DE60109943T2

DE60109943T2 - Inhibitoren der durch alpha 4 vermittelten zelladhäsion

Info

Publication number: DE60109943T2
Application number: DE60109943T
Authority: DE
Inventors: Takayuki Kawaguchi; Sumihiro Nomura; Mikiko Tsukimoto; Toshiyuki Kume; Ila Sircar
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Current assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 2000-08-31
Filing date: 2001-08-27
Publication date: 2006-02-09
Anticipated expiration: 2021-08-28
Also published as: PT1315694E; WO2002018320A2; US20030176498A1; HUP0302693A2; KR20030059099A; EP1315694A2; DE60109943D1; HUP0302693A3; CN1449377A; EP1315694B1; US7671090B2; US7026501B2; NZ524043A; RU2250895C2; HK1052684B; DK1315694T3; JP2004507519A; US7456217B2; HK1052684A1; NO20030885L

Description

Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Phenylalaninderivate, die Inhibitoren der durch α₄ (einschließlich α₄β₇ und α₄β₁) vermittelten Adhäsion sind, die bei der Behandlung von Zuständen, wie Asthma, Diabetes, rheumatoide Arthritis, entzündliche Darmerkrankung und andere mit Leukozyten-Infiltration in den Magen-Darm-Trakt oder andere mit Epithel ausgekleideten Gewebe, wie Haut, Harnorgane, Atemwege und Gelenksynovium, verbundene Erkrankungen, geeignet sein könnten.
Die erfindungsgemäßen Inhibitoren könnten auch bei der Behandlung von Zuständen geeignet sein, an denen eine Leukozyten-Infiltration zu anderen Geweben, die Lunge, Blutgefäße, Herz und Nervensystem sowie transplantierte Organe, wie Nieren, Leber, Pankreas, Herz und Eingeweide und Blutgefäße, umfassen, beteiligt ist.
Beschreibung des damit zusammenhängenden Standes der Technik
Die Adhäsion von Leukozyten an Endothelzellen oder extrazellulären Matrixproteinen ist ein für die Immunität und Entzündung fundamentaler Prozess und umfasst mehrere adhäsive Wechselwirkungen. Das früheste Ereignis bei diesem Prozess umfasst das Leukozyten-Rollen, worauf anschließend Änderungen in der Integrin-Avidität folgen, was anschließend zu einer festen Adhäsion führt. (Einen Überblick liefern Butcher, Cell 67: 1033–1036 (1991); Harlan, Blood 3: 513–525 (1985); Hemler, Annu. Rev. Immunol. 8: 365–400 (1990); Osborn, Cell 62: 3–6 (1990); Shimizu et al., Immunol. Rev. 114: 109–143 (1990); Springer, Nature 346: 425–434 (1990); und Springer, Cell 76: 301–314 (1994)). Als Reaktion auf die chemotaktischen Faktoren müssen die Leukozyten durch zwei nebeneinander liegende Endothelzellen und in Gewebe wandern, die teilweise aus dem extrazellulären Matrixprotein Fibronectin (PN) (siehe Wayner et al., J. Cell Biol. 105: 1873–1884 (1987)) und Collagen (CN) (siehe Bornstein et al., Ann. Rev. Biochem. 49: 957–1003 (1980); und Miller, Chemistry of the collagens and their distribution, in „Extracellular Matrix Biochemistry", K. A. Piez und A. H. Reddi, Herausgeber, Elsevier, Amsterdam, 41–78 (1983)) bestehen. Wichtige Erkennungsmoleküle, die an diesen Reaktionen teilhaben, gehören zur Integrin-Gen-Superfamilie (einen Überblick liefern Hemler, Annu. Rev. Immunol. 8: 365–400 (1990); Hynes, Cell 48: 549–554 (1987); Shimizu et al., Immunol. Rev. 114: 109–143 (1990); und Springer, Nature 346: 425–434 (1990)).
Integrine sind Heterodimere, die aus nicht kovalent assoziierten Untereinheiten bestehen, die als alpha (α)- und beta (β)-Untereinheiten bezeichnet werden (als Überblick siehe Hemler, Annu. Rev. Immunol. 8: 365–400 (1990); Hynes, Cell 48: 549–554 (1987); Shimizu et al., Immunol. Rev. 114: 109–143 (1990); und Springer, Nature 346: 425–434 (1990)). Bis heute wurden 8 Integrin-β-Untereinheiten identifiziert, die unter Bildung von 23 distinkten Integrinen mit 16 distinkten α-Untereinheiten assoziieren können. Das α₄β₁-Integrin, auch als VLA-4 (Very Late Antigen-4) bekannt, wird auf einer Vielzahl von Zellen exprimiert, einschließlich Lymphozyten, Monozyten und Eosinophilen (siehe Hemler et al., J. Bio. Chem. 262: 11478–11485 (1987); und Bochner et al., J. Exp. Med. 173: 1553–1556 (1991)) und kann beim Rekruitment dieser Zellen während der Entzündung eine wichtige Rolle einnehmen. VLA-4 ist ein Rezeptor für das Gefäßzellen-Adhäsionsmolekül-1 (VCAM-1) (Elices et al., Cell 60: 577–584 (1990)) und das Verbindungssegment 1 (CS-1), eine alternativ gespleißte Region der FN-A-Kette (Wayne et al., J. Cell Biol. 109: 1321–1330 (1989)). Die β₇-Integrin-Untereinheit, die zuerst von Erle et al. (Erle et al., J. Biol. Chem. 266: 11009–11016 (1991)) cloniert wurde, wird nur auf Leukozyten exprimiert und assoziiert bekanntlich mit zwei distinkten α-Untereinheiten, α₄ (Ruegg et al., J. Cell Biol. 117: 179–189 (1992)) und αE (Cerf-Bensussan et al., Eur. J. Immunol. 22: 273–277 (1992); und Kilshaw et al., Eur. J. Immunol. 21: 2591–2597 (1991)).
Der α₄β₇-Komplex besitzt 3 bekannte Liganden (VCAM-1, CS-1, MAdCAM-1). Ein Ligand, der eine einzigartige Spezifität für α₄β₇ zeigt, ist das Mucosal Addressin Cell Adhesion Molecule-1 (MAdCAM-1) (siehe Andrew et al., J. Immunol. 153: 3847–3861 (1994); Briskin et al., Nature 363: 461–464 (1993); und Shyjan et al., J. Immunol. 156: 2851–2857 (1996)). MAdCAM-1 wird auf den Hochendothelvenolen der Peyerschen Plaques, in den mesenterialen Lymphknoten und auf der Lamina propria des Darms und in den Brustdrüsen-Venolen stark exprimiert (Berg et al., Immunol. Rev. 105: 5–18 (1989)). Es hat sich gezeigt, dass das Integrin α₄β₇ und das MAdCAM-1 bei der Regulierung der Lymphozyten-Passage zum normalen Darm wichtig sind (Holzmann et al., Cell 56: 37–46 (1989)).
Der zweite Ligand für α₄β₇ ist CS-1 (siehe Guan et al., Cell 60: 53–61 (1990); und Wayner et al., J. Cell Biol. 109: 1321–1330 (1989)). Die Zellbindungsstelle innerhalb von CS-1 besteht aus 25 Aminosäuren, wobei die Carboxy-terminalen Aminosäurereste EILDVPST das Erkennungsmotiv bilden (siehe Komoriya et al., J. Biol. Chem. 266: 15075–15079 (1991); und Wagner et al., J. Cell Biol. 116: 489–497 (1992)).
Der dritte Ligand für α₄β₇ ist das Gefäßzellen-Adhäsionsmolekül-1 (VCAM-1), ein Cytokin-induzierbares Protein, das auf den Endothelzellen exprimiert wird (siehe Elices et al., Cell 60: 577–584 (1990); und Ruegg et al., J. Cell Biol. 117: 179–189 (1992)). Unzweideutig bleibt zu zeigen, ob MAdCAM-1, VCAM-1 und CS-1 an die gleiche Stelle auf α₄β₇ binden. Unter Verwendung eines Panels von monoclonalen Antikörpern zeigten Andrew et al., dass die α₄β₇-Wechselwirkung mit seinen drei Liganden distinkte, allerdings überlappende Epitope umfasst (Andrew et al., J. Immunol. 153: 3847–3861 (1994)). VCAM-1 und CS-1 (siehe Elices et al., Cell 60: 577–584 (1990)) sind zwei Liganden, die α₄β₇ und α₄β₁ gemeinsam sind. Zusätzlich bindet α₄β₁ bekanntlich an Osteopontin, ein Protein, das in den arteriosklerotischen Plaques aufreguliert ist (siehe Bayless et al., J. Cell Science 111: 1165–1174 (1998)).
Brauchbarkeit der Erfindung
Eine Anzahl von in vivo-Studien zeigt, dass die α₄-Integrine (α₄β₁/α₄β₇) eine kritische Rolle bei der Pathogenese einer Vielzahl von Erkrankungen spielt. Monoclonale Antikörper, die gegen α₄ gerichtet sind, wurden an einer Vielzahl von Erkrankungsmodellen getestet. Die Wirksamkeit des Anti-α₄-Antikörpers wurde an Ratten- und Mäusemodellen für die experimentelle Autoimmun-Enzephalomyelitis gezeigt (siehe Baron et al., J. Exp. Med. 177: 57–68 (1993); und Yednock et al., Nature 356: 63–66 (1992)). Eine nennenswerte Anzahl von Studien wurde durchgeführt, um die Rolle von α₄ bei allergischen Luftwegen zu bewerten (siehe Abraham et al., J. Clin. Invest. 93: 776–787 (1994); Bochner et al., J. Exp. Med. 173: 1553–1556 (1991); Walsh et al., J. Immunol. 146: 3419–3423 (1991); und Weg et al., J. Exp. Med. 177: 561–566 (1993)). Beispielsweise waren monoclonale Antikörper gegen α₄ in mehreren Lungen-Antigen-Provokationsmodellen wirksam (siehe Abraham et al., J. Clin. Invest. 93: 776–787 (1994); und Weg et al., J. Exp. Med. 177: 561–566 (1993)). Das Lisztäffchen, das eine spontane chronische Colitis erfährt, zeigte eine wesentliche Abschwächung der Colitis, wenn Anti-α₄-Antikörper oder Anti-α₄β₇-Antikörper verabreicht wurde (siehe Bell et al., J. Immunol. 151: 4790–4802 (1993); Podolsky et al., J. Clin. Invest. 92: 372–380 (1993); und Hesterberg et al., Gastroenterology 111: 1373–1380 (1996)). In mit CD45RB^high CD4⁺ T-Zellen rekonstituierten SCID-Mäusen blockierten monoclonale Antikörper gegen β₇ oder MAdCAM-1 das Rekruitment von Lymphozyten zum Dickdarm und verminderten die Schwere der Entzündung im Dickdarm, wie histologisch beurteilt (siehe Picarella et al., J. Immunol. 158: 2099–2106 (1997)). Monoclonale Antikörper gegen α₄ hemmen Insulitis und verzögern das Einsetzen von Diabetes bei der nicht fettsüchtigen diabetischen (NOD) Maus (siehe Baron et al., J. Clin. Invest. 93: 1700–1708 (1994); Burkly et al., Diabetes 43: 529–534 (1994); und Yang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 10494–10498 (1993)). Weitere Erkrankungen, an denen α₄ beteiligt ist, umfassen rheumatoide Arthritis (siehe Laffon et al., J. Clin. Invest. 88: 546–552 (1991); und Morales-Ducret et al., J. Immunol. 149: 1424–1431 (1992)), Atherosklerose (siehe Cybulsky et al., Science 251: 788–791 (1991)), Allograft-Abstossung (Isobe et al., J. Immunol. 153: 5810–5818 (1994)), und Nephritis (Allen et al., J. Immunol. 162: 5519–5527 (1999)). Die Hypersensitivitäts-Reaktion vom verzögerten Typ (siehe Issekutz, J. Immunol. 147: 4178–4184 (1991)), die Kontakt-Hypersensitivitäts-Reaktion (siehe Chisholm et al., Eur. J. Immunol. 23: 682–688 (1993) und Ferguson et al., J. Immunol. 150: 1172–1182 (1993)) und die intimale Hyperplasie (Lumsden et al., J. Vasc. Surg. 26: 87–93 (1997)) werden ebenfalls von Anti-α₄-Antikörpern blockiert. Eine ausgezeichnete Übersicht über die in vivo-Studien, die α₄ mit Krankheiten in Verbindung bringen, geben Lobb et al., J. Clin. Invest. 94: 1722–1728 (1995).
Die Leukozyten-Adhäsion an das entzündete Synovium wurde als von α₄β₁/VCAM-1-Wechselwirkungen dominiert vorgeschlagen, allerdings wurden auch erhöhte Anzahlen von α₄β₇-positiven T-Zellen in der Synovialmembran von rheumatoiden Arthritis-Patienten festgestellt (McMurray, Semin: Arthritis Rheum. 25: 215–233 (1996)), und es wurde vorgeschlagen, dass die erhöhte Expression von α₄β₇ zur Entwicklung und zum Anhalten dieser Erkrankung beitragen kann (siehe Lazarovits et al., J. Immunol. 151: 6482–6489 (1993)). In der NOD-Maus wurde MAdCAM-1 auf den Hochendothel-Venolen in entzündeten Inseln innerhalb des Pankreas exprimiert, was eine Rolle für α₄β₇ bei Diabetes nahe legt (siehe Yang et al., Diabetes 46: 1542–1547 (1997)). Die Expression von α₄β₁/α₄β₇ auf einer Vielzahl von Leukozyten und die Gegenwart von α₄β₁/α₄β₇-positiven Zellen in erkrankten Geweben impliziert, dass die beiden Rezeptoren beim Zell-Rekruitment zu einer Reihe von Entzündungsstellen wesentliche Rollen spielen können. Beispielsweise waren monoclonale Antikörper gegen α₄ bei mehreren Lungen-Antigen-Provokationsmodellen wirksam, wie Ovalbumin-induziertes Asthma bei Mäusen, Ratten und Meerschweinchen (siehe Pretolani et al., J. Exp. Med. 180: 795–805 (1994), Fryer et al., J. Clin. Invest. 99: 2036–2044 (1997); und Henderson et al., J. Clin. Invest. 100: 3083–3092 (1997)). Die Expression von α₄β₇ und α₄β₁ auf Lymphozyten und Eosinophilen zusammen mit in vitro-Studien, die zeigen, dass α₄β₇/α₄β₁ die menschliche Eosinophilen-Adhäsion an VCAM-1, CS-1 und MAdCAM-1 vermitteln (Walsh et al., Immunology 9: 112–119 (1996)), legen nahe, dass α₄ für die Behandlung von Asthma ein geeignetes therapeutisches Ziel ist. Insgesamt legen diese Daten nahe, dass die Integrine α₄β₇ und α₄β₁ eine bei einer Vielzahl von entzündlichen Erkrankungen wesentliche Rolle spielen können.
Die Verwendung von monoclonalen Antikörpern gegen Integrine in vivo hat gezeigt, dass eine Anzahl von Integrinen in der Tat wertvolle therapeutische Ziele für entzündliche Immun-vermittelte Erkrankungen, Herz-Kreislauf-Erkrankungen und bei Organtransplantationen sind.
Ebenso wurde beschrieben, dass ein oral bioverfügbarer nicht peptidischer kleiner Molekül-Antagonist von α₄ bei der Behandlung oder Vorbeugung von Zuständen, wie Asthma, entzündliche Darmerkrankung, rheumatoide Arthritis, multiple Sklerose, und anderen Erkrankungen geeignet sein könnte (siehe WO99/36393).
Die Aufgabe bestand hier in der Definition eines oral bioverfügbaren und potenten kleinen Molekül-Antagonisten der α₄-Integrine. Offenbart werden kleine Moleküle, die potente Inhibitoren der α₄-vermittelten Adhäsion an entweder MAdCAM-1, VCAM-1 oder CS-1 sind und die für die Behandlung oder Vorbeugung von entzündlichen Erkrankungen und/oder allergischen Erkrankungen geeignet sein könnten.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft ein neues Phenylalaninderivat der Formel [I]:
wobei X¹ ein Halogenatom ist, X² ein Halogenatom ist, Q ein Rest -CH₂- oder ein Rest -(CH₂)₂- ist, Y ein C_1-6-Alkylrest ist; CO₂R ein Carboxylrest ist, welcher verestert sein kann, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein Arzneimittel, umfassend eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung der Formel [I] oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Weiterhin betrifft die vorliegende Erfindung auch die Verwendung einer Verbindung der Formel [I] für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung oder Vorbeugung von Zuständen, die durch α₄-Integrine (einschließlich α₄β₇ und α₄β₁)-vermittelte Zelladhäsion verursacht werden, die die Verabreichung einer Verbindung der Formel [I] oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon umfasst.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die erfindungsgemäße Verbindung kann in der Form von optischen Isomeren auf der Basis des asymmetrischen Atoms davon existieren, und die vorliegende Erfindung umfasst diese optischen Isomere und Gemische davon.
Bei einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst ein Carboxylrest, der verestert sein kann, einen Carboxylrest und einen veresterten Carboxylrest, der in einem Körper unter Erhalt eines Carboxylrestes hydrolysiert werden kann. Beispiele für einen solchen veresterten Carboxylrest sind ein substituierter oder unsubstituierter C_2-7-Alkoxycarbonylrest, wie eine Methoxycarbonylgruppe, Benzyloxycarbonylgruppe, p-Aminobenzyloxycarbonylgruppe, und dergleichen.
Bei einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung braucht die R/S-Konfiguration einer Bindung nicht festzustehen. Die erfindungsgemäße Verbindung kann eine Verbindung mit einer einzigen Konfiguration oder ein Gemisch mit verschiedenen Konfigurationen sein.
Unter den erfindungsgemäßen Verbindungen sind die bevorzugten Verbindungen der Formel [I-1]:
wobei die Symbole die gleichen sind wie vorstehend definiert.
Bei einer stärker bevorzugten Ausführungsform der Verbindung [I-1] ist X¹ ein Chlor- oder Fluoratom, X² ist ein Chlor- oder Fluoratom, Y ist ein C_1-4-Alkylrest und CO₂R ist ein Carboxylrest oder ein C_2-7-Alkoxycarbonylrest.
Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Verbindung [I-1] ist X¹ ein Chlor- oder Fluoratom, X² ist ein Chloratom oder ein Fluoratom, Q ist ein Rest -CH₂-, Y ist eine Methylgruppe, Ethylgruppe oder eine n-Propylgruppe, und CO₂R ist ein Carboxylrest, ein Methoxycarbonylgruppe, Ethoxycarbonylgruppe oder tert-Butoxycarbonylgruppe.
Besonders bevorzugte Verbindungen sind Verbindungen der Formel [I-1], wobei X¹ ein Fluoratom ist, X² ein Chlor- oder Fluoratom ist, Q ein Rest -CH₂- ist, Y eine Methyl- oder Ethylgruppe ist und CO₂R ein Carboxylrest oder ein C_2-7-Alkoxycarbonylrest ist, wie eine Methoxycarbonyl- und Ethoxycarbonylgruppe.
Die besonders bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen können ausgewählt sein aus:
N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalanin [d.h. (2S)-2-[(2,6-Difluorbenzoyl)amino]-3-[4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)phenyl]propansäure;
N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalanin [d.h. (2S)-2-[(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)amino]-3-[4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)phenyl]propansäure];
N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalanin [d.h. (2S)-2-[(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)amino]-3-[4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)phenyl]propansäure];
N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalanin [d.h. (2S)-2-[(2,6-Difluorbenzoyl)amino]-3-[4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)phenyl]propansäure];
oder einem C_1-6 Alkylester davon;
oder einem pharmazeutisch verträglichen Salz davon.
Die erfindungsgemäße Verbindung kann entweder in freier Form oder in Form von pharmazeutisch verträglichen Salzen davon verwendet werden. Pharmazeutisch verträgliche Salze umfassen ein Salz mit einer anorganischen Base, einer organischen Base oder einer basischen Aminosäure (z.B. ein Alkalimetallsalz, wie ein Natrium- und ein Kaliumsatz; ein Erdalkalimetallsalz, wie ein Magnesium- und Calciumsalz; oder ein Salz mit einem Amin, wie ein Ammoniumsalz, Triethylammoniumsalz, ein Salz mit Lysin und dergleichen) und ein Salz mit einer anorganischen Säure oder einer organischen Säure (z.B. Hydrochlorid, Sulfat, Nitrat, Hydrobromid, Methansulfonat, p-Toluolsulfonat, Acetat, Maleat). Die pharmazeutisch verträglichen Salze umfassen auch ein intramolekulares Salz davon oder ein Solvat oder Hydrat davon.
Merkmale der vorliegenden Verbindung sind der Einbau eines C_1-6-Alkoxy-substituierten C_1-2-Alkylrestes an der 4'-Position des Biphenylkerns und die Kombination der Dihalogen-substituierten Benzoylgruppe und des 2',6'-Di(C_1-6-alkoxy)-4'-(C_1-6-alkoxy-substituierten C_1-2-alkyl)-Biphenylkerns, wobei solche Merkmale in den bisherigen Veröffentlichungen nicht speziell beschrieben wurden.
Die erfindungsgemäße Verbindung besitzt eine wirksame inhibitorische Aktivität gegen die α₄-vermittelte Zelladhäsion und zeigt nach oraler Verabreichung eine ausgezeichnete Bioverfügbarkeit, die die Verbesserung insgesamt widerspiegelt in: a) metabolischer Stabilität, b) Plasmaprotein-Binden und c) wässrige Löslichkeit. Insbesondere vermindert der Einbau eines C_1-6-Alkoxy-substituierten C_1-2-Alkylrestes in der 4'-Position des Biphenylkerns den schnellen Metabolismus, der mit einigen der in den bisherigen Veröffentlichungen beschriebenen Verbindungen festgestellt wurde. Die erfindungsgemäße Verbindung vermindert die Leber-Clearance in der Leber und verbessert dadurch die Bioverfügbarkeit.
Die erfindungsgemäße Verbindung zeigt darum in vivo ausgezeichnete Verbesserungen gegenüber den ungünstigen durch die α₄-vermittelte Zelladhäsion verursachten Zuständen.
Die erfindungsgemäße Verbindung kann für ein Verfahren der Behandlung oder Vorbeugung von durch α₄ (einschließlich α₄β₁ und α₄β₇)-Adhäsion vermittelten Zuständen in Säugern, wie einem Menschen, verwendet werden.
Bei einer weiteren Ausführungsform kann die erfindungsgemäße Verbindung für ein Verfahren der Behandlung eines Individuums (z.B. eines Säugers, wie eines Menschen oder eines anderen Primaten) verwendet werden, der an einer Erkrankung leidet, die mit einer Leukozyten (z.B. Lymphozyten- oder Monozyten)-Infiltration in Gewebe (einschließlich Rekruitment und/oder Akkumulation von Leukozyten in Geweben), die das Molekül MAdCAM-1 und/oder VCAM-1 exprimieren, zusammenhängt. Beispielsweise können entzündliche Erkrankungen, einschließlich Erkrankungen, die mit einer Leukozyten-Infiltration in den Magen-Darm-Trakt (einschließlich Eingeweide, assoziiertem Endothel), andere Schleimhautgewebe oder Gewebe, die das Molekül MAdCAM-1 exprimieren (z.B. Eingeweide, assoziierte Gewebe, wie Venolen der Lamina propria von Dünn- und Dickdarm; und Brustdrüsen (z.B. taktierende Brustdrüsen)) mit dem vorliegenden Verfahren behandelt werden. Gleichermaßen kann ein Individuum, das als Ergebnis des Bindens von Leukozyten an Zellen (z.B. Endothelzellen), die das Molekül VCAM-1 exprimieren, an einer mit einer Lekozyten-Infiltration zu Geweben zusammenhängenden Erkrankung leidet, erfindungsgemäß behandelt werden.
Weiterhin beschrieben ist die Verwendung einer erfindungsgemäßen Verbindung zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung oder Vorbeugung von α₄-abhängigen (einschließlich α₄β₁ und α₄β₇) Adhäsions-vermittelten Zuständen oder Erkrankungen, die mit der Leukozyten-Infiltration zusammenhängen, die an einen Säuger oder einen menschlichen Patienten in einer wirksamen Menge der erfindungsgemäßen Verbindung im Gemisch mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel verabreicht werden kann.
Die erfindungsgemäße Verbindung kann demnach zur Behandlung oder Verhinderung solcher entzündlicher Zustände verwendet werden, wie rheumatoide Arthritis (RA); Asthma; allergische Zustände, wie Rhinitis; Atemnotsyndrom bei Erwachsenen; AIDS-Demenz; Alzheimer-Erkrankung; Herz-Kreislauf-Erkrankungen; Thrombose oder gefährliche Plättchenaggregation; Reocclusion nach Thrombolyse; Reperfusionsverletzung; Schuppenflechte; entzündliche Hauterkrankungen, wie Ekzem, Kontaktdermatitis und atopische Dermatitis; Diabetes (z.B. Insulin-abhängiger Diabetes mellitus, Autoimmun-Diabetes); multiple Sklerose; systemischer Lupus erythematodes (SLE); entzündliche Darmerkrankung, wie ulcerative Colitis, Morbus Crohn (regionale Enteritis) und Pouchitis (beispielsweise als Ergebnis nach Proktokolektomie und Ileoanal-Anastomose); mit Leukozyten-Infiltration in den Magen-Darm-Trakt verbundene Erkrankungen, wie Celiac-Erkrankung, nicht tropische Sprue, Enteropathie im Zusammenhang mit seronegativen Arthropathien, lymphozytäre oder kollagene Colitis, und eosinophile Gastroenteritis; Erkrankungen im Zusammenhang mit Leukozyten-Infiltration zu anderen epitelial ausgekleideten Geweben, wie Haut, Harnorgane, Atemwege, und Gelenksynovium; Pankreatitis; Mastitis (Brustdrüse); Hepatitis; Cholecystitis; Cholangitis oder Pericholangitis (Gallenwege und umgebendes Gewebe der Leber); Bronchitis; Sinusitis; entzündliche Erkrankungen der Lunge, die zu einer interstitiellen Fibrose führen, wie Hypersensitivitäts-Pneumonitis; Kollagenerkrankung (in SLE und RA); Sarkoidose; Osteoporose; Osteoarthritis; Atherosklerose; neoplastische Erkrankungen, einschließlich Metastasen des neoplastischen oder kanzerösen Wachstums; Wunden (Wundheilungsverbesserung); bestimmte Augenerkrankungen, wie Netzhautablösung, allergische Konjunktivitis und autoimmune Uveitis; Sjögren-Syndrom; Abstoßung (chronisch und akut) nach Transplantation; Wirt-Gast- oder Gast-Wirt-Erkrankungen; Intima-Hyperplasie; Arteriosklerose (einschließlich Graft-Arteriosklerose nach Transplantation); erneuter Infarkt oder Restenose nach chirurgischem Eingriff, wie perkutane transluminale koronare Angioplastie (PTCA) und perkutane transluminale Arterienrekanalisation; Nephritis; Tumorangiogenese; maligner Tumor; multiple Myelom- und durch Myelom verursachte Knochenresorption; und Verletzung des zentralen Nervensystems, wie Schlaganfall, traumatische Gehirnverletzung und Rückenmarksverletzung.
Das Verfahren kann vorzugsweise zur Behandlung oder Vorbeugung von Asthma, allergischen Zuständen, wie Rhinitis, entzündlicher Darmerkrankung, wie ulcerative Colitis und Morbus Crohn, rheumatoide Arthritis, atopische Dermatitis, multiple Sklerose und Abstoßung nach Transplantation verwendet werden.
Die Verbindungen, die zur Verwendung in der Therapie geeignet sind, können in vivo unter Verwendung geeigneter Tiermodelle bewertet werden. Geeignete Tiermodelle für die Entzündung wurden bereits in Veröffentlichungen beschrieben. Beispielsweise stellen NOD-Mäuse ein Tiermodell des Insulin-abhängigen Diabetes mellitus bereit. Das CD45RB^Hi SCID-Maus-Modell stellt ein Modell mit Ähnlichkeit sowohl für Morbus Crohn als auch ulcerativer Colitis bereit (Powrie et al., Immunity 1: 553–562 (1994)). Lisztäffchen entwickeln eine spontane, oft chronische Colitis, die klinisch und histologisch der ulcerativen Colitis bei Menschen gleicht (Madara et al., Gastroenterology 88: 13–19 (1985)). Das Dextrannatriumsulfat (DSS)-Modell der murinen Colitis wird durch Zugabe von DSS in das Trinkwasser ausgelöst. Die physiologischen und histologischen Änderungen des DSS-Darms wurden bereits sehr gut in der Literatur beschrieben und erinnern an die menschliche ulcerative Colitis (Cooper et al., Laboratory Investig. 69: 238–249 (1993)). IL-10-knockout-Mäuse, die Darmläsionen entsprechend denjenigen der menschlichen entzündlichen Darmerkrankung entwickeln, wurden ebenfalls bereits beschrieben (Strober et al., Cell 75: 203–205 (1993)).
Obwohl die alleinige Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindungen möglich ist, ist ihre Darreichung als Arzneimittel bevorzugt, das eine therapeutisch wirksame Menge der Verbindung der Formel [I] und einen pharmazeutisch verträglichen Träger oder ein Verdünnungsmittel umfasst.
Der Träger muss in dem Sinne verträglich sein, dass er für den Empfänger davon nicht von Nachteil ist. Der pharmazeutisch verträgliche Träger oder das Verdünnungsmittel kann beispielsweise Bindemittel (z.B. Sirup, Gummi arabicum, Gelatine, Sorbit, Tragacanth, Polyvinylpyrrolidon), Exzipientien (z.B. Lactose, Saccharose, Maisstärke, Kaliumphosphat, Sorbit, Glycin), Gleitmittel (z.B. Magnesiumstearat, Talk, Polyethylenglycol, Siliciumdioxid), Zerfallshilfen (z.B. Kartoffelstärke), Netzmittel (z.B. Natriumlaurylsulfat) und dergleichen sein.
Die Arzneimittel umfassen diejenigen in einer Form, die zur oralen, pulmonalen, ophthalmischen, rektalen, parenteralen (einschließlich subkutanen, intramuskulären und intravenösen), intraartikulären, topischen, nasalen Inhalations- (z.B. mit einem Aerosol) oder zur buccalen Verabreichung geeignet ist. Die Formulierungen werden so verstanden, dass sie lang wirkende Formulierungen, die aus der pharmazeutischen Technik bekannt sind, einschließen. Orale und parenterale Verabreichungen sind die bevorzugten Verabreichungsweisen.
Das Arzneimittel kann zweckmäßigerweise in einer Darreichungsform dargereicht und durch eines der aus der pharmazeutischen Technik gut bekannten Verfahren hergestellt werden. Im Allgemeinen werden die Formulierungen hergestellt, indem der Wirkstoff mit einem flüssigen Träger oder einem fein zerteilten festen Träger oder mit beidem gleichmäßig und innig in Assoziation gebracht und das Produkt sodann, falls notwendig, zu der gewünschten Form geformt wird.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen, die zur oralen Verabreichung geeignet sind, können in Form diskreter Einheiten vorliegen, wie Kapseln, Päckchen, Tabletten oder Lutschpastillen, die jeweils eine zuvor festgelegte Menge der erfindungsgemäßen Verbindung in Form eines Pulvers oder in Form von Granulatkörnern oder in Form einer Lösung oder Suspension in einer wässrigen Flüssigkeit enthalten. Formulierungen für andere Anwendungen könnten eine nichtwässrige Flüssigkeit in Form einer Öl-in-Wasser-Emulsion oder einer Wasser-in-Öl-Emulsion; in Form eines Aerosols; oder in Form einer Creme oder einer Salbe oder als Imprägnierung eines transdermalen Pflasters zur Verwendung bei der transdermalen Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindung an einen Patienten, der dessen bedarf, umfassen. Die erfindungsgemäße Verbindung kann auch an einen Patienten, der dessen bedarf, in Form eines Bolus, einer Latwerge oder einer Paste verabreicht werden.
Die erfindungsgemäße Verbindung kann an einen Patienten, der ihrer bedarf, in Mengen verabreicht werden, die ausreichen, um die α₄-vermittelte Zelladhäsion zu vermindern oder zu verhindern. Bei einer anderen Ausführungsfonn kann die erfindungsgemäße Verbindung an den Patienten in Mengen, die ausreichen, um die erwünschte therapeutische und/oder prophylaktische Wirkung zu erreichen, oder in Mengen, die ausreichen, um das durch MAdCAM-1/VDAM-1 vermittelte Binden an einen MAdCAM-1/VCAM-1-Liganden zu vermindern oder zu verhindern und dadurch die Leukozyten-Adhäsion und -Infiltration und die damit zusammenhängende Zellreaktionen zu hemmen, verabreicht werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen und Zusammensetzungen können an Patienten, die an einem hier zuvor aufgeführten Zustand leiden, in einer Menge verabreicht werden, die wirksam ist, um die unerwünschten Symptome des Zustands vollständig oder teilweise zu lindern. Die Symptome können durch Leukozyten-Adhäsion oder Zellaktivierung verursacht werden, deren Auftreten als Ergebnis der Zunahme der VCAM-1- und/oder MAdCAM-1-Expression auf der Oberfläche der Endothelzellen typischerweise erwartet werden würden. Die erhöhte VCAM-1-, MAdCAM-1- und/oder CS-1-Expression kann auf einer normalen Entzündungsreaktion oder auf abnormen Entzündungszuständen beruhen. In jedem Fall kann eine wirksame Dosis einer erfindungsgemäßen Verbindung die erhöhte Zelladhäsion auf Grund einer verstärkten VCAM-1- und/oder MAdCAM-1-Expression durch die Endothelzellen verringern. Die Verringerung der im Erkrankungszustand festgestellten Adhäsion um 50% kann als wirksame Verringerung der Adhäsion angesehen werden. Stärker bevorzugt wird eine Verringerung bei der ex vivo Adhäsion um 90% erreicht. Besonders bevorzugt wird die durch VCAM-1-, MAdCAM-1- und/oder CS-1-Wechselwirkung vermittelte Adhäsion durch eine Wirkdosis unterbunden. Klinisch können in einigen Fällen die Wirkungen der Verbindung als Abnahme der Leukozyten-Infiltration in Gewebe oder in Verletzungs- oder Entzündungsstellen festgestellt werden. Um eine therapeutische Wirksamkeit zu erreichen, werden die erfindungsgemäßen Verbindungen oder Präparate sodann zur Bereitstellung einer Dosis verabreicht, die wirksam ist, um die Leukozyten-Adhäsion oder Zellaktivierung zur Linderung der unerwünschten Symptome zu verringern oder zu unterbinden.
Die Menge der Verbindung [I], die erforderlich ist, um eine therapeutische Wirkung zu erzielen, schwankt mit der bestimmten Verbindung, dem Verabreichungsweg, Alter, Geschlecht, Gewicht und Zustand des zu behandelnden Individuums und der bestimmten zu behandelnden Störung oder Erkrankung. Eine geeignete Tagesdosis der Verbindung [I] oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon für ein Säugerindividuum, das an einem Zustand, wie hier beschrieben, leidet oder wahrscheinlich daran leidet, beträgt 0,1 bis 100 mg/kg Körpergewicht des Säugerindividuums, vorzugsweise 0,3 bis 30 mg/kg Säuger-Körpergewicht. Im Falle der parenteralen Verabreichung kann die Dosis im Bereich von 0,1 bis 10 mg der Verbindung pro kg Körpergewicht, vorzugsweise von 0,3 bis 3 mg/kg Säuger-Körpergewicht liegen. Im Falle der oralen Dosierung kann eine zweckmäßige (tägliche) Dosis im Bereich von 1 bis 100 mg der Verbindung pro kg Körpergewicht, vorzugsweise allerdings im Bereich von 2 bis 30 mg der Verbindung pro kg liegen, wobei die besonders bevorzugte Dosierung 1 bis 10 mg/kg Säuger- Körpergewicht, verabreicht 2 bis 3-mal täglich, beträgt. Im Falle der topischen Verabreichung, z.B. auf die Haut oder das Auge, kann eine geeignete Dosis einer Verbindung der Formel [I] oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon im Bereich von 0,1 bis 100 μg der Verbindung pro kg liegen.
Die Verbindung der Formel [I] oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon kann durch die Schritte hergestellt werden, umfassend

(1) Überführen einer Verbindung der Formel [II]
wobei CO₂R¹ ein veresterter Carboxylrest ist und die anderen Symbole die gleichen sind wie zuvor definiert, in eine Verbindung der Formel [Ia]
wobei die Symbole die gleichen sind wie vorstehend definiert,
(2) Umwandeln des veresterten Carboxylrests der Verbindung [Ia] in einen Carboxylrest, falls notwendig, und
(3) Umwandeln der resultierenden Verbindung in ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon, falls weiterhin gewünscht.

Schritt 1: Die Umwandlung der Verbindung [II] in die Verbindung [Ia] kann durch eines der im Folgenden beschriebenen Verfahren A bis D durchgeführt werden.
Schritt 2: Die Umwandlung des veresterten Carboxylrests CO₂R¹ in einen Carboxylrest kann durch ein herkömmliches Verfahren durchgeführt werden, das je nach Typ des veresterten umzuwandelnden Carboxylrests gewählt wird, beispielsweise Hydrolyse unter Verwendung einer Base (z.B. ein Alkalimetallhydroxid, wie LiOH und NaOH) oder einer Säure (z.B. HCl), Behandlung mit einer Säure (z.B. TFA) und dergleichen.
Schritt 3: Die Umwandlung der resultierenden Verbindung [I] in ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon kann durch ein herkömmliches Verfahren unter Verwendung einer Base (z.B. eine anorganische Base, wie NaOH, eine organische Base, wie Triethylamin, oder eine basische Aminosäure, wie Lysin) oder einer Säure (z.B. eine anorganische Säure, wie HCl, HNO₃ und H₂SO₄, eine organische Säure, wie Essigsäure und Maleinsäure, oder eine saure Aminosäure, wie Asparaginsäure und Glutaminsäure) durchgeführt werden.
Die Umwandlung der Verbindung [II] in die Verbindung [Ia] kann durch eines der folgenden Verfahren (Verfahren A–D) erreicht werden:
Verfahren A:
Die Verbindung [Ia], wobei Q ein Rest -CH₂- ist, kann hergestellt werden durch:

(1) Oxidieren der Verbindung [II] unter Erhalt einer Verbindung der Formel [III]
wobei die Symbole die gleichen sind wie vorstehend definiert, und
(2) reduktives Kondensieren der Verbindung [III] mit einer Verbindung der Formel [IV]: Y-OH [IV]wobei Y gleich ist wie zuvor definiert.

Schritt 1: Die Oxidationsreaktion kann durch ein herkömmliches Verfahren unter Verwendung eines Oxidationsmittels mit oder ohne eine Base in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden.
Das Oxidationsmittel kann aus den herkömmlichen oxidierenden Reagentien gewählt werden, wie MnO₂, SO₃·Pyridin, KMnO₄, PCC, PDC und dergleichen.
Die Base kann aus den herkömmlichen organischen Basen, wie Trialkylamin (z.B. Et₃N, DIEA), gewählt werden.
Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Oxidationsreaktion nicht stört, beispielsweise Halogenmethane (z.B. CH₂Cl₂, CHCl₃), aromatische Kohlenwasserstoffe (z.B. Benzol, Toluol), DMSO, H₂O oder ein Gemisch davon.
Die Umsetzung kann bei einer Temperatur von –50°C bis 50°C, vorzugsweise bei Raumtemperatur durchgeführt werden.
Schritt 2: Die Kondensation der Verbindung [III] mit der Verbindung [IV] kann in Gegenwart eines Reduktionsmittels und eines Dehydratationsreagens in einem Lösungsmittel oder ohne ein Lösungsmittel durchgeführt werden.
Das Reduktionsmittel kann aus den herkömmlichen Reduktionsmitteln gewählt werden, wie Trialkylsilan (z.B. Triethylsilan) und dergleichen.
Das Dehydratationsreagens umfasst Schwefelsäure, Trifluoressigsäure und dergleichen.
Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Reaktion nicht stört, beispielsweise Ether (z.B. Dioxan, THF), aromatische Kohlenwasserstoffe (z.B. Benzol, Toluol), Halogenmethane (z.B. CH₂Cl₂ und CHCl₃) oder ein Gemisch davon.
Die Umsetzung kann bei einer Temperatur von –50°C bis 50°C, vorzugsweise bei 0°C bis Raumtemperatur durchgeführt werden.
Verfahren B:
Die Verbindung [Ia] kann hergestellt werden durch:

(1) Umwandeln der Verbindung [II] in eine Verbindung [V]:
wobei Z eine Abgangsgruppe ist und die anderen Symbole die gleichen sind wie zuvor definiert, und
(2) Umsetzen der Verbindung [V] mit einer Verbindung [IV].

Als Abgangsgruppe von Z kann vorzugsweise ein Halogenatom (z.B. ein Chlor-, Brom- und Iodatom), ein Alkansulfonyloxyrest (z.B. eine Methansulfonylgruppe) oder ein Arylsulfonyloxyrest (z.B. eine Benzolsulfonyl- und p-Toluolsulfonylgruppe) verwendet werden.
Schritt 1: Die Umwandlung der Verbindung [II] in die Verbindung [V] kann durch Halogenieren oder Sulfonylieren der Verbindung [II] durchgeführt werden.
Die Halogenierungsreaktion kann durch das herkömmliche Verfahren unter Verwendung eines Halogenierungsreagens mit oder ohne eine Base in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden.
Das Halogenierungsreagens kann aus den herkömmlichen Halogenierungsreagentien gewählt werden, wie Phosphortrihalogenid (z.B. Phosphortribromid, Phosphortrichlorid) und eine Kombination von Tetrahalogenmethan (z.B. CBr₄) und Triphenylphosphin.
Die Base kann aus den herkömmlichen anorganischen Basen gewählt werden, wie Alkalimetallcarbonat (z.B. Na₂CO₃, K₂CO₃), Alkalimetallhydrogencarbonat (z.B. NaHCO₃, KHCO₃) und dergleichen.
Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Kondesationsreaktion nicht stört, beispielsweise Halogenmethane (z.B. CH₂Cl₂, CHCl₃), Ether (z.B. Dioxan, Diethylether, THF), DMF, DMSO oder ein Gemisch davon.
Die Umsetzung kann bei einer Temperatur von –50°C bis 50°C, vorzugsweise bei 0°C bis Raumtemperatur durchgeführt werden.
Die Sulfonylierungsreaktion kann durch das herkömmliche Verfahren unter Verwendung eines Sulfonylierungsreagens mit einer Base in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden.
Das Sulfonylierungsreagens kann aus einem Alkansulfonylhalogenid und einem Arylsulfonylhalogenid gewählt werden, wie Methansulfonylchlorid, Benzolsulfonylchlorid, p-Toluolsulfonylchlorid und dergleichen.
Die Base kann aus einer organischen Base (z.B. Trialkylamin, wie Et₃N, DIEA, DBU und 4-Methylmorpholin und Pyridin), einem Alkalimetallcarbonat (z.B. Na₂CO₃, K₂CO₃), einem Alkalimetallhydrogencarbonat (z.B. NaHCO₃, KHCO₃), einem Alkalimetallhydroxid (z.B. NaOH, KOH), einem Erdalkalimetallhydroxid (z.B. Ba(OH)₂) und dergleichen gewählt werden.
Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Umsetzung nicht stört, beispielsweise Halogenmethane (z.B CH₂Cl₂, CHCl₃), Ether (z.B. Dioxan, Diethylether, THF), DMF, DMSO, oder ein Gemisch davon.
Die Reaktion kann bei einer Temperatur von –50°C bis 50°C, vorzugsweise –20°C bis 0°C durchgeführt werden.
Schritt 2: Die Umsetzung der Verbindung [V] mit der Verbindung [IV] kann in Gegenwart oder Abwesenheit einer Base und/oder eines Dehalogenierungsmittels, wie eine Silberverbindung (z.B. Silber(I)-oxid (Ag₂O) und Silberoxid (AgO)) (siehe Ortiz et al., Synth. Commun. 23: 749–756 (1993)), in einem geeigneten Lösungsmittel oder ohne ein Lösungsmittel durchgeführt werden.
Vorzugsweise kann die Umsetzung in Gegenwart einer Silberverbindung ohne eine Base in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden.
Die Base kann aus herkömmlichen anorganischen Basen und organischen Basen gewählt werden, wie Alkalimetallcarbonat (z.B. Na₂CO₃, K₂CO₃), Alkalimetallhydrogencarbonat (z.B. NaHCO₃, KHCO₃), Trialkylamin (z.B. Et₃N), Pyridin und dergleichen.
Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Kondensationsreaktion nicht stört, z.B. aromatische Kohlenwasserstoffe (z.B. Benzol, Toluol), Halogenmethane (z.B. CH₂Cl₂, CHCl₃), Ether (z.B. Dioxan, Diethylether, THF), DMF, DMSO, MeCN oder ein Gemisch davon.
Die Umsetzung kann bei einer Temperatur von Raumtemperatur bis 100°C durchgeführt werden.
Verfahren C:
Die Verbindung [Ia] kann durch Alkylierung der Verbindung [II] mit einer Verbindung der Formel [VI] hergestellt werden: Y-Z [VI]wobei die Symbole die gleichen sind wie zuvor definiert.
Die Alkylierung kann in Gegenwart oder Abwesenheit einer Base und/oder eines Dehalogenierungsreagens, wie eine Silberverbindung (z.B. Silber(I)-oxid (Ag₂O) und Silberoxid (AgO)), (siehe Choi et al., J. Med. Chem. 39: 1907–1916 (1996)), in einem geeigneten Lösungsmittel oder ohne Lösungsmittel durchgeführt werden. Die Umsetzung kann auf die gleiche Weise wie in Schritt 2 von Verfahren B beschrieben durchgeführt werden.
Verfahren D:
Die Verbindung [Ia] kann durch Kondensieren der Verbindung [II] mit der Verbindung [IV] hergestellt werden.
Die Kondensationsreaktion kann in Gegenwart eines Dehydratisierungsreagens in einem geeigneten Lösungsmittel oder ohne Lösungsmittel durchgeführt werden. Das Dehydratisierungsreagens kann aus den herkömmlichen Dehydratisierungsreagentien gewählt werden, wie Schwefelsäure, p-Toluolsulfonsäure und dergleichen.
Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Kondensationsreaktion nicht stört, beispielsweise aromatische Kohlenwasserstoffe (z.B. Benzol, Toluol), Halogenmethane (z.B. CH₂Cl₂, CHCl₃), Ether (z.B. Dioxan, Diethylether, THF), DMF, DMSO, MeCN oder ein Gemisch davon.
Die Umsetzung kann bei einer Temperatur von Raumtemperatur bis 100°C durchgeführt werden.
Die Ausgangsverbindung [II] kann durch eines der folgenden Verfahren (Verfahren E–G) hergestellt werden. Verfahren E:
(In dem obigen Schema sind die Symbole die gleichen wie vorstehend definiert)
Die Verbindung [II] kann durch Kondensieren einer Verbindung der Formel [VII], eines Salzes davon oder eines reaktiven Derivats davon mit einer Verbindung der Formel [VIII] oder eines Salzes davon hergestellt werden.
Ein Salz der Verbindung [VII] oder [VIII] umfasst beispielsweise ein Salz mit einer anorganischen oder organischen Säure (z.B. Trifluoracetat, Hydrochlorid, Sulfat), ein Salz mit einer anorganischen Base (z.B. ein Alkalimetallsalz, wie Natriumsalz oder ein Kaliumsatz, ein Erdalkalimetallsalz, wie ein Barium- oder Calciumsalz).
Die Kondensationsreaktion kann durch ein herkömmliches Verfahren durchgeführt werden, das für eine gewöhnliche Peptidsynthese angewandt wird.
Die Kondensationsreaktion der Verbindung [VII] oder eines Salzes davon mit der Verbindung [VIII] oder eines Salzes davon kann in Gegenwart eines Kondensationsreagens mit oder ohne eine Base in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden.
Das Kondensationsreagens kann aus einem gewählt werden, das für eine herkömmliche Peptidsynthese verwendet werden kann, beispielsweise BOP-Cl, BOP-Reagens, DCC, EDC oder CDI. Das Kondensationsreagens kann mit einem Aktivator (z.B. HOBt) verwendet werden.
Die Base kann aus einer organischen Base (z.B. DIEA, DMAP, DBU, Et₃N, 4-Methylmorpholin), einem Alkalimetallcarbonat (z.B. Na₂CO₃, K₂CO₃), einem Alkalimetallhydrogencarbonat (z.B.: NaHCO₃, KHCO₃), einem Alkalimetallhydroxid (z.B. NaOH, KOH), und dergleichen gewählt werden.
Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Kondensationsreaktion nicht stört, beispielsweise AcOEt, CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, DMF, H₂O oder ein Gemisch davon. Die Umsetzung kann bei einer Temperatur von –50°C bis 50°C, vorzugsweise bei 0°C bis Raumtemperatur durchgeführt werden.
Die Kondensationsreaktion der Verbindung [VIII] oder eines Salzes davon mit dem reaktiven Derivat der Verbindung [VII] wird in Gegenwart oder Abwesenheit einer Base in einem Lösungsmittel durchgeführt.
Beispiele für das reaktive Derivat der Verbindung [VII] sind ein Säurehalogenid (z.B. ein Säurechlorid), ein reaktiver Ester (z.B. ein Ester mit p-Nitrophenol), ein Anhydrid davon, ein gemischtes Anhydrid mit einer anderen Carboxylsäure (z.B. ein gemischtes Anhydrid mit Essigsäure) und dergleichen.
Die Base kann aus einer organischen Base (z.B. DIEA, DMAP, DBU, Et₃N), einem Alkalimetallcarbonat (z.B. Na₂CO₃, K₂CO₃), einem Alkalimetallhydroxid (z.B. NaOH, KOH) und dergleichen gewählt werden.
Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Kondensationsreaktion nicht stört, beispielsweise AcOEt, H₂O, CHCl₃, CH₂Cl₂, C₂H₄CL₂, Et₂O, THF, DMF, CH₂CN, DMSO, Benzol, Toluol oder ein Gemisch davon. Die Umsetzung kann bei einer Temperatur von –30°C bis Raumtemperatur durchgeführt werden. Verfahren F:
(In dem obigen Schema ist L eine Abgangsgruppe, und die anderen Symbole sind wie zuvor definiert.)
Die Verbindung [II] kann durch Umsetzung einer Verbindung der Formel [IX] mit einer Verbindung der Formel [X] hergestellt werden.
Beispiele für die Abgangsgruppe L können ein Halogenatom und eine Trifluormethansulfonyloxygruppe sein.
Die Kupplungsreaktion kann durch ein herkömmliches Aryl-Kupplungsverfahren, z.B. das Suzuki-Kupplungsverfahren (als Referenz siehe: Suzuki et al., Synth. Commun. 11: 513 (1981); Suzuki, Pure and Appl. Chem. 57: 1749–1758 (1985); Suzuki et al., Chem. Rev. 95: 2457–2483 (1995); Shieh et al., J. Org. Chem. 57: 379–381 (1992); und Martin et al., Acta Chemica Scandinavica 47: 221–230 (1993)) hergestellt werden.
Die Kupplungsreaktion kann beispielsweise bei einer Temperatur von Raumtemperatur bis 150°C, vorzugsweise bei einer Temperatur von 80°C bis 150°C in Gegenwart eines Palladium-Katalysators (z.B. Tetrakis(triphenylphosphin)-palladium, Palladium(II)-acetat, Palladium(II)-chlorid), eines Phosphinliganden (z.B. Triphenylphosphin, Triethylphosphit, Trimethylphosphit, Triisopropylphosphit) und einer Base (z.B. K₂CO₃, Et₃N, DIEA, Dabco, Diisopropylamin, Morpholin) in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden. Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Kupplungsreaktion nicht stört, beispielsweise Toluol, THF, DME, DMF, DMA, NMP, H₂O oder ein Gemisch davon. Verfahren G:
(In dem obigen Schema sind die Symbole wie bereits definiert.)
Eine Verbindung der Formel [II] kann auch hergestellt werden durch:

(1) Umwandeln einer Verbindung [IX] zu der entsprechenden Organozinn-Verbindung (z.B. die Verbindung der Formel [XI]) und
(2) Umsetzen der resultierenden Verbindung mit einer Verbindung der Formel [XII]:
wobei die Symbole die gleichen sind wie zuvor definiert.

Schritt 1: Die Umwandlung der Verbindung [IX] in die entsprechende Organozinn-Verbindung kann beispielsweise durch Umsetzung der Verbindung [IX] mit einem Hexaalkyldizinn (z.B. Hexamethyldizinn) bei einer Temperatur von Raumtemperatur bis 150°C, vorzugsweise bei einer Temperatur von 80°C bis 110°C in Gegenwart von Tetrakis(triphenylphosphin)palladium und einem Hilfsstoff (z.B. LiCl) in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden. Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Kupplungsreaktion nicht stört, beispielsweise Dioxan, Toluol, DME, DMF, H₂O oder ein Gemisch davon.
Schritt 2: Die Kupplungsreaktion kann durch ein herkömmliches Aryl-Kupplungsverfahren durchgeführt werden, z.B. das Stille-Kupplungsverfahren (als Referenz siehe: Stille et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 25: 508–524 (1986)).
Die Kupplungsreaktion kann beispielsweise bei einer Temperatur von Raumtemperatur bis 150°C, vorzugsweise bei einer Temperatur von 80°C bis 120°C in Gegenwart von Tetrakis(triphenylphosphin)palladium in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden. Das Lösungsmittel kann aus einem gewählt werden, das die Kupplungsreaktion nicht stört, beispielsweise Toluol, DME, DMF, H₂O, oder ein Gemisch davon.
Die Verbindung [IX] kann hergestellt werden durch: (1) Kondensieren einer Verbindung der Formel [XIII]:
wobei Z¹ ein Halogenatom ist und die anderen Symbole wie zuvor definiert sind, mit einer Verbindung der Formel [XIV]:
wobei CO₂R¹ gleich ist wie zuvor definiert, oder einem Salz davon durch ein herkömmliches, Verfahren E entsprechendes Verfahren; und (2) Umwandeln der Hydroxylgruppe der resultierenden Verbindung in eine Abgangsgruppe durch ein herkömmliches Verfahren. Beispielsweise kann die Umwandlung der Hydroxylgruppe in eine Trifluormethansulfonyloxygruppe unter Verwendung von Trifluormethansulfonsäureanhydrid bei –30°C bis 0°C in Gegenwart einer Base (z.B. Pyridin, NEt₃, DIEA) in einem geeigneten Lösungsmittel (z.B. CH₂Cl₂, CHCl₃, THF oder ein Gemisch davon) durchgeführt werden.
Die Verbindung [VIII] kann hergestellt werden durch: (1) Kondensieren einer Verbindung der Formel [XV]:
wobei P eine Schutzgruppe für eine Aminogruppe ist und die anderen Symbole die gleichen sind wie zuvor definiert, mit einer Verbindung [X] durch ein herkömmliches Arylkupplungsverfahren, und (2) Entfernen der Schutzgruppe für die Aminogruppe der resultierenden Verbindung.
Die Schutzgruppe für die Aminogruppe kann aus den herkömmlichen Schutzgruppen für eine Aminogruppe gewählt werden, beispielsweise ein substituierter oder unsubstituierter Aryl-C_2-7-alkokycarbonylrest (z.B. eine Benzyloxycarbonylgruppe, p-Nitrobenzyloxycarbonylgruppe), ein C_2-7-Alkoxycarbonylrest (z.B. eine tert-Butoxycarbonylgruppe) und dergleichen.
Die Kupplungsreaktion kann auf die gleiche Weise wie für die Umsetzung der Verbindung [IX] mit der Verbindung [X] in Verfahren F beschrieben durchgeführt werden.
Die Entfernung der Schutzgruppe für die Aminogruppe kann durch ein herkömmliches Verfahren, das je nach Typ der zu entfernenden Schutzgruppe gewählt wird, beispielsweise katalytische Reduktion unter Verwendung eines Katalysators (z.B. Palladium-auf-Aktivkohle), Behandlung mit Säure (z.B. TFA, HCl) und dergleichen, durchgeführt werden.
Die Verbindung [XV], wobei L eine Trifluormethansulfonyloxygruppe ist, kann durch Umsetzung der Verbindung der Formel [XVI]:
wobei die Symbole die gleichen sind wie zuvor definiert, mit Trifluormethansulfonsäureanhydrid auf die gleiche Weise wie in Schritt (2) der Herstellung der Verbindung [IX] beschrieben hergestellt werden.
Die Verbindung [X] kann durch ein herkömmliches Verfahren hergestellt werden (als Referenz siehe beispielsweise Kuivila et al., J. Am. Chem. Soc. 83: 2159 (1961); Gerrard, The Chemistry of Boron, Academic Press, New York (1961); Muetterties, The Chemistry of Boron an its Compounds, Wiley, New York (1967); und Alamansa et al., J. Am. Chem. Soc. 116: 11723–11736 (1994)). Beispielsweise kann die Verbindung [X] hergestellt werden durch: (1) Umsetzen einer Verbindung der Formel [XVII]:
wobei Q das gleiche ist wie zuvor definiert, mit einem Alkyllithium (z.B. n-BuLi) bei einer Temperatur von –100°C bis Raumtemperatur in einem geeigneten organischen Lösungsmittel (z.B. Diethylether, THF oder das Gemisch davon), (2) Umsetzen der resultierenden Verbindung mit Trimethylborat bei einer Temperatur von –100°C bis Raumtemperatur in einem organischen Lösungsmittel (z.B. Diethylether, THF oder das Gemisch davon), und (3) Hydrolysieren der resultierenden Verbindung durch ein herkömmliches Verfahren.
Die Hydrolyse kann bei 0°C bis Raumtemperatur in einem geeigneten Lösungsmittel (z.B. Diethylether, THF, Dioxan, H₂O oder das Gemisch davon) in Gegenwart einer Säure (z.B. AcOH oder Citronensäure) und Wasser durchgeführt werden.
In der vorliegenden Beschreibung und den in Ansprüchen bedeutet Halogenatom ein Chlor-, Fluor-, Brom-, oder Iodatom, ein C_1-6-Alkylrest bedeutet einen geradkettigen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Ethyl, n-Propyl, n-Butyl, Isopropyl, tert-Butyl und dergleichen. Ein C_2-7-Alkoxycarbonylrest bedeutet einen geradkettigen oder verzweigten Alkoxycarbonylrest mit 2 bis 7 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise 2 bis 5 Kohlenstoffatomen, wie Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, n-Propoxycarbonyl, n-Butoxycarbonyl, iso-Propoxycarbonyl, tert-Butoxycarbonyl und dergleichen.
Abkürzungen:

BOP-Cl:

Bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)phosphinchlorid

BOP-Reagens:

Benzotriazol-1-yloxy-tris(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorphosphat

DCC:

1,3-Dicyclohexylcarbodiimid

EDC:

1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid

THF:

Tetrahydrofuran

DMF:

N,N-Dimethylformamid

DMSO:

Dimethylsulfoxid

DMA:

N,N-Dimethylacetamid

NMP:

1-Methyl-2-pyrrolidon

DIEA:

Diisopropylethylamin

DMAP:

4-(N,N-Dimethylamino)pyridin

DBU:

1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en

Dabco:

1,4-Diazabicyclo[2.2.2]octan

CDI:

Carbonyldiimidazol

HOBT:

1-Hydroxybenzotriazol

TFA:

Trifluoressigsäure

DME:

1,2-Dimethoxyethan

PCC:

Pyridiniumchlorchromat

PDC:

Pyridiniumdichromat

Ac:

Acetyl

Me:

Methyl

Et:

Ethyl

Pr:

Propyl

Bu:

Butyl

Ph:

Phenyl

EtOAc:

Ethylacetat (=AcOEt)

Beispiele
Beispiel 1: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester

(1) Einem Gemisch von L-Tyrosinethylesterhydrochlorid (55,08 g) und NaHCO₃ (22,52 g) in CH₂Cl₂/H₂O (280 ml/280 ml) wurde portionsweise Di-tert-butylbicarbonat (56,82 g) zugesetzt. Das Gemisch wurde 2 h bei Raumtemperatur gerührt und mit AcOEt verdünnt. Die organische Schicht wurde mit H₂O gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde aus einem Gemisch von Diethylether und Hexan unter Erhalt von N-(tert-Butoxycarbonyl)-L-tyrosinethylester (62,71 g) umkristallisiert. Fp. 87–88°C; MS (APCI) m/z 327 (M + NH₄), 310 (M + H).
(2) Einer Lösung des vorstehend erhaltenen Produkts (61,63 g) in CH₂Cl₂ (1800 ml) unter Argon wurde Pyridin (48 ml) zugesetzt. Die Lösung wurde auf –35°C bis –30°C abgekühlt, und Trifluormethansulfonsäureanhydrid (35 ml) wurde unter Rühren zugetropft. Nach der Zugabe wurde das Gemisch 2 h bei –30°C bis –20°C gerührt. Dem Gemisch wurde Eiswasser zugesetzt, und die organische Schicht wurde abgetrennt, mit 5% wässriger Citronensäure, H₂O und Salzlösung gewaschen. Die resultierende CH₂Cl₂-Lösung wurde getrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel: n-Hexan/EtOAc 4:1) unter Erhalt von N-(tert-Butoxycarbonyl)-O-(trifluormethansulfonyl)-L-tyrosinethylester (87,94 g) gereinigt. Fp. 47–49°C; IR (Nujol) 3390, 1737, 1691 cm^–1; MS (APCI) m/z (M + NH₄).
(3) Einem Gemisch des vorstehend erhaltenen Produkts (76,51 g) und 2,6-Dimethoxy-4-hydroxymethylbenzolboronsäure (62,27 g) in DMF (350 ml) wurde Et₃N (41 g) zugesetzt und mit Argon entgast. Dem Gemisch wurde Pd(PPh₃)₄ (19,5 g) zugesetzt und 1 h bei 80°C bis 90°C unter Argon gerührt. Das Gemisch wurde abgekühlt, mit AcOEt und H₂O verdünnt, über Celite filtriert und mit AcOEt gewaschen. Das Filtrat wurde mit H₂O verdünnt und getrennt. Die organische Schicht wurde mit H₂O und Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) mit Kohle behandelt und eingedampft. Der Rückstand wurde über Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel: n-Hexan/EtOAc 3:2 bis 2:3) gereinigt und unter Erhalt von N-(tert-Butoxycarbonyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester (69,4 g) aus iso-PrOH umkristallisiert. Fp. 142–143°C; IR (Nujol) 3507, 3323, 1731, 1689, 1606 cm^–1; MS (APCI) m/z 477 (M + NH₄).
(4) Einer Lösung des vorstehend erhaltenen Produkts (10,0 g) in Dioxan (50 ml) wurde bei 0°C 4 N HCl-Dioxan (50 ml) zugesetzt, und das Gemisch wurde 2 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wurde mit Diethylether verdünnt. Der resultierende Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt und unter Erhalt von 4-(2,6-Dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylesterhydrochlorid (8,26 g) mit Diethylether gewaschen. IR (Nujol) 3321, 1735 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 360 (M + H).
(5) Einem Gemisch des vorstehend erhaltenen Produkts (1,5 g) in AcOEt/H₂O (60 ml/60 ml), das NaHCO₃ (955 mg) enthält, wurde 2,6-Dichlorbenzoylchlorid (0,6 ml) bei 0°C zugesetzt, und das Gemisch wurde 0,5 h bei 0°C gerührt. Das Gemisch wurde mit AcOEt, H₂O und einer kleinen Menge CH₂Cl₂ verdünnt. Die organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde unter Erhalt von N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester (1,93 g) kristallisiert. Fp. 121°C; IR (Nujol) 3249, 1725, 1641 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 532 (M + H).
(6) Einer Lösung des vorstehend erhaltenen Produkts (508 mg) in CH₂Cl₂ (10 ml) wurde MnO₂ (976 mg) zugesetzt. Das Gemisch wurde 2,5 h bei Raumtemperatur gerührt und 14 h unter Rückfluss erhitzt. Das Gemisch wurde abgekühlt, über Celite filtiert und mit CH₂Cl₂ gewaschen. Das Filtrat wurde unter Erhalt von N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6- dimethoxy-4-formylphenyl)-L-phenylalaninethylester (352 mg) eingedampft. IR (Nujol) 1734, 1691, 1655 cm^–1; MS (APCI) m/z 530 (M + H).
(7) Einem Gemisch des vorstehend erhaltenen Produkts (345 mg) in EtOH (4 ml), das Et₃SiH (226 mg) enthielt, wurde konz. H₂SO₄ (0,5 ml) zugesetzt. Nach 18 h Rühren bei Raumtemperatur wurde das Gemisch mit einem Gemisch von AcOEt und H₂O behandelt. Die organische Schicht wurde nacheinander mit H₂O und Salzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel: n-Hexan/AcOEt 2:1) gereinigt und aus einem Gemisch von Diisopropylether und Isopropanol unter Erhalt der Titelverbindung (254 mg) umkristallisiert. Fp. 91–94°C; IR (Nujol) 3290, 1729, 1652, 1463, 1123 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 560 (M + H).

Beispiel 2: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalaninmethylester

(1) N-(tert-Butoxycarbonyl)-L-tyrosinmethylester (3,34 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(1) beschrieben aus L-Tyrosinmethylesterhydrochlorid (2,69 g) erhalten. Fp. 105–106°C; IR (Nujol) 3415, 3321, 1761, 1691 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 313 (M + NH₄), 296 (M + H).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (3,3 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(2) beschrieben in N-(tert-Butoxycarbonyl)-O-(trifluormethansulfonyl)-L-tyrosinmethylester (4,62 g) umgewandelt. IR (rein) 3366, 1747, 1715 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 445 (M + NH₄).
(3) Das vorstehend erhaltene Produkt (4,56 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(3) beschrieben in N-(tert-Butoxycarbonyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninmethylester (3,21 g) umgewandelt. Fp. 100°C; IR (Nujol) 3360, 1739, 1683, 1661 cm^–1; MS (APCI) m/z 463 (M + NH₄).
(4) Das vorstehend erhaltene Produkt (3,19 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(4) beschrieben in 4-(2,6-Dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninmethylesterhydrochlorid (2,45 g) umgewandelt. Fp. 211–213°C (Zers.); IR (Nujol) 3301, 1739 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 346 (M + H).
(5) Das vorstehend erhaltene Produkt (1,08 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1- (5) beschrieben in N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L- phenylalaninmethylester (874 mg) umgewandelt. Fp. 116–120°C; IR (Nujol) 3230, 3069, 1749, 1732, 1641 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 518 (M + H).
(6) Dem Gemisch des vorstehend erhaltenen Produkts (937 mg) in Dioxan (10 ml), das NaHCO₃ (304 mg) enthielt, wurde portionsweise bei Raumtemperatur eine Lösung von PBr₃ (680 mg) in Dioxan (2 ml) zugesetzt. Nach 20 min Rühren wurde das Gemisch mit Eis gestoppt und mit AcOEt extrahiert. Die organische Schicht wurde nacheinander mit H₂O und Salzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel AcOEt/CHCl₃ 1:10) unter Erhalt von N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(4-brommethyl-2,6-dimethoxyphenyl)-L-phenylalaninmethylester (598 mg) gereinigt. MS (APCI + Q1MS) m/z 584, 582, 580 (M + H).
(7) Ein Gemisch des vorstehend erhaltenen Produkts (571 mg) in EtOH (20 ml), das AgO (659 mg) enthielt, wurde bei Raumtemperatur 7 h ultrabeschallt. Das Gemisch wurde über Celite filtriert und mit EtOH gewaschen. Das Filtrat wurde eingedampft und der Rückstand durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel: AcOEt/CHCl₃ 1:20) unter Erhalt der Titelverbindung (318 mg) gereinigt. MS (APCI + Q1MS) m/z 546 (M + H).

Beispiel 3: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Einer Lösung der Verbindung von Beispiel 1 (207 mg) in THF/H₂O (8 ml/2 ml) wurde bei 5°C LiOH (30 mg) zugesetzt. Das Gemisch wurde 20 h bei 5°C gerührt, mit 6 N HCl (1 ml) gestoppt und mit AcOEt extrahiert. Die organische Schicht wurde mit H₂O und Salzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde aus einem Gemisch von MeOH, Diehtylether und Hexan unter Erhalt der Titelverbindung (147 mg) umkristallisiert. Die Verbindung von Beispiel 2 (301 mg) wurde ebenfalls auf die gleiche Weise unter Erhalt der Titelverbindung (238 mg) hydrolysiert. Fp. 196–198°C; IR (Nujol) 3300, 3270, 1705, 1651, 1462, 1126 cm^–1; MS (ESI – Q1MS) m/z 530 (M – H).
Beispiel 4: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Einem Gemisch der Verbindung von Beispiel 1-(5) oder von Referenzbeispiel 3-(3) (304 mg) in CH₃CN (30 ml), das Ag₂O (868 mg) enthielt, wurde MeI (871 mg) zugesetzt. Das Gemisch wurde 18,5 h bei Raumtemperatur gerührt und sodann 5 h bei 50°C ultrabeschallt. Das Gemisch wurde über Celite filtriert und das Filtrat eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel: AcOEt/n-Hexan 1:2) unter Erhalt der Titelverbindung (222 mg) gereinigt. IR (rein + CHCl₃) 3285, 1736, 1663 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 546 (M + H).
Beispiel 5: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Das in Beispiel 4 (210 mg) erhaltene Produkt wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben in die Titelverbindung (139 mg) umgewandelt. Fp. 232–235°C. IR (Nujol) 3336, 1717, 1685 cm^–1; MS (ESI – Q1MS) m/z 516 (M – H).
Beispiel 6: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-n-propoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester

(1) Einer Lösung des in Beispiel 1-(5) oder in Referenzbeispiel 3-(3) erhaltenen Produkts (3,0 g) in CH₂Cl₂ (80 ml), die PPh₃ (1,77 g) enthielt, wurde bei 0°C CBr₄ (2,8 g) zugesetzt. Das Gemisch wurde 3 h bei Raumtemperatur gerührt und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel: AcOEt/n-Hexan 1:1) unter Erhalt von N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-brommethylphenyl)-L-phenylalaninethylester (3,15 g) gereinigt. IR (Nujol) 1731, 1654 cm^–1; MS (APCI) m/z 596 (M + H).
(2) Ein Gemisch des vorstehend erhaltenen Produkts (304 mg) in n-PrOH (12 ml), das AgO (515 mg) enthielt, wurde 28 h bei 45°C unter Argon ultrabeschallt. Das Gemisch wurde über Celite filtriert, und das Filtrat wurde eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel: n-Hexan/AcOEt 3:1) unter Erhalt der Titelverbindung (258 mg) gereinigt. IR (Nujol) 1733, 1655 cm^–1; MS (APCI) m/z 574 (M + H).

Beispiel 7: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-n-propoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Das in Beispiel 6 erhaltene Produkt (150 ml) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben in die Titelverbindung (142 mg) umgewandelt. Fp 183–186°C; IR (Nujol) 1719, 1684 cm^–1; MS (APCI) m/z 544 (M – H).
Beispiel 8: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-isopropoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Das in Beispiel 6-(1) erhaltene Produkt (231 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 6-(2) beschrieben unter Verwendung von iso-PrOH anstelle von n-PrOH in die Titelverbindung (179 mg) umgewandelt. IR (Nujol) 3270, 1731, 1658 cm^–1; MS (APCI) m/z 574 (M + H).
Beispiel 9: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-isopropoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Das in Beispiel 8 erhaltene Produkt (122 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (117 mg) hydrolysiert. IR (Nujol) 3341, 3070, 1718, 1681 cm^–1; MS (ESI) m/z 544 (M – H).
Beispiel 10: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester

(1) Das in Beispiel 1-(4) erhaltene Produkt (2,1 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(5) beschrieben unter Erhalt von N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester (2,75 g) mit 2,6-Difluorbenzoylchlorid acyliert. Fp. 70–72°C; IR (Nujol) 3400, 3263, 1735, 1654, 1624 cm^–1; MS (APCI) m/z 500 (M + H).
(2) Einer Lösung des vorstehend erhaltenen Produkts (1,72 g) in DMSO (20 ml) wurden nacheinander bei Raumtemperatur Et₃N (4,8 ml) und SO₃·Pyridin (5,6 g) zugesetzt. Das gesamte Gemisch wurde 25 min bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in Eiswasser gegossen, und sodann wurde das Gemisch mit EtOAc extrahiert. Die organische Schicht wurde nacheinander mit 5% wässriger HCl, H₂O und Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und sodann eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel: n-Hexan/EtOAc 5:1 bis 1:1) unter Erhalt von N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-formylphenyl)-L-phenylalaninethylester (1,54 g) gereinigt. Fp. 114–116°C;. IR (Nujol) 3332, 1735, 1695, 1657, 1644, 1623 cm^–1; MS (APCI) m/z 498 (M + H).
(3) Das vorstehend erhaltene Produkt (7,16 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(7) beschrieben in die Titelverbindung (428 mg) umgewandelt. Fp. 87–89°C;. IR (rein + CHCl₃) 3300, 1739, 1668 cm^–1; MS (APCI) m/z 528 (M + H).

Beispiel 11: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalaninmethylester

(1) Das in Beispiel 2-(4) erhaltene Produkt (1,00 g) wurde unter Erhalt von N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninmethylester (873 mg) auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(5) beschrieben mit 2,6-Difluorbenzoylchlorid acyliert. IR (Nujol) 3257, 1743, 1655, 1624 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 503 (M + NH₄), 486 (M + H).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (860 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 2-(6) und (7) beschrieben in die Titelverbindung (220 mg) umgewandelt.

Beispiel 12: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Das in Beispiel 10 erhaltene Produkt (200 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (160 mg) hydrolysiert. Das in Beispiel 11 erhaltene Produkt (220 mg) wurde ebenfalls auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (167 mg) hydrolysiert. Fp. 156–158°C; IR (Nujol) 1735, 1655 cm^–1; MS (ESI) m/z 498 (M + H).
Beispiel 13: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester

(1) Das in Beispiel 10-(1) oder Referenzbeispiel 4-(3) erhaltene Produkt (1,41 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 6-(1) beschrieben in N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-brommethylphenyl)-L-phenylalaninethylester (1,22 g) umgewandelt. IR (Nujol) 3317, 1740, 1653, 1623 cm^–1; MS (APCI) m/z 564 (M + H).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (231 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 6-(2) beschrieben unter Verwendung von MeOH an Stelle von n-PrOH in die Titelverbindung (96 mg) umgewandelt. IR (Nujol) 3347, 1754, 1655, 1626 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 514 (M + H).

Beispiel 14: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Das in Beispiel 13 erhaltene Produkt (96 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (62 mg) hydrolysiert. IR (Nujol) 3303, 3275, 1724, 1709, 1655, 1626 cm^–1; MS (ESI – Q1MS) m/z 484 (M – H).
Beispiel 15: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-n-propoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Das in Beispiel 13-(1) erhaltene Produkt wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 6-(2) beschrieben in die Titelverbindung umgewandelt. IR (rein) 3302, 1739, 1674, 1624 cm^–1; MS (APCI) m/z 542 (M + H).
Beispiel 16: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-isopropoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Das in Beispiel 13-(1) erhaltene Produkt wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 6-(2) beschrieben unter Verwendung von iso-PrOH an Stelle von n-PrOH in die Titelverbindung umgewandelt. IR (Nujol) 3332, 1756, 1653, 1625 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 542 (M + H).
Beispiel 17: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-n-propoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Das in Beispiel 15 erhaltene Produkt wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung hydrolysiert. IR (Nujol) 1735, 1660, 1624 cm^–1; MS (ESI) m/z 512 (M – H).
Beispiel 18: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-isopropoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Das in Beispiel 16 erhaltene Produkt wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung hydrolysiert. IR (Nujol) 1735, 1655, 1624 cm^–1; MS (ESI – Q1MS) m/z 512 (M – H).
Beispiel 19: N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester

(1) Einer Lösung des in Beispiel 1-(4) erhaltenen Produkts (863 mg) und 2-Chlor-6-fluorbenzoesäure (456 mg) in DMF (15 ml) wurden nacheinander bei Raumtemperatur EDC·HCl (549 mg), HOBt (383 mg) und 4-Methylmorpholin (0,48 ml) zugesetzt. Das Gemisch wurde 14 h bei Raumtemperatur gerührt und mit H₂O verdünnt. Das Gemisch wurde mit AcOEt extrahiert, und die organische Schicht wurde nacheinander mit gesättigtem wässrigem NaHCO₃, H₂O und Salzlösung gewaschen. Die resultierende organische Schicht wurde getrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel: n-Hexan/AcOEt 1:1) unter Erhalt von N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester (950 mg) gereinigt. Fp. 101–104°C; IR (Nujol) 2921, 2853, 1733, 1652, 1605 cm^–1; MS (APCI) m/z 516 (M + H).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (630 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(6) beschrieben unter Erhalt von N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-formylphenyl)-L-phenylalaninethylester (466 mg) oxidiert. IR (Nujol) 3279, 1735, 1691, 1657 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 514 (M + H).
(3) Das vorstehend erhaltene Produkt (466 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(7) beschrieben in die Titelverbindung (454 mg) umgewandelt. IR (rein + CHCl₃) 3289, 1737, 1663, 1605 cm^–1; MS (APCI) m/z 544 (M + H).

Beispiel 20: N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Einer Lösung des in Beispiel 19 erhaltenen Produkts (210 mg) in THF (5 ml) wurden bei 5°C 0,5 N LiOH (1,54 ml) und 3% H₂O₂ (65 μl) zugesetzt. Das Gemisch wurde 14 h bei 5°C gerührt und mit 1 N HCl angesäuert. Das Gemisch wurde konzentriert, mit H₂O verdünnt, und der resultierende Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt und unter Erhalt der Titelverbindung (171 mg) mit H₂O gewaschen. Fp. 182–184°C; IR (Nujol) 3295, 1729, 1711, 1653 cm^–1; MS (ESI) m/z 514 (M – H).
Beispiel 21: N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalaninmethylester

(1) Das in Beispiel 2-(4) (49 mg) erhaltene Produkt wurde unter Erhalt von N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninmethylester (58 g) auf die gleiche Weise wie in Beispiel 19-(1) beschrieben mit 2-Chlor-6-fluorbenzoesäure acyliert. IR (Nujol) 1735, 1651 cm^–1; MS (APCI) m/z 519 (M + NH₄).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (58 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(6) beschrieben unter Erhalt von N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-formylphenyl)-L-phenylalaninmethylester (45,8 g) oxidiert. IR (Nujol) 3275, 1743, 1691 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 500 (M + H).
(3) Das vorstehend erhaltene Produkt (2,0 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(7) beschrieben unter Verwendung von MeOH an Stelle von EtOH in die Titelverbindung (1,4 g) umgewandelt. IR (rein + CHCl₃) 3285, 1745, 1665, 1605 cm^–1; MS (APCI + Q1MS) m/z 533 (M + NH₄), 516 (M + H).

Beispiel 22: N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester

(1) Das in Beispiel 19-(1) oder in Referenzbeispiel 5-(3) erhaltene Produkt (3,29 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 6-(1) beschrieben in N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-brommethylphenyl)-L-phenylalaninethylester (2,91 g) umgewandelt. IR (rein + CHCl₃) 3315, 1735, 1662, 1603 cm^–1; MS (APCI) m/z 582, 580, 578 (M + H).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (250 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 2-(7) beschrieben unter Verwendung von MeOH an Stelle von EtOH in die Titelverbindung (190 mg) umgewandelt. IR (Nujol) 1736, 1659 cm^–1; MS (APCI) m/z 530 (M + H).

Beispiel 23: N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Das in Beispiel 22 erhaltene Produkt (130 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (100 mg) hydrolysiert. Fp. 170–175°C; IR (Nujol) 1720, 1680 cm^–1; MS (ESI) m/z 500 (M – H).
Das in Beispiel 21 (27,9 g) erhaltene Produkt wurde ebenfalls auf die gleiche Weise in die Titelverbindung (25,3 g) umgewandelt.
Beispiel 24: N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-n-propoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Das in Beispiel 22-(1) erhaltene Produkt wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 2-(7) beschrieben unter Verwendung von n-PrOH an Stelle von EtOH in die Titelverbindung umgewandelt. IR (rein + CHCl₃) 1737, 1667 cm^–1; MS (APCI) m/z 558 (M + H).
Beispiel 25: N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-isopropoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Das in Beispiel 22-(1) erhaltene Produkt wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 2-(7) beschrieben unter Verwendung von iso-PrOH an Stelle von EtOH in die Titelverbindung umgewandelt. IR (rein + CHCl₃) 3305, 1737, 1665, 1605 cm^–1; MS (APCI) m/z 558 (M + H).
Beispiel 26: N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-n-propoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Das in Beispiel 24 erhaltene Produkt wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung hydrolysiert. IR (Nujol) 1713, 1654 cm^–1; MS (APCI) m/z 528 (M – H).
Beispiel 27: N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-isopropoxymethylphenyl)-L-phenylalanin
Das in Beispiel 25 erhaltene Produkt wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung hydrolysiert. IR (rein + CHCl₃) 3400, 3280, 1737, 1660, 1605 cm^–1; MS (ESI) m/z 528 (M – H).
Beispiel 28: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-[2,6-dimethoxy-4-(2-ethoxyethyl)phenyl]-L-phenylalanin-tert-butylester

(1) Tyrosin-tert-butylester (2,5 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(5) beschrieben unter Erhalt von N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-L-tyrosin-tert-butylester (4,3 g) acyliert. Fp. 177–178°C; IR (Nujol) 1721, 1652 cm^–1; MS (APCI) m/z 427 (M + NH₄), 410 (M + H).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (4,3 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(2) beschrieben in N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-O-(trifluormethansulfonyl)-L-tyrosin-tert-butylester (5,6 g) umgewandelt. Fp. 92–93°C; IR (Nujol) 1716, 1643 cm^–1; MS (APCI) m/z 559 (M + NH₄).
(3) Einer entgasten Suspension des vorstehend erhaltenen Produkts (4,07 g), 2,6-Dimethoxy-4-(2-hydroxyethyl)benzolboronsäure (2,71 g, roh) und Et₃N (2,27 g) in DMF (100 ml) wurde Pd(PPh₃)₄ (866 mg) zugesetzt. Das Gemisch wurde bei 80–90°C 2 h unter Argon erhitzt. Das resultierende Gemisch wurde mit AcOEt verdünnt, mit H₂O gewaschen und über Celite filtriert. Die organische Schicht wurde abgetrennt, getrocknet (MgSO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (basisches Kieselgel (Chromatorex-NH, Fuji Silysia Chem. LTD); Elutionsmittel: AcOEt; und sodann Kieselgel; Elutionsmittel:AcOEt/n-Hexan 3:2 bis 2:1) gereinigt und unter Erhalt von N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-[2,6-dimethoxy-4-(2-hydroxyethyl)phenyl]-L-phenylalanin-tert-butylester (2,5 g) aus Diethylether umkristallisiert. Fp. 96–98°C; IR (Nujol) 1727, 1645 cm^–1; MS (APCI) m/z 591 (M + NH₄).
(4) Das vorstehend erhaltene Produkt (254 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 4 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (116 mg) mit EtI alkyliert. IR (rein + CHCl₃) 3301, 1730, 1669 cm^–1; MS (APCI) m/z 619 (M + NH₄).

Beispiel 29: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-[2,6-dimethoxy-4-(2-ethoxyethyl)phenyl]-L-phenylalanin
Einer Lösung des in Beispiel 28 erhaltenen Produkts (109 mg) in CH₂Cl₂ (2 ml) wurde bei Raumtemperatur 4 N HCl-Dioxan (3 ml) zugesetzt. Das Gemisch wurde 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel:n-Hexan/AcOEt 1:1) unter Erhalt der Titelverbindung (88 mg) gereinigt. IR (Nujol) 3320, 3067, 1736, 1715, 1683 cm^–1; MS (ESI) m/z 544 (M – H).
Beispiel 30: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-[2,6-dimethoxy-4-(2-ethoxyethyl)phenyl]-L-phenylalanin-tert-butylester.

(1) L-Tyrosin-tert-butylester (10,0 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(5) beschrieben unter Erhalt von N-(2,6-Difluorbenzoyl)-L-tyrosin-tert-butylester (15,9 g) mit 2,6-Difluorbenzoylchlorid acyliert. Fp. 145–148°C; IR (Nujol) 1728, 1638 cm^–1; MS (APCI) m/z 395 (M + NH₄), 378 (M + H).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (15,9 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(2) beschrieben in N-(2,6-Difluorbenzoyl)-O-(trifluormethansulfonyl)-L-tyrosin-tert-butylester (21,04 g) umgewandelt. IR (rein + CHCl₃) 1732, 1658 cm^–1; MS (APCI) m/z 527 (M + NH₄).
(3) Das vorstehende Produkt (5,61 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 28-(3) beschrieben in N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-[2,6-dimethoxy-4-(2-hydroxyethyl)phenyl]-L-phenylalanin-tert-butylester (3,54 g) umgewandelt. IR (rein + CHCl₃) 3307, 1731, 1660 cm^–1; MS (APCI) m/z 559 (M + NH₄), 542 (M + H).
(4) Das vorstehend erhaltene Produkt (250 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 4 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (230 mg) mit EtI alkyliert. IR (rein + CHCl₃) 1731, 1675 cm^–1; MS (APCI) m/z 588 (M + NH₄), 570 (M + H).

Beispiel 31: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-[2,6-dimethoxy-4-(2-ethoxyethyl)phenyl]-L-phenylalanin
Das in Beispiel 30 erhaltene Produkt (200 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 29 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (161 mg) hydrolysiert. Fp. 63–70°C; IR (Nujol) 1737, 1660, 1624 cm^–1; MS (APCI) m/z 512 (M – H).
Beispiel 32: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-[2,6-dimethoxy-4-(2-methoxyethyl)phenyl]-L-phenylalaninethylester

(1) Das in Beispiel 1-(2) erhaltene Produkt (43,83 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 28-(3) beschrieben in N-(tert-Butoxycarbonyl)-4-[2,6-dimethoxy-4-(2- hydroxyethyl)phenyl]-L-phenylalaninethylester (38,03 g) umgewandelt. Fp. 112–114°C; IR (Nujol) 3487, 3327, 1729, 1688, 1607 cm^–1; MS (APCI) m/z 491 (M + NH₄).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (3,04 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(4) beschrieben in 4-[2,6-Dimethoxy-4-(2-hydroxyethyl)phenyl]-L-phenylalaninethylesterhydrochlorid (2,57 g) umgewandelt. IR (Nujol) 3400, 1730 cm^–1; MS (APCI) m/z 374 (M + H).
(3) Das vorstehend erhaltene Produkt (2,57 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(5) beschrieben unter Erhalt von N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-[2,6-dimethoxy-4-(2-hydroxyethyl)phenyl]-L-phenylalaninethylester (2,35 g) mit 2,6-Difluorbenzoylchlorid acyliert. Fp. 115–117°C; IR (Nujol) 3568, 3355, 1753, 1655, 1627 cm^–1; MS (APCI) m/z 514 (M + H).
(4) Das vorstehend erhaltene Produkt (329 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 4 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (294 mg) acyliert. IR (Nujol) 3341, 1755, 1655, 1625 cm^–1; MS (APCI) m/z 528 (M + H).

Beispiel 33: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-[2,6-dimethoxy-4-(2-methoxyethyl)phenyl]-L-phenylalanin
Das in Beispiel 32 erhaltene Produkt (187 mg) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 3 beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (143 mg) hydrolysiert. IR (rein + CHCl₃) 1739, 1667 cm^–1; MS (APCI) m/z 498 (M – H).
Beispiel 34: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Die Titelverbindung in Beispiel 1 wurde auch auf dem folgenden alternativen Weg erhalten.

(1) Einer Lösung des in Beispiel 1-(5) oder Referenzbeispiel 3-(3) erhaltenen Produkts (3,00 g) in CH₂Cl₂ (50 ml) wurden bei –5°C Methansulfonylchlorid (0,523 ml) und Et₃N (1,02 mg) bei zugesetzt. Das Gemisch wurde 1 h bei –10°C bis 0°C gerührt, mit H₂O verdünnt und zweimal mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde mit AcOEt- Hexan verrieben und unter Erhalt von N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methansulfonyloxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester (3,34 g) durch Filtration gesammelt. Fp. 109°C; IR (Nujol) 3273, 2923, 2854, 1733, 1655, 1583, 1463 cm^–1; MS (APCI) m/z 610 (M + H).
(2) Eine Suspension des vorstehend erhaltenen Produkts (101 mg) in EtOH (2 ml) wurde 45 min bei 90°C gerührt. Das Gemisch wurde gekühlt, mit H₂O verdünnt und zweimal mit AcOEt extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel: n-Hexan/AcOEt 2:1) unter Erhalt der Titelverbindung (89 mg) gereinigt.

Beispiel 35: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Die Titelverbindung in Beispiel 1 wurde auch auf dem folgenden alternativen Weg erhalten.
Einer Suspension des in Beispiel 1-(5) oder Referenzbeispiel 3-(3) erhaltenen Produkts (532 mg) in EtOH (10 ml) wurde Schwefelsäure (1 ml) zugesetzt. Das Gemisch wurde 24 h unter Rückfluss gerührt. Das resultierende Gemisch wurde gekühlt, mit H₂O verdünnt und mit AcOEt extrahiert. Die organische Schicht wurde mit H₂O, Salzlösung gewaschen, getrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie (Kieselgel; Elutionsmittel:n-Hexan/AcOEt 2:1) unter Erhalt der Titelverbindung (476 mg) gereinigt.
Beispiel 36: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Die Titelverbindung in Beispiel 10 wurde auch auf dem folgenden alternativen Weg erhalten.

(1) Das in Beispiel 10-(1) oder in Referenzbeispiel 4-(3) erhaltene Produkt (73,4 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 34-(1) beschrieben unter Erhalt von N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methansulfonyloxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester (77,7 g) sulfonyliert. Fp. 125–126°C; IR (Nujol) 3335, 2922, 2853, 1756, 1735, 1653, 1625, 1583, 1525, 1464 cm^–1; MS (APCI) m/z 595 (M + NH₄).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (77,7 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 34-(2) beschrieben in die Titelverbindung (70,5 g) umgewandelt.

Beispiel 37: N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Die Titelverbindung in Beispiel 19 wurde auch auf dem folgenden alternativen Weg erhalten.

(1) Das in Beispiel 19-(1) oder in Referenzbeispiel 5-(3) erhaltene Produkt (12,4 g) wurde unter Erhalt von N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methansulfonyloxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester (14,0 g) auf die gleiche Weise wie in Beispiel 34-(1) beschrieben sulfonyliert. Fp. 104–107°C; IR (Nujol) 3286, 1734, 1655, 1605, 1583, 1541, 1460 cm^–1; MS (APCI) m/z 611 (M + NH₄).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (14,0 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 34-(2) beschrieben in die Titelverbindung (13,0 g) umgewandelt.

Referenzbeispiel 1: 2,6-Dimethoxy-4-hydroxymethylbenzolboronsäure
Einer Lösung von 3,5-Dimethoxybenzylalkohol (80 g) in THF (1900 ml) wurde portionsweise bei –50°C während 0,5 h n-BuLi (1,6 M in n-Hexan, 750 ml) unter Argon zugesetzt. Das Gemisch wurde während 2 h auf Raumtemperatur aufgewärmt und wieder auf –60°C abgekühlt. Dem Gemisch wurde (MeO)₃B (200 ml) zugesetzt. Das resultierende Gemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmt und über Nacht gerührt. Dem Reaktionsgemisch wurde portionsweise bei 0°C eine Lösung von Citronensäure (300 mg) in H₂O (1200 mg) zugesetzt. Die wässrige Schicht wurde abgetrennt, mit NaCl gesättigt und mit AcOEt extrahiert. Der vereinigte AcOEt-Extrakt wurde getrocknet (Na₂SO₄) und eingedampft. Der kristalline Rückstand wurde mit AcOEt verrieben und unter Erhalt der Titelverbindung (75,1 g) durch Filtration gesammelt. Fp. 92–98°C. IR (Nujol) 3460, 3408, 3218, 1613, 1578, 1288, 1231, 1123, 1055, 960, 779 cm^–1; MS (APCI) m/z 230 (M + NH₄).
Referenzbeispiel 2: 2,6-Dimethoxy-4-(2-hydroxyethyl)benzolboronsäure

(1) Einem Gemisch von LiAlH₄ (1,05 g) in Dioxan (100 ml) wurde portionsweise bei 0°C eine Lösung von 3,5-Dimethoxyphenylessigsäure (5,32 g) in Dioxan (20 ml) zugesetzt. Das Gemisch wurde 0,5 h bei Raumtemperatur und 2 h bei 50°C gerührt. Das Gemisch wurde mit konz. NH₄OH gestoppt und über Celite filtriert. Das Filtrat wurde unter Erhalt von 3,5-Dimethoxyphenethylalkohol (5,1 g) eingedampft. IR (rein) 3400, 1600 cm^–1; MS (GC-EI) 182 (M⁺), 151 (M – MeO).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (27,16 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Referenzbeispiel 1 beschrieben in die Titelverbindung (39,1 g) umgewandelt.

Referenzbeispiel 3: N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Die Verbindung in Beispiel 1-(5) wurde auch auf dem folgenden alternativen Weg erhalten.

(1) N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-L-tyrosinethylester (171,4 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(5) beschrieben aus L-Tyrosinethylesterhydrochlorid (110,0 g) erhalten. Fp. 141–142°C; IR (Nujol) 3381, 3329, 1718, 1659 cm^–1; MS (APCI) m/z 382 (M + H).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (130 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(2) beschrieben in N-(2,6-Dichlorbenzoyl)-O-(trifluormethansulfonyl)-L-tyrosinethylester (174,9 g) umgewandelt. IR (rein) 1737, 1651 cm^–1; MS (APCI) m/z 514 (M + H).
(3) Das vorstehend erhaltene Produkt (174,9 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(3) beschrieben in die Titelverbindung (119,7 g) umgewandelt.

Referenzbeispiel 4: N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Die Verbindung in Beispiel 10-(1) wurde auch auf dem folgenden alternativen Weg erhalten.

(1) L-Tyrosinethylesterhydrochlorid (10,0 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(5) beschrieben unter Erhalt von N-(2,6-Difluorbenzoyl)-L-tyrosinethylester (13,2 g) mit 2,6-Difluorbenzoylchlorid acyliert. Fp. 149–150°C; IR (Nujol) 3424, 3277, 1721, 1660, 1624 cm^–1; MS (APCI) m/z 350 (M + H).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (12,18 g) wurde in auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(2) beschrieben in N-2,6-Difluorbenzoyl)-O-(trifluormethansulfonyl)-L-tyrosinethylester (16,0 g) umgewandelt. Fp. 76–78°C; IR (Nujol) 3290, 1739, 1657, 1625, 1539, 1502, 1467, 1423, 1249, 1214, 1140, 1009, 891, 793 cm^–1; MS (APCI) m/z 482 (M + H).
(3) Das vorstehend erhaltene Produkt (7,7 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(3) beschrieben unter Erhalt der Titelverbindung (7,6 g) mit 2,6-Dimethoxy-4-hydroxymethylbenzolboronsäure umgesetzt.

Referenzbeispiel 5: N-(2,6-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-hydroxymethylphenyl)-L-phenylalaninethylester
Die Titelverbindung in Beispiel 19-(1) wurde auch auf dem folgenden alternativen Weg erhalten.

(1) L-Tyrosinethylesterhydrochlorid (102 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 19-(1) beschrieben unter Erhalt von N-(2,6-Chlor-6-fluorbenzoyl)-L-tyrosinethylester (137,2 g) acyliert. Fp. 144–145°C; IR (Nujol) 3425, 3260, 1720, 1659, 1615 cm^–1; MS (APCI) m/z 366 (M + H).
(2) Das vorstehend erhaltene Produkt (136,2 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(2) beschrieben in N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-O-trifluormethansulfonyl)-L-tyrosinethylester (189,8 g) umgewandelt. IR (rein) 3283, 1738, 1657, 1605 cm^–1; MS (APCI) m/z 498 (M + H).
(3) Das vorstehend erhaltene Produkt (189,8 g) wurde auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1-(3) beschrieben in die Titelverbindung (142,3 g) umgewandelt.

Claims

Phenylalaninderivat der Formel [I]:
wobei X¹ ein Halogenatom ist; X² ein Halogenatom ist; Q ein Rest -CH₂- ist oder ein Rest -(CH₂)₂- ist; Y ein C_1-6-Alkylrest ist; CO₂R ein Carboxylrest ist, welcher verestert sein kann; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei die chemische Struktur die folgende Formel [I-1] ist;
wobei die Symbole wie in Anspruch 1 definiert sind.
Verbindung gemäß Anspruch 2, wobei X¹ ein Chloratom oder Fluoratom ist; X² ein Chloratom oder Fluoratom ist; Y ein C_1-4-Alkylrest ist; und CO₂R ein Carboxylrest oder ein C_2-7-Alkoxycarbonylrest ist.
Verbindung gemäß Anspruch 3, wobei X¹ ein Chloratom oder Fluoratom ist; X² ein Chloratom oder Fluoratom ist; Q ein Rest -CH₂- ist; Y eine Methylgruppe, Ethylgruppe oder n-Propylgruppe ist; und CO₂R ein Carboxylrest, Methoxycarbonylrest, Ethoxycarbonylrest oder ein tert.-Butoxycarbonylrest ist.
Verbindung gemäß Anspruch 3, wobei X¹ ein Fluoratom ist; X² ein Chloratom oder Fluoratom ist; Q ein Rest -CH₂- ist; Y eine Methylgruppe oder Ethylgruppe ist; und CO₂R ein Carboxylrest oder ein C_2-7-Alkoxycarbonylrest ist.
Verbindung ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalanin; N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalanin; N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalanin; N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalanin; oder ein C_1-6-Alkylester davon; oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalanin oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-ethoxymethylphenyl)-L-phenylalanin oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
N-(2-Chlor-6-fluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalanin oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
N-(2,6-Difluorbenzoyl)-4-(2,6-dimethoxy-4-methoxymethylphenyl)-L-phenylalanin oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Arzneimittel, umfassend eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 10 in einer Beimischung mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel.
Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 10 zur Verwendung als einen therapeutischen Wirkstoff.
Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 10 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung oder Vorbeugung eines durch α₄-vermittelte Zelladhäsion hervorgerufenen Zustands.
Verwendung gemäß Anspruch 13, wobei der Zustand ausgewählt ist aus rheumatoider Arthritis, Asthma, allergischen Zuständen, ARDS, AIDS-Demenz, Alzheimer-Krankheit, Herz-Kreisauf-Erkrankungen, Thrombose oder gefährlicher Blutplättchenaggregation; Reocclusion nach Thrombolyse, Reperfusionsverletzung, Schuppenflechte, Hautentzündungserkrankungen, Diabetes, multipler Sklerose, systemischem Lupus erythematodes, entzündlicher Darmerkrankung, mit Leukozyteninfiltration in den Magen-Darm-Trakt verbundenen Erkrankungen, mit Leukozyteninfiltration in die mit Epithel ausgekleideten Gewebe verbundenen Erkrankungen, Pankreatitis, Mastitis, Hepatitis, Cholezystitis, Cholangitis oder Pericholangitis; Bronchitis, Sinusitis, entzündlichen Erkrankungen der Lunge, Kollagenerkrankung, Sarcoidose, Osteoporose, Osteoarthritis, Atherosklerose, neoplastischen Erkrankungen, Wunden, Augenerkrankungen, Sjögren-Syndrom, Abstoßung nach Transplantation, Gast-Wirt- oder Wirt-Gast-Erkrankungen, Intima-Hyperplasie, Arteriosklerose, erneutem Infarkt oder Restenose nach chirurgischem Eingriff, Nephritis, Tumorangiogenese, malignem Tumor, multipler Myelom- und durch Myelom verursachte Knochenresorption und Verletzung des zentralen Nervensystems.
Verwendung gemäß Anspruch 13, wobei der Zustand Asthma, allergische Zustände, entzündliche Darmerkrankung, rheumatoide Arthritis, atopische Dermatitis, multiple Sklerose oder Abstoßung nach Transplantation ist.
Verfahren zur Herstellung eines Phenylalaninderivats der Formel [I]:
wobei X¹ ein Halogenatom ist, X² ein Halogenatom ist, Q ein Rest -CH₂- oder ein Rest -(CH₂)₂- ist, Y ein C_1-6-Alkylrest und CO₂R ein Carboxylrest ist, welcher verestert sein kann, oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon, umfassend das Umwandeln einer Verbindung der Formel [II]:
wobei CO₂R¹ ein veresterter Carboxylrest ist und die anderen Symbole wie oben definiert sind, in eine Verbindung der Formel [Ia]:
wobei die Symbole wie vorstehend definiert sind, gefolgt vom Umwandeln des veresterten Carboxylrests der entstandenen Verbindung [Ia] in einen Carboxylrest, falls nötig, und gefolgt vom Umwandeln der entstandenen Verbindung in ein pharmezeutisch verträgliches Salz davon, falls ferner erwünscht.
Verfahren gemäß Anspruch 16, wobei die Umwandlung der Verbindung [II] in die Verbindung [Ia] das Oxidieren der Verbindung [II] umfasst, gefolgt von reduzierendem Kondensieren der entstandenen Verbindung mit einer Verbindung der Formel [IV]: Y-OH [IV]wobei Y ein C_1-6-Alkylrest ist.
Verfahren gemäß Anspruch 16, wobei die Umwandlung der Verbindung [II] in die Verbindung [Ia] das Umwandeln der Verbindung [II] in einer Verbindung der Formel [V] umfasst:
wobei X¹ ein Halogenatom ist, X² ein Halogenatom ist, Q ein Rest -CH₂- oder ein Rest -(CH₂)₂- ist, Z eine Abgangsgruppe ist und CO₂R¹ ein veresterter Carboxylrest ist, gefolgt vom Umsetzen der entstandenen Verbindung [V] mit einer Verbindung der Formel [IV] Y-OH [IV]wobei Y ein C_1-6-Alkylrest ist.
Verfahren gemäß Anspruch 16, wobei die Umwandlung der Verbindung [II] in die Verbindung [Ia] das Alkylieren der Verbindung [II] mit einer Verbindung der Formel [VI] umfasst: Y-Z [VI]wobei Y ein C_1-6-Alkylrest und Z eine Abgangsgruppe ist.
Verfahren gemäß Anspruch 16, wobei die Umwandlung der Verbindung [II] in die Verbindung [Ia] das Kondensieren der Verbindung [II] mit einer Verbindung der Formel [IV] umfasst: Y-OH [IV]wobei Y ein C_1-6-Alkylrest ist.