MXPA02002370A

MXPA02002370A - Metodo para separar compuestos de alto peso molecular que contienen lactona.

Info

Publication number: MXPA02002370A
Application number: MXPA02002370A
Authority: MX
Inventors: Tomoji Higaki
Original assignee: Fujisawa Pharmaceutical Co
Priority date: 1999-09-08
Filing date: 2000-09-05
Publication date: 2002-08-20
Also published as: EP1210351B1; TR200200593T2; US20030168409A1; AU779331B2; CZ302625B6; HUP0203196A3; US6881341B2; NO20021024D0; PT1210351E; PL195650B1; NZ517473A; US6576135B1; AU6871300A; ES2214307T3; BR0014016A; CZ2002860A3; ATE263773T1; DK1210351T3; HU230126B1; CN1373764A

Abstract

Se describe un metodo para separar un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona, que comprende someter una mezcla de un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona, que tiene, como su cadena lateral, por lo menos uno de un grupo alquenilo inferior y un grupo alcoxi inferior y sus compuestos analogos, a uno o ambos de los siguientes pasos en cualquier orden: un paso (A) para la adsorcion de la mezcla a una resina de adsorcion no ionica y la elucion con un solvente acuoso que contiene iones de plata, y un paso (B) para la adsorcion de la mezcla a una alumina activa basica y la elucion con un solvente organico, a los efectos de separar cada uno de los compuestos.

Description

MÉTODO PARA SEPARAR COMPUESTOS DE ALTO PESO MOLECULAR QUE CONTIENEN LACTONA CAMPO TÉCNICO La presente invención se refiere a un método para separar compuestos análogos de alto peso molecular que contienen lactona, más particularmente, un método para separar compuestos de alto peso molecular que contienen lactona, que tiene diferentes .cadenas laterales ( si de ch a i n s ) por medio de la utilización de una resina de adsorción no iónica y/o alúmina activa básica.

ANTECEDENTES DE LA ESPECIALIDAD El uso de iones de plata ha sido conocido para separar cis-trans isómeros de un ácido alifático insaturado que tiene el mismo número de átomos de carbono ( J. Ch roma t ography, 1 49 (1 978 ) 41 7 - ) . Sin embargo, ha sido dificil separar compuestos análogos que son de manera leve y parcial diferentes en sus estructuras moleculares mediante los procesos usuales, debido a que los mismos tienen el mismo o casi el mismo número de átomos de carbono y de acuerdo con ello son similares entre si en sus ÍJ *t .* propiedades físicas tales como una solubilidad y afinidad hacia los solventes.

REVELACIÓN DE LA INVENCIÓN Los inventores de la presente invención han realizado estudios extensivos para encontrar un método efectivo para separar compuestos análogos que se parezcan entre si en sus propiedades físicas sin cambiar su estructura química. De manera inesperada, ellos encontraron un método para separar compuestos análogos de alto peso molecular que contienen lactona, que tienen diferentes cadenas laterales por medio de la utilización de una resina de adsorción no iónica y un eluyente apropiado y/o alúmina activa básica y un eluyente apropiado. La presente invención proporciona un método para separar un compuesto análogo de alto peso molecular que contiene lactona, que comprende someter una mezcla de un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene como su cadena lateral, por lo menos uno de un grupo alquenilo inferior y un grupo alcoxi inferior y sus compuestos análogos para ya sea uno o ambos pasos en el orden de cualquiera de: un paso (A) para la adsorción de la mezcla a una resina de adsorción no iónica y la elución con un solvente acuoso que contiene iones de plata, y un paso (B) para la adsorción de la mezcla a una alúmina activa básica y eluir con un solvente orgánico apropiado para separar cada uno de los componentes . Con preferencia, de acuerdo con la presente invención, tanto el paso (A) como el paso (B) se llevan a cabo para separar un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona, que comprende someter una mezcla de un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona, que tiene como sus cadenas laterales, tanto un grupo alquenilo inferior, como un grupo alcoxi inferior de su compuesto análogo o sus compuestos análogos. Uno cualquiera de los pasos (A) o (B) puede ser conducido en primer lugar, pero, por lo general, el paso (A) puede con preferencia ser conducido en primer lugar. El paso (A) es con preferencia conducido para separar un compuesto análogo de alto peso molecular que contiene lactona, que tiene como su cadena lateral, un grupo alquenilo inferior de su compuesto o sus compuestos análogos.

El paso (B) es con preferencia conducido para separar un compuesto análogo de alto peso molecular que contiene lactona, que tiene como su cadena lateral, un grupo alcoxi inferior de su compuesto o sus compuestos análogos. Los compuestos de alto peso molecular que contiene lactona para los cuales es posible aplicar el método de separación de la presente invención significa aquellos que tienen uno o más anillos de lactona en sus moléculas y que tienen un peso molecular de aproximadamente 400 o más. Los mismos pueden tener una estructura de anillo básica monociclica, biciclica triciclica o similar. Con mayor preferencia, el número de átomos miembros que forman tal estructura de anillo básica es de 12 o más. Tales compuestos monociclicos incluyen eritromicinas, leucomicinas , metimicinas y demás por el estilo. Tales compuestos triciclicos que tienen un anillo de lactona incluyen los compuestos triciclicos, de la manera como se muestra en EP0184162; compuestos triciclicos que contienen heteroátomos, de la manera como se muestra en EPO427680, EPO532088 o W093/04680. Y los compuestos triciclicos de preferencia que tienen un anillo de lactona son: 1 , 14 -dihidrox i - 12 - [ 2 - 4 -hidroxi - 4 * .. . . ciclohexil)-l-l-metilvinil]-23-25-dimetoxi-13,19, 21 , 27-tetrametil, 11 , 28 -dioxa- 4 azatriciclo [22. 3.1.0 4.9 octacos-18-ene-2, 3, 10, 16-tetraona r e ferido como "Compuesto Z" de aqui en adelante) (lo cual es t a c rol i m u s cuando la posición décimo séptima es substituida con el grupo alilo y la tercera posición es substituida con el grupo metoxi y ascomicina cuando la posición décimo séptima es substituida con el grupo etilo y la tercera posición es substituida con el grupo metoxi) , rapamisinas o similares. Entre estos compuestos, los compuestos triciclicos son preferibles y el Compuesto Z es de mayor preferencia . El grupo alquenilo inferior como la cadena lateral en los compuestos de alto peso molecular que contiene lactona pueden ser grupos alquenilos de cadena lineal o de cadena ramificada que tiene 2 a 6 átomos de carbono, tales -orno vinilo, propenilo (alilo o l-propenilo), butenilo, isobutenilo, pentenilo, hexenilo y similares, entre los cuales son preferidos el vinilo y el propenilo. Los grupos alcoxi inferiores como la cadena lateral en los compuestos de alto peso molecular que contiene lactona pueden ser grupos alcoxi de cadena lineal o de cadena ramificada que tienen de 1 a 6 •ifl fellil-f átomos de carbono, tales como metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, sec-butoxi, ter-butoxi, pentiloxi, i sopent i loxi , hexiloxi y similares, entre los cuales son preferidos aquellos que tienen de 1 a 4 átomos de carbono tales como metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi y similares. En especial, el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona, para ser separado de acuerdo con la presente invención, el cual tiene por lo menos uno del grupo alquenilo inferior y del grupo alcoxi inferior como la cadena lateral es con preferencia uno que contiene el Compuesto Z como su estructura química básica en la cual, el grupo alquenilo inferior es el grupo propenilo y el grupo alcoxi inferior es el grupo metoxi, uno que contiene el compuesto Z como su estructura química de base en la cual el grupo alquenilo inferior es el grupo propenilo o uno que contiene el Compuesto Z como su estructura de base, en la cual el grupo alcoxi inferior es el grupo metoxi. Los compuestos análogos al compuesto de alto peso molecular que contiene lactona al c .al se aplica el método de separación de la presente invención, significan los compuestos que tienen la misma o substancialmente la misma estructura química como el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que se ha descrito con anterioridad, pero que tiene un sustituyente diferente o sustituyentes diferentes como su cadena lateral o sus cadenas laterales. Por ejemplo, los compuestos análogos a uno que tiene los grupos alquenilos inferiores como su cadena lateral, pueden ser aquellos que tienen la misma estructura química de base pero que tienen un grupo alquilo inferior, un grupo alcoxi inferior, un grupo hidroxi o similar en lugar del grupo alquenilo inferior en la misma posición. Tales compuestos análogos incluyen aquellos que tienen una estructura química básica algo diferente en otras partes que en la posición de sustitución mencionada con anterioridad, pero que presenta propiedades similares como una totalidad. Preferidos en particular, los compuestos análogos al compuesto de alto peso molecular que contiene lactona tiene un grupo alquenilo inferior como su cadena lateral, pueden ser aquellos que tienen un grupo alquilo inferior en lugar del grupo alquenilo inferior, los compuestos análogos a aquel que tiene un grupo alcoxi en lugar del grupo alcoxi inferior, y los compuestos análogos al compuesto de alto peso molecular que contiene lactona tienen un grupo alquenilo inferior y un grupo alcoxi inferior como sus diferentes cadenas laterales, pueden ser aquellos que tienen un grupo alquilo inferior en lugar del grupo alquenilo inferior y/o un grupo hidroxi o similar en lugar del grupo alcoxi inferior . El grupo alquilo inferior como cadena lateral en los compuestos de alto peso molecular que contienen lactona pueden ser grupos alquilos de cadena lineal o de cadena ramificada que tienen de 21 a 6 átomos de carbono, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, isopentilo, hexilo y similares, entre los cuales los preferidos son aquellos que tienen de 1 a 4 átomos de carbono, tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo y similares. La adsorción de la mezcla que contiene el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene por lo menos uno del grupo alquenilo inferior y del grupo alcoxi inferior como sus cadenas laterales y sus compuestos análogos en la resina de adsorción no iónica o la alúmina activa básica y la elución del compuesta objeto a partir k * - 2* del adsorbente de acuerdo con la presente invención, se puede llevar a cabo de la siguiente manera. Por ejemplo, en el caso en el cual una mezcla del compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene por lo menos uno del grupo alquenilo inferior y del grupo alcoxi inferior y su cadena lateral y sus compuestos análogos se obtienen por medio de la fermentación, la manera de someter la mezcla al método de separación depende de si estos compuestos son producidos por bacteria, es decir, de manera extra celular o si los mismos son producidos por bacterias en el interior, es decir, de manera intracelular. Si los mismos son producidos de manera extracelular, la mezcla del liquido de fermentación es sujeto al método de separación de la invención. Si los compuestos son producidos de manera intracelular, las bacterias son tratadas con un solvente apropiado y la mezcla liquida del extracto resultante es sometida a continuación al método de separación de la invención. La mezcla del liquido de fermentación o la mezcla del liquido del extracto, de la manera como esta o luego de concentrarse, puede ser vertida dentro de una columna o similar llena con un adsorbente. De manera alternativa, el liquido de fermentación o el liquido jl -&«% -í -A fcA i -del extracto puede ser concentrado hasta su secado para dar un residuo y luego el residuo puede disolverse en un solvente apropiado para dar una solución, la cual es vertida dentro de la columna o algo s imi lar . Si una mezcla de un compuesto de alto peso molecular que cor iene lactona que tiene por lo menos uno del grupo alquenilo inferior y del grupo alcoxi inferior como su cadena lateral y sus compuestos análogos se obtienen por medio de la sintesis, el liquido de la reacción o liquido del extracto, de la manera como está o después de concentrado, puede ser vertido dentro de una columna o similar llena con un adsorbente. De manera alternativa, el liquido de la reacción o liquido del extracto, puede ser concentrado hasta su secado para dar un residuo, y luego ese residuo puede ser disuelto en un solvente apropiado para dar una solución, la cual es vertida dentro de una columna o s imi lar. El compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene por lo menos uno del grupo alquenilo inferior y del grupo alcoxi inferior y sus cadenas laterales y sus compuestos análogos contenidos en la mezcla son eluidos de manera i i-^ ^ «S í -. selectiva de acuerdo con su afinidad al adsorbente y al eluyente y el eluyente combinado que contiene el compuesto deseado es concentrado hasta su secado. De esta manera, es separado el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona. La resina de adsorción no iónica que se utiliza como adsorbente puede ser una resina de polietileno que tiene una estructura parcial representada por la fórmula: en la cual, R es un átomo de hidrógeno o halógeno. De manera especifica, son utilizados con preferencia Diaion® HP 20, Diaion® HP 20SS, Sepabeads® SP207 (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation, Japan), o similares. Por ejemplo, en el caso en el cual la estructura química básica del compuesto de alto peso molecular que contiene lactona es el Compuesto Z, es por lo general preferible utilizar el Diaion® HP 20SS. ^» ^ >% Para efectuar la elución del compuesto de alto peso molecular que contiene lactona con adsorción por medio de la resina de adsorción no iónica, se utiliza un solvente acuoso que contiene iones de plata. Como una sal de plata contenida en el solvente acuoso que contiene iones de plata, se prefiere el nitrato de plata, el perclorato de plata o similar, que existe como iones de plata en agua, entre los cuales se prefiere el nitrato de plata en el caso en el cual la estructura química básica del compuesto de alto peso molecular que contiene lactona es el Compuesto Z, por ejemplo. La concentración de los iones de plata varia dependiendo de la naturaleza del compuesto de alto peso molecular que contiene lactona a ser separado, pero el mismo puede ser por lo general de 0.059 hasta 1.18 mol/L, con preferencia de 0.12 a 0.59 mol/L, con mayor preferencia, de 0.18 hasta 0.47 mol/L, aún con más preferencia, de 0.24 hasta 0.35 mol/L en términos de Ag+ . Como un medio acuoso para el solvente acuoso que contiene iones de plata, es posible mostrar a modo de ejemplo, una acetona acuosa, un alcohol acuoso, (por ejemplo, metanol y etanol), un acetonitrilo acuoso, o similar. Por ejemplo, una acetona acuosa puede ser utilizada con preferencia en el caso en el cual la estructura química básica del compuesto de alto peso molecular que contiene lactona es el Compuesto Z. La alúmina activ.. básica utilizada como el adsorbente puede con preferencia ser AC12 (nombre de marca fabricado por S umí t o n o Ch emi c a l Compa ny , Li mi t ed , Japa n ) en el caso en el cual la estructura química básica del compuesto de alto peso molecular que contiene lactona es el Compuesto Z, por ejemplo. Se utiliza un solvente orgánico para eluir el compuesto de alto peso molecular adsorbido por la alúmina activa, básica. El solvente orgánico que se utiliza como eluyente puede ser uno convencional tal como acetato de etilo, acetona, diclorometano, una mezcla de cloroformo y metanol, una mezcla de acetato de etilo y n-hexano o similar. Por ejemplo, es posible utilizar con preferencia acetato de etilo en el caso en el cual la estructura química básica del compuesto de alto peso molecular que contiene lactona es el Compuesto Z. El tipo de eluyente y, en el caso en el. que el eluyente es un solvente mezclado, la proporción de la misma es seleccionada con preferencia de acuerdo con la naturaleza del compuesto de alto peso ni--* &. ,i t : *. , -i molecular que contiene lactona a ser separado a través de análisis preliminar tal como cromatografia de capa fina (TLC) o similar. La cantidad del adsorbente es con preferencia 50 veces más grande que el peso del compuesto de alto peso molecular que contiene lactona en el caso en el cual el adsorbente es una resina de adsorción no iónica, y con preferencia 70 veces más grande que el peso de los compuestos de alto peso molecular que contienen lactona en el caso en el cual el adsorbente es una alúmina activa básica . La velocidad de flujo SV del solvente eluyente varia dependiendo del tamaño de la partícula del adsorbente, y puede ser por lo general de aproximadamente 3 a 5 mL/min e' el caso de la resina de adsorción no iónica y de manera usual de aproximadamente 3 a 5 mL/min en el caso de la alúmina activa básica. Las fracciones que contienen el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona, tiene por lo menos uno del grapo alquenilo inferior y del grupo alcoxi inferior como sus cadenas laterales, puede ser detectado por medio de un detector visible ultravioleta o un detector de Índice refractivo diferencial, o mediante cromatografia de capa fina (TLC) después de obtener varias fracciones. Las fracciones que contienen una substancia deseada son combinadas y evaporadas hasta su secado bajo presión reducida, por medio de lo cual la substancia deseada es pur i f icada . Aun cuando la presente invención es el método de separación para un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene por lo menos uno del grupo alquenilo inferior y del grupo alcoxi inferior como sus cadenas laterales, es posible separar además un compuesto análogo que permanece de los otros compuestos análogos después de la separación del compuesto de alto peso molecular que contiene lactona. Por ejemplo, un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene un grupo alcoxi inferior como su cadena lateral es separado de una mezcla que contiene el compuesto de alto peso molecular y un compuesto análogo que tiene substancialmente la misma estructura química básica y que tiene un grupo hidroxi como su cadena lateral, y luego, la invención puede ser aplicada de nuevo para separar el compuesto análogo por medio de la elución utilizando un solvente que tiene una polaridad di férente .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es un diagrama que muestra la separación por i omatografia de columna que utiliza Di a i on® HP 20 SS , y una acetona acuosa como un eluyente . La Figura 2 es un diagrama que muestra la separación por cromatografia de columna que utiliza Di a i on® HP 20 S S , y nitrato de plata que contiene acetona acuosa (0.294 mol/L) como un eluyente.

LA MEJOR MANERA DE LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN La presente invención se explicará ahora en detalle por medio de ejemplos, lo cual es solamente para ilustrar la invención y no se deberla construir para limitar el ámbito de la invención.

Preparación del Ejemplo 1 La preparación de una mezcla que contiene un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene por lo menos uno del grupo alquenilo inferior y del grupo alcoxi inferior como ** ? A í i -t ?. iiA I 4 ji sus cadenas laterales y sus compuestos análogos, por medio de la fermentación. Un medio de cultivo (100 L ) que contiene 1% de almidón de maiz, 1% de glicerina, 0.5% de glucosa, 1% de pulpa de semilla de algodón, 0.5% de levadura seca, 0.5% de licor de infusión de maiz y 0.2% de carbonato de calcio fue ajustado a un pH de 6.5, vertido dentro de ocho frascos Erlenmeyer de 500 ml y esterilizado a 120°C durante 30 minutos. Un anillo lleno ( loop ful) de cultivo oblicuo (slant culture) de Streptomyces tsukubaensi s N° 9993 (Depósito N° FERM BP-927 en el "National Institute of Bioscience and Human Technology , Agency of Industrial Science and technology , Japón, bajo el Tratado de Budapest) fue inoculado al medio en cada uno de los frascos y cultivado a 30°C durante 72 horas en una criba oscilante (rotary shaker) . Este caldo de cultivo fue transferido como un cultivo semilla a 160L del mismo medio, el cual fue contenido en una vasija de fermentación pre-esterilizada a 120°C durante 30 minutos y al cual se ha agregado 0.05% de Adekanol® (un agente espumante, marca de fabrica, elaborado por Asahi Denka Co . , Japón) y 0.05% de silicona (fabricado por Shinetsu Chemi cal Co. , Japón) . Este fue cultivado a 30°C durante 48 horas con agitación a 200 rpm bajo aireación de 160 L/min. Este caldo de cultivo (30 L) fue inoculado a 3.000 L de un medio de producción de pH 6.8, pre-esterilizado a 120°C durante 30 minutos, 5 que contiene 3% de un almidón soluble, 0.8% de germen de trigo, 0.4% de levadura seca, 0.6% de licor de infusión de maiz, 0.1% de carbonato de calcio, 0.05% de Adekanol® y 0.05% de silicona en un tanque de 4.000 L y fue fermentado a 25°C durante 10 168 horas con agitación a 140 rpm bajo aireación de 1.500 L/min. El caldo de cultivo obtenido de esta manera fue filtrado por medio de la utilización de 50 kg de sierra diatomaceous. Fueron extraídas tortas de 15 micelión (Mycelial cakes) con 1.000 L de acetona para dar un extracto de 1.000 L. El extracto de acetona a partir de las tortas de micelión y el filtrado (2.700 L) fueron combinados para dar una muestra cruda 20 Ejemplo 1 Separación por medio de columna de cromatografia utilizando Diaion® HP 20SS como una resina de adsorción no iónica y un eluyente que 25 contiene nitrato de plata. ,* ^ >* *~**.* - .

Una mezcla (200 mg) de tacrolimus , ascomycin y 17 -propi 1- 1 , 14 -di-hidroxi- 12 - [ 2- ( 4 -hidroxi- 3-metoxiciclohexil) -1-metilvinil] -23, 25-di -metoxi-13,19,21, 27 - 1 e t r ame t i 1- 11 , 28-dioxa-4-azatri-ciclo[22.3.1.04]octacos-18-ene-2,3,10,16-tetraona (referida como "Compuesto A" de aqui en adelante) en 50% de acetona acuosa fue sometido a cromatografia de columna mediante la utilización de Diaion® HP 20SS (20 mL), de manera tal, que las sustancias contenidas en la mezcla fueron adsorbidas. A continuación, fueron eluidos a temperatura ambiente, tacrolimus , ascomicina y el Compuesto A mediante el uso de 50% (v/v) de acetona acuosa que contiene nitrato de plata (0.294 mol/L) y un 60%(v/v) de acetona acuosa como eluyentes a una carga de 9.5 g/L-R en términos de tacrolimus . Una prueba de control fue de igual modo llevada a cabo de la misma manera por medio de la utilización de acetona acuosa como un eluyente que no contiene nitrato de plata. Los resultados se muestran en la Figura 1 y en la Figura 2.

Ejemplo 2 Separación por medio de columna de cromatografia utilizando Diaion® HP 20SS como una Ui 1 i4 kt . ?> ¿, * I . resina de adsorción no iónica y un eluyente de nitrato de plata. La muestra cruda (300 mL ) obtenida en la Preparación del Ejemplo I fue sometida a columna de cromatografia utilizando Di a i on® HP 20 SS de manera tal que las sustancias contenidas fueron adsorbidas. La columna fue lavada con 40% de acetona acuosa (100 mL) . A continuación una mezcla de t a c rol im u s y 17 alilo-l,14-di-hidroxi-12-[2-(3,4-dihidroxiciclo-hexil)-l-metilv?nil]-23,25-dimetoxi-13,19,21,27-tetrametil-11 , 28-dioxa-4-azatriciclo [22.3.1.04] -octacos- 18-ene-2 , 3 , 10 , 16- tet raona (referida como "Compuesto B" de aqui en adelante), fueron eluidos a temperatura ambiente por medio de la utilización como un eluyente al 50% (v/v) de acetona acuosa que contiene nitrato de plata (0.294 mol/L) . De manera subsiguiente, bajo las mismas condiciones, fueron eluidos de manera separada, ascomicma y el Compuesto B por medio de la utilización de un 601 (v/v) de acetona acuosa. La cantidad de cada compuesto contenido en las fracciones separadas obtenidas de esta manera fueron medidas por análisis HPLC (fase móvil: acetoni tri lo/ 10 % de solución acuosa de éter de alcohol lauril de Polioxietileno { Nak a l a i Te s qu e , ¿' «^ ,t I Inc. , Kyoto, Japón) /agua = 40/10/50; columna: gel TOSOH TSK ODS -80Tm (5µm, 4,6 f x 150 mm ) ; temperatura: 75°C longitud de onda para detección: 210 nm; velocidad de flujo: 1.0 mL/min; cantidad de 5 inyección: 20 µL) . Los resultados de la separación de una mezcla de tacrolimus y Compuesto B, ascomicina y Compuesto A se muestran en la Tabla 1. TABLA 1 * calculado de la proporción de área pico 10 con respecto al tacrolimus . Tal como se ve con claridad en la Tabla 1, el tacrolimus, el Compuesto B, la ascomicina y el iSia-"^-n.^ a i ..

Compuesto A no fueron eluidos en el liquido de paso (fracción 1) o en el liquido de lavado (fracción 2) . Los mismos fueron absorbidos de manera completa por la resina, por medio de la elución con la solución de nitrato de plata (fracción 3), el t a crol i m u s y el Compuesto B fueron recolectados, aproximadamente en el 100%, y la elución del Compuesto A por debajo del nivel detectable. En la fracción extruida por el 60% de acetona acuosa (fracción 4), la ascomicina y el Compuesto A fueron recolectados de manera selectiva, aproximadamente el 100%. En resumen, por medio de la adsorción de la mezcla que tiene compuestos de alto peso molecular que contienen lactona que tienen un grupo alquenilo inferior como sus cadenas laterales ( t a crol i m u s y Compuesto B) y sus compuestos análogos (ascomicina y Compuesto A) a la adsorción de la resina no iónica y a la elución con solvente acuoso que contiene iones de plata, es posible separar los compuestos de alto peso molecular que contienen lactona que tienen un grupo alquenilo inferior como sus cadenas laterales. Además, los resultados descritos con anterioridad muestran que los compuestos de alto peso molecular que contienen lactona que tienen un grupo alquilo inferior como sus cadenas laterales (ascomicina y Compuesto A), de igual modo fueron separados .

Ejemplo 3 Separación por medio de columna de cromatografia utilizando alúmina activa básica AC2. Las fracciones que contienen t a crol im u s y Compuesto B obtenidas en el Ejemplo 2 fueron concentradas y extraídas con acetato de etilo. Una capa orgánica fue secada con sulfato de magnesio y luego evaporada hasta su secado. El residuo obtenido fue sometido a columna cromatográfica utilizando alúmina activa básica, AC12 (20 mL ) empacada con acetato de etilo. La elución fue llevada a cabo a temperatura ambiente, por medio de la utilización de acetato de etilo (400 mL) como un eluyente y fueron obtenidas fracciones separadas (20 mL x 200 mL x 2) . La cantidad de cada compuesto contenido en las fracciones separadas obtenidas de ese modo fue medida por medio de análisis HPLC de la misma manera que en el Ejemplo 2. Los resultados de la separación de t a c r o l i m u s y Compuesto B se muestran en la Tabla 2.

TABLA 2 Tal como se ve con claridad en la Tabla 2, por medio de la absorción de la mezcla de un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene un grupo alcoxi inferior como su cadena lateral ( t a c ro l i m u s ) y su compuesto análogo (Compuesto B) a la alúmina activa básica y la elución con el solvente orgánico, es posible separar el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene un grupo alcoxi inferior como su cadena lateral. Además, los resultados descritos con anterioridad muestran que el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene un grupo hidroxi como su cadena lateral (Compuesto B), de igual manera fue separado. El Ta cro l i m u s , que es un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene un grupo alquenilo inferior y un grupo alcoxi inferior i- .Í como sus cadenas laterales fue separado por medio de llevar a cabo los Ejemplos 2 y 3, es decir, por medio de llevar a cabo el paso de adsorción mediante la resina de adsorción no iónica y la elución con el solvente acuoso que contiene iones de plata y el paso de adsorción por medio de la alúmina activa básica y la elución con el solvente orgánico, en este orden o en el orden inverso sobre la solución que contiene una mezcla de t a c rol i m u s y su compuesto análogo .

APLICABILIDAD INDUSTRIAL De acuerdo con la presente invención, un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene por lo menos uno de un grupo alquenilo inferior y un grupo alcoxi como sus cadenas laterales, puede ser separado de su componente análogo o sus componentes análogos con inesperada alta eficacia mediante la conducción de uno o de ambos pasos de un paso para la adsorción a una resina de adsorción no iónica y la elución con el solvente acuoso que contiene iones de plata y el paso para la adsorción a una alúmina activa básica y la elución con un solvente orgánico.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Método para separar un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona, caracterizado porque comprende someter una mezcla de un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona que tiene, como su cadena lateral, por lo menos uno de un grupo alquenilo inferior y un grupo alcoxi inferior y sus compuestos análogos, a uno o ambos de los siguientes pasos en cualquier orden: un paso (A) para la adsorción de la mezcla a una resina de adsorción no iónica y la elución con un solvente acuoso que contiene iones plata, y un paso (B) para la adsorción de la mezcla a una alúmina activa básica y la elución con un solvente orgánico, para separar cada uno de los compuestos .

2. Método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona tiene tanto un grupo alquenilo inferior como un grupo alcoxi inferior, como sus cadenas laterales y es separado mediante la conducción de los pasos (A) y (B) en este orden, o en el orden inverso. ,i,ti

3. Método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona tiene un grupo alquenilo inferior como su cadena lateral y es separado mediante la conducción del paso (A) .

4. Método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona tiene un grupo alcoxi inferior como su cadena lateral y es separado mediante la conducción del paso (B) .

5. Método de acuerdo con cualquiera de las la reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona y sus compuestos análogos es un compuesto triciclico .

6. Método de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizado porque el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona tiene una estructura química básica de: 1 , 14-dihidroxi- 12 - [ 2 - ( 4 -hidroxi -ciclohexil) -1-metilvinil] -23, 25-dimetoxi-13, 19, 21, 27-tetrametil-ll,28-dioxa-4-azatriciclo[22.3.1.04]-octacos-18-en-2, 3, 10, 16-tetraona. it*-** i, A ?.? «aj-si-

7. Método de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona tiene una estructura química básica de: 1 , 14-dihidroxi- 12 - [ 2 - ( 4 -hidroxi- 5 ciclohexil) -1-metilvinil] -23, 25-dimetoxi-13, 19, 21, 27-tetrametil-ll, 28-dioxa-4-azatriciclo [22.3.1. O4] - oc t acos- 18 -en-2 , 3 , 10 , 16- te t raona , el grupo alquenilo inferior como su cadena lateral es un grupo propenilo y el grupo alcoxi inferior como su cadena 10 lateral es un grupo metoxi.

8. Método de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizado porque el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona tiene una estructura 15 química básica de: 1 , 14-dihidroxi- 12- [ 2 - ( 4 -hidroxi - ciclohexil) -1-metilvinil] -23, 25-dimetoxi-13, 19, 21, 27-tetrametil-ll, 28-dioxa-4-azatriciclo[22.3.1.04]- octacos- 18-en-2 , 3 , 10 , 16- te traona, y el grupo alquenilo inferior como su cadena lateral es un 20 grupo propenilo.

9. Método de acuerdo con la rei indicación 4, caracterizado porque el compuesto de alto peso molecular que contiene lactona tiene una estructura 25 química básica de: 1 , 1 -dihidrox i - 12 - [ 2 - ( 4 -hidroxi- ciclohexil) -1-metilvinil] -23, 25-dimetoxi-13, 19, 21, 27-tetrametil-ll ,28-dioxa-4-azatriciclo[22.3.1.04]-octacos- 18-en-2 , 3 , 10 , 16- tetraona, y el grupo alcoxi inferior como su cadena lateral es un grupo metoxi.

10. Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 5, 6, 7 y 8, ca acterizado porque la resina de adsorción no iónica tiene una estructura parcial representada por la fórmula: en la cual R es un átomo de hidrogeno o un átomo de halógeno.

11. Método de acuerdo con la reivindicación 10, caracterizado porque la resina de adsorción no iónica es Diaion® HP20, Diaion® HP20SS, Sepabeads® SP207.

12. Método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 4, 5, 6, 7 y 9, caracterizado porque la alúmina activa básica es AC 12.

13. Método de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque el compuesto análogo es un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona, que tiene, como sus cadenas laterales, i*.** grupo alquilo inferior y un grupo hidroxi en lugar del grupo alquenilo y el grupo alcoxi, respectivamente .

14. Método de acuerdo con la reivindicación 3," caracterizado porque el compuesto análogo es un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona, que tiene como su cadena lateral, un grupo alquilo inferior en lugar del grupo alquenilo inferior .

15. Método de acuerdo con la reivindicación 4, caracterizado porque el compuesto análogo es un compuesto de alto peso molecular que contiene lactona, que tiene como su cadena lateral, un grupo hidroxi en lugar del grupo alcoxi inferior.