EA030276B1 - Способы идентификации страдающих раком пациентов и лечения рака у пациентов, у которых имеется или развивается резистентность к первой терапии рака - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к медицине. Конкретнее, изобретение относится к способу идентификации индивида, страдающего раком, для которого должно быть эффективно лечение ингибитором RAF и ингибитором MEK, CRAF, CrkL или TPL2/COT путем определения увеличенного числа копий генов, уровня мРНК или белка, либо уровня фосфорилирования одной или более киназ-мишеней MAP3K8 (TPL2/COT), CRKL (CrkL), FGR (Fgr), PRKCE (Prkce), PRKCH (Prkch), ERBB2 (ErbB2), AXL (Axl) или PAK3 (Pak3) по сравнению с аналогичными показателями у индивида, не страдающего раком. Также обеспечивается способ лечения рака, включающий введение индивиду эффективного количества ингибитора RAF и эффективного количества ингибитора MEK или TPL2/COT.

Description

Изобретение относится к медицине. Конкретнее, изобретение относится к способу идентификации индивида, страдающего раком, для которого должно быть эффективно лечение ингибитором КАР и ингибитором МЕК, СКАР, СткЬ или ТРЬ2/СОТ путем определения увеличенного числа копий генов, уровня мРНК или белка, либо уровня фосфорилирования одной или более киназмишеней МАР3К8 (ТРЬ2/СОТ), СККЬ (СткЬ), РОК (Рдт), РККСЕ (Ргксе), РККСН (Ртксй), ЕКВВ2 (ЕгЬВ2), АХЬ (Ах1) или РАК3 (Рак3) по сравнению с аналогичными показателями у индивида, не страдающего раком. Также обеспечивается способ лечения рака, включающий введение индивиду эффективного количества ингибитора КАР и эффективного количества ингибитора МЕК или ТРЬ2/ СОТ.

030276 Β1

030276

Релевантные заявки

Согласно 35 О.С. §119(е) по настоящей заявке испрашивается приоритет следующих предварительных заявок на патент США под серийными номерами: 61/312193, поданной 9 марта 2010; 61/312519, поданной 10 марта 2010; 61/326021, поданной 20 апреля 2010 и 61/415569, поданной 19 ноября 2010, полный объем которых включен в настоящее описание в качестве ссылки.

Спонсированное государством исследование или разработка

Настоящее изобретение выполнено при правительственной поддержке по государственным грантам К08 СА115927 и 1ΌΡ20Ό002750, выданным Национальными институтами здоровья. Правительство имеет определенные права на изобретение.

Уровень техники

Онкогенные мутации в серин/треониновой киназе В-КАР (также известной как ВКАР) обнаруживаются в 50-70% злокачественных меланом (Όανίοδ Н. с1 а1., ШШгс. 417, 949-954 (2002)). Результаты доклинических исследований показали, что мутация В-КАР (У600Е) прогнозирует зависимость от сигнального каскада митоген-активированной протеинкиназы (МАРК) в меланоме (НоеШсй К.Р. с1 а1., Сапсег Кекеагсй, 69, 3042-3051 (2009); МсСеппоП и. с1 а1., Ргос. ЫаИ. Асаб. 8ск И8А, 104, 19936-19941 (2007); 8о1й Ό.Β. е1 а1. ВКАР ти1айоп ргебюй кепзйуйу 1о МЕК ίηΗίόίΙίοη. ШШге 439, 358-362 (2006); Аап Р.Т. е1 а1., Се11, 116, 855-867 (2004); \Уе11йгоск С. е1 а1., Сапсег Кек., 64, 2338-2342 (2004)) - наблюдение, которое подтвердилось положительным эффектом ингибиторов КАР или МЕК в клинических испытаниях (Р1айебу К.Т. с! а1., N. Еп§1. I. Меб., 363, 809-819 (2010); 1п£ап1е I. К. е! а1., I. Сйп. Опсо1., 28 (кирр1.), 2503 (2010); 8сй\уаг1/ С.К. е1 а1., I. Сйп. Опсо1. 27 (кирр1.), 3513 (2009)). Однако резистентность бе поуо или приобретенная резистентность часто оказывает отрицательное влияние на клинические ответы на нацеленные противораковые препараты (Епде1тап РА. е1 а1., Заепсе, 316, 1039-1043 (2007); Согге М. Е. е1 а1., Заепсе, 293, 876-880 (2001); Нешпсй М.С. с! а1., I. Сйп. Опсо1., 24, 4764-4774 (2006); Ваий Н., 8ресй1 К. & ИПпсй А., №Циге Кеу. Όπΐβ О^соу., 3, 1001-1010 (2004)). Следовательно, остается потребность в новых способах идентификации механизмов резистентности с целью выявления "лечебных" мишеней для эффективных долгосрочных стратегий лечения, а таже в новых способах идентификации пациентов, которые, вероятно, будут иметь пользу от стратегий лечения, и в способах лечения пациентов с использованием эффективных долгосрочных стратегий лечения.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к развитию резистентности к терапевтическим агентам в лечении рака. Следовательно, в одном из аспектов изобретение относится к способу идентификации индивида, у которого имеется рак, в отношении которого, вероятно, лечение комбинированной терапией ингибитором КАР и вторым ингибитором будет эффективно. Способ предусматривает анализ числа копий генов, уровня мРНК или белка, или фосфорилирования одной или более киназ-мишеней, выбранных из группы, состоящей из МАР3К8 (ТРБ2/СОТ), КАР1 (СКАР), СККЬ (СгкЕ), РСК (Р§г), РККСЕ (Ргксе), РККСН (Ргксй), ЕКВВ2 (ЕгйВ2), АХЬ (Ах1) или РАК3 (Рак3), в раковых клетках, полученных от индивида. Способ дополнительно предусматривает сравнение числа копий генов, уровня мРНК или белка, или фосфорилирования с числом копий генов, уровнем мРНК или белка, или фосфорилирования киназы-мишени в клетках, полученных от индивида, не страдающего раком, и соотнесение повышенного числа копий генов или изменения в экспрессии мРНК или сверэкспрессии белка, или фосфорилирования киназымишени в раковых клетках по сравнению с клетками от индивида, не страдающего раком, с индивидом, у которого имеется рак, который, вероятно, будет иметь пользу от лечения комбинированной терапией.

В еще одном аспекте изобретение относится к способу лечения рака у индивида, нуждающегося в этом. Способ предусматривает введение индивиду эффективного количества ингибитора КАР и эффективного количества второго ингибитора, в котором второй ингибитор представляет ингибитор МЕК или ингибитор ТРЙ2/СОТ.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 показан функциональный скрининг, основанный на ОКР, с помощью которого идентифицируются киназы СОТ и С-КАР в качестве возбудителей резистентности к ингибированию В-КАР. (а) Схематическое изображение коллекции ОКР киназ СС8В/Института Брода. Указаны группы киназ и номер киназ в группе; (й) клетки А375, экспрессирующие коллекцию ОКР киназ СС8В/Института Брода, анализировали в отношении жизнеспособности после воздействия 1 мкМ РБХ4720 и нормализовали к конститутивно активной МЕК1 (МЕКГОО). Девять ОКР (кружки) были оценены, как имеющие различие в 2 стандартных отклонения (прерывистая линия, 58,64%) со средним значением для всех ОКР (прерывистая линия, 44,26%); (с) указанные ОКР экспрессировали в 5 клеточных линиях В-КАР^У600Е и обрабатывали ДМСО или РБХ47201 в концентрации 1 мкМ. Через 4 суток количественно оценивали жизнеспособность (по сравнению с ДМСО). Ошибки в виде коротких вертикальных отрезков представляют стандартное отклонение между повторностями опыта (п=6); (б) результаты второго скрининга на клетках А375 и 8КМЕЬ28 отдают предпочтение 9 основным кандидатам ОКР по многоточечной шкале концентраций РБХ4720.

На фиг. 2 показана резистентность к ингибированию В-КАР посредством активации пути МАРК. (а) Указанные ОКР экспрессировали в клетках А375. Определяли уровни фосфорилированных МЕК и

- 1 030276

ЕКК после обработки ДМСО в течение 18 ч (-) или РЬХ4720 (концентрации указаны); (Ь) пролиферация клеток А375, экспрессирующих указанные ОКЕ. Ошибки в виде коротких вертикальных отрезков представляют стандартное отклонение между повторностями опыта (п=6); (с) фосфорилирование С-КАЕ (8338) и ЕКК в лизатах клеток А375, экспрессирующих указанные ОКЕ; (к) экспрессия СОТ в лизатах иммортализованных первичных меланоцитов, экспрессирующих ВКАЕУ600Е или пустой вектор. мРНК СОТ содержит внутренний старт-кодон (30М), приводящий к экспрессии двух белковых продуктов различной длины; аминокислоты 1-467 или 30-467, отмеченные стрелками; (е) фосфорилирование СОТ и ЕКК в лизатах клеток А375, экспрессирующих указанные ОКЕ, после истощения В-КАЕ, опосредованного 8ЙРНК (ккВКАЕ), по сравнению с контрольной 8кРНК (ккЬис); (ί) фосфорилирование ЕКК в лизатах клеток А375, экспрессирующих указанные ОКЕ, после истощения С-КАЕ, опосредованного 8кРНК (ккСКАЕ) или контрольной 8кРНК (ккЬис), после обработки в течение 18 ч ДМСО (-) или 1 мкМ РБХ4720 (+).

На фиг. 3 показано, что экспрессия СОТ прогнозирует резистентность к ингибированию В-КАЕ в раковых клеточных линиях. (а) Число копий МАР3К8/СОТ; красные столбики: амплификация СОТ, синие столбики: неаплифицированная СОТ; (Ь) экспрессия СОТ в клеточных линиях В-КАЕ^У600Е и (с) кратковременных культурах; (к) 0150 РЬХ4720 в клеточных линиях В-КАЕ^У600Е. Цвета обозначения такие же как в п. (а); (е) фосфорилирование МЕК и ЕКК после обработки ДМСО или РЬХ4720 (концентрации указаны); (ί) фосфорилирование ЕКК в лизатах клеток М307 (ΛΖΌ-Ρ; АΖ^6244-резистентных), обработанных ДМСО или 1 мкМ РЬХ4720 (РЬХ) или С1-1040 (С1); (д) экспрессия мРНК СОТ (количественная ОТ/ПЦР) в образцах ткани метастатической меланомы, обработанных РЬХ4032. У пациентов 1 и 3 отбирали многочисленные биопсийные образцы из одного патологического участка. Ошибки в виде коротких вертикальных отрезков представляют 8ЕМ (п=3) И; неопределяемый/недектируемый; (к) фосфорилирование ЕКК и МЕК в клетках КРМ1-7951 после истощения СОТ, опосредованного 8кРНК (ккСОТ), по сравнению с контролем (ккЬис) и обработкой ДМСО (-) или 1 мкМ РЬХ4720 (+). Фосфорилирование ЕКК и МЕК анализировали количественно; (ί) фосфорилирование ЕКК и МЕК в клетках КРМ1-7951 после обработки в течение 1 ч низкомолекулярным ингибитором киназы СОТ. Фосфорилирование ЕКК и МЕК анализировали количественно. (]) Кривые чувствительности панели клеточных линий В-КАЕ^У600Е к РЬХ4720. ОИМ8-23 и М307 представляют клеточные линии с экспрессией/амплификацией СОТ и все другие представляют клеточные линии с недектируемой/неизмененной СОТ; (к) селективная экспрессия СОТ и соответствующая активация пути МАРК в метастатической подкожной злокачественной меланоме с приобретенной резистентностью к РЬХ4032 (* означает контрольную полосу, МЕТ-ММ (РЬХ-К); метастатическая злокачественная меланома, РЬХ4032-резистентная).

На фиг. 4 показано, что клеточные линии В-КАЕ^У600Е, экспрессирующие СОТ, проявляют резистентность к аллостерическим ингибиторам МЕК. (а) Значения 0150 С1-1040 в панели клеточных линий В-КАЕ^У600Е; (Ь) фосфорилирование МЕК и ЕКК в лизатах указанных клеточных линий, обработанных ДМСО или С1-1040 (концентрации указаны); (с) кратное изменение (по сравнению с МЕК1) 0150 РЬХ4720, КАЕ265, С1-1040 и АΖ^6244 для клеток А375, эктопически экспрессирующих указанные ОК8; (к) фосфорилирование ЕКК в клетках А375, экспрессирующих указанные ОК8, после обработки ДМСО или 1 мкМ РЬХ4720, КАЕ265, С1-1040 и ΛΖ^6244; (е) жизнеспособность клеток А375, экспрессирующих указанные ОК8 и обработанных ДМСО, РЬХ4720 (концентрации указаны) и РЬХ4720 в комбинации с С1-1040 и АΖ^6244 (все в концентрации 1 мкМ). Ошибки в виде коротких вертикальных отрезков представляют стандартное отклонение (п=6); (ί) фосфорилирование ЕКК в клетках А375, экспрессирующих указанные ОК8, после обработки ДМСО, РЬХ4720 (1 мкМ) или РЬХ4720 в комбинации с С1-1040 или ΛΖ^6244 (все в концентрации 1 мкМ); (д) клеточные линии с аберрантным числом копий/экспрессией МАР3К8/СОТ являются нечувствительными к аллостерическому ингибитору МЕК-киназы С1-1040 или (к) ΛΖ^6244; (ί) схематическое изображение образования комплексов МАРЗК в ответ на ингибирование В-КАЕ в мутантных клеточных линиях В-КАЕ^У600Е. Положения РЬХ4720 в С-КАЕ в сигнальномкомпетентном комплексе (верхняя правая панель), который активируется онкогенными событиями слева от С-КАЕ (нижняя правая панель), тем самым приводя к развитию резистентности. В контексте экспрессии СОТ комплексы, содержащие СОТ/КАЕ, достаточны для активации пути МАРК и опосредуют резистентность (нижняя левая панель).

На фиг. 5 показано схематическое изображение функционального скрининга, основанного на ОКЕ киназ, которые приводят к развитию резистентности к ингибированию В-КАЕ. В-КАЕ^У600Е клеточная линия А375 была трансдуцирована лентивирусом с 597 киназами коллекции ОКЕ киназ СС8В/Института Брода. Идентифицировали ОКЕ, оказывающие положительный или отрицательный эффект на пролиферацию обработанных контролем клеток А375, и исключали из конечного анализа. Способствующие развитию резистентности ОКЕ идентифицировали по определению соотношения дифференциальной жизнеспособности клеток, ингибированных В-КАЕ (обработанных РБХ4720) и обработанных контролем. Дифференциальную жизнеспособность нормализовали к конститутивно активной аллели МЕК1, МЕК1^|'^)|'⁾; специфический положительный контроль при анализе.

На фиг. 6 показано, что коллекция ОКЕ киназ СС8В/Института Брода хорошо экспрессируется за счет высокого титра лентивируса. (а) Схематическое изображение лентивирусного экспрессионного век- 2 030276

тора рЬХ-ВЬЛ§Т-У5, использованного для всех ОКТ-скринингов и последующей валидации. (Ь) ОРРмеченные ОКТ с размерами в широких пределах экспрессировали с использованием лентивирусов в клетках 1итка1 и количественно определяли процент клеток, экспрессирующих ОРР/ОКР (например, инфицированных клеток), показывая высокий титр вирусов в пределах размеров ОКР. (с) Экспрессия 96 произвольных ОКР, детектированных ЫСот с антителами к У5-эпитоп-метке, по отношению к клеточной ДНК. Экспрессию детектировали в 83% лунок.

На фиг. 7 показана экспрессия кандидатов ОКР резистентности. Клетки 293Т временно трансфектировали рЬХ-ВЬЛ§Т-У5-ОКР (указан) и экспрессию детектировали с использованием анти-У5-НКРантитела. Клон ЛХЬ является «замкнутым» и содержит стоп-кодон, предшествующий У5-метке. См. фиг. 12, на которой представлено подтверждение экспрессии; (*) в темноте указывает на экспрессию трех ОКР, не видимых на свету.

На фиг. 8 показано, что результаты вторичного скрининга отдают предпочтение 9 основным кандидатам ОКР резистентности к ингибиторам В-КАР. Основные девять ОКР, которые оценили в первичном скрининге, экспрессировали в клетках А375 или §КМЕЬ28, и определяли О1₅₀ по пределам концентраций РЬХ4720 из 8 точек.

На фиг. 9 показано влияние экспрессии ОКР на пролиферацию клеточных линий В-КАР^У600Е. Пролиферация по сравнению с МЕК1 (а) клеток А375 или (Ь) §КМЕЬ28, экспрессирующих указанные ОКР через 7 суток роста.

На фиг. 10 показано, что эктопическая экспрессия конститутивно активных МЕК1 (МЕК1^СС) и СОТ приводит к повышенной экспрессии рМЕК/рЕКК в клетках А375, в то время как С-КАР снижает уровни рМЕК/рЕКК. Лизаты клеток А375, эктопично экспрессирующих ОРР, МЕК1, МЕК^СС, СОТ или С-КАР, анализировали иммуноблоттингом для определения концентраций рЕКК и рМЕК. ОРР и МЕК1 (дорожки 1-3) разделяли с СОТ/С-КАР (дорожки 4-5) для предупреждения сигнала остаточного У5-МЕК1 в результате избытка СОТ или С-КАР, которые экспрессируются на значительно более низких уровнях.

На фиг. 11 показано, что киназная активность СОТ или С-КАР необходима для стабильного фосфорилирования ЕКК в контексте обработки РЬХ4720. Иммуноблоттинг клеток А375, экспрессирующих эктопически (а) МЕК1, СОТ дикого типа или неактивную киназу СОТ (СОТ^К167К) или (Ь) МЕК1, С-КАР дикого типа или неактивную киназу С-КАР (С-КАР^К375М), обработанных 1 мкМ РЬХ4720 в течение 18 ч.

На фиг. 12 показано влияние экспрессии ОКР на сигнальный путь МАРК в контексте ингибитора РЬХ4720 В-КАР-киназы. Путь активации МАРК оценивали иммуноблоттингом рЕКК и рМЕК в клетках А375, экспрессирующих указанные ОКР, в присутствии РЬХ4720 (18 ч, концентрации указаны). (*) указывает на использование антитела к экспрессированной ОКР, но не к У5-эпитопу. ЛХЬ клонировали без У5-метки.

На фиг. 13 показано, что В-КАР ассоциируется с иммунопреципитированной С-КАР в клетках А375 после обработки в течение 18 ч 1 мкМ РЬХ4720 (+) или ДМСО (-); (а) \УС’Е; контрольный цельный клеточный экстракт. Эктопически экспрессированная С-КАР конститутивно ассоциируется с В-КАР и фосфорилируется в 5338, что согасуется с локализацией и активацией в мембране. МЕК1, МЕК^СС и СОТэкспрессирующие клетки А375 не показывают активации С-КАР, (Ь).

На фиг. 14 показано, что ретровирусная экспрессия С-КАР дикого типа или усеченного мутанта СКАР с высокой активностью (С-КАР(22^)) придает резистентность клеткам А375 к В-КАР-ингибитору РЬХ4720 (а) и приводит к стабильным уровням рЕКК в контексте обработки РЬХ4720 (1 мкМ, 18 ч); (Ь) уровни экспрессии С-КАР, достигаемые с использованием ретровирусов, достоверно ниже по сравнению с системами на основе лентивирусов, что приводит к более низкому значению 0150 по сравнению с лентивирусной С-КАР.

На фиг. 15 показано влияние В-КАР^У600Е на мРНК СОТ (а) Количественная ОТ/ПЦР экспрессии мРНК СОТ по сравнению с экспрессией мРНК ОАРЭН в транформированных первичных меланоцитах, экспрессирующих В-КАР дикого типа (вектор) или В-КАР^У600Е. Экспрессию СОТ нормализовали к экспрессии в первичных меланоцитах, экспрессирующих вектор. (**) Различие достоверно, р<0,05 (двухсторонний, парный ΐ-тест Стьюдента). Эндогенная мРНК СОТ не детектируется в клетках А375, чувствительных к РЬХ4720, и обработка 1 мкМ РЬХ4720 не оказывает влияния на эктопически экспрессированные уровни мРНК СОТ. Клетки А375, экспрессирующие ОРР или СОТ, обрабатывали в течение 18 ч 1 мкМ РЬХ4720. Обратно транскрибированную мРНК анализировали на экспрессию СОТ, нормализованную к ОАРЭН. в сравнении с А375, экспрессирующими ОРР, обработанными ДМСО. (*) Различие недостоверно, р>0,05 (двухсторонний, парный 1-тест Стьюдента). Ошибки в виде коротких вертикальных отрезков представляют 5ЕМ.

На фиг. 16 показано, что уровни белка В- и С-КАР не требуются для фосфорилирования ЕКК, опосредованного СОТ. Клетки А375, экспрессирующие эктопическую МЕК1 (контроль) или СОТ, последовательно инфицировали лентивирусом, экспрессирующим 8ЙРНК, нацеленной на В-КАР, С-КАР или контрольную 8ЙРНК (кЬЬис), и анализировали на экспрессию указанных белков в присутствии (+) или отсутствии (-) 1 мкМ РЬХ4720 в течение 18 ч.

На фиг. 17 показано, что результаты 8МР-анализа 752 клеточных линий выявили изменения числа

- 3 030276

копий МАР3К8/СОТ. Из 752 клеточных линий, подвергнутых анализу числа копий, 534 также подверглись определению профиля мутации. Тридцать восемь (7,1%) клеток с установленным профилем мутации содержат мутацию В-КАР'^600Е. Две клеточные линии (ОИМ§-23, КРМ1-7951, указаны) содержат мутацию В-КАР'^600Е вместе с увеличением числа копий МАР3К8/СОТ.

На фиг. 18 показаны изменения МАР3К8/СОТ в раковой клеточной линии ОИМ8-23. (а) КМАсигнал зонда МАР3К8/СОТ (отмечен) в анализе мРНК с использованием микрочипов. ОИМ8-23 представляет основные 2% (из 765 клеточных линий), экспрессирующую мРНК СОТ. (Ь) Экспрессия мРНК СОТ в панели мутантных клеточных линий Β-Ρ.ΛΡ^ν600Ε. (с) Экспрессия эндогенного белка СОТ в клетках ОИМ8-23 по сравнению с эктопически экспрессированной СОТ в клеточных линиях А375 и §КМЕЬ28, как определено анализом указанных клеток иммуноблоттингом.

На фиг. 19 показано, что мРНК и белок СОТ экспрессируются в клеточных линиях и ткани, резистентных к В-КАР-ингибитору. (а) Анализ экспрессии с использованием ОТ/ПЦР мРНК СОТ, нормализованной к ОАРЭН, в панели клеточных линий, краткосрочных культурах и ткани из рецидивирующей, обработанной РЬХ4720, злокачественной меланомы (ММ-К). Соответствующая экспрессия белка в клеточных линиях и краткосрочных культурах показана соответственно на фиг. 3Ь и 3с. (Ь) Вестернблоттинг лизатов первичных меланоцитов (1° Ме1(В-КАР ^Т)), аналогичных участков нормальной кожи (кожа) и метастатической злокачественной меланомы от пациентов (ММ-К; мРНК СОТ, показанные на панели а), клеток А375 и первичных меланоцитов, экспрессирующих В-КАР'^600Е (1° Ме1(В-КАР'600Е)).

На фиг. 20 показано, что истощение СОТ оказывает влияние на жизнеспособность клеточной линии КРМ1-7951, амплифицированной СОТ. (а) Количественный анализ жизнеспособности КРМ1-7951 после истощения СОТ, опосредованного лентивирусной 8ЙРНК (ШСОТ), по сравнению с контрольной 8ЙРНК (кЬЬие). Ошибки в виде коротких вертикальных отрезков представляют стандартное отклонение между повторностями. (Ь) Иммуноблоттинг, показывающий относительную экспрессию белка СОТ в клетках КРМ1-7951, экспрессирующих кЬЬие и ШСОТ.

На фиг. 21 показано влияние экспрессии ОКР на значение ΟΙ₅₀ панели ингибиторов пути МАРК в §КМЕЬ28. Половинная максимальная ингибирующая рост концентрация (О1₅₀) для §КМЕЬ28, эктопически экспрессирующей МЕК1, МЕК1™ или СОТ, определяли для ингибиторов КАР-киназы РЬХ4720 и КАР265 и ингибиторов МЕК1/2-киназы С1-1040 и А2Э6244. Для каждого соединения определяли изменение ΟΙ₅₀ для МЕК1^СС и СОТ (по сравнению с МЕК1).

На фиг. 22 показано, что СОТ может активировать ЕКК посредством МЕК-независимого и МЕКзависимого механизмов. (а) Анализ фосфорилирования ЕКК иммуноблоттингом в лизатах клеток А375 после экспрессии ОРР или СОТ и последующем лентивирусном кЬРНК-зависимом истощении МЕК1, МЕК2 или МЕК1 и МЕК2 (МЕК1+2) по сравнению с контрольной 8ЙРНК (кЬЬие). Левая и правая панели представляют две различных пары кЬРНК-конструкций МЕК1 и МЕК2. (Ь) Анализ фосфорилирования иммуноблоттингом рекомбинантной, неактивной ЕКК (ТЬт202/Тут204) посредством рекомбинантной СОТ в тесте оценки киназной активности ίη νίΐτο.

На фиг. 23 показано, что комбинированное ингибирование пути МАРК эффективно подавляет пролиферацию §КМЕЬ28.

Жизнеспособность (по сравнению с ДМСО) клеток §КМЕЬ28, эктопически экспрессирующих МЕК1, МЕК1^СС или СОТ, и обработанных ДМСО, РЬХ4720 (концентрации указаны), РЬХ4720 (1 мкМ) и С1-1040 (1 мкМ) или РЬХ4720 (1 мкМ) и А2Э6244 (1 мкМ). Ошибки в виде коротких вертикальных отрезков представляют стандартное отклонение между повторностями.

На фиг. 24 показано, что сверхэкспрессия СОТ является достаточной для получения раковых клеток меланомы с мутацией В-КАР''"⁶⁰⁰¹''. резистентных к ингибированию В-КАР.

На фиг. 25 показано, что основные девять ОКР, отобранные в первичном скрининге, экспрессировали в (а) §КЕЬ28 (Ь) А375, и показаны значения О1₅₀ для 4 ингибиторов пути МАРК (РЬХ4720, КАР265, С1-1040, А2Э6244).

На фиг. 26 показано, что экспрессия СККЬ модифицирует чувствительность к селективному ингибитору В-КАР-киназы РЬХ4720 в панели клеточных линий В-КАР'^600Е.

На фиг. 27 показано наличие в МАР3К8/СОТ-амплифицированной/В-КАР'^600Е-мутантной раковой клеточной линии ОИМ8-23 конститутивного фосфорилирования ЕКК/МЕК в использованном диапазоне концентраций РЬХ4720.

На фиг. 28 показано, что отсутствие чувствительности к ингибированию пути МАРК соответствует увеличению числа копий МАР3К8/СОТ в подгруппе клеточных линий рака кожи. Показана панель из 20 мутантных клеточных линий В-КАР'^600Е и их чувствительность к (а) ингибитору В-КАР-киназы РЬХ4720 и (Ь) ингибитору МЕК-киназы А2Э6244.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к развитию резистентности к терапевтическим агентам в лечении рака. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение относится к киназам и, в частности, к компонентам пути киназы МАР.

В практике настоящего изобретения будут использоваться, если не указано иное, обычные методы молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, клеточной биологии и рекомбинантной ДНК,

- 4 030276

которые известны специалистам в данной области. См., например, 8атЬгоок, Ргйзск апй Машакз, Мо1еси1аг С1отпд: А БакогаЮгу Мапиа1 (СиггсШ ЕйШоп); СиггсШ Рго1осо1з ίη Мо1еси1аг Вю1о§у (Р.М. АизиЬе1 с1 а1., ейз., (СиггсШ ЕйШоп)); 1ке зепез МеЙюйз ίη Еп/утокду (Асайетк Ргезз, 1пс.): РСК 2: А Ргаскса1 Арргоаск (СиггеШ ЕйШоп) ЛпйЬоШеь А ЬаЬогакгу Мапиа1 апй Атта1 Се11 СиНиге (К. I. Ргезкпеу, ей. (1987)). ОИА С1ошппд: А Ргасйса1 Арргоаск, уо1. Ι&ΙΙ (Ό. О1оуег, ей.); Окдопис1еокйе 8уп1кез1з (Ν. Оак, ей., СиггеШ ЕйШоп); Шскк Аск НуЬпШ/айоп (В. Натез&8. Шддшз, ейз., СиггсШ Ейкоп); Тгапзспркоп апй Тгапз1акоп (В. Натез&Б.Шддшз, ейз., СиггсШ ЕйШоп); Рипйатейа1 Укокду, 2^пй Ейкоп, уо1. Ι&ΙΙ (Β.Ν. Р1е1йз апй О.М.Ктре, ейз.).

Каскад митоген-активированной протеинкиназы (МАРК), является критическим внутриклеточным сигнальным путем, который регулирует передачу сигналов, в ответ на различные внеклеточные стимулы, включая факторы роста, цитокины и протоонкогены.

Активация данного пути приводит к активации факторов транскрипции и изменениям в экспрессии генов, что в конечном итоге приводит к изменениям функций клеток, включая пролиферацию, клеток, регуляцию клеточного цикла, выживаемость клеток, ангиогенез и миграцию клеток. Классический сигнальный путь МАРК инициируется рецепторными тирозинкиназами на клеточной поверхности, однако, многие другие молекулы поверхности клеток способны активировать каскад МАРК, включая интегрины, гетеротримерные О-белки и рецепторы цитокинов.

Связывание лигандов с рецептором клеточной поверхности, например, рецептором тирозинкиназы, как правило, приводит к фосфорилированию рецептора. Белок-адаптер ОгЬ2 ассоциирует с фосфорилированным внутриклеточным доменом активированного рецептора, и такая ассоциация стимулирует рекрутинг факторов обмена гуаниннуклеотидов, включающих δΟδ-Ι и СЭС25, к клеточной мембране. Такие факторы обмена гуаниннуклеотидов взаимодействуют с и активируют ОТРазу Каз. Обычные изоформы Каз включают К-Каз, Ν-КаБ, Н-Каз и другие. После активации Каз серин/треониновая киназа КаР (например, А-КаР, В-КаР или КаР-1) рекрутирует к клеточной мембране посредством взаимодействия с Каз. Затем Каз подвергается фосфорилированию. КаР непосредственно активирует МЕЮ и МЕК2 посредством фосфорилирования двух остатков серина в положениях 217 и 221. После активации МЕЮ и МЕК2 фосфорилируют остатки тирозина (Туг-185) и треонина (Ткг-183) в серин/треониновых киназах Егк1 и Егк2, приводя к активации Егк. Активированная Егк регулирует много мишеней в цитозоле и также транслоцируется в ядро, где она фосфорилирует ряд транскрипционных факторов, регулирующих экспрессию генов. Егк-киназа имеет многочисленные мишени, включая ЕРк-Ι, с-Е1з1. с-Е1з2. р90К§Ю, МNКI, МЖ2, М8Ю, М8К2 и ТОВ. Несмотря на то, что вышеуказанный путь является классическим представлением сигнального пути МАРК, имеется значительный «перекрестный разговор» между путем МАРК и другими сигнальными каскадами.

Аберрации в сигнальном пути МАРК играют существенную роль в биологии рака. Измененная экспрессия Каз является частым явлением при многих видах рака, и были также установлены активирующие мутации Каз. Такие мутации обнаружены в 30% всех типов рака, и они являются особенно частыми при карциномах поджелудочной железы (90%) и ободочной кишки (50%). Кроме того, активирующие мутации КаР были установлены при меланоме и раке яичников. Наиболее частая мутация ВКАР^¥60С1Е приводит к конститутивной активации пути МАР-киназы выше, и она необходима для пролиферации клеток меланомы, роста на жидком агаре и получения ксенотранспланата опухоли. Основываясь на определенной роли сверхактивации МАРК при раке человека, нацеливание на компоненты пути МАРК с их специфическими ингибиторами является перспективным подходом для лечения рака. Однако у пациентов может иметь место врожденная или приобретенная резистентность к таким многообещающим препаратам. Идентификация киназ-мишеней, диагностических и/или прогностических маркеров и лекарственных препаратов для таких пациентов с врожденной или приобретенной резистентностью описана ниже.

Высокопропускной функциональный скрининг

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способам идентификации мишеней, способных индуцировать резистентность к клинически эффективным препаратам с использованием высокопропускного скрининга. В некоторых вариантах осуществления способ включает скрининг, основанный на открытой рамке считывания (ОКР) киназ, которые регулируют резистентность к терапевтическим агентам. Способ может включать обеспечение клеточной линии с киназой, о которой известно, что она имеет онкогенную мутацию. Библиотеку ОКР можно по отдельности экспрессировать в клеточной линии таким образом, чтобы можно было оценить дополнительно множество клонов, где каждый клон экспрессирует различную ОКР. На каждый клон можно (1) воздействовать ингибитором известной киназы в клеточной линии и (2) проследить за изменениями роста, основываясь на экспрессии ОКР в клеточной линии без ингибитора. Любые клоны, оказывающие влияние на рост за счет экспрессии одной ОКР, позитивный или негативный рост, элиминируются. Остальные клоны, где каждый экспрессирует различную киназу, затем сравнивают на жизнеспособность между контролем и обработанным клоном и нормализуют к положительному контролю. Повышенная жизнеспособность клеток после обработки ингибитором указывает на ОКР, которая придает резистентность и, следовательно, идентифицирует киназымишени для лечения дополнительным ингибитором. В некоторых вариантах осуществления клоны, имеющие различие в два стандартных отклонения от нормализованного среднего значения, могут представ- 5 030276

лять собой киназы-мишени, указывающие на то, что лечение дополнительным ингибитором является полезным для индивида.

В качестве неограничивающего примера на фиг. 5 приведено схематическое изображение высокопропускного функционального скрининга для киназ, которые индуцируют резистентность к ингибированию В-КАБ. Собирали коллекцию примерно 600 клонов и ОКБ с валидированной последовательностью, составляющую примерно 75% всех аннотированных киназ (Коллекция ОКБ киназ Центра биологии раковых систем (СС8В))/Института Брода, фиг. 1а, 1Ь, табл. 3). Данную широко доступную коллекцию можно быстро перенести в различные экспрессионные векторы для различных конечных применений. Для экспрессии Коллекции ОКБ киназ можно использовать любой тип экспрессионного вектора, известный специалистам в данной области. В качестве неограничивающего примера можно получить селектируемый, меченный эпитопом, лентивирусный экспрессионный вектор, способный продуцировать вирус с высоким титром и обеспечить высокую экспрессию в клетках млекопитающих для экспрессии коллекции киназ (рЬХ-ВьА§Т-У5, фиг. 6а).

Для идентификации киназ, способных обходить ингибирование КАР, упорядоченную коллекцию ОКБ можно стабильно экспрессировать в клетках А375, клеточной линии злокачественной меланомы ВΚΑΡ^ν600Ε, которая является чувствительной к ингибитору КАР-киназы РБХ4720 (фиг. 1а, 1Ь и 6с, табл. 3). Клоны клеток, экспрессирующих ОКБ, обработанные 1 мкМ РБХ4720, подвергают скринингу на жизнеспособность по сравнению с необработанными клетками и нормализуют к специфическому для анализа положительному контролю, ΜΕΚ1 (ΜΕΚ1 ) (табл. 4). ОКБ, которые оказывают отрицательное

влияние на исходную жизнеспособность или пролиферацию, исключают из анализа. Клоны, имеющие различие в более двух стандартных отклонений от нормализованного среднего значения, можно дополнительно оценить для идентификации киназы-мишени, придающей резистентность ко второму ингибитору. В некоторых вариантах осуществления ген, кодирующий киназу-мишень, может представлять собой МАР3К8 (ТРБ2/СОТ), КАБ1 (СКАБ), СККБ (СгкБ), БОК (Бдг), РККСЕ (Ргксе), РККСН (Ргкск), ЕКВВ2 (ЕгЬВ2), АХБ (Ах1) или РАК3 (Рак3). В некоторых вариантах осуществления ген, кодирующий киназу-мишень, может представлять активатор пути МАРК. В некоторых вариантах осуществления ген, кодирующий киназу-мишень, может представлять киназу МАР3, которая непосредственно фосфорилирует и активирует МЕК. В некоторых вариантах осуществления ген, кодирующий киназу-мишень, может кодировать белок-адаптер, который амплифицируется и фосфорилируется в меланоме.

В еще одних вариантах осуществления коллекцию ОКБ можно стабильно экспрессировать в клеточной линии, имеющей другую мутацию в В-КАБ, например, другую мутацию примерно в положении 600, такую как ν600Ι<. ν600Ό и ν600Κ Дополнительные мутации В-КАБ включают мутации, описанные ОаОе5 е! а1., Ха1иге, 417, 949-954, 2002, табл. 1. Можно использовать клеточные линии, которые чувствительны к другим ингибиторам киназы КАБ, включая, не ограничиваясь этим, РБХ4032; ООС-0879; КАБ265; сорафениб; 8В590855 и/или ΖΜ3336372. В некоторых вариантах осуществления коллекцию ОКБ можно стабильно экспрессировать в клеточной линии, обладающей чувствительностью к ингибитору МЕК. Неограничивающие примеры ингибиторов МЕК включают, не ограничиваясь этим, ΛΖΌ6244; С1-1040; РО184352; Р318088; РО98059; РО334581; КЭЕА119; 6-метокси-7-(3-морфолин-4-илпропокси)-4(4-феноксифениламино)хинолин-3 -карбонитрил и 4-[3 -хлор-4-( 1-метил-1Н-имидазол-2-илсульфанил)фениламино]-6-метокси-7-(3-морфолин-4-илпропокси)хинолин-3-карбонитрил. Дополнительные ингибиторы КАБ и МЕК описаны ниже. В качестве неограничивающего примера, примерные ингибиторы КАБ приведены в табл. 1 и примерные ингибиторы МЕК приведены в табл. 2.

- 6 030276

Таблица 1. Примерные ингибиторы КАР

	Название	Номер по САЗ	Структура
1	КАЕ265	927880-90-	м-р, р уЛ-О V н у 7 Р Р
2	Сорафениб тозилат Нексавар Вау 43-9006	475207-59-1	СД 0 “"А ° оЛлА»' Η Η СтН8О35
	Сорафениб 4- [4-[[4-хлор-З(трифторметил)фенил]карбамоиламино]фенокси]Ν-метилпиридин-2карбоксамид	284461-73-0	χ' н η X '"у·''0 ρ 7 .λ ,Υ .ί Ιί ,,η 0··' "‘Ν' Η
3	ЗВ590885		Оу /=х у ΥΓΧ-ΚΖΡ0 ΗΟΝ
4	РЬХ4720	918505-84-7	Υ νϋ) ο > Η
5	РЬХ4032	1029872-54-5	у ην'5^-\ с|'уу Ν Η
6	СВС-0879	905281-76-7	КЭ“ОО-°н НО
7	ΖΜ 336372	208260-29-1	% 4=0 ΗΝ ο 1

- 7 030276

Таблица 2. Примерные ингибиторы МЕК

	Название	Номер по САЗ	Структура
1	С1-1040/РР184352	21263179-3	1 . 0 0 - - - - -X \ - - - - - „, .....Р 1—
2	ΑΖΡ6244	60614352-6	О'Р°И с, ; :.'Х ^ вг
3	РР318088	39121000-7	9м н ОН Р
4	РР98059	16786921-8	О АД ΝΗ,
5	РР334581		О γ
6	ВГОЕА119 Ν- [3,4-дифтор-2-[(2-фтор4-йодфенил)амино]-6метоксифенил]-1-[(2К) -2,3дигидроксипропил]циклопропансульфонамид	92303238-6	Д он π ΗΝ 0 н к
7	б-метокси-7-(З-морфолин-4илпропокси)-4-(4феноксифениламино)хинолин3-карбонитрил		о ОцХ
8	4- [З-хлор-4-(1-метил-1Нимидазол-2илсульфанил)фениламино]-6метокси-7-(З-морфолин-4илпропокси)хинолин-3карбонитрил		о Ρ°ΤϊΝΗ

Диагностические/прогностические маркеры врожденной и приобретенной резистентности к нацеленным препаратам

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способам обнаружения наличия одного или более диагностических или прогностических маркеров в образце (например, биологическом образце от пациента, который страдает раком). Можно использовать различные скрининговые способы, известные специалистам в данной области, для детектирования наличия маркера в образце, включая детектирование ДНК, РНК и белка. Способы, описанные ниже, можно использовать для определения наличия или отсутствия киназы-мишени в образце, полученном от пациента. В некоторых вариантах осуществления

- 8 030276

пациент может иметь врожденную или приобретенную резистентность к препаратам, нацеленным на киназы, включая ингибиторы В-КАЕ или ингибиторы МЕК. Например, у пациента может иметь место врожденная или приобретенная резистентность к ингибиторам В-КАЕ, РЬХ4720 и/или РЬХ4032. В некоторых вариантах осуществления у пациента может иметь место врожденная или приобретенная резистентность к ингибитору МЕК, ΆΖΌ6244. Идентификация одного или более маркеров киназ-мишеней у пациента поможет врачу в составлении протокола лечения пациента. Например, пациента, имеющего один или более маркеров киназ-мишеней, врач может лечить комбинированной терапией, как более подробно описано ниже.

В некоторых вариантах осуществления киназа-мишень может включать, не ограничиваясь этим, МАР3К8 (ТРБ2/СОТ), КАЕ1 (СКАЕ), СККЬ (СгкЬ), ЕСК (Едт), РККСЕ (Ргксе), РККСН (Рткск), ЕКВВ2 (ЕтЬВ2), АХЬ (Ах1) или РАК3 (Рак3). Маркером для киназы-мишени может быть увеличение числа копий генов, увеличение экспрессии белка, фосфорилирование одного или более членов пути МАР, изменение экспрессии мРНК и тому подобное.

В качестве неограничивающего примера у пациента, имеющего онкогенную мутацию в В-КАЕ, идентификация активированной киназы-мишени может быть пригодной для составления протокола лечения пациента. Например, у пациента, имеющего мутацию В-КАЕ^У600Е, лечение одним ингибитором КАЕ может указывать на то, что у пациента с течением времени имеется относительно высокий риск развития приобретенной резистентности к лечению. У пациента, имеющего онкогенную мутацию, идентификация активированной киназы-мишени у этого пациента может указывать на включение второго ингибитора в протокол лечения.

Идентификация активированной киназы-мишени может включать анализ числа копий генов и определение увеличения числа копий киназы-мишени. Например, увеличение числа копий МАР3К8 является показателем того, что у пациента имеется врожденная резистентность или развивающаяся приобретенная резистентность, особенно, если пациент также имеет мутацию В-КАЕ^У600Е.

В некоторых вариантах осуществления идентификация активированной киназы-мишени может включать анализ фосфорилирования киназы-мишени и/или члена пути киназы МАР. Например, фосфорилирование С-КАЕ в положении §338 является показателем того, что у пациента имеется врожденная резистентность или развивающаяся приобретенная резистентность, особенно, если пациент также имеет мутацию В-КАЕ^У600Е. В некоторых вариантах осуществления идентификация увеличения фосфорилирования МЕК/ЕКК может указывать на то, что у пациента имеется врожденная резистентность или развивающаяся приобретенная резистентность. Повышенная экспрессия белка СОТ у пациентов с мутацией ВКАр^У600Е может быть прогнозом наличия резистентности к ингибированию КАЕ и ингибированию МЕК.

Идентификация активированной киназы-мишени может включать анализ экспрессии мРНК киназымишени. Например, повышение экспрессии мРНК СОТ после первоначального лечения первым ингибитором киназы является показателем того, что у пациента имеется или развивается резистентность. В некоторых вариантах осуществления первый ингибитор киназы может представлять ингибитор КАЕ или ингибитор МЕК.

Способы лечения

В различных вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения пациента, страдающего раком. Обычно способы включают введение первого ингибитора и второго ингибитора. Один ингибитор может представлять ингибитор КАЕ. Ингибитор КАЕ может представлять собой ингибитор пан-КАЕ или селективный ингибитор КАЕ. Ингибиторы пан-КАЕ включают, не ограничиваясь этим, КАЕ265, сорафениб или §В590885. В некоторых вариантах осуществления ингибитор КАЕ представляет ингибитор В-КАЕ. В некоторых вариантах осуществления селективный ингибитор КАЕ представляет РЬХ4720, РЬХ4032 или ОИС-0879-А. Один ингибитор может быть ингибитором МЕК (см. табл. 2, в которой приведены примеры ингибиторов МЕК). Одним ингибитором может быть ингибитор СОТ. В качестве неограничивающего примера ингибитор СОТ может представлять кЬРНК-ингибитор, как описано ниже, или низкомолекулярный ингибитор СОТ, 4-(3-хлор-4-фторфениламино)-6-(пиридин-3илметиламино)-3-циано-[1,7]нафтиридин (ЕМИ; ингибитор I ТРЬ2; номер по каталогу 616373, РиЬСЬет ГО: 9549300). Ингибиторы по настоящему изобретению ингибируют одну или более киназ-мишеней, включающих МАР3К8 (ТРЬ2/СОТ), КАЕ1 (СКАЕ), СККЬ (СгкЬ), РОК (Едт), РККСЕ (Ргксе), РККСН (Рткск), ЕКВВ2 (ЕгЬВ2), АХЬ (Ах1) или РАК3 (Рак3) или другие киназы-мишени пути МАР.

В некоторых вариантах осуществления обеспечивается комбинированная терапия рака, включающая эффективное количество ингибитора КАЕ и эффективное количество ингибитора МАР3К8 (ТРЬ2/СОТ). Также обеспечивается комбинированная терапия рака, включающая эффективное количество ингибитора КАЕ и эффективное количество ингибитора МЕК. Другие комбинированные терапии включают эффективное количество ингибитора КАЕ и эффективное количество второго ингибитора, нацеленного на ген, мРКН или белок, кодированный одним или более из следующего: МАР3К8 (ТРБ2/СОТ), КАЕ1 (СКАЕ), СККЬ (СгкЬ), ЕОК (Едт), РККСЕ (Ргксе), РККСН (Рткск), ЕКВВ2 (ЕгЬВ2), АХЬ (Ах1) или РАК3 (Рак3). Комбинированная терапия подходит для лечения пациента, у которого злокачественная опухоль содержит клетки с мутантной В-КАЕ и, в частности, клетки с мутантной ВКАЕ^У600Е. Также настоящее изобретение относится к комбинированной терапии рака, включающей эф- 9 030276

фективное количество ингибитора КАР и эффективное количество ингибитора МЕК, где у индивида, страдающего раком, имеются клетки с измененной экспрессией или числом копий генов МАР3К8 (ТРЬ2/СОТ). В некоторых вариантах осуществления ингибитор МЕК представляет С4-1040/РЭ184352 или ΑΖΌ6244.

В качестве неограничивающего примера ингибитор МЕК, описанный в данном документе, может представлять С1-1040; ΑΖΌ6244; ΡΌ318088; ΡΌ98059; ΡΌ334581; КЭЕА119; 6-метокси-7-(3-морфолин-4илпропокси)-4-(4-феноксифениламино)хинолин-3-карбонитрил или 4-[3-хлор-4-(1-метил-1Н-имидазол-2илсульфанил) фениламино]-6-метокси-7-(3 -морфолин-4-илпропокси)хинолин-3 -карбонитрил, соединение Коейе КО7420 или их комбинации. Также можно использовать дополнительные ингибиторы МЕК, известные в данной области.

В приведенных в качестве примера вариантах осуществления описанных выше аспектов ингибитор, раскрытый в данном документе, представляет РЬХ4720, РЬХ4032, ΒΑΥ 43-9006 (сорафениб), ΖМ 336372, КАР 265, ААЬ-881, ЬВТ-613, или 08352 ОУР-ААЬ881-Ж) (далее относится к ΑΑΣ881) и ХУР-ЬВТ613-АО-8 (ЬВТ613), которые являются производными изохинолина (Νοναηίδ. СатЬпбде. МА). Дополнительные примерные ингибиторы КАР, пригодные для комбинированной терапии, включают ингибиторы пан-КАР, ингибиторы В-КАР, ингибиторы А-КАР и ингибиторы КАР-1. В приведенных в качестве примера вариантах осуществления ингибиторы КАР, пригодные для комбинированной терапии, включают РБХ4720, РЬХ4032, ΒΑΥ 43-9006 (сорафениб), ΖМ 336372, КАР 265, ААЬ-881, ЬВТ-613 или 08352. Приведенные в качестве примера ингибиторы КАР включают соединения, описанные в публикации РСТ № ^0/2008/028141, полное содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки. Примерные ингибиторы КАР включают производные хиназолинона, описанные в публикации РСТ № ^0/2006/024836, и производные пиридинилхиназолинамина, описанные в публикации РСТ № ^0/2008/020203, полное содержание которых приведено в данном документе для сведения.

Введение комбинации включает введение комбинации в одной композиции или разовой лекарственной форме, введение отдельных агентов комбинации совместно, но по отдельности, или введение отдельных агентов комбинации последовательно любым подходящим путем. Для дозировок отдельных компонентов комбинации может потребоваться более частое введение одного из агентов по сравнению с другим агентом в комбинации. Следовательно, для обеспечения соответствующего дозирования, упакованные фармацевтические продукты могут содержать одну или более лекарственных форм, которые содержат комбинацию агентов, и одну или более лекарственных форм, которые содержат один из агентов комбинации, но не другой агент(ы) комбинации.

Агенты могут содержать один или более асимметричных элементов, таких как стереогенные центры или стереогенные оси, например, асимметричные атомы углерода, таким образом, что соединения могут находиться в различных стереоизомерных формах. Такие соединения могут представлять, например, рацематы или оптически активные формы. В отношении соединений с двумя или более асимметричными элементами, то такие соединения могут дополнительно представлять смеси диастереоизомеров. Очевидно, понятно, что для соединений, содержащих асимметричные центры, в объем изобретения включаются все их оптические изомеры и смеси. Кроме того, соединения с двойными углеродуглеродными связями могут находиться в Ζ- и Е-формах; все изомерные формы соединений включаются в настоящее изобретение. В таких ситуациях отдельные энантиомеры (оптически активные формы) можно получить асимметричным синтезом, синтезом из оптически чистых предшественников, или разделением рацематов. Разделение рацематов также можно осуществить, например, обычными методами, такими как кристаллизация в присутствии разделяющего агента, или хроматографией с использованием, например, колонки для хиральной ВЭЖХ.

Если не указано иное или четко не определяется по тексту, то обращение к соединениям, пригодным для комбинированной терапии по изобретению, включает свободное основание соединений и все фармацевтически приемлемые соли соединений.

Предпочтительной солью является гидрохлорид.

Термин "фармацевтически приемлемые соли" включает производные раскрытых соединений, когда исходное соединение модифицировано образованием нетоксичной аддитивной соли кислоты или основания, и дополнительно относится к фармацевтически приемлемым сольватам, включающим гидраты, таких соединений и таких солей. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, не ограничиваясь этим, аддитивные соли минеральной или органической кислоты основных остатков, таких как амины; основные или органические аддитивные соли кислых остатков, таких как карбоновые кислоты; и тому подобное, и комбинации, содержащие одну или более указанных выше солей. Фармацевтически приемлемые соли включают нетоксичные соли и четвертичные аммониевые соли исходного соединения, полученные, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Например, нетоксичные соли кислоты включают, например, полученные из неорганических кислот, таких как хлористоводородная, бромисто-водородная, серная, сульфаминовая, фосфорная и азотная кислоты; другие приемлемые неорганические соли включают соли металлов, такие как соль натрия, соль калия и соль цезия; и соли щелочно-земельных металлов, такие как соль кальция и соль магния; и комбинации, содержащие одну или более указанных выше солей.

- 10 030276

Фармацевтически приемлемые органические соли включают соли, полученные из органических кислот, таких как уксусная, трифторуксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, памовая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, метансульфоновая, этансульфоновая, бензиловая, сульфаниловая, 2-ацетоксибензойная, фумаровая, толуолсульфоновая, метансульфоновая, этандисульфоновая, щавелевая, изетионовая, НОО(СН₂)_ПСООН, где η равно 0-4; соли органических аминов, такие как соль триэтиламина, соль пиридина, соль пиколина, соль этаноламина, соль триэтаноламина, соль дициклогексиламина, соль Ν,Ν'-дибензилэтилендиамина; и соли аминокислот, такие как аргинат, аспаргинат и глутамат, и комбинации, содержащие одну или более из указанных выше солей.

"Эффективное количество" комбинации агентов (например, ингибиторов МЕК и КАЕ, или ингибиторов КАР и СОТ, или КАЕ и ингибитора, нацеленного на МАР3К8 (ТРЬ2/СОТ), КАЕ1 (СКАЕ), СККЬ (СгкЬ), РОК (Едг), РККСЕ (Ргксе), РККСН (Ргкей), ЕКВВ2 (ЕгЬВ2), АХЬ (Ах1) или РАК3 (Рак3), представляет количество, достаточное для обеспечения заметного улучшения по сравнению с клинически наблюдаемыми в исходном периоде признаками и симптомами расстройства, которое подвергается лечению.

Фармацевтические продукты можно вводить с помощью лекарственных форм для перорального введения или других, например, ректально или парентеральной инъекцией.

"Лекарственная форма для перорального введения" предназначена для включения разовой лекарственной формы, прописанной или предназначенной для приема внутрь. Лекарственная форма для перорального введения может содержать и не содержать множество субъединиц, например, таких как микрокапсулы, микротаблетки, упакованные для введения в одной дозе.

Фармацевтические продукты могут высвобождаться в различных формах. "Высвобождаемая форма" предназначена для включения форм с мгновенным высвобождением, быстрым высвобождением, контролируемым высвобождением и замедленным высвобождением.

"Мгновенное высвобождение" предназначено для включения лекарственной формы, приготовленной для обеспечения быстрого растворения активного агента, модификацией нормальной кристаллической формы активного агента с получением более быстрого растворения.

"Быстрое высвобождение" предназначено для включения формы с обычным или немодифицированным высвобождением, когда более чем или примерно 50%, или более предпочтительно примерно 75% активных агентов высвобождается в течение двух часов после введения, предпочтительно в течение 1 ч после введения.

"Замедленное высвобождение" или "растянутое высвобождение" включает высвобождение активных агентов с такой скоростью, что их концентрация в крови (например, в плазме крови) поддерживается в терапевтических пределах, но ниже токсических концентраций по меньшей мере в течение примерно 8 ч, предпочтительно по меньшей мере в течение примерно 12 ч, более предпочтительно в течение примерно 24 ч после введения в стационарном состоянии. Термин "стационарное состояние" означает, что концентрация данного активного агента или комбинации активных агентов в плазме крови достигнута и поддерживается последующими дозами активного агента(ов) на уровне, который равен или выше минимального эффективного терапевтического уровня и ниже минимального токсического уровня данного активного агента(ов) в плазме крови.

В том смысле, в котором в данном документе используются термины "лечить", "подвергать лечению", "проводить лечение" или "лечение", они относятся к облегчению, подавлению или ослаблению по меньшей мере одного симптома заболевания у индивида. Например, в результате лечения может уменьшиться один или несколько симптомов расстройства, или полностью элиминироваться расстройство, такое как рак. В значение термина "лечить" по настоящему изобретению также входит остановка, замедление начала (т. е. период до клинического проявления заболевания) и/или снижение риска развития или ухудшения заболевания. В том смысле, в котором в данном документе используется термин "защищать", он означает предупреждение задержки или лечения, или все, как это подходит, развития или продолжения, или обострения заболевания у индивида. Согласно настоящему изобретению заболевание ассоциируется с раком.

Термины "индивид" или "пациент" предназначен для включения животных, которые способны страдать или болеть раком, или любым расстройством, включающим, прямо или опосредованно, рак. Примеры индивидов включают млекопитающих, например людей, собак, коров, лошадей, свиней, овец, коз, кошек, мышей, кроликов, крыс и трансгенных животных, отличных от человека. В некоторых вариантах осуществления индивид представляет собой человека, например человека, страдающего, имеющего риск заболеть, или потенциально способного болеть раком.

Термин "примерно" или "приблизительно" обычно означает, что данное значение или интервал находятся в пределах 20%, более предпочтительно в пределах 10% и наиболее предпочтительно в пределах 5%. Альтернативно, особенно в биологических системах, термин "примерно" означает примерно 1од (т.е. порядок величины) предпочтительно с показателем два данного значения.

Термины "составляющий", "имеющий", "включающий" или "содержащий" сконструированы в качестве неограничивающих терминов (т.е. означают "включая, но не ограничиваясь этим"), если не указа- 11 030276

но иное. Указание пределов значений в данном документе служит только в качестве стенографического приема обращения по отдельности к каждому отдельному значению, попадающему в пределы, если не указано иное, и каждое отдельное значение включается в определение, как если бы оно цитировалось по отдельности в данном документе.

Как указывалось выше, в одном из аспектов настоящее изобретение относится к комбинации лекарственных средств, подходящих для лечения, профилактики, остановки, замедления начала и/или снижения риска развития или отмены по меньшей мере одного симптома рака у индивида, включающей введение индивиду комбинированной терапии, включающей эффективное количество ингибитора КАР и эффективное количество ингибитора МАР3К8 (ТРБ2/СОТ) или эффективное количество ингибитора КАР и эффективное количество ингибитора МЕК, или эффективное количество ингибитора КАР и эффективное количество второго ингибитора, нацеленного на МАР3К8 (ТРБ2/СОТ), КАР1 (СКАР), СККЬ (СгкЬ), РСК (Рдг), РККСЕ (Ргксе), РККСН (Ргксй), ЕКВВ2 (ЕгЬВ2), АХЬ (Ах1) или РАК3 (Рак3). Предпочтительно такие ингибиторы вводят в терапевтических эффективных дозах, которые при объединении обеспечивают полезный эффект. Введение может быть одновременным или последовательным.

Термин "рак", использованный в данном документе, означает широкий спектр опухолей, включая все солидные опухоли и злокачественные заболевания крови. Примеры таких опухолей включают, но не ограничиваясь этим, лейкозы, миеломы, карциномы, метастатические карциномы, саркомы, аденомы, злокачественные опухоли нервной системы и мочеполовой системы. В приведенных в качестве примера вариантах осуществления вышеуказанные способы пригодны для лечения у взрослых и детей острого лимфобластного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, адренокортикальной карциномы, связанного со СПИДом рака, рака ануса, рака червеобразного отростка, астроцитомы, базальноклеточной карциномы, рака желчных протоков, рака мочевого пузыря, рака костей, остеосаркомы, фиброзной гистиоциомы, рака головного мозга, глиомы ствола головного мозга, церебеллярной астроцитомы, злокачественной глиомы, эпендимомы, медуллобластомы, супратенториальных примитивных нейроэктодермальных опухолей, глиомы гипоталамуса, рака молочной железы, рака молочной железы у мужчин, аденомы бронхов, лимфомы Беркитта, карциноидной опухоли, карциномы неизвестного происхождения, лимфомы центральной нервной системы, церебеллярной астроцитомы, злокачественной глиомы, рака шейки матки, рака у детей, хронического лимфоцитарного лейкоза, хронического миелогенного лейкоза, хронических миелопролиферативных расстройств, колоректального рака, кожной Т-клеточной лимфомы, рака эндометрия, эпендимомы, рака пищевода, семейных опухолей Эвинга, экстракраниальной зародышевоклеточной опухоли, экстрагонадальной зародышево-клеточной опухоли, экстрагепацитарного рака желчных протоков, внутриокулярной меланомы, ретинобластомы, рака желчного пузыря, рака желудка, стромальной опухоли желудочно-кишечного тракта, экстракраниальной зародышево-клеточной опухоли, экстрагонадальной зародышево-клеточной опухоли, зародышево-клеточной опухоли яичника, гестационной трофобластной опухоли, глиомы, волосатоклеточного лейкоза, рака головы и шеи, гепатоцеллюлярного рака, ходжкинской лимфомы, неходжкинской лимфомы, гипофаренгиального рака, глиомы гипоталамуса и зрительных путей, внутриокулярной меланомы, опухоли островков Лангерганса, саркомы Капоши, рака почки, рака органов мочевой системы, рака гортани, рака губ и ротовой полости, мелкоклеточного рака легких, немелкоклеточного рака легких, первичной лимфомы центральной нервной системы, макроглобулинемии Вальденстрема, злокачественной фиброзной гистиоцитомы, медуллобластомы, меланомы, клеточной карциномы Меркеля, злокачественной мезотелиомы, плоскоклеточного рака шеи, синдрома множественной эндокринной неоплазии, множественной миеломы, грибовидного микоза, миелодиспластических синдромов, миелопролиферативных расстройств, хронических миелопролиферативных расстройств, рака носовой полости и околоносовых пазух, назофарингеального рака, нейробластомы, орофарингеального рака, рака яичников, рака поджелудочной железы, рака паращитовидной железы, рака полового члена, рака глотки, феохромоцитомы, пинеобластомы и супратенториальных примитивных нейроэктодермальных опухолей, рака гипофиза, плазмоклеточных новообразований, плевропульмональной бластомы, рака предстательной железы, рака прямой кишки, рабдомиосаркомы, рака слюнных желез, саркомы мягких тканей, саркомы матки, синдрома Сезари, рака кожи, не относящегося к меланоме, рака тонкого кишечника, плоскоклеточной карциномы, плоскоклеточной карциномы шеи, супратенториальных примитивных нейроэктодермальных опухолей, рака яичка, рака горла, тимомы и карциномы тимуса, рака щитовидной железы, переходно-клеточного рака, трофобластических опухолей, рака уретры, рака матки, саркомы матки, рака влагалища, рака вульвы и опухоли Вильмса.

В частности, рак может быть связан с мутацией гена В-КАР. Такие виды рака включают меланому, рак молочной железы, колоректальный рак, глиому, рак легких, рак яичника, саркому и рак щитовидной железы.

В конкретном варианте осуществления терапевтическая комбинация, раскрытая в данном документе, является эффективной для лечения рака средней тяжести и тяжелого рака у индивида.

Дозы

Оптимальную дозу комбинации агентов для лечения рака можно определить эмпирически для каждого индивида с использованием известных методов, и она будет зависеть от различных факторов, включая активность агентов; возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол и рацион индивида; время и

- 12 030276

путь введения и другие лекарственные средства, которые принимает индивид. Оптимальные дозы можно установить с использованием обычного тестирования и процедур, хорошо известных в данной области.

Количество комбинации агентов, которые можно объединить с носителями для получения разовой лекарственной формы, будет варьировать в зависимости от индивидуума, который подвергается лечению, и конкретного пути введения. В некоторых вариантах осуществления разовые лекарственные формы, содержащие комбинацию агентов, описанных в данном документе, будут содержать количества каждого агента комбинации, которые обычно вводят, когда агенты вводят по отдельности.

Врач или ветеринарный доктор, специалисты в данной области, могут легко определить и прописать требуемое эффективное количество фармацевтической композиции. Например, врач или ветеринарный доктор может начать лечение с дозировок используемых соединений по настоящему изобретению, в фармацевтической композиции на уровнях, которые ниже чем необходимы для достижения требуемого терапевтического эффекта, и затем постепенно повышать дозу до достижения требуемого эффекта.

В общем, подходящая суточная доза соединения по изобретению будет представлять количество соединения, которое является наиболее низкой дозой, эффективной для получения терапевтического эффекта. Как правило, такая эффективная доза будет зависеть от факторов, описанных выше, и ее может легко определить специалист в данной области.

Обычно терапевтически эффективные дозы соединений по данному изобретению для пациента, при использовании для указанных анальгетических эффектов, будут находиться в пределах от примерно 0,0001 до примерно 1000 мг на кг массы тела в сутки, более предпочтительно от примерно 0,01 до примерно 50 мг на кг в сутки.

Если желательно, то эффективную суточную дозу активного соединения можно вводить в виде двух, трех, четырех, пяти, шести или более субдоз по отдельности с соответствующими интервалами в течение дня, необязательно в разовых лекарственных формах.

Фармацевтические композиции и пути введения

Изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим комбинацию агентов для лечения рака, например меланомы. Фармацевтические композиции могут дополнительно содержать носитель или наполнитель, стабилизатор, вкусовое вещество и/или краситель.

Изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим комбинацию агентов, которая может представлять, например, комбинацию двух типов агентов: (1) ингибитор КАЕ и/или фармакологически активные метаболиты, соли, сольваты и рацематы ингибитора, и (2) ингибитор МАР3К8 (ТРЬ2/СОТ) и/или фармакологически активные метаболиты, соли, сольваты и рацематы ингибитора СОТ. В еще одном варианте осуществления можно обеспечить комбинацию агентов для индивида, имеющего клетки с мутантной ВКАЕ или имеющего клетки, сверхэкспрессирующие МАР3К8 (ТРЬ2/СОТ), и она содержит: (1) ингибитор КАЕ и/или фармакологически активные метаболиты, соли, сольваты и рацематы ингибитора, и (2) ингибитор МЕК и/или фармакологически активные метаболиты, соли, сольваты и рацематы ингибитора МЕК.

Комбинацию агентов можно вводить с использованием различных путей введения, известных в данной области. Комбинацию агентов можно вводить людям и другим животным перорально, парентерально, сублингвально, в виде спрея для аэрозольного или ингаляционного введения, ректально, интрацистернально, интравагинально, внутрибрюшинно, буккально или местно в разовых лекарственных формах, содержащих обычные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и растворители, как это требуется. Местное введение также может включать применение трансдермального введения, такого как трансдермальные пластыри или устройства для ионофореза. В том смысле, в котором в данном документе используется термин "парентеральное введение", он включает подкожные инъекции, внутривенную, внутримышечную, интрастернальную инъекцию или инфузионные методы.

Способы получения композиций хорошо известны в данной области, и они описаны, например, в Кетшдои: ТИе §с1еисе аиб Ргасйсе οί Рйагтаеу, Маек РиЪНкЫид Сотрапу, ЕаЧоп. Ра., 19^4Ь Ебйюи (1995). Фармацевтические композиции для использования в настоящем изобретении могут находиться в виде стерильных, непирогенных жидких растворов или суспензий, покрытых оболочками капсул, суппозиториев, лиофилизованных порошков, трансдермальных пластырей или других форм, известных в данной области.

Инъекционные препараты, например стерильные инъекционные водные или масляные суспензии, можно формулировать согласно способам, известным в данной области, с использованием подходящих диспергирующих и смачивающих агентов, и суспендирующих агентов. Стерильный инъекционный препарат также может представлять стерильный инъекционный раствор, суспензию или эмульсию в нетоксичном, приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, например, в виде раствора в 1,3-пропандиоле или 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых носителей и растворителей, которые можно использовать, находится вода, раствор Рингера, Фармакопея США, и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, обычно используют стерильные жирные масла в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно использовать любое жирное масло, включая синтетические моно- или диглицериды. В дополнении жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, могут найти применение в приготовлении инъекционных препаратов. Инъекционные композиции можно стерилизо- 13 030276

вать, например, фильтрованием через задерживающий бактерии фильтр, или включением стерилизующих агентов в виде стерильных твердых композиций, которые можно растворить или диспергировать в стерильной воде или другой стерильной инъекционной среде перед применением.

Для пролонгации действия лекарственного средства часто желательно замедлить всасывание лекарственного средства из места подкожной или внутримышечной инъекции. Это можно осуществить применением жидкой суспензии кристаллического или аморфного вещества с низкой растворимостью в воде. Тогда скорость всасывания лекарственного средства будет зависеть от скорости его растворения, которая в свою очередь, может зависеть от размера кристаллов и формы кристаллов. Альтернативно замедленное всасывание лекарственного средства для парентерального введения можно обеспечить растворением или суспендированием лекарственного средства в масляном растворителе. Инъекционные формыдепо получают приготовлением матриц из микрокапсул лекарственного средства в биодеградируемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от соотношения лекарственного средства к полимеру и природы конкретного используемого полимера, можно контролировать скорость высвобождения лекарственного средства. Примеры других биодеградируемых полимеров включают поли(ортоэфиры) и поли(ангидриды). Инъекционные композиции-депо также можно приготовить включением лекарственного средства в липосомы или микроэмульсии, которые совместимы с тканями организма.

Композиции для ректального или вагинального введения предпочтительно представляют собой суппозитории, которые можно приготовить смешением соединений по данному изобретению с подходящими, нераздражающими наполнителями или носителями, такими как какао-масло, полиэтиленгликоль или воск для суппозиториев, которые являются твердыми при комнатной температуре, но становятся жидкими при температуре тела и, следовательно, плавятся в полости прямой кишки или влагалища, и высвобождают активное соединение.

Твердые лекарственные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах активное соединение смешивают, по меньшей мере, с одним инертным фармацевтически приемлемым наполнителем или носителем, таким как цитрат натрия или дикальцийфосфат и/или а) наполнители или разбавители, такие как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота; Ь) связующие вещества, например, такие как карбоксиметилцелллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и аравийская камедь; с) увлажняющие вещества, такие как глицерин; ά) разрыхлители, такие как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия; е) агенты, задерживающие растворы, такие как парафин; £) усилители всасывания, такие как четвертичные аммониевые соединения; д) смачивающие вещества, например, такие как ацетиловый спирт и глицеролмоностеарат; й) абсорбенты, такие как каолин и бентонитовая глина, и ί) смазывающие вещества, такие как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственная форма также может содержать забуферивающие агенты.

Твердые композиции аналогичного типа также можно использовать в качестве наполнителей в мягких и твердых желатиновых капсулах с использованием таких наполнителей, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и тому подобное.

Твердые лекарственные формы таблетки, драже, капсулы, пилюли и гранулы можно приготовить с покрытиями и оболочками, такими как кишечные оболочки и другие оболочки, известные в области фармацевтической формуляции. Они могут необязательно содержать замутнитель, и которые также могут представлять собой композицию, которая высвобождает активный ингредиент(ы) только, или предпочтительно, в определенной части кишечного тракта необязательно замедленным образом. Примеры композиций для включения, которые можно использовать, включают полимерные вещества и воска.

Активные соединения также могут находиться в микрокапсулированной форме с одним или более наполнителями, описанными выше. Твердые лекарственные формы таблетки, драже, капсулы, пилюли и гранулы можно приготовить с покрытиями и оболочками, такими как кишечные оболочки, оболочки для контролируемого высвобождения и другие оболочки, известные в области фармацевтической формуляции. В таких твердых лекарственных формах активное соединение можно смешать, по меньшей мере, с одним инертным разбавителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Такие лекарственные формы могут также содержать, как это имеет место в обычной практике, дополнительные вещества иные, чем инертные разбавители, например, скользящие вещества для таблетирования и другие вспомогательные средства для таблетирования, такие как стеарат магния и микрокристаллическая целлюлоза. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственные формы также могут содержать забуферивающие агенты. Они могут необязательно содержать замутнитель, и которые также могут представлять собой композицию, которая высвобождает активный ингредиент(ы) только, или предпочтительно, в определенной части кишечного тракта необязательно замедленным образом. Примеры композиций для включения, которые можно использовать, включают полимерные вещества и воска.

Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнении к активным соедине- 14 030276

ниям жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в данной области, например, такие как вода или другие растворители, солюбилизаторы и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, ЕЮАс, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, диметилформамид, масла (в частности, масло семян хлопчатника, арахисовое, кукурузное, масло зародышей пшеницы, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот и сорбитана, и их смеси. Помимо инертных разбавителей композиции для перорального введения также могут содержать адъюванты, такие как смачивающие вещества, эмульгаторы и суспендирующие агенты, подсластители, вкусовые вещества и ароматизаторы.

Лекарственные формы для местного или трансдермального введения соединения по данному изобретению включают мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, порошки, растворы, спреи, ингаляторы или пластыри. Активный компонент смешивают в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и любыми необходимыми консервантами или буферами, которые могут потребоваться. Офтальмические композиции, ушные капли и тому подобное также предполагаются для включения в объем данного изобретения.

Мази, пасты, кремы, лосьоны и гели могут содержать в дополнение к активному соединению наполнители, такие как животные и растительные жиры, масла, воска, парафины, крахмал, трагакант, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, бентониты, кремниевую кислоту, тальк и оксид цинка, или их смеси.

Композиции по изобретению также можно формулировать для доставки в виде жидкого аэрозоля или сухого порошка для ингаляций. Жидкие аэрозольные композиции можно распылять преимущественно в частицы с размером, которые можно доставлять в концевые и дыхательные бронхиолы.

Аэрозольные композиции по изобретению можно доставлять с использованием образующего аэрозоль устройства, такого как разбрызгивающий распылитель, вибрирующая пористая пластинка или ультразвуковой распылитель, предпочтительно выбранный для обеспечения образования аэрозольных частиц со средним диаметром массы преимущественно в пределах от 1 до 5 мкм. Дополнительно композиция предпочтительно имеет сбалансированную ионную силу, осмолярность и концентрацию хлорида, и наименьший аэрозолируемый объем, способный доставлять эффективную дозу соединений по изобретению в место инфекции. Кроме того, аэрозольная композиция предпочтительно не оказывает отрицательного влияния на функциональное состояние дыхательных путей и не вызывает нежелательных побочных эффектов.

Устройства для аэролизации, подходящие для введения аэрозольных композиций по изобретении, включают, например, разбрызгивающий распылитель, вибрирующую пористую пластинку, ультразвуковые распылители и энергетические ингаляторы для сухих порошков, которые способны распылять композицию по изобретению в аэрозольные частицы со средним диаметром массы преимущественно в пределах от 1 до 5 мкм. Преимущественно в данной заявке означает, что, по меньшей мере, 70%, а предпочтительно более чем 90% всех образованных аэрозольных частиц имеет размер в пределах 1-5 мкм. Разбрызгивающий распылитель работает под давлением воздуха с разбиванием жидкого раствора в аэрозольные капли. Распылители с вибрирующей пористой пластинкой работают при использовании ультразвукового вакуума, образованного быстро вибрирующей пористой пластинкой для вытеснения капель растворителя через пористую пластинку. Ультразвуковой распылитель работает с помощью пьезоэлектрического кристалла, который рассекает жидкость на маленькие аэрозольные капли. Имеются различные подходящие устройства, включая, например, распылители с вибрирующей пористой пластинкой ΑΕΚΌΝΕΒ и ΑΕΚΟΌΟ8Ε (АетоСеи, 1пс., 8иппууа1е, Калифорния), распылители δΙΌΕδΤΚΕΑΜ (МеФс Αίά Иб.. \Уе51 §и88ех, Англия), разбрызгивающие распылители ΡΑΚΙ ЬС и ΡΑΚΙ ЬС δΤΑΚ (Рап Кезрйа!оту Ε^шртеηΐ, 1пс., КюЬтопб, Вирджиния) и ультразвуковые распылители ΑΕΚΟδΟNIС (ЛеУПЫ55 МеШ/1И15сНе Ргобике (Германия) СтЬН, НеШеи, Германия) и υΕΤΚΑΑΙΚΕ (Отгоп НеаИЬсаге, 1пс., Уетпои НШ5, И1шо15).

Соединения по изобретению также можно получать для применения в виде порошков и спреев для местного применения, которые могут содержать, в дополнении к соединениям по данному изобретению, наполнители, такие как лактоза, тальк, кремниевая кислота, гидроксид алюминия, силикаты кальция и порошок полиамида, и смеси этих соединений. Спреи могут дополнительно содержать обычные пропелленты, такие как хлорфторуглероды.

Трансдермальные пластыри имеют дополнительное преимущество, которое заключает в обеспечении контролируемой доставки соединения в организм. Такие лекарственные формы можно приготовить растворением или диспергированием соединения в необходимой среде. Также можно использовать усилители всасывания для повышения проникновения потока соединения через кожу. Скорость можно контролировать обеспечением мембраны, контролирующей скорость, или диспергированием соединения в полимерном матриксе или геле. Соединения по настоящему изобретению также можно вводить в виде липосом. Как это известно в данной области, липосомы обычно получают из фосфолипидов или других липидных веществ. Липосомы образуются в виде моно- или мультиламелярных жидких кристаллов, которые диспергированы в водной среде. Можно использовать любой нетоксичный, физиологически при- 15 030276

емлемый и метаболизируемый липид, способный образовывать липосомы. Настоящие композиции в липосомной форме могут содержать, в дополнении к соединению по настоящему изобретению, стабилизаторы, консерванты, наполнители и тому подобное. Предпочтительными липидами являются фосфолипиды и фосфатидилхолины (лецитины), природные или синтетические. В данной области известны способы приготовления липосом. См., например, Ргексо!! (ей.), "МеШойк ίη Се11 Вю1оду", νοί. XIV, Аеайеш1с Ргекк, №\υ Уогк, 1976, р. 33 е! кед.

Примеры

Пример 1. Основанный на ОКБ функциональный скрининг идентифицирует специфические киназы в качестве индукторов резистентности к ингибированию В-КАБ

Для идентификации киназ, способных "обходить" ингибирование КАР, собирали 597 клонов ОКБ киназ с валидированной последовательностью, представляющих примерно 75% аннотированных киназ (Коллекция ОКБ киназ Центра биологии раковых систем (СС8В)/Института Брода) и стабильно экспрессировали в клетках А375, клеточной линии злокачественной меланомы Β-ΚΑΡ^ν600Ε, которая чувствительна к ингибитору КАР-киназы РБХ4720 (Тка ί. е! а1., Ргос. Ναΐί. Асай. 8с1 И8А, 105, 3041-3046 (2008)) (фиг. 1а, 1Ь, табл. 3, фиг. 6с). Клетки, экспрессирующие ОКБ, обработанные 1 мкМ РБХ4720, подвергали скринингу на жизнеспособность в сравнении с необработанными клетками и нормализовали к специфическому для анализа положительному контролю, МЕК1 (МЕК1 ) (Етегу С.М. е! а1.,

Ргос. №И. Асай. 8с1 И8А, 106, 20411-20416 (2009) (табл. 4 и обобщенные данные на фиг. 5). Девять ОКБ придавали резистентность на уровне, превышающем два стандартных отклонения от среднего значения (фиг. 1Ь и табл. 4), и были отобраны для последующего анализа (фиг. 7). Три из девяти кандидатов ОКБ представляли собой рецепторные тирозинкиназы, что подчеркивает роль данного класса киназ для исследования путей резистентности. Эффекты резистентности подтверждали и отдавали предпочтение по мультиточечной шкале концентраций РБХ4720 в клеточных линиях В-КАБ^ν600Ε А375 и 8КМЕБ28. 8ег/ТЬг киназы киназы киназ МАР (МАР3К) МАР3К8 (СОТ/Тр12) и КАБ1 (С-КАБ) рассматривались в качестве основных кандидатов для обеих клеточных линий; данные ОКБ приводили к сдвигу С1₅₀ РБХ4720 в 10-600 раз, не оказывая влияния на жизнеспособность (табл. 5 и фиг. 8 и 9). СККБ, ОКБ которая сдвигала С1₅₀ РБХ4720 в меньшей степени (в 9,7 раз на клетках 8КМЕБ28; фиг. 8), кодирует белокадаптер, фосфорилированный с участием тирозинкиназы, такой как ВСК-АВБ (Виде К.В. е! а1., Се11 Соттип. 81дпа1 7, 13 (2009)), но теряет присущую киназную активность. СОТ и С-КАБ снижали чувствительность многочисленных клеточных линий В-КАБ'^Е600Е' к РБХ4720 (фиг. 1с), тем самым подтверждая способность данных киназ опосредовать резистентность к ингибированию КАБ. Результаты второго скрининга А375 и 8КМЕБ28 выделили 9 основных ОКБ кандидатов по мультиточечной шкале концентраций РБХ4720 (фиг. 1й).

Интересно, что две основных валидированных киназы, обе, являются 8ег/ТЬг киназами МАР (МАР3К), о которых известно, что они активируют сигнальный путь МЕК/ЕКК в нескольких контекстах. Подобно В-КАБ, С-КАБ представляет МАР3К в каноническом каскаде МАРК (МсКау М.М. апй Моткоп ΌΧ., Опсодепе, 26, 3113-3121 (2007)), об участии которой в развитии резистентности, ассоциированной с последовательным отбором в условиях ш νίΙΐΌ с использованием ингибитора пан-КАБ, сообщалось ранее (Моп1ади1 С. е! а1., Сапсег Кек., 68, 4853-4861 (2008)). СОТ (белковый продукт гена МАР3К8 человека) наиболее полно охарактеризован как МАР3К (8а1тегоп А. е! а1., ЕМВО Т, 15, 817-826 (1996)) ниже от сигнального пути №КВ в воспалительных клетках (Вапедее А. е! а1., Ргос. №!1. Асай. 8с1 И8А, 103, 3274-329 (2006)); однако его функциональная роль при раке человека ранее не исследовалась.

Пример 2. Резистентность к ингибированию В-КАБ посредством активации пути МАРК

Также исследовали, насколько сверхэкспрессия данных генов была достаточной для активации пути МАРК. В исходном периоде экспрессия СОТ приводила к усилению фосфорилирования ЕКК путем, сравнимым с МЕК1^СС, совпадающим с активацией пути МАР киназы (фиг. 2а и 10). Сверхэкспрессия СОТ и С-КАБ дикого типа приводила к конститутивному фосфорилированию ЕКК и МЕК в присутствии РБХ4720, в то время как производные с отсутствием киназной активности не оказывали влияния (фиг. 2а и 11). Таким образом, СОТ и С-КАБ индуцируют резистентность к ингибированию КАБ преимущественно через путь реактивации сигнального пути МАРК. Примечательно, что девять кандидатов ОКБ, отобранных в первоначальном скрининге, подгруппа (3), не давали стабильного фосфорилирования ЕКК/МЕК после ингибирования КАБ, на основании чего можно предположить о независимом от пути МАРК изменении чувствительности к лекарственным средствам (фиг. 12).

Пример 3. Активация С-КАБ и гетеродимеризация с В-КАБ

Активация С-КАБ и гетеродимеризация с В-КАБ составляют критические компоненты клеточного ответа на ингибирование В-КАБ. В клетках А375 эндогенные гетеродимеры С-КАБ:В-КАБ являются определяемыми и индуцибельными после обработки РБХ4720 (фиг. 13). Однако фосфорилирование эндогенной С-КАБ в 8338 событие, необходимое для активации С-КАБ - остается низким (фиг. 13). В противоположность эктопически экспрессированная С-КАБ была фосфорилирована в положении 8338 (фиг. 13), и фенотип ее резистентности к РБХ4720 ассоциирован со стабильной активацией МЕК/ЕКК (фиг. 2а и 13). Кроме того, эктопическая экспрессия усеченного мутанта С-КАБ с высокой активностью (СКАБ(\722)) была более эффективной по сравнению с С-КАБ дикого типа в опосредовании резистентно- 16 030276

сти к РЬХ4720 и активации ЕКК (фиг. 14), дополнительно указывая на то, что повышенная активность СКАР регулирует резистентность к данному агенту. Согласуясь с этой моделью, онкогенные аллели ΝΚΆδ и ККА8 придавали резистентность к РЬХ4720 клеткам А375 (фиг. 2Ь) и обеспечивали стабильное фосфорилирование С-КАР(§338) и ЕКК в контексте обработки лекарственным средством (фиг. 2с). Таким образом, несмотря на то, что генетические изменения, которые вызывают активацию С-КАР (например, онкогенные мутации КА8), показывают тенденцию к наличию взаимного исключения с мутацией ВКАР'^600Е, такие совместно имеющие события являются преимущественными в контексте развития приобретенной резистентности к ингибированию В-КАР.

Пример 4. исследование экспрессии СОТ в меланоме

Несмотря на то, что С-КАР ранее связывали с меланомой и зависимостью пути МАРК (Моп!ади! С. е! а1., 2008; КатгеШ Р.А., Ое№со1а О.М. е! а1., 2009; Оита/ Ν. е! а1., Сапсег Ке8. 66, 9483-9491 (2006); На!/АаАПои О. е! а1., №1иге (2010); НеНогп 8.1. е! а1., Се11, 140, 209-221 (2010); Роийкакок Р.1. е! а1., №Чиге (2010)), СОТ не описана как киназа, ассоциированная с меланомой.

Исследовали роль СОТ в меланоме и определяли ее экспрессию в меланоцитах человека. Первичные иммортализованные меланоциты (В-КАР дикого типа) экспрессировали СОТ (фиг. 26), хотя, эктопическая экспрессия В-КАР'^;600Е приводила к снижению уровня мРНК СОТ (фиг. 15) и делала белок СОТ практически недетектируемым (фиг. 26). В противоположность, в то время как эктопически экспрессированная СОТ была слабо детектируемой в клетках А375 (фиг. 2а, 2е), истощение эндогенного ВКАР'^600Е, опосредованное 8ЙРНК, вызывало повышение уровня белка СОТ, которое коррелировало со степенью нокдауна В-КАР (фиг. 2е). Кроме того, обработка клеток А375, экспрессирующих СОТ, РЬХ4720 приводила к зависимому от концентрации повышению белка СОТ (фиг. 2а) без воздействия на уровни мРНК эктопической СОТ (фиг. 15). Онкогенная В-КАР отменяет экспрессию СОТ в основном через измененную стабильность белка (фиг. 2а, 26, 2! и 15), и ингибирование В-КАР потенцирует рост клеток, экспрессирующих СОТ, во время обработки. Примечательно, что ни С-КАР, ни В-КАР одни или в комбинации были необходимыми для фосфорилирования ЕКК в контексте экспрессии СОТ, даже в присутствии РЬХ4720 (фиг. 2е, 2£ и фиг. 16). Как показано, экспрессия СОТ является достаточной для индукции активации пути киназы МАР независимым от КАР образом.

Пример 5. Экспрессия СОТ прогнозирует резистентность к ингибированию В-КАР в раковых клеточных линиях

Исследовали, насколько клеточные линии, экспрессирующие повышенные уровни СОТ в исходных В-КАР'^;600Е. проявляют резистентность 6е поуо к обработке РЬХ4720. Для идентификации таких случаев панель клеточных линий подвергали скринингу на увеличение числа копий МАР3К8/СОТ, совпадающего с мутацией В-КАР'^600Е. Из 534 клеточных линий, которые подверглись анализу числа копий и определению профиля мутаций, 38 клеточных линий (7,1%), содержали мутацию В-К.АР'^;600Е. В данной подгруппе две клеточные линии - ОИМ8-23 (рак ободочной кишки) и КРМ1-7951 (меланома) - также показывали наличие увеличения хромосомных копий, занимающих локус МАР3К8/СОТ (фиг. 3а и 17) и высокую экспрессию белка СОТ (фиг. 3Ь и 18). Панель кратковременных культур меланомы также подвергали скринингу на экспрессию белка СОТ. Одна из этих линий экспрессировала СОТ:М307, кратковременная культура, полученная из опухоли В-КАР'''⁶⁰⁰¹''. у которой развилась резистентность к аллостерическому ингибированию МЕК после первоначальной стабилизации заболевания (фиг. 3 с). Все три клеточные линии были устойчивыми к обработке РЬХ4720, имея значения О1₅₀ в пределах 8-10 мкМ (фиг. 36) и показывая стабильное фосфорилирование в контексте ингибирования В-КАР (фиг. 3е, 3£). ОИМ8-23 и КРМ1-7951 являются клеточными линиями пути МАРК, которые не подвергались воздействию ингибитора; таким образом, данные результаты показывают, что СОТ придает резистентность 6е поуо к ингибированию КАР (феномен, наблюдаемый примерно в 10% меланом с мутацией В-КАР'^600Е).

Пример 6. Экспрессия СОТ у пациентов, подвергшихся лечению ингибитором КАР

Исследовали экспрессию СОТ в контексте резистентности к клиническому ингибитору киназы КАР, РЬХ4720, при получении биопсийного материала от 3 пациентов с метастатической меланомой ВКар'^600Е. в каждом случае материал представлял собой замороженный, совпадающий по патологическому очагу биопсийный материал, полученный до и во время лечения ("до лечения" и "во время лечения"; фиг. 3д, табл. 6); кроме того, одна проба содержала два независимых биопсийных образца из одного и того же места рецидивирующей опухоли ("после рецидива"; фиг. 3д). Согласуясь с данными, полученными на экспериментальных моделях, представленными выше, результаты ОТ-ПЦР в режиме реального времени (дКТ/РСК) выявили повышенную экспрессию мРНК СОТ одновременно с обработкой РЬХ4720 в 2 из 3 случаев. Уровни мРНК СОТ были еще более повышены в образце рецидивирующей опухоли по сравнению с периодом до лечения и во время лечения (фиг. 3§, пациент №1). В дополнительной непарной биопсийной пробе рецидивирующей злокачественной меланомы имела место повышенная экспрессия мРНК СОТ по сравнению с уровнями, наблюдаемыми в СОТ-амплифицированных клеточных линиях, резистентных к ингибитору КАР (фиг. 19). В данном образце также отмечали высокую активацию пути МАРК и повышенную экспрессию В-КАР, С-КАР и СОТ по сравнению с аналогичными участками здоровой кожи или клеточными линиями В-КАР'^600Е (фиг. 19). Результаты секвенирования данной опухоли не выявили дополнительных мутаций в ВКАР, NКΑ§ или ККА8 (данные не представле- 17 030276

ны). Данные этих анализов обеспечили клиническое доказательство того, что СОТ-зависимые механизмы функционируют в злокачественных меланомах, резистентных к РБХ4720.

Пример 7. СОТ-регуляция фосфорилирования МЕК/ЕКК

Исследовали, насколько СОТ активно регулирует фосфорилирование МЕК/ЕКК в клетках ВКАБ^⁶⁰⁰® с естественной повышенной экспрессией СОТ посредством введения кЬРНК- конструкций, нацеленных на СОТ в клетках КРМ1-7951. Истощение СОТ подавляло жизнеспособность КРМ1-7951 (фиг. 20) и снижало фосфорилирование ЕКК (фиг. 3П); таким образом, нацеленная киназная активность СОТ ингибирует фосфорилирование МЕК/ЕКК в раковых клетках со сверхэкспрессией или амплификацией СОТ.

Кроме того, нацеленная киназная активность СОТ в присутствии ингибитора В-КАБ (РБХ4720) подавляет фосфорилирование МЕК/ЕКК (фиг. 3Ь). Обработка клеток КРМ1-7951 низкомолекулярным ингибитором СОТ-киназы (\Ууе11г„ АЬЬо! соединение ГО 9549300) (Оеогде Ό. е! а1., Вюогд. Меб. СЬет. Бе!!., 18, 4952-4955 (2008); Нгга1а К. е! а1., Вю1. РЬагт. Ви11., 33, 133-137 (2010); Бее К.М. е! а1., Сапсег Кек., 69, 8043-8049 (2009)) приводила к зависимому от концентрации ингибированию фосфорилирования МЕК и ЕКК, обеспечивая дополнительное доказательство того, что СОТ вносит свой вклад в активацию МЕК/ЕКК в данных клетках (фиг. 3г).

Пример 8. Клеточные линии В-КАБ^⁰⁰®, экспрессирующие СОТ, проявляют резистентность к аллостерическим ингибиторам МЕК

Анализировали, насколько раковые клетки, экспрессирующие СОТ, остаются чувствительными к ингибированию пути МАРК в мишени ниже от СОТ и КАБ. Клеточные линии ОИМ8-23 и КРМ1-7951 оценивали на чувствительность к ингибитору МЕК1/2, С1-1040. Обе клеточные линии были устойчивы к ингибированию МЕК (фиг. 4а) и демонстрировали стабильное фосфорилирование ЕКК даже в присутствии 1 мкМ С1-1040 (фиг. 4Ь). Эктопическая экспрессия СОТ в клетках А375 и 8КМЕБ28 также придавала пониженную чувствительность к ингибиторам МЕК, С1-1040 и ΛΖ^6244. предполагая, что одна экспрессия СОТ была достаточной для индукции данного фенотипа (фиг. 4с, 4б и 21). Аналогично результатам, полученным с фармакологическими ингибиторами МЕК, нокдаун МЕК1/2 только умеренно подавлял СОТ-опосредованное фосфорилирование ЕКК в клетках А375 (фиг. 22). Эти данные свидетельствуют о том, что СОТ активирует ЕКК посредством МЕК-независимого и МЕК-зависимого механизмов. Кроме того, проводили оценку киназной активности в условиях ίη νί!το с использованием рекомбинантной СОТ и ЕКК1, и его результаты показали, что рекомбинантная СОТ индуцировала фосфорилирование рТЬг202/Туг204 ЕКК1 в условиях ίη νί!το (фиг. 22). Таким образом, экспрессия СОТ потенцирует активацию ЕКК зависимым от МЕК путем.

Пример 9. Комбинированное ингибирование пути МАРК подавляет пролиферацию клеток

Применение ингибиторов КАБ и МЕК в комбинации может превысить резистентность к этим отдельным агентам, как показано на фиг. 23. Исследовали, насколько комбинированное ингибирование КАБ/МЕК может обойти СОТ-индуцированную резистентность. В случае эктопической экспрессии СОТ воздействие ΛΖ^6244 или С1-1040 в комбинации с РБХ4720 (1 мкМ каждого) подавляло рост клеток и экспрессию рЕКК более эффективно, чем один агент РБХ4720 даже в концентрации 10 мкМ (фиг. 4е, 4ί и 23). Эти данные подчеркивают важность данного пути в опухолевых клетках В-КΛБ^V600Ε и показывают, что двойное ингибирование В-КАБ/МЕК помогает обойти резистентность к ингибиторам КАБ.

Методы

Коллекция открытых рамок считывания киназ Центра биологии раковых систем (СС8В)/Института Брода

Собирали библиотеку из 597 ОКБ киназ в ЕпЬу векторах рЭОИК-223 (Ιηνίίτο^η). Отдельные клоны секвенировали по концам с использованием вектор-специфических праймеров в обоих направлениях. Отбрасывали клоны с существенными отклонениями от известных в литературе последовательностей. ЕпЬу клоны и последовательности доступны в Аббдепе (Ь!1р://ууу.аббдепе.огд./Ьитап_кгпа8е8). Киназные ОКБ собирали из многочисленных источников; 337 киназ выделяли в виде отдельных клонов из коллекции ОКБеоте 5.1 (Ьйр://ЬогбЬ.бРсг.Ьагхагб.еби), 183 киназы клонировали из РНК ткани здорового человека (АтЬюп) обратной транскрипцией и последующей амплификацией ПЦР для добавления последовательностей Оа!еуау (1^Ьтодеп), 64 киназы клонировали из матриц, полученных из Института Протеомики Гарвардского Университета (Н1Р) и 13 киназ клонировали в систему Оа!еуау из матриц, полученных из сотрудничающих лабораторий. Совместимый с системой Оа!еуау лентивирусный вектор рБХВ1ак!Ю5 был получен на основе рБКО.1. Проводили БК ферментные клоназные реакции рекомбинации для введения 597 киназ в рБХ-В1а8!Ю5 согласно протоколу изготовителя ОтЦгодеп).

Высокопропускной скрининг ОКБ

Клетки меланомы А375 высевали в 384-луночный микротитрационный планшет (500 клеток на лунку). На следующие сутки клетки заражали упакованной в лентивирус библиотекой ОКБ киназ в присутствии 8 мкг/мл полибрена. Через 48 ч после заражения среду заменяли на обычную культуральную среду (2 повторности), содержащую 1 мкМ РБХ4720 (2 повторности, 2 временные точки), или среду, содержащую 10 мкг/мл бластицидина (2 повторности). Через 4 и 6 суток оценивали рост клеток с использованием Се11 Тг!ег-О1о (Рготеда) согласно инструкциям изготовителя. Полный эксперимент прово- 18 030276

дили дважды.

Идентификация ОКР кандидатов резистентности

Необработанные значения люминесценции переводили в М1сто8ой Ехсе1. Эффективность инфицирования определяли по проценту от необработанных средних значений люминесценции двух определений в отобранных бластицидином клетках по сравнению с неотобранными клетками. ОКР с эффективностью инфицирования менее 0,70 исключали из дальнейшего анализа вместе с любой ОКР, имеющей стандартное отклонение >15000 необработанных единиц люминесценции между двумя определениями. Для идентификации ОКР, экспрессия которых оказывает отрицательное влияние на пролиферацию, проводили сравнение необработанных средних значений люминесценции двух определений отдельных ОКР со средним значением и стандартным отклонением всех обработанных контролем клеток через ζ-балл или стандартный балл, как показано ниже.

σ

где χ - средняя необработанная люминесценция для данной ОКР,

μ - средняя необработанная люминесценция всех ОКР и

σ - стандартное отклонение необработанной люминесценции всех лунок.

Любую отдельную ОКР со значением ζ-балла >+2 или <-2 признавали, как оказывающую отрицательное влияние на пролиферацию и исключали из конечного анализа. Дифференциальную пролиферацию определяли по проценту от необработанных средних значений люминесценции двух определений в обработанных РЬХ4720 клетках (1 мкМ) по сравнению с необработанными клетками. Затем дифференциальную пролиферацию нормализовали к положительному контролю для резистентности РЬХ4720, М1К1 ' (МЕК1^СС), с дифференциальной пролиферацией МЕК1^СС = 1,0 МЕК1^СС, нормализованная

дифференциальная пролиферация для каждой отдельной ОКР в виде среднего значения по данным двух определений с двумя временными точками для каждого опыта (сутки 4 и сутки 6). Затем рассчитывали ζбалл, как описано выше для средней нормализованной дифференциальной пролиферации МЕК1^СС. ОКР с ζ-баллом >2 рассматривали в качестве положительного результата и тестировали во вторичном скрининге.

Экспрессия ОКР и хНРНК

ОКР экспрессировали из экспрессионных плазмид рЬХ-В1а81-У5 (лентивирусный) или р\2Ь-В1а81, рВАВЕ-Риго или рВАВЕ-зеоцин. Для лентивирусной трансдукции клетки 293Т трансфектировали 1 мкг рЕХ-В1а81-У5-ОКР или рЬКО. 1-8ЬКЫА, 900 нг Δ8.9 (дад, ро1) и 100 нг У5У-О с использованием 6 мкл реагента для трансфекции Ридепе6 (КосЬе). Вирусный супернатант собирали через 72 ч после трансфекции. Клетки млекопитающих заражали в разведении вируса 1:10-1:20 в 6-луночных планшетах в присутствии 5 мкг/мл полибрена и центрифугировали при 2250 об/мин в течение 1 ч при 37°С. Через 24 ч после заражения добавляли бластицидин (рЬХ-В1а81-У5, 10 мкг/мл) или риго (РЬКО.1, 0,75 мкг/мл) и клетки отбирали через 48 ч. Для продукции ретровируса клетки 293Т трансфектировали 1 мкг ретровирусной плазмиды-ОКР, 1 мкг рСЬ-АМРНО и 100 нг У5У-О, как описано выше. Клетки инфицировали супернатантом, содержащим ретровирус, в разведении 1:2 в присутствии 5 мкг/мл полибрена в течение ночи с последующей заменой среды на культуральную среду. Заражение повторяли еще раз (в целом дважды) с последующим отбором, как описано выше.

Вторичный скрининг

Клетки А375 (1,5х10³) и §КМЕЬ28 (3х10³) высевали в 96-луночные планшеты на 18 ч. Лентивирус, экспрессирующий ОКР, добавляли в разведении 1:10 в присутствии 8 мкг/мл полибрена и центрифугировали при 2250 об/мин и при 37°С в течение 1 ч. После центрифугирования среду, содержащую вирус, заменяли на обычную культуральную среду и инкубировали в течение 18 ч. Через 24 ч после заражения добавляли ДМСО (1:1000) или 10хРЬХ4720 (в ДМСО) до конечной концентрации 100; 10; 1; 0,1; 0,01; 0,001; 0,0001 или 0,00001 мкМ. Жизнеспособность клеток оценивали с использованием \5Т-1 (КосЬе) согласно рекомендациям изготовителя через 4 суток после добавления РЬХ4720.

Клеточные линии и реагенты

Все клетки А375, §КМЕЬ28, 8КМЕЬ30, СОЬО-679, \М4511и, 8КМЕЬ5, Ма1те 3М, 8КМЕЬ30, \М3627, \М1976, \М3163, \М3130, \М3629, \М3453, \М3682 и \М3702 культивировали в среде КРМ1 (Се11дго), 10% РВ5 и 1% смесь пенициллин/стрептомицин. Клетки М307 выращивали в среде КРМ1 (Се11дго), 10% РВ5 и 1% смесь пенициллин/стрептомицин с добавлением 1 мМ пирувата натрия. Клетки 293Т и ОИМ8-23 выращивали в среде ЭМЕМ (Се11дго), 10% РВ5 и 1% смесь пенициллин/стрептомицин. Клетки КРМ1-7951 (АТСС) культивировали в среде МЕМ (Се11дго), 10% РВ5 и 1% смесь пенициллин/стрептомицин. Первичные меланоциты дикого типа культивировали в среде НАМ'к Р10 (Се11дго), 10% РВ5 и 1% смесь пенициллин/стрептомицин. Первичные меланоциты, экспрессирующие В-КΛР^V600Е, выращивали в среде Т1УА [среда НАМ'к Р10 (Се11дго), 7% РВ5, 1% смесь пенициллин/стрептомицин, 2 мМ глутамина (Се11дго), 100 мкМ 1ВМХ, 50 нг/мл ТРА, 1 мМ бЬсАМР (§1дта) и 1 мкМ ванадата натрия]. С1-1040 (РиЬСЬет ГО:6918454) получали из 8ЬапдЬш ЬесЬеп 1п1етпа1юпа1 Тгабшд Со., А2Э6244 (РиЬСЬет ГО: 10127622) из 5е11еск СЬетюак и РБХ4720 (РиЬСЬет ГО: 24180719) из 5у- 19 030276

тап818. КАЕ265 (РиЬСЬет ΙΌ: 11656518) был любезно предоставлен ΝοναΠίδ РНагта АО. Если не указано иное, то все обработки лекарственным средством проходили в течение 16 ч. Активированные аллели ΝΡΛ8 и ККА8 были описаны ранее (ВоеЬт 1.8. е! а1., Се11, 129, 1065-1079 (2007); ЬипбЬегд А.8. е! а1., Опсодепе, 21, 4577-4586 (2002)).

Фармакологические тесты ингибирования роста

Культивированные клетки высевали в 96-луночные планшеты (3000 клеток на лунку) для всех клеточных линий меланомы; 1500 клеток высевали для А375. Через 24 ч после посева готовили серийные разведения соответствующего соединения в ДМСО, и добавляли к клеткам, с получением конечных концентраций лекарственного средства в пределах от 100 мкМ до 1x105 мкМ с конечным объемом ДМСО, не превышающим 1%. Клетки инкубировали в течение 96 ч после добавления лекарственного средства. Жизнеспособность клеток оценивали с использованием теста оценки жизнеспособности А8Т1 (КосЬе). Жизнеспособность рассчитывали в виде процента от контроля (необработанные клетки) после вычитания фона. Минимум шесть повторностей проводили для каждой клеточной линии и комбинации лекарственных средств. Данные тестов по оценке ингибирования роста моделировали с использованием кривой нелинейной регрессии с сигмоидальной функцией доза-ответ. Строили эти кривые и определяли значения О1₅₀ с использованием ОгарЬРаб Ргйт 5 для Атбо\У5 (ОгарЬРаб). Сигмоидальные кривые ответа, которые пересекали точку 50% ингибирования при концентрации равной или выше 10 мкМ, имели значения О1₅₀, соответствующие >10 мкМ. Для опытов с одной концентрацией следовали идентичному протоколу с использованием одной дозы указанного лекарственного средства (1 мкМ, если не указано иное).

Иммуноблоттинг и иммунопреципитация

Клетки промывали дважды охлажденным на льду РВ8 и лизировали 1% буфером ΝΓ-40 [150 мМ №С1, 50 мМ Трис, рН 7,5, 2 мМ ЭДТА, рН 8, 25 мМ NаЕ и 1% ΝΓ-40], содержащим 2х ингибиторов протеазы (КосЬе) и 1х смеси ингибиторов фосфатазы I и II (Са1ВюСЬет). Лизаты количественно анализировали (тест Брэдфорда), нормализовали, восстанавливали, денатурировали (95°С) и разделяли электрофорезом в 8Б8 геле в 10% Трис/глициновых гелях (1пуйгодеп). Белок переносили на мембраны РУБЕ и зондировали первичными антителами, распознающими рЕКК1/2 (Τ202/Υ204), рМЕК1/2 (8217/221), МЕК1/2, МЕК1, МЕК2, С-КАЕ (хозяин кролик), рС-КАЕ (р8338) (Се11 81дпаЬпд ТесЬпо1оду; 1:1000), У5НКР (1пуйгодеп (1:5000); СОТ (1:500), В-КАЕ (1:2000), актин (1:1000), актин-НКР (1:1000; 8ап!а Сгс)), СКАЕ (хозяин мышь; 1:1000; ВБ Тгапкбисйоп ЬаЬк), винкулин (81дта; 1:20000), АХЬ (1:500; К&Б 8уЧет5). После инкубации с соответствующим вторичным антителом (антикроличий, антимышиный 1дО, НКР-конъюгированный; разведение 1:1000, Се11 81дпаЬпд ТесЬпо1оду или антикозий 1дО, НКРконъюгированный; разведение 1:1000, 8ап!а Сги/). белки детектировали хемилюминесцентным анализом (Иегсе). Иммунопреципитацию проводили в течение ночи при 4°С в 1% лизирующем буфере ΝΓ-40, как описано выше, в концентрации 1 мкг/мкл общего белка с использованием антитела, распознающего СКАЕ (1:50; Се11 81дпаЬпд ТесЬпо1оду). Комплексы антитело: антиген иммобилизовали на агарозе с белком А (25 мкл, 50% суспензия; Р1егсе) в течение 2 ч при 4°С. Шарики центрифугировали и промывали три раза лизирующим буфером, и элюировали и денатурировали (95°С) в 2х восстановленном буфере для проб ЦпуЬгодеп). Иммуноблоттинг проводили, как описано выше. Определение фосфобелка проводили с использованием №Н 1таде ί.

Лизаты опухоли и аналогичных участков здоровой кожи получали механической гомогенизацией ткани в К1РА [50 мМ Трис (рН 7,4), 150 мМ №С1, 1 мМ ЭДТА, 0,1% 8Б8, 1,0% Nа^ОС, 1,0% Тритон-Х100, 25 мМ NаЕ, 1 мМ №₃УО₄], содержащей ингибиторы протеаз и фосфатаз, как описано выше.

Последующую нормализацию и иммуноблоттинг проводили, как описано выше.

Биопсийный материал опухоли меланомы

Биопсийный материал опухоли состоял из удаленной ткани без идентификации, которую получали с информированного согласия пациента и характеризовали согласно протоколу 02-017 (парные образцы, Ма88асЬи8ей8 Оепега1 Но§рЬа1) и 07-087 (непарный образец, Бапа-ЕагЬег Сапсег 1п8Йи1е). Для парных образцов пробы "во время лечения" отбирали через 10-14 суток после начала лечения РБХ4032 (табл. 6).

Ингибирование киназной активности СОТ

Адгезированные клетки КРМ1-7951 дважды промывали 1х РВ8 и инкубировали в течение ночи в бессывороточной культуральной среде. Затем 4-(3-хлор-4-фторфениламино)-6-(пиридин-3илметиламино)-3-циано-[1,7]нафтиридин (ЕМБ; ингибитор I ТРЬ2; Са!#: 616373, РиЬСЬет 1Б: 9549300) суспендировали в ДМСО в указанных концентрациях, добавляли к клеткам на 1 ч, после чего готовили белковые экстракты, как описано выше.

Количественная ОТ-ПЦР

мРНК экстрагировали из клеточных линий и свежезамороженных опухолей с использованием набора К№а§у (01адеп). Общую фракцию мРНК для последующей обратной транскрипции с использованием 8ирег5спр1 III Е1г81-81гапб 8уп1Ье818 8ирегМ1х ЦпуЬгодеп) для клеточных линий и непарных опухолевых образцов, и набор 8ирег5спр1 УШО с^NА 8уп1Ье818 Дпуйгодеп) для парных замороженных опухолевых образцов. 5 мкл реакционной смеси ОТ использовали для количественной ПЦР с использованием смеси 8ΥВК Огееп РСК МаЧег М1х и ген-специфических праймеров в трех параллелях с использованием

- 20 030276

системы ΑΒΙ 7300 геа1 ТЁше РСК. Праймерами, использованными для детектирования, были следующие праймеры: _

Праймер	Последовательность	ЗЕО ΙΌ ΝΟ:
прямой праймер СОТ	СААСТСААСАСССАССАСТΤТ	ЗЕО ΙΌ ΝΟ: 1
обратный праймер СОТ	ССААССАААТССТССАСАСТТС	ЗЕО ΙΌ ΝΟ: 2
прямой праймер ТВР	ССССАААСССССААТАТААТСС	ЗЕО ΙΌ ΝΟ: 3
обратный праймер ТВР	САСТСТТСТТСАСТСТТСССТС	ЗЕО ΙΌ ΝΟ: 4
прямой праймер САРРН	САТСАТСТСТССССССТСТ	ЗЕО ΙΌ ΝΟ: 5
обратный праймер САРРН	ССТССТААССАСТТССТССТ	ЗЕО ΙΌ N0: 6

Тест оценки киназной активности в условиях ΐη νίίτο

Тесты оценки киназной активности в условиях ΐπ νίίτο проводили, как описано ранее с использованием в каждом случае 1 мкг СОТ (аминокислоты 30-397, Κ&Ό ЗузЁешз) и неактивной ЕКК1 (МЁШроге).

Тесты оценки жизнеспособности клеток

Адгезированные клетки КРМ1-7 951 заражали вирусом, экспрессирующим зйРНК к СОТ или люциферазе, как описано выше. После отбора клетки высевали (1,5х10⁵ клеток/лунку) в 24-луночном планшете в четырех параллелях. Подсчитывали число жизнеспособных клеток посредством вытеснения трипанового синего с использованием анализатора νΐ-СЕЕЕ Се11 УЁаЬЁ1Ё1у Апа!у/ег согласно указаниям изготовителя. Рассчитывали среднее число клеток для четырех параллелей и нормализовали относительно контрольной зйРНК.

Энциклопедия раковых клеточных линий (ССЬЕ)

Проект энциклопедия раковых клеточных линий (ССЕЕ) представляет собой результат сотрудничества Института Брода, Νοναιΐιΐδ ШзОкПез Гог ВЁошеОЁеа1 Кезеагсй (ΝΙΒΚ) и СепошЁез 1пз1ЁШ1е оГ Ше Νοναΐ'ίΐδ Кезеагсй ЕоипОаЁЁоп (ΘΝΕ) с целью проведения подробной генетической и фармакологической характеристики большой панели моделей рака человека для разработки интегрированного компьютерного анализа, который связал бы различную фармакологическую чувствительность с геномными паттернами и перенес интегративную геномику клеточных линий в группирование пациентов, страдающих раком. Для этого исследования использовали данные по числу хромосомных копий и экспрессии генов, доступную онлайн на йЦр://ффф.Ьгоа0Ёпз1Ё1и1е.огд/едЁ-ЬЁп/еапеег/0а1азе1з.едЁ.

Профилирование экспрессии раковых клеточных линий

Анализ олигонуклеотидных микрочипов проводили с использованием СепеСйЁр Нитап Сепоше И133 Р1из 2.0 АГГутейтх ехргеззЁоп аггау (АГГутеЁгЁх). Образцы превращали в меченые фрагментированные кРНК, следуя протоколу АГГушейэх для применения в экспрессионном микрочипе.

Использованные конструкции зЬРИК (рЕКО.1)

Использованные ДНК-последовательности для получения зйРНК-конструкций были следующими:

- 21 030276

8НРНК	Идентификатор ТКС	Номер ΝΜ	Последовательность	8ΕΟΙΒ ΝΟ:
зЬЬис	ΤΒΓΝ 0000072243	ΝΑ	СТТСОАААТОТССОТТСООТТ	8Е0ГО ΝΟ: 7
δΗΒΚΑΡ(Ι)	ΤΚΟΝ 0000006289	ΝΜ 004333.21106§1с1	СТТСОАААТОТССОТТСООТТ	8Е0ГО ΝΟ: 8
5ЬВКАР(2)	ΤΒΓΝ 0000006291	ΝΜ 004333.22267§1с1	ОСТООТТТССАААСАОАООАТ	ЗЕО ГО ΝΟ: 9
5йСКАР(1)	ΤΚΟΝ 0000001066	ΝΜ 002880.x1236§1с1	СООАОАТОТТОСАОТАААОАТ	ЗЕО ГО ΝΟ: 10
5ЙСКАР(2)	ΤΒΓΝ 0000001068	ΝΜ 002880.x1529§1с1	ОАОАСАТОАААТССААСААТА	ЗЕО ГО ΝΟ: 11
5ЬМЕК1(1)	ΤΚΟΝ 0000002332	ΝΜ 002755.x1015§1с1	ОАТТАСАТАОТСААСОАОССТ	ЗЕО ГО ΝΟ: 12
§ЬМЕК1(2)	ΤΒΓΝ 0000002329	ΝΜ 002755.x45581с1	ОСТТСТАТООТОСОТТСТАСА	ЗЕО ГО ΝΟ: 13
§ЬМЕК2(1)	ΤΚΟΝ 0000007007	ΝΜ 030662.21219§1с1	ТООАСТАТАТТОТОААСОАОС	ЗЕО ГО ΝΟ: 14
8ЬМЕК2(2)	ΤΕΕΝ 0000007005	ΝΜ 030662.2847з1с1	ССААСАТССТСОТОААСТСТА	ЗЕО ГО ΝΟ: 15
5ЬСОТ(1)	ΤΕί'Ν 0000010013	ΝΜ 005204.x1826§1с1	СААОАОССОСАОАССТАСТАА	ЗЕО ГО ΝΟ: 16
8ЬСОТ(2)	ΤΒΓΝ 0000196518	ΝΜ 005204.2280981с!	ОАТОАОААТОТОАССТТТААО	ЗЕО ГО ΝΟ: 17

Определения и раскрытия, приведенные в данном документе, определяют и заменяют все другие, включенные для сведения. Несмотря на то, что изобретение описано в данном документе при обращении к его предпочтительным вариантам осуществления, специалистам в данной области, очевидно, понятно, что могут быть сделаны добавления, модификации, замены и удаления, не описанные конкретно, не отступая от сущности и объема изобретения, которые определяются прилагаемой формулой изобретения. Следовательно, полагается, что приведенное выше подробное описание следует в большей степени рассматривать в качестве иллюстративного, чем ограничивающего, и что его следует понимать, как это имеет место в последующей формуле изобретения, включая все эквивалентные варианты, которая предназначена для определения сущности и объема данного изобретения.

Таблица 3. Описание библиотеки ОКР киназ ССЗВ/Института Брода и классификация ОКР

Сокращения: К8/ТК (рецепторная серин/треониновая киназа); КТК (рецепторная тирозинкиназа); НК8/ТК (нерецепторная серин/треониновая киназа); НКТК (нерецепторная тирозинкиназа)_

Ген человека	ΙΌ гена	ОПИСАНИЕ	Класс киназы
ААК1	22848	АР2-ассоциированная киназа 1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
АВЫ	25	гомолог 1 онкогена вируса лейкоза мышей Абельсона ν-аЫ	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
АВВ2	27	гомолог 2 онкогена вируса лейкоза мышей Абельсона (агд, связанный с лейкозом Абельсона ген)	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
АСУК1	90	рецептор активина А типа I	протеинкиназа (КЗ/ТК)
АСУК1В	91	рецептор активина А типа ΙΒ	протеинкиназа (КЗ/ТК)
АСУВ1С	130399	рецептор активина А типа 1С	протеинкиназа (КЗ/ТК)
АСУК2А	92	рецептор активина А типа II	протеинкиназа (КЗ/ТК)
АСУВ2В	93	рецептор активина А типа ИВ	протеинкиназа (КЗ/ТК)
АСУКЫ	94	рецептор активина А типа I1-подобный 1	протеинкиназа (КЗ/ТК)
АРСК1	57143	киназа 1, содержащая домен аагГ	протеинкиназа
АОСК2	90956	киназа 2, содержащая домен аагГ	протеинкиназа
АОСК4	79934	киназа 4, содержащая домен аагГ	протеинкиназа
аврск	83440	АРР-зависимая глюкокиназа	родственная киназе
АВКВК1	156	бета-адренергическая рецепторная киназа 1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

- 22 030276

- 23 030276

вив!	699	гомолог 1 почкования ВиВ1, неингибируемый бензимидазолами (дрожжевой)	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
ΒϋΒΙΒ	701	гомолог 1 бета почкования ВиВ1, неингибируемый бензимидазолами (дрожжевой)	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
С1ог£57	84284	открытая рамка считывания 57 хромосомы 1; С1ог£57	родственная киназе
С9ог£95	54981	открытая рамка считывания 95 хромосомы 9; С9ог£95	родственная киназе
С9ог£98	158067	открытая рамка считывания 98 хромосомы 9; С9ог£98	нуклеотидкиназа
САВС1	56997	шаперон, активность АВС1 комплекс-подобная Ьс1 (5. ротЬе)	протеинкиназа
САВМ1	801	кальмодулин 1 (фосфорилазкиназа дельта)	родственная киназе
САВМ2	805	калмодулин 2 (фосфорилазкиназа дельта)	родственная киназе
САВМЗ	808	кальмодулин 3 (фосфорилазкиназа дельта)	родственная киназе
САМК1	8536	кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа I	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
САМК1В	57118	кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа Ю	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
САМК1С	57172	кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа 1С	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
САМК2А	815	кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа (СаМ киназа) II альфа	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
САМК2В	816	кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа (СаМ киназа) II бета	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
САМК2О	817	кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа (СаМ киназа) II дельта	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
САМК2С	818	кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа (СаМ киназа) II гамма	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
САМК4	814	кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа IV	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
САМКК1	84254	кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа 1, альфа	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
САМКК2	10645	кальций/кальмодулин-зависимая протеинкиназа 2, бета	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
САМКУ	79012	гипотетический белок МСС8407	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
САВКИ	84433	член 11 семейства каспазных соединительных доменов; САЕО11	нуклеотидкиназа
САККВ	23729	углевод-киназа-подобная	углевод-киназа
САЗК	8573	кальций/кальмодулин-зависимая серинпротеинкиназа (семейство МАСиК)	нуклеотидкиназа
ССВ2	6347	лиганд 2 хемокина (СС-С мотив); ССЬ2	протеинкиназа
ССВ 4	6351	лиганд 4 хемокина (СС-С мотив); ССЬ4	протеинкиназа (НТК)
ССКК	23552	связанная с клеточным циклом киназа	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СВ2	914	антиген СО2 (р50), рецептор эритроцитов барана; Сй2	протеинкиназа
СВС2	983	белок 2 цикла деления клеток, С1 в 3 и С2 в М	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
СОС2В1	984	белок 2-подобный 1 цикла деления клеток (белки Р1ТЗЫ2Е)	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
СВС2В2	985	белок 2-подобный 2 цикла деления клеток (белки Р1ТЗЫ2Е)	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
СВС2В6	23097	белок 2-подобный 6 цикла деления клеток (СРК8-подобный)	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
СОС42ВРС	55561	связывающаяся с СРС42 протеинкиназа гамма (РМРК-подобная)	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
СВС7	8317	протеинкиназа 7 СВС7 цикла деления клеток (3. сегечгзгае)	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
СОКЮ	8558	циклин-зависимая киназа 10 (СРС2-подобная)	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
СОК2	1017	циклин-зависимая киназа 2	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
СОКЗ	1018	циклин-зависимая киназа 3	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
СйК4	1019	циклин-зависимая киназа 4	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)

- 24 030276

СОК5	1020	циклин-зависимая киназа 5	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СОК5К1	8851	циклин-зависимая киназа 5, регуляторная субъединица (р35)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СОК6	1021	циклин-зависимая киназа 6	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СОК7	1022	циклин-зависимая киназа 7 (гомолог МО15, Хепориз 1аеч1з, сбкактивирующая киназа)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СОК8	1024	циклин-зависимая киназа 8	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СОК9	1025	циклин-зависимая киназа 9 (С0С2-связанная киназа)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
спкы	8814	циклин-зависимая киназа-подобная 1 (С0С2-связанная киназа)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СОКИ 2	8999	циклин-зависимая киназа-подобная 2 (С0С2-связанная киназа)	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
сокьз	51265	циклин-зависимая киназа-подобная 3	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СВКВ4	344387	циклин-зависимая киназа-подобная 4	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СО КВ 5	6792	циклин-зависимая киназа-подобная 5	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СНЕК1	1111	гомолог чекпойнт-контроля СНК1 (3. ротЬе)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СНЕК2	11200	гомолог чекпойнт-контроля СНК2 (3. ротЬе)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СНКА	1119	холинкиназа альфа	родственная киназе
С1В1	10519	белок 1, связывающий кальций и интегрин (кальмирин); С1В1	родственный киназе
С1В4	130106	белок, связывающий кальций и интегрин член 4 семейства; С1В4	родственный киназе
СКВ	1152	креатинкиназа, головной мозг	родственная киназе
СКМ	1158	креатинкиназа, мышцы	родственная киназе
СКМТ1А	548596	креатинкиназа, митохондриальная 1А; СКМТ1А	родственная киназе
СКМТ2	1160	креатинкиназа, митохондриальная 2 (саркомерная)	родственная киназе
СК31В	1163	регуляторная субъединица 1В протеинкиназы СОС28	протеинкиназа
СК32	1164	регуляторная субъединица 2 протеинкиназы СОС28	протеинкиназа
СВК1	1195	СОС-подобная киназа 1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СВК2	1196	СОС-подобная киназа 2	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СВКЗ	1198	СОС-подобная киназа 3	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СОАЗУ	80347	Коэнзим А-синтаза; СОАЗУ	родственная киназе
СОВ4АЗВР	10087	белок, связывающийся с коллагеном типа IV, альфа 3 (антиген Гудпастера); СОЬ4АЗВР	протеинкиназа
СРКВ	1399	гомолог СТ10 онкогена вируса саркомы ν-сгк, подобный птичьему; СККЬ	родственный киназе
СЗЕ1Р	1436	рецептор колониестимулирующего фактора 1, ранее известный как гомолог онкогена вируса саркомы кошек МакДоноха (ν-йтз)	протеинкиназа (КТК)
СЗК	1445	тирозинкиназа с-згс	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
03ΝΚ1Α1	1452	казеинкиназа 1 альфа 1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
03ΝΚ1Α1Β	122011	казеинкиназа 1, альфа 1-подобная	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
сзикю	1453	казеинкиназа 1, дельта	протеинкиназа (ΝΗ3/ΤΚ)
03ΝΚ1Ε	1454	казеинкиназа 1, эпсилон	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СЗШС1	53944	казеинкиназа 1, гамма 1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
СЗЕ1К1С2	1455	казеинкиназа 1, гамма 2	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

- 25 030276

СЗШК!<зз	1456	казеинкиназа 1, гамма 3	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
С5К1К2А1	1457	казеинкиназа 2, альфа полипептид 1	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
СЗКГК2В	1460	казеинкиназа 2, бета полипептид	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΌΑΚ	26007	гомолог дигидроксиацетонкиназы 2 (3. сегечгзгае); ΏΑΚ	родственный киназе
ΌΑΡΚ1	1612	гибель-ассоциированная протеинкиназа 1	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΌΑΡΚ2	23604	гибель-ассоциированная протеинкиназа 2	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΌΑΡΚ3	1613	гибель-ассоциированная протеинкиназа 3	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΌΟΑΚΌ	79877	дефосфо-СоА-киназа домен-содержащая; ϋ6ΑΚϋ	родственная киназе
ВСАМКВ2	166614	гипотетический белок МСС45428	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ВСК	1633	дезоксицитидинкиназа	нуклеотидкиназа
ΌΌΡ1	780	член 1 семейства рецептора домена дискоидина	протеинкиназа (НТК)
ΌΌΡ2	4921	член 2 семейства рецептора домена дискоидина	протеинкиназа (НТК)
Ό3ΚΑ	1606	диацилглицерокиназа альфа 80 кДа	родственная киназе
Ό3ΚΒ	1607	диацилглицерокиназа бета 90 кДа	родственная киназе
Ό3Κ<3	1608	диацилглицерокиназа гамма 90 кДа	родственная киназе
Ό3ΚΚ	139189	диацилглицерокиназа каппа; ЙСКК	родственная киназе
Ό3ΚΖ	8525	диацилглицерокиназа зета 104 кДа	родственная киназе
ΰαυοκ	1716	дезоксигуанозинкиназа	нуклеотидкиназа
ΌΚΡΖρ434Β1231	91156	еЕЕ1А2-связывающий белок; ϋΚΓΖρ434Β1231	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΒΚΕΖρΊ 61Ρ0423	157285	гипотетический белок ΏΚΓΖρ761Ρ0423	протеинкиназа (ВЗ/ТК)
ΒΒ31	1739	диски, большой гомолог 1 (ОгозорйНа) ; ОЬС1	нуклеотидкиназа
ввез	1741	диски, большой гомолог 3 (нейроэндокрин-б1д, ОгозорйНа) ; ОЬСЗ	нуклеотидкиназа
ΒΤΥΜΚ	1841	дезокситимидилаткиназа (тимидилаткиназа)	нуклеотидкиназа
ΒΥΡΚ1Α	1859	регулируемая киназа 1А для тирозин-(Υ)-фосфорилирования с двойной специфичностью	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΒΥΡΚ1Β	9149	регулируемая киназа 1В для тирозин-(Υ)-фосфорилирования с двойной специфичностью	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΒΥΡΚ2	8445	регулируемая киназа 2 для тирозин-(Υ)-фосфорилирования с двойной специфичностью	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΒΥΡΚ3	8444	регулируемая киназа 3 для тирозин-(Υ)-фосфорилирования с двойной специфичностью	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΒΥΡΚ4	8798	регулируемая киназа 4 для тирозин-(Υ)-фосфорилирования с двойной специфичностью	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΕΕΕ2Κ	29904	эукариотический фактор-2 элонгации киназы	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ЕСЕК	1956	рецептор эпидермального фактора роста (гомолог онкогена вируса эритробластного лейкоза птиц (ν-егЬ-Ь)	протеинкиназа (ВТК)
ΕΙΕ2ΑΚ1	27102	гем-регулируемая киназа фактора 2-альфа инициации	протеинкиназа (ΝΒ3/ΤΚ)
ΕΙΕ2ΑΚ4	415116	серин-треонин-протеинкиназа ргт-З	протеинкиназа (ВЗ/ТК)
ΕΡΗΑ1	2041	ЕРН-рецептор А1	протеинкиназа (ВТК)
ΕΡΗΑ2	1969	ЕРН-рецептор А2	протеинкиназа (ВТК)
ΕΡΗΑ3	2042	ЕРН-рецептор АЗ	протеинкиназа (ВТК)

- 26 030276

ЕРНА4	2043	ЕРН-рецептор А4	протеинкиназа (НТК)
ЕРНА6	285220	ЕРН-рецептор А6	протеинкиназа (НТК)
ЕРНВ1	2047	ЕРН-рецептор В1	протеинкиназа (НТК)
ЕРНВ4	2050	ЕРН-рецептор В4	протеинкиназа (НТК)
ЕРНВб	2051	ЕРН-рецептор В6	протеинкиназа (НТК)
ЕРВВ2	2064	гомолог 2 онкогена вируса эритробластного лейкоза ч-егЬ-Ь2, нейро/глиобластомы (птиц)	протеинкиназа (НТК)
ЕРВВЗ	2065	гомолог 3 онкогена вируса эритробластного лейкоза ч-егЬ-Ь2 (птиц)	протеинкиназа (НТК)
ЕРВВ4	2066	гомолог 4 онкогена вируса эритробластного лейкоза ν-егЬ-а (птиц)	протеинкиназа (НТК)
ΕΡΝ1	2081	сигнальный белок 1 из эндоплазматического ретикулума в ядро	протеинкиназа
ΕΤΝΚ1	55500	этаноламинкиназа 1	родственная киназе
ΕΤΝΚ2	55224	этаноламинкиназа 2	родственная киназе
ЕХ03С10	5394	компонент 10 экзосомы; ЕХОЗСЮ	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ЕАЗТК	10922	ЕАЗТ киназа	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ЕАЗТКВ1	79675	домены ЕАЗТ киназы 1; ЕАЗТКО1	протеинкиназа
ΡΑ3ΤΚΌ2	22868	домены ЕАЗТ киназы 2; ΕΑ3ΤΚΌ2	протеинкиназа
ЕАЗТКВЗ	79072	домены ЕАЗТ киназы 3; ΕΑ3ΤΚΌ3	протеинкиназа
ЕАЗТ КВ 5	60493	домены ЕАЗТ киназы 5; ΕΑ3ΤΚΌ5	протеинкиназа
РЕР	2241	тирозинкиназа £ег (£рз/£ез связанная) (фосфопротеин ΝΟΡ94)	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
РЕЗ	2242	онкоген саркомы кошек	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
РСРР1	2260	рецептор 1 фактора роста фибробластов (£тз-связанная тирозинкиназа 2, синдром Пфейффера)	протеинкиназа (НТК)
РСРР2	2263	рецептор 2 фактора роста фибробластов (черепно-лицевой дизостоз, синдром Пфейффера и Джексона-Вейсса)	протеинкиназа (НТК)
РЗРРЗ	2261	рецептор 3 фактора роста фибробластов (ахондроплазия, танатофорный дварфизм)	протеинкиназа (НТК)
РСРРВ1	53834	рецептор-подобный 1 фактор роста фибробластов; ЕСЕКЫ	протеинкиназа (НТК)
РЗР	2268	гомолог онкогена вируса саркомы кошек Гарднера-Рашида (ч-£дг)	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
РВЛ098 6	55277	гипотетический белок ЕЬЛ0986; ЕЬЛ0986	углевод-киназа
Е1Л23356	84197	гипотетический белок ЕЬЛ3356	протеинкиназа
Р1Л25006	124923	гипотетический белок ЕЬЛ5006	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
Е1Л40852	285962	гипотетический белок ЕЬЛ0852	протеинкиназа
Ρ1ΤΤ1	2321	£тз-связанная тирозинкиназа 1 (рецептор васкулярного эндотелиального фактора роста/фактора проницаемости сосудов)	протеинкиназа (НТК)
РЬТЗ	2322	£тз-связанная тирозинкиназа 3	протеинкиназа (НТК)
РЬТ4	2324	£тз-связанная тирозинкиназа 4	протеинкиназа (НТК)
ΡΝ3Κ	64122	фруктозамин-3-киназа	родственная киназе
ΡΝ3ΚΚΡ	79672	фруктозамин-3-киназа-связанный белок	родственный киназе
РРК	2444	£уп-связанная киназа	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
рик	197258	фукокиназа	родственная киназе

- 27 030276

ΕΧΝ	2395	фратаксин; ΓΧΝ	родственный киназе
ΕΥΝ	2534	ΓΥΝ онкоген, связанный с ЗКС, ГСК, ΥΕ3	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
2ΑΕΚ1	2584	галактокиназа 1	углевод-киназа
2ΑΕΚ2	2585	галактокиназа 2	углевод-киназа
еск	2645	глюкокиназа (гексокиназа 4, юношеский диабет с началом в зрелом возрасте типа 2)	углевод-киназа
зк	2710	глицерокиназа	углевод-киназа
ек2	2712	глицерокиназа 2	углевод-киназа
зк5	256356	гипотетический белок МСС40579; МСС40579	углевод-киназа
зьустк	132158	глицераткиназа	углевод-киназа
3ΝΕ	10020	глюкозамин(υϋΡ-Ν-ацетил)-2-эпимераза/Ы-ацетилманнозаминкиназа	углевод-киназа
зпкб	2870	сопряженная с С-белком рецепторная киназа 6	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
екк7	131890	сопряженная с С-белком рецепторная киназа 7	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
3532	83903	каспин	протеинкиназа (КЗ/ТК)
25КЗА	2931	гликогенсинтазакиназа 3 альфа	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
2ТР2Н1	2965	общий фактор транскрипции ΙΙΗ, полипептид 1, 62 кДа; СТЕ2Н1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
зик!	2987	гуанилаткиназа 1	нуклеотидкиназа
ИСК	3055	гемопоэтическая клеточная киназа	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
ΗΙΡΚ1	204851	протеинкиназа 1, взаимодействующая с гомеодоменом	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΗΙΡΚ2	28996	протеинкиназа 2, взаимодействующая с гомеодоменом	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΗΙΡΚ3	10114	протеинкиназа 3, взаимодействующая с гомеодоменом	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΗΙΡΚ4	147746	протеинкиназа 4, взаимодействующая с гомеодоменом	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
НК1	3098	гексокиназа 1	углевод-киназа
НК2	3099	гексокиназа 2	углевод-киназа
НКЗ	3101	гексокиназа 3 (лейкоциты)	углевод-киназа
НКРС1	80201	домен-содержащая гексокиназа 1; НКЙС1	углевод-киназа
Н5РВ8	26353	белок 8 теплового шока 22 кДа	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
Ι2Ρ1Ρ	3480	рецептор инсулиноподобного фактора роста 1	протеинкиназа (КТК)
ΙΗΡΚ1	9807	инозитолгексафосфаткиназа 1	родственная киназе
ΙΗΡΚ2	51447	инозитолгексафосфаткиназа 2	липидкиназа
ΙΗΡΚ3	117283	инозитолгексафосфаткиназа 3	липидкиназа
ΙΚΒΚΕ	9641	киназа эпсилон, ингибитор энхансера гена полипептида легкой цепи каппа в В-клетках	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΙΒΚ	3611	интегрин-связанная киназа	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΙΝ5ΡΡ	3645	рецептор, связанный с инсулиновым рецептором	протеинкиназа (КТК)
ΙΡΜΚ	253430	инозитол-полифосфат-муль тикиназа	липидкиназа
ΙΡΡΚ	64768	инозитол 1,3,4,5,6-пентакисфосфат-2-киназа; ΙΡΡΚ	липидкиназа
ΙΡΑΚ2	3656	киназа 2, ассоциированная с рецептором интерлейкина-1	протеинкиназа (КЗ/ТК)

- 28 030276

ΙΡΑΚ3	11213	киназа 3, ассоциированная с рецептором интерлейкина-1	протеинкиназа (КЗ/ТК)
ΙΡΑΚ4	51135	киназа 4, ассоциированная с рецептором интерлейкина-1	протеинкиназа (КЗ/ТК)
ΙΤΟΒ1ΒΡ3	27231	белок 3, связывающийся с интегрином бета 1; 1ТСВ1ВРЗ	родственный киназе
ΙΤΚ	3702	1Ь-2-индуцибельная Т-клеточная киназа	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
ΙΤΡΚΒ	3707	инозитол 1,4,5-трифосфат-З-киназа В	родственная киназе
σΑκι	3716	Янус-киназа 1 (протеинтирозинкиназа)	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
σΑΚ2	3717	Янус-киназа 2 (протеинтирозинкиназа)	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
σΑΚ3	3718	Янус-киназа 3 (протеинтирозинкиназа, лейкоциты)	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
ΚΟΡ	3791	рецептор, содержащий инсертный домен киназы (рецепторная тирозинкиназа типа III)	протеинкиназа (КТК)
ΚΗΚ	3795	кетогексокиназа (фруктокиназа)	углевод-киназа
ΚΙΑΑ0999	23387	белок ΚΙΑΑ0999	протеинкиназа (КЗ/ТК)
ΚΙΑΑ2002	79834	белок ΚΙΑΑ2002	протеинкиназа (КЗ/ТК)
Κ3Ρ	8844	киназный супрессор газ	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
Κ3Ρ2	283455	киназный супрессор Каз-2	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΒΑΤ 31	9113	гомолог 1 большого опухолевого супрессора, ЬАТЗ, (ОгозорШа)	протеинкиназа (ΝΚ.3/ΤΚ)
ΒΑΤ 5 2	26524	гомолог 2 большого опухолевого супрессора, ЬАТЗ, (ОгозорЬИа)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ВСК	3932	лимфоцит-специфическая протеинтирозинкиназа	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
ΒΙΜΚ1	3984	киназа 1, содержащая ЫМ-домен	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

ΒΙΜΚ2	3985	киназа 2, содержащая ЫМ-домен	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ВМТК2	22853	тирозинкиназа 2 1етиг	протеинкиназа (КТК)
ВОС220686	220686	гипотетический белок ЙОС220686; ЬОС220686	родственный киназе
ВОС340156	340156	гипотетический белок ЬОС340156	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ВОС340371	340371	гипотетический белок ЬОС340371	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ВОС375133	375133	аналогичная фосфатидилинозитол-4-киназе альфа	липидкиназа
ВОС388957	388957	аналогичная ВМР2 индуцибельной киназе	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ВОС389599	389599	аналогичная хромосомной области при амиотрофическом латеральном склерозе 2 (ювенильном), кандидат 2; 1ЬР-взаимодействующий белок 1ЬР1РА	протеинкиназа
ВОС390877	390877	аналогичная аденилаткиназе (ЕС 2.7.4.3), цитозольной - обычный карп	нуклеотидкиназа
ВОС442075	442075	аналогичная серин/треониновой киназе, устанавливает полярность эмбриона	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ВОС54ЮЗ	54103	гипотетический белок ЬОС54ЮЗ; ЬОС54103	протеинкиназа (КТК)
ВОС646505	646505	аналогичная протеинкиназе СЬКЗ с двойной специфичностью (СЬСподобная киназа 3); неклассифицированная	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ВОС64727 9	647279	аналогичная киназе 3, регулирующей МАР/аффинность микротубул; неклассифицированная	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ВОС648152	648152	аналогичная белку, связанному с атаксией-телеангиэктазией и КабЗ; неклассифицированная	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ВОС649288	649288	аналогичная митохондриальной аденилаткиназе изоферменту 4; (аденилаткиназа 3-подобная 1)	нуклеотидкиназа

- 29 030276

РОС650122	650122	аналогичная РТК2 холинкиназе альфа изоформе а; неклассифицированная	родственная киназе
РОС652722	652722	аналогичная РТК2 протеинтирозинкиназе 2 изоформе а; неклассифицированная	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
РОС652 7 99	652799	аналогичная предшественнику рецептора фактора роста тучных/стволовых клеток (5СГЕ) (с-кИз) (антиген СР 117); неклассифицированная	протеинкиназа (НТК)
РОС653052	653052	аналогичная протеинкиназе 2, взаимодействующей с гомеодоменом (ЪН1Рк2); неклассифицированная	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РОС653155	653155	аналогичная гомологу В фактора 4 процессинга пре-мРНК; неклассифицированная	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РОС727 761	727761	аналогичная дезокситимидилаткиназе (тимидилаткиназе); неклассифицированная	нуклеотидкиназа
БОС730000	730000	аналогичная семенники-специфической серинкиназе 6; неклассифицированная	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РОС732306	732306	аналогичная связанной с коровьей оспой киназой 2; неклассифицированная	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РОС91461	91461	гипотетический белок ВС007901	протеинкиназа (ΝκΤΚ)
РОС91807	91807	киназа легких цепей миозина (МЬСК)	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ьреик	136332	гуанилаткиназа с богатыми лейцином повторами, домен-содержащая; ьксик	нуклеотидкиназа
ЬРРРРС	10128	протеинкиназа, богатая лейцином, содержащая РРК-мотив; ЬКРРКС	протеинкиназа (К5/ТК)
БРРК2	120892	киназа 2 с богатыми лейцином повторами	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ΡΥΚ5	92335	протеинкиназа ЬУК5	протеинкиназа
ΡΥΝ	4067	гомолог, связанный с онкогеном вируса саркомы Ямагучи ч-уез-1	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
МАЗИ	9223	ассоциированная с мембраной гуанилаткиназа 1, содержащай домены и ΡϋΖ; МАС11	нуклеотидкиназа
МАК	4117	киназа, ассоциированная с мужскими половыми клетками	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАР2К1	5604	митоген-активированная протеинкиназа киназы 1	протеинкиназа
МАР2К1ΙΡ1	8649	белок 1, взаимодействующий с митоген-активированной протеинкиназой киназы 1	протеинкиназа
МАР2К2	5605	митоген-активированная протеинкиназа киназы 2	протеинкиназа
МАР2К5	5607	митоген-активированная протеинкиназа киназы 5	протеинкиназа
МАР2К6	5608	митоген-активированная протеинкиназа киназы 6	протеинкиназа
МАР2К7	5609	митоген-активированная протеинкиназа киназы 7	протеинкиназа
МАРЗК11	4296	митоген-активированная протеинкиназа киназы 11	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРЗК12	7786	митоген-активированная протеинкиназа киназы 12	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРЗК14	9020	митоген-активированная протеинкиназа киназы 14	протеинкиназа
МАРЗК15	389840	белок ГЬЛ6518	протеинкиназа
МАРЗК2	10746	митоген-активированная протеинкиназа киназа киназы 2	протеинкиназа
МАРЗК5	4217	митоген-активированная протеинкиназа киназа киназы 5	протеинкиназа
МАРЗК6	9064	митоген-активированная протеинкиназа киназа киназы 6	протеинкиназа
МАРЗК7	6885	митоген-активированная протеинкиназа киназа киназы 7	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРЗК8	1326	митоген-активированная протеинкиназа киназа киназы 8	протеинкиназа

- 30 030276

МАР4К1	11184	митоген-активированная протеинкиназа киназа киназа киназы 1	протеинкиназа
МАР4К2	5871	митоген-активированная протеинкиназа киназа киназа киназы 2	протеинкиназа
МАР4КЗ	8491	митоген-активированная протеинкиназа киназа киназа киназы 3	протеинкиназа
МАР4К4	9448	митоген-активированная протеинкиназа киназа киназа киназы 4	протеинкиназа
МАР4К5	11183	митоген-активированная протеинкиназа киназа киназа киназы 5	протеинкиназа
МАРК1	5594	митоген-активированная протеинкиназа 1	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРК10	5602	митоген-активированная протеинкиназа 10	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРК12	6300	митоген-активированная протеинкиназа 12	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРК13	5603	митоген-активированная протеинкиназа 13	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРК14	1432	митоген-активированная протеинкиназа 14	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРК15	225689	регулируемая внеклеточным сигналом киназа 8	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРКЗ	5595	митоген-активированная протеинкиназа 3	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРК4	5596	митоген-активированная протеинкиназа 4	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРК6	5597	митоген-активированная протеинкиназа 6	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ΜΆΡΚ8	5599	митоген-активированная протеинкиназа 8	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРК9	5601	митоген-активированная протеинкиназа 9	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРКАРК2	9261	митоген-активированная протеинкиназа-активированная протеинкиназа 2	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРКАРКЗ	7867	митоген-активированная протеинкиназа-активированная протеинкиназа 3	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРКАРК5	8550	митоген-активированная протеинкиназа-активированная протеинкиназа 5	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРК2	2011	киназа 2, регулирующая аффинность МАР/микротубул	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАРКЗ	4140	киназа 3, регулирующая аффинность МАР/микротубул	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАЗТ1	22983	серин/треониновая киназа 1, ассоциированная с микротубулами	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАЗТ2	23139	серин/треониновая киназа 2, ассоциированная с микротубулами	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАЗТЬ	84930	подобная серин/треониновой киназе, ассоциированной с микротубулами	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МАТ К	4145	ассоциированная с мегакариоцитами тирозинкиназа	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
МЕРТК	10461	с-шег протоонкогенная тирозинкиназа	протеинкиназа (КТК)
МЕТ	4233	теб протоонкоген (рецептор фактора роста гепатоцитов)	протеинкиназа (КТК)
МЗС16169	93627	гипотетический белок МСС16169	протеинкиназа
МСС42105	167359	гипотетический белок МСС42105	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ΜΙΝΚ1	50488	т1ззбареп/Ы1К-связанная киназа	протеинкиназа
ΜΚΝΚ1	8569	серин/треониновая киназа 1, взаимодействующая с МАР-киназой	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ΜΚΝΚ2	2872	серин/треониновая киназа 2, взаимодействующая с МАР-киназой	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
Μ0ΡΝ2	378464	киназа 2, содержащая ΜΟΚΝ-повторы; ΜΟΚΝ2	родственная киназе
МОЗ	4342	гомолог онкогена вируса саркомы мышей Молони ν-тоз	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
МРР1	4354	мембранный белок, пальмитоилированный 1, 55 кДа; МРР1	протеинкиназа
МРР2	4355	мембранный белок, пальмитоилированный 2 (член 2 субсемейства МАСРГК р55); МРР2	нуклеотидкиназа
МРРЗ	4356	мембранный белок, пальмитоилированный 3 (член 3 субсемейства МАСиК р55); МРРЗ	нуклеотидкиназа

- 31 030276

МРР4	58538	мембранный белок, пальмитоилированный 4 (член 4 субсемейства МАСИК р55); МРР4	нуклеотидкиназа
МРР5	64398	мембранный белок, пальмитоилированный 5 (член 5 субсемейства МАСИК р55); МРР5	нуклеотидкиназа
МРР6	51678	мембранный белок, пальмитоилированный 6 (член 6 субсемейства МАСИК р55); МРР6	нуклеотидкиназа
МРР7	143098	мембранный белок, пальмитоилированный 7 (член 7 субсемейства МАСИК р55); МРР7	нуклеотидкиназа
М5Т1Р	4486	рецептор фактора 1, стимулирующего макрофаги (с-теб-связанная тирозинкиназа)	протеинкиназа (НТК)
мизк	4593	рецепторная тирозинкиназа скелетных мышц	протеинкиназа (НТК)
ШК	4598	мевалонаткиназа (мевалоновая ацидурия)	родственная киназе
ΜΥΡΚ2	85366	киназа 2 легких цепей миозина, скелетные мышцы	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
ΜΥ03Β	140469	миозин ΙΙΙΒ	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
ΝΑΌΚ	65220	ΝΑϋ-киназа	родственная киназе
ΝΑΰΚ	55577	Ν-ацетилглюкозаминкиназа	родственная киназе
ΝΕΚ10	152110	ΝΙΜΑ (печег ίη тгбозгз депе а)-родственная киназе 10	протеинкиназа
ΝΕΚ11	79858	ΝΙΜΑ (печег ίη тгбозгз депе а)-родственная киназе 11	протеинкиназа
ΝΕΚ2	4751	ΝΙΜΑ (печег ίη тгбозгз депе а)-родственная киназе 2	протеинкиназа
ΝΕΚ3	4752	ΝΙΜΑ (печег ίη тгбозгз депе а)-родственная киназе 3	протеинкиназа
ΝΕΚ4	6787	ΝΙΜΑ (печег ίη тгбозгз депе а)-родственная киназе 4	протеинкиназа
ΝΕΚ5	341676	ΝΙΜΑ (печег ίη тгбозгз депе а)-родственная киназе 5	протеинкиназа
ΝΕΚ6	10783	ΝΙΜΑ (печег ίη тгбозгз депе а)-родственная киназе 6	протеинкиназа
ΝΕΚ7	140609	ΝΙΜΑ (печег ίη тгбозгз депе а)-родственная киназе 7	протеинкиназа
ΝΕΚ8	284086	ΝΙΜΑ (печег ίη тгбозгз депе а)-родственная киназе 8	протеинкиназа
ΝΕΚ9	91754	ΝΙΜΑ (печег ίη тгбозгз депе а)-родственная киназе 9	протеинкиназа
кими-Р1	64149	протеинкиназа И)ти-К1	протеинкиназа
ΝΒΚ	51701	пето-подобная киназа	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)
ΝΜΕ1	4830	нуклеозид-дифосфаткиназа 1	нуклеотидкиназа
ΝΜΕ1-ΝΜΕ2	654364	белок ΝΜΕ1-ΝΜΕ2; ΝΜΕ1-ΝΜΕ2	нуклеотидкиназа
ΝΜΕ2	4831	НуКлеоЗИд—дИфоофатКИНаЗа 2	НуКлеготИдКИНсйЗсА
ΝΜΕ3	4832	нуклеозид-дифосфаткиназа 3	нуклеотидкиназа
ΝΜΕ4	4833	нуклеозид-дифосфаткиназа 4	нуклеотидкиназа
ΝΜΕ5	8382	белок, экспрессированный в клетках с низким метастатическим потенциалом 5 (нуклеозид-дифосфаткиназа)	нуклеотидкиназа
ΝΜΕ6	10201	белок, экспрессированный в клетках с низким метастатическим потенциалом 6 (нуклеозид-дифосфаткиназа)	нуклеотидкиназа
ΝΜΕ7	29922	белок, экспрессированный в клетках с низким метастатическим потенциалом 7 (нуклеозид-дифосфаткиназа)	нуклеотидкиназа
ΝΡΡ2	4882	рецептор натрийуретического пептида В/гуанилатциклаза В (рецептор атрионатрийуретического пептида В)	протеинкиназа
ΝΡΒΡ	29959	ядерный рецептор связывающего белка	протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)

- 32 030276

ΝΤΡΚ1	4914	нейротрофическая рецепторная тирозинкиназа типа 1	протеинкиназа (НТК)
ΝΤΡΚ2	4915	нейротрофическая рецепторная тирозинкиназа типа 2	протеинкиназа (НТК)
ΝΤΡΚ3	4916	нейротрофическая рецепторная тирозинкиназа типа 3	протеинкиназа (НТК)
ΝϋΑΚ2	81788	вероятный ортолог крысиной 5ЫЕ1/АМР-активированной протеинкиназы	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ΝΌΡ62	23636	нуклеопорин 62 кДа; Ν11Ρ62	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ΝΥΌ-3Ρ25	89882	протеинкиназа ΝΥΏ-5Ρ25	протеинкиназа
0X3 Ρ1	9943	реакционный белок 1 окислительного стресса	протеинкиназа
ΡΑΚΙ	5058	р21/Сбс42/Еас1-активированная киназа 1 (гомолог 5ТЕ20, дрожжи)	протеинкиназа
ΡΑΚ2	5062	р21 (СРКША) -активированная киназа 2	протеинкиназа
ΡΑΚ3	5063	ρ21 (СРКША)-активированная киназа 3	протеинкиназа
ΡΑΚ4	10298	р21 (СРКША) -активированная киназа 4	протеинкиназа
ΡΑΚ6	56924	р21(ΟϋΚΝΙΑ)-активированная киназа 6	протеинкиназа
ΡΑΚ7	57144	р21 (СРКША)-активированная киназа 7	протеинкиназа
ΡΑΝΚ2	80025	пантотенат-киназа 2 (синдром Галлевордена-Шпатца)	родственная киназе
ΡΑΝΚ3	79646	пантотенат-киназа 3	родственная киназе
ΡΑΝΚ4	55229	пантотенат-киназа 4	родственная киназе
ΡΑΡ331	9061	3'-фосфоаденозин-5'-фосфосульфатсинтаза 1; РАР551	родственная киназе
ΡΑΡ332	9060	3'-фосфоаденозин-5'-фосфосульфатсинтаза 2; РАР552	родственная киназе
ΡΒΚ	55872	протеинкиназа, происходящая из Т-ЬАК-клеток	протеинкиназа
РСК2	5106	фосфоенолпируваткарбоксикиназа 2 (митохондриальная)	родственная киназе
РСТК1	5127	протеинкиназа 1 РСТА1КЕ	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
РСТК2	5128	протеинкиназа 2 РСТА1ЕЕ	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
РСТКЗ	5129	протеинкиназа 3 РСТА1ЕЕ	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ΡΌΟΡΚΑ	5156	рецептор фактора роста тромбоцитов, альфа полипептид	протеинкиназа (НТК)
ΡΌΟΡΚΒ	5159	рецептор фактора роста тромбоцитов, бета полипептид	протеинкиназа (НТК)
ΡΌΟΡΚΒ	5157	рецептор-подобный фактор роста тромбоцитов; РЬСЕРЬ	протеинкиназа (НТК)
ΡΰΙΚΙΒ	149420	киназа 1-подобная, взаимодействующая с РЬЫМ1	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ΡΌΚ1	5163	пируватдегидрогеназа-киназа, изофермент 1	протеинкиназа
ΡΒΚ2	5164	пируватдегидрогеназа-киназа, изофермент 2	протеинкиназа
ΡΌΚ3	5165	пируватдегидрогеназа-киназа, изофермент 3	протеинкиназа
ΡΌΚ4	5166	пируватдегидрогеназа-киназа, изофермент 4	протеинкиназа
ΡΌΡΚ1	5170	3-фосфоинозитид-зависимая протеинкиназа-1	протеинкиназа
ΡΰΧΚ	8566	пиридоксаль(пиридоксин, витамин В6)-киназа	родственная киназе
ΡΡΚΡΒ1	5207	6-фосфофрукто-2-киназа/фруктоза-2,6-бифосфатаза 1	углевод-киназа
ΡΡΚΡΒ2	5208	6-фосфофрукто-2-киназа/фруктоза-2,6-бифосфатаза 2	углевод-киназа
ΡΡΚΡΒ3	5209	6-фосфофрукто-2-киназа/фруктоза-2,6-бифосфатаза 3	углевод-киназа
ΡΡΚΒ	5211	фосфофруктокиназа печени	углевод-киназа
ΡΡΚΜ	5213	фосфофруктокиназа, мышцы	углевод-киназа

- 33 030276

РРКР	5214	фосфофруктокиназа тромбоцитов	углевод-киназа
РРТК1	5218	протеинкиназа 1 ΡΕΤΑΙΕΕ	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
РСК1	5230	фосфоглицераткиназа 1	углевод-киназа
РСК2	5232	фосфоглицераткиназа 2	углевод-киназа
РНКА1	5255	фосфорилазкиназа, альфа 1 (мышцы)	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
РНКА2	5256	фосфорилазкиназа, альфа 2 (печень)	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
РНКВ	5257	фосфорилазкиназа, бета	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
РНКС1	5260	фосфорилазкиназа, гамма 1 (мышцы)	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
РНКС2	5261	фосфорилазкиназа, гамма 2 (семенники)	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ΡΙ4Κ2Β	55300	фосфатидилинозитол-4-киназа типа II бета	липидкиназа
ΡΙ4ΚΙΙ	55361	фосфатидилинозитол-4-киназа типа II	липидкиназа
ΡΙ КЗ С 2(3	5288	фосфоинозитид-3-киназа, класс 2, гамма-полипептид	липидкиназа
Р1КЗСЗ	5289	фосфоинозитид-3-киназа, класс 3	липидкиназа
Р1КЗСА	5290	фосфоинозитид-3-киназа, каталитическая, альфа-полипептид	липидкиназа
Р1КЗСВР	5291	фосфоинозитид-3-киназа, каталитическая, бета-полипептид	липидкиназа
Р1КЗСЗ	5294	фосфоинозитид-3-киназа, каталитическая, гамма-полипептид	липидкиназа
ΡΙΚ3Κ1	5295	фосфоинозитид-3-киназа, регуляторная субъединица 1 (р85 альфа)	липидкиназа
ΡΙΚ3Κ3	8503	фосфоинозитид-3-киназа, регуляторная субъединица 3 (р55, гамма)	липидкиназа
ΡΙΚ3Κ4	30849	фосфоинозитид-3-киназа, регуляторная субъединица 4, р150	липидкиназа
ΡΙΚ3Κ5	23533	фосфоинозитид-3-киназа, регуляторная субъединица 5, р101	липидкиназа
Р1К4СА	5297	фосфатидилинозитол-4-киназа, каталитическая, альфа-полипептид	липидкиназа
Р1К4СВ	5298	фосфатидилинозитол-4-киназа, каталитическая, бета-полипептид	липидкиназа
ΡΙΜ1	5292	онкоген ρίπι-Ι	протеинкиназа (Е5/ТК)
ΡΙΜ2	11040	онкоген р1т-2	протеинкиназа (Е5/ТК)
ΡΙΝΚ1	65018	ΡΤΕΝ-индуцированная умозрительная киназа 1	протеинкиназа (Е5/ТК)
ΡΙΡ5Κ1Α	8394	фосфатидилинозитол-4-фосфат-5-киназа, тип I, альфа	липидкиназа
ΡΙΡ5Κ1Β	8395	фосфатидилинозитол-4-фосфат-5-киназа, тип I, бета	липидкиназа
ΡΙΡ5Κ2Α	5305	фосфатидилинозитол-4-фосфат-5-киназа, тип II, альфа	липидкиназа
Р1Р5К2С	79837	фосфатидилинозитол-4-фосфат-5-киназа, тип II, гамма	родственная киназе
ΡΙΡ5Κ3	200576	фосфатидилинозитол-3-фосфат/фосфатидилинозитол-5-киназа, тип III	липидкиназа
ΡΙΡ5ΚΒ1	138429	фосфатидилинозитол-4-фосфат-5-киназа-подобная 1	липидкиназа
РКВК	5313	пируваткиназа, печень и эритроциты	углевод-киназа
РКМ2	5315	пируваткиназа, мышцы	углевод-киназа
ΡΚΜΥΤ1	9088	мембрана-ассоциированная тирозин- и треонин-специфическая сбс2ингибирующая киназа	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
рвли	5328	активатор плазминогена, урокиназа	родственная киназе
РВК1	5347	ро1о-подобная киназа 1 ( РгозорШа)	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
РВК2	10769	ро1о-подобная киназа 2 ( РгозоркИа)	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)

- 34 030276

протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ЕТК)

протеинкиназа (ЕТК)

протеинкиназа (ЕТК)

родственная киназе

протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)

нуклеотидкиназа

протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΕ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)

- 35 030276

РРКС1	5592	протеинкиназа, сСМР-зависимая, тип I	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
РРКС2	5593	протеинкиназа, сСМР-зависимая, тип II	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
РРКК	5610	интерферон-индуцируемая, зависимая от двухцепочечной РНК протеинкиназа	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
РРКХ	5613	Х-сцепленная протеинкиназа	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΡΡΚΥ	5616	Υ-сцепленная протеинкиназа	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
РРРР4В	8899	гомолог В фактора процессинга пре-мРНК РКР4 (дрожжи)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
РРР31	5631	фосфорибозилпирофосфатсинтетаза 1; РКР31	родственная киназе
РРР31В1	221823	фосфорибозилпирофосфатсинтетаза 1-подобная 1; РКР31Ы	родственная киназе
РРР32	5634	фосфорибозилпирофосфатсинтетаза 2; РКР32	родственная киназе
РЗКН1	5681	протеинсериновая киназа Н1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
РТК2	5747	РТК2 протеинтирозиновая киназа 2	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
РТК2В	2185	РТК2В протеинтирозиновая киназа 2 бета	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
РТК6	5753	РТК6 протеинтирозиновая киназа 6	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
РТК7	5754	РТК7 протеинтирозиновая киназа 7	протеинкиназа (КТК)
РТК9	5756	РТК9 протеинтирозиновая киназа 9	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
РХК	54899	серин/треониновая киназа, содержащая домен РХ	родственная киназе
РАР1	5894	гомолог 1 онкогена вируса лейкоза мышей ц-га£-1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
РАСЕ	5891	антиген опухоли почки	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
РВКЗ	64080	рибокиназа	нуклеотидкиназа
РЕТ	5979	протоонкоген ге£ (множественная эндокринная неоплазия и медуллярная карцинома 1 щитовидной железы, болезнь Гиршспрунга)	протеинкиназа (КТК)
РЕК	55312	рибофлавинкиназа	родственная киназе
ΡΙΟΚ1	83732	ΚΙΟ киназа 1 (дрожжевая)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΡΙ0Κ2	55781	ΚΙΟ киназа 2 (дрожжевая)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΡΙ0Κ3	8780	ΚΙΟ киназа 3 (дрожжевая)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΡΙΡΚ1	8737	рецептор(ΤΝΓΚ3Γ)-взаимодействующая серин-треониновая киназа 1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΡΙΡΚ2	8767	рецептор-взаимодействующая серин-треониновая киназа 2	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ΡΙΡΚ5	25778	рецептор-взаимодействующая протеинкиназа 5	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РКНВЗ	84206	протеинкиназа, содержащая «безымянный палец» и домен КН, 3; ККНРЗ	протеинкиназа
Р0Р2	4920	рецепторный тирозинкиназа-подобный орфановый рецептор 2	протеинкиназа (КТК)
РР2	6102	пигментный ретинит 2 (Х-сцепленный рецессивный); КР2	нуклеотидкиназа
РР6-213Н19.1	51765	Мз£3- и 50К1-связанная киназа	протеинкиназа
РР36КА1	6195	киназа рибосомального белка 36, 90 кДа, полипептид 1	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РР36КА2	6196	киназа рибосомального белка 36, 90 кДа, полипептид 2	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ΡΡ36ΚΑ3	6197	киназа рибосомального белка 36, 90 кДа, полипептид 3	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РР36КА4	8986	киназа рибосомального белка 36, 90 кДа, полипептид 4	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РР36КА5	9252	киназа рибосомального белка 36, 90 кДа, полипептид 5	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)

- 36 030276

РР36КА6	27330	киназа рибосомального белка 56, 90 кДа, полипептид 6	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РР36КВ1	6198	киназа рибосомального белка 56, 70 кДа, полипептид 1	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РР36КВ2	6199	киназа рибосомального белка 56, 70 кДа, полипептид 2	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ЕР36КС1	26750	киназа рибосомального белка 56, 52 кДа, полипептид 1	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
РР36КВ1	83694	киназа рибосомального белка 56-подобная 1	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ЗСУВ1	57410	5СУ1-подобная 1 (5. сегечгзгае)	протеинкиназа (ΝΕΤΚ)
ЗСУВ2	55681	гипотетический белок ЕЬЛ0074	протеинкиназа (ΝΕΤΚ)
ЗСУВЗ	57147	эзрин-связывающий партнер РАСЕ-1	протеинкиназа (ΝΕΤΚ)
3ΕΡΗ32	22928	селен-фосфатсинтетаза 2; 5ЕРН52	родственная киназе
зек	6446	сывороточная/регулируемая глюкокортикоидами киназа	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
зек2	10110	сывороточная/регулируемая глюкокортикоидами киназа 2	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
зекз	23678	сывороточная/регулируемая глюкокортикоидами киназа-подобная	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗНЗВР4	23677	5НЗ-домен-связывающий белок 4; 5НЗВР4	протеинкиназа (ΝΕΤΚ)
ЗНЗВР5	9467	5НЗ-домен-связывающий белок 5 (ВТК-ассоциированный); 5НЗВР5	родственный киназе
ЗНЗВР5В	80851	5НЗ-домен-связывающий белок 5-подобный; 5НЗВР5Ь	родственный киназе
ЗВ АМР 6	114836	член 6 семейства 5ΙΑΜ; 5ΙΑΜΕ6	протеинкиназа (НТК)
3ΝΡ1ΒΚ	150094	5ЫЕ1-подобная киназа	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
3ΝΡΚ	54861	5ЫЕ1-связанная киназа	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
3ΝΧ1 6	64089	сортинг нексин 16; 5ΝΧ16	родственный киназе
ЗРНК1	8877	сфингозинкиназа 1	углевод-киназа
ЗРНК2	56848	сфингозинкиназа 2	углевод-киназа
ЗРС	6714	гомолог онкогена вируса саркомы ν-зсг (Шмидта-Руппина А-2) (птичий)	протеинкиназа (ΝΕΤΚ)
ЗРРК1	6732	5ЕК5 протеинкиназа 1	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗРРК2	6733	5ЕК5 протеинкиназа 2	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗРРКЗ	26576	серин/треониновая киназа 23	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗТК11	6794	серин/треониновая киназа 11 (синдром Пейтца-Джигерса)	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗТК16	8576	серин/треониновая киназа 16	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗТК17В	9262	серин/треониновая киназа 17Ь (индуцирующая апоптоз)	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗТК1 9	8859	серин/треониновая киназа 19	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗТК24	8428	серин/треониновая киназа 24 (гомолог 5ТЕ20, дрожжевая)	протеинкиназа
ЗТК25	10494	серин/треониновая киназа 25 (гомолог 5ТЕ20, дрожжевая)	протеинкиназа
ЗТКЗ	6788	серин/треониновая киназа 3 (гомолог 5ТЕ20, дрожжевая)	протеинкиназа
ЗТКЗ2А	202374	серин/треониновая киназа 32А	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗТКЗ2В	55351	серин-треониновая киназа 32В	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗТКЗ2С	282974	серин-треониновая киназа 32С	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗТКЗЗ	65975	серин-треониновая киназа 33	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)
ЗТКЗ 6	27148	серин-треониновая киназа 36 (слитый гомолог, ОгозорДИа)	протеинкиназа (Е5/ТК)
ЗТКЗ 8	11329	серин-треониновая киназа 38	протеинкиназа (ΝΕ5/ΤΚ)

- 37 030276

зткзвв	23012	серин-треониновая киназа 38-подобная	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ЗТК4 0	83931	Зег/Тйг-подобная киназа	протеинкиназа
3ΤΥΚ1	55359	протеинкиназа 3ΤΥΚ1	протеинкиназа (КТК)
ЗУК	6850	тирозинкиназа селезенки	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
ТАОКЗ	51347	ТАО киназа 3	протеинкиназа
ТВК1	29110	ΤΑΝΚ-связывающая киназа 1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ТЕС	7006	протеинтирозиновая киназа бес	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
ТЕЗК1	7016	семенники-специфическая киназа 1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ТЕЗК2	10420	семенники-специфическая киназа 2	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ТСЕВК1	7046	рецептор 1 трансформирующего фактора роста бета (рецептор активина А типа ΙΙ-подобная киназа, 53 кДа)	протеинкиназа (КЗ/ТК)
ТСЕВК2	7048	рецептор II трансформирующего фактора роста бета (70/80 кДа)	протеинкиназа (КЗ/ТК)
ТСЕВКЗ	7049	рецептор III трансформирующего фактора роста бета (бета-гликан 300 кДа); ТСЕВКЗ	протеинкиназа (КЗ/ТК)
ΤΙΕ1	7075	тирозинкиназа с иммуноглобулин-подобным и ЕСЕ-подобным доменами 1	протеинкиназа (КТК)
ТК1	7083	тимидинкиназа 1, растворимая	нуклеотидкиназа
ТВК1	9874	боиз1еб-подобная киназа 1	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ТВК2	11011	боиз1еб-подобная киназа 2	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ΤΝΚ1	8711	тирозинкиназа, нерецепторная, 1	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
ΤΝΝΙ3Κ	51086	взаимодействующая с ΤΝΝΙ3 киназа	протеинкиназа
ТР53КК	112858	ТР53-регулирующая киназа	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ТРК1	27010	тиаминпирофосфокиназа 1	родственная киназе
ТРР	7175	транслоцированная промоторная область (к активированному МЕТ онкогену) ; ТРР.	протеинкиназа (КТК)
ΤΡΙΒ1	10221	бггЬЫез гомолог 1 (РгозорДИа)	протеинкиназа
ΤΡΙΒ2	28951	бггЬЫез гомолог 2 (РгозорДИа)	протеинкиназа
ΤΡΙΒ3	57761	бггЬЫез гомолог 3 (РгозорДИа)	протеинкиназа
ΤΡΙΜ2 7	5987	тройной мотив-содержащая протеинкиназа 27; ΤΚΙΜ27	протеинкиназа (КТК)
ТРРМ7	54822	кратковременный рецепторный потенциальный катионный канал, субсемейство М, член 7	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ТЗЗК1	83942	серин-треониновая киназа 22Ό (ассоциированная со спермиогенезом)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ТЗЗК2	23617	серин-треониновая киназа 22В (ассоциированная со спермиогенезом)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ТЗЗКЗ	81629	серин-треониновая киназа 22С (ассоциированная со спермиогенезом)	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ТЗЗК6	83983	серин-треониновая протеинкиназа 55ТК	протеинкиназа (ΝΚ3/ΤΚ)
ттк	7272	протеинкиназа ТТК	протеинкиназа
ТМЕ2	11344	РТК9Ь протеинтирозиновая киназа 9-подобная (Аб-связанный белок)	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
ТХК	7294	тирозинкиназа ТХК	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
тхквсз	51314	тиоредоксин-домен-содержащая нуклеотидкиназа 3 (сперматозоиды); ΤΧΝϋΟ3	нуклеотидкиназа
ΤΥΚ2	7297	тирозинкиназа 2	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)

- 38 030276

ΤΥΡ03	7301	протеинтирозиновая киназа ΤΥΚΟ3	протеинкиназа (КТК)
искг	7371	уридинцитидинкиназа 2	нуклеотидкиназа
инмк1	127933	киназа 1 с мотивом гомологии и2АГ (ИНМ)	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
иъкг	9706	ипс-51-подобная киназа 2 (С. е1едапз)	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
иькз	25989	белок ϋΚΓΖΡ4346131	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
иьк4	54986	гипотетический белок ГЬЯ20574	протеинкиназа
νκκι	7443	связанная с коровьей оспой киназа 1	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
УКК2	7444	связанная с коровьей оспой киназа 2	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
УККЗ	51231	связанная с коровьей оспой киназа 3	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ШК1	65125	протеинкиназа 1, дефицитная по лизину	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ШК4	65266	протеинкиназа 4, дефицитная по лизину	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ХРСС6ВР1	91419	ХКССб-связывающий белок 1; ХКСС6ВР1	протеинкиназа
ΧΥΒΒ	9942	гомолог ксилулокиназы (Н. 1п£1иепгае)	углевод-киназа
ΥΕ51	7525	гомолог 1 онкогена вируса саркомы Ямагучи ч-уез-1	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)
ΥΞΚ4	80122	гипотетический белок ГЬЯ23074	протеинкиназа
ΖΑΚ	51776	киназа ΑΖΚ, содержащая стерильный альфа—мотив и «лейциновую застежку»	протеинкиназа (ΝΚ5/ΤΚ)
ΖΑΡ70	7535	протеинкиназа 70 кДа, ассоциированная с зета-цепью (ТСК)	протеинкиназа (ΝΚΤΚ)

Таблица 4. Ранжирование средней дифференциальной пролиферации (1 мкМ РЬХ4720/контроль) для 597 ОКЕ киназ относительно МЕК ΌΌ

Ранг	Ген	Среднее значение	Стандартное отклонение	Ζ-балл	Примечания
-	АЬЬ ОКЕЗ	44,26%	7,19%	-
1	МЕК ΌΌ	100,00%	6, 54%	7,75	положительный контроль
2	ΚΑΕΙ	86,80%	18,00%	5,92
3	РККСЕ	74,76%	8,78%	4,24
4	МАРЗК8	67,51%	10,03%	3,23
5	РККСН	67,37%	17,56%	3,21
6	ЕСК	65,03%	20,76%	2,89
7	СККЬ	64,74%	19,66%	2,85
8	РАКЗ	60,33%	13,59%	2,23
9	АХЬ	59,75%	10,23%	2,15
10	ЬСК	59,47%	15,66%	2,11	летальный
11	ЕРВВ2	59,32%	9, 39%	2,09	2 ЗБ = 58,64%
12	ΡΚΚΟζ)	55,40%	11,97%	1,55
13	ΝΜΕ3	55,10%	15,46%	1,51
14	МОЗ	55,04%	11,84%	1,50
15	КНК	55,03%	14,75%	1,50
16	ТЬЕ1	54,65%	15,26%	1,44	пролиферативный
17	РККАС2	54,23%	7,15%	1,39
18	ЕОС914 61	53,75%	12,45%	1,32
19	ΤΥΚΟ3	53,64%	10,57%	1,30
20	СВКЗ	53,55%	13,92%	1,29
21	РЬМ2	53,36%	10,78%	1,27
22	СЬВ4	53,31%	12,21%	1,26
23	РРР32	53,24%	14,53%	1,25

- 39 030276

24	РККСВ1	53,12%	7,74%	1,23
25	АСУК1В	53,08%	9, 53%	1,23
26	ΕΤΝΚ2	52,85%	12,63%	1,19
27	ВТ КЗ 6	52,85%	15,28%	1,19
28	ΌΌΡ1	52,78%	15,54%	1,19
29	РККСА	52,47%	13,38%	1,14
30	ΑϋΡΚΒ	52,22%	11,80%	1,11
31	САМК4	52,14%	9, 09%	1,10
32	ВАРК1	51,94%	11,43%	1,07
33	Аиккс	51,89%	11,23%	1,0 6	пролиферативный
34	1СР1К	51,35%	10,70%	0,99
35	ΕΝ3Κ	51,27%	12,65%	0,97
36	ЕОС646505	50,97%	16,89%	0,93
37	Р1КЗСВ	50,90%	12,87%	0,92
38	ΥΕ31	50,68%	9, 51%	0,89
39	ЕОС340156	50,59%	14,63%	0,88
40	МАР4К5	50,57%	35,45%	0,88
41	АВЕ1	50,55%	19,09%	0,87
42	ΜΑΡ2Κ1ΙΡ1	50,47%	11,54%	0,86
43	РРКАР1В	50,34%	8,31%	0,84
44	КР36КА1	50,12%	12,28%	0,81
45	ТЗЗК6	50,10%	11,70%	0,81
46	ΝΕΚ9	50,04%	14,37%	0,80
47	ΌΡΟΙ	49,98%	12,07%	0,80
48	РТК6	49,93%	10,93%	0,79
49	ЗСУЕ2	49,85%	12,51%	0,78
50	ВТК 11	49,82%	12,10%	0,77
51	С9ог£98	49,82%	10,38%	0,77
52	РСК2	49,77%	12,93%	0,77

- 40 030276

53	ΝΤΡΚ2	49,77%	10,02%	0,77
54	ΤΡΙΜ2 7	49,69%	10,38%	0,75
55	ΕΝ3ΚΡΡ	49,69%	11,83%	0,75
56	САМК2И	49,61%	11,93%	0,74
57	АВРК2	49,56%	10,41%	0,74
58	ВОС652722	49,52%	13,10%	0,73
59	ВАТ32	49,49%	12,45%	0,73
60	ЗТКЗ	49,48%	10,15%	0,73
61	СВС42ВРС	49,44%	10,19%	0,72
62	НКВС1	49,44%	11,53%	0,72
63	СВК7	49,42%	14,45%	0,72	пролиферативный
64	ШК4	49,37%	14,07%	0,71
65	РРРЕ4В	49,36%	12,18%	0,71
66	МАРКАРК2	49,30%	12,83%	0,70
67	МЕК Ш	49,29%	14,33%	0,70	отрицательный контроль
68	РРР31	49,28%	12,09%	0,70
69	ВТК	49,22%	14,59%	0,69
70	ΜΥΟ3Β	49,19%	11,05%	0,69
71	ТЕЗК1	49,18%	12,19%	0,68
72	ΡΒΧΝΑ3	49,11%	9, 04%	0,67
73	СВК2	49,09%	8,01%	0,67
74	РРКРВ1	49,02%	14,04%	0,66
75	ΏΑΚ	49,00%	12,68%	0,66
76	ΙΤΡΚΒ	48,99%	16,62%	0,66
77	СНЕК1	48,98%	14,41%	0,66
78	МЕРТК	48,94%	12,88%	0,65
79	ΙΚΒΚΕ	48,83%	12,46%	0,63
80	САРВ11	48,83%	15,02%	0,63

- 41 030276

81	ΡΑΝΚ3	48,78%	9, 70%	0,63
82	ТКРВ2	48,76%	10,71%	0,63
83	СИС7	48,74%	9, 83%	0,62
84	Р1КЗСЗ	48,69%	12,05%	0,62
85	рреик	48,60%	11,29%	0,60
86	ЗСУРЗ	48,58%	10,86%	0,60
87	МАРЗК14	48,57%	8,10%	0,60
88	РОС730000	48,57%	13,36%	0,60
89	РОС442075	48,55%	10,75%	0,60
90	РОС54ЮЗ	48,50%	10,77%	0,5 9
91	ΝΡΚ2	48,49%	13,29%	0,59
92	СОР 4АЗВР	48,49%	11,10%	0,59
93	ΜΥΡΚ2	48,49%	11,83%	0,59
94	03ΝΚ2Β	48,48%	11,52%	0,59
95	САРКР	48,47%	9, 19%	0,58
96	ТР53РК	48,44%	14,25%	0,58	пролиферативный
97	ррксе	48,42%	8,31%	0,58
98	АРК	48,39%	14,07%	0,57
99	ΕΤΝΚ1	48,37%	11,25%	0,57
100	ΒΥΡΚ2	48,36%	11,80%	0,57
101	ΌΟΚΑ	48,31%	10,71%	0,56
102	ΑΌΡΟΚ	48,30%	13,36%	0,56
103	РККАВ2	48,29%	10,75%	0,56
104	ϋΡΚ3	48,28%	11,18%	0,56
105	ΚΙΑΑ2ΟΟ2	48,28%	12,39%	0,56
106	РРАКЗ	48,26%	10,96%	0,56
107	ΤΥΚ2	48,24%	10,88%	0,55
108	МАР2К7	48,23%	12,06%	0,55
109	ΝΚΒΡ	48,18%	13,40%	0,54

- 42 030276

110	СИК2	48,14%	14,65%	0,54
111	ΜΟΡΝ2	47,98%	11,36%	0,52
112	ЕРНВ4	47,92%	12,52%	0,51
113	ррксг	47,88%	12,68%	0,50
114	РЕК	47,85%	10,44%	0,50
115	РАСЕ	47,83%	10,46%	0,50
116	ЕОС91807	47,80%	11,25%	0,49
117	Р1КЗСС	47,76%	11,25%	0,49
118	Р1КЗС2С	47,74%	10,75%	0,48
119	арзс	47,71%	10,26%	0,48
120	СВЕШАН	47,66%	10,26%	0,47
121	АЕ32СР7	47,65%	11,56%	0,47
122	ΕΙΗ40852	47,62%	12,34%	0,47
123	ЕОС390877	47,61%	11,43%	0,46
124	ΤΡΙΒ1	47,59%	12,91%	0,46
125	ТРР	47,58%	13,00%	0,46
126	РР36КЕ1	47,57%	12,33%	0,46
127	ССРК	47,56%	10,28%	0,46
128	ΡΏΡΚ1	47,53%	10,42%	0,45
129	ΕΑ3ΤΚΏ5	47,52%	10,70%	0,45
130	СРКВЗ	47,49%	13,14%	0,45
131	ΏΤΥΜΚ	47,49%	10,60%	0,45
132	МРРЗ	47,47%	10,65%	0,45
133	НЗРВ8	47,46%	11,73%	0,44
134	ΝΜΕ6	47,44%	14,48%	0,44
135	ΝΕΚ3	47,42%	15,46%	0,44
136	ΡΙΚ3Ρ4	47,41%	11,14%	0,44
137	МСС16169	47,41%	13,90%	0,44
138	0ХЗР1	47,40%	11,68%	0,44

- 43 030276

139	МАЗ ТЕ	47,35%	10,28%	0,43
140	РЫСК	47,35%	10,15%	0,43
141	АВСК2	47,32%	15,57%	0,43
142	3ΝΧ16	47,26%	12,76%	0,42
143	ИСК	47,24%	23,41%	0,41
144	СВКВ2	47,21%	10,60%	0,41
145	ΝΕΚ11	47,20%	14,68%	0,41
146	ВМР2К	47,15%	11,18%	0,40
147	вив!	47,15%	11,76%	0,40
148	ΡΙΝΚ1	47,13%	11,38%	0,4 0
149	РВКЗ	47,08%	8,73%	0,39
150	ВОС732306	47,03%	8, 82%	0,39
151	РКВК	47,03%	12,10%	0,38
152	ΏΥΚΚ1Α	47,01%	12,69%	0,38
153	КР36КА4	47,01%	11,70%	0,38
154	веке	46,94%	12,71%	0,37
155	3ΌΚ5Κ1	46,93%	9, 40%	0,37
156	ЕВЕ25ОО6	46,87%	11,64%	0,36
157	РВК	46,86%	14,05%	0,36
158	АСУК1С	46,82%	9, 98%	0,35
159	ЕВТ1	46,78%	10,42%	0,35
160	ΡΒΧΝΑ4Β	46,76%	9, 39%	0,35
161	МУК	46,71%	9,26%	0,34
162	ΒΙΜΚ2	46,70%	11,29%	0,34
163	ΒΥΚΚ1Β	46,68%	20,75%	0,34
164	МАККЗ	46,67%	11,71%	0,34	пролиферативный
165	ВМРК1В	46,66%	12,24%	0,33
166	ΝϋΡ62	46,63%	9, 92%	0,33
167	σΑΚ2	46,62%	12,50%	0,33

44

030276

168	МАРК12	46,55%	9, 98%	0,32
169	ВВР2	46,54%	7, 99%	0,32
170	МАК	46,52%	15,42%	0,31
171	СВУСТК	46,50%	13,19%	0,31
172	АК1	46,47%	9, 68%	0,31
173	МАРК15	46,47%	11,14%	0,31
174	МАЗТ1	46,45%	10,77%	0,30
175	РАР332	46,39%	11,53%	0,30
176	СЗЕ1К	46,34%	12,86%	0,29
177	ТРК1	46,29%	9, 52%	0,28
178	РАК4	46,24%	9, 98%	0,28
179	ΝΑ3Κ	46,21%	12,34%	0,27
180	СИК8	46,20%	7, 68%	0,27
181	ЗТК40	46,19%	12,92%	0,27
182	С1В1	46,10%	10,92%	0,26
183	РВК1	46,08%	9, 99%	0,25
184	ΡΡσ23356	46,04%	10,45%	0,25
185	ВОС220 68 6	46,04%	9, 31%	0,25
186	РРКАВ1	46,03%	12,00%	0,25
187	ДАКЗ	46,02%	10,17%	0,24
188	ΝΜΕ1	46,02%	13,01%	0,24
189	ΝΜΕ5	46,00%	11,53%	0,24
190	ЕЕР	45,97%	9, 92%	0,24
191	АКЗВ1	45,97%	10,39%	0,24
192	РРКС2	45,90%	13,24%	0,23
193	РР6213Н19.1	45,88%	12,83%	0,22
194	АКТЗ	45,87%	11,32%	0,22
195	РЗКН1	45,86%	10,16%	0,22

45

030276

196	РККАК2В	45,84%	13,05%	0,22
197	рик	45,81%	10,94%	0,22
198	АВСК4	45,79%	11,25%	0,21
199	ТЕС	45,78%	11,46%	0,21
200	РККАС1	45,77%	11,08%	0,21
201	ΕΧΝ	45,77%	12,03%	0,21
202	ААК1	45,68%	11,49%	0,20
203	САМК2В	45,67%	19,84%	0,20
204	С0А5У	45,64%	11,07%	0,19
205	РРКАСЗ	45,63%	10,21%	0,19
206	ΝΜΕ7	45,58%	10,18%	0,18
207	ВМТК2	45,58%	12,15%	0,18
208	ΡΑΝΚ2	45,57%	11,72%	0,18
209	РРКВЗ	45,47%	13,14%	0,17
210	РНКА2	45,47%	10,92%	0,17
211	5 РАМЕ 6	45,46%	9, 67%	0,17
212	5КРК1	45,46%	12,54%	0,17
213	ΗΙΡΚ1	45,42%	12,59%	0,16
214	ЕРНА1	45,39%	10,59%	0,16
215	ШК1	45,38%	13,79%	0,15
216	ΡΏΙΚΙΒ	45,33%	12,31%	0,15
217	ВМР2КВ	45,33%	10,08%	0,15
218	МАРЗК5	45,32%	14,13%	0,15
219	ЕРНА2	45,30%	12,87%	0,14
220	ССВ2	45,29%	9, 71%	0,14
221	ΒΌΚΒΙ	45,25%	10,13%	0,14
222	ΝΕΜυ-ΡΙ	45,23%	8,13%	0,13
223	ВОС652799	45,18%	10,30%	0,13
224	еик!	45,15%	12,23%	0,12

- 46 030276

225	ΝΜΕ4	45,12%	13,03%	0,12
226	Υ3Κ4	45,11%	13,47%	0,12
227	ΝΕΚ2	45,11%	9, 38%	0,12
228	С9ог£95	45,10%	9, 38%	0,12
229	СЕ С 2	45,05%	11,95%	0,11
230	ЕСЕК2	45,01%	11,23%	0,10
231	ΙΡΜΚ	44,98%	10,67%	0,10
232	ЗТК32С	44,98%	12,10%	0,10
233	ΡΙΡ5Κ2Α	44,92%	14,55%	0,09
234	РРКХ	44,90%	10,44%	0,0 9
235	ТКРМ7	44,80%	10,36%	0,07
236	ЕЕЛ098 6	44,74%	10,95%	0,07
237	3ΝΕ1ΒΚ	44,74%	12,70%	0,07
238	МАР3Кб	44,71%	9, 75%	0,06
239	ЕСС653052	44,70%	14,56%	0,06
240	ΙΡΑΚ2	44,69%	11,61%	0,06
241	ΧΥΕΒ	44,68%	11,47%	0,06
242	РТК7	44,67%	14,55%	0,06
243	ΡΚΜΥΤ1	44,66%	13,74%	0,05
244	ЗРНК2	44,63%	10,35%	0,05
245	ΝΜΕ2	44,63%	11,57%	0,05
246	РККАА1	44,62%	15,03%	0,05
247	МАРК14	44,60%	10,77%	0,05
248	ΝΤΚΚ3	44,58%	13,43%	0,04
249	РККАСВ	44,58%	9, 30%	0,04
250	ВОС650122	44,56%	11,24%	0,04
251	СЕК6	44,51%	10,74%	0, 03
252	АМНР2	44,48%	11,11%	0,03
253	ΙΡΡΚ	44,42%	10,63%	0,02

- 47 030276

254	АК7	44,41%	10,36%	0,02
255	ΡΙΡ5ΚΒ1	44,36%	11,74%	0,01
256	ВОС340371	44,30%	16,04%	0,01
257	ΒΚΕΖρ434Β 1231	44,29%	12,21%	0,00
258	ΡΡΚΑΑ2	44,28%	11,42%	0,00
259	ΕΑΒΤΚΏΙ	44,28%	10,73%	0,00
260	АКАЕ	44,27%	14,40%	0,00	семейство КАР
261	НКЗ	44,26%	14,83%	0,00
262	КЗР2	44,25%	10,28%	0,00
263	РАК7	44,24%	18,45%	0,00
264	СТЕ2Н1	44,23%	10,90%	0,00
265	РР36КВ2	44,23%	9, 32%	-0,01
266	РАК6	44,21%	13,83%	-0,01
267	ΙΡΑΚ4	44,18%	10,27%	-0,01
268	ΝΡΚ	44,18%	12,92%	-0,01
269	ΕΥΝ	44,14%	12,43%	-0,02
270	ΒΜΡΚ2	44,14%	12,20%	-0,02
271	СВК4	44,13%	10,47%	-0,02
272	3ΤΚ32Α	44,07%	13,93%	-0,03
273	ΤΝΚ1	44,06%	10,80%	-0,03
274	3ΤΚ24	43,99%	10,79%	-0,04
275	ϋ3ΝΚ2Α1	43,99%	11,97%	-0,04
276	ΑΚ3	43,98%	11,16%	-0,04
277	ΤΤΚ	43,93%	10,47%	-0,05
278	РСК2	43,91%	13,31%	-0,05
279	САВК1	43,89%	10,14%	-0,05
280	ΌΥΡΚ3	43,89%	9, 32%	-0,05
281	ΕΙΕ2ΑΚ4	43,83%	11,00%	-0,06

- 48 030276

282	РВК1	43,79%	13,31%	-0,07
283	ΕΙΕ2ΑΚ1	43,79%	12,02%	-0,07
284	РККАСС	43,79%	11,37%	-0,07
285	ΒϋΒΙΒ	43,74%	10,69%	-0,07
286	РКМ2	43,74%	14,46%	-0,07
287	ВРРРРС	43,64%	10,87%	-0,09
288	ЕРНА6	43,63%	12,60%	-0,09
289	НК2	43,58%	12,55%	-0,10
290	МЕТ	43,55%	10,99%	-0,10
291	СК32	43,53%	7,83%	-0,10
292	ВОС375133	43,53%	10,05%	-0,10
293	ΒΙΜΚ1	43,52%	12,43%	-0,10
294	Т71Е2	43,50%	11,71%	-0,11
295	РСТК2	43,47%	12,02%	-0,11
296	В САКВ	43,43%	11,61%	-0,12
297	ΡΒΧΝΒ2	43,41%	11,85%	-0,12
298	МЗТ1Р	43,35%	11,99%	-0,13
299	РККАК1А	43,35%	9, 03%	-0,13
300	3ΕΡΗ32	43,32%	9, 68%	-0,13
301	ЗРНК1	43,31%	9, 87%	-0,13
302	ССР 4	43,30%	11,83%	-0,13
303	ΚΙΑΑ0999	43,28%	9, 68%	-0,14
304	РВСЕКВ	43,23%	11,93%	-0,14
305	ВРЗК1	43,21%	14,17%	-0,15
306	ВРАЕ	43,21%	12,56%	-0,15	семейство КАР
307	мизк	43,20%	11,03%	-0,15
308	ΤΝΝΙ3Κ	43,20%	10,46%	-0,15
309	екг	43,18%	15,15%	-0,15
310	СКВ	43,14%	9, 45%	-0,16

- 49 030276

311	Ώ6ΚΒ	43,12%	11,62%	-0,16
312	ВОС648152	42,99%	11,15%	-0,18
313	РР36КА5	42,87%	11,23%	-0,19
314	САЗК	42,87%	12,05%	-0,19
315	РНКА1	42,86%	10,10%	-0,20
316	АК2	42,84%	9, 83%	-0,20
317	ΡΙΜ1	42,81%	14,09%	-0,20
318	ΖΑΡ7Ο	42,81%	12,10%	-0,20
319	ΡΝΚΡ	42,79%	12,95%	-0,20
320	сркю	42,78%	9, 77%	-0,21
321	СНЕК2	42,77%	12,86%	-0,21
322	САМК2А	42,72%	11,68%	-0,21
323	САМК2С	42,70%	9, 66%	-0,22
324	ΑΒΡΒΚ2	42,70%	12,56%	-0,22
325	ΝΕΚ8	42,69%	9, 88%	-0,22
326	ΡΡΚΡ	42,69%	10,65%	-0,22
327	СНКА	42,66%	12,84%	-0,22
328	АСУРВ1	42,65%	10,85%	-0,22
329	ΡΡΚΥ	42,63%	11,80%	-0,23
330	ΤΡΙΒ3	42,62%	11,45%	-0,23
331	ΡΡΚΒ2	42,59%	10,48%	-0,23
332	ΡΙΡ5Κ3	42,57%	9, 78%	-0,24
333	ВОС727761	42,56%	14,17%	-0,24
334	ΡΤΚ2Β	42,50%	15,72%	-0,25
335	ΜΡΡ2	42,48%	10,73%	-0,25
336	СЗЫК1А1	42,47%	13,54%	-0,25
337	ΡΤΚ9	42,42%	11,31%	-0,26
338	3ΤΚ25	42,41%	12,54%	-0,26
339	РЕКЕ	42,39%	12,01%	-0,26

- 50 030276

340	ЗТК19	42,35%	11,20%	-0,27
341	ΡΙ4ΚΙΙ	42,30%	14,04%	-0,27
342	НК1	42,26%	12,73%	-0,28
343	ликкл	42,21%	14,80%	-0,29
344	СК5	42,21%	10,98%	-0,29
345	МАРЗК7	42,20%	13,13%	-0,29
346	РРТК1	42,18%	12,49%	-0,29
347	ΕΚΝ1	42,17%	13,74%	-0,29
348	ЗТКЗЗ	42,17%	13,22%	-0,29
349	ЗУК	42,13%	12,42%	-0,30
350	САВК2	42,13%	11,34%	-0,30
351	ТЗЗК1	42,12%	11,98%	-0,30
352	МАРК6	42,11%	10,58%	-0,30
353	Α33ΙΖ	42,07%	10,61%	-0,30
354	РРКР	42,07%	14,99%	-0,31
355	РХК	42,05%	14,69%	-0,31
356	ΡΙ4Κ2Β	42,05%	11,84%	-0,31
357	Р1Р5К2С	42,02%	9, 50%	-0,31
358	РРКРВЗ	42,00%	12,79%	-0,31
359	ТЗЗКЗ	41,97%	14,82%	-0,32
360	МРР6	41,97%	12,68%	-0,32
361	МРР4	41,87%	12,27%	-0,33
362	ВОС653155	41,85%	11,50%	-0,34
363	АВРК1	41,82%	12,37%	-0,34
364	3ΌΚ9	41,76%	10,32%	-0,35
365	ΡΌΚ3	41,66%	10,87%	-0,36
366	СКМТ2	41,66%	12,57%	-0,36
367	САМК1С	41,63%	12,06%	-0,37
368	МАРКАРКЗ	41,61%	13,19%	-0,37

- 51 030276

369	Р1К4СВ	41,55%	14,29%	-0,38
370	РКР31В1	41,54%	11,08%	-0,38
371	РАЗТК	41,49%	12,56%	-0,39
372	САМКШ	41,49%	11,54%	-0,39
373	МАР.К2	41,48%	14,28%	-0,39
374	ΡΏΚ4	41,43%	13,43%	-0,39
375	ΝΕΚ7	41,36%	9, 57%	-0,40
376	МАРК4	41,34%	10,83%	-0,41
377	Р1К4СА	41,32%	11,99%	-0,41
378	σΑΚΙ	41,31%	11,56%	-0,41
379	ΡΏΧΚ	41,30%	11,93%	-0,41
380	ТСРВР2	41,25%	15,85%	-0,42
381	РНКВ	41,25%	10,81%	-0,42
382	ивкг	41,24%	15,35%	-0,42
383	ΜΚΝΚ1	41,21%	13,08%	-0,42
384	СВС2В6	41,17%	10,91%	-0,43
385	СЗЫК1СЗ	41,13%	10,53%	-0,44
386	САМК1	41,08%	11,68%	-0,44
387	Β3ΚΖ	41,07%	12,69%	-0,44
388	зек	40,91%	11,92%	-0,47
389	ТВК1	40,83%	14,81%	-0,48
390	ΙΒΚ	40,81%	12,62%	-0,48
391	3ΤΚ32Β	40,80%	11,79%	-0,48
392	ΤΧΝΌ33	40,78%	12,24%	-0,48
393	КР36КВ1	40,72%	10,13%	-0,49
394	ΖΑΚ	40,71%	10,32%	-0,49
395	ΒΥΚΚ4	40,66%	12,59%	-0,50
396	1ТСВ1ВРЗ	40,57%	11,99%	-0,51
397	МРР1	40,53%	10,94%	-0,52

- 52 030276

398	ΗΙΡΚ2	40,49%	11,06%	-0,52
399	МАРК13	40,46%	12,06%	-0,53
400	ТК1	40,39%	11,04%	-0,54
401	ЗНЗВР4	40,36%	12,11%	-0,54
402	СКМ	40,29%	12,70%	-0,55
403	ЕСЕРВ1	40,23%	16,94%	-0,56
404	МАРК10	40,23%	12,29%	-0,56
405	САВМ2	40,16%	8, 64%	-0,57
406	САЕМЗ	40,12%	11,85%	-0,58
407	3ΤΥΚ1	40,09%	11,47%	-0,58
408	СВКВ4	40,08%	11,01%	-0,58
409	ΝΑΌΚ	40,08%	11,89%	-0,58
410	МРР7	40,06%	11,72%	-0,59
411	САМКУ	40,03%	12,16%	-0,59
412	ЕХСЗС1О	40,02%	12,78%	-0,59
413	С В КВ 5	39,98%	10,10%	-0,60
414	3ΤΚ38	39,90%	9, 61%	-0,61
415	ΙΝ3ΚΚ	39,90%	15,08%	-0,61
416	РСК	39,86%	10,23%	-0,61
417	ТВК2	39,80%	14,66%	-0,62
418	РСТКЗ	39,66%	10,48%	-0,64
419	ВОС388957	39,65%	10,97%	-0,64
420	РАР331	39,59%	13,48%	-0,65
421	АСУР2В	39,56%	14,70%	-0,65
422	ΝΜΕ1-ΝΜΕ2	39,53%	12,01%	-0,66
423	ΝΕΚ1Ο	39,50%	13,78%	-0,66
424	МАРЗК11	39,47%	9, 33%	-0,67
425	РМУК	39,46%	10,19%	-0,67
426	МАРК9	39,45%	12,74%	-0,67

- 53 030276

427	ΜΚΝΚ2	39,39%	13,54%	-0,68
428	СКК7	39,34%	14,98%	-0,68
429	ΚΙΟΚ2	39,27%	11,79%	-0, 69
430	ОСКК	39,27%	9, 02%	-0,69
431	АСУ ΚΙ	39,15%	13,96%	-0,71
432	ТЕК1	39,11%	15,46%	-0,72
433	ΣΑΤ31	39,05%	10,46%	-0,73
434	5 СУК 1	39,01%	11,41%	-0,73
435	ТЕЗК2	38,93%	13,30%	-0,74
436	ΏβϋΟΚ	38,90%	14,54%	-0,7 5
437	РСК1	38,87%	12,26%	-0,75
438	МАС11	38,87%	12,66%	-0,75
439	3ΝΚΚ	38,79%	11,61%	-0,76
440	САКМ1	38,65%	10,26%	-0,78
441	ΚΣΟΚ1	38,58%	12,39%	-0,79
442	ЕЕЕ2К	38,56%	11,96%	-0,79
443	МАРК8	38,45%	10,51%	-0,81
444	33ΝΚ1Ώ	38,44%	15,60%	-0,81
445	ϋΚΚ4	38,42%	12,02%	-0,81
446	3ΤΚ38Σ	38,33%	12,63%	-0,83
447	ΚΙΟΚ3	38,21%	12,80%	-0,84
448	ΜΙΝΚ1	38,00%	14,94%	-0,87
449	КОК2	37,95%	15,32%	-0,88
450	РТК2	37,93%	10,59%	-0,88
451	ΡΙΚ3Κ5	37,84%	13,17%	-0,89
452	ΑΣΏΗ18Α1	37,81%	15,66%	-0,90
453	ΝΥΏ-3Ρ25	37,79%	13,52%	-0,90
454	МАР4КЗ	37,76%	9, 58%	-0,90
455	АСК	37,61%	13,89%	-0,92

- 54 030276

456	СЗКЗА	37,56%	14,44%	-0,93
457	ВМРК1А	37,56%	16,10%	-0,93
458	ЗТК16	37,53%	11,09%	-0,94
459	ΡΑ3ΤΚΏ2	37,50%	8,53%	-0,94
460	МАР4К4	37,39%	15,68%	-0,96
461	ВРР.К2	37,38%	10,11%	-0,96
462	тсрврз	37,33%	11,04%	-0,96
463	РВСЕРВ	37,29%	16,90%	-0,97
464	ввез	37,09%	12,08%	-1,00
465	РРКРВ2	36,99%	10,37%	-1,01
466	АКТ1	36,66%	13,43%	-1,06
467	РККС1	36,54%	11,44%	-1,07
468	ΝΕΚ4	36,50%	13,19%	-1,08
469	РККВ1	36,45%	14,57%	-1,09
470	ЗКРК2	36,37%	12,38%	-1,10
471	ЗНЗВР5	36,37%	17,17%	-1,10
472	СВК1	36,06%	11,13%	-1,14
473	ек	35,86%	17,33%	-1,17
474	ΙΗΡΚ1	35,53%	12,15%	-1,21
475	ΙΗΡΚ3	35,48%	9, 30%	-1,22
476	ΡΒΑϋ	35,36%	13,10%	-1,24
477	ТАОКЗ	35,29%	14,78%	-1,25
478	РАК2	35,20%	12,51%	-1,26
479	вмх	35,12%	12,94%	-1,27
480	ВАРК2	35,01%	13,92%	-1,29
481	СЗЕВК1Е	34,83%	15,21%	-1,31
482	МАРКЗ	34,75%	19,93%	-1,32	летальный
483	МАРЗК15	34,40%	16,76%	-1,37	летальный
484	МРР5	34,35%	11,80%	-1,38

- 55 030276

485	МАЗТ2	34,08%	16,10%	-1,42
486	СКК6	34,04%	15,82%	-1,42
487	ΰΚΡΖρ761Ρ 0423	33,93%	13,58%	-1,44
488	νρκι	33,87%	9,28%	-1,45
489	РСАМКР2	33,77%	11,96%	-1,46
490	ΙΗΡΚ2	33,75%	9,56%	-1,46
491	ΜΑΤ К	33,44%	10,25%	-1,51
492	ΡΡ2	33,20%	13,41%	-1,54
493	ΜΑΡ2Κ2	32,98%	15,34%	-1,57
494	иск2	32,82%	13,75%	-1,59
495	ΝΕΚ6	32,74%	15,85%	-1,60
496	РРКС1	32,52%	14,60%	-1, 63
497	ΜΑΡ3Κ12	32,49%	15,33%	-1,64
498	РСТК1	32,48%	13,21%	-1,64
499	МСС42105	32,36%	13,85%	-1,66
500	МАР2Кб	32,32%	11,92%	-1,66
501	ЗНЗВР5В	32,11%	15,55%	-1,69
502	ЕЕЗ	32,07%	11,04%	-1,70
503	ΚΚΗΏ3	31,89%	12,45%	-1,72
504	РРКАСА	31,76%	18,45%	-1,74	летальный
505	МАР4К1	31,51%	13,69%	-1,77
506	СЗЫК1С1	30,32%	14,90%	-1,94
507	МАРКАРК5	30,15%	13,47%	-1,96
508	СЗК	29,83%	14,11%	-2,01	летальный
509	ΒΡΌ3	29,16%	8,83%	-2,10
510	ΑΌΡΒΚ1	29,00%	16,93%	-2,12
511	ВКЗК2	28,64%	13,09%	-2,17
512	αόεκι	28,30%	13,52%	-2,22

- 56 030276

513	ϋ3ΝΚ1<32	26,81%	14,42%	-2,43
514	СКМТ1А	26,80%	12,42%	-2,43
515	Τ33Κ2	25,66%	13,30%	-2,59	летальный
516	СВ2	25,01%	14,99%	-2,68
517	ΡΙΡ5Κ1Α	24,76%	15,49%	-2,71
518	РНКС1	23,31%	14,24%	-2,91
519	ΑΒΒ2	низкий выход ДНК рЬХ
520	АСУР2А	низкий выход ДНК рЬХ
521	ΒΒΚ	низкий выход ДНК рЬХ
522	СВС2В1	низкий выход ДНК рЬХ
523	ЕСЕР	низкий выход ДНК рЬХ
524	ΕΡΗΑ3	низкий выход ДНК рЬХ
525	ΕΡΗΒ1	низкий выход ДНК рЬХ
526	ΕΡΒΒ4	низкий выход ДНК рЬХ
527	ΕΑ3ΤΚΌ3	низкий выход ДНК рЬХ
528	ЕСЕР1	низкий выход ДНК рЬХ
529	ΕΒΤ3	низкий выход ДНК рЬХ
530	ΕΒΤ4	низкий выход ДНК рЬХ
531	ΗΙΡΚ3	низкий выход ДНК рЬХ
532	Κ3Ρ	низкий выход ДНК рЬХ
533	ΒΥΝ	низкий выход ДНК рЬХ
534	ΡΑΝΚ4	низкий выход ДНК рЬХ
535	ΡΌΟΕΡΑ	низкий выход ДНК рЬХ
536	ΡΒΚ4	низкий выход ДНК рЬХ
537	ΡΕΤ	низкий выход ДНК рЬХ
538	зекз	низкий выход ДНК рЬХ
539	ЗРС	низкий выход ДНК рЬХ
540	τχκ	низкий выход ДНК рЬХ

- 57 030276

541	ΒΚΏ4	неопределенная эффективность <70%
542	САМКК2	неопределенная эффективность <70%
543	СК51В	неопределенная эффективность <70%
544	СВКЗ	неопределенная эффективность <70%
545	ΏΑΡΚ3	неопределенная эффективность <70%
546	ЕРНА4	неопределенная эффективность <70%
547	ЕРНВ6	неопределенная эффективность <70%
548	ЕСЕКЗ	неопределенная эффективность <70%
549	ЕКК	неопределенная эффективность <70%
550	еск	неопределенная эффективность <70%
551	СЫЕ	неопределенная эффективность <70%
552	ΗΙΡΚ4	неопределенная эффективность <70%
553	ΙΤΚ	неопределенная эффективность <70%
554	КВК	неопределенная эффективность <70%
555	ВОС389599	неопределенная эффективность <70%
556	ВОС649288	неопределенная эффективность <70%
557	МАРЗК2	неопределенная эффективность <70%
558	ΝΕΚ5	неопределенная эффективность <70%
559	ΝΤΚΚ1	неопределенная эффективность <70%

- 58 030276

560	ΡΑΚΙ	неопределенная эффективность <70%
561	РНКС2	неопределенная эффективность <70%
562	Р1КЗСА	неопределенная эффективность <70%
563	ΡΙΚ3Ρ3	неопределенная эффективность <70%
564	ΡΙΡ5Κ1Β	неопределенная эффективность <70%
565	ΡΙΡΚ1	неопределенная эффективность <70%
566	ΡΙΡΚ2	неопределенная эффективность <70%
567	ΡΡ36ΚΑ2	неопределенная эффективность <70%
568	РР36КС1	неопределенная эффективность <70%
569	3ΤΚ17В	неопределенная эффективность <70%
570	ТСЕВР1	неопределенная эффективность <70%
571	инмк!	неопределенная эффективность <70%
572	ХРСС6ВР1	неопределенная эффективность <70%
573	в скок	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
574	С1ог£57	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
575	САМКК1	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
576	СРС2В2	5ΤΌΕν (стандартное отклонение) для повторностей
577	СВК5	5ΤΌΕν (стандартное отклонение) для повторностей
578	ЕРВВЗ	5ΤΌΕν (стандартное отклонение) для повторностей

- 59 030276

579	С8С2	5ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
580	РОС647279	5ΤΟΕν (стандартное отклонение) для повторностей
581	ΡΥΚ5	5ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
582	ΜΆΡΚ1	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей	летальный
583	МАР2К5	5ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
584	МАР4К2	ΕΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
585	ΝϋΑΚ2	ΕΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
586	ΡΌΚ2	ΒΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей	летальный
587	ΡΡΚΜ.	ЗТОЕУ (стандартное отклонение) для повторностей
588	ΡΙΚ3Ρ1	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
589	РЬК2	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
590	РККАК2А	ЗТПЕУ (стандартное отклонение) для повторностей
5 91	ΚΡ36ΚΑ3	5ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
592	РР56КА6	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
593	5СК2	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
594	ЗРРКЗ	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
595	νκκι	3ΤΟΕΥ (стандартное отклонение) для повторностей
596	УКК2	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей
5 97	УККЗ	3ΤϋΕν (стандартное отклонение) для повторностей

- 60 030276

Таблица 5. Результаты вторичного скрининга, количественно определяющего изменение значения О1₅₀ РБХ4720, индуцированного 9 основными кандидатами ОКР резистентности

Вторичный скрининг

А375

5КМЕЬ28

Ген	61бо (мкМ)	Кратное изменение ΟΙ50	Номер	Ген	01бо (мкМ)	Кратное изменение 01бо	Номер
МАРЗК8	>100,0	598	1	МАРЗК8	>100,0	-100	1
КАР1	>100,0	598	2	КАР1	>10,0	>10	2
СККР	>10,0	59,8	3	СККВ	9,7	9,7	3
рек	>10,0	59,8	4	рек	5	5	4
РККСЕ	4,41	26,4	5	РККСН	2,26	2,26	5
РККСН	4,14	24,7	6	РККСЕ	1,91	1,91	6
ЕКВБ2	1,33	7,95	7	АХР	1,18	1,18	7
АХЪ	1	5,98	8	ЕКВВ2	1	1	8
ΡΆΚ3	0,4934	2,95	9	ΡΆΚ3	0,9041	0,9041	9
	Контроли			Контроли

Моек

МЕК1

МЕК ΏΏ

0,1528

0,1671

4,8

0,91

1

28

(-)

(+)

Моек

МЕК1

0,5287

1

8,29

1,89

1

8,29

(-)

(+)

Таблица 6. Характеристики пациента

Пациент

Ткань

Возраст (годы)

Пол

Положение биопсии

Время с момента постановки первичного диагноза (годы)

Время с момента постановки диагноза метастазов (годы)

Ответ

Статус по ВКАР (до лечения)

Статус по ВКАР (на момент лечения/ после ответа)

Статус по ΝΚΑ5

Статус по ККА5

Статус по рМЕК

Статус по рЕКК

РН

биопсия

49

Женщина

Спина

5

3

Частичный

У600Е

Ν/Α

Ν/Α

Ν/Α

Ν/Α

Ν/Α

ткани

ответ

Р12

биопсия

67

Мужчина

Спина

2

0

Частичный

У600Е

Ν/Α

Ν/Α

Ν/Α

Ν/Α

Ν/Α

ткани

ответ

би и ИЯ

Частичный

Ρί3

68

Мужчина

Нога

11

0

У600Е

Ν/Α

Ν/Α

Ν/Α

Ν/Α

Ν/Α

ткани

ответ

мм-к

биопсия

38

Мужчина

Подмышечная

0

0

Частичный

У600Е

У600Е

АУТ

АУТ

*

*

ткани

впадина

ответ

Кратко-

Подмышечный

Стабильное

КеТ

М3 07

временная

59

Мужчина

лимфатический

4

4

заболевание

У600Е

У600Е

Ν/Α

Ν/Α

(14)

**

культура

узел

* см. фиг. 20

** см. фиг. 3£

Ν/А - данные отсутствуют \Т - дикий тип

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Оагга^ау, Ьеуг А. 1оЬаппеззеп, Согу М.

<120> СПОСОБЫ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ РАКА У ПАЦИЕНТОВ, У КОТОРЫХ ИМЕЕТСЯ ИЛИ

РАЗВИВАЕТСЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ К ПЕРВОЙ ТЕРАПИИ РАКА

<130> 14293/79 (80)

<150> ϋδ 61/312,193

<151> 2010-03-09

<150> ϋδ 61/312,519

<151> 2010-03-10

- 61 030276

<150> и§ 61/326,021

<151> 2010-04-20

<150> и§ 61/415,569

<151> 2010-11-19

<160> 17

<170> Ра1еп11п уегеюп 3.5

<210> 1

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетический прямой праймер СОТ

<400> 1

сааддаада дссадсадй ΐ

21

<210> 2

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетический обратный праймер СОТ

<400> 2

дсаадсаай сс1ссасад11с

22

<210> 3

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетический прямой праймер ТВР

<400> 3

сссдааасдс сдаа1а1аа1 сс

22

<210> 4

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетический обратный праймер ТВР

<400> 4

дайдйсб саскйддс 1с

<210> 5 <211> 19 <212> ДНК

22

- 62 030276

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетический прямой праймер СЛРБН

<400> 5

са1са1с1с1 дссссс1с1 19

<210> 6

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетический обратный праймер СЛРБН

<400> 6

удусыаус а§П§ёХёёХ 20

<210> 7

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция 8ЙРНК зЬЬис

<400> 7

сйсдаааЛ (ссдИсдД ΐ 21

<210> 8

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция 8ЙРНК 8ЙВКЛР(1)

<400> 8

сйсдаааЛ (ссдИсдД ΐ 21

<210> 9

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция 8ЙРНК 8ЙВКЛР(2)

<400> 9

дЛддШсс ааасададда ΐ 21

<210> 10

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

- 63 030276

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция 8кРНК 8кСКАЕ(1)

<400> 10

сддада(дй дсад!ааада ΐ 21

<210> 11

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция ккРНК §кСКАЕ(2)

<400> 11

дадаса(даа а1ссаасаа1 а 21

<210> 12

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция 8кРНК 8кМЕК1(1)

<400> 12

дайаса(ад (саасдадсс ΐ 21

<210> 13

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция 8ЙРНК 8ЙМЕК1(2)

<400> 13

дскс1а(дд 1дсдйс(ас а 21

<210> 14

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция 8ЙРНК 8ЙМЕК2(1)

<400> 14

1ддас1а1а1 1д(даасдад с 21

<210> 15

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция 8ЙРНК 8ЙМЕК2(2)

- 64 030276

<400> 15

ссааса!сс1 сд!даас!с1 а 21

<210> 16

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция кЬРНК §БСОТ(1)

<400> 16

саададссдс адасс!ас!а а 21

<210> 17

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> синтетическая ДНК-конструкция 8ЙРНК §БСОТ(2)

<400> 17

да!дадаа!д 1дасс1йаа д 21

Claims (1)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ идентификации индивида, который страдает раком, для которого должно быть эффективно лечение комбинированной терапией ингибитором КАЕ и ингибитором МЕК, сКАЕ, СгкЬ или ТРЬ2/СОТ, включающий определение числа копий генов, уровня мРНК или белка либо уровня фосфорилирования одной или более киназ-мишеней, выбранных из МАР3К8 (ТРЬ2/СОТ), СККЬ (СгкЬ), ЕОК (Едг), РККСЕ (Ргксе), РККСН (Ргксй), ЕКВВ2 (ЕгЬВ2), АХЬ (Ах1) или РАК3 (Рак3), в раковых клетках, полученных от индивида, и сравнение полученных данных с числом копий генов, уровнем мРНК или белка либо уровнем фосфорилирования киназы-мишени в клетках, полученных от индивида, который не страдает раком; причем увеличение числа копий генов, уровня мРНК или белка либо уровня фосфорилирования киназы-мишени в клетках индивида, который страдает раком, по сравнению с клетками от индивида, который не страдает раком, указывает на индивида, для которого должно быть эффективно лечение комбинированной терапией.

   2. Способ по п.1, дополнительно включающий анализ образца нуклеиновой кислоты, полученного из раковых клеток, на наличие мутантной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид ВКАЕ, с мутацией в положении 600, причем наличие мутантной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид В-КАЕ, указывает на индивида, страдающего раком, для которого будет эффективно лечение комбинированной терапией.

   3. Способ по п.2, в котором указанная мутация в положении 600 представляет собой У600Е.

   4. Способ по п.1, включающий анализ числа копий гена, уровня мРНК и белка МАР3К8 (ТРЬ/СОТ).

   5. Способ по п.1, в котором ингибитор КАЕ представляет собой ингибитор В-КАЕ или ингибитор пан-КАЕ.

   6. Способ по п.1, в котором ингибитор КАЕ выбран из КАЕ265, сорафениба, 8В590885, РЬХ4720, РБХ4032, ОИС-0879 и 2М336372.

   7. Способ по п.1, в котором индивид имеет врожденную резистентность к ингибитору КАЕ или у него имеется вероятность развития резистентности к ингибитору КАЕ.

   8. Способ по п.1, в котором рак выбран из меланомы, рака молочной железы, колоректальных раков, глиомы, рака легких, рака яичников, саркомы и рака щитовидной железы.

   9. Способ по п.8, в котором рак является меланомой.

   10. Способ лечения рака у индивида, нуждающегося в этом, причем рак имеет активированную киназу в клетках рака индивида, включающий

   - 65 030276

   определение числа копий генов, уровня мРНК или белка либо уровня фосфорилирования одной или более киназ-мишеней, выбранных из МАР3К8 (ТРЬ2/СОТ), СККЬ (СгкЬ), ЕОК (Е§г), РККСЕ (Ргксе), РККСН (РгксЬ), ЕКВВ2 (ЕгЬВ2), АХЬ (Ах1) или РАК3 (Рак3), в раковых клетках, полученных от индивида, и сравнение полученных данных с числом копий генов, уровнем мРНК или белка либо уровнем фосфорилирования киназы-мишени в клетках, полученных от индивида, который не страдает раком, для идентификации активированной киназы-мишени в клетках рака; и

   введение индивиду с увеличенным числом копий генов, уровнем мРНК или белка либо уровнем фосфорилирования киназы-мишени в раковых клетках эффективного количества ингибитора КАЕ и эффективного количества ингибитора МЕК или ингибитора ТРЬ2/СОТ.

   11. Способ по п.10, в котором у индивида имеются раковые клетки, содержащие мутацию в полипептиде В-КАЕ.

   12. Способ по п.11, в котором у индивида имеются раковые клетки, содержащие мутацию У600Е в полипептиде В-КАЕ.

   13. Способ по п.10, в котором ингибитор КАЕ выбран из КАЕ265, сорафениба, 8В590885, РЬХ4720, РЬХ4032, ОЭС-0879 и 2М336372.

   14. Способ по п.10, в котором ингибитор МЕК выбран из СЕ1040/РП184352; А2П6244; РО318088; РО98059; РО334581; КОЕА119; 6-метокси-7-(3-морфолин-4-илпропокси)-4-(4-феноксифениламино)хинолин3- карбонитрила и 4-[3 -хлор-4-(1-метил-1 Н-имидазол-2-илсульфанил)фениламино]-6-метокси-7-(3-морфолин4- илпропокси)хинолин-3 -карбонитрила.

   15. Способ по п.10, в котором индивид имеет вероятность развития резистентности к ингибитору

   КАЕ.

   16. Способ по п.10, в котором рак выбран из меланомы, рака молочной железы, колоректальных раков, глиомы, рака легких, рака яичников, саркомы и рака щитовидной железы.

   17. Способ по п.10, в котором рак является меланомой.

   18. Способ по п.10, в котором индивид имеет вероятность развития резистентности к ингибитору МЕК.

   19. Способ по п.10, в котором второй ингибитор представляет собой ингибитор ТРЕ2/СОТ.

   ССЗВ/Коллекция киназ

   ОКР института Брода (597)

   карбогидрат-киназа (28) нуклеотидкиназа (39) рецепторная Зег/ТМг киназа (26) рецепторная Туг киназа (53) нерецепторная Зег/ТКг киназа (250) нерецепторная Туг киназа (38) липидкиназа(24) протеинкиназа (80) связанная киназа (59)

   - 66 030276

   А376 АКЫЕ128 СОЮ-679 АМ451Ы АКМЕ15 Вторичный скрининг

   А375 5 КМ Е128 Ген <3150 (мкМ) кратное изменение Ранг Ген <3150 (мкМ) кратное изменение Ранг - 0,1528 0,91 - 0,4751 0,4791 МЕК1 0,1671 1 Г) МЕК1 1,0 1 И МЕКОО 4,8 28 (+) МЕКОО 8,29 8,29 м МАРЗК8 >100,0 -600 1 МАРЗК8 >100,0 -100 1 КАР! >100,0 -600 2 КАР1 >100.0 -100 2 СРК1 >10,0 -60 3 СКК1 9,70 9,7 3 рек >10,0 -60 4 рек 5,0 5 4 РККСЕ 4,41 -26 5 РККСН 2,26 2,26 5 рккен 4,14 -25 6 РККСЕ 1,91 1,91 6 ЕКВВ2 1,33 -8 7 АХ<_ 1,18 1,18 7 ΑΧ Ι- 1,00 -6 8 ЕКВВ2 1,00 1,00 8 ΡΑΙΟ 0,4934 -3 9 РАКЗ 0,9041 0,9041 9