KR20180075763A - 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜성 간손상 예방, 개선 및 치료용 조성물 - Google Patents
마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜성 간손상 예방, 개선 및 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜성 간손상 예방, 개선 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 마치현 주정 추출물은 알콜에 의해 유도되는 간손상을 억제하고, 숙취해소 효과가 있으므로 약학적 조성물, 발효유, 음료, 기능성 식품 등 간 기능 개선 및 숙취해소 효과를 갖는 제품에 응용될 수 있다.
Description
본 발명은 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜성 간손상 예방, 개선 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 간세포 생존율 증진, 항산화 활성, 간효소 활성화 및 숙취해소 활성을 가지는 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜성 간손상 예방, 개선 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
간은 내장기관에서 중요한 대사 작용을 비롯하여 글리코겐 저장, 적혈구 분해, 혈장 단백질 합성, 해독 작용과 같은 다양한 기능을 가지고 있다. 간은 이물질 섭취에 의한 피해를 막는 1차 방어기관이기 때문에 간 기능이 떨어짐으로써 바이러스나 여러 가지 약물 등에 의해 심한 질환을 일으킬 수 있다. 간에 대하여 독성을 가지는 약물들은 간질환의 주요 원인이기도 하며 심한 간질환 중 대략 절반 정도가 약에 의해 발생하며 대부분이 만성적인 간질환으로 된다. 우리나라는 만성 간질환의 만연지역으로 중추 경제 인구인 30~50대의 사망원인 중 만성 간질환이 2~4위의 높은 비율로 나타나고 있는 실정이다. 특히 노령화 사회로 빠르게 진행됨으로써 에너지 대사 및 독성 물질 대사 기관인 간의 노화로 신체 기능이 급격히 저하되어 치명적인 결과를 초래한다.
알콜(alcohol)은 술의 주성분으로 소화관을 통해 흡수되는데, 정상적인 상태에서 소량의 알코올을 섭취할 경우 간장내로 들어온 에탄올은 세포질 내의 알콜탈수소효소(alcohol dehydrogenase, ADH)와 알데히드탈수소효소(aldehyde dehydrogenase, ALDH)의 작용에 의해 아세테이트(acetate)로 전환되고, 이는 순환계를 통해 간세포 밖으로 배설되어진다(Lieber, C.S.. 1984. Alcohol and th liver. Hepatology 4, 1234-1256). 알콜의 최초 대사산물인 아세트알데히드는 반응성이 높고 독성이 강하여 알콜성 간 장애의 주원인 물질로 밝혀져 있다(Weiner, F.R. et al: Ethanol and the liver in the liver Biology and Pathology, ed. Aris, M., Jakoby, W., Popper, H., Strachter D., and Shafritz, D. A. Raven Press Ltd., New York, p1169, 1988). 간 내에는 아세트알데히드 뿐만 아니라 각종 약물 및 지방대사산물과 과산화지질의 대사과정, 그리고 C-C결합의 산화적 절단으로 생체에 극히 유해한 것으로 알려진 여러 종류의 알데히드(aldehyde)가 생성된다. 알데히드의 산화에 관여하는 주 효소, 알데히드탈수소효소(ALDH)는 간, 콩팥, 심장 및 위를 포함한 많은 장기와 조직에 폭넓은 기질 특이성을 보이며, 각종 알데히드에 대응할 수 있는 약물대사효소의 성격을 지니고 있다. 따라서 어떤 요인에 의하여 ADH활성에 변화가 오게 되면 활성 알데히드의 해독 및 물질대사에 중요한 영향을 미쳐 이 과정에서 알콜과 아세트알데히드는 간세포와 뇌세포에 손상을 입히고, 구토, 두통, 오한, 복통을 유발하는 숙취의 원인이 된다.
마치현과의 일년초인 마치현은 시골 길가에서 흔히 볼 수 있는데, 줄기와 잎은 삶아서 나물로 식용하고, 잎의 생김새가 말 이빨(馬齒)과 같기 때문에 한방에서 마치현, 한명으로 과자엽채라고 하는데, 잎이 큰 것은 약으로 쓰지 않고, 잎이 작은 것을 동쪽에 매어 2~3일 동안 햇볕에 말려서 홰나무방망이로 짓찧어 줄기와 마디를 버리고 잎만 사용한다. 동의보감에서는 마치현은 성질이 차고(寒) 맛이 시며(酸) 독이 없어 여러 가지 종기와 악창을 낫게 하고 대소변을 용이하게 하며, 쇠붙이에 다쳐서 생긴 헌데와 속에 누공이 생긴것을 치료하며, 갈증을 멎게 하며 여러 가지 벌레를 죽인다고 기록하고 있다. 또한 충독, 중풍, 이뇨제, 사독의 해독작용, 이질, 종창, 자궁수축 등 다양한 지병에 사용한다. 마치현은 양념 등으로 버무려서 먹기도 하고 약재로도 활용되어 왔으며 과거 선조들의 민간요법에서는 충독, 사독 등의 해독제로도 사용되었고, 또한 아리비아 반도에서는 방부제, 괴혈병제제, 진경제, 이뇨제, 구충제, 피부 진정제로도 사용되었다. 그 외 근육이완 활성과 항암효과에 대한 연구도 보고되고 있다.
특허문헌 1(대한민국 출원공개 제10-2005-0046694호)에는 항종양 활성, 간염억제 활성, 노화방지 및 면역증강 활성을 가지는 동량의 와송, 지유, 금은화, 귀전우, 삼칠근, 백지, 마치현, 우피두견, 지구목, 유근피로 구성된 10종의 한약재 추출물에 대해 기술되어 있다. 또한 간세포 사멸의 원인 중의 하나인 Fas-FasL 결합을 저해하고 FasL의 발현을 억제함으로서 간염을 억제한다고 기술되어 있다.
국내의 간 기능 개선제로는 curcumin을 주성분으로 한 울금, silymarin을 주성분으로 한 엉겅퀴 과에 속하는 Milk Thistle과 Artichoke 추출물, beef leaf와 black radish는 항산화 비타민과 플라보노이드를 주성분으로 하며, 민들레 뿌리와 헛개나무 열매로 만든 제품들이 판매되고 있다. 특히, 현재 식약청에서 간 기능 개선 관련 기능성 원료는 헛개나무, 표고버섯 균사체, Milk Thistle 세품목으로 원료의 대부분을 수입에 의존하고 있는 실정이다. 또한 알콜성 손상으로부터 '간을 보호하는데 도움이 됨'으로 인정된 기능성 원료는 유산균 발효 다시마추출물(1.5 g/day)과 헛개나무 과병 추출물(2,460mg/day) 뿐이며 일일 섭취량이 1.5~2.5g으로 높은 편이라 소비자가 섭취 시 용이하지 않으므로, 안전성이 보장된 천연물을 활용, 섭취량까지 낮춘 새로운 간 보호기능성 소재 개발이 시급한 실정이다.
이에 본 발명에서는 마치현을 물과 주정을 이용하여 농도별로 추출한 후, 항산화 활성이 알콜에 의한 간세포 손상에 가장 효과적으로 대응하는 주정 농도에서 마치현 주정 추출물을 제조하였고, 상기 추출물이 간세포 및 인체에 전혀 독성이 없는 안전한 물질임을 확인하였고, 알콜로부터 유도한 간손상 동물 모델에서 알콜성 간손상 개선 및 예방 효능을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜에 의해 유도된 간 손상의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜에 의해 손상된 간 기능 개선, 간세포 보호 및 숙취 해소용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜성 간 손상의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 특징으로 한다.
본 발명은 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜에 의해 손상된 간 기능 개선, 간세포 보호 및 숙취 해소용 식품 조성물을 제공하는 것을 특징으로 한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 마치현 주정 추출물은 마치현의 세척 및 살균을 위해 중량의 20배 정도의 증류수를 마치현에 혼합하여 상온에서 세척을 하고, 상기 세척액을 분리하여 남아있는 마치현을 회수하여 수분이 10% 미만이 되도록 열풍건조를 한다. 그런 다음, 상기 열풍 건조된 마치현 중량의 10배 정도의 50% 주정(酒精)을 혼합하여 상온에서 하루동안 간헐적으로 교반하면서 주정추출을 한다. 그런 다음, 상기 50% 주정 추출물을 거름망을 이용하여 주정추출액을 분리한 후 걸러진 주정추출액을 회전식 감압농축기를 이용하여 농축한다. 그런 다음, 상기 감압 농축된 주정 추출액 고형분을 24시간 이상 동결하고 48시간동안 건조한다. 그런 다음, 상기 동결건조물을 분쇄하여 분말화한다.
본 발명의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜에 의해 유도된 간손상 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물은 실제 임상 투여 시에 경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 마치현 주정 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 덱스트린(dextrin), 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘, 스티아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 들이 포함될 수 있다.
상기의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜성 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 통상적인 1일 투여량은 25 내지 300mg/kg 체중, 바람직하게는 50 내지 200mg/kg 체중의 범위이고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 활성성분의 실제 투여량은 투여경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
한편, 본 발명의 마치현 주정 추출물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선, 간세포 보호 및 숙취 해소용 식품 조성물은 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 발효유, 건강기능식품 등으로 사용될 수 있다. 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 또는 건강기능식품으로 사용되는 경우에, 각종 식품류, 발효유, 육류, 음료수, 초콜렛, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알콜 음료, 비타민 복합제, 주류 및 그 밖의 건강기능식품일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
특히, 본 발명의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선, 간세포 보호 및 숙취 해소용 발효유는 유산균 배양액과 본 발명의 마치현 주정 추출물 동결 건조 분말 및 혼합과즙시럽을 일정비율로 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 용기에 포장하여 제조한다.
또한, 본 발명의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선, 간세포 보호 및 숙취 해소용 야채주스는 고구마, 단호박 등의 혼합야채즙, 당근즙, 토마토즙, 시금치즙, 양상추즙, 셀러리즙, 무수구연산 및 본 발명의 마치현 주정 추출물의 동결건조분말을 균일하게 혼합한 후 살균과정을 거쳐 제조한다.
또한, 본 발명의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선, 간세포 보호 및 숙취 해소용 기능성 음료는 혼합과즙시럽, 본 발명의 마치현 주정 추출물 동결 건조 분말 및 물을 일정한 비율로 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조한다.
한편, 본 발명의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선, 간세포 보호 및 숙취 해소용 건강기능식품은 상기 마치현 주정 추출물 동결 건조 분말을 포함하는 것 이외에 영양보조성분으로서 비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드, 올리고당 등이 첨가될 수 있으며 여타의 식품 첨가물이 첨가되어도 무방하다.
본 발명의 마치현 주정 추출물은 알콜에 의한 간세포의 기능손상을 억제하고 알콜을 분해하는 효능을 기지는 약학적 조성물, 발효유, 기능성 음료, 건강기능식품 등 간 기능 개선 및 숙취해소 제품에 응용될 수 있다.
도 1은 알콜에 의한 세포 독성을 확인 하기 위하여 알콜에서 정상 간세포의 생존율을 나타낸 것이다
도 2는 본 발명의 마치현 주정 추출물의 알콜 독성에 대한 간세포 보호 효과를 확인 하기 위하여 고농도 알콜 상태에서 간세포의 생존율을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 마치현 주정 추출물의 간기능 개선 효과를 확인 하기 위하여 간세포에서의 항산화 활성을 확인 한 것이다.
도 4는 본 발명의 마치현 주정 추출물의 알콜에 의한 간세포 손상 개선 효과를 확인 하기 위하여 동물 실험을 통해 간기능 효소인 AST, ALT, ALP의 활성을 확인 한 것이다.
도 5는 본 발명의 마치현 주정 추물물의 알콜 분해 효과를 확인 하기 위하여 동물실험을 통하여 혈액내 알콜의 잔존량을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 마치현 주정 추출물의 알콜 독성에 대한 간세포 보호 효과를 확인 하기 위하여 고농도 알콜 상태에서 간세포의 생존율을 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 마치현 주정 추출물의 간기능 개선 효과를 확인 하기 위하여 간세포에서의 항산화 활성을 확인 한 것이다.
도 4는 본 발명의 마치현 주정 추출물의 알콜에 의한 간세포 손상 개선 효과를 확인 하기 위하여 동물 실험을 통해 간기능 효소인 AST, ALT, ALP의 활성을 확인 한 것이다.
도 5는 본 발명의 마치현 주정 추물물의 알콜 분해 효과를 확인 하기 위하여 동물실험을 통하여 혈액내 알콜의 잔존량을 나타낸 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 다음의 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니며, 본 발명의 기술적 사상의 범위 내에서 당업자에 의한 통상적인 변화가 가능하다.
<실시예 1>
마치현
주정 추출물의 제조
마치현 주정 추출물은 마치현의 세척 및 살균을 위해 중량의 20배 정도의 증류수를 마치현에 혼합하여 85℃에서 열수세척을 하였다. 상기 세척액을 분리하고, 남아있는 마치현을 회수하여 수분이 10% 미만이 되도록 열풍건조를 하였다. 본 단계를 거친 건조 마치현은 보관이 용이하고, 저장성이 증대된다. 그런 다음, 상기 열풍 건조된 마치현 중량의 10배 정도의 50% 주정(酒精)을 혼합하여 상온에서 18~24시간 동안 간헐적으로 교반하면서 주정추출을 하였다. 그런 다음, 상기 50% 주정추출물을 거름망을 이용하여 주정추출액을 분리한 후 걸러진 주정추출액을 10~15Brix°로 감압농축을 하였다. 그런 다음, 상기 감압 농축된 50% 주정추출액 고형분을 24시간 이상 동결하고 48시간 건조하였다. 그런 다음, 상기 동결건조물을 분쇄하여 분말화하였다.
<실시예 2>
마치현
주정 추출물을 함유하는 약학적 조성물의 제조
본 발명의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜에 의해 유도되는 알콜성 간질환 예방 및/또는 치료용 약학적 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
액제의
제조
상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물의 동결건조분말 1g, 이성화당 10g, 만니톨 5g을 통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고, 레몬향을 적량 가한 다음 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
캡슐제의 제조
상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물의 동결건조분말 200㎎에 폴리덱스트로스 200㎎, 유당 48㎎, 붕해제로써 카르복시메틸스타치나트륨 14㎎, 이산화규소 4mg, 스테아린산마그네슘 4mg을 완전히 혼합한 후 약전 제제총칙 중 캡슐제 제조방법에 따라 경질 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<실시예 3>
마치현
주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 발효유의 제조
본 발명의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 발효유를 제조하는 방법은 다음과 같다.
먼저, 유산균 배양액은 원유 95.36중량%와 탈지분유(또는 혼합분유) 4.6중량%를 교반하여 15℃에서의 비중은 1.0473~1.0475, 적정산도는 0.200~0.220%, pH는 6.55~6.70, 20℃에서의 브릭스(Brix°)는 16.3~16.5% 정도가 되도록 혼합하였다. 혼합 후에 이를 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)하고 40℃로 냉각한 뒤, 스트렙토코커스 써모필러스균과 유당분해효소(Valley laboratory, USA)를 각기 0.02중량%씩 첨가하고 6시간 동안 배양하여 BCP배지에서의 총 유산균 수가 1.0X109cfu/㎖ 이상, 적정산도가 0.89~0.91%, pH는 4.55~4.65가 되도록 하여 제조하였다.
그런 다음, 혼합과즙시럽은 액상과당 10중량%, 백설탕 3중량%, 혼합과즙농축액 56Brix° 10중량%, 펙틴 0.1중량%, 후레쉬후르츠 믹스 에센스 0.05중량% 및 정제수 73.85중량%를 30~35℃에서 교반하여 혼합한 후 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)한 후 냉각하여 제조하였다.
그런 다음, 상기 유산균배양액 75중량%와 상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물의 동결건조분말 0.1중량% 및 상기 혼합과즙시럽 23.9중량%를 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각하여 발효유를 제조하였다.
<실시예 4>
마치현
주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 야채주스의 제조
본 발명의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 야채주스를 제조하는 방법은 다음과 같다.
고구마, 단호박 등의 혼합야채즙 1.7중량%, 당근즙 52중량%, 토마토즙 42중량%, 시금치즙 1중량%, 양상추즙 2중량%, 셀러리즙 1중량%, 무수구연산 0.2중량%, 상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물의 동결건조분말 0.1중량%를 배합기에서 균일하게 혼합한 후 살균기를 이용하여 85~97℃에서 살균하여 야채주스를 제조하였다.
<실시예 5>
마치현
주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료의 제조
본 발명의 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료를 제조하는 방법은 다음과 같다.
먼저, 혼합과즙시럽은 액상과당 10중량%, 백설탕 3중량%, 갈색설탕 3중량%, 혼합과즙농축액 56Brix° 10중량%, 펙틴 0.1중량%, 후레쉬후르츠 믹스 에센스 0.05중량% 및 정제수 73.85중량%를 30~35℃에서 교반하여 혼합한 후 UHT열처리(135℃에서 2초간 살균)한 후 냉각하여 제조하였다.
그리고, 상기의 방법으로 제조된 혼합과즙시럽 29.9중량%와 상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물의 동결건조분말 0.1중량% 및 나머지 정제수 70중량%를 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 이를 유리병, 페트병 등 소포장 용기에 포장하여 기능성 음료를 제조하였다.
<실시예 6>
마치현
주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품의 제조
상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물의 동결건조 분말 0.1중량%에 영양보조성분(비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드) 및 올리고당을 상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물의 동결건조 분말 100중량부에 대하여 10중량부가 되도록 첨가하여 고속회전 혼합기에서 혼합하였다. 상기 혼합물에 멸균 정제수 10중량%를 첨가, 혼합하고 직경 1~2mm의 과립상으로 성형하였다. 상기 성형된 과립은 40~50℃의 진공건조기에서 건조시킨 후 12~14메쉬(mesh)를 통과시켜 균일하게 과립을 제조하였다. 상기와 같이 제조된 과립은 적당량씩 압출 성형되어 정제 또는 분말로 되거나 경질캡슐에 충전되어 경질캡슐제품으로 제조하였다.
<시험예 1>
알콜
농도에 따른 간세포의 생존율 확인
알콜에서 본 발명의 마치현 주정 추출물의 간세포 보호 활성을 확인하기에 앞서 간세포에 각각의 농도의 알콜을 처리하여 간세포의 생존 능력을 MTT 분석법을 통해 확인하였다. 즉, 본 시험에 사용된 동물 세포주로는 사람에서 유래된 Chang liver 세포를 미국 세포주 은행(ATCC)에서 분양받아 사용하였다. 일반적인 세포의 유지를 위해서 90%의 DMEM 배지(Gibco)와 10% FBS(Gibco)가 함유된 배지에서 세포배양을 하였으며, 1:8의 중량비율로 주 2회 계대 배양을 수행하였다. 상기 세포주를 1X106cells/well로 6 well plate에 계대 배양 후 2% FBS가 들어간 DMEM 배지를 이용하여 매일 배양액을 교체하며, 3~4일간 배양하여 분화를 시켰다. 상기 각 웰(well)에 50mM, 100mM, 200mM, 400mM, 800mM, 1200mM의 알콜을 처리한 뒤 1시간 후에 배지를 제거하였고 MTT 시약 10㎕를 첨가한 뒤 4시간 동안 배양하였다.
한편, 상기 웰(well)에 알콜을 처리하지 않은 경우의 간세포의 생존율을 기준으로 하여 각 농도의 알콜에 대한 간세포의 생존율은 ELISA를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정함으로서 확인하였다.
그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 50mM 알콜 농도에서는 간세포의 생존율이 알콜을 처리하지 않은 간세포와 동일한 생존율을 보였으며, 100mM 알콜 농도에서는 99%의 간세포 생존율 보였음 알 수 있었다. 그러나, 고농도의 알콜을 처리한 경우에 있어서는 즉, 200mM 알콜 농도에서는 간세포 생존율이 50%, 400mM 알콜 농도에서는 간세포 생존율이 40%, 800mM과 1200mM 알콜 농도에서는 간세포 생존율이 10% 이하로 떨어짐을 알 수 있었다.
<시험예 2>
본 발명의
마치현
주정 추출물에 의한 고농도
알콜에서의
간세포 생존율 확인
상기 시험예 1에서와 같이, 고농도의 알콜에 의한 간세포 손상에 대하여 본 발명의 마치현 주정 추출물의 간세포 보호효과를 확인하기 위하여 96 웰 플레이트에 2×104cells/well로 Chang 정상 간세포를 넣고 24시간 배양한 후, 새로운 배지로 교환하였다. 상기 웰(well)에 상기 실시예 1의 마치현 주정추출물을 100㎍/㎖의 농도로 처리하고 1시간 배양한 후, 400mM 농도의 알콜을 처리하였고, WST-1 시약을 10㎕/well 처리한 후 4시간 동안 배양하였다. 흡광도는 ELISA를 이용하여 450nm에서 측정하였다.
한편, 양성대조군으로는 상기 실시예 1의 마치현 주정추출물 대신에 헛개나무 과병추출물분말을 사용한 것을 제외하고는 상기와 동일한 방법으로 시험하였다.
음성대조군으로는 상기 실시예 1의 마치현 주정추출물을 처리하지 않은 것을 제외하고는 상기와 동일한 방법을 시험하였다.
그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 400mM 고농도의 알콜을 간세포에 처리한 경우의 간세포 생존율이 20%인데 반하여, 본 발명의 마치현 주정 추출물을 처리한 경우의 간세포 생존율은 85% 이상으로 증가하였고, 또한, 양성대조군인 헛개나무 과병추출물을 처리한 경우의 간세포 생존율 70% 보다 월등히 우수하여 본 발명의 마치현 주정 추출물이 알콜에 의해 유도되는 독성으로부터 간세포를 보호할 수 있음을 확인할 수 있었다.
<시험예 3>
본 발명의
마치현
주정 추출물의 항산화 활성 측정
간은 약물이나 독성물질을 해독하는 과정에서 반응성이 높은 중간물질 및 활성 산소가 생성되어 단백질 및 DNA의 변형을 유도하고 독성에 대한 감수성을 증가시킨다. 또한 만성적인 간손상에서는 반복되는 상처와 치유의 과정을 거치면서 염증반응이 유발되고, 다양한 염증인자들에 의해 세포막이 과산화 되어 세포사멸신호를 개시한다. 따라서 염증 및 산화적 스트레스는 지방간, 간염, 간경화, 간암을 포함하는 만성 간질환에서 전형적으로 발현되는 특징이라고 할 수 있다.
이에, 본 시험에서는 알콜에 의한 간손상으로 인한 본 발명의 마치현 주정 추출물의 항산화 활성을 측정하였다. 먼저, 95% 에탄올(ethanol)에 용해시킨 0.1mM DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl, Sigma, USA) 800μl와 상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물 200μl을 E.P. tube에 넣고 3분 동안 볼텍싱(voltexing) 하여 암실에서 30분간 반응시켰다. 남아 있는 라디칼(radical)의 농도를 자외선-가시광선 분광광도계를 사용하여 517nm에서 측정하였다. 라디칼의 농도범위는 0.5~0.025㎎/㎖ 범위내에서 측정하였다. 상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물의 DPPH에 대한 소거능은 용매(알코올)만을 사용한 음성대조군의 흡광도를 50% 감소시키는데 필요한 농도로 나타내었다.
항산화능은 시료처리군과 대조군(시료무처리군)의 흡광도를 구하여 하기의 수학식 1과 같이 백분율로 표시하였다.
한편, 양성대조군으로는 상기 실시예 1의 마치현 주정추출물 대신에 헛개나무 과병추출물분말을 사용하였고, 음성대조군으로는 상기 실시예 1의 마치현 주정추출물 대신에 알콜만 처리하여 이용하였고 상기와 동일한 방법으로 시험하였다.
그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 알콜만 투여한 음성 대조군에서 항산화 활성은 약 15%로서 매우 낮은 수준으로 감소하는 것을 확인 하였고, 양성 대조군의 경우 알콜을 처리하지 않은 정상 식이의 경우보다 약 23% 정도 항산화 활성이 감소함을 나타내었다. 반면에 본 발명의 마치현 주정 추출물을 처리한 경우에는 알콜을 처리하지 않은 정상 식이의 경우에 비해 약 95% 정도 유사한 항산화 활성을 나타내었으며, 양성 대조군과 비교시에는 약 20% 정도 항산화 활성이 증가하였음을 확인할 수 있었다. 이는 본 발명의 마치현 주정 추출물이 간세포에서 알콜에 의한 산화적 스트레스에 대해 저항성을 가짐으로써 간세포 보호에 효과적으로 작용할 수 있음을 나타내는 것으로 판단된다
<시험예 4>
본 발명의
마치현
주정 추출물의 간 효소 활성화 측정
본 발명의 마치현 주정 추출물이 알콜에 의해 유도된 간손상에 효과적으로 간세포 보호 및 간손상 개선 효과를 나타내는지 확인하기 위해 실험동물을 이용하여 분석하였다. 실험동물로는 7주령 C57/BL6 마우스를 사용하였다. 먼저, 실험군 8마리를 대상으로 상기 마우스에 마우스용 존데를 이용하여 알콜 100mg/kg을 1주일간 경구 투여를 실시하였고, 상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물은 50mg/kg의 농도로 마우스용 존데를 이용하여 경구투여 하였다. 투여를 마친 후 실험동물을 희생하여 혈청을 분리하였고, 분리한 혈청으로부터 간기능 검사에 관한 생화학 검사인 아스파테이트 아미노전이효소(aspartate aminotransferase; AST), 알라닌 아미노전이효소(alanine aminotransferase; ALT), 알칼리성 포스파타제(alkaline phosphatase; ALP)의 활성을 임상병리기관(주) 켐온)에 의뢰하여 분석하였다.
한편, 음성대조군은 상기 마우스에 알콜 5g/kg의 농도로 경구 투여한 것을 제외하고는 상기와 동일한 방법으로 시험하였다.
양성대조군은 상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물 대신에 헛개나무 과병추출물분말을 경구 투여한 것을 제외하고는 상기와 동일한 방법으로 시험하였다.
정상군은 상기 마우스에 상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물 대신에 생리식염수를 경구투여하고, 알콜을 투여하지 않은 것을 제외하고는 상기와 동일한 방법으로 시험하였다.
그 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 마치현 주정 추출물을 투여한 실험군에서 간 손상을 반영하는 아미노 전이효소(AST 및 ALT)의 상승정도가 현저히 낮아짐을 확인 하였다. AST와 ALT는 전신의 세포에 존재하는데, ALT는 주로 간세포의 세포질에 존재하고, AST는 심장, 간, 신장, 미토콘드리아 등에 분포한다. AST와 ALT는 간내에 각각 혈청의 7,000 및 3,000배 많이 존재하여 간 손상 시 혈청 내로 흘러나온다. 따라서 AST와 ALT의 상승정도에 따라 추출물의 알콜에 대한 간세포 보호 효과를 확인 할 수 있는데, 본 발명의 마치현 주정 추출물의 경우에는 양성 대조군과 비교하여 볼 때 알콜성 간손상에 대해 매우 우수한 간세포 보호 효과를 나타내고 있음을 확인 할 수 있었다.
<시험예 5>
본 발명의
마치현
주정 추출물의 혈중
알콜
농도 강하 효과
5-1. 실험동물의 사육
실험동물로는 체중 200~250g의 수컷 스프라그-다울리(Sprague-Dawley)계의 수컷 랫트 45마리를 (주)두열바이오로부터 분양받아 사용하였다. 실험동물은 오전 7시부터 오후 7시까지 빛을 가하는 일정한 명암주기 하에서 온도 21±2℃와 상대습도 55±10%로 사육하였고, 음식과 물은 자유로이 섭취하게 하였다.
5-2. 혈중 알콜 농도의 저하 확인
본 발명의 마치현 주정 추출물의 숙취해소 효과를 실험하기 위하여, 실험동물을 실험에 앞서 18시간 동안 절식을 시킨 뒤 상기 실시예 1의 마치현 주정 추출물을 먼저 50mg/kg의 농도로 랫드용 존데를 이용하여 투여한 뒤 30분 후에 5mg/kg의 발효주정을 식도용 바늘(jonde)을 사용하여 투여하였다. 상기 랫트를 알코올 투여 후 3시간 및 5시간 경과 후에 각 실험동물의 꼬리로부터 혈액을 채취하였다. 채취한 혈액은 혈청 0.2㎖를 1.8㎖ 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid)으로 침전시켰으며, 600×g에서 10분간 원심분리한 후, 상등액 중 1ml을 취하였다. 또한 상등액 일정량에 어세이키트(assay kit) 333-A(Sigma, USA)를 가하여 분석하였으며, 에탄올 표준액에 대한 분석치를 대조로 하여 알콜 함량을 산출하였다.
한편, 음성 대조군(알콜투여군)으로는 발효주정만을 사용한 것을 제외하고는 상기와 동일한 방법으로 시험하였다.
양성대조군으로는 본 발명의 마치현 주정 추출물 대신에 헛개나무과병추출물분말을 사용한 것을 제외하고는 상기와 동일한 방법으로 시험하였다.
정상군은 본 발명의 마치현 주정 추출물 대신에 생리식염수를 사용하고, 알콜을 투여하지 않은 것을 제외하고는 상기와 동일한 방법으로 시험하였다.
그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 알콜 투여 후 3시간 경과시에 알콜함량은 양성대조군은 음성대조군에 비해 혈중 알콜 농도가 22.6%가 감소한 반면, 본 발명의 마치현 주정 추출물의 경우는 음성대조군에 비해 혈중 알콜 농도가 33.8% 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
알콜 투여 후 5시간 경과시에 알콜함량은 양성대조군은 음성대조군에 비해 혈중 알콜 농도가 38.5%가 감소한 반면, 본 발명의 마치현 주정 추출물의 경우는 음성대조군에 비해 혈중 알콜 농도가 48.0% 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명의 마치현 주정 추출물에 의한 혈중 알콜 농도의 감소 효과를 확인 할 수 있었다.
Claims (5)
- 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜성 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선 또는 숙취 해소용 식품 조성물.
- 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 간세포 보호용 식품 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 식품 조성물은 야채주스, 기능성 음료, 건강기능식품, 발효유 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 간 기능 개선 또는 숙취 해소용 식품 조성물.
- 제3항에 있어서,
상기 식품 조성물은 야채주스, 기능성 음료, 건강기능식품, 발효유 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 간세포 보호용 식품 조성물.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020160179363A KR20180075763A (ko) | 2016-12-26 | 2016-12-26 | 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜성 간손상 예방, 개선 및 치료용 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| KR1020160179363A KR20180075763A (ko) | 2016-12-26 | 2016-12-26 | 마치현 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 알콜성 간손상 예방, 개선 및 치료용 조성물 |
Publications (1)
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|---|---|
| KR20180075763A true KR20180075763A (ko) | 2018-07-05 |
Family
ID=62920535
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Cited By (2)
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| KR102043813B1 (ko) | 2018-12-26 | 2019-11-12 | 이창원 | 알코올성 간 손상에 대한 간 보호용 조성물 |
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-
2016
- 2016-12-26 KR KR1020160179363A patent/KR20180075763A/ko not_active Application Discontinuation
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