JP2000204075A

JP2000204075A - ジアリ―ルアミン

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Publication number: JP2000204075A
Application number: JP11053536A
Authority: JP
Inventors: Tekuru Hale; ヘイル・テクル
Original assignee: Warner Lambert Co LLC
Current assignee: Warner Lambert Co LLC
Priority date: 1999-01-13
Filing date: 1999-03-02
Publication date: 2000-07-25

Abstract

(57)【要約】【課題】新規なスルホヒドロキサム酸ジアリールアミ
ンおよびその誘導体；それから製造した組成物；および
それらを使用する方法の提供。【解決手段】このスルホヒドロキサム酸ジアリールア
ミンは次の式(Ｉ) 【化１】（式中、Ｒ₁〜Ｒ₆は特許請求の範囲請求項１に記載の意
味を有する）で表わされ、増殖性疾患治療剤として有用
である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、スルホヒドロキサム酸ジアリー
ルアミンおよびその誘導体に関するものである。開示し
たジアリールアミンは薬理学的に活性である。

【０００２】

【発明の背景】ＭＥＫ酵素は、例えば免疫調節、炎症お
よび増殖性疾患、例えば癌および再狭窄に関係する二重
特異性（dual specificity）キナーゼである。増殖性疾
患は、細胞内シグナル伝達系またはある種の蛋白質のシ
グナル伝達（signal transduction）機構における欠陥
によって起こる。欠陥は、固有の活性またはシグナル伝
達カスケードにおける１種または２種以上のシグナル伝
達蛋白質の細胞の濃度の変化を包含する。細胞は、それ
自体の受容体に結合する増殖因子を産生し、結果として
連続的に増殖を刺激する自己分泌ループを生ずることが
できる。細胞内シグナル伝達蛋白質の突然変異また過剰
発現は、細胞内における偽マイトジェンシグナルを導き
うる。もっとも普通の突然変異の若干は、ＧＴＰに結合
したときに活性化され、ＧＤＰに結合したときに不活化
されるＧ−蛋白質であるＲａｓとして知られている蛋白
質をコード化する遺伝子において起こる。上述した増殖
因子受容体および多くの他のマイトジェン受容体は、活
性化されたときに、ＧＤＰ−結合した状態からＧＴＰ−
結合した状態に変換されるＲａｓをもたらす。このシグ
ナルは、大部分細胞型における増殖に対して絶対の必要
条件である。このシグナル伝達系における、特にＲａｓ
−ＧＴＰ複合体の失活における欠陥は、癌において共通
であり、Ｒａｓが慢性的に活性である下流へのシグナル
伝達カスケードをもたらす。

【０００３】活性化されたＲａｓは、次いでセリン／ト
レオニンキナーゼのカスケードの活性化をもたらす。そ
れ自体の活性化に対して活性なＲａｓ−ＧＴＰを必要と
することが知られているキナーゼの群の一つは、Ｒａｆ
ファミリーである。これらは、次いでＭＥＫ（例えばＭ
ＥＫ₁およびＭＥＫ₂）を活性化し、それからＭＡＰキナ
ーゼ、ＥＲＫ(ＥＲＫ₁およびＥＲＫ₂)を活性化する。マ
イトジェンによるＭＡＰキナーゼの活性化は、増殖に対
して必須であると思われ；このキナーゼの構成活性化は
細胞のトランスフォーメーションを誘発するのに十分で
ある。例えば優性の負のＲａｆ−１蛋白質の使用による
下流Ｒａｓシグナル伝達の遮断は、細胞表面受容体から
誘発されるかまたは発癌性のＲａｓ突然変異体から誘発
される有糸分裂誘発を完全に阻害することができる。Ｒ
ａｓはそれ自体蛋白質キナーゼではないが、それは多分
燐酸化機構によってＲａｆおよび他のキナーゼの活性化
に関与する。一度活性化されると、Ｒａｆおよび他のキ
ナーゼは、ＭＥＫ−１の場合における２個の非常に隣接
したセリン基Ｓ²¹⁸およびＳ²²²に対してＭＥＫを燐酸化
する。これは、キナーゼとしてのＭＥＫの活性化に対し
て必要条件である。ＭＥＫは、次いで単一のアミノ酸に
よって分離されたチロシン、Ｙ¹⁸⁵およびトレオニン
基、Ｔ¹⁸³の両方に対してＭＡＰキナーゼを燐酸化す
る。この二重の燐酸化は、ＭＡＰキナーゼを少なくとも
１００倍活性化する。それから、活性化されたＭＡＰキ
ナーゼは、いくつかの転写因子および他のキナーゼを包
含する多数の蛋白質の燐酸化を触媒することができる。
これらのＭＡＰキナーゼ燐酸化の多くは、キナーゼ、転
写因子または他の細胞蛋白質のような標的蛋白質を有糸
分裂誘発的に活性化する。Ｒａｆ−１およびＭＥＫＫの
ほかに、他のキナーゼがＭＥＫを活性化し、ＭＥＫそれ
自体がシグナルインテグレーティングキナーゼであると
思われる。現在の理解は、ＭＥＫは、ＭＡＰキナーゼの
燐酸化に対して非常に特異的であるということである。
事実、ＭＡＰキナーゼ、ＥＲＫ以外のＭＥＫに対する基
質は現在まで証明されておらずそしてＭＥＫは、ＭＡＰ
キナーゼ燐酸化配列に基づくペプチドを燐酸化しないか
またはさらに、変性したＭＡＰキナーゼを燐酸化しな
い。ＭＥＫはまた、燐酸化する前のＭＡＰキナーゼと強
力に関係しており、ＭＥＫによるＭＡＰキナーゼの燐酸
化は、２種の蛋白質間の先の強力な相互作用を必要とす
る。ＭＥＫのこの必要条件および異常な特異性は、おそ
らくＡＴＰ結合部位の普通の遮断によるよりもむしろア
ロステリック機構により操作されるＭＥＫの選択的阻害
剤を見出すことができるということは、他の蛋白質キナ
ーゼに対する作用の機構において十分な相違を有してい
ることを示唆している。

【０００４】

【発明の概要】本発明は、式（Ｉ）

【化２】を有する化合物を特徴とする。

【０００５】上記式において、Ｒ₁は、Ｈ、Ｃ_1-8アルキ
ル、Ｃ_3-8アルケニル、Ｃ_3-8アルキニル、Ｃ_3-8シクロ
アルキル、フェニル、（フェニル）Ｃ_1-4アルキル、
（フェニル）Ｃ_3-4アルケニル、(フェニル）Ｃ_3-4アル
キニル、（Ｃ_3-8シクロアルキル）Ｃ_1-4アルキル、（Ｃ
_3-8シクロアルキル）Ｃ_3-4アルケニル、（Ｃ_3-8シクロ
アルキル）Ｃ_3-4アルキニル、Ｃ_3-8複素環式基、（Ｃ
_3-8複素環式基）Ｃ_1-4アルキル、（Ｃ_3-8複素環式基）
Ｃ_3-4アルケニル、（Ｃ_3-8複素環式基）Ｃ_3-4アルキニ
ル、(ＣＨ₂)_2-4ＯＲ_Cまたは(ＣＨ₂)_2-4ＮＲ_CＲ_Dであ
る。Ｒ₂は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、フェニル、Ｃ_3-6シク
ロアルキル、Ｃ_3-6複素環式基または（Ｃ_3-6シクロアル
キル）メチルである。Ｒ₃およびＲ₄のそれぞれは、独立
して、Ｈ、Ｆ、ＮＯ₂、ＢrおよびＣlから選択されたも
のである。Ｒ₅は、ＨおよびＦから選択されたものであ
る。Ｒ₆は、Ｈ、ＣlまたはＣＨ₃である。Ｒ_CおよびＲ_D
のそれぞれは、独立して、Ｈ、Ｃ _1-4アルキル、Ｃ_3-4ア
ルケニル、Ｃ_3-4アルキニル、Ｃ_3-6シクロアルキルおよ
びフェニルから選択されたものであるか；またはＮＲ_C
Ｒ_Dは、ピペリジノ、モルホリノまたはＮ−（Ｃ_1-6アル
キル）ピペラジノ環であることができる。上述したそれ
ぞれの炭化水素基は、場合によっては、独立してハロゲ
ン、ヒドロキシル、アミノ、（アミノ）スルホニルおよ
びＮＯ₂から選択された１〜３個の置換分により置換さ
れていてもよい。上述したそれぞれの複素環式基は、場
合によっては、独立してハロゲン、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ
_3-6シクロアルキル、Ｃ_3-4アルケニル、Ｃ_3-4アルキニ
ル、フェニル、ヒドロキシル、アミノ、（アミノ）スル
ホニルおよびＮＯ₂から選択された１〜３個の置換分に
よって置換されていてもよく、そしてそれぞれの置換分
アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニルま
たはフェニルは、次いで、場合によっては、独立してハ
ロゲン、Ｃ_1-2アルキル、ヒドロキシル、アミノおよび
ＮＯ₂から選択された１〜３個の置換分により置換され
ていてもよい。

【０００６】本発明は、また、開示した化合物の医薬的
に許容し得る塩またはＣ_1-8エステルを包含する。例え
ば、開示したアルコール化合物は、ヒドロキシ基のＨを
−Ｃ(＝Ｏ)Ｃ_1-7アシル基で置換することによって得ら
れる構造を有するエステルを形成することができる。本
発明は、また、（ａ）式（Ｉ）の化合物および（ｂ）医
薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物に関するも
のである。

【０００７】さらに、本発明は、増殖性疾患、例えば
癌、再狭窄、乾癬、自己免疫疾患およびアテローム性動
脈硬化症を治療する方法に関するものである。本発明の
他の態様は、固形または造血性のＭＥＫ−関連（ラス−
関連を包含する）癌を治療する方法を包含する。癌の例
は、結腸直腸癌、頸癌、乳癌、卵巣癌、脳癌、急性白血
病、胃癌、非−小細胞肺（non-small cell lung）癌、
膵臓癌および肺癌を包含する。本発明の他の態様は、異
種移植片（器官または骨髄移植）拒絶、変形性関節症、
慢性関節リウマチ、嚢胞性線維症、糖尿病（糖尿病性網
膜症を包含する）、肝腫、心臓肥大、発作（例えば、急
性ホーカル虚血性発作および全脳虚血）、心不全、敗血
症性ショック、喘息およびアルツハイマー病の症状を治
療または軽減する方法を包含する。本発明の化合物は、
また、ＨＩＶ、肝炎（Ｂ）ウイルス（ＨＢＶ）、ヒトの
乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、レオウイルス、サイトメガ
ロウイルス（ＣＭＶ）およびエプスタイン−バーウイル
ス（ＥＢＶ）のようなウイルス感染を治療する抗ウイル
ス剤として有用である。これらの方法は、開示した化合
物またはその医薬組成物の医薬的に有効な量を、このよ
うな治療を必要とするかまたはこのような疾患または状
態にかかった患者に投与する工程を包含する。

【０００８】また、本発明は、方法がさらに放射線療法
または化学療法、例えばタキサンまたはビンカアルカロ
イドのような有糸分裂阻害剤を使用することを包含する
癌の治療方法のような組み合わせ治療方法に関するもの
である。化学療法または放射線療法は、患者の要求によ
って、開示した化合物の投与前、投与時または投与後に
行うことができる。本発明は、また、本明細書に開示し
た合成方法を特徴とする。本発明の他の態様は、以下の
説明および実施例、および特許請求の範囲に示される通
りである。

【０００９】

【発明の詳述】本発明は、ジアリールアミン化合物、そ
の医薬組成物、およびこのような化合物および組成物を
使用する方法に関するものである。本発明の一態様によ
れば、化合物は、ＭＥＫ阻害剤である。ＭＥＫ阻害アッ
セイは、米国特許第５,５２５,６２５号の第６欄３６行
〜第７欄４行に記載されているＭＡＰキナーゼ経路の阻
害剤に対するインビトロカスケードアッセイおよび同特
許の第７欄４〜２７行に記載されているインビトロＭＥ
Ｋアッセイを包含する。これらの特許の全体の開示を参
照として本明細書に組み入れる（また、以下の実施例１
〜３参照）。全細胞アッセイは、実施例４において以下
に記載する通りである。

【００１０】Ａ．用語ある種の用語は、本明細書を通じて以下の通り定義され
る。アルキル基は、遊離原子価を有する脂肪族基（すな
わち、水素および炭素原子を含有するヒドロカルビルま
たは炭化水素基構造）を包含する。アルキル基は、直鎖
状および分枝鎖状の構造を包含するものであることは明
らかである。例は、メチル、エチル、プロピル、イソプ
ロピル、ブチル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチ
ル、ペンチル、イソペンチル、２,３−ジメチルプロピ
ル、ヘキシル、２,３−ジメチルヘキシル、１,１−ジメ
チルペンチル、ヘプチルおよびオクチルを包含する。シ
クロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シ
クロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよび
シクロオクチルを包含する。

【００１１】アルキル基は、独立してハロゲン（弗素、
塩素、臭素または沃素）、ヒドロキシ、アミノ、アルコ
キシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シクロアル
キル、アリール、アリールオキシ、アリールアルキルオ
キシ、複素環式基および（複素環式基）オキシから選択
された１個、２個、３個またはそれ以上の置換分により
置換されていてもよい。具体的な例は、フルオロメチ
ル、ヒドロキシエチル、２,３−ジヒドロキシエチル、
（２−または３−フラニル）メチル、シクロプロピルメ
チル、ベンジルオキシエチル、（３−ピリジニル）メチ
ル、（２−または３−フラニル）メチル、（２−チエニ
ル）エチル、ヒドロキシプロピル、アミノシクロヘキシ
ル、２−ジメチルアミノブチル、メトキシメチル、Ｎ−
ピリジニルエチル、ジエチルアミノエチルおよびシクロ
ブチルメチルを包含する。

【００１２】アルケニル基は、少なくとも１個の二重結
合（２個の隣接ＳＰ²炭素原子）を有する以外は、アル
キル基に類似している。二重結合および置換分（存在す
る場合）の配置によって、二重結合の幾何学的形態は、
エントゲーゲン（Ｅ）またはツザンメン（Ｚ）、シスま
たはトランスであることができる。同様に、アルキニル
基は、少なくとも１個の三重結合（２個の隣接ＳＰ炭素
原子）を有している。不飽和のアルケニルまたはアルキ
ニル基は、それぞれ１個または２個以上の二重結合また
は三重結合またはその混合を有することができる。アル
キル基と同様に、不飽和基は、直鎖状または分枝鎖状で
あることができそしてこれらは、アルキルに対して上述
したようにおよび実施例による開示により記載したよう
に置換されていてもよい。アルケニル、アルキニルおよ
び置換された形態の例は、シス−２−ブテニル、トラン
ス−２−ブテニル、３−ブチニル、３−フェニル−２−
プロピニル、３−（２′−フルオロフェニル）−２−プ
ロピニル、３−メチル（５−フェニル）−４−ペンチニ
ル、２−ヒドロキシ−２−プロピニル、２−メチル−２
−プロピニル、２−プロペニル、４−ヒドロキシ−３−
ブチニル、３−（３−フルオロフェニル）−２−プロピ
ニルおよび２−メチル−２−プロペニルを包含する。式
（Ｉ）において、アルケニルおよびアルキニル基は、例
えばＣ_2-4またはＣ_2-8、好ましくはＣ_3-4またはＣ_3-8で
あることができる。

【００１３】置換された炭化水素基のより一般的な形態
は、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルケニル、ヒド
ロキシアルキニル、ヒドロキシシクロアルキル、ヒドロ
キシアリール、および接頭語のアミノ−、ハロ−（例え
ばフルオロ−、クロロ−またはブロモ−）、ニトロ−、
アルキル−、フェニル−、シクロアルキル−などまたは
置換分の組み合わせに相当する形態を包含する。それ故
に、式（Ｉ）によれば、置換されたアルキルは、ヒドロ
キシアルキル、アミノアルキル、ニトロアルキル、ハロ
アルキル、アルキルアルキル（分枝鎖状のアルキル、例
えばメチルペンチル）、（シクロアルキル）アルキル、
フェニルアルキル、アルコキシ、アルキルアミノアルキ
ル、ジアルキルアミノアルキル、アリールアルキル、ア
リールオキシアルキル、アリールアルキルオキシアルキ
ル、（複素環式基）アルキル、および（複素環式基）オ
キシアルキルを包含する。すなわち、Ｒ₁は、ヒドロキ
シアルキル、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキ
ニル、ヒドロキシシクロアルキル、ヒドロキシフェニ
ル、ヒドロキシ（フェニル）アルキル、(フェニル)ヒド
ロキシアルキル、（Ｃ_3-8ヒドロキシシクロアルキル）
Ｃ_1-4アルキル、(Ｃ_3-8シクロアルキル）Ｃ_2-4ヒドロキ
シアルケニル、Ｃ_3-8ヒドロキシ複素環式基、（Ｃ_3-8複
素環式基）Ｃ_1-4ヒドロキシアルキル、アミノアルキ
ル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、アミノシク
ロアルキル、アミノアリール、アルキルアルケニル、
（アルキルアリール）アルキル、（ハロアリール）アル
キル、（ヒドロキシアリール）アルキニルなどを包含す
る。同様に、Ｒ_Cは、ヒドロキシアルキルおよびアミノ
アリールを包含しそしてＲ_Dは、ヒドロキシアルキル、
アミノアルキル、およびヒドロキシアルキル（複素環式
基）アルキルなどを包含する。

【００１４】ヘテロアリールに限定されるものではない
が含まれる複素環式基は、フリル、オキサゾリル、イソ
キサゾリル、チオフェニル、チアゾリル、ピロリル、イ
ミダゾリル、１,３,４−トリアゾリル、テトラゾリル、
ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリル
およびこれらの非芳香族の同等基を包含する。複素環式
基の他の例は、ピペリジル、キノリル、イソチアゾリ
ル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、テト
ラヒドロフリル、テトラヒドロピロリル、ピロリジニ
ル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロベンゾチオ
フラニルおよびオクタヒドロベンゾフラニルを包含す
る。

【００１５】Ｂ．化合物本発明の一つの態様は、発明の概要の項において、式
（Ｉ）で開示された化合物に関するものである。本発明
の実施態様は、（ａ）Ｒ₃が臭素または塩素であり；
（ｂ）Ｒ₄が弗素であり；（ｃ）Ｒ₅がＨであり；（ｄ）
Ｒ₄およびＲ₅のそれぞれがＨであり；（ｅ)Ｒ₄およびＲ
₅のそれぞれが弗素であり；（ｆ）Ｒ₃が臭素であり；
（ｇ）Ｒ₃が弗素であり；（ｈ）Ｒ₄がニトロであり；
（ｉ）Ｒ₅がＨであり；（ｊ）Ｒ₆が塩素であり；（ｋ）
Ｒ₆がメチルであり；（ｌ）Ｒ₁がＨまたはＣ_1-4アルキ
ルでありそしてＲ₂がＨであり；（ｍ）Ｒ₁が（Ｃ_3-6シ
クロアルキル）メチルであり；（ｎ）Ｒ₁がＨであり；
（ｏ）Ｒ₁が(ＣＨ₂)_2-4ＯＲ_Cまたは(ＣＨ₂)_2-4ＮＲ_CＲ_D
であり；（ｐ）Ｒ₆が塩素またはメチルであり；（ｑ）
Ｒ₆がＨであり；またはこれらの組み合わせである化合
物を包含する。好ましくは、Ｒ₁、Ｒ_CまたはＲ_Dがアル
ケニルまたはアルキニルである場合は、それぞれ二重ま
たは三重結合は、結合の点がヘテロ原子であるときは、
結合の点に隣接していない。例えば、Ｒ₁は、好ましく
はプロプ−２−イニルまたはブト−２もしくは３−エニ
ルであり、そしてやや好ましくはプロプ−１−イニルま
たはブト−１−エニルである。

【００１６】式（Ｉ）の化合物の例は、４−フルオロ−
２−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベ
ンゼンスルホン酸；４−フルオロ−Ｎ−ヒドロキシ−２
−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベン
ゼンスルホンアミド；Ｎ−シクロプロピルメトキシ−４
−フルオロ−２−（４−ヨード−２−メチル−フェニル
アミノ）−ベンゼンスルホンアミド；３,４−ジフルオ
ロ−２−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）
−ベンゼンスルホン酸；３,４−ジフルオロ−Ｎ−ヒド
ロキシ−２−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミ
ノ）−ベンゼンスルホンアミド；Ｎ−シクロプロピルメ
トキシ−３,４−ジフルオロ−２−（４−ヨード−２−
メチル−フェニルアミノ）−ベンゼンスルホンアミド；
３,４,５−トリフルオロ−２−（４−ヨード−２−メチ
ル−フェニルアミノ）−ベンゼンスルホン酸；３,４,５
−トリフルオロ−Ｎ−ヒドロキシ−２−（４−ヨード−
２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゼンスルホンアミ
ド；Ｎ−シクロプロピルメトキシ−３,４,５−トリフル
オロ−２−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミ
ノ）−ベンゼンスルホンアミド；５−ブロモ−３,４−
ジフルオロ−２−（４−ヨード−２−メチル−フェニル
アミノ）−ベンゼンスルホン酸；５−ブロモ−３,４−
ジフルオロ−Ｎ−ヒドロキシ−２−（４−ヨード−２−
メチル−フェニルアミノ）−ベンゼンスルホンアミド；
５−ブロモ−Ｎ−シクロプロピルメトキシ−３,４−ジ
フルオロ−２−（４−ヨード−２−メチル−フェニルア
ミノ）−ベンゼンスルホンアミド；２−（４−ヨード−
２−メチル−フェニルアミノ）−４−ニトロ−ベンゼン
スルホン酸；Ｎ−ヒドロキシ−２−（４−ヨード−２−
メチル−フェニルアミノ）−４−ニトロ−ベンゼンスル
ホンアミド；またはＮ−シクロプロピルメトキシ−２−
（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−４−ニ
トロ−ベンゼンスルホンアミドを包含する。

【００１７】さらに、化合物の他の例は、２−(２−ク
ロロ−４−ヨード−フェニルアミノ)−４−フルオロ−
ベンゼンスルホン酸；２−（２−クロロ−４−ヨード−
フェニルアミノ）−４−フルオロ−Ｎ−ヒドロキシ−ベ
ンゼンスルホンアミド；２−（２−クロロ−４−ヨード
−フェニルアミノ）−Ｎ−シクロプロピルメトキシ−４
−フルオロベンゼンスルホンアミド；２−（２−クロロ
−４−ヨード−フェニルアミノ）−３,４−ジフルオロ
−ベンゼンスルホン酸；２−（２−クロロ−４−ヨード
−フェニルアミノ）−３,４−ジフルオロ−Ｎ−ヒドロ
キシ−ベンゼンスルホンアミド；２−（２−クロロ−４
−ヨード−フェニルアミノ）−Ｎ−シクロプロピルメト
キシ−３,４−ジフルオロ−ベンゼンスルホンアミド；
２−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−
３,４,５−トリフルオロ−ベンゼンスルホン酸；２−
（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−３,４,
５−トリフルオロ−Ｎ−ヒドロキシ−ベンゼンスルホン
アミド；２−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミ
ノ）−Ｎ−シクロプロピルメトキシ−３,４,５−トリフ
ルオロ−ベンゼンスルホンアミド；５−ブロモ−２−
（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−３,４
−ジフルオロ−ベンゼンスルホン酸；５−ブロモ−２−
（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−３,４
−ジフルオロ−Ｎ−ヒドロキシ−ベンゼンスルホンアミ
ド；５−ブロモ−２−（２−クロロ−４−ヨード−フェ
ニルアミノ）−Ｎ−シクロプロピルメトキシ−３,４−
ジフルオロ−ベンゼンスルホンアミド；２−（２−クロ
ロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−４−ニトロ−ベン
ゼンスルホン酸；２−（２−クロロ−４−ヨード−フェ
ニルアミノ）−Ｎ−ヒドロキシ−４−ニトロ−ベンゼン
スルホンアミド；または２−（２−クロロ−４−ヨード
−フェニルアミノ）−Ｎ−シクロプロピルメトキシ−４
−ニトロ−ベンゼンスルホンアミドを包含する。

【００１８】Ｃ．合成開示した化合物は、以下のスキーム１によって合成する
ことができる。

【化３】適当に置換されたスルホニルクロライド１当量を、ＣＨ
₂Ｃｌ₂またはＥｔ₂Ｏ中の適当に置換されたヒドロキシ
ルアミン１当量および過剰のトリエチルアミンの溶液に
加えそして３０分撹拌する。トリエチルアミン塩酸塩沈
澱を濾過によって分離しそして捨てる。必要な場合は、
生成物は、シリカカラム上のクロマトグラフィーによっ
てさらに精製する。それから、純粋な２−フルオロヒド
ロキサム酸またはヒドロキサメート生成物を、−７８℃
のＴＨＦ中でアニリンにＬＤＡを加えることによって製
造された適当に置換されたリチウムアニリドの溶液に加
える。室温で１６時間撹拌した後、反応混合物をＥｔ₂
Ｏ−ＨＣｌに注加する。沈澱した固体を濾過によって分
離しそして捨てる。濾液を濃縮しそして得られた粗製生
成物を、シリカカラム上で精製して所望の標的生成物を
得る。開示した化合物は、また、他の合成有機方法、な
らびに自動または組み合わせ法によって製造することも
できる。

【００１９】Ｄ．使用開示した組成物は、発明の概要の項において記載したよ
うな疾患または状態、ならびにＭＥＫカスケードによっ
て調節される疾患または状態に対する予防的および治療
的処置に有用である。疾患の例は、発作、心不全、変形
性関節症、慢性関節リウマチ、器官移植拒絶および卵
巣、肺、膵臓、脳、前立腺および結腸直腸腫瘍のような
種々の腫瘍を包含する。

【００２０】１．使用量当業者は、年令、体重、総体的健康状態、治療を必要と
する疼痛の型および他の投薬の存在のような因子を考慮
して、既知の方法によって、患者に対する適当な使用量
を決定することができる。一般に、有効な量は、１日に
つき体重１kg当たり０.１〜１０００mg、好適には体重
１kg当たり１〜３００mgの間にありそして１日当たりの
使用量は、普通の体重の成人患者に対して１０〜５００
０mgの間にある。１００mg、２００mg、３００mgまたは
４００mgの商業的に入手できるカプセル剤または他の処
方物（例えば、液体およびフィルム−被覆した錠剤）
を、開示した方法によって投与することができる。

【００２１】２．処方物投与単位形態は、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒
剤、水性および非水性の経口用溶液および懸濁液、およ
び個々の投与量に小分けするのに適応した容器に充填し
た非経口用溶液を包含する。投与単位形態は、また、皮
下移植のような調節された放出処方物を包含する種々の
投与方法に適応させることもできる。投与方法は、経口
的、直腸的、非経口的（静脈内的、筋肉内的、皮下
的）、槽内的、膣内的、腹腔内的、膀胱内的、局所的
（点滴、散剤、軟膏、ゲルまたはクリーム）投与および
吸入（口腔内または鼻スプレー）を包含する。

【００２２】非経口的処方物は、医薬的に許容し得る水
性またはそ非水性溶液、分散液、懸濁液、乳濁液および
これらを製造するための滅菌粉末を包含する。担体の例
は、水、エタノール、ポリオール(プロピレングリコー
ル、ポリエチレングリコール)、植物油および注射でき
る有機エステル、例えばオレイン酸エチルを包含する。
流動性は、レシチン、界面活性剤のようなコーティング
の使用によってまたは適当な粒子の大きさを維持するこ
とによって維持することができる。固体の投与形態に対
する担体は、（ａ）充填剤または増量剤、（ｂ）結合
剤、（ｃ）保湿剤、（ｄ）崩壊剤、（ｅ）溶液遅延剤、
（ｆ）吸収促進剤、（ｇ）吸着剤、（ｈ）滑沢剤、
（ｉ）緩衝剤および（ｊ）噴射剤を包含する。組成物
は、また、補助剤、例えば防腐剤、湿潤剤、乳化剤およ
び分散剤；抗菌剤、例えばパラベン、クロロブタノー
ル、フェノールおよびソルビン酸；等張剤、例えば糖ま
たは塩化ナトリウム；吸収−延長剤、例えばモノステア
リン酸アルミニウムおよびゼラチン；および吸収−増強
剤を含有することもできる。

【００２３】３．関連した化合物本発明は、開示した化合物および開示した化合物の密接
に関連した医薬的に許容し得る形態、例えばその塩、エ
ステル、アミド、水和または溶媒和形態；マスクされた
または保護された形態；およびラセミ混合物またはエナ
ンチオマー的にまたは光学的に純粋な形態を提供する。

【００２４】医薬的に許容し得る塩、エステルおよびア
ミドは、合理的な利点／リスク比内にあり、薬理学的に
有効でありそして不当な毒性、刺激またはアレルギー応
答なしに患者の組織と接触させるのに適当であるカルボ
キシレート塩(例えば、Ｃ_1-8アルキル、シクロアルキ
ル、アリール、ヘフロアリール、非芳香族複素環式）、
アミノ酸付加塩、エステルおよびアミドを包含する。代
表的な塩は、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸
塩、硝酸塩、酢酸塩、蓚酸塩、吉草酸塩、オレイン酸
塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、
硼酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、燐酸塩、トシレート、ク
エン酸塩、マレイン酸塩、フマール酸塩、コハク酸塩、
酒石酸塩、ナフチレート、メシレート、グルコヘプトネ
ート、ラクチオビオネートおよびラウリルスルホン酸塩
を包含する。これらは、アルカリ金属およびアルカリ土
類金属陽イオン、例えばナトリウム、カリウム、カルシ
ウムおよびマグネシウム、ならびに非毒性のアンモニウ
ム、第４級アンモニウム、およびアミン陽イオン、例え
ばテトラメチルアンモニウム、メチルアミン、トリメチ
ルアミンおよびエチルアミンを包含することができる。
例えば、参照として本明細書に組み入れるS.M. Berge
等、“Pharmaceutical Salts"，J. Pharm. Sci., 197
7，66：1-19参照。本発明の代表的な医薬的に許容し得
るアミドは、アンモニア、第１級Ｃ_1-6アルキルアミン
および第２級ジ（Ｃ_1-6アルキル）アミンから誘導され
たものである。第２級アミンは、少なくとも１個の窒素
原子および場合によっては１〜２個の追加的なヘテロ原
子を含有する５−または６−員の複素環式またはヘテロ
芳香族環部分を包含する。好ましいアミドは、アンモニ
ア、Ｃ_1-3アルキル第１級アミンおよびジ（Ｃ_1-2アルキ
ル）アミンから誘導される。本発明の代表的な医薬的に
許容し得るエステルは、Ｃ_1-7アルキル、Ｃ_5-7シクロア
ルキル、フェニルおよびフェニル（Ｃ_1-6）アルキルエ
ステルを包含する。好ましいエステルは、メチルエステ
ルを包含する。

【００２５】本発明は、また、保護基によってマスクさ
れた１個または２個以上の官能基（例えばヒドロキシ
ル、アミノまたはカルボキシル）を有する開示された化
合物を包含する。これらのマスクされたまたは保護され
た化合物の若干は、医薬的に許容することができそして
他の化合物は、中間体として有用である。本明細書にお
いて開示された合成中間体および方法およびそれらのわ
ずかの改変もまた本発明の範囲内にある。

【００２６】ヒドロキシル保護基ヒドロキシル保護基は、エーテル、エステルおよび１,
２−および１,３−ジオールに対する保護を包含する。
エーテル保護基は、メチル、置換されたメチルエーテ
ル、置換されたエチルエーテル、置換されたベンジルエ
ーテル、シリルエーテルおよび他の官能基へのシリルエ
ーテルの変換を包含する。

【００２７】置換されたメチルエーテル置換されたメチルエーテルは、メトキシメチル、メチル
チオメチル、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチ
ルシリル）メトキシメチル、ベンジルオキシメチル、ｐ
−エトキシベンジルオキシメチル、（４−メトキシフェ
ノキシ）メチル、グアイアコールメチル、ｔ−ブトキシ
メチル、４−ペンテニルオキシメチル、シロキシメチ
ル、２−メトキシエトキシメチル、２,２,２−トリクロ
ロエトキシメチル、ビス（２−クロロ−エトキシ）メチ
ル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、テトラ
ヒドロピラニル、３−ブロモテトラヒドロ−ピラニル、
テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシ
ル、４−メトキシテトラヒドロピラニル、４−メトキシ
テトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロ
チオピラニルＳ,Ｓ−ジオキシド、１−〔（２−クロロ
−４−メチル）フェニル〕−４−メトキシピペリジン−
４−イル、１,４−ジオキサン−２−イル、テトラヒド
ロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、および２,３,
３ａ,４,５,６,７,７ａ−オクタヒドロ−７,８,８−ト
リメチル−４,７−エタノベンゾフラン−２−イルを包
含する。

【００２８】置換されたエチルエーテル置換されたエチルエーテルは、１−エトキシエチル、１
−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メ
トキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチ
ル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエ
チル、２,２,２−トリクロロエチル、２−トリメチルシ
リエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチ
ル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニ
ル、２,４−ジニトロフェニル、およびベンジルを包含
する。

【００２９】置換されたベンジルエーテル置換されたベンジルエーテルは、ｐ−メトキシベンジ
ル、３,４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジ
ル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２,６−
ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニル
ベンジル、２−および４−ピコリル、３−メチル−２−
ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ,ｐ′−
ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリ
フェニルメチル、α−ナフチルジフェニル−メチル、ｐ
−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキ
シフェニル）フェニルメチル、トリ−（ｐ−メトキシフ
ェニル）メチル、４−（４′−ブロモフェナシルオキ
シ）フェニルジフェニルメチル、４,４′,４″−トリス
（４,５−ジクロロフタルイミド−フェニル）メチル、
４,４′,４″−トリス（レブリノイルオキシ−フェニ
ル）メチル、４,４′,４″トリス（ベンゾイルオキシ−
フェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イルメチ
ル）−ビス（４′,４″−ジメトキシフェニル）−メチ
ル、１,１−ビス（４−メトキシフェニル）−１′−ピ
レニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）
キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）ア
ントリル、１,３−ベンゾジチオラン−２−イル、およ
びベンズイソチアゾリルＳ,Ｓ−ジオキシドを包含す
る。

【００３０】シリルエーテルシリルエーテルは、トリメチルシリル、トリエチルシリ
ル、トリイソプロピルシリル、ジメチルイソプロピルシ
リル、ジエチルイソプロピルシリル、ジメチルテキシル
シリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェ
ニルシリル、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリル
シリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリ
ル、およびｔ−ブチルメトキシ−フェニルシリルを包含
する。

【００３１】エステルエステル保護基は、エステル、カーボネート、補助開裂
（assisted cleavage)、種々雑多なエステルおよびスル
ホン酸エステルを包含する。エステル保護エステルの例は、ホルメート、ベンゾイルホルメー
ト、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテー
ト、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、
メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテー
ト、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセ
テート、ｐ−Ｐ−フェニルアセテート、３−フェニルプ
ロピオネート、４−オキソペンタノエート(レブリネー
ト）、４,４−（エチレンジチオ）ペンタノエート、ピ
バロエート、アダマントエート、クロトネート、４−メ
トキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベン
ゾエート、および２,４,６−トリメチルベンゾエート
（メシトエート）を包含する。

【００３２】カーボネートカーボネートは、メチル、９−フルオレニルメチル、エ
チル、２,２,２−トリクロロエチル、２−（トリメチル
シリル）エチル、２−（フェニルスルホニル）エチル、
２−（トリフェニルホスホニオ）エチル、イソブチル、
ビニル、アリル、ｐ−ニトロフェニル、ベンジル、ｐ−
メトキシベンジル、３,４−ジメトキシベンジル、ｏ−
ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、Ｓ−ベンジルチ
オカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチル、および
メチルジチオカーボネートを包含する。

【００３３】補助開裂補助開裂保護基の例は、２−ヨードベンゾエート、４−
アジドブチレート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエ
ート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホル
ミルベンゼン−スルホネート、２−（メチルチオメトキ
シ）エチルカーボネート、４−（メチルチオメトキシメ
チル）ベンゾエート、および２−（メチルチオメトキシ
メチル）ベンゾエートを包含する。

【００３４】種々雑多なエステル上述したクラスに加えて、種々雑多なエステルは、２,
６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２,
６−ジクロロ−４−（１,１,３,３−テトラメチルブチ
ル）フェノキシアセテート、２,４−ビス（１,１−ジメ
チルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニ
ルアセテート、イソブチレート、モノサクシノエート、
（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート（チグロエー
ト）、ｏ−（メトキシカルボニル）ベンゾエート、ｐ−
Ｐ−ベンゾエート、α−ナフトエート、ナイトレート、
アルキルＮ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラメチル−ホスホロジ
アミデート、Ｎ−フェニルカルバメート、ボレート、ジ
メチルホスフィノチオイル、および２,４−ジニトロフ
ェニルスルフェネートを包含する。スルホネート保護サルフェートは、サルフェート、メタンスルホネー
ト（メシレート）、ベンジルスルホネートおよびトシレ
ートを包含する。

【００３５】１,２−および１,３−ジオールに対する保
護１,２−および１,３−ジオール基に対する保護は、環状
アセタールおよびケタール、環状オルトエステルおよび
シリル誘導体を包含する。環状アセタールおよびケタール環状アセタールおよびケタールは、メチレン、エチリデ
ン、１−ｔ−ブチルエチリデン、１−フェニルエチリデ
ン、（４−メトキシフェニル）エチリデン、２,２,２−
トリクロロエチリデン、アセトニド（イソプロピリデ
ン）、シクロペンチリデン、シクロヘキシリデン、シク
ロヘプチリデン、ベンジリデン、ｐ−メトキシベンジリ
デン、２,４−ジメトキシベンジリデン、３,４−ジメト
キシベンジリデン、および２−ニトロベンジリデンを包
含する。

【００３６】環状オルトエステル環状オルトエステルは、メトキシメチレン、エトキシメ
チレン、ジメトキシメチレン、１−メトキシエチリデ
ン、１−エトキシエチリデン、１,２−ジメトキシエチ
リデン、α−メトキシベンジリデン、１−（Ｎ,Ｎ−ジ
メチルアミノ）エチリデン誘導体、α−（Ｎ,Ｎ−ジメ
チルアミノ）ベンジリデン誘導体、および２−オキサシ
クロペンチリデンを包含する。

【００３７】カルボキシル基に対する保護エステルエステル保護基は、エステル、置換されたメチルエステ
ル、２−置換されたエチルエステル、置換されたベンジ
ルエステル、シリルエステル、活性化されたエステル、
種々雑多な誘導体、およびスタニルエステルを包含す
る。

【００３８】置換されたメチルエステル置換されたメチルエステルは、９−フルオレニルメチ
ル、メトキシメチル、メチルチオメチル、テトラヒドロ
ピラニル、テトラヒドロフラニル、メトキシエトキシメ
チル、２−(トリメチルシリル)エトキシ−メチル、ベン
ジルオキシメチル、フェナシル、ｐ−ブロモフェナシ
ル、α−メチルフェナシル、ｐ−メトキシフェナシル、
カルボキサミドメチル、およびＮ−フタルイミドメチル
を包含する。

【００３９】２−置換されたエチルエステル２−置換されたエチルエステルは、２,２,２−トリクロ
ロエチル、２−ハロエチル、ω−クロロアルキル、２−
（トリメチルシリル）エチル、２−メチルチオエチル、
１,３−ジチアニル−２−メチル、２（ｐ−ニトロフェ
ニルスルフェニル）−エチル、２−（ｐ−トルエンスル
ホニル）エチル、２−(２′−ピリジル)エチル、２−
（ジフェニルホスフィノ）エチル、１−メチル−１−フ
ェニルエチル、ｔ−ブチル、シクロペンチル、シクロヘ
キシル、アリル、３−ブテン−１−イル、４−（トリメ
チルシリル）−２−ブテン−１−イル、シンナミル、α
−メチルシンナミル、フェニル、ｐ−（ｍ−メチルメル
カプト）−フェニル、およびベンジルを包含する。

【００４０】置換されたベンジルエステル置換されたベンジルエステルは、トリフェニルメチル、
ジフェニルメチル、ビス（ｏ−ニトロフェニル）メチ
ル、９−アントリルメチル、２−（９,１０−ジオキ
ソ）アントリルメチル、５−ジベンゾ−スベリル、１−
ピレニルメチル,２−(トリフルオロメチル)−６−クロ
ミルメチル、２,４,６−トリメチル−ベンジル、ｐ−ブ
ロモベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジ
ル、ｐ−メトキシベンジル、２,６−ジメトキシベンジ
ル、４−（メチルスルフィニル）ベンジル、４−スルホ
ベンジル、ピペロニル、および４−Ｐ−ベンジルを包含
する。シリルエステルシリルエステルは、トリメチルシリル、トリエチルシリ
ル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｉ−プロピルジメチル
シリル、フェニルジメチルシリル、およびジ−ｔ−ブチ
ルメチルシリルを包含する。

【００４１】種々雑多な誘導体種々雑多な誘導体は、オキサゾール、２−アルキル−
１,３−オキサゾリン、４−アルキル−５−オキソ−１,
３−オキサゾリジン、５−アルキル−４−オキソ−１,
３−ジオキソラン、オルトエステル、フェニル基、およ
びペンタアミノコバルト（III）複合体を包含する。スタニルエステルスタニルエステルの例は、トリエチルスタニルおよびト
リ−ｎ−ブチルスタニルを包含する。

【００４２】アミドおよびヒドラジドアミドは、Ｎ,Ｎ−ジメチル、ピロリジニル、ピペリジ
ニル、５,６−ジヒドロフェナントリジニル、ｏ−ニト
ロアニリド、Ｎ−７−ニトロインドリル、Ｎ−８−ニト
ロ−１,２,３,４−テトラヒドロキノリル、およびｐ−
Ｐ−ベンゼンスルホンアミドを包含する。ヒドラジド
は、Ｎ−フェニル、Ｎ,Ｎ′−ジイソプロピルおよび他
のジアルキルヒドラジドを包含する。

【００４３】アミノ基に対する保護カルバメートカルバメートは、カルバメート、置換されたエチル、補
助開裂、光分解開裂、尿素型誘導体、および種々雑多な
カルバメートを包含する。カルバメートカルバメートは、メチルおよびエチル、９−フルオレニ
ルメチル、９−（２−スルホ）フルオレニルメチル、９
−（２,７−ジブロモ）フルオレニルメチル、２,７−ジ
−ｔ−ブチル−〔９−（１０,１０−ジオキソ−１０,１
０,１０,１０−テトラヒドロ−チオキサンチル）メチ
ル、および４−メトキシフェナシルを包含する。

【００４４】置換されたエチル置換されたエチル保護基は、２,２,２−トリクロロエチ
ル、２−トリメチルシリルエチル、２−フェニルエチ
ル、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチル、
１,１−ジメチル−２−ハロエチル、１,１−ジメチル−
２,２−ジブロモエチル、１,１−ジメチル−２,２,２−
トリクロロエチル、１−メチル−１−（４−ビフェニリ
ル）エチル、１−（３,５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）
−１−メチルエチル、２−（２′−および４′−ピリジ
ル）エチル、２−（Ｎ,Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキ
サミド）−エチル、ｔ−ブチル、１−アダマンチル、ビ
ニル、アリル、１−イソプロピルアリル、シンナミル、
４−ニトロシンナミル、キノリル、Ｎ−ヒドロキシピペ
リジニル、アルキルジチオ、ベンジル、ｐ−メトキシベ
ンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ブロモベンジル，ｐ
−クロロベンジル、２,４−ジクロロベンジル、４−メ
チルスルフィニルベンジル、９−アントリルメチル、お
よびジフェニルメチルを包含する。

【００４５】補助開裂補助開裂による保護は、２−メチルチオエチル、２−メ
チルスルホニルエチル、２−（ｐ−トルエンスルホニ
ル）エチル、〔２−（１,３−ジチアニル)〕メチル、４
−メチルチオフェニル、２,４−ジメチル−チオフェニ
ル、２−ホスホニオエチル、２−トリフェニルホスホニ
オイソプロピル、１,１−ジメチル−２−シアノエチ
ル、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジル、ｐ−(ジ
ヒドロキシボリル)ベンジル、５−ベンズイソキサゾリ
ル−メチル、および２−（トリフルオロメチル）−６−
クロモニルメチルを包含する。

【００４６】光分解開裂光分解開裂法は、ｍ−ニトロフェニル、３,５−ジメト
キシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、３,４−ジメトキ
シ−６−ニトロベンジル、およびフェニル（ｏ−ニトロ
フェニル）メチルのような基を使用する。尿素型誘導体尿素型誘導体の例は、フェノチアジニル−(１０)−カル
ボニル誘導体、Ｎ′−ｐ−トルエンスルホニルアミノカ
ルボニル、およびＮ′−フェニルアミノチオカルボニル
を包含する。

【００４７】種々雑多なカルバメート上述したほかに、種々雑多なカルバメートは、ｔ−アミ
ル、Ｓ−ベンジルチオカルバメート、ｐ−シアノベンジ
ル、シクロブチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、
シクロプロピルメチル、ｐ−デシルオキシ−ベンジル、
ジイソプロピルメチル、２,２−ジメトキシ−カルボニ
ルビニル、ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジメチル−カルボキサミド）
−ベンジル、１,１−ジメチル−３（Ｎ,Ｎ−ジメチルカ
ルボキサミド）プロピル、１,１−ジメチル−プロピニ
ル、ジ（２−ピリジル）メチル、２−フラニルメチル、
２−ヨードエチル、イソボルニル、イソブチル、イソニ
コチニル、ｐ（ｐ′−メトキシフェニル−アゾ）ベンジ
ル、１−メチルシクロブチル、１−メチルシクロヘキシ
ル、１−メチル−１−シクロプロピル−メチル、１−メ
チル−（３,５−ジメトキシフェニル）エチル、１−メ
チル−１（ｐ−ヘニルアゾフェニル）−エチル、１−メ
チル−１−フェニルエチル、１−メチル−１−（４−ピ
リジル）エチル、フェニル、ｐ−（フェニルアゾ）ベン
ジル、２,４,６−トリ−ｔ−ブチルフェニル、４−（ト
リメチルアンモニウム）ベンジル、および２,４,６−ト
リメチルベンジルを包含する。

【００４８】アミドアミドアミドは、Ｎ−ホルミル、Ｎ−アセチル、Ｎ−クロロア
セチル、Ｎ−トリクロロアセチル、Ｎ−トリフルオロア
セチル、Ｎ−フェニルアセチル、Ｎ−３−フェニルプロ
ピオニル、Ｎ−ピコリノイル、Ｎ−３−ピリジル−カル
ボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、
Ｎ−ベンゾイル、およびＮ−ｐ−フェニルベンゾイルを
包含する。

【００４９】補助開裂補助開裂基は、Ｎ−ｏ−ニトロフェニルアセチル、Ｎ−
ｏ−ニトロフェノキシアセチル、Ｎ−アセトアセチル、
（Ｎ′−ジチオベンジルオキシカルボニルアミノ)アセ
チル、Ｎ−３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロピオニ
ル、Ｎ−３−（ｏ−ニトロフェニル）プロピオニル、Ｎ
−２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロピオ
ニル、Ｎ−２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノ
キシ）プロピオニル、Ｎ−４−クロロブチリル、Ｎ−３
−メチル−３−ニトロブチリル、Ｎ−ｏ−ニトロシンナ
モイル、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、Ｎ−ｏ−ニト
ロベンゾイル、Ｎ−ｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベ
ンゾイル、および４,５−ジフェニル−３−オキサゾリ
ン−２−オンを包含する。

【００５０】環状イミド誘導体環状イミド誘導体は、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアサ
クシノイル、Ｎ−２,３−ジフェニル−マレオイル、Ｎ
−２,５−ジメチルピロリル、Ｎ−１,１,４,４−テトラ
メチル−ジシリルアザシクロペンタン付加物、５−置換
された１,３−ジメチル−１,３,５−トリアザシクロヘ
キサン−２−オン、５−置換された１,３−ジベンジル
−１,３,５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、およ
び１−置換された３,５−ジニトロ−４−ピリドニルを
包含する。

【００５１】特別な−ＮＨ保護基 −ＮＨに対する保護基は、Ｎ−アルキルおよびＮ−アリ
ールアミン、イミン誘導体、エナミン誘導体、およびＮ
−ヘテロ原子誘導体（例えばＮ−金属、Ｎ−Ｎ、Ｎ−
Ｐ、Ｎ−Ｓｉ、およびＮ−Ｓ）、Ｎ−スルフェニル、お
よびＮ−スルホニルを包含する。

【００５２】Ｎ−アルキルおよびＮ−アリールアミンＮ−アルキルおよびＮ−アリールアミンは、Ｎ−メチ
ル、Ｎ−アリル、−〔２−（トリメチルシリル）エトキ
シル〕−メチル、Ｎ−３−アセトキシプロピル、Ｎ−
（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピ
ロリン−３−イル）、第４級アンモニウム塩、Ｎ−ベン
ジル、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチル、Ｎ−５
−ジベンゾスベリル、Ｎ−トリフェニルメチル、Ｎ−
(４−メトキシフェニル)ジフェニルメチル、Ｎ−９−フ
ェニルフルオレニル、Ｎ−２,７−ジクロロ−９−フル
オレニルメチレン、Ｎ−フェロセニルメチル、およびＮ
−２−ピコリルアミンＮ′−オキシドを包含する。

【００５３】イミン誘導体イミン誘導体は、Ｎ−１,１−ジメチルチオメチレン、
Ｎ−ベンジリデン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデン、Ｎ
−ジフェニルメチレン、Ｎ−〔(２−ピリジル)メシチ
ル〕メチレン、Ｎ−（Ｎ′,Ｎ′−ジメチルアミノメチ
レン）、Ｎ,Ｎ′−イソプロピリデン、Ｎ−ｐ−ニトロ
ベンジリデン、Ｎ−サリシリデン、Ｎ−５−クロロサリ
シリデン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニ
ル）フェニル−メチレン、およびＮ−シクロヘキシリデ
ンを包含する。エナミン誘導体エナミン誘導体の例は、Ｎ−（５,５−ジメチル−３−
オキソ−１−シクロヘキセニル）である。

【００５４】Ｎ−ヘテロ原子誘導体Ｎ−金属誘導体は、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニル
ボリン酸誘導体、Ｎ−〔フェニル（ペンタカルボニルク
ロミウム−または−タングステン）〕カルベニル、およ
びＮ−銅またはＮ−亜鉛キレートを包含する。Ｎ,Ｎ−
誘導体の例は、Ｎ−ニトロ、Ｎ−ニトロンおよびＮ−オ
キシドを包含する。Ｎ−Ｐ誘導体の例は、Ｎ−ジフェニ
ルホスフィニル、Ｎ−ジメチルチオホスフィニル、Ｎ−
ジフェニルチオホスフィニル、Ｎ−ジアルキルホスホリ
ル、Ｎ−ジベンジルホスホリル、およびＮ−ジフェニル
ホスホリルを包含する。Ｎ−スルフェニル誘導体の例
は、Ｎ−ベンゼンスルフェニル、Ｎ−ｏ−ニトロベンゼ
ンスルフェニル、Ｎ−２,４−ジニトロベンゼンスルフ
ェニル、Ｎ−ペンタクロロベンゼンスルフェニル、Ｎ−
２−ニトロ−４−メトキシ−ベンゼンスルフェニル、Ｎ
−トリフェニルメチルスルフェニル、およびＮ−３−ニ
トロピリジンスルフェニルを包含する。Ｎ−スルホニル
誘導体は、Ｎ−ｐ−トルエンスルホニル、Ｎ−ベンゼン
スルホニル、Ｎ−２,３,６−トリメチル−４−メトキシ
ベンゼンスルホニル、Ｎ−２,４,６−トリメトキシベン
ゼンスルホニル、Ｎ−２,６−ジメチル−４−メトキシ
−ベンゼンスルホニル、Ｎ−ペンタメチルベンゼンスル
ホニル、Ｎ−２,３,５,６−テトラメチル−４−メトキ
シベンゼン−スルホニル、Ｎ−４−メトキシベンゼンス
ルホニル、Ｎ−２,４,６−トリメチルベンゼンスルホニ
ル、Ｎ−２,６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスル
ホニル、Ｎ−２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−
６−スルホニル、Ｎ−メタンスルホニル、Ｎ−β−トリ
メチル−シリルエタンスルホニル、Ｎ−９−アントラセ
ンスルホニル、Ｎ−４−（４′,８′−ジメトキシナフ
チルメチル）−ベンゼンスルホニル、Ｎ−ベンジルスル
ホニル、Ｎ−トリフルオロメチルスルホニル、およびＮ
−フェナシルスルホニルを包含する。

【００５５】マスクされているまたは保護されている開
示した化合物は、インビボで代謝またはさもなければ変
換されて、例えば代謝中に短期的に開示した化合物を生
ずるプロドラッグであることができる。この変換は、血
液のような体液または酸の作用または肝臓、胃腸または
他の酵素との接触から生ずる加水分解または酸化である
ことができる。本発明の特徴を、さらに以下の実施例に
よって説明する。

【００５６】Ｅ．実施例実施例１ＭＡＰキナーゼ経路の阻害剤に対するカスケードアッセ
イミエリン塩基性蛋白質（ＭＢＰ）への³²Ｐの取り込み
を、ｐ４４ＭＡＰキナーゼを含有するグルタチオンＳ−
トランスフェラーゼ融合蛋白質（ＧＳＴ−ＭＡＰＫ）お
よびｐ４５ＭＥＫを含有するグルタチオンＳ−トランス
フェラーゼ融合蛋白質(ＧＳＴ−ＭＥＫ)の存在下におい
てアッセイする。アッセイ溶液は、１００μlの最終容
量中に２０mMのＨＥＰＥＳ（pH７.４)、１０mMのＭｇＣ
ｌ₂、１mMのＭｎＣｌ₂、１mMのＥＧＴＡ、５０μMの
〔γ−³²Ｐ〕ＡＴＰ、１０μgのＧＳＴ−ＭＥＫ、０.５
μgのＧＳＴ−ＭＡＰＫおよび４０μgのＭＢＰを含有す
る。反応は、２０分後に、トリクロロ酢酸の添加によっ
て停止しそしてＧＦ／Ｃフィルターマットを通して濾過
する。フィルターマット上に保持された³²Ｐを、１２０
Ｓ Betaplateを使用して測定する。化合物は、１０μM
において、³²Ｐの取り込みを阻害する能力について評価
する。

【００５７】化合物がＧＳＴ−ＭＥＫまたはＧＳＴ−Ｍ
ＡＰＫを阻害するかどうかを確かめるために、２つの追
加のプロトコールを使用する。第一のプロトコールにお
いては、化合物を、ＧＳＴ−ＭＥＫを含有する管に加
え、次いでＧＳＴ−ＭＡＰＫ、ＭＢＰおよび〔γ−
³²Ｐ〕ＡＴＰを加える。第二のプロトコールにおいて
は、化合物を、ＧＳＴ−ＭＥＫおよびＧＳＴ−ＭＡＰＫ
の両方を含有する管に加え、次いでＭＢＰおよび〔γ−
³²Ｐ〕ＡＴＰを加える。両方のプロトコールにおいて活
性を示す化合物は、ＭＡＰＫ阻害剤としてスコアーし、
一方において、第一のプロトコールのみにおいて活性を
示す化合物は、ＭＥＫ阻害剤としてスコアーする。

【００５８】実施例２インビトロＭＡＰキナーゼアッセイ阻害活性は、直接的なアッセイにおいて確認することが
できる。ＭＡＰキナーゼにおいては、５０mMのトリス
（pH７.５）、１０μMのＭｇＣｌ₂、２μMのＥＧＴＡお
よび１０μMの〔γ−³²Ｐ〕ＡＴＰを含有する５０μlの
最終容量中において、ＧＳＴ−ＭＡＰＫ１μgを、ＭＢ
Ｐ４０μgと一緒に、３０℃で１５分インキュベートす
る。反応をLaemmli ＳＤＳサンプル緩衝液の添加によっ
て停止しそして燐酸化されたＭＢＰを、１０％ポリアク
リルアミドゲル上の電気泳動によって分割する。ＭＢＰ
中に取り込まれた放射能を、オートラジオグラフィーお
よび取り出したバンドのシンチレーション計数の両方に
よって測定する。

【００５９】実施例３インビトロＭＥＫアッセイ直接的なＭＥＫ活性の評価においては、ＧＳＴ−ＭＥ
Ｋ、１０μgを、７１位におけるアラニンへのリシンの
突然変異を有するｐ４４ＭＡＰキナーゼを含有するグル
タチオンＳ−トランスフェラーゼ融合蛋白質（ＧＳＴ−
ＭＡＰＫ−ＫＡ）５μgと一緒にインキュベートする。
この突然変異は、ＭＡＰＫのキナーゼ活性を除去し、添
加したＭＥＫに帰するキナーゼ活性のみが残る。５０mM
のトリス（pH７.５）、１０μMのＭｇＣｌ₂、２μMのＥ
ＧＴＡおよび１０μMの〔γ−³²Ｐ〕ＡＴＰを含有する
５０μlの最終容量中において、３０℃で１５分インキ
ュベートする。反応は、Laemmli ＳＤＳサンプル緩衝液
の添加によって停止する。燐酸化されたＧＳＴ−ＭＡＰ
Ｋ−ＫＡを、１０％ポリアクリルアミドゲル上の電気泳
動によって分割する。ＧＳＴ−ＭＡＰＫ−ＫＡに取り込
まれた放射能を、オートラジオグラフィーおよび取り出
したバンドの次のシンチレーション計数によって測定し
た。さらに、２１８および２２２位におけるグルタメー
トへのセリンの突然変異を含有する人工的に活性化され
たＭＥＫ（ＧＳＴ−ＭＥＫ−２Ｅ）を使用する。これら
の２個の部位が燐酸化されたときに、ＭＥＫ活性が増加
される。これらの部位の燐酸化は、グルタメートへのセ
リン残基の突然変異によって擬態される。このアッセイ
においては、ＧＳＴ−ＭＥＫ−２Ｅ５μgを、上述した
反応緩衝液中において、ＧＳＴ−ＭＡＰＫ−ＫＡ５μg
と一緒に、３０℃で１５分インキュベートする。反応
は、上述したように終結させそして分析する。

【００６０】実施例４全細胞ＭＡＰキナーゼアッセイ化合物が全細胞におけるＭＡＰキナーゼの活性化を遮断
するかどうかを測定するために、次のプロトコールを使
用する。細胞をマルチ−ウエルプレート中で平面培養
し、密集増殖させる。細胞を、一夜血清奪取（serum-de
prived）する。細胞を、所望の濃度の化合物またはビヒ
クル（ＤＭＳＯ）に３０分さらし次いで増殖因子、例え
ばＰＤＧＦ(１００ng／ml)を加える。増殖因子による５
分の処理後に、細胞をＰＢＳで洗浄し、７０mMのＮａＣ
ｌ、１０mMのＨＥＰＥＳ(pH７.４）、５０mMのグリセロ
ールホスフェートおよび１％のトライトンＸ−１００か
らなる緩衝液中で溶解する。溶解液を、１０分間の１
３,０００×ｇにおける遠心分離によって清澄化する。
得られた上澄液５ミクログラムを、５０mMのトリス（pH
７.４)、１０mMのＭｇＣｌ₂、２mMのＥＧＴＡおよび３
０μMの〔γ−³²Ｐ〕ＡＴＰを含有する２５μlの最終容
量中において、微小管結合蛋白質−２（Ｍａｐ２）１０
μgと一緒に３０℃で１５分インキュベートする。反応
は、Laermmliサンプル緩衝液の添加によって終結する。
燐酸化されたＭａｐ２を、７.５％アクリルアミドゲル
上で分割しそして取り込まれた放射能を取り出されたバ
ンドのシンチレーション計数によって測定する。

【００６１】実施例５³ Ｈ−チミジン取り込み細胞を、マルチ−ウエルプレート中で平面培養し密集近
くまで増殖させる。それから、培地を除去しそして１％
の牛血清アルブミンを含有する増殖培地で置換する。２
４時間の血清飢餓後に、試験化合物および特異性増殖因
子を加えインキュベーションをさらに２４時間つづけ
る。最後の２時間の間に、³Ｈ−チミジンを培地に加え
る。インキュベーションを終結するために、培地を除去
し、そして細胞層を氷冷燐酸塩緩衝生理食塩水溶液で２
回洗浄する。最後の洗浄後に、氷冷５％トリクロロ酢酸
を加え細胞を室温で１５分インキュベートする。それか
ら、トリクロロ酢酸溶液を除去し細胞層を蒸溜水で３回
洗浄する。最後の洗浄後に、細胞層を２％のドデシル硫
酸ナトリウムの添加によって可溶化する。この溶液の放
射能を、シンチレーション計数によって測定する。これ
は、阻害剤がインスリンの有糸分裂誘発および代謝作用
の間で選択的であることを証明する。一般に、選択的阻
害剤は、非選択的阻害剤よりも低い毒性を示す。

【００６２】実施例６単層増殖細胞を、１０〜２０,０００細胞／mlにおいて、マルチ
−ウエルプレート中に入れた。接種の４８時間後に、試
験化合物を細胞増殖培地に加えインキュベーションをさ
らに２日間つづけた。それから、細胞をトリプシンとの
インキュベーションによってウエルから除去しコールタ
ーカウンターにより計数する。

【００６３】実施例７軟質寒天中における増殖０.３％の寒天を含有する増殖培地を使用して、細胞
を、５〜１０,０００細胞／皿において３５mmの皿に接
種する。冷却して寒天を固化した後、細胞を３７℃のイ
ンキュベーターに移す。７〜１０日の増殖後に、可視コ
ロニーを、解剖顕微鏡を用いて手動で計数する。

【００６４】実施例８マウスにおけるコラーゲン誘発関節炎マウスにおけるII型コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）
は、慢性関節リウマチと共通の多くの病理学的、免疫学
的および遺伝学的特徴を有している関節炎の実験モデル
である。この疾患は、フロイント完全アジュバントにお
いて皮内的に排出される関節軟骨の主な成分であるII型
コラーゲン１００μgによるＯＢＡ／１マウスの免疫化
によって誘発される。この疾患の感受性は、クラスII
ＭＨＣ遺伝子座によって調節され、これは、ＨＬＡ−Ｄ
Ｒ４と慢性関節リウマチとの関係に類似している。

【００６５】１００％までの足幅増加によって特徴づけ
られる進行性および炎症性の関節炎は、免疫化された大
多数のマウスにおいて出現する。試験化合物は、１日に
つき体重１kg当たり２０、６０、１００および２００mg
のような範囲の量でマウスに投与する。試験の期間は、
４０、６０または８０日のような数週間〜数ケ月の範囲
にすることができる。紅斑および浮腫（段階１）から関
節の歪曲（段階２）、関節の強直（段階３）への疾患の
進行を評価するために、臨床的スコアリング指数を使用
する。疾患は、動物の１本またはすベての足に影響を及
ぼし、結果としてそれぞれのマウスに対して１２の可能
な全スコアリングを与えるように変化することができ
る。関節炎性の関節の組織病理学は、滑膜炎、パンヌス
形成および軟骨および骨の侵食を示す。ＣＩＡに感受性
であるすべてのマウス種は、II型コラーゲンに対する高
い抗体応答動物でありＣIIに対する著しい細胞応答があ
る。

【００６６】実施例９ＳＣＷ−誘発単関節の関節炎関節炎は、僅かな変化を行ってSchwab等〔Infection an
d immunity 59：4436-4442 (1991)〕に記載のように誘
発される。０日目に、右の脛距骨（tibiotalar)関節に
関節内的に注射することによって、超音波処理したＳＣ
Ｗ６μg〔Dulbecco's PBS (DPBS）１０μl中の〕をラ
ットに与える。２１日目に、静脈内的に投与されたＳＣ
Ｗ１００μg（２５０μl）によって、ＤＴＨを開始す
る。経口的な化合物の研究においては、化合物をビヒク
ル（０.５％のヒドロキシプロピル−メチルセルロース
／０.２％のTween ８０）に懸濁し、超音波処理し、Ｓ
ＣＷによる再活性化の１時間前に始めて、１日当たり２
回投与(１０ml／kg容量)する。化合物は、２０、３０、
６０、１００、２００および３００mg／kg／日のような
１０〜５００mg／kg／日の間の量で投与される。浮腫測
定は、２１日目の再活性化前の感作した後足の基準容量
を測定し、これらを２２、２３、２４および２５日目に
おけるようなその後の時間点における容量と比較するこ
とによって得られる。足の容量は、水銀体積変動記録法
によって測定される。

【００６７】実施例１０マウス耳−心臓移植モデル Fey T.A.等〔J. Pharm. and Toxic. Meth. 39：9-17 (1
998)〕は、マウスおよびラットの耳の耳介に、分断され
た新生児の心臓の移植片を移植する方法を記載してい
る。化合物は、無水のエタノール、水中の０.２％のヒ
ドロキシプロピルメチルセルロース、プロピレングリコ
ール、クレモフォールおよびデキストロース、または他
の溶剤または懸濁ビヒクルの組み合わせを含有する溶液
に溶解する。マウスには、移植の日（０日目）から１３
日目までまたは移植片が拒絶されるまで、１日当たり
１、２または３回経口的にまたは腹腔内的に投薬する。
ラットには、０日目から１３日目まで１日当たり１、２
または３回投薬する。それぞれの動物を麻酔し、切開を
受容動物の耳の根元において行って背側の表皮および真
皮のみを切る。この切開を頭に平行に軟骨の方へ広げそ
してラットに対する穴あけ器具またはマウスに対する挿
入器具を収容するために十分に広げる。生後６０時間未
満の新生児のマウスまたはラットの子供を麻酔し、頸部
脱臼する。心臓を胸部から除去し、生理食塩水ですす
ぎ、小刀で縦方向に２分しそして滅菌した生理食塩水で
すすぐ。供与動物の心臓のフラグメントを、挿入器具に
より予め形成したトンネルに入れそして空気または残留
液体を、軽い加圧によりトンネルから圧出する。縫い合
わせ、接着結合、包帯または抗生物質による処理は不要
である。

【００６８】麻酔することなく、移植片を立体鏡の解剖
顕微鏡によって１０〜２０倍の倍率で検査する。移植片
が目に見えて搏動していない受容動物は麻酔しそして耳
介または直接移植片におかれたGrass Ｅ２白金皮下ピン
微小電極およびタコグラフを使用して電気活性の存在に
ついて評価することができる。移植片は、１０日、２０
日、３０日またはそれ以上の日数の間１日当たり１〜４
回検査することができる。移植拒絶の症状を軽減する試
験化合物の能力は、シクロスポリン、タクロリムスまた
は経口的に投与されるレフルオノミドのような比較対照
化合物と比較することができる。

【００６９】実施例１１ヒトのＰＢＭＣ蛋白質抽出液中の燐酸化ＥＲＫ１／ＥＲ
Ｋ２のウエスタンブロット分析溶解緩衝液およびプロテアーゼ阻害剤の調製液これらの成分を加え４℃で貯蔵する。原料量最終濃度ＮａＣｌ２.４５４ｇ７０mM β−グリセロールホスフェート５.４ｇ５０mM １ＭＨＥＰＥＳ５ml １０mM トライトンＸ−１００５ml １％ｄｄＨ₂Ｏ５００mlにするのに十分な量次の原溶液を製造しそして溶解緩衝液に加える前に推薦
された条件下で貯蔵する。次の溶液は、溶解工程の直前
に溶解緩衝液に加えなければならない。この溶液は、時
間より３０分以上早く製造してはならず使用するまで４
℃で貯蔵しなければならない。

【００７０】原料量最終濃度貯蔵１．Ｎａ₃ＶＯ₄ ３.６７８ｇ１００mM ４℃ ｄｄＨ₂Ｏ２００ml ２．ＰＭＳＦ１７.４mg １００mM −２０℃ ＥｔＯＨ１ml ３週毎に新しい原溶液を調製し光から保護して貯蔵する。３．ロイペプチン５mg １mg／ml −２０℃ ｄｄＨ₂Ｏ５ml ３種の成分を、２５mlの溶解緩衝溶液に加える。

【００７１】最終濃度原溶液量１mM Ｎａ₃ＶＯ₄ １００mM ２５０μl １μM ＰＭＳＦ１００mM ｄｄＨ₂Ｏ中で１：１００、次いで、２５μlを溶解緩衝液に加える。１mMロイペプチン１mg／ml １１.９μl

【００７２】非粘着細胞を１５mlのコニカル管（氷上
の）に集め、４℃で５分間８００rpmで遠心分離して細
胞をペレット化する。溶解緩衝液２５０μlをそれぞれ
のウエルに加える（それぞれのウエルには、１０×１０
⁶の細胞を供給した）。反復してピペットで上下させて
プレート上の細胞を溶解する。一旦非粘着細胞がペレッ
ト化されたら、上澄液を吸引分離しペレットを相当する
ウエルからの溶解緩衝液で再懸濁する。非粘着細胞ペレ
ットを移し変える前に緩衝液を反復してピペットにより
導入し細胞が溶解され完全に組織培養皿から除去される
ことを確実にする。管の中のピペットの容積のすべての
細胞を溶解する。試料を４℃で１５分２５００×ｇで遠
心分離する。上澄液を、キャップを有する微小遠心分離
管に集め−８０℃でさらに使用されるまで貯蔵する。

【００７３】ゲル電気泳動１００mlの１０Ｘトリス／グリシン／ＳＤＳ緩衝液（No
vex LC 2675）をｄｄＨ₂Ｏで１Ｌにうすめる。Novexか
らの１.０または１.５mmの１０％トリスグリシンプレ−
キャストゲルを使用する。使用されたゲルの厚さ(１.０
または１.５mm)は、１ウエル当たり負荷される試料の容
量に依存する。次の表は、利用できるゲルの収容能力を
示す。ウエルの数ゲルの厚さ最大のウエル容量１０１.０ml ２５μl １５１.０mm １５μl １０１.５mm ３７μl １５１.５mm ２５μl

【００７４】ゲルポーチを開きそしてゲルカセットを取
り出す。テープを底部から離脱しそしてくし（comb）を
注意深く引き出す。ウエルを１Ｘトリス／グリシン／Ｓ
ＤＳランニング緩衝液ですすぐ。カセットのウエル側が
緩衝液コアに面するように、ゲルをMini-Cell中で配向
する。このコアをランニング緩衝液で満たし、漏れをチ
ェックする。ゲルを１００Ｖにおいて１５分予備通電(p
re-run）する。適当な容量の蛋白質およびNovexトリス
−グリシンＳＤＳ試料緩衝液(ＬＣ２６７６)を加える
ことによって試料を製造する。１レーン当たり試料の少
なくとも１０μlを負荷することが最も理想的である。
必要な容量を計算するために、３つのレーンに１レーン
当たり５μgを負荷するのに必要な蛋白質の量を測定す
る。一旦これが測定されたら、適当な容量の蛋白質試料
をエペンドルフ管(eppendorf tube)にアリコートし、そ
して等容量の２Ｘトリス−グリシンＳＤＳ緩衝液を加え
る。全体の容量を、１レーン当たり負荷される試料の容
量を測定するために、３で割る。試料を９５℃で５分加
熱する。１０μlの分子量マーカー（Benchmark Prestai
ned Protein Ladder；Gibco BRL 10748-010）を、標準
レーンに負荷する。ゲルを１２５Ｖ（一定の電圧）また
はそれ未満において約９０分または青色の染色前面がゲ
ルの底部に達するまで通電する。

【００７５】転移（transfer）４０mlの２５Ｘトリス−
グリシン転移緩衝液(Novex LC 3675)を、ｄｄＨ₂Ｏで１
Ｌにうすめる。ゲルをカセットから除去し穏やかに振盪
しながら、１Ｘ転移緩衝液中で１０分すすぐ。ニトロセ
ルロースおよび濾紙(Novex LC 2001）を、１Ｘ転移緩衝
液中で１０分予備湿潤する。ブロッティングパッド（No
vex EI 9052）を、１Ｘ転移緩衝液中で飽和するまで浸
漬する。緩衝液中で絞ることによって、空気ポケットお
よび気泡を除去する。ブロットモジュールを組み立て
る。コアを１Ｘ転移緩衝液で満たし、漏れをチェックす
る。外部の室を転移緩衝液で満たす。２５０mA max（一
定の電流）において１時間１５分転移する。

【００７６】実施例１２ネズミのオボアルブミン誘発好酸球増加雌のＣ５７ＢＬ／６マウスを、Jackson Laboratory(Bar
Harbor, ME)から得た。すべての動物に、食物および水
を自由に与えた。マウスを０日目に、みょうばんに吸着
させたＯＶＡ（グレードＶ、Sigma Chemical Company,
St. Louis, MO)（生理食塩水２００μl中のＯＶＡ１０
μg＋みょうばん９mg）またはビヒクル比較対照（生理
食塩水２００μl中のみょうばん９mg）１回の腹腔内注
射によって感作する。１４日目に、マウスを、噴霧器
（小粒子発生機、モデルSPAG-2；ICN Pharmaceuticals,
Costa Mesa, CA）により製造された生理食塩水中の１.
５（重量／容量）％のＯＶＡからなるエアゾルの１２分
の吸入によって挑戦する。８匹のマウスの群に経口ビヒ
クル（０.５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース
／０.２５％のTween 80）または経口ビヒクル中の１
０、３０または１００mg／kgの試験化合物（１匹のマウ
ス当たり２００μl、経口的）を投与する。投与は、７
日目または１３日に始めて１６日目まで延長して１日当
たり１回投与する。

【００７７】肺の好酸球増加を測定するために、はじめ
のＯＶＡエアゾル挑戦(１７日目)の３日後に、マウスを
麻酔薬（ケタミン／アセプロマジン／キシラジン）の腹
腔内注射によって麻酔し、気管を露出しカニューレを挿
入する。肺および上部気道を冷ＰＢＳ０.５mlで２回洗
浄する。気管支肺胞洗浄(ＢＡＬ)液体の一部（２００μ
l）を、コールターカウンターモデルＺＢ１(Coulter El
ectronics, Hialeah，FL）を使用して計数する。それか
ら、残留するＢＡＬ液体を、３００×ｇで５分遠心分離
し、細胞を０.５％のウシ胎仔血清(HyClone）および１
０mM ＨＥＰＥＳ（Gibco BRL）を含有するＨＢＳＳ（Gi
bco BRL）１ml中で再懸濁する。この細胞懸濁液を、サ
イトスピン（Shandon Southern Instruments, Sewickle
y, PA)中で遠心分離し、Diff Quick（American Scienti
fic Products, McGraw Park, IL)によって染色してＢＡ
Ｌ白血球を好中球、好酸球、単球またはリンパ球サブセ
ットに分ける。ＢＡＬ液体中の好酸球の数は、好酸球の
％に全細胞数を乗ずることによって測定される。

【００７８】Ｆ．他の態様上記の開示および実施例および特許請求の範囲から、本
発明の特徴は容易に理解される。また、本発明の範囲
は、当業者の知識内の種々の変形を包含する。実施例
は、保護基の添加または除去によって変形された化合
物、または開示した化合物のエステル、医薬的塩、水和
物、酸、またはアミドを包含する。引用された文献は、
全体において参照によって本明細書中に加入する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 31/18 Ａ６１Ｋ 31/00 ６３１Ｍ 35/00 ６３５ 37/06 ６３７ＤＡ６１Ｋ 31/18 31/18 Ｃ０７Ｄ 521/00 Ｃ０７Ｄ 521/00 Ｆターム(参考） 4C206 AA01 AA03 JA15 MA01 MA04 NA14 ZA16 ZA36 ZA45 ZA75 ZA89 ZA96 ZB02 ZB07 ZB15 ZB26 ZB33 ZB35 ZC35 ZC55 4H006 AA01 AA03 AB20 AB21 AB23 AB27 AB28 AB29

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（Ｉ）【化１】の化合物またはその医薬的に許容し得る塩またはそのＣ
_1-8エステル。上記式において、Ｒ₁は、Ｈ、Ｃ_1-8アルキル、Ｃ_3-8アルケニル、Ｃ_3-8ア
ルキニル、Ｃ_3-8シクロアルキル、フェニル、（フェニ
ル）Ｃ_1-4アルキル、（フェニル）Ｃ_3-4アルケニル、
（フェニル）Ｃ_3-4アルキニル、（Ｃ_3-8シクロアルキ
ル）Ｃ_1-4アルキル、（Ｃ_3-8シクロアルキル）Ｃ_3-4ア
ルケニル、（Ｃ_3-8シクロアルキル）Ｃ_3-4アルキニル、
Ｃ_3-8複素環式基、（Ｃ_3-8複素環式基）Ｃ_1-4アルキ
ル、（Ｃ_3-8複素環式基）Ｃ_3-4アルケニル、（Ｃ_3-8複
素環式基）Ｃ_3-4アルキニル、(ＣＨ₂)_2-4ＯＲ_Cまたは
(ＣＨ₂)_2-4ＮＲ_CＲ_Dであり；Ｒ₂は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキ
ル、フェニル、Ｃ_3-6シクロアルキル、Ｃ_3-6複素環式基
または（Ｃ_3-6シクロアルキル）メチルであり；Ｒ₃およ
びＲ₄のそれぞれは、独立して、Ｈ、Ｆ、ＮＯ₂、Ｂrお
よびＣlから選択されたものであり；Ｒ₅は、ＨおよびＦ
から選択されたものであり；Ｒ₆は、Ｈ、ＣlまたはＣＨ
₃であり；Ｒ_CおよびＲ_Dのそれぞれは、独立して、Ｈ、
Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_3-4アルケニル、Ｃ_3-4アルキニル、
Ｃ_3-6シクロアルキルおよびフェニルから選択されたも
のであるか；またはＮＲ_CＲ_Dは、ピペリジノ、モルホリ
ノまたはＮ−（Ｃ_1-6アルキル）ピペラジノ環であるこ
とができ；上述したそれぞれの炭化水素基は、場合によ
っては、独立してハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、
（アミノ）スルホニルおよびＮＯ₂から選択された１〜
３個の置換分により置換されていてもよく；そして上述
したそれぞれの複素環式基は、場合によっては、独立し
てハロゲン、Ｃ_1- ₄アルキル、Ｃ_3-6シクロアルキル、Ｃ
_3-4アルケニル、Ｃ_3-4アルキニル、フェニル、ヒドロキ
シル、アミノ、（アミノ）スルホニルおよびＮＯ₂から
選択された１〜３個の置換分によって置換されていても
よく、そしてそれぞれの置換分アルキル、シクロアルキ
ル、アルケニル、アルキニルまたはフェニルは、次いで
場合によっては、独立してハロゲン、Ｃ_1-2アルキル、
ヒドロキシル、アミノおよびＮＯ₂から選択された１〜
２個の置換分により置換されていてもよい。
【請求項２】Ｒ₃が臭素または塩素である請求項１記
載の化合物。
【請求項３】Ｒ₄が弗素である請求項１記載の化合
物。
【請求項４】Ｒ₅がＨである請求項１記載の化合物。
【請求項５】Ｒ₄およびＲ₅のそれぞれがＨである請求
項４記載の化合物。
【請求項６】Ｒ₄およびＲ₅のそれぞれが弗素である請
求項１記載の化合物。
【請求項７】Ｒ₃が臭素である請求項６記載の化合
物。
【請求項８】Ｒ₃が弗素である請求項６記載の化合
物。
【請求項９】Ｒ₄がニトロである請求項１記載の化合
物。
【請求項１０】Ｒ₅がＨである請求項８記載の化合
物。
【請求項１１】Ｒ₆が塩素である請求項１記載の化合
物。
【請求項１２】Ｒ₆がメチルである請求項１記載の化
合物。
【請求項１３】Ｒ₁がＨまたはＣ_1-4アルキルであり、
Ｒ₂がＨである請求項１記載の化合物。
【請求項１４】Ｒ₁が（Ｃ_3-6シクロアルキル）メチル
である請求項１記載の化合物。
【請求項１５】Ｒ₁がＨである請求項１記載の化合
物。
【請求項１６】Ｒ₁が(ＣＨ₂)_2-4ＯＲ_Cまたは(ＣＨ₂)
_2-4ＮＲ_CＲ_Dである請求項１記載の化合物。
【請求項１７】構造：４−フルオロ−２−（４−ヨー
ド−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゼンスルホン
酸；４−フルオロ−Ｎ−ヒドロキシ−２−（４−ヨード
−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゼンスルホンア
ミド；Ｎ−シクロプロピルメトキシ−４−フルオロ−２
−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベン
ゼンスルホンアミド；３,４−ジフルオロ−２−(４−ヨ
ード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゼンスルホ
ン酸；３,４−ジフルオロ−Ｎ−ヒドロキシ−２−（４
−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゼンス
ルホンアミド；Ｎ−シクロプロピルメトキシ−３,４−
ジフルオロ−２−(４−ヨード−２−メチル−フェニル
アミノ）−ベンゼンスルホンアミド；３,４,５−トリフ
ルオロ−２−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミ
ノ）−ベンゼンスルホン酸；３,４,５−トリフルオロ−
Ｎ−ヒドロキシ−２−（４−ヨード−２−メチル−フェ
ニルアミノ）−ベンゼンスルホンアミド；Ｎ−シクロプ
ロピルメトキシ−３,４,５−トリフルオロ−２−(４−
ヨード−２−メチル−フェニルアミノ)−ベンゼンスル
ホンアミド；５−ブロモ−３,４−ジフルオロ−２−
（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゼ
ンスルホン酸；５−ブロモ−３,４−ジフルオロ−Ｎ−
ヒドロキシ−２−（４−ヨード−２−メチル−フェニル
アミノ）−ベンゼンスルホンアミド；５−ブロモ−Ｎ−
シクロプロピルメトキシ−３,４−ジフルオロ−２−
（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゼ
ンスルホンアミド；２−（４−ヨード−２−メチル−フ
ェニルアミノ）−４−ニトロ−ベンゼンスルホン酸；Ｎ
−ヒドロキシ−２−（４−ヨード−２−メチル−フェニ
ルアミノ）−４−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド；ま
たはＮ−シクロプロピルメトキシ−２−（４−ヨード−
２−メチル−フェニルアミノ）−４−ニトロ−ベンゼン
スルホンアミドを有する請求項１記載の化合物。
【請求項１８】構造：２−（２−クロロ−４−ヨード
−フェニルアミノ）−４−フルオロ−ベンゼンスルホン
酸；２−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）
−４−フルオロ−Ｎ−ヒドロキシ−ベンゼンスルホンア
ミド；２−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミ
ノ）−Ｎ−シクロプロピルメトキシ−４−フルオロ−ベ
ンゼンスルホンアミド；２−（２−クロロ−４−ヨード
−フェニルアミノ）−３,４−ジフルオロ−ベンゼンス
ルホン酸；２−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルア
ミノ）−３,４−ジフルオロ−Ｎ−ヒドロキシ−ベンゼ
ンスルホンアミド；２−（２−クロロ−４−ヨード−フ
ェニルアミノ）−Ｎ−シクロプロピルメトキシ−３,４
−ジフルオロ−ベンゼンスルホンアミド；２−（２−ク
ロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−３,４,５−トリ
フルオロ−ベンゼンスルホン酸；２−（２−クロロ−４
−ヨード−フェニルアミノ）−３,４,５−トリフルオロ
−Ｎ−ヒドロキシ−ベンゼンスルホンアミド；２−（２
−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−Ｎ−シクロ
プロピルメトキシ−３,４,５−トリフルオロ−ベンゼン
スルホンアミド；５−ブロモ−２−（２−クロロ−４−
ヨード−フェニルアミノ）−３,４−ジフルオロ−ベン
ゼンスルホン酸；５−ブロモ−２−（２−クロロ−４−
ヨード−フェニルアミノ）−３,４−ジフルオロ−Ｎ−
ヒドロキシ−ベンゼンスルホンアミド；５−ブロモ−２
−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−Ｎ−
シクロプロピルメトキシ−３,４−ジフルオロ−ベンゼ
ンスルホンアミド；２−（２−クロロ−４−ヨード−フ
ェニルアミノ）−４−ニトロ−ベンゼンスルホン酸；２
−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−Ｎ−
ヒドロキシ−４−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド；ま
たは２−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）
−Ｎ−シクロプロピルメトキシ−４−ニトロ−ベンゼン
スルホンアミドを有する請求項１記載の化合物。
【請求項１９】請求項１記載の化合物および医薬的に
許容し得る担体からなる医薬組成物。
【請求項２０】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、増殖性疾患の治療を必要とす
る患者に投与することからなる増殖性疾患を治療する方
法。
【請求項２１】増殖性疾患が乾癬、再狭窄、自己免疫
疾患およびアテローム性動脈硬化症から選択されたもの
である請求項２０記載の方法。
【請求項２２】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、癌の治療を必要とする患者に
投与することからなる癌を治療する方法。
【請求項２３】癌がＭＥＫ−関連の癌である請求項２
２記載の方法。
【請求項２４】癌が、脳、乳房、肺、卵巣、膵臓、前
立腺または結腸直腸癌である請求項２２記載の方法。
【請求項２５】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、発作の続発症の治療を必要と
する患者に投与することからなる発作の続発症を治療ま
たは軽減する方法。
【請求項２６】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、心不全の続発症の治療を必要
とする患者に投与することからなる心不全の続発症を治
療または軽減する方法。
【請求項２７】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、器官移植また骨髄移植患者に
投与することからなる異種移植片拒絶の症状を治療また
は軽減する方法。
【請求項２８】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、変形性関節症の治療を必要と
する患者に投与することからなる変形性関節症を治療す
る方法。
【請求項２９】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、慢性関節リウマチの治療を必
要とする患者に投与することからなる慢性関節リウマチ
を治療する方法。
【請求項３０】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、嚢胞性線維症の治療を必要と
する患者に投与することからなる嚢胞性線維症を治療す
る方法。
【請求項３１】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、肝腫の治療を必要とする患者
に投与することからなる肝腫を治療する方法。
【請求項３２】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、心臓肥大の治療を必要とする
患者に投与することからなる心臓肥大を治療する方法。
【請求項３３】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、アルツハイマー病の治療を必
要とする患者に投与することからなるアルツハイマー病
を治療する方法。
【請求項３４】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、糖尿病の治療を必要とする患
者に投与することからなる糖尿病を治療する方法。
【請求項３５】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、敗血症性ショックの治療を必
要とする患者に投与することからなる敗血症性ショック
を治療する方法。
【請求項３６】請求項１記載の化合物を含有する組成
物の医薬的に有効な量を、ウイルス感染の治療を必要と
する患者に投与することからなるウイルス感染を治療す
る方法。
【請求項３７】ウイルス感染がＨＩＶの感染である請
求項３６記載の方法。
【請求項３８】（ａ）請求項１記載の化合物を含有す
る組成物の医薬的に有効な量を、癌の治療を必要とする
患者に投与し；そして（ｂ）放射線療法および化学療法
から選択された治療を行うことからなる癌を治療する方
法。
【請求項３９】化学療法が有糸分裂阻害剤からなる請
求項３８記載の方法。