DE69535363T2

DE69535363T2 - Rapamycin Hydroxyester, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen

Info

Publication number: DE69535363T2
Application number: DE69535363T
Authority: DE
Inventors: Jerauld Stanley Westfield Skotnicki; Christina Louise Princeton Leone; Guy Alan Yardley Schiehser
Original assignee: Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 1994-04-18
Filing date: 1995-04-14
Publication date: 2007-04-19
Anticipated expiration: 2015-04-15
Also published as: NL300348I2; CN1149296A; TW275631B; DE69529897D1; DK0763039T3; DE69535363D1; AU2247495A; ATE350384T1; PT1266899E; MX9604694A; EP0763039B3; CZ284567B6; DE69529897T2; JPH09512018A; EP0763039A1; SI1266899T1; CY2378B1; EP0763039B1; NZ283988A; PL183178B1

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Vorliegende Erfindung bezieht sich auf Rapamycin Hydroxyester und ein Verfahren zu deren Verwendung zur Induktion der Immunsuppression und Behandlung der Transplantatabstoßung, Transplantat-Wirt-Reaktion, Autoimmunkrankheiten, Entzündungskrankheiten, T-Zell-Leukämie und des T-Zell-Lymphoms bei Erwachsenen, von soliden Tumoren, Pilzinfektionen und hyperproliferativen Gefäßerkrankungen.
Rapamycin ist ein makrozyklisches Trien-Antibiotikum, das durch Streptomyces hygroscopicus produziert wird, von dem es sich gezeigt hat, dass es eine fungizide Wirkung insbesondere gegen Candida albicans, sowohl in vitro, als auch in vivo hat [C. Vezina et al., J. Antibiot. [Zeitschrift der Antibiotika] 28, 721 (1975); S.N. Sehgal et al., J. Antibiot. 28, 727 (1975); H. A. Baker et al., J. Antibiot. 31, 539 (1978); U.S. Patent 3 929 992 und U.S. Patent 3 993 749].
Von Rapamycin allein (U.S. Patent 4 885 171) oder in Kombination mit Picibanil (U.S. Patent 4 401 653) wurde nachgewiesen, dass es eine antitumorale Wirkung hat. R. Martel et al. [Can. J. Physiol. Pharmacol. [Kanadische Zeitschrift für physiologische Pharmakologie] 55, 48 (1977)] legten offen, dass Rapamycin am experimentellen allergischen Enzephalomyelitis-Modell, einem Modell für multiple Sklerose, am adjuvanten Arthritis-Modell, einem Modell für rheumatoide Arthritis, wirksam sei und die Bildung von IgE- ähnlichen Antikörpern wirksam hemme.
Die immunsuppressiven Wirkungen des Rapamycins wurden in FASEB 3, 3411 (1989) offen gelegt. Von Cyclosporin A und FK-506, weiteren makrozyklischen Molekülen, wurde ebenfalls nachgewiesen, dass sie als immunsuppressive Mittel wirksam sind und daher zur Vorbeugung gegen eine Transplantatabstoßung von Nutzen sind [FASEB 3, 3411 (1989); FASEB 3, 5256 (1989); R. Y. Calne et al., Lancet 1183 (1978) und U.S. Patent 5 100 899].
Rapamycin erwies sich auch als brauchbar zur Vorbeugung oder Behandlung des systemischen Lupus erythematodes [U.S. Patent 5 078 999], der Lungenentzündung [U.S. Patent 5 080 899], des insulinabhängigen Diabetes mellitus [Fifth Int. Conf. Inflamm. Res. Assoc. 121 (Zusammenfassung), (1990)], der Zellproliferation der glatten Muskeln und Intimaverdickung infolge eines Gefäßschadens [Morris, R. J. Heart Lung Transplant [Zeitschrift für Herz-Lungentransplantation] 11 (Pkt. 2): 197 (1992)], der T-Zell-Leukämie/des T-Zell-Lymphoms beim Erwachsenen [Europäische Patentanmeldung 525 960 A1] und der Augenentzündung [Europäische Patentanmeldung 532 862 A1].
Mono- und diacylierte Derivate des Rapamycins (esterifiziert an den 28- und 43-Positionen) erwiesen sich als Fungistatika (U.S. Patent 4 316 885, WO 9205179) als nützlich und wurden zur Herstellung von wasserlöslichen Aminoacyl-Arzneimittelvorstufen von Rapamycin verwendet (U.S. Patent 4 650 803). Vor kurzem wurde die Nummerierungsvereinbarung für Rapamycin abgeändert; deshalb befinden sich gemäß der Nomenklatur für chemische Zusammenfassungen die oben beschriebenen Ester an den 31- und 42-Positionen.
BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Vorliegende Erfindung legt Derivate des Rapamycins vor, die als Immunsuppressiva, Entzündungshemmer, Fungistatika, antiproliferative und antitumorale Agenzien von Nutzen sind und folgende Struktur aufweisen:
wobei
R³ und R⁴ ein jeder unabhängig Wasserstoff, Alkyl von 1-6 C-Atomen, Alkenyl von 2-7 C-Atomen, Alkynyl von 2-7 C-Atomen, Trifluormethyl oder -F ist;
R⁷ Wasserstoff, Alkyl von 1-6 C-Atomen, Alkenyl von 2-7 C-Atomen, Alkynyl von 2-7 C-Atomen, -(CR³R⁴)_fOR¹⁰, -CF₃ oder -F ist;
R⁸ und R⁹ ein jeder unabhängig Wasserstoff, Alkyl von 1-6 C-Atomen oder -(CR³R⁴)_fOR¹⁰ ist oder R⁸ und R⁹ zusammen genommen werden können, um X zu bilden;
R¹⁰ Wasserstoff, Alkyl von 1-6 C-Atomen, Alkenyl von 2-7 C-Atomen, Alkynyl von 2-7 C-Atomen, Tri-(Alkyl von 1-6 C-Atomen)Silyl, Tri-(Alkyl von 1-6 C-Atomen)Silylethyl, Triphenylmethyl, Benzyl, Alkoxymethyl von 2-7 C-Atomen, Tri-(Alkyl von 1-6 C-Atomen)Silylethoxymethyl, Chlorethyl oder Tetrahydropyranyl ist;
X 5-(2,2-Di-(Alkyl von 1-6 C-Atomen))[1,3]Dioxanyl, 5-(2-Spiro(Cycloalkyl von 3-8 C-Atomen))[1,3]Dioxanyl, 4-(2,2-Di-(Alkyl von 1-6 C-Atomen))[1,3]Dioxanyl, 4-(2-Spiro(Cycloalkyl von 3-8 C-Atomen))[1,3]Dioxanyl, 4-(2,2-Di-(Alkyl von 1-6 C-Atomen))[1,3]Dioxalanyl oder 4-(2-Spiro(Cycloalkyl von 3-8 C-Atomen))[1,3]Dioxalanyl ist;
und
f = 0 bis 6
unter der Voraussetzung, dass CR⁷R⁸R⁹ wenigstens eine -(CR³R⁴)_fOR¹⁰- oder X-Gruppe enthält,
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Die pharmazeutisch annehmbaren Salze sind solche, die von anorganischen Kationen wie Natrium, Kalium und Ähnlichem und organischen Basen wie Mono-, Di- und Trialkylaminen von 1-6 C-Atomen pro Alkylgruppe und Mono-, Di- und Trihydroxyalkylaminen von 1-6 C-Atomen pro Alkylgruppe und Ähnlichem abgeleitet sind.
Die Begriffe Alkyl von 1-6 C-Atomen, Alkenyl von 2-7 C-Atomen und Alkynyl von 2-7 C-Atomen umfassen sowohl gerade als auch verzweigte Kohlenstoffketten. Da die erfindungsgemäßen Verbindungen mehr als eine -(CR³R⁴)_fOR¹⁰-Gruppe enthalten können, können R³, R⁴, f und R¹⁰ gleich oder unterschiedlich sein. Desgleichen können, wenn andere generischen Substituentenbeschreibungen in derselben Struktur wiederholt werden, diese gleich oder unterschiedlich sein.
Bei einer Verbindung, in der R⁸ und R⁹ zusammen genommen werden, um X zu bilden, wobei X 5-(2,2-Di-(Alkyl von 1-6 C-Atomen))[1,3]Dioxanyl ist und die Alkylgruppe von X 1 C-Atom enthält, hat R¹ die folgende Struktur:
Desgleichen hat bei einer Verbindung, in der R⁸ und R⁹ zusammen genommen werden, um X zu bilden, wobei X 4-(2-Spiro(Cycloalkyl von 3-8 C-Atomen))[1,3]Dioxanyl ist und die Cycloalkylgruppe von X 6 C-Atome enthält, R¹ die folgende Struktur:
Verbindungen, die X enthalten, sind bevorzugt solche, bei denen die Alkylgruppe von X, wenn sie vorhanden ist, Methyl ist und die Cycloalkylgruppe von X, wenn sie vorhanden ist, Cyclohexyl ist.
Wenn R¹⁰ nicht Wasserstoff, Alkyl, Alkenyl oder Alkynyl ist, ist beabsichtigt, dass R¹⁰ eine Gruppe ist, die als eine Alkoholschutzgruppe dienen kann. So sind diese Gruppen Zwischenverbindungen freier hydroxylierter Verbindungen und sind auch aus eigenem Recht biologisch aktiv. R¹⁰ umfasst Tri-(Alkyl von 1-6 C-Atomen)Silyl, Tri-(Alkyl von 1-6 C-Atomen)Silylethyl, Triphenylmethyl, Benzyl, Alkoxymethyl von 2-7 C-Atomen, Tri-(Alkyl von 1-6 C-Atomen)Silylethoxymethyl, Chlorethyl und Tetrahydropyranylgruppen. Weitere Alkoholschutzgruppen sind dem Fachmann der Technologie bekannt und gelten auch als Bestandteil dieser Erfindung.
Erfindungsgemäße Verbindungen können zubereitet werden durch Acylierung des Rapamycins unter Verwendung von geschützten Hydroxy- und Polyhydroxysäuren, Alkoxy- oder Polyalkoxycarbonsäuren, die aktiviert worden sind, gefolgt von der Entfernung der Alkoholschutzgruppen, wenn dies gewünscht wird. Mehrere Verfahren der Carboxylataktivierung sind in der Technologie bekannt, aber die bevorzugten Verfahren verwenden Carbodiimide, gemischte Anhydride oder Säurechloride. Zum Beispiel kann eine geeignet substituierte Carbonsäure als ein gemischtes Anhydrid mit einer acylierenden Gruppe wie 2,4,6-Trichlorbenzoylchlorid aktiviert werden. Die Behandlung des Rapamycins mit dem gemischten Anhydrid unter mild basischer Bedingung liefert die gewünschten Verbindungen. Alternativ kann die Acylierungsreaktion mit 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-Ethylcarbodiimidhydrochlorid und Dimethylaminopyridin durchgeführt werden. Mixturen von 42- und 31,42-Estern können durch Chromatographie getrennt werden.
Demgemäß schlägt die Erfindung auch ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Rapamycin-Verbindungen vor. Insbesondere schlägt diese Erfindung ein Verfahren zur Herstellung der Rapamycin Hydroxyester einschließlich solcher der oben definierten Formel I vor, das folgende Schritte umfasst:
Acylieren des Rapamycins mit einem Acylierungsmittel der Formel HO-CO CR⁷R⁸R⁹ (II)oder eines reaktiven Derivats davon, wobei R⁷-R⁹ wie oben definiert sind, vorausgesetzt dass freie Hydroxygruppen geschützt werden, wenn dies erwünscht ist, Schützen der 42-Position des Rapamycins oder eines funktionalen Derivats mit einer geeigneten Schutzgruppe und nach der Reaktion Entfernen aller vorhandener Schutzgruppen, nach Bedarf.
Die Reaktion kann in Gegenwart eines Kopplungsreagens wie eines geeignet substituierten Carbodiimidkopplungsreagens erfolgen. Die oben erwähnten erfindungsgemäßen Verbindungen können auch durch Acylierung unter Verwendung von reaktiven Derivaten der Säure der Formel II wie eines Anhydrids, eines gemischten Anhydrids oder eines Säurehalids wie des Chlorids zubereitet werden.
Die immunsuppressive Wirkung repräsentativer erfindungsgemäßer Verbindungen wurde in einem pharmakologischen in vitro Standardtestverfahren ausgewertet, um die Inhibierung der Lymphozytenproliferation (LAF) zu messen, und in zwei pharmakologischen in vivo Standardtestverfahren. Das Pinch-Skin-Transplantat-Testverfahren misst die immunsuppressive Aktivität der getesteten Verbindung sowie die Fähigkeit der getesteten Verbindung, die Transplantatabstoßung zu hemmen oder zu behandeln. Das adjuvante pharmakologische Arthritisstandardtestverfahren misst die Fähigkeit der getesteten Verbindung, die vermittelte Immunentzündung zu hemmen. Das adjuvante Arthritistestverfahren ist ein pharmakologisches Standardtestverfahren für die rheumatoide Arthritis. Die Verfahren für diese pharmakologischen Standardtestverfahren sind nachstehend offen gelegt.
Das Comitogen induzierte Thymozytenproliferationsverfahren (LAF) wurde als eine in vitro Messung der immunsuppressiven Wirkungen repräsentativer Verbindungen angewandt.
Kurz zusammengefasst werden Zellen der Thymusdrüse von normalen BALB/c Mäusen 72 Stunden lang mit PHA und IL-1 gezüchtet und mit tritiertem Thymidin während der letzten sechs Stunden gepulst. Die Zellen werden mit unterschiedlichen Konzentrationen und ohne solche von Rapamycin, Cyclosporin A oder der Testverbindung gezüchtet. Die Zellen werden geerntet und die eingebaute Radioaktivität wird bestimmt. Die Inhibierung der Lymphoproliferation wird als prozentuale Veränderung der Zähler pro Minute im Vergleich zu ohne Arzneimittel behandelten Kontrollen ausgewertet. Für jede ausgewertete Verbindung wurde zu Vergleichszwecken auch Rapamycin ausgewertet. Ein IC₅₀-Wert wurde für jede Testverbindung sowie für Rapamycin ermittelt. Bei der Auswertung als Vergleichswert für die repräsentativen erfindungsgemäßen Verbindungen hatte Rapamycin einen IC₅₀-Wert, der von 0,6–1,5 nM reichte. Die erhaltenen Resultate werden als IC₅₀-Wert und als prozentuale Inhibierung der T-Zellproliferation bei 0,1 μM geliefert. Die erhaltenen Resultate für die repräsentativen erfindungsgemäßen Verbindungen wurden auch als Verhältnis verglichen mit Rapamycin ausgedrückt. Ein positives Verhältnis gibt die immunsuppressive Aktivität an. Ein Verhältnis von größer als 1 gibt an, dass die Testverbindung die Thymozytenproliferation zu einem größeren Grade als Rapamycin inhibierte. Die Berechnung des Verhältnisses ist nachstehend dargestellt.
IC₅₀ von Rapamycin
IC₅₀ der Testverbindung
Repräsentative erfindungsgemäße Verbindungen wurden auch in einem in vivo Testverfahren ausgewertet zum Zweck der Bestimmung der Überlebenszeit des Pinch-Skin-Transplantats von männlichen BALB/c Spendern, das männlichen C₃H(H-2K)-Empfängern transplantiert wurde. Das Verfahren ist von Billingham R.E. und Medawar P.B., J. Exp. Biol. [Zeitschrift für experimentelle Biologie] 28:385–402, (1951) adaptiert worden. Kurz zusammengefasst wurde ein Pinch-Skin-Transplantat des Spenders auf das Dorsum des Empfängers als Allotransplantat transplantiert und ein Isotransplantat wurde als Kontrolle in derselben Region eingepflanzt. Die Empfänger wurden entweder mit unterschiedlichen Konzentrationen der Testverbindungen intraperitoneal oder oral behandelt. Rapamycin wurde als Testkontrolle angewandt. Unbehandelte Empfänger dienen als Abstoßungskontrolle. Das Transplantat wurde täglich überwacht und die Beobachtungen wurden aufgezeichnet, bis das Transplantat trocken wurde und eine geschwärzte Schuppe bildete. Dies wurde als Abstoßungstag angesehen. Die durchschnittliche Transplantatüberlebenszeit (Anzahl von Tagen ± Standardabweichung) der mit Arzneistoff behandelten Gruppe wurde mit der Kontrollgruppe verglichen. Die folgende Tabelle gibt die erhaltenen Resultate an. Die Resultate sind als die durchschnittliche Überlebenszeit in Tagen ausgedrückt. Unbehandelte (Kontroll-)Pinch-Skin-Transplantate werden normalerweise innerhalb von 6 bis 7 Tagen abgestoßen. Die Verbindungen wurden unter Anwendung einer Dosis von 4 mg/kg getestet.
Das adjuvante pharmakologische Arthritisstandardtestverfahren misst die Fähigkeit der Testverbindungen, eine Immunentzündung zu verhüten und die rheumatoide Arthritis zu hemmen oder zu behandeln. Im Folgenden wird das durchgeführte Testverfahren kurz beschrieben. Eine Gruppe von Ratten (männliche Wistar Lewis Inzuchtratten) wird mit der zu testenden Verbindung vorbehandelt (1 Stunde vor dem Antigen) und dann komplettes Freund-Adjuvans (FCA) in die rechte Hinterpfote injiziert, um Arthritis zu induzieren. Den Ratten werden dann oral nach einem Montag-, Mittwoch-, Freitagplan vom Tag 0–14 insgesamt 7 Dosen verabreicht. Beide Hinterpfoten werden an den Tagen 16, 23 und 30 gemessen. Der Unterschied des Pfotenvolumens (ml) vom Tag 16 an bis Tag 0 wird bestimmt und eine prozentuale Veränderung gegenüber den Kontrollen ermittelt. An der linken (nicht injizierten) Hinterpfote wird durch eine T-Zell-vermittelte Entzündung eine Entzündung verursacht und in oben stehender Tabelle aufgezeichnet (% Änderung gegenüber der Kontrolle). Die Entzündung der rechten Hinterpfote andererseits wird durch eine nichtspezifische Entzündung verursacht. Die Verbindungen werden mit einer Dosis von 5 mg/kg getestet. Die Resultate werden als prozentuale Veränderung der nicht injizierten Pfote am Tage 16 gegenüber der Kontrolle ausgedrückt; je negativer die prozentuale Veränderung ist, desto potenter ist die Verbindung. Rapamycin lieferte eine Veränderung zwischen –70% und –90% gegenüber der Kontrolle, was darauf hinweist, dass mit Rapamycin behandelte Ratten zwischen 70–90% weniger immuninduzierte Entzündung aufwiesen als die Kontrollratten.
Die bei diesen pharmakologischen Standardtestverfahren ermittelten Resultate werden nach dem Verfahren zur Herstellung der spezifischen Verbindungen, die getestet wurden, geliefert.
Die Resultate dieser pharmakologischen Standardtestverfahren beweisen die immunsuppressive Aktivität sowohl in vitro als auch in vivo der erfindungsgemäßen Verbindungen. Die beim LAF-Testverfahren ermittelten Resultate weisen auf die Suppression der T-Zellproliferation hin und beweisen damit die immunsuppressive Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen. Ein weiterer Beweis der Brauchbarkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen als immunsuppressive Wirkstoffe wurde durch die Resultate erbracht, die bei den pharmakologischen Hauttransplantat- und adjuvanten Arthritisstandardtestverfahren erzielt wurden. Ferner beweisen die beim Hauttransplantat-Testverfahren erzielten Resultate auch die Fähigkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen, die Transplantatabstoßung zu behandeln oder zu hemmen. Die beim pharmakologischen adjuvanten Arthritisstandardtestverfahren erzielten Resultate beweisen ferner die Fähigkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen, die rheumatoide Arthritis zu behandeln oder zu hemmen.
Basierend auf den Resultaten dieser pharmakologischen Standard testverfahren können die Verbindungen zur Behandlung oder Inhibierung der Transplantatabstoßung wie bei den Allotransplantaten der Niere, des Herzens, der Leber, Lunge, des Knochenmarks, Pankreas (Inselzellen), der Kornea, des Dünndarms und der Haut sowie den Herzklappenxenotransplantaten, bei der Behandlung oder Inhibierung von Autoimmunkrankheiten wie Lupus, rheumatoide Arthritis, Diabetes mellitus, Myasthenia gravis und multiple Sklerose und von Entzündungskrankheiten wie Psoriasis, Dermatitis, Ekzem, Seborrhö, entzündliche Darmerkrankung, Lungenentzündung (einschließlich Asthma, chronischer obstruktiver Lungenerkrankung, Emphysem, akutes Atemnotsyndrom des Erwachsenen, Bronchitis und Ähnlichem) und Uveitis zum Einsatz kommen.
Auf Grund des erzielten Aktivitätsprofils nimmt man auch an, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen antitumorale, fungizide und antiproliferative Aktivitäten aufweisen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind daher auch nützlich zur Behandlung von soliden Tumoren, der T-Zell-Leukämie/des T-Zell-Lymphoms beim Erwachsenen, von Pilzinfektionen und hyperproliferativen Gefäßerkrankungen wie Restenose und Atherosklerose. Im Fall einer Anwendung bei Restenose wird bevorzugt, dass die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung einer nach einem Angioplastikverfahren auftretenden Restenose eingesetzt werden. Bei Verwendung zu diesem Zweck können die erfindungsgemäßen Verbindungen vor dem Verfahren, während des Verfahrens, nach dem Verfahren verabreicht werden, oder in einer Kombination dieser Zeitpunkte.
Bei Anwendung zur Behandlung oder Inhibierung der oben genannten Krankheitszustände können die erfindungsgemäßen Verbindungen einem Säugetier auf oralem, parenteralem, intranasalem, intrabronchialem, transdermalem, topischem, intravaginalem oder rektalem Wege verabreicht werden.
Es wird in Erwägung gezogen, dass bei einer Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen als immunsuppressive oder entzündungshemmende Agenzien sie in Verbindung mit einem anderen immunregulatorischen Agens oder mehreren anderen immunregulatorischen Agenzien verabreicht werden können. Solche anderen immunregulatorischen Agenzien schließen zum Beispiel Azathioprin, Kortikosteroide wie Prednison und Methylprednisolon, Zyklophosphamid, Rapamycin, Zyklosporin A, FK-506, OKT-3 und ATG ein. Durch die Kombination der erfindungsgemäßen Verbindungen mit solchen anderen Arzneistoffen oder Agenzien zur Induktion einer Immunsuppression oder zur Behandlung entzündlicher Zustände sind geringere Mengen eines jeden der Agenzien erforderlich, um die gewünschten Wirkungen zu erzielen. Die Grundlage für eine solche Kombinationstherapie wurde von Stepkowski geschaffen, dessen Resultate ergaben, dass die Anwendung einer Kombination von Rapamycin und Zyklosporin A in subtherapeutischen Dosen die Überlebenszeit eines Herzallotransplantats signifikant verlängerte. [Transplantation Proc. [Transplantationsverfahren] 23: 507 (1991)].
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können rein oder mit einem pharmazeutischen Träger einem Säugetier, das ihrer bedarf, verabreicht werden. Der pharmazeutische Träger kann fest oder flüssig sein. Für die orale Anwendung ergab sich, dass 0,01% Tween 80 in PHOSAL PG-50 (Phospholipidkonzentrat mit 1,2-Propylenglykol, A. Nattermann & Cie. GmbH) eine annehmbare orale Zubereitung darstellt.
Ein fester Träger kann eine Substanz oder mehrere Substanzen enthalten, die auch als Geschmacksstoffe, Schmiermittel, Lösungsvermittler, Suspendier-, Füll-, Gleitmittel, Kompressionshilfen, Bindemittel oder Tablettenzerkleinerungsmittel fungieren können; er kann auch ein Einkapselungsmaterial sein. In Pulvern ist der Träger ein fein zerteilter Feststoff, der sich in Beimengung mit einem fein zerteilten aktiven Bestandteil befindet. In Tabletten ist der aktive Bestandteil mit einem Träger gemischt, der die notwendigen Kompressionseigenschaften in geeigneten Proportionen besitzt und in die gewünschte Form und Größe gepresst ist. Die Pulver und Tabletten enthalten vorzugsweise bis zu 99% des aktiven Bestandteils. Geeignete feste Träger umfassen zum Beispiel Calciumphosphat, Magnesiumstearat, Talk, Zucker, Lactose, Dextrin, Stärke, Gelatine, Cellulose, Methylcellulose, Natriumcarboxymethylcellulose, Polyvinylpyrrolidin, Wachse mit niedrigem Schmelzpunkt und Ionenaustauschharze.
Flüssige Träger können bei der Zubereitung von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Sirups, Elixieren und Druckzusammensetzungen verwendet werden. Der aktive Bestandteil kann in einem pharmazeutisch annehmbaren flüssigen Träger wie Wasser, einem organischen Lösungsmittel, einer Mixtur von beiden oder in pharmazeutisch annehmbaren Ölen oder Fetten gelöst oder suspendiert sein. Der flüssige Träger kann andere geeignete pharmazeutische Zusatzstoffe wie Lösungsvermittler, Emulgatoren, Puffer, Konservierungsstoffe, Süßstoffe, Geschmacksstoffe, Suspendiermittel, Verdickungsmittel, Farben, Viskositätsregulatoren, Stabilisatoren oder Osmoseregulatoren enthalten. Geeignete Beispiele flüssiger Träger für die orale und parenterale Verabreichung umfassen Wasser (das teilweise Zusatzstoffe wie die oben genannten enthält, zum Beispiel Cellulosederivate, vorzugsweise Natriumcarboxymethylcelluloselösung), Alkohole (einschließlich einwertiger und mehrwertiger Alkohole, z. B. Glykole) und ihre Derivate und Öle (z. B. fraktioniertes Kokosnussöl und Erdnussöl). Für die parenterale Verabreichung kann der Träger auch ein öliger Ester wie Ethyloleat und Isopropylmyristat sein. Sterile flüssige Träger sind in sterilen Flüssigformzusammensetzungen für die parenterale Verabreichung brauchbar. Der flüssige Träger für Druckzusammensetzungen kann halogenierter Kohlenwasserstoff oder ein anderes pharmazeutisch annehmbares Treibmittel sein.
Flüssige pharmazeutische Zusammensetzungen, die sterile Lösungen oder Suspensionen sind, können zum Beispiel zur intramuskulären, intraperitonealen oder subkutanen Injektion verwendet werden. Sterile Lösungen können auch intravenös verabreicht werden. Die Verbindung kann auch oral entweder in flüssiger oder in fester Zusammensetzungsform verabreicht werden
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können rektal in Form von herkömmlichen Suppositorien verabreicht werden. Zur Verabreichung durch intranasale oder intrabronchiale Inhalation oder Insufflation können die erfindungsgemäßen Verbindungen in wässriger oder teilweise wässriger Lösung zubereitet werden, die dann in Form eines Aerosols angewandt wird. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch transdermal verabreicht werden durch Verwendung eines transdermalen Pflasters, das die aktive Verbindung und einen Träger enthält, der sich der aktiven Verbindung gegenüber inert verhält, für die Haut nicht toxisch ist und die Freisetzung des Wirkstoffs zur systemischen Absorption in den Blutstrom über die Haut ermöglicht. Der Träger kann jede Anzahl von Formen annehmen, wie Cremes und Salben, Pasten, Gele und umschließende Mittel. Die Cremes und Salben können viskose Flüssigkeiten oder halbfeste Emulsionen vom Öl-in-Wasser- oder Wasser-in-Öl-Typ sein. Pasten, die aus aufnahmefähigen Pulvern bestehen, die in den aktiven Bestandteil enthaltendem Petroleum oder hydrophilem Petroleum zerteilt sind, können auch geeignet sein. Eine Vielfalt von umschließenden Mitteln kann verwendet werden, um den aktiven Bestandteil in den Blutstrom freizusetzen, wie eine semipermeable Membran, die ein Behältnis bedeckt, das den aktiven Bestandteil mit einem Träger oder ohne einen solchen enthält, oder eine den aktiven Bestandteil enthaltende Matrix. In der Literatur sind weitere Umschließungsmittel bekannt.
Außerdem können die erfindungsgemäßen Verbindungen als Lösung, Creme oder Lotion verwendet werden, die mit pharmazeutisch annehmbaren Vehikeln zubereitet werden, die 0,1–5 Prozent, vorzugsweise 2% der aktiven Verbindung enthalten, und auf eine von Pilzen befallene Stelle aufgetragen werden können.
Die Dosiererfordernisse schwanken je nach den besonderen angewandten Zusammensetzungen, der Verabreichungsroute, der Schwere der bestehenden Symptome und des zu behandelnden individuellen Patienten. Basierend auf den bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielten Resultaten können die geplanten täglichen Dosierungen der aktiven Verbindung 0,1 μg/kg bis 100 mg/kg, vorzugsweise zwischen 0,001 und 25 mg/kg und bevorzugter zwischen 0,01 und 5 mg/kg liegen. Die Behandlung wird im Allgemeinen mit einer Dosierung begonnen, die unter der optimalen Dosis der Verbindung liegt. Danach wird die Dosis erhöht, bis die optimale Wirkung unter den gegebenen Umständen erreicht wird. Die genauen Dosierungen für die orale, parenterale, nasale oder intrabronchiale Verabreichung werden vom behandelnden Arzt auf Grund der Erfahrung mit dem behandelten individuellen Patienten bestimmt. Vorzugsweise liegt die pharmazeutische Zusammensetzung in einer Einheitsdarreichungsform, z. B. Tabletten oder Kapseln, vor. In einer solchen Form ist die Zusammensetzung in eine Einheitsdosis unterteilt, die geeignete Mengen des aktiven Bestandteils enthält; die Einheitsdarreichungsformen können abgepackte Zusammensetzungen sein, zum Beispiel abgepackte Pulver, Glasfläschchen, Ampullen, Fertigspritzen oder Flüssigkeiten enthaltende Plastiktütchen. Die Einheitsdarreichungsform kann zum Beispiel eine Kapsel oder Tablette selbst oder die geeignete Anzahl irgendwelcher solcher Zusammensetzungen in verpackter Form sein.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen die Zubereitung und biologischen Aktivitäten repräsentativer erfindungsgemäßer Verbindungen. Die Verbindung des Beispiels 11 wird in unserer Hauptveröffentlichung EP Nr. 763039 beansprucht, aus der vorliegend eine Unterabteilung angemeldet wird.
Beispiel 1
Rapamycin 42-Ester mit (Tetrahydropyran-2-yloxy)Essigsäure
2,4,6-Trichlorbenzoylchlorid (0,55 ml, 3,51 mmol) wurde mittels Spritze zu einer Lösung des Glycolsäure-THP-Ethers (0,562 g, 3,51 mmol) und Triethylamins (0,49 ml, 3,51 mmol) in 10 ml THF bei 0 °C unter Stickstoff hinzugefügt. Die Mixtur wurde 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und ein weißes Präzipitat bildete sich. Das weiße Präzipitat wurde durch Vakuumfiltration entfernt und das Filtrat mit einem Stickstoffstrom und Warmwasserbad konzentriert. Der Rest wurde in 10 ml Benzen gelöst, dann wurden Rapamycin (2,92 g, 3,19 mmol) und DMAP (0,429 g, 3,51 mmol) zugefügt und die Mixtur über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Mixtur wurde mit EtOAc verdünnt, mit kalter 1N HCl (aq), gesättigter NaHCO₃ (aq) und Sole gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem öligen gelben Feststoff konzentriert. Die Lichtbogenchromatographie (2 × mit 65% EtOAc-Hexan) lieferte die Titelverbindung (1,114 g, 33%) als weißen Feststoff.
(–)FAB-MS m/z 1055,5 (M–), 590,3 (Southern-Fragment), 463,2 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,60 (m, 1 H, C(42)H), 4,66 (m, 1 H), 4,14 (s, 2 H), 3,73 (m, 1 H), 3,42 (m, 1 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 169,2, 97,4, 63,5, 61,2, 29,7, 24,8, 18,8.
Beispiel 2
Rapamycin 42-Ester mit Hydroxyessigsäure
p-Toluensulfonsäure (10 mg) wurde zu einer Lösung des Produkts von Beispiel 1 (306 mg, 0,29 mmol) in 10 ml CH₃OH bei 0 °C zugefügt. Die Lösung wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, dann mit gesättigter NaHCO₃-Lösung gelöscht. Die wässrige Phase wurde 3 × mit EtOAc extrahiert und die kombinierten organischen Phasen wurden mit Sole gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem weißen Feststoff konzentriert. Die Reinigung durch Lichtbogenchromatographie (2 × mit EtOAc) lieferte die Titelverbindung (145 mg, 51%) als weißen Feststoff.
(–) FAB-MS m/z 971,3 (M^–), 590 (Southern-Fragment), 379,1 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,60 (m, 1 H, C(42)H), 3,98 (s, 2 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 172,1, 59,7.
Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
LAF IC₅₀: 1,80 nM
LAF Verhältnis: 0,83
Prozentuale Veränderung beim adjuvanten Arthritisverfahren gegenüber der Kontrolle: –88%
Beispiel 3
Rapamycin 42-Ester mit 2,2-Dimethyl-3-(Tetrahydropyran-2-yloxy)Propionsäure
Zu einer Lösung des 2,2-Dimethyl-3-Hydroxypropionsäure-THP-Ethers (0,319 g, 1,58 mmol) und Triethylamins (0,22 ml, 1,58 mmol) in 5 ml trockener THF bei 0 °C unter Stickstoff wurde 2,4,6-Trichlorbenzoylchlorid (0,25 ml, 1,58 mmol) tropfweise mittels Spritze hinzugefügt. Die Mixtur wurde 4,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das weiße Präzipitat wurde durch Vakuumfiltration entfernt und das Filtrat mit einem Stickstoffstrom und Warmwasserbad konzentriert. Der Rest wurde in 5 ml Benzen gelöst, dann wurden Rapamycin (1,31 g, 1,43 mmol) und DMAP (0,193 g, 1,58 mmol) hinzugegeben. Die Mixtur wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt, mit EtOAc verdünnt, mit 1N HCl (aq), gesättigter NaHCO₃ (aq), H₂O und Sole gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem gelben öligen Feststoff konzentriert. Die Lichtbogenchromatographie (1 × mit 60% EtOAc-Hexan, 1 × mit 55% EtOAc-Hexan) lieferte die Titelverbindung (0,356 g, 23%) als weißen Feststoff.
(–)FAB-MS m/z 1097,7 (M^–), 590,4 (Southern-Fragment), 505,3 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,55 (m, 1 H, C(42)H), 4,55 (m, 1 H), 3,69 (m, 1 H), 3,60 (m, 2 H), 3,42 (m, 1 H), 1,13 (s, 3 H), 1,11 (s, 3 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 175,0, 98,0, 73,8, 60,7, 42,6, 30,0, 24,9, 22,0, 21,6, 18,7.
Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
LAF IC₅₀: 7,10 nM
LAF Verhältnis: 0,34
Beispiel 4
Rapamycin 42-Ester mit 3-Hydroxy-2,2-Dimethylprogionsäure
p-Toluensulfonsäure (10 mg) wurde zu einer Lösung des Produkts von Beispiel 3 (250 mg, 0,23 mmol) in 10 ml CH₃OH bei 0 °C zugefügt. Die Lösung wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, dann mit gesättigter NaHCO₃-Lösung gelöscht. Die wässrige Phase wurde 3 × mit EtOAc extrahiert und die kombinierten organischen Phasen wurden mit Sole gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem weißen Feststoff konzentriert. Die Reinigung durch Lichtbogenchromatographie (2 × mit 75% EtOAc-Hexan) lieferte die Titelverbindung (103 mg, 45%) als weißen Feststoff.
(–) FAB-MS m/z 1013,3 (M^–), 590,2 (Southern-Fragment), 421,1 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,48 (m, 1 H, C(42)H), 3,39 (d, 2 H), 1,06 (s, 6 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 175,5, 68,0, 44,1, 21,7.
Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
LAF IC₅₀: 0,80 nM
LAF Verhältnis: 1,25
Überlebenszeit des Hauttransplantats: 10,7 ± 0,5 Tage.
Beispiele 5 und 6
Rapamycin 42-Ester mit 2,2-Dimethyl[1,3]Dioxalan-4-Carbonsäure (Beisp. 5) Rapamycin 31,42-Diester mit 2,2-Dimethyl[1,3]Dioxalan-4-Carbonsäure (Beisp. 6)
2,4,6-Trichlorbenzoylchlorid (0,56 ml, 3,61 mmol) wurde mittels Spritze zu einer Lösung des 2,3-Dihydroxypropionsäure-Isopropylidenketals (0,527 g, 3,61 mmol) und Triethylamins (0,50 ml, 3,61 mmol) in 10 ml THF bei 0 °C unter Stickstoff zugefügt. Die Mixtur wurde 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das weiße Präzipitat wurde durch Vakuumfiltration entfernt und das Filtrat mit einem Stickstoffstrom und Warmwasserbad konzentriert. Der Rest wurde in 15 ml Benzen gelöst und Rapamycin (3,00 g, 3,28 mmol), dann DMAP (0,441 g, 3,61 mmol) wurden zugefügt und die Mixtur über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Mixtur wurde mit EtOAc verdünnt, mit kalter 1N HCl (aq), gesättigter NaHCO₃ (aq) und Sole gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem gelben Schaum konzentriert. Die Lichtbogenchromatographie auf Silikagel (Elutionsgradient: 50–60–75–100% EtOAc-Hexan, 4 × mit 65% EtOAc-Hexan) lieferte die Titelverbindungen. Der weniger polare 31,42-Diester (0,415 g) eluierte zuerst und der mehr polare 42-Monoester (0,601 g, 16%) eluierte als zweiter und wurden als weiße Feststoffe isoliert.
Beispiel 5

(–)FAB-MS m/z 1041,4 (M^–), 590,3 (Southern-Fragment), 449,2 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,6 (m, 1 H, C(42)H), 4,6 (m, 1 H), 4,20 (dd, 1 H), 3,96 (m, 1 H), 1,36 (s, 3 H), 1,30 (s, 3 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 170,5, 110,2, 73,4, 66,6, 25,7, 25,4.

Beispiel 6

(–)FAB-MS m/z 1169,6 (M^–).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 5,3 (m, 1 H, C(31)H), 4,6 (m, 1 H, C(42)H), 4,6 (m, 2 H), 4,19 (t, 1 H), 4,13 (t, 1 H), 3,9 (m, 2 H), 1,36 (s, 3 H), 1,33 (s, 3 H), 1,30 (s, 3 H), 1,28 (s, 3 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 170,5, 169,2, 110,3, 110,2, 73,4, 66,6, 66,5, 25,8, 25,7, 25,4, 25,1.

Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
Beispiel 5

LAF IC₅₀: 1,20 nM
LAF Verhältnis: 0,74

Beispiel 6

LAF IC₅₀: 1,30 nM
LAF Verhältnis: 0,5

Beispiel 7
Rapamycin 42-Ester mit 2,3-Dihydroxypropionsäure
Eine Lösung des Produkts von Beispiel 5 (351 mg, 0,34 mmol) in 10 ml THF und 10 ml 1N HCl wurde bei Raumtemperatur 6 Stunden gerührt. Die Mixtur wurde mit EtOAc verdünnt, mit gesättigter NaHCO₃-Lösung und Sole gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem Öl konzentriert. Die Lichtbogenchromatographie (1 × mit EtOAc, 1 × mit 10% MeOH-CH₂Cl₂, 1 × mit 5% MeOH-EtOAc) lieferte die Titelverbindung (78 mg, 23%) als weißen Feststoff.
(–)FAB-MS m/z 1001,2 (M^–), 590,2 (Southern-Fragment), 409,1 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,5 (m, 1 H, C(42)H), 3,60 (m, 1 H), 3,45 (m, 2H).
Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
LAF IC₅₀: 1,4 nM
LAF Verhältnis: 0,40
Beispiel 8
Rapamycin 42-Ester mit 2,2-Dimethyl[1,3]Dioxan-5-Carbonsäure
2,4,6-Trichlorbenzoylchlorid (0,98 ml, 6,27 mmol) wurde mittels Spritze zu einer Lösung des 2-(Hydroxymethyl)-3-Hydroxypropionsäure-Isopropylidenketals (1,000 g, 6,24 mmol) und Triethylamins (0,90 ml, 6,46 mmol) in 20 ml THF bei 0 °C unter Stickstoff zugefügt. Die Mixtur wurde 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und ein weißes Präzipitat bildete sich. Das weiße Präzipitat wurde durch Vakuumfiltration entfernt und das Filtrat mit einem Stickstoffstrom und Warmwasserbad konzentriert. Der Rest wurde in 20 ml Benzen gelöst, dann wurden Rapamycin (5,70 g, 624 mmol) und DMAP (0,762 g, 6,24 mmol) hinzugefügt und die Mixtur über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Mixtur wurde mit EtOAc verdünnt, mit H₂O und Sole gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem gelben Feststoff konzentriert. Die Lichtbogenchromatographie (75% EtOAc-Hexan) lieferte die Titelverbindung (4,17 g, 63%) als weißen Feststoff.
(–)FAB-MS m/z 1055,8 (M^–), 590,5 (Southern-Fragment), 463,4 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,55 (m, 1 H, C(42)H), 3,95 (m, 4 H), 1,30 (s, 6 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 170,1, 97,4, 59,5, 24,8, 22,5.
Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
LAF IC₅₀: 0,76 nM
LAF Verhältnis: 0,45
Beispiel 9
Rapamycin 42-Ester mit 3-Hydroxy-2-Hydroxymethylpropionsäure
Eine Lösung des Produkts von Beispiel 8 (3,30 g, 3,12 mmol) in 50 ml THF und 25 ml 1N HCl wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde mit gesättigter NaHCO₃-Lösung verdünnt und mit EtOAc (3 ×) extrahiert. Die kombinierten organischen Phasen wurden mit gesättigter NaCl (aq) gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem gelben Schaum konzentriert. Die Reinigung durch Lichtbogenchromatographie (1 × mit EtOAc; 2 × mit 5% EtOH-EtOAc) lieferte die Titelverbindung (1,68 g, 53%) als weißen Feststoff.
(–)FAB-MS m/z 1015,5 (M^–), 590,3 (Southern-Fragment), 423,3 (Northern- Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,6 (br s, 2 H), 4,55 (m, 1 H, C(42)H), 3,55 (m, 35 4 H), 2,57–2,53 (m, 1 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 172,2, 59,3, 51,5.
Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
LAF IC₅₀: 0,84 nM
LAF Verhältnis: 0,57
Beispiel 10
Rapamycin 42-Ester mit 2,2,5-Trimethyl[1,3]Dioxan-5-Carbonsäure
Zu einer Lösung des 2,2-bis(Hydroxymethyl)Propionsäure-Isopropylidenketals (1,041 g, 5,98 mmol) (zubereitet nach dem Verfahren von Bruice, J. Am. Chem. Soc. 89: 3568 (1967)) und Triethylamins (0,83 ml, 5,98 mmol) in 20 ml wasserfreier THF bei 0 °C unter Stickstoff wurde 2,4,6-Trichlorbenzoylchlorid (0,93 ml, 5,98 mmol) zugefügt und die resultierende weiße Suspension 5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Präzipitat wurde durch Vakuumfiltration entfernt, wobei der Kolben und der Filterkuchen mit zusätzlichen 10 ml trockener THF gespült wurden. Das Filtrat wurde durch Rotationsverdampfung zu einem weißen Feststoff konzentriert. Der Rest wurde in 20 ml trockenen Benzens gelöst, dann wurden Rapamycin (5,47 g, 5,98 mmol) und DMAP (0,731 g, 5,98 mmol) hinzugefügt. Nach Rühren über Nacht bei Raumtemperatur wurde die Mixtur mit EtOAc verdünnt, mit H₂O und gesättigter NaCl (aq) gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem gelben Öl verdampft. Die Lichtbogenchromatographie (5 × mit 60% EtOAc-Hexan) lieferte die Titelverbindung (2,2 g, 34%) als weißen Feststoff.
(–)FAB-MS m/z 1069,5 (M^–), 590,3 (Southern-Fragment), 477,2 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,57 (m, 1 H, C(42)H), 4,02 (d, 2 H), 3,60 (d, 2 H), 1,34 (s, 3 H), 1,24 (s, 3 H), 1,06 (s, 3 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 173,2, 99,0, 65,0, 22,2, 18,1.
Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
LAF IC₅₀: 4,90 nM
LAF Verhältnis: 0,41
Überlebenszeit des Hauttransplantats: 11,0 ± 1,3 Tage.
Beispiel 11
Rapamycin 42-Ester mit 2,2-bis-(Hydroxymethyl)Propionsäure
Eine Lösung des Produkts von Beispiel 10 (2,8 g, 2,65 mmol) in 50 ml THF und 25 ml 1N HCl wurde bei Raumtemperatur für 4 Stunden gerührt. Die Mixtur wurde mit Wasser verdünnt und dreimal mit EtOAc extrahiert. Die kombinierten organischen Phasen wurden mit gesättigter NaHCO₃-Lösung, gesättigter NaCl-Lösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem gelben öligen Feststoff verdampft. Die Reinigung durch Lichtbogenchromatographie (3 × mit EtOAc) lieferte die Titelverbindung (1,6 g, 59%).
(–)FAB-MS m/z 1029,6 (M^–), 590,4 (Southern-Fragment), 437,3 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,5 (m, 1 H, C(42)H), 3,45 (s, 4 H), 1,04 (s, 3 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 174,2, 63,7, 63,6, 49,9, 16,8.
Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
LAF IC₅₀: 0,80 und 1,80 nM
LAF Verhältnis: 1,00 und 0,44
Überlebenszeit des Hauttransplantats: 11,4 ± 1,5 und 12,0 ± 1,1 Tage.
Prozentuale Veränderung des adjuvanten Arthritistestverfahrens gegenüber der Kontrolle: –88%
Beispiel 12
Rapamycin 42-Ester mit 2,2-Dimethyl-5-(2-Trimethylsilanylethoxymethyl)[1,3]Dioxan-5-Carbonsäure
2,4,6-Trichlorbenzoylchlorid (0,14 ml, 0,86 mmol) wurde mittels Spritze zu einer Lösung des 2,2-bis(Hydroxymethyl)-2-(2-Trimethylsilylethoxy) Propionsäure-Isopropylidenketals (0,250 g, 0,86 mmol) und Triethylamins (0,12 ml, 0,86 mmol) in 2 ml THF bei 0 °C unter Stickstoff zugefügt. Die Mixtur wurde 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und ein weißes Präzipitat bildete sich. Das weiße Präzipitat wurde durch Vakuumfiltration entfernt und das Filtrat mit einem Stickstoffstrom und Warmwasserbad konzentriert. Der Rest wurde in 2 ml Benzen gelöst, dann wurden Rapamycin (0,786 g, 0,86 mmol) und DMAP (0,105 g, 0,86 mmol) zugefügt und die Mixtur über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Mixtur wurde mit EtOAc verdünnt, mit H₂O und Sole gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem gelben Feststoff konzentriert. Die Lichtbogenchromatographie (Elutionsgradient: 40–60–80–100% EtOAc-Hexan) lieferte die Titelverbindung (0,559 g, 54%) als weißen Feststoff.
(–)FAB-MS m/z 1185,2 (M^–), 590,1 (Southern-Fragment), 593 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,55 (m, 1 H, C(42)H), 3,73 (m, 4 H), 3,57 (s, 2 H), 3,43 (t, 2 H), 1,29 (s, 6 H), 0,79 (t, 2 H), –0,04 (s, 9 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 171,1, 97,7, 70,2, 68,1, 61,3, 46,0, 24,6, 22,1, 14,6, –1,3.
Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
LAF IC₅₀: 7,20 nM
LAF Verhältnis: 0,05
Beispiele 13 und 14
Rapamycin 42-Ester mit 3-Methyl-1,5-Dioxaspiro[5,5]Undecan 3-Carbonsäure (Beisp. 13)
Rapamycin 31,42-Diester mit 3-Methyl-1,5-Dioxaspiro[5,5]Undecan 3-Carbonsäure (Beisp. 14)
2,4,6-Trichlorbenzoylchlorid (0,16 ml, 1,0 mmol) wurde mittels Spritze zu einer Lösung des 2,3-Dihydroxypropionsäure-Cyclohexylidenketals (0,214 g, 1,0 mmol) und Triethylamins (0,14 ml, 1,0 mmol) in 2,5 ml THF bei 0 °C unter Stickstoff zugefügt. Die Mixtur wurde 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das weiße Präzipitat wurde durch Vakuumfiltration entfernt und das Filtrat mit einem Stickstoffstrom und Warmwasserbad konzentriert. Der Rest wurde in 3 ml Benzen gelöst und Rapamycin (0,457 g, 0,5 mmol), dann DMAP (0,061 g, 0,5 mmol) wurden hinzugefügt und die Mixtur über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Mixtur wurde mit EtOAc verdünnt, mit kalter 1N HCl (aq), gesättigter NaHCO₃ (aq) und Sole gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, gefiltert und zu einem gelben Schaum konzentriert. Die Lichtbogenchromatographie auf Silikagel (45–50% EtOAc-Hexan) lieferte die Titelverbindungen. Der 31,42-Diester (0,168 g, 26%) eluierte zuerst und der mehr polare 42-Monoester (0,301 g, 52%) eluierte als zweiter und die Produkte wurden als weiße Feststoffe isoliert.
Beispiel 13

(–)FAB-MS m/z 1109,5 (M^–), 590,3 (Southern-Fragment), 517,3 (Northern-Fragment).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 4,55 (m, 1 H, C(42)H), 3,61 (t, 4 H), 1,04 (s, 3 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 173,3, 97,2, 64,2.

Beispiel 14

(–)FAB-MS m/z 1305,6 (M^–).
¹H NMR (400 MHz, d-6 DMSO) δ 5,25 (m, 1 H, C(31)H), 4,55 (m, 1 H, C(42)H), 3,64–3,54 (m, 8 H), 1,05 (s, 3 H), 0,97 (s, 3 H).
¹³C NMR (100,6 MHz, d-6 DMSO) δ 173,2, 172,1, 97,3, 97,2, 64,3, 64,2, 63,9.

Bei den pharmakologischen Standardtestverfahren erzielte Resultate:
Beispiel 13

LAF IC₅₀: 0,6 nM
LAF Verhältnis: 2,00

Beispiel 14

LAF: inhibierte T-Zellproliferation um 43% bei 0,1 μM.

Claims

Verbindung mit der Struktur
wobei R⁷ Wasserstoff, Alkyl von 1-6 C-Atomen, Alkenyl von 2-7 C-Atomen, Alkynyl von 2-7 C-Atomen, -(CR³R⁴)_fOR¹⁰, -CF₃ oder -F ist; R⁸ und R⁹ ein jeder unabhängig Wasserstoff, Alkyl von 1-6 C-Atomen oder -(CR³R⁴)_fOR¹⁰ ist oder R⁸ und R⁹ zusammen genommen werden können, um X zu bilden; R¹⁰ Wasserstoff, Alkyl von 1-6 C-Atomen, Alkenyl von 2-7 C-Atomen, Alkynyl von 2-7 C-Atomen, Tri-(Alkyl von 1-6 C-Atomen)Silyl, Tri-(Alkyl von 1-6 C-Atomen)Silylethyl, Triphenylmethyl, Benzyl, Alkoxymethyl von 2-7 C-Atomen, Tri-(Alkyl von 1-6 C-Atomen)Silylethoxymethyl, Chlorethyl oder Tetrahydropyranyl ist; X 5-(2,2-Di-(Alkyl von 1-6 C-Atomen))[1,3]Dioxanyl, 5-(2-Spiro(Cycloalkyl von 3-8 C-Atomen))[1,3]Dioxanyl, 4-(2,2-Di-(Alkyl von 1-6 C-Atomen))[1,3]Dioxanyl, 4-(2-Spiro(Cycloalkyl von 3-8 C-Atomen))[1,3]Dioxanyl, 4-(2,2-Di-(Alkyl von 1-6 C-Atomen))[1,3]Dioxalanyl oder 4-(2-Spiro(Cycloalkyl von 3-8 C-Atomen))[1,3]Dioxalanyl ist; R³ und R⁴ ein jeder unabhängig Wasserstoff, Alkyl von 1-6 C-Atomen, Alkenyl von 2-7 C-Atomen, Alkynyl von 2-7 C-Atomen, Trifluormethyl oder -F ist; und f = 0 bis 6 unter der Voraussetzung, dass CR⁷R⁸R⁹ wenigstens eine -(CR³R⁴)_fOR¹⁰- oder X-Gruppe enthält, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verbindung nach Anspruch 1, die eine der Folgenden ist: Rapamycin 42-Ester mit (Tetrahydropyran-2-yloxy)Essigsäure; Rapamycin 42-Ester mit Hydroxyessigsäure; Rapamycin 42-Ester mit 2,2-Dimethyl-3-(Tetrahydropyran-2-yloxy)Propionsäure; Rapamycin 42-Ester mit 3-Hydroxy-2,2-Dimethylpropionsäure; Rapamycin 42-Ester mit 2,2-Dimethyl[1,3]Dioxalan-4-Carbonsäure; Rapamycin 42-Ester mit 2,3-Dihydroxypropionsäure; Rapamycin 42-Ester mit 2,2-Dimethyl[1,3]Dioxan-5-Carbonsäure; Rapamycin 42-Ester mit 3-Hydroxy-2-Hydroxymethylpropionsäure; Rapamycin 42-Ester mit 2,2,5-Trimethyl[1,3]Dioxan-5-Carbonsäure; Rapamycin 42-Ester mit 2,2-Dimethyl-5-(2-Trimethylsilanylethoxymethyl)[1,3]-Dioxan-5-Carbonsäure; oder Rapamycin 42-Ester mit 3-Methyl-1,5-Dioxaspiro[5.5]Undecan 3-Carbonsäure; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 zur Verwendung als Pharmakon.
Verwendung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 bei der Zubereitung eines Medikamentes zur Behandlung der Transplantatabstoßung oder Transplantat-Wirt-Reaktion bei einem Säugetier.
Verwendung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 bei der Zubereitung eines Medikamentes zur Behandlung einer Pilzinfektion bei einem Säugetier.
Verwendung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 bei der Zubereitung eines Medikamentes zur Behandlung der rheumatoiden Arthritis bei einem Säugetier.
Verwendung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 bei der Zubereitung eines Medikamentes zur Behandlung einer Restenose bei einem Säugetier.
Verwendung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 bei der Zubereitung eines Medikamentes zur Behandlung einer Lungenentzündung bei einem Säugetier.
Verwendung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 bei der Zubereitung eines Medikamentes zur Behandlung von Tumoren bei einem Säugetier.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung der Struktur (I) nach Anspruch 1 oder Anspruch 2 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon und einen pharmazeutischen Träger umfasst.
Verfahren zur Zubereitung eines Rapamycin Hydroxyesters der in Anspruch 1 definierten Formel I, das die Acylierung des Rapamycins mit einem Acylierungsmittel der Formel HO-COCR⁷R⁸R⁹ (II)oder einem reaktiven Derivat davon umfasst, wobei R⁷-R⁹ wie in Anspruch 1 definiert sind, vorausgesetzt, dass freie Hydroxygruppen geschützt werden und nach der Reaktion sämtliche vorhandene Schutzgruppen nach Bedarf entfernt werden.