ES2693704T3 - Extracto rico en rutina de Uncaria elliptica y método de preparación - Google Patents

Extracto rico en rutina de Uncaria elliptica y método de preparación Download PDF

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Abstract

Un método para obtener un extracto rico en rutina de una planta, el método comprende disolver un extracto de una planta que contiene rutina en metanol o etanol para obtener una solución de extracto de rutina en bruto, el extracto de la planta que contiene rutina contiene de 90% a 95% de rutina en peso y de 100 a 300 ppm de hierro; reducir el volumen de la solución de extracto de rutina en bruto para obtener un concentrado; obtener una mezcla agregando al concentrado un ácido de 1-15% en peso del extracto vegetal que contiene rutina, un alcohol C1-C4 y agua, en donde el extracto vegetal que contiene rutina constituye de 8% a 30% (p/v) de la mezcla y el ácido es el ácido ascórbico; dejar reposar la mezcla para la formación de un precipitado; y aislar el precipitado, obteniendo así un extracto rico en rutina que contiene menos de 20 ppm de hierro.

Description

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DESCRIPCION
Extracto rico en rutina de Uncaria elliptica y metodo de preparacion Campo tecnico de la invencion
Esta invencion se refiere a un extracto rico en rutina y a un metodo para preparar el extracto rico en rutina. Antecedentes de la invencion
La rutina es un flavonoide natural utilizado como material de partida de la troxerutina, que aumenta la resistencia de los capilares y reduce la permeabilidad de las paredes de los vasos sangumeos venosos. Un estudio clmico mostro que el tratamiento de pacientes con un derivado de la rutina, venoruton, condujo a una mejona del smdrome postrombotico. Vease, Panminerva Medicine, 53, pagina 13, 2011. Otro estudio encontro que la rutina es uno de los agentes antitrombosis mas eficaces. Vease, The Journal of Clinical Investigation, 122, N° 6, 2012. La rutina como un material de partida para agentes farmaceuticos es cada vez mas importante.
Para extraer y purificar la rutina de varias fuentes de plantas, por ejemplo, Sophora Japonica (Asia), Fava d'anta (Brasil) y Uncaria elliptica (Brasil), se utilizan tfpicamente disolventes de agua y metanol. Sin embargo, en la practica, los extractos ricos en rutina derivados de dichas fuentes vegetales tienen desventajas significativas, tales como ser de un color marron denso y contener un mayor contenido de hierro en comparacion con extractos ricos en rutina de otras fuentes. Este color marron se atribuye a los pigmentos de la planta.
Compendio de la invencion
Es muy diffcil eliminar este color marron y reducir el contenido de hierro mediante metodos convencionales de extraccion y/o purificacion, ya que el hierro parece estar fuertemente incorporado en los pigmentos. Se han hecho intentos de superar estas desventajas. Sin embargo, estos intentos no lograron reducir el hierro incorporado en los pigmentos y al mismo tiempo mantener un buen rendimiento de rutina.
Existe la necesidad de un procedimiento economico, adecuado para aplicaciones a gran escala que pueda producir extractos ricos en rutina con un alto contenido de rutina, bajo contenido de hierro y una reduccion de la pigmentacion.
Esta invencion se basa en el descubrimiento inesperado de que se pueden usar combinaciones espedficas de alcoholes y acidos para obtener extractos ricos en rutina de plantas que tienen contenido de hierro y pigmentacion bajos.
Por consiguiente, se describe en este documento un metodo para obtener un extracto rico en rutina a partir de plantas. El metodo incluye disolver un extracto vegetal que contiene rutina en metanol o etanol para obtener una solucion de extracto de rutina en bruto, el extracto vegetal solido que contiene rutina contiene de 90% a 95% de rutina en peso y de 100 a 300 ppm de hierro; reducir el volumen de la solucion de extracto de rutina en bruto para obtener un concentrado; obtener una mezcla anadiendo al concentrado un acido de 1-15% en peso del extracto vegetal que contiene rutina, y opcionalmente un alcohol C1-C4, agua, o ambos, en donde el extracto vegetal que contiene rutina constituye de 8% a 30% (p/v) de la mezcla y el acido se selecciona del grupo que consiste en acido ascorbico, acido cftrico, acido tartarico, acido galico y acido malico; dejar reposar la mezcla para la formacion de un precipitado; y aislar el precipitado, obteniendo asf un extracto rico en rutina que contiene menos de 20 ppm de hierro.
El extracto de la planta que contiene rutina se puede obtener como un precipitado en bruto de la extraccion de Uncaria elliptica, Sophora Japonica o Fava d'anta con agua, un alcohol o un alcohol acuoso.
En algunas formas de realizacion, el acido se agrega a de 1-10%, por ejemplo, 1-5%, o 2-4% en peso del extracto vegetal que contiene rutina. En los casos en que se agregan agua y alcohol C1-C4, la relacion de agua al alcohol C1- C4 puede ser de 1:1 a 5:1, por ejemplo, de 1:1 a 3:1. El agua y el alcohol C1-C4 se pueden agregar por separado, al mismo tiempo, o en forma de un alcohol acuoso C1-C4.
Tambien se incluye en este documento un extracto rico en rutina de Uncaria elliptica, extracto que contiene de 97% a 99% de rutina medido por HPLC y menos de 20 ppm de hierro, la absorcion del extracto a 550 nm es inferior a 0,2. El extracto tambien puede contener de 5% a 10% de agua en peso. Se puede preparar por el metodo descrito anteriormente.
Descripcion de la invencion
Los detalles de uno o mas aspectos se exponen en la descripcion a continuacion. Otras caractensticas, objetos y ventajas de la invencion seran evidentes a partir de la descripcion y de las reivindicaciones. La invencion se define en las reivindicaciones.
En este documento se describe un metodo para obtener extractos ricos en rutina de fuentes vegetales utilizando nuevas combinaciones de alcoholes y acidos. Los extractos ricos en rutina obtenidos por el metodo tienen una pigmentacion y contenido de hierro significativamente reducidos en comparacion con los extractos preparados por metodos convencionales.
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Usando metodos convencionales conocidos en la tecnica, se puede preparar un extracto solido que contiene rutina a partir de varias fuentes de plantas, por ejemplo, Sophora Japonica (Asia), Fava d'anta (Brasil) y Uncaria elliptica (Brasil). Tales metodos incluyen, pero no se limitan a remojar, calentar, agitar, remover o hacer una infusion de material vegetal, por ejemplo, tallos y hojas, en varios disolventes. El material vegetal utilizado puede estar en forma de planta completamente seca, planta triturada o polvo. Los disolventes incluyen agua, alcoholes (por ejemplo, metanol) o alcoholes acuosos. Despues de la extraccion, la solucion de extracto se puede separar del solido mediante tamizado, filtrado, prensado u otras tecnicas adecuadas. El filtrado se puede concentrar y enfriar para permitir que se forme un precipitado, obteniendose asf un extracto solido que contiene rutina. Para las descripciones de varios metodos de extraccion, vease, por ejemplo, el documento de patente china 1013579; el documento de patente de Estados Unidos US2006/0099690; y Dighe et al., International Journal of Pharma and Bio Sciences, 2(1): 750-757 (2011).
Tfpicamente, los extractos solidos que contienen rutina preparados por estos metodos tienen un alto contenido de hierro, por ejemplo, de 100-300 ppm, y estan muy pigmentados, por ejemplo, amarillos o marrones, particularmente en extractos que se originan de Uncaria elliptica. La rutina puede consistir en de 85% a 90% en peso de estos extractos solidos que contienen rutina.
Un extracto solido que contiene rutina asf preparado puede disolverse en un disolvente alcoholico, preferiblemente metanol o etanol, para obtener una solucion de extracto de rutina en bruto. Por ejemplo, se pueden disolver de 0,05 - 0,13 g del extracto solido por 1 ml de disolvente. La solucion de extracto en bruto puede concentrarse adicionalmente, por ejemplo, a presion atmosferica, para reducir su volumen, por ejemplo, de 4 a 10 veces. El volumen final de la solucion de extracto en bruto se puede predeterminar segun el volumen y los contenidos deseados de la mezcla que se describe a continuacion.
Un acido, y opcionalmente un alcohol C1-C4, por ejemplo, metanol, etanol, propanol o n-butanol, se agregan a la solucion de extracto en bruto de rutina descrita anteriormente para obtener una mezcla. El agua tambien se puede incluir en la mezcla.
El acido utilizado se selecciona entre el acido ascorbico, acido dtrico, acido tartarico, acido galico y acido malico. Se agrega a la solucion de extracto en bruto de rutina a aproximadamente de 1-15%, por ejemplo, de 1 - 10%, o de 1 - 5% en peso del extracto solido que contiene rutina descrito anteriormente utilizado para preparar la solucion de extracto de rutina en bruto.
La mezcla debe contener al menos un alcohol C1-C4. Por ejemplo, como se describe anteriormente, metanol o etanol (es decir, un alcohol C1-C4) se puede usar para hacer la solucion de extracto en bruto de rutina a partir del extracto solido que contiene rutina. Puede que no sea necesario agregar alcohol C1-C4 adicional a la solucion de extracto en bruto de rutina. En algunos casos, a fin de obtener una mezcla que contenga de 8% a 30% (p/v) de extracto solido que contenga rutina, se puede agregar un alcohol C1-C4, un alcohol acuoso C1-C4 o un alcohol C1-C4 y agua, por ejemplo, a de 2-12 veces (v/p) del extracto solido que contiene rutina. El alcohol C1-C4 adicional agregado puede ser igual o diferente del alcohol utilizado para elaborar la solucion de extracto en bruto de rutina.
La rutina existe como diversos hidratos, tales como monohidrato, dihidrato y trihidrato. Se sabe que el anhidrato y el monohidrato son inestables. Por lo tanto, es preferible preparar un dihidrato o trihidrato relativamente estables por hidratacion por medio de agua durante el proceso de purificacion. Por consiguiente, se puede anadir agua a la solucion de extracto en bruto de rutina. Se puede anadir por separado. Tambien se puede anadir en forma de un alcohol acuoso C1-C4. La relacion de agua al alcohol C1-C4 puede ser de 1:1 a 5:1, por ejemplo, de 1:1 a 3:1. Como se indico anteriormente, la mezcla final contiene preferiblemente de 8% a 30% (p/v) de extracto solido que contiene rutina.
La mezcla que contiene la solucion de extracto en bruto de rutina, el alcohol C1-C4, el acido y el agua opcional se deja entonces reposar para que se forme un precipitado, es decir, cristalice. Por ejemplo, la mezcla se puede concentrar mas y la mezcla concentrada se agita y se deja enfriar para que se forme el precipitado. El precipitado se puede recoger mediante cualquier tecnica adecuada, por ejemplo, filtracion, lavado con un alcohol y/o agua, y secado.
El precipitado, es decir, un extracto rico en rutina, puede contener de 97% a 99% de rutina segun lo medido por HPLC, y menos de 20 ppm de hierro, por ejemplo, menos de 10 ppm. Tambien tiene una pigmentacion baja, por ejemplo, la absorcion del extracto a 550 nm es inferior a 0,2. Tambien puede incluir de 5% a 10% de agua en peso. El extracto rico en rutina puede tener cualquier tamano de partfcula, por ejemplo, 5 pm (micrometro) o menos. Por ejemplo, puede tener partfculas de tamano nanometrico.
El extracto rico en rutina preparado por el metodo descrito anteriormente es util para varias aplicaciones. Puede formularse como una composicion farmaceutica, por ejemplo, un farmaco. Tambien se puede utilizar como suplemento nutricional o aditivo alimentario.
Ejemplos
Los ejemplos espedficos a continuacion deben interpretarse como meramente ilustrativos y no limitativos del resto de la divulgacion de ninguna manera. Sin mas elaboracion, se cree que un experto en la tecnica puede, en base a la descripcion en este documento, utilizar la presente invencion en su maxima extension.
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Los valores de contenido de hierro, pureza y absorbancia descritos en los Ejemplos 1-4 a continuacion se obtuvieron mediante los siguientes procedimientos:
(1) Contenido de hierro
Se obtuvo con precision 1,0 g de muestra y se sometio a la accion del acido sulfurico (se vitriolizo). Se anadieron 2 ml de acido clorhffdrico al residuo. La muestra se seco luego, y se calento en agua hirviendo despues de la adicion de 10 ml de agua con una gota de acido clorhffdrico. Despues de enfriar, el volumen se ajusto con precision a 10,0 ml y luego se filtro a traves de un filtro de 0,45 micras. La concentracion de hierro en la solucion de la muestra se determino mediante analisis ICP (plasma acoplado por induccion).
(2) Absorcion visible
Se disolvio 1,0 g de muestra en 15 ml de dimetilformamida (DMF). Despues de ajustar el volumen a 20,0 ml con DMF, la solucion se filtro a traves de un filtro de 0,45 micrones. La absorcion de la muestra filtrada se midio a 550 nm con una longitud de trayectoria de 1,0 cm.
(3) Analisis por HPLC
El analisis de HPLC se realizo segun la monograffa EP de rutosido trihidrato, sustancias relacionadas por cromatograffa ffquida. Brevemente, los reactivos y condiciones utilizados se exponen a continuacion:
[Quim. 1]
Solucion de ensayo: se disuelven 0,10 g de la sustancia a examinar en 20 ml de metanol y se diluye hasta 100,0 ml con la fase movil B.
Solucion de referencia (a): Se disuelven 10,0 mg de rutosido trihidrato CRS en 10,0 ml de metanol.
Solucion de referencia (b): Se diluye 1,0 ml de la solucion de referencia (a) hasta 50,0 ml con la fase movil B. Columna (LiChrospher 100 RP-8, C8, 4,0 x 250 mm, Agilent):
-tamano: l = 0,25 m, d. i. 4,0 mm,
- fase estacionaria: gel de sflice de octilsililo para cromatograffa (5 pm)
- temperatura: 30° C.
Fase movil:
- fase movil A: mezclar 5 volumenes de tetrahidrofurano con 95 volumenes de una solucion de 15,6 g/l de fosfato diacido de sodio ajustado a pH 3,0 con acido fosforico.
- fase movil B: mezclar 40 volumenes de tetrahidrofurano con 60 volumenes de una solucion de 15,6 g/l de fosfato diacido de sodio ajustado a pH 3,0 con acido fosforico.
[Quim. 2]
Tiempos de gradiente
Tiempo (min) 0 -10 10 -20 20 - 21 21 - 25
Fase movil A (%) 50 - 0 0
0 - 50 50
Fase movil B (%) 50 -100 100
100 -50 50
Caudal: 1 ml/min.
Deteccion: espectrofotometro a 280 nm.
Inyeccion: 20 pl.
Los acidos y alcoholes utilizados en los Ejemplos 1-4 a continuacion se obtuvieron de Wako Pure Chemical Industries, Ltd (Osaka): el acido ascorbico (mmimo 99,5% de primer grado); acido cftrico (mmimo 98,0% de grado especial); acido malico (mmimo 99,0% de grado especial); acido galico (98,0-103,0% de primer grado); acido tartarico (mmimo 99,0% de primer grado); metanol (mmimo 99,5% de primer grado); etanol (mmimo 99,5% de grado especial); n-propanol (mmimo 99,7% de grado especial); n-butanol (mmimo 99,0% de grado especial).
Ejemplo 1: Preparacion de una solucion de extracto de rutina en bruto
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Los tallos y hojas de Uncaria elliptica se extrajeron con agua y/o alcohol mediante procedimientos convencionales para obtener extractos solidos que conteman rutina. Se disolvieron tres series de extracto solido que contema rutina (50 g cada uno) en 600 ml de metanol y se agitaron durante dos horas a 30-35 grados C (Celsius). Cada solucion se filtro y se concentro a la presion atmosferica para producir 300 ml de solucion de extracto de rutina en bruto. Los extractos solidos que conteman rutina, asf preparados, conteman un 85-90% (p/p) de rutina y 100-200 ppm de hierro. Desarrollaron un color marron oscuro cuando se disolvieron en disolventes organicos y la absorbancia promedio en DMF a 550 nm fue de 0,8-1,3. Los datos se resumen en la Tabla 1 a continuacion.
Tabla 1
N° de lote
Hierro (ppm) Absorcion (550nm) Contenido de rutina (%), p/p Contenido de agua (%)
A
167 1,173 88,0 9,6
B
174 1,149 89,2 9,2
C
160 1,048 88,6 8,9
Ejemplo 2: Influencia del acido ascorbico en combinacion con varios disolventes
(1) Metanol
Tres series de solucion de extracto de rutina en bruto, cada una obtenida de la disolucion de 50 g de extracto solido que contema rutina en 600 ml de metanol (MeOH), se concentraron a presion atmosferica para dar 300 ml de volumen. Cada uno de los concentrados recibio 0, 1,0 o 5,0 g de acido ascorbico y cada uno se concentro adicionalmente para dar un volumen de 150 ml. Despues de permitir la cristalizacion por enfriamiento, los cristales de rutina purificada se recogieron por filtracion seguido de lavado con metanol. La rutina purificada se seco a 60 grados C (Celsius) durante 5 horas y se analizo como se describio anteriormente. Los resultados se resumen en la Tabla 2 a continuacion. La adicion de acido ascorbico durante el procedimiento de cristalizacion redujo el hierro residual y disminuyo la absorcion a 550 nm de una manera dependiente de la dosis.
Tabla 2
N°
Extraccion Cristaliz acion Acido Cantidad (%)* Hierro (ppm) Absorcion (550 nm) Rutina HPLC Area (%) Rendimiento (%) Conteni do de Agua (%)
1
MeOH MeOH ninguno - 22,4 0,235 99,0 70,2 4,9
2
MeOH MeOH Acido ascorbico 2 13,7 0,146 98,9 69,9 4,7
3
MeOH MeOH acido Ascorbico 10 10,2 0,114 98,4 70,5 5,5
* Cantidad de aditivo en con relacion al peso del extracto solido que contiene rutina
(2) Etanol
Dos series de 500 ml de solucion de extracto de rutina en bruto, obtenidas de la disolucion de 25 g de extracto solido que contema rutina en etanol (EtOH), fueron cada una concentrada bajo presion atmosferica para dar 100 ml de volumen. Cada concentrado recibio 25 ml de agua que contema 0 o 0,5 g de acido ascorbico. Despues de permitir la cristalizacion agitando y enfriando, se recogio por filtracion los cristales de rutina purificada, seguido por lavado con 15 ml de etanol al 95%. La rutina purificada se seco a 60 grados C (Celsius) durante 5 horas y se analizo como se describio anteriormente. Los resultados se resumen en la Tabla 3 a continuacion. Los efectos del acido ascorbico no fueron tan significativos como en el caso en que se uso metanol en el proceso de cristalizacion (vease anteriormente).
Tabla 3
N°
Extraccion Cristalizacion Acido Cantidad (%)* Hierro (ppm) Absorcion (550 nm) Rutina HPLC Area (%) Rendimiento (%) Contenido de Agua (%)
4
EtOH Agua/EtOH ninguno - 10,7 0,280 97,1 84,0 9,2
5
EtOH Agua/EtOH Acido ascorbico 2 9,59 0,260 97,0 83,5 8,7
* Cantidad de aditivo en relacion con el peso del extracto solido que contiene rutina
(3) Propanol
Se prepararon dos series de soluciones de extracto de rutina en bruto disolviendo 25 g de extracto solido que contema rutina en 300 ml de MeOH. Cada extracto se concentro a presion atmosferica para dar 43 ml de volumen. Cada
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concentrado recibio propanol acuoso (n-propanol:agua 1:1; total 200 ml) que contema 0 o 0,5 g de acido ascorbico. Despues de permitir la cristalizacion agitando y enfriando, se recogio por filtracion los cristales de rutina purificada. Los cristales de rutina se lavaron con 25 ml de n-propanol seguido de agua. La rutina purificada se seco a 80 grados C (Celsius) durante 6 horas y se analizo. Los resultados analfticos se resumen en la Tabla 4 a continuacion. El acido ascorbico redujo el hierro residual y disminuyo la absorcion a 550 nm de la rutina purificada.
Tabla 4
N°
Extraccion Cristalizacion Acido Cantidad (%) Hierro (ppm) Absorcion (550 nm) Rutina HPLC area (%) Rendimiento (%) Conte- nido de agua (%)
6
MeOH Agua/propanol ninguno - 26,7 0,296 98,2 76,4 8,1
7
MeOH Agua/propanol Acido ascorbic o 2 12,8 0,148 98,2 74,8 8,1
* Cantidad de aditivo en relacion con el peso del extracto solido que contiene rutina
(4) Butanol
Se prepararon cuatro soluciones de extracto de rutina en bruto disolviendo 25 g de extracto solido que contema rutina en 300 ml de MeOH. Cada solucion de extracto se concentro a presion atmosferica para dar 43 ml de volumen. Cada uno de los concentrados recibio n-butanol acuoso (agua:n-butanol=133:67 ml) que contema 0, 0,25, 0,5 o 2,5 g de acido ascorbico. Despues se permitio la cristalizacion mediante agitacion y enfriamiento, los cristales de rutina purificados se recogieron por filtracion y luego se lavaron con 25 ml de n-butanol seguido de 100 ml de agua. La rutina purificada se seco a 80 grados C (Celsius) durante 6 horas y se analizo como se describio anteriormente. Los resultados analfticos se resumen en la Tabla 5. El acido ascorbico redujo el hierro residual y disminuyo la absorcion a 550 nm de la rutina purificada.
Tabla 5
N°
Extraccion Cristalizacion Acido Cantidad (%)* Hierro (ppm) Absorcion (550 nm) Rutina HPLC Area (%) Rendimiento (%) Contenido de Agua (%)
15
MeOH Agua/BuOH ninguno - 60,3 0,701 97,6 83,6 8,4
16
MeOH Agua/BuOH Acido ascorbico 1 15,5 0,245 98,2 83,5 8,0
17
MeOH Agua/BuOH Acido ascorbico 2 1,86 0,097 98,2 82,4 7,9
18
MeOH Agua/BuOH Acido ascorbico 10 1,36 0,074 98,1 82,9 8,0
* Cantidad de aditivo en relacion con el peso del extracto solido que contiene rutina
Ejemplo 3: Influencia de varios acidos en combinacion con butanol acuoso
Se prepararon siete soluciones de extracto de rutina en bruto disolviendo 25 g de extracto solido que contema rutina, obtenido como se describe en el Ejemplo 1, en 300 ml de MeOH. Los extractos se concentraron a presion atmosferica para dar 43 ml de volumen cada uno. Cada concentrado recibio butanol acuoso (agua:n-butanol=133:67 ml) que contema acido tartarico, acido cftrico, acido malico o acido galico en la cantidad que se muestra en la Tabla 6 a continuacion. Despues de permitir la cristalizacion de los concentrados mediante agitacion y enfriamiento, se recogio los cristales de rutina purificada por filtracion. La rutina purificada se lavo con 25 ml de n-butanol seguido de 100 ml de agua. La rutina purificada se seco a 80 grados C (Celsius) durante 6 horas y se analizo como se describio anteriormente. Los resultados se muestran en la Tabla 6. Excepto por el acido galico, todos los demas acidos redujeron el hierro residual y disminuyeron la absorcion a 550 nm de la rutina purificada.
Los resultados descritos en los Ejemplos 2 y 3 indican que una combinacion de butanol y acido ascorbico es la mas efectiva para reducir tanto el contenido de hierro como el color amarillo que muestra la absorcion a 550 nm.
Tabla 6
N°
Extraccion Cristalizacion Acido Cantidad Hierro Absorcion Rutina Rendimiento Contenido
(%)* (ppm) (550 nm) HPLC (%) de
Area Agua
(%) ____(%____
8
MeOH Agua/BuOH ninguno - 60,3 0,701 97,6 83,4 8,4
9
MeOH Agua/BuOH Acido tartarico 2 15,2 0,224 98,0 83,5 8,3
10
MeOH Agua/BuOH Acido citrico 2 27,6 0,313 98,1 80,8 8,0
11
MeOH Agua/BuOH Acido malico 2 27,9 0,353 98,2 82,8 8,0
12
MeOH Agua/BuOH Acido galico 2 60,6 0,809 98,0 82,9 8,0
13
MeOH Agua/BuOH Acido tartarico Acido tartarico 10 10,8 0,101 97,4 81,2 7,2
14
MeOH Agua/BuOH Acido citrico Acido galico 3% cada uno 18,6 0,146 97,3 81,0 7,3
* Cantidad de aditivo en relacion con el peso del extracto solido que contiene rutina
Ejemplo 4: Influencia de los disolventes
La rutina purificada se obtuvo usando varios disolventes sin ningun acido. Se observo que el butanol acuoso y el etanol acuoso dieron un mejor rendimiento de rutina en comparacion con otros disolventes. Vease la Tabla 7 a continuacion.
5 Tabla 7
N°
Extraccion Cristalizacion Acido Cantidad (%)* Hierro (ppm) Absorcion (550 nm) Rutina HPLC Area (%) Rendimiento (%) Contenido de agua (%)
1
MeOH MeOH Ninguno - 22,4 0,235 99,0 70,2 4,9
4
EtOH Agua/EtOH Ninguno - 10,7 0,280 97,1 84,0 9,2
6
MeOH Agua/propanol Ninguno - 26,7 0,296 98,2 76,4 8,1
15
MeOH Agua/BuOH Ninguno - 60,3 0,701 97,6 83,6 8,4

Claims (13)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    REIVINDICACIONES
    1. Un metodo para obtener un extracto rico en rutina de una planta, el metodo comprende disolver un extracto de una planta que contiene rutina en metanol o etanol para obtener una solucion de extracto de rutina en bruto, el extracto de la planta que contiene rutina contiene de 90% a 95% de rutina en peso y de 100 a 300 ppm de hierro;
    reducir el volumen de la solucion de extracto de rutina en bruto para obtener un concentrado;
    obtener una mezcla agregando al concentrado un acido de 1-15% en peso del extracto vegetal que contiene rutina, un alcohol C1-C4 y agua, en donde el extracto vegetal que contiene rutina constituye de 8% a 30% (p/v) de la mezcla y el acido es el acido ascorbico;
    dejar reposar la mezcla para la formacion de un precipitado; y
    aislar el precipitado, obteniendo asf un extracto rico en rutina que contiene menos de 20 ppm de hierro.
  2. 2. El metodo de la reivindicacion 1, en donde el extracto de planta que contiene rutina se obtiene como un precipitado en bruto de extraer Uncaria elliptica, Sophora Japonica o Fava d'anta con agua, un alcohol o un alcohol acuoso.
  3. 3. El metodo de la reivindicacion 1, en donde el acido se anade al 1-10% en peso del extracto de planta que contiene rutina, preferiblemente 1 a 5% en peso del extracto de planta que contiene rutina, aun mas preferiblemente al 2-4% del extracto de planta que contiene rutina.
  4. 4. El metodo de la reivindicacion 1, en donde el alcohol C1-C4 y el agua se agregan en forma de un alcohol acuoso C1-C4 que contiene 5-80% de agua en volumen.
  5. 5. El metodo de la reivindicacion 1, en donde la proporcion de agua con respecto al alcohol C1-C4 es de 1:1 a 5:1 en volumen o 1:1 a 3:1 en volumen.
  6. 6. El metodo de la reivindicacion 1, en donde el alcohol C1-C4 es el metanol y el acido es el acido ascorbico.
  7. 7. El metodo de la reivindicacion 1, en donde el alcohol C1-C4 es el n-butanol o propanol.
  8. 8. El metodo de la reivindicacion 7, en donde el alcohol C1-C4 es el n-butanol.
  9. 9. El metodo de la reivindicacion 8, en donde el acido se agrega al 1-10% en peso del extracto vegetal que
    contiene rutina, preferiblemente al 1-5% en peso del extracto vegetal que contiene rutina, aun mas preferiblemente a 2-4% en peso del extracto vegetal que contiene rutina.
  10. 10. El metodo de la reivindicacion 8, en donde la proporcion de agua con respecto al alcohol C1-C4 es de 1:1 a 5:1 en volumen o 1:1 a 3:1 en volumen.
  11. 11. Un extracto rico en rutina de Uncaria elliptica que puede obtenerse segun el metodo como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el extracto comprende de 97% a 99% de rutina como se mide por HPLC y menos de 20 ppm de hierro, la absorcion del extracto a 550 nm es menos de 0,2, en donde la absorcion se mide segun el metodo siguiente: 1,0 g de muestra se disuelve en 15 ml de dimetilformamida, despues el volumen se ajusta a 20,0 ml con dimetilformamida, la solucion se filtra a traves de un filtro de 0,45 micras y la absorcion de la muestra filtrada se mide a 550 nm con una longitud de trayectoria de 1,0 cm.
  12. 12. El extracto rico en rutina de la reivindicacion 11, en donde el extracto contiene al menos 98% de rutina como se mide por HPLC y menos de 10 ppm de hierro, y la absorcion a 550 nm es menos de 0,1.
  13. 13. El extracto rico en rutina de la reivindicacion 12, en donde el extracto contiene de 5% a 10% de agua en peso.
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