JP2022504191A

JP2022504191A - キメラ抗原受容体（ｃａｒ）群

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Publication number: JP2022504191A
Application number: JP2021518488A
Authority: JP
Inventors: ザルツァーベンヤミン; レーナーマンフレート; トラックスルマイヤーミヒャエル
Original assignee: ザンクトアンナキンダークレプスフォルシュング; ウニベルジテートフュルボーデンクルトゥルウィーン
Priority date: 2018-10-05
Filing date: 2019-10-04
Publication date: 2022-01-13
Also published as: WO2020070289A1; EP3860642A1; CN113286608A; US20220041687A1; KR20210072797A; CA3112310A1

Abstract

２、３、又は４つのＣＡＲ分子からなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）群が開示されており、ここで、ＣＡＲ群の各メンバーはそのアミノ酸配列が互いに異なり、前記群の各ＣＡＲ分子は、少なくとも膜貫通ドメインと外部ドメインとを含み、外部ドメインは、１つ又は２つの抗原結合部分、及び／又はそれぞれが少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる１つ又は２つの結合部位を含み、前記群の各ＣＡＲ分子の外部ドメインはその一般的なコンフォメーションで、前記群の他のＣＡＲ分子とそれぞれ分子間ジスルフィド結合を形成することができるシステインアミノ酸部分を含まず、前記群の各ＣＡＲ分子は少なくとも１つのヘテロ二量体化ドメインを含む。

Description

本発明は、２、３、又は４つのＣＡＲ分子からなるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）群に関する。

ＣＡＲＴ細胞、すなわちキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変されたＴ細胞を用いる免疫療法は、癌治療において最も有望なアプロ－チの１つである。現在まで、この治療戦略の高い可能性は、Ｂ細胞悪性腫瘍の患者において優れた臨床応答によって証明されている。しかし、この成功を他の腫瘍にさらに適用することは、現在いくつかのハ－ドルによって妨げられている（Lim and June, Cell. 2017;168(4):724; Labanieh et al., Nat Biomed Eng. 2018; 2:377-391）。例えば、現在のＣＡＲＴ細胞は、典型的にはＣＡＲによって単一の規定された腫瘍関連抗原に対して向けられている。腫瘍関連抗原は常に健康な細胞でも発現されるため、この事実は、いわゆるオンタ－ゲット／オフ腫瘍毒性、すなわち、この抗原を発現する健康な組織の破壊をもたらす。ＣＡＲ改変細胞の腫瘍特異性を改良するための既存の戦略は、第２の抗原に対するキメラ共抑制又は同時刺激受容体の同時発現、あるいは第２の抗原に対する同時発現されたキメラノッチベ－スの受容体によるＣＡＲ発現の転写調節に基づいている（Roybal and Lim, Annu Rev Immunol. 2017;35:229; Labanieh et al., Nat Biomed Eng. 2018; 2:377-391）。

国際公開第２０１７／１８０９９３Ａ１号は、サルベ－ジキメラ抗原受容体システムを開示しており、
Lanitis et al. (Cancer Immunol. Res. 1 (2013), 43-53) は、シグナル伝達ドメインが解離したキメラ抗原受容体Ｔ細胞が、インビボでの毒性の可能性の低い集中した抗腫瘍活性を示すことを報告しており、
Kloss et al. (Nat. biotechnol. 31 (2012), 71-75) は、バランスの取れたシグナル伝達を伴う組合せ抗原認識（combinatorial antigen recognition）が、工学作成されたＴ細胞による選択的な腫瘍根絶を促進することを報告している。

国際公開第２０１５／０７５４６８Ａ１号は、活性化内部ドメインを含むＣＡＲを備えたＣＡＲシステムを開示しており、
Wu et al. (Science 350 (2015), 293 and aab4077-1 to aab4077-10) は、小分子ゲートキメラ受容体を介する治療用Ｔ細胞の遠隔制御について説明しており、
Ajina et al. (Mol. cancer therap. 17 (2018), 1795-1815）は、ＣＡＲ強化シグナル伝達に対処するための戦略を概説している。

本発明の目的は、所望の標的細胞を認識する際のＣＡＲ改変細胞の特異性を改良するための新規戦略を提供することである。標的細胞に対するこの改良された特異性は、標的抗原の組み合わせの特異的認識、すなわち組合せ標的抗原認識によって達成される。より具体的には、新規ＣＡＲはインビボで、特にヒト患者の治療のために、副作用のリスクなしに又は少なくとも副作用が減少した状態で、適用可能であるはずである。さらなる目的は、腫瘍治療のための手段、特に腫瘍治療のための免疫療法の概念を提供することである。

発明の要約
本発明は、２、３、又は４つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子からなるＣＡＲ群に基づく組合せ標的抗原認識のためのシステムを提供し、
ここで、ＣＡＲ群の各メンバーは、そのアミノ酸配列が互いに異なり、
ここで、前記群の各ＣＡＲ分子は、少なくとも膜貫通ドメインと外部ドメインとを含み、外部ドメインは、１つ又は２つの抗原結合部分、及び／又はそれぞれが少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる１つ又は２つの結合部位を含み、前記群の少なくとも１つのＣＡＲ分子は内部ドメインをさらに含み、これは、少なくとも１つの免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を介してシグナルを伝達することができる少なくともシグナル伝達領域を含み、
ここで、前記群の各ＣＡＲ分子の内部ドメインは、各ＣＡＲ分子が内部ドメインを含む場合、もし細胞内で発現されるなら、細胞膜の細胞内側に位置し、そして前記群の各ＣＡＲ分子の外部ドメインは、もし細胞内で発現されるなら、細胞膜の細胞外側に移動し、そして前記群の各ＣＡＲ分子の膜貫通ドメインは、もし細胞内で発現されるなら、細胞膜内に位置し、
ここで、前記群の各ＣＡＲ分子の外部ドメインはその一般的なコンフォメーションで、前記群の他のＣＡＲ分子とそれぞれ分子間ジスルフィド結合を形成することができるシステインアミノ酸部分を含まず、
ここで、前記群の異なるＣＡＲ分子の及び異なる他のポリペプチドの抗原結合部分は、互いに共有結合していない異なる標的抗原に特異的であり、
ここで、各標的抗原に対する前記群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分の親和性は、１ｍＭ～１００ｎＭであり、
ここで、各標的抗原に対する他のポリペプチドの個々の抗原結合部分の親和性、あるいは各ＣＡＲ分子の結合部位に対するこの他のポリペプチドの親和性は、１ｍＭ～１００ｎＭであり、
ここで、前記群の各ＣＡＲ分子は、前記群の他のＣＡＲ分子との規定されたヘテロ二量体化を仲介することができる少なくとも１つのヘテロ二量体化ドメインを含み、ヘテロ二量体化ドメインの対のこのヘテロ二量体化は調節分子とは独立して起きるか、又は調節分子の非存在下で起きて調節分子によって低減されるか、又は調節分子によって誘導され、任意選択的に他の調節分子によって低減され、ここで、調節分子は、生理学的条件下でヘテロ二量体化ドメインの対の少なくとも１つのメンバーに結合することができ、そしてヘテロ二量体化を誘導又は低減すると、２、３、又は４つのＣＡＲ分子からなる非共有結合的に複合体化されたＣＡＲ群の形成を誘導又は低減する。

ＣＡＲ群の例示的な構成の略図を示す。ＣＡＲ群の例示的な構成の略図を示す。ＣＡＲ群の例示的な構成の略図を示す。ＣＡＲ群の例示的な構成の略図を示す。ＣＡＲ群の例示的な構成の略図を示す。ＣＡＲ群の例示的な構成の略図を示す。ヒトＥＧＦＲに対するさまざまなｒｃＳｓｏ７ｄベースの抗原結合部分のＫｄ値を示す。システインを形成する細胞外ジスルフィド結合が、ＣＡＲ群のＡＮＤゲート機能に対する結合活性効果の使用を防ぐことができることを示す。システインを形成する細胞外ジスルフィド結合が、ＣＡＲ群のＡＮＤゲート機能に対する結合活性効果の使用を防ぐことができることを示す。ｓｃＦｖ含有ＣＡＲ分子の二量体化／オリゴマー化が、ＡＮＤゲート機能を備えたＣＡＲ群を生成するための結合活性効果の使用を妨げることを示す。ｓｃＦｖ含有ＣＡＲ分子の二量体化／オリゴマー化が、ＡＮＤゲート機能を備えたＣＡＲ群を生成するための結合活性効果の使用を妨げることを示す。ｓｃＦｖ含有ＣＡＲ分子の二量体化／オリゴマー化が、ＡＮＤゲート機能を備えたＣＡＲ群を生成するための結合活性効果の使用を妨げることを示す。ＨＥＲ２に対するアフィボディベースのＣＡＲ群の生成と機能を示す。ＨＥＲ２に対するアフィボディベースのＣＡＲ群の生成と機能を示す。ＨＥＲ２に対するアフィボディベースのＣＡＲ群の生成と機能を示す。インビボで安定的に形質導入されたＴ細胞内で発現されるＣＡＲ群の機能の調節を示す。インビボ実験に使用されるＣＡＲ改変Ｔ細胞の機能的なインビトロ特性解析を示す。インビボ実験に使用されるＣＡＲ改変Ｔ細胞の機能的なインビトロ特性解析を示す。インビボ実験に使用されるＣＡＲ改変Ｔ細胞の機能的なインビトロ特性解析を示す。ＶＥＧＦによるＣＡＲ群の結合活性の調節を示す。ＶＥＧＦによるＣＡＲ群の結合活性の調節を示す。ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２に対して向けられ、調節分子によって制御できるＣＡＲ群の機能を示す。ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２に対して向けられ、調節分子によって制御できるＣＡＲ群の機能を示す。ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２に対して向けられ、調節分子によって制御できるＣＡＲ群の機能を示す。３つ又は４つのＣＡＲ分子からなるＣＡＲ群を示す。３つ又は４つのＣＡＲ分子からなるＣＡＲ群を示す。構成的な複合体形成のためのヘテロ二量体化ドメインを含むＣＡＲ群の機能を示す。構成的な複合体形成のためのヘテロ二量体化ドメインを含むＣＡＲ群の機能を示す。異なる同時刺激ドメインを含むＣＡＲ群を示す。異なる同時刺激ドメインを含むＣＡＲ群を示す。異なるＣＡＲシグナル伝達骨格に融合された異なるｒｃＳｓｏ７ｄ及びアフィボディベースの結合部分を含むＣＡＲ分子の発現を示す。異なるＣＡＲシグナル伝達骨格に融合された異なるｒｃＳｓｏ７ｄ及びアフィボディベースの結合部分を含むＣＡＲ分子の発現を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。

好適な実施態様の詳細な説明
本発明の組み合わせ抗原認識の根底にある原理はＣＡＲ群であり、ここで、この群の個々のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分は、それらの各標的抗原に対して低い親和性しか持たないため、一価の相互作用はＣＡＲ発現細胞で弱い細胞内シグナル伝達しか引き起こさないか、又はシグナル伝達をまったく引き起こさない。それぞれが少なくとも１つの抗原結合部分を含み、さらに群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドを使用する場合、他のポリペプチドの抗原結合部分とその各標的抗原との間の相互作用か、又は他のポリペプチドと群の各ＣＡＲ分子上のその結合部位との間の相互作用は、親和性が低くなければならないため、一価の相互作用は、ＣＡＲ発現細胞における弱い細胞内シグナル伝達のみを誘発するか、又はシグナル伝達を全く誘発しない。ただし、異なる結合特異性を有する群の２、３、又は４つのＣＡＲ分子の非共有結合的集合は、それぞれ２つ、最大３つ、又は最大４つの異なる標的抗原と直接に又は他のポリペプチドを介して間接的に、同時に相互作用できる多価ＣＡＲ複合体の形成をもたらし、ここで、前記他のポリペプチドのそれぞれは少なくとも抗原結合部分を含み、群のＣＡＲ分子に結合することができる。異なる抗原とのこの多価相互作用は、低親和性、すなわち結合活性（avidity）の相乗的増幅をもたらす。最終的に、異なる標的抗原の選択された組み合わせとのこの多価相互作用は、前記ＣＡＲ群を発現する細胞において増強されたシグナル伝達を誘発する。

従って、一価ではなく多価の相互作用のみが複合体化ＣＡＲ群を効率的に誘発することを確保するために、群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、１ｍＭ～１００ｎＭであり、他のポリペプチドの個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性、又はこの他のポリペプチドのその各ＣＡＲ分子の結合部位に対する親和性は、１ｍＭ～１００ｎＭである。好適な実施態様において、群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する各親和性は、１ｍＭ～１５０ｎＭ、好ましくは１ｍＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１ｍＭ～３００ｎＭ、特に１ｍＭ～４００ｎＭであり、他のポリペプチドの個々の抗原結合部分のその各標的抗原に対する親和性、又はこの別のポリペプチドの各ＣＡＲ分子の結合部位に対する親和性は、１ｍＭ～１５０ｎＭ、好ましくは１ｍＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１ｍＭ～３００ｎＭ、特に１ｍＭ～４００ｎＭである。他の好適な実施態様において、群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分の各標的抗原に対する親和性は、５００μＭ～１００ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～１００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～１００ｎＭ、特に５０μＭ～１００ｎＭであり、他のポリペプチドの個々の抗原結合部分の各標的抗原に対する親和性、又はこの他のポリペプチドの各ＣＡＲ分子の結合部位に対する親和性は、５００μＭ～１００ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～１００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～１００ｎＭ、特に５０μＭ～１００ｎＭである。他の好適な実施態様において、群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する各親和性は、５００μＭ～１５０ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～３００ｎＭ、特に５０μＭ～４００ｎＭであり、他のポリペプチドの個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性、又はこの他のポリペプチドのその各ＣＡＲ分子の結合部位に対する親和性は、５００μＭ～１５０ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～３００ｎＭ、特に５０μＭ～４００ｎＭである。本明細書に示される任意の親和性値は、例えば実施例欄の例１と４で行われるように、定常状態分析を使用して、Biacore T200 デバイス（GE Healthcare）を用いてｐＨ７．４、２５℃で行われる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される親和性を指すことに留意されたい。

すでに説明したように、本発明のＡＮＤゲート機能を有するＣＡＲを生成する基本原理は、ＣＡＲ群の定義されたヘテロ二量体化、ヘテロ三量体化、又はヘテロ四量体化に見出され、その各ＣＡＲ分子は異なる標的抗原の低親和性認識を仲介する。次に、標的抗原認識時の異なる結合部分の低親和性の増幅（すなわち、結合活性効果）は、効率的なＣＡＲシグナル伝達を誘発することができる。本発明の群の個々のＣＡＲ分子間の非共有結合的相互作用（群のＣＡＲ分子の２重、３重、又は４重特異的複合体を生じる）は、構成的であるか、又は調節分子の有無に依存することがある。重要なことに、例えば分子間細胞外ジスルフィド結合の形成によって仲介されるように、同一の標的抗原特異性を有するＣＡＲ分子の二量体化又はオリゴマー化は単一の抗原に対する親和性を増幅し、それにより本発明ＣＡＲ群のＡＮＤゲート機能を妨害するであろう。従って、同一の標的抗原特異性を有するＣＡＲ分子のそのような二量体化又はオリゴマー化は、できる限り防止されるか、又は少なくとも生物学的に可能な限り最小化される必要がある。

本発明のＣＡＲ群の定義されたヘテロ二量体化、ヘテロ三量体化、又はヘテロ四量体化を容易にするために、ＣＡＲ群の各ＣＡＲ分子は、２つのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を仲介することができ、それにより構成的に又は条件的方法で、２、３、又は４つのＣＡＲ分子の定義された非共有結合性複合体の形成を誘導することができる少なくとも１つのドメインを含む。これは、もしＣＡＲ群の個々の分子が細胞内で同時発現され、非共有結合性複合体に組み立てられるなら、前記ＣＡＲ群（任意選択的に、それぞれが少なくとも抗原結合部分を含み、群のＣＡＲ分子に結合できる１つ以上の他のポリペプチドの存在に依存する）は、非標的細胞、すなわち標的抗原のみ又は選択された標的抗原の一部のみを発現する細胞と比較して、標的細胞、すなわち２つ以上の標的抗原の選択された組み合わせを発現する細胞中に応答する、それらの細胞の活性化増強を仲介することができることを意味する。これは、非共有結合性複合体化ＣＡＲ群が、いくつかの入力、すなわち異なる標的抗原への結合を、定義された出力シグナル、すなわち前記ＣＡＲ群を発現する細胞の活性化に、統合できることを意味する。前記ＣＡＲ群のこの能力は、いわゆる論理ＡＮＤゲート機能を表し、標的細胞（すなわち、所定の標的の組み合わせを発現する細胞）を非標的細胞（すなわち、１つの抗原のみを発現する細胞）から区別するのに驚くほど効率的であった。

ロジックＡＮＤゲート機能を備えたＣＡＲを設計するための既存の概念は、異なる標的抗原に対する個々の分子の複数の結合部分の個々の親和性の相乗的増幅を使用していない（Roybal and Lim, Annu Rev Immunol. 2017;35:229; Chen et al., Curr Opin Immunol. 2018;51:103-110; Labanieh et al., Nat Biomed Eng. 2018; 2:377-391）。しかしながら、２つの異なる標的抗原（抗原ＡとＢ）に対する結合部分がタンデムに融合されて、すなわち連続的に連結されて単一のポリペプチド鎖にされて、従来のＣＡＲ骨格になる戦略が存在する。このようなＣＡＲ（タンデムＣＡＲと呼ばれる）は、論理ＯＲゲート機能を仲介するように設計されており、すなわちこれらのＣＡＲは、抗原Ａ、又は抗原Ｂ、又は両方の抗原のいずれかを発現する標的細胞に応答して、前記ＣＡＲを発現する細胞中で強いシグナルを誘発する。これは、それらの結合部分が高い親和性を有するため、これらのＣＡＲが一価の相互作用でもシグナルを誘発できるという事実によるものである（Hegde et al., J Clin Invest. 2016;126(8):3036-3052; Grada et al., Mol Ther Nucleic Acids. 2013;2:e105; Zah et al., Cancer Immunol Res. 2016;4(6):498-508; De Munter et al., Int J Mol Sci. 2018 Jan 30;19(2) pii: E403）。このようなＣＡＲの例は、米国特許出願公開第２０１７０１０７２８５Ａ１号及び米国特許出願公開第２０１８０１１１９９２Ａ１号に開示されている。報告されているＣＡＲのいくつかは、ＡＮＤゲート機能も備えている（Hedge et al., J Clin Invest. 2016;126(8):3036-3052）。しかし、これらの報告されたＣＡＲのＡＮＤゲート機能は、個々の結合部分の親和性が高いため、及び現在使用されているＣＡＲ骨格の少なくとも一部が細胞内で発現すると、細胞外システイン残基間の結合間のジスルフィド結合に起因するホモダイマーを形成するため、極めて制限される。

上述したように、同一の標的抗原特異性を有するＣＡＲ分子の二量体化又は多量体化の防止又は最小化は、本発明のＡＮＤゲート機能を有するＣＡＲ群を生成するための必須の前提条件である。同一のＣＡＲ分子の二量体化又は多量体化は、同一の標的抗原特異性を有する結合部分の親和性増幅をもたらし、それにより論理ＡＮＤゲート機能に対する結合活性効果（すなわち、抗原の組み合わせの特異的認識）の使用を防止する。

このため、本発明によれば、その「一般的なコンフォメーション」（すなわち、本来は折りたたまれたコンフォメーション）の群の各ＣＡＲ分子の外部ドメインは、群の他のＣＡＲ分子とそれぞれ分子間ジスルフィド結合を形成することができるシステインアミノ酸部分を含まない。言い換えれば、本発明の群のＣＡＲ分子の細胞外ドメインは、分子内ジスルフィド結合（すなわち、群の所定のＣＡＲ分子内に形成される）に関与しないシステインを、天然に折りたたまれたＣＡＲのコンフォメーション中に含んではならない。例えば、本来のコンフォメーションで分子間ジスルフィド結合を（つまり、群の他のＣＡＲ分子と）形成し得るＣＤ８αのヒンジ領域のシステインは、例えば突然変異や欠失などによって除外する必要がある。一方、ＣＡＲ分子の本来のコンフォメーションで分子内ジスルフィド結合に関与している（従って、他のＣＡＲ分子との分子間結合の形成にアクセスできない）システインは、本発明のＣＡＲ群のＣＡＲ中に存在することができる。一例として、分子内ジスルフィド結合を形成する抗体断片のＩｇドメイン内（例えば、ｓｃＦｖ内）のシステインは、本発明のＣＡＲ群のＣＡＲ分子中に存在することができる。例えば、ｓｃＦｖ内のシステインは分子内ジスルフィド結合に関与しているため、分子間ジスルフィド結合には使用できず（ＣＡＲ分子が、一般的な、つまり本来のコンフォメーションで存在する場合）、これにより、群のホモ二量体又はホモオリゴマーのＣＡＲ分子の形成が回避される。

さらに、現在のＣＡＲの抗原結合部分は通常、個々の分子間の可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン及び可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ドメインの分子間ヘテロ二量体化のために、オリゴマー化する傾向がある１本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）に基づいている（Hudson et al., J Immunol Methods. 1999; 231(1-2):177-89; Long et al., Nat Med. 2015;21(6):581-90）。この制御されていない二量体化又はオリゴマー化は、同一のＣＡＲ分子（つまり、同じ抗原特異性を有するＣＡＲ分子）間でも発生する可能性があるため、これにより、効率的なＡＮＤゲート機能が妨げられる可能性がある。従って、本発明のＣＡＲ群の個々の分子は、好ましくは、群のＣＡＲ分子の望ましくないかつ制御されていない共有結合性又は非共有結合性複合体化をもたらす可能性のあるｓｃＦｖベースの抗原結合部分又は他の分子成分を含まない。

一般に、ＣＡＲ分子の他のドメインによって仲介される同一のＣＡＲ分子の非共有結合性二量体化又はオリゴマー化は、本発明の効率的なＡＮＤゲート機能を妨げるであろう。従って、そのような非共有結合性二量体化又はオリゴマー化は、そのようなドメインの排除又は工学作成によって、生物学的に可能な限り防止又は少なくとも最小限に抑える必要がある。

タンデムＣＡＲと比較して、本発明のＣＡＲ群の基本設計は、異なる標的抗原のそれぞれとの効率的な相互作用のための空間的要件を最適化するための、ＣＡＲ分子のリンカー及びスペ－サ－の適応を容易にする。本発明のＣＡＲ群の構成は、ＣＡＲ分子と標的抗原との間の引っ張り力の形状に関して、ＣＡＲ分子の最適化をさらに容易にする。これは、アクトミオシン細胞骨格による抗原認識時に生成される機械的な力が、免疫シナプスの組織化に重要な役割を果たし、Ｔ細胞の活性化と標的細胞の死滅の効率を改善することがＴ細胞について知られているため、有利である（Basu and Huse, Trends Cell Biol. 2017;27(4):241-254）。接着ストリップを引き剥がすのと同様に、ＣＡＲ分子の結合部分を介する力の伝達の形状が、標的抗原との相互作用の安定性に影響を及ぼし、それによってＣＡＲ分子のシグナル伝達効率に影響を与えると考えられる。すなわち、タンデム－ＣＡＲでは、引っ張り力は、ほとんど（又は排他的に）膜貫通ドメインに隣接する結合部分に作用するが、本発明のＣＡＲ群では、引っ張り力は、群の各ＣＡＲ分子において並行して伝達され、これにより、ＣＡＲ分子上の結合部分と標的抗原の間の各相互作用が全体的な引っ張り力に寄与することが確保される。最後に、ＣＡＲ群の構成は、個々のＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を条件的にするだけで、ＣＡＲ群の機能の可逆的調節を任意選択的に可能にする。従って、ＣＡＲ工学の最先端技術であるタンデム－ＣＡＲと比較して、本発明のＣＡＲ群は、いくつかの重要な利点を提供する：（ｉ）各結合部分のリンカー長を個別に最適化する能力、（ｉｉ）引っ張り力の伝達の改善、及び（ｉｉｉ）条件的二量体化、三量体化、又は四量体化によってＣＡＲ機能を調整する選択肢。

本発明のＣＡＲ群の分子設計の基本的な構成は、論理ＡＮＤゲート機能を無効にすることなく、特定の部位で変えることができる。これにより、さまざまな要求にシステムを適応させることができる。例えばＣＡＲ群は、結合活性効果を増強するために、及び／又はそれぞれ３つ又は４つの異なる抗原の存在に依存するＡＮＤゲートＣＡＲ複合体を生成するために、又は論理ＯＲゲート機能をＣＡＲ群に組み込みむために、例えば抗原Ｂ又は抗原Ｃのいずれかと組み合わせて抗原Ａの認識を仲介するために、２つのＣＡＲ分子からなるか、あるいは３つ又は４つのＣＡＲ分子からなり得る。すなわち、これはＡＮＤ／ＯＲゲートと見なすことができ、それは、この例では、三量体ＣＡＲ群が抗原Ａと（ＡＮＤ）Ｂ又は（ＯＲ）抗原Ａと（ＡＮＤ）Ｃ、すなわちＡと（ＡＮＤ）Ｂ又は（ＯＲ）Ｃ）のいずれかに応答するためである。同様に、ＣＡＲの四量体群は、抗原（Ａ又は（ＯＲ）Ｂ）と（ＡＮＤ）（Ｃ又は（ＯＲ）Ｄ）に、又は抗原Ａと（ＡＮＤ）（Ｂ又は（ＡＮＤ）Ｃ又は（ＡＮＤ）Ｄ）に応答するように設計することができる。ＣＡＲ群はまた、可溶性タンパク質又は小分子のいずれかに機能的に依存するように簡単に設計することもできる。

ＣＡＲ機能の条件的調節のための好適な実施態様において、ＣＡＲ群は、それぞれが少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる、少なくとも細胞外結合部位をそれぞれ含むＣＡＲ分子からなり得る。そのような他のポリペプチドは、それによりＣＡＲ群に属さず、群のＣＡＲ分子の結合部位に非共有結合的に直接、又は、例えば共有結合したフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）分子などの他のポリペプチドの共有結合的改変を介して間接的に、結合できる可溶性タンパク質として定義される。この好適な実施態様において、この他のポリペプチドの定義された注入は、ＣＡＲ群の機能の制御を可能にする。ＣＡＲ分野でよく知られており（Cho et al., Cell. 2018;173(6):1426-1438; Ma et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2016;113(4):E450-458; Urbanska et al., Cancer Res. 2012;72(7):1844-1852）、現在臨床の場で試験されている（Labanieh et al., Nat Biomed Eng. 2018; 2:377-391）可溶性抗原結合タンパク質を投与することによってＣＡＲ機能を調節するこの戦略は、本発明のＣＡＲ群に組み込むこともできる。この場合、原則として、低親和性結合は、必ずしも他のポリペプチドの抗原結合部分を介して起きる必要はないが、少なくとも抗原結合を含む他のポリペプチドが結合できる結合部位を介してＣＡＲ分子で起きることもできる。

あるいは、本発明のＣＡＲ群の機能はまた、条件的ヘテロ二量体化、ヘテロ三量体化、又はヘテロ四量体化によって調節することができる。従って、好適な実施態様において、群の２、３、又は４つのＣＡＲ分子の非共有結合性複合体の形成は、ＣＡＲ群のヘテロ二量体化ドメインの対の少なくとも１つのメンバーに生理学的条件下で結合できる１つ以上の調節分子によって誘導される。原則として、調節分子は、少なくとも１つのヘテロ二量体化ドメインに結合し、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーの相互作用を誘導又は低減することができる任意の分子であり得る。これらの分子は通常、小分子であるが、例えば、腫瘍のストロマに蓄積する可溶性タンパク質である場合もあり、これはしばしば、それ自体が本来ヘテロ二量体化するタンパク質である（例えばＩＬ－１２などのヘテロ二量体サイトカインのサブユニット）。

異なる細胞間でのＣＡＲ分子の架橋によるフラトリサイド（fratricide ）の可能性を排除するために、ヘテロ二量体化ドメインは、好ましくはＣＡＲ群のＣＡＲ分子の内部ドメイン及び／又は膜貫通ドメイン、より好ましくは内部ドメインに組み込まれる。

細胞内でＣＡＲ群を安定して発現するために使用されるベクターの負担を減らすために、ＣＡＲ群は、好ましくは３つ、特に２つのＣＡＲ分子を含む。複雑さをさらに低減するために、群の各ＣＡＲ分子は、好ましくは単一の抗原結合部分のみ、又は任意選択的に他のポリペプチドが結合できる単一の細胞外結合部位のみを含み、ここで他のポリペプチドは少なくとも抗原結合部分を含む。

例えば抗原Ｂ又は（ＯＲ）抗原Ｃのいずれかと組み合わせて抗原Ａの認識を仲介するための、ＯＲゲート機能をＣＡＲ群に組み込むために、群のＣＡＲ分子はまた、２つの抗原結合部分、又は他のポリペプチドは結合できる２つの細胞外結合部位を含むことができ、ここで他のポリペプチドは少なくとも抗原結合部分を含む。

ＣＡＲ分子の潜在的な免疫原性を低減するために、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子は、好ましくは他のポリペプチドが結合できる細胞外結合部位を含み、ここで他のポリペプチドは少なくとも抗原結合部分を含む。

ＣＡＲ機能の条件的調節が必要とされない用途の場合、群のＣＡＲ分子は、調節分子の存在を必要としないヘテロ二量体化ドメインを含むことができ、構成的な複合体形成をもたらす。場合により、意図しない悪影響の場合の安全手段として、ＣＡＲ分子はまた、構成的ヘテロ二量体化を仲介するヘテロ二量体化ドメインを含むことができるが、ヘテロ二量体化ドメインの解離を誘導する調節分子にさらに結合することができる。

上述したように、本発明の群のＣＡＲ分子の基本的な構成は、異なる用途のニーズに適合させることができる。細胞外から細胞内への群のＣＡＲ分子のドメインの順序は、好ましくは細胞の表面上で以下の基本的構成に一致する：抗原結合部分又は少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる結合部位、任意選択的に、任意の第２の抗原結合部分又は少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる任意の第２の結合部位の空間的最適化のためのリンカー、好ましくは空間最適化のためのヒンジ領域、及び膜貫通ドメイン。膜貫通ドメインの後に好ましくは、少なくとも１つのＣＡＲ分子において、同時刺激ドメインを含むシグナル伝達領域が続き、好ましくはこの同時刺激シグナル伝達領域又は任意選択的に膜貫通ドメインの後に、少なくとも１つのヘテロ二量体化ドメインが続き、さらに、少なくとも１つのＣＡＲ分子において、少なくとも１つのＩＴＡＭを含むシグナル伝達領域が続き、ここで、同時刺激シグナル伝達領域とＩＴＡＭ含有シグナル伝達領域の順序を逆にすることができる。ＩＴＡＭを含まないＣＡＲ分子は同時刺激シグナル伝達領域を欠くか、又は１つの同時刺激シグナル伝達領域を含むか、又は２つの同時刺激シグナル伝達領域を含むか、又はさらにより多くの同時刺激シグナル伝達領域を含むが、しかし、好ましくは最大２つの同時刺激シグナル伝達領域を含むか、又はより好ましくは１つのみの同時刺激シグナル伝達領域を含む。一般に、その少なくとも１つが群の各ＣＡＲ分子に必須であるヘテロ二量体化ドメインは、代替的又は追加的に外部ドメイン又は膜貫通ドメインに位置することができるが、しかし好ましくは膜貫通ドメインとシグナル伝達領域との間に、及び／又は特に２つのシグナル伝達領域の間に、及び／又は特にＣＡＲ分子の細胞内末端に位置することができる。最後に、群のＣＡＲ分子の任意の２つの隣接する成分（抗原結合部分、少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる結合部位、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、シグナル伝達領域、二量体化ドメイン）は、任意選択的にリンカーによって分離され得る。

標的抗原の異なる組み合わせに対する異なるＣＡＲ群はまた、例えば、標的抗原の喪失によって引き起こされる腫瘍の免疫回避を抑制するために、細胞内で同時刺激され得る。ＣＡＲ群は、特定の細胞内の別のタンパク質と同時発現させることもできる。

１．抗原結合部分：
本発明のＣＡＲ群での使用に適した抗原結合部分は、任意の抗原結合ポリペプチド（Labanieh et al., Nat Biomed Eng. 2018; 2:377-391）であり得、その多種多様性は当該分野で公知である（Simeon et al., Protein Cell. 2017; Gilbreth et al., Curr Opin Struct Biol. 2012;22(4):413-420; Koide et al., ACS Chem Biol. 2009;4(5):325-334; Traxlmayr et al., J Biol Chem. 2016;291(43):22496-22508）。一方、さらに多くの非抗体結合タンパク質が報告されており（Pluuckthun, Alternative Scaffolds: Expanding the options of antibodies. In: Little M, ed. New York: Cambridge University Press; 2009:244-271; Chapman et al., Cell Chem Biol. 2016;23(5):543-553; Binz et al., Nat Biotechnol. 2005;23(10):1257-1268; Vazquez-Lombardi et al., Drug Discov Today. 2015;20(10):1271-1283）、そして実際、合成ライブラリ－の設計と選択は、抗原結合部分としても機能する可能性のある任意のタンパク質に適用できる（Pluuckthun, Alternative Scaffolds: Expanding the options of antibodies. In: Little M, ed. New York: Cambridge University Press; 2009:244-271）。

ある場合には、抗原結合部分は、１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、他の抗体ベースの認識ドメイン、例えばｃＡｂＶ_Ｈ（ラクダ科抗体可変ドメイン）及びそのヒト化バージョン、ＩｇＮＡＲＶ_Ｈ（サメ抗体可変ドメイン）及びそのヒト化バージョン、ｓｄＡｂＶ_Ｈ（単一ドメイン抗体可変ドメイン）、又は「ラクダ化」抗体可変ドメインであり得る。ある場合には、１本鎖ＴＣＲ（ｓｃＴｖ、ＶａＶを含む１本鎖２ドメインＴＣＲ）などのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ベースの認識ドメインも使用に適している可能性がある。好ましくは、ＣＡＲ群の各分子の抗原結合部分は、１つのみのタンパク質ドメイン、好ましくは、ヒト又は非ヒトのＶ_Ｈ又はＶＬ単一ドメイン抗体（ナノボディ）、又はブドウ球菌プロテインＡのＺドメインに基づいて工学作成された抗原結合部分、リポカリン、ＳＨ３ドメイン、フィブロネクチンＩＩＩ型（ＦＮ３）ドメイン、ノッティン、Ｓｓｏ７ｄ、ｒｃＳｓｏ７ｄ、Ｓａｃ７ｄ、Ｇｐ２、ＤＡＲＰｉｎ、又はユビキチン；又は、低親和性結合及び同型相互作用の欠如のために選択又は工学作成されたリガンド、受容体、又は補助受容体を含む。リガンドには、例えばサイトカイン（例えばＩＬ－１３）；増殖因子（例えばヘレグリン）；などが含まれる。リガンドは、リガンドの受容体結合断片（例えば、ＨＧＦのペプチド（Thayaparan et al., Oncoimmunology. 2014;14;6(12):e1363137）；インテグリン結合ペプチド（例えば、配列Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐを含むペプチド））でもよい。同様に、受容体は受容体のリガンド結合断片であり得る。適切な受容体には、例えば、サイトカイン受容体（例えば、ＩＬ－１３受容体；ＩＬ－２受容体）；細胞接着分子（例えばＣＤ１１ａ（Park et al., Sci Rep. 2017;7(1):14366)）；ＰＤ－１が含まれる。ＣＡＲ群の各分子の抗原結合部分は、好ましくはＣＡＲ分子の望ましくない凝集を引き起こさない。上記のように、群のＣＡＲ分子のそのような望ましくない二量体化又はオリゴマー化は、単一陽性の非標的細胞との多価相互作用を引き起こす可能性がある。このため、抗原結合部分は、モノクロ－ナル抗体に由来する１本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ではないことが好ましい。本発明のＣＡＲ群の臨床的応用性を目的として、抗原結合部分は、好ましくはヒト単一タンパク質ドメイン（例えばフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（ＦＮ３）ベースのモノボディ）に由来する。

２．ヒンジ領域：
いくつかの実施態様において、群のＣＡＲ分子の外部ドメインは、抗原結合部分（又は少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる結合部位）と膜貫通ドメインとの間に挿入されたヒンジ領域、好ましくはＣＤ８アルファ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔＰ０１７３２－１によるアミノ酸配列位置１３８～１８２）、又はＣＤ２８（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔＰ１０７４７によるアミノ酸配列位置１１４～１５２）、又はＰＤ－１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔＱ１５１１６によるアミノ酸配列位置１４６～１７０）に由来するヒンジ領域を含み、ここで、ＣＤ８アルファ、ＣＤ２８、又はＰＤ－１に由来する配列は、Ｎ末端及び／又はＣ末端が切断されて、前記配列領域の境界内で任意の長さを有することができ、ＣＤ８アルファとＣＤ２８に由来する前記ヒンジのシステイン残基は、削除されているか、又は他のアミノ酸残基によって置き換えられている。原則として、より多くの受容体の柔軟な膜アンカー及び他の部分は、群のＣＡＲ分子のヒンジ領域及び／又は膜貫通ドメインでの使用に適している（Labanieh et al., Nat Biomed Eng. 2018; 2:377-391）が、ただしこれらは、必要に応じて、本発明の二量体化を防止するために改変される。

選択された標的抗原の最適な結合のための個々の構造要件に応じて、ＣＡＲ分子のヒンジ領域は、約２アミノ酸～約５０アミノ酸、例えば約４アミノ酸（ａａ）～約１０ａａ、約１０ａａ～約１５ａａ、約１５ａａ～約２０ａａ、約２０ａａ～約２５ａａ、約２５ａａ～約３０ａａ、約３０ａａ～約４０ａａ、又は約４０ａａ～約５０ａａの長さを有することができる。任意選択的に、ヒンジ領域は、例えば、構造化ドメインが組み込まれている場合、５０を超えるアミノ酸を含むことができる（例えば、米国特許出願公開第２０１８／００９４０４４Ａ１号に開示されているように、ＣＡＲ改変細胞の濃縮を促進するためのＣＤ３４ＵｎｉＰｒｏｔＰ２８９０６－１ａａ４２～１４０から）。

好ましくは、他のポリペプチド、好ましくはグリシン及びグリシン－セリンポリマーも、Ｇｌｙ及びＳｅｒの両方が比較的構造化されておらず、従ってＣＡＲ成分間の中性テザ－として機能し得るため、ヒンジに使用することができる。グリシンは、アラニンよりもはるかにファイ－プサイ空間にアクセスし易く、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限が少ない（Scheraga, Rev. Computational Chem. 1992; 11173-11142）。従って、それらの標的抗原への最適な結合のためのＣＡＲ分子を調整するために、抗原結合部分（又は少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる結合部位）と膜貫通ドメインとの間に挿入されるヒンジ領域は、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ及び／又はグリシン－セリンポリマー（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＧＧＳ）ｎを含み、ここで、ｎは少なくとも１の整数である。

３．膜貫通ドメイン：
ＣＡＲ群の各分子は、真核細胞膜に挿入するための膜貫通ドメインを含む。真核生物（例えば、哺乳動物）細胞の細胞膜へのポリペプチドの挿入を提供する任意の膜貫通（ＴＭ）ドメインが使用に適している。例えば、ヒトＣＤ８アルファのＴＭ配列ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０１７３２、アミノ酸（ａａ）１８３～２０６）を使用することができる。適切なＴＭ配列のさらなる例には以下が含まれる：ヒトＣＤ８ベータ由来：LGLLVAGVLVLLVSLGVAIHLCC（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０９６６、ａａ１７３～１９５）；ヒトＣＤ４由来：ALIVLGGVAGLLLFIGLGIFFCVRC（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０１７３０、ａａ３９８～４２２）；ヒトＣＤ３ゼータ由来：LCYLLDGILFIYGVILTALFLRV（ＵｎｉｐｒｏｔＰ２０９６３、ａａ３１～５３）；ヒトＣＤ２８由来：FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０７４７、ａａ１５４～１７９）；ヒトＣＤ１３４（ＯＸ４０）由来：VAAILGLGLVLGLLGPLAILLALYLL（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４３４８９、ａａ２１５～２４０）；ヒトＣＤ２７由来：ILVIFSGMFLVFTLAGALFLH（ＵｎｉｐｒｏｔＰ２６８４２、ａａ１９２～２１２）；ヒトＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）由来：FWLPIGCAAFVVVCILGCILI（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｗ８、ａａ１４１～１６１）；ヒトＣＤ２７９（ＰＤ－１）由来：VGVVGGLLGSLVLLVWVLAVI（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５１１６、ａａ１７１～１９１）；ヒトＤＡＰ１２由来：GVLAGIVMGDLVLTVLIALAV（ＵｎｉｐｒｏｔＯ４３９１４、ａａ４１～６１）；及びヒトＣＤ７由来：ALPAALAVISFLLGLGLGVACVLA（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０９５６４、ａａ１７８～２０１）。

４．免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）：
本発明によれば、ＣＡＲ群の少なくとも１つの分子は、少なくとも１つの免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を介してシグナルを伝達することができる内部ドメインを含む。ＩＴＡＭモチーフはＹＸ_１Ｘ_２Ｌ／Ｉであり、ここでＸ_１とＸ_２は独立して任意のアミノ酸である。ＩＴＡＭを含む内部ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、又は１２を超えるＩＴＡＭモチーフを含むことができる。シグナル伝達内部ドメインのＩＴＡＭ含有部分は、好ましくは、任意のＩＴＡＭ含有タンパク質に由来し、それらが由来するタンパク質全体の配列全体を含む必要はない。適切なＩＴＡＭ含有ポリペプチドの例には以下が含まれる：ＤＡＰ１２；ＦＣＥＲ１Ｇ（Ｆｃイプシロン受容体Ｉガンマ鎖）；ＣＤ３Ｄ（ＣＤ３デルタ）；ＣＤ３Ｅ（ＣＤ３イプシロン）；ＣＤ３Ｇ（ＣＤ３ガンマ）；ＣＤ３Ｚ（ＣＤ３ゼータ）；及びＣＤ７９Ａ（抗原受容体複合体関連タンパク質アルファ鎖）。

特に好適な実施態様において、ＣＡＲ群の少なくとも１つのＣＡＲ分子中の少なくとも１つのシグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３Ｚ、Ｔ細胞受容体Ｔ３ゼータ鎖、ＣＤ２４７、ＣＤ３－ＺＥＴＡ、ＣＤ３Ｈ、ＣＤ３Ｑ、Ｔ３Ｚ、ＴＣＲＺなどとしても知られている）の細胞質ドメインに由来する。例えば、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、アミノ酸配列（２つのアイソフォーム）
MKWKALFTAAILQAQLPITEAQSFGLLDPKLCYLLDGILFIYGVILTALFLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (ＵｎｉｐｒｏｔＰ２０９６３－３) 又は
MKWKALFTAAILQAQLPITEAQSFGLLDPKLCYLLDGILFIYGVILTALFLRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPQRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (ＵｎｉｐｒｏｔＰ２０９６３－１)（ここで、ＩＴＡＭモチーフは太字でかつ下線が引かれている）のいずれかの、約５０アミノ酸～約６０アミノ酸（ａａ）、約６０ａａ～約７０ａａ、約７０ａａ～約８０ａａ、約８０ａａ～約９０ａａ、約９０ａａ～約１００ａａ、約１００ａａ～約１１０ａａ、約１１０ａａ～約１１５ａａ、約１１５ａａ～約１２０ａａ、約１２０ａａ～約１３０ａａ、約１３０ａａ～約１４０ａａ、約１４０ａａ～約１５０ａａ、又は約１５０ａａ～約１６０ａａの連続ストレッチと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

同様に、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、完全長ＣＤ３ゼータミノ酸配列のＩＴＡＭ含有部分を含むことができる。すなわち、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、
アミノ酸配列
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (ＵｎｉｐｒｏｔＰ２０９６３－３ａａ５２～１６３),
NQLYNELNLGRREEYDVLDKR (ＵｎｉｐｒｏｔＰ２０９６３－３ａａ６９～８９),
EGLYNELQKDKMAEAYSEIGMK（ＵｎｉｐｒｏｔＰ２０９６３－３ａａ１０７～１２８),
DGLYQGLSTATKDTYDALHMQ (ＵｎｉｐｒｏｔＰ２０９６３－３ａａ１３８～１５８)（ここで、ＩＴＡＭは太字でかつ下線が引かれている）のいずれかと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

ＩＴＡＭ含有ドメインはまた、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３デルタ鎖（ＣＤ３Ｄ；ＣＤ３－ＤＥＬＴＡ；Ｔ３Ｄ；ＣＤ３抗原、デルタサブユニット；ＣＤ３デルタ；ＣＤ３ｄ抗原、デルタポリペプチド（ＴｉＴ３複合体）；ＯＫＴ３、デルタ鎖；Ｔ細胞受容体Ｔ３デルタ鎖；Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３デルタ鎖などとも呼ばれる）に由来する場合もある。例えば、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、以下のアミノ酸配列（２つのアイソフォーム）（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０４２３４－１；ＵｎｉｐｒｏｔＰ０４２３４－２）のいずれかの、約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸（ａａ）、約１１０ａａ～約１１５ａａ、約１１５ａａ～約１２０ａａ、約１２０ａａ～約１３０ａａ、約１３０ａａ～約１４０ａａ、約１４０ａａ～約１５０ａａ、又は約１５０ａａ～約１７０ａａの連続ストレッチと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

同様に、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、完全長ＣＤ３デルタアミノ酸配列のＩＴＡＭ含有部分を含むことができる。従って、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、アミノ酸配列DQVYQPLRDRDDAQYSHLGGN（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０４２３４－１ａａ１４６～１６６）（ここで、ＩＴＡＭは太字でかつ下線が引かれている）と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

ＩＴＡＭ含有ドメインは、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３イプシロン鎖（ＣＤ３ｅ、Ｔ細胞表面抗原Ｔ３／Ｌｅｕ－４イプシロン鎖、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３イプシロン鎖、ＡＩ５０４７８３、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン、Ｔ３ｅなどとも呼ばれる）に由来する場合もある。例えば、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０７７６６－１の、約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸（ａａ）、約１１０ａａ～約１１５ａａ、約１１５ａａ～約１２０ａａ、約１２０ａａ～約１３０ａａ、約１３０ａａ～約１４０ａａ、約１４０ａａ～約１５０ａａ、又は約１５０ａａ～約２０５ａａの連続ストレッチと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

同様に、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、完全長ＣＤ３イプシロンアミノ酸配列のＩＴＡＭ含有部分を含むことができる。従って、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、アミノ酸配列NPDYEPIRKGQRDLYSGLNQR（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０７７６６－１ａａ１８５～２０５）（ここで、ＩＴＡＭは太字でかつ下線が引かれている）と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

ＩＴＡＭ含有ドメインは、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ガンマ鎖（ＣＤ３Ｇ、Ｔ細胞受容体Ｔ３ガンマ鎖、ＣＤ３－ＧＡＭＭＡ、Ｔ３Ｇ、ガンマポリペプチド（ＴｉＴ３複合体）などとしても知られている）に由来する場合もある。例えば、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、アミノ酸配列
MEQGKGLAVLILAIILLQGTLAQSIKGNHLVKVYDYQEDGSVLLTCDAEAKNITWFKDGKMIGFLTEDKKKWNLGSNAKDPRGMYQCKGSQNKSKPLQVYYRMCQNCIELNAATISGFLFAEIVSIFVLAVGVYFIAGQDGVRQSRASDKQTLLPNDQLYQPLKDREDDQYSHLQGNQLRRN（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０９６９３－１）（ここで、ＩＴＡＭは太字でかつ下線が引かれている）の、約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸（ａａ）、約１１０ａａ～約１１５ａａ、約１１５ａａ～約１２０ａａ、約１２０ａａ～約１３０ａａ、約１３０ａａ～約１４０ａａ、約１４０ａａ～約１５０ａａ、又は約１５０ａａ～約１８０ａａの連続ストレッチと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

同様に、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、完全長ＣＤ３ガンマアミノ酸配列のＩＴＡＭ含有部分を含むことができる。従って、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、アミノ酸配列DQLYQPLKDREDDQYSHLQGN（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０９６９３－１ａａ１５７～１７７）（ここで、ＩＴＡＭは太字でかつ下線が引かれている）と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

ＩＴＡＭ含有ドメインは、ＤＡＰ１２（ＴＹＲＯＢＰ；ＴＹＲＯタンパク質チロシンキナ－ゼ結合タンパク質；ＫＡＲＡＰ；ＰＬＯＳＬ；ＤＮＡＸ活性化タンパク質１２；ＫＡＲ関連タンパク質；ＴＹＲＯタンパク質チロシンキナ－ゼ結合タンパク質；キラ－活性化受容体関連タンパク質；キラ－活性化受容体関連タンパク質などとしても知られている）に由来する場合もある。例えば、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、以下のアミノ酸配列（４つのアイソフォーム）（ＵｎｉｐｒｏｔＯ４３９１４－１；ＵｎｉｐｒｏｔＯ４３９１４－２；ＵｎｉｐｒｏｔＯ４３９１４－３；ＵｎｉｐｒｏｔＸ６ＲＧＣ９－１）のいずれかと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

同様に、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、完全長ＤＡＰ１２アミノ酸配列のＩＴＡＭ含有部分を含むことができる。従って、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、ESPYQELQGQRSDVYSDLNTQ（ＵｎｉｐｒｏｔＯ４３９１４－１ａａ８８～１０８）（ここで、ＩＴＡＭは太字でかつ下線が引かれている）と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

ＩＴＡＭ含有ドメインは、ＦＣＥＲ１Ｇ（ＦＣＲＧ；Ｆｃイプシロン受容体Ｉガンマ鎖；Ｆｃ受容体ガンマ鎖；ｆｃ－イプシロンＲ１－ガンマ；ｆｃＲガンマ；ｆｃｅＲＩガンマ；高親和性免疫グロブリンイプシロン受容体サブユニットガンマ；免疫グロブリンＥ受容体、高親和性、ガンマ鎖などとしても知られている）に由来する場合もある。例えば、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、アミノ酸配列
MIPAVVLLLLLLVEQAAALGEPQLCYILDAILFLYGIVLTLLYCRLKIQVRKAAITSYEKSDGVYTGLSTRNQETYETLKHEKPPQ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ３０２７３）（ここで、ＩＴＡＭは太字でかつ下線が引かれている）と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

同様に、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、完全長ＦＣＥＲ１Ｇアミノ酸配列のＩＴＡＭモチーフ含有部分を含むことができる。従って、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、アミノ酸配列DGVYTGLSTRNQETYETLKHE（ＵｎｉｐｒｏｔＰ３０２７３ａａ６２～８２）（ここで、ＩＴＡＭは太字でかつ下線が引かれている）と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

ＩＴＡＭ含有ドメインは、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連タンパク質アルファ鎖；ＣＤ７９ａ抗原（免疫グロブリン関連アルファ）；ＭＢ－１膜糖タンパク質；ｉｇ－アルファ；膜結合免疫グロブリン関連タンパク質；表面ＩｇＭ関連タンパク質などとしても知られている）に由来する場合もある。例えば、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、アミノ酸配列（２つのアイソフォーム）
MPGGPGVLQALPATIFLLFLLSAVYLGPGCQALWMHKVPASLMVSLGEDAHFQCPHNSSNNANVTWWRVLHGNYTWPPEFLGPGEDPNGTLIIQNVNKSHGGIYVCRVQEGNESYQQSCGTYLRVRQPPPRPFLDMGEGTKNRIITAEGIILLFCAVVPGTLLLFRKRWQNEKLGLDAGDEYEDENLYEGLNLDDCSMYEDISRGLQGTYQDVGSLNIGDVQLEKP（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１１９１２－１）又は
MPGGPGVLQALPATIFLLFLLSAVYLGPGCQALWMHKVPASLMVSLGEDAHFQCPHNSSNNANVTWWRVLHGNYTWPPEFLGPGEDPNEPPPRPFLDMGEGTKNRIITAEGIILLFCAVVPGTLLLFRKRWQNEKLGLDAGDEYEDENLYEGLNLDDCSMYEDISRGLQGTYQDVGSLNIGDVQLEKP（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１１９１２－２）（ここで、ＩＴＡＭは太字でかつ下線が引かれている）のいずれかの、約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸（ａａ）、約１１０ａａ～約１１５ａａ、約１１５ａａ～約１２０ａａ、約１２０ａａ～約１３０ａａ、約１３０ａａ～約１５０ａａ、約１５０ａａ～約２００ａａ、又は約２００ａａ～約２２０ａａの連続ストレッチと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

同様に、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、完全長ＣＤ７９Ａアミノ酸配列のＩＴＡＭ含有部分を含むことができる。従って、適切なＩＴＡＭ含有ドメインは、アミノ酸配列ENLYEGLNLDDCSMYEDISRG（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１１９１２－１ａａ１８５～２０５）（ここで、ＩＴＡＭは太字でかつ下線が引かれている）と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

従って本発明によれば、ＣＡＲ群の少なくとも１つのＣＡＲ分子の内部ドメインは、少なくとも１つのＩＴＡＭを含み、前記ＩＴＡＭは、好ましくはＣＤ３ゼータ、ＤＡＰ１２、Ｆｃ－イプシロン受容体１ガンマ鎖、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、及びＣＤ７９Ａ（抗原受容体複合体関連タンパク質アルファ鎖）から選択される。

ＩＴＡＭの数はＣＡＲのシグナル伝達効率と相関するため（James, Sci Signal. 2018;11(531)）、ＣＡＲ群は、全部で３つのＩＴＡＭを含むことが好ましく、ここで、ＩＴＡＭは群の単一のＣＡＲ分子のみに限定することができる。あるいは、群のいくつかの又はすべてのＣＡＲ分子は、少なくとも１つのＩＴＡＭを含むことができる。いくつかの実施態様において、群のＣＡＲ分子の異なる内部ドメインにあるＩＴＡＭ含有部分は同じ受容体に由来するが、他の実施態様において、群のＣＡＲ分子の異なる内部ドメインにあるＩＴＡＭ含有部分は、異なる受容体に由来する。いくつかの実施態様において、ＣＡＲ群は、好ましくはＣＤ３ゼータに由来するＩＴＡＭ含有部分を含む１つの分子のみを含む。他の実施態様において、ＣＡＲ群は２つの分子からなり、両方ともＣＤ３ゼータに由来する細胞質ドメインの一部を含む。ベクターの負荷に関して、ＣＡＲ群内のＩＴＡＭの総数は３～６であることが好ましい。さらにＩＴＡＭ含有配列は、相同組換えのリスクを最小限にするために、好ましくはヌクレオチド配列の相同性を最小限にするように選択及び／又は工学作成される。

５．同時刺激ドメイン：
好適な実施態様において、群の少なくとも１つのＣＡＲ分子の内部ドメインは、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＯＸ－４０、ＣＤ２、ＣＤ６、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＧＩＴＲ、及びＨＶＥＭに由来する同時刺激ドメインを含むシグナル伝達領域を含み、これにより、ＣＡＲ群に含まれる同時刺激ドメインは任意選択的に、異なる同時刺激受容体から誘導することができる。

ＣＡＲ群のＣＡＲ分子の同時刺激シグナル伝達領域に含めるのに適した同時刺激ドメインは、約３０ａａ～約７０ａａの長さを有することができ、例えば同時刺激ドメインは、約３０ａａ～約３５ａａ、約３５ａａ～約４０ａａ、約４０ａａ～約４５ａａ、約４５ａａ～約５０ａａ、約５０ａａ～約５５ａａ、約５５ａａ～約６０ａａ、約６０ａａ～約６５ａａ、又は約６５ａａ～約７０ａａの長さを有することができる。任意選択的に同時刺激ドメインは、約７０ａａ～約１００ａａ、約１００ａａ～約２００ａａ、又は２００ａａを超える長さを有することができる。

特に好適な実施態様において、ＣＡＲ群の少なくとも１つの分子における同時刺激ドメインは、膜貫通タンパク質４－１ＢＢ（ＴＮＦＲＳＦ９、ＣＤ１３７、４－１ＢＢ、ＣＤｗ１３７、ＩＬＡなどとしても知られている）の細胞内部分に由来する。例えば、適切な同時刺激ドメインは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ０７０１１ａａ２１４～２５５と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

好適な実施態様において、ＣＡＲ群の少なくとも１つの分子における同時刺激ドメインは、膜貫通タンパク質ＣＤ２８（Ｔｐ４４としても知られている）の細胞内部分に由来する。例えば、適切な同時刺激ドメインは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０７４７ａａ１７７～２２０と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

特に好適な実施態様において、ＣＡＲ群の少なくとも１つの分子における同時刺激ドメインは、膜貫通タンパク質ＩＣＯＳ（ＡＩＬＩＭ、ＣＤ２７８、及びＣＶＩＤ１としても知られている）の細胞内部分に由来する。例えば、適切な同時刺激ドメインは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｗ８ａａ１６５～１９９と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

好適な実施態様において、ＣＡＲ群の少なくとも１つの分子における同時刺激ドメインは、膜貫通タンパク質ＣＤ２７（Ｓ１５２、Ｔ１４、ＴＮＦＲＳＦ７、及びＴｐ５５としても知られている）の細胞内部分に由来する。例えば、適切な同時刺激ドメインは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ２６８４２ａａ２１２～２６０と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

他の実施態様において、ＣＡＲ群の少なくとも１つの分子における同時刺激ドメインは、膜貫通タンパク質ＯＸ－４０（ＴＮＦＲＳＦ４、ＲＰ５－９０２Ｐ８．３、ＡＣＴ３５、ＣＤ１３４、ＯＸ４０、ＴＸＧＰ１Ｌとしても知られている）の細胞内部分に由来し得る。例えば、適切な同時刺激ドメインは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ４３４８９ａａ２４１～２７７と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

他の実施態様において、ＣＡＲ群の少なくとも１つの分子における同時刺激ドメインは、膜貫通タンパク質ＢＴＬＡ（ＢＴＬＡ１及びＣＤ２７２としても知られている）の細胞内部分に由来し得る。例えば、適切な同時刺激ドメインは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ７Ｚ６Ａ９ａａ１７６～２８９と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

他の実施態様において、ＣＡＲ群の少なくとも１つの分子における同時刺激ドメインは、膜貫通タンパク質ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ１８、ＲＰ５－９０２Ｐ８．２、ＡＩＴＲ、ＣＤ３５７、及びＧＩＴＲ－Ｄとしても知られている）の細胞内部分に由来し得る。例えば、適切な同時刺激ドメインは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ５Ｕ５ａａ１８８～２４１と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

他の実施態様において、ＣＡＲ群の少なくとも１つの分子における同時刺激ドメインは、膜貫通タンパク質ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４、ＲＰ３－３９５Ｍ２０．６、ＡＴＡＲ、ＣＤ２７０、ＨＶＥＡ、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴＲ、及びＴＲ２としても知られている）の細胞内部分に由来し得る。例えば、適切な同時刺激ドメインは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ９２９５６ａａ２２４～２８３と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

他の実施態様において、ＣＡＲ群の少なくとも１つの分子における同時刺激ドメインは、膜貫通タンパク質ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８、Ｄ１Ｓ１６６Ｅ、及びＫｉ－１としても知られている）の細胞内部分に由来し得る。例えば、適切な同時刺激ドメインは、アミノ酸のアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ２８９０８ａａ４０９～５９５の約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸（ａａ）、約１１０ａａ～約１１５ａａ、約１１５ａａ～約１２０ａａ、約１２０ａａ～約１３０ａａ、約１３０ａａ～約１４０ａａ、約１４０ａａ～約１５０ａａ、約１５０ａａ～約１６０ａａ、又は約１６０ａａ～約１８５ａａの連続ストレッチと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

６．リンカー：
ＣＡＲ群の分子は、任意の２つの隣接するドメイン（すなわち、ＣＡＲ分子の成分）間にリンカーを含むことができる。例えば、リンカーは、膜貫通ドメインとシグナル伝達領域との間に配置することができる。別の例としてリンカーは、シグナル伝達領域とヘテロ二量体化ドメインとの間に配置することができる。別の例として、リンカーを２つのヘテロ二量体化ドメインの間に配置することができる。別の例としてリンカーは、２つのシグナル伝達領域の間に配置することができる。別の例としてリンカーは、膜貫通ドメインとヘテロ二量体化ドメインとの間に配置することができる。別の例としてリンカーは、２つの抗原結合部分の間のＣＡＲ分子の外部ドメインに配置することができる。別の例としてリンカーは、他のポリペプチドが結合できる２つの結合部位の間のＣＡＲ分子の外部ドメインに配置することができる。別の例としてリンカーは、抗原結合部分と膜貫通ドメインとの間のＣＡＲ分子の外部ドメインに配置することができる。別の例としてリンカーは、他のポリペプチドが結合できる結合部位と膜貫通ドメインとの間のＣＡＲ分子の外部ドメインに配置することができる。別の例としてリンカーは、シグナル配列と抗原結合部分との間のＣＡＲ分子の外部ドメインに配置することができる。別の例としてリンカーは、シグナル配列と他のポリペプチドが結合できる結合部位との間のＣＡＲ分子の外部ドメインに配置することができる。別の例としてリンカーは、シグナル配列とヘテロ二量体化ドメインとの間のＣＡＲ分子の外部ドメインに配置することができる。別の例としてリンカーは、ヘテロ二量体化ドメインと抗原結合部分との間のＣＡＲ分子の外部ドメインに配置することができる。別の例としてリンカーは、ヘテロ二量体化ドメインと他のポリペプチドが結合できる結合部位との間のＣＡＲ分子の外部ドメインに配置することができる。さらに別の例としてリンカーは、抗原結合部分と他のポリペプチドが結合できる結合部位との間のＣＡＲ分子の外部ドメインに配置することができる。

リンカーは、約１～約４０アミノ酸の長さを含むペプチドであり得る。連結ペプチドは、適切なリンカーが好ましくは一般に柔軟なペプチドをもたらす配列を有することを考慮すると、事実上任意のアミノ酸配列を有し得る。柔軟なペプチドを作成する際には、好ましくはグリシン、セリン、アラニンなどの小さなアミノ酸が使用される。そのような配列の作成は、当業者にとって日常的である。適切なリンカーは容易に選択することができ、例えば１アミノ酸（例えば、Ｇｌｙ）～２０アミノ酸、２アミノ酸～１５アミノ酸、３アミノ酸～１２アミノ酸（４アミノ酸～１０アミノ酸、５アミノ酸～９アミノ酸、６アミノ酸～８アミノ酸、又は７アミノ酸～８アミノ酸を含む）などの異なる長さでもよく、１、２、３、４、５、６、又は７アミノ酸でもよい。例示的な柔軟性リンカーには、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、（ＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＳ）ｎを含み、ここで、ｎは少なくとも１の整数である）、又はグリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当技術分野で知られている他の柔軟性リンカーを含む。例示的な柔軟性リンカーには、ＧＧＳＧ（配列番号１）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２）、ＧＳＧＳＧ（配列番号３）、ＧＳＧＧＧ（配列番号４）、ＧＧＧＳＧ（配列番号５）、ＧＳＳＳＧ（配列番号６）などが含まれる。通常の当業者は、上記した任意の要素に結合されたペプチドの設計が、すべて又は部分的に柔軟性であるリンカーを含むことができ、従ってリンカーは、柔軟性リンカー、並びにより柔軟性の低い構造を与える１つ以上の部分を含むことができることを認識するであろう。

７．追加のドメイン：
対象ＣＡＲ群の分子はさらに、１つ以上の追加のポリペプチドドメインを含むことができ、そのようなドメインは、例えばシグナル配列、エピトープタグ、及び／又は検出可能なシグナルを生成するポリペプチドを含む。対象ＣＡＲ群での使用に適したシグナル配列には、任意の真核生物シグナル配列、例えば天然に存在するシグナル配列、合成（例えば人工）シグナル配列などが含まれる。適切なエピトープタグには、例えば血球凝集素（ＨＡ、例えばアミノ酸配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号７））、ＦＬＡＧ（例えば、アミノ酸配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号８））、ｃ－ｍｙｃ（例えば、アミノ酸配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号９））、ＳｔｒｅｐＩＩ（例えば、アミノ酸配列ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ（配列番号８１））、ヘキサヒスチジンタグ（６×ＨＩＳ、例えば、アミノ酸配列ＨＨＨＨＨＨ（配列番号８２））などが含まれる。適切な検出可能なシグナル生成タンパク質には、例えば蛍光タンパク質などが含まれる。適切な蛍光タンパク質には、例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）又はその変種、ＧＦＰの青色蛍光変種（ＢＦＰ）、ＧＦＰのシアン蛍光変種（ＣＦＰ）、ＧＦＰの黄色蛍光変種（ＹＦＰ）、増強ＧＦＰ（ＥＧＦＰ）、拡張ＣＦＰ（ＥＣＦＰ）、拡張ＹＦＰ（ＥＹＦＰ）、ＧＦＰＳ６５Ｔ、エメラルド、トパ－ズ（ＴＹＦＰ）、ビ－ナス、シトリン、ｍシトリン、ＧＦＰｕｖ、不安定化ＥＧＦＰ（ｄＥＧＦＰ）、不安定化ＥＣＦＰ（ｄＥＣＦＰ）、不安定化ＥＹＦＰ（ｄＥＹＦＰ）、ｍＣＦＰｍ、セルレアン、Ｔ－サファイア、ＣｙＰｅｔ、ＹＰｅｔ、ｍＫＯ、ＨｃＲｅｄ、ｔ－ＨｃＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ２、ＤｓＲｅｄ－モノマ－、Ｊ－Ｒｅｄ、ダイマー２、ｔ－ダイマー２（１２）、ｍＲＦＰ１、ポシロポリン、ウミシイタケＧＦＰ、モンスタ－ＧＦＰ、ｐａＧＦＰ、楓タンパク質及びキンドリングタンパク質、フィコビリタンパク質及びフィコビリタンパク質結合体、例えばＢ－フィコエリトリン、Ｒ－フィコエリトリン、及びアロフィコシアニンが含まれる。蛍光タンパク質の別の例には、ｍハニーデュー、ｍバナナ、ｍオレンジ、ｄトマト、ｔｄトマト、ｍタンジェリン、ｍストロベリー、ｍチェリー、ｍグラペル、ｍラズベリー、ｍグレープ２、ｍプラム（Shaner et al. (2005) Nat. Methods 2:905-909）などがある。例えば、Matz et al. (1999) Nature Biotechnol. 17:969-973 に記載されているように、花虫類からの様々な蛍光及び着色タンパク質が使用に適している。

８．ヘテロ二量体化ドメイン：
２つのＣＡＲ分子を含むＣＡＲ群の複合体化は、１つのＣＡＲ分子につき１つのヘテロ二量体化ドメインによって仲介され得る。ＣＡＲ群が３つ又は４つのＣＡＲ分子を含む実施態様において、ヘテロ二量体化による三量体又は四量体の形成を促進するために、群の少なくとも１つのＣＡＲ分子は、好ましくは２つ以上のヘテロ二量体化ドメインを含む。この場合、そのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化ドメインは、群の２つ以上の同一のＣＡＲ分子を含む複合体の形成を防ぐために、ヘテロ二量体化ドメインの異なる対のメンバーであることが優先される。ＣＡＲ分子のこのような同型相互作用の防止は、同型相互作用が単一タイプの標的抗原に対して高い結合活性を生成するため、重要である。結果として、これは、単一のタイプの標的抗原に応答してＣＡＲ群による効率的なシグナル伝達をもたらし、それにより、異なる標的抗原との多価相互作用への効率的なシグナル伝達の依存性を無効にする。

本発明によれば、群のＣＡＲ分子に組み込まれたヘテロ二量体化ドメインは、構成的ヘテロ二量体化を仲介することができるか、又は調節分子によって任意選択的に調節することができる。例えば、ヘテロ二量体化ドメインのヘテロ二量体化は、調節分子の存在によって誘導又は低減することができる。ヘテロ二量体化ドメインのヘテロ二量体化はまた、構成的であり得、調節分子に依存しない可能性がある。構成的ヘテロ二量体化を仲介するドメインは当技術分野でよく知られており、例えばコイルドコイル相互作用ドメインなどの異なる用途でうまく使用されている（Thompson et al., ACS Synth Biol. 2012; 1(4):118-29; Cho et al., Cell. 2018;173(6):1426-1438）が、自然界にはさらに多くの適切なドメインが存在する。一般に、互いに結合し、ＣＡＲ分子で発現することができる任意のポリペプチド対は、本発明のＣＡＲ群の２つのＣＡＲ分子の構成的ヘテロ二量体化を仲介するのに適している。以下に、リポカリン折り畳み分子（lipocalin-fold molecule）ベースのシステムについて記載される（第８．１．２章）が、これは、条件的だけでなく、構成的ヘテロ二量体化のために工学作成することもできる。コイルドコイルドメインとは対照的に、リポカリン折り畳み分子ベースのシステムは、調節分子によるヘテロ二量体化のスイッチを切るように、さらに容易に工学作成することができる。

８．１．条件的ヘテロ二量体化のためのドメイン：
８．１．１．核内受容体からのリガンド結合ドメインに基づくＣＡＲ分子の条件的ヘテロ二量体化：
好適な実施態様において、本発明のＣＡＲ群の少なくとも２つのＣＡＲ分子は、核内受容体からのリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）である１つのメンバーと、共調節ペプチドである第２のメンバーとを含むヘテロ二量体化ドメインの対によって、ヘテロ二量体化することができる。適切な小分子（すなわち、本発明の調節分子）の結合時に核内受容体に由来するＬＢＤは、各共調節ペプチドとヘテロ二量体化することができる。このシステムは、目的のタンパク質のヘテロ二量体化に使用することができる。ＬＢＤ及び共調節ペプチドの適切な配列は、適切な調節分子とともに、例えば、米国特許出願公開第２０１７／０３０６３０３Ａ１号に開示されている。適切なＬＢＤは、様々な核内受容体のいずれか、例えばＥＲ－アルファ、ＥＲ－ベータ、ＰＲ、ＡＲ、ＧＲ、ＭＲ、ＲＡＲ－アルファ、ＲＡＲ－ベータ、ＲＡＲ－ガンマ、ＴＲ－アルファ、ＴＲ－ベータ、ＶＤＲ、ＥｃＲ、ＲＸＲ－アルファ、ＲＸＲ－ベータ、ＲＸＲ－ガンマ、ＰＰＡＲ－アルファ、ＰＰＡＲ－ベータ、ＰＰＡＲ－ガンマ、ＬＸＲ－アルファ、ＬＸＲ－ベータ、ＦＸＲ、ＰＸＲ、ＳＸＲ、構成性アドロストラン（Adrostrane）受容体、ＳＦ－１、ＬＲＨ－１、ＤＡＸ－１、ＳＨＰ、ＴＬＸ、ＰＮＲ、ＮＧＦ１－Ｂ－アルファ、ＮＧＦ１－Ｂ－ベータ、ＮＧＦ１－Ｂ－ガンマ、ＲＯＲ－アルファ、ＲＯＲ－ベータ、ＲＯＲ－ガンマ、ＥＲＲ－アルファ、ＥＲＲ－ベータ、ＥＲＲ－ガンマ、ＧＣＮＦ、ＴＲ２／４、ＨＮＦ－４、ＣＯＵＰ－ＴＦ－アルファ、ＣＯＵＰ－ＴＦ－ベータ、及びＣＯＵＰ－ＴＦ－ガンマーカーら選択することができる。

核内受容体（核内ホルモン受容体と同義語）の略語は次のとおりである。ＥＲ：エストロゲン受容体；ＰＲ：プロゲステロン受容体；ＡＲ：アンドロゲン受容体；ＧＲ：糖質コルチコイド受容体；ＭＲ：鉱質コルチコイド受容体；ＲＡＲ：レチノイン酸受容体；ＴＲ－アルファ／ベータ：甲状腺受容体；ＶＤＲ：ビタミンＤ３受容体；ＥｃＲ：エクジソン受容体；ＲＸＲ：レチノイン酸Ｘ受容体；ＰＰＡＲ：ペルオキシソ－ム増殖因子活性化受容体；ＬＸＲ：肝臓Ｘ受容体；ＦＸＲ：ファルネソイドＸ受容体；ＰＸＲ／ＳＸＲ：プレグナンＸ受容体／ステロイド及び生体異物受容体；ＳＦ－１：ステロイド産生因子１；ＤＡＸ－１：Ｘ染色体上の用量感受性性転換－副腎形成不全先天性重要領域、遺伝子１；ＬＲＨ－１：肝臓受容体ホモログ１；ＳＨＰ：小さなヘテロダイマーパートナー；ＴＬＸ：テールレス遺伝子；ＰＮＲ：光受容体特異的核内受容体；ＮＧＦ１－Ｂ：神経成長因子；ＲＯＲ：ＲＡＲ関連オーファン受容体；ＥＲＲ：エストロゲン関連受容体；ＧＣＮＦ：生殖細胞核因子；ＴＲ２／４：精巣受容体；ＨＮＦ－４：肝細胞核因子；ＣＯＵＰ－ＴＦ：チキンオバルブミン上流プロモーター、転写因子。

８．１．１．１．ＬＢＤ：
鉱質コルチコイド受容体：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、鉱質コルチコイド受容体（ＭＲ）のＬＢＤであり得る。例えばある場合には、ＬＢＤは、ＭＲ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０８２３５）のＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＭＲのＬＢＤは、アミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＩＡＣ６．１ａａ１１２～３５９；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９１５７３．１ａａ３６５～６１２；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７Ｎ１ａａ７３４～９８１；ＧｅｎＢａｎｋＣＡＧ１１０７２．１ａａ１７３～５０１；ＰＤＢ２ＡＡ６＿Ａａａ２８～２７５；ＰＤＢ２ＡＡ２＿Ａａａ２８～２７５；ＰＤＢ２Ａ３Ｉ＿Ａａａ６～２５３；ＰＤＢ２ＯＡＸ＿Ａａａ９～２５６；ＰＤＢ１Ｙ９Ｒ＿Ａａａ８～２５５；ＰＤＢ２ＡＢＩ＿Ａａａ９～２５６）のいずれかと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２５０アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸の長さ、又は２２５アミノ酸～２５０アミノ酸の長さを有する；例えば、２４８アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＭＲのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０８２３５ａａ６８６～９８４と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～２９９アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸の長さ、又は２７５アミノ酸～２９９アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＭＲのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０８２３５ａａ７３７～９８４と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２５０アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸の長さ、又は２２５アミノ酸～２５０アミノ酸の長さ、例えば２４８アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＭＲのＬＢＤは、Ｓ８１０Ｌ置換を有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０８２３５ａａ６８６～９８４と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～２９９アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸の長さ、又は２７５アミノ酸～２９９アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＭＲのＬＢＤは、Ｓ８１０Ｌ置換を有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０８２３５ａａ７３７～９８４と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２５０アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸の長さ、又は２２５アミノ酸～２５０アミノ酸の長さ、例えば２４８アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＭＲのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、アミノ酸配列SLTARHKILHRLLQEGSPSDI（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８ａａ６８１～７０１）を含む共調節ペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約２１アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば共調節ペプチドは、２１アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＭＲのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、アミノ酸配列QEAEEPSLLKKLLLAPANTQL（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＵＢＫ２ａａ１３６～１５６）を含む共調節ペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約２１アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば共調節ペプチドは、２１アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＭＲのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、アミノ酸配列SKVSQNPILTSLLQITGNGGS（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８ａａ５９６～６１６）を含む共調節ペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約２１アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば共調節ペプチドは、２１アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

アンドロゲン受容体：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、アンドロゲン受容体（ＡＲ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、ＡＲ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０２７５）のＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＡＲのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０２７５ａａ６１９～９１９と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～３０１アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸、又は２７５アミノ酸～３０１アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＡＲのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０２７５ａａ６９０～９１９と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１９０アミノ酸～２３０アミノ酸の長さを有する（例えば、１９０アミノ酸～２１０アミノ酸、又は２１０アミノ酸～２３０アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＡＲのＬＢＤは、Ｔ８７７Ａ置換を有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０２７５ａａ６１９～９１９と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～３０１アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸、又は２７５アミノ酸～３０１アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＡＲのＬＢＤは、Ｔ８７７Ａ置換を有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０２７５ａａ６９０～９１９と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１９０アミノ酸～２３０アミノ酸の長さを有する（例えば、１９０アミノ酸～２１０アミノ酸、又は２１０アミノ酸～２３０アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＡＲのＬＢＤは、Ｆ８７６Ｌ置換を有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０２７５ａａ６１９～９１９と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～３０１アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸、又は２７５アミノ酸～３０１アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＡＲのＬＢＤは、Ｆ８７６Ｌ置換を有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０２７５ａａ６９０～９１９と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１９０アミノ酸～２３０アミノ酸の長さを有する（例えば、１９０アミノ酸～２１０アミノ酸、又は２１０アミノ酸～２３０アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＡＲのＬＢＤは、Ｆ８７６Ｌ及びＴ８７７Ａ置換を有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０２７５ａａ６１９～９１９と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～３０１アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸、又は２７５アミノ酸～３０１アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＡＲのＬＢＤは、Ｆ８７６Ｌ及びＴ８７７Ａ置換を有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０２７５ａａ６９０～９１９と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１９０アミノ酸～２３０アミノ酸の長さを有する（例えば、１９０アミノ酸～２１０アミノ酸、又は２１０アミノ酸～２３０アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＡＲのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、アミノ酸配列ESKGHKKLLQLLTCSSDDR（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９ａａ６１４～６３２）を含む共調節ペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約１９アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば、共調節ペプチドは、１９アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

プロゲステロン受容体：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、プロゲステロン受容体（ＰＲ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、ＰＲ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０６４０１）のＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＰＲのＬＢＤは、以下のアミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＱ８ＵＶＹ３ａａ４５６～７０３；ＵｎｉｐｒｏｔＰ０７８１２．１ａａ５３９～７８６；ＧｅｎＢａｎｋＣＡＱ１４５１８．１ａａ３０６～５５３；ＰＤＢ１ＳＲ７＿Ａａａ１２～２５９；ＰＤＢ１ＳＱＮ＿Ａａａ１４～２６１；ＰＤＢ１Ｅ３Ｋａａ１１～２５８；ＰＤＢ１Ａ２８＿Ａａａ９～２５６）のいずれかと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列の同一性を有し、そして約２００アミノ酸～２５０アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、又は２２５アミノ酸～２５０アミノ酸、例えば、２４８アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＰＲのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０６４０１ａａ６７８～９３３と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２５６アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、又は２２５アミノ酸～２５６アミノ酸の長さ；例えば、２５６アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＰＲのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０６４０１ａａ６８６～９３３と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２５０アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、又は２２５アミノ酸～２５０アミノ酸の長さ；例えば、２４８アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＰＲのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、アミノ酸配列GHSFADPASNLGLEDIIRKALMGSF（ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５３７６ａａ２２５１～２２７５）を含む共調節ペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約２５アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば、共調節ペプチドは、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

甲状腺ホルモン受容体ベータ：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、甲状腺ホルモン受容体ベータ（ＴＲ－ベータ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、ＴＲ－ベータ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０８２８）のＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＴＲ－ベータのＬＢＤは、以下のアミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＱ４Ｔ８Ｖ６ａａ２２３～５０２；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９０３８２．１ａａ１５９～４０１；ＵｎｉｐｒｏｔＰ１８１１５．２ａａ１７０～４１２；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＰＶＥ４．２ａａ１４１～３９２；ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０８２８．２ａａ２１６～４５８；ＧｅｎＢａｎｋＡＢＳ１１２４９．１ａａ１７９～４１９；ＮＣＢＩＲＥＦＳＥＱＸＰ＿００１１８５９７７．１ａａ１８６～４１６；ＰＤＢ１ＮＡＶ＿Ａａａ１７～２５９；ＰＤＢ２ＰＩＮ＿Ａａａ８～２５０；ＰＤＢ３Ｄ５７＿Ａａａ２２～２６４；ＰＤＢ１Ｎ４６＿Ａａａ１３～２５５；ＰＤＢ１ＢＳＸ＿Ａａａ１５～２５７）のいずれかと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２５０アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、２２５アミノ酸～２３０アミノ酸、２３０アミノ酸～２４０アミノ酸、又は２４０アミノ酸～２５０アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＴＲ－ベータのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０８２８ａａ２０２～４６１と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２６０アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、又は２２５アミノ酸～２６０アミノ酸、例えば２６０アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＴＲ－ベータのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０８２８ａａ２１６～４６１と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２４６アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、又は２２５アミノ酸～２４６アミノ酸、例えば、２４６アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＴＲ－ベータのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、例えばアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９ａａ６２７～８２９、又はＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９ａａ６７３～７５０、又はＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６ａａ７２１～１０２１を含むＮＣＯＡ３／ＳＲＣ３ポリペプチドでもよい。

エストロゲン受容体－アルファ：
好適な実施態様において、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、エストロゲン受容体アルファ（ＥＲアルファ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、ＥＲ－アルファ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０３３７２）のＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＥＲ－アルファのＬＢＤは、以下のアミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０６２１２．１ａａ３０４～５４１；ＵｎｉｐｒｏｔＰ８１５５９．１ａａ３０２～５３９；ＵｎｉｐｒｏｔＱ７ＺＵ３２ａａ２８０～５１７；ＧｅｎＢａｎｋＡＣＢ１０６４９．１ａａ３０３～５２９；ＧｅｎＢａｎｋＡＢＱ４２６９６．１ａａ２２６～４６８；ＧｅｎＢａｎｋＡＣＣ８５９０３．１ａａ１４１～３７５；ＰＤＢ１ＸＰ９＿Ａａａ４～２４１；ＰＤＢ１ＹＹ４＿Ａａａ１～２３６）のいずれかと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２４０アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、２２５アミノ酸～２３０アミノ酸、２３０アミノ酸～２３５アミノ酸、又は２３５アミノ酸～２４０アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＥＲ－アルファのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０３３７２ａａ３０５～５３３と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１８０アミノ酸～２２９アミノ酸の長さを有する（例えば、１８０アミノ酸～２００アミノ酸、又は２００アミノ酸～２２９アミノ酸、例えば、２２９アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＥＲ－アルファのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０３３７２ａａ２８２～５９５と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～３１４アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸、２７５アミノ酸～３００アミノ酸、又は３００アミノ酸～３１４アミノ酸、例えば、３１４アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＥＲ－アルファのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０３３７２ａａ３１０～５４７と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１９０アミノ酸～２３８アミノ酸の長さを有する（例えば、１９０アミノ酸～２２０アミノ酸、又は２２０アミノ酸～２３８アミノ酸、例えば、２３８アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＥＲ－アルファのＬＢＤは、置換Ｄ３５１Ｙを有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０３３７２ａａ３０５～５３３と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１８０アミノ酸～２２９アミノ酸の長さを有する（例えば、１８０アミノ酸～２００アミノ酸、又は２００アミノ酸～２２９アミノ酸、例えば、２２９アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＥＲ－アルファのＬＢＤは、置換Ｄ３５１Ｙを有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０３３７２ａａ２８２～５９５と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～３１４アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸、２７５アミノ酸～３００アミノ酸、又は３００アミノ酸～３１４アミノ酸、例えば、３１４アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＥＲ－アルファのＬＢＤは、置換Ｄ３５１Ｙを有するアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０３３７２ａａ３１０～５４７と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１９０アミノ酸～２３８アミノ酸の長さを有する（例えば、１９０アミノ酸～２２０アミノ酸、又は２２０アミノ酸～２３８アミノ酸、例えば、２３８アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＥＲ－アルファのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、アミノ酸配列DAFQLRQLILRGLQDD（配列番号１０）を含む共調節ペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約１６アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば共調節ペプチドは、１６アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＥＲ－アルファのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、アミノ酸配列SPGSREWFKDMLS（配列番号１１）を含む共調節ペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約１３アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば共調節ペプチドは、１３アミノ酸～１５アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

エストロゲン受容体－ベータ（ＥＲ－ベータ）：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、エストロゲン受容体－ベータ（ＥＲ－ベータ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、ＥＲ－ベータ（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９２７３１）のＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＥＲ－ベータのＬＢＤは、以下のアミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０６２１２．１ａａ３０４～５４１；ＵｎｉｐｒｏｔＰ８１５５９．１ａａ３０２～５３９；ＵｎｉｐｒｏｔＱ７ＺＵ３２ａａ２８０～５１７；ＧｅｎＢａｎｋＡＣＢ１０６４９．１ａａ３０３～５２９；ＧｅｎＢａｎｋＡＢＱ４２６９６．１ａａ２２６～４６８；ＧｅｎＢａｎｋＡＣＣ８５９０３．１ａａ１４１～３７５；ＰＤＢ１ＸＰ９＿Ａａａ４～２４１；ＰＤＢ１ＹＹ４＿Ａａａ１～２３６）と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２４３アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、２２５アミノ酸～２３０アミノ酸、２３０アミノ酸～２３５アミノ酸、又は２３５アミノ酸～２４３アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＥＲ－ベータのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ９２７３１ａａ２６０～５０２と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２４３アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、２２５アミノ酸～２３０アミノ酸、２３０アミノ酸～２３５アミノ酸、又は２３５アミノ酸～２４３アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＥＲ－ベータのＬＢＤである場合、二量体化対の第２のメンバーは、アミノ酸配列PRQGSILYSMLTSAKQT（配列番号１２）を含む共調節ペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約１７アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば、共調節ペプチドは、１７アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

ペルオキシソ－ム増殖因子活性化受容体－ガンマ：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、ペルオキシソ－ム増殖因子活性化受容体－ガンマ（ＰＰＡＲ－ガンマ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、ＰＰＡＲ－ガンマ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ３７２３１）のＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＰＰＡＲ－ガンマのＬＢＤは、以下のアミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＱ４Ｈ２Ｘ４ａａ１７６～４１７；ＵｎｉｐｒｏｔＰ３７２３３．１ａａ１２９～３９５；ＵｎｉｐｒｏｔＱ７Ｔ０２９ａａ９５～４３５；ＧｅｎＢａｎｋＡＡＬ２６２４５．１ａａ９５～４３５；ＮＣＢＩＲＥＦＳＥＱＸＰ＿７８１７５０．１ａａ１３７～３７８；ＮＣＢＩＲＥＦＳＥＱＸＰ７８４４２９．２ａａ２１９～４７８；ＮＣＢＩＲＥＦＳＥＱＮＰ＿００１００１４６０．１ａａ２０７～４７４；ＰＤＢ２Ｊ１４＿Ａａａ１７～２８４；ＰＤＢ１ＦＭ６＿Ｄａａ４～２７１）の１つと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２６９アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、２２５アミノ酸～２５０アミノ酸、又は２５０アミノ酸～２６９アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＰＰＡＲ－ガンマのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ３７２３１ａａ１７４～４７５と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１５０アミノ酸～２０２アミノ酸の長さを有する（例えば、１５０アミノ酸～１６０アミノ酸、１６０アミノ酸～１７０アミノ酸、１７０アミノ酸～１９０アミノ酸、又は１９０アミノ酸～２０２アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＰＰＡＲ－ガンマのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ３７２３１ａａ１８１～４７５と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２６９アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、２２５アミノ酸～２５０アミノ酸、又は２５０アミノ酸～２６９アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＰＰＡＲ－ガンマのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ３７２３１ａａ２０５～４７５とと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２６９アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸の長さ、２２５アミノ酸～２５０アミノ酸、又は２５０アミノ酸～２７１アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＰＰＡＲ－ガンマのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、アミノ酸配列ＣCPSSHSSLTERHKILHRLLQEGSPS（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６７６～７００）を含む共調節ペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約２５アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば、共調節ペプチドは、２５アミノ酸～２８アミノ酸、２８アミノ酸～２９アミノ酸、２９アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＰＰＡＲ－ガンマのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、アミノ酸配列PKKENNALLRYLLDRDDPSDV（配列番号１３）又はPKKKENALLRYLLDKDDTKDI（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１ａａ７３７～７５７）を含む共調節ペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約２１アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば、共調節ペプチドは、２１アミノ酸～２３アミノ酸、２３アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

糖質コルチコイド受容体：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０４１５０－３を有するＧＲのＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＧＲのＬＢＤは、以下のアミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＱ４ＲＩＲ９ａａ１１０～３５６；ＵｎｉｐｒｏｔＰ４９８４４．１ａａ５３０～７７６；ＮＣＢＩＲＥＦＳＥＱＮＰ＿００１０３２９１５．１ａａ５２６～７７２；ＰＤＢ１ＮＨＺ＿Ａ３４～２８０；ＰＤＢ１Ｍ２Ｚ＿Ａａａ１１～２５７；ＰＤＢ３ＢＱＤ＿Ａａａ９～２５５；ＰＤＢ３ＣＬＤ＿Ａａａ１３～２５９）の１つと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２４７アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、２２５アミノ酸～２３０アミノ酸、２３０アミノ酸～２４０アミノ酸、又は２４０アミノ酸～２４７アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＧＲのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ０４１５０－３ａａ５３２～７７８と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～２４７アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２５アミノ酸、又は２２５アミノ酸～２４７アミノ酸、例えば２４７アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＧＲのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、例えば、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８ａａ１１７２～１４４１若しくはその断片、又はＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６ａａ３２０～１０２１若しくはその断片を含むＮＣＯＡ２／ＳＲＣ２ポリペプチドでもよい。

ビタミンＤ受容体：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、ＶＤＲ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１１４７３）のＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＶＤＲのＬＢＤは、以下のアミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＯ４２３９２．１ａａ１４７～４５０；ＮＣＢＩＲＥＦＳＥＱＮＰ＿００１０７９２８８．１ａａ１２５～４２１；ＰＤＢ２ＨＢＨ＿Ａａａ５～３０１；ＰＤＢ１Ｓ０Ｚ＿Ａａａ１１～２６２）の１つと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～３１０アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸、２７５アミノ酸～３００アミノ酸、又は３００アミノ酸～３１０アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＶＤＲのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１１４７３ａａ１２４～４２６と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～３０３アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸。２７５アミノ酸～３００アミノ酸、又は３００アミノ酸～３０３アミノ酸の長さを有する）。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＶＤＲのＬＢＤである場合、対の第２のメンバーは、例えば、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８ａａ１１７２～１４４１若しくはその断片、又はＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６ａａ３２０～１０２１若しくはその断片を含む、ＮＣＯＡ１／ＳＲＣ１ポリペプチドであり得る。

例えば、ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＶＤＲのＬＢＤである場合、対のもう１つのメンバーは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６ａａ７４４～７５１を含むＮＣＯＡ２／ＳＲＣ２ポリペプチドでもよく、ここで共調節ペプチドは、約８アミノ酸～約５０アミノ酸の長さを有する（例えば、共調節ペプチドは、約８アミノ酸～１０アミノ酸、１０アミノ酸～１５アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～２３アミノ酸、２３アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する）。

甲状腺ホルモン受容体－アルファ：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、甲状腺ホルモン受容体－アルファ（ＴＲ－アルファ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、ＴＲ－アルファ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０８２７－２）のＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＴＲ－アルファのＬＢＤは、以下のアミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＱ４Ｔ８Ｖ６ａａ２２３～５０２；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９０３８２．１ａａ１５９～４０１；ＵｎｉｐｒｏｔＰ１８１１５．２ａａ１７０～４１２；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＰＶＥ４．２ａａ１４１～３９２；ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０８２８．２ａａ２１６～４５８；ＧｅｎＢａｎｋＡＢＳ１１２４９．１ａａ１７９～４１９；ＮＣＢＩＲＥＦＳＥＱＸＰ＿００１１８５９７７．１ａａ１８６～４１６；ＰＤＢ１ＮＡＶ＿Ａａａ１７～２５９；ＰＤＢ２ＰＩＮ＿Ａａａ８～２５０；ＰＤＢ３Ｄ５７＿Ａａａ２２～２６４；ＰＤＢ１Ｎ４６＿Ａａａ１３～２５５；ＰＤＢ１ＢＳＸ＿Ａａａ１５～２５７）と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１９０アミノ酸～約２４５アミノ酸の長さを有する（例えば、１９０アミノ酸～２１０アミノ酸、２１０アミノ酸～２３０アミノ酸、又は２３０アミノ酸～２４５アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＴＲ－アルファのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０８２７－２ａａ１６２～４０４と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１９０アミノ酸～約２４３アミノ酸の長さを有する（例えば、１９０アミノ酸～２１０アミノ酸、２１０アミノ酸～２３０アミノ酸、又は２３０アミノ酸～２４３アミノ酸の長さを有する）。

ＴＲ－アルファに適切な共調節ペプチドは、ＳＲＣ１ポリペプチド又はその断片（例えば、ＳＲＣ１ポリペプチド由来の８アミノ酸～５０アミノ酸の長さのペプチド）でもよい。

レチノイン酸受容体－ベータ：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、レチノイン酸受容体－ベータ（ＲＡＲ－ベータ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、ＲＡＲ－ベータ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０８２６－２）のＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＲＡＲ－ベータのＬＢＤは、以下のアミノ酸配列（ＵｎｉｐｒｏｔＱ４Ｈ２Ｗ２ａａ４００～６３４；ＵｎｉｐｒｏｔＰ２２４４８．２ａａ１８６～４１６；ＵｎｉｐｒｏｔＰ２８６９９．２ａａ２０９～４３９；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９１３９２．２ａａ１７６～４０６；ＮＣＢＩＲＥＦＳＥＱＸＰ＿７７９９７６．２ａａ１３４～３６２；ＮＣＢＩＲＥＦＳＥＱＸＰ＿００２２０４３８６．１ａａ１７９～４０９；ＰＤＢ１ＸＡＰ＿Ａａａ３２～２６２；ＰＤＢ１ＸＤＫ＿Ｂａａ３４～２６４；ＰＤＢ１ＤＫＦ＿Ｂａａ５～２３５）と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１８０アミノ酸～約２３５アミノ酸の長さを有する（例えば、１８０アミノ酸～２００アミノ酸、２００アミノ酸～２２０アミノ酸、又は２２０アミノ酸～２３５アミノ酸の長さを有する）。

例えば、ＲＡＲ－ベータのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０８２６－２ａａ１７９－４０９と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１８０アミノ酸～約２３１アミノ酸の長さを有する（例えば、１８０アミノ酸～２００アミノ酸、２００アミノ酸～２２０アミノ酸、又は２２０アミノ酸～２３１アミノ酸の長さを有する）。

ＲＡＲ－ベータの適切な共調節ペプチドは、ＳＲＣ１ポリペプチド又はその断片（例えば、ＳＲＣ１ポリペプチド由来の８アミノ酸～５０アミノ酸の長さのペプチド）でもよい。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＲＡＲ－ベータのＬＢＤである場合、二量体化対のもう１つのメンバーは、例えばアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８ａａ１１７２～１４４１若しくはその断片を含むＮＣＯＡ１／ＳＲＣ１ポリペプチドでもよい。

ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーがＲＡＲ－ベータのＬＢＤである場合、二量体化対のもう１つのメンバーは、例えばアミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６ａａ３２０～１０２１若しくはその断片を含むＮＣＯＡ２／ＳＲＣ２ポリペプチドでもよい。

ファルネソイドＸ受容体：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ９６ＲＩ１－２を有するＦＸＲのＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＦＸＲのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ９６ＲＴ１－２ａａ２３７～４７２と少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１００アミノ酸～約１３６アミノ酸の長さを有する（例えば、１００アミノ酸～１１０アミノ酸、１１０アミノ酸～１２０アミノ酸、又は１２０アミノ酸～１３６アミノ酸の長さを有する）。

ＦＸＲに適切な共調節ペプチドは、ＳＲＣ１ポリペプチド又はその断片（例えば、ＳＲＣ１ポリペプチド由来の８アミノ酸～５０アミノ酸の長さのペプチド）でもよい。

ＬＸＲ－アルファ：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、肝臓Ｘ受容体－アルファ（ＬＸＲ－アルファ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ１３１３３－１を有するＬＸＲ－アルファのＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＬＸＲ－アルファのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ１３１３３－１ａａ１８２～４４７と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～約２６６アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２０アミノ酸、２２０アミノ酸～２４０アミノ酸、又は２４０アミノ酸～２６６アミノ酸の長さを有する）アミノ酸配列を有することができる。

ＬＸＲ－アルファに適切な共調節ペプチドは、ＳＲＣ１ポリペプチド又はその断片（例えば、ＳＲＣ１ポリペプチド由来の８アミノ酸～５０アミノ酸の長さのペプチド）でもよい。

ＲＯＲ－ガンマ：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、レチノイド関連オ－ファン受容体ガンマ（ＲＯＲ－ガンマ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ５１４４９－２を有するＲＯＲ－ガンマのＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＲＯＲ－ガンマのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ５１４４９－２ａａ２３７～４９７と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２００アミノ酸～約２６１アミノ酸の長さを有する（例えば、２００アミノ酸～２２０アミノ酸、２２０アミノ酸～２４０アミノ酸、又は２４０アミノ酸～２６１アミノ酸の長さを有する）。

ＲＯＲ－ガンマに適切な共調節ペプチドは、ＮＣＯＲＮＲペプチド（CDPASNLGLEDIIRKALMGSFDDK、ＵｎｉｐｒｏｔＱ７Ｚ５１６－１ａａ２１６０～２１８２）でもよい。

ＲＯＲ－ガンマに適切な共調節ペプチドは、ＳＲＣ１ポリペプチド又はその断片（例えば、ＳＲＣ１ポリペプチド由来の８アミノ酸～５０アミノ酸の長さのペプチド）でもよい。

ＲＸＲ－アルファ：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、レチノイド－Ｘ受容体－アルファ（ＲＸＲ－アルファ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１９７９３－１を有するＲＸＲ－アルファのＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

例えば、ＲＸＲ－アルファのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ１９７９３－１ａａ２２５～４６２と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約１９０アミノ酸～約２３８アミノ酸の長さを有する（例えば、１９０アミノ酸～２００アミノ酸、２００アミノ酸～２１０アミノ酸、又は２１０アミノ酸～２３８アミノ酸の長さを有する）。

ＲＸＲ－アルファに適切な共調節ペプチドは、ＳＲＣ１ポリペプチド又はその断片（例えば、ＳＲＣ１ポリペプチド由来の８アミノ酸～５０アミノ酸の長さのペプチド）でもよい。

ＰＸＲ：
ある場合には、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーとして含めるのに適したＬＢＤは、プレグナンＸ受容体（ＰＸＲ）のＬＢＤでもよい。例えばある場合には、ＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５４６９－１を有するＰＸＲのＬＢＤと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。ある場合には、ＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５４６９－１のアミノ酸配列のアミノ酸１４３～４２８と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある場合には、ＬＢＤは、ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５４６９－１に示されているアミノ酸配列のアミノ酸２０５～４３４と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

例えば、ＰＸＲのＬＢＤは、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５４６９－１ａａ１３０～４３４と、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができ、そして約２５０アミノ酸～約３０２アミノ酸の長さを有する（例えば、２５０アミノ酸～２７５アミノ酸、２７５アミノ酸～２９０アミノ酸、又は２９０アミノ酸～３０２アミノ酸の長さを有する）。

ＰＸＲに適切な共調節ペプチドは、ＳＲＣ１ポリペプチド又はその断片（例えば、ＳＲＣ１ポリペプチド由来の８アミノ酸～５０アミノ酸の長さのペプチド）でもよい。

８．１．１．２．共調節ポリペプチド：
適切な共調節ポリペプチドには、完全長の天然に存在する核ホルモン共調節ポリペプチドが含まれる。適切な共調節ポリペプチドには、天然に存在する核ホルモン共調節ポリペプチドの断片が含まれる。適切な共調節ポリペプチドには、合成又は組換え核ホルモン共調節ポリペプチドが含まれる。

適切な共調節ポリペプチドは、８アミノ酸～２０００アミノ酸の長さを有することができる。適切な共調節ポリペプチドは、８アミノ酸～５０アミノ酸の長さ、例えば８アミノ酸～１０アミノ酸、１０アミノ酸～１５アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有することができる。適切な共調節ポリペプチドは、５０アミノ酸～１００アミノ酸の長さ、例えば５０アミノ酸～６０アミノ酸、６０アミノ酸～７０アミノ酸、７０アミノ酸～８０アミノ酸、８０アミノ酸～９０アミノ酸、又は９０アミノ酸～１００アミノ酸の長さを有することができる。適切な共調節ポリペプチドは、１００アミノ酸～２００アミノ酸、２００アミノ酸～３００アミノ酸、３００アミノ酸～４００アミノ酸、４００アミノ酸～５００アミノ酸、５００アミノ酸～６００アミノ酸、６００アミノ酸～７００アミノ酸、７００アミノ酸～８００アミノ酸、８００アミノ酸～９００アミノ酸、又は９００アミノ酸～１０００アミノ酸の長さを有することができる。適切な共調節ポリペプチドは、１０００アミノ酸～２０００アミノ酸の長さを有することができる。

適切な共調節ペプチドには、ステロイド受容体コアクチベータ－（ＳＲＣ）－１、ＳＲＣ－２、ＳＲＣ－３、ＴＲＡＰ２２０－１、ＴＲＡＰ２２０－２、ＮＲ０Ｂ１、ＮＲＩＰ１、ＣｏＲＮＲボックス、アルファ－ベータＶ、ＴＩＦ１、ＴＩＦ２、ＥＡ２、ＴＡ１、ＥＡＢ１、ＳＲＣ１－１、ＳＲＣ１－２、ＳＲＣ１－３、ＳＲＣ１－４ａ、ＳＲＣ１－４ｂ、ＧＲＩＰ１－１、ＧＲＩＰ１－２、ＧＲＩＰ１－３、ＡＩＢ１－１、ＡＩＢ１－２、ＡＩＢ１－３、ＰＧＣ１ａ、ＰＧＣ１ｂ、ＰＲＣ、ＡＳＣ２－１、ＡＳＣ２－２、ＣＢＰ－１、ＣＢＰ－２、Ｐ３００、ＣＩＡ、ＡＲＡ７０－１、ＡＲＡ７０－２、ＮＳＤ１、ＳＭＡＰ、Ｔｉｐ６０、ＥＲＡＰ１４０、Ｎｉｘ１、ＬＣｏＲ、ＣｏＲＮＲ１（Ｎ－ＣｏＲ）、ＣｏＲＮＲ２、ＳＭＲＴ、ＲＩＰ１４０－Ｃ、ＲＩＰ１４０－１、ＲＩＰ１４０－２、ＲＩＰ１４０－３、ＲＩＰ１４０－４、ＲＩＰ１４０－５、ＲＩＰ１４０－６、ＲＩＰ１４０－７、ＲＩＰ１４０－８、ＲＩＰ１４０－９、ＰＲＩＣ２８５－１、ＰＲＩＣ２８５－２、ＰＲＩＣ２８５－３、ＰＲＩＣ２８５－４、及びＰＲＩＣ２８５－５が含まれる。

各ＬＢＤ二量体化パートナーとのヘテロ二量体化に適した共調節ポリペプチドは、好ましくは、８アミノ酸～１０アミノ酸、１０アミノ酸～１５アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有し；好ましくは、以下のアミノ酸配列の８～５０の連続するアミノ酸のストレッチと、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する：ＳＲＣ１（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１）、ＳＲＣ２（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１）、ＳＲＣ３（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９－５）、ＰＧＣ１ａ（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＵＢＫ２－１）、ＰＧＣ１ｂ（ＵｎｉｐｒｏｔＱ８６ＹＮ６－１）、ＰＰＲＣ－１（ＵｎｉｐｒｏｔＱ５ＶＶ６７－１）、ＴＲＡＰ２２０（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１）、ＮＣＯＡ６（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１４６８６－１）、ＣＲＥＢＢＰ（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９２７９３－１）、ＥＰ３００（ＵｎｉｐｒｏｔＱ０９４７２－１）、ＮＣＯＡ５（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＨＣＤ５－１）、ＮＣＯＡ４（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１３７７２－１）、ＴＲＩＭ２４（ＵｎｉｐｒｏｔＯ１５１６４－２）、ＮＳＤ１（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９６Ｌ７３－１）、ＢＲＤ８（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｈ０Ｅ９－２）、ＫＡＴ５（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９２９９３－１）、ＮＣＯＡ７（ＵｎｉｐｒｏｔＱ８ＮＩ０８－１）、Ｎｉｘ１（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＢＱＩ９－１）、ＬＣｏＲ（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９６ＪＮ０－１）、Ｎ－ＣｏＲ（ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５３７６－１）、ＮＣＯＲ２（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６１８－１）、ＲＩＰ１４０（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１）、ＰＲＩＣ２８５（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＢＹＫ８－２）。

好適な実施態様において、適切な共調節ペプチドは、ＬＸＸＬＬモチーフを含み、ここでＸは任意のアミノ酸であり、ここで共調節ペプチドは、８アミノ酸～５０アミノ酸、例えば８アミノ酸～１０アミノ酸、１０アミノ酸～１２アミノ酸、１２アミノ酸～１５アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～２５アミノ酸、２５アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～３５アミノ酸、３５アミノ酸～４０アミノ酸、４０アミノ酸～４５アミノ酸酸、又は４５アミノ酸～５０アミノ酸の長さを有する。

適切な共調節ペプチドの例は以下のとおりである：ＳＲＣ１：ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６７６～７００）CPSSHSSLTERHKILHRLLQEGSPS；ＳＲＣ１－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６８２～７０２；ＳＮＰｒｓ１０４９０２１Ｅ６８５Ａ）SLTARHKILHRLLQEGSPSDI；ＳＲＣ３－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９－５ａａ６１４～６３２）ESKGHKKLLQLLTCSSDDR；ＳＲＣ３：（配列番号１３）PKKENNALLRYLLDRDDPSDV；ＰＧＣ－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＵＢＫ２－１ａａ１３８～１５４）AEEPSLLKKLLLAPANT；ＰＧＣ１ａ：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＵＢＫ２－１ａａ１３６～１５６）QEAEEPSLLKKLLLAPANTQL；ＴＲＡＰ２２０－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ５９６～６１６）SKVSQNPILTSLLQITGNGGS；ＮＣｏＲ：（ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５３７６－１ａａ２２５１～２２７５）GHSFADPASNLGLEDIIRKALMGSF；ＮＲ０Ｂ１：（ＵｎｉｐｒｏｔＰ５１８４３－１ａａ７４～９０）PRQGSILYSMLTSAKQT；ＮＲＩＰ１：（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１ａａ３７４～３９０）AANNSLLLHLLKSQTIP；ＴＩＦ２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１ａａ７３７～７５７）PKKKENALLRYLLDKDDTKDI；ＣｏＲＮＲＢｏｘ：（配列番号１４）DAFQLRQLILRGLQDD；ａｂＶ：（配列番号１１）SPGSREWFKDMLS；ＴＲＡＰ２２０－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ６３７～６５７）GNTKNHPMLMNLLKDNPAQDF；ＥＡ２：（配列番号１５）SSKGVLWRMLAEPVSR；ＴＡ１：（配列番号１６）SRTLQLDWGTLYWSR；ＥＡＢ１：（配列番号１７）SSNHQSSRLIELLSR；ＳＲＣ２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１ａａ６８３～７０１）LKEKHKILHRLLQDSSSPV；ＳＲＣ１－３：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２８～１４４１）QAQQKSLLQQLLTE；ＳＲＣ１－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６２５～６４５）KYSQTSHKLVQLLTTTAEQQL；ＳＲＣ１－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６８２～７０２；ＳＮＰｒｓ１０４９０２１Ｅ６８５Ａ）SLTARHKILHRLLQEGSPSDI；ＳＲＣ１－３：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ７４１～７６１）KESKDHQLLRYLLDKDEKDLR；ＳＲＣ１－４ａ：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２７～１４４１）PQAQQKSLLQQLLTE；ＳＲＣ１－４ｂ：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２７～１４４１Ｌ１４３５Ｒ）PQAQQKSLRQQLLTE；ＧＲＩＰ１－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１ａａ６３３～６５３）HDSKGQTKLLQLLTTKSDQME；ＧＲＩＰ１－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１ａａ６８２～７０２）SLKEKHKILHRLLQDSSSPVD；ＧＲＩＰ１－３：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１ａａ７３７～７５７）PKKKENALLRYLLDKDDTKDI；ＡＩＢ１－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９－５ａａ６１３～６３３）LESKGHKKLLQLLTCSSDDRG；ＡＩＢ１－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９－５ａａ６７７～６９７）LLQEKHRILHKLLQNGNSPAE；ＡＩＢ１－３：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９－５ａａ７３０～７５０）KKKENNALLRYLLDRDDPSDA；ＰＧＣ１ａ：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＵＢＫ２－１ａａ１３６～１５６）QEAEEPSLLKKLLLAPANTQL；ＰＧＣ１ｂ：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ８６ＹＮ６－１ａａ１４８～１６８）PEVDELSLLQKLLLATSYPTS；ＰＲＣ：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ５ＶＶ６７－１ａａ１５６～１７６）VSPREGSSLHKLLTLSRTPPE；ＴＲＡＰ２２０－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ５９６～６１６）SKVSQNPILTSLLQITGNGGS；ＴＲＡＰ２２０－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ６３７～６５７）GNTKNHPMLMNLLKDNPAQDF；ＡＳＣ２－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１４６８６－１ａａ８７９～８９９）DVTLTSPLLVNLLQSDISAGH；ＡＳＣ２－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１４６８６－１ａａ１４８３～１５０３）AMREAPTSLSQLLDNSGAPNV；ＣＢＰ－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９２７９３－１ａａ６２～８２）DAASKHKQLSELLRGGSGSSI；ＣＢＰ－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９２７９３－１ａａ３５０～３７０）KRKLIQQQLVLLLHAHKCQRR；Ｐ３００：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ０９４７２－１ａａ７３～９３）DAASKHKQLSELLRSGSSPNL；ＣＩＡ：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＨＣＤ５－１ａａ３３７～３５７）GHPPAIQSLINLLADNRYLTA；ＡＲＡ７０－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１３７７２－１ａａ８４～１０４）TLQQQAQQLYSLLGQFNCLTH；ＡＲＡ７０－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１３７７２－１ａａ３２０～３４０）GSRETSEKFKLLFQSYNVNDW；ＴＩＦ１：（ＵｎｉｐｒｏｔＯ１５１６４－２ａａ７１８～７３８）NANYPRSILTSLLLNSSQSST；ＮＳＤ１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９６Ｌ７３－１ａａ８９９～９１９）IPIEPDYKFSTLLMMLKDMHD；ＳＭＡＰ：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｈ０Ｅ９－２ａａ２６３～２８３）ATPPPSPLLSELLKKGSLLPT；Ｔｉｐ６０：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９２９９３－１ａａ４８１～５０１）VDGHERAMLKRLLRIDSKCLH；ＥＲＡＰ１４０：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ８ＮＩ０８－１ａａ５１４～５３４）HEDLDKVKLIEYYLTKNKEGP；Ｎｉｘ１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＢＱＩ９－１ａａ２３６～２５６）ESPEFCLGLQTLLSLKCCIDL；ＬＣｏＲ：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９６ＪＮ０－１ａａ４５～６５）AATTQNPVLSKLLMADQDSPL；ＣｏＲＮＲ１（Ｎ－ＣｏＲ）：（ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５３７６－１ａａ２３９～２６８）MGQVPRTHRLITLADHICQIITQDFARNQV；ＣｏＲＮＲ２（Ｎ－ＣｏＲ）：（ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５３７６－１ａａ２２６０～２２７３）NLGLEDIIRKALMG；ＣｏＲＮＲ１（ＳＭＲＴ）：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６１８－１ａａ２１３１～２１７０）APGVKGHQRVVTLAQHISEVITQDTYRHHPQQLSAPLPAP；ＣｏＲＮＲ２（ＳＭＲＴ）：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６１８－１ａａ２３４７～２３６０）NMGLEAIIRKALMG；ＲＩＰ１４０－Ｃ：（配列番号１８）RLTKTNPILYYMLQKGGNSVA；ＲＩＰ１４０－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１ａａ１３～３３）QDSIVLTYLEGLLMHQAAGGS；ＲＩＰ１４０－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１ａａ１２５～１４５）KGKQDSTLLASLLQSFSSRLQ；ＲＩＰ１４０－３：（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１ａａ１７７～１９７）CYGVASSHLKTLLKKSKVKDQ；ＲＩＰ１４０－４：（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１ａａ２５８～２７８）KPSVACSQLALLLSSEAHLQQ；ＲＩＰ１４０－５：（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１ａａ３７２～３９２）KQAANNSLLLHLLKSQTIPKP；ＲＩＰ１４０－６：（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１ａａ４９３～５１３）NSHQKVTLLQLLLGHKNEENV；ＲＩＰ１４０－７：（配列番号１９）NLLERRTVLQLLLGNPTKGRV；ＲＩＰ１４０－８：（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１ａａ８１１～８３１）FSFSKNGLLSRLLRQNQDSYL；ＲＩＰ１４０－９：（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１ａａ９２８～９４８）RESKSFNVLKQLLLSENCVRD；ＰＲＩＣ２８５－１：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＢＹＫ８－２ａａ４５８～５１８）ELNADDAILRELLDESQKVMV；ＰＲＩＣ２８５－２：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＢＹＫ８－２ａａ５４１～５６１）YENLPPAALRKLLRAEPERYR；ＰＲＩＣ２８５－３：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＢＹＫ８－２ａａ５９６～６１６）MAFAGDEVLVQLLSGDKAPEG；ＰＲＩＣ２８５－４：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＢＹＫ８－２ａａ１４３５～１４５５）SCCYLCIRLEGLLAPTASPRP；及びＰＲＩＣ２８５－５：（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＢＹＫ８－２ａａ１６５２～１６７２）PSNKSVDVLAGLLLRRMELKP。

ある場合には、所定のＬＢＤは２つ以上の異なる共調節ポリペプチドと対を形成することができる。例えば、ＰＰＡＲ－ガンマ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ３７２３１）は、ＳＲＣ１（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６２５～６４５；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６７６～７００；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６８２～７０２、ＳＮＰｒｓ１０４９０２１Ｅ６８５Ａ；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ７４１～７６１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２８～１４４１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２７～１４４１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２７～１４４１Ｌ１４３５Ｒ）、ＳＲＣ２（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１ａａ６８３～７０１）、ＳＲＣ３（配列番号１３；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９－５ａａ６１４～６３２）、又はＴＲＡＰ２２０（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ５９６～６１６；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ６３７～６５７）と対を形成することができる。別の例として、ＥＲ－アルファ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０３３７２）は、ＣｏＲＮＲ（ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５３７６－１ａａ２３９～２６８；ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５３７６－１ａａ２２６０～２２７３；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６１８－１ａａ２１３１～２１７０；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６１８－１ａａ２３４７～２３６０）、アルファ－ベータＶ（配列番号１１）、又はＴＡ１（配列番号１６）と対を形成することができる。別の例として、ＥＲ－ベータ（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９２７３１）は、ＣｏＲＮＲ（ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５３７６－１ａａ２３９～２６８；ＵｎｉｐｒｏｔＯ７５３７６－１ａａ２２６０～２２７３；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６１８－１ａａ２１３１～２１７０；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６１８－１ａａ２３４７～２３６０）、アルファ－ベータＶ（配列番号１１）、又はＴＡ１（配列番号１６）と対を形成することができる。別の例として、ＡＲ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０２７５）は、ＳＲＣ１（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６２５～６４５；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６７６～７００；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６８２～７０２、ＳＮＰｒｓ１０４９０２１Ｅ６８５Ａ；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ７４１～７６１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２８～１４４１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２７～１４４１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２７～１４４１Ｌ１４３５Ｒ）、ＳＲＣ２（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１ａａ６８３～７０１）、ＳＲＣ３（配列番号１３；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９－５ａａ６１４～６３２）、又はＴＲＡＰ２２０（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ５９６～６１６；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ６３７～６５７）と対を形成することができる。別の例として、ＰＲ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ０６４０１）は、ＳＲＣ１（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６２５～６４５；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６７６～７００；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６８２～７０２、ＳＮＰｒｓ１０４９０２１Ｅ６８５Ａ；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ７４１～７６１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２８～１４４１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２７～１４４１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２７～１４４１Ｌ１４３５Ｒ）、ＳＲＣ２（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１ａａ６８３～７０１）、ＳＲＣ３（配列番号１３；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９－５ａａ６１４～６３２）、ＴＲＡＰ２２０（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ５９６～６１６；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ６３７～６５７）、ＮＲ０Ｂ１（ＵｎｉｐｒｏｔＰ５１８４３－１ａａ７４～９０）、ＰＧＣ１Ｂ（ＵｎｉｐｒｏｔＱ８６ＹＮ６－１ａａ１４８～１６８）、ＮＲＩＰ１（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４８５５２－１ａａ３７４～３９０）、ＥＡ２（配列番号１５）、又はＥＡＢ１（配列番号１７）と対を形成することができる。別の例として、ＴＲ－ベータ（ＵｎｉｐｒｏｔＰ１０８２８）は、ＳＲＣ１（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６２５～６４５；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６７６～７００；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ６８２～７０２、ＳＮＰｒｓ１０４９０２１Ｅ６８５Ａ；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ７４１～７６１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２８～１４４１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２７～１４４１；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５７８８－１ａａ１４２７～１４４１Ｌ１４３５Ｒ）、ＳＲＣ２（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５５９６－１ａａ６８３～７０１）、ＳＲＣ３（配列番号１３；ＵｎｉｐｒｏｔＱ９Ｙ６Ｑ９－５ａａ６１４～６３２）、又はＴＲＡＰ２２０（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ５９６～６１６；ＵｎｉｐｒｏｔＱ１５６４８－１ａａ６３７～６５７）と対を形成することができる。

８．１．１．３．ＬＢＤベースのヘテロ二量体化のための調節分子：
ヘテロ二量体化ドメインの対の１つのメンバーが核ホルモン受容体のＬＢＤである場合、使用される調節分子の少なくとも１つのタイプは群の最初のＣＡＲ分子のＬＢＤに結合でき、これは、次に、群の第２のＣＡＲ分子内の共調節ペプチドとヘテロ二量体化することができる。

ＬＢＤベースのヘテロ二量体化システムに適した調節分子は当技術分野で知られている。ＬＢＤベースのヘテロ二量体化システムの調節分子の例には以下が含まれる：コルチコステロン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１－ヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３－ジメチル－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；デオキシコルチコステロン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３－ジメチル－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；コルチゾール（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１１，１７－ジヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３－ジメチル－２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；１１－デオキシコルチゾール（（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－ヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３－ジメチル－２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；コルチゾン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－ヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３－ジメチル－１，２，６，７，８，９，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１１－ジオン）；１８－ヒドロキシコルチコステロン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１－ヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１３－（ヒドロキシメチル）－１０－メチル－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；１α－ヒドロキシコルチコステロン（（１Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１，１１－ジヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３－ジメチル－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；アルドステロン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１－ヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０－メチル－３－オキソ－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１３－カルバルデヒド）；アンドロステンジオン（（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）－１０，１３－ジメチル－２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１７－ジオン）；４－ヒドロキシ－アンドロステンジオン（（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）－４－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１７－ジオン）；１１β－ヒドロキシアンドロステンジオン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）－１１－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１７－ジオン）；アンドロスタンジオ－ル（（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，５，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１７－ジオ－ル）；アンドロステロン（（３Ｒ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）－３－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－１，２，３，４，５，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－テトラデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－オン）；エピアンドロステロン（（３Ｓ，５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）－３－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－１，２，３，４，５，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－テトラデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－オン）；アドレノステロン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）－１０，１３－ジメチル－１，２，６，７，８，９，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１１，１７－トリオン）；デヒドロエピアンドロステロン（（３Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）－３－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－１，２，３，４，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－オン）；デヒドロエピアンドロステロンサルフェ－ト（［（３Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）－１０，１３－ジメチル－１７－オキソ－１，２，３，４，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル］ハイドロジェンサルフェ－ト）；テストステロン（（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１７－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；エピテストステロン（（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；５α－ジヒドロテストステロン（（５Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１７－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－１，２，４，５，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；５β－ジヒドロテストステロン（（５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１７－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－１，２，４，５，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；５β－ジヒドロテストステロン（（５Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１７－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－１，２，４，５，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；１１β－ヒドロキシテストステロン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１，１７－ジヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；１１－ケトテストステロン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１７－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－２，６，７，８，９，１２，１４，１５，１６，１７－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１１－ジオン）；エストロン（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）－３－ヒドロキシ－１３－メチル－７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロ－６Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－オン）；エストラジオ－ル（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１３－メチル－６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１７－ジオ－ル）；エストリオ－ル（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｒ）－１３－メチル－６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１６，１７－トリオ－ル）；プレグネノロン（１－［（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－３－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－イル］エタノン）；１７－ヒドロキシプレグネノロン（１－［（３Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－３，１７－ジヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－１，２，３，４，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－イル］エタノン）；プロゲステロン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１７－アセチル－１０，１３－ジメチル－１，２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；１７－ヒドロキシプロゲステロン（（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－アセチル－１７－ヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；Ｔ３（（２Ｓ）－２－アミノ－３－［４－（４－ヒドロキシ－３－ヨ－ドフェノキシ）－３，５－ジヨ－ドフェニル］プロパン酸）；Ｔ４（（２Ｓ）－２－アミノ－３－［４－（４－ヒドロキシ－３，５－ジヨ－ドフェノキシ）－３，５－ジヨ－ドフェニル］プロパン酸）；スピロノラクトン（Ｓ－［（７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－３，５'－ジオキソスピロ［２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７，２'－オキソラン］－７－イル］エタンチオエ－ト）；エプレレノン（ＰｕｂＣｈｅｍＣＩＤ４４３８７２）；

シプロテロンアセテ－ト（ＰｕｂＣｈｅｍＣＩＤ９８８０）；ヒドロキシフルタミド（２－ヒドロキシ－２－メチル－Ｎ－［４－ニトロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル］プロパンアミド）；エアンザルタミド（４－［３－［４－シアノ－３－（トリフルオロメチル）フェニル］－５，５－ジメチル－４－オキソ－２－スルファニリデンイミダゾリジン－１－イル］－２－フルオロ－Ｎ－メチルベンズアミド）；ＡＲＮ－５０９（４－［７－［６－シアノ－５－（トリフルオロメチル）ピリジン－３－イル］－８－オキソ－６－スルファニリデン－５，７－ジアザスピロ［３．４］オクタン－５－イル］－２－フルオロ－Ｎ－メチルベンズアミド）；３，３'－ジインドリルメタン（ＤＩＭ）（３－（１Ｈ－インドール３－イルメチル）－１Ｈ－インドール）；ベクスロステリド（（４ａＲ，１０ｂＲ）－８－クロロ－４－メチル－１，２，４ａ，５，６，１０ｂ－ヘキサヒドロベンゾ［ｆ］キノリン－３－オン）；ビカルタミド（Ｎ－［４－シアノ－３－（トリフルオロメチル）フェニル］－３－（４－フルオロフェニル）スルホニル－２－ヒドロキシ－２－メチルプロパンアミド）；Ｎ－ブチルベンゼン－スルホンアミド（ＮＢＢＳ）（Ｎ－ブチルベンゼンスルホンアミド）；デュタステリド（（１Ｓ，３ａＳ，３ｂＳ，５ａＲ，９ａＲ，９ｂＳ，１１ａＳ）－Ｎ－［２，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル］－９ａ，１１ａ－ジメチル－７－オキソ－１，２，３，３ａ，３ｂ，４，５，５ａ，６，９ｂ，１０，１１－ドデカヒドロインデノ［５，４－ｆ］キノリン－１－カルボキサミド）；エプリステリド（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１７－（ｔｅｒｔ－ブチルカルバモイル）－１０，１３－ジメチル－２，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－カルボン酸）；フィナステリド（（１Ｓ，３ａＳ，３ｂＳ，５ａＲ，９ａＲ，９ｂＳ，１１ａＳ）－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル－９ａ，１１ａ－ジメチル－７－オキソ－１，２，３，３ａ，３ｂ，４，５，５ａ，６，９ｂ，１０，１１－ドデカヒドロインデノ［５，４－ｆ］キノリン－１－カルボキサミド）；フルタミド（２－メチル－Ｎ－［４－ニトロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル］プロパンアミド）；イゾンステリド（（４ａＲ，１０ｂＲ）－８－［（４－エチル－１，３－ベンゾチアゾール２－イル）スルファニル］－４，１０ｂ－ジメチル－２，４ａ，５，６－テトラヒドロ－１Ｈ－ベンゾ［ｆ］キノリン－３－オン）；ケトコナゾール（１－［４－［４－［［（２Ｒ，４Ｓ）－２－（２，４－ジクロロフェニル）－２－（イミダゾール１－イルメチル）－１，３－ジオキソラン－４－イル］メトキシ］フェニル］ピペラジン－１－イル］エタノン）；Ｎ－ブチルベンゼン－スルホンアミド（Ｎ－ブチルベンゼンスルホンアミド）；ニルタミド（５，５－ジメチル－３－［４－ニトロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル］イミダゾリジン－２，４－ジオン）；メゲストロ－ル（（８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－アセチル－１７－ヒドロキシ－６，１０，１３－トリメチル－２，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；ツロステリド（（１Ｓ，３ａＳ，３ｂＳ，５ａＲ，９ａＲ，９ｂＳ，１１ａＳ）－６，９ａ，１１ａ－トリメチル－７－オキソ－Ｎ－プロパン－２－イル－Ｎ－（プロパン－２－イルカルバモイル）－２，３，３ａ，３ｂ，４，５，５ａ，８，９，９ｂ，１０，１１－ドデカヒドロ－１Ｈ－インデノ［５，４－ｆ］キノリン－１－カルボキサミド）；

ミフェプリストン（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－１７－ヒドロキシ－１３－メチル－１７－プロパ－１－ｙｎｙｌ－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；リロプリストン（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－１７－ヒドロキシ－１７－［（Ｚ）－３－ヒドロキシプロパ－１－エニル］－１３－メチル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；オナプリストン（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－１７－ヒドロキシ－１７－（３－ヒドロキシプロピル）－１３－メチル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；アソプリスニル（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１－［４－［（Ｅ）－ヒドロキシイミノメチル］フェニル］－１７－メトキシ－１７－（メトキシメチル）－１３－メチル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；Ｊ９１２（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１７－ヒドロキシ－１１－［４－［（Ｚ）－ヒドロキシイミノメチル］フェニル］－１７－（メトキシメチル）－１３－メチル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；ＣＤＢ－２９１４（（８Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－アセチル－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－１７－ヒドロキシ－１３－メチル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；ＪＮＪ－１２５０１３２（［（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－アセチル－１３－メチル－３－オキソ－１１－（４－ピペリジン－１－イルフェニル）－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－イル］アセテ－ト）；ＯＲＧ－３１７１０（（６Ｒ，８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－６，１３－ジメチルスピロ［１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７，２'－オキソラン］－３－オン）；ＯＲＧ－３３６２８（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１１－（４－アセチルフェニル）－１３－メチル－３'－メチリデンスピロ［１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７，２'－オキソラン］－３－オン）；ＯＲＧ－３１８０６（（７Ｓ，８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－７，１３－ジメチルスピロ［１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７，２'－オキソラン］－３－オン）；ＺＫ－１１２９９３（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１－（４－アセチルフェニル）－１７－ヒドロキシ－１３－メチル－１７－プロパ－１－イニル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；ＯＲＧ－３１３７６（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｒ，１７Ｓ）－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－１３－メチルスピロ［１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７，２'－オキソラン］－３－オン）；ＯＲＧ－３３２４５（（８Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－１３－メチル－３'－メチリデンスピロ［１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７，２'－オキソラン］－３－オン）；ＯＲＧ－３１１６７；ＯＲＧ－３１３４３；ＲＵ－２９９２；ＲＵ－１４７９；ＲＵ－２５０５６；ＲＵ－４９２９５；ＲＵ－４６５５６；ＲＵ－２６８１９；ＬＧ１１２７；ＬＧ１２０７５３（３－（２，２，４－トリメチル－１Ｈ－キノリン－６－イル）ベンゾニトリル）；ＬＧ１２０８３０（３－フルオロ－５－（２，２，４－トリメチル－１Ｈ－キノリン－６－イル）ベンゾニトリル）；ＬＧ１４４７；ＬＧ１２１０４６；ＣＧＰ－１９９８４Ａ（ナトリウム；メチル［（２Ｚ）－３－メチル－２－［（Ｚ）－［５－メチル－３－（２－メチルプロパ－２－エニル）－４－オキソ－１，３－チアゾリジン－２－イリデン］ヒドラジニリデン］－４－オキソ－１，３－チアゾリジン－５－イル］ホスフェート）；ＲＴＩ－３０２１－０１２（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－アセチル－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－１７－ヒドロキシ－１３－メチル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；ＲＴＩ－３０２１－０２２（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－アセチル－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－１７－ヒドロキシ－１３－メチル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；ＲＴＩ－３０２１－０２０；ＲＷＪ－２５３３３（（３，４－ジクロロフェニル）－（６－フェニル－４，５－ジヒドロ－３Ｈ－ピリダジン－２－イル）メタノン）；ＺＫ－１３６７９６；ＺＫ－１１４０４３（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１－（４－アセチルフェニル）－１７－ヒドロキシ－１７－［（Ｅ）－３－ヒドロキシプロパ－１－エニル］－１３－メチル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；ＺＫ－２３０２１１（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１－（４－アセチルフェニル）－１７－ヒドロキシ－１３－メチル－１７－（１，１，２，２，２－ペンタフルオロエチル）－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；ＺＫ－１３６７９８；ＺＫ－９８２２９；ＺＫ－９８７３４（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１１－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－１７－ヒドロキシ－１７－［（Ｚ）－３－ヒドロキシプロパ－１－エニル］－１３－メチル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；ＺＫ－１３７３１６；アソプリスニル（（８Ｓ，１１Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１１－［４－［（Ｅ）－ヒドロキシイミノメチル］フェニル］－１７－メトキシ－１７－（メトキシメチル）－１３－メチル－１，２，６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；

４－［１７β－メトキシ－１７α－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１β－イル］ベンズアルデヒド－１－（Ｅ）－［Ｏ－（エチルアミノ）カルボニル］オキシム；（Ｚ）－６′－（４－シアノフェニル）－９，１１α－ジヒドロ－１７β－ヒドロキシ－１７α－［４－（１－オキソ－３－メチルブトキシ）－１－ブテニル］４′Ｈ－ナフト［３′，２′，１′；１０，９，１１］エストラ－４－エン－３－オン；１１β－（４－アセチルフェニル）－１７β－ヒドロキシ－１７α－（１，１，２，２，２－ペンタ－フルオロエチル）エストラ－４，９－ジエン－３－オン；１１β－（４－アセチルフェニル）－１９，２４－ジノル－１７，２３－エポキシ－１７α－コラ－４，９，２０－トリエン－３－オン；（Ｚ）－１１β，１９－［４－（３－ピリジニル）－ｏ－フェニレン］－１７β－ヒドロキシ－１７α－［３－ヒドロキシ－１－プロペニル］－４－アンドロステン－３－オン；１１β－［４－（１－メチルエテニル）フェニル］－１７α－ヒドロキシ－１７β－β－ヒドロキシプロピル）－１３α－エストラ－４，９－ジエン－３－オン；４′，５′－Ｄｉヒドロ－１１β－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－６β－メチルスピロ［エストラ－４，－９－ジエン－１７β，２′（３′Ｈ）－フラン］－３－オン；ドロスピレノン（ＰｕｂＣｈｅｍＣＩＤ６８８７３）；

Ｔ３（（２Ｓ）－２－アミノ－３－［４－（４－ヒドロキシ－３－ヨ－ドフェノキシ）－３，５－ジヨ－ドフェニル］プロパン酸）；ＫＢ－１４１（２－［３，５－ジクロロ－４－（４－ヒドロキシ－３－プロパン－２－イルフェノキシ）フェニル］酢酸）；ソベチロ－ム（２－［４－［（４－ヒドロキシ－３－プロパン－２－イルフェニル）メチル］－３，５－ジメチルフェノキシ］酢酸）；ＧＣ－２４（２－［４－［（３－ｂｅｎｚｙｌ－４－ヒドロキシフェニル）メチル］－３，５－ジメチルフェノキシ］酢酸）；４－ＯＨ－ＰＣＢ１０６（２－クロロ－４－（２，３，４，５－テトラクロロフェニル）フェノ－ル）；エプロチロ－ム（３－［３，５－ジブロモ－４－（４－ヒドロキシ－３－プロパン－２－イルフェノキシ）アニリノ］－３－オキソプロパン酸）；ＭＢ０７８１１（ＰｕｂＣｈｅｍＣＩＤ１５９４２００５）；ＱＨ２（２－［（２Ｅ）－３，７－ジメチルオクタ－２，６－ジエニル］－５，６－ジメトキシ－３－メチルベンゼン－１，４－ジオ－ル）；ＭＢ０７３４４（［４－［（４－ヒドロキシ－３－プロパン－２－イルフェニル）メチル］－３，５－ジメチルフェノキシ］メチルホスホン酸）；タモキシフェン（２－［４－［（Ｚ）－１，２－ジフェニルブタ－１－エニル］フェノキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチルエタンアミン）；４－ＯＨ－タモキシフェン（４－［（Ｚ）－１－［４－［２－（ジメチルアミノ）エトキシ］フェニル］－２－フェニルブタ－１－エニル］フェノ－ル）；ラロキシフェン（［６－ヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシフェニル）－１－ベンゾチオフェン－３－イル］－［４－（２－ピペリジン－１－イルエトキシ）フェニル］メタノン）；ラソフォキシフェン（（５Ｒ，６Ｓ）－６－フェニル－５－［４－（２－ピロリジン－１－イルエトキシ）フェニル］－５，６，７，８－テトラヒドロナフタレン－２－オ－ル）；バゼドキシフェン（１－［［４－［２－（アゼパン－１－イル）エトキシ］フェニル］メチル］－２－（４－ヒドロキシフェニル）－３－メチルインドール５－オ－ル）；ファルソデックス（（７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１３－メチル－７－［９－（４，４，５，５，５－ペンタフルオロペンチルスルフィニル）ノニル］－６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１７－ジオ－ル）；クロミフェン（２－［４－［（Ｅ）－２－クロロ－１，２－ジフェニルエテニル］フェノキシ］－Ｎ，Ｎ－ジエチルエタンアミン）；フェマレレ（）；オルメロキシフェン（１－［２－［４－［（３Ｒ，４Ｒ）－７－メトキシ－２，２－ジメチル－３－フェニル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］フェノキシ］エチル］ピロリジン）；トレミフィエン（２－［４－［（Ｚ）－４－クロロ－１，２－ジフェニルブタ－１－エニル］フェノキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチルエタンアミン）；オスペミフェン（２－［４－［（Ｚ）－４－クロロ－１，２－ジフェニルブタ－１－エニル］フェノキシ］エタノール）；及びエチニルエストラジオ－ル（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－エチニル－１３－メチル－７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロ－６Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１７－ジオ－ル）；エストラジオ－ル（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）－１３－メチル－６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－デカヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１７－ジオ－ル）；エチニルエストラジオ－ル（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－エチニル－１３－メチル－７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロ－６Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１７－ジオ－ル）；

チアゾリジンジオン：（例えばロシグリタゾン（５－［［４－［２－［メチル（ピリジン－２－イル）アミノ］エトキシ］フェニル］メチル］－１，３－チアゾリジン－２，４－ジオン）；ピオグリタゾン（５－［［４－［２－（５－エチルピリジン－２－イル）エトキシ］フェニル］メチル］－１，３－チアゾリジン－２，４－ジオン）；ロベグリタゾン（５－［［４－［２－［［６－（４－メトキシフェノキシ）ピリミジン－４－イル］－メチルアミノ］エトキシ］フェニル］メチル］－１，３－チアゾリジン－２，４－ジオン）；トログリタゾン（５－［［４－［（６－ヒドロキシ－２，５，７，８－テトラメチル－３，４－ジヒドロクロメン－２－イル）メトキシ］フェニル］メチル］－１，３－チアゾリジン－２，４－ジオン））、ファルグリタザル（（２Ｓ）－２－（２－ベンゾイルアニリノ）－３－［４－［２－（５－メチル－２－フェニル－１，３－オキサゾール４－イル）エトキシ］フェニル］プロパン酸）；アレグリタザル（（２Ｓ）－２－メトキシ－３－［４－［２－（５－メチル－２－フェニル－１，３－オキサゾール４－イル）エトキシ］－１－ベンゾチオフェン－７－イル］プロパン酸）；及びフェノフィブリン酸（２－［４－（４－クロロベンゾイル）フェノキシ］－２－メチルプロパン酸）；ベンゾピラノキノリンＡ２７６５７５、マプラコラ－ト（（２Ｒ）－１，１，１－トリフルオロ－４－（５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－１－ベンゾフラン－７－イル）－４－メチル－２－［［（２－メチルキノリン－５－イル）アミノ］メチル］ペンタン－２－オ－ル）；ＺＫ２１６３４８（４－（２，３－ジヒドロ－１－ベンゾフラン－７－イル）－２－ヒドロキシ－４－メチル－Ｎ－（４－メチル－１－オキソ－２，３－ベンゾキサジン－６－イル）－２－（トリフルオロメチル）ペンタンアミド）；５５Ｄ１Ｅ１；デキサメタゾン（（８Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｒ）－９－フルオロ－１１，１７－ジヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３，１６－トリメチル－６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；プレドニソロン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１１，１７－ジヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３－ジメチル－７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロ－６Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；プレドニソン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－ヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３－ジメチル－６，７，８，９，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，１１－ジオン）；メチルプレドニソロン（（６Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１１，１７－ジヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－６，１０，１３－トリメチル－７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロ－６Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；フルチカゾンプロピオネ－ト（［（６Ｓ，８Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｒ）－６，９－ジフルオロ－１７－（フルオロメチルスルファニルカルボニル）－１１－ヒドロキシ－１０，１３，１６－トリメチル－３－オキソ－６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－イル］プロパノエ－ト）；ベクロメタゾン－１７－モノプロピオネ－ト（［（８Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｓ，１７Ｒ）－９－クロロ－１１－ヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３，１６－トリメチル－３－オキソ－６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－イル］プロパノエ－ト）；ベタメタゾン（（８Ｓ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｓ，１７Ｒ）－９－フルオロ－１１，１７－ジヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３，１６－トリメチル－６，７，８，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロシクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；リメキソロン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｓ）－１１－ヒドロキシ－１０，１３，１６，１７－テトラメチル－１７－プロパノイル－７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロ－６Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；パラメタゾン（（６Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｒ，１７Ｒ）－６－フルオロ－１１，１７－ジヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３，１６－トリメチル－７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－オクタヒドロ－６Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；及びヒドロコルチゾン（（８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１１，１７－ジヒドロキシ－１７－（２－ヒドロキシアセチル）－１０，１３－ジメチル－２，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６－デカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オン）；

１，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（カルシトリオ－ル）（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｚ）－５－［（２Ｅ）－２－［（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）－１－［（２Ｒ）－６－ヒドロキシ－６－メチルヘプタン－２－イル］－７ａ－メチル－２，３，３ａ，５，６，７－ヘキサヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イリデン］エチリデン］－４－メチリデンシクロヘキサン－１，３－ジオ－ル）、パリカリト－ル（（１Ｒ，３Ｒ）－５－［（２Ｅ）－２－［（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）－１－［（Ｅ，２Ｒ，５Ｓ）－６－ヒドロキシ－５，６－ジメチルヘプタ－３－エン－２－イル］－７ａ－メチル－２，３，３ａ，５，６，７－ヘキサヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イリデン］エチリデン］シクロヘキサン－１，３－ジオ－ル）、ドキセルカルシフェロール（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｚ）－５－［（２Ｅ）－２－［（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）－１－［（Ｅ，２Ｒ，５Ｒ）－５，６－ジメチルヘプタ－３－エン－２－イル］－７ａ－メチル－２，３，３ａ，５，６，７－ヘキサヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イリデン］エチリデン］－４－メチリデンシクロヘキサン－１，３－ジオ－ル）、２５－ヒドロキシビタミンＤ３（カルシフェジオ－ル）（（１Ｓ，３Ｚ）－３－［（２Ｅ）－２－［（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）－１－［（２Ｒ）－６－ヒドロキシ－６－メチルヘプタン－２－イル］－７ａ－メチル－２，３，３ａ，５，６，７－ヘキサヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イリデン］エチリデン］－４－メチリデンシクロヘキサン－１－オ－ル）、コレカルシフェロール（（１Ｓ，３Ｚ）－３－［（２Ｅ）－２－［（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）－７ａ－メチル－１－［（２Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル］－２，３，３ａ，５，６，７－ヘキサヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イリデン］エチリデン］－４－メチリデンシクロヘキサン－１－オ－ル）、エルゴカルシフェロール（（１Ｓ，３Ｚ）－３－［（２Ｅ）－２－［（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）－１－［（Ｅ，２Ｒ，５Ｒ）－５，６－ジメチルヘプタ－３－エン－２－イル］－７ａ－メチル－２，３，３ａ，５，６，７－ヘキサヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イリデン］エチリデン］－４－メチリデンシクロヘキサン－１－オ－ル）、タカルシト－ル（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｚ）－５－［（２Ｅ）－２－［（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）－１－［（２Ｒ，５Ｒ）－５－ヒドロキシ－６－メチルヘプタン－２－イル］－７ａ－メチル－２，３，３ａ，５，６，７－ヘキサヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イリデン］エチリデン］－４－メチリデンシクロヘキサン－１，３－ジオ－ル）、２２－ジヒドロエルゴカルシフェロール（（１Ｓ，３Ｚ）－３－［（２Ｅ）－２－［（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）－１－［（２Ｒ，５Ｓ）－５，６－ジメチルヘプタン－２－イル］－７ａ－メチル－２，３，３ａ，５，６，７－ヘキサヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イリデン］エチリデン］－４－メチリデンシクロヘキサン－１－オ－ル）、（６Ｚ）－タカルシオ－ル（（１Ｓ）－３－［（Ｚ）－２－［（１Ｒ，７ａＲ）－７ａ－メチル－１－［（２Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル］－１，２，３，３ａ，６，７－ヘキサヒドロインデン－４－イル］エテニル］－４－メチルシクロヘキサ－３－エン－１－オ－ル）、２－メチレン－１９－ノル－２０（Ｓ）－１α－ヒドロキシ－ビスホモプレグナカルシフェロール（（１Ｒ，３Ｒ）－５－［（２Ｅ）－２－［（１Ｒ，３ａＳ，７ａＲ）－１－［（２Ｓ）－ブタ－２－ニル］－７ａ－メチル－２，３，３ａ，５，６，７－ヘキサヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イリデン］エチリデン］－２－メチリデンシクロヘキサン－１，３－ジオ－ル）、１９－ノル－２６，２７－ジメチレン－２０（Ｓ）－２－メチレン－１アルファ，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３、２－メチレン－１α，２５－ジヒドロキシ－（１７Ｅ）－１７（２０）－デヒドロ－１９－ノル－ビタミンＤ３、２－メチレン－１９－ノル－（２４Ｒ）－１アルファ，２５－ジヒドロキシビタミンＤ２、２－メチレン－（２０Ｒ，２５Ｓ）－１９，２６－ジノル－１アルファ，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３、２－メチレン－１９－ノル－１α－ヒドロキシ－プレグナカルシフェロール、１α－ヒドロキシ－２－メチレン－１９－ノル－ホモプレグナカルシフェロール、（２０Ｒ）－１α－ヒドロキシ－２－メチレン－１９－ノル－ビスホモプレグナカルシフェロール、２－メチレン－１９－ノル－（２０Ｓ）－１α－ヒドロキシ－トリスホモプレグナカルシフェロール、２－メチレン－２３，２３－ジフルオロ－１α－ヒドロキシ－１９－ノル－ビスホモプレグナカルシフェロ－１、２－メチレン－（２０Ｓ）－２３，２３－ジフルオロ－１α－ヒドロキシ－１９－ノル－ビスホモプレグナン－カルシフェロール、（２－（３′ヒドロキシプロピル－１′，２′－イデン）－１９，２３，２４－トリノル－（２０Ｓ）－１α－ヒドロキシビタミンＤ３、２－メチレン－１８，１９－ジノル－（２０Ｓ）－１アルファ，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３など、

レチノイン酸（（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）－３，７－ジメチル－９－（２，６，６－トリメチルシクロヘキセン－１－イル）ノナ－２，４，６，８－テトラエン酸）、オールトランス－レチノイン酸（（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）－３，７－ジメチル－９－（２，６，６－トリメチルシクロヘキセン－１－イル）ノナ－２，４，６，８－テトラエン酸）、９－シス－レチノイン酸（（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ，８Ｅ）－３，７－ジメチル－９－（２，６，６－トリメチルシクロヘキセン－１－イル）ノナ－２，４，６，８－テトラエン酸）、タミバロテン（４－［（５，５，８，８－テトラメチル－６，７－ジヒドロナフタレン－２－イル）カルバモイル］安息香酸）、１３－シス－レチノイン酸（（２Ｚ，４Ｅ，６Ｅ，８Ｅ）－３，７－ジメチル－９－（２，６，６－トリメチルシクロヘキセン－１－イル）ノナ－２，４，６，８－テトラエン酸）、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ，８Ｅ）－３，７－ジメチル－９－（２，６，６－トリメチル－１－シクロヘキセンｅｙｌ）ノナ－２，４，６，－８－テトラエン酸、９－（４－メトキシ－２，３，６－トリメチル－フェニル）－３，７－ジメチル－ノナ－２，４，６，８－テトラエン酸、６－［３－（１－アダマンチル）－４－メトキシフェニル］－２－ナフトエ酸、４－［１－（３，５，５，８，８－ペンタメチル－テトラリ－２－ニル）エテニル］安息香酸、レチノ安息香酸（４－［（５，５，８，８－テトラメチル－６，７－ジヒドロナフタレン－２－イル）カルバモイル］安息香酸）、６－［２－（４，４－ジメチルチオクロマン－６－イル）エチニル］ピリジン－３－カルボン酸エチル、レチノイルｔ－ブチレ－ト、レチノイルピナコ－ル及びレチノイルコレステロ－ル、

オベチコ－ル酸（（４Ｒ）－４－［（３Ｒ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｓ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－６－エチル－３，７－ジヒドロキシ－１０，１３－ジメチル－２，３，４，５，６，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－１７－イル］ペンタン酸）、ＬＹ２５６２１７５（６－（４－（（５－シクロプロピル－３－（２，６－ジクロロフェニル）イソキサゾリル－４－イル）メトキシ）ピペリジン－１－イル）－１－メチル－１Ｈ－インドール３－カルボン酸）、及びＧＷ４０６４（３－［２－［２－クロロ－４－［［３－（２，６－ジクロロフェニル）－５－（１－メチルエチル）－４－イソキサゾリル－］メトキシ］フェニル］エテニル］安息香酸）；Ｔ０９０１３１７（Ｎ－（２，２，２－Ｔｒｉフルオロエチル）－Ｎ－［４－［２，２，２－トリフルオロ－１－ヒドロキシ－１－（トリフルオロメチル）エチル］フェニル］ベンゼンスルホンアミド）、ＧＷ３９６５（３－［３－［［［２－クロロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］（２，２－ジフェニルエチル）アミノ］プロポキシ］ベンゼン酢酸ヒドロクロリド）、及びＬＸＲ－６２３（２－［（２－クロロ－４－フルオロフェニル）メチル］－３－（４－フルオロフェニル）－７－（トリフルオロメチル）インダゾール）；ＧＮＥ－３５００（２７，１－｛４－［３－フルオロ－４－（（３Ｓ，６Ｒ）－３－メチル－１，１－ジオキソ－６－フェニル－［１，２］チアジナン－２－イル－メチル）－フェニル］－ピペラジン－１－イル｝－エタノン）；７β，２７－ジヒドロキシコレステロ－ル（（３Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－［（２Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メチルヘプタン－２－イル］－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，７－ジオ－ル）、及び７α，２７－ジヒドロキシコレステロ－ル（（３Ｓ，７Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－［（２Ｒ）－７－ヒドロキシ－６－メチルヘプタン－２－イル］－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１１，１２，１４，１５，１６，１７－ドデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３，７－ジオ－ル）；９－シスレチノイン酸（（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ，８Ｅ）－３，７－ジメチル－９－（２，６，６－トリメチルシクロヘキセン－１－イル）ノナ－２，４，６，８－テトラエン酸）、ＬＧＤ１００２６８（６－［１－（３，５，５，８，８－ペンタメチル－６，７－ジヒドロナフタレン－２－イル）シクロプロピル］ピリジン－３－カルボン酸）、ＣＤ３２５４（３－［４－ヒドロキシ－３－（５，６，７，８－テトラヒドロ－３，５，５，８，８－ペンタメチル－２－ナフタレニル）－フェニル］－２－プロペン酸）、及びＣＤ２９１５（Sorensen et al. (1997) Skin Pharmacol. 10:144）。

ヘテロ二量体化ドメインの対が鉱質コルチコイド受容体（ＭＲ）のＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子にはスピロノラクトンとエプレレノンが含まれる。スピロノラクトンは、１０～３５ｍｇ／日の範囲の用量、例えば２５ｍｇ／日で投与することができる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がアンドロゲン受容体（ＡＲ）のＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、酢酸シプロテロン、ヒドロキシフルタミド、エンザルタミド、ＡＲＮ－５０９、３，３'－ジインドリルメタン（ＤＩＭ）、ベクスロステリド、ビカルタミド、Ｎ－ブチルベンゼン－スルホンアミド（ＮＢＢＳ）、デュタステリド、エプリステリド、フィナステリド、フルタミド、イゾンステリド、ケトコナゾール、Ｎ－ブチルベンゼン－スルホンアミド、ニルタミド、メゲストロ－ル、ステロイド性抗アンドロゲン、及びツロステリドが含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がプロゲステロン受容体（ＰＲ）のＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、ミフェプリストン（ＲＵ－４８６；１１β－［４Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノフェニル］－１７β－ヒドロキシ－１７－（１－プロピニル）－エストラ－４，９－ジエン－３－オン）；リロプリストン（１１β－（４Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノフェニル）－１７β－ヒドロキシ－１７－（（Ｚ）－３－ヒドロキシプロペニル）エストラ－４，９－ジエン－３－オン）；オナプリストン（１１β－（４Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノフェニル）－１７α－ヒドロキシ－１７－（３－ヒドロキシプロピル）－１３α－エストラ－４，９－ジエン－３－オン）；アソプリスニル（ベンズアルデヒド、４－［（１１β，１７β）－１７－メトキシ－１７－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１－イル］－１－（Ｅ）－オキシム；Ｊ８６７）；Ｊ９１２（４－［１７β－ヒドロキシ－１７α－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１β－イル］ベンズアルデヒド－（１Ｅ）－オキシム）；及びＣＤＢ－２９１４（１７α－アセトキシ－１１β－（４－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノフェニル）－１９－ノルプレグナ－４，９－ジエン－３，２０－ジオン）が含まれる。他の適切な二量体化剤には、例えばＪＮＪ－１２５０１３２、（６α，１１β，１７β）－１１－（４－ジメチルアミノフェニル）－６－メチル－４'，５'－ジヒドロスピロ［エストラ－４，９－ジエン－１７，２'（３'Ｈ）－フラン］－３－オン（ＯＲＧ－３１７１０）；（１１β，１７α）－１１－（４－アセチルフェニル）－１７，２３－エポキシ－１９，２４－ジノルコラ－４，９－、２０－トリエン－３－オン（ＯＲＧ－３３６２８）；（７β，１１β，１７β）－１１－（４－ジメチルアミノフェニル－７－メチル］－４'，５'－ジヒドロスピロ［エストラ－４，９－ジエン－１７，２'（３'Ｈ）－フラン］－３－オン（ＯＲＧ－３１８０６）；ＺＫ－１１２９９３；ＯＲＧ－３１３７６；ＯＲＧ－３３２４５；ＯＲＧ－３１１６７；ＯＲＧ－３１３４３；ＲＵ－２９９２；ＲＵ－１４７９；ＲＵ－２５０５６；ＲＵ－４９２９５；ＲＵ－４６５５６；ＲＵ－２６８１９；ＬＧ１１２７；ＬＧ１２０７５３；ＬＧ１２０８３０；ＬＧ１４４７；ＬＧ１２１０４６；ＣＧＰ－１９９８４Ａ；ＲＴＩ－３０２１－０１２；ＲＴＩ－３０２１－０２２；ＲＴＩ－３０２１－０２０；ＲＷＪ－２５３３３；ＺＫ－１３６７９６；ＺＫ－１１４０４３；ＺＫ－２３０２１１；ＺＫ－１３６７９８；ＺＫ－９８２２９；ＺＫ－９８７３４；ＺＫ－１３７３１６；４－［１７β－メトキシ－１７α－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１β－イル］ベンズアルデヒド－１－（Ｅ）－オキシム；４－［１７β－メトキシ－１７α－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１β－イル］ベンズアルデヒド－１－（Ｅ）－［Ｏ－（エチルアミノ）カルボニル］オキシム；４－［１７β－メトキシ－１７α－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１β－イル］ベンズアルデヒド－１－（Ｅ）－［Ｏ－（エチルチオ）カルボニル］オキシム；（Ｚ）－６'－（４－シアノフェニル）－９，１１α－ジヒドロ－１７β－ヒドロキシ－１７α－［４－（１－オキソ－３－メチルブトキシ）－１－ブテニル］４'Ｈ－ナフト［３'，２'，１'；１０，９，１１］エストル－４－エン－３－オン；１１β－（４－アセチルフェニル）－１７β－ヒドロキシ－１７α－（１，１，２，２，２－ペンタ－フルオロエチル）エストラ－４，９－ジエン－３－オン；１１β－（４－アセチルフェニル）－１９，２４－ジノル－１７，２３－エポキシ－１７α－コラ－４，９，２０－トリエン－３－オン；（Ｚ）－１１β，１９－［４－（３－ピリジニル）－ｏ－フェニレン］－１７β－ヒドロキシ－１７α－［３－ヒドロキシ－１－プロペニル］－４－アンドロステン－３－オン；１１β－［４－（１－メチルエテニル）フェニル］－１７α－ヒドロキシ－１７β－β－ヒドロキシプロピル）－１３α－エストラ－４，９－ジエン－３－オン；４'，５'－ジヒドロ－１１β－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－６β－メチルスピロ［エストラ－４，９－ジエン－１７β，２'（３'Ｈ）－フラン］－３－オン、及びドロスピレノンが含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対が甲状腺受容体ベータ（ＴＲ－ベータ）のＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、Ｔ３（３，５，３'－トリヨード－Ｌ－チロニン）；ＫＢ－１４１（３，５－ジクロロ－４－（４－ヒドロキシ－３－イソプロピルフェノキシ）フェニル酢酸）；ソベチロ－ム（ＧＣ－１としても知られている）（３，５－ジメチル－４－（４'－ヒドロキシ－３'－イソプロピルベンジル）－フェノキシ酢酸）；ＧＣ－２４（３，５－ジメチル－４－（４'－ヒドロキシ－３'－ベンジル）ベンジルフェノキシ酢酸）；４－ＯＨ－ＰＣＢ１０６（４－ＯＨ－２'，３，３'，４'，５'－ペンタクロロビフェニル）；エプロチロ－ム；ＭＢ０７８１１（（２Ｒ，４Ｓ）－４－（３－クロロフェニル）－２－［（３，５－ジメチル－４－（４'－ヒドロキシ－３'－イソプロピルベンジル）フェノキシ）メチル］－２－オキシド－［１，３，２］－ジオキサホスホナン）；ＱＨ２；及び（３，５－ジメチル－４－（４'－ヒドロキシ－３'－イソプロピルベンジル）フェノキシ）メチルホスホン酸（ＭＢ０７３４４）が含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がエストロゲン受容体アルファ（ＥＲアルファ）のＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、タモキシフェン、４－ＯＨ－タモキシフェン、ラロキシフェン、ラソフォキシフェン、バゼトキシフェン、ファルソデックス、クロミフェン、フェマレレ、オルメロキシフェン、トレミフィエン、オスペミフェン、及びエチニルエストラジオ－ルが含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がエストロゲン受容体ベータ（ＥＲ－ベータ）のＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、エストラジオ－ル（Ｅ２；又は１７－β－エストラジオ－ル）及びエチニルエストラジオ－ルが含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＬＢＤＰＰＡＲ－ガンマ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、チアゾリジンジオン（例えばロシグリタゾン、ピオグリタゾン、ロベグリタゾン、トログリタゾン）、ファルグリタザ－ル、アレグリタザ－ル、及びフェノフィブリン酸が含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＧＲのＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子は、選択的ＧＲアゴニスト（ＳＥＧＲＡ）又は選択的ＧＲモジュレ－タ－（ＳＥＧＲＭ）であり得る。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＧＲのＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、ベンゾピラノキノリンＡ２７６５７５、マプラコラット、ＺＫ２１６３４８、５５Ｄ１Ｅ１、デキサメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、プロピオン酸フルチカゾン、ベタメタゾン－１７－モノプロピオネート、ベタメタゾン、リメキソロン、パラメタゾン、及びヒドロコルチゾンが含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＶＤＲのＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子は、１，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（カルシトリオ－ル）、パリカリト－ル、ドキセルカルシフェロール、２５－ヒドロキシビタミンＤ３（カルシフェジオ－ル）、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール、タカルシオ－ル、２２－ジヒドロエルゴカルシフェロール、（６Ｚ）－タカルシオ－ル、２－メチレン－１９－ノル－２０（Ｓ）－１α－ヒドロキシ－ビスホモプレグナカルシフェロール、１９－ノル－２６，２７－ジメチレン－２０（Ｓ）－２－メチレン－１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３、２－メチレン－１α，２５－ジヒドロキシ－（１７Ｅ）－１７（２０）－デヒドロ－１９－ノルビタミンＤ３、２－メチレン－１９－ノル－（２４Ｒ）－１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ２、２－メチレン－（２０Ｒ，２５Ｓ）－１９，２６－ジノル－１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３、２－メチレン－１９－ノル－１α－ヒドロキシ－プレグナカルシフェロール、１α－ヒドロキシ－２－メチレン－１９－ノル－ホモプレグナカルシフェロール、（２０Ｒ）－１α－ヒドロキシ－２－メチレン－１９－ノル－ビスホモプレグナカルシフェロール、２－メチレン－１９－ノル－（２０Ｓ）－１α－ヒドロキシ－トリスホモプレグナカルシフェロール、２－メチレン－２３，２３－ジフルオロ－１α－ヒドロキシ－１９－ノル－ビスホモプレグナカルシフェロ－１，２－メチレン－（２０Ｓ）－２３，２３－ジフルオロ－１α－ヒドロキシ－１９－ノル－ビスホモプレグナ－ｎ－カルシフェロール、（２－（３'ヒドロキシプロピル－１'，２'－イデン）－１９，２３，２４－トリノル－（２０Ｓ）－１α－ヒドロキシビタミンＤ３、２－メチレン－１８，１９－ジノル－（２０Ｓ）－１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３などでもよい。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＲＡＲ－ベータのＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子は、レチノイン酸、オ－ルトランスレチノイン酸、９－シス－レチノイン酸、タミバロテン、１３－シス－レチノイン酸、（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ，８Ｅ）－３，７－ジメチル－９－（２，６，６－トリメチル－１－シクロヘキセネイル）ノナ－２，４，６，８－テトラエン酸、９－（４－メトキシ－２，３，６－トリメチル－フェニル）－３，７－ジメチル－ノナ－２，４，６，８－テトラエン酸、６－［３－（１－アダマンチル）－４－メトキシフェニル］－２－ナフトエ酸、４－［１－（３，５，５，８，８－ペンタメチル－テトラリン－２－イル）エテニル］安息香酸、レチノ安息香酸、６－［２－（４，４－ジメチルチオクロマン－６－イル）エチニル］ピリジン－３－カルボン酸エチル、レチノイルｔ－ブチレ－ト、レチノイルピナコ－ル、及びレチノイルコレステロ－ルでもよい。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＦＸＲ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、オベチコ－ル酸、ＬＹ２５６２１７５（６－（４－（（５－シクロプロピル－３－（２，６－ジクロロフェニル）イソオキサゾール４）－イル）メトキシ）ピペリジン－１－イル）－１－メチル－１Ｈ－インドール３－カルボン酸）、及びＧＷ４０６４（３－［２－［２－クロロ－４－［［３－（２，６－ジクロロフェニル）－５－（１－メチルエチル）－４－イソキサゾリル－］メトキシ］フェニル］エテニル］安息香酸）が含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＬＸＲ－アルファのＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、Ｔ０９０１３１７（Ｎ－（２，２，２－トリフルオロエチル）－Ｎ－［４－［２，２，２－トリフルオロ－１－ヒドロキシ－１－（トリフルオロメチル）エチル］フェニル］ベンゼンスルホンアミド）、ＧＷ３９６５（３－［３－［［［２－クロロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］（２，２－ジフェニルエチル）アミノ］プロポキシ］ベンゼン酢酸塩酸塩）、及びＬＸＲ－６２３（２－［（２－クロロ－４－フルオロフェニル）メチル］－３－（４－フルオロフェニル）－７－（トリフルオロメチル）インダゾール）が含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＲＯＲ－ガンマのＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、ＧＮＥ－３５００（２７，１－｛４－［３－フルオロ－４－（（３Ｓ，６Ｒ）－３－メチル－１，１－ジオキソ－６－フェニル－［１，２］チアジナン－２－イル－メチル）－フェニル］－ピペラジン－１－イル｝－エタノン）が含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＲＯＲ－ガンマのＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、７β，２７－ジヒドロキシコレステロ－ル、及び７α，２７－ジヒドロキシコレステロ－ルが含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＲＸＲ－アルファのＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子には、９－シスレチノイン酸、ＬＧＤ１００２６８、ＣＤ３２５４（３－［４－ヒドロキシ－３－（５，６，７，８－テトラヒドロ－３，５，５，８，８－ペンタメチル－２－ナフタレニル）－フェニル］－２－プロペン酸）、及びＣＤ２９１５（Sorensen et al. (1997) Skin Pharmacol. 10:144）が含まれる。

ヘテロ二量体化ドメインの対がＰＸＲのＬＢＤ及び対応する共調節ペプチドを含む場合、適切な調節分子は、リファンピシン、クロトリマゾール、及びロバスタチンであり得る。

８．１．２．リポカリン折り畳み分子に基づくＣＡＲ分子の条件的ヘテロ二量体化：
他の好適な実施態様において、本発明のＣＡＲ群の少なくとも２つのＣＡＲ分子は、リポカリン折り畳み分子である１つのメンバーと、リポカリン折り畳み結合相互作用パートナー（２０１７年１２月２０日に提出されたＥＰ１７２０８９２４．５に開示されている）である第２のメンバーとを含む、ヘテロ二量体化ドメインの対によってヘテロ二量体化され得る。好適な実施態様によれば、リポカリン折り畳みベースのヘテロ二量体化システムは、
（ａ）リポカリン折り畳み分子
（ｂ）１５００Ｄａ以下の低分子量のリポカリン折り畳みリガンド、及び
（ｃ）リポカリン－フォールド結合相互作用パートナー、を含み、
ここで、リポカリン折り畳み分子は、リポカリン折り畳みリガンドに結合することができ、そして
ここで、リポカリン折り畳みリガンドに結合したリポカリン折り畳み分子は、リポカリン折り畳み結合相互作用パートナーに、リポカリン折り畳みリガンドに結合していないリポカリン折り畳み分子の親和性よりも少なくとも１０倍高い親和性で結合し、
ここで、リポカリン折り畳み結合相互作用パートナーは、リポカリン折り畳みリガンドの存在下で天然に存在するリポカリン折り畳み分子に対して＜１０μＭの親和性を有する天然に存在するタンパク質ではない。

さらに好適な実施態様によれば、リポカリン折り畳みベースのヘテロ二量体化システムは、
（ａ）リポカリン折り畳み分子
（ｂ）１５００Ｄａ以下の低分子量のリポカリン折り畳みリガンド、及び
（ｃ）リポカリン－フォールド結合相互作用パートナー、を含み、
ここで、リポカリン折り畳み分子は、リポカリン折り畳みリガンドがリポカリン折り畳み分子に結合していない場合、少なくとも第１のコンフォメーションを有し、リポカリン折り畳みリガンドがリポカリン折り畳み分子に結合している場合、少なくとも第２のコンフォメーションを有し、
ここで、第２のコンフォメーションでリポカリン折り畳みリガンドに結合したリポカリン折り畳み分子は、第１のコンフォメーションでリポカリン折り畳みリガンドに結合していないリポカリン折り畳み分子の親和性よりも少なくとも１０倍高い親和性で、リポカリン折り畳み結合相互作用パートナーに結合し、
及び、ここで、リポカリン折り畳み結合相互作用パートナーは、任意のリポカリン折り畳みリガンドの存在下で、天然に存在するリポカリン折り畳み分子に対して＜１０μＭの親和性を有する天然に存在するタンパク質ではない。

条件的ヘテロ二量体化のためのこのリポカリン折り畳み分子ベースのシステムは、一般に、リポカリン折り畳みリガンドが結合しているかどうかに応じて、リポカリン折り畳み分子のリポカリン折り畳み結合相互作用パートナーに対する親和性の実質的な違いに依存する。親和性ウィンドウ（すなわち、リポカリン折り畳みリガンドに結合しているか又は結合していないリポカリン折り畳み分子に対する、リポカリン折り畳み結合相互作用パートナーの親和性）が、生理学的条件下でヘテロ二量体化を可能にする合理的な親和性範囲で存在することが好ましい。従って、リガンド結合状態のリポカリン折り畳み分子に対するリポカリン折り畳み結合相互作用パートナーの親和性は、１０μＭ未満、好ましくは２μＭ未満、特に４００ｎＭ未満であることが好ましい。

リポカリン折り畳み結合相互作用パートナーが、リポカリン折り畳みリガンドが充填されているか又はリポカリン折り畳みリガンドが充填されていないリポカリン折り畳み分子への結合のために工学作成されているかどうかに応じて、リポカリン折り畳み分子ベースのシステムを、それぞれ条件的ヘテロ二量体化（すなわちオンスイッチング用）のために又は構成的ヘテロ二量体化のために使用することができる。リポカリン折り畳み結合相互作用パートナーは、リポカリン折り畳みリガンドの存在下ではなく非存在下でリポカリン折り畳み分子に結合するように工学作成することもできるため、このシステムは、ヘテロ二量体化を条件的に防止するためにも使用できる（すなわちオフスイッチング用）。原則として、リポカリン折り畳み分子ベースのシステムは、少なくとも２つの異なるリポカリン折り畳みリガンドを結合するように任意に工学作成することもでき、それに応じて選択されたリポカリン折り畳み結合相互作用パートナーは、２つの異なって誘導されたコンフォメーション状態を区別することができ、これが、２つの異なるリポカリン折り畳みリガンドを順次追加することによる条件的オンスイッチング及びオフスイッチングを可能にする。

本発明のヘテロ二量体化ドメインとして使用することができるリポカリン折り畳み分子は、そこに（又はその中で）リポカリン折り畳みリガンドが結合し、リポカリン折り畳み結合相互作用パートナーへのリポカリン折り畳み分子の結合を可能にするリポカリン折り畳みの構造モチーフを含む、任意のタンパク質であり得る。

リポカリン折り畳み分子は、ＳＣＯＰデータベ－ス（バージョン１．７５）でリポカリンス－パ－ファミリ－に分類される天然に存在する分子、又はその変種として定義される。しかし、限られた数のアミノ酸のみを交換することが好ましい。

好適な実施態様によれば、リポカリン折り畳み分子は、天然に存在するｉＬＢＰ（細胞内脂質結合タンパク質）、天然に存在するリポカリン又はアンチカリン、及び１～３０個のアミノ酸交換を有するこれらの分子の任意の誘導体、又はその断片と同一の分子である。他の好適な実施態様において、リポカリン折り畳み分子は、天然に存在するリポカリン又は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２５、若しくは３０個のアミノ酸交換を有するｉＬＢＰの誘導体である。

本発明の好適な実施態様によれば、リポカリン折り畳み分子は、１つ以上のアミノ酸交換、挿入、及び／又は欠失によって工学作成されて、リポカリン折り畳みリガンド結合を最適化する。好適な実施態様によれば、リポカリン折り畳み分子は、βバレル構造において少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、特に少なくとも９０％の配列同一性を有する、天然に存在するか又はそうでなければ開示された（そのアミノ酸配列によって）リポカリン折り畳み分子の誘導体であり、これにより、このβバレル構造は、好ましくは以下から選択されるアミノ酸残基の領域に構造的に対応する領域として定義される：
－ヒトＲＢＰ４のアミノ酸残基２１～３０、４１～４７、５２～５８、７１～７８、８５～８８、１０２～１０９、１１４～１２０、及び１３２～１３８（ＰＤＢエントリー１ＲＢＰのアミノ酸残基番号付けスキームによる）。これらはヒトＲＢＰ４の構造的に保存されたβ鎖を規定する；
－ヒト涙リポカリンのアミノ酸残基１４～２３、３７～４３、４８～５４、６２～６９、７６～７９、８４～９１、９６～１０２、及び１１１～１１７（ＴＬＣ；Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985によって規定されている）。これらはヒトＴＬＣの構造的に保存されたβ鎖を規定する；
－ヒトアポリポタンパク質Ｍのアミノ酸残基４４～５３、６９～７５、８１～８７、９６～１０３、１１０～１１３、１１９～１２６、１３１～１３７、及び１４２～１４８（ＡｐｏＭ；Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985によって規定されている）。これらはヒトＡｐｏＭの構造的に保存されたβ鎖を規定する；
－ヒト細胞レチノイン酸結合タンパク質ＩＩのアミノ酸残基５～１２、４１～４５、５０～５４、６１～６５、７１～７３、８１～８７、９３～９６、１０８～１１２、１１９～１２４、及び１２９～１３５（ＣＲＡＢＰＩＩ；ＰＤＢエントリー２ＦＳ６のアミノ酸残基番号付けスキームによる）。これらはヒトＣＲＡＢＰ１Ｉの構造的に保存されたβ鎖を規定する；
－ヒト脂肪酸結合タンパク質１のアミノ酸残基５～１２、３９～４３、４８～５２、５９～６３、６９～７１、７９～８５、９１～９４、９９～１０３、１０９～１１４、及び１１９～１２５（ＦＡＢＰ１；ＰＤＢエントリー２Ｆ７３のアミノ酸残基番号付けスキームによる）。これらはヒトＦＡＢＰ１の構造的に保存されたβ鎖を規定する。

好適な実施態様によれば、リポカリン折り畳み分子は、リポカリン折り畳みの少なくとも構造的に保存されたβバレル構造をカバ－する、天然に存在するリポカリン、又は少なくとも８０、好ましくは少なくとも１００、特に少なくとも１２０アミノ酸の長さを有するその誘導体の断片であるか、又は、ここでリポカリン折り畳み分子は、リポカリン折り畳みの少なくとも構造的に保存されたβバレル構造をカバ－する、少なくとも８０、好ましくは少なくとも８５、特に少なくとも９０アミノ酸の長さを有する天然に存在するｉＬＰＢ又はその誘導体の断片であり、ここで、構造的に保存されたβバレル構造は、好ましくは以下から選択されるアミノ酸残基の領域に構造的に対応するアミノ酸位置を含むか又はそれからなる：
－ヒトＲＢＰ４のアミノ酸残基２１～３０、４１～４７、５２～５８、７１～７８、８５～８８、１０２～１０９、１１４～１２０、及び１３２～１３８（ＰＤＢエントリー１ＲＢＰのアミノ酸残基番号付けスキームによる）。これらはヒトＲＢＰ４の構造的に保存されたβ鎖を規定する；
－ヒト涙リポカリンのアミノ酸残基１４～２３、３７～４３、４８～５４、６２～６９、７６～７９、８４～９１、９６～１０２、及び１１１～１１７（ＴＬＣ；Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985によって規定されている）。これらはヒトＴＬＣの構造的に保存されたβ鎖を規定する；
－ヒトアポリポタンパク質Ｍのアミノ酸残基４４～５３、６９～７５、８１～８７、９６～１０３、１１０～１１３、１１９～１２６、１３１～１３７、及び１４２～１４８（ＡｐｏＭ；Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985によって規定されている）。これらはヒトＡｐｏＭの構造的に保存されたβ鎖を規定する；
－ヒト細胞レチノイン酸結合タンパク質ＩＩのアミノ酸残基５～１２、４１～４５、５０～５４、６１～６５、７１～７３、８１～８７、９３～９６、１０８～１１２、１１９～１２４、及び１２９～１３５（ＣＲＡＢＰＩＩ；ＰＤＢエントリー２ＦＳ６のアミノ酸残基番号付けスキームによる）。これらはヒトＣＲＡＢＰ１Ｉの構造的に保存されたβ鎖を規定する；
－ヒト脂肪酸結合タンパク質１のアミノ酸残基５～１２、３９～４３、４８～５２、５９～６３、６９～７１、７９～８５、９１～９４、９９～１０３、１０９～１１４、及び１１９～１２５（ＦＡＢＰ１；ＰＤＢエントリー２Ｆ７３のアミノ酸残基番号付けスキームによる）。これらはヒトＦＡＢＰ１の構造的に保存されたβ鎖を規定する。

さらに好適な実施態様によれば、リポカリン折り畳み分子は、構造的に保存されたβバレル構造の外に、好ましくは以下から選択されるアミノ酸残基の領域に構造的に対応する、最大１５、最大３０、又は最大５０アミノ酸の欠失、及び／又は最大１５、最大３０、又は最大５０個のアミノ酸の挿入を有する、天然に存在するリポカリン又はｉＬＢＰの誘導体である：
－ヒトＲＢＰ４のアミノ酸残基１～２０、３１～４０、４８～５１、５９～７０、７９～８４、８９～１０１、１１０～１１３、１２１～１３１、及び１３９～１８３。これはＰＤＢエントリー１ＲＢＰのアミノ酸残基番号付けスキームによる、ヒトＲＢＰ４の構造的に保存されたβ鎖に隣接する領域を規定する；
－ヒトＴＬＣのアミノ酸残基１～１３、２４～３６、４４～４７、５５～６１、７０～７５、８０～８３、９２～９５、１０３～１１０、及び１１８～１５８（Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985のアミノ酸残基の番号付けスキームによる）。これらはヒトＴＬＣで構造的に保存されたβ鎖に隣接する領域を規定する；
－ヒトＡｐｏＭのアミノ酸残基１～４３、５４～６８、７６～８０、８８～９５、１０４～１０９、１１４～１１８、１２７～１３０、１３８～１４１、及び１４９～１８８（Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985のアミノ酸残基の番号付けスキームによる）。これらはヒトＡｐｏＭの構造的に保存されたβ鎖に隣接する領域を規定する；
－ヒトＣＲＡＢＰＩＩのアミノ酸残基１～４、１３～４０、４６～４９、５５～６０、６６～７０、７４～８０、８８～９２、９７～１０７、１１３～１１８、１２５～１２８、及び１３６～１３７（ＰＤＢエントリー２ＦＳ６のアミノ酸残基番号付けスキームによる）。これらはヒトＣＲＡＢＰＩＩの構造的に保存されたβ鎖に隣接する領域を規定する；
－ヒトＦＡＢＰ１のアミノ酸残基１～４、１３～３８、４４～４７、５３～５８、６４～６８、７２～７８、８６～９０、９５～９８、１０４～１０８、１１５～１１８、及び１２６～１２７（ＰＤＢエントリー２Ｆ７３のアミノ酸残基番号付けスキームによる）。これらはヒトＦＡＢＰ１の構造的に保存されたβ鎖に隣接する領域を規定する。

他のとの好適な実施態様において、リポカリン折り畳み分子は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０のアミノ酸交換を有するリポカリンス－パ－ファミリ－の天然に存在するメンバーの誘導体である。

さらに好適な実施態様によれば、本発明のヘテロ二量体化ドメインとして使用されるリポカリン折り畳み分子は、リポカリン、すなわち、＋１トポロジ－に配置された８本鎖の上下のβバレルの後に、８番目のβ鎖のＣ末端の後にαヘリックスが続くタンパク質である。

本発明の調節分子として使用することができるリポカリン折り畳みリガンドは、「小分子」、例えばポリペプチドやタンパク質、例えばリポカリン折り畳み分子と比較して「小さい」。従って、リポカリン折り畳みリガンドの分子量は、１５００Ｄａ以下、好ましくは１０００Ｄａ以下、特に７５０Ｄａ以下である。リポカリン折り畳みリガンドの好ましいＭｗ範囲は、５０～１５００Ｄａ、好ましくは７５～１５００Ｄａ、特に１５０～７５０Ｄａである。好ましくは、リポカリン折り畳みリガンドは、リポカリン折り畳み構造のバレルとル－プ領域によって形成されるリポカリン折り畳み分子の顎部に結合することができる。

リポカリン折り畳みリガンドは、リポカリン折り畳み分子に対して１ｍＭ未満、好ましくは１００μＭ未満、特に１０μＭ未満の親和性を有することが好ましい。リポカリン折り畳みリガンドとリポカリン折り畳み分子とのこの親和性は、Ｋ_ｄ（解離定数）値として定義され、自動MicroCal PEAQ-ITC機器（Malvern Instruments）を使用した等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）によって決定されることが好ましい。

リポカリン折り畳みリガンドを選択できる例は次のとおりである：

Ｎｒデータベ－スＨＭＤＢ
１ナフシリン
２ゲルベリノ－ル
３モンテルカスト
４フルラゼパム
５バルビツ－ル酸キニジン
６グリセオリンＩ
７グリセオリンＩＩ
８（－）－シンプテロカルピン
９カンゾノ－ルＷ
１０６α－ヒドロキシファセオリン
１１（１ａ，５ｂ，６ａ）－７－プロトイルデン－１，５，６，１４－テトロ－ル１４－（２，４－ジヒドロキシ－６－メチル安息香酸）
１２４'－Ｏ－メチルカンゾノ－ルＷ
１３シクロキエビトン
１４リコフラノン
１５アルミラチン
１６２－（４－メチル－３－ペンテニル）アントラキノン
１７ソラフェニブベータ－Ｄ－グルクロニド
１８ヘテロフィリン
１９２ '－Ｏ－メチルファセオリンイソフラバン
２０チアプリド
２１グルテンエキソルフィンＣ
２２ムルベロフランＭ
２３ダルキサントンＧ
２４スクラレオ－ル
２５コルプドクスａ
２６カンゾノ－ルＦ
２７マンゴスティノン
２８ガンカオニンＸ
２９ルブラフラボンＤ
３０シクロキエビトン水和物
３１グリセオリジンＩＩ
３２シクランデレイト
３３ダルキサントンＥ
３４モルシン
３５（Ｅ）－２'，４，４'－トリヒドロキシ－３－プレニルカルコン
３６ダルキサントンＨ
３７ジュデオール
３８アルトニンＥ
３９カンゾノ－ルＴ
４０フラグランソールＡ
４１ダルキサントンＦ
４２ムルベロフランＴ
４３ガルシマンゴソンＡ
４４アルトニンＢ
４５アステルトキシン

データベ－スＫＥＧＧ
４６オキシフェドリン
４７プロフルトリン
４８モンフルオロスリン
４９キシロイルスルファミン
５０塩酸セトチアミン水和物
５１塩酸ジセチアミン水和物
５２ジセタミン
５３オキソラミン
５４オクサラミン
５５メシル酸クリスナト－ル
５６イオフルベンズアミドＩ
５７セリチニブ
５８ジカディア
５９イミプロトリン
６０トリクラベンダゾール
６１ファシネックス
６２ブリバニブアラニネ－ト
６３トランスフルトリン
６４エノリカムナトリウム
６５エノリカムナトリウム一水和物
６６ジブカイン
６７シンコカイン
６８ヌペルカイン
６９トラメチニブ

データベ－スＷＤＩ
７０フルクロキサシリン
７１Ｓ－ファルネシルチオサリチル酸
７２２－フルオロトロパプリド
７３ブタンピシリン
７４硫酸ジクロキサシリン
７５フロキサシリン
７６イブシリン
７７プラゾシリン
７８サレタミド
７９テトラクロルサリチルアニリド
８０カルベニシリン
８１ジクロメチド
８２メチル－スルホメツロン
８３トリクロロサリチルアニリド
８４クロメトシリン
８５シストダイチン－Ｆ
８６データノサル
８７ディアバロ－ネ
８８ジクロフォプ
８９エピフェネチシリン
９０フタリル－メデイオール
９１塩酸サレタミド
９２塩酸チアプリド
９３トランキュリン－Ａ
９４デオキシペンタレニルグルクローン
９５ラフルニムス
９６メラゾラム
９７ディブサド－ル
９８フェネチシリンカーリウム
９９プラノサル
１００ダレフォルミス
１０１ジフェニシリン
１０２塩酸フェノテロ－ル
１０３巨酸
１０４ハロリトラリン－Ｂ
１０５イソプロピシリン
１０６塩酸プログアニル
１０７ピラノクントン－Ｂ
１０８ツベロシン
１０９ゾプフィエラミド－Ｂ
１１０クロキサシリンナトリウム
１１１塩酸レチミド
１１２バイゲン－Ｂ
１１３ビドウィロン－Ｂ
１１４カルベニシリン二ナトリウム
１１５ヒドロキシプロカイン
１１６オクラトキシン－Ａ
１１７テロックス
１１８マーカーランガフラバノン－Ｂ
１１９メノキシマイシン－Ｂ
１２０ペニシリン－Ｓ
１２１ソラリジン
１２２ルビジノン－Ｃ１
１２３セコシュードプテロシン－Ｅ
１２４アサジサルフィド
１２５バラングカドイック酸－Ａ
１２６ベフェドン
１２７メレドナル－Ｂ
１２８ネラミノ－ル
１２９フォモプソリド－Ａ
１３０堅牢酸
１３１ゾプフィエラミド－Ａ
１３２シストダイチン－Ｂ
１３３ジクロキサシリン
１３４フルオロプロプラノロ－ル
１３５イリオシコリン－Ｂ
１３６インディカニン－Ｂ
１３７ジャカリュ－ビン
１３８コッタミド－Ｃ
１３９メキソラミン
１４０ミカペロキシド－Ｈ
１４１オトギリン
１４２塩酸オキソラミン
１４３オキソプロパリン－Ａ
１４４プルバラノ－ル－Ａ
１４５ルビギノン－Ｃ２
１４６テラクリルシコニン
１４７クロジナフォップ－プロパルギル－エステル
１４８マザティコル
１４９セトキシジム
１５０スルファグアノ－ル
１５１バラペリドン
１５２フルクロキサシリンナトリウム
１５３ジオディアモリド－ＴＡ
１５４ルカントン－スルホキシド
１５５メレオライド－Ｄ
１５６塩酸ナドキソロ－ル
１５７ベクロブリック酸グルクロニド
１５８クロキサシリン
１５９ハイパ－ギノン－Ｂ
１６０オリゴスポロール－Ａ
１６１塩酸プロポキシカイン
１６２ロニフィブレート
１６３ス－ダンブル－ＧＮ
１６４トリコデルマミド－Ｂ
１６５ボトリラミド－Ａ
１６６カルフェシリン
１６７クレソディム
１６８デュタドルピン
１６９エピコクリオキノン－Ｂ－１４
１７０フルラゼパム
１７１ヒドロキシフルクロキサシリン
１７２リナカンチン－Ｃ
１７３テフルベンズロン
１７４ゼニサレ－ト
１７５アンチマイシン－Ａ８Ａ
１７６アルトインドネシアニン－Ｕ
１７７ブロンコカイン
１７８エノリカム
１７９イパジリド
１８０モ－ダントブラウン－１
１８１プロプラノロ－ルフェノバルビタ－ル
１８２プギイニン－Ａ
１８３アンフィビン－Ｈ
１８４アルミラル酸
１８５カリンダシリン
１８６クロロビオケ－ト
１８７クロロプログアニル
１８８シンリンドロール－Ｂ
１８９エクリプタルビン
１９０ガルシゲリン－Ａ
１９１Ｏ－デメチルクロロトリシン
１９２サンゲノン－Ｃ
１９３テトラプテロ－ル－Ｇ
１９４クロルスルフロン
１９５デキサメタゾンジエチルアミノアセテ－ト
１９６ジエチキシム
１９７ピリドベリシン
１９８スベエンダゾール
１９９チオカイン
２００トラペジフォリキサントン
２０１トリクラザン
２０２３'，４'ジクロロベンザミル
２０３カエトビリジン－Ｃ
２０４シクログレガチン
２０５フルラゼパム一塩酸塩
２０６フシジラクトン－Ｂ
２０７グリセオケリンメチルエステル
２０８イソブチルシコニン
２０９ミシニケート
２１０アジュダゾールＢ
２１１シストジチン－Ｅ
２１２デメチルプレカンソン－Ａ
２１３デストルキシン－Ａ
２１４ジフェニド－ルエンボネ－ト
２１５ディスコキオリド－Ｂ
２１６イルマノリド－２
２１７ラクトキノマイシン
２１８ネオボルニルバル
２１９サロスラレン－Ｄ
２２０アビスシノン－Ｖ
２２１アキチローム
２２２クロルフルアズロン
２２３コンドリリジエン－１８，２０
２２４ユーグロバル－Ｇ２
２２５塩酸イダルビシン
２２６ムチシコウマラノン－Ａ
２２７３－Ｏ－メチルカロポカルピン
２２８塩酸アロクラミド
２２９アノプテリン
２３０ジオキサチオン
２３１ユーグロバル－ＩＩＣ
２３２イリシコリン－Ｃ
２３３ミシノリド－ＩＩ
２３４スイリン
２３５トコトリエノ－ル－ガンマ
２３６インドミシノン－ベータ
２３７イソチオルバミン
２３８メベベリン
２３９ムチシコウマラノン－Ｄ
２４０ニンフェオール－Ｃ
２４１プルソカイン
２４２ジメト－２０－８４
２４３２，４－Ｄ－ブトキシプロピル
２４４アビシノン－ＩＶ
２４５バイゲン－Ａ
２４６クリソクラム酸
２４７エポロン－Ｂ
２４８エトキシカイン
２４９フルオレナミル
２５０メフェナム酸グアヤコ－ル
２５１マキシマ－イソフラボン－Ｃ
２５２サルコジクチイン－Ｂ
２５３トリクラベンダゾール
２５４アキヨフラン
２５５アステリキノン
２５６ジエチルグリコレ－ト－トリヒドラジド
２５７マロトフィリペンス－Ｄ
２５８ナフトキサ－ト
２５９パチジクチオール－Ａ－エポキシド
２６０ラトジャドン
２６１塩酸サルベリン
２６２４－メナヒドロキノン
２６３ボトリラミド－Ｃ
２６４エルサミシン
２６５フェンフルトリン
２６６ムチシフェノン－Ａ
２６７サンゲノン－Ａ
２６８シュヴァインフルチン－Ａ
２６９バニリジロ－ル
２７０４－Ｏ－メチルメレオリド
２７１アセチルビスミオン－Ｆ
２７２塩酸アルフェンタニル
２７３アスペルテロニン－Ａ
２７４ベータ－ヒドロキシイソバレリルシコニン
２７５カルビソカイン
２７６塩酸クロルログアニル
２７７クリプトフィシン－５２
２７８ジデメチルトコトリエノ－ル
２７９フルオソル－ＤＡ
２８０ピリドキシフェン
２８１塩酸ティアゼシム
２８２ブトクタミド
２８３デオキシシコニン
２８４ガンビエリン酸－Ａ
２８５リコフラノン
２８６プレドニリデン－ジエチルアミノアセテ－ト
２８７シュ－ドプテロシン－Ｇ
２８８トリケンディオ－ル
２８９ゾアパタノ－ル
２９０エルゴキニン－Ｃ
２９１塩酸ペンタモキサン
２９２スキャンデニン
２９３アクチノピロン－Ｃ
２９４アミトン
２９５クラトキシアルボレノン－Ｃ
２９６シモポール
２９７ドキシサイクリン－ヒクレート
２９８フラビデュロ－ル－Ｃ
２９９フラン－１２
３００ミリアポロン－３
３０１オリノシノリド
３０２トナベルサット
３０３ビスミオン－Ｂ
３０４アミケリン
３０５塩酸ブタモキサン
３０６クロロビオシン
３０７シクロコムニン
３０８フェナザフロール
３０９ビスミオン－Ｄ
３１０３－トリクロロレメタホス
３１１アミノプロピロンフェニルブタゾン
３１２ジオクレノール
３１３グリフォリン
３１４ハイパ－ジョビノ－ル－Ａ
３１５タモラリジン
３１６トメントール
３１７トランス－デルタ－トコトリエノール酸
３１８塩酸ジアセトロール
３１９デュトマイシン
３２０リグロブストシド－Ｏ
３２１レスパイロール－Ｂ
３２２エレクトキオン－Ａ
３２３サロトラレン－Ａ
３２４シタマキン
３２５トリコポリン－ＩＩ
３２６３－ヒドロキシトルファゼパム
３２７ジメトプラミド
３２８フェノテロ－ル臭化水素酸塩
３２９フェンカプトン
３３０クラトキシアルボレノン－Ｂ
３３１塩酸エトモキサン
３３２イソセントラテリン
３３３カリマンタシン－Ａ
３３４ヒスパグラブリジン－Ａ
３３５ランカシクリノ－ル
３３６マクルラキサントン
３３７塩酸ピバンピシリン
３３８プルラフラビン－Ａ
３３９シグモイディン－Ｉ
３４０フェナラミド
３４１ヒドロキシクラシノマイシン－Ｍ，２
３４２ソフォラディン
３４３アスコクロリン
３４４ベータ－ヒドロキシサンシュ－ル
３４５ビストラミド－Ｋ
３４６ホウ酸クロルテトラサイクリン
３４７デヒドロアスコクロリン－８＋，９＋
３４８塩化ジメチアリウム
３４９マーカーランギン
３５０マルセロマイシン
３５１ベンゾイルゴミシン－Ｈ
３５２塩酸クリンダマイシン
３５３ヒドロキシアスコクロリン－８＋
３５４ネオカルジリン－Ａ
３５５カエトビリジン－Ｂ
３５６クロルテトラサイクリン重硫酸塩
３５７ナピラジオマイシン－Ｃ１
３５８サロアスピジン－Ｂ
３５９サラシン
３６０エレクトン－Ｂ
３６１ホモハルジアン酸
３６２アステリキノン－Ｂ１
３６３データミド
３６４ルブラキサントン
３６５ドラスタチン－１９
３６６エデトール
３６７ファセオリジン
３６８ゲドカルニル
３６９マヌマイシン－Ｂ
３７０サンタロ－ル－ベータ－サリチル酸塩
３７１コワニン
３７２インジブリン
３７３コワノ－ル
３７４カラタビシン
３７５ピクロキシジン
３７６プロキサゾール
３７７ストロビルリン－Ｅ
３７８エレクトキノン－Ｂ
３７９スリカイニド
３８０ジエチルアミノメチルルチン
３８１トロペシン
３８２塩酸ピクロキシジン
３８３ＨＥＸ－１
３８４デクロバニロビオシン

データベ－スＭＤＤＲ
３８５ルビジノンＣ２
３８６フロブフェン
３８７テトロノチオジン
３８８ラフルニムス
３８９マイカペロキシドＡ
３９０塩酸フルラゼパム
３９１ルビジノンＣ１
３９２メシル酸クリスナト－ル
３９３ドラスタチンＤ
３９４エポラクタエン
３９５レキシパファント

データベ－スＣＨＥＭＢＬ
３９６カルベニシリン
３９７ジクロフォップ
３９８エピフェニチシリン
３９９フロブフェン
４００巨酸
４０１フェネチシリンカーリウム
４０２ジフェニシリン

データベ－スＰｕｂｃｈｅｍ
４０３アコチアミド
４０４アコジボローレ
４０５アクマピモッド
４０６アパルタミド
４０７ＡＳＰ３０２６
４０８ＡＺＤ１４８０
４０９ＢＩＩＢ０２１
４１０ブランプラム
４１１ブレキナ－ル
４１２クロルプログアニル
４１３エムリカサン
４１４エナシデニブ
４１５エノリカム
４１６フルラゼパム
４１７ＩＬＸ２９５５０１
４１８インジブリン
４１９メトクロプラミド
４２０メバスタチン
４２１ＭＫ０６８６
４２２ナバリキシン
４２３ネファゾドン
４２４パントプラゾール
４２５パビネタント
４２６ＳＣＹＸ－７１５８
４２７シカニン
４２８スルホグアノ－ル
４２９スニチニブ
４３０スボレキサント
４３１チアプリド
４３２トナベルサット
４３３ウリモレリン
４３４キシパムミド
４３５ＭＧＧＢＹＭＤＡＰＣＣＫＣＴ－ＵＨＦＦＦＡＯＹＳＡ－Ｎ
４３６ＶＮＢＲＧＳＸＶＦＢＹＱＮＮ－ＵＨＦＦＦＡＯＹＳＡ－Ｎ
４３７ＹＵＨＮＸＵＡＡＴＡＭＶＫＤ－ＰＺＪＷＰＰＢＱＳＡ－Ｎ

８．１．３．条件的ヘテロ二量体化のためのさらなるシステム：
本発明によれば、例えばＣＡＲ群の２つのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化のためのヘテロ二量体化ドメインの対は、以下からも選択され得る。
ａ）ＦＫＢＰ及びＦＫＢＰ－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＢ、変異Ｔ８２Ｌ）、
ｂ）ＧＡＩ及びＧＩＤ１、
ｃ）ＦＫＢＰ及びカルシニュ－リン触媒性サブユニットＡ（ＣｎＡ）、
ｄ）ＦＫＢＰ及びシクロフィリン、
ｅ）ＰＹＬ及びＡＢＩ。

これらのヘテロ二量体化ドメインの配列、並びにこれらのヘテロ二量体化ドメインの二量体化に適した調節分子の配列は、当技術分野で公知であり（Rutkowska et al., Angew Chem Int Ed Engl. 2012;51(33):8166）、例えば国際公開第２０１４１２７２６１号に開示されている。

ＧＡＩ、ＧＩＤ１、ＦＫＢＰ、ＣｎＡ、シクロフィリン、ＰＹＬ、及びＡＢＩから選択されるヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーは、約５０アミノ酸～約３００アミノ酸以上の長さを有することができ、例えば、ヘテロ二量体化ドメインの対のメンバーは、約５０ａａ～約１００ａａ、約１００ａａ～約１５０ａａ、約１５０ａａ～約２００ａａ、約２００ａａ～約２５０ａａ、約２５０ａａ～約３００ａａ、又は３００ａａ以上の長さを有することができる。

例えば、好ましいヘテロ二量体化ドメインは、ＦＫＢＰに由来することができ、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ６２９４２－１と少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

別の例として、ヘテロ二量体化ドメインは、カルシニュ－リン触媒性サブユニットＡ（ＰＰＰ３ＣＡ；ＣＡＬＮ；ＣＡＬＮＡ；ＣＡＬＮＡ１；ＣＣＮ１；ＣＮＡ１；ＰＰＰ２Ｂ；ＣＡＭ－ＰＲＰ触媒性サブユニット；カルシニュ－リンＡアルファ；カルモジュリン依存性カルシニュ－リンＡサブユニットアルファアイソフォーム；タンパク質ホスファタ－ゼ２Ｂ、触媒性サブユニット、アルファアイソフォームなどとしても知られている）に由来することができ、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ０８２０９－１アミノ酸（ａａ）５６～３４７（ＰＰ２Ａｃドメイン）と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

別の例として、ヘテロ二量体化ドメインは、シクロフィリン（シクロフィリンＡ、ＰＰＩＡ、ＣＹＰＡ、ＣＹＰＨ、ＰＰＩア－ゼＡなどとしても知られている）に由来することができ、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ６２９３７－１と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

別の例として、ヘテロ二量体化ドメインは、ＭＴＯＲ（ＦＫＢＰ－ラパマイシン関連タンパク質、ＦＫ５０６結合タンパク質１２－ラパマイシン関連タンパク質１；ＦＫ５０６結合タンパク質１２－ラパマイシン関連タンパク質２；ＦＫ５０６結合タンパク質１２－ラパマイシン複合体関連タンパク質１；ＦＲＡＰ；ＦＲＡＰ１；ＦＲＡＰ２；ＲＡＦＴ１；及びＲＡＰＴ１としても知られている）に由来することができ、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＰ４２３４５－１ａａ２０２１～２１１３（「Ｆｒｂ」としても知られている：Ｆｋｂｐ－ラパマイシン結合ドメイン）と、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

別の例として、ヘテロ二量体化ドメインは、ＰＹＬタンパク質（アブシジン酸受容体及びＲＣＡＲとしても知られている）に由来することができ、以下のアミノ酸配列（ＰＹＬ１０（ＵｎｉｐｒｏｔＱ８Ｈ１Ｒ０－１）；ＰＹＬ１１（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＦＪ５０）；ＰＹＬ１２（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＦＪ４９－１）；ＰＹＬ１３（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＳＮ５１－１）；ＰＹＬ１（ＵｎｉｐｒｏｔＱ８ＶＺＳ８－１）；ＰＹＬ２（ＵｎｉｐｒｏｔＯ８０９９２－１）；ＰＹＬ３（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＳＳＭ７－１）；ＰＹＬ４（ＵｎｉｐｒｏｔＯ８０９２０－１）；ＰＹＬ５（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＦＬＢ１－１）；ＰＹＬ６（ＵｎｉｐｒｏｔＱ８Ｓ８Ｅ３－１）；ＰＹＬ７（ＵｎｉｐｒｏｔＱ１ＥＣＦ１－１）；ＰＹＬ８（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＦＧＭ１－１）；ＰＹＬ９（ＵｎｉｐｒｏｔＱ８４ＭＣ７－１）；ＰＹＲ１（ＵｎｉｐｒｏｔＯ４９６８６－１））のいずれかと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

別の例として、ヘテロ二量体化ドメインは、ＡＢＩタンパク質（アブシジン酸非感受性としても知られている）に由来することができ、及びシロイヌナズナ（Arabidopsis thaliana）のタンパク質ＡＢＩ１（アブシジン酸非感受性１、プロテインホスファタ－ゼ２Ｃ５６、ＡｔＰＰ２Ｃ５６、Ｐ２Ｃ５６、及びＰＰ２ＣＡＢＩ１としても知られている）及び／又はＡＢＩ２（Ｐ２Ｃ７７、プロテインホスファタ－ゼ２Ｃ７７、ＡｔＰＰ２Ｃ７７、アブシジン酸非感受性２、プロテインホスファタ－ゼ２ＣＡＢＩ２、及びＰＰ２ＣＡＢＩ２としても知られている）に由来することができる。例えば、適切なヘテロ二量体化ドメインは、以下のアミノ酸配列ＡＢＩ１（ＵｎｉｐｒｏｔＰ４９５９７－１）；ＡＢＩ２（ＵｎｉｐｒｏｔＯ０４７１９－１）のいずれかの、約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸（ａａ）、約１１０ａａ～約１１５ａａ、約１１５ａａ～約１２０ａａ、約１２０ａａ～１３０ａａ、約１３０ａａ～約１４０ａａ、約１４０ａａ～約１５０ａａ、約１５０ａａ～約１６０ａａ、約１６０ａａ～約１７０ａａ、約１７０ａａ～約１８０ａａ、約の１８０ａａ～約１９０ａａ、又は約１９０ａａ～約２００ａａの連続ストレッチと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

別の例として、ヘテロ二量体化ドメインは、ＧＡＩシロイヌナズナタンパク質（ジベレリン酸非感受性、及びＤＥＬＬＡタンパク質ＧＡＩとしても知られている）に由来することができ、アミノ酸配列ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＬＱＴ８－１の、約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸（ａａ）、約１１０ａａ～約１１５ａａ、約１１５ａａ～約１２０ａａ、約１２０ａａ～１３０ａａ、約１３０ａａ～約１４０ａａ、約１４０ａａ～約１５０ａａ、約１５０ａａ～約１６０ａａ、約１６０ａａ～約１７０ａａ、約１７０ａａ～約１８０ａａ、約の１８０ａａ～約１９０ａａ、又は約１９０ａａ～約２００ａａの連続ストレッチと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

別の例として、ヘテロ二量体化ドメインは、ＧＩＤ１シロイヌナズナタンパク質（ギベレリン受容体ＧＩＤ１としても知られている）に由来することができ、以下のアミノ酸配列（ＧＩＤ１Ａ（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＭＡＡ７－１）；ＧＩＤ１Ｂ（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９ＬＹＣ１－１）；ＧＩＤ１Ｃ（ＵｎｉｐｒｏｔＱ９４０Ｇ６－１））のいずれかの、約１００アミノ酸～約１１０アミノ酸（ａａ）、約１１０ａａ～約１１５ａａ、約１１５ａａ～約１２０ａａ、約１２０ａａ～１３０ａａ、約１３０ａａ～約１４０ａａ、約１４０ａａ～約１５０ａａ、約１５０ａａ～約１６０ａａ、約１６０ａａ～約１７０ａａ、約１７０ａａ～約１８０ａａ、約の１８０ａａ～約１９０ａａ、又は約１９０ａａ～約２００ａａの連続ストレッチと、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。

８．１．３で説明されているヘテロ二量体化ドメインのヘテロ二量体化は、異なる調節分子（ヘテロ二量体化ドメインの対に続く括弧内に示されている）：
ｂ）ＦＫＢＰ及びＣｎＡ（ラパマイシン）；
ｃ）ＦＫＢＰ及びシクロフィリン（ラパマイシン）；
ｄ）ＦＫＢＰ及びＦＲＧ（ラパマイシン）；
ｈ）ＰＹＬ及びＡＢＩ（アブシジン酸）；
ｊ）ＧＡＩ及びＧＩＤ１（ジベレリン又はジベレリン類似体ＧＡ－３Ｍ）、によって達成できる。

上記のように、ラパマイシン（ＰｕｂＣｈｅｍＣＩＤ５２８４６１６）は調節分子として機能する。あるいは、ラパマイシン誘導体又は類似体を使用することができる。例えば、国際公開第９６／４１８６５号；国際公開第９９／３６５５３号；国際公開第０１／１４３８７号；及びYe et al (1999) Science 283:88-91を参照されたい。例えば、ラパマイシンに構造的に関連する類似体、同族体、誘導体、及び他の化合物（「ラパログ」）には、特にラパマイシンに対して以下の修飾のうちの１つ以上を有するラパマイシンの変種が含まれる：Ｃ７、Ｃ４２、及び／又はＣ２９でのメトキシの脱メチル化、脱離、又は置換。；ＣＩ３、Ｃ４３、及び／又はＣ２８でのヒドロキシの脱離、誘導体化、又は置換；Ｃ１４、Ｃ２４、及び／又はＣ３０でのケトンの還元、脱離、又は誘導体化；６員のピペコリン酸環を５員のプロリル環で置換；及び、シクロヘキシル環上の代替置換、又は置換シクロペンチル環によるシクロヘキシル環の置換。追加情報は、例えば、米国特許第５，５２５，６１０号；５，３１０，９０３号；５，３６２，７１８号；及び５，５２７，９０７号に提示されている。Ｃ－２８ヒドロキシル基の選択的エピマ－化が報告されている；例えば、国際公開第０１／１４３８７号を参照されたい。ラパマイシンの代替として使用するのに適した追加の合成調節分子には、米国特許公開第２０１２／０１３００７６号に記載されているもの、例えば２８－エピラパマイシン（ＰｕｂＣｈｅｍＣＩＤ１３１６６８１２３）が含まれる。

ラパログとしても適切なのは、次の式の化合物である。

（例えば米国特許出願公開第７０６７５２６Ｂ１号に開示されている）、式中、ｎは１又は２であり；Ｒ^２８及びＲ^４３は、独立してＨ、又は置換若しくは非置換の脂肪族若しくはアシル部分であり；Ｒ^７ａとＲ^７ｂの１つはＨで、もう他の１つはハロ、Ｒ^Ａ、ＯＲ^Ａ、ＳＲ^Ａ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ^Ａ、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ＡＲ^Ｂ、－ＮＲ^ＡＲ^Ｂ、－ＮＲ^ＢＣ（ＯＲ）Ｒ^Ａ、ＮＲ^ＢＣ（Ｏ）ＯＲ^Ａ、－ＮＲ^ＢＳＯ_２Ｒ^Ａ、又はＮＲ^ＢＳＯ_２ＮＲ^ＡＲ^Ｂ'であり；又は、Ｒ^７ａとＲ^７ｂは一緒にテトラエン部分のＨであり：

式中、Ｒ^Ａは、Ｈ又は置換若しくは非置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、又はヘテロアリール部分であり、Ｒ^Ｂ及びＲ^Ｂ'は、独立してＨ、ＯＨ、又は置換若しくは非置換脂肪族、ヘテロ脂肪族、アリール、又はヘテロアリール部分である。

８．１．４．分泌された可溶性因子による細胞外二量体化：
本発明のＣＡＲ群の少なくとも２つのＣＡＲ分子の非共有結合性複合体化はまた、分泌された可溶性因子、例えば腫瘍間質に蓄積するタンパク質によって誘導することができ、それによりしばしば、これらのタンパク質は、それ自体がホモ又はヘテロ二量体化することができる。この場合、これらの可溶性因子は本発明の調節分子として機能する。次に、二量体化ドメインは、例えば、可溶性因子が結合できる天然の受容体（又はそれに由来する短いペプチド；例えば、Young et al., J Biol Chem. 2004;279(46):47633-42）のドメイン、又は選択された可溶性因子に結合するように工学作成された任意の抗原結合ポリペプチド（第１章「抗原結合部分」ですでに説明したように）（例えば、Dotor et al., Cytokine. 2007;39(2):106-15); Lobner et al., MAbs. 2017;9(7):1088-1104) (実施例６のＣＡＲ群の複合体化に使用されるＶＥＧＦ結合ドメイン）であり得る。

９．標的抗原：
本発明の好適な実施態様において、ＣＡＲ群の各抗原結合部分、及び前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの各抗原結合部分は、細胞上に存在する標的抗原、好ましくは細胞の、固体表面上の、又は脂質２重層上の標的抗原に結合する。

本発明によれば、ＣＡＲ群の抗原結合部分によって、あるいは前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの抗原結合部分によって特異的に認識される特定の標的抗原は、天然に存在する細胞表面抗原に結合した天然に存在する細胞表面抗原、又はポリペプチド、炭水化物、又は脂質でもよい。

ＣＡＲ群の抗原結合部分、及び前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの抗原結合部分が結合できる抗原の例には、例えば以下が含まれる：ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４２ｃ、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４７、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８２、ＣＤ８５Ａ、ＣＤ８５Ｂ、ＣＤ８５Ｄ、ＣＤ８５Ｈ、ＣＤ８５Ｋ、ＣＤ９６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１１２、ＣＤ１１５、ＣＤ１１７、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１４６、ＣＤ１４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１８５、ＣＤ２００、ＣＤ２０４、ＣＤ２２１、ＣＤ２７１、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ３０１、ＣＤ３１２、ＣＤ３５３、ＣＤ３６２、ＢＣＭＡ、ＣＤ１６Ｖ、ＣＬＬ－１、Ｉｇカッパ、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＣＫＬＦ、ＣＬＥＣ２Ｄ、ＥＭＣ１０、ＥｐｈＡ２、ＦＲ－ａ、ＦＬＴ３ＬＧ、ＦＬＴ３、ルイス－Ｙ、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＣＡＭ５、ＩＧＨＡ１／ＩｇＡ１、ＩＬ－１ＲＡＰ、ＩＬ－１７ＲＥ、ＩＬ－２７ＲＡ、ＭＩＬＲ１、ＭＲ１、ＰＳＣＡ、ＰＴＣＲＡ、ＰＯＤＸＬ２、ＰＴＰＲＣＡＰ、ＵＬＢＰ２、ＡＪＡＰ１、ＡＳＧＲ１，ＣＡＤＭ１、ＣＡＤＭ４、ＣＤＨ１５、ＣＤＨ２３、ＣＤＨＲ５、ＣＥＬＳＲ３、ＣＳＰＧ４、ＦＡＴ４、ＧＪＡ３、ＧＪＢ２、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ＩＧＳＦ９、ＬＲＦＮ４、ＬＲＲＮ６Ａ／ＬＩＮＧＯ１、ＬＲＲＣ１５、ＬＲＲＣ８Ｅ、ＬＲＩＧ１、ＬＧＲ４、ＬＹＰＤ１、ＭＡＲＶＥＬＤ２、ＭＥＧＦ１０、ＭＰＺＬＩ１、ＭＴＤＨ、ＰＡＮＸ３、ＰＣＤＨＢ６、ＰＣＤＨＢ１０、ＰＣＤＨＢ１２、ＰＣＤＨＢ１３、ＰＣＤＨＢ１８、ＰＣＤＨＧＡ３、ＰＥＰ、ＳＧＣＢ、ベザチン、ＤＡＧＬＢ、ＳＹＴ１１、ＷＦＤＣ１０Ａ、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、未分化リンパ腫キナ－ゼ、カドヘリン２４、ＤＬＫ１、ＧＦＲＡ２、ＧＦＲＡ３、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＦＮＢ１、ＥＰＯＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ４、ＧＡＬＲ２、ＧＬＧ１、ＧＬＰ１Ｒ、ＨＢＥＧＦ、ＩＧＦ２Ｒ、ＵＮＣ５Ｃ、ＶＡＳＮ、ＤＬＬ３、ＦＺＤ１０、ＫＲＥＭＥＮ２、ＴＭＥＭ１６９、ＴＭＥＭ１９８、ＮＲＧ１、ＴＭＥＦＦ１、ＡＤＲＡ２Ｃ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＢ４、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＧ、ＤＲＤ４、ＧＡＢＲＢ３、ＧＲＩＮ３Ａ、ＧＲＩＮ２Ｃ、ＧＲＩＫ４、ＨＴＲ７、ＡＰＴ８Ｂ２、ＮＫＡＩＮ１、ＮＫＡＩＮ４、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮＡ１Ｉ、ＣＡＣＮＧ８、ＣＡＣＮＧ４、ＣＬＣＮ７、ＫＣＮＡ４、ＫＣＮＧ２、ＫＣＮＮ３、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＵ１、ＰＫＤ１Ｌ２、ＰＫＤ２Ｌ１、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６Ａ１１、ＳＬＣ６Ａ１５、ＳＬＣ７Ａ１、ＳＬＣ７Ａ５Ｐ１、ＳＬＣ７Ａ６、ＳＬＣ９Ａ１、ＳＬＣ１０Ａ３、ＳＬＣ１０Ａ４、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ１６Ａ８、ＳＬＣ１８Ａ１、ＳＬＣ１８Ａ３、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ２６Ａ１０、ＳＬＣ２９Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ１、ＳＬＣ３０Ａ５、ＳＬＣ３５Ｅ２、ＳＬＣ３８Ａ６、ＳＬＣ３８Ａ９、ＳＬＣ３９Ａ７、ＳＬＣ３９Ａ８、ＳＬＣ４３Ａ３、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＶ４、ＴＭＥＭ１６Ｊ、ＴＭＥＭ１４２Ｂ、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、ＢＡＩ１、ＥＤＧ６、ＧＰＲ１、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ４４、ＧＰＲ５６、ＧＰＲ６８、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７５、ＬＧＲ４、ＭＭＤ、ＮＴＳＲ２、ＯＰＮ３、ＯＲ２Ｌ２、ＯＳＴＭ１、Ｐ２ＲＸ３、Ｐ２ＲＹ８、Ｐ２ＲＹ１１、Ｐ２ＲＹ１３、ＰＴＧＥ３、ＳＳＴＲ５、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＡＤＡＭ２２、ＡＤＡＭＴＳ７、ＣＳＴ１１、ＭＭＰ１４、ＬＰＰＲ１、ＬＰＰＲ３、ＬＰＰＲ５、ＳＥＭＡ４Ａ、ＳＥＭＡ６Ｂ、ＡＬＳ２ＣＲ４、ＬＥＰＲＯＴＬ１、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＲＯＭ１、ＴＭ４ＳＦ５、ＶＡＮＧＬ１、ＶＡＮＧＬ２、Ｃ１８ｏｒｆ１、ＧＳＧＬ１、ＩＴＭ２Ａ、ＫＩＡＡ１７１５、ＬＤＬＲＡＤ３、ＯＺＤ３、ＳＴＥＡＰ１、ＭＣＡＭ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＡ５、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ４、ＫＩＡＡ１５２４、ＮＲＭ．３、ＲＰＲＭ、ＧＲＭ８、ＫＣＮＨ４、ＤＬＫ１、ＧＦＲＡ２、ＧＦＲＡ３、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＦＮＢ１、ＥＰＯＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ４、ＧＬＰ１Ｒ、ＨＢＥＧＦ、ＩＧＦ２Ｒ、ＵＮＣ５Ｃ、ＶＡＳＮ、ＤＬＬ３、ＦＺＤ１０、ＫＲＥＭＥＮ２、ＴＭＥＭ１６９、ＴＭＥＭ１９８、ＮＲＧ１、ＴＭＥＦＦ１、ＡＤＲＡ２Ｃ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＢ４、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＧ、ＤＲＤ４、ＧＡＢＲＢ３、ＧＲＩＮ３Ａ、ＧＲＩＮ２Ｃ、ＧＲＩＫ４、ＮＫＡＩＮ４、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮＡ１Ｉ、ＣＡＣＮＧ８、ＣＡＣＮＧ４、ＣＬＣＮ７、ＫＣＮＡ４、ＫＣＮＧ２、ＫＣＮＮ３、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＵ１、ＰＫＤ１Ｌ２、ＰＫＤ２Ｌ１、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣＡ１０、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６ＡＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ１６Ａ８、ＳＬＣ１８Ａ１、ＳＬＣ１８Ａ３、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ２６Ａ１０、ＳＬＣ２９Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ１、ＳＬＣ３０Ａ５、ＳＬＣ３５Ｅ２、ＳＬＣ３８Ａ６、ＳＬＣ３８Ａ９、ＳＬＣ３９Ａ７、ＳＬＣ３９Ａ８、ＳＬＣ４３Ａ３、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＶ４、ＴＭＥＭＧＰＲ４４、ＧＰＲ５６、ＧＰＲ６８、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７５、ＬＧＲ４、ＭＭＤ、ＮＴＳＲ２、ＯＰＮ３、ＯＲ２Ｌ２、ＯＳＴＭ１、Ｐ２ＲＸ３、Ｐ２ＲＹ８、Ｐ２ＲＹ１１、Ｐ２ＲＹ１３、ＰＴＧＥ３、ＳＳＴＲ５、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＡＤＡＭ２２、ＡＤＡＭＴＳ７、ＣＳＴ１１、ＭＭＰ１４、ＬＰ１ＳＥＭＡ４Ａ、ＳＥＭＡ６Ｂ、ＡＬＳ２ＣＲ４、ＬＥＰＲＯＴＬ１、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＲＯＭ１、ＴＭ４ＳＦ５、ＶＡＮＧＬ１、ＶＡＮＧＬ２、Ｃ１８ｏｒｆ１、ＧＳＧＬ１、ＩＴＭ２Ａ、ＫＩＡＡ１７１５、ＬＤＬＲＡＤ３、ＯＺＤ３、ＳＴＥＡＰ１、ＭＣＡＭ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＡ５、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ４、ＫＩＡＡ１５２４、ＮＲＭ．３、ＲＰＣ、ＧＲＭ８、ＫＣＮＨ４、メラノコルチン１受容体、ＰＴＰＲＨ、ＳＤＫ１、ＳＣＮ９Ａ、ＳＯＲＣＳ１、ＣＬＳＴＮ２、エンドセリン変換酵素様－１、リゾリン酸受容体２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＬＲ２、神経向性チロシンキナ－ゼ１、ＭＵＣ１６、Ｂ７－Ｈ４、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＲＢＢ２、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ変種ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＨＧＦＲ、ＦＯＬＲ１、ＭＳＬＮ、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、メソセリン、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、Ｌ１－ＣＡＭ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、高分子量メラノ－マ関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＩＬ－１３Ｒ－α２、ジシアロガングリオシド（ＧＤ２及びＧＤ３）、腫瘍関連炭水化物抗原（ＣＡ－１２５、ＣＡ－２４２、Ｔｎ、及びシアリールＴｎ）、４－１ＢＢ、５Ｔ４、ＢＡＦＦ、炭酸アンヒドラ－ゼ９（ＣＡ－ＩＸ）、Ｃ－ＭＥＴ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、ＦＡＰ、フィブロネクチンエクストラドメインＢ（ＥＤ－Ｂ）、ＧＰＮＭＢ、ＩＧＦ－１受容体、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ３、ＩＴＢ５、ＩＴＧＡＸ、エンビギン、ＰＤＧＦ－Ｒα、ＲＯＲ１、シンデカン１、ＴＡＧ－７２、テネイシンＣ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＮＫＧ２Ｄ－リガンド、腫瘍特異的ペプチドエピトープを提示する主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子、好ましくはＰＲ１／ＨＬＡ－Ａ２、系統特異的又は組織特異的組織抗原、好ましくはＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２、ＣＤ３１９、エンドグリン、ＭＨＣ分子など。

１０．核酸、細胞の調製、治療上の使用：
本発明の別の態様は、本発明のＣＡＲ群のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む核酸に関する。本発明の核酸は、いくつかの実施態様において、例えば発現ベクターを含むＤＮＡ又はＲＮＡである。本発明の核酸はまた、他の形態、例えばウイルスベクターで提供され得る。核酸は、細胞内で活性又は条件的に活性であり得、いくつかの実施態様において、ＲＮＡ、例えばインビトロで合成されたＲＮＡとして存在し得る。宿主細胞へのＲＮＡ又はＤＮＡの導入は、インビトロ又はエクスビボ又はインビボで行うことができる。例えば、宿主細胞（例えばＮＫ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球）は、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含むＲＮＡを用いて、インビトロ又はエクスビボで電気穿孔することができる。

ある場合には、本開示の核酸は、２、３、又は４つのＣＡＲ分子のいずれかからなる、本発明のＣＡＲ群のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む。ある場合には、本開示の核酸は、それぞれが２、３、又は４つのＣＡＲ分子のいずれかからなるＣＡＲ群の１つの分子をコードする、１、２、３、又は４つの別個のヌクレオチド配列を含む。

ＣＡＲ群のＣＡＲ分子が異なる核酸分子によってコードされる場合、本発明は、ＣＡＲ群の１、２、３、又は４つの分子をコードする少なくとも２つの核酸のキットを提供し、ここで、再度核酸は、好ましくはＤＮＡ、ＲＮＡ、又はインビトロで転写されたＲＮＡから選択される。

本発明はまた、本発明の核酸（すなわち、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子をコードする）を含むベクター、及び／又は核酸（ＣＡＲ群のＣＡＲ分子をコードする）のキットを提供する。

そのようなベクターは、選択可能なマーカー、複製起点、及びベクターの複製及び／又は維持を提供する他の特徴を含むことができる。適切なベクターには、例えばプラスミド、ウイルスベクターなどが含まれる。多数の適切なベクター及びプロモーターが当業者に知られており、多くが、本発明の組換え構築物を作成するために市販されている。以下のベクターは、例として提供されている。細菌用：ｐＢｓ、ファ－ジスクリプト、ＰｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ、ｐＢｓＫＳ、ｐＮＨ８ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ａ、ｐＮＨ４６ａ（Stratagene, La Jolla, Calif., USA）；ｐＴｒｃ９９Ａ、ｐＫＫ２２３－３、ｐＫＫ２３３－３、ｐＤＲ５４０、及びｐＲＩＴ５（Pharmacia, Uppsala, Sweden）。真核生物用：ｐＷＬｎｅｏ、ｐＳＶ２ｃａｔ、ｐＯＧ４４、ＰＸＲ１、ｐＳＧ（Stratagene）ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、及びｐＳＶＬ（Pharmacia）。ベクターは、異種タンパク質をコードする核酸配列の挿入を提供するために、プロモーター配列の近くに位置する便利な制限部位を有することができる。発現宿主で機能する選択可能なマーカーが存在してもよい。適切なベクターには、ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ＳＶ４０、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、及びレトロウイルスに由来するベクター、例えばラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、鳥類白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、及び乳腺腫瘍ウイルスに由来するベクターなど）が含まれる。形質導入された細胞のゲノムに効率的に組み込まれる能力のために、好ましいベクターは、レトロウイルスベクター、特にガンマレトロウイルスベクター、及びレンチウイルスベクター、すなわちレトロウイルスゲノムの少なくとも一部に由来するベクターである。好ましいレトロウイルスベクターの例は、自己不活化レンチウイルスベクターである（Milone et al., Mol Ther. 2009;17(8):1453-1464に提供されている）。臨床で使用され得るレンチウイルスベクターの他の例には、例えば、Oxford BioMedicaからのLENTIVECTOR（登録商標）遺伝子送達技術、LentigenからのLENTIMAX（商標）ベクターシステムなどが含まれる。非臨床型のレンチウイルスベクターも使用可能であり、当業者に周知されているであろう。トランスフェクトされた細胞のゲノムに効率的に組み込むことができる他のタイプの好ましいベクターは、トランスポゾンベクター、好ましくはPiggyBACベースのベクター及びSleeping beautyベースのベクターである。目的の遺伝子を細胞のゲノムに組み込むためのさらに重要な非ウイルス戦略は、部位特異的ヌクレア－ゼ技術（例えば、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）に基づく）、又はＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ技術（例えば、Gaj et al., Trends Biotechnol. 2013;31(7):397-405; 及び Ren et al., Protein Cell 2017;8(9):634-643）に基づいている。これらの技術は、任意のＤＮＡ分子（１本鎖ＤＮＡ又は２本鎖ＤＮＡ；ベクター、ＰＣＲアンプリコンなどの形態）から規定されたヌクレオチド配列の組み込みを可能にし、目的の遺伝子を内因性プロモーターの下流のゲノムに組み込むことができるため魅力的である（例えば、Eyquem et al., Nature. 2017;543(7643):113-117に記載されている）。

本発明はまた、少なくとも２つのベクターのキットを提供し、各ベクターは、本発明のＣＡＲ群の１、２、３、又は４つのＣＡＲ分子をコードする核酸配列を含む。ベクターは、同じか又は異なる宿主系（例えば、ベクターによる形質転換又は増殖後にベクターがＣＡＲ分子を発現する適切な細胞）での発現を達成するために、同じか又は異なる調節配列を備え得る。

本発明のベクター又はベクターのキットにおいて、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子をコードする核酸は、転写制御要素に作動可能に連結されて、発現ベクターを生じることができる。そのような転写制御要素は、プロモーター、エンハンサーなどでもよく、適切なプロモーター及びエンハンサー要素が当技術分野で知られている。細菌細胞での発現に適切なプロモーターには、ｌａｃ１、ｌａｃＺ、Ｔ３、Ｔ７、ｇｐｔ、ラムダＰ、及びｔｒｃが含まれる。真核生物細胞での発現に適したプロモーターには、軽鎖及び／又は重鎖免疫グロブリン遺伝子プロモーター及びエンハンサー要素、サイトメガロウイルス前初期プロモーター、単純ヘルペスウイルスチミジンキナ－ゼプロモーター、初期及び後期ＳＶ４０プロモーター、レトロウイルスからの長い末端反復に存在するプロモーター（例えば、ガンマレトロウイルスの５'－ＬＴＲ、又はモロニ－マウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）の５'－ＬＴＲのサブ要素Ｒ及びＵ３を含むプロモーター配列）、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）に存在するプロモーター、マウスメタロチオネイン－Ｉプロモーター、イントロンを含むか又は含まないＥＦ１－アルファ、ホスホグリセリン酸キナ－ゼ（ＰＧＫ）のプロモーター、及び当技術分野で知られている様々な組織特異的プロモーターが含まれる。可逆的誘導性プロモーターを含む適切な可逆的プロモーターは、当技術分野で知られている。そのような可逆的プロモーターは、例えば真核生物や原核生物などの多くの生物から単離及び誘導することができる。第２の生物で使用するための第１の生物に由来する可逆的プロモーターの改変、例えば第１の原核生物と第２の真核生物、第１の真核生物と第２の原核生物などは、当技術分野で公知である。そのような可逆的プロモーター、及びそのような可逆的プロモーターに基づき追加の制御タンパク質も含むシステムには、アルコ－ル調節プロモーター（例えば、アルコ－ル脱水素酵素Ｉ（ａｌｃＡ）遺伝子プロモーター、アルコールトランスアクチベータ－タンパク質（ＡｌｃＲ）に応答するプロモーターなど）、テトラサイクリン調節プロモーター（例えば、ＴｅｔＡｃｔｉｖａｔｏｒｓ、ＴｅｔＯＮ、ＴｅｔＯＦＦなどを含むプロモーターシステム）、ステロイド調節プロモーター（例えば、ラット糖質コルチコイド受容体プロモーターシステム、ヒトエストロゲン受容体プロモーターシステム、レチノイドプロモーターシステム、甲状腺プロモーターシステム、エクジソンプロモーターシステム、ミフェプリストンプロモーターシステムなど）、金属調節プロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーターシステムなど）、病因関連調節プロモーター（例えば、サリチル酸調節プロモーター、エチレン調節プロモーター、ベンゾチアジアゾール調節プロモーターなど）、温度調節プロモーター、例えば熱ショック誘導性プロモーター（例えば、ＨＳＰ－７０、ＨＳＰ－９０、大豆熱ショックプロモーターなど）、光調節ｄプロモーター、合成誘導性プロモーターなどが含まれる。

ある場合には、適切なプロモーターを含む遺伝子座又は構築物又はトランス遺伝子は、誘導性システムの誘導を通じて不可逆的に切り替えることができる。不可逆スイッチの誘導に適したシステムは当技術分野で公知であり、例えば、不可逆スイッチの誘導は、Ｃｒｅ－ｌｏｘ仲介組換えを使用することができる。当技術分野で知られているリコンビナ－ゼ、エンドヌクレア－ゼ、リガ－ゼ、組換え部位などの任意の適切な組み合わせを使用して、不可逆的に切り替え可能なプロモーターを作成することができる。本明細書の別の場所に記載されている、部位特異的組換えを実施するための方法、メカニズム、及び要件は、不可逆的に切り替えられるプロモーターを作成する際に使用され、当技術分野でよく知られている。ある場合にはプロモーターは、ＣＤ８細胞特異的プロモーター、ＣＤ４細胞特異的プロモーター、好中球特異的プロモーター、又はＮＫ特異的プロモーターである。例えば、ＣＤ４遺伝子プロモーターを使用することができる。別の例として、ＣＤ８遺伝子プロモーターを使用することができる。ＮＫ細胞特異的発現は、Ｎｅｒｉ（ｐ４６）プロモーターを使用することで達成できる。いくつかの実施態様において、例えば酵母細胞での発現の場合、適切なプロモーターは、構成性プロモーター、例えばＡＤＨ１プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、ＥＮＯプロモーター、ＰＹＫ１プロモーター；又は、調節可能なプロモーター、例えばＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ１０プロモーター、ＡＤＨ２プロモーター、ＰＨ０５プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＧＡＬ７プロモーター、ＭＥＴ２５プロモーター、ＭＥＴ３プロモーター、ＣＹＣｌプロモーター、ＨＩＳ３プロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰＤＨプロモーター、ＡＤＣ１プロモーター、ＴＲＰ１プロモーター、ＵＲＡ３プロモーター、ＬＥＵ２プロモーター、ＥＮＯプロモーター、ＴＰ１プロモーター、及びＡＯＸ１（例えば、ピキア属で使用するため）である。適切なベクター及びプロモーターの選択は、当業者の技術レベルの範囲内である。原核生物の宿主細胞で使用するのに適したプロモーターには、バクテリオファ－ジＴ７ＲＮＡポリメラ－ゼプロモーター；ｔｒｐプロモーター；ｌａｃオペロンプロモーター；ハイブリッドプロモーター、例えばｌａｃ／ｔａｃハイブリッドプロモーター、ｔａｃ／ｔｒｃハイブリッドプロモーター、ｔｒｐ／ｌａｃプロモーター、Ｔ７／ｌａｃプロモーター；ｔｒｃプロモーター；ｔａｃプロモーターなど；ａｒａＢＡＤプロモーター；インビボ調節プロモーター、例えばｓｓａＧプロモーター又は関連プロモーター、ｐａｇＣプロモーター、ｎｉｒＢプロモーターなど；ｓｉｇｍａ７０プロモーター、例えばコンセンサースｓｉｇｍａ７０プロモーター（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受け入れ番号ＡＸ７９８９８０、ＡＸ７９８９６１、及びＡＸ７９８１８３を参照）；固定相プロモーター、例えばｄｐｓプロモーター、ｓｐｖプロモーター；病原性島ＳＰＩ－２に由来するプロモーター；ａｃｔＡプロモーター；ｒｐｓＭプロモーター；ｔｅｔプロモーター；ＳＰ６プロモーター；などが含まれる。大腸菌などの原核生物で使用するのに適した強力なプロモーターには、Ｔｒｃ、Ｔａｃ、Ｔ５、Ｔ７、及びＰＬａｍｂｄａが含まれる。細菌宿主細胞で使用するためのオペレ－タ－の例には、ラクトースプロモーターオペレーター（Ｌａｃｉリプレッサ－タンパク質は、ラクトースと接触すると構造が変化し、それによってＬａｃｉリプレッサ－タンパク質がオペレ－タ－に結合するのを防ぐ）、トリプトファンプロモーターオペレーター（トリプトファンと複合体を形成した場合、ＴｒｐＲリプレッサ－タンパク質は、オペレーターに結合するコンフォメーションを有する；トリプトファンがない場合、ＴｒｐＲリプレッサ－タンパク質はオペレ－タ－に結合しないコンフォメーションを有する）、そしてｔａｃプロモーターオペレーターが含まれる。

本発明の好適な実施態様によれば、ベクター又は少なくとも２つのベクターのキットは、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結している、Ｔリンパ球特異的プロモーター、又はＮＫ細胞特異的プロモーター、又はＥＦ１－アルファプロモーターを含む。

さらなる態様によれば、本発明はまた、本発明のＣＡＲ群のすべてのＣＡＲ分子を産生するように改変された遺伝子改変細胞に関する。本発明の細胞はまた、本発明のベクターを産生する（例えば、ウイルス又はプラスミド上清として）ために使用することができ、これらはそこからさらに精製され、これらのベクターを増幅及び精製された形態で提供することができる。

好適な実施態様によれば、細胞は、本発明のＣＡＲ群のＣＡＲ分子を産生するように遺伝子改変された哺乳動物細胞である。好ましい哺乳動物細胞は、幹細胞、前駆細胞、又は幹細胞若しくは前駆細胞に由来する細胞、好ましくはリンパ球である。本発明に従って遺伝子改変されるさらに好ましい細胞は、初代細胞及び不死化細胞株である。製薬用途では、ヒト細胞、特にリンパ球が特に好ましい。しかしながら、非ヒト初代細胞及び細胞株もまた、特に本発明のシステムで科学的疑問に対処するために、適切な細胞型、例えば非ヒト霊長類細胞株、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株であり得る。

本発明のさらに好ましい細胞は、ＨｅＬａ細胞（例えば、アメリカンタイプカルチャ－コレクション（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ－２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１５７３）、ベロ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（例えばＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１６５８）、Ｈｕｈ－７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ－７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１．３）、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞、Ｈｕｔ－７８、ジャーカット（Jurkat）、ＨＬ－６０、ＮＫ細胞株（例えば、ＮＫＬ、ＮＫ９２、及びＹＴＳ）などでもよい。いくつかの好ましい例では、本発明の細胞は、不死化細胞株ではなく、個体から得られた細胞（例えば、初代細胞）である。例えばある場合には、細胞は個人から得られた免疫細胞である。一例として、細胞は個体から得られたＴリンパ球である。別の例として、細胞は、個体から得られた細胞傷害性細胞である。別の例として、細胞は、個体から得られた幹細胞又は前駆細胞である。

特に好適な実施態様によれば、本発明のＣＡＲ群の個々のＣＡＲ分子をコードするベクター又は少なくとも２つのベクターのキットで形質転換される本発明の哺乳動物細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞である。

さらなる態様によれば、本発明は、本発明の核酸、本発明の核酸のキット、本発明のベクター又はベクターのキット、又は本発明の細胞若しくは細胞のキットを含む医薬調製物に関する。

本開示は、組合せ抗原認識が可能な細胞を作成する方法を提供する。この方法は、一般に、本開示のＣＡＲ群の分子をコードするヌクレオチド配列を含む、ベクター又はベクターのキット、又はＲＮＡ（例えば、インビトロ転写されたＲＮＡ）で、哺乳動物細胞を遺伝子改変することを含む。遺伝子改変は、インビボ、インビトロ、又はエクスビボで実施することができる。細胞は、免疫細胞（例えば、Ｔリンパ球又はＮＫ細胞）、幹細胞、前駆細胞などであり得る。

遺伝子改変は、好ましくはエクスビボで実施される。例えば、Ｔリンパ球（すなわちＴ細胞）、幹細胞、又はＮＫ細胞は、個体から得ることができ、個体から得られた細胞は、本開示のＣＡＲ群を発現するように遺伝子改変される。ある場合には、遺伝子改変細胞はエクスビボで活性化される。遺伝子改変細胞が個体（例えば、その細胞が得られた個体）に導入される場合、遺伝子改変細胞は、個体の細胞の表面上で生理学的発現レベルで存在する標的抗原の選択された組み合わせと接触すると、インビボで活性化される。例えば、遺伝子改変細胞がＴリンパ球又はＮＫ細胞である場合、遺伝子改変細胞は、ＣＡＲ群（及び／又は他のポリペプチドの抗原結合部分）が結合するその表面に、生理学的発現レベルで標的抗原の選択された組み合わせを提示する細胞に対して細胞毒性を示すことができる。条件的に活性なＣＡＲ群の場合、遺伝子改変細胞は、個体において生理学的発現レベルで細胞の表面に存在する標的抗原の選択された組み合わせと接触し、そして、１つ以上の調節分子及び／又はそれぞれがＣＡＲ群の分子の結合部位に結合することができ少なくとも抗原結合部分を含む１つ以上の他のポリペプチドを、個体に投与時したときにのみ効率的に活性化される。他のいくつかの場合において、個体の生理学的発現レベルで細胞の表面に存在する標的抗原と接触したとき遺伝子改変細胞の活性化は、調節分子を個体に投与すると減少する。

本開示は、対象ＣＡＲ群を使用する様々な治療方法を提供する。

本発明のＣＡＲ群は、Ｔリンパ球又はＮＫ細胞に存在する場合、標的細胞に対する細胞毒性を仲介することができる。本発明の非共有結合的に複合体化されたＣＡＲ群は、ある場合には、標的抗原に結合する他のポリペプチドの存在に依存して、標的細胞上に存在する標的抗原の選択された組み合わせに結合することができ、それにより、ＣＡＲ群を生成するように遺伝子改変されたＴリンパ球又はＮＫ細胞による標的細胞の死滅を仲介する。

標的細胞には癌細胞が含まれる。従って本開示は、標的癌細胞を死滅させるか、又はその増殖を阻害する方法を提供し、この方法は、標的癌細胞に、対象ＣＡＲ群を生成するように遺伝子改変された細胞傷害性免疫エフェクター細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞又はＮＫ細胞）を接触させることを含み、その結果、Ｔリンパ球又はＮＫ細胞は、標的癌細胞の表面に存在する標的抗原の選択された組み合わせを認識し、標的細胞の死滅を仲介する。

本開示は、癌を有する個体の癌を治療する方法を提供する。好適な実施態様において、この方法は、以下を含む：ｉ）個体から得られたＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球を、本発明のＣＡＲ群の各ＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも１つのベクターを用いて遺伝子改変し、ここでＣＡＲ群の抗原結合部分は、個体の癌細胞上の標的抗原に特異的であり、遺伝子改変はインビトロ又はエクスビボで行われる；ｉｉ）遺伝子組み換え細胞を個体に導入する；ｉｉｉ）群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を誘導又は低減するための、好ましくは群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を誘導するための、少なくとも１つの調節分子の有効量を前記個体に投与し、それによってＣＡＲ群の非共有結合性複合体化を誘導又は低減し、好ましくはＣＡＲ群の非共有結合性複合体化を誘導し、ここで、非共有結合性複合体化したＣＡＲ群は、生理学的発現レベルで各標的抗原の組み合わせを発現する癌細胞と接触すると、遺伝子改変された細胞の活性化を仲介し、これは癌細胞の死滅につながり、それによって癌の治療を可能にする。他の好適な実施態様において、この方法は、以下を含む：ｉ）個体から得られたＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球を、本発明のＣＡＲ群の各ＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも１つのベクターを用いて遺伝子改変し、ここで、前記群のＣＡＲ分子の抗原結合部分、及び／又は群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの抗原結合部分は、個体の癌細胞上の標的抗原に特異的であり、ここで前記群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は調節分子の投与を必要とせず、前記遺伝子改変はインビトロ又はエクスビボで行われる；ｉｉ）遺伝子組み換え細胞を個体に導入する；ｉｉｉ）少なくとも1つの抗原結合部分を含み、前記ＣＡＲ群のＣＡＲ分子の結合部位に結合できる少なくとも１つの調節分子の有効量を前記個体に投与し、ここで、これは、生理学的発現レベルで各標的抗原の組み合わせを発現する癌細胞と接触すると、遺伝子改変された細胞の活性化を仲介し、これは癌細胞の死滅につながり、それによって癌の治療を可能にする。さらに他の好適な実施態様において、この方法は、以下を含む：ｉ）個体から得られたＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球を、本発明のＣＡＲ群の各ＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも１つのベクターを用いて遺伝子改変し、ここで群のＣＡＲ分子の結合部分は個体の癌細胞上の標的抗原に特異的であり、群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は調節分子の投与を必要とせず、前記遺伝子改変はインビトロ又はエクスビボで行われる；ｉｉ）遺伝子改変された細胞を個体に導入し、これが癌細胞の死滅を可能にし、それによって癌を治療する。
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本明細書に開示される方法により治療できる可能性がある癌には、食道癌、肝細胞癌、基底細胞癌（皮膚癌の形態）、扁平上皮癌（様々な組織）、移行細胞癌（膀胱の悪性新生物）を含む膀胱癌、気管支原性癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、肺の小細胞癌及び非小細胞癌を含む肺癌、副腎皮質癌、甲状腺癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、腎細胞癌、インサイチュ又は胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、子宮癌、精巣癌、骨形成癌、上皮癌、及び鼻咽頭癌が含まれる。本明細書に開示される方法により治療できる可能性がある肉腫には、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、脊索腫、骨形成肉腫、骨肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜肉腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、及びその他の軟部肉腫が含まれる。本明細書に開示される方法により治療できる可能性がある他の固形腫瘍には、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫瘍、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、及び網膜芽細胞腫が含まれる。本明細書に開示される方法により治療できる可能性がある白血病には、以下が含まれる。ａ）慢性骨髄増殖性症候群（多能性造血幹細胞の腫瘍性障害）；ｂ）急性骨髄性白血病（多能性造血幹細胞又は系統可能性が制限された造血細胞の新生物形質転換）；ｃ）慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ；免疫学的に未成熟で機能的に機能不全の小リンパ球のクローン性増殖）、Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ－細胞ＣＬＬ前リンパ性白血病、及び毛状細胞白血病を含む；ｄ）急性リンパ芽球性白血病（リンパ芽球の蓄積を特徴とする）。対象の方法を使用して治療することができるリンパ腫には、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）；ホジキンリンパ腫；非ホジキンリンパ腫などが含まれる。本明細書に開示される方法により治療できる可能性がある他の癌には、非定型髄膜腫（脳）、膵島細胞癌（膵臓）、髄様癌（甲状腺）、間葉腫（腸）、肝細胞癌（肝臓）、肝芽腫（肝臓）、明細胞癌（腎臓）、及び縦隔神経線維腫が含まれる。

対象の方法はまた、炎症状態及び自己免疫疾患を治療するために使用することができる。対象ＣＡＲ群は、免疫調節法で使用するために、Ｔヘルパ－細胞又は制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞内で発現させることができる。免疫調節法には、例えば、病原体に対する哺乳動物被験体の免疫応答の増強；免疫不全被験体の免疫反応の増強；炎症反応の低減；例えば自己免疫疾患を治療するための、自己抗原にさらされている哺乳動物被験体の免疫応答の低減；臓器又は組織の拒絶反応を減らすための、移植された臓器又は組織にさらされている哺乳動物被験体の免疫応答の低減が含まれる。この方法が自己抗原に対する免疫応答を低減させることを含む場合、ＣＡＲ群を活性化するために使用される標的抗原の少なくとも１つは、好ましくは自己抗原である。この方法が移植された器官又は組織に対する免疫応答を低減させることを含む場合、ＣＡＲ群を活性化するために使用される抗原の少なくとも１つは、好ましくは移植臓器に特異的な抗原である。

上記のように、好ましい場合における本開示の治療方法は、それを必要とする個体への、有効量の１つ以上の異なる調節分子及び／又は１つ以上の異なる他のポリペプチドの投与を含み、ここで他のポリペプチドのそれぞれは、少なくとも抗原結合部分を含み、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子の細胞外結合部位に結合できる。

本発明に従ってＣＡＲ群を発現するＴリンパ球又はＮＫ細胞（「エフェクター細胞」）を投与された必要な個体に投与される各調節分子の必要な有効量は、必要な各調節分子の存在下と非存在下で、各抗原の組み合わせを発現する標的細胞と接触したときの、これらのエフェクター細胞の異なる応答によって規定される。これによりこれらのエフェクター細胞の応答は、インターフェロンガンマ、及び／又はマクロファージ炎症性タンパク質－１（ＭＩＰ－１）アルファ、及び／又はＭＩＰ－１ベータ、及び／又はグランザイムＢ、及び／又はＩＬ－２、及び／又はＴＮＦ、及び／又はＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－４の分泌、及び／又はエフェクター細胞の脱顆粒によって規定され、ここで細胞の脱顆粒は、好ましくはそれらの表面にＣＤ１０７ａを移動させるエフェクター細胞の割合によって、すなわち脱顆粒アッセイを使用したフローサイトメトリー解析（例えば、Proff et al., Front Micro-biol. 2016 ;7 :844に記載されているように）によって検出されるＣＤ１０７ａ陽性エフェクター細胞の割合によって検出され、これは、任意選択的に、少なくとも抗原結合部分を含みＣＡＲ群のＣＡＲ分子の結合部位に結合できる、各必要な他のポリペプチドの有効濃度の存在下で、細胞あたり１００，０００分子を超える各標的抗原を発現する標的細胞との接触後に行われる。好適な実施態様において、各必要な調節分子の有効濃度の存在下対非存在下でのエフェクター細胞の応答は、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、又はさらにより好ましくは少なくとも１００％異なり、ここで、各必要な調節分子の有効濃度は、それを必要とする個体に１回以上の投与で、各必要な調節分子の有効量を投与することによって達成される濃度である。少なくとも抗原結合部分を含みＣＡＲ群に結合できる必要な他の各ポリペプチドの有効濃度は、完全に複合体化された対象ＣＡＲ群（すなわち、ＣＡＲ群に含まれるすべての二量体化ドメイン）の応答によって規定され、これは、少なくとも抗原結合部分を含みＣＡＲ群に結合できる必要な他の各ポリペプチドの存在下対非存在下で、細胞１個あたり１００，０００分子を超える各標的抗原を発現する標的細胞との接触後に行われ、ここで、応答は好ましくは少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、又はさらにより好ましくは少なくとも１００％異なり、ここで、少なくとも抗原結合部分を含みＣＡＲ群に結合できる各必要な他のポリペプチドの有効濃度は、対象ＣＡＲ群を発現するＴリンパ球又はＮＫ細胞を投与されたそれを必要とする個体に１回以上の投与で、これらの他のポリペプチドのそれぞれの有効量を投与することによって達成される濃度である。

本発明のＣＡＲ群のＣＡＲ分子に結合できる調節分子と抗原特異的な他のポリペプチドの両方は、以後まとめて「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」と呼ぶ。

対象の方法において、「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、所望の治療効果又は診断効果をもたらすことができる任意の便利な手段を使用して、宿主に投与することができる。すなわち「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、治療的投与のための様々な製剤に組み込むことができる。より詳しくは「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、適切な医薬的に許容し得る担体又は希釈剤と組み合わせることによって医薬組成物に処方することができ、固体、半固体、液体、又は気体の形態の調製物、例えば錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤、エアロゾールなどに処方することができる。医薬剤形において「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、それらの医薬的に許容し得る塩の形態で投与することができ、又は、それらはまた単独で又は適切に組み合わせて、並びに他の医薬的に活性な化合物と組み合わせて使用することができる。以下の方法及び賦形剤は単なる例示である：

適切な賦形剤ビヒクルは、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、及びそれらの組み合わせであり得る。さらに、所望であればビヒクルは、湿潤剤又は乳化剤又はｐＨ緩衝剤などの少量の補助物質を含むことができる。そのような剤形を調製する実際の方法は、当業者に知られているか又は明らかになるであろう。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 17th edition, 1985を参照されたい。いずれにしても、投与される組成物又は製剤は、治療される被験体の所望の状態を達成するのに十分な量の必要な「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」を含有する。ビヒクル、アジュバント、担体、又は希釈剤などの医薬的に許容し得る賦形剤は、一般に容易に入手可能である。さらに、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、張性調整剤、安定剤、湿潤剤などの医薬的に許容し得る補助物質は、一般に容易に入手可能である。経口製剤の場合、「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」を単独で又は適切な添加剤と組み合わせて使用して、従来の添加剤、例えばラクトース、マンニト－ル、コーンスターチ、ジャガイモ澱粉を用いて；結合剤、例えば結晶セルロース、セルロ－ス誘導体、アカシア、コーンスターチ、又はゼラチンを用いて；崩壊剤、例えばコーンスターチ、ジャガイモ澱粉、又はカルボキシメチルセルロースナトリウムを用いて；滑沢剤、例えばタルクやステアリン酸マグネシウムを用いて；及び所望であれば、希釈剤、緩衝剤、保湿剤、防腐剤、香料を用いて、錠剤、粉末、顆粒、又はカプセルを製造することができる。

「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、これらを、水性又は非水性溶媒、例えば植物油又は他の同様の油、合成脂肪族酸グリセリド、高級脂肪酸のエステル又はプロピレングリコ－ルのエステル中に、所望であれば、通常の添加剤、例えば可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤、及び防腐剤を用いて、溶解、懸濁、又は乳化することにより、注射用製剤に処方することができる。

「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」を含む医薬組成物は、所望の純度を有する「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」を、任意の生理学的に許容される担体、賦形剤、安定剤、界面活性剤、緩衝剤、及び／又は張性剤と混合することによって調製することができる。許容される担体、賦形剤、及び／又は安定剤は、好ましくは、使用される投薬量及び濃度で受容者に対して無毒であり、緩衝剤、例えばリン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；酸化防止剤、例えばアスコルビン酸、グルタチオン、システイン、メチオニン、及びクエン酸；防腐剤、例えばエタノール、ベンジルアルコ－ル、フェノ－ル、ｍ－クレゾール、ｐ－クロル－ｍ－クレゾール、メチル又はプロピルパラベン、塩化ベンザルコニウム、又はそれらの組み合わせ；アミノ酸、例えばアルギニン、グリシン、オルニチン、リジン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、イソロイシン、ロイシン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、メチオニン、セリン、プロリン、及びそれらの組み合わせ；単糖、二糖、及び他の炭水化物；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質、例えばゼラチン及び血清アルブミン；ＥＤＴＡなどのキレ－ト剤；糖、例えばトレハロース、スクロース、ラクトース、グルコ－ス、マンノ－ス、マルトース、ガラクトース、フルクトース、ソルボ－ス、ラフィノ－ス、グルコサミン、Ｎ－メチルグルコサミン、ガラクトサミン、及びノイラミン酸；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばツイーン、ブリジプルロニック、トリトンＸ、又はポリエチレングリコ－ル（ＰＥＧ）が含まれる。

医薬組成物は、液体形態、凍結乾燥形態、又は凍結乾燥形態から復元された液体形態でもよく、ここで凍結乾燥調製物は、投与前に無菌溶液で復元されるものである。凍結乾燥された組成物を復元するための標準的な手順は通常、ある量の純水（通常、凍結乾燥中に除去された量と同等）を追加することであるが、抗菌剤を含む溶液を、非経口投与用の医薬組成物の製造に使用することができる。Chen (1992) Drug Dev Ind Pharm 18, 1311-54も参照されたい。

「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、任意選択的に制御放出製剤で製剤化することもできる。徐放性調製物は、当技術分野で公知の方法を使用して調製することができる。徐放性調製物の適切な例には、「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、Ｌ－グルタミン酸とエチル－Ｌ－グルタミン酸のコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、ヒドロゲル、ポリラクチド、分解性乳酸－グリコ－ル酸コポリマー、及びポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が含まれる。生物学的活性の喪失の可能性は、適切な添加剤を使用し、水分含有量を制御し、特定のポリマーマトリックス組成物を開発することにより防ぐことができる。

適切な投与量は、主治医又は他の資格のある医療関係者がさまざまな臨床的要因に基づいて、決定することができる。医学分野でよく知られているように、一人の患者の投与量は、患者の大きさ、体表面積、年齢、投与される特定の「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」、患者の性別、投与の時間と経路、全身の健康、及び同時に投与されている他の薬剤などの多くの要因に依存する。「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、１投与あたり１ｎｇ／ｋｇ体重～２０ｍｇ／ｋｇ体重の量、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば０．５ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重で投与され得るが、特に前述の要因を考慮して、この例示的な範囲より少ないか又は多い用量が想定される。処方が持続注入である場合、それはまた、毎分体重１キログラムあたり１μｇ～１０ｍｇの範囲であり得る。

熟練者は、用量レベルが、特定の「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」、症状の重症度、及び副作用に対する被験体の感受性の関数として変化し得ることを容易に理解するであろう。所定の化合物の好ましい投与量は、様々な手段によって当業者が容易に決定可能である。

１つ以上の「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、薬物送達に適した任意の使用可能な方法及び経路、例えばインビボ及びエクスビボ方法、並びに全身及び局所投与経路を使用して個体に投与することができる。従来の医薬的に許容し得る投与経路には、腫瘍内、腫瘍周囲、筋肉内、気管内、頭蓋内、皮下、皮内、局所適用、静脈内、動脈内、直腸内、鼻内、経口、及び他の経腸及び非経口投与経路が含まれる。投与経路は、必要に応じて組み合わせるか、又は「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」及び／又は所望の効果に応じて調整することができる。「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、単回投与又は複数回投与で投与することができる。条件的に活性なＣＡＲ群の好適な実施態様において、「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、経口的又は代替的に静脈内投与され得る。他の実施態様において、「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、吸入経路を介して投与することができる。さらに他の実施態様において、「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、鼻腔内、局所的、又は腫瘍内にも投与することができる。さらに他の実施態様において、「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」を腫瘍周囲に投与することができる。脳腫瘍の治療のための条件的に活性なＣＡＲ群を有する好適な実施態様において、「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は頭蓋内に投与することができる。

「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、全身経路又は局所経路を含む、従来の薬物の送達に適した任意の使用可能な従来方法及び経路を使用して宿主に投与することができる。一般に、本発明によって企図される投与経路には、経腸、非経口、又は吸入経路が含まれる。吸入投与以外の非経口投与経路には、局所、経皮、皮下、筋肉内、眼窩内、被膜内、脊髄内、胸骨内、腫瘍内、腫瘍周囲、及び静脈内経路が含まれる。非経口投与は、「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」の全身的又は局所的送達をもたらすために実施することができる。全身送達が望まれる場合、投与は通常、医薬製剤の侵襲的又は全身的に吸収された局所又は粘膜投与を伴う。「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、経腸投与によって被験体に送達することもできる。経腸投与経路には、経口及び直腸（例えば坐剤を使用する）送達が含まれる。

治療とは、少なくとも宿主を苦しめている病的状態に関連する症状の改善を意味し、ここで改善は、広義には少なくとも、例えば癌などの治療中の病的状態に関連するパラメ－ター、例えば症状の大きさの減少を指すために使用される。従って、治療には、病的状態又は少なくともそれに関連する症状が完全に抑制されている状況、例えば、発生が防止されているか又は停止されている、例えば終了している状態が含まれ、従って、宿主は、病的状態又は少なくとも病的状態を特徴付ける症状に苦しむことがない。

「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、注射及び／又は送達によって、例えば脳動脈の部位に又は直接脳組織に投与することができる。「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」はまた、例えば、直接注射によって、浸透圧ポンプ又は徐放性粒子などの薬物送達デバイスの移植によって、標的部位への微粒子銃送達によって、標的部位に直接投与することができる。さらに「ＣＡＲ群に特異的に結合する薬剤」は、標準的な癌治療に対する補助療法として投与することができる。標準的な癌治療には、外科手術（例えば、癌性組織の外科的除去）、放射線療法、骨髄移植、化学療法剤治療、抗体治療、生物学的応答改変物質治療、及び前述の特定の組み合わせが含まれる。

様々な被験体が、癌を治療する対象方法による治療に適している。適切な被験体には、任意の個人、例えば癌を有するか、癌と診断されたか、癌を発症するリスクがあるか、癌を有し癌の再発のリスクがあるか、他の治療法で治療されたがそのような治療に反応しなかったか、又はそのような治療への最初の応答後に再発したヒト又は非ヒト人動物が含まれる。

対象の免疫調節法による治療に適した被験体には、自己免疫障害を有する個人、臓器又は組織移植の受容者である個人など、免疫無防備状態の個人、そして病原体に感染している個人が含まれる。

図１：ＣＡＲ群の例示的な構成の略図。図１Ａは、抗原結合部分がＣＡＲ分子に組み込まれているバージョン（左）と、ＣＡＲ分子が、１つの抗原結合部分又は２つの抗原結合部分（異なる標的抗原に対して向けられる）を例示的に含む他のポリペプチドの結合部位に結合する結合部位を含むバージョンにおける、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子の基本的な構造を概略的に示す。低親和性相互作用は、抗原結合部分と標的抗原の間、又はＣＡＲ分子の結合部位と、ＣＡＲ分子の結合部位に結合する他のポリペプチドの結合部位との間のいずれかで起きる。ＣＡＲ群のＣＡＲ分子の少なくとも１つは、少なくとも１つのＩＴＡＭを含む少なくとも１つのシグナル伝達領域を含まなければならない。示されているＣＡＲ分子の例では、内部ドメインは、例示的に単一のシグナル伝達領域を含む。示されているＣＡＲ分子の各成分間の線は、任意選択的なリンカーを示す。ヘテロ二量体化ドメイン（その少なくとも１つは群の各ＣＡＲ分子に必須である）及び任意選択的な追加ドメイン又は成分は示されていない。

図１Ｂは、２つの抗原結合部分、又は少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる２つの結合部位を含むか、又は抗原結合部分と、少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる結合部位との組み合わせを含む、ＣＡＲ分子のバージョンを概略的に示す。示されているＣＡＲ分子の例では、内部ドメインは、例示的に、単一のシグナル伝達領域を含む。示されているＣＡＲ分子の各成分間の線は、任意選択的なリンカーを示す。ヘテロ二量体化ドメイン及び任意選択的な追加ドメイン又は成分は示されていない。

図１Ｃは、２、３、又は４つのＣＡＲ分子からなるＣＡＲ群内のいくつのＣＡＲ分子が少なくとも１つのシグナル伝達領域を含むことができるかを、概略的に示す（所定のＣＡＲ分子のシグナル伝達領域の全体は、白い四角の記号によって表される）。少なくとも１つのシグナル伝達領域を含むＣＡＲ分子のうち、全ての又は一部の、しかし少なくとも１つのＣＡＲ分子は、少なくとも１つのＩＴＡＭを含む。簡単にするために、外部ドメイン、ヘテロ二量体化ドメイン、及び任意選択的な追加ドメイン若しくは成分は示されていない。示されているＣＡＲ分子の各成分間の線は、任意選択的なリンカーを示す。

図１Ｄは、２つのＣＡＲ分子からなるＣＡＲ群の例を用いて、シグナル伝達領域の配置を概略的に示す。描かれている例は、異なる配置の可能な組み合わせの一部のみを示す。例えばＣＡＲ分子は、２つ以上のＩＴＡＭ含有シグナル伝達領域、又は２つ以上の同時刺激シグナル伝達領域を含むことができる。簡単にするために、外部ドメイン、ヘテロ二量体化ドメイン、及び任意選択的な追加ドメイン又は成分は示されていない。示されているＣＡＲ分子の各成分間の線は、任意選択的なリンカーを示す。

図１Ｅ～１Ｋは、ＣＡＲ群の非共有結合性複合体化に、ヘテロ二量体化ドメインをどのように使用できるかを概略的に示す。描かれている例は、可能な配置の一部のみを示す。記載の例では、ヘテロ二量体化ドメインの異なる対が、それぞれが１つ又は２つのシグナル伝達領域を例示的に含む、ＣＡＲ分子中の異なる位置に示されている。簡単にするために、図は、シグナル伝達領域、膜貫通ドメイン、及びヘテロ二量体化ドメインのみを示す。示されているＣＡＲ分子の各成分間の線は、任意選択的なリンカーを示す。ヘテロ二量体化ドメインの同様の配置は、細胞外に組み込むこともできる。

図１Ｌは、調節分子として作用する細胞外可溶性因子によるＣＡＲ群の非共有結合性複合体化を例示す。調節分子は、天然にヘテロ二量体化するタンパク質を用いて概略的に例示されている。示されるＣＡＲ分子は、例示的に１つのシグナル伝達領域と、１つの抗原結合部分、又は他のポリペプチドが結合できる１つの結合部位のみを含む。任意選択的な追加のヘテロ二量体化ドメイン及び任意選択的な追加のドメイン又は成分は示されていない。抗原結合ドメイン（又は結合部位）及び二量体化ドメインの順序は逆にすることもできる。すなわち、抗原結合ドメイン（又は結合部位）はまた、ヘテロ二量体化ドメインよりも原形質膜に近接していてもよい。示されているＣＡＲ分子の各成分間の線は、任意選択的なリンカーを示す。

図２は、３つの補完的な方法で決定されたヒトＥＧＦＲに対する異なるｒｃＳｓｏ７ｄベースの抗原結合部分（ス－パ－フォルダ－ＧＦＰ（ｓｆＧＦＰ）に融合）のＫ_ｄ値を示す。（ａ）高レベルの末端切断型ＥＧＦＲ（ｔＥＧＦＲ）を発現するジャーカット（Jurkat）Ｔ細胞に結合した異なるｓｆＧＦＰ融合タンパク質の量のフローサイトメトリーによる定量、（ｂ）及び（ｃ）ＩｇＧ１のＦｃドメインに融合したＥＧＦＲの細胞外ドメインを含むキメラＥＧＦＲタンパク質でコ－ティングされたマトリックスを使用することによる表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析。親和性は、速度論的モード（ｂ）又は定常状態分析モード（ｃ）のいずれかで決定した。

図３：システインを形成する細胞外ジスルフィド結合は、ＡＮＤゲート機能の結合活性効果の使用を防ぐ。（Ａ）Ｓ－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ（「Ｃｙｓ」）のＣＡＲシグナル伝達骨格「Ｃｙｓ」、及びＳ－８ｓｅｒ－ＢＢ－３ｚ（「Ｓｅｒ」）のＣＡＲシグナル伝達骨格「Ｓｅｒ」の構成の略図であり、これらは、それぞれジスルフィド結合が可能であるか又は可能ではない。これらのシグナル伝達骨格は、異なるｒｃＳｓｏ７ｄベースの抗原結合部分に融合され、初代ヒトＴ細胞での機能試験のために発現された。（Ｂ）初代ヒトＴ細胞で５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔の２０時間後の、典型的なＣＡＲ発現（「Ｃｙｓ」又は「Ｓｅｒ」ＣＡＲ骨格のいずれかに融合したｒｃＳｓｏ７ｄ変種「Ｅ１１．４．１－ＷＴ」で示されている）。トランス遺伝子を発現しない（「ＣＡＲなし」）Ｔ細胞を陰性対照とした。（Ｃ）ｔＥＧＦＲをコードする３μｇのｍＲＮＡの電気穿孔の２０時間後の、標的細胞として使用されたジャーカット細胞におけるｔＥＧＦＲの発現。構築物のないジャ－カットＴ細胞（「構築物なし」）及び各アイソタイプ対照（「アイソタイプ対照」）を陰性対照とした。ＣＡＲの機能は、標的細胞の死滅（Ｄ）及びＩＦＮ－γ産生（Ｅ）について、異なるＣＡＲで改変された初代ヒトＴ細胞の能力を決定することによって試験された。４人の異なるドナ－（異なる記号で示されている）のＴ細胞を、示されたＣＡＲ構築物の５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔し、翌日、ジャーカットＴ細胞（３μｇのｔＥＧＦＲ－ｍＲＮＡで電気穿孔した）とエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比２：１で３７℃で４時間同時培養した。ＣＡＲのない（「ＣＡＲなし」）Ｔ細胞を陰性対照とした。

図４：ｓｃＦｖ含有ＣＡＲ分子の二量体化／多量体化は、ＡＮＤゲート機能の結合活性効果の使用を防ぐ。（Ａ）実験で使用されたＣＡＲの略図。（Ｂ、Ｃ、Ｄ）各５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔から２０時間後の、ヒト初代Ｔ細胞におけるＣＡＲ構築物の発現。ＣＡＲのない（「ＣＡＲなし」）Ｔ細胞を陰性対照とした。（Ｅ）ｔＥＧＦＲをコードする５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔から２０時間後の、標的細胞として使用されたジャーカット細胞におけるｔＨＥＲ２の発現。構築物のない（「構築物なし」）ジャーカットＴ細胞を陰性対照とした。ＣＡＲＴ細胞とジャーカット－ｔＨＥＲ２細胞をＥ：Ｔ比２：１で、３７℃で４時間同時培養した。図４Ｆ及び４ＧはＣＡＲの能力を示し、ここでｓｃＦｖ４Ｄ５－５を２つの異なるＣＡＲシグナル伝達骨格に融合し（ジスルフィド結合が可能か又は可能ではない、すなわち４Ｄ５－５－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚの「Ｃｙｓ」（配列番号６１）及び４Ｄ５－５－８ｓｅｒ－ＢＢ－３ｚの「Ｓｅｒ」（配列番号６２））、細胞毒性（Ｇ）及びＩＦＮ－ガンマ産生（Ｆ）を誘発した。Ｖ_ＨとＶ_Ｌが２つの別々のポリペプチド（「Ｖ_ＨとＶ_Ｌ」；４Ｄ５－５（スプリット）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ（配列番号５８及び配列番号５９）に融合されたＣＡＲの機能は（Ｈ）に示されている。単量体シグナル伝達骨格が４Ｄ５－５－ｓｃＦｖに融合されたＣＡＲ４Ｄ５－５－８ｓｅｒ－ＢＢ－３ｚ（配列番号６２）を発現する初代Ｔ細胞を陽性対照とした。３人の異なるドナ－のＣＡＲＴ細胞（異なる記号で示されている）を、ｔＨＥＲ２でトランスフェクトしたジャーカットＴ細胞とトランスフェクトしていないジャーカットＴ細胞の混合物と、Ｅ：Ｔ比４：１：１で、３７℃で４時間同時培養し（Ｔ細胞：ｔＨＥＲ２^ｐｏｓジャ－カット細胞：ｔＨＥＲ２^ｎｅｇジャ－カット細胞）、生存活性のあるｔＨＥＲ２^ｐｏｓ及びｔＨＥＲ２^ｎｅｇ標的細胞の比率をフローサイトメトリーによって決定した。二量体化を誘導するために、Ｔ細胞を二量体化剤ＡＰ２０１８７で前処理した（１０ｎＭ、３０分、３７℃）。同じ濃度のＤＭＳＯによる処理を対照条件とした。ＣＡＲを含まないＴ細胞（「ＣＡＲなし」）及びＶ_Ｈ鎖のみを発現するＴ細胞（「４Ｄ５－５（Ｖ_Ｈ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ」（配列番号５９））を陰性対照とした。

図５：本発明のＣＡＲ群での使用に適したアフィボディベースの結合部分のスクリ－ニング。エピトープ結合に関与する可能性のあるすべてのアミノ酸をアラニンで置き換えることにより、アフィボディｚＨＥＲ２－ＷＴの親和性が低下した。ｚＨＥＲ２－ＷＴのさまざまな変種を、条件的二量体化のための細胞内ホモ二量体化ドメインＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）を含むＣＡＲシグナル伝達骨格８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚに融合した。これらのＣＡＲの構成を（Ａ）に示す。（ＢとＣ）それぞれ、ジャ－カットＴ細胞における標的抗原ｔＨＥＲ２の発現と、初代Ｔ細胞におけるアフィボディベースのＣＡＲの発現。初代Ｔ細胞とジャーカットＴ細胞を、各構築物をコードする５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔し、電気穿孔の２０時間後に発現を測定した。構築物を発現しない初代Ｔ細胞及びジャ－カットＴ細胞（それぞれ「ＣＡＲなし」及び「構築物なし」）を陰性対照として使用した。（Ｄ）初代Ｔ細胞における１３の異なるアフィボディベースのＣＡＲの発現（それぞれ「Ｌ９Ａ」、「Ｒ１０Ａ」、「Ｑ１１Ａ」、「Ｙ１３Ａ」、「Ｗ１４Ａ」、「Ｑ１７Ａ」、「Ｗ２４Ａ」、「Ｔ２５Ａ」、「Ｓ２７Ａ」」、「Ｒ２８Ａ」、「Ｒ３２Ａ」、「Ｙ３５Ａ」、及び「ｚＨＥＲ２－ＷＴ」）（ＣＡＲシグナル伝達骨格に融合されたアフィボディベースの抗原結合部分の配列は、配列番号２６～配列番号３８に示されている。初代Ｔ細胞を各構築物をコードする５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔し、電気穿孔の２０時間後に発現を測定した。構築物を発現しない（「ＣＡＲなし」）Ｔ細胞を陰性対照として使用した。（Ｅ）アフィボディベースのＣＡＲの二量体化誘導活性化。２人のドナ－からの初代Ｔ細胞（異なる記号で示されている）に、各構築物について５μｇを電気穿孔した。標的細胞の特異的溶解は、異なるＣＡＲＴ細胞をｔＨＥＲ２トランスフェクトと同時インキュベーションした後のルシフェラーゼベースの細胞毒性アッセイで決定された（３７℃で４時間、Ｅ：Ｔ比２：１）。ＣＡＲの二量体化は、Ｔ細胞をＡＰ２０１８７で前処理することによって誘導された（１０ｎＭ、３０分、３７℃）。同じ濃度のＤＭＳＯによる処理を対照条件とした。ＣＡＲのない（「ＣＡＲなし」）Ｔ細胞を陰性対照とした。図５Ｆは、ＩｇＧ１のＦｃドメインに融合したＨＥＲ２の細胞外ドメインを含むキメラＨＥＲ２タンパク質でコ－ティングされたマトリックスを使用して、ＳＰＲ分析によって決定された、ヒトＨＥＲ２に対するそれぞれのアフィボディベースの結合部分（ス－パ－フォルダ－ＧＦＰ（ｓｆＧＦＰ）に融合）のＫ_ｄ値を示す。親和性は速度論的モードで決定された。

図６：ＮＳＧマウスモデルにおけるインビボで安定的に形質導入されたＣＡＲＴ細胞の機能の調節。（Ａ）インビボＮＳＧマウスモデルにおけるＣＡＲの二量体化誘導性活性化の有効性。９～１６週齢のＮＳＧマウスに、ルシフェラーゼ及びｔＥＧＦＲをコードするベクターを安定的に形質導入した０．５ｘ１０^６のＮａｌｍ６細胞（「Ｎａｌｍ６－ｔＥＧＦＲ－ｆＬｕｃ」）を静脈内注射した。３日後、ＮＳＧマウスは、１０ｘ１０^６ＣＡＲＴ細胞の静脈内投与によって治療された（抗ＣＤ３／ＣＤ２８抗体被覆ビ－ズによる活性化の１４日後、すなわち、安定的形質導入の１３日後）。リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）の注射を対照条件とした。４匹のマウスからなるＳ（ＷＴ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ（配列番号４９）で処置された群を除いて、５匹のＮＳＧマウスが各処置群に使用された。二量体化は、２ｍｇ／ｋｇのホモ二量体化剤ＡＰ２０１８７を１１日間（注射の日数を矢印で示す）にわたって腹腔内投与することによって誘導された。二量体化剤を投与されなかった群は、対照条件として各ビヒクル溶液を腹腔内投与された。腫瘍サイズ（各処置群の平均）は、ＮＳＧマウスの全身を含む目的領域内で決定された総光子束として示されている。（Ｂ）は、Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ（配列番号４６）ＣＡＲＴ細胞で処置されたが、１１日目まで二量体化剤ＡＰ２０１８７を投与されなかったマウスにおける二量体化剤の投与の延長が、効率的なＣＡＲの活性化と腫瘍増殖の制御をもたらすことを示す。

図７：インビトロで安定的に形質導入されたＣＡＲＴ細胞の機能の調節。（Ａ）実施例５のインビボ実験に使用されたホモ二量体化ＣＡＲ分子の略図。（Ｂ）抗ＣＤ３／ＣＤ２８抗体被覆ビ－ズによる活性化の１４日後（すなわち、各ＣＡＲ構築物による安定的形質導入の１３日後）の初代ヒトＴ細胞における、ＥＧＦＲに対して高親和性又は低親和性を有する抗原結合部分を含むＣＡＲ分子の発現（すなわち、それぞれＳ（ＷＴ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ「Ｅ１１．４．１－ＷＴ」（配列番号４９）及びＳ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ「Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ」（配列番号４６））。ＣＡＲのない（「ＣＡＲなし」）Ｔ細胞を陰性対照とした。（Ｃ）抗ＣＤ３／ＣＤ２８抗体被覆ビ－ズによる活性化の１４日後（すなわち、安定的形質導入の１３日後）の初代ヒトＴ細胞における、抗ＣＤ１９ＣＡＲＣＤ１９－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ「ＣＤ１９－ＢＢｚ」（配列番号６０）の発現。ＣＡＲのない（「ＣＡＲなし」）Ｔ細胞を陰性対照とした。（Ｄ及びＥ）それぞれＮａｌｍ６－ｆＬｕｃ及びＮａｌｍ６－ｔＥＧＦＲ－ｆＬｕｃ細胞におけるｔＥＧＦＲの発現。未染色の細胞と各アイソタイプ対照を陰性対照とした。（Ｆ及びＧ）異なるＣＡＲ分子を発現する初代ヒトＴ細胞によるＮａｌｍ６－ｆＬｕｃ及びＮａｌｍ６－ｔＥＧＦＲ－ｆＬｕｃ細胞の溶解。３人のドナ－の初代Ｔ細胞（異なる記号で示されている）は、ｒｃＳｓｏ７ｄベースのＣＡＲ（Ｓ（ＷＴ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ「Ｅ１１．４．１－ＷＴ」及びＳ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ「Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ」）、又はＣＤ１９に対するｓｃＦｖベースのＣＡＲ（ＣＤ１９－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ「ＣＤ１９－ＢＢｚ」）（これを陽性対照とした）をコードするベクターで安定的に形質導入された。ＣＡＲのない（「ＣＡＲなし」）Ｔ細胞を陰性対照とした。ＡＰ２０１８７を、「Ｅ１１．４．１－ＷＴ」（Ｓ（ＷＴ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ）及び「Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ」（Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ）の非共有結合性二量体化の調節分子とした。二量体化は、Ｔ細胞を１０ｎＭのＡＰ２０１８７で３７℃で３０分間前処理することにより誘導された。同じ濃度のＤＭＳＯを用いる処理を対照条件とした。改変Ｔ細胞の細胞毒性は、Ｅ：Ｔ比１０：１で３７℃で４時間同時培養した後、生存活性のあるルシフェラーゼ発現標的細胞を定量することによって決定された。

図８：腫瘍微小環境に蓄積する細胞外因子の例としてのＶＥＧＦによって調節できるＣＡＲの生成。示されている例では、可溶性因子ＶＥＧＦを調節分子として使用し、ＥＧＦＲ特異的抗原結合部分Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａを抗原結合部分として使用した。それぞれのＣＡＲの構成の略図を（Ａ）と（Ｂ）に示す。５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔から２０時間後のジャーカットＴ細胞における標的抗原ｔＥＧＦＲの発現を（Ｃ）に示す。初代ヒトＴ細胞における２つのポリペプチドの発現は、抗ＩｇＧ１抗体を使用して検出した（Ｄ）。ＶＥＧＦ結合部位を含むＣＡＲ分子（膜貫通ドメインを含まないＪａｎｕｓ－ＣＴ６－Ｆｃドメイン）の検出、及びＩｇＧ－Ｆｃドメインを含まない対照ＣＡＲのために、抗ＳｔｒｅｐＩＩ－タグ抗体が追加的に使用された。初代Ｔ細胞のさまざまなＣＡＲによって引き起こされる細胞毒性は、ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイで決定された（Ｅ）。３人の異なるドナ－（異なる記号で示されている）からのＣＡＲＴ細胞を、ｔＥＧＦＲをトランスフェクトしたジャーカット細胞と、Ｅ：Ｔ比４：１：１（Ｔ細胞：ｔＥＧＦＲ^ｐｏｓジャーカット細胞：ｔＥＧＦＲ^ｎｅｇジャーカット細胞）で３７℃で４時間同時培養した。ＣＡＲの二量体化は、Ｔ細胞をＶＥＧＦで前処理することによって誘導された（示された濃度、３０分、３７℃）。ＣＡＲのない（「ＣＡＲなし」）Ｔ細胞は陰性対照とし、ＣＡＲＳ（ＷＴ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚのあるＴ細胞は陽性対照とした。

図９：ＥＧＦＲとＨＥＲ２を同時発現している標的細胞を特異的に認識できるＣＡＲＴ細胞の機能的特性評価。（Ａ）細胞外システイン残基がセリン残基で置換されたシグナル伝達骨格に融合した低親和性結合部分Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ（ＥＧＦＲを標的とする）及びｚＨＥＲ２－Ｒ１０Ａ（ＨＥＲ２を標的とする）を含む、ＣＡＲ群「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ－３ｚ＋Ａ（Ｒ１０Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＲＢ－３ｚ」（配列番号４８及び配列番号５４）の略図。２つの無関係なエピトープタグ（ＦＬＡＧタグとＳｔｒｅｐＩＩタグ）を使用すると、両方の鎖の発現を効率的に検出できる。ヘテロ二量体化ドメインＦＫＢＰ及びＦＲＢは、調節分子ＡＰ２１９６７を介してＣＡＲ分子の特異的ヘテロ二量体化を仲介する。（Ｂ）２つの異なる低親和性結合部分（Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ及びｚＨＥＲ２－Ｒ１０Ａ）が、単一のＣＡＲ分子の外部ドメインに（柔軟な２ｘＧ_４Ｓリンカーを介して）連続して組み込まれる、タンデム－ＣＡＲ「Ａ（Ｒ１０Ａ）－Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ」（配列番号７１）の略図。（Ｃ及びＤ）各５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔から２０時間後のヒト初代Ｔ細胞におけるＣＡＲ構築物の発現。ＣＡＲのない（「ＣＡＲなし」）初代Ｔ細胞を陰性対照とした。（Ｅ及びＦ）各５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔から２０時間後の、ジャーカットＴ細胞におけるｔＥＧＦＲ又はｔＨＥＲ２あるいはその両方の発現。トランス遺伝子を発現しない（「構築物なし」）ジャーカットＴ細胞を陰性対照とした。調節分子ＡＰ２１９６７の存在下及び非存在下でのＣＡＲ群の機能を（Ｇ）に示す。ＣＡＲ群「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ－３ｚ＋Ａ（Ｒ１０Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＲＢ－３ｚ」又はタンデム－ＣＡＲ「Ａ（Ｒ１０Ａ）－Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ」又はＣＡＲなし（示されている）を発現する３つの異なるドナ－からのＴ細胞（異なる記号で示される）を、ｔＥＧＦＲ（「ＥＧＦＲ」）又はｔＨＥＲ（「ＨＥＲ２」）又は両方（「ＥＧＦＲ／ＨＥＲ２」）を発現するジャ－カットＴ細胞と同時培養した。Ｔ細胞との同時培養（Ｅ：Ｔ比４：１：１（Ｔ細胞：トランス遺伝子^ｐｏｓジャーカット細胞：トランス遺伝子^ｎｅｇジャーカット細胞）で３７℃で４時間）後の、標的抗原発現ジャーカット細胞の溶解を、フローサイトメトリーにより定量化した。群のＣＡＲ分子の二量体化は、Ｔ細胞を５００ｎＭのＡＰ２１９６７で３７℃で３０分間前処理することによって誘導された。同じ濃度のエタノールによる処理を対照条件とした。ＣＡＲのない（「ＣＡＲなし」）Ｔ細胞を陰性対照とした。

図１０：３つ及び４つのＣＡＲ分子からなるＣＡＲ群の機能的特性評価。（Ａ及びＢ）それぞれ３つ又は４つのＣＡＲ分子からなるＣＡＲ群の略図。（Ｃ及びＤ）各構築物の５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔から２０時間後の、ジャーカットＴ細胞における三量体及び四量体ＣＡＲ群の発現。構築物を発現しない（「ＣＡＲなし」）ジャーカットＴ細胞を陰性対照として使用した。

図１１：構成的な複合体形成のためのヘテロ二量体化ドメインを含むＣＡＲ群の機能的特性評価。（Ａ）それぞれがロイシンジッパ－ベースのヘテロ化ドメイン（「ＥＥ」及び「ＲＲ」）を含む２つのＣＡＲ分子からなるＣＡＲ群の略図。（Ｂ及びＣ）各構築物の５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔から２０時間後のジャーカットＴ細胞におけるＣＡＲ群の発現。構築物を発現しない（「ＣＡＲなし」）ジャーカットＴ細胞を陰性対照として使用した。（Ｄ及びＥ）各構築物の５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔から２０時間後の、初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲ群の発現。構築物を発現しない（「ＣＡＲなし」）初代ヒトＴ細胞を陰性対照として使用した。４人の異なるドナ－の初代ヒトＴ細胞（異なる記号で示されている）におけるＣＡＲ群の機能を（Ｆ）に示す。ＥＧＦＲとＨＥＲ２の両方、又はＥＧＦＲ若しくはＨＥＲ２のみを発現する標的細胞に応答するＴ細胞の細胞毒性を、ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイを使用して決定した。構築物を発現しないＴ細胞（「ＣＡＲなし」）及び示された構築物を発現するＣＡＲＴ細胞を、各ジャ－カットＴ細胞（「ｔＥＧＦＲ」、「ｔＨＥＲ２」、又は「ｔＥＧＦＲ／ｔＨＥＲ２」）と３７℃で４時間、Ｅ：Ｔ比４：１：１（Ｔ細胞：トランス遺伝子^ｐｏｓジャーカット細胞：トランス遺伝子^ｎｅｇジャーカット細胞）で同時培養した。統計的有意性は、一元配置分散分析（ＧｒａｐｈＰａｄＰＲＩＳＭソフトウェアを用いて）を使用して計算された（＊＝ｐ＜０．０５；ｎｓ＝ｐ＞０．０５）。

図１２：異なる同時刺激分子を含むＣＡＲ群の発現と機能。（Ａ）それぞれがその同時刺激シグナル伝達領域にＣＤ２８又はＩＣＯＳ又はＯＸ４０の同時刺激ドメインのいずれかを含む２つのＣＡＲ分子からなるＣＡＲ群の略図。（Ｂ及びＣ）それぞれジャーカットＴ細胞又は初代ヒトＴ細胞における５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔の２０時間後のＣＡＲ分子の発現（赤いヒストグラム）。構築物を発現しない（「ＣＡＲなし」）ジャ－カットＴ細胞又は初代ヒトＴ細胞を、それぞれ陰性対照として使用した（塗りつぶした青いヒストグラム）。（Ｄ）Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＯＸ４０－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚをコードする５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔したジャーカットＴ細胞におけるＮＦ－κＢ及びＮＦ－ＡＴプロモーターの誘導。これらの細胞は、ＡＰ２０１８７の存在下又は非存在下で、ｔＥＧＦＲをコードする５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔したジャーカットＴ細胞と、さらに２０時間同時培養したか又は同時培養しなかった。ＣＡＲを発現するレポーター細胞におけるＮＦ－κＢ及びＮＦ－ＡＴプロモーターの誘導は、それぞれ、増強された緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）とＧＦＰのシアン蛍光変種（ＣＦＰ）の発現のフローサイトメトリー分析によって検出された。示されたＣＡＲ分子を発現する初代ヒトＴ細胞の細胞毒性を（Ｅ）に示す。各ＣＡＲ分子をコードする５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔の２０時間後、Ｔ細胞を標的細胞とＥ：Ｔ比４：１：１（Ｔ細胞：ｔＥＧＦＲ^ｐｏｓジャ－カット細胞：ｔＥＧＦＲ^ｎｅｇジャ－カット細胞）で、３７℃でさらに４時間又は２０時間同時培養した。群のＣＡＲ分子の二量体化は、ジャーカット細胞（Ｄ）と初代ヒトＴ細胞（Ｅ）を、１０ｎＭのＡＰ２０１８７で３７℃で３０分間前処理することによって誘導された。同じ濃度のＤＭＳＯによる処理を対照条件とした。

図１３：異なるＣＡＲシグナル伝達骨格に融合されたｒｃＳｓｏ７ｄ及びアフィボディベースの結合部分を含むＣＡＲ分子の発現。（Ａ）各５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔の２０時間後の初代ヒトＴ細胞における、ＣＡＲ構築物「Ｍｙｃ－Ｓ（１８．４．２）－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号３９）、「Ｓ（１８．４．２）－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号４０）、及び「Ｓ（１８．４．２）－Ｇ４Ｓ－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号４１）の発現。ＣＡＲのない初代Ｔ細胞を陰性対照とした（塗りつぶしたヒストグラム）。発現は、ヒトＥＧＦＲの細胞外ドメイン、ＩｇＧ１のＦｃドメイン、及び抗ヒトＩｇＧ１抗体からなる融合タンパク質を使用して検出した。（Ｂ）各５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔の２０時間後の初代ヒトＴ細胞における、ＣＡＲ構築物「Ｓ（ＷＴ）－Ｇ４Ｓ－ｍｙｃ－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号４２）、「Ｓ（ＷＴ）－Ｇ４Ｓ－ＳｔｒｅｐＩＩ－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号４３）、及び「Ｓ（ＷＴ）－Ｇ４Ｓ－ｈｉｓ－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号４５）の発現。ＣＡＲのない初代Ｔ細胞を陰性対照とした（塗りつぶしたヒストグラム）。ＣＡＲの発現は、それぞれ抗ｃ－ｍｙｃ抗体、抗ＳｔｒｅｐＩＩ抗体、又は抗ヘキサヒスチジン抗体のいずれかを使用して検出した。（Ｃ）各５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔の２０時間後の初代ヒトＴ細胞における、ＣＡＲ構築物「Ｓ（ＷＴ）－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号７９）、「Ｓ（Ｇ２５Ａ）－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号７７）、「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号４３）、「Ｓ（ＷＴ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号８０）、「Ｓ（Ｇ２５Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号７８）、「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－３ｚ」（配列番号４４）の発現。ＣＡＲのない初代Ｔ細胞を陰性対照とした（塗りつぶしたヒストグラム）。発現は抗ＳｔｒｅｐＩＩ抗体を使用して検出した。（Ｄ）各５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔の２０時間後の初代ヒトＴ細胞における、ＣＡＲ構築物「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ」（配列番号４６）、「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＲＢ－３ｚ」（配列番号４７）、「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ－３ｚ」（配列番号４８）、「Ａ（ＷＴ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ」（配列番号５２）、「Ａ（ＷＴ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＲＢ－３ｚ」（配列番号５３）、「Ａ（Ｒ１０Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＲＢ－３ｚ」（配列番号５４）の発現。ＣＡＲのない初代Ｔ細胞を陰性対照とした（塗りつぶしたヒストグラム）。示されているように、発現は、抗ＦＬＡＧ抗体、抗ＳｔｒｅｐＩＩ抗体、又は抗ヘキサヒスチジン抗体のいずれかを使用して検出した。

図１４は、さまざまなＣＡＲ分子の設計の略図を示す。対応するアミノ酸配列を図１５に示す。

図１５は、さまざまなＣＡＲ分子のアミノ酸配列を示す。

実施例１
本発明のＣＡＲ群で使用するためのｒｃＳｓｏ７ｄに基づく低親和性単一ドメイン抗原結合部分の作成
第１の実施例は、本発明のＣＡＲ群での抗原結合部分としての使用に適した、低親和性の抗原結合部分を作成するための戦略を示す。電荷の低減したＳｓｏ７ｄ（ｒｃＳｓｏ７ｄ）は、古細菌スルホロブス・ソルファタリカス（Sulfolobus solfataricus）からの小さな（約７ｋＤａ）ＤＮＡ結合タンパク質の電荷低減バージョンである。電荷低減は、静電相互作用の低下により非特異的結合を最小限に抑える。ｒｃＳｓｏ７ｄは、高い熱安定性と単量体挙動を示す単一ドメインのタンパク質抗原結合部分であるため、適切な結合足場の例である。１９ｎＭのＫ_ｄでヒトＥＧＦＲに結合する十分に特性解析された抗原結合部分ｒｃＳｓｏ７ｄＥ１１．４．１（Traxlmayr et al., J Biol Chem. 2016;291(43):22496-22508）から出発して、我々は、エピトープ結合に関与する可能性のあるすべてのアミノ酸をアラニンに置き換えるアラニンスキャンを実行することにより、すなわち、各変種において抗原結合に関与する１つの位置をアラニンに変異させることにより、低親和性変異体を作成した。ｒｃＳｓｏ７ｄＥ１１．４．１の変異体をｓｆＧＦＰに融合し、細菌発現系で可溶性タンパク質として発現した。融合タンパク質の構成の略図を図１４Ｇに示す。結合親和性は、（ｉ）高レベルの各標的抗原ＥＧＦＲを発現するようにｍＲＮＡ電気穿孔によって工学作成されたジャ－カットＴ細胞上で、ｓｆＧＦＰとの結合部分の可溶性融合タンパク質の力価測定実験を行うことによって、及び（ｉｉ）ＩｇＧ－Ｆｃに融合したＥＧＦＲの細胞外ドメインを充填したプロテインＡチップでＳＰＲ実験を行うことによって、決定された。アラニンスキャンの結果と抗原結合部分の得られた親和性を図２に示す。

タンパク質抗原結合部分のアラニンスキャン：
エピトープ結合に関与するすべてのアミノ酸の部位特異的変異誘発は、QuikChange Lightning 部位特異的変異誘発キット（Agilent Genomics）を使用して、製造業者の指示に従って行った。プライマ－はQuikChangePrimer Design ソフトウェア（Agilent Genomics）を使用して工学作成され、オリコヌクレオチドはBiomersによって合成された。

ｒｃＳｓｏ７ｄベースの抗原結合部分の発現と精製：
結合足場は、ｐＥ－ＳＵＭＯベクター（Life Sensors）を使用して、ｓｆＧＦＰ融合タンパク質（ｒｃＳｓｏ７ｄ又はアフィボディとｓｆＧＦＰが後に続くＮ末端ヘキサヒスチジンタグから成る）として発現された。ｓｆＧＦＰレポータータンパク質をコードするヌクレオチド配列は、Addgeneから得られた（プラスミド＃５４７３７）。簡単に説明すると、大腸菌細胞（ＴｕｎｅｒＤＥ３）は、配列が検証されたプラスミドを用いて熱ショック形質転換を使用して形質転換された。３７℃で一晩培養した後、培養物を、カナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）を補足した素晴らしいブロス（ＴＢ）培地（１２ｇ／Ｌトリプトン、２４ｇ／Ｌ酵母エキス、４％グリセロール、２．３１ｇ／ＬＫＨ_２ＰＯ_４、及び１６．４３ｇ／ＬＫ_２ＨＰＯ_４・３Ｈ_２Ｏ）で１：１００に希釈し、３７℃で振盪しながらインキュベートした。培養物が約２のＡ_６００に達したとき、１ｍＭのイソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）の添加によりトランス遺伝子の発現を誘導し、細胞をさらに２０℃で一晩培養した。細胞を遠心分離（５０００ｇ、２０分、４℃）して回収し、超音波処理緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭＮａＣｌ、３％グリセロール、１％トリトンＸ－１００、ｐＨ８．０）に再懸濁し、超音波処理（２ｘ９０秒、デュ－ティサイクル５０％、振幅を５に設定）し、再度遠心分離して細胞片を除去した。ヘキサヒスチジンタグ付き融合タンパク質は、粗細胞抽出物からＴＡＬＯＮ金属親和性樹脂（Clontech Laboratories）を使用して精製した。１０ｍＭイミダゾールを添加後、超音波処理した上清を樹脂に２回適用し、続いてイミダゾールの量を増やしながら（５～１５ｍＭ）、平衡化緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ８．０）による洗浄工程を行った。２５０ｍＭイミダゾールを補足した平衡化緩衝液を適用することにより、結合足場を溶出した。Amicon Ultra-15 10K 遠心フィルタ－（Merck Millipore）を使用して緩衝液をＰＢＳに交換した後、各モル吸光係数を使用して２８０ｎｍの吸光度を測定することにより濃度を決定し、最後にタンパク質を－８０℃で直接凍結した。

ヒト細胞株の維持：
ジャーカットＴ細胞は、Children's Cancer Research Institute（CCRI）のDr. Sabine Strehlから供与され、１０％ＦＣＳ（Sigma Aldrich）と１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Thermo Scientific）を補足したＲＰＭＩ－１６４０（Thermo Scientific）で維持された。細胞株はマイコプラズマ汚染について定期的に試験し、認証はドイツのMultiplexionで行われた。細胞密度は、フローサイトメーターベースの細胞計数プラットフォームであるAccuCheck計数ビ－ズ（Thermo Scientific）を用いてモニタ－された。

ｍＲＮＡのインビトロ転写と電気穿孔：
インビトロ転写は、mMessage mMachine T7 Ultra キット（Ambion）を製造業者の指示に従って使用して行われた。５０～２００ｎｇのカラム精製ＰＣＲ産物を反応テンプレートとして使用した。得られたｍＲＮＡは、RNeasyカラム精製キット（Qiagen）を使用して、適合プロトコールを用いて精製した。簡単に説明すると、ｍＲＮＡ溶液は、ＲＬＴ緩衝液（Qiagen）、エタノール（Merck）、及び２－メルカプトエタノール（Merck）の混合物で希釈した。混合物はRNeasyカラムに充填し、製造業者の指示に従って精製した。溶出はヌクレア－ゼ不含水（Thermo Scientific）で行われ、精製されたｍＲＮＡは電気穿孔のときまで－８０℃で凍結された。一過性のトランス遺伝子発現のために、ジャーカットＴ細胞を、Gene Pulser（Biorad）を使用してさまざまな量の各ｍＲＮＡで電気穿孔した。以下のプロトコールを各細胞タイプに使用した：ジャーカットＴ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、３ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）。

抗体とフローサイトメトリー：
ジャーカットＴ細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ（Thermo Scientific）、０．２％ヒトアルブミン（CSL Behring）、０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁し、１０％ヒト血清で４℃で１０分間処理した。細胞を各１次抗体を用いて４℃で２５分間染色した。染色した細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、BD LSRFortessaを用いて直接処理した。工学作成された標的抗原ｔＥＧＦＲの発現は、ＰＥ－又はＡＰＣ－結合抗ＥＧＦＲ抗体（クローンＡＹ１３、BioLegend）のいずれかを用いて検出した。分析はFlowJoソフトウェアによって行った。

細胞膜上の結合親和性の決定：
ジャーカットＴ細胞は、各腫瘍抗原を高レベルで発現するように工学作成された。従って、ｔＥＧＦＲをコードする３μｇのｍＲＮＡでジャーカットＴ細胞を電気穿孔し、１日後にエフェクター細胞と同時培養した。ＰＢＳで洗浄した後、細胞を０．１％ＢＳＡ（Sigma Aldrich）を含むＰＢＳに再懸濁し、ｓｆＧＦＰに融合したさまざまな濃度のバインダ－タンパク質とインキュベートして、各腫瘍抗原に対する抗原結合部分の親和性を決定した。振盪しながら４℃で１時間インキュベートした後、プレートを遠心分離し（４５０ｇ、７分、４℃）、上清を廃棄し、BD LSRFortessaを用いて細胞を取得した。エンドサイトーシスを避けるために、細胞を氷上に置いた。Ｋ_ｄは、Microsoft Excel（Microsoft Corporation）を使用してカーブフィッティングによって得た。

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用した結合親和性の決定：
Biacore T200機器（GE Healthcare）を使用して、ＳＰＲ実験を行った。すべての実験は、０．１％ＢＳＡ及び０．０５％ツイーン－２０（Merck Millipore）を含有する脱気及び濾過されたＰＢＳ、ｐＨ７．４中で２５℃で行った。ｈＥＧＦＲ－Ｆｃ（R&D）を、プロテインＡセンサーチップ（GE Healthcare）に１０μＬ／分の流速で６０秒間、６．６７μｇ／ｍＬの濃度で固定化した。ｒｃＳｓｏ７ｄベースの抗原結合部分の親和性を決定するために、各タンパク質の５つの濃度（抗原結合部分の予想されるＫ_ｄに応じて）を３０μＬ／分の流速で１５秒間、単一サイクル速度論モードで注入し、続いて解離工程（３０秒）を行った。再生は、１０ｍＭグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ１．７を使用し、流速３０μＬ／分で３０秒間行った。Ｋ_ｄは、Biacore T200評価ソフトウェア（GE Healthcare）を使用してカーブフィッティングによって得た。

実施例２
細胞外ジスルフィド結合形成システインはＣＡＲ群のＡＮＤゲート機能に対する結合活性効果の完全な使用を防ぐ
例えばＣＤ８αなどの細胞外ヒンジ領域における細胞外ジスルフィド結合形成システインは、本発明の結合活性効果の使用を防ぐことができる。これは、実施例２で証明され、ここで、実施例１の結合部分「Ｅ１１．４．１Ｇ３２Ａ」の低親和性変異体はＣＡＲシグナル伝達骨格に融合され、ここで、ＣＤ８αのヒンジ領域にある２つの細胞外システイン残基（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤＰ０１７３２、位置Ｃ１６４及びＣ１８１）は、それぞれセリン残基で置換されたか又は置換されなかった。システイン含有ＣＡＲ変種（「Ｃｙｓ」）が標的細胞に応答してＴ細胞活性化を効率的に誘発したのに対し、セリン含有変種（「Ｓｅｒ」）はＴ細胞を誘発しなかったか、又は弱く誘発した。従ってこの実施例は、本発明のＣＡＲ群での使用に適したＣＡＲ分子を作成するためのジスルフィド結合形成を防止することの重要性を示す。図３Ａ中の図は、試験された構築物の工学作成を示す。図３Ｂ及び３Ｃは、ＣＡＲ及び標的抗原の発現を示す。初代ヒトＴ細胞を、各構築物の５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔し、電気穿孔の２０時間後にＳｔｒｅｐＩＩタグを介してＣＡＲ発現を検出した。ジャーカットＴ細胞を、ＥＧＦＲの末端切断型バージョン（ｔＥＧＦＲ）をコードする３μｇのｍＲＮＡで電気穿孔した。完全長ＥＧＦＲをＮ末端とＣ末端の両方で切断して機能的に不活性なヒトポリペプチドを作成し、これは、その天然のリガンドＥＧＦに結合できないことと、キナ－ゼドメインが存在しないことのために、二量体化特性が低下させた（Wang et al., Blood. 2011;118(5):1255-1263）。得られたトランス遺伝子は、顆粒球マクロファージコロニ－刺激因子２受容体アルファサブユニット（ＧＭ－ＣＳＦ－Ｒａ）のリ－ダ－配列と、２つの細胞外膜近位ドメイン及び膜貫通ドメインとを含むヒトＥＧＦＲのアミノ酸３３４～６７５（ＵｎｉｐｒｏｔＰ００５３３）で構成された。トランス遺伝子の発現は、ＥＧＦＲに対する抗体を介する電気穿孔の２０時間後に検出された。Ｔ細胞を電気穿孔してから２０時間後、ＣＡＲの機能は、ルシフェラーゼベースの細胞毒性アッセイ（図３Ｄ）を使用し、及びＴ細胞から放出されたサイトカインをＥＬＩＳＡを使用して定量することによって決定された（図３Ｅ）。図３Ｄ及び３Ｅは、試験された親和性が最も低い抗原結合部分（「Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ」）が、標的細胞との二価相互作用の場合にのみＴ細胞を誘発できることを示し、すなわち、ＣＤ８αヒンジ（「Ｃｙｓ」）中にシステインを含むＣＡＲに融合した場合にのみ誘発できるが、これらのシステインがセリン（「Ｓｅｒ」）に置換されたＣＡＲに融合した場合は、誘発できないか、弱く誘発した。逆に、親和性が上昇した抗原結合部分（Ｅ１１．４．１－ＷＴ及びＥ１１．４．１－Ｇ２５Ａ）は、「Ｓｅｒ」ＣＡＲ骨格に融合した場合は、一価の相互作用でも強力な細胞毒性を誘発した。まとめると、この例は、システインを含むＣＡＲ分子はホモ二量体化して、単一陽性の標的細胞（つまり、１つの抗原のみを発現する標的細胞）によるＣＡＲの活性化をもたらし得ることを示す。しかしながら、本発明の目的は、所定の抗原の組み合わせ（すなわち、ＡＮＤゲートＣＡＲ機能）を発現する標的細胞を特異的に認識するＣＡＲ群を構築することである。従って、本発明のＣＡＲ群の各ＣＡＲ分子の外部ドメインは、群の他のＣＡＲ分子とそれぞれ分子間ジスルフィド結合を形成することができるシステインアミノ酸部分を含まない。

ヒト細胞株の維持：
初代ヒトＴ細胞は、アフェレ－シス後の匿名の健康なドナ－の血液から得た（Austrian Red Cross, Vienna, Austriaからのバフィーコート）。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、RosetteSep ヒトＴ細胞濃縮カクテル（STEMCELL Technologies）を使用して負の選択によって濃縮された。単離及び精製されたＴ細胞は、２０％ＦＣＳ及び１０％ＤＭＳＯ（Sigma Aldrich）を補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で、使用するまで凍結保存された。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビ－ズ（Thermo Scientific）を用いて製造業者の指示に従って活性化され、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び２００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２（Peprotech）を補足したＲＰＭＩ－１６４０からなるヒトＴ細胞培地で増殖された。実験を行う前に、初代Ｔ細胞は少なくとも１４日間培養された。ジャーカットＴ細胞は、CCRIのDr. Sabine Strehlから供与され、１０％ＦＣＳ及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０で維持された。細胞株はマイコプラズマ汚染について定期的に試験し、認証はMultiplexion, Germanyで行われた。細胞密度は、AccuCheck計数ビ－ズを用いてモニタ－した。

ｍＲＮＡのインビトロ転写と電気穿孔：
インビトロ転写は、mMessage mMachine T7 Ultra キットを使用して製造業者の指示に従って行った。５０～２００ｎｇのカラム精製ＰＣＲ産物を反応テンプレートとして使用した。得られたｍＲＮＡは、RNeasyカラム精製キットを使用して、適合プロトコールを用いて精製した。簡単に説明すると、ｍＲＮＡ溶液を、ＲＬＴ緩衝液、エタノール、及び２－メルカプトエタノールの混合物で希釈した。混合物はRNeasyカラムに充填し、製造業者の指示に従って精製した。溶出はヌクレア－ゼ不含水で行い、精製されたｍＲＮＡは電気穿孔のときまで－８０℃で凍結した。一過性のトランス遺伝子発現のために、Gene Pulser（Biorad）を使用して、初代Ｔ細胞又をジャーカットＴ細胞をさまざまな量の各ｍＲＮＡで電気穿孔した。以下のプロトコールを各細胞タイプに使用した：初代Ｔ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、５ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）、ジャーカットＴ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、３ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）。

抗体とフローサイトメトリー：
初代ヒトＴ細胞又は腫瘍細胞株をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、及び０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁し、１０％ヒト血清で４℃で１０分間処理した。細胞を各１次抗体を用いて４℃で２５分間染色した。染色された細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、２次抗体で４℃で２５分間染色したか、又はBD LSRFortessaで直接処理した。ＣＡＲ構築物の発現は、ＳｔｒｅｐＩＩタグを介して抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体（クローン５Ａ９Ｆ９、Genscript）を１次抗体として使用して、及びＰＥ－又はＡＰＣ－結合２次抗体（eBioscience）を使用して検出した。工学作成された標的抗原ｔＥＧＦＲの発現は、ＰＥ－又はＡＰＣ－結合抗ＥＧＦＲ抗体（クローンＡＹ１３、BioLegend）のいずれかを用いて検出した。分析はFlowJoソフトウェアによって行った。

トランス遺伝子構築物の構築：
シグナルペプチドＣＤ３３、ヒトＣＤ８αヒンジ、ヒト単量体ＣＤ８αヒンジ（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤＰ０１７３２、Ｃ１６４Ｓ、及びＣ１８１Ｓ）、及びＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ同時刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインをコードするヌクレオチド配列は、GenScriptによって合成された。ＥＧＦＲの細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインをコードする配列は、Addgeneから得られた（プラスミド＃１１０１１）。ＳｔｒｅｐＩＩタグ（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ）と柔軟性リンカーの挿入はＰＣＲによって行った。機能的トランス遺伝子へのヌクレオチド配列の組み立ては、ギブソン組み立てマスターミックス（Gibson Assembly Master Mix）（New England BioLabs）を使用して、製造業者の指示に従って行った。図と配列をそれぞれ図１４と図１５に示す。得られた構築物はＰＣＲにより増幅し、その後インビトロ転写に使用した。

ルシフェラーゼベースの細胞毒性アッセイ：
ルシフェラーゼ発現腫瘍細胞を、ＣＡＲＴ細胞とＥ：Ｔ細胞比２：１で、白い丸底９６ウェルプレート（Sigma Aldrich）中で、フェノ－ル不含ＲＰＭＩ（Thermo Scientific）、１０％ＦＣＳ、１％Ｌ－グルタミン（Thermo Scientific）、及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンからなる細胞毒性アッセイ培地の１０，０００個の標的細胞／ウェルを、３７℃で４時間同時培養した。最後に、残りの生細胞は、同時培養物の残留ルシフェラーゼ活性を測定することによって定量化した。室温で１０分間平衡化した後、ルシフェリンを細胞懸濁液（１５０μｇ／ｍＬ最終濃度；Perkin Elmer）に添加し、ルシフェラーゼ活性を２０分後にENSPIREマルチモードプレートリ－ダ－を使用して測定した。具体的な溶解の割合は、次の式で決定した：
％特異的溶解＝１００－（（エフェクターと標的細胞の同時培養物を含むウェルからのＲＬＵ）／（標的細胞のみを含むウェルからのＲＬＵ）ｘ１００））。

ＣＡＲＴ細胞によるサイトカイン放出：
初代ＣＡＲＴ細胞のサイトカイン分泌は、標的細胞とＥ：Ｔ比１：１又は２：１で平底９６ウェルプレート中で、３７℃で４時間又は２４時間同時培養することにより評価した。いくつかの実験では、放出されたサイトカインは、細胞毒性を決定するための同時培養実験からの上清で定量化した。上清を遠心分離（１６００ｒｐｍ、７分、４℃）して残りの細胞と破片を除去し、続いて－８０℃で凍結した。分泌されたＩＦＮ－γの分析のために、ヒトＩＦＮガンマELISA Ready-SET-Go!（登録商標）キット（eBioscience）を製造業者の指示に従って使用して、ＥＬＩＳＡを行った。測定は、ENSPIREマルチモードプレートリ－ダ－を使用して行った。

実施例３
１本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は細胞膜でＣＡＲのクラスター化を誘発し、それによって抗原の組み合わせを特異的に認識するための結合活性効果の使用を防ぐことができる
第３の例は、ｃａｒ分子へのｓｃＦｖベースの結合部分の組み込みが、抗原の組み合わせの特異的な認識のための結合活性効果の使用を防ぐことができることを示す。図４Ａに示されているＣＡＲ構築物の略図は、試験されたＣＡＲ変種（４Ｄ５－５－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ、４Ｄ５－５－８ｓｅｒ－ＢＢ－３ｚ、４Ｄ５－５（ｓｐｌｉｔ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ）の設計を示す。示されている例では、ＨＥＲ２に対するｓｃＦｖ４Ｄ５－５は抗原結合部分として使用し、単量体（「Ｓｅｒ」）又は二量体（「Ｃｙｓ」）のＣＡＲシグナル伝達骨格のいずれかに組み込んだ。図４Ｂは、初代Ｔ細胞におけるＣＡＲの発現を示す。ｓｃＦｖ４Ｄ５－５の有効な結合親和性は１．１μＭであると報告されており（Liu et al., Cancer Res. 2015;75(17):3596-3607）、これはＥ１１．４．１－Ｇ３２Ａの親和性に匹敵する。末端切断型のＨＥＲ２（ｔＨＥＲ２）を発現するジャーカットＴ細胞は標的細胞株とした（図４Ｅ）。セリン含有ＣＡＲ「４Ｄ５－５－８ｓｅｒ－ＢＢ－３ｚ」によって誘発されるＣＡＲＴ細胞によるＩＦＮ－ガンマ分泌（図４Ｆ）及び標的細胞の溶解（図４Ｇ）は、低親和性ｓｃＦｖにもかかわらず、システイン含有ＣＡＲ「４Ｄ５－５－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ」と比較してわずかに減少し、これは、実施例２（図３）のＣＡＲＳ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－３ｚ（配列番号４４））の低親和性ｒｃＳｓｏ７ｄベースの抗原結合部分での観察とはまったく対照的である。ダイアボディ形成で観察されるように、Ｔ細胞の表面でｓｃＦｖ中で一緒に結合されたＶ_ＨとＶ_Ｌは、同じ１本鎖分子内（つまり同じＣＡＲ分子内）で二量体化できるだけでなく、分子間リンク（つまり異なるＣＡＲ分子間）を形成することもできる。これは、精製されたｓｃＦｖタンパク質について報告されているように二量体化又はオリゴマー化さえも仲介し（Atwell et al., Protein Eng. 1999;12(7):597-604）、以前に観察されたＣＡＲクラスター化（Long et al., Nat Med. 2015;21(6):581-590）を説明するであろう。最終的に、ｓｃＦｖのこの二量体化又はオリゴマー化は、単量体のＣＡＲ骨格に基づいている場合でさえ、二価又は多価のＣＡＲの形成をもたらすであろう。従ってＶ_ＨとＶ_Ｌの間のリンカーを切断するとオリゴマー化が防止され、従って単量体のＣＡＲ骨格に基づく低親和性ＣＡＲの活性化が防止される。さらに我々は、リンカーのないＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインでも、Ｔ細胞の表面で少なくとも部分的にヘテロ二量体化して機能的なＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌヘテロ二量体（すなわちＦｖ）を形成できると仮定した。Ｆｖ間に非特異的な粘着性がない場合、これらのＦｖは、その親和性が低いため（４Ｄ５－５の場合はＫｄ１．１μＭ）、２つのＦｖの制御された二量体化（Ｖ_Ｈ運搬鎖に細胞内で融合したＦＫＢＰＦ３６Ｖドメインを介して）によってのみＴ細胞の活性化を誘発できるはずである。実際、図４Ｈは、低親和性ｓｃＦｖ４Ｄ５～５のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを２つの別個の膜に固定された分子（配列番号５８及び配列番号５９）上に分離することによって示されるように、これが事実であることを示している。予測されたように、これらの構築物を発現するＣＡＲＴ細胞（図４Ｃ及び４Ｄ）は、ｔＨＥＲ２^ｐｏｓ標的細胞によって活性化されなかった。ただし、Ｖ_Ｈ構築物がＡＰ２０１８７によってホモ二量体化された場合、Ｔ細胞はこれらの標的細胞によって活性化された（図４Ｈ）。二量体の存在下でのこのＴ細胞の活性化は、２つの別々の構築物が実際にＴ細胞表面に機能的なＦｖを形成し、二量体の非存在下での活性化の欠如がＦｖの一価的性質によるものであることを確認した。これは、４Ｄ５－５の低い親和性に一致し、及び実施例２のｒｃＳｓｏ７ｄベースの抗原結合部分で得られた観察結果に一致する。比較のために我々は、ｓｃＦｖバージョン（つまり、リンカー「２１８」によって接続されたＶ_ＨとＶ_Ｌ）の発現を、Ｖ_Ｈ構築物で得られた発現レベル（図４Ｃ）まで大マーカーに調整した。これは、低発現にもかかわらず、ＣＡＲＴ細胞の強力な活性化をもたらした（図４Ｈ）。まとめると図４のデータは、少なくとも特定のバージョンのｓｃＦｖが、Ｔ細胞表面上の隣接する分子間のＶ_ＨとＶ_Ｌの分子間ヘテロ二量体化によって部分的に二量体化（又はオリゴマー化）することを強く示唆している。システインアミノ酸残基によって引き起こされる二量体化又はオリゴマー化（上記で説明）と同様に、少なくとも特定のｓｃＦｖｓ変種によって仲介されるＣＡＲ分子の制御されていない二量体化又はオリゴマー化は、同一のＣＡＲ分子のホモ二量体化を引き起こす可能性がある。これは、次に、単一の陽性細胞に遭遇したときに結合活性効果をもたらす可能性があり、従って、本発明のＣＡＲ群による標的細胞上の抗原組み合わせの所望の特異的認識を妨げる。従って、好適な実施態様において、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子の抗原結合部分も、本発明の群のＣＡＲ分子に結合する他のポリペプチドの抗原結合部分も、ｓｃＦｖではない。

ヒト細胞株の維持：
初代ヒトＴ細胞は、アフェレ－シス後の匿名の健康なドナ－の血液から得た（Austrian Red Cross, Vienna, Austriaからのバフィーコート）。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、RosetteSep ヒトＴ細胞濃縮カクテルを使用する負の選択によって濃縮された。単離及び精製されたＴ細胞は、２０％ＦＣＳ及び１０％ＤＭＳＯを補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で、使用するまで凍結保存された。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビ－ズを用いて製造業者の指示に従って活性化され、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び２００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２を補足したＲＰＭＩ－１６４０からなるヒトＴ細胞培地で増殖された。実験を行う前に、初代Ｔ細胞は少なくとも１４日間培養された。ジャーカットＴ細胞は、CCRIのDr. Sabine Strehlから供与され、１０％ＦＣＳ及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０で維持された。細胞株はマイコプラズマ汚染について定期的に試験し、認証はMultiplexion, Germanyで行われた。細胞密度は、AccuCheck計数ビ－ズを用いてモニタ－した。

ｍＲＮＡのインビトロ転写と電気穿孔：
インビトロ転写は、mMessage mMachine T7 Ultra キットを使用して製造業者の指示に従って行った。５０～２００ｎｇのカラム精製ＰＣＲ産物を反応テンプレートとして使用した。得られたｍＲＮＡは、RNeasyカラム精製キットを使用して、適合プロトコールを用いて精製した。簡単に説明すると、ｍＲＮＡ溶液を、ＲＬＴ緩衝液、エタノール、及び２－メルカプトエタノールの混合物で希釈した。混合物はRNeasyカラムに充填し、製造業者の指示に従って精製した。溶出はヌクレア－ゼ不含水で行い、精製されたｍＲＮＡは電気穿孔のときまで－８０℃で凍結した。一過性のトランス遺伝子発現のために、Gene Pulser（Biorad）を使用して、初代Ｔ細胞又はジャーカットＴ細胞をさまざまな量の各ｍＲＮＡで電気穿孔した。以下のプロトコールを各細胞タイプに使用した：初代Ｔ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、５ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）、ジャーカットＴ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、３ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）。

抗体とフローサイトメトリー：
初代ヒトＴ細胞又は腫瘍細胞株をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、及び０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁し、１０％ヒト血清で４℃で１０分間処理した。細胞を各１次抗体を用いて４℃で２５分間染色した。染色された細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、２次抗体で４℃で２５分間染色したか、又はBD LSRFortessaで直接処理した。ＣＡＲ構築物の発現は、ＳｔｒｅｐＩＩタグを介して抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体（クローン５Ａ９Ｆ９、Genscript）を又はＦＬＡＧタグを介して、抗ＦＬＡＧタグ抗体（クローンＬ５、BioLegend）を１次抗体として使用し、ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体の場合は、ＰＥ－又はＡＰＣ－結合２次抗体を使用して検出した。工学作成された標的抗原ｔＨＥＲ２の発現は、ＰＥ－結合抗ＨＥＲ２抗体（クローン２４Ｄ２、BioLegend）を用いて検出した。分析はFlowJoソフトウェアによって行った。

トランス遺伝子構築物の構築：
ＧＭ－ＣＳＦ－Ｒａシグナルペプチド、抗ヒトＣＤ１９ｓｃＦｖＦＭＣ６３、ヒトＣＤ８αヒンジ、ヒト単量体ＣＤ８αヒンジ（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤＰ０１７３２、Ｃ１６４Ｓ、及びＣ１８１Ｓ）、及びＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ同時刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインをコードするヌクレオチド配列は、GenScriptによって合成された。シグナルペプチドＩｇＧｋ、抗ヒトＨＥＲ２ｓｃＦｖ４Ｄ５－５、及び二量体化ドメインＦＫＢＰＦ３６Ｖをコードするヌクレオチド配列は、GeneArt（Thermo Scientific）によって合成された。ＨＥＲ２の細胞外ドメインと膜貫通ドメインをコードする配列は、Addgene（プラスミド＃１６２５７）から得た。ＳｔｒｅｐＩＩタグ（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ）又はＦＬＡＧタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）及び柔軟性リンカーの挿入は、ＰＣＲによって行った。機能的トランス遺伝子へのヌクレオチド配列の組み立ては、ギブソン組み立てマスターミックスを使用して製造業者の指示に従って行った。図と配列はそれぞれ図１４と１５に示される。得られた構築物はＰＣＲにより増幅し、その後インビトロ転写に使用した。

ルシフェラーゼベースの細胞毒性アッセイ：
ルシフェラーゼ発現腫瘍細胞を、ＣＡＲＴ細胞とＥ：Ｔ細胞比２：１で同時培養し、白い丸底９６ウェルプレート中の１０，０００個の標的細胞／ウェルを、３７℃で４時間、フェノ－ル不含ＲＰＭＩ、１０％ＦＣＳ、１％Ｌ－グルタミン、及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンからなる細胞毒性アッセイ培地で培養した。最後に、残りの生細胞は、同時培養物の残留ルシフェラーゼ活性を測定することによって定量化した。室温で１０分間平衡化した後、ルシフェリンを細胞懸濁液に添加し（１５０μｇ／ｍＬ最終濃度）、ルシフェラーゼ活性を２０分後にENSPIREマルチモードプレートリ－ダ－を使用して測定した。具体的な溶解の割合は、次の式で決定した：
％特異的溶解＝１００－（（エフェクターと標的細胞の同時培養物を含むウェルからのＲＬＵ）／（標的細胞のみを含むウェルからのＲＬＵ）ｘ１００））。

ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイ：
ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイでは、２つの標的細胞集団を生成した：（ｉ）ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡと各標的抗原をコードするＲＮＡで電気穿孔されたジャーカット細胞、及び（ｉｉ）ｍＣｈｅｒｒｙをコードするｍＲＮＡのみで電気穿孔されたジャーカット細胞。これらの２つの集団を１：１の比率で混合し、ＣＡＲＴ細胞とＥ：Ｔ細胞比４：１：１で、丸底９６ウェルプレートで２０，０００個の標的細胞／ウェルと３７℃で４時間同時培養した。ＣＡＲＴ細胞を添加していない標的細胞を対照条件とした（「標的のみ」）。インキュベ－ション時間後、同時培養物を遠心分離し（５分、１６００ｒｐｍ、４℃）、その後のサイトカイン測定のために上清を採取し、残りの細胞は、ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、０．０２％アジ化ナトリウムからなる１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。標的抗原^ｐｏｓ細胞及び標的抗原^ｎｅｇ細胞集団の生存活性を、BD LSRFortessaフローサイトメーターを使用して決定し、特異的溶解は以下の式で計算した：
％特異的溶解＝（１－（（（試料のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（試料のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％））））×１００。

ＣＡＲＴ細胞によるサイトカイン放出：
初代ＣＡＲＴ細胞のサイトカイン分泌を、標的細胞とＥ：Ｔ比１：１又は２：１で平底９６ウェルプレート中で、３７℃で４時間又は２４時間同時培養することにより評価した。いくつかの実験では、放出されたサイトカインは、細胞毒性を決定するための同時培養実験からの上清で定量化した。上清を遠心分離（１６００ｒｐｍ、７分、４℃）して残りの細胞と破片を除去し、続いて－８０℃で凍結した。分泌されたＩＦＮ－γの分析のために、ヒトＩＦＮガンマELISA Ready-SET-Go!（登録商標）キット（eBioscience）を製造業者の指示に従って使用して、ＥＬＩＳＡを行った。測定は、ENSPIREマルチモードプレートリ－ダ－を使用して行った。

トランス遺伝子のインビトロ二量体化：
トランス遺伝子の二量体化は、同時培養実験の前に誘導された。初代Ｔ細胞を各細胞培養培地で最終細胞濃度に希釈した。ホモ二量体化剤ＡＰ２０１８７（MedChemExpress）を細胞培養培地で希釈し、１０ｎＭの最終濃度で添加した。同じ濃度の各ビヒクル対照ＤＭＳＯの添加を対照とした。トランス遺伝子の効率的な二量体化とその後のインビトロ実験を確実にするために、細胞を３７℃で３０分間インキュベートし、その後インビトロ実験で使用した。

実施例４
ＨＥＲ２に対するアフィボディベースのＣＡＲ群の生成と機能
第４の例で我々は、本発明のＣＡＲ群での使用に適したＨＥＲ２に対するアフィボディベースの結合部分を作成及び同定した。ここでも我々は、ヒトＨＥＲ２への高親和性結合のために工学作成された十分に特性解析された既存の抗原結合部分から開始した（Wikman et al., Protein Eng Des Sel. 2004;17(5):455-462）。潜在的なＮ－グリコシル化部位を排除し、ＩｇＧ結合を減らすために、２つの点突然変異（Ｎ２３Ａ及びＳ３３Ｋ）を結合足場のフレ－ムワ－ク領域に導入すると（Feldwisch et al., J. Mol. Biol. 2010;398(2):232-47）、これは抗原結合部分「ｚＨＥＲ２－ＷＴ」をもたらした。「ｚＨＥＲ２－ＷＴ」のアラニンスキャンを実行して、抗原結合に関与するすべてのアミノ酸を連続的にアラニンに変異させて、それぞれ１つのアラニン変異を含むさまざまな変種をもたすことによって、低親和性変異体を作成した。大腸菌で１３の変種を発現させ、適切な抗原結合部分を選択するためのそれらの親和性を決定する代わりに、我々は、条件的にホモ二量体化することができる（図５Ａ）すべての変種をＣＡＲ骨格（配列番号５２中のバインダ－ｚＨＥＲ２－ＷＴ（ＷＴ）で例示）に直接組み込むことにより、機能的スクリ－ニングを行った。このようにして、異なるＣＡＲを発現するＴ細胞を、ｔＨＥＲ２をコードする５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔したジャーカットＴ細胞との同時培養において、ホモ二量体の存在下及び非存在下での活性化について直接スクリ－ニングすることができる。図５Ｂは、ジャーカット細胞におけるｔＨＥＲ２の発現を示す。各ＣＡＲ構築物について初代ヒトＴ細胞を５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔し、電気穿孔の２０時間後にヘキサヒスチジンタグを介して発現を検出した（図５Ｃ）。１３の異なるアフィボディベースのＣＡＲすべての発現は同等であった（図５Ｄ）。構築物を発現しない初代Ｔ細胞を陰性対照として使用した。機能的スクリ－ニングのために、ＣＡＲ分子の二量体化は、ＣＡＲＴ細胞を１０ｎＭのＡＰ２０１８７で３７℃で３０分間処理し、次にジャーカットＴ細胞と同時培養することによって誘導した。ビヒクル対照ＤＭＳＯを対照とした。Ｅ：Ｔ比２：１で３７℃で４時間同時培養した後、細胞毒性を誘発するＣＡＲの能力をルシフェラーゼベースの細胞毒性アッセイを実施することによって決定した。１０ｎＭのＡＰ２０１８７の存在下又は非存在下でＴ細胞の細胞毒性を誘発するさまざまなＣＡＲの能力を、図５Ｅに示す。高親和性アフィボディ抗原結合部分ｚＨＥＲ２－ＷＴは、ＡＰ２０１８７の存在に依存しない効率的な標的細胞溶解を誘発した。同様に、変異体Ｑ１１Ａ、Ｑ１７Ａ、Ｗ２４Ａ、Ｔ２５Ａ、Ｓ２７Ａ、及びＲ２８Ａを含むＣＡＲは、二量化体の存在に対して有意な依存性を示さなかった。置換Ｙ１３Ａ及びＷ１４Ａを有するアフィボディ抗原結合部分を含むＣＡＲによって細胞毒性が誘発されることはなかったが、Ｙ３５Ａは低レベルで細胞毒性を誘発した。二量体化誘導活性化は、変異体Ｌ９Ａ－、Ｒ１０Ａ－、及びＲ３２Ａで観察され、従ってこれらは、本発明のＣＡＲ分子への組み込みに適した結合部分である。

ヒト細胞株の維持：
初代ヒトＴ細胞は、アフェレ－シス後の匿名の健康なドナ－の血液から得た（Austrian Red Cross, Vienna, Austriaからのバフィーコート）。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、RosetteSep ヒトＴ細胞濃縮カクテル（STEMCELL Technologies）を使用する負の選択によって濃縮された。単離及び精製されたＴ細胞は、２０％ＦＣＳ及び１０％ＤＭＳＯを補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で、使用するまで凍結保存された。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビ－ズを用いて製造業者の指示に従って活性化され、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び２００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２を補足したＲＰＭＩ－１６４０からなるヒトＴ細胞培地で増殖された。実験を行う前に、初代Ｔ細胞は少なくとも１４日間培養された。ジャーカットＴ細胞は、CCRIのDr. Sabine Strehlから供与され、１０％ＦＣＳ及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０で維持された。細胞株はマイコプラズマ汚染について定期的に試験し、認証はMultiplexion, Germanyで行われた。細胞密度は、AccuCheck計数ビ－ズを用いてモニタ－した。

抗体とフローサイトメトリー：
初代ヒトＴ細胞又は腫瘍細胞株をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、及び０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁し、１０％ヒト血清で４℃で１０分間処理した。細胞を各１次抗体を用いて４℃で２５分間染色した。染色された細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、２次抗体で４℃で２５分間染色したか、又はBD LSRFortessaで直接処理した。ＣＡＲ構築物の発現は、ヘキサヒスチジンタグを介して、ＡＦ６４７結合抗ペンタヒスチジンタグ抗体（Qiagen）を使用して検出した。工学作成された標的抗原ｔＨＥＲ２の発現は、ＰＥ－結合抗ＨＥＲ２抗体（クローン２４Ｄ２、BioLegend）を用いて検出した。分析はFlowJoソフトウェアによって行った。

トランス遺伝子構築物の構築：
ＣＤ３３シグナルペプチド、アフィボディｚＨＥＲ２－ＷＴ、ヘキサヒスチジンタグ、柔軟なＧ_４Ｓリンカー、ヒト単量体ＣＤ８αヒンジ（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤＰ０１７３２、Ｃ１６４Ｓ、及びＣ１８１Ｓ）、及びＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ同時刺激ドメイン、二量体化ドメインＦＫＢＰＦ３６Ｖ、及びＣＤ３ζ ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインをコードするヌクレオチド配列は、GenArtによって合成された。ＨＥＲ２の細胞外ドメインと膜貫通ドメインをコードする配列は、Addgene（プラスミド＃１６２５７）から得た。柔軟性リンカーの挿入は、ＰＣＲによって行った。機能的トランス遺伝子へのヌクレオチド配列の組み立ては、ギブソン組み立てマスターミックスを使用して製造業者の指示に従って行った。図と配列はそれぞれ図１４と１５に示される。得られた構築物はＰＣＲにより増幅し、その後インビトロ転写に使用した。

タンパク質抗原結合部分のアラニンスキャン：
エピトープ結合に関与するすべてのアミノ酸の部位特異的変異誘発は、QuikChange Lightning 部位特異的変異誘発キットを使用して、製造業者の指示に従って行った。プライマ－はQuikChangePrimer Design ソフトウェア（Agilent Genomics）を使用して工学作成され、オリコヌクレオチドはBiomersによって合成された。

ルシフェラーゼベースの細胞毒性アッセイ：
ルシフェラーゼ発現腫瘍細胞を、ＣＡＲＴ細胞とＥ：Ｔ細胞比２：１で、白い丸底９６ウェルプレート（Sigma Aldrich）中で、フェノール不含ＲＰＭＩ（Thermo Scientific）、１０％ＦＣＳ、１％Ｌ－グルタミン（Thermo Scientific）、及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンからなる細胞毒性アッセイ培地の１０，０００個の標的細胞／ウェルを、３７℃で４時間同時培養した。最後に、残りの生細胞は、同時培養物の残留ルシフェラーゼ活性を測定することによって定量化した。室温で１０分間平衡化した後、ルシフェリンを細胞懸濁液（１５０μｇ／ｍＬ最終濃度）に添加し、ルシフェラーゼ活性を２０分後にENSPIREマルチモードプレートリーダーを使用して測定した。具体的な溶解の割合は、次の式で決定した：
％特異的溶解＝１００－（（エフェクターと標的細胞の同時培養物を含むウェルからのＲＬＵ）／（標的細胞のみを含むウェルからのＲＬＵ）ｘ１００））。

トランス遺伝子のインビトロ二量体化：
トランス遺伝子の二量体化は、同時培養実験の前に誘導された。初代Ｔ細胞を各細胞培養培地で最終細胞濃度に希釈した。ホモ二量体化剤ＡＰ２０１８７を細胞培養培地で希釈し、１０ｎＭの最終濃度で添加した。同じ濃度の各ビヒクル対照ＤＭＳＯの添加を対照とした。トランス遺伝子の効率的な二量体化とその後のインビトロ実験を確実にするために、細胞を３７℃で３０分間インキュベートし、その後インビトロ実験で使用した。

アフィボディベースの抗原結合部分の発現と精製：
結合足場は、ｐＥ－ＳＵＭＯベクターを使用して、ｓｆＧＦＰ融合タンパク質（Ｎ末端ヘキサヒスチジンタグとそれに続くｒｃＳｓｏ７ｄ又はアフィボディとｓｆＧＦＰのいずれかで構成される）として発現された。融合タンパク質の構成の略図を図１４Ｇに示す。アフィボディベースのバインダーｚＨＥＲ２のさまざまな変異体を、図１４Ｇに示すものと同じ方法でｓｆＧＦＰに融合させた。ｓｆＧＦＰレポータータンパク質をコードするヌクレオチド配列は、Addgeneから得られた（プラスミド＃５４７３７）。簡単に説明すると、大腸菌細胞（ＴｕｎｅｒＤＥ３）を、熱ショック形質転換を使用して、配列が検証されたプラスミドで形質転換した。３７℃で一晩培養した後、培養物を、カナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）を補足したＴＢ培地（１２ｇ／Ｌトリプトン、２４ｇ／Ｌ酵母エキス、４％グリセロール、２．３１ｇ／ＬＫＨ_２ＰＯ_４、及び１６．４３ｇ／ＬＫ_２ＨＰＯ_４・３Ｈ_２Ｏ）で１：１００に希釈し、３７℃で振盪しながらインキュベートした。培養物が約２のＡ_６００に達したとき、１ｍＭのＩＰＴＧの添加によりトランス遺伝子の発現を誘導し、細胞をさらに２０℃で一晩培養した。細胞を遠心分離（５０００ｇ、２０分、４℃）して回収し、超音波処理緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭＮａＣｌ、３％グリセロール、１％トリトンＸ－１００、ｐＨ８．０）に再懸濁し、超音波処理（２ｘ９０秒、デューティサイクル５０％、振幅を５に設定）し、再度遠心分離して細胞片を除去した。ヘキサヒスチジンタグ付き融合タンパク質は、ＴＡＬＯＮ金属親和性樹脂を使用して粗細胞抽出物から精製した。１０ｍＭイミダゾールを添加した後、超音波処理した上清を樹脂に２回適用し、続いて、イミダゾールの量を増やしながら（５～１５ｍＭ）平衡化緩衝液（５０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ８．０）による洗浄工程を行った。２５０ｍＭイミダゾールを補足した平衡化緩衝液を適用することにより、結合足場を溶出した。Amicon Ultra-15 10K 遠心フィルタ－を使用して、緩衝液をＰＢＳに交換した後、各モル吸光係数を使用して２８０ｎｍの吸光度を測定することにより濃度を決定し、最後にタンパク質を－８０℃で直接凍結した。

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用した結合親和性の決定：
Biacore T200機器（GE Healthcare）を使用して、ＳＰＲ実験を行った。すべての実験は、０．１％ＢＳＡ及び０．０５％ツイーン－２０（Merck Millipore）を含有する脱気及び濾過されたＰＢＳ、ｐＨ７．４中で２５℃で行った。ｈＨＥＲ２－Ｆｃ（R&D）を、プロテインＡセンサーチップに１０μＬ／分の流速で６０秒間、４μｇ／ｍＬの濃度で固定化した。アフィボディベースの抗原結合部分の親和性を決定するために、各タンパク質の５つの濃度（抗原結合部分の予想されるＫｄに応じて）を３０μＬ／分の流速で１５秒間（ｚＨＥＲ２－Ｒ１０Ａ及びｚＨＥＲ２－Ｒ３２Ａ）又は６０秒間（ｚＨＥＲ２－ＷＴ）、単一のサイクル速度論モードで注入し、続いて解離工程（ｚＨＥＲ２－Ｒ１０Ａ及びｚＨＥＲ２－Ｒ３２Ａの場合は６０秒、ｚＨＥＲ２－ＷＴの場合は１８０秒）を行った。再生は、１０ｍＭグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ１．５を使用し、流速３０μＬ／分で３０秒間行った。Ｋｄは、Biacore T200評価ソフトウェア（GE Healthcare）を使用してカーブフィッティングによって得た。

実施例５
薬物投与によってその結合活性を制御することができるＣＡＲ群を発現する安定に形質導入されたＴ細胞による担癌マウスの治療
実施例５では、免疫不全ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^Ｓｃｉｄ１１２ｒｇ^{ｔｍ１ＷＪ１}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスを用いる白血病モデルで、腫瘍増殖が、低親和性ＣＡＲ「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ」（配列番号４６）を発現するレンチウイルスで形質導入されたＴ細胞によって、調節分子の存在下では効率的に阻害できるが、非存在下では阻害できないことを示す。現在、長期のインビボ実験に適した条件的ヘテロ二量体化に使用できるシステムが存在しないため、ホモ二量体化にＦＫＢＰベースのシステムを使用して、ＣＡＲ分子の結合活性を調節することによりＴ細胞の機能を調節するというインビボ概念証明を行った。これは、単一特異性の低親和性ＣＡＲ「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ」が、その複合体状態すなわち二量体状態の二価の抗ＥＧＦＲ／ＥＧＦＲ－ＣＡＲであり、原理的には２重陽性の標的細胞（すなわち二価の相互作用）を認識する抗ＥＧＦＲ／ＨＥＲ２－ＣＡＲに匹敵するという結論に基づいている。

インビボモデルでは、生物発光イメージングを使用して腫瘍増殖をインビボで定量化するために、ｔＥＧＦＲの高発現用ベクター（細胞あたり約１ｘ１０^６個のｔＥＧＦＲ分子）で形質導入したＢ－ＡＬＬ細胞株Ｎａｌｍ６と、ホタルルシフェラーゼを使用した。０．５ｘ１０^６個のＮａｌｍ６－ｔＥＧＦＲ－ｆＬｕｃ細胞のＮＳＧマウスへの静脈内（ｉ．ｖ．）注射は、未治療のマウスで指数関数的な腫瘍増殖をもたらした。しかしながら図６Ａは、ＮＳＧマウスにおけるこの細胞株の増殖が、腫瘍細胞注入の３日後に抗ＣＤ１９－８ｃｙｓ－ＢＢ－３ｚ（配列番号６０）又は高親和性抗ＥＧＦＲＣＡＲ「Ｓ（ＷＴ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ」（配列番号４９）のいずれかを発現する１０ｘ１０^６個のＴ細胞を静脈内注射した場合に、効率的に阻害されたことを示す。重要なことに、低親和性ＥＧＦＲ－ＣＡＲ「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ」（配列番号４６）を有するＴ細胞もまた白血病の増殖を阻害したが、これは、ホモ二量体化剤ＡＰ２０１８７、すなわち調節分子を定期的に投与した場合（図６Ａ）はわずかにしか阻害されず、ＣＡＲＳ（Ｇ３２Ａ）－ｓｅｒ８－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚが二量体状態（すなわち、複合体化ＣＡＲ群＝オン状態）の場合にのみ、完全な活性があることを示す。二量体化剤が存在しない（すなわち、複合体化されていないＣＡＲ＝オフ状態）場合、中程度の増殖阻害しか観察されなかった（図６Ａ）。Ｔ細胞注射の１１日後にこの後者の群のマウスに、二量体化剤すなわち調節分子が投与された場合、ＣＡＲ分子の誘発された複合体化は、２匹のマウスで腫瘍負荷の強力な低減と３匹の他のマウスで中程度の阻害をもたらした（図６Ｂ）。まとめると、これらのインビボ実験は、我々のインビトロデータを確認しており、ＣＡＲ分子がＣＡＲ群に複合体化（すなわち組み立て）され、それによって結合活性が生じた場合にのみ、低親和性抗原結合部分を有するＣＡＲ分子を発現する細胞が効率的に誘発されることを証明している。

ＣＡＲの発現は、ｒｃＳｓｏ７ｄベースのＣＡＲの場合は抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体を用いて検出し、ＣＤ１９特異的ＣＡＲの場合はプロテインＬを用いて検出した（それぞれ図７Ａ及び７Ｂ）。インビトロでの機能的特性評価のために、ＣＡＲＴ細胞を、ＥＧＦＲを発現していないＮａｌｍ６細胞（「Ｎａｌｍ６－ｆＬｕｃ」）又は高レベルのＥＧＦＲを発現しているＮａｌｍ６細胞（「Ｎａｌｍ６－ｔＥＧＦＲ－ｆＬｕｃ」）とともに（図７Ｅ及び７Ｆ）、３７℃で４時間、Ｅ：Ｔ比１０：１で同時培養した。標的細胞との同時培養の前に、Ｔ細胞に１０ｎＭのＡＰ２０１８７を添加することによってＣＡＲホモ二量体化が誘導された。ビヒクル対照であるＤＭＳＯの添加を対照とした。図７Ｃ及び７Ｄは、それぞれＮａｌｍ６－ｆＬｕｃ又はＮａｌｍ６－ＥＧＦＲ－ｆＬｕｃ細胞と同時培養されたＣＡＲＴ細胞の細胞溶解能力を示す。

ヒト細胞株の維持：
初代ヒトＴ細胞は、アフェレ－シス後の匿名の健康なドナ－の血液から得た（Austrian Red Cross, Vienna, Austriaからのバフィーコート）。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、RosetteSep ヒトＴ細胞濃縮カクテルを使用する負の選択によって濃縮された。単離及び精製されたＴ細胞は、２０％ＦＣＳ及び１０％ＤＭＳＯを補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で、使用するまで凍結保存された。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビ－ズを用いて製造業者の指示に従って活性化され、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び２００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２を補足したＲＰＭＩ－１６４０からなるヒトＴ細胞培地で増殖された。実験を行う前に、初代Ｔ細胞は少なくとも１４日間培養された。細胞株はマイコプラズマ汚染について定期的に試験し、認証はMultiplexion, Germanyで行われた。細胞密度は、AccuCheck計数ビ－ズを用いてモニターした。

Ｔ細胞及び細胞株の形質導入：
汎親和性ＶＳＶ－Ｇシュ－ドタイプ化レンチウイルスのウイルス産生は、Ｌｅｎｔｉ－Ｘ２９３Ｔ細胞から、第３世代ピューロマイシン選択可能ｐＣＤＨトランス遺伝子ベクターと第２世代ウイルスパッケージングプラスミドｐＭＤ２．Ｇ及びｐｓＰＡＸ２（どちらもAddgeneから得られ、それぞれプラスミド＃１２２５９及び＃１２２６０）を用いて行った。同時トランスフェクションは、Purefection Transfection試薬を製造業者の指示に従って使用して実施した。トランスフェクションの１日後と２日後に上清を採取し、Ｌｅｎｔｉ－Ｘ濃縮器を製造業者の指示に従って使用して濃縮した。

レンチウイルス形質導入の２４時間前に、初代Ｔ細胞を、抗ＣＤ３／２８ビ－ズを使用して製造業者の指示に従って活性化した。細胞培養プレートをRetroNectinで製造業者の指示に従ってコーティングして、レンチウイルスと初代Ｔ細胞の同時局在を促進した。細胞を濃縮レンチウイルス上清に１日間曝露した後、ウイルス粒子を除去した。３日後、Ｔ細胞を１μｇ／ｍＬピュ－ロマイシンで処理して、トランス遺伝子の高く均一な発現を確保した。Ｔ細胞は、２％オクタプラス、１％Ｌ－グルタミン、２．５％ヘペス、及び２００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２を補足したＡＩＭ－ＶからなるＴ細胞形質導入培地で増殖させた。

レンチウイルス形質導入の２４時間前に細胞株を分割して、形質導入の時点で指数関数的な細胞増殖を確保した。細胞をさまざまな濃度のレンチウイルス上清に１日間曝露した。形質導入されていない細胞を除外するために、１～８μｇ／ｍＬの異なる濃度で形質導入の３日後に、ピューロマイシン選択を行った。

トランス遺伝子構築物の構築：
ＣＤ３３シグナルペプチド、低親和性ｒｃＳｓｏ７ｄ変種Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ、ＳｔｒｅｐＩＩタグ（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ）、柔軟性Ｇ４Ｓリンカー、ヒト単量体ＣＤ８αヒンジ（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤＰ０１７３２、Ｃ１６４Ｓ及びＣ１８１Ｓ）、及びＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ同時刺激ドメイン、二量体化ドメインＦＫＢＰＦ３６Ｖ、及びＣＤ３ζ ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインをコードするヌクレオチド配列は、GeneArt（Thermo Scientific）によって合成された。ＧＭ－ＣＳＦ－Ｒａシグナルペプチド及び抗ヒトＣＤ１９ｓｃＦｖＦＭＣ６３をコードするヌクレオチド配列はGenScriptによって合成された。ＥＧＦＲの細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列は、Addgene（プラスミド＃１１０１１）から得られた。機能的トランス遺伝子へのヌクレオチド配列の組み立ては、ギブソン組み立てマスターミックスを使用して製造業者の指示に従って行った。図と配列はそれぞれ図１４と１５に示される。得られた構築物はＰＣＲにより増幅し、その後インビトロ転写に使用した。

抗体とフローサイトメトリー：
初代ヒトＴ細胞又は腫瘍細胞株をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、及び０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁し、１０％ヒト血清で４℃で１０分間処理した。細胞を各１次抗体を用いて４℃で２５分間染色した。染色された細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、２次抗体で４℃で２５分間染色したか、又はBD LSRFortessaで直接処理した。ＣＡＲ構築物の発現は、ＳｔｒｅｐＩＩタグを介して抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体（クローン５Ａ９Ｆ９、Genscript）を、又はＣＤ１９－ＢＢｚＣＡＲの場合はプロテンＬを１次抗体として、及びＰＥ－又はＡＰＣ－結合２次抗体を使用して検出した。ＥＧＦＲの発現は、ＰＥ－結合抗ＥＧＦＲ抗体（クローンＡＹ１３、BioLegend）を用いて検出した。分析はFlowJoソフトウェアによって行った。

ルシフェラーゼベースの細胞毒性アッセイ：
ルシフェラーゼ発現腫瘍細胞を、ＣＡＲＴ細胞とＥ：Ｔ細胞比２：１で同時培養し、白い丸底９６ウェルプレート中の１０，０００個の標的細胞／ウェルを、３７℃で４時間、フェノ－ル不含ＲＰＭＩ、１０％ＦＣＳ、１％Ｌ－グルタミン、及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンからなる細胞毒性アッセイ培地で培養した。最後に、残りの生細胞は、同時培養物の残留ルシフェラーゼ活性を測定することによって定量化した。室温で１０分間平衡化した後、ルシフェリンを細胞懸濁液に添加し（１５０μｇ／ｍＬ最終濃度）、ルシフェラーゼ活性を２０分後にENSPIREマルチモードプレートリーダーを使用して測定した。具体的な溶解の割合は、次の式で決定した：
％特異的溶解＝１００－（（エフェクターと標的細胞の同時培養物を含むウェルからのＲＬＵ）／（標的細胞のみを含むウェルからのＲＬＵ）ｘ１００））。

トランス遺伝子のインビトロ二量体化：
トランス遺伝子の二量体化は、同時培養実験の前に誘導された。初代Ｔ細胞を各細胞培養培地で最終細胞濃度に希釈した。ホモ二量体化剤ＡＰ２０１８７を細胞培養培地で希釈し、１０ｎＭの最終濃度で添加した。同じ濃度の各ビヒクル対照ＤＭＳＯの添加を対照とした。トランス遺伝子の効率的な二量体化を確実にするために、細胞を３７℃で３０分間インキュベートし、その後インビトロ実験で使用した。

インビボ標的細胞死滅：
ＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩｌ２ｒｇ^{ｔｍ１ＷＪＩ}／ＳｚＪ（ＮＳＧ）マウスを、動物繁殖のためにAnna Spiegel施設に収容した。以後の実験のために、マウスをウィーン医科大学の前臨床研究所（ＰＩＬ）に移した。すべての操作は、the Magistratsabteilung 58, Viennaによって承認されたとおりに行った（ＧＺ：８１３２６７／２０１５／２４）。

初代Ｔ細胞は、「Ｔ細胞及び細胞株の形質導入」に示されているプロトコールを使用して、ＣＤ１９特異的対照ＣＡＲ（ＣＤ１９－ＢＢｚ）、ＥＧＦＲ特異的高親和性ＣＡＲ及び低親和性ＣＡＲ（それぞれ「Ｅ１１．４．１－ＷＴ」及び「Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ」）を発現するように工学作成された。形質導入後、ＣＡＲＴ細胞を１４日以上増殖させた後、インビボ実験で十分な細胞数を作成した。

ホモ二量体化剤ＡＰ２０１８７（Clontech Laboratories）を、製造業者の指示に従ってビヒクル溶液に溶解した。簡単に説明すると、ＡＰ２０１８７をまず、エタノールに１２．５ｍｇ／ｍＬの濃度で激しく確認しながらボルテックス混合した。次に、化合物を、水中のＰＥＧ－４００（Sigma Aldrich）とツイーン８０（Sigma Aldrich）の適切な混合物を使用して、最終使用濃度０．５ｍｇ／ｍＬに希釈した。得られたビヒクル溶液は、注射用水中の４％エタノール、１０％ＰＥＧ－４００、及び１．７％ツイーン８０から構成されていた。ＡＰ２０１８７の使用ストックは、注入の直前に調製し、滅菌濾過し、３０分以内に使用した。

高レベルのｔＥＧＦＲ－ＦＫＢＰ及びｆＬｕｃを発現するように工学作成されたＮａｌｍ６細胞（「Ｎａｌｍ６－ｔＥＧＦＲ－ｆＬｕｃ」）をＰＢＳに再懸濁し、３５μｍセルストレーナー（Corning Falcon）で濾過し、最終濃度を５ｘ１０^６／ｍＬに設定した。０．５ｘ１０^６個の細胞を各ＮＳＧマウス（オスとメスマウスの混合、Jackson Laboratory）の尾静脈に静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。３日後、マウスを各ＣＡＲＴ細胞（尾静脈への１０ｘ１０^６個のＣＡＲＴ細胞のｉ．ｖ．）で処理し、続いてホモ二量体化剤ＡＰ２０１８７（２ｍｇ／ｋｇ投与）の又はビヒクル対照を腹腔内（ｉ．ｐ．）注射を使用して注射した。二量体化剤ＡＰ２０１８７（２ｍｇ／ｋｇ）又はビヒクル対照を、０日目（Ｔ細胞注射の直後）、記載されている１日目、２日目、４日目、７日目、９日目、及び１１日目に投与した。すべての対照条件は、各ビヒクル対照（注射用水中の４％エタノール、１０％ＰＥＧ－４００、及び１．７％ツイーン８０）で処理された。腫瘍増殖と制御は、生物発光イメージング（ＢＬＩ）によって追跡された。実験の最後に、マウスを頸椎脱臼により殺処分した。

生物発光イメージング（ＢＬＩ）：
腫瘍増殖のＢＬＩイメージングは、ウィーン医科大学の前臨床研究所（ＰＩＬ）で、ＩＶＩＳスペクトルインビボイメージングシステム（Perkin Elmer）を使用して実施された。Ｄ－ルシフェリン基質（Perkin Elmer）をＰＢＳに溶解して最終濃度を１５ｍｇ／ｍＬにし、滅菌濾過した。マウスをイソフルランで麻酔し、腹腔内投与した。ルシフェリン使用ストック（最終用量１５０ｍｇ／ｋｇ体重）を腹腔内注射した。１５～２０分後、１～３匹のマウスをＩＶＩＳイメージングシステムに移し、中程度のビニングモードで１秒～２分の取得時間で生物発光を測定して、不飽和画像を得た。ルシフェラーゼ活性をLiving Image フトウェア（Caliper）で解析し、マウスの全身を含む目的領域内で光子束を測定した。

実施例６
ＶＥＧＦによるＣＡＲ群の結合活性の調節
第６の例は、細胞外可溶性因子によって複合体化することができるＣＡＲ群を生成するための戦略を示しており、この場合、この因子は本発明の調節分子として機能する。示されている例では、ＶＥＧＦは、ＣＡＲＳ（Ｇ３２Ａ）－Ｊ．ＣＴ６－８ｓｅｒ－ＢＢ－３ｚ（配列番号６６及び配列番号６７）のホモ二量体化のための潜在的な二量体化剤（すなわち調節分子）として使用された。この目的のために、工学作成されたＣＨ２－ＣＨ３－ＩｇＧ１－ＦｃドメインをＣＡＲ分子の外部ドメイン（配列番号６７）に組み込み、ＣＨ２－ＣＨ３－Ｆｃドメイン「ＪａｎｕｓＣＴ６」（配列番号６６）を含む可溶性構築物と同時刺激させた。前記構築物は、ＶＥＧＦへの高親和性結合のために工学作成され（Lobner et al., MAbs. 2017;9(7):1088-1104）、ＣＡＲ分子の外部ドメイン中のＣＨ２－ＣＨ３－Ｆｃドメインとジスルフィド架橋を形成して共有結合的にヘテロ二量体化する。両方の構築物のＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、ホモ二量体化を最小限に抑えるように工学作成された（Lobner et al., MAbs. 2017;9(7):1088-1104）。与えられた例では、Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａは、協調的結合に依存しているため、抗原結合部分として使用された。図８Ａは、２つの構築物（配列番号６６及び配列番号６７）を含むＶＥＧＦ依存性ＥＧＦＲ特異的ＣＡＲの略図を示し、図８Ｂは、ＶＥＧＦの添加の効果を示す。ジャーカットＴ細胞をｔＥＧＦＲの５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔し、電気穿孔の２０時間後に発現を検出した（図８Ｃ）。初代ヒトＴ細胞を各構築物の５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔した。次にＴ細胞は、単量体の第２世代ＣＡＲシグナル伝達骨格（配列番号６７）を含むＣＡＲ分子を発現し、前記骨格は、Ｊａｎｕｓ－ＣＴ６－Ｆｃドメインに融合した低親和性Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ結合部分を含む構築物と結合し、膜貫通ドメイン（配列番号６６）を含まなかった。２つの構築物を発現するＣＡＲＴ細胞（図８Ｄ）をさまざまな量のＶＥＧＦで処理し、高レベルのｔＥＧＦＲを発現するジャーカットＴ細胞と同時培養した（図８Ｃ）。図８Ｅは、ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイを使用して決定された細胞毒性を誘発する能力を示す。図８Ｅは、ＣＡＲ群が、標的細胞に対するＴ細胞の細胞傷害性をＶＥＧＦ（すなわち調節分子）依存的に誘発したことを示す。これは、ＶＥＧＦなどの細胞外可溶性因子が調節分子として機能し、それにより本発明のＣＡＲ群の複合体化を促進できることを証明している。

ヒト細胞株の維持：
初代ヒトＴ細胞は、アフェレーシス後の匿名の健康なドナ－の血液から得た（Austrian Red Cross, Vienna, Austriaからのバフィーコート）。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、RosetteSep ヒトＴ細胞濃縮カクテルを使用する負の選択によって濃縮された。単離及び精製されたＴ細胞は、２０％ＦＣＳ（Sigma Aldrich）及び１０％ＤＭＳＯを補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で、使用するまで凍結保存された。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビ－ズを用いて製造業者の指示に従って活性化され、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び２００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２（Peprotech）を補足したＲＰＭＩ－１６４０からなるヒトＴ細胞培地で増殖された。実験を行う前に、初代Ｔ細胞は少なくとも１４日間培養された。ジャーカットＴ細胞は、CCRIのDr. Sabine Strehlから供与され、１０％ＦＣＳ及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０で維持された。細胞株はマイコプラズマ汚染について定期的に試験し、認証はMultiplexion, Germanyで行われた。細胞密度は、AccuCheck計数ビ－ズを用いてモニタ－した。

抗体とフローサイトメトリー：
初代ヒトＴ細胞又は腫瘍細胞株をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、及び０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁し、１０％ヒト血清で４℃で１０分間処理した。細胞を各１次抗体を用いて４℃で２５分間染色した。染色された細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、２次抗体で４℃で２５分間染色したか、又はBD LSRFortessaで直接処理した。ＣＡＲ構築物の発現は、ＳｔｒｅｐＩＩタグを介して、抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体（クローン５Ａ９Ｆ９、Genscript）を、又はＦｃドメインを介してビオチン化抗ヒトＩｇＧ１抗体（クローンＪＤＣ－１０、Biozol）を１次抗体として、及びＰＥ結合ストレプトアビジンを２次染色試薬として使用して行われた。工学作成された標的抗原ｔＥＧＦＲの発現は、ＰＥ－又はＡＰＣ－結合抗ＥＧＦＲ抗体（クローンＡＹ１３、BioLegend）のいずれかを用いて検出した。分析はFlowJoソフトウェアによって行った。

トランス遺伝子構築物の構築：
ＣＤ３３シグナルペプチド、低親和性ｒｃＳｓｏ７ｄ変種Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ、ＳｔｒｅｐＩＩタグ（ＮＷＳＨＰＱＦＥＫ）、柔軟なＧ_４Ｓリンカー、ヒト単量体ＣＤ８αヒンジ（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤＰ０１７３２、Ｃ１６４Ｓ及びＣ１８１Ｓ）、及びＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ同時刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインをコードするヌクレオチド配列は、GeneArt（Thermo Scientific）によって合成された。ＣＨ２－ＣＨ３－Ｆｃドメイン「ＪａｎｕｓＣＴ６」と変異した「ＷＴ」ＣＨ２－ＣＨ３－Ｆｃドメインを含むプラスミドは、ウィ－ンのUniversity of Natural Resources and Life SciencesのElisabeth Lobnerからの親切な供与であった。ＥＧＦＲの細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列は、Addgene（プラスミド＃１１０１１）から得られた。機能的トランス遺伝子へのヌクレオチド配列の組み立ては、ギブソン組み立てマスターミックスを使用して製造業者の指示に従って行った。図と配列はそれぞれ図１４と１５に示される。得られた構築物はＰＣＲにより増幅し、その後インビトロ転写に使用した。

ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイ：
ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイでは、２つの標的細胞集団を生成した：（ｉ）ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡと各標的抗原をコードするＲＮＡで電気穿孔されたジャーカット細胞、及び（ｉｉ）ｍＣｈｅｒｒｙをコードするｍＲＮＡのみで電気穿孔されたジャーカット細胞。これらの２つの集団を１：１の比率で混合し、ＣＡＲＴ細胞とＥ：Ｔ細胞比４：１：１で丸底９６ウェルプレートで２０，０００個の標的細胞／ウェルと３７℃で４時間同時培養した。ＣＡＲＴ細胞を添加していない標的細胞を対照条件とした（「標的のみ」）。インキュベ－ション時間後、同時培養物を遠心分離し（５分、１６００ｒｐｍ、４℃）、その後のサイトカイン測定のために上清を採取し、残りの細胞は、ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、０．０２％アジ化ナトリウムからなる１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。標的抗原^ｐｏｓ細胞及び標的抗原^ｎｅｇ細胞集団の生存活性を、BD LSRFortessaフローサイトメーターを使用して決定し、特異的溶解は以下の式で計算した：
％特異的溶解＝（１－（（（試料のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（試料のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％））））×１００。

ＶＥＧＦの組換え発現と精製：
末端切断型のヒトＶＥＧＦ（残基１４～１０８）の組換え発現は、すでに（Lobner et al., MAbs. 2017;9(7):1088-1104）に記載されている。

実施例７
ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２に対して向けられ、調節分子によって制御され得るＣＡＲ群の生成
実施例７において我々は、調節分子ＡＰ２１９６７によって条件的に複合体を形成でき、標的細胞上のＥＧＦＲとＨＥＲ２の複合発現の特異的認識を可能にするＣＡＲ群を生成するための戦略を例示した。この目的のために我々は、２つの異なる単一ドメイン結合足場、すなわちｒｃＳｓｏ７ｄベースのＥＧＦＲ特異的抗原結合部分Ｅ１１．４．１の低親和性変異体（Traxlmayr et al., J Biol Chem. 2016;291(43):22496-22508）とアフィボディベースのＨＥＲ２特異的抗原結合部分（et al., Protein Eng Des Sel. 2004;17(5):455-462）とを、ヘテロ二量体化ドメインＦＫＢＰ又はＦＲＢのいずれかを含む第２世代シグナル伝達骨格を移植した。すなわち、それぞれ「Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ－３ｚ」（配列番号４８）及び「Ａ（Ｒ１０Ａ）－ｓｅｒ８－ＢＢ－ＦＲＢ－３ｚ」（配列番号５４）（図９Ａ）。さらに我々は、両方の結合部分が単一のＣＡＲ分子の外部ドメインに連続的に組み込まれた（柔軟な２ｘＧ_４Ｓリンカーによって分離された）タンデムＣＡＲ「Ａ（Ｒ１０Ａ）－Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ」（配列番号７１）」を生成した（図９Ｂ）。初代Ｔ細胞を各構築物について５μｇで電気穿孔し、電気穿孔の２０時間後に発現を検出した（図９Ｃ及び図９Ｄ）。ｔＥＧＦＲの場合は５μｇのｍＲＮＡ、ｔＨＥＲ２の場合は５μｇのｍＲＮＡ、又は両方の構築物の５μｇのいずれかで電気穿孔したジャーカットＴ細胞を、標的細胞として使用した。図９Ｅ及び図９Ｆは、電気穿孔の２０時間後のジャーカットＴ細胞における両方のトランス遺伝子の発現を示す。３７℃で４時間、Ｅ：Ｔ比４：１：１で同時培養した後、ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイを使用して、細胞毒性を誘発する能力を決定した。図９Ｇは、それぞれＥＧＦＲ及びＨＥＲ２に特異的な２つのＣＡＲ分子を発現する初代Ｔ細胞が、ＡＰ２１９６７と複合体を形成すると、ｔＥＧＦＲとｔＨＥＲ２とを発現するジャーカットＴ細胞では細胞死を効率的に誘発できるが、２つの標的抗原の一方のみを発現するジャーカット細胞では、誘発できないことを示す。ＡＰ２１９６７が存在しない場合、つまり複合体化されていない状態では、ＣＡＲ群は２重陽性の標的細胞に対する応答は不活性であった。タンデム－ＣＡＲは、２重陽性の標的細胞に対して中程度の活性を示し、ＡＰ２１９６７の存在に依存しなかった。従ってこれらのデータは、本発明の非共有結合的に複合体化されたＣＡＲ群が、標的細胞上の抗原の組み合わせを特異的に認識することを確認している。さらに、これらのデータは、ＣＡＲ群の活性が条件的ヘテロ二量体化によって任意選択的に調節できることも示す。

ヒト細胞株の維持：
初代ヒトＴ細胞は、アフェレーシス後の匿名の健康なドナ－の血液から得た（Austrian Red Cross, Vienna, Austriaからのバフィーコート）。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、RosetteSep ヒトＴ細胞濃縮カクテル（STEMCELL Technologies）を使用する負の選択によって濃縮された。単離及び精製されたＴ細胞は、使用するまで、２０％ＦＣＳ及び１０％ＤＭＳＯ（Sigma Aldrich）を補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で凍結保存された。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、製造業者の指示に従って抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Thermo Scientific）で活性化され、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び２００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２（Peprotech）を補足したＲＰＭＩ－１６４０からなるヒトＴ細胞培地で増殖された。実験を行う前に、初代Ｔ細胞は少なくとも１４日間培養された。ジャーカットＴ細胞は、CCRIのDr. Sabine Strehlから供与され、１０％ＦＣＳ及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０で維持された。細胞株はマイコプラズマ汚染について定期的に試験し、認証はMultiplexion, Germanyで行われた。細胞密度は、AccuCheck計数ビ－ズを用いてモニターした。

ｍＲＮＡのインビトロ転写と電気穿孔：
インビトロ転写は、mMessage mMachine T7 Ultra キットを使用して製造業者の指示に従って行った。５０～２００ｎｇのカラム精製ＰＣＲ産物を反応テンプレートとして使用した。得られたｍＲＮＡは、RNeasyカラム精製キットを使用して、適合プロトコールを用いて精製した。簡単に説明すると、ｍＲＮＡ溶液を、ＲＬＴ緩衝液、エタノール、及び２－メルカプトエタノールの混合物で希釈した。混合物はRNeasyカラムに充填し、製造業者の指示に従って精製した。溶出はヌクレアーゼ不含水で行い、精製されたｍＲＮＡは電気穿孔のときまで－８０℃で凍結した。一過性のトランス遺伝子発現のために、Gene Pulser（Biorad）を使用して、初代Ｔ細胞又はジャーカットＴ細胞をさまざまな量の各ｍＲＮＡで電気穿孔した。以下のプロトコールを各細胞タイプに使用した：初代Ｔ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、５ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）、ジャーカットＴ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、３ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）。

抗体とフローサイトメトリー：
初代ヒトＴ細胞又は腫瘍細胞株をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、及び０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁し、１０％ヒト血清で４℃で１０分間処理した。細胞を各１次抗体を用いて４℃で２５分間染色した。染色された細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、２次抗体で４℃で２５分間染色したか、又はBD LSRFortessaで直接処理した。ＣＡＲ構築物の発現は、ＳｔｒｅｐＩＩタグを介して抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体（クローン５Ａ９Ｆ９、Genscript）を使用して、又はＦＬＡＧタグを介して抗ＦＬＡＧタグ抗体（クローンＬ５、BioLegend）を１次抗体として使用し、ＰＥ－又はＡＰＣ－結合２次抗体（eBioscience）を使用して検出した。工学作成された標的抗原ｔＥＧＦＲ及びｔＨＥＲ２の発現は、ＰＥ－又はＡＰＣ－結合抗ＥＧＦＲ抗体（クローンＡＹ１３、BioLegend）を用いて、又はＰＥ－結合抗ＨＥＲ２抗体（クローン２４Ｄ２、BioLegend）を用いて検出した。分析はFlowJoソフトウェアによって行った。

トランス遺伝子構築物の構築：
ＣＤ３３シグナルペプチド、低親和性ｒｃＳｓｓｏ７ｄ変種Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ、低親和性アフィボディ変種ｚＨＥＲ２－Ｒ１０Ａ、ヒト単量体ＣＤ８αヒンジ（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤＰ０１７３２、Ｃ１６４Ｓ及びＣ１８１Ｓ）、及びＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ同時刺激ドメイン、二量体化ドメインＦＫＢＰＦ３６Ｖ、及びＦＲＢ、及びＣＤ３ζ ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインをコードするヌクレオチド配列は、GeneArt（Thermo Scientific）によって合成された。二量体化ドメインＦＫＢＰをコードするヌクレオチド配列はGenscriptによって合成された。ＥＧＦＲ及びＨＥＲ２の細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインをコードする配列は、Addgeneから得られた（それぞれ、プラスミド＃１１０１１及び＃１６２５７）。柔軟性リンカー、ＦＬＡＧタグ、及びＳｔｒｅｐＩＩタグは、各ＰＣＲプライマーを使用して挿入された。機能的トランス遺伝子へのヌクレオチド配列の組み立ては、ギブソン組み立てマスターミックス（New England Biolabs）を使用して製造業者の指示に従って行った。図と配列はそれぞれ図１４と１５に示される。得られた構築物はＰＣＲにより増幅し、その後インビトロ転写に使用した。

ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイ：
ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイでは、２つの標的細胞集団を生成した：（ｉ）ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡと各標的抗原をコードするＲＮＡで電気穿孔されたジャーカット細胞、及び（ｉｉ）ｍＣｈｅｒｒｙをコードするｍＲＮＡのみで電気穿孔されたジャーカット細胞。これらの２つの集団を１：１の比率で混合し、ＣＡＲＴ細胞とＥ：Ｔ細胞比４：１：１で、丸底９６ウェルプレートで２０，０００個の標的細胞／ウェルと３７℃で４時間同時培養した。ＣＡＲＴ細胞を添加していない標的細胞を対照条件とした（「標的のみ」）。インキュベーション時間後、同時培養物を遠心分離し（５分、１６００ｒｐｍ、４℃）、その後のサイトカイン測定のために上清を採取し、残りの細胞は、ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、０．０２％アジ化ナトリウムからなる１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。標的抗原^ｐｏｓ細胞及び標的抗原^ｎｅｇ細胞集団の生存活性を、BD LSRFortessaフローサイトメーターを使用して決定し、特異的溶解は以下の式で計算した：
％特異的溶解＝（１－（（（試料のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（試料のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％））））×１００。

トランス遺伝子のインビトロ二量体化：
トランス遺伝子の二量体化は、同時培養実験の前に誘導された。初代Ｔ細胞を各細胞培養培地で最終細胞濃度に希釈した。ホモ二量体化剤ＡＰ２１９６７（Clontech Laboratories）を細胞培養培地で希釈し、５００ｎＭの最終濃度で添加した。対照条件は、同じ濃度のエタノールで処理された（ビヒクル対照）。トランス遺伝子の効率的な二量体化を確実にするために、細胞を３７℃で３０分間インキュベートし、その後、インビトロ実験に使用した。

実施例８
３つ又は４つのＣＡＲ分子を含むＣＡＲ群の生成
２つの直交二量体化プラットフォーム（ＡＰ２１９６７を使用するＦＫＢＰ／ＦＲＢ、ＡＰ２０１８７を使用するＦＫＢＰＦ３６Ｖ／ＦＫＢＰＦ３６Ｖ）と低親和性抗原結合部分Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａを使用することにより、我々は、３つのＣＡＲ分子（２つの構築物（配列番号６９）及び（配列番号４８）を含む）又は４つのＣＡＲ分子（２つの構築物（配列番号７０）及び（配列番号４８）を含む）含む条件的に活性なＣＡＲ群を、複合体化状態で生成するための方策を例示する。図１０Ａ及び図１０Ｂは、それぞれ三量体及び四量体のＣＡＲの略図を示す。ジャーカットＴ細胞を、３量体又は４量体のＣＡＲ群の２つの別々の鎖をコードする５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔し、各シグナル伝達鎖に応じて、ＳｔｒｅｐＩＩタグ又はＦＬＡＧタグを介する電気穿孔の２０時間後にＣＡＲ発現を検出した。図１０Ｃは、三量体及び四量体のＣＡＲ群の発現を示す。この例では、ＣＡＲ群はＥＧＦＲのみに向けられていた。本発明のＣＡＲ群において、複合体化されたＣＡＲ群におけるすべてのＣＡＲ分子は、異なる標的抗原に対して向けられるであろう。

ヒト細胞株の維持
初代ヒトＴ細胞は、アフェレーシス後の匿名の健康なドナ－の血液から得た（Austrian Red Cross, Vienna, Austriaからのバフィーコート）。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、RosetteSep ヒトＴ細胞濃縮カクテル（STEMCELL Technologies）を使用する負の選択によって濃縮された。単離及び精製されたＴ細胞は、２０％ＦＣＳ及び１０％ＤＭＳＯを補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で、使用するまで凍結保存された。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビ－ズを用いて製造業者の指示に従って活性化され、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び２００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２を補足したＲＰＭＩ－１６４０からなるヒトＴ細胞培地で増殖された。実験を行う前に、初代Ｔ細胞は少なくとも１４日間培養された。ＮＦ－κＢ依存性ｅＧＦＰ遺伝子及びＮＦ－ＡＴ依存性ＣＦＰ遺伝子を用いて工学作成されたジャーカットＴレポーター細胞株は、ウィーン医科大学のDr. Peter Steinbergerから供与され、１０％ＦＣＳ及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０で維持された。細胞株はマイコプラズマ汚染について定期的に試験し、認証はMultiplexion, Germanyで行われた。細胞密度は、AccuCheck計数ビ－ズを用いてモニタ－した。

ｍＲＮＡのインビトロ転写と電気穿孔
インビトロ転写は、mMessage mMachine T7 Ultra キットを製造業者の指示に従って使用して行われる。５０～２００ｎｇのカラム精製ＰＣＲ産物が反応テンプレートとして使用される。得られたｍＲＮＡは、RNeasyカラム精製キットを使用して、適合プロトコールを用いて精製される。簡単に説明すると、ｍＲＮＡ溶液を、ＲＬＴ緩衝液、エタノール、及び２－メルカプトエタノールの混合物で希釈される。混合物はRNeasyカラムに充填され、製造業者の指示に従って精製される。溶出はヌクレアーゼ不含水で行われ、精製されたｍＲＮＡは電気穿孔のときまで－８０℃で凍結される。一過性のトランス遺伝子発現のために、Gene Pulser（Biorad）を使用して、ジャーカットＴ細胞はさまざまな量の各ｍＲＮＡで電気穿孔される。以下のプロトコールが使用される：初代Ｔ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、５ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）、ジャーカットＴ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、３ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）。

抗体とフローサイトメトリー
初代ヒトＴ細胞及びジャーカットＴ細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、及び０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁し、１０％ヒト血清で４℃で１０分間処理する。細胞は各１次抗体を用いて４℃で２５分間染色される。染色された細胞はＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄された後、２次抗体で４℃で２５分間染色されるか、BD LSRFortessaで直接処理される。ＣＡＲ構築物の発現は、ＳｔｒｅｐＩＩタグを介して抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体（クローン５Ａ９Ｆ９、Genscript）を使用して、又はＦＬＡＧタグを介して抗ＦＬＡＧタグ抗体（クローンＬ５、BioLegend）を１次抗体として使用し、抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体の場合はＰＥ－又はＡＰＣ－結合２次抗体を使用して検出される。工学作成された標的抗原ｔＥＧＦＲの発現は、ＰＥ－又はＡＰＣ－結合抗ＥＧＦＲ抗体（クローンＡＹ１３、BioLegend）を用いて検出される。分析はFlowJoソフトウェアによって行った。

トランス遺伝子構築物の構築
ＣＤ３３シグナルペプチド、低親和性ｒｃＳｓｓｏ７ｄ変種Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ、ＳｔｒｅｐＩＩタグ、柔軟性Ｇ４Ｓリンカー、ヒト単量体ＣＤ８αヒンジ（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤＰ０１７３２、Ｃ１６４Ｓ及びＣ１８１Ｓ）、及びＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ同時刺激ドメイン、二量体化ドメインＦＫＢＰＦ３６Ｖ、及びＦＲＢ、及びＣＤ３ζ ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインをコードするヌクレオチド配列は、GeneArt（Thermo Scientific）によって合成される。二量体化ドメインＦＫＢＰをコードするヌクレオチド配列はGenscriptによって合成される。ＥＧＦＲの細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインをコードする配列は、Addgeneから得られる（プラスミド＃１１０１１）。柔軟性リンカー及びＦＬＡＧタグは、各ＰＣＲプライマ－を使用して挿入される。機能的トランス遺伝子へのヌクレオチド配列の組み立ては、製造業者の指示に従って行われる。図と配列はそれぞれ図１４と１５に示される。得られた構築物はＰＣＲにより増幅され、その後インビトロ転写に使用される。

ジャーカットＴレポーター細胞株による転写因子活性の測定
ジャーカットＴレポーター細胞株は、異なる蛍光タンパク質で異なって標識されて、同じウェル内で各腫瘍抗原を発現するジャーカットＴレポーター細胞とジャーカットＴ標的細胞の効率的な分化を可能にする。適切な蛍光タンパク質は、ｄＫｅｉｍａ（Addgene ＃５４６１８）、ｍＡｍｅｔｒｉｎｅ（Addgene ＃５４５０５）、又はレポータータンパク質とのクロストークが最小の同様のタンパク質である。各ＣＡＲを発現するジャーカットＴレポーター細胞における転写因子ＮＦＡＴ及びＮＦκＢの活性は、丸底９６ウェルプレート中で標的細胞とＥ：Ｔ比０．２５：１、０．５：１、１：１、又は２：１で、３７℃で４時間、８時間、１６時間、又は２４時間の同時培養によって評価される。細胞はBD LSRFortessaを使用して得られ、ジャーカットＴレポーター細胞の活性化は、各レポータータンパク質の蛍光強度の幾何平均を、又はレポータータンパク質陽性細胞の割合を、測定することによって決定される。

トランス遺伝子のインビトロ二量体化
トランス遺伝子の二量体化は、同時培養実験の前に誘導される。初代Ｔ細胞とジャーカットＴ細胞は、各細胞培養培地で最終細胞濃度に希釈される。ホモ二量体化剤ＡＰ２０１８７及びヘテロ二量体化剤ＡＰ２１９６７は細胞培養培地で希釈され、それぞれ１０ｎＭ及び５００ｎＭの最終濃度で添加される。同じ濃度の各ビヒクル対照ＤＭＳＯ又はエタノールの添加を、それぞれ対照とした。トランス遺伝子の効率的な二量体化を確実にするために、細胞を３７℃で３０分間インキュベートし、その後インビトロ実験に使用する。

ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイ：
ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイでは、２つの標的細胞集団が生成される：（ｉ）ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡと各標的抗原をコードするＲＮＡで電気穿孔されたジャーカット細胞、及び（ｉｉ）ｍＣｈｅｒｒｙをコードするｍＲＮＡのみで電気穿孔されたジャーカット細胞。これらの２つの集団を１：１の比率で混合し、ＣＡＲＴ細胞とＥ：Ｔ細胞比４：１：１で、丸底９６ウェルプレートで２０，０００個の標的細胞／ウェルと３７℃で４時間又は２４時間同時培養する。ＣＡＲＴ細胞を添加していない標的細胞を対照条件とする（「標的のみ」）。インキュベーション時間後、同時培養物を遠心分離し（５分、１６００ｒｐｍ、４℃）、その後のサイトカイン測定のために上清を採取し、残りの細胞は、ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、０．０２％アジ化ナトリウムからなる１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁される。標的抗原^ｐｏｓ細胞及び標的抗原^ｎｅｇ細胞集団の生存活性を、BD LSRFortessaフローサイトメーターを使用して決定し、特異的溶解は以下の式で計算される：
％特異的溶解＝（１－（（（試料のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（試料のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％））））×１００。

実施例９
構成的な複合体形成のためのヘテロ二量体化ドメインを含むＣＡＲ群の生成
ヘテロ二量体化ロイシンジッパー（Moll et al., Protein Sci. 2001;10(3):649-655）、低親和性抗原結合部分Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ、及びｚＨＥＲ２－Ｒ１０Ａを使用して、調節分子の存在とは無関係に効率的にヘテロ二量体化することができるドメインを含むＣＡＲ分子によって形成されるＣＡＲ群を生成するための方策を例示する。図１１Ａは、構築物Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８Ｓｅｒ－ＢＢ－ＲＲ－３ｚ（配列番号７２）及びＡ（Ｒ１０Ａ）－８ｓｅｒ－ＢＢ－ＥＥ－３ｚ（配列番号７３）を含むＣＡＲ群の略図を示す。ジャーカットＴレポーター細胞と初代Ｔ細胞を、２つの別々のＣＡＲ分子をコードする５μｇのｍＲＮＡで電気穿孔し、電気穿孔の２０時間後にＳｔｒｅｐＩＩタグ又はＦＬＡＧタグを介してＣＡＲ発現を検出した（図１１Ｂ～Ｅを参照）。図１１Ｆは、ＥＧＦＲとＨＥＲ２の複合認識のためのこのＣＡＲ群を発現する初代ヒトＴ細胞が、ＥＧＦＲ又はＨＥＲ２のいずれかのみを発現する同じタイプの標的細胞（すなわちジャーカット細胞）と比較して、両方の標的抗原（すなわちＥＧＦＲとＨＥＲ２）を発現する標的細胞において、より効率的に細胞死を誘導できることを示す。

ヒト細胞株の維持
初代ヒトＴ細胞は、アフェレーシス後の匿名の健康なドナ－の血液から得た（Austrian Red Cross, Vienna, Austriaからのバフィーコート）。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、RosetteSep ヒトＴ細胞濃縮カクテル（STEMCELL Technologies）を使用する負の選択によって濃縮された。単離及び精製されたＴ細胞は、２０％ＦＣＳ及び１０％ＤＭＳＯを補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で、使用するまで凍結保存された。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを用いて製造業者の指示に従って活性化され、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び２００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２を補足したＲＰＭＩ－１６４０からなるヒトＴ細胞培地で増殖された。実験を行う前に、初代Ｔ細胞は少なくとも１４日間培養された。ジャーカットＴ細胞は、CCRIのDr. Sabine Strehlから供与され、１０％ＦＣＳ及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０で維持された。細胞株はマイコプラズマ汚染について定期的に試験し、認証はMultiplexion, Germanyで行われた。細胞密度は、AccuCheck計数ビーズを用いてモニタ－した。

ｍＲＮＡのインビトロ転写と電気穿孔
インビトロ転写は、mMessage mMachine T7 Ultra キットを使用して製造業者の指示に従って行った。５０～２００ｎｇのカラム精製ＰＣＲ産物を反応テンプレートとして使用した。得られたｍＲＮＡは、RNeasyカラム精製キットを使用して、適合プロトコールを用いて精製した。簡単に説明すると、ｍＲＮＡ溶液を、ＲＬＴ緩衝液、エタノール、及び２－メルカプトエタノールの混合物で希釈した。混合物はRNeasyカラムに充填し、製造業者の指示に従って精製した。溶出はヌクレアーゼ不含水で行い、精製されたｍＲＮＡは電気穿孔のときまで－８０℃で凍結した。一過性のトランス遺伝子発現のために、Gene Pulser（Biorad）を使用して、初代Ｔ細胞をさまざまな量の各ｍＲＮＡで電気穿孔した。以下のプロトコールが使用される：初代Ｔ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、５ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）、ジャーカットＴ細胞（方形波プロトコール、５００Ｖ、３ｍｓ、及び４ｍｍキュベット）。

抗体とフローサイトメトリー
初代ヒトＴ細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、及び０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁し、１０％ヒト血清で４℃で１０分間処理した。細胞を各１次抗体を用いて４℃で２５分間染色した。染色された細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、２次抗体で４℃で２５分間染色したか、又はBD LSRFortessaで直接処理した。ＣＡＲ構築物の発現は、ＳｔｒｅｐＩＩタグを介して抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体（クローン５Ａ９Ｆ９、Genscript）を又はＦＬＡＧタグを介して、抗ＦＬＡＧタグ抗体（クローンＬ５、BioLegend）を１次抗体として使用し、抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体の場合は、ＰＥ－又はＡＰＣ－結合２次抗体を使用して検出した。工学作成された標的抗原ｔＥＧＦＲ及びｔＨＥＲ２の発現は、ＰＥ－結合抗ＥＧＦＲ抗体（ＡＹ１３、BioLegend）を用いて、又はＰＥ結合抗ＨＥＲ２抗体（クローン２４Ｄ２、BioLegend）を用いて、検出された。分析はFlowJoソフトウェアによって行った。

トランス遺伝子構築物の構築
ＣＤ３３シグナルペプチド、低親和性ｒｃＳｓｓｏ７ｄ変種Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ、ＳｔｒｅｐＩＩタグ、柔軟性Ｇ４Ｓリンカー、ヒト単量体ＣＤ８αヒンジ（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤＰ０１７３２、Ｃ１６４Ｓ及びＣ１８１Ｓ）、及びＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ同時刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインをコードするヌクレオチド配列は、GeneArt（Thermo Scientific）によって合成された。ＥＥ及びＲＲロイシンジッパーをコードするヌクレオチド配列は、Biocatによって合成された。ＥＧＦＲの細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインをコードする配列は、Addgene（プラスミド＃１１０１１）から得られた。柔軟性リンカーとＦＬＡＧタグは、各ＰＣＲプライマーを使用して挿入された。機能的トランス遺伝子へのヌクレオチド配列の組み立ては、ギブソン組み立てマスターミックスを使用して製造業者の指示に従って行った。図と配列はそれぞれ図１４と１５に示される。得られた構築物はＰＣＲにより増幅し、その後インビトロ転写に使用した。

ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイ：
ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイでは、２つの標的細胞集団を生成した：（ｉ）ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡと各標的抗原をコードするＲＮＡで電気穿孔されたジャーカット細胞、及び（ｉｉ）ｍＣｈｅｒｒｙをコードするｍＲＮＡのみで電気穿孔されたジャーカット細胞。これらの２つの集団を１：１の比率で混合し、ＣＡＲＴ細胞とＥ：Ｔ細胞比４：１：１で、丸底９６ウェルプレートで２０，０００個の標的細胞／ウェルと３７℃で４時間及び２４時間同時培養された。ＣＡＲＴ細胞を添加していない標的細胞を対照条件とした（「標的のみ」）。インキュベーション時間後、同時培養物を遠心分離し（５分、１６００ｒｐｍ、４℃）、その後のサイトカイン測定のために上清を採取し、残りの細胞は、ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、０．０２％アジ化ナトリウムからなる１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。標的抗原^ｐｏｓ細胞及び標的抗原^ｎｅｇ細胞集団の生存活性を、BD LSRFortessaフローサイトメーターを使用して決定し、特異的溶解は以下の式で計算した：
％特異的溶解＝（１－（（（試料のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（試料のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％））））×１００。

実施例１０
ＣＡＲ分子の同時刺激シグナル伝達領域に異なる同時刺激ドメインを含むＣＡＲ群の生成
過去２０年間で、異なる同時刺激ドメインを含む第２世代のＣＡＲ分子がＴ細胞を効率的に活性化できることが証明されている。実施例１０は、それらの同時刺激シグナル伝達領域に異なる同時刺激ドメインを含むＣＡＲ分子が、標的抗原との一価及び多価相互作用を区別するための本発明のＣＡＲ群の状況においても機能することを示す。図１２Ａは、同時刺激シグナル伝達領域にＣＤ２８又はＩＣＯＳ又はＯＸ４０のいずれかを含む、ＥＧＦＲ特異的ＣＡＲ分子Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－２８－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ（配列番号７４）、Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＩＣＯＳ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ（配列番号７５）、及びＳ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＯＸ４０－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ（配列番号７６）の構成を示す。ジャーカット細胞及び初代ヒトＴ細胞におけるこれらのＣＡＲ分子の発現を、それぞれ図１２Ｂ及びＣに示す。発現は、各５μｇのｍＲＮＡの電気穿孔の２０時間後に、組み込まれたＳｔｒｅｐＩＩタグを介してフローサイトメトリーによって分析した。ジャーカット細胞でプロモーターＮＦ－κＢ及びＮＦ－ＡＴを活性化し、初代ヒトＴ細胞中で細胞毒性エフェクター機能を誘発する非複合体化（すなわち一価）及び複合体化（すなわち二価）状態のこれらのＣＡＲ分子の能力を、それぞれ図１２Ｄ及びＥに示す。図１２Ｄは、Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＯＸ４０－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚが、ＮＦ－ｋＢ及びＮＦ－ＡＴレポーターで安定して形質導入されたジャーカット細胞内で発現された場合、調節分子ＡＰ２０１８７によって二価のＣＡＲ群に複合体化されるときはＮＦ－κＢ及びＮＦ－ＡＴを効率的に誘発できるが、複合体化されていない一価状態では誘発できないことを示す。同様に、ＣＡＲ分子がＡＰ２０１８７によってそれぞれＣＡＲ群に複合体化された（図１２Ｅ）場合のみ、ＣＡＲ分子Ｓ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＩＣＯＳ－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚ及びＳ（Ｇ３２Ａ）－８ｓｅｒ－ＯＸ４０－ＦＫＢＰ（３６Ｖ）－３ｚによって、初代ヒトＴ細胞で特異的溶解が効率的に誘発された。まとめるとこれは、本発明のＣＡＲ群のＣＡＲ分子の同時刺激シグナル伝達領域における同時刺激ドメインのタイプを変え得ることを確認している。

ヒト細胞株の維持
初代ヒトＴ細胞は、アフェレーシス後の匿名の健康なドナ－の血液から得た（Austrian Red Cross, Vienna, Austriaからのバフィーコート）。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、RosetteSep ヒトＴ細胞濃縮カクテル（STEMCELL Technologies）を使用する負の選択によって濃縮された。単離及び精製されたＴ細胞は、２０％ＦＣＳ及び１０％ＤＭＳＯを補足したＲＰＭＩ－１６４０培地で、使用するまで凍結保存された。ＣＤ３^ｐｏｓＴ細胞は、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビ－ズを用いて製造業者の指示に従って活性化され、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、及び２００ＩＵ／ｍＬ組換えヒトＩＬ－２を補足したＲＰＭＩ－１６４０からなるヒトＴ細胞培地で増殖された。実験を行う前に、初代Ｔ細胞は少なくとも１４日間培養された。ジャーカットＴ細胞は、CCRIのDr. Sabine Strehlから供与され、１０％ＦＣＳ及び１％ペニシリン－ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０で維持された。ＮＦκＢ依存性ｅＧＦＰ遺伝子とＮＦＡＴ依存性ＣＦＰ遺伝子で工学作成されたジャーカットＴレポーター細胞株は、ウィーン医科大学のDr. Peter Steinbergerから供与され、１０％ＦＣＳと１％ペニシリン－ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ－１６４０で維持された。細胞株はマイコプラズマ汚染について定期的に試験し、認証はMultiplexion, Germanyで行われた。細胞密度は、AccuCheck計数ビ－ズを用いてモニタ－した。

抗体とフローサイトメトリー
初代ヒトＴ細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、及び０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁し、１０％ヒト血清で４℃で１０分間処理した。細胞を各１次抗体を用いて４℃で２５分間染色した。染色された細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、２次抗体で４℃で２５分間染色したか、又はBD LSRFortessaで直接処理した。ＣＡＲ構築物の発現は、ＳｔｒｅｐＩＩタグを介して抗ＳｔｒｅｐＩＩタグ抗体（クローン５Ａ９Ｆ９、Genscript）を１次抗体として使用し、ＰＥ－又はＡＰＣ－結合２次抗体を使用して検出した。工学作成された標的抗原ｔＥＧＦＲの発現は、ＰＥ－又はＡＰＣ－結合抗ＥＧＦＲ抗体（ＡＹ１３、BioLegend）を用いて検出した。分析はFlowJoソフトウェアによって行った。

トランス遺伝子構築物の構築
ＣＤ３３シグナルペプチド、低親和性ｒｃＳｓｏ７ｄ変種Ｅ１１．４．１－Ｇ３２Ａ、ＳｔｒｅｐＩＩタグ、柔軟性Ｇ４Ｓリンカー、ヒト単量体ＣＤ８αヒンジ（ＵｎｉＰｒｏｔＩＤＰ０１７３２、Ｃ１６４Ｓ及びＣ１８１Ｓ）、及びＣＤ８α膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ同時刺激ドメイン、二量体化ドメインＦＫＢＰＦ３６Ｖ、及びＣＤ３ζ ＩＴＡＭシグナル伝達ドメインをコードするヌクレオチド配列は、GeneArt（Thermo Scientific）によって合成された。ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、及びＯＸ４０の細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列は、ｃＤＮＡクローン（Sino Biological）から得られた。ＥＧＦＲの細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインをコードする配列は、Addgene（プラスミド＃１１０１１）から得られた。各ＰＣＲプライマーを使用して、柔軟性リンカーを挿入した。機能的トランス遺伝子へのヌクレオチド配列の組み立ては、ギブソン組み立てマスターミックスを使用して製造業者の指示に従って行った。図と配列はそれぞれ図１４と１５に示される。得られた構築物はＰＣＲにより増幅し、その後インビトロ転写に使用した。

ジャーカットＴレポーター細胞株による転写因子活性の測定
ジャーカットＴレポーター細胞株は、異なる蛍光タンパク質で異なって標識されて、同じウェル内で各腫瘍抗原を発現するジャーカットＴレポーター細胞とジャーカットＴ標的細胞の効率的な分化を可能にした。適切な蛍光タンパク質は、ｄＫｅｉｍａ（Addgene ＃５４６１８）、ｍＡｍｅｔｒｉｎｅ（Addgene ＃５４５０５）、又はレポータータンパク質とのクロスト－クが最小の同様のタンパク質であった。各ＣＡＲを発現するジャーカットＴレポーター細胞における転写因子ＮＦＡＴ及びＮＦκＢの活性は、丸底９６ウェルプレート中で標的細胞とＥ：Ｔ比０．２５：１、０．５：１、１：１、又は２：１で、３７℃で２４時間の同時培養によって評価された。細胞はBD LSRFortessaを使用して採取され、ジャーカットＴレポーター細胞の活性化は、各レポータータンパク質の蛍光強度の幾何平均を、又はレポータータンパク質陽性細胞の割合を、測定することによって決定された。

ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイ：
ＦＡＣＳベースの細胞毒性アッセイでは、２つの標的細胞集団を生成した：（ｉ）ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡと各標的抗原をコードするＲＮＡで電気穿孔されたジャーカット細胞、及び（ｉｉ）ｍＣｈｅｒｒｙをコードするｍＲＮＡのみで電気穿孔されたジャーカット細胞。これらの２つの集団を１：１の比率で混合し、ＣＡＲＴ細胞とＥ：Ｔ細胞比４：１：１で、丸底９６ウェルプレートで２０，０００個の標的細胞／ウェルと３７℃で４時間又は２４時間同時培養した。ＣＡＲＴ細胞を添加していない標的細胞は、対照条件とした（「標的のみ」）。インキュベ－ション時間後、同時培養物を遠心分離し（５分、１６００ｒｐｍ、４℃）、その後のサイトカイン測定のために上清を採取し、残りの細胞をＰＢＳ、０．２％ヒトアルブミン、及び０．０２％アジ化ナトリウムからなる１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。標的抗原^ｐｏｓ細胞及び標的抗原^ｎｅｇ細胞集団の生存活性を、BD LSRFortessaフローサイトメーターを使用して決定し、特異的溶解は次の式で計算された。
％特異的溶解＝（１－（（（試料のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（試料のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｅＧＦＰ^ｐｏｓ細胞％）／（「標的のみ」対照のｍＣｈｅｒｒｙ^ｐｏｓ細胞％））））×１００。

従って本発明は、以下の好適な実施態様を開示する。

１．２、３、又は４つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子からなるＣＡＲ群であって、
ここで、前記ＣＡＲ群の各メンバーはそのアミノ酸配列が互いに異なり、
ここで、前記群の各ＣＡＲ分子は、少なくとも膜貫通ドメインと外部ドメインとを含み、外部ドメインは、１つ又は２つの抗原結合部分を、及び／又はそれぞれが少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる１つ又は２つの結合部位を含み、前記群の少なくとも１つのＣＡＲ分子は、内部ドメインを内部ドメイン含み、これは少なくとも１つの免疫受容体であるチロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を介してシグナルを伝達することができる少なくともシグナル伝達領域を含み、

ここで、前記群の各ＣＡＲ分子の内部ドメインは、各ＣＡＲ分子が内部ドメインを含む場合、細胞内で発現されるなら、細胞膜の細胞内側に位置し、前記群の各ＣＡＲ分子の外部ドメインは、細胞内で発現されるなら、細胞膜の細胞外側に移動し、前記群の各ＣＡＲ分子の膜貫通ドメインは、細胞内で発現されるなら細胞膜に位置し、

ここで、そ前記群の各ＣＡＲ分子の外部ドメインはその一般的なコンフォメーションで、前記群の他のＣＡＲ分子とそれぞれ分子間ジスルフィド結合を形成することができるシステインアミノ酸部分を含まず、
ここで、前記群の異なるＣＡＲ分子及び異なる他のポリペプチドの抗原結合部分は、互いに共有結合していない異なる標的抗原に特異的であり、

ここで、前記群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分のその各標的抗原に対する親和性は、１ｍＭ～１００ｎＭであり、
ここで、その各標的抗原に対する他のポリペプチドの個々の抗原結合部分の親和性は、あるいはその各ＣＡＲ分子の結合部位に対するこの他のポリペプチドの親和性は、１ｍＭ～１００ｎＭであり、

ここで、前記群の各ＣＡＲ分子は、前記群の他のＣＡＲ分子との定義されたヘテロ二量体化を仲介することができる少なくとも１つのヘテロ二量体化ドメインを含み、ここで、ヘテロ二量体化ドメインの対のこのヘテロ二量体化は、調節分子とは独立して起きるか、又は調節分子の非存在下で起き、調節分子によって低減されるか、又は調節分子によって誘導され、かつ任意選択的に他の調節分子によって低減され、ここで調節分子は、生理学的条件下で、ヘテロ二量体化ドメインの対の少なくとも１つのメンバーに結合することができ、ヘテロ二量体化を誘導又は低減することにより、２、３、又は４つのＣＡＲ分子からなる非共有結合的に複合体化されたＣＡＲ群の形成を誘導又は低減する。

２．前記抗原結合部分は１つのタンパク質ドメインのみを含む、実施態様１に記載のＣＡＲ群。

３．実施態様１又は２に記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記抗原結合部分は１つのタンパク質ドメインのみを含み、ヒト細胞の表面に発現されたときにその群のＣＡＲ分子の二量体化又はオリゴマー化を引き起こさず、及び
ここで、前記タンパク質ドメインは、好ましくは、ヒト又は非ヒトのＶ_Ｈ又はＶＬ単一ドメイン抗体（ナノボディ）、又はブドウ球菌プロテインＡのＺドメインに基づいて工学作成された抗原結合部分、リポカリン、ＳＨ３ドメイン、フィブロネクチンタイプＩＩＩ型（ＦＮ３）ドメイン、ノッティン（ｋｎｏｔｔｉｎ）、Ｓｓｏ７ｄ、ｒｃＳｓｏ７ｄ、Ｓａｃ７ｄ、Ｇｐ２、ダーピン（ＤＡＲＰｉｎ）、ユビキチン、受容体、受容体のリガンド、又は補助受容体から成る群から選択される。

４．実施態様１～３のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、１ｍＭ～１５０ｎＭ、好ましくは１ｍＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１ｍＭ～３００ｎＭ、特に１ｍＭ～４００ｎＭであり、及び
ここで、他のポリペプチドの個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、又はこの他のポリペプチドのその各ＣＡＲ分子の結合部位に対する親和性は、１ｍＭ～１５０ｎＭ、好ましくは１ｍＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１ｍＭ～３００ｎＭ、特に１ｍＭ～４００ｎＭである。

５．実施態様１～３のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、５００μＭ～１００ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～１００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～１００ｎＭ、特に５０μＭ～１００ｎＭであり、及び
ここで、他のポリペプチドの個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、又はこの他のポリペプチドの各ＣＡＲ分子の結合部位に対する親和性は、５００μＭ～１００ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～１００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～１００ｎＭ、特に５０μＭ～１００ｎＭである。

６．実施態様１～３のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分の各標的抗原に対する親和性は、５００μＭ～１５０ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～３００ｎＭ、特に５０μＭ～４００ｎＭであり、及び
ここで、他のポリペプチドの個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、又はこの他のポリペプチドの各ＣＡＲ分子の結合部位に対する親和性は、５００μＭ～１５０ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～３００ｎＭ、特に５０μＭ～４００ｎＭである。

７．実施態様１～６のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記ＣＡＲ群の又は前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの、抗原結合部分によって特異的に認識される標的抗原は、天然に存在する細胞表面抗原、あるいは天然に存在する細胞表面抗原に結合したポリペプチド、炭水化物、又は脂質である。

８．実施態様１～７のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記ＣＡＲ群の、及び前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの抗原結合部分は、細胞上に存在する少なくとも２つの異なる標的抗原、好ましくは固体表面上又は脂質２重層上の細胞の少なくとも２つの異なる標的抗原に結合する。

９．実施態様１～８のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記ＣＡＲ群の又は前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの、抗原結合部分は、好ましくは以下から選択される分子に特異的に結合するか又はそれらを含む、ＣＡＲ群：ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４２ｃ、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４７、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８２、ＣＤ８５Ａ、ＣＤ８５Ｂ、ＣＤ８５Ｄ、ＣＤ８５Ｈ、ＣＤ８５Ｋ、ＣＤ９６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１１２、ＣＤ１１５、ＣＤ１１７、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１４６、ＣＤ１４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１８５、ＣＤ２００、ＣＤ２０４、ＣＤ２２１、ＣＤ２７１、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ３０１、ＣＤ３１２、ＣＤ３５３、ＣＤ３６２、ＢＣＭＡ、ＣＤ１６Ｖ、ＣＬＬ－１、Ｉｇカッパ、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＣＫＬＦ、ＣＬＥＣ２Ｄ、ＥＭＣ１０、ＥｐｈＡ２、ＦＲ－ａ、ＦＬＴ３ＬＧ、ＦＬＴ３、ルイス－Ｙ、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＣＡＭ５、ＩＧＨＡ１／ＩｇＡ１、ＩＬ－１ＲＡＰ、ＩＬ－１７ＲＥ、ＩＬ－２７ＲＡ、ＭＩＬＲ１、ＭＲ１、ＰＳＣＡ、ＰＴＣＲＡ、ＰＯＤＸＬ２、ＰＴＰＲＣＡＰ、ＵＬＢＰ２、ＡＪＡＰ１、ＡＳＧＲ１、ＣＡＤＭ１、ＣＡＤＭ４、ＣＤＨ１５、ＣＤＨ２３、ＣＤＨＲ５、ＣＥＬＳＲ３、ＣＳＰＧ４、ＦＡＴ４、ＧＪＡ３、ＧＪＢ２、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ＩＧＳＦ９、ＬＲＦＮ４、ＬＲＲＮ６Ａ／ＬＩＮＧＯ１、ＬＲＲＣ１５、ＬＲＲＣ８Ｅ、ＬＲＩＧ１、ＬＧＲ４、ＬＹＰＤ１、ＭＡＲＶＥＬＤ２、ＭＥＧＦ１０、ＭＰＺＬＩ１、ＭＴＤＨ、ＰＡＮＸ３、ＰＣＤＨＢ６、ＰＣＤＨＢ１０、ＰＣＤＨＢ１２、ＰＣＤＨＢ１３、ＰＣＤＨＢ１８、ＰＣＤＨＧＡ３、ＰＥＰ、ＳＧＣＢ、ベザチン、ＤＡＧＬＢ、ＳＹＴ１１、ＷＦＤＣ１０Ａ、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、未分化リンパ腫キナ－ゼ、カドヘリン２４、ＤＬＫ１、ＧＦＲＡ２、ＧＦＲＡ３、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＦＮＢ１、ＥＰＯＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ４、ＧＡＬＲ２、ＧＬＧ１、ＧＬＰ１Ｒ、ＨＢＥＧＦ、ＩＧＦ２Ｒ、ＵＮＣ５Ｃ、ＶＡＳＮ、ＤＬＬ３、ＦＺＤ１０、ＫＲＥＭＥＮ２、ＴＭＥＭ１６９、ＴＭＥＭ１９８、ＮＲＧ１、ＴＭＥＦＦ１、ＡＤＲＡ２Ｃ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＢ４、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＧ、ＤＲＤ４、ＧＡＢＲＢ３、ＧＲＩＮ３Ａ、ＧＲＩＮ２Ｃ、ＧＲＩＫ４、ＨＴＲ７、ＡＰＴ８Ｂ２、ＮＫＡＩＮ１、ＮＫＡＩＮ４、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮＡ１Ｉ、ＣＡＣＮＧ８、ＣＡＣＮＧ４、ＣＬＣＮ７、ＫＣＮＡ４、ＫＣＮＧ２、ＫＣＮＮ３、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＵ１、ＰＫＤ１Ｌ２、ＰＫＤ２Ｌ１、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６Ａ１１、ＳＬＣ６Ａ１５、ＳＬＣ７Ａ１、ＳＬＣ７Ａ５Ｐ１、ＳＬＣ７Ａ６、ＳＬＣ９Ａ１、ＳＬＣ１０Ａ３、ＳＬＣ１０Ａ４、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ１６Ａ８、ＳＬＣ１８Ａ１、ＳＬＣ１８Ａ３、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ２６Ａ１０、ＳＬＣ２９Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ１、ＳＬＣ３０Ａ５、ＳＬＣ３５Ｅ２、ＳＬＣ３８Ａ６、ＳＬＣ３８Ａ９、ＳＬＣ３９Ａ７、ＳＬＣ３９Ａ８、ＳＬＣ４３Ａ３、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＶ４、ＴＭＥＭ１６Ｊ、ＴＭＥＭ１４２Ｂ、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、ＢＡＩ１、ＥＤＧ６、ＧＰＲ１、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ４４、ＧＰＲ５６、ＧＰＲ６８、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７５、ＬＧＲ４、ＭＭＤ、ＮＴＳＲ２、ＯＰＮ３、ＯＲ２Ｌ２、ＯＳＴＭ１、Ｐ２ＲＸ３、Ｐ２ＲＹ８、Ｐ２ＲＹ１１、Ｐ２ＲＹ１３、ＰＴＧＥ３、ＳＳＴＲ５、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＡＤＡＭ２２、ＡＤＡＭＴＳ７、ＣＳＴ１１、ＭＭＰ１４、ＬＰＰＲ１、ＬＰＰＲ３、ＬＰＰＲ５、ＳＥＭＡ４Ａ、ＳＥＭＡ６Ｂ、ＡＬＳ２ＣＲ４、ＬＥＰＲＯＴＬ１、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＲＯＭ１、ＴＭ４ＳＦ５、ＶＡＮＧＬ１、ＶＡＮＧＬ２、Ｃ１８ｏｒｆ１、ＧＳＧＬ１、ＩＴＭ２Ａ、ＫＩＡＡ１７１５、ＬＤＬＲＡＤ３、ＯＺＤ３、ＳＴＥＡＰ１、ＭＣＡＭ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＡ５、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ４、ＫＩＡＡ１５２４、ＮＲＭ．３、ＲＰＲＭ、ＧＲＭ８、ＫＣＮＨ４、メラノコルチン１受容体、ＰＴＰＲＨ、ＳＤＫ１、ＳＣＮ９Ａ、ＳＯＲＣＳ１、ＣＬＳＴＮ２、エンドセリン変換酵素様－１、リゾホスファチジン酸受容体２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＬＲ２、神経向性チロシンキナ－ゼ１、ＭＵＣ１６、Ｂ７－Ｈ４、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＲＢＢ２、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ変種ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＨＧＦＲ、ＦＯＬＲ１、ＭＳＬＮ、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、メソセリン、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、Ｌ１－ＣＡＭ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、高分子量メラノ－マ関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、ＭＡＧＥ－Ａｌ、ＩＬ－１３Ｒ－α２、ジシアロガングリオシド（ＧＤ２及びＧＤ３）、腫瘍関連炭水化物抗原（ＣＡ－１２５、ＣＡ－２４２、Ｔｎ、及びシアリールＴｎ）、４－１ＢＢ、５Ｔ４、ＢＡＦＦ、炭酸アンヒドラ－ゼ９（ＣＡ－ＩＸ）、Ｃ－ＭＥＴ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、ＦＡＰ、フィブロネクチンエクストラドメインＢ（ＥＤ－Ｂ）、ＧＰＮＭＢ、ＩＧＦ－１受容体、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ３、ＩＴＢ５、ＩＴＧＡＸ、エンビギン、ＰＤＧＦ－Ｒα、ＲＯＲ１、シンデカン１、ＴＡＧ－７２、テナシンＣ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＮＫＧ２Ｄ－リガンド、腫瘍特異的ペプチドエピトープ、好ましくはＰＲ１／ＨＬＡ－Ａ２、系統特異的若しくは組織特異的抗原を提示する主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子、好ましくはＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２、ＣＤ３１９、エンドグリン、及びＭＨＣ分子。

１０．実施態様１～９のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の外部ドメインは、抗原結合部分と膜貫通ドメインとの間に挿入された構造的に柔軟なヒンジ領域、好ましくはＣＤ８アルファに由来するヒンジ領域（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔＰ０１７３２－１によるアミノ酸配列位置１３８～１８２）、又はＣＤ２８に由来するヒンジ領域（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔＰ１０７４７によるアミノ酸配列位置１１４～１５２）、又はＰＤ－１に由来するヒンジ領域（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔＱ１５１１６によるアミノ酸配列位置１４６～１７０）を含み、ここで、ＣＤ８アルファ、ＣＤ２８、又はＰＤ－１に由来する配列は、Ｎ末端及び／又はＣ末端が末端切断されていてもよく、及び前記配列領域の境界内で任意の長さを有することができ、及びここで、ＣＤ８アルファ及びＣＤ２８に由来する前記ヒンジのシステイン残基は削除されるか、又は他のアミノ酸残基によって置き換えられる。

１１．実施態様１～１０のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、ＣＡＲ分子のドメインは、異なるタンパク質に由来し、これらのドメインの少なくとも２つはアミノ酸リンカー配列を介して接続され、リンカーは好ましくは１～４０アミノ酸の長さを含む。

１２．実施態様１～１１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子の、好ましくは前記群のすべてのＣＡＲ分子の、ヘテロ二量体化ドメインのヘテロ二量体化は、調節分子の結合によって増強される。

１３．実施態様１～１２のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子の、好ましくは前記群のすべてのＣＡＲ分子の、ヘテロ二量体化ドメインのヘテロ二量体化は、調節分子の結合を必要としない。

１４．実施態様１～１３のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、ＣＡＲ分子内の少なくとも２つのヘテロ二量体化ドメインの場合、前記群の２つ以上の同一のＣＡＲ分子を含む複合体の形成を防ぐために、そのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化ドメインは細胞膜によって分離されており、及び／又は調節分子の存在下及び非存在下で互いに結合することができないヘテロ二量体化ドメインの異なる対のメンバーである。

１５．実施態様１～１４のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の各ＣＡＲ分子は、少なくとも１つの免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を介してシグナルを伝達することができる少なくともシグナル伝達領域を含む。

１６．実施態様１～１５のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化ドメインは、ＦＫ５０６結合タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２、ＦＫＢＰ）、ＦＫＢＰ－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＢ）変異体Ｔ８２Ｌ、カルシニュ－リン触媒性サブユニットＡ（ＣｎＡ）、シクロフィリン、ＧＡＩ、ＧＩＤ１、ＰＹＬ、及びＡＢＩから選択される。

１７．実施態様１～１６のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は、ＦＫＢＰ及びＦＫＢＰ－ラパマイシン関連タンパク質（ＦＲＢ、変異体Ｔ８２Ｌ）を含むヘテロ二量体化ドメインの対、及び／又は相互作用性コイルドコイルドメインの対によって仲介される。

１８．実施態様１～１７のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は、核内受容体からのリガンド結合ドメインと共調節ペプチドとを含むヘテロ二量体化ドメインの対によって仲介される。

１９．実施態様１～１８のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は、リポカリン折り畳み分子とリポカリン折り畳み結合相互作用パートナーとを含むヘテロ二量体化ドメインの対によって仲介される。

２０．実施態様１～１９のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は、核内受容体からのリガンド結合ドメインと共調節ペプチドとを含むヘテロ二量体化ドメインの対によって仲介され、かつ核内受容体由来のリガンド結合ドメインは、エストロゲン受容体、エクジソン受容体、糖質コルチコイド受容体、アンドロゲン受容体、甲状腺ホルモン受容体、ミネラルコルチコイド受容体、プロゲステロン受容体、ビタミンＤ受容体、ＰＰＡＲγ受容体、ＰＰＡＲβ受容体、ＰＰＡＲα受容体、プレグナンＸ受容体、肝臓Ｘ受容体、ファルネソイドＸ受容体、レチノイドＸ受容体、ＲＡＲ関連オ－ファン受容体、レチノイン酸受容体、及びＳＲＣ１、ＧＲＩＰ１、ＡＩＢ１、ＰＧＣ１ａ、ＰＧＣ１ｂ、ＰＲＣ、ＴＲＡＰ２２０、ＡＳＣ２、ＡＳＣ２－１、ＡＳＣ２－２、ＣＢＰ、ＣＢＰ－１、ＣＢＰ－２、Ｐ３００、ＣＩＡ、ＡＲＡ７０、ＡＲＡ７０－１、ＡＲＡ７０－２、ＮＳＤ１、ＳＭＡＰ、Ｔｉｐ６０、ＥＲＡＰ１４０、Ｎｉｘ１、ＬＣｏＲ、Ｎ－ＣｏＲ、ＳＭＲＴ、ＲＩＰ１４０、ＲＩＰ１４０－１、ＲＩＰ１４０－２、ＲＩＰ１４０－３、ＲＩＰ１４０－４、ＲＩＰ１４０－５、ＲＩＰ１４０－６、ＲＩＰ１４０－７、ＲＩＰ１４０－８、ＲＩＰ１４０－９、ＰＲＩＣ２８５、ＰＲＩＣ２８５－１、ＰＲＩＣ２８５－２、ＰＲＩＣ２８５－３、ＰＲＩＣ２８５－４、ＰＲＩＣ２８５－５、ＳＲＣ１－１、ＳＲＣ１－２、ＳＲＣ１－３、ＳＲＣ１－４ａ、ＳＲＣ１－４ｂ、ＳＲＣ２、ＳＲＣ３、ＳＲＣ３－１、ＰＧＣ１、ＴＲＡＰ２２０－１、ＴＲＡＰ２２０－２、ＮＲ０Ｂ１、ＮＲＩＰ１、ＴＩＦ１、ＴＩＦ２、ＣｏＲＮＲボックス、ＣｏＲＮＲ１、ＣｏＲＮＲ２、αβＶ、ＥＡ２、ＴＡ１、ＥＡＢ１、ＧＲＩＰ１－１、ＧＲＩＰ１－２、ＧＲＩＰ１－３、ＡＩＢ１－１、ＡＩＢ１－２、ＡＩＢ１－３、ＰＧＣ１ａ、ＰＧＣ１ｂから選択される核受容体のそれぞれの適合性のある共調節因子、から選択される。

２１．実施態様１～２０のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は、リポカリン折り畳み分子とリポカリン折り畳み結合相互作用パートナーとを含むヘテロ二量体化ドメインの対によって仲介され、リポカリン折り畳み分子は、天然に存在するリポカリンの、又は最大１５、最大３０、又は最大５０のアミノ酸欠失を、及び／又は構造的に保存されたβバレル構造の外側への最大１５、最大３０、又は最大５０のアミノ酸挿入を有するｉＬＢＰの誘導体であり、好ましくは、
－ＰＤＢエントリー１ＲＢＰのアミノ酸残基番号付けスキームに従って、ヒトＲＢＰ４の構造的に保存されたβ鎖に隣接する領域を規定する、ヒトＲＢＰ４のアミノ酸残基１～２０、３１～４０、４８～５１、５９～７０、７９～８４、８９～１０１、１１０～１１３、１２１～１３１、及び１３９～１８３、
－ヒトＴＬＣの構造的に保存されたβ鎖に隣接する領域を規定する、ヒトＴＬＣのアミノ酸残基１～１３、２４～３６、４４～４７、５５～６１、７０～７５、８０～８３、９２～９５、１０３～１１０、及び１１８～１５８（Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985のアミノ酸残基の番号付けスキームによる）、
－ヒトＡｐｏＭの構造的に保存されたβ鎖に隣接する領域を規定する、ヒトＡｐｏＭのアミノ酸残基１～４３、５４～６８、７６～８０、８８～９５、１０４～１０９、１１４～１１８、１２７～１３０、１３８～１４１、及び１４９～１８８（Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985のアミノ酸残基の番号付けスキームによる）、
－ヒトＴＬＣＢＰＩＩの構造的に保存されたβ鎖に隣接する領域を規定する、ヒトＣＲＡＢＰＩＩのアミノ酸残基１～４、１３～４０、４６～４９、５５～６０、６６～７０、７４～８０、８８～９２、９７～１０７、１１３～１１８、１２５～１２８、及び１３６～１３７（ＰＤＢエントリー２ＦＳ６のアミノ酸残基番号付けスキームによる）、
－ヒトＦＡＢＰ１の構造的に保存されたβ鎖に隣接する領域を規定する、ヒトＦＡＢＰ１のアミノ酸残基１～４、１３～３８、４４～４７、５３～５８、６４～６８、７２～７８、８６～９０、９５～９８、１０４～１０８、１１５～１１８、及び１２６～１２７（ＰＤＢエントリー２Ｆ７３のアミノ酸残基番号付けスキームによる）、
から選択されるアミノ酸残基の領域に構造的に対応する

２２．実施態様１～２１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は、リポカリン折り畳み分子とリポカリン折り畳み結合相互作用パートナーとを含むヘテロ二量体化ドメインの対によって仲介され、リポカリン折り畳み分子は、天然に存在するリポカリンの、又はβバレル構造において少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、特に少なくとも９０％の配列同一性を有するｉＬＢＰの誘導体であり、これにより、このβバレル構造は、
－ヒトＲＢＰ４の構造的に保存されたβ鎖を規定する、ヒトＲＢＰ４のアミノ酸残基２１～３０、４１～４７、５２～５８、７１～７８、８５～８８、１０２～１０９、１１４～１２０、及び１３２～１３８（ＰＤＢエントリー１ＲＢＰのアミノ酸残基番号付けスキームによる）、
－ヒトＴＬＣの構造的に保存されたβ鎖を規定する、ヒト涙リポカリンのアミノ酸残基１４～２３、３７～４３、４８～５４、６２～６９、７６～７９、８４～９１、９６～１０２、及び１１１～１１７（ＴＬＣ；Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985により規定される）、
－ヒトＡｐｏＭの構造的に保存されたβ鎖を規定する、ヒトアポリポタンパク質Ｍのアミノ酸残基４４～５３、６９～７５、８１～８７、９６～１０３、１１０～１１３、１１９～１２６、１３１～１３７、及び１４２～１４８（ＡｐｏＭ；Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985により規定される）、
－ヒトＣＲＡＢＰＩＩの構造的に保存されたβ鎖を規定する、ヒト細胞レチノイン酸結合タンパク質ＩＩのアミノ酸残基５～１２、４１～４５、５０～５４、６１～６５、７１～７３、８１～８７、９３～９６、１０８～１１２、１１９～１２４、及び１２９～１３５（ＣＲＡＢＰＩＩ；ＰＤＢエントリー２ＦＳ６のアミノ酸残基番号付けスキームによる）、
－ヒトＦＡＢＰ１の構造的に保存されたβ鎖を規定する、ヒト脂肪酸結合タンパク質１のアミノ酸残基５～１２、３９～４３、４８～５２、５９～６３、６９～７１、７９～８５、９１～９４、９９～１０３、１０９～１１４、及び１１９～１２５（ＦＡＢＰ１；ＰＤＢエントリー２Ｆ７３のアミノ酸残基番号付けスキームによる）、
から選択されるアミノ酸残基の領域に構造的に対応することが好ましい領域として規定される。

２３．実施態様１～２２のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は、リポカリン折り畳み分子とリポカリン折り畳み結合相互作用パートナーとを含むヘテロ二量体化ドメインの対によって仲介され、リポカリン折り畳み分子は、天然のリポカリン又はその誘導体の断片であり、リポカリン折り畳みの少なくとも構造的に保存されたβバレル構造をカバ－する、少なくとも８０、好ましくは少なくとも１００、特に少なくとも１２０のアミノ酸の長さを有するか、又はリポカリン折り畳み分子は、天然のｉＬＢＰ又はその誘導体の断片であり、リポカリン折り畳みの少なくとも構造的に保存された場合βバレル構造をカバーする、少なくとも８０、好ましくは少なくとも８５、特に少なくとも９０のアミノ酸の長さを有し、
ここで、構造的に保存されたβバレル構造は、
－ヒトＲＢＰ４の構造的に保存されたβ鎖を規定する、ヒトＲＢＰ４のアミノ酸残基２１～３０、４１～４７、５２～５８、７１～７８、８５～８８、１０２～１０９、１１４～１２０、及び１３２～１３８（ＰＤＢエントリー１ＲＢＰのアミノ酸残基番号付けスキームによる）、
－ヒトＴＬＣの構造的に保存されたβ鎖を規定する、ヒト涙リポカリンのアミノ酸残基１４～２３、３７～４３、４８～５４、６２～６９、７６～７９、８４～９１、９６～１０２、及び１１１～１１７（ＴＬＣ；Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985により規定される）、
－ヒトＡｐｏＭの構造的に保存されたβ鎖を規定する、ヒトアポリポタンパク質Ｍのアミノ酸残基４４～５３、６９～７５、８１～８７、９６～１０３、１１０～１１３、１１９～１２６、１３１～１３７、及び１４２～１４８（ＡｐｏＭ；Schiefner et al., Acc Chem Res. 2015;48(4):976-985により規定される）、
－ヒトＣＲＡＢＰＩＩの構造的に保存されたβ鎖を規定する、ヒト細胞レチノイン酸結合タンパク質ＩＩのアミノ酸残基５～１２、４１～４５、５０～５４、６１～６５、７１～７３、８１～８７、９３～９６、１０８～１１２、１１９～１２４、及び１２９～１３５（ＣＲＡＢＰＩＩ；ＰＤＢエントリー２ＦＳ６のアミノ酸残基番号付けスキームによる）、
－ヒトＦＡＢＰ１の構造的に保存されたβ鎖を規定する、ヒト脂肪酸結合タンパク質１のアミノ酸残基５～１２、３９～４３、４８～５２、５９～６３、６９～７１、７９～８５、９１～９４、９９～１０３、１０９～１１４、及び１１９～１２５（ＦＡＢＰ１；ＰＤＢエントリー２Ｆ７３のアミノ酸残基番号付けスキームによる）、
から選択されるアミノ酸残基の領域に、好ましくは構造的に対応するアミノ酸位置を含むか又はそれらからなる。

２４．実施態様１～２３のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、調節分子は、ヒトの体内の生理学的環境において、又は細胞内の生理学的条件下で、細胞の表面で、又は標準化された生理学的条件下で、好ましくはＰＢＳ条件下で達成され得る濃度で可溶性である分子であり、ここでＰＢＳ条件は、１３７ｍＭＮａＣｌ、２．７ｍＭＫＣｌ、１０ｍＭＮａ_２ＨＰＯ_４、及び１８ｍＭＫＨ_２ＰＯ_４である。

２５．実施態様１～２４のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、少なくとも１つの調節分子は、ラパマイシン、ラパマイシン類似体、アブシジン酸、ジベレリン、又はジベレリン類似体ＧＡ３－ＡＭから選択される。

２６．実施態様１～２５のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、少なくとも１つの調節分子は、核内受容体からのリガンド結合ドメインに結合し、以下から選択される、ＣＡＲ群：コルチコステロン（１１β，２１－ジヒドロキシ－４－プレグネン－３，２０－ジオン）；デオキシコルチコステロン（２１－ヒドロキシ－４－プレグネン－３，２０－ジオン）；コルチゾール（１１β，１７，２１－トリヒドロキシ－４－プレグネン－３，２０－ジオン）；１１－デオキシコルチゾール（１７，２１－ジヒドロキシ－４－プレグネン－３，２０－ジオン）；コルチゾン（１７，２１－ジヒドロキシ－４－プレグネン－３，１１，２０－トリオン）；１８－ヒドロキシコルチコステロン（１１β，１８，２１－トリヒドロキシ－４－プレグネン－３，２０－ジオン）；１．α－ヒドロキシコルチコステロン（１α，１１β，２１－トリヒドロキシ－４－プレグネン－３，２０－ジオン）；１１β，２１－ジヒドロキシ－３，２０－ジオキソ－４－プレグナン－１８－ａ１のアルドステロン１８，１１－ヘミアセタ－ル；アンドロステンジオン（４－アンドロステン－３，１７－ジオン）；４－ヒドロキシ－アンドロステンジオン；１１β－ヒドロキシアンドロステンジオン（１１β－４－アンドロステン－３，１７－ジオン）；アンドロスタンジオ－ル（３－β，１７－β－アンドロスタンジオ－ル）；アンドロステロン（３α－ヒドロキシ－５α－アンドロスタン－１７－オン）；エピアンドロステロン（３β－ヒドロキシ－５α－アンドロスタン－１７－オン）；アドレノステロン（４－アンドロステン－３，１１，１７－トリオン）；デヒドロエピアンドロステロン（３β－ヒドロキシ－５－アンドロステン－１７－オン）；デヒドロエピアンドロステロン硫酸塩（３β－スルホキシ－５－アンドロステン－１７－オン）；テストステロン（１７β－ヒドロキシ－４－アンドロステン－３－オン）；エピテストステロン（１７α－ヒドロキシ－４－アンドロステン－３－オン）；５α－ジヒドロテストステロン（１７β－ヒドロキシ－５α－アンドロスタン－３－オン５β－ジヒドロテストステロン；５－β－ジヒドロキシテストステロン（１７β－ヒドロキシ－５β－アンドロスタン－３－オン）；１１β－ヒドロキシテストステロン（１１β，１７β－ジヒドロキシ－４－アンドロステン－３－オン）；１１－ケトテストステロン（１７β－ヒドロキシ－４－アンドロステン－３，１７－ジオン）；エストロン（３－ヒドロキシ－１，３，５（１０）－エストラトリエン－１７－オン）；エストラジオ－ル（１，３，５（１０）－エストラトリエン－３，１７β－ジオ－ル）；エストリオ－ル１，３，５（１０）－エストラトリエン－３，１６α，１７β－トリオ－ル；プレグナン（３－β－ヒドロキシ－５－プレグナン）－２０－オン）；１７－ヒドロキシプレグネノロン（３－β，１７－ジヒドロキシ－５－プレグナン－２０－オン）；プロゲステロン（４－プレグナン－３，２０－ジオン）；１７－ヒドロキシプロゲステロン（１７－ヒドロキシ－４－プレグナン－３，２０－ジオン）；プロゲステロン（プレグナ－４－エン－３，２０－ジオン）；Ｔ３；Ｔ４；スピロノラクトン；エプレレノン；酢酸シプロテロン、ヒドロキシフルタミド；エンザルタミド；ＡＲＮ－５０９；３，３'－ジインドリルメタン（ＤＩＭ）；ベクスロステリド；ビカルタミド；Ｎ－ブチルベンゼン－スルホンアミド（ＮＢＢＳ）；デュタステリド；エプリステリド；フィナステリド；フルタミド；イゾンステリド；ケトコナゾール；Ｎ－ブチルベンゼン－スルホンアミド；ニルタミド；メゲストロール；ツロステリド；ミフェプリストン（ＲＵ－４８６；１１β－［４Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノフェニル］－１７β－ヒドロキシ－１７－（１－プロピニル）－エストラ－４，９－ジエン－３－オン）；リロプリストン（１１β－（４Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノフェニル）－１７β－ヒドロキシ－１７－（（Ｚ）－３－ヒドロキシプロペニル）エストラ－４，９－ジエン－３－オン）；オナプリストン（１１β－（４Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノフェニル）－１７α－ヒドロキシ－１７－（３－ヒドロキシプロピル）－１３α－エストラ－４，９－ジエン－３－オン）；アソプリスニル（ベンズアルデヒド、４－［（１１β，１７β）－１７－メトキシ－１７－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１－イル］－１－（Ｅ）－オキシム；Ｊ８６７）；Ｊ９１２（４－［１７β－ヒドロキシ－１７α－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１β－イル］ベンズアルデヒド－（１Ｅ）－オキシム）；ＣＤＢ－２９１４（１７α－アセトキシ－１１β－（４－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノフェニル）－１９－ノルプレグナ－４，９－ジエン－３，２０－ジオン）；ＪＮＪ－１２５０１３２（６α，１１β，１７β）－１１－（４－ジメチルアミノフェニル）－６－メチル－４'，５'－ジヒドロスピロ［エストラ－４，９－ジエン－１７，２'（３'Ｈ）－フラン］－３－オン（ＯＲＧ－３１７１０）；（１１β，１７α）－１１－（４－アセチルフェニル）－１７，２３－エポキシ－１９，２４－ジノルコラ－４，９，２０－トリエン－３－オン（ＯＲＧ－３３６２８）；（７β，１１β，１７β）－１１－（４－ジメチルアミノフェニル－７－メチル］－４'，５'－ジヒドロスピロ［エストラ－４，９－ジエン－１７，２'（３'Ｈ）－フラン］－３－オン（ＯＲＧ－３１８０６）；ＺＫ－１１２９９３；ＯＲＧ－３１３７６；ＯＲＧ－３３２４５；ＯＲＧ－３１１６７；ＯＲＧ－３１３４３；ＲＵ－２９９２；ＲＵ－１４７９；ＲＵ－２５０５６；ＲＵ－４９２９５；ＲＵ－４６５５６；ＲＵ－２６８１９；ＬＧ１１２７；ＬＧ１２０７５３；ＬＧ１２０８３０；ＬＧ１４４７；ＬＧ１２１０４６；ＣＧＰ－１９９８４Ａ；ＲＴＩ－３０２１－０１２；ＲＴＩ－３０２１－０２２；ＲＴＩ－３０２１－０２０；ＲＷＪ－２５３３３；ＺＫ－１３６７９６；ＺＫ－１１４０４３；ＺＫ－２３０２１１；ＺＫ－１３６７９８；ＺＫ－９８２２９；ＺＫ－９８７３４；ＺＫ－１３７３１６；４－［１７β－メトキシ－１７α－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１β－イル］ベンズアルデヒド－１－（Ｅ）－オキシム；４－［１７β－メトキシ－１７α－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１β－イル］ベンズアルデヒド－１－（Ｅ）－［Ｏ－（エチルアミノ）カルボニル］オキシム；４－［１７β－メトキシ－１７α－（メトキシメチル）－３－オキソエストラ－４，９－ジエン－１１β－イル］ベンズアルデヒド－１－（Ｅ）－［Ｏ－（エチルチオ）カルボニル］オキシム；（Ｚ）－６'－（４－シアノフェニル）－９，１１α－ジヒドロ－１７β－ヒドロキシ－１７α－［４－（１－オキソ－３－メチルブトキシ）－１－ブテニル］４'Ｈ－ナフト［３'，２'，１'；１０，９，１１］エストラ－４－エン－３－オン；１１β－（４－アセチルフェニル）－１７β－ヒドロキシ－１７α－（１，１，２，２，２－ペンタ－フルオロエチル）エストラ－４，９－ジエン－３－オン；１１β－（４－アセチルフェニル）－１９，２４－ジノル－１７，２３－エポキシ－１７α－コラ－４，９，２０－トリエン－３－オン；（Ｚ）－１１β，１９－［４－（３－ピリジニル）－ｏ－フェニレン］－１７β－ヒドロキシ－１７α－［３－ヒドロキシ－１－プロペニル］－４－アンドロステン－３－オン；１１β－［４－（１－メチルエテニル）フェニル］－１７α－ヒドロキシ－１７β－β－ヒドロキシプロピル）－１３α－エストラ－４，９－ジエン－３－オン；４'，５'－ジヒドロ－１１β－［４－（ジメチルアミノ）フェニル］－６β－メチルスピロ［エストラ－４，９－ジエン－１７β，２'（３'Ｈ）－フラン］－３－オン；ドロスピレノン；Ｔ３（３，５，３'－トリヨード－Ｌ－サイロニン）；ＫＢ－１４１（３，５－ジクロロ－４－（４－ヒドロキシ－３－イソプロピルフェノキシ）フェニル酢酸）；ソベチロ－ム（３，５－ジメチル－４－（４'－ヒドロキシ－３'－イソプロピルベンジル）－フェノキシ酢酸）；ＧＣ－２４（３，５－ジメチル－４－（４'－ヒドロキシ－３'－ベンジル）ベンジルフェノキシ酢酸）；４－ＯＨ－ＰＣＢ１０６（４－ＯＨ－２'，３，３'，４'，５'－ペンタクロロビフェニル）；エプロチロ－ム；ＭＢ０７８１１（（２Ｒ，４Ｓ）－４－（３－クロロフェニル）－２－［（３，５－ジメチル－４－（４'－ヒドロキシ－３'－イソプロピルベンジル）フェノキシ）メチル］－２－オキシド－［１，３，２］－ジオキサホスホナン）；ＱＨ２；（３，５－ジメチル－４－（４'－ヒドロキシ－３'－イソプロピルベンジル）フェノキシ）メチルホスホン酸（ＭＢ０７３４４）；タモキシフェン；４－ＯＨ－タモキシフェン；ラロキシフェン；ラソフォキシフェン、バゼドキシフェン；ファルソデクス；クロミフェン；フェマレル；オルメロキシフェン；トレミフィエン；オスペミフェン；エストラジオ－ル（１７－β－エストラジオ－ル）；エチニルエストラジオ－ル；チアゾリジンジオン（好ましくはロシグリタゾン、ピオグリタゾン、ロベグリタゾン、トログリタゾン）；ファルグリタザ－ル；アレグリタザ－ル；フェノフィブリン酸；ベンゾピラノキノリンＡ２７６５７５；マプラコラト；ＺＫ２１６３４８；５５Ｄ１Ｅ１；デキサメタゾン；プレドニゾロン；プレドニゾン；メチルプレドニゾロン；プロピオン酸フルチカゾン；ベクロメタゾン－１７－モノプロピオン酸；ベタメタゾン；リメキソロン；パラメタゾン；ヒドロコルチゾン；１，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３（カルシトリオ－ル）；パリカリト－ル；ドキセルカルシフェロール；２５－ヒドロキシビタミンＤ３（カルシフェジオ－ル）；コレカルシフェロール；エルゴカルシフェロール；タカルシオ－ル；２２－ジヒドロエルゴカルシフェロール；（６Ｚ）－タカルシオ－ル；２－メチレン－１９－ノル－２０（Ｓ）－１α－ヒドロキシ－ビスホモプレグナカルシフェロール；１９－ノル－２６，２７－ジメチレン－２０（Ｓ）－２－メチレン－１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３；２－メチレン－１α，２５－ジヒドロキシ－（１７Ｅ）－１７（２０）－デヒドロ－１９－ノル－ビタミンＤ３；２－メチレン－１９－ノル－（２４Ｒ）－１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ２；２－メチレン－（２０Ｒ，２５Ｓ）－１９，２６－ジノル－１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３；２－メチレン－１９－ノル－１α－ヒドロキシ－プレグナカルシフェロール；１α－ヒドロキシ－２－メチレン－１９－ノルホモプレグナカルシフェロール；（２０Ｒ）－１α－ヒドロキシ－２－メチレン－１９－ノル－ビスホモプレグナカルシフェロール；２－メチレン－１９－ノル－（２０Ｓ）－１α－ヒドロキシ－トリスホモプレグナカルシフェロール；２－メチレン－２３，２３－ジフルオロ－１α－ヒドロキシ－１９－ノル－ビスホモプレグナカルシフェロール；２－メチレン－（２０Ｓ）－２３，２３－ジフルオロ－１α－ヒドロキシ－１９－ノル－ビスホモプレグナン－カルシフェロール；（２－（３'－ヒドロキシプロピル－１'，２'－イデン）－１９，２３，２４－トリノル－（２０Ｓ）－１α－ヒドロキシビタミンＤ３；２－メチレン－１８，１９－ジノル－（２０Ｓ）－１α，２５－ジヒドロキシビタミンＤ３；レチノイン酸；オ－ルトランスレチノイン酸；９－シス－レチノイン酸；タミバロテン；１３－シス－レチノイン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ，８Ｅ）－３，７－ジメチル－９－（２，６，６－トリメチル－１－シクロヘキセニル）ノナ－２，４，６，８－テトラエン酸；９－（４－メトキシ－２，３，６－トリメチル－フェニル）－３，７－ジメチル－ノナ－２，４，６，８－テトラエン酸；６－［３－（１－アダマンチル）－４－メトキシフェニル］－２－ナフトエ酸；４－［１－（３，５，５，８，８－ペンタメチル－テトラリン－２－イル）エテニル］安息香酸；レチノ安息香酸；６－［２－（４，４－ジメチルチオクロマン－６－イル）エチニル］ピリジン－３－カルボン酸エチル－ト；レチノイルｔ－ブチレ－ト；レチノイルピナコ－ル；レ
チノイルコレステロ－ル；オベチコ－ル酸；ＬＹ２５６２１７５（６－（４－（（５－シクロプロピル－３－（２，６－ジクロロフェニル）イソキサゾール４－イル）メトキシ）ピペリジン－１－イル）－１－メチル－１Ｈ－インドール３－カルボン酸）；ＧＷ４０６４（３－［２－［２－クロロ－４－［［３－（２，６－ジクロロフェニル）－５－（１－メチルエチル）－４－イソキサゾリル］メトキシ］フェニル］エテニル］安息香酸）；Ｔ０９０１３１７（Ｎ－（２，２，２－トリフルオロエチル）－Ｎ－［４－［２，２，２－トリフルオロ－１－ヒドロキシ－１－（トリフルオロメチル）エチル］フェニル］ベンゼンスルホンアミド）；ＧＷ３９６５（３－［３－［［［２－クロロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］（２，２－ジフェニルエチル）アミノ］プロポキシ］ベンゼン酢酸塩酸塩）；ＬＸＲ－６２３；ＧＮＥ－３５００（２７，１－｛４－［３－フルオロ－４－（（３Ｓ，６Ｒ）－３－メチル－１，１－ジオキソ－６－フェニル－［１，２］チアジナン－２－イルメチル）－フェニル］－ピペラジン－１－イル｝－エタノン）；７β，２７－ジヒドロキシコレステロ－ル；７α，２７－ジヒドロキシコレステロ－ル；９－シスレチノイン酸；ＬＧＤ１００２６８；ＣＤ３２５４（３－［４－ヒドロキシ－３－（５，６，７，８－テトラヒドロ－３，５，５，８，８－ペンタメチル－２－ナフタレニル）フェニル］－２－プロペン酸）；ＣＤ２９１５（Sorensen et al. (1997) Skin Pharmacol. 10:144）；リファンピシン；クロトリマゾール；及びロバスタチン。

２７．実施態様１～２６のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、少なくとも１つの調節分子がタモキシフェンであり、核内受容体からの、好ましくはエストロゲン受容体アルファ又はエストロゲン受容体ベータからのリガンド結合ドメインに結合する。

２８．実施態様１～２７のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、少なくとも１つの調節分子は、リポカリン折り畳み分子に結合し、以下から選択される、ＣＡＲ群：フェンレチニド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５２８８２０９）、Ｎ－エチルレチナミド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５２８８１７３）、オールトランスレチノイン酸（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ４４４７９５）、アキセロフテン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５２８７７２２）、Ａ１１２０（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ２５１３８２９５）及びそれらの誘導体（Cioffi et al., J Med Chem. 2014;57(18):7731-7757; Cioffi et al., J Med Chem. 2015;58(15):5863-5888）、１，４－ブタンジオ－ル（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ８０６４）、スフィンゴシン－１－ホスフェ－ト（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５２８３５６０）、テトラデカン酸（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１１００５）、インジカキサンチン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ６０９６８７０及び１２３１０７９６）、ブルガキサンチンＩ（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５２８１２１７）、モンテルカスト（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５２８１０４０）、シクランデレート（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ２８９３）、オキソールアミド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１３７３８）、マザチコール（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ４０１９）、ブトクタミド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ６５７８０）、トナベルサト（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ６９１８３２４）、ノバジン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ６５７３４）、ジフェニドール（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ３０５５）、アロクラミド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ７１８３７）、ジアセトール（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５０８９４）、アコチアミド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５２８２３３８）、アコジボロール（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ４４１７８３５４）、アクマピモード（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１１３３８１２７）、アパルタミド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ２４８７２５６０）、ＡＳＰ３０２６（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ２５１３４３２６）、ＡＺＤ１４８０（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１６６５９８４１）、ＢＩＩＢ０２１（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１６７３６５２９）、ブラナプラム（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ８９９７１１８９）、ブレキナル（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５７０３０）、クロロプログアニル（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ９５７１０３７）、シリンダマイシン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ４４６５９８）、エムリカサン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１２０００２４０）、エナシデニブ（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ８９６８３８０５）、エノリカム（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５４６７９２０３）、フルラゼパム（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ３３９３）、ＩＬＸ－２９５５０１（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１２７７３７）、インジブリン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ２９２９）、メトクロプラミド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ４１６８）、メバスタチン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ６４７１５）、ＭＧＧＢＹＭＤＡＰＣＣＫＣＴ－ＵＨＦＦＦＡＯＹＳＡ－Ｎ（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ２５１３４３２６）、ＭＫ０６８６（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１６１０２８９７）、ナバリキシン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１１２８１４４５）、ネファゾドン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ４４４９）、パントプラゾール（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ４６７９）、パビネタント（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ２３６４９２４５）、プロキサゾール（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ８５９０）、ＳＣＹＸ－７１５８（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ４４１７８３５４）、シッカニン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ７１９０２）、スルファグアノール（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ９５７１０４１）、スニチニブ（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５３２９１０２）、スボレキサント（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ２４９６５９９０）、チアプリド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５４６７）、トナベルサット（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ６９１８３２４）、ＶＮＢＲＧＳＸＶＦＢＹＱＮＮ－ＵＨＦＦＦＡＯＹＳＡ－Ｎ（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ２４７９４４１８）、ＹＵＨＮＸＵＡＡＴＡＭＶＫＤ－ＰＺＪＷＰＰＢＱＳＡ－Ｎ（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ４４５４８２４０）、ウリモレリン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１１５２６６９６）、キシパミド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ２６６１８）、トロペシン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ４７５３０）、トリクラベンダゾール（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ５０２４８）、トリクラベンダゾールスルホキシド（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１２７６５７）、トリクラベンダゾールスルホン（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１０３４０４３９）、及びトラメチニブ（ＰｕｂｃｈｅｍＣＩＤ１１７０７１１０）。

２９．実施態様１～２８のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、少なくとも１つの調節分子は、ラパマイシン、ラパマイシン類似体、タモキシフェン、エムリカサン、及びＡ１１２０から選択される。

３０．実施態様１～２９のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、細胞外側から細胞表面の細胞内側への前記群のＣＡＲ分子中のドメインの順序は以下である、ＣＡＲ群：抗原結合部分又は少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる結合部位、任意選択的に、任意の第２の抗原結合部分又は少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる任意の第２の結合部位の空間的最適化のためのリンカー、好ましくは空間最適化のためのヒンジ領域、及び膜貫通ドメイン、ここで膜貫通ドメインの後に好ましくは、少なくとも１つのＣＡＲ分子において、同時刺激ドメインを含むシグナル伝達領域が続き、好ましくはこの同時刺激シグナル伝達領域又は任意選択的に膜貫通ドメインの後に、少なくとも１つのヘテロ二量体化ドメインが続き、さらに、少なくとも１つのＣＡＲ分子において、少なくとも１つのＩＴＡＭを含むシグナル伝達領域が続き、ここで、同時刺激シグナル伝達領域とＩＴＡＭ含有シグナル伝達領域の順序を逆にすることができ、及びＩＴＡＭを含まないＣＡＲ分子は同時刺激シグナル伝達領域を欠くか、又は１つの同時刺激シグナル伝達領域を含むか、又は２つの同時刺激シグナル伝達領域を含むか、又はさらにより多くの同時刺激シグナル伝達領域を含むが、しかし、好ましくは３つ以上の同時刺激シグナル伝達領域は含まず、又はより好ましくは１つのみの同時刺激シグナル伝達領域を含み、及び
ここで、ＣＡＲ分子の任意の２つの隣接する成分は、任意選択的にリンカーによって分離することができ、及び
ここで、その少なくとも１つが群の各ＣＡＲ分子に必須であるヘテロ二量体化ドメインは、代替的又は追加的に外部ドメイン又は膜貫通ドメインに位置することができるが、しかし好ましくは膜貫通ドメインとシグナル伝達領域との間に、及び／又は特に２つのシグナル伝達領域の間に、及び／又は特にＣＡＲ分子の細胞内末端に位置することができる。

３１．ヘテロ二量体化ドメインは、前記群のＣＡＲ分子の内部ドメイン及び／又は膜貫通ドメイン、好ましくは内部ドメインに位置する、実施態様１～３０のいずれか１つに記載のＣＡＲ群。

３２．前記群の少なくとも２つのＣＡＲ分子の外部ドメインは、好ましくは１つのタンパク質ドメインのみを含むヘテロ二量体化ドメインを含み、調節分子は、細胞から分泌されて前記二量体化ドメインの二量体化を誘導する、実施態様１～３０のいずれか１つに記載のＣＡＲ群。

３３．前記群の少なくとも１つのＣＡＲ分子は、少なくとも１つのＩＴＡＭを介してシグナルを伝達することができるシグナル伝達領域を含む内部ドメインを含み、前記ＣＡＲ群は好ましくは少なくとも３つのＩＴＡＭを含む、実施態様１～３２のいずれか１つに記載のＣＡＲ群。

３４．前記群の少なくとも１つのＣＡＲ分子の内部ドメインは、少なくとも１つのＩＴＡＭを含み、前記ＩＴＡＭは、ＣＤ３ゼータ、ＤＡＰ１２、Ｆｃ－イプシロン受容体１ガンマ鎖、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、及びＣＤ７９Ａ（抗原受容体複合体関連タンパク質アルファ鎖）、好ましくはＣＤ３ゼータから選択される、実施態様１～３３のいずれか１つに記載のＣＡＲ群。

３５．前記群のＣＡＲ分子の内部ドメインにおける同時刺激シグナル伝達領域の同時刺激ドメインは、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、ＢＴＬＡ、ＯＸ－４０、ＣＤ２、ＣＤ６、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＧＩＴＲ、及びＨＶＥＭ、好ましくは４－１ＢＢ及びＩＣＯＳに由来する、実施態様１～３４のいずれか１つに記載のＣＡＲ群。

３６．前記群が２つ又は３つのＣＡＲ分子、好ましくは２つのＣＡＲ分子からなる、実施態様１～３５のいずれか１つに記載のＣＡＲ群。

３７．各ＣＡＲ分子の外部ドメインは、単一の抗原結合部分又は他のポリペプチドが結合できる単一の結合部位を含み、他のポリペプチドは少なくとも１つの抗原結合部分を含む、実施態様１～３６のいずれか１つに記載のＣＡＲ群。

３８．各ＣＡＲ分子の外部ドメインは、１つ又は２つの抗原結合部分、好ましくは１つの抗原結合部分を含む、実施態様１～３６のいずれか１つに記載のＣＡＲ群。

３９．前記群のＣＡＲ分子は抗原結合部分を含まないが、それぞれが少なくとも抗原結合を含み、前記群のＣＡＲ分子の結合部位に結合できる他のポリペプチドの結合を介して、間接的にのみ標的抗原に結合することができ、
及び群の各ＣＡＲ分子は、その内部ドメインに少なくとも１つのヘテロ二量体化ドメインを含み、ヘテロ二量体化ドメインのヘテロ二量体化は、好ましくは調節分子の存在を必要としない、実施態様１～３６のいずれか１つに記載のＣＡＲ群。

４０．前記核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はインビトロ転写されたＲＮＡから選択される、実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群の個々のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子。

４１．前記核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はインビトロ転写されたＲＮＡから選択される、実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群の個々のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子のキット。

４２．前記核酸分子は、ベクター中に存在し、好ましくはＤＮＡ又はＲＮＡとして感染性ウイルス粒子にパッケージされている、実施態様４１に記載の核酸分子のキット。

４３．前記核酸配列は、リンパ球における強力で安定なトランス遺伝子発現を仲介する配列に連結されており、そのような配列は、好ましくはガンマレトロウイルスの５´－ＬＴＲ、又はモロニ－ネズミ白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）の５´－ＬＴＲのサブ要素Ｒ及びＵ３、又はネズミ幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）のプロモーター、又はホスホグリセリン酸キナ－ゼ（ＰＧＫ）のプロモーター、又はさらにより好ましくは、ヒト伸長因子１（ＥＦ－１）アルファプロモーターを含む、実施態様４０～４２のいずれか１つに記載の核酸分子又は核酸分子のキット。

４４．実施態様４１～４３のいずれか１つに記載の核酸分子のキットであって、第１の核酸は前記群の第１のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含み、前記第２の核酸は前記群の第２のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含み、及び任意選択的に、前記ＣＡＲ群が少なくとも３つの異なるＣＡＲ分子からなる場合、前記キットはさらに第３の核酸を含み、前記第３の核酸は前記群の第３のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含み、及び任意選択的に、前記ＣＡＲ群が４つの異なるＣＡＲ分子からなる場合、前記キットはさらに第４の核酸を含み、前記第４の核酸は前記群の第４のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む。

４５．前記核酸はＤＮＡ又はＲＮＡである、実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群の個々のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含むベクター又はベクターのキット。

４６．ベクターは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクター又はトランスポゾンベクター、好ましくは「眠れる森の美女（Sleeping Beauty）」トランスポゾンベクター又は「ピギーバック（PiggyBac）」トランスポゾンベクターであるか、又はベクターは、レトロウイルスベクター、好ましくはガンマレトロウイルスベクター又はレンチウイルスベクターである、実施態様４５に記載のベクター又はベクターのキット。

４７．前記ベクターは、発現ベクター、好ましくはヌクレオチド配列が、リンパ球における強力で安定なトランス遺伝子発現を仲介する配列に作動可能に連結されている発現ベクターであり、そのような配列は、好ましくはガンマレトロウイルスの５'－ＬＴＲ、又はモロニ－マウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）の５'－ＬＴＲのサブ要素Ｒ及びＵ３、又はマウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）のプロモーター、又はホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）のプロモーター、又はさらにより好ましくはヒト伸長因子１（ＥＦ－１）アルファプロモーターを含む、実施態様４５又は４６に記載のベクター又はベクターのキット。

４８．実施態様４５～４７のいずれか１つに記載のベクターのキットであって、前記第１のベクターは前記群の第１のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含み、前記第２のベクターは前記群の第２のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含み、及び任意選択的に、ＣＡＲ群が少なくとも３つの異なるＣＡＲ分子からなる場合、キットはさらに第３のベクターを含み、前記第３のベクターは前記群の第３のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含み、及び任意選択的に、ＣＡＲ群が４つの異なるＣＡＲ分子からなる場合、キットはさらに第４のベクターを含み、前記第４のベクターは前記群の第４のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む。

４９．実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群の個々のＣＡＲ分子を産生するために、実施態様４０～４４のいずれか１つに記載の核酸分子又は核酸分子のキットを用いて、又は実施態様４５～４８のいずれか１つに記載のベクター又はベクターのキットを用いて、インビトロ又はエクスビボで改変された細胞、又は前記改質細胞の２つ以上を含むキット。

５０．前記細胞は、哺乳動物細胞、好ましくは造血幹細胞（ＨＳＣ）、又はＨＳＣに由来する細胞、より好ましくはＮＫ細胞又はＴ細胞、特にＴ細胞である、実施態様４９に記載の細胞又は細胞のキット。

５１．前記細胞は、実施態様４５～４８のいずれか１つに記載のベクターを用いて、又はベクターのキットを用いてトランスフェクト又は形質導入された、実施態様４９又は５０に記載の細胞又は細胞のキット。

５２．前記細胞は、実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群をコードするヌクレオチド配列をそのゲノムに安定して組み込んだ、実施態様４９～５１のいずれか１つに記載の細胞又は細胞のキット。

５３．前記細胞は、部位特異的ヌクレア－ゼ技術の使用により、好ましくは亜鉛フィンガーヌクレアーゼ又はＴＡＬＥＮの使用により、又はさらにより好ましくはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ技術の使用により、実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群をコードするヌクレオチド配列を、そのゲノムに安定に組み込んだ、実施態様４９～５１のいずれか１つに記載の細胞又は細胞のキット。
。

５４．実施態様４０～４４のいずれか１つに記載の核酸又は核酸のキット、実施態様４５～４８のいずれか１つに記載のベクター又はベクターのキット、又は実施態様４９～５３のいずれか１つに記載の細胞又は細胞のキットを含む、医薬製剤。

５５．前記ウイルスベクターは好ましくは感染性ウイルス粒子内に含まれる、実施態様５４に記載の医薬製剤。

５６．実施態様４９～５３のいずれか１つに記載の細胞を作製する方法であって、実施態様４０～４４のいずれか１つに記載の核酸分子又は核酸分子のキットを、又は実施態様４５～４８のいずれか１つに記載のベクター又はベクターのキットを、インビトロ又はエクスビボで、細胞に導入すること、好ましくは細胞のゲノムに安定して組み込むことを含む。

５７．個体の癌の治療方法で使用するための実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、前記方法は、
ｉ）個体から得られたＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球を、ＣＡＲ群の各ＣＡＲ分子をコードする配列を含む少なくとも１つの核酸分子で遺伝子改変する工程であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の抗原結合部分は、個体の癌細胞上の標的抗原に特異的であり、前記遺伝子改変はインビトロ又はエクスビボで行われる工程と；
ｉｉ）遺伝子改変細胞を個体に導入する工程と；
ｉｉｉ）群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を誘導又は低減するために、好ましくは群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を誘導又は低減するために、少なくとも１つの調節分子の有効量を個体に投与し、それによって、ＣＡＲ群の非共有結合性複合体化を誘導又は低減し、好ましくはＣＡＲ群の非共有結合性複合体化を誘導する工程であって、ここで、非共有結合性複合体化ＣＡＲ群は、各標的抗原の組み合わせを生理学的発現レベルで発現する癌細胞と接触すると、遺伝子改変された細胞の活性化を仲介し、それが癌細胞の死滅につながり、それによって癌の治療を可能にする工程とを含む。

５８．個体の癌の治療方法で使用するための、実施態様１～１１、１３～１５、１７、１９、２１～２３、３０、３１、又は３３～３９のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、前記方法は、
ｉ）個体から得られたＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球を、ＣＡＲ群の各ＣＡＲ分子をコードする配列を含む少なくとも１つの核酸分子で遺伝子改変する工程であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の抗原結合部分、及び／又は群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの抗原結合部分は、個体の癌細胞上の標的抗原に特異的であり、前記群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は調節分子の投与を必要とせず、前記遺伝子改変はインビトロ又はエクスビボで行われる工程；
ｉｉ）遺伝子改変細胞を個体に導入する工程と；
ｉｉｉ）少なくとも抗原結合部分を含み、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子の結合部位に結合できる少なくとも１つの他のポリペプチドの有効量を個体に投与する工程であって、前記ポリペプチドは、各標的抗原の組み合わせを生理学的発現レベルで発現する癌細胞と接触すると、遺伝子改変細胞の活性化を仲介し、それが癌細胞の死滅につながり、それによって癌の治療を可能にする工程とを含む。

５９．個体の癌の治療方法で使用するための、実施態様１～１１、１３～１５、１７、１９、２１～２３、３０、３１、又は３３～３８のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、前記方法は、
ｉ）個体から得られたＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球を、ＣＡＲ群の各ＣＡＲ分子をコードする配列を含む少なくとも１つの核酸分子で遺伝子改変する工程であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の抗原結合部分は個体の癌細胞上の標的抗原に特異的であり、前記群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は調節分子の投与を必要とせず、前記遺伝子改変はインビトロ又はエクスビボで行われる工程と；
ｉｉ）遺伝子改変細胞を個体に導入する工程であって、それが癌細胞の死滅を可能にし、それによって癌を治療する工程とを含む。

６０．ＣＡＲ群の抗原結合部分が個体の癌細胞上の標的抗原に特異的である、個体の癌の治療方法で使用するための実施態様４９～５３のいずれか１つに記載の細胞であって、前記方法は、
ｉ）細胞を個体に導入する工程と；
ｉｉ）群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を誘導又は低減し、好ましくは群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を誘導し、それによってＣＡＲ群の非共有結合性複合体化を誘導又は低減し、好ましくはＣＡＲ群の非共有結合性複合体化を誘導するために、少なくとも１つの調節分子の有効量を個体に投与する工程であって、ここで、非共有結合性複合体化ＣＡＲ群は、各標的抗原を発現する癌細胞と接触すると、遺伝子改変細胞の活性化を仲介し、それが癌細胞の死滅につながり、それによって癌の治療を可能にする工程とを含む。

６１．個体の癌の治療方法で使用するための、実施態様４９～５３のいずれか１つに記載の細胞であって、前記群のＣＡＲ分子の抗原結合部分、及び／又は前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの抗原結合部分は、個体の癌細胞上の標的抗原に特異的であり、前記群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は、調節分子の投与を必要とせず、前記方法は、
ｉ）細胞を個体に導入する工程と；
ｉｉ）少なくとも抗原結合部分を含み、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子の外部ドメインの結合部位に結合できる少なくとも1つの他のポリペプチドの有効量を個体に投与する工程であって、前記ポリペプチドは、各標的抗原を発現する癌細胞と接触すると、遺伝子改変細胞の活性化と各標的抗原を発現する癌細胞の死滅を仲介し、それによって癌の治療を可能にする工程とを含む。

６２．個体の癌の治療方法で使用するための、実施態様４９～５３のいずれか１つに記載の細胞であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の抗原結合部分は、個体の癌細胞上の標的抗原に特異的であり、前記群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化は調節分子の投与を必要とせず、前記方法はさらに、細胞を個体に導入する工程を含み、これが癌細胞の死滅を可能にし、それによって調節分子に依存せずに癌を治療する、細胞。

６３．以下を含むキット：
－１つ、２つ、又は３つの調節分子、好ましくは２つ、さらにより好ましくは１つの調節分子、及び
－実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群、実施態様４５～４８のいずれか１つに記載のベクター又はベクターのキット、又は実施態様４９～５３のいずれか１つに記載の細胞又は細胞のキット。

６４．実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群、実施態様４５～４８のいずれか１つに記載のベクター又はベクターのキット、又は実施態様４９～５３のいずれか１つに記載の細胞又は細胞のキットを含むキット。

６５．以下を含むキット：
－少なくとも１つの調節分子、及び／又は前記群のＣＡＲ分子の各結合部位に結合できる少なくとも１つの他のポリペプチド、及び
－実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群、実施態様４５～４８のいずれか１つに記載のベクター又はベクターのキット、又は実施態様４９～５３のいずれか１つに記載の細胞又は細胞のキット。

６６．細胞上の標的抗原にＴリンパ球又はＮＫ細胞を結合させる必要性を特徴とする疾患の治療に使用するための、好ましくは腫瘍患者の治療に使用するための、特にユ－イング肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、骨形成性肉腫、中皮腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、平滑筋肉腫、黒色腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、乏突起膠腫、髄膜腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管腫、聴神経腫、慢性骨髄増殖症候群、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ細胞ＣＬＬ、前リンパ球性白血病及び毛細胞白血病を含む慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、食道癌、肝細胞癌、基底細胞癌、扁平上皮癌、膀胱癌、移行細胞癌、気管支原性癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、肺癌（肺の小細胞癌及び非小細胞癌を含む）、副腎皮質癌、甲状腺癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、腺癌、汗腺癌、脂漏性腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、腎細胞癌、管癌、胆管癌、絨毛癌、セミノ－マ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、子宮癌、精巣癌、骨形成癌、上皮癌、及び鼻咽頭癌、非定型髄膜腫、膵島細胞癌、髄質癌、間葉腫、肝細胞癌、肝芽腫、明細胞癌、及び縦隔神経線維腫から選択される腫瘍を有する腫瘍患者の、治療に使用するための、実施態様１～３９又は６７～７１のいずれか１つに記載のＣＡＲ群、実施態様４５～４８のいずれか１つに記載のベクター又はベクターのキット、実施態様４９～５３のいずれか１つに記載の細胞又は細胞のキット、特にＴリンパ球又はＮＫ細胞、又は実施態様４１～４８若しくは６３～６５のいずれか１つに記載のキット。

６７．実施態様１～３７のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記ＣＡＲ群は、ＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球で発現された場合、その非共有結合的に複合体化された状態で、及び少なくとも抗原結合部分を含みＣＡＲ群によって構成されるＣＡＲ分子の結合部位に結合できるそれぞれ必要な他のポリペプチドの存在下で、標的抗原を発現する標的細胞との接触時に、宿主細胞中で応答を誘発し、この応答は、細胞脱顆粒後に及び／又は細胞脱顆粒による、インターフェロンガンマ、及び／又はマクロファージ炎症性タンパク質－１（ＭＩＰ－１）アルファ、及び／又はＭＩＰ－１ベータ、及び／又はグランザイムＢ、及び／又はＩＬ－２、及び／又はＴＮＦ、及び／又はＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－４の排出によって規定され、細胞脱顆粒は、好ましくはＣＤ１０７ａ陽性エフェクター細胞の割合によって検出され、この応答は、ＣＡＲ分子に及びＣＡＲ群に結合できる他のポリペプチドに含まれるその抗原結合部分を介して、ＣＡＲ群によって認識されるそれらの標的抗原のうちの１つのみの同数の分子を発現する標的細胞に接触後の応答と比較して、ＣＡＲ分子に及びＣＡＲ群に結合できる他のポリペプチドに含まれるその抗原結合部分を介して、ＣＡＲ群によって認識されるそれらの標的抗原の少なくとも１００，０００分子を発現する標的細胞に接触後は、少なくとも２０％高く、好ましくは少なくとも５０％高く、及びさらにより好ましくは少なくとも１００％高い。

６８．実施態様１～３８のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記ＣＡＲ群は、ＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球で発現された場合、その非共有結合的に複合体化された状態で、標的抗原を発現する標的細胞との接触時に、宿主細胞中で応答を誘発し、この応答は、細胞脱顆粒後に及び／又は細胞脱顆粒による、インターフェロンガンマ、及び／又はマクロファージ炎症性タンパク質－１（ＭＩＰ－１）アルファ、及び／又はＭＩＰ－１ベータ、及び／又はグランザイムＢ、及び／又はＩＬ－２、及び／又はＴＮＦ、及び／又はＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－４の排出によって規定され、細胞脱顆粒は、好ましくはＣＤ１０７ａ陽性エフェクター細胞の割合によって検出され、この応答は、このＣＡＲ群によって認識されるそれらの標的抗原のうちの１つのみの同数の分子を発現する標的細胞に接触後の応答と比較して、群のＣＡＲ分子中の抗原結合部分を介して、その標的抗原と排他的に相互作用するＣＡＲ群によって認識される各標的抗原の少なくとも１００，０００分子を発現する標的細胞に接触後に、少なくとも２０％高く、好ましくは少なくとも５０％高く、及びさらにより好ましくは少なくとも１００％高い。

６９．実施態様１～３７及び３９のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記ＣＡＲ群は、ＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球で発現された場合、その非共有結合的に複合体化された状態で、及び少なくとも抗原結合部分を含みＣＡＲ群によって構成されるＣＡＲ分子の結合部位に結合できるそれぞれ必要な他のポリペプチドの存在下で、標的抗原を発現する標的細胞との接触時に、宿主細胞中で応答を誘発し、この応答は、細胞脱顆粒後に及び／又は細胞脱顆粒による、インターフェロンガンマ、及び／又はマクロファージ炎症性タンパク質－１（ＭＩＰ－１）アルファ、及び／又はＭＩＰ－１ベータ、及び／又はグランザイムＢ、及び／又はＩＬ－２、及び／又はＴＮＦ、及び／又はＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－４の排出によって規定され、及びこの細胞脱顆粒は、好ましくはＣＤ１０７ａ陽性エフェクター細胞の割合によって検出され、この応答は、このＣＡＲ群に結合できる他のポリペプチドによって認識されるそれらの標的抗原のうちの１つのみの同数の分子を発現する標的細胞に接触後の応答と比較して、ＣＡＲ群に結合できる他のポリペプチドに含まれる抗原結合部分を介して間接的にその標的抗原と排他的に相互作用するＣＡＲ群によって認識される各標的抗原の少なくとも１００，０００分子を発現する標的細胞に接触後に、少なくとも２０％高く、好ましくは少なくとも５０％高く、及びさらにより好ましくは少なくとも１００％高い。

７０．実施態様１～３８のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記ＣＡＲ群は、そのＣＡＲ分子に含まれる抗原結合部分を介して、直接的にのみその標的抗原と相互作用し、そしてＣＡＲ群の非共有結合性複合体化は、１種類以上の調節分子の有効濃度の存在を必要とし、ＣＡＲ群は、ＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球で発現されると、ＣＡＲ群によって認識される各標的抗原の少なくとも１００，０００分子を発現する標的細胞と接触すると、その非共有結合性複合体化状態で、宿主細胞において応答を誘発し、この応答は、インターフェロンガンマ、及び／又はマクロファージ炎症性タンパク質－１（ＭＩＰ－１）アルファ、及び／又はＭＩＰ－１ベータ、及び／又はグランザイムＢ、及び／又はＩＬ－２、及び／又はＴＮＦ、及び／又はＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－４の排出によって、及び／又は細胞の脱顆粒によって規定され、この細胞脱顆粒は、好ましくはＣＤ１０７ａ陽性エフェクター細胞の割合によって検出され、ＣＡＲ群の非共有結合性複合体化に必要なすべての調節分子の有効濃度の存在下で誘発される応答は、調節分子の非存在下で誘発される応答よりも、少なくとも２０％高く、好ましくは少なくとも５０％高く、さらにより好ましくは少なくとも１００％高く、ここで、各必要な調節分子の有効濃度は、それを必要とする個体への１回以上の投与量中の各必要な調節分子の有効量を投与する工程によって達成される濃度である。

７１．実施態様１～３７及び３９のいずれか１つに記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記ＣＡＲ群は、そのＣＡＲ分子に結合できる１つ以上の他のポリペプチドに含まれる抗原結合部分を介して間接的にのみその標的抗原と相互作用し、そしてＣＡＲ群は、調節分子の非存在下で非共有結合性複合体化され、ＣＡＲ群は、ＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球で発現されると、ＣＡＲ群に結合できる他のポリペプチドによって認識される各標的抗原の少なくとも１００，０００分子を発現する標的細胞と接触すると、宿主細胞中で応答を誘発し、この応答は、インターフェロンガンマ、及び／又はマクロファージ炎症性タンパク質－１（ＭＩＰ－１）アルファ、及び／又はＭＩＰ－１ベータ、及び／又はグランザイムＢ、及び／又はＩＬ－２、及び／又はＴＮＦ、及び／又はＩＬ－１０、及び／又はＩＬ－４の排出によって、及び／又は細胞の脱顆粒によって規定され、この細胞脱顆粒は、好ましくはＣＤ１０７陽性エフェクター細胞の割合によって検出され、少なくとも抗原結合部分を含みＣＡＲ群に結合できる全ての必要な他のポリペプチドの有効濃度の存在下で誘発される応答は、少なくとも抗原結合部分を含みＣＡＲ群に結合できる他のポリペプチドの非存在下で誘発される応答よりも、少なくとも２０％高く、好ましくは少なくとも５０％高く、さらにより好ましくは少なくとも１００％高く、ここで、これらの必要な他の各ポリペプチドの有効濃度は、それを必要とする個体への１回以上の投与量中の各必要な他のポリペプチドの有効量を投与する工程によって達成される濃度である。

Claims

２、３、又は４つのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子からなるＣＡＲ群であって、
ここで、前記ＣＡＲ群の各メンバーはそのアミノ酸配列が互いに異なり、
ここで、前記群の各ＣＡＲ分子は、少なくとも膜貫通ドメインと外部ドメインとを含み、外部ドメインは、１つ又は２つの抗原結合部分を、及び／又はそれぞれが少なくとも抗原結合部分を含む他のポリペプチドが結合できる１つ又は２つの結合部位を含み、前記群の少なくとも１つのＣＡＲ分子は、内部ドメインを追加的に含み、これは少なくとも１つの免疫受容体であるチロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を介してシグナルを伝達することができる少なくともシグナル伝達領域を含み、
ここで、前記群の各ＣＡＲ分子の内部ドメインは、各ＣＡＲ分子が内部ドメインを含む場合、細胞内で発現されるなら、細胞膜の細胞内側に位置し、前記群の各ＣＡＲ分子の外部ドメインは、細胞内で発現されるなら、細胞膜の細胞外側に移動し、前記群の各ＣＡＲ分子の膜貫通ドメインは、細胞内で発現されるなら細胞膜に位置し、
ここで、前記群の各ＣＡＲ分子の外部ドメインはその一般的なコンフォメーションで、前記群の他のＣＡＲ分子とそれぞれ分子間ジスルフィド結合を形成することができるシステインアミノ酸部分を含まず、
ここで、前記群の異なるＣＡＲ分子の及び異なる他のポリペプチドの抗原結合部分は、互いに共有結合していない異なる標的抗原に特異的であり、
ここで、前記群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分のその各標的抗原に対する親和性は、１ｍＭ～１００ｎＭであり、
ここで、その各標的抗原に対する他のポリペプチドの個々の抗原結合部分の親和性は、あるいはその各ＣＡＲ分子の結合部位に対するこの他のポリペプチドの親和性は、１ｍＭ～１００ｎＭであり、
ここで、前記群の各ＣＡＲ分子は、前記群の他のＣＡＲ分子との定義されたヘテロ二量体化を仲介することができる少なくとも１つのヘテロ二量体化ドメインを含み、ここで、ヘテロ二量体化ドメインの対のこのヘテロ二量体化は、調節分子とは独立して起きるか、又は調節分子の非存在下で起き、調節分子によって低減されるか、又は調節分子によって誘導され、かつ任意選択的に他の調節分子によって低減され、ここで調節分子は、生理学的条件下で、ヘテロ二量体化ドメインの対の少なくとも１つのメンバーに結合することができ、ヘテロ二量体化を誘導又は低減することにより、２、３、又は４つのＣＡＲ分子からなる非共有結合的に複合体化されたＣＡＲ群の形成を誘導又は低減する、ＣＡＲ群。
請求項１に記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、１ｍＭ～１５０ｎＭ、好ましくは１ｍＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１ｍＭ～３００ｎＭ、特に１ｍＭ～４００ｎＭであり、及び
ここで、他のポリペプチドの個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、又はこの他のポリペプチドのその各ＣＡＲ分子の結合部位に対する親和性は、１ｍＭ～１５０ｎＭ、好ましくは１ｍＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１ｍＭ～３００ｎＭ、特に１ｍＭ～４００ｎＭである、ＣＡＲ群。
請求項１に記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、５００μＭ～１００ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～１００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～１００ｎＭ、特に５０μＭ～１００ｎＭであり、及び
ここで、他のポリペプチドの個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、又はこの他のポリペプチドの各ＣＡＲ分子の結合部位に対する親和性は、５００μＭ～１００ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～１００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～１００ｎＭ、特に５０μＭ～１００ｎＭである、ＣＡＲ群。
請求項１に記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記群のＣＡＲ分子の個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、５００μＭ～１５０ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～３００ｎＭ、特に５０μＭ～４００ｎＭであり、及び
ここで、他のポリペプチドの個々の抗原結合部分のその標的抗原に対する親和性は、又はこの他のポリペプチドの各ＣＡＲ分子の結合部位に対する親和性は、５００μＭ～１５０ｎＭ、好ましくは２５０μＭ～２００ｎＭ、より好ましくは１２５μＭ～３００ｎＭ、特に５０μＭ～４００ｎＭである、ＣＡＲ群。
請求項１～４のいずれか１項に記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記ＣＡＲ群の又は前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの、抗原結合部分によって特異的に認識される標的抗原は、天然に存在する細胞表面抗原、あるいは天然に存在する細胞表面抗原に結合したポリペプチド、炭水化物、又は脂質である、ＣＡＲ群。
請求項１～５のいずれか１項に記載のＣＡＲ群であって、ここで、前記ＣＡＲ群の又は前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの、抗原結合部分は、好ましくは以下から選択される分子に特異的に結合するか又はそれらを含む、ＣＡＲ群：ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４２ｃ、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４７、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８２、ＣＤ８５Ａ、ＣＤ８５Ｂ、ＣＤ８５Ｄ、ＣＤ８５Ｈ、ＣＤ８５Ｋ、ＣＤ９６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１１２、ＣＤ１１５、ＣＤ１１７、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１４６、ＣＤ１４８、ＣＤ１５５、ＣＤ１８５、ＣＤ２００、ＣＤ２０４、ＣＤ２２１、ＣＤ２７１、ＣＤ２７６、ＣＤ２７９、ＣＤ２８０、ＣＤ２８１、ＣＤ３０１、ＣＤ３１２、ＣＤ３５３、ＣＤ３６２、ＢＣＭＡ、ＣＤ１６Ｖ、ＣＬＬ－１、Ｉｇカッパ、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＣＫＬＦ、ＣＬＥＣ２Ｄ、ＥＭＣ１０、ＥｐｈＡ２、ＦＲ－ａ、ＦＬＴ３ＬＧ、ＦＬＴ３、ルイス－Ｙ、ＨＬＡ－Ｇ、ＩＣＡＭ５、ＩＧＨＡ１／ＩｇＡ１、ＩＬ－１ＲＡＰ、ＩＬ－１７ＲＥ、ＩＬ－２７ＲＡ、ＭＩＬＲ１、ＭＲ１、ＰＳＣＡ、ＰＴＣＲＡ、ＰＯＤＸＬ２、ＰＴＰＲＣＡＰ、ＵＬＢＰ２、ＡＪＡＰ１、ＡＳＧＲ１、ＣＡＤＭ１、ＣＡＤＭ４、ＣＤＨ１５、ＣＤＨ２３、ＣＤＨＲ５、ＣＥＬＳＲ３、ＣＳＰＧ４、ＦＡＴ４、ＧＪＡ３、ＧＪＢ２、ＧＰＣ２、ＧＰＣ３、ＩＧＳＦ９、ＬＲＦＮ４、ＬＲＲＮ６Ａ／ＬＩＮＧＯ１、ＬＲＲＣ１５、ＬＲＲＣ８Ｅ、ＬＲＩＧ１、ＬＧＲ４、ＬＹＰＤ１、ＭＡＲＶＥＬＤ２、ＭＥＧＦ１０、ＭＰＺＬＩ１、ＭＴＤＨ、ＰＡＮＸ３、ＰＣＤＨＢ６、ＰＣＤＨＢ１０、ＰＣＤＨＢ１２、ＰＣＤＨＢ１３、ＰＣＤＨＢ１８、ＰＣＤＨＧＡ３、ＰＥＰ、ＳＧＣＢ、ベザチン、ＤＡＧＬＢ、ＳＹＴ１１、ＷＦＤＣ１０Ａ、ＡＣＶＲ２Ａ、ＡＣＶＲ２Ｂ、未分化リンパ腫キナ－ゼ、カドヘリン２４、ＤＬＫ１、ＧＦＲＡ２、ＧＦＲＡ３、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＦＮＢ１、ＥＰＯＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ４、ＧＡＬＲ２、ＧＬＧ１、ＧＬＰ１Ｒ、ＨＢＥＧＦ、ＩＧＦ２Ｒ、ＵＮＣ５Ｃ、ＶＡＳＮ、ＤＬＬ３、ＦＺＤ１０、ＫＲＥＭＥＮ２、ＴＭＥＭ１６９、ＴＭＥＭ１９８、ＮＲＧ１、ＴＭＥＦＦ１、ＡＤＲＡ２Ｃ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＢ４、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＧ、ＤＲＤ４、ＧＡＢＲＢ３、ＧＲＩＮ３Ａ、ＧＲＩＮ２Ｃ、ＧＲＩＫ４、ＨＴＲ７、ＡＰＴ８Ｂ２、ＮＫＡＩＮ１、ＮＫＡＩＮ４、ＣＡＣＮＡ１Ａ、ＣＡＣＮＡ１Ｂ、ＣＡＣＮＡ１Ｉ、ＣＡＣＮＧ８、ＣＡＣＮＧ４、ＣＬＣＮ７、ＫＣＮＡ４、ＫＣＮＧ２、ＫＣＮＮ３、ＫＣＮＱ２、ＫＣＮＵ１、ＰＫＤ１Ｌ２、ＰＫＤ２Ｌ１、ＳＬＣ５Ａ８、ＳＬＣ６Ａ２、ＳＬＣ６Ａ６、ＳＬＣ６Ａ１１、ＳＬＣ６Ａ１５、ＳＬＣ７Ａ１、ＳＬＣ７Ａ５Ｐ１、ＳＬＣ７Ａ６、ＳＬＣ９Ａ１、ＳＬＣ１０Ａ３、ＳＬＣ１０Ａ４、ＳＬＣ１３Ａ５、ＳＬＣ１６Ａ８、ＳＬＣ１８Ａ１、ＳＬＣ１８Ａ３、ＳＬＣ１９Ａ１、ＳＬＣ２６Ａ１０、ＳＬＣ２９Ａ４、ＳＬＣ３０Ａ１、ＳＬＣ３０Ａ５、ＳＬＣ３５Ｅ２、ＳＬＣ３８Ａ６、ＳＬＣ３８Ａ９、ＳＬＣ３９Ａ７、ＳＬＣ３９Ａ８、ＳＬＣ４３Ａ３、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＶ４、ＴＭＥＭ１６Ｊ、ＴＭＥＭ１４２Ｂ、ＡＤＯＲＡ２Ｂ、ＢＡＩ１、ＥＤＧ６、ＧＰＲ１、ＧＰＲ２６、ＧＰＲ３４、ＧＰＲ４４、ＧＰＲ５６、ＧＰＲ６８、ＧＰＲ１７３、ＧＰＲ１７５、ＬＧＲ４、ＭＭＤ、ＮＴＳＲ２、ＯＰＮ３、ＯＲ２Ｌ２、ＯＳＴＭ１、Ｐ２ＲＸ３、Ｐ２ＲＹ８、Ｐ２ＲＹ１１、Ｐ２ＲＹ１３、ＰＴＧＥ３、ＳＳＴＲ５、ＴＢＸＡ２Ｒ、ＡＤＡＭ２２、ＡＤＡＭＴＳ７、ＣＳＴ１１、ＭＭＰ１４、ＬＰＰＲ１、ＬＰＰＲ３、ＬＰＰＲ５、ＳＥＭＡ４Ａ、ＳＥＭＡ６Ｂ、ＡＬＳ２ＣＲ４、ＬＥＰＲＯＴＬ１、ＭＳ４Ａ４Ａ、ＲＯＭ１、ＴＭ４ＳＦ５、ＶＡＮＧＬ１、ＶＡＮＧＬ２、Ｃ１８ｏｒｆ１、ＧＳＧＬ１、ＩＴＭ２Ａ、ＫＩＡＡ１７１５、ＬＤＬＲＡＤ３、ＯＺＤ３、ＳＴＥＡＰ１、ＭＣＡＭ、ＣＨＲＮＡ１、ＣＨＲＮＡ３、ＣＨＲＮＡ５、ＣＨＲＮＡ７、ＣＨＲＮＢ４、ＫＩＡＡ１５２４、ＮＲＭ．３、ＲＰＲＭ、ＧＲＭ８、ＫＣＮＨ４、メラノコルチン１受容体、ＰＴＰＲＨ、ＳＤＫ１、ＳＣＮ９Ａ、ＳＯＲＣＳ１、ＣＬＳＴＮ２、エンドセリン変換酵素様－１、リゾホスファチジン酸受容体２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＬＲ２、神経向性チロシンキナ－ゼ１、ＭＵＣ１６、Ｂ７－Ｈ４、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＲＢＢ２、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ変種ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＨＧＦＲ、ＦＯＬＲ１、ＭＳＬＮ、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、メソセリン、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、Ｌ１－ＣＡＭ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、高分子量メラノ－マ関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、ＭＡＧＥ－Ａｌ、ＩＬ－１３Ｒ－α２、ジシアロガングリオシド（ＧＤ２及びＧＤ３）、腫瘍関連炭水化物抗原（ＣＡ－１２５、ＣＡ－２４２、Ｔｎ、及びシアリールＴｎ）、４－１ＢＢ、５Ｔ４、ＢＡＦＦ、炭酸アンヒドラ－ゼ９（ＣＡ－ＩＸ）、Ｃ－ＭＥＴ、ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、ＦＡＰ、フィブロネクチンエクストラドメインＢ（ＥＤ－Ｂ）、ＧＰＮＭＢ、ＩＧＦ－１受容体、インテグリンα５β１、インテグリンαｖβ３、ＩＴＢ５、ＩＴＧＡＸ、エンビギン、ＰＤＧＦ－Ｒα、ＲＯＲ１、シンデカン１、ＴＡＧ－７２、テナシンＣ、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＮＫＧ２Ｄ－リガンド、腫瘍特異的ペプチドエピトープを提示する主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子、好ましくはＰＲ１／ＨＬＡ－Ａ２、系統特異的若しくは組織特異的抗原、好ましくはＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２、ＣＤ３１９、エンドグリン、及びＭＨＣ分子。
核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はインビトロ転写されたＲＮＡから選択される、請求項１～６のいずれか１項に記載のＣＡＲ群の個々のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子。
核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はインビトロ転写されたＲＮＡから選択される、請求項１～６のいずれか１項に記載のＣＡＲ群の個々のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子のキット。
核酸は、ＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１～６のいずれか１項に記載のＣＡＲ群の個々のＣＡＲ分子をコードするヌクレオチド配列を含むベクター又はベクターのキット。
請求項１～６のいずれか１項に記載のＣＡＲ群の個々のＣＡＲ分子を生成するために、請求項７又は８に記載の核酸分子又は核酸分子のキットを用いて、又は請求項９に記載のベクター又はベクターのキットを用いて、インビトロ又はエクスビボで改変された細胞、又は前記改質細胞の２つ以上を含むキット。
請求項７又は８に記載の核酸又は核酸のキット、請求項９に記載のベクター又はベクターのキット、又は請求項１０に記載の細胞又は細胞のキットを含む、医薬製剤。
個体の癌の治療方法で使用するための、請求項１～６のいずれか１項に記載のＣＡＲ群であって、前記方法は、
ｉ）個体から得られたＮＫ細胞又は好ましくはＴリンパ球を、ＣＡＲ群の各ＣＡＲ分子をコードする配列を含む少なくとも１つのベクターで遺伝子改変する工程であって、ここで、前記ＣＡＲ群の抗原結合部分及び／又は前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの抗原結合部分は、個体の癌細胞上の標的抗原に特異的であり、前記遺伝子改変はインビトロ又はエクスビボで行われる工程；
ｉｉ）遺伝子改変細胞を個体に導入する工程；そして任意選択的に
ｉｉｉ）群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を誘導又は低減するために、好ましくは群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を誘導するために、少なくとも１つの他のポリペプチド（これは、少なくとも１つの抗原結合部分を含み、前記ＣＡＲ群のＣＡＲ分子中の結合部位に結合できる）の有効量を、及び／又は少なくとも１つの調節分子の有効量を、個体に投与する工程であって、ここで、非共有結合的に複合体化されたＣＡＲ群は、各標的抗原の組み合わせを生理学的発現レベルで発現する癌細胞と接触すると、遺伝子改変された細胞の活性化を仲介し、それが癌細胞の死滅につながり、それによって癌の治療を可能にする工程、を含むＣＡＲ群。
ＣＡＲ群の抗原結合部分、及び／又は前記群のＣＡＲ分子に結合できる他のポリペプチドの抗原結合部分が、個体の癌細胞上の標的抗原に特異的である、個体の癌の治療方法で使用するための請求項１０に記載の細胞であって、前記方法は、
ｉ）細胞を個体に導入する工程；そして
ｉｉ）群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を誘導又は低減するために、好ましくは群の各ＣＡＲ分子のヘテロ二量体化を誘導するために、少なくとも抗原結合部分を含み、個体に、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子の結合部位に結合できる少なくとも１つの他のポリペプチド有効量を、及び／又は少なくとも１つの調節分子の有効量を、個体に投与する工程であって、非共有結合性複合体化したＣＡＲ群は、各標的抗原を発現する癌細胞と接触すると、遺伝子改変細胞の活性化を仲介し、それが癌細胞の死滅につながり、それによって癌の治療を可能にする工程、を含むＣＡＲ群。
以下を含むキット：
－請求項１～６のいずれか１項に記載のＣＡＲ群、請求項９に記載のベクター又はベクターのキット、又は請求項１０に記載の細胞又は細胞のキット、及び
－少なくとも抗原結合部分を含み、ＣＡＲ群のＣＡＲ分子の結合部位及び／又は少なくとも１つの調節分子に結合できる少なくとも１つの他のポリペプチド。
細胞上の標的抗原にＴリンパ球又はＮＫ細胞を結合させる必要性を特徴とする疾患の治療に使用するための、好ましくは腫瘍患者の治療に使用するための、特にユ－イング肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、骨形成性肉腫、中皮腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、平滑筋肉腫、黒色腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、乏突起膠腫、髄膜腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管腫、聴神経腫、慢性骨髄増殖症候群、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ細胞ＣＬＬ、前リンパ球性白血病及び毛細胞白血病を含む慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、食道癌、肝細胞癌、基底細胞癌、扁平上皮癌、膀胱癌、移行細胞癌、気管支原性癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、肺癌（肺の小細胞癌及び非小細胞癌を含む）、副腎皮質癌、甲状腺癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、腺癌、汗腺癌、脂漏性腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、腎細胞癌、管癌、胆管癌、絨毛癌、セミノ－マ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、子宮癌、精巣癌、骨形成癌、上皮癌、及び鼻咽頭癌、非定型髄膜腫、膵島細胞癌、髄質癌、間葉腫、肝細胞癌、肝芽腫、明細胞癌、及び縦隔神経線維腫から選択される腫瘍を有する腫瘍患者の、治療に使用するための、請求項１～６のいずれか１項に記載のＣＡＲ群、請求項９に記載のベクター又はベクターのキット、請求項１０に記載の細胞又は細胞のキット、特にＴリンパ球又はＮＫ細胞、又は請求項８、９、若しくは１４に記載のキット。