CN109810919B - 一类安莎全碳环聚酮类抗生素及其在制备抗菌药物或抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

一类安莎全碳环聚酮类抗生素及其在制备抗菌药物或抗肿瘤药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一类安莎全碳环聚酮类抗生素及其在制备抗菌药物或抗肿瘤药物中的应用。海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399于2018年10月22日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，保藏编号为：GDMCC No.60466。本发明的海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物能够制备新化合物kendomycin B‑D，如式(I)‑(III)所示，这三种化合物具有显著的抗菌和抗肿瘤活性，具有广阔的应用前景。
Figure DDA0001960509850000011

Description

一类安莎全碳环聚酮类抗生素及其在制备抗菌药物或抗肿瘤 药物中的应用
技术领域：
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399 及从该菌株中提取分离的三种kendomycin类新化合物kendomycin B-D，本发明还涉及该菌株制备该三种新化合物的方法和应用。
背景技术：
Kendomycin属于ansamycin抗生素家族的聚酮类化合物，母核特征为杂合了醌甲基发色团的大环内酯。最初于1996年由Takeda制药公司作为内皮素受体的拮抗剂从链霉菌Streptomyces AL-71389中分离获得[Bahnck KB,Rychnovsky SD.Formal synthesis of(-)-kendomycin featuring a Prins-cyclization to construct the macrocycle[J].JAm Chem Soc,2008. 130(39):13177-13181]。1998年，Su等从链霉菌Streptomyces NRRL-21370中再次分离得到，活性测试结果表明具有抗骨质疏松作用[Xu S,ArimotoH.Strategies for construction of the all-carbon macrocyclic skeleton of theansamycin antibiotic-kendomycin[J].J Antibioti(Tokyo), 2016,47(31):203]。2000年，Bode和Zeeck通过Mosher反应对其绝对构型进行了确定[Bode H B,Zeeck A.Structureand biosynthesis of kendomycin,a carbocyclic ansa-compound from Streptomyces[J].J chem soc perkin Trans,2000,58(3):323-328]。Kendomycin类抗生素的生物合成途径最初由Bode和Zeek用同位素标记法进行了阐述[Bode H B,Zeeck A.Biosynthesis ofkendomycin:origin of the oxygen atoms and further investigations[J].J chemsoc perkin Trans, 2000,16(16):2665-2670]。后Wenzel等克隆了其生物合成基因簇，生物合成分析结果表明该类化合物其母核的形成由混合I型和III型PKS聚酮合酶负责，这在ansamycin类抗生素中是首次报道[Wenzel SC,Bode HB,Kochems I,et al.A Type I/TypeIII polyketide synthase hybrid biosynthetic pathway for the structurallyunique ansa compound kendomycin[J].Chembiochem, 2008,9(16):2711-2721]。据报道，kendomycin类抗生素具有良好的生物活性，不仅抗菌谱广，对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及耐万古霉素金黄色葡萄球菌有抑制作用，同时对人类多种肿瘤细胞也有显著的细胞毒活性，并有望开发成为内皮质素受体拮抗剂及抗骨质疏松剂 [Magauer T,Martin HJ,MulzerJ.Ring-closing metathesis and photo-fries reaction for the construction ofthe ansamycin antibiotic kendomycin:development of a protecting group freeoxidative endgame[J].Chemistry,2010,16(2):507-519]。
发明内容：
本发明的目的之一是提供一种能够产生kendomycin B-D的海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399，该菌于2018年10月22日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，保藏编号为：GDMCC No.60466。
本发明的目的之二是提供如式(I)、(II)和(III)所示的安莎全碳环聚酮类抗生素kendomycin B-D，或其药用盐：
Figure BDA0001960509830000021
其中，式(I)为kendomycin B，式(II)为kendomycin C，式(III)为kendomycin D。
本发明的目的之三是提供海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399在制备kendomycin B-D中的应用。
本发明的目的之四是提供kendomycins B-D的制备方法，所述的kendomycin B-D是从海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物中制备得到的。
按照本发明，优选所述的kendomycin B-D是从海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物中制备得到的，具体包括以下步骤：
(a)制备海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵上清液和菌丝体分开，发酵上清液用丁酮萃取，丁酮相经浓缩后得到浸膏A，菌丝体用丙酮浸泡萃取，丙酮浸提液经浓缩后得到浸膏B；
(b)将浸膏A和浸膏B合并，采用硅胶柱层析，以氯仿-甲醇作为洗脱剂，从体积比100:0、 99:1、98:2、96:4、94:6、92:8、9:1、8:2、5:5、0:100依次进行梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比为92:8、9:1、8:2和5:5洗脱的馏分Fr.A6～A9，将馏分Fr.A6～A9合并后经反相中压液相色谱，以流动相CH3CN/H2O 10％～100％v/v线性梯度洗脱120min，流速10mL/min，每馏分 150mL，顺序得到8个馏分Fr.B1～B8，将馏分Fr.B5经Sephex LH-20葡聚糖凝胶色谱柱，以CHCl3/MeOH体积比1:1作为流动相洗脱，收集馏分再经纯化后得到kendomycin D，将馏分Fr.B7经Sephex LH-20葡聚糖凝胶色谱柱，以CHCl3/MeOH体积比1:1作为流动相洗脱，收集馏分再经纯化后得到kendomycin B和kendomycin C。
所述的制备海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物是通过以下方法制备：
将海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399接入种子培养基中，发酵得种子培养液，将种子培养液接入到发酵培养基，发酵得到发酵培养物；所述的种子培养基的配方为：每升含有可溶性淀粉10g、酵母提取物4g、细菌学蛋白胨2g和海盐30g，余量为水；发酵培养基的配方为：每升含有可溶性淀粉20g、葡萄糖10g、麦芽糖10g、玉米粉5g、麦芽提取粉10g、CaCO3 2g和海盐30g，余量为水。
本发明的第五个目的是提供了kendomycin B、kendomycin C或kendomycin D，或其药用盐在制备抗菌药物或抗肿瘤药物中的应用。
本发明的第六个目的是提供一种抗菌药物或抗肿瘤药物，含有有效量的所述的kendomycin B、kendomycin C或kendomycin D，或其药用盐作为活性成分。
优选，所述的抗菌药物为抗苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药物；所述的抗肿瘤药物为抗人胃癌、人肺癌、人宫颈癌、人肝癌、人乳腺腺癌或人结直肠癌的药物。
本发明提供了一株能够产生kendomycin类抗生素的海洋疣孢菌(Verrucosisporasp.) SCSIO 07399，利用该菌可以制备新化合物kendomycin B-D，这三个化合物具有显著的抗菌和抗肿瘤活性，具有广阔的应用前景。
本发明的海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399于2018年10月22日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，保藏编号为：GDMCC No.60466。
附图说明：
图1是海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399在M-ISP4培养基上的形态图；
图2是海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的系统进化树，其中07399代表海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399；
图3是海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399发酵生产kendomycin B和kendomycin C的HPLC图谱；
图4是海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399发酵生产kendomycin D的HPLC 图谱。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的分离与鉴定
本发明的海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399是从我国南海海域的沉积物样品中分离得到的。
该菌株的分类学特征是：
1、形态学特征：
菌落小，通常橙黄色，菌丝体纤细，有分支，不断裂。形成基生菌丝，偶见稀疏微白色气生菌丝(如图1所示)。
2、分子生物学分离特征：
提取上述分离的菌株的基因组DNA，通过常规方法PCR扩增其16S rDNA序列(其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)，并测序分析，构建基于16S rDNA序列的系统进化树(如图 2所示)，显示菌株SCSIO 07399与Verrucosispora sp.R8-37 16S rDNA的序列相似性为99％，表明菌株SCSIO 07399属于疣孢菌(Verrucosispora sp.)。
综上所述，鉴定菌株SCSIO 07399属于疣孢菌属的一个种，命名为海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399，该菌于2018年10月22日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，保藏编号为：GDMCC No.60466。
实施例2：kendomycin B-D的分离鉴定
1、制备海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物：
(1)种子培养基和发酵培养基的配制：
a)种子培养基的配制：每升种子培养基中含有可溶性淀粉10g、酵母提取物4g、细菌学蛋白胨2g和海盐30g，余量为水，将上述组份混合均匀，调节pH至7.0。配制1L种子培养基，然后平均分装于20个250mL锥形瓶中，每瓶50mL，121℃灭菌30min备用。
b)发酵培养基的配制：每升发酵培养基中含有可溶性淀粉20g、葡萄糖10g、麦芽糖10g、玉米粉5g、麦芽提取粉10g、CaCO3 2g和海盐30g，余量为水，将上述组份混合均匀，调节pH至7.0。配制1L发酵培养基，然后平均分装于5个1L锥形瓶中，121℃灭菌 30min备用。
(2)种子的培养：
将活化的海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399(保藏编号为：GDMCCNo.60466) 接入到装有50mL种子培养基的250mL锥形瓶中，于28℃、200rpm的摇床上培养24h，得到种子培养液。
(3)规模发酵培养：
将上述锥形瓶中的50mL种子培养液转接到装有200mL发酵培养基的1L锥形瓶中，于28℃、200r/min的摇床上培养7天，获得海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物。
2、海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399所产kendomycin B-D的分离
(1)发酵培养物的萃取
将海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物进行离心分离(3800～4000 r/min，10～15min)使发酵上清液与菌丝体分开；发酵上清液使用丁酮进行等体积萃取3次，丁酮相经旋蒸冷凝浓缩之后得到浸膏A；菌丝体使用丙酮(2L)浸泡萃取，超声处理得到丙酮浸提液，丙酮浸提液经旋蒸冷凝浓缩后得到浸膏B。
(2)kendomycin B-D的提取
经HPLC分析，浸膏A和浸膏B的成分类似，将浸膏A和浸膏B合并，经正相硅胶柱层析，用氯仿-甲醇作为流动相，不同体积比(100:0、99:1、98:2、96:4、94:6、92:8、9:1、8:2、5:5、0:100)依次进行梯度洗脱，100％氯仿梯度下洗脱下来的馏分记为Fr.A1，氯仿-甲醇体积比为99:1梯度下洗脱下来的馏分记为Fr.A2，氯仿-甲醇体积比为98:2梯度下洗脱下来的馏分记为Fr.A3，氯仿-甲醇体积比为96:4梯度下洗脱下来的馏分记为Fr.A4，氯仿-甲醇体积比为 94:6梯度下洗脱下来的馏分记为Fr.A5，氯仿-甲醇体积比为92:8梯度下洗脱下来的馏分记为 Fr.A6，氯仿-甲醇体积比为9:1梯度下洗脱下来的馏分记为Fr.A7，氯仿-甲醇体积比为8:2梯度下洗脱下来的馏分记为Fr.A8，氯仿-甲醇体积比为5:5梯度下洗脱下来的馏分记为Fr.A9，氯仿-甲醇体积比为0:100梯度下洗脱下来的馏分记为Fr.A10。对上述馏分Fr.A1～A10进行高效液相分析，发现Fr.A6、Fr.A7、Fr.A8和Fr.A9馏分中含有kendomycinB-D(1-3)，进行合并。合并后的馏分经反相中压液相色谱仪(CH3CN/H2O 10％～100％v/v线性梯度洗脱120min，流速10mL/min)，每馏分150mL，顺序得到8个馏分Fr.B1～B8。经HPLC检测，发现Fr.B5 中含化合物3，Fr.B7中含化合物1和化合物2。将馏分Fr.B5和Fr.B7分别经Sephex LH-20 葡聚糖凝胶色谱柱纯化(流动相CHCl3/MeOH 1/1v/v等度洗脱)，得Fr.C1～C15及Fr. D1～D15。经HPLC检测，将Fr.C5～C9(含有kendomycin D)合并后通过反相ODS(YMC-Pack ODS-A column，250×20mm,5μm)半制备高效液相色谱分离纯化(流动相CH3CN/H2O 55％～100％v/v线性梯度洗脱30min，流速2.5mL/min)(如图4所示)，得到化合物3(6.2mg，保留时间16.2min)，即为kendomycin D。将Fr.D5～D12(含有kendomycin B和kendomycin C)合并后通过反相ODS(YMC-Pack ODS-A column，250×20mm,5μm)半制备高效液相色谱分离纯化(流动相CH3CN/H2O 70％～100％v/v线性梯度洗脱30min，流速2.5mL/min) (如图3所示)，得到化合物1(5.0mg；保留时间26.0min)和化合物2(4.0mg；保留时间24.5min)，化合物1即为kendomycin B，化合物2即为kendomycin C。
通过结构分析，对本发明的从海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物中制备的化合物1-3鉴定结果如下：
化合物1为黄色粉末，分子式C28H40O6，HR-ESI-MS m/z 471.2757([M-H]-)；[α]20 D-59 (c 0.21,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)202(4.276),307(3.681)nm；IR(film):vmax:3325,2937, 2358,2341,1602,1456,1359,1195,1095,1022cm-1。在1H NMR谱高场显示6个甲基信号δH 0.73(3H,d,J＝6.8Hz，Me-26)，δH 0.89(3H,d,J＝6.6Hz，Me-23)，δH 0.91(3H,d,J＝6.6Hz， Me-21)，δH 0.95(3H,d,J＝7.0Hz，Me-22)，δH 0.95(3H,d,J＝6.5Hz，Me-25)和δH1.61 (3H,m,Me-24)。结合一维13C NMR，DEPT NMR和二维HSQC数据，显示共有28个碳信号，其中含6个甲基，4个亚甲基，12个次甲基，6个季碳根据COSY和HMBC谱图分析，可以推断化合物1中C-5/C-6(C-21)/C-7/C-8(C-22)/C-9/C-10/C-11/C-12(C-23)/C-13和C-15/C-16(C-25)/C-17/C-18(C-26)两个片段的存在。在HMBC谱中可以观察到H-12与C-14； H-13与C-14,C-15,C-24；H-15与C-13,C-14,C-24；H-16与C-14和H-24与C-13,C-14,C-15 的相关，推断出上述两片段通过C-14相连。结合一维13C NMR及HMBC相关，显示化合物 1中的8个典型的芳香碳δC 173.9(C-1),96.7(C-2),183.9(C-3),148.2(C-4),113.0(C-4a),120.6 (C-19),143.5(C-20)和131.4(C-20a)为一个多取代吡喃内醌环的结构。同时，通过H-5与C-4, C-4a,C-20a；H-6与C-4a；H-17与C-19；H-18与C-19,C-20；H-26与C-19的HMBC相关，确定化合物1的平面结构。
查阅文献，化合物1的NMR数据与文献[Magauer T,Martin HJ,Mulzer J.Ring-closing metathesis and photo-fries reaction for the construction of theansamycin antibiotic kendomycin: development of a protecting group freeoxidative endgame[J].Chemistry,2010,16(2):507-519]报道的kendomycin A的NMR数据比对，鉴定化合物1为kendomycin类抗生素新化合物，命名为kendomycin B，其结构如式(I)所示，碳谱和氢谱数据如表1所示。
化合物2为黄色粉末，分子式C29H42O6S，HR-ESI-MS m/z 517.2633([M-H]-)；[α]20 D-547 (c 0.22,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)202(4.265),240(3.490),380(3.600)nm；IR(film):vmax: 3298,2937,2358,2333,1597,1421,1008cm-1。通过1H，13C和DEPT NMR谱图的对比，化合物2为1的同系物，其差异在于2比1多一个-SCH3结构。最终根据HMBC谱中H-27与C-20 的相关，确定该-SCH3与C-20相连，命名为kendomycin C，其结构如式(II)所示，碳谱和氢谱数据如表1所示。
化合物3为黄色粉末，分子式C33H47NO9S，HR-ESI-MS m/z 471.2757([M-H]-)；[α]20 D-240(c 0.34,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)202(4.328),244(3.591),382(3.453)nm；IR(film): vmax:3363,2949,2362,2330,1602,1373,1010cm-1。通过核磁谱图归属，确定化合物3与1含有相同的22元多取代吡喃内酯环的母核结构。其主要差异在于，1H NMR谱中，在高场区多了1个甲基信号δH 1.93(3H，s，Me-31)，低场区多了δH 3.52(1H，dd，J＝5.0，13.6Hz)，δH3.87(1H，dd，J＝7.8，13.6Hz)和δH 4.60(1H，dd，J＝5.0，7.8Hz)3个信号；13C NMR 中多了5个C信号，其中含1个甲基信号δC 22.7，1个亚甲基信号δC 35.8，1个次甲基信号， 1个羰基碳δC 172.6及1个羧基碳δC 173.9。在HMBC谱图中可观察到H-27(δH 3.52，δH 3.87) 与C-20(δC151.5)及C-28(δC 55.1H-28(δH 4.60)与C-27(δC 35.8)C-29(δC 173.9)及 C-30(δC172.7)，H-31(δH 1.93)与C-30(δC 172.7)的远程相关，并结合1H-1H COSY中 H-27(δC 35.8)与H-28(δH 4.60)的耦合，推断出氮乙酰半胱氨酸的存在。氮乙酰半胱氨酸的连接位置通过HMBC谱图中H-27(δH 3.52，δH 3.87)与C-20(δC 151.5)的相关确定。氮乙酰半胱氨酸的绝对构型通过化学方法确定，由L和D型氮乙酰半胱氨酸与底物1在中性条件下反应，通过HPLC及LC-MS分析，最终确定化合物3中C-20连接的为L型氮乙酰半胱氨酸。因此，最终确定化合物3的结构，并命名为kendomycin D，其结构如式(III)所示，碳谱和氢谱数据如表1所示。
Figure BDA0001960509830000101
表1kendomycin B-D的核磁碳谱和氢谱数据
Figure BDA0001960509830000111
Figure BDA0001960509830000121
a Measured in CD3OD.
由滤纸片法对化合物进行抑菌活性测试，发现化合物1-3对大多革兰氏阳性菌均有一定的抑菌活性。继续选取苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)BT01，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS01，粪肠球菌(Enterococcus faecalis)ATCC 29212，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 29213，金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)745524及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcusaureus)shhs-A1，96孔板法测最小抑菌浓度，卡那霉素、氨苄霉素和万古霉素作为阳性对照。化合物1对金黄色葡萄球菌ATCC 29213、金黄色葡萄球菌745524、粪肠球菌ATCC 29212和苏云金芽孢杆菌BT01的最小抑菌浓度(MIC)分别为0.5、1.0、2.0、1.0μg/mL，优于卡那霉素、氨苄霉素和万古霉素的阳性对照，化合物2 对金黄色葡萄球菌ATCC 29213、金黄色葡萄球菌745524、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 shhs-A1、粪肠球菌ATCC 29212和苏云金芽孢杆菌BT01的最小抑菌浓度(MIC)分别为0.5、 1.0、1.0、0.5、0.5μg/mL，优于卡那霉素、氨苄霉素和万古霉素的阳性对照，化合物3对金黄色葡萄球菌ATCC 29213、金黄色葡萄球菌745524和苏云金芽孢杆菌BT01的最小抑菌浓度(MIC)分别为1.0、2.0、2.0μg/mL，优于卡那霉素、氨苄霉素和万古霉素的阳性对照。测试结果如表2所示。
表2化合物1-3的MIC值(μg/mL)
Figure BDA0001960509830000131
a Vancomycin,kanamycin and ampicilin served as positive controls.Thetests were performed in triplicate.
化合物1-3通过标准MTT法用对人胃癌细胞系MGC803(human gastric carcinomacell line)、人肺癌细胞系A549(human lung cancer cell line)、人宫颈癌细胞系Hela(human cervival carcinoma cell line)、人肝癌细胞系HepG2(human hepatocellularcarcinoma cell line)、人乳腺腺癌细胞系MCF-7(human breast adenocarcinoma cellline)和人结直肠癌细胞系RKO(human colorectal carcinoma cell line)六种癌细胞系及人类肝细胞系L02(normal human hepatic cell line) 和人脐静脉内皮细胞系Huvec-12(normal human umbilical vein endothelial cell line)两种非恶性细胞系进行细胞毒活性测试，以顺铂作为阳性对照。化合物1-3均具有显著的抗肿瘤活性。测试结果如表3所示。据Janssen等的报道可知，化合物1和2对A549的细胞毒活性是显著优于kendomycin A的[Janssen CO,Lim S,Lo EP,et al.Interaction of kendomycin and semi-syntheticanalogues with the anti-apoptotic protein Bcl-xl[J].Bioorg Med Chem Lett,2008,18 (21):5771-5773]。
表3化合物1-3的IC50值(μM)
Figure BDA0001960509830000141
a Data are expressed as mean of at least three independentexperiments.Cis-platinum was used as positive control 。
序列表
<110> 中国科学院南海海洋研究所
<120> 一类安莎全碳环聚酮类抗生素及其在制备抗菌药物或抗肿瘤药物中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1608
<212> DNA
<213> 海洋疣孢菌SCSIO 07399(Verrucosispora sp. SCSIO 07399)
<400> 1
tgggcccgac gtcgcatgct cccggccgcc atggcggccg cgggaattcg atttacggct 60
accttgttac gacttcgtcc caatcgccag ccccaccttc gacggctccc tccacaaggg 120
ttgggccacc ggcttcgggt gttgccgact ttcgtgacgt gacgggcggt gtgtacaagg 180
cccgggaacg tattcaccgc agcgttgctg atctgcgatt actagcgact ccgacttcac 240
ggggtcgagt tgcagacccc gatccgaact gagaccggct ttttgggatt cgctccacct 300
cacggtatcg cagcccattg taccggccat tgtagcatgc gtgaagccct ggacataagg 360
ggcatgatga cttgacgtca tccccacctt cctccgagtt gaccccggca gtcttcgatg 420
agtccccgcc ataacgcgct ggcaacatcg aacgagggtt gcgctcgttg cgggacttaa 480
cccaacatct cacgacacga gctgacgaca gccatgcacc acctgtcacc ggccccgaag 540
gaccccacat ctctgcagga tttccggcga tgtcaaaccc aggtaaggtt cttcgcgttg 600
catcgaatta atccgcatgc tccgccgctt gtgcgggccc ccgtcaattc ctttgagttt 660
tagccttgcg gccgtactcc ccaggcgggg cgcttaatgc gttagctgcg gcacagagaa 720
ccggagaggc cccccacacc tagcgcccaa cgtttacagc gtggactacc agggtatcta 780
atcctgttcg ctccccacgc tttcgctcct cagcgtcagt atcggcccag agacccgcct 840
tcgccaccgg tgttcctcct gatatctgcg catttcaccg ctacaccagg aattccagtc 900
tcccctaccg aactctagcc tgcccgtatc gactgcaggc ccgcagttga gccacgggtt 960
ttcacagtcg acgcgacaag ccgcctacga gctctttacg cccaataaat ccggacaacg 1020
ctcgcgccct acgtcttacc gcggctgctg gcacgtagtt ggccggcgct tcttctgcag 1080
gtaccgtcac ttgcgcttcg tccctgctga aagaggttta caacccgaag gccgtcatcc 1140
ctcacgcggc gtcgctgcat caggcttccg cccattgtgc aatattcccc actgctgcct 1200
cccgtaggag tctgggccgt gtctcagtcc cagtgtggcc ggtcgccctc tcaggccggc 1260
tacccgtcgt cgccttggta ggccattacc ccaccaacaa gctgataggc cgcgagccca 1320
tcccaagccg aaaaactttc cacccacaaa catgcgccca tgagtgaata ttcggtatta 1380
gcccccgttt ccgagggtta tcccaaagcc tagggcaggt tgctcacgtg ttactcaccc 1440
gttcgccgct cgagtacccc gaagggcctt tccgctcgac ttgcatgtgt taagcacgcc 1500
gccagcgttc gtcctgagcc aggatcaaac tctaatcact agtgaattcg cggccgcctg 1560
caggtcgacc atatgggaga gctcccaacg cgttggatgc atagcttg 1608

Claims (10)

1.海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399，其保藏编号为：GDMCC No.60466。
2.如式(I)、(II)和(III)所示的任一安莎全碳环聚酮类抗生素或其药用盐：
Figure FDA0001960509820000011
其中，式(I)为kendomycin B，式(II)为kendomycin C，式(III)为kendomycin D。
3.权利要求1所述的海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399在制备权利要求2中所述的kendomycin B、C或D中的应用。
4.一种权利要求2所述的kendomycin B-D的制备方法，其特征在于，所述的kendomycinB-D是从权利要求1所述的海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物中制备得到的。
5.根据权利要求4所述的kendomycin B-D的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(a)制备海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵上清液和菌丝体分开，发酵上清液用丁酮萃取，丁酮相经浓缩后得到浸膏A，菌丝体用丙酮浸泡提取，丙酮浸提液经浓缩后得到浸膏B；
(b)将浸膏A和浸膏B合并，采用硅胶柱层析，以氯仿-甲醇作为洗脱剂，从体积比100:0、99:1、98:2、96:4、94:6、92:8、9:1、8:2、5:5、0:100依次进行梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比为92:8、9:1、8:2和5:5洗脱的馏分Fr.A6～A9，将馏分Fr.A6～A9合并后经反相中压液相色谱，以流动相CH3CN/H2O 10％～100％v/v线性梯度洗脱120min，流速10mL/min，每馏分150mL，顺序得到8个馏分Fr.B1～B8，将馏分Fr.B5经Sephex LH-20葡聚糖凝胶色谱柱，以CHCl3/MeOH体积比1:1作为流动相洗脱，收集馏分再经纯化后得到kendomycin D，将馏分Fr.B7经Sephex LH-20葡聚糖凝胶色谱柱，以CHCl3/MeOH体积比1:1作为流动相洗脱，收集馏分再经纯化后得到kendomycin B和kendomycin C。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的制备海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399的发酵培养物是通过以下方法制备：
将海洋疣孢菌(Verrucosispora sp.)SCSIO 07399接入到种子培养基中，发酵得种子培养液，将种子培养液接入到发酵培养基，发酵得到发酵培养物；所述的种子培养基的配方为：每升含有可溶性淀粉10g、酵母提取物4g、细菌学蛋白胨2g和海盐30g，余量为水；发酵培养基的配方为：每升含有可溶性淀粉20g、葡萄糖10g、麦芽糖10g、玉米粉5g、麦芽提取粉10g、CaCO3 2g和海盐30g，余量为水。
7.权利要求2所述的kendomycin B、kendomycin C或kendomycin D，或其药用盐在制备抗菌药物或抗肿瘤药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的抗菌药物为抗苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药物；所述的抗肿瘤药物为抗人胃癌、人肺癌、人宫颈癌、人肝癌、人乳腺腺癌或人结直肠癌的药物。
9.一种抗菌药物或抗肿瘤药物，其特征在于，含有有效量的权利要求2所述的kendomycin B、kendomycin C或kendomycin D，或其药用盐作为活性成分。
10.根据权利要求9所述的抗菌药物或抗肿瘤药物，其特征在于，所述的抗菌药物为抗苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌或耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的药物；所述的抗肿瘤药物为抗人胃癌、人肺癌、人宫颈癌、人肝癌、人乳腺腺癌或人结直肠癌的药物。
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