CZ302625B6 - Zpusob oddelování sloucenin s vysokou molekulovou hmotností s obsahem laktonu - Google Patents
Zpusob oddelování sloucenin s vysokou molekulovou hmotností s obsahem laktonu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302625B6 CZ302625B6 CZ20020860A CZ2002860A CZ302625B6 CZ 302625 B6 CZ302625 B6 CZ 302625B6 CZ 20020860 A CZ20020860 A CZ 20020860A CZ 2002860 A CZ2002860 A CZ 2002860A CZ 302625 B6 CZ302625 B6 CZ 302625B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- lactone
- compound
- group
- side chain
- molecular weight
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
- C07D498/18—Bridged systems
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Epoxy Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Zpusob oddelování slouceniny s obsahem laktonu, pri kterém se smes slouceniny s obsahem laktonu, mající základní chemickou strukturu 1,14-dihydroxy-12-[2-(4-hydroxycyklohexyl)-1-methylvinyl]-23,25-di-methoxy-13,19,21,27-tetramethyl-11,28-dioxa-4-azatricyklo-[22.3.1.0.sup.4,9.n.]-oktakos-18-en-2,3,10,16-tetraonu a která má jako svuj postranní retezec alespon jednu skupinu, zvolenou z C.sub.2-6.n. alkenylové skupiny, C.sub.1-6.n. alkoxylové skupiny a jí analogických sloucenin ci slouceniny, podrobí bud jednomu nebo obema krokum, v jakémkoli poradí, kterými jsou krok (A) pro adsorbování smesi na neiontovou adsorpcní pryskyrici a eluování vodným rozpouštedlem, obsahujícím stríbrné ionty, a krok (B) pro adsorbování smesi na zásaditou aktivní aluminu a eluování organickým rozpouštedlem k oddelení každé ze sloucenin.
Description
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká způsobu oddělování analogických sloučenin s vysokou molekulovou hmotností, obsahujících laktonový kruh a konkrétněji způsobu oddělování sloučenin s vysokou molekulovou hmotností, obsahujících laktonový kruh a majících odlišné postranní řetězce, za použití neiontové adsorpční pryskyřice a/nebo zásadité aktivní aluminy (přirozeného oxidu hliniio tého).
Dosavadní stav techniky
Dosud bylo známé použití stříbrných iontů k oddělování cis-trans isomerů nenasycené alifatické kyseliny, majících stejný počet uhlíkových atomů (J. Chromatography 149, 417, 1978). Obvyklými postupy bylo ovšem obtížné oddělit analogické sloučeniny, nepatrně a částečně se lišící svou molekulovou strukturou, neboť ty mají stejný nebo téměř stejný počet uhlíkových atomů ajsou si proto podobné fyzikálními vlastnostmi, jako je rozpustnost a afinita k rozpouštědlům.
Podstata vynálezu
Autoři tohoto vynálezu provedli rozsáhlé studie k nalezení způsobu účinného oddělování analo25 gických sloučenin, které si jsou vzájemně podobné fyzikálními vlastnostmi, aniž by došlo ke změně jejich chemické struktury. Neočekávaně nalezli způsob oddělování sloučenin o vysoké molekulové hmotnosti, obsahujících lakton a majících odlišný postranní řetězec, za použití neiontové adsorpční pryskyřice a vhodného eluční ho činidla a/nebo zásadité aktivní aluminy (přirozeného oxidu hlinitého) a vhodného eluěního činidla.
Podstatu vynálezu tvoří způsob oddělování sloučeniny s obsahem laktonu, při němž se směs sloučeniny s obsahem laktonu se základní chemickou strukturou l,l4--dihydroxy -l2- [2-(4-hydroxycyklohexyl)-1-methylvinyl]-23,25-dÍ-methoxy-13,19,21,27-tetramethyl-I l,28—dioxa-4azatricyklo—[22.3.1.04’9]-oktakos-I8-en-2,3,10,16-tetraonu, mající jako svůj postranní řetězec alespoň jednu skupinu, zvolenou z C2_óalkenylové skupiny, Cj_6alkoxyskupiny a jí analogických sloučenin nebo sloučeniny v jakémkoliv pořadí podrobí jednomu nebo oběma krokům, kterými jsou krok A) pro adsorbování směsi na ne iontovou adsorpční pryskyřici a eluování vodným rozpouš40 tědlem, obsahujícím stříbrné ionty, a krok B) pro adsorbování směsi na zásaditou aktivní aluminu a eluování organickým rozpouštědlem k oddělení každé ze sloučenin.
S výhodou se podle předkládaného vynálezu oba kroky (A) a (B) provádějí k oddělování sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, která má jako postranní řetězce jak skupinu nižšího alkenylu, tak i skupinu nižšího alkoxylu, od sloučeniny či sloučenin, které jsou jí analogické. Jako první se může provádět jak krok (A), tak i krok (B), ale obvykle se s výhodou bude provádět nejprve krok (A).
Krok (A) se s výhodou provádí k oddělování sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, která má jako postranní řetězec skupinu nižšího alkenylu, od sloučeniny či sloučenin, které jsou jí analogické.
- 1 CZ 302625 B6
Krok (B) se s výhodou provádí k oddělování sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, která má jako postranní řetězec skupinu nižšího alkoxylu, od sloučeniny či sloučenin, které jsou jí analogické.
s
Sloučeninami s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, na něž lze aplikovat způsob oddělování podle tohoto vynálezu, jsou myšleny takové sloučeniny, které mají ve své molekule jeden nebo více z laktonových kruhů a vykazují molekulovou hmotnost přibližně 400 nebo vyšší. Mohou mít monocyklickou, bicykl ickou, tricyklickou nebo podobnou základní kruhovou struktuio ru. Výhodněji se počet atomů, které vytvářejí uvedenou základní kruhovou strukturu, rovná 12 neboje vyšší. Takové monocyklické sloučeniny zahrnují erythromyciny, leukomyciny, methylmyciny a podobně. Takové tricyklické sloučeniny, mající laktonový kruh, zahrnují tricyklické sloučeniny, které jsou uvedeny v EP 0 184 162, a tricyklické sloučeniny obsahující heteroatomy, uvedené v EP 0 427 680, EP 0 532 088 nebo WO 93/04680.
Upřednostňovanými tricyklickými sloučeninami, mající laktonový kruh, jsou 1,14-dihydroxy12-[2-(4-hydroxycyk lohexy 1)-1 -methylvinyl]-23,25-dimethoxy-l 3,19,21,27-tetramethyl1 l,28-dioxa-4-azatricyklo[22.3.1.045 * * * 49 50 * * * * 55]oktakos_18-en-2,3,10,16~tetraon (uváděný zde jako sloučenina Z), (což je tacrolimus, pokud je poloha 17 substituována ally lovou skupinou a poloha 3 je substituována ethoxyskupinou a ascomycin, pokud je poloha 17 substituována ethylovou skupinou a poloha 3 je substituována methoxy skupinou), rapamyciny a podobně. Z těchto uvedených sloučenin se přednost dává tricyklickým sloučeninám a největší přednost se dává sloučenině Z.
Skupinou nižšího alkenylu jako postranním řetězcem sloučenin o vysoké molekulové hmotnosti as obsahem laktonu mohou být alkenylové skupiny o 2 až 6 atomech uhlíku s rovným nebo rozvětveným řetězcem, jako vinyl, propeny! (allyl nebo 1-propenyl), butenyl, isobutenyl, pentenyl, hexenyl a podobně, z nichž se upřednostňují vinyl a propenyI.
Skupinou nižšího alkoxy lu jako postranním řetězcem sloučenin o vysoké molekulové hmotnosti s obsahem laktonu mohou být alkoxylové skupiny o 1 až 6 atomech uhlíku s rovným nebo rozvětveným řetězcem, jako methoxyskupina, ethoxyskupina, propoxyskupina, isopropoxyskupina, butoxyskupina, isobutoxyskupina, sekundární butoxyskupina, terciární butoxyskupina, pentyloxyskupiny, isopentyloxyskupina, hexy loxy skupina a podobně, z nichž se upřednostňují ty, které mají 1 až 4 uhlíkové atomy, jako methoxyskupina, ethoxyskupina, propoxyskupina, isopropoxy3? skupina, butoxyskupina, isobutoxyskupina a podobně.
Sloučeninou s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, která má být oddělena způsobem podle tohoto vynálezu a která má jako svůj postranní řetězec alespoň jednu skupinu ze skupiny nižšího alkenylu a skupiny nižšího alkoxylu, je s výhodou zvláště sloučenina, obsahující jako základní chemickou strukturu sloučeninu Z, u níž je skupinou nižšího alkenylu propeny lová skupina a skupinou nižšího alkoxylu methoxyskupina, sloučenina, obsahující sloučeninu Z, u níž je skupinou nižšího alkenylu propenylová skupina a sloučenina, obsahující sloučeninu Z, u níž je skupinou nižšího alkoxylu methoxyskupina.
Analogickými sloučeninami sloučenin s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, na něž lze aplikovat způsob oddělování podle tohoto vynálezu, jsou myšleny takové sloučeniny, které mají stejnou nebo v podstatě stejnou základní chemickou strukturu jako výše popsaná sloučenina s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, jako postranní řetězec či řetězce však mají odlišný substituent či substituenty. Sloučeninami analogickými sloučeninám, které mají jako postranní řetězec skupiny nižšího alkenylu, mohou být například sloučeniny o stejné základní chemické struktuře, mající ale místo skupiny nižšího alkenylu v téže poloze skupinu nižšího alkylu, skupinu nižšího alkoxylu, hydroxyskupinu a podobně. Takové analogické sloučeniny zahrnují i ty, jež mají chemickou strukturu poněkud odlišnou v jiných částech, než jsou výše uvedené polohy substituce, ale vykazují podobné vlastnosti jako celek.
-2CZ 302625 B6
Zvláště upřednostňovanými sloučeninami, analogickými sloučenině s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, mající jako postranní řetězec skupinu nižšího alkenylu, mohou být takové sloučeniny, které mají místo skupiny nižšího alkenylu skupinu nižšího alkylu; sloučeninami analogickými sloučenině, mající jako postranní řetězec skupinu nižšího alkoxylu, mohou být takové sloučeniny, které mají místo skupiny nižšího alkoxylu hydroxylovou skupinu a sloučeninami, analogickými sloučenině s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, mající jako různé postranní řetězce skupinu nižšího alkenylu a skupinu nižšího alkoxylu mohou být takové sloučeniny, které mají skupinu nižšího alkylu místo skupiny nižšího alkenylu a/nebo hydroxylovou skupinu místo skupiny nižšího alkoxylu.
Skupinou nižšího alkylu, tvořící postranní řetězec ve sloučeninách s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, mohou být alkylové skupiny s rovným nebo rozvětveným řetězcem o 1 až 6 atomech uhlíku, jako methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sekundární butyl, terciární butyl, pentyl, isopentyl, hexyl a podobně, z nichž se nejvíce upřednostňují ty, které mají 1 až 4 uhlíkové atomy, jako methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl a podobně.
Adsorpce směsi, obsahující sloučeninu s vysokou molekulovou hmotnostní a obsahem laktonu, která má jako svůj postranní řetězec či řetězce alespoň jednu skupinu ze skupiny nižšího alkenylu a skupiny nižšího alkoxylu, a sloučeninu nebo sloučeniny jí analogické, na neiontovou adsorpční pryskyřici nebo na zásaditou aktivní aluminu (přirozený oxid hlinitý) a eluce předmětné sloučeniny z adsorbentu podle předkládaného vynálezu se může provádět následujícím způsobem.
Například v případě, že se směs sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, která má jako svůj postranní řetězec alespoň jednu skupinu ze skupiny nižšího alkenylu a sku25 piny nižšího alkoxylu, a sloučeniny nebo sloučenin jí analogických, získává kvašením, závisí cesta k podrobení směsi postupu oddělování na tom, zda jsou tyto sloučeniny produkovány vně z bakterií, tedy extracelulámě (vněbuněčně), nebo zda jsou produkovány uvnitř bakterie, tedy intracelulámě (nitrobuněčné). Pokud jsou produkovány extracelulámě, je směs kvasné tekutiny podrobena způsobu oddělování podle tohoto vynálezu. Pokud jsou sloučeniny produkovány intra30 celulárně, působí se na bakterie vhodným rozpouštědlem a výsledný extrakt kapalné směsi je poté podroben způsobu oddělování podle předkládaného vynálezu. Směs kvasné tekutiny nebo extrakt kapalné směsi může být sám o sobě, nebo po zahuštění, nalit na kolonu nebo podobně naplněn adsorbentem. Jinou možností je zahuštění směsi kvasné tekutiny nebo extraktu kapalné směsi do sucha k poskytnutí zbytku, který může být poté rozpuštěn ve vhodném rozpouštědle k poskytnutí roztoku, která se nalévá na kolonu nebo podobně.
Pokud se směs sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, která má jako svůj postranní řetězec či řetězce alespoň jednu skupinu ze skupiny nižšího alkenylu a skupiny nižšího alkoxylu a sloučeniny nebo sloučenin jí analogických, získává synteticky, mohou být reakční kapalina nebo kapalný extrakt, sami o sobě, nebo po zahuštění, nality na kolonu nebo podobně naplněny adsorbentem. Jinou možností je zahuštění reakční kapaliny nebo kapalného extraktu do sucha k poskytnutí zbytku, který může být poté rozpuštěn ve vhodném rozpouštědle k poskytnutí roztoku, která se nalévá na kolonu nebo podobně.
Sloučenina s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, která má jako svůj postranní řetězec či řetězce alespoň jednu skupinu ze skupiny nižšího alkenylu a skupiny nižšího alkoxylu a sloučenina nebo sloučeniny jí analogické, obsažené ve směsi, se selektivně eluují v závislosti na své afinitě k adsorbentu a eluentu a spojený eluát, obsahující požadovanou sloučeninu, se zahustí do sucha. Tak je požadovaná sloučenina s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu oddělena.
Neiontovou adsorpční pryskyřicí, používanou jako adsorbent, může být polyethylenová pryskyřice, jejíž částečná struktura je představovaná vzorcem:
-3 CZ 302625 B6
—CH2—CHkde R je vodíkový atom nebo halogenový atom. S výhodou se specificky používají Diaion® HP20, Diaion® HP20SS, Sepabeads® SP207 (vyráběné firmou Mitsubishi Chemical Corpo5 ration, Japonsko) či podobné materiály. V případě, že základní chemickou strukturou sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu je například sloučenina Z, se obvykle upřednostňuje použití Diaion® HP20SS.
K eluci sloučeniny s vysokou molekulovou hmotnosti a obsahem laktonu, adsorbované neiontoK) vou adsorpční pryskyřicí, se používá vodné rozpouštědlo s obsahem stříbrných iontů. Jako stříbrná sůl, obsažená ve vodném rozpouštědle s obsahem stříbrných iontů, se upřednostňuje dusičnan stříbrný, chloristan stříbrný a podobně, které ve vodě existují ve formě stříbrných iontů, z nichž se dusičnan stříbrný upřednostňuje v tom případě, že základní chemickou strukturou sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu je například sloučenina Z. Koncentrace stříbrných iontů se liší v závislosti na povaze sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, jež má být oddělena, ale obecně může být v rozmezí od 0,059 do 1,18 mol.l1, lépe od 0,12 do 0,59 mol.l*1, ještě lépe od 0,18 do 0,47 mol.l-1 a nejlépe od 0,24 do 0,35 mokl-1, pokud se týká Ag+.
Příkladem vodného média pro vodné rozpouštědlo, obsahující stříbrné ionty, mohou být vodný aceton, vodný alkohol (například methanol a ethanol), vodný acetonitril a podobně. Například vodný aceton může být s výhodou použit v případě, že základní chemickou strukturou sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu je sloučenina Z.
Zásaditou aktivní aluminou, používanou jako adsorbent, může být v tom případě, že základní chemickou strukturou sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu je například sloučenina Z, s výhodou AC12 (™, vyrábí firma Sumitomo Chemical Company, Limited. Japonsko).
3(> K eluci sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, adsorbované na zásaditou aktivní aluminu, se používá organické rozpouštědlo. Organickým rozpouštědlem, používaným jako eluent, může být vyhovující takové rozpouštědlo, jako ethylacetát, aceton, dichlormethan, směs chloroformu a methanolu, směs ethylacetátu a hexanu a podobně. Ethylacetát lze s výhodou použít v případě, že základní chemickou strukturou sloučeniny s vysokou molekulo35 vou hmotností a obsahem laktonu je například sloučenina Z.
Typ eluentu a, pokud je eíuentem směsné rozpouštědlo, směsný poměr jsou s výhodou zvoleny v závislosti na povaze sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, která má být oddělena, prostřednictvím předběžné analýzy, jako je chromatografíe na tenké vrstvě (TLC) a podobně.
Množství adsorbentu je s výhodou padesát i násobně větší než hmotnost sloučenin s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu v tom případě, že adsorbentem je neiontová adsorpční pryskyřice a s výhodou sedm desátí násobně větší než hmotnost sloučenin s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu v tom případě, že adsorbentem je zásaditá aktivní alumina.
-4CZ 302625 B6
Rychlost toku SV elučního rozpouštědla se mění v závislosti na velikosti částic adsorbentu a obvykle může být přibližně od 3 do 5 ml za minutu v případě neiontové adsorpční pryskyřice a přibližně od 3 do 5 ml za minutu v případě zásadité aktivní aluminy.
Podíl či podíly, obsahující sloučeninu s vysokou molekulovou hmotností a obsahem 1 akt onu, která má jako svůj postranní řetězec Či řetězce alespoň jednu skupinu ze skupiny nižšího alkenylu a skupiny nižšího alkoxylu, lze detegovat detektorem pracujícím v oblasti ultrafialového/viditelného světla nebo detektorem diferenčního indexu lomu, nebo chromatografií na tenké vrstvě, po získání několika podílů. Podíly, obsahující požadovanou látku, se spojí a odpaří do sucha za sníženého tlaku, čímž se požadovaná látka vyčistí.
Ačkoli předkládaný vynález je způsobem oddělování pro sloučeninu s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, která má jako svůj postranní řetězec či řetězce alespoň jednu skupinu ze skupiny nižšího alkenylu a skupiny nižšího alkoxylu, je po oddělení sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu možné dále oddělit zbývající analogickou sloučeninu od jiných analogických sloučenin. Například se sloučenina s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, mající jako postranní řetězec skupinu nižšího alkoxylu, oddělí od směsi s obsahem sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu a analogické sloučeniny, mající v podstatě stejnou základní chemickou strukturu a jako postranní řetězec hydroxylovou skupinu a poté může být postup podle vynálezu opakován znovu, k oddělování analogické sloučeniny elucí za použití odlišně polárního rozpouštědla.
Přehled obrázků na výkrese
Obr. 1 je schéma, znázorňující oddělování kolonovou chromatografií za použití náplně Diaion® HP20SS a vodného acetonu jako eluentu.
Obr. 2 je schéma, znázorňující oddělování kolonovou chromatografií za použití náplně Diaion® HP20SS a vodného acetonu s obsahem dusičnanu stříbrného (0,294 mol.l·1) jako eluentu.
Příklady provedení vynálezu
Nej lepší způsob provedení vynálezu
Předkládaný vynález je nyní podrobněji vysvětlen pomocí příkladů, které slouží pouze k dokreslení vynálezu a nejsou míněny k omezení rozsahu tohoto vynálezu.
Přípravný příklad 1
Příprava směsi, obsahující sloučeninu s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, která má jako svůj postranní řetězec či řetězce alespoň jednu skupinu ze skupiny nižšího alkenylu a skupiny nižšího alkoxylu a sloučeninu jí analogickou, kvašením.
Kultivační médium (100 ml), obsahující 1 % škrobu, 1 % glycerinu, 0,5 % glukózy, I % bavlníkové moučky, 0,5 % sušených kvasnic, 0,5 % kukuřičného výluhu a 0,2 % uhličitanu vápenatého bylo upraveno tak, aby pH mělo hodnotu 6,5, rozlito do osmi Erlenmeyerových baněk o obsahu 500 ml a sterilizováno 30 minut při teplotě 120 °C. Plná klička šikmo pěstované kultury Streptomyces tsukubaensis č. 9993 (ukládací číslo FERM BP-927 v National Institute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industrial Science and Technology, Japonsko, podle Budapešťské dohody) byla zaočkována do média v každé baňce a kultivace probíhala 72 hodin při teplotě 30 °C za použití rotační třepačky.
-5 CZ 302625 B6
Tento kultivační bujón byl převeden jako inokulační kultura do 160 litrů téhož média, obsaženého ve fermentoru o objemu 200 I, předem sterilizovaného 30 minut při 120 °C, do něhož bylo přidáno 0,05 % Adekanolu® (odpěňovací činidlo, zapsaná značka, vyráběné firmou Asahi Denka Co., Japonsko) a 0,05 % silikonu (výrobek firmy Shinetsu Chemical Co., Japonsko). Tato směs byla kultivována 48 hodin při teplotě 30 °C a za promíchávání při 200 otáčkách za minutu a provzdušňování 160 litrů za minutu. Tento kultivační bujón (30 I) byl zaočkován do 3000 litrů produkčního média o pH 6,8, předem sterilizovaného 30 minut při 120 °C a obsahujícího 3 % rozpustného škrobu, 0,8 % pšeničných klíčků, 0,4 % sušených kvasnic, 0,6 % kukuřičného výluhu, 0,1 % uhličitanu vápenatého, 0,05% Adekanolu® a 0,05% silikonu ve fermentačním tanku ío o objemu 4000 litrů. Směs byla kvašena 168 hodin při 25 °C za promíchávání při 140 otáčkách za minutu a provzdušňování 1500 litrů za minutu.
Takto získaný kultivační bujón byl zfiltrován za použití 50 kg křemeliny (infusoriové hlinky). Myceliální koláče byly extrahovány 1000 litry acetonu k poskytnutí 1000 1 extraktu. Acetonový extrakt z myčeliálnich koláčů a filtrát (2 700 I) byly spojeny k poskytnutí surového vzorku.
Příklad 1
Oddělování kolonovou chromatografií za použití Diaion® HP20SS jako ne iontové adsorpční pryskyřice a eluentu s obsahem dusičnanu stříbrného
Směs (200 mg) látek tacrolimus, ascomycin a 17-propyl-l,14—dihydroxy-12-[2^4-hydroxy-3— methoxycyklohexyl)-!-methyl v inyl]-23,25-di-methoxy-l 3,19,21,27-tetramethyl-l 1,2825 dioxa-4-azatricyklo-[22.3.1.04’9]-oktakos-l8-en-2,3,10,16-tetraon (zde uváděný jako „látka
A”) v 50% vodném acetonu byla podrobena kolonové chromatografii za použití Diaionu® HP20SS (20 ml) tak, aby látky obsažené ve směsi byly adsorbovány.
Dále byly tacrolimus, ascomycin a sloučenina A eluovány při teplotě místnosti za použití
3o 50% (objem/objem) vodného acetonu, obsahujícího dusičnan stříbrný (0,294 mol.Γ1’ a 60% (objem/objem) vodného acetonu jako eluentů při zatížení 9,5 g/L-R sloučeniny, pokud se týká tacrolimu. Kontrolní test byl rovněž prováděn za stejného uspořádání, za použití vodného acetonu jako eluentu, neobsahujícího dusičnan stříbrný. Výsledky jsou znázorněny na obr. 1 a obr. 2.
Příklad 2
Oddělování kolonovou chromatografií za použití Diaion® HP20SS jako neiontové adsorpční pryskyřice a eluentu dusičnanu stříbrného
Surový vzorek (300 ml), získaný v Přípravném příkladu 1, byl podroben kolonové chromatografii za použití Diaion® HP20SS (20 ml) tak, aby obsažené látky byly adsorbovány. Kolona byla promyta 40% vodným acetonem (100 ml). Poté byla směs látek tacrolimus a 17—allyl—l,14— dihydroxy-12-(2-(3,4-dihydroxycyklohexyl)-l-methylvinyl]-23,25-di-methoxy-13,19,21,2745 tetramethyl-1 l,28-dioxa^4-azatricyklo[22.3.1.04,9]-oktakos-l 8-en-2,3,10,16-tetraon (zde uváděný jako „látka B“) eluována za použití 50% (objem/objem) vodného acetonu, obsahujícího dusičnan stříbrný (0,294 moll ') jako eluentu. Následně byla směs ascomycinu a sloučeniny A za stejných podmínek odděleně promyta za použití 60% (objem/objem) vodného acetonu.
Množství každé ze sloučenin, obsažených v takto získaných oddělených podílech, byla měřena analýzou prostřednictvím HPLC [mobilní fáze: acetonitril/10% vodný roztok etheru polyoxyethy lenlaurylalkoholu (Nakalai Tesque, lne., Kyoto, Japonsko)/voda v poměrech 40/10/50; kolona: TOSOH TSK-gel ODS-80Tm (5 pm, 4,6 x 150 mm); teplota 75 °C; vlnová délka pro detekci: 210 nm; rychlost toku: 1,0 ml/minutu; injikovaný objem: 20 μΙ]. Výsledky oddělování směsi látek tacrolimus a sloučenina B, ascomycin a sloučenina A jsou uvedeny v Tabulce 1.
-6CZ 302625 B6
Tabulka 1
číslo podílu | eluent | rozdělení směsi takrolimu a sloučeniny B | rozdělení ascomycinu * | rozdělení sloučeniny A ♦ |
0 | surový vzorek | 100 % | 100 % | 100 % |
1 | procházející kapalina | 0 % | 0 % | 0 % |
2 | 40% vodný aceton (promýv. kapalina) | 0 % | 0 % | 0 % |
3 | 50% vodný aceton, obs. AgNO3 (0,294 mot.l'1) | 97,7 % | 19,2 % | 0 % |
4 | 60% vodný aceton (výtlačná kapalina) | 0,3 % | 80,8 % | 90,7 % |
5 | 100% aceton (výtlačná kapalina) | 0 % | 0 % | 9,3 % |
* počítáno z poměru plochy maxima (píku) vzhledem k tacrolimu
Jak je z Tabulky 1 jasně zřejmé, tacrolimus, sloučenina B, ascomycin a sloučenina A nebyly eluovány procházející kapalinou (podíl 1) nebo promývací kapalinou (podíl 2). Byly pryskyřicí plně adsorbovány. Elucí roztokem dusičnanu stříbrného (podíl 3) byly shromážděny tacrolimus a sloučenina B a eluce sloučeniny A byla pod hranicí rozlišitelnosti. V podílu, vytlačeném 60% vodným acetonem (podíl 4), byly přibližně stoprocentně selektivně shromážděny ascomycin a sloučenina A.
Souhrnně, adsorbováním směsi sloučenin o vysoké molekulové hmotnosti s obsahem laktonu, majících jako postranní řetězec skupinu nižšího alkenylu (tacrolimus a sloučenina B) a sloučenin jim analogických (ascomycinu a sloučeniny B) na neiontovou adsorpční pryskyřici a elucí (promytím) vodným rozpouštědlem s obsahem stříbrných iontů lze oddělit sloučeniny o vysoké molekulové hmotnosti s obsahem laktonu, mající jako postranní řetězec skupinu nižšího alkenylu.
Výše uvedené výsledky dále ukazují, zeje rovněž možné oddělit sloučeniny o vysoké molekulové hmotnosti s obsahem laktonu, mající jako postranní řetězec skupinu nižšího alkylu (ascomycin a sloučenina A).
Příklad 3
Oddělování kolonovou chromatografií za použití zásadité aktivní aluminy, AC12
Podíly, obsahující směs látek tacrolimus a sloučenina B, získané v Příkladu 2, byly zahuštěny a extrahovány ethylacetátem. Organická vrstva byla vysušena síranem hořečnatým a poté odpařena do sucha. Získaný zbytek byl podroben kolonové chromatografíi za použití zásadité aktivní
-7CZ 302625 B6 aluminy. AC12 (20 ml), balené s ethylacetátem. Pří teplotě místnosti byla eluce prováděna za použití ethylacetátu (400 ml) jako eluentu a získány byly oddělené podíly (20 ml χ 1 a 200 ml x2).
Množství každé sloučeniny, obsažené v takto získaných oddělených frakcích, bylo měřeno analýzou pomocí HPLC stejným způsobem, jak bylo popsáno v Příkladu 2. Výsledky oddělení tacrolimu a sloučeniny B jsou uvedeny v Tabulce 2.
ío Tabulka 2
číslo podílu | množství kapaliny | tacrolimus | sloučenina B |
1 | 20 ml | 0% | 0 % |
2 | 100 ml | 59,7 % | 0 % |
3 | 100 ml | 10,4 % | 0 % |
celkem | 220 ml | 70,1 % | 0 % |
Jak je z Tabulky 2 jasně zřejmé, adsorbováním směsi sloučeniny o vysoké molekulové hmotnosti s obsahem laktonu, mající jako postranní řetězec skupinu nižšího alkoxylu (tacrolimus) a sloučeniny jí analogické (sloučenina B) na zásaditou aktivní aluminu a eluováním organickým rozpouštědlem je možné sloučeninu o vysoké molekulové hmotnosti s obsahem laktonu, mající jako postranní řetězec skupinu nižšího alkoxylu, oddělit.
Svrchu uvedené výsledky dále ukazují, že lze oddělit také sloučeninu o vysoké molekulové hmotnosti s obsahem laktonu, mající jako postranní řetězec hydroxylovou skupinu.
Tacrolimus, což je sloučenina o vysoké molekulové hmotnosti s obsahem laktonu, mající jako postraní řetězce skupinu nižšího alkenylu a skupinu nižšího alkoxylu, byl oddělen provedením postupu podle Příkladu 2 a Příkladu 3, tj. provedením kroku adsorpce neiontovou adsorpční pryskyřicí a elucí vodným rozpouštědlem s obsahem stříbrných iontů a kroku adsorpce zásaditou aktivní aluminou a elucí organickým rozpouštědlem v tomto pořadí nebo v obráceném pořadí z roztoku, obsahujícího směs tacrolimu a sloučeniny této látce analogické.
Podle předkládaného vynálezu lze sloučeninu s vysokou molekulovou hmotností a obsahem laktonu, mající jako postranní řetězec či řetězce alespoň jednu skupinu, zvolenou z nižší alkenylové skupiny a nižší alkoxylové skupiny, od analogické sloučeniny či sloučenin oddělit s neočekávaně vysokou účinností, provedením buď jednoho nebo obou kroků, kterými jsou krok adsorbování neiontovou adsorpční pryskyřicí a eluování vodným rozpouštědlem s obsahem stříbrných iontů a krok adsorbování zásaditou aktivní aluminou a eluování organickým rozpouštědlem.
-8CZ 302625 B6
Claims (12)
- PATENTOVÉ NÁROKY5 1. Způsob oddělování sloučeniny sobsahem laktonu, vyznačující se tím, že se směs sloučeniny sobsahem laktonu, mající základní chemickou strukturu l,14-dihydroxy-12[2-(4hydroxycyklohexyl)---l -methy lvinyTJ-23,25-di-methoxy-4 3,19,21,2 7-tetramethy 1-11,28dioxa—4-azatricyklo~[22.3.1.04,9]-oktakos-l 8-en-2,3,10,16-tetraonu a která má jako svůj postranní řetězec alespoň jednu skupinu, zvolenou z C26 alkenylové skupiny, Ci^ alkoxy lové io skupiny a jí analogických sloučenin či sloučeniny, podrobí buď jednomu nebo oběma krokům, v jakémkoli pořadí, kterými jsou:krok (A) pro adsorbování směsi na neiontovou adsorpční pryskyřici a eluování vodným rozpouštědlem, obsahujícím stříbrné ionty, a krok (B) pro adsorbování směsi na zásaditou aktivní alum inu a eluování organickým rozpouštědlem k oddělení každé ze sloučenin.
- 2. Způsob oddělování podle nároku 1, vyznačující se tím, že sloučenina s obsahem laktonu má jako své postranní řetězce jak C2-6 alkenylovou skupinu, tak i Ο·_6 alkoxylovou skupinu a odděluje se provedením kroků (A) a (B) v tomto nebo obráceném pořadí.25
- 3. Způsob oddělování podle nároku 1, vyznačující se tím, že sloučenina s obsahem laktonu má jako svůj postranní řetězec Ci 6 a I ken v lovou skupinu a odděluje se provedením kroku (A) .
- 4. Způsob oddělování podle nároku 1, vyznačující se tím, že sloučenina s obsahem 30 laktonu má jako svůj postranní řetězec alkoxylovou skupinu a odděluje se provedením kroku (B) .
- 5. Způsob oddělování podle nároku 2, vyznačující se tím, že C26 alkenylovou skupinou je jako postranní řetězec propenylová skupina a C|_6 alkoxylovou skupinou je jako postran35 ní řetězec methoxyskupina.
- 6. Způsob oddělování podle nároku 3, vyznačující se tím, že C2_6 alkenylovou skupinou je jako postranní řetězec propenylová skupina.40
- 7. Způsob oddělování podle nároku 4, vyznačující se tím, že C i_6 alkoxylovou skupinou je jako postranní řetězec methoxyskupina.
- 8. Způsob oddělování podle nároku 1, vyznačující se tím, že neiontová adsorpční pryskyřice má částečnou strukturu, která se charakterizuje vzorcem:-9CZ 302625 B6 kde Rje vodíkový atom nebo halogenový atom.
- 9. Způsob oddělování podle nároku 2, vyznačující se tím, že jako analogická slou5 čenina se používá sloučenina s obsahem laktonu, mající jako své postranní řetězce místo C?_6 alkenylové skupiny C alkylovou skupinu a místo C|_6 alkoxyskupiny hydroxyskupinu.
- 10. Způsob oddělování podle nároku 3, vyznačující se tím, že jako analogická sloučenina se používá sloučenina s obsahem laktonu, mající jako své postranní řetězce místo C2_(1 io alkenylové skupiny C]_6 alkylovou skupinu.
- 11. Způsob oddělování podle nároku 4, vyznačující se tím, že jako analogická sloučenina se používá sloučenina s obsahem laktonu, mající jako své postranní řetězce místo Ct^ alkoxyskupiny hydroxyskupinu.
- 12. Způsob oddělování podle nároku 5 nebo 6, vyznačující se tím, že propenylovou skupinou je allyl.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP25381399 | 1999-09-08 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ2002860A3 CZ2002860A3 (cs) | 2002-08-14 |
CZ302625B6 true CZ302625B6 (cs) | 2011-08-10 |
Family
ID=17256507
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ20020860A CZ302625B6 (cs) | 1999-09-08 | 2000-09-05 | Zpusob oddelování sloucenin s vysokou molekulovou hmotností s obsahem laktonu |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6576135B1 (cs) |
EP (1) | EP1210351B1 (cs) |
JP (1) | JP3925198B2 (cs) |
CN (1) | CN1195760C (cs) |
AR (1) | AR025598A1 (cs) |
AT (1) | ATE263773T1 (cs) |
AU (1) | AU779331B2 (cs) |
BR (1) | BR0014016B1 (cs) |
CA (1) | CA2384440C (cs) |
CZ (1) | CZ302625B6 (cs) |
DE (1) | DE60009723T2 (cs) |
DK (1) | DK1210351T3 (cs) |
ES (1) | ES2214307T3 (cs) |
HK (1) | HK1048991A1 (cs) |
HU (1) | HU230126B1 (cs) |
MX (1) | MXPA02002370A (cs) |
NO (1) | NO328422B1 (cs) |
NZ (1) | NZ517473A (cs) |
PL (1) | PL195650B1 (cs) |
PT (1) | PT1210351E (cs) |
RU (1) | RU2245338C2 (cs) |
TR (1) | TR200200593T2 (cs) |
TW (1) | TW553946B (cs) |
WO (1) | WO2001018007A2 (cs) |
Families Citing this family (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW553946B (en) * | 1999-09-08 | 2003-09-21 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Method for separating lactone-containing high-molecular weight compounds |
US7452692B2 (en) | 2002-02-13 | 2008-11-18 | Teva Gyógyszergyár Zártkörüen Müködö Részvénytársaság | Method for extracting a macrolide from biomatter |
EP1474404A4 (en) | 2002-02-13 | 2006-01-11 | Biogal Gyogyszergyar | PROCESS FOR EXTRACTION OF A BIOLOGICAL MATERIAL |
CA2533548C (en) * | 2003-07-24 | 2010-02-16 | Teva Gyogyszergyar Reszvenytarsasag | Method of purifying macrolides |
CA2548297C (en) * | 2003-12-05 | 2011-06-14 | Biocon Limited | Process for the purification of macrolides |
CA2562805C (en) * | 2004-04-12 | 2014-03-11 | Biocon Limited | Process for the production of macrolides using a novel strain, streptomyces sp. bicc 7522 |
CA2580127A1 (en) * | 2004-09-10 | 2006-03-23 | Ivax Pharmaceuticals S.R.O. | Process for isolation of crystalline tacrolimus |
ITMI20042098A1 (it) * | 2004-11-03 | 2005-02-03 | Antibioticos Spa | Processo per la purificazione di tacrolimus |
JP2007519758A (ja) * | 2004-12-01 | 2007-07-19 | テバ ジョジセルジャール ザ−トケルエン ムケド レ−スベニュタ−ルシャシャ−グ | 結晶マクロライドの生成方法 |
WO2006069333A1 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-29 | Teva Gyógyszergyár Zàrtköruen Muködo Rèszvènytàrsasàg | Method of purifying macrolides |
WO2006083486A1 (en) * | 2005-01-05 | 2006-08-10 | TEVA GYÓGYSZERGYÁR ZÁRTKöR..EN M..k..D.. RÉSZVÉNYTÁRSASÁG | Amorphous tacrolimus and preparation thereof |
WO2007013017A1 (en) * | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Ranbaxy Laboratories Limited | A process for purification of macrolides |
ITMI20051549A1 (it) * | 2005-08-05 | 2007-02-06 | Antibioticos Spa | Purificazione del tacrolimus su supporti dimorigine vegetale |
JP4700022B2 (ja) * | 2006-03-15 | 2011-06-15 | アイバックス ファーマシューティカルズ スポレツノスト エス ルチェニム オメゼニム | タクロリマスの精製方法 |
WO2007106587A2 (en) * | 2006-03-15 | 2007-09-20 | Teva Gyogyszergyar Zartköruen Muködo Reszvenytarsasag | Process for purifying tacrolimus |
JP5602626B2 (ja) * | 2007-06-29 | 2014-10-08 | アーティフィシャル マッスル,インク. | 感覚性フィードバック用途のための電気活性ポリマートランスデューサー |
KR101022067B1 (ko) | 2008-05-30 | 2011-03-17 | 이연제약주식회사 | 고순도 타크로리무스의 회수방법 |
KR100910165B1 (ko) | 2008-09-18 | 2009-07-30 | (주) 제노텍 | 은 이온 용액 추출을 이용한 불포화 알킬기를 가진 락톤 화합물 정제방법 |
US20110318277A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | APT Pharmaceuticals, Inc. University of Maryland, Baltimore | Tacrolimus compositions for aerosol administration |
JP6210983B2 (ja) | 2012-07-06 | 2017-10-11 | 合同酒精株式会社 | 環状マクロライド系化合物の分離方法 |
RU2694354C1 (ru) * | 2018-09-25 | 2019-07-11 | Закрытое акционерное общество "БиоХимМак СТ" | Способ сорбционно-хроматографического выделения и очистки такролимуса |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2157682A (en) * | 1984-03-09 | 1985-10-30 | Glaxo Group Ltd | Recovering ceftazidime |
EP0382173A2 (en) * | 1989-02-07 | 1990-08-16 | Meiji Seika Kaisha Ltd. | PF 1022 substance, method of producing same and anthelmintic composition containing same |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU600187B2 (en) * | 1987-12-15 | 1990-08-02 | Unilever Plc | Process for concentrating lactones, as well as the use of the concentrate thus obtained for flavouring foodstuffs |
JPH03191788A (ja) | 1989-12-19 | 1991-08-21 | Nippon Kayaku Co Ltd | 新規抗生物質nk155141およびその製造法 |
TW553946B (en) * | 1999-09-08 | 2003-09-21 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Method for separating lactone-containing high-molecular weight compounds |
-
2000
- 2000-08-29 TW TW089117479A patent/TW553946B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-09-05 RU RU2002108718/04A patent/RU2245338C2/ru active
- 2000-09-05 AT AT00956935T patent/ATE263773T1/de active
- 2000-09-05 WO PCT/JP2000/006023 patent/WO2001018007A2/en active IP Right Grant
- 2000-09-05 TR TR2002/00593T patent/TR200200593T2/xx unknown
- 2000-09-05 CZ CZ20020860A patent/CZ302625B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-09-05 JP JP2001522230A patent/JP3925198B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-05 BR BRPI0014016-3A patent/BR0014016B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-09-05 AU AU68713/00A patent/AU779331B2/en not_active Expired
- 2000-09-05 NZ NZ517473A patent/NZ517473A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-09-05 DK DK00956935T patent/DK1210351T3/da active
- 2000-09-05 HU HU0203196A patent/HU230126B1/hu unknown
- 2000-09-05 EP EP00956935A patent/EP1210351B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-05 CA CA002384440A patent/CA2384440C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-05 US US10/069,964 patent/US6576135B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-05 PT PT00956935T patent/PT1210351E/pt unknown
- 2000-09-05 PL PL00353802A patent/PL195650B1/pl unknown
- 2000-09-05 DE DE60009723T patent/DE60009723T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-05 MX MXPA02002370A patent/MXPA02002370A/es active IP Right Grant
- 2000-09-05 CN CNB008125864A patent/CN1195760C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-05 ES ES00956935T patent/ES2214307T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-07 AR ARP000104697A patent/AR025598A1/es active IP Right Grant
-
2002
- 2002-03-01 NO NO20021024A patent/NO328422B1/no not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-02-17 HK HK03101134A patent/HK1048991A1/xx unknown
- 2003-04-07 US US10/407,168 patent/US6881341B2/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2157682A (en) * | 1984-03-09 | 1985-10-30 | Glaxo Group Ltd | Recovering ceftazidime |
EP0382173A2 (en) * | 1989-02-07 | 1990-08-16 | Meiji Seika Kaisha Ltd. | PF 1022 substance, method of producing same and anthelmintic composition containing same |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
OKA. H. et al: "Separation of antibiotics by conter-current chromatography" Journal of chromatography, 3.7.1998, vol. 812 no. 1-2, str. 35-52 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ302625B6 (cs) | Zpusob oddelování sloucenin s vysokou molekulovou hmotností s obsahem laktonu | |
US5441977A (en) | 21-norrapamycin | |
Pettit et al. | Antineoplastic agents. 277. Isolation and structure of phakellistatin 3 and isophakellistatin 3 from a Republic of Comoros marine sponge | |
CZ300783B6 (cs) | Zpusob oddelování sloucenin | |
CN109912604B (zh) | 喹唑啉酮生物碱类化合物及其制备方法和在制备肝x受体激动剂中的应用 | |
CN109810919B (zh) | 一类安莎全碳环聚酮类抗生素及其在制备抗菌药物或抗肿瘤药物中的应用 | |
CN108484626B (zh) | 螺环化蒽醌类化合物及其制备方法和在制备钙通道激动剂中的应用 | |
CN1298722C (zh) | 吲哚咔唑生物碱及其制备方法和用途 | |
CN114989126A (zh) | 一种嗜氮酮类化合物及其制备方法和用途 | |
CN109295125B (zh) | 安莎霉素类化合物及其制备方法与应用 | |
CN108676013B (zh) | 具有自噬激活活性的黄醇酮类化合物、其制备方法及其制药应用 | |
JP5461082B2 (ja) | ストレプトミセス属に属する新規微生物、その微生物が産生する新規化合物、及びその化合物を有効成分とする医薬 | |
RU2089614C1 (ru) | Противоопухолевый антибиотик вму-46164 и способ его получения | |
CN115536616B (zh) | 一种珊瑚球菌来源的重排甾体化合物及其制备方法与应用 | |
KR101033845B1 (ko) | 은 이온 용액 결정화에 의한 불포화 알킬기를 가진 락톤 화합물 정제방법 | |
CN1259330C (zh) | 七烯大环内酯聚酮抗生素fr-008复合物 | |
CZ284121B6 (cs) | Seskviterpeny, způsob jeho přípravy a farmeceutické nebo veterinární přípravky je obsahující | |
JP2009249319A (ja) | 新規マクロライド化合物 | |
JP2009051745A (ja) | 新規抗腫瘍性マクロライド化合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MK4A | Patent expired |
Effective date: 20200905 |