DE2730952C2 - Antibiotikum Sporamycin, Verfahren zu seiner Herstellung und diese Verbindung enthaltendes Arzneimittel - Google Patents

Description

2. Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums Sporamycin des Anspruchs 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Streptosporangium pseudovulgare FERM BP-393 in einem Nährmedium züchtet, zum

Kulturfiltrat Ammoniumsulfat bis zu einer Sättigung von 90% gibt und das Gemisch über Nacht bei 5⁰C stehen läßt, das gebildete Sediment in Wasser auflöst und in einem Cellophanrohr gegen Eiswasser dialysiert. den Dialyseriickstand zentrifugiert und das unlösliche Material verwirft, die Lösung auf eine SäuJe von Diethylaminoethylcellulose aufbringt, welche mit einem 1/500 Ni-Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 7 bis 8 ins Gleichgewicht gesetzt wurde, die Säule mit einem linearen Gradienten einer steigenden Natrium-

Chloridkonzentration eluiert. zu einer eluierten aktiven Fraktion Ammoniumsulfat zugibt, den gebildeten Niederschlag in Wasser auflöst, zur Entsalzung dialysiert und auf einer Säule aus Diethylaminoethylcellulose rechromatographiert, welche mit 1 /500 M-Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 5,4 ins Gleichgewicht gesetzt worden war, das Produkt mit einem linearen Gradienten einer steigenden Natriumchloridkonzentration eluiert, die aktiven Fraktionen sammelt und mit Ammoniumsulfat versetzt, den Niederschlag in Wasser

auflöst, unter Verwendung einer Cellophanmembran dialysiert und auf eine Säule aus Sephadex G-75 aufbringt, mit Wasser eluiert und die so eluierte aktive Fraktion lyophilisiert.

3. Arzneimittel, dadurch gekennzeichnet, daß es neben üblichen Hilfs- und Trägerstoffen Sporamycin des Anspruchs 1 als Wirkstoff enthält.

Die Erfindung betrifft das neue Antibiotikum Sporamycin mit Antitumorwirkung, ein Verfahren zu seiner Herstellung und ein Arzneimittel, welches dieses Antibiotikum enthält (vgl. hierzu die Patentansprüche).
Das neue erfindungsgemäße Antibiotikum hat die folgenden physikalisch-chemischen Eigenschaften:

1) Elementaranalyse: Es enthält die Elemente Kohlenstoff, Wasserstoff, Stickstoff und Sauerstoff in folgenden Mengen: C: 44.72 bis 47,38%. H: 6,4 bis 6,88% und N: 13,93 bis 15,0%;

2) UUraviolett-Absorptionsspektrum: Absorptionspeaks bei 285 nm (Schulter), 276 nm, 267 nm, 265 nm. 258 nm und 253 nm in einer wäßrigen Lösung (gemäß F i g. 1) oder in saurer Lösung und bei 290 nm in alkalischer Lösung;

3) Infrarot-Absorptionsspektrum: gemäß Fig. 2, Absorptionspeaks bei 3320 cm"¹,1640 cm"' und 1520 cm ' in KBr;

4) weißes Pulver;

5) Löslichkeit: löslich in Wasser, unlöslich in organischen Lösungsmitteln, wie Methanol, Äthanol und Aceton;

6) Farbreaktion: positiv bei der Folin-Lowry-, Ehrlich- und Biuret-Reaktion, schwach positiv bei der Ninhydrinreaktion, negativ bei der Molisch-, Fehling-, Tollens- und Anthron-Reaktion·

7) Molekulargewicht- 10 500 bis 13 000;

8) Aminosäureanalyse durch Hydrolyse mit 6N-HC1 (110⁰C, 15 h). Es wurden mindestens 12 Arten von Aminosäuren festgestellt, nämlich Lysin, Aspartinsäure, Threonin, Serin, Glutaminsäure, Glycin, Alanin, Valin, Isoleucin, Leucin, Tyrosin und Phenylalanin.

9) basische Substanz, wie durch Bestimmung der Mobilität zur Kathode bei der Elektrophorese (250 V, 3,5 h) unter Verwendung von Acetatpuffer (pH 4,0) oder Phosphatpuffer (pH 8,0) auf Papier festgestellt wurde;

10) Schmelzpunkt: die Substanz wird bei 220 bis 225°C braun und verkohlt bei erhöhter Temperatur

11) [a]-_D°: ungefähr -56° (C = 0,5, H₂O);

12) Die Verbindung kann nicht durch eine Cellophanmembran hindurchgehen und sie wird durch eine 80%ige I gesättigte Ammoniumsulfatlösung ausgefallt. |

Die biologischen Eigenschaften von Sporamycin sind wie folgt:

1) Antimikrobielle Aktivität

In Tabelle I ist das antibakterielle und antifungale Spektrum, ausgedrückt als minimale Hemmkonzentration (MIC), nach der Agarverdünnungsmethode zusammengestellt.

Tabelle 1

Antimikrobielle Aktivität von Sporamycin

Testorganismus MlC (mcg/ml)

Staphylococcus aureus FDA 209 P 0,1 ,_s

Staphylococcus aureus JC-I 0,05

Staphylococcus aureus FS 1277 2,1

Bacillus subtilis PCI 219 2,1

Bacillus cereus IFO 3001 10,3

Sarcina lutea PCI 1001 50,0

Mycobacterium smegmatis ATCC 607 > 100

Escherichia coli NIHJ > 100

Shigella sonnei E 33 >100

Salmonella typhimurium > 100

Klebsieila pneumoniae PCI 602 > 100

Aerobacter aerogenes ATCC 9621 > 100

Pseudomonas aeruginosa P-3 > 100

Candida albicans >500

Saccharomyces sake >500

Aspergillus nigar >500

Aspergillus fumigatus >500

Trichophyton interdigitate >500

Trichophyton mentagrophytes >500

Piricularia oryzae >500

Cryptococcus neoformans >500

Alternaria kikuchiana >500

Sclerotinia cinerea >500

Penicillium notatum >500

2) Toxizität: akute Toxizität (LD₅₀) bei Mäusen ungefähr 15 mg/kg (i.p.) und ungefähr 13 mg/kg (i.v.)

3) Antitumor-Aktivität

I) Versuchsmethode a) Tumortransplantation

1. CDF,-Mäuse wurden intraperitoneal mit 1 X 10⁵ Ascites-Zellen von Leukämie L-1210 oder P-388-Zellen inokuliert.

2. dd-Mäuse wurden intraperitoneal mit 2 x 10⁶ Zellen von Ehrlich-Asciteskarzinom inokuliert.

3. dd-Mäuse wurden subkutan mit kleinen Teilen von Tumorgeweben von Sarcoma 180 (2 mm³) in der Achselgegend implantiert.

b) Behandlung

1. 24 h nach Inokulierung mit den Tumorzellen wurde Sporamycin intraperitoneal oder intravenös einmal

täglich über 9 Tage verabreicht.

2. 24 h nach Inokulierung mit den Tumorzellen wurde Sporamycin zu einem einzigen Zeitpunkt intraperitoneal oder intravenös injiziert.

II) Bewertung

Die therapeutische Wirksamkeit von Sporamycin gegenüber Leukämie L-1210, P-388 und gegenüber Ehrlich-Asciteskarzinom wurde bestimmt, indem die in Tagen ausgedrückte Überlebenszeit der Mäuse bestimmt wurde. Die therapeutische Wirksamkeit wird durch folgenden Quotienten ausgedrückt:

durchschnittliche Überlebenszeit der behandelten

Gruppe (T), Tage

durchschnittliche Überlebenszeit der Kontrollgruppe (C), Tage

x 100 = Überlebensverhältnis (T/C)%.

2. Der Effekt von Sporamycin auf festes Tumorsarcoma-180 wurde in der Weise bestimmt, daß die

Größe des maximalen und des minimalen Durchmessers eines subkutanen Tumors mit der Lehre gemessen wurde. Die Wirkung wird als prozentuale Inhibierung des Tumorwachstums nach folgender Gleichung angegeben:

100 -

durchschnittliche Tumorgröße der

behandelten Gruppe (S)

durchschnittliche Tumorgröße der Kontrollgruppe (W)

x 100 = Wachstumsinhibierung (S/W %).

Ill) Ergebnisse

25 Die Wirkungen von Sporamycin auf Leukämie L-1210, Leukämie P-388, Ehrlich-Asciteskarzinom und Sarcoma- 180-Tumor vom festen Typ sind in den Tabellen Ii, III, IV und V dargestellt.

Tabelle Il 30 Wirkung von Sporamycin auf Leukämie L-1210

Behandlungsschema	Gesamtdosis	Gesamtdosis	durchschnittliche	Überlebens
			Überlebenszeit	verhältnis
(i-p.)	(mg/kg)	(mg/kg)	Tage	(T/C %)
Kontrollversuch täglich verabreicht	_	__	8,0	100
(1 bis 9.)	15	15	12,6	157
	10	10	12,7	159
	7,5	10,7	134
	5,0	11,9	148
	3,8	11,6	145
	2,5	11,4	143
	1,3	10,6	132
einzige Verabreichung (1. Tag)	10	11,4	143
	7,5	>16,6	>198*)
	5,0	11,3	141
	3,8	10,9	136
	2,5	11,4	143
	0,9	11,3	141
*) Eine Maus überlebte über die 60 Tage	(Versuchszeitraum).
Tabelle ΠΙ
Wirkung von Sporamycin auf Leukämie P-388
Behandlungsschema	durchschnittliche	Überlebens
	Überlebenszeit	verhältnis
(i.p.)	Tage	(T/C %)
Kontrollversuch täglich verabreicht	12,0	100
(1 bis 9.)	19,3	161
	18,9	157

Fortsetzung

Behundlungsschema

Gesamtdosis	durchschnittliche	Überlebens
	Überlebenszeit	verhältnis
(mg/kg)	Tage	(T/C %)
7,5	17,6	146
5,0	17,0	142
3,8	17,0	142
2,5	15,7	131
1,9	15,9	132
10	20,9	172
7,5	17,6	145
5,0	>21,9	> 181*)
3,8	>20,9	>181*)
2,5	19,1	158
0,9	17,0	140

einzige Verabreichung (1. Tag)

·) Jeweils eine Maus überlebte über 60 Tage (Versuchszeitraum).

Tabelle IV

Wirkung von Sporamycin auf Ehrlich-Asciteskarzinom

Behandlung.sschema	Gesamtdosis	durchschnittliche	Überlebens	13. Tag 17.	überlebende Tiere nach	Anzahl der ge-
		Überlebenszeit	verhältnis	60 Tagen/Gesamtzahl	Tas heilten Mäuse
(i.P.)	(mg/kg)	Tage	(T/C %)	der behandelten Tiere
Kontrollversuch täglich		26,1	100	0/7
verabreicht (1 bis 9.)	10	50,1	192	0/7
	7,5	>52,4	>201	3/7
	5,0	>54,7	>210	4/7
	3,8	>54,0	>207	3/7
	2,5	>55,0	>211	4/7
	1,9	>59,6	>228	6/7
	1,3	>52,6	>201	4/7
einzige Verabreichung	10	>38,7	>157	4/7
H-Tag)	7,5	>51,7	>210	5/7
	5,0	>52,6	>214	5/7
	3,8	>49,9	>203	4/7
	2,5	>55,4	>225	6/7
	1,9	>44,4	>181	3/7
	1,3	>35,4	>144	2/7
Tabelle V
Wirkung von Sporamycin	auf Sarcoma-180
Behandlungsschema (i. v.)	Gesamtdosis	Wachstumsinhibierung (S/W %)
	(mg/kg)	8. Tag

kcmitroHvenuch täglich	—	0	0	0	0
verabreicht (1 bis 9.)	15	82	80	86	0
	10	67	68	75	2
	7,5	54	58	65	3
	5,0	47	53	55	2
	3,8	42	45	53	2
	2,5	27	23	27	3

10

Fortsetzung	Gesamtdosis	Wachstumsinhibierung (S/W %)	13. Tag	17. Tag	Anzahl der ge
Behandlungsschema (i. v.)	(mg/kg)	8. Tag	99	99	heilten Mäuse
	10	97	83	85	1
einzige Verabreichung (1. Tag)	7,5	83	57	60	3
	5,0	56	53	62	3
	3,8	50	49	55	3
	2.5	37			4

15

20

25

30

35

40

45

50

Eine erhöhte Lebensdauer wurde auch beobachtet, als Sporamycin intraperitoneal Mäusen verabreicht wurde, welche ein B-16-Melanom und ein Lewis-Lungenkarzinom hatten.

Wie bereits ausgeführt wurde, hat Sporamycin eine antibakterielle Aktivität sowie eine erhebliche Antitumoraktivität gegenüber verschiedenen experimentellen Tumoren bei Mäusen, wenn es sowohl intravenös a!s auch intraperitoneal verabreicht wird. Die Toxizität (LD₅₀) von Sporamycin ist im Vergleich zu anderen bekannten Substanzen mit Antitumorwirkungsmittel, wobei Sporamycin selbst bei einer erheblich niedrigeren Dosis als dem LD_S0-Wert wirksam ist.

Sporamycin ist dem Antitumor-Antibiotikum Meocaroinostatin hinsichtlich der Antitumorwirkung überlegen und weniger toxisch.

Es gibt einige basische Polypeptide, die eine Antitumoraktivität ähnlich wie Sporamycin haben, d. h. Actinacarcin [J. Antibiotics, 27,994 (1974)], Phenomycin [J. Antibiotics, Ser. A, 20,210 (1967)] und Mirolidin [Mycology and Mycosis, 7, 272 (1966)].

Actinocarcin und Phenomycin haben jedoch keine antibakterielle Aktivität und sie unterscheiden sich auch im Ultraviolettabsorptionsspektrum von Sporamycin. Auch Mirolidin unterscheidet sich von Sporamycin durch die Toxizität und das Ultraviolettabsorptionsspektrum. Sporamycin ist daher als neues Antibiotikum anzusehen.

Sporamycin wird in der Weise hergestellt, daß man Streptosporangium pseudo vulgäre FERM BP-393 in einem Nährmedium züchtet und das Antibiotikum in bestimmter Weise aus der Kulturbrühe isoliert.

Streptosporangium sp. Stamm PO-357 (= FERM BP-393) wurde aus einer Erdprobe in Setagaya-ku, Tokyo, Japan, isoliert.

Die taxonomischen Eigenschaften dieses Stammes PO-357 sind wie folgt:

1. Morphologische Eigenschaften

Die mikroskopische Untersuchung zeigte, daß das Luftmycel gerad war, wobei sich die meisten Sporen auf der Oberseite des Mycels befanden. Die Größe der Sporen ist 5 bis 10 μΐη, wobei der durchschnittliche Durchmesser 7,5 ,um beträgt. Die Länge der Sporen tragenden Luft-Hyphen ist gering und beträgt höchstens etwa 3 um. Die Sporen sind rund oder eiförmig mit einer glatten Oberfläche und einem Durchmesser von 0,9 bis 1,4 μπι. Geiseln werden nicht beobachtet.

2. Kultivierungseigenschaften auf verschiedenen Medien Beobachtung bei 27°C, 10- bis 14tägige Kultivierung.
Medium

Saccharosenitratagar G'ucoscar.paraginagar

Glycerinasparaginagar ⁵⁵ anorganisches Salz - Stärkeagar Tyrosinagar Nähragar

Hefeextrakt - Malzextraktagar 60 Hafermehlagar

Wachstum	Rückseite	Luftmycelium	lösliches
			Pigment
schlecht	hell-orange	milchweiß	keines
schlecht	hellgelb	milchweiß	keines
schlecht	hellgelb	milchweiß	keines
schlecht	bräunlich-weiß - weiß	milchweiß	keines
mäßig	hell-orange	hell-orange	keines
mäßig bis gut	orange	orange	keines
gut	orange	orange	keines
gut	orange	orange	keines

3. Physiologische Eigenschaften

1) Wachsturastemperatur: das Wachstum ist bei 43°C möglich, wobei ein optimales Wachstum bei etwa 27 bis 30⁰C erfolgt

2) Melaninerzeugung: negativ auf Tyrosinagar.

3) Verflüssigung von Gelatine: positiv.

4) Hydrolyse von Stärke: positiv.

5) Peptonisierung von Milch: positiv.

6) HjS-Bildung: negativ.

7) Nitratreduktion: positiv.

4. Verwertung der Kohlenstoffquelle

Beobachtet auf einem Pridham-Gottlieb-Agarmedium mit einem Gehalt von etwa 0,05% Hefeextrakt.

Verwertung von: D-Glucose, L-Arabinose, D-Xylose, D-Mannose.

Wahrscheinliche Verwertung von: D-Galactose, D-Raffinose, L-Rhamnose, D-Fructose.

Keine Verwertung von: Inosit, Saccharose.

5. Zusammensetzung der Zeilwand

Die Analyse der Zellwände erfolgte nach der Methode von Becker et al. [Appl. Microbiol., 13, 236 bis 243 (1965)]. '

DAP*) Glycin Arabinose Galactose

Mesotyp -** - ~

*) Diaminopimelinsäure.
**) nicht festgestellt.

Die verschiedenen taxonomischen Eigenschaften zeigen eindeutig, daß der Stamm PO-357 ein Mikroorganismus der Gattung Streptosporangium ist. -?

Unter bekannten Arten steht Streptosporangium pseudovulgare Nonomura [J. Ferm. Tech. Japan,47,701 bis 709 (1969)] in enger Beziehung zu dem Stamm PO-357, doch liegen Unterschiede insbesondere hinsichtlich der Farbe, des Luftmycels und der biologischen Eigenschaften vor. Der Stamm PO-357 wird daher als Streptosporangium pseudovulgare PO-357 bezeichnet. Der Stamm wurde im Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, hinterlegt und er hat die Hinterlegungsnummer FERM BP-393 erhalten. Erfindungsgemäß kann die Kultivierung in einem herkömmlichen Medium erfolgen. Als Kohlenstoffquellen des Mediums können assimilierbare Kohlenhydrate, wie Glucose und Stärke, verwendet werden. Als Stickstoffquelle kann eine organische Stickstoffquelle, z. B. ein Pepton oder Fleischextrakt, verwendet werden. Anorganische Substanzen, z. B. Calcium-, Natrium- oder Magnesiumsalze, können ebenfalls zu dem Medium gegeben werden.

Die Kultivierung kann vorzugsweise unter aeroben Bedingungen, z. B. als Schüttelkultur oder Tauch-Belüftungskultur, bei pH-Werten von 6,8 bis 7,0 und bei 27°C sowie über einen Zeitraum von 40 bis 70 h erfolgen. Da Sporamycin eine basische hochmolekulare Substanz ist, kann eine herkömmliche Isolierung durchgeführt werden.

Die Isolierung und Reinigung von Sporamycin wird wie folgt durchgeführt:

Zu einem Kulturfiltrat wird Ammoniumsulfat bis zu einer Sättigung von 90% gegeben und das Gemisch wird über Nacht bei 5°C stehen gelassen. Das gebildete Sediment wird in Wasser aufgelöst und in einem Cellophanrohr gegen Eiswasser dialysiert, wobei dieses mehrfach ausgewechselt wird. Der Dialyserückstand wird zentrifugiert und das unlösliche Material wird verworfen. Die Lösung wird auf eine Säule von Diethylaminoethylcellulose aufgebracht, welche mit einem 1 /500 M-Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von etwa 7 bis 8 ins Gleichgewicht gesetzt wurde. Die Säule wird mit einem linearen Gradienten einer steigenden Natriumchloridkonzentraikm eluiert. Zu einer eluierten aktiven Fraktion wird Ammoniumsulfat gegeben. Der gebildete Niederschlag wird in Wasser aufgelöst, zur Entsalzung dialysiert und auf einer Säule aus Diethylaminoethylcellulose rechromatographiert, welche mit 1/500M-Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 5,4 ins Gleichgewicht gesetzt worden war. Das Produkt wird mit einem linearen Gradienten einer steigenden Natriumchloridkonzentration eluiert. Die aktiven Fraktionen werden gesammelt und mit Ammoniumsulfat versetzt, um den Wirkstoff auszufallen. Der Niederschlag wird in Wasser aufgelöst, unter Verwendung einer Ceüophanmembran dialysiert und auf eine Säule aus Sephadex G-75 aufgebracht. Es wird mit Wasser eluiert. Die so eluierte aktive Fraktion wird j i lyophüisiert, wodurch Sporamycin als weißes Pulver erhalten wird.

P Sporamycin wird durch die herkömmliche Mikrobioassay-Methode untersucht, wobei Staphylococcus aureus

£ als Testorganismus verwendet wird.

p Die Erfindung wird durch das nachfolgende Beispiel weiter erläutert.

g Beispiel

R

j J 100 ml Waksman-Medium (2% Glucose, 0,3% getrockneter Hefeextrakt, 0,5% Pepton, 0,3% Calciumcarbonat,

ο 0,5% Fleischextrakt und 0,5% Natriumchlorid, jeweils auf das Gewicht bezogen, pH 7,0) wurden in einem 500-

!| mlSakaguchi-Kolben gegeben und 15 min bei 121°C sterilisiert. Streptosporangium pseudovulgare PO-357

ji. FEKM BP-393 wurde einokuliert und es wurde 96 h eine Schütte]kultur (120 Schläge/min) bei 27°C durchgeführt.

ti 10 ml der Kulturbrühe wurden in einem Vorkulturmedium (0,2% Glucose, 1,5% Stärke, 0,15% getrockneter

Hefeextrakt, 0,25% Pepton, 0,25% Calciumcarbonat und 0,3% Fleischextrakt, jeweils auf das Gewicht bezogen,

|V pH-Wert 7,0) inokuliert. Es wurde 48 h bei den gleichen Bedingungen wie oben kultiviert. Das kultivierte Impf-

iS Drodukt wurde in zwei 30-1-Fermentationsgefäße gegeben, welche 20 1 des obigen Waksman-Mediums ent-

hielten. Es wurde 44 h lang unter Rühren mit 250 Upm bei einer Temperatur von 27°C und unter Belüften (15 *

l/min) aerob kultiviert, wodurch eine Kulturbrühe erhalten wurde, die Sporamycin enthielt. j|

Die Brühe wurde zentrifugiert, um die Mycelien, Calciumcarbonat und andere feste Materialien zu entfernen. p Zu dem resultierenden Kuiturfillrat (351) wurden 22 kg Ammoniumsulfat gegeben. Es wurde gerührt und 20 h |l

lang bei S⁰C in der Dunkelheit stehen gelassen. Der Niederschlag wurde durch Saugfiltration auf Celite gesam- f| melt und in Wasser aufgelöst Nach der Filtration wurde das Celite verworfen und Ammoniumsulfat wurde zu S dem Filtrat gegeben, um den Wirkstoff auszufallen. Das Sediment wurde 3 Tage in einem Cellophanrohr gegen j j Eiswasser dialysiert, wobei dieses mehrfach ausgetauscht wurde. Das Dialysat wurde auf eine Säule von Diäthylaminoäthylcellulose (60 x 54 cm) aufgebracht, die mit einem 1/500M-Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von ι |

ίο 7,5 ins Gleichgewicht gesetzt worden war. Die Säule wurde mit einem linearen Gradienten einer steigenden '

Natriumchloridkonzentration eluiert und das Eluat wurde in Fraktionen zu jeweils 15 ml gesammelt. Ammoniumsulfat wurde zu der Lösung der Fraktionen Nr. 28 bis 61 gegeben. Die Lösung wurde zentrifugiert. Der N iederschlag wurde in einem Minimalvolumen von Wasser aufgelöst und in einem Cellophanrohr gegen Eiswasser 3 Tage lang dialysiert.

is Die dialysierte Lösung wurde auf eine Diäthylaminoäthylcellulose-Säule (55 x 5,5 cm) aufgegeben, welche zuvor bei einem pH-Wert von 7 mit 1/500M-Phosphatpuffer ins Gleichgewicht gesetzt worden war. Auf die Säule wurde ein linearer Gradient einer steigenden Natriumchloridkonzentration aufgegeben. Es wurden Fraktionen mit jeweils 15 ml gesammelt Die Fraktionen Nr. 26 bis 58 wurden vereinigt und Ammoniumsulfat wurde zugesetzt, um den Wirkstoff auszufallen. Die Lösung wurde in ein Cellophanrohr gegeben und gegen Eiswasser dialysiert. Die dialysierte Lösung wurde auf eine Sephadex-G-75-Säule (75 x 2,7 cm) aufgegeben, welche mit Wasser eluiert wurde. Das aktive Eluat wurde lyophilisiert, wodurch Sporamycin als weilks Pulver (585 mg> erhalten wurde.

Wie in Fig. 4 gezeigt wird, ergab das Ultrazentrifugenmuster des so erhaltenen Sporamycinpulvers bei 52 000 Upm bei 1 bis 65 min einen einzigen Schlierenpeak. Bei der Sche^:benelektrophorese auf Polyacrylamid gel wurde ein gut definiertes einziges Band beobachtet, wie es in Fig. 3 gezeigt ist. ·

Hierzu 2 Blatt Zeichnungen

Claims (1)

1. Patentansprüche:

   1. Antibiotikum Sporamycin mit Antitumorwirkung mit den folgenden Eigenschaften:

   1) Elementaranalyse: einen Gehalt von Kohlenstoff, Wasserstoff, Sauerstoff und Stickstoff in folgenden

   Mengen: C: 44,72 bis 47,38%, H: 6,4 bis 6,88%, N: 1.5,99 bis 15,0%;
   2) Ultraviolettabsorptionsspektrum: Absorptionspeaks bei 285 nm (Schulter), 276 nm, 267 nm, 265 nm,

   258 nm und 253 nm in einer wäßrigen und in einer Ο,ΙΝ-HCl-Lösung; Peak bei 290 nm in einer 0,1 N-

   NaOH-Lösung;
   3) Infrarotabsorptionsspektrum: Absorptionspeaks bei 3320 cm"¹, 1640 cm"' und 1520 cm ' in KBr;

   4) weißes Pulver;

   5) Löslichkeit: löslich in Wasser, unlöslich in Methanol, Ethanol und Aceton;

   6) Farbreaktion: positiv: Foiin-Lowry-, Ehrlich- und Biuret-Reaktion, schwach positiv: Ninhydrinreaktion, negativ: Molisch-, Fehling-, Tollens- und Anthron-Reaktion;

   is 7) Molekulargewicht: 10 500 bis 13 000;

   8) Aminosäureanalyse durch Hydrolyse mit 6N-HC1 (HO⁰C, 15 h): mindestens 12 Arten von Amino- I säuren, nämlich Lysin, Asparaginsäure, Threonin, Serin, Glutaminsäure, Glycin, Alanin, Valin, Isoleu- I ein. Leucin, Tyrosin und Phenylalanin; I

   9) basische Substanz;

   10) Schmelzpunkt: Braunwerden bei 220 bis 225"C, verkohlt bei erhöhter Temperatur und
   11) [ajö°: ungefähr -56° (C = 0,5, H₂O).