PT777495E

PT777495E - Formulacoes em solucao aquosa estavel de alfa interferao

Info

Publication number: PT777495E
Application number: PT95935151T
Authority: PT
Inventors: Pui-Ho C Yuen; Douglas F Kline
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 1994-10-11
Filing date: 1995-10-10
Publication date: 2000-12-29
Also published as: EP0970703A1; US5766582A; NO971633D0; US5935566A; DE69531314D1; CZ110497A3; CA2201749C; JP2006193536A; FI117377B; ES2198830T3; NZ294464A; HK1008813A1; FI971486A; CZ296961B6; PL319603A1; AU708337B2; SK282949B6; CA2201749A1; NO320604B1; DE69518084T2

Description

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-1 - DESCRIÇÃO "FORMULAÇÕES EM SOLUÇÃO AQUOSA, ESTÁVEL, DE ALFA INTERFERÃO"

FUNDAMENTOS DO INVENTO

Este invento relaciona-se com formulações de solução aquosa, estável, que se encontram livres de produtos derivados do soro do sangue humano e que mantêm uma elevada actividade biológica e uma elevada estabilidade física do interferão do tipo alfa durante um período de tempo prolongado. A Patente dos E.U.A. No. 4.496.537 apresenta formulações de solução aquosa estável de interferão alfa biologicamente estável contendo interferão alfa, albumina do soro humano ou glicina, água, e um sistema tampão para se manter o pH a 6,5-8,0. A albumina do soro humano ("HSA") actua como um agente estabilizador para o interferão alfa e evita perdas de interferão alfa a partir da solução por revestimento e/ou adsorção do interferão alfa para as superfícies de aço inoxidável ou de vidro de recipientes para a formação de compostos, equipamento de processamento e recipientes de armazenamento. Formulações em solução contendo interferão alfa e HSA mantiveram a estabilidade química e biológica do interferão alfa quando essas soluções foram armazenadas a 2-8° C durante períodos de tempo prolongados, isto é, mais de 2 anos.

Recentemente, a epidemia de SIDA a nível mundial levou a que fabricantes requerendo agencias de registo no campo da saúde tenham colocado advertências em produtos, tais como o interferão alfa, contendo produtos derivados do sangue humano tal como HSA.

Existe uma necessidade de reformular produtos de solução de interferão do tipo alfa a fim de se obter uma formulação em solução livre de produtos derivados do sangue tais como HSA mantendo-se entretanto uma elevada estabilidade química, uma elevada estabilidade física e uma elevada actividade biológica do interferão do tipo alfa nas formulações de solução aquosa para períodos de armazenamento prolongados. EP-A-0284249 descreve preparações de interferão 2-alfa recombinante liofilizadas destinadas a suportar armazenagem a longo prazo a temperaturas ambientes. Estas preparações requerem tanto um agente de estabilização como um agente de volume. Glicina, alanina e albumina do soro humano são indicadas como sendo agentes de estabilização eficazes, e a albumina do soro humano e manitol como agentes de volume eficazes. O Exemplo 4 descreve uma solução sem albumina do soro humano que contem um interferão alfa, um agente quelante e 40 mg/ml de manitol em que o manitol está presente como um agente de volume. WO-A-89/04177 relaciona-se especificamente com formulações de interferão gama, e em particular, com a utilização de álcoois de açúcar polihídricos como agentes de estabilização. De um modo típico, 40 mg/ml de manitol são usados para estabilizar o interferão gama. JP 59/176,216 tem como finalidade proporcionar agentes antisepticos para formulações de interferão sem albumina do soro humano. JP 61/277633 tem como finalidade, inter alia, conseguir -3- formulações de interferão aquosas, estabilizadas, sem albumina do soro humano e propõe a utilização de uma ampla gama de agentes tensio activos, incluindo derivados do sorbitan, para esta finalidade. É descrita a estabilização do interferão beta (exemplos 1 6 2) e do interferão gama (exemplo 3), mas a estabilização do interferão gama foi fraca visto que após sete dias a actividade do interferão tinha declinado para 59%. JP 63/26160 relaciona-se com a estabilização de soluções contendo interferão mas com interferão natural purificado parcialmente, o qual contem produtos derivados do sangue humano.

SUMÁRIO DO INVENTO O presente invento porporciona uma formulação de solução aquosa, estável, que mantém elevada actividade biológica do interferão do tipo alfa e que se apresenta livre de produtos derivados do sangue humano, que compreende: a. 0,1 x 106 a 100 χ 106 IU/ml de interferão do tipo alfa; b. um sistema tampão para manter o pH entre 4,5 e 7,1. c. uma quantidade eficaz de um agente quelante; d. uma quantidade de um estabilizador seleccionado de entre polissorbato 20 e polissorbato 80 suficiente para estabilizar o interferão do tipo alfa contra perda de interferão do tipo alfa; e. uma quantidade eficaz de um agente de tonicidade; -4- f. uma quantidade eficaz de um conservante antimicrobiano; e g. uma quantidade de água para injecção suficiente para preparar uma solução dos ingredientes acima indicados; apresentando-se a referida formulação livre de uma quantidade de manitol eficaz para actuar como um agente de volume quando o estabilizador é polissorbato 20. O presente invento proporciona uma formulação solúvel aquosa tendo uma elevada actividade biológica de interferão do tipo alfa e sem produtos derivados do sangue humano, que compreende: a. 0,1 x 106 a 100 x 106 IU/ml de interferão do tipo alfa. b. um sistema tampão suficiente para manter o pH da solução entre 4,5 e 7,1; c. cerca de 0,01 a 1 mg/ml de etilenodiaminotetraacetato de di-hidrogénio e dissódio. d. cerca de 0,01 a 1 mg/ml de polissorbato 20 ou polissorbato 80; e. cerca de 1 a 9 mg/ml de cloreto de sódio; f. uma quantidade eficaz de um conservante antimicrobiano seleccionado de entre m-cresol, fenol, metilparabeno, poliparabeno ou suas misturas; e g. água para injecção q.s. para 1 ml.

Num aspecto preferido o presente invento proporciona ainda uma formulação de solução aquosa estável apresentando elevada actividade biológica de interferão do tipo alfa e livre de produtos derivados de sangue humano, que compreende: mg/ml a. Interferão 2-Alfa 5 x 106 a 50 x 106IU b. Fosfato de Sódio Dibásico 1,8 Anidro c. Mono-hidrato de Fosfato de Sódio 1,3 Monobásico d. Etilenodiamino tetraacetato de 0,1 Di-hidrogénio e Dissódio e. Polissorbato 80 0,1 f. Metilparabeno 1,2 g. Propilparabeno 0,12 h. Cloreto de Sódio; 7,5 6 r i. Agua para Injecção q.s. ad 1 ml

Num outro aspecto preferido o presente invento proporciona ainda uma formulação de solução aquosa estável apresentando elevada actividade biológica de interferão do tipo alfa e livre de produtos derivados de sangue humano, que compreende: me/ml a. Interferão 2-Alfa 5 x 106 a 50 x 106IU b. Fosfato de Sódio Dibásico 1,8 Anidro c. Mono-hidrato de Fosfato de Sódio 1,3 Monobásico d. Etilenodiaminotetraacetato de 0,1 Di-hidrogénio e Dissódio e. Polissorbato 80 0,1 f. m-Cresol 1,5 g. Cloreto de Sódio; 7,5 e h. Água para Injecção q.s. ad 1 ml O presente invento também proporciona uma formulação de solução aquosa estável apresentando elevada actividade biológica de interferão do tipo alfa e livre de produtos derivados de sangue humano compreendendo a mistura de uma quantidade eficaz de interferão do tipo alfa com um sistema tampão capaz de manter o pH variando entre 4,5 e 7,1, um agente quelante, polissorbato 20 ou polissorbato 80, um agente de tonicidade, um conservante antimicrobiano e água suficiente para formar uma solução. Num aspecto preferido do processo do presente invento, a solução é preparada e mantida substâncialmente livre de -7- oxigénio dissolvido e um espaço no topo de atmosfera inerte acima da solução é mantido com um valor inferior a cerca de 4% em volume de oxigénio.

As formulações e métodos do invento apresentam-se ainda livres de uma quantidade de manitol eficaz para actuar como um agente de volume.

DESCRIÇÃO DETALHADA

Seleccionámos quantidades específicas de um conjunto específico de ingredientes que nos permitiram desenvolver uma formulação de solução aquosa de interferão do tipo alfa que não contem albumina do soro humano mantendo todavia elevada estabilidade química, biológica e física para o interferão do tipo alfa armazenado a de 2° a 8o C por períodos prolongados de pelo menos 24 meses. A expressão "livre de produtos derivados do sangue humano" tal como é aqui usada em referência às formulações do presente invento significa que nenhuns produtos derivados do sangue tais como HSA são usados na preparação das formulações de solução do presente invento. A expressão "elevada estabilidade química" tal como é aqui usada em referência ao interferão do tipo alfa usado nas formulações do presente invento significa que o interferão do tipo alfa mantém pelo menos 85%, de preferência 85% a 100% da sua integridade química após armazenamento a de 2o a 8o C durante pelo menos 24 meses. Ver Quadros 1 e 2. A integridade química é determinada medindo o conteúdo de proteína num ensaio HPLC tal como o apresentado por T. L. Nagabhushan, et al., num artigo intitulado "Characterization of Genetically Emgineered ALFA-2 Interferão", páginas 79-88 publicado em Interferão Research Clinicai Application, and Regulatorv -8-

Consideration. Zoon, et al., eds., Elsevier Science Publishing Co., Inc. 1984. (Ver resultados nos Quadros 1 a 4). A expressão "elevada estabilidade biológica" tal como é aqui usada em referência ao interferão do tipo alfa usado nas formulações do presente invento significa que o interferão do tipo alfa na formulação mantém pelo menos 75%, de preferência pelo menos 85%, com maior preferência 90% a 100% da sua actividade biológica após armazenamento a de 2o a 8°C durante pelo menos 24 meses (ver resultados nos Quadros 1 a 4) tal como é medido no método padronizado de inibição do efeito citopático (CPE) de um vírus tal como o método apresentado por W. P. Protzman, et al., em J. Clinicai Microbiology. (1985),22,596-599. A expressão "elevada estabilidade física" tal como é aqui usada em referência ao interferão do tipo alfa usado nas formulações do presente invento significa que a formulação do presente invento permanece transparente, isto é, não apresenta turvação ou matéria em partículas visível (isto é, partículas com um diâmetro superior a de 60 a 70 mícrons) ao ser armazenada a de 2o a 8° C durante pelo menos 24 meses. Ver Quadros 1, 2 e 3. Os resultados apresentados nos Quadros 1, 2 e 3 são surpreendentes pelo facto da maior parte das formulações contendo produtos proteicos afins do interferão do tipo alfa desenvolverem matéria em partículas observável visualmente (isto é, partículas tendo diâmetros superiores a de 60 a 70 mícrons) após armazenamento prolongado mesmo a de 2° a 8o C. O método do teste usado para determinar matéria em partículas na formulação de solução deste invento (ver Quadros 1 a 4) é descrito em The United States Pharmacopeia/The National Formulary ISP 23/NF 18, publicado por United States Pharmacopeial Convention, Inc., (1995), Rockville, Maryland; ver Physical Test <788> nas páginas 1813 a 1816. O método usado para determinar a descrição visual das formulações de solução deste invento é também -9- descrito em USP 23 como o "General Requirement Test and Assays <1> Injections" nas páginas 1650 a 1652.

Verificámos que ao adicionar um agente quelante às formulações do presente invento, fomos capazes de evitar matéria em partículas visível. Agentes quelantes apropriados típicos incluem hidrogeno etilenodiamina de tetraacetato de dissódio (EDTA ou edetato de dissódio) ou ácido cítrico. É preferida a utilização de edetato de dissódio. Embora não desejemos estar limitados por qualquer teoria, pensa-se que edetato de dissódio forma efectivamente complexos com quantidades vestigiais de catiões metálicos, tais como Zn2+, Fe2+, Cu2+ ou Al3+, iões esses que podem estar presentes em excipientes e componentes de embalagem, por exemplo rolhas de borracha ou gaxetas. Como edetato de dissódio apresenta uma maior afinidade para esses catiões de metal do que os interferãos do tipo alfa, é evitada a interacção entre catiões de metal e interferão do tipo alfa que dá origem a formação de complexos insolúveis (sob a forma de, por exemplo, matéria em partículas visível) e a perda de actividade é evitada. A quantidade eficaz de agente quelante varia entre 0,01 e 1 mg/ml tendo como base 0,1 x 106 a 100 x 106 Unidades Internacionais ("IU") de interferão do tipo alfa/ml. De preferência, 0,1 mg de edetato de dissódio é usado para 5 x 106 a 50 x 106 IU de interferão do tipo alfa.

Os sistemas tampão apropriados para as formulações do presente invento são as que mantêm o pH da formulação de solução aquosa entre 4,5 e 7,1, de preferência entre 6,5 e 7,1 e com a maior preferência 6,8. É preferida a utilização de um sistema tampão de fosfato de sódio dibásico e de fosfato de sódio monobásico. Normalmente um tampão 0,005 a 0,1 molar do sistema tampão preferido fosfato de sódio monobásico/dibásico é usado para uma formulação contendo 0,1 x 106 a 100 x 106 IU de interferão do tipo alfa por ml. Outros sistemas tampão apropriados para manter o pH desejado entre 4,5 e 7,1 incluem citrato de sódio/ácido cítrico e acetato de sódio/ácido acético. O agente de tonicidade útil no presente invento é qualquer agente capaz de tomar as formulações do presente invento iso-osmóticas com soro humano. Agentes de tonicidade apropriados típicos incluem cloreto de sódio, manitol, glicina, glucose e sorbitol. É preferida a utilização de cloreto de sódio como um agente de tonicidade . A quantidade do agente de tonicidade usada varia entre 1 e 10 mg/ml quando a formulação do presente invento contem 0,1 x 106 a 100 x 106 IU de interferão do tipo alfa/ml. A utilização de 7,5 mg/ml de cloreto de sódio é preferida para 5 x 106 a 50 x 106 IU de interferão do tipo alfa por ml nas formulações do presente invento.

Os derivados de sorbitan mono-9-octadecenoato poli(oxi-l,2-etanodiilo) tais como polissorbato 80 ou polissorbato 20 são úteis como um agente de estabilização a fim de evitar adsorção das proteínas interferão do tipo alfa tal como interferão alfa-2b para as superfícies de aço inoxidável ou de vidro do equipamento usado para produzir as formulações susceptiveis de conter interferão do tipo alfa. A quantidade de polissorbato 20 ou 80 eficaz na formulação deste invento varia entre 0,01 a 1,0 mg por ml para uma formulação contendo 0,1 x 106 a 100 x 106 IU de interferão do tipo alfa por ml. É preferida a utilização de polissorbato 80. A utilização de 0,1 mg/ml de polissorbato 80 é mais preferida em todas as formulações de solução do presente invento. Quando as concentrações de interferão do tipo alfa tais como interferão alfa-2 são inferiores a cerca de 15 x 106 IU/ml, por exemplo 6 x 106 IU/ml, perda de actividade devida a adsorção do interferão alfa na ausência de polissorbato 80 diminui significativamente a actividade biológica da formulação. De um modo surpreendente, verificamos que polissorbato 80 evita a perda de inetrferon alfa-2b e permite administração sistémica do interferão alfa-2b sem perda de actividade biológica. No decurso do desenvolvimento da formulação do presente invento, -11 - verificamos de um modo surpreendente que polissorbato 80 proporcionava estabilidade química e biológica a interferão alfa-2b em comparação com outros agentes tensio activos não iónicos, por exemplo, Pluronic F 127 e Pluronic F-68. A quantidade de interferão do tipo alfa útil na formulação do presente invento varia entre 0,1 x 106 e 100 x 106 IU/ml, de preferência entre 5 x 106 e 50 x 106 IU/ml. A expressão "interferão do tipo alfa" tal como é aqui usada significa a família de proteínas específicas em relação à espécie altamente homologas que inibem replicação virai e proliferação celular e que modulam a resposta imunitária. Interferãos do tipo alfa apropriados típicos incluem interferão alfa-2 tal como interferão alfa-2a ROFERON A fornecido por Hoffmann-La Roche, Nutley, N.J., interferão alfa-2b tal como interferão alfa-2b INTRON fornecido por Schering Corporation, Kenilworth, N.J., interferão alfa-2c tal como interferão alfa-2c BEROFOR fornecido por Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, CT., interferão alfa-nl, uma mistura purificada de interferãos alfa naturais tais como SUMIFERON fornecido por Sumimoto, Japan ou como interferão alfa-nl WELLFERON fornecido por The Wellcome Foundation Ltd., London, Great Britain, ou interferão alfa consenso fornecido por Amgen, Inc., Newbuiy Park, Califórnia, ou interferão alfa-n3, uma mistura de interferãos alfa naturais, fabricados por Interferon Sciences e fornecido por Purdue Frederick Co., Norwalk, CT., com o nome comercial ALFERON. É preferida a utilização de interferão alfa-2a ou alfa-2b. A utilização de interferão alfa-2b é mais preferida.

Verificou-se que os agentes de conservação antimicrobianos úteis no presente invento incluem m-cresol, fenol e metil-paraben e poliparaben e misturas dos agentes de conservação acima indicados, por exemplo misturas fenol-metilparabeno. A quantidade eficaz de m-cresol que se verificou ser útil no - 12- presente invento varia entre 0,5 e 2 mg/ml para uma formulação contendo 0,1 x 106 a 100 x 106 IU/ml de interferão do tipo alfa. É preferível usar 1,5 mg/ml de m-cresol para uma formulação contendo 5 x 106 a 50 x 106 IU/ml de interferão alfa-2b. A quantidade eficaz de fenol que se verificou ser útil varia entre 0,5 e 5 mg/ml para uma formulação de solução contendo 0,1 x 106 a 100 x 106 IU/ml de interferão do tipo alfa. A quantidade eficaz de metilparabeno varia entre 0,6 e 1,8 mg/ml e a quantidade de propilparabeno varia entre 0,06 e 0,18 mg/ml quando a formulação do presente invento contem 0,1 x 106 a 100 x 106 IU/ml de interferão do tipo alfa. É preferível utilizar 1,2 mg/ml de metilparabeno em combinação com 0,12 mg/ml de propilparabeno quando a formulação do presente invento contem 0,1 x 106 a 100 x 106 IU/ml de interferão alfa-2b. A utilização de m-cresol como conservante antimicrobiano é mais preferida. A água usada para preparação de formulações do presente invento é de preferência água para injecção.

No decurso de desenvolvimento das formulações de solução aquosa do presente invento que iriam manter elevada actividade biológica assim como elevada estabilidade química e elevada estabilidade física do interferão do tipo alfa durante um período de armazenamento prolongado sem utilização de HSA como um estabilizador, identificamos que a quantidade de um derivado de sorbitano-mono-9-octadecenoato-poli(oxi-l,2-etanodi-ilo) tal como polissorbato - 13 - 80 requerido para actuar como agente de estabilização para o interferão do tipo alfa apresentava um efeito directo sobre a quantidade eficaz do conservante antimicrobiano que podia ser adicionado à formulação de solução aquosa a fim de proporcionar protecção antimicrobiana para a referida formulação de acordo com vários pedidos de registo de saúde a nível mundial sem causar formação de turvação indesejável na solução.

Assim, quando o agente de estabilização preferido, polissorbato 80, estava presente em formulações do presente invento, na quantidade eficaz preferida de 0,1 mg/ml, verificou-se que a quantidade eficaz do conservante antimicrobiano preferido, por exemplo, m-cresol que podia ser adicionada sem causar turvação da referida formulação era de importância crítica. Por exemplo, se a quantidade de m-cresol adicionada a uma formulação que contenha 0,1 mg/ml de polissorbato 80, tal como é indicado no Exemplo 3, for aumentada para mais de 1,75 mg/ml, observa-se turvação. Foi observado um problema de turvação semelhante quando a quantidade de polissorbato 80 na formulação resultante variou entre 0,01 e 1 mg/ml. Nenhuma turvação foi observada quando 1,75 mg/ml ou menos, de preferência cerca de 1,5 mg/ml de m-cresol foram adicionados a uma formulação preparada de acordo com os processos do Exemplo 3 que contem 0,1 mg/ml de polissorbato 80. Esta importância crítica foi também observada com os parabéns e fenol quando foram usados como agentes de conservação antimicrobianos. Para formulações do presente invento contendo 0,01 a 1 mg/ml de polissorbato 80, a quantidade eficaz de metilparabeno deverá ser não superior a cerca de 1,2 mg/ml quando usada com 0,12 mg/ml de propilparabeno a fim de evitar turvação, e a quantidade eficaz de fenol (quando usado em vez dos parabéns) deverá variar entre 0,5 e menos de cerca de 4 mg/ml a fim de evitar turvação.

Formulações de interferão do tipo alfa são úteis para o tratamento de uma série de estados patológicos tais como carcinomas de células renais, - 14- sarcoma de Kaposi relacionado com SIDA, hepatite B crónica e aguda, hepatite não-A, não-B/C crónica e aguda. As formulações do presente invento são úteis no tratamento desses estados patológicos de preferência sob a forma de soluções aquosas injectáveis.

EXEMPLOS

Os exemplos não limitativos que se seguem ilustram a preparação das soluções aquosas de interferãos do tipo alfa.

Os processos indicados no Exemplo 5 são usados para preparar as formulações do presente invento de Exemplos 1 a 5. EXEMPLO 1

Substância Activa: Interferão alfa-2b 0,1 x 106-100 x Tampão: Fosfato de Sódio 106 IU/ml* 0,005-0,1 M Agente Quelante: (monobásico/dibásico) Edetato de Dissódio 0,01-1 mg/ml Estabilizador: Polissorbato 80 0,01-1 mg/ml Agente Ajustador da Tonicidade: Cloreto de Sódio 1-9 mg/ml Conservante Antimicrobiano: m-Cresol 0,5 - 1,75 mg/ml ou Fenol 0,5 - <4 mg/ml ou Metilparabeno 0,6 - 1,2 mg/ml Propilparabeno 0,06 - 0,12 mg/ml Solvente: Agua para injecção q.s. ad 1 ml *IU - Unidades Internacionais - 15- EXEMPLO 2

Interferão alfa-2b 10 x 106 IU/ml Fosfato de Sódio Dibásico Anidro 1,8 mg/ml Mono-hidrato de Fosfato de Sódio Monobásico 1,3 mg/ml Edetato de Dissódio 0,1 mg/ml Polissorbato 80 0,1 mg/ml Metilparabeno 1,2 mg/ml Propilparabeno 0,12 mg/ml Cloreto de Sódio 7,5 mg/ml Agua para injecção q.s.ad 1 ml EXEMPLO 3 Interferão alfa-2b 10 x 106 IU/ml Fosfato de Sódio Dibásico Anidro 1,8 mg/ml Mono-hidrato de Fosfato de Sódio Monobásico 1,3 mg/ml Edetato de Dissódio 0,1 mg/ml Polissorbato 80 0,1 mg/ml m-Cresol 1,5 mg/ml Cloreto de Sódio 7,5 mg/ml Agua para Injecção q.s. ad 1 ml

Dados sobre a estabilidade nos Exemplos 2 e 3 são resumidos nos Quadros 1 e 2 respectivamente. - 16- EXEMPLO 4 A formulação do Exemplo 3 foi preparada com 6 x 106 IU/ml de interferão alfa-2b de acordo com o método de fabrico descrito detalhadamente mais abaixo usando aspersão da solução com azoto e mantendo não mais do que cerca de 4% em volume de oxigénio no espaço de topo.

Frascos contendo um volume rotulado de 3 ml de solução foram armazenados a 30°, 25° e 4o C. Os resultados são resumidos no Quadro 3. EXEMPLO 5 A formulação do Exemplo 4 foi preparada de acordo com o método de fabrico descrito detalhadamente aqui mais abaixo com todos os detalhes exceptuando o facto de não se ter aspergido azoto através da solução ou sobre ela e o volume de oxigénio no espaço de topo foi ~20% em volume tal como é encontrado no ar ambiente.

Frascos contendo um volume rotulado de 3 ml de solução foram armazenados a 30°, 25° e 45° C. Os resultados são resumidos no Quadro 4. São esperados resultados semelhantes se o interferão alfa-2b nos Exemplos 1 a 5 for substituído por uma quantidade equivalente de interferão alfa Roferon A, Wellferon ou Sumiferon.

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CN *CCS - Solução incolor, transparente, essencialmente livre de partículas visíveis. -23- Método de Fabrico para Exemplos 1 a 5 A. Composição de Formulações de Solução Aquosa Contendo Paraben tal como é Indicado no Exemplo 2 1. Carregar aproximadamente 80% de água para injecção a uma temperatura superior a 70° C num recipiente para formar compostos revestido, apropriado, equipado com um agitador. 2. Carregar separadamente aproximadamente 30% da água para injecção num outro recipiente apropriado. Arrefecer e manter a temperatura da água entre 20° e 25° C. Começar a aspergir com azoto filtrado e sobre a água que irá ser usada para levar o lote ao volume final para manter um nível de oxigénio dissolvido a ou abaixo de 0,25 ppm. 3. Carregar e dissolver com mistura metilparabeno e propilparabeno no recipiente para composição no passo 1 mantendo-se entretanto a temperatura da solução entre 70° e 80° C. 4. Arrefecer a solução do passo 3 até uma temperatura variando entre 20° e 25° C. Aspergir e cobrir a solução com azoto filtrado. Manter um nível de oxigénio dissolvido a ou abaixo de 0,25 ppm. 5. Carregar e dissolver com mistura os ingredientes que se -24- seguem na solução do passo 4 mantendo-se o aspergir e cobertura com azoto:

Fosfato de sódio dibásico anidro Fosfato de sódio monobásico monohidrato Edetato de dissódio Cloreto de sódio 6. Interromper a aspersão da solução com azoto do passo 5. Manter a cobertura com azoto no recipiente da composição. 7. Carregar e dissolver polissorbato 80 em aproximadamente 50 ml de água para injecção (para um lote com o tamanho (volume) de 1 litro) num recipiente separado. Transferir a solução de polissorbato 80 para a solução do passo 6. 8. Avaliar o pH da solução. O pH deverá situar-se entre 6,6 e 7,0. Não é requerido qualquer ajustamento do pH. 9. Carregar solução de droga a granel interferão alfa-2b na solução do passo 8 com mistura concomitante. 10. Adicionar água para injecção que tinha sido aspergida com azoto (do passo 2) para levar o lote a volume final. Agitar a solução suavemente até que fique homogénea. 11. Filtrar assepticamente a solução através de um filtro esterilizado que tenha sido lavado e testado quanto à sua pureza. Recolher a solução esterilizada para um recipiente -25- de enchimento esterilizado que tenha sido coberto com azoto filtrado, estéril. Teste de pureza do filtro após filtração. 12. Cobrir o recipiente de enchimento do passo 11 com azoto filtrado, estéril e selar. B. Composição de Formulações de Solução Aquosa Contendo m-Cresol tal como é Indicado no Exemplo 3 O processo de fabrico usado para preparar as soluções aquosas contendo m-cresol como um conservante (tal como é indicado no Exemplo 3) é exactamente igual ao descrito aqui anteriormente exceptuando o facto da temperatura da solução no Passo 3 ser mantida entre 20° e 25° C e do m-cresol ser carregado após o Passo 6. C. Composição de formulações de Solução Aquaosa de Interferão Alfa Livre de HSA sob Ar Ambiente O processo de fabrico usado para preparar as formulações aquosas de interferão alfa livre de HSA dos Exemplos 1 a 4 foi usado para preparar as formulações tais como a do Exemplo 5 exceptuando o facto de todos os passos serem realizados sob ar ambiente; não foi aspergido azoto através da solução ou sobre ela e ar ambiente (normalmente contendo 20% em volume de oxigénio) ocupava o volume do espaço de topo.

Para manter elevada estabilidade química, física e biológica, é preferível que a água usada para preparar a solução aquosa de interferão alfa assim como a solução aquosa de interferão alfa assim formada se encontre substâncialmente livre de oxigénio dissolvido, e que a solução aquosa seja -26-

formada e armazenada com um espaço de topo de uma atmosfera inerte, tal como azoto, contendo não mais do que cerca de 4% em volume de oxigénio. A expressão "substâncialmente livre de oxigénio dissolvido" tal como é aqui usada significa um nível de oxigénio de não mais de cerca de 0,25 ppm a uma temperatura da água de cerca de 20° - 25° C. Normalmente, o nível preferido de oxigénio dissolvido de 0,25 ppm é convenientemente alcançado aspergindo uma atmosfera inerte, por exemplo gás azoto para a água usada para preparar as soluções aquosas (mantidas a uma temperatura variando entre cerca de 20° e 25° C) durante um período de tempo suficiente (por exemplo cerca de 30 minutos) para diminuir o oxigénio dissolvido até um valor de não mais do que cerca de 0,25 ppm. O aspergir é continuado ao longo do processo de fabrico para que se mantenha o nível de oxigénio dissolvido a 0,25 ppm. Verificamos que formulações aquosas do presente invento que têm um nível de oxigénio dissolvido de 1 ppm e um conteúdo de oxigénio no espaço de topo de 7% em volume apresentaram uma perda significativamente maior de estabilidade química do interferão alfa após 3 meses de armazenamento a 25° C em comparação com uma formulação aquosa semelhante tendo o nível de oxigénio dissolvido preferido de 0,25 ppm e um conteúdo de oxigénio no espaço de topo de 4% em volume armazenada nas mesmas condições.

Uma comparação lado a lado dos dados sobre estabilidade da solução de interferão alfa-2b nos Quadros 3 e 4 revela que não existe uma diferença significativa na estabilidade entre as formulações de solução aquosa do presente invento que tenham sido preparadas nas condições de azoto/baixo teor de oxigénio usadas no Exemplo 4 e as formulações preparadas de acordo com o Exemplo 5 sob ar ambiente durante um período de armazenamento de 12 meses a 4° C. Pelo contrário, uma comparação da estabilidade de interferão alfa-2b em soluções dos Exemplos 4 e 5 armazenadas a temperaturas mais elevadas, por exemplo 25° e 30° C revela que o efeito protector conseguido pela utilização -27- preferida (mais segura) de aspersão de de azoto origina níveis de oxigénio dissolvido baixos na solução aquosa mantendo-se, entretanto, simultaneamente, um conteúdo de oxigénio no espaço de topo com um valor de não mais de cerca de 4% em volume. A formulação de solução aquosa do presente invento pode ser armazenada em quaisquer recipientes ou contentores de enchimento lavados e esterilizados apropriados tais como frascos de vidro do Tipo I de 2 ml ou de 5 ml encerrados com oclusões de borracha de butilo cinzenta. As formulações de solução aquosa do presente invento podem também ser armazenadas em seringas de doses múltiplas cheias previamente tais como as que são úteis para administração de soluções de drogas susceptíveis tais como a insulina. Seringas apropriadas típicas incluem sistemas compreendendo um recipiente cheio previamente ligadas a uma seringa do tipo caneta tal como a Novolet Novo Pen fornecida por Novo Nordisk. Sistemas apropriados típicos incluem uma seringa do tipo caneta, cheia previamente o que permite fácil auto-injecção pelo utilizador assim como dispositivos de dose exacta, reproduzível.

As formulações de solução aquosa do presente invento, tal como estão presentes nos Exemplos podem também ser lifíolizadas para formar um pó para reconstituição. Espera-se que o pó de interferão do tipo alfa liofilizado mantenha a sua estabilidade química e biológica quando armazenado a de 2o a 8o C durante pelo menos 2 anos.

Lisboa, 29 de Setembro de 2000

JORGE CRUZ

Agente Oficial da Propriedade Industrial

RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Uma formulação aquosa, estável, apresentando interferão do tipo alfa com elevada actividade biológica e livre de produtos derivados do sangue humano que compreende: a. Ο,ΐχ 106 a 100 x 106 IU/ml de interferão do tipo alfa; b. um sistema tampão para manter o pH entre 4,5 e 7,1. c. uma quantidade eficaz de um agente quelante; d. uma quantidade de um estabilizador seleccionado de entre polissorbato 20 e polissorbato 80 suficiente para estabilizar o interferão do tipo alfa contra perda de interferão do tipo alfa; e. uma quantidade eficaz de um agente de tonicidade; f. uma quantidade eficaz de um conservante antimicrobiano; e g. uma quantidade de água para injecção suficiente para preparar uma solução dos ingredientes acima indicados; apresentando-se a referida formulação livre de uma quantidade de manitol eficaz para actuar como um agente de volume quando o estabilizador é plysorbate 20
2. A composição da reivindicação 1, em que o sistema tampão é fosfato dibásico de sódio e fosfato monobásico de sódio.
3. A composição da reivindicação 1, em que o agente quelante é edetato de dissódio ou ácido cítrico. -2-
4. A composição da reivindicação 1, em que o agente de tonicidade é cloreto de sódio.
5. A composição da reivindicação 1, em que o referido conservante é seleccionado de entre m-cresol, fenol, metilparabeno, propilparabeno ou suas misturas.
6. A composição da reivindicação 1, em que o interferão do tipo alfa é interferão alfa-2.
7. Uma formulação de solução aquosa estável tendo interferão alfa-2 com elevada actividade biológica e livre de albumina do soro humano, que compreende: a. Interferão 2-Alfa mg/ml 5 x 106 a b. Fosfato de Sódio Dibásico 50 x 106 IU 1,8 Anidro c. Mono-hidrato de Fosfato de Sódio 1,3 Monobásico d. Etilenodiaminotetraacetato de 0,1 Di-hidrogénio e Dissódio e. Um estabilizador seleccionado de 0,1 entre polissorbato 80 f. Metilparabeno 1,2 g. Propilparabeno 0,12 h. Cloreto de Sódio 7,5 C r i. Agua para Injecção q.s. ad 1 ml -3-
8. Uma formulação de solução aquosa estável tendo interferão alfa-2 com elevada actividade biológica e livre de albumina do soro humano, que compreende: me/ml a. Interferão 2-Alafa 5 x 106 a 50 x 106 IU b. Fosfato de Sódio Dibásico Anidro 1,8 c. Mono-hidrato de Fosfato de Sódio Monobásico 1,3 d. Etilenodiaminotetraacetato de Di-hidrogénio e Dissódio 0,1 e. Um estabilizador seleccionado de entre polissorbato 80 0,1 f. m-Cresol 1,5 g. Cloreto de Sódio 7,5 c r h. Agua para Injecção q.s. ad 1 ml
9. Um artigo de fabrico compreendendo um material de embalagem e a formulação de qualquer reivindicação anterior em que o referido material de embalagem é um frasco de vidro com doses múltiplas.
10. Um artigo de fabrico compreendendo uma seringa cheia -4- previamente contendo uma quantidade eficaz da formulação de qualquer uma das Reivindicações 1 a 8.
11. Um artigo de fabrico compreendendo um material de embalagem e a formulação de qualquer uma das Reivindicações 1 a 8 em que o referido material de embalagem é um frasco com uma única dose.
12. Um processo para a preparação de uma formulação aquosa, estável, tendo interferão do tipo alfa com elevada actividade biológica e livre de produtos derivados do sangue humano compreendendo a mistura de uma quantidade eficaz de interferão do tipo alfa com um sistema tampão capaz de manter o pH entre 4,5 e 7,1, um agente quelante, um agente de estabilização seleccionado de entre polissorbato 20 e polissorbato 80, um agente de tonicidade, um conservante antimicrobiano e água suficiente para fazer uma solução aquosa, em que quando o agente de estabilização é polissorbato 20 o método é realizado na ausência de uma quantidade de manitol eficaz para actuar como um agente de volume.
13. O processo da reivindicação 12, em que a solução aquosa é preparada e mantida substâncialmente livre de oxigénio dissolvido.
14. O processo da reivindicação 13, em que o teor de oxigénio dissolvido não é superior a 0,25 ppm.
15. O processo da reivindicação 13 ou 14, em que o espaço de topo acima da solução aquosa é uma atmosfera inerte contendo não mais de 4% em volume de oxigénio. -5-
16. Um recipiente de enchimento esterilizado contendo uma formulação que se pode obter por um processo tal como é reivindicado em qualquer uma das reivindicações 12 a 15. Lisboa, 29 de Setembro de 2000

JORGE CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA