CN101474240B

CN101474240B - 一种从含羞草中提取总黄酮的方法

Info

Publication number: CN101474240B
Application number: CN2009100957318A
Authority: CN
Inventors: 袁珂
Original assignee: Zhejiang Forestry College
Current assignee: Zhejiang A&F University ZAFU
Priority date: 2009-01-22
Filing date: 2009-01-22
Publication date: 2012-01-25
Anticipated expiration: 2029-01-22
Also published as: CN101474240A

Abstract

一种从含羞草中提取总黄酮的方法，属于黄酮提取方法技术领域。包括以下步骤：含羞草粉碎成粗粉，过筛；将含羞草粗粉用含水乙醇浸泡后，以含水乙醇进行渗漉；渗漉液减压浓缩得到浓缩液；浓缩液用活性炭超声脱色，滤液备用；滤液减压浓缩得滤液浓缩液；大孔树脂纯化：滤液浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，用H₂O和10～70％含水乙醇进行梯度洗脱，合并10～70％含水乙醇各部位的洗脱液减压浓缩；洗脱浓缩液二次大孔树脂纯化，合并20～60％含水乙醇各部位的洗脱液减压浓缩、再进一步真空浓缩干燥，得含羞草总黄酮提取物干粉。采用上述方法得到的提取物中总黄酮含量为42.60％左右，总黄酮转移率达76.56％左右。

Description

一种从含羞草中提取总黄酮的方法

技术领域

本发明属于黄酮提取方法技术领域，具体为一种从含羞草中提取总黄酮的方法。

背景技术

含羞草为豆科(Fabaceae)含羞草属(Mimosaceae)植物含羞草(Mimosa pudica)的全草，为亚灌木状草本植物，又名知羞草、怕羞草、喝乎草、望江南、怕丑草，刺含羞草等。含羞草原产于热带美洲，1645年由荷兰人引入台湾，主要分布在我国华东、华南、西南等地的山坡丛林、路旁、湿地，今作为观赏植物广为栽培。《全国中草药汇编》载：含羞草“甘、涩、凉，具有清热利尿、化痰止咳、安神止痛的作用。《广西本草选编》记载：“味甘微涩，性凉，有小毒。有安神镇静，凉血止血功效。临床多用于急性肝炎，神经衰弱，失眠，肺结核咳血，血尿，小儿疳积，结膜炎，跌打损伤，带状疱疹等症。近年来有关于它治疗糖尿病疗效较好的报道。

含羞草中的主要化学成分为黄酮苷、酚类、氨基酸、有机酸、植物甾醇类等成分，在含羞草较多的活性成分中，尤以黄酮苷类的含量较高且活性突出。现已从含羞草中分离得到的黄酮类化合物包括有荭草苷、异荭草苷、5，7，3′，4′-四羟基-6-C-[β-D-芹糖-(1→4)]-β-D-葡糖黄酮碳苷、5，7，3′，4′-四羟基-8-C-[β-D-芹糖-(1→4)]-β-D-葡糖黄酮碳苷、5，7，4’-三羟基-6-C-[a-L-鼠李糖(1→2)]-β-D-葡糖黄酮碳苷、7，8，3’，4’-四羟基-6-C-[α-L-鼠李糖-(1→2)]-β-D-葡糖黄酮碳苷、7，8，3’，4’-四羟基-8-C-[α-L-鼠李糖-(1→2)]-β-D-葡糖黄酮碳苷等，其中所含的荭草苷、异荭草苷等黄酮苷类成分结构较稳定，不宜被降解破坏，具有抗氧化、降血压、增加冠脉流量、降血脂、抗菌消炎等方面的活性。目前，尚未见到从含羞草中提取纯化总黄酮类化合物的报道。近年来从中草药中提取黄酮类化合物的方法多采用超声提取法、回流提取法及冷浸提取法，采用这些方法存在溶剂用量大、提取时间长、操作麻烦、工作效率较低等缺点，且分离纯化黄酮类成分多采用反复硅胶柱色谱，操作步骤多，有机溶剂用量大，尤其是常要用到氯仿、甲醇等有害溶剂，对环境造成污染，生产成本高。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种快速从含羞草中提取总黄酮的方法的技术方案，该方法工艺简单，生产成本低，总黄酮的转移率高。

所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将含羞草全草晾干后粉碎成粗粉，过筛；

2)将含羞草粗粉装入渗漉筒中，用含水乙醇浸泡后，以含水乙醇进行渗漉，收集渗漉液；

3)减压浓缩：渗漉液真空浓缩，回收乙醇，得到浓缩液；

4)脱色处理：步骤3)得到的浓缩液用活性炭超声脱色，抽滤，除去活性碳，滤液备用；

5)减压浓缩：步骤4)得到的滤液真空浓缩，得到滤液浓缩液；

6)大孔树脂纯化：将步骤5)得到的滤液浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，然后先用H₂O洗脱，再依次用10～70％含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70％丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并10～70％含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液减压浓缩，得到洗脱浓缩液；

7)二次大孔树脂纯化：将步骤6)中得到的洗脱浓缩液通过大孔吸附树脂柱分离富集，然后先用H₂O洗脱，再依次用10～70％含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70％丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并20～60％含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液减压浓缩、再进一步真空浓缩干燥，即得含羞草总黄酮提取物干粉。

所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤1)中含羞草全草挑选后打成粗粉，过20～40目筛。

所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤2)中将含羞草粗粉装入渗漉筒中，用50～80％的含水乙醇浸泡12～14小时后，用含羞草粗粉8～16倍量的50～80％含水乙醇进行渗漉提取，流速为4～6mL/min，收集渗漉液。

所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤3)中渗漉液在水浴温度50℃以下真空浓缩，回收乙醇，得到浓缩液。

所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤4)中将浓缩液用粉末状活性炭在50℃以下超声脱色30-60分钟，活性炭的用量为含羞草粗粉用量的2-5％，脱色1～2次，抽滤，除去活性炭，滤液备用。

所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤5)中将滤液在50℃以下真空浓缩，得到滤液浓缩液。

所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)、步骤7)中选用20～60％含水乙醇进行梯度洗脱。

所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)、步骤7)中所述的减压浓缩为50℃以下真空浓缩。

所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)中将洗脱浓缩液真空浓缩干燥，得到干粉，将干粉加水溶解后进入下步工艺。

大孔吸附树脂是近代发展起来的一类有机高聚物吸附剂，广泛应用于中草药成分的提取分离。中国医学科学院药物研究所试用大孔吸附树脂对糖类、生物碱、黄酮等进行吸附，并在此基础上用于天麻、赤勺、灵芝和照山白等中草药的提取分离，结果表明大孔吸附树脂是分离中草药水溶性成分的一种有效方法，除无机矿物质外，其它中药有效部位均可不同程度的被树脂吸附纯化。

上述一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其工艺简单、操作方便、设备投资少、减少了溶剂用量，无环境污染，生产成本低。采用紫外法测定所得到的总黄酮提取物干粉，提取物中总黄酮的含量为42.60％左右，其中荭草苷含量达8.84％左右，总黄酮的转移率达76.56％左右，总黄酮的转移率高。

本申请文件中涉及的百分含量除另有说明外，液体的百分含量为体积比，固体的百分含量为重量比。

具体实施方式

现结合具体实施例，对本发明作进一步说明，具体工艺步骤如下所述：

1)原料处理：将含羞草全草挑选后打成粗粉，过20-40目筛；2)提取：将含羞草粗粉装入渗漉筒中，用50％含水乙醇浸泡14小时后，用含羞草粗粉16倍量的50％含水乙醇进行渗漉提取，流速为5mL/min，收集渗漉液；3)减压浓缩：提取液在水浴温度50℃以下真空浓缩，回收乙醇，得到含2mL浓缩液/每g含羞草粗粉；4)脱色处理：将步骤3)得到的浓缩液用粉末状活性炭在50℃以下超声脱色30分钟，活性炭的用量为含羞草粗粉用量的2％，脱色1次，抽滤，除去活性碳，滤液备用；5)减压浓缩：将步骤4)得到的滤液继续在50℃以下真空浓缩到含1mL滤液浓缩液/每g含羞草粗粉；6)大孔树脂纯化：将步骤5)得到的滤液浓缩液通过Diaion HP-20大孔吸附树脂分离富集，然后先用H₂O洗脱，再依次用10％含水乙醇、20％含水乙醇、40％含水乙醇、60％含水乙醇、70％含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70％丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并10-70％含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液在50℃以下真空浓缩，得到洗脱浓缩液；7)二次大孔树脂纯化：将步骤6)中得到的洗脱浓缩液通过Diaion HP-20大孔吸附树脂柱分离富集，然后先用H₂O洗脱，再依次用10％含水乙醇、20％含水乙醇、40％含水乙醇、60％含水乙醇、70％含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70％丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并20-60％含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液在50℃以下真空浓缩、干燥，即得含羞草总黄酮提取物干粉。上述步骤6)中用H₂O洗脱除掉水溶性杂质，步骤7)中用H₂O和10％含水乙醇洗脱除掉水溶性杂质；最后都用70％丙酮洗脱除掉全部杂质，再生大孔吸附树脂。步骤6)中还可以将洗脱浓缩液真空浓缩干燥，得到干粉，将干粉加水溶解后进入下步工艺。

申请人在步骤2)中采用60％含水乙醇、70％含水乙醇或80％含水乙醇浸泡后渗漉，含羞草粗粉浸泡时间为12小时，提取用含水乙醇用量为含羞草粗粉的8倍、10倍、12倍或14倍量，流速为4mL/min或6mL/min；在步骤4)中活性炭的用量为含羞草粗粉用量的3％或4％，超声脱色时间为40分钟、50分钟或60分钟，脱色2次，每次脱色处理均加入同样量的活性炭；在步骤6)中采用15％含水乙醇、30％含水乙醇、50％含水乙醇、60％含水乙醇进行梯度洗脱，合并15-60％含水乙醇各部位；或者采用20％含水乙醇、35％含水乙醇、45％含水乙醇、65％含水乙醇进行梯度洗脱，合并20-65％含水乙醇各部位；在步骤7)中分别采用15％含水乙醇、25％含水乙醇、45％含水乙醇、60％含水乙醇进行梯度洗脱，合并25-60％含水乙醇各部位；或者采用20％含水乙醇、30％含水乙醇、40％含水乙醇、50％含水乙醇、60％含水乙醇进行梯度洗脱，合并30-60％含水乙醇各部位；其它方法和上述具体工艺步骤相同，也基本能达到本发明所述的技术效果。

上述步骤2)中用含羞草粗粉8～16倍量的意思是：若含羞草粗粉为1kg，则溶剂用量为8～16升。步骤3)中得到含2mL浓缩液/每g含羞草粗粉的意思是：浓缩液的浓缩程度由含羞草粗粉重量来决定，若含羞草粗粉为1g，则浓缩液体积为2毫升。步骤5)中含1mL滤液浓缩液/每g含羞草粗粉的意思是：滤液浓缩液的浓缩程度由含羞草粗粉重量来决定，若含羞草粗粉为1g，则滤液浓缩液的的体积为1毫升。

本发明所述的从含羞草中提取总黄酮的方法，工艺简单、操作方便、设备投资少、减少了溶剂用量，无环境污染，生产成本低。采用紫外法测定所得到的总黄酮提取物干粉，提取物中总黄酮的含量为42.60％左右，其中荭草苷含量达8.84％左右，总黄酮的转移率达76.56％左右，总黄酮的转移率高。

Claims

1.一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将含羞草全草晾干后粉碎成粗粉，过20～40目筛；

2)将含羞草粗粉装入渗漉筒中，用50～80％的含水乙醇浸泡12～14小时后，用含羞草粗粉10～16倍量的50～80％含水乙醇进行渗漉提取，流速为4～6mL/min，收集渗漉液；

3)减压浓缩：渗漉液在水浴温度50℃以下真空浓缩，回收乙醇，得到浓缩液；

4)脱色处理：步骤3)得到的浓缩液用粉末状活性炭在50℃以下超声脱色30-60分钟，活性炭的用量为含羞草粗粉用量的2-5％，脱色1～2次，抽滤，除去活性炭，滤液备用；

5)减压浓缩：步骤4)得到的滤液真空浓缩，得到滤液浓缩液；

2.如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤5)中将滤液在50℃以下真空浓缩，得到滤液浓缩液。

3.如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)、步骤7)中选用20～60％含水乙醇进行梯度洗脱。

4.如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)、步骤7)中所述的减压浓缩为50℃以下真空浓缩。

5.如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)中将洗脱浓缩液真空浓缩干燥，得到干粉，将干粉加水溶解后进入下步工艺。