ES2219670T3 - Utilizacion de compuestos de pirazola para el tratamiento de la glomerulonefritis, cancer, ateroesclerosis o restenosis. - Google Patents
Utilizacion de compuestos de pirazola para el tratamiento de la glomerulonefritis, cancer, ateroesclerosis o restenosis.Info
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Abstract
SE MUESTRA UN METODO PARA INHIBIR SELECTIVAMENTE UNA QUINASA, QUE SUPONE LA PUESTA EN CONTACTO DE UNA COMPOSICION QUE CONTIENE UNA QUINASA CON UN COMPUESTO DE LA FORMULA (I), DONDE: R{SUB,1} ES ALQUIL REBAJADO, HIDROCARBIL REBAJADO , ALQUIL REBAJADO CON ARIL, ALQUIL REBAJADO CON HETEROARIL, CARBONIL POLIAROMATICO, POLIAROMATICO, AROMATICO HETEROCICLICO DE 5- O 6- ELEMENTOS, CARBONIL POLIHETEROAROMATICO O POLIHETEROAROMATICO; R{SUB,2} ES ALQUIL REBAJADO, HIDROCARBIL REBAJADO, ALQUIL REBAJADO CON ARIL, ALQUIL REBAJADO CON HETEROARIL, HIDROCARBOIL REBAJADO, AROMATICO HETEROCICLICO DE 5- 0 6 ELEMENTOS, HIDROCARBOIL REBAJADO, CARBONIL AROMATICO HETEROCICLICO DE 5- O 6- ELEMENTOS, POLIAROMATICO O POLIHETEROAROMATICO; R{SUB,3} ES H O ALQUIL REBAJADO; R{SUB,5}ES H, ALQUIL REBAJADO, HIDROCARBIL REBAJADO, ALQUIL REBAJADO CON ARIL, ALQUIL REBAJADO CON HETEROARIL, UN AROMATICO HETEROCICLIOCO DE 5- O 6- ELEMENTOS, HALOGENO, O CIANO; Y R{SUB,6} ES H O HIDROCARBOIL REBAJADO.
Description
Utilización de compuestos de pirazola para el
tratamiento de la glomerulonefritis, cáncer, ateroesclerosis o
restenosis.
La presente invención se refiere a pirazoles y a
usos recientemente descubiertos de pirazoles como inhibidores de
proteína quinasas, especialmente tirosina quinasas, como reactivos
en el análisis de quinasas y sus substratos, y como composiciones
farmacéuticas útiles en la inhibición de procesos dependientes de
quinasas, tales como el crecimiento celular.
Las proteína quinasas específicas de tirosina
(tirosina quinasas) representan una familia de enzimas que catalizan
las transferencia del fosfato terminal del trifosfato de adenosina a
residuos de tirosina en sustratos de proteína. Los primeros miembros
de esta clase en ser identificados fueron tirosina quinasas
asociadas con genes víricos (denominados oncogenes), que eran
capaces de transformación celular (por ejemplo,
pp60v-src y pp98v-fps). Después, se
demostró que habían contrapartes celulares normales (es decir,
pp60c-src y pp98c-fps) a estos
productos genéticos víricos. Una tercera categoría de tirosina
quinasas en ser identificados son aquellos denominados receptores
del factor de crecimiento, los cuales incluyen insulina, factor de
crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento derivado de
plaqueta (PDGF), factor de crecimiento de fibroblasto (FGF) y
receptores p185HER-2. Se piensa que todas estas
tirosina quinasas, mediante fosforilación del sustrato, juegan un
papel crítico en la transducción de señal para varias funciones
celulares.
Aunque aún no se han elucidado los mecanismos
exactos de la transducción de señal, se ha demostrado que las
tirosina quinasas son factores importantes que participan en la
proliferación celular, la carcinogénesis y la diferenciación
celular.
La replicación celular puede desencadenarse
mediante la exposición de las células a uno o más factores de
crecimiento, ejemplos de los cuales son FGF, EGF y PDGF. Dichos
factores de crecimiento interaccionan específicamente con sus
correspondientes receptores, cuyos receptores comprenden un dominio
extracelular, un dominio transmembrana y un dominio citoplásmico
que posee la actividad enzimática de la tirosina quinasa. Se piensa
que el inicio de la proliferación celular tiene lugar cuando un
factor de crecimiento se une al dominio extracelular de su receptor
en la superficie celular. Esta unión del receptor con el factor de
crecimiento induce la dimerización del receptor que resulta en la
autofosforilación del receptor, un aumento en la actividad
enzimática del receptor y la fosforilación del sustrato.
Recientemente se ha identificado una vía común para la señalización
de la superficie celular al núcleo, y se ha demostrado que es
utilizada por los receptores del factor de crecimiento de la
tirosina quinasa. Esta vía implica la activación mediada por el
factor de crecimiento de la proteína ras que inicia una cascada de
proteína quinasa que lleva a la fosforilación de los factores de
transcripción que regulan la expresión de genes que participan en
la división celular.
La autofosforilación del receptor y la
fosforilación de sustratos intracelulares son eventos bioquímicos
que se requieren para la señalización del factor de crecimiento y
la proliferación celular. Esto se ha demostrado mediante la
eliminación de la actividad de la proteína tirosina quinasa de
varios receptores, incluyendo el receptor EGF (EGFR), el receptor
FGF (FGFR) y el receptor PDGF (PDGFR) mediante mutagénesis dirigida
al sitio que resulta en la pérdida completa de la actividad
biológica de los receptores. Asimismo, inhibidores de proteína
quinasa como la staurosporina, K252a y las tirfostina, que bloquean
la actividad enzimática de la tirosina quinasa del receptor,
previenen la señalización intracelular y la proliferación celular.
Estos estudios confirman la función esencial de la fosforilación de
la tirosina en la señalización mediante receptores del factor de
crecimiento, y demuestran que se pueden utilizar compuestos que
inhiban la actividad de la tirosina quinasa para regular la
proliferación celular.
Muchos estados de enfermedad se caracterizan por
proliferación celular no controlada. Estas enfermedades abarcan
varios tipos de células e incluyen trastornos como cáncer,
psoriasis, fibrosis pulmonar, glomerulonefritis, aterosclerosis y
restenosis después de angioplastia. La utilidad de los inhibidores
de tirosina quinasa para el tratamiento de dichos trastornos se ha
demostrado en varios estudios in vivo. Se ha demostrado que
inhibidores de la tirosina quinasa con selectividad para la familia
EGFR bloquean la formación de tumores en animales, demostrando así
su utilidad potencial para suprimir directamente el crecimiento de
células tumorales en el tratamiento del cáncer humano,
especialmente el carcinoma de mama. Se ha demostrado también que la
metástasis tumorosa y su antiogénesis asociada son inhibidas al
prevenir la activación de la tirosina quinasa del receptor del
factor de crecimiento endotelial vascular, lo cual indica una
utilidad de los inhibidores de la tirosina quinasa en el bloqueo de
eventos separados que ocurren durante la carcinogénesis.
En modelos experimentales de glomerulonefritis se
asocia un aumento de 20 veces la expresión del receptor PDGF con la
proliferación de células mesangiales. La neutralización de PDGF que
previene la activación de su receptor de tirosina quinasa, limita
al grado de degeneración renal que sucede normalmente. Estos
estudios demuestran que un inhibidor de tirosina quinasa que
bloqueara al receptor PDGF podría tener potencial para el
tratamiento de la glomerulonefritis humana.
Un problema importante aún no resuelto de la
cardiología de intervención es la restenosis seguida de una
angioplastia coronaria. De las casi 400.000 angioplástias que se
realizan comúnmente en los Estados Unidos cada año, del 30 al 40% de
ellas fracasan dentro del primer año debido a la restenosis. El
proceso de restenosis implica la reoclusión de una arteria
aterosclerótica que en muchos casos se debe a la proliferación de
células de músculo liso, que es mediada por factores de crecimiento
como PDGF y FGF. En modelos de restenosis en animales, anticuerpos
que bloquean la activación de la actividad de tirosina quinasa del
receptor PDGF o FGF, previenen la proliferación de células de
músculo liso y la formación de la neoíntima. Estos estudios indican
que los inhibidores de tirosina quinasa que bloquean el
funcionamiento del receptor PDGF o FGF podrían tener utilidad en el
tratamiento de la restenosis humana.
Actualmente, la quimioterapia del cáncer hace uso
de inhibidores de la síntesis del ADN (por ejemplo, adriamicina,
fluorouracilo) y compuestos que rompen el citoesqueleto
(vinblastina). Estos compuestos son altamente tóxicos, ya que su
actividad inhibidora no se limita a células cancerosas, con la
distinción, sin embargo, de que las células tumorales son atacadas
más fácilmente por los inhibidores antedichos, debido a que estas
células se dividen más rápidamente y el metabolismo de su ADN es, en
consecuencia, más activo. Unos pocos tipos de cáncer son tratados
con derivados de hormonas específicas. Estos casos, sin embargo,
son la excepción y el tratamiento quimioterapéutico para la mayoría
de los diferentes tipos de cáncer es inespecífico.
A principios de la década de 1980, fue evidente
que del 20 al 30% de los cánceres expresan productos oncogénicos
característicos que son receptores del factor de crecimiento o sus
homólogos mutados, y que exhiben actividad proteica de tirosina
quinasa (PTK). La actividad de PTK es intrínseca al receptor o su
oncogeno homólogo e influye en la proliferación celular mediante su
dominio PTK. Además, cada uno de estos receptores (normales o
mutados) exhibe una actividad de PTK característica con una
especificidad distinta por el sustrato. Uno de estos receptores es
EGFR y su homólogo oncogénico
V-ERB-B.
Como resultado de los desarrollos anteriormente
descritos respecto a la actividad PTK de los receptores del factor
de crecimiento, que ha propuesto tratar el cáncer por medio de
varias sustancias químicas capaces de inhibir la actividad PTK de
EGF. Véase, por ejemplo, las patentes Japonesas Nos.
62-39523, 62-39558,
62-42923 y 62-42925. Por ejemplo,
la patente japonesa referida y expuesta No. SHO
62-39558 describe a la
alfa-ciano-2,5-dihidroxicinamamida
como el compuesto activo en composiciones eficaces como inhibidores
de PTK.
La utilización de cinamamil malononitrilo y
varios compuestos de malononitrilo de bencilideno como inhibidores
del crecimiento tumoral, se describe en Gal y otros, Studies on the
Biological Actino of Malononitriles. I. The Effect of Substituted
Malononitriles on the Growth of Transplanted Tumors in Mice, Cancer
Research, 12:565-72, 1952.
Yoshida y otros, Solicitud de patente japonesa
No. 49100080 describen derivados de 3-aminopirazol
que se dice tienen efectos antiinflamatorios y analgésicos.
Por lo tanto, un objeto de la presente invención
es proporcionar utilizaciones adicionales para viejas composiciones
y proporcionar nuevas pirazolas útiles como inhibidores de proteína
quinasas.
Estos y otros objetos de la invención se han
cumplido mediante la proporción de procedimientos y utilizaciones
según se definen en las reivindicaciones.
Los grupos alquilo, hidrocarbilo, arilalquilo,
heteroarilalquilo, hidrocarboilo, heterocíclico aromático,
poliaromático y poliheteraromático de los compuestos de fórmula (I)
se pueden sustituir con diferentes sustituyentes, según se discute
en detalle más abajo.
En la presente invención, "mamífero" tiene
el significado habitual e incluye humanos junto con otros mamíferos.
Utilizaciones farmacéuticas tienen la intención de incluir
utilizaciones veterinarias, especialmente utilización en animales
domésticos como ganado, ovejas, cerdos, cabras, perros, gatos,
conejos, hámsters, jerbos, ratas y ratones.
Otras características y ventajas serán evidentes
a partir de la descripción y las reivindicaciones.
La invención se entenderá mejor con referencia a
la siguiente descripción detallada, en combinación con las figuras
que forman parte de esta descripción, en donde:
La Figura 1 muestra el efecto del compuesto 1
sobre la inhibición de fosforilación en células
HR5-\betaR.
La Figura 2 muestra el efecto del compuesto 1
sobre la actividad mitogénica en células
32D-\alphaR.
La presente invención está dirigida a un nuevo
uso de pirazoles sustituidos, algunos de los cuales son compuestos
conocidos anteriormente, y algunos de los cuales son compuestos
nuevos. Estos pirazoles son preferiblemente pirazoles
3,5-disustituidos o pirazoles
3,4,5-trisustituidos. Un compuesto preferido útil
en los procedimientos de la invención tiene un substituyente de
fenilcarboxamida en la posición 3 del anillo de pirazol y un
substituyente fenilo en la posición 5. Muchos compuestos de esta
clase son conocidos, pero no se ha sabido anteriormente que tengan
actividad como inhibidores de quinasa.
En general, los compuestos útiles en las
utilizaciones de esta invención tienen la fórmula I:
en
donde:
R_{1} es alquilo inferior, hidrocarbilo
inferior, arilalquilo inferior, heteroarilalquilo inferior,
aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros, poliaromático o
poliheteroaromático;
R_{2} es alquilo inferior, hidrocarbilo
inferior, arilalquilo inferior, heteroarilalquili inferior,
aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros, hidrocarboilo inferior,
carbonilo aromático heterocílico de 5 ó 6 miembros, poliaromático,
carbonilo poliaromático, poliheteroaromático o carbonilo
poliheteroaromático;
R_{3} es H o alquilo inferior;
R_{5} es H, alquilo inferior, hidrocarbilo
inferior, arilalquilo inferior, heteroarilalquilo inferior,
aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros, halógeno o ciano; y
R_{6} es H o hidrocarboilo inferior.
Incluidos dentro de estas definiciones están los
grupos alguilo, hidrocarbilo, arilalquilo, heteroarilalquilo,
hidrocarboilo, aromático heterocíclico, poliaromático y
poliheteroaromático que están sustituidos independientemente con (es
decir, un hidrógeno o hidrógenos son reemplazados con) hasta 4
grupos R_{4} (preferiblemente no más de 3, preferiblemente no más
de 2, sobre cualquiera de uno de los tres grupos R en la fórmula),
en donde cada R_{4} representa independientemente halógeno, ciano,
nitro, alquilo inferior (el cual da simplemente otro grupo
hidrocarbilo), hidroxilo, alcoxilo, carbonilo, carboxilo, amino,
alquilamino, dialquilamino, o hidrocarboilamido.
Se ha descubierto ahora que estos compuestos y
composiciones farmacéuticas que los contienen pueden utilizarse para
unirse con dominios de quinasa e inhibir la actividad de la quinasa.
Dichas utilizaciones se describen, a continuación, con más
detalle.
Como se utilizaron anteriormente y se utilizan a
lo largo de la descripción, debe entenderse que los siguientes
términos, a menos que se indique otra cosa, tienen los siguientes
significados:
"Alquilo" significa un hidrocarburo
alifático saturado que puede ser de cadena lineal o ramificada,
conteniendo aproximadamente 1 a aproximadamente 6 átomos de
carbono.
"Alquilo inferior" significa un grupo
alquilo como anteriormente, que tiene de 1 lineal a 4 átomos de
carbono, que puede ser de cadena lineal o ramificada, tal como
metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo,
sec-butilo o terc-butilo. Grupos
alquilo halogenados, particularmente grupos alguilo fluorados, tales
como CF_{3}. CH_{2}CF_{3}. y CF_{2}CF_{3}. se incluyen
dentro de la definición de grupos alquilo.
"Arilalquilo inferior" y
"heteroarilalquilo inferior" significan un "alquilo
inferior" como se describió previamente, unido a un grupo arilo o
heteroarilo, respectivamente. El término "arilo" se refiere a
un anillo aromático no sustituido o sustituido, sustituido con uno,
dos, tres o cuatro substituyentes R_{4}. Los grupos arilo
preferidos incluyen fenilo, fenantrenilo, naftacenilo, y
heterocíclicos aromáticos. El término "heteroarilo" utilizado
en la presente se refiere a cualquier grupo arilo, que contiene de
uno a cuatro heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en
nitrógeno, oxígeno y azufre.
"Alcoxi" significa un grupo
alguil-oxi, en el cual "alquilo" es como se
describió anteriormente. Se prefieren grupos alcoxi inferiores.
Ejemplos de estos grupos incluyen metoxi, etoxi,
n-propoxi, i-propoxi y
n-butoxi.
"Hidrocarbilo" significa un radical orgánico
derivado de una molécula de hidrocarburo por eliminación de uno de
sus átomos de hidrógeno. Grupos hidrocarbilo incluyen tanto
hidrocarburos alifáticos como aromáticos. Los hidrocarburos
alifáticos pueden ser saturados o insaturados, de cadena lineal o
ramificada. El grupo hidrocarbilo aromátido preferido es el fenilo,
un aromático carbocíclico. "Hidrocarbilo inferior" se refiere a
6 o menos átomos de carbono alifáticos o un anillo fenilo.
"Hidrocarboilo" significa un radical
orgánico derivado de un ácido orgánico, es decir, un ácido
carboxílico, o ácido sufónico, mediante la eliminación de su grupo
hidroxilo ácido. Grupos hidrocarboilo preferidos son grupos alquilo
inferiores de ácido carboxílico, tales como acetilo y propionilo. Se
prefiere también benzoilo. "Hidrocarboilo inferior" se refiere
a 6 o menos átomos de carbono alifáticos o un anillo de fenilo, no
contando el carbono de carbonilo mediante el cual ocurre el enlace
del radical al resto de la molécula. Un símbolo "\varnothing"
se usa para representar un anillo de fenilo en algunas formulaciones
en esta descripción. Son menos preferidos los compuestos formados a
partir de ácidos sulfónicos, pero están incluidos dentro del
significado de hidrocarboilo, en cuyo caso todas las partes del
radical son carbono o hidrógeno diferentes del grupo sulfonilo, a
menos que el compuesto sea un hidrocarboilo sustituido, como se
definió en otra parte. Entre los ejemplos se encuentra un grupo
bencensulfonilo.
Hidrocarbilo o hidrocarboilo "sustituido"
significa un hidrocarbilo o hidrocarboilo en el cual se ha
reemplazado un átomo de hidrógeno o un grupo de átomos de hidrógeno
por un substituyente de manera que el compuesto resultante sea
estable a una concentración de 0,01 M en agua (conteniendo hasta un
10% de etanol para aumentar la solubilidad, si fuera necesario)
durante 1 hora (medida típicamente a 37ºC, pH 7,4). Los
substituyentes preferidos son halógeno, alquilo inferior (que da
simplemente otro grupo hidrocarbilo), hidroxilo, alcoxilo,
carbonilo, amino, alquilamino, dialquilamino, o hidrocarboilamido.
Los substituyentes adicionales más preferibles en grupos
hidrocarbilo e hidrocarboilo aromáticos que en los grupos alifáticos
incluyen el nitro.
"Halo" significa un átomo de halógeno.
Halógenos preferidos incluyen cloruro, bromo y flúor.
"Anillo aromático heterocíclico" se refiere
a un anillo de 5 ó 6 miembros que contiene átomos de carbono y uno o
más átomos de N, O, o S y un sistema de enlace pi conjugado
deslocalizado de 6 electrones. Dicho anillo aromático heterocíclido
puede reemplazar un anillo de fenilo en cualquiera de las
estructuras descritas en la presente. Anillos aromáticos
heterocíclicos preferidos son furano, tiofeno, pirrol, pirazol,
triazol, imidazol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotiazol, piridina,
pirimidina, piridazina, pirazina, y triazina; son grupos
especialmente preferidos el furano, tiofeno, pirrol, tiazol y
piridina. "Carbonilo aromático heterocíclico" se refiere a un
anillo aromático heterocíclico unido a un carbonilo. La unión ocurre
preferiblemente mediante un carbono del anillo aromático tal como
son 2-furilcarbonilo y
2-tiofenilcarbonilo.
"Poliaromático" y "poliheteroaromático"
se refiere a sistemas de anillo múltiple, preferiblemente los
sistemas que contienen dos anillos. Los términos están destinados a
cubrir tanto radicales de anillo como naftilo y quinolino, como
radicales de anillo no fusionados tales como bifenilo. "Carbonilo
poliaromático" y "carbonilo poliheteroaromático" se refieren
a un grupo "pliaromático" y "poliheteroaromático" unido a
un carbonilo.
Un grupo preferido de compuestos de fórmula (I)
tiene los siguientes substituyentes: R_{1} es alquilo inferior,
hidrocarbilo inferior, o aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros;
R_{2} es alquilo inferior, hidrocarbilo inferior, aromático
heterocíclico de 5 ó 6 miembros, hidrocarboilo inferior, o carbonilo
aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros; R_{3} es H o alquilo
inferior; R_{5} es H, alquilo inferior, halógeno, o ciano; y
R_{6} es H o hidrocarboilo inferior.
Otro grupo preferido de compuestos de fórmula (I)
tiene los siguientes substituyentes: R_{1} es hidrocarbilo
inferior o aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros; R_{2} es
hidrocarboilo inferior o carbonilo aromático heterocíclido de 5 ó 6
miembros; R_{3} es H o alquilo inferior; R_{5} es H; y R_{6}
es H o alguilocarbonilo inferior.
Los compuestos preferidos incluyen aquellos en
donde R_{1} es un hidrocarbilo inferior o un aromático
heterocíclico de 5 ó 6 miembros, y está sustituido opcionalmente con
hasta 4 grupos R_{4}. Compuestos incluso más preferidos incluyen
aquellos en los cuales R_{1} es un aromático carbocíclico, tal
como fenilo o fenilo subsituido o un aromático heterocíclico de 5
miembros tal como tienilo. El grupo R_{1} más preferido es fenilo
o fenilo sustituido.
Los compuestos preferidos incluyen aquellos en
donde R_{2} es un hidrocarboilo inferior, o un carbonilo aromático
heterocíclico de 5 ó 6 miembros, y está sustituido opcionalmente con
hasta 4 grupos R_{4}. Compuestos incluso más preferidos incluyen
aquellos en los cuales R_{2} es un hidrocarboilo inferior tal como
un carbonilo aromático carbocíclico, preferiblemente un
fenilcarbonilo o un fenilcarbonilo sustituido. Los substituyentes
preferidos incluyen grupos nitro y amino. También se prefieren los
compuestos en donde R_{2} es un carbonilo aromático heterocíclico
de 6 miembros tal como nicotinoilo o isonicotinoilo. Compuestos más
preferidos son aquellos en donde R_{2} es fenilcarbonilo (es decir
benzoílo) o fenilcarbonilo sustituido. Los substituyentes R_{2}
particularmente preferidos son aquellos que contienen un
fenilcarbonilo o un fenilcarbonilo sustituido con un substituyente
donador de electrones o neutro electrónicamente (en relación al H
del grupo fenilo), especialmente substituyentes alquilo o
alcoxilo.
Los compuestos preferidos incluyen aquellos en
donde R_{3} es H.
Los compuestos preferidos incluyen aquellos en
los que R_{5} es H, alquilo inferior, halógeno o ciano, sujeto a
las limitaciones de substitución explicadas anteriormente.
Compuestos incluso más preferidos incluyen aquellos en donde R_{5}
es H.
Compuestos preferidos incluyen aquellos en donde
R_{6} es H.
Las estructuras identificadas de los compuestos
de fórmula (I) se indican en la tabla de más abajo. El compuesto 1,
un compuesto preferido en donde R_{1} es fenilo, R_{2} es
benzoilo, y R_{3}, R_{5} y R_{6} son H, se utilizó en el
trabajo experimental descrito con detalle en la sección de ejemplos
de esta descripción.
En la tabla 1A se usan las siguientes
abreviaturas: Me-metilo; Et-etilo;
nPr-n-propilo;
iPr-isopropilo;
nBu-n-butilo;
tBu-tercbutilo;
nPn-neo-pentilo
(2,2-dimetilpropilo); iBu-isobutilo;
MeCO-acetilo; (los demás derivados de acilo
nombrados de la misma manera);
\varnothing-fenilo.
La siguiente tabla indica los compuestos fórmula
(I) que fueron sintetizados de manera similar a la descrita en el
ejemplo 3. Los substituyentes R_{1}-R_{6} en
estos compuestos son ilustrativos de los substituyentes que son
adecuados para utilizarse en la presente invención y no están
diseñados para ser limitantes.
Se evaluaron sus actividades de manera similar a
la descrita en el Ejemplo 1. Todos estos compuestos inhibieron la
actividad de proteína quinasa de los \alphaPDGFR y \betaPDGFR.
Los acilamino-pirazoles aromáticos y
heteroaromáticos, ambos, tanto sustituidos como no sustituidos, en
donde R_{3}, R_{5} y R_{6} son H, exhibieron las mejores
actividades: compuestos 37-42, 45 y 46.
En la tabla 1B se utilizaron las siguientes
abreviaturas: Me-metilo;
iPr-isopropilo; MeCO-acelito (los
demás derivados de acilo nombrados de la misma manera),
\varnothingtBu-\varnothing-terc-butilo
y \varnothing-fenilo.
Muchos compuestos de la clase de aminopirazol
útiles en la presente invención son bien conocidos, estando descrita
la síntesis de varios compuestos en la literatura científica durante
30 años. Existe algo de confusión potencial sobre la nomenclatura en
la literatura, lo cual no debería ocasionar problemas a ningún
experto en la materia. Esto se presenta debido a la naturaleza
simétrica del anillo de pirazol, puesto que cualquiera de los dos
nitrógenos se puede considerar como el punto de partida para la
enumeración de los átomos del anillo. En las fórmulas anteriores y a
lo largo de esta solicitud, los compuestos son nombrados de manera
coherente para que el substituyente amino aparezca sobre el carbono
designado "3" en la numeración del anillo de pirazol. Sin
embargo, sería igualmente satisfactorio numerar el anillo en la
dirección contraria de manera que el substituyente amino aparezca en
el carbono 5 y el otro substituyente aparezca en el carbono 3. De
esta manera, parte de la literatura científica se refiere a
3-aminopirazoles y parte a
5-aminopirazoles, significando al mismo tiempo el
mismo compuesto o compuestos. Sin embargo, la utilización de la
nomenclatura en una sola publicación es coherente, y no hay una
confusión total en la literatura una vez que este rasgo de
nomenclatura se entienda.
Los 3-aminopirazoles utilizados
en los procedimientos de la invención pueden prepararse y
modificarse mediante técnicas conocidas, ya que muchos de estos
compuestos ya son conocidos para otros usos. El mismo
3-aminopirazol se encuentra disponible
comercialmente, por ejemplo de Aldrich Chemical Company, Inc.,
Milwaukee, Wisconsin, Missouri, USA (catálogo No.
16,064-4). Los pirazoles pueden ser sintetizados
fácilmente mediante la reacción de diazometano con acetileno. Esta
ruta sintética para pirazoles tiene casi 100 años de antigüedad y se
encuentra bien establecida. Véase, por ejemplo, von Pechmann,
Ver. Deut. Chem. Ges., 31:2950 (1898) y Hueckel et y otros.,
Z. Phys. Chem., A, 186:159 (1940). Pueden prepararse
fácilmente varios patrones de substitución en el pirazol resultante,
seleccionando alquinos y compuestos diazo de partida con el patrón
de substitución deseado.
Existen otras rutas sintéticas para producir
3-aminopirazoles. Por ejemplo, una síntesis general
de 3-aminopirazoles sustituidos se da en la Patente
US no. 4,622,330, en la cual una alquilhidrazina de fórmula
R_{1}-NHNH_{2} sufre una reacción de
condensación con un compuesto de fórmula
AlqOCR_{4}=C(CN)_{2}, para dar un producto
l-R_{1}-3-R_{4}-4-CN-5-aminopirazol.
Esta reacción puede adaptarse con facilidad para producir compuestos
de fórmula (I) substituyendo hidracina por la alquilhidrazina y (si
es necesario) extraer el grupo ciano del producto de pirazol,
conversirlo en un grupo alquilo, o seleccionar un material de
partida con solo un grupo ciano. Para ejemplos de la síntesis del
compuesto
3-benzoilamida-5-fenilpirazol,
que es el compuesto 1 en la Tabla 1A, véase Huening, Chem.
Ber., 95:937-943 (1962) y Checchi y otros.,
Gazz. Chim. Ital., 85:1558-1568 (1955).
Varios compuestos de particular interés se
encuentran disponibles comercialmente de Maybridge Chemical Co.,
Ltd., Travillett, Tintagel, Cornwall PL340HW, Reino Unido,
especialmente
3-[2'-fluorobenzoilamino]-5-pentilpirazol,
3-[2'-clorobenzoilamino]-5-fenilpirazol,
3-benzoilamino-5-fenilpirazol
y
3-[4'-clorobenzoilamino]-5-fenilpirazol.
Debe observarse aquí que los nombres dados en la oración anterior no
están estrictamente de acuerdo a las reglas de nomenclatura de la
IUPAC, sino que están nombradas para retener la nomenclatura de los
compuestos como pirazoles para consistencia en esta descripción. Un
nombre alternativo para el
3-benzoilamino-5-fenilpirazol
(compuesto 1) es el
N-5(fenil-1(2)H-pirazol-3-il)-benzamida.
Este es el nombre usado en Beilstein (Beilstein Reg. No. 22573; CAS
Reg. No. 97620-2).
Pueden estar presentes varios substituyentes en
el grupo 3-amino o en el anillo de pirazol en el
compuesto de partida o agregarse después de la formación del
producto de condensación por métodos conocidos en la materia por
sustitución o conversión de un grupo a otro. Si los mismos
sustituyentes son reactivos, entonces los mismos sustituyentes
pueden ser protegidos de acuerdo a las técnicas conocidas en la
materia. Puede emplearse una variedad de grupos protectores
conocidos en la materia. Ejemplos de muchos de estos posibles grupos
pueden encontrarse en "Protective Groups in Organic Síntesis"
de T.W. Green, John Wiley and Sons, 1981. Los alcoholes primarios
pueden oxidarse mediante agentes oxidantes conocidos en la materia
para formar ácidos carboxílicos o aldehídos y los alcoholes
secundarios pueden oxidarse para formar cetonas. De esta manera, las
reacciones de substitución o alteración se pueden utilizar para
proporcionar una variedad de substituyentes en toda la molécula del
material de partida, intermediarios o el producto final. Es de
particular importancia la ruta sintética disponible por hidrólisis
de grupos existentes de carboxamida y la sustitución por otro
mediante una simple reacción de amidación.
Otros ejemplos de publicaciones científicas que
dan detalles de las técnicas sintéticas para preparar los compuestos
de la invención, así como discusiones sobre sus utilidades conocidas
anteriormente, incluyen los siguientes: Sanz et al., J. Chem.,
Soc. Perkin Trans. I, 1990, pp.809-810;
Hammouda. et al., J. Heterocycl. Chem.,
21:945-947 (1984) y Sawali. et al; J. Heterocycl.
Chem., 17:877-880(1980).
Todos los compuestos de fórmula (I) se adaptan
fácilmente para uso terapéutico como inhibidores de quinasa para el
control de enfermedades dependientes de quinasa en mamíferos,
especialmente las relacionadas con tirosina quinasa. Los compuestos
particularmente adecuados son aquellos con un valor de IC_{50}
dentro de la escala 10 nM - 1 \muM. La capacidad de un dericado
del ácido de pirazol para inhibir específicamente uno de los tres
tipos de proteína quinasas con preferencia sobre otras clases (las
tres clases conocidas se discuten más abajo) es uno de los factores
que determinan la manera en la cual será utilizado un compuesto
específico. Las enfermedades dependientes de tirosina quinasa
incluyen trastornos hiperproliferativos que se inician o mantienen
por la actividad enzimática aberrante de tirosina quinasa. Los
ejemplos incluyen cáncer, aterosclerosis, y antiangiogénesis (p.e.,
crecimiento tumoral, retinopatía diabética). Aunque existe menos
información disponible sobre la relación de otras clases de quinasas
con enfermedades específicas, se entiende en la técnica que los
compuestos inhibidores de la PTK terapéuticamente útiles deberían
ser preferiblemente selectivos, y los mismo es válido para las otras
clases de quinasas. Los inhibidores de PTK quercetina, genisteína y
estaurosporina inhiben muchas otras proteína quinasas, además de
tirosina quinasas, y son altamente citotóxicas como resultado de su
falta de especifidad. Por lo tanto, se pueden utilizar ensayos de
rutina que midan la citotoxicidad para identificar inhibidores de la
PTK (o inhibidores de otras clases de quinasas) que probablemente
produzcan efectos laterales indeseables debido a una falta de
selectividad.
Se han identificado tres clases generales de
proteína quinasas en base al aminoácido o aminoácidos que sirven
como su substrato: quinasas que fosforilan tirosina, quinasas que
fosforilan tirosina y treonina y quinasas que fosforilan serina y
treonina. Como una prueba más detallada de selectividad, se debería
de probar la capacidad de los compuestos para inhibir la actividad
enzimática de una gama de estas proteína quinasas. En la sección de
"Antecedentes" se describen proteína quinasas específicas de
tirosina. Ejemplos de quinasas que fosforilan serina y treonina (la
clase más común) inluyen RAF, proteína quinasa A, proteína quinasa C
y el receptor del factor de crecimiento transformante beta. La
quinasa MEK es un ejemplo de quinasas que fosforilan tirosina y
treonina.
En la siguiente discusión de las utilizaciones de
inhibidores de quinasa, la discusión se enfoca en las tirosina
quinasas, puesto que éstas son las quinasas que han estado más
fácilmente accesibles a control farmacéutico. Sin embargo, debe
entenderse que cualquier discusión en la presente sobre la
utilización de un compuesto como un inhibidor de tirosina quinasa es
aplicable igualmente al uso de un compuesto que es específico para
alguna de las otras clases de quinasa, una vez que se conozca la
especifidad de acción. Se determina fácilmente si un compuesto de
pirazol es específico para una clase particular de quinasa mediante
la utilización de los ensayos de actividad de quinasa expuestos en
los ejemplos (o un ensayo idéntico de otra manera que sustituya una
quinasa diferente por la quinasa discutida en el ejemplo). Con el
fin de evitar una repetición indebida, la siguiente discusión
describe tirosina quinasas como ejemplos de lo que puede hacerse con
otras clases de quinasas. De esta manera, una referencia a
"tirosina quinasa" o "PTK" para una utilización
determinada en una situación concreta, debe tomarse como ejemplo de
una utilización de un compuesto específico para cualquiera de las
clases de quinasa, a menos que se especifique o aclare de otra
manera en el contexto.
Con el fin de que los compuestos que inhiben la
PTK o alguna de las otras clases de quinasa sean terapéuticamente
útiles, ser activos en células intactas. Se sabe que los inhibidores
de PTK, que son identificados en base a su capacidad para inhibir
preparaciones de enzima aislada, son frecuentemente débiles o
inefectivos al inhibir PTKs nativos. Esta falta de actividad se debe
a la incapacidad de los inhibidores de la PTK a atravesar la
membrana celular para alcanzar su sitio de acción, o son incapaces
de inhibir las PTKs en células en donde las concentraciones de
trifosfato de adenosina (ATP) son altas y se pueden incluir otros
factores. Se tienen fácilmente disponibles varios procedimientos
para determinar la actividad de inhibidores de PTK contra tirosina
quinasas del receptor del factor de crecimiento. El tratamiento de
células con factor de crecimiento da como resultado la rápida
autofosforilación del receptor correspondiente así como la
fosforilación de los substratos receptores y estos hechos pueden
medirse utilizando anticuerpos de antifosfotirosina. También pueden
medirse acontecimientos de señales intracelulares adicionales
incluyendo el flujo de calcio, metabolismo del fosfato de inositol y
síntesis celular de ADN. Finalmente, un inhibidor de PTK
terapéuticamente útil debe ser capaz de bloquear la proliferación
celular que es el resultado indeseado de la acción del factor de
crecimiento y es fácil de darle seguimiento.
Se supone que la solubilidad de los compuestos de
fórmula (I) tanto en agua como en disolventes ligeramente
hidrofóbicos aumenta la probabilidad de que atraviesen la membrana
celular. Sin embargo, varios compuestos insolubles han exhibido una
inhibición significativa de quinasas en ensayos in vitro.
Los compuestos de fórmula (I) pueden ser útiles
en forma de ácido o base libres (si está presente un grupo
carboxilo, hidroxilo fenólico o amino), en forma de una sal o como
un hidrato. Todas las formas están dentro del alcance de la
invención. Pueden formarse sales básicas y son simplemente una forma
más conveniente para utilizar; en la práctica, el uso de la forma de
sal iguala inherentemente el uso de la forma de ácido. Los ácidos o
las bases que pueden usarse para preparar las sales incluyen
preferiblemente aquellas que producen cuando se combinan con el
ácido o la base libres, sales farmacéuticamente aceptables, esto es,
sales cuyos cationes o aniones no son tóxicos para el organismo
animal en dosis farmacéuticas de las sales, de manera que las
propiedades benéficas inherentes en el ácido o la base libres no
sean anuladas por los efectos laterales atribuibles a los cationes.
Aunque se prefieren las sales farmacéuticamente aceptables de un
compuesto ácido o básico, todas las sales son útiles como fuentes de
la forma de ácido libre, aún si la sal particular per se se
desea solamente como un producto intermedio, como por ejemplo cuando
la sal se forma solamente con la finalidad de purificación o
identificación, o cuando se usa como un intermedio en la preparación
de una sal farmacéuticamente aceptable mediante procedimientos de
intercambio de iones.
Los compuesto de fórmula (I) que tienen actividad
como inhibidores específicos de proteínas tirosina quinasa poseen
valor terapéutico como agentes antiproliferativos celulares para el
tratamiento de ciertos estados que incluyen por ejemplo, psoriasis y
restenosis. Se espera que las utilizaciones de la invención se
pueden aplicar, en particular, en el tratamiento de la
ateroesclerosis. Con respecto al tratamiento de algunos estados, por
ejemplo, aterosclerosis, se pueden identificar ciertas personas como
de alto riesgo, debido, por ejemplo, a factores genéticos, al medio
ambiente o históricos. Los compuestos de fórmula (I) se pueden
utilizar en la prevención o retraso de la ocurrencia o recurrencia
de dichos estados o para tratar de otra forma.
Los compuestos de fórmula (I) se pueden
administrar a un hospedador mamífero de diversas maneras, es decir,
pueden combinarse con diferentes vehículos inertes farmacéuticamente
aceptables en la forma de tabletas, cápsulas, pastillas, troches,
caramelos duros, polvos, aerosoles, elixires, jarabes, soluciones
inyectables o para gotas oftálmicas y similares, dependiendo de la
ruta de administración elegida, por ejemplo oralmente o
parentenalmente. En este sentido, la administración parenteral
incluye la administración mediante las siguientes rutas:
intravenosa, intramuscular, subcutánea, intraocular, instrasinovial,
transepitelial (incluyendo transdérmica, oftálmica, sublingual y
bucal), tópica (incluyendo oftálmica, dérmica, ocular, rectal,
inhalación nasal mediante insuflación y aerosol), y rectal
sistémica.
Como se ha indicado más arriba, las enfermedades
dependientes de quinasa se pueden controlar inhibiendo la actividad
quinasa. Aunque son bien conocidos muchos compuestos de la clase de
aminopirazol útiles en la presente invención, no se conoce ninguno
que inhiba la actividad quinasa y muy pocos tienen utilidad
terapéutica conocida. Una composición farmacéutica preferida
contiene un compuesto de fórmula (I) con la condición de que cuando
R_{1} sea fenilo o fenilo sustituido con un alquilo inferior,
alcoxilo inferior o halógeno; R_{3} y R_{6} sea H; y R_{5} sea
alquilo inferior, arilo o arilo sustituido con alquilo inferior,
alcoxilo inferior o halógeno, entonces R_{2} no puede ser alquilo
inferior.
El compuesto activo puede administrarse
oralmente, por ejemplo, con un diluyente inerte o con un vehículo
comestible asimilable, o puede ser encerrado en cápsulas de gelatina
dura o de capa blanda, o puede ser comprimido en tabletas, o se pude
incorporar directamente con el alimento de la dieta. Para
administración terapéutica oral, el compuesto activo puede ser
incorporado con un excipiente y usado en la forma de tabletas
ingeribles, tabletas bucales, troches, cápsulas, elixires,
suspensiones, jarabes, wafers y similares. Dichas
composiciones y preparaciones deberían contener por lo menos un 0,1%
de compuesto activo. Por supuesto, puede variar el porcentaje de las
composiciones y preparaciones, y puede estar convenientemente
aproximadamente de un 2 a aproximadamente un 6% del peso de la
unidad. La cantidad de compuesto activo en dichas composiciones
terapéuticamente útiles es tal que se obtiene una dosificación
adecuada. Las composiciones o preparaciones preferidas de acuerdo
con la presente invención se preparan de manera que una forma de
dosis oral unitaria contenga entre aproximadamente 1 y 1000 mg de
compuesto activo.
Las tabletas, troches, píldoras, cápsulas y
similares pueden contener también lo siguiente: un aglutinador tal
como polivinilpirrolidona, goma tragacanto, acacia, sacarosa,
almidón de maíz o gelatina; un excipiente tal como fosfato de
calcio, citrato de sodio y carbonato de calcio; un agente
desintegrante tal como almidón de maíz, almidón de patata, almidón
de tapioca, ciertos silicatos complejos, ácido algínico y similares;
un lubricante tal como laurilsulfato de sodio, talco y estearato de
magnesio; un agente edulcorante tal como menta, aceite de pirola o
sabor cereza. En cápsulas de gelatina blanda y dura también se
emplean composiciones sólidas de un tipo similar como rellenos; a
este respecto, los materiales preferidos incluyen también lactosa o
azúcar de leche así como polietilenglicoles de alto peso molecular.
Cuando la forma de dosis unitaria es una cápsula, esta puede
contener, además de los materiales del tipo anterior, un vehículo
líquido. Pueden estar presentes otros materiales diferentes como
recubrimientos o para modificar la forma física de la unidad
dosificada. Por ejemplo, pueden recubrirse tabletas, píldoras o
cápsulas con goma laca, azúcar o ambos. Un jarabe o elixir puede
contener el compuesto activo, sacarosa como agente edulcorante,
metil y propilparabenos como conservadores, un colorante, agente
saborizante tal como sabor cereza o naranja, agentes emulsificantes
y/o agentes de suspensión, así como diluyentes tales como agua,
etanol, propilenglicol, glicerina y diversas combinaciones similares
de los mismos. Por supuestos, cualquier material utilizado en la
preparación de cualquier forma de dosis unitaria debería ser
farmacéuticamente pura y substancialmente no tóxica en las
cantidades empleadas. Además, el compuesto activo puede incorporarse
en preparaciones y formulaciones de liberación sostenida.
El compuesto activo puede también administrarse
parenteralmente o intraperitonealmente. Para propósitos de
administración parenteral, pueden emplearse soluciones en aceite de
sésamo o cacahuete, o en propilenglicol acuoso, así como soluciones
acuosas estériles de las correspondientes sales de metal alcalino o
alcalinotérreo solubles en agua, indicadas anteriormente. Dichas
disoluciones acuosas deberían estar reguladas en su pH
adecuadamente, si es necesario, y debería hacerse primero el
diluyente líquido isotónico con suficiente solución salina o
glucosa. Las disoluciones del compuesto activo, como base libre o
como sal farmacéuticamente aceptable, pueden prepararse en agua
mezclado adecuadamente con un agente tensioactivo tal como
hidroxipropilcelulosa. También puede prepararse una dispersión en
glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos y en
aceites. Bajo condiciones ordinarias de almacenamiento y uso, estas
preparaciones contienen un conservante para evitar el crecimiento de
microorganismos. Estas soluciones acuosas particulares son adecuadas
especialmente para propósitos de inyección intravenosa,
intramuscular, subcutánea e intraperitoneal. A este respecto, el
medio acuoso estéril empleado es obtenible fácilmente mediante
técnicas estándar bien conocidas para los expertos en la
materia.
Las formas farmacéuticas adecuadas para uso
inyectable incluyen disoluciones o dispersiones acuosas estériles y
polvos estériles para la preparación extemporánea de disoluciones o
dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma
debe ser estéril y debe ser fluida a una extensión tal que pueda ser
extraída fácilmente de la jeringa. Debe ser estable bajo las
condiciones de fabricación y almacenamiento y debe estar conservada
contra la acción contaminante de microorganismos tales como
bacterias y hongos. El vehículo puede ser un disolvente o un medio
de dispersión que contiene, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por
ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido y
similares), mezclas adecuadas de los mismos, y aceites vegetales.
Puede mantenerse la fluidez apropiada, por ejemplo, con el uso de un
recubrimiento tal como lecitina, mediante el mantenimiento del
tamaño de partícula requerido en el caso de una dispersión, y con el
uso de agentes tensioactivos. La prevención de la acción de los
microorganismos puede lograrse con diferentes agentes
antibacterianos y fúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol,
fenol, ácido sórbico, timerosal y similares. En muchos casos será
preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares o
cloruro de sodio. Puede llevarse a cabo la absorción prolongada de
composiciones inyectables con el uso de agentes que retardan la
absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.
Las soluciones inyectables estériles se preparan
incorporando el compuesto activo en la cantidad requerida en el
solvente apropiado con varios de los otros ingredientes enumerados
anteriormente, según sea requerido, seguido de esterilización por
filtración. Generalmente, se preparan dispersiones incorporando el
ingrediente activo esterilizado en un vehículo estéril que contenga
el medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de
los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la
preparación de soluciones inyectables estériles, los procedimientos
preferidos de preparación son secado a vacío y la técnica de secado
en congelación que produce un polvo del ingrediente activo más
cualquier ingrediente deseado adicional, a partir de la solución
anteriormente esterilizada por filtración.
Para propósitos de administración tópica, se
preparan soluciones acuosas diluidas estériles habitualmente en
aproximadamente 0,1% a 5% de concentración), similares, de otra
manera, a las soluciones parenterales anteriores, en recipientes
adecuados para administración en forma de gotas oftálmicas.
Los compuestos terapéuticos de fórmula (I) se
puedenadministrar a un mamífero solos o en combinación con vehículos
farmacéuticamente aceptables. Como se indicó antes, las proporciones
relativas de ingrediente activo y vehículo se determinan por la
solubilidad y naturaleza química del compuesto, ruta de
administración elegida y práctica farmacéutica normal.
La dosificación de los agentes terapéuticos
presentes que sea más adecuada para la profilaxis o el tratamiento
varía con la forma de administración, el compuesto particular
elegido y las características fisiológicas del paciente particular
bajo tratamiento. Generalmente al principio se usan dosis pequeñas
y, si es necesario, se aumentan mediante pequeños incrementos hasta
que se alcance el efecto óptimo bajo esas circunstancias. La
dosificación humana terapéutica, en base a estudios fisiológicos
usando ratas, será generalmente de aproximadamente 0,01 mg a
aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día o de
aproximadamente 0,4 mg a aproximadamente 10 g y mayor, aunque se
puede administrar en varias unidades de dosis diferentes de una sola
vez a varias veces al día. La administración oral requiere
dosificaciones más altas.
Los compuestos se administran oralmente o
parenteralmente, o tópicamente como gotas oftálmicas, en
dosificaciones que varían de aproximadamente 0,1 a 10 mg/kg de peso
corporal por día en una sola dosis o dosis divididas. En situaciones
concretas, por ejemplo, se usan dosis fuera de esta escala a
discreción del médico tratante.
En una composición farmacéutica que comprende un
compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del
mismo, la proporción en peso de vehículo respecto a ingrediente
activo está normalmente en la escala de 1:4 a 4:1 y preferiblemente
de 1:2 a 2:1. Sin embargo, en cualquier caso dado, la proporción
elegida depende de factores tales como la solubilidad del componente
activo, la dosificación contemplada y la ruta precisa de
administración.
Los compuestos de fórmula (I) son útiles también
para detectar la presencia de tirosina quinasa o un substrato de
tirosina quinasa en un fluido corporal tal como sangre o una
fracción de sangre. Se mide la actividad de tirosina quinasa en una
composición en ausencia de un compuesto de la invención y se compara
con la actividad medida en presencia de dicho compuesto. La
diferencia en estas actividades medidas de quinasa se relaciona, a
continuación, con la concentración de tirosina quinasa o el
substrato de tirosina quinasa en la composición.
La invención ahora descrita de manera general, se
entenderá mejor con referencia a los siguientes ejemplos detallados,
que se proporcionan con el fin de ilustrar solamente y no para
considerarlos limitantes de la invención, a menos que se especifique
de otra manera.
Los compuestos de pirazol usados en éste y en los
siguientes ejemplos se obtuvieron de Maybridge Chemical Co.Ltd.,
Trevillent, Tintagel, Cornwall PL340HW, Reino Unido.
La estimulación de la proliferación celular
mediante factores de crecimiento tales como PDGF, FGF y EGF depende
de su inducción de la autofosforilación de cada uno de sus
respectivos receptores de tirosina quinasa. Por lo tanto, la
capacidad de un inhibidor de PTK para inhibir la proliferación
celular inducida por estos factores de crecimiento se correlaciona
directamente con su capacidad para bloquear la autofosforilación del
receptor. Para medir la autofosforilación de
alfa-PDGFR, se utilizó la línea celular
hematopoyética de ratón descrita anteriormente,
32D-\alphaR, la cual ha sido manipulada por
ingeniería genética para sobreexpresar el alfa PDGFR humano. Estas
células se desarrollaron en una suspensión de 10^{6} células/ml en
medio RPMI (Gibco BRL) que contenía suero fetal bovino al 10% y
medio acondicionado WEHI al 5% (medio de cultivo de tejido
acondicionado con células WEHI disponibles de ATCC), como se
describió anteriormente. Las células se hicieron pellets mediante
centrifugación a baja velocidad y se resuspendieron en RPMI libre de
suero antes de su distribución a 500,000 células/pocillo en placas
de microtítulo de fondo cónico de 96 pocillos (Falcon). Se agregaron
los compuestos (0,01-30 \muM) a los pocillos a
temperatura ambiente, 15 minutos antes de la adición de PDGF AA (15
ng/ml) y la incubación se continuó sobre hielo durante 90 minutos en
un volumen de incubación final de 100 \mul. Después, las células
se hicieron pellets a 2000 rpm durante 10 minutos a 4ºC y se
agregaron directamente a cada pocillo 50 \mul de un tampón de pH
de lisis recién preparado (20 mM de Tris a pH 7,3, 150 mM de NaCl,
1% de Tritón X-100, 1 mM de fluoruro de
fenilmetilsulfonilo (PMSF), 1 mM de ortovanadato de sodio, 10 mg/ml
de aprotinina y 10 mg/ml de leupeptina), se continuó la incubación
durante 10 minutos sobre hielo y se facilitó la lisis celular
mediante agitación vigorosa sobre un agitador de placas. Los lisados
celulares se clarificaron mediante centrifugación a 2000 rpm durante
10 minutos, antes de su análisis.
Para el análisis de autofosforilación de
beta-PDGFR, se utilizó la línea celular de ovario de
hámster chino (CHO), HR5-\betaR, la cual ha sido
manipulada mediante ingeniería genética para sobreexpresar
establemente el beta-PDGFR humano, como se describió
antes. Estas células se sembraron a 10,000 células/pocillo en placas
de microtítulo (placas de 96 pocillos Falcon) y se incubaron a 37ºC
en RPMI con 10% de suero fetal bovino durante tres días, al cabo de
los cuales se alcanzó confluencia. Se extrajo medio de los pocillos
y se reemplazó con 100 \mul de RPMI libre de suero, y se continuó
la incubación a 37ºC durante 18 horas. Se agregaron los compuestos
(0,01-30 \muM) a los pocillos 15 minutos antes de
la adición de PDGF BB (100 ng/ml) y la incubación se continuó a 37ºC
durante 10 minutos. El medio se vacía y se agregaron 50 \mul de
solución tamponadora de lisis recién preparada a cada pocillo y la
placa se agitó vigorosamente para preparar el lisado celular. Los
lisados se clarificaron, a continuación, mediante centrifugación a
2600 rpm durante 10 minutos antes de su análisis.
En un placa de microtítulo separada, se
inmovilizaron anticuerpos monoclonales (preparados en COR
Therapeutics, Inc.) dirigidos contra el dominio extracelular del
alfa-PDGFR, (Mab \alphaR10) o del
beta-PDGFR (Mab 1B5B11), incubando 0,5 \mug. de
anticuerpo por pocillo a 4ºC durante 18 horas en Tris 23 mM a pH
8,0, 68 mM de NaCl, 14 mM de bicarbonato de amonio y 0,01% de azida
de sodio. Se eliminó el anticuerpo no unido y los pocillos se
bloquearon con 25 mM de
N-(2-hidroxietil)-piperazina-N-(ácido
2-etanolsulfónico) (HEPES) pH 7,6, 100 mM de NaCl, y
0,2% de Tween 20 justo antes de la adición del lisado celular que
había sido diluido 1:2 en tampón de unión (tampón de bloqueo con
0,3% de gelatina). El lisado celular 32D-\alphaR o
HR5-\betaR se incubó con Mab \alphaR10 o Mab
1B5B11 inmovilizado, respectivamente, durante 2 horas a temperatura
ambiente y los pocillos se lavaron 3 veces con 200 \mul de tampón
de lavado (solución salina tamponada de fosfato, "PBS", 0,01%
de Tween 20). Para detectar el nivel de fosforilación de PDGFR se
añadió un anticuerpo de conejo antifosfotirosina (Upstate
Biotechnology, Inc., "UBI"), a 1,25 \mug/ml y se incubó
durante 1 hora a 37ºC. Después de la eliminación del anticuerpo
antifosfotirosina no unido, las placas se incubaron con IgG
anticonejo conjugada de cabra y rábano (Boehringer Mannheim) a una
dilución 1:1000, antes de la adición de sustrato de peroxidasa
(ABTS^{TM}). Se siguió la formación de producto a 650 nm
utilizando un lector de placas de microtítulo (Molecular
devices).
Se midió autofosforilación de EGFR en células MDA
MB 468 (ATTC # HTB 132), una línea celular de tumor mamario humano
que sobreexpresa el EGFR. Estas células se desarrollaron para
confluencia en placas de 6 pocillos y se incubaron en medio de Eagle
modificado de Dulbeco libre de suero (DMEM) durante 10 horas. Las
células se expusieron a diferentes concentraciones de compuestos
(0,01 a 30 \muM) durante 15 minutos y después a EGF (100 ng/ml)
durante 10 minutos a 37ºC. Las células se rasparon y se prepararon
lisados en el mismo tampón que el descrito para las células
32D-\alphaR antes del fraccionamiento mediante SDS
PAGE convencional, seguido de análisis de transferencia Western.
Para esto, se transfirieron proteínas sobre nitrocelulosa y la
membrana se bloqueó en solución salina tamponadora Tris (TBS) pH
7,0, 0,1% de Tween 20,5% de leche en polvo. La membrana se manchó
con anticuerpo antifosfotirosina (UBI, 1 \mug/ml) en un tampón de
unión (TBS, 0,1% Tween 20; 1% de leche en polvo) durante 2 horas a
temperatura ambiente. Se efectuó la detección utilizando una IgG
conjugada a peroxidasa de rábano anticonejo (Boehringer Mannheim).
La mancha se desarrolló usando un sistema quimoluminiscente
(Amersham).
Con el fin de medir la autofosforilación de
FGFR-1, el ADNc del FGFR-1 humano se
sobreexpresó de manera estable en células CHO utilizando técnicas
estándar. Estas células se desarrollaron a confluencia en RPMI con
suero bovino fetal al 10%, el medio se reemplazó por RPMI libre de
suero y se continuó la incubación durante 18 horas antes de la
estimulación con \beta-FGF (75 ng/ml) durante 10
min a 37ºC en ausencia o presencia de inhibidores de PTK en un rango
de concentración de 0,1-30 \muM. Los lisados
celulares se prepararon bajo las mismas condiciones que se
describieron anteriormente para la prueba del EGFR. Se incubaron los
lisados con un anticuerpo monoclonal dirigido contra el dominio
extracelular de FGFR-1 (Mab 1H9D3, que fue preparado
en COR) y el receptor inmunoprecipitado se sometió a análisis de
SDS-PAGE y transferencia con anticuerpos
antifosfotirosina conjugados con peroxidasa de rábano, 4G10 (UBI) y
se realizó la detección mediante quimoluminiscencia (Amersham).
Como se muestra en la figura 1, el compuesto 1
(véase Tabla 1A para la estructura) bloquea eficientemente la
autofosforilación del beta-PDGFR en células
HR5-\betaR con un valor IC_{50}=220 nM y
inhibición fue máxima a 5 \muM. Cuando se comparó el compuesto 1
con otros inhibidores potentes de PTK bajo estas condiciones, se
encontró que el compuesto 1 era igualmente potente a K252a y un poco
menos potente (tres veces) que la Staurosporina (véase Tabla 2 de
más abajo). También se encontró que el compuesto 1 inhibía la
autofosforilación de PDGFR sobre el mismo rango de concentraciones
que la observada para el beta-receptor. Estos
resultados demuestran que el compuesto 1 es un inhibidor potente de
la autofosforilación del PDGFR en células intactas, lo que indica
que este compuesto será activo in vivo y que deberían de
alcanzarse concentraciones terapéuticas.
Para determinar si el compuesto 1 inhibe
selectivamente el PDGFR de tirosina quinasa, se evaluó su efecto
sobre los EGFR y FGFR-1 de tirosina quinasas,
estrechamente relacionados. Sorprendentemente, no se observó
inhibición detectable de autofosforilación de estos receptores a
concentraciones del compuesto 1 tan altas como 30 \muM. La
autofosforilación de EGFR fue inhibida por K252a (IC_{50}=1
\muM), pero no por Staurosporina a concentraciones de hasta 30
\muM (Tabla 2).
La familia src PTK está relacionada
estructuralmente con el receptor PTKs según se demuestra por la
identidad de secuencia del 60 al 80% de aminoácidos en sus dominios
enzimáticos de tirosina quinasa. También, estas quinasas son
similares funcionalmente ya que intervienen en la señalización
intracelular que conduce a proliferación celular. A diferencia de
los receptores PTKs, las proteínas src no contienen dominios
extracelulares o transmembrana y por lo tanto no funcionan
directamente como receptores para estímulos extracelulares. Para
probar adicionalmente la especifidad del compuesto 1, se evaluó su
capacidad para inhibir la actividad del c-src
recombinante (catálogo UBI # 14-117). Con el fin de
adaptar este ensayo a un formato de placa de microtítulo de 96
pocillos, se añadieron 0,5 \mug del péptido 2 de substrato src
(catálogo UBI # 12-140) a cada pocillo en 23 mM de
Tris a pH 8,0, 68 mM de NaCl, 14 mM de bicarbonato de amonio y 0,01%
de azida de sodio. Después de la inmovilización del péptido, se
lavaron los pocillos y, a continuación, se bloquearon con 25 mM de
HEPES pH 7,6, 100 mM de NaCl, 0,2% de Tween 20. La reacción de
quinasa se inició añadiendo a cada pocillo 100 ml de una mezcla de
reacción de compuestos de prueba contenidos a
0,03-30 \muM, 50 \muM de ATP y 10 unidades de
c-src en 50 mM de Tris; pH 7, 25 mM de MnCl_{2}; 5
mM de MnCl_{2}; 0,05 mM de Na_{3}VO_{4}; 100 mM de HEPES pH 7;
5% de glicerol y 0,05% de nonifenoxipolietoxietanol
(NP-40). Después de 20 minutos de incubación a 37ºC,
se pararon las reacciones añadiendo 10 \mul de ácido acético al
50%, se lavaron los pocillos y se utilizó anticuerpo
antifosfotirosina para detectar el sustrato fosforilado de tirosina
en las mismas condiciones que las descritas anteriormente para la
detección del PDGFR fosforilado. Como se muestra en la Tabla 2, el
compuesto 1 inhibió src quinasa con un valor de IC_{50} = 8,0
\muM lo cual era una concentración 40 veces mayor que la requerida
para inhibir la autofosforilación del PDGFR. Por otra parte, la
Steauroporina y K252a bloquearon la actividad de la src quinasa con
valores IC_{50} de 70 nM y 20 nM, respectivamente. Estos
resultados demuestran que mientras el compuesto 1 es selectivo para
inhibir la actividad del PDGFR de quinasa, la Stauroporina y K252a
son igualmente o más potentes inhibiendo la actividad de la src
quinasa ya que son PDGFR con actividad de quinasa.
Se sabe que la Staurosprina es un potente
inhibidor de receptor de tirosina quinasa, la familia src de
tirosina quinasas y las quinasas serina/treonina relacionadas más
distantemente. Esta falta de especificidad asociada con la
Stauroporina y otros inhibidores conocidos de PTK limitan, en gran
medida, su potencial como agentes terapéuticos. Para investigar la
posibilidad de que el compuesto 1 pueda inhibir proteína quinasas de
serina/treonina, se efectuaron ensayos de proteína quinasa A (PKA) y
proteína quinasa C (PKA) utilizando el ensayo de proteína quinasa no
radioactiva de UBI en las condiciones descritas por el fabricante
(catálogo UBI # 17-112). Se comparó el compuesto 1
con la Stauroporina y K25a probando cada uno de éstos compuestos
sobre una escala de concentración de 0,025-40
\muM. Como se muestra en la Tabla 2, el compuesto 1 no alcanzó una
reducción del 50% ni de actividad PKC ni PKA a una concentración de
40 \muM, la cual es aproximadamente 200 veces más grande que la
concentración requerida para inhibir la actividad de la quinasa de
PDGFR. Se encontró que K252a es un potente inhibidor de estas
serina/treonina quinasas con un valor de IC_{50} de 70 nM para PKA
y 100 nM para PKC, mientras que la Staurosporina inhibió ambas
quinasas con un valor de IC_{50} = 70-80 nM. Estos
resultados demuestran que aunque algunos inhibidores de quinasa
tales como la Staurosporina y K252a carecen de selectividad, el
compuesto 1 es de 40 a 200 veces más selectivo para el receptor PDGF
que para otros receptores de tirosina quinasas, src quinasas y
serina/treonina quinasas. Dicha selectividad aumenta en gran medida
el potencial terapéutico del compuesto 1 para tratamiento de
enfermedades en las que el PDGF juega una función, tales como la
aterosclerosis, ciertos cánceres, glomerulonefritis y restenosis
siguiente a angioplastia.
| Compuesto | \alphaPDGFR | \betaPDGFR | EGFR | FGFR-1 | src-quinasa | PKA | PKC |
| Comp.1 | 17 | 0,22 | >30 | >30 | 8,0 | >40 | >40 |
| K252a | ND | 0,27 | 1,0 | ND | 0,02 | 0,07 | 0,10 |
| Staurosporina | ND | 0,07 | >30 | ND | 0,07 | 0,07 | 0,08 |
| ND = No determinado |
Para determinar la utilidad terapéutica potencial
de un inhibidor de PTK es importante demostrar la capacidad
inhibidora para bloquear la proliferación celular en respuesta a un
factor de crecimiento que está implicado en la mediación de un
trastorno proliferativo. Puesto que existen muchas publicaciones en
la literatura que implican al PDGF en enfermedades tales como
glomerulonefritis, cáncer, aterosclerosis, y restenosis, se probó el
compuesto 1 para su capacidad de bloquear la proliferación celular
inducida por PDGF. Con este propósito, se usaron células
32D-\alphaR y técnicas estándar que han sido
desarrolladas previamente para medir la proliferación inducida por
PDGF. Brevemente, se desarrollaron células
32D-\alphaR en medio RPMI acondicionado con
interleucina 3 (IL-3) con suero bovino fetal al 10%
y se lavaron 2 veces con RPMI con suero bobino fetal al 10%, se
resuspendió a 5 X 10^{5} células/ml, en el mismo medio y, a
continuación, se dispensaron a 250 \mul/pocillo en placas de 24
pocillos (Falcon). Se añadió PDGF AA a 30 ng/ml en ausencia o
presencia del compuesto 1 (0,04-40 \muM) en un
volumen de incubación final de 0,5 ml. Las células se incubaron
durante 43 horas seguido de una incubación adicional de 3 horas con
[^{3}H]timidina (10 \muCi/pocillo). Después, las células
se recogieron con un colector de células automatizado; se colocaron
filtros en mezcla de escintilación líquida y se contaron en un
contador \beta. Como se muestra en la figura 2, el compuesto 1
bloqueaba la incorporación de timidina inducida por PDGF en un 50% a
700 nM e inhibía completamente la mitogenecidad a concentraciones
>1 \muM.
Para determinar si el compuesto 1 ejerce un
efecto no específico antiproliferativo o es citotóxico, se
determinaron sus efectos sobre la proliferación de líneas celulares
humanas (p.e., HS68, HS 27, CCD18, y WS1, obtenidas de ATCC) en
condiciones estándar de cultivo de tejidos. Las células fueron
sembradas no densamente en un medio de cultivo de tejido normal que
contenía un 10% de suero bovino fetal a 3,5 x 10^{3}
células/pocillo en una placa de microtítulo de 96 pocillos (Falcon)
en ausencia o presencia del compuesto 1, la Staurosporina o K252a,
en el rango de concentración de 0,01-30 \muM. A
continuación, se dejaron desarrollar las células en condiciones
estándar de cultivo de tejido durante 96 horas al cabo de las cuales
fueron fijadas con glutaraldehído al 3,3%, se lavaron con H_{2}O y
se tiñeron con azul de metileno al 0,05% (Sigma). Después de
tinción, las células se lavaron, el colorante se eluyó con HC1 al 3%
y se siguió la absorbancia a 665 nM utilizando un lector de placa
(Molecular Decives). Se determinó el porcentaje de inhibición de
proliferación celular mediante comparación de absorbancia observada
en presencia del inhibidor con la absorbancia obtenida en ausencia
del inhibidor. Como se muestra en la Tabla 3, no se observó un
descenso en el crecimiento celular de cualquiera de las líneas
celulares probadas después del tratamiento con el compuesto 1 a
concentraciones de hasta 10 \muM, y ocurrió solamente un ligero
descenso (10-20%) a 30 \muM. En contraste, la
Staurosporina bloqueó completamente el crecimiento de todas las
líneas celulares a 0,01 \muM, y K252a inhibió el crecimiento
celular en un 50% en el rango de concentraciones de
1-12 \muM, siendo las células CCD 1B las más
sensibles (IC_{50}=1 \muM). También se evaluó el efecto de estos
compuestos sobre el crecimiento celular normal con células
HR5-\betaR que se utilizaron previamente para
medir la autofosforilación de beta-PDGFR. Se
requirió de una concentración elevada (28 \muM) del compuesto 1
para inhibir en un 50% el crecimiento de células
HR5-\betar. En contraste, la Staurosporina
(IC_{50}<10 nM) y K252a (IC_{50}=130 nM) inhibieron
potentemente el crecimiento celular de HR5- \betaR a
concentraciones más bajas que las requeridas para inhibir la
fosforilación de PDEGFR. Estos resultados demuestran que la
Staurosporina, que es un inhibidor no específico de proteína
quinasa, también ejerce un efecto no específico antiproliferativo o
citotóxico a concentraciones más bajas que las requeridas para
inhibir la actividad de quinasa. Por otra parte, las concentraciones
del compuesto 1 requeridas para inhibir el crecimiento celular bajo
condiciones estándar de cultivo de tejido fueron > 100 veces más
altas que las requeridas para bloquear la autofosforilación de
PDGFR. Estos resultados indican que el efecto terapéutico de la
inhibición de actividad del PDGFR de quinasa debería ocurrir a
concentraciones del compuesto 1 muy por debajo de las que ocasionan
efectos citotóxicos.
| IC_{50} [\muM] | |||||
| Líneas celulares | |||||
| Compuesto | CCD18 | HS27 | WS1 | HS68 | HR5-\betaR |
| Compuesto 1 | >30 | >30 | >30 | >30 | 28 |
| Staurospina | <0,01 | <0,01 | <0,01 | <0,01 | <0,01 |
| K252a | 1,0 | 12 | 5,0 | 5,0 | 0,13 |
General: Se registraron los espectros RMN es un
instrumento Varian Unity Plus 400 MHz. Los espectros IR fueron
registrados en un Perkin Elmer Modelo 1600 FT-IR. Se
efectuó la HPLC de fase inversa sobre un controlador Waters Modelo
600 con un detector Modelo 965 Photo Dio de Array, utilizando un
software Millenium 2020 para procesar los datos y una columna
analítica Vydac 4,5 mm x 25 cm C18 o una columna preparativa Vydac
2,5 cm x 25 cm C18. Se efectuó la HPLC de fase normal sobre un
controlador Waters DeltaPrep Modelo 4000 con un detector Modelo 965
PhotoDiodeArray utilizando un software Millenium 2020 para procesar
los datos y una columna analítica de gel de sílice Alltech Econosil
4,5 mm x 25 cm o una columna semipreparativa de gel de sílice
Alltech Econosil 22 mm x 25 cm. Se efectuó la cromatografía en
columna instantánea utilizando gel de sílice GF E Merck. Se
efectuaron espectros de masas utilizando técnicas de introducción de
muestra de impacto de electrones o ionización química directa.
A una solución de 0,31 g (2,0 mmoles) de
5-amino-3-fenilpirazol
(suministrado por Maybridge o Aldrich) disuelto en 5,0 ml de
piridina agitando en un baño de hielo-agua bajo
atmósfera de argón, se introdujeron 1,4 ml (12,1 mmoles) de cloruro
de benzoilo. La solución se agitó en el baño frío durante una hora,
se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante tres horas y
media más. Durante la reacción, se separó de la solución el
clorhidrato de piridinio.
La reacción se extinguió mediante la introducción
de 10 ml de ácido clorhídrico acuoso al 10% (v/v), se transfirió a
un embudo de separación, y se extrajo dos veces con 25 ml de
diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una
porción de 10 ml de ácido clorhídrico al 10%, una vez con solución
de cloruro de sodio saturada, se secó sobre sulfato de magnesio, y
se concentró al vacío. Se obtuvo un sólido blanco.
El sólido fue sometido a cromatografía sobre una
columna semipreparativa de gel de sílice utilizando el instrumento
Waters DeltaPrep. Se desarrolló el gradiente de elusión de
9:l:hexano: diclorometano a 1:1:hexano:diclormetano durante 80
minutos a una velocidad de flujo de 10 ml por minuto. Se obtuvieron
0,37 g (1,0 mmoles, 50%) del compuesto del título como un sólido
blanco.
CCD (diclorometano): R_{f}=0,86
IR (nujol): NH a 3317 cm^{-1}, CO a 1689
cm^{-1}
RMN (CDCI_{3}): 11,67 (s,NH);8,21/8,23 (dd,2
ArH); 8,00/8,02 (dd,2 ArH); 7,88/7,90 (dd,2 ArH);
7,58-7,66 (m,2 ArH); 7,51-7,56 (m,5
ArH); 7,38-7,48 (m,3 ArH)
ES (EI); M^{+} = 367
Se calentó una suspensión de 100 mg (0,27 mmoles)
de
5-benzoilamino-3-fenil-1-benzoilpirazol
en 4 ml de hidróxido de potasio acuoso al 10% (p/v) en un baño de
agua mantenido a 100ºC durante 5 minutos. Durante este tiempo la
mezcla de reacción permaneció como una suspensión. La suspensión
fría se filtró y se lavó con agua y, a continuación, se secó con
aire. Se obtuvieron 48 mg (0,18 mmoles, 67%) del compuesto de título
como un sólido blanco.
CCD (diclorometano): R_{f} = 0,20
IR (nujol): NH a 3288 cm^{-1}, CO a 1656
cm^{-1}
RMN (DMSO-d_{6}): 10,80
(s,NH);7,97/7,99 (dd,2 ArH); 7,71/7,73 (d,2 ArH); 7,40/7,56 (m,5
ArH); 7,29-7,33 (t, ArH); 7,01 (bs, pirazol CH)
ES (EI); M^{+} = 263
Se transfirieron 0,17 g (0,66 mmoles) de
5-benzoilamino-3-fenilpirazol
a un matraz de fondo redondo de 3 cuellos seco, equipado con un
tapón de hule, un tapón de vidrio y un condensador de reflujo con
entrada de argón. Se añadió tetrahidrofurano anhidro (5 ml) mediante
jeringa, y la agitación a temperatura ambiente produjo una solución
clara incolora. Se introdujeron a esta solución 0,93 ml (1,86
mmoles) de una solución 2 Molar disponible comercialmente (Aldrich)
de un complejo borano-sulfuro de dimetilo en
tetrahidrofurano. La solución se sometió a reflujo en un baño de
aceite durante 17 horas. La solución de reacción se enfrió a
temperatura ambiente y se extinguió con 2 ml de ácido clorhídrico
acuoso al 10% (v/v).
La mezcla cruda se sometió a cromatografía sobre
una columna de C_{18} utilizando el instrumento Waters Modelo 600.
El gradiente de elusión fue de un 100% de agua (con ácido
trifluoroacetico al 0,1% "TFA") hasta 1:1: agua: acetontrilo
(con 0,1% TFA), durante 50 minutos, después un lavado isocrático de
10 minutos al 100% de agua (con 0,1% TFA) a una velocidad de flujo
de 10 ml por minuto. Se analizaron las fracciones eluidas sobre una
columna analítica de C_{18} utilizando un gradiente de 9 5:5 agua:
acetonitrilo (con 0,1% TFA) hasta 20:80: agua: acetonitrilo (con
0,1% TFA) hasta 30 minutos a una velocidad de flujo de 1,5 ml por
minuto. Se reunieron las fracciones apropiadas (es decir, aquellas
que eluyeron entre 38%-44% de acetonitrilo) y se liofilizaron para
producir 72,3 mg (0,29 mmoles, 44%) del compuesto del título como un
polvo blanco.
HPLC (Columna C_{18}): R_{t} = 16.9
minutos
RMN (CD_{3}OD)): 7,65-7,68 (m,
2 ArH); 7,44-7,47 (m, 3 ArH);
7,31-7,38 (m, 4 ArH); 7,23-7,27 (m,
ArH); 4,42 (s, NCH_{2})
EM (EI): M^{+} = 249
Debe entenderse que la invención no está limitada
a las modalidades particulares mostradas y descritas en la presente,
sino que pueden hacerse varios cambios y modificaciones sin
apartarse del espíritu y alcance de este concepto novedoso como está
definido por las siguientes reivindicaciones.
Claims (20)
1. Utilización de un compuesto de la fórmula
(I):
en
donde
R_{1} es un alquilo inferior, hidrocarbilo
inferior, arilalquilo inferior, hteroarilalquilo inferior, aromático
heterocíclico de 5 ó 6 miembros, pliaromático o
poliheteroaromático;
R_{2} es un alquilo inferior, hidrocarbilo
inferior, arilalquilo inferior, heteroarilalquilo inferior,
aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros, hidrocarboilo inferior,
carbonilo poliaromático, poliheteroaromático o carbonilo
poliheteroaromático;
R_{3} es H o alquilo inferior;
R_{5} es H, alquilo inferior, hidrocarbilo
inferior, arilalquilo inferior, heteroarilalquilo inferior,
aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros, halógeno o ciano; y
R_{6} es H o hidrocarboilo inferior;
en donde cada uno de dichos grupos alquilo,
hidrocarbilo, alquilarilo, alquilheteroarilo, hidrocarboilo o
aromático heterocíclico están sustituidos opcionalmente de manera
independiente con hasta cuatro grupos R_{4}, en donde cada R_{4}
representa independientemente halógeno, ciano, nitro, alquilo
inferior, hidroxilo, alcoxilo, carbonilo, carboxilo, amino,
alquilamino, dialquilamino o hidrocarboilamido en la preparación de
un medicamento destinado al tratamiento de glomerulonefritis,
cáncer, aterosclerosis o restenosis en mamíferos en donde "alquilo
inferior" significa un grupo alquilo que tiene de 1 a 4 átomos de
carbono, y "hidrocarbilo inferior" significa un grupo
hidrocarbilo que tiene 6 o menos átomos de carbono o un anillo
fenilo.
2. Utilización de la reivindicación 1, en donde
R_{1} es un hidrocarbilo inferior o un aromático heterocíclico de
5 ó 6 miembros, y está sustituido opcionalmente con hasta cuatro
grupos R_{4}.
3. Utilización de la reivindicación 2, en donde
dicho hidrocarbilo inferior es un aromático carbocíclico y está
sustituido opcionalmente con hasta cuatro grupos R_{4}.
4. Utilización de la reivindicación 3, en donde
el aromático carbocíclico es fenilo o fenilo sustituido con hasta
cuatro grupos R_{4}.
5. Utilización de la reivindicación 1, en donde
R_{2} es un hidrocarboilo inferior o un carbonilo aromático
heterocíclico de 5 ó 6 miembros, y está sustituido opcionalmente con
hasta cuatro grupos R_{4}.
6. Utilización de la reivindicación 5, en donde
dicho hidrocarboilo inferior es un carbonilo aromático carbocíclico
y está sustituido opcionalmente con hasta cuatro grupos R_{4}.
7. Utilización de la reivindicación 6, en donde
dicho carbonilo aromático carbocíclico es fenilcarbonilo o
fenilcarbonilo sustituido con hasta cuatro grupos R_{4}.
8. Utilización de la reivindicación 1, en donde
R_{3} es H.
9. Utilización de la reivindicación 1, en donde
R_{5} es H, alquilo inferior, halógeno o ciano.
10. Utilización de la reivindicación 9, en donde
R_{5} es H.
11. Utilización de la reivindicación 1, en donde
R_{6} es H.
12. Utilización de la reivindicación 1, en donde
R_{1} es alquilo inferior, hidrocarbilo inferior o aromático
heterocíclico de 5 ó 6 miembros; R_{2} es alquilo inferior,
hidrocarbilo inferior, aromático heterocíclico de 5 ó 6 miembros,
hidrocarboilo inferior o carbonilo aromático heterocíclico de 5 ó 6
miembros; R_{3} es H o alquilo inferior; R_{5} es H, alquilo
inferior, halógeno o ciano; y R_{6} es H o hidrocarboilo
inferior.
13. Utilización de la reivindicación 12, en donde
R_{1} es fenilo o un fenilo sustituido; R_{2} es fenilcarbonilo
o fenilcarbonilo sustituido y R_{3}, R_{5} y R_{6} son H.
14. Utilización de la reivindicación 1, en donde
R_{1} es fenilo, R_{2} es benzoilo y R_{3}, R_{5} y R_{6}
son H.
15. Utilización de la reivindicación 1, en donde
R_{2} es un fenilcarbonilo o un fenilcarbonilo sustituido con un
sustituyente donador de electrones o neutro electrónicamente con
respecto a H en el grupo fenilo.
16. Utilización de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones precedentes en donde el medicamento comprende una
cantidad inhibidora del receptor de PDGF de un compuesto de fórmula
(I) es un vehículo farmacéuticamente aceptable.
17. Utilización de la reivindicación 16 con la
condición de que cuando R es fenilo o fenilo sustituido con un
alquilo inferior, alcoxilo inferior o halógeno, R_{3} y R_{6}
son H, y R_{5} es alquilo inferior, arilo o arilo sustituido con
un alquilo inferior, alcoxilo inferior o halógeno, entonces R_{2}
no puede ser alquilo inferior.
18. Utilización según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes en donde el medicamento es para el
tratamiento de la glomerulonefritis, aterosclerosis o
restenosis.
19. Procedimiento de inhibición de un receptor de
PDGF, no siendo un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano o
animal mediante cirugía o terapia o un procedimiento de diagnóstico
aplicado en el cuerpo humano o animal que comprende:
poner en contacto una composición que contiene un
receptor PDGF con un compuesto de fórmula (I) según se define en
cualquiera de las reivindicaciones 1-15.
20. Procedimiento de la reivindicación 19 en
donde dicha composición que contiene un receptor de ADGF comprende
un fluido corporal de un mamífero, y dicho procedimiento comprende
además medir la actividad tirosina quinasa en dicho fluido corporal
en presencia o ausencia de dicho compuesto y relacionar dicha
actividad quinasa con la concentración de tirosina quinasa o el
sustrato para tirosina quinasa en dicha composición.
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|---|---|---|---|
| US33763094A | 1994-11-10 | 1994-11-10 | |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES95939917T Expired - Lifetime ES2219670T3 (es) | 1994-11-10 | 1995-11-09 | Utilizacion de compuestos de pirazola para el tratamiento de la glomerulonefritis, cancer, ateroesclerosis o restenosis. |
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Families Citing this family (94)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9222253D0 (en) * | 1992-10-23 | 1992-12-09 | Celltech Ltd | Chemical compounds |
| GB9304919D0 (en) * | 1993-03-10 | 1993-04-28 | Celltech Ltd | Chemical compounds |
| GB9304920D0 (en) * | 1993-03-10 | 1993-04-28 | Celltech Ltd | Chemical compounds |
| GB9326699D0 (en) * | 1993-12-22 | 1994-03-02 | Celltech Ltd | Chemical compounds |
| WO1995017399A1 (en) * | 1993-12-22 | 1995-06-29 | Celltech Therapeutics Limited | Trisubstituted phenyl derivatives, processes for their preparation and their use as phosphodiesterase (type iv) inhibitors |
| US6245774B1 (en) | 1994-06-21 | 2001-06-12 | Celltech Therapeutics Limited | Tri-substituted phenyl or pyridine derivatives |
| GB9523675D0 (en) * | 1995-11-20 | 1996-01-24 | Celltech Therapeutics Ltd | Chemical compounds |
| GB9526246D0 (en) * | 1995-12-21 | 1996-02-21 | Celltech Therapeutics Ltd | Chemical compounds |
| GB9526245D0 (en) * | 1995-12-21 | 1996-02-21 | Celltech Therapeutics Ltd | Chemical compounds |
| GB9608435D0 (en) * | 1996-04-24 | 1996-06-26 | Celltech Therapeutics Ltd | Chemical compounds |
| GB9619284D0 (en) * | 1996-09-16 | 1996-10-30 | Celltech Therapeutics Ltd | Chemical compounds |
| GB9622363D0 (en) * | 1996-10-28 | 1997-01-08 | Celltech Therapeutics Ltd | Chemical compounds |
| AU5135998A (en) * | 1996-12-03 | 1998-06-29 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel urea derivatives |
| GB9625184D0 (en) * | 1996-12-04 | 1997-01-22 | Celltech Therapeutics Ltd | Chemical compounds |
| AU5410498A (en) * | 1996-12-12 | 1998-07-03 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Pyrazole derivatives |
| US6166038A (en) * | 1996-12-13 | 2000-12-26 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Aminopyrazole derivatives |
| DE69729315T2 (de) | 1996-12-16 | 2005-06-23 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Aminopyrazolderivate |
| WO1998028281A1 (en) * | 1996-12-23 | 1998-07-02 | Celltech Therapeutics Limited | Fused polycyclic 2-aminopyrimidine derivatives, their preparation and their use as protein tyrosine kinase inhibitors |
| GB9705361D0 (en) * | 1997-03-14 | 1997-04-30 | Celltech Therapeutics Ltd | Chemical compounds |
| CA2304466A1 (en) | 1997-10-06 | 1999-04-15 | Basf Aktiengesellschaft | Indeno[1,2-c]pyrazole derivatives for inhibiting tyrosine kinase activity |
| DE69818083T2 (de) | 1997-10-06 | 2004-07-08 | Abbott Gmbh & Co. Kg | INDENO[1,2-c]-,NAPHTHO[1,2-C]-UND BENZO[6,7]CYCLOHEPTA[1,2-c]PYRAZOLDERIVATE |
| US6376527B1 (en) | 1998-05-05 | 2002-04-23 | Syntex (U.S.A.) Llc | Pyrazole derivatives-p38 map kinase inhibitors |
| US6316466B1 (en) | 1998-05-05 | 2001-11-13 | Syntex (U.S.A.) Llc | Pyrazole derivatives P-38 MAP kinase inhibitors |
| HN2000000051A (es) * | 1999-05-19 | 2001-02-02 | Pfizer Prod Inc | Derivados heterociclicos utiles como agentes anticancerosos |
| UA71971C2 (en) | 1999-06-04 | 2005-01-17 | Agoron Pharmaceuticals Inc | Diaminothiazoles, composition based thereon, a method for modulation of protein kinases activity, a method for the treatment of diseases mediated by protein kinases |
| US7141581B2 (en) | 1999-07-02 | 2006-11-28 | Agouron Pharmaceuticals, Inc. | Indazole compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases, and methods for their use |
| TWI262914B (en) | 1999-07-02 | 2006-10-01 | Agouron Pharma | Compounds and pharmaceutical compositions for inhibiting protein kinases |
| PE20010306A1 (es) * | 1999-07-02 | 2001-03-29 | Agouron Pharma | Compuestos de indazol y composiciones farmaceuticas que los contienen utiles para la inhibicion de proteina kinasa |
| US6387900B1 (en) | 1999-08-12 | 2002-05-14 | Pharmacia & Upjohn S.P.A. | 3(5)-ureido-pyrazole derivatives process for their preparation and their use as antitumor agents |
| EP1202733B1 (en) | 1999-08-12 | 2005-10-05 | Pharmacia Italia S.p.A. | 3(5)-amino-pyrazole derivatives, process for their preparation and their use as antitumor agents |
| YU54202A (sh) | 2000-01-18 | 2006-01-16 | Agouron Pharmaceuticals Inc. | Jedinjenja indazola, farmaceutske smeše i postupci za stimulisanje i inhibiranje ćelijske proliferacije |
| HN2001000008A (es) | 2000-01-21 | 2003-12-11 | Inc Agouron Pharmaceuticals | Compuesto de amida y composiciones farmaceuticas para inhibir proteinquinasas, y su modo de empleo |
| ATE279410T1 (de) | 2000-02-07 | 2004-10-15 | Bristol Myers Squibb Co | 3-aminopyrazole als inhibitoren von cyclinabhängigen kinasen |
| JP2004501083A (ja) * | 2000-04-18 | 2004-01-15 | アゴーロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | プロテインキナーゼを阻害するためのピラゾール |
| MXPA03001189A (es) * | 2000-08-09 | 2004-05-14 | Agouron Pharma | Compuestos de pirazol-tiazol, composiciones farmaceuticas que los contienen y su uso para inhibir las cinasas dependientes de ciclinas. |
| BR0113258A (pt) | 2000-08-18 | 2003-07-15 | Agouron Pharma | Compostos, pró-drogas, metabólitos ou sais, métodos de tratamento de condição doentia em mamìferos, mediada pela atividade de proteìna cinase e métodos de modulação ou inibição da atividade de um receptor de proteìna cinase |
| AU2001291013A1 (en) | 2000-09-15 | 2002-03-26 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors |
| US7473691B2 (en) * | 2000-09-15 | 2009-01-06 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors |
| US6660731B2 (en) * | 2000-09-15 | 2003-12-09 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors |
| AU2001297619B2 (en) | 2000-12-21 | 2006-06-08 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pyrazole compounds useful as protein kinase inhibitors |
| ES2320204T3 (es) | 2001-05-29 | 2009-05-20 | Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft | Pirimidinas inhibidoras de cdk, su preparacion y su utilizacion como medicamentos. |
| HN2002000156A (es) | 2001-07-06 | 2003-11-27 | Inc Agouron Pharmaceuticals | Derivados de benzamida tiazol y composiciones farmaceuticas para inhibir la proliferacion de celulas y metodos para su utilización. |
| WO2003035065A1 (en) * | 2001-10-26 | 2003-05-01 | Aventis Pharmaceuticals Inc | Benzimidazoles and analogues and their use as protein kinases inhibitors |
| ES2437391T3 (es) * | 2002-02-06 | 2014-01-10 | Vertex Pharmaceuticals, Inc. | Compuestos de heteroarilo útiles como inhibidores de GSK-3 |
| DE60332604D1 (de) * | 2002-03-15 | 2010-07-01 | Vertex Pharma | Azolylaminoazine als proteinkinasehemmer |
| UA77303C2 (en) | 2002-06-14 | 2006-11-15 | Pfizer | Derivatives of thienopyridines substituted by benzocondensed heteroarylamide useful as therapeutic agents, pharmaceutical compositions and methods for their use |
| MY141867A (en) | 2002-06-20 | 2010-07-16 | Vertex Pharma | Substituted pyrimidines useful as protein kinase inhibitors |
| CA2494100C (en) | 2002-08-02 | 2011-10-11 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pyrazole compositions useful as inhibitors of gsk-3 |
| AR042067A1 (es) | 2002-11-27 | 2005-06-08 | Bayer Pharmaceuticals Corp | Derivados de anilinopirazol utiles en el tratamiento de la diabetes |
| PT1585743E (pt) | 2002-12-19 | 2007-07-12 | Pfizer | Compostos de 2- (1h-indazol-6-ilamin)-benzamida como inibidores de proteína-cinases úteis para o tratamento de doenças aftálmicas. |
| WO2004072029A2 (en) * | 2003-02-06 | 2004-08-26 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pyrazolopyridazines useful as inhibitors of protein kinases |
| CA2523245C (en) * | 2003-04-28 | 2012-03-06 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Indole acetic acid derivatives and their use as pharmaceutical agents |
| TW200509910A (en) | 2003-05-02 | 2005-03-16 | Elan Pharm Inc | Substituted pyrazole derivatives and related compounds as bradykinin B1 receptor antagonists |
| ATE435649T1 (de) * | 2003-05-02 | 2009-07-15 | Elan Pharm Inc | 4-brom-5-(2-chlor-benzoylamino)-1h-pyrazol-3- carbonsäure(phenyl)amid-derivate und verwandte verbindungen als bradykinin b1 receptor antagonisten zur behandlung von entzündlichen erkrankungen |
| WO2004098590A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-18 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | 4-bromo-5- (2-chloro-benzoylamino)-1h-pyrazole-3-carboxylic acid (1-(aminocarbonyl) eth-1-yl) amide derivatives and related compounds as bradykinin b1 receptor antagonists for the treatment of inflammatory diseases |
| KR101204247B1 (ko) | 2003-07-22 | 2012-11-22 | 아스텍스 테라퓨틱스 리미티드 | 3,4-이치환된 1ｈ-피라졸 화합물 및 그의 시클린 의존성키나제 (ｃｄｋ) 및 글리코겐 합성효소 키나제-3(ｇｓｋ-3) 조정제로서 용도 |
| JP2006528661A (ja) * | 2003-07-25 | 2006-12-21 | ファイザー・インク | アミノピラゾール化合物およびｃｈｋ１阻害剤としての使用 |
| EP1660504B1 (en) | 2003-08-29 | 2008-10-29 | Pfizer Inc. | Thienopyridine-phenylacet amides and their derivatives useful as new anti-angiogenic agents |
| WO2005030128A2 (en) * | 2003-09-23 | 2005-04-07 | Merck & Co., Inc. | Pyrazole modulators of metabotropic glutamate receptors |
| US7592340B2 (en) * | 2003-12-04 | 2009-09-22 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Quinoxalines useful as inhibitors of protein kinases |
| DE602005005211T2 (de) | 2004-10-14 | 2009-03-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Neue azaindol-thiazolinone als krebsmittel |
| AU2005306458B2 (en) * | 2004-11-17 | 2011-02-17 | Miikana Therapeutics, Inc. | Kinase inhibitors |
| AR054425A1 (es) | 2005-01-21 | 2007-06-27 | Astex Therapeutics Ltd | Sales de adicion de piperidin 4-il- amida de acido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino) 1h-pirazol-3-carboxilico. |
| US8404718B2 (en) | 2005-01-21 | 2013-03-26 | Astex Therapeutics Limited | Combinations of pyrazole kinase inhibitors |
| US7304074B2 (en) | 2005-04-05 | 2007-12-04 | Hoffmann-La Roche Inc. | Substituted 1,5-naphthyridine azolinones |
| EP1917259B1 (en) * | 2005-08-18 | 2012-01-25 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Pyrazine kinase inhibitors |
| KR20140025610A (ko) * | 2005-09-30 | 2014-03-04 | 미카나 테라퓨틱스, 인크. | 치환된 피라졸 화합물 |
| CN103145702A (zh) * | 2005-11-03 | 2013-06-12 | 顶点医药品公司 | 用作激酶抑制剂的氨基嘧啶 |
| DE602007004750D1 (de) * | 2006-11-02 | 2010-03-25 | Vertex Pharma | Als inhibitoren von proteinkinasen geeignete aminopyridine und aminopyrimidine |
| SG173409A1 (en) * | 2006-11-24 | 2011-08-29 | Ac Immune Sa | N-(methyl)-1h-pyrazol-3-amine, n-(methyl)-pyridin-2-amine and n-(methyl)-thiazol-2-amine derivatives for the treatment of diseases associated with amyloid or amyloid-like proteins, like e.g. alzheimers |
| ES2347721T3 (es) * | 2006-12-19 | 2010-11-03 | Vertex Pharmaceuticals, Inc. | Aminopirimidinas utiles como inhibidores de proteina quinasas. |
| US7737149B2 (en) | 2006-12-21 | 2010-06-15 | Astrazeneca Ab | N-[5-[2-(3,5-dimethoxyphenyl)ethyl]-2H-pyrazol-3-yl]-4-(3,5-dimethylpiperazin-1-yl)benzamide and salts thereof |
| NZ579483A (en) | 2007-03-09 | 2012-07-27 | Vertex Pharma | Aminopyridines useful as inhibitors of protein kinases |
| NZ579485A (en) * | 2007-03-09 | 2012-02-24 | Vertex Pharma | Aminopyrimidines useful as inhibitors of protein kinases |
| EP2134707B1 (en) * | 2007-03-09 | 2013-09-11 | Vertex Pharmaceuticals, Inc. | Aminopyrimidines useful as inhibitors of protein kinases |
| WO2008128009A2 (en) | 2007-04-13 | 2008-10-23 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Aminopyrimidines useful as kinase inhibitors |
| MX2009011812A (es) * | 2007-05-02 | 2010-01-14 | Vertex Pharma | Aminopirimidinas utiles como inhibidores de cinasa. |
| MX2009011811A (es) * | 2007-05-02 | 2010-01-14 | Vertex Pharma | Aminopirimidinas utiles como inhibidores de cinasa. |
| CA2685876A1 (en) | 2007-05-02 | 2008-11-13 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Thiazoles and pyrazoles useful as kinase inhibitors |
| AU2008257044A1 (en) * | 2007-05-24 | 2008-12-04 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Thiazoles and pyrazoles useful as kinase inhibitors |
| JP2010529193A (ja) * | 2007-06-11 | 2010-08-26 | ミイカナ セラピューティクス インコーポレイテッド | 置換ピラゾール化合物 |
| JP5553751B2 (ja) * | 2007-07-31 | 2014-07-16 | バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | ５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−３−アミンおよびその誘導体を調製するためのプロセス |
| AU2009288200A1 (en) | 2008-09-03 | 2010-03-11 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Co-crystals and pharmaceutical formulations comprising the same |
| US20120045459A1 (en) * | 2009-05-05 | 2012-02-23 | Van Andel Research Institute | Methods for Treating Autophagy-Related Disorders |
| EP2311823A1 (en) | 2009-10-15 | 2011-04-20 | AC Immune S.A. | 2,6-Diaminopyridine compounds for treating diseases associated with amyloid proteins or for treating ocular diseases |
| CA2829790C (en) | 2010-03-30 | 2018-06-05 | Verseon Corporation | Multisubstituted aromatic compounds as inhibitors of thrombin |
| WO2013038390A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Novartis Ag | N-substituted heterocyclyl carboxamides |
| US20140179712A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Astrazeneca Ab | Pharmaceutical formulation of n-[5-[2-(3,5-dimethoxyphenyl)ethyl]-2h-pyrazol-3-yl]-4-[(3r,5s)-3,5-dimethylpiperazin-1-yl]benzamide |
| SG10201707480PA (en) | 2013-03-15 | 2017-10-30 | Verseon Corp | Multisubstituted aromatic compounds as serine protease inhibitors |
| BR112015023214A8 (pt) | 2013-03-15 | 2019-12-24 | Verseon Corp | composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto ou composição farmacêutica |
| CN103232394B (zh) * | 2013-05-14 | 2014-09-24 | 浙江医药高等专科学校 | 含吡唑类化合物、其制备方法和用途 |
| BR112017004704A2 (pt) | 2014-09-17 | 2018-01-23 | Verseon Corp | composto, composição farmacêutica, e, método para tratar uma doença ou distúrbio em um indivíduo |
| LT3261639T (lt) | 2015-02-27 | 2022-11-25 | Verseon International Corporation | Pakaitiniai pirazolo junginiai kaip serino proteazės inhibitoriai |
| CN112694474B (zh) * | 2019-10-23 | 2022-03-18 | 四川大学 | 吲唑类衍生物及其制备方法和用途 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS49100080A (es) * | 1973-02-01 | 1974-09-20 | ||
| US4622330A (en) * | 1982-12-20 | 1986-11-11 | Merck & Co., Inc. | Antiprotozoal 3-amino or substituted amino pyrazoles |
| JPH01258695A (ja) * | 1988-04-07 | 1989-10-16 | Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd | （ピラゾリルアミノ）メチレンビス（ホスホン酸）誘導体及びその医薬 |
| US5196446A (en) * | 1990-04-16 | 1993-03-23 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Certain indole compounds which inhibit EGF receptor tyrosine kinase |
| ATE159009T1 (de) * | 1991-05-10 | 1997-10-15 | Rhone Poulenc Rorer Int | Bis mono- und bicyclische aryl- und heteroarylderivate mit inhibierender wirkung auf die egf und/oder pdgf-rezeptor tyrosinkinase |
| EP0541486A1 (de) * | 1991-11-07 | 1993-05-12 | Ciba-Geigy Ag | Polycyclische Konjugate |
| JP2862374B2 (ja) * | 1992-12-17 | 1999-03-03 | フアイザー・インコーポレイテツド | Ｃｒｆアンタゴニスト活性を有するピラゾール及びピラゾロピリミジン |
| TW336932B (en) * | 1992-12-17 | 1998-07-21 | Pfizer | Amino-substituted pyrazoles |
| PH30300A (en) * | 1993-05-07 | 1997-01-20 | Ciba Geigy Ag | Polycyclic compounds and processes for the preparation thereof |
| US5605820A (en) * | 1994-06-23 | 1997-02-25 | Chemgenics Pharmaceuticals, Inc. | Production of strains having biological activities by sexual crosses between vegetatively incompatible strains of Aspergillus nidulans |
-
1995
- 1995-11-09 AT AT95939917T patent/ATE262902T1/de not_active IP Right Cessation
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- 1995-11-09 CA CA002203517A patent/CA2203517A1/en not_active Abandoned
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| MX9703488A (es) | 1998-07-31 |
| CN1165482A (zh) | 1997-11-19 |
| ATE262902T1 (de) | 2004-04-15 |
| DE69532817D1 (de) | 2004-05-06 |
| EP0788358B1 (en) | 2004-03-31 |
| AU700964B2 (en) | 1999-01-14 |
| CA2203517A1 (en) | 1996-05-23 |
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|---|---|---|
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