DE60003001T2

DE60003001T2 - Pyrimidinverbindungen

Info

Publication number: DE60003001T2
Application number: DE60003001T
Authority: DE
Inventors: Gloria Anne Macclesfield BREAULT; Stewart Russell Macclesfield JAMES; Jane Elizabeth Macclesfield PEASE
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 1999-03-06
Filing date: 2000-03-02
Publication date: 2004-05-06
Anticipated expiration: 2020-03-03
Also published as: EP1161428A1; AU2818700A; DE60003001D1; JP2002539120A; CA2366668A1; ATE241617T1; MXPA01008960A; NZ513893A; BR0008770A; NO20014317L; KR100683512B1; IL145192A0; DK1161428T3; CN1227249C; NO20014317D0; IL145192A; US6716831B1; ES2200824T3; EP1161428B1; ZA200107252B

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Pyrimidinderivate, und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und in vivo hydrolysierbare Ester, die eine den Zellzyklus inhibierende Wirkung haben und daher aufgrund ihrer Antikrebswirkung (wie z.B. antizellproliferativen Wirkung, Antizellmigrationswirkung und/oder apoptotischen Wirkung) von Wert sind und sich deshalb für Verfahren zur Behandlung des menschlichen oder tierischen Körpers eignen. Die Erfindung betrifft weiterhin Verfahren zur Herstellung dieser Pyrimidinderivate, pharmazeutische Zusammensetzungen, die sie enthalten, und ihre Verwendung zur Herstellung von Medikamenten zum Hervorrufen einer antizellproliferativen Wirkung in einem Warmblüter wie dem Menschen.
Im Zellzyklus spielt eine als Cycline bezeichnete Gruppe intrazellulärer Proteine eine zentrale Rolle. Die Synthese und der Abbau von Cyclinen wird streng kontrolliert, so daß ihr Expressionsniveau während des Zellzyklus schwankt. Cycline binden sich an cyclinabhängige Serin-/Threoninkinasen (CDKs), und diese Assoziation ist für CDK (wie CDK1, CDK2, CDK4 und/oder CDK6) in der Zelle entscheidend. Wenngleich man die genauen Details davon, wie diese Faktoren kombiniert die CDK-Aktivität beeinflussen, noch schlecht versteht, steht fest, daß das Verhältnis der beiden bestimmt, ob die Zelle den Zellzyklus durchläuft oder nicht.
Bei der in der jüngeren Zeit erfolgten Konvergenz in der Forschung mit Onkogenen und Tumorsuppressorgenen wurde gefunden, daß es sich bei der Regulation des Eintritts in den Zellzyklus um einen Schlüsselpunkt der Mitogenese in Tumoren handelt. Außerdem scheinen CDKs downstream von einer Reihe von Onkogen-Signalpfaden aufzutreten. Bei der Disregulation der CDK-Aktivität durch Hochregulieren von Cyclinen und/oder Deletierung endogener Inhibitoren scheint es sich um eine wichtige Achse zwischen mitogenen Signalpfaden und der Proliferation von Tumorzellen zu handeln.
Demgemäß wurde festgestellt, daß Inhibitoren von Zellzykluskinasen, insbesondere Inhibitoren von CDK2, CDK4 und/oder CDK6 (die die S-Phase, die G1-S-Phase bzw. die G1-S-Phase regulieren), als selektive Inhibitoren der Zellproliferation wie z.B. des Wachstums von Krebszellen in Säugetieren von Nutzen sein sollten.
Weiterhin wird angenommen, daß durch die Hemmung der Focal Adhesion Kinase (FAK), die an Signalübertragungspfaden beteiligt ist, die Apoptose (den Zelltod) induziert und/oder die Zellmigration inhibiert wird und sich FAK-Inhibitoren daher als Antikrebsmittel eignen sollten.
In der WO 95/09852 werden bestimmte 2-Phenylaminopyrimidine und deren Verwendung bei der Behandlung von Tumorkrankheiten offenbart.
Die vorliegende Erfindung beruht auf der Entdeckung, daß bestimmte Pyrimidinverbindungen überraschenderweise die Wirkungen von Zellzykluskinasen mit Selektivität für CDK2, CDK4 und CDK6 hemmen und auch FAK inhibieren und somit Antikrebswirkung (Antizellmigration/Antizellproliferation und/oder apoptotisch) haben. Es ist anzunehmen, daß solche Eigenschaften bei der Behandlung von mit aberranten Zellzyklen und aberranter Zellproliferation assoziierten Krankheiten wie Krebs (feste Tumore und Leukämien), fibroproliferativen und differenzierenden Erkrankungen, Psoriasis, rheumatoider Arthritis, Karposi-Sarkom, Hämangioma, akuter und chronischer Nephropathien, Atheroma, Atherosklerose, arterieller Restenose, Autoimmunerkrankungen, akuter und chronischer Entzündung, Knochenkrankheiten und Augenkrankheiten mit Proliferation der Gefäße in der Netzhaut von Nutzen sein sollten.
Erfindungsgemäß werden Pyrimidinderivate der Formel (I) oder (I'):
wobei R^x aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxyl, Nitro, Amino, C_1–3-Alkylamino, Di-[C_1–3-alkyl]amino, Cyano, Trifluormethyl, Trichlormethyl, C_1–3-Alkyl [gegebenenfalls substituiert durch 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, Cyano, Amino, C_1–3-Alkylamino, Di-[C_1–3-alkyl]amino, Hydroxyl und Trifluormethyl], C_3–5-Alkenyl [gegebenenfalls substituiert durch bis zu drei Halogensubstituenten oder durch einen Trifluormethylsubstituenten], C_3–5-Alkinyl, C_1–3-Alkoxy, -SH, -S-C_1–3-Alkyl, Carboxyl und C_1–3-Alkoxycarbonyl ausgewählt ist;
Q₁ für Phenyl steht, wobei Q₁ an einem zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatom, das nicht zur -NH-Bindung benachbart ist, einen Substituenten der Formel (Ia) trägt und -NQ₂ (unten definiert) gegebenenfalls an einem zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatom weitere Substituenten der Formel (Ia) tragen kann:
wobei:
X für -CH₂-, -O-, -NH-, -NR^y- oder -S- steht [wobei R^y für C_1–4-Alkyl steht, gegebenenfalls substituiert durch einen Substituenten ausgewählt aus Halogen, Amino, Cyano, C_1–4-Alkoxy oder Hydroxyl];
Y¹ für H oder C_1–4-Alkyl steht oder wie für Z definiert ist;
Y² für H oder C_1–4-Alkyl steht;
Z für R^aO- , R^bR^cN- , R^dS- , R^eR^fNNR^g-, einen mit Stickstoff verbundenen Heteroarylrest oder einen mit Stickstoff verbundenen Heterocyclus steht [wobei der Heterocyclus gegebenenfalls an einem Ringkohlenstoff oder einem Ringstickstoff durch C_1–4-Alkyl oder C_1–4-Alkanoyl substituiert ist], wobei R^a, R^b, R^c, R^d, R^e, R^f und R^g unabhängig voneinander aus Wasserstoff, C_1–4-Alkyl, C_2–4-Alkenyl und C_3–8-Cycloalkyl ausgewählt sind und wobei C_1–4-Alkyl und C_2–4-Alkenyl gegebenenfalls durch eine oder mehrere Phenylgruppen substituiert sind;
n für 1, 2 oder 3 steht;
m für 1, 2 oder 3 steht;
und -NQ₂ für eine nicht quaternisierte, mit N verbundene, 5-, 6- oder 7gliedrige monocyclische heterocyclische Einheit, die ein Stickstoffheteroatom und gegebenenfalls ein oder zwei weitere Hetereoatome ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel enthält, steht, oder -NQ₂ für eine nicht quaternisierte, mit N verbundene, 8-, 9- oder 10gliedrige bicyclische heterocyclische Einheit, die ein oder zwei Stickstoff heteroatome und gegebenenfalls ein oder zwei weitere Heteroatome ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel enthält und wobei, wenn die heterocyclische Einheit eine -NH-Einheit enthält, der Stickstoff gegebenenfalls durch eine Gruppe ausgewählt aus C_1–6-Alkyl, C_1–6-Alkanoyl, C_1–6-Alkylsulfonyl, C_1–6-Alkoxycarbonyl, Benzyl, Benzoyl oder Phenylsulfonyl substituiert ist, steht; und Q₁ und NQ₂ gegebenenfalls unabhängig voneinander an zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatomen bis zu vier Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, Hydroxyl, Thio, Nitro, Carboxyl, Cyano, C_2–4-Alkenyl [gegebenenfalls substituiert durch bis zu drei Halogensubstituenten oder durch einen Trifluormethylsubstituenten], C_2–4-Alkinyl, C_1–5-Alkanoyl, C_1–4-Alkoxycarbonyl, C_1–6-Alkyl, Hydroxy-C_1–3-alkyl, Fluor-C_1–4-alkyl, Amino-C_1–3-alkyl, C_1–4-Alkylamino-C_1–3-alkyl, Di-[C_1–4-alkyl]amino-C_1–3-alkyl, Cyano-C_1–4-alkyl, C_2–4-Alkanoyloxy-C_1–4-alkyl, C_1–4-Alkoxy-C_1–3-alkyl, Carboxy-C_1–4-alkyl, C_1–4-Alkoxycarbonyl-C_1–4-alkyl, Carbamoyl-C_1–4-alkyl, N-C_1–4-Alkylcarbamoyl-C_1–4-alkyl, N,N-Di[C_1–4-alkyl]carbamoyl-C_1–4-alkyl, Pyrrolidin-1-yl-C_1–3-alkyl, Piperidin-1-yl-C_1–3-alkyl, Piperazin-1-yl-C_1–3-alkyl, Morpholino-C_1–3-alkyl, Thiomorpholino-C_1–3-alkyl, Imidazo-1-yl-C_1–3-alkyl, Piperazin-1-yl, Morpholino, Thiomorpholino, C_1–4-Alkoxy, Cyano-C_1–4-alkoxy, Carbamoyl-C_1–4-alkoxy, N-C_1–4-Alkylcarbamoyl-C_1–4-alkoxy, N,N-Di-[C_1–4-alkyl]carbamoyl-C_1–4-alkoxy, 2-Aminoethoxy, 2-C_1–4-Alkylaminoethoxy, 2-Di-[C_1–4-alkyl]-aminoethoxy, C_1–4-Alkoxycarbonyl-C_1–4-alkoxy, Halogen-C_1–4-alkoxy, 2-Hydroxyethoxy, C_2–4-Alkanoyloxy-C_2–4-alkoxy, 2-C_1–4-Alkoxyethoxy, Carboxy-C_1–4-alkoxy, 2-Pyrrolidin-1-ylethoxy, 2-Piperidinoethoxy, 2-Piperazin-1-ylethoxy, 2-Morpholinoethoxy, 2-Thiomorpholinoethoxy, 2-Imidazo-1ylethoxy, C_3–5-Alkenyloxy, C_3–5-Alkinyloxy, C_1–4-Alkylthio, C_1–4-Alkylsulfinyl, C_1–4-Alkylsulfonyl, Hydroxy-C_2–4-alkylthio, Hydroxy-C_2–4-alkylsulfinyl, Hydroxy-C_2–4-alkylsulfonyl, Ureido (HN₂-CO-NH-), C_1–4-Alkyl-NH-CO-NH-, Di-[C_1–4-alkyl]-N-CO-NH-, C_1–4-Alkyl-NH-CO-N-[C_1–4-alkyl]-, Di-[C_1–4-alkyl]-N-CO-N-[C_1–4-alkyl]-, Carbamoyl, N-[C_1–4-Alkyl]carbamoyl, N,N-Di-[C_1–4-alkyl]carbamoyl, Amino, C_1–4-Alkylamino, Di-[C_1–4-alkyl]amino, C_2–4-Alkanoylamino, Sulfamoyl, N-(C_1–4-Alkyl)sulfamoyl, N,N-Di-(C_1–4-alkyl)-sulfamoyl tragen können,
und Q₁ und -NQ₂ weiterhin unabhängig von oder gegebenenfalls zusätzlich zu den obigen fakultativen Substituenten gegebenenfalls unabhängig voneinander an zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatomen bis zu zwei weitere Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus C_3–8-Cycloalkyl, Phenyl-C_1–4-alkyl, Phenyl-C_1–4-al- koxy, Phenylthio, Phenyl, Naphthyl, Benzoyl, Phenoxy, Benzimidazol-2-yl und einem 5- oder 6gliedrigen aromatischen Heterocyclus (gebunden über ein Ringkohlenstoffatom und mit einem bis drei Heteroatomen, unabhängig voneinander ausgewählt aus Sauerstoff, Schwefel und Stickstoff) tragen können; wobei die Naphthylsubstituenten, Phenylsubstituenten, Benzoylsubstituenten, Phenoxysubstituenten, 5- oder 6gliedrigen aromatischen heterocyclischen Substituenten und die Phenylgruppe in Phenyl-C_1–4-alkyl-, Phenylthio- und Phenyl-C_1–4-alkoxysubstituenten gegebenenfalls einen oder zwei Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, C_1–4-Alkyl und C_1–4-Alkoxy tragen können;
und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und in vivo hydrolysierbare Ester bereitgestellt.
Ein geeigneter Wert für -NQ₂ als nicht quaternisierte, mit N verbundene, 5-, 6- oder 7gliedrige monocyclische heterocyclische Einheit, die ein Stickstoffheteroatom und gegebenenfalls ein oder zwei weitere Hetereoatome ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel enthält, ist eine monocyclische heterocyclische Einheit, die (vor der Bindung an den Pyrimidinring in (I) oder (I')) ein freies -NH enthält, wie Pyrrol, 2-Pyrrolin, 3-Pyrrolin, Pyrrolidin, Imidazol, Imidazolin, Imidazolidin, Pyrazol, Pyrazolin, Pyrazolidin, Triazol, Piperidin, Morpholin, Thiomorpholin, Piperazin, Homopiperazin oder Homopiperidin.
Ein geeigneter Wert für -NQ₂ als eine nicht quaternisierte, mit N verbundene, 8-, 9- oder 10gliedrige bicyclische heterocyclische Einheit, die ein oder zwei Stickstoffheteroatome und gegebenenfalls ein oder zwei weitere Heteroatome ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel enthält, ist eine bicyclische heterocyclische Einheit, die (vor der Bindung an den Pyrimidinring in (I) oder (I')) ein freies -NH enthält, wie 1H-Imidazo[1,2-a]pyrrol, Indol, Isoindol, Indolin, Isoindazol (Benzopyrazol), Benzimidazol oder Purin (oder eine teilweise oder vollständig hydrierte Form eines dieser Reste); oder ein teilweise oder vollständig gesättigter aromatischer Heterocyclus, der (vor der Bindung an den Pyrimidinring in (I) oder (I')) ein freies -NH enthält, beispielsweise teilweise oder vollständig gesättigte Derivate von Chinolyl (wie 1,2-Dihydrochinolinyl oder 1,2,3,4-Tetrahydroquinolinyl), Isochinolyl, Cinnolinyl, Chinazolinyl, Chinoxalinyl, Phthalazinyl, Naphtyridinyl, Benzoxazol, Benzothiazol, Imidazo[1,2-a]pyridin, Imidazo[1,5-a]pyridin, Imidazo[1,2-c]pyrimidin, Imidazo[1,2-a]pyrimidin, Imidazo[1,5-a]pyrimidin, Imidazo[1,2-a]pyrazin oder Imidazo[1,5-a]pyrazin oder 4,5,6,7-Tetrahydrothieno[2,3-c]pyridin-6-yl.
Steht -NQ₂ für eine nicht quaternisierte, mit N verbundene, 8-, 9- oder 10gliedrige bicyclische heterocyclische Einheit, die ein oder zwei Stickstoffheteroatome (und gegebenenfalls ein oder zwei weitere Heteroatome ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel) enthält, so kann die Bindung zum Pyrimidinring in (I) oder (I') über ein Stickstoffatom an einem beliebigen der beiden Ringe der bicyclischen heterocyclischen Einheit erfolgen, vorausgesetzt, das Ringsystem bleibt nicht quarternisiert.
-NQ₂ steht zweckmäßigerweise beispielsweise für Indol, Isoindol, Indolin, Isoindazol (Benzopyrazol), Benzimidazol, Purin oder 1,2,3,4-Tetrahydrochinolinyl.
Alternativ dazu steht -NQ₂ beispielsweise für Indol, Indolin, Benzimidazol, 1,2,3,4-Tetrahydrochinolinyl, Piperazin oder Morpholin.
Ein geeigneter Wert für einen Ringsubstituenten, wenn es sich um einen 5- oder 6gliedrigen aromatischen Heterocyclus handelt (der über ein Ringkohlenstoffatom gebunden ist und ein bis drei Heteroatome, unabhängig voneinander ausgewählt aus Stickstoff, Schwefel und Sauerstoff enthält), ist beispielsweise Pyrrol, Furan, Thiophen, Imidazol, Oxazol, Isoxazol, Thiazol, Pyridyl, Pyridazinyl, Pyrimidinyl, Pyrazinyl oder p-Isoxazin.
Ein geeigneter Wert für Z in der Gruppe (Ia), wenn es sich um einen „mit Stickstoff verbundenen Heteroarylrest" handelt, ist ein mono- oder bicyclischer Ring mit einem gewissen Grad an Ungesättigtheit, der 4–12 Atome enthält, von denen wenigstens eines aus Stickstoff ausgewählt ist und wobei gegebenenfalls 1 bis 3 weitere Atome aus Stickstoff, Schwefel oder Sauerstoff ausgewählt sind, wobei eine -CH₂-Gruppe gegebenenfalls durch -C(O)ersetzt sein kann und wobei ein Ringschwefel- und/oder -stickstoffatom gegebenenfalls unter Bildung eines S-Oxids bzw. eines N-Oxids oxidiert sein kann. Geeigneterweise steht ein "mit Stickstoff verbundener Heteroarylrest" für einen monocyclischen Ring mit 5 oder 6 Atomen oder für einen bicyclischen Ring mit 9 oder 10 Atomen. Die Stickstoffbindung führt zur Bildung einer neutralen Verbindung. Geeignete Werte für "mit Stickstoff verbundene Heteroarylreste" schließen Imidazol-1-yl, Pyrrolin-1-yl, Imidazolin-1-yl, Pyrazolin-1-yl, Triazol-1-yl, Indol-1-yl, Isoindol-2-yl, Indolin-1-yl, Benzimidazol-1-yl, Pyrrol-1-yl oder Pyrazol-1-yl ein. Vorzugsweise handelt es sich bei einem "mit Stickstoff verbundenen Heteroarylrest" um Imidazol-1-yl.
Ein geeigneter Wert für Z in der Gruppe (Ia), wenn es sich um einen "mit Stickstoff verbundenen Heterocyclus" handelt, ist ein ungesättigter mono- oder bicyclischer Ring, der 4–12 Atome enthält, von denen wenigstens eines aus Stickstoff ausgewählt ist und wobei gegebenenfalls 1 bis 3 weitere Atome aus Stickstoff, Schwefel oder Sauerstoff ausgewählt sind, wobei eine -CH₂-Gruppe gegebenenfalls durch -C(O)- ersetzt sein kann und wobei ein Ringschwefelatom gegebenenfalls unter Bildung von S-Oxid(en) oxidiert sein kann. Geeigneterweise steht ein "mit Stickstoff verbundener Heterocyclus" für einen monocyclischen Ring mit 5 oder 6 Atomen oder für einen bicyclischen Ring mit 9 oder 10 Atomen. Geeignete Werte für "mit Stickstoff verbundene Heterocylen" schließen Pyrrolidin-1-yl, Piperidino, Piperazin-1-yl, Morpholino, Thiomorpholino, Homopiperidin-1-yl oder Homopiperazin-1-yl ein. Vorzugsweise handelt es sich bei einem "mit Stickstoff verbundenen Heterocyclus" um Pyrrolidin-1-yl, Piperazin-1-yl oder Morpholino.
In der vorliegenden Beschreibung schließt der Ausdruck "Alkyl" sowohl geradkettige als auch verzweigte Alkylgruppen ein, jedoch sind Verweise auf einzelne Alkylgruppen wie "Propyl" ausschließlich für die geradkettige Form spezifisch. Eine analoge Übereinkunft trifft auch auf andere allgemeine Bezeichnungen zu.
Geeignete Werte für die oben aufgeführten allgemeinen Reste (wie in den Substituenten an Q und -NQ₂) schließen die unten aufgelisteten ein:
Wenn es sich um Halogen handelt, so steht dies beispielsweise für Fluor, Chlor, Brom und Iod; wenn es sich um C_2–4 handelt, so steht dies beispielsweise für Vinyl und Allyl; wenn es sich um C_3–5-Alkenyl handelt, so steht dies beispielsweise für Allyl und Buten-3-yl; wenn es sich um C_3–5-Alkinyl handelt, so steht dies beispielsweise für Propin-2-yl; wenn es sich um C_2–4-Alkinyl handelt, so steht dies beispielsweise für Ethinyl und Propin-2-yl; wenn es sich um C_1–5-Alkanoyl handelt, so steht dies beispielsweise für Formyl und Acetyl; wenn es sich um C_1–3-Alkoxycarbonyl handelt, so steht dies beispielsweise für Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl und Propoxycarbonyl; wenn es sich um C_1–4-Alkoxycarbonyl handelt, so steht dies beispielsweise für Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Propoxycarbonyl und tert.-Butoxycarbonyl; wenn es sich um C_1–3-Alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl; wenn es sich um C_1–4-Alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sek.-Butyl oder tert.-Butyl; wenn es sich um C_1–6-Alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sek.-Butyl, tert.-Butyl, 3-Methylbutyl oder Hexyl; wenn es sich um Hydroxy-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Hydroxymethyl, 1-Hydroxyethyl, 2-Hydroxyethyl und 3-Hydroxypropyl; wenn es sich um Fluor-C_1–4-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Fluormethyl, Difluormethyl, Trifluormethyl und 2-Fluorethyl; wenn es sich um Amino-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Aminomethyl, 1-Aminoethyl und 2-Aminoethyl; wenn es sich um C_1–4-Alkylamino-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Methylaminomethyl, Ethylaminomethyl, 1-Methylaminoethyl, 2-Methylaminoethyl, 2-Ethylaminoethyl und 3-Methyl aminopropyl; wenn es sich um Di-[C_1–4-alkyl] amino-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Dimethylaminomethyl, Diethylaminomethyl, 1-Dimethylaminoethyl, 2-Dimethylaminoethyl und 3-Dimethylaminopropyl; wenn es sich um Cyano-C_1–4-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Cyanomethyl, 2-Cyanoethyl und 3-Cyanopropyl; wenn es sich um C_2–4-alkanoyloxy-C_1–4-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Acetoxymethyl, Propionyloxymethyl, Butyryloxymethyl, 2-Acetoxyethyl und 3-Acetoxypropyl; wenn es sich um C_1–4-Alkoxy-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Methoxymethyl, Ethoxymethyl, 1-Methoxyethyl, 2-Methoxyethyl, 2-Ethoxyethyl und 3-Methoxypropyl; wenn es sich um Carboxy-C_1–4-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Carboxymethyl, 1-Carboxyethyl, 2-Carboxyethyl und 3-Carboxypropyl; wenn es sich um C_1–4-Alkoxycarbonyl-C_1–4-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Methoxycarbonylmethyl, Ethoxycarbonylmethyl, tert.-Butoxycarbonylmethyl, 1-Methoxycarbonylethyl, 1-Ethoxycarbonylethyl, 2-Methoxycarbonylethyl, 2-Ethoxycarbonylethyl, 3-Methoxycarbonylpropyl und 3-Ethoxycarbonylpropyl; wenn es sich um Carbamoyl-C_1–4-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Carbamoylmethyl, 1-Carbamoylethyl, 2-Carbamoylethyl und 3-Carbamoylpropyl; wenn es sich um N-C_1–4-alkylcarbamoyl-C_1–4-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für N-Methylcarbamoylmethyl, N-Ethylcarbamoylmethyl, N-Propylcarbamoylmethyl, 1-(N-Methylcarbamoyl)ethyl, 1-(N-Ethylcarbamoyl)ethyl, 2-(N-Methylcarbamoyl)ethyl, 2-(N-Ethylcarbamoyl)ethyl und 3-(N-Methylcarbamoyl)propyl; wenn es sich um N, N-Di-[C_1–4-alkyl]carbamoyl-C_1–4-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für N,N-Dimethylcarbamoylmethyl, N-Ethyl-N-methylcarbamoylmethyl, N,N-Diethylcarbamoylmethyl, 1-(N,N-Dimethylcarbamoyl)ethyl, 1-(N,N-Diethylcarbamoyl)ethyl, 2-(N,N-Dimethylcarbamoyl)ethyl, 2-(N,N-Diethylcarbamoyl)ethyl und 3-(N,N-Dimethylcarbamoyl)propyl; wenn es sich um Pyrrolidin-1-yl-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Pyrrolidin-1- ylmethyl und 2-Pyrrolidin-1-ylethyl; wenn es sich um Piperidin-1-yl-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Piperidin-1-ylmethyl und 2-Piperidin-1-ylethyl; wenn es sich um Piperazin-1-yl-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Piperazin-1-ylmethyl und 2-Piperazin-1-ylethyl; wenn es sich um Morpholino-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Morpholinomethyl und 2-Morpholinoethyl; wenn es sich um Thiomorpholino-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Thiomorpholinomethyl und 2-Thiomorpholinoethyl; wenn es sich um Imidazo-1-yl-C_1–3-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Imidazo-1-ylmethyl und 2-Imidazo-1ylethyl; wenn es sich um C_1–3-Alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für Methoxy, Ethoxy, Propoxy oder Isopropoxy; wenn es sich um C_1–4-Alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Isopropoxy oder Butoxy; wenn es sich um Cyano-C_1–4-alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für Cyanomethoxy, 1-Cyanoethoxy, 2-Cyanoethoxy und 3-Cyanopropoxy; wenn es sich um Carbamoyl-C_1–4-alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für Carbamoylmethoxy, 1-Carbamoylethoxy, 2-Carbamoylethoxy und 3-Carbamoylpropoxy; wenn es sich um N-C_1–4-Alkylcarbamoyl-C_1–4-alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für N-Methylcarbamoylmethoxy, N-Ethylcarbamoylmethoxy, 2-(N-Methylcarbamoyl)ethoxy, 2-(N-Ethylcarbamoyl)ethoxy und 3-(N-Methylcarbamoyl)propoxy; wenn es sich um N,N-Di-[C_1–4-alkyl] carbamoyl-C_1–4-alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für N,N-Dimethylcarbamoylmethoxy, N-Ethyl-N-methylcarbamoylmethoxy, N,N-Diethylcarbamoylmethoxy, 2-(N,N-Dimethylcarbamoyl)ethoxy, 2-(N,N-Diethylcarbamoyl)ethoxy und 3-(N,N-Dimethylcarbamoyl)propoxy; wenn es sich um 2-C_1–4-Alkylaminoethoxy handelt, so steht dies beispielsweise für 2-(Methylamino)ethoxy, 2-(Ethylamino)ethoxy und 2-(Propylamino)ethoxy; wenn es sich um 2-Di[C_1–4-alkyl]aminoethoxy handelt, so steht dies beispielsweise für 2-(Dimethylamino)ethoxy, 2-(N-Ethyl-N- methylamino)ethoxy, 2-(Diethylamino)ethoxy und 2-(Dipropylamino)ethoxy; wenn es sich um C_1–4-Alkoxycarbonyl-C_1–4-alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für Methoxycarbonylmethoxy, Ethoxycarbonylmethoxy, 1-Methoxycarbonylethoxy, 2-Methoxycarbonylethoxy, 2-Ethoxycarbonylethoxy und 3-Methoxycarbonylpropoxy; wenn es sich um Halogen-C_1–4-alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für Difluormethoxy, Trifluormethoxy, 2-Fluorethoxy, 2-Chlorethoxy, 2-Bromethoxy, 3-Fluorpropoxy und 3-Chlorpropoxy; wenn es sich um C_2–4-Alkanoyloxy-C_2–4-alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für 2-Acetoxyethoxy, 2-Propionyloxyethoxy, 2-Butyryloxyethoxy und 3-Acetoxypropoxy; wenn es sich um 2-C_1–4-Alkoxyethoxy handelt, so steht dies beispielsweise für 2-Methoxyethoxy und 2-Ethoxyethoxy; wenn es sich um Carboxy-C_1–4-alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für Carboxymethoxy, 1-Carboxyethoxy, 2-Carboxyethoxy und 3-Carboxypropoxy; wenn es sich um C_3–5-Alkenyloxy handelt, so steht dies beispielsweise für Allyloxy; wenn es sich um C_3–5-Alkinyloxy handelt, so steht dies beispielsweise für Propinyloxy; wenn es sich um C_1–4-Alkylthio handelt, so steht dies beispielsweise für Methylthio, Ethylthio oder Propylthio; wenn es sich um C_1–4-Alkylsulfinyl handelt, so steht dies beispielsweise für Methylsulfinyl, Ethylsulfinyl oder Propylsulfinyl; wenn es sich um C_1–4-Alkylsulfonyl handelt, so steht dies beispielsweise für Methylsulfonyl, Ethylsulfonyl oder Propylsulfonyl; wenn es sich um N-C_1–4-Alkylcarbamoyl handelt, so steht dies beispielsweise für N-Methylcarbamoyl, N-Ethylcarbamoyl und N-Propylcarbamoyl; wenn es sich um N,N-Di [C_1–4-alkyl]carbamoyl handelt, so steht dies beispielsweise für N,N-Dimethylcarbamoyl, N-Ethyl-N-methylcarbamoyl und N,N-Diethylcarbamoyl; wenn es sich um C_1–4-Alkylamino oder C_1–3-Alkylamino handelt, so steht dies beispielsweise für Methylamino, Ethylamino oder Propylamino; wenn es sich um Di[C_1–4-alkyl]amino oder Di [C_1–3-alkyl]amino handelt, so steht dies beispielsweise für Dimethylamino, N-Ethyl-N-methylamino, Diethylamino, N-Methyl-N-propylamino oder Dipropylamino; wenn es sich um C_2–4-Alkanoylamino handelt, so steht dies beispielsweise für Acetamido, Propionamido oder Butyramido; wenn es sich um Phenyl-C_1–4-alkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Benzyl oder 2-Phenylethyl; wenn es sich um Phenyl-C_1–4-alkoxy handelt, so steht dies beispielsweise für Benzyloxy; wenn es sich um C_3–8-Cycloalkyl handelt, so steht dies beispielsweise für Cyclopropyl, Cyclopentyl oder Cyclohexyl; wenn es sich um Hydroxy-C_2–4-alkylthio handelt, so steht dies beispielsweise für 2-Hydroxyethylthio oder 2-Hydroxypropylthio; wenn es sich um Hydroxy-C_2–4-alkylsulfinyl handelt, so steht dies beispielsweise für 2-Hydroxyethylsulfinyl oder 2-Hydroxypropylsulfinyl; wenn es sich um Hydroxy-C_2–4-alkylsulfonyl handelt, so steht dies beispielsweise für 2-Hydroxyethylsulfonyl oder 2-Hydroxypropylsulfonyl; wenn es sich um N-(C_1–4-Alkyl)sulfamoyl handelt, so steht dies beispielsweise für N-Methylsulfamoyl oder N-Ethylsulfamoyl; wenn es sich um N,N-Di(C_1–4-alkyl)- sulfamoyl handelt, so steht dies beispielsweise für N,N-Dimethylsulfamoyl, N-Ethyl-N-methylsulfamoyl und N,N-Diethylsulfamoyl.
Ein geeignetes pharmazeutisch unbedenkliches Salz eines erfindungsgemäßen Pyrimidinderivats ist beispielsweise ein Säureadditionssalz eines erfindungsgemäßen Pyrimidinderivats, das ausreichend basisch ist, beispielsweise ein Säureadditionssalz mit beispielsweise einer anorganischen oder organischen Säure, zum Beispiel Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Trifluoressigsäure, Citronensäure oder Maleinsäure. Weiterhin ist ein geeignetes pharmazeutisch unbedenkliches Salz eines erfindungsgemäßen Pyrimidinderivats ein Alkalisalz, das ausreichend azidisch ist, beispielsweise ein Natrium- oder Kaliumsalz, ein Erdalkalisalz, beispielsweise ein Calcium- oder Magnesiumsalz, ein Ammoniumsalz oder ein Salz mit einer organischen Base, die ein physiologisch unbedenkliches Kation liefert, ein Salz mit Methylamin, Dimethylamin, Trimethylamin, Piperidin, Morpholin oder Tris-(2-hydroxyethyl)amin.
Die Verbindungen der Formel (I) bzw. (I') können in Form einer Prodrug verabreicht werden, die im Körper des Menschen bzw. eines Tieres zur Verbindung der Formel (I) bzw. (I') abgebaut wird. Zu den Prodrugs gehören beispielsweise in vivo hydrolysierbare Ester einer Verbindung der Formel (I) bzw. (I').
Ein in vivo hydrolysierbarer Ester einer Verbindung der Formel (I) bzw. (I') mit einer Carboxyl- oder Hydroxylgruppe ist beispielsweise ein pharmazeutisch unbedenklicher Ester, der im Körper des Menschen oder eines Tieres zur Säure- bzw. Alkoholstammverbindung hydrolysiert wird. Zu den geeigneten pharmazeutisch unbedenklichen Estern für Carboxy gehören C_1–6-Alkoxymethylester, beispielsweise Methoxymethylester, C_1–6-Alkanoyloxymethylester, beispielsweise Pivaloyloxymethylester, Phthalidylester, C_3–8-Cycloalkoxycarbonyloxy-C_1–6-alkylester, beispielsweise 1-Cyclohexylcarbonyloxyethyl; 1,3-Dioxolen-2-onylmethylester, beispielsweise 5-Methyl-l,3-dioxolen-2-onylmethyl; und C_1–6-Alkoxycarbonyloxyethylester, beispielsweise 1-Methoxycarbonyloxyethyl, die an einer beliebigen Carboxylgruppe in den erfindungsgemäßen Verbindungen gebildet werden können.
Zu den in vivo hydrolysierbaren Estern einer Verbindung der Formel (I) bzw. (I') mit einer Hydroxylgruppe gehören anorganische Ester wie Phosphatester (einschließlich cyclischer Phosphoramidate) und α-Acyloxyalkylether und verwandte Verbindungen, bei denen der Ester in vivo unter Freigabe der Hydroxyl-Ausgangsgruppe(n) hydrolysiert wird. α-Acyloxyalkylether schließen beispielsweise Acetoxymethoxy und 2,2-Dimethylpropionyloxymethoxy ein. Eine Auswahl von Gruppen, die in vivo hydrolysierbare Ester bilden, schließt Alkanoyl, Benzoyl, Phenylacetyl und substituiertes Benzoyl, sowie Phenylacetyl, Alkoxycarbonyl (was Alkylcarbonsäureester ergibt), Dialkylcarbamoyl und N-(Dialkylaminoethyl)-N-alkylcarbamoyl (was Carbamate ergibt), Dialkylaminoacetyl und Carboxyacetyl ein. Substituenten an Benzoyl sind beispielsweise Morpholino und Piperazino, die über ein Ringstickstoffatom und eine Methylengruppe an die 3- oder 4-Stellung des Benzoylrings gebunden sind.
Einige Verbindungen der Formel (I) bzw. (I') können chirale Zentren und/oder geometrische isomere Zentren (E- und Z-Isomere) aufweisen, und es versteht sich, daß die Erfindung alle diese optischen Isomere, Diastereoisomere und geometrischen Isomere (und deren Mischungen) mit CDK- und/oder FAK-hemmender Wirkung umfaßt.
Die Erfindung betrifft alle möglichen tautomeren Formen der Verbindungen der Formel (I) bzw. (I') mit CDK- und/oder FAK-hemmender Wirkung.
Es versteht sich weiterhin, daß bestimmte Verbindungen der Formel (I) oder (I') in solvatisierten sowie nicht solvatisierten Formen wie beispielsweise hydratisierten Formen vorliegen können. Es versteht sich, daß die Erfindung alle solchen solvatisierten Formen mit CDK- und/oder FAK-hemmender Wirkung umfaßt.
Gemäß einem weiteren Merkmal der Erfindung wird ein Pyrimidinderivat der Formel (I) oder (I'):
wobei R^x aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxyl, Nitro, Amino, C_1–3-Alkylamino, Di-[C_1–3-alkyl]amino, Cyano, Trifluormethyl, Trichlormethyl, C_1–3-Alkyl [gegebenenfalls substituiert durch 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, Cyano, Amino, C_1–3-Alkylamino, Di-[C_1–3-alkyl]amino, Hydroxyl und Trifluormethyl], C_3–5-Alkenyl [gegebenenfalls substituiert durch bis zu drei Halogensubstituenten oder durch einen Trifluormethylsubstituenten], C_3–5-Alkinyl, C_1–3-Alkoxy, -SH, -S-C_1–3-Alkyl, Carboxyl und C_1–3-Alkoxycarbonyl ausgewählt ist;
Q₁ für Phenyl steht, wobei Q₁ an einem zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatom, das nicht zur -NH-Bindung benachbart ist, einen Substituenten der Formel (Ia') trägt und -NQ₂ (unten definiert) gegebenenfalls an einem zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatom weitere Substituenten der Formel (Ia') tragen kann:
wobei:
X für CH₂, O, NH oder S steht;
Y für H steht oder wie für Z definiert ist;
Z für OH, SH, NH₂, C_1–4-Alkoxy, C_1–4-Alkylthio, -NH-C_1–4-Alkyl, -N[C_1–4-Alkyl]₂, Pyrrolidin-1-yl, Piperidin-1-yl, Piperazin-1-yl, Morpholino oder Thiomorpholino steht;
n für 1, 2 oder 3 steht;
m für 1, 2 oder 3 steht;
und -NQ₂ für eine nicht quaternisierte, mit N verbundene, 8-, 9- oder 10gliedrige bicyclische heterocyclische Einheit steht, die ein oder zwei Stickstoffheteroatome und gegebenenfalls ein oder zwei weitere Heteroatome ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel enthält;
und Q₁ und -NQ₂ gegebenenfalls unabhängig voneinander an zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatomen bis zu vier Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, Hydroxyl, Thio, Nitro, Carboxyl, Cyano, C_2–4-Alkenyl [gegebenenfalls substituiert durch bis zu drei Halogensubstituenten oder durch einen Trifluormethylsubstituenten], C_2–4-Alkinyl, C_1–5-Alkanoyl, C_1–4-Alkoxycarbonyl, C_1–6-Alkyl, Hydroxy-C_1–3-alkyl, Fluor-C_1–4-alkyl, Amino-C_1–3-alkyl, C_1–4-Alkylamino-C_1–3-alkyl, Di-[C_1–4-alkyl] amino-C_1–3-alkyl, Cyano-C_1–4-alkyl, C_2–4-Alkanoyloxy-C_1–4-alkyl, C_1–4-Alkoxy-C_1–3-alkyl, Carboxy-C_1–4-alkyl, C_1–4-Alkoxycarbonyl-C_1–4-alkyl, Carbamoyl-C_1–4-alkyl, N-C_1–4-Alkylcarbamoyl-C_1–4-alkyl, N,N-Di-[C_1–4-alkyl]Carbamoyl-C_1–4-alkyl, Pyrrolidin-1-yl-C_1–3-alkyl, Piperidin-1-yl-C_1–3-alkyl, Piperazin-1-yl-C_1–3-alkyl, Morpholino-C_1–3-alkyl, Thiomorpholino-C_1–3-alkyl, Piperazin-1-yl, Morpholino, Thiomorpholino, C_1–4-Alkoxy, Cyano-C_1–4-alkoxy, Carbamoyl-C_1–4-alkoxy, N-C_1–4-Alkylcarbamoyl-C_1–4-alkoxy, N, N-Di-[C_1–4-alkyl]Carbamoyl-C_1–4-alkoxy, 2-Aminoethoxy, 2-C_1–4-Alkylaminoethoxy, 2-Di-[C_1–4-alkyl]aminoethoxy, C_1–4-Alkoxycarbonyl-C_1–4-alkoxy, Halogen-C_1–4-alkoxy, 2-Hydroxyethoxy, C_2–4-Alkanoyloxy-C_2–4-alkoxy, 2-C_1–4-Alkoxyethoxy, Carboxy-C_1–4-alkoxy, C_3–5-Alkenyloxy, C_3–5-Alkinyloxy, C_1–4-Alkylthio, C_1–4-Alkylsulfinyl, C_1–4-Alkylsulfonyl, Ureido (HN₂-CO-NH-), C_1–4-Alkyl-NH-CO-NH-, Di-[C_1–4-alkyl]-N-CO-NH-, C_1–4-Alkyl-NH-CO-N-[C_1–4-alkyl]-, Di-[C_1–4-alkyl]-N-CO-N-[C_1–4-alkyl]-, Carbamoyl, N-[C_1–4-Alkyl]carbamoyl, N,N-Di-[C_1–4-alkyl]carbamoyl, Amino, C_1–4-Alkylamino, Di-[C_1–4-alkyl]amino, C_2–4-Alkanoylamino tragen können, und Q₁ und -NQ₂ weiterhin unabhängig von oder gegebenenfalls zusätzlich zu den obigen fakultativen Substituenten gegebenenfalls unabhängig voneinander an zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatomen bis zu zwei weitere Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Phenyl-C_1–4-alkyl, Phenyl-C_1–4-alkoxy, Phenyl, Naphthyl, Benzoyl und einem 5- oder 6gliedrigen aromatischen Heterocyclus (gebunden über ein Ringkohlenstoffatom und mit einem bis drei Heteroatomen, unabhängig voneinander ausgewählt aus Sauerstoff, Schwefel und Stickstoff) tragen können; wobei die Naphthylsubstituenten, Phenylsubstituenten, Benzoylsubstituenten, 5- oder 6gliedrigen aromatischen heterocyclischen Substituenten und die Phenylgruppe in Phenyl-C_1–4-alkyl- und Phenyl-C_1–4-alkoxysubstituenten gegebenenfalls einen oder zwei Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, C_1–4-Alkyl und C_1–4-Alkoxy tragen können; und deren pharmazeutisch unbedenklichen Salze und in vivo hydrolysierbare Ester bereitgestellt.
Besonders bevorzugte erfindungsgemäße Verbindungen sind Pyrimidinderivate der Formel (I) oder (I'), und deren pharmazeutisch unbedenklichen Salze und in vivo hydrolysierbare Ester, in denen R^x, Q₁, -NQ₂, X, Y, Z, m und n eine der oben definierten Bedeutungen oder einen der folgenden Werte haben:

(a) -NQ₂ steht vorzugsweise für Indolin;
(b) -NQ₂ steht besonders bevorzugt für Indolin, Piperazin, Morpholin, Indolin, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthalin, Benzimidazol oder Indol;
(c) R^x wird vorzugsweise ausgewählt aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxy, Nitro, Amino, C_1–3-Alkylamino, Di-[C₁_₃-alkyl]amino, Cyano, Trifluormethyl, C_1–3-Alkyl [gegebenenfalls substituiert durch 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, Cyano, Amino, C_1–3-Alkylamino, Di-[C₁_₃-alkyl]amino, Hydroxy und Trifluormethyl], C_3–5 [gegebenenfalls substituiert durch bis zu drei Halogensubstituenten oder durch einen Trifluormethylsubstituenten], C_3–5-Alkinyl, C_1–3-Alkoxy, -SH und -S-C_1–3-alkyl;
(d) R^x wird besonders bevorzugt ausgewählt aus Wasserstoff, Halogen (insbesondere Chlor), Nitro und C_1–3-Alkyl (insbesondere Methyl); R^x steht ganz besonders bevorzugt für Wasserstoff oder Chlor;
(e) R^x steht insbesondere für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Brom oder Methyl;
(f) in dem Substituenten der Formel (Ia') steht X vorzugsweise für O, Y steht vorzugsweise für OH und Z steht vorzugsweise für -N[C_1–4-Alkyl]₂; n steht vorzugsweise für 1 und m steht vorzugsweise für 1;
(g) in dem Substituenten der Formel (Ia) steht X vorzugsweise für 0, Y¹ steht vorzugsweise für OH, Y² steht vorzugsweise für H und Z steht vorzugsweise für -N[C_1–4-Alkyl]2; n steht vorzugsweise für 1 und m steht vorzugsweise für 1;
(h) ganz besonders bevorzugt handelt es sich bei dem Substituenten der Formel (Ia) oder (Ia') um 3-Dimethylamino-2-hydroxypropoxy;
(i) vorzugsweise ist ein Substituent der Formel (Ia) oder (Ia') vorhanden, d.h. -NQ₂ trägt vorzugsweise keinen Substituenten der Formel (Ia) oder (Ia');
(j) der Substituent der Formel (Ia) oder (Ia') in Q₁ befindet sich entweder in der para- oder der meta-Stellung zum -NH-, vorzugsweise in der para-Stellung;
(k) weitere bevorzugte Substituenten für -NQ₂ schließen Halogen (insbesondere Brom), C_1–5-Alkanoyl (insbesondere Acetyl) und C_1–5-Alkyl (insbesondere Methyl) ein;s
(l) der Ring -NQ₂, der nicht den Substituenten der Formel (Ia) oder (Ia') trägt, ist vorzugsweise durch einen oder zwei weitere Substituenten, vorzugsweise Halogen (insbesondere Brom), C_1–5-Alkanoyl (insbesondere Acetyl) oder C_1–4-Alkyl (insbesondere Methyl) substituiert;
(m) -NQ₂ ist vorzugsweise gegebenenfalls durch Halogen, C_1–5-Alkanoyl oder C_1–4-Alkyl substituiert; und sollte eine heterocyclische Einheit in -NQ₂ eine -NH-Einheit enthalten, so ist der Stickstoff vorzugsweise unsubstituiert oder durch C_1–6-Alkoxycarbonyl substituiert;
(n) -NQ₂ steht für Indolin, 4-t-Butyloxycarbonylpiperazin, Piperazin, Morpholin, 2-Methylindolin, 5-Bromindolin, 5-Acetylindolin, 2,3-Dimethylindolin, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthalin, Benzimidazol oder Indol;
(o) sollte eine heterocyclische Einheit in -NQ₂ eine -NH-Einheit enthalten, so ist der Stickstoff vorzugsweise unsubstituiert oder durch C_1–6-Alkoxycarbonyl substituiert;
(p) gemäß einem Aspekt der Erfindung weist die Verbindung vorzugsweise die Formel (I) auf; und
(q) gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung weist die Verbindung vorzugsweise die Formel (I') auf.

Eine bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung ist ein Pyrimidinderivat der Formel (I) oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder ein in vivo hydrolysierbarer Ester davon, wobei:
Q₁ für Phenyl steht und -NQ₂ für Indolin steht;
R^x für Wasserstoff oder Chlor (insbesondere Wasserstoff) steht;
Q₁ einen Substituenten der Formel (Ia) oder (Ia') (insbesondere 3-Dimethylamino-2-hydroxypropoxy) trägt, vorzugsweise in der para-Stellung;
-NQ₂ einen oder zwei Substituenten trägt, die unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Halogen (insbesondere Brom), C_1–5-Alkanoyl (insbesondere Acetyl) und C_1–4-Alkyl (insbesondere Methyl).
Eine ganz besonders bevorzugte Verbindung ist ein Pyrimidinderivat der Formel (I) oder (I') oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder ein in vivo hydrolysierbarer Ester davon, wobei:
Q₁ für Phenyl steht und -NQ₂ für Indolin, Piperazin (gegebenenfalls am 4-Stickstoff substituiert durch t-Butoxycarbonyl), Morpholin, Indolin, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthalin, Benzimidazol oder Indol steht;
R^x für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Brom oder Methyl steht;
Q₁ einen Substituenten in der para-Stellung der Formel (Ia) oder (Ia') trägt, bei dem es sich um 3-Dimethylamino-2-hydroxypropoxy handelt;
-NQ₂ einen oder zwei Substituenten trägt, die unabhängig voneinander ausgewählt sind aus Brom, Acetyl und Methyl.
Eine besondere bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung ist das Pyrimidinderivat der Formel (I), bei dem es sich um das (im folgenden beschriebene) Beispiel 5 handelt; oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder ein in vivo hydrolysierbarer Ester davon.
Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung gehören zu den bevorzugten erfindungsgemäßen Verbindungen alle Verbindungen aus den Beispielen und deren pharmazeutisch unbedenklichen Salze und in vivo hydrolysierbare Ester.
Bevorzugte Aspekte der Erfindung sind die, die die Verbindung oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz davon betreffen.
Ein Pyrimidinderivat der Formel (I) oder (I') bzw. ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder ein in vivo hydrolysierbarer Ester davon läßt sich durch ein beliebiges Verfahren, von dem bekannt ist, daß es sich zur Herstellung chemisch verwandter Verbindungen eignet, darstellen. Solche Verfahren werden, wenn sie zur Darstellung eines Pyrimidinderivats der Formel (I) oder (I') bzw. eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes oder eines in vivo hydrolysierbaren Esters davon angewendet werden, als weiteres Merkmal der Erfindung bereitgestellt und sind in den folgenden repräsentativen Beispielen erläutert, in denen (wenn nicht anders angegeben) Q1, -NQ₂ , R^x, X, Y¹, Y², Z, m und n eine der oben für ein Pyrimidinderivat der Formel (I) oder (I') definierten Bedeutungen haben, und wobei, wenn am Ring Q₁ oder -NQ₂ kein anderer Substituent gezeichnet ist, der Ring beliebige der oben beschriebenen Substituenten (die gegebenenfalls, wenn erforderlich, geschützt sein können) tragen kann. Ist am Ring Q₁ ein Substituent gezeichnet, so schließt dies (wenn nicht anders angegeben) (gegebenenfalls) die Möglichkeiten ein, daß sich der Substituent am Ring -NQ₂ befindet, zusätzlich dazu, oder anstelle dessen, daß sich der Substituent am Ring Q₁ befindet. Ist X in diesem Abschnitt als -NH- definiert, so versteht sich, daß dies auch die Möglichkeit einschließt, daß X für -NR^y- steht. Die erforderlichen Ausgangsverbindungen können durch Standardverfahren der organischen Chemie (siehe beispielsweise Advanced Organic Chemistry (Wiley-Interscience), Jerry March – das auch für allgemeine Empfehlungen zu den Reaktionsbedingungen und Reagentien von Nutzen ist) erhalten werden. Die Darstellung solcher Ausgangsverbindungen ist in den begleitenden, nicht einschränkenden Verfahren und Beispielen beschrieben. Alternativ dazu lassen sich die erforderlichen Ausgangsverbindungen durch Vorschriften analog den geschilderten, mit denen der Durchschnittsfachmann auf dem Gebiet der organischen Chemie vertraut ist, erhalten.
2,4-Pyrimidine: Verfahren
Gemäß einem weiteren Merkmal der Erfindung werden somit die folgenden Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I) bereitgestellt, bei denen man:
Verfahren a)
ein Pyrimidin der Formel (II):
in welcher L für eine wie unten definierte Abgangsgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (III):
umsetzt,
Verfahren b)
ein Pyrimidin der Formel (IV):
in welcher L für eine wie unten definierte Abgangsgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (V):
umsetzt,
Verfahren c)
für Verbindungen der Formel (I), in denen n für 1, 2 oder 3, m für 1, Y² für H und Y¹ für OH, NH₂ oder SH steht, eine einen dreigliedrigen Heteroalkylring enthaltende Verbindung der Formel (VI):
in welcher A für O, S oder NH steht,
mit einem Nukleophil der Formel (VII):
in welcher D für H oder ein geeignetes Gegenion steht, umsetzt,
Verfahren d)
für Verbindungen der Formel (I), in welchen X für Sauerstoff steht, einen Alkohol der Formel (VIII):
mit einem Alkohol der Formel (IX):
umsetzt,
Verfahren e)
für Verbindungen der Formel (I), in welchen X für -CH₂-, -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für OH, Y² für H und m für 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (x)
in welcher LgO für eine Abgangsgruppe steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII) umsetzt,
Verfahren f)
für Verbindungen der Formel (I), in welchen X für -CH₂-, -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für H, Y² für H, n für 1, 2 oder 3 und m für 1, 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (XI):
in welcher LgO für eine Abgangsgruppe steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII) umsetzt,
Verfahren g)
für Verbindungen der Formel (I), in welchen X für -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für H, Y² für H, n für 1, 2 oder 3 und m für 1, 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (XII):
mit einer Verbindung der Formel (XIII)
in welcher L für eine Abgangsgruppe steht, umsetzt,
Verfahren h)
für Verbindungen der Formel (I), in welchen Z für HS- steht, eine Thioacetatgruppe in einer entsprechenden Verbindung umwandelt, und anschließend gegebenenfalls:

i) eine Verbindung der Formel (I) in eine andere Verbindung der Formel (I) umwandelt,
ii) gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen entfernt,
iii) ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder einen in vivo hydrolysierbaren Ester bildet.

L steht für eine Abgangsgruppe; geeignete Werte für L sind beispielsweise eine Halogen- oder Sulfonyloxygruppe, beispielsweise eine Chlor-, Brom-, Methansulfonyloxy- oder Toluol-4-sulfonyloxygruppe. Alternative geeignete Gruppen für L schließen Halogen, Mesyl, Methylthio und Methylsulfinyl ein.
D steht für Wasserstoff oder ein geeignetes Gegenion. Steht D für ein Gegenion, so schließen geeignete Werte für D Natrium und Kalium ein.
LgO steht für eine Abgangsgruppe. Geeignete Werte für LgO schließen Mesylat und Tosylat ein.
Spezifische Reaktionsbedingungen für die obigen Umsetzungen sind wie folgt:
Verfahren a)
Pyrimidine der Formel (II) und Verbindungen der Formel (III) können

i) gegebenenfalls in Gegenwart einer geeigneten Säure, beispielsweise einer anorganischen Säure wie Salzsäure oder Schwefelsäure, oder einer organischen Säure wie Essigsäure oder Ameisensäure miteinander umgesetzt werden. Die Reaktion wird vorzugsweise in einem geeigneten inerten Lösungsmittel oder Verdünnungsmittel, beispielsweise Dichlormethan (DCM), Acetonitril, Butanol, Tetramethylensulfon, Tetrahydrofuran, 1,2-Dimethoxyethan, N,N-Dimethylformamid, N,N-Dimethylacetamid oder N-Methylpyrrolidin-2-on, und bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 0° bis 150°C, zweckmäßigerweise bei oder um Rückflußtemperatur durchgeführt; oder
ii) unter Standard-Buchwaldbedingungen (siehe beispielsweise J. Am. Chem. Soc., 118, 7215; J. Am. Chem. Soc., 119, 8451; J. Org. Chem, 62, 1568 und 6066), beispielsweise in Gegenwart von Palladiumacetat, in einem geeigneten Lösungsmittel, beispielsweise einem aromatischen Lösungsmittel wie Toluol, Benzol und Xylol, mit einer geeigneten Base, beispielsweise einer anorganischen Base wie Cesiumcarbonat oder einer organischen Base wie Kalium-t-butanolat, in Gegenwart eines geeigneten Liganden wie 2,2'-Bis(diphenylphosphino)-1,1'binaphthyl und bei einer Temperatur im Bereich von 25 bis 80°C

Pyrimidine der Formel (II) lassen sich nach dem folgenden Schema darstellen:
in welcher R^a für eine gegebenenfalls substituierte Alkyl- oder Arylgruppe steht und L für eine wie oben definierte Abgangsgruppe steht. R^a steht vorzugsweise für Methyl, Ethyl oder p-Tolyl.
Verbindungen der Formeln (V) und (III) sind im Handel erhältlich oder können nach im Stand der Technik bekannten Verfahren hergestellt werden.
Verfahren b)
Pyrimidine der Formel (IV) und Verbindungen der Formel (V) können miteinander in Gegenwart eines geeigneten Lösungsmittels, beispielsweise eines Ketons wie Aceton oder eines Alkohols wie Ethanol oder Butanol oder eines aromatischen Kohlenwasserstoffs wie Toluol oder N-Methylpyrrolidin, oder eines Lösungsmittels wie Tetramethylensulfon, gegebenenfalls in Gegenwart einer geeigneten Säure (wie den oben für Verfahren a) definierten Säuren oder einer Lewis-Säure) oder Base (wie Hünig-Base oder Calciumcarbonat) und bei einer Temperatur im Bereich von 0°C bis Rückfluß, vorzugsweise bei Rückfluß, umgesetzt werden.
Pyrimidine der Formel (IV) können nach dem folgenden Schema dargestellt werden:
Die Verbindungen der Formeln (IVA), (III) und (V) sind im Handel erhältlich oder lassen sich nach im Stand der Technik bekannten Verfahren herstellen. Zum Beispiel können Pyrimidine der Formel (IVA) beispielsweise durch Umsetzung einer Verbindung der Formel (IVA), in welcher L für -OH steht (d.h. ein Uracil), mit POCl₃ dargestellt werden, wodurch man eine Verbindung der Formel (IVA) erhält, in der L für -Cl steht.
Verfahren c)
Die einen dreigliedrigen Heteroarylring enthaltenden Verbindungen der Formel (VI) und die Nukleophile der Formel (VII) werden bei einer Temperatur im Bereich von 20° bis 100°C, vorzugsweise von 20° bis 50°C, miteinander umgesetzt, gegebenenfalls in Gegenwart eines geeigneten Lösungsmittels, beispielsweise N,N-Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid oder Tetrahydrofuran.
Die Verbindungen der Formel (VI) können nach den folgenden Schemata dargestellt werden:
Schema I)
Bei Verbindungen der Formel (VI), in denen A für O steht und X nicht für Kohlenstoff steht:
Die Umwandlung von (VIB) in (VI) läßt sich auch durch Umsetzung mit Br-(CH₂)_n-CHO oder einem äquivalenten Ester in DMF und in Gegenwart einer Base und anschließender Reaktion mit einem Schwefelylid wie (Me₂SOCH₂) in einem inerten Lösungsmittel wie THF (siehe Schema V) bewerkstelligen.
Schema II)
Bei Verbindungen der Formel (VI), in denen A für NH steht und X nicht für Kohlenstoff steht:
(für PhINTs, siehe beispielsweise Tet.Let., 1997, 38 (39), 6897–6900; Verbindungen der Formel (VIC) können auch unter Bedingungen ähnlich denen in Schema IV unten zum Epoxid oxidiert werden).
Schema III)
Bei Verbindungen der Formel (VI), in denen A für S steht und X nicht für Kohlenstoff steht:
(siehe beispielsweise Synlett, 1994, 267–268).
Schema IV)
Bei Verbindungen der Formel (VI), in denen x für Kohlenstoff steht:
wobei R³, zusammen mit der -COO-Gruppe, an die es gebunden ist, eine Estereinheit bildet, beispielsweise einen Methylester oder einen Ethylester.
Schema V)
Bei Verbindungen der Formel (VI), in denen X für CH₂, O, NH oder S steht; Y¹ für OH steht; Y² für H steht; n für 1, 2 oder 3 steht und m für 1 steht:
(VIJ) wird mit (IV) umgesetzt (gemäß Schema I), wodurch man (VI) erhält.
Es ist auch möglich, einen äquivalenten Ester (VIH) zu verwenden. Siehe auch Russ.Chem. Rev. 47, 975–990, 1978.
Verbindungen der Formeln (VIH), (VII) und (VIA) und (VIE) sind im Handel erhältlich oder können nach im Stand der Technik bekannten Verfahren hergestellt werden.
Verfahren d)
Alkohole (beispielsweise Phenole) der Formeln (VIII) und (IX) können unter Standard-Mitsunobubedingungen miteinander umgesetzt werden. Beispielsweise in Gegenwart von Azodicarbonsäurediethylester und Triphenylphosphin, in einem geeigneten Lösungsmittel wie Dichlormethan, Toluol oder Tetrahydrofuran, und bei einer Temperatur im Bereich von 0° bis 80°C, vorzugsweise im Bereich von 20° bis 60°C. Alternativ dazu lassen sich Alkohole der Formel (VIII) mit einer geeigneten Verbindung der Formel (IX), in der die terminale Hydroxylgruppe durch eine geeignete Abgangsgruppe ersetzt worden ist, alkylieren.
Alkohole der Formel (VIII) werden gemäß Schema I) oben zur Synthese von Zwischenprodukt (VIB) (wobei X für Sauerstoff steht) dargestellt.
Alkohole der Formel (IX) sind im Handel erhältlich oder werden durch im Stand der Technik bekannte Verfahren hergestellt.
In einem Verfahren analog Verfahren d) lassen sich Verbindungen, in denen X für -S- steht, durch Umsetzung einer Verbindung der Formel (VIII), in welcher es sich bei der Hydroxylgruppe um -SH handelt, mit einer Verbindung der Formel (IX), in welcher es sich bei der Hydroxylgruppe um eine Abgangsgruppe wie Mesylat oder Tosylat handelt, darstellen.
Verfahren e)
Verbindungen der Formel (X), in denen X für -CH₂-, -O-, -NH- oder -S- steht; Y¹ für OH steht; Y² für H steht und m für 2 oder 3 steht, und Nukleophile der Formel (VII) werden bei einer Temperatur im Bereich von 20° bis 100°C, vorzugsweise von 20° bis 50°C, gegebenenfalls in Gegenwart eines geeigneten Lösungsmittels, beispielsweise N,N-Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid oder Tetrahydrofuran, und gegebenenfalls in Gegenwart einer geeigneten Base wie Kaliumcarbonat, miteinander umgesetzt.
Die Verbindungen der Formel (x) werden gemäß dem folgenden Schema dargestellt (m steht für 2 oder 3):
Die Reihenfolge von Schritten 1) und 2) im letzten Schritt kann umgekehrt werden. Eine für Schritt 2) geeignete Base ist Triethylamin.
Die Verbindungen der Formeln (XA) und (VII) sind im Handel erhältlich oder werden durch im Stand der Technik bekannte Verfahren hergestellt. Verbindungen der Formel (XA), in denen X für -NH-, -O- oder -Ssteht, lassen sich beispielsweise darstellen, indem man eine Verbindung der Formel (VIA) mit einem geeigneten Halogenaldehyd oder einem äquivalenten Ester unter Standardbedingungen für solche Reaktionen umsetzt.
Verfahren f) Verbindungen der Formel (XI) und Nukleophile der Formel (VII) werden wie für Verfahren e) oben beschrieben miteinander umgesetzt.
Verbindungen der Formel (XI) werden analog Schritt 2) im letzten Schritt zur Herstellung von Verbindungen Formel (X) oben dargestellt. Die erforderlichen als Ausgangsverbindungen eingesetzten primären Alkohole sind im Handel erhältlich oder werden nach im Stand der Technik bekannten Verfahren hergestellt.
Verfahren g) Verbindungen der Formeln (XII) und (XIII) werden in einem inerten Lösungsmittel wie DMF in Gegenwart einer Base wie Kaliumcarbonat umgesetzt.
Verbindungen der Formel (XII) haben die gleiche allgemeine Formel wie die hier beschriebenen Verbindungen der Formel (VIB) und werden wie für diese Verbindungen beschrieben dargestellt (siehe Schema I). Die Verbindungen der Formel (XIII) sind im Handel erhältlich oder können nach im Stand der Technik bekannten Verfahren hergestellt werden.
Verfahren h) Bei Verbindungen der Formel (I), in denen Z für SH steht, wird die Umwandlung einer Thioacetatgruppe in einer entsprechenden Verbindung wie hier für die Umwandlung von Verbindungen der Formel (IJ) in (IK) beschrieben durchgeführt.
Geeignete eine Thioacetatgruppe enthaltende Ausgangs verbindungen werden aus entsprechenden Verbindungen mit einer Abgangsgruppe wie Mesylat oder Tosylat (dargestellt unter Standardbedingungen aus der entsprechenden Hydroxylverbindung) mit Thiolessigsäure wie hier für die Umwandlung von Verbindungen der Formel (IG) in (IJ) beschrieben hergestellt.
Beispiele für Umwandlungen einer Verbindung der Formel (I) in eine andere Verbindung der Formel (I) sind:
Umwandlung i) einer Seitenkette der Formel (Ia) oder (Ia') in eine andere Seitenkette der Formel (Ia) oder (Ia'), beispielsweise:
Umwandlung I) für Verbindungen der Formel (I), in denen Y¹ für H steht und Y¹ für NHZ (unten unter Anwendung von Ammoniak gezeigt), C_1–4-Alkoxy, C_1–4-Alkylthio, -NH-C_1–4-Alkyl, -N[C₁_₄-Alkyl]₂, Pyrrolidin-1-yl, Piperidin-1yl, Piperazin-1-yl, Morpholino oder Thiomorpholino steht;
oder
Umwandlung ii) für Verbindung der Formel (I), in denen Y² für H steht und Y¹ für S steht:
Umwandlung III) für Verbindungen der Formel (I), in denen Y¹ für H steht und Y² für H steht:
Umwandlung ii) eines Werts von R^x in einen anderen Wert von R^x unter Anwendung von Standardverfahren, beispielsweise Umwandlung von R^x mit der Bedeutung Hydroxy in C_1–30-Alkoxy.
Dem fachkundigen Leser wird einleuchten, daß man die in Verfahren c) und d) oben beschriebene Manipulation an der Seitenkette (Ia) oder (Ia') auch an Zwischenprodukten zum Beispiel zur Herstellung von Zwischenprodukten der Formeln (II), (IIA), (IIB) oder (V) durchführen kann. Beispielsweise:
4,6-Pyrimidine: Verfahren
Somit werden als weiteres Merkmal der Erfindung die folgenden Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I') bereitgestellt, bei denen man:
Verfahren a')
ein Pyrimidin der Formel (II'):
in welcher L für eine wie unten definierte Abgangsgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (III')
umsetzt,
Verfahren b') ein Pyrimidin der Formel (IV'):

in welcher L für eine wie unten definierte Abgangsgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (V'):
umsetzt,
Verfahren c' )
für Verbindungen der Formel (I'), in welchen n für 1, 2 oder 3, m für 1, Y² für H und Y¹ für OH, NH₂ oder SH steht, einen 3gliedrigen Heteroalkylring der Formel (VI')
in welcher A für 0, S oder NH steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII'):
in welcher D für H oder ein geeignetes Gegenion steht, umsetzt,
Verfahren d')
für Verbindungen der Formel (I'), in welchen X für Sauerstoff steht, einen Alkohol der Formel (VIII'):
mit einem Alkohol der Formel (IX'):
umsetzt,
Verfahren e')
für Verbindungen der Formel (I'), in welchen X für -CH₂-, -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für OH, Y² für H und m für 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (X'):
in welcher LgO für eine wie unten definierte Abgangsgruppe steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII') umsetzt,
Verfahren f' )
für Verbindungen der Formel (I'), in welchen X für -CH₂-, -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für H, Y² für H, n für 1, 2 oder 3 und m für 1, 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (XI'):
in welcher LgO für eine wie unten definierte Abgangsgruppe steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII') umsetzt, Verfahren g' ) für Verbindungen der Formel (I'), in welchen X für -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für H, Y² für H, n für 1, 2 oder 3 und m für 1, 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (XII'):
mit einer Verbindung der Formel (XIII'):
in welcher L für eine wie unten definierte Abgangsgruppe steht, umsetzt,
Verfahren h')
für Verbindungen der Formel (I'), in welchen Z für HS- steht, eine Thioacetatgruppe in einer entsprechenden Verbindung umwandelt, und anschließend gegebenenfalls:

i) eine Verbindung der Formel (I') in eine andere Verbindung der Formel (I') umwandelt,
ii) gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen entfernt,
iii) ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder einen in vivo hydrolysierbaren Ester bildet.

Wenn nicht anders angegeben sind die Werte von Variablen (wie L und D) in diesem Verfahrensabschnitt über 4,6-Pyrimidine die gleichen wie die in dem Verfahrensabschnitt über 2,4-Pyrimidine beschriebenen.
Spezifische Reaktionsbedingungen für die obigen Verfahrensreaktionen bei 4,6-Pyrimidinen sind wie folgt:
Verfahren a')
Pyrimidine der Formel (II') und Verbindungen der Formel (III') können wie in dem obigen Verfahren a) über 2,4-Pyrimidine beschrieben miteinander umgesetzt werden.
Pyrimidine der Formel (II') lassen sich nach dem folgenden Schema darstellen:

Verbindungen der Formel (III') sind im Handel erhältlich oder lassen sich nach im Stand der Technik bekannten Verfahren darstellen.
Verfahren b')
Pyrimidine der Formel (IV') und Verbindungen der Formel (V') können wie in dem obigen Verfahren b) über 2,4-Pyrimidine beschrieben miteinander umgesetzt werden.
Pyrimidine der Formel (IV') werden nach dem folgenden Verfahren dargestellt:
wobei L für eine wie oben definierte Abgangsgruppe steht.
Verbindungen der Formel (V') sind im Handel erhältlich oder lassen sich nach im Stand der Technik bekannten Verfahren darstellen.
Verfahren c')
Dreigliedrige Heteroalkylringe der Formel (VI') und Nukleophile der Formel (VII') können wie in dem obigen Verfahren c) über 2,4-Pyrimidine beschrieben miteinander umgesetzt werden.
Verbindungen der Formel (VI') lassen sich nach Schemen analog Schema I) bis IV) wie oben in dem Verfahrensabschnitt über 2,4-Pyrimidine beschrieben darstellen (wobei jedoch 4,6-Pyrimidinverbindungen anstelle der in den oben erwähnten Schemen gezeigten 2,4-Pyrimidine verwendet werden).
Verbindungen der Formel (VII') und die erforderlichen Zwischenprodukte sind im Handel erhältlich oder lassen sich nach im Stand der Technik bekannten Verfahren darstellen (analog des oben beschriebenen Verfahrensabschnitts c) über 2,4-Pyrimidine).
Verfahren d')
Alkohole der Formeln (VIII') und (IX') lassen sich wie in dem obigen 2,4-Pyrimidinverfahren d) beschrieben nach Standard-Mitsunobubedingungen miteinander umsetzen.
Alkohole der Formel (VIII') werden analog des oben beschriebenen Verfahrensabschnitts d) über 2,4-Pyrimidine hergestellt.
Alkohole der Formel (IX') sind im Handel erhältlich oder lassen sich nach im Stand der Technik bekannten Verfahren darstellen.
Verfahren e')
Verbindungen der Formeln (X') und (VII') können nach Standardbedingungen wie im obigen Verfahren e) über 2,4-Pyrimidine beschrieben miteinander umgesetzt werden.
Verbindungen der Formel (X') werden analog dem oben beschriebenen Verfahrensabschnitt d) über 2,4-Pyrimidine dargestellt.
Verbindungen der Formel (VII') sind im Handel erhältlich oder lassen sich nach im Stand der Technik bekannten Verfahren darstellen.
Verfahren f)
Verbindungen der Formeln (XI') und (VII') können nach Standardbedingungen wie im obigen Verfahren f) über 2,4-Pyrimidine beschrieben miteinander umgesetzt werden.
Verbindungen der Formel (XI') werden analog dem oben beschriebenen Verfahrensabschnitt d) über 2,4-Pyrimidine dargestellt.
Verfahren g')
Verbindungen der Formeln (XII') und (XIII') können nach Standardbedingungen wie im obigen Verfahren g) über 2,4-Pyrimidine beschrieben miteinander umgesetzt werden.
Verbindungen der Formel (X'II) werden analog dem oben beschriebenen Verfahrensabschnitt d) über 2,4-Pyrimidine dargestellt.
Verbindungen der Formel (XIII') sind im Handel erhältlich oder lassen sich nach im Stand der Technik bekannten Verfahren darstellen.
Verfahren h')
Die Umwandlung des Thioacetats kann Standardbedingungen wie den im obigen Verfahren h) über 2,4-Pyrimidine beschriebenen erfolgen.
Beispiele für Umwandlungen einer Verbindung der Formel (I') in eine andere Verbindung der Formel (I') sind analog den oben für 2,4-Pyrimidine der Formel (I) beschriebenen Umwandlungen I) bis III), beispielsweise die Umwandlung einer Seitenkette der Formel (Ia) oder (Ia') in eine andere Seitenkette der Formel (Ia) oder (Ia') (wobei jedoch 4,6-Pyrimidinverbindungen anstelle der in den oben erwähnten Umwandlungen gezeigten 2,4-Pyrimidine verwendet werden).
Wie bei den oben für 2,4-Pyrimidine der Formel (I) beschriebenen Umwandlungen wird dem fachkundigen Leser einleuchten, daß die beschriebene Manipulation der Seitenkette (Ia) oder (Ia') auch an Zwischenprodukten durchgeführt werden kann (analog dem oben beschriebenen Verfahrensabschnitt d) über 2,4-Pyrimidine).
Es versteht sich, daß bestimmte der verschiedenen Ringsubstituenten in den Verbindungen der vorliegenden Erfindung durch Standardreaktionen der aromatischen Substitution eingeführt oder durch herkömmliche Modifikationen funktioneller Gruppen erzeugt werden können, entweder vor oder unmittelbar nach den oben erwähnten Verfahren, und als solche fallen sie mit unter den Verfahrensaspekt der Erfindung. Zu diesen Reaktionen und Modifikationen gehören die Einführung eines Substituenten durch aromatische Substitution, die Reduktion von Substituenten, die Alkylierung von Substituenten und die Oxidation von Substituenten. Die Reagentien und Reaktionsbedingungen für solche Vorschriften sind im Stand der chemischen Technik gut bekannt. Besondere Beispiele für aromatische Substitutionsreaktionen schließen die Einführung einer Nitrogruppe mit konzentrierter Salpetersäure, die Einführung einer Acylgruppe, beispielsweise mit einem Acylhalogenid und Lewis-Säure (wie Aluminiumtrichlorid) unter Friedel-Crafts-Bedingungen, die Einführung einer Alkylgruppe mit einem Alkylhalogenid und Lewis-Säure (wie Aluminiumtrichlorid) unter Friedel-Crafts-Bedingungen und die Einführung einer Halogengruppe ein. Besondere Beispiele für Modifikationen schließen die Reduktion einer Nitrogruppe zu einer Aminogruppe, beispielsweise durch katalytische Hydrierung mit einem Nickelkatalysator oder durch Behandlung mit Eisen in Gegenwart von Salzsäure unter Erhitzen und die Oxidation von Alkylthio zu Alkylsulfinyl oder Alkylsulfonyl ein.
Es wird weiterhin einleuchten, daß es bei einigen der hier erwähnten Reaktionen erforderlich/wünschenswert sein könnte, empfindliche Gruppen in den Verbindungen zu schützen. Wann es erforderlich bzw. wünschenswert ist, zu schützen, und für das Schützen geeignete Verfahren sind dem Fachmann bekannt. Herkömmliche Schutzgruppen können in üblicher Weise zur Anwendung gelangen (zur Erläuterung siehe T.W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1991). Enthalten die Reaktionspartner also Gruppen wie Amino, Carboxy oder Hydroxy, so kann es wünschenswert sein, die Gruppe in einigen der hier erwähnten Umsetzungen zu schützen.
Geeignete Schutzgruppen für eine Amino- oder Alkylaminogruppe sind beispielsweise eine Acylgruppe, zum Beispiel eine Alkanoylgruppe wie Acetyl, eine Alkoxycarbonylgruppe, beispielsweise eine Methoxycarbonyl-, Ethoxycarbonyl- oder t.-Butoxycarbonylgruppe, eine Arylmethoxycarbonylgruppe, beispielsweise Benzyloxycarbonyl, oder eine Aroylgruppe, beispielsweise Benzoyl. Die Entschützungsbedingungen für die oben aufgeführten Schutzgruppen hängen natürlich von der gewählten Schutzgruppe ab. So kann man beispielsweise eine Acylgruppe wie eine Alkanoyl- oder Alkoxycarbonylgruppe oder eine Aroylgruppe zum Beispiel durch Hydrolyse mit einer geeigneten Base wie einem Alkalihydroxid, beispielsweise Lithium- oder Natriumhydroxid, abspalten. Alternativ dazu kann man eine Acylgruppe wie eine t.-Butoxycarbonylgruppe beispielsweise durch Behandlung mit einer geeigneten Säure wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure oder Phosphorsäure oder Trifluoressigsäure entfernen, und eine Arylmethoxycarbonylgruppe wie eine Benzyloxycarbonylgruppe kann zum Beispiel durch Hydrierung über einem Katalysator wie Palladium-auf-Aktivkohle oder durch Behandeln mit einer Lewissäure, beispielsweise Bortris(trifluoracetat), abgespalten werden. Eine geeignete alternative Schutzgruppe für eine primäre Aminogruppe ist beispielsweise eine Phthaloylgruppe, die sich durch Behandeln mit einem Alkylamin, beispielsweise Dimethylaminopropylamin, oder mit Hydrazin, entfernen läßt.
Eine geeignete Schutzgruppe für eine Hydroxygruppe ist beispielsweise eine Acylgruppe, zum Beispiel eine Alkanoylgruppe wie Acetyl, eine Aroylgruppe wie zum Beispiel Benzoyl, oder eine Arylmethylgruppe, zum Beispiel Benzyl. Die Entschützungsbedingungen für die oben aufgeführten Schutzgruppen hängen natürlich von der gewählten Schutzgruppe ab. So kann man beispielsweise eine Acylgruppe wie eine Alkanoyl- oder eine Aroylgruppe zum Beispiel durch Hydrolyse mit einer geeigneten Base wie einem Alkalihydroxid, beispielsweise Lithium- oder Natriumhydroxid, entfernen. Alternativ dazu kann eine Arylmethylgruppe wie z.B. eine Benzylgruppe zum Beispiel durch Hydrierung über einem Katalysator wie Palladium-auf-Aktivkohle abgespalten werden.
Eine geeignete Schutzgruppe für eine Carboxygruppe ist beispielsweise eine Estergruppe, beispielsweise eine Methyl- oder eine Ethylgruppe, die zum Beispiel durch Hydrolyse mit einer Base wie Natriumhydroxid entfernt werden kann, oder beispielsweise eine t.-Butylgruppe, die zum Beispiel durch Behandlung mit einer Säure, beispielsweise einer organischen Säure wie Trifluoressigsäure, entfernt werden kann, oder beispielsweise eine Benzylgruppe, die zum Beispiel durch Hydrierung über einem Katalysator wie Palladium-auf-Aktivkohle entfernt werden kann.
Die Schutzgruppen können mit herkömmlichen, im Stand der chemischen Technik gut bekannten Verfahren in einer zweckmäßigen Stufe der Synthese abgespalten werden.
Viele der hier definierten Zwischenprodukte sind neu, beispielsweise die der Formel II und IV, und diese Verbindungen werden als weiteres Merkmal der Erfindung bereitgestellt.
ASSAYS
Wie oben ausgeführt haben die in der vorliegenden Erfindung definierten Pyrimidinderivate antizellproliferative Wirkung wie z.B. Antikrebswirkung, wobei man davon ausgeht, daß dies in der CDK- und/oder FAK-hemmenden Wirkung der Verbindung begründet ist. Diese Eigenschaften lassen sich beispielsweise unter Anwendung der unten erläuterten Vorschrift untersuchen:
CDK4-Inhibierungsassay
Es wurden die folgenden Abkürzungen verwendet:
HEPES steht für N-(2-Hydroxyethyl)piperazin-N'-(2-ethansulfonsäure)
DTT steht für Dithiothretiol
PMSF steht für Phenylmethylsulfonylfluorid.
Die Verbindungen wurden in einem in-vitro-Kinaseassay in Platten mit 96 Vertiefungen unter Anwendung des Scintillation Proximity Assay (SPA – von Amersham), bei dem der Einbau von [γ-33-P]-Adenosintriphosphat in eine Testsubstanz (GST-Retinoblastoma) gemessen wird, getestet. In jede der Vertiefungen wurde die zu testende Verbindung (mit DMSO und Wasser auf die korrekten Konzentrationen verdünnt) gegeben, und in die Kontrollvertiefungen wurde entweder p16 als Inhibitor oder DMSO als positive Kontrolle gegeben.
Jeweils ungefähr 0,5 μl teilgereinigtes CDK4/Cyclin-D1-Enzym (die Menge richtet sich nach der Enzymaktivität), verdünnt mit 25 μl Inkubationspuffer, wurde in die Vertiefungen gegeben, gefolgt von 20 μl einer GST-Rb/ATP/ATP33-Mischung (mit 0,5 μg GST-Rb und 0,2 μM ATP und 0,14 μCi [γ-33-P]-Adenosintriphosphat), und die so erhaltene Mischung wurde sachte geschüttelt und dann 60 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubiert.
In jede der Vertiefungen wurden dann 150 μl Stopplösung mit (0,8 mg/Vertiefung Protein A-PVT SPA-Perle (Amersham)), 20 μp/Vertiefung Anti-Glutathiontransferase, Kaninchen-IgG (von Molecular Probes), 61 mM EDTA und 50 mM HEPES pH 7,5 mit 0,05% Natriumazid gegeben.
Die Platten wurden mit Topseal-S versiegelt, zwei Stunden lang Ruhen gelassen und dann 5 Minuten lang bei 2500 U/min, 1124×g, zentrifugiert. Die Platten wurden auf einem Topcount ausgewertet, jeweils 30 Sekunden pro Vertiefung.
Der zum Verdünnen der Enzym- und Substratmischungen verwendete Inkubationspuffer enthielt 50 mM HEPES pH 7,5, 10 mM MnCl₂, 1 mM DTT, 100 μM Natriumvanadat, 100 μM NaF, 10 mM Natriumglycerophosphat und Rinderserumalbumin (BSA) (Endkonzentration 1 mg/ml).
Als Kontrolle kann man anstelle von p16 auch einen anderen bekannten CDK4-Inhibitor verwenden.
Testsubstrat
In diesem Assay wurde lediglich ein Retinoblastomateil (Science 1987 Marl 3; 235 (4794): 1394 – 1399; Lee W.H., Bookstein R., Hong F., Young L.J., Shew J.Y., Lee E.Y.) verwendet, kondensiert mit einem GST-Tag. Mit den Retinoblastoma-Aminosäuren 379–928 (aus dem Retinoblastoma-Plasmid ATCC pLRbRNL) wurde eine Polymerase-Kettenreaktion (PCR) durchgeführt, und die Sequenz wurde in den pGEX-2T-Fusionsvektor kloniert (Smith D.B. und Johnson, K.S. Gene 67, 31 (1988); der einen tac-Promotor für induzierbare Expression, ein internes lac I^q-Gen für die Verwendung in einem E.coli-Wirt und eine Kodierungsregion für die Thrombinspaltung enthielt – von Pharmacia Biotech), der zur Amplifizierung von Aminosäuren 792-928 verwendet wurde.
Diese Sequenz wiederum wurde in pGEX-2T kloniert.
Die so erhaltene Retinoblastoma-Sequenz 792–928 wurde mittels Standardverfahren zur induzierbaren Expression in E.Coli (BL21-(DE3)-pLysS-Zellen) exprimiert und wie folgt gereinigt.
E.Coli-Paste wurde in 10 ml/g NETN-Puffer (50 mM Tris pH 7,5, 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 0,5% v/v NP-40, 1 mM PMSF, 1 μg/Leupeptin, 1 μg/ml Aprotinin und 1 μg/ml Pepstatin) resuspendiert und pro 100 ml Homogenat 2 × 45 Sekunden ultraschallbehandelt. Nach dem Zentrifugieren wurde der Überstand auf eine 10 ml Glutathion-Sepharose-Säule (Pharmacia Biotech, Herts, Großbritannien) aufgetragen und mit NETN-Puffer gewaschen. Nach dem Waschen mit Kinase-Puffer (50 mM HEPES pH 7,5, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, imM PMSF, 1 μg/ml Leupeptin, 1 μg/ml Aprotinin und 1 μg/ml Pepstatin) wurde das Protein mit 50 mM reduziertem Glutathion in Kinase-Puffer eluiert. Die GST-Rb(792-927) enthaltenden Fraktionen wurden gepoolt und über Nacht gegen Kinase-Puffer dialysiert. Das Endprodukt wurde mit Natriumdodecasulfat-(SDS-)PAGE (Polyacrylamidgel) unter Verwendung von 8 bis 16% Tris-Glycin-Gelen (Novex, San Diego, USA) analysiert.
CDK4 und Cyclin D1
CDK4 und Cyclin D1 wurden aus RNA der MCF-7-Zellinie (von ATCC-Nummer:HTB22, Brustadenokarzinomalinie) wie folgt kloniert. Die RNA wurde aus MCF-7-Zellen isoliert und dann einer reversen Transkription mit Oligo-dT-Primern unterzogen. Die vollständige Kodesequenz der einzelnen Gene wurde mit PCR amplifiziert [CDK4-Aminosäuren 1-303; Lit. Cell 1992 Oct 16; 71(2): 323-334; Matsushime H., Ewen M.E., Stron D.K., Kato J.Y., Hanks S.K., Roussel M.F., Sherr C.J., und Cyclin-D1-Aminosäuren 1-296; Ref. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 1991; 56: 93–97; Arnold A., Motokura T., Bloom T., Kronenburg, Ruderman J., Juppner H., Kim H.G.].
Nach dem Sequenzieren wurden die PCR-Produkte unter Anwendung von Standardverfahren in den Insekten-Expressionsvektor pVL 1393 (von Invitrogen 1995, Katalognummer: V1392-20) kloniert. Die PCR-Produkte wurden dann [unter Anwendung der Standard-Baculogoldvirus Koinfektionsmethode] doppelt im Insektenzellsystem SF21 (aus Eierstockgewebe des Heerwurms gewonnene Spodoptera-Frugiperda-Zellen – im Handel erhältlich) exprimiert.
Im folgenden Beispiel werden Einzelheiten zur Produktion von Cyclin D1/CDK4 in SF21-Zellen (in TC100 + 10% FBS(TCS) + 0,2% Pluronic) mit Doppelinfektion mit einer MOI von 3 für jedes der Viren von Cyclin D1 und CDK4 beschrieben.
Beispielhafte Produktion von Cyclin D1/CDK4
In einer Rollflaschenkultur bis zu einer Zelldichte von 2,33 × 10⁶ Zellen/ml herangezogene SF21-Zellen wurden zur Inokulation von 10 × 500 ml Rollflaschen zu 0,2 × 10⁶ Zellen/ml verwendet. Die Rollflaschen wurden auf einem Rollgerüst bei 28°C inkubiert.
Nach 3 Tagen (72 Stunden) wurden die Zellen gezählt, wobei der für 2 Flaschen gefundene Durchschnittswert 1,86 × 10⁶ Zellen/ml (99% lebensfähig) betrug. Die Kulturen wurden dann mit dem Doppelvirussystem in einer MOI von 3 für jedes der Viren infiziert.
10 × 500 ml wurden mit JS303 Cyclin-D1 Virustiter – 9 × 10⁷ pfu/ml. JS304 CDK4 Virustiter – 1 × 10⁸ pfu/ml-infiziert.
Die Viren wurden vor der Zugabe zu den Kulturen gemischt, und die Kulturen wurden wieder bei 28°C auf das Rollgerüst gelegt.
3 Tage (72 Stunden) nach der Infektion wurden 5 Liter der Kultur geerntet. Die Gesamtzellenzahl bei der Ernte betrug 1,58 × 10⁶ Zellen/ml (99% lebensfähig). Die Zellen wurden in einer Heraeus Omnifuge 2.0 RS in Chargen von 250 ml bei 4°C 30 Minuten lang bei 2500 U/min zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen.
20 Pellets von ~ 4 × 10⁸ Zellen/Pellet wurden in LN₂ schockgefroren und bei –80°C in einem CCRF-Kühlraum aufbewahrt. Die SF21-Zellen wurden dann durch Resuspendieren in Lysepuffer (50 mM HEPES pH 7,5, 10 mM Magnesiumchlorid, 1 mM DTT, 10 mM Glycerophosphat, 0,1 mM PMSF, 0,1 mM Natriumfluorid, 0,1 mM Natriumorthovanadat, 5 μg/ml Aprotinin, 5 μg/ml Leupeptin und 20% w/v Saccharose) und Zugabe von eiskaltem entionisiertem Wasser einer hypotonen Lyse unterzogen. Nach dem Zentrifugieren wurde der Überstand auf eine Poros HQ/M 1.4/100 Anionenaustauschersäule (PE Biosystems, Hertford, Großbritannien) aufgetragen. CDK4 und Cyclin D1 wurden mit 375 mM NaCl in Lysepuffer koeluiert, und ihr Vorhandensein wurde durch Western-Blot unter Verwendung geeigneter Anti-CDK4- und Anti-Cyclin-D1-Antikörper (von Santa Cruz Biotechnology, Californien, USA) kontrolliert.
p16-Kontrolle (Nature 366: 704–707; 1993; Serrano M, Hannon GJ, Beach D)
p16 (der natürliche Inhibitor von CDK4/Cyclin D1) wurde von HeLa-cDNA (Hela-Zellen von ATCC CCL2, humanes Epithelzellenkarzinom aus dem Gebärmutterhals; Cancer Res. 12: 264, 1952), kloniert in pTB 375 NBSE mit 5'- His-Tag, amplifiziert und unter Anwendung von Standardverfahren in BL21 (DE3) pLysS-Zellen transformiert (von Promega; Ref. Studier F.W. und Moffat B.A., J. Mol. Biol., 189, 113, 1986). Eine 1-Liter-Kultur wurde bis zur entsprechenden OD kultiviert und dann zur Expression von p16 über Nacht mit IPTG induziert. Die Zellen wurden dann durch Ultraschallbehandlung in 50 mM Natriumphosphat, 0,5 M Natriumchlorid, PMSF, 0,5 μg/ml Leupeptin und 0,5 μg/ml Aprotinin lysiert. Die Mischung wurde zentrifugiert, der Überstand wurde zu Nickelchelat-Perlen gegeben und es wurde 1½ Stunden lang gemischt. Die Perlen wurden mit Natriumphosphat, NaCl pH 6,0 gewaschen und das Produkt p 16 eluierte mit Natriumphosphat, NaCl pH 7,4 mit 200 mM Imidazol.
Das pTB NBSE wurde wie folgt aus pTB 375 NBPE konstruiert:
p TB375
Bei dem für die Herstellung von pTB 375 verwendeten Hintergrundvektor handelte es sich um pZEN0042 (siehe GB Patent 2253852), der die induzierbare tetA/tetR-Tetracyclinresistenzsequenz aus dem Plasmid RP4 und die cer-Stabilitätssequenz aus dem Plasmid pKS492 in einem von pAT153 abgeleiteten Hintergrund enthielt. pTB375 wurde durch Addition einer aus dem T7 Gen 10 Promotor, einer multiplen Klonierungsstelle und der T7 Gen 10 Terminationssequenz bestehenden Expressionskassette erzeugt. Zusätzlich wurde vor der Expressionskassette eine Terminatorsequenz eingebaut, um das Transkriptionsablesen des Hintergrundvektors zu reduzieren.
pTB 375 NBPE
Die in pTB 375 vorhandene einzigartige EcoRI-Restriktionsstelle wurde entfernt. Zwischen NdeI und BamHI wurde in pTB 375 eine neue multiple Klonierungsstelle mit den Erkennungssequenzen für die Restriktionsenzyme NdeI, BamHI, PstI und EcoRI eingefügt, wodurch die ursprünglich in pTB 375 vorhandene BamHI-Stelle zerstört wurde.
pTB 375 NBSE
In pTB 375 NBPE wurde zwischen den NdeI- und EcoRI-Stellen eine neue multiple Klonierungsstelle mit den Erkennungssequenzen für die Restriktionsenzyme NdeI, BamHI, SmaI und EcoRI eingefügt. Das diese Restriktionsstellen enthaltende Oligonukleotid enthielt auch 6 Histidin-Codons, die sich zwischen den NdeI- und BamHI-Stellen im gleichen Leserahmen wie das in der NdeI-Stelle vorhandene Start-Codon (ATG) befanden.
Analog dem oben Gesagten lassen sich Assays zur Untersuchung der Inhibierung von CDK2 und CDK6 entwerfen. CDK2 (EMBL Zugangsnr. X62071) kann zusammen mit Cyclin A oder Cyclin E (siehe EMBL Zugangsnr. M73812) verwendet werden, und weitere Einzelheiten zu solchen Assays finden sich in der internationalen PCT-Patentschrift Nr. W0 99/21845, deren betreffende Abschnitte zur Biochemischen und Biologischen Auswertung hiermit durch Verweis Bestandteil der vorliegenden Anmeldung werden.
Verwendet man CDK2 mit Cyclin E, so läßt sich eine teilweise gemeinsame Aufreinigung wie folgt erzielen: Sf21-Zellen werden in Lysepuffer (50 mM Tris pH 8,2, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM Glycerophosphat, 0,1 mM Natriumorthovanadat, 0,1 mM NaF, 1 mM PMSF, 1 μg/ml Leupeptin und 1 μg/ml Aprotinin) resuspendiert und 2 Minuten lang in einem 10 ml-Dounce-Homogenisator homogenisiert. Nach der Zentrifugation wird der Überstand auf eine Poros HQ/M 1,4/100-Anionenaustauschersäule (PE Biosystems, Hertford, Großbritannien) aufgetragen. CDK2 und Cyclin E werden zusammen am Anfang eines 0–1 M NaCl-Gradienten (der in Lysepuffer ohne Proteaseinhibitoren gefahren wird) über 20 Säulenvolumina eluiert. Die Koelution wird durch Western-Blot sowohl mit Anti-CDK2- als auch mit Anti-Cyclin-E-Antikörpern (Santa Cruz Biotechnology, Californien, USA) kontrolliert.
FAK3-Kinase-Inhibierungsassay
In diesem Assay wird die Fähigkeit einer Testverbindung zur Inhibierung der Tyrosinkinaseaktivität humaner Focal Adhesion Kinase (FAK) bestimmt.
Die für FAK kodierende DNA wird durch Totalgensynthese (Edwards M, International Biotechnology Lab 5(3), 19–25, 1987) oder durch Klonieren erhalten. Diese werden dann in einem geeigneten Expressionssystem exprimiert, wodurch man Polypeptid mit Tyrosinkinaseaktivität erhält. Durch Exprimieren von rekombinatem Protein in Insektenzellen erhaltene FAK beispielsweise zeigte intrinsische Tyrosinkinaseaktivität.
FAK (vollständige humane cDNA, beschrieben von Andre et al. (Biochemical and Biophysical Research Communications, 1993, 190(1): 140–147; EMBL/GenBank Zugangsnummer L05186)) wurde so modifiziert, daß das erhaltene Protein nach der Translation am N-Terminus unmittelbar vor dem Startmethionin einen 6-Histidin-Tag aufwies. Aktives FAK-Protein ist bereits in einem Baculovirus-System unter Anwendung eines ähnlichen N-terminalen 6-Histidin-Tags exprimiert worden (Protein Expression And Purification, 1996, 7: 12–18). Die humane FAK-cDNA wurde in den Baculovirus-Transplacementvektor pFast-bac 1 (Life Technologien) kloniert, und das rekombinante Konstrukt wurde zur Herstellung von rekombinantem Baculovirus mit viraler DNA in Insektenzellen (beispielsweise Spodoptera frugiperda 21 (Sf21)) kotransfiziert (Einzelheiten über Methoden zum Zusammenbau rekombinanter DNA-Moleküle und die Herstellung und Anwendung von rekombinanten Baculoviren finden sich in Standard-Lehrbüchern, beispielsweise in Sambrook et al., 1989, Molecular cloning – A Laboratory Manual, 2. Auflage, Cold Spring Harbour Laboratory Press und O'Reilly et al., 1992, Baculovirus Expression Vectors – A Laboratory Manual, W. H. Freeman und Co, New York. Spezifische Angaben zur Anwendung des pFastbac-Systems ("Bac zu Bac") werden in Anderson et al., 1995, FOCUS (Life Technologies Bulletin Magazine), 17, S. 53, gegeben).
Zur Expression von biologisch aktivem humanem FAK-Protein wurden Sf21-Zellen mit plaquereinem FAK-rekombinantem Virus in einer MOI von 3 infiziert und 48 Stunden später geerntet. Die geernteten Zellen wurden mit eiskalter, phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) (10 mM Natriumphosphat pH 7,4, 138 mM Natriumchlorid, 2,7 mM Kaliumchlorid) gewaschen und dann in eiskaltem Lysepuffer (50 mM HEPES pH 7,5, 1 mM Dithiothreitol, 100 μM Natriumfluorid, 100 μM Natriumorthovanadat, 10 mM Glycerophosphat, 100 μM Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF), 5 μg/ml Aprotinin, 5 μg/ml Leupeptin, 1% Tween; das PMSF wird unmittelbar vor der Verwendung aus einer frisch zubereiteten 100 mM Lösung in Methanol zugegeben) resuspendiert, wobei 250 μl Lysepuffer pro 10 Millionen Zellen verwendet wurden. Die Suspension wurde dann 15 Minuten lang auf Eis inkubiert und bei 4°C 10 Minuten lang bei 13000 U/min zentrifugiert. Der Überstand (Enzymstammlösung) wurde abgenommen und aliquotiert, und die Aliquots wurden in flüssigem Stickstoff schockgefroren und bei –70°C aufbewahrt. Bei einer typischen Charge wurde die Enzymstammlösung 1:250 mit Enzymverdünnungsmittel ((100 mM HEPES pH 7,4, 0,2 mM Dithiothreitol, 200 μM Natriumorthovanadat, 0,1% Triton X-100) verdünnt, und in die Vertiefungen des Assays wurden jeweils 50 ml des frisch verdünnten Enzyms gegeben (siehe FAK3-Protokoll, unten).
FAK3: In-vitro-Enzymassayprotokoll
Eine Substrat-Stammlösung wurde aus einem statistischen, Tyrosin enthaltenden Copolymer, beispielsweise Poly(Glu, Ala, Tyr) 6:3:1 (Sigma P3899) zubereitet, als 1 mg/ml Stammlösung in PBS bei –20°C aufbewahrt und zum Beschichten der Platten 1 zu 500 mit PBS verdünnt.
Am Tag vor dem Assay wurde in alle Vertiefungen der Assayplatten 100 μl der verdünnten Substratlösung gegeben (Maxisorp Immunplatten mit 96 Vertiefungen von Life technologies, Kat.-Nr. 439454A) und die Platten wurden mit einem Plattenversieglungssystem versiegelt und über Nacht bei 4°C aufbewahrt.
Am Tag des Assays wurde die Substratlösung verworfen, und die Vertiefungen der Assayplatte wurden einmal mit 200 μl PBST (PBS mit 0,05 v/v Tween 20) und einmal mit 200 μl Hepes 50 mM pH 7,4 gewaschen.
Die Testverbindungen wurden als 10-mM- oder 30-mM-Stammlösungen in DMSO zubereitet und dann weiter mit in Glass destilliertem Wasser auf eine Konzentration verdünnt, die um einen Faktor von 10 über der Assayendkonzentration lag. In die Vertiefungen der gewaschenen Assayplatten wurden jeweils 10 μl der verdünnten Verbindung gegeben. Kontrollvertiefungen "ohne Verbindung" enthielten anstelle von Verbindung 10 μl glassdestilliertes Wasser.
In alle Testvertiefungen wurden vierzig Mikroliter einer 25 mM Manganchloridlösung mit 6,25 μM Adenosin-5'-triphosphat (ATP) gegeben. Zum Start der Reaktionen wurde in jede Vertiefung 50 μl frisch verdünntes Enzym gegeben, und die Platten wurden 90 Minuten lang bei 23°C inkubiert. Die Umsetzung wurde dann durch Zugabe von 100 μl PBS mit 20 mM EDTA gestoppt. Die Flüssigkeit wurde anschließend verworfen, und die Vertiefungen wurden zweimal mit PBST gewaschen.
In jede Vertiefung wurden einhundert Mikroliter an HRP-gebundener Maus-Antiphosphotyrosin-Antikörper (Santa Cruz, Produkt SC 7020-HRP), 1:1500 mit PBST mit 0,5% w/v Rinderserumalbumin (SBA) verdünnt, gegeben, und die Platten wurden 1 Stunde lang bei Raumtemperatur inkubiert, woraufhin die Flüssigkeit verworfen wurde und die Vertiefungen zweimal mit 200 μl PBST gewaschen wurden. In jede Vertiefung wurden einhundert Mikroliter einer Lösung von 2,2'-Azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsäure) (ABTS), frisch aus einer 50 mg ABTS-Tablette (Boehringer 1204 521) in 50 ml frisch zubereitetem 50 mM Phosphat-Citrat-Puffer pH 5,0 + 0,03% Natriumperborat (zubereitet mit 1 Phosphat-Citrat-Puffer mit Natriumperborat-(PCSB-)Kapsel (Sigma P4922) auf 100 ml destilliertes Wasser) zubereitet, gegeben. Die Platten wurden dann 20–60 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert, bis der bei 405 nm mit einem Spektrophotometer für das Lesen von Platten gemessene Extinktionswert der "ohne Verbindung"-Kontrollvertiefungen ungefähr 1,0 betrug.
Die Dosis-Reaktions-Kurven wurden mit Origin-Software aus den abgelesenen Extinktionswerten erstellt. Die Verbindungen wurden gemäß der durch die Analyse mit der Origin-Software erhaltenen Inhibitionkonzentration 50 (IC50) entsprechend ihrer Wirksamkeit eingeordnet.
Wenngleich sich die pharmakologischen Eigenschaften der Verbindungen der Formel (I) bzw. (I') ändern, wenn man die Struktur modifiziert, so zeigen die Verbindungen der Formel (I) bzw. (I') in den obigen Assays im allgemeinen bei IC₅₀-Konzentrationen bzw. -Dosierungen im Bereich von 250 μM bis 1 nM Wirkung.
Bei dem Test im obigen in-vitro-Assay wurde die CDK4-inhibierende Wirkung von Beispiel 5 als IC₅₀ = 0,02 μM gemessen. Bei dem Test im obigen in-vitro-Assay wurde die FAK-hemmende Wirkung von Beispiel 3 als IC₅₀ = 0,553 μM gemessen.
Die in-vivo-Wirkung der Verbindungen der vorliegenden Erfindung läßt sich durch Standardverfahren ermitteln, beispielsweise indem man die Hemmung des Zellwachstums mißt und die Zytotoxizität abschätzt. Weitere Einzelheiten finden sich in den folgenden Literaturstellen:

a) Attenuation of the Expression of the Focal Adhesion Kinase induces Apoptosis in Tumor Cells. Xu L-h et al. Cell Growth & Differentiation (1996) 7, S. 413–418;
b) The COOH-Terminal Domain of the Focal Adhesion Kinase Induces Loss of Adhesion and Cell Death in Human Tumour Cells. Xu L-h et al. Cell Growth & Differentiation (1998) 9, S. 999–1005;
c) Inhibition of pp125-FAK in Cultured Fibroblasts Results in Apoptosis. Hungerford J.E. et al. The Journal of Cell Biology (1996) 135, S. 1383–1390;
d) Inhibition of Focal Adhesion Kinase (FAK) Signalling in Focal Adhesions Decreases Cell Motility and Proliferation. Gilmore A.P. und Romer L.H. Molecular Biology of the Cell (1996) 7, S. 1209–1224.

Die Hemmung des Zellwachstums läßt sich durch Anfärben der Zellen mit Sulforhodamin B (SRB), einem Fluoreszenzfarbstoff, der Proteine anfärbt, messen, wodurch man die Menge an Protein (d.h. Zellen) in einer Vertiefung abschätzen kann (siehe Boyd, M. R. (1989) Status of the NCI preclinical antitumour drug discovery screen. Prin. Prac Oncol 10: 1–12). Die Messung der Inhibierung des Zellwachstums wird im Einzelnen wie folgt durchgeführt:
Die Zellen wurden in entsprechendem Medium in einem Volumen von 100 μl in Platten mit 96 Vertiefungen plattiert; bei dem Medium handelte es sich um Dulbecco's Modified Eagle für MCF-7, SK-UT-1B und SK-UT-1. Die Zellen wurden über Nacht anhaften gelassen, dann wurden verschiedene Konzentrationen der Inhibitorverbindungen mit einer Maximalkonzentration von 1% DMSO (v/v) zugesetzt. Eine Kontrollplatte wurde getestet, wodurch man einen Wert für die Zellen vor Zugabe der Verbindung erhielt. Die Zellen wurden drei Tage lang bei 37°C (5% CO2) inkubiert.
Nach den drei Tagen wurde den Platten TCA in einer Endkonzentration von 16% (v/v) zugesetzt. Die Platten wurden dann 1 Stunde lang bei 4°C inkubiert, worauf der Überstand entfernt und die Platten mit Leitungswasser gewaschen wurden. Nach dem Trocknen wurde bei 37°C 30 Minuten lang 100 μl SRB-Farbstoff (0,4% SRB in 1%-iger Essigsäure) zugegeben. Überschüssiges SRB wurde entfernt, und die Platten wurden mit 1%iger Essigsäure gewaschen. Das proteingebundene SRB wurde in 10 mM Tris pH 7,5 solubilisiert und 30 Minuten lang bei Raumtemperatur geschüttelt. Die ODs wurden bei 540 nm abgelesen, und die eine 50%ige Wachstumshemmung bewirkende Konzentration an Inhibitor wurde aus einer semi-log-Auftragung der Inhibitorkonzentration gegen die Extinktion bestimmt. Die Verbindungskonzentration, bei der die optische Dichte unter dem beim Plattieren der Zellen zu Beginn des Experiments erhaltenen Wert fällt, ergab den Toxizitätswert.
Typische IC₅₀-Werte für erfindungsgemäße Verbindungen beim Testen im SRB-Assay liegen im Bereich von 1 mM bis 1 nM.
Gemäß einem weiteren Aspekt der Erfindung wird eine pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend ein Pyrimidinderivat der Formel (I) oder (I') oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder ein in vivo hydrolysierbare Ester davon, wie oben definiert, zusammen mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Verdünnungsmittel oder einem pharmazeutisch unbedenklichen Träger bereitgestellt.
Die Zusammensetzung kann in einer für die orale Verabreichung geeigneten Form, beispielsweise als Tablette oder Kapsel, in einer für die parenterale Injektion (einschließlich intravenös, subkutan, intramuskulär, intravasal oder Infusion) geeigneten Form als sterile Lösung, Suspension oder Emulsion, in einer für die topische Verabreichung geeigneten Form als Salbe oder Creme oder in einer für die rektale Verabreichung geeigneten Form als Zäpfchen vorliegen.
Im allgemeinen werden die obigen Zusammensetzungen auf herkömmliche Weise unter Verwendung herkömmlicher Hilfsstoffe dargestellt.
Das Pyrimidin wird einem Warmblüter normalerweise in einer Einheitsdosis im Bereich von 5 bis 5000 mg pro Quadratmeter Körperoberfläche des Tiers verabreicht, d.h. ungefähr 0,1 bis 100 mg/kg, und hierdurch wird normalerweise eine therapeutisch wirksame Dosis bereitgestellt. Eine Einheitsdosisform wie eine Tablette oder Kapsel enthält gewöhnlich beispielsweise 1–250 mg an Wirkstoff. Vorzugsweise liegt die Tagesdosis im Bereich von 1–50 mg/kg. Die Tagesdosis hängt jedoch notwendigerweise vom behandelten Wirt, von dem jeweiligen Verabreichungsweg und dem Schweregrad der behandelten Erkrankung ab. Demgemäß wird die optimale Dosierung von dem den betreffenden Patienten behandelnden Arzt bestimmt.
Gemäß einem weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein Pyrimidinderivat der Formel (I) oder (I'), oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder ein in vivo hydrolysierbarer Ester davon, wie oben definiert, zur Verwendung bei einem Verfahren zur therapeutischen Behandlung des Körpers eines Tieres einschließlich des Menschen bereitgestellt.
Es wurde gefunden, daß es sich bei den in der vorliegenden Erfindung definierten Pyrimidinderivaten bzw. deren pharmazeutisch unbedenklichen Salzen oder in vivo hydrolysierbaren Estern um wirksame Zellzyklusinhibitoren (antiproliferative Mittel) handelt, wobei angenommen wird (ohne sich damit theoretisch festzulegen), daß diese Eigenschaft auf ihre CDK-hemmenden Eigenschaften zurückzuführen ist. Die Verbindungen sind darüber hinaus wirksame FAK-Inhibitoren. Demgemäß ist zu erwarten, daß die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sich zur Behandlung von Krankheiten bzw. medizinischen Leiden eignen, die ausschließlich oder teilweise durch CDK- und/oder FAK-Enzyme vermittelt werden, d.h. die Verbindungen können dazu verwendet werden, in einem einer solchen Behandlung bedürftigen Warmblüter eine CDK-hemmende Wirkung hervorzurufen. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung stellen somit ein Verfahren zur Behandlung der Proliferation und/oder Migration maligner Zellen bereit, das durch eine Hemmung von CDK- und/oder FAK-Enzymen charakterisiert ist, d.h. die Verbindungen können dazu verwendet werden, eine antiproliferative Wirkung/Antimigrationswirkung hervorzurufen, die ausschließlich oder teilweise durch die Inhibierung von CDKs und/oder FAK vermittelt wird. Die Verbindungen können sich auch als FAK-Inhibitoren eignen, indem sie Zelltod (Apoptose) induzieren. Es ist zu erwarten, daß ein solches erfindungsgemäßes Pyrimidinderivat eine Vielzahl verschiedener Antikrebswirkungen hat, da CDKs und/oder FAK für viele häufig vorkommende Humankarzinome wie Leukämie und Brust-, Lungen-, Kolon-, Rektal-, Magen-, Prostata-, Blasen-, Bauchspeicheldrüsen- und Eierstockkrebs mitverantwortlich gemacht werden. Es steht somit zu erwarten, daß ein erfindungsgemäßes Pyrimidinderivat gegen diese Arten von Krebs wirksam sein sollte. Weiterhin ist zu erwarten, daß ein Pyrimidinderivat der vorliegenden Erfindung gegen verschiedene Leukämien, lymphoide maligne Tumore und feste Tumore wie Karzinome und Sarkome in Geweben wie der Leber, den Nieren, der Prostata und der Bauchspeicheldrüse Wirkung zeigen sollte. Insbesondere wird erwartet, daß solche erfindungsgemäßen Verbindungen das Wachstum von primären und rekursiven festen Tumoren wie beispielsweise des Kolons, der Brust, der Prostata, der Lunge und der Haut in vorteilhafter Weise verlangsamen sollten. Ganz besonders wird erwartet, daß solche erfindungsgemäßen Verbindungen bzw. ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder ein in vivo hydrolysierbarer Ester davon das Wachstum von primären und rekursiven festen Tumoren, die mit CDKs und/oder FAK assoziiert sind, insbesondere von Tumoren, deren Wachstum und Verbreitung in beträchtlichem Maße von CDKs und/oder FAK abhängen, einschließlich beispielsweise bestimmter Tumore des Kolons, der Brust, der Prostata, der Lunge, der Vulva und der Haut, hemmen.
Weiterhin steht zu erwarten, daß ein Pyrimidinderivat der vorliegenden Erfindung gegen andere Zellproliferations-/Migrationskrankheiten bei einer Vielzahl verschiedener anderer Krankheitszustände, beispielsweise bei Leukämien, fibroproliferativen und differentiativen Erkrankungen, Psoriasis, rheumatoider Arthritis, Kaposi-Sarkom, Hämangiom, akuten und chronischen Nephropathien, Atheroma, Atherosklerose, arterieller Restenose, Autoimmunerkrankungen, akuter und chronischer Entzündung, Knochenkrankheiten und Augenkrankheiten mit Proliferation der Gefäße in der Netzhaut Wirkung zeigen sollte.
Gemäß diesem Aspekt der Erfindung wird somit ein Pyrimidinderivat der Formel (I) oder (I'), oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder ein in vivo hydrolysierbarer Ester davon, wie oben definiert, zur Verwendung als Medikament bereitgestellt; sowie die Verwendung eines Pyrimidinderivats der Formel (I) oder (I'), oder eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes oder eines in vivo hydrolysierbaren Esters davon, wie oben definiert, zur Herstellung eines Medikaments zum Herbeiführen einer Antikrebs-, den Zellzyklus inhibierenden (antiproliferativen) Wirkung und/oder FAK-inhibierenden (Antizellmigration und/oder Apoptose induzierenden) Wirkung bei einem Warmblüter wie dem Menschen. Insbesondere wird durch die Hemmung von CDK2, CDK4 und/oder CDK6, vor allem von CDK4 und CDK6, eine den Zellzyklus inhibierende Wirkung in der S- oder G1-S-Phase hervorgerufen.
Gemäß einem weiteren Merkmal dieses Aspekts der Erfindung wird ein Verfahren zum Herbeiführen einer Antikrebs-, den Zellzyklus inhibierenden (antiproliferativen) Wirkung und/oder FAK-inhibierenden (Antizellmigration und/oder Apoptose induzierenden) Wirkung bei einem einer solchen Behandlung bedürftigen Warmblüter wie dem Menschen bereitgestellt, bei dem man dem Tier eine wirksame Menge eines wie unmittelbar oben definierten Pyrimidinderivats verabreicht. Insbesondere wird durch die Hemmung von CDK2, CDK4 und/oder CDK6, vor allem von CDK4 und CDK6, eine inhibierende Wirkung in der S- oder G1-S-Phase hervorgerufen.
Wie oben angegeben hängt die Größe der für die therapeutische oder prophylaktische Behandlung einer bestimmten Zellproliferationskrankheit erforderlichen Dosis vom behandelten Wirt, der Verabreichungsroute und dem Schweregrad der behandelten Krankheit ab. In Betracht gezogen wird eine Einheitsdosis im Bereich von beispielsweise 1–100 mg/kg, vorzugsweise von 1–50 mg/kg.
Die hier definierte CDK- und/oder FAK-hemmende Aktivität kann als Einzeltherapie zur Anwendung kommen oder zusätzlich zur erfindungsgemäßen Verbindung eine oder mehrere andere Substanzen und/oder Behandlungen umfassen. Solche Kombinationsbehandlungen können durch die gleichzeitige, aufeinanderfolgende oder getrennte Verabreichung der einzelnen Komponenten der Behandlung erfolgen. Auf dem Gebiet der medizinischen Onkologie ist es eine normale Vorgehensweise, bei der Behandlung eines Krebspatienten eine Kombination verschiedener Behandlungsformen anzuwenden. Bei der/den anderen, zusätzlich zu der oben definierten, den Zellzyklus inhibierenden Behandlung erfolgenden Komponente(n) einer solchen Kombinationsbehandlung in der medizinischen Onkologie kann es sich um einen operativen Eingriff, eine Strahlentherapie oder eine Chemotherapie handeln. Eine solche Chemotherapie kann drei Hauptkategorien therapeutischer Mittel umfassen:

(i) andere den Zellzyklus inhibierende Mittel, die auf die gleiche oder eine andere Weise wie die oben definierten wirken;
(ii) Cytostatika wie Antiöstrogene (beispielsweise Tamoxifen, Toremifen, Raloxifen, Droloxifen, Iodoxyfen), Progestagene (beispielsweise Megestrolacetat), Aromatasehemmer (beispielsweise Anastrozol, Letrazol, Vorazol, Exemestan), Antiprogestagene, Antiandrogene (beispielsweise Flutamid, Nilutamid, Bicalutamid, Cyproteronacetat), Agonisten und Antagonisten von LHRH (beispielsweise Goserelinacetat, Luprolid), Testosteron-5a-dihydroreduktasehemmer (beispielsweise Finasterid), antiinvasive Mittel (beispielsweise Metalloproteinaseinhibitoren wie Marimastat und Inhibitoren der Rezeptorfunktion des Urokinaseplasminogenaktivators) und Inhibitoren der Funktion von Wachstumsfaktoren (wobei zu diesen Wachstumsfaktoren beispielsweise der Platelet Derived Growth Factor und der Hepatocyte Growth Factor zählen und wobei zu den Inhibitoren Antikörper gegen Wachtumsfaktoren, Antikörper gegen Wachstumsfaktorrezeptoren, Tyrosinkinasehemmer und Serin-/Threoninkinasehemmer gehören); und
(iii) antiproliferative/antineoplastische Medikamente und Kombinationen davon, wie sie in der medizinischen Onkologie zur Anwendung kommen, wie Antimetaboliten (beispielsweise Antifolate wie Methotrexat, Fluorpyrimidine wie 5-Fluoruracil-, Purin- und Adenosinanaloga, Cytosinarabinosid); Antibiotika mit Antitumorwirkung (beispielsweise Anthracycline wie Doxorubicin, Daunomycin, Epirubicin und Idarubicin, Mitomycin-C, Dactinomycin, Mithramycin); Platinderivate (beispielsweise Cisplatin, Carboplatin); Alkylierungsmittel (beispielsweise Stickstofflost, Melphalan, Chlorambucil, Busulphan, Cyclophosphamid, Ifosfamid, Nitrosoharnstoffe, Thiotepa); antimitotische Mittel (beispielsweise Vincaalkaloide wie Vincristin und Taxoide wie Taxol, Taxoter); Topoisomerasehemmer (beispielsweise Epipodophyllotoxine wie Etoposid und Teniposid, Amsacrin, Topotecan). Gemäß diesem Aspekt der Erfindung wird ein pharmazeutisches Produkt bereitgestellt, das ein Pyrimidinderivat der wie oben definierten Formel (I) oder (I') und eine zusätzliche Substanz mit Antitumorwirkung wie oben definiert zur Kombinationsbehandlung von Krebs enthält. Weiterhin kann auch die Verabreichung eines Antiemetikums von Nutzen sein, beispielsweise bei der Anwendung einer wie oben beschriebenen Kombinationsbehandlung.

Über ihre Anwendung in der therapeutischen Medizin hinaus eignen sich die Verbindungen der Formel (I) bzw. (I') und deren pharmazeutisch unbedenklichen Salze auch als pharmakologische Werkzeuge für die Entwicklung und Standardisierung von in-vitro- und in-vivo-Testsystemen zur Untersuchung der Wirkungen von Inhibitoren der Zellzyklusaktivität in Versuchstieren wie Katzen, Hunden, Kaninchen, Affen, Ratten und Mäusen als Beitrag zu der Suche nach neuen Therapeutika.
Auf die obigen anderen Merkmale hinsichtlich pharmazeutischer Zusammensetzung, Verfahren, Methode, Verwendung und Medikamentenherstellung treffen auch die hier beschriebenen alternativen und bevorzugten Ausführungsformen der erfindungsgemäßen Verbindungen zu.
Die Erfindung wird nun durch die folgenden, nicht einschränkenden Beispiele erläutert, wobei gegebenenfalls dem chemischen Fachmann bekannte Standard verfahren und Techniken analog den in diesen Beispielen beschriebenen zur Anwendung gelangen können, und wobei, wenn nicht anders angegeben:

(i) Eindampfungen am Rotationsverdampfer im Vakuum durchgeführt wurden und die Aufarbeitung nach dem Abfiltrieren von restlichen Feststoffen wie Trockenmitteln erfolgte;
(ii) die Arbeiten bei Raumtemperatur, typischerweise im Bereich von 18–25°C und an der Luft vergenommen wurden, wenn nicht anders angegeben bzw. wenn ein Fachmann nicht normalerweise unter einer Inertgasatmosphäre wie einer Argonatmosphäre arbeiten würde;
(iii) Säulenchromatographie (nach der Flash-Methode) und Mitteldruck-Flüssigchromatographie (MPLC) an Merck Kieselgel (Art. 9385) oder Merck Lichroprep RP-18 (Art. 9303) Umkehrphasenkieselgel von E. Merck, Darmstadt, Deutschland, durchgeführt wurde; "Bond Elut"-Chromatographie unter Verwendung von Varian Mega Bond Elut-Kartuschen (10 g, Bestellcode 1225-6034), von Varian Sample Preparation Products, Californien, USA, durchgeführt wurde;
(iv) die Ausbeuten nur zur Erläuterung angegeben sind und nicht unbedingt das erzielbare Maximum darstellen;
(v) die Strukturen der Endprodukte der Formel (I) im allgemeinen durch kernmagnetische (im allgemeinen Protonen) Resonanz (NMR) und massenspektrometrische Verfahren bestätigt wurden; die chemischen Verschiebungen bei der protonenmagnetischen Resonanz (wenn nicht anders angegeben) in deuteriertem DMSO-d₆ auf der delta-Skala (ppm tieffeldverschoben von Tetramethylsilan) mit einem bei einer Feldstärke von 300 MHz betriebenen Varian Gemini 2000 Spektrometer oder einem bei einer Feldstärke von 250 MHz betriebenen Bruker AM250 Spektrometer gemessen wurden; und wobei die Peak-Multiplizitäten wie folgt angeführt sind: s, Singulett; d, Dublett; dd, Dublett von Dubletts; t, Triplett; tt, Triplett von Tripletts; q, Quartett; tq, Triplett von Quartetts; m, Multiplett; br, breit; Massenspektrometrie (MS) wurde durch Elektrospray auf einer VG-Plattform durchgeführt;
(vi) die Zwischenprodukte nicht generell vollständig charakterisiert wurden und die Reinheit durch Dünnschichtchromatographie (DC), HPLC, Infrarot-(IR-), MS- oder NMR-Analyse kontrolliert wurde;
(vii) beim Trocknen von Lösungen Magnesiumsulfat als Trockenmittel verwendet wurde;
(viii) oben bzw. im folgenden die folgenden Abkürzungen verwendet wurden:

Beispiel 1
2-{4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilino}-4-(indolin-1-yl)pyrimidin
Eine heiße Lösung von 4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilin-hydrochlorid (Methode 1, 219 mg, 0,77 mmol) in Methanol (2 ml) wurde zu einer Lösung von 2-Chlor-4-(indolin-1-yl)pyrimidin (Methode 3, 200 mg, 0,86 mmol) in n-Butanol (20 ml) gegeben. Die Mischung wurde 18 Stunden lang auf 100°C erhitzt und mit Kieselgel (1 g) versetzt. Flüchtige Komponenten wurden abgedampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung einer 0–5%igen 2,0 M methanolischen Ammoniaklösung in DCM als Laufmittel gereinigt, wodurch man das Produkt als farblosen Feststoff (201 mg, 61%) erhielt. NMR: 2,19 (s, 6H), 2,21–2,3 (m, 1H), 2,3–2,4 (m, 1H), 3,1–3,25 (m, 2H), 3,8–4,1 (m, 5H), 5,75 (m, 1H), 6,2 (m, 2H), 6,8–6,9 (m, 3H), 7,0–7,1 (m, 1H), 7,15–7,25 (m, 1H), 7,5–7,6 (m, 2H), 8,05–8,1 (m, 1H), 8,3–8,4 (m, 1H), 8, 95 (s, 1H); MS (MH⁺): 406,5.
Beispiele 2–5
Die folgenden Verbindungen wurden nach einer Methode analog der in Beispiel 1 beschriebenen dargestellt, wobei 4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilinhydrochlorid (Methode 1) und das entsprechende 2-Chlor-4-(indolin-1-yl)pyrimidin (Methoden 4–7) verwendet wurden:
Beispiel 6
4-(1,2,3,4-Tetrahydrochinolin-1-yl)-2-{4-[2-hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilino}pyrimidin
Das Produkt wurde unter Anwendung einer Methode analog der in Beispiel 1 beschriebenen, jedoch unter Verwendung von 4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilin-hydrochlorid (Methode 1) und 2-Chlor-4-(1,2,3,4-tetrahydrochinolin-1-yl)pyrimidin (Methode 8) als Ausgangsverbindungen, erhalten. NMR: 1,8–2,0 (m, 2H), 2,19 (s, 6H), 2,2–2,3 (m, 1H), 2,3–2,45 (m, 1H), 2,7–2,8 (m, 2H), 3,7–3,9 (m, 5H), 5,7 (m, 1H), 6,35 (m, 2H), 6,8 (m, 2H), 7,0–7,05 (m, 1H), 7,1–7,2 (m, 2H), 7,35–7,4 (m, 1H), 7,5–7,6 (m, 2H), 7,9–8,0 (m, 2H), 8,95 (s, 1H); MS (MH⁺): 420,5.
Beispiele 7–9
Die folgenden Verbindungen wurden nach einer Methode analog der in Beispiel 1 beschriebenen dargestellt, wobei 4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilinhydrochlorid (Methode 1) und das entsprechende 4-substituierte 2-Chlorpyrimidin (wie in PCT WO 9911657 und Eur. J. Med. Chem., 1991, 26, 729–33 beschrieben erhalten) verwendet wurden:
Beispiele 10–11
Die folgenden Verbindungen wurden nach einer Methode analog der in Beispiel 1 beschriebenen dargestellt, wobei 4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilinhydrochlorid (Methode 1) und das entsprechende 2-Chlor-5-halogen-4-(indolin-1-yl)pyrimidin (Methoden 9–10) verwendet wurden:
Beispiele 12–14
i Die folgenden Verbindungen wurden nach einer Methode analog der in Beispiel 1 beschriebenen dargestellt, wobei 4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilinhydrochlorid (Methode 1) und das entsprechende 4-substituierte 2-Chlor-5-halogenpyrimidin (Methoden 12–14) verwendet wurden:
Beispiel 15
2-{4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilino}-4-(indol-1-yl)-5-methylpyrimidin
Natriumhydrid (60%ige Dispersion in Öl; 116 mg, 2,9 mmol) wurde bei 0°C zu einer Lösung von Indol (340 mg, 2,9 mmol) in NMP (2 ml) gegeben. Die Mischung wurde 10 Minuten lang bei 0°C gerührt und dann zu einer kalten (0°C) Lösung von 2,4-Dichlor-5-methylpyrimidin (489 mg, 3,0 mmol) in NMP (3 ml) getropft. Die Mischung wurde 3 Stunden lang bei 0°C gerührt und dann mit 4-[3-(N,N-Dimethyl)amino-2-hydroxypropoxy]anilinhydrochlorid (Methode 1, 500 mg, 1,76 mmol) versetzt. Die Mischung wurde über Nacht auf 100°C erhitzt und dann mit Kieselgel (2 g) versetzt. Flüchtige Komponenten wurden abgedampft, und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung einer 0-5%igen 2,0 M methanolischen Ammoniaklösung in DCM als Laufmittel gereinigt, wodurch man das Produkt als einen weißen Feststoff (166 mg, 13%) erhielt. NMR: 2,1 (m, 9H), 2,3 (m, 2H), 3,9 (m, 3H), 4,8 (d, 1H), 6,85 (d, 1H), 6,9 (d, 2H), 7,2 (m, 2H), 7,6 (m, 5H), 8,5 (s, 1H), 9,5 (s, 1H); MS (MH⁺): 418.
Beispiel 16
6-{4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilino}-4-(indolin-1-yl)pyrimidin
Eine Lösung von 4-Chlor-6-(indolin-1-yl)pyrimidin (Methode 15, 220 mg, 0,95 mmol) und 4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilin-hydrochlorid (Methode 1, 229 mg, 0,81 mmol) in NMP (5 ml) wurde 1 Stunde lang auf 150°C erhitzt. Es wurde mit Natriumhydrogencarbonatlösung (20 ml) versetzt, und die Mischung wurde mit Essigsäureethylester (20 ml) extrahiert. Die Extrakte wurden mit Wasser (2 x 10 ml) gewaschen und getrocknet. Kieselgel (1 g) wurde zugesetzt, und die flüchtigen Komponenten wurden abgedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung einer 0–8%igen 2,0 M methanolischen Ammoniaklösung in DCM als Laufmittel gereinigt, wodurch man das Produkt als farblosen Feststoff (108 mg) erhielt. NMR: 2,18 (s, 6H), 2,32 (m, 2H), 3,17 (m, 2H), 3,86 (m, 5H), 4,78 (d, 1H), 5, 96 (s, 1H), 6, 85 (m, 3H), 7, 16 (m, 2H), 7, 44 (d, 2H), 8,26 (m, 2H), 9,02 (s, 1H); MS (MH⁺): 406.
Beispiele 17–18
Die folgenden Verbindungen wurden nach einer Methode analog der in Beispiel 16 beschriebenen dargestellt, wobei 4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilinhydrochlorid (Methode 1) und das entsprechende 4-Chlor-6-(indolin-1-yl)pyrimidin (Methoden 16–17) verwendet wurde:
Darstellung der Ausgangsverbindungen
Die Ausgangsverbindungen für die obigen Beispiele sind entweder im Handel erhältlich oder lassen sich leicht nach Standardmethoden aus bekannten Materialien darstellen. Die folgenden Umsetzungen beispielsweise erläutern einige der in den obigen Reaktionen verwendeten Ausgangsverbindungen, ohne daß dies eine Einschränkung bedeuten soll.
Methode 1
4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]anilinhydrochlorid
Eine Lösung von 4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)-propoxy]nitrobenzol (Methode 2, 3,75 g) in Ethanol (40 ml) wurde über Nacht katalytisch über 10% Palladium-auf-Aktivkohle (0,4 g) hydriert. Der Katalysator wurde über Diatomeenerde abfiltriert und das Filtrat wurde eingeengt. Der Rückstand wurde in Diethylether gelöst, der eine kleine Menge Isopropanol enthielt, und etherischer Chlorwasserstoff (1 M, 16 ml) wurde zugesetzt. Der Diethylether wurde abgedampft und der feste Rückstand wurde in Isopropanol suspendiert. Die Mischung wurde mehrere Minuten lang auf einem Dampfbad erhitzt und dann abkühlen gelassen. Der unlösliche Feststoff wurde abfiltriert, mit Iospropanol und Ether gewaschen und getrocknet, wodurch man das Produkt (3,04 g, 72,4%) erhielt. NMR: 2,80 (s, 6H), 3,15 (m, 2H), 3,88 (m, 2H), 4,25 (m, 1H), 5,93 (s breit, 1H), 6,88 (m, 4H); MS (MH⁺): 211; C₁₁H₁₈N₂O₂·1,6 HCl erfordert: C; 49,2, H; 7,4, N; 10,4, Cl; 21,7%; gefunden: C; 49,2, H; 7,2, N; 10,1; Cl; 19,1%.
Methode 2
4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]nitrobenzol
4-(2,3-Epoxypropoxy)nitrobenzol (erhalten wie in Synthetic Communications, 1994, 24, 833, beschrieben; 4,3 g) wurde in Methanol (30 ml) und DMF (10 ml) gelöst. Eine Lösung von Dimethylamin in Methanol (2 M, 17 ml) wurde zugesetzt, und die Mischung wurde über Nacht gerührt. Die flüchtigen Komponenten wurden abgedampft und der Rückstand wurde zwischen gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (100 ml) und Essigsäureethylester (100 ml) verteilt. Die organische Phase wurde abgetrennt, mit gesättigter Kochsalzlösung (2 x 100 ml) gewaschen und getrocknet. Durch Einengen erhielt man das Produkt als ein Öl, das im Hochvakuum langsam kristallisierte (4,79 g, 89,9%). NMR (CDCl₃): 2,33 (s, 6H), 2,98 (m, 1H), 2,54 (m, 1H), 4,00 (m, 3H), 7,00 (d, 2H), 8,20 (d, 2H); MS (MH⁺): 241.
Methode 3
2-Chlor-4-(indolin-1-yl)pyrimidin
Eine Lösung von 2,4-Dichlorpyrimidin (596 mg, 4,0 mmol), Indolin (0,45 ml, 4,0 mmol) und N,N-Diisopropylethylamin (0,69 ml, 4,0 mmol) in n-Butanol (20 ml) wurde 18 Stunden lang auf 100°C erhitzt. Kieselgel (3 g) wurde zugesetzt, und die flüchtigen Komponenten wurden abgedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung von 0–4% Essigsäureethylester/Isohexan gereinigt, wodurch man das Produkt als farblosen Feststoff (460 mg, 50%) erhielt. NMR (CDCl₃): 3,2 (t, 2H), 4,0–4,1 (t, 2H), 6,5 (d, 1H), 7,0–7,1 (m, 1H) 7,2–7,3 (m, 2H), 8,2 (m, 1H), 8,3–8,4 (m, 1H); MS (MH⁺): 232,7.
Methoden 4–7
Die folgenden Verbindungen wurden nach einer Methode analog der in Methode 3 beschriebenen dargestellt, wobei 2,4-Dichlorpyrimidin und das entsprechende substituierte Indolin als Ausgangsverbindungen verwendet wurden:
Methode 8
2-Chlor-4-(1,2,3,4-tetrahydrochinolin-1-yl)pyrimidin
Das Produkt wurde unter Anwendung einer Methode analog der in Methode 3 beschriebenen, jedoch unter Verwendung von 2,4-Dichlorpyrimidin und 1,2,3,4-Tetrahydrochinolin als Ausgangsverbindungen, erhalten. MS (MH⁺): 246, 248.
Methoden 9–10
Die folgenden Verbindungen wurden nach einer Methode analog der in Methode 3 beschriebenen dargestellt, wobei Indolin und das entsprechende 2,4-Dichlor-5-halogenpyrimidin (im Handel erhältlich oder wie in Methode 11 beschrieben dargestellt) als Ausgangsverbindungen verwendet wurden:
Methode 11
2,4,5-Trichlorpyrimidin
5-Chloruracil (10,0 g, 68,5 mmol) wurde in Phosphoroxychlorid (60 ml) gelöst und mit Phosphorpentachlorid (16,0 g, 77,0 mmol) versetzt. Die Mischung wurde 16 Stunden lang unter Rückfluß erhitzt, abkühlen gelassen und dann unter kräftigem Rühren langsam in Wasser (200 ml) gegossen. Die Mischung wurde 1,5 Stunden lang gerührt und dann mit Essigsäureethylester (250 ml) versetzt. Die organische Phase wurde abgetrennt und die wäßrige Phase wurde mit einer weiteren Portion Essigsäureethylester (250 ml) extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (200 ml) und einer gesättigten Kochsalzlösung (200 ml) gewaschen und dann getrocknet. Die flüchtigen Komponenten wurden abgedampft und der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung von DCM als Laufmittel gereinigt, wodurch man das Produkt als gelbe Flüssigkeit (6,37 g, 51%) erhielt. NMR (CDCl₃): 8,62 (s, 1H); MS (MH⁺): 182, 184, 186.
Methode 12
5-Brom-2-chlor-4-(benzimidazol-1-yl)pyrimidin
Natriumhydrid (60%ige Dispersion in Öl; 110 mg, 2,75 mmol) wurde bei 0°C zu einer Lösung von Benzimidazol (295 mg, 2,5 mmol) in DMF (6 ml) gegeben. Die Mischung wurde 10 Minuten lang bei 0°C gerührt und dann zu einer kalten (0°C) Lösung von 5-Brom-2,4-dichlorpyrimidin (712 mg, 3,14 mmol) in DMF (6 ml) getropft. Die Mischung wurde 2 Stunden lang bei 0°C gerührt und dann mit Essigsäureethylester (20 ml) und Wasser (20 ml) versetzt. Die organische Phase wurde abgetrennt und getrocknet, und die flüchtigen Komponenten wurden abgedampft. Der Rückstand wurde durch Säulenchromatographie unter Verwendung von 20% Essigsäureethylester/DCM als Laufmittel gereinigt, wodurch man das Produkt als weißen Feststoff (500 mg, 52%) erhielt. NMR: 7,4 (m, 2H), 7,8 (m, 2H), 8,8 (s, 1H), 9,3 (s, 1H); MS (MH⁺) 309, 311.
Methoden 13–14
Die folgenden Verbindungen wurden nach einer Methode analog der in Methode 12 beschriebenen dargestellt, wobei Indol und das entsprechende 2,4-Dichlor-5-halogenpyrimidin (im Handel erhältlich oder wie in Methode 11 beschrieben dargestellt) als Ausgangsverbindungen verwendet wurden:
Methoden 15–17
Die folgenden Verbindungen wurden nach einer Methode analog der in Methode 3 beschriebenen dargestellt, wobei 4,6-Dichlorpyrimidin und das entsprechende Indolin als Ausgangsverbindungen verwendet wurden und 1 Stunde lang bei 125°C umgesetzt wurde:
Beispiel 19
Im folgenden werden repräsentative pharmazeutische Dosierungsformen, die die Verbindung der Formel (I) oder (I'), oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder einen in vivo hydrolysierbaren Ester davon enthalten (im folgenden Verbindung X) zur therapeutischen oder prophylaktischen Anwendung beim Menschen erläutert:
Anmerkung
Die obigen Formulierungen lassen sich durch im Stand der pharmazeutischen Technik gut bekannte Vorschriften erhalten. Die Tabletten (a) – (c) können auf herkömmliche Weise magensaftresistent beschichtet werden, beispielsweise durch einen Überzug aus Celluloseacetatphthalat.

Claims

Pyrimidinderivate der Formel (I) oder (I'):
wobei R^x aus Wasserstoff, Halogen, Hydroxyl, Nitro, Amino, C_1–3-Alkylamino, Di-[C₁_₃-alkyl]amino, Cyano, Trifluormethyl, Trichlormethyl, C_1–3-Alkyl [gegebenenfalls substituiert durch 1 oder 2 Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, Cyano, Amino, C_1–3-Alkylamino, Di-[C_1–3-alkyl]amino, Hydroxyl und Trifluormethyl], C_3–5-Alkenyl [gegebenenfalls substituiert durch bis zu drei Halogensubstituenten oder durch einen Trifluormethylsubstituenten], C_3–5-Alkinyl, C₁_₃-Alkoxy, -SH, -S-C_1–3-Alkyl, Carboxyl und C_1–3-Alkoxycarbonyl ausgewählt ist; Q₁ für Phenyl steht, wobei Q₁ an einem zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatom, das nicht zur -NH-Bindung benachbart ist, einen Substituenten der Formel (Ia) trägt und -NQ₂ (unten definiert) gegebenenfalls an einem zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatom weitere Substituenten der Formel (Ia):
tragen kann, wobei: X für -CH₂-, -O-, -NH-, -NR^y- oder -S- steht [wobei R^y für C_1–4-Alkyl steht, gegebenenfalls substituiert durch einen Substituenten ausgewählt aus Halogen, Amino, Cyano, C_1–4-Alkoxy oder Hydroxyl]; Y¹ für H oder C_1–4-Alkyl steht oder wie für Z definiert ist; Y² für H oder C_1–4-Alkyl steht; Z für R^aO-, R^bR^cN-, R^dS-, R^eR^fNNR^g-, einen mit Stickstoff verbundenen Heteroarylrest oder einen mit Stickstoff verbundenen Heterocyclus steht [wobei der Heterocyclus gegebenenfalls an einem Ringkohlenstoff oder einem Ringstickstoff durch C_1–4-Alkyl oder C_1–4-Alkanoyl substituiert ist], wobei R^a, R^b, R^c, R^d, R^e, R^f und R^g unabhängig voneinander aus Wasserstoff, C_1–4-Alkyl, C_2–4-Alkenyl und C_3–8-Cycloalkyl ausgewählt sind und wobei C_1–4-Alkyl und C_2–4-Alkenyl gegebenenfalls durch eine oder mehrere Phenylgruppen substituiert sind; n für 1, 2 oder 3 steht; m für 1, 2 oder 3 steht; und -NQ₂ für eine nicht quaternisierte, mit N verbundene, 5-, 6- oder 7gliedrige monocyclische heterocyclische Einheit, die ein Stickstoffheteroatom und gegebenenfalls ein oder zwei weitere Hetereoatome ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel enthält, steht, oder -NQ₂ für eine nicht quaternisierte, mit N verbundene, 8-, 9- oder 10gliedrige bicyclische heterocyclische Einheit, die ein oder zwei Stickstoffheteroatome und gegebenenfalls ein oder zwei weitere Heteroatome ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel enthält und wobei, wenn die heterocyclische Einheit eine -NH-Einheit enthält, der Stickstoff gegebenenfalls durch eine Gruppe ausgewählt aus C_1–6-Alkyl, C_1–6-Alkanoyl, C_1–6-Alkylsulfonyl, C_1–6-Alkoxycarbonyl, Benzyl, Benzoyl oder Phenylsulfonyl substituiert ist, steht; und Q₁ und -NQ₂ gegebenenfalls unabhängig voneinander an zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatomen bis zu vier Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, Hydroxyl, Thio, Nitro, Carboxyl, Cyano, -C_2–4Alkenyl [gegebenenfalls substituiert durch bis zu drei Halogensubstituenten oder durch einen Trifluormethylsubstituenten], C_2–4-Alkinyl, C_1–5-Alkanoyl, C_1–4-Alkoxycarbonyl, C_1–6-Alkyl, Hydroxy-C_1–3-alkyl, Fluor-C_1–4-alkyl, Amino-C_1–3-alkyl, C_1–4-Alkylamino-C_1–3-alkyl, Di-[C_1–4-alkyl] amino-C_1–3-alkyl, Cyano-C₁_₄-alkyl, C_2–4-Alkanoyloxy-C_1–4-alkyl, C_1–4-Alkoxy-C_1–3-alkyl, Carboxy-C₁_₄-alkyl, C_1–4-Alkoxycarbonyl-C_1–4-alkyl, Carbamoyl-C₁_₄-alkyl, N-C_1–4-Alkylcarbamoyl-C_1–4-alkyl, N,N-Di-[C_1–4-alkyl]carbamoyl-C_1–4-alkyl, Pyrrolidin-1-yl-C_1–3-alkyl, Piperidin-1-yl-C_1–3-alkyl, Piperazin-1yl-C_1–3-alkyl, Morpholino-C_1–3-alkyl, Thiomorpholino-C_1–3-alkyl, Imidazo-1-yl-C_1–3-alkyl, Piperazin-1-yl, Morpholino, Thiomorpholino, C_1–4-Alkoxy, Cyano-C₁_₄-alkoxy, Carbamoyl-C_1–4-alkoxy, N-C_1–4-Alkylcarbamoyl-C_1–4-alkoxy, N,N-Di-[C_1–4-alkyl]carbamoyl-C_1–4-alkoxy, 2-Aminoethoxy, 2-C_1–4-Alkylaminoethoxy, 2-Di-[C_1–4-alkyl]aminoethoxy, C_1–4-Alkoxycarbonyl-C_1–4-alkoxy, Halogen-C_1–4-alkoxy, 2-Hydroxyethoxy, C_2–4-Alkanoyloxy-C_2–4-alkoxy, 2-C_1–4-Alkoxyethoxy, Carboxy-C_1–4-alkoxy, 2-Pyrrolidin-1-ylethoxy, 2-Piperidinoethoxy, 2-Piperazin-1-ylethoxy, 2-Morpholinoethoxy, 2-Thiomorpholinoethoxy, 2-Imidazo-1-ylethoxy, C_3–5-Alkenyloxy, C_3–5-Alkinyloxy, C_1–4-Alkylthio, C_1–4-Alkylsulfinyl, C_1–4-Alkylsulfonyl, Hydroxy-C_2–4-alkylthio, Hydroxy-C_2–4-alkylsulfinyl, Hydroxy-C_2–4-alkylsulfonyl, Ureido (HN₂-CO-NH-), C_1–4-Alkyl-NH-CO-NH-, Di-[C_1–4-alkyl]-N-CO-NH-, C_1–4-Alkyl-NH-CO-N[C_1–4-alkyl]-, Di-[C_1–4-alkyl]-N-CO-N-[C_1–4-alkyl]-, Carbamoyl, N-[C_1–4-Alkyl]carbamoyl, N,N-Di-[C_1–4-alkyl]carbamoyl, Amino, C_1–4-Alkylamino, Di-[C_1–4-alkyl]amino, C_2–4-Alkanoylamino, Sulfamoyl, N-(C_1–4-Alkyl)sulfamoyl, N,N-Di-(C_1–4-alkyl)-sulfamoyl tragen können, und Q₁ und -NQ₂ weiterhin unabhängig von oder gegebenenfalls zusätzlich zu den obigen fakultativen Substituenten gegebenenfalls unabhängig voneinander an zur Verfügung stehenden Kohlenstoffatomen bis zu zwei weitere Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus C_3–8-Cycloalkyl, Phenyl-C_1–4-alkyl, Phenyl-C_1–4-alkoxy, Phenylthio, Phenyl, Naphthyl, Benzoyl, Phenoxy, Benzimidazol-2-yl und einem 5- oder 6gliedrigen aromatischen Heterocyclus (gebunden über ein Ringkohlenstoffatom und mit einem bis drei Heteroatomen, unabhängig voneinander ausgewählt aus Sauerstoff, Schwefel und Stickstoff) tragen können; wobei die Naphthylsubstituenten, Phenylsubstituenten, Benzoylsubstituenten, Phenoxysubstituenten, 5- oder 6gliedrigen aromatischen heterocyclischen Substituenten und die Phenylgruppe in Phenyl- C_1–4-alkyl-, Phenylthio- und Phenyl-C_1–4-alkoxysubstituenten gegebenenfalls einen oder zwei Substituenten unabhängig voneinander ausgewählt aus Halogen, C_1–4-Alkyl und C_1–4-Alkoxy tragen können; und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und in vivo hydrolysierbare Ester.
Pyrimidinderivate nach Anspruch 1, wobei R^x für Wasserstoff, Fluor, Chlor, Brom oder Methyl steht, und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und in vivo hydrolysierbare Ester.
Pyrimidinderivate nach Anspruch 1 oder 2, wobei -NQ₂ für Indolin, Piperazin, Morpholin, 1,2,3,4-Tetrahydrochinolinyl, Benzimidazol oder Indol steht, und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und in vivo hydrolysierbare Ester.
Pyrimidinderivate nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei es sich bei dem Substituenten der Formel (Ia) um 3-Dimethylamino-2-hydroxypropoxy handelt, und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und in vivo hydrolysierbare Ester.
Pyrimidinderivate nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei -NQ₂ gegebenenfalls durch Halogen, C_1–5-Alkanoyl oder C_1–4-Alkyl substituiert ist und, wenn eine heterocyclische Einheit in -NQ₂ eine -NH-Einheit enthält, der Stickstoff unsubstituiert oder durch C_1–6-Alkoxycarbonyl substituiert ist, und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und in vivo hydrolysierbare Ester.
Pyrimidinderivate nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei der Substituent der Formel (Ia) para zum -NH- steht, und deren pharmazeutisch unbedenkliche Salze und in vivo hydrolysierbare Ester.
Pyrimidinderivate nach einem der Ansprüche 1 bis 6, bei denen es sich um: 2-{4-[2-Hydroxy-3-(N,N-dimethylamino)propoxy]-anilino}-4-(2,3-dimethylindolin-1-yl)pyrimidin und dessen pharmazeutisch unbedenkliche Salze und in vivo hydrolysierbare Ester handelt.
Verfahren zur Darstellung von Pyrimidinderivaten der Formel (I), bei dem man: a) ein Pyrimidin der Formel (II):
in welcher L für eine Abgangsgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (III):
umsetzt, b) ein Pyrimidin der Formel (IV):
in welcher L für eine Abgangsgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (V):
umsetzt, c) für Verbindungen der Formel (I), in denen n für 1, 2 oder 3, m für 1, Y² für H und Y¹ für OH, NH₂ oder SH steht, eine einen dreigliedrigen Heteroalkylring enthaltende Verbindung der Formel (VI):
in welcher A für O, S oder NH steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII):
in welcher D für H oder ein geeignetes Gegenion steht, umsetzt, d) für Verbindungen der Formel (I), in welchen X für Sauerstoff steht, einen Alkohol der Formel (VIII):
mit einem Alkohol der Formel (IX):
umsetzt, e) für Verbindungen der Formel (I), in welchen X für -CH₂-, -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für OH, Y² für H und m für 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (X):
in welcher LgO für eine Abgangsgruppe steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII) umsetzt, f) für Verbindungen der Formel (I), in welchen X für -CH₂-, -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für H, Y² für H, n für 1, 2 oder 3 und m für 1, 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (XI):
in welcher LgO für eine Abgangsgruppe steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII) umsetzt, g) für Verbindungen der Formel (I), in welchen X für -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für H, Y² für H, n für 1, 2 oder 3 und m für 1, 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (XII):
mit einer Verbindung der Formel (XIII)
in welcher L für eine Abgangsgruppe steht, umsetzt, h) für Verbindungen der Formel (I), in welchen Z für HS- steht, eine Thioacetatgruppe in einer entsprechenden Verbindung umwandelt, und anschließend gegebenenfalls: i) eine Verbindung der Formel (I) in eine andere Verbindung der Formel (I) umwandelt, ii) gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen entfernt, iii) ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder einen in vivo hydrolysierbaren Ester bildet.
Verfahren zur Herstellung von Pyrimidinderivaten der Formel (I'), bei dem man: a) ein Pyrimidin der Formel (II'):
in welcher L für eine Abgangsgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (III'):
umsetzt, b) ein Pyrimidin der Formel (IV'):
in welcher L für eine Abgangsgruppe steht, mit einer Verbindung der Formel (V'):
umsetzt, c) für Verbindungen der Formel (I'), in welchen n für 1, 2 oder 3, m für 1, Y² für H und Y¹ für OH, NH₂ oder SH steht, einen 3gliedrigen Heteroalkylring der Formel (VI'):
in welcher A für O, S oder NH steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII'):
in welcher D für H oder ein geeignetes Gegenion steht, umsetzt, d) für Verbindungen der Formel (I'), in welchen X für Sauerstoff steht, einen Alkohol der Formel (VIII')
mit einem Alkohol der Formel (IX'):
umsetzt, e) für Verbindungen der Formel (I'), in welchen X für -CH₂-, -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für OH, Y² für H und m für 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (X')
in welcher LgO für eine Abgangsgruppe steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII') umsetzt, f) für Verbindungen der Formel (I'), in welchen X für -CH₂-, -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für H, Y² für H, n für 1, 2 oder 3 und m für 1, 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (XI'):
in welcher LgO für eine Abgangsgruppe steht, mit einem Nukleophil der Formel (VII') umsetzt, g) für Verbindungen der Formel (I'), in welchen X für -O-, -NH- oder -S-, Y¹ für H, Y² für H, n für 1, 2, 3 und m für 1, 2 oder 3 steht, eine Verbindung der Formel (XII'):
mit einer Verbindung der Formel (XIII'):
in welcher L für eine Abgangsgruppe steht, umsetzt, h) für Verbindungen der Formel (I'), in welchen Z für HS- steht, eine Thioacetatgruppe in einer entsprechenden Verbindung umwandelt, und anschließend gegebenenfalls: i) eine Verbindung der Formel (I') in eine andere Verbindung der Formel (I') umwandelt, ii) gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen entfernt, iii) ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder einen in vivo hydrolysierbaren Ester bildet.
Verwendung eines Pyrimidinderivates der Formel (I) oder (I') nach einem der Ansprüche 1 bis 7 oder eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes oder in vivo hydrolysierbaren Esters davon zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung beim Hervorrufen einer Antikrebswirkung in einem Warmblüter.
Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend ein Pyrimidinderivat der Formel (I) oder (I') nach einem der Ansprüche 1 bis 7 oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz oder einen in vivo hydrolysierbaren Ester davon und ein pharmazeutisch unbedenkliches Verdünnungsmittel oder einen pharmazeutisch unbedenklichen Träger.