ES2642926T3 - Alimentos relacionados con la reducción del nivel de colesterol humano - Google Patents

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Ako Ikeda
Toshio Tabei
Mayumi Kotani
Akihito Fujita
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Abstract

Producto alimenticio que comprende brócoli y col para la utilización en la reducción del colesterol sérico humano superior al normal.

Description

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DESCRIPCION
Alimentos relacionados con la reduccion del nivel de colesterol humano Campo tecnico
La presente invencion se refiere a alimentos que contienen brocoli y col para la utilizacion en la reduccion de los niveles de colesterol serico humano.
Antecedentes de la tecnica
Algunos estudios recientes han revelado que la flora intestinal presenta diversas funciones, tales como la formacion o la inactivacion de sustancias carcinogenas o sustancias aceleradoras de la senilidad y la activacion o toxificacion de farmacos, en los intestinos. En la flora intestinal, es conocido que las bifidobacterias presentan funciones tales como la proteccion del cuerpo frente a la infeccion enterica y el envenenamiento alimenticio causado por bacterias patogenas, la supresion de la putrefaccion intestinal para reducir de esta manera las actividades enzimaticas relacionadas con la carcinogenesis y la formacion de productos de putrefaccion, la prevencion del estrenimiento mediante la estimulacion de la motilidad intestinal, la mejora de la funcion inmunitaria del huesped mediante estimulacion, la descomposicion o adsorcion de sustancias carcinogenicas y la produccion del grupo de vitaminas B (J. Antibact. Antifung. Agents vol. 25, n° 4, paginas 219 a 231, 1997). Se han realizado intentos para mantener el predominio de las bifidobacterias que presentan estas funciones en los intestinos, mediante la administracion en el ser humano de materiales estimuladores de la proliferacion de Bifidobacterium, solos o como alimentos o farmacos que contienen dichos materiales.
Entre los materiales estimuladores conocidos de la proliferacion de Bifidobacterium se incluyen sacaridos, tales como N-acetilglucosamina, lactulosa, rafinosa, estaquiosa, maltotriosa ("Bifidobacteria", pagina 77, 1979, Yakult Honsha Co., Ltd.), fructooligosacarido ("Kagaku to Seibutsu Chemistry and Organism", vol. 21, pagina 291, 1983, Gakkai Shuppan Center), galactooligosacarido (publicaciones de patente japonesa examinada n° 1983-20266 y n° 1986-46479 y publicacion de patente japonesa no examinada n° 1985-41449), isomaltooligosacarido (Japan Nutritional Science Society, 1986), teanderosa (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1991-183454), ciclodextrina (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1982-138385) y manano konjac ("Riken Intestinal Flora Symposium, Intestinal Flora and Nutrition, pagina 89, 1983, Gakkai Shuppan Center), extracto de zanahoria (que comprende pantetefna como componente principal; "Bifidobacteria", pagina 77, 1979, Yakult Honsha Co., Ltd.), leche de soja (publicacion de patente japonesa examinada n° 1970-9822), extracto de leche de soja (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1984-17906), extracto de solucion de cultivo de Escherichia coli no patogenica (publicacion de patente japonesa examinada n° 1975-13359), un producto de descomposicion enzimatica de material que contiene protefna de cebada (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1986-282070), calabaza en polvo (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1988291579), extracto alcoholico de residuo tras la extraccion de los componentes solubles en aceite de las habas de la soja (publicaciones de patente japonesa no examinada n° 1987-155082 y n° 1985-66978), jarabe extrafdo del fruto de la calabaza (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1990-135088), extracto de te (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1989-191680), extracto vegetal de la familia Araliaceae (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1990-249482), un producto de patata seco (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1994-217733), extracto de hojas de Coffea L. (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1994-125771), col china (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1990-242667) y fruto cftrico (publicacion de patente japonesa no examinada n° 1990-273155).
Muchos de los materiales estimuladores de la proliferacion de Bifidobacterium conocidos muestran un efecto reducido en la practica o presentan una baja selectividad para enterobacterias de manera que son utilizadas por bacterias daninas diferentes de las bifidobacterias para producir de esta manera gases toxicos. Ademas, algunos de los materiales conocidos exigen una complicada manipulacion para la produccion o resultan caros. Por lo tanto, los materiales estimuladores de la proliferacion de Bifidobacterium conocidos no resultan satisfactorios en todos los aspectos.
Ademas, en los ultimos anos un creciente numero de personas de media a avanzada edad y de ninos sufre de enfermedades inducidas por el estilo de vida, tales como el infarto de miocardio y la arterioesclerosis. Uno de los principales factores de riesgo del infarto de miocardio y la arterioesclerosis es la hipercolesterolemia.
La hipercolesterolemia habitualmente se trata mediante la administracion de una medicina, en combinacion con diversos tipos de restricciones en la dieta. Sin embargo, la medicina utilizada predominantemente para el tratamiento de la hipercolesterolemia, el inhibidor de la HMG-CoA reductasa para la inhibicion de la accion enzimatica en la ruta de sfntesis del colesterol en el cuerpo, produce efectos secundarios tales como rabdomiolisis y deterioro funcional hepatico y fenomenos de rebote. Tambien se conoce una medicina que utiliza una resina de intercambio ionico para la adsorcion, en los intestinos, de los acidos biliares que presentan un contenido elevado de colesterol y la descarga del colesterol fuera del cuerpo. Sin embargo, la medicina debe ingerirse en una cantidad elevada y presenta un sabor desagradable. Ademas, las restricciones en la dieta
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prolongadas resultan indeseables ya que el paciente se ve forzado a soportar comidas desagradables.
Por lo tanto, resultana ideal que el nivel serico de colesterol pudiese rebajarse manteniendo simultaneamente una dieta ordinaria, sin restricciones en la dieta o la administracion de medicinas con efectos secundarios tales como rabdomiolisis y deterioro funcional hepatico.
A partir de lo expuesto anteriormente, se han realizado diversos estudios sobre alimentos funcionales que resultan eficaces para reducir el nivel serico del colesterol en el ser humano y para mejorar el metabolismo de los lfpidos.
El documento EP 0 462 021 A y K. Ebihara et at.. "Cholesterol-lowering activity of various dietary fibers and their taurocholate-binding capacity in vitro", n° de acceso de base de datos 1979.53579, y Nippon Nogei Kagaku Kaishi, vol. 52, n° 9, 1978, paginas 401 a 408 dan a conocer la utilizacion de un extracto o fibras alimentarias procedentes del rabano japones como agente reductor del nivel de colesterol.
I. Jahodar et at.. "A study on the antihypercholesterolemic and antihyperlipidemic effects of cabbage extracts and their phytochemical evaluation", n° de acceso de base de datos 1994.1007353 y Pharmazie, vol. 50, n° 12, 1995, paginas 833 a 834 y T. Kiribuchi et at.. "Hypocholesterolemic effect of cabbage sterols (I) on plasma and liver cholesterol levels in rats", n° de acceso de base de datos 1974.131951 y Eiyo to shokuryo, vol. 26, n° 8, 1973, paginas 491 a 495 dan a conocer la utilizacion de extractos de col como agentes reductores del nivel de colesterol.
Hoagland P.D.. "Binding of Dietary Anions to Vegetable Fiber", Journal of Agricultural and Food Chemistry, American Chemical Society, US LNKD-DOI.10.1021/ JF00089A030, vol. 37, n° 5, 1 de septiembre de 1989 (1989-09-01), paginas 1343 a 1347, da a conocer que el quenodesoxicolato y el decanoato se unen al residuo insoluble en alcohol de la zanahoria, la col, el brocoli y la cebolla. El documento sugiere ademas que dicha union podna resultar beneficiosa al reducir los niveles de colesterol en sangre.
Breve descripcion de los dibujos
La figura 2 es un grafico que representa el efecto estimulador de la proliferacion de Bifidobacterium mediante la utilizacion combinada de verduras espedficas.
La figura 3 es un grafico que representa el cambio en el nivel de IgE en suero de raton con el tiempo.
Divulgacion de la invencion
Un objetivo de la presente invencion es proporcionar un agente estimulador de la proliferacion de Bifidobacterium que contiene un material estimulador de la proliferacion de Bifidobacterium que se encuentra libre de las desventajas anteriormente indicadas, presenta una elevada actividad de proliferacion de Bifidobacterium, puede ser producido con facilidad a bajo coste y es altamente seguro desde el punto de vista de la higiene alimentaria y un alimento y material alimenticio que posee una accion estimuladora de la proliferacion de Bifidobacterium. Otro objetivo de la presente invencion es proporcionar un metodo para hacer proliferar un Bifidobacterium.
En el contexto de la presente invencion se ha realizado una exhaustiva investigacion para desarrollar, a partir de diversos productos naturales, materiales con una elevada actividad estimuladora de la proliferacion de Bifidobacterium. Como resultado, se ha descubierto que algunas verduras y frutas, tales como brocoli, col, espinacas, komatsuna (Brassica rapa L.), takana (Brassica juncea Czern. et Coss. var. integrifotia Sinsk.), karashina (Brassica juncea Czern. et Coss.), coliflor y col rizada.
El objetivo de la presente invencion es proporcionar un alimento con una accion de reduccion del nivel de colesterol en el suero humano y un agente preventivo o terapeutico para la hipercolesterolemia o la arterioesclerosis en el ser humano sin efectos secundarios, tales como el deterioro funcional hepatico, encontrandose el alimento y el agente libres de las desventajas anteriormente indicadas.
En el contexto de la presente invencion se somete a ensayo un zumo de verduras mixto comercializado por su comparna, a fin de evaluar su accion de reduccion del nivel de colesterol, mediante la administracion en ratas. Sin embargo, una accion de este tipo no pudo ser demostrada. Por lo tanto, se entendio que el zumo de verduras no presentaba ninguna accion de reduccion del nivel del colesterol serico.
Sin embargo, en un examen medico rutinario y posterior revision detallada realizada en la comparua de los inventores, se observo que un gran numero de miembros del personal presentaban un nivel de colesterol serico notablemente reducido. La investigacion sobre estos miembros del personal revelo que no habfan bebido regularmente el zumo de verduras antes del examen rutinario pero que habfan empezado a beberlo despues de la revision rutinaria, aproximadamente una lata al dfa del zumo comercializado en la compafna. En consecuencia, se encontro inesperadamente que el zumo de verduras presentaba una accion de reduccion del nivel de
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En el contexto de la presente invencion se realiza una investigacion exhaustiva respecto al efecto del zumo de verduras mixto sobre el colesterol serico en el ser humano con el fin de identificar que ingrediente mostraba la accion. Ademas, sometieron a ensayo extensivamente otras plantas comestibles para la accion y encontraron que el brocoli, la bolsa de pastor y otras plantas comestibles, en particular, los componentes funcionales en las fracciones solubles en agua de las plantas comestibles, presentaban una actividad inhibidora de la sfntesis del colesterol en hepatocitos humanos y una buena accion de reduccion del nivel serico de colesterol y una buena accion reductora del nivel de lipoprotefna-colesterol de baja densidad (LDL-Col). Ademas, se encontro inesperadamente que la utilizacion combinada de col, coles de Bruselas, rabano japones u hojas de rabano japones con las plantas comestibles anteriormente indicas con actividad inhibidora de la sfntesis de colesterol en hepatocitos humanos incrementaba especfficamente la actividad inhibidora de la sfntesis de colesterol en hepatocitos humanos, alcanzando de esta manera una accion mas elevada de reduccion del nivel de colesterol serico en el ser humano y una accion mas elevada de reduccion del nivel de lipoprotefna de baja densidad- colesterol (LDL-Col) en el ser humano. Ademas, en el contexto de la presente invencion se descubre que una medicina que contenfa las plantas comestibles anteriormente indicadas resulta utilizable como agente preventivo o terapeutico para la hipercolesterolemia humana o como agente preventivo o terapeutico para la arterioesclerosis humana, en ambos casos sin efectos secundarios tales como el deterioro funcional hepatico. La presente invencion se ha llevado a cabo basandose en los resultados anteriormente indicados.
La presente invencion proporciona los alimentos siguientes:
[1] Un alimento segun las reivindicaciones 1 a 9 que contiene brocoli y col y opcionalmente elementos seleccionados de entre el grupo que consiste en coliflor, col rizada, bolsa de pastor, suzushiro (Arabis flagellosa Miq.), hatazao (Arabis glabra), tagarashi (Cardamine flexuosa), hierba pastel, oobatanetsukebana (Cardamine scutata), yamagarashi (Barbarea vulgaris R.Br. var. stricta Regel), berro, takana (Brassica juncea Czern. et Coss. var. integrifolia Sinsk.), karashina (Brassica juncea Czern. et Coss.), rabano picante japones, yuriwasabi (Wasabia tenuis), hinona (Brassica campestris var. akana), sugukina (Brassica campestris var. neosuguki), nabo, colza, espinacas, komatsuna (Brassica rapa L.), apio, perejil, lechuga, manzana, col china, coles de Bruselas, rabano japones y hojas de rabano japones.
[1-A] Alimento segun el item [1] que presenta una accion de reduccion del nivel serico de colesterol en el ser humano.
Los alimentos de la presente invencion se describen a continuacion con mayor detalle.
El alimento de la presente invencion contiene brocoli y col y elementos seleccionados de entre el grupo que consiste en coliflor, col rizada, bolsa de pastor, suzushiro (Arabis flagellosa Miq.), hatazao (Arabis glabra), tagarashi (Cardamine flexuosa), hierba pastel, oobatanetsukebana (Cardamine scutata), yamagarashi (Barbarea vulgaris R.Br. var. stricta Regel), berro, takana (Brassica juncea Czern. et Coss. var. integrifolia Sinsk.), karashina (Brassica juncea Czern. et Coss.), rabano picante japones, yuriwasabi (Wasabia tenuis), hinona (Brassica campestris var. akana), sugukina (Brassica campestris var. neosuguki), nabo, colza, espinacas, komatsuna (Brassica rapa L.), apio, perejil, lechuga, manzana, col china, coles de Bruselas, rabano japones y hojas de rabano japones. Estas verduras o frutas se utilizan en combinacion, segun las reivindicaciones 1 a 9.
Las verduras y frutas mencionadas anteriormente presentan una accion reductora del nivel serico de colesterol en el ser humano. Por lo tanto, el alimento de la invencion presenta una accion de reduccion del nivel serico de colesterol en el ser humano.
Segun la invencion se utilizan habitualmente partes comestibles, a menos que se indique lo contrario, Por ejemplo, la rafz de las espinacas, que habitualmente no es comestible, no se utiliza en la invencion. En el caso de la manzana, se utiliza el fruto de la manzana.
En la presente invencion, las verduras o frutas pueden utilizarse en un estado crudo, o en forma termicamente esterilizada. Alternativamente, las verduras o frutas crudas o termicamente esterilizadas pueden secarse con aire caliente o liofilizarse, con el fin de preparar una pelfcula, placa, bloque o producto solido similar. Ademas, son utilizables unos polvos preparados mediante la trituracion del producto solido.
Mas alternativamente, las verduras o frutas crudas o termicamente esterilizadas pueden prensarse o exprimirse con el fin de utilizar el producto resultante en su conjunto, o para utilizar unicamente el zumo de verduras o frutas obtenido. Tambien es utilizable un concentrado del zumo de verduras o frutas, o un producto en polvo, granulos, comprimidos o similar preparado mediante el secado y procesamiento del concentrado. Resulta adicionalmente utilizable un zumo obtenido a partir de verduras o frutas crudas o termicamente esterilizadas utilizando una tela filtrante adecuada o similar y un lfquido sobrenadante obtenido mediante centrifugacion del filtrado. El lfquido sobrenadante puede secarse con aire caliente o liofilizarse para obtener una pelfcula, placa, bloque o producto solido similar. El producto solido puede ser molido para obtener unos polvos.
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De esta manera, para la utilizacion en la invencion, las verduras o frutas anteriormente indicadas pueden procesarse mediante un procedimiento convencional que comprende cualquier combinacion de operaciones, tales como el lavado, clasificacion, pelado, deshuesado, prensado, exprimido, filtracion, separacion, concentracion, calentamiento, enfriamiento, homogeneizacion y secado.
El alimento [1-A] puede consistir unicamente en brocoli y col o puede contener otros ingredientes utilizados comunmente para alimentos.
La cantidad de los demas ingredientes que debe anadirse no se encuentra limitada sino que es, por ejemplo, de entre aproximadamente 0,001% y 99,99% en peso respecto a la cantidad total tras la adicion de los demas ingredientes.
Entre los ejemplos de otros ingredientes utilizables se incluyen verduras o frutas diferentes de las mencionadas anteriormente, tales como limon, naranja, zanahoria, hojas de rabano japones, calabaza, pimiento dulce y boniato. Se utilizan en forma de un zumo, un concentrado, granulo o similares, obtenidos mediante el mismo procedimiento que para las verduras o frutas anteriormente indicadas.
Ademas, algunos aditivos utilizados comunmente para la preparacion de alimentos o materiales alimenticios pueden utilizarse a modo de otros ingredientes. Entre los ejemplos especfficos de aditivos utilizables se incluyen fibra de manzana, fibra de mafz, acido algfnico y fibras similares; lactosa, almidon y excipientes similares; sacarosa, maltosa, sorbitol, manitol, oligosacaridos y edulcorantes similares; vitaminas, calcio y complementos nutricionales similares; espesantes, condimentos, colorantes, etc.
Las otras verduras o frutas y aditivos pueden seleccionarse segun la utilizacion pretendida y la forma del alimento, la preferencia del usuario y otros factores, y utilizarse en una combinacion adecuada.
En caso necesario, el alimento puede conformarse o mezclarse en un producto alimenticio deseado, tal como: unos polvos, granulos, comprimidos, capsulas, dulces, goma de mascar, turron, chocolate, gelatina, galletas, pastel, pan, fideos, una bebida, zumo de verdura, margarina, bebida fermentada lactica, miso (pasta de soja), yogur o alimento fermentado similar, pastel de pescado, pasta de pescado hervido o pasta de alimento marino similar, jamon, embutido, leche procesada, queso o producto alimenticio de animal domestico similar, o salsa de carne, aderezo, salsa, salsa de soja o condimento similar. De entre dichos productos alimenticios resulta preferida una bebida, en particular zumo de verdura, como la forma de alimento de la invencion.
El alimento puede utilizarse como material alimenticio para preparar un producto alimenticio deseado, tal como los alimentos indicados anteriormente. El material alimenticio puede utilizarse individualmente para preparar un producto alimenticio o puede combinarse con otros materiales alimenticios para preparar un producto alimenticio.
El alimento puede ingerirse en forma de una mezcla con un alimento preparado, tal como una sopa deshidratada o zumo en polvo, o como solucion o dispersion en zumos envasados o similares.
Por lo tanto, el alimento de la invencion puede utilizarse como alimento saludable, alimento funcional, alimento para un uso saludable, un alimento para personas enfermas, etc.
[1-B]
En el caso de que el alimento de la presente invencion se utilice como alimento con una accion reductora del nivel serico de colesterol en el ser humano, el alimento contiene brocoli y col y opcionalmente contiene ademas elementos seleccionados de entre bolsa de pastor, suzushiro, hatazao, tagarashi, hierba pastel, oobatanetsukebana, yamagarashi, berro, takana, karashina, rabano picante japones, yuriwasabi, col china, hinona, sugukina, nabo, colza, coles de Bruselas, rabano japones y hojas de rabano japones segun las reivindicaciones 1 a 9. Dichas plantas comestibles presentan una actividad inhibidora de la sfntesis del colesterol en los hepatocitos, que es el mecanismo de accion para reducir el nivel serico de colesterol en el ser humano mas eficaz, y para reducir el nivel de lipoprotefna de baja densidad-colesterol (LDL-Col), un colesterol danino. El alimento de la invencion, que contiene dichas plantas, presenta una elevada accion reductora del nivel serico de colesterol en el ser humano y una elevada accion reductora del nivel de LDL-Col en el ser humano. Es decir, el alimento de la invencion resulta eficaz para mejorar el metabolismo de los lfpidos. El alimento [1-B] puede ingerirse en forma de un alimento saludable, un alimento funcional, un alimento para un uso saludable especffico, un alimento para personas enfermas, etc.
El alimento se encuentra limitado al uso en el ser humano y no esta destinado a la utilizacion como alimento o pienso para animales no humanos (perros, gatos, conejos, ratones, ratas, etc.).
Resulta particularmente preferido que el alimento contenga brocoli y col y adicionalmente por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en bolsa de pastor, suzushiro, hatazao, tagarashi, hierba
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pastel, oobatanetsukebana, yamagarashi, berro, takana, karashina, rabano picante japones, yuriwasabi, col china, hinona, sugukina, nabo y colza, segun las reivindicaciones 1 a 9.
El contenido total de dichas plantas (verduras) en el alimento varfa segun el tipo de alimento que debe prepararse y las diferencias entre usuarios (diferencias individuales, diferencias raciales, etc.) y no se encuentra limitado con la condicion de que el efecto reductor del nivel serico de colesterol en el ser humano pueda alcanzarse. Resulta adecuado que el contenido total sea de entre aproximadamente 0,01% y 100% en peso, preferentemente de entre aproximadamente 1,0% y 99,9% en peso.
Un contenido total inferior a 0,01% en peso puede resultar en un efecto de mejora del metabolismo de los lfpidos insuficiente, por lo tanto no deseable.
El alimento puede contener otros ingredientes ademas de las plantas anteriormente indicadas, con la condicion de que no resulte perjudicado el efecto de reduccion del nivel serico de colesterol en el ser humano.
Entre los demas ingredientes utilizables se incluyen col rizada, habas de soja, avena, cebada y plantas similares que es conocido que presentan una accion reductora del nivel de colesterol. Ademas, pueden anadirse otras plantas utilizadas comunmente en alimentos, tales como apio, lechuga, espinacas, komatsuna (Brassica rapa L.), perejil, manzana y limon, que han sido procesados anteriormente de la manera anteriormente indicada.
En particular, el alimento preferentemente contiene por lo menos un elemento seleccionado de entre apio, lechuga, espinacas, komatsuna, perejil, manzana y limon, ademas de la combinacion de brocoli y col.
El alimento puede contener, a modo de ingredientes adicionales, aditivos utilizados comunmente en la industria alimentaria, tales como almidones, lactosa, celulosa, dextrina, alcoholes de azucar, mucopolisacaridos y excipientes similares, sacarosa, maltosa, sorbitol, manitol, oligosacaridos y edulcorantes similares, y vitaminas, calcio y complementos nutricionales similares.
El alimento puede prepararse mediante la adicion a los materiales de partida para la preparacion de un alimento de las plantas procesadas de la manera anteriormente indicada, o las plantas procesadas diluidas con un excipiente o parte de los materiales de partida, o una solucion o dispersion de las plantas procesadas en etanol, agua o similar, en una etapa apropiada de la produccion. A continuacion, la mezcla resultante se mezcla de una manera convencional, seguido de un procedimiento ordinario para la preparacion del alimento. La etapa de mezcla puede llevarse a cabo bajo calentamiento.
Alternativamente, el alimento puede prepararse mediante la adicion de las plantas procesadas de la manera anteriormente indicada o una mezcla o solucion de las plantas procesadas, a un producto alimenticio preparado, seguido de la mezcla de una manera convencional.
El alimento se encuentra limitado a la utilizacion en el ser humano y no esta destinado a la utilizacion como alimento o pienso para animales no humanos (perros, gatos, conejos, ratas, ratones, etc.).
El alimento no se encuentra limitado en la forma y puede conformarse en cualquiera de las formas indicadas. Alternativamente, el alimento puede ingerirse en forma de una mezcla con un producto alimenticio preparado, tal como sopa deshidratada o zumo en polvo, o en forma de una solucion o dispersion en zumo envasado.
La ingesta del alimento puede determinarse segun la forma del alimento, la edad, el peso, el sexo y las condiciones de salud del usuario, y el proposito de la ingesta, sin limitacion. Habitualmente resulta preferido que la ingesta diaria en el adulto del alimento sea de entre aproximadamente 5 y 1.000 ml en el caso de que el alimento se encuentre en una forma lfquida, o de entre aproximadamente 0,1 y 100 g en el caso de que el alimento se encuentre en una forma solida. La ingesta diaria preferentemente se divide en varias raciones.
El alimento puede ingerirse en cualquier momento del dfa, es decir, antes, despues o entre comidas. La ingesta antes del desayuno, comida del mediodfa o cena o la ingesta en un estomago vacfo, resultan particularmente eficaces.
La ingestion del alimento reduce el nivel serico de colesterol en el ser humano sin restricciones en la dieta o ejercicios programados.
El alimento puede utilizarse en combinacion con un agente preventivo o terapeutico convencional para la hipercolesterolemia, tal como Mevalotin. En la utilizacion combinada, puede reducirse la cantidad del agente convencional, ya que la accion reductora del nivel de colesterol del alimento de la invencion compensara la reduccion. De esta manera, la utilizacion combinada con el alimento de la invencion resulta ventajosa en una prevencion o tratamiento a largo plazo, desde el punto de vista de los efectos secundarios.
Las verduras o frutas que deben utilizarse como ingredientes activos del alimento de la presente invencion han
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sido utilizados como alimento desde hace mucho tiempo y por lo tanto pueden ingerirse o administrarse con seguridad durante un periodo prolongado, con fines profilacticos o terapeuticos.
Mejor modo de poner en practica la invencion
Los Ejemplos de ensayo y Ejemplos de ensayo comparativos a continuacion se proporcionan con el fin de ilustrar la presente invencion en detalle adicional. En estos ejemplos los porcentajes son todos en peso (% p/p), a menos que se indique lo contrario.
Ejemplo de ensayo 1: ensayo de la actividad inhibidora de la sfntesis del colesterol en los hepatocitos
(i) Composicion y metodo de preparacion de la muestra de ensayo
Se filtraron a traves de un filtro de gasa zumos obtenidos a partir de las muestras vegetales (1.000 g cada una) mostradas en la Tabla 1, y los filtrados resultantes se filtraron mediante centrifugacion a 10.000 g. Los sobrenadantes obtenidos mediante la filtracion centrffuga se liofilizaron con el fin de obtener las muestras de ensayo mostradas en la Tabla 2.
Tabla 1
Composicion de muestra vegetal (%)
Muestra vegetal
T-1 T-2 T-3 T-4 T-5 T-6 T-7 T-8
Brocoli
100 - - - - - 75 75
Bolsa de pastor
- 100 - - - - - -
Hierba pastel
- - 100 - - - - -
Col china
- - - 100 - - - -
Col
- - - - 100 - 25 -
Hojas de rabano japones
- - - - - 100 - 25
Total
100 100 100 100 100 100 100 100
Tabla 2 muestra de ensayo
Muestra vegetal
T-1 T-2 T-3 T-4 T-5 T-6 T-7 T-8
Muestra de ensayo
S-1 S-2 S-3 S-4 S-5 S-6 S-7 S-8
Peso de muestra de ensayo tras la liofilizacion (g)
65 42 54 41 54 36 62 58
(2) Metodo de ensayo
Se utilizaron las muestras de ensayo S-1 a S-8 mostradas en la Tabla 2 a modo de materiales de ensayo y se utilizaron comprimidos que contenfan 5,6% de pravastatina sodio (nombre comercial: Mevalotin) como material de control positivo. Estos materiales se molieron en un mortero y se utilizaron.
Se inocularon en placas de 6 pocillos celulas HepG2 (2x105 celulas) cultivadas en DMEM que contenfa FCS al 10% y se incubaron durante 3 dfas (sustancialmente confluyentes). Tras eliminar el medio de cultivo, los materiales de ensayo S-1 a S-8 y el material de control positivo se diluyeron todos con DMEM y se mezclaron con 14C-acido acetico, se introdujeron individualmente en las placas de 6 pocillos, seguido de una incubacion de 2 horas. A continuacion, se elimino el medio de cultivo y las celulas se lavaron con PBS, se disolvieron en KOH y se saponificaron. Los productos saponificados se sometieron a extraccion en eter y se desecaron.
Los extractos secos se disolvieron en acetona-etanol y se anadio digitonina al 0,5% a cada una de las soluciones. A continuacion, se midio el nivel de radioactividad de los precipitados resultantes utilizando un contador de centelleo.
(3) Resultado del ensayo
La Tabla 3 representa los resultados de ensayo, es decir, las concentraciones de los materiales de ensayo y el material de control positivo que provocan una inhibicion del 50% de la sfntesis de colesterol en las celulas HepG2.
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Tabla 3
Concentracion para el 50% de inhibicion de la sfntesis de colesterol
Muestra de ensayo
Concentracion (%) Proporcion de titulacion respecto al material de control positivo Tftulo corregido basandose en el rendimiento (referencia: S-7)
S-1
0,49 1/245 1/234
S-2
0,37 1/185 1/273
S-3
0,46 1/230 1/264
S-4
0,40 1/200 1/302
S-5
1,09 1/545 1/626
S-6
0,78 1/390 1/672
S-7
0,42 1/210 1/210
S-8
0,40 1/200 1/213
Material de control positivo (Mevalotin)
0,002 1/1 1/1
En la Tabla 3, "proporcion de titulacion respecto al control positivo" indica un valor obtenido mediante la division de 0,002% (la concentracion del control positivo (Mevalotin) para la inhibicion al 50% de la sfntesis del colesterol) por la concentracion de cada material de ensayo para la inhibicion al 50% de la sfntesis del colesterol. De esta manera, el valor indica la proporcion de titulacion de cada material de ensayo respecto a un peso igual del material de control positivo.
La expresion "tftulo corregido basandose en el rendimiento (referencia: S-7)" en la Tabla 3 se refiere a un valor obtenido mediante la correccion de la proporcion de titulacion respecto al control positivo basandose en el rendimiento de cada material de ensayo en la Tabla 2, utilizando la muestra de ensayo S-7 como referencia. Este valor se presenta de manera que las actividades de inhibicion de la sfntesis de colesterol de las muestras vegetales originales para la preparacion de los materiales de ensayo puedan compararse entre sf.
Por lo tanto, en teorfa, al encontrar las dosis de muestra de ensayo S-7 y del material de control positivo (Mevalotin) que muestran una accion reductora del nivel serico de colesterol equivalente a partir de los resultados de un ensayo clfnico de administracion de la muestra de ensayo S-7 y el material de control positivo a un grupo de hipercolesterolemia, puede estimarse una dosis adecuada de cada muestra vegetal basandose en el tftulo corregido.
En el Ejemplo de ensayo 1, se descubrio una actividad inhibidora de la sfntesis de colesterol unicamente en la fraccion soluble en agua de cada muestra de ensayo. La fraccion de etanol, la fraccion de acetona y la fraccion de acetato de etilo de cada muestra de ensayo tambien se sometieron a ensayo para la actividad inhibidora de la sfntesis de colesterol pero se encontro que no presentaban dicha actividad.
Ejemplo de ensayo 2: ensayo clfnico humano
De entre las muestras de ensayo en las que se encontro actividad inhibidora de la sfntesis de colesterol en hepatocitos en el Ejemplo de ensayo 1, las muestras vegetales T-1, T-5 y T-7 y la muestra de ensayo S-7 fueron utilizados en un ensayo clfnico humano en grupos de sujetos de hipercolesterolemia con el fin de determinar la presencia o ausencia de un efecto clfnico y la correlacion entre el efecto clfnico y la actividad inhibidora de la sfntesis de colesterol.
(1) Contenido del ensayo clfnico
(1-1) Se dividieron ochenta sujetos de hipercolesterolemia en 4 grupos. Cada sujeto recibio dos latas al dfa de las muestras de ensayo (bebidas envasadas) mostradas en la Tabla 4, durante 4 semanas, con el fin de evaluar el efecto de mejora de los indices sangufneos, tales como el nivel serico de colesterol.
(1-2) Se ingirio sangre antes y despues del periodo de ensayo de 4 semanas (semana 0 y semana 4).
(1-3) Durante el periodo de ensayo, se permitio a los sujetos que continuaran con su dieta y actividad habitual, sin restricciones de la dieta o ejercicios programados.
(2) Sujetos de ensayo clfnico
El ensayo clfnico se llevo a cabo en pacientes de hipercolesterolemia que cumplfan los criterios siguientes.
(2-1) Criterios de seleccion
i) Pacientes con un nivel de colesterol total serico de 240 (mg/dl) o superior
ii) Pacientes que entendfan el proposito y el contenido del ensayo y que consintieron ser sujetos de ensayo
5
(2-2) Criterios de exclusion
i) Pacientes con una complicacion de una enfermedad hepatica, diabetes o enfermedad similar.
ii) Pacientes administrados con un agente terapeutico bajo tratamiento de hipercolesterolemia.
10 iii) Pacientes considerados inadecuados por el medico por cualesquiera otros motivos.
(3) Muestra de ensayo
Los zumos vegetales exprimidos a partir de las muestras vegetales T-1, T-5 y T-7 se filtraron y los filtrados se 15 envasaron en latas (160 g en cada lata), obteniendo las muestras de ensayo. Ademas, se preparo otra muestra de ensayo mediante el envasado, en cada lata, de 160 g de una solucion de 9,92 g de muestra de ensayo S-7 (correspondiente a 160 g de muestra vegetal T-7) en agua purificada.
Tabla 4
20
Muestra de ensayo para el Ejemplo de ensayo 2
Muestra de ensayo
Contenido y peso del mismo (g) Peso del producto final (g) Dosis diaria
O-1
T-1 60 160 2 latas (320 g)
O-2
T-2 60 160 2 latas (320 g)
O-3
T-7 60 160 2 latas (320 g)
O-4
S-7 0,92 160 2 latas (320 g)
(4) Resultado del ensayo
La Tabla 5 muestra el cambio y tasa de reduccion antes y despues del ensayo clmico del nivel de colesterol total 25 en los cuatro grupos de ensayo. La Tabla 6 muestra el cambio y la tasa de reduccion del nivel de LDL-colesterol.
Tabla 5
Grupo de sujetos
Cambio del nivel de colesterol total
Semana 0 (mg/dl)
Semana 4 (mg/dl) Tasa de cambio (%) {Nivel de cambio (mg/dl)}
Grupo O-1
253,4±26,9 226,5±23,3** ▲ 10,6 (26,9)
Grupo O-2
252,6±23,1 243,8±21,5* ▲ 3,5 (8,8)
Grupo O-3
252,4±27,9 223,3±24,6** ▲ 11,5 (29,1)
Grupo O-4
253,7±26,3 223,5±22,3** ▲ 11,9 (30,2)
En la tabla, * indica P<0,05 y ** indica P<0,01.
30 Tabla 6
Grupo de sujetos
Cambio del nivel de colesterol total
Semana 0 (mg/dl)
Semana 4 (mg/dl) Tasa de cambio (%) {Nivel de cambio (mg/dl)}
Grupo O-1
171,4±23,0 147,5±21,5** ▲ 13,9 (23,9)
Grupo O-2
168,2±26,5 160,5±23,3 ▲ 4,6 (7,7)
Grupo O-3
170,7±23,3 144,6±21,7** ▲ 15,3 (26,1)
Grupo O-4
171,0±24,8 143,3±21,1 ** ▲ 16,2 (27,7)
En la tabla, ** indica P<0,01.
La Tabla 5 revela que la ingesta del alimento de la presente invencion redujo el nivel de colesterol total en todos los grupos, Grupo O-1 a O-4.
35
En particular, el nivel de colesterol total en el Grupo O-4 se redujo de media en 11,9% mediante la ingesta durante 4 semanas. En comparacion con la tasa de reduccion alcanzada con diferentes dosis de Mevalotin (el material de control positivo utilizado en el Ejemplo de ensayo 1), la tasa de reduccion en el Grupo O-4 fue sustancialmente equivalente a la tasa de reduccion alcanzada mediante la administracion durante 4 semanas de 40 Mevalotin a una dosis diaria de 5 mg (11,1%). La dosis diaria prescrita de Mevalotin era de 10 mg, que puede reducir el nivel de colesterol total en 18% a 20%.
La magnitud del cambio en el nivel de colesterol representada en las Tablas 5 y 6 revela que el factor principal de
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la reduccion del nivel de colesterol total es la reduccion de LDL-colesterol.
Al comparar los tftulos corregidos mostrados en la Tabla 3 y los resultados mostrados en la Tabla 5, la tasa de reduccion en el Grupo O-3 (T-7) fue de A 11,5%, que es practicamente igual a la tasa de reduccion en el Grupo O-4 (S-7), de A 11,9%. Esto concuerda sustancialmente con el hecho de que, en el caso de la muestra de ensayo S-7, la proporcion de tftulo corregido a tftulo original era de 1:1.
La tasa de reduccion en el Grupo O-1 (T-1) fue de A 10,6%, mientras que la tasa de reduccion en el Grupo O-4 (S-7) fue de A 11,9%. La proporcion de los dos valores (A 10,6 % : A11,9%) era de 0,89:1, que es practicamente igual a la proporcion de tftulos corregida de la muestra de ensayo S-1 a la muestra de ensayo S-7 (0,90:1). Ademas, la proporcion de tasa de reduccion en el Grupo O-5 (T-5) (A3,5%) a tasa de reduccion en el Grupo O-4 (S-7) (A11,9%) era de 0,29:1, que es practicamente igual a la proporcion de tftulos corregida de muestra de ensayo T-5 a muestra de ensayo S-7 (0,34:1).
Respecto a los indices de seguridad, no se observaron cambios en los indices relacionados con el tftgado, tales como GOT, GPT, ALP, y-GTP y LDH-5, o en indices relacionados con el musculo cardiaco o el musculo esqueletico, tales como CPK, LDH-1, LDH-2, LDH-3, LDH-4, creatina y creatinina, o en indices relacionados con el hfgado, tales como BUN, creatinina y acido urico.
Respecto a los indices de suficiencia nutritiva, no se observaron cambios en las protemas totales, albumina, inmunoglobulina, colina esterasa, amilasa serica o indices similares en el suero, o en el recuento eritrocitario, nivel de hemoglobina, recuento plaquetario, hematocrito, recuento leucocitario, fracciones de leucocitos (tales como leucocitos basofilos, leucocitos acidofilos, linfocitos y monocitos) o indices similares.
Tal como resulta evidente a partir de lo expuesto anteriormente, la accion reductora del colesterol serico en el ser humano del alimento de la presente invencion se manifiesta principalmente en el mecanismo de actividad inhibidora de la smtesis de colesterol en los hepatocitos. Es decir, el alimento de la invencion reduce selectivamente la lipoprotema de baja densidad-colesterol (LDL-Col), reduciendo de esta manera el colesterol total en suero, y por lo tanto resulta eficaz para mejorar el metabolismo de los ftpidos.
La accion reductora del nivel serico de colesterol del alimento de la invencion era baja en comparacion con el de Mevalotin, una medicina, pero el alimento de la invencion se encontraba completamente libre de efectos secundarios sobre el tugado o el musculo cardfaco.
Por lo tanto, el alimento de la invencion es suficientemente significativo para los fines de mantener la buena salud de las personas que presentan un nivel serico de colesterol ligeramente superior al nivel normal, ya que segun la invencion puede reducirse el colesterol serico en el ser humano mediante la ingesta de una mezcla de verduras ingeridos comunmente que se encuentran libres del riesgo de efectos secundarios desconocidos habitualmente presentes en las nuevas medicinas.
Ejemplo comparativo 1
A continuacion se proporcionan los resultados de un ensayo en el que se administro en ratas un zumo de verduras mixto que contema cantidades adecuadas de brocoli, col, hojas de rabano japones, apio, lechuga, espinacas, komatsuna, perejil y manzana.
Se dividieron diez ratas SD-SPF (macho, de 4 semanas de edad) en 2 grupos. El grupo A (grupo de control) se alimento con solo una dieta estandar ad libitum mientras que el grupo B (grupo de ensayo) fue alimentado con una dieta estandar y el zumo de verduras mixto ad libitum.
En general, las dietas excesivamente ricas en grasas, tales como las dietas cargadas de grasa, no fueron utilizadas durante el tratamiento profilactico o terapeutico para reducir el nivel de colesterol, aunque el tratamiento no implicase restricciones en la dieta. Por lo tanto, en los ejemplos de ensayo de la presente invencion, las ratas fueron alimentadas con una dieta estandar, no una dieta cargada de grasas, con el fin de evaluar la accion reductora del colesterol serico del zumo de verduras mixto.
La Tabla 7 representa el nivel de colesterol total en cada grupo antes y 4 semanas despues del inicio del ensayo. Tabla 7
Grupo de sujetos
Cambio del nivel de colesterol total
Semana 0 (mg/dl) Semana 4 (mg/dl) Tasa de cambio (%) [Magnitud del cambio (mg/dl)]
Grupo A
111,8 74,2 A 33,6 (37,6)
Grupo B
114,6 92,2 A 19,5 (22,4)
El nivel de colesterol total se redujo no solo en el Grupo B en el que se habfa administrado zumo de verduras mixto ademas de la dieta estandar, sino tambien en el Grupo A que solo habfa recibido la dieta estandar. Por el contrario, la cantidad y tasa de cambio en el Grupo A, que habfa sido alimentado con solo dieta estandar, fueron 5 superiores a los del Grupo B.
Los resultados anteriormente indicados demuestran que el zumo de verduras mixto que contenfa brocoli, col, hojas de rabano japones y otras verduras no presenta una accion de reduccion del colesterol total en ratas.
10 A continuacion se proporcionan ejemplos de formulacion de alimentos y medicinas segun la presente invencion.
Ejemplo de formulacion 1: comprimidos
15
Lactosa
80,0%
Gelatina
10,0%
Brocoli liofilizado
1,0%
Col liofilizada
1,0%
Saborizante de frutas
0,5%
Agua
7,5%
Ejemplo de formulacion 2:
bebida
Zumo de manzana
20,0 %
Pure de brocoli
20,0 %
Zumo de col
10,0 %
Zumo de limon concentrado
0,5 %
Pigmento
0,05%
Saborizante
0,5 %
Agua
48,95%

Claims (9)

  1. 5
    10
    15
    20
    25
    30
    35
    40
    45
    REIVINDICACIONES
    1. Producto alimenticio que comprende brocoli y col para la utilizacion en la reduccion del colesterol serico humano superior al normal.
  2. 2. Producto alimenticio para la utilizacion segun la reivindicacion 1, en el que el alimento contiene ademas hojas de rabano japones o col china.
  3. 3. Producto alimenticio para la utilizacion segun la reivindicacion 1, en el que el alimento contiene ademas por lo
    menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en coliflor, col rizada, bolsa de pastor, suzushiro (Arabis flagellosa Miq.), hatazao (Arabis glabra), tagarashi (Cardamine flexuosa), hierba pastel,
    oobatanetsukebana (Cardamine scutata), yamagarashi (Barbarea vulgaris R. Br. var. stricta Regel), berro, takana (Brassica juncea Czern. et Coss. var. integrifolia Sinsk.), karashina (Brassica juncea Czern. et Coss.), rabano picante japones, yuriwasabi (Wasabia tenuis), hinona (Brassica campestris var. akana), sugukina (Brassica campestris var. neosuguki), nabo, colza, espinaca, komatsuna (Brassica rapa L.), apio, perejil, lechuga, manzana, col china, coles de Bruselas, rabano japones y hojas de rabano japones.
  4. 4. Producto alimenticio para la utilizacion segun la reivindicacion 1, en el que el alimento contiene ademas por lo
    menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en coliflor, col rizada, bolsa de pastor, suzushiro (Arabis flagellosa Miq.), hatazao (Arabis glabra), tagarashi (Cardamine flexuosa), hierba pastel,
    oobatanetsukebana (Cardamine scutata), yamagarashi (Barbarea vulgaris R. Br. var. stricta Regel), berro, takana (Brassica juncea Czern. et Coss. var. integrifolia Sinsk.), karashina (Brassica juncea Czern. et Coss.), rabano picante japones, yuriwasabi (Wasabia tenuis), hinona (Brassica campestris var. akana), sugukina (Brassica campestris var. neosuguki), nabo, colza, espinaca, komatsuna (Brassica rapa L.), apio, perejil, lechuga y manzana.
  5. 5. Producto alimenticio para la utilizacion segun la reivindicacion 1, en el que el alimento contiene ademas por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en bolsa de pastor, suzushiro (Arabis flagellosa Miq.), hatazao (Arabis glabra), tagarashi (Cardamine flexuosa), hierba pastel, oobatanetsukebana (Cardamine scutata), yamagarashi (Barbarea vulgaris R. Br. var. stricta Regel), berro, takana (Brassica juncea Czern. et Coss. var. integrifolia Sinsk.), karashina (Brassica juncea Czern. et Coss.), rabano picante japones, yuriwasabi (Wasabia tenuis), col china, hinona (Brassica campestris var. akana), sugukina (Brassica campestris var. neosuguki), nabo, colza, coles de Bruselas, rabano japones y hojas de rabano japones.
  6. 6. Producto alimenticio para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el alimento contiene ademas por lo menos un elemento seleccionado de entre el grupo que consiste en coles de Bruselas, rabano japones y hojas de rabano japones y por lo menos uno de entre bolsa de pastor, suzushiro, hatazao, tagarashi, hierba pastel, oobatanetsukebana, yamagarashi, berro, takana, karashina, rabano picante japones, yuriwasabi, col china, hinona, sugukina, nabo y colza.
  7. 7. Producto alimenticio para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, en el que por lo menos un elemento es un fruto o una verdura y en un estado crudo o es esterilizado termicamente.
  8. 8. Producto alimenticio para la utilizacion segun la reivindicacion 7, en el que el alimento es un polvo.
  9. 9. Producto alimenticio para la utilizacion segun cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y 7 a 8, en el que el alimento es un zumo de verduras o de frutas, o un concentrado de un zumo de verduras o de frutas.
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