CZ296961B6

CZ296961B6 - Stabilní vodný injikovatelný prostredek s vysokoubiologickou aktivitou interferonu typu alfa, výrobek jej obsahující a zpusob jeho prípravy

Info

Publication number: CZ296961B6
Application number: CZ0110497A
Authority: CZ
Inventors: C. Yuen@Pui-Ho; F. Kline@Douglas
Original assignee: Schering Corporation
Priority date: 1994-10-11
Filing date: 1995-10-10
Publication date: 2006-08-16
Also published as: FI971486A; HK1008813A1; CZ110497A3; SK282949B6; WO1996011018A1; NZ294464A; DE69531314D1; DE69531314T2; KR970706017A; CA2201749A1; BR9509313A; ES2148568T3; EP0970703B1; EP0777495A1; NO320604B1; DE69518084D1; JP3978228B2; UA42028C2; MX9702578A; PT777495E

Abstract

Stabilní vodný injikovatelný prostredek s vysokoubiologickou aktivitou interferonu typu alfa a prostý produktu odvozených z lidské krve obsahující: a) 0,1 x 10.sup.6.n. az 100 x 10.sup.6.n. m.j./ml interferonu typu alfa; b) ústojný systém pro udrzení pH v rozmezí 4,5 az 7,1; c) úcinné mnozství chelatacního cinidla v rozmezí 0,01 az 1 mg/ml v závislosti na mnozství interferonu z bodu a), pricemz chelatacní cinidlo je dihydrogenethylendiamintetraacetát disodný nebo kyselina citronová; d) mnozství stabilizátoru vybraného z polyoxyethylen(20)sorbitan-monolaurátu a polyoxyethylen(80)sorbitan-monooleátu v rozmezí 0,01 az 1,0 mg/ml v závislosti namnozství interferonu z bodu a), postacujícím ke stabilizaci interferonu typu alfa proti jeho ztráte; e) úcinné mnozství chloridu sodného jako tonizacního cinidla v rozmezí 1 az 10 mg/ml v závislosti na mnozství interferonu z bodu a); f) úcinné mnozství protimikrobiálního konzervacního cinidla vybíraného z m-kresolu, fenolu, methylparabenu, propylparabenu nebo jejich smesí, pricemz úcinné mnozstvím-kresolu je v rozmezí 0,5 az 2 mg/ml, úcinné mnozství fenolu je v rozmezí 0,5 az 5 mg/ml, úcinné mnozství methylparabenu je v rozmezí 0,6 az 1,8 mg/ml a úcinné mnozství propylparabenu je v rozmezí 0,06 az 0,18 mg/ml, vse v závislosti na mnozství interferonu z bodu a); a g) mnozství vody pro injekce postacující pro prípravu roztoku ze shora vyjmenovaných slozek; pricemz tento prostredek je prostýcinidla pro zvetsení objemu. Dále je popsán výrobek obsahující úcinné mnozství výse uvedeného prostredku a zpusob jeho prípravy.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká stabilních vodných injikovatelných přípravků, které jsou prosté produktů odvozených z lidského krevního séra a které si udržují vysokou biologickou aktivitu a vysokou chemickou a vysokou fyzikální stabilitu interferonu typu alfa po dlouhou dobu.

Dosavadní stav techniky

US patent 4 496 537 uvádí biologickou stabilní alfa-interferonové vodné formulace, obsahující alfa-interferon, albumin z lidského séra a alanin nebo glycin, vodu a ůstojný systém pro udržení pH na 6,5 až 8,0. Albumin z lidského séra („HSA“) působí jako stabilizátor alfa-interferonu a zabraňuje ztrátám alfa-interferonu z roztoku následkem tvorby povlaků a/nebo absorpcí alfainterferonu na stěnách z nerez oceli a skla směšovacích nádob, výrobního zařízení a skladovacích nádob. Formulace v roztoku, obsahující alfa-interferon a HSA, si udržují chemickou a biologickou stabilitu alfa-interferonu při skladování roztoků při 2 až 8 °C po dlouhou dobu, tj. více než dva roky.

Celosvětová epidemie AIDS v nedávné minulosti měla za následek, že registrační agentury požadují od výrobců, aby produkty, jako je alfa-interferon které obsahují produkty odvozené z lidské krve, jako je HSA, byly opatřeny varováním.

Existuje nutnost přeformulovat alfa-interferonové rozpuštěné produkty, aby se získaly rozpuštěné formulace prosté produkty z lidské krve, jako je HSA, přičemž by se ve vodě rozpuštěným formulacím zachovala po dlouhou dobu skladování vysoká chemická stabilita, vysoká fyzikální stabilita a vysoká biologická alfa-interferonová aktivita.

Podstata vynálezu

Tento vynálezu se týká stabilního injikovatelného prostředku s vysokou biologickou aktivitu interferonu typu alfa a prostý produktů odvozených z lidské krve, obsahujícího:

a) 0,1 x 10⁶ až 100 x 10⁶ m.j./ml interferonu typu alfa;

b) ůstojný systém pro udržení pH v rozmezí 4,5 až 7,1;

c) účinné množství chelatačního činidla v rozmezí 0,01 až 1 mg/ml v závislosti na množství interferonu s bodu a), přičemž chelatační činidlo je dihydrogenethylendiamintetraacetát disodný nebo kyselina citrónová;

d) množství stabilizátoru vybraného z polyoxyethylen(20)sorbitan-monolaurátu a polyoxyethylen(80)sorbitan-monooleátu v rozmezí 0,01 až 1,0 mg/ml v závislosti na množství interferonu z bodu a), postačující ke stabilizaci interferonu typu alfa proti jeho ztrátě;

e) účinné množství chloridu sodného jako ionizačního činidla v rozmezí 1 až 10 mg/ml v závislosti na množství interferonu z bodu a);

f) účinné množství protimikrobiálního konzervačního činidla vybíraného z m-kresolu, fenolu, methylparabenu, propylparabenu nebo jejich směsí, přičemž účinné množství m-kresolu je v rozmezí 0,5 až 2 mg/ml, účinné množství fenolu je v rozmezí 0,5 až 5 mg/ml, účinné množství

-1 CZ 296961 B6 methylparabenu je v rozmezí 0,6 až 1,8 mg/ml a účinné množství propylparabenu je v rozmezí 0,06 až 0,18 mg/ml, vše v závislosti na množství interferonu z bodu a); a

g) množství vody pro injekce postačující pro přípravu roztoku ze shora vyjmenovaných složek;

přičemž tento prostředek je prostý činidla pro zvětšení objemu.

Tento vynález také poskytuje stabilní vodný injikovatelný prostředek s vysokou biologickou aktivitou interferonu typu alfa a prostý produktů odvozených z lidské krve, který obsahuje:

a. Ο,ΙχΙΟ⁶ až lOOxlO⁶ m.j./ml interferonu typu alfa;

b. ústojný systém, dostačující pro dodržení pH roztoku v mezích 4,5 až 7,1;

c. 0,01 až 1 mg/1 dihydrogenethylendiamintetraacetátu disodného;

d. 0,1 až 1 mg/ml derivátu sorbitan-mono-9-oktadecenoát-poly(oxy-l,2-ethandiyl)u;

e. 1 až 9 mg/ml chloridu sodného;

f. účinné množství protimikrobiálního činidla, vybraného z m-kresolu, fenolu, methylparabenu nebo směsi z nich; a

g. vodu pro aplikaci v injekcích v množství dostačujícím na doplnění do 1 ml.

Ve výhodném provedení tento vynález poskytuje stabilní vodný injikovatelný prostředek obsahující:

mg/1

a) alfa-2-interferon 5 x 10⁶ až 50 x 10⁶ m.j.

b 1.) dihydrogenfosforeČnan sodný bezvodý1,8 b2.) monohydrogenfosforečnan sodný monohydrát1,3

c) dihydrogenethylendiamin-tetraacetát disodný0,1

d) stabilizátor vybíraný z polyoxyethylen(20)sorbitan-

-monolaurátu a polyoxyethylen(80)sorbitan-monooleátu 0,1

e) chlorid sodný7,5 fl.) methylparaben1,2 f2.) propylparaben0,12 a

vodu pro injekce doplněk do 1 ml, přičemž tento prostředek je prostý činidla pro zvětšení objemu.

V jiném výhodném provedení tento vynález dále poskytuje stabilní vodný injikovatelný prostředek obsahující:

-2CZ 296961 B6 mg/1

a) alfa-2-interferon 5 x 10⁶ až 50 x 10⁶ m.j.

bl.) dihydrogenfosforečnan sodný bezvodý1,8 b2.) monohydrogenfosforečnan sodný monohydrát1,3

c) dihydrogenethylendiamin-tetraacetát disodný0,1

d) stabilizátor vybíraný z polyoxyethylen(20)sorbitan-monolaurátu a polyoxyethylen(80)sorbitan-monooleátu 0,1

e) chlorid sodný7,5

f) m-kresol 1,5 vodu pro injekce doplněk do 1 ml.

Tento vynález rovněž poskytuje způsob přípravy stabilního vodného injikovatelného prostředku s vysokou biologickou alfa-interferonovou aktivitou a prostého produktů odvozených z lidské krve, obsahujícího smíšené účinné množství interferonu typu alfa a ústrojného systému, schopného udržet pH v mezích 4,5 až 7,1 a chelatační činidlo, derivát sorbitan-mono-9-oktadecenoátpoly(oxy-l,2-ethandiyl)u, ionizační činidlo, protimikrobiální konzervační činidlo a dostatečné množství vody pro vytvoření roztoku. Ve výhodném provedení přípravy podle tohoto vynálezu se roztok připraví a udržuje v podstatě bez rozpuštěného kyslíku a s polštářem inertním atmosféry nad roztokem s méně než 4 % objemovými kyslíku.

Podrobný popis

Bylo vybráno specifické množství specifického souboru přísad, které umožňují vyvinout vodný alfa-interferonový prostředek, který neobsahuje albumin z lidského séra, avšak podržuje se vysokou chemickou, biologickou a fyzikální stabilitu interferonu alfa při skladování při 2 až 8 °C po dlouhou dobu nejméně 24 měsíců.

Termín „prosté produktů odvozených z lidského krevního séra“, tak, jak je zde použit, se vztahuje k prostředkům podle tohoto vynálezu a znamená, že při přípravě roztoku prostředků podle tohoto vynálezu se nepoužívají žádné z lidské krve odvozené produkty, jako je HSA.

Termín „vysoká chemická stabilita“, tak, jak je zde použit v odkazech na interferon typu alfa, použitý v prostředích podle tohoto vynálezu, znamená zachování nejméně 85 %, výhodně 85 až 100 % své chemické neporušenosti při skladování při 2 až 8 °C po dobu nejméně 24 měsíců. Viz tabulky 1 a 2. Chemická neporušenost se stanovuje měřením obsahu proteinu metodou HPLC (vysokotlaká kapalná chromatografie), jak uvádí T.L. Nagabhusan a kol. v článku nazvaném „Characterization of Genetically Engineered ALFA-2 Interferon - Charakteristika geneticky upraveného alfa-2-interferonu“, strany 79 až 88, zveřejněném v Interferon Research Clinical Application and Regulátory Consideration - Interferonové výzkumné klinické a aplikační a regulační úvahy, Zoon a kol., vyd., Elsevier Science Publishing Co., Inc. 1984 (Viz výsledky v tabulkách 1 až 4).

Termín „vysoká biologická stabilita“, tak, jak je zde použit v odkazech na interferon typu alfa použitý v přípravcích podle tohoto vynálezu, znamená zachování nejméně 75 %, výhodně 85 %, ještě výhodněji 90 až 100 % své biologické aktivity při skladování při 2 až 8 °C po dobu nejméně 24 měsíců (viz výsledky v tabulkách 1 až 4), měřeno standardní metodou inhibice cytopathického efektu (CPE) viru, jako je metoda, uváděná W. P. Protzmanem a kol., v J. Clinical Microbiology, 1985, 22, 596-599.

-3CZ 296961 B6

Termín „vysoká fyzikální stabilita“, tak, jak je zde použit v odkazech na interferon typu alfa použitý v přípravcích podle tohoto vynálezu znamená, že prostředek podle vynálezu zůstává čirý, tzn. nevykazuje zákal nebo viditelné pevné částice (tzn. částice o průměru větší než 60 až 70 pm při skladování při 2 až 8 °C po dobu nejméně 24 měsíců. Viz tabulky 1, 2 a 3. Výsledky uvedené v tabulkách 1, 2 a 3 jsou překvapující tím, že většina rozpouštěných prostředků, obsahujících proteinové produkty, jako interferon typu alfa, mají tendenci vytvářet vizuálně pozorovatelné pevné částice (tzn. částice s průměrem větším než 60 až 70 pm) při dlouhém skladování, dokonce i při teplotách 2 až 8 °C. Zkušební metoda, použitá pro stanovení pevných částic v rozpuštěném prostředku podle tohoto vynálezu (viz tabulky 1 až 4), je popsána v The Uniter States Pharmacopeia (USP) - Lékopis USA/The National Formulary - Národní lékopis USP 23/NF 18, vydala United States Pharmacopeial Convention, lne., 1995, Rockville, Maryland; viz fyzikální test <78> na stranách 1813 až 1816. Metoda, použitá pro stanovení vizuálního popisu rozpuštěných prostředků podle tohoto vynálezu, je rovněž popsána v USP jako „Obecné požadavky testů a zkoušek <1> injekcí“ na stranách 1650 až 1652.

Bylo zjištěno, že přidáním chelatačního činidla k prostředkům podle tohoto vynálezu jsou schopni vyvarovat se pevných částic. Typická vhodná chelatační činidla zahrnují dihydrogen-ethylendiamin-tetraacetat disodný nebo edetat disodný nebo kyselinu citrónovou. Výhodné je použití edatatu disodného. Ačkoliv se nechceme vázat teorií, domníváme se, že edetat disodný tvoří účinně komplexy se stopovým množstvím kovových kationtů, jako jsou Zn⁺², Fe⁺², Cu⁺² nebo Al⁺³, jejichž ionty mohou být přítomné v excipientech a obalových komponentách, např. pryžových zátkách nebo těsněních. Jelikož edetat disodný má vyšší afinitu k těmto kovovým kationtům než interferony typu alfa, nedochází k interakci kovových kationtů a interferonů typu alfa, která má za následek tvorbu nerozpustných komplexů (ve formě, například, viditelných pevných částic) a ztrátu aktivity. Účinné množství chelatačního činidla je v mezích 0,01 až 1 mg/ml na základě Ο,ΙχΙΟ⁶ až lOOxlO⁶ mezinárodních jednotek (m.j.) interferonů typu alfa/ml. Výhodně se použije 0,1 mg, eetatu disodného na 5xl0⁶ až 50xl0⁶ m.j. alfa-2-interferonu.

Ústojné systémy, vhodné pro prostředky podle tohoto vynálezu, jsou ty, které udržují pH ve vodě rozpuštěných prostředků v mezích 4,5 až 7,1, výhodně 6,5 až 7,1 a nejvýhodněji 6,8. Výhodné je použití ústrojného systému dihydrogenfosforečnanu sodného a monohydrogenfosforečnanu sodného. Normálně se používá 0,005 až 0,1 molámí pufr výhodného ústrojného systému mono-/dihydrogenfosforečnan sodného pro prostředky, obsahující Ο,ΙχΙΟ⁶ až 10x10⁶ m.j. interferonů typu alfa na ml. Jiné vhodné ústrojné systémy pro udržení žádaného pH v mezích 4,5 až 7,1 zahrnují systémy citran sodný/kyselina citrónová a octan sodný/kyselina octová.

Tonizační činidlo, použitelné v tomto vynálezu, je jakékoliv činidlo, které je schopno učinit prostředky podle tohoto vynálezu iso-osmotickými s lidským sérem. Typická vhodná tonizační činidla zahrnují chlorid sodný, mannitol, glycin, glukosu a sorbitol. Použití chloridu sodného jako ionizačního činidla je výhodné.

Množství použitého tonizačního činidla je v mezích 1 až 10 mg/ml, jestliže prostředek podle tohoto vynálezu obsahuje Ο,ΙχΙΟ⁶ až lOOxlO⁶ m.j. alfa-interferonu/ml. V prostředcích podle tohoto vynálezu je výhodné použití 7,5 mg/ml chloridu sodného pro 5xl0⁶ až 50xl0⁶ m.j. alfainterferonu na 1 ml.

Sorbitan-mono-9-oktadecenoat-poly(oxy-l,2-ethandiyl)ové deriváty, jako je polysorbat 80 nebo polysorbat 20, jsou použitelné jako stabilizátor pro zamezení absorpce proteinů interferonů typu alfa, jako je alfa-2b-interferon na nerezocelové a skleněné plochy zařízení, které se používá pro přípravu pojednávaných prostředků, obsahujících interferon typu alfa. Množství polysorbatu 20 nebo 80, vhodné ve prostředcích podle tohoto vynálezu, je v mezích 0,01 až 1,0 mg na ml pro formulace s obsahem Ο,ΙχΙΟ⁶ až lOOxlO⁶ m.j. interferonů typu alfa na ml. Výhodné je použití polysorbatu 80. Ještě výhodnější je použití 0,1 mg/ml polysorbatu 80 ve všech rozpuštěných prostředcích podle tohoto vynálezu. Jestliže koncentrace interferonů typu alfa, jako je alfa-2

-4CZ 296961 B6 interferon, je menší než 15xl0⁶ m.j./ml, např. 6xl0⁶ m.j./ml, tak úbytek sníží biologickou aktivitu prostředku. Překvapivě bylo zjištěno, že polysorbát 80 zabraňuje úbytku alfa-2b-interferonu a umožňuje systematicky dodávat alfa-2b-interferon bez ztráty biologické aktivity. Během vývoje prostředku podle tohoto vynálezu bylo překvapivě zjištěno, že polysorbát 80 dává vynikající chemickou a biologickou stabilitu alfa-2b-interferonu ve srovnání s jinými neiontovými povrchově aktivními činidly, např. s produkty Pluronic F127 a Pluronic F-68.

Množství interferonu typu alfa, použitelné ve prostředcích podle tohoto vynálezu, je v mezích Ο,ΙχΙΟ⁶ až lOOxlO⁶ m.j./ml, výhodně 5xl0⁶ až 50xl0⁶ m.j./ml.

Termín „interferon typu alfa“, tak, jak je použit, znamená rodinu vysoce homologických, druhově specifických proteinů, které inhibují virovou reprodukci a buněčnou proliferaci a tlumí imunitní odezvu. Typické vhodné interferony typu alfa zahrnují alfa-2a-interferon, jako je ROFERON A alfa-2a-interferon od firmy Hoffmann-La Roche, Nutlex, N.J., alfa-2-interferon, jako je INTRON A alfa-2b-interferon of firmy Schering Corporation, Kenilworth, N.J., alfa-2C-interferon, jako BEROFOR alfa-2c-interferon od firmy Boehrinter Ingelheim Pharmaceutical, lne., Ridgrield, CT., alfa-nl-interferon, vyčištěná směs přírodních alfa-interferonů, jako je SUMIFERON od firmy Sumitomo, Japonsko, nebo jako je WELLFERON alfa-nl-interferon od The Welcome Foundation Ltd., Londýn Británie, nebo konsensuální alfa-interferon od Amgen, lne., Newbury Park, Cal., nebo interferon alfa-n3, směs přírodních interferonů, vyráběná Interferon Sciences a k dostání u Purdue Frederick Co., Norwalk, CT., pod obchodním jménem ALFERON. Použití alfa-2a- nebo alfa-2b-interferonu je výhodné. Použití alfa-2b-interferonu je ještě výhodnější.

Zjištěná vhodná protimikrobiální konzervační činidla v tomto vynálezu zahrnují m-kresol, fenol, methylparaben a propylparaben a směsi shora vyjmenovaných konzervačních činidel, např. směsi fenol-propylparaben. Zjištěné vhodné účinné množství m-kresolu v tomto vynálezu je v mezích 0,5 až 2 mg/ml pro prostředky s obsahem Ο,ΙχΙΟ⁶ až lOOxlO⁶ m.j./ml interferonu typu alfa. Výhodné je použití 1,5 mg/ml m-kresolu pro prostředky s obsahem 5xl0⁶ až 50xl0⁶ m.j./ml alfa-2b-interferonu.

Účinné množství fenolu, zjištěné jako užitečné, je v mezích 0,5 až 5 mg/ml pro rozpuštěné prostředky, obsahující Ο,ΙχΙΟ⁶ až lOOxlO⁶ m.j./ml interferonu typu alfa.

Účinné množství methylparabenu je v mezích 0,6 až 1,8 mg/ml a množství propylparabenu je v mezích 0,06 až 0,18 mg/ml, jestliže prostředky podle tohoto vynálezu obsahují 0,1x10® a lOOxlO⁶ m.j./ml interferonu typu alfa.

Výhodné je použití 1,2 mg/ml methylparabenu v kombinaci s 0,12 mg/ml propylparabenu, jestliže prostředky podle tohoto vynálezu obsahují Ο,ΙχΙΟ⁶ x lOOxlO⁶ m.j./ml interferonu typu alfa.

Použití m-kresolu jako protimikrobiálního konzervačního činidla je ještě výhodnější.

Voda, která se používá pro přípravu prostředků podle tohoto vynálezu, je výhodně voda pro injekce.

Během vývoje vodných roztoků prostředků podle tohoto vynálezu, které si mají podržet vysokou biologickou aktivitu, jakož i vysokou chemickou a vysokou fyzikální stabilitu interferonu typu alfa po dlouhou dobu skladování bez použití HSA jako stabilizátoru, bylo zjištěno, že množství sorbitan-mono-9-oktadecenoat-poly(oxy-l,2ethandiyl)ového derivátu, jako je polysorbát 80, od něhož se požaduje, aby působil jako stabilizátor pro interferon typu alfa, má přímý vliv na účinné množství protimikrobiálního konzervačního činidla, které by mohlo být přidáno k prostředku ve vodném roztoku pro zajištění řádné protimikrobiální ochrany pro tento prostředek s přihlédnutím k různým světovým zdravotnickým registračním požadavkům, bez vyvolání nežádoucí tvorby zákalu roztoku.

-5CZ 296961 B6

Tlak, jestliže byl v prostředcích podle tohoto vynálezu přítomen výhodný stabilizátor, polysorbat 80, ve výhodném účinném množství 0,1 mg/ml, tak účinné množství výhodného protimikrobiálního konzervačního činidla, např. m-kresolu, které mohlo být přidáno bez vyvolání zákalu tohoto prostředku, bylo zjištěno jako kritické. Například, jestliže množství m-kresolu, přidaného k prostředku, který obsahuje 0,1 mg/ml polysorbátu 80, jak je uvedeno v příkladu 3, bylo zjištěno na více než 1,75 mg/ml, tak bylo pozorováno zkalení. Podobný problém zakalení byl pozorován, když množství polysorbátu 80 ve výhodném prostředku bylo měněno od 0,01 do 1 mg/ml. Žádané zakalení nebylo pozorováno, jestliže bylo přidáno 1,75 mg/ml nebo méně, výhodně 1,5 mg/ml m-kresolu k prostředku, který byl připraven v souladu s postupy příkladu 3, který obsahovala 0,1 mg/ml polysorbátu 80. Tento kritický stav byl rovněž pozorován s parabeny a fenolem, jestliže byly použity spolu s protimikrobiálními konzervačními činidly. Pro prostředky podle tohoto vynálezu, obsahující 0,01 až 1 mg/ml polysorbátu 80, má být účinné množství methylparabenu nikoliv větší než 1,2 mg/ml, jestliže je použit spolu s 0,12 mg/ml propylparabenu, aby se předešlo zakalení, a účinné množství fenolu (když je použit místo parabenů) má být v mezích 0,5 až méně než 4 mg/ml, aby se předešlo zakalení.

Prostředky interferonu alfa typu jsou použitelné pro léčení řady chorobných stavů, jako je renální buněčný karcinom, AIDS-příbuzný Kaposiho sarkom, chronická a akutní hepatitida B, chronická a akutní non-A a non-B/C hepatitida. Prostředky podle tohoto vynálezu jsou použitelné pro léčení těchto chorobných stavů výhodně ve formě injekcí vodných roztoků.

Příklady provedení vynálezu

Následující neomezující příklady ilustrují přípravu vodných roztoků interferonů alfa typu.

Způsoby, vyjmenované po příkladu 5, se používají pro přípravu prostředků podle tohoto vynálezu u příkladů 1 až 5.

Voda, která se používá pro přípravu formulací podle tohoto vynálezu, je výhodně voda pro injekce.

Během vývoje vodných roztoků formulací podle tohoto vynálezu, které si mají podržet vysokou biologickou aktivitu, jakož i vysokou chemickou a vysokou fyzikální stabilitu interferonu typu alfa po dlouhou dobu skladování bez použití HSA jako stabilizátoru jsme zjistili, že množství sorbitan- mono~9-okradecenoat-poly(oxy-l,2ethandiyl)ového derivátu, jako je polysorbat 80, od něhož se požaduje, aby působil jako stabilizátor pro interferon typu alfa, má přímý vliv na účinné množství protimikrobiálního konzervačního činidla, které by mohlo být přidáno k formulaci ve vodném roztoku pro zajištění řádné protimikrobiální ochrany pro tuto formulaci s přihlédnutím k různým světovým zdravotnickým registračním požadavkům, bez vyvolání nežádoucí tvorby zákalu roztoku.

Tak, jestliže byl ve formulacích podle tohoto vynálezu přítomen výhodný stabilizátor, polysorbát 80, ve výhodném účinném množství 0,1 mg/ml, tak účinné množství výhodného protimikrobiálního konzervačního činidla, např. m-kresolu, které mohlo být přidáno bez vyvolání zákalu této formulace, bylo zjištěno jako kritické. Například, jestliže množství m-kresolu, přidaného k formulaci, která obsahuje 0,1 mg/ml polysorbátu 80, jak je uvedeno v příkladu 3, bylo zvětšeno na více než 1,75 mg/ml, tak bylo pozorováno zkalení. Podobný problém zakalení byl pozorován, když množství polysorbátu 80 ve výhodné formulaci bylo měněno od 0,01 do 1 mg/ml. Žádné zakalení nebylo pozorováno, jestliže bylo přidáno 1,75 mg/ml nebo méně, výhodně 1,5 mg/ml m-kresolu k formulaci, která byla připravena v souladu s postupy příkladu 3, která obsahovala 0,1 mg/ml polysorbátu 80. Tento kritický stav byl rovněž pozorován s parabeny a fenolem, jestliže byla použity spolu s protimikrobiálními konzervačními činidly. Pro formulace podle tohoto

-6CZ 296961 B6 vynálezu, obsahující 0,01 až 1 mg/ml polysorbatu 80 má být účinné množství methylparabenu nikoliv větší než 1,2 mg/ml, jestliže je použit spolu s 0,12 mg/ml propylparabenu, aby se předešlo zakalení a účinné množství fenolu (když je použit místo parabenů) má být v mezích 0,5 až méně než 4 mg/ml, aby se předešlo zakalení.

Formulace interferonu alfa typu jsou použitelné pro léčení řady chorobných stavů jako je renální buněční karcinom, AIDS-příbuzný Kaposiho sarkom, chronická a akutní hepatitida B, chronická a akutní non-A a non-B/C hepatitida. Formulace podle tohoto vynálezu jsou použitelné pro léčení těchto chorobných stavů výhodně ve formě injekcí vodných roztoků.

Příklady provedení vynálezu

Způsoby, vyjmenované po příkladu 5, se používají pro přípravu formulací podle tohoto vynálezu u příkladů 1 až 5.

Příklad 1

aktivní substance:	alfa-2b-interferon	0,01xl0⁶až lOOxlO⁶ m.j./ml*
pufr:	fosforečnan sodný (mono-/ dihydrogen)	0,005-0,1 M
chelatační činidlo:	edetat disodný	0,01-1 mg/ml
stabilizátor:	polysorbat 80	0,01-1 mg/ml
činidlo pro nastavení tonusu:	chlorid sodný	1-9 mg/ml
protimikrobiální konzervační činidlo:	m-kresol nebo fenol nebo methylparaben propylparaben	0,5 - 1,75 mg/ml 0,5 - <4 mg/ml 0,6 - 1,2 mg/ml 0,06 - 0,12 mg/ml
rozpustilo:	voda pro injekce	doplněk do 1 ml

*) m.j. - mezinárodní jednotky

Příklad 2

alfa-2b-interferon	10xl0⁶mj/ml
dihydrogenfosforečnan sodný bezvodý	1,8 mg/ml
monohydrogenfosforečnan sodný monohydrát	1,3 mg/ml
edetat disodný	0,1 mg/ml
polysorbat 80	0,1 mg/ml
methylparaben	1,2 mg/ml
propylparaben	0,12 mg/ml
chlorid sodný	7,5 mg/ml
voda pro injekce doplněk do	lml

Příklad 3 alfa-2b-interferon dihydrogenfosforečnan sodný bezvodý monohydrogenfosforečnan sodný monohydrát edetat disodný polysorbat 80 m-kresol chlorid sodný voda pro injekce doplněk do

10xl0⁶mj/ml

1,8 mg/ml

1,3 mg/ml

0,1 mg/ml

1.5 mg/ml

7.5 mg/ml ml

Příklad 4

Formulace z příkladu 3 byla připravena s 6xl0⁶ m.j./ml alfa-2b-interferonu v souladu se způsobem přípravy podrobně zde dále popsaným s použitím ošetření roztoku dusíku při dodržení ne více než 4 % objemových kyslíku v plynovém polštáři.

Ampule, obsahující značený objem 3 ml roztoku, byly skladovány při 30, 25 a 4 °C. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 3.

Příklad 5

Formulace z příkladu 4 byla připravena v souladu se způsobem přípravy zde dole podrobně uvedeným s tou výjimkou, že dusík nebyl proháněn roztokem, aby nebyl nad roztok zaveden a objem kyslíku v plynovém polštáři byl cca 20 % jako okolním vzduchu.

Ampule, obsahující značený objem 3 ml roztoku, byly skladovány při 30, 25 a 4 °C. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 4.

Podobné výsledky jsou očekávány, jestliže alfa-2b-interferon v příkladech 1 až 5 je nahrazen ekvivalentním množstvím alfa-interferonu z produktů Roferon A, Wellferon nebo Sumiferon.

-8CZ 296961 B6

Tabulka 1

Údaje o stabilitě alía-2b-interferonu z příkladu 2

1 ...... f............. 1 1 1 Idoba \| tepl. j prot-ivirový j obsah proteinu i pevné částice	1-------------1 I popíši i 1 •1 1 1 1 i 1 1 1 1 1
1 1 I měsíc 1 1 I	1 1 \| °c ! 1 1	I test 1	(CPE)	\| (test HPLC) \| 1 1
1 Γ ixlQs \| \|m. j . \| \| /ml \| I \|	%L. S.	1 Γ \| mcg/ml j SípŮvod . i 1 1 1 1 1	1 Γ 12:10 \|; 1 μκι 1 1 1	>25 μπι	1 jžSO 1 urn 1
\|		1 1	I		1 1		1	1 1
\| původní	1 10,o)	100	1 42,5 l	\| 100 I	1 40 \|	3	1 i 1	i ccs*} \| I
1 1 3 \|	1 1 4 I	1 1 1 9,θ\| \| i	90	1 [ 42,4 1	í I 100 \|	1 1 1 16 1 i 1	13	1 1 11 I	1 1 1 ccs \|
1 1 6 »	i 1 4	1 1 1 10,oj \| 1	100	1 1 41,8 t	1 j 98 \|	1 1 1 8 I i [	3	1 i I i	1 1 1 ccs \| I I
1 1 9	i 1 4 i	1 Γ [ 10,o\| 1 1	100	1 i 43,3 1	1 j 102 1	1 1 i 52 i 1 \|	3	1 1 0 1	1 1 1 ccs \| \| I
1 12 1	1 ! 4 I	1Γ 1 10,oj I 1	100	i 1 44,3	[ 1 104 i .	1 1 1 17 1 I 1	4	1 1 2 i	1 1 \| CCB j
1 j 18 I	1 1 4 i	lΓ i 9,s\|	98	1 1 41,5 í	1 \| 98 I	1 1 1 6 1	1	1 1 o J	i 1 1 CCE j i· 1
\| I 24 1........	1 1 4 j	ir 1 10,oj J L	100	1 1 39,5 J	I \| 93 1	1 1 1 5 I J J	1	1 1 0 J	1 I 1 ccs \| 1 1

*) ccs - čirý, bezbarvý rpztok v podstatě bez viditelných částic

-9CZ 296961 B6

Tabu1ka 2

Údaje o stabilitě alía-2b-interíeronu z přikladu 3

t t i i 1 doba (tepl. 1 1 1 1	π---------- .\|protivirový	1 i 1 obsah proteinuípevné částice	Ί-------------1 I popis j 1 i J 1
1 test 1	(CPE)	I (test 1	HPLC) \| t
1 í I měsíc i	°C	I i JxlO^c \|	%L. S .	Ί 1 j mcg/ml\|%původ.	I >10	! >25	1 I >50	1 I I l
i 1 1 1 ! L		\|m. j . \| 1 /ml 1 \| I		1 1 I	1 I I	1 Mm f \| .....	\| Mm 1 J	i ym 1	í I I I \| I
1 í původní	1 1 i 10,3\| \| 1	103	1 1 37,9	l I 100 \| .	1 \| 68 1 .	1 1 4 í..........	i 1 3 1.......	I I I CCS* \| \| i
I Γ 1 1 ! ! 1	4	1 1 1 io I 1 1	100	l 1 38,2 !	1 1 ιοί 1	1 I 142 J	1 I 24 \|........	1 I 23 -l	1 1 1 1 ! 1
1 1 3 I	4	1 1 1 10 \|	100	i \| 38,9 I	1 \| 103 1 . . .............	1 I 311 1	1 I 63	1 I 35 1	1 1 \| CCS \| í 1
1 r 1 6 1	4	1 1 ΐ 10 1 ! 1	100	! 1 40,0 f	1 I 105 1	! 1 206 t	1 17 J	1 16 J	1 CCS 1
1 r 1 9 i	4	1 1 í io I i j	100	! ! 37,1 [	I 1 97,9 J	1 1 211 1	1 1109 \|	I 1 50 J	1 1 1 ccs I \| 1
f t 1 12 \| 1 I	4	1 10 i \| 1	100	1 \| 36,6 l	1 1 96,6 1	l I 300 1	1 I 65 J	i 1 1 12 J	\| { \| CCS i .1,............ I
1 1 15 \| 1,L	4	1 1 1 io ! 1 f	100	1 1 36,1 1	\| 95, 31123 J-ί	1 1 8 J	1 1 6 J	1 1 ! ccs j J!

*) ccs - Čirý, bezbarvý rpztok v podstatě bez viditelných

ČástlC

-10CZ 296961 B6

Tabulka 3

1-----Γ~~ I doba\|tepl . i i 1 1	1 1 I po loha \| prot. i v i rový	1 1 !obsah prOteinui I (test HPLC) \| \| i	1 ' ; m-kresol test	T~~ -) 1 ! ! i H i 1 ph 1 ! 1 1 1 1 1
!ampule 1 *) 1 1 1 1 I	l \| test 1	(CPE)
i 1 Imes.\| 1 1 I 1	=*c	1 i \|xio« \| \|m.j. \| \|/ml I 1 1	Ξ.	1 1 1 \|mcg/ml\| Xp&vod. \| 1 ! 1 1 1 1 J i !	1 mg/mi i «L. S 1 1 1..........
i 1 j původní	1 1 \|	1 1 1 6,48\| 1 1	108	1 1 25,7 1 ............. .	T1 1 100 1 1 ................!	1,47	Ί ! 98,0 \|	i1 le.si1 I 1
1 I i !	30	1 1 up 1	1 ! 1 6,θθ\| 1 1	100	1 1 24,8 I	1 1 1 96,5 i \| I	1,47	1 Í98,0 \|	! 6,9θ\| \| I
i i 1 1 ! > i	1 I INV 1 „	1 1 1 6,θθ\| [.........I	100	1 1 24,8 1	i 1 1 96,5 \| L .... j	1,47	1 i 98,0 1	1\| !e,9oi 1 I
1 1 i ! 1 o 1		1 I up \|_______________	1 1 1 6,00)	100	1 I 23, 5 I.............	Γ 1 1 91,4 i 1 i	1,46	1 1 97,3 I	T 1 16,sel I {
1 3 i i ! 1 1	4	1 \| INV	1 1 1 6,θθ\| I 1	100	1 1 24,2 \|	i i 1 94,2 \| 1 i	1,48	1 1 98,7 1	Í6,87\| \| 1
1 Γ 1 1 1 -> 1	25	1 1 UP 1	1 6,θθ\| 1 1	100	1 1 21,7 1	1 I 1 84,4 \|	1,43	1 1 95, 3 \|	“T......j í6,88! I I
1 3 \| i 1 1 1	1 \| INV 1	1 1 j 6,θθ\|	100	1 1 21,7 1	1 I 1 84,4 \|	1,47	1 i 98,0 1......	t 1 16,88I
1 1 1 1		1 I up i	1 1 1 6,θθ\|	100	1 1 24,6 L..........................	1 1 1 95.7 !	1,46	1 1 97,3	1 1 16,84) \| i
1 6 1 1 i I I	4	I i INV t	1 1 i e.ool 1 I	100	1 i 24, 3 1	1 1 1 94,6 i	1,45	1 ΐ 96,7 !	1 i 6,841 \| i
1 i 1 1 i 6 1 1 !	25	1 ] UP I	1 1 1 5,5ó\| 1 1	92,3	1 \| 20,5 1	rr 1 79,8 1 1 I	1,45	1 ! 96,7 I	Π I 16,85 i
1 j INV	1 1 1 6,00 i 1 1	100	1 1 20,4 1	! 79,4 I [ 1	1,44	1 \|96,0 1	i 1 16,85\|
1 1 1 1 ! 12 í 1 l 1 i 1 f		1 1 up I____________________________________	i 1 i 6,001 1 L	100	1 1 23,4 í	i 1 1 91,0 \| l 1	1,47	1 I I i 98,016,84!
4	1 ! INV 1	i 1 i 6,00Í I 1	100	1 1 23,4 1	1 1 ! 91,0 i J L	1,47	i l i 1 97,3\|&,84\| 1 i

*) UP - svisl© INV - převráceně

- 11 CZ 296961 B6

Tabullka 3 - pokračování

í 1 I---Γ I doba íteplotajpoloha!	pevné částice	1 i 1 popis! 1 ΐ 1 i 1 i
? 1 1 1 i 1 Imesícel °C \| 1	i ampule\| ! l· 1 1 . 1...........]
1 í ! >10 um\|ž25 um\|>50 μιπί .....................\|........... i !
1 \| původní I	1 1 i 1	1 1 1 23 ΐ 2 \| 0 \| 1 1 1	f 1 CCS* 1
I f 1 1 II 1 30	i i 1 up \| i-------------------------l·	\| ήj 109 í 61 \| 16 i —--1--—1----1	ccs j ------------------------1

I 1 I INV | 55 1 11 | 2 I ccb

! ! 3 1 I.......	1 í 4 i 1	! up l	1 29 ;	1 1 1 2 i i i	! o 1	~Ί---------1 ! ccs í
í ! INV 1	I ! 1 59 i 1 1	1 1 f 1 1 23 \| I 1	! ί 2	i 1 i	1 f ccs \| 1
1	' 1	1	1 1	1 í		1	---------------------1
1 1 ->	1 ] 25	\| UP 1	1 141 \|	ί 76 \| í f	17	1 l	ccs \|
1 3	1	1 1	! ‘		1	I
i \|	1 \|	ΐ INV	1 49 I	16 \| ' 1	3	1 ! 1	t CCS i \|
1 1 I	1 i	! UP í	í 1 1 59 I ! 1	í 1 21 \| 1	3	1 1 1	I ccs \|
1 o	1 4	I	1 1	1		1	1
!	1 1	i INV	i 68 j i \|	20 í 1	4	1 I	ccs \| \|
1 1	1 ! ! 25	í UP I	i 1 1 38 \|	1 4 \| 1	0	!	1 ccs \|
1 o	1	1 1	1		1	1
1 I	1 ......1	I INV I	! 57 \| I 1	8 1 i	0	1 \|	ccs i I
1 I 112	! 1 1 _Λ	1 1 up i	ί 1 ! 21 1 i 1	1 2 1 \|	0	Γ 1 I	CCS \| 1
1 4	1	1 j	1			1
i	1 1	I INV	í 18 j	2 i	0	!	1 ccs 1
1	1	t f	J 1	1			1

*) cce - čirý, bezbarvý roztok v podstatě bez viditelných částic

-12CZ 296961 B6

Tabulka 4

Údaje o stabilitě alfa-2b-iriteríeronu z přikladu 5

IxlO¹⁵ !%L.S. Imcg/ml |%p€kvod. [mg/ml í%L. S.I |_w.j. i I I I I[

l./ml <>C

PH

I

*) UP svisle INV - převráceně

- 13CZ 296961 B6

Tabulika 4 - pokračováni

1 : í doba i í ! 1 1 (měsíce\| t 1	1-----------------------------j-------------------------_r i teplota(poloha i 1 Iampule(	pevné částice i 1 I	1----------------------------------) (popis 1 1 ΐ i ( ! 1 I 1
1 °c	1 * > Γ i ! \| \|	j \| >10 pm(>25 pmj i 1	1 1 1>50 pm 1 1
1 \| pCvodní	1 r ! i i I	144	1 1 ! 4 I	1 1 í 4 ( : I	1 1 i ccs*I 1
í 1 1 1 1 , 1	30	1 1 1 up \| 1 I	89	1 1 ! 3 1 1 1	1 i I I \|	I ccs \|
1 i 1 i i f 1	1 T 1 INV I ( \|	64	1 1 1 1 ! \| ]	: 1 o ( I	. I ccs \|
( ! 1 3 ( 1 i ! 1		τ r í υρ ( í 1	39	1 1 i 1 i	1 □ ! .......1	^! ί CCB \| \|
4	\| j- ΐ INV [ 1 1	77	í 1 1 19 ! 1 !	1 6 1 4	1 ccs ! 1
1 1 ! 1 ! 3 i 1 1 1 (	25	1 Γ i up I I 1	57	1 1 ! i 1 1 !	1 o 1 1	1 ccs j \|
Γ Γ \| INV \| j 1	140	1 1 1 24 ΐ .1...... í	1 1 i 1	1 ccs ! I
r π 1 i í £ 1		í Γ i υρ 1 I I	66	i í i 1 i 1 1	1 0 i .... 1	1 1 CCB 1 1
1 6 1 1 1 I I	4	( INV \| 1 I	220	I 1 i 37 ( i l	1 27 \| I	1 1 ccs \| I
I f. i 1 ! 6 \| 1 1 I I	25	1 Γ 1 UP 1	92	1 I i 3 \| ! I	1 0 I l	1 CCB ( \|
i Γ i INV \| I i	241	1 1 1 5 I 1 1	0 i 1	1 ccs ( 1
! 1 112 1 1 1 1.L		1 Γ 1 UP \| \| \|	63	1I I 1 i \|. 1	1 o 1 1	1 ccs (
4	í Γ i INV \| I J	119	1 1 i 6 ! J l	...................1 1 1 1 !	1 CCB \| 1

*) ccb - čirý, bezbarvý roztok v podstatě bez viditelných

Částic

- 14CZ 296961 B6

Způsob přípravy pro příklady 1 až 5

A. Směsné, paraben obsahující, vodné roztoky prostředku, uvedené v příkladu 2

1. Do vhodné duplikátové směšovací nádoby opatřené míchadlem se při teplotě vyšší než 70 °C vsadí 80 % vody pro injekce.

2. Odděleně se vsadí 30 % vody pro injekce do jiné vhodné nádoby. Voda se ochladí a udržuje se v rozmezí teplot 20 až 25 C. Vodou a nad vodou, která se použije pro uvedení šarže na konečný objem, se začne prohánět filtrovaný dusík, aby se obsah rozpuštěného kyslíku udržel na nebo dostal pod úroveň 0,25 pm.

3. Do směšovací nádoby z kroku 1 se vsadí a za míchání rozpustí methylparaben, přičemž se teplota roztoku udržuje v rozmezí 70 až 80 °C.

4. Roztok z kroku 3 se ochladí na teplotu mezi 20 a 25 °C. Roztokem a nad roztokem se prohání filtrovaný dusík. Hladina rozpouštěného kyslíku se udržuje na nebo pod 0,25 ppm.

5. Do roztoku z kroku 4 se dávkují a za míchání rozpouštějí následující přísady, přičemž se pokračuje v prohánění dusíku a udržování dusíkového polštáře:

dihydrogenfosforečnan sodný bezvodý monohydrogenfosforečnan sodný monohydrát edetát disodný chlorid sodný

6. Přeruší se vhánění dusíku do roztoku z kroku 5. Ve směšovací nádobě se udržuje dusíkový polštář.

7. V samostatné nádobě se nadávkuje a rozpustí polysorbat 80 v 50 ml vody pro injekce (pro vsázku o velikost 1 litr). Roztok polysorbatu 80 se přenese do roztoku z kroku 6.

8. Zkontroluje se pH roztoku. Má být mezi 6,6 a 7,0. Úprava pH není třeba.

9. Za míchání se nadávkuje do roztoku z kroku 8 roztok materiálu drogy alfa-2b-interferon.

10. Přidá se voda pro injekce, kterou byl proháněn dusík (z kroku 2) a šarže se doplní na finální objem. Roztokem se mírně míchá do dosažení homogenizace.

11. Roztok se asepticky přefiltruje přes sterilizovaný filtr, který byl promyt a vyzkoušen co do celistvosti. Sterilizovaný roztok se sbírá do sterilizovaná náplňové nádoby, ve které byl vytvořen polštář sterilně filtrovaného dusíku. Provádí se test integrity filtru a filtrace.

12. V náplňové nádobě z kroku 11 se vytvoří polštář sterilně filtrovaného dusíku a nádoba se těsně uzavře.

B. Směsné, m-kresol, vodné roztoky prostředku, uvedené v příkladu 3

Způsob přípravy, použitý pro přípravu vodných roztoků s obsahem m-kresolu jako konzervačního činidla (jak je uvedeno v příkladu 3) je přesně stejný jako byl způsob popisovaný shora s tou výjimkou, že teplota roztoku v kroku 6 se udržuje mezi 20 a 25 °C a m-kresol se dávkuje po kroku 6.

-15CZ 296961 B6

C. Směsné, HSA prosté, vodné roztoky alfa-interferonové prostředky pod atmosférou okolního vzduchu

Způsob přípravy, použitý pro přípravu HSA prostých, vodných roztoků alfa-interferonových prostředků z příkladů 1 až 4, byl použit pro přípravu prostředků jako je prostředek z příkladu 5, s tou výjimkou, že všechny kroky se provádějí pod atmosférou okolního vzduchu; dusík se roztokem neproháněl ani z něho nebyl vytvořen plynový polštář a okolní vzduch (s normálním obsahem 20 % objemových kyslíku) zaplňoval prostor nad roztokem.

Pro udržení vysoké chemické, fyzikální a biologické stability je výhodné, aby voda, použitá na přípravu vodného alfa-interferonového roztoku, jakož i takto formovaný vodný alfa-interferonový roztok, byly v podstatě prosté rozpuštěného kyslíku a aby vodný roztok byl připravován a skladován pod polštářem inertní atmosféry jako je dusík, obsahující nikoliv více než 4 % objemová kyslíku. Termínem „v podstatě prosté rozpuštěného kyslíku“, tak jak je zde použit, se míní hladina kyslíku 0,25 ppm pohodlně dosáhne vháněním inertní atmosféry, např. plynného dusíku do vody, používané pro přípravu vodných roztoků (udržovaných na teplotě 20 až 25 °C) po dostatečně dlouhou dobu (např. 30 minut), aby se rozpuštěný kyslík snížil na hodnotu ne větší než 0,25 ppm. V prohánění se pokračuje po celou dobu výrobní procedury, aby se hladina rozpuštěného kyslíku udržela na 0,25 ppm. Bylo zjištěno, že vodné prostředky podle tohoto vynálezu, které mají hladinu rozpuštěného kyslíku 1 ppm a obsah kyslíku v plynném polštáři 7 % objemových, vykazovaly významně větší ztrátu chemické stability alfa-mterferonu po 3 měsících skladování při 25 °C v porovnání s podobným vodným prostředkem, který měl výhodnou hladinu rozpuštěného kyslíku 0,25 ppm a obsah kyslíku v plynovém polštáři 4 % objemová při skladování za stejných podmínek.

Vzájemné srovnání údajů o stabilitě roztoků alfa-2b-interferonu z tabulek 3 a 4 ukazuje, že není podstatný rozdíl ve stabilit mezi vodných roztoků prostředků podle tohoto vynálezu, které byly připraveny pod dusíkovou atmosférou nebo atmosférou s nízkým obsahem kyslíku podle příkladu 4 a těmi, které byly připraveny v souladu s příkladem 5 pod atmosférou okolního vzduchu, během skladování po dobu 12 měsíců při 4 °C. Na rozdíl od toho, srovnání stability alfa-2binterferonu v roztocích z příkladů 4 a 5, skladovaných při vyšších teplotách, např. 25 a 30 °C ukazuje ochranný efekt, dosažený výhodným (bezpečnějším) použitím prohánění dusíku pro vyvolání nižších hladin rozpuštěného kyslíku ve vodných roztocích při současném udržení obsahu kyslíku v plynovém polštáři na hodnotě ne vyšší než 4 % objemová.

Vodný roztok prostředku podle tohoto vynálezu se může skladovat v jakýchkoliv vhodných vymytých a sterilizovaných náplňových nádobách nebo kontejnerech jako jsou 2-ml nebo 5ml ampule typu I z flintového skla s uzávěry z šedé butylové pryže. Vodné roztoky prostředků podle tohoto vynálezu mohou být rovněž skladovány v naplněných multidávkových injekčních stříkačkách jako jsou ty, které jsou používané pro podávání léků jako je inzulín. Typické vhodné injekční stříkačky zahrnují systémy, obsahující přednaplněnou ampuli, připojenou k injekční stříkačce tužkového typu jako je výrobek Novolet Novo Pen, od firmy Novo Nordisk. Typické vhodné systémy zahrnují přednaplněné injekční stříkačky tužkového typu, které umožňují snadnou aplikaci samotným uživatelem a rovněž přesné a reprodukovatelné nastavení dávek.

Vodné roztoky prostředků podle tohoto vynálezu, jako jsou uvedeny v příkladech, mohou být rovněž lyofilizovány na rekonstituovaný prášek. Předpokládá se, že lyofilizovaný prášek interferonu typu alfa si uchová chemickou a biologickou stabilitu při skladování při 2 až 8 °C nejméně 2 roky.

Claims

1. Stabilní vodný injikovatelný prostředek s vysokou biologickou aktivitou interferonu typu alfa a prostý produktů odvozených z lidské krve, vyznačující se tím, že obsahuje:

a) 0,1 x 10⁶ až 100 x 10⁶ mj./ml interferonu typu alfa;

b) ústojný systém pro udržení pH v rozmezí 4,5 až 7,1;

c) účinné množství chelatačního činidla v rozmezí 0,01 až 1 mg/ml v závislosti na množství interferonu z bodu a), přičemž chelatační činidlo je dihydrogenethylendiamintetraacetát disodný nebo kyselina citrónová;

d) množství stabilizátoru vybraného zpolyoxyethylen(20)sorbitan-monolaurátu a polyoxyethylen(80)sorbitan-monooleátu v rozmezí 0,01 až 1,0 mg/ml v závislosti na množství interferonu z bodu a), postačující ke stabilizaci interferonu typu alfa proti jeho ztrátě;

e) účinné množství chloridu sodného jako tonizačního činidla v rozmezí 1 až 10 mg/ml v závislosti na množství interferonu z bodu a);

f) účinné množství protimikrobiálního konzervačního činidla vybíraného z m-kresolu, fenolu, methylparabenu, propylparabenu nebo jejich směsí, přičemž účinné množství m-kresolu je v rozmezí 0,5 až 2 mg/ml, účinné množství fenolu jev rozmezí 0,5 až 5 mg/ml, účinné množství methylparabenu je v rozmezí 0,6 až 1,8 mg/ml a účinné množství propylparabenu je v rozmezí 0,06 až 0,18 mg/ml, vše v závislosti na množství interferonu z bodu a); a

g) množství vody pro projekce postačující pro přípravu roztoku ze shora vyjmenovaných složek;

přičemž tento prostředek je prostý činidla pro zvětšení objemu.

2. Stabilní vodný injikovatelný prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že ústojný systém je dihydrogenfosforečnan sodný a monohydrogenfosforečnan sodný.

3. Stabilní vodný injikovatelný prostředek podle nároku 1,vyznačující se tím, že chelatační činidlo je dihydrogenethylendiamin-tetraacetát disodný.

4. Stabilní vodný injikovatelný prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že konzervační činidlo je vybráno z m-kresolu, fenolu, methylparabenu, propylparabenu nebo ze směsi těchto látek.

5. Stabilní vodný injikovatelný prostředek podle nároku 1, vy z n a č uj í c í se tím, že interferon typu alfa je alfa-2-interferon.

6. Stabilní vodný injikovatelný prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje:

a) alfa-2-interferon bl.) dihydrogenfosforečnan sodný bezvodý b2.) monohydrogenfosforečnan sodný monohydrát

c) dihydrogenethylendiamin-tetraacetát disodný mg/1

5 x 10⁶ až 50 x 10⁶ m.j.

1,8

1,3

0,1

-17CZ 296961 B6

d) stabilizátor vybíraný z polyoxyethylen(20)sorbitan-

-monolaurátu a polyoxyethylen(80)sorbitan-monooleátu 0,1

e) chlorid sodný7,5 fl.) methylparaben1,2 £2.) propylparaben0,12 a

7. Stabilní vodný injikovatelný prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje:

mg/1

a) alfa-2-interferon 5 x 10⁶ až 50 x 10⁶ m.j.

c) dihydrogenethylendiamin-tetraacetát disodný0,1

d) stabilizátor vybíraný z polyoxyethylen(20)sorbitan-

-monolaurátu a polyoxyethylen(80)sorbitan-monooleátu 0,1

e) chlorid sodný7,5

f) m-kresol1,5 a

vodu pro injekce doplněk do 1 ml

8. Výrobek vy z n a č u j í c í se tím, že zahrnuje jednodávkovou vialku, multidávkovou vialku nebo předplněnou injekční stříkačku obsahující účinné množství stabilního vodného injikovatelného prostředku podle kteréhokoliv z předchozích nároků 1 až 7.

9. Způsob přípravy stabilního, vodného injikovatelného prostředku s vysokou biologickou aktivitou interferonu typu alfa a prostého produktů odvozených z lidské krve, vyznačující se tím, že se smíchá

a) 0,1 x 10⁶ až 100 x 10⁶ m.j ./ml interferonu typu alfa;

b) ústojný systém pro udržení pH v rozmezí 4,5 až 7,1;

c) účinné množství chelatačního činidla v rozmezí 0,01 a 1 mg/ml v závislosti na množství interferonu z bodu a), přičemž chelatační činidlo je dihydrogenethylendiamintetracetát disodný nebo kyselina citrónová;

d) množství stabilizátoru vybraného zpolyoxyethylen(20)sorbitan-monolaurátu a polyoxyethylen(80)sorbitan-monooleátu v rozmezí 0,01 až 1,0 mg/ml v závislosti na množství interferonu z bodu a), postačujícím ke stabilizaci interferonu typu alfa proti jeho ztrátě;

-18CZ 296961 B6

f) účinné množství protimikrobiálního konzervačního činidla vybíraného z m-kresolu, fenolu, methylparabenu, propylparabenu nebo jejich směsí, přičemž účinné množství m-kresolu je v rozmezí 0,5 až 2 mg/ml, účinné množství fenolu je v rozmezí 0,5 až 5 mg/ml, účinné množství methylparabenu je v rozmezí 0,6 až 1,8 mg/ml a účinné množství propylparabenu je v rozmezí 0,06 až 0,18 mg/ml, vše v závislosti na množství interferonu z bodu a); a

g) množství vody pro injekce postačující pro přípravu roztoku ze shora vyjmenovaných složek.

10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že vodný roztok se připravuje a udržuje v podstatě prostý rozpuštěného kyslíku.

11. Způsob podle nároku 10, vy z n a č uj í c í se tím, že rozpuštěného kyslíku není více než 0,25 ppm.