DE69925820T2 - Zubereitungen zur stabilisierung von peg-interferon alpha konjugaten - Google Patents

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Description

  • Gebiet der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung betrifft Formulierungen zur Stabilisierung von PEG-Interferon α-Konjugaten während und nach der Lyophilisation, ihre Herstellung und Verwendung.
  • Hintergrund der Erfindung
  • Verschiedene natürliche und rekombinante Proteine werden pharmazeutisch verwendet. Nachdem sie gereinigt, getrennt und formuliert worden sind, können sie wegen verschiedener therapeutischer Indikationen parenteral verabreicht werden. Parenteral verabreichte Proteine können jedoch immunogen sein, können relativ wasserunlöslich sein und können eine kurze pharmakologische Halbwertszeit haben. Es kann daher schwierig sein, bei Patienten therapeutisch brauchbare Blutkonzentrationen zu erreichen.
  • Diese Probleme lassen sich überwinden, indem die Proteine mit Polymeren konjugiert werden, wie Polyethylenglykol. Davis et al., US-A-4 179 337 offenbaren das Konjugieren von Polyethylenglykol (PEG) an Proteine wie Enzyme und Insulin, um Konjugate mit geringerer immunogener Wirkung als die ursprünglichen Proteine zu erhalten und dennoch einen wesentlichen Anteil ihrer physiologischen Aktivität aufrechtzuerhalten. Veronese et al. (Applied Biochem. and Biotech, 11:141–152, 1985) offenbaren das Aktivieren von Polyethylenglykolen mit Phenolchlorformiaten, um eine Ribonuklease und eine Superoxiddimutase zu modifizieren. Katre et al., US-A-4 766 106 und US-A-4 917 888, offenbaren auch das Solubilisieren von Proteinen durch Polymerkonjugation. In ähnlicher Weise können PEG und andere Polymere an rekombinante Proteine konjugiert werden, um die Immunogenizität zu vermindern und die Halbwertszeit zu erhöhen. Siehe Nitecki et al., US-A-4 902 502, Enzon, Inc., Internationale Anmeldung Nr. PCT/US90/02133, Nishimura et al. EP-A-154 316 und Tomasi, Internationale Anmeldung Nr.
  • PCT/US85/02572. Interferon α-2b ist beispielsweise bekanntermaßen wirksam zur Behandlung von Krankheitszuständen wie Nierenzellenkarzinom, mit AIDS zusammenhängendem Kaposi-Sarkom, chronischer und akuter Hepatitis B, chronischer und akuter Non-A, Non-B/C-Hepatitis sowie Hepatitis C. Die Verbesserung der pharmakologischen Halbwertszeit von Interferon α-2b würde die Behandlung dieser Zustände verbessern.
  • Obwohl die Herstellung von Protein-Polymer-Konjugaten günstig ist, können sie erst dann praktisch verwendet werden, wenn sie während der Fertigung und Verteilung an Anbieter auf dem Gesundheitssektor über einen längeren Zeitraum gelagert werden können. Einige Protein-Polymer-Konjugate altern jedoch rasch, sogar in gefrorenen Lösungen. Lyophilisation (auch als Gefriertrocknen bekannt) ist ein Verfahren, das ein Pharmakon in eine Form überführen kann, die diesen Mangel überwinden kann.
  • Lyophilisation ist ein Verfahren, wodurch Wasser aus einer Zusammensetzung sublimiert wird, nachdem sie gefroren worden ist. In diesem Verfahren können Pharmaka und Biologika, die in einer wässrigen Lösung über einen Zeitraum relativ instabil sind, in einem leicht verarbeiteten flüssigen Zustand in Dosierbehälter angeordnet, ohne Verwendung schädlicher Wärme getrocknet und in einem getrockneten Zustand über längere Zeiträume gelagert werden.
  • Infolge der geringen Gesamtmasse der aktiven Substanz in jeder Dosis erfordern die Formulierungen der meisten Pharmaka und Biologika einschließlich Protein-Polymer-Konjugaten weitere Bestandteile, um den aktiven Bestandteil während des Lyo philisationsverfahrens zu schützen. Ein als wässrige Lösung mit geringer Konzentration in einen Dosierbehälter gefülltes Pharmakon kann beispielsweise zu physikalischem Verlust während des Lyophilisationsvakuumverfahrens oder zu Adsorption an dem Behälter neigen. Eine lyophilisierte Formulierung enthält oft Ballastbestandteile, die die Menge an festem Material erhöhen, sowie Kryoschutzstoffe, Lyoschutzstoffe und andere Stabilisatoren, um die Wirkkomponente vor Schäden zu bewahren. Welche spezielle Formulierung einen gegebenen Pharmakontyp schützt, muss jedoch empirisch bestimmt werden.
  • Es gibt einen aktuellen Bedarf an einer Formulierung, die zum Schützen von Protein-Polymer-Konjugaten und insbesondere PEG-Interferon α-Konjugaten vor Schäden während der Lyophilisation geeignet ist. Eine derartige Formulierung sollte es PEG-Interferon α-Polymer-Konjugaten ermöglichen, ihre biologische Aktivität, physikalische Stabilität und chemische Stabilität über längere Zeiträume aufrechtzuerhalten.
  • Zusammenfassung der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung liefert Formulierungen, die die Stabilisierung von PEG-Interferon α-Konjugaten während und nach der Lyophilisation ermöglicht.
  • In einem ersten Aspekt liefert die vorliegende Erfindung eine Formulierung, die Stabilisierung von PEG-Interferon α-Konjugaten während und nach Lyophilisation ermöglicht, die Polyethylenglykol- (PEG)-Interferon α-Konjugate, einen Puffer, einen Stabilisator, ein Kryoschutzmittel und ein Lösungsmittel enthält, wobei das Kryoschutzmittel Sucrose ist.
  • Die vorliegende Erfindung schließt auch Verfahren zur Herstellung stabiler wässriger Formulierungslösungen ein, bei denen eine wirksame Menge PEG-Interferon α-Konjugate mit einem Puffer, einem Stabilisator, einem Kryoschutzmittel und einem Lösungsmittel gemischt wird, wobei das Kryoschutzmittel Sucrose ist. In einem bevorzugten Aspekt des erfindungsgemäßen Verfahrens wird die Formulierung im Wesentlichen frei von gelöstem Sauerstoff hergestellt und gehalten, und ein Kopfraum aus inerter Atmosphäre über der Formulierung wird auf einem Wert von weniger als etwa 4 Vol.% Sauerstoff gehalten.
  • Die vorliegende Erfindung ist nicht auf spezielle Chemikalien für die Lösungskomponenten begrenzt. In einer bevorzugten Ausführungsform ist der Puffer jedoch Natriumphosphat, der Stabilisator ist ein Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivat, das Kryoschutzmittel ist Sucrose und das Lösungsmittel ist Wasser. In einer solchen Ausführungsform kann das Natriumphosphat Dinatriumphosphat wasserfrei mit Mononatriumphosphat-dihydrat enthalten.
  • Die vorliegende Erfindung ist auch nicht durch die Konzentrationen der Komponenten der erfindungsgemäßen Formulierungen eingeschränkt. In einer Ausführungsform ist die Konzentration der PEG-Interferon α-Konjugate vorzugsweise 0,03 bis 2,0 mg Interferon α pro ml, während die Konzentration des Natriumphosphats vorzugsweise 0,005 bis 0,1 molar ist, die Konzentration des Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivats ist vorzugsweise 0,01 bis 1,0 mg/ml und die Konzentration der Sucrose ist vorzugsweise 20 bis 100 mg/ml. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist die Masse der PEG-Interferon α-Konjugate 0,1 mg Interferon α, die Masse des wasserfreien Dinatriumphosphats ist 0,75 mg, die Masse des Mononatriumphosphatdihydrats ist 0,75 mg, die Masse der Sucrose ist 40 mg, die Masse des Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivats ist 0,05 mg und das Volumen des Wassers ist 0, 5 ml. Das Verhältnis der Komponenten ist alternativ 0,08 Gew.-% PEG-Interferon α-Konjugate, gemessen durch die Masse des Interferon α, 3,6 % Natriumphosphat, 0,12 Gew.-% Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivat und 96,2 Gew.-% Sucrose.
  • Obwohl die vorliegende Erfindung nicht auf ein spezifisches PEG-Interferon α-Konjugat begrenzt ist, enthalten in einer Ausführungsform die PEG-Interferon α-Konjugate einzelne PEG-Moleküle, die an einzelne Interferonmoleküle konjugiert sind. In einer solchen Ausführungsform können die Interferon α-Moleküle ausgewählt sein aus der Gruppe bestehend aus Interferon α-2a, Interferon α-2b, Interferon α-2c und Consensus-Interferon. In einer bevorzugten Ausführungsform sind die Interferonmoleküle Interferon α-2b. In ähnlicher Weise ist in einer Ausführungsform das Polyethylenglykol PEG12000, obwohl die vorliegende Erfindung nicht auf ein spezielles PEG-Molekül begrenzt ist. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform sind die Interferon-α-2b-Moleküle über eine Urethanbindung an die PEG12000-Moleküle gebunden.
  • Die vorliegende Erfindung schließt ein, ohne sich auf eine spezielle Charakterisierung zu beschränken, wenn einzelne Interferon α-Moleküle mit einzelnen Polymermolekülen verbunden sind, dass die resultierenden PEG-Interferon α-Konjugate eine Mischung von Positionsisomeren enthalten können. In einer bevorzugten Ausführungsform ist eines der Positionsisomere ein Interferon α-2b-Molekül, das an einem Histidinrest von dem das Interferon α-2b-Moleküls an ein PEG12000-Molekül gebunden ist.
  • Die vorliegende Erfindung schließt auch ein Lyophilisationsverfahren ein, bei dem die oben beschriebenen Formulierungen lyophilisiert werden, um ein lyophilisiertes Pulver zu erzeugen. In einer bevorzugten Ausführungsform beinhaltet das Verfahren ferner Wiederauflösung (Rekonstitution) des lyophilisierten Pulvers mit Wasser oder anderen wässrigen Verdün nungsmitteln, wie Benzylalkohol enthaltendem bakteriostatischem Wasser zur Injektion, um eine wiederaufgelöste Lösung zu erzeugen (bakteriostatisches Wasser zur Injektion, Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA).
  • Die vorliegende Erfindung beinhaltet auch lyophilisierte Pulver, die durch Lyophilisation der oben beschriebenen Formulierungen hergestellt sind. In einer bevorzugten Ausführungsform enthält das lyophilisierte Pulver 0,08 Gew.-% der PEG-Interferon α-Konjugate, 3,6 % des Natriumphosphats, 0,12 Gew.% des Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivats und 96,2 Gew.-% der Sucrose.
  • In ähnlicher Weise sind auch Gegenstände wie eine Spritze oder Ampulle eingeschlossen, die eine wirksame Menge derartiger lyophilisierter Pulver enthalten. In einer bevorzugten Ausführungsform enthält der Gegenstand ferner ein Volumen an Wasser zur Wiederauflösung des Pulvers. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform wird das Pulver mit bakteriostatischem Wasser wieder aufgelöst. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird das lyophilisierte Pulver mit dem gleichen Wasservolumen wieder aufgelöst, wie aus der Lyophilisierungslösung während der Lyophilisation entfernt wurde.
  • Die vorliegende Erfindung schließt auch Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen bei Tieren ein. In einer Ausführungsform beinhaltet dieses Verfahren das Einbringen der wiederaufgelösten Lösung in ein Tier mit einer Krankheit. In einer Ausführungsform ist das Tier ein Mensch. In einer bevorzugten Ausführungsform ist der Mensch mit einem Hepatitisvirus infiziert, wie Hepatitis C Virus. In einer alternativen bevorzugten Ausführungsform hat der Mensch Krebs.
  • Detaillierte Beschreibung der Erfindung
  • "PEG-Interferon α-Konjugate" sind Interferon α-Moleküle, die kovalent an ein PEG-Molekül gebunden sind. In bevorzugten Ausführungsformen enthalten die erfindungsgemäßen PEG-Interferon α-Konjugate Interferon α-2a (Roferon, Hoffman La-Roche, Nutley, NJ, USA), Interferon α-2b (Intron, Schering-Plough, Madison, NJ, USA), Interferon α-2c (Berofor Alpha, Boehringer Ingelheim, Ingelheim, Deutschland) oder Consensus-Interferon, gemäß der Bestimmung einer Consensus-Sequenz von natürlich vorkommenden Interferon-α's (Infergen, Amgen, Thousand Oaks, CA, USA).
  • Polymere sind andererseits Moleküle mit kovalent gebundenen, sich wiederholenden chemischen Einheiten. Das ungefähre Molekulargewicht des Polymers wird oft mit einer Zahl bezeichnet, gefolgt von dem Namen der sich wiederholenden chemischen Einheit. "PEG12000" oder "Polyethylenglykol (12.000)" bezieht sich auf Polymer von Polyethylenglykol mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von ungefähr 12.000. In einem PEG12000-Polymer ist die Anzahl der sich wiederholenden Polyethylenglykoleinheiten in dem Polymer ungefähr 273. Es sei darauf hingewiesen, dass diese Bezeichnungen Näherungswerte sind, da Polymere in Form einer Mischung mit einer Verteilung von Kettenlängen hergestellt werden, bei der ein durchschnittliches Molekulargewicht angegeben wird, und oft ist es unmöglich, ein Polymer mit einem genauen und einheitlichen Molekulargewicht oder einer genauen und einheitlichen Anzahl sich wiederholender Einheiten herzustellen. Verschiedene andere Polymere und Verfahren zu ihrer Herstellung sind in der Technik wohl bekannt.
  • Verfahren zur Herstellung von Protein-Polymer-Konjugaten sind auch in der Technik bekannt. US-A-5 691 154 von Callstrom et al., US-A-5 686 071 von Subramanian et al., US-A-5 639 633 von Callstrom et al., US-A-5 492 821 von Callstrom et al., US-A-5 447 722 von Lang et al. und US-A-5 091 176 von Braatz et al. liefern alle Verfahren zur Herstellung von Protein-Polymer-Konjugaten.
  • Die Konjugation von Polymeren an Proteine kann zu einem einzelnen Polymermolekül führen, das an ein Protein konjugiert ist, oder mehreren derartigen Konjugationen an ein einzelnes Protein. Der Konjugationsgrad hängt von den Reaktionsbedingungen und dem gewünschten Ergebnis ab. In einer bevorzugten Ausführungsform enthält das PEG-Interferon α-Konjugat in den erfindungsgemäßen Formulierungen ein einzelnes Interferon α-2b, das an ein einzelnes PEG12000 konjugiert ist. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist das Interferon-α-2b-Molekül mit einer Urethanbindung an das PEG12000-Molekül gebunden. Reagenzien und Verfahren zur Herstellung dieses Protein-Polymer-Konjugats finden sich in US-A-5 612 460 von Zalipsky und US-A-5 711 944 von Gilbert et al. Wenn ein derartiges Protein-Polymer-Konjugat in den erfindungsgemäßen Formulierungslösungen verwendet wird, beträgt die bevorzugte Konzentration von PEG-Interferon α-Konjugat 0,03 bis 2,0 mg Interferon α pro Milliliter.
  • Wenn ein einzelnes Interferon-α-Molekül an ein einzelnes Polymermolekül gebunden ist, können die resultierenden PEG-Interferon α-Konjugate in Form eines einzelnen Positionsisomers oder einer Mischung von Positionsisomeren vorliegen. Eine "Mischung von Positionsisomeren" bedeutet, dass die individuellen PEG-Interferon α-Konjugate an unterschiedlichen Stellen von unterschiedlichen Interferon α-Molekülen gebunden sein können. In einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung enthält die PEG-Interferon α-Mischung beispielsweise minde stens ein PEG-Interferon α-Konjugat, das an einen Histidinrest des Interferon α-Moleküls gebunden ist, während ein anderes PEG-Interferon α-Konjugat an eine andere Stelle des Interferon α-Moleküls gebunden ist (z. B. an das Aminoende).
  • Die Konservierung der PEG-Interferon α-Konjugate kann, wie oben beschrieben, durch Lyophilisation erreicht werden. Lyophilisation ist ein Verfahren zum Gefriertrocknen einer Zusammensetzung, bei der eine gefrorene wässrige Mischung behandelt wird, um Wasser zu entfernen. Das Verfahren beinhaltet üblicherweise die Sublimation von Wasser aus den gefrorenen wässrigen Lösungen, üblicherweise unter Bedingungen mit vermindertem Druck. Nach der Lyophilisation kann das PEG-Interferon α-Konjugat über längere Zeiträume gelagert werden.
  • PEG-Interferon α-Konjugate sind jedoch anfällig für Schäden während und nach der Lyophilisation. Schäden an den PEG-Interferon α-Konjugaten können durch den Verlust von Protein, den Verlust der biologischen Aktivität oder durch die Veränderung des Grads und/oder der Beschaffenheit der Konjugation des Interferon α gekennzeichnet sein. Ein PEG-Interferon α-Konjugat kann beispielsweise zu freiem PEG und Interferon α abgebaut werden, was zu einer Herabsetzung des Konjugationsgrads führt. Das resultierende freie PEG kann in ähnlicher weise für die Konjugation mit einem anderen Interferon α zur Verfügung stehen, was möglicherweise zu einem Anstieg des Konjugationsgrads dieses Zielmoleküls führt. In ähnlicher Weise kann ein PEG-Interferon α-Konjugat eine intramolekulare Verschiebung des PEGs von einer Konjugationsstelle zu einer anderen innerhalb desselben Moleküls eingehen, wodurch die Art der Konjugation des Interferon α geändert wird.
  • Die vorliegende Erfindung schützt PEG-Interferon α-Konjugate vor Schäden, indem sie in Formulierungen eingeschlossen werden, die während und nach der Lyophilisation Schäden verhindern. Obwohl die vorliegende Erfindung nicht auf irgendeine spezielle Formulierung begrenzt ist, verwendet das Verfahren in einer bevorzugten Ausführungsform einen Puffer, einen Stabilisator, ein Kryoschutzmittel und ein Lösungsmittel zusätzlich zu dem PEG-Interferon α-Konjugat.
  • Puffer sind geeignet, um den pH-Wert der Formulierung in einem Bereich von 4,5 bis 7,1, vorzugsweise 6,5–7,1 und am meisten bevorzugt 6,8 zu halten. Die Verwendung eines Puffersystems aus Dinatriumphosphat und Mononatriumphosphat ist bevorzugt. Wenn ein System aus Dinatriumphosphat wasserfrei/Mononatriumphosphatdihydrat verwendet wird, ist es vorzugsweise in gleichen Massemengen von Dinatriumphosphat zu Mononatriumphosphat in einer bevorzugten Gesamtkonzentration von 0,005 bis 0,1 molar vorhanden. Andere geeignete Puffersysteme zum Aufrechterhalten des gewünschten pH-Bereichs schließen Citrat/Citronensäure und Natriumacetat/Essigsäure ein.
  • Ein Stabilisierungsmittel ist brauchbar, um Adsorption des PEG-Interferon α-Konjugats an den rostfreien Stahl- und Glasoberflächen der Geräte zu verhindern, die zur Herstellung und Lagerung der das PEG-Interferon α-Konjugat enthaltenden Formulierungen verwendet werden. Als ein Beispiel sind Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivate als Stabilisierungsmittel brauchbar. Mono-9-octadecenoat-poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivate (Polysorbat 80) ist ein bevorzugtes Stabilisierungsmittel. Wenn Polysorbat 80 verwendet wird, ist die bevorzugte Konzentration 0,01 bis 1 mg/ml.
  • Kryoschutzmittel, die auch als kryoschützende Mittel oder Verbindungen bekannt sind, sind Mittel, die chemische Verbin dungen, Zellen oder Gewebe vor den schädlichen Wirkungen des Gefrierens schützen, die üblicherweise mit Lyophilisation verbunden sind. Im Fall der PEG-Interferon α-Konjugate können Kryoschutzmittel dieselben vor Schäden, Adsorption und Verlust durch Vakuum schützen, das bei der Lyophilisation verwendet wird.
  • Das Kryoschutzmittel ist Sucrose.
  • In ähnlicher Weise ist die vorliegende Erfindung nicht auf irgendeine spezielle Menge an verwendetem Kryoschutzmittel begrenzt. In einer Ausführungsform sind Kryoschutzmittel in einer ausreichenden Menge vorhanden, damit das PEG-Interferon α-Konjugat lyophilisiert werden kann. In einer solchen Ausführungsform können Kryoschutzmittel in einer Menge von 0,05 bis 90 %, vorzugsweise 0,05 bis 50 % und am meisten bevorzugt in einer Menge von etwa 0,15 % bis etwa 10 % vorhanden sein, bezogen auf das Gesamtgewicht der PEG-Interferon α-Lösung. Wenn Sucrose verwendet wird, ist die bevorzugte Konzentration 20 bis 100 mg/ml.
  • Formulierungen, die eine wirksame Menge an biologisch aktiven PEG-Interferon α-Konjugaten einschließen, sind zur Behandlung von Krankheitszuständen brauchbar, vorzugsweise als injizierbare wässrige Lösungen. Eine wirksame Menge bedeutet, dass die Formulierung oder das Pulver eine adäquate Konzentration von biologisch aktiver Komponente hat, um einen Krankheitszustand bei einem Tier zu behandeln. Die bevorzugten Interferon α-2b-PEG12000-Konjugate sind geeignet zur Behandlung von Krankheitszuständen wie Nierenzellenkarzinom, mit AIDS zusammenhängendem Kaposi-Sarkom, chronischer und akuter Hepatitis B, chronischer und akuter Non-A, Non-B/C-Hepatitis sowie Hepatitis C. Eine Lösung, die eine wirksame Menge dieses PEG- Interferon α-Konjugats enthält, enthält 0,03 bis 2,0 mg/ml PEG12000-Interferon α-2b-Konjugat, gemessen durch Proteinmasse.
  • Beispiel
  • Dieses Beispiel liefert eine Beschreibung einer erfindungsgemäßen Formulierung und Schutz eines PEG-Interferon α-Konjugats während Lyophilisation und Lagerung. Das PEG-Interferon α-Konjugat wird in eine Lyophilisationsformulierung eingebracht, lyophilisiert und als trockenes Pulver gelagert. Die Komponenten der Formulierung sind wie folgt: Tabelle 1: Formulierung für Lyophilisation und Lagerung
    Figure 00120001
    • * Menge, die in einem angegebenen Volumen von 0,5 ml enthalten war.
    • ** Wasser wurde während der Lyophilisation sublimiert.
    • *** Basierend auf Proteinmasse.
  • Nach der Lyophilisation wurde das resultierende Pulver gelagert, und über einen Zeitraum von sechs Monaten wurden Proben mit Wasser zur Analyse wiederaufgelöst. Die wiederaufgelöste Lösung wurde auf Proteinmassengehalt, Konjugationsgrad des PEG-Interferon α-Konjugats, Bioaktivität und visuelle Klarheit bewertet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 wiedergegeben.
  • Tabelle 2: Stabilitätsdaten Stabilitätsdaten einer 100 μg Ampulle
    Figure 00130001
    • * Angegebene Füllung ist 0,5 ml/Ampulle
    • ** CCS Weißes Pulver, nach dem Wiederauflösen eine klare, farblose Lösung, im Wesentlichen frei von sichtbaren Partikeln.
  • Die Ergebnisse zeigen, dass der Gesamtproteinmassengehalt über den Zeitraum von neun Monaten relativ stabil war. Die Veränderung des Grads an monopegyliertem Interferon α-2b (d. h. Abbau zu freiem Interferon und Polymer oder Erzeugung von dipegyliertem Interferon) war vernachlässigbar. Die Bioaktivität, gemessen durch einen antiviralen Assay auf Zellbasis, blieb im Wesentlichen unverändert. Die wiederaufgelösten Lösungen blieben während des Zeitraums von sechs Monaten klar, farblos und frei von sichtbaren Partikeln. Dies zeigt eine überraschend hohe Stabilität während der Lyophilisation und anschließenden Lagerung.
  • Es ist aus dem obigen ersichtlich, dass die vorliegende Erfindung Formulierungen liefert, die PEG-Interferon α-Konjugate vor Schäden während Lyophilisation und während anschließender Lagerung schützen können.

Claims (25)

  1. Wässrige Formulierung, die Stabilisierung von PEG-Interferon α-Konjugaten während und nach Lyophilisation ermöglicht, die Polyethylenglykol- (PEG)-Interferon α-Konjugate, einen Puffer, einen Stabilisator, ein Kryoschutzmittel und ein Lösungsmittel enthält, wobei das Kryoschutzmittel Sucrose ist.
  2. Formulierung nach Anspruch 1, bei der der Stabilisator ein Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivat ist.
  3. Formulierung nach Anspruch 1, bei der der Puffer ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus einem Dinatriumphosphat/Mononatriumphosphat-Puffer, einem Natriumcitrat/Citronensäure-Puffer und einem Natriumacetat/Essigsäure-Puffer.
  4. Formulierung nach Anspruch 2, bei der der Puffer Natriumphosphat ist und das Lösungsmittel Wasser ist.
  5. Formulierung nach Anspruch 4, bei der das Natriumphosphat wasserfreies Dinatriumphosphat und Mononatriumphosphatdihydrat enthält.
  6. Formulierung nach Anspruch 2, bei der das Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivat Polysorbat 80 ist.
  7. Formulierung nach Anspruch 1, bei der die PEG-Interferon α-Konjugate einzelne PEG-Moleküle enthalten, die mit einzelnen Interferon α-Molekülen konjugiert sind.
  8. Formulierung nach Anspruch 7, bei der die Interferon α-Moleküle ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Interferon α-2a, Interferon α-2b, Interferon α-2c und Consensus-Interferon.
  9. Formulierung nach Anspruch 7, bei der das PEG PEG12000 ist.
  10. Formulierung nach Anspruch 8, bei der die Interferon α-Moleküle Interferon α-2b sind.
  11. Formulierung nach Anspruch 10, bei der die PEG-Moleküle PEG12000 sind, und bei der die Interferon α-2b-Moleküle über eine Urethanbindung an die PEG12000-Moleküle gebunden sind.
  12. Formulierung nach Anspruch 7, bei der die PEG-Interferon α-Konjugate eine Mischung von Positionsisomeren enthalten.
  13. Formulierung nach Anspruch 12, bei der eines der Positionsisomere ein Interferon α-2b-Molekül enthält, das an einem Histidinrest an dem Interferon α-2b-Molekül an ein PEG12000-Molekül gebunden ist.
  14. Formulierung nach Anspruch 4, bei der die Konzentration der PEG-Interferon α-Konjugate 0,03 bis 2,0 mg Interferon α pro ml beträgt, die Konzentration des Natriumphosphats 0,005 bis 0,1 molar ist, die Konzentration des Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivats 0,01 bis 1,0 mg/ml ist und die Konzentration der Sucrose 20 bis 100 mg/ml ist.
  15. Formulierung nach Anspruch 5, bei der die Masse der PEG-Interferon α-Konjugate 0,1 mg Interferon α ist, die Masse des wasserfreien Dinatriumphosphats 0,75 mg ist, die Masse des Mononatriumphosphatdihydrats 0,75 mg ist, die Masse der Sucrose 40 mg ist, die Masse des Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivats 0,05 mg ist und das Volumen des Wassers 0,5 ml ist.
  16. Formulierung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der das PEG-Interferon α-Konjugat PEG12000-Interferon α-2b-Konjugat ist.
  17. Wässrige Formulierung, die Stabilisierung von PEG-Interferon α-Konjugaten während und nach der Lyophilisation ermöglicht, die Interferon α-2b-PEG12000, wasserfreies Dinatriumphosphat, Mononatriumphosphatdihydrat, Sucrose, Polysorbat 80 und Wasser enthält, wobei die Masse des Interferon α-2b-PEG12000 0,1 mg Interferon α ist, die Masse des wasserfreien Dinatriumphosphats 0,75 mg ist, die Masse des Mononatriumphosphatdihydrats 0,75 mg ist, die Masse der Sucrose 40 mg ist, die Masse des Palysorbats 80 0,05 mg ist und das Volumen des Wassers 0,5 ml ist.
  18. Verfahren zur Herstellung eines lyophilisierten Pulvers, bei dem die Formulierung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 17 lyophilisiert wird.
  19. Lyophilisiertes Pulver, das nach dem Verfahren von Anspruch 18 herstellbar ist.
  20. Lyophilisiertes Pulver nach Anspruch 19, bei dem das Pulver 0,08 Gew.-% der PEG-Interferon α-Konjugate, gemessen durch die Masse des Interferon α, 3,6 % des Natriumphosphats, 0,12 Gew.-% des Poly(oxy-1,2-ethandiyl)derivats und 96,2 Gew.-% der Sucrose enthält.
  21. Verfahren zur Herstellung einer Lösung von PEG-Interferon α-Konjugaten, umfassend die Schritte: a) Bereitstellen des lyophilisierten Pulvers von Anspruch 19 und b) Wiederauflösen des lyophilisierten Pulvers mit Wasser, um die Lösung zu erzeugen.
  22. Verfahren nach Anspruch 21, bei dem das Wasser bakteriostatisches Wasser umfasst.
  23. Gegenstand, der eine Spritze oder eine Ampulle umfasst, die das lyophilisierte Pulver nach einem der Ansprüche 19 oder 20 enthält.
  24. Gegenstand nach Anspruch 23, der ferner ein Volumen an Wasser zum Wiederauflösen des Pulvers enthält.
  25. Gegenstand nach Anspruch 24, bei dem das Wasser bakteriostatisches Wasser umfasst.
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