EA030246B1 - Полимерные соединения-иммуномодулирующие средства - Google Patents

Полимерные соединения-иммуномодулирующие средства Download PDF

Info

Publication number
EA030246B1
EA030246B1 EA201171480A EA201171480A EA030246B1 EA 030246 B1 EA030246 B1 EA 030246B1 EA 201171480 A EA201171480 A EA 201171480A EA 201171480 A EA201171480 A EA 201171480A EA 030246 B1 EA030246 B1 EA 030246B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
polymer
solution
alkyl
compound according
poly
Prior art date
Application number
EA201171480A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201171480A1 (ru
Inventor
Чарльз Зепп
Грэйсон Б. Липфорд
Юнь Гао
Ллойд Джонстон
Фынь-ни Фу
Марк Дж. Киган
Сэм Болдуин
Original Assignee
Селекта Байосайенсиз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Селекта Байосайенсиз, Инк. filed Critical Селекта Байосайенсиз, Инк.
Publication of EA201171480A1 publication Critical patent/EA201171480A1/ru
Publication of EA030246B1 publication Critical patent/EA030246B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/525—Isoalloxazines, e.g. riboflavins, vitamin B2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0013—Therapeutic immunisation against small organic molecules, e.g. cocaine, nicotine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/593—Polyesters, e.g. PLGA or polylactide-co-glycolide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6925—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a microcapsule, nanocapsule, microbubble or nanobubble
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A61K47/6937—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol the polymer being PLGA, PLA or polyglycolic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5138—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/34—Tobacco-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/02—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
    • C08G63/06—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds derived from hydroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/02—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
    • C08G63/06—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds derived from hydroxycarboxylic acids
    • C08G63/08—Lactones or lactides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/91—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G63/912—Polymers modified by chemical after-treatment derived from hydroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G64/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbonic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G64/42—Chemical after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/24—Crosslinking, e.g. vulcanising, of macromolecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55544—Bacterial toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • A61K2039/627—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier characterised by the linker
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2367/00—Characterised by the use of polyesters obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain; Derivatives of such polymers
    • C08J2367/04—Polyesters derived from hydroxy carboxylic acids, e.g. lactones

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Diabetes (AREA)

Abstract

Изобретение относится к соединениям формулы (I)где R-R, Y имеют значения, определенные в формуле изобретения, Rозначает биоразлагаемый полимер или его элементарное звено, где биоразлагаемый полимер или его элементарное звено включает сложный полиэфир, поликарбонат или полиамид или их элементарное звено. Изобретение относится также к композиции, содержащей указанное соединение (I), фармацевтической композиции, включающей вакцину, содержащую соединение (I), способу модуляции иммунного ответа введением соединения (I). Изобретение относится также к способам получения конъюгата, включающего структуру формулы (I). Конъюгаты могут содержаться в синтетических наноносителях, и иммуномодулирующие средства могут высвобождаться из синтетических наноносителей зависимым от pH способом.

Description

Изобретение относится к соединениям формулы (Ι)
где К1-К4, Υ имеют значения, определенные в формуле изобретения, К8 означает биоразлагаемый полимер или его элементарное звено, где биоразлагаемый полимер или его элементарное звено включает сложный полиэфир, поликарбонат или полиамид или их элементарное звено. Изобретение относится также к композиции, содержащей указанное соединение (Ι), фармацевтической композиции, включающей вакцину, содержащую соединение (Ι), способу модуляции иммунного ответа введением соединения (Ι). Изобретение относится также к способам получения конъюгата, включающего структуру формулы (Ι). Конъюгаты могут содержаться в синтетических наноносителях, и иммуномодулирующие средства могут высвобождаться из синтетических наноносителей зависимым от рН способом.
030246
Родственные заявки
Данная заявка заявляет приоритет согласно 35 И.8.С. § 119 США предварительным заявкам 61/217129, 61/217117, 61/217124 и 61/217116, каждая из которых подана 27 мая 2009 года, содержание каждой из которых включено в данный документ в качестве ссылки в полном объеме.
Область изобретения
Данное изобретение относится к композициям, а также к соединениям и способам, конъюгатов иммуномодулирующих средств и полимеров или их элементарного звена (элементарных звеньев). Конъюгаты могут содержаться в синтетических наноносителях, и иммуномодулирующие средства могут высвобождаться из синтетических наноносителей рН-зависимым способом.
Предпосылки
Иммуномодулирующие средства применяют для получения иммунных ответов у субъектов. Время от времени предпочтительно присоединять такие средства к носителям для доставки. На данный момент известные для присоединения химические соединения часто нуждаются в определенных реакционноспособных группах, использовании определенных этапов активации для осуществления присоединения и/или они в итоге дают конъюгаты, которые не проявляют оптимальных свойств. Таким образом, существует необходимость в новых способах присоединения иммуномодулирующих средств к носителям для доставки, а также необходимость в получаемых в результате конъюгатах, которые проявляют требуемые свойства.
Краткое описание данного изобретения
В одном аспекте данное изобретение предлагает соединение, которое включает структуру как в формуле (I)
где К1 - Н, ОН, 8Н, ΝΗ2 или (С1-С4)алкил, замещенный (С1-С4)алкил, содержащий (С1С3)алкокси; или (С1-С3)алкокси;
К2 - Н, (С1-С3)алкил или замещенный (С1-С3)алкил, содержащий метил, гидрокси, фенил, или -ΝΗδϋ2ΟΗ3;
Υ - N или С;
К3 отсутствует, если Υ - Ν; или если Υ - С, то К3 представляет собой Н, или К3 объединен с К4 с образованием 6-членного карбоцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены;
К4 представляет собой Н или (С1-С5)алкил, (С1-С4)алкокси, или (С1-С4)алкиламино, или замещенный (С1-С4)алкиламино, содержащий фенил, когда не объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены; или К4 объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; и
К8 представляет собой биоразлагаемый полимер или его элементарное звено, где биоразлагаемый полимер или его элементарное звено включает сложный полиэфир, поликарбонат или полиамид или их элементарное звено.
В другом варианте осуществления биоразлагаемый полимер или его элементарное звено включает поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер поли(гликолевой и молочной кислот) или поликапролактон или их элементарные звенья.
В одном варианте осуществления соединения формулы (I) К1 представляет собой Н, К2 представляет собой изобутил, Υ представляет собой С, и К3 и К4 объединены с образованием бензольного кольца с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены. В другом варианте осуществления К1 представляет собой этоксиметил, К2 представляет собой гидроксиизобутил, Υ - С, и К3 и К4 объединены с образованием бензольного кольца с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены. В еще одном варианте осуществления К1 представляет собой этоксиметил, К2 представляет собой метансульфонамидоизобутил, Υ - С, и К3 и К4 объединены с образованием бензольного кольца с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены. В одном варианте осуществления К1 представляет собой ОН, К2 представляет собой бензил, Υ - Ν, К3 отсутствует, и К4 представляет собой бутокси. В другом варианте осуществления Υ представляет собой Ν, К1 представляет собой ОН, К2 представляет собой бензил, К3 отсутствует, и К4 представляет собой бутиламино. В еще одном варианте осуществления Υ представляет собой Ν, К1 представляет собой ОН, К2 представляет собой бензил, К3 отсутствует, и К4 представляет собой бутокси. В еще одном варианте осуществления Υ представляет собой Ν, К1 представляет собой ОН, К2 представляет собой бензил, К3 отсутствует, и К4 представляет собой бензиламино. В одном варианте осуществления Υ представляет собой Ν, К1 представляет собой ОН, К2 представляет собой бензил, К3 отсутствует, и К4 представляет собой пентил.
В одном варианте осуществления соединения формулы (I) полимер является нерастворимым в воде
- 1 030246
при рН 7,4 и при 25°С. В одном варианте осуществления соединения формулы (I) полимер имеет средневесовой молекулярный вес в диапазоне от 800 до 10000 Да, который определяют с помощью гельпроникающей хроматографии. В другом варианте осуществления соединения формулы (I) полимер или его элементарное звено не содержит поликеталь или его элементарное звено. В одном варианте осуществления приводится композиция, включающая соединение с формулой (I). В следующем варианте осуществления композиция дополнительно включает фармацевтически приемлемый эксципиент.
В одном варианте осуществления приводится синтетический наноноситель, включающий соединение с формулой (I). В другом варианте осуществления приводится композиция, содержащая синтетический наноноситель. В еще одном следующем варианте осуществления композиция дополнительно включает фармацевтически приемлемый эксципиент.
В одном варианте осуществления приводится композиция, содержащая вакцину, которая содержит соединение формулы (I). В другом варианте осуществления приводится композиция, содержащая вакцину, которая содержит композицию, содержащую соединение формулы (I). В еще другом варианте осуществления приводится способ модуляции иммунного ответа у субъекта, включающий введение субъекту любого из вышеописанных соединений.
В одном аспекте способ получения конъюгата, который включает структуру как в формуле (I)
включает активацию биоразлагаемого полимера или его элементарного звена и воздействие на активированный биоразлагаемый полимер или его элементарное звено и соединение, включающее структуру как в формуле (III), основанием и/или растворителем
где К1 - Н, ОН, 8Н, ΝΗ2 или (С1-С4)алкил, замещенный (С1-С4)алкил, содержащий (С1С3)алкокси; или (С1-С3)алкокси;
К2 - Н, (С1-С3)алкил или замещенный (С1-С3)алкил, содержащий метил, гидрокси, фенил, или -ΝΗδΘ2^3;
Υ - N или С;
К3 отсутствует, если Υ - Ν; или если Υ - С, то К3 представляет собой Н, или К3 объединен с К4 с образованием 6-членного карбоцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены;
К4 представляет собой Н или (С1-С5)алкил, (С1-С4)алкокси, или (С1-С4)алкиламино, или замещенный (С1-С4)алкиламино, содержащий фенил, когда К4 не объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; или К4 объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; и
К8 представляет собой биоразлагаемый полимер или его элементарное звено.
В другом аспекте способ получения конъюгата, который включает структуру как в формуле (I)
включает воздействие на композицию, содержащую полимер или его элементарное звено и соединение, которое включает структуру как в формуле (III), агентом сочетания и основанием и/или растворителем
где К1 - Н, ОН, 8Н, ΝΙΙ2 или (С1-С4)алкил, замещенный (С1-С4)алкил, содержащий (С1С3)алкокси; или (С1-С3)алкокси;
К2 - Н, (С1-С3)алкил или замещенный (С1-С3)алкил, содержащий метил, гидрокси, фенил, или
-КН8О2СН3;
Υ - N или С;
К3 отсутствует, если Υ - Ν; или если Υ - С, то К3 представляет собой Н, или К3 объединен с К4 с об- 2 030246
разованием 6-членного карбоцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены;
К4 представляет собой Н или (С1-С5)алкил, (С1-С4)алкокси, или (С1-С4)алкиламино, или замещенный (С1-С4)алкиламино, содержащий фенил, когда К4 не объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; или К4 объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; и
К8 представляет собой биоразлагаемый полимер или его элементарное звено.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1 демонстрирует высвобождение резиквимода (К848) из составов синтетического наноносителя при рН 7,4, 37°С.
Фиг. 2 демонстрирует высвобождение К848 из составов синтетического наноносителя при рН 4,5,
37°С.
Фиг. 3 демонстрирует высвобождение К848 из составов синтетического наноносителя при рН 7,4 и рН 4,5 за 24 ч.
Фиг. 4 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями с СрОсодержащей иммуностимулирующей нуклеиновой кислотой (группы 2 и 3) по сравнению с уровнем индукции антител синтетическими наноносителями без СрО-содержащей иммуностимулирующей нуклеиновой кислоты (группа 1).
Фиг. 5 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями, которые высвобождают сложный фосфодиэфир, СрО-содержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту без остатка тиокислоты или СрО-содержащую иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту с остатком тиокислоты.
Фиг. 6 демонстрирует уровень индукции антител синтетическими наноносителями, которые высвобождают К848 с различными скоростями.
Подробное описание
Прежде чем описывать данное изобретение в деталях должно быть понятно, что это изобретение не ограничивается отдельно проиллюстрированными материалами или технологическими параметрами, которые, конечно, могут различаться. Также следует понимать, что терминология, использованная в настоящем документе, применена только с целью описания отдельных вариантов осуществления изобретения и не предназначена для ограничения применения альтернативной терминологии для описания данного изобретения.
Все публикации, патенты и патентные заявки, цитируемые в данном документе выше или ниже, включены в данный документ в качестве ссылки во всей их полноте для любых целей.
Как используется в данном описании и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают ссылки с множественным числом, если содержание четко не диктует иное. Например, ссылка на "полимер" включает смесь из двух или более подобных молекул, ссылка на "растворитель" включает смесь из двух или более подобных растворителей, ссылка на "адгезив" включает смеси из двух или более подобных материалов и т.п.
Введение
Изобретатели неожиданно и к удивлению обнаружили, что проблемы и ограничения, отмеченные выше, могут быть преодолены применением изобретения, раскрытого в данном документе. В частности, изобретатели неожиданно обнаружили, что возможно доставлять соединения наряду с соответствующими композициями и способами, которые включают
структуру как в формуле (I)
где К1 - Н, ОН, 8Н, ΝΗ2 или (С1-С4)алкил, замещенный (С1-С4)алкил, содержащий (С1С3)алкокси; или (С1-С3)алкокси;
К2 - Н, (С1-С3)алкил или замещенный (С1-С3)алкил, содержащий метил, гидрокси, фенил, или
-ΝΙ18О2С113;
Υ - N или С;
К3 отсутствует, если Υ - Ν; или если Υ - С, то К3 представляет собой Н, или К3 объединен с К4 с образованием 6-членного карбоцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены;
К4 представляет собой Н или (С1-С5)алкил, (С1-С4)алкокси, или (С1-С4)алкиламино, или замещенный (С1-С4)алкиламино, содержащий фенил, когда не объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены; или К4 объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; и
К8 представляет собой биоразлагаемый полимер или его элементарное звено, где биоразлагаемый
- 3 030246
полимер или его элементарное звено включает сложный полиэфир, поликарбонат или полиамид или их элементарное звено.
При применении синтетических наноносителей для получения иммунного ответа у субъекта предпочтительно вместе с синтетическими наноносителями включать иммуномодулирующее средство. Подобное средство включает средства, которые являются иммуномодулирующими, если не связаны с синтетическим наноносителем, но могут не проявлять иммуномодулирующие свойства при присоединении к синтетическому наноносителю. Особенно предпочтительно включать иммуномодулирующее средство собственно как часть синтетических наноносителей. Для достижения этого иммуномодулирующее средство можно ковалентно присоединить к соответствующему полимеру или его элементарному звену. Отсюда следует, что соединения и конъюгаты, приведенные в данном документе, в некоторых вариантах осуществления включают иммуномодулирующее средство, которое, как подразумевается, включает средство, которое является иммуномодулирующим, если не связано с полимером или его элементарным звеном, но которое может не проявлять иммуномодулирующие свойства при связывании с полимером или его элементарным звеном. Приведенные в данном документе соединения можно включить в один или несколько синтетических наноносителей. Соединения включают в синтетические наноносители посредством способов, известных в данной области техники или описанных в данном документе.
В некоторых вариантах осуществления приведенным полимером или его элементарным звеном из соединений или конъюгатов является биоразлагаемый полимер или его элементарное звено. Полимер или его элементарное звено, таким образом, может включать сложный полиэфир, поликарбонат или полиамид или их элементарные звенья. Отсюда следует, что полимер или его элементарное звено могут включать поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер поли(гликолевой и молочной кислот) или поликапролактон или их элементарные звенья. В целом предпочтительно, чтобы если полимер включает простой полиэфир, такой как поли(этиленгликоль) (РЕО) или его элементарное звено, полимером является блок-сополимер простого полиэфира и биоразлагаемого полимера с тем, чтобы полимер разрушался естественными факторами. В некоторых вариантах осуществления полимер или его элементарное звено не включает простой полиэфир, такой как поли(этиленгликоль), или его элементарное звено. В других вариантах осуществления полимер сам по себе не включает простой полиэфир или его элементарное звено, такой как поли(этиленгликоль) или его элементарное звено. В целом, для применения в составе синтетического наноносителя полимер из соединений или конъюгатов, приведенных в данном документе, является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25°С, биоразлагаемым или и то, и другое. Соединения, конъюгаты и синтетические наноносители, приведенные в данном документе, являются уникальными в композиции и являются пригодными для получения вакцин и связанных материалов.
Также приведены способы создания вышеупомянутых соединений. В вариантах осуществления способ создания конъюгата, который включает структуру как в формуле (I)
включает
активацию биоразлагаемого полимера или его элементарного звена и
воздействие на активированный биоразлагаемый полимер или его элементарное звено и соединение, которое включает структуру как в формуле (III), основанием и/или растворителем
где К! - Н, ОН, 8Н, ΝΗ2 или (С1-С4)алкил, замещенный (С1-С4)алкил, содержащий (С1С3)алкокси; или (С1-С3)алкокси;
К2 - Н, (С1-С3)алкил или замещенный (С1-С3)алкил, содержащий метил, гидрокси, фенил, или -т§О2СНз;
Υ - N или С;
К3 отсутствует, если Υ - Ν; или если Υ - С, то К3 представляет собой Н, или К3 объединен с К4 с образованием 6-членного карбоцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены;
К4 представляет собой Н или (С1-С5)алкил, (С1-С4)алкокси, или (С1-С4)алкиламино, или замещенный (С1-С4)алкиламино, содержащий фенил, когда К4 не объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; или Кд объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; и
К8 представляет собой биоразлагаемый полимер или его элементарное звено.
В других вариантах осуществления способ создания конъюгата, который включает структуру как в
- 4 030246
формуле (I)
включает
воздействие на композицию, содержащую полимер или его элементарное звено и соединение, которое включает структуру как в формуле (III), агентом сочетания и основанием и/или растворителем
где Κι - Н, ОН, 8Н, ΝΗ2 или (С1-С4)алкил, замещенный (С1-С4)алкил, содержащий (С1С3)алкокси; или (С1-С3)алкокси;
Κ2 - Н, (С1-С3)алкил или замещенный (С1-С3)алкил, содержащий метил, гидрокси, фенил, или -ΝΗδΘ2ΟΗ3;
Υ - N или С;
К3 отсутствует, если Υ - Ν; или если Υ - С, то К3 представляет собой Н, или К3 объединен с К4 с образованием 6-членного карбоцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены;
К4 представляет собой Н или (С1-С5)алкил, (С1-С4)алкокси, или (С1-С4)алкиламино, или замещенный (С1-С4)алкиламино, содержащий фенил, когда К4 не объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; или К4 объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; и
К8 представляет собой биоразлагаемый полимер или его элементарное звено.
Было открыто, что возможно присоединение средств, таких как иммуномодулирующие средства, включающих структуру как в формуле (III), к полимеру или его элементарному звену со спиртом на конце. В целом, спирты, находящиеся на конце, являются менее реакционноспособными, делая химию присоединения затруднительной.
Изобретатели также неожиданно и к удивлению открыли, что возможно создание полимерных синтетических наноносителей с помощью полимеров, которые имеют средневесовой молекулярный вес, варьирующийся в диапазоне от приблизительно 800 до приблизительно 10000 Да, который определяется с помощью гельпроникающей хроматографии. Как в целом полагали, молекулярный вес полимеров в составе полимерных синтетических наноносителей должен составлять или превышать 10000 Да. Иногда прикрепление к полимерам иммуномодулирующего соединения, которое может высвобождаться из синтетического наноносителя в результате этапа неспецифического распада в организме, является преимущественным. Если необходимо использовать синтетические наноносители для целенаправленного воздействия на эндосомальный/лизосомальный компартмент, то, в частности, преимущественно то, чтобы данный этап распада проходил предпочтительно при кислом рН. Одним из недостатков прикрепления иммуномодулирующего средства к полимеру является то, что загрузка снижается по мере увеличения молекулярного веса полимера. Кроме того, поскольку молекулярный вес увеличивается, то увеличивается гидрофобность полимера, в результате чего скорость распада при данном рН может снизиться. Это приводит к нежелательно пониженной скорости высвобождения иммуномодулирующего средства. Неожиданно было обнаружено, что низкомолекулярные полимеры со средневесовым молекулярным весом, варьирующимся в диапазоне от приблизительно 800 до приблизительно 10000 Да, образуют стабильные синтетические наноносители, и что скорость высвобождения иммуномодулирующего средства из синтетического наноносителя повышается по мере снижения молекулярного веса. Полимер из приведенных в данном документе соединений, таким образом, в вариантах осуществления имеет средневесовой молекулярный вес, варьирующийся в диапазоне от приблизительно 800 до приблизительно 10000 Да, и такие соединения можно применять для получения синтетических наноносителей.
Приведенные в данном документе соединения или синтетические наноносители, которые включают данные соединения, могут быть также чувствительными к рН (т.е. проявляют повышенное высвобождение иммуномодулирующего средства при рН или около 4,5 по сравнению с высвобождением иммуномодулирующего средства при или около значения физиологического рН (т.е. рН или 7,4). Свойство обладания относительно низким высвобождением иммуномодулирующих средств при или около значения физиологического рН, но повышенным высвобождением при или около рН 4,5 является желательным для его нацеливания иммуномодулирующих средств на эндосомальный/лизосомальный компартмент, например, антигенпрезентирующих клеток (АРС), которые склонны иметь рН, который равен или около 4,5. Этот низкий уровень рН обнаруживают в основном в верхней части пищеварительного тракта и эндосомах/лизосомах. Соответственно, если только соединения и композиции по данному изобретению
- 5 030246
вводят не через пероральный путь введения, то ускоренное высвобождение при или около рН 4,5 обеспечивает повышенную концентрацию иммуномодулирующего средства в целевом компартменте. При данных условиях иммуномодулирующее средство проявляет рН-зависимую диссоциацию и затем имеет возможность взаимодействовать с рецепторами в эндосоме/лизосоме и стимулировать требуемый иммунный ответ. Кроме того, поскольку связывание полимера может происходить в положении на иммуномодулирующем средстве или представляющем интерес соединении, что, в целом, значительно уменьшает или исключает биологическую активность иммуномодулирующего средства или представляющего интерес соединения, то связывание может эффективно давать эффект наподобие "пролекарства". Данный эффект в сочетании с повышенным высвобождением в условиях, присутствующих в эндосоме/лизосоме, означает что нецелевые эффекты (например, побочные эффекты) уменьшаются, а пределы безопасности возрастают для композиций и вакцин, которые включают соединения и композиции по данному изобретению.
Данное изобретение теперь будет описано более подробно.
Определения.
"Введение" или "ввод" означает обеспечение соединения, конъюгата, синтетического наноносителя или композиции, приведенных в данном документе, пациенту фармакологически пригодным способом.
"Признак нацеливания на АРС" означает одну или более частей, из которых состоят синтетические наноносители по данному изобретению, которые нацеливают синтетические наноносители на специализированные антигенпрезентирующие клетки ("АРС"), такие как, но, не ограничиваясь этим, дендритные клетки, 8С8 макрофаги, фолликулярные дендритные клетки и В-клетки. В вариантах осуществления признак нацеливания на АРС может содержать иммуноспецифическую поверхность(ти) и/или нацеливающие фрагменты, которые связывают известные мишени на АРС. В вариантах осуществления признаки нацеливания на АРС могут включать один или более В-клеточных антигенов на поверхности синтетического наноносителя. В вариантах осуществления признаки нацеливания на АРС могут также включать один или более размеров синтетических наночастиц, которые выбраны с тем, чтобы способствовать поглощению АРС.
В вариантах осуществления нацеливающие фрагменты для известных мишеней на макрофагах ("МФ") содержат любой нацеливающий фрагмент, который специфически связывается с любым объектом (например, белок, липид, углевод, малая молекула и т.д.), который заметно экспрессирован и/или представлен на макрофагах (т.е. маркеры макрофагов субкапсулярного синуса). Иллюстративные маркеры СКС-МФ включают, но не ограничиваются, СИ4 (Ь3Т4, А3/25. Т4); СИ9 (р24, ИКАР-1, МКР-1); СИ11а (ЬРА-1а, аЬ-цепь интегрина); СИ11Ь (аМ-цепь интегрина, СК3, Мо1, С3шК, Мас-1); СИ11е (αΧинтегрин, р150, 95, АХЬ2); С1А12 (р90-120); СИ13 (ΑΡΝ, др150, ЕС 3.4.11.2); СИ14 (ЬР8-К); СИ15 (Хгаптен, Льюис X, 88ЕА-1, 3-РАЬ); СИ158 (сиалил-Льюис X); СИ15и (3'-сульфо-Льюис X); СИ158И (6сульфосиалил-Льюис X); СИ16а (РСКША); СИ16Ь (РсдКШЬ); СИ\у17 (лактозилцерамид, ЬаеСег); СИ18 (интегрин β2, СИ11а,Ь,с β-субъединица); СИ26 (ΌΡΡ IV эктоэнеим, АИА-связывающий белок); СИ29 (тромбоцитарный ОРПа, β-1 интегрин, СР); СИ31 (РЕСАМ-1, эндокам); СИ32 (РСуКП); СИ33 (др67); СИ35 (СК1, С3Ь/С4Ь рецептор); СИ36 (СрШЬ, СРГ\, РА8Г\); СИ37 (др52-40); СИ38 (АДФрибозилциклаза, Т10); СИ39 (АТФ-дегидрогеназа, ΝΤΡ-дегидрогеназаЛ); СИ40 (Вр50); СИ43 (сиалофорин, лейкосиалин); СИ44 (ЕМСКГГ, Н-САМ, Рдр-1); СИ45 (ЬСА, Т200, В220, Ьу5); СИ45КА; СИ45КВ; СИ45КС; СИ45КО (ИСНЬ-1); СИ46 (МСР); СИ47 (др42, ГАР, ОАЗ, нейрофилин); СИ47К (МЕМ-133); СИ48 (В1а§1-1, Ни1ут3, ВСМ-1, ОХ-45); СИ49а С\ЪА-1а, а1-интегрин); СИ49Ь (νΕΛ-2(Λ др1а, а2интегрин); СИ49е (νΕΛ-3α, а3-интегрин); СИ49е (νΕΛ-5α, а5-интегрин); СИ49Г(νΕΛ-6α, а6-интегрин, др1с); СИ50 (ГСАМ-3); СИ51 (интегрин а, νΝΕ-α, витронектин-Ка); СИ52 (САМРАТН-1, НЕ5); СИ53 ^-44); СИ54 (ГСАМ-1); СИ55 (ИАР); СИ58 (ЬРА-3); СИ59 (1Р5Ад, Н19, протектин, МАСГР, МГКЬ, Р18); СИ60а (СИ3); СИ60Ь (9-О-ацетил СИ3); СИ61 (ОР 111а, в3-интегрин); СИ62Ь (Ь-селектин, ЬАМ-1, ЬЕСАМ-1, МЕЬ-14, Ьеи8, ТЦ1); СИ63 (ЬГМР, МЬА1, др55, ΝΟΑ ЬАМР-3, МЕ491); СИ64 (РеуКГ); СИ65 (церамид, \;'1М-2); СИ658 (сиалированный СИ65, \ГМ2); СИ72 (Ьу-19.2, Ьу-32.2, ЬуЬ-2); СИ74 (Ιί, инвариантная цепь); СИ75 (сиалозамаскированный лактозамин); СИ758 (а2,6-сиалированный лактозамин); СИ80 (В7, В7-1, ВВ1); СИ81 (ТАРА-1); СИ82 (4Р9, С33, ГА4, КАГ1, К2); СИ84 (р75, СК6); СИ85а (ГЬТ5, ЫК2, НЬ9); СИ856 (ГЬТ4, ЫК2, МГК10); С1)85| (ГЬТ2, Ь1К1, МГК7); СИ85к (ГЬТ3, ЫК5, НМ18); СИ86 (В7-2/В70); СИ87 (иРАК); СИ88 (С5аК); СИ89 (Ре-рецептор к ГдА, РеаК); СИ91 (а2М-К, ЬКР); С1А92 (р70); СИ^93 (СК11); СИ95 (АРО-1, РА8, ТХРК8Р6); СИ97 (ВЬ-КИИ/Р12); СИ98 (4Р2, РКР-1, КЬ-388); СИ99 (МГС2, Е2); СИ99К (СИ99, связываемый моноклональными антителами); СИ100 (8ЕМА4И); СИ101 (ГС8Р2, Р126, V?); СИ102 (ГСАМ-2); СИ111 (Р\КЬ1, НуеС, РКК1, нектин 1, НГдК); СИ112 (НуеВ, РКК2, Р\КЬ2, нектин 2); СИ114 (С8Р3К, С-С8КР, НС-С8РК); СИ115 (е-Гтк, С8Р-1К, М-С8РК); СИ116 (СМС8РКа); С1)\\119 (ΙΡΝγΚ Ш№уКА); СИ120а (ТОТКГ, р55); СИ120Ь (ТОТКП, р75, Т\РК р80); СИ121Ь (ГЬ-1К типа 2); СИ122 (ГЬ2Кв); СИ123 (ГЬ-3Ка); СИ124 (ГЬ-4Ка); СИ127 (р90, ГЬ-7К, ГЬ-7Ка); СИ128а (ГЬ-8Ка, СXСК1, (ориентировочно переименованный как СИ181)); СИ128Ь (ГЬ-8КЬ, С8СК2, (ориентировочно переименованный как СИ182)); СИ130 (др130); СИ131 (общая β-субъединица); СИ132 (общая γ-цепь, ГЬ-2Ку); СИмГ36 (М8Р-К, КОН р158-гоп); СИмГ37 (4-1ВВ, ГЬА); СИ139; СИ141 (тромбо- 6 030246
модулин, фетомодулин); СИ147 (басигин, ΕΜΜΡΚΙΝ, М6, 0X47); СИ148 (ΗΡΤΡ-η, р260, ΌΕΡ-1); СИ155 (РУК); СИ156а (СИ156, ΆΌΆΜ8, Μ82); СИ156Ь (ТАСЕ, ΆΌΛΜ17, οδνΡ); СП\\156С (ΛΌΛΜ10); СИ157 (Μο5, Β8Τ-1); СИ162 (Ρ8ΟΕ-1); СИ164 (ΜΟ^24, Μ^-24); СИ165 (ΛΟ2, др37); СИ168 (ΚΗΛΜΜ, ΙΗΛΒΡ, ΗΜΜΚ); СВ169 (сиалоадгезин, сиглек-1); СИ170 (сиглек-5); СИ171 (Ε^ΛΜ, ΝΙΕΕ); СИ172 (8ΙΚΡ-1α, Μγϋ-1); СИ172Ь (8ΙΚΡβ); СИ180 (ΚΡ105, Вдр95, Ьу64); СИ181 (СХСК1, (прежде известный как СО128а) ); СИ182 (С.ХСИ2. (прежде известный как СИ128Ь) ); СИ184 (0Χ0Κ4, ΝΡΥ3Κ); СИ191 (ССМ); 00192 (ССЮ); СО195 (ССЮ); С1Ш197 (ССЮ (был СБ^197)); С1Ш198 (СЖ8); СО204 (Μ8Κ); 00205 (ОЕС-25); СИ206 (ΜΜΚ); СИ207 (лангерин); С1Ш210 (СК); СИ213а (СК); С1)и21? (СК); СИ220 (инсулин Κ); СО221 (ΙΟΡ1 Κ); СИ222 (Μ6Ρ-Κ, ΙΟΡΙΙ-Κ); СИ224 (00Т); СИ226 (ϋΝΛΜ-1, ΡΤΛ1); СИ230 (прионный белок (ΡγΡ)); СИ232 (νΕ8Ρ-Κ); СИ244 (2В4, Ρ38, ΝΛΙΕ); СИ245 (р220/240); СИ256 (ΛΡΚΙΕ, ΤΛΕΕ2, суперсемейство ΤΝΕ (лиганд), член 13); СИ257 (ΒΕΥ8, ΤΛΕΕ1, суперсемейство ΤΝΕ (лиганд), член 13Ь); СИ261 (ΤΚΛΙΕ-Κ1, суперсемейство ΤΝΕ-Κ, член 10а); СИ262 (ΤΚΛΙΕ-Κ2, суперсемейство ΤΝΕ-Κ, член 10Ь); СО263 (ΤΚΛΙΕ-Κ3, суперсемейство ΤΝΒΡ-Κ, член 10с); СИ264 (ΤΚΛΙΕ-Κ4, суперсемейство ΤΝΡ-Κ, член 100); СО2 65 (ΤΚΛNСΕ-Κ, суперсемейство ΤΝΕ-Κ, член 11а); СО277 (ΒΤ3.1, семейство В7: бутирофилин 3); СИ280 (ΤΕΜ22, ΕΝ00180); СО281 (ΤΕΚ1, ТОБЬ-подобный рецептор 1); СИ282 (ΤΕΚ2, ТОБЬ-подобный рецептор 2); СО284 (ΤΕΚ4, ТОБЬ-подобный рецептор 4); СИ295 (ΕΕΡΚ); СО298 (АТР1В3, Nа/К-АТФаза, в3-субъединица); СИ300а (€ΜΚΡ-35Η); СИ300с СИ300е
(ΓΜ^^Ο); СО302 (ОСЬ1); СИ305 (ΕΛΙΚ1); СИ312 (ΕΜΚ2); СИ315 (ϋΟ9Ρ1); СИ317 (Β8Τ2); СИ321 (ΙΛΜ1); СИ322 (ΙΛΜ2); ί.Ό\ν328 (сиглек-7); ί.Ό\ν329 (сиглек-9); СО68 (др 110, макросиалин); и/или рецептор маннозы; где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия.
В вариантах осуществления нацеливающие фрагменты для известных мишеней на дендритных клетках ("ДК") содержат любой нацеливающий фрагмент, который специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), который заметно экспрессируется и/или представлен на ДК (т.е. маркер ДК). Иллюстративные маркеры ДК включают, но не ограничиваются, СО1а (Κ4, Т6, НТА-1); СИ1Ь (Κ1); СИ1с (Μ241, Κ7); С01Й (Κ3); СИ1е (Κ2); СИ11Ь (аМцепь интегрина, СР3. Μο1, С3шК Μас-1); СИ11с (аХ-интегрин, р150, 95, ΛXЬ2); ί.Ό\ν117 (лактозилцерамид, ЬасСег); СИ19 (Β4); СИ33 (др67); СИ 35 (СМ, рецептор С3Ь/С4Ь); СИ 36 (0рШЬ, ΟΡΙν, ΡΛ8Ιν); СО39 (АТФ-дегидрогеназа, NΤΡ-дегидрогеназа-1); СИ40 ^р50); СИ45 Τ200, Β220, Ьу5); С^45ΚА; ΘΟ45ΚΒ; СШ^ИС; СШАК) (иСИЬ-1); СО49Й (^Λ-4α, а4-интегрин); СИ49е (^Λ-5α, а5-интегрин); СО58 (ΕΡΛ-3); СИ64 (РсуМ); СИ72 (Ьу-19.2, Ьу-32.2, ЬуЬ-2); СИ73 (экто-5'нуклеотидаза); СИ74 (Ιί, инвариантная цепь); СО80 (Β7, Β7-1, ΒΒ1); СИ81 (ΤΛΡΛ-1); СИ83 (ΗΒ15); СИ85а (ΚΤ5, ΜΚ3, ΗΕ9); СИ85Й (ШГ4, ЬШ2, ΜΙΚ10); СВ85| (ШГ2, ИМ, ΜΙΚ7); СИ85к (ШГ3, ΜΚ5, ΗΜ18); СИ86 (Β7-2/Β70); СИ88 (С5аΒ); СИ97 (ΒΕ-ΚΟϋ/Ρ12); СИ101 (ΙΟ8Ρ2, Ρ126, У7); СИ116 (ΟΜ^ΡΚα); СИ120а (ΤΜΡΚΙ, р55); СО120Ь (ΤΝΡΚΙΙ, р75, ΤΝΡΚ р80); СИ123 (Κ-3Κα); СИ139; СИ148 (ΗΡΤΡ-η, ϋΕΡ-1); СИ150 (8ΕΛΜ, ΙΡ0-3); СИ156Ь (Ι^Ε, ΛΟΛΜ17, с8VΡ); СИ157 (Μο5, Β8Τ-1); СИ167а (ϋϋΚ1, ύΕΕ, сак); СО168 (ΚΗΛΜΜ, ΙΗΛΒΡ, ΗΜΜΚ); СИ169 (сиалоадгезин, сиглек-1); СИ170 (сиглек-5); СИ171 (Ε^ΛΗ ΝΙΕΕ); СО172 (8ΙΚΡ-1α, Μγϋ-1); СИ172Ь (8ΙΚΡβ); СИ180 (ΚΡ105, Βёр95, Ьу64); СИ184 (СХСМ, ΝΡΥ3Κ); СИ193 (ССЮ); СИ196 (ϋϋΚό); СИ197 (ССЮ (ν СП\у197)); С1)и19? (ССЮ, ΕΒΙ1, ΒΕΚ2); С0200 (0X2); СИ205 ^^205); (0206 (ΜΜΚ); СИ207 (лангерин); СИ208 (ИС-ΕΛΜΡ); (0209 (ΟΕ8ΙΟΝ); (Όν218π (ΙΕ18Κα); С1)\\218Ь (Κ8Κβ); СИ227 (ΜυΟ, ΡυΜ, РЕМ, ЕМА); СИ230 (прионный белок (ΡγΡ)); СИ252 (0Х40Ь, суперсемейство ΤΝΡ (лиганд), член 4); СИ258 (ΜΟΗΤ, суперсемейство ΤΝΡ (лиганд), член 14); СО265 (ΤΚΛNСΕ-Κ, суперсемейство ΤΝΡ-Κ, член 11а); СИ271 (ΝΟΡΚ, р75, суперсемейство ΤΝΡΚ, член 16); СИ273 (ЮСС ΡΟΙ.2); СИ274 (В7Н1, ΡΏΜ); СИ275 (В7Н2, Ю08Е); СО276 (В7Н3); СО277 (ВТ3.1, семейство В7: бутирофилин 3); СО283 (ΤΕΚ3, ТОБЬ-подобный рецептор 3); СИ289 (ΤΕΚ9, Τ01.1 .-подобный рецептор 9); СИ295 (ΕΕΡΚ); СИ298 (АТРШ3, в3-субъединица Nа/КАТФазы); СИ300а (€ΜΚΡ-35Η); СИ300с (ϋΜ^^Λ); СИ301 (ΜΟΕ1, С^ΕС8Ρ14); СИ302 (0СЬ1); СИ303 (Β^СА2); СИ304 (Β^СА4); СИ312 (ΕΜΚ2); СИ317 (Β8Τ2); СИ319 ^^^, 8ΕΛΜΡ7); СИ320 (806); и СО68 (др110, макросиалин); МНС ΙΙ класса; ΒΟί.Ά-1; сиглек-Н; где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия.
В вариантах осуществления нацеливание может быть выполнено с помощью любого нацеливающего фрагмента, который специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), который заметно экспрессируется и/или представлен на В-клетках (т.е. маркер В-клеток). Иллюстративные маркеры В-клеток включают, но не ограничиваются, СИ 1с (Μ241, Κ7); С01Й (Κ3); СИ2 (рецептор Е-розетки, Τ11, ΕΡΛ-2); СО5 (Τ1, Τр67, Ьеи-1, Ьу-1); СИ6 (Τ12); СИ9 (р24, ϋΚΛΡ-1, ΜΚΡ-1); СИ11а ^0^1(/., αΕ-цепь интегрина); С011Ь (αΜ-цепь интегрина, СР3, Μο1, С3η^Κ, Μас-1); СИ11с (αΧ-интегрин, Р150, 95, ΛΧΒ2); Θ0ν17 (лактозилцерамид, ЬасСег); СО18 (интегрин β2, β-субъединица СИ11а, Ь, с); СИ19 (Β4); СИ20 (Β1, Βр35); СИ21 (€Κ2, ΕΒν-Κ, €3άΚ); СИ22 (ΒΕСΛΜ, ЬуЬ8, сиглек-2); СИ23 (РсеМ, Β6, ΒΕΛ8Τ-2, Ьеи-20); СИ24 (ΒΒΛ-1, Η8Λ); СИ25 (Тас-антиген, ΙΕ2Κα, р55); СИ26 (ϋΡΡ ГУ эктоэнеим, Λ^А-связывающий белок); СИ27 (Τ14, 8152); СО29 (тромбоцитарный ΟΡΙΕι, интегрин β-1, ΟΡ); СИ31 (ΡΕСΛΜ-1, эндокам); СИ32 ^ΌγΚΗ); СИ35 (СР1, С3Ь/С4Ь рецеп- 7 030246
тор); С.П37 (др52-40); СИ38 (АДФ-рибозилциклаза, Т10); СИ39 (АТФ-дегидрогеназа, ΝΤΡдегидрогеназа-1); СИ40 (Вр50); СИ44 (ЕСМКП, Н-САМ, Рдр-1); СИ45 (ЬСА, Τ200, В220, Ьу5); СИ45КА; СИ45КВ; СИ45КС; СИ45КО (ИСНЬ-1); СИ46 (МСР); СИ47 (др42, 1АР, ОА3, нейрофилин); СИ47К (МЕМ-133); СЭ48 (В1а«1-1, Ни1ут3, ВСМ-1, ОХ-45); СИ49Ь (УЪА-2а, §р1а, а2-интегрин); СИ49с (УЪА3α, а3-интегрин); СИ49' (УЪА-4а, а4-интегрин); СИ50 (1САМ-3); СИ52 (САМРАТН-1, НЕ8); СИ53 (ОХ-44); СИ54 (1САМ-1); СИ55 (ПАР); СИ58 (ЬРА-3); СИ60а (ОИ3); СИ62Ь (Ь-селектин, ЬАМ-1, ЬЕСАМ-1, МЕЬ-14, Ьеи8, ТЦ1); СИ72 (Ьу-19.2, Ьу-32.2, ЬуЬ-2); СИ73 (экто-5'-нуклеотидаза); СИ74 (Ιί, инвариантная цепь); ί'.Ό75 (сиалозамаскированный лактозамин); СЭ758 (а2, 6-сиализированный лактозамин); СИ77 (Рк-антиген, ВЬА, СТН/ОЬ3); СИ79а (Ι§α, МВ1); СИ79Ь (Ι§β, В29); СИ80; СИ81 (ТАРА-1); СИ82 (4Р9, С33, 1А4, КАП, К2); СИ83 (НВ15); СИ84 (Р75, ОК6); СП85| (1ЬТ2, МК1, М1К7); С1Ш92 (р70); СИ95 (АРО-1, РАЗ, ТОТК8Р6); СИ98 (4Р2, РКР-1, КЬ-388); СИ99 (М1С2, Е2); СИ100 (8ЕМА4И); СЭ102 (1САМ-2); СИ108 (8ЕМА7А, антиген группы крови 1МН); С1Ш119 (^ΝγΚ, ΙΤΝγΚα); СИ120а (ТОТМ, р55); СИ120Ь (Т№КИ, р75, АРК р80); СИ121Ь (1Ь-1К типа 2); СИ122 (ΙΕ2Κβ); СИ124 (1Ь-4Ка); СИ130 (§р130); СИ132 (общая γ-цепь, ΙΕ-2Κγ); СИм437 (4-1ВВ, 1ЬА); СИ139; СИ147 (басигин, ЕММРКШ, М6, ОХ47); СИ150 (8ЬАМ, ]РО-3); СИ162 (Р8ОЬ-1); СИ164 (МОС-24, МИС-24); СИ166 (АЬСАМ, КО-САМ, 8С-1, ВЕН ИМ-ОКА8Р); СИ167а (ИИК1, Ш2 сак); СП171 (Ь1СМА, МЬЕ); СИ1755 (сиалил-Тп (δ-Тп)); СИ180 (КР105, Вдр95, Ьу64); СИ184 (СХСК4, №У3К); СИ185 (СХСК5); СИ192 (ССК2); СИ196 (ССК6); СИ197 (ССК7 (был СБ^197)); СПху197 (ССК7, ЕВП, ВЬК2); СИ200 (ОХ2); СИ205 (ПЕС-205); С1Ш210 (СК); СП213а (СК); СПху217 (СК); С1А\218а (ΙΌ18Κα); СПх\218Ь (ΙΌ18Κβ); СИ220 (инсулин К); СП221 (ЮР1 К); СП222 (М6Р-К, ЮРИ-К); СП224 (ООТ); СП225 (Ьеи13); СИ226 ^АМ-1, РТА1); СП227 (МИС1, РИМ, РЕМ, ЕМА); СП229 (Ьу9); СП230 (прионный белок (Ргр)); СИ232 (УЕ8Р-К); СП245 (р220/240); СП247 (зета-цепь СЭ3); СП261 (ТКАЮ-К1, суперсемейство ЮТ-К, член 10а); СИ262 (ТКАЮ-Ю, суперсемейство ΊΝΕ-Κ, член 10Ь); СЭ263 (ТКАЮ-К3, суперсемейство ЮТ-К, член 10с); СИ264 (ТКАЮ-К4, суперсемейство ТОТ-К, член 10ά); СЭ265 (ΤКАNСЕ-К, суперсемейство ТОТ-К, член 11а); СИ267 (ТАСЕ суперсемейство ТОТ-К, член 13В); СИ268 (ВАРРК, суперсемейство ТОТ-К, член 13С); СИ269 (ВСМА, суперсемейство ТОТ-К, член 16); СИ275 (В7Н2, ЮОЗЬ); С.П277 (ВТ3.1.семейство В7: бутирофилин 3); СЭ295 (ЬЕРК); СЭ298 (АТР1В3 в3-субъединица Nа/КАТФазы); СП300а (СМКР-35Н); СП300с (СМКР-35А); СП305 (ЬАГО!); СП307 ЦКТА2); СП315 (СП9Р1); СП316 (ЕА12); СП317 (В8Т2); СП319 (СКАСС, 8ЬАМР7); СП321 ЦАМ1); СП322 ЦАМ2); СИ^327 (сиглек-6, СП33Ь); СЭ68 (др 100, макросиалин); СХСК5; УЬА-4; МНС ΙΙ класса; поверхностный ЦМ; поверхностный Ι§Ό; АРКЕ и/или ВАРР-К; где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия. Примеры маркеров включают те, которые предусмотрены в других местах данного документа.
В некоторых вариантах осуществления нацеливание на В-клетки может быть выполнено с помощью любого нацеливающего фрагмента, который специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), который заметно экспрессируется и/или представлен на В-клетках при активации (т.е. маркер активированных В-клеток). Иллюстративные маркеры активированных В-клеток включают, но не ограничиваются, СИ1а (К4, Т6, НТА-1); СИ1Ь (К1); СИ158 (сиалил-Льюис Х); СИ15и (3'-сульфо-Льюис Х); СИ158и (6-сульфосиалил-Льюис Х); СИ30 (ВегН2, КД-1); СИ69 (АРМ, ЕА 1, МЬК3, §р34/28, УЕА); СИ70 (К1-24, СИ27 лиганд); СИ80 (В7, В7-1, ВВ1); СИ86 (В7-2/В70); СИ97 (ВЬКИИ/Р12); СИ125 (Ю-5Ка); СИ126 (Ю-6Ка); СИ138 (синдекан-1, гепарансульфат-протеогликан); СИ152 (СТЬА-4); СИ252 (ОХ40Ь, суперсемейство ТОТ1 (лиганд) , член 4); СИ253 (ТКАЮ, суперсемейство ТОТ1 (лиганд), член 10); СИ279 (РИ1); СИ289 (ТЬК9, ТОЬЬ-подобный рецептор 9); и С.П312 (ЕМК2); где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия. Примеры маркеров включают те, которые предусмотрены в других местах данного документа.
"В-клеточный антиген" означает любой антиген, который встречается в природе или может быть сконструирован для того, чтобы узнаваться В-клеткой, и запускает (естественным образом или, будучи сконструированным, как известно в области техники) иммунный ответ у В-клетки (например, антиген, который специфически распознается В-клеточным рецептором на В-клетке). В некоторых вариантах осуществления антиген, являющийся Т-клеточным антигеном, также является В-клеточным антигеном. В других вариантах осуществления Т-клеточный антиген также не является В-клеточным антигеном. Вклеточные антигены включают, но без ограничений, белки, пептиды, малые молекулы и углеводы. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является небелковым антигеном (т.е. не является белковым или пептидным антигеном). В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является углеводом, связанным с инфекционным агентом. В некоторых вариантах осуществления Вклеточный антиген является гликопротеином или гликопептидом, связанным с инфекционным агентом. Инфекционный агент может быть бактерией, вирусом, грибом, простейшим, паразитом или прионом. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является слабоиммуногенным антигеном. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является веществом, которым злоупотребляют, или его частью. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является вызывающим привыкание веществом или его частью. Вызывающие привыкание вещества включают, но без ограниче- 8 030246
ний, никотин, наркотическое средство, средство от кашля, транквилизатор и седативное средство. В некоторых вариантах осуществления В-клеточным антигеном является токсин, например токсин из химического оружия или естественных источников, или загрязняющее вещество. В-клеточный антиген также может быть средством, вредным для окружающей среды. В других вариантах осуществления Вклеточный антиген является аллоантигеном, аллергеном, контактным сенсибилизирующим веществом, антигеном дегенеративного заболевания, гаптеном, антигеном инфекционного заболевания, раковым антигеном, антигеном атопического заболевания, вызывающим привыкание веществом, ксеноантигеном или ферментом нарушения обмена веществ или продуктом данного фермента.
"Биоразлагаемый полимер" означает полимер, который распадается с течением времени при введении в организм субъекта. Биоразлагаемый полимер включает, но без ограничений, сложные полиэфиры, поликарбонаты, поликетали или полиамиды. Такие полимеры могут включать поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер поли(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон. В некоторых вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает блок-сополимер простого полиэфира, например поли(этиленгликоля) и сложного полиэфира, поликарбоната или полиамида или другой биоразлагаемый полимер. В вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает блоксополимер поли(этиленгликоля) и поли(молочной кислоты), поли(гликолевой кислоты), блоксополимера поли(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактона. В некоторых вариантах осуществления, однако, биоразлагаемый полимер не включает простой полиэфир, такой как поли(этиленгликоль), или состоит только из простого полиэфира. В целом, для применения в составе синтетического наноносителя биоразлагаемый полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25°С. Биоразлагаемый полимер в вариантах осуществления имеет средневесовой молекулярный вес в диапазоне от приблизительно 800 Да до приблизительно 10000 Да, что определяют с помощью гельпроникающей хроматографии. В варианте осуществления биоразлагаемый полимер не включает поликеталь или его элементарное звено.
"Связывают", или "связанный", или "связывает" (и подобное) означает присоединенный к полимеру или его элементарному звену или присоединенный к или содержащийся в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления ковалентное связывание опосредовано одним или более линкеров. В некоторых вариантах осуществления связывание является нековалентным. В некоторых вариантах осуществления нековалентное связывание опосредовано взаимодействиями зарядов, аффинными взаимодействиями, координационной связью металлов, физической адсорбцией, взаимодействиями типа хозяин-гость, гидрофобными взаимодействиями, взаимодействиями ТТ укладки, взаимодействиями водородных связей, взаимодействиями ван-дер-Ваальса, магнитными взаимодействиями, электростатическими взаимодействиями, диполь-дипольными взаимодействиями и/или их комбинациями. В вариантах осуществления связывание может появляться в контексте инкапсуляции в синтетические наноносители с использованием традиционных методик. Любое из вышеупомянутых связываний может быть организовано так, чтобы быть на поверхности или внутри синтетического наноносителя по данному изобретению.
"Лекарственная форма" означает приведенные в данном документе соединение, конъюгат, синтетический наноноситель или композицию в среде, транспортере, носителе или устройстве, пригодном для ввода субъекту.
"Инкапсулировать" означает заключать в синтетическом наноносителе, предпочтительно полностью заключать в синтетическом наноносителе. Большая часть или все вещество, которое инкапсулируется, не подвергается воздействию локального окружения, внешнего по отношению к синтетическому наноносителю. Инкапсуляция отличается от абсорбции, которая размещает большую часть или все вещество на поверхности синтетического наноносителя и позволяет веществу подвергаться воздействию локального окружения, внешнего по отношению к синтетическому наноносителю. В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство или В-клеточный и/или Т-клеточный антиген инкапсулированы в синтетическом наноносителе.
"Иммуномодулирующее средство" означает средство, которое модулирует иммунный ответ. "Модулировать", как используется в данном документе, относится к индуцированию, усилению, стимуляции или направлению иммунного ответа. Подобные средства включают иммуностимулирующие средства, которые стимулируют (или поддерживают) иммунный ответ на антиген, но не являются антигеном или производным антигена. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство находится на поверхности синтетического наноносителя и/или заключено в синтетический наноноситель. В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с синтетическим наноносителем через полимер или его элементарное звено из приведенных соединений или конъюгатов.
В некоторых вариантах осуществления все иммуномодулирующие средства синтетического наноносителя идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит ряд различных типов иммуномодулирующих средств. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит множество отдельных иммуномодулирующих средств, все из которых идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит строго один тип иммуномодулирующего средства. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит строго два различных типа иммуномодулирующих средств. В некото- 9 030246
рых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит больше чем два различных типа иммуномодулирующих средств.
"Максимальный размер синтетического наноносителя" означает самый большой размер наноносителя, измеренный вдоль любой оси синтетического наноносителя. "Минимальный размер синтетического наноносителя" означает самый маленький размер синтетического наноносителя, измеренный вдоль любой оси синтетического наноносителя. Например, для сфероидального синтетического наноносителя максимальный и минимальный размеры синтетического наноносителя были бы, по существу, идентичными и являлись бы величиной его диаметра. Подобным образом, для кубического синтетического наноносителя минимальный размер синтетического наноносителя был бы наименьшим из его высоты, ширины или длины, а максимальный размер синтетического наноносителя был бы наибольшим из его высоты, ширины или длины. В варианте осуществления минимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, составляет больше 100 нм. В варианте осуществления максимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или меньше 5 мкм. Предпочтительно минимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или больше 110 нм, более предпочтительно равен или больше 120 нм, более предпочтительно равен или больше 130 нм и все же более предпочтительно равен или больше 150 нм. Предпочтительно максимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или меньше 3 мкм, более предпочтительно равен или меньше 2 мкм, более предпочтительно равен или меньше 1 мкм, более предпочтительно равен или меньше 800 нм, более предпочтительно равен или меньше 600 нм и все же более предпочтительно равен или меньше 500 нм. В предпочтительных вариантах осуществления максимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, равен или больше 100 нм, более предпочтительно равен или больше 120 нм, более предпочтительно равен или больше 130 нм, более предпочтительно равен или больше 140 нм и более предпочтительно также равен или больше 150 нм. Измерение размера синтетического наноносителя проводится суспендированием синтетического наноносителя в жидкой (обычно водной) среде с применением динамического светорассеяния (например, используя прибор Вгоокйауеп 2е1аРЛЬ§).
"Фармацевтически приемлемый эксципиент" означает фармакологически неактивное вещество, добавляемое к соединению, конъюгату, синтетическому наноносителю или композиции по данному изобретению для дополнительного облегчения их введения. Примеры, без ограничения, фармацевтически приемлемых наполнителей включают карбонат кальция, фосфат кальция, различные разбавители, различные сахара и типы крахмала, производные целлюлозы, желатин, растительные масла и полиэтиленгликоли.
"Скорость высвобождения" означает скорость, с которой захваченное иммуномодулирующее средство выходит из композиции, например наноносителя, в окружающую среду в тесте высвобождения ίη νίίΓΟ. Сначала получают синтетический наноноситель для тестирования высвобождения посредством размещения в соответствующей среде высвобождения ίη νίίΓΟ. Это обычно осуществляется посредством замены буфера после центрифугирования с осаждением синтетического наноносителя и ресуспендирования синтетических наноносителей в мягких условиях. Данный анализ начинают путем размещения образца при 37°С в соответствующем приборе с контролируемой температурой. В различные моменты времени забирают образец.
Синтетические наноносители отделяют от среды для высвобождения путем центрифугирования с осаждением синтетических наноносителей. Среду высвобождения анализируют на предмет иммуномодулирующего средства, которое диспергировалось из синтетических наноносителей. Иммуномодулирующее средство измеряют с помощью ВЭЖХ для определения содержания и качества иммуномодулирующего средства. Осадок, содержащий остаток удерживаемого иммуномодулирующего средства, растворяют в растворителях или гидролизуют основанием с освобождением удерживаемого иммуномодулирующего средства из синтетических наноносителей. Остаток, содержащий иммуномодулирующее средство, также затем измеряют с помощью ВЭЖХ для определения содержания и качества иммуномодулирующего средства, которое не высвободилось на данный момент времени.
Равновесие масс ограничивается иммуномодулирующим средством, которое было высвобождено в среду высвобождения, и тем, что остается в синтетических наноносителях. Данные представлены в виде высвобожденной фракции или чистого высвобожденного веса, представленного как микрограммы, высвобожденные за период времени.
"Субъект" означает животное, включая млекопитающих, таких как человек и приматы; птичьих;
- 10 030246
животных домашнего хозяйства или фермы, таких как кошки, собаки, овцы, козы, крупный рогатый скот, лошади и свиньи; лабораторных животных, таких как мыши, крысы и морские свинки, рыбы и тому подобное.
"Синтетический(е) наноноситель(и)" означает дискретный объект, который не встречается в природе, и который обладает по меньшей мере одним размером, который меньше или равен 5 мкм. Наночастицы альбумина специально включены в качестве синтетических наноносителей.
Синтетические наноносители включают приведенные в данном документе соединения и композиции и, таким образом, могут быть полимерными наночастицами. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут содержать одну или несколько полимерных матриц. Синтетические наноносители, однако, могут также включать прочие наноматериалы и могут быть, например, липиднополимерными наночастицами. В некоторых вариантах осуществления полимерная матрица может быть окружена покрывающим слоем (например, липосома, липидный монослой, мицелла и т.д.). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель не является мицеллой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать ядро, содержащее полимерную матрицу, окруженную липидным слоем (например, липидным бислоем, липидным монослоем и т.д.). В некоторых вариантах осуществления различные элементы синтетических наноносителей могут быть связаны с полимерной матрицей.
Синтетические наноносители могут содержать один или более липидов. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать липосому. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать липидный бислой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать липидный монослой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать мицеллу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать неполимерное ядро (например, металлическую частицу, квантовую точку, керамическую частицу, костную частицу, вирусную частицу, белки, нуклеиновые кислоты, углеводы и т.д.), окруженное липидным слоем (например, липидным бислоем, липидным монослоем и т.д.).
Синтетические наноносители могут включать наночастицы на основе липидов, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболлы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе пептида или белка (такие как наночастицы альбумина). Синтетические наноносители могут быть рядом различных форм, включая, но не ограничиваясь, сфероидальной, кубической, пирамидальной, вытянутой, цилиндрической, тороидальной и тому подобное. Синтетические наноносители согласно данному изобретению содержат одну или более поверхностей. Примеры синтетических наноносителей, которые могут быть адаптированы для использования в практическом применении данного изобретения, содержат: (1) биоразлагаемые наночастицы, раскрытые в патенте США 5543158, ОгеТ с1 а1., (2) полимерные наночастицы из опубликованной заявки на патент США 2006/0002852, 8а11/тап с1 а1., (3) сконструированные литографическим способом наночастицы из опубликованной заявки на патент США 2009/0028910, ОсШшопс с1 а1., (4) раскрытие ΥΘ 2009/051837, νοη Лпбйап с1 а1., или (5) наночастицы, раскрытые в опубликованной заявке на патент США 2008/0145441, Репабек с1 а1.
Синтетические наноносители согласно данному изобретению, которые имеют минимальный размер, равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не содержат поверхности с гидроксильными группами, которые активируют комплемент или, альтернативно, содержат поверхность, которая состоит в основном из фрагментов, не являющихся гидроксильными группами, которые активируют комплемент. В предпочтительном варианте осуществления синтетические наноносители согласно данному изобретению, имеющие минимальный размер, равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не содержат поверхность, которая существенно активирует комплемент или, альтернативно, содержат поверхность, которая состоит в основном из фрагментов, которые существенно не активируют комплемент. В более предпочтительном варианте осуществления синтетические наноносители согласно данному изобретению, имеющие минимальный размер, равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не содержат поверхность, которая активирует комплемент или, альтернативно, содержат поверхность, которая состоит в основном из фрагментов, которые не активируют комплемент. В вариантах осуществления синтетические наноносители могут иметь соотношение сторон более 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 или более 1:10.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители являются сферами или сфероидами. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители плоские или пластинчатые. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители кубы или кубические. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители овалы или эллипсы. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители цилиндры, конусы или пирамиды.
Часто желательно применение популяции синтетических наноносителей, которая является относительно равномерной с точки зрения размера, формы и/или композиции так, чтобы каждый синтетический наноноситель имел сходные свойства. Например, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по
- 11 030246
меньшей мере 95% синтетических наноносителей может иметь минимальный размер или максимальный размер, который попадает в пределы 5, 10 или 20% от среднего диаметра или среднего размера. В некоторых вариантах осуществления популяция синтетических наноносителей может быть гетерогенной по отношению к размеру, форме и/или композиции.
Синтетические наноносители могут быть сплошными или полыми и могут содержать один или несколько слоев. В некоторых вариантах осуществления каждый слой имеет уникальную композицию и уникальные свойства по отношению к другому слою(ям). Чтобы дать лишь один пример, синтетические наноносители могут иметь структуру ядро/оболочка, в которой ядро является одним слоем (например, полимерное ядро) и оболочка является вторым слоем (например, липидный бислой или монослой). Синтетические наноносители могут содержать несколько разных слоев.
"Его элементарное звено" относится к мономерному элементарному звену полимера, при этом полимер, в целом, составлен из ряда связанных мономеров.
"Вакцина" означает композицию вещества, которая усиливает иммунный ответ на конкретный патоген или заболевание. Вакцина обычно содержит факторы, которые стимулируют иммунную систему субъекта для узнавания специфического антигена как чужого и его устранения из организма субъекта. Вакцина также создает иммунологическую "память", поэтому антиген будет быстро узнаваться, и на него будет быстро дан ответ, если человек подвергнется вторичному заражению. Вакцины могут быть профилактическими (например, для предупреждения будущей инфекции каким-либо патогеном) или терапевтическими (например, вакцина против опухолеспецифического антигена для лечения рака). Вакцины по данному изобретению могут включать одно или несколько из приведенных в данном документе соединений, конъюгатов, синтетических наноносителей или композиций.
Способы создания соединений, конъюгатов или синтетических наноносителей по данному изобретению.
Иммуномодулирующее средство и полимеры или их элементарное звенья связаны ковалентно посредством амидной или сложноэфирной связи. В некоторых вариантах осуществления эти конъюгаты образуют часть синтетического наноносителя. В целом, полимер, такой как полилактид (РЬА) или сополимер полилактида и гликолида (РЬСА), может соединяться с иммуностимулирующим средством, таким как резиквимод (также известный как К.848), несколькими способами. Способы связывания приведены ниже и в примерах.
Следующие способы или любой этап из приведенных способов приводятся в качестве примеров и могут быть осуществлены при любых подходящих условиях. В некоторых случаях реакцию или любой этап приведенных способов можно осуществить в присутствии растворителя или смеси растворителей. Неограничивающие примеры растворителей, которые могут быть пригодны для применения в данном изобретении, включают, но без ограничений, р-крезол, толуол, ксилол, мезителен, диэтиловый эфир, гликоль, петролейный эфир, гексан, циклогексан, пентан, дихлорметан (или метиленхлорид), хлороформ, диоксан, тетрагидрофуран (ТНР), диметилсульфоксид (ИМ8О), диметилформамид (ИМР), этилацетат (ЕЮАс), триэтиламин, ацетонитрил, метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ), Ν-метилпиррилидон (ΝΜΡ), диметилацетамид (ИМАС), изопропанол (1РА), их смеси или подобное. В некоторых случаях растворитель выбран из группы, состоящей из этилацетата, метиленхлорида, ТНР, ИМР, ΝΜΡ, ИМАС, ИМ8О и толуола или их смесей.
Реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены при любой подходящей температуре. В некоторых случаях реакция или любой этап из приведенных способов осуществляют при приблизительно комнатной температуре (например, приблизительно 25°С, приблизительно 20°С, от приблизительно 20°С до приблизительно 25°С и подобное). В некоторых случаях, однако, реакцию или любой этап из приведенных способов можно осуществить при температуре ниже или выше комнатной температуры, например при приблизительно -20°С, при приблизительно -10°С, при приблизительно 0°С, при приблизительно 10°С, при приблизительно 30°С, приблизительно 40°С, приблизительно 50°С, приблизительно 60°С, приблизительно 70°С, приблизительно 80°С, приблизительно 90°С, приблизительно 100°С, приблизительно 120°С, приблизительно 140°С, приблизительно 150°С или выше. В конкретных вариантах осуществления реакцию или любой этап из приведенных способов проводят при температуре от 0 до 120°С. В некоторых вариантах осуществления реакцию или любой этап из приведенных способов можно осуществить при более чем одной температуре (например, реагенты, добавляемые при первой температуре, и реакционную смесь, перемешиваемую при второй, где переход от первой температуры ко второй температуре может быть постепенным или быстрым).
Реакции или любому этапу из приведенных способов можно позволить проходить в течение любого подходящего периода времени. В некоторых случаях реакции или любому этапу из приведенных способов позволяют проходить в течение приблизительно 10 мин, приблизительно 20 мин, приблизительно 30 мин, приблизительно 40 мин, приблизительно 50 мин, приблизительно 1 ч, приблизительно 2 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 8 ч, приблизительно 12 ч, приблизительно 16 ч, приблизительно 24 ч, приблизительно 2 суток, приблизительно 3 суток, приблизительно 4 суток или дольше. В некоторых случаях аликвоты реакционной смеси можно собрать и проанализировать в промежуточное время для определения хода реакции или любого этапа из приведенных способов. В некоторых вариантах осуществления
- 12 030246
реакцию или любой этап из приведенных способов можно осуществить в инертной атмосфере в безводных условиях (например, в атмосфере азота или аргона, безводных растворителей и т.д.).
Продукты реакции и/или промежуточные продукты можно выделить (например, посредством дистилляции, колоночной хроматографии, экстракции, осаждения и т.д.) и/или проанализировать (например, газожидкостной хроматографией, высокоэффективной жидкостной хроматографией, ядерной магнитнорезонансной спектроскопией и т.д.) с использованием общеизвестных методик. В некоторых случаях конъюгат или синтетический наноноситель, который включает конъюгированные, можно проанализировать для определения загрузки иммуномодулирующего средства, например, с помощью обращеннофазовой ВЭЖХ.
Полимеры могут иметь любой подходящий молекулярный вес. Например, полимеры могут иметь низкий или высокий молекулярный вес. Неограничивающие значения молекулярного веса включают 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000 Да. Молекулярный вес полимера можно определить с помощью гельпроникающей хроматографии.
Ниже в качестве примера приведены реакции соединения, которые не подразумеваются как ограничивающие.
Способ 1.
Полимер (например, РЬЛ, РЬОЛ) или его элементарное звено по меньшей мере с одной кислотной концевой группой превращают в реакционноспособное ацилирующее средство, такое как ацилгалогенид, ацилимидазол, активный сложный эфир и т.д., с помощью активирующего реагента, обычно применяемого при синтезе амидов.
В этом двухэтапном способе получаемый в результате активированный полимер или его элементарное звено (например, РЬЛ, РЬОЛ) выделяют и затем вводят в реакцию с иммуномодулирующим средством (например, К848) в присутствии основания с получением требуемого конъюгата (например, РБА-К848), например, как показано на следующей схеме:
Активирующие реагенты, которые можно применять для превращения полимеров или их элементарных звеньев, таких как РЬА или РЬОА, в активированную ацилированную форму, включают, но без ограничений, циануровый фторид, Ν,Ν-тетраметилфторформамидингексафторфосфат (ТРРН); ацилимидазолы, такие как карбонилдиимидазол (СЭ1), Н№-карбонилбис(3-метилимидазол)трифлат (СВМ1Т); и активные сложные эфиры, такие как Ν-гидроксилсукцинимид (ΝΗ3 или НОЗи), в присутствии карбодиимида, такого как Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (ЭСС), №этил-№-(3(диметиламино)пропил)карбодиимидгидрохлорид (ЕЭС) или Ν,Ν'-диизопропилкарбодиимид (Э1С); Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбонат (ЭЗС); пентафторфенол в присутствии ЭСС, или ЕЭС, или Э1С; пентафторфенилтрифторацетат.
Активированный полимер или его элементарное звено можно выделить (например, посредством осаждения, экстракции и т.д.), и/или хранить в подходящих условиях (например, при низкой температуре в атмосфере аргона) после активации, или можно сразу использовать. Активированный полимер или его элементарное звено можно ввести в реакцию с иммуностимулирующим средством при любых подходящих условиях. В некоторых случаях реакцию осуществляют в присутствии основания и/или катализатора. Неограничивающие примеры оснований/катализаторов включают диизопропилэтиламин (Э1РЕА) и 4-диметиламинопиридин (ЭМАР).
Способ 2.
Полимер или его элементарное звено (например, РРА, РРОА, имеющие любой пригодный молекулярный вес) с кислотной концевой группой вступают в реакцию с иммуномодулирующим средством (например, К848) в присутствии активирующего или связывающего реагента, который превращает полимер или его элементарное звено (например, РРА, РРОА) с реакционноспособным ацилирующим средством ΐπ 811и, с получением требуемого конъюгата (например, РБА-К848, РБОА-К848)
- 13 030246
Связующие вещества или активаторы включают, но без ограничений, активаторы, используемые в присутствии карбодиимида, такого как ЕЭС, или ИСС, или ΌΣΟ, такого как 1-гидроксибензотриазол (НОВ!), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (ΗΘΆί), 3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазин (НОИНЫ), Ν-гидроксисукцинимид (ΝΗδ или НО8и), пентафторфенол (РЕР); активаторы без карбодиимида; соли фосфония, такие как О-бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (ВОР), О-бензотриазол-1-илокситрис(пирролидин)фосфония гексафторфосфат (РуВОР), 7азабензотриазол-1-илокситрис(пирролидин)фосфония гексафторфосфат (РуАОР); соли урония, такие как О-бензотриазол-1-илокситрис-1,1,3, 3-тетраметилурония тетрафторборат (ТВТи) и гексафторфосфат (НВТи), О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат (НАТи), О-(1,2дигидро-2-оксо-1-пиридил)-1,1,3,3-тетраметил-урония тетрафторборат (ТРТи); галогенурониевые и галогенфосфониевые соли, такие как бис-(тетраметилен)фторформамидиниевый гексафтофосфат (ВТЕЕН), бромтрис-(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (ВгоР), бромтрипирролидинфосфония гексафторфосфат (РуВгоР) и хлортрипирролидинфосфония гексафторфосфат (РуС1ор); производные бензотриазина, такие как О-(3,4-дигидро-4-оксо-1,2,3-бензотриазин-3-ил)-^^№^'-тетраметилурония тетрафторборат (ТИВТИ) и 3- (диэтилоксифосфорилокси)-1,2,3-бензотриазин-4(3Н)-он (ИЕРВТ). Неограничивающие примеры подходящих растворителей включают ΌΜΕ, ИСМ, толуол, этилацетат и т.д., которые описаны в данном документе.
Способ 3.
Иммуномодулирующие средства, такие как К848, также можно связывать с полимерами или их элементарными звеньями, которые заканчиваются гидроксильной группой. Такие полимеры или их элементарные звенья включают полиэтиленгликоль, полилактид, сополимер полилактида и гликолида, поликапролактон и другие подобные сложные полиэфиры или их элементарные звенья. В целом, реакция протекает следующим образом, где имид с общей структурой (IV) будет вступать в реакцию с концевым гидроксилом вышеупомянутых полимеров или их элементарных звеньев при помощи катализатора, используемого в реакциях полимеризации с раскрытием лактонового кольца. Получаемый в результате продукт реакции (II) связывает амид средства с полимером или его элементарным звеном посредством сложноэфирной связи. Соединения с формулами (IV) и (II) представляют собой следующее:
где Κι - Н, ОН, 8Н, ΝΙЕ или замещенный или незамещенный алкил, алкокси, алкилтио или алкиламино; К2 - Н, алкил или замещенный алкил; Υ - N или С; К3 отсутствует, если Υ - Ν; или представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, или объединен с К4 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены, если Υ - С; Кд представляет собой Н, или замещенный или незамещенный алкил, алкокси, алкилтио или алкиламино, если не объединен с К3 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами пиридинового кольца, к которому они присоединены; или объединен с К3 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены; К5 представляет собой полимер или его элементарное звено; X представляет собой С, Ν, О или δ; каждый из Кб и К7 независимо представляет собой Н или замещен; и каждый из К9, К10, К11 и К12 независимо представляет собой Н, галоген, ОН, тио, ИН2 или замещенный или незамещенный алкил, арил, гетероциклил, алкокси, арилокси, алкилтио, арилтио, алкиламино или ариламино.
Катализаторы включают, но без ограничений, фосфазиновые основания, 1,8-диазабициклоундец-7ен (ИВИ), 1,4,7-триазабициклодецен (ТВИ) и ^метил-1,4,7-триазабициклодецен (МТИВ). В данной об- 14 030246
ласти техники известны и приводятся другие катализаторы, например у КашЬег е! а1., Ог§апоса1а1уйс Кт§-Орешп§ Ро1утеп7а1юп, СНет. Кеу. 2007, 107, 58-13-5840. Неограничивающие примеры подходящих растворителей включают метиленхлорид, хлороформ и ТНР.
Конкретный пример реакции, осуществляемой по такому способу, показан ниже
где К5-ОН содержит две гидроксильных группы (например, диол, НО-К5-ОН), каждая из которых функционализирована при помощи реакции с имидом, связанным с К848. В некоторых случаях НО-К5ОН представляет собой полидиол, такой как поли(гексаметилкарбонат)диол или поликапролактондиол. Например, реакцию можно осуществить следующим образом:
где К-группы являются такими, как описано в данном документе. Неограничивающие примеры подходящих полимеров включают поликетальдиолы, поли(этилен)гликоль, поликапролактондиол, диблок-сополимер полилактида и поли(этилен)гликоля, диблок-сополимер полилактида/полигликолида и поли(этилен)гликоля, диблок-сополимер полигликолида и поли(этилен)гликоля, поли(пропилен)гликоля, поли(гексаметиленкарбонат)диол и поли(тетрагидрофуран).
В вариантах осуществления, в которых задействован полидиол, одну из групп диола можно защитить защитной группой (например, 1-бутилоксикарбонил), таким образом, полидиолом может быть соединение с формулой НО-К5-ОР, в которой Р является защитной группой. После реакции с иммуномодулирующим средством с образованием конъюгата иммуномодулирующее средство-К5-ОР, причем защитную группу можно удалить, и можно ввести в реакцию вторую группу диола с любым подходящим реагентом (например, РЬСА, РЬА).
Способ 4.
Конъюгат (например, К848-РЬА) можно образовать посредством проводимой в одном сосуде полимеризации с раскрытием кольца иммуномодулирующего средства (например, К848) с полимером или его элементарным звеном (например, Ό/Ь-лактид) в присутствии катализатора, например, как показано в следующей схеме:
При одностадийной процедуре иммуномодулирующее средство и полимер или его элементарное звено можно объединить в единую реакционную смесь, содержащую катализатор. Реакция может проходить при подходящей температуре (например, при приблизительно 150°С), а полученный в результате конъюгат можно выделить с помощью общеизвестных методик. Неограничивающие примеры подходящих катализаторов включают ОМАР и этилгексаноат олова.
Способ 5.
Конъюгат можно образовать посредством двустадийной полимеризации с раскрытием кольца иммуномодулирующего средства (например, К848) с одним или несколькими полимерами или их элементарными звеньями (например, Ό/Ь-лактид или гликолид) в присутствии катализатора, например, как показано в следующей схеме:
- 15 030246
Полимеры или их элементарные звенья можно сначала объединить и в некоторых случаях нагреть (например, до 135°С) с образованием раствора. В раствор, содержащий полимеры или их элементарные звенья, можно добавить иммуномодулирующее средство с последующим добавлением катализатора (например, этилгексаноат олова). Полученный в результате конъюгат можно выделить с помощью общеизвестных методик. Неограничивающие примеры подходящих катализаторов включают ΌΜΆΡ и этилгексаноат олова.
В некоторых вариантах осуществления приведенные в данном документе соединение или конъюгат, другое иммуномодулирующее средство, антиген и/или фрагмент нацеливания можно ковалентно связать с полимерной матрицей. В некоторых вариантах осуществления ковалентное соединение опосредовано линкером. В некоторых вариантах осуществления приведенные в данном документе соединение или конъюгат, другое иммуномодулирующее средство, антиген и/или фрагмент нацеливания можно нековалентно связать с полимерной матрицей. Например, в некоторых вариантах осуществления приведенные в данном документе соединение или конъюгат, другое иммуномодулирующее средство, антиген и/или фрагмент нацеливания можно инкапсулировать внутри, окружить и/или диспергировать по полимерной матрице. Альтернативно или дополнительно, приведенные в данном документе соединение или конъюгат, другое иммуномодулирующее средство, антиген и/или фрагмент нацеливания можно связать с полимерной матрицей гидрофобными взаимодействиями, взаимодействиями зарядов, силами Ван-дерВаальса и т.д.
Широкое разнообразие полимеров и способов формирования полимерных матриц посредством этого общеизвестны. В основном полимерная матрица содержит один или более полимеров. Полимеры могут быть природными или неприродными (синтетическими) полимерами. Полимеры могут быть гомополимерами или сополимерами, содержащими два или более мономеров. С точки зрения последовательности сополимеры могут быть статистическими, блок-сополимерами или состоять из комбинации статистических и блоковых последовательностей. Как правило, полимеры в соответствии с настоящим изобретением являются органическими полимерами.
Примеры полимеров, подходящих для применения в данном изобретении, включают, но не ограничиваясь, полиэтилены, поликарбонаты (например, поли(1,3-диоксан-2-он)), полиангидриды (например, поли(себациновый ангидрид)), полигидроксикислоты (например, поли(в-гидроксиалканоат)), полипропилфумераты, поликапролактоны, полиамиды (например, поликапролактам), полиацетали, простые полиэфиры, сложные полиэфиры (например, полилактид, полигликолид), поли(сложные эфиры ортокислот), полицианоакрилаты, поливиниловые спирты, полиуретаны, полифосфазены, полиакрилаты, полиметакрилаты, полимочевины, полистиролы, полиамины и полисахариды (например, хитозан).
В некоторых вариантах осуществления полимеры в соответствии с данным изобретением включают полимеры, которые были одобрены к применению для людей Управлением по делам пищевых продуктов и медикаментов США (ΡΌΆ), 21 С.Р.К. § 177.2600, включая, но не ограничиваясь, сложные полиэфиры (например, полимолочной кислоты, сополимер полимолочной и полигликолевой кислот), поликапролактон, поливалеролактон, поли(1,3-диоксан-2-он)); полиангидриды (например, поли(себациновый ангидрид)); простые полиэфиры (например, полиэтиленгликоль); полиуретаны; полиметакрилаты; полиакрилаты и полицианоакрилаты.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть гидрофильными. Например, полимеры могут содержать анионные группы (например, фосфатную группу, сульфатную группу, карбоксилатную группу); катионные группы (например, четвертичную аминогруппу); или полярные группы (например, гидроксильную группу, тиольную группу, аминогруппу). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель, содержащий гидрофильную полимерную матрицу, образует гидрофильное окружение внутри синтетического наноносителя. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть гидрофобными. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель, содержащий гидрофобную полимерную матрицу, образует гидрофобное окружение внутри синтетического наноносителя. Выбор гидрофильности или гидрофобности полимера может оказать влияние на характер материалов, которые заключены (например, связаны) в синтетическом наноносителе.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью одного или нескольких фрагментов и/или функциональных групп. Различные фрагменты или функциональные группы могут быть использованы в соответствии с данным изобретением. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью ΡΕΘ, углеводов и/или ациклических полиацеталей, производных полисахаридов (Ραρίδον, 2001, ЛС8 8ушроьшш 8епеь, 786:301).
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью липидных или жирно-кислотных групп. В некоторых вариантах осуществления жирно-кислотная группа может быть одной или более масляной, капроновой, каприловой, каприновой, лауриновой, миристиновой,
- 16 030246
пальмитиновой, стеариновой, арахидиновой, бегеновой или лигноцериновой кислоты. В некоторых вариантах осуществления жирно-кислотная группа может состоять из одной или более пальмитолеиновой, олеиновой, вакценовой, линолевой, альфа-линоленовой, гамма-линоленовой, арахидоновой, гадолеиновой, арахидоновой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой или эруковой кислоты.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть сложными полиэфирами, в том числе включающими сополимеры, содержащие элементарные звенья гликолевой кислоты и молочной кислоты, такие как сополимер полимолочной кислоты и полигликолевой кислоты и сополимер полилактида и полигликолида, совместно именуемые здесь "РЬОА"; и гомополимерами, включающими элементарные звенья гликолевой кислоты, упомянутые в настоящем документе как "РОА", и элементарные звенья молочной кислоты, такие как поли-Ь-молочная кислота, поли-Э-молочная кислота, поли-Э,Ь-молочная кислота, поли-Ь-лактид, поли-Э-лактид и поли-О,Ь-лактид, совместно именуемые здесь "РЬА". В некоторых вариантах осуществления образцы сложных полиэфиров включают, например, полигидроксикислоты; РЕО-сополимеры и сополимеры лактида и гликолида (например, сополимеры РЬА-РЕО, сополимеры РОА-РЕО, сополимеры РЬОА-РЕО и их производные). В некоторых вариантах осуществления сложные полиэфиры включают, например, полиангидриды, поли(сложный эфир ортокислоты), сополимеры поли(сложный эфир ортокислоты)-РЕО, поли(капролактон), сополимеры поли(капролактон)-РЕО, полилизин, сополимеры полилизин-РЕО, поли(этиленимин), сополимеры поли(этиленимин)-РЕО, сополимер поли(Ь-лактида и Ь-лизина), поли(сложный эфир серина), поли(сложный эфир 4-гидрокси-Ь-пролина), поли[а-(4-аминобутил)-Ь-гликолевая кислота] и их производные.
В некоторых вариантах осуществления полимер может быть РЬОА. РЬОА является биосовместимым и биоразлагаемым сополимером молочной кислоты и гликолевой кислоты, и различные формы РЬОА характеризуются соотношением молочная кислота:гликолевая кислота. Молочная кислота может быть Ь-молочной кислотой, Ό-молочной кислотой или Ό,Ό-молочной кислотой. Скорость разложения РЬОА можно регулировать путем изменения соотношения молочная кислота:гликолевая кислота. В некоторых вариантах осуществления РЬОА, которая будет использоваться в соответствии с настоящим изобретением, характеризуется соотношением молочная кислота:гликолевая кислота приблизительно 85:15, приблизительно 75:25, приблизительно 60:40, приблизительно 50:50, приблизительно 40:60, приблизительно 25:75 или приблизительно 15:85.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть одним или более акриловыми полимерами. В определенных вариантах осуществления акриловые полимеры включают, например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, этоксиэтилметакрилаты, цианоэтилметакрилат, сополимер аминоалкилметакрилата, поли(акриловую кислоту), поли(метакриловую кислоту), сополимер алкиламида метакриловой кислоты, поли(метил метакрилат), поли(метакриловой кислоты ангидрид), метил метакрилат, полиметакрилат, сополимер поли(метилметакрилата), полиакриламид, сополимер аминоалкил метакрилата, сополимеры глицидилметакрилата, полицианакрилаты и комбинации, содержащие один или более из вышеприведенных полимеров. Акриловый полимер может содержать полностью полимеризованные сополимеры сложных эфиров акриловой и метакриловой кислоты с низким содержанием групп четвертичного аммония.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть катионными полимерами. В целом, катионные полимеры могут конденсировать и/или защищать отрицательно заряженные нити нуклеиновых кислот (например, ДНК, РНК или их производных). Аминосодержащие полимеры, такие как поли(лизин) (2аипег е1 а1., 1998, Айу. Огид Όβΐ. Кеу., 30:97 и КаЬапоу е1 а1., 1995, Вюсон)ида1е Сйет., 6:7), поли(этиленимин) (РЕ1; Воиккй е1 а1., 1995, Ргос. Ыа11. Асай. 8сг, И8А, 1995, 92:7297) и поли(амидоамин) дендримеры (Кико№5ка-Ьа1а11о е1 а1., 1996, Ргос. Ыа11. Асай. 8сг, И8А, 93:4897; Тапд е1 а1., 1996, Вюсоп]ида1е Сйет., 7:703 и Наепз1ег е1 а1., 1993, Вюсоп)ида1е Сйет., 4:372) являются положительно заряженными при физиологических значениях рН, образуют ионные пары с нуклеиновыми кислотами и опосредуют трансфекцию в различных клеточных линиях.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть разлагаемыми полиэфирами, несущими катионные боковые цепи (Ри1пат е1 а1., 1999, Масгото1еси1ек, 32:3658; Ваггега е1 а1., 1993, 1. Ат. Сйет. 8ос, 115:11010; К\уоп е1 а1., 1989, Масгото1еси1ек, 22:3250; Вт е1 а1., 1999, 1. Ат. Сйет. 8ос, 121:5633 и 2йои е1 а1., 1990, Масгото1еси1ек, 23:3399).
Примеры таких сложных полиэфиров включают сополимер поли-Ь-лактида и полилизина (Ваггега е1 а1., 1993, 1. Ат. Сйет. 8ос, 115:11010), поли(сложный эфир серина) (2йои е1 а1., 1990, Масгото1еси1ек, 23:3399), поли(сложный эфир 4-гидрокси-Ь-пролина) (Ри1пат е1 а1., 1999, Масгото1еси1ек, 32:3658 и Вт е1 а1., 1999, 1. Ат. Сйет. 8ос, 121:5633), и поли(сложный эфир 4-гидрокси-Ь-пролина) (Ри1пат е1 а1., 1999, Масгото1еси1ек, 32:3658 и Вт е1 а1., 1999, 1. Ат. Сйет. 8ос, 121:5633).
Свойства этих и других полимеров и способы их получения хорошо известны в данном уровне техники (см., например, патенты США №№ 6123727, 5804178, 5770417, 5736372, 5716404, 6095148, 5837752, 5902599, 5696175, 5514378, 5512600, 5399665, 5019379, 5010167, 4806621, 4638045 и 4946929; Аапд е1 а1., 2001, 1. Ат. Сйет. 8ос, 123:9480; Вт е1 а1., 2001, 1. Ат. Сйет. 8ос, 123:2460; Ьапдег, 2000, Асе Сйет. Ке8., 33:94; Ьапдег, 1999, 1. Соп1го1. Ке1еаке, 62:7 и ийпсй е1 а1., 1999, Сйет. Кеу., 99:3181). В целом, различные методы синтеза определенных подходящих полимеров описаны в Сопсйе Епсус1орейга
- 17 030246
о£ Ро1утег Баеисе апй Ро1утейс Лштек апй Аттопшт БаЙ8, Ей. Ьу Сое!йак, Регдатоп Рге88, 1980; Рппсар1с5 о£ Ро1утеп/айоп Ьу ОШаи, 1окп Айеу & Бопз, Роийй Еййюп, 2004; Сойетрогагу Ро1утег Скепийгу Ьу А11соск е! а1., Ргепйсе-Най, 1981; Иеттд е! а1., 1997, №!иге, 390:386 и в патентах США №№ 6506577, 6632922,6686446 и 6818732.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть линейными или разветвленными полимерами. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть дендримерами. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть в основном сшиты друг с другом. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть в основном свободны от сшивок. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, не подвергаясь этапу сшивания. Далее следует понимать, что соединения по данному изобретению и синтетические наноносители могут включать в себя блок-сополимеры, привитые-сополимеры, сочетания, смеси и/или аддукты любого из вышеуказанных и других полимеров. Специалистам в данной области техники будет понятно, что полимеры, перечисленные в данном документе, представляют собой примерный не являющийся исчерпывающим список полимеров, которые могут быть применены в соответствии с данным изобретением.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут включать металлические частицы, квантовые точки, керамические частицы и т.д.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут факультативно содержать один или более амфифильных объектов. В некоторых вариантах осуществления амфифильный объект может способствовать получению синтетических наноносителей с повышенной стабильностью, улучшенной однородностью или повышенной вязкостью. В некоторых вариантах осуществления амфифильные объекты могут быть присоединены к внутренней поверхности липидной мембраны (например, липидного бислоя, липидного монослоя и т.д.). Многие амфифильные объекты, известные в данном уровне техники, подходят для применения в создании синтетических наноносителей в соответствии с данным изобретением. Такие амфифильные объекты включают, но не ограничиваясь, фосфоглицериды; фосфатидилхолины; дипальмитоилфосфатидилхолин (ИРРС); диолеилфосфатидилэтаноламин (ИОРЕ); диолеилоксипропилтриэтиламмоний (ИОТМА); диолеилфосфатидилхолин, холестерин, сложные эфиры холестерина; диацилглицерол; диацилглицеролсукцинат; дифосфатидилглицерин (ИРРС); гексанодеканол, жирные спирты, такие как полиэтиленгликоль (РЕС); полиоксиэтилен-9-лауриловый простой эфир, поверхностно-активные жирные кислоты, такие как пальмитиновая кислота или олеиновая кислота, жирные кислоты, моноглицериды жирных кислот, диглицериды жирных кислот, амиды жирных кислот; сорбитантриолеат (8раи®85) гликохолат; сорбитанмонолаурат (8раи®20); полисорбат 20 (Т\уееп®20); полисорбат 60 (Т\уееп®®60); полисорбат 65 (Т\\ееп®®65); полисорбат 80 (Т\уееп®®80); полисорбат 85 (Т\\ееп®®85); полиоксиэтилена моностеарат; суфрактин; полоксомер; сорбитановый сложный эфир жирной кислоты, такой как сорбитантриолеат, лецитин; лизолецитин; фосфатидилсерин; фосфатидилинозитол; сфингомиелин; фосфатидилэтаноламин (цефалин); кардиолипин; фосфатидная кислота; цереброзиды; дицетилфосфат; дипальмитоилфосфатидилглицерол; стеариламин; додециламин; гексадециламин, ацетилпальмитат; глицеринрицинолеат; гексадецилстеарат; изопропилмиристат; тилоксапол; поли(этиленгликоль)5000-фосфатидилэтаноламин; поли(этиленгликоль)400-моностеарат; фосфолипиды, синтетические и/или природные моющие средства, имеющие высокие поверхностно-активные свойства; деоксихолаты; циклодекстрины; хаотропные соли; средства ионного спаривания, а также их комбинации. Компонент амфифильного объекта может быть смесью различных амфифильных объектов. Специалистам в данном уровне техники будет понятно, что это примерный не являющийся исчерпывающим перечень веществ с поверхностно-активным действием. Любое амфифильное средство может быть использовано в создании синтетических наноносителей, которые будут применены в соответствии с данным изобретением.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут факультативно содержать один или более углеводов. Углеводы могут быть природными или синтетическими. Углевод может быть производным природного углевода. В определенных вариантах осуществления углевод содержит моносахарид или дисахарид, включая, но не ограничиваясь, глюкозу, фруктозу, галактозу, рибозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, целлибозу, маннозу, ксилозу, арабинозу, глюкуроновую кислоту, галактуроновую кислоту, маннуроновую кислоту, глюкозамин, галактозамин и нейраминовую кислоту. В определенных вариантах осуществления углевод является полисахаридом, включая, но не ограничиваясь, пуллулан, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, гидроксипролилметилцеллюлозу (НРМС), гидроксицеллюлозу (НС), метилцеллюлозу (МС), декстран, циклодекстран, гликоген, крахмал, гидроксиэтилкрахмал, карагенан, гликон, амилозу, хитозан, Ν,Ο-карбоксиметилхитозан, альгин и альгиновую кислоту, крахмал, хитин, гепарин, конджак, глюкоманнан, пустулан, гепарин, гиалуроновую кислоту, курдлан и ксантан. В определенных вариантах осуществления углевод является сахарным спиртом, включая, но не ограничиваясь, маннит, сорбит, ксилит, эритрит, мальтит и лактит.
Синтетические наноносители могут быть получены, используя широкое разнообразие способов, известных в данном уровне техники. Например, синтетические наноносители могут быть сформированы
- 18 030246
способами, такими как нанопреципитация, потоковая фокусировка с использованием жидкостных каналов, распылительная сушка, испарение растворителя однокомпонентных и двухкомпонентных эмульсий, экстракция растворителем, разделение фаз, размалывание, микроэмульсионные процедуры, микросборка, наносборка, жертвенные слои, простая и комплексная коацервация и другими способами, хорошо известными специалисту в данной области техники. Альтернативно или дополнительно, описаны синтезы водных и органических растворителей для монодисперсных полупроводниковых, проводящих, магнитных, органических и других наноматериалов (Ре11едг1по е! а1., 2005, §та11, 1:48; Миггау е! а1., 2000, Апп. Кеу. Май δοί., 30:545 и Тппйайе е! а1., 2001, СНет. Май, 13:3843). Дополнительные способы были описаны в литературе (см. например, ОоиЬго\у. Ей., "М1сгосар8и1е8 апй №тораг0с1е5 ίη Мейюше апй Рйагтасу," СКС Рге55, Воса Ка!оп, 1992; Ма11йо\\Ц/ е! а1., 1987, 1. Соп!го1. Ке1еа5е, 5:13; Ма11йо\\Ц/ е! а1., 1987, Кеасйуе Ро1утег5, 6:275; Ма11йо\\Ц/ е! а1., 1988, 1. Арр1. Ро1утег δοί., 35:755 и также патенты США 5578325 и 6007845).
В определенных вариантах осуществления синтетические наноносители получают с помощью нанопреципитационного процесса или распылительной сушки. Условия, использованные при подготовке синтетических наноносителей, могут быть изменены для получения частиц нужного размера или свойств (например, гидрофобность, гидрофильность, внешняя морфология, "липкость", форма и т.д.). Способ подготовки синтетических наноносителей и используемые условия (например, растворитель, температура, концентрация, расход воздуха и т.д.) могут зависеть от материалов, которые будут связаны с синтетическими наноносителями, и/или композиции полимерной матрицы.
Если частицы, полученные любым из указанных выше методов, имеют диапазон размеров за пределами желаемого диапазона, частицы могут быть калиброваны, например, с помощью микрофильтра.
Связывание может быть достигнуто множеством разных способов и может быть ковалентным или нековалентным. Такое связывание может быть организовано, чтобы быть на поверхности или внутри синтетического наноносителя по данному изобретению. Элементы синтетических наноносителей по данному изобретению (такие как фрагменты, которые содержит иммуноспецифическая поверхность, фрагменты нацеливания, полимерные матрицы и т.п.) могут быть напрямую связаны друг с другом, например, одной или более ковалентными связями, или могут быть связаны одним или более линкерами. Дополнительные способы функционализации синтетических наноносителей могут быть адаптированы из опубликованной патентной заявки США № 2006/0002852, δа1!ζтаη е! а1., опубликованной патентной заявки США № 2009/0028910, ^еδ^тоηе е! а1. или опубликованной международной патентной заявки №0/2008/127532 А1, МигШу е! а1.
Любой подходящий линкер может использоваться в соответствии с данным изобретением. Линкеры могут быть применены для формирования амидных связей, сложноэфирных связей, дисульфидных связей и т.д. Линкеры могут содержать атомы углерода или гетероатомы (например, азот, кислород, серу и т.д.). В некоторых вариантах осуществления линкер является алифатическим или гетероалифатическим линкером. В некоторых вариантах осуществления линкер является полиалкильным линкером. В определенных вариантах осуществления линкер является линкером простых полиэфиров. В определенных вариантах осуществления линкер является полиэтиленовым линкером. В определенных специфических вариантах осуществления линкер является полиэтиленгликольным (РЕО) линкером.
В некоторых вариантах осуществления линкер является расщепляемым линкером. Чтобы дать лишь несколько примеров, расщепляемые линкеры включают пептидные линкеры, расщепляемые протеазами, нуклеазочувствительные линкеры из нуклеиновых кислот, липазочувствительные липидные линкеры, гликозидазочувствительные углеводные линкеры, рН-чувствительные линкеры, гипоксиячувствительные линкеры, фоторасщепляемые линкеры, термолабильные линкеры, ферментрасщепляемые линкеры (например, эстеразой расщепляемый линкер), УЗИ-чувствительные линкеры, линкеры, расщепляемые рентгеновскими лучами и т.д. В некоторых вариантах осуществления линкер не является расщепляемым линкером.
Множество разнообразных способов может использоваться для связывания линкера или другого элемента синтетического наноносителя с синтетическим наноносителем. Общая стратегия включает пассивную адсорбцию (например, через электростатические взаимодействия), мультивалентное хелатирование, нековалентное связывание высокой аффинности между членами специфически связывающихся пар, образование ковалентной связи и т.д. (Оао е! а1., 2005, Сигг. Ор. Вю!есйпо1., 16:63). В некоторых вариантах осуществления клик-химия может использоваться для связывания материала с синтетическим наноносителем.
Взаимодействия нековалентного специфического связывания могут быть применены. Например, или одна частица, или биомолекула может быть функционализирована с биотином, а еще одна функционализирована со стрептавидином. Эти два фрагмента специфически связываются друг с другом нековалентно и с высокой аффинностью, тем самым, связывая частицу и биомолекулу. Другие пары специфического связывания могут быть использованы аналогичным образом. С другой стороны, гистидинмеченые биомолекулы могут быть связаны с частицами, конъюгированными с никельнитролотриуксусной кислотой (Νί-ΝΤΑ).
Дополнительную общую информацию о связывании см. журнал Вюсоп)ида!е СНет151гу, опублико- 19 030246
ванный Американским химическим обществом, Со1итЪиз ОН, РО Вох 3337, Со1итЪиз, ОН, 43210; "Сгозз-Ыпктд," Химическая техническая библиотека Пирса, доступная на веб-сайте Р1егее и первоначально опубликованная в 1994-1995 в каталоге Р1егее, и ссылки, цитируемые в них; ^опд 8.8., Скеш1з1гу о£ Рго!ет Софидайоп апд Сгозз-Нпктд, СКС Ргезз РиЪНзкегз, Воса Ка!оп, 1991 и Негшапзоп О.Т., Вюеопщда1;е ТесНтциез, Асадеш1с Ргезз, Ыс., 8ап Эхедо, 1996.
Следует понимать, что композиции согласно изобретению могут быть сделаны любым подходящим способом, и изобретение никоим образом не ограничивается композициями, которые могут быть получены с использованием способов, описанных в данном документе. Выбор подходящего способа может потребовать внимания к свойствам деталей присоединенных фрагментов.
Фармацевтические композиции и способы применения
Композиции согласно данному изобретению содержат соединения по данному изобретению, конъюгаты или синтетические наноносители, факультативно в комбинации с фармацевтически приемлемыми наполнителями. Композиции могут быть получены с использованием традиционного фармацевтического производства и рецептурных методик, чтобы получить пригодные лекарственные формы. В варианте осуществления соединения по данному изобретению, конъюгаты, синтетические наноносители или композиции суспендированы в стерильном физиологическом растворе для инъекций вместе с консервантом.
В некоторых вариантах осуществления соединения по данному изобретению, конъюгаты, синтетические наноносители или композиции получают в стерильных условиях или в заключении стерилизуют. Это может гарантировать, что полученные композиции стерильны и неинфекционны, тем самым, повышая безопасность по сравнению с нестерильными композициями. Это обеспечивает важные меры безопасности, особенно когда субъекты, получающие соединения по данному изобретению, конъюгаты, синтетические наноносители или композиции, имеют иммунные дефекты, страдают от инфекции и/или восприимчивы к инфекции. В некоторых вариантах осуществления соединения по данному изобретению, конъюгаты, синтетические наноносители или композиции могут быть лиофилизированными и храниться в виде суспензии или как лиофилизированный порошок в зависимости от способа составления в течение длительного периода без потери активности.
Соединения по данному изобретению, конъюгаты, синтетические наноносители или композиции могут быть введены различными путями введения, включая, но без ограничений, парентеральный, подкожный, внутримышечный, внутрикожный, пероральный, интраназальный, чресслизистый, ректальный; глазной, трансдермальный, чрескожный или посредством комбинации этих путей.
Соединения по данному изобретению, конъюгаты, синтетические наноносители или композиции и способы, описываемые в данном документе, можно применять для индукции, усиления, стимуляции, модуляции или управления иммунным ответом. Соединения по данному изобретению, конъюгаты, синтетические наноносители или композиции и способы, описываемые в данном документе, можно применять для диагностики, профилактики и/или лечения состояний, таких как разновидности рака, инфекционные заболевания, метаболические расстройства, дегенеративные заболевания, воспалительные заболевания, иммунологические заболевания, или других расстройств и/или состояний. Соединения по данному изобретению, конъюгаты, синтетические наноносители или композиции и способы, описываемые в данном документе, также можно применять для профилактики или лечения привыкания, например привыкания к никотину или наркотическому веществу. Соединения по данному изобретению, конъюгаты, синтетические наноносители или композиции и способы, описываемые в данном документе, можно также применять для профилактики и/или лечения состояния, возникшего в результате воздействия токсина, вредного вещества, токсина окружающей среды или другого токсичного вещества.
Примеры
Пример 1. Проводимая в одном сосуде полимеризация с раскрытием кольца К848 с Ό/Ь-лактидом в присутствии катализатора
Смесь из К848 (0,2 ммоль, 63 мг), Ό/Ь-лактида (40 ммоль, 5,8 г) и 4-диметиламинопиридина (ЭМАР) (50 мг, 0,4 ммоль) в 2 мл безводного толуола медленно нагрели до 150°С (температура масляной бани) и поддерживали при этой температуре в течение 18 ч (через 3 ч не осталось К848). Смесь охладили до окружающей температуры, и в полученной смеси остановили реакцию водой (50 мл) с осаждением полученного полимера, К848-РЬА. Полимер затем промыли последовательно 45 мл каждого из МеОН, хРгОН и этилового простого эфира. Полимер высушили под вакуумом при 30°С с получением грязнобелого рыхлого твердого вещества (5,0 г). Полимерную структуру подтвердили посредством 1Н ЯМР в СЭС13. Небольшой образец полимера обработали 2Н водным №О11 в ТНР/МеОН для определения загрузки К848 на полимере с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. Загрузка К848 составляет 3 мг на грамм полимера (0,3% загрузка - 27,5% от теории).
- 20 030246
Пример 2. Двухэтапная полимеризация с раскрытием кольца К848 с Э/Ь-лактидом и гликолидом
Смесь Э/Ь-лактида (10,8 г, 0,075 моль) и гликолидом (2,9 г, 0,025 моль) нагрели до 135°С в атмосфере аргона. После расплавления всех материалов и получения прозрачного раствора добавили К848 (1,08 г, 3,43х10-3 моль). Данный раствор перемешивали при 135°С под медленным потоком аргона в течение одного часа. Добавили этилгексаноат олова (150 мкл), и продолжали нагревание в течение 4 ч. После охлаждения твердую светло-коричневую массу растворили в метиленхлориде (250 мл), и раствор промыли 5% раствором винной кислоты (2х200 мл). Раствор метиленхлорида высушили над сульфатом магния, профильтровали и затем сконцентрировали под вакуумом. Остаток растворили в метиленхлориде (20 мл) и добавили 2-пропанол (250 мл) с перемешиванием. Отделившийся полимер выделили декантацией 2-пропанола и высушили в высоком вакууме. ЯМР показал, что полимер имел 71,4% лактида и 28,6% гликолида с молекулярным весом 4000. Загрузка К848 была близкой к теоретической по данным ЯМР.
Пример 3. Получение конъюгата РЬОА-К848
Смесь из РЬОЛ (Ьакезйогез Ро1ушегз, МВ -5000, 7525ЭЬО1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 10 г, 7,0 ммоль) и НВТи (5,3 г, 14 ммоль) в безводном ЕЮАс (160 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 50 мин. Добавили соединение К848 (2,2 г, 7 ммоль) с последующим диизопропилэтиламином (ΌΙΡΕΑ) (5 мл, 28 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов и затем при 50-55°С в течение ночи (приблизительно 16 ч). После охлаждения смесь разбавили ЕЮАс (200 мл) и промыли насыщенным раствором ИН4С1 (2х40 мл), водой (40 мл) и концентрированным соляным раствором (40 мл). Раствор высушили над Να28Ο4 (20 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили изопропиловый спирт (ΙΡΑ) (300 мл), и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли ΙΡΑ (4х50 мл) для удаления остаточных реагентов и высушили под вакуумом при 35-40°С в течение 3 дней в виде белого порошка (10,26 г, МВ по ГПХ (гельпроникающая хроматография) составляет 5200, загрузка К848 составляет 12% по ВЭЖХ).
Пример 4. Получение конъюгата РЬОА-854А
Смесь из РЬОА (Ьакезйогез Ро1утегз, МВ ~5000, 7525ЭЬО1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и НВТИ (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном ЕЮАс (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 45 мин. Добавили соединение 845А (0,29 г, 0,7 ммоль) с последующим диизопропилэтиламином (ЭГРЕА) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (приблизительно 15 ч). После охлаждения смесь разбавили ЕЮАс (100 мл) и промыли насыщенным раствором ИН4С1 (2х20 мл), водой (20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушили над Ν28Ο4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили изопропиловый спирт (1РА) (40 мл), и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли 1РА (4х25 мл) для удаления остаточных реагентов и высушили под вакуумом при 3540°С в течение 2 дней в виде белого порошка (1,21 г, МВ по ГПХ (гельпроникающая хроматография) составляет 4900, загрузка 854А составляет 14% по ВЭЖХ).
Пример 5. Получение конъюгата РЬОА-ВВНА
Смесь из РЬОА (Ьакезйогез Ро1утегз, МВ ~5000, 7525ЭЬО1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и НВТИ (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном ЕЮАс (30 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 30 мин. Добавили соединение ВВНА (0,22 г, 0,7 ммоль) в 2 мл сухого ЭМ8О с последующим диизопропилэтиламином (ЭГРЕА) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивали при
- 21 030246
комнатной температуре в течение 20 ч. Добавили дополнительные количества НВТИ (0,53 г, 1,4 ммоль) и ΌΙΡΕΑ (0,5 мл, 2,8 ммоль), и смесь нагревали при 50-55°С в течение 4 ч. После охлаждения смесь разбавили ЕЮЛс (100 мл) и промыли насыщенным раствором ЫН4С1 (2x20 мл), водой (20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушили над №2ЗО4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили изопропиловый спирт (ΙΡΑ) (35 мл), и коричневатый конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли ΙΡΑ (2x20 мл) для удаления остаточных реагентов и высушили под вакуумом при 35-40°С в течение 2 дней в виде коричневатого порошка (1,1 г).
Пример 6. Получение конъюгата ΡΕΑ-Κ848 с низким МВ
Раствор ΡΡΑ-Ο)2Ι I (средний МВ: 950, ΌΡΙ:1,32; 5,0 г, 5,26 ммоль) и НВТИ (4,0 г, 10,5 ммоль) в ЕЮАс (120 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 45 мин. Добавили соединение К848 (1,65 г, 5,26 ммоль) с последующим ΌΙΡΕΑ (5,5 мл, 31,6 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение 15 ч. После охлаждения смесь разбавили ΕΐОΑс (150 мл) и промыли 1%-ным раствором лимонной кислоты (2x40 мл), водой (40 мл) и соляным раствором (40 мл). Раствор высушили над №2ЗО4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ) (150 мл), и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли МТВЕ (50 мл) и высушили под вакуумом при комнатной температуре в течение 2 дней в виде белой пены (5,3 г, средний МВ по ГПХ составляет 1200, ΡΌΙ: 1,29; загрузка К848 составляет 20% по ВЭЖХ).
Пример 7. Получение конъюгата ΡΌΑ-Κ848 с низким МВ
Раствор ΡΡΑ-Ο)2Ι I (средний МВ: 1800, ΌΡΙ:1,44; 9,5 г, 5,26 ммоль) и НВТИ (4,0 г, 10,5 ммоль) в ΕΐОΑс (120 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 45 мин. Добавили соединение К848 (1,65 г, 5,26 ммоль) с последующим ΌΙΡΕΑ (5,5 мл, 31,6 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение 15 ч. После охлаждения смесь разбавили ΕΐОΑс (150 мл) и промыли 1%-ным раствором лимонной кислоты (2x40 мл), водой (40 мл) и соляным раствором (40 мл). Раствор высушили над №2ЗО4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ) (150 мл), и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли МТВЕ (50 мл) и высушили под вакуумом при комнатной температуре в течение 2 дней в виде белой пены (9,5 г, средний МВ по ГПХ составляет 1900, ΡΌΙ: 1,53; загрузка К848 составляет 17% по ВЭЖХ).
Пример 8. Конъюгирование К848 с ΡСΑ^Κ через раскрытие имидного кольца.
Следующие примеры описывают синтез поликеталя, ΡСΑ^Κ, согласно способу, приведенному в ΡυΙβηάΓαη е! а1, Ж) 2008/127532, который проиллюстрирован на этапе 1 ниже.
ΡСΑ^Κ синтезируют в 50 мл колбе с двумя горлышками, соединенной с короткой дистилляционной головкой. Сначала 5,5 мг перекристаллизованной п-толуолсульфоновой кислоты (0,029 ммоль, Α1бпсИ, Сент-Луис, Миссури) растворяют в 6,82 мл этилацетата и добавили к 30 мл раствора бензола (поддерживая 100°С), который содержит 1,4-циклогександиметанол (12,98 г, 90,0 ммоль, Αΐάτΐφ). Этилацетату позволяют выкипеть и добавляют дистиллированный 2,2-диметоксипропан (10,94 мл, 90,0 ммоль, Α1бпсИ) к раствору бензола, инициируя реакцию полимеризации. Последовательно добавляют дополнительные дозы 2,2-диметоксипропана (5 мл) и бензола (25 мл) к реакционной смеси каждый час в течение 6 ч через мерную воронку для компенсации выкипевших 2,2-диметоксипропана и бензола. Через 8 ч реакцию останавливают добавлением 500 мкл триэтиламина. Полимер выделяют осаждением в холодном гексане (хранили при -20°С) с последующей вакуумной фильтрацией. Молекулярный вес ΡСΑ^Κ определяют посредством гельпроникающей хроматографии (ГПХ) (ЗЫшаб/и, Киото, Япония), прибор оборудован УФ-детектором. ТНЕ применяют в качестве подвижной фазы при скорости потока 1 мл/мин. Стандарты полистирола от Ρο1уте^ ЕаЪога£опе§ (Амхерст, Массачусетс) применяли для построения калибровочной кривой молекулярного веса. Данное соединение применяют для создания частиц ΡСΑ^Κ во всех последующих экспериментах.
К848 можно конъюгировать к концевым спиртовым группам ΡСΑ^Κ с молекулярным весом 6000 посредством раскрытия имидного кольца в соответствии с этапом 2, показанным ниже.
Этап 1. Получение ΡСΑ^Κ
- 22 030246
На этапе 2 полимер из этапа 1 (12 г, 2,0х10-3 моль) растворяют в 100 мл метиленхлорида и добавляют лактам К848 (3,3 г, 8,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7триазабицикло[4,4,0]дец-5-ен (ΤΒΌ, 0,835 г, 6х10'3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи образуется прозрачный раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл), и раствор промывают 5%-ной лимонной кислотой. Данный раствор сушат над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки в высоком вакууме получают 11,3 г (81%) полимера. Часть гидролизуют в кислоте и определяют, что содержание К848 составляет 9 вес.%.
Пример 9. Конъюгирование К848 с поликапролактондиолом через раскрытие имидного кольца.
Раскрытие имидного кольца применяют для присоединения К854 к концевым спиртовым группам поликапролактондиола с молекулярным весом 2000. Поликапролактондиол приобретен у ЛЫпсй Сйеш1са1 Сотрапу, кат. № 189421, и имеет следующую структуру:
Конъюгат поликапролактондиол-К854 имеет следующую структуру:
Полимер (5 г, 2,5х10-3 моль) растворяют в 25 мл метиленхлорида и добавляют лактам К854 (2,4 г, 5,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7-триазабицикло[4,4,0]дец-5-ена (ΤΒΌ, 0,557 г, 4х10-3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение 15 мин образуется прозрачный бледно-желтый раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл), и раствор промывают 5%-ной лимонной кислотой. Данный раствор сушат над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки в высоком вакууме получают 5,2 г (70%) полимера. Часть гидролизуют в кислоте и определяют, что содержание К848 составляет 18,5 вес.%.
Пример 10. Конъюгирование К848 с поли(гексаметиленкарбонат)диолом посредством раскрытия имидного кольца.
Раскрытие имидного кольца применяют для присоединения К848 к концевым спиртовым группам поли(гексаметиленкарбонат)диола с молекулярным весом 2000. Поли(гексаметиленкарбонат)диол приобретен у ЛЫпсй Сйетюа1 Сотрапу, кат. №461164, и имеет следующую структуру:
Конъюгат поли(гексаметиленкарбонат)диол-К848 имеет следующую структуру:
Полимер (5 г, 2,5х10-3 моль) растворяют в 25 мл метиленхлорида и добавляют лактам К848 (2,06 г, 5,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7-триазабицикло[4,4,0]дец-5-ена (ΤΒΌ, 0,557 г, 4х10-3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи образуется прозрачный бледно-желтый раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл), и раствор промывают 5%-ной лимонной кислотой. Данный раствор сушат над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки в высоком вакууме получают 5,9 г (84%) полимера. Применяют ЯМР для определения содержания К848, которое, как определили, составляет 21%.
Пример 11. Конъюгаты полимолочной кислоты и имидазохинолина при помощи катализатора на основе этилгексаноата олова
- 23 030246
В двугорлую круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин резиквимод (К-848, 100 мг, 3,18х 10-4 моль), Ώ/Б лактид (5,6 г, 3,89х10-2 моль) и безводный сульфат натрия (4,0 г). Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре 50°С в течение 8 ч. Колбу затем продули аргоном и добавили толуол (100 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной бане, установленной на 120°С, пока весь лактид не растворился, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (75 мг, 60 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения добавили воду (20 мл), и перемешивание продолжали в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавили дополнительно толуолом (200 мл) и затем промыли водой (200 мл). Раствор толуола затем промыли по очереди 10%-ным раствором хлорида натрия, содержащего 5% конц. соляной кислоты (200 мл), затем насыщенным раствором бикарбоната натрия (200 мл). ТСХ (диоксид кремния, 10% метанола в метиленхлориде) показала, что раствор не содержит свободного К-848. Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением 3,59 г конъюгата полимолочная кислота-К-848. Часть полимера гидролизовали основанием и исследовали с помощью ВЭЖХ на предмет содержания К848. Путем сравнения калибровочной кривой концентрации К-848 относительно ВЭЖХ-отклика установили, что полимер содержал 4,51 мг К-848 на грамм полимера. Молекулярная масса полимера, определенная с помощью ГПХ, составила приблизительно 19000.
Пример 12. Конъюгаты полимолочной кислоты с низким молекулярным весом и имидазохинолина
СН3
В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин, резиквимод (К-848, 218 мг, 6,93 х10-4 моль), Ώ/Б лактид (1,0 г, 6,93 х10-3 моль) и безводный сульфат натрия (800 мг). Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре 55°С в течение 8 ч. После охлаждения колбу затем продули аргоном и добавили толуол (50 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной ванне, установленной на 120°С, пока весь лактид не растворился, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (19 мг, 15 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения реакционную смесь разбавили простым эфиром (200 мл), и затем раствор промыли водой (200 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением 880 мг неочищенного конъюгата полимолочная кислота-К-848.
Неочищенный полимер подвергли хроматографии на силикагеле с использованием 10%-ного метанола в метиленхлориде в качестве элюента. Фракции, содержащие конъюгат, объединили и выпарили с получением очищенного конъюгата. Его высушили в высоком вакууме с получением конъюгата в виде твердой пены с выходом 702 мг (57,6%). Посредством интегрирования ЯМР-сигналов для ароматических протонов хинолина и при сравнении с интегральной интенсивностью протона СН молочной кислоты определили, что молекулярный вес конъюгата составлял приблизительно 2 КДа. ГПХ показала, что конъюгат содержал менее 5% свободного К848.
Пример 13. Конъюгаты сополимера гликолевой кислоты и полимолочной кислоты с низким молекулярным весом и имидазохинолина
В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин, резиквимод (К-848, 436 мг, 1,39х10-3 моль), гликолид (402 мг, 3,46х10-3 моль), Ώ/Б лактид (2,0 г, 1,39х10-2 моль) и безводный сульфат натрия (1,6 г). Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре 55°С в течение 8 ч. После охлаждения колбу затем продули аргоном и добавили толуол (60 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной бане, установленной на 120°С, пока не растворился весь К848, гликолид и лактид, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (50 мг, 39 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения реакционную смесь разбавили этилацетатом (200 мл), и затем раствор промыли водой (200 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением неочищенного конъюгата РБОЛ-К-848. Неочищенный полимер подвергли хроматографии на силикагеле с использованием 10%-ного метанола в метиленхлориде в качестве элюента. Фракции, содержащие конъюгат, объединили и выпарили с получением очищенного
- 24 030246
конъюгата. Его высушили в высоком вакууме с получением конъюгата в виде твердой пены с выходом 1,55 г (54,6%). Посредством интегрирования ЯМР-сигналов для ароматических протонов хинолина и их сравнения с интегральной интенсивностью протона СН молочной кислоты было определено, что молекулярный вес конъюгата составлял приблизительно 2 КДа. ГПХ показала, что конъюгат не содержал поддающийся обнаружению свободный К848.
Пример 14. Конъюгаты полимолочной кислоты и имидазохинолина при помощи катализа на основе диизопропиламида лития.
Имидазохинолин (К-848), Б/Ь лактид и имеющая отношение лабораторная посуда - все сушили под вакуумом при 50°С в течение 8 ч до использования. В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили К-848 (33 мг, 1,05х10-4 моль) и сухой толуол (5 мл). Ее нагревали с обратным холодильником до полного растворения К-848. Раствор перемешали в атмосфере азота и охладили до комнатной температуры для получения суспензии мелкодисперсного К-848. К этой суспензии добавили раствор диизопропиламида лития (2,0М в ТНР, 50 мкл, 1,0х10-4 моль), после чего продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 5 мин. Бледно-желтый раствор, который образовался, добавили с помощью шприца к горячему (120°С) раствору Б/Б лактида (1,87 г, 1,3х10-2 моль) в атмосфере азота. Устранили тепло, и бледно-желтый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение одного часа. Раствор разбавили метиленхлоридом (200 мл) и затем его промыли 1%-ной соляной кислотой (2х50 мл), а затем насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением конъюгата полимолочная кислота-К-848. ТСХ (диоксид кремния, 10%-ный метанол в метиленхлориде) показала, что раствор не содержит свободного К-848. Полимер растворили в метиленхлориде (10 мл), и этот раствор добавили по каплям в перемешиваемый гексан (200 мл). Осажденный полимер выделили декантацией и высушили под вакуумом с получением 1,47 г конъюгата полимолочная кислота-К848 в виде белого твердого вещества. Часть полимера гидролизовали основанием и исследовали с помощью ВЭЖХ на предмет содержания К-848. Путем сравнения калибровочной кривой концентрации К-848 относительно ВЭЖХ-отклика установили, что полимер содержал 10,96 мг К-848 на грамм полимера.
Пример 15. Активация полимолочной кислоты.
РБА (Б/Б-полилактид) (Кекотег К202Н от ВоеЬттдегЧидеШеш, кислотное число в эквиваленте КОН 0,21 ммоль/г, характеристическая вязкость (ίν): 0,21 дл/г) (10 г, 2,1 ммоль, 1,0 экв.) растворили в дихлорметане (БСМ) (35 мл). Добавили ЕБС (2,0 г, 10,5 ммоль, 5 экв.) и ΝΉ8 (1,2 г, 10,5 ммоль, 5 экв.). Твердые вещества растворили при помощи воздействия ультразвуком. Полученный в результате раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 6 дней. Раствор концентрировали для удаления большей части БСМ, и остаток добавили в раствор 250 мл диэтилового эфира и 5 мл МеОН для осаждения активированного сложного эфира РБА^Н8. Растворители удалили, и полимер дважды промыли простым эфиром (2х 200 мл) и высушили под вакуумом с получением активированного сложного эфира РБА-ΝΉδ в виде белого пенистого твердого вещества (~8 г выделенного, 1Н ЯМР подтвердил присутствие сложного эфира NΉ§). Сложный эфир РБА^Н§ хранят в атмосфере аргона в морозилке с температурой ниже -10°С до использования.
Или же реакцию можно осуществить в БМР, ТНР, диоксане или СНС13 вместо БСМ. БСС можно использовать вместо ЕБС (получаемую в результате БСС-мочевину отфильтровывают перед осаждением сложного эфира РБА^Н8 из простого эфира). Количество ЕБС или БСС и NΉ§ может варьировать в диапазоне 2-10 экв. РБА.
Пример 16. Активация РБА.
РБА (Б/Б-полилактид) с МВ 5000 (10,5 г, 2,1 ммоль, 1,0 экв.) растворяют в дихлорметане (БСМ) (35 мл). Добавляют ЕБС (2,0 г, 10,5 ммоль, 5 экв.) и NΉ§ (1,2 г, 10,5 ммоль, 5 экв.). Полученный в результате раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 3 дней. Раствор концентрируют для удаления большей части БСМ, и остаток добавляют в раствор 250 мл диэтилового эфира и 5 мл МеОН для осаждения активированного сложного эфира РБА^Н8. Растворители удаляют, и полимер дважды промывают простым эфиром (2х 200 мл) и высушивают под вакуумом с получением активированного сложного эфира РБА^Н8 в виде белого пенистого твердого вещества (~8 г выделенного, Н ЯМР можно использовать для подтверждения присутствия сложного эфира NΉ§). Сложный эфир РБА^Н8 хранят в атмосфере аргона в морозилке с температурой ниже -10°С до использования.
Альтернативно, реакцию можно осуществить в БМР, ТНР, диоксане или СНС13 вместо БСМ. БСС можно использовать вместо ЕБС (получаемую в результате БСС-мочевину отфильтровывают перед осаждением сложного эфира Р^А-NΉ§ из простого эфира). Количество ЕБС или БСС и NΉ§ может находиться в диапазоне 2-10 экв. РБА.
Пример 17. Активация РБСА с низким МВ.
Таким же образом, как приведено выше для активации полимера, РБСА с низким МВ с 50-75% гликолидом превращают в соответствующий активированный сложный эфир РРСА^Н5> и хранят в атмосфере аргона в морозилке при температуре ниже -10°С до использования.
Пример 18. Активация полимолочной кислоты.
- 25 030246
РЬА (К202Н, кислотное число 0,21 ммоль/г) (2,0 г, 0,42 ммоль, 1,0 экв.) растворили в 10 мл сухого ацетонитрила. Добавили Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбонат (И8С) (215 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.) и каталитическое количество 4-(Х^диметиламино)пиридина (ИМАР). Полученную в результате смесь перешивали в атмосфере аргона 1 день. Полученный в результате раствор сконцентрировали до почти полной сухости. Остаток затем добавили к 40 мл простого эфира для осаждения полимера, который дважды промыли простым эфиром (2x30 мл) и высушили под вакуумом с получением активированного сложного эфира РЬА-ΝΉδ (1Н ЯМР показал количество сложного эфира ΝΉδ на уровне приблизительно 80%).
Пример 19. Активация полимолочной кислоты.
РЬА (К202Н) (5,0 г, 1,05 ммоль) растворили в 25 мл безводного ИСМ и 2,5 мл безводного ИМР. Добавили ИСС (650 мг, 3,15 ммоль, 5,0 экв. ) и пентафторфенол (РРР) (580 мг, 3,15 ммоль, 5,0 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 6 дней и затем сконцентрировали для удаления ИСМ. Полученный в результате остаток добавили к 250 мл простого эфира для осаждения активированного полимера РЬА, который промыли простым эфиром (2x100 мл) и высушили под вакуумом с получением активированного сложного эфира РЬА-РРР в виде белого пенистого твердого вещества (4,0 г).
Пример 20. Конъюгаты полимолочной кислоты или РЬОА и имидазохинолина.
РЬА-ΝΉδ (1,0 г), К848 (132 мг, 0,42 ммоль) и диизопропилэтиламин (И1РЕА) (0,073 мл, 0,42 ммоль) растворили в 2 мл сухого ИМР в атмосфере аргона. Полученный в результате раствор нагревали при 5060°С в течение 2 дней. Раствор охладили до комнатной температуры и добавили к 40 мл деионизированной (И1) воды для осаждения полимерного продукта. Затем полимер промыли И1 водой (40 мл) и простым эфиром (2x40 мл) и высушили при 30°С под вакуумом с получением конъюгата К848-РЬА в виде белого пенистого твердого вещества (0,8 г, 1Н ЯМР показал конъюгацию К848 с РЬА через амидную связь). Степень конъюгации (загрузки) К848 на полимер подтвердили с помощью ВЭЖХ-анализа следующим образом: навеску полимера растворили в ТНР/МеОН и обработали 15% №ЮН. Полученные в результате гидролизованные полимерные продукты проанализировали на количество К848 с помощью ВЭЖХ относительно калибровочной кривой.
Пример 21. Конъюгаты полимолочной кислоты или РЬОА и имидазохинолина.
РЬА-ΝΉδ (1,0 г, 0,21 ммоль, 1,0 экв.), К848 (132 мг, 0,42 ммоль, 2,0 экв.), И1РЕА (0,15 мл, 0,84 ммоль, 4,0 экв.) и ИМАР (25 мг, 0,21 ммоль, 1,0 экв.) растворили в 2 мл сухого ИМР в атмосфере аргона. Полученный в результате раствор нагревали при 50-60°С в течение 2 дней. Раствор охладили до комнатной температуры и добавили к 40 мл деионизированной (И1) воды для осаждения полимерного продукта. Затем полимер промыли И1 водой (40 мл) и простым эфиром (2x40 мл) и высушили при 30°С под вакуумом с получением конъюгата РЬА-К848 в виде белого пенистого твердого вещества (0,7 г, 20 мг полимера гидролизовали в растворе из 0,2 мл ТНР, 0,1 мл МеОН и 0,1 мл 15% №ЮН). Количество К848 на полимере, как определили, составляло приблизительно 35 мг/г согласно обращенно-фазовому ВЭЖХанализу (колонка С18, подвижная фаза А: 0,1% ТРА в воде, подвижная фаза В: 0,1% ТРА в СН3,СК градиент).
Пример 22. Конъюгаты полимолочной кислоты и имидазохинолина.
РЬА (К202Н) (2,0 г, 0,42 ммоль, 1,0 экв. ), ИСС (260 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), ΝΉδ (145 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), К848 (200 мг, 0,63 ммоль, 1,5 экв.), ИМАР (77 мг, 0,63 ммоль, 1,5 экв.) и И1РЕА (0,223 мл, 1,26 ммоль, 3,0 экв.) растворили в 4 мл сухого ИМР. Смесь нагревали при 50-55°С в течение 3 дней. Смесь охладили до комнатной температуры и разбавили ИСМ. ИСС-мочевину отфильтровали, и фильтрат сконцентрировали для удаления ИСМ. Полученный остаток в ИМР добавили к воде (40 мл) для осаждения полимерного продукта, который промыли водой (40 мл), простым эфиром/ИСМ (40 мл/4 мл) и простым эфиром (40 мл). После сушки под вакуумом при 30°С получили требуемый конъюгат РЬА-К848 в виде белого пенистого твердого вещества (1,5 г).
Пример 23. Конъюгаты полимолочной кислоты и имидазохинолина.
РЬА (К202Н) (2,0 г, 0,42 ммоль, 1,0 экв.), ЕИС (242 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), НОАГ (171 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), К848 (200 мг, 0,63 ммоль, 1,5 экв.) и И1РЕА (0,223 мл, 1,26 ммоль, 3,0 экв.) растворили в 4 мл сухого ИМР. Смесь нагревали при 50-55°С в течение 2 дней. Раствор охладили до комнатной температуры и добавили к воде (40 мл) для осаждения полимерного продукта, который промыли водой (40 мл), простым эфиром/МеОН (40 мл/2 мл) и простым эфиром (40 мл). Полимер оранжевого цвета растворили в 4 мл ИСМ, и полученный раствор добавили к 40 мл простого эфира для осаждения полимера без значительной части оранжевого цвета. Светло-оранжевый полимер промыли простым эфиром (40 мл). После сушки под вакуумом при 30°С получили требуемый конъюгат РЬА-К848 в виде светлокоричневого пенистого твердого вещества (1,5 г).
Пример 24. Конъюгаты полимолочной кислоты или РЬОА и имидазохинолина.
РЬА (К202Н) (1,0 г, 0,21 ммоль, 1,0 экв. ), ЕИС (161 мг, 0,84 ммоль, 4,0 экв.), НОВГ-Н2О (65 мг, 0,42 ммоль, 2,0 экв.), К848 (132 мг, 0,42 ммоль, 2,0 экв.) и И1РЕА (0,150 мл, 0,84 ммоль, 4,0 экв.) растворили в 2 мл сухого ИМР. Смесь нагревали при 50-55°С в течение 2 дней. Раствор охладили до комнатной температуры и добавили к воде (40 мл) для осаждения полимерного продукта. Полимер оранжевого цвета
- 26 030246
растворили в 2 мл БСМ, и полученный раствор добавили к 40 мл простого эфира для осаждения полимера, который промыли водой/ацетоном (40 мл/2 мл) и простым эфиром (40 мл). После сушки под вакуумом при 30°С требуемый конъюгат РЬЛ-К848 получили в виде грязно-белого пенистого твердого вещества (1,0 г, загрузка К848 на полимере составила приблизительно 45 мг/г по данным ВЭЖХ-анализа и подтверждена 1Н ЯМР). Таким же способом получили РЬОА (75% лактида)-К848 и РЬОА (50% лактида)К848.
Пример 25. Конъюгация К848 с полиглицином, полиамид
Получают защищенную 1-бутилоксикарбонилом (1ВОС) полиглицинкарбоновую кислоту (I) посредством полимеризации с раскрытием цикла Ν-карбоксиангидрида глицина (АШпсЬ кат. № 369772) с применением сложного бензилового эфира 6-аминокапроновой кислоты (АЫпсЬ кат. № 833465) по способу ЛИТепз е1 а1. (Вютасгото1еси1е§, 5, 1653, (2004)). Защита концевой аминогруппы в виде 1-ВОС-карбамата с последующей гидрогенизацией над палладием на углероде для удаления бензилового сложного эфира завершает синтез ВОС-защищенной полиглицинкарбоновой кислоты (I).
Смесь ВОС-защищенной полиглицинкарбоновой кислоты (5 г, МВ=2000, 2,5х10-3 моль) и ИВТИ (3,79 г, 1,0х 10-2 моль) в безводном ΌΜΕ (100 мл) перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 50 мин. Затем добавляют К848 (1,6 г, 5,0х10-3 моль) с последующим диизопропилэтиламином (4 мл, 2,2х10-2 моль). Смесь перемешивают при КТ (комнатная температура) в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (16 ч). После охлаждения ΌΜΕ выпаривают под вакуумом, и остаток растирают в порошок в ЕЮАс (100 мл). Полимер выделяют при помощи фильтрации и затем полимер промывают 2-пропанолом (4х25 мл) для удаления остаточных реагентов и сушат под вакуумом при 3540°С в течение 3 дней. Полимер выделяют в виде грязно-белого твердого вещества с выходом 5,1 г (88%). Загрузка К848, которую можно определить с помощью ЯМР, составляет 10,1%.
Защитную группу 1-ВОС удаляют с помощью трифторуксусной кислоты, и полученный полимер прививают к РЬА карбоксильными концевыми группами посредством традиционных способов.
Пример 26. Получение конъюгата РЬОА с полимером полиглицин/К848.
Этап 1.
Конъюгат полиглицин/К848, защищенный 1-ВОС, (5 г) растворяют в трифторуксусной кислоте (25 мл), и этот раствор нагревают при 50°С в течение одного часа. После охлаждения трифторуксусную кислоту удаляют под вакуумом, и остаток растирают в порошок в этилацетате (25 мл). Полимер выделяют фильтрацией и хорошо промывают 2-пропанолом. После сушки под вакуумом получают 4,5 г полимера в виде грязно-белого твердого вещества.
Этап 2.
Смесь из РЬОА (Еакезкогез Ро1утег§, МВ -5000, 7525ΌΕΟ1Α, кислотное число 0,7 ммоль/г, 10 г, 7,0 ммоль) и ИВТИ (5,3 г, 14 ммоль) в безводном ΌΜΕ (100 мл) перемешивают при КТ в атмосфере аргона в течение 50 мин. Добавляют полимер из приведенного выше (1,4 г, 7 ммоль), растворенный в сухом ΌΜΕ (20 мл), с последующим диизопропилэтиламином (Б1РЕА) (5 мл, 28 ммоль). Смесь перемешивают при КТ в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (16 ч). После охлаждения ΌΜΕ выпаривают под вакуумом, и остаток растворяют в метиленхлориде (50 мл). Полимер осаждают посредством добавления 2-пропанола (200 мл). Полимер выделяют при помощи декантирования, промывают 2-пропанолом (4х50 мл) для удаления остаточных реагентов и высушивают под вакуумом при 35-40°С в течение ночи.
Получают 9,8 г (86%) блок-сополимера.
Пример 27. Получение конъюгата РЬОА-2-бутокси-8-гидрокси-9-бензиладенин
Смесь РЬОА (Еакезкогез Ро1утег§, ΜВ -5000, 7525БЕО1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и ИВТИ (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном Е1ОАс (30 мл) перемешивают при КТ в атмосфере аргона в течение 30 мин. Добавляют соединение (I) (0,22 г, 0,7 ммоль) в 2 мл сухого ^ΜδО с последующим диизопропилэтиламином (Б1РЕА) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в
- 27 030246
течение 20 ч. Добавляют дополнительные количества НВТи (0,53 г, 1,4 ммоль) и БГРЕА (0,5 мл, 2,8 ммоль), и смесь нагревают при 50-55°С в течение 4 ч. После охлаждения смесь разбавляют ЕЮАс (100 мл) и промывают насыщенным раствором Ν^Ο (20 мл), водой (2x20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор сушат над №28О4 (10 г) и концентрируют в гелеподобный остаток. Затем добавляют изопропиловый спирт 0РА) (35 мл), и осаждают из раствора коричневатый конъюгат полимера. Затем полимер промывают ГРА (2x20 мл) для удаления остаточных реагентов и сушат под вакуумом при 35-40°С в течение 2 дней в виде коричневатого порошка (1,0 г).
Пример 28. Получение конъюгата РЕОА-2,9-дибензил-8-гидроксиаденин РН он
πο^ί(ο'-Λο'\^°γΛΌΗ + о т ° ' Рй
РЮА-СО2Н
Смесь РЬОА (Ьаке§йоге§ Ро1утег§, МВ ~5000, 7525ЭЬО1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и НВТи (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном ЕЮАс (30 мл) перемешивают при КТ в атмосфере аргона в течение 30 мин. Добавляют соединение (II) (0,24 г, 0,7 ммоль) в 2 мл сухого ЭМЗО с последующим диизопропилэтиламином (ЭШЕА) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивают при КТ в течение 20 ч. Добавляют дополнительные количества НВТи (0,53 г, 1,4 ммоль) и ГЛРЕА (0,5 мл, 2,8 ммоль), и смесь нагревают при 50-55°С в течение 4 ч. После охлаждения смесь разбавляют ЕЮАс (100 мл) и промывают насыщенным раствором Ν^Ο (20 мл), водой (2x20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушивают над №28О4 (10 г) и концентрируют в гелеподобный остаток. Затем добавляют изопропиловый спирт 0РА) (35 мл), и из раствора осаждают коричневатый конъюгат полимера. Затем полимер промывают ША (2x20 мл) для удаления остаточных реагентов и сушат под вакуумом при 35-40°С в течение 2 дней в виде коричневатого порошка (1,2 г).
Пример 29. Раскрытие имидного кольца, применяемое для присоединения 2-пентил-8-гидрокси-9бензиладенина к концевым спиртовым группам поли(гексаметиленкарбонат)диола с молекулярным весом 2000.
Поли(гексаметиленкарбонат)диол приобретен у А1с1псИ Сйешюа1 Сотрапу, кат. № 461164.
Поли(гексаметиленкарбонат)диол
НО-[СН2(СН2)4СН2ОСО2]пСН2(СН2)4СН2-ОН
Конъюгат поли(гексаметиленкарбонат)диол-8-оксоаденин
Полимер (5 г, 2,5 х10-3 моль) растворяют в 25 мл метиленхлорида и добавляют лактам 2-пентил-8гидрокси-9-бензиладенина (2,05 г, 5,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7триазабицикло[4,4,0]дец-5-ена (ТВЭ, 0,557 г, 4х10-3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи образуется прозрачный бледно-желтый раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл), и раствор промывают 5%-ной лимонной кислотой. Данный раствор высушивают над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки в высоком вакууме получают 5,5 г (78%) полимера. Применяют ЯМР для определения содержания бензиладенина, которое составляет 18%.
Пример 30. Конъюгаты никотин-Ред-Р1а.
Полимер 3-никотин-РЕО-РЬА синтезировали следующим образом. Сначала растворили моноаминополи(этиленгликоль) от ЛепКет® с молекулярным весом 3,5 КДа (0,20 г, 5,7х10-5 моль) и избыток 4карбоксиникотина (0,126 г, 5,7х10-4 моль) в диметилформамиде (5,0 мл). Перемешали раствор и добавили дициклогексилкарбодиимид (0,124 г, 6,0х10-4 моль). Этот раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавили воду (0,10 мл), и перемешивание продолжали еще в течение 15 мин. Осадок дициклогексилмочевины удалили фильтрацией, и фильтраты выпарили под вакуумом. Остаток растворили в метиленхлориде (4,0 мл), и этот раствор добавили к диэтиловому эфиру (100 мл). Раствор охлаждали в холодильнике в течение 2 ч, и осажденный полимер выделили фильтрацией. После промывания диэтиловым эфиром твердый белый полимер высушили в высоком вакууме. Выход составил 0,188 г. Этот полимер был использован без дополнительной очистки для следующего этапа.
Полимер никотин/РЕО (0,20 г, 5,7х10-5 моль) растворили в сухом тетрагидрофуране (10 мл) в атмосфере азота, и перемешивали раствор по мере добавления раствора алюмогидрида лития в тетрагидрофу- 28 030246
ране (1,43 мл 2,0М, 2,85х10-3 моль). Добавление алюмогидрида лития вызвало осаждение полимера в виде студенистой массы. Реакционную смесь нагрели до 80°С в медленном потоке азота, позволяя тетрагидрофурану испаряться. Остаток затем нагревали при 80°С в течение 2 ч. После охлаждения осторожно добавили воду (0,5 мл). После того как выделение водорода остановилось, добавили 10%-ный метанол в метиленхлориде (50 мл), и реакционную смесь перемешивали до растворения полимера. Эту смесь отфильтровали через кизельгур (диатомовую землю) марки Се1йе® (доступна от ЕМЭ 1пс. как Се1йе® 545, кат. № СХ0574-3), и фильтрат выпарили досуха под вакуумом. Остаток растворяли в метиленхлориде (4,0 мл), и этот раствор медленно добавляли к диэтиловому эфиру (100 мл). Полимер, отделенный в виде белого хлопьевидного твердого вещества, выделили с помощью центрифугирования. После промывания в диэтиловом эфире твердое вещество высушили под вакуумом. Выход составил 0,129 г.
Затем наполнили круглодонную колбу объемом 100 мл, оснащенную мешалкой и обратным холодильником, полимером РЕО/никотин (0,081 г, 2,2х10-5 моль), Ό/Ь-лактидом (0,410 г, 2,85х10-3 моль) и безводным сульфатом натрия (0,380 г). Смесь высушивали под вакуумом при 55°С в течение 8 ч. Колбу охлаждали и продували аргоном, а затем добавляли сухой толуол (10 мл). Колбу помещали на масляную баню, установленную на 120°С, и как только лактид растворялся, добавляли этилгексаноат олова (5,5 мг, 1,36х10-5 моль). Реакцию проводили при 120°С в течение 16 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавили воду (15 мл), и перемешивание продолжили в течение 30 мин. Добавили метиленхлорид (200 мл), и после встряхивания в делительной воронке фазам позволили осесть. Слой метиленхлорида выделен и высушен над безводным сульфатом магния. После фильтрации для удаления высушивающего средства фильтраты выпарили под вакуумом с получением полимера в виде бесцветной пены. Полимер растворили в тетрагидрофуране (10 мл), и этот раствор медленно добавили в воду (150 мл) при перемешивании. Осажденный полимер выделили с помощью центрифугирования, и твердое вещество растворили в метиленхлориде (10 мл). Метиленхлорид удалили под вакуумом, и остаток высушили под вакуумом. Выход полимера 3-никотин-РЕО-РЬА составил 0,38 г.
Пример 31. Состав с синтетическим наноносителем.
Для инкапсулированных составов адъюванта синтезировали Резиквимод (также известный как К848) в соответствии с синтезом, приведенным в примере 99 патента США № 5389640 Оегйег и соавт.
К848 конъюгировали с РЬА вышеприведенным способом, и структуру РЬА подтвердили ЯМР.
Конъюгат РЬА-РЕО-никотин получили согласно примеру 30.
Приобрели РЬА (ВоеЬйпдег 1п§е1Ье1т СЬетюаБ, 1пс., 2820 ΝογΟι Νοπηαηάν Опус. Питерсберг, Вирджиния 23805). Поливиниловый спирт (МВ=11 КДа-31 КДа, гидролизованный на 85-89%) приобрели у ν\νΚ. 5С1епОПс. Пептид овальбумина 323-339 получили от ВасЬет Лтепсап 1пс. (3132 КакЫуа З1гее1, Торранс, Калифорния 90505. Кат. № 4064565).
Вышеприведенные материалы применяли для получения следующих растворов:
1) Резиквимод (К848), 10 мг/мл, и РЬА, 100 мг/мл, в метиленхлориде или конъюгат РЬА-К.848, 100 мг/мл, в метиленхлориде.
2) РЬА-РЕО-никотин в метиленхлориде, 100 мг/мл.
3) РЬА в метиленхлориде, 100 мг/мл.
4) Овальбумина пептид 323-339 в воде, 10 или 69 мг/мл.
5) Поливиниловый спирт в воде, 50 мг/мл.
Раствор № 1 (0,25-0,75 мл), раствор № 2 (0,25 мл), раствор № 3 (0,25-0,5 мл) и раствор № 4 (0,1 мл) объединили в небольшой емкости, и смесь обработали ультразвуком при 50%-ной амплитуды в течение 40 с с помощью Вгапзоп Όί§ίίπ1 Зошйег 250. К этой эмульсии добавили раствор № 5 (2,0 мл), и обработка ультразвуком при 35% амплитуды в течение 40 с с помощью Вгапкоп Όί§ίίπ1 Зошйег 250 образует вторую эмульсию. Ее добавили в стакан с фосфатно-соляным буфером (30 мл), и данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч для образования наночастиц.
Чтобы промыть частицы, часть дисперсии наночастиц (7,4 мл) перенесли в центрифужную пробирку и крутили при 5300 д один час, супернатант удалили, а осадок ресуспендировали в 7,4 мл соляного раствора, забуференного фосфатом. Повторили процедуру цинтрифугирования, и осадок ресуспендировали в 2,2 мл фосфатно-соляного буфера для конечной дисперсии наночастиц приблизительно 10 мг/мл.
Пример 32. Двойная эмульсия с множеством первичных эмульсий.
Материалы.
Пептид овальбумина 323-339, 17 аминокислотный пептид, известный как Т-клеточный эпитоп белка овальбумина, приобрели у ВасЬет Атепсак 1пс. (3132 КакЫуа З1гее1, Торранс, Калифорния 90505.)
Резиквимод (также известный как К848) синтезировали согласно способу, приведенному в патенте США № 6608201.
РЬА-К.848, резиквимод конъюгировали с РЬА с молекулярным весом приблизительно 2500 Да согласно вышеприведенному способу.
РЬОА-К848, резиквимод конъюгировали с РЬОА с молекулярным весом приблизительно 4100 Да согласно вышеприведенному способу.
РЗ-1826 олигонуклеотид ДНК с полностью фосфотиоатированным остовом, имеющий нуклеотид- 29 030246
ную последовательность 5'-ТСС АТС АСО ТТС СТО АСО ТТ-3' с натриевым противоионом, приобрели у Θ1ΐ§θδ Е1с (9775 8^ Соттегсе С1гс1е С-6, Уилсонвиль, Орегон 97070).
Р8-1826 олигонуклеотид ДНК с фосфодиэфирным остовом, имеющий нуклеотидную последовательность 5'-ТСС АТО АСО ТТС СТО АСО ТТ-3' с натриевым противоионом, приобрели у Θ1ΐ§οδ Е1с. (9775 8^ Соттегсе СЕс1е С-6, Уилсонвиль, Орегон 97070).
РБА с характеристической вязкостью 0,21 дл/г приобрели у 8игМос1^ РБагтасеиБсаБ (756 Тот МагПп БгАе, Бирмингем, Алабама 35211. Код продукта 100 ОБ 2А).
РБА с характеристической вязкостью 0,71 дл/г приобрели у 8игМос1^ РБагтасеиПсаБ (756 Тот МагБп БгАе, Бирмингем, Алабама 35211. Код продукта 100 ОБ 7А).
РБА с характеристической вязкостью 0,19 дл/г приобрели у ВоеБипдег 1п§еШе1т СБет1саБ, 1пс. (Питерсберг, Вирджиния. Кат. № К202Н).
РБА-РЕО-никотин с молекулярным весом приблизительно 18500-22000 Да получили согласно вышеприведенному способу.
РБА-РЕО-К848 с молекулярным весом приблизительно 15000 Да получили согласно вышеприведенному способу.
Поливиниловый спирт (МВ=11000-31000 Да, гидролизованный на 87-89%) приобрели у БТ. Вакег (кат. № И232-08).
Партии изготовили с помощью способа двойных эмульсий с множеством первичных эмульсий. Приведенная ниже таблица дает ссылку на индексы растворов (например, В в колонке раствора №1 указывает на то, что применялся раствор №1В) и объем использованного раствора.
Номер образца Раствор №1 (объем) Раствор №2 (объем) Раствор №3 (объем) Раствор №4 (объем) Раствор №5 (объем)
1 в (0,1 мл) с (1,0 мл) А (0,1 мл) С (1,0 мл) А (2,0 мл)
2 А (0,2 мл) А (1,0 мл) А (0,1 мл) А (1,0 мл) А (3,0 мл)
3 А (0,2 мл) В (1,0 мл) А (0,1 мл) В (1,0 мл) А (3,0 мл)
4 А (0,2 мл) В (1,0 мл) А (0,1 мл) В (1,0 мл) А (3,0 мл)
Раствор 1А.
Пептид овальбумина 323-339, 35 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина в 0,13Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 1В.
Пептид овальбумина 323-339, 70 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина в 0,13Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 2А.
0,21-ΐν РБА, 75 мг/мл, и РБА-РЕО-никотин, 25 мг/мл, в метиленхлориде. Раствор приготовили путем приготовления сначала двух отдельных растворов при комнатной температуре: 0,21-1 V РБА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде и РБА-РЕО-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде. Конечный раствор приготовили путем добавления 3 частей раствора РБА на каждую часть раствора РБА-РЕОникотин.
Раствор 2В.
0,71-ΐν РБА, 75 мг/мл, и РБА-РЕО-никотин, 25 мг/мл, в метиленхлориде. Раствор приготовили путем приготовления сначала двух отдельных растворов при комнатной температуре: 0,71-ΐν РБА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде и РБА-РЕО-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде. Конечный раствор приготовили путем добавления 3 частей раствора РБА на каждую часть раствора РБА-РЕОникотин.
Раствор 2С.
0,19-ΐν РБА, 75 мг/мл, и РБА-РЕО-никотин, 25 мг/мл, в метиленхлориде. Раствор приготовили путем приготовления сначала двух отдельных растворов при комнатной температуре: 0,19-1 V РБА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде и РБА-РЕО-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде. Конечный раствор приготовили путем добавления 3 частей раствора РБА на каждую часть раствора РБА-РЕОникотин.
Раствор 3А.
Олигонуклеотид (либо Р8-1826, либо РО-1826), 200 мг/мл, в очищенной воде. Раствор приготовили путем растворения олигонуклеотида в очищенной воде при комнатной температуре.
Раствор 4А.
- 30 030246
Такой же, как и раствор № 2А.
Раствор 4В.
Такой же, как и раствор № 2В.
Раствор 4С.
Такой же, как и раствор № 2С.
Раствор 5А.
Поливиниловый спирт, 50 мг/мл, в 100 мМ фосфатном буфере с рН 8.
Приготовили две отдельные первичные эмульсии вода-в-масле (В/М). В1/М2 приготовили путем объединения раствора 1 и раствора 2 в небольшой пробирке давления и обработки ультразвуком с 50%ной амплитудой в течение 40 с с помощью Вгапзоп П1§ка1 8опШег 250. В3/М4 приготовили путем объединения раствора 3 и раствора 4 в пробирке с низким давлением и обработки ультразвуком с 50%-ной амплитудой в течение 40 с с помощью Вгапзоп П1§ка1 8ошйег 250. Третью эмульсию с эмульсией из двух внутренних эмульсий ([В1/М2, В3/М4]/В5) приготовили путем объединения 0,5 мл каждой первичной эмульсии (В1/М2 и В3/М4) и раствора 5 и обработки ультразвуком с 30%-ной амплитудой в течение 4060 с с помощью Вгапзоп П1§ка1 8опШег 250.
Третью эмульсию добавили в стакан, содержащий 70 мМ фосфатный буферный раствор (30 мл), и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч с тем, чтобы позволить испариться метиленхлориду и сформироваться наноносителям. Часть наноносителей промыли путем перенесения суспензии наноносителей в центрифужную пробирку и кручения при 13823 д в течение одного часа, удаления супернатанта и ресуспендирования осадка в фосфатно-соляном буфере. Повторили процедуру промывания, и осадок ресуспендировали в фосфатно-соляном буфере для конечной дисперсии наночастиц приблизительно 10 мг/мл.
Количества олигонуклеотида и пептида в наноносителе определили посредством ВЭЖХ-анализа.
Пример 33. Стандартная двойная эмульсия.
Материалы.
Как приведено в примере 32 выше.
Партии изготовили с помощью стандартного способа двойных эмульсий. Приведенная ниже таблица дает ссылку на индексы растворов (например, В в колонке раствора №1 указывает на то, что применялся раствор №1В) и объем использованного раствора.
Номер образца Раствор №1 (объем) Раствор №2 (объем) Раствор №3 (объем) Раствор №4 (объем) Раствор №5 (объем)
1 А (0,1 мл) А (0,75 мл) А (0,25 мл) Нет А (2,0 мл)
2 А (0,1 мл) Нет А (0,25 мл) А (0,75 мл) А (2,0 мл)
3 А (0,1 мл) В (0,75 мл) А (0,25 мл) Нет А (2,0 мл)
4 В (0,1 мл) С (0,75 мл) А (0,25 мл) Нет В (2,0 мл)
5 В (0,1 мл) ϋ (0,25 мл) А (0,25 мл) А (0,50 мл) В (2,0 мл)
6 С (0,2 мл) Нет А (0,25 мл) А (0,75 мл) В (2,0 мл)
7 Р) (0,1 мл) Нет А (0,25 мл) А (0,75 мл) В (2,0 мл)
Раствор 1А.
Пептид овальбумина 323-339, 69 мг/мл, в деионизированной воде. Раствор приготовили путем медленного добавления пептида овальбумина к воде при перемешивании при комнатной температуре.
Раствор 1В.
Пептид овальбумина 323-339, 70 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина в 0,13Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 1С.
Олигонуклеотид (Р8-1826), 50 мг/мл, в очищенной воде. Раствор приготовили путем растворения олигонуклеотида в очищенной воде при комнатной температуре.
Раствор 1Ό.
Пептид овальбумина 323-339, 17,5 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина, 70 мг/мл, в 0,13Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре и затем разведения раствора 3 частями очищенной воды на одну часть исходного раствора.
- 31 030246
Раствор 2А.
К848, 10 мг/мл, и 0,19-ΐν РЬА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 2В.
РЬА-К.848, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 2С.
РЬОА-К.848, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 2Ό.
РЬА-РЕО-К.848, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 3А.
РЬА-РЕС-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 4А.
0,19-ΐν РЬА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 5А.
Поливиниловый спирт, 50 мг/мл, в деионизированной воде.
Раствор 5В.
Поливиниловый спирт, 50 мг/мл, в 100 мМ фосфатном буфере с рН 8.
Первичную эмульсию вода-в-масле (В/М) приготовили путем объединения раствора 1 и раствора 2, раствора 3 и раствора 4 в небольшой пробирке давления и обработки ультразвуком с 50%-ной амплитудой в течение 40 с с помощью Вгапзоп Όί§ίίαί 8ошйег 250. Двойную эмульсию вода/масло/вода (В/М/В) приготовили путем добавления раствора 5 к первичной эмульсии и обработки ультразвуком при 30-35%ной амплитуде в течение 40 с с помощью Вгапзоп ОщПа1 8ошйег 250.
Двойную эмульсию добавили в стакан с раствором фосфатного буфера (30 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч с тем, чтобы позволить испариться метиленхлориду и сформироваться наноносителям. Часть наноносителей промыли путем перенесения суспензии наноносителей в центрифужную пробирку и кручения при 5000-9500 об/мин в течение одного часа, удаления супернатанта и ресуспендирования осадка в фосфатно-соляном буфере. Повторили процедуру промывания, и осадок ресуспендировали в фосфатно-соляном буфере для конечной дисперсии наночастиц приблизительно 10 мг/мл.
Пример 34. Определение количества средств.
Способ для К848 и пептидов (например, пептида овальбумина, пептида человека, ТТ2рЭТ51).
Количество К848 (иммуностимулирующее средство) и пептида овальбумина (Т-клеточный антиген) измерили с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе ЛдПеШ 1100 при соотвествующих длинах волн (А=254 нм для К848 и 215 нм для пептида оуа), оснащенной колонкой АдПеШ 2огЬах 8В-С18 (3,5 мкм 75х4,6 мм. Температура колонки=40°С (кат. номер 866953-902)) с применением подвижной фазы А (МРА) 95% воды/5% ацетонитрила/0,1% ТРА и подвижной фазы В (МРВ) 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ТРА (градиент В=5-45% за 7 мин; постепенно до 95% В до 9 мин; обратное понижение до 5% В до 9,5 мин и сохранять в равновесии до конца. Общее время цикла составило 13 мин со скоростью потока 1 мл/мин).
Способ для СрО.
Количество СрО (иммуностимулирующее средство) измерили с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе Адйей 1100 при 260 нм, оснащенной ХВйбде С-18 Аа1егз (2,5-микронная частица, 50х4,6 мм внутренний диаметр (кат. № 186003090), темп, колонки 600°С) с применением подвижной фазы А 2% ацетонитрил в 100 мМ ТЕА-ацетатный буфер, рН приблизительно 8,0, и подвижной фазы В в виде 90% ацетонитрила, 10% воды (колонку уравновесили до 5% В с повышением до 55% В за 8,5 мин, затем постепенно до 90% В до 12 мин. Концентрацию В быстро повысили до 5% за 1 мин и уравновесили до времени остановки, 16 мин. Скорость потока составляла 1 мл/мин до окончания способа, 16 мин).
Способ для аналога никотина.
Аналог никотина измеряли с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе Адйей 1100, оснащенной ХВйбде С-18 Аа1егз (5-микронная частица, 100х4,6 мм внутренний диаметр, температура колонки 400°С) с применением подвижной фазы А (МРА) 95% воды/5% ацетонитрила/0,1% ТРА и подвижной фазы В (МРВ) 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ТРА (градиент: колонку уравновесили при 5% В, повышали до 45% В за 14 мин. Затем постепенно повышали до 95% В от 14 до 20 мин). Концентрацию подвижной фазы В быстро понизили обратно до 5% и повторно уравновесили до конца способа. Скорость потока способа поддерживали при 0,5 мл/мин с общим временем цикла 25 мин. Суспензию NС центрифугировали при 14000 об/мин в течение приблизительно 15-30 мин в зависимости от размера частиц. Собранные осадки обрабатывали 200 мкл концентр. NΗ4ΟΗ (8 М) в течение 2 ч при покачивании до тех пор, пока раствор не стал прозрачным. 200 мкл 1% ТРА добавили для нейтрализации раствора смеси, что дало общий объем раствора осадка 200 мкл. Аликвоту 50 мкл раствора разбавили МРА (или водой) до 200 мкл и проанализировали на ВЭЖХ, как описано выше, для определения количества, присутствовавшего в осадках.
- 32 030246
Инкапсулированный свободный К848 в наноносителе 0,5 мл суспензии NС центрифугировали при 14000 об/мин в течение приблизительно 15 мин. Собранный остаток растворили 0,3 мл ацетонитрила и недолго центрифугировали при 14000 об/мин для удаления любых остаточных нерастворимых веществ. Прозрачный раствор дополнительно разбавили 4-кратным эквивалентным объемом МРА и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанной выше.
Инкапсулированный СрС в наноносителе.
330 мкл суспензии NС с производства (приблизительно 10 мг/мл суспензия в РВ8) осадили центрифугированием при 14000 об/мин в течение 15-30 мин в зависимости от размера частиц. Собранные осадки ресуспендировали 500 мкл воды и обрабатывали ультразвуком в течение 30 мин до полного диспергирования частиц. NС затем нагревали при 600°С в течение 10 мин. К смеси добавили дополнительные 200 мкл 1 N №ЮН. нагревали еще 5 мин, в результате чего смесь становится прозрачной. Раствор гидролизованного NС недолго центрифугировали на 14000 об/мин. Затем осуществили конечное 2-кратное разведение прозрачного раствора с использованием воды и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанной выше.
Инкапсулированные Т-клеточные антигены (например, пептид оуа или пептид человека, ТТ2рЭТ51).
330 мкл суспензии NС с производства (приблизительно 10 мг/мл суспензия в РВ8) осадили центрифугированием при 14000 об/мин в течение 15-30 мин. К осадкам добавили 100 мкл ацетонитрила для растворения полимерных компонентов ΝΟ. Смесь перемешали на вортекс-мешалке и обрабатывали ультразвуком в течение 1-5 мин. 100 мкл 0,2% ТРА добавили к смеси для экстрагирования пептидов и обработали ультразвуком в течение еще 5 мин, чтобы обеспечить разрушение агрегатов. Смесь центрифугировали при 14000 об/мин в течение 15 мин для отделения каких-либо нерастворимых материалов (например, полимеров). Взяли 50 мкл аликвоту супернатанта, разведенную 150 мкл МРА (или воды), и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, как описано выше.
Количество конъюгированного аналога никотина (В-клеточный антиген) в наноносителях.
1,5 мл суспензии NС осаждали центрифугированием при 14000 об/мин в течение приблизительно 15 мин, осадки гидролизовали с помощью 150 мкл концентрированного NΗ4ОΗ (8М) в течение приблизительно 2-3 ч до тех пор, пока раствор не становится прозрачным. К смеси осадков добавили 150 мкл 2% ТРА (водн.) для нейтрализации раствора. Аликвоту 100 мкл смеси развели 200 мкл воды и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанной выше, и определили количество на основе калибровочной кривой, построенной при помощи предшественника (РЕС-никотин) РЬА-РЕО-никотина, применяемого в производстве.
Пример 35. Скорость высвобождения иммуномодулирующего средства из синтетических наноносителей.
Следующие данные демонстрируют скорости высвобождения К848 из наночастиц, произведенных из конъюгата низкомолекулярной полимолочной кислоты К848, показанного выше. Табл. 1 приводит соответствующую информацию о составах для экспериментов.
Высвобождение Т-клеточного антигена, пептида оуа и адъюванта, К848 из синтетического наноносителя (наночастиц) в РВ8 (100 мМ, рН 7,4) и цитратного буфера (100 мМ, рН 4,5) при 37°С осуществили следующим образом:
Аналитический способ.
Высвобожденное количество К848 и оуа пептида измеряют при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе АдйепГ 1100 при А=215 нм, оснащенной колонкой 2огЪах 8В-С18 АдйепГ (3,5 мкм, 75x4,6 мм. Температура колонки=40°С (кат. № 866953-902)) с применением подвижной фазы А (МРА) 98% воды/2% ацетонитрила/0,1% ТРА и подвижной фазы В (МРВ) 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ТРА с градиентом: В=5-45% за 7 мин; постепенно до 95% В до 9 мин; повторно уравновесили до конца. Время цикла 13 мин. Поток=1 мл/мин.
Общее количество К848 и пептида оуа, присутствующих в наночастицах, было такое, как показано в табл. 1. Водную суспензию тестируемых синтетических наноносителей затем развели РВ8 до конечного объема исходного раствора 4,4 мл.
А) Измерение скорости высвобождения ш уйго в РВ8 (рН 7,4).
Для образца Т0 сразу удалили аликвоту 200 мкл из каждого образца № и центрифугировали при 14000 об/мин в микроцентрифужных пробирках с помощью микроцентрифуги (модель: Са1аху 16). Удалили 100 мкл супернатанта, развели до 200 мкл в подвижной фазе А (МРА) ВЭЖХ и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида оуа на обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Для измерений в моменты времени: 9x200 мкл каждого из образцов добавили в микроцентрифужные пробирки (3x200 для несконъюгированных), и добавили 300 мкл 37°С РВ8 к каждой из вышеупомянутых аликвот, и образцы немедленно поместили в 37°С термостат. В следующие моменты времени: 24, 48, 96 и 144 ч (для конъюгированного К848) или 2, 16 и 24 ч (для несконъюгированного (инкапсулированного) К848) образцы центрифугировали и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида оуа, как описано выше для образца Т0.
- 33 030246
В) Измерение скорости высвобождения ΐη νΐίΓΟ в цитратном буфере (рН 4,5).
Для образца Т0 удалили 200 мкл аликвоту из каждого образца и центрифугировали при 6000 об/мин в течение 20 мин, и удалили супернатант. Остаточные наночастицы ресуспендировали в 200 мкл цитратного буфера и центрифугировали при 14000 об/мин в течение 15 мин. Удалили 100 мкл супернатанта, развели до 200 мкл посредством МРА и проанализировали на К848 и пептид, как приведено выше.
Для измерений в моменты времени: 9х200 мкл каждого из образцов добавили в микроцентрифужные пробирки (3х200 для неконъюгированного) и центрифугировали в течение 20 мин при 6000 об/мин, и удалили супернатанты. Остаточные ΝΡ затем ресуспендировали в 500 мкл цитратного буфера и поместили в 37°С термостат. В следующие моменты времени: 24, 48, 96 и 144 ч (для конъюгированного К848) или 2, 16 и 24 ч (для неконъюгированного (инкапсулированного) К848) образцы центрифугировали и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида ονα, как описано выше для образца Т0.
Для установления баланса масс из вышеуказанных измерений в РВ8 и цитратном буфере оставшиеся осадки (только образцы конъюгированного К848) из каждого образца обработали 200 мкл конц. ΝΙ 14О11 (8 М) в течение 3 ч с перемешиванием. После осаждения смеси добавили 200 мкл 1% ТТЛ с доведением общего объема осадка до 400 мкл. Аликвоту 50 мкл раствора развели МРА до 200 мкл и проанализировали на ВЭЖХ, как описано выше, для определения количества К848 и пептида ονα, которые остались в осадке после высвобождения ΐη νΐίΓΟ для сведения баланса масс. Для несконъюгированных образцов разводят образец посредством ТТЛ в ацетонитриле и анализируют, как описано выше для К848 и пептида.
Результаты подытожены на фиг. 1-3.
Таблица 1
Целевые составы с ковалентным К848
Е - инкапсуляция К848.
Материалы и способ.
ВЭЖХ - Лдйеп! 1100. λ=215 нм. Темп. колонки=40°С.
Колонка - 2огЬах 8В-С18 Лдйеп!, 3,5 мкм. 75х4,6 мм (кат. № 866953-902).
С18 предколонка.
Подвижная фаза А (МРА) - 98% воды/2% ацетонитрила/0,1% ТТЛ.
Подвижная фаза В (МРВ) - 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ТТА.
Градиент: В=5-45% за 7 мин; постепенно до 95% В до 9 мин; повторно уравновесили до конца. Время цикла - 13 мин. Поток=1 мл/мин.
РВЗ - 100 мМ, рН 7,4.
Цитратный буфер - 100 мМ, рН 4,5.
Термостат.
Микроцентрифуга - Оа1аху 16.
Микроцентрифужные пробирки.
Ультразвуковой аппарат.
Пипетки - 20, 200, 1000 мкл, регулируемые, вода класса "для ВЭЖХ" - ΕΜΌ - №^Х0008-1.
ЯН4ОН - 8 М МаШпксгобБ ТТА, 0,2%. Пригот. 4/27/09.
ТТА, 1%. Пригот. 5/13/09.
Термометр.
Образцы "6-1" и "6-2" имеют удерживаемый К848. Все остальные имеют конъюгированный К848. Оценочные значения основаны на результатах загрузки из "62" серии.
- 34 030246
Таблица 2
Оценочные К848 и пептид оуа в синтетических наноносителях
ИК образца Оценочный К.848 в ΝΡ (мкг/мл) Оценочный ονΒ в ΝΡ (мкг/мл)
1 54 146
2 166 184
3 119 32
4 114 34
5 465 37
б 315 34
7 116 40
Объемы образцов были слегка ниже, чем планировалось. Для обеспечения достаточного количества материала для всех моментов времени к образцам добавили следующие объемы РВ8 с доведением их всех до 4,4 мл.
Таблица 3
ИК образца Объем образца (мл) Объем добавленного РВ5 (мл)
1 4,35 0, 05
2 4,23 0, 17
3 4,21 0, 19
4 4,20 0,20
5 4,21 0, 19
б 4,19 0,21
7 4,20 0,20
Процедура.
1) Приготовление образца Т=0.
a. РВ8:
1. Взять 200 мкл аликвоту из каждого образца. Центрифугировать на микроцентрифуге при 14000 об/мин. Удалить супернатант.
ίί. Развести 100 мкл >200 мкл супернатанта в МРА. (ОР(фактор разведения)=2). ΐΐΐ. Проанализировать на пептид и К848.
b. Цитрат:
1. Взять 200 мкл аликвоту из каждого образца. Центрифугировать на микроцентрифуге при 6000 об/мин в течение 20 мин. Удалить супернатант.
ίί. Добавить 200 мкл цитратного буфера и тщательно ресуспендировать.
ΐΐΐ. Центрифугировать на микроцентрифуге при 14000 об/мин в течение 15 мин. Удалить супернатант.
ιν. Развести 100 мкл >200 мкл супернатанта в МРА. (ΌΡ=2). ν. Проанализировать пептид и К848.
2) РВ8 ГУК.
a. Добавить 9x200 мкл каждого из образцов в микроцентрифужные пробирки (3x200 для неконъюгированных).
b. К каждой аликвоте добавить 300 мкл 37°С РВ8.
c. Образцы сразу поместить в 37°С термостат.
3) Цитрат 1УК.
a. Добавить 9x200 мкл каждого из образцов в микроцентрифужные пробирки (3x200 для неконъюгированных).
b. Центрифугировать 20 мин при 6000 об/мин.
c. Удалить супернатанты.
б. В каждую пробирку добавить 500 мкл цитратного буфера и тщательно ресуспендировать. е. Образцы поместить в 37°С термостат.
4) Для партий 1-4 и 8 забрать образцы (см. этап 6) в следующие моменты времени:
a. Конъюгированные:
1. 24 ч.
ίί. 48 ч (2 суток). ш. 96 ч (4 суток). ιν. 144 ч (6 суток).
ν. Дальнейшие моменты времени ТВО следует определять на основе вышеприведенных данных.
b. Неконъюгированные:
1. 2 ч.
- 35 030246
ίί. 16 ч. ίίί. 24 ч.
5) Для партий 6 и 7 взять образцы в следующие моменты времени:
a. РВ8: ί. 24 ч.
ίί. 48 ч (2 суток). ίίί. 96 ч (4 суток). ίν. 144 ч (6 суток).
ν. Дальнейшие моменты времени ТВЭ следует определять на основе вышеприведенных данных.
b. Цитрат: ί. 2 ч.
ίί. 16 ч. ίίί. 24 ч.
ίν. 48 ч (2 суток). ν. 72 ч (3 суток). νί. 96 ч (4 суток). νίί. 120 ч (5 суток).
νίίί. Дальнейшие моменты времени ТВО следует определять на основе вышеприведенных данных.
6) Забор образца следующим образом:
a. Центрифугировать на микроцентрифуге при 14000 об/мин. в течение 15 мин.
b. Удалить супернатант.
c. Развести от 100 до 200 мкл в МРА. (ИР=2).
7) Проанализировать на пептид и К848. Это даст количество, высвобождаемое в каждый момент времени.
Для сведения баланса масс выполнить следующее:
8) К оставшимся осадкам (только конъюгированным) добавить 200 мкл ΝΗ4ΟΗ.
9) Недолго крутить на вортекс-мешалке и обработать ультразвуком для диспергирования.
10) Добавить магнитную мешалку. Дать осесть до прозрачности (по меньшей мере 3 ч).
11) Добавить 200 мкл 1% ТРА (общий объем осадка=400 мкл).
12) Развести 50 мкл-200 мкл в МРА. Проанализировать с помощью ВЭЖХ для определения пептида и К848, оставшихся в осадке. (ИР=4).
13) Для неконъюгированных партий проанализировать пептид и К848 посредством обычного способа АсЖГРА.
Пример 36. Тестирование скорости высвобождения.
Высвобождение антигена (например, пептида оνа, Т-клеточного антигена) и иммуностимулирующих средств (например, К848, СрО) из синтетических наноносителей в фосфатно-соляном буфере (РВ8) (100 мМ, рН 7,4) и цитратном буфере (100 мМ, рН 4,5) при 37°С определяли следующим образом:
Высвобождение К848 из наноносителя, составленного из конъюгированного К848 и пептида оνа, осуществили путем замены требуемого количества водной суспензии тестируемых синтетических наноносителей, полученных с производства (например, приблизительно 10 мг/мл в РВ8), на такой же объем соответствующих сред для высвобождения (цитратный буфер, 100 мМ) посредством центрифугирования и ресуспендирования.
Измерение скорости высвобождения ш νίΙΐΌ в РВ8 (рН 7,4).
1 мл суспензии NС в РВ8 центрифугировали при 14000 об/мин в микроцентрифужных пробирках, в основном от 15 до 30 мин в зависимости от размера частиц. Собранный супернатант затем развели равным объемом подвижной фазы А (МРА) или водой и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ на предмет количества К848, высвобожденного при хранении. Оставшийся осадок ресуспендировали до однородной суспензии в 1 мл РВ8 и поместили в термокамеру при 37°С с постоянным легким помешиванием.
Для образца Т0 сразу удалили аликвоты 150 мкл из суспензии NС перед тем, как поместить суспензию NС в термокамеру при 37°С, и центрифугировали при 14000 об/мин в микроцентрифужных пробирках с помощью микроцентрифуги (модель: Оа1аху 16). Удалили 100 мкл супернатанта, развели до 200 мкл подвижной фазой А (МРА) ВЭЖХ или водой и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида оνа на обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Для измерений в моменты времени удалили аликвоты 150 мкл из суспензии-образца NС 37°С, и образцы центрифугировали, и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида оνа тем же способом, что и для образца Т0. Высвобожденные К848 и пептида оνа тестировали в момент времени 6, 24 ч для обычного контроля с дополнительными моментами времени 2, 48, 96 и 144 ч для установки полного профиля высвобождения.
Измерение скорости высвобождения ш νίΙΐΌ в цитратном буфере (рН 4,5).
Применили 100 мМ буфер на основе цитрата натрия (рН 4,5) для замены исходного раствора для хранения NС (например, РВ8) вместо РВ8-буфера, рН 7,4. Для того чтобы свести баланс масс из выше- 36 030246
приведенных измерений в ГВ§ и цитратном буфере, оставшиеся осадки от каждого момента времени обработали 100 мкл МН4ОН (8 М) в течение 2 ч (или дольше) при перемешивании до тех пор, пока раствор не стал прозрачным. 100 мкл 1% ТΡΑ добавили для нейтрализации смеси, что дало общий объем раствора осадка 200 мкл. Аликвоту 50 мкл смеси развели МРА (или водой) до 200 мкл и проанализировали на ВЭЖХ, как описано выше, для определения количества невысвобожденного К.848, который остался в осадке после высвобождения ίη νίΐΓΟ для сведения баланса масс. Для несконъюгированных образцов образец разводят ТΡΑ в ацетонитриле и анализируют как описано выше для К848.
Высвобождение СрО определяли схожим образом как для измерения К848 и пептида оνа с точки зрения приготовления образцов и контролируемых моментов времени. Тем не менее, количество СрО в средах для высвобождения оценивали с помощью способа обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанного выше.
Пример 37. Иммунизация посредством ЫС-№с, транспортирующих адъювант СрО.
Группы из пяти мышей иммунизировали три раза (подкожно, в задние конечности) с 2-недельными интервалами (дни 0, 14 и 28) посредством 100 мг ЫС-№с. ЫС-№с представлял собой композицию наноносителей с находящимся на внешней поверхности никотином, и для всех групп мышей, за исключением группы 1, транспортирующий адъювант СрО-1826 (тиоатированный), который высвобождался из наноносителей с различными скоростями. Наноносители получали в соответствии с приведенным выше способом. Затем измерили антитела к никотину сыворотки крови на 26 и 40 дни. ЕС50 для антител к никотину, как измерено в стандартном ΕΡΙδΑ на полилизинникотин, показаны на фиг. 4.
Мышам группы 1 вводили ΝΟ-Νΐο без СрО-1826, содержащие пептид оνа и полимеры, 75% которых представляли собой ΡΡΑ, и 25% представляли собой ΡΡΑ-ΡΕΟ-Νκ. Мышам группы 2 вводили Ν^Νκ, содержащие пептид оνа, полимеры, 75% которых представляли собой ΡΡΑ, и 25% представляли собой ΡΡΑ-ΡΕΟ-Νκ, и 3,2% СрО-1826; скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 4,2 мкг СрО на мг ΝΟ. Мышам группы 3 вводили Νί'.'-Νχ. содержащие полимеры, 75% которых представляли собой ΡΡΑ, и 25% представляли собой ΡΕΑ-ΡΕβ-ΝΑ, и 3,1% СрО-1826; скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 15 мкг СрО на мг ΝΟ. Высвобождение определяли при рН 4,5.
Результаты, показанные на фиг. 4, демонстрируют, что удержание адъюванта в наноносителях является полезным для иммунного ответа на связанный с NС антиген, и, кроме того, что более высокая скорость высвобождения удерживаемого адъюванта СрО из наноносителей (ΝΟ) на момент времени 24 ч давала иммунный ответ, который был повышен по сравнению с ответом, индуцированным посредством NС с более низкой скоростью высвобождения адъюванта СрО (агонист ТЬК9).
Пример 38. Иммунизация посредством ΝΟ-Νΐο, транспортирующих две формы адъюванта СрО.
Группы из пяти мышей иммунизировали дважды (подкожно, в задние конечности) с 4-недельными интервалами (дни 0 и 28) посредством 100 мкг ΝΟ-Νΐο, а затем антитела к никотину сыворотки крови измеряли на 12, 24 и 40 дни. ΝΟ-Νΐο представлял собой композицию наноносителя с находящимся на внешней поверхности никотином и транспортирующий одну из двух форм адъюванта СрО-1826. Наноносители получали в соответствии с приведенным выше способом. ΕС5ο для антител к никотину, как измерено в стандартном ΕΡΙδΑ на полилизинникотин, показаны на фиг. 5.
Мышам группы 1 вводили ΝΡ-Νχ, содержащие пептид оνа, полимеры, 75% которых представляли собой ΡΡΑ, и 25% представляли собой Ρ^Α-ΡΕО-N^с, и 6,2% СрО-1826 (тиоатированный); скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 16,6 мкг СрО на мг ΝΟ. Мышам группы 2 вводили ΝΕ-ΝΑ, содержащие пептид оνа, полимеры, 75% которых представляли собой ΡΡΑ, и 25% представляли собой ΡΡΑΡΕО-N^с, и 7,2% СрО-1826 (тиоатированный); скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 13,2 мкг СрО на мг ΝΟ. Мышам группы 3 вводили ΝΟ-ΝΑ, содержащие пептид оνа, полимеры, 75% которых представляли собой ΡΡΑ, и 25% представляли собой Ρ^Α-ΡΕО-N^с, и 7,9% СрО-1826 (сложный фосфодиэфир или РО, нетиоатированный); скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 19,6 мкг СрО на мг ΝΌ. Мышам группы 4 вводили ΝΓ-Νΐο, содержащие пептид оνа, полимеры, 75% которых представляли собой ΡΡΑ, и 25% представляли собой Ρ^Α-ΡΕО-N^с, и 8,5% СрО-1826 (ΡΟ, нетиоатированный); скорость высвобождения на момент времени 24 ч: 9,3 мкг СрО на мг ΝΌ. Высвобождение определяли при рН 4,5.
Результаты, показанные на фиг. 5, демонстрируют, что скорость высвобождения удерживаемого адъюванта (СрО, агонист ТЬК9) из наноносителей влияла на продуцирование антитела к связанному с NС антигену (никотину), при этом наноноситель, проявлявший более высокую скорость высвобождения на момент времени 24 ч, индуцировал более сильный гуморальный иммунный ответ (группа 1>группа 2 и группа 3>группа 4). Это имело место независимо от использовавшейся формы СрО (более стабильный, тиоатированный или менее стабильный нетиоатированный).
Пример 39. Иммунизация посредством Ж.’-Нщ транспортирующих К848.
Группы из пяти мышей иммунизировали трижды (подкожно, в задние конечности) с 2-недельными интервалами (дни 0, 14 и 28) посредством 100 мкг Ж.'-'Нщ а затем антитела к никотину сыворотки крови измеряли на 26, 40 и 54 дни. Наноносители получали в соответствии с приведенным выше способом. ΕС5ο для антител к никотину, как измерено в стандартном ΕΡΙδΑ на полилизинникотин, показаны на фиг. 6.
Мышам группы 1 вводили НС-Ню, содержащие пептид оνа и полимеры, 75% которых представляли
- 37 030246
собой РЬА, и 25% представляли собой РЬА-РЕС-№с, но без адъюванта. Мышам группы 2 вводили Ν^ №с, содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой РЬА, и 25% представляли собой РЬА-РЕС-№с, и 1,0% К848; из которого 92% высвобождается за 2 ч и более 96% высвобождается за 6 ч. Мышам группы 3 вводили Ν^Νΐ^ содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой РБА-К848, и 25% представляли собой РЬА-РЕС-№с, и 1,3% К848; из которого 29,4% высвобождается за 6 ч и 67,8% высвобождается за 24 ч. Мышам группы 4 вводили Ν^Νΐ^ содержащие пептид оуа, полимеры, 75% которых представляли собой РБА-К848, и 25% представляли собой РЬА-РЕС-№с, и 1,4% К848; из которого 20,4% высвобождается за 6 ч и 41,5% высвобождается за 24 ч. Мышам группы 5 вводили Ν^Νΐ^ содержащие пептид оуа, полимеры, 25% которых представляли собой РБА-РЕС-К848, 50% РЬА, и 25% представляли собой РЬА-РЕС-№с, и 0,7% К848; из которого менее 1% высвобождается за 24 ч. Высвобождение определяли при рН 4,5.
Результаты, показанные на фиг. 6, демонстрируют, что адъювант К848 (агонист ТБК 7/8), содержащийся в ΝΟ, увеличивает гуморальный иммунный ответ на связанный с NС антиген (группы 25>>группа 1). Более того, ни быстрое (группа 2), ни медленное (группа 5) высвобождение К848 не повышало иммунный ответ до такого же уровня, как ΝΩ, высвобождавшие К848 со средней скоростью (группа 3-группа 4>группа 2-группа 5).

Claims (23)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение структурной формулы (I)
    где К1 - Н, ОН, 8Н, \Н2 или (С1-С4)алкил, замещенный (С1-С4)алкил, содержащий (С1С3)алкокси; или (С1-С3)алкокси;
    К2 - Н, (С1-С3)алкил или замещенный (С1-С3)алкил, содержащий метил, гидрокси, фенил, или ^НЗО^Нз;
    Υ - Ν или С;
    К3 отсутствует, если Υ - Ν; или если Υ - С, то К3 представляет собой Н, или К3 объединен с Кд с образованием 6-членного карбоцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены;
    К представляет собой Н или (С1-С5)алкил, (С1-С4)алкокси, или (С1-С4)алкиламино, или замещенный (С1-С4)алкиламино, содержащий фенил, когда не объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены; или Кд объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; и
    К8 представляет собой биоразлагаемый полимер или его элементарное звено, где биоразлагаемый полимер или его элементарное звено включает сложный полиэфир, поликарбонат или полиамид или их элементарное звено.
  2. 2. Соединение по п.1, где биоразлагаемый полимер или его элементарное звено включает поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер поли(гликолевой и молочной кислот) или поликапролактон или их элементарное звено.
  3. 3. Соединение по п.1, где К8 представляет собой биоразлагаемый полимер, содержащий сложный полиэфир, поликарбонат или полиамид.
  4. 4. Соединение по п.3, где биоразлагаемый включает полимер поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер поли(гликолевой и молочной кислот) или поликапролактон.
  5. 5. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по любому из пп.1-4.
  6. 6. Синтетический наноноситель, который включает соединение по любому из пп.1-4.
  7. 7. Фармацевтическая композиция, включающая синтетический наноноситель по п.6.
  8. 8. Фармацевтическая композиция, включающая вакцину, которая содержит соединение по любому из пп.1-4.
  9. 9. Способ модуляции иммунного ответа у субъекта, включающий введение соединения по любому из пп.1-4 субъекту.
  10. 10. Способ получения конъюгата, который включает структуру формулы (I)
    включающий
    активацию биоразлагаемого полимера или его элементарного звена и
    - 38 030246
    воздействие на активированный биоразлагаемый полимер или его элементарное звено и соединение структурной формулы (III) основанием и/или растворителем
    где Κι - Н, ОН, δ! \Н2 или (С1-С4)алкил, замещенный (С1-С4)алкил, содержащий (С1С3)алкокси; или (С1-С3)алкокси;
    К2 - Н, (С1-С3)алкил или замещенный (С1-С3)алкил, содержащий метил, гидрокси, фенил, или -Я^О2СН3;
    Υ - N или С;
    К3 отсутствует, если Υ - Ν; или если Υ - С, то К3 представляет собой Н, или К3 объединен с Кд с образованием 6-членного карбоцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены;
    К4 представляет собой Н или (С1-С5)алкил, (С1-С4)алкокси, или (С1-С4)алкиламино, или замещенный (С1-С4)алкиламино, содержащий фенил, когда Кд не объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; или К4 объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; и
    К8 представляет собой биоразлагаемый полимер или его элементарное звено.
  11. 11. Способ по п.10, где К8 представляет собой биоразлагаемый полимер.
  12. 12. Способ получения конъюгата, который включает структуру формулы (I)
    включающий
    воздействие на композицию, включающую полимер или его элементарное звено и соединение структурной формулы (III), агентом сочетания и основанием и/или растворителем;
    где Κι - Н, ОН, δ! ΝΙΙ2 или (С1-С4)алкил, замещенный (С1-С4)алкил, содержащий (С1С3)алкокси; или (С1-С3)алкокси;
    К2 - Н, (С1-С3)алкил или замещенный (С1-С3)алкил, содержащий метил, гидрокси, фенил, или -М^О2СН3;
    Υ - Ν или С;
    К3 отсутствует, если Υ - Ν; или если Υ - С, то К3 представляет собой Н, или К3 объединен с К4 с образованием 6-членного карбоцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены;
    К4 представляет собой Н или (С1-С5)алкил, (С1-С4)алкокси, или (С1-С4)алкиламино, или замещенный (С1-С4)алкиламино, содержащий фенил, когда К4 не объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла или К4 объединен с К3 с образованием 6-членного карбоцикла; и
    К8 представляет собой биоразлагаемый полимер или его элементарное звено.
  13. 13. Способ по п.12, где К8 представляет собой биоразлагаемый полимер.
  14. 14. Соединение по любому из пп.1-4, где Κι представляет собой Н, К2 представляет собой изобутил, Υ представляет собой С, и К3 и К4 объединены с образованием бензольного кольца с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены.
  15. 15. Соединение по любому из пп.1-4, где Κι представляет собой этоксиметил, К2 представляет собой гидроксиизобутил, Υ - С и К3 и К4 объединены с образованием бензольного кольца с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены.
  16. 16. Соединение по любому из пп.1-4, где К! представляет собой этоксиметил, К2 представляет собой метансульфонамидоизобутил, Υ - С и К3 и К4 объединены с образованием бензольного кольца с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены.
  17. 17. Соединение по любому из пп.1-4, где К1 представляет собой ОН, К2 представляет собой бензил, Υ - Ν, К3 отсутствует и К4 представляет собой бутокси.
  18. 18. Соединение по любому из пп.1-4, где Υ представляет собой Ν, К! представляет собой ОН, К2 представляет собой бензил, К3 отсутствует и К4 представляет собой бутиламино.
  19. 19. Соединение по любому из пп.1-4, где Υ представляет собой Ν, К1 представляет собой ОН, К2
    - 39 030246
    представляет собой бензил, К3 отсутствует и К4 представляет собой бутокси.
  20. 20. Соединение по любому из пп.1-4, где Υ представляет собой Ν, К1 представляет собой ОН, К2 представляет собой бензил, К3 отсутствует и К4 представляет собой бензиламино.
  21. 21. Соединение по любому из пп.1-4, где Υ представляет собой Ν, К1 представляет собой ОН, К2 представляет собой бензил, К3 отсутствует и К4 представляет собой пентил.
  22. 22. Соединение по любому из пп.1-4, где полимер является не растворимым в воде при рН 7,4 и при
    25°С.
  23. 23. Соединение по любому из пп.1-4, где полимер имеет средневесовой молекулярный вес в диапазоне от 800 до 10000 Да, как определено с помощью гельпроникающей хроматографии.
EA201171480A 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения-иммуномодулирующие средства EA030246B1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21712909P 2009-05-27 2009-05-27
US21712409P 2009-05-27 2009-05-27
US21711609P 2009-05-27 2009-05-27
US21711709P 2009-05-27 2009-05-27
PCT/US2010/001561 WO2010138194A2 (en) 2009-05-27 2010-05-26 Immunomodulatory agent-polymeric compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201171480A1 EA201171480A1 (ru) 2012-07-30
EA030246B1 true EA030246B1 (ru) 2018-07-31

Family

ID=43012672

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201171480A EA030246B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения-иммуномодулирующие средства
EA201171479A EA022699B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ
EA201791383A EA201791383A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения
EA201171478A EA028288B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения
EA201890311A EA201890311A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения - иммуномодулирующие средства
EA201500447A EA201500447A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ

Family Applications After (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201171479A EA022699B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ
EA201791383A EA201791383A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения
EA201171478A EA028288B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения
EA201890311A EA201890311A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения - иммуномодулирующие средства
EA201500447A EA201500447A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ

Country Status (12)

Country Link
US (9) US8629151B2 (ru)
EP (3) EP2435092A2 (ru)
JP (8) JP6297775B2 (ru)
KR (6) KR20180026572A (ru)
CN (7) CN102481376B (ru)
AU (6) AU2010254549B2 (ru)
BR (3) BRPI1012036A2 (ru)
CA (3) CA2762650A1 (ru)
EA (6) EA030246B1 (ru)
IL (3) IL216549A0 (ru)
MX (5) MX2011012599A (ru)
WO (3) WO2010138193A2 (ru)

Families Citing this family (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030129251A1 (en) 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US6993506B2 (en) 2000-12-05 2006-01-31 Jgr Acquisition, Inc. Method and device utilizing polymorphic data in e-commerce
JP4817599B2 (ja) * 2003-12-25 2011-11-16 独立行政法人科学技術振興機構 免疫活性増強剤とこれを用いた免疫活性の増強方法
JP5848127B2 (ja) 2008-08-13 2016-01-27 カリフォルニア インスティテュート オブ テクノロジー 担体ナノ粒子ならびに関連する組成物、方法およびシステム
RU2477753C2 (ru) * 2008-12-09 2013-03-20 Коули Фармасьютикал Груп, Инк. Иммуностимулирующие олигонуклеотиды
US11446374B2 (en) 2008-12-09 2022-09-20 Novavax, Inc. Modified RSV F proteins and methods of their use
LT3067064T (lt) 2008-12-09 2020-09-10 Novavax, Inc. Modifikuoti rsv f baltymai ir jų panaudojimo būdai
KR20120022984A (ko) * 2009-04-21 2012-03-12 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. Ｔｈ１ 편향 반응을 제공하는 면역나노치료법
CN102481376B (zh) 2009-05-27 2016-12-21 西莱克塔生物科技公司 免疫调节剂-聚合物化合物
CN107617110A (zh) * 2009-08-26 2018-01-23 西莱克塔生物科技公司 诱导t细胞辅助的组合物
AU2011258156B2 (en) 2010-05-26 2016-11-24 Selecta Biosciences, Inc. Multivalent synthetic nanocarrier vaccines
EP2640190A4 (en) 2010-11-05 2016-05-11 Selecta Biosciences Inc MODIFIED NICOTINIC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS
MX358598B (es) 2010-11-12 2018-08-27 Cour Pharmaceuticals Dev Company Partículas inmuno-moduladoras modificadas.
WO2012079047A2 (en) * 2010-12-10 2012-06-14 California Institute Of Technology Targeting kidney mesangium with nanoparticles of defined diameter
EP2495567A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-05 Erasmus University Medical Center Rotterdam Methods and means for monitoring disruption of tissue homeostasis in the total body
AU2012236937B2 (en) * 2011-03-25 2017-06-08 Selecta Biosciences, Inc. Osmotic mediated release synthetic nanocarriers
BR112013026661B1 (pt) 2011-04-18 2020-12-01 University Of Georgia Research Foundation, Inc. composição de vacina, usos da mesma e método para produzir a referida composição
US9289477B2 (en) 2011-04-29 2016-03-22 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce cytotoxic T lymphocyte responses
WO2013019658A2 (en) * 2011-07-29 2013-02-07 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers comprising polymers comprising multiple immunomodulatory agents
MX2014007233A (es) 2011-12-16 2015-02-04 Moderna Therapeutics Inc Composiciones de nucleosidos, nucleotidos y acidos nucleicos modificados.
EP2834259A4 (en) 2012-04-02 2016-08-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES
CA2868391A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Stephane Bancel Polynucleotides comprising n1-methyl-pseudouridine and methods for preparing the same
CA2876495C (en) 2012-06-21 2023-10-17 Northwestern University Peptide conjugated particles
CA2892529C (en) 2012-11-26 2023-04-25 Moderna Therapeutics, Inc. Terminally modified rna
US9468681B2 (en) 2013-03-01 2016-10-18 California Institute Of Technology Targeted nanoparticles
EP2968584A1 (en) * 2013-03-11 2016-01-20 Cristal Delivery B.V. Vaccination composition
KR20210057832A (ko) 2013-03-13 2021-05-21 코어 파마슈티칼스 디벨롭먼트 컴퍼니 인크. 염증 치료용 면역-변형된 입자
US10258698B2 (en) 2013-03-14 2019-04-16 Modernatx, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2014179771A1 (en) * 2013-05-03 2014-11-06 Selecta Biosciences, Inc. Dosing combinations for reducing undesired humoral immune responses
EA201592106A3 (ru) 2013-05-03 2016-08-31 Селекта Байосайенсиз, Инк. Локальное сопутствующее введение толерогенных синтетических наноносителей для снижения гиперчувствительности типа i и гиперчувствительности типа iv
EA201592273A1 (ru) * 2013-06-04 2016-09-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Повторное введение неиммуносупрессивных антигенспецифических иммунотерапевтических средств
JP7019233B2 (ja) 2013-07-11 2022-02-15 モデルナティエックス インコーポレイテッド ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質をコードする合成ポリヌクレオチドおよび合成ｓｇＲＮＡを含む組成物ならびに使用方法
FI3033102T4 (fi) 2013-08-13 2024-03-01 Univ Northwestern Peptidikonjugoituja hiukkasia
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
EP3041934A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
DE102013015112B4 (de) 2013-09-13 2016-07-14 Holger Frey Spaltbare Polyethylenglykol-(PEG)-Makromoleküle zum Einschluss von (Glyko-) Proteinen/Antigenen/Allergenen in abbaubaren Polyethylenglykol-(PEG)-Nanopartikeln sowie Verfahren zu ihrer Herstellung
ES2904276T3 (es) 2013-09-27 2022-04-04 Massachusetts Inst Technology Nanoestructuras de proteínas biológicamente activas sin vehículo
CA2930973A1 (en) 2013-11-22 2015-05-28 Pal SAERTROM C/ebp alpha short activating rna compositions and methods of use
US10428331B2 (en) 2014-01-16 2019-10-01 Musc Foundation For Research Development Targeted nanocarriers for the administration of immunosuppressive agents
US9919058B2 (en) 2014-07-15 2018-03-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Polyketal particles including a CpG oligodeoxynucleotide for the treatment of lung cancer
WO2016014846A1 (en) 2014-07-23 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
WO2016019126A1 (en) * 2014-07-30 2016-02-04 The Research Foundation For The State University Of New York System and method for delivering genetic material or protein to cells
WO2016037163A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene therapy anti-viral transfer vector immune responses
EP3317323B1 (en) 2015-07-01 2021-05-26 California Institute of Technology Cationic mucic acid polymer-based delivery systems
EP3334417A4 (en) 2015-08-12 2019-07-17 Massachusetts Institute of Technology CELL SURFACE COUPLING OF NANOPARTICLES
MX2018002728A (es) 2015-09-03 2018-09-05 Novavax Inc Composiciones de vacuna que tienen estabilidad e inmunogenicidad mejoradas.
EP3347047A1 (en) * 2015-09-09 2018-07-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Expression vector delivery system and use thereof for inducing an immune response
HRP20220872T1 (hr) 2015-10-22 2022-12-23 Modernatx, Inc. Cjepiva protiv respiratornih virusa
CN108463217A (zh) 2015-11-20 2018-08-28 克里斯特递送有限公司 具有主动靶向的纳米颗粒
EP3394093B1 (en) 2015-12-23 2022-01-26 Modernatx, Inc. Methods of using ox40 ligand encoding polynucleotides
MA43587A (fr) 2016-01-10 2018-11-14 Modernatx Inc Arnm thérapeutiques codant pour des anticorps anti-ctla-4
KR20180114946A (ko) * 2016-03-02 2018-10-19 더 보드 오브 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 면역요법을 위한 sting 활성화 나노백신
AU2017283480A1 (en) 2016-06-13 2019-01-24 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
WO2018017985A1 (en) * 2016-07-21 2018-01-25 Case Western Reserve University Plant virus or virus-like particle constructs
EP3568162A1 (en) * 2017-01-10 2019-11-20 Nektar Therapeutics Multi-arm polymer conjugates of tlr agonist compounds and related immunotherapeutic treatment methods
BR112019018748A2 (pt) 2017-03-11 2020-04-07 Selecta Biosciences Inc métodos e composições relacionados ao tratamento combinado com anti-inflamatórios e nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor
EP3678701A4 (en) 2017-09-05 2021-12-01 Torque Therapeutics, Inc. THERAPEUTIC PROTEIN COMPOSITIONS AND METHOD FOR MANUFACTURING AND USING THEREOF
US20200208152A1 (en) 2017-09-08 2020-07-02 Mina Therapeutics Limited Stabilized sarna compositions and methods of use
EP4183882A1 (en) 2017-09-08 2023-05-24 MiNA Therapeutics Limited Stabilized hnf4a sarna compositions and methods of use
CA3092984A1 (en) 2018-03-19 2019-09-26 Novavax, Inc. Multivalent influenza nanoparticle vaccines
US11566246B2 (en) 2018-04-12 2023-01-31 Mina Therapeutics Limited SIRT1-saRNA compositions and methods of use
GB2589246A (en) 2018-05-16 2021-05-26 Synthego Corp Methods and systems for guide RNA design and use
CN111971296A (zh) * 2018-05-30 2020-11-20 韩国亿诺生物有限公司 包含cd300e抑制剂作为活性成分的用于预防或治疗癌症的药物组合物
EP3833762A4 (en) 2018-08-09 2022-09-28 Verseau Therapeutics, Inc. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS FOR TARGETING CCR2 AND CSF1R AND THEIR USES
WO2020141225A1 (en) * 2019-01-04 2020-07-09 Ascendis Pharma A/S Minimization of systemic inflammation
CA3125533A1 (en) * 2019-01-04 2020-07-09 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Conjugates of pattern recognition receptor agonists
EP3914714A4 (en) 2019-01-25 2024-04-10 Synthego Corp SYSTEMS AND METHODS FOR MODULATING CRISPR ACTIVITY
EP3953473A1 (en) 2019-04-12 2022-02-16 MiNA Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
CN111249453B (zh) * 2020-02-26 2021-11-19 浙江大学 一种纳米疫苗及其制备方法
US20230181760A1 (en) * 2020-05-15 2023-06-15 Rutgers, The State University Of New Jersey Compositions and methods for treating wounds
WO2022006011A1 (en) * 2020-07-01 2022-01-06 Cello Therapeutics, Inc. Platelet membrane coated nanoparticles and uses thereof
WO2022044025A1 (en) * 2020-08-31 2022-03-03 Rav Bariach (08) Industries Ltd. Mechanical muti-point lock with an electro-mechanical unit for remote operation
US11952492B2 (en) * 2020-11-20 2024-04-09 Encapsys, Llc Biodegradable, controlled release microcapsules
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
CN112494460B (zh) * 2020-12-10 2022-03-11 浙江大飞龙动物保健品股份有限公司 替米考星粉剂及其制备方法
WO2022152939A1 (en) 2021-01-18 2022-07-21 Conserv Bioscience Limited Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof
EP4314292A1 (en) 2021-03-26 2024-02-07 MiNA Therapeutics Limited Tmem173 sarna compositions and methods of use
JP2024515626A (ja) 2021-04-16 2024-04-10 アスクレピオス バイオファーマシューティカル， インコーポレイテッド 血液脳関門を横断し低減された液性応答を惹起する合理的ポリプロイドａａｖビリオン
CN117813398A (zh) * 2021-09-17 2024-04-02 因美纳有限公司 试剂组合物、方法、料筒和系统
WO2023099884A1 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Mina Therapeutics Limited Pax6 sarna compositions and methods of use
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
WO2023161350A1 (en) 2022-02-24 2023-08-31 Io Biotech Aps Nucleotide delivery of cancer therapy
WO2023170435A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Mina Therapeutics Limited Il10 sarna compositions and methods of use
CN117224699B (zh) * 2023-09-05 2024-03-19 贵州大学 一种纳米复合物及其制备方法和用途

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1035123A1 (en) * 1997-11-28 2000-09-13 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Novel heterocyclic compounds
WO2005110013A2 (en) * 2004-04-09 2005-11-24 3M Innovative Properties Company Methods, compositions, and preparations for delivery of immune response modifiers
US20080160089A1 (en) * 2003-10-14 2008-07-03 Medivas, Llc Vaccine delivery compositions and methods of use
WO2008079924A1 (en) * 2006-12-22 2008-07-03 3M Innovative Properties Company Immune response modifier compositions and methods
WO2009051837A2 (en) * 2007-10-12 2009-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Vaccine nanotechnology
WO2010042870A1 (en) * 2008-10-12 2010-04-15 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
WO2010138192A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Selecta Biosciences, Inc. Nanocarriers possessing components with different rates of release

Family Cites Families (253)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR7461M (ru) 1968-06-19 1970-01-05
GB1355961A (en) 1970-02-27 1974-06-12 Wellcome Found Preparation of immunosuppressive antilymphocytic serum
CH594444A5 (ru) * 1972-12-04 1978-01-13 Gerd Birrenbach
DK143689C (da) 1975-03-20 1982-03-15 J Kreuter Fremgangsmaade til fremstilling af en adsorberet vaccine
US4756907A (en) 1978-10-17 1988-07-12 Stolle Research & Development Corp. Active/passive immunization of the internal female reproductive organs
US4946929A (en) 1983-03-22 1990-08-07 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible articles useful as implants and prostheses having predictable degradation rates
US6309669B1 (en) 1984-03-16 2001-10-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Therapeutic treatment and prevention of infections with a bioactive materials encapsulated within a biodegradable-biocompatible polymeric matrix
US4638045A (en) 1985-02-19 1987-01-20 Massachusetts Institute Of Technology Non-peptide polyamino acid bioerodible polymers
US4631211A (en) 1985-03-25 1986-12-23 Scripps Clinic & Research Foundation Means for sequential solid phase organic synthesis and methods using the same
US4806621A (en) 1986-01-21 1989-02-21 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible, bioerodible, hydrophobic, implantable polyimino carbonate article
JPS63122620A (ja) * 1986-11-12 1988-05-26 Sanraku Inc ポリ乳酸マイクロスフエア及びその製造方法
CA1340581C (en) 1986-11-20 1999-06-08 Joseph P. Vacanti Chimeric neomorphogenesis of organs by controlled cellular implantation using artificial matrices
US5736372A (en) 1986-11-20 1998-04-07 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable synthetic polymeric fibrous matrix containing chondrocyte for in vivo production of a cartilaginous structure
US5759830A (en) 1986-11-20 1998-06-02 Massachusetts Institute Of Technology Three-dimensional fibrous scaffold containing attached cells for producing vascularized tissue in vivo
FR2608988B1 (fr) 1986-12-31 1991-01-11 Centre Nat Rech Scient Procede de preparation de systemes colloidaux dispersibles d'une substance, sous forme de nanoparticules
US5912017A (en) 1987-05-01 1999-06-15 Massachusetts Institute Of Technology Multiwall polymeric microspheres
US5229490A (en) 1987-05-06 1993-07-20 The Rockefeller University Multiple antigen peptide system
US5019379A (en) 1987-07-31 1991-05-28 Massachusetts Institute Of Technology Unsaturated polyanhydrides
US6130082A (en) 1988-05-05 2000-10-10 American Cyanamid Company Recombinant flagellin vaccines
US4929624A (en) * 1989-03-23 1990-05-29 Minnesota Mining And Manufacturing Company Olefinic 1H-imidazo(4,5-c)quinolin-4-amines
US5010167A (en) 1989-03-31 1991-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Poly(amide-and imide-co-anhydride) for biological application
US5114703A (en) * 1989-05-30 1992-05-19 Alliance Pharmaceutical Corp. Percutaneous lymphography using particulate fluorocarbon emulsions
US5733572A (en) 1989-12-22 1998-03-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas and gaseous precursor filled microspheres as topical and subcutaneous delivery vehicles
GB9016885D0 (en) * 1990-08-01 1990-09-12 Scras Sustained release pharmaceutical compositions
US5389640A (en) 1991-03-01 1995-02-14 Minnesota Mining And Manufacturing Company 1-substituted, 2-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
NZ242220A (en) 1991-04-02 1994-04-27 Biotech Australia Pty Ltd Complex for oral delivery of a substance to the circulatory or lymphatic drainage system comprising microparticle coupled to at least one carrier, the substance being encapsulated by the microparticle
US5811447A (en) * 1993-01-28 1998-09-22 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US6235313B1 (en) * 1992-04-24 2001-05-22 Brown University Research Foundation Bioadhesive microspheres and their use as drug delivery and imaging systems
JPH07509467A (ja) 1992-07-21 1995-10-19 ザ　ゼネラル　ホスピタル　コーポレーション リンパ組織への薬物輸送システム
GB9216082D0 (en) 1992-07-28 1992-09-09 Univ Nottingham Lymphatic delivery composition
US6608201B2 (en) 1992-08-28 2003-08-19 3M Innovative Properties Company Process for preparing 1-substituted, 2-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
FR2695563B1 (fr) 1992-09-11 1994-12-02 Pasteur Institut Microparticules portant des antigènes et leur utilisation pour l'induction de réponses humorales ou cellulaires.
AU4932493A (en) 1992-09-25 1994-04-26 Dynagen, Inc. An immunobooster for delayed release of immunogen
US5399665A (en) 1992-11-05 1995-03-21 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymers for cell transplantation
US5928647A (en) 1993-01-11 1999-07-27 Dana-Farber Cancer Institute Inducing cytotoxic T lymphocyte responses
US5512600A (en) 1993-01-15 1996-04-30 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of bonded fiber structures for cell implantation
US5514378A (en) 1993-02-01 1996-05-07 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible polymer membranes and methods of preparation of three dimensional membrane structures
ATE167396T1 (de) 1993-02-22 1998-07-15 Alza Corp Mittel zur oralen gabe von wirkstoffen
WO1994021240A2 (de) 1993-03-17 1994-09-29 Silica Gel Ges.M.B.H Superparamagnetische teilchen, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung derselben
US5543158A (en) 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
WO1995003035A1 (en) 1993-07-23 1995-02-02 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes with enhanced stability for oral delivery
US5565215A (en) 1993-07-23 1996-10-15 Massachusettes Institute Of Technology Biodegradable injectable particles for imaging
US5798340A (en) 1993-09-17 1998-08-25 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
US5500161A (en) 1993-09-21 1996-03-19 Massachusetts Institute Of Technology And Virus Research Institute Method for making hydrophobic polymeric microparticles
JP2930421B2 (ja) 1994-02-28 1999-08-03 メディノヴァ メディカル コンサルティング ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 薬剤組成物、その製造方法及びその使用方法
GB9412273D0 (en) 1994-06-18 1994-08-10 Univ Nottingham Administration means
AU713040B2 (en) 1994-07-15 1999-11-18 University Of Iowa Research Foundation, The Immunomodulatory oligonucleotides
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6007845A (en) 1994-07-22 1999-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Nanoparticles and microparticles of non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymers
US5716404A (en) 1994-12-16 1998-02-10 Massachusetts Institute Of Technology Breast tissue engineering
DE69630514D1 (de) 1995-01-05 2003-12-04 Univ Michigan Oberflächen-modifizierte nanopartikel und verfahren für ihre herstellung und verwendung
US6123727A (en) 1995-05-01 2000-09-26 Massachusetts Institute Of Technology Tissue engineered tendons and ligaments
WO1997004747A1 (en) 1995-07-27 1997-02-13 Dunn James M Drug delivery systems for macromolecular drugs
EP0850051A2 (en) 1995-08-31 1998-07-01 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US6095148A (en) 1995-11-03 2000-08-01 Children's Medical Center Corporation Neuronal stimulation using electrically conducting polymers
US5902599A (en) 1996-02-20 1999-05-11 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymer networks for use in orthopedic and dental applications
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5922695A (en) 1996-07-26 1999-07-13 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonomethyoxy nucleotide analogs having increased oral bioavarilability
US6368598B1 (en) 1996-09-16 2002-04-09 Jcrt Radiation Oncology Support Services, Inc. Drug complex for treatment of metastatic prostate cancer
IL129319A0 (en) 1996-10-25 2000-02-17 Minnesota Mining & Mfg Immune response modifier compounds for treatment of TH2 mediated and related diseases
US6042820A (en) 1996-12-20 2000-03-28 Connaught Laboratories Limited Biodegradable copolymer containing α-hydroxy acid and α-amino acid units
WO1998037919A1 (en) 1997-02-28 1998-09-03 University Of Iowa Research Foundation USE OF NUCLEIC ACIDS CONTAINING UNMETHYLATED CpG DINUCLEOTIDE IN THE TREATMENT OF LPS-ASSOCIATED DISORDERS
DK1005368T3 (da) 1997-03-10 2010-01-04 Ottawa Hospital Res Inst Anvendelse af nukleinsyrer, der indeholder ikke-metyleret CpG dinukleotid i kombination med alun som hjælpestoffer
US6211159B1 (en) 1997-04-11 2001-04-03 University Of Toronto Flagellin gene, FlaC of campylobacter
US6060082A (en) * 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
DE69838294T2 (de) 1997-05-20 2009-08-13 Ottawa Health Research Institute, Ottawa Verfahren zur Herstellung von Nukleinsäurekonstrukten
US5837752A (en) 1997-07-17 1998-11-17 Massachusetts Institute Of Technology Semi-interpenetrating polymer networks
US6989435B2 (en) * 1997-09-11 2006-01-24 Cambridge University Technical Services Ltd. Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response
DE19745950A1 (de) 1997-10-17 1999-04-22 Dds Drug Delivery Service Ges Arzneistoffträgerpartikel für die gewebespezifische Arzneistoffapplikation
US6197229B1 (en) * 1997-12-12 2001-03-06 Massachusetts Institute Of Technology Method for high supercoiled DNA content microspheres
US6254890B1 (en) 1997-12-12 2001-07-03 Massachusetts Institute Of Technology Sub-100nm biodegradable polymer spheres capable of transporting and releasing nucleic acids
FR2775435B1 (fr) * 1998-02-27 2000-05-26 Bioalliance Pharma Nanoparticules comprenant au moins un polymere et au moins un compose apte a complexer un ou plusieurs principes actifs
US6232287B1 (en) * 1998-03-13 2001-05-15 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
US6506577B1 (en) 1998-03-19 2003-01-14 The Regents Of The University Of California Synthesis and crosslinking of catechol containing copolypeptides
US6632922B1 (en) 1998-03-19 2003-10-14 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
US6686446B2 (en) 1998-03-19 2004-02-03 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
ES2284247T3 (es) 1998-04-03 2007-11-01 University Of Iowa Research Foundation Metodos y productos para estimular el sistema inmunitario usando oligonucleotidos y citoquinas inmunoterapeuticos.
EP1077708A1 (en) 1998-05-06 2001-02-28 University Of Iowa Research Foundation Methods for the prevention and treatment of parasitic infections and related diseases using cpg oligonucleotides
DE19827164A1 (de) * 1998-06-18 1999-12-23 Merck Patent Gmbh Katalytisch Titan(IV)-oxid vermittelte geminale symmetrische Dialkylierung von Carbonsäureamiden
US6242589B1 (en) 1998-07-14 2001-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Phosphorothioate oligonucleotides having modified internucleoside linkages
ES2260923T3 (es) 1998-07-29 2006-11-01 Chiron Corporation Micorparticulas con superficies adsorbentes, procedimientos de fabricacion y uso de las mismas.
DE19839214C1 (de) * 1998-08-28 2000-05-25 Aventis Res & Tech Gmbh & Co Verfahren zur Herstellung von sphärischen Mikropartikeln mit glatter Oberfläche, die ganz oder teilweise aus mindestens einem wasserunlöslichen linearen Polysaccharid bestehen, sowie mit diesem Verfahren erhältliche Mikropartikel und deren Verwendung
US6306640B1 (en) 1998-10-05 2001-10-23 Genzyme Corporation Melanoma antigenic peptides
KR20070051953A (ko) 1998-11-02 2007-05-18 엘란 코포레이션, 피엘씨 다입자 변형 방출 조성물
US7521068B2 (en) 1998-11-12 2009-04-21 Elan Pharma International Ltd. Dry powder aerosols of nanoparticulate drugs
US7238711B1 (en) 1999-03-17 2007-07-03 Cambridge University Technical Services Ltd. Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response
US6444192B1 (en) 1999-02-05 2002-09-03 The Regents Of The University Of California Diagnostic imaging of lymph structures
US7390780B2 (en) 1999-04-23 2008-06-24 Alza Corporation Gene delivery mediated by liposome-DNA complex with cleavable peg surface modification
US7238368B2 (en) 1999-04-23 2007-07-03 Alza Corporation Releasable linkage and compositions containing same
EP1880736A1 (en) 1999-04-23 2008-01-23 Alza Corporation Releasable linkage and composition containing same
US6800296B1 (en) 1999-05-19 2004-10-05 Massachusetts Institute Of Technology Modification of surfaces using biological recognition events
US6815170B1 (en) 1999-06-30 2004-11-09 John Wayne Cancer Institute Methods for lymph node identification
EP1202671A4 (en) 1999-08-13 2004-11-10 Point Biomedical Corp MICROPARTICLES USEFUL AS ULTRASONIC CONTRAST AGENTS FOR THE LYMPHATIC SYSTEM
CA2391534A1 (en) 1999-11-15 2001-05-25 Drug Innovation & Design, Inc. Selective cellular targeting: multifunctional delivery vehicles
EP1294930B1 (en) 2000-01-13 2011-03-30 Nanosphere, Inc. Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor
US20050032733A1 (en) * 2001-05-18 2005-02-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA)
US8202979B2 (en) 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US20050020525A1 (en) * 2002-02-20 2005-01-27 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
CN1406140A (zh) 2000-02-28 2003-03-26 吉倪塞思公司 纳米胶囊包封系统与方法
US20030129251A1 (en) 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US7129222B2 (en) 2000-03-10 2006-10-31 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US7192725B2 (en) 2000-05-19 2007-03-20 University Of Toronto Flagellin gene, flaC of Campylobacter
AU2001297913A1 (en) 2000-10-13 2002-12-23 Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. Polyvalent nanoparticles
GB0025414D0 (en) 2000-10-16 2000-11-29 Consejo Superior Investigacion Nanoparticles
EP1355965B1 (en) 2000-10-19 2012-09-19 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Method of synthesizing block copolymers for multifunctional self-assembled systems
US7592008B2 (en) 2000-11-20 2009-09-22 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois, A Body Corporate And Politic Of The State Of Illinois Membrane scaffold proteins
US7097837B2 (en) 2001-02-19 2006-08-29 Pharmexa A/S Synthetic vaccine agents
US20030175950A1 (en) 2001-05-29 2003-09-18 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of HIV gene expression using short interfering RNA
EP2545937A1 (en) 2001-06-05 2013-01-16 The Regents Of The University Of Michigan Nanoemulsion vaccines
AU2002354644C1 (en) 2001-07-10 2009-04-30 Corixa Corporation Compositions and methods for delivery of proteins and adjuvants encapsulated in microspheres
AU2002326561B2 (en) 2001-08-07 2008-04-03 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions, formulations, and methods for use thereof
US6818732B2 (en) 2001-08-30 2004-11-16 The Regents Of The University Of California Transition metal initiators for controlled poly (beta-peptide) synthesis from beta-lactam monomers
US8088388B2 (en) 2002-02-14 2012-01-03 United Biomedical, Inc. Stabilized synthetic immunogen delivery system
CA2476626A1 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Chiron Corporation Microparticles with adsorbed polypeptide-containing molecules
US20030232013A1 (en) 2002-02-22 2003-12-18 Gary Sieckman Therapeutic and diagnostic targeting of cancers cells with tumor homing peptides
US7635463B2 (en) * 2002-02-27 2009-12-22 Pharmain Corporation Compositions for delivery of therapeutics and other materials
AU2003230806B2 (en) 2002-04-04 2009-05-07 Zoetis Belgium S.A. Immunostimulatory G,U-containing oligoribonucleotides
US20040038303A1 (en) 2002-04-08 2004-02-26 Unger Gretchen M. Biologic modulations with nanoparticles
US7285289B2 (en) 2002-04-12 2007-10-23 Nagy Jon O Nanoparticle vaccines
US20080233181A1 (en) 2002-04-12 2008-09-25 Nagy Jon O Nanoparticle adjuvants for sub-unit vaccines
WO2003089906A2 (en) 2002-04-22 2003-10-30 University Of Florida Functionalized nanoparticles and methods of use
ATE469135T1 (de) * 2002-05-30 2010-06-15 Scripps Research Inst Kupferkatalysierte ligierung von aziden und acetylenen
WO2003105780A2 (en) * 2002-06-18 2003-12-24 Epigenesis Pharmaceuticals, Inc. A dry powder oligonucleotide formulation, preparation and its uses
US20040142887A1 (en) 2002-07-10 2004-07-22 Chengji Cui Antigen-polymer compositions
BR0312297A (pt) 2002-07-18 2005-04-12 Cytos Biotechnology Ag Conjugados veìculos de hapteno e seu uso
US7488792B2 (en) 2002-08-28 2009-02-10 Burnham Institute For Medical Research Collagen-binding molecules that selectively home to tumor vasculature and methods of using same
WO2004053056A2 (en) 2002-09-24 2004-06-24 University Of Kentucky Research Foundation Nanoparticle-based vaccine delivery system containing adjuvant
US7008411B1 (en) 2002-09-30 2006-03-07 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method and apparatus for treating vulnerable plaque
NO20024755D0 (no) 2002-10-03 2002-10-03 Amersham Health As Metode
SE0203687D0 (sv) * 2002-12-13 2002-12-13 Ian Harwigsson Med Adagit Fa Pharmaceutical Porous Particles
US20040156846A1 (en) 2003-02-06 2004-08-12 Triton Biosystems, Inc. Therapy via targeted delivery of nanoscale particles using L6 antibodies
WO2004071493A1 (en) 2003-02-17 2004-08-26 Peter Burkhard Peptidic nanoparticles as drug delivery and antigen display systems
US20040191215A1 (en) 2003-03-25 2004-09-30 Michael Froix Compositions for induction of a therapeutic response
AU2004224762B2 (en) * 2003-03-26 2009-12-24 Kuros Us Llc Packaging of immunostimulatory oligonucleotides into virus-like particles: method of preparation and use
CA2518223A1 (en) 2003-03-26 2004-10-07 Ltt Bio-Pharma Co., Ltd. Intravenous nanoparticles for targeting drug delivery and sustained drug release
US7731967B2 (en) * 2003-04-30 2010-06-08 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Compositions for inducing immune responses
US7727969B2 (en) 2003-06-06 2010-06-01 Massachusetts Institute Of Technology Controlled release nanoparticle having bound oligonucleotide for targeted delivery
CA2544240A1 (en) 2003-07-22 2005-02-17 Cytos Biotechnology Ag Cpg-packaged liposomes
US20050042298A1 (en) * 2003-08-20 2005-02-24 Pardridge William M. Immunonanoparticles
WO2005037190A2 (en) * 2003-09-03 2005-04-28 Dendritherapeutics, Inc. Multiplex vaccines
US7943179B2 (en) 2003-09-23 2011-05-17 Massachusetts Institute Of Technology pH triggerable polymeric particles
CA2558916C (en) 2003-10-20 2009-09-22 William Marsh Rice University Method to fabricate microcapsules from polymers and charged nanoparticles
WO2005055949A2 (en) 2003-12-09 2005-06-23 The Children's Hospital Of Philadelphia Sustained release preparations composed of biocompatible complex microparticles
MXPA06006738A (es) * 2003-12-19 2006-08-31 Univ North Carolina Metodos para fabricar micro- y nano-estructuras aisladas utilizando litografia suave o de impresion.
WO2005065418A2 (en) 2003-12-31 2005-07-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods of use of targeting peptides for diagnosis and therapy
US20070087986A1 (en) * 2004-01-26 2007-04-19 Brett Premack Compositions and methods for enhancing immunity by chemoattractant adjuvants
JP2007526253A (ja) 2004-02-19 2007-09-13 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド 免疫刺激性ウイルスｒｎａオリゴヌクレオチド
ES2246695B1 (es) 2004-04-29 2007-05-01 Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A. Composicion estimuladora de la respuesta inmunitaria que comprende nanoparticulas a base de un copolimero de metil vinil eter y anhidrido maleico.
US20060017339A1 (en) * 2004-06-03 2006-01-26 Lalit Chordia Brushless canned motor
WO2005120574A1 (ja) 2004-06-11 2005-12-22 Riken 調節性細胞リガンドをリポソームに含有させてなる医薬
US7713550B2 (en) 2004-06-15 2010-05-11 Andrx Corporation Controlled release sodium valproate formulation
US7534448B2 (en) 2004-07-01 2009-05-19 Yale University Methods of treatment with drug loaded polymeric materials
WO2006014579A2 (en) 2004-07-08 2006-02-09 The Regents Of California Enhancing class i antigen presentation with synthetic sequences
US8017151B2 (en) 2004-09-07 2011-09-13 Board Of Regents Of The University Of Nebraska By And Behalf Of The University Of Nebraska Medical Center Amphiphilic polymer-protein conjugates and methods of use thereof
CN1692943A (zh) 2004-09-17 2005-11-09 四川大学 CpG DNA分子抗感染免疫制剂的制备和应用
GB0421296D0 (en) 2004-09-24 2004-10-27 Angiogene Pharm Ltd Bioreductively-activated prodrugs
JP5117191B2 (ja) * 2004-10-01 2013-01-09 ミダテック リミテッド 抗原及びアジュバントを含むナノ粒子、並びに免疫原性構造
AU2005294214A1 (en) * 2004-10-07 2006-04-20 Emory University Multifunctional nanoparticles conjugates and their use
WO2007001448A2 (en) 2004-11-04 2007-01-04 Massachusetts Institute Of Technology Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals
WO2006137934A2 (en) 2004-11-05 2006-12-28 The General Hospital Corporation Purposeful movement of human migratory cells away from an agent source
CA2588089C (en) 2004-11-15 2015-06-23 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Immunogenic compositions containing anthrax antigen, biodegradable polymer microparticles, and polynucleotide-containing immunological adjuvant
US20060111271A1 (en) 2004-11-24 2006-05-25 Cerny Erich H Active and passive immunization against pharmacologically active hapten molecules using a synthetic carrier compound composed of similar elements
AU2005316384B2 (en) 2004-12-14 2012-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi modulation of MLL-AF4 and uses thereof
US20060257359A1 (en) 2005-02-28 2006-11-16 Cedric Francois Modifying macrophage phenotype for treatment of disease
WO2006102395A2 (en) 2005-03-22 2006-09-28 Medstar Health Inc Delivery systems and methods for diagnosing and treating cardiovascular diseases
US20080305161A1 (en) 2005-04-13 2008-12-11 Pfizer Inc Injectable depot formulations and methods for providing sustained release of nanoparticle compositions
EP1899467A2 (en) 2005-04-26 2008-03-19 Coley Pharmaceutical GmbH Modified oligoribonucleotide analogs with enhances immunostimulatory activity
US8497250B2 (en) 2005-05-04 2013-07-30 Noxxon Pharma Ag Use of spiegelmers to inhibit an intracellular target molecule
CN101189020A (zh) * 2005-05-10 2008-05-28 N·巴拉班 用于给予rnaⅲ-抑制肽的组合物
WO2006122223A2 (en) 2005-05-10 2006-11-16 Emory University Strategies for delivery of active agents using micelles and particles
WO2007003054A1 (en) 2005-07-06 2007-01-11 Shoichet Molly S Method of biomolecule immobilization on polymers using click-type chemistry
CN101287507B (zh) 2005-08-12 2012-12-05 刘江 用于淋巴靶向的方法和装置
WO2007028341A1 (fr) * 2005-09-09 2007-03-15 Beijing Diacrid Medical Technology Co., Ltd. Nanomicelles servant de medicaments anticancereux a polyethylene phospholipides glycolyles contenant des vinca alcaloides
SI1957647T1 (sl) 2005-11-25 2015-04-30 Zoetis Belgium S.A. Imunostimulatorni oligoribonukleotidi
US9393215B2 (en) 2005-12-02 2016-07-19 Novartis Ag Nanoparticles for use in immunogenic compositions
AU2006325225B2 (en) 2005-12-14 2013-07-04 Cytos Biotechnology Ag Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity
US9267937B2 (en) 2005-12-15 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology System for screening particles
US7842312B2 (en) 2005-12-29 2010-11-30 Cordis Corporation Polymeric compositions comprising therapeutic agents in crystalline phases, and methods of forming the same
WO2007089870A2 (en) * 2006-01-31 2007-08-09 Medivas, Llc Vaccine delivery compositions and methods of use
US8021689B2 (en) 2006-02-21 2011-09-20 Ecole Polytechnique Federale de Lausanne (“EPFL”) Nanoparticles for immunotherapy
AU2007221154A1 (en) 2006-02-24 2007-09-07 Novartis Ag Microparticles containing biodegradable polymer and cationic polysaccharide for use in immunogenic compositions
CA2648099C (en) 2006-03-31 2012-05-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc System for targeted delivery of therapeutic agents
WO2007118653A2 (de) 2006-04-11 2007-10-25 Koko Kosmetikvertrieb Gmbh & Co. Kg Nanopartikel, enthaltend nicotin und/oder cotinin, dispersionen und die verwendung derselben
CN101573141B (zh) 2006-05-15 2016-05-04 麻省理工学院 用于功能性颗粒的聚合物
WO2007137117A2 (en) 2006-05-17 2007-11-29 Massachusetts Institute Of Technology Aptamer-directed drug delivery
MX2008015529A (es) 2006-06-12 2009-01-13 Cytos Biotechnology Ag Procesos para empacar oligonucleotidos en particulas similares a virus de bacteriofagos de arn.
JP2010502766A (ja) * 2006-06-16 2010-01-28 フロリダ アトランティック ユニヴァーシティ アジュバントとしてのキチン微粒子
WO2007150030A2 (en) 2006-06-23 2007-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Microfluidic synthesis of organic nanoparticles
WO2008019142A2 (en) 2006-08-04 2008-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Oligonucleotide systems for targeted intracellular delivery
US20080171059A1 (en) 2006-08-07 2008-07-17 Shanshan Wu Howland Methods and compositions for increased priming of t-cells through cross-presentation of exogenous antigens
CN101500937A (zh) 2006-08-11 2009-08-05 万能药生物有限公司 用于递送活性成分的粒子及其制备方法和组合物
WO2008033432A2 (en) 2006-09-12 2008-03-20 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immune modulation by chemically modified ribonucleosides and oligoribonucleotides
EP3590503A1 (en) 2006-10-12 2020-01-08 The University of Queensland Compositions and methods for modulating immune responses
WO2008147456A2 (en) 2006-11-20 2008-12-04 Massachusetts Institute Of Technology Drug delivery systems using fc fragments
WO2008073856A2 (en) 2006-12-08 2008-06-19 Massachusetts Institute Of Technology Delivery of nanoparticles and/or agents to cells
WO2008071774A1 (en) 2006-12-14 2008-06-19 Cytos Biotechnology Ag Purification process for coat protein of rna bacteriophages
PT2510946E (pt) 2007-02-07 2015-11-23 Univ California Conjugados de agonistas sintéticos de tlr e suas utilizações
WO2008098165A2 (en) 2007-02-09 2008-08-14 Massachusetts Institute Of Technology Oscillating cell culture bioreactor
US8889117B2 (en) 2007-02-15 2014-11-18 Yale University Modular nanoparticles for adaptable vaccines
US20100151031A1 (en) 2007-03-23 2010-06-17 Desimone Joseph M Discrete size and shape specific organic nanoparticles designed to elicit an immune response
US11246831B2 (en) 2007-03-30 2022-02-15 Particle Sciences, Inc. Particle formulations and uses thereof
EP2144600A4 (en) 2007-04-04 2011-03-16 Massachusetts Inst Technology POLY (AMINIC ACID) TARGET MOLECULES
WO2008124634A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Polymer-encapsulated reverse micelles
WO2008124165A2 (en) 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
EP2146747A1 (en) 2007-04-12 2010-01-27 Emory University Novel strategies for delivery of active agents using micelles and particles
US8394914B2 (en) 2007-08-24 2013-03-12 Board Of Trustees Of Michigan State University Functional polyglycolide nanoparticles derived from unimolecular micelles
WO2009038685A1 (en) 2007-09-18 2009-03-26 The Scripps Research Institute Ligands for copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition reactions
EP2217930B1 (en) * 2007-10-24 2013-03-06 Tallinn University Of Technology Maldi ms-based high-throughput screening method for substances inhibiting aggregation of alzheimer's amyloid beta peptides
ES2664753T3 (es) 2007-12-07 2018-04-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Composiciones de inducción de respuestas inmunes
WO2009109428A2 (en) 2008-02-01 2009-09-11 Alpha-O Peptides Ag Self-assembling peptide nanoparticles useful as vaccines
WO2009106999A2 (en) 2008-02-28 2009-09-03 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung Des Öffentlichen Rechts Hollow nanoparticles and uses thereof
EP2262480B1 (en) 2008-03-04 2018-02-14 Liquidia Technologies, Inc. Immunomodulator particles
US20090297621A1 (en) 2008-06-03 2009-12-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Microparticles For The Treatment Of Disease
US8613951B2 (en) 2008-06-16 2013-12-24 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mTor inhibitors and methods of making and using same
JP2012501965A (ja) 2008-06-16 2012-01-26 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 薬剤を装填したポリマーナノ粒子及びその製造方法と使用方法
EP2303236A4 (en) * 2008-07-01 2012-09-26 Univ Emory SYNERGISTIC INDUCTION OF HUMOR AND CELLULAR IMMUNITY BY COMBINATORY ACTIVATION OF TOLL-LIKE RECEPTORS
JP5667566B2 (ja) 2008-08-06 2015-02-12 ノバルティス アーゲー 免疫原性組成物における使用のための微粒子
JP2011530562A (ja) 2008-08-11 2011-12-22 グラクソスミスクライン エルエルシー アレルギー性、炎症性及び感染性疾患治療用のプリン誘導体
WO2010018130A1 (en) 2008-08-11 2010-02-18 Smithkline Beecham Corporation Purine derivatives for use in the treatment of allergic, inflammatory and infectious diseases
UA103195C2 (ru) 2008-08-11 2013-09-25 Глаксосмитклайн Ллк Производные пурина для применения в лечении аллергий, воспалительных и инфекционных заболеваний
WO2010018132A1 (en) 2008-08-11 2010-02-18 Smithkline Beecham Corporation Compounds
US8323696B2 (en) 2008-08-29 2012-12-04 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Nanoparticles for immunotherapy
US8889635B2 (en) 2008-09-30 2014-11-18 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer conjugates
US8343497B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics
US8591905B2 (en) * 2008-10-12 2013-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nicotine immunonanotherapeutics
US8277812B2 (en) 2008-10-12 2012-10-02 Massachusetts Institute Of Technology Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen
JP5661735B2 (ja) 2009-04-01 2015-01-28 ユニバーシティ オブ マイアミ ワクチン組成物及びその使用方法
KR20120022984A (ko) 2009-04-21 2012-03-12 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. Ｔｈ１ 편향 반응을 제공하는 면역나노치료법
EP2425019B1 (en) 2009-05-01 2014-03-19 QIAGEN Gaithersburg, Inc. A non-target amplification method for detection of rna splice-forms in a sample
EP3058953A1 (en) 2009-07-07 2016-08-24 The Research Foundation Of State University Of New York Lipidic compositions for induction of immune tolerance
CN107617110A (zh) 2009-08-26 2018-01-23 西莱克塔生物科技公司 诱导t细胞辅助的组合物
EA201290499A1 (ru) 2009-12-15 2013-01-30 Байнд Байосайенсиз, Инк. Композиции терапевтических полимерных наночастиц с высокой температурой стеклования и высокомолекулярными сополимерами
US20110171248A1 (en) 2010-01-08 2011-07-14 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic virus-like particles conjugated to human papillomavirus capsid peptides for use as vaccines
US20110229556A1 (en) 2010-03-19 2011-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Lipid-coated polymer particles for immune stimulation
US20110272836A1 (en) 2010-04-12 2011-11-10 Selecta Biosciences, Inc. Eccentric vessels
US20110262491A1 (en) 2010-04-12 2011-10-27 Selecta Biosciences, Inc. Emulsions and methods of making nanocarriers
AU2011258156B2 (en) * 2010-05-26 2016-11-24 Selecta Biosciences, Inc. Multivalent synthetic nanocarrier vaccines
AU2011291522A1 (en) * 2010-08-20 2013-01-24 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarrier vaccines comprising peptides obtained or derived from human influenza A virus M2E
KR20130098308A (ko) 2010-08-23 2013-09-04 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 항원에 대한 면역 반응을 유도하기 위한 표적화 다중 에피토프 투여형
EP2640190A4 (en) 2010-11-05 2016-05-11 Selecta Biosciences Inc MODIFIED NICOTINIC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS
WO2012092552A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers with reactive groups that release biologically active agents
AU2012236937B2 (en) 2011-03-25 2017-06-08 Selecta Biosciences, Inc. Osmotic mediated release synthetic nanocarriers
US9289477B2 (en) 2011-04-29 2016-03-22 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce cytotoxic T lymphocyte responses
WO2013019658A2 (en) * 2011-07-29 2013-02-07 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers comprising polymers comprising multiple immunomodulatory agents
WO2013036293A1 (en) * 2011-09-06 2013-03-14 Selecta Biosciences, Inc. Dendritic cell subsets for generating induced tolerogenic dendritic cells and related compositions and methods
EA201592106A3 (ru) 2013-05-03 2016-08-31 Селекта Байосайенсиз, Инк. Локальное сопутствующее введение толерогенных синтетических наноносителей для снижения гиперчувствительности типа i и гиперчувствительности типа iv
EA201592273A1 (ru) 2013-06-04 2016-09-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Повторное введение неиммуносупрессивных антигенспецифических иммунотерапевтических средств
US20160220501A1 (en) 2015-02-03 2016-08-04 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce immune responses to therapeutic proteins
US20150359865A1 (en) 2014-06-17 2015-12-17 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers for t-cell-mediated autoimmune disease
EP3160453A1 (en) 2014-06-25 2017-05-03 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for treatment with synthetic nanocarriers and immune checkpoint inhibitors
WO2016037163A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene therapy anti-viral transfer vector immune responses
PL3215133T3 (pl) 2014-11-05 2021-06-14 Selecta Biosciences, Inc. Sposoby i kompozycje związane z zastosowaniem związków powierzchniowo czynnych o niskiej hlb do wytwarzania syntetycznych nanonośników zawierających rapalog

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1035123A1 (en) * 1997-11-28 2000-09-13 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Novel heterocyclic compounds
US20080160089A1 (en) * 2003-10-14 2008-07-03 Medivas, Llc Vaccine delivery compositions and methods of use
WO2005110013A2 (en) * 2004-04-09 2005-11-24 3M Innovative Properties Company Methods, compositions, and preparations for delivery of immune response modifiers
WO2008079924A1 (en) * 2006-12-22 2008-07-03 3M Innovative Properties Company Immune response modifier compositions and methods
WO2009051837A2 (en) * 2007-10-12 2009-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Vaccine nanotechnology
WO2010042870A1 (en) * 2008-10-12 2010-04-15 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
WO2010138192A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Selecta Biosciences, Inc. Nanocarriers possessing components with different rates of release
WO2010138193A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Selecta Biosciences, Inc. Targeted synthetic nanocarriers with ph sensitive release of immunomodulatory agents

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HAMMERBECK, D.M. BURLESON, G.R. SCHULLER, C.J. VASILAKOS, J.P. TOMAI, M. EGGING, E. COCHRAN, F.R. WOULFE, S. MILLE: "Administration of a dual toll-like receptor 7 and toll-like receptor 8 agonist protects against influenza in rats", ANTIVIRAL RESEARCH, ELSEVIER BV, NL, vol. 73, no. 1, 14 January 2007 (2007-01-14), NL, pages 1 - 11, XP022575655, ISSN: 0166-3542, DOI: 10.1016/j.antiviral.2006.07.011 *
TONG RONG , CHENG JIANJUN: "Ring-Opening Polymerization-Mediated Controlled Formulation of Polylactide-Drug Nanoparticles", JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 131, no. 13, 8 April 2009 (2009-04-08), US, pages 4744 - 4754, XP002631550, ISSN: 0002-7863, DOI: 10.1021/JA8084675 *
WALDVOGEL SIEGFRIED R., PFLEIDERER WOLFGANG: "Nucleotides. Part 55. Synthesis and application of a novel linker for solid-phase synthesis of modified oligonucleotides", HELVETICA CHIMICA ACTA, VERLAG HELVETICA CHIMICA ACTA., CH, vol. 81, 1 January 1998 (1998-01-01), CH, pages 46 - 58, XP002631549, ISSN: 0018-019X, DOI: 10.1002/hlca.19980810106 *
ZHANG, Z. ; FENG, S.S.: "Nanoparticles of poly(lactide)/vitamin E TPGS copolymer for cancer chemotherapy: Synthesis, formulation, characterization and in vitro drug release", BIOMATERIALS., ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS BV., BARKING., GB, vol. 27, no. 2, 1 January 2006 (2006-01-01), GB, pages 262 - 270, XP025096972, ISSN: 0142-9612, DOI: 10.1016/j.biomaterials.2005.05.104 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2010254550A1 (en) 2011-12-15
JP6297776B2 (ja) 2018-03-20
JP2017200925A (ja) 2017-11-09
KR20120087807A (ko) 2012-08-07
AU2017200383A1 (en) 2017-02-09
AU2017200388A1 (en) 2017-02-09
MX357630B (es) 2018-07-17
CN102481376A (zh) 2012-05-30
CA2762650A1 (en) 2010-12-02
MX2011012598A (es) 2012-04-19
BRPI1010674A2 (pt) 2016-03-15
CN102481376B (zh) 2016-12-21
US20150328300A1 (en) 2015-11-19
MX350667B (es) 2017-09-12
EP2435092A2 (en) 2012-04-04
AU2010254551B2 (en) 2016-10-20
US20110027217A1 (en) 2011-02-03
JP6236048B2 (ja) 2017-11-22
IL216550A (en) 2016-10-31
MX2011012599A (es) 2012-04-19
IL216548A0 (en) 2012-02-29
KR101916875B1 (ko) 2018-11-08
IL216548B (en) 2018-11-29
CA2762647A1 (en) 2010-12-02
EA201500447A1 (ru) 2017-03-31
AU2016200137A1 (en) 2016-02-04
WO2010138193A3 (en) 2011-06-03
CN107033339A (zh) 2017-08-11
US8629151B2 (en) 2014-01-14
CN102481375B (zh) 2017-06-06
CA2762653A1 (en) 2010-12-02
IL216550A0 (en) 2012-02-29
US20140030344A1 (en) 2014-01-30
WO2010138192A3 (en) 2011-06-03
BRPI1012034A2 (pt) 2016-05-17
CN107096018A (zh) 2017-08-29
WO2010138194A2 (en) 2010-12-02
AU2010254550B2 (en) 2015-10-15
KR20120061040A (ko) 2012-06-12
KR20120023830A (ko) 2012-03-13
JP2016041708A (ja) 2016-03-31
JP6297775B2 (ja) 2018-03-20
EA201171479A1 (ru) 2012-06-29
US20180256709A1 (en) 2018-09-13
AU2010254551A1 (en) 2011-12-15
WO2010138193A2 (en) 2010-12-02
AU2010254549B2 (en) 2016-10-20
AU2016200137B2 (en) 2018-02-08
JP2012528154A (ja) 2012-11-12
JP2016053048A (ja) 2016-04-14
KR20180122487A (ko) 2018-11-12
BRPI1012036A2 (pt) 2017-10-10
US20110020388A1 (en) 2011-01-27
CN107080848A (zh) 2017-08-22
EA201171480A1 (ru) 2012-07-30
JP2012528153A (ja) 2012-11-12
CN102481374A (zh) 2012-05-30
AU2010254549A1 (en) 2011-12-15
JP2016094411A (ja) 2016-05-26
EA201171478A1 (ru) 2012-06-29
MX2011012597A (es) 2012-04-19
CN102481375A (zh) 2012-05-30
US9006254B2 (en) 2015-04-14
EA022699B1 (ru) 2016-02-29
US9884112B2 (en) 2018-02-06
JP6282395B2 (ja) 2018-02-21
US20140193453A1 (en) 2014-07-10
US20100303850A1 (en) 2010-12-02
US20200390881A1 (en) 2020-12-17
CN107252482A (zh) 2017-10-17
WO2010138194A3 (en) 2011-06-30
EA201890311A1 (ru) 2018-10-31
WO2010138192A2 (en) 2010-12-02
EA201791383A1 (ru) 2018-06-29
IL216549A0 (en) 2012-02-29
KR20180026572A (ko) 2018-03-12
EA028288B1 (ru) 2017-10-31
EP2435095A2 (en) 2012-04-04
KR20180026571A (ko) 2018-03-12
EP2435094A2 (en) 2012-04-04
JP2018065808A (ja) 2018-04-26
JP2012528155A (ja) 2012-11-12
US20140242173A1 (en) 2014-08-28
AU2010254551A9 (en) 2016-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA030246B1 (ru) Полимерные соединения-иммуномодулирующие средства
Bershteyn et al. Robust IgG responses to nanograms of antigen using a biomimetic lipid-coated particle vaccine
ES2709391T3 (es) Nanopartículas para inmunoterapia
JP2004521152A (ja) 生分解ポリマーを基にした材料及びその製造方法
BR112012029823A2 (pt) seleção da dose de nanoveículos sintéticos adjuvantados
Ebrahimian et al. Induction of a balanced Th1/Th2 immune responses by co-delivery of PLGA/ovalbumin nanospheres and CpG ODNs/PEI-SWCNT nanoparticles as TLR9 agonist in BALB/c mice
Gupta et al. Tolerogenic Modulation of the Immune Response by Oligoglycerol–and Polyglycerol–Peptide Conjugates
Anish et al. The immunogenic characteristics associated with multivalent display of Vi polysaccharide antigen using biodegradable polymer particles
Ceballos-Alcantarilla et al. Protein-free hapten-carbon nanotube constructs induce the secondary immune response
WO2017216768A1 (en) Dendrimer-derived artificial antigen, methods and uses thereof
Sakhabeev et al. Features of the Humoral Immune Response When Using Protein Immobilized on the Surface of Nano-and Microparticles Based on Poly (Lactic Acid)
US20140242117A1 (en) Vaccine Composition Capable of Inducing Memory Antibody Response from Single Point Immunization
CN117467127A (zh) 具有佐剂作用的高分子衍生物及其制备方法与应用
Lanz Landázuri Modification of microbial polyacids for drug delivery systems

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU