CZ3298A3

CZ3298A3 - Cyklické GMP-specifické inhibitory fosfodiesterasy

Info

Publication number: CZ3298A3
Application number: CZ9832A
Authority: CZ
Inventors: Alain Claude-Marie Daugan; Francoise Gellibert
Original assignee: Icos Corporation
Priority date: 1995-07-14
Filing date: 1996-07-11
Publication date: 1998-06-17
Also published as: HRP960321A2; AR003455A1; ATE216997T1; CN1069318C; DE69621026T2; EP0846118B1; MX9800411A; ZA965934B; SK3898A3; NO980154L; CA2226761A1; BR9609780A; CO4700455A1; PL324527A1; JPH11509535A; EP0846118A1; HUP9900006A3; HUP9900006A2; JP4150818B2; GB9514465D0

Description

Cyklické GMC-specifické inhibitory fosfodiesterasy

Oblast techniky:

Tento vynález se týká řady tetracyklických derivátů, způsobů jejich přípravy, farmaceutických přípravků, které jé obsahují, a jejich použití jako terapeutických činidel. Zejména se vynález týká tetracyklických derivátů, které jsou možnými a selektivními inhibitory cyklické guanosin 3 ,5-monofosfátové specifické fosfodiesterasy (cGMP specifické PDE), které mají použití v různých terapeutických oblastech, kdy se tato inhibice považuje za výhodnou, včetně léčení kardiovaskulárních nemocí.

Podstata vynálezu:

Prvním předmětem předloženého vynálezu je poskytnutí sloučenin obecného vzorce (I)

a jejich solvátů (jako hydrátů), v nichž:

Ř° znamená.'vodík, halogen nebo Ci_&alkyi;

R¹ znamená vodík nebo Ci-6 alkyl;

R² znamená bicyklický kruh

který může být výhodně substituován jednou nebo dvěma

i skupinami vybranými z halogenu a Ci_3alkylu;

a

R³ znamená vodík nebo Ci-3alkyl.

Termín halogen, jak se zde používá, znamená brom, chlor, fluor a jod.

Termíny Ci-3alkyl a “Ct-6 alkyl, jak se zde používají, znamenají přímý nebo větvený alkylový řetězec jako je methyl, ethyl, i -propy1, n-butyl, pentyl, hexyl nebo podobné.

Zejména výhodnou podskupinou sloučenin podle předloženého vynálezu jsou sloučeniny, kde R° znamená vodík.

Další výhodná podskupina zahrnuje sloučeniny, kde R¹ je vybrán z vodíku, methylu a isopropylu.

Výhodně R³ znamená nesubstituovaný bicykl ický kruh

Ještě další podskupinou sloučenin vzorce (I) jsou sloučeniny, kde R³ znamená vodík nebo methyl.

Je zřejmé, že předložený vynález pokrývá všechny příslušné kombinace konkrétních a výhodných uvedených seskupení.

Sloučeniny vzorce (I) mohou obsahovat jedno nebo více asymetrických center, a proto mohou existovat jako enantiomery nebo diastereoisomery. Musí být zřejmé, že vynález zahrnuje i směsi, i samostatné jednotlivé isomery sloučenin vzorce (I). Zejména výhodnými jsou 6R a 12aR isomery.

Konkrétní jednotlivé sloučeniny zahrnují:

« • · * •·· · ♦ t • · I · ·♦ «··· (6R,12aR)-2, 3,6, 7, 12,12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)-2-methyl-pyrazino [2 ,1 =6,1lpyrido[3,4-blindol-1,4-dion;

(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)✓ Λ

-pyrazino [2 ,1 ^:6,13pyridot3, 4-blindol-1,4-dion;

(3S,6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)-3-methyl-pyrazino [2 ,1 = 6, 1 ]pyr idot 3, 4-b] indol - 1,4-dion;

(3S,6R,12aR)-2,3,6, 7,12,12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)-2,3-dimethyl-pyrazino C2 , 1 '6,llpyridoC3, 4-blindol-1,4-dion;

(6R,12aR)-2, 3, 6, 7, 12,12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)-2r s

- isopropyl-pyrazino [2 ,1 ^:6,1Ipyridot3,4-blindol -1,4-dion; a jejich fyziologicky přijatelné solváty (jako hydráty).

Nejvýhodnější sloučeninou podle vynálezu je (6R,12aR)-2,3,6.7, 12,12a-Hexahydro-6- ( 5-benzofuranyl) - 2-methyl-pyrazino [2 ,1 = 6,1Jpyridof3,4-blindol-1,4-dion; a její fyziologicky přijatelné solváty (jako hydráty).

Bylo uvedeno, že sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou možnými a selektivními inhibitory cGMP specifické PDE. Proto jsou sloučeniny vzorce (I) zajímavé pro použití pří léčení, zejména pro léčení různých stavů, kdy je považována inhibice GMP specifické PDE za výhodnou.

V důsledku selektivní inhibice PDE 5, vykazované sloučeninami podle předloženého vynálezu, jsou hladiny cGMP zvýšené, což naopak může vést k vzestupu prospěšných antidestičkových, antineutrofilních, antivazospastických, vazodilatačních, natriuretických a diuretických aktivit, stejně jako k potenciaci účinků relaxačního faktoru (EDRF) odvozeného z endotelu, nitrovazodilatorů, atriálního natriuretického faktoru (ANF), mozkového natriuretického peptidu (BNP), C-typu natriuretického peptidu (CNP) a relaxačního činidla závislého na endothelu, jako je • · · 9 · ·· v * 9 9 · ··· · 9 9 9 9« • 99999 9 9 9 ·· 9 99

9 9 b >99b

9*9 ♦♦ ·· 9999 9«·· bradykinin acetylcholin a 5-HTi. Sloučeniny vzorce (I) jsou tedy vhodné pro léčení řady nemocí, včetně stabilní, nestabilní, nebo variantní (Prinametal) angíny, hypertenze, pulmonární hypertenze, městnavého srdečního selhání, selhání činnosti ledvin, atherosklerózy, stavu snížené cévní průchodnosti krve (jako post-perkutánní transluminální koronární angíoplastíky) , periferní vaskulární nemoci, vaskulární poruchy jako je Raynaudova nemoc, zánětlivé nemoci, mrtvice, bronchitidy, chronického astma, alergického astma, alergické rýmy, glaukomu, erektilní dysfunkce a nemoci charakterizované střevní motilitou ( jako iri Labilního střevního syndromu).

Předpokládá se, že odkazy zde na léčení se vztahují na prevenci stejně jako léčení daných stavů.

Rověž lze předpokládat, že sloučeniny vzorce (I), nebo jejich fyziologicky přijatelné soli nebo solváty, mohou být podávány jako surové sloučeniny nebo jako farmaceutické přípravky obsahující jedno nebo druhé.

Dalším předmětem předloženého vynálezu jsou sloučeniny vzorce (I) pro použití

Při léčení stabilní, nestabilni a variantní (Prinzmetal) angíny, hypertenze, pulmonární hypertenze, chronické obstrukční pulmonární choroby, městnavého srdečního selháni , selhání činnosti ledvin, atherosklerózy, stavu snížené cévní průchodnosti krve (jako post-PTCA) , periferní vaskulární nemoci, vaskulární poruchy jako je Raynaudova némóc, zánětlivé nemoci, mrtvice, bronchitidy, chronického astma, alergického astma, alergické rýmy, glaukomu, erektilní dysfunkce nebo nemoci střevní motility ( jako IBS).

Dalším předmětem vynálezu je poskytnout použití sloučeniny vzorce (I) pro výrobu léčiva pro léčení stabilní, nestabilní a variantní (Prinzmetal) anginy, hypertenze, pulmonární hypertenze, chronické obstrukční pulmonární choroby, ·· ·« ’·· ·· , _ _♦·· · · * · · v «9 99#·» • ·«· · · 9 t · *« 9 ·· • 999· · ·9 ··· ·· «· ···· ·· ·* městnavého srdečního selhání, selhání činnosti ledvin, atherosklerózy, stavů snížené cévní průchodnosti krve (jako post-PTCA) , periferní vaskulární nemoci, vaskulární poruchy jako je Raynaudova nemoc, zánětlivé nemoci, mrtvice, bronchitidy, chronického astma, alergického astma, alergické rýmy, glaukomu, erektilní dysfunkce nebo nemoci charakterizované poruchami střevní motility ( jako IBS).

V dalším předmětu poskytuje vynález léčení stabilní, nestabilní a proměnné (Prinzmetal) anginy, hypertenze, pulmonární hypertenze, chronické obstrukční pulmonární choroby, městnavého srdečního selhání, selhání činnosti ledvin, atherosklerózy, stavů snížené cévní průchodnosti krve (jako post-PTCA) , periferní vaskulární nemoci, vaskulární poruchy jako je Raynaudova nemoc, zánětlivé nemoci, mrtvice, bronchitidy, chronického astma, alergického astma, alergické rýmy, glaukomu, erektilní dysfunkce nebo nemocí charakterizovaných poruchami střevní motility ( jako IBS) , těl lidí nebo zvířat, které zahrnuje podání těmto objektům terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce (I).

Sloučeniny podle vynálezu mohou být podávány jakoukoliv vhodnou cestou, například orálním, bukálním, sublingválním, rektálním, vaginálním, nasálním, topíckým nebo patenterálním (včetně intravenózního, intramuskulárního, subkutáního a intrakoronárního) podáním. Obvykle se dává přednost orálnímu podání.

Pří podáváni 1 idera při léčebném a preventivním léčení výše uvedených chorob je orální dávkování sloučeniny vzorce (I) obvykle v rozmezí od 0,5 - S00 mg denně pro průměrného dospělého pacienta (70 kg). Pro typického dospělého pacienta obsahují jednotlivé tablety nebo kapsle od 0,2 - 400 mg účinné sloučeniny na vhodném farmaceuticky přijatelném vehikulu nebo nosiči, pro podání v jediné nebo násobných dávkách, jednou nebo vícekrát denně. Dávkování pro intravenózní, bukální nebo sublingvální podání je typicky • · · 9 « 9 9 9 9 · « • 99 9 * 9 · 9 99 • 99**9 9 · 9 99*99 • *999 9 99 ··· ·· 9» 9999 9*9« v rozmezí od 0,1 - 400 mg na jedinou dávku, jak je požadováno. V praxi stanoví lékař aktuální režim dávkování, který bude mnohem vhodnější pro jednotlivé pacienty a bude se měnit s věkem, hmotností a odezvou konkrétnho pacienta. Výše uvedená dávkování jsou exemplární pro průměrné případy, ale mohou nastat individuální situace, v nichž se požaduji vyšší nebo nižší dávkovači rozmezí, a které jsou v rozsahu vynálezu.

Pro použití pro lidi může být sloučenina vzorce CI) podána samotná, ale obvykle se podává ve směsi s farmaceutickým nosičem zvoleným s ohledem na uvažovanou cestu podání a standardní farmaceutickou praxi. Například může být sloučenina podána orálně, bukálně nebo sublingválně, ve formě tablet obsahujících excipienty, jako je škrob nebo laktóza, v

nebo v kapslích nebo vajíčkách, bud samotná nebo ve směsi s excipienty, nebo ve formě léčebných nápojů nebo suspenzí obsahujících ochucovadlo nebo barvicí činidla. Takové kapalné přípravky mohou být připraveny e farmaceuticky přijatelnými přísadami, jako jsou suspendační činidla (jako methylcelulóza, semisyntetický glycerid, jako je vitepsol, nebo směsi glyceridů, jako je směs oleje z meruňkových jader a esterů PEG-6, nebo směsi PEG-8 a kaprylové/kaprlnové glyceridy); Sloučenina také může být injektována parenterálně, například intravenózně, intramuskulárně, subkutánně nebo intrakoronárně. Pro parenterální podání se nejlépe použije sloučenina ve formě sterilního vodného roztoku, který může obsahovat další látky, například soli nebo monóšacharidy, jako'je manitol nebo'glukóza, - aby se připravil roztok isotonický s krví.

Dalším předmětem vynálezu je farmaceutická kompozice obsahující sloučeninu vzorce (I) společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo jejich nosičem.

Předložený vynález dále poskytuje způsob přípravy farmaceutické kompozice obsahující sloučeninu vzorce (I), τ

I

··· ·

·. · ·« ♦♦ přičemž způsob zahrnuje smísení sloučeniny vzorce (I) dohromady s jejím farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

Sloučenina vzorce (I) se rovněž může použít v kombinaci s jinými terapeutickými látkami vhodnými pro léčení výše zmíněných chorobných stavů. Vynález dále poskytuje, jako další předmět , kombinaci sloučeniny vzorce Cl) společně s jinou terapeuticky účinnou látkou.

Výše uvedená kombinace se může běžně uvádět pro použití ve formě farmaceutické formulace, a proto farmaceutické přípravky obsahující kombinaci, jak je definována výše, společně s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem, představují další předmět vynálezu.

Jednotlivé složky takové kombinace mohou být také podávány bud postupně nebo současně v samostatných farmaceutických formulacích.

Příslušná dávkování terapeutických činidel pro použití v kombinaci se sloučeninou vzorce (I) jsou pro odborníka v oblasti techniky snadno stanovitelná.

Sloučeniny vzorce (I) mohou být připraveny jakýmkoliv vhodným postupem známým ze stavu techniky, a nebo následně uvedenými postupy, které tvoří součást předloženého vynálezu. V postupech dále znamenají R°, R¹, R² a R³ stejné, jako je definováno ve vzorci (I) výše, pokud není uvedeno jinak.

První postup (A) přípravy sloučeniny vzorce (I) zahrnuje zpracování sloučeniny vzorce (II)

OAÍk

CHHal (II)

(v němě Alk znamená Ci-ealkyl, jako methyl nebo ethyl, a Hal je atom halogenu, jako chlor) s primárním aminem R¹NH2 ve vhodném rozpouštědle jako je alkohol (jako methanol nebo ethanol) nebo směs rozpouštědel, vhodně při teplotě od 20 °C do teploty refluxu (tedy při asi 50 °C).

Podle druhého postupu (B) přípravy sloučeniny vzorce (I) je zahrnuta hydrogenace sloučeniny vzorce (III)

CbZ

R¹ (i) v němž je Alk def inován výše a Cbz znamená karbobenzy1oxyskup i nu, za přítomnosti kata1yzátoru, jako je paladi um na aktivním uhlíku, ve vhodném rozpouštědle, jako je methanol.nebo ethanol, při zvýšené teplotě.

Sloučeninu vzorce (II) lze vhodně připravit zpracováním sloučeniny vzorce (IV)

š hálóacetylhalogenidem (například ch1or acetylch1or idem)~ ve vhodném rozpouštědle, jako je halogenovaný uhlovodík (například trichlormethan nebo dichlormethan) nebo ether (například tetrahydrofuran) , výhodně za přítomnosti báze jako je organický amin (například trialkylamin jako je triethylamin) nebo uhličitan nebo hydrogenuhličitan alkalického kovu (například NaHC03) Reakce se vhodně provádí Při teplotě od -20 do +20 °C (například kolem 0 °C) .

·· ·« φ φ φ φ φ φ φφ φ φφφφ · φ · • Φ φφ

Sloučeninu vzorce (IV) lze vhodně připravit 2 alkylesteru tryptofanu vzorce (V)

(V) ‘

Tento krok zahrnuje Picket-Spenglerovu cyklizaci mezi sloučeninou vzorce (V) a aldehydem R²CHO. Reakce běžně probíhá ve vhodném rozpouštědle, jako je halogenovaný uhlovodík (například dichlormethan) nebo aromatický uhlovodík (například toluen), za přítomnosti kyseliny, jako je kyselina trifluoroctová. Reakce se běžně provádí při teplotě od -20 °C do refluxu za tvorby sloučeniny vzorce (III) v jednom kroku. Reakce se rovněž může provádět v rozpouštědle, jako je aromatický uhlovodík (například benzen nebo toluen), pod refluxem, výhodně použitím Dean-Stárková přístroje k zachycování tvořené vody. Reakcí se získá směs cis a trans isomerů, které mohou být bud individuálními enantiomery nebo racemáty páru cis nebo trans isomerů v závislosti na tom, zda se jako výchozí materiál použije racemický, nebo enantiomerně čistý alkylester tryptofanu. Jednotlivé cis a trans enantiomery se mohou vhodně oddělit ze své směsi frakční krystalizací nebo chromatografií (jako je mžiková kolonová chromatografie) použitím příslušných rozpouštědel a eluentů. Obdobně se může odděl it.chromatografií dvojíce cis a trans ísómérů (například ’ mžikovou kolonovou chromatografií) použitím příslušných eluens. Opticky čisté trans isomery mohou být také přeměněny na opticky čisté cis isomery použitím vhodných eplmerizačnich postupů. Jeden takový postup zahrnuje zpracování trans isomerů nebo směsi (například 1^;1 směsi) cis a trans isomerů methanolickým nebo vodným chlorovodíkem při teplotě od 0 °C do teploty refluxu roztoku. Potom se směs podrobí chromatografi i (například mžikové kolonové chromatografi i) k oddělení výsledných

44·· ·· · · 9 4 ♦· · 4 4 4·

9949¼ 99 , · 4 99

449 99 ······ diastereoisomerů.

Sloučenina vzorce (III) může být připravena reakcí sloučeniny vzorce (IV), jak byla dříve popsána, sloučeninou vzorce (VI) se

HO

Cbz

R¹ (VI) kde CBz je definován výše. Výhodně se reakce provádí za přítomnosti 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu (DCC), v rozpouštědle, jako je halogenovaný uhlovodík (například dichlormethan) od 0 °C do teploty místnosti.

Sloučeniny vzorce (V) a (VI) jsou známé sloučeniny, nebo nohou být připraveny standardními dále popsanými postupy.

Sloučeniny podle vynálezu lze izolovat ve spojení s molekulami rozpouštědla krystalizací z nebo odpařením příslušného rozpouštědla.

Proto jako další předmět vynálezu předkládáme způsob (C) přípravy sloučeniny vzorce (I) nebo jejího solvátu (například hydrátu), který zahrnuje postup (A) nebo (B), jak byl dříve popsán, následovaný

i) stupněm interkonverze; a/nebo i i) tvorbou šolvátu (například hydrátu). Syntézy sloučeniny podle vynálezu a meziproduktů pro jejich použití zde jsou ilustrovány následujícími, neomezujícími příklady.

Příklady provedení;

«.11 .·

99·· ·· ♦ * · · 9 · » · » · ·· * · · » * b ♦ *·

999 * 9 · 9 9 999 9· • 9 9 9 9 9 99

999 99 99 999999 «V

Meziprodukty 1 a 2 (IR,3R)-Methyl 1.2.3, 4-tetrahydro-1 -(5-benzofuranyl)-9H-pyrido[3,4-b]indol-3-karboxylát, cis isomer a (1S.3R)-methyl 1,2,3,4-tetrahydro-1 - ( 5-benzofuranyl)-9H-pyr i do[3,4-b]indol-3-karboxylát, trans isomer

Do míchaného roztoku methylesteru D-tryptofanu (3,73 g) a

5-formy1-benzofuranu¹ (2,5 g) v bezvodém dichlormethanu (100 ml) ochlazeném na 0 °C se přidá po kapkách kyselina trifluoroctová (2,63 ml) a roztok se ponechá reagovat při okolní teplotě. Po 72 hodinách se roztok promyje nasyceným vodným roztokem

NaHC03, potom vodou, a suší se nad NazS04·

Organická vrstva se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se čist í mžikovou chromatograf i í promyt i m dichlormethan/ethylacetátem (90/10) za vzniku prvního cis isomeru (meziprodukt 1) (3 g) jako amorfní sloučeniny, následované trans isomerem (meziprodukt

2) (2,5

g) jako bílé krystaly, b.t.: 194-195 °C.

¹ Syntéza 5-formyl-benzofuranu je Thérapeutique 4, pp 221-227 (1966).

popsána v Chimie

Meziprodukt 3 (IR,3R)-Methyl 1.2,3,4- tetrahydro-1 - ( 5-benzofuranyl)-2-chloracetyl-9H-pyrido[3,4-blindol-3-karboxylát

Do míchaného roztoku meziproduktu 1 (2 g) a triethylaminu (0,88 ml) v bezvodém dichlormethanu (40 ml) ochlazeném na 0°C se přidá po kapkách chloracetylchlorid (0,5 ml) a roztok se míchá při stejné teplotě po 1 hodinu. Roztok se promyje vodou, suší se nad Na2S04 a odpaří se do sucha a zbytek krystalizuje z methanolu za vzniku sloučeniny uvedené v názvu (1,8 g) jako bledě žlutých krystalů.

b.t.= 227-228 °C.

Meziprodukt 4 (IR,3R)-Methyl 1,2,3,4-tetrahydro-1 ( 5-benzofuranyl)-2-(2-(S)benzyloxykarbonylaminopropionyl) -9H-pyr idoí 3, 4-b] indol -3-karboxylát

9 9 9-9 * 9 9··.

• »99 9 « « 9 9 9«· 99 • 99999 9· ··· 99 99 9999 «·*9

Do míchaného roztoku kyseliny (S)-2-benzyloxykarbonylaminopropionové ( 1,3 g) a 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) (1,2 g) v bezvodém dichlormethanu (50 ml) při 0 °C se přidá meziprodukt 1 (1,0 g). Získaná směs se míchá po 72 hodin, potom se výsledná sraženina odfiltruje. Filtrát se odpaří do sucha a zbytek se purifikuje mžikovou chromatografií, elucí cyklohexan/ethylacetátem (60/40) za vzniku sloučeniny uvedené v názvu jako bílých krystalů. (1,4 g)

b.t. =91-92 °C.

Meziprodukt 5 (IR.3R)-Methyl 1,2, 3, 4-tetrahydro-1(5-benzofuranyl)-2-[2-(S)benzyloxykarbonylmethylamino)propionyl)-9H-pyr idot 3,4-blindol - 3-karboxylát

I

Stejný postup, jako byl použit při přípravě meziproduktu

4, ale s výchozí kyselinou 2-(S)-ben2yloxykarbonylmethylamino)propionovou (0,82 g) a použitím meziproduktu 1 (0,6 g), DCC (0,72 g) a dichlormethanu (25 ml), poskytne po chromatografi i, elucí s cyklohexan/ethylacetátem (70/30), sloučeninu uvedenou v názvu jako bílou pěnu.

¹H NMR (240MHz, CDCL3) 6 7,7(s, 1H), 7,6(d,2H), 7,4-7,05(m,

11H), 6,6(d,lH), 5,4-5,0(m, 4H) , 3,5(d,lH), 3,0(m,lH),

2, 9-2, 7( m, 6H) , 2,6(dd,lH), l,3(s,3H).

Příklad 1 (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)-2-methyl-pyrazino[2 ,1 =6,1]pyrido[3.4-blindol - 1,4-dion;

Do míchané suspenze meziproduktu 3 (0,42 g) v methanolu (30 ml) se přidá při teplotě okolí roztok methylaminu (33% v EtOH) (0,47 ml) a získaná směs se zahřívá při 50 °C pod dusíkem po 72 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a rozpustí se v dichlormethanu. Po promytí vodou, sušení nad NazS04 a odpaření do sucha se surový produkt čistí krystalizací z methanolu za vzniku sloučeniny uvedené v názvu, jako bílých krystalů (0,21 g).

• ··	13 ··	• 4
·· * ♦	4 · · « · ·	• ·
	4 · · · ·	·*
* ···	*44 4 · ···	4	•
9' ·	• 4 · >	*	*
·· · 44	«· ···« 44	44

b. t. : 291-293 °C.

Analýza pro C23H19O3··

Vypočteno=0,71,68; H, 4, 97; N, 10,90;

Nalezeno C, 71,5; H, 4, 91; N, 10, 74°4 . [ÁJ^2Oi> = + 55, 7°(C=1;CHCI3) .

Následující sloučeniny byly připraveny obdobným způsobem.

Příklad 2

16R,12aR)-2,3.6,7,12,12a-Hexahydro-6- (5-benzofuranyl)-pyrazino[2 ,1 ^:6,1]pyrido[3, 4-b]indol-1,4-dion

Stejný postup, jako byl použít při přípravě v příkladu 1, ale s výchozí látkou amoniakem a meziproduktem 3, poskytne po rekrystalizaci z methanolu sloučeninu uvedenou v názvu jako bílé krystaly.

b.t.-310-311 °C.

Analýza pro C22H17N3O3 (0,4 MeOH);

Vypočteno: C, 70,03; H,4,88; N,10,94;

Nalezeno: 0,70,01; H,4,8; Ν,10,6Γ/$; [<Á]³⁰d = + 60,4° (0=0,5; pyridin).

Příklad 3 (6R,12aR)-2,3,6,7, 12, 12a-Hexahydro-6-(5-benzofurany1)-2-isopropyl-pyra2ino[2 ,1 = 6, 1]pyridol3,4-b]indol-1,4-dion

Stejný postup, jako byl použit při přípravě v příkladu 1, ale s výchozí látkou isopropylaminem a meziproduktem 3, poskytne po rekrystalizaci z methanolu sloučeninu uvedenou v názvu jako bílé krystaly.

b.t. =291-292 °C.

Analýza pro C25H23N3O3 (0,6 MeOH);

Vypočteno: 0,71,06; H, 5, 92; N,9, 71;

Nalezeno: 0,70,94; H,5,62; N,9,77%;

[<A]^3Oi> - + 37,9° (0=1; CHCI3).

·· 14 ·· ·· ·· ··

* 4	4'	4 4	4 4 4·
*•4 ·	♦'	• 4	• ··· · *
4'	4'	• a	4 4 4
• ··	··	«··*	·· ··

Příklad 4 (3S,6R,12aR)-2,3,6.7,12.12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)-3-methyl -pyrazino[2 ,1 = 6.1]pyrido[3.4-b]indol - 1.4-dion

Roztok meziproduktu 4 (0,3 g) za přítomnosti 10% Pd/C (30 mg) v methanolu (10 ml) se míchá pod atmosférou vodíku při 50 °C po dvě hodiny. Reakční směs se ochladí, zfiltruje se přes

Celit, filtrační koláč se promyje methanolem a f i 1trát se odpař í ve vakuu.

Zbytek se purifikuje mžikovou chromatografií, elucí dichlormethan/methanolem (98/2) za vzniku sloučeniny uvedené v názvu jako bílých krystalů po rekrystalizaci z methanolu (0,15 g).

b.t.:150-151 °C.

Analýza pro C23H19N3O3 (0,1 MeOH)i Vypočteno: C.71.39; H, 5, 03: N, 10,81; Nalezeno: C.71,08; H, 5, 16; N,10,50%; [<A1^2OI> = + 50° (C=0,25; CHCI3).

Příklad 5 (3S.6R,12aR)-2,3,6.7,12,12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)-2.3-dimethyl-pyrazinoE2 ,1 ^:6,1]pyrido[3,4-bJindol-1,4-díon

Stejný postup, jako byl použit při přípravě v příkladu 4, ale s výchozí látkou meziproduktem 5 a použitím 10% Pd/C (50 mg) v methanolu (20 ml) poskytne po rekrystalizaci z methanolu sloučeninu uvedenou v názvu jako bílé krystaly (40 mg).

b.t. =323-324 °C.

Analýza pro C24H21N3O3 (0,1 MeOH);

Vypočteno: C,71,52; H,5,35; N,10,43;

Nalezeno: C.71,71: H, 5,44; N,10,39%;

[<<]^2Oi> = + 53° (C=0,35; CHCI3) .

TABLETY PRO ORÁLNÍ PODÁNÍ

A. Přímé lisování

ΦΦ · Φ ’ · ·* • Φ «Φ • •Φ ·Φ « Φ·.

ΦΦ ΦΦ ♦

1 .	\| mg/tabletu 1
Účinná složka	\| 50,0
Crospovidon USNF	I 8,0
Stearát horečnatý Ph Eur	1 1,0
Bezvodá laktóza	1 141,0 1
Účinná složka se prošije a směs se slisuje do tablet.	smísí se s excipienty. Zí
2.	\| mg/tabletu 1
Účinná složka	1 50,0
Koloidní oxid křemičitý	1 0,5
Crospov i don	1 8,0
Laurylsulfát sodný	1 í.o
Stearát hořečnatý Ph Eu	1 1,0
Mikrokrystalická celulóza USNF	\| 139,5
Účinná složka se prošije a směs se slisuje do tablet.	smísí se s excipienty. Zí
B. Mokrá granulace
1.	\| mg/tabletu 1
Účinná složka	1 50,0
Polyvinylpyrrolidon	\| 150,0
Polyethylenglykol	1 50,0
Polysorbat 80	1 10,0
Stearát hořečnatý Ph Eu	1 2,5
Kroskarmelóza sodná	1 25,0
Kol oi dní oxid křemičitý	1 2,5
Mikrokrystalická celulóza USNF	\| 210,0 1

skaná • ·· 16 ·· ·· ·· ·· ·· «4 to··*···· • to to to to to · to ·· • to·· · to ♦ · * ··· ·· ·' · to ♦ « · ·· • toto ·· ·· ···· ♦♦ toto

Polyvinylpyrrolidon, polyethylenglykol a polysorbat 80 se rozpustí ve vodě. Výsledný roztok se použije ke granulaci účinné složky. Po usušení se granule prošijí, potom se vytlačují při zvýšených teplotách a tlacích. Extrudát se mele a/nebo prošije, potom se smísí s mikrokrystalickou celulózou, kroskarmelózou sodnou, koloi dním oxidem křemičitým a stearátem horečnatým. Získaná směs se slisuje do tablet.

Účinná složka

Polysorbat 80

Laktóza Ph Eur

Škrob BP

Předgelovatěný kukuřičný škrob BP

Stearát hořečnatý BP

2. Í mg/tabletu i__________________________________________________________________________________________________ |50,0

I 3,0 |178,0

I 45,0 |22,5

I 1,5

I________________________________________________________________________________________________________.__________________________________________

Účinná složka se prošije a smísí s laktózou, škrobem a předgelovatěným kukuřičným škrobem. Polysorbat 80 se rozpustí v purifikované vodě. Přidá se příslušný objem roztoku polysorbatu a prášek se granuluje. Po usušení se granulát prošije a smísí se se stearátem hořečnatým. Potom se granulát slisuje do tablet.

Tablety s jinou účinností se připraví v odpovídajícím poměru účinné složky k ostatním excipientům.

TABLETY POTRŽENÉ FILMEM

Výše zmíněné tabletovací směsi byly potaženy filmem.

Potahovací suspenze j % hmotn/hmotn ________________I—_______ Opadry bíláf | 13,2

Purifikovaná voda Ph Eu | do 100,0* .3 33 1 f *3»3 «Φ Φ Φ ♦Φ · φ

Φ Φ Φ 4 4*

Φ ΦΦΦ.Φ Φ ·φ

Φ· Φ Φ Φ φ

Φ·* ΦΦ Φ· ΦΦΦΦ • Φ ··

Φ Φ ΦΦ

Φ Φ ΦΦ • Φ·Φ Φ· • ·φ

ΦΦ ΦΦ χ Voda se neobjevila v konečném výrobku. Maximální teoretická hmotnost pevné látky aplikované během potahování byla 20 mg/tabletu.

f Opadry bílá je chráněný materiál získatelný od Colorcon Limited, UK, který obsahuje hydroxypropylmethylcelulózu, oxid titaničitý a triacetin.

Tablety byly potaženy filmem použitím potahové suspenze v běžném zařízení pro potahování filmem.

KAPSLE

1.	\| mg/kaps1e 1
Účinná složka	1 50,0
Laktóza	\| 148,5
Polyvinylpyrroli don	\| 100,0
Stearát hořečnatý	1 1,5 i

Účinná složka se prošije a smísí s excipienty. Směs se naplní do tvrdých želatinových kapslí velikosti č.1 použitím vhodného zařízení.

2.	\| mg/kapsle 1
Účinná látka	\| 50, 0
Mi krokrysta1 ická ce1ulóza	1 233,5
Laurylsíran sodný	1 3,0
Crospovidon	1 12,0
Stearát hořečnatý	I 1.5 1

Účinná složka se prošije a smísi se s excipienty. Směs se náplni do tvrdých želatinových kapslí velikosti č.l použitím vhodného zařízení.

Je možné připravit i jiná dávkování změnami poměru účinné • ·« 18 «» ·« ·· ·· ·· v · · ·· 9 9 4 4· • 9 · 4jj * · ··-.·♦ • ·«· * · · « · »9· 44 · > · 9 9 ·' 44

444 44 44 *494 «444 látky k excipientu, hmotnosti náplně, a, nezbytné, velikostí kapslí.

pokud je to

3.	\| mg/kapsle 1
Účinná látka	1 50,0
Labrafil H1944CS	\| do 1,0 ml 1
Inhibiční účinek na cGMP-PDE

cGMP-PDE účinnost sloučenin z předloženého vynálezu se měří použitím jednostupňové zkoušky uzpůsobené Wellsem a kol. (Wells, J.N., Baird, C.E.,Wu, Y.J. a Hardman, J.G. , Biochim. Biophys. Acta 384, 430 (1975)). Reakční medium obsahovalo 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 5 mM Mg-acetátu, 250 yg/ml

-nukleotidasy, 1 mM EGTA a 0,15 mM 8-[H³l-cGMP. Použitým enzymem byl lidský rekombinantní PDE V (ICOS, Seattle USA).

Sloučeniny podle vynálezu byly rozpuštěny v DMSO, nakonec přítomném ve 2% v testu. Inkubační doba byla 30 minut , během nichž celková konverze substrátu nepřesáhla 30

Hodnoty IC50 testovaných sloučenin byly stanoveny z odpovídajících koncentračních křivek použitím obvyklých koncentrací v rozmezí od 10 nM do 10 11M. Testy oproti jiným

PDE enzymům používajících standardní metody také ukazují, že sloučeniny z vynálezu jsou vysoce, selektivní pro CGMP specifický PDE enzym.

Měření hladin cGMP

Byly použity buňky z krysího aortálního hladkého svalstva (RSMC) připravené podle Chamleye a kol., v Cell Tissue Res. 177, 503-522 (1977) mezi 10. a 25. průchodem v soutoku ve

24-prohlubňových kultivačních nádobách. Kultivační medium bylo odsáto a přeneseno PBS (0,5 ml) obsahujícím testovanou

•	••19	··	«· ♦·	4·
··	• ·	•	* · 4 · 4	4	4'
•	• ·	4	• · · ·		··
*	··· ·	4	4 φ » *«4	•	«
•1'	*	•	* · ·	•	*
4*4	··	• 4	•444		té

sloučeninu v příslušné koncentraci. Po 30 minutách při 37 °C byly částice guanylat cyklasy stimulovány přídavkem ANF (100 nM) po 10 minut. Na konci inkubace bylo prostředí odebráno a byly provedeny dvě extrakce přídavkem 65% ethanolu (0,25 ml). Dva ethanolické extrakty byly spojeny a odpařeny do sucha použitím Speed-vac systému. c-GMP byla měřena po acetylaci selnti lačním proxlmitním imunotestem (AMERSHAM). Hodnoty ECso jsou vyjádřeny jako dávky poskytující poloviční stimulaci při koncentracích nasycení.

Biologická data

Bylo nalezeno, že sloučeniny podle předloženého vynálezu typicky vykazují ICso hodnotu menší než 500 nM a ECso hodnotu menší než . 5jiM. Data testovaná in vitro u reprezentativních sloučenin podle vynálezu jsou uvedena v následující tabulce^:

Tabulka 1. Výsledky in vitro

Příklad č.	ICsonM	ECsoiiM
1	15	0,6
2	20	<1
3	30	<1
4	8	<1
5	8	<1

Hypotenzní účinky sloučenin podle předloženého vynálezu, jak jsou uvedeny v tabulce 2, byly studovány na spontánně hypertenznfch krysách při vědomí (SHRs). Sloučeniny byly podávány orálně v dávce 5 mg/kg ve směsi 5 % DMF a 95 % olivového oleje. Katetrem umístěným do krční tepny byl měřen krevní tlak a zaznamenáván 5 hodin po podání. Výsledky jsou vyjádřeny jako plocha pod křivkou (Area Under the Curve AUC • ·· ·· ·· ···· ·· · · · to · to to · ·· • · to to to · · ··· • to·· · to · ·· ·♦·toto to: to to · · · ·· ··· ·· ·· toto·· ···· od O do 5 hodin, mmHg.hod) poklesu krevního tlaku s časem.

Tabulka 2. Výsledky in vivo

Příklad č.	AUC PO (mmHg.h)
1	137
2	93
3	108
4	101
5	89

Claims

• ♦· 21 · * ·· • * A A • A · A • · · * • A A · • A . · A · · · . • A AA • · · · ·. ·« A A A • A • · · • A A >A A ·· ·· ··*· A· ·Α PATENTOVÉ N Á R 0 K Y

1. Sloučenina vzorce I a její solváty, kde:

R° R¹ R³ znamená znamená znamená vodík, halogen nebo Ci-ealkyl; vodík nebo Ci-e alkyl; bicykl ický kruh 9) který může být výhodně substituován jednou nebo více

skupinami vybranými z halogenu a Ci-3alkylu;

a

R³ znamená vodík nebo Ci-3alkyl.
2. Součenina podle nároku 1, kde R° znamená vodík.
3. Sloučenina podle nároku 1 nebo 2, kde R¹ je vybrán z vodíku, methylu a isopropylu.
4. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 3, kde R³ znamená vodík nebo methyl.
5. ( 6R, 12aR) -2,3,6,7,12, 12a-Hexahydro-6- ( 5-benzofuranyl )-2-

-methyl-pyrazino [2 ,1 :6, 11pyrido[3,4-bJindol-1,4-dion;

(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexahydro-6- ( 5-benzofuranyl) # f

-pyrazino [2 ,1 :6,1]pyridoí3,4-blindol-1,4-dioni «» •4 ·«· • · * 9 · · * · · ·4 »· 4 4 4 4 4 ·· ·

Φ ··· 4 4 ♦ * · ··*94

4 4»·· 4 ·* *44 44 44 444« »4·4 (3S,6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexahydro-6- ( 5-benzofuranyl )-3-methyl-pyrazino [2 ,1 :6,1]pyridol3,4-bJindol-1,4-dion;

(3S, 6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)-2,3-dimethyl-pyrazino [2 ,1 :6,1lpyrido[3, 4-b]indol - 1,4-dion;

(6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)-2- isopropyl-pyrazino [2 ,1 :6,1]pyrido[3,4-b]indol-1,4-dion; a jejich fyziologicky přijatelné solváty .
6. (6R,12aR)-2,3,6,7;12,12a-Hexahydro-6-(5-benzofuranyl)-2-

-methyl-pyrazino [2 ,1 ^:6,1]pyrido[3,4-b]indol-1,4-dion; a jeho fyziologicky přijatelné solváty .
7. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 6 pro použití při léčení.
8. Sloučenina podle některého z nároků 1 až 6 pro použití při léčení stavů, kdy je terapeuticky prospěšná inhibice cGMP specifické PDE.
9. Použití sloučeniny podle některého z nároků 1 až 6 pro výrobu léčiva pro léčení stavů, kdy je terapeuticky prospěšná inhibice cGMP specifické PDE.
10. Způsob léčení stavů těl lidí nebo zvířat, kdy je terapeuticky prospěšná inhibice cGMP specifické PDE, který zahrnuje podání uvedenému objektu terapeuticky účinného množství sloučeniny podle některého z nároků 1 až 6. ..
11. Farmaceutický přípravek obsahující sloučeninu podle některého z nároků 1 až 6, společně s jejich farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.
12. Způsob přípravy farmaceutického přípravku obsahujícího sloučeninu podle některého z nároků 1 až 6 vyznačující se tím, že zahrnuje smísení uvedené sloučeniny spolu s jejím farmaceuticky přijatelným ředidlem

• ·· tot ·· toto • to toto · · • · • to to « • • ♦ · · to · to • to to · • to toto • · to • « • •to to « • to to . · to to • • • tom ·· • to ···· ·· ··

nebo nosičem.
13. Způsob (A) přípravy sloučeniny podle nároku 1 vyznačující se tím, še zahrnuje zpracování sloučeniny vzorce (II) v němě Alk znamená Ci-c alkyl, a Hal je atom halogenu, s primárním aminem R¹NHz; nebo způsob (B) zahrnující hydrogenování sloučeniny vzorce (III)

O

Cbz

R¹ (i) v němž Alk je definován jako výše a Cbz znamená karbobenzyloxyskupinu, za přítomnosti katalyzátoru ve vhodném rozpouštědle jako je alkohol, při zvýšené teplotě; nebo způsob (C), který zahrnuje způsob (A) nebo (B), následovaný

i) i i) stupněm interkonverze; a/nebo tvorbou sol vátu .