JP6469629B2 - 水素を吸蔵させたシリカを有効成分とするアレルギー疾患の予防・改善用組成物 - Google Patents
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Description
実施例I.水素吸蔵シリカを有効成分とする組成物
<1.水素吸蔵シリカ>
水素吸蔵シリカとしては、「シリカハイドライドパウダー」(商品名、株式会社三旺コーポレーション製)(以下「SHP」とする)を用いた。なお、SHPは水素吸蔵シリカ(2質量%)、クエン酸カリウム、炭酸カリウム、オレイン酸を含む微粒子からなっている。
耐圧ねじ口瓶に、SHP1.00gと超純水(pH=7.2)100mLを入れ、室温下で攪拌させながら23時間水素ガスを発生させた。発生した水素ガスをアルミニウムバッグに回収した。回収した水素ガスは、熱伝導度検出器付きガスクロマトグラフ(GC(TCD))で分析し、回収した水素ガスの濃度を測定した。また、水素ガス濃度測定後、回収した水素ガスの体積を注射筒で測定した。なお、水素ガス濃度の測定に用いたGC(TCD)の測定条件は表1のとおりである。
SHP投与による抗アレルギー作用について、アトピー性皮膚炎モデルマウスを用いて比較検討した。
(1)材料と方法
i)モデルマウス
モデルマウスとして、NC/NgaTndCrlj系統(SPFグレード)(日本チヤールズリバー)、雄、6週齢(試験開始適齢)を用い、設定温湿度は24±1℃、55±50%、飼料は固形飼料CRF−1(オリエンタル酵母工業)を自由摂取、給水は蒸留水を給水瓶にて自由摂取の条件の下で飼育した。
・冷却遠心機(MX300型:TOMY)
・プレートリーダー(ImmunoMini NJ-2300:バイオテック)
・Picryl Chloride(2,4,6-trinitocholorobenzene、以下、PCL:東京化成工業)
・エタノール(和光純薬工業)
・アセトン(和光純薬工業)
・食用オリーブオイル(Filippo Berio:J-オイルミルズ)
・マウスIgE測定キット(MS341:モリナガ)
・IL-4, Mouse, ELISA Kit(ELM-IL4-1:RayBiO)
・IFN-γ, Mouse, ELISA Kit(ELM-IFNg-1:RayBIO)
・Mouse C-Reactive Protein/CRP Quantikine ELISA Kit(MCRPOO:R&D)
・TARC, Mouse, ELISA Kit, Quantikine M <CCL17, ELISA Kit>(MCC170:R&D)
iii)試験群の設定
試験は、Normal群(正常群)、Control群(対照群)、SHP群をそれぞれ6匹ずつ用いた試験群を設定した。
[1]予備飼育期間(7日間)
動物入荷時より本試験前日まで予備飼育を行い、馴化した。予備飼育最終日に体重を考慮し群分けを行った。
a)スケジュール
本試験は表3のスケジュールで行った。
感作(免疫)用PCL溶液は、エタノール:アセトン=4:1混合溶液を溶媒とし、PCL5%濃度に調製したものを用いた。ハプテン(連続チャレンジ)用PCL溶液は、食用オリーブオイルを溶媒とし、PCL1%濃度に調製したものを用いた。
SHPは、下記調製方法により調製し、感作溶液塗布開始日より、胃ゾンデを用いて連日強制胃内投与した。1回の投与量については、体重10gあたり0.2mLとした。なお、感作溶液及びハプテン塗布日については、塗布前に投与を行った。
Normal群:蒸留水
Control群:蒸留水
SHP群:SHP6.68mgを蒸留水にて4mLに調製
d)皮膚表面の肉眼的観察
ハプテン塗布日前日及び解剖日に下記のアトピー性皮膚炎症の臨床症状の評価基準に基づき評価観察を行い、重篤度の指標とした。評価部位は左右耳介部とし、観察はSHPの投与前に実施した。
項目:掻痔感、発赤(出血)、浮腫、擦創、痴皮形成(乾燥)
スコア:0=無症状、1=軽症、2=中等度、3=高度
e)解剖
SHP投与終了翌日に、ソムノペンチル(40mkg/g)麻酔下にて開腹し、後大静脈よりEDTA加採血を行った。得られた血液については、遠心分離(4℃、3000rpm、20分)後、血漿を採血して、60℃にて凍結保存した。
上記のe)で得られた血漿は、下記項目について測定を行った。
測定項目
IgE、IL−4、IFN−γ、CRP、TARC
g)統計処理
試験結果は平均値±標準誤差で表した。データについては一元配置分散分析を行い、分散分析で有意差が認められた項目については、Tukey法を用いて多重比較検定を行った。有意差の判定は分散分析及び多重比較ともに、p<0.05を有意と判定した。
i)耳介の皮膚観察スコア(表4、図2)
4日目より1週間毎にハプテン溶液を塗布し、皮膚の変化について観察を行った。結果を表4、及び図2に示す。
ハプテン塗布2回目時、及び4回目時の耳介の写真を図3,4に示す。
試験終了日に採取した血漿中のIgE、IL−4、IFN−γ、CRP、TARCついて分析を行った。結果を表5、及び図4に示す。
今回、アトピー性皮膚炎モデル動物のNC/Ngaマウスを用い、SHPの抗アレルギー作用について検討を行った。
(1)材料と方法
i)対象組織
上記「3.抗アレルギー作用検討試験」にて得られた背部皮膚組織、Normal群、Control群、及びSHP群のそれぞれ6検体を使用した。
ii)器具、機材、試薬・冷却遠心機(MX300型:TOMY)
・プレートリーダー(ImmunoMini NJ2-300:バイオテック)
・Moues Type I Collagen Detection kit(#6012:Chondrex.Inc.)
・Hyaluronan Quantikine ELISA kit (DHYAL0:R&D Systems,Inc.)
iii)分析項目及び方法
凍結保存している各組織を、氷上にて解凍した後、はさみを用いて細切し、各分析に必要な量を素早く秤量した。秤量した組織は、各分析項目の添付所に準じてコラーゲン濃度とヒアルロン酸濃度を測定し分析を行った。
試験結果は平均値±標準誤差で表した。データについては一元配置分散分析を行い、分散分析で有意差が認められた項目については、Tukey法を用いて多重比較検定を行った。有意差の判定は分散分析及び多重比較ともに、p<0.05を有意と判定した。
i)コラーゲン濃度(表6、図6)
Control群はNormal群に対して有意に低値を示した。SHP群はControl群に対して有意に高値を示した。
Control群はNormal群に対して有意に低値を示した。SHP群はControl群に対して高い値を示したが、有意差は認められなかった。
<1.水素吸蔵シリカとルチンを有効成分とする組成物の製造>
実施例Iで用いたSHP166mgと、更にエンジュ抽出物(商品名、アルプス薬品工業株式会社)33mgとを(以下「A10P」とする)を1カプセルとして封入したものを製造した。
(1)試験対象者ならびに試験方法
i)試験対象者(被験者)
試験対象者はアトピー性皮膚炎患者とした。但し、下記除外基準のいずれにも該当しない場合を適格とした。つまり、試験2週間前から試験終了まで、被験部を日焼けし、または予定の方、皮膚過敏症の方、検査結果に影響する可能性のあると思われる薬を服用または塗布している方、現在皮膚科に通っている方、アルコール依存症の方、留意すべき消化器系の慢性疾患あるいは障害を有する方、留意すべき腎臓機能に関わる症状の治療中の方、他の臨床試験に参加している方、試験担当医師が本モニターの参加に適切でないと判断した方、及びタトゥーがある方のいずれにも該当しない場合を適格とした。更に、試験期間中に以下管理事項を遵守できない方に該当する場合を非適格とした。つまり、試験期間中は、試験開始以前と同様の生活環境(睡眠、食事、水分摂取量、運動、生活全般)を維持すること、初回来院前日から最終来院日は、不規則な生活(睡眠不足、暴飲暴食など)を送らないこと、何らかの食物アレルギーがある場合、普段避けている食品(小麦、卵、乳製品等)があれば、試験期間中も同様の食事を摂取すること、及び万が一、試験期間中に食物アレルギーを含む食品の摂取により、アレルギー性湿疹など皮膚症状が悪化した場合は必ず日誌に記載することを遵守できない方に該当する場合を非適格とした。
試験対象としてA10Pを用い、起床後(朝食前)、就寝前の空腹時に各毎1〜3カプセルをお水又は、白湯にて摂取した。
a)試験方法
A10Pの摂取前後における皮膚状態の観察から、アトピー性皮膚炎への影響評価を検証する。試験人数は30人とし、30日の期間行った。被験者の初来院日を試験開始日とし、初来院日から30日後を終了日とした。被験者の2度目の来院は、原則、試験終了日の翌日(31日後)とした。
試験開始日及び終了日の翌日の計2回で皮膚の観察を行い、更に皮膚の写真撮影を行った。
男性5人、女性22人の計27人(平均年齢31歳)を被験者とした。
A10Pを、ヒトアトピー性皮膚炎罹患者に投与した今回の試験では、肌状態に関するアンケート調査では、「痒みの改善」や「乾燥しなくなった」など、回答があった23人中17名で自覚症状の改善があった。A10Pが、アレルギー反応やアトピー性皮膚炎に対し、何らかの影響を及ぼしていることが示唆される。
2 水槽
3 ボウル
4 定電流高電圧電源
5 タングステン電極
6 配管
7 配管
8 反応容器
9 台
10 リード線
11 バルブ
12 フィルターストーン
Claims (2)
- H - イオンがかご(ケージ)型シリカのマトリックス内部に封埋された状態のハイドライド系化合物である水素吸蔵シリカとエンジュ(Styphnolobium japonicum)抽出物とを有効成分とするアトピー性皮膚炎の予防・改善用組成物。
- 水分含量が5質量%以下の乾燥状態で、カプセル又は非透湿性の包装材に封入されている、請求項1に記載のアレルギー疾患の予防・改善用組成物。
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JP2016228963A JP6469629B2 (ja) | 2016-11-25 | 2016-11-25 | 水素を吸蔵させたシリカを有効成分とするアレルギー疾患の予防・改善用組成物 |
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