CZ3398A3

CZ3398A3 - Použití inhibitorů cGMP fosfodiesterasy pro výrobu léčiva pro léčení impotence

Info

Publication number: CZ3398A3
Application number: CZ9833A
Authority: CZ
Inventors: Alain Claude-Marie Daugan
Original assignee: Icos Corporation
Priority date: 1995-07-14
Filing date: 1996-07-11
Publication date: 1998-05-13
Also published as: IL122870A0; CA2226784C; NO314685B1; DE69636193D1; CN1195290A; CY2563B1; CN1513452A; JP4169365B2; SK3998A3; ATE327756T1; US6140329A; US6608065B1; PL324495A1; HU228369B1; HUP9900065A2; CY2006007I1; IL122870A; PL185737B1; CA2226784A1; DK0839040T3

Description

Použití inhibitorů cGMP-fosfodiesterasy|^pro léčení impotence

Oblast techniky:

Tento vynález se týká použití tetracyklických derivátů, které jsou potenciálními a selektivními inhibitory cyklické guanosin-3 ,5 -monofosfát specifické fosfodiesterasy (cGMP specifická PDE) při léčení impotence.

Dosavadní stav techniky:

Impotence může být definována jako nedostatek síly, který znemožňuje mužům kopulovat, a zahrnuje neschopnost dosáhnout ztopoření penisu, nebo ejakulace, nebo obojího. Ještě přesněji, erektilní impotence nebo dysfunkce mohou být definovány jako neschopnost získat nebo zachovat erekci potřebnou pro pohlavní styk. Je stanoveno, že její výskyt je mezi 2 a 7 % u lidské mužské populace, vzrůstá s věkem až do 50-ti let, a mezi 18 a 75 % mezi 55. a 80. rokem věku.

Zpráv o dobře řízených klinických pokusech je málo a účinnost orálně podávaných léčiv je nízká. Ačkoliv bylo nalezeno mnoho rozdílných léčiv, které vyvolávají erekci penisu, jsou účinné pouze po přímé injekci do penisu, například intrauretálně nebo intrakavernozně (i.c.), a nejsou schváleny pro erektilní dysfunkci. Současné medicinální ošetření je založeno na i.c. injekci vazoaktivních látek, a dobrých výsledků bylo dosaženo s fenoxybenzaminem, fentolaminem, papaverinem a prostaglandínem Ei, bud samotných nebo v kombinaci: nicméně s i.c. podáváním některých těchto látek je spojena bolest, priapismus a fibroza penisu. Látky otevírající draslíkové kanálky (KCO) a vazoaktivní intestinální polypeptid (VIP) se rovněž ukázaly jako účinné i.c., ale cena a stabilita omezují jejich rozvoj.

Alternativní cestou k i.c. je použití glyceryltrinitrátových (GTN) náplastí aplikovaných na penis, které se ukázaly jako účinné, ale mají vedlejší účinky na pacienta i partnera.

Jako obvyklá alternativa k farmakologickému zákroku se používá pro dosažení erekce řada protéz penisu. Krátká doba úspěšné rychlosti je dobrá, ale problémy s infekcí a ischemií, zejména u diabetických lidí, činí tento typ léčení až konečnou volbou, spíše než prve uvedená terapie.

Sloučeniny podle vynálezu jsou potentními inhibitory cyklických guaosin-3 ,5 -monofosfátfosfodiesteras (cGMP PDE) GB 9514464,8, který je prioritním dokumentem pro předloženou přihlášku, popisuje syntézy sloučenin a jejich použití při impotenci. WO 95/19978, který nebyl zveřejněn do prioritního data předložené přihlášky, také popisuje syntézy sloučenin podle vynálezu a jejich použitelnost u dalších nemocí spojených s inhibicí cGMP PDE. Sloučeniny jsou znázorněny následujícím obecným vzorcem (I):

(I) a jejich solemi a solváty (jako hydráty).

v němž

R° znamená vodík, halogen nebo Ci-©alkyl;

R¹ znamená vodík,

Ci-ealkyl, C2-6alkenyl,

C2 -©alkynyl, haloCi-©alkyl,

C3-scykloalkyl,

C3-scykloalkylCi_3alkyl, arylCi-3alkyl nebo heteroaryl Ci-₃alkyl;

R² znamená výhodně substituovaný monocyklický aromatický kruh vybraný z benzenu, thiofenu, furanu a pyridinu nebo výhodně substituovaný bicykl ický kruh

	3	• · · • · · · • · · • · · · • · • · · · ·	·· · · · · ·· • · · · · · · • · · · · ·· • · · · · ···· e · · · · ·· · · · · ♦ · ··
navázaný na	zbytek	molekuly přes	jeden z	atomů uhlíku
benzenového	kruhu a	kde kondenzovaný kruh A	je 5- nebo 6-
členný kruh,	který může být nasycený	nebo částečně nebo zcela
nenasycený a	obsahuje	atomy uhlíku a	vol i tělně	jeden nebo dva

heteroatomy vybrané z kyslíku, síry a dusíku; a

R³ znamená vodík nebo Ci_3alkyl, nebo R¹ a R³ společně znamená 3- nebo 4-členný a1kýlový nebo alkenylové řetězec.

Vhodné jednotlivé sloučeniny podle vynálezu pro použití v léčení erektilní dysfunkce zahrnují:

Cis-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-(4-pyridylmethyl)-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyraziono[2 ,1 :6, 1]pyridoE3,4-b]indol - 1,4-dion.

Cis-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-6-(2, 3-dihydrobenzoíblfuran-5-yl)-2-methyl-pyraziono[2 ,1 :6,13pyridoE3, 4-blindol-1,4-dion;

Cis-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-6 - ( 5-brom-2-thienyl)-2-methyl-pyrazionoE2 ,1 :6,1IpyridoE3, 4-b]indol-1,4-dion;

Cis-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-butyl-6- ( 4-methylfenyl)-pyrazionoE2 ,1 :6,1lpyridoE3,4-b]indol-1,4-dion;

(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-isopropyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyrazionoE2 ,1 :6,1]pyridoE3, 4-b]indol-1,4-dion;

(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-cyklopentyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyrazionoE2 ,1 =6,1]pyridoE3,4-b]indol-1,4-dion;

(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-cyklopropylmethyl-6( 4-methoxyfenyl)-pyrazionoE2 ,1 ^:6, 1IpyridoE3,4-b]indol -1,4-dion;

(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-6-( 3-chlor-4-methoxyfenyl)-2z z

-methyl-pyrazionoE2 ,1 :6,1]pyridoE3, 4-b]indol - 1,4-dion;

( 6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyrazionoE2 ,1 ^:6,1]pyridoE3, 4-b]indol-1,4-dion;

( 6R, 12aR) -2, 3, 6, 7, 12, 12a-hexahydro-6- ( 3, 4-methylendioxyfenyl ) -pyrazionot2 ,1 = 6,1Jpyridol 3,4-b]indol-1,4-dion;

(5aR,12R,14aS)-1,2,3,5,6,11,12,14a-oktahydro-12-(3, 4-methylendioxyfenyl)-pyrrolo-t1,2=4 ,5 1-pyrazionot2 ,1 :6,l]pyrido-

13,4-blindol-5-1,4-dion;

Cis-2,3,6,7, 12,12a-hexahydro-2-cyklopropyl-6-(3, 4-methylendioxyfenyl)-pyrazionot2',1':6,1]pyridot3,4-blindol -1,4-dion;

( 3S, 6R, 12aR) - 2, 3,6,7, 12, 12a-hexahydro-3-methyl -6-(3, 4-methylendioxyfenyl)-pyrazionot2 ,1 ^:6,1]pyridot3,4-b]indol-1,4-dion;

a jejich fyziologicky přijatelné soli a solváty (např. hydráty).

Specifickými sloučeninami podle vynálezu jsou:

(6R, 12aR)-2, 3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3, 4-methylendioxyfenyl)-pyrazionot2 ,1:6,1Jpyridot3, 4-bl- indol -1,4-dion (Sloučenina A); a (3S,6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2,3-dimethyl-6-(3, 4-methylendioxyfenyl)-pyrazionot2 ,1 :6,1]pyridot3,4-b]indol -1,4-dion (Sloučenina B) ;

a jejich fyziologicky přijatelné soli a solváty (např. hydráty).

Nyní bylo neočekávaně zjištěno, že sloučeniny vzorce (I), a zejména sloučeniny A a B, jsou vhodné pro léčení erektilní dysfunkce. Sloučeniny mohou být podávány orálně, a tím se vyhne nevýhodám spojeným s i.c. podáním. Proto se předložený vynález týká použití sloučenin vzorce (I), a zejména sloučenin A a B, nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, nebo farmaceutické kompozice obsahující jednu nebo druhou entitu, pro výrobu léčiva pro léčebné nebo preventivní léčení erektilní dysfunkce samců zvířat, včetně mužů.

• 9 • · • · • · • ·

Farmaceuticky přijatelné soli sloučenin vzorce (I), a zejména sloučenin A a B, které obsahují bázické centrum, jsou kyselé adiční soli vytvořené s farmaceuticky přijatelnými kyselinami. Příklady zahrnují hydrochlorid, hydrobromid.

síran nebo hydrogensíran, fosforečnan nebo hydrogenfosforečnan, acetát, benzoát, sukcinat, fumarat, maleat, laktát, citrát, vinan, glukonát, methansulfonát, benzensulfonát a p-toluensulfonátové soli. Sloučeniny vzorce (I), a zejména sloučeniny A a B, mohou také poskytnout farmaceuticky přijatelné kovové soli, zejména soli alkalických kovů, s bázemi. Příklady zahrnují sodné a draselné soli.

Bylo uvedeno, že sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou potentními a selektivními inhibitory cGMP specifické PDE. Nyní bylo překvapivě nalezeno, že lidské houbovité tělísko obsahuje tři odlišné PDE enzymy. Dále byla převládající PDE překvapivě určena, že je cGMP PDE. Jako důsledek selektivní PDE V inhibice vykazované sloučeninami podle předloženého vynálezu, mohou předmětné sloučeniny zvýšit hladinu cGMP, která naopak může zajistit uvolnění tkáně houbovitého tělíska a následně erekci penisu.

Ačkoliv jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu primárně představovány pro léčení erektilní dysfunkce nebo mužské sexuální dysfunkce, mohou být také vhodné pro léčení ženské sexuální dysfunkce včetně dysfunkce orgasmu týkající se klitorálních poruch.

Obvykle je u lidí preferovanou cestou orální podání sloučenin podle vynálezu, které je nejběžnější a vyhybá se nevýhodám spojeným s i.c. podáním. V podmínkách, kdy příjemce trpí polykacími poruchami nebo narušenou absorpcí léčiva po orálním podání, může být léčivo podáno parenterálně, např. sublingválně nebo bukálně.

Při podání mužům v léčebném nebo preventivním léčení výše

• · · • · · · · · identifikovaných poruch bude orální dávkování sloučeniny vzorce (I), a zejména sloučenin A a B, obvykle v rozmezí od 0,5 do 800 mg denně pro průměrného dospělého pacienta (70 kg). Proto pro typického dospělého pacienta obsahují jednotlivé tablety nebo kapsle od 0,2-400 mg účinné látky, ve vhodném farmaceuticky přijatelném vehikulu nebo nosiči, pro podání v jedné nebo násobných dávkách, jednou nebo několikrát denně. Dávkování pro bukální nebo sublingvální podání je typicky v rozmezí od 0,1-400 mg na jednu dávku, jak je požadováno. V praxi lékař stanoví aktuální dávkovači režim, který bude pro jednotlivého pacienta nejvhodnější, a bude se měnit s věkem, hmotností a stavem každého pacienta. Uvedená dávkování jsou exemplární pro průměrný případ, ale jsou individuální případy, v nichž se může zvažovat vyšší nebo nižší dávkovači rozmezí, a které jsou v rozsahu tohoto vynálezu.

Pro použití pro lidi může být sloučenina vzorce (I), a zejména sloučeniny A a B, podána samotná, ale obvykle se podává ve směsi s farmaceutickým nosičem zvoleným s ohledem na uvažovanou cestu podání a standardní farmaceutickou praxi. Například může být sloučenina podána orálně, buká1ně nebo sublingválně, ve formě tablet obsahujících excipienty, jako je škrob nebo laktóza, nebo v kapslích nebo vajíčkách, bud samotná nebo ve směsi s excipienty, nebo ve formě léčebných nápojů nebo suspenzí obsahujících ochucovadlo nebo barvicí činidla. Takové kapalné přípravky mohou být připraveny s farmaceuticky přijatelnými přísadami, jako jsou suspendační činidla (jako methylcelulóza, semisyntetický glycerid, jako je witepsol, nebo směsi glyceridů, jako je směs oleje z meruňkových jader a esterů PEG-6, nebo směsi PEG-8 a kaprylové/kaprinové glyceridy).

Pro veterinární použití se sloučenina vzorce (I), a zejména sloučenina A nebo B nebo její netoxická sůl, podává ve vhodně přijatelné formulaci v souladu s normální veterinární praxí, a veterinární lékař určí dávkovači režim a cestu podání, která bude pro konkrétního zvířecího samce ne j výhodně j š í .

Proto zahrnuje vynález farmaceutickou kompozici pro léčebné a preventivní léčení erektilní dysfunkce u samců zvířat, včetně mužů, obsahující sloučeninu vzorce (I), a zejména sloučeninu A nebo B, nebo jejich farmaceuticky přijatelnou sůl, společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

Předložený vynález dále poskytuje způsob přípravy farmaceutické kompozice pro léčení nebo prevenci erektilní dysfunkce u samců zvířat, a mužů, zahrnující formulování sloučeniny vzorce (I), a zejména sloučeniny A nebo B, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

Vynález také poskytuje způsob léčení zvířecích samců , a mužů, při léčbě nebo prevenci erektilní dysfunkce, který zahrnuje léčení uvedeného zvířecího samce účinným množstvím sloučeniny vzorce (I), a zejména sloučeniny A nebo B, nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, nebo farmaceutické kompozice obsahující alespoň její část.

vynález použití

A nebo B, f armaceut i cké

Dále zahrnuje zejména sloučeniny přijatelné soli, nebo část, pro výrobu léčiva pro dysfunkce u zvířecích samců a

Sloučenina vzorce (I), mohou být také použity v látkami, které mohou být dysfunkce v podstatě, jako poskytuje, z jiného pohledu, a zejména sloučeniny A nebo sloučeniny vzorce (I), a nebo jejich farmaceuticky kompozice obsahující její léčení nebo prevenci erektilní mužů.

zejména sloučenina A nebo B, kombinaci s jinými terapeutickými užitečné při léčení erektilní je popsána dříve. Vynález také kombinaci sloučeniny vzorce (I), B, společně s jinou terapeuticky účinnou látkou.

Výše uvedená kombinace se může běžně uvádět pro použití ve formě farmaceutické formulace, a proto farmaceutické přípravky obsahující kombinaci, jak je definována výše, společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem, představují další předmět vynálezu.

Jednotlivé složky takové kombinace mohou být také podávány bud postupně nebo současně v samostatných farmaceutických formulacích.

Příslušná dávkování známých terapeutických činidel pro použití v kombinaci se sloučeninou podle vynálezu jsou pro odborníka v oblasti techniky snadno stanovitelná.

Sloučeniny podle vynálezu mohou být připraveny jakýmkoliv vhodným postupem známým ze stavu techniky, a nebo následně uvedeným postupem, který tvoří součást předloženého vynálezu. Postup byl dříve v podstatě popsán v prioritním dokumentu předloženého vynálezu GB9514464.8 a ve W095/19978.

Postup přípravy sloučeniny vzorce (I) zahrnuje zpracování sloučeniny vzorce (II)

O

(v němž Alk znamená Ci-ealkyl, např.methyl nebo ethyl, a Hal je atom halogenu, např. chlor) s primárním aminem R¹NH2 ve vhodném rozpouštědle jako je alkohol (např. methanol nebo ethanol) nebo směs rozpouštědel.

vhodně při teplotě od 20 °C do teploty refluxu (tedy při asi 50 °C) .

Sloučeninu vzorce (II) lze vhodně připravit zpracováním sloučeniny vzorce (III) se sloučeninou vzorce (IV) • · • ·

ve vhodném rozpouštědle.

jako je halogenovaný uhlovodík (například trichlormethan nebo dichlormethan) nebo ether (například tetrahydrofuran) výhodně za přítomnosti báze jako je organický am i n (např í k1ad trialkylamin jako je triethylamin) nebo uhličitan nebo hydrogenuhličitan alkalického kovu (například NaHCO₃).

Reakce se vhodně provádí při teplotě od -20 °C do +20 °C (například kolem O °C).

Sloučenina vzorce (I) může být také připravena ze sloučeniny vzorce (III) dvoustupňovým postupem přes sloučeninu vzorce (II) izolovanou bez purifikace.

Sloučeniny vzorce (I) mohou být připraveny jako samostatné enantiomery ve dvou stupních z příslušného enantiomeru vzorce (III) nebo jako směsi (například racemáty) dvojic cis nebo trans isomerů z odpovídajících směsí dvojic cis a trans isomerů vzorce (III).

Jednotlivé enantiomery sloučenin podle vynálezu mohou být připraveny z racemátů štěpením stavu techniky pro rozdělení enantiomerní složky, například kapalinové chromatografie) na Hypersil naftylmočovína.

použitím postupů známých ze racemických směsí na jejich použ i t í m HPLC (vysokoúč i nné chirální koloně, jako je

Sloučeninu vzorce (III) lze vhodně připravit z alkylesteru tryptofanu vzorce (V)

(kde Alk je definováno dříve) nebo jeho soli (například hydrochloridové soli) s aldehydem

R²CH0.

Reakce běžně probíhá ve vhodném rozpouštědle, jako je halogenovaný uhlovodík (například dichlormethan) nebo aromatický uhlovodík (například toluen), za přítomnosti kyseliny, jako je kyselina trifluoroctová. Reakce se běžně provádí při teplotě od -20 °C do re f1uxu za tvorby sloučeniny vzorce (III) v jednom kroku.

Reakce se rovněž může provádět v rozpouštědle, jako je aromatický uhlovodík (například benzen nebo toluen), pod refluxem, výhodně použ i t í m

Dean-Stárková přístroje k zachycování tvořené vody.

Reakcí se získá směs cis a trans isomerů, které mohou být bud individuálními enantiomery nebo racemáty páru cis nebo trans isomerů v závislosti na tom, zda se jako výchozí materiál použije racemický, nebo enantiomerně čistý alkylester tryptofanu. Jednotlivé cis nebo trans enantiomery se mohou vhodně oddělit ze své směsi frakční krystal ižací nebo chromatografií (jako je mžiková kolonová chromatografie) použitím příslušných rozpouštědel a eluentů. Obdobně se může oddělit dvojice cis a trans isomerů chromatografií (například mžikovou kolonovou chromatografií) použitím příslušných eluens. Opticky čisté trans isomery mohou být také přeměněny na opticky čisté cis isomery použitím vhodných epimerizačních postupů. Jeden takový postup zahrnuje zpracování trans isomerů nebo směsi (například 1:1 směsi) cis a trans isomerů methanolickým nebo vodným chlorovodíkem při teplotě od 0 °C do teploty refluxu roztoku. Potom se směs podrobí chromatografi i (například mžikové kolonové chromatografi i) k oddělení výsledných diastereoisomerů, nebo se v postupu, který používá vodný chlorovodík, požadovaný cis isomer « ·· ·· ·· ·· ·· • · · · · ·· · · ·· · ····· ····· ·* ^Λ · ··· · · · · · ··» · · • * · · · ··· ··· .· ·· ···· «· ·· vysráží jako hydrochloridová sůl, která se potom izoluje f i 1trací.

Farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli sloučeniny vzorce (I), a zejména sloučeniny A nebo B, které obsahuj í bázické centrum, mohou být připraveny běžným způsobem.

Například, roztok volné báze může být zpracován s vhodnou kyselinou, bud samotnou nebo ve vhodném roztoku, a získaná sůl se izoluje bud f i 1trac í nebo odpařován í m pod vakuem z reakčního rozpouštědla. Farmaceuticky přijatelné bázické adiční soli mohou být získány zpracováním roztoku sloučeniny A nebo typy soli mohou být tvořeny nebo analogickým postupem

B s vhodnou báz í. Oba navzájem konvertovány technikami iontově-výměnné pryskyřice.

Sloučeniny z vynálezu se izolují v souvislosti s molekulami rozpouštědla krystalizací nebo odpařením z příslušného rozpouštědla.

Syntézy sloučenin A a B a meziproduktů pro jejich použití jsou doloženy následujícími příklady. Příklady byly dříve uvedeny v prioritním dokumentu tohoto vynálezu GB9514464.8, a odpovídající meziprodukt nebo čísla příkladů jsou uvedena jako vsuvka za současným meziproduktem nebo číslem příkladu.

V příkladové části dále se používají následující zkratky:

MeOH	(methanol)
EtOH	(ethanol).

Příklady provedení:

Meziprodukt 1 ¢54) (IR,3R-Methyl 1,2,3,4-tetrahydro-1 -(3,4-methylendioxyfenyl)-9H-pyrido[3,4-b]indol-3-karboxylát, cis isomer

Do míchaného roztoku methylesteru D-tryptofanu (11 g) a piperonalu (7,9 g) v bezvodém CH2CI2 (400 ml) ochlazeném na O °C se po kapkách přidává kyselina trifluoroctová (7,7 ml) a roztok se ponechá reagovat při okolní teplotě. Po 4 dnech se žlutý roztok zředí CH2CI2 (200 ml) a promyje se nasyceným vodným roztokem NaHC03, potom vodou (3x200 ml) a suší se nad Na2S04. Organická vrstva se odpaří za sníženého tlaku a zbytek obsahující dva geometrické isomery se purifikuje mžikovou chromatografií eluováním dichlormethan/ethylacetátem (97/3) za vzniku, jako prvního produktu eluce, sloučeniny uvedené v názvu (6,5 g).

b.t.: 154 °C.

Meziprodukt 2 (83) (IR,3R-Methyl_______1,2,3,4-tetrahydro-2-(2-chlorpropionyl)-1 -(3,4-methylendioxyfenyl)-9H-pyrido[3,4-blindol-3-karboxylát

Do roztoku (R)-(+)-2-chlorpropionové kyseliny (191 pl, 2,2 mmol) v bezvodém dichlormethanu dicyklohexylkarbodiimid (0,45 g,

2, 2 mol).Potom se přidá meziprodukt 1 (0,7 g, mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti po hod i n.

Vzniklá sraženina dicyklohexylmočoviny se odstraní f i 1trací, f i 1trát se odpař í ve vakuu a surový produkt se pur i f i kuj e mž ikovou chromatograf i í e1uován í m toluenem/ethylacetátem:

95/5. Získaná olejovitá sloučenina potom krystalizuje z ether/hexanu za vzniku sloučeniny uvedené v názvu jako bledě žlutých krystalů (0,74 g).

b.t.: 126-128 °C.

44	44	44	4 4	44
• 4	• 4	4 4	4 4	4	9
4 4	•	•	•	4 4	• 4
• 44 *	4 4	4	• 444	4	•
«	4	4	•	4	4	•
9 4	44	444 ·	4«	«4

Příklad 1 (78) (Sloučenina A) ( 6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexyhydro-2-methyl-6-(3.4-methylendioxyfenyl)-pyrazino[2',1=6,1lpyrido[3,4-b]indol -1,4-dion

a) Do míchaného roztoku meziproduktu 1 (0,5 g) a NaHC03 (0,14 g) v bezvodém CHCI3 (20 ml) se přidá po kapkách chloracetylchlorid (0,27 ml) při 0 °C. Získaná směs se míchá po 1 hodinu při stejné teplotě a ředí se CHCI3 (20 ml). Potom se přidá do směsi za míchání po kapkách voda (10 ml), potom nasycený roztok NaHC03. Organická vrstva se promývá vodou až do neutrality a suší se nad Na₂S04. Po odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku se získá (6R,12aR)-methyl 1,2,3,4-tetrahydro-2- chloracetyl - 1 - (3,4-methylendioxyfenyl)-9H-pyrido[3,4-blindol-3-karboxylát jako olej, který krystalizuje z etheru za vzniku pevné látky (0,38 g, b.t.: 233 °C), která se použ i j e bez da1š í puri f i kace v př í št í m kroku.

b) Do míchané suspenze chloracetylového meziproduktu (0,37

g) v MeOH (20 ml) se přidá při teplotě místnosti roztok methylaminu (33% v EtOH) (0,4 ml) a získaná směs se zahřívá

Při 50 °C pod dusíkem po dobu 16 hodin.

Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v CH2CI2 (50 ml). Po promyt í vodou (3x20 ml), sušení nad NazS04 a odpaření do sucha se zbytek pur i f i kuj e mžikovou chromatograf i í e1uován í m

CH2Cl₂/MeOH (99/1) a rekrystalizuje z 2-propanolu za vzniku sloučeniny uvedené v názvu jako bílých krystalů (0,22

b.t.: 302-303 °C.

Analýza pro C22H19N3O4^:

Vypočteno: C, 67,86; H, 92 ;N,10,79;

Nalezeno: C,67,77; H,4,92; N,10,74% [</]^2Od = + 71,0 ⁰ (C=l,00; CHCI3) .

• ····· · · © · · · · · • · · · · ··· ··· ·· ·· ···· ·· ··

Příklad 2 (117) (Sloučenina B) (3S,6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2,3-dimethyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyrazino[2\1'-6,11pyrido[3,4-blindol-1,4-dion

Do míchaného roztoku meziproduktu 2 (0,3 g, 0,68 mmol) v THF (30 ml) se přidá při teplotě místnosti roztok methylaminu (33% v EtOH) (0,68 ml) a získaná směs se zpracuje pod refluxem pod dusíkem po dobu 6 dní. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v CH2CI2 (50 ml). Po promytí vodou (2,25 ml), sušení nad Na2S04 a odpařen í do sucha se surový produkt pur i f i kuj e mži kovou chromatografií eluováním dichlormethan/methanolem (99/1). Získaný olejovítý zbytek krystalizuje z methanolu za vzniku sloučeniny uvedené v názvu jako bílých krystalů (40 mg).

b.t.: 307-309 °C.

Analýza pro C23H21N3O4:

Vypočteno: c, 68,47; H, 5,25 ;N,10,42; Nalezeno: C,68,35; H,5,33; N,10,42% [ΑρΟρ = +65,2° (C=l,15; CHCI3) .

Následující sloučenina se připraví podobně:

Příklad 3 (3S,6R,12aR)-2,3.6,7,12,12a-hexahydro-3-methyl-6-(3.4-methylendioxyfenyl)-pyrazino[2 ,1 :6,1]pyrido[3,4-b]indol-1,4-dion jako bílé krystaly použitím amoniaku jako báze

b.t.: 319-321°C

Analýza pro C22HÍ9N3O4^:

Vypočteno: C,67,86 ; H, 5,17; N, 10,79 ; Nalezeno: C, 67,86; H, 5,17 ; N, 10,72 %. [<A)^2oi> = + 107 ⁰ (c =

1; pyridin).

Sloučeniny A a B byly začleněny do farmaceutických přípravků, a detaily těchto přípravků jsou uvedeny dále.

TABLETY PRO ORÁLNÍ PODÁNÍ

A. Přímé lisování

1 .	\| mg/tabletu 1
Účinná složka	j 50,0
Crospovidon USNF	1 8,0
Stearát hořečnatý Ph Eur	1 1,0
Bezvodá laktóza	1 141,0 1

Účinná složka se prošije a smísí se s excipienty. Získaná směs se slisuje do tablet.

2.	\| mg/tabletu 1
Účinná složka	\| 50, 0
Koloidní oxid křemičitý	1 0,5
Crospovidon	1 8,0
Laury1su1f át sodný	1 1,0
Stearát hořečnatý Ph Eu	1 i.o
Mikrokrystalická celulóza USNF	\| 139,5 1

B. Mokrá granulace

1 .	\| mg/tabletu 1
Účinná složka	\| 50, O
Po1yv i ny1pyrro1 i don	\| 150,0
Po1ye thylenglykol	! 50, 0
Polysorbat 80	1 10,0
Stearát hořečnatý Ph Eu	1 2, 5
Kroskarme1óza sodná	\| 25,0
Koloidní oxid křemičitý	1 2,5
Mikrokrystalická celulóza USNF	\| 210,0 1

Polyvinylpyrrolidon, polyethylenglykol a polysorbat 80 se rozpustí ve vodě. Výsledný roztok se použije ke granulaci účinné složky. Po usušení se granule prošijí, potom se vytlačují při zvýšených teplotách a tlacích. Extrudát se mele a/nebo prošije, potom se smísí s mikrokrystalickou celulózou, kroskarmelózou sodnou, koloidním oxidem křemičitým a stearátem hořečnatým. Získaná směs se slisuje do tablet.

2. I 1	mg/tabletu
Účinná složka \|	50, 0
Polysorbat 80 \|	3,0
Laktóza Ph Eur I	\| 178,0
Škrob BP \|	i 45,0
Předgelovatěný kukuřičný škrob BP \|	\| 22,5
Stearát hořečnatý BP \| 1	1 1,5 \|

Účinná složka se prošije a smísí s laktózou, škrobem a předgelovatěným kukuřičným škrobem. Polysorbat 80 se rozpustí v purifikované vodě. Přidá se příslušný objem roztoku polysorbatu a prášek se granuluje. Po usušení se granulát prošije a smísí se se stearátem hořečnatým. Potom se granulát slisuje do tablet.

Tablety s jinou účinností se připraví v odpovídajícím poměru účinné složky k ostatním excipientům.

TABLETY POTAŽENÉ FILMEM

Výše zmíněné tabletovací směsi byly potaženy filmem.

Potahovací suspenze | % hmotn/hmotn ____________________________________________________________________________________________________________________________________I______________________________________________________________________ ••Opadry bíláf I 13,2

Purifikovaná voda Ph Eu | do 100,0^x χ Voda se neobjevila v konečném výrobku. Maximální teoretická hmotnost pevné látky aplikované během potahování byla 20 mg/tabletu.

Ý Opadry·· bílá je chráněný materiál získatelný od Colorcon Limited, UK, který obsahuje hydroxypropylmethylcelulózu, oxid titaničitý a triacetin.

Tablety byly potaženy filmem použitím potahové suspenze v běžném zařízení pro potahování filmem.

KAPSLE

1 .	\| mg/kapsle i
Účinná složka	\| 50, 0
Laktóza	\| 148,5
Po1yv inylpyrro1 i don	\| 100,0
Stearát hořečnatý	1 1,5 1

Účinná složka se prošije a smísí s excipienty. Směs se naplní do tvrdých želat inových kapslí velikosti č.1 použitím vhodného zařízení.

• ·

2.	\| mg/kapsle 1
Účinná látka	\| 50, 0
Mikrokrystalická celulóza	\| 233,5
Laury1s í ran sodný	1 3,0
Crospov i don	1 12,0
Stearát hořečnatý	1 1,5 1

Účinná složka se prošije a smísí se s excipienty. Směs se naplní do tvrdých želatinových kapslí velikosti č.l použitím vhodného zařízení.

Je možné připravit i jiná dávkování změnami poměru účinné látky k excipientu, hmotnosti náplně, a, pokud je to nezbytné, velikostí kapslí.

3.	\| mg/kaps1e 1
Účinná látka	\| 50,0
Labrafil M1944CS	\| do 1,0 ml 1

Účinná látka se prošije a smísí se s Labrafilem. Suspenze se plní do měkkých želatinových kapslí použitím vhodného zařízení.

Inhibiční účinek na cGMP-PDE cGMP-PDE účinnost sloučenin z předloženého vynálezu se měří použitím jednostupňové zkoušky uzpůsobené Wellsem a kol. (Wells, J.N., Baird, C.E.,Wu, Y.J. a Hardman, J.G.,Biochim. Biophys. Acta 384, 430 (1975)). Reakční medium obsahovalo 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, mM Mg-acetátu, 250 jig/ml • 4 4 44 4 444

4 4 4 4 4 4 •4444 4 · 4 4444

8-[H³J-cGMP. Použitým (ICOS, Seattle

USA) .

-nukleotidasy, 1 mM EGTA a 0,15 μΜ enzymem byl lidský rekombinantní PDE V

Sloučeniny podle vynálezu byly rozpuštěny v DMSO, nakonec přítomném ve 2 % testech. Inkubační doba byla 30 minut , během nichž celková konverze substrátu nepřesáhla 30 %.

Hodnoty ICso testovaných sloučenin byly stanoveny z odpovídajících koncentračních křivek použitím obvyklých koncentrací v rozmezí od 10 nM do 10 μΜ. Testy oproti jiným PDE enzymům používajících standardní metody také ukazují, že sloučeniny z vynálezu jsou vysoce selektivní pro CGMP spec i f i cký PDE enzym.

Měření hladin cGMP

Byly použity buňky z krysího aortálního hladkého svalstva (RSMC) připravené podle Chamleye a kol., v Cell Tissue Res. 177, 503-522 (1977) mezi 10. a 25. průchodem v soutoku ve

24-prohlubňových kultivačních nádobách. Kultivační medium bylo odsáto a přeneseno PBS (0,5 ml) obsahujícím testovanou sloučeninu v příslušné koncentraci. Po 30 minutách při 37 °C byly částice guanylatcyklasy stimulovány přídavkem ANF (100 nM) po 10 minut. Na konci inkubace bylo prostředí odebráno a byly provedeny dvě extrakce přídavkem 65% ethanolu (0,25 ml). Dva ethanolické extrakty byly spojeny a odpařeny do sucha použitím Speed-vac systému. c-GMP byla měřena po acetylaci scintilačním proximitním imunotestem (AMERSHAM).

U sloučenin podle předloženého vynálezu bylo nalezeno, že typicky vykazují hodnoty ECso menší než 500 nM a hodnoty EC50 menší než 5. Hodnoty in vivo testu pro reprezentativní sloučeniny podle vynálezu jsou uvedeny v následující tabulce 1 :

• · · · · · · · ·9 · ··· 9 · · · 9 · 9 99

99999 9 9 9 99999

9999999 • 99 9 · ·· 9999 ··99

Tabulka 1.

Příklad č.	ICsonM	ECsowM
1		2	0, 2
2		2	0. 2
Výše uvedené	hodnoty	dokládají schopnost	předmětných
sloučenin podle	vynálezu	inhibovat	cGMP PDE, a	tudíž jejich
použitelnost při	léčení	erekti lni	dysfunkce v	podstatě jak

byla popsána výše.

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY

1. Použití sloučeniny vzorce (I) (I) a jejích solí a solvátů, například hydrátů, kde

R° znamená vodík, halogen nebo Ci-ealkyl;

R¹ znamená vodík.

Ci_6alkyl, C2-6alkenyl, C2-6alkynyl, haloCi-ealkyl,

C3-scykloalkyl,

C3-scykloalkylCi_3alkyl, arylCi_3alkyl nebo heteroaryl Ci_₃alkyl;

R² znamená výhodně substituovaný monocyklický aromatický kruh vybraný z benzenu, thiofenu, furanu a pyridinu nebo výhodně substituovaný bicykl ický kruh navázaný na zbytek molekuly přes jeden z atomů uhlíku benzenového kruhu a kde kondenzovaný kruh A je 5- nebo 6členný kruh, který může být nasycený nebo částečně nebo zcela nenasycený a obsahuje atomy uhlíku a volitelně jeden nebo dva heteroatomy vybrané z kyslíku, síry a dusíku; a

R³ znamená vodík nebo Ci-3alkyl, nebo R¹ a R³ společně znamenají 3- nebo 4-členný alkylový nebo alkenylový řetězec;

pro výrobu léčiva pro léčení nebo prevenci erektilní dysfunkce u zvířecích samců, včetně mužů.

• · • · ( 6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyraziono[2 1' =6,1]pyrido[3,4-b]-indol - 1,4-dionu,
2. Použití sloučeniny vybrané z (3S,6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2,3-dimethyl -6-(3, 4-methylendioxyfenyl)-pyrazionoE2 ,1 ·6,1]pyridoE3,4-b]indol -1,4-dionu a jejich fyziologicky přijatelných solí a solvátů pro výrobu léčiva pro léčení nebo prevenci erektilní dysfunkce u zvířecích samců, včetně mužů.
3. Způsob léčebného nebo preventivního léčení erektilní dysfunkce u zvířecích samců, včetně mužů, zahrnující podání sloučeniny vzorce (I) a jejích solí a solvátů například hydrátů, kde

R° znamená vodík.

halogen nebo Ci-ealkyl;

R¹ znamená vodík,

Ci-©alkyl, C2-6alkenyl, C2-aalkynyl, haloCi.©alkyl,

C3-scykloalkyl,

C3-scykloalkylCi_3alkyl, arylCi-₃alkyl nebo heteroaryl Ci_₃alkyl;

R² znamená výhodně substituovaný monocyklický aromatický kruh vybraný z benzenu, thiofenu, furanu a pyridinu nebo výhodně substituovaný bicykl ický kruh *·· · · ··· navázaný na zbytek benzenového kruhu a členný kruh, nenasycený a molekuly přes jeden z atomů uhlíku kde kondenzovaný kruh A je 5- nebo 6který může být nasycený nebo částečně nebo zcela obsahuje atomy uhlíku a volitelně jeden nebo dva heteroatomy vybrané z

R³ znamená vodík kyslíku, síry a dusíku; a nebo Ci_3alkyl, nebo R¹ a R³ společně znamenaj í 3- nebo 4-členný alkylový nebo alkenylový řetězec.
4. Způsob léčebného nebo preventivního léčení erektilní dysfunkce u zvířecích samců, včetně mužů, zahrnující podání sloučeniny vybrané z ( 6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyraziono[2 ,1 :6,1]pyrido[3, 4-bl- indol-1,4-dionu, a

( 3S,6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2, 3-dimethyl -6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyraziono[2 ,1 ’€>, 1 lpyrido[3, 4-b] indol -1,4-dionu a jejich fyziologicky přijatelných solí a solvátů.
5. Farmaceutický prostředek pro léčebné nebo preventivní léčení erektilní dysfunkce u zvířecích samců, včetně mužů, obsahující sloučeninu vzorce (I) (O a její soli a solváty , například hydráty, kde

R° znamená vodík, halogen nebo Ci_6alkyl;

R¹ znamená vodík,

Ci-ealkyl, C2-ealkenyl,

C2-ealkynyl, haloCi-ealkyl,

C3-scykloalkyl,

C3-scykloalkylCi_3alkyl, arylCi_3alkyl nebo heteroaryl Ci_3alkyl;

R² znamená výhodně substituovaný monocyklický aromatický kruh vybraný z benzenu, thiofenu, furanu a pyridinu nebo výhodně substituovaný bicykl ický kruh navázaný na zbytek molekuly přes jeden z atomů uhlíku benzenového kruhu a kde kondenzovaný kruh A je 5- nebo 6členný kruh, který může být nasycený nebo částečně nebo zcela nenasycený a obsahuje atomy uhlíku a volitelně jeden nebo dva heteroatorny vybrané z kyslíku, síry a dusíku; a

R³ znamená vodík nebo Ci-3alkyl, nebo R¹ a R³ společně znamenají 3- nebo 4-členný alkylový nebo alkenylový řetězec;

společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
6. Farmaceutický prostředek pro léčebné nebo preventivní léčení erektilní dysfunkce u zvířecích samců, včetně mužů, obsahující sloučeninu vybranou z ( 6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3, 4-methylendioxyfenyl)-pyraziono[2 ,1 :6,1Ipyrido[3,4-bJ-indol-1,4-dionu, a (3S,6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2,3-dimethyl -6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyraziono[2 ,1 :6, 13pyrido[3,4-blindol-1,4-dionu a jejich fyziologicky přijatelných solí a solvátů, společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
7. Způsob přípravy farmaceutického prostředku podle nároku 5 pro léčebné nebo preventivní léčení erektilní dysfunkce u zvířecích samců, včetně mužů, vyznačující se t í m, že zahrnuje vytvoření sloučeniny vzorce (I) a jejich fyziologicky přijatelných solí a solvátů, s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
8. Způsob přípravy farmaceutického prostředku podle nároku 6 pro léčebné nebo preventivní léčení erektilní dysfunkce u zvířecích samců, včetně mužů, vyznačující se tím, že zahrnuje vytvoření sloučeniny vybrané z (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyrazionot2 ,1 :6, 1]pyridol3, 4-bl-indol-1,4-dionu, a

(3S,6R,12aR)-2,3,6,7,12, 12a-hexahydro-2,3-dimethyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyraziono[2 ,1 :6, 1Jpyrido[3,4-blindol-1,4-dionu a jejich fyziologicky přijatelných solí a solvátů, s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
9. Způsob ošetření zvířecích samců, včetně mužů, při léčbě nebo prevenci erektilní dysfunkce, který zahrnuje ošetření uvedeného zvířecího samce účinným množstvím farmaceutického prostředku podle nároků 5 nebo 6.
10. Použití farmaceutického prostředku podle nároků 5 nebo 6 pro výrobu léčiva pro léčebné nebo preventivní ošetření erektilní dysfunkce u zvířecích samců, včetně mužů.
11. Kombinace sloučenin vybraných z (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2-methyl-6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyraziono[2 ,1 :6, 1]pyrido[3, 4-bl- indol -1,4-dionu, ♦ ·· ( 3S, 6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahydro-2, 3-dimethyl -6-(3,4-methylendioxyfenyl)-pyrazíono[2 ,1 =6,1]pyrido(3,4-blindol -1,4-dionu a jejich fyziologicky přijatelných solí a solvátů, společně s jinou terapeuticky účinnou látkou, pro současné, samostatné nebo postupné použití při léčení erektilní dysfunkce u zvířecích samců, včetně mužů.
12. Farmaceutická formulace obsahující kombinaci podle nároku 11 společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.