DE69719367T2

DE69719367T2 - Verfahren zur herstellung einer zusammensetzung mit verzoegerter abgabe

Info

Publication number: DE69719367T2
Application number: DE69719367T
Authority: DE
Inventors: Susumu Iwasa; Masafumi Misaki; Yutaka Yamagata
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1996-12-20
Filing date: 1997-12-18
Publication date: 2003-10-16
Anticipated expiration: 2017-12-19
Also published as: ZA9711385B; CA2275422A1; DE69719367D1; WO1998027980A2; US6197350B1; DK0946169T3; EP0946169B1; US6399103B1; AU7871298A; KR20000057693A; WO1998027980A3; ATE233088T1; EP0946169A2

Description

TECHNISCHES GEBIET

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zum Herstellen einer Zubereitung mit verzögerter Freisetzung, die ein physiologisch aktives Polypeptid umfaßt.

STAND DER TECHNIK

Es ist bekannt, daß physiologisch aktive Polypeptide oder ihre Derivate in vivo eine Vielfalt pharmakologischer Aktivitäten zeigen. Einige davon sind durch Benützen von Escherichia coli, Hefen, tierischen Zellen oder Wirtstieren wie etwa Ziege und Hamster unter Anwenden der kürzlich entwickelten Gentechnik und Zelltechnologie in großem Maßstab hergestellt und der medizinischen Verwendung zugeführt worden. Diese physiologisch aktiven Polypeptide müssen wegen ihrer im allgemeinen kurzen biologischen Halbwertszeit jedoch häufig verabreicht werden. Die wiederholten Injektionen sind für die Patienten eine bedeutende physische Last.
Zum Beispiel ist das Wachstumshormon (hierin nachstehend manchmal als GH bezeichnet), ein repräsentatives Hormon, das ursprünglich im vorderen Teil der Hypophyse produziert und ausgeschieden wird, ein physiologisch aktives Polypeptid mit stark verschiedenen physiologischen Aktivitäten wie etwa der Wachstumsförderung im Körper, dem Metabolismus von Glucose und Lipiden, Anabolismus von Proteinen und der Zellproliferation und -differenzierung. Weiter wird GH in großem Maßstab durch Benützen von Escherichia coli mittels rekombinanter Gentechnik hergestellt und klinisch weltweit der medizinischen Verwendung zugeführt. GH muß jedoch wegen der kurzen biologischen Halbwertszeit häufig verabreicht werden, um eine wirkungsvolle Blutkonzentration aufrecht zu erhalten. Insbesondere im Falle von hypophysärem Zwergwuchs wird in der Praxis eine tägliche subkutane Verabreichung an Kleinkinder oder junge Patienten über einen von einigen Monaten bis mindestens 10 Jahren reichenden langen Zeitraum ausgeführt.
Zum Überwinden dieses Problems sind verschiedene Versuche unternommen worden, eine Zubereitung mit verzögerter Freisetzung zu entwickeln, die ein physiologisch aktives Polypeptid enthält.
Die JP-A-3055/1996 (EP-A-633 020) offenbart ein Verfahren zum Herstellen einer Zubereitung mit verzögerter Freisetzung, umfassend das Gestatten einem wasserlöslichen Peptid, in eine bioabbaubare Matrix, die ein bioabbaubares Polymer und ein Metallsalz einer Fettsäure in einer wäßrigen Lösung umfaßt, einzudringen und durch dieses Verfahren hergestellte Mikrokapseln mit verzögerter Freisetzung (hierin manchmal als MC bezeichnet).
Die JP-A-217 691/1996 (WO96/07399) offenbart die Herstellung eines wasserunlöslichen oder gering wasserlöslichen, mehrwertigen Metallsalzes durch Verwenden einer physiologisch aktiven Substanz vom Typ des wasserlöslichen Peptids und einer wäßrigen Zinkchloridlösung usw. und ein Verfahren zum Herstellen einer Zubereitung mit verzögerter Freisetzung, die dieses Salz und ein bioabbaubares Polymer enthält.
Die WO94/12158 offenbart den Zusatz eines die Polymererosionsrate modulierenden Mittels wie etwa Zinkhydroxid in einer Menge von 0,1 bis 30% (Gew./Gew.) bezogen auf das Polymer zu einer Polymerlösung als ein Verfahren zum Herstellen einer Zubereitung mit verzögerter Freisetzung, die humanes GH und ein bioabbaubares Polymer umfaßt. Diese Veröffentlichung offenbart weiter ein Verfahren zum Herstellen von MC als poröse Teilchen durch Sprühen einer Lösung von humanem GH und einem Polymer in einem organischen Lösungsmittel in flüssigen Stickstoff unter Erhalt der biologischen Aktivität.
Die WO92/17200 und Nature Medicine, Bd. 2, S. 795 (1996), offenbaren ein Verfahren zum Herstellen einer Zubereitung mit verzögerter Freisetzung durch Verwenden eines Zinksalzes von humanem GH.
Die WO95/29664 offenbart ein Verfahren zum Herstellen von MC, das die Schritte des Dispergierens eines Metallsalzes wie etwa Zinkcarbonat in festem Zustand in einer Polymerlösung, Zufügen einer physiologisch aktiven Substanz wie etwa Hormone und getrenntes Dispergieren der physiologisch aktiven Substanz und eines Metallkationbestandteils in einem bioabbaubaren Polymer umfaßt.
Obschon wie vorstehend beschrieben verschiedene Versuche zum Herstellen einer Zubereitung mit verzögerter Freisetzung mit einer erhaltenen physiologischen Aktivität eines physiologisch aktiven Polypeptids unternommen worden sind, ist noch keine klinisch zufriedenstellende Zubereitung erhalten worden, da einige physiologisch aktive Polypeptide Probleme wie etwa ein niedriges Einschlußverhältnis des physiologisch aktiven Polypeptids in der Zubereitung, eine übermäßige Freisetzung im Anfangsstadium nach der Verabreichung, eine nicht erreichte konstante Freisetzung über einen langen Zeitraum und eine nicht erhaltene, zufriedenstellende Blutkonzentration über einen langen Zeitraum aufweisen. Weiter sind Herstellungsverfahren in vielen Fällen nicht zur Industrialisierung geeignet, die in der derzeitigen Lage eine Herstellung in großem Maßstab voraussetzt.

Offenbarung der Erfindung

Über eine intensive Untersuchung zum Lösen der vorstehenden Probleme fanden die Erfinder, daß die gleichzeitige Anwesenheit eines als MC-Grundlage verwendeten Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers (hierin nachstehend manchmal als PLGA abgekürzt) und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel unerwarteterweise ein Lösen des Zinkoxids liefert, das in einem organischen Lösungsmittel selbst unlöslich ist, und wirkungsvoll einen PLGA-Zinkoxid-Komplex mit hohem Gehalt liefert und daß die direkte Dispersion eines physiologisch aktiven Polypeptids in einer Lösung des PLGA-Zinkoxid-Komplexes in einem organischen Lösungsmittel und das nachfolgende Ausformen eine Zubereitung mit verzögerter Freisetzung mit ausgezeichneten Eigenschaften wie etwa ein erhöhtes Einschlußverhältnis des physiologisch aktiven Polypeptids, eine verringerte Anfangsfreisetzung nach der Verabreichung und eine ausgezeichnete verzögerte Freisetzung liefert. Weiter fanden die Erfinder, daß dieses Herstellungsverfahren eine verringerte Stufenzahl aufweist und ein zur Industrialisierung geeignetes Verfahren ist. Nach weiteren Untersuchungen entwickelten die Erfinder die vorliegende Erfindung.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf
(1) ein Verfahren zum Herstellen einer Zubereitung mit verzögerter Freisetzung, das das Dispergieren eines physiologisch aktiven Polypeptids in einer Lösung eines bioabbaubaren Polymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel, gefolgt vom Entfernen des organischen Lösungsmittels umfaßt, wobei das bioabbaubare Polymer ein Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer ist;
(2) das Verfahren gemäß vorstehend (1), wobei das physiologisch aktive Polypeptid ein Wachstumshormon ist;
(3) das Verfahren gemäß vorstehend (1), wobei das molekulare Zusammensetzungsverhältnis Milchsäure/Glykolsäure in dem Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer von 85/15 bis 50/50 beträgt;
(4) das Verfahren gemäß vorstehend (1), wobei das Gewichtsmittel des Molekulargewichts des Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers von 8000 bis 20000 beträgt;
(5) das Verfahren gemäß vorstehend (1), wobei der Zinkgehalt bezogen auf das bioabbaubare Polymer in der Lösung des organischen Lösungsmittels von 0,001 bis 2 Gew.-% beträgt;
(6) das Verfahren gemäß vorstehend (1), wobei der mittlere Teilchendurchmesser der Zubereitung mit verzögerter Freisetzung von 0,1 bis 300 um beträgt;
(7) das Verfahren gemäß vorstehend (1), wobei die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung zur Injektion bestimmt ist;
(8) das Verfahren gemäß vorstehend (1), wobei eine O/W-Emulsion, die eine durch Dispergieren eines Wachstumshormons in einer Lösung eines Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel als Ölphase hergestellte Dispersion umfaßt, dem In-Wasser- Trocknen unterzogen wird;
(9) das Verfahren gemäß vorstehend (1), wobei die Zubereitung eine Mikrokapsel ist;
(10) eine Lösung eines Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel;
(11) einen Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer-Zinkoxid-Komplex, der in einem organischen Lösungsmittel löslich ist und der durch das gemeinsame Vorliegen eines Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel erhalten wird;
(12) eine Dispersion, die durch Dispergieren eines physiologisch aktiven Polypeptids in einer Lösung eines Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel hergestellt wird;
(13) die Dispersion gemäß vorstehend (12), wobei das physiologisch aktive Polypeptid ein Wachstumshormon ist, und
(14) die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung, die durch das Verfahren gemäß vorstehend (1) hergestellt wird.
Das in der vorliegenden Erfindung verwendete Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer, das hierin nachstehend auch als bioabbaubares Polymer bezeichnet wird, kann durch katalysatorfreie Dehydratation-Kondensation-Polymerisation hergestellt werden und kann eine freie terminale Carboxygruppe aufweisen.
Die Polymerisation kann vom Random-, Block- oder Pfropftyp sein. Wenn die α- Hydroxycarbonsäuren als Ausgangsmaterialien ein optisch aktives Zentrum in ihren Molekülstrukturen aufweisen, können sie von der D-, L- oder DL- Konfiguration sein.
Unter diesen Polymeren ist ein bioabbaubares Polymer mit einer freien terminalen Carboxygruppe bevorzugt.
Das bioabbaubare Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer weist ein Zusammensetzungsverhältnis (Mol%) von vorzugsweise 100/0 bis 40/60, bevorzugter von 85/15 bis 50/50 auf.
In der vorliegenden Beschreibung wird das Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer manchmal einfach als Milchsäure/Glykolsäure-Polymer bezeichnet.
Das Gewichtsmittel des Molekulargewichts des vorstehend beschriebenen Milchsäure/Glykolsäure-Polymers ist vorzugsweise etwa 3000 bis etwa 25000, bevorzugter etwa 5000 bis etwa 20000.
Der Dispersionsgrad (Gewichtsmittel des Molekulargewichts/Zahlenmittel des Molekulargewichts) des Milchsäure/Glykolsäure-Polymers ist vorzugsweise etwa 1,2 bis etwa 4,0, bevorzugter etwa 1,5 bis etwa 3,5.
Was das Gewichtsmittel des Molekulargewichts und den Dispersionsgrad betrifft, gilt in der vorliegenden Beschreibung, daß ersteres als Polystyrol ausgedrückt wird, das durch Gelpermeationschromatographie (GPC) unter Verwenden von 9 Polystyrolen als Bezugssubstanzen mit Gewichtsmitteln des Molekulargewichts von 120 000, 52 000, 22 000, 9 200, 5 050, 2 950, 1 050, 580 beziehungsweise 162 bestimmt wurde und das letzterer daraus berechnet wird. Die vorstehende Bestimmung wurde mittels einer GPC-Säule KF804Lx2 (hergestellt von Showa Denko, Japan) und eines RI-Monitors L-3300 (hergestellt von Hitachi, Ltd., Japan) mit Chloroform als mobiler Phase durchgeführt.
Ein bioabbaubares Polymer mit einer freien terminalen Carboxygruppe ist ein bioabbaubares Polymer, bei dem das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der GPC-Messung und das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der mengenmäßigen Endgruppenbestimmung miteinander nahezu übereinstimmen.
Das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der mengenmäßigen Endgruppenbestimmung wird wie folgt berechnet:
etwa 1 bis 3 g des bioabbaubaren Polymers werden in einem Lösungsmittelgemisch aus Aceton (25 ml) und Methanol (5 ml) gelöst und die Lösung wird rasch mit 0,05 N alkoholischer Kaliumhydroxidlösung titriert, während bei Raumtemperatur (20ºC) mit Phenolphthalein als Indikator zum Bestimmen des Carboxygruppengehalts gerührt wird. Das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der mengenmäßigen Endgruppenbestimmung wird aus der folgenden Gleichung berechnet:
Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der mengenmäßigen Endgruppenbestimmung = 20000 · A/B
A: Gewichtsmasse (g) des bioabbaubaren Polymers
B: Menge (ml) der zugesetzten 0,05 N alkoholischen Kaliumhydroxidlösung bis der Titrationsendpunkt erreicht ist
Während das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der mengenmäßigen Endgruppenbestimmung ein absoluter Wert ist, ist der auf der Grundlage der GPC-Messung ein relativer Wert, der in Abhängigkeit von verschiedenen analytischen Bedingungen (z. B. Art der mobilen Phase, Art der Säule, Bezugssubstanz, gewählte Spaltbreite, gewählte Grundlinie usw.) schwankt. Es ist daher schwierig, eine absolute zahlenmäßige Darstellung dieser beiden Werte zu haben. Die Beschreibung, daß das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der GPC-Messung und das auf der Grundlage der mengenmäßigen Endgruppenbestimmung nahezu übereinstimmen, bedeutet jedoch zum Beispiel, daß das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der mengenmäßigen Endgruppenbestimmung innerhalb in den Bereich von etwa dem 0,5- bis etwa 2fachen, vorzugsweise vom etwa 0,7- bis etwa 1,5fachen des Zahlenmittels des Molekulargewichts auf der Grundlage der GPC-Messung bei einem Polymer, das aus einer oder mehreren α-Hydroxycarbonsäuren synthetisiert wurde, fällt.
Im Falle eines Polymers mit einer freien terminalen Carboxygruppe, das aus einer oder mehreren α-Hydroxycarbonsäuren durch katalysatorfreie Dehydratation- Kondensation-Polymerisation synthetisiert wurde, stimmen zum Beispiel das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der GPC-Messung und das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der mengenmäßigen Endgruppenbestimmung miteinander nahezu überein. Andererseits ist im Falle eines Polymers mit im wesentlichen keinen freien terminalen Carboxygruppen, das aus einem cyclischen Dimeren durch ringöffnende Polymerisation unter Verwenden eines Katalysators synthetisiert wurde, das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der mengenmäßigen Endgruppenbestimmung bedeutend (etwa 2 Mal oder mehr) höher als das auf der Grundlage der GPC-Messung. Dieser Unterschied ermöglicht es, ein Polymer mit einer freien terminalen Carboxygruppe von einem Polymer ohne freie terminale Carboxygruppe eindeutig zu unterscheiden.
Ein Milchsäure/Glykolsäure-Polymer mit einer freien terminalen Carboxygruppe kann durch ein sich bekanntes Verfahren wie etwa das in der JP-A-28 521/1986 beschriebene (z. B. ein Verfahren durch katalysatorfreie Dehydratation- Kondensation-Polymerisationsreaktion oder Dehydratation-Kondensation- Polymerisationsreaktion in Gegenwart eines anorganischen festen Säurekatalysators) hergestellt werden.
Die Zersetzungs/Ausscheidungsrate eines Milchsäure/Glykolsäure-Polymers schwankt breit in Abhängigkeit von der Zersetzungsgeschwindigkeit oder dem Gewichtsmittel des Molekulargewichts. Die Wirkstofffreisetzungsdauer kann durch Erniedrigen des Glykolsäureverhältnisses oder Erhöhen des Molekulargewichts verlängert werden, da die Zersetzung/Ausscheidung üblicherweise verzögert wird, wenn das Glykolsäureverhältnis abnimmt. Umgekehrt kann die Wirkstofffreisetzungsdauer durch Erhöhen des Glykolsäureverhältnisses oder Erniedrigen des Molekulargewichts verkürzt werden. Zum Erhalten einer Zubereitung mit langzeitig verzögerter Freisetzung (z. B. 1-4 Monate) ist es bevorzugt, ein Milchsäure/Glykolsäure-Polymer zu verwenden, dessen Zusammensetzungsverhältnis und Gewichtsmittel des Molekulargewichts innerhalb der vorstehend beschriebenen Bereiche liegen.
Bei dem Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer ist das Milchsäure/Glykolsäure- Zusammensetzungsverhältnis (Mol%) vorzugsweise etwa 85/15 bis etwa 50/50, bevorzugter etwa 75/25 bis etwa 50/50. Das Gewichtsmittel des Molekulargewichts des Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers ist vorzugsweise etwa 8 000 bis etwa 20 000, bevorzugter etwa 10 000 bis etwa 20 000. Weiter ist der Dispersionsgrad (Gewichtsmittel des Molekulargewichts/Zahlenmittel des Molekulargewichts) des Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers etwa 1,2 bis etwa 4,0, bevorzugter etwa 1,5 bis etwa 3,5.
Das verwendete Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer kann durch die bekannten Verfahren wie etwa die in der vorstehend beschriebenen Veröffentlichung und dergleichen beschriebenen Verfahren hergestellt werden. Das Copolymer ist vorzugsweise eines, das durch katalysatorfreie Dehydratationspolymerisation hergestellt wurde. Es ist bevorzugt, daß das Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (PLGA), bei dem das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der mengenmäßigen Endgruppenbestimmung und das Zahlenmittel des Molekulargewichts auf der Grundlage der GPC-Messung miteinander nahezu übereinstimmen.
Weiter können zwei Arten Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer, die sich im Zusammensetzungsverhältnis und dem Gewichtsmittel des Molekulargewichts unterscheiden in einer Mischung in einem vorgegebenen Verhältnis verwendet werden. Ein typisches Beispiel ist ein Gemisch aus einem Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer, bei dem das Zusammensetzungsverhältnis Milchsäure/Glykolsäure (Mol%) etwa 75/25 ist und das Gewichtsmittel des Molekulargewichts etwa 10 000 ist, und einem Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer, bei dem das Zusammensetzungsverhältnis Milchsäure/Glykolsäure (Mol%) etwa 50/50 und das Gewichtsmittel des Molekulargewichts etwa 12 000 ist. Das bevorzugte Gewichtsverhältnis des Gemisches ist etwa 25/75 bis etwa 75/25.
In der vorliegenden Erfindung ist das zur Herstellung des PLGA-Zinkkomplexes verwendete Zinkoxid eine wenig wasserlösliche Zinkverbindung und ist auch in einem organischen Lösungsmittel wie etwa Dichlormethan selbst unlöslich oder schwerlöslich. Die gleichzeitige Anwesenheit von Zinkoxid und PLGA in einem organischen Lösungsmittel wie etwa Dichlormethan liefert ziemlich unerwartet die wirkungsvolle Bildung eines PLGA-Zinkoxid-Komplexes und das nachfolgende Auflösen in dem organischen Lösungsmittel. Diese Arbeitsgänge werden einfach durch Zugabe von PLGA und Zinkoxid in dem organischen Lösungsmittel bewerkstelligt und benötigen kein getrenntes Verfahren für den PLGA-Zinkoxid- Komplex. Der auf diese Weise erhaltenen Lösung des PLGA-Zinkoxid-Komplexes in einem organischen Lösungsmittel wird ein physiologisch aktives Polypeptid direkt unter leichtem Herstellen von MC zugefügt, die das physiologisch aktive Polypeptid enthalten. Weiter halten die so erhaltenen MC das physiologisch aktive Polypeptid biologisch stabil und liefern eine Zubereitung mit verzögerter Freisetzung, die eine verringerte Anfangsfreisetzung und eine ausgezeichnete verzögerte Freisetzung zeigt.
Das in der vorliegenden Erfindung verwendete physiologisch aktive Polypeptid schließt ein physiologisch aktives Polypeptid mit einem Molekulargewicht von vorzugsweise etwa 1 000 bis etwa 50 000, bevorzugter etwa 5 000 bis etwa 40 000 ein.
Die repräsentative Aktivität des physiologisch aktiven Polypeptids ist eine hormonelle Aktivität. Das physiologisch aktive Polypeptid kann ein natürliches Produkt, synthetisches Produkt, halbsynthetisches Produkt und deren Derivate und Analoga sein. Die Wirkungsweise des physiologisch aktiven Polypeptids kann agonistisch oder antagonistisch sein.
Das physiologisch aktive Polypeptid zur Verwendung bei der vorliegenden Erfindung schließt Peptidhormone, Cytokine, Peptidneurotransmitter, hämatopoetische Faktoren, verschiedene Wachstumsfaktoren, Enzyme, Polypetidantibiotika und analgetische Peptide ein.
Beispiele der Peptidhormone schließen Insulin, Somatostatin, Somatostatinderivate (Sandostatin; siehe US-Patent Nr. 4 087 390, 4 093 574, 4 100 117 und 4 253 998), Wachstumshormone (GH), natriumdiuretische Peptide, Gastrin, Prolactin, adrenokortikotropes Hormon (ACTH), ACTH-Derivate (z. B. Ebiratid), Melanozyten-stimulierendes Hormon (MSH), Thyreotropinfreisetzendes Hormon (TRH) und Salze und Derivate davon (siehe JP-A-121 273/1975 und 116 465/1977), Thyroid-stimulierendes Hormon (TSH), Luteinisierungshormon (LH), Follikel-stimulierendes Hormon (FSH), humanes Chorion-Gonadotropin (HCG), Thymosin, Motilin, Vasopressin, Vasopressinderivat [Desmopressin, siehe Folia Endocrinologica Japonica, Bd. 54, Nr. 5, S. 676-691 (1978)], Oxytocin, Calcitonin, Parathyroidhormon (PTH), Glucagon, Secretin, Pancreozymin, Cholecystokinin, Angiotensin und humanes Plazentalactogen ein. Die Peptidhormone sind vorzugsweise Insulin und Wachstumshormone.
Die Cytokine schließen Lymphokine und Monokine ein. Die Lymphokine schließen Interferone (alpha, beta und gamma) und Interleukine (IL-2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12) ein. Die Monokine schließen Interleukin-1 (IL-1) und Tumornekrosefaktor (TNF) ein. Das bevorzugte Cytokin ist ein Lymphokin und bevorzugter Interferon. Das besonders bevorzugte Cytokin ist Interferon-α. Die Peptidneurotransmitter schließen Substanz P, Serotonin und GABA ein. Die hämatopoetischen Faktoren schließen Erythropoietin (EPO), koloniestimulierende Faktoren (G-CSF, GM-CSF, M-CSF), Thrombopoietin (TPO), aus Blutplättchen stammenden Wachstumsfaktor und Megakaryozytenpotentiator ein.
Die verschiedenen Wachstumsfaktoren schließen basische und saure Fibroblastenwachstumsfaktoren (FGF) und ihre Familien (z. B. EGF, TGF-α, TGF- β, PDGF, saurer FGF, basischer FGF, FGF-9), Nervenwachstumsfaktor (NGF) und seine Familie (z. B. BDNF, NT-3, NT-4, CNTF, GDNF), insulinähnliche Wachstumsfaktoren (z. B. IGF-1, IGF-2 usw.) und Knochenmorphogeneseprotein (BMP) und seine Familie ein.
Die Enzyme schließen Superoxiddismutase (SOD), Urokinase, Gewebeplasminogenaktivator (TPA), Asparaginase und Kallikrein ein.
Die Polypeptidantibiotika schließen Polymixin B, Colistin, Gramicidin und Bacitracin ein.
Die analgetischen Peptide schließen Enkephalin, Enkephalinderivate (siehe US- Patent Nr. 4 277 394 und EP-A-31 567), Endorphin und Kyotorphin ein.
Weiter schließen die physiologisch aktiven Polypeptide Thymopoietin, Dynorphin, Bombesin, Caerulein, Thymostimulin, Thymus-Serum-Faktor (THF), Thymus- Blut-Faktor (FTS) und Derivate davon (siehe US-Patent Nr. 4 229 439), andere Thymusfaktoren [Igaku no Ayumi, Bd. 125, Nr. 10, S. 835-843 (1983)], Neurotensin, Bradykinin und Endothelin-antagonistische Peptide (siehe EP-A-436 189, 457 195 und 496 452 und JP-A-94 692/1991 und 130 299/1991) ein.
Die besonders bevorzugten, physiologisch aktiven Polypeptide schließen Wachstumshormon und Insulin ein.
Wenn das physiologisch aktive Polypeptid in dieser Erfindung ein Metall enthält, ist der Metallgehalt vorzugsweise nicht größer als 0,1%, bevorzugter nicht größer als 0,01% und am bevorzugtesten nicht größer als 0,001%. Somit sind im wesentlichen metallfreie, physiologisch aktive Polypeptide für die vorliegende Erfindung am besten geeignet. Kristallines Insulin enthält zum Beispiel üblicherweise kleine Mengen Schwermetalle wie etwa Zink, Nickel, Kobalt und Cadmium. 0,4% (Gew./Gew.) Zink enthaltendes Insulin liegt als stabiles Hexamer vor und scheint bei der Wechselwirkung mit dem bioabbaubaren Polymermetallsalz verhältnismäßig inert zu sein.
Nötigenfalls können die in dem physiologisch aktiven Polypeptid vorkommenden Metalle vorher entfernt werden. Als Verfahren zum Entfernen der Metalle werden bekannte Verfahren eingesetzt. Zum Beispiel liefert das Dialysieren einer sauren, wäßrigen Salzsäurelösung von Insulin gegen Wasser oder eine wäßrige Ammoniumacetlösung und Lyophilisieren des Dialysats amorphes Insulin mit minimalem Metallgehalt.
Das Wachstumshormon kann aus jeder Art stammen und es ist vorzugsweise eines, das aus Menschen stammt. Obschon aus der Hypophyse extrahierte natürliche Produkte für die vorliegende Erfindung verwendet werden können, ist ein GH des genetisch rekombinanten Typs (JP-B-12 996/1994, 48 987/1994) bevorzugt. Das humane GH des rekombinanten Typs mit derselben Struktur wie ein natürlicher Typ ohne Methionin an der N-terminalen Gruppe ist bevorzugter. Ein derartiges GH kann in Form eines Metallsalzes vorliegen und eines im wesentlichen kein Metall enthaltendes wird ebenfalls verwendet.
Das bei der vorliegenden Erfindung verwendete organische Lösungsmittel weist vorzugsweise einen 120ºC nicht überschreitenden Siedepunkt auf. Derartige organische Lösungsmittel schließen halogenierte Kohlenwasserstoffe (z. B. Dichlormethan, Chloroform, Tetrachlorkohlenstoff usw.), Alkohole (z. B. Ethanol, Methanol, 1,4-Butandiol, 1,5-Pentandiol usw.), Ethylacetat, Acetonitril und so weiter ein. Diese Lösungsmittel können auch als Gemisch in einem vorgegebenen Verhältnis verwendet werden. Das bevorzugte, einzeln verwendete organische Lösungsmittel schließt zum Beispiel Dichlormethan und Acetonitril ein.
Das bevorzugte, als Gemisch verwendete organische Lösungsmittel schließt zum Beispiel eine Kombination aus halogenierten Kohlenwasserstoffen (z. B. Dichlormethan, Chloroform) und Alkohole (z. B. Ethanol, Methanol, 1,4- Butandiol, 1,5-Pentandiol) oder Acetonitril ein. Insbesondere wird eine Kombination von Dichlormethan und Acetonitril breit verwendet. Das Mischungsverhältnis (Volumenverhältnis) der halogenierten Kohlenwasserstoffe bezogen auf Alkohole oder Acetonitril reicht von etwa 40 : 1 bis etwa 1 : 1, vorzugsweise von etwa 20 : 1 bis etwa 1 : 1. Insbesondere ist die einzelne Verwendung halogenierter Kohlenwasserstoffe wie etwa Dichlormethan bevorzugt.
In der vorliegenden Erfindung wird Zinkoxid zur Herstellung einer Zubereitung mit verzögerter Freisetzung vorzugsweise im Zustand eines feinen Pulvers verwendet. Obschon von der Reaktionszeit erwartet wird, daß sie kürzer wird, wenn der Durchmesser kleiner ist, treten zur selben Zeit Handhabungsprobleme auf, da sich die Bröckeligkeit erhöht. Der Teilchendurchmesser des Zinkoxids ist üblicherweise etwa 0,001 um bis etwa 10 um, vorzugsweise etwa 0,005 um bis etwa 1 um, bevorzugter etwa 0,01 um bis etwa 0,1 um.
Bei einer Lösung des bioabbaubaren Polymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel ist der Zinkgehalt (Zn) als Gewichtsverhältnis bezogen auf das bioabbaubare Polymer vorzugsweise etwa 0,001 bis etwa 2% (Gew./Gew.), bevorzugter etwa 0,01 bis etwa 2% (Gew./Gew.), am bevorzugtesten etwa 0,1 bis etwa 2% (Gew./Gew.). Der Zinkgehalt in der Lösung des bioabbaubaren Polymers und Zinkoxid in dem organischen Lösungsmittel wird durch gemeinhin bekannte Analysenverfahren wie etwa Atomabsorptionsanalyse bestimmt.
In der vorliegenden Beschreibung ist die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung solange nicht beschränkt wie sie in Form feiner Teilchen vorliegt, die ein physiologisch aktives Polypeptid und eine Mikrokapselgrundlage (d. h. der bioabbaubare Polymer-Zinkoxid-Komplex) umfassen. Beispiele der feinen Teilchen schließen Mikrokapseln, die einen Wirkstoffkern in jedem Teilchen enthalten, Mehrkern-Mikrokapseln, die eine große Anzahl Wirkstoffkerne in jedem Teilchen enthalten und Mikrokugeln ein, bei denen ein Wirkstoff in molekularer Form in der Mikrokapselgrundlage gelöst oder dispergiert ist.
Die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung in der vorliegenden Erfindung wird durch Dispergieren eines physiologisch aktiven Polypeptids in einer Lösung eines bioabbaubaren Polymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel und anschließend Entfernen des Lösungsmittels hergestellt. In der vorliegenden Beschreibung wird ein Produkt, das aus dem bioabbaubaren Polymer und Zinkoxid hergestellt wird und in einer klaren Lösung ausgeformt wird, wobei das bioabbaubare Polymer und Zinkoxid in dem organischen Lösungsmittel gelöst sind, als "bioabbaubares Polymer-Zinkoxid-Komplex" bezeichnet.
Der bioabbaubare Polymer-Zinkoxid-Komplex kann eine Verbindung, die sich aus einer intermolekularen Wechselwirkung ergibt, wie etwa normale Salze, Komplexsalze, Doppelsalze und metallorganische Verbindungen oder eine Zusammensetzung sein.
Der bioabbaubare Polymer-Zinkoxid-Komplex weist Eigenschaften wie etwa das Lösen in einem organischen Lösungsmittel und Versehen der Zubereitung mit verzögerter Freisetzung als Endprodukt mit einer ausgezeichneten Verzögerung auf. Weiter wird der Komplex, bei dem das bioabbaubare Polymer PLGA ist, als "PLGA-Zinkoxid-Komplex" bezeichnet.
In der vorliegenden Beschreibung bedeutet "Dispersion" eine homogene Dispersion eines physiologisch aktiven Polypeptids in einem organischen Lösungsmittel. Sowohl eine Lösung als auch Suspension des physiologisch aktiven Polypeptids in dem organischen Lösungsmittel sind in der Dispersion der vorliegenden Erfindung inbegriffen.
Bei dem Verfahren der vorliegenden Erfindung schließen Verfahren zum Entfernen des organischen Lösungsmittels zum Beispiel (a) ein In-Wasser- Trocknungsverfahren (O/W-Verfahren), (b) Phasentrennungsverfahren (Koazervationsverfahren), (c) Sprühtrocknungsverfahren und Abwandlungen davon ein.
Hierin nachstehend wird ein Herstellungsverfahren beschrieben, bei dem Mikrokapseln als Zubereitung mit verzögerter Freisetzung hergestellt werden.
Bei dem Verfahren der vorliegenden Erfindung läßt man das bioabbaubare Polymer und Zinkoxid zuerst zusammen in einem organischen Lösungsmittel vorliegen, um eine Lösung eines bioabbaubaren Polymer-Zinkoxid-Komplexes in dem organischen Lösungsmittel herzustellen. Obschon die Konzentration des bioabbaubaren Polymers in der Lösung in Abhängigkeit vom Molekulargewicht und der Art des organischen Lösungsmittels schwankt, ist sie zum Beispiel etwa 0,1 bis etwa 80% (Gew./Gew.), vorzugsweise etwa 1 bis etwa 70% (Gew./Gew.), bevorzugter etwa 2 bis etwa 60% (Gew./Gew.). Die zugesetzte Zinkoxidmenge schwankt in Abhängigkeit von der Art des organischen Lösungsmittels und ist zum Beispiel etwa 0,001 bis etwa 5% (Gew./Gew.), vorzugsweise etwa 0,01 bis etwa 2,5% (Gew./Gew.), bevorzugter etwa 0,1 bis etwa 2,5% (Gew./Gew.) bezogen auf die Menge des bioabbaubaren Polymers.
Was die Reihenfolge der Zugabe des bioabbaubaren Polymers und Zinkoxids zu dem organischen Lösungsmittel betrifft, kann Zinkoxid sowohl im Pulverzustand als auch in dispergiertem Zustand in dem organischen Lösungsmittel einer Lösung des bioabbaubaren Polymers in dem organischen Lösungsmittel zugefügt werden. Umgekehrt kann eine Lösung des bioabbaubaren Polymers in dem organischen Lösungsmittel einer Dispersion von Zinkoxid in dem organischen Lösungsmittel zugefügt werden. Weiter kann das organische Lösungsmittel zugefügt werden, nachdem sowohl das bioabbaubare Polymer als auch Zinkoxid im Pulverzustand vermischt worden sind.
Die Bedingungen zum Herstellen einer Lösung des PLGA-Zinkoxid-Komplexes aus PLGA und Zinkoxid können entsprechend dem Teilchendurchmesser des Zinkoxids, der Art des organischen Lösungsmittels und diesen Zusammensetzungen geändert werden. Der PLGA-Zinkoxid-Komplex kann durch die Reaktion bei üblicherweise etwa 0 bis etwa 30ºC, vorzugsweise etwa 2 bis etwa 25ºC während etwa 1 bis etwa 168 Stunden, vorzugsweise etwa 12 bis etwa 96 Stunden, bevorzugter etwa 24 bis etwa 72 Stunden, erhalten werden. Die Reaktionszeit ist jedoch nicht auf die vorstehenden Bereiche beschränkt und kann dadurch bestimmt werden, daß man Beobachtungen des flüssigen Zustandes mit bloßem Auge als Anzeiger verwendet. Die Herstellung des PLGA- Zinkoxid-Komplexes in der vorliegenden Erfindung kann mit bloßem Auge bestätigt werden, da Zinkoxid, das sich zum Zugabezeitpunkt in dispergiertem Zustand befindet, sich in dem organischen Lösungsmittel unter Ergeben einer klaren Lösung löst.
Obschon diese Reaktion einfach durch die gleichzeitige Anwesenheit von PLGA und Zinkoxid in dem organischen Lösungsmittel abläuft, ist die unter Rühren oder Schütteln durch ein geeignetes Rühr- oder Schüttelmittel durchgeführte Reaktion für eine Verringerung der Reaktionszeit von Vorteil. Weiter ist die unter Ultraschall durchgeführte Reaktion gleichermaßen bevorzugt. Wenn die Reaktionstemperatur höher wird, wird die Reaktionszeit kürzer, während die höhere Reaktionstemperatur gleichzeitig von einer schnelleren Zersetzung des PLGA begleitet wird.
Auf den so erhaltenen bioabbaubaren Polymer-Zinkoxid-Komplex wird vorzugsweise als Lösung in einem organischen Lösungsmittel, nötigenfalls als Feststoff nach dem Entfernen des organischen Lösungsmittels, das nächste Verfahren angewendet.
Anschließend wird ein physiologisch aktives Polypeptid vorzugsweise im Pulverzustand zum Lösen oder Dispergieren in einer Menge von etwa 0,1 bis etwa 50% (Gew./Gew.), vorzugsweise etwa 1 bis etwa 20% (Gew./Gew.), bevorzugter etwa 3 bis etwa 15% (Gew./Gew.), der Lösung des bioabbaubaren Polymers und Zinkoxid in dem organischen Lösungsmittel unter Herstellen einer Dispersion des bioabbaubaren Polymers, Zinkoxid und des physiologisch aktiven Polypeptids in einem organischen Lösungsmittel (hierin nachstehend einfach als physiologisch aktive Polypeptiddispersion bezeichnet) zugefügt, Falls das physiologisch aktive Polypeptid Eigenschaften wie etwa kein Lösen in der Lösung des bioabbaubaren Polymers und Zinkoxid in dem organischen Lösungsmittel, Trübung durch Zugabe im Pulverzustand und Widerstand gegenüber der Dispergierung aufweist, ist es bevorzugt, daß das physiologisch aktive Polypeptid zuvor in dem organischen Lösungsmittel dispergiert wird. Der Lösung des organischen Lösungsmittels können Stabilisatoren für das physiologisch aktive Polypeptid (z. B. Serumalbumin, Gelatine, Protaminsulfat) zugefügt werden.
Zum Zwecke der homogenen Dispersion des physiologisch aktiven Polypeptids in dem organischen Lösungsmittel ist der Zusatz äußerer physikalischer Energie bevorzugt. Derartige Verfahren schließen zum Beispiel eine Ultrabeschallung, einen Rührer vom Turbinentyp und Homogenisator ein. In diesem Fall ist die Teilchengröße des physiologisch aktiven Polypeptids in dem organischen Lösungsmittel etwa 0,01 bis etwa 200 um, vorzugsweise etwa 0,05 bis etwa 100 um, bevorzugter etwa 0,1 bis etwa 50 um. Die Konzentration des physiologisch aktiven Polypeptids in dem organischen Lösungsmittel ist etwa 1 bis etwa 50%, vorzugsweise etwa 2 bis etwa 20%. Eine derartige Behandlung verleiht dem physiologisch aktiven Polypeptid in dem organischen Lösungsmittel eine gleichförmige Teilchengröße und liefert eine homogene Dispersion in einer Lösung des bioabbaubaren Polymers und Zinkoxid in dem organischen Lösungsmittel.
Weiter kann das physiologisch aktive Polypeptid unabhängig von dem bioabbaubaren Polymer-Zinkoxid-Komplex zuvor in dem organischen Lösungsmittel dispergiert werden. In diesem Fall können die Zusammensetzung des verwendeten organischen Lösungsmittels und die des zum Lösen des bioabbaubaren Polymers und Zinkoxids verwendeten organischen Lösungsmittels gleich oder von einander verschieden sein. Es ist zum Beispiel möglich, daß der bioabbaubare Polymer-Zinkoxid-Komplex in Dichlormethan gelöst wird, das physiologisch aktive Polypeptid in Acetonitril dispergiert wird und anschließend beide gemischt werden. In diesem Fall ist das Verhältnis (Volumenverhältnis) des physiologisch aktiven Polypeptids zu dem bioabbaubaren Polymer-Zinkoxid- Komplex zum Beispiel etwa 1 : 1000 bis etwa 1 : 1, vorzugsweise etwa 1 : 200 bis etwa 1 : 5, insbesondere bevorzugt etwa 1 : 100 bis etwa 1 : 5.

(a) In-Wasser-Trocknungsverfahren (O/W-Verfahren)

Die Dispersion des in der vorstehenden Weise hergestellten physiologisch aktiven Polypeptids wird weiter einer wäßrigen Phase unter Bilden einer O/W-Emulsion zugefügt. Anschließend wird das Lösungsmittel in der Ölphase unter Herstellen von Mikrokapseln verdampft. In diesem Fall kann der äußeren wäßrigen Phase ein Emulgator zugesetzt werden. Der Emulgator kann jede Substanz sein, die zum Liefern einer stabilen O/W-Emulsion befähigt ist. Beispiele derartiger Emulgatoren schließen anionische Tenside, nichtionische Tenside, Polyoxyethylen-Rizinusölderivate, Polyvinylpyrrolidon, Polyvinylalkohol, Carboxymethylcellulose, Lecithin, Gelatine, Hyaluronsäure und so weiter ein. Der bevorzugte Emulgator ist Polyvinylalkohol. Diese Emulgatoren können einzeln oder in Kombination zweier oder mehrerer verwendet werden. Die Konzentration des Emulgators in der äußeren wäßrigen Phase reicht von etwa 0,001 bis etwa 20% (Gew./Gew.), vorzugsweise von etwa 0,01 bis etwa 10% (Gew./Gew.), insbesondere bevorzugt von etwa 0,05 bis etwa 5% (Gew./Gew.).
Die so erhaltenen Mikrokapseln werden durch Zentrifugieren oder Filtration isoliert, mit destilliertem Wasser zum Entfernen des an der Mikrokapseloberfläche haftenden Emulgators usw. gewaschen, in destilliertem Wasser erneut dispergiert und lyophilisiert.
Anschließend werden nötigenfalls Wasser und das organische Lösungsmittel in den Mikrokapseln durch Erhitzen weiter entfernt. Das Erhitzen kann unter verringertem Druck ausgeführt werden. Was die Erhitzungsbedingungen betrifft, wird das Erhitzen und Trocknen bei einer Temperatur ausgeführt, die nicht niedriger als die Glasübergangstemperatur des bioabbaubaren Polymers und nicht so hoch ist, um eine Aggregation jedes Mikrokapselteilchens zu bewirken. Das Erhitzen und Trocknen wird vorzugsweise bei einer von der Glasübergangstemperatur des bioabbaubaren Polymers bis zu einer Temperatur, die etwa 30ºC höher als die Glasübergangstemperatur ist, reichenden Temperatur ausgeführt. Die Glasübergangstemperatur ist als der mittlere Glasübergangspunkt definiert, der unter Verwenden eines Differentialscanningkalorimeters erhalten wurde, als die Temperatur mit einer Geschwindigkeit von 10 bis 20ºC je Minute erhöht wurde.

(b) Phasentrennverfahren (Koazervationsverfahren)

Wenn MC durch das vorliegende Verfahren hergestellt werden, wird der vorstehend beschriebenen Dispersion des physiologisch aktiven Polypeptids allmählich unter Rühren ein Koazervierungsmittel zum Fällen und Verfestigen der MC zugefügt. Die verwendete Menge des Koazervierungsmittels ist etwa das 0,01- bis etwa 1000fache Volumen, vorzugsweise etwa das 0,05- bis etwa 500fache Volumen, insbesondere bevorzugt etwa das 0,1- bis etwa 200fache Volumen. Jedes Koazervierungsmittel kann verwendet werden, so lange es eine polymere, Mineralöl- oder Pflanzenölverbindung ist, die mit dem organischen Lösungsmittel zum Lösen des bioabbaubaren Polymers mischbar ist und das verwendete bioabbaubare Polymer nicht löst. Beispiele derartiger Koazervierungsmittel schließen speziell Silikonöl, Sesamöl, Sojabohnenöl, Maisöl, Baumwollsamenöl, Kokosnußöl, Leinsamenöl, Mineralöl, n-Hexan und n-Heptan ein. Zwei oder mehr davon können in Kombination verwendet werden.
Die so erhaltenen MC werden durch Filtration isoliert und mehrfach mit Heptan usw. zum Entfernen des Koazervierungsmittels gewaschen. Weiter wird ein Waschen in derselben Weise wie in vorstehend (a) ausgeführt, gefolgt von der Lyophilisierung.
Bei der MC-Herstellung durch das In-Wasser-Trocknungsverfahren oder Koazervationsverfahren kann bei dem Verfahren des Waschens der MC zum Verhindern einer Teilchenaggregation ein Antiaggregationsmittel zugefügt werden. Beispiele des Antiaggregationsmittels schließen zum Beispiel wasserlösliche Polysaccharide wie etwa Mannit, Lactose, Glucose, Stärken (z. B. Maisstärke), Hyaluronsäure und ihre Alkalimetallsalze, Aminosäuren wie etwa Glycin und Alanin, Proteine wie etwa Fibrin und Kollagen und anorganische Salze wie etwa Natriumchlorid und Natriumhydrogenphosphat und so weiter ein.

(c) Sprühtrocknungsverfahren

Wenn MC durch das vorliegende Verfahren hergestellt werden, wird die Dispersion des physiologisch aktiven Polypeptids über eine Düse in die Trockenkammer eines Sprühtrockners unter Verdampfen des organischen Lösungsmittels in den feinen Tröpfchen in sehr kurzer Zeit unter Liefern von MC gesprüht. Beispiele der Düse schließen zum Beispiel eine Düse des Zwei- Flüssigkeiten-Typs, eine Düse des Drucktyps und einen Drehscheibentyp ein. Es ist ferner von Vorteil, nötigenfalls eine wäßrige Lösung des vorstehend beschriebenen Antiaggregationsmittels über eine weitere Düse zu versprühen, um eine Aggregation jedes MC-Teilchens zu verhindern.
Die so erhaltenen MC werden in derselben Weise wie in vorstehend (a) gewaschen, nötigenfalls gefolgt vom Erhitzen (nötigenfalls unter verringertem Druck) zum Entfernen des Wassers und organischen Lösungsmittels.
In der vorliegenden Erfindung ist das Einschlußverhältnis des physiologisch aktiven Polypeptids wie etwa GH in den MC vorzugsweise mindestens 50% wenn ein PLGA-Zinkoxid-Komplex als Mikrokapselgrundlage verwendet wird.
Der Gehalt des physiologisch aktiven Polypeptids in der Zubereitung mit verzögerter Freisetzung der vorliegenden Erfindung ist zum Beispiel etwa 0,1 bis etwa 30% (Gew./Gew.), vorzugsweise etwa 0,2 bis etwa 20% (Gew./Gew.), bevorzugter etwa 0,5 bis etwa 10% (Gew./Gew.)
Die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung der vorliegenden Erfindung kann zum Beispiel als feine Teilchen wie etwa Mikrokapseln als solche oder in Form verschiedener Dosierungsformen nichtoraler Zubereitungen (z. B. intramuskuläre, subkutane oder viszerale Injektionen; Dauerkatheter- Zubereitungen; nasale, rektale oder Uterus-transmucosale Zubereitungen usw.) oder orale Zubereitungen (z. B. Kapseln wie etwa Hartkapseln und Weichkapseln usw., feste Zubereitungen wie etwa Granulate und Pulver usw., flüssige Zubereitungen wie etwa Suspensionen usw.) durch Verwenden der feinen Teilchen als Rohmaterialien verabreicht werden.
Die Zubereitungen dieser Dosierungsformen können durch bekannte, zur pharmazeutischen Produktion in allgemeinem Gebrauch befindliche Verfahren hergestellt werden.
Die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung der vorliegenden Erfindung liegt vorzugsweise in der Form von Injektionen vor. Zum Herstellen von Injektionen unter Verwenden der feinen Teilchen wie etwa der durch die vorstehenden Verfahren erhaltenen Mikrokapseln können die feinen Teilchen mit einem Dispergiermittel (z. B. Tenside wie etwa Tween 80, HCO-60; Polysaccharide wie etwa Carboxymethylcellulose, Natriumalginat, Natriumhyaluronat, Protaminsulfat; Polyethylenglykol 400 usw.), einem Konservierungsmittel (z. B. Methylparaben, Propylparaben usw.), einem Isotoniemittel (z. B. Natriumchlorid, Mannit, Sorbit, Glucose usw.) und einem Lokalanästhetikum (z. B. Xylocainhydrochlorid, Chlorbutanol usw.) unter Liefern einer wäßrigen Suspension formuliert werden oder mit einem Pflanzenöl (z. B. Sesamöl, Maisöl usw.) oder einem Gemisch davon mit einem Phospholipid (z. B. Lecithin) oder mittelkettigen Fettsäureglyceriden (z. B. Miglyol 812) unter Liefern einer öligen Suspension dispergiert werden.
Die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung liegt besonders bevorzugt in Form feiner Teilchen vor. Der Teilchendurchmesser der Zubereitung mit verzögerter Freisetzung für eine injizierbare Suspension kann aus dem Bereich gewählt werden, der die Erfordernisse an den Dispersionsgrad und die Nadeldurchgängigkeit bei der Injektion erfüllt. Der Teilchendurchmesser liegt zum Beispiel innerhalb des Bereichs von etwa 0,1 bis etwa 300 um, vorzugsweise etwa 1 bis etwa 150 um, bevorzugter etwa 2 bis etwa 100 um als mittlerer Teilchendurchmesser.
Verfahren zum Herstellen der vorstehenden feinen Teilchen als sterile Zubereitung schließen das Verfahren, bei dem das gesamte Herstellungsverfahren steril ist, das Verfahren, bei dem Gammastrahlen als Sterilisationsmittel verwendet werden und das Verfahren, bei dem ein Antiseptikum während des Herstellungsverfahrens zugesetzt wird, ein, sind aber nicht darauf beschränkt.
Die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung kann bei Säugern (z. B. Menschen, Rinder, Schweine, Hunde, Katzen, Mäuse, Ratten, Kaninchen usw.) mit niedriger Toxizität verwendet werden.
Die Indikation der Zubereitung mit verzögerter Freisetzung schwankt in Abhängigkeit von dem verwendeten physiologisch aktiven Polypeptid. Die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung ist zur Prophylaxe oder Behandlung von Diabetes, wenn Insulin als physiologisch aktives Polypeptid verwendet wird; viraler Hepatitis (z. B. Hepatitis Typ C, HBe-Antigen-positive Hepatitis) und Krebs (z. B. Nierenkarzinom, multiples Myelom usw.), wenn Interferon-α verwendet wird; Anämie (z. B. Anämie während der Nierendialyse), wenn Erythropoietin verwendet wird; Neutropänie (z. B. bei der Krebstherapie) und Infektionen, wenn G-CSF verwendet wird; Krebs (z. B. Hämangioendotheliom) wenn IL-2 verwendet wird; ein Bruch, eine Wunde (z. B. Wundliegen), Periodontitis und Magengeschwür, wenn FGF verwendet wird; Thrombozytopänie, wenn FGF-9 verwendet wird; seniler Demenz und Neuropathie, wenn NGF verwendet wird; Thrombose, wenn TPA verwendet wird, und Krebs, wenn Tumornekrosefaktor verwendet wird, brauchbar.
Weiter wird die GH enthaltende Zubereitung mit verzögerter Freisetzung bei Turner-Syndrom, chronischen Nierenerkrankungen, Achondroplasie und sowohl Zwergwuchs des Erwachsenen als auch hypophysärem Zwergwuchs auf der Grundlage der Wachstumshormonwirkung von GH angewendet. Weiter wird von GH berichtet, daß es bei Krankheiten wie etwa Down-Syndrom, Silver-Syndrom, Hypochondroplasie und juveniler chronischer Arthritis unter Liefern ausgezeichneter therapeutischer Wirkungen angewendet wird.
Obschon die Dosis der Zubereitung mit verzögerter Freisetzung in Abhängigkeit von der Art und dem Gehalt des physiologisch aktiven Polypeptids, der Freisetzungsdauer, Zielkrankheit, behandelten Tierart und anderen Faktoren schwankt, kann sie auf jeden Wert eingestellt werden, solange die wirksame Konzentration des physiologisch aktiven Polypeptids im Körper aufrecht erhalten wird.
Wenn die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung zum Beispiel eine für eine Freisetzung während einer Woche ausgelegte ist, kann die Dosis des physiologisch aktiven Polypeptids aus dem Bereich von vorzugsweise etwa 0,0001 bis etwa 10 mg/kg Körpergewicht, bevorzugter etwa 0,0005 bis etwa 1 mg/kg Körpergewicht für einen Erwachsenen gewählt werden. Die bevorzugte Verabreichungshäufigkeit der Zubereitung mit verzögerter Freisetzung kann in Abhängigkeit von der Art und dem Gehalt des physiologisch aktiven Polypeptids, der Dosierungsform, der Freisetzungsdauer, Zielkrankheit, behandelten Tierart und anderen Faktoren aus einmal wöchentlich, einmal alle zwei Wochen usw. geeignet gewählt werden.
Wenn das physiologisch aktive Polypeptid als aktiver Bestandteil in der Zubereitung mit verzögerter Freisetzung zum Beispiel Insulin ist, wird die Dosis je Verabreichung an einen diabetischen Erwachsenen aus dem Bereich von üblicherweise etwa 0,001 bis etwa 1 mg/kg Körpergewicht, vorzugsweise etwa 0,01 bis etwa 0,2 mg/kg Körpergewicht als wirkungsvoller Bestandteil gewählt. Die bevorzugte Verabreichungshäufigkeit ist einmal wöchentlich.
Wenn das physiologisch aktive Polypeptid als aktiver Bestandteil in der Zubereitung mit verzögerter Freisetzung GH ist, kann die Dosis auf jeden Wert eingestellt werden, solange die wirksame GH-Konzentration im Körper aufrecht erhalten wird, obschon sie in Abhängigkeit von der Art und dem GH-Gehalt, der Freisetzungsdauer, Zielkrankheit, behandelten Tierart und anderen Faktoren schwankt. Was die Behandlung der vorstehend beschriebenen Krankheiten betrifft, kann, wenn die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung eine für eine Verabreichung über zwei Wochen ausgelegte ist, die GH-Dosis zu einer sicheren Verabreichung aus dem Bereich von etwa 0,01 bis etwa 5 mg/kg Körpergewicht, bevorzugter etwa 0,05 bis etwa 1 mg/kg Körpergewicht, je Kind oder Erwachsenem gewählt werden. Die bevorzugte Verabreichungshäufigkeit kann in Abhängigkeit vom GH-Gehalt, der Dosierungsform, Freisetzungsdauer, Zielkrankheit, behandelten Tierart und anderen Faktoren aus einmal wöchentlich, einmal alle zwei Wochen, einmal monatlich usw. geeignet gewählt werden.
Die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung wird vorzugsweise bei gewöhnlicher Temperatur oder an einem kalten Ort aufbewahrt. Bevorzugter wird die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung an einem kalten Ort aufbewahrt. Die "gewöhnliche Temperatur" und der "kalte Ort" sind in der Pharmakopöe von Japan definiert. Und zwar bedeutet "gewöhnliche Temperatur" 15 bis 25ºC und der "kalte Ort" bedeutet eine 15ºC nicht übersteigende Temperatur.

Beste Ausführungsweise der Erfindung

Die vorliegende Erfindung wird hierin nachstehend mittels der folgenden Ausführungsbeispiele und Versuchsbeispiele, die nicht als den Umfang der vorliegenden Erfindung einschränkend aufzufassen sind, genauer beschrieben.

Ausführungsbeispiel 1

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 10 000) und 6,6 mg Zinkoxid wurden 1,7 ml Dichlormethan zugefügt, das 3 Tage bei 25ºC unter Liefern einer klaren Lösung des Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer-Zinkoxid-Komplexes in einem organischen Lösungsmittel gerührt (60 Upm) wurde. Dieser Lösung wurden 53,0 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt und mittels eines Vortex-Mischers und eines kleinen Homogenisators vermischt. Anschließend wurde eine Ultrabeschallung unter Liefern einer Lösung von humanem Wachstumshormon und Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer-Zinkoxid- Komplex in einem organischen Lösungsmittel durchgeführt. Diese Lösung in einem organischen Lösungsmittel wurde in 400 ml 0,1%ige (Gew./Vol.) wäßrige Polyvinylalkohollösung (PVA) gegossen, die zuvor auf 18ºC eingestellt worden war, gefolgt von der Emulgierung mit einem Homomischer vom Turbinentyp unter Liefern einer O/W-Emulsion. Diese O/W-Emulsion wurde zum Verdampfen von Dichlormethan bei Raumtemperatur gerührt. Die erhaltenen Mikrokapseln wurden durch Zentrifugieren (etwa 1500 Upm) gesammelt. Der erhaltene Niederschlag wurde anschließend zweimal mit 400 ml destilliertem Wasser gewaschen, das unter Liefern von 521 mg humanes Wachstumshormon enthaltender Mikrokapseln gefriergetrocknet wurde.

Ausführungsbeispiel 2

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 10 000) und 13,1 mg Zinkoxid wurden in 2,3 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 53,3 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 536 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 3

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 10 000) und 21,9 mg Zinkoxid wurden in 2,8 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 53,8 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 589 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 4

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 12 000) und 5,1 mg Zinkoxid wurden in 1,9 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 52,9 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 506 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 5

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 12 000) und 10,2 mg Zinkoxid wurden in 2,5 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 53,2 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 568 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 6

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 65/35 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 12 000) und 17,0 mg Zinkoxid wurden in 3,0 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 53,5 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 561 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 7

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 15 000) und 4,5 mg Zinkoxid wurden in 2,0 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 52,9 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 540 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 8

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 15 000) und 8,9 mg Zinkoxid wurden in 2,6 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 53,1 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 559 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 9

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 15 000) und 14,9 mg Zinkoxid wurden in 3,1 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 53,4 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 464 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 10

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 20 000) und 4,0 mg Zinkoxid wurden in 2,5 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 52,8 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 595 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 11

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 20 000) und 7,9 mg Zinkoxid wurden in 3,6 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 53,1 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 478 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 12

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 20 000) und 13,2 mg Zinkoxid wurden in 5,2 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 53,3 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 534 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 13

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 75/25 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 10 500) und 6,6 mg Zinkoxid wurden in 3,0 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 53,0 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 521 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 14

1 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 85/15 (Mol%); Gewichtsmittel des Molekulargewichts 12 000) und 5,8 mg Zinkoxid wurden in 2,0 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure- Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 53,0 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 503 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 15

1,89 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 10 000) und 10 mg Zinkoxid wurden in 3,4 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 100 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 1,41 g humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 16

1,89 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 12 000) und 10 mg Zinkoxid wurden in 3,5 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 100 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 1,41 g humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 17

1,89 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 14 000) und 10 mg Zinkoxid wurden in 4,0 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 100 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 1,40 g humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Ausführungsbeispiel 18

1,89 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 16 000) und 10 mg Zinkoxid wurden in 4,2 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer-Zinkoxid-Komplex in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 100 mg gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon zugefügt, das auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 1,34 g humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt wurde.

Vergleichsbeispiel 1

Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 15 000) wurde in Dichlormethan (950 mg/ml) unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer in einem organischen Lösungsmittel gelöst. 1 ml dieser Lösung und 1 ml einer Lösung eines gefriergetrocknetes Pulver aus humanem Wachstumshormon in Dichlormethan (50 mg/ml) wurden gemischt und auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 490 mg humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt.

Vergleichsbeispiel 2

1,90 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 10 000) wurden in 2,6 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 100 mg eines gefriergetrockneten Pulvers aus humanem Wachstumshormon zugefügt und auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 1,28 g humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt.

Vergleichsbeispiel 3

1,90 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 12 000) wurden in 2,8 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 100 mg eines gefriergetrockneten Pulvers aus humanem Wachstumshormon zugefügt und auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 1,18 g humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt.

Vergleichsbeispiel 4

1,90 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 14 000) wurden in 3,0 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 100 mg eines gefriergetrockneten Pulvers aus humanem Wachstumshormon zugefügt und auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 0,89 g humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt.

Vergleichsbeispiel 5

1,90 g Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer (Milchsäure/Glykolsäure = 50/50 (Mol%), Gewichtsmittel des Molekulargewichts 16 000) wurden in 3,2 ml Dichlormethan unter Liefern einer Lösung von Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer in einem organischen Lösungsmittel gelöst. Dieser Lösung wurden 100 mg eines gefriergetrockneten Pulvers aus humanem Wachstumshormon zugefügt und auf dieselbe Weise wie in Ausführungsbeispiel 1 unter Liefern von 1,26 g humanen Wachstumsfaktor enthaltender, pulveriger Mikrokapseln behandelt.

Versuchsbeispiel 1

308 mg humanes Wachstumshormon und PGLA-Zinkoxid-Komplex enthaltende Mikrokapseln, die in Ausführungsbeispiel 7 erhalten worden waren; 351 mg humanes Wachstumshormon und PGLA-Zinkoxid-Komplex enthaltende Mikrokapseln, die in Ausführungsbeispiel 8 erhalten worden waren; 327 mg humanes Wachstumshormon und PG LA-Zinkoxid-Komplex enthaltende Mikrokapseln, die in Ausführungsbeispiel 9 erhalten worden waren, und 229 mg humanes Wachstumshormon und PGLA-Zinkoxid-Komplex enthaltende Mikrokapseln, die in Vergleichsbeispiel 1 erhalten worden waren, wurden in 2,25 ml Dispersionsmedium (Zusammensetzung des Dispersionsmediums: Mannit (5%), Carboxymethylcellulose (0,5%) und Tween 20 (0,1%) wurden in destilliertem Wasser gelöst, gefolgt von der Einstellung des pH auf 6,0 mit Essigsäure (dasselbe trifft hierin nachstehend zu), 2,25 ml Dispersionsmedium, 1,75 ml Dispersionsmedium beziehungsweise 1,75 ml Dispersionsmedium dispergiert.
0,5 ml der so erhaltenen Dispersion (die 3 mg humanes GH enthielt) wurden Ratten unter Betäubung mit Ether in den Rücken verabfolgt. Im Verlauf der Zeit wurde über die Schwanzvene Blut abgenommen und das Blutserum wurde abgetrennt. Die Konzentration des humanen GH in dem erhaltenen Blutserum wurde mittels eines Radioimmuntests (Ab Beads HGH, hergestellt von Eiken Kagaku, Japan) bestimmt. Die erhaltenen Ergebnisse werden in Tabelle 1 dargestellt. Tabelle 1
Die Konzentration des humanen GH in Gruppen, denen humanes Wachstumshormon und PGLA-Zinkoxid-Komplex enthaltende Mikrokapseln verabfolgt wurden, die in Ausführungsbeispiel 7, 8 und 9 erhalten worden waren, zeigten bedeutend höhere Werte verglichen mit denen in einer Gruppe, der Wachstumshormon und PGLA-Zinkoxid-Komplex enthaltende Mikrokapseln verabfolgt wurden, die in Vergleichsbeispiel 1 erhalten worden waren, und zeigten weiter über einen langen Zeitraum eine verzögerte Freisetzung. Gemäß dem Verfahren der vorliegenden Erfindung kann eine Zubereitung mit verzögerter Freisetzung mit einem ausgezeichneten Wirkungsprofil erhalten werden.

Versuchsbeispiel 2

550 mg, 556 mg, 576 mg beziehungsweise 573 mg humanes Wachstumshormon und PGLA-Zinkoxid-Komplex enthaltende Mikrokapseln, die in Ausführungsbeispiel 15, 16, 17 und 18 erhalten worden waren, wurden in 3,38 ml des in Versuchsbeispiel 1 beschriebenen Dispersionsmediums dispergiert, während 548 mg, 548 mg, 567 mg und 560 mg humanes Wachstumshormon und PGLA enthaltende Mikrokapseln, die in Vergleichsbeispiel 2, 3, 4 und 5 erhalten worden waren, in 3,38 ml desselben Dispersionsmediums dispergiert wurden.
0,75 ml der so erhaltenen Dispersion (die 6 mg humanes GH enthielt) wurden Ratten unter Betäubung mit Ether in den Rücken verabfolgt. Im Verlauf der Zeit wurde über die Schwanzvene Blut abgenommen und das Blutserum wurde abgetrennt. Die Konzentration des humanen GH in dem erhaltenen Blutserum wurde mittels des in Versuchsbeispiel 1 beschriebenen Radioimmuntests bestimmt. Die erhaltenen Ergebnisse werden in Tabelle 2 bis 5 dargestellt. Tabelle 2 Tabelle 3 Tabelle 4 Tabelle 5
Die Konzentration des humanen GH in Gruppen, denen humanes Wachstumshormon und PGLA-Zinkoxid-Komplex enthaltende Mikrokapseln verabfolgt wurden, die in Ausführungsbeispiel 15, 16, 17 und 18 erhalten worden waren, zeigten bedeutend höhere Werte verglichen mit denen in einer Gruppe, der Wachstumshormon und PGLA enthaltende Mikrokapseln verabfolgt wurden, die in Vergleichsbeispiel 2, 3, 4 und 5 erhalten worden waren.

Industrielle Anwendbarkeit

Gemäß der vorliegenden Erfindung kann eine Zubereitung mit verzögerter Freisetzung, die ein hohes Einschlußverhältnis eines physiologisch aktiven Polypeptids wie etwa ein Wachstumshormon und dessen gleichbleibend hohen Blutkonzentrationswert über einen langen Zeitraum zeigt, bereitgestellt werden.

Claims

1. Verfahren zum Herstellen einer Zubereitung mit verzögerter Freisetzung, das das Dispergieren eines physiologisch aktiven Polypeptids in einer Lösung eines bioabbaubaren Polymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel, gefolgt vom Entfernen des organischen Lösungsmittels umfaßt, wobei das bioabbaubare Polymer ein Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer ist.

2. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei das physiologisch aktive Polypeptid ein Wachstumshormon ist.

3. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei das molekulare Zusammensetzungsverhältnis Milchsäure/Glykolsäure in dem Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer von 85/15 bis 50/50 beträgt.

4. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei das Gewichtsmittel des Molekulargewichts des Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers von 8000 bis 20000 beträgt.

5. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei der Zinkgehalt bezogen auf das bioabbaubare Polymer in dem organischen Lösungsmittel von 0,001 bis 2 Gew.-% beträgt.

6. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei der mittlere Teilchendurchmesser der Zubereitung mit verzögerter Freisetzung von 0,1 bis 300 um beträgt.

7. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei die Zubereitung mit verzögerter Freisetzung zur Injektion bestimmt ist.

8. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei eine O/W-Emulsion, die eine durch Dispergieren eines Wachstumshormons in einer Lösung eines Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel als Ölphase hergestellte Dispersion umfaßt, dem In-Wasser- Trocknen unterzogen wird.

9. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei die Zubereitung eine Mikrokapsel ist.

10. Lösung eines Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel.

11. Milchsäure/Glykolsäure-Copolymer-Zinkoxid-Komplex, der in einem organischen Lösungsmittel löslich ist und der durch das gemeinsame Vorliegen eines Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel erhalten wird.

12. Dispersion, die durch Dispergieren eines physiologisch aktiven Polypeptids in einer Lösung eines Milchsäure/Glykolsäure-Copolymers und Zinkoxid in einem organischen Lösungsmittel hergestellt wird.

13. Dispersion gemäß Anspruch 12, wobei das physiologisch aktive Polypeptid ein Wachstumshormon ist.

14. Zubereitung mit verzögerter Freisetzung, die durch das Verfahren gemäß Anspruch 1 hergestellt wird.