JP2904687B2 - 新規オリゴ糖 - Google Patents
新規オリゴ糖Info
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- JP2904687B2 JP2904687B2 JP5254748A JP25474893A JP2904687B2 JP 2904687 B2 JP2904687 B2 JP 2904687B2 JP 5254748 A JP5254748 A JP 5254748A JP 25474893 A JP25474893 A JP 25474893A JP 2904687 B2 JP2904687 B2 JP 2904687B2
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- galactopyranosyl
- oligosaccharide
- glucose
- peak
- lactose
- Prior art date
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- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
る。本発明の新規なオリゴ糖は、生体内でビフィズス菌
に対して優れた増殖作用を示すことから、機能性食品の
素材として利用することができる。
り生成したガラクトース−グルコース系のオリゴ糖は、
一般的にはガラクトオリゴ糖と称し、ビフィズス菌の増
殖因子として注目されている。そして、これらのガラク
トオリゴ糖を製造する方法としては、乳糖にアスペルギ
ルス・オリゼ起源のβ−ガラクトシダーゼを作用させる
方法(特公昭58−20226号公報)、乳糖にクリベ
ロマイセス属起源のβ−ガラクトシダーゼを作用させる
方法(特公昭63−49983号公報)、乳糖にバチル
ス・サーキュランス起源の酵素を作用させる方法(特公
平3−54559号公報)、乳糖に起源の異なる二種類
以上のβ−ガラクトシダーゼを作用させる方法(特開昭
63−91092号公報)などの酵素法や乳糖にクリプ
トコッカス属の微生物を作用させる方法(特開昭60−
251896号公報、特開昭61−236790号公
報)、乳糖に乳糖資化性のアスペルギルス属、ペニシリ
ウム属あるいはトリコデルマ属の微生物を作用させる方
法(特開昭62−79791号公報)、乳糖にブレラ属
の微生物を作用させる方法(特開昭62−208293
号公報)などの発酵法が知られている。
は、上述したように起源の異なるβ−ガラクトシダーゼ
を乳糖に作用させることにより、O−β−D−ガラクト
ピラノシル−(1→6)−O−β−D−ガラクトピラノ
シル−(1→4)−D−グルコース、O−β−D−ガラ
クトピラノシル−(1→4)−O−β−D−ガラクトピ
ラノシル−(1→4)−D−グルコース、O−β−D−
ガラクトピラノシル−(1→3)−O−β−D−ガラク
トピラノシル−(1→4)−D−グルコース、O−β−
D−ガラクトピラノシル−(1→6)−O−β−D−ガ
ラクトピラノシル−(1→6)−D−グルコース、O−
β−D−ガラクトピラノシル−(1→6)−〔O−β−
D−ガラクトピラノシル−(1→4)〕−D−グルコー
ス及びO−β−D−ガラクトピラノシル−(1→6)−
〔O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→2)〕D−
グルコースの6種類のオリゴ糖が生成されることが報告
されているに過ぎない。特に、バチルス・サーキュラン
ス起源のβ−ガラクトシダーゼを乳糖に作用させた場合
に生成するオリゴ糖は、O−β−D−ガラクトピラノシ
ル−(1→4)−O−β−D−ガラクトピラノシル−
(1→4)−D−グルコース1種類のみである。
によるオリゴ糖の製造について鋭意検討を行った結果、
乳糖にバチルス・サーキュランス起源のβ−ガラクトシ
ダーゼを長時間作用させることにより、以下の新規なオ
リゴ糖が生成することを見出し、本発明を完成するに至
った。すなわち、本発明は、新規な結合をもつガラクト
オリゴ糖を提供することを課題とする。さらに本発明
は、生体内でビフィズス菌に対して優れた増殖作用など
を示す新規なオリゴ糖を提供することを課題とする。
は、乳糖にバチルス・サーキュランス起源のβ−ガラク
トシダーゼを長時間作用させ、この反応生成物から三糖
類のガラクトオリゴ糖を採取することより得ることがで
きる。出発原料の乳糖としては、市販の乳糖は勿論のこ
と、全乳、脱脂乳、ホエーなど乳糖を含有するものを用
いることもできる。また、出発原料の乳糖に作用させる
バチルス・サーキュランス起源のβ−ガラクトシダーゼ
は、市販されているものを用いることができる。まず、
出発原料の乳糖濃度を5〜60重量%に調製した溶液
に、バチルス・サーキュランス起源のβ−ガラクトシダ
ーゼを1〜1,000単位/mlで添加し、pH3〜
8、温度5〜60℃で2時間〜数日間、好ましくは、1
8〜24時間程度の長時間酵素反応を行う。そうすると
ガラクトース転移反応あるいは縮合反応が起こり、オリ
ゴ糖が生成する。次に、このオリゴ糖を含む反応混合液
を90℃以上で3〜5分間加熱して酵素を失活させた
後、常法に従って分離、精製を行うことにより、上述し
た新規なオリゴ糖を得ることができる。
(a)〜(e)よりなる群から選択される少くとも1種
のオリゴ糖がある。 (a)O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→4)−
O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→3)−D−グ
ルコース。 (b)O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→4)−
O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→2)−D−グ
ルコース。 (c)O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→4)−
〔O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→2)〕−D
−グルコース。 (d)O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→4)−
O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→6)−D−グ
ルコース。 (e)O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→6)−
〔O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→3)〕−D
−グルコース。
明する。
Hを6.0に調整した後、バチルス・サーキュランス起
源のβ−ガラクトシダーゼ(大和化成(株)製)300
mgを加えて、60℃で18時間酵素反応を行った。こ
のようにして得られた反応混合液を100℃で5分間加
熱して酵素反応を停止させた後、活性炭カラム(10c
m×50cm)に通して未反応の乳糖及び生成したオリ
ゴ糖を吸着させた。次に、水20lをカラムに通して単
糖を溶出させた後、5%エタノール20lをカラムに通
して吸着した乳糖を完全に溶出、除去した。そして、3
0%エタノール15lをカラムに通してオリゴ糖を溶出
し、その溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥してオリゴ
糖粉末180gを得た。さらに、このオリゴ糖をゲル濾
過カラムクロマトグラフィー(Bio gel P2、
2.0cm×100cm+Biogel P4、2.0
cm×100cm)で三糖の画分のみを分取した後、凍
結乾燥して本発明の新規なオリゴ糖を含むオリゴ糖粉末
100gを得た。
たところ、図1に示したようにピーク1〜8(P1〜
8)が確認された。そこで、このピーク1〜8を活性炭
カラム(グラジェント法)及びHPLC法で繰り返し分
離、精製し、得られたオリゴ糖について性質を調べた。 (イ)構成糖 分離、精製したピーク1〜8について、1N−トリフル
オロ酢酸で加水分解を行い構成糖を測定した結果、いず
れも、ガラクトース:グルコース=2:1のモル比で生
成していることが判った。 (ロ)分子量 分離、精製したピーク1〜8について、Negativ
eイオンモードで質量分析(FAB−MS)を行った結
果、いずれも、m/e503(M−H)- が確認され
た。したがって、ピーク1〜8のオリゴ糖はいずれも三
糖であることが判った。
的性質を示した。 (1)色調: 乾燥粉末状態で白色 (2)溶解性: 水に可溶 (3)呈色反応: アニリン、ジフェニルアミン反応 + フェノール硫酸反応 + ニンヒドリン反応 (ニ)糖の結合様式 分離、精製したピーク1〜8について、あらかじめ重水
素化ホウ素ナトリウム(NaBD4)で還元した後、常
法に従ってメチル化、加水分解及びアセチル化を行い、
ガスクロマトグラフィー−質量分析計(GC−MS)で
同定した結果、表1に示した部分メチル化アルジトール
アセテートを確認した。このメチル化分析の結果によ
り、ピーク3はO−β−D−ガラクトピラノシル−(1
→4)−O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→4)
−D−グルコース、ピーク7はO−β−D−ガラクトピ
ラノシル−(1→6)−〔O−β−D−ガラクトピラノ
シル−(1→2)〕−D−グルコース、ピーク8はO−
β−D−ガラクトピラノシル−(1→6)−〔O−β−
D−ガラクトピラノシル−(1→4)〕−D−グルコー
スであり、既に報告されているオリゴ糖であることが確
認された。しかしながら、ピーク1、ピーク2、ピーク
4、ピーク5及びピーク6は、新規オリゴ糖である可能
性があるため、次に1H−NMRによる確認を行った。
−NMRのスペクトルを図2〜図7に示した。ピーク1
のスペクトルを図2に、ピーク2,4,5及び6のスペ
クトルを図3〜6に順次示す。
び(ホ)に示した性質より、ピーク1はO−β−D−ガ
ラクトピラノシル−(1→4)−O−β−D−ガラクト
ピラノシル−(1→3)−D−グルコース、ピーク2は
O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→4)−O−β
−D−ガラクトピラノシル−(1→2)−D−グルコー
ス、ピーク4はO−β−D−ガラクトピラノシル−(1
→4)−〔O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→
2)〕−D−グルコース、ピーク5はO−β−D−ガラ
クトピラノシル−(1→4)−O−β−D−ガラクトピ
ラノシル−(1→6)−D−グルコース、ピーク6はO
−β−D−ガラクトピラノシル−(1→6)−〔O−β
−D−ガラクトピラノシル−(1→3)〕−D−グルコ
ースであるとそれぞれ同定された。
Hを6.0に調整した後、バチルス・サーキュランス起
源のβ−ガラクトシダーゼ(大和化成(株)製)300
mgを加えて、60℃で24時間酵素反応を行った。こ
のようにして得られた反応混合液を100℃で5分間加
熱して酵素反応を停止させた後、活性炭カラム(10c
m×50cm)に通して未反応の乳糖及び生成したオリ
ゴ糖を吸着させた。次に、水201をカラムに通して単
糖を溶出させた後、5%エタノール201をカラムに通
して吸着した乳糖を完全に溶出、除去した。そして、3
0%エタノール151をカラムに通してオリゴ糖を溶出
し、その溶出液を減圧濃縮した後、凍結乾燥してオリゴ
糖粉末180gを得た。さらに、このオリゴ糖をゲル濾
過カラムクロマトグラフィー(Bio gel P2、
2.0cm×100cm+Biogel P4、2.0
cm×100cm)で三糖の画分のみを分取した後、凍
結乾燥して本発明の新規なオリゴ糖を含むオリゴ糖粉末
100gを得た。得られたオリゴ糖粉末には、ピーク3
のオリゴ糖、ピーク7及びピーク8のオリゴ糖が含まれ
ていたので、活性炭カラム(グラジェント法)でピーク
3のオリゴ糖を除去した後、HPLC法でピーク7及び
ピーク8のオリゴ糖を除去して本発明の新規なオリゴ糖
を得た。
糖を用い、ビフィズス菌増殖作用についてヒト腸内細菌
に対する醗酵試験により検討を行った。濃度が0.5%
となるようにオリゴ糖を添加した液体培地に、各腸内細
菌を接種し、嫌気的条件下、37℃で24時間培養した
後、OD.660nmにおける濁度を測定した。また、
対照としてグルコースを添加した液体培地で同様の試験
を行った。その結果を表2に示す。本発明の新規なオリ
ゴ糖は、Bifidobacterium infan
tisを除き他のビフィズス菌によく利用されることが
判った。また、Clostridium perfri
ngenes及びE.coliには殆ど利用されないこ
とが判った。したがってこの結果から、本発明の新規な
オリゴ糖は、ビフィズス菌の増殖因子であることが明ら
かとなった。
する作用を示す新規なオリゴ糖を提供する。本発明の新
規オリゴ糖は、粉乳、乳飲料その他の食品に添加するビ
フィズス菌増殖促進作用をもつ機能性食品素材として有
用である。
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
Claims (1)
- 【請求項1】 次の(a)〜(e)よりなる群から選択
される少くとも1種であるO−β−D−ガラクトピラノ
シル−O−β−D−ガラクトピラノシル−D−グルコー
ス。 (a)O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→4)−
O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→3)−D−グ
ルコース。 (b)O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→4)−
O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→2)−D−グ
ルコース。 (c)O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→4)−
〔O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→2)〕−D
−グルコース。 (d)O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→4)−
O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→6)−D−グ
ルコース。 (e)O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→6)−
〔O−β−D−ガラクトピラノシル−(1→3)〕−D
−グルコース。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5254748A JP2904687B2 (ja) | 1993-09-17 | 1993-09-17 | 新規オリゴ糖 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5254748A JP2904687B2 (ja) | 1993-09-17 | 1993-09-17 | 新規オリゴ糖 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0789976A JPH0789976A (ja) | 1995-04-04 |
JP2904687B2 true JP2904687B2 (ja) | 1999-06-14 |
Family
ID=17269332
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP5254748A Expired - Lifetime JP2904687B2 (ja) | 1993-09-17 | 1993-09-17 | 新規オリゴ糖 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2904687B2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3138848A4 (en) * | 2014-05-02 | 2017-03-08 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Preparation method for high-purity 4'-galactosyl-lactose composition |
Families Citing this family (7)
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JP4384656B2 (ja) | 2003-06-30 | 2009-12-16 | クラサド インコーポレイテッド | 新規のガラクトシダーゼ酵素活性を生じさせるビフィドバクテリウムビフィダムの新規株 |
GB0525857D0 (en) | 2005-12-20 | 2006-02-01 | Product and process | |
GB0601901D0 (en) | 2006-01-31 | 2006-03-08 | Product and Process | |
GB0606112D0 (en) | 2006-03-28 | 2006-05-03 | Product and process | |
BRPI0925002A2 (pt) | 2009-05-27 | 2016-06-21 | Clasado Inc | uso de uma composição para a prevenção de diarréia |
JP6072516B2 (ja) * | 2012-11-19 | 2017-02-01 | 雪印メグミルク株式会社 | アレルギー改善剤 |
GB201805578D0 (en) * | 2018-04-04 | 2018-05-16 | Optibiotix Health Ltd | Prebiotic compositions and methods of production thereof |
-
1993
- 1993-09-17 JP JP5254748A patent/JP2904687B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Carbohydr.Res.201(1),115〜123(1990) |
雪印乳業研究所報告 86号、133頁及び135〜139頁、1988年 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3138848A4 (en) * | 2014-05-02 | 2017-03-08 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Preparation method for high-purity 4'-galactosyl-lactose composition |
US10221204B2 (en) | 2014-05-02 | 2019-03-05 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Preparation method for high-purity 4′-galactosyl-lactose composition |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0789976A (ja) | 1995-04-04 |
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