロキシ−５−β−アンドロスタン−17 −オンである請求の範囲第５項記載のリポソーム調製物。９．前記抗−肥満症ペプチド又はタンパク質がob遺伝子の発現生成物である請求の範囲第５項記載のリポソーム調製物。 10．前記５−βステロイドが５−β−アンドロスタン−３，17−ジオンである請求の範囲第９項記載のリポソーム調製物。 11．前記５−βステロイドが３α−ヒドロキシ−５−β−アンドロスタン−17 −オンである請求の範囲第９項記載のリポソーム調製物。 12．前記５−βステロイドが３β−ヒドロキシ−５−β−アンドロスタン−17 −オンである請求の範囲第９項記載のリポソーム調製物。 13．２つのカルボン酸成分を有する有機酸を含んで成るリポソーム調製物であって、前記カルボン酸成分の１つが５−βステロイドとエステル結合して存在し、そして他のカルボン酸成分が遊離状態で存在し又はその塩として存在する、リポソーム調製物。 14．前記エステル結合が前記５−βステロイドの３位炭素原子で存在する請求の範囲第13項記載のリポソーム調製物。 15．前記５−βステロイドが５−β−アンドロスタン−３α−ヘミスクシネート−17−オンである請求の範囲第13項記載のリポソーム調製物。 16．前記５−βステロイドが５−β−アンドロスタン−３β−ヘミスクシネート−17−オンである請求の範囲第13項記載のリポソーム調製物。 17．前記５−βステロイドが５−β−アンドロスタン−３α−ヘミスクシネート−17−オン及び５−β−アンドロスタン−３β−ヘミスクシネート−17−オンの混合物である請求の範囲第13項記載のリポソーム調製物。 18．前記リポソームの水性部分が抗−肥満症的有効量の抗−肥満症ペプチド又はタンパク質を含んで成る請求の範囲第13項記載のリポソーム調製物。 19．前記抗−肥満症ペプチド又はタンパク質がob遺伝子の発現生成物である請求の範囲第18項記載のリポソーム調製物。 20．リポソームを含んで成るリポソーム調製物であって、前記リポソームの脂質成分が、肥満症、糖尿病又は高コルチコイド症及びそれらの組合せを処理するために有効量のDHEAを含んで成る、リポソーム調製物。 21．２つのカルボン酸成分を有する有機酸において、前記２つのカルボン酸成分の１つがDHEAとエステル結合して存在し、そして他のカルボン酸成分が遊離状態で存在し、又はその塩として存在する請求の範囲第20項記載のリポソーム調製物。 22．前記エステル結合が前記DHEAの３位炭素原子で存在する請求の範囲第21項記載のリポソーム調製物。 23．前記DHEAがアンドロスタン−３β−ヘミスクシネート−17−オンである請求の範囲第22項記載のリポソーム調製物。 24．前記リポソームの水性部分が、抗−肥満症的有効量の抗−肥満症ペプチド又はタンパク質を含んで成る請求の範囲第22項記載のリポソーム調製物。 25．前記抗−肥満症ペプチド又はタンパク質が、ab遺伝子又はその抗−肥満症活性フラグメントの発現生成物である請求の範囲第24項記載のリポソーム調製物。 26．前記５βステロイドの量が用量形当たり約１〜約1000mgの用量範囲内にある請求の範囲第１項記載の組成物。 27．前記DHEAの量が用量形当たり約１〜約1000mgの用量範囲内にある請求の範囲第26項記載の組成物。 28．請求の範囲第１項記載の組成物及び医薬的に許容できるキャリヤー又は希釈剤を含んで成る医薬組成物。 29．請求の範囲第23項記載の組成物及び医薬的に許容できるキャリヤー又は希釈剤を含んで成る医薬組成物。 30．肥満症、糖尿病症候群、糖尿病関連の高コルチコイド症及びそれらの組合せ、及び骨髄抑制疾患から成る群から選択された病状を処理するための方法であって、肥満症、糖尿病又は高コルチコイド症及びそれらの組合せ、及び骨髄抑制疾患を処理するのに有効な５−βステロイドの量を含んで成る、リポソームの脂質部分から成るリポソームを含んで成るリポソーム調製物をそのような処理の必要な哺乳類に投与することを含んで成る方法。 31．肥満症、糖尿病症候群、糖尿病関連の高コルチコイド症及びそれらの組合せ、及び骨髄抑制疾患から成る群から選択された病状を処理するための方法であって、肥満症、糖尿病又は高コルチコイド症及びそれらの組合せ、及び骨髄抑制疾患を処理するのに有効なDHEAの量を含んで成る、リポソームの脂質部分から成るリポソームを含んで成るリポソーム調製物をそのような処理の必要な哺乳類に投与することを含んで成る方法。