EA002544B1

EA002544B1 - RET-ЛИГАНДЫ (RetL) ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ РОСТА НЕВРАЛЬНОЙ И РЕНАЛЬНОЙ ТКАНИ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ

Info

Publication number: EA002544B1
Application number: EA199800990A
Authority: EA
Inventors: Мишель Сэникола-Надель; Катрин Хессион; Ричард Л. Кейт
Original assignee: Байоджен, Инк.
Priority date: 1996-05-08
Filing date: 1997-05-07
Publication date: 2002-06-27
Also published as: KR20060024843A; NO985231L; CN1232469A; DE69736428T2; CA2253871C; EP1757617A1; JP2002515743A; CA2253871A1; ES2270465T3; NO324957B1; ATE335003T1; PT914339E; EP0914339B1; WO1997044356A2; BG109433A; BR9710665A; NO323612B1; BG102973A; NZ332706A; IL126918A0

Abstract

Настоящее изобретение относится к нуклеотидным последовательностям, которые кодируют Ret-лиганд (RetL), а также к способам стимуляции неврального и ренального роста путем лечения клеток и субъектов-млекопитающих с помощью ДНК или белка RetL. В настоящем изобретении получили, выделили и очистили молекулу ДНК, кодирующую RetL, обладающую нуклеотидной последовательностью любого RetL, но специфически включающую в себя кДНК retL1 крысы (SEQ ID NO:1), кДНК неполного RetL1 человека (SEQ ID NO:8), кДНК полноразмерного retL1 человека (SEQ ID NO:10), кДНК RetL2 человека (SEQ ID NO:12), кДНК retL3 мыши (SEQ ID NO:12) или кДНК retL3 человека (SEQ ID NO:16), кДНК неполного retL3 человека (SEQ ID NO:18) или кДНК retL3 человека (SEQ ID NO:20). Кроме того, в настоящем изобретении создали RetL3-белок с аминокислотной последовательностью, которая включает RetL1 крысы (SEQ ID NO:2), неполный RetL1 человека (SEQ ID NO:9), полноразмерный RetL человека (SEQ ID NO:11), RetL2 человека (SEQ ID NO:13), RetL3 мыши (SEQ ID NO:17), неполный RetL3 человека (SEQ ID NO:19) или RetL3 человека (SEQ ID NO:21).

Description

Настоящее изобретение относится к нуклеотидным последовательностям, которые кодируют ВеЕлиганд (КеГО), а также к способам стимуляции роста нервной и почечной тканей путем лечения клеток и особей млекопитающих с помощью КеШ-ДНК или КЕТ-белка.

Предпосылки к созданию изобретения

Одна из целей настоящего исследования клеточных сигналов и рецепторной активации заключается в том, чтобы создать возможность для терапевтической модуляции процессов, участвующих в клеточном росте и жизнеспособности. Такие процессы определяют последствия различных медицинских состояний, в том числе, органную недостаточность, внутриутробное развитие и, среди других, опухолевый рост. Каждое их этих состояний считается во всем мире клинически важным и обладает ограниченным выбором эффективного лечения. Цель настоящего изобретения заключается в создании композиций и способов по усилению регенерации или жизнеспособности поврежденной ткани, а также для лечения нарушений, влекущих за собой аберрантный рост и развитие тканей.

Гибель ткани или повреждаемость органа на терминальной стадии поражает миллионы людей во всем мире каждый год и существенно прибавляет расходы по уходу за здоровьем. Утрату органа или ткани обычно лечат путем трансплантации органов от доноров, путем хирургической реконструкции или с помощью технических приспособлений. Каждое из этих средств обладает недостатками. Трансплантация ограничена нехваткой доноров, хирургическая реконструкция может создавать другие долговременные проблемы, а технические устройства не могут осуществлять все функции отдельного органа, и поэтому не могут предупреждать прогрессирующую деградацию. Поэтому практическая медицина нуждается в получении новых решений этих проблем.

Белковые факторы, которые влияют на рост, дифференциацию и/или жизнеспособность клеток могут быть полезны для лечения болезней органов, которые содержат клетки-мишени. Факторы или лиганды, которые взаимодействуют с рецепторами из семейства тирозинкиназного белкового рецептора (КРТК), представляют в этом отношении особый интерес. Эти рецепторы участвуют во многих клеточных программах, включающих клеточный рост и дифференцировку, а также генезис многих неоплазий. Поэтому данные факторы или лиганды, которые взаимодействуют с этими рецепторами, могут оказываться пригодными для лечения болезней некоторых органов, ткани которых были повреждены. Альтернативно, может быть полезно блокировать взаимодействие этих факторов с их рецепторами с целью блокировать опухолевый рост.

КеЕпротоонкоген кодирует рецепторную тирозинкиназу, которая экспрессируется во время развития разных тканей, в том числе, периферической и центральной нервной систем и почек. Аномалии, представленные в теНнулевых мышах, предполагают, что Ее1 крайне необходим для иннервации энтеронейронами задней кишки, а также для пролиферации и ветвления эпителиальной ткани эмбрионального мочеточника во время развития почки (№11иге 367, 380383, 1994). Поиск ключевого компонента сигнального пути Ке1, Ее1-лиганда, явилось частью интенсивного исследования.

Краткое изложение существа изобретения

В настоящем изобретении создали очищенную и выделенную молекулу ДНК, кодирующую КеГО, содержащую нуклеотидную последовательность любого КеГО, но специфически включающую кДНК те1Ь1 крысы (8Е0 ГО N0:1), кДНК неполного теГО1 человека (8Е0 ГО N0:8), кДНК полноразмерного те1Ь1 человека (8Е0 ГО N0:10), кДНК ге11.2 человека (8Е0 ГО N0: 12), кДНК теГОЗ мыши (8Е0 ГО N0: 16), кДНК неполного теГО3 человека (8Е0 ГО N0: 18) или кДНК теГО3 человека (8Е0 ГО N0:20). Кроме того, в настоящем изобретении создали К.е1-белок с аминокислотной последовательностью, которая включает К.еГО1 (8Е0 ГО N0:2), неполного К.еГО1 человека (8Е0 ГО N0:9), полноразмерного К.еГО1 человека (8Е0 ГО N0:11), КеГО2 человека (8Е0 ГО N0:13), Ве1Б3 мыши (8Е0 ГО N0:17), неполного Ве1Б3 человека (8Е0 ГО N0:19) или Ве1Б3 человека (8Е0 ГО N0:21).

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, настоящее изобретение включает последовательность ДНК, которая охватывает последовательность (кДНК неполного К.еГО1 человека (8Е0 ГО N0:8)) ДНКвставки из клона НКЕ20, которая представляет собой АТСС N0. 97604, или последовательность ДНК-вставки из клона #230-5А-8617 (кДНК теГО1 крысы (8Е0 ГО N0:1)), которая включена в АТСС N0. 98047.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения, очищали и выделяли молекулу ДНК для применения в гарантированной экспрессии в прокариотической или эукариотической хозяйской клетке полипептидного продукта, который обладает, как минимум, частью первичной структурной конформации и биологической активности КеГО; эта ДНК может быть а) молекулой ДНК, которая включает кДНК ге1Б1 крысы, кДНК неполного те1Ь1 человека, кДНК полноразмерного теГО1 человека, кДНК теГО2 человека, кДНК ге1Б3 мыши или кДНК ге1Б3 человека, или комплементарной цепью кДНК теГО1 крысы, кДНК неполного теГО1 человека, кДНК полноразмерного те1Ь1 человека, кДНК ге1Б2 человека, кДНК ге1Б3 мыши или кДНК теГО3 человека; Ь) молекулами ДНК, которые гибридизуют в строгих условиях с моле3 кулами ДНК, указанными в а) или его фрагментах; или с) молекулами ДНК, но для вырожденного генетического кода, которые должны были бы гибридизовать с молекулами ДНК, указанными в а) и Ь). В рамках настоящего изобретения также очищали и выделяли молекулу ДНК, кодирующую полипептидный фрагмент или вариант Ке4Б человека, обладающий биологической активностью Кс1Б.

Любую из рекомбинантных молекул ДНК настоящего изобретения можно присоединить путем сшивки к последовательности, контролирующей экспрессию.

В рамки настоящего изобретения включены также векторы и системы доставки, которые включают молекулы ДНК или конструкции, указанные в других местах данного описания. Такой вектор может включать молекулу ДНК, кодирующую Кс1Б или вариант Кс1Б.

Настоящее изобретение включает прокариотические или эукариотические клетки, устойчиво трансформированные или трансфецированные вектором, включающим молекулу ДНК, кодирующую нативный или вариантный КеШ.

Очищенный и выделенный Кс1Б человека, практически свободный от других белков человека, является специфическим в рамках настоящего изобретения, поскольку представляет собой способ по получению полипептидного продукта, обладающего частью или всею первичной структурной конформацией и биологической активностью Кс1Б. Такой способ может включать стадии выращивания, в подходящих культуральных условиях, прокариотических или эукариотических хозяйских клеток, трансформированных или трансфецированных любой молекулой ДНК настоящего изобретения способом, обеспечивающим экспрессию такого полипептидного продукта и получение Кс1Б. Включен также полипептид как продукт экспрессии ДНК в прокариотических или эукариотических клетках хозяина.

Настоящее изобретение включает также белки и белковые фрагменты, варианты или производные, растворимые и мембранносвязанные. В избранных вариантах осуществления настоящего изобретения, данный белок обладает аминокислотной последовательностью, которая включает крысиный Кс1Б1. неполный Кс1Б1 человека, полноразмерный Кс1Б1 человека, Кс1Б2 человека, мышиный Кс1Б3 или Кс1Б3 человека, или представляет собой вариант одной из этих последовательностей. В других вариантах осуществления настоящего изобретения данный белок представляет собой фьюжн белок, включающий Кс1 или Кс1Б. слитый с другой молекулой или молекулярным фрагментом, таким как иммуноглобулин, токсин, воспроизводимое соединение или радионуклид. Включены также химерные молекулы Кс1Б.

Другие варианты настоящего изобретения включают специфические моноклональные антитела к Кс1Б настоящего изобретения. Такие антитела могут быть ассоциированы с токсином, воспроизводимым соединением или радионуклидом. Настоящее изобретение включает также гибридомные клеточные линии, которые продуцируют специфические антитела к КсГ в том числе, ΆΆ.ΕΕ9, АА.НЕ3, АЕ.Е9, ВА.В1, ВВ.В6, АА.ОЕ7. ΟΌ.Ε11, АН.Е3, 0Ό.Ο4. АО.Е7. ΒΌ.Ο6 и ВН.О8, а также субклоны этих гибридом и антитела, образуемые этими гибридомами или субклонами этих гибридом.

Кроме того, настоящее изобретение включает способ стимуляции роста новой ткани или стимуляции выживания поврежденной ткани у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества, которое взаимодействует с клеточным Кс1 и, в связи с этим, индуцирует аутофосфорилирование КсГ Данное соединение может представлять собой Кс1Б1. Кс1Б2 или Кс1Б3. фрагмент полноразмерного Кс1Б или антитело, которое связывается с КсГ Данное соединение может быть введено совместно с терапевтически эффективным количеством второго соединения, таким как ΟΌΝΡ, неуртурин или родственной ΟΌΝΕ молекулой. Несмотря на то, что ткани, представляющие интерес для этих способов, могут включать любую ткань, предпочтительные ткани включают ренальную ткань, невральную ткань, сердце, желудок, тонкий кишечник, спинной мозг или легкие. Субъектом для данных способов может быть человек.

В другом способе настоящего изобретения, КеНсигнальная трансдукция между первой клеткой, экспрессирующей Кс1Е и второй клеткой ингибируется при контактировании первой клетки с растворимым КеНбелком или с антителом к Кс1Б. Растворимый Кс1-белок может быть слитым (фьюжн) белком.

Настоящее изобретение включает также способ для мишенирования токсина, воспроизводимого соединения или радионуклида в клетке, экспрессирующей КсГ включающий контактирование данной клетки с КеШ-слитым белком или антителом анти-К.е1, конъюгированного с токсином, воспроизводимым соединением или радионуклидом. Данный Кс1Б может представлять собой Кс1Б1. Кс1Б2 или Кс1Б3. В другом способе супрессируется рост опухолевой клетки, которая экспрессирует КсГ на стадии данного способа, включающего контактирование данной клетки со слитым белком Кс1Б и токсином или радионуклидом, или антителом к анти-КеГ конъюгированным с токсином или радионуклидом. Данная клетка может находиться в рамках субъекта, а белок или конъюгированное антитело быть введенным данному субъекту.

В настоящее изобретение включен также способ мишенирования токсина, воспроизводимого соединения или радионуклида в клетке, экспрессирующей ВеВ. включающий контактирование данной клетки со слитым белком, включающим Не! и токсин, воспроизводимое соединение или радионуклид, или антитело к анти-Ве1, конъюгированное с токсином, воспроизводимым соединением или радионуклидом. Очередной вариант осуществления настоящего изобретения включает способ супрессии роста опухолевой клетки, которая экспрессирует Ве1Ь. включающий контактирование данной клетки со слитым белком Ве! и токсином или радионуклидом или с антителом к анти-Ве1Ь, конъюгированным с токсином или радионуклидом; данная клетка может находиться в рамках субъекта, а данный белок введен данному субъекту.

Для любого способа настоящего изобретения Ве1Ь может представлять собой Ве1Ь1. Ве1Ь2 или Ве1Ь3. или вариант или фрагмент Ве1Ь1. Ве1Ь2 или Ве1Ь3.

В рамках настоящего изобретения рассматриваются также способы генной терапии. Один из вариантов осуществления настоящего изобретения представляет собой способ лечения субъекта с нарушением Ве1-метаболизма, включающий введение субъекту вектора, включающего молекулу ДНК, кодирующую Ве1Ь. а также способ усиления роста новой ткани у любого субъекта, включающий введение такого вектора данному субъекту. Другой вариант осуществления настоящего изобретения включает способ, усиливающий выживаемость поврежденной ткани у любого субъекта, первая стадия данного способа заключается во введении терапевтически эффективного количества вектора, кодирующего Ве1Ь для данного субъекта.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1 представляет собой последовательность кДНК (БЕО ГО N0:1) и выведенную из нее аминокислотную последовательность (БЕО ГО N0:2) крысиного Ве1Ь1. Данная нуклеотидная последовательность простирается от 201-й пары оснований до 1700-й пары оснований 8Е0 ГО N0:1 и содержит полную открытую рамку считывания.

Фиг. 2А представляет собой неполную последовательность кДНК (БЕО ГО N0:8) и установленную аминокислотную последовательность (БЕО ГО N0:9) Ве1Ь1 человека. Данная последовательность представляет собой последовательность-вставку из клона НВБ20, депонированного в АТСС № 97604.

Фиг. 2В представляет собой композитную полноразмерную последовательность ДНК (БЕО ГО N0:10) и установленную аминокислотную последовательность (БЕО ГО N0:11) Ве1Ь1 человека.

Фиг. ЗА представляет собой сравнение нуклеотидной последовательности Ве1Ь1 человека (верхний ряд последовательности) с нуклеотидной последовательностью Ве1Ь1 крысы ( нижний ряд последовательности). Вертикальные линии между нуклеотидами показывают тождество в позиции, а точка указывает на делецию в этой позиции.

Фиг. ЗВ представляет собой аминокислотную последовательность Ве1Ь1 человека (верхний ряд последовательности) с нуклеотидной последовательностью Ве1Ь1 крысы (нижний ряд последовательности). Вертикальные линии между соответствующими аминокислотами показывают тождество в позиции, а точка указывает на консервативную замену по этому остатку.

Фиг. 4А представляет собой схематическую диаграмму возможной роли Ве! и Ве1Ь во взаимодействии между клеткой метанефрогенной мезенхимы и эмбриональной клеткой мочеточника.

Фиг. 4В представляет собой схематическую диаграмму способа скрининга трансфектантов кДНК-библиотеки клонов, которые экспрессирует Ве1Ь. Наличие в трансфектантах экспрессируемого Ве1Ь детектировали путем анализа связывания с этими трансфектантами слитого белка Ве1/1д6 или слитого белка Ве1/щелочная фосфатаза.

Фиг. 5 представляет собой схематическую диаграмму, показывающую конструкцию плазмид, используемых для экспрессии слитого белка Ве1/1д6 крысы.

Фиг. 6 представляет собой схематическую диаграмму, показывающую конструкцию плазмид, используемых для экспрессии слитого белка Ве1/1д6 человека.

Фиг. 7 представляет собой последовательность кДНК (БЕО ГО N0:12) и установленную аминокислотную последовательность (БЕО ГО N0:13) те1Ь2 человека, которую обнаружили в клоне Ό8^240. Открытая рамка считывания белка находится в пределах нуклеотидов 251416.

Фиг. 8 представляет собой сравнение аминокислотной последовательности Ве1Ь2 человека (верхняя линия последовательности) с последовательностью Ве1Ь1 человека (нижняя линия последовательности). Вертикальные линии между аминокислотами показывают идентичность позиции, тогда как точки указывают пробел в этой позиции.

Фиг. 9 представляет собой последовательность кДНК (БЕО ГО N0:16) и установленную аминокислотную последовательность (БЕО ГО N0:17) Ве1Ь3 мыши.

Фиг. 10 представляет собой последовательность кДНК (БЕО ГО N0:20) и установленную аминокислотную последовательность (БЕО ГО N0:21) Ве1Ь3 человека.

Подробное описание настоящего изобретения

Идентификационные номера последовательностей

Нуклеотидные и аминокислотные последовательности, указанные в настоящем описании, приведены под нижеследующими идентификационными номерами:

8Е0 ГО N0: 1 - ге1Ь1-кДНК крысы

8ΕΟ ΙΌ N0: 2 - Не1й1-аа крысы 8Ε0 ΙΌ N0: 3 - олигомер к1Н-13 8Ε0 ΙΌ N0: 4 - олигомер 164-14 8Ε0 ΙΌ N0: 5 - олигомер к1Н-15 8Ε0 ΙΌ N0: 6 - внеклеточная тейкДНК крысы

8Ε0 ΙΌ N0: 7 - внеклеточная Не!-аа крысы

8Ε0 ΙΌ N0: 8 - неполная ге!Ь1-кДНК человека

8Ε0 ΙΌ N0: 9 - неполная Не1й1-аа человека

8Ε0 ΙΌ N0: 10 - те!Ь 1 -кДНК человека 8Ε0 ΙΌ N0: 11 - Не!Ь1-аа человека 8Ε0 ΙΌ N0: 12 - ге1Ь2-кДНК человека 8Ε0 ΙΌ N0: 13 - Не1й2-аа человека

8Ε0 ΙΌ N0: 14 - неполная мышиная те!Ь3кДНК (Ε8Τ АА50083)

8Ε0 ΙΌ N0: 15 - неполная мышиная те!Ь3-аа 8Ε0 ΙΌ N0: 16 - мышиная ге!Ь3-кДНК 8Ε0 ΙΌ N0: 17 - мышиная Не1й3-аа

8Ε0 ΙΌ N0: 18 - неполная теШЗ-кДНК человека

8Ε0 ΙΌ N0: 19 - неполная Не!Ь3-аа человека

8Ε0 ΙΌ N0: 20 - ге!Ь3-кДНК человека

8Ε0 ΙΌ N0: 21 - те!Ь3-аа человека

Определения

Термин Не!Ь, как он используется здесь, означает любой белок, который специфически взаимодействует с рецепторным белком Не! и который при взаимодействии с Не! запускает Ве!-димеризацию и/или аутофосфорилирование тирозинкиназного домена Не!. Последовательности ДНК, которые кодируют Не!Ь и Не! назвали, соответственно, ге!Ь и ге!. Лиганд может быть растворимым или быть представленным в виде мембранно-связанной молекулы в одной и той же или в отличающейся клетке в виде ВеЕмолекулы, по которой запускается аутофосфорилирование. Для некоторых применений или взаимодействий с Не! данный лиганд может нуждаться в дополнительных молекулах для запуска аутофосфорилирования. Лиганды настоящего изобретения включают корецепторы или дополнительные лигандные кофакторы. Лиганды настоящего изобретения включают, кроме того, анти-Ве! шАЬ, которые действуют в качестве Ве!-антагонистов, запуская Не! димеризацию и аутофосфорилирование. Данный лиганд можно также модифицировать разными способами, таким, когда инкорпорируется часть слитого белка, такого как токсин или радионуклид.

Под выравниванием последовательностей подразумевается позиционирование одной последовательности, нуклеотидной или аминокислотной, которая позиционируется с другой, что дает возможность сравнивать актуальные части данной первой последовательности с актуальными частями другой последовательности. Пример одного из способов этой методики дан у №ей1ешап с соавт. (1. Μοί. ΒίοΙ. 48:443-453,

1970). Этот способ может быть удобно осуществлен с помощью компьютерной программы, такой как Айди-программа (ЭНАкЮг, Ιηο.). Специалистам в данной области понятно, что гомологичные или функциональные эквивалентные последовательности включают функционально эквивалентные расстановки цистеиновых остатков в границах консервативного цистеинового остова, включающего аминокислотные инсерции или делеции, которые изменяют линейный строй этих цистеинов, но практически не нарушают их взаимоотношения в упорядоченной структуре данного белка. Поэтому внутренние выпадения и аминокислотные вставки выбранной последовательности игнорируются в целях вычисления уровня аминокислотной гомологии или идентичности между выбранной и тестпоследовательностью. Первая характеристика, часто используемая для установления гомологии белков, представляет собой сходство численности и местоположения цистеиновых остатков между одним и другим белком.

Под клонированием подразумевают применение ίη νίίτο рекомбинантных методик для вставки отдельного гена или иной последовательности ДНК в молекулу вектора. Чтобы успешно клонировать требуемый ген, необходимо использовать методы для получения фрагментов ДНК, присоединения фрагментов к векторным молекулам, интродуцирования составной молекулы ДНК в клетку хозяина, в которой он может реплицироваться, и селекции клона, обладающего геном-мишенью, из реципиентных клеток хозяина.

Под кДНК подразумевают комплементарную или копийную ДНК, полученную из РНК-матрицы с помощью действия РНКзависимой ДНК-полимеразы (обратная транскриптаза). Таким образом, кДНК-клон представляет собой дуплексную ДНК-последовательность, комплементарную рассматриваемой молекуле РНК, переносимой в клонирующий вектор.

Под кДНК-библиотекой подразумевают коллекцию рекомбинантных молекул ДНК, содержащих кДНК-вставки, которые вместе включают представительные молекулы мРНК, присутствующие в целом организме или ткани, в зависимости от источника РНК-матриц. Такая кДНК-библиотека может быть приготовлена методами, известными специалистам в данной области и описана выше, например, у Машайк с соавт., Мо1еси1аг С1опшд: А ЬаЬота!огу Мапиа1. Обычно, РНК первой выделяют из клеток организма, из генома которого желательно проклонировать отдельный ген. Для целей настоящего изобретения предпочтительными являются клеточные линии млекопитающих, и особенно человека. Альтернативно, РНК может быть выделена из опухолевой клетки, полученной из опухоли животного и, предпочтительно, из опухоли человека. Следовательно, библиотека может быть получена, например, из опухоли надпочечника, но может быть использована любая опухоль.

Термин полиморфизм ДНК, как он используется здесь, относится к состоянию, в котором две или несколько отличающихся нуклеотидных последовательностей могут существовать по отдельному участку в ДНК.

Экспрессирующий вектор включает векторы, которые обеспечивают экспрессию содержащихся в них последовательностей ДНК, т. е. кодирующие последовательности, присоединенные путем сшивки к другим последовательностям, улучшающим их экспрессию. Подразумевается, хотя не всегда точно оговаривается, что эти экспрессирующие векторы должны быть реплицируемыми в хозяйских организмах либо в качестве эписом, либо в качестве неотъемлемой части хромосомной ДНК. Полезно, но не необходимо, чтобы элемент эффективного экспрессирующего вектора был маркером, кодирующим последовательность, которая представляет собой последовательность, кодирующую белок, который имеет своим результатом фенотипические свойства (например, устойчивость к тетрациклину) клеток, содержащих данный белок, который позволяет таким клеткам быть легко идентифицированными. В общем, экспрессирующий вектор представляет собой данное функциональное определение, и любая последовательность ДНК, которая обладает способностью эффективно экспрессировать точно определенный содержащийся код ДНК, включена в данный термин, что применимо к данной указанной последовательности. Такие векторы часто бывают в форме плазмид, поэтому плазмида и экспрессирующий вектор часто взаимозаменяемы. Однако настоящее изобретение подразумевает включение также других форм экспрессирующих векторов, в том числе фагов, которые выполняют эквивалентные функции и которые, время от времени, становятся известны в данной области.

Аналогично, функциональное производное гена любого белка настоящего изобретения подразумевает включение фрагментов, вариантов и аналогов данного гена, который может быть фактически сходным по нуклеотидной последовательности и который кодирует молекулу, обладающую аналогичной активностью.

бЭНТ-родственная молекула подразумевает любую молекулу, которая, как минимум, на 40% гомологична ΟΌΝΡ или неуртурину и обладает способностью специфического связывания КсЛ.

Термин ген означает полинуклеотидную последовательность, кодирующую пептид.

Под гомогенностью подразумевается, при ссылке на пептидную или ДНКпоследовательность, что первичная молекулярная структура (т.е. последовательность аминокислот или нуклеотидов) практически всех молекул рассматриваемой композиции идентична.

Термин олигонуклеотид, как он используется здесь, относится к пробам, олигомерным фрагментам для детектирования, олигомерным контролям, немеченным блокирующим олигомерам и праймерам для амплификации последовательностей, определяемых в качестве молекулы, включающей более чем три дезоксирибонуклеотида или рибонуклеотида. Ее точный размер зависит от многих факторов, которые, в свою очередь, зависят от основной функции или использования данного олигонуклеотида.

Термин проба относится к лиганду с известными характеристиками, способного селективно связываться с антилигандом-мишенью. Применительно к нуклеиновым кислотам, термин проба относится к цепи нуклеиновой кислоты, обладающей последовательностью оснований, комплементарных цепи-мишени.

Рекомбинантные хозяйские клетки относятся к клеткам, которые были трансформированы с помощью векторов, построенных с использованием методик рекомбинантной ДНК. Как здесь указано, антитело или его модификацию получали в рекомбинантной хозяйской клетке посредством этой трансформации в таких небольших количествах, или точнее, в таком малом, чем детектируемые количества, как будто бы его получали в нетрансформированном хозяине.

Как он используется здесь, термин эндонуклеазы рестрикции и ферменты рестрикции относится к бактериальным ферментам, каждый из которых разрезает двухцепочечную ДНК по, или вблизи, специфической нуклеотидной последовательности.

Как он используется здесь, термин полиморфизм длины фрагмента рестрикции (КРЬР) относится к различиям между индивидуумами по длинам отдельного фрагмента рестрикции.

Указанная молекула фактически подобна другой молекуле, если последовательность аминокислот в обеих молекулах фактически одна и та же, и если обе молекулы обладают сходной биологической активностью. Таким образом, если созданные две молекулы обладают сходной активностью, они считаются вариантами в качестве термина, который используется здесь, даже если одна из молекул содержит дополнительные аминокислотные остатки, не обнаруженные в другой молекуле, или если последовательность аминокислотных остатков не идентична. Как она используется здесь, указанная молекула является химическим производным другой молекулы, когда она содержит дополнительные химические составляющие, обычно не являющиеся частью данной молекулы. Такие составляющие могут улучшать молекулярные растворимость, абсорбцию, время биологической полужизни и т.д. Составляющие могут альтернативно уменьшать токсичность данной молекулы, элиминировать или аттенуировать любой нежелательный побочный эффект данной молекулы и т.д. Составляющие, способные опосредовать такие эффекты, раскрыты, например, в Кетшдоп'к Рйагтасеибса1 Заепсек 16'¹' еб., Маск РиЫкЫпд Со., Еак1оп, Репп. (1980).

Под вектором подразумевается молекула ДНК, полученная из плазмиды или бактериофага, в которой могут быть вставлены или клонированы фрагменты ДНК. Вектор будет содержать один или несколько уникальных сайтов рестрикции и может обладать способностью автономно реплицироваться в указанном хозяине или в таком репродуцируемом организмепосреднике, который клонирует последовательность.

Под фактически чистым подразумевается любой белок настоящего изобретения или любой ген, кодирующий такой белок, который по существу свободен, соответственно, от других белков или генов, или от других контаминантов, с которыми он может быть обычно обнаружен в природе и, как таковой, существует в форме, не обнаруживаемой в природе.

Соединения настоящего изобретения

Настоящее изобретение включает кДНК, кодирующую К.е1Ь, такую как нуклеотидную последовательность ге1Ь1-кДНК крысы, неполную гсШ-кДНК человека, полноразмерную ге1Ь1-кДНК человека, те1Е2-кДНК человека, мышиную ге1Ь3-кДНК или ге1Ь3-кДНК человека. Кроме того, соединения настоящего изобретения включают последовательности, которые включают вышеуказанные последовательности или производные этих последовательностей. Настоящее изобретение включает также векторы, липосомы и другие транспортные средства, которые включают одну из этих последовательностей или производное одной из этих последовательностей. Настоящее изобретение включает также белки, транскрибируемые и транслируемые из те1Е1-кДНК крысы, неполной ге1Ь1кДНК человека, полноразмерной те1Е1-кДНК человека, те1Е2-кДНК человека, мышиной те1Ь3кДНК или ге1Ь3-кДНК человека, включающие, но не ограничивающие его, К.е1Ь1 крысы, неполный К.е1Ь1 человека, полноразмерный К.е1Ь1 человека, К.е1Ь2 человека, мышиный К.е1Ь3 или Ке1Е3 человека и их производные и варианты.

Первый вариант настоящего изобретения включает растворимые варианты К.е1Ь. В растворимом варианте отсутствует, как минимум, часть внутримембранного участка нативного К.е1Ь. В некоторых примерах в растворимом варианте отсутствует фосфатидилинозитолгликан, входящий в состав нативного КеТЪ. Растворимые варианты включают фьюжн (слитые) белки, которые охватывают производные КеТЪ, которым недостает фосфатидилинозитоловой части.

Варианты могут отличаться от природного К.е1Ь по аминокислотной последовательности или без участия последовательности, или отличаться двояко. Варианты аминокислотной последовательности получают, когда один или несколько аминокислотных остатков в природном К.е1Ь замещены отличающейся природной аминокислотой, аминокислотным производным или неприродной аминокислотой. Наиболее предпочтительные варианты включают природный КеТЪ или биологически активные фрагменты природного КеТЪ, последовательности которых отличаются от последовательности дикого типа по одной или нескольким консервативным аминокислотным заменам, которые обычно обладают минимальным влиянием на вторичную структуру и гидрофобную природу данного белка или пептида. Варианты могут также обладать последовательностями, которые отличаются по одной или нескольким не консервативным аминокислотным заменам, делециям или инсерциям, которые не нарушают биологическую активность Ке1Ь. Консервативные замены обычно включают замены одной аминокислоты на другую с аналогичными характеристиками, такими как замены в рамках нижеследующих групп: валин, глицин; глицин, аланин; валин, изолейцин; аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота; аспарагин, глутамин; серин, треонин; лизин, аргинин; и фенилаланин, тирозин. Неполярные (гидрофобные) аминокислоты включают аланин, лейцин, изолейцин, валин, пролин, фенилаланин, триптофан и метионин. Полярные нейтральные аминокислоты включают глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин и глутамин. Положительно заряженные (основные) аминокислоты включают аргинин, лизин и гистидин. Негативно заряженные (кислые) аминокислоты включают аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту.

Другие консервативные замены могут быть взяты из нижеприведенной таблицы, а еще одни описаны у ЭауНоГГ в Абак οί Рто1еш 8есщепсе апб 81тис1иге (1988).

Таблица 1. Консервативные аминокислотные замены

Аминокислота	Код	Замена на любую из
Аланин	А	О-.\1а, О1у, Ье1а-А1а, Т-Сук, 0-Сук
Аргинин	К	0-Ага, Тук, 11ото-.\га, О-11ото-.\га, Ме1, 1)-Ме1, 11е, О-11е, От, Ώ-От
Аспарагин	N	О-.\ки, Акр, 0-Акр, О1и, Ο-(ΐ1ιι, О1п, О-О1п
Аспарагиновая кислота	Ώ	0-Акр, Ώ-Акп, Акп, О1и, Ο-(ΐ1ιι, О1п, О-О1п
Цистеин	С	О-Сук, 8-Ме-Сук, Ме1, О-Ме1, ТИг, 0-Т11Г
Глутамин	Ω	О-О1п, Акп, О-.\ки, О1и, О-О1и, Акр, 0-Акр
Глутаминовая кислота	Е	О-О1и, 0-Акр, Акр, Акп, О-.\ки, О1п, О-О1п
Глицин	О	А1а, О-А1а, Рго, Ο-Рго, Ве1а-А1а, Аср
Изолейцин	I	О-11е, Уа1, О-Уа1, Ееи, 0-Реп, Ме1, О-Ме1
Лейцин	ь	0-Реп, Уа1, О-Уа1, Ме1, О-Ме1

Лизин	К	1 )-Ь-, Агд, Ό-Ага, йошо-Агд, ΌЕошо-Агд, Ме1, Ό-МеГ, 11е, 1)-11е, 0т, Ό-0γπ
Метионин	М	1)-Ме1, 8-Ме-Суз, 11е, 1)-11е, Ьеи, ΌЬеи, \ а1, 1)-\а1, \ог1еи
Фенилаланин	Г	1)-Р11е, Туг, 1)-Т11г, [-Пора, Ηίδ, ΌΗίδ, Тгр, О-Тгр, транс 3,4 или 5фенилпролин, цис 3,4 или 5фенилпролин
Пролин	Р	Ό-Рго, Ь-1-тиоазолидин-4карбоновая кислота, Ό- или Ι.-1оксазолидин-4-карбоновая кислота
Серин	8	1)-8ег, Т11Г, 1)-Т11г, а11о-Т11г, Ме1, Ό- Ме1, Ме1(0), 0-Ме1(0), ναΐ, Ό-να1
Треонин	Т	1)-Т11г, 8ег, 1)-8ег, а11о-Т11г, Ме1, Ό- Ме1, Ме1(0), 0-Ме1(0), ναΐ, Ό-να1
Тирозин	Υ	Ό-Туг, Р11е, Ό-РНе, [.-Пора, Ηίδ, Ό- Ηίδ
Валин	V	О^а1, Ьеи, Ό-Ьеи, 11е, Ό-Пе, Ме1, Ό-МеГ

Другие варианты в настоящем изобретении представляют собой варианты с модификациями, которые повышают стабильность пептида. Такие варианты могут, например, содержать один или несколько непептидных связей (которые замещают пептидные связи) в данной пептидной последовательности. Включенными также являются: варианты, которые включают остатки иные, чем природные Ь-аминокислоты, такие как Ό-аминокислоты, или не встречающиеся в природе или синтетические аминокислоты, такие как бета- или гамма-аминокислоты и циклические варианты. Включение Ό- вместо Ь-аминокислот в данный полипептид может повышать его устойчивость к протеазам. См., например, патент США 5 219 990.

Пептиды данного изобретения могут быть также модифицированы различными изменениями, такими как инсерции, делеции и замещения, консервативными или неконсервативными, где такие изменения могут создавать определенные преимущества в их использовании. В настоящее изобретение отдельно включены варианты сплайсинга.

В дополнение к фактически полноразмерным полипептидам в настоящем изобретении создали биологически активные фрагменты этих полипептидов. ВеШ-полипептид или фрагмент биологически активен, если он проявляет биологическую активность природного Ве1Ь. Такая биологическая активность включает способность к специфическому связыванию внеклеточного участка Ве1Ь, которая составляет, как минимум, 50% или, по крайней мере, равна по сродству природному Ве1Ь с внеклеточным участком Ве1. Другая биологическая активность заключается в способности связываться с антителом к эпитопу, который присутствует в природном ВеШ.

В других вариантах осуществления настоящего изобретения, вариантах с аминокислотными заменами, которые менее консервативны, можно также получать желаемые производные, например, вызывая изменения в заряде, конформации и других биологических свойствах. Такие замены должны были бы включать, к примеру, замещение гидрофильного остатка на гидрофобный остаток, замещение цистеина или пролина другим остатком, замещение остатка, обладающего малой боковой цепью, на остаток, обладающий объемной боковой цепью, замещение остатка, обладающего суммарным положительным зарядом, на остаток, обладающий суммарным отрицательным зарядом. Когда результат данного замещения невозможно предсказать с уверенностью, полученные производные можно легко проанализировать в соответствии с методами, описанными здесь, для определения наличия или отсутствия желаемых характеристик.

Вообще, замены, которые могут, предположительно, вызывать изменения в функциональных свойствах Ве1-полипептидов, представляют собой замены, в которых: (ί) гидрофильный остаток, например, серин или треонин, замещен гидрофобным остатком, например, лейцином, изолейцином, фенилаланином или аланином; (ίί) цистеиновый остаток замещен на любой другой остаток; (ίίί) остаток, обладающий электроположительной боковой цепью, например, лизин, аргинин или гистидин, замещен на остаток, обладающий электроотрицательным зарядом, например, глутаминовая кислота или аспарагиновая кислота; или (ίν) остаток, обладающий объемной боковой цепью, например, фенилаланин замещен на остаток, не обладающий такой боковой цепью, например, глицин.

Варианты в рамках объема настоящего изобретения включают белки или пептиды с аминокислотными последовательностями, обладающие, по крайней мере, шестьюдесятью процентами гомологии с Ве1Ь1 крысы (8ЕО 1Б N0:2), неполным Ве1Ь1 человека (8Е0 Ш N0:9), полноразмерным Ве1Ь1 человека (8Е0 1Б N0:11), Ве1Ь2 человека (8ЕО ГО N0:13), Ве1Ь3 мыши (8Е0 ГО N0:17), неполным Ве1Ь3 человека (8Е0 ГО N0:19) или Ве1Ь3 человека (8Е0 ГО N0:21). Более предпочтительна последовательность с гомологией, по крайней мере, восемьдесят, по крайней мере, девяносто процентов, или, по крайней мере, девяносто пять процентов. Для целей определения гомологии, длина сравниваемых последовательностей должна обычно составлять, по крайней мере, 8 аминокислотных остатков, обычно, по крайней мере, 20 аминокислотных остатков. Варианты соединений настоящего изобретения включают также любой белок, который 1) обладает аминокислотной последовательностью, которая, по крайней мере, на 40 процентов гомологична белку Ве1Ь настоящего изобретения, и у которого также 2) после оптимального выстраивания с ВеШ-последовательностью (как изображено для Ве1Ь1 и Ве1Ь2 на фиг. 8) местоположение, по крайней мере, 80% цистеиновых остатков соот15 ветствует цистеинам белка Ке1Ь настоящего изобретения.

Поскольку представляется возможным заменить заместители данного остова, то можно заменить функциональные группы, которые связаны с остовом, на группы с аналогичными свойствами. Такие модификации не изменяют первичную последовательность. Изначально они должны быть консервативными, т. е. замещающая группа должна обладать, приблизительно, тем же размером, формой, гидрофобностью и зарядом, что и исходная группа. Модификации не последовательности могут включать, например, ίη νίνο или ίη νίίτο химически произведенные части природного К.е1Ь, а также изменения в ацетилировании, метилировании, фосфорилировании, карбоксилировании или гликозилировании.

В рамки настоящего изобретения включены также агенты, которые специфически связываются с белком настоящего изобретения или с фрагментом такого белка. Эти агенты включают 1д слитые белки и антитела (в том числе, одноцепочечные, двухцепочечные, РаЬ-фрагменты и другие, или природные, или человеческие, или от приматов, или химерные). Дополнительные описания агентов этих категорий находятся в РСТ-заявке 95/16709, описание которой включено здесь путем ссылки.

Методика эксперимента

Общее представление о способе

Общий прием, используемый для клонирования Ке1Ь1. показан на фиг. 4 А и 4В. Наш подход основан на той предпосылке, что, по крайней мере, К.е1Ь экспрессируется в метанефрогенной мезенхиме развивающейся почки в виде мембранного белка (хотя представляется возможным, что данный лиганд экспрессируется также в растворимой форме; фиг. 4А). Ве1Ь взаимодействует в эмбриональной клетке мочеточника с Ке!-рецептором, активирующим ее тирозинкиназный цитоплазматический домен и посылающим сигнал в ядро, которое, в свою очередь, активирует гены, вовлеченные в рост и ветвление мочеточниковой почки. Поэтому белки, содержащие внеклеточный домен Не!, слитые либо с Е_с-частью человеческого иммуноглобулина 01 (1дО1), либо со щелочной фосфатазой (АР), могут использоваться как часть подхода к клонированию Ке1Ь, как показано на фиг. 4В. Слитые белки, экспрессируемые библиотеки и другие реагенты, используемые для клонирования Ке1Ь1. описаны ниже.

Сначала выделили кДНК для крысиного Ке1Ь1 и затем использовали ее в качестве пробы для выделения кДНК человеческого Ке1Ь1. кДНК последовательно выделяли для К.е1Ь2 и КеГОЗ.

Получение реагентов, необходимых для прямой экспрессии клонированных Ке!лигандов

1. Выделение кДНК, кодирующей крысиный внеклеточный домен Не!.

Чтобы идентифицировать Ке1Ь1, получали слитые белки, состоящие из внеклеточных доменов либо крысиного, либо человеческого Не!, сливаемого с белком, в одном примере - с Р_счастью 1дС1 человека, а в другом примере - со щелочной фосфатазой. Оба слитых белка можно легко проанализировать при анализе клеток, которые экспрессируют данный лиганд, как проиллюстрировано на фиг. 4В.

Так как кДНК, кодирующая крысиный Не!, никогда не была описана, была выделена кДНК, кодирующая внеклеточный домен крысиного Ке!-рецептора с использованием метода Полимеразной Цепной Реакции с Обратной Транскриптазой (КТ-РСК). Две нуклеотидные последовательности для ге! человека (ОепЬапк, каталожные номера М57464 и Х15262) и мыши (ОепЬапк, каталожный номер Х67812) сравнили и создали олигонуклеотидные праймеры из высокоидентичных областей между двумя последовательностями. Смысловой олигомер, названный ΚίΗ-013 (8ЕЦ ГО N0:3; содержит нуклеотиды 150-169 последовательности Х15262 из ОепЬапк), выбрали с 5'-конца ге!-кДНК-последовательности человека, перекрывающей инициаторный кодон АТС. Он включает нуклеотиды на ее 5'-конце, кодирующие сайт рестрикции Νο!1 для целей клонирования. Антисмысловые олигомеры, названные Κίό-014 (8ЕЦ ГО N0:4; содержит комплементарные последовательности М57464 из ОепЬапк нуклеотиды 1819-1839,) и ΚίΗ-015 (8Е0 ГО N0:5, содержат комплементарные последовательности Х67812 из ОепЬапк нуклеотиды 1894-1914), выбраны, соответственно, из человеческой и мышиной кДНКпоследовательностей, непосредственно примыкающих к 5' -концу последовательности, которая кодирует трансмембранные домены. Олигомеры 166-014 и к1б-015 содержат дополнительные нуклеотиды на своих 5'-концах, которые кодируют сайт рестрикции 8а11 для целей клонирования.

Общую РНК выделяли из 1 4-дневной эмбриональной крысиной почки, мРНК выделяли очисткой, используя олиго-бТ-хроматографию. мРНК превращали в кДНК, используя АМУ обратную транскриптазу, и данную кДНК преобразовывали в двухцепочечную кДНК и амплифицировали с использованием Тас.|полимеразы в стандартной полимеразной цепной реакции с олигомерами 166-013 и 166-015. Синтез 1942 п.н. фрагмента РСК подтверждали электрофорезом аликвот РСК в 1%-ном агарозном геле. Остальной РСК-фрагмент подвергали гидролизу с помощью Νο!1 и 8а11 и клонировали в р8АВ132, предварительно гидролизованную также Νο!1 и 8а11. Полученную плазмиду назвали р1С011. Полную вставку плазмиды р1С011, содержащуюся между сайтами Νο!1 и 8а11, секвенировали и показали в качестве вне17 клеточной крысиной те!-кДНК, 8ЕЭ ΙΌ N0: 6. Трансляция этой последовательности обнаруживает пептидную последовательность (8ЕЭ ΙΌ N0:7) внеклеточного крысиного Ке!. Вследствие того, что олигомеры для РСК были выбраны из человеческой и мышиной последовательностей те!, представляется возможным, что данная нуклеотидная последовательность, показанная в качестве внеклеточной крысиной те!-кДНК, и пептидная последовательность, показанная в качестве внеклеточной крысиной Ке!, могут отличаться от природной крысиной ге!нуклеотидной и Ке1-пептидной последовательностей в областях последовательностей 166-013 и 166-015. Впоследствии те!-кДНК клонировали и выделяли из кДНК-библиотеки почки 18дневного крысиного эмбриона и наблюдали несколько нуклеотидных замен в праймерных областях, приводящих к двум аминокислотным заменам. Одна замена находится в сигнальной последовательности (аргинин в позиции 5 на треонин) и одна замена находится вблизи конца внеклеточного домена (глутаминовая кислота в позиции 633 на аланин). Обе эти замены не должны влиять на лигандное связывание.

2. Слитые белки Ке!/1дС.

Получали фьюжн белки, состоящие из внеклеточных доменов крысиного (аминокислотные остатки #1-637) и человеческого (аминокислотные остатки #1-636) Ке1-рецепторов, сливали с Е_с-фрагментом человеческого 1дС1.

Конструкцию данных плазмид использовали для экспрессии крысиного слитого белка Ке1/1дС, схематически показанного на фиг. 5. Для того, чтобы сконструировать ген, кодирующий крысиный слитый белок Ре1/1дС, обработали р1С011 (описанную выше), содержащую крысиный внутриклеточный домен Ке!, с помощью 8а11 и лигировали его с 700 п.н. 8а11фрагментом из плазмиды 2-4, чтобы создать плазмиду р1С012. Данный 8а11-фрагмент содержит часть Е_с-домена человеческого 1дС. первоначально полученного из плазмиды р8ЛВ144. Плазмиду 2-4 создали ранее путем трехлинейного лигирования: №11-8а11-фрагмента, полученного с помощью РСК, содержащего внеклеточный домен кроличьего рецептора ТСЕ-Ье1а тип II; 693 п.н. 8а11-№11-фрагмента из р8ЛВ144, содержащую часть Е_с-домена человеческого 1§С1; и р8ЛВ132, обработанную Νο!1. Как показано на фиг. 5, фрагмент, содержащий Ес-домен, может быть высвобожден из плазмиды 2-4 в виде 700 п.н. 8а11-фрагмента. р1С012 трансфецировали в СО8-клетки и крысиный слитый белок Ке1/1дС выделяли через 48 ч хроматографией на белок-А-Сефарозе. Для того, чтобы создать устойчивую клеточную линию, продуцирующую крысиный Ке1/1дС-белок, 2612 п.н. ΝοΠ-фрагмент из р1С012, содержащий полный крысиный слитый белок Ке1/1дС, выделяли и клонировали в Νοί 1-сайт экспрессирующего вектора рМОК901. Результирующую плазмиду назвали р1С022. Плазмиду р1С022 трансфецировали в СНО-клетки с получением стабильных клеточных линий. Наиболее продуктивную клеточную линию адаптировали для суспензии. Типичные выходы крысиного Ке1/1§С составили в СНО-линии 75 мг/л.

Конструкции плазмид, используемых для экспрессии человеческого слитого белка Ке1/1дС, показаны схематически на фиг. 6. Для того, чтобы сконструировать ген, кодирующий человеческий слитый белок Ке1/1дС, получали плазмиду, содержащую кДНК, кодирующую человеческий Ке1-рецептор, от Ότ. М. ТакайакЫ (Эераг1теп1 о£ Ра!йо1оду, №щоуа Ишуегайу, 8сйоо1 о£ Мебкше, №§оуа, Япония). РСКфрагмент получали из этой плазмиды с использованием олигомеров 166-013 и 166-014. Полученный РСК-фрагмент обрабатывали фрагментом Клёнова с последующей обработкой №!1, чтобы получить РСК-фрагмент с одним липким №11 -концом и одним тупым концом. Этот фрагмент клонировали в вектор рСЕМ117С(+), предварительно гидролизованный ЕсоК1, обработанный с фрагментом Клёнова и гидролизованный №!1, чтобы получить один липкий №11 -конец и один тупой конец. Результирующую плазмиду назвали р1С013. 1916 п.н. №!18а11-фрагмент выделяли из р1С013 после полного гидролиза №!1 и частичного гидролиза 8а11 и лигировали с 693 п.н. 8а11-№!1 -фрагментом из р8АВ144, содержащем Е_с-домен человеческого 1дС1, с экспрессирующим вектором р8АВ132, гидролизованным №!1.

Результирующую плазмиду назвали р1С015. Вставку в плазмиде р1С013 секвенировали и обнаружили единственную нуклеотидную замену, которая изменяет одну аминокислоту во внеклеточном домене человеческого Ке! (СеиЬаик, последовательность М57464 обладает С в позиции 812, тогда как р1С013 обладает Т в соответствующей позиции; это приводит к изменению аминокислот с аланина на валин в положении 294 Ке1-белковой последовательности человека). Этот нуклеотид исправляли обратно на С-остаток, описанный в Сеийапк-последовательности М57464, с помощью сайт-специфического мутагенеза плазмиды р1С013, получая плазмиду р1С023. 585 п.н. фрагмент В81Е2 выделяли из р1С023, содержащей восстановленную нуклеотидную последовательность, и клонировали в плазмиду р1С015, из которой был удален 585 п.н. фрагмент В§1Е2, содержащий вариантный нуклеотид. Новую плазмиду назвали р1С024. Из р1С024, содержащей полный слитый белок Ке1/1дС человека, выделяли 2609 п.н. фрагмент №!1 и клонировали в ΝοΠ-сайт экспрессирующего вектора рМЭК901. Результирующую плазмиду назвали р1С025. Плазмиду р1С025 трансфецировали в СНО-клетки для получения стабильных клеточных линий. Клеточную линию с наивысшей продуктивностью адаптировали к росту в суспензии. Обычные выходы СНО-линии с человеческим Ке1/1дС составляют 6 мг/л.

Дополнительные детали получения векторов, используемых в методах настоящего изобретения даны в РСТ-заявках 94/01456 и 92/02050, описание которых приведено здесь путем ссылки.

3. Биоактивность слитых белков Рс1/1дС.

Для того, чтобы определить, обладают ли полученные слитые белки Рс1/1дС биоактивностью и, следовательно, могут ли быть хорошими скринирующими реагентами для клонирования Рс1Б. провели несколько анализов органной культуры на биоактивность. Анализ данной органной культуры состоит из 13-14-дневного выращивания эмбриональных крысиных почек в органной культуре в течение 3-5 дней в присутствии слитого белка Ке!/1д в концентрации 50 ид/мл. Почки культивировали в присутствии ЬЕА-3Т1Р/1дС или в буфере для клонирования. После культивирования некоторые из почек окрашивали флуоресцентным лектином Όο1ίсйок ΒίΠοΓίΐδ Адд1и11П1п (ΌΒ-лектин), который окрашивает ткани собирательного канала, эпителиальные клетки которого произведены из эмбрионального мочеточника. Эти ΌΒпозитивные клетки метят КсРпозитивные клетки, поскольку Ке! экспрессируется в эмбриональном мочеточнике и его эпителиальных производных. Это высоко оценивает слитый белок Ке1/1дС в росте и развитии эмбриональной почки. Существует четкое отличие в морфологии и росте собирающего канала между почками, которые культивировали с БЕА-3Т1Р и почками, которые культивировали со слитым белком Ке1/1дС крысы. Почки, обработанные Ке1/1дС. обладают собирающими каналами, которые показывают существенно меньшее ветвление и обычно меньше в целом.

Из других почек получали парафиновые срезы для гистологического исследования. Эмбриональные почки обрабатывали контрольным буфером или буфером с Ке1/1дС. затем окрашивали гематоксилином и эозином. Эмбриональная почка, обработанная Ке1/1дС. проявляет меньшее ветвление собирающих каналов, чем эмбриональные почки, обработанные контрольным буфером. Кроме того, почки, обработанные Ке1/1дС. обладают немногочисленными трубочками. Этот эффект наблюдали также с человеческим слитым белком Ке1/1дС. Эти наблюдения согласуются с наблюдением в отношении слитых белков, блокирующих индуктивный сигнал между мезенхимой и мочеточниковой почкой. По этой причине можно утверждать, что данный слитый белок представляет собой хороший реагент для клонирования КеШ.

4. Слитый белок Рс1/щелочная фосфатаза.

Слитые белки рецептор/щелочная фосфатаза (АР) с успехом использовали, чтобы идентифицировать и клонировать лиганды для с-кй (Се11 63:185, 1990), лиганды для членов ер!1- семейства огрйаи-рецепторов (Се11 79:157, 1994) и, в последнее время, для клонирования рецептора для лептина, продукта оЬ-гена (Се11 83:1263, 1995). Конструировали плазмиды, кодирующие слитый белок, и производили крысиный КеЕАР-белок в СО8-7 клетках на клеточных фабриках. Впоследствии получали стабильную клеточную линию ΝΙΗ3Τ3, экспрессирующую, в среднем, 10 мг/л слитого белка. δΌδ-РАбЕ-анализ крысиного белка Ке1/АР свидетельствует, что его размер согласуется с предсказанным молекулярным весом, а анализ гельфильтрации свидетельствует, что он производится в виде димера. Неполную очистку осуществляли с помощью аффинной хроматографии на колонке с апБ-АР.

5. Антитела апИ-Ке!.

Получали кроличьи поликлональные антитела к крысиному слитому белку Ке1/1дС. Полученное антитело работает в Вестерн-блотах, ЕАС8-анализе Ке!-положительных клеточных линий и в иммуногистохимических срезах эмбриональной почки.

Получали панель антител хомячка к крысиным Ке!-моноклональным антителам. Крысиный Ке1/1дС-слитый белок, присоединенный к белку А Сефарозы, использовали для иммунизации Армянских хомячков. Получили 316 клонов после слияния и скринирования их способности связывать крысиные Ке1-слитые белки и человеческий 1дС в ЕЬ18А-анализе. 11 клонов продуцировали антитела, которые связывались только с крысиными Ке1/1дС (и крысиными Ке/АР), но не с человеческим 1д6. Перекрестную реакцию с человеческим Ре! анализировали с помощью ЕАС8; получили четыре клона антител, которые могут связываться с Ке!положительной человеческой клеточной линией ТНР-1 . Нижеследующая таблица суммирует Ке!-связывающие свойства двенадцати моноклональных антител.

Клон	ЕЫ8А Ке!/1д крысы	ЕАС8 ТНР-1 человека
АА.ЕЕ9.5	+	-
АА.НЕ3.7	+	+
АЕ.Е9.5	+
ВА.В1.16	+
ВВ.В6	+
АА.СЕ7.3	+
СИ.Е11.2	+
АН.Е3.11	+	+
СИ.64.2	+	+
А6.Е7.9	+	-
ΒΌ.66	+	+
ΒΗ.68	-	-

6. Экспрессионные библиотеки кДНК.

Получали кДНК-библиотеки из эмбриональной почки крысы, одну - в СИМ8-вектор, который использует 8У40-опдш для амплифи21 кации, и одну - в модифицированный Уйтодепвектор, рСЕР4, который использует ЕВУ-ойдш для амплификации. Этот модифицированный вектор, СН269, обладал удаленной генной последовательностью ΕΒΝΑ-1. Белок ΕΒΝΑ-1 взаимодействует с ЕВУ-ойдш, но данный ген не нуждается в векторе, когда используются клетки, которые стабильно экспрессируют ΕΒΝΑбелок. Библиотека в СБ М8-векторе содержит 1,5 х 10⁶ клонов со средним размером вставки 1,18 т.п.н., а библиотека в СН269-векторе содержит, приблизительно, 1 х 10⁶ клонов со средним размером вставки 1,5 т.п.н.

Экспрессия клонируемого Ре! лиганда Ре!Ь1

А. Клонирование лиганда Ре!Ь1 крысой Ре!.

1. Начальные попытки экспрессии клонирующего Ре! лиганда Ре!Ь1.

Для клонирования Ре!Ь1 был испробован ряд методов прямой экспрессии. Все эти методы основаны на концепции, проиллюстрированной на фиг. 4В. кДНК из кДНК-библиотеки интродуцировали в клетки млекопитающих, клетки, которые приобретали Ре!Ь1, могли быть идентифицированы с использованием Ре!-слитых белков. Несмотря на то, что три методики, описанные ниже, оказались безуспешными, были получены важные знание и заключение специалистов, которые были учтены в последующем подходе, которого ждал успех.

а. Метод иммобилизации Ре!/1дО на пластинках - Использовали крысиный слитый белок Ре!/1дО в попытке выделить Ре!Ь1 путем прямого экспрессионного клонирования, применяя метод иммобилизации на пластинках (Атийо апб 8ееб. Ргос. №111. Асаб. δει. 84:87538757 (1987)). На 18-й день эмбрионального развития крысиной почки кДНК-библиотеку использовали в СЭМ8 для осуществления попытки метода панорамирования. кДНК, сведенные воедино из данной библиотеки (5000 - 10000 кДНК на пул), интродуцировали в СО8-клетки с применением БЕАЕ-декстранового метода. Через 48 ч эти клетки удаляли из чашек с помощью ЭДТА, инкубировали со слитым белком и затем помещали на чашки, покрытые антителом к человеческому 1дС|. ДНК извлекали из клеток, которые прилипали, трансформировали обратно в Е. сой и затем выделяли для второго цикла иммобилизации на пластинках. Невозможно было увидеть какие-либо связанные клетки после третьего цикла иммобилизации на пластинках и были получены очень немногие клоны после обратной трансформации Ηίή-ДНК в Е. сой. УСАМ-кДНК, используемая в сочетании с анти-УСАМ моноклональным антителом в качестве положительного контроля, можно разводить в соотношении 1:100 и все еще детектировать, что свидетельствует о том, что размеры предлагаемого пула, вероятно, слишком велики. Анализ некоторых клонов, которые получали после второго цикла иммобилизации на пласти нах, свидетельствует о том, что данные клоны подвергались перестройке и делеции.

b. Препаративный ЕАС8-метод для Ре!/1дО - 80000 клонов кДНК из библиотеки 18-дневной крысиной почки (СБМ8-вектор) интродуцировали в СО δ 7-клетки и подвергали препаративному ЕАС8 с использованием крысиного белка Ре!/1дО с последующим флуоресцентным меченьем вторичного антитела. Собирали 0,5% и 0,9% верхних флуоресцирующих клеток и извлекали плазмидную ДНК с помощью Ηίήлизиса. Полученную ДНК электропорировали обратно в Е. сой; получали 228 клонов для 0,5%-го пула и 752 клона для 0,9%-го пула. Из полученных бактериальных клонов извлекали ДНК и осуществляли второй цикл препаративного ЕАС8. В конце второго цикла из бактериальных клонов извлекали и анализировали плазмиды и обнаруживали, что они содержат много делеций и перестроек.

c. Способ колориметрической детекции с помощью Ре!/АР -Клетки СО8 трансфецировали 400 пулами кДНК-клонов (1000 клонов на пул) от 18-дневной кДНК-библиотеки эмбриональной почки (СБМ8-вектор) и окрашивали с помощью белка Ре!/АР и колориметрического субстрата щелочной фосфатазы. Полученные трансфецированные клетки обследовали под микроскопом на позитивные сигналы. В одном из экспериментов повторно проанализировали пять потенциальных позитивов, но все они оказались отрицательными.

В качестве контроля для белка Ре!/АР получали белок УСАМ/АР путем слияния первых двух доменов УСАМ человека с Ν-концом АР из плаценты. (УСАМ связан с интегрином УЪА4, который составлен из двух цепей, альфа4 и бета-1). Временные трансфекции СО8клеток образуют достаточно белка УСАМ/АР для контрольных экспериментов. Белок УСАМ/АР сравнивали с УСАМДдО, непосредственно присоединенным к АР, а к УСАМДдО плюс АР присоединяли вторичное антитело, чтобы проанализировать их способность детектировать УБА4 в СО8-клетках, трансфецированных цепью альфа-4 кДНК (СО8-клетки уже экспрессируют цепь бета-1 ). Полученные результаты демонстрируют, что несмотря на то, что белок УСАМ/АР мог бы детектировать УБА4 в трансфецированных клетках, лучшую детекцию обнаруживает белок УСАМДдО в сочетании с АР-присоединенным вторичным антителом.

б. Методологические выводы.

На основании этих первоначальных попыток клонирования выявляются три основных вывода.

1) Методы, которые необходимы для получения в последовательных циклах плазмидной ДНК (т.е. иммобилизирующий и препаративный ЕАС8) непригодны, когда распространенность кДНК-мишени является низкой, вследствие перестроек и делений, которые происходят во время этих последовательных циклов. Из-за низкой экспрессии Ке! имеется веское основание подозревать, что экспрессия Ке!Ь1 также является низкой. Предпочтительный подход заключается в трансфекции пулов и использовании метода детекции, который позволяет идентифицировать позитивный пул. Исходный пул может быть затем разбит без необходимости получения временной экспрессии ДНК из трансфецированных клеток.

2) Белок Ке1/1дС при присоединении ко вторичному реагенту обладает лучшей детектирующей способностью, нежели белок Ке!/ЛР.

3) Контрольные эксперименты с контрольным белком УСАМЛдб (и АР-присоединенным вторичным антителом) и альфа-4 интегриновой кДНК (разбавленной в СИМ8-векторе и трансфецированной в СО8-клетках) свидетельствуют, что предлагаемая детекционная способность составляет один на тысячу (т.е. размер пула не может превышать 1000 клонов). Для достижения повышенного уровня чувствительности был заменен вектор, основанный на 8У-опдт (экспрессируемый в СО8-клетках), на вектор, основанный на ЕВУ-опдт (экспрессируемый в ΕΒΝΑ-положительных клеточных линиях). Векторы на основе ЕВУ-опдт сохраняются в качестве эписом и не так токсичны для клеток после амплификации, как векторы на основе 8У40опдт. Имеются существенные доказательства того, что гены могут экспрессироваться в наибольшей мере в этих векторах и что кДНК могут быть разбавлены много больше (т.е. до 1 к 80000) и все еще детектироваться.

2. Скринирование пулов из кДНКбиблиотек, основанных на ЕВУ-ориджине.

Были скринированы пулы клонов из кДНК-библиотек (вектор СН269 с ЕВУ-опдт) 18-дневной эмбриональной почки крысы со слитым крысиным белком Ке1/1дС. В первом эксперименте получили 256 пулов, содержащих, каждый, 5000 клонов из данной библиотеки. Коротко, аликвоты кДНК-библиотеки титровали, размещали 5000 клеток (на 256 чашках) и выращивали в течение ночи. Полученные колонии соскабливали в среду: часть культуры использовали для образования глицеринового стока для пула (сохраняемого при -70), а часть использовали для выделения плазмид. ДНК из 256 пулов индивидуально трансфецировали в 293/ЕВNА-клетки (8 Х 10⁵ на 60 мм чашку), применяя метод липофекции. Через 48 ч эти клетки промывали два раза НВНА-буфером (0,5 мг/мл ΒδΑ, 0,1% ΝαΝ₃, 20 мл НЕРЕ8 (рН 7,0)) и инкубировали с 20 ид/мл крысиного Ке1/1дС в Трис-солевом буфере плюс 1 мМ МдС1₂ и СаС1₂) в течение 60-90 мин при комнатной температуре. После этой инкубации клетки промывали четыре раза НВНА-буфером и затем фиксировали с помощью 60% ацетона/3% формальдегида/20 мМ НЕРЕ8 (рН 7,0) в течение 30

с. После двух промывок ΗΒδ-буфером (150 мМ №С1, 20 мМ НЕРЕ8 (рН 7,0)) эти клетки инкубировали с АР-конъюгированным вторичным антителом (козьи антитела к Ес-гаммаспецифичному (ЕаЬ')₂ анти-1д6 человека (1асккоп 1ттипо Кекеагск ЬаЬогаЛпек; са!а1од # 109056-098; разведение 1:5000 в Трис-солевом буфере плюс 1 мМ МдС1₂ и СаС1₂ в течение 60 мин при комнатной температуре. Затем эти клетки дважды промывали ΗΒδ-буфером и дважды с АР-субстратным буфером (100 мМ Трис-НС1 (рН 9,5), 100 мМ №С1, 5 мМ МдС1₂), содержащем 2Х Р1егсе 1ттипо Риге^К РНохркйаю §ирргеюог (№ по каталогу 35002). Последнюю промывку оставляли на 15 мин. Затем в АРсубстратный буфер, содержащий указанный АРингибитор Р1егсе, вносили АР-субстраты ΝΒΤ (0,33 мг/мл) и ВС1Р (0,17 мг/мл) и инкубировали с клетками в течение 5-20 мин. Затем чашки дважды промывали водой. После этого эти чашки просматривали под препаровальным микроскопом на наличие пурпурно окрашенных клеток.

При первичном просмотре из 256 пулов идентифицировали 17 позитивных пулов. ДНК из каждого позитивного пула ретрансфецировали в 293/ЕВНА-клетки и повторяли вышеуказанную процедуру вместе с некоторыми дополнительными контрольными экспериментами для подтверждения того, что наблюдаемое окрашивание является Ке1/1дС -специфичным. 10 из 17 позитивных клонов демонстрируют окрашивание только со слитым белком Ке1/1дС. но не с другим 1д6-слитым белком.

3. Разбиение пула #230.

В качестве примера один из вышеописанных позитивных пулов, обозначенный #230, разбивали на небольшие субпулы для того, чтобы идентифицировать кДНК в рамках данного пула, который обеспечивает связывание со слитым белком Ке1/1дС. 600 клеток из глицеринового стока пула #230 помещали на чашки (10 раз) и выращивали (10 раз) в течение ночи. Колонии этих чашек соскребали в среду: одну десятую полученной культуры использовали для получения глицеринового стока, а остальную порцию использовали для получения ДНК. Десять субпулов из 600 клонов обозначили от 2301А до 230-5А и от 230-1В до 230-5В. ДНК из этих пулов трансфецировали в клетки 293/ΕΒΝΑ и повторяли вышеописанную процедуру по окрашиванию со слитым белком Ке1/1дС. При окрашивании с Ве1/1д6-белком один субпул #230 оказался позитивным.

Пул #230-5А дополнительно разбивали, чтобы идентифицировать кДНК этого субпула, обеспечивающего связывание с Ве1/1д6-слитым белком. Клетки данного глицеринового стока помещали на чашки и выращивали в течение ночи. Колонии отбирали в лунки семи 96луночных ВюЫоскк® и растили в течение ночи. Из каждого 96-луночного Биоблока получали 4 пула из 20 клонов и 1 пул из 16 клонов. Таким образом получали 35 пулов из семи ВюЫоскк®. обозначенных от 230-5А-71 до 230-5А-105. ДНК получали от каждого из этих пулов и трансфецировали в клетки 293/ЕВNΑ и повторно анализировали со слитым белком Ве1/1дС. как описано выше. Пул #230-5А-86 оказался позитивным.

Пул #230-5А-86 разбивали путем возвращения в указанный Биоблок и идентифицировали 20 клонов, которые смешивали для создания этого пула. Получали ДНК из всех двадцати клонов и индивидуально трансфецировали в клетки 293/ЕВNΑ и повторно анализировали на Ве1/1дС. как описано выше. Обнаружили, что пул #230-5А-86-17 оказался позитивным.

4. Характеристика клона #230-5А-86-17.

Клон #230-5А-86-17 (называемый ге1Ь-17 или клон 17 и депонированный в АТСС № 98047) дополнительно анализировали путем ДНК-секвенирования. Полная нуклеотидная последовательность вставки этого клона представляет собой 8ЕО ГО N0:1 (кДНК ге1Ь1 крысы). и часть данной нуклеотидной последовательности показана на фиг. 1. В рамках этой нуклеотидной последовательности обнаружили открытую рамку считывания, кодирующую белок из 468 аминокислот (крысиный Ве1Ь1). Предсказываемый белок обладает сигнальной последовательностью с предсказываемым расщеплением после аминокислоты 24 (Уоп Неупе с соавт., №с1. Ас1й Век. 14:14683 (1986)). Гидрофобный С-конец указывает, что данный белок может быть присоединен к клетке через фосфатидилинозитол-гликановую связь. Имеется три предсказываемых Ν-сцепленных сайта гликозилирования. Эти свойства согласуются со свойствами, прогнозируемыми для лиганда Ве!.

Можно экспрессировать растворимые формы крысиного Ве1Ь1-белка с помощью усечения гена до гидрофобного С-конца. Например, это можно было бы осуществить путем усечения после Лизина 435 (крысиный Ве1Ь1). Усечение выше этой аминокислоты должно было бы привести к экспрессии растворимой формы крысиного ВеВ1-белка. Данный растворимый крысиный ВеВ1-белок может быть экспрессирован один или в виде неполно слитого с человеческим иммуноглобулином, гистидиновой метки или небольшого эпитопа, который распознается антителом.

В. Клонирование человеческого Ве!лиганда Ве1Ь1.

кДНК-библиотеку эмбриональной почки человека в векторе лямбда-д110 приобретали у С1оп1ес11 (№ по каталогу НБ5004А). Один миллион бляшкообразующих единиц из фагового штамма помещали в 10 чашек Nиηс™. Реплики фаговых бляшек осуществляли на фильтрах 8сЫе1сйег апЙ 8сйие11 0р1йгап™.

Пробу получали путем гидролиза плазмиды крысиного Ве1Ь1 ферментом рестрикции

РуиП с последующим выделением в агарозном геле 1.34 т.п. н. фрагмента, который соответствует 242-1582 нуклеотидной последовательности Ве1Ь крысы (геВ 1 -кДНК крысы).

Эту кодирующую область пробы метили Р³² путем случайного праймирования (БетЬегд апЙ Уоде1к!еш. Апа1. Вюсйет. 137:266267.1984). Эти фильтры гибридизовали в течение ночи в 300 мл буфера Р8В (50 мМ Трис рН 7.5. 1 М №С1. 0.1% натрийпирофосфат, 0.2% РУР и 0.2% Фиккола), содержащего 10% декстрансульфата, 100 ид/мл (ВИА и 6.7 X 10⁷ СРМ крысиной пробы, при 55°С. Их дважды промывали буфером для скрининга бляшек и дважды с 2Х88С/1% 8Ό8 при 55°С и экспонировали на пленке при -70°С с усиливающим экраном.

Позитивные реплики переносили из исходных чашек в 8М (100 мМ №С1. 10 мМ 80₄. 50 мМ Трис рН 7.5) плюс желатин. 24 из этих позитивов представляли собой чистые бляшки. Очищенную ДНК из кандидата-бляшки гидролизовали с №!1, фрагменты разделяли электрофорезом в 1%-ном агарозном геле и получали блоты по Саузерну. Полученный Саузерн-блот гибридизовали с кодирующей областью пробы крысиного ВеВ1. Клон НВБ20 обладает наиболее длинной вставкой (4.4 т.п.н.), которая интенсивно гибридизует с данной крысиной пробой. Последовательность ДНК (неполная геВ1кДНК человека; 8ЕО ГО N0:8; фиг. 2А) и установленная пептидная последовательность (неполный ВеВ1 человека; 8ЕО ГО N0:9; фиг. 2 А) были получены из этого клона, подтверждая, что она представляет гомолог человека. Данный клон кодирует большую часть кодирующей области, в том числе, 3'-конец кодирующей области.

Для получения 5'-конца кДНК человека, от С1оп1ес11 приобретали набор кДНК эмбриональной почки человека МагаВоп-ВеаЙу™ (каталожный #7423-1). Синтезировали антисмысловой олигонуклеотид К1Й-155, соответствующий последовательности 62-81 8Е0 ГО N0: 8 (кДНК неполного геВ1 человека), и К1Й-154, соответствующий последовательности 17-43 8Е0 ГО N0: 8 (кДНК неполного геВ1 человека). РСВ осуществляли с использованием РСВ-ного набора кДНК АЙуап!аде™ (каталожный # по С1оп1ес11 8417-1) в сочетании с реагентами кДНК МагаВоп™ и данными олигонуклеотидами К1Й-155 или К1Й-154. Первую РСВ-реакцию осуществляли следующим образом: 35.5 и1 Н₂О; 5.0 и1 10Х К1епТ;к] Вийег; 1.0 и1 10 мМ ЙКГР смеси; 1.0 и1 50Х АЙуап!аде™ К1епТас.| Ро1утегаке смеси. Эти реагенты объединяли и смешивали. Затем добавляли 5.0 и1 МагаВоп-ВеаЙу™ Бе!а1 К1Йпеу кДНК; 1.0 и1 10 иМ АР1-праймера и 1.5 и1 6.4 иМ К1Й-155 (конечный объем = 50 и1). РСВ осуществляли в Регк1п-Е1тег Се!ик ЭНА Тйегта1 Сус1ег 480 с нижеследующими условиями амплификации: 1 цикл при 94°С в течение 1 мин; 30 циклов при 94°С в течение 30 с, 55°С в течение 30 с, 68°С в течение 4 мин. Гнез27 довую РСК осуществляли с использованием продукта из первой РСК. Вначале разбавляли 5 и1 РСК-продукта #1 в 50 раз с помощью ТЕ (конечный объем 250 и1) . Данная гнездовая РСКреакция содержит 35,5 и1 Н₂О; 5,0 и1 10Х К1епТас.| Вийсг; 1,0 и1 10 мМ смеси 6ΝΤΡ; 1,0 и1 50Х смеси Абуап!аде™ К1епТас.| Ро1утега§е. Эти реагенты смешивали как указано выше. Затем добавляли 5,0 и1 разбавленного РСК-продукта #1; 1,0 и1 10 иМ АР2-праймера и 1,5 и1 6,9 иМ Κίά-154. Условия амплификации были теми же, что и вышеуказанные. Полученный продукт, приблизительно 700 п.н. выделяли очисткой в 1%-ном геле легкоплавкой агарозы и экстрагировали фенолом. Выделенную ДНК клонировали по ЕсоК5-сайту ρΖΕιΟ™ (каталожный # по 1пуйгодеп К2510-01). Сведения о последовательности получали от множества изолятов, в том числе от клонов, названных НКЕ7С6 и НКЬ7С8.

Последовательность клона НКЕ7С8, перекрывающуюся с последовательностью из клона НКЬ20 (кДНК неполного геШ1 человека), использовали для получения полноразмерного Ке!Ь1 человека (кДНК полноразмерного геШ1 человека) (фиг. 2В). Нуклеотидная последовательность клона НКЕ7С8 представляет нуклеотиды 1-502 кДНК полноразмерного ге!Ь1 человека; нуклеотидная последовательность клона НКЕ20 представлена нуклеотидами 460-1682 кДНК полноразмерного ге!Ь1 человека. Последовательность клона НКЕ7С8 подтверждена путем секвенирования другого кДНК-клона (СП02), выделенного из кДНК-библиотеки лямбда д!10 эмбриональной почки человека, описанной выше, с использованием пробы, полученной из клона НКЕ7С6. Нуклеотиды 1181497 включают белковую рамку считывания полноразмерной кДНК ге!Ь1 человека.

Полная аминокислотная последовательность ге!Ь1 человека также показана на фиг. 2В. Как показано с помощью анализа ВЕ8ТРТТ, изображенного на фиг. 3А, кДНК ге!Ь1 человека идентична на 88,2% кДНК крысиного геШ1. Сравнение пептидов (фиг. 3В) показывает, что предполагаемая пептидная последовательность человека на 93% идентична и на 97,2% аналогична такой же последовательности, но из крысы.

Клонирование Кс1-лиганда Ке!Ь2

А. Клонирование Ке!Ь2 человека.

Пептидную последовательность Ке!Ь1 г115С5 (Ке!Ь1 крысы) использовали для поиска в базе данных СепВапк с помощью программы ВЬА8Т, чтобы идентифицировать близкие белки (т.е. изологи). ВЬА8Т или ВаДс Ьоса1 Айдптеп1 8еагсй Тоо1 использует метод Л118сйи1 с соавт. (I. Мо1. Вю1. 215: 403-410, 1990) для поиска сходства между запрашиваемой последовательностью и всеми последовательностями в базе данных последовательностей. Запрашиваемая последовательность и найденная в базе дан ных могут представлять собой либо пептидную, либо нуклеотидную в любом сочетании. Когда пептидную последовательность Ке!Ь1 крысы запрашивают по отношению к Последовательности, Снабженной Меткой (Е8Т) в нуклеотидной базе данных, получают две существенно совпадающие последовательности. Первая представлена каталожным #К02249 СепВапк, 229 п.н. Е8Т из объединенной кДНКбиблиотеки печени и селезенки плода человека, а вторая представлена каталожным #Н12981, 521 п.н. Е8Т из кДНК-библиотеки мозга человеческого младенца. Эти две Е8Т обладают 99% идентичности в области перекрывания, указывающей на то, что они происходят из одной и той же кДНК. Олигонуклеотиды получали из Н12981 Е8Т: КШ-228 (САА ТСА САА СТС САА САА ССТ ССС СТС СТС; соответствующий нуклеотидам 38-67, а также нуклеотидам 534-563 8ЕЦ Ш N0:12), и антисмысловой олигонуклеотид КШ-229 (СТС ТАС ТСС СТС ССС АСС СС; соответствующий нуклеотидам 156-175, а также нуклеотидам 652-671 8ЕЦ Ш N0:12).

1х10⁶ бляшкообразующих единиц из кДНК-библиотеки 5'-участка печени плода плюс лямбда-СТ 10, полученной от С1оп1ес11 (№ по каталогу НЬ5003а) , скринировали на реплики в ОРТ1ТКАЫ™-филырах.

Эти фильтры гибридизовали при 65°С в течение ночи с меченными по Р³² олигонуклеотидами КШ-228 и КШ-229 в 400 мл буфера для скрининга бляшек (50 мМ Трис рН 7,5, 1 М №С1, 0,1% натрийпирофосфата, 0,2% поливинилпирролидона и 0,2% Фиккола), содержащего 10% декстрансульфата и 100 ид/мл ΙΡΝΛ и 80 пмоль каждого олигонуклеотида, меченного ³²Р. Их дважды отмывали с 2Х 88С/1% 8Ό8 и дважды с 1Х 88С/1% 8Ό8 и экспонировали с пленкой. Выделяли очисткой 11 дуплицированных позитива. ДНК от каждого из этих клонов анализировали путем обработки ферментом рестрикции с последующим электрофорезом в агарозном геле и Саузерн-блоттингом. Полученные фильтры гибридизовали с КШ-228 и КШ-229 для подтверждения того, что данная вставка гибридизируется с данной пробой. Вставку клона Ό8^240 полностью секвенировали (кДНК геШ2 человека, 8ЕЦ Ш N0:12) (фиг. 7).

Нуклеотиды 25-1416 включают белковую открытую рамку считывания кДНК геШ2 человека, которая кодирует белок из 464 аминокислот (КеШ2 человека; 8ЕЦ Ш N0:13) (фиг. 7). Как показано с помощью ΒΕδΤΕΙΤ-анализа, изображенного на фиг. 8, белок КеШ2 человека на 49,1% идентичен и на 63,75 сходен с белком КеШ1 человека. Он совпадает с обычным для КеШ1 человека Ν-гидрофобным концом, указывающим на сигнальную последовательность, и С-концом, свидетельствующим о фосфатидилинозитолгликановом мотиве сцепления. Кроме того, 30 цистеинов из 31, которые представлены в каждом белке, являются консервативными.

В. Демонстрация того, что Ке!Ь2 представляет собой лиганд для Не!.

Мы продемонстрировали, что Ке!Ь2 представляет собой лиганд для Не!, путем трансфекции 293/ЕВЫЛ-клеток экспрессирующей плазмидой, которая содержит вставку клона Ό8ν240 и путем показа того, что данные клетки могут связывать растворимый слитый белок КеГОДдС.

Вставку из Ό8\ν240 выделяли с использованием Νοΐ1 и клонировали в экспрессирующий вектор СН269, который содержит ЕВУ-опдш. что обеспечивает возможность для высокой экспрессии в ΕΒΝΑ-позитивных клеточных линиях. Рестрикционные обработки осуществляли, чтобы идентифицировать клоны, которые обладают правильной ориентацией. Плазмидную ДНК получали из клона, обладающего правильной ориентацией.

Плазмидные ДНК (экспрессирующая плазмида те1Ь2, экспрессирующая плазмида те1Ь1 для позитивного контроля и экспрессирующая плазмида, содержащая неродственный белок для негативного контроля) трансфецировали в 293/ΕΒΝΑ-κ№τκη (8 х 10⁵ на 60 мл чашку) с использованием метода липофекции. Через 48 ч полученные клетки промывали два раза НВНА-буфером (0,5 мг/мл Β8Α, 0,1% ΝηΝ₃. 20 мМ НЕРЕ8 (рН 7,0) и инкубировали с 20 ид/мл Ке!Ь/1дС крысы в Трис-солевом буфере плюс 1 мМ МдС1₂ и СаС1₂ в течение 60-90 мин при комнатной температуре. После этой инкубации клетки промывали четыре раза НВНА-буфером, а затем фиксировали с помощью 60% ацетона/3% формальдегида/20 мМ НЕРЕ8 (рН 7,0) в течение 30 с. После двух промывок НВ8буфером (150 мМ №С1, 20 мМ НЕРЕ8 (рН 7,0) полученные клетки инкубировали с АРприсоединенным вторичным антителом (козьи Рс-гамма-специфичные Р(аЬ')₂ анти-1дС человека (1асккоп 1ттипо Кекеагсй ЬаЬогаЮпек; са!а1од # 109-056-098; разведение 1:5000 в Триссолевом буфере плюс 1 мМ МдС1₂ и СаС1₂) в течение 60 мин при комнатной температуре. Затем эти клетки дважды промывали НВ 8буфером и дважды с АР-субстратным буфером (100 мМ Трис-НС1 (рН 9,5), 100 мМ №С1, 5 мМ МдС1₂)), содержащем 2Х Р1егсе 1ттипо Риге® Рйокрйа!аке кирргекког (№ по каталогу 35002). Последнюю промывку оставляли на 15 мин. Затем в АР-субстратный буфер, содержащий указанный АР-ингибитор Р1егсе, вносили АРсубстраты ΝΒΤ (0,33 мг/мл) и ВС1Р (0,17 мг/мл) и инкубировали с клетками в течение 5-20 мин. Затем чашки дважды промывали водой. После этого эти чашки просматривали под препаровальным микроскопом на наличие пурпурно окрашенных клеток. Наличие пурпурных окрашенных клеток свидетельствует о том, что Ке!/слитый белок связан с клетками и что

Ке!Ь2-белок является лигандом для Ке!. Пурпурно окрашенные клетки наблюдали также после трансфекции с экспрессирующим вектором те!Ь1, но не с негативным контрольным вектором.

Клонирование Ке!-лиганда Ке!Ь3

А. Мышиный Ке!Ь3.

Поиск Е8Т в базе данных с аминокислотными последовательностями Ке!Ь1 крысы обнаружил гомологию с Ке!-лигандами двух мышиных Е8Т. Эти Е8Т представляют собой АА049894 и АА050083 (которая представляет собой неполную кДНК мышиного ге!Ь3, 8ЕО ГО ΝΟ:14). Плазмиды, кодирующие эти Е8Т, получали из Сепоте 8ук!етк 1пс. (№ по каталогу 475791 и № 475497) в виде столбиков питательного агара с бактериями. Плазмидную ДНК получали из одиночных колоний, полученных путем штрихования косячков в ЬВ-Ашр-чашках. Вставки из этих плазмид секвенировали на их полноту. Сравнение двух последовательностей демонстрирует, что АА049894, которая обладает 1,4 т.п.н. вставкой, содержится в АА050083, которая обладает 1,9 т.п.н вставкой. Трансляция последовательности ДНК из АА050083 указывает на существование непрерывной открытой рамки считывания от ΝΤ205 до ΝΤ1242 (неполный мышиный Ке!Ь3; 8ЕО ГО ΝΟ:15). Эта открытая рамка считывания обладает 37,5% идентичности с открытой рамкой считывания ге!Ь1 крысы и 40,2% идентичности с ге!Ь2 крысы. Однако данная открытая рамка считывания не кодирует Ме! или сигнальную последовательность на 5'-конце. Исследовали 5'-открытые рамки считывания, лежащие выше этой области, и обнаружили Ме! в контексте консенсусной последовательности Кохак для инициации трансляции и потенциальную сигнальную последовательность для поверхностной экспрессии/секреции. Эта открытая рамка считывания отсутствует в рамке с нижележащей открытой рамкой считывания, указывая, что Е8Т АА50083 содержит потенциальную мутацию, такую как инсерция, делеция, интрон или артефакт клонирования на своем 5'-конце.

Для того, чтобы получить правильный 5'конец, использовали Мата!йоп КАСЕ. кДНК эмбриона мыши Мата!йоп-Кеабу™ (кат. #74581) и набор Абуап!аде™ (кат. #8417-1) приобретали от С1оп!есй. Синтезировали антисмысловые олигонуклеотиды, Κίά-366, соответствующие нуклеотидам 847-866 8ЕО ГО ΝΟ:14 и Κίά365, соответствующие нуклеотидам 589-615 8ЕО ΙΌ ΝΟ:14. РСК осуществляли с использованием и набора кДНК Абуап!аде™ для РСК (С1оп!есй кат. #8417-1) в сочетании с кДНКреагентами Мата!йоп™ и олигонуклеотидом Κίά-366. Первую РСК-реакцию осуществляли следующим образом: 35,3 и1 НЮ; 5,0 и1 10Х К1епТас| Вийет; 1,0 и1 10 мМ смеси ДЫТР; 1,0 и1 50Х Абуап!аде™ К1епТас| Ро1утегаке смеси. Эти реагенты объединяли и смешивали. Затем до бавляли 5,0 и1 кДНК 11-дневного эмбриона мыши Мага!йоп-Неайу™; 1,0 иМ АР 1-праймера и 1,7 и1 5,88 иМ Κίά-Збб (конечный объем = 50 и1). РСН осуществляли в Регк1п-Б1тег Се!ик ЭХА Т11егта1 Сус1ег 480 в нижеследующих условиях амплификации: 1 цикл при 94°С в течение 1 мин; 5 циклов при 94°С в течение 30 с, 72°С в течение 4 мин; 5 циклов при 94°С в течение 30 с, 70°С в течение 4 мин; 25 циклов при 94°С в течение 30 с, 68°С в течение 4 мин. Гнездовую РСН осуществляли с использованием продукта из первой РСВ-реакции. Вначале, 5 и1 РСВ-продукта #1 разбавляли в 50 раз с помощью ТЕ (конечный объем 250 и1). Гнездовая РСВ-реакция содержит 35,5 и1 Н₂О; 5,0 и1 10Х 1<1епТас.| Вийег; 1,0 и1 10 мМ смеси йКТР; 1,0 и1 смеси АФшИаде'™ К1епТас.| Ро1утегаке. Эти реагенты смешивали как указано выше. Затем добавляли 5,0 и1 разбавленного РСВ-продукта #1; 1,0 и1 10 иМ АР2-праймера и 3,6 и1 2,8 иМ Κίά-365. Условия амплификации были теми же, которые указаны выше. Полученный продукт, приблизительно 665 п. н. выделяли очисткой в 1%-ном геле легкоплавкой агарозы и экстрагировали О1аех (О1аех кат. #20021). Выделенную очисткой ДНК клонировали в ρNοΤА/Τ7™ с использованием клонирующей системы РНГМБ РСН (·Ε0\ΕΕ™ (5 Рпте -> 3 Рпте кат. #1725029). Информация о последовательности получена от множества изолятов, в том числе, от клонов, названных Όδν252 и Όδ\ν253.

Обнаружили, что последовательность Όδν252 перекрывается с δΕΟ ΙΌ N0: 14 за тем исключением, что дополнительный Т представлен между нуклеотидами 252 и 253 из последовательности δΕΟ Ш N0:14. Этот Т представлен также в других изолятах, Όδν251 и Όδν253. Инсерция этого дополнительного основания исправляет открытую рамку считывания так, что получали единственную 1191 п.н. открытую рамку считывания (счет от первого Ме!), кодирующую 397 аминокислот. Эта открытая рамка считывания кодирует Ме! в контексте канонической консенсусной последовательности (Кохак) инициации трансляции и включает сигнальную последовательность для поверхностной экспрессии/секреции.

Для получения полноразмерного мышиного клона, который способен экспрессироваться, выделяли очисткой 630 п.н. Nο!1-ΒатН1фрагмент из Όδν252 и 1308 п.н. ВатН1-Ыо!1фрагмент из АА050083 лигировали в экспрессирующий вектор СН269, гидролизованный ИоН, и трансформировали Е. со11 ХБ1-В1ие ^!га!едепе са!. #200236). Οίη\\υ11 И1!га тпйргерк осуществляли на полученных трансформантах. Их анализировали электрофорезом рестрикционных фрагментов гидролиза по правильной длине и по ориентации. Эту конструкцию назвали Όδν254. Полученную вставку Όδν254 секвенировали на ее полноту (мышиный ге!Ь3; δΕΟ ΙΌ N0:16), а открытую рамку считывания коди рует белок из 397 аминокислот (мышиный Не!Ь3; δΕΟ ΙΌ N0:17). Эти последовательности показаны также на фиг. 9. Полученный С-конец Не!Ь3 является гидрофобным и свидетельствует о фосфатидилинозитолгликановом сцепленном мотиве.

В. Не!Ь3 человека.

Чтобы найти источник ткани-кандидата для клонирования Не!Ь3 человека, использовали нозерн-блоты мышиных тканей для определения экспрессии мышиного Не!Ь3. Из данных обследованных тканей наибольшая экспрессия Не!Ь3 найдена в ткани сердца. кДНКбиблиотеку сердца взрослого человека в векторе лямбда-д!10 приобрели у С1оп!есй (са!а1од #НБ3026а). Один миллион бляшкообразующих единиц из данного фагового стока поместили на 10 Νιιπο-чашек. Реплики фаговых бляшек осуществляли на фильтрах δΟιΕΚΙκΓ апй δΛ^11 0рй!гап™.

Пробу получали при помощи РСН с праймерами Κίά-Збб и К1й-3б7, соответствующими нуклеотидам 397-420 последовательности АА050083. Параметры РСВ-реакции были следующими: смешивали 10 и1 10Х РЕИ-буфер, 2,0 и1 10 мМ άΝΤΈ-смеси, 72 и1 Н₂0, 3,1 и1 13,2 иМ Κίά-367, 6,8 и1 5,88 иМ Κίά-366, 5,0 и1 0,1 ид/и1 АА050083 ДНК и 2,0 и1 2,5 Единиц/и1 РЕИ ^йа!едепе са!а1од #600154). РСН осуществляли на Регк1п-Б1тег Се!ик ОНА Тйегта1 Сус1ег 480 с нижеследующими условиями: 25 циклов при 94°С в течение 1 мин, 53°С в течение 1 мин., 72°С в течение 4 мин. Полученный продукт выделяли очисткой путем экстракции с фенолом, хлороформом, изоамиловым спиртом в соотношении 50:49:1 с последующим электрофорезом в легкоплавком агарозном геле и Р1аехПвыделением очисткой вырезанных фрагментов. Эту кодирующую область пробы, содержащую Р³², метили случайным праймированием (ЕешЬегд апй Уоде1к!ет). Полученные фильтры гибридизовали в течение ночи в 200 мл буфера для скринирования бляшек, содержащего 10% декстрансульфата, 100 ид/мл ίНNА и 1,8 X 10⁸ СРМ из мышиной пробы, при б5°С. Их дважды промывали с помощью буфера для скринирования бляшек, дважды - с помощью 2Х88С/1% δΌδ, дважды - с 1 ΧδδΟ?/1%> δΌδ при б5°С и экспонировали на пленке при -70°С с усиливающим экраном. Реплики позитивных бляшек выделяли очисткой. ДНК из выделенных бляшеккандидатов гидролизовали с помощью БсоН1, фрагменты разделяли электрофорезом в 1 %-ном агарозном геле и готовили блоты по Саузерну. Полученный Саузерн-блот гибридизовали с мышиной пробой. Клон С1128, который обладает 1,3 т.п.н. вставкой, интенсивно гибридизовался с мышиной пробой кодирующей области. От этого клона получали последовательность ДНК (кДНК неполного ге!Б3 человека; δΕΟ ΙΌ N0:18), установленная пептидная последовательность (неполный Не!Б3 человека; δΕΟ ΙΌ

N0:19) подтверждала, что данная последовательность гомологична последовательности человека. Этот клон содержит наибольшую часть кодирующей области, в том числе, 3'-конец.

Из СЛ28 выделяли очисткой 1,3 т.п.н. вставку, метили с помощью Р³² и использовали для скринирования С1оп1ес11-библиотеки сердца взрослого человека для того, чтобы получить клон с 5'-концом. При скринировании 2 Х 10⁶бляшек из этой библиотеки не получали клонов, содержащих 5'-конец. Нозерн-анализированные мРНК-блоты ткани взрослого человека (С1оп1ес11. каталожный #7760-1,7759-1 и 7767-1), гибридизованные с той же пробой с использованием протоколов, представленных производителем, свидетельствуют, что РеШ3 человека экспрессируется в спинном мозге взрослого человека, желудке, сердце, поджелудочной железе, тонкой кишке, толстой кишке, предстательной железе и яичках. С1ои1есЬ-кДНК-библиотеку спинного мозга взрослого человека (каталожный #5001а) скринировали с помощью СЛ28вставки. Выделили очисткой 3 независимых клона и самый длинный, СЛ 35, секвенировали. Последовательность вставки СЛ35 перекрывает вставку СЛ28, что позволяет получить составную последовательность кДНК полноразмерного геГОЗ человека (ЛЕС ГО N0:20) и определить полноразмерный РеГО3 человека (ЛЕС ГО N0:21). Эти последовательности показаны также на фиг. 10. Ре(Б3 человека на 34,3% и 34,9% идентичны, соответственно, Ре(Б1 человека и РеГО2 человека. Он обладает 76,8%-ной идентичностью с Ре(Б3 мыши.

Терапевтическое использование соединения настоящего изобретения

Природный и вариантный РеГО, антитела к анти-РеГО, антитела к анти-Ре1 и слитые белки Ре( и Ре1Б могут иметь терапевтическое применение в ситуациях, когда желательно блокировать или активировать сигнальный путь Кер чтобы стимулировать рост или выживание ренальной и/или невральной клетки при заболеваниях, в которых эти клетки утрачены или повреждены, или для супрессии роста или для уничтожения нежелательных клеток, таких как опухолевые клетки, которые экспрессируют Ре( или РеГО.

Вообще, соединения настоящего изобретения, которые связываются с Кер индуцируя димеризацию и/или аутофосфорилирование Ре1. пригодны для стимуляции роста или ограничения повреждения тканей, экспрессирующих Ре(. Соединения настоящего изобретения пригодны для стимуляции роста и/или выживания ренальной ткани, сохраняя ренальную функцию и минимизируя повреждение ренальной ткани после различных инсультов. Конкретные состояния, которые поддаются успешному лечению соединениями настоящего изобретения, включают острую ренальную недостаточность, острый нефрит, хроническую ренальную недостаточ ность, нефротический синдром, дефекты почечных канальцев, почечные трансплантанты, токсическое повреждение, гипоксическое повреждение и травму. Дефекты почечных канальцев включают дефекты любой природы, наследственной или приобретенной, ювенильный нефронофтиз и медуллярная губчатая почка. Данный список не ограничен и может включать многие другие болезни почек (см., например, Нагг18оп'8 Рг1пс1р1е8 оГ 1п(егпа1 Мебюте, 13^4Ь еб., 1994, включенное здесь путем ссылки).

В других заявках гены и белки настоящего изобретения могут использоваться для лечения состояний, где требуется невральный рост и должна быть регенерация. В настоящую заявку включены состояния, вызывающие заболевания, связанные с расстройством нервной системы, такие как болезнь Альцгеймера, Паркинсона, боковой амиотрофический склероз, а также заболевание двигательного нейрона, демиелинизирующие заболевания, такие как множественный склероз, заболевания, вызванные бактериями, такие как менингиты, абсцессы или эмпиема, вирусные заболевания, такие как Н1Уассоциированная миелопатия, прионовые заболевания, в том числе, заболевание Гревтцфельдт-Джекоба. Включены также болезни, повреждающие нервные ткани, независимо от того, вызваны ли они неопластическим посягательством, травмой или цереброваскулярными событиями, такими как кровоизлияние или эмболия. Заболевания краниальных нервов и спинного мозга, в том числе, болезни, сопряженные с травматической, воспалительной, врожденной или сосудистой этиологиями, включены специфически, поскольку являются болезнями, влияющими на вегетативную нервную систему. Включены также болезни, связанные с развитием нервной системы, такие как задержка умственного развития, аутизм, плодный алкогольный синдром, синдром Дауна, церебральный паралич. Соединения настоящего изобретения могут также использоваться для лечения синдромов, сопряженных с периферической нервной системой. Эти болезни включают болезни, вызванные любым из факторов ранее приведенного списка, и специфически включают болезнь Лима, Н1У-ассоциированные невропатии, полиомиозиты, мышечную дистрофию и миастению.

Антитела анти-РеГО и слитые белки Ре( настоящего изобретения, которые специфически связываются с крысиным белком РеГО, неполным РеГО1 человека, полноразмерным Ре(Б1 человека, Ре(Б2 человека, мышиным РеГОЗ или РеГОЗ человека или с фрагментами этих белков, пригодны для нескольких способов. Настоящие соединения могут использоваться терапевтически для ингибирования или блокирования сигнального рецептора Ре1, такого, который блокирует рост опухолей, зависящих от ростовой активации Ре1-сигнала. Эти агенты могут также сливаться с детектируемыми маркерами, такими как флуоресцентно или радиографически непроницаемые вещества, и вводиться субъекту для того, чтобы получить изображение ткани, которая экспрессирует Ке1Б. Эти агенты могут также связываться с веществами, такими как пероксидаза хрена, которая может использоваться для иммуноцитохимической окраски для визуализации областей клеток, позитивных по Ке1Б. на гистологических срезах. В данном способе специфическое антитело могло бы использоваться в одиночку, а участки, где оно связывается, можно визуализировать в сэндвич-анализе с использованием антитела к иммуноглобулину, которое связывается с детектируемым маркером. Специфические антитела к любому Ке1Б также пригодны в иммуноанализах по количественному анализу вещества, к которому данное антитело обладает специфичностью. Специфические антитела к Ке1Б могут также связываться с твердыми подложками, такими как бусинки и чашки, и использоваться для удаления данного лиганда из раствора, либо при выделении очисткой белка или для извлечения его из раствора. Каждая из этих методик является стандартной для специалистов в области иммунологии.

Другие методы настоящего изобретения включают модуляцию сигнализирования Ке1Ке1Б путем контактирования Ке1 с моноклональным антителом к анти-Ке!. Эффект такого тАВ-Ке1-контакта может приводить либо к блокированию, либо к стимуляции активности КеБсигнального пути, в зависимости от особенностей взаимодействия каждого отдельного тАВ с КеБ Некоторые тАЬ взаимодействуют с Ке1 в качестве агонистов, с помощью связывания агониста тАВ-Ке1 запускается димеризация и аутофосфорилирование Ке1. Другие тАВ действуют в качестве антагонистов КеБ Взаимодействие Ке1 с тАВ-антагонистом предотвращает Ке-сигнальную активацию с помощью других Ке1Б или с помощью комплексов, включающих Ке1Б. которые должны иначе активировать Ке1сигнальный путь.

Ке1Б и/или антитела к КеБ или к Ке1слитым белкам могут применяться для получения (оптических) изображений тканей, которые экспрессируют КеБ или в иммуногистологических или препаративных методах, описанных выше для антител к Ке1Б.

Слитые белки, охватывающие Ке1Б и/или антитела к анти-КеБ могут использоваться для специфически мишенированного терапевтического лечения рака и опухолей, которые экспрессируют Ке1. Такие опухоли могут включать несколько различных опухолевых фенотипов, которые ассоциированы с мутациями по Ке1 (Ν. Еид1. 1. Меб. 335:943-951. 1996; ХаИие 367:319320. 1996; Тгеибз беи. 12:138-144. 1996). Терапевтическое вмешательство против неоплазий, которые экспрессируют Ке1Б. использует слитые белки, которые инкорпорируют Ке1 и/или антитело к анти-Ке!Б. Антитело к анти-Ке! или антитело к анти-Ке1Б может быть эффективным само по себе, вследствие антитело-зависимого и комплемент-зависимого цитолиза, опосредованного Ес-доменом. Такие гибридные лиганды и антитела могут сделать лечение рака более эффективным при использовании их в качестве транспортных поставщиков антинеопластических лекарственных средств, токсинов и разрушающих клетки радионуклидов, таких как иттрий 90. Цитотоксические эффекторные клетки могут мишенироваться на опухолевые клетки с использованием гетероконъюгатных антител, когда антитело, специфичное либо по КеБ либо по Ке1Б. экспрессируемого опухолью, ковалентно соединяется с антителом, нацеленным против поверхностного белка, на цитотоксических эффекторных клетках, таких как ΝΚ-клетки или СТБ.

Один из примеров терапии антителом к анти-Ке! или к Ке1Б заключается в конъюгировании токсичной А-цепи рицина или модифицированной полноразмерной формы рицина (который может непродолжительно связывать клетки) с Ке1Б или с антителом, нацеленным против Ке!-полипептида, экспрессируемого на поверхности малигнизированной клетки. В другом варианте осуществления настоящего изобретения, токсин конъюгировали с Ке1 или с анти-Ке! антителом, чтобы избирательно мишенировать и убить Ве1Б-позитивную клетку, такую как опухолевую, экспрессирующую Ке1Б. Такой подход оказывается успешным для блокирования рицина, конъюгированного с моноклональным антителом к антигену СЭ19, экспрессируемому большинством неопластических клеток (СгоззЬагб с соавт., В1ооб 79:576. 1992). Другие токсины, пригодные в равной степени, известны специалистам в данной области. Такие токсины включают, но не ограничиваются, экзотоксин псевдомонад, дифтерийный токсин и сапорин. Этот подход должен оказаться даже более успешным с использованием Ке1Б или анти-Ке! антителом, в противоположность известному подходу с антигеном анти-СЭ19, потому что Ке1 экспрессируется очень ограниченным числом тканей.

Вышеприведенные подходы с использованием слияний рицина или других токсинов в равной мере применимы к конъюгатам токсинов с Ке1Б или с антителом анти-Ке!; они пригодны для избирательного мишенирования и уничтожения Ке!-позитивных клеток, таких как опухолевые клетки, экспрессирующие КеБ

Другой подход к такому терапевтическому лечению заключается в использовании меченных радиоизотопом Ке1Б или антител анти-Ке!. Такие соединения, меченные радиоизотопами, будут предпочтительными для радиоактивного мишенирования участков опухоли в клетках, экспрессирующих Ке1, располагающихся бок-обок с нормальными тканями. В зависимости от используемого радиоизотопа, испускаемая радиоактивность радиоактивно меченного антитела, связывающегося с опухолевой клеткой, может также уничтожать расположенные рядом клетки малигнизированной опухоли, которые не экспрессируют Ве!. Могут использоваться разнообразные радионуклиды. Изотопы, которые испускают β-частицы (например, ¹³¹1), имели успех при использовании моноклональных антител к СИ20, присутствующих в В-клеточных лимфомах (Каш1И8к1 с соавт., N. Епд1. 1. Меб. 329:459 (1993); Ргекк с соавт., N. Еид1. 1. Меб. 329:1219 (1993)). Радионуклиды, испускающие β-частицы, создают радиоактивную эмиссию, которая может повреждать опухолевые клетки на расстоянии, превышающем несколько клеточных диаметров, позволяя искоренять антиген-негативные клетки и уменьшать последствия негомогенного расположения антитела или лиганда в опухолях.

Могут также использоваться радионуклиды, испускающие α-частицы. Низкодозовая облучаемость, создаваемая с помощью радионуклида, метящего антитела Ве!Ь или анти-Ве!, терапевтически может быть более эффективной, чем мгновенное облучение, производимое при традиционной радиационной терапии. Облучение малыми дозами может индуцировать апоптоз (программируемая клеточная гибель) в некоторых клеточных линиях (Маскйк с соавт., Ваб1а1. Век. 130:220 (1992); МакНк с соавт., Вабюрйатш. 5:339 (1992)).

Соединения настоящего изобретения вводили в терапевтически эффективных количествах, что означает количество соединения, которое производит терапевтически желаемый результат или воздействует на отдельное состояние, которое лечат.

Термин субъект, используемый здесь, подразумевает любое млекопитающее, которому может быть введен Яе1-лиганд или ген. Специально подобранные субъекты для лечения способом настоящего изобретения включают людей, а также не человекообразных приматов, овец, лошадей, крупный рогатый скот, коз, свиней, собак, кошек, кроликов, морских свинок, хомячков, песчанок, крыс и мышей, а также органы, опухоли и клетки, производные или исходные от этих хозяев.

Использование соединений настоящего изобретения для генной терапии

ЯеШ-гены настоящего изобретения вводили в поврежденную ткань, чтобы стимулировать образование Ве!Ь трансфецированными клетками, для усиления клеточного роста и/или выживаемости клеток, которые экспрессируют Ве!.

В конкретном варианте осуществления способа генной терапии ЯеШ-ген может быть введен в ренальную или невральную тканьмишень, по выбору. Позже Ве!Ь должен устойчиво экспрессироваться и стимулировать рост, деление, дифференциацию и/или потенциальную клеточную выживаемость позитивных по Ве! рецепторных клеток. Помимо этого, Ве!Ьгены могут быть введены в клетку-мишень с использованием различных хорошо известных способов, основанных на использовании вирусных или невирусных подходов.

Невирусные способы включают электропорацию, мембранное слияние с липосомами, высокоскоростную бомбардировку микропулями, покрытыми ДНК, инкубацию с кальцийфосфат-ДНК преципитатом, трансфекцию, опосредованную ИЕЛЕ-декстраном, и прямую микроинъекцию в отдельную клетку. Например, ЯеШ-ген может быть интродуцирован в клетку с помощью кальцийфосфатной копреципитации (Р1Шеет с соавт., 8с1епсе, 209:1414-1422 (1980); механической микроинъекцией или ускоренной частицей (ратйс1е ассе1етабоп) (Апбегкоп с соавт., Ргос. №а!1. Асаб. 8сг И8А, 77:5399-5403 (1980); ДНК-переносом, основанным на липосоме (например, Ь1РОЕЕСТ1И-опосредованная трансфекция РеГдпег с соавт., Ргос. №11. Асаб. 8сг И8А, 84:471-477, 1987; Сао апб Ниапд, БюсЫт. Вюрйук. Век. Сотт., 179:280-285, 1991; трансфекцией, опосредованной ИЕАЕдекстраном; электропорацией (Патент США 4956288); или способами, основанными на полилизине, в которых ДНК конъюгировали с доставщиком ДНК, предпочтительно с гепатоцитами печени (ГСо1ГГ с соавт., 8аепсе, 247:465-468, 1990; Сште1 с соавт., Нитап Сепе Тйетару 3:147154, 1992).

Клетки-мишени могут быть трансфецированы генами настоящего изобретения путем прямого переноса гена. См., например, ГСо1£Г с соавт., Ийес! Сепе ТгапкГег 1п!о Мооке 1п УАо. 8с1епсе 247:1465-68, 1990. Во многих случаях желательна вектор-опосредованная трансфекция. Можно использовать любой из способов, известный в данной области, по инсерции полинуклеотидной последовательности в вектор. См., например, 8атЬтоок с соавт., Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬота1огу Мапиа1, Со1б 8рпп§ НагЬог ЬаЬога1огу, Со1б 8ртшд НагЬог, ΝΥ (1989) и АикиЬе1 с соавт., Ситтеп! Рго!осо1к ш Мо1еси1аг Вю1оду, ЕГСПеу & 8опк, ΝΥ (1992), которые, оба, включены здесь путем ссылки. Промоторная активация может быть тканеспецифической или индуцибельной с помощью метаболического продукта или вводимого вещества. Такие промоторы/энхансеры включают, но не ограничивают, нативный ЯеШ-промотор, цитомегаловирусный предранний промотор/энхансер (Кагакиуата с соавт., 1. Ехр. Меб., 169:13 (1989); бета-актиновый промотор человека (Сипшпд с соавт., Ргос. №11. Асаб. 8сг И8А, 84:4831 (1987); глюкокортикоид-индуцибельный промотор, присутствующий в длинном концевом повторе мышиной вирусной опухоли молочной железы (ММТУ ЬТВ) (К1еккщ с соавт., Мо1. Се11. Вю1.,

4:1354 (1984); в длинно-концевых повторяю39 щихся последовательностях вируса лейкоза мышей Молони (МиЬУ ЬТК) (№е188 с соавт., ΡΝΛ Типют Упизез, Сб1б 8рппд ΗπγΕογ Ε;ώοηЮгу. Сб1б 8рппд ΜηΓΕοΓ, ΝΥ (1985)); промотор ранней области 8У40 (Велюр! апб СкатЬοη. №!иге, 290:304 (1981)); промотор вируса саркомы Рауса (К8У) (Υататο!ο с соавт., Се11, 22:787 (1980)); тимидинкиназный промотор вируса простого герпеса (Н8У) (№адпег с соавт., Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А, 78:1441 (1981)); аденовирусный промотор (Аашаба с соавт., Ргос. №11. Асаб. 8с1. И8А, 82:3567 (1985)).

КеШ-гены могут быть также интродуцированы с помощью специфических вирусных векторов, используемых для систем генного переноса, которые в настоящее время хорошо определены. См., например: Маб/ак с соавт., 1. Сеп. Уилк, 73:1533-36, 1992 (рарονаν^^и8 8У40); Вегкпег с соавт., Сигг. Шр. М1сгоЬю1. Iттиηο1., 158:39-61, 1992 (абеηον^^и8); ^Гтапп с соавт., Ргос. №6. Асаб. 8ск 92:10099-10103, 1995 (Ьаαι1ονίπ.ΐ5); Μοκκ с соавт., Сигг. Шр. М1сгоЬю1. Iттиηο1., 158:25-38, 1992 (вирус коровьей оспы); Ми/ус/ка, Сигг. Шр. М1сгоЬю1. Тштипск, 158:97-123, 1992 (адено-ассоциированный вирус); МагдиНкее, Сигг. Шр. М1сгоЬю1. 1тти№1., 158:67-93 (вирус простого герпеса (Н8У) и вирус Эпштейн-Барра (НВУ)); МШег, Сигг. Шр. М1сгоЬю1. Iттиηο1., 158:1-24, 1992 (ретровирус); В^аηбуοрабкуау с соавт., Мο1. Се11. Βίο1., 4:749-754, 1984 (ретровирус); МШег с соавт., ^Шге, 357:455-450, 1992 (ретровирус); А^ег^й 8с1епсе, 256:808-813, 1992 (ретровирус). Сиггеп! ΡΐΌΐο^Κ т Мο1еси1а^ Вю^ду: 8есΙϊοιΐ5 9.10-9.14 (Аи8иЬе1 с соавт., Ебз.), Сгеепе РиЬБзЫпд А88οс^а!е8, 1989, которые все включены здесь путем ссылки.

Предпочтительными векторами являются ДНК-вирусы, которые включают аденовирус (предпочтительно векторы, основанные на Аб-2 или Аб-5), бакуловирус, вирусы герпеса (предпочтительно векторы, основанные на вирусе простого герпеса) и парвовирусы (предпочтительно векторы, основанные на дефективном или на не автономном парвовирусе, более предпочтительно векторы, основанные на аденоассоциированном вирусе, наиболее предпочтительно - векторы, основанные на ААУ-2). См., например, А11 с соавт., Сепе ТНегару 1:367-384, 1994; патент США 4797368 и 5399346 и обсуждение ниже.

Выбор конкретной векторной системы для трансфецирования, например, КеШ-последовательности зависит от разных факторов. Одним из важных факторов является природа мишени клеточной популяции. Хотя ретровирусы изучались широко и применялись для генной терапии, в целом, они непригодны для инфицирования клеток, которые не делятся, но могут быть полезны для терапии рака, поскольку они интегрируют и экспрессируют свои гены в реплицирующихся клетках. Они пригодны для использования ех νίνο и являются привлекательными в этом отношении, вследствие их устойчивой интеграции в геном клетки-мишени.

Аденовирусы представляют собой эукариотические ДНК-вирусы, которые можно модифицировать для эффективной доставки терапевтического или репортерного трансгена к разным типам клеток. Основные аденовирусные типы 2 и 5 (соответственно, Аб2 и Аб5), которые вызывают респираторное заболевание у людей, в настоящее время применяются для генной терапии мышечной дистрофии Дюшена (БМО) и муковисцидоза (СР). И Аб2 и Аб5 относятся к подклассу аденовирусов, которые не ассоциированы с малигнизациями человека. Аденовирусные векторы обладают способностью создавать очень высокие уровни доставки трансгена практически во все типы клеток, независимо от митотического состояния. Высокие титры (10¹³ бляшкообразующих единиц/мл) рекомбинантного вируса можно легко получить у клеток 293 (трансформированная аденовирусом комплементационная клеточная линия эмбриональной почки человека: АТСС СКЕ1573) и криосохраняемая в течение продолжительных периодов без ощутимых потерь. Эффективность этой системы для доставки терапевтического трансгена ш νίνο, который комплементирует генетический дисбаланс, была продемонстрирована на животных моделях различных болезней. См., Υ. №а1апаЬе, АШегозскгозН, 36:261-268 (1986); К. Тапха\\а с соавт., РЕВ8 Ье!!ег8, 118(1):81-84 (1980); ЕЬ. СЫайеп с соавт., \еи Епд1. 1. Меб., 309 (11983):288-296 (1983); 8. кЫЬазЫ с соавт., 1. С1ш. [пуеб., 92:883-893 (1993); и 8. ЫиЬаОи с соавт., 1. СБп. [пуеб., 93:18891893 (1994), которые все включены здесь путем ссылки. Действительно, рекомбинантный аденовирус, дефективный по репликации, кодирующий кДНК трансмембранного регулятора (СРТК) муковисцидоза, был одобрен для использования на человеке, по крайней мере, в двух клинических СР-испытаниях. См., например, 1. №118сп, ^Шге, 365;691-692 (0с!., 21, 1993). Дополнительное подтверждение безопасности рекомбинатных аденовирусов для генной терапии заключается в широком опыте применения живых аденовирусных вакцин на человеческие популяции.

Аденовирусы человека включают линейную, приблизительно 36 т.п.н. двухцепочечную геномную ДНК, которую разделили на 100 единиц генетической карты (т.и.), каждая из которых имеет в длину 360 п.н. Эта ДНК содержит короткие инвертированные концевые повторы (1ТК) на конце генома, который требуется для репликации вирусной ДНК. Эти генные продукты организованы в ранние (Е1-Е4) и поздние (Е1-Ь5) области, основанные на экспрессии до или после инициации синтеза вирусной ДНК. См., например, ΗοΓ^νίΙζ, Убго^ду, 2б ебй., еб. Β.Ν. Р1е1бз, Катен Ргезз Ь!б., Нью-Йорк (1990).

Впервые образованный рекомбинант, аденовирусы, дефицитные по репликации, которые были созданы для генной терапии БМБ и других наследственных болезней, содержат делеции полной Е1а- и неполной Е1Ь-областей. Данный вирус, дефективный по репликации, выращивали в 293-клетках, содержащих функциональный Е1а-ген аденовируса, который создает трансдействующий белок Е1а. Е1-делетированные вирусы способны реплицироваться и продуцировать в 293-клетках инфекционные вирусы, которые создают генные продукты области Е1а и Е1Ь в транс. Этот результирующий вирус способен инфицировать многие типы клеток и может экспрессировать интродуцированный ген (созданный под своим собственным промотором), но не может реплицировать его в клетке, которая не несет Е1-область ДНК, если клетка не инфицирована при очень высокой множественности инфицирования. Аденовирусы обладают тем преимуществом, что они обладают широким кругом хозяев, могут инфицировать неподвижные, полностью дифференцированные клетки, такие как нейроны, и, по существу, не являются онкогенными. Аденовирусы не интегрируются в геном хозяина. Вследствие того, что они существуют не в хромосомах, риск мутагенных вставок сильно снижен. А11 с соавт., см. выше, на 373. Рекомбинантные аденовирусы (гАбУ) производят очень высокие титры, умеренно стабильные вирусные частицы, высокие уровни экспрессии и могут инфицировать широкий круг хозяев. Их естественными хозяйскими клетками являются клетки эпителия дыхательных путей, поэтому они пригодны для терапии легочных раков.

Перенос, опосредованный бакуловирусом, обладает несколькими преимуществами. Перенос бакуловирусного гена может происходить в реплицирующихся и не реплицирующихся клетках и может происходить в клетках почек, а также в гепатоцитах, нервных клетках, селезенки, кожи и мышечных. Бакуловирус не реплицируется и не патогенен в клетках млекопитающих. Людям недостает предсуществующих антител к рекомбинантному бакуловирусу, которые могли бы блокировать инфекцию. Кроме того, бакуловирус обладает способностью инкорпорироваться и трансдуцировать очень большие вставки ДНК.

Адено-ассоциированные вирусы (ААУ) также использовали в качестве векторов для терапии соматических генов. ААУ представляет собой небольшой вирус с одноцепочечной ДНК с простой геномной организацией (4,7 т.п.н), что делает его идеальным субстратом для генной инженерии. Две открытые рамки считывания кодируют серии полипептидов - гер и сар. Рер-полипептиды (гер78, гер68, гер62 и гер40) вовлечены в репликацию, сохранение и интеграцию ААУ-генома. Кэпированные белки (УР1, УР2 и УР3) формируют капсид вириона.

Фланкирующие открытые рамки считывания гер и сар на 5'- и З'-концах представляют собой 145 п.н. инвертированные концевые повторы (1ТР), первый из которых, 125 п.н., обладает способностью формировать Υ- или Т-образные дуплексные структуры. Важные для создания ААУвекторов полные гер- и сар-домены могут быть вырезаны и заменены на терапевтический или репортерный трансген. См. ВЛ. Саг!ег, в НапбЬоок ой Рагуоу1гикек, еб., Р. ТЦккег. СРС Ргекк, рр. 155-168 (1990). Было показано, что 1ТР представляют минимальную последовательность, необходимую для репликации, сохранения, упаковки и интеграции ААУ-генома.

Жизненный цикл ААУ двухфазный, составленный из латентного и литического эпизодов. Во время латентной инфекции ААУвирионы входят в клетку в виде инкапсулированной одноцепочечной ДНК, и некоторое время спустя достигают ядра, где ДНК ААУ устойчиво интегрируется в хромосому хозяина без необходимости в делении клетки хозяина. В отсутствие хелперного вируса, интегрированный ААУ-геном остается латентным, но способен активироваться и сохраняться. Литическая фаза жизненного цикла начинается тогда, когда клетка, несущая ААУ-провирус, подвергается вторичному заражению с помощью герпесвируса или аденовируса, который кодирует хелперные функции, которые привлекаются с помощью ААУ, чтобы облегчить его вырезание их хроматина хозяина (ВЭ. Саг!ег, выше). Инфицирующая родительская одноцепочечная ДНК увеличивается в объеме до дуплексной реплицирующейся формы (РЕ) ДНК гер-зависимым образом. Сохраняемые геномы ААУ упаковываются в ранее сформированные белковые капсиды (икосаэдрическая симметрия, приблизительно, 20 нм в диаметре) и высвобождаются в виде инфекционных вирионов, которые упаковали либо +, либо -одноцепочечные ДНКгеномы с последующим клеточным лизисом.

Адено-ассоциированные вирусы (ААУ) обладают существенным потенциалом для генной терапии. Вирусные частицы очень стабильны, а рекомбинантные ААУ (гААУ) обладают лекарственно-подобными характеристиками, которые могут быть выделены центрифугированием в градиенте плотности СкС1. Они теплоустойчивы и могут быть лиофилизированы до порошка и регидратированы до полной активности. Их ДНК устойчиво интегрирована в хозяйские хромосомы, чтобы длительно экспрессироваться. Их хозяйский ряд широк и ААУ не вызывает известное заболевание, потому что данные рекомбинатные векторы не токсичны.

Однажды интродуцировавшись в клеткумишень, обсуждаемые последовательности могут быть идентифицированы традиционными методами, такими как ДНК-гибридизация с использованием проб, включающих последовательности, которые гомологичны/комплемен43 тарны клонированным в данном векторе генным последовательностям. В другой методике данная последовательность(и) может быть идентифицирована в присутствии или в отсутствие маркерной генной функции (например, тимидинкиназной активности, устойчивости к антибиотику и т. д.) путем интродукции экспрессирующего вектора в клетку-мишень.

Препараты и введение

Соединения настоящего изобретения могут быть введены любым способом, который является терапевтически приемлемым. Способ введения может включать инъекции с помощью парентеральных путей, таких как внутривенный, внутрисосудистый, внутриартериальный, подкожный, внутримышечный, внутриопухолевый, внутрибрюшинный, внутрижелудочный, внутриэпидуральный или других, а также пероральный, назальный, глазной, ректальный или местный. Также в настоящее изобретение отдельно включено поддерживающее введение, с помощью таких средств, как депонирующие инъекции или эродийные имплантанты. Особенно рассматривается локализованная доставка с помощью таких средств, как доставка через катетер по одной или нескольким артериям, таких как почечная артерия или сосуд, снабжающие локализованную опухоль.

Термин фармацевтически приемлемый носитель означает один или несколько органических или неорганических ингредиентов, естественных или синтетических, с которыми сочетают мутантный протоонкоген или мутантный онкопротеин, чтобы облегчить их применение. Подходящий носитель включает стерильный физиологический раствор, хотя другие фармацевтически приемлемые водные и не водные изотонические стерильные растворы и стерильные суспензии известны специалистам в данной области. В этом отношении термин носитель включает липосомы и Н1У-1-1а1-белок (см. СНеп с соавт., Апа1. Вюсйет. 227:168-175, 1995), а также любые плазмиды и вирусные экспрессирующие векторы. Эффективное количество относится к такому количеству, которое способно улучшать или замедлять развитие заболеваемости, дегенеративного или повреждающего состояния. Эффективное количество можно определить на индивидуальной основе или на основе частичного рассмотрения симптомов, чтобы лечить и получить желаемые результаты. Эффективное количество может быть определено одним из рядовых специалистов в данной области, применяющим такие факторы или применяющим лишь в рутинном экспериментировании.

Липосомная система может представлять собой разнообразные одноламеллярные везикулы, мультиламеллярные везикулы или стабильные плюриламеллярные везикулы, и могут быть приготовлены и введены в соответствии с методами, хорошо известными специалистам в данной области, например, в соответствии с указаниями на патенты Соединенных штатов 5169637, 4762915, 5000958 или 5185154. Кроме того, желательно экспрессировать новые полипептиды настоящего изобретения, а также другие выбранные полипептиды, такие как липопротеины, чтобы усилить их связывание с липосомами. В качестве примера, лечение острой почечной недостаточности человека с помощью липосом-инкапсулированного КеШ можно осуществить ίη νινο путем интродуцирования КеШ в клетки, нуждающиеся в таком лечении с использованием липосом. Эти липосомы можно доставить через катетер в ренальную артерию. Рекомбинантный КеШ-белок выделяли очисткой, например, из СНО-клеток с помощью аффинной хроматографии или любым другим традиционным методом, затем смешивали с липосомами и инкорпорировали в них с высокой эффективностью. Инкапсулированный белок можно проверить ίη νίίτο по любому эффекту на стимуляцию клеточного роста.

Настоящее изобретение предполагает также, что новый полипептид данного изобретения может быть введен животному с помощью липосомной системы доставки для того, чтобы усилить их устойчивость и/или иммуногенность. Доставка новых полипептидов с помощью липосом может быть особенно преимущественной, потому что липосомы могут быть поглощены фагоцитными клетками при лечении животного. Такие клетки при заглатывании липосомной мембраной и последующего присутствия полипептидов в иммунной системе в соединении с другими молекулами необходимы для выявления сильного иммунного ответа.

Любой из новых КеШ-полипептидов настоящего изобретения может использоваться в форме фармацевтически приемлемой соли. Соответствующие кислоты и основания, которые способны образовывать соли с полипептидами настоящего изобретения, хорошо известны специалистам в данной области и включают неорганические и органические кислоты и основания.

Хотя вышеизложенное изобретение было описано довольно подробно в виде иллюстрации и примера для целей лучшего восприятия, специалистам в данной области необходимо иметь в виду, что в рамках объема настоящего изобретения могут быть осуществлены определенные изменения и модификации, которые не ограничиваются объемом нижеследующей формулы изобретения.

Список последовательностей (1) СНЦ4Е СВЕДЕНИЯ:

(ί) ЗАЯВИТЕЛЬ: ΒΙΟΕΕΝ, ШС.

(ϋ) НАЗВАНИЕ ИЗСБЕЕТЕНИЯ: КеТ-Лигавд дня стимуляции неврального и ренального роста (ίϋ) КОЛИЧЕСТВО ПООВДВИЕЛЬНОСТЕЙ: 21 (IV) АДРЕС ДЛЯ СООБЩЕНИЙ:

(А) АДРЕСАТ: Вгодеп, 1пс.

(B) УЛИЦА: 14 СатЬгШде СегЛег (C) ГОРОД: СатЬгМде (Б) пшат: ма (Е) СТРАНА: США (Г) ΖΙΡ: 02142 (V) ФОИ®. КМЬЮТЕРНОГО ПРОЧТЕНИЯ:

(A) ТИП НОСИТЕЛЯ ДАННЫХ: Мягкий даек (B) КОМПЬЮТЕР: совместимый с персональными компьютерами фирмы ΙΒΜ (С) ШЕРАЦИСННАЯ СИСТЕМА: РЗ-ЮЗ/МЗ-ГОЗ (Б) ПРСГРАМЖОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ: РаСепСТп Ке1еазе #1.0, Версия #1.30 (VI) ПОСЛЕДНИЕ СВЕДЕНИЯ О ПОДАННСЙ ЗАЯВКЕ:

(A) НОМЕР ЗАЯВКИ:

(B) ДАТА Е8ОДАЧИ: 07-МАЯ-1997 г.

(C) КПАССИШКАПИЯ:

(νϊί) ПРЕДЫДУПЦЖ ДАННЫЕ О ЗАЯВКЕ:

(A) НОМЕР ЗАЯВКИ: США 08/999999 (B) ДАТА ПОДАЧИ: 01-ЯНВ 1996 г.

(νϋί) СВЕДЕНИЯ О ПАТЕНТНОМ ПОВЕРЕННОМ:

(A) ИМЯ: Ьетапе, ЬезИе М.

(B) РЕГИСТРАЦИОННЫЙ НОМЕР: 35245 (C) НОМЕР ЕЕГИСГЕАЦИИ/ЕЕЕСТРА: А008 РСТ СТР (ίχ) ТЕЛЕЖСМФНИЮЦЮННЫЕ СНЕ,ПЕНИЯ:

(A) ТЕЛЕФОН: 617-679-2400 (B) ТЕЛЕФАКС: 617-679-2838 (2) СВЕДЕНИЯ О 3ΕΩ ГО N0:1:

(ί) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПССЛЕЩСВАТЕЛЪНССТИ:

(A) ДЛИНА: 3616 пар оснований (B) ВИЦ: нуклеиновая кислота (C) СТРУКТУРА ЦЕПИ: двойная (Ώ) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ίί) ВИЦ МОЛЕКУЛЫ: кЦНК (ΐϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКАЯ: НЕТ (ίν) АНТИСМЫСЛОВАЯ: НЕД (V) ОТЛИЧИТЕЛЬНАЯ ОСОБЕННОСТЬ:

(A) ИМЯ/КЛШ: СОЗ (B) МЕСГОНАХСЯДЕНИЕ: 257..1660

САС ССА ОСС ДАС ССС

769

Αερ А1а А1а Ьуз А1а

160

ТСС ССС ТАС АТС АСС 817 .

Бег А1а Туг Не ТЬг

175

ААС СО С ССТ ДАС ТСС 865

Αεη Агд Агд Ьуз Су5

190

ССС ССС ААС САС АСС 913

Рго А1а Ьув Ηΐβ Бег 205

ССС ТСС АСС САС ССС 961

А1а Суб ТЫ С1и Агд

220

САА САА ССА САС АСС 1009

С1и С1й Агд С1и Агд 24С

АСС ААТ ТАС АТС ТСС 1057

ТЬг Авп. Тут Не Суб

255

САС ССА САС ТСА АСС 1105

С1п Рго С1и Вег Агд 270

САС ТСС СТС СТС ССС 1153

Апо Суе Ьеи Ьеи А1а 285

ААС ТАС СТА САС ТСС 1201

Азг. Туг Уа1 Авр Бег

300

АСС ААС АСС ОСС ДАТ 1249

Бех Азп Бег С1у Азп

320

ТТТ ААС САС ААТ АСТ 1297

РЬе Ьуз Аяр Авη ТЬг

335

ССС ТСА ОАТ СТС АСС 1345

С1у Бег Авр Уа1 ΊΊ1Γ

350

ТСС ААС СТС САС САС Сув Αεη Ьеи Азр Авр ' 165 ССС ТСС АСС АСС АСС Рго Суб ТЫ ТЫ Бег

180

САС ААС ССС СТС АСС

Ηϊε Ьуе А1а Ьеи Агд

195

ТАС ССС АТС СТС ТТС

Туг С1у МеС Ьеи РЬе

210

ССС ССА САС АСТ АТС

Агд Агд С1п ТЫ Не

225

ССС ААС ТСС СТС АСТ

Рго Авп Суе Ьеи Бег

245 АСА ТСТ ССС СТТ ССА Агд £ег Агд Ьеи А1а . . 260

ТСТ СТС АСС ААС ТСТ

Зег Уе1 Бег Αεη Суе

275

ТАС ТСС ССА СТС АТТ

Тух Бег <31у Ьеи Не

290

АСС АСС СТС АСС СТС

Бег Бег Ьеи Бег νβΐ

305

САС СТС САА САС ТСС

Азр Ьеи С1и Абр Суз

325

ТОТ СТС ААА ААТ ССА

Суз Ьеи Ьуе Αεη А1а

340

АТС ТСС САС ССА ОСС

Меи Тгр С1п Рго А1а

355

АСС ТОТ ААС ААС ТАС АОС

ТЫ Суб Ьуз Ьуз Туг Агд 170

АТС ТСС ААС САС СТС ТСС

Меи Бег Азп С1и Уа1 Сув 185

САС ТТС ТТС САС ААС СТТ

С1п РЬе РЬе Азр Ьуе 7а1 200

ТСС ТСС ТСС ССС САС АТС

Суе Бег Суз Агд Αερ Не 215

СТС ССС СТС ТСС ТСС ТАТ

Уа1 Рго ν&1 Суз Бег Тут

230 235

СТС САА САС ТСС ТСС ААС

Ьеи С1п Азр Бег Сув Ьуз 250

ОАТ ТТТ ТТТ АСС ААС ТСС

Авр РЬе РЬе ТЫ Азп Суа

265

СТТ· ДАО САС ААС ТАС ОСА

Ьеи Ьуз С1и Αεη Тух А1а 280

СЭС АСА СТС АТС АСТ ССС

С1у ТЫ ν&1 Меи ТЬг Рго 295

ССА ССА ТСС ТСТ САС ТСС

А1а Рго Тгр Суз Азр Сув 310 315

ТТС ААА ТТТ СТС ААТ ТТТ

Ьеи. Ьуя РЬе Ьеи Αεη РЬе 330

АТТ САА ССС ТТТ ЕБС ААТ

11е С1п А1а РЬе С1у Аеп

345

ССТ ССА СТС САЕ АСС АСС

Рго Рго Уа1 С1п ТЫ ТЬг

360 (Х1) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ΕΏ ГО N0:1:

ССЗСССОСАС СТТОССТСЗС ААСТСААССС СТСАААбСЗС СТССОССТСС ОССССТСССО 60

СССССССОСА ТСТСАОТССС ТОЭССССССТ ЗОССЗССАСА ССОАСОСТОА СТСТССТСТС 120 ·

АСССТЙЗАТС САОСТОААСТ ТТСАСТСЭСС АСАССАСССС АСТСЭССССС ССАТСЗСТСС 180

АСССТСАОСТ СТСТСССССА САСССОССОО СЭССТТТОСА ТТТТООСООЗ ССССЮСАССА

ЭСТСССССЭС ЭССАСС АТЕ ТТС СТА ОСС АСТ СТС ТАС ТТС ССЗ СТС ССА 289

Меи РЬе Ьеи А1а ТЬг Ьеи Туг РЬо А1а Ьеи Рго

1

5

10

СТС

САТ

ТТС

СТС

АТС

ТСС

ОСС

САС

СТС

АСТ

ОСТ

ССА

САС

ССТ

СТС

337

Ьеи

Азр

Ьеи

Меи

Бег

А1а

С1и

ν&1

Бег

С1у С1у

Αερ

Агд

Ьеи

15

20

25

САС

ТСТ

СТС

ААА

ССС

АОС

ОАТ

САЕ

ТСС

СТС

ААС

САА

САС

АЭС

ТСС

АСС

385

Азр

Суе

Уа1

Ьуз

А1а

Бет

Авр

С1п

Суз

Ьеи

Ьуз

С1и

О1п

Бег

Суз

Бег

30

35

40

АСС

ААС

ТАС

СЭС

АСА

СТА

АСС

САС

ТСС

ото

ОСС

СЭС

ААО

САА

АСС

ААС

433

ТЫ

Ьув

Тут

Агд

ТЫ

Ьеи

Агд

61л

Суз

Уа1

А1а

С1у

Ьуз

О1и

ТЬг

Абп

45

50

55

ТТС

АОС

СТС

АСА

ТСС

ОСС

СТТ

САС

ССС

ААО

ОАТ

САЕ

ТСС

ССТ

АСС

ССС

481

РЬе

Бег

Ьеи

ТЬг

Зег

С1у

Ьеи

С1и

А1а

Ьув

Αερ

С1и

Суз

Агд

Бег

А1а

60

65

70

75

АТС

САС

ССС

ТТС

ААО

САС

ААС

ТСТ

СТС

ТАС

ААС

тсс

ССС

ТСС

ААС

<ГОО

529

Меи

С1и

А1а

Ьеи

Ьуз

С1п

Ьув

Бег

Ьеи

Тут

Ава

Сув

Агд

Суе

Ьуз

Ахд

80

85

90

СЭС

АТС

ААЕ

ААА

ОАЭ

ААС

ААТ

ТСТ

СТС

ССТ

АТС

ТАС

ТСС

АОС

АТС

ТАС

577

О1у

МеЬ

Ьув

С1и

Ьув

АбП

Суб

Ьеи

Агд

Не

Туг

Тгр

Бет

МеЬ

Туг

95

100

105

САС

АЭС

СТС

САС

СОА

ААТ

САС

СТС

САА

САТ

ТСС

ССС

ТАТ

САС

ССС

625

О1п

Бег

Ьеи

С1п

С1у

Азп

Аер

Ьеи

С1и

Авр

Бег

Рго

Туг

С1и

Рхо

110

115

12 0

СТТ

ААС

АСС.

АЭС

ТТС

ТСА

ОАТ

АТА

ТТС

ССС

ССА

ОТС

ССС

ТТС

АТА

ТСА

673

Уа1

Αεη

Бег

Агд

Ьеи

Бег

АВр

Не

РЬе

Агд

А1а

Уа1

Рго

РЬе

Не

Бег

125

130

135

ОАТ

СТТ

ТТС

САС

САА

СТС

САА

САС

АТТ

ТСС

ААА

ООО

ААС

ТОС

СТС

721

Азр

Уа1

РЬе

С1п

О1п

Уа1

С1и

ΗΪ3

Но

Бег

Ьув

Оху

АВП

Абп

Суе

Ьеи

140

149

150

255

АСТ

ССС

АСС

АСТ

АСС

АСТ

ССС

ТТС

сос

ОТС

ААС

ДАО

ССТ

СТО

зеэ

1393

ТЬт

А1а

ТЬг

А1а

РЬе

Агд

Уа1

Ьуе

Абп

Ьуз

Рго

Ьеи

С1у

365

370

375

ССА

ОСА

ССС

ТСТ

САС

ААТ

ОАО

АТС

ССС

АСА

САС

СТТ

ТТА

ССА

ССС

ТСТ

1441

Рго

А1а

С1у

Бег

С1и

Αεη

С1и

11е

Рго

ТЬг

Н1в

νβΐ

Ьеи

Рго

Суб

380

385

390

3 95

ССС

ААТ

ТТС

СА£3

ОСТ

САС

ААС

СТС

ААА

ТСС

ААТ

СТС

тез

ССТ

АОС

АСА

1489

А1а

Αεη

Ьеи

С1П

А1а

от

Ьув

Ьеи

Ьуз

Бег

АВП

ν&1

Бег

С1у

Бег

ТЬг

400

405

410

САС

СТС

ТСТ

СТТ

ТСТ

ОАТ

АСТ

ОАТ

ТТС

ССА

ААС

ОАТ

сот

СТС

ССТ

СОТ

1537

Н1з

Ьеи

Суе

Ьеи

Бег

Азр

Бег

Авр

РЬе

С1у

Ьув

Азр

С1у

Ьеи

А1а

Э1у

415

420

425

ССС

ТСС

АСС

САС

АТА

АСС

АСА

ААА

ТСА

АТС

сст

ССТ

ССС

АЭС

тес

1585

А1а

Бег

9ег

Н1Б

Не

ТЬг

Ьув

£ег

МеЬ

А7а

А1а

Рго

Бех

Суз

430

435

440

АСТ

СТС

АСС

ТСА

СТС

ССС

СТС

АТС

СТС

АСС

ССС

СТТ

ССТ

ОСС

СТС

1633

Бег

Беи

Бег

Ьеи

Рго

ν&1

Ьеи

МеЬ

Ьеи

ТЫ

А1а

Ьеи

А1а

Ьеи

445

450

455

ТТА

ТСТ

СТА

тсо

ТТС

ССА

САА

АСС

ТСС

ТАССТССАТС ι

ССССААААСА

1680

Ьеи

Бег

Уа1

Бег

Ьеи

А1а

61и

ТЬг

Бег

460

465

АСААААСАСА АССААСТАТТ

СТСТСССТСТ ССТСТТСТАТ

ОТАТОААААС

1740

ССАЗТТТТАА

1800

ТААСАААОСТ

1860

АТСТСААААТ

ААЭСТСССТТ САСААССАСТ

ТТСАСССААС ТССААСТСТТ

ТССТТСЗТТТТ

ТСТОССССТС АОЭСОСТТСТ

СТТЭААСААС ТОСТАСА0СС

СТААТТССАА

АСССАТААОС

1920

ОСТОСОСТТА

1980

СТСТСЭСССС тсстссссст

ТСАТСТСТТТ ЕАТССТСАСО

ТААССТСАСС АТТТССАССА

АТСОТАСТСС ТОАТОАТСА'

ТСТАААССДА

СЗТААТТТТА

АСАУС'ГТСАА СССТСТГСТС ТСТАСТССТТ АССААСДССА САТАСТАТТС АТАААСАТТС 2040

ТТССАТСТСТ ТАСТСАОСАС САТТСССТТС ТСААСАСАОС СССССАСССТ ДСТСТСААТО

2100

АСААСТССАС ЗТТСС-ССТСА АСАСТССАСТ ТОССАСАСТС ТАССТТСТАС ТААТСТГСАС 2160

СТТТСССТСТ АТСОТСТССА САОАОТОТТТ АТСТАТТТАС АОАСТиТТСТ СТСАТССССС 2220

ААСААСААСА АССАСАААТТ ССТТОСТСАС СТССАААТЗТ ААССООТССТ ТТАОСССАЭТ

2280

АСАССАСССТ СОЗТСТСССС СТСССАСАСС ТСССССАТТС ТТСАТСОССА СТСТССТСАС 2340

СТТТ5СТТСА СТОАСААССТ СААТСТАОСТ 2400

СТТС6ТТСАС ТТАССАССТС АСАТАТАСАА 2460

ССТТСССААС ТАТТАССТТТ СТАТСТТТТС 2520

САТСОТТТАА ТАСАТССАСС ССТТТССТСТ 2580

САТССАТСТС ССТСТСАААА ССАЗСССССА

2640 тсстстттст стзсасассс ассаосааас 2700

ТТТТСАААТС ААСССТСССТ СТС'ГСТААСС

2760

ЗТТЗАТСССА СААСТСССАС ТТССТСТАСС 2820

АОАОАСАОСТ ТТСАТТСССА СТОЗСТОЗСС 28В0

СТСТТТСААА СТТСАССССТ СССАССССАС 2940

ТАСААСАССТ ТССАТТСААС СТСАТСААСС

30ΰ0

ААСАСАСТСТ СССССАСААА АССААССЗСА 3060

СТССЛЛЛОаТ СААСССАТТС ССААААТАСА 3120

САТСТТССТТ ЛСТАСССАСА САССАТСТСС 31В0 ттаостстат атстлласас стсттсаатс

3240 . ССТОССАССС АТТССТЗЛЛА АСТСААСААА 3300

САААСТАТСА СТОССТТСТС АСССТСССАС 3360

СТСАТАТССТ СССТССТСТТ ТСАЗЗТТТСС 3420 аАссстттса тстстсаазт асстттатлт 34В0

СТСААТАССС АССТТТСТТС ССТТСАСААТ 3540

СТСТАССТОС ТСАСТСССАА СТТССАТСАА

3600

СААААТСААС ТСТТСТТАСА СТТСТТАСТС САААСАТСАС СААСТАТТАС СТТАСССТТА АААССАСТЗТ ТССТСАСССС АТСТТТТААТ САТССОТААС АСТАОСТССА АСАТСААСТТ АСААССССАС ТТСТТТАЗСА САААССТССС АСАССАСССТ СССССТССТС ТСТТТАТСТС ААТССТТСАА ТТСТТАТААА ССОТСССАСТ ТССАССАСАС СССТТТССАТ СТТСССТОСС АСААСССАТС ССАТСААСА.Т СТССТССССТ АТАЗААЗСАТ СТТТЗСТССТ ЗАССАСААСС СТСТССТСТА САТТССТСТС ТСАССТТСАТ СТТТАТССАТ СТАСАСДССС АССАСАСОСТ САЗААСАЗЗА ОССАСАСТСТ СААЗССЗАЗА ТССАССССТС СТССТОАССТ ССССАСАССС ТТСАСОТТСА СААТСТСТАА атсзттэсст ЗЗАЗАСЗАТА ТСТТТССТСС АТТСАОСССТ АЗАССАЗВОА ССССТССТСС АСАСАСТСТС СТТСССЛСАА АЛТОАТТСАС СТСЗЗЗАЗЗЗ СЗАААТЗТТА АТСААТЛССС АТЗТААААТА ЗТТТТСОАСЗ ОСЛАТЗСАТС СААСЛТССАА САСТСАТАСА ТТЙДАТАААС АТАТТССАТС

ТОССЗАААЗС СССССС 3616 (2) сведения О 5ΕΏ ГО N0:2:

(1) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПСТЛЕДОВАТЕПЬНОСТИ:

(A) ДЛИНА: 468 аминокислот (B) ВИЦ: аминокислота (ϋ) ТОТСШГИЯ: линейная (ΐΐ) вад МОЛЕКУЛЫ: белок (χΐ) ОПИСАНИЕ ПССЛЕЩСЕМГЕЛШССТИ: 2Е0 ГО N0:2:

Моб

РЬе

Ьеи

А1а

ТЬг

Ьеи

Туг

РЬе

А1а

Ьеи

Рго

Ьеи

Азр

Ьеи

1

5

10

15

Мее

Зег

А1а

31 и

ν&ι

Зег

С1у

Авр

Агд

Ьеи

Азр

Суз

Ьуз

АДа

20

25

30

Зег

Азр

31п

Сув

Ьеи

Ьуз

С1и

С1п

Зег

Суз

Зег

ТЬг

Ьуз

Тух

Ахд

ТЬг

35

40

45

Ьеи

Агд

С1п

СУ5

ν&1

А1а

С1у

Ьув

С1и

ТЬг

Аби

РЬе

Зег

Ьеи

ТЬг

Зет

50

55

60

С1у

Ьеи

С1и

А1а

Ьув

Азр

С1и

Суз

Агд

Зег

А1а

МеЬ

С1и

А1а

Ьеи

Ьуз

65

70

75

ВО

С1п

Ьув

Зег

Ьеи

Туг

Αεη

Суз

Агд

Сув

Ьув

Агд

С1у

Нес

Ьуз

С1и

85

90

95

Ьук

Аяп

Сув

Ьеи

Агд

Не

Тут

Тгр

Бег

меб

Тут

С1п

Зег

Ьеи

С1п

51у

100

105

110

Аап

Авр

Ьеи

<11 и

Азр

Зег

Рго

Тут

С1и

Рго

Уа1

Азп

Бог

Агд

Ьеи

115

120

125

Зег

Азр

Не

РЬ.е

Агд

А) а

Уа1

Рго

РЬе

Не

Зег

Αερ

ν_Βι

РЬе

С1п

130

135

140

Уа1

С1и

Н16

Не

Зег

Ьуз

<31у

Аят)

Азп

Суз

Ьеи

Авр

А1а

А1«

Ьув

А1а

145

150

155

160

СУЕ

Αεη

Ьеи

Азр

АЗР

ТЫ

Суз

Ьуз

Ьуч

Тут

Ахд

Зег

А1а

Туг

11е

ТЬг

155

170

175

Рго

Суз

ТЬг

ТЫ

Зег

Неб

Зег

Αεη

С1и

Уа)

Суз

Αεη

Агд

Ьуз

Сув

180

385

190

ΗΪ8

Ьуз

АЗа

Ьеи

Агд

С 1г.

РЬе

Азр

Ьув

Иа1

Ргэ

АТ а

Ьуз

Н13

2ег

195

200

205

Туг

<31у

МеС

Ьеи

РЬе

Суз

Зег

Суб

Агд

Азр

Не

А1а

Суз

ТЫ

С1и

Агд

210

215

220

Αχ а

Ахд

О1п

ТЬг

Не

Уа1

Рго

УаГ

Суз

Бех

Тут

О1и

Ага

С1и

Агд

225

230

235

240

Рго

Αεη

Суз

Ьеи

Зег

Ьеи

С1п

Азр

Зег

Сув

Ьуз

ТЬг

А5П

туг

Не

Сув

245

250

255

Агд

Зег

Агд

Ьеи

А1а

Авр

РЬе

ТЬг

Азп

Суе

С1п

Рго

С1и

Зег

Агд

260 265 270

Зет νβΐ Зег

Азп Сув

Ьеи

Ьуз 51и Азп Тут А1а Авр Суз Ьеи Ьеи А1а

275

280

285

Туг

Зег 290

<31у

Ьеи

11е

С1У

ТЫ 295

ναΐ

Мес

ТЫ

Рго

Авп 300

ЛУт

ν&ι

Авр

Зег

Зег 305

Зег

Ьеи

Зет

ν&ι

А1а 310

Рго

Тхр

Сув

Авр

Сув 315

Зег

Азп

Бет

С1у

Азп 320

Аяр

Ьеи

С1и

Азр

Суз 325

Ьеи

Ьуз

РЬе

Ьеи

Авп 330

РЬе

Ьув

Авр

Авп 335

ТЫ

Сув

Ьеи

Ьуз

Азп 340

АЗ а

71е

<31п

А1а

РЬе 345

С1у

Азп

С1у

5ег

Αερ 350

¥а1

ТЫ

МеС

Тгр

С1п 355

Рго

А1а

Рго

νΛΐ 360

С1п

ТЬг

ТЫ

ты

А1а 365

ТЬг

ТЫ

ТЬг

Айа 370

РЬе

Агд

Уа1

Ьуз

Азп 375

Ьуз

Рго

Ьеи

С1у

Рго ЗВО

А1а

С1у

Зет

С1и

Азп ЗЕБ

С1и

Не

Рго

ТЬг

Н1з 390

ναΐ

Ьеи

Рго

Суя 395

А1а

Азп

Ьеи

С1п

А1а 400

С1п

Ьуа

Ьеи

Ьуз

Зег 405

Αεη

Уа1

Зег

С1У

Зег 410

ТЫ

ΗΪΒ

т.еи

Сув

Ьеи 415

5ег

Азр

Зег

Азр

РЬе 420

С1у

Ьуе

Авр

С1у

Ьеи 425

А1а

С1у

А 1а

Зет

Яе г 430

Ηίβ

Не

ТЫ

ТЬг

Ьуз 435

5ег

МеЪ

А1а

Рго 440

Рго

Зег

Сув

Зег

Ьеи 445

Бег

.Чет

т.еи

Рго

ν*ι 450

Ьеи

Мес

Ьеи

ТЫ

А1а 455

Ьеи

А1а

Ьеи

Ьеи 46С

Зет

ν&ι

Зет

Ьеи

А1а С1и ТЬг Зег

465 (2) СВЕДЕНИЯ О 5ΕΏ ГО N0:3:

(ί) ХАРАКГЕЕИСТИКИ ПОСЛВДСВА1ЕПЬНОСТИ:

(A) ДЛИНА: 39 пар оснований (B) ВИЦ: нуклеиновая кислота (C) СТРУКТУРА ПДПИ: одиночная (О) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ΐΐ) ВИД МОЛЕКУЛЫ: кДНК (ΧΪ) СПИСАНИЕ ПОСЛЕДСВАГЕЛЬНССТИ: ЗЕО ГО N0:3:

ААЗЗАААААА ССССССОССА ТССССААССС САССТСССС 39 (2) СВЕДЕНИЯ О 5Е0 ГО N0:4:

(г) ХАРАКГЕЕИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:

(A) ДЛИНА: 33 пара оснований (B) ВИД: нуклеиновая кислота (C) СТРУКТУРА ЦЕЛИ: одиночная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ΐΐ) ЕВД МОЛЕЮТЫ: кДНК (ΧΪ) СПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ΞΕΏ ГО N0:4:

АСТТТТСТСС АСССТССССС АСАССТСЗТС ОСА (2) СВЕДЕНИЯ О ЗЕО ГО N0:5:

(ΐ) ХАРАКГЕЕИСТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:

(A) ДЛИНА: 33 пары оснований (B) ВИЦ: нуклеиновая кислота (C) СТРУКТУРА ЦЕЛИ: одиночная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ΐΐ) ВИЦ МОЛЕКУЛЫ: кДНК (ΧΪ) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ЗЕО ГО N0:5:

АСТТТТСТСС АСССТОСССС АСАОСССАТС АСА (2) СВЕДЕНИЯ О ЗЕО ГО N0:6:

(ΐ) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПСХДЕЩСВАТЕЛЬНССТИ:

(A) ДЛИНА: 1926 пар оснований (B) ЕВД: нуклеиновая кислота (C) СТРУКТУРА ЦЕПИ: одиночная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ΐΐ) ВДД МОЛЕКУЛЫ: кДНК (ΐχ) ОТЛИЧИТЕЛЬНАЯ ОООВЕННОСТЬ:

(A) ИМЯ/КЛКЧ: СОЗ (B) МЕСГОНАХСЙДЕНИЕ: 10..1920 (ΧΪ) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ЗЕО 10 N0:6:

ОСЗЗССЗСС АТС ССС ААС ССС АСС ТСС ССС ССС ОСА ССС СТС 333 СТС

Меь А1а ьув А1а ТЬг Зег С1у А1а А1а С1у Ьеи С1у Ьеи 470 475 460

96

ААО

СТС

ТТТ

ТТС

СТС

СТ<3

ССС

СТА

СТС

ССА

САА

ССС

СТО

ССТ

СТС

Ьуз

Ьеи

РЬе

Ьеи

Рго

Ьеи

С1у

С1и

А1а

Рго

Ьеи

С1у

Ьои

485

490

495

ТАС

ТТС

тел

АСС

САТ

ССТ

ТАС

ТСС

СДС

АСС

СТС

ТАТ

С1С

САС

ССА

144

Туг

РЬе

Сег

Агд

Авр

Айа

Туг

Тгр

<31и

Агд

Ьеи

Тух

ν«1

Азр

С1П

Рго

500

505

510

с ст

ОСС

АСА

сст

сто

СТС

ТАТ

СТС

САТ

ССС

СТА

ССС

САТ

ССС

ССТ

ССА

192

А1а С1у ТЬг Рго Ьеи Ьеи Туг V·! ΗΪΒ А1а Ьеи Ага Авр А1а

Рго С1у

515

520

525

ЕАА

стс

ССС

А5С

ТТС

СОС

СТС

ССС

САС

ТАТ

СТС

ТАТ

ССС

стс

ТАС

ССС

240

О1и

Уа1

Рго

Зег

РЬе

Агд

Ьеи

С1у

С1П

туг

Ьеи

Тух

С1у

Уа1

Туг

Агд

530

535

540

545

АСС

СЕТ

СТС

САТ

ОАС

ААТ

ОАС

тсс

АТС

САС

АТС

САТ

ССС

лет

СЕС

288

ТЬг

Ахд

Ьеи

Ηχε

С1и

Авп

Авр

Тгр

11·

Ηίβ

11«

Аар

А1в

С1у

ТЬх

С1у

550

555

560

СТС

ТАС

СТС

ААТ

САО

АСС

СТС

ОАС

САТ

лот

ТСС

САС

САЗ

СТС

336

Ьеи

дуг

ьеи

Ави

С1п

Зег

Ьеи

Аар

Н13

Зег

Ттр

С1и

С1п

Ьеи

565

570

575

АЗС

АТС

ССА

ААТ

ОСС

ССС

ТК

ССС

ТТС

СТС

АСС

СТС

ТТС

стс

САО

СТС

384

Зег

Не

Ахд

Авп

С1у

РЬе

Рго

Ьеи

ТЬг

ν®ι

РЬе

Ьеи

С1п

Уа1

560

585

590

ТТС

СТС

сте

ТСС

АСА

ССС

САС

АСА

САЕ

ССА

САС

тот

САТ

ТЕС

ССА

СТС

432

РЬе

Ьеи

Е1у

Зег

ТЫ

А1а

С1п

Ахд

С1и

С1у

С1и

Суз

Их в

Тхр

Рго

С1у

595

600

605

тот

ССС

ССТ

СТС

ТАС

ТТС

ТСС

ТТС

АТС

ААС

ОАС

АСС

ТТС

ССА

ААТ

ТОТ

480

Оув

А1а

Агд

Уа1

Туг

РЬе

Зет

РЬе

Не

Айп

Аар

ТЫ

РЬе

Рго

Αεη

Суз

610

€15

620

625

АСС

тсс

ТТС

ААА

ССС

САТ

стс

тсс

АСС

ССА

С-АЕ

АСС

СЕТ

СТС

ТСС

52В

Зег

РЬе

Дув

А1а

Агд

Авр

Ьеи

Сув

ТЫ

Рго

С1и

ТЬг

С1у

ν&1

Зег

630

635

640

ТТС

ССС

АТС

АСС

САС

ААС

АСС

ССС

ССТ

ССС

АСС

ТТС

ТАС

САС

ТТС

ССС

576

РЬе

Агд

Не

Агд

С1и

Авп

Ахд

Рго

Е1у

ТЬг

РЬе

Тух

С1п

РЫ

Ахд

645

650

655

АТС

СТА

ССТ

СТС

САС

ТТС

СТТ

тот

ССТ

ААС

АТС

АСТ

СТС

ААС

ТАС

ААА

624

Мае

Ьеи

Рго

ν·1

О1п

РЬа

Ьеи

Сув

Рго

Αεη

Не

Зег

Уа1

Ьув

7Уг

Ьув

660

665

67 0

СТС

ТТА

САА

ССС

САС

ССТ

СТС

ССС

ТТС

ССТ

ТСТ

САС

ССС

САС

ТСТ

СТС

672

Ьеи

С1и

С1у

Авр

С1у

Ьеи

Рхо

РЬе

Агд

Сув

Αερ

Рго

Авр

Сув

Ьеи

675

660

665

САС

ЕТС

АСС

ССС

тсс

ССА

СТС

САТ

ССС

САС

СТТ

САС

ААС

ТАТ

720

С1и

Уа1

Бег

ТЬг

Агд

Тгр

Л1а

Ьеи

Авр

Ахд

С1и

Ьеи

С1п

С1и

Ьув

Туг

690

695

700

7С5

СТС

стс

САО

ССТ

САС

ТСС

ССА

СТС

ССА

СТС

ССТ

ОСА

ОСС

ААС

САО

768

Уа1

Ьеи

С1и

А1а

С1и

Суз

А1а

Уа1

А1а

Е1у

Рго

Д1у

А1а

Авп

Ьув

С1и

710

715

720

ААС

СТС

ССС

отс

ТСС

ТТС

ССС

СТС

АСС

ста

ТАТ

ЗАТ

ПАА

САС

ТСС

816

Ьув

Уа1

А1а

Уа1

Зег

РЬе

Рго

ν»1

ТЬг

ν»1

Тут

Авр

С1 и

Аар

Авр

Зег

725

730

735

ССС

АСС

ТТС

ТСС

ССА

ост

ста

ССС

АСС

ССС

АСТ

ССТ

СТС

САС

864

Рго

ТЬг

РЬе

Бег

С1у

ν&ι

<51у

ТЫ

А1а

Зег

А1а

Уа1

νβΐ

С1и

740

745

750

ТТТ

ААС

ССС

ААС

САС

ССС

АСТ

СТС

СТА

ССС

АСТ

СТС

САС

СТО

ттт

САТ

912

РЬе

Ьув Агд

Дув

Е1и

С1у

ТЫ

Уа1

Оа1

А1а

ТЬг

Ьеи

С1п

νβΐ

РЬе

Авр

755

760

765

ССА

САТ

СТО

СТС

ССА

ОСА

ТСТ

ССС

ОАО

стс

СТО

АСС

ест

ТАС

АСА

АСС

960

А1а

Авр

ν&1

Рго

А1а

Зег

С1у

Е1и

Ьеи

Уа1

Агд

Тут

ТЬг

Зег

770

775

760

78Ь

АСА

СТА

стс

ТСА

ССС

САТ

тсс

ТСТ

ССС

САС

АСС

ТТС

ССС

СТС

САС

1008

ТЫ

Ьеи

Зег

Е1у

Авр

Бег

Тгр

А1а

С1л

С1п

ты

РЬе

Ахд

Уа1

С1и

790

795

800

САС

АСА

ССС

ААС

САС

АСС

ТТС

СТС

САС

ТСС

ААС

ТСС

СТС

ССС

1056

Βίε

ТЫ

Рго

Авп

С1и

ТЫ

Деи

Уа1

О1п

Зег

Авп

Зег

ν&1

Ахд

805

810

815

ССА

АСС

АТС

САС

ААТ

ТАС

ААС

СТС

СТТ

СТС

ААС

АСС

СТО

ТСС

АТС

1104

А1а

ТЬг

Мег

Ηίβ

Аби

Тут

Ьув

Ьеи

νβΐ

Ьеи

Авп

Агд

Зег

Деи

Зег

Не

Й20

825

830

ТСА

САС

АСС

ССА

СТС

САС

СТА

СТС

стс

ААТ

САС

ТСА

САС

1152

Зег

С1и

Бег

Атд

νβΐ

Ьеи

С1п

Деи

Уа1

Ьеи

Уа1

Авп

Авр

Зег

Авр

835

840

845

ТТС

САС

СЕС

ССТ

ССС

ТСА

ССТ

СТТ

стс

ТТС

СТС

САТ

ТТС

ААС

ста

ТСТ

1200

Рпе

С1п С1у

Рго

С1у

Бег

<31у

ν&ι

Деи

РЬе

Ьеи

Ηίε

РЬе

Авп

Уа1

Сег

Е50

855

860

865

СТС

ССТ

СТС

АСС

СТС

ААС

СТА

ССС

АТС

ССС

ТАС

ТСС

ТТС

ССА

СТС

1248

Уа1

Деи

Рго

Уа1

ТЫ

Ьеи

АВП

Ьеи

Рго

Мег

А1а

Туг

Бег

РЬе

Рго

Уа1

870

875

880

ААТ

АСС

АСА

ССС

ССТ

ТАТ

ССС

САС

АТТ

ССС

ААА

СТТ

ТСС

ста

САС

1296

Азп

Агд

А1а

Ахд

Агд

Туг

А1а

С1п

Не

С1у

Дуя

Уа1

Суз

Ув1

С1и

885

890

895

ААС

ТОС

САС

ТТС

АСС

стт

СТС

ТСС

' АТС

САС

ТАС

ААС

СТС

ССТ

ССС

1344.

Азп

Суя

С1П

С1и

РЬе

Зег

С1у

7а1

Зег

Не

<51п

Туг

ЬУБ

Ьеи

С1п

Рго

900

905

910

ТСС

АСС

АЛС

ТСС

АСТ

ССС

СТА

ССТ

СТС

АСС

ТСА

АСА

САА

САС

1392

Зег

Яйу

ТЬг

Авп

Суе

Бег

А1а

С1у

Уа1

ναΐ

ТЫ

Зег

ТЫ

С1и

Аар

915

920

925

АСС

тел

. ССС

АСС

ΟΤΖι

ТАТ

' СТА

ААТ

¹ САС

АСС

САО

ССС

СТС

ССС

СОА

. ССТ

1440

ТЬг

Зег

С1у

ТЬг

Ьеи

Туг

νβΐ

Азп

Авр

ТЬг

О1и

А1а

Деи

Ахд

Рго

930

935

940

945

ОАО

ТСТ

АСС

ОАО

СТТ

САО

ТАС

АСА

ЕТС

СТА

ССС

АСТ

САС

ССС

САС

АСС

1488

С1и

Сув

ТЬг

С1и

Ьеи

С1п

Туг

ТЬг

νβΐ

Уа1

А1а

ТЬг

Авр

Агд

О1п

ТЬг

950

955

960

ССС

АСС

САС

АСС

САА

ЕСТ

тсс

ТТА

стс

СТС

АСА

СТС

САС

ОСТ

АСА

ТАС

1536

*

Агд

С1п

ТЬг

ст

А1а

Зег

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

О1и

О1у

ТЬг

Туг

965

970

975

АТТ

ССА

САА

ОТС

СТС

ТСС

ССС

ЛАЕ

ТСС

ТСТ

ОСА

СТА

ААС

АСТ

1584

Не

А1а

С1и

νβΐ

Е1у

Суя

Рго

Ьув

Зет

Сув

А1а

Уа1

Авп

Дув

Агд

980

985

990

СОА

ССТ

САС

ТСТ

САС

ОАО

ТОТ

сот

ССС

СТС

СТТ

ТСТ

ССА

АСТ

ОСС

АСА

1632

Агд

Рго

С1и

Суя

С1и

<31и

Сув

С1у С1у

Ьеи

С1у

Бег

Рго

ТЬг

С1у

Ахд

995

1000

1005

ТСТ

САС

ТСС

ССТ

САС

СТА

САТ

СТТ

ААА

СТС

АТС

АСС

АБС

ААС

ТТС

ТСС

1680

Суб

51 и

Тгр

Агд

С1п

С1у

Авр С1у

Дув

С1у

Не

ТЫ

Ахд

Авп

РЬе

Бег

1010

1015

1020

1025

АСС

ТОТ

ТСТ

ССТ

АОС

АСС

АОС

АСС

тот

ССТ

САТ

ССС

САС

ТСТ

САТ

ССТ

172 В

ТЫ

Сув

Бег

рго

Бег

ТЫ

Агд

ТЬх

Суя

Рго

Авр

О1у

И1В

Сув

Авр

А1а

1030

1035

1040

стс

САО

АСС

ССС

САТ

АТС

ААС

АТТ

ТСС

ССС

САС

ОАС

ТСТ

СТС

ССТ

1776

Ьеи

С1и

Бет

Ахд

Аяр

Не

Авп

Не

Сув

Рго

С1П

Авр Сув

Ьеи

Ахд

С1у

1045

1050

1055

ССС

АТТ

СТТ

ССС

САТ

САС

ССА

ССС

САС

ССС

САС

СТС

АТТ

ААА

ССС

1824

Рго

Не

Уа1

С1у

Е1у

ЕХ5

О1и

Агд

<31у

С1А1

Агд

61П

С1У

Не

Ьув

А1а

1060

1065

1070

ССС

ТАТ

ССС

АТС

ТСС

ААС

ТСТ

ТТС

ССТ

ОАТ

ОАО

ААО

тсс

ТТС

тсс

1872

С1у

ДУГ

<31у

11с

Сув

Авп

Сув

РЬе

Рго

Авр

С1и

Ьув

Сув

РЬе

Сув

1075

1080

1085

САС

• ССА

ОАО

САС

АСС

САО

СТС

ССА

. ТТС

ТОТ

ОАТ

<ЗСО

СТО

ТСС

ССС

АСС

1920

С1и

. Рго

С1и

Авр

' Бег

О1п

С1у

¹ Рго

Ьеи

Сув

Авр

А1а

Ьеи

Сув

Ахд

ТЬг

1090

1095

1100

1105

СТСЕАС

1926 (2) СВЕДЕНИЯ О ЗВ2 П) N0:7:

(1) ЖРЖГЕИ4СТИКИ ПССТВДСВаДЪЛЬНССГИ:

(A) ДЛИНА: 637 аминокислот (B) ВИД: аминокислота (Ω) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ίί) ВДЦ МОЛЕКУЛЫ: белок (XI) СПИСАНИЕ ПССЛЕЩСВАГЕЛЬНСХЛИ: 3ΕΏ Ю N0:7

Мей А1в Дуб А1а ТЫ Бег

С1у А1а А1а С1у Ьеи Е1у Ьаи 10 '

Дуе Ьеи РЬе 15

1

Ь

Деи

Ьеи

Рго 20

Ьеи

Деи

С1у

С1и

А1а 25

Рго

Ьеи

С1у

Деи

Туг 30

РЬе

Зег

Агд

Авр

А1а 35

Τιτ

Тгр

С1и

Ахд

Ьеи 40

Тух

Уа1

Авр

61п

Рго 45

А1а

С1у

ТЬг

Рго

Ьеи 50

Ьеи

Туг

Уа1

Ηίε

А1а 55

Ьеи

Агд

Азр

А1а

Рго 60

Е1у

С1и

ν&ι

Рго

Бег 65

РНе

Агд

Ьеи

С1у

О1п 70

Туг

Ьеи

Туг

С1у

Уа1 75

Туг

Ахд

ТЫ

Агд

Ьеи 80

Н15

С1и

Аеп

Авр

Тгр 85

Не

Ηΐε

Не

Авр

А1а 90

<31у

ТЫ

С1у

Ьеи

Ьеи 95

Тух

Ьеи

Авп

С1п

Бег 100

Деи

Авр

Ηίε

Зег

Бег 105

Тгр

Е1и

<31п

Деи

Бег 110

Не

Агд

АЗП

С1у

С1у 115

РЬе

Рго

Ьеи

ТЬг 120

Уа1

РЪе

Ьеи

С1п

ν&ι 125

РЪе

Ьеи

Е1у

Бег

ты 130

А1а

С1п

Агд

С1и

(Э1у 135

Е1и

Сув

ΗΪΒ

Тгр

Рго 140

С1у

Суз

А1а

Агд

Уа1 145

Тут

РЬе

Бег

РЬе

11е 150

АВП

Авр

ТЫ

РЬе

Рхо 155

Авп

сув

Бег

РЪе 160

Ьув

А1а

Агд

Азр

Ьеи 165

Суе

ТЬг

Рго

С1и

ТЬг 17 0

С1у

Уа1

Бег

РЪе

Агд 175

11е

Ахд

<31 и

Авп

Ахд 180

Рго

О1у

ТЬг

РЪе 185

Туг

С1п

РЪе

Агд

май 190

Ьеи

Рго

Уа1

□1п

РЬе 195

Ьеи

Суб

Рго

Азп

11е 200

Бег

Уа1

ЬуЕ

Тух

Ьуе 205

Ьеи

С1и

С1у

Авр 210

С1у

Ьеи

Рго

РЬе

Агд 215

Сув

Дер

Рго

Авр

Сув 220

'1- Ьеи

С1и

ν&ι

Зег

•гы 225

Агд

Тгр

А1а

Ьеи

Авр 230

Ахд

С1и

Ьеи

С1п

С1и 235

Ьув

Тух

Уа1

Деи

С1и 240

А1а

С1и

Суб

А1а

Уа1 245

А1а

О1у

Рго

С1у

А1а 250

Αεη

Ьув

С1и

Ьуз

Уа1 255

А1а

Уа1

Бег

РЬе

Рго 260

Уа1

ТЬг

УаЗ

туг

АВр 265

С1и

Авр

Бог

Рхо 270

Рго

ТЫ

РЬе

Бег

С1у 275

С1у

Уа1

С1у

ТЬг

А1а 280

Бег

А1а

Уа1

С1и 285

РЬе

Ьуз

Ахд

Ьув

С1и 290

С1у

ТЬг

Уа1

У«1

А1о 295

ТЬг

Ьеи

С1п

Уа1

РЬе 300

Авр

А1а

Авр

Уа1

Уа1 305

Рго

?11а

Зег

С1у

С1и 310

Ьеи

Уа1

Агд

Туг 315

ТЬг

Зег

ТЫ

Ьеи

Деи 320

Зег

С1у

' А-ВР

Зег

Тгр

Л1а

. С1п

. ТЫ

РЬе

. Ахд Уа1

С1и

ΗΪ3

ТЬг

Рго

325 330 335

Ава С1и ТЬг Ьеи Уа1 <31а Зег Авп Дел Ава Зег V®! агст А1а ТЬг Мес

340

345

350

Κίβ

Азп

Туг

Ьув

Ьеи

\^та1

Ьеи

АЗП

Агд

Зег

Ьеи

Зег

Не

Зег

О1и

Зег

355

360

365

Агд

ναΙ

Ьеи

С1п

Ьеи

Уа1

Ьеи

Уа1

Азп

Авр

Зег

Авр

РЬе

31п

51у

370

375

360

Рго

С1у

Я₽.г

С1у

ν_Β1

Ьеи

РЬе

Ьеи

Ηχε

РЬе

Αεη

Уа1

Бег

ν«1

Т.еи

Рго

365

390

395

400

νβΐ

ТЬг

Ьеи

Асг.

Ьеи

Рго

МеС

А1а

Тут

Зег

РЬе

Рго

ν®ι

Аап

Агд

405

410

415

Αία

Агд

Агя

Туг

А1а

51л

Не

51Υ

Ьув

Уа1

Сув

Уа1

С1и

АВП

Суз

01а

420

425

430

С1и

РЬе

Бег

С1у

Уа1

Зег

Не

61П

7Уг

ьуе

Ьеи

С1п

Рго

Зег

Бег

ТЬг

435

440

445

Авп

Суб

Зет

А1а

Ьеи

31у

ν»1

ТЬг

Зег

ТЬг

С1и

Авр

ТЬг

бег

51у

450

455

460

ТЬг

Ьеи

Тут

Уа1

Ава

Азр

ТЬг

С1и

Айа

Ьеи

Агд

Рго

51и

Сув

Тлг

465

470

475

4В0

61и

Ьеи

С1п

Туг

ТЬг

Уа1

А1а

ТЬг

Авр

Агд

Й1п

ТЬг

Агд

С 1а

485

490

495

ТИг

С 1г.

А1а

Зег

Ьеи

ν«ι

Уь1

ТЬг

УаХ

С1и

С1у

ТЬг

Туг

11е

А1а

С1и

500

505

510

С1и

Уа1

<31у

Суе

РГО

Ьуз

Бет

Суе

Айа

Уай

Азп

Ьуз

Агд

Рго

Сйи

515

520

525

Суе

С1и

б!и

Суз

С1у

Ьеи

51у

Зег

Рго

ТЬг

51у

Агд

Суз

С1и

Тгр

530

535

540

Агд

С1П

С1У

Авр

С1у

ьув

<31у

Не

ТЬг

Агд

Авп

РЬе

Зег

ТЬг

Суз

Зег

545

ььо

555

560

Рго

Зег

ТЬг

Агд

ТИг

Суз

Рго

Азр

С1у

НХЗ

Сув

Авр

А1а

Ьеи

С1и

бег

565

570

575

Агд

Авр

Не

Ава

Не

Суе

Рго

51П

Авр

Сув

Ьеи

Агд

51у

Рго

Не

Уа1

580

585

590

О1у 01У

Είδ

О1и

Агд

51у

С1и

Агд

С1п

С1у

Не

Ьув

А1а

С1у

Туг

О1у

595

600

505

Не

Сув

Авл

Суя

РЬе

Рго

Авр

51и

Ьув

ьув

Сув

РЬе

Суе

©1и

Рго

01и

610

615

620

Авр

ι Бег

О1а

. С1у

• Рго

Ьеи

Суз

Авр

Айа

Ьеи

. Сув

Агд

ТЬг

625 630 635 (2) СВЕДЕНИЯ О 5Е£) ГО N0:8:

Аби

Авп

Суе

Ьеи

Авр

А1а

Айа

Ьуе

А1а

Сув

Азп

Ьеи

Авр

Аар

Не

Суб

670

675

660

685

АДО

ААЗ

ТАС

АСС

ТСС

ССС

ТАС

АТС

АСС

ССС

тсс

АСС

СТС

ТСС

Ьув

Туг

Агд

Зег

А1а

Туг

Не

ТЬг

Рго

Суе

ТЬг

Зег

νεΊ

Бег

690

69Б

700

ААС

САТ

СТС

ТСС

ААС

ССС

ААС

ТСС

САС

ААС

ССС

СТС

ССС

САС

ТТС

Аап

Авр

Уа1

Суз

Азп

Агд

Ьув

Суз

Ηίε

Ьув

Айа

Ьеи

Агд

С1П

РЬе

703

710

715

Авр

Ьув 720

Уа1

Рго

Айа

Ьув

Ηίε 725

Зег

ТУГ

С1у

Ме!

Ьеи 730

РЬе

Суа

Зег

ССС

САС

АТС

ССС

ТСС

АСА

САС

ССС

АСС

ССА

САС

АСС

АТС

СТС

ССТ

Ага 735

Авр

11 е

А1а

Суе

ТЬг 740

С1и

Агд

ст 745

ТЬг

Не

Уа1

Рго

ТСС

ТАТ

САА

САС

АСС

САС

ААС

ССС

ААС

ТСТ

ТТС

ААТ

ТТС

САС

Суз

£ет

Туг

С1и

С1и 755

Агд

С1и

Ьуз

Рго

Авп 760

Суз

Ьеи

Авп

Ьеи

С1п 765

РЬе ТЬг

Авп Суе 7В5

С1п

Рго С1и Зет Агд 750

Бег

νβΐ Зег

Зег

САД

ААС

ТАС

ССТ

САС

ТСС

СТС

ССС

ТАС

ТСС

ССС

СТТ

528

С1и

Ава

Туг

А1а

Азр

Суа

Ьеи

Айа

Туг

Зет

Сйу

Ьеи

800

805

810

СТС

АТС

АСС

ССС

ААС

ТАС

АТА

САС

ТСС

АСТ

АСС

СТС

АСТ

СТС

ССС

ССА

576

Уа1

Ме!

ТЬг

Рго

Азп

Туг

Не

Авр

Зег

Ьеи

Зег

ν»1

Айа

Рго

815

820

825

ТСС

ТСТ

САС

тсс

АСС

ААС

АСТ

ОСС

ААС

САС

СТА

САА

САЗ

тос

ТТС

ААА

624

Тгр

Суа

Авр

Суа

Зег

Аап

Зег

Сйу

Авп

Авр

Ьеи

Сйи

Сув

Ьеи

Ьуз

830

835

840

845

ТТТ

ТТС

ААТ

ТТС

ААС

САС

ААТ

АСА

ТСТ

СТТ

ААА

ААТ

ССА

АТТ

САА

672

РЬе

Ьеи

Аап

РЬе

Ьуз

Авр

Авп

ТЬг

Сув

Ьуя

Арп

Айа

Не

С1п

850

855

8Б0

ССС

ТТТ

ССС

ААТ

ОСС

ТСС

САТ

СТС

АСС

СТО

ТОО

САС

ССА

ССС

ТТС

ССА

720

Αία

РЬе

С-1у

Азп

бйу

Веи-

Аар

Уа1

ТЬг

Уа1

Тгр

б1п

Рго

А1а

РЬе

Рго

865

870

675

СТА

САС

АСС

АСТ

ООС

АСТ

АСС

АСТ

ССС

СТС

ССС

стт

ААС

768

ναΐ

С1П

ТЬг

А1а

ТЬг

Айа

Ьеи

Агд

ν«1

Ьув

Авп

880

885

890

ААС

ССС

СТС

ССС

ССА

ССС

ТСТ

ОАО

ААТ

САА

АТТ

ССС

АСТ

САТ

стт

816

Ьув

Рго

Ьеи

Сйу

Рго

Айа

Сйу

Зег

С1и

Аеа

Сйи

11е

Рго

ТЬг

Ηίε

Уа1

895

900

905

ТТС

ССА

ССС

ТСТ

ССА

ААТ

ТТА

САС

ССА

САС

ААЕ

СТО

ААА

тсс

ААТ

СТО

864

Ьеи

РГО

Рго

Сув

А1а

Авп

Ьеи

Θΐη

Айа

С1п

Ьуз

Ьеи

Ьуз

Зег

А.зп

ναΐ

910

915

920

925

ТСС

ССС

ААТ

АСА

САС

СТС

ТСТ

АТТ

ТСС

ААТ

ССТ

ААТ

ТАТ

САА

ААА

САА

912

Зег

С1у

Авп

ТЬг

ЙХ8

Ьеи

Суа

Не

Зег

Авп

О1У

Авп

Туг

Сйи

Ьуе

Сйи

930

935

940

ост

СТС

ССТ

ТСС

АСС

САС

АТА

АСС

АСА

ААА

ТСА

АТС

ССТ

960

С1у

Ьеи

С1у

Айа

Бег

Ηίε

Не

ТЬг

Ьув

Зег

Ме!

А1а

Айа

Рго

•945

950

955

ССА

АСС

ТСТ

ССТ

СТС

АбС

ССА

СТС

СТО

етс

СТС

ото

СТА

АСС

ССТ

СТЗ

1008

Рго	Зег	Сув	С1у	Ьеи	Вег	Рго	Ьеи	Ьеи	\'а1	Ьеи Уа1 Уай ТЬг А1а Ьеи
		960					965			970
тсс	АСС	СТА	ТТА	ТСТ	ТТА	АСА	САА	АСА	ТСА	ТАССТССАТТ АААААААТАС
1058
Зег	ТЬг	Ьеи	Ьеи	Зег	Ьеи	ТЬг	С1и	ТЬг	Вег
	975					980

ААТАТ13САСА ТСТАААААСА САААЛЛССАА СТТАТСТСТТ ТССТОТТСТС ТТОТАТЛОСТ 1118

САААТТССАО ТТТАбОАОСТ САОТТОАЗАА АСАОТТССАТ ТСААСТббАЛ САТТТТТТТТ 1178

ТТТТССТТТТ ААСАААОСТТ сттотбАтсс ТТСОООбСТТ СТОТС 1223 (2) СВЕДЕНИЯ О 5Е0 ГО N0:9:

(Ϊ) ХАРЖТЕЕИС1ЖИ ПОЕЖЦСЕАИЛЬНСХЛИ:

(A) ДЛИНА: 346 аминокислот (B) БИЛ: аминокислота (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ίΐ) ЕВД МОЛЕКУЛЫ: белок (Х1) СПИСАНИЕ ПООЛЕДСВАГЕЛЬНООТИ: 5Εβ ГО N0:9:

Ьеи 1

Ьеи <31и Азр

Зег 5

Рго Тут С1и Рго Уа1 Аза Бет Агд Ьеи Бег Авр

10

15

Не

РЬе

Агд

ν_&ι 20

νβΐ

Рго

РЬе

Не

бет 25

ναΐ

<31и

Ηίε

Не

Рго 30

Ьуз

С1у

Авп

Сув 35

Ьеи

Аар

А1а

Ьуз 40

А1а

Сув

Авп

Ьеи

Авр 45

Авр

Не

Сув

Ьуе

ьуз 50

Тут

Агд

Бег

А1а

Тут 55

Не

ТЬг

Рго

Суз

ТЬг 60

ТЬг

Зег

ναΐ

Зет

Авп 65

Авр

ναΐ

С/Э

А2П

Агд 70

Агд

Ьуз

Сув

Ηχε

Ьув 75

Айа

Ьеи

Агд

С±а

РЬе 80

РЬе

Аеп

Ьув

Уа1

Рго 85

А1а

Ьув

Ηίε

Зег

туг 90

Оху

МеТ

Ьеи

РЬе

еуз 95

Бет

Сув

Агд Авр

Не 10С

А1а

Суз

ТЬг

С1и

Агд 105

Агд Агд

С1п

ТЬг

Не 110

ναΐ

Его

Уай

Сув

Бег 115

Туг

С1и

Агу

С1и 120

Ьуз

Рго

Азп

Сув

Ьеи 12 5

АВП

Ьеи

С1п

Авр

Зег 130

Суз

Ьув

ТЬг

Азп

Тут 135

11й

Сув

А1‘9

Бет

Агд 140

Ьеи

А1а

Авр

РЬе

РЬе 145

ТЬг

Авп

Суз

Сйп

Рго 150

С1и

Зет

Агд

Зет

ν&ι 155

Зет

бег

Сув

Ьеи

Ьув 160

Сйи

Авп

Туг

А1а

Азр 165

Суа

Ьеи

Αία

Тух 170

Бет

б1у

Ьеи

Не

С1у 175

ТЬг

Уа1

Маб

ТЬг

Рго 180

Ава

Тут

Не

Азр

Зег 185

Бег

бег

Ьеи

Бет

Уа1 190

А1а

Рго

Тгр

Сус

Азр 195

Суз

Зег

Авп

Бег

С1у 200

Авп

Азр

Ьеи

С1и

01и 205

Сув

Ьеи

Ьуз

РЬе

Ьеи 210

Аеп

РЬе

Ьув

Авр 215

Азп

ТЬг

Суе

Ьеи

Ьув 220

Азп

А1а

Не

<?1п

Айа 225

РЬе

Сйу

Авп

Сйу

Бег 230

Авр

Уа1

ТЬг

Уа1

Тгр 235

С1п

Рго

А1а

РЬе

Рго 240

Уа1

Сйп

ТЬг

ТНг 245

А1а

ТЬг

ТЬг 250

А1а

Ьеи

Агд

νβΐ

Ьуя 255

Авп

ЬУВ

Рго

Ьеи

Сйу 260

Рго

А1а

СЗу

бег

С1и 265

Авп

О1и

11е

Рго

ТЬг 270

Нхз

Ца1

Ьеи

Рго

Рго 275

Сув

А1а

Азп

Ьеи

С1п 280

А1а

С1п

Ьуз

Ьеи

Ьув 285

бет

Азп

Уа1

£сг	С1у	Авп	ТЬг	ΙΙΪΒ	Деи	Суз	11е	Зег	Аап	О1у
	290					295
С1у	Деи	С1у	А1а	Зег	Зег	ΚΪ3	и е	ТЬг	ТЬг	Ду£
305					310					315
Рго	Зет	Су Б	С1у	Деи	Зет	Рго	Деи	Деи	Уа1	Деи
				325					330

Деи

Зег

А1а

С1и

Уа1

Зег

В1у

С1у

Αερ

Агд

Деи

Дер

Суе

ν&ι

1уз

365

370

375

АСТ

ОАТ

САС

тсс

СТС

ДАС

САС

лее

ТСС

ДОС

АСС

ААС

ТАС

ССС

Зег

Αερ

С1п

Сув

Деи

Дуг

О1и

С1п

Зег

Суз

Зег

ТЫ

Дув

Туг

Агд

380

385

390

СТА

АТС

ОАО

гос

СТС

ОСС

ДАО

САС

ДОС

ДАС

ттс

АСС

СТС

ОСА

Деи

Агд

С1п

Суя

ν^]

А1а

С1у

Дуз

С1и

ТЬг

Ляп

РЬо

Зег

Деи

А1а

395

400

405

сес

СТО

САС

ССС

ДАО

САТ

ОАО

тсс

ССС

АСС

ОСС

АТС

САС

ССС

СТС

О1у

Деи

С1и

А1а

Ду Б

Аир

О1и

Суз

Агд

Зет

Д1а

МеЕ

О1и

А1а

Деи

415

420

425

САС

ААС

ТСС

СТС

ТАС

ДАС

ТСС

СЭС

ТСС

АДО

ссс

ост

АТС

ДАС

ЛАС

С1п

Ьус

Зег

Деи

Туг

Авп

Суз

Агд

Суе

Дуз

Агд

С1у

МеЬ

Ьуз

Дув

63 5

640

645

650

ТСС

ССА

ттс

ТСТ

САС

ТСС

АТС

ААС

АСТ

ТСС

ААС

САС

СТА

САА

САС

ТСС

1077

А1а

Рго

Тгр

Суе

Авр

Сув

Зег

Лап

Зег

О1у

Авп

Авр

Деи

С1и

Сув

655

660

665

ТТС

ААА

ТТТ

ТТС

АЛТ

ТТС

ААО

САС

АЛТ

АСА

ТСТ

стт

ААА

ААТ

ССА

1125

Деи

Дуз

РЬе

Деи

Авп

РЬе

Дуз

Азр

Азп

ТЬг

Суе

Деи

Дуг

Агг.

А1а

670

675

680

АТТ

САА

ССС

•пт

ТСС

ААТ

тсс

ТСС

САТ

СТС

АСС

СТС

ТТС

САС

ССА

ОСС

1173

Не

С1п

А1а

РЬе

С1у

Авп

С1у

Зег

Авр

Уа1

ТЬг

Уа1

Тгр

С1п

Рго

А1а

685

690

695

ТТС

ССА

СТА

САС

АСС

АСТ

ССС

АСТ

АСС

АСТ

ССС

СТС

ССС

СТТ

1221

РЬе

Рго

Уа1

С1п

ТЬг

А1а

ТЬг

АП а

Г.ей

Агд

νβΐ

700

705

710

ААС

ССС

СТО

ООО

ССА

СТС

ТСТ

ОАО

ААТ

САА

АТТ

ССС

АСТ

1269

Ьуз

Авп

Дуз

Рго

Деи

О1у

Рго

А1а

С1у

Зег

С1и

Авп

С1и

Не

РГО

ТЬг

715

720

725

730

САТ

стт

ттс

ССА

ССС

ТСТ

ССА

ААТ

ТТЛ

САС

ССА

САС

ААС

СТС

ААА

ТСС

1317

ΗΪ8

ν&1

Деи

Рго

Сув

А1а

Авп

Деи

С1п

А1а

С1п

Дув

Деи

Дув

Зег

735

740

745

ДАТ

СТС

ТСС

ААТ

АСА

САС

СТС

ТСТ

АТТ

ТСС

ААТ

ТСТ

ААТ

ТАТ

САА

1365

Азп

Уа1

Зег

С1у

Авп

ТЬг

ΗΪ3

Деи

Сув

Не

Зег

Αεη

С1у

Авп

Туг

С1и

75С

755

760

ААА

САЛ

ТСТ

СТС

ТСТ

ТСС

АОС

САС

АТА

АСС

АСА

ААА

ТСА

АТС

ОСТ

1413

Дуа

С1и

С1у

Деи

С1у

Л1а

Зег

Ηίβ

Не

ТЬг

Дув

Зег

МеС

А1а

765

770

775

ест

ССТ

ССА

АСС

ТСТ

ССТ

СТС

АСС

ССА

СТС

СТА

АСС

1461

А1а

Рго

Зег

Сув

01у

Деи

Зег

Рго

Деи

Уа1

Деи

Уа1

ТЬг

780

785

790

СОТ

СТС

тсс

АСС

СТА

ТТЛ

ТСТ

ТТЛ

АСА

САА

АСА

ТСА

ТЛССТССАТТ

1507

А1а

Деи

Зег

ты

Деи

Зег

Деи

ТЬг

О1и

ТЬг

Зег

755

800

805

АААААААТАС 1557	ААТАТССАСА	ТСТАААААСЛ	САААААССАА	СТТАТСТСТТ	ТССТСТТСТС
ТТСТАТАССТ 1627	САААТТССАС	ТТТАССАСС'Г	САСТТСАСАА	АСАСТТССАТ	ТСААСТССАА
САТТТТТТТТ	ттттсстттт	ААОАААОСТТ	СТТСТОАТСС	ТТСТССОСТТ	СТСТС

1682

Αεη

Αερ 460

Деи

С1и

Авр

Зег 465

Рго

Тут

С1и

Рго

ν&ι 470

Авп

Зег

Агд

Деи

ТСА

САТ

АТА

ТТС

стс

СТС

ССА

ТТС

АТА

ТСА

СТС

ОАО

САС

АТТ

ССС

Зег 475

Азр

Не

РЬе

Агд

ν&1 430

νηΐ

Рго

РЬе

11е

Зет 4В5

νβΐ

С1и

ΗΪ8

Не

Рго 490

АДА

ССС

ААС

ТСС

СТС

САТ

ОСА

ОСС

ААС

ОСС

тсс

ААС

СТС

САС

Дуз

О1у Αεη Αδη

Суе 495

Деи

Азр А1а

А1а Дуг А1а 500

Суе Хвп Деи

Авр 505

Авр

АТТ

ТСС

ААС

ТАС

АТС

ТСС

ССС

ТАС

АТС

АСС

ССС

ТСС

АСС

64=

Не

Суз

Дуг

Дув

туг

Агд

Зег

А1а

Туг

Не

ТЬг

Рго

Суз

Тпг

ТЬг

Зег

510

515

520

СТС

ТСС

ААС

САТ

СТС

тсс

ААС

ТСС

ССС

ААС

тсс

САС

ААС

ССС

СТС

693

Ув1

Зег

Авп

Авр

Уа1

Суз

Азп

Агд

Дув

Суз

Нхз

Дув

А1а

Деи

Агд

(2) СВЕДЕНИЯ О ЗЕС 10 N0:11:

(1) ХАРЖГЕШСГИКИ ПССЛЕДСВМТЛШОСТИ:

(A) ДЛИНА: 460 аминокислот (B) ВЦЦ: аминокислота (О) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ίί) вад ЮЕЮТ: белок (ΧΪ) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДСВАЗИЪНССТИ: 5Εζ) ГО N0:11:

Меи

РЬе

Деи

А1а

ТЬг

Деи

Туг

РЬе

А1а

Деи

Рго

Деи

Деи Αερ

Деи

1

5

10

15

Деи

Зег

А1а

О1и

νβΐ

Зег

С1у

О1у

лер

Агд

Деи

Авр

СУ я V»!

Дув .

А1а

20

25

30

Зег

Авр

С1п

Сув

Деи

Дув

01и

С1п.

Зег

Сув

Зет

ТЬг

Дув

Туг

Агд

ТЫ

35

40

45

Деи

Агд

С1П

Сув

Уа1

А1а

<31у

Дув

С1и

ТЬг

Авп

РЬе

Зет

Деи

А1а

Зет

50

55

60

О1у

Дви

(31 и

А1а

Дув

Авр

С1и

Суе

Агд

Зег

А1а

мер

О1и

А1а

Деи

Дуе

65

70

75

80

С1п

Дув

Зег

Деи

Туг

Авп

Сув

Агд

Суа

Дув

Агд

С1у

МеЬ

Дув

С1и

85

90

95

Дуг

Αεη

Суз

Деи

Агд

Не

Туг

Тгр

Зег

Меб

Туг

С1п

Зег

Деи

Олп

С1у

ЮС

105

110

Авп

Авр

Деи

С1и

Агр

Зет

Рго

Туг

С1и

Рго

Уа1

Авп

Зет

Агд

Деи

115

120

125

Зег

Азр

Не

РЬе

Агд

Уа1

Рго

РЬе

Не

Зег

Уа1

О1и

Н1Б

Пе

РГО

130

135

140

Дув

О1у

Авп

Суе

Деи

Азр

Ала

А1а

Дув

А1а

Сув

Азп

Деи

Азр

Авр

145

150

155

160

11е

Сув

Дуг

Дув

Туг

Агд

Зег

А1а

Туг

11е

ТЫ

Рго

Сув

ТЫ

Зег

165

170

17 5

ναΐ

Зех

Авп

Авр

7а1

Сув

Авп

Агд

Дув

Сув

ΗίΒ

Дуе

А1а

Деи

Агд

180

185

190

βΐη

РЬе

Агр

Дув

Уа1

Рго

А1а

Дув

Нхв

Зет

Туг

С1у

МеЬ

Деи

РЬе

195

200

205

Сув

Зег

Сув

Агд

Азр

11е

А1а

Сув

ТЬг

01 и

Агд

О1п

ТЬг

Не

210

215

220

Уа1

Рго

Уа1

Сув

Зег

Туг

О1и

С1и

Агд

С1и

Дуя

Рго

Авп

Суз

Деи

Αεη

225

230

235

240

Деи

ОДп

Авр

Зег

Сув

Дув

ТЫ

Авп

Тут

Не

Суя

Агд

Зег

Агд

Деи

А1а

245

250

255

Абр

РЬе

ТЬг

Азп

Сув

О1п

РГО

О1и

Зег

Агд

Зег

Уа1

Зег

СУв

260

265

270

Деи

Дун

О1и

ι Ааи

. Тух

А1а

ι Азр

ι Суб

Деи

. ьеи

. А1а

. Туг

Зег

С1у

¹ Деи

11е

275

280

285

С1у ТЬг

• Уа1

. Мес

. ТЬг

• Рго Азп Тух

11е

: Авр

> Зег

Зег Зет

Деи

ι Зег

νβΐ

290 295 300

А1а Рго Тхр Суе 305

Авр

Сув Зег Авп Зег СХу Авп Азр ьеи С1и 01и Сув

310

315

320

Ьеи

Ьув

РЬе

Ьеи

Αεη

РЬе

Ьув

Авр

Авп.

ты

Суа

Ьеи

Ьуе

Авп

А1а

325

330

335

Не

С1п

АХ в

РЬе

СХУ

Авп

СХу

Зех

Авр

νβΐ

ТЬг

ν»ι

Тгр

С1п

Рго

А1а

340

345

350

РЬе

Рго

УаХ

СХп

ТЬг

А1а

ТЬг

ты

ТЫ

А1а

Ьеи

Агд

УаХ

355

360

365

Ьув

Авп

Ьуз

Рго

Ьеи

61у

Рго

А1а

□1у

Зег

С1и

Αεη

С1и

Не

Ргс

ТЫ

370

375

зво

Ηχε

УаХ

Ьеи

Рго

Сув

АХа

Авп

Ьеи

С1п

АХа

С1г.

Ьуе

Ьеи

Ьув

Зег

385

390

395

400

λεη

νβΧ

Зег

С1у

Авп

ТЫ

Ηίε

Ьеи

Сув

Не

Зег

Аеп

СХу

Авп

Тух

С1и

405

410

415

ьуе

СХи

С1у

Ьеи

С1у

А1а

Зег

Н1В

Не

ТЫ

ТЬг

Ьув

Зег

Мег

А1а

420

425

430

АХа

Рго

Зег

Суз

СХу

Ьеи

Зег

Рго

Ьеи

УаХ

Ьеи

ν&ι

ТЫ

435

440

445

А1а

Ьеи

Зег

ТЬх

Ьеи

5ег

Ьеи

ты

СХи

ТЬг

Зег

450 455 460 (2) сведения о БЕО ΙΟ N0:12:

(ί) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПССДВДОВАТЕЖДСС1И:

(A) ДЛИНА: 1888 пары оснований (B) ВИЦ: нуклеиновая кислота (C) СТРУКТУРА ЦЕПИ: одиночная (О) ТСПОЛагиЯ: линейная (ϋ) вад молекулы: аднк (ίχ) ОТЛИЧИТЕЛЬНАЯ ОСОБЕННОСТЬ:

(A) ИМЯ/ЮТИ: СЕЗ (B) МЕСКЖАХСЖЦЕНИЕ: 25..1416 (хх) ОПИСАНИЕ ПООПЗДСеАТЕЛЬНССТИ: 332 Ю N0:12:

ААААААССЗТ СССЛТТТЛТТ ТААС АТС АТС ТГС ССА ААС СТС ТГС ТСС СТС

Мер Не Ьеи А1а Авп 1/а1 РЬе Суе Деи

465

ССС ТСТ ТТС ССС АСС СОТ ТСС ТСС

Агд Зег Ьеи АХа Зег Рго Зег Зег

4В0485

ТСС ССС ССС ССА ОТО ОАО ТСТ СТС

ТГР Агд Рго Рго 17аЗ А яр Сув Х/а1

495500

САЛ ТСС ААС ТСС АСС ТСТ СОС ТАС

С1и Зег Авп Сув Зег Зег Агд Туг

510515

ОСС СОС САС СОС ААС АСС АТС СТО

С1у Агд Авр Агд Авп ТЬг Неи Ьеи

530

ТТС САЕ СТС ТТС САС САС АСС ССС

Ьеи С1и Уа1 Ьеи СХл С1и Зег Рго 545 вас АТС ААС ААС САС СТС САС ТСТ

СХу Мес Ьув Ьув С1и Ьеи СХп Сув

560565

СТС ССС СТС АСС САС ОСТ САС САС

Ьеи С1у Ьеи ТЬг С1и СХу СХи С1и

575580 ссс стс асс тсс ссс стс тсс сас

Рго УаХ ТЬх Зег Αχσ Ьеи Зег Азр

590595

ТСА ССС АСА СОС ОСА ОАС ССС СТС

Зег С1у ТЬх СХу АХа Авр Рго Уа1

610

СТС САТ ОСТ ССС ААС ССС ТСС ААС

Ьеи Авр А1а А1а Ьув А1а Сув Авп 625

ССС ТСС ТСС ТАС АТС ТСС АТС ТСС

Агд Зег Зег Тут Не Зег 11 е Сув

640645

ССС ТСС ААС ССС ССС ААС ТСС САС

Агд Сус Лсп Лтд Агд Ьув Сув Ехв

655660

СОС СТС ССС АСС СЛС ТЛС АСС ТАС

Агд Уа1 Рго Зег С1и Туг ТЬг Туг

670675

САС САС ССС ТСС ССТ САС ССС ССС

Азр 61п А]а Сув А1а С1и Агд Агд

690

ТСС ТАТ САС САС ААС САС ААС, ССС

5ег Туг С]и Авр Ьув СХи Ьуе Рго

705

ТСС СОС лет САС САС СТС ТОТ ССС

ТТС ТТС ТТТ СТА САС САС АСС СТС 99

РЬе РЬе РЬе Ьеи Авр О1и ТЫ Деи 470 475

СТС САС ОСС ССС САС СТС САС ССС 147

Ьеи С1п С1у Рго С1и Ьеи Н1Я С1у

490

ССС ССС ДДТ САС СТС тст ссс ссс 195

Агд А1а Абп С1и Ьеи Сув А1а АХа

505

ССС АСТ СТС ССС САС ТСС СТС ОСА 243

Агд ТЬх Ьеи Агд СХп Суя Ьеи А1а 520525

ССС ДАС ААС ОАО ТСС САС ССС ССС 291

АХа Авп Ьув СХи Сув С1п А1а А1а 535540

СТС ТАС САС ТСС ОСС ТСС ААС ССС 339

Ьеи Туг Авр Сув Агд Сув Ьув Агд 550553

СТО САС АТС ТАС ТСС АСС АТС САС 387

Ьеи СХп. Не Туг Тгр Зег Не Н£в

570

ТТС ТАС САА ССС ТСС ССС ТАТ САС 435

РЬе Тут С1и АХа Зет Рго Туг С1и 585

АТС ТТС АСС СТТ СОТ ТСА АТС ТТС 483

Не РЬе Агд Ьеи АХа Зег Не РЬе 600605

СТС АСС ССС ААС АСС ААС САТ ТСС 531

Уа1 Зег А1а Ьув Зег Авп Ηίδ Суз 615620

СТС ΑΆΤ САС ААС ТСС ААС ААС СТС 579

Ьеи Авп Авр Авп Сув Ьуе Ьув Ьеи 530635

ААС ССС САС АТС ТСС ССС АСС САС 627

Авп Агд С1и Не Зег Рго ТЬг С1и 650

ААС ССС СТС ССС САС ТТС ТТС САС 675

Ьув А1а Ьеи Агд С1п РЬе РЬе Авр 665

ССС АТС СТС ТТС ТСС ТСТ тес САА 723

Агд Меб Ьеи РЬе Суе Зег Суз С1п 660685

ССС САА АСС АТС СТО ССС ДОС ТСС 771

Агд СХп ТЬг Не Ьеи Рго Зег Сув 695700

ААС ТОС СТО ОАО СТО СОТ ОСС СТС 819

УаХ Сув Агд ТЬг Авр Ηίβ Ьеи Суе Ахд

720725

ССС ДАТ ТСТ ССА ССС ТСС ТАС САС АСС

А1а Авп Суз Агд А1а Зех Туг СХп ТЬг 735740

ААТ ТАС САС ОСС ТСТ СТС СОС ТСТ ТАТ

Авп Туг СХп АХа Суе Ьеи 61у Зег Тух 750755

АТС АСА ССТ ААС ТАТ СТС САС ТССАСС

Меи ТЬг Рго Авп Туг УаХ Авр ЬегЗег

765770

ССС ТСС ТОС АСС ТОТ ССТ ОСС АСС СОС

Рго Тгр Сув Зег Сув Агд СХу Зег СХу

785

ААС ТТС СТС АЗС САС ТТС АСС САС ААС

Ьув РЬе Ьеи Агд Авр РЬе ТЬг СХи Авп

В00-805

САС ССС ТТТ ССС ААС ОСС АСС САССТС

01» АХа Рпе СХу Авп СХу ТЫ АврУа1

8X5820 тсс ТТС САС ОСС АСС САС ССС ССТССС

5ег РЬе С1п А1а ТЬг СХп АХа РгоАгд

830635

ССА ОАТ САС СТС АСТ САС АСТ АССАСС

Рго Авр Авр Ьеи Зег Авр Зех ТотЗег

845850

АСС ТСС АСС ТСТ СТС САС САС САС ССС

ТЫ Сув ТЫ Зег Уа1 СХп С1и С1п СХу

865

САС ТТЛ АСС АТС ТСС ТТС АСА САС СТС

С1и Ьеи Зег Меи Суе РЬе ТЬг С1и Ьеи

ВВОВ65

АСТ ААС ААС- ΰ'ΙΚ АТС ААА ССТ ААСТСА

Зег Авп Ьуб Уа1 1Хе Ьув Рго АвпЗег

895900

ТСС ОСТ ССС ТТС АСС СТС СТС ТСТСТС

Зег А!а АХа Ьеи ТЫ Уа1 Ьеи ЗегУаХ

9X0915

ТА03СТСТ6С СААСССАСТС АСААСАТТТТ

Авп Сув Ьеи Авр Ьеи Агд СХу

710 715

ТСС ССС СТС ССС САС ТТС САТ 867

Зег Агд Ьеи А1а Авр РЬе Ηίβ

730

СТС АСС АСС ТСС ССТ ССС САС 915

Уа1 ТЬг Зег Сув Рго АХа Авр 745

ССТ ОСС АТС АТТ ОСС ТТТ САС 963

А1а С1у Μεΐ. Не СХу РЬе Авр 760

ССС АСТ ОСС АТС СТС СТС ТСС 10X1

Рте ТЫ О1у IIе Уа1 Уа1 Зег 775 780

ААС АТС САС ОАО САС ТСТ САС 1059

Авп МеЪ СХи С1и СХи Сув С1и 790 795

ССА ТСС СТС ССС ААС ССС АТС 1107

Рго Сув Ьеи Агд Αεη А1а Не 810

ААС СТС ТСС ССА ААА ССС ССС 1155 .

Авп УаХ Зег Рго Ьув С1у Рго

825

СТС ОАО ААС АСС ССТ ТСТ ТТЕ 1203

Уа1 СХи Ьув ТЫ Рго Зег Ьеи 843

ТТС ССС АСС АСТ СТС АТС АСС 1251.

Ьеи СХу ТЬг Зег Уа1 Не ТЬг 855-860

СТС ААС ССС ЛАС ААС ТСС ААА 1299

Ьеи Ьув А1а Лап Авп Зег Ьув 870875

АСС АСА АЛТ АТС АТС ССА ССС 3 347

ТЬг ТЬг Авп Не Не Рго С1у 890

ССС ССС АСС АСА ОСС АСА ССС 1395

СХу Рго Зег Агд АХа Агд Рго 905

СТО ЛТО СТС ААА СТС ССС ТТС 1446

Ьеи Нее Ьеи Ьув Ьеи А1а Ьеи

920.

ТСАААССТАС 3506	ССАОАСААСА	АСАССССССТ	САССАААТСС	АААСАСАСАС	АСАСАСАСАС
АСАССТТССА 1566	АААААААААТ	ТСТТТТТССС	АССТТСТССС	ТСААССТОТС	ТССТСССАК5
ТТТСТТСТСТ 1626	ССАСААСТТТ	ТТСТАААССА	ААСАСАСААС	САСССАСССА	СССТСАСАСС
ТСССССАССС 1686	СТССССТССС	АССССАААСТ	СТССТССССС	ОСЛО ОС-САСС	АСССТСТАСА
ААТССССТТС 1746	АСТТТСТССТ	ССТСТТТТТС	ТСТСТОСАСС	СГТСТСААОС	АОАОАССОСА
СААСАСССТС 1806	САССССААСС	САСТСТСССС	ТСТСССТСАС	сстссстссс	СССАССАСАА
САСАССТССТ	ТССССАСССТ	ССССАСТСТС	СССАСССССТ	ОССЗСЗСТССС	АСАССССАТС

1866

ССТСАССССС ССАССССЗСС ТС 18ВВ (2) СВЕДЕНИЯ О ЗЕО П) N0:13:

(ί) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛЕДОВМЕДЕНОСТИ:

(A) ДЛИНА: 464 аминокислот (B) ЕВД: аминокислота (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ίί) рад МОЛЕКУЛЫ: белок (ΧΪ) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ЗЕО П) N0:13:

Меб 1

Не

Ьеи

А1а

АВП 5

Уа1

РЬе

Сув

Ьеи

РЬе 10

РЬе

Ьеи

Авр

С1и 15

ТЬг

Ьеи

Агд

Зег

Ьеи 20

А1а

£ех

Рго

Зег

5ег 25

ьеи

С1п

<Э1у

Рго

С1и 30

Ьеи

Ηίε

СХу

Тгр

Ахд 35

Рго

УаХ

Дер

Суз 40

Уа1

Ахд

А1а

Авп

С1и 45

Ьеи

Сув

А1а

АХа

С1и 50

Зег

Авп

Сув

Зех

5ег 55

Агд

Туг

Агд

ТЬг

Ьеи 60

Агд

С1п

Сув

Ьеи

А1а 65

61у

Ахд

Авр

Ахд

Αεη 70

Т11Г

Меи

Ьеи

А1а

Авп 75

Ьун

С1и

Сув

С1п

Л1а 80

АХа

Ьеи

С1и

ν&ι

Ьеи 85

С1п

31и

Зег

Рго

Ьеи 90

Тух

Αερ

Сув

Агд

Суз 95

Ьув

Агд

С1у

Меи

Ьув 100

Ьув

С1и

Ьеи

СХп

Сус 105

Ьеи

С1п

Не

Туг

Тгр но

Зег

Не

Ηίε

Ьеи

С1у 115

1^и

ТЬг

С1и

<31у

СХи 120

С1и

РЬо

Туг

С1и

АХа 125

Зех

Рго

Тух

ΟΊ и

Рго 13 0

νβΐ

ТЬг

Лет

Агд

Ьеи 135

Зег

Лзр

11с

РЬе

Ахд 140

Ьеи

А1&

Зег

Не

РЬе Бег 145

О1у ТЬг С1у А1а Авр Рго ν»1 УаХ Зег А1а Ьуз Бег Азп ΗΪ3

150

155

160

Суя

Ьеи

Азр

А1а

А1а 165

Ьуя

А1а

Суе

Ава

Ьеи 170

Азп

Аяр

АВП

Сув

Ьув 175

Ьуз

Ьеи

Агд

Вег

Вех 180

Туг

Не

Вег

Не

Сув 1В5

Αεη

Агд

<31и

Не

Вог 190

Рго

ТЬг ·

<з1и

Агд

Суз 195

Азп

Агд

Ьуз

Суз 200

Ηίε

Ьуз

А1а

Ьеи

Агд 205

С1п

РЬе

Азр

Агд 210

Уа1

Рго

Вег

31 и

Тух 215

ТЬг

Туг

Агд

Мед

Ьеи 220

РЬе

Суз

Бег

Суз

О1п 225

Азр

О1п

А1а

Суя

А1а 230

01 и

Агд

Атд

Агд

О1п 235

ТЬг

Не

Ьеи

Рго

Вех 240

Суе

Бег

Туг

С1и

Авр 245

Ьув

С1и

Ьуз

Рго

Азп 250

Суз

Ьеи

Азр

Ьеи

Агд 255

(51 у

7а1

Сув

Агд

ТЫ 260

Азр

НХЗ

Ьеи

Суз

Агд 265

Бег

Агд

Ьеи

А1&

Аер 270

РЬе

Н1з

А1а

Ага

Суя 275

Агд

А1а

Зег

Тут

О1п 280

ТЬг

Уа1

ТЬг

Вег

Суз 285

Рхо

АХа

Авр

Азп

Туг 290

О1п

АХа

СУБ

Ьеи

С Ху 295

Бег

Туг

АХа

С1у

Меь 300

Не

С1у

РЬе

Азр

Мед 305

ТЫ

Рго

Азп

Тут

Уа1 310

Азр

Бег

Рго

ТЫ 315

С1у

Не

Уа1

Бег 320

Рго

Тгр

Суэ

Вег

Суз 325

Агд С1у

Бег

С1у

Азп 330

Мед

С1и

(31и

С1и

Суз 335

С1и

Ьув

РЬе

Ьеи

Агд 34С

Азр

РЬе

ТЬт

<31и

Азп 345

Рго

Суз

Ьеи

Агд

АВГ. 350

А1а

Не

С1п

А1а

РЬе 355

С1у

Ава

С1у

ТЬг

Авр 360

Уа1

Азп

Уа1

Вег

Рго 365

Ьуз

<ЗХу

Рго

Вег

Иге 370

С1п

А1а

ТЬг

С1п

А1а 375

Рго

Агд

Уа1

<21и

Ьуз 380

ТЬг

Рго

Бет

Ьеи

Рго 385

Азр Αερ

Ьеи

Зет

Азр' 390

Вег

ТЬг

Зег

Ьеи

61у 395

ТЬг

Бег

Ув1

Не

ТЬг 400

ТЫ

Суз

ТЫ

Вет

Уа1 405

С1п

<31и

е1п

С1у

Ьеи 410

Ьуз

АХа

А5П

Азп

Вег 415

Ьуз

О1и

Ьеи

Вег

Мой 420

Суз

Рас

ТЬг

С1и

Ьеи 425

ТЫ

ты

АВП

Не

Не 43 и

Рго

<31у

Вех

’ Азп

> Ьуз 435

ν&1

Не

Ьув

Рго

Ава 440

Вег

<31у

Рго

Вег

Ахд 445

АХа

Агд

Рго

Вег

А1а

. АХа

Ьеи

. ТЬг

Уа1

Ьеи

. Вех

УД1

Ьеи

. меь

Ьеи

Ьуз

Ьеи

А1а

Ьеи

450 455 450 (2) СВЕДЕНИЯ О 3ΕΏ ТО N0:14:

(ί) ХАРЖГЕЕИСТИКИ ПОСЛЕДСВАТЕЛЬНОСТИ:

(A) ДЛИНА: 1878 пары оснований (B) ВИД: нуклеиновая кислота (C) СТРУКТУРА ДЕЛИ: одиночная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: линейная (И) ВИД МОЛЕКУЛЫ: КДНК

СТС САО АСС СТС

САС

ССТ

ТТС

тес

АСА

ТСА

ССС

СТС

АТС

ОАС

ТТС

САС

АСС

САС

Авр

Рго

Ьеи 670

Сув

Агд

Зег

Ахд

Ьеи 675

МеО

Авр

РЬе

С1п

ТЬг 680

Нйе

ССТ

АТС

ОАС

АТС

СТТ

ОСО

АСТ

ТСТ

ОСА

АСТ

САЗ

САО

ТСС

АСА

Рхо

Мес

Аер

Не

Ьеи

О1у

ТЬг

Суе

АХа

ТЬг

С1и

С1п

Вег

Агд

С1у	Зег	С1у	Азп	Ьеи	е1п	Азр	С1и	Суя	С1и
730					73 5
ТСС	САС	ААС	ССС	тос	СТС	СТС	САС	ОСС	АТТ
Зег	О1п	Азп.	Рхо	Суз	Ьеи	Уа1	О1и	А1а	Не

Нхе

Ахч

(51П

Ьеи

РЬе

Зег

61п

Авр

Тгр

А1а

Авр

Бег

ТЬг

РЬе

Бег

ν&1

765

770

775

сте

САС

САО

ААС

АБС

ААС

ССТ

ОСТ

СТО

АСА

СТО

САО

ССС

ЛОО

СТА

Уа1

61п

О1п

01 п

Азп

Бег

Азп

Рго

А1а

Ьеи

Ахд

Ьеи

С1п

Рхо

Ахд

Ьеи

780

785

790

СТТ ТСТ ТТС ТСС АТС

СТТ ССС ТТО АТТ СТС

АТТ

ССС

1239

Рго тсс 1292

Тгр

810

Не

755

Ьеи Вег РЬе Вет 11е

800

Ьеи Рго Ьеи Не Ьеи

805

Ьеи С1п ТЬг Ьеи

ТАССТССССТ ТССТСАСССТ ССТТТСТССТ СТССАССАСА :ССАСАСТСА (ΪΧ) ОТЛИЧИТЕЛЬНАЯ ООСБЕНЮСТЬ:

(A) ИМЯ/КИИ: СОЗ (B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 205..1242 (χί) ОПИСАНИЕ ПССЛНЩСВАТЕТЪНССТИ: ЗЕО ТО N0:14:

СССООСОССС АБСБСАООСА САССОСтеТС ССАТСССОСС СОТССАСССО ссатбсюсст 60 стсстзсазс ссесеасстс сасгостса'Г еатсстсста слзстсстот ссттотоост 120

СССАСТТССА ССАСОАААСТ сссттсссас аоаоаасаоо тттотоааса ОСТСТАСССА 180

ТТТССАСССТ 1352

САССААСССС

1412

ТАОААСТОАС

1472

СТССТСС-САС

АЗААСТСССС АСССТСТССА

СААССААССА етстстсАСс

ССТССТТССТ ТСТСССТСАС 1532

ЕССАТТСССС АССАСАТССС

СТТСССАТСС ТСАСССОСТА

АОААЕАСССА

ОССТССТАСЛ

СТСТССТССА

ЕААЕАОСТСТ

СТТТТСАААС

СТСССТТЗСС

ССТССТССТС СТТАОСАСТТ

ТСТООЕТССА СТТТТСССТТ

СТСТТСТСАТ ©ЭТСАСТАЗС СССТСАССТС САССССТТСТ ТССТСТТТСС САССАССАСС 1592

САЕАООСТАА ССААТСАСТС АТТСССТСТТ СССТТСТССА ОЗААСОСАЕЗ СТААСССТТС 1652

СОССАвАААС АААТОСОАСЮ СТАА ТСС СО С ТТС САА ООС ТОС СТА ССА ОСА

231

Вех Агд Ьеи С1п С1у Сув Ьеи Рго А1а

465

470

ССТ

ССС

СТС

САС

СТС

САС

ТТА

АСС

ССС

СТС

ССС

ТТА

САС

САБ

279

Рго

С1у

Ьеи

Ηχε

Ьеи

БХп

Ьеи

Бег

Агд

Рго

Ьеи

Рхо

Ьеи

С1и

Б1и

475

480

485

ТСТ

ССС

АТС

ТСТ

ССА·

САС

ТСС

СТА

ОАО

ОСА

ССА

САА

СТС

АСС

ААС

327

Зег

А1а

МеД

Зег

А1а

Αερ

Сув

Ьеи

О1и

А1п

А1а

С1и

С-1п

Ьеи

Ахд

Αεη

490

495

500

505

АСС

ТСТ

СТС

АТА

САС

ТСС

АБС

тес

САТ

ССС

АТС

ААС

САС

САА

ОСТ

375

Зег

Ьеи

11е

Азр

Суя

Агд

Суз

Нхз

Агд Агд

Мес

Ьув

Ηίε

С1п

А1а

510

515

520

АСС

ТСТ

СТС

САС

АТТ

ТАТ

тес

АСС

сэтт

САС

ССТ

ССС

ССА

АСС

СТТ

ССТ

423

ТЬг

Суз

Ьеи

Авр

Не

Тух

Тгр

ТЬг

Уа1

ΗΪ5

Рго

А1а

Ахд

Бег

Ьеи

С1у

.525

530

535

БАС

ТАС

САБ

ТТС

САТ

СТС

ТСА

ССС

ТАТ

САА

САС

АСА

СТС

АСС

ААА

471

Азр

Тух

С1и

Ьеи

Азр

Уа1

Зег

Рго

Туг

С1и

Аер

ТЬг

Уа1

ТЬг

Зег

Ьуя

540

54 5

550

ССС

ТОО

ААА

АТС

ААТ

СТТ

АЭС

ΛΑΟ

ТТС

ААС

АТС

СТС

ААА

ССА

слс

ТСЕ

519

РГО

тгр

Ьуз

Мер

Абп

Ьеи

Зет

Ьу=

Ьеи

Аяп

Мех

ьеи

ьув

Рго

Авр

Зег

555

560

565

САС

СТС

ТСС

СТС

ААА

ТТТ

ОСТ

АТС

СТС

ТСТ

АСТ

С'ГТ

САС

ААЕ

к/г

567

Авр

Ьеи

Суп

Ьеи

Ьуз

РЬе

А1а

МЫ

Ьеи

сув

ТЬг

Ьеи

Нхв

Азр

Ьуя

Суе

570

575

580

585

ТСАОСТОАСТ САСАААААТС ТТТССТТТСТ СТЯОААСССТ ССТОСТССАБ ССТССАСБТС 1712 .

ССТСТОААТБ СААСАТАААА АССТОСТСОТ ОТСТТОАСТО СТСТСССАСК 1772

СААТССТБАА

САТТТССССА ТСААСАССТА ААСТСТТТСС СТСТТЕТТТА АСТССТАТТА СТСТССССАА 1832

АТТССССТАС ТСССТТСССТ САТОАТТААА САТТТТСАСТ ТААААА

1878 (2) СВЕДЕНИЯ О 3ΕΏ ТО N0:15:

(ί) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПССЛЕДСВАСЪЛЬНОСТИ:

(A) ДЛИНА: 346 аминокислот (B) ВДЦ: аминокислота (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: линейная (χί) СПИСАНИЕ ПОСЛЫДСВАГЕЛЬНОСТИ:

Вег

Ьеи

Суз

ТЬг

Агя

Зег

О1и

V»!

κίε

Ьеи

С 1а

С1у

Суп

Ьеи

Рго

А1а

Рго

С1у

Ьеи

Нхп

Ьеи

О1п

5

10

15

Агд

Рхо

Ьеи

Рго

Ьеи

61и

О1и

Бег

А1а

Мес

Зег

А1а

Авр

Суп

20

25

30

А1а

С1и

С1п

Ьеи

Агд

Азп

Зег

Бег

Ьеи

Не

Аер

Суз

Ахд

35

40

45

Агд

МеЬ

Ьуя

Нхз

С1п

А1а

ТЫ

Суз

Ьеи

Азр

Не

Туг

Тхр

55

60

Н15

Рго

А1а

Агд

Зег

Ьеи

С1у

Αερ

Туг

О1и

Ьеи

Авр

ν&1

Бег

65

70

75

80

Рго

Тух

Сйи

Азр

ТЫ

Уай

ТЫ

Бег

Ьув

Рго

Тгр

Ьуз

МеС

Азп

Ьеи

Бег

85

90

95

Ьув

Ьеи

Азп

МеО

Ьеи

Ьув

Рго

Азр

Бег

Авр

Ьеи

Сув

Ьеи

Ьуз

РЬе

Айа

100

105

110

Μβϋ

Ьеи

Сув

ТЬг

Ьеи

Нхз

Авр Ьуз

суе

Азр

Агд

Ьеи

Агд

Ьув

Айа

Туг

115

120

125

С1у

Сйи

Айа

Суз

Бег

С1у

Не

Агд

Сув

Сйп

Агд

Кхв

Ьеи

Суз

Ьеи

Айа

130

135

140

С1п

Ьеи

Агд

Бег

РЬе

Сйи

Ьуз

А1а

Айа

Сйи

Бег

Нхз

Айа

Сйп

Сйу

145

150

1=5

160

Ьеи

Сув

Рго

Суз

Айа

Рго

Сйи

Авр

Айа

Сйу

Сув

сйу

Сйи

Агд

165

170

175

Агд

Авп

ТЫ

Не

Айа

Рго

Бег

Сув

Айа

Ьеи

Рго

Бег

Уай

ТЬх

Рго

180

185

190

Авг.

Сув

Ьеи

Авр

Ьеи

Агд

Бег

РЬе

Сув

Агд

Айа

Авр

Рго

Ьеи

Суз

Агд

195

200

205

Бег

Агд

Ьеи

МеЬ

Авр

РЬе

Сйп

ТЬг

Ηχε

Сув

Ηχε

Рго

Мес

Азр

Не

Ьеи

210

215

220

Сйу

ТЫ

Суз

Айа

ТЫ

Сйи

сйп

Бег

Агд

Суз

Ьеи

Агд

Айа

тух

Ьеи

αίν

225

230

235

240

Ьеи

Не

О1у

ТЬг

Айа

Мег;

ТЫ

Рго

Авп

РЬе

1йе

Бег

Ьуз

Уа1

Азп

ТЫ

245

250

255

ТЫ

Уай

Айа

Ьеи

Бег

Суз

ТЬг

Суе

Агд

Сйу

Бег

Сйу

Авп

Ьеи

С1п

Азр

260

265

270

С1и

Суз

Зйи

Сйп

Ьеи

О1и

Агд

Бег

РЬе

Бег

Сйп

Авп

Рго

СУБ

Ьеи

Уа1

275

280

285

Сйи

Айа

11е

Айа

А1а

Ьуз

Меь

Агд

РЬе

Нхз

Агд

Сйп

Ьеи

РЬе

Бег

Сйп

290

295

300

Авр

Тгр

Айа

Азр

Бег

ТЫ

РЬе

Бег

Уай

Сйп

Авп

Бег

Азп

305

310

315

320

Рго

Айа

Ьеи

Агд

Ьеи

Сйп

Рго

Агд

Ьеи

Рго

Не

Ьеи

Бег

РЬе

Вех

Не

325

330

335

Ьеи

Рго

Ьеи

Не

Ьеи

Сйп

ТЬг

Ьеи

тгр

340

3 45

(2) СВЕДЕНИЯ О ΞΕΟ ГО N0:16:

(ί) ХАРАКТЕВ4СТИКИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:

(A) ДЛИНА: 1889 пары оснований (B) ВДЦ: нуклеиновая кислота (C) СТРУКТУРА ЦЕПИ: одиночная (О) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ΪΪ) ВИД МОЛЕКУЛЫ: кДНК

ССА ТСС ТСА ССС АТС ССС ТСС

631

Айа Сув Бет Сйу IIе Агд Сув

530

ССС ТСС ТТС ТТТ ЗАС ААС ССА 679

Ахд Зег РЬе РЬе С1и Ьуз Айа 545 550

СТС ТСТ ССС ТСТ ССА ССА САА 727

Ьеи Суя Рго Суз А1а Рго О1и

560 565

ААС АСС АТС ССС ССС АСТ ТСС 775

Анн ТЫ Не А1а Рго Бег Суз 580

СТС САТ СТС ССС АСС ТТС ТСС 823

Ьеи Азр Ьеи Агд Бег РЬе Суз

555

СТС АТС САС ТТС САС АСС САС 871

Ьеи МеЬ Авр РЬе Сйп ТЫ Нхз 610

ТСТ ССА АСТ САС САС ТСС АСА 919

Сув А1а Й1Г С1и Сйп Бег Агд 625 630

ССС АСТ ССС АТС АСС ССА ААС 967

Сйу ТЬг Айа МеЬ ТЫ Рго Азп 640 645

ССС ТТА АСС ТСС АСС ТСС ССА 1015

А1а Ьеи Бег Сун ТЬг Суз Агд - 660

САА САС СТС САД АСС ТСС ТТС 1063

Сйи Сйп Ьеи С1и Агд Зег РЬе 675

АТТ ССА ОСТ ААС АТС ССТ ТТС 1111

Не Айа Айа пуд ме(_ Агд РЬе 690

ССА САС ТСТ АСТ ТТТ ТСА СТС 1159

А1а Авр Зег ТЫ РЬе Бег Уай 705 710

СТС АСА СТС САС ССС АЖ СТА 1207

Ьеи Агд Ьеи Сйп Рго Агд Ьеи

720 725

САС ССС САС СТС ТСС СТА ССС САС СТС

С1п Агд ΗΪ8 Ьеи Суз Ьеи Айа Сйп Ьеи

535 540

ССА САС ТСС САС ОСТ САС ОСТ СТС СТС

Айа Б1и Зег Нхв Айа Сйп Сйу Ьеи Ьеи

555

САТ ССС ССС ТСТ 035 САС ССС ССС ССТ

Азр А1а Сйу Сув С1у Сйи Агд Агд Агд

570575

ОСС СТО ССТ ТСТ СТА АСС ССС ААТТСС

Айа Ьеи его Бег Уай ТЫ Рго АбпСув

5В5590

ССТ ССС ОАС ССТ ТТС ТСС АСА ТСАССС

Агд Айа Азр Рго Ьеи Суз Агд БегАгд

600605

ТСТ САТ ССТ АТС САС АТС СТТ ОССАСТ

Суз Кхв Рго Мее Азр Не Г^?.и СйуТЫ

615620

ТСТ СТС ССС ССА ТАС СТС 505 СТС АТТ

Сув Ьеи Агд Айа Туг Ьеи Сйу Ьеи Не

5

ТТС АТС АСС ААС СТС ААС АСТ АСТ СТТ

РЬе Г1е Бег Ьуз Уай Авп ТЫ ТЬг Уай

650655

ОСС АСС О6С ААС СТА САО САС САСТСТ

С1у Бег С1у Азп Ьеи Сйп Азр С1иСуз

665670

ТСС САС ААС ССС ДОС СТС СТС САС ССС

Зег Сйп Азп Рго Сув Ьеи Уа1 Сйи Айа 680685

САС АЙА СЛО СТС ТТС ТСС САС САС ТСД

Ηίε Агд Сйп Ьеи РЬе Бег Сйп Азр Тгр 695700

СТО САС САС САС ААС АСС ААС ССТ ССТ

Уай 01п Сйп Сйп Азп Бег Авп Рго Айа 715

ССС АТТ СТТ ТСТ ТТС ТСС АТС СТТ ССС

Рго 11е Ьеи Бег РЬе Зог 11е Ьеи Рго

730 735 (IX) ОТЛИЧИТЕЛЬНАЯ ОСОБЕННОСТЬ:

(A) ИМЯ/КЖЧ: С05 (B) №СТО№ХСИДЕНИЕ: 41..1231 (χί) СПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ЗЕО ГО N0:16:

СОСАБССАСА ССССТСТССС АТСССОСССС ТССАССС&СС АТС ССС СТС тсс тсс

ДОС ССС ССА ССТ ССА СТС СТС 103

Бег Рго Агд Рго Рго Ьеи Ьеи 355

ТСС СТС ССА СТТ ОСА ССА ОСА 151

Тгр Ьеи Рго Ьеи Сйу Айа Бйу 370

СТС ААС АСС ТСТ АСС САС ССС 19 9

Уай Авп Бег Суз ТЫ Сйп Айа 385 390

ТСС ААС ССТ ССС ТАС САС САС 247

Суз Ьуз А1а А1а Тут Сйп Из в 400 405

АСС ССС СТС ССС ТТА САС САС 295

Агд Рго Ьеи Ргр Ьеи Сйи С1и 420

ССА ССА САА САА СТС АСС ААС 343

Айа Айа Сйи Сйп Ьеи Агд Азп

435

ССС ССС АТС ААС САС САА ССТ 391

Агд Агд Мес Ьув Нхз Сйп Айа 450 .

САС ССТ ССС ССА АСС СТТ ССТ 439

Н1з Рго Айа Агд Зег Ьеи Сйу 465 470

САА ЗАС АСА СТС АСС АСС ААА 487

Сйи Азр ТЬг Уай ТЫ Зег Ьуз 480 4В5

ААС АТС СТС ААА ССА САС ТСС 535

Азп Мес Ьеи Ьув Рго Азр Зег 500

ТСТ АСТ СТТ САС САС ААС ТОТ 583

Суз ТЬг Ьеи Ша Авр Ьуз Суз

515

МеЬ С1у Ьеи Зег Тгр 350

АТС АТС СТС СТА СТС СТС СТБ ТСС ТТС

МеЪ Не Ьеи Ьеи Ьеи Уай Ьеи Зег Ьеи 360 365

ААС ТСС СТТ ССС АСА САС ААС АСС ТТТ

Авп Зег Ьеи Айа ТЫ Сйи Азп Агд РЬе 375 ЗВО

АСА ААС ААА ТСС САС ССТ ААТ ССС ССТ

Агд Ьуз Ьуз Суз Сйи А1а Авп Рго Айа

395

СТС ССС ТСС ТСС АСС ТСС АСТ ТТА АСС

Ьеи С1у Бег Суз ТЫ Зег Бех Ьеи Бег

410 415

ТСТ ССС АТС ТСТ ОСА САС ТСС СТА САС

Бег А1а Мес. Бег А1а Азр Сув Ьеи С1и

425 430

АСС ТСТ СТС АТА САС ТСС ДОС ТСС САТ

Бег Бег Ьеи Не Азр Сув Агд Суз Κΐε 440 445

АСС ТСТ СТС САС АТТ ТАТ ТСС АСС СТТ

ТЬг Сув Ьеи Азр Не Туг Тгр ТЬг УаТ

455 460

САС ТАС САС ТТС САТ СТС ТСА ССС ТАТ

Агр Туг Сйи Ьеи Азр Уа1 Бег Рго Туг

475

ССС ТСС ААА АТС ААТ СТТ АСС ААС ТТС

Ргс Тгр Ьув Меб Азп Ьеи Бег Ьуз Ьеи

490 495

САС СТС ТСС СТС ААА ТТТ ССТ АТС СТО

Азр Ьеи Суз Ьеи Ьуз РЬе Айа Мех. Ьеи 505 510

САС ССС СТС ССС ААС ССС ТАС ССС САС

Азр Агд Ьеи Агд Г.ув А1а Луг Б1у С1и

520 525

ТТС АТТ СТС СТС САС АСС СТС ТОО ТАССТСОССТ ТССТСАСССТ ССТТТСТССТ 1261

Ьеи 1йе Ьеи Ьеи С1п ТЫ Ьеи Тгр 740
СТССАССАСА 1321	СССАБАСТОА	ТТТССАСССТ	СТБСГООСАС	АСААСТСБСС	АБССТСТБСА
АСААСАСССЛ 1381	ССОТЗСТАСА	САБСААСССС	СААССААССА	БССАТТССОС	АССАСАТССС
СТСТССТССА 1441	САЛСАССТСТ	ТАСЭААСТСАС	СССТСТСАСС	СТТСССАТСС	ТОАССБСССА
БТТТТСАААС 1501	СТСССТТССС	ССТОСТТССТ	ТСТОЭСТСАС	ССТБСГССТС	СГТАББАСТТ
тстссбтсса 1561	СТТТТОССТТ	СТСТТСТБАГ	БОТСАТТАСС	БССТСАССТС	САССБСТТСТ
₁₆₂₁ ^{ТССТ(ЗТТТСС}	САЛЗАССАСС	САСАСЭСТАА	ССААТСАСТС	АТТСССТСТТ	БССТТСТССА
СБААОБСАОБ 1681	СТААССОТТС	ТОАББТСАСТ	БАСДААААТС	ТТТССТТТСТ	БТББААБССТ
ССТССТССАС 1741	ССТССАССТС	ССТСТБААТС	СААСАТАААА	АССТССТОСТ	ОТСТТСАСТС
СТСТСССАСС 1801	СААТССТСАА	САТТТОСБСА	ТСААБАБСТА	ААБТСТТТСС	БТСТТСТТТА
АСТССТАТТА 1861	СТСТССССАА	АТТССССТАО	ТСССТТОББТ	САТБАТТААА	САТТТТБАСТ
ТААААААААА	АААААААААА	АААААААА

1889 (2) СВЕДЕНИЯ О ЗЕО ГО N0:17:

(ί) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПООЛЕЩОЗДТЕЛЬНОСТИ:

(A) ДЛИНА: 397 аминокислот (B) ЕВД: аминокислота (О) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ίί) вад МОЛЕКУЛЫ: белок (χί) СПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5Е£) ГО N0:17:

Мес 1	Сйу	Ьеи	Бег	Тгр 5	Бег	Рго	Агд
Ьеи	Уа1	Г.ей	Бег 20	Ьеи	Тгр	Ьеи	Рго
ТЬг	Сйи	Авп 35	Агд	РЬе	Уа1	А ЯП	Бег 40
Сйи	Айа 50	Авп	Рго	Айа	СУ8	Ьуз 55	Айа
ТЬГ 65	Бег	Бег	Ьеи	Бег	Агд 70	Рго	Ьеи

Рго	Рго 10	Ьеи	Ьеи	Меи	Не	Ьеи 15	Ьеи
Ьеи 25	СЗу	Айа	Сйу	Авп	Бег 30	Ьеи	Айа
Сув	ТЫ	Сйп	Айа	Дгд 45	Ьуз	Ьуя	Суе
А] л	Туг	Сйп	Нхя 60	Ьеи	Сйу	Бег	Суз
Рго	Ьеи	Й1и 75	Сйи	Бег	Айа	Мес	Бег ВО

А1а Авр Суп

Ьеи

С1и А1о А1а С1и С1п Ьеи Агд Азп Зех

Зег Ьеи 11е 95

85

90

Авр

Сув

Агд

Сув

К£в

Агд

Ахд

МеС

Ьуз

К£а

С1п

Αία

ТЬг

Сув

Ьеи

Азу

100

105

110

114

Туг Тгр

ТЬг

ναΐ

Н£в

Рго

А1а

Агд

Бег

Ьеи

С1у

Авр

Туг

С1и

Ьеи

115

120

125

Авр

ναΐ

Зег

Рго

Туг

С1и

Авр

ТЬх

Уа1

ТЬг

Бег

Ьув

Рго

Тгр

Ьув

мег

130

135

140

Азп

Ьеи

Зег

Ьув

Ьеи

Азп

Мег.

Ьеи

т.уз

Рго

Азр

Бег

Авр

Ьеи

Сув

Ьеи

145

150

155

160

Ьув

РЬе

А1а

Мес

Ьеи

Суз

ТЬг

Ьеи

Н£з

Азр

1.уя

Суз

Азр

Агд

Ьеи

Агд

165

170

175

Ьуз

А1а

Туг

С1у

С31и

АЧа

Суз

Бег

О1у

Не

Агд

Сув

С1п

Агд

ни

Ьеи

180

185

190

Сув

Ьеи

А1а

<31п

Ьеи

Агд

Зег

РЬе

С1и

Ьуа

Αία

А1а

С1и

Бег

ни

195

200

205

Αία

σΐη

61у

Ьеи

Суз

Рго

Сув

А1а

Рго

51и

Аер

А1а

О1у

Сув

210

215

220

С1у

С1и

Агд

Азп

ТЬг

Не

А1а

Рго

зет

Сув

А1а

Ьеи

Рго

Бег

225

230

235

240

V©!·

ТЬг

Рго

Азп

Суз

Ьеи

Авр

Ьеи

Агд

Бег

РЬе

Суз

АГЯ

А1а

Азр

РГО

245

250

255

Ьеи

Суг

Агд

Бег

Агд

Ьеи

Мес

Авр

Рпе

С1п

ТЬг

ΗΪΒ

Суз

НЬв

Рго

МеС

250

265

270

А₅р

Не

Ьеи

С1у

Тпг

Суе

А1а

ТЬг

(Ни

С1п

Бег

Агд

Сув

Ьеи

Агд

А1а

275

280

285

Туг

Ьеи

С1у

Ьеи

Не

Э1у

ТЬг

А1а

МеС

Тпг

Рго

Азп

РЬе

Не

Бег

Ъуз

290

295

ЗСО

Уа1

Ав η

ТНг

ТЬг

ναΐ

Αία

Ьеи

Бег

Суз

ТЬг

Суз

Агд

О1у

Бег

О1у

Авг.

305

310

315

320

Ьеи

αΐη

Авр

С1и

Суз

С1и

<31п

Ьеи

С1и

Ахд

Бег

РЬе

Бег

С1п

Азп

Рго

325

330

335

Сув

Ьеи

νηΐ

<31и

Αία

11с

А1а

Αία

Ьув

МеС

Агд

РЬе

Низ

Агд

С1п

Ьеи

340

245

3 50

РЬе

Бег

С 1л

Авр

Тгр

А1а

Αερ

Бег

ТЬг

РЬе

Бег

νδΐ

Уа1

С1п

Схп

355

36С

365

Αεη

Бег

Азп

. Рго

А1.а

Ьеи

Агд

Ьеи

С1п

Рго

Агд

Ьеи

Рго

11е

Ьеи

Бег

370

375

360

РЬе

ι 5ег

12е

Ьеи

Рго

Ьеи

. 11е

Ьеи

σΐη

ТЬг

Ьеи

Тгр

385 390 395 (2} СНЕДЕНИЯ О ЗЕО Ю N0:18:

ССС

ААС

тсс

СТС

САС

СТС

СЭС

СТС

тос

ТТС

ТСС

САС

ССС

СТТ

526

А1а

Рго

Аяп

Суя

Г<еи

С1и

Ьеи

Агд

Ьеи

Сун

РЬе

Бег

Авр

Рго

Ьеи

560

565

570

ТСС

АСА

ТСА

ССС

СТС

САТ

ТТС

САС

АСС

САС

ТСС

САТ

ССС

АТС

САС

574

Суе

Агд

Бег

Агд

Ьеи

Уа1

Авр

РЬе

<51п

ТЬг

Н£а

Суз

Н18

Рго

МеГ

Авр

575

580

585

АТС

СТА

ССА

АСТ

тот

ССА

АСА

САС

ТСС

АСА

ТОТ

СТА

ССА

ТАС

622

Не

Ьеи

С1у

ТЬг

Сув

А1а

ТЬг

С1и

С1П

Бег

Агд

Суе

Ьеи

Агд

А1а

Туг

590

595

600

СТС

ССС

СТС

АТТ

ССС

АСТ

ССС

АТС

АСС

ССС

ААС

ТТТ

СТС

АСС

ААТ

СТС

670

Ьеи

С1у

Ьеи

Не

С1у

ТЬг

А1а

Мее

ТЬг

Рго

АВП

РЬе

να2

Зег

Авп

Уа1

605

610

615

620

ААС

АСС

АСТ

СТТ

ССС

ТТА

АСС

ТСС

АСС

тсс

СОА

ТСС

АСТ

ТСС

ААС

СТС

718

Авп

ТЬг

Бег

Уа1

А1а

Ьеи

Бег

Суз

ТЬг

Суз

Агд

С1у

Зег

С1у

Аап

Ьеи

625

630

635

САС

ТСТ

САА

АТС

СТС

САА

(ТСС

ттс

ТТС

ТСС

САС

ААС

ССС

ТСС

766

С1П

С1и

Сув

С1и

Мег

Ьеи

С1и

С1у

РЬе

Зег

Н13

Авг.

РГО

суз

640

645

650

СТС

АСС

САС

ССС

АТТ

ССА

ест

ААС

АТС

ССТ

ТТТ

САС

АСС

САА

СТС

ттс

814

Ьеи

ТЬг

С1и

А1а

Не

А1а

Αία

Ьув

Мег

Агд

РЬе

Н£з

Зег

О1п

Ьеи

РЪ.е

655

660

665

ТСС

САС

ТСС

ССА

САС

ССТ

АСС

ТТТ

ССТ

СТС

АТС

ССА

САС

ААТ

862

Бег

01x1

Азр

Тгр

Рго

ΗίΒ

Рго

ТЬг

РЪе

А1а

νηΐ

Меб

А1а

ΗΪ5

С1п

Авп

670

675

6В0

САА

ААС

ест

ост

СТС

АТС

ССА

САС

ССС

ТТС

ОТО

ССС

ТСТ

СТТ

ТТС

ТСС

910

С1и

Авп

Рго

А1а

Уа1

Агд

Рго

С1п

Рю

Тгр

Уа1

Рхо

Бег

Ьеи

РЬе

Бех

685

690

695

700

ТСС

АСС

стт

ССС

ТТС

АТТ

СТС

АСС

СТА

ТОС

ТАОСТССАСТ

956

Сун

ТЬГ

Ьеи

РГО

Ьеи

Не

Ьеи

Зет

Ьеи

Тгр

	705		710
ТССССАТССС 1016	ССТСТТСССС	ТССАССАСАС	ССАТСТССАС	ТТССАССССА	СААТСССТСА
ТСАААССАСА 107 6	ССАССАТСАА	ТСАТСТССАС	ТССССАСАТС	АТСССАСАСС	АСААССТААС
ТСТТАТСАСС изб	ТССАСАТССТ	ТАСТТСТССА	СТССТСАТТС	ССТССАСССС	АТСТССАСТТ
СТСАТТСАТС 1196	СТЗССССТСС	ТТССТООССА	СААТТТАССС	АТСТСАТСТС	стссстсттс
сссттссттт	АТТССТАТТА	ТТОТССТААА	СТС7СТСТТС	ССТСТТТСАТ	САТСАТТААА

1256 (1) ХАРЖГЕЕИСТИКИ ПССПЕЩСеИШЪНССГИ:

(А) ДЛИНА: 1271 пары осноеаний ‘ (В) ВИЦ: нуклеиновая кислота (С) СТРУКТУРА ЦЕПИ: одиночная (0) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ίΐ) вад МОЛЕКУЛЫ: аднк

ССТтТСЬСТТ ΑΑΑΑΆ 1271 (2) СВЕДЕНИЯ О ЗЕО ГО N0:19:

(ί) ХАРАКГЕЕИСТИКИ ПОСПЭДСВАТЕЛЬНССТИ:

(A) ДЛИНА: 315 аминокислот (B) ВДЦ: аминокислота (О) ТОПОЛОГИЯ: линейная (И) вад МОЛЕКУЛЫ: белок (ΐχ) ОТЛМИТЕПЬНАЯ ОСОБЕННОСТЬ:

(A) ИМЯ/КЖИ: СОЗ (B) МЕСТСНАХСВДЕНИЕ: 2..946 (х£) ОПИСАНИЕ ПОСПЕДСЕКГЕЛЬНССШ: 3Εβ ГО N0:18:

С ОСС ТАС ТСТ САА АСА ССТ САА СТС АСиЗ ААС АСС ТСТ СТС АТА ООО

С1у Тут Суз С1и ТЬг Рго С1п Ьеи Агр Анн Бег Зег Ьеи Не С1у 400 405 410

тсс

АТС

тсс

САС

сое

тсс

АТС

ААС

САС

СТТ

ССС

ТСС

ТТС

САС

АТС

94

Суе

МеС

Суе

Н£б

Агд

Меи

Ьув

АВП

С1п

Уа1

А1а

Сув

Ьеи

Азр

Не

415

420

425

ТАТ

ТСС

АСС

СТТ

САС

сот

ОСС

ССС

АСС

СТТ

ест

ААС

ТАТ

САС

СТС

6АТ

142

туг

Тгр

ТНг

ν&ι

ни

Агд

А1а

Агд

Зег

Ьеи

О1у

Азп

Туг

С1и

Ьеи

Азр

430

43 5

440

СТС

тсс

ССС

ТАТ

САА

САС

АСА

СТС

АСС

ААА

ССС

ТСС

ААА

АТС

ААТ

190

ναι

Бег

Рго

туг

<51и

Азр

ТЬг

νβΐ

ТЬг

Бег

Ьув

Рго

Тгр Ьув

Меб

Азп

445

450

455

460

СТС

АСС

ААА

СТС

ААС

АТС

СТС

ААА

ССА

САС

ТСА

САС

СТС

ТСС

СТС

ААС

238

Ьеи

Бег

Ьув

Ьеи

λεη

МеС

Ьеи

Ьуа

Рго

Аар

Бег

Азр

Ьеи

Суз

Ьеи

Ьуз

465

47 0

475

ТТТ

ОСС

АТС

СТС

ТСТ

АСТ

СТС

ААТ

САС

ААС

ТСТ

САС

ССС

СТС

ССС

ААС

286

РЬе

Αία

Мес

Ьеи

Сув

ТЬг

Ьеи

Авп

Αερ

Ьув

Сув

Авр Агд

Ьеи

Агд

Ьув

46С

485

490

ОСС

•ТАС

ООО

ОАО

осе

ТСС

сзс

ССС

САС

ТСС

САС

ССС

САС

СТС

ТСС

334

А1а

туг С1у

С1и

А1а

Суб

Бег

С1у

РГО

Н1в

Суз

С1п

Агд

Н£в

ναΐ

Суз

495

500

505

СТС

АСКЗ

САС

СТС

АСТ

ттс

ТТС

САС

ААС

ССС

САС

ССС

САС

ССС

382

Ьеи

Агд

С1п

Теи

Ьеи

ТЬг

РЬе

РИе

С1и

Ьув

А1а

С-1и

Рго

Их в

А1а

510

515

520

САЭ

ОСС

СТС

СТА

СТС

ТСС

ССА

ТС'Г

ССС

ААС

САС

ССС

ТСС

осе

430

С1п

СЗу

Ьеи

Сув

Рх о

Сув

А1а

Рго

Авп

Азр

Агд

61у

Сув

СЗу

525

530

535

540

САС

ССС

ААС

АСС

АТС

ССС

ААС

ТСС

ОСС

СТС

ССС

ест

СТС

47β

61и

Агд

Авп

ТПГ

Не

А1а

Рго

Авп

Суя

А1а

Ьеи

Рго

Уа1

(Х1)

СПИСАНИЕ ПОСЛВДСНАТЕЛЬНССТИ: ЗЕС ТО N0:19:

С1у Туг 1

Суз

С1и

ТЬг 5

Рго

С1п

Ьеи

Агд

Аап 10

Бег

Ьеи

Не

С1у 15

Суз

Мег

Сун

Е£а

Агд 20

Агд

Мег

Ьув

Авп

С1п 25

ν&1

А1а

Суе

Ьеи

Азр 30

Не

Туг

тгр

Тпг

ναΐ 35

Н£б

Агд

А1а

Агд

Бег 40

Ьеи

С1у

Авп

Туг

С1и 45

Ьеи

Авр

νβΐ

Зег

Рго 50

Туг

С1и

Авр

ТЬг

Уа1 55

ТЬг

Бег

Ьуз

Рго

Тгр 60

ьув

МеЬ

Азп

Ьеи

Бег 65

ьуа

Ьеи

АвП

Мег

Ьеи 70

Ьув

Рго

Азр

Бет

Аэр 75

Ьеи

Суз

Ьеи

Ьув

РЬе 80

А1а

Мег

Ьеи

Сув

ТЬг 85

ьеи

АВП

Авр

Ьув

Сун 90

Авр

Агд

Ьеи

Агд

Ьуз 95

А1а

Туг

С1у

С1и

А1а 100

Суз

Бег

С1у

Рго

Ηίε 105

суе

С1п

Агд

Н1В

Уа1 НС

Сув

Ьеи

Агд

С1п

Ьеи 115

Ьеи

ТЬх

РЬе

С1и 120

Ьув

А1а

С1и

Рго 125

Н£з

А1а

С1П

С1у

Ьеи 130

Ьеи

Сув

Рго

Сув 135

А1а

Рго

Азп

Азр

Агу 140

С1у

Сув

(31у

С1и

Агд 145

Агд

Аап

ТЬг

Не 150

А1а

Рго

Азп

Суз

А1а 155

Ьеи

Рго

ν«*ι

А1а 160

Рго

Авп

Сув

Ьеи

С1и 165

Ьеи

Агд

Ьеи

Суе 170

РЬе

Бег

Азр

Рго

Ьеи 175

Су=

Ахд

Зег

Агд

Ьеи 180

Уа1

Азр

ГЬе

С1п

ТЬг 185

ΗΪΒ

Сув

Н£з

Рго

НеГ 190

Авр

11е

Ьеи

О1у

ТЬг 195

Суе

А1а

ТЬг

С1и

С1п 200

Бег

Агд

Суд

Ьеи

Агд 205

А1а

Туг

Ьеи

С1у

Ьеи 210

Не

С1у

ТЬг

АЗ а

МеГ 215

ТЬг

Рго

Азп

РЬе

Уа1 220

Зег

Азп

Уа1

Асп

ТЬг 225

Бег

А1а

Г.р. и

Зег 230

сув

ТЬг

Сув

Ахд

С1у 235

Бег

С1у

Азп

Ьеи

<31п 240

С1и

Сув

С1и

Мег 245

Ьеи

С1и

01у

РИе

РЬе 250

Зег

Н.1Я

Аяп

Ртп

Сув 255

Ьеи

ТЬг

С1и

А1а

. Не

А1а

. Ьув

Мег

Агд

РИе

Нье

Бех

С1п

Ьеи

РИе

Баг

260 265 270

545 550 555

С1п

Аар

Тгр

Рго

Н1в

Рго

ТЬг

РЬе

А1а

νβΐ

МеС

А1а

Нхв

С1п Авп

С1и

275

280

285

Азп

Рго

Л1а

Уа1

Агд

Рго

С1п

Рго

Тгр

ναΐ

Рго

Зег

Ьеи

РЬе Зег

Суз

290

295

300

ТЬг

Ьеи

Рго

Ьеи

11ё

Ьеи

Зег

Ьеи

Тгр

305

310

315

(2) СВЕДЕНИЯ О ЗЕО ГО N0:20:

(ί) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПГСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:

(A) ДЛИНА: 1699 пар оснований (B) ВИД: нуклеиновая кислота (C) СТРУКТУРА ЦЕЛИ: одиночная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ίί) ВВД МОЛЕКУЛЫ: кДНК (ΪΧ) ОТЛИЧИТЕЛЬНАЯ ОСОБЕННОСТЬ:

(A) РМЯ/КЖН: -СОЗ (B) МЕСТОНАХОЖДЕНИЕ: 175..1374 (XI) СПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 3ΕΏ ГО N0:20: , тстооасссс сссттсссас ттссассссс ссссссасса ссстсстхзсс АСАСТСТСТС 60

СОТСССССТС ОАСОСССССА (ЗОСССССЗСС «злазтосо? СТССАСССАС сссссстстс 120

АСАССТССАО СОСАССАССС АССССАСССС ССАССССССС СССТАСАССТ СССС АТС

177 мер

СТС ССС ССС СТО ААС ССС ССА ССС

225 ν&1 Агд Рго Ьеи Αεη Рго Агд Рго

320

СТС СТС СТС- СТО ССС ССС ТСС ССС 273

Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Рго Рго' Зег Рго 335.340

СТТ ССС АСА САА АСС ССА СТС АТС 321

Ьеи Рго ТИг СТ и Яег Агд Гли МйП 350355

ААС ТСС САС ССТ САТ ССС АСС ТОС 369

Ьуе Сув С1п А1а Аар Рго ТЬг Суд 365370

ТСС ТСС АСС ТСТ АСС АТА АСС АСС 417

Зег Суз ТЬг Зег Зег 11с Зег ТНг 385

СТС ССТ ОСТ САС ТСС СТС САС ОСА 465

7а1 Рго А1а Авр Сув Ьеи С1и А1а

400

СТО АТА ССС ТОС АТС ТСС САС ССС 513

Ьеи Не С1у Суз Мес Сув Нхз Агд 415420

ТТС САС АТС ТАТ ТСС АСС СТТ САС 561

Ьеи Азр Не Туг Тгр ТЫ νηΐ Ηίυ 430435

ОАО СТС САТ СТС ТСС ССС ТАТ САА 609

С1и Ьеи Авр 57а1 Зег Рго Туг С1и 445450

ААА АТС ААТ СТС АСС ААА СТС ААС 657

Ьув Мес Авп Ьеи Зег Ьуз Ьеи Αεη 465

ТСС СТС ААС ТТТ ССС АТС СТС ТСТ 7ϋ5

Суз Ьеи Ьуз РЬе А1а Мес Ьеи Суе 480

СТС ССС ААС ССС ТАС ССС САС ССС 753

Ьеи Агд Ьуз А1а Туг С1у О1и А1а 495 500

САС СТС ТОС СТС АСС САС СТС СТС 801

Нхз Уа1 Суз Ьеи Агд С1п Ьеи Ьеи 510 ЫЬ

ССС САС ССС САС ОСС СТС СТА СТС 849

Рго Нхв А1а С1п СТ у Ъеи Ьеи Ьеи 525 530

ССС ТСС ООО ОАО СОС ССС ССС ААС 8Э7 ·

С1у Сув СТ у С1и лгд Агд Агд Лна

545

ССС ССТ СТС ССС ССС ААС ТОС СТС 945

Рго Рго УаЬ А1а Рго Азп Суз Ьеи 560

САС ССС СТТ ТОС АСА ТСА ССС СТС 993

Авр Рго Ьеи Суе Агд Зег Агд Ьеи 575 580

ССС АТС САС АТС СТА ССА АСТ ТОТ 1041

Рго МеЬ Азр Не Ьеи С1у ТЬг Суз 590 595

СТО ССС ССС СТА СТС СТС АТС ТТС

Ьеи Рго Рго Уа1 Уа1 Ьеи Мег Ьеи 325 330

СТС ССТ СТС ССА ССС ОСА САС ССС

Ьеи Рго Ьеи А1а А1а С1у Аве Рго 345 *

ААС АСС ТСТ СТС САС ССС АСС АСС

Авп Зег Суз Ьеи С1п А/я Агд Агд 360

АСТ ССТ ОСС ТАС САС САС СТС ОАТ

Зег А1а А1а Туг Н1з Нхз Ьеи Азр 375 .380

ССА СТС ССС ТСА САС САС ССТ ТСС

Рго Ьеи Рго Зег С1и С1и Рго Зег 390395

ССА САС САА СТС АСб ААС АЗС ТСТ

А1а С1п СТ η Ьеи Агд Ава Зег Зег 405410

ССС АТС ААС ААС САС СТТ ОСС ТСС

Агд МеС Ьуз Азп С1п ν«1 А1а Сув

425

ССТ ССС ССС АСС СТТ ССТ ААС ТАТ

Агд А1а Агд Зег Ьеи С1у Αεη туг 440

САС АСА СТС АСС АСС ААА ССС ТОО

Авр ТНг 7а1 ТЬг Зег Ьуз Рго Тгр

455460

АТС СТС ААА ССА САС ТСА САС СТС

МеС Ьеи Ьув Рго Авр Зег Азр Ьеи 470475

АСТ СТС ААТ САС ААС ТСТ САС СОЗ

ТЫ Ьеи Αεη Лор Ьув Суз Аер Агд 485490

ТСС ТСС ССС ССС САС ТСС САС СОС

Суз Зег С1у Рго Ηχε Ονε С1п Агд 505

АСТ ТТС ТТС ОАО ААС ССС ССС САС

ТЫ РЬе РЬе С1и Ьуз А1е А1а С1и 520

ТОС ССА ТСТ ОСС ССС ААС САС ССС

Суз Рго Суз А1а Рго Авп Лар Агд

535540

АСС АТС ССС ССС ААС ТСС ССС СТО

ТЫ 11е А1а Рго Аап Су5 АХа Ьеи 550555

ОАО СТС СОС СОС СТС ТСС ТТС ТСС

С1и Ьеи Агд Агд Ьеи Сув РЬе Зег 565570

СТС САТ ТТС САО АСС САС ТСС САТ

Уа1 Азр РЬе С1п ТЫ Нхз Суз Нхз 585

ОСА АСА ОАО САС ТСС ЛОА ТСТ СТА

А1а ТЬг С1и С1п Зег Лхд Сув Ьеи 500

ССА

ТАС

СТС

ССС

СТС

АТТ

ССС

АСТ

ССС

АТС

АСС

ССС

ААС

ТТТ

СТС

1089

Агд

А1а

Туг

Ьеи

С1у

Ьеи

Не

С1у

ТЬг

А1а

МеЕ

ТЬг

Рго

Азп

Рае

Уа1

605

610

615

620

АСС

ААТ

СТС

ААС

АСС

АСТ

СТТ

ОСС

ТТА

АСС

тсс

АСС

ТСС .

ССА

СОС

АСТ

1137

Зег

Азп

νβΐ

Αεη

ТЬг

Зег

V»!

А1а

Ьеи

Зег

Сув

ТНг

Сув

Агд

С1у

Бег

625

630

635

ССС

ААС

СТС

САС

ТСТ

САА

АТС

СТС

САА

ССС

ТТС

ТСС

САС

1185

С51У

АВП

ьеи

С1п

С1и

(31и

Оуз

С1и

МеС

Ьеи

С1и

С1у

РЬе

РЬс

Зег

Нхз

640

645

650

ААС

ССС

ТСС

СТС

АСС

САС

ССС

АТТ

ОСА

ССТ

ААС

АТС

ССТ

ТТТ

САС

АСС

1233

Азп

РХО

Суз

Ьеи

ТЬг

<31и

Ά1Β

Не

А 1а

А1а

Ьув

Мее

Агд

РЬе

Нхз

Бег

655

660

665

САА

СТС

ТТС

ТСС

САС

ТСС

ССА

САС

ССТ

АСС

ТТТ

сст

СТС

АТС

ССА

1281

С1п

Ьеи

РЬе

Зег

С1п

Азр

Тгр

Рго

Нхз

Рго

ТЬг

РЬе

А1а

Уа1

Мее

А1а

670

675

680

САС

ТАС

ААТ

САА

ААС

ССТ

СТС

АСС

ССА

САС

ССС

ТСС

СТС

ССС

ТСТ

1329

Нхв

С1п

Авп

01 и

Авп

Рго

А1а

νβΐ

Агд

Рго

С1п

Рго

Тгр

Уа1

Рго

5ех

685

690

695

700

СТТ

ТТС

ТСС

АСС

СТТ

ССС

ТТС

лтт

СТС

СТО

АСС

СТА

ТСС

1374

Ьеи

РЬе

Бег

Сув

Таг

Ьеи

Рго

Ьеи

Не

Ьеи

Зег

Ьеи

Тгр

705

710

715

ТАССТСЗАСТ ТССССАСССС ССТСТТСССС ТССЛССАСАС ССДОСТССАС ТТССАОСССА 1434

СААССССТСА ССАААССАСЛ ССАССАССАА ССАССТССАС ТССССАС-АТС АСОССАСАСС 1494

АСААССТААС ССТТАТСАСС ТССАСЛТССТ ТАСТССТССА СТССТСАТТС СС7ССАСССС 1554

АТСТССАСТТ СТСАТТСАТС СТСССССТСС ТТССТССССА СААТТТАОСС АТСТСАТСТС 1614

СТСССТСТСС ОССТТССТТТ АТТССТАТТА ТТСТССТААА СТСТСТСТСС ССТСТТОСАТ 1674

САТСАТТААА ССТТТСАСТТ ААААА

1699 (2) СВЕДЕНИЯ О ЗЕС ГО N0:21:

(х) ХАРАКГЕЕИСТИКИ ПОСТЕДСВАТЕПЬНОСТИ:

(Л) ДЛИНА: 400 аминокислот (В) ВВД: аминокислота (В) ТОПОЛОГИЯ: линейная (ίί) ЕИД МОЛЕКУЛЫ: белок (XI) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ВЕС ГО N0:21:

МеЬ Уа1 Агд Рго Ьеи Авп Рго Агд Рго Ьеи Рго Рго 7а1 Уа1 Ьеи Мее

1

5

10

15

Ьеи

Рго

Зег

РГО

Ьеи

Рго Ьеи

А1а

СТУ .

Азр

20

25

30

Рго

Ьеи

Рго

ТЬг

С1и

5ех

Агд

Ьеи

Мей

Авп

Зег Сув

Ьеи

С1п

А1а .

Ахд

35

40

45

Агд

Ьув

Суз

С1п

А1а

Азр

Рго

ТЫ

Сув

Зег

А1а А1а

Туг

Нхз

Ьеи

50

55

60

Азр

бег

Суз

ТЫ

Зег

Не

Зег

ТЬг

Рго

Ьеи Рго

Зег

<31 и

С1и

Рго

65

70

75

80

Бег

Уа1

Рго

А1а

Авр

Сув

Ьеи

С1и

А1а

С1п С1п

Ьеи

Агд

Авп

Зег

85

90

95

5ег

Ьеи

Не

С1у

Сув

Мае

Сув

НХЗ

Агд

МеС Ьув

Азп

СЬп

Уа1

А1а

100

105

110

Сув

Ьеи

Аэр

Не

Туг

Тгр

ТЫ

Уа1

Нхв

Агд

А1а Агд

Зег

Ьеи

С1у

Авп

115

12β

125

Туг

С31и

Ьеи

Аву

ν«ι

бег

Рго

Туг

СЬи

Азр

ТЫ Уа1

ТЫ

бег

Ьув

Рго

130

135

140

Тгр

Ьув

Мее

Авп

Ьеи

Зег

Ьуе

Ьеи

Азп

нее

Ьеи Ьув

Рго

Авр

Бег

Авр

145

150

155

160

Ьеи

Суз

Ьеи

Ьув

РЬе

А1а

МеЬ

Ьеи

Сув

ТЫ

Ьеи Авп

Азр

Ьув

Суз

Авр

155

170

175

Агд

Ьеи

Агд

Ьуе

А1а

Туг

С1у

С1и

А1и

Сув

Зег С1у

РГО

Нхз

Сув

<51п

160

185

190

Агд

Нхв

Уа1

Сув

Ьеи

Агд

О1п

Ьеи

ТЬх

₽Ие РЬе

С1и

Ьув

А1а

195

200

205

(31и

Рго

Нхз

А1а

О1п

С1у

Ьеи

Сув

Рго Сув

А1а

Рго

Авп

Аср

210

215

220

Лгд

С1у

Суз

С1у

охи

Агд

Азп

ТЬх

11е А1а

Рго

Авп

Сув

А1а

225

23С

235

240

Ьеи

РГО

Рго

Уа1

Л1а

Рго

Авп

Сув

Ьеи

С1и

Ьеи Агд

Агд

Ьеи

Су&

РЬе

245

250

255

Зег

Азр

Рго

Ьеи

Суе

Ахд

Зег

Агд

Ьеи

Уа1

Авр РЬе

С1п

ТЬх

Нхв

Суз

260

265

270

Яхв

Рго

МеЪ

Авр

11е

Ьеи

О1у

ТИг

Сус

Л1а

ТЫ С1и

С1п

Зех

Агд

Суе

275

280

285

Ьои

. Агд

А1а

-Руг

Ьеи

О1у

Ьои

Не

С1у

ТЬг

А1а Мес

ТИг

Рго

Азп

290

295

300

Уах

Зег

• Азп

. 7а1

Азп

ТИг

Зег

Уа1

А1я

Ьеи

Зег Сув

ТЬг

Суз

Агд

С1у

305

310

315

320

Зег

• <311

' Азп

ι Ьеи

. С1п

. СТ и

С1и

ι Суз

С1и

МеС

Ьеи С1и

. С1у

• РИ₽

РЬе

Зег

325

330

335

Нхе

> Авп Рго Суз

: Ьеи

. ТЫ О1и

ι А1а Не

АЗ а

ι А1а Ьув

Мет

: Агд РЬс

ι Из я

340

345

350

£ег С1п Беи ₽Ье £ег С1п λερ Тгр Рго Н1в Рю ТИг РЬе А1а Уа1 Мес 355 360365

А1а Ηΐε 31г. Лап С1и Авп Рго А1а Уа1 Агд Рго <31п Рго Τιρ Уа1 Рю 370 375380

Бег Беи РЬе £ег Сус 7кг Беи Рго Беи Не Беи Беи Беи 5ег Беи Тгр 385 390 395400

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Нуклеиновая кислота, кодирующая Ре!лиганд, выбранная из Ре!Ь1 крысы (8Ер ΙΌ N0:2), Ре! 1.1 человека (8Ер ΙΌ N0:11), Ре!Ь2 человека (8Ер ΙΌ N0: 13), Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:17) и Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:21).
2. Нуклеиновая кислота, кодирующая вариант КеЕлиганда с аминокислотной заменой, выбранной из Ре!Ь1 крысы (8Ер ΙΌ N0:2), Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:11), Ре!Ь2 человека (8Ер ΙΌ N0:13), Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:17) и Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:21).
3. Нуклеиновая кислота по п.2, отличающаяся тем, что указанный вариант с заменой при сопоставлении с Ре!-лигандом, выбранным из Ре!Ь1 крысы (8Ер ΙΌ N0:2), Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:11), Ре!Ь2 человека (8Ер ΙΌ N0:13), Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:17) и Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:21), обладает, по крайней мере, 40% сходством последовательности, и, кроме того, указанный вариант с заменой обладает, по крайней мере, 80% сходством сопоставленных цистеиновых остатков с указанным КеЕлигандом.
4. Нуклеиновая кислота по п.2, отличающаяся тем, что указанный вариант с заменой при сопоставлении с Ке!-лигандом, выбранным из Ре!Ь1 крысы (8Ер ΙΌ N0:2), Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:11), Ре!Ь2 человека (8Ер ΙΌ N0:13), Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:17) и Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:21), обладает, по крайней мере, 80% сходством последовательности.
5. Нуклеиновая кислота, кодирующая растворимый вариант Ке!-лиганда, выбранный из группы, состоящей из Ре!Ь1 крысы (8Ер ΙΌ N0:2), Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:11), Ре!Ь2 человека (8Ер ΙΌ N0:13), Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:17) и Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:21).
6. Нуклеиновая кислота, имеющая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, включающей: кДНК Ре!Ь1 крысы (8Ер ΙΌ N0:1), кДНК неполного Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0: 8), кДНК Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:10), Ре!Ь2 человека (8Ер ΙΌ N0:12), Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:16), неполного Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:18) и Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:20).
7. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту по пп.1, 2, 5 или 6, представленный здесь в виде вставки, при том, что указанный вектор необязательно включает экспрессирующую контрольную последовательность, присоединенную путем сшивки к указанной вставке.
8. Прокариотический штамм хозяйской клетки, включающий вектор по п.7.
9. Эукариотический штамм хозяйской клетки, включающий вектор по п.7.
10. Способ получения полипептида, включающий стадии культивирования штамма хозяйской клетки по пп.8 или 9 в клеточной культуральной среде и получение КеЕлигандного полипептида, экспрессируемого указанным вектором со вставкой в указанном штамме хозяйской клетки.
11. КеЕлигандный полипептидный вариант, полученный путем удаления гидрофобной Ν-концевой сигнальной последовательности Ре! лигандного полипептида, выбранного из группы состоящего из Ре!Ь1 крысы (8Ер ΙΌ N0:2), неполного Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:9), Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:11), Ре!Ь2 человека (8Ер ΙΌ N0:13), неполного Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:15), Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:17), неполного Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:19) и Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:21).
12. КеЕлигандный полипептид по п.11, который при связывании с КеЕполипептидом запускает его димеризацию или аутофосфорилирование.
13. КеЕлиганд, выбранный из (a) Ре!Ь1 крысы (8Ер ΙΌ N0:2), неполного Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:9), Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:11), Ре!Ь2 человека (8Ер ΙΌ N0:13), неполного Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:15), Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:17), неполного Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:19) и Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:21) или (b) вариантов с аминокислотными заменами из Ре!Ь1 крысы (8Ер ΙΌ N0:2), неполного Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:9), Ре!Ь1 человека (8Ер ΙΌ N0:11), Ре!Ь2 человека (8Ер ΙΌ N0:13), неполного Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:15), Ре!Ь3 мыши (8Ер ΙΌ N0:17), неполного Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:19) и Ре!Ь3 человека (8Ер ΙΌ N0:21).
14. Растворимый, усеченный Ре!лигандный полипептид, включающий, как минимум, около 400 аминокислот, имеющий гидрофобную С-концевую последовательность.
15. Слитый белок, включающий Ре!лигандный полипептид по пп.11, 12, 13 или 14, слитый с иммуноглобулиновым полипептидом, токсиновым полипептидом, визуализирующим веществом или радионуклидом.
16. Поликлональное антитело, которое специфически связывается с КеЕлигандным полипептидом по пп.11, 12, 13 или 14.
17. Моноклональное антитело, которое специфически связывается с КеЕлигандным полипептидом по пп.11, 12, 13 или 14.
18. Антитело по пп.16 или 17, отличающееся тем, что указанное антитело блокирует связывание КеЕлигандного полипептида с Ре!полипептидом.
19. Применение КеЕлигандного полипептида по пп.11, 12, 13 или 14 для лечения или терапии почечных или нейродегенеративных заболеваний.
20. Применение слитого белка по п. 15 для лечения или терапии почечных или нейродегенеративных заболеваний.
21. Применение антитела по пп.16, 17 или 18 для лечения или терапии почечных или нейродегенеративных заболеваний.
22. Способ стимулирования роста или ограничения повреждения ткани, экспрессирующей Ке1 у субъекта, включающий стадию введения указанному субъекту терапевтически эффективного количества Ве1-лигандного полипептида по пп.11, 12, 13 или 14.
23. Способ по п.22, отличающийся тем, что указанный Кс1-лигандный полипептид вводят совместно с родственным полипептидом нейротрофного фактора, производного глиальной линии клеток (ΟΌΝΕ).
24. Способ по п. 22, отличающийся тем, что указанная Ке1-экспрессирующая ткань представляет собой почечную ткань или нервную ткань.
25. Способ подавления роста опухолевой клетки, которая экспрессирует Яс1. включающий стадию контактирования указанной клетки с эффективным количеством Ке1-лигандного полипептида по п.14.
26. Способ подавления роста опухолевой клетки, которая экспрессирует Ке1-лигандный полипептид, включающий стадию контактирования указанной клетки с эффективным количеством Ке1-лигандного полипептида по п.14.
27. Способ модуляции Ке1-сигнальной трансдукции, вовлекающий клетку, экспрессирующую либо Ве1-полипептид, либо Яс1лигандный полипептид, включающий стадию контактирования указанной клетки с Яс1лигандным полипептидом по п.14.
28. Способ нацеливания токсина, визуализирующего вещества или радионуклида на клетку, включающий стадию контактирования клетки со слитым белком по п.15.
29. Способ подавления роста опухолевой клетки, включающий стадию использования слитого белка по п.15.
30. Выделенная нуклеиновая кислота, имеющая нуклеотидную последовательность, включающую вырожденный вариант последовательности, выбранной из группы, состоящей из кДНК Ве1Ь1 крысы (8ЕО ГО N0:1), кДНК неполного Ве1Ь1 человека (8Е0 ГО N0:8), кДНК Ве1Ь1 человека (8Е0 ГО N0:10), Ве1Ь2 человека (8ЕО ГО N0:12), Ве1Ь3 мыши (8Ер ГО N0:16), неполного Ве1Ь3 человека (8Е0 ГО N0:18) и Ве1Ь3 человека (8Е0 ГО N0:20).
31. Выделенная нуклеиновая кислота, имеющая нуклеотидную последовательность, включающую полиморфный вариант последовательности, выбранной из группы, состоящей из кДНК Ве1Ь1 крысы (8Е0 ГО N0:1), кДНК неполного Ве1Ь1 человека (8Е0 ГО N0:8), кДНК

Ке1Ь1 человека (8Е0 ГО N0:10), Ке1Ь2 человека (8ЕО ГО N0:12), Ве1Ь3 мыши (8Е(3 ГО N0:16), неполного Ке1Ь3 человека (8Е0 ГО N0:18) и Ке1Ь3 человека (8Е0 ГО N0:20).
32. Способ стимулирования роста или ограничения повреждения ткани, экспрессирующей Ве1 у субъекта, включающий стадию введения указанному субъекту терапевтически эффективного количества иммуноглобулинового слитого белка по п.15.
33. Способ стимулирования роста или ограничения повреждения ткани, экспрессирующей Ве1 у субъекта, включающий стадию введения указанному субъекту терапевтически эффективного количества антитела по пп.16, 17 или 18.
34. Способ подавления роста опухолевой клетки, которая экспрессирует Ве1, включающий стадию контактирования указанной клетки с эффективным количеством антитела по пп.16, 17 или 18.
35. Способ модуляции Ке1-сигнальной трансдукции, вовлекающий клетку, экспрессирующую либо Ке1-полипептид, либо Ве1лигандный полипептид, включающий стадию использования слитого белка по п.15.
36. Способ модуляции Ке1-сигнальной трансдукции, вовлекающий клетку, экспрессирующую либо Ке1-полипептид, либо Ве1лигандный полипептид, включающий стадию контактирования указанной клетки с антителом по пп.16, 17 или 18.
37. Способ нацеливания токсина, визуализирующего вещества или радионуклида на клетку, включающий стадию использования антитела по пп.16, 17 или 18, конъюгированного с указанным токсином, визуализирующим веществом или радионуклидом.
38. Способ подавления роста опухолевой клетки, экспрессирующей либо Ке1-полипептид, либо Ке-лигандный полипептид, включающий стадию контактирования указанной клетки с антителом по п.16, 17 или 18, конъюгированным с токсином или радионуклидом.
39. Вектор, включающий нуклеиновую кислоту по п.30 или 31, представленный здесь в виде вставки, отличающийся тем, что указанный вектор необязательно включает экспрессирующую контрольную последовательность, присоединенную путем сшивки к указанной вставке.
40. Прокариотический штамм хозяйской клетки, включающий вектор по п.39.
41. Эукариотический штамм хозяйской клетки, включающий вектор по п.39.
42. Способ получения полипептида, включающий стадии культивирования штамма хозяйской клетки по п.40 или 41 в клеточной культуральной среде и получение Ке1лигандного полипептида, экспрессируемого данным вектором со вставкой в указанном штамме хозяйской клетки.