BR0014016B1 - método para separar um composto de alto peso molecular contendo lactona. - Google Patents
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Description
"MÉTODO PARA SEPARAR UM COMPOSTO DE ALTO PESO MOLECULAR CONTENDO LACTONA" Campo Técnico
A presente invenção refere-se a um método para separar compostos análogos de alto peso molecular contendo lactona, mais particularmente a um método para separar compostos de alto peso molecular contendo lactona tendo cadeias laterais diferentes, utilizando uma resina de adsorção não-iônica e/ou uma alumina ativa básica.
Histórico da Invenção
É conhecido o uso de íons de prata para separar isômeros cis-trans de um ácido alifático insaturado tendo o mesmo número de átomos de carbono (J. Chroma.togra.phy 149 (1978) 417-) . Porém, é difícil separar compostos análogos que tenham estrutura molecular ligeira e parcialmente diferente através dos processos usuais, devido ao fato de eles terem o mesmo ou quase o mesmo número de átomos de carbono e, conseqüentemente, serem similares entre si quanto às propriedades físicas, tal como solubilidade em e afinidade por solventes. Descrição da Invenção
Os inventores da presente invenção fizeram estudos extensivos para descobrir um método para separar eficazmente compostos análogos que fossem similares entre si quanto às propriedades físicas, sem alterar sua estrutura química. Inesperadamente, descobriram um método para separar compostos de alto peso molecular contendo lactona com cadeia lateral diferente, utilizando uma resina de adsorção não-iônica e um eluente apropriado e/ou uma alumina ativa básica e um eluente apropriado.
A presente invenção provê um método para separar um composto de alto peso molecular contendo lactona compreendendo submeter uma mistura de um composto de alto peso molecular contendo lactona, como sua cadeia lateral, pelo menos um grupo alquenila inferior e um grupo alcoxi inferior e seu(s) composto(s) análogos a qualquer uma ou a ambas as etapas em qualquer ordem deuma etapa (A) para adsorver a mistura numa resina de adsorção não-iômica e eluir com um solvente aquoso contendo íons de prata, e
uma etapa (B) para adsorver a mistura numa alumina ativa básica e eluir com um solvente orgânico para separar cada um dos compostos.
Preferivelmente, de acordo com. a presente invenção, as etapaS (A) e (B) são conduzidas para separar um composto de alto peso molecular contendo lactona tendo, como suas cadeias laterais, um grupo alquenila inferior bem como um grupo alcoxi inferior de seu(s) composto(s) análogo (s). Qualquer uma das etapas (A) e (B) podem ser conduzidas primeiro, porém geralmente a etapa (A) pode ser conduzida em primeiro lugar.
A etapa (A) é preferivelmente conduzida para separar um composto de alto peso molecular contendo lactona tendo, como sua cadeia lateral, um grupo alquenila inferior de seu(s) composto(s) análogo(s).
A etapa (B) é preferivelmente conduzida para separar umcomposto de alto peso molecular contendo lactona tendo,como sua cadeia lateral, um grupo alcoxi inferior de seu(s) composto(s) análogo(s).
Os compostos de alto peso molecular contendo lactona aos quais pode ser aplicado o método de separação da presente invenção, significam aqueles compostos que possuem um ou mais anéis de lactona em suas moléculas e que têm um peso molecular de cerca de 400 ou mais. Eles podem ter uma estrutura de anel básica monocíclica, bicíclica, tricíclica ou similar. Mais preferivelmente, o número dede átomos membro formando dita estrutura de anel básicaé de 12 ou mais. Tais compostos monocíclicos incluem eritromicinas, leucomicinas, metimicinas e similares. Tais compostos tricíclicos contendo um anel de lactona incluem compostos tricíclicos, conforme mostrado em EP0184162; compostos tricíclicos contendo heteroátomos, conforme mostrado em EP0427680, EP0532088 ou W093/04680. E os compostos tricíclicos preferidos tendo um anel delactona são 1,14-dihidroxi-12 -[2 -(4-hidroxi-ciclohexil)-1-metilvinil]-23,2 5-dimetoxi-13,19,21,27-tetrametil-11, 2 8-dioxa-4 - azatriciclo[22.3.1.04'9] oc tacos -18 -eno-2,3,10,16-tetraona (adiante designado "Composto Z") que é tacrolimus quando a 17a posição é substituída com grupo alila e a 3a posição é substituída com grupo metoxi, e ascomicina quando a 17a posição é substituída com grupo etila e a 3a posição é substituída com grupo metoxi), rapamisinas, ou similares. Entre esses compostos, os compostos tricíclicos são preferíveis e o Composto Z é mais preferível.
O grupo alquenila inferior como a cadeia lateral nos compostos de alto peso molecular contendo lactona podem ser grupos alquenila de cadeia linear ou ramificada tendo de 2-6 átomos de carbono, tal como vinila, propenila (alila ou 1-propenila), butenila, isobutenila, pentenila, hexenila e similares, entre os quais vinila e propenila são preferidos.
Os grupos alcoxi inferiores como a cadeia lateral nos compostos de alto peso molecular contendo lactona podem ser grupo alcoxi de cadeia linear ou ramificada tendo de 1 a 6 átomos de carbono, tal como metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, sec-butoxi, ter-butoxi, pentiloxi, isopentiloxi, hexiloxi e similares, entre os quais são preferidos os que têm de 1 a 4 átomos de carbono, tais como metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi e similares.
Especialmente, o composto de alto peso molecular contendo lactona a ser separado de acordo com a presente invençãoe que tem pelo menos um do grupo alquenila inferior e do grupo alcoxi inferior como cadeia lateral é preferivelmente um contendo Composto Z como sua estrutura química básica no qual o grupo alquenila inferior é grupo propenila e o grupo alcoxi inferior é grupo metoxi, um contendo composto Z como sua estrutura química básica no qual o grupo alquenila inferior é grupo propenila, ou um contendo Composto Z como sua estrutura química básica noqual o grupo alcoxi inferior é grupo metoxi. Compostos análogos ao composto de alto peso molecular contendo lactona ,aos quais se aplica o método de separação da presente invenção, significam compostos tendo a mesma ou substancialmente a mesma estrutura química básica como o composto de alto peso molecular contendo lactona acima descrito, porém tendo substituinte(s) diferente(s) como sua(s) cadeia(s) lateral(ais). Por exemplo, compostos análogos àquele que contém os grupos alquenila inferiores como sua cadeia lateral podem ser os que possuem a mesma estrutura química básica, porém tendo um grupo alquila inferior, um grupo alcoxi inferior, um grupo hidroxi ou similar, ao invés do grupo alquenila inferior na mesma posição. Tais compostos análogos incluem aqueles que possuem uma estrutura química básica um tanto diferente em outras partes em relação à posição de substituição acima mencionada, porém exibindo propriedades similares como um todo.
Compostos particularmente preferidos análogos aos compostos de alto peso molecular contendo lactona, tendo um grupo alquenila inferior como sua cadeia lateral, podem ser os que possuem um grupo alquila inferior em vez do grupo alquenila inferior, compostos análogos àquele que possui um grupo alcoxi inferior como sua cadeialateral podem ser os que possuem um grupo hidroxi em vez do grupo alcoxi inferior, e compostos análogos ao composto de alto peso molecular contendo lactona tendo um grupo alquenila inferior e um grupo alcoxi inferior como suas cadeias laterais diferentes podem ser os que possuem um grupo alquila inferior em vez do grupo alquenila inferior e/ou um grupo hidroxi em vez do grupo alcoxi inferior.
O grupo alquila inferior como cadeia lateral nos compostos de alto peso molecular contendo lactona podem ser grupos alquila de cadeia linear ou ramificada tendo de 1 a 6 átomos de carbono, tal como metila, etila,propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, ter-butila, pentila, isopentila, hexila e similares, entre os quais preferidos são os que possuem de 1 a 4 átomos de carbono, tais como metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila e similares.
A adsorção da mistura contendo o composto de alto peso molecular contendo lactona, tendo pelo menos um do grupo alquenila inferior e do grupo alcoxi inferior como sua cadeia(s) lateral(ais) e seu(s) composto(s) análogo(s) na resina de adsorção não-iônica ou na alumina ativa básica, e a eluição do composto objeto do adsorvente, de acordo com a presente invenção, podem ser conduzidas da forma a seguir descrita.
Por exemplo, caso uma mistura de composto de alto peso molecular contendo lactona tendo pelo menos um de grupo alquenila inferior e de grupo alcoxi inferior como sua cadeia lateral e seu(s) composto(s) análogo(s) seja obtida através de fermentação, a forma de se submeter a mistura ao método de separação dependerá se esses compostos são produzidos fora de bactérias, ou seja, extracelularmente, ou se são produzidos dentro de bactérias, ou seja, intracelularmente. Se são produzidos extracelularmente, a mistura de líquido de fermentação é submetida ao método de separação da presente invenção. Se os compostos são produzidos intracelularmente, asbactérias são tratadas com um solvente apropriado e a mistura de líquido de extrato resultante é então "submetida ao método de separação da presente invenção. A mistura líquida de fermentação ou a mistura líquida deextrato, concentrada ou pós-concentrada, pode serdespejada numa coluna ou similar, carregada com um adsorvente. Alternativamente, o líquido de fermentação ou o líquido de extrato pode ser concentrado até secagem para produzir um resíduo e então o resíduo pode ser 35 dissolvido num solvente apropriado para produzir uma solução, que é despejada dentro da coluna ou similar. Se uma mistura de um composto de alto peso molecularcontendo lactona tendo pelo menos um de grupo alquenila inferior e de grupo alcoxi inferior como sua cadeia lateral e seu(s) composto(s) análogo (s) for obtida através de síntese, o líquido de reação ou líquido de extrato, concentrado ou pós-concentrado, pode ser despejado numa coluna ou similar carregada com um adsorvente. Alternativamente, o líquido de reação ou líquido de extrato pode ser concentrado até secagem para produzir um resíduo e então o resíduo pode ser dissolvido num solvente apropriado para produzir uma solução, que é despejada dentro de uma coluna ou similar.
0 composto de alto peso molecular contendo lactona, tendo pelo menos um de grupo alquenila inferior e de grupo alcoxi inferior como sua cadeia(s) lateral(ais) e seu(s) composto(s) análogo(s) contidos na mistura são seletivamente eluídos de acordo com sua afinidade pelo adsorvente e pelo eluente, e um eluato combinado contendo um composto desejado é concentrado até secagem. Assim, é separado o composto desejado de alto peso molecular contendo lactona.
A resina de adsorção não-iônica utilizada como adsorvente pode ser uma resina de polietileno tendo uma estrutura parcial representada pela fórmula:
<formula>formula see original document page 7</formula>
onde R é átomo de hidrogênio ou de halogênio.
Especificamente, são preferivelmente utilizados Diaion ®HP 20, Diaion®HP2 OSS, Sepabeads®SP207 (fabricado por Mitsubishi Chemical Corporation, Japan) ou similares. Por exemplo, caso a estrutura química básica do composto de alto peso molecular contendo lactona for o Composto Z, é usualmente preferível utilizar Diaion®HP2OSS.
Para eluir o composto de alto peso molecular contendolactona adsorbido pela resina de adsorção não-iônica, é utilizado um solvente aquoso contendo ion de prata. Como um sal de prata contido no solvente aquoso contendo íon de prata, é preferido o nitrato de prato, perclorato de prata ou similar, que existe na forma de íons de prata em água, entre os quais é preferido o nitrato de prata, caso a estrutura química básica do composto de alto peso molecular contendo lactona for o Composto Z, por exemplo. A concentração de íons de prata varia dependendo da natureza do composto de alto peso molecular contendo lactona a ser separado, mas ele pode ser geralmente de 0,059 a 1,18 mol/L, preferivelmente de 0,12 a 0,59 mol/L, mais preferivelmente de 0,18 a 0,47 mol/L, o mais preferivelmente de 0,24 a 0,35 mol/L, em termos de Ag+. Como um meio aquoso para o solvente aquoso contendo íon de prata, uma acetona aquosa, um álcool aquoso (ex: metanol e etanol), uma acetonitrila aquosa ou similar podem ser exemplificados. Por exemplo, uma acetona aquosa pode preferivelmente ser utilizada quando a estrutura química básica do composto de alto peso molecular contendo lactona for o Composto Z.
A alumina ativa básica utilizada como adsorvente pode preferivelmente ser AC12 (marca registrada, fabricada por Sumitomo Chemical Company, Limited, Japan), quando a estrutura química básica do composto de alto peso molecular contendo lactona for o Composto Z, por exemplo. Um solvente orgânico é utilizado para eluir o composto de alto peso molecular contendo lactona adsorvido pela alumina ativa básica. 0 solvente orgânico utilizado como eluente pode ser um solvente convencional, tal como acetato de etila, acetona, diclorometano, uma mistura de clorofórmio e metanol, uma mistura de acetato de etila e n-hexano ou similares. Por exemplo, o acetato de etila pode ser preferivelmente utilizado quando a estrutura química básica do composto de alto peso molecular contendo lactona for o Composto Z.
O tipo do eluente e, se o eluente for um solvente misto,a relação de mistura do mesmo é preferivelmente selecionada de acordo com a natureza do composto de alto peso molecular contendo lactona a ser separado, através de análise preliminar, tal como cromatografia de camada fina (TLC) ou similar.
A quantidade do adsorvente é preferivelmente 50 vezes maior do que o peso dos compostos de alto peso molecular contendo lactona, quando o adsorvente for uma resina de adsorção não-iônica, e preferivelmente.70 vezes maior do que o peso dos compostos de alto peso molecular contendo lactona, quando o adsorvente for uma alumina ativa básica.
A taxa de escoamento SV do solvente de eluição varia dependendo do tamanho de partícula do adsorvente, e pode ser usualmente de cerca de 3 a 5 mL/min, no caso da resina e adsorção não-iônica e usualmente de cerca de 3 a 5 mL/min no caso da alumina ativa básica.
A(s) fração (ões) contendo o composto de alto peso molecular contendo lactona tendo pelo menos um de grupo alquenila inferior e de grupo alcoxi inferior como sua(s) cadeia(s) lateral pode(m) ser detectada(s) através de detector visível por ultravioleta ou um detector de índice refrativo diferencial ou através de TLC após obter diversas frações. Frações contendo uma substânciadesejada são combinadas e evaporadas até secagem, sobpressão reduzida, por meio do que a substância desejada é purificada.
Embora a presente invenção consista num método de separação para um composto de alto peso molecularcontendo lactona, tendo pelo menos um de grupo alquenilainferior e de grupo alcoxi inferior como sua(s) cadeia(s) lateral(ais), é possível separar também um composto análogo remanescente de outros compostos análogos após a separação do composto de alto peso molecular contendo lactona. Por exemplo, um composto de alto peso molecular contendo lactona tendo um grupo alcoxi inferior como sua cadeia lateral, é separado de uma mistura contendo ocomposto de alto peso molecular contendo lactona e um composto análogo tendo substancialmente a mesma estrutura química básica e tendo um grupo hidroxi como sua cadeia lateral e, então, a invenção pode ser aplicada novamente para separar o composto análogo através de eluição, utilizando um solvente com uma polaridade diferente.
Breve Descrição dos Desenhos
A Figura 1 é um gráfico mostrando a separação através de cromatograf ia de coluna utilizando Diaion®HP2 OSS e umaacetona aquosa como eluente.
A Figura 2 é um gráfico mostrando a separação através de cromatograf ia de coluna utilizando Diaion®HP20SS e acetona aquosa contendo nitrato de prata (0,2 94 mol/L) como eluente.
Melhor Forma de Executar a Invenção
A presente invenção é agora explicada em detalhes através de exemplos, cuja finalidade é somente ilustrar a invenção, não devendo ser interpretados como limitando seu escopo.
Exemplo de Preparação 1
Preparação de uma mistura contendo um composto de alto peso molecular contendo lactona, tendo pelo menos um de um grupo alquenila inferior e de um grupo alcoxi inferior como suas cadeias laterais e seu composto análogo atravésde fermentação.
Um meio de cultura (100 mL) contendo 1% de amido de milho, 1% de glicerina, 0,5% de glicose, 1% de farinha de caroço de algodão, 0,5% de levedura dessecada, 0,5% de licor de infusão de milho e 0,2% de carbonato de cálcioteve seu pH ajustado em 6,5, sendo despejado em oitofrascos Erlenmeyer de 500 mL e esterilizado a 120°C durante 30 minutos. Um alça de cultura em plano inclinado de Streptomyces tsukubaensis No. 9993 (Depósito No. FERM BP-927 no National Institute of Bioscience and HumanTechnology, Agency of Industrial Science and Technology, Japan, de acordo com o Tratado de Budapeste) foi inoculada no meio em cada um dos frascos e cultivada a30°C durante 72 horas num agitador giratório. Esse caldo de cultura foi transferido como cultura de inoculação para 160L do mesmo meio, que estava contido num vaso fermentador de 200L pré-esterilizado a 120°C durante 30 minutos e ao qual tinham sido adicionados 0,05% de Adekanol® (agente antiespumante, marca registrada, fabricado por Asahi Denka, Co., Japan) e 0,05% de silicone (fabricado por Shinetsu Chemical Co., Japan). Esse caldo foi cultivado a 30°C durante 48 horas com agitação a 200 rpm sob aeração de 160 L/min. Esse caldo cultivado (30 L) foi inoculado em 3.000 L de um meio de produção com pH 6,8 pré-esterilizado a 120°C durante 30 minutos, contendo 3% de amido solúvel, 0,8% de germe de trigo, 0,4% de levedura dessecada, 0,6% de licor de infusão de milho, 0,1% de carbonato de cálco, 0,05% de Adekanol® e 0,05% de silicone num tanque de 4.000 L e foi fermentado a 25°C durante 168 horas com agitação a 140 rpm sob aeração de 1.500 L/min.
0 caldo cultivado assim obtido foi filtrado utilizando-se 50 kg de terra diatomácea. Tortas miceliais foram extraídas com 1.000 L de acetona para produzir 1.000 L de extrato. 0 extrato de acetona das tortas miceliais e o filtrado (2.700 L) foram combinados para produzir uma amostra bruta.
Exemplo 1
Separação através de cromatografia de coluna utilizando Diaion®HP2 0SS como uma resina de adsorção não-iônica e um eluente contendo nitrato de prata.
Uma mistura (2 00 mg) de tacrolimus, ascomicina e 17- propil-1,14-dihidroxi-12 -[2-(4-hidroxi-3metoxiciclohexil)-1-metilvinil]-23,25-dimetoxi-13,19,21,2 7 -tetrametil-11,2 8-dioxa-4-azatriciclo [22 . 3 .1. O4'9] octacos-18-eno-2 , 3,10, 16-tetraona (adiante designado "Composto A") numa acetona aquosa a 50% foi submetido â cromatografia de coluna utilizando Diaion®HP20SS (20 mL) , para que as substâncias contidas na mistura fossem adsorvidas. Em seguida, tacrolimus,ascomicina e o Composto A foram eluídos à temperatura ambiente utilizando uma acetona aquosa a 50%(v/v) contendo nitrato de prata (0,294 mol/L) ' e uma acetona aquosa a 60% (v/v) como eluentes a uma carga de 0,5 g/L-R em termos de tacrolimus. Um teste de controle foi também conduzido da mesma forma utilizando acetona aquosa como um eluente que não continha nitrato de prata. Os resultados são mostrados na Fig. 1 e Fig. 2.
Exemplo 2
Separação através de cromatografia de coluna utilizando Diaion®HP20SS como resina de adsorção não-iônica e um eluente de nitrato de prata.
A amostra bruta (300 mL) obtida no Exemplo de Preparação 1 foi submetida à cromatografia de coluna utilizandoDiaion®HP20SS (20 mL) para que as substâncias contidas na mistura fossem adsorvidas. A coluna foi lavada com acetona aquosa a 40% (100 mL). Em seguida, uma mistura de tacrolimus e 17-alil-l,14-dihidroxi-12- [2-(3,4-dihidroxiciclohexil)-1-metilvinil]-23,25-dimetoxi- 13,19,21,27-tetrametil-ll,2 8-dioxa-4-azatriciclo[22.3.1.04'9] octacos-18-eno-2 ,3,10, 16-tetraona (adiante designado "Composto B") foi eluída à temperatura ambiente utilizando como eluente acetona aquosa a 50% (v/v) contendo nitrato de prata (0,294 mol/L).
Posteriormente, sob as mesmas condições, uma mistura de ascomicina e Composto A foi eluída separadamente utilizando acetona aquosa a 60% (v/v).
A quantidade de cadã composto contido nas frações separadas assim obtidas, foi 1 medida através de análise deHPLC (fase móvel : acetonitrila / solução aquosa a 10% éter de polioxietileno lauril álcool (Nakalai Tesque, Inc., Kyoto, Japan)/água = 40 / 10/ 50; coluna : TOSOH TSK-gel ODS- 80 Tm (5μ m, 4,6 φ χ 150 mm); temperatura: 75°C; comprimento de onda para detecção : 210 nm; taxa de escoamento: 1,0 mL/min; quantidade de injeção: 20 μL). Os resultados de separação de uma mistura de tacrolimus e Composto B, ascomicina e Composto A são mostrados naTabela 1.
<table>table see original document page 13</column></row><table>
*calculada a partir da relação de área de pico em relação a tacrolimus.
Conforme mostra claramente a Tabela 1, tacrolimus, Composto B, ascomicina e Composto A não foram eluídos no líquido de passagem (fração 1) ou no líquido de lavagem (fração 2). Eles foram totalmente adsorvidos pela resina. Através de eluição com a solução de nitrato de prata (fração 3), tacrolimus e Composto B foram coletados em aproximadamente 100%, e a _eluição do Composto B mostrou-se abaixo de um nível detectável. Na fração extrudada através de acetona aquosa a 60% (fração 4), ascomicina e Composto A foram seletivamente coletados em aproximadamente 100%. Em resumo, adsorvendo-se a mistura de compostos de alto peso molecular contendo lactona tendo um grupo alquenila inferior como sua cadeia lateral (tacrolimus e CompostoΒ) e seus compostos análogos (ascomicina e Composto A) na resina de adsorção não-iônica e eluindo-se com o solvente aquoso contendo íon de prata, os compostos de alto peso molecular contendo lactona tendo um grupo alquenila inferior como sua cadeia lateral, podem ser separados.
Além disso, os resultados acima mostram que os compostos de alto peso molecular contendo lactona tendo um grupo alquila inferior como sua cadeia lateral (ascomicina e Composto A) foram também separados.
Exemplo 3
Separação através de cromatografia de coluna utilizando uma alumina ativa básica, AC12
As frações contendo a mistura de tacrolimus e de Composto B obtidas no Exemplo 2 foram concentradas e extraídas com 15 acetato de etila. Uma camada orgânica foi secada com sulfato de magnésio e então evaporada até secagem. O resíduo obtido foi submetido à cromatografia de coluna utilizando uma alumina ativa básica, AC12 (20 mL) carregada com acetato de etila. À temperatura ambiente, a eluição foi conduzida utilizando acetato de etila (400 mL) como eluente e frações separadas (2 0 mL χ 1 e 2 00 mL χ 2) foram obtidas.
A quantidade de cada composto contido nas frações separadas assim obtidas foi medida através de análise por HPLC da mesma forma como no Exemplo 2 . Os resultados de separação de tacrolimus e de Composto B são mostrados na Tabela 2.
Tabela 2
<table>table see original document page 14</column></row><table>
Conforme pode ser claramente observado na Tabela 2, absorvendo-se a mistura de um composto de alto peso molecular contendo lactona tendo um grupo alcoxi inferior como sua cadeia lateral (tacrolimus) e seu composto análogo (Composto B) na alumina ativa básica e eluindo-secom o solvente orgânico, foi possível separar o composto de alto peso molecular contendo lactona tendo um grupo alcoxi inferior como sua cadeia lateral.
Além disso, os resultados acima mostram que o composto de alto peso molecular contendo· lactona tendo um grupo hidroxi como sua cadeia lateral (Composto B) foi também separado.
Tacrolimus, que é um composto de alto peso molecular contendo lactona tendo um grupo alquenila inferior e um grupo alcoxi inferior como suas cadeias laterais, foi separado conduzindo-se os Exemplos 2 e 3, ou seja, conduzindo-se a etapa de adsorção através da resina de adsorção não-iônica e eluição com o solvente aquoso contendo íon de prata e a etapa de adsorção através de alumina ativa básica e eluição com o solvente orgânico, nessa ordem ou na ordem inversa, na solução contendo uma mistura de tacrolimus e de seu composto análogo. Aplicabilidade Industrial
De acordo com a presente invenção, um composto de alto peso molecular contendo lactona tendo pelo menos um de um grupo alquenila inferior e um grupo alcoxi inferior como sua(s) cadeia(s) lateral(ais) pode ser separado de composto(s) análogo(s) com eficiência inesperadamente alta, conduzindo-se qualquer uma ou ambas as etapas de uma etapa de adsorção numa resina de adsorção numa resina de adsorção não-iônica para adsorver numa alumina ativa básica e eluir com um solvente orgânico.
Claims (14)
1. Método para separar um composto contendo lactona, caracterizado pelo fato de compreender submeter umamistura de um composto contendo lactona tendo uma estrutura química básica de 1,14-dihidroxi-12-[2-(4-hidroxi-ciclohexil-l-metilvinil]23,25-dimetoxi-13,19,21,27-tetrametil-ll,2 8-dioxa-4-azatriciclo-[22.3.1.O4'9] octacos-18-eno-2 ,3,10,16-tetraona, e pelo menos um de um grupo alquenila C2-e e um grupo alcoxi Ci.6 como sua cadeia lateral, e seu(s) composto(s) análogo(s) a qualquer uma ou ambas as etapas, em qualquer ordem de uma etapa (A) para adsorver a mistura numa resina de adsorção não-iônica e eluir com um solvente aquoso contendo íons de prata, e uma etapa (B) para adsorver a mistura numa alumina ativa básica e eluir com um solvente orgânico para separar cada um dos compostos.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de o composto contendo lactona ter um grupoalquenila C2.6 bem como um grupo alcoxi Ci-6 como suas cadeias laterais e ser separado mediante a condução das etapas (A) e (B) nessa ordem ou na ordem inversa.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de o composto contendo lactona ter um grupo alquenila C2-6 como sua cadeia lateral e ser separadomediante a execução da etapa (A).
4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de o composto contendo lactona ter um grupo alcoxi Ci-6 como sua cadeia lateral e ser separado mediante a execução da etapa (B).
5. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de o grupo C2.6 inferior como cadeia lateral serum grupo propenila e o grupo alcoxi Ci-6 como cadeialateral ser um grupo metoxi.
6. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de o grupo alquenila C2-6 como cadeia lateralser um grupo propenila.
7. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de o grupo alcoxi Ci-6 como cadeia lateral ser um grupo metoxi.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 5, 6, 7e8, caracterizado pelo fato de a resinade adsorção não-iônica ter uma estrutura parcial representada pela fórmula:<formula>formula see original document page 17</formula>onde R é um átomo de hidrogênio ou um átomo de halogênio.
9. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de a resina de adsorção não-iônica ser Diaion®HP2 0, Diaion®HP2 OSS ou Sepabeads®SP207.
10. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de a alumina ativa básica ser AC12.
11. Método, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de o composto análogo ser um composto contendo lactona tendo, como suas cadeias laterais, um grupo alquila C1-6 e um grupo hidroxi em vezdo grupo alquenila C2-6 e do grupo alcoxi C1-6,respectivamente.
12. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de o composto análogo ser um composto contendo lactona tendo, como sua cadeia lateral,um grupo alquila C1-6 em vez do grupo alquenila C2-=6.
13. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de o composto análogo ser um composto contendo lactona tendo, como sua cadeia lateral, um grupo hidroxi em vez do grupo alcoxi C1-6.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações-7 ou 8, caracterizado pelo fato de o grupo propenila ser alila.
Applications Claiming Priority (3)
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