CN101974008B - 小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺 - Google Patents

Abstract

小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺。该工艺是取小八角莲根茎粉碎成粗粉，通过有机溶剂对小八角莲粗粉进行预处理，经热水中回流提取，滤渣继续热回流提取再次过滤，合并两次滤液，回收有机溶剂后用适量水定容，得到鬼臼毒素提取液。用鬼臼毒素提取液制备含生药量为0.12g/mL～0.18g/mL的溶液作为上样液，选择净化好的大孔吸附树脂作为上柱树脂，充分吸附后，分别用水、10％乙醇依次洗去杂质，再用解吸剂进行洗脱，收集洗脱部分，回收解吸剂后用适量水定容，得到鬼臼毒素纯化液。本发明工艺使用的均是无毒有机溶剂，且有机溶剂还可回收，再利用，无污染环境的“三废”产物产生。整个工艺绿色环保，且操作简单，易于工业化，工艺所得鬼臼毒素纯度在98％以上。

Description

小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺

技术领域

本发明涉及一种从天然植物小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺。

背景技术

鬼臼毒素属于木脂素类，主要存在于小檗科足叶草属、鲜黄莲属、山荷叶属和八角莲属植物中，1820年美国药典收载，被用于治疗尖锐湿疣。0.5％鬼臼毒素酊剂是世界卫生组织(WHO)推荐的治疗性病尖锐湿疣的首选药物。鬼臼毒素几乎能治疗所有的疣，而且比其他的方法疗程短、疗效显著、副作用少。鬼臼毒素和其类似化合物还具有对抗麻疹、单纯疱疹和抗细胞巨化病毒等作用，还被用作生物农药。但抗肿瘤和抗病毒是其最重要的作用，鬼臼毒素衍生物依托泊苷、替尼泊苷已被成功用于临床治疗各种肿瘤。通常，鬼臼毒素是从足叶草属根茎中提取分离，然而，从此单一植物资源中提取鬼臼毒素作为药物和合成依托泊苷和新衍生物的半合成物的原料药是十分有限的。

目前，鬼臼毒素获得主要有两条途径，一条途径是化学全合成，另一条途径是从天然植物中提取分离。化学全合成技术难度高，合成成本高，很不经济。从植物中直接提取鬼臼毒素，在目前看来还是最有效、最经济、最迅速的办法，但也有许多亟待解决的问题，如资源持续供给、分离纯化步骤繁多、复杂，也是最难解决的问题之一。

由于鬼臼毒素主要存在于小檗科多年生草本类群鬼臼亚科八角莲属(DysosmaWoodson)、桃儿七属(Sinopodophyllum Ying)、山荷叶属(Diphylleia Michx)及足叶草属(Podophyllum)植物中。这些植物由于都具有盾状着生的叶，茎中具有多数散生微管束，花不具蜜腺，浆果含鬼臼毒素等一些共同特征而被看作一个自然而相对独立的类群，习惯上称为鬼臼类植物。由于，鬼臼类植物不仅具有药用价值，而且具有良好的花卉观赏价值。所以，受到多年来人类采挖的影响，作为提取鬼臼毒素的八角莲、六角莲、中华山荷叶、东北山荷叶、桃儿七等原植物已濒临灭绝。目前，八角莲已被列为国家二级保护植物。

发明人通过专利检索和文献查阅表明，目前鬼臼毒素提纯化工艺是甲醇、乙醇等有机溶剂回流或超声加热提取八角莲、六角莲、桃儿七等植物中的鬼臼毒素，得鬼臼毒素浸膏，然后采用溶剂萃取，重结晶工艺分离得鬼臼毒素，如200710018473.4发明专利关于鬼臼毒素分离纯化工艺采用苯为溶剂对鬼臼毒素浸膏回流进一步提取，回收溶剂后，对析出的晶体采用苯-乙醇重结晶，得鬼臼毒素-苯加合物，再加热分解加合物，得鬼臼毒素白色粉未；200410052833.9发明专利关于鬼臼毒素分离工艺改进采用石油醚萃取，再用硅胶柱层析分离纯化，以醇类或酮类与氯仿的混合液进行洗脱，得到鬼臼毒素；200910047696.2发明专利关于鬼臼毒素分离纯化工艺采用二氯甲烷萃取，再以硅胶柱层析分离纯化，以丙酮+二氯甲烷混合洗脱剂洗脱，得到鬼臼毒素。但以上工艺也存在着不够环保，分离纯化步骤繁多、复杂的问题。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种可避开现有已濒临灭绝的可提取鬼臼毒素植物，开辟一个新原料供应渠道，并提供一种可有效的从该原料中提取并纯化鬼臼毒素的新工艺，整个工艺具有绿色环保，且操作简单，易于工业化，工艺所得鬼臼毒素纯度高的特点。

本发明的目的可以通过如下措施来实现：

本发明包括如下步骤：

取小八角莲根茎粉碎成粗粉，通过有机溶剂对小八角莲粗粉进行预处理；加5～15倍量浓度为60％～90％的热回流提取有机溶剂在温度为70℃～95℃的热水中回流提取60～120分钟并过滤，滤渣在70℃～95℃的温度下加10～25倍量浓度为60％～90％相同的热回流提取有机溶剂继续热回流提取80～150分钟后再次过滤，合并两次滤液，回收有机溶剂后用适量水定容，得到鬼臼毒素提取液；用鬼臼毒素提取液制备含生药量为0.12g/mL～0.18g/mL的溶液作为上样液，选择净化好的大孔吸附树脂作为上柱树脂，以1BV/h～3BV/h的流速进行上样并充分吸附后，分别用水、8～12％乙醇依次洗去杂质，再用浓度为30％～70％的解吸剂以3BV/h～6BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱部分，回收解吸剂后用适量水定容，得到鬼臼毒素纯化液；

对于小八角莲粗粉进行预处理的有机溶剂是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种或几种混合；

用于热回流提取的有机溶剂是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯或乙酸丁酯；

用于纯化的解吸剂是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种或几种混合。

上述方案中用于纯化的大孔吸附树脂是LSA5B、HPD100、HPD400、HPD600、HPD800、D101或AB-8。

将得到鬼臼毒素纯化液回收有机溶剂，放置，干燥，得鬼臼毒素。

本发明所述新工艺具有如下优点：本发明采用的原料为小八角莲，为小檗科八角莲属植物，在我国湖南等地有广泛分布，是八角莲属植物在湖南省分布最普遍的一种。其根及根茎入药，具有清热解毒、散结祛瘀的功效。但目前对小八角莲化学成分的研究在国内外均未见报道。因而，发明人对从小八角莲中提取分离鬼臼毒素进行研究，并获取从小八角莲中提取并纯化鬼臼毒素的新工艺，可为医药工业生产依托泊干等抗肿瘤药物创造新的条件。另外，本发明采用的是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯等无毒有机溶剂及其混合有机溶剂对小八角莲粗粉进行预处理，使小八角莲粗粉处于强渗促溶环境下。本发明工艺简便可行，所需设备简单，成本低。本发明利用木质素类物质的溶解特性，将原料中的鬼臼毒素能够比较完全地提取并纯化。本发明所采用的溶剂均是无毒有机溶剂，且有机溶剂还可回收，再利用；所采用的大孔吸附树脂无毒、安全、价廉、可重复利用。无污染环境的“三废”产物产生。整个工艺绿色环保，且操作简单，易于工业化，工艺所得鬼臼毒素纯度可达98％以上。

附图说明

图1为本发明的工艺流程图。

具体实施方式

本发明还将结合实施例做进一步详述，但本发明不仅限于所述实施例。

实施例一：

取小八角莲根茎粉碎成粗粉，以乙醇为有机溶剂，对小八角莲粗粉进行预处理，使小八角莲粗粉处于强渗促溶环境，再加9倍量浓度为80％的乙醇在90℃的热水中热回流提取60分钟并过滤，滤渣加7倍量浓度为80％的乙醇继续在100℃的热水中热回流提取45分钟后再次过滤，合并两次滤液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼臼毒素提取液。取鬼臼毒素提取液制备成含小八角莲生药量为0.121g/mL的溶液作为上样液，选择净化好的LSA5B大孔吸附树脂作为上柱树脂，以2BV/hr流速进行上样并充分吸附后，分别用水、10％乙醇各5BV依次洗去杂质，再用5BV的浓度为70％乙醇作为解吸剂进行洗脱，流速控制在4BV/h，接取70％乙醇的洗脱液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼臼毒素纯化液。回收有机溶剂，放置，干燥，得鬼臼毒素。鬼臼毒素纯度在98.2％以上。

实施例二：

取小八角莲根茎粉碎成粗粉，以乙醇和丙酮7∶3比例混合有机溶剂，对小八角莲粗粉进行预处理，使小八角莲粗粉处于强渗促溶环境，再加12倍量浓度为70％的乙醇在95℃的热水中热回流提取80分钟并过滤，滤渣加15倍量浓度为70％的乙醇继续在95℃的热水中热回流提取120分钟后再次过滤，合并两次滤液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼臼毒素提取液。取鬼臼毒素提取液制备成含小八角莲生药量为0.152g/mL的溶液作为上样液，选择净化好的HPD100大孔吸附树脂作为上柱树脂，以2BV/h流速进行上样并充分吸附后，分别用水、10％乙醇各5BV依次洗去杂质，再用5BV的浓度为50％乙醇作为解吸剂进行洗脱，流速控制在4BV/h，接取50％乙醇的洗脱液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼臼毒素纯化液。回收有机溶剂，放置，干燥，得鬼臼毒素。鬼臼毒素纯度在98.9％以上。

实施例三：

取小八角莲根茎粉碎成粗粉，以乙醇和乙酸乙酯9∶1比例混合有机溶剂，对小八角莲粗粉进行预处理，使小八角莲粗粉处于强渗促溶环境，再加15倍量浓度为90％的乙醇在90℃的热水中热回流提取60分钟并过滤，滤渣加20倍量浓度为90％的乙醇继续在90℃的热水中热回流提取100分钟后再次过滤，合并两次滤液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼臼毒素提取液。取鬼臼毒素提取液制备成含小八角莲生药量为0.152g/mL的溶液作为上样液，选择净化好的HPD400大孔吸附树脂作为上柱树脂，以3BV/h流速进行上样并充分吸附后，分别用水、10％乙醇各5BV依次洗去杂质，再用6BV的浓度为30％乙醇作为解吸剂进行洗脱，流速控制在3BV/h，接取30％乙醇的洗脱液，回收乙醇后用适量水定容，得到鬼臼毒素纯化液。回收有机溶剂，放置，干燥，得鬼臼毒素。鬼臼毒素纯度在99.3％以上。

Claims (3)

1.小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺，取小八角莲根茎粉碎成粗粉，通过有机溶剂对小八角莲粗粉进行预处理；加5～15倍量浓度为60%～90%的热回流提取有机溶剂在温度为70℃～95℃的热水中回流提取60～120分钟并过滤，滤渣在70℃～95℃的温度下加10～25倍量浓度为60%～90%的相同的热回流提取有机溶剂继续热回流提取80～150分钟后再次过滤，合并两次滤液，回收有机溶剂后用适量水定容，得到鬼臼毒素提取液；用鬼臼毒素提取液制备含生药量为0.12g/mL～0.18g/mL的溶液作为上样液，选择净化好的大孔吸附树脂作为上柱树脂，以1BV/h～3BV/h的流速进行上样并充分吸附后，分别用水、8～12%乙醇依次洗去杂质，再用浓度为30%～70%的解吸剂以3BV/h～6BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱部分，回收解吸剂后用适量水定容，得到鬼臼毒素纯化液；

对于小八角莲粗粉进行预处理的有机溶剂是乙醇、丙酮、正丁醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种或几种混合；

用于热回流提取的有机溶剂是乙醇；

用于纯化的解吸剂是乙醇。

2.根据权利要求1所述的工艺，用于纯化的大孔吸附树脂是LSA5B、HPD100、HPD400、HPD600、HPD800、D101或AB-8。

3.根据权利要求1或2所述的工艺，将得到鬼臼毒素纯化液回收溶剂，放置，干燥，得鬼臼毒素。