DK1644482T4 - Hidtil ukendt galactooligosaccharidpræparat og fremstillingen deraf - Google Patents
Hidtil ukendt galactooligosaccharidpræparat og fremstillingen deraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK1644482T4 DK1644482T4 DK04743163.0T DK04743163T DK1644482T4 DK 1644482 T4 DK1644482 T4 DK 1644482T4 DK 04743163 T DK04743163 T DK 04743163T DK 1644482 T4 DK1644482 T4 DK 1644482T4
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- gal
- milk
- glc
- mixture
- lactose
- Prior art date
Links
- 235000021255 galacto-oligosaccharides Nutrition 0.000 title claims abstract description 39
- 150000003271 galactooligosaccharides Chemical class 0.000 title claims abstract description 39
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 56
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 26
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims abstract description 24
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 29
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 claims description 19
- 229940002008 bifidobacterium bifidum Drugs 0.000 claims description 19
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 18
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 17
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 16
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 14
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 11
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 11
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 claims description 10
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 claims description 9
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 claims description 9
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 7
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims description 4
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims description 3
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 2
- 235000015895 biscuits Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000012970 cakes Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 2
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 claims description 2
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 2
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 2
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 claims 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims 1
- 235000015496 breakfast cereal Nutrition 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims 1
- 230000036541 health Effects 0.000 abstract description 4
- 244000005706 microflora Species 0.000 abstract description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000754 repressing effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 22
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 21
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 18
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 14
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 13
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 13
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 11
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 10
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 10
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 6
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 5
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 210000004921 distal colon Anatomy 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 5
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 5
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- DLRVVLDZNNYCBX-JZSVMVJISA-N beta-D-Galp-(1->6)-D-Galp Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-JZSVMVJISA-N 0.000 description 4
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 4
- 235000021391 short chain fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- -1 alditol acetates Chemical class 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 3
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 3
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 3
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N (2,3,4,5,6-pentaacetyloxycyclohexyl) acetate Chemical compound CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 2
- 241000933531 Bifidobacterium bifidum NCIMB 41171 Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000004322 Butylated hydroxytoluene Substances 0.000 description 2
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 2
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 2
- 229940095259 butylated hydroxytoluene Drugs 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 2
- 235000021243 milk fat Nutrition 0.000 description 2
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 2
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000001967 plate count agar Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000003239 susceptibility assay Methods 0.000 description 2
- 235000019722 synbiotics Nutrition 0.000 description 2
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- VZQZXAJWZUSYHU-TXPJSTSBSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxy-1-[(3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]hexan-1-one Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(=O)C1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VZQZXAJWZUSYHU-TXPJSTSBSA-N 0.000 description 1
- VZQZXAJWZUSYHU-LKSFBTKESA-N (2r,3s,4s,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxy-1-[(3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]hexan-1-one Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(=O)C1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VZQZXAJWZUSYHU-LKSFBTKESA-N 0.000 description 1
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- CHUGKEQJSLOLHL-UHFFFAOYSA-N 2,2-Bis(bromomethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CBr)CBr CHUGKEQJSLOLHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BUOYTFVLNZIELF-UHFFFAOYSA-N 2-phenyl-1h-indole-4,6-dicarboximidamide Chemical compound N1C2=CC(C(=N)N)=CC(C(N)=N)=C2C=C1C1=CC=CC=C1 BUOYTFVLNZIELF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 241001655328 Bifidobacteriales Species 0.000 description 1
- 241000286268 Bifidobacterium bifidum ATCC 29521 = JCM 1255 = DSM 20456 Species 0.000 description 1
- 206010048909 Boredom Diseases 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 241000252210 Cyprinidae Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000004258 Ethoxyquin Substances 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 206010019133 Hangover Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N L-cysteine hydrochloride Chemical compound Cl.SC[C@H](N)C(O)=O IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010008699 Mucin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000007270 Mucin-4 Human genes 0.000 description 1
- GKXJWSZPLIKUPS-IUNAMMOKSA-N N-[(2Z,6Z)-2,6-bis(hydroxyimino)cyclohexylidene]hydroxylamine Chemical compound O\N=C1\CCC\C(=N\O)C1=NO GKXJWSZPLIKUPS-IUNAMMOKSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 108010079723 Shiga Toxin Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- OKJPEAGHQZHRQV-UHFFFAOYSA-N Triiodomethane Natural products IC(I)I OKJPEAGHQZHRQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 230000000181 anti-adherent effect Effects 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037358 bacterial metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 208000024330 bloating Diseases 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 235000019282 butylated hydroxyanisole Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007809 chemical reaction catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001731 descending colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000019285 ethoxyquin Nutrition 0.000 description 1
- 229940093500 ethoxyquin Drugs 0.000 description 1
- DECIPOUIJURFOJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyquin Chemical compound N1C(C)(C)C=C(C)C2=CC(OCC)=CC=C21 DECIPOUIJURFOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical compound CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 1
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000007366 host health Effects 0.000 description 1
- 244000005702 human microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEFLONBTGZFSGQ-UHFFFAOYSA-N isoglutamine Chemical compound NC(=O)C(N)CCC(O)=O AEFLONBTGZFSGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021140 nondigestible carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000012354 sodium borodeuteride Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N sulfasalazine Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(\N=N\C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N 0.000 description 1
- 229960001940 sulfasalazine Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 1
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
- C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7016—Disaccharides, e.g. lactose, lactulose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/702—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
Description
Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte stammer af Bifidobacterium bifidum, hvilke stammer frembringer en hidtil ukendt galactosidaseenzymaktivitet som er i stand til at omdanne lactose til en hidtil ukendt blanding af galactooligo-saccharider. Galactooligosaccharider er ikke-fordøjelige carbohydrater som er resistente over for fordøjelsesenzymer i pattedyrs mave-tarmkanal men som fermenteres af specifikke tyktarmsbakterier. Opfindelsen angår også anvendelsen af en bifidobakteriestamme til fremstilling af et hidtil ukendt galactooligosaccharid-præparat som er i stand til at fremme bifidobakterievækst i tarmen. Opfindelsen angår også den hidtil ukendte sammensætning af galactooligosaccharid-produkterne.
Den humane tarmflora omfatter patogene, godartede og fordelagtige mikrobielle slægter. Overvægt af førstnævnte kan føre til tarmlidelser som både kan være akutte (fx gastroenteritis) og kroniske (fx inflammatorisk tarmsygdom, irritabel tarmsyndrom og visse tarmcancertyper). Det er blevet forsøgt at påvirke tarmfloraens balance til fordel for fordelagtige mikroorganismer, såsom bifidobakterier-ne, ved at tilføre én eller flere af sådanne mikrobielle stammer til en egnet fødevarebærer. Et sådant levende mikrobielt fødevaretilskud er kendt som et probiotisk middel. Det er imidlertid vanskeligt at garantere levende bakteriers overlevelse i fødevarer, samt efter fordøjelse.
En alternativ tilgang til kostmanipulation af tarmens mikroflora er anvendelsen af et præbiotikum der defineres som en ikke-fordøjelig fødevarebestanddel der på fordelagtig vis påvirker værten ved selektivt at stimulere væksten og/eller aktiviteten af én eller et begrænset antal bakterier i tyktarmen, hvorved der opnås en forbedring af værtens sundhedstilstand.
Den humane tyktarms mikroflora erhverves ved fødsel. Spædbørn der er blevet ammet, har en overvægt af bifidobakterier som let konkurrerer med andre slægter. Dette skyldes at humane mælkekomponenter er stimulerende. I modsætning hertil har spædbørn der har fået modermælkserstatning, en mere kompleks flora der minder om voksnes tarm, idet bakteroider, clostridier, bifidobakterier, lactobaciller, grampositive cocci, coliformer og andre grupper alle er repræsenteret i relativt lige mængder. Bifidobakterier anses generelt som beskyttende i forbindelse med tyktarmsinfektioner, og denne forskel forklarer formentlig den meget lavere forekomst af infektion hos spædbørn der er blevet ammet, i forhold til de børn der har fået modermælkserstatning.
Visse komponenter i tarmfloraen har været impliceret i ætiologien af tarmsygdom. For eksempel er mycobakterier associeret med Crohns sygdom, ulcerøs colitis kan udløses af sulfatreducerende bakterier, og bakterier kan være involveret i udviklingen af tarmcancer. Det ville tydeligvis være en fordel hvis den selektive vækst af medfødte fordelagtige tarmbakterier kunne tilskyndes ved indtagelse af et præbiotikum. Dette ville have den vedvarende effekt at den patogene mikroflora ville blive undertrykt. Én gruppe af forbindelser der er klassificeret som præbiotika, er galactooligo-sacchariderne som er galactoseholdige oligosaccharider af typen Gie α1-4[β Gal l-6]n, hvor n = 2-5, og fremstilles ud fra lactosesirup under anvendelse af β-galactosidaseenzymets transgalactosylaseaktivitet (Crittenden, (1999) Probiotics: A Critical Review. Tannock, G. (red.) Horizon Scientific Press, Wymondham, s. 141-156). Tre produkter er for tiden kommercielt tilgængelige, hvilke produkter har en anelse forskellige sammensætninger. Det første af disse, transgalactosylerede oligosaccharider (TOS), fremstilles under anvendelse af β-galactosidase fra Aspergillus oryzae (Tanaka et al, (1983) Bifidobacteria Microflora. 2, 17-24) og består af tri-, tetra-, penta- og hexa-galacto-oligosaccharider. Det andet er Oligomate 55 som fremstilles under anvendelse af β-galactosidase fra A. oryzae og Streptococcus thermophilus (Ito et al., (1990), Microbial Ecology in Health and Disease. 3, 285-292) og indeholder 36% tri-, tetra-, penta- og hexa-galacto-oligosaccharider, 16% disaccharider galactosyl-glucose og galactosyl-galactose, 38% monosaccharider og 10% lactose. Endeligt fremstilles et transgalactosyleret disaccharid (TD)-præparat under anvendelse af β-galactosidase fra S. thermophilus (Ito et al., (1993) J. Nutritional Science and Vitaminology, 39, 279-288).
Det er kendt at medlemmer af bifidobakterierne frembringer β-galactosidase-enzymer som er involveret i lactoses bakteriemetabolisme. Moller, P.L. et al i Appl. & Environ. Microbiol., (2001),62,(5), 2276-2283 beskriver isoleringen og karakteriseringen af tre β-galactosidasegener fra en stamme af Bifidobacterium bifidum. US-patentpublikation nr. US 2002/0086358 beskriver en hidtil ukendt β-galactosidase fra Bifidobacterium bifidum, især en trunkeret version af enzymet som har en høj transgalactosyleringsaktivitet. Mens det blev fremført at inkubation med lactose kan finde sted i nærværelse af 0,5-60% lactose, var det maksimale eksemplificerede udbytte af galactooligosaccharid som blev opnået i transgalacto-syleringsreaktioner, 44% (mg oligosaccharid frembragt pr. mg tilsat lactose). Endvidere er det ud fra definitionen af oligosaccharid i denne US-patentpublikation åbenlyst at produktet består af mindst tre bundne sukkermolekyler.
Dumortier et al beskriver i Carbohydrate Research, 201, (1990), 115-123 dannelsen af oligosaccharider ved en transgalactosyleringsreaktion under lactosehydrolyse med Bifidobacterium bifidum DSM 20456. Deres analyse af strukturen af den opnåede blanding af oligosaccharider viste at bindingerne var β-(1^3)-, β-(1^·6)- og β-(1-»4)-0^θΙθΛθ5γ^^^βΓ. Dumortier foreslår at forbindelser som er frembragt af Bifidobacterium bifidum, er involveret i bakteriers adhærens i tyktarmen.
Det har nu vist sig at stammer af bifidobakterie ikke alene er i stand til at frembringe galactosidaseenzymaktivitet der omdanner lactose til en blanding af galactooligosaccharider, men også er i stand til at frembringe en galactooligo-saccharidblanding der indeholder op til 35% af disaccharidet galabiose (Gal (al-6)-Gal). Sidstnævnte er kendt (se Paton, J.C. & Paton, A.W. (1989), Clin. Microbiol. Revs.. 11. 450-479; Carlsson, K.A. (1989), Ann. Reviews Biochem.. 58. 309-350.) for at være et antiadhæsivt middel der er i stand til at forebygge adhæsion af toksiner, fx. Shiga-toksin, og patogener, såsom E. coli, til tarmens væg.
Ifølge opfindelsen tilvejebringes der en Bifidobacterium bifidum-stamme som frembringer en galactosidaseenzymaktivitet, hvilken galactosidaseenzymaktivitet omdanner lactose til en galactooligosaccharidblanding der omfatter disaccharid Gal (al-6)-Gal, trisaccharider Gal ^l-6)-Gal ^l-4)-Glc og Gal (βl-3)-Gal ^l-4)-Glc, tetrasaccharid Gal ^l-6)-Gal ^l-6)-Gal ^l-4)-Glc og pentasaccharid Gal (β 1-6)-Gal ^l-6)-Gal ^l-6)-Gal (β1-4)-6Ια Blandingen omfatter fortrinsvis fra 20 til 35 vægt/volumenprocent af disaccharidet, fra 20 til 35 vægt/volumenprocent af trisaccharidet, fra 15 til 25 vægt/volumenprocent af tetrasaccharidet og fra 10 til 20 vægt/volumenprocent af pentasaccharidet.
Udtrykket "enzymaktivitet", er, når det anvendes i forbindelse med galactosidase-enzymaktiviteten ifølge den foreliggende opfindelse, den aktivitet som er resultatet af mindst ét galactosidaseenzym.
En Bifidobacterium bifidum-stamme der er i stand til at frembringe en galactosi-daseenzymaktivitet, som omdanner lactose til blandingen af galactooligosacchari-der, som defineret ovenfor, er blevet deponeret under deponeringsnummer NCIMB 41171 på the National Collection of Industrial and Marine Bacteria, Aberdeen, d. 31. marts 2003.
En sådan deponeret Bifidobacterium bifidum-stamme, eller biologisk funktionel ækvivalent deraf, kan anvendes til frembringelse af ovenfor definerede galactooligosaccharidblanding. Blandingen af galactooligosaccharider kan udgøre en del af et produkt til forbedring af tarmens sundhed ved at fremme væksten af bifidobakterier i tarmen, især den oprindelige producerstamme. Et sådant produkt kan være valgt fra gruppen bestående af mælkeprodukter (fx flydende mælk, tørret mælkepulver, såsom sødmælkspulver, skummetmælkspulver, fedtholdige mælkepulvere, vallepulvere, babymælk, is, yoghurt, ost, fermenterede mælkeprodukter), drikkevarer, mad til spædbørn, morgenmadsprodukter, brød, kiks, konfekture, kager, fødevaretilskud, kosttilskud, dyrefoder, fjerkræfoder eller faktisk en hvilken som helst føde- eller drikkevare.
Blandingen af oligosaccharider kan også anvendes til fremstilling af et lægemiddel til forebyggelse af adhæsionen af patogener eller toksiner som er frembragt af patogener til tarmvæggen. Blandingen kan administreres til en patient efter et behandlingsforløb med antibiotikum som ofte ændrer eller endda ødelægger den normale sunde tarmflora, eller efter tarmkirurgi, for således at "genpode" eller genetablere den normale tarmflora som findes i en sund tarm. Blandingen af galactooligosaccharider kan anvendes i kombination med ovennævnte Bifidobacterium bifidum-stamme eller en biologisk funktionel ækvivalent deraf.
Udtrykket "biologisk funktionel ækvivalent" skal betegne en Bifidobacterium bifidum-stamme som er i stand til at frembringe en galactosidaseenzymaktivitet der omdanner lactose til ovenfor definerede blanding af galactooligosaccharider. I overensstemmelse med et andet aspekt af opfindelsen tilvejebringes et galactooligosaccharidpræparat til fremme af vækst af bifidobakterier, hvilket præparat som effektive bestanddele omfatter ovennævnte galactooligosaccharid-blanding.
Galactooligosacharidpræparatet omfatter fortrinsvis fra 20 til 35 vægt/volumen-procent af disaccharidet, fra 20 til 35 vægt/volumenprocent af trisaccharidet, fra 15 til 25 vægt/volumenprocent af tetrasaccharidet og fra 10 til 20 vægt/volumenprocent af pentasaccharidet. I overensstemmelse med et yderligere aspekt af opfindelsen tilvejebringes en fremgangsmåde til fremstilling af et stof til fremme af væksten af bifidobakterier, hvilken fremgangsmåde er karakteriseret ved at lactose eller et lactoseholdigt materiale behandles med en ovenfor defineret stamme af Bifidobacterium bifidum.
Egnet lactoseholdigt materiale kan vælges blandt kommercielt tilgængeligt lactose, sødmælk, letmælk, skummetmælk, valle og fedtholdig mælk. Sådanne mælkeprodukter kan opnås fra køer, bøfler, får eller geder. Fedtholdig mælk defineres som sødmælk der er skummet for at fjerne mælkefedtet, hvilket mælkefedt efterfølgende erstattes ved tilsætning af vegetabilsk fedt eller olie.
Under anvendelse af vækstmedier beriget med andre carbohydratsubstrater end lactose har det vist sig at Bifidobacterium bifidum ifølge opfindelsen kan anvende maltose, raffinose, xylan og fruktose. Dyrkning af bakterierne i medium beriget med ét af disse carbohydrater inducerede ekspressionen af henholdsvis a-glucosidase, α-galactosidase, xylosidase og β-fructofuranosidase og resulterede således i frembringelsen af henholdsvis α-glucooligosaccharider, a-galactooligo-saccharider, xylooligosaccharider og fructooligosaccharider. I en undersøgelse der førte til den foreliggende opfindelse, blev tarm-afledte bakterier screenet for evnen til at frembringe galactosidase og således have det største potentiale for at frembringe galactooligosaccharid(er). Som resultat viste det sig at visse bakterier der tilhører Bifidobacterium-slægten, især Bifdobacterium bifidum, ikke alene var i stand til at frembringe en galactosidaseenzymaktivitet men også at enzymet kunne omdanne lactose til en galactooligosaccharidblanding omfattende fra 20 til 35 vægt/volumenprocent af et disaccharid, fra 20 til 35 vægt/volumenprocent af et trisaccharider, fra 15 til 25 vægt/volumenprocent af et tetrasaccharid, fra 10 til 20 vægt/volumenprocent af et pentasaccharid. Et specifikt eksempel på Bifidobacterium bifidum blev deponeret d. 31. marts 2003 på NCIMB, Aberdeen under deponeringsnummer 41171.
Til dyrkning af disse bakterier kan en hvilken som helst næringskilde anvendes, forudsat at den kan assimileres af bakterierne. Egnede dyrkningsmedier kan formuleres med eksempelvis carbohydrater, såsom lactose, saccharose eller glucose; nitrogenholdige uorganiske eller organiske næringskilder, såsom gærekstrakt, trypton, kødekstrakt (Lab Lemco) og lignende; uorganiske næringskilder, såsom phosphater, kalium og lignende. Til dyrkning bør næringsmediets pH-værdi ligge i intervallet fra 6,0 til 8,0, fortrinsvis 7,0, og dyrkning foregår anaerobt ved et temperaturinterval på fra 35° til 40°C, fortrinsvis 37°C, i fra 40 til 64 timer, fortrinsvis 50 timer.
Stammen kan dyrkes ved en hvilken som helst af de kendte dyrkningsfremgangsmåder, såsom kultur i stationær fase, ved nedsænket anaerob kultur eller rystekultur. Bakteriecellerne høstes ved centrifugering eller filtrering, og cellerne kan som sådan anvendes som reaktionskatalysator uden yderligere behandling. Alternativt kan cellerne anvendes i en immobiliseret tilstand ved en egnet immobiliseringsfremgangsmåde.
Bifidobacterium bifidum ifølge opfindelsen kan anvendes til at omdanne lactose i sig selv eller lactose indeholdt i et mælkeprodukt til det hidtil ukendte galactooligo-saccharidpræparat ifølge opfindelsen. Efter omdannelse kan bakteriecellerne fjernes ved centrifugering. Et hvilket som helst forekommende monosaccharid kan fjernes ved eksempelvis at anvende inkubation med Saccharomvces cerevisiae-gæren. Blandingen kan så efterfølgende underkastes centrifugering og mikrofiltrering. Den resulterende GOS-opløsning kan derefter spray-tørres til fremstilling af et pulver. Mælk der indeholder galactooligosaccharidpræparatet ifølge opfindelsen som er fremstillet på denne måde, kan administreres direkte til børn, voksne eller dyr. Alternativt kan det anvendes til fremstilling af produkter såsom brød, konfekture eller lignende, hvor galactooligosaccharidernes stabilitet under sure og høje temperaturbetingelser muliggør anvendelse uden nedbrydning. Alternativt kan GOS-pulveret tilsættes til et ovenfor nævnt produkt. GOS-pulveret kan administreres til patienter der lider af tarmsygdomme, såsom inflammatorisk tarmsygdom og irritabel tarmsyndrom, i hvilket tilfælde patienten kan indtage en daglig dosis på fra 2 til 20 g, fortrinsvis 5 til 10 g, især 7 g, indtaget i to særskilte doser.
Alternativt kan galactooligosaccharidpræparatet ifølge opfindelsen blandes med en Bifidobacterium bifidum-kultur ifølge opfindelsen til fremstilling afen blanding til forbedring af tarmsundhed. En sådan blanding klassificeres som et synbiotikum, hvilket synbiotikum defineres som "en blanding af probiotikum og præbiotikum der på fordelagtig vis indvirker på værten ved at forbedre overlevelse og implantation af levende mikrobielt kosttilskud i Gi-kanalen" (se Gibson og Roberfroid, 1995, Dietary modulation of the human microbiota: introducing the concept of prebiotics. Journal of Nutrition 125, 1401-1412). En sådan kombination fremmer overlevelsen af probiotikaene i det fjendtlige miljø i tyktarmen ved at frembyde et tilgængeligt selektivt substrat. Det bakterielle probiotikum kan mikroindkapsles i galactooligosaccharid-præbiotikaet til opnåelse af eksempelvis et pulver, hvilket pulver derefter kan tilsættes til mælkeprodukter, såsom yoghurt, eller anvendes som et kosttilskud.
Fordelen ved at indtage mælk eller andre produkter der indeholder galactooligo-saccharidpræparatet ifølge opfindelsen, er at det fremmer en stigning i niveauet af fordelagtige bifidobakterier i tarmen, på bekostning af andre mindre ønskelige bakterier i tarmens mikroflora, såsom clostridierne. Der er således et fald i visse medfødte bakterier, der kunne have en skadelig virkning på individets sundhedstilstand. Dette ville så resultere i en reduktion af mave-tarmkanalinfektioner. Det bidrager til at forhindre eller behandle colitis, forkorter diaréepisoder og reducerer risikoen for kronisk tarmsygdom, såsom ulcerøs colitis og cancer. Det kan også bidrage til at afhjælpe symptomer på irritabel tarmsyndrom.
Husdyr der fodres med et foder tilsat galactooligosaccharidpræparatet ifølge opfindelsen, fx i pulverform, kan udvise en forbedret vægtomdannelse af deres foder.
Den foreliggende opfindelse vil yderligere blive beskrevet ved hjælp af de følgende eksempler. EKSEMPEL 1 1 I medium (pH 7,0) indeholdende 10,0 g/l trypton, 5,0 g/l Lab-LEMCO (kødekstrakt), 5,0 g/l gærekstrakt, 3,0 g/l K HPO, 0,05 g/l cystein HCL, 10 g/l lactose og 1 ml/l Tween 80 blev steriliseret ved 121°C i 15 min. Efter sterilisation blev mediet inokuleret med 1,0% (volumen/volumen) af en frisk Bifidobacterium bifidum NCIMB 41171-kultur og inkuberet under anaerobe betingelser ved 37°C i 50 timer. Bakteriecellerne blev høstet ved centrifugering (30000 g i 20 min.). Efter at være blevet vasket to gange med phosphatbuffer (0,02M, pH 7,0), var cellerne klar til at blive anvendt i oligosaccharidsyntesereaktioner.
Bakteriecellerne (40 enheder β-galactosidaseaktivitet) blev resuspenderet i 100 ml phosphatbuffer (0,02M, pH 7,0) indeholdende 50 g lactose. Reaktionen lodes forløbe ved 40°C, og efter 7 timer bestod blandingen af 35% (vægt/volumen) hydrolyseprodukter (glucose, galactose), 37% (vægt/volumen) lactose og 18% (vægt/volumen) galactooligosaccharider med en polymeriseringsgrad på mellem 2 og 5. Efter fjernelse af bakteriecellerne ved centrifugering (3000 g i 20 min.) blev monosaccharider (glucose og galactose) fjernet ved inkubation med Saccharomyces cerevisiae-gæren. Gæren blev efterfølgende fjernet ved centrifugering (10000 g i 10 min.), og blandingen blev derefter filtreret gennem et mikrofiltreringsfilter på 0,1 μηη for at sikre produktets mikrobiologiske kvalitet. Sukkeropløsningen blev derefter spray-tørret for at opnå pulverformen. Produkter blev kvantitativt analyseret ved højtryksvæskekromatografi under anvendelse af et Merck-Hitachi LaChrom-system (Merck, Poole, Dorset, UK) udstyret med en APEX Carbohydrate-søjle (Jones Chromatography, Mid Glamorgan, UK) og en Merck-Hitachi LaChrom Ri-detektor. 70% (volumen/volumen) acetonitril blev anvendt som eluent ved 25°C og en strømningshastighed på 0,8 ml/min. Galactooligo-saccharidblandingen bestod af 25% Gal-Gal, 35% Gal-Gal-Glc, 24% Gal-Gal-Gal-Glc og 16% Gal-Gal-Gal-Gal-GIc. EKSEMPEL 2
Bifidobacterium bifidum NCIMB 41171-celler blev fremstillet i overensstemmelse med eksempel 1 og tilsat til 500 ml skummetmælk i et omrørt kar (tilsat 300 enheder β-galactosidaseaktivitet). Lactoseomdannelse lodes forløbe ved 40°C. Efter 8 timer var koncentrationen af galactooligosaccharider 22% (vægt/volumen), og blandingen omfattede 28% Gal-Gal, 32% Gal-Gal-Glc, 21% Gal-Gal-Gal-Glc og 19% Gal-Gal-Gal-Gal-GIc. EKSEMPEL 3 In vitro-tarmmodel
Betingelserne i tyktarmen blev replikeret i en kontinuerlig tretrins-fermenteringsbeholder (Macfarlane et al., 1998, Microbial Ecology, 35, 180-187) og inokuleret med 10% (vægt/volumen) fækalt homogenat fra raske frivillige forsøgspersoner i et vækstmedium uden og med 1% (vægt/volumen) af GOS-blandingen fremstillet i overensstemmelse med eksempel 1 (tabel 2). Modellen bestod af tre beholdere, VI, V2 og V3, med respektive driftsvolumener på 270, 300 og 300 ml. Temperatur blev indstillet til 37°C og blev sammen med pH reguleret automatisk. Kulturens pH-værdi i de tre beholdere blev holdt på henholdsvis 5,5, 6,2 og 6,8. Hver fermenteringsbeholder blev magnetomrørt og holdt under anaerobe betingelser ved kontinuerlig tilførsel af 02-fri N2 (15 ml/min.). Vækstmediet indeholdt følgende bestanddele: stivelse 8 g/l, mucin 4 g/l, casein 3 g/l, peptonvand 5 g/l, tryptonvand 5 g/l, galde N°3 0,4 g/l, gær 4,5 g/l, FeSCU 0,005 g/l, NaCI 4,5 g/l, KCI 4,5 g/l, KH2PO4 0,5 g/l, MgS04.7H20 1,25 g/l, CaCl2.6H20 0,15 g/l, NaHCOs 1,5 g/l, Tween 80 1 ml, Hemin 0,05 g/l, Cystein.HCI 0,8 g/l. Mediet blev tilført til VI ved hjælp af en peristaltisk pumpe, og VI blev sekventielt forsynet med V2 og V3 gennem en række rør. Systemet fungerede ved en retentionstid på ca. 36 timer. Tarmmodellen lodes ækvilibrere natten overfør mediumpumpen blev tændt og kørt i mindst 10 dage før medieholdigt testsubstrat blev indført, og den lodes henstå i yderligere 10 dage. Prøver blev udtaget i starten og slutningen af hver cyklus. Det fjernede prøvevolumen var 5 ml, og denne mængde blev anvendt til bakteriegruppeoptælling.
In s/tu-fluorescenshybridisering (FISH).
Forskelle i bakteriepopulationer blev vurderet via anvendelse af FISH med oligonukleotidprober udformet til at målrette diagnostiske områder i 16S rRNA. Disse blev kommercielt syntetiseret og mærket med fluorescensfarvestof Cy3 (stillet til rådighed af Eurogentec UK Ltd). De anvendte molekylære prober er vist i tabel 1. Til samlede bakterietællinger blev nukleinsyrefarvestof 4,6-diamidino-2-phenylindol (DAPI) anvendt. Prøver opnået fra fermenteringsbeholdere blev fortyndet i 4% (vægt/volumen) paraformaldehyd og fikseret natten over ved 4°C. Cellerne blev derefter centrifugeret ved 1500 x g i 5 minutter, vasket to gange med phosphatbufret saltvand (PBS; 0,1M, pH 7,0), resuspenderet i en blanding af PBS/99% ethanol (1:1 vægt/volumen) og lagret ved -20°C i mindst 1 time. Cellesuspensionen blev derefter tilsat til hybridiseringsblandingen og lodes hybridisere natten over ved den temperatur der er egnet for hver probe. Hybridiseret blanding blev vakuumfiltreret under anvendelse af et Isopore-membranfilter på 0,2 μηη (Millipore Corporation, Herts, UK). Filtret blev fjernet, anbragt på et objektglas med SlowFade (Molecular Probes, Eugan, OR, USA) og undersøgt under et fluorescerende mikroskop (Nicon Eclipse, E400). De DAPI-farvede celler blev undersøgt under UV-lys, og hybridiserede celler blev betragtet under anvendelse af et DM510-filter. For hvert objektglas blev mindst 15 forskellige synsfelter talt.
Tabel 1. Oligonukleotidprober anvendt til karakterisering af tarm-mikroflora under anvendelse af FISH
RESULTATER
Tabel 2. Bakteriepopulationer som bestemt ved FISH i en in vitro-tarmmodel når kommercielt GOS (Vivinal (RTM)) blev anvendt som substrat på 7 g pr. dag.
Tabel 3. Bakteriepopulationer som bestemt ved FISH i en in vitro-tarmmodel når det syntetiserede GOS ifølge den foreliggende opfindelse blev anvendt som substrat på 7 g pr. dag.
KONKLUSION
Af tabel 3 fremgår det at GOS-blandingen ifølge den foreliggende opfindelse udviser bedre præbiotiske egenskaber (dvs. en højere stigning i Bifidobakterier, samt en nedgang i bakteroider) end den kommercielle GOS-ækvivalent (se tabel 2). Den præbiotiske virkning var stærkere i beholder 1 (VI) og 2 (V2), hvilket kan forklares ved det faktum at GOS ifølge den foreliggende opfindelse består af oligosaccharider med lav molekylvægt. EKSEMPEL 4 Methyleringsanalyse
Galactooligosaccharidsynteseprodukter fremstillet i overensstemmelse med eksempel 1 blev oprenset ved gelfiltrering på en søjle af Biogel P2 (Pharmacia) som var elueret ved 3 ml min-1 med vand.
Bindingsstillinger for de respektive galacto-oligosaccharidpræparater blev bestemt ved methyleringsanalyse. De frysetørrede prøver (5-6 mg) blev dispergeret i tør dimethyl-sulfoxid (DMSO) ved 20°C i 16 timer efter gennemskylning med argon.
De blev methyleret ved sekventiel tilsætning af pulverformigt natriumhydroxid (0,5 g) og iodmethan (4 ml) (Ciucanu og Kerek, 1984; MacCormick et al, 1993). Efter elueringsekstraktion på en C18-bundet patron (Sep-Pak, Waters, Watford, UK) blev de methylerede carbohydrater tørret, ekstraheret i CHCI3/CH3OH (1:1, v:v) og inddampet til tørhed. Prøverne blev hydrolyseret under anvendelse af trifluoreddikesyre (Blakeney et al, 1983) og omdannet til delvist methylerede alditolacetater (PMAA'er) ved NaBD4-reduktion og acetylering med eddikesyre-anhydrid og N-methylimidazol (Alberscheim et al, 1967). PMAA'erne blev analyseret ved GC på en krydsbundet 50% cyanopropyl methyl-50% phenylmethylpolysiloxan-søjle (Thames Chromatrography, Maidenhead, UK) under anvendelse af en flammeioniseringsdetektor og et temperaturprogram: 55°C (2 min.), + 45°C min'1 (1,9 min.), 140°C (2 min.), + 2°C min'1^ min.), 210°C (40 min.). PMAA'erne blev identificeret ved at måle deres retentionstider i forhold til myo-inositolhexaacetat og sammenligne de relative retentionstider med eksterne standarder. En blanding af standarder for hvert sukker blev fremstillet ved bevidst methylering af methylglycosider (Doares et al, 1991). Toparealer blev angivet som relative molmængder under anvendelse af effektive carbonrespons-faktorer (Sweet et al, 1975). PMAA'ers identiteter blev bekræftet ved deres elektron-ioniseringsmassespektrum (Carpita og Shia, 1989). GC-MS-analyse blev udført på en identisk GC i serieforbindelse med et Fisons Analytical Trio lS-massespektrometer under anvendelse af en kildetemperatur på 200°C og et ioniseringspotential på 70eV.
For at bestemme synteseproduktets anomere konfiguration blev oligosacchariderne behandlet med α-galactosidase eller β-galactosidase (Melibiase; Sigma) ved de optimale foreslåede betingelser i 30 min. Reaktionsprodukterne blev analyseret ved HPLC.
Resultater
Ud fra ovennævnte analyse blev det beregnet at oligosaccharidstrukturen for tetrasaccharidfraktionen var Gal (β l-6)-Gal (β l-6)-Gal (β l-4)-Glc, for trisaccharidfraktionen Gal (β l-6)-Gal (β l-4)-Glc; Gal (β l-3)-Gal (β l-4)-Glc og for disaccharidfraktionen Gal (β l-4)-Glc (lactosesubstrat); Gal (β l-3)-Glc; Gal (β l-3)-Gal; Gal (β l-6)-Gal; Gal (a l-6)-Gal (galabiose)
Gal: galactose, Glc: glucose
Referencer 1. Albersheim P.D., D.J. Nevins, P.D. English og A. Karr. 1967. A method for the analysis of sugars on plant cell-wall polysaccharides by gas-liquid chromatography. Carbohydr Res 5: 340-345 2. Blakeney A.B., P.J.Harris, R.J. Henry og B.A. Stone. 1983. A simple and rapid preparation of alditol acetates for monosaccharide analysis. Carbohydr Res 113: 291-299 3. Carpita N.C., and E.M. Shia. 1989. Linkage structure of carbohydrates by gas chromatography-mass spectroscopy (GC-MS) for partially methylated alditol acetates, s. 157-216. I C.J. Biermann og G.D. McGinnis (red.), Analysis of carbohydrates by gas-liquid chromatography and mass spectroscopy. CRC Press Poca Raton, Fla. 4. Ciucanu I. og F. Kerek. 1984. A simple and rapid method for the permethyla-tion of carbohydrates. Carbohydr Res 131: 209-217 5. Doares S.H., P. Albersheim og A.G. Darvill. 1991. An improved method for the preparation of standards for the glycosyl-linkage analysis of complex carbohydrates. Carbohydr Res 210: 311-317 6. MacCormick C.A., J.E. Harris, A.P. Cunning og V.J. Morris. 1993. Characterization of a variant of polysaccharide acetan produced by a mutan of Acetobacter xylinumstrain CR 1/4. J Appl Bacteriol 74: 196-199 7. Sweet D.P., R. Shapiro og P. Albersheim. 1975. Quantitative analysis by various GLC response-factor theories for partially methylated and partially ethylated alditol acetates. Carbohydr Res 40: 217-225 EKSEMPEL 5
Materialer og fremgangsmåder HT29-cellelinjen blev opnået fra European Collection of Cell Cultures for Applied Microbiology and Research. Cellestammer blev dyrket ved 37°C i fugtig 5% CO2 i et standardmedium indeholdende Dulbeccos høj-glucose modificerede Eagles medium (DMEM) beriget med 5% (volumen/volumen) føtalt bovint serum (FBS), lOOmM penicillin, 0,1M streptomycin, ikke-essentielle aminosyrer (NEAA xlOO) og 200mM a-glutamin. Celler blev tilført igen hver 48. time og passeret før konfluens blev opnået.
Oligosaccharidsensitivitetsassay
Serum-standardmedium (1% volumen/volumen) beriget med forskellige koncentrationer af oligosaccharider (0,01, 0,1, 1, 10, lOOmM) blev anvendt til oligosaccharidsensitivitetsassay ifølge Olano-Martin et al., 2003). Celler blev igen tilført eksperimentelt medium (indeholdende oligosaccharidet af interesse) dagligt, og måling af adhærente celler blev udført ved at fjerne eksperimentelle medier og afvaske cellerne med Ca++-frit phosphatbufret saltvand (pH 7, 9,6 gi'1). Adhærente celler blev derefter trypsiniseret og neutraliseret med et lige så stort volumen af serum-standardmedium. Cellesuspensionen blev fortyndet i Isoton II, og celler blev talt i en Coulter-tæller. Celleoverlevelsesprocent blev beregnet som følger (figur 1) % overlevelse = (middelabsorbans af behandlede celler/middelabsorbans af kontrol) x 100
Adhæsionsassay HT29-celle blev dyrket i vævskulturplader med 12 brønde til >90% konfluens under anvendelse af standardmedium. Til den sidste celletilførsel før udførelse af assayet blev antibiotika-frit medium anvendt.
Patogener blev dyrket anaerobt i antibiotika-frit celledyrkningsmedium i mindst tre subkulturer. På dagen for assayet blev friskt på forhånd reduceret vævdyrkningsmedium inokuleret med 10% af en kultur der var blevet dyrket natten over og inkuberet i 4 time før assayet.
Stamopløsningen af testoligosacchariderne blev fremstillet i en koncentration på 5M i phosphatbufret saltvand og filtersteriliseret.
En 1/1000-fortynding af patogenkulturen efter 4 timer blev fremstillet i PBS og specificeret ved pladetælling. Mediet blev aspireret fra vævskulturpladen, og cellerne blev vasket én gang med PBS (lml).
Til hvert testoligosaccharid blev 0,5 ml oligosaccharid (5M)-opløsning tilsat til tre brønde. Phospat-bufret saltvand (PBS) uden noget oligosaccharid blev indbefattet som kontrol. 0,5 ml suspensionskultur blev tilsat til alle brønde, pladen blev blandet ved at vugge den og blev inkuberet aerobt ved 37°C i 2 timer.
Kulturen blev aspireret fra, og alle brønde blev vasket tre gange i steril PBS (1 ml pr. brønd). Efter den sidste vask blev PBS aspireret fra, og 70 μΙ trypsin/EDTA-opløsning blev tilsat til hver brønd som blev blandet og lodes henstå i 5 minutter ved 37°C. 1 ml PBS blev tilsat pr. brønd og pipette-blandet for at sikre at alle cellerne var fjernet fra brøndens bund og at klumper var opbrudt. 1 ml af cellesuspensionen blev afpipetteret i en universalkolbe af MRD (Maximum Recovery Diluent) og yderligere fortyndet efter behov. Fortyndinger blev udpladet på pladetællingsagar (PCA) og inkuberet ved 37°C i 24 timer.
Efter inkubering blev kolonier specificeret, og inhibering af adhæsion blev beregnet som forholdet mellem bakterier (c.f.u ml'1) til stede i prøven og kontrollen (PBS) (figur 2).
KONKLUSION
De i figur 2 viste resultater angiver en kraftig inhibering af adhæsion af E. coli-EPEC og S. typhimurium i nærværelse af disaccharidfraktionen, hvilken inhibering også forekommer i GOS-blandingen. Der er en lavere anti-adhæsionsvirkning i nærværelse af den højere end trisaccharid (>tri)-fraktion af blandingen mod S. typhimurium.
Oligosaccharidsensitivitetsassayet udføres for at sikre at oligosaccharidblandingen ikke er toksisk for HT29-cellerne (figur 1).
Referencer
Olano-Martin E., Williams M.R., Gibson G.R., Rastall R.A. 2003. Pectins and pectic-oligosaccharides inhibit Escherichia coli 0157 : H7 Shiga toxin as directed towards the human colonic cell line HT29. FEMS Microbiol Letters 218 (1): 101-105
Figur 1. Virkning på celle-overlevelsesevne ved tilsætning af forskellige oligosaccharidkoncentrationer (0,01-100mM) efter 24 og 48 timers inkubation.
Figur 2. Virkning af oligosaccharidblanding (ALL) og de forskellige fraktioner af blandingen på adhæsionen af E. coli-EPEC, E.coli-VTEC og Salmonella typhimurium til HT29-celler.
EKSEMPEL 6
Det GOS-produkt som blev anvendt i denne undersøgelse, blev fremstillet som tidligere beskrevet (eksempel 1), og inulin blev erhvervet hos Orafti (Belgien).
Fyrre ukastrerede hangrise der var blevet afvænnet, blev erhvervet hos JSR Genetics Ltd, Southburn, Driffeld, Yorkshire. Y025 9ED
Ved ankomsten til Reading University blev grise anbragt i fire grupper å ti grise i en periode på syv dage for at give grisene lov til at falde til ro efter transport og akklimatisere til enheden og kosten. Ved ankomst var grises gennemsnitsvægt 14,70 kg.
Efter en syv-dages akklimatiseringsperiode blev grisene overført til individuel opstaldning inden for den samme enhed. Ved overførslen til individuel opstaldning var grises gennemsnitsvægt 17,46 kg.
Grise blev identificeret ved en unik øretatovering; de blev også nummereret enkeltvis under anvendelse af vandfast besætningsmarkør. Hver individuelle stald blev angivet med det samme identifikationsnummer som blev anvendt til at markere hver gris.
Ti grise blev tildelt ét af fire typer af foder, et kontrol-foder (NEG), foder beriget med 1,6% (vægt/vægt) GOS fremstillet i overensstemmelse med eksempel 1 til kontrol-foderet, foder beriget med 4% (vægt/vægt) GOS til kontrol-foderet eller foderberiget med 1,6% (vægt/vægt) inulin til kontrol-foderet.
Grise gik på underlag af savsmuld gennem hele undersøgelsen, strå blev også tilvejebragt som en miljømæssig berigelse og det samme blev legetøj der skulle afhjælpe kedsomhed.
Gennem hele undersøgelsen modtog grisene Deltawean 15 NGP-pellets (ABN, ABN House, PO Box 250, Oundle Rd, Woodston, Peterborough. PE 9QF); et komplet foderstoftil ad-libitum-fodring af grise i vækst.
Næringsstof/mineral-sammensætning for Deltawean 15 NGP
Grisefoder indeholdt også tilladte antioxidanter, butyleret hydroxyanisol (BHA), butyleret hydroxytoluen (BHT) og ethoxyquin.
Grise blev tilfældigt tildelt behandling selv om to eller tre grise på samme foderbehandling blev anbragt individuelt inden for det samme svinesti-område. Grise var grupperet på denne måde for at undgå at behandlinger blev blandet sammen, skulle grise undslippe deres individuelle svinesti, vil det sige at de kun vil kunne stjæle mad indeholdende den korrekte foderbehandling til den bestemte gris. Individuelt anbragte grise, i grupper å to eller tre, på samme behandling, blev tilfældigt anbragt i hele enheden. Fækale prøver blev opsamlet fra hver gris i starten og efter fire ugers fodring med testfoderne, og fækale mikrobielle populationer blev bestemt under anvendelse af FISH (tabel 4) som tidligere beskrevet (eksempel 3). Ved eksperimentets afslutning blev grise slagtet for at opnå prøver af indhold fra den proksimale og distale tyktarm. pH-værdi (tabel 5), kortkædede fedtsyrer (SCFA) (tabel 6) og mikrobielle populationer (tabel 7) blev bestemt ud fra indholdet fra den proksimale og distale tyktarm. Data er vist som middelværdi +/- standardafvigelse. Forskellene blev analyseret ved hjælp af Student's T-test. Forskelle blev anset som signifikante ved P<0,05.
Tabel 4 Virkning af præbiotisk behandling og foder på mikrobielle populationer i fæces fra grise i begyndelsen og efter en eksperimentel periode på fire uger
cfu logio/g fæces; hver værdi er middelværdi ± SD, * n=40, + n = 10; forskellene blev analyseret ved hjælp af Student's T-test. Middelværdier i en række med hævet skrift der er signifikant forskellig (P<0,05)a fra NEG, b fra GOS 1,6%,0 fra tiden 0.
Tabel 5 Virkning af præbiotisk behandling og foder på proksimale og distale tyktarm prøvers pH.
Hver værdi er middelværdi ± SD, n=10. Forskellene blev analyseret ved hjælp af Student's T-test. Middelværdier i en række med hævet skrift der er signifikant forskellig (P<0,05) a fra NEG, b fra GOS 1,6%,c fra inulin.
Tabel 6 Virkning af præbiotisk behandling og foder på proksimale og distale tyktarmprøvers SCFA-koncentrationer*.
Hver værdi er middelværdi ± SD, n=10. Forskellene blev analyseret ved hjælp af Student's T-test. Middelværdier i en række med hævet skrift der er signifikant forskellig (P<0,05)a fra NEG, b fra GOS 1,6%,c fra inulin. ND ikke påvist; *pmol/g på vådstof-basis.
Tabel 7 Virkning af præbiotisk behandling og foder på mikrobiel population i proksimale og distale tyktarmsprøver.
cfu logio/g på en vådstof-basis; hver værdi er middelværdi ± SD, n=10; forskellene blev analyseret ved hjælp af Student's T-test. Middelværdier i en række med hævet skrift der er signifikant forskellig (P<0,05)a fra NEG, b fra GOS 1,6%,c fra inulin.
KONKLUSION
Tabel 5: der er et fald i den proksimale tyktarms pH-værdi i nærværelse af GOS (for 1,6%, og især for 4%), hvilket i kombination med SCFA-dataene (tabel 6) tyder på at GOS-produktet når den proksimale tyktarm (fermenteringsprodukter er steget)
Tabel 7: nærværelsen af GOS (4%) viser en signifikant stigning i populationstallet af fordelagtige bakterier (bifidobakterier, lactobaciller) i den proksimale tyktarm. Denne stigning i populationstallet er lavere i den distale del og i de fækale prøver, hvilket kan forklares ved det faktum at GOS-produktet ser ud til at være fermenteret hovedsageligt i den proksimale tyktarm. GOS-behandlingen på 1,6% udviste lignende tendenser. I den proksimale tyktarm kan der ses en stigning i bifidobakteriepopulationstallet samt en stigning i produktionen af eddikesyre (bifidobakteriers hovedfermenteringsprodukt). Dette antyder at GOS-produktet er meget selektivt mod bifidobakteriespecies. EKSEMPEL 7 Case Studies
Case Study 1 - Inflammatorisk tarmsygdom (IBD)
En 43-årig kvindelig patient diagnosticeret med ulcerøs colitis (én af to hovedformer for IBD) er angivet som et case study af virkningerne af GOS-produktet, fremstillet i overensstemmelse med eksempel 1
Patienten havde lidt af ulcerøs colitis i 5 år og var ikke under medicinsk behandling før og under testperioden. Det antiinflammatoriske middel sulfasalazin var tidligere blevet anvendt, men uden positiv virkning. Patienten havde svært ved at fordøje mad, var på en standardkost og led af kvalme, diaré og abdominal smerte. Sidstnævnte var i den venstre del af tyktarmen, hvilket korrelerede med diagnosen på colitis baseret på inflammation i den nedadgående tyktarm.
En samlet daglig GOS-dosis på 7 g/d (i 2 separate doser) blev indtaget. Inden for 4 dages indtagelse begyndte symptomer at aftage. Patienten blev i bedre stand til at fordøje kosten, tarmsmerter begyndte at aftage og kvalme var reduceret. Der blev ikke foretaget nogen klinisk analyse ved hjælp af endoskopi, men ikke desto mindre var patientens fornemmelse af velvære markant forbedret. Den eneste ændring af kosten var tilsætningen af GOS. Seks uger senere var denne virkning opretholdt.
Selv om dette ikke er en placebo-kontrolleret undersøgelse med flere patienter, giver dette case study anekdotisk evidens for de positive virkninger af præbiotisk GOS i én væsentlig form af IBD.
Case Study 2 - Irritabel tarmsyndrom (IBS)
En 27-årig mand som havde lidt af IBS i 3 år, indtog i 3 uger 7 g/d GOS fremstillet i overensstemmelse med eksempel 1 i to separate doser. Forud for denne periode oplevede han oppustethed, forstoppelse, tarmsmerte og træthed. Disse er klassiske symptomer forbundet med IBS. Patienten havde ikke indtaget antibiotika i 6 måneder og var på en hvede/gluten og sukkerfri diæt.
Efter indtagelse af præbiotika skete der en markant lindring af disse symptomer inden for 3 dage, og denne lindring blev opretholdt. Patienten beretter om en markant forbedring i overordnet velvære og tarmsundhed, nemlig: "Jeg er nu klar til at løbe et maraton". Han er i stand til at fordøje en normal kost uden vanskeligheder.
Denne rapport er ikke et kontrolleret forsøg men tjener alligevel som anekdotisk evidens der viser at GOS kan forbedre IBS-tilstanden og give patienten en bedre livskvalitet.
Claims (17)
1. Bifidobacterium bifidum-stamme deponeret under deponeringsnr. NCIMB 41171 ved the National Collection of Industrial and Marine Bacteria, Aberdeen, UK, d. 31. marts 2003, hvilken Bifidobacterium bifidum-stamme frembringer en galactosidaseenzymaktivitet der omdanner lactose til en galactooligosaccharid-blanding omfattende Gal (al-6)-Gal, trisaccharider Gal ^l-6)-Gal ^l-4)-Glc, Gal (pi-3)-Gal (pi-4)-Glc, tetrasaccharid Gal (pi-6)-Gal (pi-6)-Gal (pi-4)-Glc og pentasaccharid Gal ^l-6)-Gal ^l-6)-Gal ^l-6)-Gal ^l-4)-Glc.
2. Stamme ifølge krav 1, hvor galactooligosaccharidblandingen omfatter fra 20 til 35 vægt/volumenprocent af disaccharidet, fra 20 til 35 vægt/volumenprocent af trisaccharidet, fra 15 til 25 vægt/volumenprocent af tetrasaccharidet og fra 10 til 20 vægt/volumenprocent af pentasaccharidet.
3. Galactooligosaccharidpræparat til at fremme specifik vækst af bifidobakterier, hvilket galactooligosaccharidpræparat som effektive bestanddele omfatter en blanding omfattende disaccharid-Gal (al-6)-Gal, trisaccharider Gal ^l-6)-Gal ^l-4)-Glc og Gal (hl-3)-Gal ^l-4)-Glc, tetrasaccharid Gal ^l-6)-Gal (β1-6)-Gal^l-4)-Glc og pentasaccharid Gal ^l-6)-Gal ^l-6)-Gal ^l-6)-Gal ^l-4)-Glc.
4. Præparat ifølge krav 3, hvilket præparat omfatter fra 20 til 35 vægt/volumenprocent af disaccharidet, fra 20 til 35 vægt/volumenprocent af trisaccharidet, fra 15 til 25 vægt/volumenprocent af tetrasaccharidet og fra 10 til 20 vægt/volumenprocent af pentasaccharidet.
5. Præparat til forbedring af tarmsundhed, hvilket præparat omfatter en kultur af Bifidobacterium bifidum-stammen ifølge krav 1 eller 2 i kombination med præparatet ifølge krav 3 eller 4.
6. Præparat til at fremme vækst af bifidobakterie ifølge et hvilket som helst af kravene 3 til 5, til anvendelse i en fremgangsmåde til behandling af et menneske eller et dyr ved terapi.
7. Anvendelse af præparatet ifølge et hvilket som helst af kravene 3 til 5 ved fremstilling af et lægemiddel til forebyggelse af adhæsion af patogener eller toksiner som frembringes af patogener til tarmvægen.
8. Anvendelse af præparatet ifølge et hvilket som helst af kravene 3 til 5 ved fremstilling af et lægemiddel til reetablering af en normal tarmflora efter behandling med antibiotika eller kirurgisk behandling.
9. Anvendelse af præparatet ifølge et hvilket som helst af kravene 3 til 5 ved fremstilling af et lægemiddel til behandling af tarmlidelser, fx inflammatorisk tarmsygdom eller irritabel tarmsyndrom.
10. Anvendelse af en Bifidobacterium bifidum-stamme ifølge krav 1 eller krav 2 til frembringelse af blandingen af galactooligosaccharider som defineret i krav 3 eller krav 4.
11. Anvendelse ifølge krav 10, hvor blandingen af galactooligosaccharider er en del af et produkt til forbedring af tarmsundhed.
12. Anvendelse ifølge krav 11, hvor produktet er valgt fra gruppen bestående af mælkeprodukter, drikkevarer, mad til spædbørn, morgenmadsprodukter, kiks, konfekture, kager, fødevaretilskud, kosttilskud, dyrefoder, fjerkræfoder eller en hvilken som helst føde- eller drikkevare.
13. Anvendelse ifølge krav 12, hvor mælkeproduktet er valgt fra gruppen bestående af flydende mælk, tørret mælkepulver, sødmælkspulver, skummetmælkspulver, fedtholdigt mælkepulver, vallepulver, babymælk, is, yoghurt, ost og fermenterede mælkeprodukter.
14. Fremgangsmåde til fremstilling af et stof der fremmer væksten af bifidobakte-rier, hvilken fremgangsmåde er kendetegnet ved at lactose eller et lactoseholdigt materiale behandles med en Bifidobacterium bifid um-stamme ifølge krav 1 eller krav 2.
15. Fremgangsmåde ifølge krav 14, hvor det lactoseholdige materiale er valgt fra gruppen bestående af kommercielt tilgængelig lactose, sødmælk, letmælk, skummetmælk, valle og fedtholdig mælk.
16. Fremgangsmåde ifølge krav 15, hvor mælken opnås fra kvæg, bøfler, får eller geder.
17. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 14 til 16, i hvilken fremgangsmåde stoffet spray-tørres efter fjernelse af Bifidobacterium bifidum-celler til frembringelse af et pulver.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0315266A GB0315266D0 (en) | 2003-06-30 | 2003-06-30 | Novel galactooligosaccharide composition and the preparation thereof |
| GB0325224A GB0325224D0 (en) | 2003-10-29 | 2003-10-29 | Novel galactooligosaccharide composition and the preparation thereof |
| GB0405837A GB0405837D0 (en) | 2004-03-16 | 2004-03-16 | Novel Galactooligosaccharide composition and the preparation thereof |
| PCT/GB2004/002815 WO2005003329A1 (en) | 2003-06-30 | 2004-06-30 | Novel galactooligosaccharide composition and the preparation thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK1644482T3 DK1644482T3 (da) | 2007-08-13 |
| DK1644482T4 true DK1644482T4 (da) | 2014-12-15 |
Family
ID=33568264
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK04743163.0T DK1644482T4 (da) | 2003-06-30 | 2004-06-30 | Hidtil ukendt galactooligosaccharidpræparat og fremstillingen deraf |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7883874B2 (da) |
| EP (1) | EP1644482B2 (da) |
| JP (2) | JP4384656B2 (da) |
| KR (1) | KR100857500B1 (da) |
| AT (1) | ATE360682T1 (da) |
| AU (1) | AU2004254110B2 (da) |
| BR (1) | BRPI0408911B1 (da) |
| CA (1) | CA2520043C (da) |
| CY (1) | CY1107671T1 (da) |
| DE (1) | DE602004006133T3 (da) |
| DK (1) | DK1644482T4 (da) |
| ES (1) | ES2284028T5 (da) |
| GB (1) | GB2412380B (da) |
| HK (1) | HK1077323A1 (da) |
| IL (1) | IL172553A (da) |
| MX (1) | MXPA05010349A (da) |
| NO (1) | NO335413B1 (da) |
| NZ (1) | NZ542482A (da) |
| PL (1) | PL1644482T5 (da) |
| PT (1) | PT1644482E (da) |
| RU (1) | RU2313572C2 (da) |
| WO (1) | WO2005003329A1 (da) |
Families Citing this family (64)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4384656B2 (ja) * | 2003-06-30 | 2009-12-16 | クラサド インコーポレイテッド | 新規のガラクトシダーゼ酵素活性を生じさせるビフィドバクテリウムビフィダムの新規株 |
| WO2006012536A2 (en) | 2004-07-22 | 2006-02-02 | Ritter Andrew J | Methods and compositions for treating lactose intolerance |
| GB0522740D0 (en) * | 2005-11-08 | 2005-12-14 | Clasado Inc | Process for the production of oligosaccharides |
| GB0525857D0 (en) * | 2005-12-20 | 2006-02-01 | Product and process | |
| EP1803358A1 (en) | 2005-12-28 | 2007-07-04 | Laboratorios Ordesa, S.L | Infant immunological formula |
| GB0601901D0 (en) | 2006-01-31 | 2006-03-08 | Product and Process | |
| WO2007090894A1 (en) † | 2006-02-10 | 2007-08-16 | Nestec S.A. | Oligosaccharide mixture |
| GB0606112D0 (en) * | 2006-03-28 | 2006-05-03 | Product and process | |
| FR2900029B1 (fr) * | 2006-04-25 | 2012-09-14 | Bel Fromageries | Procede d'aromatisation de produits fromagers. |
| EP1887017A1 (en) * | 2006-08-09 | 2008-02-13 | Friesland Brands B.V. | Prebiotic carbohydrate |
| SI2076271T1 (sl) | 2006-10-02 | 2011-12-30 | Friesland Brands Bv | Inhibicija toksinov kolere z galatooligosaharidi (GOS) |
| EP1988096A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-11-05 | Laboratorios Ordesa, S.L | Process for preparing a galactooligosaccharides powder |
| US9139856B2 (en) | 2008-03-12 | 2015-09-22 | Tata Chemicals Ltd. | Process for production of galactooligosaccharides (GOS) |
| GB0809921D0 (en) * | 2008-05-30 | 2008-07-09 | Clasado Inc | Product and process therefor |
| US20090297660A1 (en) * | 2008-06-02 | 2009-12-03 | Kraft Food Holdings, Inc. | Cheese Products Containing Galacto-Oligosaccharides And Having Reduced Lactose Levels |
| SG2014014435A (en) | 2009-02-24 | 2014-07-30 | Ritter Pharmaceuticals Inc | Prebiotic formulations and methods of use |
| KR101121161B1 (ko) | 2009-02-24 | 2012-03-19 | 주식회사 제노포커스 | 고당전이 활성의 신규한 베타-갈락토시다제 및 그 용도 |
| AU2010223965A1 (en) * | 2009-03-13 | 2011-10-06 | Dsm Food Specialties Usa Inc. | Prebiotic oligosaccharides |
| GB0906983D0 (en) * | 2009-04-23 | 2009-06-03 | Clasado Inc | Novel use |
| AU2009347008B2 (en) * | 2009-05-27 | 2013-08-15 | Clasado Limited | Method of preventing diarrhoea |
| TWI446914B (zh) * | 2009-06-04 | 2014-08-01 | Clasado Inc | 製備預防旅人腹瀉發生藥物之組成物之用途 |
| WO2010143940A1 (en) * | 2009-06-12 | 2010-12-16 | N.V. Nutricia | Synergistic mixture of beta-galacto-oligosaccharides with beta-1,3 and beta-1,4/1,6 linkages |
| IT1395068B1 (it) * | 2009-08-07 | 2012-09-05 | Inalco Spa | Processo per la produzione di galatto-oligosaccaridi ultrapuri |
| WO2011093907A1 (en) * | 2010-02-01 | 2011-08-04 | Corn Products International, Inc. | High-purity galactooligosaccharides and uses thereof |
| WO2011137249A1 (en) | 2010-04-28 | 2011-11-03 | Ritter Pharmaceuticals, Inc. | Prebiotic formulations and methods of use |
| IL206678A0 (en) | 2010-06-28 | 2010-12-30 | Hcl Cleantech Ltd | A method for the production of fermentable sugars |
| JP2017018135A (ja) * | 2010-07-19 | 2017-01-26 | アルラ フーズ アムバＡｒｌａ Ｆｏｏｄｓ Ａｍｂａ | ガラクトオリゴ糖含有組成物およびそれを生産する方法 |
| JP2013530719A (ja) * | 2010-07-19 | 2013-08-01 | アルラ フーズ アムバ | ガラクトオリゴ糖含有組成物およびそれを生産する方法 |
| PT2481299T (pt) * | 2011-01-31 | 2017-03-08 | Synformulas Gmbh | Estirpes de bifidobacterium bifidum para aplicação em doenças gastrointestinais |
| GB2492559B (en) * | 2011-07-05 | 2018-07-25 | Clasado Inc | Composition and method for preventing or reducing the risk of developing a syndrome |
| US11446316B2 (en) | 2011-07-22 | 2022-09-20 | Abbott Laboratories | Galactooligosaccharides for preventing injury and/or promoting healing of the gastrointestinal tract |
| JP5980785B2 (ja) * | 2011-09-08 | 2016-08-31 | 株式会社ヤクルト本社 | 新規ビフィズス菌及びその利用 |
| US9617608B2 (en) | 2011-10-10 | 2017-04-11 | Virdia, Inc. | Sugar compositions |
| BR112014008944B1 (pt) * | 2011-10-18 | 2020-09-15 | Société des Produits Nestlé S.A. | Composição nutricional simbiótica compreendendo lc-pufa, probiótico e mistura de oligossacarídeos para crescimento cerebral e/ou desenvolvimento cognitivo e/ou psicomotor |
| WO2013082562A1 (en) * | 2011-11-30 | 2013-06-06 | Ritter Pharmaceuticals, Inc. | Prebiotic formulations and methods of use |
| US20130172547A1 (en) | 2011-12-30 | 2013-07-04 | Renmatix, Inc. | Compositions comprising c5 and c6 oligosaccharides |
| CN104105471B (zh) | 2012-02-14 | 2018-03-13 | 宝洁公司 | 皮肤共生益生元剂和包含其的组合物的局部使用 |
| GB201305708D0 (en) * | 2013-03-28 | 2013-05-15 | Clasado Inc | Novel use |
| CA2913393A1 (en) | 2013-05-24 | 2014-11-27 | General Mills, Inc. | Food products with yogurt whey |
| EP3030093B1 (en) * | 2013-07-26 | 2017-09-06 | Novozymes A/S | POLYPEPTIDES HAVING alpha-L-GALACTOSIDASE ACTIVITY AND POLYNUCLEOTIDES ENCODING SAME |
| US20160219916A1 (en) * | 2013-08-30 | 2016-08-04 | Abbott Laboratories | Oral rehydration compositions with galactooligosaccharides |
| GB201319531D0 (en) * | 2013-11-05 | 2013-12-18 | Optibiotix Health Ltd | Composition & methods of screening |
| WO2015095747A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | Abbott Laboratories | Oral rehydration composition with oligosaccharides |
| ES2701163T3 (es) | 2014-01-20 | 2019-02-21 | Jennewein Biotechnologie Gmbh | Procedimiento para la purificación eficiente de oligosacáridos de la leche humana (HMO) neutros a partir de la fermentación microbiana |
| BR112017000345B1 (pt) | 2014-07-09 | 2022-04-26 | Cadena Bio, Inc | Composições de oligossacarídeo, métodos para produção das mesmas e produto alimentar |
| EP3222281B1 (en) * | 2014-11-19 | 2020-01-08 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Preventive and therapeutic agent for celiac disease |
| ES2764499T3 (es) | 2015-01-07 | 2020-06-03 | Virdia Inc | Métodos para extraer y convertir azúcares de hemicelulosa |
| ES2659648T3 (es) | 2015-01-26 | 2018-03-16 | Kaleido Biosciences, Inc. | Compuestos terapéuticos de glicano y métodos relacionados de los mismos |
| EP4209130A1 (en) | 2015-01-26 | 2023-07-12 | DSM Nutritional Products, LLC | Oligosaccharide compositions for use animal feed and methods of producing thereof |
| CN107771083A (zh) | 2015-04-23 | 2018-03-06 | 卡莱多生物科技有限公司 | 聚糖治疗剂和治疗方法 |
| US11091815B2 (en) | 2015-05-27 | 2021-08-17 | Virdia, Llc | Integrated methods for treating lignocellulosic material |
| US10190142B2 (en) | 2016-01-25 | 2019-01-29 | King-Prebiotics Biotechnology (Tw) Co., Ltd. | High-purity galactooligosaccharide compositions, preparations, and applications thereof |
| CN109475151A (zh) * | 2016-06-24 | 2019-03-15 | 叶塞纳吉控股有限公司 | 控制肠道微生物群中有害细菌的免疫调节和促生长组合物及其用途 |
| JP2020513410A (ja) | 2016-12-06 | 2020-05-14 | カレイド・バイオサイエンシズ・インコーポレイテッド | グリカンポリマーおよびその関連方法 |
| KR101955251B1 (ko) | 2017-07-31 | 2019-03-08 | 최승오 | 독서대 겸용 얼굴베개 |
| WO2019090182A2 (en) | 2017-11-03 | 2019-05-09 | Kaleido Biosciences, Inc. | Glycan preparations and methods of use for hyperammonemia |
| EP3862006A1 (en) | 2017-11-03 | 2021-08-11 | Kaleido Biosciences, Inc. | Glycan preparations for the treatment of infection |
| EP3877424A2 (en) | 2018-11-08 | 2021-09-15 | Kaleido Biosciences, Inc. | Oligosaccharide compositions and methods of use thereof |
| JPWO2020203782A1 (da) * | 2019-03-29 | 2020-10-08 | ||
| WO2020229690A1 (en) * | 2019-05-15 | 2020-11-19 | N.V. Nutricia | Beta-1,3'-galactosyllactose for the treatment of gut barrier function diseases |
| AU2022302375A1 (en) * | 2021-07-01 | 2024-02-01 | N.V. Nutricia | Nutritonal compositions for gut barrier function |
| GB202200069D0 (en) * | 2022-01-05 | 2022-02-16 | Vemico Ltd | Compositions and methods for immunomodulation via control of intestinal microbiome |
| GB2619977A (en) * | 2022-06-24 | 2023-12-27 | Clasado Res Services Limited | Compositions and uses thereof |
| GB2623336A (en) * | 2022-10-12 | 2024-04-17 | Clasado Res Services Limited | Compositions and uses thereof |
Family Cites Families (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4435389A (en) | 1980-07-07 | 1984-03-06 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Composition for promoting growth of bifidobacteria |
| JPS6259290A (ja) | 1985-09-09 | 1987-03-14 | Riyoushiyoku Kenkyukai | イソラフイノ−ス及びその製造方法 |
| JP2711095B2 (ja) | 1986-09-27 | 1998-02-10 | ユニチカ株式会社 | ビフイドバクテリウム菌の増殖促進剤の製造法 |
| DK199887D0 (da) | 1987-04-15 | 1987-04-15 | Danisco Bioteknologi As | Gaerstamme |
| JP2518663B2 (ja) | 1987-12-24 | 1996-07-24 | 株式会社ヤクルト本社 | ガラクトオリゴ糖含有加工乳の製造法 |
| US5149640A (en) | 1988-12-22 | 1992-09-22 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing galactose transfer products |
| JP2819313B2 (ja) | 1989-07-18 | 1998-10-30 | 焼津水産化学工業株式会社 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造方法 |
| JP2819312B2 (ja) | 1989-07-18 | 1998-10-30 | 焼津水産化学工業株式会社 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 |
| CA2027835A1 (en) | 1990-01-19 | 1991-07-20 | William D. Prevatt | Strains of phaffia rhodozyma containing high levels of astaxanthin |
| JP2750767B2 (ja) | 1990-02-21 | 1998-05-13 | 雪印乳業株式会社 | 新規糖アルコール |
| JP2952439B2 (ja) † | 1991-11-26 | 1999-09-27 | 株式会社ホーネンコーポレーション | 新規飲食品素材 |
| JPH05146296A (ja) | 1991-11-27 | 1993-06-15 | Yakult Honsha Co Ltd | β−ガラクトシダーゼ遺伝子を含むＤＮＡ断片及び該ＤＮＡ断片を組み込んだプラスミド |
| JP2904687B2 (ja) | 1993-09-17 | 1999-06-14 | 雪印乳業株式会社 | 新規オリゴ糖 |
| FR2723963B1 (fr) | 1994-08-31 | 1997-01-17 | Gervais Danone Co | Preparation de produits fermentes par streptococcus thermophilus, enrichis en galacto-oligosaccharides et en beta-galactosidase |
| JP3246296B2 (ja) | 1995-11-09 | 2002-01-15 | 宇部興産株式会社 | 半溶融金属の成形方法 |
| JPH1023898A (ja) | 1996-07-10 | 1998-01-27 | Meiji Milk Prod Co Ltd | Ｎ−アセチルラクトサミン誘導体の新規な製造法 |
| KR100245383B1 (ko) | 1996-09-13 | 2000-03-02 | 정훈보 | 교차홈 형성 전열관 및 그 제조 방법 |
| JP2894293B2 (ja) | 1996-09-17 | 1999-05-24 | 不二製油株式会社 | ガラクタナーゼｓ−３９及びこれを産生するバチルスエスピーｓ−３９ |
| NL1010770C2 (nl) * | 1998-12-09 | 2000-06-13 | Nutricia Nv | Preparaat dat oligosacchariden en probiotica bevat. |
| JP3049693B1 (ja) | 1998-12-10 | 2000-06-05 | ソフィアインターナショナル株式会社 | 端末ターミナル |
| FR2789086B1 (fr) | 1999-02-03 | 2003-01-31 | Alain Rambach | Procede de detection de bacteries cultivees en condition anaerobie |
| AU6206801A (en) | 2000-05-26 | 2001-12-03 | Arla Foods Amba | A new enzyme isolated from a bifidobacterium |
| EP1227152A1 (en) | 2001-01-30 | 2002-07-31 | Société des Produits Nestlé S.A. | Bacterial strain and genome of bifidobacterium |
| GB0229015D0 (en) * | 2002-12-12 | 2003-01-15 | Novartis Nutrition Ag | New Compound |
| GB0303716D0 (en) | 2003-02-18 | 2003-03-19 | Mars Uk Ltd | Food product and process |
| JP4384656B2 (ja) * | 2003-06-30 | 2009-12-16 | クラサド インコーポレイテッド | 新規のガラクトシダーゼ酵素活性を生じさせるビフィドバクテリウムビフィダムの新規株 |
-
2004
- 2004-06-30 JP JP2006500267A patent/JP4384656B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-30 AU AU2004254110A patent/AU2004254110B2/en not_active Expired
- 2004-06-30 WO PCT/GB2004/002815 patent/WO2005003329A1/en active IP Right Grant
- 2004-06-30 BR BRPI0408911A patent/BRPI0408911B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-06-30 DE DE602004006133.6T patent/DE602004006133T3/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-30 PT PT04743163T patent/PT1644482E/pt unknown
- 2004-06-30 NZ NZ542482A patent/NZ542482A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-06-30 KR KR1020057018098A patent/KR100857500B1/ko active IP Right Grant
- 2004-06-30 AT AT04743163T patent/ATE360682T1/de active
- 2004-06-30 GB GB0513376A patent/GB2412380B/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-30 PL PL04743163T patent/PL1644482T5/pl unknown
- 2004-06-30 ES ES04743163.0T patent/ES2284028T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-30 MX MXPA05010349A patent/MXPA05010349A/es active IP Right Grant
- 2004-06-30 DK DK04743163.0T patent/DK1644482T4/da active
- 2004-06-30 RU RU2005129997/13A patent/RU2313572C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2004-06-30 EP EP04743163.0A patent/EP1644482B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-30 CA CA002520043A patent/CA2520043C/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-30 US US10/552,483 patent/US7883874B2/en active Active
-
2005
- 2005-10-20 HK HK05109241A patent/HK1077323A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2005-12-13 IL IL172553A patent/IL172553A/en active IP Right Grant
- 2005-12-16 NO NO20056004A patent/NO335413B1/no not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-06-13 CY CY20071100783T patent/CY1107671T1/el unknown
-
2009
- 2009-06-03 JP JP2009133580A patent/JP4932874B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK1644482T4 (da) | Hidtil ukendt galactooligosaccharidpræparat og fremstillingen deraf | |
| US7772212B2 (en) | Isomaltooligosaccharides to inhibit avian pathogenic intestinal bacteria | |
| JP5689601B2 (ja) | 組成物 | |
| CN108741083A (zh) | 促进有益细菌生长的中性人乳寡糖 | |
| KR20050057259A (ko) | 프로바이오틱 박테리아 : 락토바실러스 퍼멘텀 | |
| CN102670662A (zh) | 糖醛酸和益生菌 | |
| WO2004074496A1 (en) | Food product and process for their preparation by enzymatic galactosyltransfer with lactobacillus alpha-galactosidase | |
| JP2012519659A (ja) | 共生メープルの生成組成物および方法 | |
| Goderska et al. | Comparision of growth of Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium Bifidum species in media suplemented with selected saccharides including prebiotics | |
| ZA200507550B (en) | Novel galactooligosaccharide composition and the preparation thereof | |
| CA3172064A1 (en) | Composition for enhancing urolithin production in a human subject | |
| Kelly | In vitro assessment of potential health benefits of prebiotics and probiotics to the feline colon |