CN102816066B - 一种从金银花叶中提取绿原酸和金丝桃苷的方法 - Google Patents

Abstract

为了充分利用当地资源，又能降低提取纯化设备投资，有效提高金银花叶中绿原酸和金丝桃苷得率，缩短从收集到得到高含量绿原酸和金丝桃苷的生产时间，降低金银花绿原酸和金丝桃苷的生产成本，本发明提供了一种从新鲜金银花叶中提取绿原酸和金丝桃苷的纯化方法，采用杀青处理、盐酸浸提、过滤、萃取、大孔吸附树脂层析、结晶，得到绿原酸和金丝桃苷纯品。整个分离过程中对环境条件要求不高，分离时间较短，纯度高。分离材料易得便宜，分离操作过程简单，易控制，采用结晶和重结晶，纯化效率高，减少对环境的污染，同时又节约了资源。

Description

一种从金银花叶中提取绿原酸和金丝桃苷的方法

所属技术领域：

本发明属于天然产物加工领域，涉及了一种从金银花中提取绿原酸和金丝桃苷的方法，更具体地说是涉及了一种从金银花鲜叶中提取绿原酸和金丝桃苷的方法。

背景技术

绿原酸，又名咖啡鞣酸，是由咖啡酸与奎尼酸形成的缩酸，属于苯丙素类化合物，是细胞自身产生的天然抗氧化剂，是细胞代谢的激活剂，能够提高机体的免疫力。近年来有研究表明，绿原酸对对消化系统、血液系统和生殖系统均有药理作用，具有较广泛的的抗菌消炎、利胆、止血及增高白血球数量的作用。对金黄葡萄球菌、溶血性链球菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌有显著的抑制作用；对由放疗、化疗所致的白细胞养活症有显著疗效；口服绿原酸可显著刺激胆汁的分泌，具有利胆功效；对急性咽喉炎症及脓皮肤病有显著疗效；对月经过多，子宫功能性出血也有良好的止血效果。绿原酸具有抗艾滋病病毒HIV活性，对胃溃疡也有显著的抑制作用。因此对绿原酸的提取和纯化也越来越引起人们的关注。绿原酸在植物中广泛存在，只在几种植物中含量较多，如金银花、如葵花籽、金银花叶、咖啡豆、元宝枫叶、牛蒡叶、红薯叶中，其含量在1%~8%干基左右，不同产地其含量也不一样，而且来自不同植物的绿原酸的药理作用也不一样。

公开号为 CN1425643 的中国专利介绍了一种金银花中绿原酸的提取纯化方法：干金银花粉碎，采用稀乙醇对金银花进行二次回流提取，浓缩提取物再用絮凝法初步除杂纯化，最后采用大孔树脂法或酸性乙酸乙酯萃取法纯化精制。

公开号为 CN1616403的中国专利介绍了从金银花中提取制备绿原酸的工艺：金银花加水或乙醇进行回流提取，过滤，收集滤液并回收溶剂，加乙醇沉淀杂质，过夜，过滤，减压回收溶剂，加水适量，静置过夜，过滤，滤液上大孔树脂柱，用洗脱剂浓缩，收集含有绿原酸的组分，上聚酰胺柱，用洗脱剂洗脱，收集含有绿原酸的组分，浓缩，精制得到含量大于95％的绿原酸。

公开号为CN1199728的中国专利介绍了从金银花中提取绿原酸的工艺：金银花加酸性乙醇浸泡一定时间，加热回流提取一定时间，药渣再加酸性乙醇回流提取一定时间，合并药液，减压回收乙醇，浓缩、精制。

公开号为CN1398845的中国专利介绍了大孔树脂吸附提取高含量绿原酸的工艺方法：由金银花粉碎、绿原酸水提取液提取及大孔树脂吸附高含量绿原酸的分离工艺组成，其特征是后者通过绿原酸提液加入大孔树脂柱中进行饱和吸附，低浓度乙醇洗涤溶解树脂柱中的绿原酸，使其与柱分离成为绿原酸洗脱液，再回收其中乙醇，将余下的无乙醇绿原酸洗脱液浓缩，然后喷雾干燥可得高于40％绿原酸含量的成品干粉；用高浓度甲醇洗涤溶解树脂柱中的异绿原酸，使其与柱分离成为异绿酸洗脱液，回收其中甲醇后将洗脱液浓缩、喷雾干燥可得异绿原酸成品干粉。

公开号为CN101985421A的中国专利介绍了一种从金银花中同时制备绿原酸和木犀草苷的方法：公开了一种从金银花中同时制备绿原酸和木犀草苷的方法，其包括乙醇提取、D101型大孔树脂富集、硅胶柱、聚酰胺柱分离纯化和重结晶等步骤。

公开号为CN102001946A的中国专利介绍了一种同时提取和分离金银花中绿原酸与金银花精油的新方法：采用高频振动破壁粉碎机破壁处理后超声波水提过滤，过滤液静置冷藏后离心滤过得到油水混合物，油水混合物再次高速离心，将水相超滤后用乙酸乙酯萃取，分离浓缩干燥，获得高纯度绿原酸，而油相通过分子蒸馏制备出高品质的金银花精油。

公开号为CN102001947A的中国专利介绍了一种金银花绿原酸的制备方法：采用金银花及其枝叶为原料，水提后用水溶性有机溶剂与盐溶液和水溶性复合物按比例组成双水相体系，然后把总提取物浸膏溶解在双水相体系中进行分配，使之达到浸膏在两相中的平均浓度为30～50％的分配平衡，再用与两水相不相溶的萃取剂进行萃取，分出萃取液，先把极性小于绿原酸的杂质去掉，余下双水相再用另一萃取剂进行萃取的三相萃取方法，选择性地直接富集和分离纯化得到绿原酸初产品，后经过脱色、结晶和干燥得到质量分数为95％绿原酸产品。

公开号为CN101941908A 的中国专利介绍了一种从金银花露加工残液中制备及半合成绿原酸的方法：包括沉淀步骤、大孔吸附树脂分离步骤、酸水解步骤、离子交换柱分离步骤、半合成步骤、结晶步骤。本发明以金银花露加工残液为原料，实现资源的综合利用，并能充分利用提取过程中的咖啡酰奎尼酸类物质，将该类化合物水解成咖啡酸及奎尼酸后，再合成制备绿原酸，最终经过结晶步骤后得到纯度大于99％的绿原酸。

公开号为CN101851163A的中国专利介绍了一种从金银花中提取高纯度绿原酸的方法：将金银花物料用低温超音速气流粉碎，得到细胞级金银花微粉；经酶化，超声波处理，水提过滤，得到绿原酸初液，再经絮凝，脱色、纯化、浓缩干燥，即得高纯度绿原酸。

公开号为CN101838200A的中国专利介绍了一种从金银花中提取分离绿原酸的方法：(1)醇浸泡：将金银花置于醇溶液中浸泡，加热回流，过滤，浓缩；(2)脱脂：所得滤液采用弱极性溶剂脱脂三次，取水层；(3)上大孔树脂富集：(2)步所得水层溶液通过大孔树脂，水洗，收集流出液及水洗液，浓缩，调节pH值；(4)萃取：采用中等极性溶剂萃取(3)步所得，取有机层，浓缩回收溶剂，得到淡黄色蓬松固体物；(5)重结晶。

公开号为CN101830804A的中国专利介绍了 一种采用复合酶法提取金银花中绿原酸的方法：采用纤维素酶与果胶酶复合酶法提取金银花中主要药用有效成分绿原酸的新工艺，通过单因素试验和正交试验，优化出复合酶法提取金银花中绿原酸的最佳工艺条件：酶解温度45℃，pH4.5，纤维素酶与果胶酶复合比为1.0∶0.3，酶解时间1.5小时。

公开号为CN101602668的中国专利介绍了一种绿原酸提取的方法：将大孔树脂富集、乙酸乙酯萃取、混合溶剂分相法相结合，实现绿原酸分步梯度纯化，从而获得纯度较高的绿原酸产品。本发明工艺包括水提、过柱、萃取、分相和重结晶。本发明工艺中过柱采用的大孔树脂选择306型或XAD系列树脂；分相法采用的分相剂为石油醚或氯仿或者石油醚、氯仿混合物。

公开号为CN101503357 的中国专利介绍了一种金银花中绿原酸的萃取方法：将粉碎的金银花用石油醚进行动态浸提，提取液经过滤回收石油醚后，浓缩获得金银花香浸膏；石油醚浸提后的金银花，再以乙酸乙酯进行回流提取，提取液经过滤后回收乙酸乙酯，浓缩获金银花总黄酮；乙酸乙酯回流提取后的金银花，加水，动态提取，提取液经过滤、减压、浓缩、醇沉、脱色、纯化、浓缩、干燥，即得金银花绿原酸。

公开号为CN102285885A的中国专利介绍了一种 从金银花中快速高效提取绿原酸的方法：由净选、粉碎、取液压滤、吸附洗脱、纳滤浓缩、减压浓缩、干燥、检验包装等工艺流程组成。

公开号为CN102134192A 的中国专利介绍了一种金银花提取绿原酸的制备方法和金银花提取物的应用：取金银花药材，加8～20倍体积的水提取2～4次，每次0.5～1.5小时，调节提取液的pH值为1～6，上大孔吸附树脂柱，先用水洗脱杂质，再用10～70％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，调节浓缩液pH值为1～6，加乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，浓缩，干燥。

公开号为CN1793105的中国专利介绍了一种金银花高纯度绿原酸提取工艺：(1)是通过加入NaHSO₃、收率促进剂和澄清剂，板框压滤，再通过大孔吸附树脂柱上柱，得浓缩液，喷雾干燥得口服液绿原酸；(2)是通过加入乙醇沉淀，再加水水沉，二次澄清处理得澄清液，经活性炭处理，减压浓缩，喷雾干燥得注射用金银花提取物；(3)将所述澄清液加入β-CD络合反应，再加入环己酮解络、转型得绿原酸浓缩液，真空干燥得含量90％左右的绿原酸，环己酮免回收，套用于下一批次；(4) 是将(3)所述的浓缩液，用乙醇溶解，上硅胶层析柱，分段解析，用薄层层析，测定，合并相同部分，减压干燥，结晶，得含量≥95％绿原酸。

公开号为CN1746149的中国专利介绍了 一种由金银花粗提物制备高纯度绿原酸的方法：将金银花粗提物用去离子水溶解、充分搅拌，配制成金银花粗提物的水溶液，再加入乙醇进行醇沉，再过滤；将过滤液加热蒸去乙醇，剩余溶液将pH值调节至1～4，然后用含乙酸乙酯的混合溶剂进行多级逆流萃取；合并萃取液并浓缩回收乙酸乙酯，得到浓缩液S1；将浓缩液S1加水配制成水相；柱析步骤：将上述水相流过层析柱，随后用洗脱液进行洗脱，分段收集解吸液；将分段收集到的解吸液浓缩、结晶、干燥后得到绿原酸含量50～92％的产品。

公开号为CN1810763的中国专利介绍了 一种金银花绿原酸提取技术：采用金银花鲜活材料(鲜花、鲜叶、鲜藤)，将打浆、醇沉、膜分离工艺与超临界流体CO₂萃取联用，提取出活性物质金银花绿原酸及附产物金银花总黄酮。

金丝桃苷，又名槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷，属于黄酮醇苷类化合物。金丝桃苷广泛存在于各种植物体内，如金丝桃科、蔷薇科、桔梗科、唇形科、杜鹃花科、葵科、藤黄科、豆科以及卫矛科等的果实与全草中。苷元为槲皮素，糖基为吡喃半乳糖，由槲皮素的3位O原子以β糖苷键与糖基相连。金丝桃苷有显著的局部镇痛作用，镇痛效果弱于吗啡，强于阿司匹林，且没有依赖性，是一种新型局部镇痛药；金丝桃苷对心肌缺血再灌，脑缺血再灌，脑梗塞都显示良好的保护作用；金丝桃苷具有明显的抗炎作用；具有较强的止咳作用；有较强的抑制眼醛糖还原酶的作用，可能对预防糖尿病性白内障有利。 目前主要采用乙醇热回流提取、甲醇热回流提取、乙醇超声提取、甲醇超声提取等方法从生药粉末中对金丝桃苷进行粗提。

公开号为CN1634325的中国专利介绍了一种罗布麻提取物及其提取方法，将(1)以金丝桃苷作为代表成分对该提取物进行测定，提取物中总黄酮含量35％-90％；(2)完全水解该提取物后，槲皮素化合物的含量30％-80％；(3)提取物中，金丝桃苷化合物的含量15％-55％。提取方法与采用聚酰胺树脂分离柱，并用澄清剂对上柱液进行澄清、纯化，可明显延长分离柱的寿命。本发明所表征的罗布麻提取物是首次从罗布麻中提取出来的一种新物质，不仅精制程度高，而且保留了大部分罗布麻的药理活性，而且服用量远小于罗布麻粗体物，其药理、药性与罗布麻粗提物相比有显著区别。

公开号为CN1765912的中国专利介绍了火棘提取物及其制备方法和应用，包括组分芦丁、金丝桃苷；其制备方法包括干燥并粉碎的火棘果实中加入相当于其1～50倍重量的水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮中的一种或一种以上，提取得到提取液；提取液经过滤，离心分离，浓缩，冷冻干燥；经大孔树脂、正相硅胶和反相C18填料柱层析，洗脱分离纯化。

公开号为CN1803787的中国专利介绍了贯叶金丝桃总黄酮提取物、其制备及应用，贯叶金丝桃总黄酮提取物、其制备及应用，所述提取物总黄酮含量为80-95％；其所含黄酮成分为：芦丁5.0-50.0％、金丝桃苷6.0-70.0％、异槲皮苷3.0-10.0％、扁蓄苷0.5-5.0％、槲皮苷0.5-5.0％、槲皮素0.1-1.0％，其他黄酮类成分余量。

公开号为CN1880328的中国专利介绍了贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，涉及金丝桃苷和金丝桃素药用活性成分的制备方法本发明综合利用我国丰富的贯叶连翘果实，同时制备出总收得率和产品纯度均高的金丝桃苷和金丝桃素两种药用活性成分，生产成本低；在生产过程中，实现了多种溶剂如乙醇乙醚的回收和再次反复使用；实现了反胶束萃取剂及吸附树脂的再生和反复使用采用本发明方法制备出的植物生物活性物质，可广泛应用于清热解毒收敛止血利尿及抑郁治疗等药物中。

公开号为CN102190693A的中国专利介绍了罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，该制备方法首先确定了最佳提取温度，分离材料，洗脱剂浓度，然后调节pH值后再采用针对金丝桃苷溶解萃取能力强的溶剂进行萃取，得到萃取液后，本发明再采用乙醇或甲醇在80~85℃加热回流提取，然后再在优选的冷却温度下，放置析晶，可以非常有效的将性质相近的金丝桃苷和异槲皮苷两种黄酮苷成分分离，发明还采用制备液相进一步纯化金丝桃苷，用方法学考察确定流动相，并根据金丝桃苷吸收波长，有针对性、高效率的进行分离纯化，能得到纯度达90~99%的金丝桃苷，符合一类原料药的要求。

公开号为CN101260133的中国专利介绍了从棉花花瓣中制备金丝桃苷和异槲皮素的方法，是以棉花花瓣为原料，用有机溶剂提取，然后将提取液减压浓缩至浸膏，加入适量水溶液溶解，上大孔树脂为载体的柱层析，用水冲洗柱床至无色，然后用乙醇溶液洗脱柱床，收集洗脱液，浓缩，得到金丝桃苷与异槲皮素的粗品，再将粗品用硅胶或C18硅胶层析得到金丝桃苷和异槲皮素的纯品。

公开号为CN101524359的中国专利介绍了一种治疗阴茎勃起障碍的药物，其特征在于其有效成分包括金丝桃苷和/或金丝桃素。药理实验和临床实验表明，本发明药物具有副作用小、治疗窗宽等优点，服用该药物，不会对患者产生后遗效应，具有天然药物的特点；本发明药物具有很好的药理作用。

公开号为 CN101386634的中国专利介绍了一种金丝桃苷的提取方法及其制剂和用途，是由黄蜀葵花乙醇提取液的浓缩液，用正丁醇或醋酸乙酯萃取，或通过HPD100或HPD600大孔吸附树脂柱层析而制得黄蜀葵花提取物粗品，再经溶剂纯化和复结晶，得金丝桃苷含量按重量百分比为90-98％。金丝桃苷制剂，是以金丝桃苷为活性成分和药用辅料加工制成的冻干粉针剂或水针剂或输液或滴丸或片剂或胶囊剂或软胶囊剂。

公开号为CN101891785A的中国专利介绍了 金丝桃苷的提取方法及其制备药物的用途，所述金丝桃苷采用如下的提取方法获得：取山香圆叶或贯叶金丝桃，加5～15倍量的30％90％乙醇回流提取1～3次，每次回流提取1～3小时，滤过；合并滤液，回收乙醇，水溶液通过大孔吸附树脂柱洗脱，收集洗脱部分，减压浓缩，干燥，得金丝桃苷的混合总苷，经硅胶柱层析、Sephadex?LH-20柱层析分离，合并金丝桃苷流份，结晶，得到金丝桃苷纯品，金丝桃苷可作神经氨酸酶抑制剂用在预防和治疗流感，制成药学上可以接受的剂型。

公开号为 CN102234299A的中国专利介绍了一种分离金丝桃苷的方法，其特征是取山里红或山楂叶药材，粉碎成粗粉，用含水醇回流提取，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，经AB-8或D101大孔吸附树脂除杂，以浓度为30-80％乙醇洗脱，减压浓缩至无醇味，干燥，所得干燥物经聚酰胺柱层析分离，用含水乙醇梯度洗脱，洗脱部分将其减压浓缩，经硅胶层柱层析，再以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水洗脱或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水洗脱，直接得金丝桃苷。

综上所述，目前高含量金银花绿原酸主要通过粉碎干金银花叶、浸提、过滤、萃取或层析等步骤完成，在整个生产过程中绿原酸利用率只达到30%左右，主要是在金银花叶干燥过程损失很大，鲜叶中绿原酸含量能达到3%干基左右，而干金银花叶中绿原酸含量只有1%干基左右。金丝桃苷的生产主要从山楂叶、贯叶金丝桃等植物材料中提取，而金丝桃苷含量并不高，生产成本比较高。若浸提绿原酸后的金银花废弃物中含有大量醇溶性物质，其中金丝桃苷含量较高。如果利用其废弃物提取金丝桃苷，既充分利用当地资源，又能降低提取纯化设备投资，有效提高金银花叶中绿原酸得率，缩短从收集到得到高含量绿原酸的生产时间，降低金银花绿原酸的生产成本，成为绿原酸和金丝桃苷生产需要解决主要问题。

发明内容

本发明的目的在于针对目前金银花叶中绿原酸和金丝桃苷得率低，需要投资的设备费用高，严重影响了绿原酸和金丝桃苷的生产，为了充分利用金银花叶，公开一种利用结晶与重结晶方法从新鲜金银花叶中规模化生产绿原酸和金丝桃苷，缩短从收集金银花叶到得到高含量绿原酸和金丝桃苷的生产时间，又能降低绿原酸和金丝桃苷的生产成本。

因此，本发明提供一种从金银花叶中提取绿原酸和金丝桃苷的方法，其具体步骤如下：

(1)将新鲜金银花叶采用茶叶滚筒杀青机进行杀青2—3分钟，立即进行绞碎；

(2)将绞碎后金银花叶与水进行室温浸提4h；

(3)过滤除渣后滤液中加入适量抗氧化剂，加入活性碳脱色30min，将脱色后的提取液进行真空浓缩至原有体积的1/10-1/15；

(4)将浓缩液用DM130大孔树脂吸附，收集流出液，并用五倍柱体积水进行洗柱，收集水洗液，合并流出液和水洗液得溶液I；

(5)将洗脱液I进行真空浓缩至原有体积的1/20-1/25，再0.01mol/L盐酸溶液调节pH值至3左右，加入乙醇溶液至终浓度为50%，室温过夜结晶重结晶得到绿原酸产品；

(6) 将步骤(3)中的滤渣与乙醇溶液进行60℃回流提取4h；

(7)过滤除渣后滤液进行真空浓缩至原有体积的1/15-1/20，将浓缩液用硅胶柱（200目）吸附，用三倍柱体积水进行洗柱，再用三倍柱体积乙醇溶液进行柱洗脱，得到洗脱液II；

(8)将洗脱液II再经浓缩至原有体积的1/3-1/8，室温过夜结晶得到金丝桃苷产品。

在一个具体实施方案中，步骤(2)中所述水的量，按体积(L)/ 金银花叶重量(kg)比为3-7:1。

在一个实施方案中，步骤(3)中所述过滤过程是纱布过滤、陶瓷膜过滤，其中，优选是三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次。

在一个实施方案中，步骤(3)中所述加入适量抗氧化剂是抗坏血酸，滤液体积与加入抗坏血酸的重量比（V/g）为20—45：8。

在一个具体实施方案中，步骤(5)中所述乙醇溶液的浓度为70-80%。

在一个具体实施方案中，步骤(6)中所述乙醇溶液的浓度为60%-80%，所述加入乙醇溶液的量，按体积(L)/ 金银花叶重量(kg)比为4-6:1。

在一个具体实施方案中，步骤(7)中所述乙醇溶液的浓度为70-80%。

在上述各个方案中，金银花叶优选为含水率在80%左右的鲜叶，并且不必经任何干燥过程处理。

技术效果：

1、本发明方法中所用的原料、设备均为常见的普通原料、设备，避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、仪器的依赖，改变了传统的生产工艺，原料不需干燥，杀青后直接使用，耗能少，绿原酸得率高，安全隐患低。

2、金银花叶产量高，来源方便，在农村储备很丰富，后续资源有保障，大大提高了金银花叶的利用效率，同时也增加了金银花叶的附加值。

3、原料经过杀青后能有效避免金银花叶中酶对绿原酸的降解，另外原料杀青后直接使用不需要干燥，又能大大节省了能耗。

4、本发明方法纯化工艺操作简单，仅使用萃取、树脂层析过滤、结晶再结晶技术，也不需要精密仪器或自动化设备，可在金银花资源丰富的乡镇企业进行生产，这极大地降低了绿原酸的生产成本，简化了生产过程，确保规模化生产绿原酸。

5、本发明所用的试剂均为无毒、廉价、量产的化学试剂，整个过程中可利用成熟的试剂回收的常规技术，这极大地降低了向环境排放废弃物的风险。

6、通过采用金银花叶同时提取绿原酸和金丝桃苷，充分利用了原材料，降低了绿原酸和金丝桃苷的生产成本，节省了中药材资源。

具体实施方式

用本发明的实施实例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限制本发明。

实施例1

将含水率在80%左右的鲜金银花叶采用茶叶滚筒杀青机（岳阳市农业机械化研究所生产茶叶滚筒杀青机6CST-80）进行杀青并绞碎，称取200kg含水45%的新鲜金银花叶加入水溶液1000L，室温条件下浸提4h，三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次得滤液，固液分离后加入颗粒活性碳（巩义市恒泰滤材有限公司提供）处理30min，加入210g抗坏血酸在50℃进行真空浓缩至80L；将浓缩液上DM130大孔树脂柱吸附，收集流出液和水洗液得溶液I 240L；将洗脱液再经浓缩至20L，再0.01mol/L盐酸溶液调节pH值至3左右，加入95%乙醇溶液至终浓度为50%，室温过夜结晶重结晶得到绿原酸产品3.43kg。向步骤(3)中的滤渣加入1000L的60%乙醇溶液进行60℃回流提取4h；过滤除渣后滤液进行真空浓缩至60L，将浓缩液用硅胶柱（200目）吸附，用120L水进行洗柱，再用120L的70%乙醇溶液进行柱洗脱，得到洗脱液II100L，将洗脱液II再经浓缩至20L，室温过夜结晶得到金丝桃苷产品1.58kg。检测设备为Agilent1100高效液相色谱仪，色谱柱为Hypersil ODS (150mm×4.6mm，5μ)，检测条件∶流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液 (10∶90，V/V) 、检测波长为327nm、流速1.0 mL/ min 、柱温25℃、进样量为20μL，检测绿原酸样品的含量为98.25%；检测条件∶流动相为乙腈-1％冰醋酸溶液 (14∶86，V/V)、检测波长为350nm、流速1.0 mL/ min、柱温30℃、进样量为20μL，检测金丝桃苷样品的含量为97.04%。

实施例2

将含水率在75%左右的鲜金银花叶采用茶叶滚筒杀青机（岳阳市农业机械化研究所生产茶叶滚筒杀青机6CST-80）进行杀青并绞碎，称取400kg含水48%的新鲜金银花叶加入水1800L，室温条件下浸提4h，三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次得滤液，固液分离后加入颗粒活性碳处理30min，加入400g抗坏血酸在50℃进行真空浓缩至140L；将浓缩液上DM130大孔树脂柱吸附，收集流出液和水洗液得溶液I 450L；将洗脱液再经浓缩至50L，再0.01mol/L盐酸溶液调节pH值至3左右，加入95%乙醇溶液至终浓度为50%，室温过夜结晶得到绿原酸纯品11.23kg。向步骤(3)中的滤渣加入2000L的60%乙醇溶液进行60℃回流提取4h；过滤除渣后滤液进行真空浓缩至100L，将浓缩液用硅胶柱（200目）吸附，用350L水进行洗柱，再用300L的70%乙醇溶液进行柱洗脱，得到洗脱液II250L，将洗脱液II再经浓缩至35L，室温过夜结晶得到金丝桃苷产品3.27kg。按实例1进行检测，检测绿原酸样品的含量为98.85%，金丝桃苷样品的含量为98.25%。

Claims (7)

1.一种从金银花叶中提取绿原酸和金丝桃苷的方法，其具体步骤如下：

(1)将新鲜金银花叶采用茶叶滚筒杀青机进行杀青2—3分钟，立即进行绞碎；

(2)将绞碎后金银花叶与水进行室温浸提4h；

(3)过滤除渣后滤液中加入适量抗氧化剂，加入活性碳脱色30min，将脱色后的提取液进行真空浓缩至原有体积的1/10-1/15；

(4)将浓缩液用DM130大孔树脂吸附，收集流出液，并用五倍柱体积水进行洗柱，收集水洗液，合并流出液和水洗液得溶液Ⅰ；

(5)将洗脱液Ⅰ进行真空浓缩至原有体积的1/20-1/25，再0.01mol/L盐酸溶液调节pH值至3左右，加入乙醇溶液至终浓度为50％，室温过夜结晶重结晶得到绿原酸产品；

(6)将步骤(3)中的滤渣与乙醇溶液进行60℃回流提取4h；

(7)过滤除渣后滤液进行真空浓缩至原有体积的1/15-1/20，将浓缩液用200目硅胶柱吸附，用三倍柱体积水进行洗柱，再用三倍柱体积乙醇溶液进行柱洗脱，得到洗脱液Ⅱ；

(8)将洗脱液Ⅱ再经浓缩至原有体积的1/3-1/8，室温过夜结晶得到金丝桃苷产品。

2.根据权利要求1的方法，步骤(2)中所述水的量，按体积L/金银花叶重量kg比为3-7:1。

3.根据权利要求2的方法，步骤(3)中所述过滤过程是三层纱布过滤2次和陶瓷膜过滤1次。

4.根据权利要求3的方法，步骤(3)中所述加入适量抗氧化剂是抗坏血酸，滤液体积L与加入抗坏血酸的重量g比为20—45：8。

5.根据权利要求4的方法，步骤(5)中所述乙醇溶液的浓度为70-80％。

6.根据权利要求5的方法，步骤(6)中所述乙醇溶液的浓度为60％-80％，所述加入乙醇溶液的量，按体积L/金银花叶重量kg比为4-6:1。

7.根据权利要求6的方法，步骤(7)中所述乙醇溶液的浓度为70-80％。