CN109021045A - 大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法 - Google Patents

大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法，其特点是，包括大孔树脂柱吸附过程、洗脱液分段洗脱过程和凝胶色谱柱精制过程；本发明以大叶白麻叶为原料，经处理后得到大叶白麻叶提取物，经蒸馏水充分溶解后滤除不溶物，滤液以通过大孔树脂柱，用洗脱液分段洗脱，第一阶段洗脱液经浓缩冻干，得到纯度为52%以上的绿原酸；第二阶段洗脱液经减压蒸馏后，产物用甲醇溶解，继续使用凝胶色谱柱进行精制，得到纯度为93%以上的白麻苷和97%以上的异檞皮苷；该分离方法在一个简单的工艺过程中同时得到了高纯度的白麻苷（93%以上）和异檞皮苷（97%以上）以及绿原酸（52%以上），工艺简单可行，生产效率高，原材料利用率高，适用于工业化生产，具有较高的生产和实用价值。

Description

大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法
技术领域：
本发明涉及大叶白麻叶活性成分分离纯化技术领域，具体地讲是大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法。
背景技术：
大叶白麻（Pocynum hendersonii (Hook. f.) Woodson）为夹竹桃科白麻属野生药用植物，也称为大花罗布麻、大花白麻。广泛分布于我国西北内陆荒漠地区及东部沿海等省区，野生在盐碱荒地、沙漠边缘、河流和湖泊周围。大叶白麻具有延缓衰老、降压、降脂、抗感冒、镇静安神等功效，常常作为中药罗布麻的替代品入药。
大叶白麻中主要含有黄酮类化合物。已从大叶白麻中发现的黄酮化合物包括白麻苷、异槲皮苷、6′′-丙二酰化-异槲皮素、芦丁、槲皮素、紫云英苷、北美圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、山柰酚、三叶豆苷、异鼠李素-3-O-α-D-葡萄糖苷、金丝桃苷等。白麻苷（Quercetion-3-O-sophoroside）和异槲皮苷（Isoquercetin）是大叶白麻中含量较高的两种黄酮化合物，具有多种生物活性。白麻苷具有较强的抗肿瘤、抗氧化活性以及多巴胺能神经保护作用。异槲皮苷具有抗菌、抗真菌、抗氧化、神经保护、降压、保肝、降脂、抗癌、抗炎及利尿等作用。绿原酸也是大叶白麻的主要药效成分，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。
目前关于大叶白麻叶中黄酮类化合物的分离纯化方法的报道主要集中在大叶白麻叶中总黄酮的纯化工艺方面（史俊友等，大叶白麻中总黄酮超临界CO2萃取工艺优化，2015；叶菊等，大孔树脂对大叶白麻叶总黄酮的分离纯化工艺研究，2010；张永秀，大叶白麻叶总黄酮提取方法研究，2009；赵明，柴达木大叶白麻叶总黄酮提取工艺及成分研究，2008），对于黄酮单体的分离纯化方法报道较少（应用高速逆流色谱法从大叶白麻中纯化三种黄酮苷的方法，CN201210182475.8），而对于大叶白麻叶中黄酮单体和绿原酸的同时分离纯化的方法还未见报道。
发明内容：
本发明的目的是克服上述已有技术的不足，而提供一种大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法，从而提高现有方法的生产效率和原料的利用率；主要解决现有的大叶白麻叶不能同时分离黄酮单体和绿原酸的问题。
本发明的技术方案是：大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法，其特殊之处在于，包括大孔树脂柱吸附过程、洗脱液分段洗脱过程和凝胶色谱柱精制过程，操作步骤如下：
a大孔树脂柱吸附过程：大叶白麻叶经过干燥粉碎、乙醇水溶液回流提取、提取液减压蒸馏后得到大叶白麻叶提取物；将大叶白麻叶提取物加入蒸馏水超声溶解，滤除不溶物，滤液流经大孔树脂柱吸附；
b洗脱液分段洗脱过程：将吸附后的大孔树脂柱先用蒸馏水充分洗脱，收集第一阶段洗脱液；再用乙醇水溶液进行洗脱，收集第二阶段洗脱液，第一阶段洗脱液经浓缩冻干，得到纯度为52%以上的绿原酸；第二阶段洗脱液经减压蒸馏得到的产物用于下一步精制；
c凝胶色谱柱精制过程：将第二阶段洗脱液得到的产物用甲醇溶解，上样到凝胶色谱柱上进行精制，洗脱液洗脱后分别收集单体洗脱液，减压蒸馏后得到纯度93%以上的白麻苷和97%以上的异檞皮苷。
c凝胶色谱柱精制过程：将第二阶段得到的产物用甲醇溶解，上样到凝胶色谱柱上进行精制，洗脱液洗脱后分别收集单体洗脱液，减压蒸馏后得到纯度93%以上的白麻苷和97%以上的异檞皮苷。
进一步的：所述的a步骤大孔树脂为聚苯乙烯型大孔树脂。
进一步的：所述的大孔树脂为HPD-200A、HPD-300、HPD-400、HPD-750、HPD-500或HPD-826中的一种。
进一步的：所述的b步骤第二阶段洗脱液为20%-100%（V/V）的乙醇水溶液。
本发明所述的大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法与已有技术相比具有突出的实质性特点和显著进步：1、在一个工艺流程中可同时得到高纯度的白麻苷（纯度93%以上）、异檞皮苷（纯度97%以上）和绿原酸（纯度52%以上），提高了生产效率和原材料利用率，具有较高的生产和实用价值；2、工艺流程简单易操作，适用于工业化生产；3、大孔树脂材料性质稳定、吸附性能好、价格低廉，而且大孔树脂材料和洗脱溶剂均可回收再利用，降低了生产成本。
附图说明：
图1是实施例1的HPD-300树脂吸附前的大叶白麻叶提取物色谱图；
图2是实施例1的经过HPD-300树脂吸附后的第二阶段洗脱液的色谱图；
图3是实施例1的经过凝胶色谱柱精制后的白麻苷的色谱图；
图4是实施例1的经过凝胶色谱柱精制后的异檞皮苷的色谱图。
具体实施方式：
实施例1，干燥的大叶白麻叶500g经粉碎后，加入1000mL70%乙醇溶液加热回流提取2次，合并提取液经减压蒸馏得51.34g大叶白麻叶提取物；大叶白麻叶提取物加入500mL蒸馏水超声溶解，滤除不溶物，滤液以3BV/h的流速流经HPD-300大孔树脂柱；吸附完成后，HPD-300大孔树脂柱先用5BV的蒸馏水充分洗脱，收集第一阶段洗脱液，经浓缩冻干后，得到5.36g纯度为53.3%的绿原酸；HPD-300大孔树脂柱再用5BV 20%乙醇水溶液充分洗脱，收集第二阶段洗脱液，经减压蒸馏得到4.63g产物；将该产物用30mL甲醇溶解，上样到SephadexLH-20凝胶色谱柱上，用甲醇洗脱，分别收集单体洗脱液，减压蒸馏后得到0.87g纯度为94.2%的白麻苷和0.43g纯度为97.8%的异檞皮苷。具体结果参见图1、2、3、4。
实施例2，干燥的大叶白麻叶2500g经粉碎后，加入5000mL70%乙醇溶液加热回流提取2次，合并提取液经减压蒸馏得249.33g大叶白麻叶提取物；大叶白麻叶提取物加入2500mL蒸馏水超声溶解，滤除不溶物，滤液以2BV/h的流速流经HPD-400大孔树脂柱；吸附完成后，HPD-400大孔树脂柱先用7BV的蒸馏水充分洗脱，收集第一阶段洗脱液经浓缩冻干后，得到26.76g纯度为52.5%的绿原酸；HPD-400大孔树脂柱再用7BV 40%乙醇水溶液充分洗脱，收集第二阶段洗脱液，经减压蒸馏得到22.78g产物；将该产物用150mL甲醇溶解，上样到Sephadex LH-20凝胶色谱柱上，用甲醇洗脱，分别收集单体洗脱液，减压蒸馏后得到4.29g纯度为93.5%的白麻苷和2.09g纯度为97.3%的异檞皮苷。
实施例3，干燥的大叶白麻叶5000g经粉碎后，加入10000mL70%乙醇溶液加热回流提取2次，合并提取液经减压蒸馏得490.66g大叶白麻叶提取物；大叶白麻叶提取物加入5000mL蒸馏水超声溶解，滤除不溶物，滤液以2BV/h的流速流经HPD-200A大孔树脂柱；吸附完成后，HPD-200A大孔树脂柱先用10BV的蒸馏水充分洗脱，收集第一阶段洗脱液，经浓缩冻干后，得到52.48g纯度为52.0%的绿原酸；HPD-200A大孔树脂柱再用10BV 100%乙醇水溶液充分洗脱，收集第二阶段洗脱液，经减压蒸馏得到40.07g产物；将该产物用300mL甲醇溶解，上样到Sephadex LH-20凝胶色谱柱上，用甲醇洗脱，分别收集单体洗脱液，减压蒸馏后得到8.12g纯度为93.0%的白麻苷和3.89g纯度为97.0%的异檞皮苷。
以上实施例均为本发明的较佳实施例，对本发明的分离方法做了详细介绍，并不限制本发明，凡在本发明的原则内所做的任何修改，改进等，均包含在本发明的保护范围内。

Claims (4)

1.大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法，其特征在于，包括大孔树脂柱吸附过程、洗脱液分段洗脱过程和凝胶色谱柱精制过程，操作步骤如下：
a大孔树脂柱吸附过程：大叶白麻叶经过干燥粉碎、乙醇水溶液回流提取、提取液减压蒸馏后得到大叶白麻叶提取物；将大叶白麻叶提取物加入蒸馏水超声溶解，滤除不溶物，滤液流经大孔树脂柱吸附；
b洗脱液分段洗脱过程：将吸附后的大孔树脂柱先用蒸馏水充分洗脱，收集第一阶段洗脱液；再用乙醇水溶液进行洗脱，收集第二阶段洗脱液，第一阶段洗脱液经浓缩冻干，得到纯度为52%以上的绿原酸；第二阶段洗脱液经减压蒸馏得到的产物用于下一步精制；
c凝胶色谱柱精制过程：将第二阶段洗脱液得到的产物用甲醇溶解，上样到凝胶色谱柱上进行精制，洗脱液洗脱后分别收集单体洗脱液，减压蒸馏后得到纯度93%以上的白麻苷和97%以上的异檞皮苷。
2.根据权利要求1所述的大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法，其特征在于：所述的a步骤大孔树脂为聚苯乙烯型大孔树脂。
3.根据权利要求2所述的大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法，其特征在于：所述的大孔树脂为HPD-200A、HPD-300、HPD-400、HPD-750、HPD-500或HPD-826中的一种。
4.根据权利要求1所述的大叶白麻叶中同时分离白麻苷、异檞皮苷和绿原酸的方法，其特征在于：所述的b步骤第二阶段洗脱液为20%-100%（V/V）的乙醇水溶液。
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