JP2819312B2 - Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 - Google Patents
Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法Info
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- JP2819312B2 JP2819312B2 JP18491889A JP18491889A JP2819312B2 JP 2819312 B2 JP2819312 B2 JP 2819312B2 JP 18491889 A JP18491889 A JP 18491889A JP 18491889 A JP18491889 A JP 18491889A JP 2819312 B2 JP2819312 B2 JP 2819312B2
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- acetyllactosamine
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Description
【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、人乳オリゴ糖や複合糖質の糖鎖中に含まれ
るＮ−アセチルラクトサミンの製造法に関するものであ
る。
るＮ−アセチルラクトサミンの製造法に関するものであ
る。
〈従来の技術〉 Ｎ−アセチルラクトサミンは、血液型糖蛋白質の分解
物から最初に単離されたガラクトースとＮ−アセチルグ
ルコサミンがβ−1,4結合したアミノ２糖で、人乳オリ
ゴ糖や、リポ多糖、各種の糖蛋白質及び糖脂質の糖鎖中
に存在する生化学的に非常に重要なオリゴ糖である。ま
た、腸内細菌の一つビフィズス菌の発育因子としても知
られ、機能性食品素材としても有用な物質である。
物から最初に単離されたガラクトースとＮ−アセチルグ
ルコサミンがβ−1,4結合したアミノ２糖で、人乳オリ
ゴ糖や、リポ多糖、各種の糖蛋白質及び糖脂質の糖鎖中
に存在する生化学的に非常に重要なオリゴ糖である。ま
た、腸内細菌の一つビフィズス菌の発育因子としても知
られ、機能性食品素材としても有用な物質である。
従来、Ｎ−アセチルラクトサミンの製造は、化学合成
もしくは高エネルギー化合物UDP−ガラクトースとＮ−
アセチルグルコサミンを基質として、ラクトース合成酵
素により合成されることが知られているが、これらの方
法は、工程が複雑でしかも高価となり工業的にはまだ難
点の多い製造法である。一方、簡便な方法として、ラク
トースとＮ−アセチルラクトサミンを基質として、ラク
トバシラスビフィダス（Lactobacillus bifidus）やス
ポロボロミセス シングラリス（Sporobolomyces sing
ularis）の生菌体を値いた報告［J.Biol.Chem.,217,79
（1955）,Can.J.Chem.,42,2307（1964）］や、ラクトバ
シラス ビフィダスの生産するβ−ガラクトシダーゼを
作用させた報告［J.Biol.Chem.,208,299（1954）］など
がある。又、最近ではガラクトースとＮ−アセチルグル
コサミンを基質としてエシェリシア コリ（Escherichi
a coli）の生産するβ−ガラクトシダーゼを作用さ
せ、脱水縮合反応によるＮ−アセチルラクトサミン生産
の報告［第10回糖質シンポジウム講演要旨集,p107（198
7）］も示されている。
もしくは高エネルギー化合物UDP−ガラクトースとＮ−
アセチルグルコサミンを基質として、ラクトース合成酵
素により合成されることが知られているが、これらの方
法は、工程が複雑でしかも高価となり工業的にはまだ難
点の多い製造法である。一方、簡便な方法として、ラク
トースとＮ−アセチルラクトサミンを基質として、ラク
トバシラスビフィダス（Lactobacillus bifidus）やス
ポロボロミセス シングラリス（Sporobolomyces sing
ularis）の生菌体を値いた報告［J.Biol.Chem.,217,79
（1955）,Can.J.Chem.,42,2307（1964）］や、ラクトバ
シラス ビフィダスの生産するβ−ガラクトシダーゼを
作用させた報告［J.Biol.Chem.,208,299（1954）］など
がある。又、最近ではガラクトースとＮ−アセチルグル
コサミンを基質としてエシェリシア コリ（Escherichi
a coli）の生産するβ−ガラクトシダーゼを作用さ
せ、脱水縮合反応によるＮ−アセチルラクトサミン生産
の報告［第10回糖質シンポジウム講演要旨集,p107（198
7）］も示されている。
〈発明が解決しようとする問題点〉 しかしながら、前記の微生物菌体やβ−ガラクトシダ
ーゼを用いる方法は、いずれもＮ−アセチルラクトサミ
ンの生成量が少ないこと及び目的とするＮ−アセチルラ
クトサミンの生成量に比べ、β−1,6結合異性体のＮ−
アセチルラクトサミンの生成比率が非常に高いことなど
の欠点があった。本発明者らは、前述の欠点を解消すべ
くＮ−アセチルラクトサミンを簡便でしかも安価に工業
生産できる方法を種々検討した結果、バラシス サーキ
ュランスの生産するβ−ガラクトシダーゼが、ラクトー
スとＮ−アセチルラクトサミンを基質としてＮ−アセチ
ルラクトサミンを効率よく生産することを見い出し、本
発明をが完成するに至った。
ーゼを用いる方法は、いずれもＮ−アセチルラクトサミ
ンの生成量が少ないこと及び目的とするＮ−アセチルラ
クトサミンの生成量に比べ、β−1,6結合異性体のＮ−
アセチルラクトサミンの生成比率が非常に高いことなど
の欠点があった。本発明者らは、前述の欠点を解消すべ
くＮ−アセチルラクトサミンを簡便でしかも安価に工業
生産できる方法を種々検討した結果、バラシス サーキ
ュランスの生産するβ−ガラクトシダーゼが、ラクトー
スとＮ−アセチルラクトサミンを基質としてＮ−アセチ
ルラクトサミンを効率よく生産することを見い出し、本
発明をが完成するに至った。
〈問題を解決するための手段〉 本発明は、ラクトースとＮ−アセチルラクトサミンを
含有する基質に、バラシス サーキュランスの生産する
β−ガラクトシダーゼを作用させ、ガラクトース転移反
応によりＮ−アセチルラクトサミンを効率よく製造する
方法を提供することを目的とする。
含有する基質に、バラシス サーキュランスの生産する
β−ガラクトシダーゼを作用させ、ガラクトース転移反
応によりＮ−アセチルラクトサミンを効率よく製造する
方法を提供することを目的とする。
本発明のβ−ガラクトシダーゼは、バシラス サーキ
ュランスの生産する酵素であれば、微生物を培養し、そ
の培養液から硫安沈殿等により調製した粗酵素や市販酵
素、いずれでも用いることができる。
ュランスの生産する酵素であれば、微生物を培養し、そ
の培養液から硫安沈殿等により調製した粗酵素や市販酵
素、いずれでも用いることができる。
反応に用いるラクトースとＮ−アセチルラクトサミン
の量は、モル比で1:1〜1:5とし、全基質濃度として20〜
70％とするのが好ましい。また、本発明に用いるバシラ
ス サーキュランスの生産するβ−ガラクトシダーゼ
は、反応系において0.5U/ml〜5U/mlとなるように添加
し、pH4〜９、温度５℃〜50℃に保持し、２時間〜50時
間作用させるのが好ましい。
の量は、モル比で1:1〜1:5とし、全基質濃度として20〜
70％とするのが好ましい。また、本発明に用いるバシラ
ス サーキュランスの生産するβ−ガラクトシダーゼ
は、反応系において0.5U/ml〜5U/mlとなるように添加
し、pH4〜９、温度５℃〜50℃に保持し、２時間〜50時
間作用させるのが好ましい。
上記のようにして得られた反応液は、加熱により反応
を停止させ、生成したＮ−アセチルラクトサミンを必要
に応じて活性炭カラムクロマトグラフィー、ゲル濾過、
高速液体クロマトグラフィー等の手段を組み合わせて精
製することができる。
を停止させ、生成したＮ−アセチルラクトサミンを必要
に応じて活性炭カラムクロマトグラフィー、ゲル濾過、
高速液体クロマトグラフィー等の手段を組み合わせて精
製することができる。
〈実施例〉 以下に、本発明の実施例について、さらに具体的に説
明するが、かかる説明によって本発明が何ら限定されな
いことは勿論である。
明するが、かかる説明によって本発明が何ら限定されな
いことは勿論である。
（１）ラクトース0.9gとＮ−アセチルグルコサミン1.1g
（モル比1:2）を0.1Mを0.1Mリン酸緩衝液（pH7.0）に溶
解し、5ml溶液とした。この溶液に、バシラス サーキ
ュランス起源の市販β−ガラクトシダーゼ（大和化成：
ビオラクタ）を12U添加し、25℃で28時間反応させ、５
分間の煮沸により反応を停止した。次に、得られた反応
液のＮ−アセチルラクトサミンの生成量を高速液体クロ
マトグラフィーにより測定した。本反応により295mgの
Ｎ−アセチルラクトサミンが製造された （２）ラクトース0.45gとＮ−アセチルグルコサミン1.1
g（モル比1:4）を0.1Mリン酸緩衝液（pH7.0）に溶解
し、5ml溶液とした。この溶液に、バシラス サーキュ
ランス起源の市販β−ガラクトシダーゼ（大和化成：ビ
オラクタ）を14U添加し、25℃で10時間反応させ、５分
間の煮沸により反応を停止した。次に、得られた反応液
のＮ−アセチルラクトサミンの生産量を高速液体クロマ
トグラフィーにより測定した。本反応により、200mgの
Ｎ−アセチルラクトサミンが製造された。
（モル比1:2）を0.1Mを0.1Mリン酸緩衝液（pH7.0）に溶
解し、5ml溶液とした。この溶液に、バシラス サーキ
ュランス起源の市販β−ガラクトシダーゼ（大和化成：
ビオラクタ）を12U添加し、25℃で28時間反応させ、５
分間の煮沸により反応を停止した。次に、得られた反応
液のＮ−アセチルラクトサミンの生成量を高速液体クロ
マトグラフィーにより測定した。本反応により295mgの
Ｎ−アセチルラクトサミンが製造された （２）ラクトース0.45gとＮ−アセチルグルコサミン1.1
g（モル比1:4）を0.1Mリン酸緩衝液（pH7.0）に溶解
し、5ml溶液とした。この溶液に、バシラス サーキュ
ランス起源の市販β−ガラクトシダーゼ（大和化成：ビ
オラクタ）を14U添加し、25℃で10時間反応させ、５分
間の煮沸により反応を停止した。次に、得られた反応液
のＮ−アセチルラクトサミンの生産量を高速液体クロマ
トグラフィーにより測定した。本反応により、200mgの
Ｎ−アセチルラクトサミンが製造された。
β−ガラクトシダーゼの酵素活性の測定 10mMのONP−Gal（オルトーニトロフェニルガラクトシ
ド）溶液0.2mlと0.1Mリン酸緩衝液（pH7）0.7mlを混合
し、適当濃度に希釈した酵素液0.1mlを加え、30℃で反
応を行った。1MNa2CO22mlを加え、反応停止後、オルト
ーニトロフェノールの吸収である420nmの吸光度を測定
した。酵素活性1Uは、１分間に１μmoleのオルトーニト
ロフェノールを遊離する酵素量と定義した。
ド）溶液0.2mlと0.1Mリン酸緩衝液（pH7）0.7mlを混合
し、適当濃度に希釈した酵素液0.1mlを加え、30℃で反
応を行った。1MNa2CO22mlを加え、反応停止後、オルト
ーニトロフェノールの吸収である420nmの吸光度を測定
した。酵素活性1Uは、１分間に１μmoleのオルトーニト
ロフェノールを遊離する酵素量と定義した。
Ｎ−アセチルラクトサミンの分析 実施例で得られた反応液は、次の高速液体クロマトグ
ラフィーの条件で測定した。
ラフィーの条件で測定した。
カラム:YMC−Pack PA−03（4.6×250mm） 移動層：アセトニトリル：水＝80:20 流 速:0.8ml/min. 温 度:25℃ 検 出:UV215nm 資 料:10μｌ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12P 19/26 ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】ラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを
含有する基質にバシラス サーキュランス（Bacillus c
irculans）の生産するβ−ガラクトシダーゼを作用さ
せ、ガラクトース転移反応を行わせることを特徴とする
Ｎ−アセチルラクトサミンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18491889A JP2819312B2 (ja) | 1989-07-18 | 1989-07-18 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18491889A JP2819312B2 (ja) | 1989-07-18 | 1989-07-18 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0349692A JPH0349692A (ja) | 1991-03-04 |
| JP2819312B2 true JP2819312B2 (ja) | 1998-10-30 |
Family
ID=16161611
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18491889A Expired - Lifetime JP2819312B2 (ja) | 1989-07-18 | 1989-07-18 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2819312B2 (ja) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4819240B2 (ja) * | 2000-04-13 | 2011-11-24 | 生化学工業株式会社 | 精製されたｎ−アセチルラクトサミンの製造方法 |
| JP2001292791A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-10-23 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Ｎ−アセチルラクトサミンの製造方法 |
| GB2412380B (en) | 2003-06-30 | 2005-11-09 | Clasado Inc | Novel galactooligosaccharide composition and the preparation thereof |
| WO2006030729A1 (ja) | 2004-09-13 | 2006-03-23 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | ディスク装置 |
| JP2006223268A (ja) * | 2005-02-21 | 2006-08-31 | Yakult Honsha Co Ltd | ガラクトシル２糖類の製造法 |
| GB0525857D0 (en) | 2005-12-20 | 2006-02-01 | Product and process | |
| GB0601901D0 (en) | 2006-01-31 | 2006-03-08 | Product and Process | |
| GB0606112D0 (en) | 2006-03-28 | 2006-05-03 | Product and process | |
| JP4695671B2 (ja) * | 2008-06-23 | 2011-06-08 | ウラベ株式会社 | 伸縮性経編地 |
-
1989
- 1989-07-18 JP JP18491889A patent/JP2819312B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0349692A (ja) | 1991-03-04 |
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