EA028288B1 - Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения - Google Patents

Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения Download PDF

Info

Publication number
EA028288B1
EA028288B1 EA201171478A EA201171478A EA028288B1 EA 028288 B1 EA028288 B1 EA 028288B1 EA 201171478 A EA201171478 A EA 201171478A EA 201171478 A EA201171478 A EA 201171478A EA 028288 B1 EA028288 B1 EA 028288B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antigen
synthetic nanocarriers
solution
synthetic
polymer
Prior art date
Application number
EA201171478A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201171478A1 (ru
Inventor
Грэйсон Б. Липфорд
Чарльз Зепп
Юнь Гао
Марк Дж. Киган
Сэм Болдуин
Фынь-ни Фу
Ллойд Джонстон
Original Assignee
Селекта Байосайенсиз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Селекта Байосайенсиз, Инк. filed Critical Селекта Байосайенсиз, Инк.
Publication of EA201171478A1 publication Critical patent/EA201171478A1/ru
Publication of EA028288B1 publication Critical patent/EA028288B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/91—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G63/912—Polymers modified by chemical after-treatment derived from hydroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/525—Isoalloxazines, e.g. riboflavins, vitamin B2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0013—Therapeutic immunisation against small organic molecules, e.g. cocaine, nicotine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/593—Polyesters, e.g. PLGA or polylactide-co-glycolide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6925—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a microcapsule, nanocapsule, microbubble or nanobubble
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A61K47/6929—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle
    • A61K47/6931—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer
    • A61K47/6935—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol
    • A61K47/6937—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores the form being a nanoparticle, e.g. an immuno-nanoparticle the material constituting the nanoparticle being a polymer the polymer being obtained otherwise than by reactions involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamides or polyglycerol the polymer being PLGA, PLA or polyglycolic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/513—Organic macromolecular compounds; Dendrimers
    • A61K9/5138—Organic macromolecular compounds; Dendrimers obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/34—Tobacco-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/02—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
    • C08G63/06—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds derived from hydroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G63/02—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
    • C08G63/06—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds derived from hydroxycarboxylic acids
    • C08G63/08—Lactones or lactides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G64/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbonic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G64/42—Chemical after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
    • C08J3/24—Crosslinking, e.g. vulcanising, of macromolecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55544—Bacterial toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • A61K2039/627—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier characterised by the linker
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
    • C08J2367/00—Characterised by the use of polyesters obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain; Derivatives of such polymers
    • C08J2367/04—Polyesters derived from hydroxy carboxylic acids, e.g. lactones

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)

Abstract

Изобретение относится к композициям и связанным с ними способам из синтетических наноносителей, которые включают иммуномодулирующие средства и антигены, которые дифференциально высвобождаются из синтетических наноносителей.

Description

Аспекты изобретения относятся к композициям, содержащим синтетические наноносители, которые включают иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем, и антиген, связанный с синтетическим наноносителем, при этом иммуномодулирующее средство и антиген отделяются от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
ΙΑ (высв.)%/А(высв.)%>1,2, где ΙΑ (высв.)% определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной среды при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму веса иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной среды при рН 4,5 в течение 24 ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной среды при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный в весовом проценте и взятый как среднее образцов синтетических наноносителей, и где А (высв.)% определяют как вес антигена, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной среды при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму вес антигена, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной среды при рН 4,5 в течение 24 ч, плюс вес антигена, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной среды при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный в весовом проценте и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей.
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с синтетическим наноносителем посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В определенных вариантах осуществления иммуномодулирующее средство ковалентно связано с синтетическим наноносителем. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство инкапсулировано в синтетическом наноносителе. В определенных вариантах осуществления антиген связан с синтетическим наноносителем посредством связывающей антиген части. В некоторых вариантах осуществления антиген ковалентно связан с синтетическим наноносителем. В определенных вариантах осуществления антиген инкапсулирован в синтетическом наноносителе.
В некоторых вариантах осуществления антиген является В-клеточным антигеном. В определенных вариантах осуществления В-клеточный антиген является антигеном, происходящим от инфекционного агента. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является слабоиммуногенным антигеном. В определенных вариантах осуществления В-клеточный антиген является злоупотребляемым веществом или его частью или вызывающим привыкание веществом или его частью. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является токсином или вредным для окружающей среды средством. В определенных вариантах осуществления В-клеточный антиген является аллергеном, антигеном дегенеративного заболевания, раковым антигеном, антигеном атопического заболевания или антигеном заболевания обмена веществ.
В некоторых вариантах осуществления антиген является Т-клеточным антигеном. В определенных вариантах осуществления Т-клеточный антиген является антигеном МНС I класса. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующим средством является адъювант. В некоторых вариантах осуществления адъювант включает агонист Τοΐΐ-подобного рецептора (ТЬК), такой как агонист ТЬК 3, агонист ТШ 7, агонист ТЬК 8, агонист ТЬК 7/8 или агонист ТЬК 9. В некоторых вариантах осуществления агонистом ТЬК является имидазохинолином. В определенных вариантах осуществления имидазохинолин представляет собой резиквимод или имиквимод. В некоторых вариантах осуществления агонистом ТЬК является иммуностимулирующая нуклеиновая кислота, такая как иммуностимулирующая ДНК или иммуностимулирующая РНК. В определенных вариантах осуществления иммуностимулирующая нуклеиновая кислота представляет собой СрО-содержащую иммуномодулирующую нуклеиновую кислоту.
В некоторых вариантах осуществления адъювант включает универсальный Т-клеточный антиген. В определенных вариантах осуществления синтетические наноносители включают один или несколько биоразлагаемых полимеров. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство свя- 1 028288 зано с одним или несколькими биоразлагаемыми полимерами посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В определенных вариантах осуществления иммуномодулирующее средство ковалентно связано с одним или несколькими биоразлагаемыми полимерами. В некоторых вариантах осуществления связывающая иммуномодулирующее соединение часть включает амидную связь. В определенных вариантах осуществления связывающая иммуномодулирующее соединение часть включает сложноэфирную связь. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее соединение включает электростатическую связь.
В некоторых вариантах осуществления биоразлагаемые полимеры включают поли(лактид), поли(гликолид) или сополимер(лактида и гликолида). В определенных вариантах осуществления биоразлагаемые полимеры имеют средневесовой молекулярный вес в диапазоне от 800 до 10000 Да, как определено с помощью гель-проникающей хроматографии. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители дополнительно обладают свойством нацеливания на антигенпрезентирующие клетки (АРС).
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители включают наночастицы на основе липидов, полимерные наночастицы, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболлы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе пептида или белка, наночастицы, которые содержат комбинацию наноматериалов, сфероидальные наночастицы, кубические наночастицы, пирамидальные наночастицы, вытянутые наночастицы, цилиндрические наночастицы или тороидальные наночастицы. В определенных вариантах осуществления композиции, связанные с данным изобретением, дополнительно включают фармацевтически приемлемый эксципиент.
Дополнительные аспекты данного изобретения относятся к композициям, включающим вакцины, которые включают любую из композиций, связанных с данным изобретением.
Дополнительные аспекты данного изобретения относятся к способам, включающим введение любой из композиций, связанных с данным изобретением, субъекту. В некоторых вариантах осуществления композиции находятся в количестве, эффективном для индукции или усиления иммунного ответа. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется рак, инфекционное заболевание, неаутоимунное нарушение обмена веществ, дегенеративное заболевание или привыкание.
Краткое описание графических материалов
Фигура демонстрирует, что специфические к никотину антитела были индуцированы синтетическими наноносителями, которые транспортировали антиген никотина и адъювант и из которых адъювант, но не антиген, заметно высвобождался за 24 ч.
Подробное описание
Прежде чем описывать данное изобретение в деталях, следует понять, что данное изобретение не ограничивается отдельно проиллюстрированными материалами или технологическими параметрами, которые, конечно, могут варьировать. Также следует понимать, что терминология, использованная в настоящем документе, приведена только с целью описания отдельных вариантов осуществления изобретения и не предназначена для ограничения применения альтернативной терминологии для описания данного изобретения.
Все публикации, патенты и патентные заявки, цитируемые в данном документе выше или ниже, тем самым включены ссылкой во всей их полноте для любых целей.
Как используется в данном описании и прилагаемой формуле изобретения, формы единственного числа включают ссылки с множественным числом, если содержание четко не диктует иное. Например, ссылка на полимер включает смесь из двух или более таких молекул, ссылка на растворитель включает смесь из двух или более таких растворителей, ссылка на адгезив включает смеси из двух или более таких материалов и т.п.
Введение.
Данное изобретение является полезным в том, что оно представляет путь доставки антигенов с иммуномодулирующими средствами для оптимальной индукции иммунных ответов на антиген. Представленные композиции и способы предусматривают высвобождение иммуномодулирующего средства до или одновременно с антигеном. Такое высвобождение может обеспечить сильные и долговременные иммунные ответы и представляет, таким образом, особый интерес применения вакцин для профилактики и лечения. В некоторых вариантах осуществления антигены могут быть связаны с синтетическими наноносителями так, что они присутствуют на поверхности синтетических наноносителей, инкапсулированы в наноносители или и то и другое. В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство усиливает иммунный ответ на антиген.
Авторы неожиданно и к удивлению обнаружили, что проблемы и ограничения, отмеченные выше, могут быть преодолены путем осуществления данного изобретения, раскрытого в данном документе. В частности, авторы неожиданно обнаружили, что возможно обеспечение композиций и связанных с ними способов, включающих синтетические наноносители, которые включают (а) иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем; и (Ь) антиген, связанный с синтетическим наноносителем; при этом иммуномодулирующее средство и антиген отделяются от синтетического наноносите- 2 028288 ля согласно следующему соотношению:
ΙΑ (высв.)%/А(высв.)%>1,2, где 1А (высв.)% определяется как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной среды при рН 4,5 в течение ΐ ч, деленный на сумму веса иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίΐτο водной среды при рН 4,5 в течение ΐ ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίΐτο водной среды при рН 4,5 в течение ΐ ч, выраженный в весовом проценте и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей, и где А(высв.)% определяют как вес антигена, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίίτο водной среды при рН 4,5 в течение ΐ ч, деленный на сумму веса антигена, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίΐτο водной среды при рН 4,5 в течение ΐ ч, плюс вес антигена, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель ίη νίΐτο водной среды при рН 4,5 в течение ΐ ч, выраженный в весовом проценте и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей; и где ΐ равно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 18, 24, 30, 36, 42 или 48 ч. В предпочтительных вариантах осуществления ΐ равно 12, 24 или 48 ч.
В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство и антиген отделяются от синтетического наноносителя согласно следующему соотношению:
1А(высв.)%/А(высв. )%> 1,3, 1А(высв.)%/А(высв.)%> 1,6, 1А(высв.)%/А(высв.)%> 1,9, 1А(высв.)%/А(высв.)%>3, 1А(высв.)%/А(высв.)%>4,5,
1А(высв.)%/А(высв.)%> 1,5, 1А(высв .)%/А(высв .)%> 1,8, 1А(высв .)%/А(высв .)%>2,5, 1А(высв.)%/А(высв.)%>4, 1А(высв .)%/А(высв .)%>6,
1А(высв.)%/А(высв.)%>1,4,
1А(высв.)%/А(высв.)%> 1,7,
1А(высв.)%/А(высв.)%>2,
1А(высв.)%/А(высв.)%>3,5,
1А(высв.)%/А(высв.)%>5,
1А(высв.)%/А(высв.)%>7, 1А(высв.)%/А(высв.)%>8, 1А(высв.)%/А(высв.)%>9, 1А(высв.)%/А(высв.)%>10, 1А(высв.)%/А(высв.)%>15, 1А(высв.)%/А(высв.)%>20, 1А(высв.)%/А(высв.)%>25,
1А(высв.)%/А(высв.)%>>30, 1А(высв.)%/А(высв.)%>40, 1А(высв.)%/А(высв.)%>50,
1А(высв.)%/А(высв.)%>75 или 1А(высв.)%/А(высв.)%>100, где 1А(высв.)%, А(высв.)% и ΐ являются такими, как определено выше.
В некоторых вариантах осуществления композиции и относящиеся к ним способы включают синтетические наноносители, которые включают (а) иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическим наноносителем; и (Ь) антиген, связанный с синтетическим наноносителем; где высвобождается по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 17, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80 или 90% иммуномодулирующего средства, в то время как антиген заметно не высвобождается. В данных вариантах осуществления процент высвобожденного составляет 100 х (вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΐτο при рН 4,5 в течение ΐ ч, деленный на сумму веса иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΐτο при рН 4,5 в течение ΐ ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΐτο при рН 4,5 в течение ΐ ч, взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей). В данных вариантах осуществления ΐ является таким, как определено выше. В предпочтительных вариантах осуществления ΐ равно 12, 24 или 48 ч.
В частности, авторы отметили, что лизосомы иммуноцитов меняют свое поведение, если они содержат конкретное вещество, которое не расщепляется за период 24-48 ч после того, как были поглощены клеткой посредством эндоцитоза. Как правило, большая часть поглощенных посредством эндоцитоза биологических материалов расщепляются на молекулы меньшего размера (такие как аминокислоты, небольшие пептиды или нуклеиновые кислоты), которые становятся доступными для клеточного метаболизма или удаления из клетки. Тем не менее, лизосомы, которые не могут расщепить частицы, которые они содержат, за период 24-48 ч модифицируются клеткой. Теряются сигнальные рецепторы и другие системы, и лизосома превращается в тупиковую везикулу, которая, наконец, перерабатывается для удаления из клетки. Следовательно, после эндоцитоза частицы клеткой иммунной системы есть окно времени. Если синтетический наноноситель не высвобождает свой полезный груз иммуномодулирующего средства в пределах этого окна 24-48 ч, предпочтительно 12 ч, то сигнальные рецепторы, которые предназначены для нацеливания, могут быть удалены с везикулы. Это в свою очередь делает любое последующее высвобождение иммуномодулирующего средства в этой везикуле, по большей мере, неуместным при воздействии на иммуногенные ответы.
Авторы также отметили, что наличие и вовлеченность сигнальных рецепторов, таких как ΤοΙΙподобные рецепторы, во время поглощения антигена может контролировать кинетику и результат активации и/или созревания иммуноцитов (например, созревания фагосом). Наличие и вовлеченность сигнальных рецепторов не только ведет к более быстрому созреванию иммуноцитов, но также наделяет иммуноциты большей способностью обеспечивать пептиды для узнавания молекулами основного комплекса гистосовместимости (МНС) (Ыанбсг. Апп. Кйеит. Όίδ. 2008: 67(§ирр1 ΙΙΙ):ϊϊΐ44-ϊϊΐ49).
- 3 028288
Желательно, чтобы передача сигнала рецептором у иммунноцитов происходила до или одновременно с поглощением антигена. Представленные в данном документе композиции и способы предусматривают такую передачу сигнала рецептором путем доставки иммуномодулирующего средства и антигена в виде части синтетического наноносителя, что позволяет высвободить иммуномодулирующее средство до или одновременно с антигеном. В вариантах осуществления высвобождение иммуномодулирующего средства или антигена происходит, если связь между иммуномодулирующим средством или антигеном и синтетическим наноносителем в значительной мере ослабляется или исчезает. Такая связь может быть ослаблена или устранена посредством ослабления или устранения связывания между иммуномодулирующим средством или антигеном и связывающей частью (частью, связывающей иммуномодулирующее средство или антиген соответственно). Такая связь также может быть ослаблена или устранена путем разложения синтетического наноносителя так, чтобы иммуномодулирующее средство или антиген высвободились из состояния заключенности в синтетическом наноносителе. В таком варианте осуществления иммуномодулирующее средство или антиген не связываются с синтетическим наноносителем в результате связывания перед указанным разложением. Кроме того, такая связь может быть ослаблена или устранена путем разложения синтетического наноносителя так, чтобы иммуномодулирующее средство или антиген все еще оставались связанными с частью синтетического наноносителя (например, посредством иммуномодулирующей или связывающей антиген части соответственно), но чтобы указанная часть в удовлетворительной степени разложилась с тем, чтобы стать способной индуцировать иммунный ответ. В вариантах осуществления иммунный ответ является подобным или таким же как и иммунный ответ, который был бы вызван в такой же среде иммуномодулирующим средством или антигеном в несвязанном с частью синтетического наноносителя состоянии.
Предпочтительно, высвобождение иммуномодулирующего средства или антигена происходит в лизосоме или эндосоме. Следовательно, высвобождение иммуномодулирующего средства или антигена предпочтительно происходит при рН 4,5. Эффективность высвобождения иммуномодулирующего средства в окне времени может быть аппроксимирована путем сравнения скорости высвобождения ίη νίΐΓΟ антигена из синтетического наноносителя со скоростью высвобождения ίη νίΐτο иммуномодулирующего средства при рН среды приблизительно 4,5. Высвобождение антигена из синтетического наноносителя служит в качестве индикатора того, насколько быстро синтетический наноноситель расщепляется лизосомой клетки иммунной системы. В действительности было обнаружено, что антиген может быть связан с наноносителем таким образом, что высвобождение не определяется ίη νίΐτο при рН 4,5, но зато при основных условиях. В таких случаях это демонстрирует, что связывание антигена с синтетическим наноносителем является очень стабильным при физиологических условиях (например, при рН 7,4 или 4,5), и что, в целом, высвобождение антигена будет происходить по мере расщепления синтетического наноносителя ίη νίνο. Из этого следует, что такой синтетический наноноситель будет обеспечивать более быстрое высвобождение иммуномодулирующего средства.
Если иммуномодулирующее средство высвобождается из синтетического наноносителя быстрее, чем антиген при стимуляции условиями с низким рН лизосомы и в соответствующем окне времени, то это является указанием на то, что активная лизосома - и, соответственно, клетка иммунной системы может находиться под влиянием иммуномодулирующего средства. Если верно обратное, то это является указанием на то, что некоторая часть или весь груз иммуномодулирующего средства может не обладать оптимальным эффектом на клетку. Соответственно, синтетические наноносители по данному изобретению могут обеспечить больший иммунный ответ(ответы) и, в результате, усиленную терапевтическую полезность субъектам.
Определения
Злоупотребляемое вещество является любым веществом, употребляемым субъектом (например, человеком) с целями, отличными от тех, для которых оно предназначено, или способом, или в количествах, отличных от предписанных врачом. В некоторых вариантах осуществления злоупотребляемое вещество является лекарством, таким как запрещенное лекарство. В определенных вариантах осуществления злоупотребляемое вещество является безрецептурным лекарством. В некоторых вариантах осуществления злоупотребляемое вещество является предписанным лекарством. Злоупотребляемое вещество в некоторых вариантах осуществления является веществом, вызывающим привыкание. В некоторых вариантах осуществления злоупотребляемое вещество обладает психотропными действиями и, таким образом, включает летучие препараты и растворители. В других вариантах осуществления злоупотребляемое вещество является веществом, которое не обладает психотропными действиями или не обладает отравляющими свойствами, и, таким образом, включает анаболические стероиды. Вещества, которыми злоупотребляют, включают, но без ограничений, каннабиноиды (например, гашиш, марихуана), депрессанты (например, барбитураты, бенодиазепины, флунитразепам (рогипнол), СНВ, метаквалон (куаалюды)), диссоциативные анестетики (например, кетамин, РСР), галлюциногены (например, ЛСД, мескалин, псилоцибин), опиоиды и производные морфина (например, кодеин, фентанил, героин, морфин, опиум), стимуляторы (амфетамин, кокаин, экстази (МИМА), метамфетамин, метилфенидат (риталин), никотин), анаболические стероиды и летучие вещества. В некоторых вариантах осуществления злоупотребляемое вещество для включения в наноноситель является целой молекулой или ее частью.
- 4 028288
Вызывающее привыкание вещество является веществом, которое вызывает навязчивое состояние, компульсивное побуждение, или физическую зависимость, или психологическую зависимость. В некоторых вариантах осуществления вызывающее привыкание вещество является запрещенным лекарством. В другом варианте осуществления вызывающее привыкание вещество является безрецептурным лекарством. В других вариантах осуществления вызывающее привыкание вещество является предписанным лекарством. Вызывающие привыкание вещества включают, но без ограничения, кокаин, героин, марихуану, метамфетамины и никотин. В некоторых вариантах осуществления вызывающее привыкание вещество для включения в наноноситель является целой молекулой или ее частью.
Адъювант означает средство, которое не представляет собой специфический антиген, но увеличивает силу и продолжительность иммунного ответа на антиген. Такие адъюванты могут включать, но без ограничений, стимуляторы образраспознающих рецепторов, таких как То11-подобные рецепторы, Р1С-1 и ΝΘΌ-подобные рецепторы (ЫЙК), минеральные соли, такие как квасцы, квасцы, комбинированные с монофосфориллипидами (МРЬ) А из Еп1сгоЬас1спа. таких как ЕзсЬепЫа сой, 8а1топе11а ттпезоЕк 8а1топе11а ЕрЫтипит или 8Ыде11а йехпеп, или, в частности, с МРЬ® (А804), МРЬ А из вышеупомянутых бактерий отдельно, сапонины, такие как 08-21, 0ш1-А, 18СОМ, 18СОМАТР1Х™, эмульсии, такие как МР59™, Мойашбе® Ι8Α 51 и Ι8Α 720, А802 (0821+сквален+МРЬ®), липосомы и липосомальные составы, такие как А801, синтезированные или специально полученные микрочастицы и микротранспортеры, такие как происходящие от бактерий везикулы из внешней мембраны (ОМУ) из Ν. допотгЬеае, СЫатуШа !гас1ютайз и других, или хитозановые частицы, средства, образующие депо, такие как блок-сополимеры Р1игошс®, специально модифицированные или полученные пептиды, такие как мурамил-дипептид, аминоалкилглюкозаминида 4-фосфаты, такие как РС529, или белки, такие как бактериальные токсоиды или фрагменты токсинов. В вариантах осуществления адъюванты включают агонисты для образраспознающих рецепторов (РКП), включая, но без ограничений, То11-подобные рецепторы (ТЬР), в особенности ТЬР 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9 и/или их комбинации. В других вариантах осуществления адъюванты включают агонисты для То11-подобных рецепторов 3, агонисты для То11-подобных рецепторов 7 и 8 или агонисты для То11-подобного рецептора 9; предпочтительно, упомянутые адъюванты включают имидазохинолины; такие как резиквимод (также известный как Р848); адениновые производные, такие как те, которые раскрыты в патенте США 6329381 (8итйото Рйагтасеийса1 Сотрапу); иммуностимулирующую ДНК или иммуностимулирующую РНК. В специфических вариантах осуществления синтетические наноносители включают в качестве адъювантов соединения, которые представляют собой агонисты То11-подобных рецепторов (ТЬР) 7 и 8 (агонисты ТЬР 7/8). С практической стороны соединения-агонисты ТЬР 7/8 раскрыты в патенте США №6696076 Тота1 е! а1., включая, но без ограничения, имидазохинолинамины, имидазопиридинамины, 6,7-конденсированные циклоалкилимидазопиридинамины и 1,2-мостиковые имидазохинолинамины. Предпочтительные адъюванты включают имиквимод и резиквимод. В конкретных вариантах осуществления адъювант может быть агонистом для поверхностной молекулы С.П40 ОС. В определенных вариантах осуществления синтетический наноноситель включает адъювант, который способствует созреванию ОС (необходимых для эффективного примирования наивных Т-клеток) и продуцирования цитокинов, таких как интерфероны Ι типа, которые в свою очередь стимулируют иммунный ответ с помощью антител и цитотоксический иммунный ответ против желаемого антигена. В вариантах осуществления адъюванты также могут содержать иммуностимулирующие молекулы РНК, такие как, но без ограничения, άδΚΝΑ или поли 1:С (ТЬР3 стимулятор), и/или раскрытые у Р. Ней е! а1., 8решез8ресбтс Ресодшйоп оГ 8шд1е-81тапбеб ΡΝΑ У1а То11-йке Ресер!ог 7 апб 8 8с1епсе 303(5663), 1526-1529 (2004); ί. Уо11тег е! а1., 1ттипе тоби1айоп Ьу сЬетюайу тоббгеб йЬопис1еоз1без апб оНдопЬопис1еойбез АО 2008033432 А2; А. РогзЬасй е! а1., 1ттипозйти1а1оту ойдойЬопис1еойбез соп!аййпд зресШс зесщепсе тойГ(з) апб Пгдейпд Не То11-йке гесер!ог 8 ра!й\уау АО 2007062107 А2; Е. ИЫтапп е! а1., МобШеб ойдойЬопис1еойбе апа1одз \\йй епйапсеб 1ттипозйти1а1огу асйуйу и.8. Ра!. Арр1. РиЬ1. И8 2006241076; С. ЫрГогб е! а1., 1ттипозйти1а1огу У1га1 ΡΝΑ ойдопис1еойбез апб изе Гог !геайпд сапсег апб тГесйопз АО 2005097993 А2; С. ЫрГотб е! а1. , 1тпшпозйпш1а!огу С, И-сойшитд ойдойЬопис1еойбез, сотрозйюпз, апб зсгеетпд тебюбз АО 2003086280 А2. В некоторых вариантах осуществления адъювантом может быть агонист ТЬК-4, такой как бактериальный липополисахарид (ЬР8), У8У-С и/или НМСВ-1. В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут включать агонисты ТЬК-5, такие как флагеллин или его части, или производные, включая, но без ограничения, те, которые раскрыты в патентах США 6130082, 6585980 и 7192725. В специфических вариантах осуществления синтетические наноносители включают лиганд То11-подобного рецептора (ТЬК)-9, например иммуностимулирующие молекулы ДНК, содержащие СрС, которые индуцируют секрецию интерферона Ι типа и стимулируют активацию Т- и В-клеток, приводящую к повышенной продукции антител и цитотоксическому Т-клеточному ответу (Кпед е! а1., СрС шойГз ш Ьас!епа1 ΌΝΑ йтддет бйес! В се11 асйуайоп. Ха!пге. 1995. 374:546-549; СЬи е! а1. СрС ойдобеохупис1еойбез ас! аз абщуап!з !1а! з^йсй оп Т йе1рет 1 (Т11) 1ттипйу. ί. Ехр. Меб. 1997. 186:1623-1631; ЫрГогб е! а1. СрС-сойштпд зуййейс ойдопис1еойбез ргото!е В апб су!о!ох1с Т се11 гезропзез !о рго!ет апйдеп: а пей с1азз оГ уассте аб)пуап!з. Еиг. ί. 1ттипо1. 1997. 27:2340-2344; Ротап е! а1. 1ттипозйти1а!огу ΌΝΑ зедиепсез Гцпсйоп аз Т Ье1рег-1-рготойпд аб)пуап!з. №1. Меб. 1997. 3:849-854;
- 5 028288
Ωανίδ е! а1. СрО ΌΝΆ ίβ а ро1сп1 епйапсег оГ вресШс штипИу ίη т1се иптшй/ей \νί11ι гесотЬтап! йераИИв В вигГасе апИдеп. ί. 1ттипо1. 1998. 160:870-876; ЫрГогй е! а1., Вас1епа1 ΌΝΆ ав 1ттипе се11 асйуа!ог. Тгепйв М1сгоЫо1. 1998. 6:496-500. В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут быть провоспалительными стимулами, выделенными из некротических клеток (например, кристаллы уратов). В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут быть активированными компонентами каскада комплемента (например, СЭ21. СИ35 и т.д.). В некоторых вариантах осуществления адъюванты могут быть активированными компонентами иммунных комплексов. Адъюванты также включают агонисты рецептора комплемента, такие как молекула, которая связывается с СИ21 или СИ35. В некоторых вариантах осуществления агонист рецептора комплемента индуцирует опсонизацию эндогенного комплемента синтетического наноносителя. В некоторых вариантах осуществления адъюванты являются цитокинами, которые относятся к малым белкам или биологическим факторам (в диапазоне 5-20 кДа), которые выделяются клетками и имеют специфические эффекты на межклеточное взаимодействие, коммуникацию и поведение других клеток. В некоторых вариантах осуществления агонист цитокинового рецептора является небольшой молекулой, антителом, сшитым белком или аптамером.
Введение или ввод означает обеспечение лекарства пациенту фармакологически пригодным способом.
Аллерген относится к любому средству, которое может вызывать аллергический ответ у субъекта. Аллергены включают, но без ограничения, обычную пыль, пыльцу, растения, перхоть животных, лекарства (например, пенициллин), пищевые аллергены, яд насекомых, споры грибов, вирусы и бактерии.
Связывающая антиген часть означает любую часть, посредством которой антиген связывается с синтетическим наноносителем. Такие части включают ковалентные связи, такие как амидная связь или сложноэфирная связь, а также отдельные молекулы, которые связывают (ковалентно или нековалентно) антиген с синтетическим наноносителем. Такие молекулы включают линкеры или полимеры или их элементарное звено. Например, связывающая антиген часть может включать загруженный полимер, с которым электростатически связывается антиген. В качестве другого примера связывающая антиген часть может включать полимер или его элементарное звено, с которым ковалентно связывается антиген. В некоторых вариантах осуществления часть включает сложный полиэфир. В других вариантах осуществления часть включает поли(этиленгликоль) (РЕО), поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), блок-сополимер(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон. Часть также может включать элементарное звено любого из вышеупомянутых полимеров, такое как лактид или гликолид.
Признак нацеливания на АРС означает одну или несколько частей, из которых состоят синтетические наноносители по данному изобретению, которые нацеливают синтетические наноносители на специализированные антигенпрезентирующие клетки (АРС), такие как, но без ограничения, дендритные клетки, 8С8 макрофаги, фолликулярные дендритные клетки и В-клетки. В вариантах осуществления признак нацеливания на АРС может включать иммуноспецифическую поверхность(поверхности) и/или нацеливающие части, которые связывают известные мишени на АРС. В вариантах осуществления признаки нацеливания на АРС могут включать один или несколько В-клеточных антигенов на поверхности синтетических наноносителей. В вариантах осуществления признаки нацеливания на АРС также могут включать один или несколько размеров синтетических наночастиц, которые выбраны с тем, чтобы способствовать поглощению АРС.
В вариантах осуществления нацеливающие части для известных мишеней на макрофагах (МФ) содержат любую нацеливающую часть, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), который заметно экспрессируется и/или представлен на макрофагах (т.е. маркеры субкапсулярного синуса-МФ). Типичные маркеры СКС-МФ включают, но без ограничения, СЭ4 (Ь3Т4, \У3/25, Т4); СЭ9 (р24, ΌΚΑΡ-1, МРР-1); СИ11а (ЬРА-1а, аЬцепь интегрина); СИ11Ь (аМ-цепь интегрина, СК3, Мо1, С3тК, Мас-1); СИ11с (αΧ-интегрин, р150, 95, АХЬ2); СИте12 (р90-120); СН13 (ΑΡΝ, др150, ЕС 3.4.11.2); СН14 (ЬР8-К); СН15 (Х-гаптен, Льюис X, 88ЕА-1,3-РАР); СИ15в (сиалил-Льюис X); СЭ15и (3'-сульфо-Льюис X); СЭ155И (6-сульфо-сиалил-Льюис X); СИ16а (РСКША); СИ16Ь (РсдКШЬ); СИте17 (лактозилцерамид, ЬасСег); СИ18 (интегрин β2, СИНаДс β-субъединица); СЭ26 (ИРР IV эктоэнеим, АЭА-связывающий белок); СЭ29 (тромбоцитарный ОР11а, β-1 интегрин, ОР); СН31 (РЕСАМ-1, эндокам); СН32 (РСуКП); СН33 (§р67); СН35 (СК1, С3Ь/С4Ь рецептор); СН36 (ОрШЬ, ОРТУ РА8ТУ); СН37 (§р52-40); СН38 (АДФ-рибозилциклаза, Т10); СН39 (АТФ-дегидрогеназа, ЭТР-дегидрогеназа-1); СИ40 (Вр50); СИ43 (сиалофорин, лейкосиалин); СИ44 (ЕМСК11, Н-САМ, Рдр-1); СН45 (ЬСА, Т200, В220, Ьу5); СИ45КА; СИ45КВ; СИ45КС; СН45КО (иСНЬ1); СЭ46 (МСР); СН47 (др42,ТАР, ОА3, нейрофилин); СИ47К (МЕМ-133); СН48 (В1ав1-1, Ни1ут3, ВСМ1, 0X45); СИ49а ^ЕА-1а, а1-интегрин); СИ49Ь ^ЕА-2а, др1а, а2-интегрин); СЭ49с ^ЕА-3а, а3интегрин); СЭ49е ^ЬА+а, а5-интегрин); СЭ49Г ^ЕА-6а, а6-интегрин, др1с); СЭ50 (1САМ-3); СИ51 (интегрин а, νΝΚ-α, витронектин-Ка); СН52 (САМРАТН-1, НЕ5); СН53 (0X44); СН54 (1САМ-1); СН55 (ИАР); СИ58 (ЬРА-3); СН59 (1Р5А& Н19, протектин, МАС1Р, М1КЬ, Р-18); СН60а (СВ3); СН60Ь (9-0ацетил СЭ3); СН61 (ОР 111а, в3-интегрин) ; СН62Ь (Ь-селектин, ЬАМ-1, ЬЕСАМ-1, МЕЬ-14, Реи8, Тр1); СН63 (ЬТМР, МЬА1, др55, ^А, ЬАМР-3, МЕ491); СН64 (РсуКТ); СН65 (церамид, ЦМ-2); СН65в (сиа- 6 028288 лированный СБ65, У1М2); С.В72 (Ьу-19.2, Ьу-32.2, ЬуЬ-2); СБ74 (Ιί, инвариантная цепь); СБ75 (сиалозамаскированный лактозамин); СБ758 (а2,6-сиалированный лактозамин); СБ80 (В7, В7-1, ВВ1); С.В81 (ТАРА-1); СБ82 (4Р9, С33, ΙΑ4, КАИ, К2); СБ84 (р75, ОК6); СБ85а (ШГ5, ЫК2, НЬ9); СБ856 (ШГ4, ЫК2, МТО10); СВ85| (ШГ2, ЫК1, МК7); СБ85к (ШГ3, ЫК5, НМ18); СБ86 (В7-2/В70); СБ87 (иРАК); СБ88 (С5аК); СБ89 (Ре-рецептор к Ι§Α, РсаК); СБ91 (а2М-К, ЬКР); С1ГО92 (р70); СБте93 (ОК11); СБ95 (АРО-1, РА8, ΤΝΡΚ8Ρ6); СБ97 (ВЬ-КББ/Р12); СБ98 (4Р2, РКР-1, КЬ-388); СБ99 (М1С2, Е2); СБ99К (СБ99, МаЬ рестриктированный); СБ100 (8ЕМА4Б); СБ101 (ΙΟ8Ρ2, Р126, У7; СБ102 (1САМ-2); СБ111 (РУКИ1, НуеС, РКК1, нектин 1, Ш§К); СВ112 (НуеВ, РКК2, РУКИ2, нектин 2); СБ114 (С8Р3К, О-С8КР, НО-С8РК); СБ115 (с-Ршк, С8Р-1К, М-С8РК); СВ116 (ОМС8РКа); С1ГО119 (ΙΡΝγΚ, ΙΡΝγΡΛ); СБ120а (ΤΝΡΚΙ, р55); СБ120Ь (ГОРКЛ, р75, ΤΝΡΚ р80); СБ121Ь (ГО-1К типа 2); СБ122 (ГО2Кв); СБ123 (ГО-3Ка); СБ124 (ΙΕ-4Κα); СБ127 (р90, ГО-7К, ΙΕ-7Κα); СБ128а (ГО-8Ка, СХСК1, (ориентировочно переименованный как СБ181)); СБ128Ь (ГО-8КЬ, С8СК2, (ориентировочно переименованный как СБ182)); СБ130 (др130); СБ131 (общая β-субъединица); С.В132 (общая γ-цепь, ГО-2ГО/); С'.В\у136 (М8Р-К, ΚΟΝ, р158-гоп); СЭ\у137 (4-1ВВ, ГОА); СБ139; СБ141 (тромбомодулин, фетомодулин); СБ147 (басигин, ЕММРКРИ, М6, ОХ47); СБ148 (НРΤР-η, р260, ВЕР-1); СВ155 (РУК); СВ156а (СВ156, АБАМ8, М82); СВ156Ь (ДАСЕ, АБАМ17, с8УР); С1ГО156С (АБАМ10); СВ157 (Мо5, ВЗГО1); СВ162 (РЗОЬ-1); СВ164 (МОС-24, МИС24); СБ165 (АБ2, др37); СВ168 (КНАММ, ШАВР, НММК); СВ169 (сиалоадгезин, сиглек-1); СВ170 (сиглек-5); СБ171 (Ь1САМ, №ЬЕ); СВ172 (8ЖР-1а, МуБ-1); СВ172Ь (δΙΚΓβ); СВ180 (КР105, Вдр95, Ьу64); С.В181 (СХСК1, (прежде известный как СЭ128а)); С.В182 (СХСК2, (прежде известный как СБ128Ь)); СБ184 (СХСК4, ΝΕΥ3Κ); СВ191 (ССК1); СВ192 (ССК2); СВ195 (ССК5); СБте197 (ССК7 (был СВте197)); С1ГО198 (ССК8); СВ204 (М8К); СВ205 (ВЕС-25); СБ206 (ММК); СБ207 (лангерин); С1ГО210 (СК); СБ213а (СК); СБте217 (СК); СБ220 (инсулин К); СБ221 (ΙΟΡ1 К); СБ222 (М6Р-К, ΙΟΡΙΙ-К); СБ224 (ССТ); СБ226 (БНАМ-1, РΤΑ1); СБ230 (прионный белок (РгР)); СБ232 (УЕ8Р-К); СБ244 (2В4, Р38, НАГО); СБ245 (р220/240); СБ256 (АРКГО, ΤΑ^^2, суперсемейство ΤΝΡ (лиганд), член 13); СБ257 ^ΕΥ8, ΤΛΕΤΤ суперсемейство ΤΝΡ (лиганд), член 13Ь); СБ261 (ΤКΑI^-К1, суперсемейство ΤΝΡ-К, член 10а); С.В262 (ΤКΑI^-К2, суперсемейство ΤΝΡ-К, член 10Ь); СБ263 (ΤКΑI^-К3, суперсемейство ГОВР-К, член 10с); СБ264 (теАГО-Ю, суперсемейство ΤΝΡ-К, член 106); СБ265 (ЮАнСе-К, суперсемейство ΤΝΡ-К, член 11а); С.В277 (ΒΤ3.1, семейство В7: бутирофилин 3); СБ280 (ΤЕМ22, ΕΝΒΟ180); С.В281 (ΤΡΒ1, Τοΐΐ-подобный рецептор 1); СБ282 (ΤΡΒ2, Τοΐΐ-подобный рецептор 2); СБ284 (ΤΡΒ4, ΤοΙΙподобный рецептор 4); СБ295 (ЬЕРК); СБ298 (АТР1В3, На/К-АТФаза, в3-субъединица); СБ300а (СМКР-35Н); СБ300С (СМКР-35А); СБ300е (СМКР-35Ы); СБ302 (БСЬ1); СБ305 (ЬАШ); СБ312 (ЕМК2); СБ315 (СВ9Р1); СБ317 ^8Τ2); СБ321 (1АМ1); СБ322 (1АМ2); СБте328 (сиглек-7); СБте329 (сиглек-9); СБ68 (др 110, макросиалин); и/или рецептор маннозы; где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия.
В вариантах осуществления нацеливающие фрагменты для известных мишеней на дендритных клетках (ДК) включают любую нацеливающую часть, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), который заметно экспрессирован и/или представлен на ДК (т.е. маркер ДК). Типичные маркеры ДК включают, но без ограничения, СБ1а (К4, Т6, НТА-1); СБ1Ь (К1); СБ1с (М241, К7); СБ16 (К3); СБ1е (К2); СБ11Ь (аМ-цепь интегрина, СК3, Мо1, С3тК, Мас-1); СБ11с (аХ-интегрин, р150, 95, АХЬ2); СВ\у117 (лактозилцерамид, ЬасСет); СБ19 (В4); СБ33 (др67); СБ 35 (СК1, рецептор С3Ь/С4Ь); СБ 36 (СрШЬ, СРГУ, РА8ГУ); СБ39 (АТФдегидрогеназа, ЭТР-дегидрогеназа-1); С1)40 (Вр50); СБ45 (ЬСА, Τ200, В220, Ьу5); СБ45КА; СБ45КВ; СБ45КС; СБ45КО (ИСНЬ-1); СО496 (УЪА-4а, а4-интегрин); С1)49е (УЪА-5а, а5-интегрин); СБ58 (ЬРА-3); СБ64 (ΡογΜ); СБ72 (Ьу-19.2, Ьу-32.2, ЬуЬ-2); СБ73 (экто-5'нуклеотидаза); СБ74 (Ιί, инвариантная цепь); С1)80 (В7, В7-1, ВВ1); СБ81 (ДАРА-1); СБ83 (НВ15); СБ85а (ΙΕΤ5, ЫК3, НЬ9); СБ856 (ΙΕΤ4, ЫК2, МК10); СВ85_) (ΙΕΤ2, ЫК1, МК7); СБ85к (ΙΕΤ3, ЫК5, НМ18); СБ86 (В7-2/В70); СБ88 (С5аВ); СБ97 (ВЬ-КВБ/Р12); СБ101 (ΙΟ8Ρ2, Р126, У7); СБ116 (ОМ-С8РКа); СБ120а (Έ^ΡΜ, р55); СБ120Ь (ГОРКЛ, р75, ЕНЕК р80); СБ123 (ГО-3Ка); СБ139; СБ148 (^ΤΈ-η, БЕР-1); СБ150 (8ЬАМ, №О-3); СБ156Ь ЦАСЕ, АБАМ17, с8УР); СБ157 (Мо5, В8ГО1); СБ167а (ВБК1, йкЕ, сак); СБ168 (КНАММ, ШАВР, НММК); СВ169 (сиалоадгезин, сиглек-1); СБ170 (сиглек-5); СБ171 (Ь1САМ, МЬЕ); СБ172 (8РКР-1а, МуБ-1); СБ172Ь (8ГОР(3); СБ180 (КР105, Вдр95, Ьу64); СБ184 (СХСК4, NРΥ3К); СБ193 (ССК3); СБ196 (ССК6); СБ197 (ССК7 (те СВ^197)); С1ГО197 (ССК7, ЕВП, ВЬК2); СБ200 (ОХ2); СБ205 (БЕС-205); СБ206 (ММК); СБ207 (лангерин); СБ208 (БС-ЬАМР); СБ209 (ϋϋδΙΟΝ); СБте218а (РЕ18Ка); СБте218Ь (ГО8Кв); СБ227 (МИС1, РИМ, РЕМ, ЕМА); СБ230 (прионный белок (РгР)); СБ252 (ОХ40Ь, суперсемейство ΤΝΡ (лиганд), член 4); СБ258 (иСНГО суперсемейство ΤΝΡ (лиганд), член 14); СБ265 (ΤКΛNСΕ-К, суперсемейство ΤΝΡ-К, член 11а); СБ271 (ΝΟΡΚ р75, суперсемейство ГОРК, член 16); СБ273 (В7БС, РБЬ2); СБ274 (В7Н1, РБЬ1); СБ275 (В7Н2, ЮО8Ь); СБ276 (В7Н3); СБ277 (ВТ3.1, семейство В7: бутирофилин 3); СБ283 (ΤΕ^, ЮИ-подобный рецептор 3); СБ289 (ΤΡΒ9, ЮИ-подобный рецептор 9); СБ295 (ЬЕРК); СБ298 (АТР1В3, в3-субъединица На/К-АТФазы); СБ300а (СМКР-35Н); СБ300с (СМКР-35А); СБ301 (МОЬ1, СЬЕС8Ь14); СБ302 (БСЬ1); СБ303 (ВБСА2); СБ304 (ВБСА4);
- 7 028288
ΟΌ312 (ЕМК2); ΟΌ317 (В5Т2); ΟΌ319 (СКАСС, 5ЬАМР7); ΟΌ320 (8Ό6) и ΟΌ68 (§р110, макросиалин); МНС II класса; ВОСЛ-1; сиглек-Н; где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия.
В вариантах осуществления нацеливание может быть выполнено с помощью любой нацеливающей части, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), который заметно экспрессирован и/или представлен на В-клетках (т.е. маркер В-клеток). Типичные маркеры В-клеток включают, но без ограничения, СП1с (М241, К7); СЭ16 (К3); СЭ2 (рецептор Е-розетки, Т11, ЬРЛ-2); С.П5 (Т1, Тр67, Ьеи-1, Ьу-1); С.П6 (Т12); СЬ9 (р24, ΌΚΆΡ-1, МКР1); ί'.Ό11а (ЬРА-1а, аЬ-цепь интегрина); СЬ11Ь (аМ-цепь интегрина, СК3, Мо1, С3шК, Мас-1); СЬ11с (аХ-интегрин, Р150, 95, ЛХЬ2); СП\у17 (лактозилцерамид, ЬасСет); СЭ18 (интегрин β2, β-субъединица СО11а, Ь, с); СП19 (В4); СП20 (В1, Вр35); СП21 (СК2, ЕВУ-К, С36К); СП22 (ВЬ-СЛМ, ЬуЬ8, сиглек-2); СО23 (РсеКИ, В6, ВЬА5Т-2, Ьеи-20); СП24 (ВВА-1, Н5А); СП25 (Тас-антиген, 1Ь-2Ка, р55); СП26 (ΌΡΡ 1У эктоэнеим, АЭА-связывающий белок); СЭ27 (Т14, 5152); СЭ29 (тромбоцитарный ОРПа, интегрин (31, ОР); СП31 (РЕСАМ-1, эндокам); СП32 (РСуКН); СП35 (СК1, С3Ь/С4Ь рецептор); СП37 (др52-40); ί'.Ό38 (АДФ-рибозилциклаза, Т10); СЭ39 (АТФ-дегидрогеназа, ЫТР-дегидрогеназа-1); СЭ40 (Вр50); СО44 (ЕСМКИ, Н-САМ, Рдр-1); СП45 (ЬСА, Т200, В220, Ьу5); СО45КА; СП45КВ; СО45КС; СО45КО (ИСНЬ-1); С.П46 (МСР); СП47 (др42, 1АР, ОА3, нейрофилин); СО47К (МЕМ-133); СП48 (В1аз1-1, Ни1ут3, ВСМ-1, ОХ-45); СЬ49Ь (УЪА-2а, др1а, а2-интегрин); СЬ49с (УЪА-3а, а3-интегрин); СЬ496 (УЬА-4а, а4-интегрин); СП50 (1САМ-3); СП52 (САМРАТН-1, НЕ5); СП53 (ОХ-44); СП54 (1САМ-1); СО55 (ПАР); СП58 (ЬРА-3); СП60а (ΟΌ3); СП62Ь (Ь-селектин, ЬАМ-1, ЬЕСАМ-1, МЕЬ-14, Ьеи8, ТЦ1); ί'.Ό72 (Ьу-19.2, Ьу-32.2, ЬуЬ-2); СЭ73 (экто-5'-нуклеотидаза); СЭ74 (И, инвариантная цепь); СЭ75 (сиалозамаскированный лактозамин); СЬ755 (а2,6-сиализированный лактозамин); С.П77 (Рк-антиген, ВЬА, СТН/ОЬ3); СП79а (1да, МВ1); СП79Ь (1§β, В29); СП80; СП81 (ТАРА-1); СП82 (4Р9, С33, 1А4, КА11, К2); СО83 (НВ15); СП84 (Р75, ОК6); Ы)85| (ШГ2, ЫК1, М1К7); ЫА\92 (р70); СП95 (АРО-1, РА5, ТЫРК5Р6); СО98 (4Р2, РКР-1, КЬ-388); СП99 (М1С2, Е2); СП100 (5ЕМА4П); СП102 (1САМ-2); СП108 (5ЕМА7А, антиген группы крови ,1\111); ЫЬ\119 (1РЫуК, 1РЫуКа); СП120а (ТЫРКф р55); СП120Ь (ГОРКЛ, р75, ТЫРК р80); СО121Ь (1Ь-1К типа 2); СП122 (ΙΤ2Κβ); СП124 (1Ь-4Ка); СП130 (др130); СП132 (общая уцепь, ГЬ-2Ку); ЫА\137 (4-1ВВ, 1ЬА); СП139; СП147 (басигин, ЕММРМЫ, М6, ОХ47); СП150 (5ЬАМ, 1РО-3); СО162 (Р5ОЬ-1); СП164 (МОС-24, МИС-24); СИ166 (ЛЬСАМ, КО-САМ, 5С-1, ВЕЫ, ИМОКА5Р); СИ167а (ΌΌΚ1, 1ткЕ, сак); СП171 (Ь1СМА, МЬЕ); СИ1755 (сиалил-Тп (5-Тп)); СИ180 (КР105, В§р95, Ьу64); СИ184 (СХСК4, ЫРУ3К); СИ185 (СХСК5); СИ192 (ССК2); СИ196 (ССК6); СИ197 (ССК7 (был С1А\197)); С1А\197 (ССК7, ЕВ11, ВЬК2); СИ200 (ОХ2); СИ205 (ПЕС-205); ЫА\210 (СК); СП213а (СК); С1Ь\217 (СК); ЫЬ\218а (1Ь18Ка); ЫА\218Ь (ΙΤ18Κβ); СП220 (инсулин К); СП221 (1ОР1 К); СИ222 (М6Р-К, 1ОР11-К); СП224 (ООТ); СП225 (Ьеи13); СП226 (ПЫАМ-1, РТА1); СП227 (МИС1, РИМ, РЕМ, ЕМА); СП229 (Ьу9); СП230 (прионный белок (Ргр)); СП232 (УЕ5Р-К); СП245 (р220/240); СП247 (зета-цепь СИ3); С.П261 (ТКМЬ-Кб, суперсемейство ТЫР-К, член 10а); С.П262 (ТКА1Ь-К2, суперсемейство ТЫР-К, член 10Ь); С.П263 (ТКАЮ-КЗ, суперсемейство ТЫР-К, член 10с); СЭ264 (ТКМЬ-КД, суперсемейство ТЫР-К, член 106); С.П265 (ТКАИСЕ-К, суперсемейство ТЫР-К, член 11а); С.П267 (ТАС1, суперсемейство ТЫР-К, член 13В); С.П268 (ВАРРК, суперсемейство ТЫР-К, член 13С); С.П269 (ВСМА, суперсемейство ТЫР-К, член 16); С.П275 (В7Н2, 1СО8Ь); СЭ277 (ВТ3.1.семейство В7: бутирофилин 3); СИ295 (ЬЕРК); СП298 (АТР1В3 β3-субъединица Ыа/К-АТФазы); СП300а (СМКР-35Н); СП300с (СМКР35А); СИ305 (ЬА1К1); СП307 (1КТА2); СП315 (СИ9Р1); СП316 (Е№12); СП317 (В5Т2); СП319 (СКАСС, 5ЬАМР7); СП321 (1АМ1); СП322 (1АМ2); СИ^327 (сиглек-6, СП33Ь); СП68 (др 100, макросиалин); СХСК5; УЪА-4; МНС II класса; поверхностный 1дМ; поверхностный Ι§Ό; АРКЬ и/или ВАРР-К; где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия. Примеры маркеров включают такие, которые представлены в других местах данного документа.
В некоторых вариантах осуществления нацеливание на В-клетки может быть выполнено с помощью любой нацеливающей части, которая специфически связывается с любым объектом (например, белком, липидом, углеводом, малой молекулой и т.д.), который заметно экспрессирован и/или представлен на В-клетках при активации (т.е. маркер активированных В-клеток). Типичные маркеры активированных В-клеток включают, но без ограничения, СП1а (К4, Т6, НТА-1); СИ1Ь (К1); СЭ155 (сиалил-Льюис Х); СП15и (3'-сульфо-Льюис Х); СЭ155И (6-сульфосиалил-Льюис Х); СЭ30 (Вег-Н2, КЬ1); С.П69 (А^, ЕА 1, МЬК3, др34/28, УЕА); СП70 (К1-24, СП27 лиганд); СП80 (В7, В7-1, ВВ1); СП86 (В7-2/В70); СП97 (ВЬКПП/Р12); С.П125 (Τ-τΡα); С.П126 (ΤΑΡα); СЭ138 (синдекан-1, гепарансульфат-протеогликан); СО152 (СТЬА-4); СЭ252 (ОХ40Ь, суперсемейство ТЫР (лиганд), член 4); С.П253 (ТКАЮ суперсемейство ТЫР (лиганд), член 10); СЭ279 (РЮ1); С.П289 (ТЬК9, То11-подобный рецептор 9) и СЭ312 (ЕМК2); где названия, указанные в круглых скобках, представляют собой альтернативные названия. Примеры маркеров включают такие, которые предусмотрены в других местах данного документа.
А(высв.)% определяется как вес антигена, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίΐτο при рН 4,5 в течение I ч, деленный на сумму веса антигена, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение
- 8 028288 ΐ ч, плюс вес антигена, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение ΐ ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей. В данном документе ί определяется как 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 18, 24, 30, 36, 42 или 48 ч. В предпочтительных вариантах осуществления ί равно 12, 24 или 48 ч.
В-клеточный антиген означает любой антиген, который встречается в природе или может быть сконструирован для того, чтобы узнаваться В-клеткой, и запускает (естественным образом или будучи сконструированным, как известно в области техники) иммунный ответ у В-клетки (например, антиген, который специфически распознается В-клеточным рецептором на В-клетке). В некоторых вариантах осуществления антиген, являющийся Т-клеточным антигеном, также является В-клеточным антигеном. В других вариантах осуществления Т-клеточный антиген также не является В-клеточным антигеном. Вклеточные антигены включают, но без ограничения, белки, пептиды, малые молекулы и углеводы. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является небелковым антигеном (т.е. не является белковым или пептидным антигеном). В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является углеводом, связанным с инфекционным агентом. В некоторых вариантах осуществления Вклеточный антиген является гликопротеином или гликопептидом, связанным с инфекционным агентом. Инфекционный агент может быть бактерией, вирусом, грибом, простейшим, паразитом или прионом. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является слабоиммуногенным антигеном. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является злоупотребляемым веществом или его частью. В некоторых вариантах осуществления В-клеточный антиген является вызывающим привыкание веществом или его частью. Вызывающие привыкание вещества включают, но без ограничения, никотин, наркотическое средство, средство от кашля, транквилизатор и седативное средство. В некоторых вариантах осуществления В-клеточным антигеном является токсин, например, токсин из химического оружия или естественных источников, или загрязняющее вещество. В-клеточный антиген также может быть средством, вредным для окружающей среды. В других вариантах осуществления В-клеточный антиген является аллоантигеном, аллергеном, контактным сенсибилизирующим веществом, антигеном дегенеративного заболевания, гаптеном, антигеном инфекционного заболевания, раковым антигеном, антигеном атопического заболевания, вызывающим привыкание веществом, ксеноантигеном или ферментом заболевания обмена веществ или продуктом данного фермента.
Биоразлагаемый полимер означает полимер, который распадается с течением времени при введении в организм субъекта. Биоразлагаемый полимер включает, но без ограничения, сложные полиэфиры, поликарбонаты, поликетали или полиамиды. Такие полимеры могут включать поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), сополимер(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон. В некоторых вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает блок-сополимер простого полиэфира, например, поли(этиленгликоля) и сложного полиэфира, поликарбоната или полиамида, или другой биоразлагаемый полимер. В вариантах осуществления биоразлагаемый полимер включает блок-сополимер поли(этиленгликоля) и поли(молочной кислоты), поли(гликолевой кислоты), блок-сополимера(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактона. В некоторых вариантах осуществления, однако, биоразлагаемый полимер не включает полиэфир, такой как поли(этиленгликоль), или состоит только из полиэфира. В целом, для применения в составе синтетического наноносителя биоразлагаемый полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25°С. Биоразлагаемый полимер в вариантах осуществления имеет средневесовой молекулярный вес в диапазоне от приблизительно 800 до приблизительно 50000 Да, который определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В некоторых вариантах осуществления средневесовой молекулярный вес составляет от приблизительно 800 до приблизительно 10000 Да, предпочтительно от 800 до 10000 Да, который определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В других вариантах осуществления средневесовой молекулярный вес составляет от 1000 до 10000 Да, что определяют с помощью гель-проникающей хроматографии. В варианте осуществления биоразлагаемый полимер не включает поликеталь или его элементарное звено.
Связывают, или связанный, или связывает (и подобное) означает присоединенный к или содержащийся в синтетическом наноносителе. В некоторых вариантах осуществления связывание является ковалентным. В некоторых вариантах осуществления ковалентное связывание опосредовано одним или несколькими линкерами. В некоторых вариантах осуществления связывание не является ковалентным. В некоторых вариантах осуществления не ковалентное связывание опосредовано взаимодействиями зарядов, аффинными взаимодействиями, координацией металлов, физической адсорбцией, взаимодействиями типа хозяин-гость, гидрофобными взаимодействиями, взаимодействиями ТТ укладки, взаимодействиями водородных связей, взаимодействиями ван-дер-Ваальса, магнитными взаимодействиями, электростатическими взаимодействиями, диполь-дипольными взаимодействиями и/или их комбинациями. В вариантах осуществления связывание может появляться в контексте инкапсуляции в синтетические наноносители с использованием традиционных методик. Любое из вышеупомянутых связываний может быть организовано с нахождением на поверхности или внутри синтетического наноносителя по данному изобретению.
Происходящий от означает адаптированный или модифицированный по сравнению с исходным
- 9 028288 источником. Например, в качестве неограничивающего примера, пептидный антиген, происходящий от инфекционного штамма, может иметь несколько искусственных аминокислотных остатков, которые замещают естественные аминокислотные остатки, обнаруживаемые в исходном антигене, который обнаруживается у инфекционного штамма. Адаптации или модификации могут осуществляться по ряду причин, включая, но без ограничения, повышенную специфичность, более легкий процессинг антигена или повышенная безопасность.
Лекарственная форма означает лекарство в среде, транспортере, носителе или устройстве, пригодном для введения субъекту.
Эффективное количество композиции по данному изобретению представляет собой количество, эффективное для определенной цели. Например, если эффективное количество предназначено для терапевтической цели, то количество является эффективным для лечения, ослабления, улучшения, облегчения, замедления начала, ингибирования развития, уменьшения тяжести и/или уменьшения частоты одного или нескольких симптомов или признаков заболевания, расстройства и/или состояния, приведенных в данном документе.
Инкапсулировать означает заключать в синтетическом наноносителе, предпочтительно полностью заключать в синтетическом наноносителе. Большая часть или все вещество, которое инкапсулируется, не подвергается воздействию локального окружения, внешнего по отношению к синтетическому наноносителю. Инкапсуляция отличается от абсорбции, которая размещает большую часть или все вещество на поверхности синтетического наноносителя и позволяет веществу подвергаться воздействию локального окружения, внешнего по отношению к синтетическому наноносителю.
Проявляет рН-чувствительную диссоциацию означает, что связь между двумя частицами, такими как иммуномодулирующее средство или антиген и синтетический наноноситель, или иммуномодулирующее средство, или связывающая антиген часть, соответственно, значительно ослабляется или устраняется путем изменения рН среды. В вариантах осуществления соответствующие рН-чувствительные диссоциации могут удовлетворять любому из приведенных в данном документе соотношений. В целом, связь между иммуномодулирующим средством и синтетическим наноносителем значительнее ослабляется или устраняется при рН 4,5 по сравнению со связью между антигеном и синтетическим наноносителем. соотношения, которые определяют диссоциацию иммуномодулирующего средства и антигена, приведены в других частях данного документа.
ΙΑ (высв.)% определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение ί ч, деленный на сумму веса иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение ί ч, плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетическом наноносителе при воздействии на синтетический наноноситель водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение ί ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее среди образцов синтетических наноносителей. В данном документе ί определяется как 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 18, 24, 30, 36, 42 или 48 ч. В предпочтительных вариантах осуществления ί равно 12, 24 или 48 ч.
Иммуномодулирующее средство означает средство, которое модулирует иммунный ответ. Модулировать, как используется в данном документе, относится к индуцированию, усилению, стимуляции или направлению иммунного ответа. Подобные средства включают адъюванты, которые стимулируют (или поддерживают) иммунный ответ на антиген, но не являются антигеном или производным антигена. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство находится на поверхности синтетического наноносителя и/или заключено в синтетический наноноситель. В вариантах осуществления иммуномодулирующее средство связано с синтетическим наноносителем через полимер или его элементарное звено.
В некоторых вариантах осуществления все иммуномодулирующие средства синтетического наноносителя идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит ряд различных типов иммуномодулирующих средств. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит множество отдельных иммуномодулирующих средств, все из которых идентичны друг другу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит строго один тип иммуномодулирующего средства. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит строго два различных типа иммуномодулирующих средств. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель содержит больше двух различных типов иммуномодулирующих средств.
Связывающая иммуномодулирующее средство часть представляет собой любую часть, посредством которой иммуномодулирующее средство связывается с синтетическим наноносителем. Такие части включают ковалентные связи, такие как амидная связь или сложноэфирная связь, а также отдельные молекулы, которые связывают (ковалентно или не ковалентно) иммуномодулирующее средство с синтетическим наноносителем. Такие молекулы включают линкеры или полимеры или их элементарное звено. Например, связывающая иммуномодулирующее средство часть может включать загруженный полимер, с которым электростатически связывается иммуномодулирующее средство (например, иммуностимулирующая нуклеиновая кислота). В качестве другого примера связывающая иммуномодулирующее средст- 10 028288 во часть может включать полимер или его элементарное звено, с которым ковалентно связывается иммуномодулирующее средство. В некоторых вариантах осуществления часть включает сложный полиэфир. В других вариантах осуществления часть включает поли(этиленгликоль), поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), блок-сополимер(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон. Часть также может включать элементарное звено из любого из вышеупомянутых полимеров, такое как лактид или гликолид.
Инфекционный агент относится к любому агенту, который происходит от бактерии, гриба, вируса, простейшего или паразита. В некоторых вариантах осуществления вирус представляет собой поксвирус, вирус оспы человека, вирус Эбола, вирус, вызывающий марбургскую болезнь, вирус лихорадки Денге, вирус гриппа, вирус парагриппа, респираторно-синцитиальный вирус, вирус кори, вирус иммунодефицита человека, вирус папилломы человека, вирус ветряной оспы, вирус простого герпеса, цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барра, вирус Джона Каннингема, рабдовирус, ротавирус, риновирус, аденовирус, папилломавирус, парвовирус, пикорнавирус, полиовирус, вирус, который вызывает эпидемический паратит, вирус, который вызывает бешенство, реовирус, вирус краснухи, тогавирус, ортомиксовирус, ретровирус, гепаднавирус, вирус Коксаки, вирус энцефалита лошадей, вирус японского энцефалита, вирус желтой лихорадки, вирус лихорадки долины Рифт, вирус гепатита А, вирус гепатита В, вирус гепатита С, вирус гепатита Ό или вирус гепатита Е.
Максимальный размер синтетического наноносителя означает самый большой размер наноносителя, измеренный вдоль любой оси синтетического наноносителя. Минимальный размер синтетического наноносителя означает самый маленький размер синтетического наноносителя, измеренный вдоль любой оси синтетического наноносителя. Например, для сфероидального синтетического наноносителя максимальный и минимальный размер синтетического наноносителя были бы, по существу, идентичными и являлись бы величиной его диаметра. Подобным образом, для кубического синтетического наноносителя минимальный размер синтетического наноносителя был бы наименьшим из его высоты, ширины или длины, а максимальный размер синтетического наноносителя был бы наибольшим из его высоты, ширины или длины. В варианте осуществления минимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце, основываясь на общем количестве синтетических наноносителей в образце, составляет больше 100 нм. В варианте осуществления максимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце от общего количества синтетических наноносителей в образце равен или меньше 5 мкм. Предпочтительно, минимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце от общего количества синтетических наноносителей в образце равен или больше 110 нм, более предпочтительно равен или больше 120 нм, более предпочтительно равен или больше 130 нм и еще более предпочтительно равен или больше 150 нм. Предпочтительно, максимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце от общего количества синтетических наноносителей в образце, равен или меньше 3 мкм, более предпочтительно равен или меньше 2 мкм, более предпочтительно равен или меньше 1 мкм, более предпочтительно равен или меньше 800 нм, более предпочтительно равен или меньше 600 нм и еще более предпочтительно равен или меньше 500 нм. В предпочтительных вариантах осуществления максимальный размер по меньшей мере 75%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90% синтетических наноносителей в образце от общего количества синтетических наноносителей в образце равен или больше 100 нм, более предпочтительно равен или больше 120 нм, более предпочтительно равен или больше 130 нм, более предпочтительно равен или больше 140 нм и еще более предпочтительно равен или больше 150 нм. Измерение размеров синтетического наноносителя проводится суспендированием синтетических наноносителей в жидкой (обычно водной) среде с применением динамического рассеивания света (например, с использованием прибора ВтоокЬауеи 2е1аРАЕ8).
Полученный означает взятый без адаптации или модификации из исходного источника. Например, в вариантах осуществления антигены, полученные из источника, могут включать исходную последовательность аминокислотных остатков, обнаруженную в этом источнике. В других вариантах осуществления, например, антигены, полученные из источника, могут включать исходную молекулярную структуру, обнаруженную в этом источнике.
Фармацевтически приемлемый эксципиент означает фармакологически неактивное вещество, добавленное к композиции по данному изобретению для дальнейшего облегчения введения данной композиции. Примеры, без ограничения, фармацевтически приемлемых наполнителей включают карбонат кальция, фосфат кальция, различные разбавители, различные сахара и типы крахмала, производные целлюлозы, желатин, растительные масла и полиэтиленгликоли.
Слабоиммуногенный антиген относится к антигену, который не запускает вообще или запускает на удовлетворительном уровне желательный иммунный ответ. Применяемое в данном документе выражение удовлетворительный относится к способности вызывать выявляемый или защитный иммунный ответ при введении в композиции, которая не задействует описываемый в данном документе наноноси- 11 028288 тель, например свободный антиген, смешанный с адъювантом в отсутствии наноносителя. В некоторых вариантах осуществления желаемый иммунный ответ должен лечить или предупреждать заболевание или состояние. В определенных вариантах осуществления желаемый иммунный ответ должен ослаблять один или несколько симптомов заболевания или состояния. Слабоиммуногенные антигены включают, но без ограничения, малые молекулы и углеводороды.
Скорость высвобождения означает скорость, с которой связанное иммуномодулирующее средство или антиген выходит из частицы в окружающую среду в тесте высвобождения ίη νίίτο. Сначала получается синтетический наноноситель для тестирования высвобождения посредством размещения его в соответствующей среде высвобождения ίη νίίτο. Это обычно осуществляется посредством замены буфера после центрифугирования с осаждением синтетического наноносителя и воссоздания синтетических наноносителей в мягких условиях. Данный анализ начинают путем размещения образца при 37°С в соответствующем приборе с контролируемой температурой. В различные моменты времени забирается образец. В целом, связывание антигена с синтетическим наноносителем посредством связывающей антиген части является более стабильным при физиологическом рН (например, рН 4,5), чем связывание иммуномодулирующего средства с синтетическим наноносителем посредством связывающей иммуномодулирующее средство части. В вариантах осуществления связывание антигена с синтетическим наноносителем является менее рН-чувствительным, чем связывание иммуномодулирующего средства с синтетическим наноносителем. В вариантах осуществления стабильность связывания антигена с синтетическим наноносителем определяется посредством измерения количества антигена, высвобождаемого из синтетического наноносителя. В вариантах осуществления количество антигена, высвобождаемого из синтетического наноносителя, значительно не отличается при рН 4,5 от высвобождаемого при рН 7,4. В вариантах осуществления количество антигена, высвобождаемого из синтетического наноносителя при рН 4,5, меньше, чем количество иммуномодулирующего средства, высвобождаемого из синтетического наноносителя. В вариантах осуществления количество высвобождаемого антигена не является выявляемым при рН 7,4 или 4,5.
Синтетические наноносители отделяются от среды высвобождения путем центрифугирования с осаждением синтетических наноносителей. Среда высвобождения анализируется на предмет иммуномодулирующего средства или антигена, которые были диспергированы из синтетических наноносителей. Иммуномодулирующее средство или антиген измеряется с помощью ВЭЖХ для определения содержания и качества иммуномодулирующего средства или антигена. Осадок, содержащий оставшиеся захваченное иммуномодулирующее средство или антиген, растворяется в растворителях или гидролизуется основанием с освобождением захваченного иммуномодулирующего средства или антигена из синтетических наноносителей. Затем остаток, содержащий иммуномодулирующее средство или антиген, также измеряется с помощью ВЭЖХ для определения содержания и качества иммуномодулирующего средства или антигена, которые не высвободились на данный момент времени.
Равновесие масс ограничивается иммуномодулирующим средством или антигеном, которые были высвобождены в среду высвобождения, и тем, что остается в синтетических наноносителях. Данные представлены в виде высвобожденной фракции или высвобожденного чистого веса, представленного в микрограммах, высвобожденных за период времени.
Малая молекула в данной области техники следует понимать как органическая молекула, которая по размеру меньше приблизительно 2000 г/моль. В некоторых вариантах осуществления малые молекулы меньше приблизительно 1500 г/моль или меньше приблизительно 1000 г/моль. В некоторых вариантах осуществления малые молекулы меньше приблизительно 800 г/моль или меньше приблизительно 500 г/моль. В некоторых вариантах осуществления малые молекулы не являются полимерными и/или олигомерными. В некоторых вариантах осуществления малые молекулы не являются белками, пептидами или аминокислотами. В некоторых вариантах осуществления малые молекулы не являются нуклеиновыми кислотами или нуклеотидами. В некоторых вариантах осуществления малые молекулы не являются сахаридами или полисахаридами.
Субъект означает животное, включая млекопитающих, таких как человек и приматы; птиц; животных домашнего хозяйства или фермы, таких как кошки, собаки, овцы, козы, крупный рогатый скот, лошади и свиньи; лабораторных животных, таких как мыши, крысы и морские свинки, рыбу и т.п.
Синтетический наноноситель(наноносители) означает дискретный объект, который не встречается в природе, и который обладает по меньшей мере одним размером, значение которого меньше или равно 5 мкм. Наночастицы альбумина специально включены в качестве синтетических наноносителей.
Синтетические наноносители включают полимерные наночастицы. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут содержать одну или несколько полимерных матриц. Синтетические наноносители, однако, также могут включать прочие наноматериалы и могут быть, например, липидно-полимерными наночастицами. В некоторых вариантах осуществления полимерная матрица может быть окружена покрывающим слоем (например, липосома, липидный монослой, мицелла и т.д.). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель не является мицеллой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать ядро, включающее полимерную матрицу, окруженную липидным слоем (например, липидный бислой, липидный монослой и т.д.). В не- 12 028288 которых вариантах осуществления различные элементы синтетических наноносителей могут быть связаны с полимерной матрицей.
Синтетические наноносители могут содержать один или несколько липидов. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать липосому. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать липидный бислой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать липидный монослой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать мицеллу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может содержать неполимерное ядро (например, металлическую частицу, квантовую точку, керамическую частицу, костную частицу, вирусную частицу, белки, нуклеиновые кислоты, углеводы и т.д.), окруженное липидным слоем (например, липидным бислоем, липидным монослоем и т.д.).
Синтетические наноносители могут включать наночастицы на основе липидов, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболлы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе пептида или белка (такие, как наночастицы альбумина). Синтетические наноносители могут иметь ряд различных форм, включая, но без ограничения, сфероидальную, кубическую, пирамидальную, вытянутую, цилиндрическую, тороидальную и т.п. Синтетические наноносители согласно данному изобретению имеют одну или несколько поверхностей. Примеры синтетических наноносителей, которые могут быть адаптированы для использования в практическом применении данного изобретения, включают: (1) биоразлагаемые наночастицы, раскрытые в патенте США 5543158, Оте£ с1 а1., (2) полимерные наночастицы из опубликованной заявки на патент США 20060002852, 5>а11/тап е1 а1., (3) сконструированные литографическим способом наночастицы из опубликованной заявки на патент США 20090028910, ОеЕптопе е1 а1., (4) раскрытие νΟ 2009/051837, νοη Αηббаи е1 а1., или (5) наночастицы, раскрытые в опубликованной заявке на патент США 2008/0145441, Реиабек е! а1.
Синтетические наноносители согласно данному изобретению, которые имеют минимальный размер, равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не имеют поверхности с гидроксильными группами, которые активируют комплемент, или альтернативно имеют поверхность, которая состоит в основном из частей, не являющихся гидроксильными группами, которые активируют комплемент. В предпочтительном варианте осуществления синтетические наноносители согласно данному изобретению, имеющие минимальный размер, равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не имеют поверхность, которая, по сути, активирует комплемент, или альтернативно имеют поверхность, которая состоит в основном из частей, которые по сути не активируют комплемент. В более предпочтительном варианте осуществления синтетические наноносители согласно данному изобретению, имеющие минимальный размер, равный или меньше приблизительно 100 нм, предпочтительно равный или меньше 100 нм, не имеют поверхность, которая активирует комплемент, или альтернативно имеют поверхность, которая состоит в основном из частей, которые не активируют комплемент. В вариантах осуществления синтетические наноносители могут иметь соотношение сторон более 1:1, 1:1,2, 1:1,5, 1:2, 1:3, 1:5, 1:7 или более 1:10.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители являются сферами или сфероидами. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители плоские или пластинчатые. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители являются кубами или кубическими. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители являются овалами или эллипсами. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители являются цилиндрами, конусами или пирамидами.
Часто желательно применение популяции синтетических наноносителей, которая является относительно однородной с точки зрения размера, формы и/или композиции так, чтобы каждый синтетический наноноситель имел сходные свойства. Например, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% синтетических наноносителей могут иметь минимальный размер или максимальный размер, который попадает в пределы 5, 10 или 20% среднего диаметра или среднего размера. В некоторых вариантах осуществления популяция синтетических наноносителей может быть гетерогенной по отношению к размеру, форме и/или композиции.
Синтетические наноносители могут быть сплошными или полыми и могут содержать один или несколько слоев. В некоторых вариантах осуществления каждый слой имеет уникальную композицию и уникальные свойства по отношению к другому слою (слоям). В качестве одного примера, синтетические наноносители могут иметь структуру ядро/оболочка, в которой ядро является одним слоем (например, полимерное ядро), а оболочка является вторым слоем (например, липидный бислой или монослой). Синтетические наноносители могут включать несколько разных слоев.
Т-клеточный антиген означает любой антиген, который распознается и инициирует иммунный ответ в Т-клетках (например, антиген, который специфически распознается Т-клеточным рецептором на Т-клетках или клетке ΝΚΤ посредством презентации антигена или его части, которые связаны с молекулой класса I или класса II основного комплекса гистосовместимости (МНС) или связаны с С.П1комплексом). В некоторых вариантах осуществления антиген, являющийся Т-клеточным антигеном,
- 13 028288 также является В-клеточным антигеном. В других вариантах осуществления Т-клеточный антиген также не является В-клеточным антигеном. Т-клеточные антигены обычно являются белками или пептидами. Т-клеточные антигены могут быть антигенами, которые стимулируют ответ СЭ8+ Т-клеток, ответ СЭ4+ Т-клеток или оба. Т-клеточные антигены, следовательно, в некоторых вариантах осуществления могут эффективно стимулировать оба типа ответов.
В некоторых вариантах осуществления Т-клеточный антиген является Т-хелперным антигеном, который является Т-клеточным антигеном, который может давать усиленный ответ на несвязанный Вклетками антиген благодаря стимуляции помощи Т-клеток. В вариантах осуществления Т-хелперный антиген может содержать один или несколько пептидов, происходящих от столбнячного токсина, вируса Эпштейна-Барра, вируса гриппа, респираторно-синцитиального вируса, вируса кори, вируса, вызывающего эпидемический паротит, вируса краснухи, цитомегаловируса, аденовируса, дифтерийного анатоксина или ΡΆΌΚΕ-пептида. В других вариантах осуществления Т-хелперный антиген может включать один или несколько липидов или гликолипидов, включая, но без ограничения, α-галактозилцерамид (αОа1Сег), гликосфинголипиды, связанные по α-положению (из БрЫидошоиак 8рр.), галактозилдиацилглицеролы (из ВоггеЬа ЪигдДогГеп), липофосфогликан (из Ье18Ъташа άοηοναηί) и фосфатидилинозитола тетраманнозид (ΡΙΜ4) (из МусоЬасЮпит 1ергае). Дополнительные липиды и/или гликолипиды, пригодные в качестве Т-хелперных антигенов, могут быть найдены у V. СегииДо1о е1 а1., Нагие88ш§ шуапай ΝΚΤ се118 ίη уасстаОоп 81га1еще8. №Лиге Кеу. 1ттип., 9:28-38 (2009). В вариантах осуществления СЭ4+ Тклеточные антигены могут быть производными СЭ4+ Т-клеточного антигена, полученного из источника, например, природного источника. В таких вариантах осуществления последовательности СЭ4+ Тклеточных антигенов, такие как те пептиды, которые связываются с МНС II, могут быть по меньшей мере на 70, 80, 90 или 95% идентичны антигену, полученному из этого источника. В вариантах осуществления Т-клеточный антиген, предпочтительно Т-хелперный антиген, может быть связанным или несвязанным с синтетическим наноносителем.
Его элементарное звено относится к мономерному элементарному звену полимера, при этом полимер в целом является составленным из серий связанных мономеров.
Вакцина означает композицию вещества, которая улучшает иммунный ответ на конкретный патоген или заболевание. Вакцина обычно содержит факторы, которые стимулируют иммунную систему субъекта для узнавания специфического антигена как чужого и его устранения из организма субъекта. Вакцина также создает иммунологическую память, поэтому антиген будет быстро узнаваться, и на него будет быстро дан ответ, если человек подвергнется вторичному заражению. Вакцины могут быть профилактическими (например, для предупреждения будущей инфекции каким-либо патогеном) или терапевтическими (например, вакцина против опухолеспецифического антигена для лечения рака). Вакцины по данному изобретению могут включать одно или несколько из представленных в данном документе синтетических наноносителей или композиций.
Способы создания соединений, конъюгатов или синтетических наноносителей по изобретению
Иммуномодулирующее средство и антиген могут быть связаны с синтетическим наноносителем любым способом так, чтобы диссоциация иммуномодулирующего средства и антигена от синтетического наноносителя удовлетворяла диссоциативному соотношению, приведенному в данном документе. Способы определения того, удовлетворяет ли или нет диссоциативное соотношение, приведены выше и в примерах.
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство и/или антиген могут быть связаны (например, ковалентно) с синтетическим наноносителем посредством связывающей иммуномодулирующее средство части или связывающей антиген части соответственно. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель состоит из полимеров, таких как биоразлагаемые полимеры (например, низкомолекулярные биоразлагаемые полимеры), а иммуномодулирующее средство и/или антиген связаны посредством связывающей иммуномодулирующее средство части или связывающей антиген части, соответственно, с полимером. Способы связывания иммуномодулирующих средств и антигенов с полимерами с образованием синтетических наноносителей по данному изобретению приведены ниже, а также в других частях данного документа, включая примеры.
Связывающие антиген части могут быть синтезированы с помощью методик для снижения их склонности к рН-чувствительной диссоциации. Такие методики могут включать устранение или уменьшение числа химических связей, присутствующих в связывающих антиген частях, которые чувствительны к разрыву вследствие рН-эффектов среды. Менее чувствительные связи вместо этого могут замещаться. Другие методики могут включать применение стерически затрудненных химических связей, которые чувствительны к кислотному или основному распаду.
Способы синтеза стабильных в кислоте/основании связывающих частей включает клик-химию с образованием триазола посредством 1,3-диполярной циклизации алкина с азидом, циклоприсоединение Дильса-Адлера с образованием шестичленных гетероциклов, присоединение Майкла или открытие эпоксида тиольной группой с образованием связи сера-углерод, связи азот-углерод путем открытия эпоксида амином или восстановительного аминирования амина альдегидом или кетоном, образование мочевин и
- 14 028288 карбаматов посредством реакции амина с изоцианатами или цианатами, связи сера-сера путем окисления или открытия эпоксида амином. В вариантах осуществления реакционноспособная группа, такая как тиол, амин, алкин или азид, или двойная связь могут быть частью антигена. В вариантах осуществления такая реакционноспособная группа может быть частью, например, одной из аминокислот, такой как цистеин (тиол) или лизин (аминогруппа) или присоединенной к антигену с помощью пептидной или подобной химии.
Кроме того, антиген может содержаться в синтетическом наноносителе так, чтобы он был выставлен в окружающую среду после того, как будет так выставлено иммуномодулирующее средство. Например, синтетический наноноситель может состоять из двух или нескольких слоев, а антиген может быть связан с внутренним слоем, в то время как иммуномодулирующее средство может быть связано с внешним слоем. В качестве другого примера, иммуномодулирующее средство может быть связано с поверхностью синтетического наноносителя, в то время как антиген инкапсулирован в синтетический наноноситель.
В отличие от этого, части, связывающие иммуномодулирующее средство, могут быть синтезированы с помощью методик для увеличения их склонности к рН-чувствительной диссоциации. Такие методики могут включать включение или увеличение числа химических связей, присутствующих в связывающих антиген частях, которые чувствительны к разрыву вследствие рН-эффектов среды. Такие связи описаны более детально ниже.
Следующие способы или любой этап из приведенных способов приводятся в качестве примеров и могут быть осуществлены при любых подходящих условиях. В некоторых случаях реакция или любой этап приведенных способов могут быть осуществлены в присутствии растворителя или смеси растворителей. Неограничивающие примеры растворителей, которые могут быть пригодны для применения в данном изобретении, включают, но без ограничений, п-крезол, толуол, ксилол, мезителен, диэтиловый эфир, гликоль, петролейный эфир, гексан, циклогексан, пентан, дихлорметан (или метиленхлорид), хлороформ, диоксан, тетрагидрофуран (ТНР), диметилсульфоксид (ΌΜδΘ), диметилформамид (ΌΜΡ), этилацетат (ЕЮАс), триэтиламин, ацетонитрил, метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ), Ν-метилпиррилидон (ΝΜΡ), диметилацетамид (ΌΜΑΟ), изопропанол (1РА) их смеси или подобное. В некоторых случаях растворитель выбран из группы, состоящей из этилацетата, метиленхлорида, ТНР, ΌΜΡ, ΝΜΡ, ЭМАС. ΌΜδΘ и толуола или их смесей.
Реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены при любой подходящей температуре. В некоторых случаях реакция или любой этап из приведенных способов осуществляют при приблизительно комнатной температуре (например, приблизительно 25°С, приблизительно 20°С, от приблизительно 20 до приблизительно 25°С и подобное). В некоторых случаях, однако, реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены при температуре ниже или выше комнатной температуры, например при приблизительно -20°С, при приблизительно -10°С, при приблизительно 0°С, при приблизительно 10°С, при приблизительно 30°С, приблизительно 40°С, приблизительно 50°С, приблизительно 60°С, приблизительно 70°С, приблизительно 80°С, приблизительно 90°С, приблизительно 100°С, приблизительно 120°С, приблизительно 140°С, приблизительно 150°С или выше. В конкретных вариантах осуществления реакцию или любой этап из приведенных способов проводят при температурах от 0 до 120°С. В некоторых вариантах осуществления реакция или любой этап из приведенных способов могут быть осуществлены при более чем одной температуре (например, реагенты, добавляемые при первой температуре, и реакционную смесь, перемешиваемую при второй, где переход от первой температуры ко второй температуре может быть постепенным или быстрым).
Реакции или любому этапу из приведенных способов может быть позволено проходить в течение любого подходящего периода времени. В некоторых случаях реакции или любому этапу из приведенных способов позволяют проходить в течение приблизительно 10 мин, приблизительно 20 мин, приблизительно 30 мин, приблизительно 40 мин, приблизительно 50 мин, приблизительно 1 ч, приблизительно 2 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 8 ч, приблизительно 12 ч, приблизительно 16 ч, приблизительно 24 часа, приблизительно 2 суток, приблизительно 3 суток, приблизительно 4 суток или дольше. В некоторых случаях аликвоты реакционной смеси могут быть собраны и проанализированы в промежуточное время для определения хода реакции или любого этапа из приведенных способов. В некоторых вариантах осуществления реакция или любой этап из приведенных способов может осуществляться в инертной атмосфере в безводных условиях (например, в атмосфере азота или аргона, в безводных растворителях и т.д.).
Продукты реакции и/или промежуточные продукты могут быть выделены (например, посредством дистилляции, колоночной хроматографии, экстракции, осаждения и т.д.) и/или проанализировать (например, газожидкостной хроматографией, высокоэффективной жидкостной хроматографией, ядерной магнитно-резонансной спектроскопией и т.д.) с использованием общеизвестных методик. В некоторых случаях синтетический наноноситель может быть проанализирован для определения загрузки иммуномодулирующего средства или антигена, например, с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Полимеры могут иметь любой подходящий молекулярный вес. Например, полимеры могут иметь
- 15 028288 низкий или высокий молекулярный вес. Неограничивающие значения молекулярного веса включают 100, 200, 300, 500, 750, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 10000 Да или более. В некоторых вариантах осуществления полимеры имеют средневесовой молекулярный вес от приблизительно 800 до приблизительно 10000 Да. В других вариантах осуществления любой из приведенных в данном документе полимеров имеет средневесовой молекулярный вес от приблизительно 800 до 10000 Да (например, 2000 Да). Молекулярный вес полимера может быть определен с помощью гельпроникающей хроматографии.
В некоторых вариантах осуществления полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25°С является биоразлагаемым или и тем, и другим. В других вариантах осуществления полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25°С, но растворимым при рН 4,5 и при 25°С. В еще других вариантах осуществления полимер является нерастворимым в воде при рН 7,4 и при 25°С, но растворимым при рН 4,5 и при 25°С и биоразлагаемым.
В некоторых вариантах осуществления полимер включает сложный полиэфир, поликарбонат, полиамид или простой полиэфир. В других вариантах осуществления полимер включает поли(этиленгликоль) (РЕС), поли(молочную кислоту), поли(гликолевую кислоту), блок-сополимер(молочной и гликолевой кислот) или поликапролактон. В некоторых вариантах осуществления предпочтительно, чтобы полимер был биоразлагаемым. Таким образом, в данных вариантах осуществления предпочтительно, что если полимер включает простой полиэфир, такой как поли(этиленгликоль) или его элементарное звено, то полимер включает блок-сополимер простого полиэфира и биоразлагаемого полимера с тем, чтобы полимер был биоразлагаемым. В других вариантах осуществления полимер сам по себе не включает простой полиэфир, такой как поли(этиленгликоль). В других вариантах осуществления полимер не включает лишь простой полиэфир, такой как поли(этиленгликоль).
Ниже в качестве примера приведены реакции, которые не подразумеваются как ограничивающие. Иммуномодулирующее средство со связывающей иммуномодулирующее средство частью согласно одной из приведенных в качестве примера реакций.
Способ 1.
Полимер (например, РЬА, РЬСА) или его элементарное звено с по меньшей мере одной кислотной концевой группой превращают в реакционноспособное ацилирующее средство, такое как ацилгалогенид, ацилимидазол, активный сложный эфир и т.д., с помощью активирующего реагента, обычно используемого при синтезе амидов.
В этом двухэтапном способе получаемый в результате активированный полимер или его элементарное звено (например, РЬА, РЬСА) выделяют и затем вводят в реакцию с иммуномодулирующим средством (например, К848) в присутствии основания с получением требуемого конъюгата (например, РЬА-К.848), например, как показано в следующей схеме:
Активирующие реагенты, которые могут быть использованы для превращения полимеров или их элементарных звеньев, таких как РЬА или РЬСА, в активированную ацилированную форму, включают, но без ограничений, циануровый фторид, Ν,Ν-тетраметилфторформамидингексафторфосфат (ТЕРН); ацилимидазолы, такие как карбонилдиимидазол (ΟΌΙ), ^№-карбонилбис(3-метилимидазол)трифлат (СВМ1Т); и активные сложные эфиры, такие как Ν-гидроксилсукцинимид (ΝΗδ или НО8и), в присутствии карбодиимида, такого как Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (ЭСС). ^этил-№-(3(диметиламино)пропил)карбодиимидгидрохлорид (ЕЭС) или Ν,Ν'-диизопропилкарбодиимид (Ю1С); Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбонат (ЭЗС); пентафторфенол в присутствии ЭСС, или ЕЭС, или Э1С; пентафторфенилтрифторацетат.
Активированный полимер или его элементарное звено могут быть выделены (например, посредством осаждения, экстракции и т.д.), и/или храниться в подходящих условиях (например, при низкой температуре в атмосфере аргона) после активации, или могут быть сразу использованы. Активированный полимер или его элементарное звено могут быть выделены в реакцию с иммуномодулирующим средством при любых подходящих условиях. В некоторых случаях реакцию осуществляют в присутствии основания и/или катализатора. Неограничивающие примеры оснований/катализаторов включают диизопропилэтиламин (Э1РЕА) и 4-диметиламинопиридин (ОМАР).
- 16 028288
Способ 2.
Полимер или его элементарное звено (например, РЬА, РЬОА, имеющие любой пригодный молекулярный вес) с кислотной концевой группой вступают в реакцию с иммуномодулирующим средством (например, К848) в присутствии активирующего или связывающего реагента, который превращает полимер или его элементарное звено (например, РЬА, РЬОА) в реакционноспособное ацилирующее средство ίη δίΐιι с получением требуемого конъюгата (например, РЬА-К848, РЬОА-К848)
Связующие вещества или активаторы включают, но без ограничений, активаторы, используемые в присутствии карбодиимида, такого как ЕЭС, или ЭСС. или Э1С. такого как 1-гидроксибензотриазол (ΗΟΒί), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (НОАГ), 3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазин (НОΌΙιόΙ), Ν-гидроксисукцинимид (ΝΗδ или НО8и), пентафторфенол (РРР); активаторы без карбодиимида: активаторы, используемые в присутствии карбодиимида, такого как ЕИС, или ЭСС, или И1С, такого как 1-гидроксибензотриазол (ΗΟΒί), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (НОАГ), 3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1, 2, 3-бензотриазин (НО-ЭЬЬГ), Ν-гидроксисукцинимид (ΝΗδ или ΗΟδιι), пентафторфенол (РРР); активаторы без карбодиимида: соли фосфония, такие как О-бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (ВОР), О-бензотриазол-1-илокситрис(пирролидин)фосфония гексафторфосфат (РуВОР), 7-азабензотриазол-1-илокситрис(пирролидин)фосфония гексафторфосфат (РуАОР); соли урония, такие как О-бензотриазол-1-илокситрис-1,1,3,3-тетраметилурония тетрафторборат (ТВТИ) и гексафторфосфат (НВТИ), О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат (НАТИ), О-(1,2-дигидро-2-оксо-1-пиридил)-1,1,3,3-тетраметилурония тетрафторборат (ТРТИ); галогенурониевые и галогенфосфониевые соли, такие как бис(тетраметилен)фторформамидиниевый гексафторфосфат (ВТРРН), бромтрис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (ВтоР), бромтрипирролидинфосфония гексафторфосфат (РуВгоР) и хлортрипирролидинфосфония гексафторфосфат (РуС^р); производные бензотриазина, такие как О-(3,4-дигидро-4-оксо-1,2,3-бензотриазин-3-ил)-кк№,№тетраметилурония тетрафторборат (ТИВТИ) и 3-(диэтилоксифосфорилокси)-1,2,3-бензотриазин-4(3Н)-он (ИЕРВТ). Неограничивающие примеры подходящих растворителей включают ΌΜΡ, ИСМ, толуол, этилацетат и т.д., которые описаны в данном документе.
Способ 3.
Иммуномодулирующие средства, такие как К848, также могут быть связаны с полимерами или их элементарными звеньями, которые заканчиваются гидроксильной группой. Такие полимеры или их элементарные звенья включают полиэтиленгликоль, полилактид, сополимер полилактида и гликолида, поликапролактон и другие подобные сложные полиэфиры или их элементарные звенья. В целом, реакция протекает следующим образом, где имид с общей структурой (IV) будет вступать в реакцию с концевым гидроксилом вышеупомянутых полимеров или их элементарных звеньев при помощи катализатора, используемого в реакциях полимеризации с раскрытием лактонового кольца. Получаемый в результате продукт реакции (II) связывает амид средства с полимером или его элементарным звеном посредством сложноэфирной связи. Соединения с формулами (IV) и (II) представляют собой следующее:
где К.1=Н, ОН, δΗ, ΝΗ2 или замещенный или незамещенный алкил, алкокси, алкилтио или алкиламино;
- 17 028288
Р2=Н. алкил или замещенный алкил; Υ=Ν или С; К3 отсутствует, если Υ=Ν; или представляет собой Н, алкил, замещенный алкил, или объединен с Рд с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены, если Υ=Ο; К4 представляет собой Н или замещенный или незамещенный алкил, алкокси, алкилтио или алкиламино, если не объединен с К3 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами пиридинового кольца, к которому они присоединены; или объединен с К3 с образованием углеродного кольца или гетероцикла с атомами углерода пиридинового кольца, к которому они присоединены; К5 представляет собой полимер или его элементарное звено; X представляет собой С, Ν, О или 8; каждый из Кб и К7 независимо представляет собой Н или замещен; и каждый из Кд, К.10, Кц и Κι2 независимо представляет собой Н, галоген, ОН, тио, ΝΗ2 или замещенный или незамещенный алкил, арил, гетероциклил, алкокси, арилокси, алкилтио, арилтио, алкиламино или ариламино.
Катализаторы включают, но без ограничений, фосфазиновые основания, 1,8-диазабициклоундец-7ен (ΟΒϋ), 1,4,7-триазабициклодецен (ΤΒΌ) и ^метил-1,4,7-триазабициклодецен (ΜΤΌΒ). В данной области техники известны и приводятся другие катализаторы, например, у КатЬег с1 а1., Огдапоса1а1уЬс Кш§-Оретп§ Ро1утег17аЬоп, СЬет. Кеу. 2007, 107, 58-13-5840. Неограничивающие примеры подходящих растворителей включают метиленхлорид, хлороформ и ТНР.
Конкретный пример реакции, осуществляемой по такому способу, показан ниже:
где К5-ОН содержит две гидроксильных группы (например, диол, НО-К5-ОН), каждая из которых функционализирована при помощи реакции с имидом, связанным с К848. В некоторых случаях НО-К5ОН представляет собой полидиол, такой как поли(гексаметилкарбонат)диол или поликапролактондиол.
В вариантах осуществления, в которых задействован полидиол, одна из групп диола может быть защищена защитной группой (например, ΐ-бутилоксикарбонил), таким образом полидиолом может быть соединение с формулой НО-К5-ОР, в которой Р является защитной группой. После реакции с иммуномодулирующим средством с образованием коньюгата иммуномодулирующее средство-К5-ОР, защитная группа может быть удалена, и может быть введена в реакцию вторая группа диола с любым подходящим реагентом (например, РЬСЛ, РЬЛ).
Способ 4.
Конъюгат (например, К848-РЬЛ) может быть образован посредством проводимой в одном сосуде полимеризации с раскрытием кольца иммуномодулирующего средства (например, К848) с полимером или его элементарным звеном (например, О/Ь-лактид) в присутствии катализатора, например, как показано в следующей схеме:
При одностадийной процедуре иммуномодулирующее средство и полимер или его элементарное звено может быть объединено в единую реакционную смесь, содержащую катализатор. Реакция может проходить при подходящей температуре (например, при приблизительно 150°С), а полученный в результате конъюгат может быть выделен с помощью общеизвестных методик. Неограничивающие примеры подходящих катализаторов включают ОМАР и этилгексаноат олова.
Способ 5.
Конъюгат может быть образован посредством двухстадийной полимеризации с раскрытием кольца иммуномодулирующего средства (например, К848) с одним или несколькими полимерами или их элементарными звеньями (например, О/Ь-лактид или гликолид) в присутствии катализатора, например, как показано в следующей схеме:
- 18 028288
Полимеры или их элементарные звенья могут быть сначала объединены и в некоторых случаях нагреты (например, до 135°С) с образованием раствора. В раствор, содержащий полимеры или их элементарные звенья, могут быть добавлены иммуномодулирующее средство с последующим добавлением катализатора (например, этилгексаноата олова). Полученный в результате конъюгат может быть выделен при помощи общеизвестных методик. Неограничивающие примеры подходящих катализаторов включают ΌΜΑΡ и этилгексаноат олова.
Иммуномодулирующие средства (или антигены) могут быть также инкапсулированы в наноносители. Наноносители, таким образом, могут быть из любого материала, который рН-чувствительный, при условии, что полученные по данному изобретению синтетические наноносители удовлетворяют приведенным в данном документе соотношениям диссоциаций. Такие синтетические наноносители хорошо известны в данной области техники и включают поликеталевые наноносители, рН-чувствительные липосомы, разбухающие под действием кислоты сшитые наночастицы, такие как в СгЪс! с1 а1., 1. Ат. СЬет. §ос. 2009, 131, 2469-2471, которые в своем изначальном состоянии являются гидрофобными, но при клеточной интернализации трансформируются в гидрофильную структуру (гидрогелевая частица), и полимерные наночастицы, такие как в диссертации Сгйе! под названием ЭеЬуегу о£ Рас1Ьа\е1 νία рНКехропчуе Ро1утепс ЫапорагЬскк £ог Ргеуепбоп о£ Ьипд Сапсег апб МекоШеЬота Кееиггепее, ОЫо δίаίе ишуегЩу. 2003. рН-чувствительные наноносители также включают такие, которые включают полимеры, которые растворяются при рН ниже 6, полимеры, которые разбухают при кислом рН. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители состоят не из поликеталевого материала. В другом варианте осуществления синтетические наноносители не являются мицеллами.
В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания ковалентно связаны с полимерной матрицей. В некоторых вариантах осуществления ковалентное соединение опосредовано линкером. В некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания нековалентно связаны с полимерной матрицей. Например, в некоторых вариантах осуществления иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания могут быть инкапсулированы внутри, окружить и/или диспергировать по полимерной матрице. Альтернативно или дополнительно, иммуномодулирующее средство, антиген и/или часть нацеливания могут быть связаны с полимерной матрицей гидрофобными взаимодействиями, взаимодействиями зарядов, силами Ванн-дер-Ваальса и т.д. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители включают одну или несколько полимерных матриц. В некоторых вариантах осуществления такая полимерная матрица может быть окружена покрывающим слоем (например, липосома, липидный монослой, мицелла и т.д.). В некоторых вариантах осуществления различные элементы синтетических наноносителей могут быть связаны с полимерной матрицей.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут необязательно содержать один или несколько липидов. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липосому. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липидный бислой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать липидный монослой. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать мицеллу. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать ядро, содержащее полимерную матрицу, окруженную липидным слоем (например, липидным бислоем, липидным монослоем и т.д.). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель может включать неполимерное ядро (например, металлическую частицу, квантовую точку, керамическую частицу, костную частицу, вирусную частицу, белки, нуклеиновые кислоты, углеводы и т.д.), окруженное липидным слоем (например, липидным бислоем, липидным монослоем и т.д.).
Широкое разнообразие полимеров и способов формирования полимерных матриц посредством этого являются общеизвестными. В основном, полимерная матрица содержит один или несколько полимеров. Полимеры могут быть природными или неприродными (синтетическими) полимерами. Полимеры могут быть гомополимерами или сополимерами, содержащими два или несколько мономеров. С точки зрения последовательности сополимеры могут быть статистическими, блок-сополимерами или состоять из комбинации статистических и блоковых последовательностей. Как правило, полимеры в соответствии с настоящим изобретением являются органическими полимерами.
Примеры полимеров, подходящих для применения в данном изобретении, включают без ограничения полиэтилены, поликарбонаты (например, поли(1,3-диоксан-2он)), полиангидриды (например, поли(себациновый ангидрид)), полигидроксикислоты (например, поли (β-гидроксиалканоат)), полипропилфумераты, поликапролактоны, полиамиды (например, поликапролактам), полиацетали, простые полиэфиры, сложные полиэфиры (например, полилактид, полигликолид), сложные полиэфиры ортокислот,
- 19 028288 полицианоакрилаты, поливиниловые спирты, полиуретаны, полифосфазены, полиакрилаты, полиметакрилаты, полимочевины, полистиролы, полиамины и полисахариды (например, хитозан).
В некоторых вариантах осуществления полимеры в соответствии с данным изобретением включают полимеры, которые были одобрены к применению для людей Управлением по делам пищевых продуктов и медикаментов США (ΡΌΛ). 21 С.Р.К § 177.2600, включая без ограничения сложные полиэфиры (например, полимолочной кислоты, сополимер полимолочной и полигликолевой кислот) поликапролактон, поливалеролактон, поли(1,3-диоксан-2он)); полиангидриды (например, поли(себациновый ангидрид)); простые полиэфиры (например, полиэтиленгликоль); полиуретаны; полиметакрилаты; полиакрилаты и полицианоакрилаты.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть гидрофильными. Например, полимеры могут содержать анионные группы (например, фосфатную группу, сульфатную группу, карбоксилатную группу); катионные группы (например, четвертичную аминогруппу); или полярные группы (например, гидроксильную группу, тиоловую группу, аминогруппу). В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель, содержащий гидрофильную полимерную матрицу, образует гидрофильное окружение внутри синтетического наноносителя. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть гидрофобными. В некоторых вариантах осуществления синтетический наноноситель, содержащий гидрофобную полимерную матрицу, образует гидрофобное окружение внутри синтетического наноносителя. Выбор гидрофильности или гидрофобности полимера может оказать влияние на характер материалов, которые заключены (например, связаны) в синтетическом наноносителе.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью одной или нескольких частей и/или функциональных групп. Различные части или функциональные группы могут быть использованы в соответствии с данным изобретением. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью РЕС, углеводов и/или ациклических полиацеталей, производных полисахаридов (ΡαρΕον, 2001, АС8 Зутрокшт Зспсх 786:301).
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть модифицированы с помощью липидных или жирно-кислотных групп. В некоторых вариантах осуществления жирно-кислотная группа может быть одной или несколькими из масляной, капроновой, каприловой, каприновой, лауриновой, миристиновой, пальмитиновой, стеариновой, арахидиновой, бегеновой или лигноцериновой кислот. В некоторых вариантах осуществления жирно-кислотная группа может быть одной или несколькими из пальмитолеиновой, олеиновой, вакценовой, линолевой, альфа-линоленовой, гамма-линоленовой, арахидоновой, гадолеиновой, арахидоновой, эйкозапентаеновой, докозагексаеновой или эруковой кислот.
В некоторых вариантах осуществления полимерами могут быть сложные полиэфиры, в том числе включая сополимеры, содержащие элементарные звенья молочной кислоты и гликолевой кислоты, такие как сополимер полимолочной кислоты и полигликолевой кислоты и сополимер полилактида и полигликолида, совместно именуемые здесь РЬСА; и гомополимерами, включающими элементарные звенья гликолевой кислоты, упомянутые в настоящем документе как РСА, и элементарные звенья молочной кислоты, такие как поли-Ь-молочная кислота, поли-Э-молочная кислота, поли-О,Ь-молочная кислота, поли-Ь-лактид, поли-Э-лактид и поли-О,Ь-лактид, совместно именуемые в данном описании РЬА. В некоторых вариантах осуществления образцы сложных полиэфиров включают, например, полигидроксикислоты; РЕС-сополимеры и сополимеры лактида и гликолида (например, сополимеры РЬА-РЕС, сополимеры РСА-РЕС, сополимеры РЬСА-РЕС и их производные). В некоторых вариантах осуществления сложные полиэфиры включают, например, полиангидриды, сложный полиэфир ортокислот, сополимеры сложного полиэфира ортокислот-РЕС, поли(капролактон), сополимеры поли(капролактон)-РЕС, полилизин, сополимеры полилизин-РЕС, поли(этиленимин), сополимеры поли(этиленимин)-РЕС, сополимер (Ь-лактида и Ь-лизина), сложный полиэфир серина, сложный полиэфир 4-гидрокси-Ь-пролина, поли[а-(4-аминобутил)-Ь-гликолевая кислота] и их производные.
В некоторых вариантах осуществления полимер может быть РЬСА. РЬСА является биосовместимым и биоразлагаемым сополимером молочной кислоты и гликолевой кислоты, и различные формы РЬСА характеризуются соотношением молочная кислота:гликолевая кислота. Молочная кислота может быть Ь-молочной кислотой, Ό-молочной кислотой или Ό,Ε-молочной кислотой. Скорость разложения РЬСА может быть регулирована путем изменения соотношения молочная кислота:гликолевая кислота. В некоторых вариантах осуществления РЬСА, который будет использоваться в соответствии с настоящим изобретением, характеризуется соотношением молочная кислота:гликолевая кислота приблизительно 85:15, приблизительно 75:25, приблизительно 60:40, приблизительно 50:50, приблизительно 40:60, приблизительно 25:75 или приблизительно 15:85.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть одним или несколькими акриловыми полимерами. В определенных вариантах осуществления акриловые полимеры включают, например, сополимеры акриловой кислоты и метакриловой кислоты, сополимеры метилметакрилата, этоксиэтилметакрилаты, цианоэтилметакрилат, сополимер аминоалкилметакрилата, поли(акриловую кислоту), поли(метакриловую кислоту), сополимер алкиламида метакриловой кислоты, поли(метилметакрилат), поли(метакриловой кислоты ангидрид), метилметакрилат, полиметакрилат, сополимер поли(метилметакрилата) , полиакриламид, сополимер аминоалкилметакрилата, сополимеры глицидилме- 20 028288 такрилата, полицианакрилаты и комбинации, включающие один или несколько из вышеприведенных полимеров. Акриловый полимер может включать полностью полимеризованные сополимеры сложных эфиров акриловой и метакриловой кислот с низким содержанием групп четвертичного аммония.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть катионными полимерами. В целом, катионные полимеры могут конденсировать и/или защищать отрицательно заряженные нити нуклеиновых кислот (например, ДНК, РНК или их производных). Аминосодержащие полимеры, такие как поли(лизин) (ΖαιιιΚΓ еΐ а1., 1998, А6у. Огид Ое1. Ксу., 30:97; и КаЬагюу еΐ а1. , 1995, Β^οсοη^идаΐе Сйет., 6:7), поли(этиленимин) (ΡΕΙ; Βοιΐ88ίΓеΐ а1., 1995, Ргос. Ν·ιΐ1. Асаб. δοΐ., И8А, 1995, 92:7297), и поли(амидоамин) дендримеры (Κιι1<ο\Υ5ΐ<;·ι-Ρ·;·ιΙ;·ι11ο еΐ а1., 1996, Ргос. Ναΐ1. Асаб. δα., И§А, 93:4897; Таид еΐ а1., 1996, Βίο^η|ида1е Сйет., 7:703; и НаегМег еΐ а1., 1993, Β^οсοη^идаΐе Сйет., 4:372) являются положительно заряженными при физиологических значениях рН, образуют ионные пары с нуклеиновыми кислотами и опосредуют трансфекцию в различных клеточных линиях.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть разлагаемыми полиэфирами, несущими катионные боковые цепи (РиШат еΐ а1. , 1999, Мас^οтο1еси1е8, 32:3658; Ваггега еΐ а1. , 1993, ί. Ат. Сйет. δοα, 115:11010; Κγοη еΐ а1., 1989, Мас^οтο1еси1е8, 22:3250; Вт еΐ а1., 1999, ί. Ат. Сйет. δο^, 121:5633; и ΖΙιοιι еΐ а1., 1990, Мастот-юВси^, 23:3399). Примеры таких полиэфиров включают сополимер (Ь-лактида и лизина) (Ваггега еΐ а1. , 1993, ί. Ат. Сйет. δο^, 115:11010), сложный полиэфир серина (ΖΙιοιι еΐ а1., 1990, Мастот-юВсШев, 23:3399), сложный полиэфир 4-гидрокси-Ь-пролина (РиШат еΐ а1., 1999, МасΓοιποΒαι^, 32:3658; и Вт еΐ а1., 1999, ί. Ат. Сйет. δο^, 121:5633), и сложный полиэфир 4-гидрокси-Ьпролина (РиШат еΐ а1., 1999, Мас^οтο1еси1е8, 32:3658; и Вт еΐ а1., 1999, ί. Ат. Сйет. δοα, 121:5633).
Свойства этих и других полимеров и способы их получения хорошо известны в данном уровне техники (см., например, патенты США №6123727, №5804178, №5770417, №5736372, №5716404, №6095148, №5837752, №5902599, №5696175, №5514378, №5512600, №5399665, №5019379, №5010167, №4806621, №4638045 и №4946929; \\ аид е1 а1., 2001, ί. Ат. Сйет. δοο., 123:9480; Ыт е1 а1., 2001, ί. Ат. Сйет. δοο., 123:2460; й-аидеи 2000, Асс. Сйет. Кее., 33:94; й-аидеи 1999, ί. ΟοηΐΓο1. Ке1еа8е, 62:7; и ийпсй еΐ а1. , 1999, Сйет. Рее., 99:3181). В целом, различные методы синтеза определенных подходящих полимеров описаны в СощАе Εηсус1οреб^а οΓ Ρο1уте^ δ^ι^ аиб Ρο1уте^^с Атте8 аиб Атпюшит δа1ΐ8, Еб. Ьу Сοеίйа18, Ре^апют Рге88, 1980; Рттар1е8 οΓ Ρο1уте^^ζаΐ^οη Ьу Об1ап, ίοΐιη \УПеу & δοη8, РоиПй Ебйющ 2004; С'опΐетрο^а^у Ρο1уте^ С’йепщЩу Ьу АПтоск еΐ а1., РтсШсе-НаИ, 1981; Оеттд еΐ а1., 1997, №Щ.1ге, 390:386; и в патентах США №6506577, 6632922, 6686446 и 6818732.
В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть линейными или разветвленными полимерами. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть дендримерами. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть в основном сшиты друг с другом. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть в основном свободны от сшивок. В некоторых вариантах осуществления полимеры могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, не подвергаясь этапу сшивания. Далее следует понимать, что соединения по данному изобретению и синтетические наноносители могут включать в себя блок-сополимеры, привитые сополимеры, сочетания, смеси и/или аддукты любого из вышеуказанных и других полимеров. Специалистам в данной области техники будет понятно, что полимеры, перечисленные в данном документе, представляют собой примерный, не являющийся исчерпывающим, список полимеров, которые могут быть применены в соответствии с данным изобретением.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут включать металлические частицы, квантовые точки, керамические частицы и т.д.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут необязательно содержать один или более амфифильных объектов. В некоторых вариантах осуществления амфифильный объект может способствовать получению синтетических наноносителей с повышенной стабильностью, улучшенной однородностью или повышенной вязкостью. В некоторых вариантах осуществления амфифильные объекты могут быть присоединены к внутренней поверхности липидной мембраны (например, липидного бислоя, липидного монослоя и т.д.). Многие амфифильные объекты, известные в данном уровне техники, подходят для применения при создании синтетических наноносителей в соответствии с данным изобретением. Такие амфифильные объекты включают без ограничения фосфоглицериды; фосфатидилхолины; дипальмитоилфосфатидилхолин (ОРРС); диолеилфосфатидилэтаноламин (ПОРЕ); диолеилоксипропилтриэтиламмоний (ПОТМА); диолеилфосфатидилхолин, холестерин, сложные эфиры холестерина; диацилглицерол; диацилглицеролсукцинат; дифосфатидилглицерин (ОРРС); гексанодеканол, жирные спирты, такие как полиэтиленгликоль (РЕС); полиоксиэтилен-9-лауриловый простой эфир, поверхностно-активные жирные кислоты, такие как пальмитиновая кислота или олеиновая кислота, жирные кислоты, моноглицериды жирных кислот, диглицериды жирных кислот, амиды жирных кислот; сорбитантриолеат (δраη®85) гликохолат; сорбитанмонолаурат (δраη®20); полисорбат 20 (Τγееη®20); полисорбат 60 (Τγееη®60); полисорбат 65 (Τγееη®65); полисорбат 80 (Τγееη®80); полисорбат 85 (Τγееη®85); полиоксиэтилена моностеарат; суфрактин; полоксомер; сорбитановый сложный эфир жирной кислоты, такой как сорбитантриолеат, лецитин; лизолецитин; фосфатидилсерин; фосфатидилинози- 21 028288 тол; сфингомиелин; фосфатидилэтаноламин (цефалин); кардиолипин; фосфатидная кислота; цереброзиды; дицетилфосфат; дипальмитоилфосфатидилглицерол; стеариламин; додециламин; гексадециламин, ацетилпальмитат; глицеринрицинолеат; гексадецилстеарат; изопропилмиристат; тилоксапол; поли(этиленгликоль) 5000-фосфатидилэтаноламин; поли(этиленгликоль) 400-моностеарат; фосфолипиды, синтетические и/или природные моющие средства, имеющие высокие поверхностно-активные свойства; деоксихолаты; циклодекстрины; хаотропные соли; средства ионного спаривания, а также их комбинации. Компонент амфифильного объекта может быть смесью различных амфифильных объектов. Специалистам в данном уровне техники будет понятно, что это примерный, не являющийся исчерпывающим, перечень веществ с поверхностно-активным действием. Любое амфифильное средство может быть использовано при создании синтетических наноносителей, которые будут применены в соответствии с данным изобретением.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители могут необязательно включать один или несколько углеводов. Углеводы могут быть природными или синтетическими. Углевод может быть производным природного углевода. В определенных вариантах осуществления углевод включает моносахарид или дисахарид, включая без ограничения глюкозу, фруктозу, галактозу, рибозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, целлибозу, маннозу, ксилозу, арабинозу, глюкуроновую кислоту, галактуроновую кислоту, маннуроновую кислоту, глюкозамин, галактозамин и нейраминовую кислоту. В определенных вариантах осуществления углевод является полисахаридом, включая без ограничения пуллулан, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, гидроксипролилметилцеллюлозу (НРМС), гидроксицеллюлозу (НС), метилцеллюлозу (МС), декстран, циклодекстран, гликоген, крахмал, гидроксиэтилкрахмал, карагенан, гликон, амилозу, хитозан, Ν,Ο-карбоксиметилхитозан, альгин и альгиновую кислоту, крахмал, хитин, гепарин, конджак, глюкоманнан, пустулан, гепарин, гиалуроновую кислоту, курдлан и ксантан. В определенных вариантах осуществления углевод является сахарным спиртом, включая без ограничения маннит, сорбит, ксилит, эритрит, мальтит и лактит.
Синтетические наноносители могут быть получены с помощью широкого разнообразия способов, известных в данной области техники. Например, синтетические наноносители могут быть сформированы способами, такими как нанопреципитация, потоковая фокусировка с использованием жидкостных каналов, распылительная сушка, испарение растворителя однокомпонентных и двухкомпонентных эмульсий, экстракция растворителем, разделение фаз, размалывание, микроэмульсионные процедуры, микросборка, наносборка, жертвенные слои, простая и комплексная коацервация, и другими способами, хорошо известными специалисту в данной области техники. Альтернативно или дополнительно, описаны синтезы водных и органических растворителей для монодисперсных полупроводниковых, проводящих, магнитных, органических и других наноматериалов (РеПедгшо е! а1., 2005, §та11, 1:48; Миггау е! а1., 2000, Αηη. Кеу. Май δει., 30:545; и Тгш4а4е е! а1., 2001, СЬет. Май, 13:3843). Дополнительные способы были описаны в литературе (см. например, ЭоиЬгои. Е4., М1сгосар8и1е8 ап4 №июрагПс1е5 ίη МеЛсше ап4 РЬагтасу, СКС Рге88, Воса КаЮт 1992; Ма11йо\\Ь/ е! а1. , 1987, ί. Соп!го1. Ке1еа8е, 5:13; Ма11йо\\Ь/ е! а1., 1987, КеасРуе Ро1утег8, 6:275; и Ма11ио\уП/ е! а1., 1988, 1. Арр1. Ро1утег δΰ., 35:755, и также патенты США 5578325 и 6007845).
В определенных вариантах осуществления синтетические наноносители получают с помощью нанопреципитационного процесса или распылительной сушки. Условия, использованные при подготовке синтетических наноносителей, могут быть изменены для получения частиц нужного размера или свойств (например, гидрофобность, гидрофильность, внешняя морфология, липкость, форма и т.д.). Способ подготовки синтетических наноносителей и используемые условия (например, растворитель, температура, концентрация, расход воздуха и т.д.) могут зависеть от материалов, которые будут связаны с синтетическими наноносителями, и/или композиции полимерной матрицы.
Если частицы, полученные любым из указанных выше способов, имеют диапазон размеров за пределами желаемого диапазона, то они могут быть отсортированы по размеру с помощью, например, микрофильтра.
Связывание может быть достигнуто множеством разных способов и может быть ковалентным или нековалентным. Такое связывание может быть организовано, чтобы быть на поверхности или внутри синтетического наноносителя по данному изобретению. Элементы синтетических наноносителей по данному изобретению (такие как части, которые содержит иммуноспецифическая поверхность, части нацеливания, полимерные матрицы и т.п.) могут быть напрямую связаны друг с другом, например, одной или более ковалентными связями, или могут быть связаны одним или более линкерами. Дополнительные способы функционализации синтетических наноносителей могут быть адаптированы из опубликованной патентной заявки США №2006/0002852, δа1ίζтаη е! а1., опубликованной патентной заявки США №2009/0028910, ^еδ^тοηе е! а1., или опубликованной международной патентной заявки \УО 2008/127532 А1, МийЬу е! а1.
Любой подходящий линкер может использоваться в соответствии с данным изобретением. Линкеры могут быть применены для формирования амидных связей, сложноэфирных связей, дисульфидных связей и т.д. Линкеры могут содержать атомы углерода или гетероатомы (например, азот, кислород, серу и т.д.). В некоторых вариантах осуществления линкер является алифатическим или гетероалифатическим
- 22 028288 линкером. В некоторых вариантах осуществления линкер является полиалкильным линкером. В определенных вариантах осуществления линкер является линкером простых полиэфиров. В определенных вариантах осуществления линкер является полиэтиленовым линкером. В определенных специфических вариантах осуществления линкер является полиэтиленгликольным (РЕО) линкером.
В некоторых вариантах осуществления линкер является расщепляемым линкером. Чтобы дать лишь несколько примеров, расщепляемые линкеры включают пептидные линкеры, расщепляемые протеазами, нуклеазо-чувствительные линкеры из нуклеиновых кислот, липазо-чувствительные липидные линкеры, гликозидазо-чувствительные углеводные линкеры, рН-чувствительные линкеры, гипоксиячувствительные линкеры, фоторасщепляемые линкеры, термолабильные линкеры, ферментрасщепляемые линкеры (например, эстеразой расщепляемый линкер), УЗИ-чувствительные линкеры, линкеры, расщепляемые рентгеновскими лучами и т.д. В некоторых вариантах осуществления линкер не является расщепляемым линкером.
Множество разнообразных способов может быть использовано для связывания линкера или другого элемента синтетического наноносителя с синтетическим наноносителем. Общая стратегия включает пассивную адсорбцию (например, через электростатические взаимодействия), мультивалентное хелатирование, нековалентное связывание высокой аффинности между членами специфически связывающихся пар, образование ковалентной связи и т.д. (Оао е1 а1., 2005, Сшт. Ор. В|о1есНпо1.. 16:63). В некоторых вариантах осуществления для связывания материала с синтетическим наноносителем может быть использована клик-химия.
Могут быть использованы взаимодействия нековалентного специфического связывания. Например, биотином может быть функционализировна или одна частица, или биомолекула, а еще одна функционализирована стрептавидином. Эти две части специфически связываются друг с другом нековалентно и с высокой аффинностью, тем самым связывая частицу и биомолекулу. Аналогичным образом могут быть использованы другие пары специфического связывания. С другой стороны, гистидин-меченые биомолекулы могут быть связаны с частицами, сконъюгированными с никель-нитролотриуксусной кислотой (ΝίΝΤΑ).
Дополнительную общую информацию о связывании см. журнал В|осоп]ида1е СЬет1к1ту, опубликованный Американским химическим обществом, Со1итЬик ОН, РО Вох 3337, Со1итЬик, ОН, 43210; Сгокк-Ыиктд, Химическая техническая библиотека Пирса, доступная на веб-сайте Р1егсе и первоначально опубликованная в 1994-95 гг. в каталоге Р1егсе и ссылки, цитируемые в них; \Уопд 8.8., СНепиЧгу о£ Рто1еш Соищдабои апб Стокк-Никшд, СКС Ргекк РиЬЬкЬетк, Воса КаЮи, 1991; и Негтапкои О.Т., Вюсои)ида1е ТесНшсщек, Асабепис Ргекк, 1пс., 8ап О|едо, 1996.
Следует понимать, что композиции согласно данному изобретению могут быть сделаны любым подходящим способом, и данное изобретение никоим образом не ограничивается композициями, которые могут быть получены с использованием способов, описанных в данном документе. Выбор подходящего способа может потребовать внимания к свойствам конкретных присоединяемых частей.
Фармацевтические композиции и способы применения.
Композиции согласно данному изобретению содержат синтетические наноносители по данному изобретению в комбинации с фармацевтически приемлемыми наполнителями. Композиции могут быть получены с использованием традиционного фармацевтического производства и рецептурных методик для получения пригодных лекарственных форм. В варианте осуществления синтетические наноносители по данному изобретению суспендированы в стерильном физиологическом растворе для инъекций вместе с консервантом.
В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители по данному изобретению получают в стерильных условиях или в заключении стерилизуют. Это может гарантировать, что полученная композиция стерильна и неинфекционна, тем самым, повышая безопасность по сравнению с нестерильными композициями. Это обеспечивает важные меры безопасности, особенно когда субъекты, получающие синтетические наноносители по данному изобретению, имеют иммунные дефекты, страдают от инфекции и/или восприимчивы к инфекции. В некоторых вариантах осуществления синтетические наноносители по данному изобретению могут быть лиофилизированными и храниться в виде суспензии или в виде лиофилизированного порошка в зависимости от способа составления в течение длительного периода без потери активности.
Композиции по данному изобретению могут быть введены различными путями введения, включая без ограничений подкожный, внутримышечный, внутрикожный, пероральный, парентеральный, интраназальный, чресслизистый, ректальный; глазной, трансдермальный, чрескожный или посредством комбинации этих путей.
Композиции и способы, описываемые в данном документе, могут быть применены для индукции, усиления, стимуляции, модуляции или управления иммунным ответом. Композиции и способы, описываемые в данном документе, можно применять для диагностики, профилактики и/или лечения состояний, таких как разновидности рака, инфекционные заболевания, метболические расстройства, дегенеративные заболевания, воспалительные заболевания, иммунологические заболевания, или других расстройств и/или состояний. Композиции и способы, описываемые в данном документе, также могут быть примене- 23 028288 ны для профилактики или лечения привыкания, например привыкания к никотину или наркотическому веществу. Композиции и способы, описываемые в данном документе, также могут быть применены для профилактики и/или лечения состояния, возникшего в результате воздействия токсина, вредного вещества, токсина окружающей среды или другого токсичного вещества.
Примеры
Пример 1. Получение активированного полимера.
РЬА (Ό/Ь-полилактид) (резомер Κ202Η от ВоеЬттдегЯидеШеш, кислотное число эквивалента КОН 0,21 ммоль/г, характеристическая вязкость (ίν): 0,21 дл/г) (10 г, 2,1 ммоль, 1,0 экв.) растворяли в дихлорметане (ΌΟΜ) (35 мл). Добавили ΕΌΟ (2,0 г, 10,5 ммоль, 5 экв.) и ΝΗδ (1,2 г, 10,5 ммоль, 5 экв.). Твердые вещества растворили при помощи воздействия ультразвуком. Полученный в результате раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 6 дней. Раствор концентрировали для удаления большей части ΌΟΜ и остаток добавили в раствор 250 мл диэтилового эфира и 5 мл МеОН для осаждения активированного сложного эфира РЬА-ΝΗδ. Растворители удалили, и полимер дважды промыли простым эфиром (2x200 мл), и высушили под вакуумом с получением активированного сложного эфира РЬА-ΝΗδ в виде белого пенистого твердого вещества (~8 г выделенного, Н-ЯМР использовали для подтверждения присутствия сложного эфира ΝΗδ). Сложный эфир РЬА-ΝΗδ хранили в атмосфере аргона в морозилке с температурой ниже -10°С до использования.
Альтернативно, реакцию можно осуществить в ΌΜΡ. ΤΗΡ, диоксане или СНС13 вместо ΌΟΜ. ΌΟΟ можно использовать вместо ЕОС (получаемую в результате ОСС-мочевину отфильтровывают перед осаждением сложного эфира РЬА-ΝΗδ из простого эфира). Количество ЕОС или ОСС и ΝΗδ может варьировать в диапазоне 2-10 экв. РЬА.
Таким же образом РЬА с ίν 0,33 дл/г и кислотным числом 0,11 ммоль/г, или РЬОА (резомер ΚΟ653Η, 65% лактида-35% гликолида, ίν: 0,39 дл/г и кислотным числом 0,08 ммоль/г), или РЬОА (резомер ΚΟ752Η, 75% лактида-25% гликолида, ίν: 0,19 дл/г и кислотным числом 0,22 ммоль/г) превращают в соответствующий активированный РЬА-ΝΗδ или РЬОА-ΝΗδ сложный эфир и хранят в атмосфере аргона в морозилке с температурой ниже -10°С до использования.
Пример 2. Получение активированного полимера.
РЬА (Κ202Η, кислотное число 0,21 ммоль/г) (2,0 г, 0,42 ммоль, 1,0 экв.) растворили в 10 мл сухого ацетонитрила. Добавили Ν,Ν'-дисукцинимидилкарбонат (ΌδΟ) (215 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.) и каталитическое количество 4-(НК-диметиламино)пиридина (^ΜΑР). Полученную в результате смесь перемешивали в атмосфере аргона 1 день. Полученный в результате раствор сконцентрировали до почти полной сухости. Остаток затем добавили к 40 мл простого эфира для осаждения полимера, который дважды промыли простым эфиром (2x30 мл) и высушили под вакуумом с получением активированного сложного эфира РЬА-ΝΗδ (1Η ЯМР показал количество сложного эфира ΝΗδ на уровне приблизительно 80%).
Пример 3. Получение активированного полимера.
РЬА (Κ202Η) (5,0 г, 1,05 ммоль) растворили в 25 мл безводного ^СΜ и 2,5 мл безводного ΌΜΡ. Добавили ОСС (650 мг, 3,15 ммоль, 5,0 экв.) и пентафторфенол (РРР) (580 мг, 3,15 ммоль, 5,0 экв.). Полученный в результате раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 6 дней и затем сконцентрировали для удаления ΌίΜ. Полученный в результате остаток добавили к 250 мл простого эфира для осаждения активированного полимера РЬА, который промыли простым эфиром (2x100 мл) и высушили под вакуумом с получением активированного сложного эфира РЬА-РРР в виде белого пенистого твердого вещества (4,0 г).
Пример 4. Конъюгация иммуномодулирующего средства.
РЬА-ΝΗδ (1,0 г), К848 (132 мг, 0,42 ммоль) и диизопропилэтиламин (О1РЕА) (0,073 мл, 0,42 ммоль) растворили в 2 мл сухого ΌΜΡ в атмосфере аргона. Полученный в результате раствор нагревали при 5060°С в течение 2 дней. Раствор охладили до КТ и добавили к 40 мл деионизированной (ΌΙ) воды для осаждения полимерного продукта. Затем полимер промыли ΌΙ водой (40 мл) и простым эфиром (2x40 мл) и высушили при 30°С под вакуумом с получением конъюгата К848-РЬА в виде белого пенистого твердого вещества (0,8 г, Н ЯМР показал конъюгацию К848 с РЬА через амидную связь). Степень конъюгации (загрузки) К848 на полимер подтвердили ВЭЖХ-анализом следующим образом: навеску полимера растворили в ΤΗΡ/^ΟΗ и обработали посредством 15% №·ιΟΗ. Полученные в результате гидролизованные полимерные продукты проанализировали на количество К848 с помощью ВЭЖХ относительно калибровочной кривой.
Пример 5. Конъюгация иммуномодулирующего средства.
РЬА-ΝΗδ (1,0 г, 0,21 ммоль, 1,0 экв.), К848 (132 мг, 0,42 ммоль, 2,0 экв.), О1РЕА (0,15 мл, 0,84 ммоль, 4,0 экв.) и ^ΜΑР (25 мг, 0,21 ммоль, 1,0 экв.) растворили в 2 мл сухого ΌΜΡ в атмосфере аргона. Полученный в результате раствор нагревали при 50-60°С в течение 2 дней. Раствор охладили до КТ и добавили к 40 мл деионизированной (ΌΙ) воды для осаждения полимерного продукта. Затем полимер промыли ΌΙ водой (40 мл) и простым эфиром (2x40 мл) и высушили при 30°С под вакуумом с получением конъюгата РЬА-К848 в виде белого пенистого твердого вещества (0,7 г, 20 мг полимера гидролизовали в растворе из 0,2 мл ΤΗΡ, 0,1 мл МеОН и 0,1 мл 15% №·ιΟΗ. Количество К848 на полимере, как опре- 24 028288 делили, составило приблизительно 35 мг/г согласно обращенно-фазовому ВЭЖХ-анализу (колонка С18, подвижная фаза А: 0,1% ТРА в воде, подвижная фаза В: 0,1% ТРА в СН3,СК градиент).
Пример 6. Конъюгация иммуномодулирующего средства.
РЬА (К202Н) (2,0 г, 0,42 ммоль, 1,0 экв.), 1)СС (260 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), ΝΗδ (145 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), К848 (200 мг, 0,63 ммоль, 1,5 экв.), ^ΜΑΡ (77 мг, 0,63 ммоль, 1,5 экв.) и Э1РЕА (0,223 мл, 1,26 ммоль, 3,0 экв.) растворили в 4 мл сухого ΌΜΡ. Смесь нагревали при 50-55°С в течение 3 дней. Смесь охладили до КТ и разбавили ϋί','Μ. ЭСС-мочевину отфильтровали и фильтрат сконцентрировали для удаления ϋί'.'Μ. Полученный остаток в ΌΜΡ добавили к воде (40 мл) для осаждения полимерного продукта, который промыли водой (40 мл), простым эфиром/ЭСМ (40 мл/4 мл) и простым эфиром (40 мл). После сушки под вакуумом при 30°С получили требуемый конъюгат РБА-К848 в виде белого пенистого твердого вещества (1,5 г).
Пример 7. Конъюгация иммуномодулирующего средства.
ЬА (К202Н) (2,0 г, 0,42 ммоль, 1,0 экв.), ЕОС (242 мг, 1,2 6 ммоль, 3,0 экв.), НОА1 (171 мг, 1,26 ммоль, 3,0 экв.), К848 (200 мг, 0,63 ммоль, 1,5 экв.) и Э1РЕА (0,223 мл, 1,26 ммоль, 3,0 экв.) растворили в 4 мл сухого ΌΜΡ. Смесь нагревали при 50-55°С в течение 2 дней. Раствор охладили до КТ и добавили к воде (40 мл) для осаждения полимерного продукта, который промыли водой (40 мл), простым эфиром/МеОН (40 мл/2 мл) и простым эфиром (40 мл). Полимер оранжевого цвета растворили в 4 мл ΩΕ’Μ и полученный раствор добавили к 40 мл простого эфира для осаждения полимера без значительной части оранжевого цвета. Светло-оранжевый полимер промыли простым эфиром (40 мл). После сушки под вакуумом при 30°С получили требуемый конъюгат РБА-К848 в виде светло-коричневого пенистого твердого вещества (1,5 г).
Пример 8. Конъюгация иммуномодулирующего средства.
РЬА (К202Н) (1,0 г, 0,21 ммоль, 1,0 экв.), ЕОС (161 мг, 0,84 ммоль, 4,0 экв.), НОВРН2О (65 мг, 0,42 ммоль, 2,0 экв.), К848 (132 мг, 0,42 ммоль, 2,0 экв.) и Э1РЕА (0,150 мл, 0,84 ммоль, 4,0 экв.) растворили в 2 мл сухого ΌΜΡ. Смесь нагревали при 50-55°С в течение 2 дней. Раствор охладили до комнатной температуры и добавили к воде (40 мл) для осаждения полимерного продукта. Полимер оранжевого цвета растворили в 2 мл ϋΕ'Μ и полученный раствор добавили к 40 мл простого эфира для осаждения полимера, который промыли водой/ацетоном (40 мл/2 мл) и простым эфиром (40 мл). После сушки под вакуумом при 30°С требуемый конъюгат РБА-К848 получили в виде грязно-белого пенистого твердого вещества (1,0 г, загрузка К848 на полимере составила приблизительно 45 мг/г на основе ВЭЖХ-анализа и подтверждена 'Н ЯМР). Таким же способом получили РЬСА (75% лактида)-К848 и РЬСА (50% лактида)К848.
Пример 9. Конъюгация иммуномодулирующего средства
В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин, резиквимод (К-848, 218 мг, 6,93х10-4 моль), Ό/Ь лактид (1,0 г, 6,93х10-3 моль) и безводный сульфат натрия (800 мг). Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре 55°С в течение 8 ч. После охлаждения колбу затем продули аргоном и добавили толуол (50 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной ванне, установленной на 120°С, пока весь лактид не растворился, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (19 мг, 15 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения реакционную смесь разбавили простым эфиром (200 мл) и затем раствор промыли водой (200 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением 880 мг неочищенного конъюгата полимолочная кислота-К-848. Неочищенный полимер подвергли хроматографии на силикагеле с использованием 10% метанола в метиленхлориде в качестве элюента. Фракции, содержащие конъюгат, объединили и выпарили с получением очищенного конъюгата. Его высушили под высоким вакуумом с получением конъюгата в виде твердой пены с выходом 702 мг (57,6%). Посредством интегрирования ЯМР-сигналов для ароматических протонов хинолина и их сравнения с интегральной интенсивностью протона СН молочной кислоты было определено, что молекулярный вес конъюгата составлял приблизительно 2 КДа. ГПХ показала, что конъюгат содержал менее 5% свободного К848.
Пример 10. Получение конъюгата РБА-К848 с низким ΜΒ
- 25 028288
Раствор РЬА-СО2Н (средний МВ: 950, ЭР1:1,32; 5,0 г, 5,26 ммоль) и НВТИ (4,0 г, 10,5 ммоль) в ЕЮАс (12 0 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 45 мин. Добавили соединение К848 (1,65 г, 5,26 ммоль) с последующим Э1РЕА (5,5 мл, 31,6 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в 15 ч. После охлаждения смесь разбавили ЕЮАс (150 мл) и промыли 1% раствором лимонной кислоты (2x40 мл), водой (40 мл) и соляным раствором (40 мл). Раствор сушили над Ν2δΟ4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ) (150 мл) и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли МТВЕ (50 мл) и высушили под вакуумом при комнатной температуре в течение 2 дней в виде белой пены (5,3 г, средний МВ по ГПХ составляет 1200, РЭ1 : 1,29; загрузка К848 составляет 20% по ВЭЖХ).
Пример 11. Получение конъюгата РЬА-К848 с низким МВ
Раствор РЬА-СО2Н (средний МВ: 1800, ЭР1:1,44; 9,5 г, 5,26 ммоль) и НВТИ (4,0 г, 10,5 ммоль) в ЕЮАс (120 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 45 мин. Добавили соединение К848 (1,65 г, 5,26 ммоль) с последующим Э1РЕА (5,5 мл, 31,6 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение 15 ч. После охлаждения смесь разбавили ЕЮАс (150 мл) и промыли 1% раствором лимонной кислоты (2x40 мл), водой (40 мл) и соляным раствором (40 мл). Раствор высушили над Να2δΟ.·ι (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили метил-трет-бутиловый эфир (МТВЕ) (150 мл) и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли МТВЕ (50 мл) и высушили под вакуумом при комнатной температуре в течение 2 дней в виде белой пены (9,5 г, средний МВ по ГПХ составляет 1900, РЭ1: 1,53; загрузка К848 составляет 17% по ВЭЖХ).
Пример 12. Конъюгирование К848 с РСАЭК через раскрытие имидного кольца.
Следующие примеры описывают синтез поликеталя, РСЛЭК, согласно способу, приведенному в РШспШип с1 а1., \АО 2008/127532, который проиллюстрирован на этапе 1 ниже.
РСАЭК синтезируют в 50 мл колбе с двумя горлышками, соединенной с короткой дистилляционной головкой. Сначала 5,5 мг перекристаллизованной р-толуолсульфоновой кислоты (0,029 ммоль, А1йпсй, Сент-Луис, Миссури) растворяют в 6,82 мл этилацетата и добавили к 30 мл раствора бензола (поддерживая 100°С), который содержит 1,4-циклогександиметанол (12,98 г, 90,0 ммоль, А1ФлсЬ). Этилацетату позволяют выкипеть и добавляют дистиллированный 2,2-диметоксипропан (10,94 мл, 90,0 ммоль, А1йпсй) к раствору бензола, инициируя реакцию полимеризации. Последовательно добавляют дополнительные дозы 2,2-диметоксипропана (5 мл) и бензола (25 мл) к реакционной смеси каждый час в течение 6 ч через мерную воронку для компенсации выкипевших 2,2-диметоксипропана и бензола. Через 8 ч реакцию останавливают добавлением 500 мкл триэтиламина. Полимер выделяют осаждением в холодном гексане (хранили при -20°С) с последующей вакуумной фильтрацией. Молекулярный вес РСАЭК определяют посредством гель-проникающей хроматографии (ГПХ) (Ыйтайхи, Киото, Япония), прибор оборудован УФ-детектором. ТНР применяют в качестве подвижной фазы при скорости потока 1 мл/мин. Стандарты полистирола от Ро1утег ЬаЪогаФпев (Амхерст, Массачусетс) применяли для построения калибровочной кривой молекулярного веса. Данное соединение применяют для создания частиц РСАОК во всех последующих экспериментах.
К848 можно конъюгировать к концевым спиртовым группам РСАЭК с молекулярным весом 6000 посредством раскрытия имидного кольца в соответствии с этапом 2, показанным ниже.
Нзс СН3
Этап 1. Получение РСАОК
Этап 2. Конъюгация РСАЭК к К848
- 26 028288
На этапе 2 полимер из этапа 1 (12 г, 2,0х10-3 моль) растворяют в 100 мл метиленхлорида и добавляют лактам К848 (3,3 г, 8,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7триазабицикло-[4,4,0]дец-5-ен (ΤΒΌ, 0,835 г, 6х10-3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи образуется прозрачный раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл) и раствор промывают 5% лимонной кислотой. Данный раствор высушивают над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки под высоким вакуумом получают 11,3 грамм (81%) полимера. Часть гидролизуют в кислоте и определяют, что содержание К848 составляет 9 вес.%.
Пример 13. Конъюгирование К848 с поликапролактондиолом через раскрытие имидного кольца.
Раскрытие имидного кольца применяют для присоединения К854 к концевым спиртовым группам поликапролактондиола с молекулярным весом 2000. Поликапролактондиол приобретен у А1йпсН СНениса1 Сотрапу, кат. №189421 и имеет следующую структуру:
Конъюгат поликапролактондиол-К854 имеет следующую структуру:
Полимер (5 г, 2,5х10-3 моль) растворяют в 25 мл метиленхлорида и добавляют лактам К854 (2,4 г, 5,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7-триазабицикло-[4,4,0] дец-5-ена (ΤΒΌ, 0,557 г, 4х10-3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение 15 минут образуется прозрачный бледно-желтый раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл) и раствор промывают 5% лимонной кислотой. Данный раствор высушивают над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки под высоким вакуумом получают 5,2 грамм (70%) полимера. Часть гидролизуют в кислоте и определяют, что содержание К848 составляет 18,5 вес.%.
Пример 14. Конъюгирование К848 с поли(гексаметиленкарбонат)диолом посредством раскрытия имидного кольца.
Раскрытие имидного кольца применяют для присоединения К848 к концевым спиртовым группам поли(гексаметиленкарбонат)диола с молекулярным весом 2000. Поли(гексаметиленкарбонат)диол приобретен у А1йпсН СЬетюа1 Сотрапу, кат. №461164 и имеет следующую структуру:
Конъюгат поли(гексаметиленкарбонат)диол-К848 имеет следующую структуру:
Полимер (5 г, 2,5х10-3 моль) растворяют в 25 мл метиленхлорида и добавляют лактам К848 (2,06 г, 5,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7-триазабицикло-[4,4,0] дец-5-ена (ΤΒΌ, 0,557 г, 4х10-3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи образуется прозрачный бледно-желтый раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл) и раствор промывают 5% лимонной кислотой. Данный раствор высушивают над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки под высоким вакуумом получают 5,9 г (84%) полимера. Применяют ЯМР для определения содержания К848, которое, как определили, составляет
- 27 028288
21%.
Пример 15. Конъюгаты полимолочной кислоты и имидазохинолина при помощи катализатора на основе этилгексаноата олова
В двугорлую круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин резиквимод (К-848, 100 мг, 3,18х10-4 моль), Ό/Ь лактид (5,6 г, 3,89х10-2 моль) и безводный сульфат натрия (4,0 г). Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре 50°С в течение 8 ч. Колбу затем продули аргоном и добавили толуол (100 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной бане, установленной на 120°С, пока весь лактид не растворился, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (75 мг, 60 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения добавили воду (20 мл) и перемешивание продолжали в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавили дополнительно толуолом (200 мл) и затем промыли водой (200 мл). Раствор толуола затем промыли по очереди 10% раствором хлорида натрия, содержащего 5% конц. соляной кислоты (200 мл), затем насыщенным раствором бикарбоната натрия (200 мл). ТСХ (диоксид кремния, 10% метанол в метиленхлориде) показала, что раствор не содержит свободного К-848. Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением 3,59 г конъюгата полимолочная кислота-К-848. Часть полимера гидролизовали основанием и исследовали с помощью ВЭЖХ на предмет содержания К848. Путем сравнения калибровочной кривой концентрации К-848 относительно ВЭЖХ-отклика установили, что полимер содержал 4,51 мг К-848 на грамм полимера. Молекулярная масса полимера, определенная с помощью ГПХ, составила приблизительно 19000.
Пример 16. Конъюгаты полимолочной кислоты с низким молекулярным весом и имидазохинолина
В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин, резиквимод (К-848, 218 мг, 6,93х10-4 моль), Ό/Ь лактид (1,0 г, 6,93х10-3 моль) и безводный сульфат натрия (800 мг). Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре 55°С в течение 8 ч. После охлаждения колбу затем продули аргоном и добавили толуол (50 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной ванне, установленной на 120°С, пока весь лактид не растворился, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (19 мг, 15 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения реакционную смесь разбавили простым эфиром (200 мл) и затем раствор промыли водой (200 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением 880 мг неочищенного конъюгата полимолочная кислота-К-848. Неочищенный полимер подвергли хроматографии на силикагеле с использованием 10% метанола в метиленхлориде в качестве элюента. Фракции, содержащие конъюгат, объединили и выпарили с получением очищенного конъюгата. Его высушили под высоким вакуумом с получением конъюгата в виде твердой пены с выходом 702 мг (57,6%). Посредством интегрирования ЯМР-сигналов для ароматических протонов хинолина и их сравнения с интегральной интенсивностью протона СН молочной кислоты было определено, что молекулярный вес конъюгата составлял приблизительно 2 КДа. ГПХ показала, что конъюгат содержал менее 5% свободного К848.
Пример 17. Конъюгаты сополимера гликолевой кислоты и полимолочной кислоты с низким молекулярным весом и имидазохинолина
В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили имидазохинолин, резиквимод (К-848, 436 мг, 1,39х10-3 моль), гликолид (402 мг, 3,46х10-3 моль), Ό/Ь лактид (2,0 г, 1,39х10-2 моль) и безводный сульфат натрия (1,6 г) . Колбу и содержимое сушили под вакуумом при температуре
- 28 028288
55°С в течение 8 ч. После охлаждения колбу затем продули аргоном и добавили толуол (60 мл). Реакционную смесь перемешивали на масляной бане, установленной на 120°С, пока не растворился весь К848, гликолид и лактид, а затем добавили пипеткой этилгексаноат олова (50 мг, 39 мкл). Нагревание продолжали в атмосфере аргона в течение 16 ч. После охлаждения реакционную смесь разбавили этилацетатом (200 мл) и затем раствор промыли водой (200 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением неочищенного конъюгата РЬСЛ-К-848. Неочищенный полимер подвергли хроматографии на силикагеле с использованием 10% метанола в метиленхлориде в качестве элюента. Фракции, содержащие конъюгат, объединили и выпарили с получением очищенного конъюгата. Его высушили в высоком вакууме с получением конъюгата в виде твердой пены с выходом 1,55 г (54,6%). Посредством интегрирования ЯМР-сигналов для ароматических протонов хинолина и их сравнения с интегральной интенсивностью протона СН молочной кислоты было определено, что молекулярный вес конъюгата составлял приблизительно 2 КДа. ГПХ показала, что конъюгат не содержал поддающийся обнаружению свободный К848.
Пример 18. Конъюгаты полимолочной кислоты и имидазохинолина при помощи катализа на основе диизопропиламида лития.
Имидазохинолин (К-848), Ό/Ь лактид и имеющая отношение лабораторная посуда - все сушили под вакуумом при 50°С в течение 8 ч до использования. В круглодонную колбу, оснащенную мешалкой и конденсатором, добавили К-848 (33 мг, 1,05х104 моль) и сухой толуол (5 мл). Ее нагревали с обратным холодильником для полного растворения К-848. Раствор перемешали в атмосфере азота и охладили до комнатной температуры для получения суспензии мелкодисперсного К-848. К этой суспензии добавили раствор диизопропиламида лития (2,0 М в ТНР, 50 мкл, 1,0х10-4 моль), после чего продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 5 мин. Бледно-желтый раствор, который образовался, добавили с помощью шприца к горячему (120°С) раствору Ό/Ь лактида (1,87 г, 1,3х10-2 моль) в атмосфере азота. Устранили тепло и бледно-желтый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение одного часа. Раствор разбавили метиленхлоридом (200 мл) и затем его промыли 1% соляной кислотой (2х50 мл), а затем насыщенным раствором бикарбоната натрия (50 мл). Раствор высушили над сульфатом магния, отфильтровали и выпарили под вакуумом с получением конъюгата полимолочная кислота-К-848. ТСХ (диоксид кремния, 10% метанол в метиленхлориде) показала, что раствор не содержит свободного К-848. Полимер растворили в метиленхлориде (10 мл) и этот раствор добавили по каплям в перемешиваемый гексан (200 мл). Осажденный полимер выделили декантацией и высушили под вакуумом с получением 1,47 г конъюгата полимолочная кислота-К848 в виде белого твердого вещества. Часть полимера гидролизовали основанием и исследовали с помощью ВЭЖХ на предмет содержания К-848. Путем сравнения калибровочной кривой концентрации К-848 относительно ВЭЖХ-отклика установили, что полимер содержал 10,96 мг К-848 на грамм полимера.
Пример 19. Прикрепление иммуномодулирующего средства к РЬЛ с низким МВ.
РЬЛ (Ό/Ь-полилактид) с МВ 5000 (10,5 г, 2,1 ммоль, 1,0 экв.) растворяют в дихлорметане (ЭСМ) (35 мл). Добавляют БОС (2,0 г, 10,5 ммоль, 5 экв.) и ΝΗδ (1,2 г, 10,5 ммоль, 5 экв.). Полученный в результате раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 3 дней. Раствор концентрируют для удаления большей части ЭСМ и остаток добавляют в раствор 250 мл диэтилового эфира и 5 мл МеОН для осаждения активированного сложного эфира РЬЛ-ΝΗδ. Растворители удаляют, и полимер дважды промывают простым эфиром (2х 200 мл), и высушивают под вакуумом с получением активированного сложного эфира РЬЛ-ΝΗδ в виде белого пенистого твердого вещества (~8 г выделенного, Н ЯМР можно использовать для подтверждения присутствия сложного эфира ΝΗδ). Сложный эфир РЬЛ-ΝΗδ хранят в атмосфере аргона в морозилке с температурой ниже -10°С до использования.
Альтернативно, реакцию можно осуществить в ΌΜΡ, ТНР, диоксане или СНС13 вместо ЭСМ. ОСС можно использовать вместо БОС (получаемую в результате ЭСС-мочевину отфильтровывают перед осаждением сложного эфира РЬЛ-ΝΗδ из простого эфира). Количество БОС или ОСС и ΝΗδ может варьировать в диапазоне 2-10 экв. РЬЛ.
Пример 20. Прикрепление иммуномодулирующего средства к РЬСЛ с низким МВ.
Таким же образом, как приведено выше для активации полимера, РЬСЛ с низким МВ с 50-75% гликолидом превращают в соответствующий активированный сложный эфир РЬСЛ-ΝΗδ и хранят в атмосфере аргона в морозилке при температуре ниже -10°С до использования.
Пример 21. Проводимая в одном сосуде полимеризация с раскрытием кольца К848 с Ό/Ь-лактидом в присутствии катализатора
Смесь из К848 (0,2 ммоль, 63 мг), Ό/Ь-лактида (40 ммоль, 5,8 г) и 4-диметиламинопиридина
- 29 028288 (ΌΜΑΡ) (50 мг, 0,4 ммоль) в 2 мл безводного толуола медленно нагрели до 150°С (температура масляной бани) и поддерживали при этой температуре в течение 18 ч (через 3 ч не осталось К848). Смесь охладили до окружающей температуры и в полученной смеси остановили реакцию водой (50 мл) с осаждением полученного полимера, К848-РЬА. Полимер затем промыли последовательно 45 мл каждого из МеОН, ιΡγΟΗ и этилового простого эфира. Полимер высушили под вакуумом при 30°С с получением грязнобелого рыхлого твердого вещества (5,0 г). Полимерную структуру подтвердили посредством 'Н ЯМР в СОС’Р. Небольшой образец полимера обработали 2Н водным ЫаОН в ТНР/МеОН для определения загрузки К848 на полимере с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. Загрузка К848 составляет 3 мг на грамм полимера (0,3% загрузка - 27,5% от теории).
Пример 22. Двухэтапная полимеризация с раскрытием кольца К848 с Ό/Ь-лактидом и гликолидом
Смесь Ό/Ь-лактида (10,8 г, 0,075 моль) и гликолида (2,9 г, 0,025 моль) нагрели до 135°С в атмосфере аргона. После расплавления всех материалов и получения прозрачного раствора добавили К848 (1,08 г, 3,43 х10-3 моль). Данный раствор перемешивали при 135°С под медленным потоком аргона в течение одного часа. Добавили этилгексаноат олова (150 мкл) и продолжали нагревание в течение 4 ч. После охлаждения твердую светлокоричневую массу растворили в метиленхлориде (250 мл) и раствор промыли 5% раствором винной кислоты (2x200 мл). Раствор метиленхлорида высушили над сульфатом магния, профильтровали и затем сконцентрировали под вакуумом. Остаток растворили в метиленхлориде (20 мл) и добавили 2-пропанол (250 мл) с перемешиванием. Отделившийся полимер выделили декантацией 2пропанола и высушили под высоким вакуумом. ЯМР показал, что полимер имел 71,4% лактида и 28,6% гликолида с молекулярным весом 4000. Загрузка К848 была близкой к теоретической по данным ЯМР.
Пример 23. Получение конъюгата РЬОА-К848
Смесь из РЬОА (ЬакекЬогек Ро1утег8, МВ ~5000, 7525ΌΌΟ1Α, кислотное число 0,7 ммоль/г, 10 г, 7,0 ммоль) и НВТи (5,3 г, 14 ммоль) в безводном ΕίОΑс (16 0 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 50 мин. Добавили соединение К848 (2,2 г, 7 ммоль) с последующим диизопропилэтиламином (ΌΙΡΕΑ) (5 мл, 28 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (приблизительно 16 ч). После охлаждения смесь разбавили ΕίОΑс (200 мл) и промыли насыщенным раствором МН4С1 (2x40 мл), водой (40 мл) и концентрированным соляным раствором (40 мл). Раствор высушили над Ыа28О4 (20 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили изопропиловый спирт (ΙΡΑ) (300 мл) и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли ΙΡΑ (4x50 мл) для удаления остаточных реагентов и высушили под вакуумом при 35-40°С в течение 3 дней в виде белого порошка (10,26 г, МВ по ГПХ составляет 5200, загрузка К848 составляет 12% по ВЭЖХ).
Пример 24. Получение конъюгата ΡΕΟΑ-854Α
Смесь из ΡΕΟΑ (ЬакекЬогек Ρο1уте^5. МВ ~5000, 7525ΌΕΟ1Α, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и НВТИ (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном ΕίОΑс (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 45 мин. Добавили соединение 845А (0,29 г, 0,7 ммоль) с последующим диизопропилэтиламином (ΌΙΡΕΑ) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (приблизительно 15 ч). После охлаждения смесь разбавили ΕίОΑс (100 мл) и промыли насыщенным раствором МН4С1 (2x20 мл), водой (20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушили над Ыа28О4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили изопропиловый спирт (ΙΡΑ) (40 мл) и конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли ΙΡΑ (4x25 мл) для удаления остаточных реагентов и высушили под вакуумом при 35- 30 028288
40°С в течение 2 дней в виде белого порошка (1,21 г, МВ по ГПХ составляет 4900, загрузка 854А составляет 14% по ВЭЖХ).
Пример 25. Получение конъюгата РЬСА-ВВНА
Смесь из РЬСА (ЬакекЬотек Ро1утет8, МВ ~5000, 7525ЭЕС1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и НВТи (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном ЕЮАс (30 мл) перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 30 мин. Добавили соединение ВВНА (0,22 г, 0,7 ммоль) в 2 мл сухого ЭМ8О с последующим диизопропилэтиламином (Э1РЕА) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Добавили дополнительные количества НВТИ (0,53 г, 1,4 ммоль) и Э1РЕА (0,5 мл, 2,8 ммоль) и смесь нагревали при 50-55°С в течение 4 ч. После охлаждения смесь разбавили ЕЮАс (100 мл) и промыли насыщенным раствором ЫН4С1 (2x20 мл), водой (20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушили над Ыа28О4 (10 г) и сконцентрировали в гелеподобный остаток. Затем добавили изопропиловый спирт (1РА) (35 мл) и коричневатый конъюгат полимера осадили из раствора. Затем полимер промыли 1РА (2x20 мл) для удаления остаточных реагентов и высушили под вакуумом при 35-40°С в течение 2 дней в виде коричноватого порошка (1,1 г).
Пример 26. Конъюгация К848 с полиглицином, полиамид
Получают защищенную ί-бутилоксикарбонилом (1ВОС), полиглицинкарбоновую кислоту (I) посредством полимеризации с раскрытием цикла Ν-карбоксиангидрида глицина (АИпсН кат. №369772) с применением сложного бензилового эфира 6-аминокапроновой кислоты (АИпсН кат. №833465) по способу АПГегЕ еί а1. (Вютастото1еси1е8, 5, 1653, (2004)). Защита концевой аминогруппы в виде ί-ВОСкарбамата с последующей гидрогенизацией над палладием на углероде для удаления бензилового сложного эфира завершает синтез ВОС-защищенной полиглицинкарбоновой кислоты (I).
Смесь ВОС-защищенной полиглицинкарбоновой кислоты (5 г, МВ=2000, 2,5х10-3 моль) и НВТИ (3,79 г, 1,0х10-2 моль) в безводном ΌΜΕ (100 мл) перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 50 мин. Затем добавляют К848 (1,6 г, 5,0х10-3 моль) с последующим диизопропилэтиламином (4 мл, 2,2х10-2 моль). Смесь перемешивают при КТ (комнатная температура) в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (16 ч). После охлаждения ΌΜΕ выпаривают под вакуумом и остаток растирают в порошок в ЕЮАс (100 мл). Полимер выделяют при помощи фильтрации и затем полимер промывают 2-пропанолом (4x25 мл) для удаления остаточных реагентов и сушат под вакуумом при 3540°С в течение 3 дней. Полимер выделяют в виде грязно-белого твердого вещества с выходом 5,1 г (88%). Загрузку К848 можно определить с помощью ЯМР, и она составляет 10,1%.
Защитную группу ί-ВОС удаляют с помощью трифторуксусной кислоты и полученный полимер прививают к РЬА карбоксильными концевыми группами посредством традиционных способов.
Пример 27. Получение конъюгата РЬСА с полимером полиглицин/К848.
Этап 1. Конъюгат полиглицин/К848, защищенный ί-ВОС, (5 г) растворяют в трифторуксусной кислоте (25 мл) и этот раствор нагревают при 50°С в течение одного часа. После охлаждения трифторуксусную кислоту удаляют под вакуумом и остаток растирают в порошок в этилацетате (25 мл). Полимер выделяют фильтрацией и хорошо промывают 2-пропанолом. После сушки под вакуумом получают 4,5 грамм полимера в виде грязно-белого твердого вещества.
Этап 2. Смесь из РЬСА (ЬакекЬотек Ро1утет8, МВ ~5000, 7525ЭЕС1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 10 г, 7,0 ммоль) и НВТИ (5,3 г, 14 ммоль) в безводном ΌΜΕ (100 мл) перемешивают при КТ в атмосфере аргона в течение 50 мин. Добавляют полимер из приведенного выше (1,4 г, 7 ммоль), растворенный в
- 31 028288 сухом ΌΜΡ (20 мл), с последующим диизопропилэтиламином (Э1РЕА) (5 мл, 28 ммоль). Смесь перемешивают при КТ в течение 6 ч и затем при 50-55°С в течение ночи (16 ч). После охлаждения ΌΜΡ выпаривают под вакуумом и остаток растворяют в метиленхлориде (50 мл). Полимер осаждают посредством добавления 2-пропанола (200 мл). Полимер выделяют при помощи декантирования и промывают 2пропанолом (4х50 мл) для удаления остаточных реагентов и высушивают под вакуумом при 35-40°С в течение ночи. Получают 9,8 г (86%) блок-сополимера.
Пример 28. Получение конъюгата РЬСА-2-бутокси-8-гидрокси-9-бензиладенин
Смесь РЬСА (Ьаке8Ьоге8 Ро1утег8, ΜΒ ~5000, 7525ОЬС1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и ЖТО (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном ЕЮАс (30 мл) перемешивают при КТ в атмосфере аргона в течение 30 мин. Добавляют соединение (I) (0,22 г, 0,7 ммоль) в 2 мл сухого ΌΜΕΌ с последующим диизопропилэтиламином (Э1РЕА) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч. Добавляют дополнительные количества ΗΒΤυ (0,53 г, 1,4 ммоль) и Э1РЕА (0,5 мл, 2,8 ммоль) и смесь нагревают при 50-55°С в течение 4 ч. После охлаждения смесь разбавляют ЕЮАс (100 мл) и промывают насыщенным раствором ХН4С1 (20 мл), водой (2х20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушивают над №-ь8О4 (10 г) и концентрируют в гелеподобный остаток. Затем добавляют изопропиловый спирт (1РА) (35 мл) и осаждают из раствора коричневатый конъюгат полимера. Затем полимер промывают 1РА (2х20 мл) для удаления остаточных реагентов и сушат под вакуумом при 35-40°С в течение 2 дней в виде коричноватого порошка (1,0 г).
Пример 29. Получение конъюгата РЬСА-2,9-дибензил-8-гидроксиаденин
Смесь РЬСА (Ьаке8Ьоге8 Ро1утег8, ΜΒ ~5000, 7525ОЬС1А, кислотное число 0,7 ммоль/г, 1,0 г, 7,0 ммоль) и ЖТО (0,8 г, 2,1 ммоль) в безводном ЕЮАс (30 мл) перемешивают при КТ в атмосфере аргона в течение 30 мин. Добавляют соединение (II) (0,24 г, 0,7 ммоль) в 2 мл сухого ΌΜ^ с последующим диизопропилэтиламином ЩГРЕА) (0,73 мл, 4,2 ммоль). Смесь перемешивают при КТ в течение 20 ч. Добавляют дополнительные количества ΗΒΤυ (0,53 г, 1,4 ммоль) и Э1РЕА (0,5 мл, 2,8 ммоль) и смесь нагревают при 50-55°С в течение 4 ч. После охлаждения смесь разбавляют ЕЮАс (100 мл) и промывают насыщенным раствором ХН4С1 (20 мл), водой (2х20 мл) и соляным раствором (20 мл). Раствор высушивают над №-ь8О4 (10 г) и концентрируют в гелеподобный остаток. Затем добавляют изопропиловый спирт (1РА) (35 мл) и из раствора осаждают коричневатый конъюгат полимера. Затем полимер промывают 1РА (2х20 мл) для удаления остаточных реагентов и сушат под вакуумом при 35-40°С в течение 2 дней в виде коричноватого порошка (1,2 г).
Пример 30. Раскрытие имидного кольца, применяемое для присоединения 2-пентил-8-гидрокси-9бензиладенина к концевым спиртовым группам поли(гексаметиленкарбонат)диола с молекулярным весом 2000.
Поли(гексаметиленкарбонат)диол приобретен у А1йпсН СЬетюа1 Сотрапу, кат. №461164.
Поли(гексаметиленкарбонат)диол
Конъюгат поли(гексаметиленкарбонат)диол-8-оксоаденин
- 32 028288
Полимер (5 г, 2,5х10-3 моль) растворяют в 25 мл метиленхлорида и добавляют лактам 2-пентил-8гидрокси-9-бензиладенина (2,05 г, 5,0х10-3 моль). Эту взвесь перемешивают по мере добавления 1,5,7триазабицикло-[4,4,0]дец-5-ена (ТВЭ, 0,557 г, 4х10-3 моль) одной порцией. После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи образуется прозрачный бледно-желтый раствор. Раствор разводят метиленхлоридом (100 мл) и раствор промывают 5% лимонной кислотой. Данный раствор высушивают над сульфатом натрия, после чего его фильтруют и выпаривают под вакуумом. После сушки под высоким вакуумом получают 5,5 г (78%) полимера. Применяют ЯМР для определения содержания бензиладенина, которое составляет 18%.
Пример 31. Конъюгаты никотин-РЕО-РЬА.
Полимер 3-никотин-РЕО-РЬА синтезировали следующим образом. Сначала растворили моноаминополи(этиленгликоль) от .ГенКет® с молекулярным весом 3,5 КДа (0,20 г, 5,7х10-5 моль) и избыток 4карбоксиникотина (0,126 г, 5,7х10-4 моль) в диметилформамиде (5,0 мл). Перемешали раствор и добавили дициклогексилкарбодиимид (0,124 г, 6,0х10-4 моль). Этот раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавили воду (0,10 мл) и перемешивание продолжали еще в течение 15 мин. Осадок дициклогексилмочевины удалили фильтрацией и фильтраты выпарили под вакуумом. Остаток растворили в метиленхлориде (4,0 мл) и этот раствор добавили к диэтиловому эфиру (100 мл). Раствор охлаждали в холодильнике в течение 2 ч и осажденный полимер выделили фильтрацией. После промывания диэтиловым эфиром твердый белый полимер высушили в высоком вакууме. Выход составил 0,188 г. Этот полимер был использован без дополнительной очистки для следующего этапа.
Полимер никотин/РЕО (0,20 г, 5,7х10-5 моль) растворили в сухом тетрагидрофуране (10 мл) в атмосфере азота и перемешивали раствор по мере добавления раствора алюмогидрида лития в тетрагидрофуране (1,43 мл 2,0 М, 2,85х10-3 моль). Добавление алюмогидрида лития вызвало осаждение полимера в виде студенистой массы. Реакционную смесь нагрели до 80°С в медленном потоке азота, позволяя тетрагидрофурану испаряться. Остаток затем нагревали при 80°С в течение 2 ч. После охлаждения осторожно добавили воду (0,5 мл). После того как выделение водорода остановилось, добавили 10% метанол в метиленхлориде (50 мл) и реакционную смесь перемешивали до растворения полимера. Эту смесь отфильтровали через кизельгур (диатомовую землю) марки СеШе® (доступна от ΕΜΌ Шс. как Се1Ье® 545, кат. №СХ0574-3) и фильтрат выпарили досуха под вакуумом. Остаток растворили в метиленхлориде (4,0 мл) и этот раствор медленно добавили к диэтиловому эфиру (100 мл). Полимер, отделенный в виде белого хлопьевидного твердого вещества, выделили с помощью центрифугирования. После промывания в диэтиловом эфире твердое вещество высушили под вакуумом. Выход составил 0,129 г.
Затем наполнили круглодонную колбу объемом 100 мл, оснащенную мешалкой и обратным холодильником, полимером РЕО/никотин (0,081 г, 2,2х10-5 моль), Ό/Ь-лактидом (0,410 г, 2,85х10-3 моль) и безводным сульфатом натрия (0,380 г). Смесь сушили под вакуумом при 55°С в течение 8 ч. Колбу охладили и продули аргоном, а затем добавили сухой толуол (10 мл). Колбу поместили на масляную баню, установленную на 120°С, и после растворения лактида добавили этилгексаноат олова (5,5 мг, 1,36х10-5 моль). Реакцию проводили при 120°С в течение 16 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавили воду (15 мл) и перемешивание продолжили в течение 30 мин. Добавили метиленхлорид (200 мл) и после встряхивания в делительной воронке фазам позволили осесть. Выделили слой метиленхлорида и высушили над безводным сульфатом магния. После фильтрации для удаления высушивающего средства фильтраты выпарили под вакуумом с получением полимера в виде бесцветной пены. Полимер растворили в тетрагидрофуране (10 мл) и этот раствор медленно добавили в воду (150 мл) при перемешивании. Осажденный полимер выделили с помощью центрифугирования и твердое вещество растворили в метиленхлориде (10 мл). Метиленхлорид удалили под вакуумом, а остаток высушили под вакуумом. Выход полимера 3-никотин-РЕО-РЬА составил 0,38 г.
Пример 32. Состав с синтетическим наноносителем.
Для инкапсулированных составов адъюванта синтезировали резиквимод (также известный как К848) в соответствии с синтезом, приведенным в примере 99 патента США №5389640 СегШег еГ а1.
К848 конъюгировали с РЬА вышеприведенным способом и структуру РЬА подтвердили ЯМР.
Конъюгат РЬА-РЕО-никотин получили согласно примеру 31.
Приобрели РЬА (ΒοеЬ^^η§е^ ШдеШеш СНеписак Щс., 2820 ΝοΠίι Шппанбу Όπ\ό, Питерсберг, Вирджиния 23805). Поливиниловый спирт (МВ=11 КДа - 31 КДа, гидролизованный на 85-89%) приобрели у ννΥΡ 5С1еШ|Пс. Пептид овальбумина 323-339 получили от ВасНет Атепсак Шс. (3132 КакЫтеа δίι^ί, Торранс, Калифорния 90505. Кат. №4064565).
Вышеприведенные материалы применяли для получения следующих растворов.
1. Резиквимод (К848), 10 мг/мл, и РЬА, 100 мг/мл, в метиленхлориде или конъюгат РЬА-К848, 100 мг/мл, в метиленхлориде.
2. РЬА-РЕО-никотин в метиленхлориде, 100 мг/мл.
3. РЬА в метиленхлориде, 100 мг/мл.
4. Пептид овальбумина 323-339 в воде, 10 или 69 мг/мл.
5. Поливиниловый спирт в воде, 50 мг/мл.
- 33 028288
Раствор №1 (0,25-0,75 мл), раствор №2 (0,25 мл), раствор №3 (0,25-0,5 мл) и раствор №4 (0,1 мл) объединили в небольшой емкости и смесь обработали ультразвуком при 50% амплитуде в течение 40 с с помощью Вгапвоп Όί§ί1π1 8отйег 250. К этой эмульсии добавили раствор №5 (2,0 мл) и обработка ультразвуком при 35% амплитуды в течение 40 с с помощью Вгапвоп Όί§ίίπ1 8отйег 250 образует вторую эмульсию. Ее добавили в стакан с фосфатно-соляным буфером (30 мл) и данную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч для образования наночастиц.
Чтобы промыть частицы, часть дисперсии наночастиц (7,4 мл) перенесли в центрифужную пробирку и крутили при 5300д один час, супернатант удалили, а осадок ресуспендировали в 7,4 мл фосфатносоляного буфера. Повторили процедуру цинтрифугирования и осадок ресуспендировали в 2,2 мл фосфатно-соляного буфера для конечной дисперсии наночастиц приблизительно 10 мг/мл.
Пример 33. Двойная эмульсия с множеством первичных эмульсий.
Материалы.
Пептид овальбумина 323-339, 17 аминокислотный пептид, известный как Т-клеточный эпитоп белка овальбумина, приобрели у ВасНет Атейсав 1пс. (3132 КавЫтеа 81гее1, Торранс, Калифорния 90505).
Резиквимод (также известный как К848) синтезировали согласно способу, приведенному в патенте США №6608201.
РЙА-К848, резиквимод конъюгировали с РЬА с молекулярным весом приблизительно 2500 Да согласно вышеприведенному способу.
РЬОА-К848, резиквимод конъюгировали с РЬОА с молекулярным весом приблизительно 4100 Да согласно вышеприведенному способу.
Р8-1826 олигонуклеотид ДНК с полностью фосфотиоатированным остовом, имеющий нуклеотидную последовательность 5'-ТСС АТО АСО ТТС СТО АСО ТТ-3', с натриевым противоионом приобрели у Ойдов Е!с (9775 8\У Соттегсе Сис1е С-6, Уилсонвиль, Орегон 97070).
Р8-1826 олигонуклеотид ДНК с фосфодиэфирным остовом, имеющий нуклеотидную последовательность 5'-ТСС АТО АСО ТТС СТО АСО ТТ-3', с натриевым противоионом приобрели у Ойдов Е!с. (9775 8\У Соттегсе Сис1е С-6, Уилсонвиль, Орегон 97070).
РЬА с характеристической вязкостью 0,21 дл/г приобрели у 8игМоФс5 РНагтасеийсак (756 Тот Магйп Опус, Бирмингем, Алабама 35211. Код продукта 100 ОБ 2А).
РЬА с характеристической вязкостью 0,71 дл/г приобрели у 8игМоФс5 РНагтасеийсак (756 Тот Магйп Опус, Бирмингем, Алабама 35211. Код продукта 100 ОБ 7А).
РЬА с характеристической вязкостью 0,19 дл/г приобрели у ВоеНйпдег 1п§е1Не1т СНеткай, 1пс. (Питерсберг, Вирджиния. Кат. №К202Н).
РЬА-РЕО-никотин с молекулярным весом приблизительно 18500-22000 Да получили согласно вышеприведенному способу.
РЬА-РЕО-К848 с молекулярным весом приблизительно 15000 Да получили согласно вышеприведенному способу.
Поливиниловый спирт (МВ=11000-31000 Да, гидролизованный на 87-89%) приобрели у ТТ. Вакег (кат. №И232-08).
Партии изготовили с помощью способа двойных эмульсий с множеством первичных эмульсий. Приведенная ниже таблица дает ссылку на индексы растворов (например, В в колонке раствора №1 указывает на то, что применялся раствор №1В) и объем использованного раствора
Номер Раствор №1 Раствор №2 Раствор №3 Раствор №4 Раствор №5
образца (объем) (Объем) (Объем) (Объем) (Объем)
1 В (0,1 мл) С (1,0 мл) А (0,1 мл) С (1,0 мл) А (2,0 мл)
2 А (0,2 мл) А (1,0 мл) А (0,1 мл) А (1,0 мл) А (3,0 мл)
3 А (0/2 мл) В (1/0 мл) А (0,1 мл) В (1,0 мл) А (3,0 мл)
4 А (0/2 мл) В (1,0 мл) А (0,1 мл) В (1,0 мл) А (3,0 мл)
Раствор 1А. Пептид овальбумина 323-339, 35 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина в 0,13 Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 1В. Пептид овальбумина 323-339, 70 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина в 0,13 Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 2А. 0,21-ΐν РЬА, 75 мг/мл, и РЬА-РЕО-никотин, 25 мг/мл, в метиленхлориде. Раствор приготовили путем приготовления сначала двух отдельных растворов при комнатной температуре: 0,21-ΐν РЬА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде и РЬА-РЕО-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде. Конечный раствор приготовили путем добавления 3 частей раствора РЬА на каждую часть раствора РЬА-РЕО-никотин.
Раствор 2В. 0,71-ΐν РЬА, 75 мг/мл, и РЬА-РЕО-никотин, 25 мг/мл, в метиленхлориде. Раствор получали путем приготовления сначала двух отдельных растворов при комнатной температуре: 0,71-ΐν
- 34 028288
РЬА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде и РЬА-РЕС-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде. Конечный раствор приготовили путем добавления 3 частей раствора РЬА на каждую часть раствора РЬА-РЕС-никотин.
Раствор 2С. 0,19-ΐν РЬА, 75 мг/мл, и РЬА-РЕС-никотин, 25 мг/мл, в метиленхлориде. Раствор приготовили путем приготовления сначала двух отдельных растворов при комнатной температуре: 0,19-ΐν РЬА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде и РЬА-РЕС-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде. Конечный раствор приготовили путем добавления 3 частей раствора РЬА на каждую часть раствора РЬА-РЕС-никотин.
Раствор 3А. Олигонуклеотид (либо Р8-1826, либо РО-1826), 200 мг/мл, в очищенной воде. Раствор приготовили путем растворения олигонуклеотида в очищенной воде при комнатной температуре.
Раствор 4А. Такой же, как и раствор №2А.
Раствор 4В. Такой же, как и раствор №2В.
Раствор 4С. Такой же, как и раствор №2С.
Раствор 5А. Поливиниловый спирт, 50 мг/мл, в 100 мМ фосфатном буфере с рН 8.
Приготовили две отдельные первичные эмульсии вода-в-масле (В/М). В1/М2 приготовили путем объединения раствора 1 и раствора 2 в небольшой пробирке давления и обработки ультразвуком с 50% амплитудой в течение 40 с с помощью Вгаикои ϋίβίΐαΐ δοηίΠοΓ 250. В3/М4 приготовили путем объединения раствора 3 и раствора 4 в небольшой пробирке давления и обработки ультразвуком с 50% амплитудой в течение 40 с с помощью Вгаикои ϋίβίΐαΐ §отйег 250. Третью эмульсию с эмульсией из двух внутренних эмульсий ([В1/М2,В3/М4]/В5) приготовили путем объединения 0,5 мл каждой первичной эмульсии (В1/М2 и В3/М4) и раствора 5 и обработки ультразвуком с 30% амплитудой в течение 40-60 с с помощью Вгаи8ои ϋίβίΐαΐ §отйег 250.
Третью эмульсию добавили в стакан, содержащий 70 мМ фосфатный буферный раствор (30 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч с тем, чтобы позволить испариться метиленхлориду и сформироваться наноносителям. Часть наноносителей промыли путем перенесения суспензии наноносителей в центрифужную пробирку и кручения при 13823д в течение одного часа, удаления супернатанта и ресуспендирования осадка в фосфатно-соляном буфере. Повторили процедуру промывания и осадок ресуспендировали в фосфатно-соляном буфере для конечной дисперсии наночастиц приблизительно 10 мг/мл.
Количества олигонуклеотида и пептида в наноносителе определили посредством ВЭЖХ-анализа.
Пример 34. Стандартная двойная эмульсия.
Материалы.
Как приведено в примере 33 выше.
Партии изготовили с помощью стандартного способа двойных эмульсий. Приведенная ниже таблица дает ссылку на индексы растворов (например, В в колонке раствора №1 указывает на то, что применялся раствор №1В) и объем использованного раствора
Номер образца Раствор №1 (объем) Раствор Ν*2 (Объем) Раствор №3 (Объем) Раствор №4 (Объем) Раствор №5 (Объем)
1 А (0,1 мл) А (0/75 мл) А (0/25 мл) Нет А (2,0 мл)
2 А (0/1 мл) Нет А (0,25 мл) А (0,75 мл) А (2,0 мл)
3 А (0,1 мл) В (0/75 мл) А (0/25 мл) Нет А (2,0 мл)
4 Б (0,1 мл) С (0,75 мл) А (0,25 мл) Нет В (2,0 мл)
5 Б (0/1 мл) ϋ (0,25 мл) А (0,25 мл) А (0,50 мл) В (2,0 мл)
6 С (0,2 мл) Нет А (0,25 мл) А (0,75 мл) В (2,0 мл)
7 Ό (0/1 мл) Нет А (0,25 мл) А (0,75 мл) В (2,0 мл)
Раствор 1А. Пептид овальбумина 323-339, 69 мг/мл, в деионизированной воде. Раствор приготовили путем медленного добавления пептида овальбумина к воде при перемешивании при комнатной температуре.
Раствор 1В. Пептид овальбумина 323-339, 70 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина в 0,13 Ν растворе соляной кислоты при комнатной температуре.
Раствор 1С. Олигонуклеотид (Р8-1826), 50 мг/мл, в очищенной воде. Раствор приготовили путем
- 35 028288 растворения олигонуклеотида в очищенной воде при комнатной температуре.
Раствор 1Ό. Пептид овальбумина 323-339, 17,5 мг/мл, в разбавленном водном растворе соляной кислоты. Раствор приготовили путем растворения пептида овальбумина, 70 мг/мл, в 0,13 N растворе соляной кислоты при комнатной температуре и затем разведения раствора 3 частями очищенной воды на одну часть исходного раствора.
Раствор 2А. К848, 10 мг/мл, и 0,19-ΐν РЬА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 2В. РЬА-К848, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 2С. РЬОА-К848, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 2Ό. РЬА-РЕО-К848, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 3А. РЬА-РЕО-никотин, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 4А. 0,19-ΐν РЬА, 100 мг/мл, в чистом метиленхлориде приготовили при комнатной температуре.
Раствор 5А. Поливиниловый спирт, 50 мг/мл, в деионизированной воде.
Раствор 5В. Поливиниловый спирт, 50 мг/мл, в 100 мМ фосфатном буфере с рН 8.
Первичную эмульсию вода-в-масле (В/М) приготовили путем объединения раствора 1 и раствора 2, раствора 3 и раствора 4 в небольшой пробирке давления и обработки ультразвуком с 50% амплитудой в течение 40 с с помощью Вгапкои Οίβίΐηΐ 8ошйег 250. Двойную эмульсию вода/масло/вода (В/М/В) приготовили путем добавления раствора 5 к первичной эмульсии и обработки ультразвуком при 30-35% амплитуде в течение 40 с с помощью Вгапкои Οίβίΐηΐ 8отйег 250.
Двойную эмульсию добавили в стакан с раствором фосфатного буфера (30 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч с тем, чтобы позволить испариться метиленхлориду и сформироваться наноносителям. Часть наноносителей промыли путем перенесения суспензии наноносителей в центрифужную пробирку и кручения при 5000-9500 об/мин в течение одного часа, удаления супернатанта и ресуспендирования осадка в фосфатно-соляном буфере. Повторили процедуру промывания и осадок ресуспендировали в фосфатно-соляном буфере для конечной дисперсии наночастиц приблизительно 10 мг/мл.
Пример 35. Определение количества средств.
Способ для К848 и пептидов (например, пептида оуа, пептида человека, ΤΤ2ρΌΤ5!).
Количество К848 (иммуностимулирующее средство) и пептида оуа (Т-клеточный антиген) измерили с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе АдЛеи! 1100 при соответствующих длинах волн (λ=254 нм для К848 и 215 нм для пептида оуа), оснащенной колонкой АдЛеи! БогЬах 8В-С18 (3,5 мкм 75x4,6 мм. Температура колонки=40°С (кат. номер 866953-902)) с применением подвижной фазы А (МРА) 95% воды/5% ацетонитрила/0,1% ΤΡΑ и подвижной фазы В (МРВ) 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ΤΡΑ (градиент: В=5-45% за 7 мин; постепенно до 95% В до 9 мин; обратное понижение до 5% В до 9,5 мин и сохранять в равновесии до конца. Общее время цикла составило 13 мин со скоростью потока 1 мл/мин).
Способ для СрО.
Количество СрО (иммуностимулирующее средство) измерили с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе АдЛеи! 1100 при 260 нм, оснащенной ХВпбде С-18 \Уа1егк (2,5 микронная частица, 50x4,6 мм внутренний диаметр (кат. №186003090), темп, колонки 600°С) с применением подвижной фазы А 2% ацетенитрил в 100 мМ ТЕА-ацетатный буфер, рН приблизительно 8,0, и подвижной фазы В в виде 90% ацетонитрила, 10% воды (колонку уравновесили до 5% В с повышением до 55% В за 8,5 мин, затем постепенно до 90% В до 12 мин. Концентрацию В быстро повысили до 5% за 1 мин и уравновесили до времени остановки 16 мин. Скорость потока составляла 1 мл/мин до окончания способа 16 мин).
Способ для аналога никотина.
Аналог никотина измеряли с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе АдЛеи! 1100, оснащенной ХВпбде С-18 ^а!егк (5-микронная частица, 100x4,6 мм внутренний диаметр, температура колонки 400°С) с применением подвижной фазы А (МРА) 95% воды/5% ацетонитрила/0,1% ΤΡΑ и подвижной фазы В (МРВ) 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ΤΡΑ (градиент: колонку уравновесили на 5% В, повысили до 45% В за 14 мин. Затем постепенно повышали до 95% В от 14 до 20 мин. Концентрацию подвижной фазы В быстро понизили обратно до 5% и повторно уравновесили до конца способа. Скорость потока способа поддерживали при 0,5 мл/мин с общим временем цикла 25 мин. Суспензию NС центрифугировали при 14000 об/мин в течение приблизительно 15-30 мин в зависимости от размера частиц. Собранные осадки обрабатывали 200 мкл концентр. ΝΗ4ΟΗ (8 М) в течение 2 ч при покачивании до тех пор, пока раствор не стал прозрачным. 200 мкл 1% ΤΡΑ добавили для нейтрализации раствора смеси, что дало общий объем раствора осадка 200 мкл. Аликвоту 50 мкл раствора разбавили МРА (или водой)
- 36 028288 до 200 мкл и проанализировали на ВЭЖХ, как описано выше, для определения количества, присутствовавшего в осадках.
Инкапсулированный свободный К848 в наноносителе.
0,5 мл суспензии NС центрифугировали при 14000 об/мин в течение приблизительно 15 мин. Собранный остаток растворили 0,3 мл ацетонитрила и недолго центрифугировали при 14000 об/мин для удаления любых остаточных нерастворимых веществ. Прозрачный раствор дополнительно разбавили 4кратным эквивалентным объемом МРА и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанной выше.
Инкапсулированный СрС в наноносителе.
330 мкл суспензии NС с производства (приблизительно 10 мг/мл суспензия в РВδ) осадили центрифугированием при 14000 об/мин в течение 15-30 мин в зависимости от размера частиц. Собранные осадки ресуспендировали 500 мкл воды и обрабатывали ультразвуком в течение 30 мин до полного диспергирования частиц. NС затем нагревали при 600°С в течение 10 мин. К смеси добавили дополнительные 200 мкл 1 Ν ΝηΟΗ, нагревали еще 5 мин, в результате чего смесь становится прозрачной. Раствор гидролизованного NС недолго центрифугировали при 14000 об/мин Затем осуществили конечное 2-кратное разведение прозрачного раствора с использованием воды и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанной выше.
Инкапсулированные Т-клеточные антигены (например, пептид ονа или пептид человека, ТТ2рЦТ5!).
330 мкл суспензии NС с производства (приблизительно 10 мг/мл суспензия в РВδ) осадили центрифугированием при 14000 об/мин в течение 15-30 мин. К осадкам добавили 100 мкл ацетонитрила для растворения полимерных компонентов Ν^ Смесь перемешали на вортекс-мешалке и обрабатывали ультразвуком в течение 1-5 мин. 100 мкл 0,2% ТРА добавили к смеси для экстрагирования пептидов и обработали ультразвуком в течение еще 5 мин, чтобы обеспечить разрушение агрегатов. Смесь центрифугировали при 14000 об/мин в течение 15 мин для отделения каких-либо нерастворимых материалов (например, полимеров). Взяли 50 мкл аликвоту супернатанта, разведенную 150 мкл МРА (или воды) и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, как описано выше.
Количество конъюгированного аналога никотина (В-клеточный антиген) в наноносителях 1,5 мл суспензии NС осаждали центрифугированием при 14000 об/мин в течение приблизительно 15 мин, осадки гидролизовали с помощью 150 мкл концентрированного ΝΗ4ΟΗ (8М) в течение приблизительно 2-3 ч до тех пор, пока раствор не становится прозрачным. К смеси осадков добавили 150 мкл 2% ТГА(водн.) для нейтрализации раствора. Аликвоту 100 мкл смеси развели 200 мкл воды и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанной выше, и определили количество на основе калибровочной кривой, построенной при помощи предшественника (РЕС-никотин) РЬА-РЕС-никотина, применяемого в производстве.
Пример 36. Тестирование скорости высвобождения.
Высвобождение антигена (аналога никотина) и иммуностимулирующего средства (К848) из синтетических наноносителей в фосфатно-солевом буфере ^Βδ) (100 мМ, рН 7,4) и цитратном буфере (100 мМ, рН 4,5) при 37°С проводят следующим образом.
Аналитический способ. Высвобожденное количество К848 и ονа пептида измеряют при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ на системе АдЛей 1100 при λ=215 нм, оснащенной колонкой 2огЬах δΒ-ί'.Ί8 АдПей (3,5 мкм, 75x4,6 мм. Температура колонки=40°С (кат. номер 866953-902)) с применением подвижной фазы А (МРА) 98% воды/2% ацетонитрила/0,1% ТРА и подвижной фазы В (МРВ) 90% ацетонитрила/10% воды/0,09% ТРА (градиент: В=5-45% за 7 мин; постепенно до 95% В до 9 мин; повторно уравновесили до конца. Общее время цикла составляет 13 мин со скоростью потока 1 мл/мин).
Общее количество К848 и аналога никотина, присутствующих в наноносителях, сначала оценивают по загрузке К848 и аналога никотина в синтетических наноносителях. Водную суспензию тестируемых синтетических наноносителей затем разводят РΒδ до конечного объема исходного раствора 4,4 мл.
Измерение скорости высвобождения ίη νίΙΐΌ в РΒδ (рН 7,4).
Для образца Т0 сразу удаляют аликвоту 200 мкл из каждого образца NС и центрифугируют при 14000 об/мин в микроцентрифужных пробирках с помощью микроцентрифуги (модель: Са1аху 16). Удаляют 100 мкл супернатанта и разводят до 200 мкл подвижной фазой А (МРА) ВЭЖХ и анализируют на предмет количества высвобожденных К848 и аналога никотина на обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Для измерений в моменты времени: 9x200 мкл каждого из образцов добавляют в микроцентрифужные пробирки (3x200 для несконъюгированных), и добавляют 300 мкл 37°С РΒδ к каждой из вышеупомянутых аликвот, и образцы немедленно помещают в 37°С термостат. В следующие моменты времени: 2, 12, 24, 48, 96 и 144 ч (для конъюгированного К848) или 2, 12, 16 и 24 ч (для несконъюгированного (инкапсулированного) К848), образцы центрифугируют и анализируют на предмет количества высвобожденных К848 и аналога никотина таким же способом, как для образца Т0.
Измерение скорости высвобождения ίη νίΙΐΌ в цитратном буфере (рН 4,5).
Для образца Т0 удаляют 200 мкл аликвоту из каждого образца и центрифугируют при 6000 об/мин в
- 37 028288 течение 20 мин и удаляют супернатант. Остаточные синтетические наноносители ресуспендируют в 200 мкл цитратного буфера и центрифугируют при 14000 об/мин в течение 15 мин. Удаляют 100 мкл супернатанта, и разводят до 200 мкл посредством МРА, и анализируют на К848 и аналог никотина, как приведено выше.
Для измерений в моменты времени: 9x200 мкл каждого из образцов добавляют в микроцентрифужные пробирки (3x200 для неконъюгированного), и центрифугируют в течение 20 мин при 6000 об/мин, и удаляют супернатанты. Остаточные NС затем ресуспендируют в 500 мкл цитратного буфера и помещают в 37°С термостат. В следующие моменты времени: 12, 24, 48, 96 и 144 ч (для конъюгированного К848) или 2, 12, 16 и 24 ч (для несконъюгированного (инкапсулированного) К848), образцы центрифугируют и анализируют на предмет количества высвобожденных К848 и аналога никотина, как описано выше для образца Т0.
Для установления баланса масс из вышеуказанных измерений в РВ§ и цитратном буфере оставшиеся осадки из каждого образца обрабатывают 200 мкл конц. МН4ОН (8М) в течение 3 ч с перемешиванием. После осаждения смеси добавляют 200 мкл 1% ТРА с доведением общего объема раствора с осадком до 400 мкл. Аликвоту 50 мкл раствора разводят МРА до 200 мкл и анализируют на ВЭЖХ, как описано выше, для определения количества невысвобожденных К848 и аналога никотина, которые остаются в осадках после высвобождения ίη νίΐΓΟ для сведения баланса масс. Для несконъюгированных образцов разводят образец посредством ТРА в ацетонитриле и анализируют, как описано выше для К848 и аналога никотина.
Пример 37. Тестирование скорости высвобождения.
Высвобождение антигена (например, пептида ονα, Т-клеточного антигена) и иммуностимулирующих средств (например, К848, СрС) из синтетических наноносителей в фосфатно-соляном буфере (РВ§) (100 мМ, рН 7,4) и цитратном буфере (100 мМ, рН 4,5) при 37°С определяли следующим образом.
Высвобождение К848 из наноносителя, составленного из конъюгированного К848 и пептида ονα, осуществили путем замены требуемого количества водной суспензии тестируемых синтетических наноносителей, полученных с производства (например, приблизительно 10 мг/мл в РВ§), на такой же объем соответствующих сред для высвобождения (цитратный буфер, 100 мМ) посредством центрифугирования и ресуспендирования.
Измерение скорости высвобождения ίη νίΐτο в РВ§ (рН 7,4) мл суспензии NС в РВ§ центрифугировали при 14000 об/мин в микроцентрифужных пробирках, в основном от 15 до 30 мин, в зависимости от размера частиц. Собранный супернатант затем развели равным объемом подвижной фазы А (МРА) или водой и проанализировали на обращенно-фазовой ВЭЖХ на предмет количества К848, высвобожденного при хранении. Оставшийся осадок ресуспендировали до однородной суспензии в 1 мл РВ§ и поместили в термокамеру при 37°С с постоянным легким помешиванием.
Для образца Т0 сразу удалили аликвоты 150 мкл из суспензии NС перед тем, как поместить суспензию NС в термокамеру при 37°С, и центрифугировали при 14000 об/мин в микроцентрифужных пробирках с помощью микроцентрифуги (модель: Са1аху 16). Удалили 100 мкл супернатанта, и развели до 200 мкл подвижной фазой А (МРА) ВЭЖХ или водой, и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида ονα на обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Для измерений в моменты времени удалили аликвоты 150 мкл из суспензии-образца NС 37°С, и образцы центрифугировали, и проанализировали на предмет количества высвобожденных К848 и пептида ονα тем же способом, что и для образца Т0. Высвобожденные К848 и пептида ονα тестировали в момент времени 6, 24 ч для обычного контроля с дополнительными моментами времени 2, 48, 96 и 144 ч для установки полного профиля высвобождения.
Измерение скорости высвобождения ίη νίΐτο в цитратном буфере (рН 4,5).
Применили 100 мМ буфер на основе цитрата натрия (рН 4,5) для замены исходного раствора для хранения NС (например, РВ§) вместо РВ§-буфера, рН 7,4. Для того чтобы свести баланс масс из вышеприведенных измерений в РВ§ и цитратном буфере, оставшиеся осадки от каждого момента времени обработали 100 мкл МН4ОН (8М) в течение 2 ч (или дольше) при перемешивании до тех пор, пока раствор не стал прозрачным. 100 мкл 1% ТРА добавили для нейтрализации смеси, что дало общий объем раствора осадка 200 мкл. Аликвоту 50 мкл смеси развели МРА (или водой) до 200 мкл и проанализировали на ВЭЖХ, как описано выше, для определения количества невысвобожденного К848, который остался в осадке после высвобождения ίη νίΐτο для сведения баланса масс. Для несконъюгированных образцов образец разводят ТРА в ацетонитриле и анализируют, как описано выше для К848.
Высвобождение СрС определяли схожим образом как для измерения К848 и пептида ονα с точки зрения приготовления образцов и контролируемых моментов времени. Тем не менее, количество СрС в средах для высвобождения оценивали с помощью способа обращенно-фазовой ВЭЖХ, описанного выше.
Пример 38. Иммунизация посредством ΝΟ-Νκ, транспортирующих К848.
Группу из пяти мышей иммунизировали три раза (подкожно, в задние конечности) с 2-недельными интервалами (дни 0, 14 и 28) посредством 100 мг Νϋ-Νκ. Нанотраспортеры получили посредством
- 38 028288 принципа составления, который описан выше, и они содержали пептид оуа и полимеры, 50% из которых были РБСА-Р848, 25% из которых были РЬА, и 25% из которых были РЬА-РЕС-№с. Затем измерили антитела к никотину сыворотки крови на 26, 40, 54 и 69 дни. Значения ЕС50 для антител к никотину, как измерено в стандартном ЕБ18А на полилизинникотин, показаны на фиг. 1.
Скорость высвобождения Р848 из ΝΟΝΕ составляла 19,8 мкг на 1 мг ΝΟΝΕ за 24 ч инкубации при 37°С (рН 4,5). Сходная обработка не дала выявляемого высвобождения РЕС-никотинового антигена из ИС-№с. РЕС-никотин высвобождался из ИС-№с только при крайних значениях рН (после обработки ЯН4ОН или ТРА), демонстрируя 5,2% высвобождение (52 мкг на 1 мг ЫС-№с).
Данный эксперимент демонстрирует, что использование ЫС-№с, транспортирующего Р848 (адъювант Т11, агонист ТБР7/8), который высвобождался из ЫС-№с намного быстрее при физиологических условиях (рН 4,5), чем антиген (РЕС-никотин), создает сильный долговременный гуморальный иммунный ответ на антиген, переносимый ЫС. Индукция антител после иммунизации посредством ЫС-№с (наноноситель, с никотином на внешней поверхности в форме РЬА-РЕС-никотин) также транспортирующим адъювант Р848.

Claims (23)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Композиция для индукции или усиления иммунного ответа, содержащая синтетические наноносители, которые включают:
    (a) иммуномодулирующее средство, связанное с синтетическими наноносителями посредством связывающей иммуномодулирующее средство части; и (b) антиген, связанный с синтетическим наноносителем посредством связывающей антиген части, где связывающая часть антигена более стабильна при рН 4,5, чем связывающая часть иммуномодулирующего средства.
  2. 2. Композиция по п.1, где иммуномодулирующее средство связано с синтетическим нано носителем посредством связывающей иммуномоделирующее средство части ковалентно.
  3. 3. Композиция по п.1 или 2, где антиген связан с синтетическим наноносителем посредством связывающей антиген части ковалентно.
  4. 4. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где антиген представляет собой Вклеточный антиген, где, необязательно, В-клеточный антиген является: (а) антигеном, происходящим от инфекционного агента; или (Ь) слабоиммуногенным антигеном; или (с) злоупотребляемым веществом или его частью или вызывающим привыкание веществом или его частью; или (б) токсином или средством, вредным для окружающей среды; или (е) аллергеном, антигеном дегенеративного заболевания, раковым антигеном, антигеном атопического заболевания или антигеном заболевания обмена веществ.
  5. 5. Композиция по любому из пп.1-3, где антиген представляет собой Т-клеточный антиген, где, необязательно, Т-клеточный антиген является антигеном МНС1 класса.
  6. 6. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где иммуномодулирующее средство является адъювантом.
  7. 7. Композиция по п.6, где адъювант включает универсальный Т-клеточный антиген или агонист То11-подобного рецептора (ТЬР), где, необязательно, агонист ТЬР представляет собой: (а) агонист ТЬР 3, агонист ТЬР 7, агонист ТЬР 8, агонист ТЬР 7/8 или агонист ТЬР 9; или (Ь) имидазохинолин, например резиквимод или имиквимод; или (с) иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту, например иммуностимулирующую ДНК, иммуностимулирующую РНК или содержащую СрС иммуностимулирующую нуклеиновую кислоту.
  8. 8. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где синтетические наноносители включают один или несколько биоразлагаемых полимеров.
  9. 9. Композиция по любому из пп.1-8, где связывающая часть антигена содержит простой полиэфирный линкер.
  10. 10. Композиция по любому из пп.1-8, где синтетические наноносители включают несколько биоразлагаемых полимеров.
  11. 11. Композиция по п.10, где иммуномодулирующее средство и антиген, каждое, связано через связывающую часть иммуномодулирующего средства и связывающую часть антигена, соответственно, с биоразлагаемым полимером синтетических наноносителей.
  12. 12. Композиция по п.11, где биоразлагаемый полимер, с которым связано иммуномодулирующее средство, не включает простой полиэфир.
  13. 13. Композиция по п.12, где биоразлагаемый полимер включает полилактид, полигликолид или сополимер полилактида и полигликолида.
  14. 14. Композиция по любому из пп.8-13, где биоразлагаемый полимер или полимеры имеют средневесовой молекулярный вес в диапазоне от 800 до 10000 Да, определенный с помощью гель-проникающей хроматографии.
  15. 15. Композиция по любому из пп.8-13, где иммуномодулирующее средство связано с одним или несколькими биоразлагаемыми полимерами ковалентно.
    - 39 028288
  16. 16. Композиция по п.15, где связывающая иммуномодулирующее средство часть включает амидную связь, сложноэфирную связь или электростатическую связь.
  17. 17. Композиция по любому из предшествующих пунктов, где синтетические наноносители дополнительно включают функциональный элемент нацеливания на антигенпрезентирующую клетку (АРС) и/или включают наночастицы на основе липидов, полимерные наночастицы, металлические наночастицы, эмульсии на основе поверхностно-активных веществ, дендримеры, бакиболлы, нанопроволоки, вирусоподобные частицы, частицы на основе пептида или белка, наночастицы, которые содержат комбинацию наноматериалов, сфероидальные наночастицы, кубические наночастицы, пирамидальные наночастицы, вытянутые наночастицы, цилиндрические наночастицы или тороидальные наночастицы.
  18. 18. Композиция по любому из предшествующих пунктов, дополнительно включающая фармацевтически приемлемый эксципиент.
  19. 19. Композиция, содержащая вакцину, которая включает композицию по любому из предшествующих пунктов.
  20. 20. Применение композиции по любому из предшествующих пунктов в способе лечения или профилактики, включающем введение композиции субъекту.
  21. 21. Применение композиция по п.20 в способе индукции или усиления иммунного ответа, например, при лечении или профилактике рака, инфекционного заболевания, неаутоимунного нарушения обмена веществ, дегенеративного заболевания или привыкания.
  22. 22. Способ индукции или усиления иммунного ответа, включающий определение, что иммуномодулирующее средство и антиген, связанные с синтетическими наноносителями, отделяются от синтетических наноносителей согласно следующему соотношению:
    1А (высв.)%/А (высв.)%>1,2, где иммуномодулирующее средство связано с синтетическими наноносителями посредством связывающей иммуномодулирующее средство части и антиген связан с синтетическими наноносителями посредством связывающей антиген части; где связывающая антиген часть более стабильна при рН 4,5, чем связывающая иммуномодулирующее средство часть; и где 1А (высв.)% определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму веса иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетических наноносителях при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее из образцов синтетических наноносителей; и где А (высв.)% определяют как вес антигена, высвобождаемого при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму веса антигена, высвобождаемого при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, плюс вес антигена, удерживаемого в синтетических наноносителях при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее из образцов синтетических наноносителей; и введение указанных наноносителей субъекту.
  23. 23. Способ индукции или усиления иммунного ответа, включающий введение иммуномодулирующего средства и антигена субъекту, где иммуномодулирующее средство и антиген связаны с синтетическими наноносителям и определены как диссоциирующие от синтетических наноносителей согласно следующему соотношению:
    1А (высв.)%/А (высв.)%>1,2, где иммуномодулирующее средство связано с синтетическим наноносителем посредством связывающей иммуномодулирующее средство части; и антиген связан с синтетическими наноносителями посредством связывающей антиген части; где связывающая антиген часть более стабильна при рН 4,5, чем связывающая иммуномодулирующее средство часть; и где 1А (высв.)% определяют как вес иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму веса иммуномодулирующего средства, высвобождаемого при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч плюс вес иммуномодулирующего средства, удерживаемого в синтетических наноносителях при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и взятый как среднее из образцов синтетических наноносителей; и где А (высв.)% определяют как вес антигена, высвобождаемого при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, деленный на сумму веса антигена, высвобождаемого при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, плюс вес антигена, удерживаемого в синтетических наноносителях при воздействии на синтетические наноносители водной средой ίη νίίτο при рН 4,5 в течение 24 ч, выраженный как весовой процент и
    - 40 028288 взятый как среднее из образцов синтетических наноносителей.
EA201171478A 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения EA028288B1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US21712909P 2009-05-27 2009-05-27
US21712409P 2009-05-27 2009-05-27
US21711609P 2009-05-27 2009-05-27
US21711709P 2009-05-27 2009-05-27
PCT/US2010/001559 WO2010138192A2 (en) 2009-05-27 2010-05-26 Nanocarriers possessing components with different rates of release

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201171478A1 EA201171478A1 (ru) 2012-06-29
EA028288B1 true EA028288B1 (ru) 2017-10-31

Family

ID=43012672

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201171480A EA030246B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения-иммуномодулирующие средства
EA201171479A EA022699B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ
EA201791383A EA201791383A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения
EA201171478A EA028288B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения
EA201890311A EA201890311A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения - иммуномодулирующие средства
EA201500447A EA201500447A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201171480A EA030246B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения-иммуномодулирующие средства
EA201171479A EA022699B1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ
EA201791383A EA201791383A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201890311A EA201890311A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 Полимерные соединения - иммуномодулирующие средства
EA201500447A EA201500447A1 (ru) 2009-05-27 2010-05-26 НАЦЕЛЕННЫЕ СИНТЕТИЧЕСКИЕ НАНОНОСИТЕЛИ С pH-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ ВЫСВОБОЖДЕНИЕМ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ СРЕДСТВ

Country Status (12)

Country Link
US (9) US8629151B2 (ru)
EP (3) EP2435092A2 (ru)
JP (8) JP6297775B2 (ru)
KR (6) KR20180026572A (ru)
CN (7) CN102481376B (ru)
AU (6) AU2010254549B2 (ru)
BR (3) BRPI1012036A2 (ru)
CA (3) CA2762650A1 (ru)
EA (6) EA030246B1 (ru)
IL (3) IL216549A0 (ru)
MX (5) MX2011012599A (ru)
WO (3) WO2010138193A2 (ru)

Families Citing this family (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030129251A1 (en) 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US6993506B2 (en) 2000-12-05 2006-01-31 Jgr Acquisition, Inc. Method and device utilizing polymorphic data in e-commerce
JP4817599B2 (ja) * 2003-12-25 2011-11-16 独立行政法人科学技術振興機構 免疫活性増強剤とこれを用いた免疫活性の増強方法
JP5848127B2 (ja) 2008-08-13 2016-01-27 カリフォルニア インスティテュート オブ テクノロジー 担体ナノ粒子ならびに関連する組成物、方法およびシステム
RU2477753C2 (ru) * 2008-12-09 2013-03-20 Коули Фармасьютикал Груп, Инк. Иммуностимулирующие олигонуклеотиды
US11446374B2 (en) 2008-12-09 2022-09-20 Novavax, Inc. Modified RSV F proteins and methods of their use
LT3067064T (lt) 2008-12-09 2020-09-10 Novavax, Inc. Modifikuoti rsv f baltymai ir jų panaudojimo būdai
KR20120022984A (ko) * 2009-04-21 2012-03-12 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. Ｔｈ１ 편향 반응을 제공하는 면역나노치료법
CN102481376B (zh) 2009-05-27 2016-12-21 西莱克塔生物科技公司 免疫调节剂-聚合物化合物
CN107617110A (zh) * 2009-08-26 2018-01-23 西莱克塔生物科技公司 诱导t细胞辅助的组合物
AU2011258156B2 (en) 2010-05-26 2016-11-24 Selecta Biosciences, Inc. Multivalent synthetic nanocarrier vaccines
EP2640190A4 (en) 2010-11-05 2016-05-11 Selecta Biosciences Inc MODIFIED NICOTINIC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS
MX358598B (es) 2010-11-12 2018-08-27 Cour Pharmaceuticals Dev Company Partículas inmuno-moduladoras modificadas.
WO2012079047A2 (en) * 2010-12-10 2012-06-14 California Institute Of Technology Targeting kidney mesangium with nanoparticles of defined diameter
EP2495567A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-05 Erasmus University Medical Center Rotterdam Methods and means for monitoring disruption of tissue homeostasis in the total body
AU2012236937B2 (en) * 2011-03-25 2017-06-08 Selecta Biosciences, Inc. Osmotic mediated release synthetic nanocarriers
BR112013026661B1 (pt) 2011-04-18 2020-12-01 University Of Georgia Research Foundation, Inc. composição de vacina, usos da mesma e método para produzir a referida composição
US9289477B2 (en) 2011-04-29 2016-03-22 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce cytotoxic T lymphocyte responses
WO2013019658A2 (en) * 2011-07-29 2013-02-07 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers comprising polymers comprising multiple immunomodulatory agents
MX2014007233A (es) 2011-12-16 2015-02-04 Moderna Therapeutics Inc Composiciones de nucleosidos, nucleotidos y acidos nucleicos modificados.
EP2834259A4 (en) 2012-04-02 2016-08-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES
CA2868391A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Stephane Bancel Polynucleotides comprising n1-methyl-pseudouridine and methods for preparing the same
CA2876495C (en) 2012-06-21 2023-10-17 Northwestern University Peptide conjugated particles
CA2892529C (en) 2012-11-26 2023-04-25 Moderna Therapeutics, Inc. Terminally modified rna
US9468681B2 (en) 2013-03-01 2016-10-18 California Institute Of Technology Targeted nanoparticles
EP2968584A1 (en) * 2013-03-11 2016-01-20 Cristal Delivery B.V. Vaccination composition
KR20210057832A (ko) 2013-03-13 2021-05-21 코어 파마슈티칼스 디벨롭먼트 컴퍼니 인크. 염증 치료용 면역-변형된 입자
US10258698B2 (en) 2013-03-14 2019-04-16 Modernatx, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2014179771A1 (en) * 2013-05-03 2014-11-06 Selecta Biosciences, Inc. Dosing combinations for reducing undesired humoral immune responses
EA201592106A3 (ru) 2013-05-03 2016-08-31 Селекта Байосайенсиз, Инк. Локальное сопутствующее введение толерогенных синтетических наноносителей для снижения гиперчувствительности типа i и гиперчувствительности типа iv
EA201592273A1 (ru) * 2013-06-04 2016-09-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Повторное введение неиммуносупрессивных антигенспецифических иммунотерапевтических средств
JP7019233B2 (ja) 2013-07-11 2022-02-15 モデルナティエックス インコーポレイテッド ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質をコードする合成ポリヌクレオチドおよび合成ｓｇＲＮＡを含む組成物ならびに使用方法
FI3033102T4 (fi) 2013-08-13 2024-03-01 Univ Northwestern Peptidikonjugoituja hiukkasia
EP3041938A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
EP3041934A1 (en) 2013-09-03 2016-07-13 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
DE102013015112B4 (de) 2013-09-13 2016-07-14 Holger Frey Spaltbare Polyethylenglykol-(PEG)-Makromoleküle zum Einschluss von (Glyko-) Proteinen/Antigenen/Allergenen in abbaubaren Polyethylenglykol-(PEG)-Nanopartikeln sowie Verfahren zu ihrer Herstellung
ES2904276T3 (es) 2013-09-27 2022-04-04 Massachusetts Inst Technology Nanoestructuras de proteínas biológicamente activas sin vehículo
CA2930973A1 (en) 2013-11-22 2015-05-28 Pal SAERTROM C/ebp alpha short activating rna compositions and methods of use
US10428331B2 (en) 2014-01-16 2019-10-01 Musc Foundation For Research Development Targeted nanocarriers for the administration of immunosuppressive agents
US9919058B2 (en) 2014-07-15 2018-03-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Polyketal particles including a CpG oligodeoxynucleotide for the treatment of lung cancer
WO2016014846A1 (en) 2014-07-23 2016-01-28 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of intrabodies
WO2016019126A1 (en) * 2014-07-30 2016-02-04 The Research Foundation For The State University Of New York System and method for delivering genetic material or protein to cells
WO2016037163A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene therapy anti-viral transfer vector immune responses
EP3317323B1 (en) 2015-07-01 2021-05-26 California Institute of Technology Cationic mucic acid polymer-based delivery systems
EP3334417A4 (en) 2015-08-12 2019-07-17 Massachusetts Institute of Technology CELL SURFACE COUPLING OF NANOPARTICLES
MX2018002728A (es) 2015-09-03 2018-09-05 Novavax Inc Composiciones de vacuna que tienen estabilidad e inmunogenicidad mejoradas.
EP3347047A1 (en) * 2015-09-09 2018-07-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Expression vector delivery system and use thereof for inducing an immune response
HRP20220872T1 (hr) 2015-10-22 2022-12-23 Modernatx, Inc. Cjepiva protiv respiratornih virusa
CN108463217A (zh) 2015-11-20 2018-08-28 克里斯特递送有限公司 具有主动靶向的纳米颗粒
EP3394093B1 (en) 2015-12-23 2022-01-26 Modernatx, Inc. Methods of using ox40 ligand encoding polynucleotides
MA43587A (fr) 2016-01-10 2018-11-14 Modernatx Inc Arnm thérapeutiques codant pour des anticorps anti-ctla-4
KR20180114946A (ko) * 2016-03-02 2018-10-19 더 보드 오브 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 면역요법을 위한 sting 활성화 나노백신
AU2017283480A1 (en) 2016-06-13 2019-01-24 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
WO2018017985A1 (en) * 2016-07-21 2018-01-25 Case Western Reserve University Plant virus or virus-like particle constructs
EP3568162A1 (en) * 2017-01-10 2019-11-20 Nektar Therapeutics Multi-arm polymer conjugates of tlr agonist compounds and related immunotherapeutic treatment methods
BR112019018748A2 (pt) 2017-03-11 2020-04-07 Selecta Biosciences Inc métodos e composições relacionados ao tratamento combinado com anti-inflamatórios e nanocarreadores sintéticos compreendendo um imunossupressor
EP3678701A4 (en) 2017-09-05 2021-12-01 Torque Therapeutics, Inc. THERAPEUTIC PROTEIN COMPOSITIONS AND METHOD FOR MANUFACTURING AND USING THEREOF
US20200208152A1 (en) 2017-09-08 2020-07-02 Mina Therapeutics Limited Stabilized sarna compositions and methods of use
EP4183882A1 (en) 2017-09-08 2023-05-24 MiNA Therapeutics Limited Stabilized hnf4a sarna compositions and methods of use
CA3092984A1 (en) 2018-03-19 2019-09-26 Novavax, Inc. Multivalent influenza nanoparticle vaccines
US11566246B2 (en) 2018-04-12 2023-01-31 Mina Therapeutics Limited SIRT1-saRNA compositions and methods of use
GB2589246A (en) 2018-05-16 2021-05-26 Synthego Corp Methods and systems for guide RNA design and use
CN111971296A (zh) * 2018-05-30 2020-11-20 韩国亿诺生物有限公司 包含cd300e抑制剂作为活性成分的用于预防或治疗癌症的药物组合物
EP3833762A4 (en) 2018-08-09 2022-09-28 Verseau Therapeutics, Inc. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS FOR TARGETING CCR2 AND CSF1R AND THEIR USES
WO2020141225A1 (en) * 2019-01-04 2020-07-09 Ascendis Pharma A/S Minimization of systemic inflammation
CA3125533A1 (en) * 2019-01-04 2020-07-09 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Conjugates of pattern recognition receptor agonists
EP3914714A4 (en) 2019-01-25 2024-04-10 Synthego Corp SYSTEMS AND METHODS FOR MODULATING CRISPR ACTIVITY
EP3953473A1 (en) 2019-04-12 2022-02-16 MiNA Therapeutics Limited Sirt1-sarna compositions and methods of use
CN111249453B (zh) * 2020-02-26 2021-11-19 浙江大学 一种纳米疫苗及其制备方法
US20230181760A1 (en) * 2020-05-15 2023-06-15 Rutgers, The State University Of New Jersey Compositions and methods for treating wounds
WO2022006011A1 (en) * 2020-07-01 2022-01-06 Cello Therapeutics, Inc. Platelet membrane coated nanoparticles and uses thereof
WO2022044025A1 (en) * 2020-08-31 2022-03-03 Rav Bariach (08) Industries Ltd. Mechanical muti-point lock with an electro-mechanical unit for remote operation
US11952492B2 (en) * 2020-11-20 2024-04-09 Encapsys, Llc Biodegradable, controlled release microcapsules
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
CN112494460B (zh) * 2020-12-10 2022-03-11 浙江大飞龙动物保健品股份有限公司 替米考星粉剂及其制备方法
WO2022152939A1 (en) 2021-01-18 2022-07-21 Conserv Bioscience Limited Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof
EP4314292A1 (en) 2021-03-26 2024-02-07 MiNA Therapeutics Limited Tmem173 sarna compositions and methods of use
JP2024515626A (ja) 2021-04-16 2024-04-10 アスクレピオス バイオファーマシューティカル， インコーポレイテッド 血液脳関門を横断し低減された液性応答を惹起する合理的ポリプロイドａａｖビリオン
CN117813398A (zh) * 2021-09-17 2024-04-02 因美纳有限公司 试剂组合物、方法、料筒和系统
WO2023099884A1 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Mina Therapeutics Limited Pax6 sarna compositions and methods of use
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
WO2023161350A1 (en) 2022-02-24 2023-08-31 Io Biotech Aps Nucleotide delivery of cancer therapy
WO2023170435A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Mina Therapeutics Limited Il10 sarna compositions and methods of use
CN117224699B (zh) * 2023-09-05 2024-03-19 贵州大学 一种纳米复合物及其制备方法和用途

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004098509A2 (en) * 2003-04-30 2004-11-18 Chiron Corporation Compositions for inducing immune responses
US20080160089A1 (en) * 2003-10-14 2008-07-03 Medivas, Llc Vaccine delivery compositions and methods of use
WO2008115319A2 (en) * 2007-02-07 2008-09-25 Regents Of The University Of California Conjugates of synthetic tlr agonists and uses therefor
WO2009051837A2 (en) * 2007-10-12 2009-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Vaccine nanotechnology
WO2009076158A1 (en) * 2007-12-07 2009-06-18 Novartis Ag Compositions for inducing immune responses
WO2010003009A2 (en) * 2008-07-01 2010-01-07 Emory University Synergistic induction of humoral and cellular immunity by combinatorial activation of toll-like receptors
WO2010042870A1 (en) * 2008-10-12 2010-04-15 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
WO2010138194A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Selecta Biosciences, Inc. Immunomodulatory agent-polymeric compounds

Family Cites Families (252)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR7461M (ru) 1968-06-19 1970-01-05
GB1355961A (en) 1970-02-27 1974-06-12 Wellcome Found Preparation of immunosuppressive antilymphocytic serum
CH594444A5 (ru) * 1972-12-04 1978-01-13 Gerd Birrenbach
DK143689C (da) 1975-03-20 1982-03-15 J Kreuter Fremgangsmaade til fremstilling af en adsorberet vaccine
US4756907A (en) 1978-10-17 1988-07-12 Stolle Research & Development Corp. Active/passive immunization of the internal female reproductive organs
US4946929A (en) 1983-03-22 1990-08-07 Massachusetts Institute Of Technology Bioerodible articles useful as implants and prostheses having predictable degradation rates
US6309669B1 (en) 1984-03-16 2001-10-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Therapeutic treatment and prevention of infections with a bioactive materials encapsulated within a biodegradable-biocompatible polymeric matrix
US4638045A (en) 1985-02-19 1987-01-20 Massachusetts Institute Of Technology Non-peptide polyamino acid bioerodible polymers
US4631211A (en) 1985-03-25 1986-12-23 Scripps Clinic & Research Foundation Means for sequential solid phase organic synthesis and methods using the same
US4806621A (en) 1986-01-21 1989-02-21 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible, bioerodible, hydrophobic, implantable polyimino carbonate article
JPS63122620A (ja) * 1986-11-12 1988-05-26 Sanraku Inc ポリ乳酸マイクロスフエア及びその製造方法
CA1340581C (en) 1986-11-20 1999-06-08 Joseph P. Vacanti Chimeric neomorphogenesis of organs by controlled cellular implantation using artificial matrices
US5736372A (en) 1986-11-20 1998-04-07 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable synthetic polymeric fibrous matrix containing chondrocyte for in vivo production of a cartilaginous structure
US5759830A (en) 1986-11-20 1998-06-02 Massachusetts Institute Of Technology Three-dimensional fibrous scaffold containing attached cells for producing vascularized tissue in vivo
FR2608988B1 (fr) 1986-12-31 1991-01-11 Centre Nat Rech Scient Procede de preparation de systemes colloidaux dispersibles d'une substance, sous forme de nanoparticules
US5912017A (en) 1987-05-01 1999-06-15 Massachusetts Institute Of Technology Multiwall polymeric microspheres
US5229490A (en) 1987-05-06 1993-07-20 The Rockefeller University Multiple antigen peptide system
US5019379A (en) 1987-07-31 1991-05-28 Massachusetts Institute Of Technology Unsaturated polyanhydrides
US6130082A (en) 1988-05-05 2000-10-10 American Cyanamid Company Recombinant flagellin vaccines
US4929624A (en) * 1989-03-23 1990-05-29 Minnesota Mining And Manufacturing Company Olefinic 1H-imidazo(4,5-c)quinolin-4-amines
US5010167A (en) 1989-03-31 1991-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Poly(amide-and imide-co-anhydride) for biological application
US5114703A (en) * 1989-05-30 1992-05-19 Alliance Pharmaceutical Corp. Percutaneous lymphography using particulate fluorocarbon emulsions
US5733572A (en) 1989-12-22 1998-03-31 Imarx Pharmaceutical Corp. Gas and gaseous precursor filled microspheres as topical and subcutaneous delivery vehicles
GB9016885D0 (en) * 1990-08-01 1990-09-12 Scras Sustained release pharmaceutical compositions
US5389640A (en) 1991-03-01 1995-02-14 Minnesota Mining And Manufacturing Company 1-substituted, 2-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
NZ242220A (en) 1991-04-02 1994-04-27 Biotech Australia Pty Ltd Complex for oral delivery of a substance to the circulatory or lymphatic drainage system comprising microparticle coupled to at least one carrier, the substance being encapsulated by the microparticle
US5811447A (en) * 1993-01-28 1998-09-22 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US6235313B1 (en) * 1992-04-24 2001-05-22 Brown University Research Foundation Bioadhesive microspheres and their use as drug delivery and imaging systems
JPH07509467A (ja) 1992-07-21 1995-10-19 ザ　ゼネラル　ホスピタル　コーポレーション リンパ組織への薬物輸送システム
GB9216082D0 (en) 1992-07-28 1992-09-09 Univ Nottingham Lymphatic delivery composition
US6608201B2 (en) 1992-08-28 2003-08-19 3M Innovative Properties Company Process for preparing 1-substituted, 2-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
FR2695563B1 (fr) 1992-09-11 1994-12-02 Pasteur Institut Microparticules portant des antigènes et leur utilisation pour l'induction de réponses humorales ou cellulaires.
AU4932493A (en) 1992-09-25 1994-04-26 Dynagen, Inc. An immunobooster for delayed release of immunogen
US5399665A (en) 1992-11-05 1995-03-21 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymers for cell transplantation
US5928647A (en) 1993-01-11 1999-07-27 Dana-Farber Cancer Institute Inducing cytotoxic T lymphocyte responses
US5512600A (en) 1993-01-15 1996-04-30 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of bonded fiber structures for cell implantation
US5514378A (en) 1993-02-01 1996-05-07 Massachusetts Institute Of Technology Biocompatible polymer membranes and methods of preparation of three dimensional membrane structures
ATE167396T1 (de) 1993-02-22 1998-07-15 Alza Corp Mittel zur oralen gabe von wirkstoffen
WO1994021240A2 (de) 1993-03-17 1994-09-29 Silica Gel Ges.M.B.H Superparamagnetische teilchen, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung derselben
US5543158A (en) 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
WO1995003035A1 (en) 1993-07-23 1995-02-02 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes with enhanced stability for oral delivery
US5565215A (en) 1993-07-23 1996-10-15 Massachusettes Institute Of Technology Biodegradable injectable particles for imaging
US5798340A (en) 1993-09-17 1998-08-25 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
US5500161A (en) 1993-09-21 1996-03-19 Massachusetts Institute Of Technology And Virus Research Institute Method for making hydrophobic polymeric microparticles
JP2930421B2 (ja) 1994-02-28 1999-08-03 メディノヴァ メディカル コンサルティング ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 薬剤組成物、その製造方法及びその使用方法
GB9412273D0 (en) 1994-06-18 1994-08-10 Univ Nottingham Administration means
AU713040B2 (en) 1994-07-15 1999-11-18 University Of Iowa Research Foundation, The Immunomodulatory oligonucleotides
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6007845A (en) 1994-07-22 1999-12-28 Massachusetts Institute Of Technology Nanoparticles and microparticles of non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymers
US5716404A (en) 1994-12-16 1998-02-10 Massachusetts Institute Of Technology Breast tissue engineering
DE69630514D1 (de) 1995-01-05 2003-12-04 Univ Michigan Oberflächen-modifizierte nanopartikel und verfahren für ihre herstellung und verwendung
US6123727A (en) 1995-05-01 2000-09-26 Massachusetts Institute Of Technology Tissue engineered tendons and ligaments
WO1997004747A1 (en) 1995-07-27 1997-02-13 Dunn James M Drug delivery systems for macromolecular drugs
EP0850051A2 (en) 1995-08-31 1998-07-01 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Composition for sustained release of an agent
US6095148A (en) 1995-11-03 2000-08-01 Children's Medical Center Corporation Neuronal stimulation using electrically conducting polymers
US5902599A (en) 1996-02-20 1999-05-11 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable polymer networks for use in orthopedic and dental applications
US5874064A (en) 1996-05-24 1999-02-23 Massachusetts Institute Of Technology Aerodynamically light particles for pulmonary drug delivery
US5922695A (en) 1996-07-26 1999-07-13 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonomethyoxy nucleotide analogs having increased oral bioavarilability
US6368598B1 (en) 1996-09-16 2002-04-09 Jcrt Radiation Oncology Support Services, Inc. Drug complex for treatment of metastatic prostate cancer
IL129319A0 (en) 1996-10-25 2000-02-17 Minnesota Mining & Mfg Immune response modifier compounds for treatment of TH2 mediated and related diseases
US6042820A (en) 1996-12-20 2000-03-28 Connaught Laboratories Limited Biodegradable copolymer containing α-hydroxy acid and α-amino acid units
WO1998037919A1 (en) 1997-02-28 1998-09-03 University Of Iowa Research Foundation USE OF NUCLEIC ACIDS CONTAINING UNMETHYLATED CpG DINUCLEOTIDE IN THE TREATMENT OF LPS-ASSOCIATED DISORDERS
DK1005368T3 (da) 1997-03-10 2010-01-04 Ottawa Hospital Res Inst Anvendelse af nukleinsyrer, der indeholder ikke-metyleret CpG dinukleotid i kombination med alun som hjælpestoffer
US6211159B1 (en) 1997-04-11 2001-04-03 University Of Toronto Flagellin gene, FlaC of campylobacter
US6060082A (en) * 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
DE69838294T2 (de) 1997-05-20 2009-08-13 Ottawa Health Research Institute, Ottawa Verfahren zur Herstellung von Nukleinsäurekonstrukten
US5837752A (en) 1997-07-17 1998-11-17 Massachusetts Institute Of Technology Semi-interpenetrating polymer networks
US6989435B2 (en) * 1997-09-11 2006-01-24 Cambridge University Technical Services Ltd. Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response
DE19745950A1 (de) 1997-10-17 1999-04-22 Dds Drug Delivery Service Ges Arzneistoffträgerpartikel für die gewebespezifische Arzneistoffapplikation
KR100613634B1 (ko) * 1997-11-28 2006-08-18 다이닛본 스미토모 세이야꾸 가부시끼가이샤 신규한 복소환 화합물
US6197229B1 (en) * 1997-12-12 2001-03-06 Massachusetts Institute Of Technology Method for high supercoiled DNA content microspheres
US6254890B1 (en) 1997-12-12 2001-07-03 Massachusetts Institute Of Technology Sub-100nm biodegradable polymer spheres capable of transporting and releasing nucleic acids
FR2775435B1 (fr) * 1998-02-27 2000-05-26 Bioalliance Pharma Nanoparticules comprenant au moins un polymere et au moins un compose apte a complexer un ou plusieurs principes actifs
US6232287B1 (en) * 1998-03-13 2001-05-15 The Burnham Institute Molecules that home to various selected organs or tissues
US6506577B1 (en) 1998-03-19 2003-01-14 The Regents Of The University Of California Synthesis and crosslinking of catechol containing copolypeptides
US6632922B1 (en) 1998-03-19 2003-10-14 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
US6686446B2 (en) 1998-03-19 2004-02-03 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for controlled polypeptide synthesis
ES2284247T3 (es) 1998-04-03 2007-11-01 University Of Iowa Research Foundation Metodos y productos para estimular el sistema inmunitario usando oligonucleotidos y citoquinas inmunoterapeuticos.
EP1077708A1 (en) 1998-05-06 2001-02-28 University Of Iowa Research Foundation Methods for the prevention and treatment of parasitic infections and related diseases using cpg oligonucleotides
DE19827164A1 (de) * 1998-06-18 1999-12-23 Merck Patent Gmbh Katalytisch Titan(IV)-oxid vermittelte geminale symmetrische Dialkylierung von Carbonsäureamiden
US6242589B1 (en) 1998-07-14 2001-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Phosphorothioate oligonucleotides having modified internucleoside linkages
ES2260923T3 (es) 1998-07-29 2006-11-01 Chiron Corporation Micorparticulas con superficies adsorbentes, procedimientos de fabricacion y uso de las mismas.
DE19839214C1 (de) * 1998-08-28 2000-05-25 Aventis Res & Tech Gmbh & Co Verfahren zur Herstellung von sphärischen Mikropartikeln mit glatter Oberfläche, die ganz oder teilweise aus mindestens einem wasserunlöslichen linearen Polysaccharid bestehen, sowie mit diesem Verfahren erhältliche Mikropartikel und deren Verwendung
US6306640B1 (en) 1998-10-05 2001-10-23 Genzyme Corporation Melanoma antigenic peptides
KR20070051953A (ko) 1998-11-02 2007-05-18 엘란 코포레이션, 피엘씨 다입자 변형 방출 조성물
US7521068B2 (en) 1998-11-12 2009-04-21 Elan Pharma International Ltd. Dry powder aerosols of nanoparticulate drugs
US7238711B1 (en) 1999-03-17 2007-07-03 Cambridge University Technical Services Ltd. Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response
US6444192B1 (en) 1999-02-05 2002-09-03 The Regents Of The University Of California Diagnostic imaging of lymph structures
US7390780B2 (en) 1999-04-23 2008-06-24 Alza Corporation Gene delivery mediated by liposome-DNA complex with cleavable peg surface modification
US7238368B2 (en) 1999-04-23 2007-07-03 Alza Corporation Releasable linkage and compositions containing same
EP1880736A1 (en) 1999-04-23 2008-01-23 Alza Corporation Releasable linkage and composition containing same
US6800296B1 (en) 1999-05-19 2004-10-05 Massachusetts Institute Of Technology Modification of surfaces using biological recognition events
US6815170B1 (en) 1999-06-30 2004-11-09 John Wayne Cancer Institute Methods for lymph node identification
EP1202671A4 (en) 1999-08-13 2004-11-10 Point Biomedical Corp MICROPARTICLES USEFUL AS ULTRASONIC CONTRAST AGENTS FOR THE LYMPHATIC SYSTEM
CA2391534A1 (en) 1999-11-15 2001-05-25 Drug Innovation & Design, Inc. Selective cellular targeting: multifunctional delivery vehicles
EP1294930B1 (en) 2000-01-13 2011-03-30 Nanosphere, Inc. Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor
US20050032733A1 (en) * 2001-05-18 2005-02-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA)
US8202979B2 (en) 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US20050020525A1 (en) * 2002-02-20 2005-01-27 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
CN1406140A (zh) 2000-02-28 2003-03-26 吉倪塞思公司 纳米胶囊包封系统与方法
US20030129251A1 (en) 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US7129222B2 (en) 2000-03-10 2006-10-31 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US7192725B2 (en) 2000-05-19 2007-03-20 University Of Toronto Flagellin gene, flaC of Campylobacter
AU2001297913A1 (en) 2000-10-13 2002-12-23 Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. Polyvalent nanoparticles
GB0025414D0 (en) 2000-10-16 2000-11-29 Consejo Superior Investigacion Nanoparticles
EP1355965B1 (en) 2000-10-19 2012-09-19 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Method of synthesizing block copolymers for multifunctional self-assembled systems
US7592008B2 (en) 2000-11-20 2009-09-22 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois, A Body Corporate And Politic Of The State Of Illinois Membrane scaffold proteins
US7097837B2 (en) 2001-02-19 2006-08-29 Pharmexa A/S Synthetic vaccine agents
US20030175950A1 (en) 2001-05-29 2003-09-18 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of HIV gene expression using short interfering RNA
EP2545937A1 (en) 2001-06-05 2013-01-16 The Regents Of The University Of Michigan Nanoemulsion vaccines
AU2002354644C1 (en) 2001-07-10 2009-04-30 Corixa Corporation Compositions and methods for delivery of proteins and adjuvants encapsulated in microspheres
AU2002326561B2 (en) 2001-08-07 2008-04-03 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions, formulations, and methods for use thereof
US6818732B2 (en) 2001-08-30 2004-11-16 The Regents Of The University Of California Transition metal initiators for controlled poly (beta-peptide) synthesis from beta-lactam monomers
US8088388B2 (en) 2002-02-14 2012-01-03 United Biomedical, Inc. Stabilized synthetic immunogen delivery system
CA2476626A1 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Chiron Corporation Microparticles with adsorbed polypeptide-containing molecules
US20030232013A1 (en) 2002-02-22 2003-12-18 Gary Sieckman Therapeutic and diagnostic targeting of cancers cells with tumor homing peptides
US7635463B2 (en) * 2002-02-27 2009-12-22 Pharmain Corporation Compositions for delivery of therapeutics and other materials
AU2003230806B2 (en) 2002-04-04 2009-05-07 Zoetis Belgium S.A. Immunostimulatory G,U-containing oligoribonucleotides
US20040038303A1 (en) 2002-04-08 2004-02-26 Unger Gretchen M. Biologic modulations with nanoparticles
US7285289B2 (en) 2002-04-12 2007-10-23 Nagy Jon O Nanoparticle vaccines
US20080233181A1 (en) 2002-04-12 2008-09-25 Nagy Jon O Nanoparticle adjuvants for sub-unit vaccines
WO2003089906A2 (en) 2002-04-22 2003-10-30 University Of Florida Functionalized nanoparticles and methods of use
ATE469135T1 (de) * 2002-05-30 2010-06-15 Scripps Research Inst Kupferkatalysierte ligierung von aziden und acetylenen
WO2003105780A2 (en) * 2002-06-18 2003-12-24 Epigenesis Pharmaceuticals, Inc. A dry powder oligonucleotide formulation, preparation and its uses
US20040142887A1 (en) 2002-07-10 2004-07-22 Chengji Cui Antigen-polymer compositions
BR0312297A (pt) 2002-07-18 2005-04-12 Cytos Biotechnology Ag Conjugados veìculos de hapteno e seu uso
US7488792B2 (en) 2002-08-28 2009-02-10 Burnham Institute For Medical Research Collagen-binding molecules that selectively home to tumor vasculature and methods of using same
WO2004053056A2 (en) 2002-09-24 2004-06-24 University Of Kentucky Research Foundation Nanoparticle-based vaccine delivery system containing adjuvant
US7008411B1 (en) 2002-09-30 2006-03-07 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method and apparatus for treating vulnerable plaque
NO20024755D0 (no) 2002-10-03 2002-10-03 Amersham Health As Metode
SE0203687D0 (sv) * 2002-12-13 2002-12-13 Ian Harwigsson Med Adagit Fa Pharmaceutical Porous Particles
US20040156846A1 (en) 2003-02-06 2004-08-12 Triton Biosystems, Inc. Therapy via targeted delivery of nanoscale particles using L6 antibodies
WO2004071493A1 (en) 2003-02-17 2004-08-26 Peter Burkhard Peptidic nanoparticles as drug delivery and antigen display systems
US20040191215A1 (en) 2003-03-25 2004-09-30 Michael Froix Compositions for induction of a therapeutic response
AU2004224762B2 (en) * 2003-03-26 2009-12-24 Kuros Us Llc Packaging of immunostimulatory oligonucleotides into virus-like particles: method of preparation and use
CA2518223A1 (en) 2003-03-26 2004-10-07 Ltt Bio-Pharma Co., Ltd. Intravenous nanoparticles for targeting drug delivery and sustained drug release
US7727969B2 (en) 2003-06-06 2010-06-01 Massachusetts Institute Of Technology Controlled release nanoparticle having bound oligonucleotide for targeted delivery
CA2544240A1 (en) 2003-07-22 2005-02-17 Cytos Biotechnology Ag Cpg-packaged liposomes
US20050042298A1 (en) * 2003-08-20 2005-02-24 Pardridge William M. Immunonanoparticles
WO2005037190A2 (en) * 2003-09-03 2005-04-28 Dendritherapeutics, Inc. Multiplex vaccines
US7943179B2 (en) 2003-09-23 2011-05-17 Massachusetts Institute Of Technology pH triggerable polymeric particles
CA2558916C (en) 2003-10-20 2009-09-22 William Marsh Rice University Method to fabricate microcapsules from polymers and charged nanoparticles
WO2005055949A2 (en) 2003-12-09 2005-06-23 The Children's Hospital Of Philadelphia Sustained release preparations composed of biocompatible complex microparticles
MXPA06006738A (es) * 2003-12-19 2006-08-31 Univ North Carolina Metodos para fabricar micro- y nano-estructuras aisladas utilizando litografia suave o de impresion.
WO2005065418A2 (en) 2003-12-31 2005-07-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods of use of targeting peptides for diagnosis and therapy
US20070087986A1 (en) * 2004-01-26 2007-04-19 Brett Premack Compositions and methods for enhancing immunity by chemoattractant adjuvants
JP2007526253A (ja) 2004-02-19 2007-09-13 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド 免疫刺激性ウイルスｒｎａオリゴヌクレオチド
US20070166384A1 (en) * 2004-04-09 2007-07-19 Zarraga Isidro Angelo E Methods , composition and preparations for delivery of immune response modifiers
ES2246695B1 (es) 2004-04-29 2007-05-01 Instituto Cientifico Y Tecnologico De Navarra, S.A. Composicion estimuladora de la respuesta inmunitaria que comprende nanoparticulas a base de un copolimero de metil vinil eter y anhidrido maleico.
US20060017339A1 (en) * 2004-06-03 2006-01-26 Lalit Chordia Brushless canned motor
WO2005120574A1 (ja) 2004-06-11 2005-12-22 Riken 調節性細胞リガンドをリポソームに含有させてなる医薬
US7713550B2 (en) 2004-06-15 2010-05-11 Andrx Corporation Controlled release sodium valproate formulation
US7534448B2 (en) 2004-07-01 2009-05-19 Yale University Methods of treatment with drug loaded polymeric materials
WO2006014579A2 (en) 2004-07-08 2006-02-09 The Regents Of California Enhancing class i antigen presentation with synthetic sequences
US8017151B2 (en) 2004-09-07 2011-09-13 Board Of Regents Of The University Of Nebraska By And Behalf Of The University Of Nebraska Medical Center Amphiphilic polymer-protein conjugates and methods of use thereof
CN1692943A (zh) 2004-09-17 2005-11-09 四川大学 CpG DNA分子抗感染免疫制剂的制备和应用
GB0421296D0 (en) 2004-09-24 2004-10-27 Angiogene Pharm Ltd Bioreductively-activated prodrugs
JP5117191B2 (ja) * 2004-10-01 2013-01-09 ミダテック リミテッド 抗原及びアジュバントを含むナノ粒子、並びに免疫原性構造
AU2005294214A1 (en) * 2004-10-07 2006-04-20 Emory University Multifunctional nanoparticles conjugates and their use
WO2007001448A2 (en) 2004-11-04 2007-01-04 Massachusetts Institute Of Technology Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals
WO2006137934A2 (en) 2004-11-05 2006-12-28 The General Hospital Corporation Purposeful movement of human migratory cells away from an agent source
CA2588089C (en) 2004-11-15 2015-06-23 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. Immunogenic compositions containing anthrax antigen, biodegradable polymer microparticles, and polynucleotide-containing immunological adjuvant
US20060111271A1 (en) 2004-11-24 2006-05-25 Cerny Erich H Active and passive immunization against pharmacologically active hapten molecules using a synthetic carrier compound composed of similar elements
AU2005316384B2 (en) 2004-12-14 2012-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi modulation of MLL-AF4 and uses thereof
US20060257359A1 (en) 2005-02-28 2006-11-16 Cedric Francois Modifying macrophage phenotype for treatment of disease
WO2006102395A2 (en) 2005-03-22 2006-09-28 Medstar Health Inc Delivery systems and methods for diagnosing and treating cardiovascular diseases
US20080305161A1 (en) 2005-04-13 2008-12-11 Pfizer Inc Injectable depot formulations and methods for providing sustained release of nanoparticle compositions
EP1899467A2 (en) 2005-04-26 2008-03-19 Coley Pharmaceutical GmbH Modified oligoribonucleotide analogs with enhances immunostimulatory activity
US8497250B2 (en) 2005-05-04 2013-07-30 Noxxon Pharma Ag Use of spiegelmers to inhibit an intracellular target molecule
CN101189020A (zh) * 2005-05-10 2008-05-28 N·巴拉班 用于给予rnaⅲ-抑制肽的组合物
WO2006122223A2 (en) 2005-05-10 2006-11-16 Emory University Strategies for delivery of active agents using micelles and particles
WO2007003054A1 (en) 2005-07-06 2007-01-11 Shoichet Molly S Method of biomolecule immobilization on polymers using click-type chemistry
CN101287507B (zh) 2005-08-12 2012-12-05 刘江 用于淋巴靶向的方法和装置
WO2007028341A1 (fr) * 2005-09-09 2007-03-15 Beijing Diacrid Medical Technology Co., Ltd. Nanomicelles servant de medicaments anticancereux a polyethylene phospholipides glycolyles contenant des vinca alcaloides
SI1957647T1 (sl) 2005-11-25 2015-04-30 Zoetis Belgium S.A. Imunostimulatorni oligoribonukleotidi
US9393215B2 (en) 2005-12-02 2016-07-19 Novartis Ag Nanoparticles for use in immunogenic compositions
AU2006325225B2 (en) 2005-12-14 2013-07-04 Cytos Biotechnology Ag Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity
US9267937B2 (en) 2005-12-15 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology System for screening particles
US7842312B2 (en) 2005-12-29 2010-11-30 Cordis Corporation Polymeric compositions comprising therapeutic agents in crystalline phases, and methods of forming the same
WO2007089870A2 (en) * 2006-01-31 2007-08-09 Medivas, Llc Vaccine delivery compositions and methods of use
US8021689B2 (en) 2006-02-21 2011-09-20 Ecole Polytechnique Federale de Lausanne (“EPFL”) Nanoparticles for immunotherapy
AU2007221154A1 (en) 2006-02-24 2007-09-07 Novartis Ag Microparticles containing biodegradable polymer and cationic polysaccharide for use in immunogenic compositions
CA2648099C (en) 2006-03-31 2012-05-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc System for targeted delivery of therapeutic agents
WO2007118653A2 (de) 2006-04-11 2007-10-25 Koko Kosmetikvertrieb Gmbh & Co. Kg Nanopartikel, enthaltend nicotin und/oder cotinin, dispersionen und die verwendung derselben
CN101573141B (zh) 2006-05-15 2016-05-04 麻省理工学院 用于功能性颗粒的聚合物
WO2007137117A2 (en) 2006-05-17 2007-11-29 Massachusetts Institute Of Technology Aptamer-directed drug delivery
MX2008015529A (es) 2006-06-12 2009-01-13 Cytos Biotechnology Ag Procesos para empacar oligonucleotidos en particulas similares a virus de bacteriofagos de arn.
JP2010502766A (ja) * 2006-06-16 2010-01-28 フロリダ アトランティック ユニヴァーシティ アジュバントとしてのキチン微粒子
WO2007150030A2 (en) 2006-06-23 2007-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Microfluidic synthesis of organic nanoparticles
WO2008019142A2 (en) 2006-08-04 2008-02-14 Massachusetts Institute Of Technology Oligonucleotide systems for targeted intracellular delivery
US20080171059A1 (en) 2006-08-07 2008-07-17 Shanshan Wu Howland Methods and compositions for increased priming of t-cells through cross-presentation of exogenous antigens
CN101500937A (zh) 2006-08-11 2009-08-05 万能药生物有限公司 用于递送活性成分的粒子及其制备方法和组合物
WO2008033432A2 (en) 2006-09-12 2008-03-20 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immune modulation by chemically modified ribonucleosides and oligoribonucleotides
EP3590503A1 (en) 2006-10-12 2020-01-08 The University of Queensland Compositions and methods for modulating immune responses
WO2008147456A2 (en) 2006-11-20 2008-12-04 Massachusetts Institute Of Technology Drug delivery systems using fc fragments
WO2008073856A2 (en) 2006-12-08 2008-06-19 Massachusetts Institute Of Technology Delivery of nanoparticles and/or agents to cells
WO2008071774A1 (en) 2006-12-14 2008-06-19 Cytos Biotechnology Ag Purification process for coat protein of rna bacteriophages
US20080149123A1 (en) * 2006-12-22 2008-06-26 Mckay William D Particulate material dispensing hairbrush with combination bristles
WO2008098165A2 (en) 2007-02-09 2008-08-14 Massachusetts Institute Of Technology Oscillating cell culture bioreactor
US8889117B2 (en) 2007-02-15 2014-11-18 Yale University Modular nanoparticles for adaptable vaccines
US20100151031A1 (en) 2007-03-23 2010-06-17 Desimone Joseph M Discrete size and shape specific organic nanoparticles designed to elicit an immune response
US11246831B2 (en) 2007-03-30 2022-02-15 Particle Sciences, Inc. Particle formulations and uses thereof
EP2144600A4 (en) 2007-04-04 2011-03-16 Massachusetts Inst Technology POLY (AMINIC ACID) TARGET MOLECULES
WO2008124634A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Polymer-encapsulated reverse micelles
WO2008124165A2 (en) 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
EP2146747A1 (en) 2007-04-12 2010-01-27 Emory University Novel strategies for delivery of active agents using micelles and particles
US8394914B2 (en) 2007-08-24 2013-03-12 Board Of Trustees Of Michigan State University Functional polyglycolide nanoparticles derived from unimolecular micelles
WO2009038685A1 (en) 2007-09-18 2009-03-26 The Scripps Research Institute Ligands for copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition reactions
EP2217930B1 (en) * 2007-10-24 2013-03-06 Tallinn University Of Technology Maldi ms-based high-throughput screening method for substances inhibiting aggregation of alzheimer's amyloid beta peptides
WO2009109428A2 (en) 2008-02-01 2009-09-11 Alpha-O Peptides Ag Self-assembling peptide nanoparticles useful as vaccines
WO2009106999A2 (en) 2008-02-28 2009-09-03 Deutsches Krebsforschungszentrum, Stiftung Des Öffentlichen Rechts Hollow nanoparticles and uses thereof
EP2262480B1 (en) 2008-03-04 2018-02-14 Liquidia Technologies, Inc. Immunomodulator particles
US20090297621A1 (en) 2008-06-03 2009-12-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Microparticles For The Treatment Of Disease
US8613951B2 (en) 2008-06-16 2013-12-24 Bind Therapeutics, Inc. Therapeutic polymeric nanoparticles with mTor inhibitors and methods of making and using same
JP2012501965A (ja) 2008-06-16 2012-01-26 バインド バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 薬剤を装填したポリマーナノ粒子及びその製造方法と使用方法
JP5667566B2 (ja) 2008-08-06 2015-02-12 ノバルティス アーゲー 免疫原性組成物における使用のための微粒子
JP2011530562A (ja) 2008-08-11 2011-12-22 グラクソスミスクライン エルエルシー アレルギー性、炎症性及び感染性疾患治療用のプリン誘導体
WO2010018130A1 (en) 2008-08-11 2010-02-18 Smithkline Beecham Corporation Purine derivatives for use in the treatment of allergic, inflammatory and infectious diseases
UA103195C2 (ru) 2008-08-11 2013-09-25 Глаксосмитклайн Ллк Производные пурина для применения в лечении аллергий, воспалительных и инфекционных заболеваний
WO2010018132A1 (en) 2008-08-11 2010-02-18 Smithkline Beecham Corporation Compounds
US8323696B2 (en) 2008-08-29 2012-12-04 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Nanoparticles for immunotherapy
US8889635B2 (en) 2008-09-30 2014-11-18 The Regents Of The University Of Michigan Dendrimer conjugates
US8343497B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics
US8591905B2 (en) * 2008-10-12 2013-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nicotine immunonanotherapeutics
US8277812B2 (en) 2008-10-12 2012-10-02 Massachusetts Institute Of Technology Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen
JP5661735B2 (ja) 2009-04-01 2015-01-28 ユニバーシティ オブ マイアミ ワクチン組成物及びその使用方法
KR20120022984A (ko) 2009-04-21 2012-03-12 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. Ｔｈ１ 편향 반응을 제공하는 면역나노치료법
EP2425019B1 (en) 2009-05-01 2014-03-19 QIAGEN Gaithersburg, Inc. A non-target amplification method for detection of rna splice-forms in a sample
EP3058953A1 (en) 2009-07-07 2016-08-24 The Research Foundation Of State University Of New York Lipidic compositions for induction of immune tolerance
CN107617110A (zh) 2009-08-26 2018-01-23 西莱克塔生物科技公司 诱导t细胞辅助的组合物
EA201290499A1 (ru) 2009-12-15 2013-01-30 Байнд Байосайенсиз, Инк. Композиции терапевтических полимерных наночастиц с высокой температурой стеклования и высокомолекулярными сополимерами
US20110171248A1 (en) 2010-01-08 2011-07-14 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic virus-like particles conjugated to human papillomavirus capsid peptides for use as vaccines
US20110229556A1 (en) 2010-03-19 2011-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Lipid-coated polymer particles for immune stimulation
US20110272836A1 (en) 2010-04-12 2011-11-10 Selecta Biosciences, Inc. Eccentric vessels
US20110262491A1 (en) 2010-04-12 2011-10-27 Selecta Biosciences, Inc. Emulsions and methods of making nanocarriers
AU2011258156B2 (en) * 2010-05-26 2016-11-24 Selecta Biosciences, Inc. Multivalent synthetic nanocarrier vaccines
AU2011291522A1 (en) * 2010-08-20 2013-01-24 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarrier vaccines comprising peptides obtained or derived from human influenza A virus M2E
KR20130098308A (ko) 2010-08-23 2013-09-04 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. 항원에 대한 면역 반응을 유도하기 위한 표적화 다중 에피토프 투여형
EP2640190A4 (en) 2010-11-05 2016-05-11 Selecta Biosciences Inc MODIFIED NICOTINIC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS
WO2012092552A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers with reactive groups that release biologically active agents
AU2012236937B2 (en) 2011-03-25 2017-06-08 Selecta Biosciences, Inc. Osmotic mediated release synthetic nanocarriers
US9289477B2 (en) 2011-04-29 2016-03-22 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce cytotoxic T lymphocyte responses
WO2013019658A2 (en) * 2011-07-29 2013-02-07 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarriers comprising polymers comprising multiple immunomodulatory agents
WO2013036293A1 (en) * 2011-09-06 2013-03-14 Selecta Biosciences, Inc. Dendritic cell subsets for generating induced tolerogenic dendritic cells and related compositions and methods
EA201592106A3 (ru) 2013-05-03 2016-08-31 Селекта Байосайенсиз, Инк. Локальное сопутствующее введение толерогенных синтетических наноносителей для снижения гиперчувствительности типа i и гиперчувствительности типа iv
EA201592273A1 (ru) 2013-06-04 2016-09-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Повторное введение неиммуносупрессивных антигенспецифических иммунотерапевтических средств
US20160220501A1 (en) 2015-02-03 2016-08-04 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers to reduce immune responses to therapeutic proteins
US20150359865A1 (en) 2014-06-17 2015-12-17 Selecta Biosciences, Inc. Tolerogenic synthetic nanocarriers for t-cell-mediated autoimmune disease
EP3160453A1 (en) 2014-06-25 2017-05-03 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for treatment with synthetic nanocarriers and immune checkpoint inhibitors
WO2016037163A1 (en) 2014-09-07 2016-03-10 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for attenuating gene therapy anti-viral transfer vector immune responses
PL3215133T3 (pl) 2014-11-05 2021-06-14 Selecta Biosciences, Inc. Sposoby i kompozycje związane z zastosowaniem związków powierzchniowo czynnych o niskiej hlb do wytwarzania syntetycznych nanonośników zawierających rapalog

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004098509A2 (en) * 2003-04-30 2004-11-18 Chiron Corporation Compositions for inducing immune responses
US20080160089A1 (en) * 2003-10-14 2008-07-03 Medivas, Llc Vaccine delivery compositions and methods of use
WO2008115319A2 (en) * 2007-02-07 2008-09-25 Regents Of The University Of California Conjugates of synthetic tlr agonists and uses therefor
WO2009051837A2 (en) * 2007-10-12 2009-04-23 Massachusetts Institute Of Technology Vaccine nanotechnology
WO2009076158A1 (en) * 2007-12-07 2009-06-18 Novartis Ag Compositions for inducing immune responses
WO2010003009A2 (en) * 2008-07-01 2010-01-07 Emory University Synergistic induction of humoral and cellular immunity by combinatorial activation of toll-like receptors
WO2010042870A1 (en) * 2008-10-12 2010-04-15 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
WO2010138194A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Selecta Biosciences, Inc. Immunomodulatory agent-polymeric compounds
WO2010138193A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Selecta Biosciences, Inc. Targeted synthetic nanocarriers with ph sensitive release of immunomodulatory agents

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DIWAN, M. TAFAGHODI, M. SAMUEL, J.: "Enhancement of immune responses by co-delivery of a CpG oligodeoxynucleotide and tetanus toxoid in biodegradable nanospheres", JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE, ELSEVIER, AMSTERDAM., NL, vol. 85, no. 1-3, 13 December 2002 (2002-12-13), NL, pages 247 - 262, XP004397783, ISSN: 0168-3659, DOI: 10.1016/S0168-3659(02)00275-4 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2010254550A1 (en) 2011-12-15
JP6297776B2 (ja) 2018-03-20
JP2017200925A (ja) 2017-11-09
KR20120087807A (ko) 2012-08-07
AU2017200383A1 (en) 2017-02-09
AU2017200388A1 (en) 2017-02-09
MX357630B (es) 2018-07-17
CN102481376A (zh) 2012-05-30
CA2762650A1 (en) 2010-12-02
MX2011012598A (es) 2012-04-19
BRPI1010674A2 (pt) 2016-03-15
CN102481376B (zh) 2016-12-21
US20150328300A1 (en) 2015-11-19
MX350667B (es) 2017-09-12
EP2435092A2 (en) 2012-04-04
AU2010254551B2 (en) 2016-10-20
US20110027217A1 (en) 2011-02-03
JP6236048B2 (ja) 2017-11-22
IL216550A (en) 2016-10-31
MX2011012599A (es) 2012-04-19
IL216548A0 (en) 2012-02-29
KR101916875B1 (ko) 2018-11-08
IL216548B (en) 2018-11-29
CA2762647A1 (en) 2010-12-02
EA201500447A1 (ru) 2017-03-31
AU2016200137A1 (en) 2016-02-04
WO2010138193A3 (en) 2011-06-03
CN107033339A (zh) 2017-08-11
US8629151B2 (en) 2014-01-14
CN102481375B (zh) 2017-06-06
CA2762653A1 (en) 2010-12-02
IL216550A0 (en) 2012-02-29
US20140030344A1 (en) 2014-01-30
WO2010138192A3 (en) 2011-06-03
BRPI1012034A2 (pt) 2016-05-17
CN107096018A (zh) 2017-08-29
WO2010138194A2 (en) 2010-12-02
AU2010254550B2 (en) 2015-10-15
KR20120061040A (ko) 2012-06-12
KR20120023830A (ko) 2012-03-13
JP2016041708A (ja) 2016-03-31
JP6297775B2 (ja) 2018-03-20
EA201171479A1 (ru) 2012-06-29
US20180256709A1 (en) 2018-09-13
AU2010254551A1 (en) 2011-12-15
WO2010138193A2 (en) 2010-12-02
AU2010254549B2 (en) 2016-10-20
AU2016200137B2 (en) 2018-02-08
JP2012528154A (ja) 2012-11-12
JP2016053048A (ja) 2016-04-14
KR20180122487A (ko) 2018-11-12
BRPI1012036A2 (pt) 2017-10-10
US20110020388A1 (en) 2011-01-27
CN107080848A (zh) 2017-08-22
EA201171480A1 (ru) 2012-07-30
JP2012528153A (ja) 2012-11-12
CN102481374A (zh) 2012-05-30
AU2010254549A1 (en) 2011-12-15
JP2016094411A (ja) 2016-05-26
EA201171478A1 (ru) 2012-06-29
MX2011012597A (es) 2012-04-19
CN102481375A (zh) 2012-05-30
US9006254B2 (en) 2015-04-14
EA022699B1 (ru) 2016-02-29
US9884112B2 (en) 2018-02-06
JP6282395B2 (ja) 2018-02-21
US20140193453A1 (en) 2014-07-10
US20100303850A1 (en) 2010-12-02
US20200390881A1 (en) 2020-12-17
CN107252482A (zh) 2017-10-17
WO2010138194A3 (en) 2011-06-30
EA201890311A1 (ru) 2018-10-31
EA030246B1 (ru) 2018-07-31
WO2010138192A2 (en) 2010-12-02
EA201791383A1 (ru) 2018-06-29
IL216549A0 (en) 2012-02-29
KR20180026572A (ko) 2018-03-12
EP2435095A2 (en) 2012-04-04
KR20180026571A (ko) 2018-03-12
EP2435094A2 (en) 2012-04-04
JP2018065808A (ja) 2018-04-26
JP2012528155A (ja) 2012-11-12
US20140242173A1 (en) 2014-08-28
AU2010254551A9 (en) 2016-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA028288B1 (ru) Наноносители, имеющие компоненты с различными скоростями высвобождения
ES2661978T3 (es) Vacunas multivalentes de nanovehículos sintéticos
US20130028857A1 (en) Synthetic nanocarriers comprising polymers comprising multiple immunomodulatory agents
US20120171229A1 (en) Synthetic nanocarriers with reactive groups that release biologically active agents
CA2868450C (en) Nanoparticle vaccine against malaria
WO2014120804A1 (en) Enteric coated nanoparticles for oral vaccine and drug delivery and methods of production and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU