EA012869B1 - Замещённые пиримидины, композиции на их основе и применение замещенных пиримидинов в качестве ингибиторов протеинкиназ - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы Vили их фармацевтически приемлемым производным или солям, где Rвыбран из водорода или Cалифатической группы; Rвыбран из Cалифатической группы и Rпредставляет собой циклопропил. Композиции, содержащие соединения формулы V в качестве активного агента, также раскрыты. Настоящее изобретение относится к способу ингибирования Aurora-1, Aurora-2, Aurora-3, FLT-3 и лечению рака у пациентов.

Description

Данное изобретение относится к легкому способу получения замещенных пиримидинов. Этот способ применим для получения ингибиторов протеинкиназ, в частности ЕЬТ-3 и киназ семейства Аигога, серин/треонинпротеинкиназ. Данное изобретение относится также к ингибиторам протеинкиназ ЕЬТ-3, Аигога-1, Аигога-2 и Аигога-3 и их композициям.

Уровень техники

Поиск новых терапевтических средств был в значительной степени облегчен в последние годы лучшим пониманием структуры ферментов и других биомолекул, ассоциированных с представляющими интерес заболеваниями. Одним важным классом ферментов, который был предметом интенсивного исследования, являются протеинкиназы.

Протеинкиназы опосредуют внутриклеточную трансдукцию сигналов. Они осуществляют это путем переноса фосфорила от нуклеозидтрифосфата к белковому акцептору, который участвует в пути передачи сигнала. Имеется ряд киназ и путей, посредством которых внеклеточные и другие стимулы индуцируют различные клеточные реакции внутри клетки. Примеры таких стимулов включают в себя сигналы окружающей среды и химического стресса (например, осмотический шок, тепловой шок, ультрафиолетовую радиацию, бактериальный эндотоксин и Н₂О₂), цитокины (например, интерлейкин-1 (ГС-1) и фактор некроза опухолей альфа (ΤΝΕ-α)) и факторы роста (например, колониестимулирующий фактор гранулоцитов и макрофагов (ОМ-С8Е) и фактор роста фибробластов (ГОЕ)). Внеклеточный стимул может действовать на одну или несколько клеточных реакций, связанных с ростом, миграцией, дифференцировкой клеток, секрецией гормонов, активацией факторов транскрипции, мышечным сокращением, метаболизмом глюкозы, регуляцией синтеза белка и регуляцией клеточного цикла.

Многие заболевания ассоциированы с нарушенными клеточными реакциями, запускаемыми опосредуемыми протеинкиназами событиями. Эти заболевания включают в себя аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания, костные заболевания, метаболические заболевания, неврологические и нейродегенеративные заболевания, рак, сердечно-сосудистые заболевания, аллергии и астму, болезнь Альцгеймера и связанные с гормонами заболевания. Таким образом, в медицинской химии прилагались существенные усилия для нахождения ингибиторов протеинкиназ, которые являются эффективными в качестве терапевтических агентов.

Семейство Аигога серин/треонинкиназ является важным для пролиферации клеток |В1зсНоГГ, 1.К. & Р1о^шап, Ο.Ό. (ТНе Аигога/1р11р кшазе Гашбу: геди1а!огз оГ сНготозоте зедтедабоп апб су!окшез1з) Тгепбз ίη Се11 Вю1оду 9, 454-459 (1999); О1е!, В. апб Рг1цеп(, С. (Аигога/1р11р-ге1а1еб кшазез, а пе\т опсодешс Гатйу оГ тйоНс зеппеЭНтеошпе кшазез) 1оигпа1 оГ Се11 8аепсе 112, 3591-3601 (1999); Νί§§, Е.А. (МНоИс кшазез аз геди1а!огз оГ се11 бМзюпз апб Из сНескрош!з) №1. Кеу. Мо1. Се11 Вю1. 2, 21-32 (2001); Абатз, К.К., Сагтепа, М., апб ЕагпзНате, \У.С. (СНготозота1 раззепдегз апб !Не (аигога) АВС оГ тйоз1з) Тгепбз ш Се11 Вю1оду 11, 49-54 (2001)]. Таким образом, ингибиторы семейства киназ Аигога имеют потенциал блокирования роста всех типов опухолей.

Три известных члена семейства млекопитающих, Аигога-А (1), В (2) и С (3), являются высокогомологичными белками, ответственными за хромосомное расщепление, функцию митотического веретена и цитокинез. Экспрессия Аигога является низкой или недетектируемой в покоящихся клетках, с повышением экспрессии и активности до максимума во время фазы 02 и митотической фазы в клеточном цикле. В клетках млекопитающих предполагаемые субстраты Аигога включают в себя гистон Н3, белок, участвующий в конденсации хромосом, и СЕ№-А, регуляторную легкую цепь миозина II, протеинфосфатазу 1, ТРХ2, которые все необходимы для деления клеток.

С его открытия в 1997 г. семейство киназ Аигога тесно связывали с онкогенезом. Наиболее привлекающим внимание доказательством этой связи является то, что сверхэкспрессия Аигога-А вызывает перерождение фибробластов грызунов (В1зсНоГГ, 1.К., е! а1., А Ното1одие оГ ЭгозорНба аигога кшазе 1з опсодешс апб атрНЕеб ш Нитап со1огес!а1 сапсегз. ЕМВО 1. 17, 3052-3065 (1998)). Клетки с повышенными уровнями этой киназы содержат множественные центросомы и мультиполярные веретена и быстро становятся анеуплоидными. Онкогенная активность киназ Аигога, по-видимому, связана с генерированием такой генетической нестабильности. Действительно, наблюдали корреляцию между амплификацией локуса аитота-А и хромосомной нестабильностью в опухолях молочной железы и желудка (М1уозЫ, Υ., Г^ао, К., Еда^а, С., апб ШдисНт 8. Аззоаабоп оГ сеп!гозота1 кшазе 8ТК15/ВТАК ιηΒΝΛ ехртеззюп \\'6Н сНготозота1 шз!аЬШ1у ш Нитап Ьгеаз! сапсегз. Гп!. 1. Сапсег 92, 370-373 (2001); 8акакига, С. е! а1. ТбиогатрНЕеб кшазе ВТАК 1з атрНЕеб апб оуегехргеззеб ш даз!пс сапсегз \νί(1ι розз1Ь1е шуокетеп! ш апеир1о1б ГоттаНоп. ВпбзН 1оитпа1 о Г Сапсег 84, 824-831 (2001)). Сообщалось, что киназы Аигога сверхэкспрессируются в большом диапазоне опухолей человека. Повышенная экспрессия Аигога-А была обнаружена в более чем 50% колоректальных опухолей (В1зсНо££, 1.К., е! а1., А Ното1одие оГ ЭгозорНба аигога кшазе 1з опсодешс апб атрНЕеб ш йитап со1огес!а1 сапсегз. ЕМВО 1. 17, 3052-3065 (1998); ТакаНазЫ, Т.,

- 1 012869 е! а1. СеШгокота1 ктакек. НкА1Кк1 апб НкА1КК3. аге оуегехргеккеб ίη рптагу со1огес!а1 сапсегк. 1рп. 1. Сапсег Кек. 91. 1007-1014 (2000)). опухолей яичников (СгНксНко. Т.М. е! а1. Ас!Ка!юп апб оуегехргеккюп о! сеШгокогае ктаке ВТЛК/Лигога-Л ш Нитап оуапап сапсег. Сйшса1 Сапсег КекеагсН 9. 1420-1426 (2003)) и опухолей желудка (8акакига. С. е! а1. Типог-атрНПеб ктаке ВТАК ίκ атрППеб апб оуегехргеккеб ш дак1г1с сапсегк \\'НН рокк1Н1е туоКетеп! ш апеир1о1б Гогтабоп. ВгЫкН 1оита1 о! Сапсег 84. 824-831 (2001)) и в 94% инвазивных аденокарцином млечных протоков молочной железы (Тапака. Т.. е! а1.. Сеп!гокота1 ктаке А1К1 1к оуегехргеккеб т Ыуакгуе бис!а1 сагстота оГ !Не Нгеак!. Сапсег КекеагсН. 59. 2041-2044 (1999)). Высокие уровни Аигога-А сообщались также в почечных. цервикальных. нейробластомных. меланомных. лимфомных. панкреатических линиях опухолевых клеток и линиях клеток опухоли предстательной железы (В1ксНоГГ. 1.К.. е! а1.. А Ното1одие оГ Бгокорййа аигога ктаке 1к опсодеЫс апб атр1Шеб ш Нитап со1огес!а1 сапсегк. ЕМВО 1. 17. 3052-3065 (1998); К1тига. М.. Ма!киба. Υ.. АокЫока. Т.. апб Окапо. Υ. Се11 сус1е-берепбеп! ехргеккюп апб сеп!гокота1 1оса11/а!юп оГ а !Ыгб Нитап Аигога/1р11-ге1а(еб рго!ет ктаке. А1Ь3. 1оигпа1 оГ Вю1одюа1 СНет1к!гу 274. 7334-7340 (1999); 2Нои е! а1. Титоиг атр1Шес ктаке 8ТК15/ВТАК Ыбисек сеЫгокоте атрППсаОоп. апеир1о1бу апб !гапкГогта!юп. ЫаЫге Сепебск 20: 189-193 (1998); Ь1 е! а1. Оуегехргеккюп оГ опсодеЫс 8ТК15/ВТАК/Аигога-А ктаке ш Нитап рапсгеабс сапсег. СНп Сапсег Кек. 9(3):991-7 (2003)). Амплификацию/сверхэкспрессию Аигога-А наблюдают в раках мочевого пузыря человека. и амплификация Аигога-А связана с анеуплоидией и агрессивным клиническим поведением (8еп. 8. е! а1.. АтрНДсабоп/оуегехргеккюп оГ т11о(1с ктаке депе т Нитап Ыаббег сапсег. 1. №111. Сапсег. 1пк!. 94(17):132909 (2002)). Кроме того. амплификация локуса аигога-А (20с.|13) коррелирует с плохим прогнозом для пациентов с лимфоузел-отрицательным раком молочной железы (1ко1а. 1.1.. е! а1. Сепебс аНеггабопк беесЫб Ну сотрагабуе депотю НуНпб1ха!юп ргебю!: ои!соте Ы побе-педабуе Нгеак!: сапсег. Атепсап 1оигпа1 оГ Ра!Но1оду 147. 905-911 (1995)). Аигога-В экспрессируется на высоком уровне во множественных линиях опухолевых клеток человека. в том числе лейкозных клетках (Ка!ауата е! а1. Нитап А1М-1: сБИА с1ошпд апб гебисеб ехргеккюп бштд епботНокБ т тедакагуосу!е-Нпеаде се11к. Сепе 244:1-7)). Уровни этого фермента увеличиваются как функция стадии Пике в первичных колоректальных раках (Ка!ауата. Н. е! а1. М11о11с ктаке ехргеккюп апб со1огес!а1 сапсег ргодгеккюп. 1оигпа1 оГ !Не Ыа!юпа1 Сапсег 1пк!йи!е 91. 1160-1162 (1999)). Аигога-С. которая обычно обнаруживается только в зародышевых клетках. сверхэкспрессируется также в высоком проценте первичных колоректальных раков и в различных линиях опухолевых клеток. в том числе клетках цервикальной аденокарциномы и карциномы молочной железы (Кгтига. М.. Ма!киба. Υ.. ΥоκН^ока. Т.. апб Окапо. Υ. Се11 сус1е-берепбеп! ехргеккюп апб сеп1гокота1 1осаНха!юп оГ а !Ыгб Нитап Аигога/1р11-ге1а1еб рго!ет ктаке. А1К3. 1оигпа1 оГ Вю1одюа1 СНет1к1гу 274. 7334-7340 (1999); ТакаНакЫ. Т.. е! а1. Сеп1гокота1 ктакек. НкА1Кк1 апб НкА1КК3. аге оуегехргеккеб т рптагу со1огес!а1 сапсегк. 1рп. 1. Сапсег Кек. 91. 1007-1014 (2000)).

На основе известного действия киназ Аигога ингибирование их активности должно нарушать митоз. приводя к остановке клеточного цикла. Таким образом. ш у1уо ингибитор Аигога замедляет рост и индуцирует регресс опухоли.

Повышенные уровни всех членов семейства Аигога наблюдаются в широком разнообразии линий опухолевых клеток. Киназы Аигога сверхэкспрессируются во многих опухолях человека и. как сообщается. ассоциированы с хромосомной нестабильностью в опухолях молочной железы (М1уокН е! а1. 2001. 92. 370-373).

Аигога-2 экспрессируется на высоком уровне во множественных линиях опухолевых клеток человека. и уровни увеличиваются как функция стадии Бике в первичных колоректальных раках |Ка!ауата. Н. е! а1. МНобс ктаке ехргеккюп апб со1огес!а1 сапсег ргодгеккюп. 1оигпа1 оГ !Не №Шопа1 Сапсег 1пкб!и!е 91. 1160-1162 (1999)]. Аигога-2 играет роль в регуляции точного расщепления хромосом во время митоза. Ошибочная регуляция клеточного цикла может привести к клеточной пролиферации и другим нарушениям. Было обнаружено. что в ткани рака ободочной кишки человека сверхэкспрессируется белок Аигога-2 [В1ксНоГГ е! а1.. ЕМВО 1.. 17. 3052-3065 (1998); 8сНитасНег е! а1.. 1. Се11. Вю1.. 143. 1635-1646 (1998); К1тига е! а1.. 1. Вю1. СНет.. 272. 13766-13771 (1997)]. Аигога-2 сверхэкспрессируется в большинстве трансформированных клеток. В1ксНоГГ е! а1. обнаружил высокие уровни Аигога-2 в 96% клеточных линий. полученных из опухолей легкого. ободочной кишки. почки. меланомы и молочной железы (В1ксНоГГ е! а1.. ЕМВО 1.. 1998. 17. 3052-3065). Два интенсивных исследования показывают повышенный уровень Аигога-2 в 54 и 68% (В1ксНоГГ е! а1.. ЕМВО 1.. 1998. 17. 3052-3065; ТакаНакЫ е! а1. 2000. 1рп. 1. Сапсег Кек. 91. 1007-1014) колоректальных опухолей и в 94% инвазивных аденокарцином млечных протоков молочной железы (Тапака е! а1.. 1999. 59. 2041-2044).

Экспрессия Аигога-1 является повышенной в клеточных линиях. полученных из опухолей ободочной кишки. молочной железы. легкого. меланомы. печени. яичника. поджелудочной железы. ЦНС. желудочно-кишечного тракта и лейкозов (Та!кика е! а1. 1998. 58. 4811-4816).

Высокие уровни Аигога-3 были обнаружены в нескольких линиях опухолевых клеток. хотя она ограничена яичком в нормальных тканях (Кгтига е! а1. 1999. 274. 7334-7340). Сверхэкспрессия Аигога-3 в высоком проценте (приблизительно 50%) колоректальных раков также была документирована (ТакаНакЫ е! а1. 2000. 1рп. 1. Сапсег Кек. 91. 1007-1014). В противоположность этому. семейство Аигога экспрессируется при низком уровне в большинстве нормальных тканей. за исключением тканей с высокой долей

- 2 012869 делящихся клеток, таких как вилочковая железа и яичко (ВЬсНоГГ е! а1., ЕМВО 1., 1998, 17, 3052-3065).

В отношении дополнительного обзора роли киназ Ашота, которую они играют в пролиферативных нарушениях, см. ВщсйоГГ, 1.К. & Ио^шаи, Ο.Ό. (Тйе Аигога/Ιρΐΐρ ктаке Гатбу: гещбаЮгк оГ сйготокоте ведгедаОоп аиб суЮкбюкЬ) Тгеибк ίη Се11 Вю1оду 9, 454-459 (1999); О1е!, К. аиб Рпдеи!, С. (Ашота/Ιρΐΐρге1а!еб ктакек, а пе\у оисодешс Гатбу оГ тйобс кегте-Лгеошие ктакек) 1ошпа1 оГ Се11 8с1еисе 112, 35913601 (1999); Νί§§, Е.А. (Мйобс ктакек ак гещбаЮгк оГ се11 бМыоик аиб б§ сЬескρο^иΐ8) №11. Кеу. Мо1. Се11 Вю1. 2, 21-32 (2001); Абатк, К.К, Сагтеиа, М., аиб Еатикбате, XV.С. (СНготокота1 ρа88еиде^8 аиб 1Пе (ашота) АВС оГ тбокщ) Тгеибк ш Се11 Вю1оду 11, 49-54 (2001) и Пи!ег!ге, 8., □ексап-уэк, 8., & Рпдеи!, Р. (Ои 111е го1е оГ ашота-А ш сеШгокоте Гиисбои) Оисодеие 21, 6175-6183 (2002).

Рецепторная тирозинкиназа типа III, ЕЬТ-3, играет важную роль в поддержании, росте и развитии гемопоэтических и негемопоэтических клеток. [8сбеуеи, В., бпГГш Ι.Ό., Оисодеие, 2002, 21, 3314-3333 и Кеб1у, 1.Т., ВгбЫ 1ошиа1 оГ Наета!о1о§у, 2002, 116, 744-757]. ЕЬТ-3 регулирует поддержание пулов стволовых клеток/клеток-предшественников, а также развитие зрелых лимфоидных и миелоидных клеток [Ьутаи, 8., 1асоЬ8еи, 8., В1ооб, 1998, 91, 1101-1134]. ЕЬТ-3 содержит внутренний киназный домен, который активируется после опосредованной лигандом димеризации этих рецепторов. После активации киназный домен индуцирует аутофосфорилирование рецептора, а также фосфорилирование различных цитоплазматических белков, которые способствуют размножению сигнала активации, приводящего к росту, дифференцировке и выживанию. Некоторые из стоящих далее по ходу процесса регуляторов передачи сигнала ЕЬТ-3-рецептора включают в себя РЬСу, Р13-киназу, ОгЬ-2, 8Н1Р и 8гс-родственные киназы [8сбеуеи, В., ОпГГш Ι.Ό., Оисодеие, 2002, 21, 3314-3333]. Киназа ЕЬТ-3 играет роль во многих гемопоэтических и негемопоэтических злокачественностях. Считают, что мутации, которые индуцируют лиганднезависимую активацию ЕЬТ-3, участвуют в остром миелогенном лейкозе (АМЬ), остром лимфоцитарном лейкозе (АЬЬ), мастоцитозе и желудочно-кишечной стромальной опухоли (С18Т). Эти мутации включают в себя изменения единственной аминокислоты в киназном домене или внутренних тандемных удвоениях, точковые мутации или делеции в рамке считывания юкстамембранного района этих рецепторов. Кроме активации мутаций, лигандзависимая (аутокринная или паракринная) стимуляция сверхэкспрессируемой киназы ЕЬТ-3 дикого типа вносит вклад в злокачественный фенотип [8сбеуеи, В., СпГПп Ι.Ό., Оисодеие, 2002, 21, 3314-3333]. См. также 8а^уег, С.1. (Ешбшд 1йе иех! О1ееуех: ЕЬТ3 !агде!еб кате абаЬйог Ιίκηρν Гог аси!е туе1о1б 1еикает1а) Саисег Се11. 1, 413-415 (2002).

Три- или тетразамещенные производные пиримидинов, применимые в качестве ингибиторов киназ, известны в данной области. Обычно эти производные пиримидинов являются 2,4,6- или 2,4,5,6замещенными, как показано ниже

2,4,5,6-замещенный пиримидин

Известные способы получения таких производных пиримидинов обладают родом недостатков синтеза, такими как отсутствие возможности региоселективного введения заместителей в положении 2, 4 или 6 с высокими выходами. См. М. Войа, №.1с1ео81бе8 №с1ео!1бе8, 13, 8, 1994, 1769-78; М. Ваи, Вюогд. Меб. Сйет., 6, 7, 1998, 1057-68; Υ. Ее11аЫ, Еиг. 1. Меб. Сйет. СЫт. Тйег., 31, 1, 1996, 77-82; N.1. ОеНа, 1. Не!. Сйет., 35, 2, 1998, 269-74; Н. исйе1, Тейайебгои Ье!!., 36, 52, 1995, 9457-60 и Υ. №ζυ, РеШс. 8ск, 47, 2, 1996, 115-24.

- 3 012869

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы V к®

V или их фармацевтически приемлемым производным или солям, где К⁵ выбран из водорода или С_1-4алифатической группы;

Я⁶ выбран из С1_залифатической группы и

К⁷ представляет собой циклопропил.

Предпочтительно изобретение относится к соединениям формулы V, где Я⁵ выбран из водорода, метила, этила, трет-бутила или изопропила; более предпочтительно к соединениям формулы V, где Я⁶ выбран из метила, этила или циклопропила.

Изобретение также охватывает соединения, выбранные из табл. 1 и 2.

Таблица 1

№	Структура	№	Структура
1		7
11		13
14		18	1-г
19

- 4 012869

Таблица 2

Репрезентативные соли соединений формулы V

ν-1 /	н-а	ν-1ί
ν-1///		ν-1 Ιν	гС ноАЛсн
ν-1 ν		ν-1 νί	Л “г-1-
ν-1 ν№		ν-1 νϋί	у Н—г—ОН НО—Г-Н
ν-1 Ιχ		ν-1χ
ν-1χ/	X ν* ΙίΑ нсг\н хДоУ

Изобретение также относится к композиции, содержащей соединение формулы V и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель.

Кроме того, настоящее изобретение включает варианты, когда композиция дополнительно содержит антипролиферативный агент или химиотерапевтический агент.

В другом варианте изобретение относится к способу ингибирования Аигога-1 в биологической пробе или у пациента, включающему контактирование указанной пробы с (а) соединением формулы V или (Ь) композицией, содержащей соединение формулы V, или введение пациенту (а) соединения формулы V или (Ь) композиции, содержащей его.

Следующее воплощение изобретения также раскрывает способ ингибирования Аигога-2 в биологической пробе или у пациента, предусматривающий контактирование указанной пробы с (а) соединением формулы V или (Ь) композицией, содержащей соединение формулы V, или введение пациенту (а) соединения формулы V или (Ь) композиции, содержащей его.

В другом варианте изобретение раскрывает способ ингибирования Аигога-3 в биологической пробе или у пациента, предусматривающий контактирование указанной пробы с (а) соединением формулы V или (Ь) композицией, содержащей соединение формулы V, или введение пациенту (а) соединения формулы V или (Ь) композиции, содержащей его.

Изобретение также относится к способу ингибирования РЬТ-3 в биологической пробе или у паци

- 5 012869 ента, предусматривающий контактирование указанной пробы с (а) соединением формулы V или (Ь) композицией, содержащей соединение формулы V, или введение пациенту (а) соединения формулы V или (Ь) композиции, содержащей его.

В одном из вариантов изобретение раскрывает способ ингибирования Аигога-1, Аигога-2, Аигога-3 и РЬТ-3 у пациента, включающий введение указанному пациенту (а) соединения формулы V или (Ь) композицией, содержащей его.

Изобретение также относится к способу лечения рака у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту композиции, содержащей соединение формулы V.

Кроме того, способ лечения рака может включать стадию введения пациенту дополнительного химиотерапевтического или антипролиферативного агента, при этом рак выбран из меланомы, лимфомы, нейробластомы, лейкоза или рака, выбранного из рака ободочной кишки, молочной железы, легкого, почки, яичника, поджелудочной железы, почечного рака, рака ЦНС, рака шейки матки, рака предстательной железы или рака желудочно-кишечного тракта, острого миелогенного лейкоза (АМЬ), острого лимфоцитарного лейкоза (АЬЬ), мастоцитоза или желудочно-кишечной стромальной опухоли (С13Т).

Изобретение также охватывает способ лечения или ослабления рака у пациента, включающий стадию нарушения митоза раковых клеток ингибированием протеинкиназы Аигога соединением формулы V. Данный способ предусматривает введение указанному пациенту композиции, содержащей соединение формулы V.

В частном воплощении изобретение относится к соединению формулы ^1

СН₃

N

ν-1 или его фармацевтически приемлемой соли, выбранной из группы, состоящей из ацетата, адипата, альгината, аспартата, бензоата, бензолсульфоната, бисульфата, бутирата, цитрата, камфората, камфорсульфоната, циклопентанпропионата, диглюконата, додецилсульфата, этансульфоната, формиата, фумарата, глюкопентаноат, глицерофосфат, гликолат, гемисульфат, гептаноата, гексаноата, гидрохлорида, гидробромида, гидройодида, 2-гидроксиэтансульфоната, лактата, малеата, малоната, метансульфоната, 2нафталинсульфоната, никотината, нитрата, оксалата, пальмоата, пектината, персульфата, 3фенилпропионата, фосфата, пикрата, пивалата, пропионата, салицилата, сукцината, сульфата, тартрата, тиоцианата, тозилата, ундеканоата, натрия, калия, магния, аммония и Ν' (С_1-4алкил)₄.

В предпочтительном варианте соединение формулы ^1 представляет собой сульфат или лактат.

Изобретение также относится к применению соединения формулы ^1 в сочетании с С1ссусс для производства лекарственного средства для лечения рака, в частности для лечения лейкемии.

В частном варианте изобретение относится к соединениям формулы V к®

V или их фармацевтически приемлемым солям, где Я⁵ представляет собой Н, метил, этил, н-пропил, ί-пропил, циклопропил, изобутил, или третбутил;

Я⁶ представляет собой метил, этил, циклопропил;

Я⁷ представляет собой метил, этил, циклопропил, трет-бутил;

при условии, что соединение не является

- 6 012869

или его солью.

В предпочтительном варианте изобретение включает соединение формулы V н⁶

ν или его фармацевтически приемлемую соль, где В⁵ представляет собой метил;

В⁶ представляет собой метил;

В⁷ представляет собой циклопропил.

При этом указанные соединения могут быть представлены в форме соли, где соль выбрана из группы, состоящей или из ее фармацевтически приемлемой соли или производного либо таутомера или стереоизомера фармацевтически приемлемой соли, выбранной из группы, состоящей из ацетата, адипата, альгината, аспартата, бензоата, бензолсульфоната, бисульфата, бутирата, цитрата, камфората, камфорсульфоната, циклопентанпропионата, диглюконата, додецилсульфата, этансульфоната, формиата, фумарата, глюкопентаноат, глицерофосфат, гликолат, гемисульфат, гептаноата, гексаноата, гидрохлорида, гидробромида, гидройодида, 2-гидроксиэтансульфоната, лактата, малеата, малоната, метансульфоната, 2нафталинсульфоната, никотината, нитрата, оксалата, пальмоата, пектината, персульфата, 3фенилпропионата, фосфата, пикрата, пивалата, пропионата, салицилата, сукцината, сульфата, тартрата, тиоцианата, тозилата, ундеканоата, натрия, калия, магния, аммония и У'(С|_,|ал1сил),|.

Изобретение также относится к композициям, содержащим указанные соединения в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, адъювантом или разбавителем и дополнительно содержащим антипролиферативный агент или химиотерапевтический агент.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к композиции, содержащей соединение по данному изобретению или его фармацевтически приемлемое производное и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель. Количество соединения в композициях по данному изобретению такое, которое является эффективным для детектируемого ингибирования протеинкиназы, в частности киназы Аигога и/или киназы 1^;1,Т-3, в биологической пробе или у пациента. Предпочтительно композицию по данному изобретению готовят для введения пациенту, нуждающемуся в такой композиции. Наиболее предпочтительно композицию по данному изобретению готовят для перорального введения пациенту.

Термин «пациент» в данном контексте относится к животному, предпочтительно млекопитающему и наиболее предпочтительно человеку.

Термин «фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель» относится к нетоксичному носителю, адъюванту или разбавителю, который не разрушает фармакологическую активность соединения, вместе с которым его изготавливают. Фармацевтически приемлемые носители, адъюванты или разбавители, которые могут быть использованы в композициях по данному изобретению, включают в себя, но не ограничиваются ими, ионообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, белки сыворотки, такие как человеческий сывороточный альбумин, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, частичные глицеридные смеси насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как сульфат протамина, динатрийгидрофосфат, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, колоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, воски, сополимеры полиэтилена и полиоксипропилена, полиэтиленгликоль и ланолин.

Термин «детектируемо ингибируют» в данном контексте означает измеримое изменение активности протеинкиназы между пробой, содержащей указанную композицию и протеинкиназу, и эквивалентной пробой, содержащей протеинкиназу в отсутствие указанной композиции.

Термин «фармацевтически приемлемые производное или соль» обозначает любые нетоксичные

- 7 012869 соль, эфир, соль эфира или другое производное соединения по данному изобретению, которое при введении реципиенту способно обеспечивать, прямо или косвенно, соединение по данному изобретению или его ингибиторно активные метаболит или остаток. В данном контексте термин «его ингибиторно активный метаболит или остаток» означает, что его метаболит или остаток также является ингибитором киназы Аигога и/или киназы РЬТ-3.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способам получения фармацевтически приемлемой соли соединения в формуле I, I' или V, включающим стадию преобразования соединения формулы I, I' или V, полученного в соответствии со способами по данному изобретению, в желаемую фармацевтически приемлемую соль. Такие превращения хорошо известны в данной области. См., в общем виде, Абуапееб Отдаше Сйешщбу, 1епу Матей, 4'¹' ебйюп, 1о1ш XVПсу апб 8оп5, Ν.Υ. (1992).

Фармацевтически приемлемые соли соединений по данному изобретению включают в себя соли, полученные из фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот и оснований. Примеры подходящих кислотных солей включают в себя ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкопентаноат, глицерофосфат, гликолат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, салицилат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат. Другие кислоты, такие как щавелевая кислота, хотя они сами не являются фармацевтически приемлемыми, могут быть использованы при получении солей, которые могут использоваться в качестве промежуточных продуктов при получении соединений по данному изобретению и их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей.

Соли, полученные из подходящих оснований, включают в себя соли щелочных металлов (например, натрия и калия), соли щелочно-земельных металлов (например, магния), соли аммония и ^(С_1-4алкил)₄соли. Данное изобретение включает также кватернизацию любой из содержащих основной азот групп описанных здесь соединений. Посредством такой кватернизации могут быть получены водорастворимые или диспергируемые в воде продукты.

В табл. 2 представлены характерные соли соединений формулы V по данному изобретению.

Композиции по данному изобретению могут вводиться перорально, парентерально, посредством ингаляционного спрея, местно, ректально, назально, буккально, вагинально или через имплантированный резервуар. Термин «парентеральный» в данном контексте включает в себя подкожный, внутривенный, внутримышечный, внутрисуставный, интрасиновиальный, внутригрудинный, внутриоболочечный, внутрипеченочный, внутрь повреждения и внутричерепной способы инъекции или инфузии. Предпочтительно эти композиции вводят перорально, внутрибрюшинно или внутривенно. Стерильные инъекционные формы композиций по данному изобретению могут быть в виде водной или масляной суспензий. Эти суспензии могут быть приготовлены в соответствии со способами, известными в данной области, использующими подходящие диспергирующие или увлажняющие агенты и суспендирующие агенты. Стерильный инъекционный препарат может также быть стерильным инъекционным раствором или суспензией в нетоксичном приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, например раствором в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых разбавителей и растворителей, которые могут быть использованы, можно указать воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды удобно использовать стерильные нелетучие масла.

Для этой цели могут использоваться легкие нелетучие масла, в том числе синтетические моно- или диглицериды. При приготовлении инъекционных растворов могут быть использованы жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, а также природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно в их полиоксиэтилированных вариантах. Эти масляные растворы или суспензии могут также содержать разбавитель, состоящий из спирта с длинной цепью, или диспергирующий агент, такой как карбоксиметилцеллюлоза или сходные диспергирующие агенты, которые обычно используют при приготовлении фармацевтически приемлемых дозированных форм, в том числе эмульсий и суспензий.

Для целей приготовления могут быть также использованы другие обычно используемые поверхностно-активные вещества, такие как Твины, Спаны и другие эмульгирующие агенты и усиливающие биодоступность агенты, которые обычно используются при приготовлении фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других дозированных лекарственных форм.

Фармацевтически приемлемые композиции по данному изобретению могут вводиться перорально в любой приемлемой для перорального введения дозированной форме, в том числе, но не только, в виде капсул, таблеток, водных суспензий или растворов. В случае таблеток для перорального применения обычно используемые носители включают в себя лактозу и кукурузный крахмал. Обычно добавляют также смазывающие агенты, такие как стеарат магния. Для перорального введения в виде капсул подходящие разбавители включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. Когда водные суспензии не

- 8 012869 обходимы для перорального введения, активный ингредиент объединяют с эмульгирующими и суспендирующими агентами. Если желательно, могут быть также добавлены некоторые подслащивающие, ароматизирующие или красящие агенты.

Альтернативно, фармацевтически приемлемые композиции по данному изобретению могут вводиться в виде суппозиториев для ректального введения. Они могут быть приготовлены смешиванием агента с подходящим нераздражающим эксципиентом, который является твердым при комнатной температуре, но становится жидким при ректальной температуре и, следовательно, будет расплавляться в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. Такие материалы включают в себя какао-масло, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.

Фармацевтически приемлемые композиции по данному изобретению могут также вводиться местно, в частности, когда мишень обработки включает в себя участки или органы, легко доступные для локального введения, в том числе глаза, кожу или нижнюю часть кишечного тракта. Подходящие композиции для локального введения могут быть легко приготовлены для каждого из этих участков и органов.

Локальное применение для нижней части кишечного тракта может выполняться с использованием композиции ректального суппозитория (см. выше) или с использованием композиции подходящей клизмы. Могут быть также использованы трансдермальные пластыри.

Для локальных применений фармацевтически приемлемые композиции могут быть приготовлены в виде подходящей мази, содержащей активное соединение, суспендированное или растворенное в одном или нескольких носителях. Носители для локального введения соединений по данному изобретению включают в себя, но не ограничиваются ими, минеральное масло, жидкий вазелин (вазелиновое масло), белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, соединение полиоксипропилена, эмульгирующий воск и воду. Альтернативно, фармацевтически приемлемые композиции могут быть приготовлены в виде подходящих лосьона или крема, содержащих активные компоненты, суспендированные или растворенные в одном или нескольких фармацевтически приемлемых носителях. Подходящие носители включают в себя, но не ограничиваются ими, минеральное масло, моностеарат сорбитана, полисорбат 60, цетиловые эфиры, воск, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.

Для офтальмологического применения фармацевтически приемлемые композиции могут быть приготовлены в виде тонкоизмельченных суспензий в изотоническом стерильном солевом растворе с корректированным рН или предпочтительно в виде растворов в изотоническом стерильном солевом растворе с корректированным рН, либо с консервантом, таким как бензилалконийхлорид, либо без консерванта. Альтернативно, для офтальмологических применений фармацевтически приемлемые композиции могут быть приготовлены в виде мази, такой как вазелин.

Фармацевтически приемлемые композиции данного изобретения могут также вводиться с использованием назального аэрозоля или ингаляции. Такие композиции готовят в соответствии со способами, хорошо известными в области приготовления фармацевтических композиций, и они могут быть приготовлены в виде растворов в солевом растворе, с использованием бензилового спирта или других подходящих консервантов, усилителей абсорбции для увеличения биодоступности, фторуглеродов и/или других общепринятых солюбилизирующих или диспергирующих агентов.

Наиболее предпочтительно фармацевтически приемлемые композиции данного изобретения готовят для перорального введения.

Количество соединений данного изобретения, которое может быть объединено с веществаминосителями для получения композиции в форме отдельных доз, будет варьироваться в зависимости от проходящего лечение хозяина, конкретного способа введения. Предпочтительно композиции должны быть приготовлены таким образом, чтобы доза 0,01-100 мг/кг массы тела/день ингибитора могла быть введена пациенту, получающему эти композиции.

Должно быть также понятно, что конкретная доза и схема введения для любого конкретного пациента будет зависеть от различных факторов, в том числе от активности конкретного используемого соединения, возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола, диеты, времени введения, скорости экскреции, комбинации лекарственных средств и суждений лечащего врача и тяжести конкретного подлежащего лечению заболевания. Количество соединения данного изобретения в композиции будет также зависеть от конкретного соединения в данной композиции.

В зависимости от конкретного состояния или заболевания, которое подлежит лечению или предупреждению, дополнительные терапевтические агенты, которые обычно вводят для лечения или предупреждения этого состояния, могут также присутствовать в композициях по данному изобретению. В данном контексте дополнительные терапевтические агенты, которые обычно вводят для лечения или предупреждения конкретного заболевания или состояния, известны как подходящие для подлежащего лечению заболевания или состояния.

Например, химиотерапевтические агенты или другие антипролиферативные агенты могут быть объединены с соединениями по данному изобретению для лечения пролиферативных заболеваний и рака. Примеры известных химиотерапевтических агентов включают в себя, но не ограничиваются ими, С1ееуес™, адриамицин, дексаметазон, винкристин, циклофосфамид, фторурацил, топотекан, таксол, интерферон и производные платины. Другие примеры агентов, с которыми могут быть также объединены

- 9 012869 ингибиторы по данному изобретению, включают в себя, без ограничения: средства для лечения болезни Альцгеймера, такие как Арицепт® и Эксцелон®; средства для лечения болезни Паркинсона, такие как ЬДОПА/карбидопа, энтакапон, ропинрол, прамипексол, бромокритин, перголид, тригексефендил и амантадин; агенты для лечения рассеянного склероза (М8), такие как бета-интерферон (например, Авонекс® и Ребиф®), Копаксон® и митоксантрон; средства для лечения астмы, такие как албутерол и Сингулаир®; агенты для лечения шизофрении, такие как ципрекса, риспердал, сероквел и галоперидол; противовоспалительные агенты, такие как кортикостероиды, ΤΝΡ-блокаторы, 1Ь-1 КА, азатиоприн, циклофосфамид и сульфазалазин; иммуномодуляторные и иммуносупрессивные агенты, такие как циклоспорин, такролимус, рапамицин, микофенолат мофетил, интерфероны, кортикостероиды, циклофосфамид, азатиоприн и сульфазалазин; нейротрофические факторы, такие как ингибиторы ацетилхолинэстеразы, ингибиторы МАО, интерфероны, антиконвульсанты, блокаторы ионных каналов, рилузол и агнеты против болезни Паркинсона; агенты для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, такие как бета-блокаторы, ингибиторы АСЕ, диуретики, нитраты, блокаторы кальциевых каналов и статины; агенты для лечения заболевания печени, такие как кортикостероиды, холестирамин, интерфероны и антивирусные агенты; агенты для лечения нарушений, связанных с кровью, такие как кортикостероиды, противолейкозные агенты и факторы роста и агенты для лечения иммунодефицитных нарушений, такие как гамма-глобулин.

Дополнительные примеры химиотерапевтических агентов или других антипролиферативных агентов, которые могут быть объединены с соединениями по данному изобретению для лечения пролиферативных заболеваний и рака, включают в себя, но не ограничиваются ими, например, другие терапии или антираковые агенты, которые могут быть использованы в комбинации с антираковыми агентами данного изобретения, и включают в себя хирургию, лучевую терапию (в качестве небольшого числа примеров, гамма-радиацию, нейтронную лучевую терапию, электронную лучевую терапию, протонную терапию, брахитерапию и системные радиоактивные изотопы, среди прочих), эндокринную терапию, модификаторы биологических реакций (интерфероны, интерлейкины и фактор некроза опухолей (ΤΝΕ), среди прочих), гипертермию и криотерапию, агенты для ослабления любых неблагоприятных побочных эффектов (например, противорвотные средства) и другие одобренные химиотерапевтические лекарственные средства, в том числе, но не только, алкилирующие лекарственные средства (меклоретамин, хлорамбуцил, циклофосфамид, мелфалан, ифосфамид), антиметаболиты (метотрексат), антагонисты пуринов и антагонисты пиримидинов (6-меркаптопурин, 5-фторурацил, цитарабил, гемцитабин), яды митотического веретена (винбластин, винкристин, винорелбин, паклитаксел), подофиллотоксины (этопозид, иринотекан, топотекан), антибиотики (доксорубицин, блеомицин, митомицин), нитрозомочевины (кармустин, ломустин), неорганические ионы (цисплатин, карбоплатин), ферменты (аспарагиназа) и гормоны (тамоксифен, лейпролид, флутамид и мегестрол), 61ееуес™, адриамицин, дексаметазон и циклофосфамид. В отношении более исчерпывающего обсуждения модернизированных раковых терапий см. ййр://те^ет.пс1.и1й.доу/, перечень одобренных ΕΌΑ лекарственных средств для онкологии в 1Шр://\у\у\у.Г6а.80у/с6ег/сапсег/6гидН51Ггате.1ит. и Т1е Мегск Мапиа1, 8еуеи1ееи1й Еб. 1999, все содержания которых включены здесь в качестве ссылки.

Количество дополнительного терапевтического агента, присутствующего в композициях данного изобретения, будет не большим, чем количество, которое вводилось бы обычно в композиции, содержащей этот терапевтический агент в виде единственного активного агента. Предпочтительно количество дополнительного терапевтического агента в описанных здесь композициях будет находиться в диапазоне приблизительно 50-100% количества, обычно присутствующего в композиции, содержащей этот агент в виде единственного терапевтически активного агента.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу ингибирования активности киназ Ашота-1, Ашота-2, Ашота-3 и/или ЕЬТ-3 в биологической пробе, предусматривающий стадию контактирования указанной биологической пробы с соединением формулы V или композицией, содержащей указанное соединение.

Термин «биологическая проба» в данном контексте включает в себя, без ограничения, культуры клеток или их экстракты; материал биопсий, полученный из млекопитающего, или его экстракты; и кровь, слюну, мочу, фекалии, сперму, слезы и другие жидкости тела или их экстракты.

Ингибирование активности киназ Ашота-1, Ашота-2, Ашота-3 и/или ЕЬТ-3 в биологической пробе может быть использовано в различных целях, которые известны специалисту с квалификацией в данной области. Примеры таких целей включают в себя, но не ограничиваются ими, переливание крови, трансплантацию органов, хранение биологических образцов и биологические анализы.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу ингибирования активности киназы Ашота-1 у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения формулы V или композиции, содержащей указанное соединение.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу ингибирования активности киназы Ашота-2 у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения формулы V или композиции, содержащей указанное соединение.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу инги

- 10 012869 бирования активности киназы Аигога-3 у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения формулы V или композиции, содержащей указанное соединение.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу ингибирования активности киназы РЬТ-3 у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения формулы V или композиции, содержащей указанное соединение.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу ингибирования активности киназ Аигога-1, Аигога-2, Аигога-3 и РЬТ-3 у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения формулы V или композиции, содержащей указанное соединение.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу лечения или ослабления тяжести опосредованного Аигога заболевания или состояния у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения формулы V или композиции, содержащей указанное соединение.

Термин опосредованное Аигога заболевание в данном контексте означает любое заболевание или другое пагубное состояние или заболевание, о котором известно, что в нем играет роль протеинкиназа семейства Аигога. Такие заболевания и состояния включают в себя, без ограничения, меланому, лейкоз или рак, выбранный из рака ободочной кишки, молочной железы, желудка, яичника, шейки матки, меланомы, почечного рака, рака предстательной железы, лимфомы, нейробластомы, рака поджелудочной железы, лейкоза и рака мочевого пузыря.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу лечения рака у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения формулы V или его композиции.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу лечения меланомы, лимфомы, нейробластомы, лейкоза или рака, выбранного их рака ободочной кишки, молочной железы, легкого, почки, яичника, поджелудочной железы, ренального рака, рака ЦНС, шейки матки, предстательной железы или рака желудочно-кишечного тракта у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения формулы V или его композиции.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу лечения острого миелогенного лейкоза (АМЬ), острого лимфоцитарного лейкоза (АЬЬ), мастоцитоза или желудочно-кишечной стромальной опухоли (С18Т) у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения формулы V или его композиции.

Другой аспект данного изобретения относится к нарушению митоза раковых клеток у пациента, включающему стадию введения указанному пациенту соединения формулы V или его композиции.

В соответствии с другим вариантом осуществления данное изобретение относится к способу лечения или ослабления тяжести рака у пациента, включающему стадию нарушения митоза раковых клеток ингибированием Аигога-1, Аигога-2 и/или Аигога-3 соединением формулы V или его композиции.

В другом варианте осуществления способы по данному изобретению, по которым используются композиции, не содержащие дополнительного терапевтического агента, предусматривают дополнительную стадию отдельного введения указанному пациенту дополнительного терапевтического агента. При раздельном введении этих дополнительных терапевтических агентов они могут вводиться пациенту перед введением, последовательно с введением или после введения композиции данного изобретения.

Для более полного понимания описанного здесь изобретения приводятся следующие примеры. Следует учесть, что эти примеры приведены только для иллюстративных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие каким-либо образом данное изобретение.

Примеры

- 11 012869

Пример 1.

4,6-Дихлорпиримидин-2-метилсульфон (А) получен способами, по существу, одинаковыми со способами, приведенными в Корре1 с1 а1., ЮС, 26, 1961, 792, следующим образом. К перемешиваемому раствору 4,6-дихлор-2-(метилтио)пиримидина (50 г, 0,26 моль) в дихлорметане (1 л) при 0°С добавляли метахлорпероксибензойную кислоту (143,6 г, 0,64 моль) в течение 20 мин. Раствору давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Смесь разбавляли дихлорметаном (1,5 л) и затем обрабатывали последовательно 50% раствором Ν;·ι₂8₂Θ₃/Ν;·ιΗΟΘ₃ (2x200 мл), насыщенным раствором ЫаНСОз (4x300 мл) и солевым раствором (200 мл), затем сушили (Мд§О₄). Растворитель удаляли в вакууме с получением твердого вещества не совсем белого цвета, которое вновь растворяли в ЕЮАС (1л) и обрабатывали последовательно насыщенным водным раствором NаНСО₃ (3x300 мл) и солевым раствором (100 мл), затем сушили (Мд§О₄). Растворитель удаляли в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (А) в виде белого твердого вещества (55,6 г, выход 96%).

Ή-ЯМР СПС1₃, δ 3,40 (3Н, с, СН₃), 7,75 (1Н, с, АгН).

Пример 2.

[4-(4,6-Дихлорпиримидин-2-илсульфанил)фенил]амид циклопропанкарбоновой кислоты (С).

Суспензию соединения А (10 г, 44,04 ммоль) и (4-меркаптофенил)амид циклопропанкарбоновой кислоты (В, 8,51 г, 44,04 ммоль) в трет-бутаноле (300 мл) дегазировали откачиванием воздуха с последующей продувкой азотом. Смесь перемешивали при 90°С в атмосфере азота в течение 1 ч, затем растворитель удаляли в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате (600 мл) и промывали водным раствором карбоната калия и хлорида натрия. Органический экстракт сушили над сульфатом магния, концентрировали до малого объема и давали кристаллизоваться. Продукт С собирали в виде бесцветных кристаллов (11,15 г, 74%).

Ή-ЯМР ДМСО-бе, δ 0,82-0,89 (4Н, м), 1,80-1,88 (1Н, м), 7,55 (2Н, д), 7,70-7,76 (3Н, м), 10,49 (1Н, с); М+Н, 340.

Пример 3.

{4-[4-Хлор-6-(5-метил-2Н-пиразол-3-иламино)пиримидин-2-илсульфанил]фенил}амид циклопропанкарбоновой кислоты (Ό).

Смесь соединения С (1,0 г, 2,94 ммоль) и 3-амино-5-метилпиразола (314 мг, 3,23 ммоль) в диметилформамиде (6 мл) обрабатывали диизопропилэтиламином (0,614 мл, 3,53 ммоль) и йодидом натрия (530 мг, 3,53 ммоль). Смесь перемешивали в атмосфере азота при 85°С в течение 4 ч, охлаждали до комнатной температуры и разбавляли этилацетатом. Раствор промывали водой (х4), сушили над сульфатом магния и концентрировали до 5 мл с получением после кристаллизации и сбора бесцветных кристаллов указанного в заголовке соединения Ό (920 мг, 78%).

Ή-ЯМР ДМСО-6₆, δ 0,80-0,87 (4Н, м), 1,77-1,85 (1Н, м), 1,92 (1Н, с), 5,24 (1Н, шир.с), 6,47 (1Н, шир.с), 7,55 (2Н, д), 7,70-7,80 (2Н, м), 10,24 (1Н, с), 10,47 (1Н, с), 11,92 (1Н, с).

Пример 4. {4-[4-(4-Метилпиперазин-1-ил)-6-(5-метил-2Н-пиразол-3-иламино)пиримидин-2илсульфанил]фенил}амид циклопропанкарбоновой кислоты (У-1).

Соединение И (2,373 г, 5,92 ммоль) обрабатывали Ν-метилпиперазином (10 мл) и смесь перемешивали при 110°С в течение 2 ч. Избыток Ν-метилпиперазина удаляли в вакууме, затем остаток растворяли в этилацетате, промывали водным раствором бикарбоната натрия, сушили над сульфатом магния и концентрировали. Остаток кристаллизовали из метанола с получением бесцветных кристаллов желаемого продукта У-1 (1,82 г, 66%).

Ή-ЯМР ДМСО-бе, δ 0,81 (4Н, д), 1,79 (1Н, м), 2,01 (3Н, с), 2,18 (3Н, с), 2,30 (4Н, м), 3,35 (маскированный сигнал), 5,42 (1Н, с), 6,02 (1Н, шир.с), 7,47 (2Н, д), 7,69 (2Н, д), 9,22 (1Н, с), 10,39 (1Н, с), 11,69 (1Н, с).

Пример 5.

№{4-[4-(5-Метил-2Н-пиразол-3-илметил)-6-(4-пропилпиперазин-1-ил)пиримидин-2илсульфанил]фенил}пропионамид (У-5).

{4-[4-Хлор-6-(5-метил-2Н-пиразол-3-иламино)пиримидин-2-илсульфанил]фенил}амид этанкарбоновой кислоты (119 мг, 0,306 ммоль), полученный способами, аналогичными способам, приведенным в

- 12 012869 примерах 1, 2 и 3, в н-ВиОН (5 мл) обрабатывали дигидробромидом Ν-пропилпиперазина (887 мг, 3,06 ммоль), затем диизопропилэтиламином (1,066 мл, 6,12 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 110°С в течение 20 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали с использованием препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (ДМСО), δ 1,10 (3Н, т), 2,05 (3Н, с), 2,35 (2Н, д), 3,30 (4Н, с), 3,70 (4Н, с), 5,45 (1Н, с), 6,05 (1Н, шир.с), 7,45 (2Н, д), 7,70 (2Н, д), 9,20 (1Н, с), 10,05 (1Н, с), 11,70 (1Н, шир.с).

Пример 6.

№[4-(4,6-Дихлорпиримидин-2-илокси)фенил]ацетамид.

Раствор 4-ацетамидофенола (666 мг, 4,40 ммоль) в безводном ТГФ (40 мл), перемешивающийся при температуре окружающей среды, обрабатывали 60% дисперсией гидрида натрия в минеральном масле (176 мг, 4,40 ммоль). Затем реакционной смеси давали перемешиваться в течение 30 мин при температуре окружающей среды и добавляли 4,6-дихлор-2-метансульфонилпиримидин (1,0 г, 4,40 ммоль). Затем реакционную смесь перемешивали в течение еще 3 ч и разбавляли реакционную смесь насыщенным водным раствором ΝΗ₄Ο1 и ЕЮАС. Органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором №1С1 и сушили над сульфатом натрия и затем концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией (силикагель, МеОН:СН₂С1₂, 5:95) с получением указанного в заголовке соединения 1,25 г (95%) в виде твердого вещества.

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-6₆): δ 2,06 (3Н, с), 7,18 (2Н, д, 1=8,5 Гц), 7,62 (2Н, д, 1=8,5 Гц), 10,05 (1Н, с); Ь8-МС: Е8⁺=298,16, Е8^-=296,18.

Пример 7. {4-[4-(4-Метил-4-оксипиперазин-1-ил)-6-(5-метил-2Н-пиразол-3-иламино)пиримидин-2илсульфанил]фенил}амид циклопропанкарбоновой кислоты (У-19).

Соединение У-1 (1 г, 2,1 ммоль) суспендировали в дихлорметане (20 мл), охлаждали до 0°С и обрабатывали раствором дихлорметана в тСРВА в 10 аликвотах при 10-минутных интервалах (каждая аликвота состояла из 100 мг, 0,44 ммоль) в 1 мл ДХМ. Каждый раз при добавлении аликвоты этот раствор становился коричневым и постепенно возвращался к желтому цвету по мере расходования тСРВА. После расходования всего исходного материала растворитель удаляли в вакууме, и полученное оранжевое масло очищали препаративной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества не совсем белого цвета (69 мг, 7%).

^!Н-ЯМР (ДМСО-6₆): δ 0,85-0,91 (4Н, м), 1,90 (1Н, м), 2,10 (3Н, с), 3,10-3,17 (2Н, м), 3,25 (3Н, с), 3,50-3,66 (4Н, м), 3,98 (2Н, д), 5,50 (1Н, с), 6,11 (1Н, шир.с), 7,56 (2Н, д), 7,80 (2Н, д), 9,42 (1Н, с), 10,50 (1Н, с), 11,82 (1Н, шир.с).

Пример 8.

Метансульфонат {4-[4-(4-метилпиперазин-1-ил)-6-(5-метил-2Н-пиразол-3-иламино)пиримидин-2илсульфанил]фенил}амида циклопропанкарбоновой кислоты (У-1п).

Соединение У-1 (515 мг, 1,11 ммоль) суспендировали в этаноле (80 мл) и нагревали с обратным холодильником при кипячении. К прозрачному раствору добавляли метансульфоновую кислоту (106 мг, 1,11 ммоль) и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником при кипячении в течение еще 10 мин. Смеси давали остыть до комнатной температуры и растворитель выпаривали, пока не начинал образовываться осадок. Затем смесь охлаждали до 0°С и полученный осадок собирали фильтрацией и затем сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (290 мг, 47%).

^!Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-6₆): δ 0,81-0,82 (4Н, д), 1,82 (1Н, м), 2,36 (6Н, с), 2,83 (3Н, д), 3,03-3,12 (4Н, м), 3,40-3,47 (2Н, м), 3,79 (шир.с, ОН), 4,14-4,18 (2Н, м), 5,50 (1Н, с), 6,05 (1Н, с), 7,49 (2Н, д), 7,72 (2Н, д), 9,61 (1Н, с), 10,41 (1Н, шир.с), 10,80 (1Н, с).

Пример 9.

Следующие соединения, представленные в табл. 3 ниже, получали в соответствии со способами по данному изобретению и способами, по существу, одинаковыми с приведенными в примерах 1-8 выше. Данные, характеризующие эти соединения, суммированы в табл. 3 ниже и включают в себя ¹Н-ЯМР, точку плавления (т. пл.) и данные масс-спектрометрии (М8).

Если нет других указаний, все представленные данные ¹ Н-ЯМР, приведенные в табл. 3, были получены при 400 МГц в дейтерированном диметилсульфоксиде (ДМСО-6₆).

- 13 012869

Данные характеристики представительных соединений

0,97 (6Н, д) , 1,10 (ЗН, т),	2,00 (ЗН,	с) ,
2, 35	(2Н, кв.), 2,45 (4Н,	шир.	.с) г	2,65
(1Н,	шир.с), 3,35 (4Н, шир.	с) ,	5,40	(1Н,
с) , 6	,00 (1Н, шир.с), 7,50	(2Н,	д),	7,70
(2Н,	д), 9,20 (1Н, с), 1С	), 10	(1Н,	с) ,
11,70	(1Н, шир.с)

Таблица 3

Массспектр

Е3+439,4

Е3-437,4

Е3+467,35

Е5-465,38

ЕЗ+481,4

ЕЗ+467,3

ЕЗ-465,4

|-0,82	(4Н, м), 1,81 (1Н, м) ,	2,01
с) ,	2,68 (4Н, м), 3,1-3,5 (5Н,	, м) ,
: (1Н,	с), 5,99 (1Н, шир.с), 7,47	(2Н,
7, 69	(2Н, д), 9,21 (1Н, с),	10,40
с) ,	11,70(1Н, с)

Е3+451,3

ЕЗ-449,4

0, 08	(2Н, м) , 0,46 (2Н, м), 0,84 (1Н,	, м),
1, 09	(ЗН,	т) , 2,00	(ЗН, с), 2,19 (2Н,	, д),
2,34	(2Н,	. кв.),	2,44 (4Н, м),	3,35
(маскированный сигнал), 5,41 (1Н,	с) ,
6,00	(1Н,	шир.с), 7	,47 (2Н, д) , 7,70	(2Н,
Д) г	9,23	(1Н, с),	10,08 (1Н, с), 11,66

Е3+493,4

ЕЗ-491,4

ЕЗ+479,4

0,33 (2Н, м), 0,42 (2Н, м), 1,09 (ЗН, т), (1Н, (ЗН,,(2Н, (4Н, (маскированный сигнал), 5,42 (1Н, с), 6,00 (1Н, шир.с),

7,47 (2Н, д), 7,70 (2Н, л), 9,22 (1Н, с), 10,07 (1Н, с), 11,69 (1Н, с) '

ЕЗ-477,4

(маскированный сигнал

0,76-0,91	(4Н, м)	, 1,00-1,18	(ЗН, м).
1,76-1,86	(1Н,	м), 2,18	(ЗН, с).
2,22-2,43	(6Н, М) ,	3,3-3,4 (4Н,	, слабый).
5,46 (1Н,	с), 6,08	(1Н, шир.с),	7,49 (2Н,
д),	7,72	(2Н, д),	9,30 (1Н,	с), 10,4ι
(1н,	С),	11,72 <1Н,	, с)

- 15 012869

1-5		-	I, 06 (ЗН, τ), 1,98 (ЗН, с), 2,20 (ЗН, с), 2,31 (2Н, кв.), 2,50 (маскированный сигнал), 2,84 (ЗН, с), 3,38 (2Н, м) , 5,42 (1Н, с), 5,77 (1Н, с), 7,45 (2Н, д), 7,65 (2Н, д) , 9,00 (1Н, с), 10,18 (1Н, с), II, 68 (1Н, шир.с)	ЕЗ+441,3 Ε3-439,4
1-6		-	1,10 (ЗН, т), 1,45 (4Н, с), 1,60 (2Н, с), 2,00 (ЗН, с), 2,35 (2Н, кв.), 3,35 (4Н, с), 5,40 (1Н, с), 6,05 (1Н, шир.с) , 7,50 (2Н, д) , 7,70 (2Н, д), 9,15 (1Н, с), 10,05 (1Н, с), 11,80 (1Н, шир.с)	Ε3+438,3
1-7	,θΑσν·	-	1,10 (ЗН, т), 1,70 (2Н, с), 2,05 (ЗН, с), 2,35 (2Н, кв.), 2,70 (2Н, с), 2,75 (2Н, с), 3,45 (2Н, с), 5,50 (1Н, с), 6,00 (1Н, шир.с), 7,50 (2Н, д), 7,70 (2Н, д) , 9,15 (1Н, с), 10,10 (1Н,с), 11,70 (1Н, шир.с)	Ε3+453,3
1-8	Α^υσν	-	1,10 (ЗН, т), 2,05 (ЗН, с), 2,15 (6Н, с), 2,3-2,4 (4Н, м) , 3,15 (2Н, с), 5,40 (1Н, с), 5,85 (1Н, шир.с), 6,75 (1Н, шир.с), 7,45 (2Н, д) , 7,70 (2Н, д) , 9,05 (1Н, шир.с), 10,10 (1Н, с), 11,65 (1Н, шир.с)	ЕЗ+441,3

1-9		-	1,09 (ЗН, т), 1,78 (2Н, м), 2,03 (ЗН, с), 2,22 (ЗН, с), 2,33 (2Н, кв.), 2,41 (4Н, м), 3,3 (маскированный сигнал), 3,50 (2Н, м), 5,48 (1Н, с), 5,97 (1Н, шир.с), 7,46 (2Н, д), 7,68 (2Н, д), 9,14 (1Н, с), 10,06 (1Н, с), 11,70 (1Н, с)	ЕЗ+467,4 ЕЗ-465,4
1-10		-	1,09 (ЗН, т), 1,94 (ЗН, с), 2,20 (ЗН, с), 2,30-2,38 (6Н, м), 3,42 (4Н, м), 6,94 (1Н, с), 7,49 (2Н, д), 7,69 (2Н, д), 7,95 (1Н, с), 9,27 (1Н, с), 10,07 (1Н, с)	ЕЗ+470,2 ЕЗ-468,3
1-11	ДА	-	1,10 (ЗН, т), 2,05 (ЗН, с), 2,35 (2Н, д), 3,30 (4Н, с), 3,70 (4Н, с), 5,45 (1Н, с), 6,05 (1Н, шир.с), 7,45 (2Н, д), 7,70 (2Н, д), 9,20 (1Н, с), 10,05 (1Н, с), 11,70 (1Н, шир.с)	ЕЗ+456,2
1-12		-	1,09 (ЗН, т), 2,00 (ЗН, с), 2,25-2,41 (8Н, м), 3,35 (частично маскированный сигнал), 3,51 (2Н, м), 4,45 (1Н, м), 5,42 (1Н, с), 6,00 (1Н, шир.с), 7,47 (2Н, д) , 7,70 (2Н, д) , 9,22 (1Н, с), 10,08 (1Н, с), 11,70 (1Н, с)	Е3+483,4 ЕЗ-481,4

- 16 012869

кв.) ,	1,37	(9Η,
Н, с),	2, 35	(2Η,
? (ΙΗ,	μ) ,	3,95

1,07	(3Η,	τ) ,	1,12-1,22	(2Η, м).	1,70
(2Η,	Д), 2,02	(ЗН, с), 2	,35 (2Н,	кв. ) ,
2,80-	-2, 90	(3Η,	м), 3,95	(2Н, д).	5,45
(ΙΗ,	с) ,	6, 00	(ΙΗ, шир.с),	7,45 (2Н	/ Д> ,
7,70	(2Η,	Д) '	9,20 (ΙΗ,	с), 10,15	(1Н,
с), :	11,75 (ΙΗ,	шир.с)

1,00	(ЗН, д), 1	,08	(ЗН, т), 2,00 (ЗН, с),
2, 35	(2Н, кв		2,55-2,90 (ЗН, и),
3, 65-	-4,25 С5Н,	м)	, 5,45 (1Н, с), 6,00
(1н,	шир.с), 7,	45	(2Н, д), 7,70 (2Н, д).
9,25	(1Н, шир.	с) ,	10,20 (1Н, с), 11,70
(1Н,	шир.с)

(2Н,	м.) ,
(эн.	с) г
/ о=	7,5
(1 н,	с) ,

0,50-0,58 (2Н, м), 0,78-0,85	(2Н,	м) ,
0,90	(ЗН, д, .7=6,1 Гц),	0, 95	-1,05	(2Н,
м),	1,09 (ЗН, т, σ=7,6	Гц) ,	1,51-	-1,64
(ЗН,	и), 1,66-1,75 (1Η,	м) ,	2,32	(2Н,
кв. ,	σ=7,5 ГЦ), 2,66-	2,78	(2Н,	м) ,
3, 96-	-4,08 (2Н, м) , 5,48	(1Н,	с) ,	6,16
(1Н,	шир.с), 7,48 (2Н,	КВ. ,	7=8,6	Гц) ,

- 17 012869

0,80-0,82 (4Н, м)	, 1,81 (1Н,	м) , 2,04
(зн,	с), 2,28 (бН,	м) , 3,15 (2Н,	, м) , 3,53
(4Н,	м), 5,48 (1Н,	с), 5,89 (1Н, шир.с).
6.81	(1н. шир.с),	7,46 (2Н, п),	7.68 (2Н,
д),	9,06 (1Н, с).	10,38 (1Н,	с), 11,66
(1Н,	шир.с)

1,10 (ЗН, т), 1,47 (2Н	., кв.) , 1,90	(2Н,
д) г	2,03 (ЗН, с).	, 2,35 (2Н, кв.).	2,85
(2Н,	шир.с), 3,23	(2Н,	д), 5,45 (1Н,	с) ,
5, 90	(1Н, шир.с),	7,05	(1Н, д), 7,50	(2Н,
д) г	7,70 (2Н, д),	8,30	(1Н, шир.с),	8,55
(1Н,	шир.с)г 9,10	(1Н,	С), 10,10 (1Н,	с) ,
11,70 (1Н, шир.с)

0,81-0,83	(4Н, м), 1,81	(1Н,	м) ,
3,29-3,31	(4Н, м), 3,59-3,61	(4Н,	м) ,
5,82 (1Н,	с), 6,22 (1Н, шир.с),	7,36	(1Н,
с), 7,48	(2Н, д), 7,64 (2Н, д),	9, 38	(1Н,
с), 10,37	(1Н, с), 12,10 (1Н, с)

3,50 (2Н,	м) ,	4,44	(1Н,	С) ,	5,81
6,23 (1Н,	шир.с),	7,36	(1Н,	с) ,
д), 7,65	(2Н,	д),	9,32	(1Н,	с) ,

- 18 012869

0,77-0,88·	(4Н,	м) ,	1,28-1,55	(6Н,	м) ,
1,76-1,88	(1Н,	м) ,	2,12-2,43	(6Н,	м) ,
3,05-3,17	(2Н,	м) г 5(	,81 (1Н, шир.с),	6, 04
(1Н, шир.	с), 6,	84 (1Н, шир.с),	7,39	(1Н,
шир.с), 7	,47 (2Н, д,	Л=8,6 Гц),	7, 65	С2Н,
д, σ=8,6	Гц),	9,12	(1Н, шир.	,с) ,	10,33
(1Н, с),	12,06	(1Н, шир.с)
0,78-0,89	(4Н,	м) ,	1,59-1,86	(зн,	м) ,
2,18-2,26	(ЗН,	м) ,	2,38-2,52	(2Н,	м) ,
2,70-2,83	(2Н,	м) ,	3,28-3,55	(4Н,	м) ,
5,88 (1Н,	с), 6	, 15 (1Н, шир.с),	7,39	(1Н,

0,72-0,90	(4Н, м),	1,31-1,54 (ЗН,	м) ,
2,20-2,35	(2Н, м) ,	2,57-2,75 (ЗН,	м) ,
3,12-3,50	(2Н, м),	5,80 (1Н, с).	6,22
(1Н, шир.	с), 7,38 (1Н, шир.с), 7,47	(2Н,
д, Ц=8,6	Гц), 7,64	(2Н, д, Э=8,6	ГЦ) ,
9,29 (1Н,	с), 10,36	(1Н, с), 12,08	(1н,
шир.с)

- 19 012869

уменьшение

(4Н,	м) ,	1,15-2,02	(5Н,	м) ,
(1Н,	2м) ,	2,63-2,79	(1Н,	2м) ,
(6Н,	м) ,	4,03-4,53	(1Н,	2м) ,
с) ,	6, 15	и 6,24 (1Н,	, 2шир.с)г

(4Н,	м) ,	1,15-2,02
(1Н,	2м) ,	2,63-2,79
(6Н,	М) ,	4,03-4,53
с) ,	6,15	и 6,24 (1Н,

0,79-0,89	(4Н,	м), 1,80-1,89	(1НГ	м) (
2,65-2,73	(1Н,	м), 2,90-2,99	(1Н,	м) ,
4,49 (2Н,	с) , 5	, 86 (1Н, шир. с) ,	6,30	(1Н,
шир.с), 6,	95-7,	20 (4Н, м) , 7,40	(1Н,	с) ,
7,50 (2Н,	Л,	σ=8,6 Гц), 7,69	(2Н,	Д<
σ=8,6 Гц),	9,36 (1Н, с), 10,40	(1Н,	с) ,
12,15 (1Н,	шир.	с)

- 20 012869

2 (1Н, м), 2,22 (ЗН, с), , 3,33 (4НГ м) 5,81 (1Н, с), 6,24 (1Н, с), 7,48 (2Н, д) , 7,65 шир.с), 10,35 (1Н, с) ,

0,80-0,85 (4Н, м) , 1,06	(ЗН, д),	1,80
(1Н,	кв. ) , 2,67 (1Н, шир.	с} , 3,65	(1Н,
м) ,	4,05 (1Н, шир.с), 5,85	(1Н, с).	6,25
(1Н,	шир.с), 7,40 (1Н, с),	7,50 (2Н	, Д) /
7, 65	(2Н, д), 9,30 (1Н,	шир.с),	10,35
(1Н,	с), 12,10 (1Н, шир.с)

0,80-0,85	(4Н,	, м), 1,8	2 (1Н, кв.),
2,35-2,45	(4Н,	м), 3,17	(2Н, шир.с).
3,22-3,26	(2Н,	м), 3,42-	3,45 (2Н, м) ,
3,50-3,58	(6Н,	м) , 5,85	(1Н, с), 6,25
(1Н, шир.с)	, 7,	,40 (1Н, с),	7,50 (2Н, д).
7,70 (2Н,	Д) ,	9,35 (1Н,	шир.с), 10,40
(1Н, с) , 12	,10	(1Н, шир.с)

0,78-0,82 (4Н,	м) , 1,79	(1Н, м),	2, 36
(4Н, м), 3,3 (маскированный сигнал),	3,48
(2Н, с), 5,81	(1Н, с), 6,	19 (1Н, шир	1.С) ,
7,24-7,35 (6Н,	м) , 7,47	(2Н, д),	7,63
(2Н, д), 9,33	(1Н, с),	10,34 (1Н,	с) ,
12,09 (1Н, с)

- 21 012869

0,80	(4Н	, м) ,	0,93 (6Н,	Д) ,	1,82 (1Н, м),
2,20	(2Н	, т) /	2,58 (2Н,	м) ,	3,79 (2Н, м),
5,87	(1Н	, С) ,	6,23 (1Н,	шир.	с), 7,40 (1Н,
с) ,	7,47 (2Н,	л) ,	7,74	(2Н,	Д), 9,27 (1Н,
шир.	С) /	10,35	(1Н,	с) ,	12,11	(1Н, шир.с)

0,75-0,89	(4Н,	м) , 0,89-1,03	(6Н,	м) ,
1,74-1,88	(1Н,	м) , 3,153,29 (4Н,	, м) ,	5, 89
(1Н, шир.·	с), 6	,18 (1Н, шир.с),	7, 42	(1Н,
шир.с), 7	, 47 (2Н, д, σ=8,6 Гц),	7, 63	(2Н,
д, 7=8,6	Гц) ,	9,19 (1Н, шир.	с) ,	10, 34

0,81-0,83 (4Н, м)	, 1,00 (9Н,	с) ,	1, 81
(1Н, м), 2,47 (4Н,	ы), 3,14 (4Н,	м),	5,82
(1Н, с), 6,20 (1Н,	шир.с), 7,36	(1Н,	с) ,
7,47 (2Н, д), 7,65 (2Н, д), 9,32 10,37 (1Н, с), 12,09 (1Н, с)	(1Н,	с) ,

2,05 (ЗН,	с), 2,19 (ЗН,	с)
(4Н, м),	3,36-3,46 (4Н,	м) ,
шир.с), 6,	37 (1Н, шир. с),	7,
σ=8, 9 Гц)	, 7,45 (1Н, шир	.с)

1,34 (ЗН, т.	7=7,1	Гц) ,	. 3,33-3,42	(4Н,
м), 3,59-3,68	(4Н,	м) ,	4,32 (2Н,	кв.,
σ=7,ι гц),	5, 94	(1Н,	с)г 6,40	(1Н,
шир.с), 7,29	(2Н,	Д, 7;	=8, 7 Гц),	7, 49
(1Н, шир.с).	7,99	(2Н,	д, ^8, 7	гц),
9,50 (1Н, с).	12, 20	(1Н,	шир.с)

- 22 012869

0,81 (4Н, д), 1,83 (1Н, м), 2,02 (ЗН, с),
2,77	(ЗН, с),	2,90-3,17	(4Н, м),
4,09-	4,33 (4Н, м) ,	5,46 (1Н,	с), 6,06
ИН,	с), 7,47 (2Н,	д), 7,72 (2Н,	, Д) г 9,35
(1Н,	с), 1,45 С1Н	, с), 10,62	(1Н, с).
11,72	(1Н, с)

0,83	(4Н, д).	1, 81	(1Н,	м) , 2,04
с) ,	2,82-2,83	(ЗН,	и),	3,08-3,11
м) ,	3,42-3,47	(4Н,	м),	4,14-4,17

д), 1,80 (1Н, м), 2,02 (ЗН, с), с), 2,69 (шир.с, ОН), 3,01 (2Н, 3.47 (8Н, м), 5,45 (1Н, с), 6,05 7.47 (2Н, д), 7,70 (2Н, д), 9,25 10,36 (1Н, с)

3,30-3,39 (4Н, м), 3,60-3,65 (4Н, м) ,

5,89 (1Н, с), 6,25 (1Н, шир.с), 7,15-7,50 (9Н, м) , 9,40 (1Н, шир.с), 12,12 (1Н, с)

2,05	(ЗН,	С)	г 3,	25-	•3,45	(4Н,	м) , 3	,59-
3, 70	(4Н,	м)	, 5;	, 94	(1Н,	с) г	6,35	(1Н,
шир.с)	, 7,07	(2Н,	Д,	0=8,9	Гц) ,	7,46	(1Н,
шир.с)	, 7,58	(2Н,	д,	1=8,9	Гц) ,	9,40	(1Н,
с) , 9,	98 (1Н,	с) ,	12,	,13 (1Н, шир.с)

0,38-0,48	(2Н, М),	0,79-0,89 (2Н,	м) ,
1,64-1,73	(1Н, м)	, 2,04 (ЗН,	с) ,
3,34-3,40	(4Н, м),	3,61-3,69 (4Н,	и) ,
5,46 (1Н,	с), 6,10 (1Н, шир.с), 7,05	(2Н,
д, σ=β, 9	Гц), 7,61	(2Н, д, σ=8, 9	Гц) ,
9,34 (1Н,	с), 9,99	(1Н, с), 11,85	(1Н,
шир.с).

0,85 (4Н, с), 1,80 (1Н, м), 2,00 (ЗН, с),

3,35 (4Н, с), 3,60 (4Н, с), 5,43 (1Н, с),

6,00 (1Н, шир.с), 7,50 (2Н, д), 7,70 (2Н, д) , 9,30 (1Н, с)., 10,40 (1Н, с), 11,70 (1Н, шир.с).

Е3+415,32

Е5-413,37

Ε3+396,32

Ε3-394,38

ЕЗ+436,3.6

Ε3-434,41

ЕЗ+452,2

- 23 012869

ν-1νΐ	Л Vх	-	0,80-0,82 (4Н, д), 1,81 (1Н, м) , 2,02 (ЗН, с), 2,21 (ЗН, с), 2,33-2,36 (4Н, м) , 2,41 (4Н, с), 3,30-3,45 (маскированный сигнал, 4Н, м) , 4,19 (1Н, шир.с), 5,45 (1Н, с), 6,03 (1Н, шир.с), 7,47 (2Н, д) , 7,69 (2Н, д) , 9,18 (1Н, с), 10,35 (1Н,с), 11,70 (1Н шир.с)	-
ν-1νίΐ		-	0,81-0,83 (4Н, д), 1,81 (1Н, м) , 2,02 (ЗН, с), 2,80 (ЗН, с), 3,11-3,45 (маскированный сигнал, 8Н, м) , 5,45 (1Н, с), 6,07 (ЗН, с), 7,48 (2Н, д), 7,71 (2Н, д), 9,36 (1Н, с), 10,38 (1Н, с), 11,75 (1Н, шир.с)	-
ν-1νϋί		-	0,81-0,82 (4Н, д), 1,81 (1Н, м) , 2,02 (ЗН, с), 2,27 (ЗН, с), 2,43 (4Н, м) , 3,38-3, 47 (маскированный сигнал, 4Н, м) , 4,20 (2Н, с), 5,45 (1Н, с), 6,04 (1Н, шир.с), 7,47 (2Н, д), 7,69 (2Н, д) , 9,20 (1Н, с), 10,36 (1Н, с)	-

ν-1ΐχ		-	0,81-0,83 (4Н, д), 1,81 (1Н, м) , 2,02 (ЗН, с), 2,82 (ЗН, с), 3,03-3,13 (4Н, м), 3,36-3,75 (маскированный сигнал, 6Н, м) , 4,12-4,15 (2Н, м) , 5,45 (1Н, с), 6,05 (1Н, с), 7,48 (2Н, д) , 7,71 (2Н, д) , 9,37 (1Н, с), 9,61 (1Н, шир.с), 10,38 (1Н, с)	-
ν-1χ		-	0,81-0,82 (4Н, д) , 1,81 (1Н, м) , 2,02 (ЗН, с), 2,40 (ЗН, с), 2,54-2,68 (8Н, м), 3, 40-3,45 (маскированный сигнал, 4Н, м) , 4,32 (1Н, шир.с), 5,45 (1Н, с), 6,05 (1Н, шир.с), 7,47 (2Н, д) , 7,69 (2Н, д) , 9,24 (1Н, с), 10,36 (1Н, с)	-
ν-1χί	«Л нсгЧн	-	0, 80-0,82 (4Н, д) , 1,80 (1Н, м), 2,02 (ЗН, с), 2,31 (ЗН, с), 2,50 (маскированный сигнал, 4Н) , 3,36-3,47 (4Н, м}, 4,88 (шир.м, ОН), 5,45 (1Н, с), 6,04 (1Н, с), 7,47 (2Н, д), 7,69 (2Н, д), 9,22 (1Н, с), 10,36 (1Н, с)	-
ν-20 ί	Αίον но»»		1,09 (ЗН, т), 2,00 (ЗН, с), 2,38 (2Н, кв.}, 2,77 (ЗН, с), 3,00 (2Н, м) , 3,18 (2Я, м), 3,40 (2Н, д), 4,10 (2Н, д), 5,41 (1Н, с), 6,06 (1Н, шир.с), 7,48 <2Н, д) , 7,73 (2Н, д) , 9,42 (1Н, с), 10,15 (1Н, с), 10,64 (1Н, шир.с), 11,77 (1Н, шир.с)	ЕЗ-451,4 Е8+453,4 (М+Н)+
ν-20 Я			I, 09 (ЗН, ш), 2,0 (ЗН, с), 2,35 (5Н, м), 2,81 (ЗН, с), 3,09 (4Н, м), 3,44 (2Н, д), 4,12 (2Н, д), 5,41 (1Н, с), 6,02 (1Н, шир.с), 7,48 (2Н, д), 7,73 (2Н, д) , 9,44 (1Н, с), 9,70 (1Н, шир.с), 10,10 (1Н, с), II, 80 {1Н, шир.с)	ЕЗ-451,4 ЕЗ+453,4 (М+Н) +

Биологические анализы

Активность соединений по данному изобретению в качестве ингибиторов киназ может анализироваться ίη νίΐτο, ίη νίνο или в клеточной линии. Анализы ίη νίΐτο включают в себя анализы, которые определяют ингибирование либо киназной активности, либо АТФ-азной активности активированного фермента Аигога и/или ЕЬТ-3. Другие анализы ίη νίΐτο количественно определяют способность ингибитора связываться с Аигога и/или ЕЬТ-3 и могут быть измерены либо радиоактивным мечением ингибитора перед связыванием, выделением комплекса ингибитор/Аигога и/или ингибитор/ЕЬТ-3 и определением количества связанной радиоактивной метки, либо проведением конкурентного эксперимента, в котором новые соединения инкубируют с Аигога и/или ЕЬТ-3, связанными с известными радиоактивными лигандами. Можно использовать любой тип или любую изоформу Аигога, в зависимости от того, какой тип или какая изоформа должны быть ингибированы. Подробности используемых условий для этих анализов ферментов описаны в примерах ниже.

- 24 012869

Пример 10.

Определение К₁ для ингибирования Ашота.

Соединения подвергали скринингу следующим образом на их способность ингибировать Ашота с использованием стандартного ферментсвязанного анализа (Рох е1 а1. (1998) Ргоуеш 8с1. 7, 2249). К исходного буферному раствору для анализа, содержащему 0,1 М НЕРЕ8 7,5, 10 мМ МдС1₂, 1 мМ ДТТ, 25 мМ №С1, 2,5 мМ фосфоенолпируват, 3000 мМ НАДН, 30 мг/мл пируваткиназы, 10 мг/мл лактатдегидрогеназы, 40 мМ АТФ и 800 мкМ пептид (ЬККА8Ь6, Ашепсап Рерббе, 8ипиууа1е, СА) добавляли раствор в ДМСО соединения данного изобретения до конечной концентрации 30 мкМ. Полученную смесь инкубировали при 30°С в течение 10 мин. Реакцию инициировали добавлением 10 мкл исходного раствора Ашота с получением конечной концентрации 70 нМ в этом анализе. Скорости реакции получали мониторингом оптической плотности при 340 нм в течение 5-минутного времени считывания результатов при 30°С с использованием планшет-ридера ВюРаб ИНгашагк (Негси1е8, СА). Величины К₁ определяли из данных скорости как функцию концентрации ингибитора.

Было обнаружено, что соединения формулы У данного изобретения являются ингибиторами Ашота-1, Ашота-2 и Аигога-3.

Пример 11.

Определение К₁ для ингибирования РЬТ-3.

Соединения подвергали скринингу на их способность ингибировать активность РЬТ-3 с использованием радиометрического анализа связывания на фильтре. Этот анализ выполняет мониторинг включения ³³Р в субстрат поли(61и,Туг)4:1 (ρΕ4Υ). Реакции проводили в растворе, содержащем 100 мМ НЕРЕ8 (рН 7,5), 10 мМ МдС1₂, 25 мМ №С1, 1 мМ ДТТ, 0,01% БСА и 2,5% ДМСО. Конечные концентрации субстрата в этом анализе были 90 мкМ АТФ и 0,5 мг/мл ρΕ4Υ (оба из 81дша Сйеткак, 8ΐ Ьоик, МО). Конечная концентрация соединения данного изобретения обычно была между 0,01 и 5 мкМ. Обычно проводили титрование с 12 точками приготовлением серийных разведений из исходного ДМСО-раствора тест-соединения. Реакции проводили при комнатной температуре.

Готовили два раствора для анализа. Раствор 1 содержит 100 мМ НЕРЕ8 (рН 7,5), 10 мМ МдС1₂, 25 мМ №С1, 1мг/мл ρΕ4Υ и 180 мкМ АТФ (содержащий 0,3 мкКи [у-³³Р]АТФ для каждой реакции). Раствор 2 содержит 100 мМ НЕРЕ8 (рН 7,5), 10 мМ МдС1₂, 25 мМ №С1, 2 мМ ДТТ, 0,02% БСА и 3 нМ РЬТ-

3. Анализ проводили на 96-луночном планшете смешиванием 50 мкл каждого из раствора 1 и 2,5 мл соединения данного изобретения. Реакцию инициировали раствором 2. После инкубирования в течение 20 мин при комнатной температуре реакцию останавливали 50 мкл 20% ТХУ, содержащей 0,4 мМ АТФ. Затем весь объем реакции переносили на фильтрующий планшет и промывали 5% ТХУ с использованием харвестера 9600 из ТОМТЕС (Нашбеп, СТ). Количество включения ³³Р в ρΕ4Υ анализировали сцинтилляционным счетчиком для счета в микропланшетах Раскагб Тор Соип1 Мкгор1ак 8сшЦ11а1юп Соипкг (Мепбеп. СТ). Данные строили с использованием программы Ргкт с получением 1С₅₀ или К₁.

Было обнаружено, что соединения формулы У данного изобретения являются ингибиторами РЬТ-3. Пример 12.

Определение 1С₅₀ для ингибирования Ашота в анализе с клетками Со1о205.

Соединения анализировали также на ингибирование пролиферации клеток. В этом анализе полную среду готовили добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, Ь-глутамина и раствора пенициллина/стрептомицина к среде РРМ1 1640 (8щша). Клетки рака ободочной кишки (клеточной линии Сок205) добавляли в 96-луночный планшет при плотности посева 1,25 х10⁴ клеток/лунка/150 мкл. Раствор тест-соединения готовили в полной среде серийным разведением, тест-соединение (50 мкл) добавляли в каждую лунку.

Каждый планшет содержал ряд лунок, в которые добавляли только полную среду (200 мкл), для образования контрольной группы для измерения максимальной пролиферации. Контрольную группу с носителем также добавляли на каждом планшете. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 2 дней. Исходный раствор ³Н-тимидина (1 мКи/мл, Атегайат Рйагташа ИК) разбавляли до 20 мкКи/мл в среде РРМ1 1640, затем 25 мкл этого раствора добавляли в каждую лунку. Планшеты инкубировали дополнительно при 37°С в течение 3 ч и анализировали на поглощение ³Н-тимидина с использованием жидкостного сцинтилляционного счетчика.

Было обнаружено, что соединения формулы У являются ингибиторами пролиферации раковых клеток Со1о205.

Пример 13.

Измерение пролиферации клеток в панели опухолевых и нормальных типов клеток: анализ включения ³Н-тимидина.

Анализ включения ³Н-тимидина был выбран в качестве хорошо охарактеризованного способа определения пролиферации клеток. Клетки из нормальных тканей и большое разнообразие различных типов опухолей были выбраны для анализа. Многие опухолевые клетки были выбраны потому, что они экспрессируют высокие уровни белков Ашота (например, МСР-7, РС3, А375, А549) (См. раздел 5.3.5 и ВЬсйоГГ е1 а1. ЕМВО Ь 1998 17, 3052-3065) и/или способны образовывать опухоли в голых мышах или

- 25 012869 крысах (например, НСТ116, МСЕ-7 и ΜΌΑ-ΜΒ-231).

Логарифмически растущие клетки инкубировали с соединением в течение 96 ч. Для измерения пролиферации клеток за 3 ч перед окончанием этого эксперимента в каждую лунку добавляли 0,5 мкКи ³Нтимидина. Затем клетки собирали, промывали и включенную радиоактивность считали на бета-счетчике для микропланшетов \Уа11ае. Для определения ингибирования пролиферации, имп/мин, строили в зависимости от концентрации соединения и определяли графически 1С₅₀.

В табл. 4 ниже представлены клеточные линии, использованные в описанном выше анализе пролиферации клеток. Для каждой клеточной линии определяли ингибирование пролиферации клеток и включение ³Н-тимидина (временная точка 96 ч).

Таблица 4

Клеточные линии

Происхождение Клеточная линия

Колоректальная	аденокарцинома	НСТ-116
Колоректальная	аденокарцинома	ΣΞ174Τ
Лейкоз		НЬбО
Аденокарцинома	молочной железы	ΜϋΑ-ΜΒ-231
Аденокарцинома	молочной железы	ΖΚ-75-1
Аденокарцинома	молочной железы	МСЕ-7
Аденокарцинома	предстательной железы	РСЗ
Поджелудочная железа	М1А-Ра-Са-2
Меланома		Г375
Первичные	стимулируемые ФГА	ФГА-бласты
лимфоциты человека

Хотя описан ряд вариантов осуществления данного изобретения, очевидно, что эти основные примеры могут быть изменены для получения других вариантов, которые используют соединения и способы данного изобретения. Таким образом, должно быть понятно, что объем данного изобретения должен определяться прилагаемой формулой изобретения, а не конкретными вариантами осуществления, которые были представлены в качестве примеров.

Claims (1)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ или его фармацевтически приемлемые производное или соль, где К⁵ выбран из водорода или С1_-4алифатической группы;

   Я⁶ выбран из С1_-3алифатической группы и

   К⁷ представляет собой циклопропил.

   2. Соединение по п.1, где Я⁵ выбран из водорода, метила, этила, трет-бутила или изопропила.

   3. Соединение по п.2, где Я⁶ выбран из метила, этила или циклопропила.

   4. Соединение, выбранное из следующих соединений табл. 1:

   - 26 012869

   Таблица 1

   № Структура № Структура 1 7 11 13 14 13 19 А

   5. Соединение, выбранное из следующих соединений табл. 2:

   Таблица 2

   - 27 012869

   ν-1 ί Η-α ν-1 ϋ ν-1/ί X· ν-1Λ< ν-1 ν >> ν-1 νί ή “С¹” ν-1 νϋ ν-ι νΐα _ο:& ν-1 & ν-1 X ν-1 χί ιτί V ΛΤ* нсг\н

   6. Композиция, содержащая соединение по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель.

   7. Композиция по п.6, дополнительно содержащая антипролиферативный агент или химиотерапевтический агент.

   8. Способ ингибирования Аигога-1 в биологической пробе или у пациента, включающий контактирование указанной пробы с:

   (a) соединением по п.1 или (b) композицией по п.6 или введение пациенту:

   (a) соединения по п.1 или (b) композиции по п.6.

   9. Способ ингибирования Аигога-2 в биологической пробе или у пациента, предусматривающий контактирование указанной пробы с:

   (a) соединением по п.1 или (b) композицией по п.6 или введение пациенту (a) соединения по п.1 или (b) композиции по п.6.

   10. Способ ингибирования Аигога-3 в биологической пробе или у пациента, предусматривающий

   - 28 012869 контактирование указанной пробы с:

   (a) соединением по п.1 или (b) композицией по п.6 или введение пациенту:

   (a) соединения по п.1 или (b) композиции по п.6.

   11. Способ ингибирования ЕЬТ-3 в биологической пробе или у пациента, предусматривающий контактирование указанной пробы с:

   (a) соединением по п.1 или (b) композицией по п.6 или введение пациенту:

   (a) соединения по п.1 или (b) композиции по п.6.

   12. Способ ингибирования Аигога-1, Аигога-2, Аигога-3 и ЕЬТ-3 у пациента, включающий введение указанному пациенту:

   (a) соединения по п.1 или (b) композиции по п.6.

   13. Способ лечения рака у пациента, включающий стадию введения указанному пациенту композиции по п.6.

   14. Способ по п.13, включающий стадию введения указанному пациенту дополнительного химиотерапевтического или антипролиферативного агента.

   15. Способ по п.13, где указанный рак выбран из меланомы, лимфомы, нейробластомы, лейкоза или рака, выбранного из рака ободочной кишки, молочной железы, легкого, почки, яичника, поджелудочной железы, почечного рака, рака ЦНС, рака шейки матки, рака предстательной железы или рака желудочнокишечного тракта, острого миелогенного лейкоза (АМЬ), острого лимфоцитарного лейкоза (АЬЬ), мастоцитоза или желудочно-кишечной стромальной опухоли (ОГ8Т).

   16. Способ лечения или ослабления рака у пациента, включающий стадию нарушения митоза раковых клеток ингибированием протеинкиназы Аигога соединением по п.1.

   17. Способ по п.16, предусматривающий стадию введения указанному пациенту композиции по п.6.

   18. Соединение формулы У-1 сн₃

   У-1 или его фармацевтически приемлемая соль, выбранная из группы, состоящей из ацетата, адипата, альгината, аспартата, бензоата, бензолсульфоната, бисульфата, бутирата, цитрата, камфората, камфорсульфоната, циклопентанпропионата, диглюконата, додецилсульфата, этансульфоната, формиата, фумарата, глюкопентаноата, глицерофосфата, гликолата, гемисульфата, гептаноата, гексаноата, гидрохлорида, гидробромида, гидройодида, 2-гидроксиэтансульфоната, лактата, малеата, малоната, метансульфоната, 2нафталинсульфоната, никотината, нитрата, оксалата, пальмоата, пектината, персульфата, 3фенилпропионата, фосфата, пикрата, пивалата, пропионата, салицилата, сукцината, сульфата, тартрата, тиоцианата, тозилата, ундеканоата, натрия, калия, магния, аммония и Ν⁺(С_3-4алкил)₄.

   19. Соединение по п.18, представляющее собой соль соединения формулы У-1 в виде сульфата.

   20. Соединение по п.18, представляющее собой соль соединения формулы У-1 в виде лактата.

   21. Применение соединения по п.18 в сочетании с С1ееуес для производства лекарственного средства для лечения рака.

   22. Применение соединения по п.18 в сочетании с С1ееуес для производства лекарственного средства для лечения лейкемии.

   23. Соединение формулы У

   - 29 012869

   Η*

   V или его фармацевтически приемлемая соль, где Я⁵ представляет собой Н, метил, этил, н-пропил, ί-пропил, циклопропил, изобутил или третбутил;

   Я⁶ представляет собой метил, этил, циклопропил;

   Я⁷ представляет собой метил, этил, циклопропил, трет-бутил, при условии, что соединение не является или его фармацевтически приемлемая соль, где Я⁵ представляет собой метил;

   Я⁶ представляет собой метил;

   Я⁷ представляет собой циклопропил.

   25. Соединение по пп.23, 24 в форме соли, где соль выбрана из группы, состоящей или из ее фармацевтически приемлемой соли или производного или таутомера или стереоизомера фармацевтически приемлемой соли, выбранной из группы, состоящей из ацетата, адипата, альгината, аспартата, бензоата, бензолсульфоната, бисульфата, бутирата, цитрата, камфората, камфорсульфоната, циклопентанпропионата, диглюконата, додецилсульфата, этансульфоната, формиата, фумарата, глюкопентаноата, глицерофосфата, гликолата, гемисульфата, гептаноата, гексаноата, гидрохлорида, гидробромида, гидройодида, 2гидроксиэтансульфоната, лактата, малеата, малоната, метансульфоната, 2-нафталинсульфоната, никотината, нитрата, оксалата, пальмоата, пектината, персульфата, 3-фенилпропионата, фосфата, пикрата, пивалата, пропионата, салицилата, сукцината, сульфата, тартрата, тиоцианата, тозилата, ундеканоата, натрия, калия, магния, аммония и Ν' (С_1-4алкил)₄.

   26. Соединение по п.25, представляющее собой соль соединения в виде сульфата.

   27. Соединение по п.25, представляющее собой соль соединения в виде лактата.

   28. Композиция, содержащая соединение по пп.25-27 и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель.

   29. Композиция по пп.25-27, дополнительно содержащая антипролиферативный агент или химиотерапевтический агент.