DE69531314T2

DE69531314T2 - Verwendung von metallionen chelatoren zur stabilisierung von interferon-enthaltenden pharmazeutischen zubereitungen

Info

Publication number: DE69531314T2
Application number: DE69531314T
Authority: DE
Inventors: Pui-Ho C. Princeton Junction Yuen; Douglas F. Hoboken Kline
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme Corp
Priority date: 1994-10-11
Filing date: 1995-10-10
Publication date: 2004-05-13
Anticipated expiration: 2015-10-11
Also published as: EP0970703A1; US5766582A; NO971633D0; US5935566A; DE69531314D1; CZ110497A3; CA2201749C; JP2006193536A; FI117377B; ES2198830T3; NZ294464A; HK1008813A1; FI971486A; CZ296961B6; PL319603A1; AU708337B2; SK282949B6; CA2201749A1; NO320604B1; DE69518084T2

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Diese Erfindung betrifft stabile wässrige Lösungsformulierungen, die frei von humanen blutabgeleiteten Produkten sind, und die hohe biologische Aktivität und hohe chemische und hohe physikalische Stabilität von Interferon vom α-Typ über einen längeren Zeitraum beibehalten.
US-A-4 496 537 offenbart biologisch stabile wässrige α-Interferon-Lösungsformulierungen, die α-Interferon, Humanserumalbumin und Alanin oder Glycin, Wasser und ein Puffersystem enthalten, um den pH-Wert auf 6,5 bis 8,0 zu halten. Das Humanserumalbumin ("HSA") wirkt als Stabilisator für α-Interferon und verhindert Verluste an α-Interferon aus der Lösung durch Beschichtung und/oder Adsorption des α-Interferons auf den rostfreien Stahl- und Glasoberflächen von Kompoundiergefäßen, Verfahrensgeräten und Lagerungsbehältern. Lösungsformulierungen, die α-Interferon und HSA enthalten, halten die chemische und biologische Stabilität des α-Interferons, wenn solche Lösungen über längere Zeiträume, d. h. mehr als 2 Jahre, bei 2 bis 8°C gelagert worden sind.
In letzter Zeit hat die weltweite AIDS-Epidemie dazu geführt, dass die Gesundheitsbehörden den Herstellern das Anbringen von Warnungen an Produkten wie α-Interferon vorschreiben, die humane blutabgeleitete Produkte enthalten.
Es besteht ein Bedarf nach Umformulierung von Lösungsprodukten von Interferon vom α-Typ, um eine Lösungsformulierung zu erhalten, die frei von humanen blutabgeleiteten Produkten wie HSA ist, während hohe chemische, hohe physikalische Stabilität und hohe biologische Aktivität des Interferons vom α-Typ in den wässrigen Lösungsformulierungen über längere Lagerungszeiträume erhalten bleiben.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung liefert eine stabile wässrige Lösungsformulierung, die eine hohe biologische Aktivität an Interferon vom α-Typ aufrechterhält und frei von humanen blutabgeleiteten Produkten ist und:

a. 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU/ml Interferon vom α-Typ;
b. ein Puffersystem zur Aufrechterhaltung eines pH's im Bereich von 4,5 bis 7,1;
c. eine wirksame Menge eines Chelatbildners;
d. eine Menge an einem Sorbitan-mono-9-octadecenoat-poly(oxy-1,2-ethandiyl)-Derivat, welche ausreicht, um das Interferon vom α-Typ gegenüber Verlust von Interferon vom α-Typ zu stabilisieren;
e. eine wirksame Menge eines Tonizitätsmittels;
f. eine wirksame Menge antimikrobiellen Konservierungsmittels; und
g. eine Menge an Wasser zur Injektion enthält, die ausreicht, um eine Lösung der oben angegebenen Bestandteile herzustellen.

Die vorliegende Erfindung liefert eine stabile wässrige Lösungsformulierung, die eine hohe biologische Aktivität an Interferon vom α-Typ aufrechterhält und frei von humanen blutabgeleiteten Produkten ist und:

a. 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU/ml Interferon vom α-Typ;
b. ein Puffersystem, das zur Aufrechterhaltung eines pH's im Bereich von 4,5 bis 7,1 ausreicht;
c. etwa 0,01 bis 1 mg/ml Dinatriumdihydrogenethylendiamintetraacetat;
d. etwa 0,01 bis 1 mg/ml eines Sorbitan-mono-9-octadecenoat-poly(oxy-1,2-ethandiyl)-Derivats;
e. etwa 1 bis 9 mg/ml Natriumchlorid;
f. eine wirksame Menge eines antimikrobiellen Konservierungsmittels ausgewählt aus m-Kresol, Phenol, Methylparaben, Propylparaben oder Mischungen davon; und
g. Wasser zur Injektion bis auf 1 ml enthält.

In einem bevorzugten Aspekt liefert die vorliegende Erfindung eine stabile wässrige Lösungsformulierung, die hohe biologische Aktivität von Interferon vom α-Typ hat und frei von humanen blutabgeleiteten Produkten ist, die enthält:

	mg/l
a. α-2-Interferon	5 × 10⁶ bis 50 × 10⁶ IU
b. zweibasiges Natriumphosphat, wasserfrei	1,8
c. einbasiges Natriumphosphat-monohydrat	1,3
d. Dinatriumdihydrogenethylendiamintetraacetat	0,1
e. Polysorbat 80	0,1
f. Methylparaben	1,2
g. Propylparaben	0,12
h. Natriumchlorid	7,5
i. und Wasser zur Injektion	q. s. ad 1 ml

In einem anderen bevorzugten Aspekt liefert die vorliegende Erfindung ferner eine stabile wässrige Lösungsformulierung, die hohe biologische Aktivität von Interferon vom α-Typ hat und frei von humanen blutabgeleiteten Produkten ist, die enthält:

	mg/l
a. α-2-Interferon	5 × 10⁶ bis 50 × 10⁶ IU
b. zweibasiges Natriumphosphat, wasserfrei	1,8
c. einbasiges Natriumphosphat-monohydrat	1,3
d. Dinatriumdihydrogenethylendiamintetraacetat	0,1
e. Polysorbat 80	0,1
f. m-Kresol	1,5
g. Natriumchlorid	7,5
h. und Wasser zur Injektion	q. s. ad 1 ml

Die vorliegende Erfindung liefert auch ein Verfahren zur Herstellung einer stabilen, wässrigen Lösungsformulierung, die hohe biologische Aktivität von Interferon vom α-Typ hat und frei von humanen blutabgeleiteten Produkten ist, bei dem eine wirksame Menge Interferon vom α-Typ mit einem Puffersystem, das in der Lage ist, den pH-Wert im Bereich von 4,5 bis 7,1 zu halten, einem Chelatbildner, einem Sorbitanmono-9-octadecenoatpoly(oxy-1,2-ethandiyl)-Drivat, einem Tonizitätsmittel, einem antimikrobiellen Konservierungsmittel und ausreichend Wasser gemischt wird, um eine Lösung zu bilden. In einem bevorzugten Aspekt des erfindungsgemäßen Verfahrens wird die Lösung hergestellt und im Wesentlichen frei von gelöstem Sauerstoff gehalten, und ein Kopfraum aus inerter Atmosphäre oberhalb der Lösung wird auf einem Wert von weniger als etwa 4 Vol.% Sauerstoff gehalten.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG
Wir haben spezielle Mengen einer speziellen Gruppe von Bestandteilen gewählt, die es uns ermöglicht haben, eine wässrige Lösungsformulierung von Interferon vom α-Typ zu bilden, die kein Humanserumalbumin enthält, dennoch hohe chemische, biologische und physikalische Stabilität des Interferons vom α-Typ bei Lagerung von 2° bis 8°C über längere Zeiträume von mindestens 24 Monaten beibehält.
Der Begriff "frei von humanen blutabgeleiteten Produkten" bedeutet hier in Bezug auf die erfindungsgemäßen Formulierungen, dass keine humanen blutabgeleiteten Produkte wie HSA zur Herstellung der erfindungsgemäßen Lösungsformulierungen verwendet werden.
Der Begriff "hohe chemische Stabilität" bedeutet hier in Bezug auf das in den erfindungsgemäßen Formulierungen verwendete Interferon vom α-Typ, dass das Interferon vom α-Typ mindestens 85%, vorzugsweise 85% bis 100% seiner chemischen Integrität nach Lagerung bei 2° bis 8°C für mindestens 24 Mo nate behält. Siehe Tabellen 1 und 2. Die chemische Integrität wird ermittelt, indem der Proteingehalt in einem HPLC-Assay gemessen wird, wie in demjenigen, der von T. L. Nagabhushan et al. in einem Artikel mit dem Titel "Characterization of Genetically Engineered ALFA-2 Interferon", Seiten 79 bis 88, in Interferon Research Clinical Application, and Regulatory Considerations, Herausgeber Zoon et al., Elsevier Science Publishing Co., Inc. 1984, (siehe Ergebnisse in Tabellen 1 bis 4) offenbart ist.
Der Begriff "hohe biologische Aktivität" bedeutet hier in Bezug auf das in den erfindungsgemäßen Formulierungen verwendete Interferon vom α-Typ, dass das Interferon vom α-Typ in der Formulierung mindestens 75%, vorzugsweise mindestens 85%, insbesondere 90% bis 100% seiner biologischen Aktivität bei Lagerung bei 2° bis 8°C für mindestens 24 Monate behält (siehe Ergebnisse in Tabellen 1 bis 4), gemessen in dem Standardverfahren zur Inhibierung der zytopathischen Wirkung (CPE) eines Virus, wie in dem Verfahren, das von W. P. Protzman et al. in J. Clinical Microbiology (1985), 22, 596 bis 599 offenbart ist.
Der Begriff "hohe physikalische Stabilität" bedeutet hier in Bezug auf das in den erfindungsgemäßen Formulierungen verwendete Interferon vom α-Typ, dass die erfindungsgemäße Formulierung klar bleibt, d. h. keine Trübung oder sichtbares Schwebstoffmaterial (d. h. Teilchen mit mehr als etwa 60 bis 70 μm Durchmesser) nach Lagerung bei 2° bis 8°C für mindestens 24 Monate zeigt. Siehe Tabellen 1, 2 und 3. Die in den Tabellen 1, 2 und 3 aufgeführten Ergebnisse sind überraschend, da die meisten Lösungsformulierungen, die Proteinprodukte wie Interferon vom α-Typ enthalten, dazu neigen, visuell wahrnehmbares Schwebstoffmaterial (d. h. Teilchen mit Durchmessern von mehr als 60 bis 70 μm) nach längerer Lagerung selbst bei 2° bis 8°C zu entwickeln. Das zum Ermitteln von Schwebstoffmate rial in der erfindungsgemäßen Lösungsformulierung verwendete Testverfahren (siehe Tabellen 1 bis 4) ist in The United States Pharmacopeia/The National Formulary USP 23/NF beschrieben, veröffentlicht von United States Pharmacopeial Convention, Inc., (1995), Rockville, Maryland, USA; siehe Physical Test <788> auf den Seiten 1813 bis 1816. Das Verfahren, das zum Ermitteln der visuellen Beschreibung der erfindungsgemäßen Lösungsformulierungen verwendet wird, ist auch in USP 23 als "General Requirement Test and Assays <1> Injections" auf den Seiten 1650 bis 1652 beschrieben.
Wir haben gefunden, dass durch Zugabe eines Chelatbildners zu den erfindungsgemäßen Formulierungen sichtbares Schwebstoffmaterial vermieden werden konnte. Typische geeignete Chelatbildner schließen Dinatriumdihydrogenethylendiamintetraacetat (EDTA oder Dinatriumedetat) oder Zitronensäure ein. Die Verwendung von Dinatriumedetat ist bevorzugt. Ohne sich auf irgendeine Theorie festlegen zu wollen, wird angenommen, dass Dinatriumedetat effektiv Spurenmengen von Metallkationen komplexiert, wie Zn²⁺, Fe²⁺, Cu²⁺ oder Al³⁺, wobei die Ionen in Hilfsstoffen und Verpackungskomponenten vorhanden sein können, z. B. Gummistopfen oder Dichtungen. Da Dinatriumedetat eine höhere Affinität zu diesen Metallkationen als die Interferone vom α-Typ hat, wird die Wechselwirkung zwischen Metallkationen und Interferon vom α-Typ vermieden, die zur Bildung unlöslicher Komplexe (in Form von beispielsweise sichtbarem Schwebstoffmaterial) und Aktivitätsverlust führt. Die wirksame Menge des Chelatbildners liegt im Bereich von 0,01 bis 1 mg/ml, bezogen auf 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ internationale Einheiten ("IU") von Interferon vom α-Typ/ml. Vorzugsweise werden 0,1 mg Dinatriumedetat auf 5 × 10⁶ bis 50 × 10⁶ IU α-2-Interferon verwendet.
Die für die erfindungsgemäßen Formulierungen geeigneten Puffersysteme sind jene, die den pH-Wert der wässrigen Lö sungsformulierung im Bereich von 4,5 bis 7,1 halten, vorzugsweise 6,5 bis 7,1 und am meisten bevorzugt 6,8. Die Verwendung eines Puffersystems aus zweibasigem Natriumphosphat und einbasigem Natriumphosphat ist bevorzugt. Normalerweise wird ein 0,005 bis 0,1 molarer Puffer des bevorzugten Puffersystems aus einbasigem Natriumphosphat/zweibasigem Natriumphosphat für eine Formulierung verwendet, die 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU Interferon vom α-Typ pro ml enthält. Andere geeignete Puffersysteme, um den gewünschten pH-Bereich von 4,5 bis 7,1 zu halten, schließen Natriumzitrat/Zitronensäure und Natriumacetat/Essigsäure ein.
Das erfindungsgemäß brauchbare Tonizitätsmittel ist jedes Mittel, das die erfindungsgemäßen Formulierungen isoosmotisch mit Humanserum machen kann. Typische geeignete Tonizitätsmittel schließen Natriumchlorid, Mannitol, Glycin, Glukose und Sorbitol ein. Die Verwendung von Natriumchlorid als Tonizitätsmittel ist bevorzugt.
Die Menge des verwendeten Tonizitätsmittels liegt im Bereich von 1 bis 10 mg/ml, wenn die erfindungsgemäße Formulierung 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU Interferon vom α-Typ/ml enthält. Die Verwendung von 7,5 mg/ml Natriumchlorid für 5 × 10⁶ bis 50 × 10⁶ IU Interferon vom α-Typ pro ml ist in den erfindungsgemäßen Formulierungen bevorzugt.
Die Sorbitanmono-9-octadecenoat-poly(oxy-1,2-ethandiyl)-Derivate, wie Polysorbat 80 oder Polysorbat 20, sind als Stabilisierungsmittel brauchbar, um die Adsorption der Interferonproteine vom α-Typ, wie α-2b-Interferon, auf rostfreien Stahl- und Glasoberflächen der Geräte zu verhindern, die zur Herstellung der injizierbaren Formulierungen verwendet werden, die Interferon vom α-Typ enthalten. Die wirksame Menge an Polysorbat 20 oder 80 in der erfindungsgemäßen Formulierung liegt im Bereich von 0,01 bis 1,0 mg pro ml bei einer Formulierung, die 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU Interferon vom α-Typ pro ml enthält. Die Verwendung von Polysorbat 80 ist bevorzugt. Die Verwendung von 0,1 mg/ml Polysorbat 80 ist in allen erfindungsgemäßen Lösungsformulierungen besonders bevorzugt. Wenn die Konzentrationen von Interferon vom α-Typ, wie α-2-Interferon, unter etwa 15 × 10⁶ IU/ml liegt, z. B. 6 × 10⁶ IU/ml, verringert der Aktivitätsverlust infolge von Adsorption des α-Interferons in Abwesenheit von Polysorbat 80 die biologische Aktivität der Formulierung deutlich. Wir haben überraschenderweise gefunden, dass Polysorbat 80 den Verlust von α-2b-Interferon verhindert und systemische Abgabe des α-2b-Interferons ohne Verlust an biologischer Aktivität ermöglicht. Im Verlauf der Entwicklung der erfindungsgemäßen Formulierung haben wir überraschenderweise gefunden, dass Polysorbat 80 α-2b-Interferon hervorragende chemische und biologische Stabilität verleiht, verglichen mit anderen nicht-ionischen Tensiden, z. B. Pluronic F127 und Pluronic F-68.
Die in den erfindungsgemäßen Formulierungen brauchbare Menge an Interferon vom α-Typ liegt im Bereich von 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU/ml, vorzugsweise 5 × 10⁶ bis 50 × 10⁶ IU/ml.
Der Begriff "Interferon vom α-Typ" bedeutet hier die Familie hochhomologer speziesspezifischer Proteine, die virale Replikation und zelluläre Proliferation inhibieren und die Immunreaktion modulieren. Typische geeignete Interferone vom α-Typ schließen ein: Interferon α-2a, wie ROFERON A Interferon α-2a, erhältlich von Hoffmann-La Roche, Nutley, N. J., USA, Interferon α-2b wie INTRON A Interferon α-2b, erhältlich von Schering Corporation, Kenilworth, N. J., USA, Interferon α-2c wie BEROFOR Interferon α-2c, erhältlich von Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, CT., USA, Interferon α-n1, eine gereinigte Mischung natürlicher Interferone, wie SUMIFERON, erhältlich von Sumitomo, Japan, oder WELLFERON Interferon α-n1, erhältlich von The Wellcome Foundation Ltd., Lon don, UK, oder Consensus-α-Interferon, erhältlich von Amgen, Inc., Newbury Park, Kalifornien, USA, oder Interferen α-n3, eine Mischung natürlicher α-Interferone, hergestellt von Interferon Sciences und erhältlich von Purdue Frederic Co., Norwalk, CT, USA unter dem Handelsnamen ALFERON. Die Verwendung von Interferon α-2a oder α-2b ist bevorzugt. Die Verwendung von Interferon α-2b ist besonders bevorzugt.
Die erfindungsgemäß brauchbaren antimikrobiellen Konservierungsmittel schließen m-Kresol, Phenol und Methylparaben und Propylparaben und Mischungen der oben genannten Konservierungsmittel ein, z. B. Phenol/Methylparaben-Mischungen. Die sich als erfindungsgemäß brauchbar erwiesene wirksame Menge m-Kresol liegt im Bereich von 0,5 bis 2 mg/ml für eine Formulierung, die 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU/ml Interferon vom α-Typ enthält. Es ist bevorzugt, 1,5 mg/ml m-Kresol für eine Formulierung zu verwenden, die 5 × 10⁶ bis 50 × 10⁶ IU/ml Interferon α-2b enthält.
Die sich als brauchbar herausgestellte wirksame Menge Phenol liegt im Bereich von 0,5 bis 5 mg/ml für eine Lösungsformulierung, die 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU/ml Interferon vom α-Typ enthält.
Die wirksame Menge Methylparaben liegt im Bereich von 0,6 bis 1,8 mg/ml, und die Menge an Propylparaben liegt im Bereich von 0,06 bis 0,18 mg/ml, wenn die erfindungsgemäße Formulierung 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU/ml Interferon vom α-Typ enthält.
Es ist bevorzugt, 1,2 mg/ml Methylparaben in Kombination mit 0,12 mg/ml Propylparaben zu verwenden, wenn die erfindungsgemäße Formulierung 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU/ml α-2b-Interferon enthält.
Die Verwendung von m-Kresol als antimikrobielles Konservierungsmittel ist besonders bevorzugt.
Das zur Herstellung der erfindungsgemäßen Formulierungen verwendete Wasser ist vorzugsweise Wasser zur Injektion.
Während des Verlaufs der Entwicklung der erfindungsgemäßen wässrigen Lösungsformulierungen, die hohe biologische Aktivität sowie hohe chemische und hohe physikalische Stabilität des Interferons vom α-Typ über einen längeren Lagerungszeitraum aufrechterhalten, ohne HSA als Stabilisator zu verwenden, haben wir gefunden, dass die Menge eines Sorbitanmono-9-octadecenoat-poly(oxy-1,2-ethandiyl)-Derivats, wie Polysorbat 80, die erforderlich ist, um als Stabilisierungsmittel für das Interferon vom α-Typ zu wirken, einen direkten Einfluss auf die wirksame Menge des antimikrobiellen Konservierungsmittels hatte, die der wässrigen Lösungsformulierung zugesetzt werden konnte, um der Formulierung den passenden antimikrobiellen Schutz gemäß verschiedenen weltweiten Anforderungen der staatlichen Gesundheitsbehörden zu liefern, ohne unerwünschte Bildung von Trübung in der Lösung hervorzurufen.
Wenn somit das bevorzugte Stabilisierungsmittel, Polysorbat 80, in erfindungsgemäßen Formulierungen in der bevorzugten wirksamen Menge von 0,1 mg/ml vorhanden war, stellte sich heraus, dass die wirksame Menge des bevorzugten antimikrobiellen Konservierungsmittels, z. B. m-Kresol, die ohne Herbeiführung von Trübung der Formulierung zugefügt werden konnte, kritisch war. Wenn die Menge m-Kresol, die einer Formulierung zugefügt wurde, die 0,1 mg/ml Polysorbat 80 enthielt, wie in Beispiel 3 gezeigt ist, beispielsweise auf mehr als 1,75 mg/ml erhöht wurde, wurde Trübung beobachtet. Ein ähnliches Trübungsproblem wurde beobachtet, wenn die Menge Polysorbat 80 in der resultierenden Formulierung auf 0,01 bis 1 mg/ml variiert wurde. Es wurde keine Trübung beobachtet, wenn 1,75 mg/ml oder weniger, vorzugsweise etwa 1,5 mg/ml m-Kresol zu einer Formulierung ge geben wurden, die gemäß den Verfahren von Beispiel 3 hergestellt war, die 0,1 mg/ml Polysorbat 80 enthielt. Diese kritische Empfindlichkeit wurde auch mit den Parabenen und Phenol beobachtet, wenn sie als antimikrobielle Konservierungsmittel verwendet wurden. Für erfindungsgemäße Formulierungen, die 0,01 bis 1 mg/ml Polysorbat 80 enthielten, sollte die wirksame Menge Methylparaben nicht mehr als etwa 1,2 mg/ml betragen, wenn es mit 0,12 mg/ml Propylparaben verwendet wird, um Trübung zu vermeiden, und die wirksame Menge Phenol (wenn es anstelle der Parabene verwendet wird) sollte im Bereich von 0,5 bis weniger als etwa 4 mg/ml liegen, um Trübung zu vermeiden.
Formulierungen von Interferon vom α-Typ sind zur Behandlung vieler unterschiedlicher Krankheitszustände brauchbar, wie Nierenzellenkarzinomen, dem mit AIDS zusammenhängenden Kaposi-Sarkom, chronischer und akuter Hepatitis B, chronischer und akuter non-A, non-B/C-Hepatitis. Die erfindungsgemäßen Formulierungen sind vorzugsweise als injizierbare wässrige Lösungen zur Behandlung dieser Krankheitszustände brauchbar.
BEISPIELE
Die folgenden nicht-einschränkenden Beispiele illustrieren die Herstellung der wässrigen Lösungen der Interferone vom α-Typ.
Die nach Beispiel 5 aufgeführten Prozeduren wurden zur Herstellung der erfindungsgemäßen Formulierungen der Beispiele 1 bis 5 verwendet.
Beispiel 1
Beispiel 2
Beispiel 3
Die Stabilitätsdaten der Beispiele 2 und 3 sind in Tabellen 1 beziehungsweise 2 zusammengefasst.
Beispiel 4
Die Formulierung von Beispiel 3 wurde mit 6 × 10⁶ IU/ml α-2b-Interferon gemäß dem hier detailliert beschriebenen Herstellungsverfahren hergestellt, wobei die Lösung mit Stickstoff durchblasen und nicht mehr als etwa 4 Vol.% Sauerstoff im Kopfraum aufrechterhalten wurden.
Ampullen, die ein Nennvolumen von 3 ml Lösung enthielten, wurden bei 30°, 25° und 4°C gelagert. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 zusammenfasst.
Beispiel 5
Die Formulierung von Beispiel 4 wurde gemäß dem hier detailliert beschriebenen Herstellungsverfahren in allen Details hergestellt, außer dass kein Stickstoff durch die Lösung geblasen oder diese damit bedeckt wurde, und das Sauerstoffvolumen in dem Kopfraum war etwa 20 Vol.%, wie in Umgebungsluft gefunden wird.
Ampullen, die ein Nennvolumen von 3 ml Lösung enthielten, wurden bei 30°, 25° und 4°C gelagert. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 zusammengefasst.
Ähnliche Ergebnisse werden erwartet, wenn das Interferon α-2B in den Beispielen 1 bis 5 durch eine äquivalente Menge Roferon A, Wellferon oder Sumiferon Interferon-α ersetzt wird.
Tabelle 1 Interferon-α-2b Stabilitätsdaten von Beispiel 2
Tabelle 2 Interferon-α-2b Stabilitätsdaten von Beispiel 3
Tabelle 3 Interferon-α-2b Stabilitätsdaten von Beispiel 4
Tabelle 3 – Fortsetzung
Tabelle 4 Interferon-α-2b Stabilitätsdaten von Beispiel 5
Tabelle 4 – Fortsetzung
HERSTELLUNGSVERFAHREN FÜR DIE BEISPIELE 1 BIS 5
A. Kompoundieren parabenhaltiger wässriger Lösungsformulierungen wie in Beispiel 2 gezeigt

1. Ungefähr 80% des Wassers zur Injektion wurden bei einer Temperatur größer als 70°C in ein geeignetes ummanteltes Gefäß eingebracht, das mit einem Rührer ausgestattet ist.
2. Ungefähr 30% des Wassers zur Injektion wurden separat in ein anderes geeignetes Gefäß eingebracht. Es wurde gekühlt und die Wassertemperatur zwischen 20° und 25°C gehalten. Es wurde mit dem Durchblasen und Bedecken des Wassers, welches verwendet werden sollte, um die Charge auf ein Endvolumen zu bringen, mit gefiltertem Stickstoff begonnen, um ein Niveau an gelöstem Sauerstoff auf oder unter 0,25 ppm zu halten.
3. Unter Mischen wurden Methylparaben und Propylparaben in das Kompoundiergefäß von Stufe 1 eingebracht und gelöst, während die Temperatur der Lösung zwischen 70° und 80°C gehalten wurde.
4. Die Lösung in Stufe 3 wurde auf eine Temperatur zwischen 20° und 25°C abgekühlt. Die Lösung wurde mit filtriertem Stickstoff durchblasen und bedeckt. Es wurde ein Niveau an gelöstem Sauerstoff auf oder unter 0,25 ppm gehalten.
5. Unter Mischen wurden die folgenden Bestandteile in die Lösung von Stufe 4 eingebracht und aufgelöst, während das Durchblasen und Bedecken mit Stickstoff aufrechterhalten wurden: dibasiges Natriumphosphat, wasserfrei einbasiges Natriumphosphat, Monohydrat Dinatriumedetat Natriumchlorid
6. Das Durchblasen der Lösung von Stufe 5 mit Stickstoff wurde unterbrochen. Das Bedecken mit Stickstoff wurde in dem Kompoundiergefäß aufrechterhalten.
7. Polysorbat 80 wurde (für eine Charge von 1 L Größe) in ungefähr 50 ml Wasser zur Injektion in ein separates Gefäß eingebracht und aufgelöst. Die Polysorbat 80 Lösung wurde in die Lösung von Stufe 6 überführt.
8. Der pH-Wert der Lösung wurde überprüft. Er sollte zwischen 6,6 und 7,0 liegen. Es war keine pH-Justierung erforderlich.
9. Interferon-α-2b Massenarzeistofflösung wurde unter Mischen in die Lösung von Stufe 8 eingebracht.
10. Wasser zur Injektion wurde eingebracht, das mit Stickstoff durchblasen war (aus Stufe 2), um die Charge auf das Endvolumen zu bringen. Die Lösung wurde gelinde bewegt, bis sie homogen war.
11. Die Lösung wurde aseptisch durch einen sterilisierten Filter filtriert, der gewaschen und auf Integrität getestet worden war. Die sterilisierte Lösung wurde in ein sterilisiertes Abfüllgefäß aufgefangen, das mit steril-gefiltertem Stickstoff bedeckt worden war. Der Filter wurde nach Filtration auf Integrität getestet.
12. Das Füllgefäß in Stufe 11 wurde mit steril gefiltertem Stickstoff bedeckt und versiegelt.

B. Kompoundieren m-Kresol-haltiger wässriger Lösungsformulierungen, wie in Beispiel 3 gezeigt
Das Herstellungsverfahren, das zur Herstellung der wässrigen Lösungen verwendet wurde, die m-Kresol als Konservierungsmittel enthielten (wie in Beispiel 3 gezeigt ist), war genau das gleiche wie zuvor beschrieben, außer dass die Temperatur der Lösung in Stufe 3 zwischen 20° und 25°C gehalten wurde und das m-Kresol nach Stufe 6 eingebracht wurde.
C. Kompoundieren HSA-freier wässriger α-Interferonlösungsformulierungen unter Umgehungsluft
Das zur Herstellung der HSA-freien wässrigen α-Interferonformulierungen von Beispielen 1 bis 4 verwendete Herstellungsverfahren wurde wie dasjenige von Beispiel 5 zur Herstellung der Formulierungen verwendet, außer dass alle Stufen unter Umgebungsluft durchgeführt wurden; es wurde weder Stickstoff durch die Lösung geblasen noch die Lösung damit bedeckt, und Umgebungsluft (die normalerweise etwa 20 Vol.% Sauerstoff enthält) nahm das Kopfraumvolumen ein.
Um hohe chemische, physikalische und biologische Stabilität aufrechtzuerhalten, ist es bevorzugt, dass das zur Herstellung der wässrigen α-Interferonlösung verwendete Wasser sowie die so gebildete wässrige α-Interferonlösung im Wesentlichen frei von gelöstem Sauerstoff sind und die wässrige Lösung mit einem Kopfraum aus einer inerten Atmosphäre hergestellt und gelagert wird, wie Stickstoff, der nicht mehr als etwa 4 Vol.% Sauerstoff enthält. Mit dem Begriff "im Wesentlichen frei von gelöstem Sauerstoff" ist hier ein Sauerstoffniveau von nicht mehr als etwa 0,25 ppm bei einer Wassertemperatur von etwa 20° bis 25°C gemeint. Dieses bevorzugte Niveau an gelöstem Sauerstoff von 0,25 ppm wird normalerweise zweckmäßig durch Durchblasen einer inerten Atmosphäre, z. B. Stickstoffgas in das Wasser, das zur Herstellung der wässrigen Lösungen (die auf einer Temperatur von etwa 20° bis 25°C gehalten wird) verwendet wird, für eine ausreichende Zeit (z. B. etwa 30 Minuten) erreicht, um den gelösten Sauerstoff auf einen Wert von nicht mehr als etwa 0,25 ppm abzusenken. Das Durchblasen wird während des Fertigungsverfahrens fortgesetzt, um das Niveau des gelösten Sauerstoffs auf 0,25 ppm zu halten. Wir haben gefunden, dass wässrige Formulierungen der vorliegenden Erfindung, die ein Niveau an gelöstem Sauerstoff von 1 ppm und einen Sauerstoffgehalt in dem Kopfraum von 7 Vol.% aufweisen, erheblich größeren Verlust der chemischen Stabilität des α-Interferons nach 3 Monaten Lagerung bei 25°C zeigten, verglichen mit einer ähnlichen wässrigen Formulierung mit dem bevorzugten Niveau an gelöstem Sauerstoff von 0,25 ppm und einem Sauer stoffgehalt im Kopfraum von 4 Vol.%, die unter den gleichen Bedingungen gelagert worden war.
Ein Punkt für Punkt erfolgender Vergleich der Stabilitätsdaten der α-2b-Interferonlösung, die in Tabellen 3 und 4 gezeigt sind, zeigt, dass es während Lagerung für 12 Monate bei 4°C keinen bedeutsamen Stabilitätsunterschied zwischen den erfindungsgemäßen wässrigen Lösungsformulierungen, die unter den Stickstoff/sauerstoffarmen Bedingungen von Beispiel 4 hergestellt worden waren, und jenen gibt, die gemäß Beispiel 5 unter Umgebungsluft hergestellt waren. Im Unterschied dazu zeigt ein Vergleich der α-2b-Interferonstabilität in Lösungen der Beispiele 4 und 5, die bei höheren Temperaturen, z. B. 25° und 30°C gelagert wurden, die schützende Wirkung, die durch die bevorzugtere (sicherere) Verwendung von Durchblasen mit Stickstoff erreicht wird, um die niedrigeren Gehalte an gelöstem Sauerstoff in der wässrigen Lösung zu bewirken, während gleichzeitig ein Sauerstoffgehalt in dem Kopfraum auf einem Wert von nicht mehr als etwa 4 Vol.% gehalten wird.
Die erfindungsgemäße wässrige Lösungsformulierung kann in jeglichen geeigneten gewaschenen und sterilisierten Abfüllgefäßen oder Behälter gelagert werden, wie 2 ml oder 5 ml Flintglasampullen vom Typ I, die mit grauen Butylkautschukverschlüssen verschlossen sind. Die erfindungsgemäßen wässrigen Lösungsformulierungen können auch in vorbefüllten Multidosisspritzen gelagert werden, wie solchen, die zur Abgabe injizierbarer Lösungen von Arzneimitteln wie Insulin brauchbar sind. Typische geeignete Spritzen schließen Systeme ein, die eine vorbefüllte Ampulle aufweisen, die an einer Spritze vom Kugelschreibertyp befestigt ist, wie der Novolet Novo Pen, erhältlich von Novo Nordisk. Typische geeignete Systeme schließen eine vorbefüllte Spritze vom Kugelschreibertyp ein, die leichte Selbstinjektion durch den Anwender sowie genaue reproduzierbare Einstellungen der Dosis ermöglicht.
Die erfindungsgemäßen wässrigen Lösungsformulierungen, wie sie in den Beispielen vorliegen, können auch lyophilisiert werden, um ein Pulver zur erneuten Auflösung in Wasser zu bilden. Es wird erwartet, dass das lyophilisierte Pulver des Interferons vom α-Typ seine chemische und biologische Stabilität mindestens 2 Jahre beibehält, wenn es bei 2° bis 8°C gelagert wird.

Claims

Verwendung einer wirksamen Menge eines Chelatisierungsmittels in einer stabilen wässrigen Formulierung, die Interferon vom alpha-Typ enthält, um die Bildung von unlöslichen Komplexen des Interferons zu verhindern.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei das Chelatisierungsmittel ausgewählt ist aus Dinatriumedetat oder Zitronensäure.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei die stabile wässrige Formulierung eine hohe biologische Aktivität an Interferon vom alpha-Typ hat und frei von humanen blutabgeleiteten Produkten ist und: a. 0,1 × 10⁶ bis 100 × 10⁶ IU/ml Interferon vom alpha-Typ; b. ein Puffersystem zur Aufrechterhaltung eines pH's im Bereich von 4,5 bis 7,1; c. eine Menge an einem Sorbitan-mono-9-octadecenoat-poly(oxy-1,2-ethandiyl)-Derivat oder Polysorbate 20, welche ausreicht, um das Interferon vom alpha-Typ gegenüber Verlust von Interferon vom alpha-Typ zu stabilisieren; und d. eine Menge an Wasser zur Injektion enthält, die ausreicht, um eine Lösung der oben angegebenen Bestandteile herzustellen.
Verwendung nach Anspruch 3, wobei das Puffersystem Natriumhydrogenphosphat und Natriumdihydrogenphosphat ist.
Verwendung nach Anspruch 3 oder Anspruch 4, wobei die Formulierung eine wirksame Menge an einem Tonizitätsmittel ent hält.
Verwendung nach Anspruch 5, wobei das Tonizitätsmittel Natriumchlorid ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1–6, wobei die Formulierung eine wirksame Menge eines antimikrobiellen Konservierungsmittels enthält.
Verwendung nach Anspruch 7, wobei das Konservierungsmittel ausgewählt ist aus m-Kresol, Phenol, Methylparaben, Propylparaben oder Mischungen davon.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1–8, wobei das Chelatisierungsmittel Dinatriumedetat ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1–8, wobei das Chelatisierungsmittel Zitronensäure ist.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Interferon vom alpha-Typ alpha-2-Interferon ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 3–8, wobei das Sorbitanmono-9-octadecenoat-poly(oxy-1,1-ethandiyl)-Derivat Polysorbate 80 ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 3–8, wobei die Formulierung Polysorbate 20 enthält.