EA004402B1 - Модуляторы регенерации тканей - Google Patents

Модуляторы регенерации тканей Download PDF

Info

Publication number
EA004402B1
EA004402B1 EA199801044A EA199801044A EA004402B1 EA 004402 B1 EA004402 B1 EA 004402B1 EA 199801044 A EA199801044 A EA 199801044A EA 199801044 A EA199801044 A EA 199801044A EA 004402 B1 EA004402 B1 EA 004402B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
subject
polypeptide
therapeutically effective
nucleic acid
zeg
Prior art date
Application number
EA199801044A
Other languages
English (en)
Other versions
EA199801044A1 (ru
Inventor
Мишель Саникола-Надель
Генри Вей
Ричард Л. Кейт
Такахару Итимура
Джозеф В. Бонвентре
Кэтрин А. Хессион
Original Assignee
Байоджен, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26690881&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA004402(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Байоджен, Инк. filed Critical Байоджен, Инк.
Publication of EA199801044A1 publication Critical patent/EA199801044A1/ru
Publication of EA004402B1 publication Critical patent/EA004402B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Electrotherapy Devices (AREA)

Abstract

Описаны белки, которые стимулируются в поврежденных или регенерирующих тканях, и ДНК, кодирующая эти белки, а также терапевтические композиции и способы лечения с использованием этих соединений.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к белкам, которые стимулируются в поврежденных или регенерирующих тканях, а также к ДНК, кодирующей эти белки. Кроме того, настоящее изобретение относится к терапевтическим композициям, и к способам лечения с использованием белков.
Уровень техники
Динамическое ремоделирование архитектуры тканей происходит в процессе развития и во время восстановления тканей после повреждения. Для изучения этого процесса, мы сосредоточили свои исследования на модели повреждения почки, вызванного поражением в результате ишемической реперфузии.
Почки обладают способностью восстанавливать свои ткани после повреждения в эпителии проксимальных канальцев посредством сложной серии событий, включающих гибель клеток, пролиферацию выживших эпителиальных клеток проксимальных канальцев, образования частично дифференцированного регенеративного эпителия поверх оголенной базальной мембраны, и дифференцировку регенеративного эпителия с образованием полностью функциональных эпителиальных клеток проксимальных канальцев (^аШи е! а1., ЬаЬ. 1пус51. 66: 474-484, 1992; ^йгдаП е! а1., Мо1. Се11 Βΐο1. 13:1933-1942, 1994; 1сЫшига е! а1. Ат. 1. РЬу8ю1. 269: Е653-662, 1995; ТЬабЬат е! а1., N. Εη§1. 1. Меб.: 1448-1460, 1996). В этом процессе репарации тканей участвуют факторы роста, такие как, 1СЕ, ЕСЕ и НОЕ, поскольку он имеет адгезионную молекулу 1САМ-1 эндотелиальных клеток. Однако, механизмы, с помощью которых происходит восстановление эпителиальных клеток канальцев, еще не изучены.
Для идентификации молекул, участвующих в процессе повреждения и репарации эпителия канальцев, нами были проанализированы различия в мРНК-популяциях, присутствующих в поврежденных/регенерирующих почках и в нормальных почках, с помощью репрезентативного дифференциального анализа (ВО А). ВО А представляет собой субстрактивный метод на основе РСВ, с помощью которого получают ткань-мишень или клетко-специфичные кДНКфрагменты путем многократного исключения и амплификации (НиЬак & 8с1и.11х. N^1. Ас1бз Вее., 22:5640-5648, 1994).
Сущность изобретения
В общих чертах, настоящее изобретение относится к молекулам, ассоциированным с повреждением почек (каждая из которых в дальнейшем будет обозначаться К1М), и стимулируемым в почечной ткани после ее повреждения. Белки и пептиды К1М настоящего изобретения, а также их агонисты и антагонисты, и их соответствующие аналоги могут быть использо ваны в различных способах терапевтического лечения.
Настоящее изобретение относится к очищенной и выделенной ДНК-молекуле, имеющей нуклеотидную последовательность, представленную в 8ЕС ГО Νο:1, 8ЕС ГО Νο: 2, 8ЕС ГО Νο:4 или 8ЕЦ ГО Νο: 6. Настоящее изобретение также относится к комплементарным цепям этих последовательностей, к ДНК-молекулам, которые гибридизируются в жестких условиях с вышеуказанными ДНК-молекулами, и к ДНКмолекулам, которые, благодаря вырожденности генетического кода, могут гибридизироваться с любой из ДНК-молекул, определенных выше. Эти ДНК-молекулы могут быть рекомбинантными, и могут быть правильно присоединены к последовательности, регулирующей экспрессию.
Кроме того, настоящее изобретение относится к вектору, содержащему очищенную и выделенную ДНК-молекулу, имеющую нуклеотидную последовательность, представленную в 8ЕР ГО Νο:1, 8ЕС ГО Νο: 2, 8ЕС ГО Νο: 4 или 8ЕЦ ГО Νο: 6, или одну из других ДНКмолекул, определенных выше. Этот вектор может быть биологически функциональной плазмидой или вирусным ДНК-вектором. В одном из своих вариантов, настоящее изобретение относится к прокариотической или эукариотической клетке-хозяину, стабильно трансформированной или трансфецированной вектором, содержащим ДНК-молекулу, представленную в 8ЕР ГО Νο:1, 8ЕС ГО Νο: 2, 8ЕС ГО Νο: 4 или 8ЕС ГО Νο:6. В другом своем варианте, настоящее изобретение относится к способу продуцирования полипептидного продукта К1М, кодированного ДНК-молекулой, описанной выше, где указанный способ предусматривает культивирование, в благоприятствующих росту условиях, прокариотических или эукариотических клеток-хозяина, трансформированных или трансфецированных ДНК-молекулой так, чтобы оно способствовало экспрессии ДНК-молекулы; и выделение полипептидного продукта указанной экспрессии.
Очищенный и выделенный белок К1М человека, который, в основном, не содержит других человеческих белков, входит, в частности, в объем настоящего изобретения, поскольку он используется в способе продуцирования полипептидного продукта, имеющего частично или полностью первичную структурную конформацию и биологическую активность белка К1М. Белки К1М настоящего изобретения могут иметь аминокислотную последовательность, которая включает 8 ЕС ГО Νο:3, 8 ЕС ГО Νο: 5 или 8ЕС ГО Νο: 7, либо они могут быть вариантами 8ЕС ГО Νο:3, 8ЕС ГО Νο:5 или 8ЕС ГО Νο:7, или они могут представлять собой очищенный или выделенный белок, кодированный ДНК-последовательностями 8ЕС ГО Νο:1, 8ЕС ГО Νο:2, 8ЕС ГО Νο: 4 или 8ЕС ГО Νο: 6. Эти белки могут, в основном, не содержать других белков человека. Кроме того, настоящее изобретение относится к вариантам этих белков, таким как растворимые варианты или гибридные белки. Гибридные белки ΚΙΜ настоящего изобретения могут содержать иммуноглобулин, токсин, визуализируемое соединение или радионуклид.
Настоящее изобретение также относится к специфическому моноклональному антителу против белков ΚΙΜ, описанных выше. Антитело против ΚΙΜ может быть ассоциировано с токсином, виализируемым соединением или радионуклидом. Другим объектом исследования является гибридомная клеточная линия, которая продуцирует указанное специфическое антитело.
Настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции. Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут содержать фармацевтически эффективное количество белка ΚΙΜ или антитела против ΚΙΜ настоящего изобретения в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.
Настоящее изобретение включает диагностические методы, такие как обнаружение присутствия или процесса восстановления ткани в поврежденных почках путем измерения концентрации ΚΙΜ в моче, сыворотке, или мочевом осадке пациентов, страдающих прогрессирующим заболеванием почек, или относящихся к группе риска заболевания почек.
Терапевтические способы настоящего изобретения предусматривают лечение пациентов с использованием терапевтически эффективных количеств ΚΙΜ, вариантов ΚΙΜ, аналогов ΚΙΜ, гибридных белков на основе ΚΙΜ, агонистов ΚΙΜ, и антител против ΚΙΜ или против ΚΙΜлигандов. Другими терапевтическими соединениями настоящего изобретения являются ΚΙΜлиганды, антитела против ΚΙΜ, и гибридные белки на основе ΚΙΜ-лигандов. Эти соединения могут быть использованы в терапевтических методах, предусматривающих либо стимуляцию, либо ингибирование клеточных ответов, которые зависят от функции ΚΙΜ.
Другие способы настоящего изобретения заключаются в ингибировании роста ΚΙΜэкспрессирующих опухолевых клеток посредством контактирования этих клеток с гибридными белками, полученными на основе ΚΙΜ-лиганда и либо токсина, либо радионуклида, или с антителом против ΚΙΜ, конъюгированным с токсином или радионуклидом. Аналогичным образом, рост опухолевых клеток, экспрессирую-щих ΚΙΜ-лиганд, может быть ингибирован либо посредством контактирования этих клеток с гибридным белком на основе ΚΙΜ и токсина или радионуклида, либо с антителом против ΚΙΜ, конъюгированным с токсином или радионуклидом.
Настоящее изобретение также относится к способам генной терапии. Такая генная терапия включает способ лечения индивидуума с почечным заболеванием, способ стимуляции роста новой ткани у этого индивидуума, и способ стимуляции выживания поврежденной ткани у индивидуума, предусматривающий введение этому индивидууму вектора, который содержит ДНК, включающую нуклеотидную последовательность 8ЕО ΙΌ Νο:1, 8ЕО ΙΌ Νο: 2, 8ЕО ΙΌ Νο: 4 или 8ЕО ΙΌ Νο:6.
Соединения настоящего изобретения могут быть также использованы для визуализации тканей, либо ίη νίίτο, либо ίη νίνο. Один из таких способов визуализации предусматривает направленную доставку визуализируемого соединения к клетке, экспрессирующей белок, имеющий последовательности 8ЕО ΙΌ Νο:3, 8ЕО ΙΌ Νο: 5 или 8ЕО ΙΌ Νο:7, где указанную доставку осуществляют посредством контактирования этой клетки либо с моноклональным антителом настоящего изобретения, либо с гибридным белком, содержащим белок, описанный выше и присоединенный к визуализируемому соединению. В ίη νίνο-методах эта клетка присутствует в организме индивидуума, а белок или моноклональное антитело вводят этому индивидууму.
Настоящее изобретение также относится к диагностическим способам, таким как способ идентификации повреждения или регенерации клеток почки в организме индивидуума, предусматривающий сравнение уровней экспрессии последовательностей 8ЕО ΙΌ Νο:1, 8ЕО ΙΌ Νο: 2, 8ЕО ΙΌ Νο: 4 или 8ЕО ΙΌ Ν0:6 в почечных клетках индивидуума с контрольным уровнем экспрессии этих последовательностей в почечных клетках контроля. Другой способ настоящего изобретения заключается в идентификации стимуляции экспрессии последовательностей 8ЕО ΙΌ Νο:1, 8ЕО ΙΌ Νο: 2, 8ЕО ΙΌ Νο: 4 или 8ЕО ΙΌ Νο:6 в клетке путем осуществления контакта этой клетки с антисмысловым зондом с последующей оценкой гибридизации с РНК в этой клетке.
В еще одном варианте диагностические способы настоящего изобретения предусматривают обнаружение присутствия или оценку концентрации молекулы настоящего изобретения в моче, сыворотке или в другой физиологической жидкости организма, либо в образцах мочевого остатка или ткани. Измеренные молекулы, ассоциированные с повреждением, могут коррелировать с присутствием, уровнем или продолжительностью патологического процесса. Эта корреляция может быть также использована для оценки эффективности терапевтической схемы лечения.
Краткое описание рисунков
Фиг. 1 представляет нуклеотидную последовательность крысиного кДНК-клона 3-2 с предполагаемой рамкой считывания для белка, соответствующей нуклеотидам 615-1535.
Фиг. 2 представляет кДНК-последовательность крысиного клона 1-7 с предполагаемой рамкой считывания для белка, соответствующей нуклеотидам 145-1065.
Фиг. 3 представляет кДНК-последовательность крысиного клона 4-7 с предполагаемой рамкой считывания для белка, соответствующей нуклеотидам 107-1822.
Фиг. 4 представляет кДНК и выведенные аминокислотные последовательности человеческого клона Н13-10-85 с предполагаемой рамкой считывания для белка, соответствующей нуклеотидам 1-1002. Верхняя строка этих последовательностей представляет кДНКпоследовательность (8ΕΟ ΙΌ Νο:6), а нижняя строка представляет выведенную аминокислотную последовательность (8ΕΟ ΙΌ Νο:7).
Фиг. 5 иллюстрирует оптимальное сравнение (ΒΕ8ΤΡΙΤ) нуклеотидной последовательности человеческого клона Н13-10-85 с нуклеотидной последовательностью крысиного клона 3-2.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Мы идентифицировали гены ΚΙΜ посредством определения различий в экспрессии мРНК для регенерирующих и нормальных почек с использованием репрезентативного дифференциального анализа (КЭЛ). КЭЛ представляет собой субтрактивный метод на основе РСК, с помощью которого получают ткани-мишени или клеткоспецифичные кДНК-фрагменты путем многократного исключения и амплификации. Представленность (копийность) кДНК, исходя из РНК для 48 ч.-пост-ишемической почки взрослой крысы, получали методом исключения (субтрактивным методом) с использованием образца от нормальной (ложнооперированной) почки взрослой крысы. В этой процедуре последовательности, которые являются одинаковыми для образцов постишемической и нормальной почки, удаляют, оставляя те последовательности, которые экспрессируются, в основном, лишь в поврежденной почечной ткани. Эти гены кодируют белки, которые могут иметь благоприятное терапевтическое значение для заболевания почек, или белки, которые могут участвовать в процессе повреждения. Было получено, секвенировано, и охарактеризовано несколько клонов. Затем эти клоны были исследованы на характер их экспрессии во время репарации и развития почек, и на их распределение в тканях с помощью Нозерн-блот-анализа и ίη §йигибридизации РНК.
Идентификационные номера последовательностей
Нуклеотидным и аминокислотным последовательностям, упоминаемым в настоящем описании, были присвоены следующие идентификационные номера:
8ΕΟ ΙΌ Νο:1 - нуклеотидная последовательность крысиной кДНК-вставки 3-2;
8ΕΟ ΙΌ Νο:2 - нуклеотидная последовательность крысиной кДНК-вставки 1-7;
8ΕΟ ΙΌ Νο:3 - аминокислотная последовательность ΚΙΜ-1 крысы, кодированная крысиной кДНК-последовательностью 3-2 и 1-7;
8ΕΟ ΙΌ Νο:4 - нуклеотидная последовательность крысиной кДНК-вставки 4-7;
8ΕΟ ΙΌ Νο:5 - аминокислотная последовательность, кодированная крысиной кДНКвставкой 4-7;
8ΕΟ ΙΌ Νο:6 - нуклеотидная последовательность человеческого кДНК-клона Н13-1085;
8ΕΟ ΙΌ Νο:7 - аминокислотная последовательность, кодированная человеческим кДНКклоном Н13-10-85.
Определение терминов
Термин белок ΚΙΜ, используемый в настоящем описании наряду с термином ΚΙΜ, означает белок, кодированный мРНК, которая избирательно стимулируется после повреждения почек. Одна группа из представляющих интерес белков ΚΙΜ включает белки, кодированные мРНК, которая избирательно стимулируется в любой период времени через одну неделю после любого инсульта, который приводит к повреждению почечной ткани. Примерами периода времени, в течение которого такая стимуляция может быть идентифицирована, являются периоды времени, 10, 24, 48 и 96 ч после инсульта. Примерами типов инсульта являются инсульты, которые приводят к ишемическому повреждению, токсическому повреждению, или повреждению другого типа.
Термин агонист ΚΙΜ означает молекулу, которая может специфически индуцировать клеточный ответ, обычно, стимулируемый посредством взаимодействия ΚΙΜ с ΚΙΜлигандом. Агонистом ΚΙΜ может быть вариант ΚΙΜ, или специфическое антитело против ΚΙΜ, или растворимая форма ММ-лиганда.
Термин агонист ΚΙΜ означает молекулу, которая может специфически ассоциироваться с ΚΙΜ-лигандом или ΚΙΜ, тем самым, блокируя или ингибируя каким-либо другим способом связывание ΚΙΜ с ΚΙΜ-лигандом. Этот антагонист связывания блокирует или ингибирует ответы, которые так или иначе должны запускаться посредством связывания ΚΙΜ-лиганда с ΚΙΜ или с агонистом ΚΙΜ. Примерами антагонистов ΚΙΜ являются некоторые варианты ΚΙΜ, гибридные белки на основе ΚΙΜ, и специфические антитела против ΚΙΜ-лиганда или ΚΙΜ.
Термин ΚΙΜ-лиганд означает молекулу, которая нековалентно и специфически связывается с белком ΚΙΜ. Таким лигандом может быть белок, пептид, стероид, антитело, аминокислотное производное, или молекулы другого типа, в любой форме, включая природные, рекомбинантно продуцированные, или каким-либо дру гим способом синтезированные молекулы. ΚΙΜлиганд может присутствовать в любой форме, включая растворимые формы, мембраноассоциированные формы, или в виде части гибридной конструкции с иммуноглобулином, жирной кислотой или другими молекулами. ΚΙΜ-лигандом может быть интегрин. Мембрано-ассоциированный ΚΙΜ-лиганд может действовать как рецептор, который, при его связывании или ассоциации с ΚΙΜ, индуцирует клеточный ответ. В некоторых случаях ΚΙΜ может ассоциироваться с более, чем одним ΚΙΜлигандом, либо он может ассоциироваться с ΚΙΜ-лигандом как частью комплекса с одним или несколькими другими молекулами или кофакторами. Если оба ΚΙΜ-лиганд и ΚΙΜ связаны с клеточными мембранами, то в этом случае, ΚΙΜ может ассоциироваться и реагировать с ΚΙΜ-лигандом, который связывается с той же самой клеткой, что и ΚΙΜ, либо он может ассоциироваться и реагировать с ΚΙΜ-лигандом, связанным с другой клеткой. Если присоединение ΚΙΜ происходит между молекулами, связанными с разными клетками, то эти две клетки могут быть одинаковыми или различными по своему клеточному типу или происхождению, фенотипическими или метаболическими условиями, либо по типу или степени клеточного ответа (например, роста, дифференцировки или апоптоза) для данного стимула. Термин присоединение ΚΙΜ означает контактирование и связывание ΚΙΜ с ΚΙΜ-лигандом.
Термин сравнительный анализ первичных последовательностей означает определение положения одной последовательности (нуклеотидной или аминокислотной последовательности) по отношению к другой для того, чтобы провести сравнение соответствующих частей одной последовательности с другой. Один из примеров способа осуществления этой процедуры описан в работе №еб1ешап и др. (1. Μοί. Βίο1., 48:443-453, 1970). Этот метод может быть соответствующим образом осуществлен с помощью компьютерных программ, таких как программа Λίφη (ΟΝΑδΙατΙηο.). Как хорошо известно специалистам, гомологичные или функционально эквивалентные последовательности имеют функционально эквивалентную локализацию цистеиновых остатков в консервативном цистеиновом скелете, включая аминокислотные вставки или делеции, которые изменяют линейную локализацию этих цистеинов, но существенно не влияют на их взаимосвязь в складчатой структуре белка. Поэтому, внутренние бреши и аминокислотные инсерции в последовательностях - кандидатах не учитываются при вычислении уровня гомологии аминокислотной последовательности или идентичности между последовательностями - кандидатами и стандартными последовательностями. Одной из характеристик, часто используемых для установления гомологии белков, является сходство числа и положения цистеиновых остатков у двух сравниваемых белков.
Термин антисмысловая ДНК относится к последовательности хромосомной ДНК, которая является транскрибированной.
Термин антисмысловой зонд означает зонд, который содержит, по крайней мере, часть антисмысловой ДНК для представляющей интерес части нуклеиновой кислоты.
Термин клонирование означает использование техники ίη νίίτο-рекомбинации для встраивания конкретного гена или другой ДНКпоследовательности в векторную молекулу. Для успешного клонирования нужного гена необходимо использовать методы генерирования ДНКфрагментов в целях присоединения фрагментов к векторным молекулам; встраивания составной ДНК-молекулы в клетку-хозяина, в которой оно может реплицироваться; и отбора клона, имеющего нужный ген для реципиентных клетокхозяина.
Термин кДНК означает комплементарную или копийную ДНК, продуцированную из РНК-матрицы под действием РНК-зависимой ДНК-полимеразы (обратной транскриптазы). Таким образом, кДНК-клон означает дуплексную ДНК-последовательность, комплементарную представляющей интерес РНК-молекуле, присутствующей в векторе клонирования.
Термин кДНК-библиотека означает коллекцию рекомбинантных ДНК-молекул, содержащих кДНК-вставки, которые, взятые вместе, отражают представленность мРНК-молекул, присутствующих во всем организме или в ткани в зависимости от источника РНК-матриц. Такая кДНК-библиотека может быть получена методами, известными специалистам, и описанными например, в руководстве ΜαηίαΙίδ, Т., еί а1., (1989), ΜοΚαιΙατ Οίοηίη^: А РаЬогаЮгу Μαηυαί (см. выше) . Обычно РНК сначала выделяют из клеток организма, из генома которого желательно клонировать конкретный ген. Для целей настоящего изобретения, предпочтительными являются клетки млекопитающих, а в частности, клеточные линии человека. Альтернативно, РНК может быть выделена из опухолевых клеток, происходящих из опухолей животных, а предпочтительно из опухолей человека. Так, например, библиотека может быть получена из опухоли предстательной железы, но может быть использована и любая другая опухоль.
Используемый в настоящем описании термин ДНК-полиморфизм относится к состоянию, при котором в конкретном сайте ДНК могут присутствовать две или более различных нуклеотидных последовательностей.
Термин экспрессирующий вектор включает векторы, которые способны экспрессировать содержащиеся в нем ДНК- последовательности, то есть, эти кодирующие последовательности правильно присоединены к другим последовательностям, способствующим их эффек тивной экспрессии. Это означает, хотя и не всегда может быть точно установлено, что эти экспрессирующие векторы должны реплицироваться в организме-хозяине либо как эписомы, либо как интегральная часть хромосомной ДНК. Полезным, но не обязательным, элементом эффективного экспрессирующего вектора является маркерная кодирующая последовательность, представляющая собой последовательность, кодирующую белок, который наделяет клетки, содержащие этот белок, фенотипичным свойством (таким как, устойчивость к тетрациклину), позволяющим осуществлять их реальную идентификацию. В целом, термин экспрессирующий вектор дает функциональное определение, и любая ДНК-последовательность, которая способна к эффективной экспрессии конкретного содержащегося в ней ДНК-кода, также определяется этим термином, поскольку он применяется к конкретной последовательности. Поскольку в настоящее время такие векторы часто используются в виде плазмид, то термины плазмида и экспрессирующий вектор являются в большинстве случаев взаимозаменяемыми. Однако настоящее изобретение может включать другие формы экспрессирующих векторов, которые имеют эквивалентные функции, и которые со временем станут известны специалистам.
Термин функциональное производное означает фрагменты, варианты, аналоги или химические производные молекулы. Фрагмент молекулы, такой как, любой из антигенов настоящего изобретения, означает любую полипептидную субпопуляцию этой молекулы. Термин вариант такой молекулы означает природную молекулу, в основном, аналогичную либо целой молекуле, либо ее фрагменту. Термин аналог молекулы означает не встречающуюся в природе молекулу, в основном, аналогичную либо целой молекуле, либо ее фрагменту.
Термин ген означает полинуклеотидную последовательность, кодирующую пептид.
Термин гомогенный, если он относится к пептидной или ДНК-последовательности, означает, что первичная молекулярная структура (то есть, последовательность аминокислот или нуклеотидов), в основном, всех молекул, присутствующих в композиции, считается идентичной.
Термин выделенный относится к белку настоящего изобретения, или к любому гену, кодирующему любой такой белок, которые, в основном, не содержат других белков или генов, соответственно, или других примесей, с которыми они обычно ассоциируются в природе, и которые как таковые присутствуют в форме, не существующей в природе.
Термин метка относится к молекуле, способной к детекции, неограничивающими примерами которой являются радиоактивные изотопы, ферменты, люминесцентные агенты, и красители.
Термин зонд относится к лиганду известного качества, способному к избирательному связыванию с антилигандом-мишенью. В применении к нуклеиновым кислотам, термин зонд означает цепь нуклеиновой кислоты, основная последовательность которой комплементарна цепи-мишени.
Термин рекомбинантные клетки-хозяева относится к клеткам, которые были трансформированы векторами, сконструированными с использованием техники рекомбинантных ДНК. Как определено в настоящем описании, рекомбинантные клетки-хозяева, благодаря своей трансформации, продуцируют антитела или их модификации в значительно меньших количествах, или, в более общем смысле, в количествах, меньших, чем те детектируемые количества, которые обычно продуцируют нетрансформированные хозяева.
Термин в основном, чистый означает любой белок настоящего изобретения, или любой ген, кодирующий любой такой белок, который, в основном, не включает других белков или генов, соответственно, или других примесей, с которыми они обычно ассоциируются в природе, и которые как таковые присутствуют в форме, не существующей в природе.
Молекула считается, в основном, аналогичной другой молекуле, если аминокислотные последовательности обеих молекул являются, в основном, одинаковыми, и если обе эти молекулы обладают одинаковой биологической активностью. Таким образом, при условии, что эти две молекулы обладают аналогичной активностью, они считаются вариантами, поскольку этот термин используется в настоящем описании даже в том случае, если одна из этих молекул содержит дополнительные аминокислотные остатки, не встречающиеся в другой молекуле, или если последовательности аминокислотных остатков этих молекул не являются идентичными. В настоящем описании молекула, называемая химическим производным другой молекулы, в том случае, если она содержит дополнительные химические группы, которые обычно не являются частью этой молекулы. Такие группы могут улучшать растворимость молекул, их абсорбцию, время их биологической полужизни, и т.п. Альтернативно, эти группы могут снижать токсичность молекулы, устранять или ослаблять любое нежелательное побочное действие молекулы и т.п. Группы, способные опосредовать такие эффекты, описаны, например, в РетшЦопА Рйагтасеийса1 Бсюпсеу 16 111 еб., Маск РнЫМипд Со., Еав!оп, Репп. (1980).
Термин вектор означает ДНК-молекулу, происходящую от плазмиды или бактериофага, в которую могут быть встроены или клонированы фрагменты ДНК. Вектор может содержать один или несколько рестрикционных сайтов, и может быть способным к автономной репликации в определенном хозяине или организме-переносчике, таком, в котором данная клонированная последовательность может реплицироваться.
Соединения настоящего изобретения
Настоящее изобретение относится к кДНКпоследовательности ΙΌ Νο:1, 8Еф ГО Νο:2, 8ЕС ГО Νο:4 или 8ЕС ГО Νο:6, а также к последовательностям, которые включают последовательность 8ЕС ГО Νο:1, 8ЕС ГО Νο: 2, 8ЕС ГО Νο: 4 или 8Еф ГО Νο:6, и к производным этих последовательностей. Настоящее изобретение также относится к векторам, липосомам, и другим носителям, которые включают эти последовательности или их производные. Кроме того, настоящее изобретение относится к белкам, транскрибированным из 8ЕС ГО Νο:1, 8ЕС ΙΌ Νο: 2, 8ЕС ΙΌ Νο: 4 или 8ЕС ΙΌ Νο:6, включая, но не ограничиваясь ими, 8ЕС ΙΌ Νο:3, 8ЕС ΙΌ Νο:5 или 8Еф ГО Νο:7, и к их производным и вариантам.
В одном из своих вариантов, настоящее изобретение также относится к растворимым вариантам белка ΚΙΜ, который обычно синтезируется в виде мембрано-ассоциированного белка, и который стимулируется после повреждения ткани. В растворимых вариантах отсутствует, по крайней мере, часть трансмембранной и внутримембранной области нативного белка ΚΙΜ. В некоторых примерах, растворимый вариант не содержит всей трансмембранной или внутримембранной области нативного белка ΚΙΜ. Растворимые варианты включают гибридные белки, к которым относятся производные белков ΚΙΜ, не содержащие, по крайней мере, части трансмембранной и внутримембранной области нативного белка ΚΙΜ. Объем настоящего изобретения включает все типы гибридных белков ΚΙΜ, особенно те белки, которые содержат 1из-1ад-. !д-1ад- и щусЭад-формы молекулы. Эти ΚΙΜ-гибриды могут обладать свойствами, которые могут быть предпочтительными с терапевтической точки зрения, такие как, увеличенное время полужизни, которое сообщается формой !д-1ад. В объем настоящего изобретения также входят гибридные белки, которые включают части выбранных доменов белка ΚΙΜ.
Эти варианты могут отличаться от природного белка ΚΙΜ по своей аминокислотной последовательности, или по признакам, которые не относятся к аминокислотной последовательности, или по тому и другому. Варианты аминокислотной последовательности продуцируются в том случае, когда одна или несколько аминокислот в природном белке ΚΙΜ заменены другой или другими аминокислотами, аминокислотным производным или не встречающейся в природе аминокислотой. Особенно предпочтительными вариантами являются природный белок ΚΙΜ, или его природные биологически активные фрагменты, последовательности которых отличаются от последовательностей дикого типа благодаря заменам одной или нескольких консервативных аминокислот, где указанные замены оказывают, обычно, минимальный эффект на вторичную структуру и гидрофобную природу белка или пептида. Варианты могут также иметь последовательности, которые отличаются от природной последовательности благодаря заменам одной или нескольких консервативных аминокислот, а также благодаря делециям, или инсерциям, которые не оказывают нежелательного действия на биологическую активность белка ΚΙΜ. Консервативные замены обычно предусматривают замену одной аминокислоты на другую аминокислоту с аналогичными свойствами, например, такие, как замены в пределах следующих групп: валин, глицин; глицин, аланин; валин, изолейцин; аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота; аспарагин, глутамин; серии, треонин; лизин, аргинин; и фенилаланин, тирозин. Неполярными (гидрофобными) аминокислотами, являются аланин, лейцин, изолейцин, валин, пролин, фенилаланин, триптофан и метионин. Полярными нейтральными аминокислотами являются глицин, серии, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, и глутамин. Положительно заряженными (основными) аминокислотами являются аргинин, лизин и гистидин. Отрицательно заряженными (кислотными) аминокислотами являются аспарагиновая и глутаминовая кислота.
Другие аминокислотные замены могут быть взяты из нижеследующей таблицы, а еще некоторые замены описаны Оау1юТТ в АПаз οί ΡΐΌΐοίη 8сс.|11спсс аиб 81гпс1пгс (1988).
Таблица 1. Консервативные аминокислотные замены
Аминокислота Код Замена любой из
Аланин А Э-А1а, О1у, бета-А1а, Ь-Суз, Ό-Суз
Аргинин К Ό-Агд, Ьуз, гомо-Агд, Ό-гомо-Агд, Μβί, ΌΜβί, Не, Ό-Не, Огп, Ό-Оги
Аспарагин Ν Ό-Ази, Азр, Ό-Азр, О1и, Е>-О1и, О1и, Е>-О1и
Аспарагиновая кислота ϋ Ό-Азр, Ό-Ази, Ази, О1и, Е>-О1и, О1и, Е)-О1и
Цистеин С Ό-Суз, 8^е-Суз, Μе!, ТЬг, Ό-ТЬг
Глутамин О П-С1и, Ази, Ό-Ази, О1и, Э-С1и, Азр, Ό-Азр
Глутаминовая кислота Е Э-С1и, Ό-Азр, Азр, Ази, Ό-Ази, О1и, П-С1и
Глицин О А1а, Р-А1а, Ριό, Ό-Ργθ, бета-А1а, Аср
Изолейцин Ι Ό-Не, ν81, Ό-ν31, Ьеи, Ό-Ьеи, Μе!, Э^е!
Лейцин ь Ό-Ьеи, ν81, Ό-ν31, Μе!, Э^е!
Лизин Κ Ό-Ьуз, Агд, Ό-Агд, гомо-Агд, Ό-гомо-Агд, Μе!, ^-Μеι, Не, Ό-Не, От, Ό-Оги
Метионин М Э^е!, 8^е-Суз, Не, Ό-Не, Ьеи, Ό-Ьеи, ν81, Ό-ν81, норлейцин
Фенилаланин Е Ό-РЬе, Туг, Ό-ТЬг, Ь-ЕЮра, Н1з, Е>-Н1з, Тгр, Ό-Тгр, транс-3,4- или 5-фенилпролин, цис 3,4 или 5-фенилпролин
Пролин Р Ό-Ργο, Γ-Ι-тиоазолидинЛ-карбоновая кислота, Ό- или Ε-Ι-оксазолидинЛкарбоновая кислота
Серии 8 Э-8ег, ТЬг, Ό-ТЬг, алло-ТЬг, Μе!, Э^е!, Μе!(О), Е^еКО), νβ1, Ώ-ν31
Треонин Т Ό-ТЬг, 8ег, Э-8ег, алло-ТЬг, Μе!, Э^е!, Μе!(О), Ό^!(0), Vз1, О^а1
Тирозин Υ Ό-Туг, РЬе, Ό-РЬе, ^-^οрз, Н1з, Э-Н1з
Валин V Э^а1, Ьеи, Ό-Ьеи, Не, Ό-Не, Μе!, Э^е!
Другими вариантами настоящего изобретения являются варианты с модификациями, которые способствуют увеличению стабильности пептида. Такие варианты могут содержать, например, одну или несколько непептидных связей (которые заменяют пептидные связи) в пептидной последовательности. Такими вариантами являются варианты, которые включают остатки, не являющимися природными Ьаминокислотами, такие как, Ό-аминокислоты либо не встречающиеся в природе или синтетические аминокислоты, такие как, бета- или гамма-аминокислоты и циклические варианты. Включение в полипептид Ό-аминокислот вместо Ь-аминокислот может способствовать повышению устойчивости этого полипептида к протеазам. См., например, патент США 5219990.
В общих чертах, заменами, которые, как ожидается, индуцируют изменения функциональных свойств полипептидов ΚΙΜ, являются замены, в которых: (ί) гидрофильные остатки, например, серии или треонин, заменены гидрофобными остатками, например, лейцином, изолейцином, фенилаланином, или аланином; (ίί) любой остаток заменен на цистеиновый остаток (или наоборот); (ίίί) остаток, имеющий электроотрицательный заряд, например, глутаминовая кислота или аспарагиновая кислота, заменен на остаток, имеющий электроположительную боковую цепь, например, лизин, аргинин или гистидин (или наоборот); или (ίν) остаток, который не имеет объемной боковой цепи, например, глицин, заменяют на остаток (или наоборот) имеющий такую объемную боковую цепь, например, фенилаланин.
Пептиды настоящего изобретения могут быть также модифицированы путем различных изменений, таких как, инсерции, делеции и замены консервативных или неконсервативных аминокислот, где указанные модификации могут давать некоторые преимущества при их использовании. Настоящее изобретение включает, в частности, варианты сплайсинга.
В других вариантах осуществления настоящего изобретения, варианты с аминокислотными заменами, которые являются менее консервативными, также могут приводить к образованию нужных производных, например, путем индуцирования изменений заряда, конформации и других биологических свойств. Такими заменами являются, например, замена гидрофобного остатка на гидрофильный остаток, замена любого остатка на цистеин или пролин, замена остатка, имеющего объемную боковую цепь на остаток, имеющий небольшую боковую цепь, или замена остатка, имеющего суммарный отрицательный заряд на остаток, имеющий суммарный положительный заряд. Если результат данной замены не может быть предсказан с уверенностью, то для определения присутствия или отсутствия нужных свойств, эти производные могут быть легко проанализи рованы методами, описанными в настоящей заявке.
В объем настоящего изобретения входят варианты, включающие белки и пептиды с аминокислотными последовательностями, имеющими по крайней мере 80% гомологию с белком ΚΙΜ. Более предпочтительно, чтобы гомология этой последовательности составляла по крайней мере 90% или по крайней мере 95%. Для определения гомологии, длина сравниваемых последовательностей должна составлять, по крайней мере, 8 аминокислотных остатков, обычно, по крайней мере, 20 аминокислотных остатков. Варианты соединений настоящего изобретения также включают любой белок, который 1) имеет аминокислотную последовательность, имеющую, по крайней мере, 40% гомологию с белком ΚΙΜ настоящего изобретения, и который 2) после оптимального сравнения его первичной последовательности с последовательностью ΚΙΜ (как показано на фиг. 5 для последовательностей человеческого и крысиного ΚΙΜ-1), имеет, по крайней мере, 80% цистеиновых остатков, соответствующих цистеиновым остаткам в белке ΚΙΜ настоящего изобретения.
Если возможно сделать замены каркасной цепи, то также возможно заменить функциональные группы, которые связывают каркасную цепь с группами, характеризующимися аналогичными признаками. Эти замены могут быть сначала консервативными, то есть, заменяемая группа будет иметь приблизительно тот же размер, форму, гидрофобность и заряд, что и исходная группа. Модификация разрыва цепи может включать, например, химическую ίη νίίτοили ίη νίνο-дериватизацию части природного белка ΚΙΜ, а также изменения в ацетилировании, метилировании, фосфорилировании, карбоксилировании или гликозилировании.
Настоящее изобретение также включает агенты, которые специфически связываются с белком, или с фрагментом белка (8ЕО ΙΌ Νο:3, 5 или 7). Этими агентами являются лиганды и антитела (включая моноклональные антитела, одноцепочечные антитела, двухцепочечные антитела, ЕаЬ-фрагменты, и т.п., которые могут быть негативными антителами; человеческими антителами; гуманизированными (очеловеченными) антителами; антителами, близкими к антителам приматов; или химерными антителами). Дополнительные описания этих категорий агентов приводятся в заявке РСТ 95/16709, описание которой вводится в настоящую заявку посредством ссылки.
Экспериментальные методы
1. Получение РНК из ишемической и нормальной почек взрослой крысы.
Почки, подвергшиеся ишемическому повреждению, получали как описано \νίΙζ§;·ι11 с1 а1., (1. Ο1ίη. Ιηνβδί., 93:2175-2188, 1994). Для этого почечную артерию и вену от одной почки взрослой крысы 8ргадие-ОаМеу зажимали на 40 мин, а затем подвергали реперфузии. Поврежденные почки удаляли из крыс через 24 ч и через 48 ч после реперфузии. Были также получены почки от ложнооперированных нормальных взрослых крыс 8ргадие-Иа\\1еу.
Из этих органов получали полную РНК в соответствии с протоколом, разработанным Οΐίδίη е! а1. (ВюсЕетЧгу 13:2633, 1974). Для этого выделенные органы сразу помещали в буфер ΟΝΓ (4Μ тиоцианат гуанидина, 0,5% ДСН, 25 мМ цитрат натрия, 0,1% противовспениватель 8щта) и измельчали на льду с помощью дезинтегратора ΡοΕΊιόπ. Клеточный дебрис удаляли путем центрифугирования на малой скорости в клинической центрифуге, а супернатант помещали на 5,7 М С§С1, 25 мМ ацетат натрия, 1 мМ, 1 мМ ЕИТА-градиент.
РНК осаждали путем центрифугирования в градиенте с использованием ротора 8\ν40Τί при 22Κ в течение 15 ч. Затем РНК ресуспендировали в стерильной ИЕРС-обработанной воде, дважды осаждали в 1/10 объеме 3М ацетата натрия и 2,5 объемах ЕЮН. Ρο1\·(Α)'ΡΗΙ< выделяли с использованием набора для очистки мРНК (РЕагтас1а, саΐа1οд № 27-9258-02).
2. Метод репрезентативного дифференциального анализа (РИА) для выделения РИАфрагментов 1-7, 3-2 и 4-7.
Двухцепочечную кДНК синтезировали из ροΚ(Α)'ΡΗΚ ложнооперированной почки, и почки, полученной через 48 ч после ишемии, с использованием набора Οί^ο ВРЬ 8ирег5спр1 С1ю1сет™ 8уЧет сИХА 8уп111еч5 Κίΐ саΐа1οд № 18090. Первую нить синтезировали путем праймирования с οΐί^ο бТ и с использованием обратной транскриптазы 8ирег5спр1 ΙΙ™. Вторую нить генерировали с использованием ДНКполимеразы Ι Е. той и РНКазы Н с использованием ДНК-полимеразы Т4 в условиях, рекомендованных ВРИ
РИА-анализ осуществляли, в основном, как описано НиЬапк & 8сНа1х (№.1с1ею Ааб Рекеагсй 22:5640-48, 1994). Для этого кДНК почки, полученной через 48 ч после ишемии, гидролизовали рестриктирующим ферментом Όρη ΙΙ, и лигировали в олигенуклеотиды Р-Вд1-12/24 (см. ссылку на точную последовательность). Для генерирования первоначальной представленности проводили РСР-амплификацию (осуществляемую с использованием полимеразы Тад Регк1п-Е1тег и ее соответствующий РСР-буфер) лигированной посредством линкера кДНК. Этот РСР-продукт обозначали тестер-ампликон. Ту же самую процедуру использовали для генерирования драйвер-ампликона из кДНК почки ложнооперированной крысы.
Гибридизацию тестер- и драйверампликонов с последующей селективной амплификацией осуществляли три раза, в результате чего генерировали Дифференциальный продукт Один (ИР1), Дифференциальный продукт Два (ИР2) и Дифференциальный продукт
Три (ИР3). Генерирование продукта ИР1 осуществляли как описано НиЬапк & 8сйа1х (№.1с1ею Ас1б Рекеагсй 22:5640-48, 1994). Продукты ИР2 и ИР3 также генерировали как описано НиЬапк & 8с11а1х (см. выше), за исключением того, что отношения драйвер :тестер было заменено на отношение 5333:1 для ИР2, и на отношение 40000:1 или 4 000:1 для ИР3.
Три РИА-продукта клонировали из ИР3 в клонирующий вектор рИС18: РИА-продукт 1-7 (252 п.о.), в случае, когда ИР3 генерировали с использованием отношения 40000:1; и РИАпродукт 3-2 (445 п.о.) и 4-7 (483 п.о.), в случае, когда ИР3 генерировали с использованием отношения 4000:1. ДНК-фрагменты субклонировали с использованием набора Рйагтааа 8игеοΐοηε™ кй ^ηΓι1ο8 № 27-9300-01) для застраивания концов РСК-фрагментов ферментом Кленова и для облегчения лигирования фрагментов по тупым концам в вектор рИС18.
3. Нозерн-блот-анализ.
Ро1у(А)+РНК (2,5 мкг), полученную от нормальной почки взрослой крысы (ложнооперированной), от почки взрослой крысы, взятой через 48 ч после ишемии, и от почки 18дневного эмбриона, подвергали электрофорезу и Нозерн-блот-анализу (Са!е, Се11 45:685, 1986) на мембране 6епе8сгееп™ (Όπροηΐ). Гибридизацию в РВ8-буфере (50 мМ Трис 7,5, 1М №С1, 0,1% пирофосфат Ν^ 0,2% РУР, 0,2% Фиколл, 0,2% В8А, 1% ДСН) , содержащем 10% сульфата декстрана и 100 мкг/мл тРНК, осуществляли при 65°С с использованием трех различных зондов: РИА-продукта 1-7, РИА-продукта 3-2, РИА-продукта 4-7. Все продукты подвергали радиоактивному мечению с использованием набора для рандомизированного праймирования Рйагтааа’к Реабу !ο Οο™ (саΐа1οд № 27-925101). РИА-продукты 1-7, 3-2 и 4-7 гибридизировались с мРНК, присутствующими во всех трех образцах, а большинство из них интенсивно гибридизировалось с мРНК, присутствующими в РНК-образцах почки, полученной через 48 ч после ишемии.
Нозерн-блот-анализ тканей взрослой крысы указывал на то, что ген 1-7 экспрессировался на очень низких уровнях на почке, яичках, селезенке и легких нормальной взрослой крысы. Ген 3-2 экспрессировался в печени, почке, селезенке, и в головном мозге. Ген 4-7 экспрессировался в селезенке, почке, легких, яичках, сердце, головном мозге, печени, и в скелетной мышце. Присутствие мРНК различных размеров в некоторых тканях в блотах 1-7 и 3-2 свидетельствовало о том, что первичный продукт транскрипции гена 1-7 и гена 3-2 может подвергаться альтернативному сплайсингу и/или полиаденилированию.
4. Выделение кДНК-клонов 3-2 и 4-7.
кДНК-библиотеку генерировали из 4 мкг ρο1у(Α)+РНΚ, взятой через 48 ч от почки, подвегнутой ишемическому повреждению, с ис пользованием реагентов ВКЬ 8ирегкспр1 Сйо1се™ 8ук1ет для синтеза кДНК, и набора для клонирования §!га!адеие™ ЬатЬба ΖαρΙΙ с1ои1ид кН (са!а1од № 236201) в соответствии с инструкциями, рекомендованными производителями.
105 клонов скринировали с использованием ΚΌΑ-продукта 3-2 в качестве зонда (меченного путем рандомизированного праймирования как описано выше). Было отобрано восемь положительных клонов, и четыре из них было произвольно выбрано для вторичного анализа в целях получения чистых фаговых бляшек. После третьего скрининга было выделено четыре чистых фаговых клона. Клонированные вставки, полученные от фага, выделяли путем процедуры ιη ν/νο-вырезания в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к набору 8!га!адеие™ ЬатЬба Ζар II кН. Самую большую вставку приблизительно 2,6 т.п.о. (обозначенную кДНКклоном 3-2) подвергали ДНК-секвенированию. Последовательность этой вставки (8Εβ ΙΌ Νο:1) показана на фиг. 1. кДНК-клон 3-2 (К-12 Е. соИ 8ОЬК/р3-2#5-1) был депонирован в АТСС № 98061. Последовательность кДНК-клона 3-2 была идентична кДНК-клону 1-7 (8Εβ ΙΌ Νο:2), за исключением того, что в 8Εβ ΙΌ Νο:1 вставку представляли нуклеотиды 136-605. Таким образом, последовательность 8Εβ ΙΌ Νο:2 представляла собой форму варианта сплайсинга 8Εβ ΙΌ Νο:1. кДНК-клон 1-7 (К-12 Е. соИ 8ОЬК/р1-7#31) был депонирован в АТСС № 98060.
105 клонов скринировали с использованием ΚΌΆ-продукта 1-7 в качестве зонда (меченного путем рандомизированного праймирования как описано выше). Было отобрано восемь положительных клонов, и четыре из них было произвольно выбрано для вторичного анализа в целях получения чистых фаговых бляшек. После третьего скрининга было выделено четыре чистых фаговых клона. Клонированные вставки, полученные от фага, выделяли путем процедуры ίη ν/νο-вырезания в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к набору 81га1адепе™ ЬатЬба Ζар ΙΙ кН. Самую большую вставку приблизительно 2,6 т.п.о. (обозначенную кДНКклоном 1-7) подвергали ДНК-секвенированию; последовательность этой вставки (8Εβ ΙΌ Νο:2) показана на фиг. 2.
105 клонов скринировали с использованием ΚΌΆ-продукта 4-7 в качестве зонда (меченного путем рандомизированного праймирования как описано выше и гибридизированного в РВ8 при 65°С). Было отобрано восемь положительных клонов, и четыре из них было произвольно выбрано для вторичного анализа в целях получения чистых фаговых бляшек. После второго скрининга было выделено два чистых фаговых клона. Клонированные вставки, полученные от фага, выделяли путем процедуры ίη νίνοвырезания в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к набору 81га1адепе™ ЬатЬба Ζар ΙΙ к11. Самую большую вставку приблизительно 2,4 т.п.о. (обозначенную кДНК-клоном 4-7) подвергали ДНК-секвенированию. Последовательность этой вставки (8Εβ ΙΌ Νο: 4) показана на фиг. 3. кДНК-клон 4-7 (Е. отН К-12 8ОЬК/р47#3-1) был депонирован в АТСС № 98062. 5.
Характеризация кДНК-клонов 1-7, 3-2 и 4-7
A) ДНК-последовательность и последовательность белка:
Последовательность кДНК-клона 3-2 (фиг. 1; 8Εβ ΙΌ Νο:1) содержит открытую рамку считывания для 307 аминокислот (фиг. 1; 8Εβ ΙΌ Νο:3). Сигнальная последовательность, состоящая из 21 аминокислоты, была получена, исходя из анализа νοη Неупе (νοη Неупе е1 а1., №с1. Ас1бк. Кек. 14:14683 (1986)), а трансмембранная область, локализованная приблизительно в области аминокислот 235-257, указывала на то, что продукт 3-2 является белком клеточной поверхности.
Последовательность кДНК-клона 1-7 (фиг. 2; 8Εβ ΙΌ Νο:2) содержит открытую рамку считывания для 307 аминокислот, которая идентична открытой рамке считывания, содержащейся в кДНК-клоне 3-2 (8Εβ ΙΌ Νο:3). Последовательность кДНК-клона 4-7 (Фиг. 3; 8Εβ ΙΌ Νο:4) содержит открытую рамку считывания для 572 аминокислот (8Εβ ΙΌ Νο:5). Трансмембранная область локализована приблизительно на участке, соответствующем аминокислотам 501-521.
B) ίη кйи - анализ мРНК 1-7, 3-2 и 4-7 в контрлатеральной и постишемической почках взрослой крысы:
ίη кйи -Гибридизацию осуществляли методом, описанным Ешсй е1 а1., Ое\г. ^уηат^сκ 203:223-240, 1995. Для этого, ишемическую и контрлатеральную почки подвергали перфузионной фиксации с использованием 4% формальдегида в РВ8. Затем, почки подвергали дополнительной фиксации в течение ночи при 4°С и обрабатывали. Парафиновые срезы очищали от парафина и снова гидратировали, а затем фиксировали с использованием 4% формальдегида в РВ8, гидролизовали протеиназой К, снова фиксировали, после чего ацетилировали уксусным ангидридом в триэтаноламиновом буфере. Затем срезы дегидратировали и гибридизировали с 32Р-меченными рибозондами в течение ночи при 55°С, где 32Р-меченные рибозонды, генерированные из ΚΌΑ-продуктов 3-2 или 1-7, субклонировали в ВатН1-сайт рСЕМ-11Ζ. После гибридизации, срезы промывали в высокой степени жестких условиях (2 х 88С, 50% формамид при 65°С). И наконец, срезы дегидратировали, покрывали эмульсией (ΝΌΤ-2) для авторадиографии, и выдерживали в течение по крайней мере одной недели. Гранулы серебряного красителя проявляли, срезы подвергали контрастному окрашиванию толуидиновым синим и микрофотографировали.
Анализы на экспрессию мРНК 1-7 и 3-2, проводимые методом ίη Ми-гибридизации, указывали на то, что эти гены в значительной степени стимулируются в клетках поврежденной почки по сравнению с их экспрессией в срезах нормальной почки. Эта экспрессия наблюдалась в регенеративных клетках коркового слоя и внешнего слоя мозгового вещества, но в основном, она наблюдалась в клетках проксимальных канальцев.
Анализ характера ίη Ми-экспресии РНК 47 также выявил значительно более высокий уровень экспрессии этого гена в поврежденной ишемической почке по сравнению с уровнем экспрессии в нормальной почке взрослой крысы. Участком экспрессии были, очевидно, инфильтрующие клетки.
6. Выделение человеческого кДНК-клона, который перекрестно гибридизируется с крысиным кДНК-клоном 3-2.
Был получен 32Р-меченный ДНК-зонд, содержащий нуклеотиды 546-969 вставки клона 32, показанного на фиг. 1, и этот зонд использовали для скрининга лямбда дП0-кДНКбиблиотеки печени эмбриона человека (С1опе1ес11 Са!а1од#НЬ5003а). 1 х 106 бляшек скринировали в дубликате с использованием стандартных условий, описанных выше, за исключением того, что температура скрининга составляла 55°С. Для промывки в условиях высокой жесткости, фильтры промывали в 2 х ББС при 55°С. Было идентифицировано 50 положительных фагов, после чего бляшки очищали и получали ДНК. Фаговые ДНК подвергали Саузерн-блот-анализу с использованием тех же самых зондов, которые были описаны выше. Саузерн-блот-фильтр подвергали конечной промывке 0,5 х ББС при 55°С. Два клона были идентифицированы как положительные. Вставку клона Н13-10-85 секвенировали, и выявляли область, которая кодирует белок, являющийся в высокой степени идентичным белку 3-2, показанному на фиг. 3.
Нуклеотидная последовательность (БЕЦ ГО Ыо:6) и предсказанная аминокислотная последовательность (БЕЦ ГО Ыо:7) родственного белка человека 3-2 показаны на фиг. 4. Как видно из оптимального анализа (Вее®!), проиллюстрированного на Фиг. 5, человеческий родственный белок 3-2 на 43,8% идентичен и на 59,1% подобен крысиному белку 3-2. Оба эти белка содержат 1дС-, муциновый, трансмембранный и цитоплазматический домены. Шесть цистеинов в 1дС-доменах обоих белков являются консервативными.
7. Продуцирование гибридного белка К1М-1-1д.
Гибридный белок внеклеточного домена К1М и Рс-область иммуноглобулина (1д) были использованы в качестве инструмента для исследования молекулярной и клеточной биологии поврежденной/регенерирующей почки, а также в качестве терапевтической молекулы. Для продуцирования гибридного белка К1М-1д с внеклеточным доменом человеческого и крысиного белка К1М-1, фрагмент кДНК внеклеточного домена К1М-1 амплифицировали с помощью РСК, и клонировали в экспрессирующий вектор Вюдеп, рСА125, для кратковременной экспрессии в клетках СОБ. Экспрессирующий вектор рСА125 продуцирует гибридный белок, который имеет структуру, кодированную геном, клонированным в Ν-конце, и Рс-область 1д человека в С-конце. Клетки СОБ трансфецировали плазмидами Б1К 103 или 104, экспрессирующими гибридный белок, который содержит последовательности человеческого белка К1М 2631147 (БЕЦ ГО №:6, Б1К 103) или последовательности 599-1319 крысиного белка К1М (БЕЦ ГО Νθ:1, БРК 104), соответствующие внеклеточному домену, соединенному с Рс-областью 1д человека. Клетки культивировали в 10% РСБ в ЭМЕМ в клеточной фабрике (Шпс, ШрегуШе, II) . Через 2-3 дня после трансфекции, среду собирали, концентрировали с использованием концентратора Аписон и гибридный белок очищали с использованием колонки с Сефарозой-Белком А. После очистки чистоту гибридного белка оценивали с помощью электрофореза в ПААГ с ДСН.
Диагностическое использование соединений настоящего изобретения
Анти-К1М антитела настоящего изобретения, которые специфически связываются с белком, имеющим последовательность БЕЦ ГО Νθ:3, БЕЦ ГО №: 5 или БЕЦ ГО №: 7, или его фрагментом, могут быть использованы в нескольких диагностических методах. Эти агенты могут быть помечены детектируемыми маркерами, такими как флуоресцентно или радиографически непрозрачные вещества, и введены индивидууму для визуализации тканей, которые экспрессируют белок К1М. Эти агенты могут быть также связаны с веществами, такими как, пероксидаза хрена, которые могут быть использованы в качестве иммуноцитохимических красителей, позволяющих визуализировать области К1М-положительных клеток на гистологических срезах. Таким образом, специфическое антитело может быть использовано как таковое, и участки, в которых оно связывается, могут быть визуализированы в сэндвич-анализе с использованием антитела против иммуноглобулина, которое само является связанным с детектируемым маркером.
Специфические антитела против белка К1М могут быть также использованы в иммуноанализе для обнаружения присутствия К1М или для определения его концентрации в образцах тканей и физиологических жидкостей организма. Эти концентрации могут коррелировать с различными состояниями тканей. В своем варианте, представляющем особый интерес, настоящее изобретение относится к способу диагно стирования повреждения почек, или к способу мониторинга процесса репарации почек путем измерения концентрации ΚΙΜ или фрагментов ΚΙΜ в моче, плазме или сыворотке пациента. Аналогично, концентрация ΚΙΜ может быть измерена в мочевом осадке, а в частности, в клеточном дебрисе мочевого осадка. Плотные слои клеток почечных канальцев, которые могут присутствовать в мочевом осадке пациента, страдающего заболеванием почек на начальной стадии, могут содержать повышенные уровни белка ΚΙΜ и мРНК.
Специфические антитела против белка ΚΙΜ могут быть также связаны с твердыми носителями, такими как шарики или чашки, и использованы для удаления лиганда из раствора либо в целях измерения, либо в целях очистки и характеризации белка или его характерных свойств (таких как, посттрансляционные модификации). Такая характеризация белка ΚΙΜ пациента может быть использована для идентификации делеционных мутантов или дефектов процессинга, которые нарушают функцию ΚΙΜ и ассоциируются с аномальными фенотипами пациента. Каждый из этих методов является стандартным и известен любому специалисту в области иммунологии.
В других методах визуализации, осуществляемых в целях диагностической визуализации тканей, экспрессирующих КГМ-лиганды, особенно опухолей, могут быть использованы ΚΙΜ или его фрагменты, связанные с визуализируемыми молекулами.
Другие диагностические методы основаны на демонстрации стимулированных ΚΙΜ-мРНК в тканях, которые указывают на процессы, связанные с повреждением. Эти способы были протестированы, и было показано, что они могут быть успешно использованы в модели ишемического повреждения у крыс, как описано ниже.
Для того, чтобы определить повышается ли количество белка ΚΙΜ после повреждения ткани, мы исследовали гомогенаты контрлатеральной почки и пост-ишемической почки, полученной через 24 и 48 ч после 40-минутного зажима почечной артерии и вены одной почки у каждой крысы. Почечный гомогенат оценивали на присутствие белка ΚΙΜ-1. С помощью Вестерн-блот-анализа идентифицировали три белка, которые были обнаружены, с использованием двух различных антител, в почках, подвергнутых ишемическому повреждению, и которые не были обнаружены в гомогенатах от контрлатеральной почки, не подвергнутой ишемическому повреждению. Кажущиеся молекулярные массы полос составляли приблизительно 40 кДа, 50 кДа и 70-80 кДа. Эти три вида белков, обнаруженных с помощью Вестерн-блот-анализа, могут представлять гликозилированные формы того же самого белка при условии, что присутствуют потенциальные сайты Ν- и О-связанного гликозилирования. Тот факт, что каждый из этих белков реагирует с двумя различными сериями поликлональных антител, подтверждает мнение, что они являются родственными белку ΚΙΜ-1 и не являются полосами перекрестного реагирования. Это мнение подтверждают результаты частичного СNΒ^-расщепления трех белков, которые имеют общие фрагменты С№Вг-расщепления. Поскольку не предполагалось, что цитоплазматический домен белка ΚΙΜ-1 содержит какие-либо посттрансляционные модификации, то два самых малых продукта гидролизата (4,7 кДа и 7,4 кДа), обнаруженные с помощью антител, направленных против цитоплазматического домена ΚΙΜ-1, должны иметь тот же самый размер для трех различных полос белка ΚΙΜ-1, в том случае, если они происходят от того же самого белка. Мы наблюдали, что белки 40 кДа и 70-80 кДа ΚΙΜ-1 дают фрагменты, мигрирующие при предсказанном размере. Гидролизат 50 кДа-полосы белка также давал тот же самый отличительный признак Сконцевого пептида полосы.
В последовательности ΚΙΜ-1 присутствуют два предполагаемых сайта для Νгликозилирования и муциновый домен, где Огликозилирование должно покрывать полипептидную цепь. Три полосы ΚΙΜ-1, обнаруженные в пост-ишемической почке, должны соответствовать вариантам гликозилирования того же самого корового белка. Де-№гликозилирование с использованием ΡΝΟιγϊβι Р приводило к сдвигу во всех трех полосах до низкомолекулярной массы, соответствующей потере около 3 кДа, что указывало на то, что все три белка являются Ν-гликозилированными. Различия в О-гликозилировании могут быть объяснены различиями в размерах этих трех полос.
Терапевтическое использование соединений настоящего изобретения
Терапевтические способы настоящего изобретения предусматривают избирательное стимулирование или ингибирование клеточного ответа, который зависит от присоединения ΚΙΜ. Если ΚΙΜ и ΚΙΜ-лиганд оба являются мембрано-ассоциированными и экспрессируются различными клетками, то в ΚΙΜ-экспрессирующих клетках или в клетках, экспрессирующих ΚΙΜлиганд, или в тех и других может индуцироваться трансдукция сигнала.
Ответ, запущенный присоединением ΚΙΜ в клетках, экспрессирующих ΚΙΜ-лиганд, может быть продуцирован посредством контактирования клетки с экзогенным белком ΚΙΜ, ΚΙΜгибридными белками, или активирующими антителами против ΚΙΜ-лиганда, либо ίη νίΐτο, либо ίη νίνο. Кроме того, ответы клеток, экспрессирующих ΚΙΜ-лиганд, которые тем или иным способом стимулируются эндогенными ΚΙΜ, могут быть блокированы посредством контактирования клеток, экспрессирующих ΚΙΜ-лиганд, с антагонистом ΚΙΜ-лиганда (например, антителом-антагонистом, которое свя зывается с К1М-лигандом) или посредством контактирования эндогенного К1М с антителом против К1М или с другой К1М-связывающей молекулой, которая препятствует эффективному связыванию К1М с К1М-лигандом.
Аналогично ответы, индуцированные посредством связывания К1М в К1М-экспрессирующей клетке, могут стимулироваться или ингибироваться экзогенными соединениями. Так, например, ответ, стимулированный связыванием К1М в К1М-экспрессирующей клетке, может быть генерирован благодаря контактированию этой клетки с растворимым К1М-лигандом, или с некоторыми активирующими антителами против К1М. Кроме того, ответы К1М-экспрессирующей клетки, которые могут быть запущены тем или иным способом благодаря взаимодействию с эндогенным К1М-лигандом, могут блокироваться посредством контактирования К1М-экспрессирующей клетки с антагонистом К1М (например, блокирующим антителом, которое связывается с К1М таким образом, что это связывание способствует предупреждению эффективного сигнал-генерирующего присоединения К1М), или посредством контактирования эндогенного К1М-лиганда с антителом против К1М-лиганда или с другой молекулой, связывающейся с К1М-лигандом, связывание которой способствует предупреждению эффективного присоединения К1М к К1М-лиганду.
Которое из указанных выше событий может быть использовано в терапевтических целях зависит от соответствующего этиологического механизма, либо патологического процесса, который необходимо ингибировать, либо от терапевтически желаемого процесса, который необходимо стимулировать, как это очевидно любому специалисту. Так, например, если связывание К1М приводит к желаемому росту клеток, сохранению зрелого фенотипа, устойчивости к апоптозу, индуцированному различными инсультами, или к другим с медицинской точки зрения желательным ответам, то может быть использован один из вышеуказанных механизмов, который индуцирует ответ, стимулируемый присоединением К1М. Альтернативно, если присоединение К1М приводит к нежелательным последствиям, таким как опухолевый рост, нежелательная потеря клеточной функции, восприимчивость к апоптозу, или стимуляция воспалительных реакций, то, в этом случае могут быть использованы ингибирующие механизмы.
Ниже приводятся примеры ранее описанных терапевтических способов настоящего изобретения. Одним из примеров терапевтического использования соединений настоящего изобретения, родственных белку К1М, является лечение индивидуума с почечным заболеванием, способствующее росту у этого индивидуума новой ткани, либо способствующее заживлению поврежденной ткани у этого индивидуума; где указанное лечение предусматривает введение этому индивидууму терапевтически эффективного количества белка К1М настоящего изобретения, или фармацевтической композиции, содержащей белок настоящего изобретения. Белком, используемым в этих способах, может быть фрагмент полноразмерного белка К1М, растворимый белок К1М-лиганда или гибридный фрагмент, или агонист К1М. Эти методы также могут быть осуществлены путем введения индивидууму терапевтически эффективного количества антитела-агониста настоящего изобретения, либо фармацевтической композиции, которая содержит антитело-агонист настоящего изобретения. Белок К1М может быть введен одновременно с терапевтически эффективным количеством второго соединения, которое оказывает дополнительное благоприятное действие. Тканями, представляющими интерес в этих методах, являются любые ткани, а предпочтительными тканями являются почечная ткань, печень, нервная ткань, сердце, желудок, тонкая кишка, спинной мозг, или легкие. Конкретными почечными заболеваниями, которые могут быть подвергнуты эффективному лечению путем введения соединений настоящего изобретения, являются острая почечная недостаточность, острый нефрит, хроническая почечная недостаточность, нефротический синдром, недостаточная функция почечных канальцев, почечные трансплантаты, токсические повреждения, повреждения в результате гипоксии, и травмы. Дефектами почечных канальцев являются либо врожденные, либо приобретенные почечные заболевания, такие как поликистоз почек, ювенильный нефронофтиз, и губчатая почка. Этот список заболеваний не ограничивается вышеуказанными заболеваниями и может включать множество других почечных расстройств (см. например, работу Наглю η Рг1пс1р1еь οί 1п!егпа1 Мебюте, 1311 еб., 1994, которая вводится в настоящее описание посредством ссылки). Индивидуумом, участвующим в этих методах, может быть человек.
Терапевтическое лечение, направленное на ингибирование роста у индивидуума нежелательной ткани, экспрессирующей К1М-лиганд, включает стадию введения этому индивидууму терапевтически эффективного количества антагониста К1М (например, антитела-антагониста, которое связывается с К1М-лигандом), либо стадию введения терапевтически эффективного количества антитела против К1М, или другой К1М-связывающей молекулы, которая блокирует связывание К1М с тканью, экспрессирующей К1М-лиганд. В одном представляющем интерес варианте, антагонист К1М или антитело против К1М может быть использовано в терапевтических целях для ингибирования или блокирования роста опухолей, который зависит от белка К1М.
Другие способы настоящего изобретения предусматривают уничтожение опухолевых клеток, экспрессирующих ΚΙΜ-лиганд, или ингибирование их роста посредством контактирования этих клеток с гибридным белком ΚΙΜ или токсина или радионуклида, или с антителом против ΚΙΜ-лиганда, конъюгированного с токсином или радионуклидом. Эти клетки могут присутствовать в организме индивидуума, а белок или конъюгированное антитело вводят в организм индивидуума.
Настоящее изобретение также относится к способу направленной доставки токсина или радионуклида к КГМ-экспрессирующей клетке, предусматривающему контактирование этой клетки с гибридным белком, содержащим ΚΙΜлиганд и токсин или радионуклид, или с антителом против ΚΙΜ-лиганда, конъюгированного с токсином или радионуклидом. Другим вариантом настоящего изобретения является способ подавления роста ΚΙΜ-экспрессирующей опухолевой клетки, предусматривающий контактирование этой клетки с гибридным белком, содержащим ΚΙΜ-лиганд и токсин или радионуклид, или с антителом против ΚΙΜ-лиганда, конъюгированного с токсином или радионуклидом; где указанная клетка присутствует в организме индивидуума, а белок вводят этому индивидууму.
Термин индивидуум, используемый в настоящем описании, означает любое млекопитающее, которому может быть введен ΚΙΜ. Конкретными индивидуумами, подвергаемыми лечению способом настоящего изобретения, являются люди, а также не относящиеся к человеку приматы, овцы, лошади, крупный рогатый скот, козы, свиньи, собаки, кошки, кролики, морские свинки, хомячки, песчанки, крысы и мыши, а также органы, опухоли, и клетки, полученные или происходящие от этих хозяев.
Использование соединений настоящего изобретения в генной терапии
Гены ΚΙΜ настоящего изобретения вводят в поврежденную ткань, или в ткань, рост которой желательно стимулировать. Такая генная терапия стимулирует продуцирование белка ΚΙΜ трансфецированными клетками, индуцируя, тем самым, клеточный рост и/или выживание клеток, которые экспрессируют белок ΚΙΜ.
В конкретном варианте метода генной терапии, ген, кодирующий белок ΚΙΜ, может быть введен в почечную ткань-мишень. Белок ΚΙΜ должен стабильно экспрессироваться и стимулировать рост, деление и дифференцировку ткани, либо он должен потенцировать выживание клеток. Кроме того, ген ΚΙΜ может быть введен в клетку-мишень с использованием ряда хорошо известных методов, в которых используются модели на основе вирусных или невирусных моделей.
Методами, не предусматривающими использование вирусов, являются электропорация; метод с использованием мембранных гибридов с липосомами; высокоскоростная бомбардировка клетки микрочастицами, покрытыми ДНК; инкубирование с ДНК, осажденной фосфатом кальция; ΌΕΛΕ-декстран-опосредованная трансфекция; и прямая микроинъекция в одиночную клетку. Так, например, ген ΚΙΜ может быть введен в клетку путем копреципитации фосфатом кальция (Рбксег еί а1., 8с1епсе, 209: 1414-1422 (1980)); путем механической микроинъекции и/или акселерации частиц (Апбеггоп е1 а1., Ргос. Ναίί. Асаб. 8с1. И8А, 77:5399-5403 (1980)); путем переноса ДНК с помощью липосом (например, БΙΡΟΡΈΕ’ΤΙΝ-опосредованная трансфекция, ЕеЕдпег еί а1., Ргос. ИаИ. Асаб. 8ск, И8А, 84: 471-477, 1987; Саο & Ниапд, ВюсЫт. Вюркук. Кек. Сопип., 179: 280-285, 1991); путем ПЕАЕ-декстран-опосредованной трансфекции; путем электропорации (патент США 4956288); или способами с использованием полилизина, в которых ДНК конъюгируют для доставки ДНК, предпочтительно, к гепатоцитам печени (^νοΙΓΓ еί а1., 8с1епсе, 247: 465-468, 1990; Сипе1 еί а1., Нитап Сепе Ткегару 3: 147-154, 1992).
Клетки-мишени настоящего изобретения могут быть трансфецированы путем прямого переноса гена. См., например, νο1ΓΓ еί а1., Όίгес1 Сепе ТгапкГег ΙπΓο Μοο^ 1п νίνο, 8аепсе, 247: 1465-68, 1990. Во многих случаях желательно использовать вектор-опосредованную трансфекцию. Все эти методы хорошо известны специалистам, и могут быть использованы для встраивания полинуклеотидной последовательности в вектор, (см., например, 8атЬгоοк еί а1., ΜοΚα-ΐΠπ С^пт^. А ^аЬο^аίο^у тапиа1, С.о1б 8ргшд Нат^г ^аЬο^аίο^у, Со1б 8ргтд Нат^г ΝΥ, 1989; и Аикике1 еί а1., СиггегИ Ρτοίο^1κ ш ΜοΚαιΡίΓ Βίο1ο^, 1. ^Пеу & δοϊ'ΐκ, Ν. Υ. 1992, оба эти руководства вводятся в настоящее описание посредством ссылки). Активация промотора может быть тканеспецифической или индуцируемой метаболическим продуктом или введенным веществом. Такими промоторами/ энхансерами являются, но не ограничиваются ими, нативный промотор белка лиганда с-геР предранний промотор/энхансер цитомегаловируса (Гагакпуата еί а1., 1. Ехр. Μеб., 169:13, 1989); промотор бета-актина человека (Сипшпд е1 а1., Ргос. ЦаЙ. Асаб. 8с1., И8А, 84: 4831, 1987); глюкокортикоид-индуцибельный промотор, присутствующий в длинном концевом повторе вируса опухоли молочной железы мыши (ΜΜΤν ЬТК) (Шекктд е1 а1., Μο1. Се11 Вю1., 4: 1354, 1984); длинные концевые повторы вируса мышиного лейкоза Молони (ΜπΕν ЬТК) (^1екк еР а1., ЖА Тинто г νύΜ^, Со1б 8ргшд ΗητόοΓ Ρπόοπ-ιΙοιγ, Со1б 8ргшд Η-ιΛοί', ΝΥ, 1985); ранний промотор 8ν40 (ВеитоМ & Скат^п, Шипе, 290: 304, 1981); промотор вируса саркомы Рауса (Κδν) (Υататοίο еί а® Се11, 22:787, 1980); промотор тимидинкиназы вируса простого герпеса (Н8У) (^адпег еί а1., Ргос. ИаИ. Асаб. 8ск, И8А, 76:1441, 1981); промотор аденовируса (Уашаба е! а1., Ргос. №11. Асаб. Зек, ИЗА, 82: 3567, 1985).
Гены ΚΙΜ могут быть также введены с помощью специфических вирусных векторов, используемых в системах переноса генов, которые в настоящее время хорошо известны. См., например, Μабζак е! а1., I. Сен. νίτο1., 73: 153336, 1992 (паповавирус 8У40); Вегкпег е! а1., Сшт. Τορ. ΜκτοΜο1. Iттиηο1., 158: 39-61, 1992 (аденовирус); ΗοβΜπηπ е! а1., Ргос. №!1. Асаб. 8сг 92: 10099-10103, 1995 (бакуловирус); Μοκκ е! а1., Сшт. Τορ. ΜκτοΜο1. Iттиηο1., 158: 25-38, 1992 (вирус коровьей оспы); Μиζусζка, Сигг. Τορ. ΜκτοΜο1. Iттиηο1., 158: 97-123, 1992 (аденоассоциированный вирус); Μа^диккее, Сигг. Τορ. ΜκτοΜο1. Iттиηο1., 158: 67-93, 1992 (вирус простого герпеса (Н8У) и вирус ЭпштейнаБарра (НВУ)); Μ Шег. Сшт. Τορ. ΜκτοΜο1. Ιιηтиηο1., 158: 1-24, 1992 (ретровирус); Вшпбуορабйуау е! а1., Μο1. Се11. Βίο1., 4: 749-754, 1984 (ретровирус); Μι11ογ е! а1., №!ите, 357: 455450, 1992 (ретровирус); ΑΜοκοη, Заенсе, 256: 808-813, 1992 (ретровирус), С’вггегИ Ρτο!ο^1δ ίη ΜοΕα.ι1;·ΐΓ ВюШду: 8ο^οη5.9.10-9.14 (Аи8иЬе1 е! а1., Ебк.), Отсеве РиЫЫШщ А^аасШе^ 1989, все указанные работы вводятся в настоящее описание посредством ссылки.
Предпочтительными векторами являются ДНК-вирусы, к которым относятся аденовирусы (предпочтительно, векторы на основе вирусов Аб-2 или Аб-5), бакуловирусы, вирусы герпеса (предпочтительно вектор на основе простого герпеса), и парвовирусы (предпочтительно, векторы на основе дефектных или неавтономных парвовирусов, более предпочтительно векторы на основе аденоассоциированного вируса, а наиболее предпочтительно векторы на основе ААУ-2). См., А11 е! а1., Сене Τίκπιρ}· 1: 367- 384: патенты США 4797368 и 5399346, и обсуждение, приведенное ниже.
Выбор конкретной векторной системы для переноса, например, последовательности ΚΙΜ зависит от ряда факторов. Одним из важных факторов является природа популяции клетокмишеней. Хотя ретро-вирусные векторы были основательно изучены и использованы в ряде методов генной терапии, однако, они, в основном, не пригодны для инфицирования клеток, которые не делятся, но они могут быть использованы в противораковой терапии, поскольку они лишь интегрируются в их геном и экспрессируют свои гены в реплицирующихся клетках. Эти векторы могут быть использованы ех νινο, и с этой точки зрения они представляют интерес, поскольку они стабильно интегрируются в геном клетки-мишени.
Аденовирусы представляют собой эукариотические ДНК-вирусы, которые могут быть модифицированы для эффективной доставки терапевтического или репортерного трансгена к различным типам клеток. Основные типы аденовирусов тип 2 и тип 5 (Аб2 и Аб5, соответст венно) , которые вызывают респираторные заболевания у человека, используются в настоящее время для генной терапии мышечной дистрофии Дюшенна (ΌΜΌ) и кистозного фиброза (СР) . Оба эти аденовируса, Аб2 и Аб5, принадлежат к подклассу аденовирусов, которые не ассоциируются со злокачественными опухолями человека. Векторы на основе аденовирусов способны обеспечивать исключительно высокие уровни доставки трансгена, практически, ко всем типам клеток, независимо от их митотической стадии. Высокие титры (1013 бляшкообразующих единиц/мл) рекомбинантного вируса могут быть легко продуцированы в клетках 293 (трансформированная аденовирусом, комплементационная клеточная линия почек эмбриона человека: АТСС СВЬ 1573), и могут храниться в замороженном виде в течение длительного периода времени без каких-либо заметных потерь. Эффективность этой системы в доставке терапевтического трансгена ίη νίνο которая возмещает генетический дисбаланс, была продемонстрирована на модели животных для различных заболеваний. См., ^а!аиаЬе, Абтсгохскгом^ 36: 261-268, 1986; Τηηζηχνη е! а1., РЕВЗ Ьейетк 118 (1):81-84, 1980; Οο^^η е! а1., Νανν Εη§1. I. Μο6. 309: 288-296, 1983; ПЫЬакЫ е! а1., I. С1т. ШуеШ., 92: 883-893, 1993; и ЬЫЬазЫ е! а1., I. С1ш. ^ек!., 93: 1889-1893, 1994; все указанные работы вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Действительно, рекомбинантный и дефектный по репликации аденовирус, кодирующий ДНК для трансмембранного регулятора кистозного фиброза (СРТО.), был разрешен для использования, по крайней мере, в двух клинических испытаниях с участием пациентов с кистозным фиброзом (СР). См., например, ХУНгои, №!ите, 365: 691-692, 1993. Дополнительным подтверждением безопасности использования рекомбинантных аденовирусов для генной терапии является широкомасштабный эксперимент, проведенный с участием группы людей, которым вводили вакцину на основе живого аденовируса.
Рекомбинантные в первой генерации и дефектные по репликации аденовирусы, которые были разработаны для генной терапии ΌΜΌ и других наследственных заболеваний, содержали делеции всей области Е1а и части области Е1Ь. Этот дефектный по репликации вирус выращивали в клетках 293, содержащих функциональный ген Е1 а аденовируса, который кодирует транс-активный белок Е1 а. Е1-делетированные вирусы способны реплицироваться и продуцировать инфекционный вирус в клетках 293, которые содержат продукты гена области Е1 а и Е1Ь в транс-положении. Продуцированный в результате вирус способен инфицировать многие типы клеток, и может экспрессировать встроенный ген (при условии, что он несет свой собственный промотор), но он не способен реплицироваться в клетке, которая не содержит
ДНК-область Е1, даже если эта клетка инфицирована с очень высокой множественностью инфекции. Аденовирусы обладают тем преимуществом, что они имеют широкий круг хозяев; могут инфицировать покоящиеся клетки или клетки, находящиеся в конечной стадии дифференцировки, такие как нервные клетки; и являются, в основном неонкогенными. Очевидно, что аденовирусы не интегрируются в геном хозяина. Поскольку они существуют вне хромосомы, то риск инсерционного мутагенеза является совсем незначительным. См. выше, А11 с1 а1., 373. Рекомбинантные аденовирусы (гАбУ) продуцируют очень высокие титры; их вирусные частицы являются умеренно стабильными, а уровни экспрессии являются высокими; при этом, аденовирусы могут инфицировать широкий круг хозяев. Их природными клетками-хозяевами являются эпителиальные клетки дыхательных путей, а поэтому эти вирусы могут быть использованы для терапии рака легких.
Перенос, опосредованный бакуловирусом, имеет несколько преимуществ. Бакуловирусный перенос гена может происходить в реплицирующихся и нереплицирующихся клетках, и он может также происходить в почечных клетках, гепатоцитах, нервных клетках, клетках селезенки, клетках кожи и в мышечных клетках. Бакуловирусы не реплицируются в клетках млекопитающих и являются непатогенными для этих клеток. У человека отсутствуют уже выработанные антитела к рекомбинантному бакуловирусу, которые могут блокировать инфекцию. Кроме того, бакуловирус способен встраивать и трансдуцировать большое количество ДНК-вставок.
Аденоассоциированные вирусы (АЛУ) были также использованы в качестве векторов для соматической генной терапии. АЛУ представляет собой небольшой одноцепочечный (оц) ДНК-вирус с простой организацией генома (4-7 т.п.о.), что делает его идеальным субстратом для генетической инженерии. Две открытые рамки считывания кодируют серию полипептидов гер и сар. Полипептиды гер (гер78, гер68, гер62 и гер40/ участвуют в репликации, спасении и интеграции генома АЛУ. Белки сар (УР1, УР2 и УР3) образуют капсид вириона. Фланкирующие открытые рамки считывания гер и сар у 5'- и 3'-концов представляют собой инвертированные концевые повторы в 145 п.о. (ΙΤΚ.) , из которых первые 125 п.о. способны к образованию Υ- или Т-образных дуплексных структур. Важное значение разработки векторов на основе АЛУ заключается в том, что полные домены гер и сар могут быть вырезаны и заменены терапевтическим или репортерным трансгеном. См., В.
1. СаПег. НапбЬоок о£ Рагуосю.!^, еб. , Р. Τΐ_)88ег, СКС Рге§8, рр. 155-168 (1990). Было показано, что ΙΤΒ представляют собой минимальную последовательность, необходимую для репликации, спасения, упаковки, и интеграции генома ААУ.
Аденоассоциированные вирусы (ААУ) имеют важное значение в генной терапии. Их вирусные частицы очень стабильны, а рекомбинантные ААУ (гААУ) имеют лекарственноподобные свойства, благодаря чему гААУ могут быть очищены путем осаждения или путем центрифугирования в градиенте С§С1. Эти вирусы являются термостабильными, и могут быть лиофизилизованы с получением порошка, а затем снова гидратированы до восстановления полной активности. Их ДНК стабильно интегрируется в хромосомы хозяина, поскольку их экспрессия является продолжительной. Вирусы ААУ имеют широкий круг хозяев, и не вызывают известного заболевания, а поэтому рекомбинантные векторы являются нетоксичными.
После введения в клетку-мишень нужные последовательности могут быть идентифицированы стандартными методами, такими как гибридизация нуклеиновой кислоты с использованием зондов, содержащих последовательности, которые являются гомологичными/ комплементарными последовательностями гена, встроенного в вектор. В другом методе эта последовательность (или последовательности) могут быть идентифицированы путем обнаружения присутствия или отсутствия функции маркерного гена (например, активности тимидинкиназы, устойчивости к антибиотику, и т.п.), индуцированной благодаря введению экспрессирующего вектора в клетку-мишень .
Фармацевтические препараты и введение
Соединения настоящего изобретения получают в соответствии со стандартной практикой, такой как введение в вектор-носитель. Термин фармацевтически приемлемый носитель означает один или несколько органических или неорганических ингредиентов, природных или синтетических, с которыми мутантный онкоген или мутантный онкопротеин может быть объединен для облегчения его применения. Подходящим носителем является стерильный физиологический раствор, хотя могут быть использованы и другие водные и безводные изотонические стерильные растворы и стерильные суспензии, которые применяются в фармацевтической практике и известны каждому специалисту. В этом смысле термин носитель включает в себя липосомы и 1а1-белок ВИЧ-1 (см., Сйеп е1 а1., Апа1. Вюсйет. 227: 168-175, 1995), а также любую плазмиду и вирусные экспрессирующие векторы.
Любые новые полипептиды настоящего изобретения могут быть использованы в форме фармацевтически приемлемой соли. Подходящими кислотами и основаниями, которые способны образовывать фармацевтически приемлемые соли с полипептидами настоящего изобретения, являются кислоты и основания, хорошо известные специалистам, такие как неорганические и органические кислоты и основания.
Соединение настоящего изобретения вводят индивидууму в терапевтически эффективном количестве, которое означает количество соединения, продуцирующее терапевтически желаемый эффект или оказывающее влияние на конкретное состояние пациента, подвергаемого лечению. Эффективное количество соединений настоящего изобретения способно ослаблять или уменьшать прогрессирование заболевания, дегенеративного состояния, или повреждения. Эффективное количество может быть определено для каждого конкретного индивидуума, исходя, частично, из характерных физических свойств индивидуума, симптомов, подвергаемых лечению, и желаемых результатов. На основании этих факторов и с использованием всего лишь рутинного экспериментирования, эффективное количество может быть определено любым специалистом.
Липосомная система доставки соединения настоящего изобретения может представлять собой любую из ряда моноламеллярных везикул, мультиламеллярных везикул, или стабильных плюриламеллярных везикул, и может быть получена и введена методами, хорошо известными специалистам, например, методами, описанными в патентах США №№ 5169637, 4762915, 5000958 или 5185154. Кроме того, может оказаться желательным продуцировать новые полипептиды настоящего изобретения, а также другие выбранные полипептиды, такие как, липопротеины, для усиления их связывания с липосомами. Так, например, лечение острой почечной недостаточности у человека с использованием белка К1М, инкапсулированного в липосомы, может быть осуществлено ιη νινο путем введения белка К1М в клетки, необходимого для такого лечения с использованием липосом. Эти липосомы могут быть доставлены в почечную артерию с помощью катетера. Рекомбинантный белок К1М выделяют, например, из клеток СНО с помощью иммуноаффинной хроматографии или любым другим стандартным методом, а затем смешивают с липосомами, и вводят в липосомы с высокой эффективностью. Инкапсулированный белок может быть проанализирован ίη νίίτο на любое действие, направленное на стимуляцию клеточного роста.
Соединения настоящего изобретения могут быть введены любым терапевтическим приемлемым способом. Они могут быть введены путем инъекции, парентеральными способами, такими как внутривенное, внутрисосудистое, внутриартериальное, подкожное, внутримышечное, внутриопухолевое, внутрибрюшинное, интарвентрикулярное (внутрижелудочковое), интраэпидуральное (внутримозговое) введение, а также путем перорального, интраназального, внутриглазного, ректального или местного введения. В настоящем изобретении также предусматривается введение препарата пролонгированного действия, такого как депо - инъекция или разлагаемые имплантаты. В частности, рассматривается местное применение путем доставки препарата в определенный участок организма, такой как доставка посредством катетера к одному или нескольким участкам, таким как, почечная артерия или сосуд, снабжающие кровью локализированную в данном участке опухоль.
Хотя настоящее изобретение описано достаточно подробно и сопровождается иллюстрациями и примерами, приведенными для лучшего его понимания, однако, в него могут быть внесены некоторые изменения и модификации, которые не должны выходить за рамки объема изобретения и сформулированной ниже формулы изобретения.
Список последовательностей (1) Общая информация:
(ί) Заявитель: М1сйе1е 8аη^сο1а-Nабе1
Шюрй У^^епЕе
Са!йеппе А. Неююп
Такайиги 1сЫтига
Непгу \Уе1
Вкйагб Ь.Са!е (ίί) Название изобретения: Модуляторы регенерации тканей (ΐϊϊ) Число последовательностей: 7 (ίν) Почтовый адрес:
(A) Адрес: Вюдеп, 1пс.
(B) Улица: 14 СатЬпбде Сеп!ег (C) Город: СатЬпбде (Ό) Штат: МА (Е) Страна: И8А (Е) Почтовый индекс (ΖΙΡ): 02142 (ν) Форма компьютерного считывания:
(A) Тип носителя: гибкий диск (B) Компьютер: РС, совместимая с 1ВМ (C) Операционная система: РС-ОО8/М8ΌΘ8 (Ό) Программное обеспечение: Ра!епйп Ве1еа§е # 1.0, Уегкюп #1.30 (νί) Данные настоящей заявки:
(A) номер заявки:
(B) Дата подачи: 23 мая 1997 г.
(C) Классификация:
(νίί) Данные предшествующей заявки:
(A) Номер заявки: И8 60/018228 (B) Дата подачи: 24 мая 1996 г. (νίίί) Данные о поверенном/агенте:
(A) Имя, фамилия: йесте, ЬеШе М.
(B) Регистрационный номер: 35245 (C) Номер документа/досье: А010 РСТ С1Р (ίχ) Телекоммуникационные данные:
(A) Телефон: (617) 679-2810 (B) Телефакс: (617) 679-2838 (2) Данные последовательности 8ЕС ΙΌ Νο:1:
(ί) Характеристики последовательности:
(A) Длина: 2566 пар оснований (B) Тип: нуклеиновая кислота (C) Цепочечность: одноцепочечная (Ό) Топология: линейная (и) Тип молекулы: кДНК (ίχ) Отличительный признак:
(A) Имя/Ключ: СЭ8 (B) Локализация: 615..1535 (χί) Описание последовательности 8Εζ) ГО Νο:1:
СССВССВСВТ СВАСССТВСС Т6ТВАВТААА ТАСАТСАССС ТСТССТТСАС АССАСАТТСТ60
ССА66ААССС ВА6САААСАТ ТАСТЗСТАТТ ТТАСССАВЗА ССАААТСТАС ВТСТАСАВАВ12 0
СТСТАСССАТ СТААОСТТТС САТСТСТАСС САВТВСТТТТ ТТАССТСТСТ ТТАСАСАТТТ180
СТСА6САА6А ТВТАСТСТСТ 6ТСАССАТЗТ ВТЗССТСААТ ТСТАЗСТСАС ТССАТСТТАТ240
ТЗТСТТТААЗ СТАСТТЗААС ТТТАССААСС ААССАСТАТС ТСТСТЗАССА СААЗАЗТАСА300
СТ6ТССАТСТ ТЗАЗЗАСААЗ СТСАТСТТТА ССАТТАВАСС ЗСТСЗССТТЗ ССТТАСАТТС360
ТАССВАЗААС АТАСТСТСТА АТСВСТВССС ТСАЗТТТТСТ СТЗТТТЗСТЗ ТСТТАТТТЗТ420
СТСАТС6ССА 6АА6ТСАТАТ С6АТ0ССТСТ АТЗТСАССАА ССАСССАСАТ АЗААЗАЗТЗТ480
АТТТВСВВСА АСАЗЗТТЗСС СТААСАЗАЗА 6ТССТВТССС АТТСАТ6САС ТСАЗЗАТЗАА540
ЗАССТЗАТСА САСАСАСТСТ ЗСТЗАЗТЗСС АСЗЗСТААСС АСАСТВАСТТ ЗТСАСТЗТСС600
ТТСАВСТСАА САСС АТС ЗТТ САА СТТ САА ЗТС ТТС АТТ ТСА ВВС СТС СТЗ6 50
Мес Уа1 31п Ьеи 31п Уа1 РЬе Не Зег СХу Ьеи Ьеи
1510
СТЗ СТТ СТТ ССА ССС ТСТ СТА ЗАТ ТСТ ТАТ САА СТА СТЗ ААС 333 СТЗ698
Ьеи Ьеи Ьеи Рго 31у Зег Уа1 Азр Зег Туг С1и Уа1 Уа1 Ьуз С1уУа1
2025
СТС ЗСТ САС ССТ ЗТС АСА АТТ ССА ТСТ АСТ ТАС ТСА АСА СОТ ССА ССА746
Уа1 31у Нхв Рго Уа1 ТЬг 11е Рго Суз ТЬг Туг Зег ТЬг Агд В1уС1у
3540
АТС АСА АСС АСА ТСТ ТСС ССС СЗЗ ССС САА ТСС ССА ТАТ ТСТ АСТ ТСТ7Э4
Не ТЬг ТЬг ТЬг Суз Тгр 31у Агд С1у 31п Суз Рго Туг Зег ЗегСуз
50 5560
САА ААТ АТА СТТ АТТ ТСС АСС ААТ ССА ТАС САА СТС АСС ТАТ ССС АЗС842
С1П Азп Не Ьеи 11е Тгр ТЬг Азп С1у Туг С1п Уа1 ТЬг Туг АгдЗег
7075
АЗС ССТ ССА ТАС ААС АТА ААЗ ССС СЗТ АТТ ТСА САА ССА ВАС СТА ТСС890 £ег С1у Агд Туг Азп Не Ьуя 31у Агд Не Зег С1и С1у Азр УаХ5ег
8590
ТТС АСА АТА САС ААС ТСТ СТТ ЗАТ АСТ САТ АСТ ССТ СТС ТАТ ТСТ ТСС938
Ьеи ТЬг Не С1и Азп Зег Уа1 Азр Зег Азр Зег С1у Ьеи Туг СузСуз
100105
ССА СТС САЗ АТТ ССТ ССА ТСС ТТС ААС САТ САС ААА АТС АСС ТТТ ТСА986
Агд Уа1 С1и Не Рго 31 у Тгр РЬе Азп Азр 61п Ьуз Мес ТЬг РЬе Зег
110 115120
ТТС САА СТТ ААА ССА САА АТТ ССС АСА АСТ ССТ ССА АСА АЗА ССС АСА1034
Ьеи С1и Уа1 Ьуз Рго 31и Не Рго ТЬг Зег Рго Рго ТЬг Агд Рго ТЬг
125 130 135140
АСТ АСА АЗА ССС АСА АСС АСА АСС ССС АСА АСТ АТТ ТСА АСА АСА ТСС1082
ТЬг ТЬг Агд Рго ТЬг ТЬг ТЬг Агд Рго ТЬг ТЬг Не Зег ТЬг Агд Зег
145 150155
АСА САТ СТА ССА АСА ТСА АСС АСА СТС ТСС АСС ТСТ АСТ ССА АСА ССА1130
ТЬг Нхз Уа1 Рго ТЬг Зег ТЬг Агд Уа1 5ег ТЬг Зег ТЬг Рго ТЬгРго
160 165170
САА САА АСА САС АСТ САС ААА ССА САА АТС ^СТ АСА ТТТ ТАТ ССС САТ1178
СХи С1п ТЬг В1п ТЬг Нхз Ьуз Рго С1и 11е ТЬг ТЫ РЬе Туг А1аНхз
175 180185
САЗ АСА АСТ ССТ ВАС 6Т6 АСА САА АСТ ССА ТСА ТАТ АСТ ССТ ССА САС1226
С1и ТЬг ТЬг АХа С1и Уа1 ТЬг С1и ТЬг Рго Зег Туг ТЬг Рго А1аАзр
190 195200
ТСС ААТ ССС АСТ СТС АСА ТСС ТСА САС САС ССС ТСС ААТ ААТ САС АСТ1274
Тгр Азп С1у ТЬг Уа1 ТЬг Зег Зег С1и С1и А1а Тгр Азп Азп НхзТЬг
205 210 215220
СТА АСА АТС ССТ ТТС АСС ААЗ ССС САС АСА ААС ССС АСТ ААС ССС ТТС1322
Уа1 Агд Не Рго Ьеи Агд Ьуз Рго С1п Агд Азп Рго ТЬг Ьуя О1уРЬе
225 230235
ТАТ ЗТТ ССС АТЗ ТСС СТТ ССА ССС СТС СТС СТС СТС СТС СТТ ССС АСС1370
Туг УаХ СХу МеС Зег УаХ А1а АХа Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи АХаЗег
240 245250
АСС СТС СТТ СТС АСС АВС ТАС АТС АТТ АТА АСА ААС ААС АТС ССС ТСТ1418
ТЬг Уа1 Уа1 Уа1 ТЬг Агд Туг 11е 11е Не Агд Ьуз Ьуз Мес С1уЗег
255 260265
СТЗ АЗС ТТТ СТТ 6СС ТТС САТ СТС ТСТ ААС АСТ АСА ССТ ТТС САС ААС1466
Ьеи Зег РЬе УаХ А1а РЬе Нхз Уа1 Зег Ьуз Зег Агд А1а Ьеи С1пАзп
270 275280
ССА ССС АТТ СТС САТ ССС СОА ССТ ЗАА САС ААС АТС ТАС АТТ АТТ САА1514
А1а А1а Не Уа1 Нхз Рго Агд А1а С1и Азр Азп 11е Туг Не 11еС1и
285 290 295300
САТ АЗА ТСТ ССА ССТ ССА САА ТСАЗТСССАС АЗСССТТСТС ТСЗССССТТС Азр Агд Зег Агд С1у АХа ЗХи
305
ТЗССТССЗАТ ТАСА6АЗАТС 6ТЗАСТСАТТ ТСАСАЗАЗТА АААТАСССАТ ТССА6СТССТ 1625
СЗСАСАТТТТ СТЗТТТТЗСТ ТСТТССАЗСТ ССАВТССАЗА ЗЗЗТААСССТ СТАСССТЗТА 1685
ТАТССААААС ТСЗАСЗТТАА САТСАТССТА АТТСТТСТАТ САЗСААСАСС ТСАЗТЗТСТС 1745
САСТСАСТСС АЗСЗАТТСТС ТСАААТЗТЗА АСАТТТТАЗА А6ТТТ8ТЗТТ ТССТТТТЗТС 1805
САТЗТААТСА ТТЗЗТААТАС ААЗААТТТТА ТСТТЗТТТАТ ТААААССАТТ ААТВАЗАСЗС 186 5
СААТА6СААТ ТААААССТСС ТЗССААССЗС СТССТЗААТТ ТАВААЗСАСТ ТСАТЗАТТЗГ 1925
СТТТАТСТСТ ТТТАТТЗТАА ТТТЗАААТЗТ ТАСТТСТАТС СТТСССААСС СССААААТСА 1985
ТС8САССАТС ЗАВВТТТТАА ТТССССТСАТ АЗАТААЗТАЗ ААСААЗАЗАЗ ТСТААТЗССА 2045
ССААТАСА63 ТВЗТТАТВСТ ТТСТСАСАЗС ТСГВЗАААТА ТЗАТСАТТТА ТТАТЗСАЗТТ 2105
ЗАТСТТАСЗА ТВАЗЗАТЗВС ТТТСТТАЗСА ЗЗАЗАЗСТТА ССАТЗСТВАЗ ТЗСАССАВЗС 2X65
АСАСАТСАЗЗ ЗСААЗААААС ААТ63АТСАА ЗЗЗАТТОАЗТ ТСАТТАСАСС САТ хТССАСТ 2225
ССАСТТСТВТ СТТЗАТЗСТС АСТЗТТССТА ААСТСАСССА СТВАЗСТСТЗ ААТТАЗВТЗС 2285
Α333Α83Α3Α СЗТЗСАЗААА ССАААЗАЗЗА ААЗАААЗЗАЗ А8АЗАССАЗЗ АСАСАЗЗСТТ 2345
ТСТЗСТЗАЗА 8ААЗТССТАТ ТЗСАСЗТЗТЗ АСАЗТЗТТТЗ ЗЗАСТАССАС 336ТТТССТТ 2405
САЗАСТТСТА АЗТТТСТААА ТСАСТАТСАТ ЗТЗАТСАТАТ ТТАТТТТТАА ААТТАТТТСА 2465
ЗАААЗАСАСС АСАТТТТСАА ТААТАААТСА ЗТТТСТСАСА АТТААТАААА ТАТТТТЗТТТ 2525
ССТААСААСТ АААААААААА АААААААЗТС ЗАСЗСВЗССЗ С 2566
(2) Данные ΐ последовательности ЗЕф 10 Νο:2:
(ΐ) Характеристики последовательности: (А) Длина: 2084 пары оснований
(В) Тип: нуклеиновая кислота
(С) Цепочечность: одноцепочечная
(0) Топология: линейная
(ίί) Тил молекулы: кДНК (ίχ) Отличительный признак:
(А) Имя/Ключ: СОЗ
(В) Локализация: 145 ..1065
(χί) Описание последовательности ЗЕО 10 Νο:2:
ССС6СССССТ ССАССВТССС Т8Т6А6ТААА ТАЗАТСАЗЗС ТСТССТТСАС АССАСАТТСТ 60
ССАССААССС САССАААСАТ ТАСТССТАТТ ТТАСССАВВА ССАААТСТАС ВТСТАВАСАС 120
СТСТАСССАТ СТААССТСАА САСС АТС СТТ САА Мес УаХ ВХп 1 1 СТТ САА СТС ТТС АТТ ТСА Ьеи В1п УаХ РЬе Не Зег 5 171
ССС С1у 10 стс сто ста стт стт ссд Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Рго 15 ВВС ТСТ СТА СХу Зег Уа1 ВАТ ТСТ ТАТ Азр Зег Туг 20 САА СТА ЗТС СХи УаХ УаХ 25 219
ААС Ьуз аса ста ста ззт сас сст 31у Уа1 УаХ З1у Нхэ Рго 30 СТС АСА АТТ Уа1 ТЫ Не 35 ССА ТОТ АСТ РГО Суя ТЬг ТАС ТСА АСА Туг Зег ТЫ 40 267
сст Агд ВСА ОСА АТС АСА АС6 АСА С1у В1у Не ТЫ ТЫ ТЬг 45 ТВТ ТОО ВВС Суз Тгр 61у 50 ССС ВВС САА Агд СХу С1п ТСС ССА ТАТ Суз Рго Туг 55 315
ТСТ Зег АСТ ТОТ САА ААТ АТА СТТ 5ег Суз ВХп Азп Не Ьеи 60 АТТ ТСС АСС Не Тгр ТЬг 65 ААТ ОВД ТАС Аяп С1у Туг 70 САА СТС АСС 31п Уа1 ТЬг 363
ТАТ СВВ АВС АВС ВОТ ССА ТАС Агд Зег Зег 81у Агд Туг 75 80 ААС АТА ААЗ Азп Не Ьуз ВВС ССТ АТТ В1у Агд 11е 85 ТСА САА ВСА Зег С1и СХу 411
САС Азр 90 СТА ТСС ТТВ АСА АТА ЗАВ УаХ Зег Ьеи ТЫ Не В1и 95 ААС ТСТ СТТ Азп 5ег УаХ ВАТ АСТ САТ Аяр Зег Азр 100 АСТ ССТ СТС Зег СХу Ьеи 105 459
ТАТ Туг тат тас сва ста ваз атт Суя Суя Агд Уа1 С1и Не НО ССТ ВСА ТСС Рго С1у Тгр 115 ТТС ААС ВАТ РЬе Азп Азр САВ ААА АТС С1п Ьуз Мес 120 507
АСС ТЬг ТТТ ТСА ТТВ ВАА ΒΤΤ ААА РЬе Зег Ьеи СХи Уа1 Ьуз 125 ССА ВАА АТТ Рго С1и Не 130 ССС АСА АВТ Рго ТЬг Зег ССТ ССА АСА Рго Рго ТЬг 135 555
АСА ТЬг АВА ССС АСА АСТ АСА АЗА ССС Агд Рго ТЬг ТЬг ТЬг Агд Рго 140 АЗА ТСС АСА САТ СТА ССА АСА Агд Зег ТЬг Н1а Уа1 Рго ТЬг 155 хбо АСА АСС АСА АВС ССС АСА АСТ АТТ ТСА ТЫ ТЬг ТЬг Агд Рго ТЬг ТЬг Не Зег 145 150 ТСА АСС АСА ЗТС ТСС АСС ТСТ АСТ Зег ТЬг Агд Уа1 Зег ТЬг Зег ТЬг 165 603 651
ССА РГО 170 АСА ССА САА САА АСА САЗ АСТ ТЬг Рго С1и 31п ТЬг С1п ТЬг 175 САС ААА ССА ЗАА АТС АСТ АСА ТТТ ΗΪ8 Ьуз Рго 31и 11е ТЬг ТЬг РЬе 180 185 699
ТАТ Туг ССС САТ ЗАЗ АСА АСТ ЗСТ ЗАЗ А1а Нхз 31и ТЬг ТЬг А1а 31и 190 ОТО АСА ЗАА АСТ ССА ТСА ТАТ АСТ Уа1 ТЬг 81и ТЬг Рго Зег Туг ТЬг 195 200 747
1565
ССТ ССА САС ТСС ДАТ Рго А1а Азр Тгр Азп ССС АСТ СТС АСА ТСС ТСА САС САС ССС ТСС ААТ 795
С1у ТНг νβΐ ТНг 210 Зег Зег С1и С1и А1а 215 Тгр Азп
205
ААТ САС АСТ СТА АСА АТС ССТ ТТС АСЗ ААС ССС САС АСА ААС ССС АСТ 843
Азп Ηί3 ТНг Уа1 Агд Не Рго Ьеи Агд Ьуз Рго С1п Агд Азп Рго ТНг
220 225 230
ДАВ ССС ТТС ТАТ СТТ ССС АТС ТСС СТТ ССА ссс СТС СТО СТС СТС СТС 891
Ьуз 31у РНе Туг Уа1 С1у Мее Зег Уа1 А1а А1а Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи
235 240 245
стт ССС АЗС АСС СТС СТТ СТС АСС АСС ТАС АТС АТТ АТА АСА ААС ААС 939
Ьеи А1а Зег ТНг Уа1 Уа1 νβΐ ТНг Агд Туг Не Не Не Агд Ьуз Ьуз
250 255 260 265
АТС ОСС тст СТС АСС ТТТ ОТТ ССС ТТС САТ СТС ТСТ ААС АСТ АСА ССТ 987
Мес. С1у Зег Ьеи Зег РЬе Уа1 А1а РЬе ΗΪ8 Уа1 Зег Ьуз Зег Агд А1а
270 275 280
ттз САЗ ААС ССА ССС АТТ СТО САТ ССС С3~ ССТ САА САС ААС АТС ТАС 1035
Ьеи В1п Азп А1а А1а Не Уа1 Ηί3 Рго Агд А1а 31и Азр Азп Не Туг
285 290 295
АТТ АТТ ЗАД САТ АЗА ТСТ ССА СОТ ССА САА ТСАЗТСССАС АССССТТСТС 1085
Не Не С1и Азр Агд Зег Агд С1у А1а С1и
300 305
ТСЗССССТТС ТСССТСССАТ ТАСАЗАСАТС СТЗАСТСАТТ ТСАСАСАСТА АААТАСССАТ 1145
ТССАбСТССТ 8СЗАСАТТТТ СТСТТТТООТ ТСТТССАССТ ССАСТССАСА ЗССТААСССТ 1205
СТАСССТСТА ТАТССААААС ТСЗАЗСТТАА САТСАТССТА АТТСТТСТАТ САЗСААСАСС 1265
ТСАСТСТСТС САСТСАСТСС АССЗАТТСТС ТСАААТСТСА АСАТТТТАЗА АСТТТСТЗТТ 1325
ТССТТТТСТС САТСТААТСА ТТСОТААТАС ААСААТТТТА ТСТТСТТТАТ ТААААССАТТ 1305
ААТЗАЗАЗЗЗ ЗААТАССААТ ТААААЗСТСС ТСЗЗААССЗС СТССТЗААТТ ТАЗААЗСАСТ 1445
ТСАТВАТТЗТ ЗТТТАТСТСТ ТТТАТТСТАА ТТТСАААТСТ ТАСТТСТАТС СТТСССААЗС 1505
СССААААТСА ТЗЗСАССАТС ЗАЗЗТТТТАА ТТЗСССТСАТ АЗАТААЗТАЗ ААЗААЗАЗАЗ 1565
ТСТААТСССА ССААТАСАСС ТССТТАТССТ ТТСТСАСАЗС ТСТОСАААТА ТСАТСАТТТА 1625
ТТАТОСАСТТ ЗАТСТТАСЗА ТЗАЗЗАТОСС ТТТСТТАССА ЗСАЗАЗЗТТА ССАТЗОТСАЗ 1605
ТССАССАЗСС АСАСАТСАЗЗ ЗСААЗААААС ЛАТССАТСАА ССЗАТГЗАЗТ ТСАТТАЗАЗС 1745
САТТТССАСТ ССАСТТСТОТ СТТЗАТССТС АСТСТГССТА ААСТСАСССА СТСАОСТСТЗ 1005
ААТТАСВТСС АСЗСАЗСАСА ССТССАЗААА СЗАААЗАЗЗА ААЗАААЗЗАЗ АЗАСАЗСАСЗ 1065
АСАСАСССТТ ТСТЗСТЗАСА ЗААЗТССТАТ ТЗСАЗЗТОТЗ АСАЗТЗТТТС ЗСАСТАССАС 1925
ЗЗЗТТТССТТ САСАСТТСТА АЗТТТСТААА ТСАСТАТСАТ СТСАТСАТАТ ТТАТТТГТАА 1905
ААТТАТТТСА СААЛСАСАСС АСАТТТТСАА ТААТАААТСА СТТТЗТСАСА АТТААТАААА 2045
ТАТТТТЗТТТ ССТААСААСТ АААААЗТСЗА ССССССССС 2084 (2) Данные последовательности 8Εζ) Ш
Νο:3: (ί) Характеристики последовательности:
(A) Длина: 307 аминокислот (B) Тип: аминокислотная (Ό) Топология: линейная (и) Тип молекулы: белок (χί) Описание последовательности 8Εβ Ш
Νο:3:
Мее 1 Уа1 <31п Ьеи С1п 5 Уа1 РНе Не Зег 01у Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Рго
10 15
<31у 5ег Уа1 Азр 20 5ег Туг С1и Уа1 Уа1 25 Ьуз С1у Уа1 V»! 31у 30 ΗΪ5 Рго
νβΐ ТНг Не 35 Рго Суз ТНг Туг Зег 40 ТНг Агд С1у С1у Не 45 ТНг ТНг ТНг
Суз Тгр 50 С1у Агд О1у С1п Суз 55 Рго Туг Зег Зег Суз 60 С1п Азп 11е Ьеи
11е 65 Тгр ТНг Азп в!у туг 70 31п Уа1 ТНг Туг Агд 75 Зег Зег <31у Агд Туг 60
Азп Не Ьуз С1у Агд 85 Не Зег С1и С1у Азр 90 Уа1 Зег Ьеи ТНг Пе 95 <31и
Азп Зет Уа1 Азр 100 Зег Азр Зег С1у Ьеи 105 Туг Суз Суз Агд Уа1 но 31и Не
?го □1у Тгр 115 РЬе Азп Азр С1п Ьуз 120 Мес ТНг РНе Зег Ьеи 125 31и Уа1 Ьуз
Рго <31и 1Э0 Не Рго ТНг Зег Рго 135 Рго ТНг Агд Рго ТНг 140 ТНг ТНг Агд ₽го
ТНг 145 ТНг ТНг Агд Рго ТНг 150 ТНг Не Зег ТНг Агд 155 Зег ТНг ΗΪ3 ν<ι Рго 160
ТЫ 5ег ТНг Агд ν«ι 165 Зег ТНг Зег ТНг Рго 170 ТНг Рго С1и О1П ТНг 175 С1п
ТЫ ΗΪ8 Ьув Рго С1и Не ТЫ ТЫ РЬе Туг А1а Наз С1и ТЬг ТНг А1а 180 185 190
61и Уа1 ТНг <31и ТНг Рго Зег Туг ТЫ Рго А1а Азр Тгр Азп О1у ТЫ
195 200 205
νβΐ ТНг Зег Зег С1и О1 и А1а Тгр Азп Азп Н1з ТНг Уа1 Агд Не Рго
210 215 220
Ьеи Агд Ьуз Рго С1п Агд Азп Рго ТНг ьуз С1у РНе Туг Уа1 С1у Мес
225 230 235 240
Зег Уа1 А1а А1а Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи Ьеи А1а Зег ТНг Уа1 Уа1 Уа1
245 250 255
ТНг Агд Туг Не Не 11е Агд Ьуз Ьуз Мес 01 у Зег Ьеи 5ег РЬе Уа1
260 265 270
А1а РНе низ ν*ι Зег ьуз Зег Агд А1а Ьеи 61п Азп А1а А1а Не Уа1
275 280 285
ΗΪ3 Рго Агд А1а С1и Азр Азп Не Туг Не Не <31и Азр Агд Зег Агд
290 295 300 (31у А1а 31и
305 (2) Данные последовательности 8Εζ) Ш Νο:4:
(ί) Характеристики последовательности:
(A) Длина: 2303 пары оснований (B) Тип: нуклеиновая кислота (C) Цепочечность: одно цепочечная (Ό) Топология: линейная (и) Тип молекулы: кДНК (ίχ) Отличительный признак:
(A) Имя/Ключ: СО 8 (B) Локализация: 107..1822 (χί) Описание последовательности 8Εζ) Ш Νο:4:
ССССССЗССТ ССАСТСССАб ЗАОЗССЗЗСА СТСТЗАСТСС ТОСТЗСАТСС ЗАСТАЗССАС 60
ТСАЗАСТСАА ССССТСАСТЗ ССТСАССССС ЗССССТСССА СТСАСС АТС ОДА АСТ 115
СТС тсс ССС СТС СТС ОТА ттт стс ста сто ест сса сса ста ссс стс 163
Ьеи Сув 5 С1у Уа1 Ьеи Уа1 РНе 10 Ьеи Ьеи Ьеи А1а А1а С1у 15 Ьеи Рго Ьеи
САС ССС ССС ААС ССС ТТС ССТ САТ СТС СТС ССС САТ САС САЗ ТАТ ССС 211
С1п А! а А1а Ьуз Агд РЬе Агд Азр Уа1 Ьеи С1у ΗίΒ С1и С1п Туг РГО
20 25 30 35
САТ САС АТС АСС САС ААС ААС САА ТТА ССТ ссс тсс ТСТ ТСА САТ ЗАА 259
Азр Н13 Мес Агд С1и Азп Азп <31п Ьеи Агд О1у Тгр 5ег 5ег Азр С1и
40 45 50
ААТ САА ТСС САТ САА САС стс ТАТ ССА СТС тсс АСС АСС ССА САС ССС 3 07
АЗП С1и Тгр Азр С1и С1п Ьеи Туг Рго Уа1 Тгр Агд Агд С1у С1и с1у
55 60 65
АСА ТСС ААС САС ’тсс ТСС САА ССА ССС ССТ стс САС ССА ССС СТА АСС 355
Агд Тгр Ьув Авр 5ег Тгр С1и 31у С1у Агд Уа1 С1п А1а А1а Ьеи ТНг
70 75 00
АСТ САТ ТСА ССС ссс ТТС стс ССТ тсс ААТ АТС АСС ТТС СТА СТС ААС 403
Зег Авр Зег Рго А1а Ьеи Уа1 С1у 5ег Азп Не ТНг РНе Уа1 Уа1 Азп
85 90 95
СТС СТС ТТС ССС АСА тсс САС ААС САА САТ ссс ААС ССС ААТ АТС СТС 451
Ьеи Уа1 РНе Рго Агд Суз С1п Ьуз С1и Авр А1а Азп С1у Азп Не νβΐ
100 105 110 115
ТАТ САС АСС ААС тсс АСА АСТ САТ ТТС САС сто ССТ тст САС ССС ТАТ 499
Туг С1и Агд АЗП Сув Агд Зег Азр Ьеи С1и Ьеи А1а 5ег Азр Рго Туг
120 125 130
СТС ТАС ААС ТСС АСС АСА ссс ССА САС САТ САС САС ТСС САА САС АСС 547
ν&1 Туг Авп Тгр ТНг ТНГ С1у А1а Авр Азр С1и Азр Тгр С1и Азр Зег
135 140 145
АСС АЗС САА ссс САС САС СТС АСС ТТС ССС САС ССС ААС ССС ТТС ССТ 595
ТНг Зег С1п С1у С1п Н18 Ьеи Агд РНе Рго Азр С1у ьуз Рго РНе Рго
150 155 160
ССС ССС САС ССА ссс ААС ААА ТСС ААС ТТС стс ТАС стс ТТС САС АСА 643
Агд Рго Н18 С1у Агд ьув Ьув Тгр А8П РЬе Уа1 Туг Уа1 РЬе ΗίΒ ТНг
165 170 175
стт СОТ САС ТАТ ТТТ САА ААС СТС ССТ ССС ТСТ ТСА ССА ССА стт ТСТ 691
Ьеи С1у С1П Туг РЬе С1п Ьув Ьеи С1у Агд Сув 8ег А1а Агд νβΐ Зег
190 185 190 195
АТА ААС АСА ОТС ААС ТТС АСА СТТ ссс ССТ САС СТС АТС ЗАА стс АТТ 739
Не Азп ТНг νβΐ Азп Ьеи ТНг Уа1 С1у Рго С1п Уа1 Мес С1и Уа1 Не
200 205 210
СТС ТТТ ССА АЗА САС ССС ссс ССА ТАС АТТ ссс АТС ТСС ААА СТС ААА 787
Уа1 РНе Агд Агд ΗΪΒ С1у Агд А1а Тут 11е Рго Не Зег Ьув Уа1 Ьув
215 220 225
САС Азр СТС νβΐ ТАТ СТС АТА АСА САТ САС АТС ССТ АТА ТТС СТС АСС АТС ТАС 835
Туг Уа1 230 Не ТЬг Азр С1П 235 Не Рго Не РЬе Уа1 240 ТЬг Мее туг
САС ААС ААТ САС ССС ААС ТСС ТСТ САТ САА АСС ТТС СТС АСА САС СТС 883
С1п Ьуз Азп Азр Агд Азп Зег Зег Азр С1и ТЬг РЬе Ьеи Агд Азр Ьеи
245 250 255
ССС АТТ ТТС ТТС САТ СТС СТС АТТ САС САТ ССС АСТ САТ ТТС СТС ААСЭ31
Рго Не РЬе РЬе Азр Уа1 Ьеи Не Нхз Азр Рго Бег Нхз РЬе ЬеиАзп
260 265 270275
ТАС ТСТ ССС АТТ ТСС ТАС ААС ТСС ААС ТТТ ССС САС ААС АСТ ССС СТС979
Туг 5ег А1а Не Зег Туг Ьуз Тгр Азп РЬе С1у Азр Азп ТЬг С1уЬеи
290 235290
ТТТ СТС ТСС ААС ААТ САС АСТ ТТС ААТ САС АСС ТАТ СТС СТС ААТ ССА1027
РЬе Уа! Зег Азп Азп Нхз ТЬг Ьеи Азп Нхз ТЬг Туг Уа1 Ьеи АзпС1у
295 300305
АСС ТТС ААС ТТТ ААС СТС АСС СТС САА АСТ ОСА СТС ССС ССА ССА ТСС1075
ТЬг РЬе Азп РЬе Азп Ьеи ТЬг Уа1 С1п ТЬг А1а Уа1 Рго С1у РгоСуз
310 315320
ССС ТСА ССС АСА ССТ ТСС ССТ ТСТ ТСТ ТСС АСТ ТСТ ССТ ТСС ССТ ССА1123
Рго Зег Рго ТЬг Рго Зег Рго Зег Зег Зег ТЬг Зег Рго Зег Рго А1а
ТСТ ТСС ССТ ТСА ССС АСА ТТА ТСА АСА ССТ АСТ ССС ТСТ ТТА АТС Ьеи Мес ССТ Рго 355 1171
Зег Зег Рго Зег Рго ТЬг Ьеи Зег ТЬг Рго Зег Рго 350 Зег
340 345
АСТ ССС САС ААА ТСС АТС САС СТС АСТ САС АТТ ТСС ААТ САА ААС ТСС 1219
ТЬг С1у Нхз Ьуз Зег мее С1и Ьеи Зег Азр Не Зег Азп С1и Азп Суз
360 365 370
ССА АТА ААС АСА ТАТ ССТ ТАС ТТС АСА ССС АСС АТС АСА АТТ СТА САТ 1267
Агд Не Азп Агд Туг С1у Туг РЬе Агд А1а ТЬг Не ТЬг Не Уа1 Азр
375 380 385
ССА АТС СТА САА СТС ААС АТС АТС САС СТА ССА САТ СТС ССА АТС ССС 1315
С1у Не Ьеи С1и Уа1 Азп Не Не С1п Уа1 А1а Азр Уа1 РГО Не Рго
390 395 400
АСА ССС САС ССТ САС ААС ТСА СТС АТС САС ТТС АТТ СТС АСС ТСС ААА 1363
ТЬг Рго С1п рго Азр АЗП Зег Ьеи мее Αδρ РЬе Не ν*1 ТЬг Суз Ьуз
405 410 415
ССС □сс АСТ ССС АСС САА ССС ТОТ АСС АТС АТС ТСТ САС ССС АСС ТСС 1411
<Э1у А1а ТЬг Рго ТЬг 31и А1а Суз ТЬг Не Не Зег Азр Рго ТЬг Суз
420 425 430 435
САС АТС ССС САС ААС АСС СТС ТСС АСС ССС СТО ССТ СТС САТ САС СТС 1459
С1п Не А1а С1п Азп Агд Уа1 Суз Зег Рго Уа1 А1а Уа1 Азр С1и Ьеи
440 445 450
ТСС СТС СТС ТСС СТС АЗС АСА ССС ТТС ААТ ССС ТСС ССС АСС ТАС ТСТ 1507
су· Ьеи Ьеи Зег Уа1 Агд Агд А1а РЬе Азп С1у Зег С1у ТЬг Туг Суз
455 460 465
СТС ААТ ТТС АСТ СТС ССА САС САТ ССА АСС СТС ССС СТС АСС АСС ССС 1555
Уа1 Азп РЬе ТЫ Ьеи С1у Азр Азр А1а Зег Ьеи А1а Ьеи ТЬг Зег А1а
470 475 480
СТС АТС ТСТ АТС ССТ ССС ААА САС СТА ССС ТСС ССТ СТС АСА АСА СТС 1603
Ьеи Не Зег Не Рго С1у Ьуз Азр Ьеи С1у Зег РГО Ьеи Агд ТЬг Уа1
485 4 90 495
ААТ ССТ СТС СТС АТС ТСС АТТ ССС ТСС СТС ССС АТС ТТТ СТС АСС АТС 1651
А5П 31у Уа1 Ьеи Не Зег Не С1у Суз Ьеи А1а Мес РЬе ν*ι ТЬг мес
500 505 510 515
СТТ АСС АТС ТТС СТС ТАС ААА ААА САС ААС АСС ТАС ААС ССА АТА ССА 1699
Уа1 ТЫ Не Ьеи Ьеи Туг Ьуз Ьуз Нхз Ьуз ТЬг Туг Ьуз Рго Не С1у
520 525 530
ААС ТСС АСС АСС ААС СТС СТС ААС ССС ААА ССС СТС АСТ СТТ ТТТ СТС 1747
Азп Суз ТЬг Агд Αδη Уа1 Уа1 Ьуз С1у Ьуз С1у Ьеи Зег ν<1 РЬе Ьеи
535 540 345
АСС САТ ССА ААА ССС ССС ТТС ТСС ССА ССА САС ССС САС ААС САТ ССА 1795
Зег Нхз А1а Ьуз А1а Рго РЬе Зег Агд С1у Азр Агд С1и Ьуз Азр Рго
550 555 560
СТС СТС САС САС ААС ССА ТСС АТС СТС ТААСТСТТСА СТСТСАСТТС 1842
Ьеи Ьеи С1п Азр Ьуз Рго Тгр. Мее Ьеи
565 570
ТСАСТаССАА СССАСТСТТС ТСТССАТСТА ТСТСАССТСТ ССАСААСТАС АТСАСТССТА 1902 ССТСТТСТТТ ТСТАСССАТТ АТТСТААААТ СТАТАТСАТС СТТГАСССАС ССТАСТТААТ 1962 ТСССАТТТТА СТСААСССАТ СССААСАСАС ТАТТТСТТСА САТСТСТАТТ СТССТТТТТА 2022
ТАСТСТТААТ АСССТССССА САТТСТСТСТ СААСССССАС ССССАССТСА СТЗСТАСТТА 2082 АССТССТАСС ТТААСТЗССА САСЗАТСССС САСССТССТТ АОАТТТСТАС АСААСАТСТС 2142 ССТСААСССА ССТАСТССТС АССТАААССС САТССТТСАТ СААСТСТАТС ТСАССТСАТТ 2202 ОААСАТАССТ САССАССТСА ТССААТТАТА АТОСААССАА ССТТСТТСТА ТССТСТСТСТ 2262
СТСТАСАТАА САТАСТСАТГ АААААСАСАС ТСТАТТАААА А 2303 (2) Данные последовательности 8Εζ) Ю Νο:5: (ί) Характеристики последовательности:
(A) Длина: 572 аминокислоты (B) Тип: аминокислотная (И) Топология: линейная (ΐΐ) Тип молекулы: белок (χί) Описание последовательности 8 Ер Ю Νο:5:
Ьеи Рго Ьеи С1п А1а А1а Ьуз Агд РЬе Агд Азр Уа1 Ьеи С1у Нхз С1и
20 25 30
<31п Туг Рго Азр ΗΪ3 Мес Агд С1и Азп Азп С1п Ьеи Агд С1у тгр Зег
35 40 45
Зег Азр С1и АЗП <31и Тгр Азр С1и С1п Ьеи Туг Рго Уа1 Тгр Агд Агд
50 55 60
С1у С1и С1у Агд Тгр Ьуз Азр Зег Тгр 61и С1у 61 у Агд ν*1 С1п А1а
65 70 75 80
А1а Ьеи ТЬг Зег Азр Зег Рго А1а Ьеи Уа1 С1у Зег Азп Не ТЬг РЬе
85 90 95
Уа! Уа1 Азп Ьеи Уа1 РЬе Рго Агд Су· С1п Ьув С1и Азр А1а АЗП С1у
100 105 110
Азп Не Уа1 Туг С1и Агд Азп Суз Агд Зег Азр Ьеи С1и Ьеи А1а Зег
115 120 125
Азр Рго Туг ν*ι Туг АЗП Тгр ТЬГ ТЬг С1у А1а Азр Азр С1и Азр Тгр
130 135 140
□1и Азр Зег ТЬг Зег βΐη <31у С1П Нхз Ьеи Агд РЬе Рго Азр С1у Ьуз
145 150 155 160
Рго РЬе Рго Агд Рго Ηϊβ <31у Агд Ьуз Ьуз Тгр Азп РЬе Уа1 Туг Уа1
165 170 175
РЬе Нхз ТЫ Ьеи <31 у С1п Туг РЬе С1п Ьуз Ьеи <51у Агд Суз Зег А1а
180 185 190
Агд Уа1 Зег Не Азп ТЬг Уа1 Азп Ьеи ТЬг Уа1 С1у Рго С1п Уа1 Мес
195 200 205
<31и Уа1 Не Уа1 РЬе Агд Агд Н18 С1у Агд А1а Туг Не Рго Не Зег
210 215 220
Ьуз νβΐ Ьуз Азр Уа1 Туг Уа1 Не ТЫ Авр С1п Не Рго Не РЬе Уа1
225 230 235 240
ТЫ МеС Туг С1п Ьуз Азп Азр Агд Азп Зег Зег Азр С1и ТЬг РЬе Ьеи
245 250 255
Агд Азр Ьеи Рго Не РЬе РЬе Азр Уа1 Ьеи Не Нхз Азр Рго Зег Нхз
260 265 270
РЬе Ьеи Азп Туг Зег А1а Не Зег Туг Ьуз Тгр Азп РЬе <31у Авр Азп
275 280 2В5
ТЬг С1у Ьеи РЬе Уа1 Зег Азп Азп Нхз ТЬг Ьеи Азп Нхз ТЬг Туг Уа1
290 295 300
Ьеи Азп С1у ТЫ РЬе Азп РЬе АЗП Ьеи ТЬг ν<ι С1п ТЬг А1а Уа1 Рго
305 310 315 320
С1у Рго Суз Рго Зег РГО ТЬг Рго Зег Рго Зег Зег Зег ТЬг 5ег Рго
325 330 335
5ег Рго А1а Зег Зег РГО Зег Рго ТЬг Ьеи Зег ТЬг Рго Зег Рго Зег
340 345 350
Ьеи мес Рго ТЬг С1у Нхз Ьуз Зег Мес С1и Ьеи Зег Азр Не Зег Азп
355 360 365
С1и Азп Суз Агд Не Азп Агд Туг <31у туг РЬе Агд А1а ТЬг Не ТЬг
370 375 380
Не Уа1 Азр С1у Не Ьеи С1и ν*ι Азп Не Не С1п Уа1 А1а Азр 7а1
385 390 395 400
Рго Не Рго ТЬг Рго <31п Рго Азр АЗП Зег Ьеи мес Азр РЬе Не Уа1
405 410 415
ТЬг Суз Ьуз С1у А1а ТЫ Рго ТЬг <51и А1а Суз ТЬг Не Не 5ег Азр
420 425 430
Рго ТЬг Суз С1п Не А1а С1п Азп Агд Уа1 Суз Зег Рго Уа1 А1а νβΐ
435 440 445
Азр С1и Ьеи Суз Ьеи Ьеи Зег Уа1 Агд Агд А1а РЬе Азп С1у Зег С1у
450 455 460
ТЬг Туг Суз Уа1 Азп РЬе ТЬг Ьеи О1у Азр Авр А1а Зег Ьеи А1а Ьеи
465 470 475 480
ТЬг Зег А1а Ьеи Не Зег. Не Рго С1у Ьуз Азр Ьеи (31у Зег Рго Ьеи
485 490 495
Агд ТЬг Уа1 Азп С1у Уа1 Ьеи Не Зег Не <?1у Суз Ьеи А1а Мес РЬе
500 505 510
Уа1 ТЬг МеС Уа1 ТЬг Не Ьеи Ьеи Туг Ьуз Ьуз Н1з Ьув ТЬг туг ьуз
515 520 525
Рго Не □1у Азп Суз ТЬг Агд Азп Уа1 ν«ι Ьуз <31у Ьуз С1у Ьеи зег
530 535 540
ν«ι РЬе Ьеи Зег Нхз А1а Ьуз А1а Рго РЬе Зег Агд С1у Азр Агд С1и
545 550 555 560
Ьуз Азр Рго Ьеи Ьеи С1п Азр Ьуз Рго Тгр Мес Ьеи
565 570
(2) Данные последовательности 8Е(} ю
Νο:6: (ί) Характеристики последовательности:
(A) Длина: 1795 пар оснований (B) Тип: нуклеиновая кислота (C) Цепочечность: одно цепочечная (ϋ) Топология: линейная (и) Тип молекулы: кДНК (ίχ) Отличительный признак:
(A) Имя/Ключ: СЭ § (B) Локализация: 278..1279 (χί) Описание последовательности 8Е0 Ю Νο:6:
ССССССЗСЗТ СЗАСЗААЗСТ СЗЗААЗТСАС ССССТСТТТС ТСТЗСЗСАСС ТГТСССТСТС 60
СТТТССААСЗ САСАСАССТС ТСАЗСТССАС ЗЗААСТААСА САССТСТСАА ССССТТАТАТ 120 СТССТСТТСТ СТСАТТТССА ССАСАССАСС СТСАТАТСАА ТСААССААСТ СССТСААААС 1в0 АТААЗТТЗСА АТСТЗАЗАТТ ТААЗАСТТЗА ТСАСАТАССА ТСТССТЗСАС ЗСТАССААСС 240
АСССТСТСТС СТСАТТТТСС ТТСАЗЗСТСА ТСССАТА АТС САТ ССТ САА СТС СТС Мес Нхз Рго С1п Уа1 Уа1 5
АТС Не ТТА АСС СТС АТС СТА САТ Н15 СТС ССА САТ ТСТ СТА ССТ ССТ ТСТ СТА
Ьеи Зег Ьеи 10 Х1е Ьеи Ьеи А1а 15 Азр Зег Уа1 А1а С1у Зег ν<1 20
ААС СТТ ССТ ССА САС ССА ССТ ССА ТСТ СТС АСА СТА ССС ТСС САС ТАС
Ьуз Уа1 С1у С1у С1и А1а С1у Рго Зег Уа1 ТЬГ Ьеи Рго Суз Н13 Туг
25 30 35
АСТ ССА ССТ СТС АСА ТСА АТС тсс ТСС ААТ АСА ССС ТСА ТОТ ТСТ СТА
Зег С1у А1а Уа1 ТЬг Зег Мес Суз тгр Азп Агд С1у Зег Суз Зег Ьеи
40 45 50
ТТС АСА ТСС САА ААТ ССС АТТ СТС тсс АСС ААТ ССА АСС САС СТС АСС
РЬе ТЬг Суз С1п Азп С1у 11е νβΐ тгр ТЫ АЗП С1у ТЫ ΗΪ3 ν<ι ТЫ
55 60 65 70
ТАТ ССС ААС САС АСА ССС ТАТ ААС СТА ТТС ССС САС СТТ ТСА АЗА АЗС
Туг Агд Ьуз Азр ТЫ Агд Туг Ьуз ьеи Ьеи С1у Азр Ьеи Зег Агд Агд
75 80 85
ЗАТ ЗТС ТСТ ТТС АСС АТА САА ААТ АСА ССТ СТС ТСТ САС АСТ ССС ЭТА
Аар ν*1 зег Ьеи ТЬг Х1е С1и АЗП ТЬг А1а Уа1 Зег Авр Зег С1у Уа1
90 95 100
ТАТ ТОТ ТСС ССТ СТТ САС САС ССТ ССС ТСС ТТС ААТ САС АТС ААА АТС
Туг Суз Суз Агд ν<1 С1и Н18 Агд С1у Тгр РЬе АЗП Азр мее Ьуз Х1е
105 110 115
АСС СТА ТСА ТТС САС АТТ СТС ССА ССС ААС СТС АСС АСТ АСТ ССА АТТ
ТЬг νβΐ Зег Ьеи С1и Х1е Уа1 Рго Рго Ьуз νβΐ ТЫ ТЬг ТЫ Рго Х1е
120 125 130
СТС АСА АСТ ОТТ ССА АСС СТС АСС АСТ СТТ ССА АСС АСС АСС АСТ СТТ
ν<1 ТЬг ТЬг V*! Рго ТЬг νβΐ ТЬг ТЬг Уа1 Агд ТЬГ Зег ТЫ ТЫ Уа1
135 14 0 145 150
ССА АСС АСА АСС АСТ СТТ ССА АСС АСА АСТ СТТ ССА АСА АСА АТС АСС
Рго ТЬг ТЬг ТЬг ТЬг Уа1 РГО ТЬг ТЬг ТЬг Уа1 РГО ТЫ ТЫ Мес 5ег
155 160 165
АТТ ССА АСС АСА АСС АСТ СТТ ССС АСС АСА АТС АСТ СТТ ТСА АСС АСА
Х1е Рго ТЬг ТЬг ТЬг ТЬг Уа1 Рго ТЬг ТЬг Мег ТЫ V»! Зег ТЬг ТЬг
170 175 180
АСЗ АСС СТТ ССА АСС АСА АСС АСС АТТ ССА АСА АСА АСА АСТ СТТ ССА
ТЫ Зег Уа1 Рго ТЬг ТЬг ТЬг Зег 11е РГО ТЫ ТЬг ТЫ Зег V»! Рго
185 190 195
ЗТС АСА АСА АСС СТС ТС V АСС ТТТ СТТ ССТ ССА АТС ССТ ТТС ССС АСС
ν<ι ТЬг ТЬг ТЫ Уа1 Зег ТЬг РЬе ν>ι Рго Рго мег Рго Ьеи Рго Агд
200 205 210
САЗ ААС САТ САА ССА СТА ССС АСТ ТСА ССА ТСТ ТСА ССТ САС ССА ССА
С1п Азп Ηίί О1и Рго V*! А1а ТЬг Зег Рго Зег Зег Рго С1п Рго А1а
215 220 225 230
САА АСС САС ССТ АСС АСА СТС САС ССА ССА АТА АЭС АСА САА ССС АСС
31и ТЬг Н1В Рго ТЬг ТЬг Ьеи С1п С1у А1а 11е Агд Агд С1и Рго ТЫ
235 240 245
АСС ТСА ССА ТТС ТАС ТСТ ТАС АСА АСА САТ ССС ААТ САС АСС СТС АСА
Зег зег Рго Ьеи Туг Зег Туг ТЫ ТЫ Азр С1у Азп Азр ТЬг Уа1 ТЬг
250 255 260
САЗ ТСТ ТСА САТ ССС СТТ ТСС ААТ ААС ААТ САА АСТ САА СТС ТТС СТА
С1и Зег Зег Азр С1у Ьеи Тгр Азп Азп Азп С1п ТЫ С1п Ьеи РЬе Ьеи
265 270 275
САА САТ АСТ СТА СТС АСС ССС ААТ АСС АСТ ААА ССА АТС ТАТ ССТ ССА
С1и ЙХЗ Зег Ьеи Ьеи ТЬг А1а Азп ТЬг тьг Ьуз С1у 11е Туг А1а С1у
280 285 290
СТС ТСТ АТТ ТСТ СТС ТТС СТС СТТ СТТ ССТ СТТ ТТС ССТ СТС АТС АТТ
ν·1 Суз Х1е Зег ν®ι Ьеи ν<ι Ьеи Ьеи А1а Ьеи Ьеи С1у νβΐ 11е Х1е
295 300 305 310
ЗСС ААА ААС ТАТ ТТС ТТС ААА ААС САС СТТ САА САА СТА АСА ССС САТ
А1а Ьуз Ьув Туг РЬе РЬе Ьуз Ьуз С1и Уа1 С1п С1п Ьеи Агд Рго Н1В
315 320 325
ААА ТСС ТЗТ АТА САТ САА АСА САА ТАСТСССТСС АААСАТАССА ААТСААСТТС
Ьуз 5ег Суз Не Нхз С1п Агд С1и 330
ТАТСТТСЗСС АТСАСАССТЗ ТССАСААСАЗ
АССТЗАСАСТ ТСАТТТССАА ССАТТЗТАТЗ
ААТСТТССАТ ТТССТАТЗТТ ТТССАААЗЗТ
СЗСАААСААА СТЗАСТСТАА СТСАСАССТГ
АТЗСАТТААЗ ТАСТССАТСТ СТСААТТЗСС
АТАСТАТССА АСАСАТАЗАС АССАЗССЗАА
ЗЗЗААТСТСТ СТТАААААСС АССАААТССА АТТАТСТСГГ СТТТСТАТСТ ТАТАСТТССА ТТСАААТСОТ ЗСЗТТТТТАТ ТТССТССЗТЗ ТАССТСТТТТ СТСАТААСТС ТССАААТСТС ЗТАССТСТТТ ТАССАСТТАА АСАСССТАСА СААААТСАТТ ТЗССАЗЗТЗА ТТТААСАТАТ
ТТАТЗСААТТ ТТ'
ТТТ ТТТТТОАСАТ ЗЗАЗСТТТЗС
ТСТТСТТССС САЗССТЗСАС
ТЗСЗАТЗСТЗ АААТСТСЗЗС ТСАСТСТААС СТССАССТТС ССССТТСААС
295
343
391
439
487
535
583
631
679
727
775
823
871
919
967
1015
ЮбЗ
1111
1159
1207
1255
1309
1369
1429
1489
1549
1609
1669
1729
1789
СААТТСТССС (2) Данные последовательности §Εζ) Ю Νο:7: (ί) Характеристики последовательности:
(A) Длина: 334 аминокислоты (B) Тип: аминокислотная (ϋ) Топология: линейная (и) Тип молекулы: белок (χί) Описание последовательности §Εζ) Ю
Νο:7:
Мес 1 Н1з Рго С1п Уа1 5 ν*ι Не Ьеи Зег Ьеи 10 Не Ьеи ΗΪ5 Ьеи А1а 15 Азр
Зег Уа1 А1а в1у 20 Зег νβΐ Ьуе Уа1 <31у <31у 25 С1и А1а <31у Рго 30 Зег Уа1
ТЫ Ьеи Рго 35 Суз Нхз Туг Зег <31у 40 А1а Уа1 ТЫ зег Меъ 45 Суз Тгр Азп
Агд С1у 50 Зег Суз Зег Ьеи РЬе 55 ТЬг Суз С1п Азп С1у 60 11е νβΐ Тгр ТЫ
Азп 65 <31у ТНг НХ8 Уа1 ТЫ 70 Туг Агд ьуз Азр ТЫ 75 Агд Туг Ьуз Ьеи Ьеи 80
С1у Азр Ъеи Зег Агд Агд Азр νβΐ Зег Ьеи ТЫ 11е (Ни Азп ТЫ А1а
85 90 95
Уа1 Зег Авр Зег в1у Уа1 Туг Суз Суа Агд Уа1 С1и Н13 Агд С1у Тгр
100 105 110
РЬе Азп Азр Меь Ьуз Не ты Уа1 Зег Ьеи С1и Не Уа1 Рго Рго Ьуз
115 12 0 125
Уа1 ТЫ ТЫ ТЫ ₽го 11е ν»ι ты ты Уа1 Рго ТЫ Уа1 ТЫ ТЫ Уа1
130 135 140
Агд ты Зег ты ТЫ 7а1 Рго ты ты ТЬг ТЬг Уа1 Рго ты ты ты
145 150 155 160
Уа1 Рго ТЫ ты МеС Зег Не Рго ТЬг ТЫ ТЫ ТЫ Уа1 Рго ты ты
16 5 170 175
МеС ты νβΐ Зег ТЫ ТЫ ТЫ Зег Уа1 Рго ты ты ТЫ Зег Не Рго
160 185 190
ТЫ ТЬг ТЫ Зег νβΐ Рго Уа1 ТЫ ТЫ ТЫ Уа1 Зег ты РЬе Уа1 Рго
195 200 205
Рго Мес Рго Ьеи Рго Агд С1п Азп Н1з С1и Рго νβΐ А1а ТЫ Зег Рго
210 215 220
Зег Зег Рго С1п Рго А1а £1и ТЫ Н13 Рго ты ТЬг Ьеи С1п <31у А1а
225 230 235 240
11е Агд Агд С1и РГО ТЫ Зег Зег Рго Ьеи Туг Зег Туг ты ТЫ Азр
245 250 255
(Пу Азп Азр ТЫ Уа1 ты С1и Зег Зег Азр С1у Ъеи Тгр Азп Азп Азп
260 265 270
С1п ты (31п Ъеи РЬе Ьеи С1и ΗΪ8 Зег Ьеи Ьеи ТЫ А1а Авп ТЫ ТЫ
275 280 285
Ьуз (31у 11е Туг А1а <31у Уа1 Суз Не 5ег Уа1 Ьеи Уа1 Ьеи Ьеи А1а
290 295 300
Ьеи Ъеи (Ну νβΐ Не 11е А1а Ьуз Ъуз Туг РЬе РЬе Ьуз Ьуз <31и Уа1
305 310 315 320
<31п <31п Ьеи Агд Рго ΗΪ8 Ьуз Зег Суз Не ΗΪ3 С1п Агд <31и
325 330
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (28)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, содержащий аминокислоты 21-290 §Εζ) Ю N0: 7.
  2. 2. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, содержащий аминокислоты 1-290 §Εζ) Ю N0: 7.
  3. 3. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1 или 2, где кодируемый полипептид дополнительно содержит Ес-домен 1§.
  4. 4. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая нуклеотиды 278-1147 §Εζ) Ю N0: 6 или последовательность, комплементарную нуклеотидам 278-1147 §Εζ) Ю N0: 6.
  5. 5. Экспрессирующий ДНК-вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.1 или 2.
  6. 6. Экспрессирующий ДНК-вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.4.
  7. 7. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.5 или 6.
  8. 8. Способ получения полипептида, причем указанный способ предусматривает культивирование клетки-хозяина по п.7 в среде для культивирования клеток и выделение полипептида, экспрессированного вектором в указанной клетке-хозяине.
  9. 9. Выделенный полипептид, содержащий аминокислоты 21-290 8ЕС ΙΌ N0: 7.
  10. 10. Полипептид, содержащий полипептид по п.9 и иммуноглобулин, токсин или меченую группу.
  11. 11. Антитело, специфично связывающееся с полипептидом по п.9.
  12. 12. Антитело по п.11, конъюгированное с токсином или меченой группой.
  13. 13. Способ лечения субъекта с почечным состоянием, выбранным из группы, включающей острую почечную недостаточность, острый нефрит, хроническую почечную недостаточность, нефротический синдром, повреждение почечных канальцев, трансплантацию почки, токсическое повреждение, гипоксическое повреждение, травму, поликистоз почек, ювенильный нефронофтиз и медуллярное губчатое заболевание, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества нуклеиновой кислоты по п. 1 или 2 или вектора по п. 5 или 6.
  14. 14. Способ стимулирования роста новой почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение субъекту терапевтически эффективного количества нуклеиновой кислоты по п. 1 или 2 или вектора по п. 5 или 6.
  15. 15. Способ повышения жизнеспособности поврежденной почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества нуклеиновой кислоты по п.1 или 2 или вектора по п.5 или 6.
  16. 16. Способ по любому из пп.13-15, где указанным субъектом является человек.
  17. 17. Фармацевтическая композиция, включающая физиологически приемлемый носитель, содержащий нуклеиновую кислоту по п.1 или 2 или вектор по п.5 или 6, диспергированные в указанном носителе в терапевтически эффективной концентрации.
  18. 18. Способ оценки наличия или хода восстановления поврежденной почки у субъекта, предусматривающий стадию измерения концентрации нуклеиновой кислоты по п.1 или 2 в моче, сыворотке или мочевом осадке указанного субъекта, страдающего повреждением или заболеванием почек или подвергающегося риску их развития.
  19. 19. Способ визуализации клеток или ткани, продуцирующих полипептид по п.9, предусмат ривающий стадию взаимодействия клеток или ткани с антителом по п.12.
  20. 20. Способ лечения субъекта с почечным состоянием, выбранным из группы, включающей острую почечную недостаточность, острый нефрит, хроническую почечную недостаточность, нефротический синдром, повреждение почечных канальцев, трансплантацию почки, токсическое повреждение, гипоксическое повреждение, травму, поликистоз почек, ювенильный нефронофтиз и медуллярное губчатое заболевание, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества полипептида по п.9.
  21. 21. Способ лечения субъекта с почечным состоянием, выбранным из группы, включающей острую почечную недостаточность, острый нефрит, хроническую почечную недостаточность, нефротический синдром, повреждение почечных канальцев, трансплантацию почки, токсическое повреждение, гипоксическое повреждение, травму, поликистоз почек, ювенильный нефронофтиз и медуллярное губчатое заболевание, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества антитела по п.11 или 12.
  22. 22. Способ стимулирования роста новой почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества полипептида по п.9.
  23. 23. Способ стимулирования роста новой почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества антитела по п.11 или 12.
  24. 24. Способ повышения жизнеспособности поврежденной почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества полипептида по п.9.
  25. 25. Способ повышения жизнеспособности поврежденной почечной ткани у субъекта, предусматривающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества антитела по п.11 или 12.
  26. 26. Фармацевтическая композиция, включающая физиологически приемлемый носитель, содержащий полипептид по п.9, диспергированный в указанном носителе в терапевтически эффективной концентрации.
  27. 27. Фармацевтическая композиция, включающая физиологически приемлемый носитель, содержащий антитело по п. 11 или 12, диспергированные в указанном носителе в терапевтически эффективной концентрации.
  28. 28. Способ оценки наличия или хода восстановления поврежденной почки у субъекта, предусматривающий стадию измерения концентрации полипептида по п.9 в моче, сыворотке или мочевом осадке указанного субъекта, страдающего повреждением или заболеванием почек или подвергающегося риску их развития.
EA199801044A 1996-05-24 1997-05-23 Модуляторы регенерации тканей EA004402B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1822896P 1996-05-24 1996-05-24
US2344296P 1996-08-23 1996-08-23
PCT/US1997/009303 WO1997044460A1 (en) 1996-05-24 1997-05-23 Modulators of tissue regeneration

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA199801044A1 EA199801044A1 (ru) 1999-04-29
EA004402B1 true EA004402B1 (ru) 2004-04-29

Family

ID=26690881

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA199801044A EA004402B1 (ru) 1996-05-24 1997-05-23 Модуляторы регенерации тканей

Country Status (27)

Country Link
US (4) US6664385B1 (ru)
EP (2) EP0907735B9 (ru)
JP (3) JP4602482B2 (ru)
CN (1) CN1147584C (ru)
AT (1) ATE318903T1 (ru)
AU (1) AU712289B2 (ru)
BG (1) BG64678B1 (ru)
BR (1) BR9709115A (ru)
CA (1) CA2257851C (ru)
CZ (1) CZ295936B6 (ru)
DE (1) DE69735364T3 (ru)
DK (1) DK0907735T5 (ru)
EA (1) EA004402B1 (ru)
EE (1) EE04817B1 (ru)
ES (1) ES2258793T5 (ru)
HK (1) HK1021746A1 (ru)
HU (1) HU226205B1 (ru)
IL (1) IL127162A (ru)
IS (1) IS2636B (ru)
NO (2) NO327597B1 (ru)
NZ (1) NZ336467A (ru)
PL (1) PL188826B1 (ru)
PT (1) PT907735E (ru)
SI (1) SI0907735T2 (ru)
SK (1) SK285461B6 (ru)
TR (1) TR199802421T2 (ru)
WO (1) WO1997044460A1 (ru)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU226205B1 (en) * 1996-05-24 2008-06-30 Biogen Idec Ma Modulators of tissue regeneration
AU7592998A (en) * 1997-05-23 1998-12-11 Biogen, Inc. Modulators of tissue regeneration
CA2513336A1 (en) 1998-03-20 1999-09-30 Benitec Australia Ltd. Control of gene expression in a non-human eukaryotic cell, tissue or organ
AUPP249298A0 (en) 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
US6423885B1 (en) 1999-08-13 2002-07-23 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells
EP1160321A1 (en) * 2000-05-31 2001-12-05 Sanofi-Synthelabo Kidney Injury Novel Gene-1: Isolation and therapeutic applications
US7179901B2 (en) 2000-06-16 2007-02-20 Biogen Idec Ma Inc. Renal regulatory elements and methods of use thereof
US6812002B2 (en) * 2000-08-30 2004-11-02 Pfizer Inc. Osteoactivin protein and nucleic acids encoding the same, compositions and methods of stimulating bone differentiation
ATE382060T1 (de) * 2001-06-01 2008-01-15 Biogen Idec Inc Moleküle und verfahren zur inhibierung der freisetzung von kim-1
US8709412B2 (en) 2001-06-29 2014-04-29 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Modulation of TIM receptor activity in combination with cytoreductive therapy
US7553939B2 (en) * 2001-06-29 2009-06-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University T cell regulatory genes and methods of use thereof
EP1576169B1 (en) * 2002-03-19 2016-08-10 Celldex Therapeutics, Inc. Therapeutic polypeptides and methods of use
JP4689275B2 (ja) * 2002-12-30 2011-05-25 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド Ｋｉｍ−１アンタゴニストおよび免疫系を調節するための使用
ES2557769T3 (es) * 2003-03-19 2016-01-28 Amgen Fremont Inc. Anticuerpos contra el antígeno del dominio de inmunoglobulina de células T y el dominio 1 de mucina (TIM-1) y usos de los mismos
WO2004088276A2 (en) * 2003-03-27 2004-10-14 Children's Hospital Medical Center A method and kit for detecting the early onset of renal tubular cell injury
CA2565701A1 (en) 2004-05-06 2005-11-17 Jonathan M. Barasch Ngal for reduction and amelioration of ischemic and nephrotoxic injuries
US20050272101A1 (en) * 2004-06-07 2005-12-08 Prasad Devarajan Method for the early detection of renal injury
RU2283666C9 (ru) * 2004-05-14 2007-03-10 Бизяев Алексей Вячеславович Средство для активации восстановления структуры и функции поврежденных тканей и органов
US20060003345A1 (en) * 2004-06-30 2006-01-05 Pfizer Inc RNA bioassay
DK2128625T3 (en) * 2004-12-20 2017-05-01 Antibodyshop As Determination of neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) as a diagnostic marker for renal disorders
ATE478707T1 (de) 2005-03-02 2010-09-15 Biogen Idec Inc Kim-1-antikörper zur behandlung von th2- vermittelten erkrankungen
US20070037232A1 (en) * 2005-03-31 2007-02-15 Barasch Jonathan M Detection of NGAL in chronic renal disease
US20080090304A1 (en) * 2006-10-13 2008-04-17 Barasch Jonathan Matthew Diagnosis and monitoring of chronic renal disease using ngal
CA2629453C (en) 2005-11-10 2018-03-06 Curagen Corporation Method of treating ovarian and renal cancer using antibodies against t cell immunoglobulin domain and mucin domain 1 (tim-1) antigen
EP2035835B1 (en) 2006-05-30 2011-12-28 Antibodyshop A/S Methods for rapid assessment of severity of a trauma
US20100210031A2 (en) * 2006-08-07 2010-08-19 Antibodyshop A/S Diagnostic Test to Exclude Significant Renal Injury
US8313919B2 (en) * 2007-03-21 2012-11-20 Bioporto Diagnostics A/S Diagnostic test for renal injury
US8846036B2 (en) 2007-10-19 2014-09-30 Abbott Laboratories Antibodies that bind to mammalian NGAL and uses thereof
US20090297479A1 (en) * 2008-03-28 2009-12-03 Kiyoshi Ariizumi Dc-hil conjugates for treatment of t-cell disorders
KR20110073471A (ko) * 2008-08-28 2011-06-29 아스튜트 메디컬 인코포레이티드 신손상 및 신부전의 진단 및 예후를 위한 방법 및 조성물
EP2324354B1 (en) * 2008-08-29 2014-07-16 Astute Medical, Inc. Methods for prognosis of acute renal failure
EP3246707B1 (en) 2008-10-21 2020-09-30 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
EP2347260A4 (en) * 2008-10-21 2012-09-26 Astute Medical Inc METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE DIAGNOSIS AND PROGNOSIS OF RENAL INJURY AND RENAL FAILURE
CN104330574B (zh) 2008-11-10 2017-04-12 阿斯图特医药公司 用于诊断和预后肾损伤和肾衰竭的方法和组合物
NZ592552A (en) * 2008-11-22 2013-12-20 Astute Medical Inc Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
WO2010085878A1 (en) * 2009-01-28 2010-08-05 Industrial Technology Research Institute Biomarkers associated with nephropathy
US9229010B2 (en) 2009-02-06 2016-01-05 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
WO2011017654A1 (en) 2009-08-07 2011-02-10 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
EP2462446B1 (en) * 2009-08-07 2017-09-27 Astute Medical, Inc. Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
JP2013510322A (ja) 2009-11-07 2013-03-21 アスチュート メディカル，インコーポレイテッド 腎損傷および腎不全の診断および予後診断のための方法ならびに組成物
CN102725636B (zh) 2009-12-20 2015-04-01 阿斯图特医药公司 用于肾损伤和肾衰竭的诊断及预后的方法和组合物
BR112012019542A2 (pt) 2010-02-05 2018-03-27 Astute Medical Inc "método para avaliar o estado renal em um indivíduo, medição de um ou mais biomarcadores, e, kit"
EA201290711A1 (ru) 2010-02-26 2013-10-30 Астьют Медикал, Инк. Способы и композиции для диагностики и прогнозирования повреждений почек и почечной недостаточности
WO2011149962A1 (en) 2010-05-24 2011-12-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Mutant ngal proteins and uses thereof
NZ703055A (en) 2010-06-23 2016-07-29 Astute Medical Inc Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
NZ605698A (en) 2010-06-23 2015-03-27 Astute Medical Inc Methods and compositions for diagnosis and prognosis of renal injury and renal failure
BR112013020312B1 (pt) * 2011-02-09 2021-03-23 Synbiotics Ab Composições simbióticas para restauração e reconstituição da microbiota intestinal
EP2788759B1 (en) 2011-12-08 2019-02-20 Astute Medical, Inc. Methods and uses for diagnosis of renal injury and renal failure
WO2014081980A2 (en) 2012-11-21 2014-05-30 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Mutant ngal proteins and uses thereof
ES2681955T3 (es) 2013-01-17 2018-09-17 Astute Medical, Inc. Métodos y composiciones para el diagnóstico y pronóstico de lesión renal e insuficiencia renal
US10420337B2 (en) 2013-03-15 2019-09-24 Lifeline Scientific, Inc. Transporter with a glucose sensor for determining viability of an organ or tissue
WO2015134671A1 (en) 2014-03-04 2015-09-11 Targeson, Inc. Molecular imaging contrast agents and uses thereof
US11243217B2 (en) 2016-06-06 2022-02-08 Astute Medical, Inc. Management of acute kidney injury using insulin-like growth factor-binding protein 7 and tissue inhibitor of metalloproteinase 2

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2003A (en) * 1841-03-12 Improvement in horizontal windivhlls
US5019368A (en) * 1989-02-23 1991-05-28 Cancer Biologics, Inc. Detection of necrotic malignant tissue and associated therapy
GB9122820D0 (en) * 1991-10-28 1991-12-11 Wellcome Found Stabilised antibodies
EP0640094A1 (en) * 1992-04-24 1995-03-01 The Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
CA2166313A1 (en) * 1994-02-14 1995-08-17 John N. Simons Non-a, non-b, non-c, non-d, non-e hepatitis reagents and methods for their use
US5622861A (en) * 1994-08-05 1997-04-22 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant DNA encoding hepatitis A virus receptor
CA2196892A1 (en) * 1994-08-18 1996-02-29 The Trustees Of Columbia University Unique associated kaposi's sarcoma virus sequences and uses thereof
US6069230A (en) * 1994-11-10 2000-05-30 Promega Corporation High level expression and facile purification of proteins, peptides and conjugates for immunization, purification and detection applications
US6066322A (en) * 1995-03-03 2000-05-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of immune disorders
HU226205B1 (en) * 1996-05-24 2008-06-30 Biogen Idec Ma Modulators of tissue regeneration
US7179901B2 (en) * 2000-06-16 2007-02-20 Biogen Idec Ma Inc. Renal regulatory elements and methods of use thereof
ATE382060T1 (de) * 2001-06-01 2008-01-15 Biogen Idec Inc Moleküle und verfahren zur inhibierung der freisetzung von kim-1
US7838220B2 (en) * 2001-06-29 2010-11-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University T cell regulatory genes associated with immune disease
US7553939B2 (en) * 2001-06-29 2009-06-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University T cell regulatory genes and methods of use thereof
US7215871B2 (en) * 2001-07-27 2007-05-08 Thomson Licensing Changing a playback speed for video presentation recorded in a field structure format
US7687454B2 (en) * 2001-12-03 2010-03-30 The University Of British Columbia Effectors of innate immunity determination
EP4091631A1 (en) * 2002-01-30 2022-11-23 The Brigham and Women's Hospital, Inc. A tim-3 binding molecule for use in the treatment of a disease
EP1576169B1 (en) * 2002-03-19 2016-08-10 Celldex Therapeutics, Inc. Therapeutic polypeptides and methods of use
JP4689275B2 (ja) * 2002-12-30 2011-05-25 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド Ｋｉｍ−１アンタゴニストおよび免疫系を調節するための使用
TW200539890A (en) * 2004-03-12 2005-12-16 Brigham & Womens Hospital Methods of modulating immune responses by modulating tim-1, tim-2 and tim-4 function
US20050276756A1 (en) * 2004-03-24 2005-12-15 Hoo William S Compositions as adjuvants to improve immune responses to vaccines and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
JP4602482B2 (ja) 2010-12-22
PL330313A1 (en) 1999-05-10
NZ336467A (en) 2000-10-27
EP0907735B1 (en) 2006-03-01
DE69735364D1 (de) 2006-04-27
CN1147584C (zh) 2004-04-28
JP2008067701A (ja) 2008-03-27
JP4316640B2 (ja) 2009-08-19
US20070141590A1 (en) 2007-06-21
DK0907735T4 (da) 2009-12-21
PL188826B1 (pl) 2005-04-29
WO1997044460A1 (en) 1997-11-27
HU226205B1 (en) 2008-06-30
HUP9902770A3 (en) 2001-09-28
JP2001505761A (ja) 2001-05-08
NO327597B1 (no) 2009-08-31
HK1021746A1 (en) 2000-06-30
HUP9902770A2 (hu) 1999-12-28
EP0907735B9 (en) 2010-05-19
DE69735364T3 (de) 2010-05-06
IS4902A (is) 1998-11-20
EE9800409A (et) 1999-06-15
AU712289B2 (en) 1999-11-04
NO985427L (no) 1999-01-25
EE04817B1 (et) 2007-04-16
ES2258793T3 (es) 2006-09-01
CA2257851A1 (en) 1997-11-27
IL127162A (en) 2007-07-24
PT907735E (pt) 2006-06-30
CZ295936B6 (cs) 2005-12-14
BR9709115A (pt) 1999-08-03
CN1223685A (zh) 1999-07-21
ES2258793T5 (es) 2010-01-25
US20050089868A1 (en) 2005-04-28
JP2009039111A (ja) 2009-02-26
SI0907735T2 (sl) 2010-01-29
AU3567697A (en) 1997-12-09
EP1655367A1 (en) 2006-05-10
IS2636B (is) 2010-06-15
SI0907735T1 (sl) 2006-08-31
US6664385B1 (en) 2003-12-16
DK0907735T3 (da) 2006-06-26
CZ381398A3 (cs) 1999-05-12
EP0907735A1 (en) 1999-04-14
EP0907735B2 (en) 2009-10-07
US20060286031A1 (en) 2006-12-21
NO20090945L (no) 1999-01-25
IL127162A0 (en) 1999-09-22
NO985427D0 (no) 1998-11-20
SK285461B6 (sk) 2007-02-01
CA2257851C (en) 2011-11-15
EA199801044A1 (ru) 1999-04-29
DK0907735T5 (da) 2010-06-14
DE69735364T2 (de) 2006-11-30
SK160998A3 (en) 1999-07-12
BG102967A (bg) 2000-05-31
TR199802421T2 (xx) 1999-02-22
ATE318903T1 (de) 2006-03-15
BG64678B1 (bg) 2005-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA004402B1 (ru) Модуляторы регенерации тканей
KR100587556B1 (ko) 신경 및 신장 증식을 자극하기 위한 ＲＥＴ리간드（ＲｅｔＬ)
KR100499600B1 (ko) 신생 세포 성장을 억제하기 위한 방법 및 조성물
Carson Receptor for the group B coxsackieviruses and adenoviruses: CAR
WO2000053758A2 (en) Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
JPH11513883A (ja) ヒト血管内皮増殖因子２
KR100553300B1 (ko) 혈관신생 및 심혈관형성의 촉진 또는 억제 방법
CA2289906A1 (en) Smad2 phosphorylation and interaction with smad4
JP2003525566A (ja) １２５個のヒト分泌タンパク質
KR100554901B1 (ko) 신경및신장증식을자극하기위한RET리간드(RetL)
KR100498530B1 (ko) 조직재생조절물질
MXPA98009812A (en) Modulators of the regeneration of the tej
US20060116338A1 (en) Mammalian early developmental regulator gene

Legal Events

Date Code Title Description
TC4A Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU