CZ299381B6

CZ299381B6 - 2,6,9-Trisubstituovaný purin, jeho použití pro inhibici bunecné proliferace a farmaceutická kompozice a antifungální cinidlo s jeho obsahem

Info

Publication number: CZ299381B6
Application number: CZ0033899A
Authority: CZ
Inventors: T. Lum@Robert; Lynn Blum@Cheri; Mackman@Richard; M. Wick@Michael; R. Schow@Steven
Original assignee: Cv Therapeutics, Inc.
Priority date: 1996-08-02
Filing date: 1997-08-01
Publication date: 2008-07-09
Also published as: US5866702A; UA71890C2; WO1998005335A1; ATE298572T1; ES2242981T3; DE69733674T2; EP1021186B1; HUP9902414A2; BR9710801A; NO990466L; PL189775B1; AU731778B2; NO990466D0; NO323775B1; JP2000515550A; PL331408A1; HUP9902414A3; HK1020884A1; TR199900683T2; CN1161356C

Abstract

2,6,9-Trisubstituovaný purin vzorce I, kde R.sub.1.n. predstavuje halogen; R.sub.2.n. predstavuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, poprípade substituovanou jednou, dvema nebo tremi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, halogenu a -C(O)R; nebo kde R.sub.1.n. predstavuje -NHR.sub.1.n.'; R.sub.1.n.' predstavuje chinolin-3-yl nebo chinolin-6-yl nebo poprípade substituovanou benzylskupinu. Použití terapeuticky úcinného množství tohoto purinu k výrobe farmaceutické kompozice na inhibici bunecné proliferace u savce. Farmaceutická kompozice s obsahem tohoto purinu. Antifungální cinidlo obsahující tento purin, užitecné k lécení fungálních infekcí u cloveka.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká 2,6,9-trisubstituovaných purinových sloučenin, o nichž bylo zjištěno, že jsou selektivními inhibitory kináz buněčného cyklu a jako takové jsou sloučeninami, které inhibují buněčnou proliferaci. 2,6,9-Trisubstituované puriny jsou například užitečné při léčbě autoimunit10 nich chorob, jako je například rheumatoidní arthritis, lupus, diabetes typu I, roztroušená sklerosa apod., rakoviny, kardiovaskulárních chorob, jako je restenóza, choroby host-versus-grafit, dny, polycystické choroby ledvin a jiných proliferativních chorob, jejichž patogenese zahrnuje abnormální proliferaci buněk.

Vynález se rovněž týká 2,6,9-trisubstituovaných purinových sloučenin, o nichž bylo zjištěno, že jsou účinnými a specifickými inhibitory IkappaB-alfa kinázy, která zabraňuje signálně indukované aktivaci NF-kappaB a syntéze cytokinů in vitro a in vivo. O takových inhibitorech se předpokládá, že inhibují syntézu cytokinů a adhesních proteinů, jejichž syntéza je transkripčně regulována NF-kappaB. Ktéto třídě molekul náleží proinflamatomí cytokiny, jako jsou IL-1, IF-6,

TNF a adhesní proteiny (například ICAM, VCAM a selekce) a byla prokázána jejich účast na patogenesi zánětlivých chorob. Účinný inhibitor IkappaB-alfa kinázy je tedy užitečný při klinickém léčení chorob, pro jejichž indukci je nutná aktivace NF-kappaB.

Dosavadní stav techniky

Pokrok v molekulární a buněčné biologii dosažený za několik posledních let přispěl k lepšímu pochopení mechanismu buněčné proliferace a specifických jevů, které se vyskytují během mitózy buněk, viz například „Progress in Cell Cycle Research“, sv. 1, ed. F. Meijer, S. Guidet a Η. Y. F. Tung; Plenům Press, New York, 1995. Tyto studie ukázaly, že v průběhu buněčného cyklu je vývoj kontrolován skupinou serin/threonin kináz nazývaných jako kinázy závislé na cyklinu. Tyto enzymy obsahují (a) katalytický protein, nazývaný jako kináza závislá na cyklinu (CDK), který využívá ATP jako substrát a (b) regulační protein, zvaný cyklin. Procesy, jako je růst, replikace DNA a buněčné dělení řídí různé kombinace cyklin-CDK. Klíčovým členem skupiny enzymů CDK je CDK2. Ukázalo se, že aktivita CDK2 je nezbytná pro postup buněčného cyklu u savců na rozhraní fází Gl/S. Mikroinjekce protilátek proti CDK2 blokuje postup humánních diploidních fibroblastů do S fáze buněčného cyklu. Exprese dominantního negativního mutantu CDK2 v buňkách lidského osteosarkomu má podobný účinek. Tyto studie tedy ukázaly, že inhibice aktivity CDK2 v buňce bude zabraňovat vývoji buňky v průběhu mito40 tického cyklu a indukovat zastavení růstu před S fází. V souladu s tímto přístupem se při in vitro studii s olomoucinem (2-(hydroxyethylamino)-6-benzylamino-9-methylpurinem) ukázalo, že je specifickým inhibitorem CDK2 s IC₅₀ přibližně 2,1 Tg/ml (J. Veselý et al., Eur. J. Biochem. 224, 771 až 786 (1994), L. Meijer „Chemical Inhibitors of Cyclin-Dependent Kinázes“, str. 351 až 356, „Progress in Cell Cycle Research, sv. 1, ed. F. Meijer, S. Guidet a Η. Y. F. Tung; Plenům

Press, New York, 1995. In vivo studie na kulturách savčích buněk ukázaly, že olomoucin inhibuje proliferaci buněk při koncentraci přibližně 50 Tg/ml.

V souvislosti s tímto vynálezem bylo vyvinuto několik sloučenin, jejichž biologická aktivita je značně vyšší než aktivita olomoucinu. In vivo studie se savčími buňkami ukazují, že některé z popsaných sloučenin inhibují proliferaci buněk při koncentracích, které jsou výrazně nižší než u olomoucinu.

Nedávno byla popsána aktivita IkappaB-alfa kinázy v cytoplasmě stimulovaných buněk endothelia pupeěníkové vény člověka (Bennett et al., 1996, J. Biol. Chem. 271, 19680 až 19688).

Některé sloučeniny podle vynálezu byly identifikovány jako účinné a specifické inhibitory

- 1 CZ 299381 B6

IkappaB-alfa kinázy, která zabraňuje signálně indukované NF-kappaB aktivaci a syntéze cytokinů in vitro a in vivo. Aktivace heterodimemího transkripčního faktoru NF-kappaB je komplexní proces. V nestimulovaných buňkách je NF-kappaB (p50/p65) heterodimer umístěn v cytosolu, kde tvoří komplex s inhibiční podjednotkou IkappaB-alfa. IkappaB-alfa se váže k NF-kappaB, čímž maskuje svůj jádrový lokalizační signál a zabraňuje translokaci k jádru. Při stimulaci buněk různými signály (například lipopolysacharidem) je IkappaB-alfa proteasomem rychle fosforylována, ubikvitinována a degradována. Degradace IkappaB-alfa umožní přemístění NF-kappaB k jádru, kde aktivuje transkripci řady genů zánětlivé odpovědi.

Tato pozorování svědčí o tom, že Ikappa-B kináza je atraktivním cílem pro identifikaci inhibitorů, které mohou být užitečné při léčení zánětlivých chorob, pro jejichž indukci je nutná aktivace NF-kappaB.

Podstata vynálezu

Prvním aspektem A) předmětu vynálezu je 2,6,9-trisubstituovaný purin obecného vzorce I

kde

Ri představuje halogen;

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, halogenu a -C(O)R;

R a R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -O- alkylskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku, halogenu, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, merkaptoskupiny, alkylthiolové skupiny s 1 až

10 atomy uhlíku, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části,

-C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí nebo -C(O)O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, kyanoskupiny, fenyloxyskupiny, alkenylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, alkynylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, skupiny vzorce -C(O)alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, nebo fenyl- nebo monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z alkylskupiny s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenu, merkaptoskupiny, alkylthioskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku, zbytku acetylenu, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části,

C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, -C(O)O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, nebo -C(O)alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, hydroxyskupiny, fenylskupiny, fenoxyskupiny, monocyklické nebo bicyklické heteroarylskupiny s jedním atomem dusíku, nitroskupiny nebo kyanoskupiny; a

R₃ představuje halogen, -NR4R5 nebo zbytek obecného vzorce

-2CZ 299381 B6

kde m, n a o představuje nezávisle 1, 2 nebo 3;

Y představuje -NR4R5, hydroxyskupinu, merkaptoskupinu, -OR, nebo alkylthiolovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části; a

R4, Rť, R4, Rť, R₅, R5 a R₅' představuje každý nezávisle vodík, hydroxyskupinu, alkyl10 skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, NRR', nebo fenylskupinu, monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části; nebo

Y a Rť mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo

R4 a R₅ mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku;

R₄' a R₅' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku;

nebo jeho farmaceuticky vhodná sůl.

Přednostní provedení aspektu A) předmětu vynálezu zahrnují zejména 25 - B) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení A), kde R, představuje chlor.

C) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení B), kde R₂ představuje alkylskupinu se až 10 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi hydroxyskupinami.

- D) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení B), kde R₃ představuje halogen nebo

-NR₄R₅.

- E) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení D), kde R₃ představuje chlor.

- F) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení D), kde R₃ představuje -NR₄R₅.

-3 CZ 299381 B6

Druhým aspektem G) předmětu vynálezu je 2,6,9-trisubstituovaný purin podle obecného vzorce Γ

R/ představuje chinolin-3-yl nebo chinolin-6-yl; nebo

Rf představuje benzylskupinu, jejíž kruhová část je substituována jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z halogenu, skupiny OR, thienylskupiny, nitroskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupiny, přičemž fenylskupina je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethyl skupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, nižší alkoxyskupinou se 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, merkaptosku15 pinou, alkylthioskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo kyanoskupinou; nebo

Ri' představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z bromu, jodu, skupiny -OR”, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny nebo fenylskupiny, přičemž fenylskupina je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethyl20 skupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, merkaptoskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo kyanoskupinou;

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, halogenu a -C(O)R;

R a R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, skupiny -O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, halogenu, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až

10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, merkaptoskupiny, alkylthiolové skupiny s 1 až atomy uhlíku, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, -C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, nebo -C(O)O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, kyanoskupiny, fenoxyskupiny, alkenylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, alkynylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, skupiny vzorce -C(O)alkyl s 1 až

10 atomy uhlíku, nebo fenyl- nebo monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z alkylskupiny s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenu, merkaptoskupiny, alkylthiolové skupiny s 1 až 10 atomy uhlíku, acetylenové skupiny, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku alkylové části,

C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, -C(O)O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku alkylové části, nebo -C(O)alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku alkylové části, hydroxyskupiny, fenylskupiny, fenoxyskupiny, monocyklické nebo bicyklické heteroarylskupiny s jedním atomem dusíku, nitroskupiny nebo kyanoskupiny;

-4CZ 299381 B6

R představuje vodík nebo alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, která je popřípadě substituovaná jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, skupiny -O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, halogenu, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, merkaptoskupiny, alkylthiolové skupiny s 1 až

-C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, nebo -C(O)O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, kyanoskupiny, fenoxyskupiny, alkenylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, alkynylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, skupiny vzorce -C(O)alkyl se 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, nebo fenyl- nebo monocyklickou nebo bicyklickou io heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z alkylskupiny s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenu, merkaptoskupiny, alkylthiolové skupiny s 1 až 10 atomy uhlíku, acetylenové skupiny, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, -C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí,

-C(O)O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, nebo -C(O)alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, hydroxyskupiny, fenylskupiny, fenoxyskupiny, monocyklické nebo bicyklické heteroarylskupiny s jedním atomem dusíku, nitroskupiny nebo kyanoskupiny;

R₃ představuje halogen, -NR4R5 nebo zbytek obecného vzorce

kde m, n a o představuje nezávisle 1, 2 nebo 3;

Y představuje -NR4R5, hydroxyskupiny, merkaptoskupinu, -OR nebo alkylthioskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku; a

R4, R4', R4, R4', R5, R5 a R₅' představuje každý nezávisle vodík, hydroxyskupinu, alkylsku³⁰ pinu s 1 až 5 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, NRR', nebo fenylskupinu, monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části; nebo

Y a R4' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo

Ri a R₅ mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo

R4' a R₅' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku;

nebo jeho farmaceutická sůl.

-5CZ 299381 B6

Přednostní provedení druhého aspektu (provedení G)) zahrnují zejména

- H) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení H), kde

R] představuje NH Ar; a

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z bromu, jodu, skupiny -OR, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkyl10 skupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, merkaptoskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.

- I) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení H) kde,

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny a halogenu;

R a R' nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

R představuje vodík nebo alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R3 představuje halogen, -NR4R5 nebo zbytek obecného vzorce

kde m, n a o představuje nezávisle 1, 2 nebo 3;

Y představuje -NR4R5, hydroxyskupinu, merkaptoskupinu, -OR, alkylthioskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku; a

R4, Rť, R4, R4', Rs, R5', Rs a R₅' představuje každý nezávisle vodík, alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, NRR', nebo fenylskupinu, monocyklickou nebo bicyklickou heteroaryl35 skupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části;

Y a Rf mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo

R, a R₅ mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo

-6CZ 299381 B6

Rf a R₅' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku.

- J) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení H), kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku,

R a R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

R představuje vodík nebo alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

R4 a R₅ nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenyl15 skupinu, monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části.

- K) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle stanovení H), kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku,

R představuje vodík nebo alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

R4 a R₅ nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenyl30 skupinu, monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části a

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z bromu, jodu, skupiny -OR, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.

L) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení H), kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku,

R představuje vodík nebo alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

Rt a R₅ nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substi50 tuovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části a

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z bromu, jodu, skupiny -OR, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo

-7CZ 299381 B6 fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.

- M) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení G), kde

R) představuje NHCH₂Ar;

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými ío z halogenu, skupiny -OR, thienylskupiny, nitroskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, merkaptoskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.

- N) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení M), kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny nebo halogenu;

R₃ představuje halogen, -NR4R5 nebo zbytek obecného vzorce

kde m, n a o představuje nezávisle 1, 2 nebo 3;

Rt, Rť, Rť', Rť”, Rs, R5', R5 a R₅' představuje každý nezávisle vodík, nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, NRR', nebo fenylskupinu, monocykl ickou nebo bicykl ickou heteroaryl35 skupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové ěásti; nebo

Y a Rť mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo 40 Rf' a R₅ mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo

-8CZ 299381 B6

R4' a R₅' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; a

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z halogenu, skupiny -OR, thienylskupiny, nitroskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupinu, která je nesubstituované nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, merkaptoskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.

- O) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle M), kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

R4 a R₅ nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku; popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenyl20 skupiny nebo monocyklické nebo bicyklické heteroarylskupiny s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části.

- P) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení M), kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

Rt a R₅ nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu, popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenylskupiny nebo monocyklické nebo bicyklické heteroarylskupiny s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části;

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z halogenu, skupiny -OR, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupinu, která je nesubstituované nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxy40 skupinou, aminoskupinou, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.

- Q) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení M), kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

R4 a R₅ nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části; a

-9CL 299381 B6

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z halogenu, skupiny -OR, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupi5 nou, aminoskupinou, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.

- R) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení G), kde

R, představuje NHRf a Rf představuje chinolin-3-ylskupinu.

- S) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení H), kde Ar představuje 3-jodfenylskupinu, 4-bromfenylskupinu nebo 4-bifenylskupinu.

- T) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení M), kde CH₂Ar představuje 4-fenylbenzyl, 15 4-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-(2-thienyl)benzyl, 4-{4-methyl)fenylbenzyl, 4—(4—trifluormethyl)fenylbenzyl, 3-(4-kyanofenylbenzyl), 4-(4-kyanfenyl)benzyl, 4-(2-pyridyl)benzyl, 3-methoxybenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,5-difluorbenzyl, 4- a 4-nitrobenzyl.

- U) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení K), kde R₃ představuje chlor, diethanolamino, diizopropanolamino, 2-aminomethylamino, 2-aminopropylamino, 2-(methylamino)ethylamino, l-hydroxymethyl-2-methylpropylamin nebo 3-amino-l,2-propandiol a R₂ představuje izopropyl.

- V) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení U), kde R₃ představuje chlor, diethanolamino, diizopropanolamino, 2-aminoethylamino, 2-aminopropylamino, l-hydroxymethyl-2methylpropylamin nebo 3-amino-l,2-propandiol a R₂ představuje izopropyl.

- X) 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle provedení G), kterým je

2-{(2-hydroxyethyl)-[9-izopropyl-6-(4-methoxybenzyl-amino)-9H-purin-2-yl]amino}ethanol; nebo

2-[[6-(4-brombenzylamino)-9-izopropyl-9H-purin-2-yl]-(2-hydroxyethyl)amino]ethanol].

První a druhý aspekt předmětu vynálezu zahrnuje i soli těchto purinů s kationtem a adičních solí s kyselinou.

Třetím aspektem předmětu vynálezu je použití terapeuticky účinného množství 2,6,9-trisub40 stituovaného purinu podle některého z provedení G) až X) k výrobě farmaceutické kompozice na inhibicí buněčné proliferace u savce. Terapeuticky účinné množství sloučeniny přitom přednostně leží v rozmezí od 0,001 do 100 mg/kg tělesné hmotnosti savce.

Výše uvedená kompozice se zejména hodí k podávání savci, zvláště člověku, který trpí poruchou buněčné proliferace zvolenou ze souboru sestávajícího z rheumatoidní arthritis, lupu, diabetes typu I, roztroušené sklerosy, rakoviny, restenózy, choroby host—versus—graft, dny a polycystické choroby ledvin.

Čtvrtým aspektem předmětu vynálezu je farmaceutická kompozice, která obsahuje 2,6,9-tri50 substituovaný purin podle některého z provedení G) až X) a jeden nebo více farmaceutických excipientů. Přednostně je tato kompozice ve formě roztoku nebo tablety.

Konečně pátým aspektem předmětu vynálezu je antifungální činidlo užitečné k léčení fungálních infekcí u člověka, které obsahuje 2,6,9-trisubstituovaný purin podle některého z provedení G) až

X).

- 10CZ 299381 B6

Přehled obrázku na výkrese

Na obr. 1 je znázorněna střední plocha neointimy karotidové artérie (mm²) u potkana ošetřená solným vehikulem a sloučeninou 3 připravenou podle příkladu 2, kde prázdný sloupec představuje neošetřenou část karotidy a plný sloupec představuje ošetřenou část karotidy.

Dále jsou definovány pojmy, jichž se používá v tomto textu.

ío Pod pojmem „halogen“, ať už samotným nebo v kombinaci, se rozumí všechny halogeny, tj. chlor (Cl), fluor (F), brom (Br) a jod (1).

Pod pojmem „hydroxy“ nebo „hydroxyl“ se rozumí skupina vzorce -OH.

Pod pojmem „thiol“ nebo „merkapto“ se rozumí skupina vzorce -SH.

Pod pojmem „alkyl“, ať už samotným, nebo v kombinaci, se rozumí zbytek odvozený od alkanů, který obsahuje 1 až 20, přednostně 1 až 15 atomů uhlíku (pokud není počet uhlíkových atomů konkrétně uveden). Do rozsahu tohoto pojmu spadají alkylskupiny s přímým řetězcem, rozvětve20 né alkylskupiny a cykloalkylskupiny. V přednostním provedení přímá nebo rozvětvená alkylskupina obsahuje 1 až 15, výhodněji 1 až 8, ještě výhodněji 1 až 6 atomů uhlíku, ještě výhodněji 1 až 4 a nej výhodněji 1 až 2 atomy uhlíku. Jako příklady takových alkylskupin lze uvést methylethyl-, propyl-, izopropyl-, butyl-, terc-butylskupinu apod. Cykloalkylskupina je přednostně monocyklickým, bicyklickým nebo tricyklickým kruhovým systémem se 3 až 8, výhodněji 3 až 6 členy v jednom kruhu. Jako příklady takových skupin je možno uvést cyklopropyl-, cyklopentyl-, cyklohexyl-, adamantylskupinu apod. Do rozsahu pojmu alkyl také spadají alkylskupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem, které obsahují cykloalkylovou nebo jsou přerušeny cykloalkylovou částí. Přímá nebo rozvětvená alkylskupina je připojena v jakémkoliv dostupném místě, které umožní vznik stabilní sloučeniny. Jako neomezující příklady takových skupin lze uvést 4-(izopropyl)cyklohexylethylskupinu nebo 2-methylcyklopropylpentylskupinu. Substituovanou alkylskupinou je přímá, rozvětvená nebo cyklická alkylskupina definovaná výše, která je substituována 1 až 3 substituenty nezávisle zvolenými ze souboru sestávajícího z halogenu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, alkylthioskupiny, alkylsulfinylskupiny, alkylsulfonylskupiny, acyloxyskupiny, aryloxyskupiny, heteroaryloxyskupiny, aminoskupiny popřípadě mono- nebo disubstituované alkylskupinou, arylskupinou nebo heteroarylskupinou, amidinoskupiny, zbytku močoviny popřípadě substituovaného alkylskupinou, arylskupinou, heteroarylskupinou nebo heterocyklylskupinou, aminosulfonylskupiny, která je popřípadě N-mono- nebo N,N-disubstituována alkylskupinou, arylskupinou nebo heteroarylskupinou, alkylsulfonylaminoskupiny, arylsulfonylaminoskupiny, heteroarylsulfonylaminoskupiny, alkylkarbonylaminoskupiny, aryl40 karbonylaminoskupiny, heteroarylkarbonylaminoskupiny apod.

Pod pojmem „alkenyl“, ať už samotným nebo v kombinaci, se rozumí přímý, rozvětvený nebo cyklický uhlovodíkový zbytek, který obsahuje 2 až 20, přednostně 2 až 17, výhodněji 2 až 10, ještě výhodněji 2 až 8 a nejvýhodněji 2 až 4 atomy uhlíku a alespoň jednu, přednostně 1 až 3, výhodněji 1 až 2 a nej výhodněji 1 dvojnou vazbu uhlík-uhlík. V případě cykloalkylskupiny, konjugace více než jedné dvojné vazby uhlík-uhlík není taková, aby kruhu propůjčovala aromatický charakter. Dvojné vazby uhlík-uhlík mohou být obsaženy v cykloalkylové části, s výjimkou cyklopropylskupiny, nebo v části s přímým nebo rozvětveným řetězcem. Jako příklady alkenylskupin je možno uvést ethenyl-, propenyl-, izopropenyl-, butenyl-, cyklohexenyl-, cyklo50 hexenylalkylskupinu apod. Substituovanou alkenylskupinou je přímá nebo rozvětvená alkenylskupina nebo cykloalkenylskupina definovaná výše, která je substituována 1 až 3 substituenty nezávisle zvolenými ze souboru sestávajícího z halogenu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, alkylthioskupiny, alkylsulfínylskupiny, alkylsulfonylskupiny, acyloxyskupiny, aryloxyskupiny, heteroaryloxyskupiny, aminoskupiny popřípadě mono- nebo disubstituované alkylskupinou, arylskupinou nebo heteroarylskupinou, amidinoskupiny, zbytku močoviny popřípadě substituo-11 CZ 299381 B6 váného alkylskupinou, arylskupinou, heteroarylskupinou nebo heterocyklylskupinou, aminosulfonylskupiny, která je popřípadě N-mono- nebo Ν,Ν-disubstituována alkylskupinou, arylskupinou nebo heteroarylskupinou, alkylsulfonylaminoskupiny, arylsulfonylaminoskupiny, heteroarylsulfonylaminoskupiny, alkylkarbonylaminoskupiny, arylkarbonylaminoskupiny, heteroarylkarbonylaminoskupiny, karboxyskupiny, alkoxykarbonylskupiny, aryloxykarbonylskupiny, heteroaryloxykarbonylskupiny apod., vázanými kjakémukoliv dostupnému místu, které umožní vznik stabilní sloučeniny.

Pod pojmem „alkinyl“, ať už samotným nebo v kombinaci, se rozumí přímý nebo rozvětvený uhlovodíkový zbytek, který obsahuje 2 až 20, přednostně 2 až 17, výhodněji 2 až 10, ještě výhodněji 2 až 8 a nejvýhodněji 2 až 4 atomy uhlíku a alespoň jednu, přednostně jednu, trojnou vazbu uhlík-uhlík. Jako příklady alkinylskupin lze uvést ethinyl-, propinyl-, butinylskupinu apod. Substituovaná alkinylskupina představuje přímou alkinylskupinu nebo rozvětvenou alkinylskupinu definovanou výše, která je substituována 1 až 3 substituenty nezávisle zvolenými ze souboru sestávajícího z halogenu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, alkylthioskupiny, alkylsulfinylskupiny, alkylsulfonylskupiny, acyloxyskupiny, aryloxyskupiny, heteroaryloxyskupiny, aminoskupiny popřípadě mono- nebo disubstituované alkylskupinou, arylskupinou nebo heteroarylskupinou, amidinoskupiny, zbytku močoviny popřípadě substituovaného alkylskupinou, arylskupinou, heteroarylskupinou nebo heterocyklylskupinou, aminosulfonylskupiny, která je popřípadě N-mono- nebo Ν,Ν-disubstituována alkylskupinou, arylskupinou nebo heteroarylskupinou, alkylsulfonylaminoskupiny, arylsulfonylaminoskupiny, heteroarylsulfonylaminoskupiny, alkylkarbonylaminoskupiny, arylkarbonylaminoskupiny, heteroarylkarbonylaminoskupiny apod., které jsou vázány v kterémkoliv dostupném místě umožňujícím vznik stabilní sloučeniny.

Pod pojmem „alkylalkenyl“ se rozumí skupina vzorce -R-CR'=CR'R, kde R představuje nižší alkylskupinu nebo substituovanou nižší alkylskupinu a R', R' a R představuje každý nezávisle vodík, halogen, nižší alkylskupinu, substituovanou nižší alkylskupinu, acylskupinu, arylskupinu, substituovanou arylskupinu, hetarylskupinu nebo substituovanou hetarylskupinu definovanou dále.

Pod pojmem „alkylalkinyl“ se rozumí skupina vzorce -RC=CR', kde R představuje nižší alkylskupinu nebo substituovanou nižší alkylskupinu a R' představuje vodík, nižší alkylskupinu, substituovanou nižší alkylskupinu, acylskupinu, arylskupinu, substituovanou arylskupinu, hetarylskupinu nebo substituovanou hetarylskupinu definovanou dále.

Pod pojmem „alkoxy“ se rozumí skupina vzorce -OR, kde R představuje nižší alkylskupinu, substituovanou nižší alkylskupinu, acylskupinu arylskupinu, substituovanou arylskupinu, aralkylskupinu, substituovanou aralkylskupinu, heteroalkylskupinu, heteroarylalkylskupinu, cyklo40 alkylskupinu, substituovanou cykloalkylskupinu, cykloheteroalkylskupinu nebo substituovanou cykloheteroalkylskupinu, jak jsou definovány v tomto textu.

Pod pojmem „alkylthio“ se rozumí skupinu -SR, -S(O)_n=,_₂-R, kde R představuje nižší alkylskupinu, substituovanou nižší alkylskupinu, arylskupinu, substituovanou arylskupinu, aralkyl45 skupinu nebo substituovanou aralkylskupinu, jak jsou definovány v tomto textu.

Pod pojmem „acyl“ se rozumí skupina vzorce -C(O)R, kde R představuje vodík, nižší alkylskupinu, substituovanou nižší alkylskupinu, arylskupinu, substituovanou arylskupinu apod., jak jsou definovány v tomto textu.

Pod pojmem „aryloxy“ se rozumí skupina vzorce -OAr, kde Ar představuje arylskupinu, substituovanou arylskupinu, heteroarylskupinu nebo substituovanou heteroarylskupinu, jak jsou definovány v tomto textu.

- 12CZ 299381 B6

Pod pojmem „amino“ se rozumí skupina vzorce NRR', kde R a R' představuje každý nezávisle vodík, nižší alkylskupinu, substituovanou nižší alkylskupinu, arylskupinu, substituovanou aiylskupinu, hetarylskupinu nebo substituovanou hetarylskupinu, jak jsou definovány v tomto textu, nebo acylskupinu.

Pod pojmem „amido“ se rozumí skupina vzorce -C(O)NRR', kde R a R' představuje každý nezávisle vodík, nižší alkylskupinu, substituovanou nižší alkylskupinu, arylskupinu, substituovanou arylskupinu, hetarylskupinu nebo substituovanou hetarylskupinu, jak jsou definovány v tomto textu.

Pod pojmem „karboxyl“ se rozumí skupina vzorce -C(O)OR, kde R představuje vodík, nižší alkylskupinu, substituovanou nižší alkylskupinu, arylskupinu, substituovanou arylskupinu, hetarylskupinu, nebo substituovanou hetarylskupinu, jak jsou definovány v tomto textu.

Pod pojmem „aryl“, ať už samotným nebo v kombinaci, se rozumí fenylskupina nebo nafiylskupina popřípadě karbocyklicky anelovaná s cykloalkylskupinou přednostně s 5- až 7-, výhodněji 5- až 6-členným kruhem a/nebo popřípadě substituovaná 1 až 3 skupinami nebo substituenty zvolenými ze souboru sestávajícího z halogenu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, alkylthioskupiny, alkylsulfinylskupiny, alkylsulfonylskupiny, acyloxyskupiny, aryloxyskupiny, heteroaryloxyskupiny, aminoskupiny popřípadě mono- nebo disubstituované alkylskupinou, arylskupinou nebo heteroarylskupinou, amidinoskupiny, zbytku močoviny popřípadě substituovaného alkylskupinou, arylskupinou, heteroarylskupinou nebo heterocyklylskupinou, aminosulfonylskupiny, která je popřípadě N-mono- nebo Ν,Ν-disubstituována alkylskupinou, arylskupinou nebo heteroarylskupinou, alkylsulfonylaminoskupiny, arylsulfonylaminoskupiny, heteroarylsulfonylaminoskupiny, alkylkarbonylaminoskupiny, arylkarbonylaminoskupiny, heteroarylkarbonylaminoskupiny apod.

Pod pojmem „substituovaný aryl“ se rozumí arylskupina substituovaná jednou nebo více funkčními skupinami, jako je například halogen, nižší alkylskupina, nižší alkoxyskupina, alkylthio30 skupina, acetylenová skupina, aminoskupina, amidoskupina, karboxyskupina, hydroxyskupina, arylskupina, aryloxyskupina, heterocyklická skupina, hetarylskupina, substituovaná hetarylskupina, nitroskupina, kyanoskupina, thiolová skupina, sulfamidoskupina apod.

Pod pojmem „heterocyklická skupina“ se rozumí nasycená, nenasycená nebo aromatická karbo35 cyklická skupina s jediným kruhem (například morfolino-, pyridyl- nebo furylskupina) nebo několika anelovanými kruhy (například naftpyridyl-, chinoxalyl-, chinolyl- indolizinyl- nebo benzo[b]thienylskupina), která v obsahuje alespoň jeden kruhový heteroatom, jako dusíkový, kyslíkový nebo sírový heteroatom a je nesubstituovaná nebo substituovaná například halogenem, nižší alkylskupinou, nižší alkoxyskupinou, alkylthioskupinou, acetylenovou skupinou, amino40 skupinou, amidoskupinou, karboxyskupinou, hydroxyskupinou, arylskupinou, aryloxyskupinou, heterocyklickou skupinou, hetarylskupinou, substituovanou hetarylskupinou, nitroskupinou, kyanoskupinou, substituovanou hetarylskupinou, nitroskupinou, kyanoskupinou, thiolovou skupinou, sulfamidoskupinou apod.

Pod pojmem „heteroaryl“, ať už samotným nebo v kombinaci, se rozumí monocyklická aromatická kruhová struktura obsahující 5 nebo 6 kruhových atomů nebo bicyklická aromatická skupina s 8 až 10 atomy, která obsahuje jeden nebo více, přednostně 1 až 4, výhodněji 1 až 3 aještě výhodněji 1 až 2 heteroatomy, nezávisle zvolené ze souboru sestávajícího z atomů kyslíku, síry a dusíku, a je popřípadě substituovaná 1 až 3 skupinami nebo substituenty zvolenými ze souboru sestávajícího z halogenu, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny, alkylthioskupiny, alkylsulfinylskupiny, alkylsulfonylskupiny, acyloxyskupiny, aryloxyskupiny, heteroaryloxyskupiny, aminoskupiny popřípadě mono- nebo disubstituované alkylskupinou, arylskupinou nebo heteroarylskupinou, amidinoskupiny, zbytku močoviny popřípadě substituovaného alkylskupinou, arylskupinou, heteroarylskupinou nebo heterocyklylskupinou, aminosulfonylskupiny, která je popří55 pádě N-mono- nebo Ν,Ν-disubstituována alkylskupinou, arylskupinou nebo heteroarylskupinou,

-13CZ 299381 B6 alkylsulfonylaminoskupiny, arylsulfonylaminoskupiny, heteroarylsulfonylaminoskupiny, alkylkarbonylaminoskupiny, arylkarbonylaminoskupiny, heteroarylkarbonylaminoskupiny apod. Do rozsahu tohoto pojmu také spadají skupiny, které obsahují oxidovanou síru nebo dusík, ve formě sulfínylskupiny, sulfonylskupiny a N-oxidu terciárního kruhového dusíku. Uhlíkové a dusíkové atomy jsou takovým místem připojení heteroarylová kruhové struktury, aby se zachoval stabilní aromatický kruh. Jako příklady heteroarylskupin je možno uvést pyridyl-, pyridazinylpyrazinyl-, chinazolinyl-, purinyl-, indolyl—, chinolyl-, pyrimidinyl-, pyrrolyl-, oxazolylthiazolyl-, thienyl-, izoxazolyl-, oxathiadiazolyl-, izothiazolyl-, tetrazolyl-, imidazolyltriazinyl-, furyl-, benzofuryl-, indolylskupinu apod. Substituovaná heteroarylskupina obsahuje substituent připojený ke kterémukoliv dostupnému atomu uhlíku nebo dusíku, který umožní vznik stabilní sloučeniny.

Pod pojmem „substituovaný heteroaryl“ se rozumí heterocyklická skupina popřípadě mononebo polysubstituovaná jednou nebo více funkčními skupinami, jako je například halogen, nižší alkylskupina, nižší alkoxyskupina, alkylthioskupina, acetylenová skupina, aminoskupina, amidoskupina, karboxyskupina, hydroxyskupina, arylskupina, aryloxyskupina, heterocyklická skupina, substituovaná heterocyklická skupina, hetarylskupina, substituovaná hetarylskupina, nitroskupina, kyanoskupina, thiolová skupina, sulfamidová skupina apod.

Pod pojmem „aralkyl“, ať už samotným nebo v kombinaci, se rozumí zbytek, v němž je arylskupina definovaná výše připojena k alkylovému zbytku definovanému výše. Jako příklady takových skupin je možno uvést benzylskupinu, fenylpropylskupinu, naftylmethylskupinu, 4-fluorbenzylskupinu apod.

Pod pojmem „heteroalkyl“ se rozumí skupina vzorce -R-Het, kde Het představuje heterocyklickou skupinu a R představuje nižší alkylskupinu. Heteroalkylskupiny mohou být nesubstituované nebo substituované, například halogenem, nižší alkylskupinou, nižší alkoxyskupinou, alkylthioskupinou, acetylenovou skupinou, aminoskupinou, amidoskupinou, karboxyskupinou, arylskupinou, aryloxyskupinou, heterocyklickou skupinou, substituovanou heterocyklickou sku30 pinou, hetarylskupinou, substituovanou hetarylskupinou, nitroskupinou, kyanoskupinou, thiolovou skupinou, sulfamidoskupinou apod.

Pod pojmem „heteroarylalkyl“ se rozumí skupina vzorce -R-HetAr, kde HetAr představuje heteroarylskupinu a R představuje nižší alkylskupinu nebo substituovanou nižší alkylskupinu.

Heteroarylalkylskupiny mohou být nesubstituovaná nebo substituované, například halogenem, nižší alkylskupinou, substituovanou nižší alkylskupinou, alkoxyskupinou, alkylthioskupinou, acetylenovou skupinou, arylskupinou, aryloxyskupinou, heterocyklickou skupinou, substituovanou heterocyklickou skupinou, hetarylskupinou, substituovanou hetarylskupinou, nitroskupinou, kyanoskupinou, thiolovou skupinou, sulfamidoskupinou apod.

Pod pojmem „cykloalkyl“ se rozumí dvojvazná cyklická nebo polycyklická alkylskupina obsahující 3 až 15 atomů uhlíku.

Pod pojmem „substituovaný cykloalkyl“ se rozumí cykloalkylskupina substituovaná jedním nebo více substituenty, jako například halogenem, nižší alkylskupinou, substituovanou nižší alkylskupinou, alkoxyskupinou, alkylthioskupinou, acetylenovou skupinou, arylskupinou, aryloxyskupinou, heterocyklickou skupinou, substituovanou heterocyklickou skupinou, hetarylskupinou, substituovanou hetarylskupinou, nitroskupinou, kyanoskupinou, thiolovou skupinou, sulfamidoskupinou apod.

Pod pojmem „cykloheteroalkyl“ se rozumí cykloalkylskupina, v níž je alespoň jeden z kruhových atomů uhlíku nahrazen heteroatomem (například atomem dusíku, kyslíku, síry nebo fosforu).

Pod pojmem „substituovaný cykloheteroalkyl“ se rozumí cykloheteroalkylskupina definovaná výše, která obsahuje jedním nebo více substituenty, jako například halogenem, nižší alkylskupi- 14CZ 299381 B6 nou, nižší alkoxyskupinou, alkylthioskupinou, acetylenovou skupinou, aminoskupinou, amidoskupinou, karboxyskupinou, hydroxyskupinou, arylskupinu, aryloxyskupinou, heterocyklickou skupinou, substituovanou heterocyklickou skupinou, hetarylskupinou, substituovanou hetarylskupinou, nitroskupinou, kyanoskupinou, thiolovou skupinou, sulfamidoskupinou apod.

Pod pojmem „alkylcykloalkyl“ se rozumí skupina vzorce -R-cykloalkyl, kde cykloalkyl představuje cykloalkylskupinu a R představuje nižší alkylskupinou nebo substituovanou nižší alkylskupinu. Cykloalkylová skupina je nesubstituovaná nebo substituovaná například halogenem, nižší alkylskupinou, nižší alkoxyskupinou, alkylthioskupinou, acetylenovou skupinou, aminosku10 pinou, amidoskupinou, karboxyskupinou, hydroxyskupinou, arylskupinou, aryloxyskupinou, heterocyklickou skupinou, substituovanou heterocyklickou skupinou, hetarylskupinou, substituovanou hetarylskupinou, nitroskupinou, kyanoskupinou, thiolovou skupinou, sulfamidoskupinou apod.

Pod pojmem „alkylcykloheteroalkyl“ se rozumí skupina vzorce -R-cykloheteroalkyl, kde R představuje nižší alkylskupinu nebo substituovanou nižší alkylskupinu. Cykloheteroalkylskupina je nesubstituovaná nebo substituovaná například halogenem, nižší alkylskupinou, nižší alkoxyskupinou, alkylthioskupinou, acetylenovou skupinou, aminoskupinou, amidoskupinou, karboxyskupinou, hydroxyskupinou, arylskupinou, aryloxyskupinou, heterocyklickou skupinou, substi20 tuovanou heterocyklickou skupinou, hetarylskupinou, substituovanou hetarylskupinou, nitroskupinou, kyanoskupinou, thiolovou skupinou, sulfamidoskupinou apod.

Pod pojmem „farmakologický vhodné soli“ se rozumějí soli připravované obvyklými postupy, které jsou odborníkům v tomto oboru dobře známy. Tyto soli zahrnují soli bazických sloučenin podle vynálezu s anorganickými a organickými kyselinami. Jako neomezující příklady takových kyselin lze uvést kyselinu chlorovodíkovou, kyselinu bromovodíkovou, kyselinu sírovou, kyselinu fosforečnou, kyselinu methansulfonovou, kyselinu ethansulfonovou, kyselinu jablečnou, kyselinu octovou, kyselinu šťavelovou, kyselinu vinnou, kyselinu citrónovou, kyselinu mléčnou, kyselinu fumarovou, kyselinu jantarovou, kyselinu maleinovou, kyselinu salicylovou, kyselinu benzoovou, kyselinu fenyloctovou, kyselinu mandlovou apod. V případě, že sloučeniny obecného vzorce I až III obsahují kyselou funkční skupinu, jako karboxyskupinu, budou odborníku v tomto oboru známy vhodné kationtové protějšky karboxyskupiny. Jako příklad takových kationtů je možno uvést kationty alkalických kovů, kovů alkalických zemin, amoniové, kvartemí amoniové kationty apod. Další příklady „farmakologický vhodných solí“ je možno nalézt v publikaci Berge et al., J. Pharm. Sci. 66,1 (1977).

V případě, že konečná 2,6,9-trisubstituovaná purinová sloučenina podle vynálezu obsahuje bazickou skupinu, je možno připravovat její adiční soli s kyselinami. Adiční soli sloučenin podle vynálezu s kyselinami se z rodičovské sloučeniny připravují standardním postupem ve vhodném rozpouštědle za použití přebytku kyseliny. Jako neomezující příklady kyselin lze uvést kyselinu chlorovodíkovou, kyselinu bromovodíkovou, kyselinu sírovou, kyselinu fosforečnou, kyselinu octovou, kyselinu maleinovou, kyselinu jantarovou nebo kyselinu methansulfonovou. Zvláště užitečnou formou je hydrochloridová sůl.

Pokud konečná 2,6,9-trisubstituovaná purinová sloučeniny obsahuje kyselou skupinu, je možno připravovat jejich soli s kationty. Obvykle se tyto soli připravují tak, že se kyselá rodičovská sloučenina nechá reagovat s přebytkem alkalického činidla. Jako neomezující příklady takových alkalických činidel lze uvést hydroxidy, uhličitany a alkoxidy obsahující vhodný kation, jako například sodný, draselný, vápenatý nebo amoniový kation. Některé sloučeniny tvoří vnitřní soli nebo zwitterionty, které jsou rovněž vhodné.

Sloučeniny podle vynálezu jsou užitečné při inhibici buněčné proliferace u savců, včetně lidí.

2,6,9-Trisubstituované puriny jsou například užitečné při léčení autoimunitních chorob, jako je například rheumatoidní arthritis, lupus, diabetes typu I, roztroušená sklerosa atd., při léčení rakoviny, kardiovaskulárních chorob, jako restenózy, choroby host—versus—graft, dny, poly- 15CZ 299381 B6 cystické choroby ledvin a jiných proliferativních chorob, jejichž patogenese zahrnuje abnormální proliferaci buněk.

Způsob léčení zahrnuje parenterální a orální podávání účinného množství zvolené sloučeniny podle vynálezu, která je přednostně dispergována ve farmaceutickém nosiči. Terapeuticky užitečné množství sloučeniny podle vynálezu bude obvykle v rozmezí od asi 0,01 do asi 100 mg/kg, avšak jak je zřejmé odborníku v tomto oboru, bude záviset na způsobu podávání, věku a stavu pacienta. Terapeuticky užitečné množství sloučeniny podle vynálezu je možno podávat jednou až desetkrát za den, nebo častěji, v případě akutní nebo chronické choroby, ío Budou-li sloučeniny podle vynálezu podávány v souladu s tímto popisem, nepředpokládají se žádné nepřijatelné toxikologické účinky.

Sloučeniny podle vynálezu jsou také užitečné jako protizánětlivá a antifungální činidla. Jsou jako takové užitečné pro léčbu zánětů a fungálních infekcí u lidí a zvířat a pro léčbu fungálních infekcí u rostlin.

Farmaceutické kompozice, které obsahují sloučeniny podle vynálezu a/nebo jejich deriváty, je možno připravovat ve formě roztoků nebo lyofilizovaných prášků pro parenterální podávání. Prostředek lze z prášku rekonstituovat tak, že se k němu před aplikací přidá vhodné ředidlo nebo jiný farmaceuticky vhodný nosič. Pokud se používá kompozice podle vynálezu v kapalné formě, jsou přednostně začleněny do pufrovaného isotonického vodného roztoku. Jako příklady vhodných ředidel je možno uvést normální isotonický solný roztok, standardní 5% dextronu ve vodě a tlumivý roztok octanu sodného nebo amonného. Takové kapalné prostředky j sou vhodné pro parenterální podávání, ale lze je použít rovněž pro orální podávání.

K farmaceutickým kompozicím, které obsahují sloučeniny podle tohoto vynálezu, může být žádoucí přidávat excipienty, jako polyvinylpyrrolidinon, želatinu, hydroxycelulózu, klovatinu, polyethylenglykol, mannitol, chlorid sodný, citran sodný nebo jakýkoliv jiný excipient známý odborníkům v tomto oboru. Alternativně sloučeniny podle vynálezu mohou tvořit náplň tobolek, mohou být tabletovány nebo připravovány ve formě emulze nebo sirupu pro orální podávání. Za účelem posílení nebo stabilizace kompozice nebo usnadnění její přípravy je možno přidávat farmaceuticky vhodné pevné nebo kapalné nosiče. Jako neomezující příklady kapalných nosičů lze uvést sirup, arašídový olej, olivový olej, glycerin, solný roztok, alkoholy a vodu. Pevnými nosiči jsou například škrob, laktóza, dihydrát síranu vápenatého, teffa alba, stearan hořečnatý nebo kyselina stearová, mastek, pektin, klovatiny, agar nebo želatina. Nosič také může obsahovat látku pro přetrvávající uvolňování, jako například glycerylmonostearat nebo glyceryldistearát, samotný nebo s voskem. Množství pevného nosiče je proměnlivé, přednostně však bude ležet v rozmezí od asi 20 mg do asi 1 g na dávkovači jednotku.

Farmaceutické dávkovači formy je možno připravovat za použití obvyklých postupů, jako je například mletí, míšení, granulce a lisování, je-li to nezbytné, pro přípravu tabletových forem; nebo mletí, míšení a plnění do tvrdých želatinových tobolek. V případě, že se použije kapalného nosiče, přípravky budou mít formu sirupu, elixíru, emulze nebo vodné nebo nevodné suspenze. Takové kapalné prostředky lze podávat přímo nebo jimi plnit měkké želatinové tobolky.

Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Sloučeniny podle vynálezu se připravují obvyklými postupy organické chemie. Reakční sekvence znázorněná v následujícím schématu syntézy je obecným způsobem syntézy sloučenin podle vynálezu.

-16CZ 299381 B6

Cl

R,

-sloučenina butanol, Λ

NaH

I R^-sloučenina

N-methylpyrrolidinon

R^-sloučenina

Ra

2,6-Dichlorpurin se rozpustí v butanolu a k výslednému roztoku se přidá vhodný R|-amin. Reakční směs se několik hodin zahřívá a poté ochladí, čímž se získá sloučenina vzorce l. Ke sloučenině vzorce l se přidá hydrid sodný a poté R₂-sloučenina a izoluje se sloučenina vzorce 2.

Ke sloučenině vzorce 2 se přidá R₃-sloučenina ve formě roztoku v N-methylpyrrolidinonu. Vzniklá směs se zahřívá po vhodné období a po následném přečištění se získá požadovaná sloučenina.

Výše popsaným postupem se připraví následující sloučenina.

Příprava 2-chlor-6-(4-methoxybenzylamino)purinu (1)

2,6-Dichlorpurin (4,06 g, 21,5 mmol) se suspenduje v n-butanolu (150 ml) a ke vzniklé suspenzi se přidá 4-methoxybenzylamin (3,4 ml, 26 mmol). Vzniklý roztok se vyjasní a o několik minut poté opět zakalí. Tento roztok se 2 hodiny zahřívá na 120 °C, poté ochladí a odpaří se zněj n-butanol. Zbytek se suspenduje ve směsi vody a diethyletheru. K výsledné suspenzi se přidá roztok 2M hydroxidu sodného (1,3 ml, 26 mmol). Vzniklý roztok se 10 minut míchá a poté přefiltruje. Odfdtrovaná sraženina se promyje vodou a malou dávkou etheru a vysuší za vakua. Matečný louh se přes noc nechá stát a následující den se shromáždí další krystaly, které se promyjí diethyletherem. Výtěžek = 71 %.

Příprava 2-chlor-6-(4-methoxybenzylamino)-9-izopropylpurinu (2)

2-Chlor-6-(4-methoxybenzylamino)purin se suspenduje v suchém dimethylformamidu (5 ml).

Vzniklá suspenze se smísí s hydridem sodným (60% disperze, 82 mg, 2,06 mmol). Výsledná suspenze se 30 minut míchá. Ke vzniklému žlutozelenému roztoku se během 5 minut přidá 2-jodpropan (0,280 ml, 1,7 ekv.). Takto připravený roztok se 2 dny míchá a přidá se kněmu voda. Vodný roztok se extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se odpaří, čímž se získá izopropylpurinový produkt (výtěžek = 508 mg, 89 %)

Příprava 2-diethanolamino-6-(4-methoxybenzylamino)-9-izopropylpurinu (3)

Purin (1,65 g, 4,98 mmol) se rozpustí v dimethylsulfoxidu (12 ml) a diethanolaminu (4 ml). Vzniklý roztok se 2 až 3 dny zahřívá na 140 °C, poté 1 den na 160 °C, ochladí a přidá se k němu butanol nasycený vodou (100 ml). Výsledný roztok se promyje vodou (3 x 50 ml) a odpaří na hnědý olej. Tento zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití ethylacetátu a poté 3% methanolu v ethylacetátu, jako elučního činidla, čímž se získá produkt (výtěžek 730 mg, 37 %) ve formě světle žlutého oleje.

1H NMR (CDC1₃): δ 7,29 (brs, 1H), 7,25 (d, 2H), 6,94 (brs, 1H), 6,83 (d, 2H), 5,43 (brs, <2H), 4,63 (brs, 2H), 4,53 (m, 1H), 3,86 (t, 4H), 3,76 (m, 7H), 1,47 (d, 6H)

- 17CL 299381 B6

V tabulce 1 jsou uvedeny sloučeniny podle vynálezu, které byly připraveny syntetickým postupem popsaným v tomto příkladu.

Tabulka 1

Sloučeniny připravené postupem podle příkladu 1

^Rl'-^X	^R2	^R3
4-methoxybenzylamino	3-kyanopropy1	Cl
4 -methoxyben zylamino	3-chlorpropyl	Cl
4-methoxybenzylamino	benzyl	Cl
4-methoxybenzylamino	methy1-4-karboxybenzyl	Cl
4-methoxyben zylamino	N-ftaloylethyl	Cl
4-methoxymethylamino	isopropyl	ethanolamin
4-methoxybenzylamino	isopropyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	3-methylbutyl	Cl
4-methoxybenzylamino	2-methylbutyl	Cl
4-methoxybenzylamino	cyklopentyl	Cl
4-methoxybenzylamino	3-nitrobenzyl	Cl
4-methoxybenzylamino	4-nitrobenzyl	Cl
4-methoxybenzylamino	ethyl	Cl
4-methoxybenzylamino	propyl	Cl
4-methoxybenzylamino	3-methylbenzyl	Cl
4-methoxyben zylamino	4-methylbenzyl	Cl
heptylamin	H	Cl
N-benzylhydroxylamin	H	Cl
propylamin	H	Cl
noradamantylamin	H	Cl
cyklobutylamin	H	Cl
3-methoxypropylamin	H	Cl
2-methoxyethylamin	H	Cl
cyklopentylamin	H	Cl

-18CZ 299381 B6

2-amino-2-methyl-l-	H	Cl
-propanol
4-amino-l-benzylpiperidin	H	Cl
heptylamin	Me	Cl
N-benzylhydroxylamin	Me	Cl
propylamin	Me	Cl
noradamantylamin	Me	Cl
cyklobutylamin	Me	Cl
3-methoxypropylamin	Me	Cl
2-methoxyethylamin	Me	Cl
cyklopentylamin	Me	Cl
2-amino-2-methyl-l-	Me	Cl
propanol
4-amino-l-benzylpiperidin	Me	Cl
2,4-dimethoxybenzylamin	Me	Cl
2-methoxyben z ylamin	H	Cl
2-(aminomethyl)pyridin	H	Cl
3,4-dimethoxyfenylethyl-	H	Cl
amin
3-(aminomethyl)pyridin	H	Cl
4-(aminomethyl)pyridin	H	Cl
6-amino-l-hexanol	H	Cl
fenethylamin	H	Cl
2-aminobenzothiazol	H	Cl
2,4-dimethoxybenzylamin	H	Cl
2-methoxybenzylamin	Me	Cl
2-(aminomethylpyridin)	Me	Cl
3,4-dimethoxyfenylethyl-	Me	Cl
amin
4-methoxybenzylamino	Me	Cl
3-(aminomethyl)pyridin	isopropyl	ethylendiamin
4-(aminomethyl)pyridin	H	Cl
6-amino-l-hexanol	H	Cl
fenylethylamin	H	Cl

2-aminobenzothiazol	H	Cl
4-methoxybenzylamino	H	Cl
3-fenyl-l-propylamin	isopropyl	3-pyrrolin
2-aminoindan	H	Cl
4-methoxyfenylethylamin	H	Cl
4-nitrobenzylamin	H	Cl
2,6-difluorbenzylamin	H	Cl
3-fenyl-l-propylamin	H	Cl
2-aminoindan	Me	Cl
4-methoxyfenylethylamin	Me	Cl
4-nitrobenzylamin	Me	Cl
2,6-difluorbenzylamin	Me	Cl
aminomethylcyklopropan	Me	Cl
piperonylamin	H	Cl
1-aminomethylbenzen-	H	Cl
sulfonamid aminomethylcyklohexanol	H	Cl
2-aminomethylbenzimidazol	H	Cl
cyklohexanmethanamin	H	Cl
4-methoxybenzylamíno	H	Cl
4-methoxyben zylamino	isopropyl	serinol
aminomethylcyklopropan	isopropyl	1,3-diamino-2
piperonylamin	Me	hydroxypropan Cl
1-aminomethylbenzen- sulfonamid	Me	Cl
aminomethylcyklohexanol	Me	Cl
2-aminomethylbenzimidazol	Me	Cl
cyklohexanmethanamin	Me	Cl
3-(aminomethyl)pyridin	Me	Cl
4-(aminomethyl)pyridin	2-methylpropyl	Cl
6-amino-l-hexanol	cyklopentyl	Cl
fenethylamin	propyl	Cl
2-aminobenzothiazol	ethyl	Cl
3-fenyl-l-propylamin	isopropyl	Cl

-20CZ 299381 B6

2-aminoindan	2-methylpropyl	Cl
4-methoxyfenethylamin	cyklopentyl	Cl
4-nitrobenzylamin	propyl	Cl
2,6-difluorbenzylamin	ethyl	Cl
4-methoxyben zylamino	isopropyl	Cl
fenpropylamino	isopropyl	4-hydroxy- piperidin
2-aminoindan	H	Cl
2-(4-methoxyfenyl)ethyl- amino	H	Cl
4-nitrobenzylamino	H	Cl
2,6-difluorbenzylamino	H	Cl
4-methoxybenzylamino	H	Cl
4-methoxybenzylamino	isopropyl	3-(benzylamino)propionitril
fenpropylamino	isopropyl	(R/S)-leucinol
2-aminoindan	isopropyl	Cl
2-(4-methoxyfenyl)ethylamino	isopropyl	Cl
4-nitrobenzylamino	isopropyl	Cl
2,6-difluorbenzylamino	isopropyl	Cl
4-methoxybenzylamino	isopropyl	Cl
4-methoxybenzylamino	isopropyl	piperidin
4-methoxybenzylamino	isopropyl	3-hydroxypiperidin
fenpropylamino	isopropyl	L-histidinol
2-aminoindan	isopropyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	isopropyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	isopropyl	(S)-{-)-2-pyrro- lidinmethanol
4-methoxybenzylamino	isopropyl	morfolin
4-methoxyben zylamino	benzyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	3-methylbutyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	2-methylpropyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	cyklopentyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	3-nitrobenzy1	diethanolamin

-21 CZ 299381 B6

4-methoxybenzylamino	4-nitrobenzyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	ethyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	propyl	d iethano1amin
4-methoxybenzylamino	3-methylbenzyl	diethanolamin
heptylamin	4-methylbenzyl	diethanolamin
N-benzylhydroxylamin	Me	diethanolamin
propylamin	Me	diethanolamin
noradamantylamin	Me	diethanolamin
cyklobutylamin	Me	diethanolamin
3-methoxypropylamin	Me	diethanolamin
2-methoxyethylamin	Me	diethanolamin
cyklopentylamin	Me	diethanolamin
2-amino-2-methyl-l-	Me	diethanolamin
-propanol
4-amino-l-benzylpiperidin	Me	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	Me	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	isopropyl	2-pyrrolidinol
2,4-dimethoxybenzylamin	isopropyl	tryptamin
2-methoxybenzylamin	Me	diethanolamin
2—(aminomethyl)pyridin	Me	diethanolamin
3,4-dimethoxyfenylethyl-	Me	diethanolamin
amin
3-(aminomethyl)pyridin	Me	diethanolamin
4-(aminomethyl)pyridin	Me	diethanolamin
6-amino-l-hexanol	Me	diethanolamin
fenylethylamin	Me	diethanolamin
2-aminobenzothiazol	Me	diethanolamin
3-feny1-1-propylamin	Me	diethanolamin
2-aminoindan	Me	diethanolamin
4-methoxyfenethylamin	Me	diethanolamin
4-nitrobenzylamin	Me	diethanolamin
2,6-difluorbenzylamin	Me	diethanolamin
aminomethylcyklopropan	Me	diethanolamin
piperonylamin	Me	diethanolamin

1-aminomethylbenzen-	Me	diethanolamin
sulfonamid aminomethylcyklohexanol	Me	diethanolamin
2-aminomethylbenzimidazol	Me	diethanolamin
cyklohexanmethanamin	Me	diethanolamin
3-(aminomethyl)pyridin	Me	diethanolamin
4-(aminomethyl)pyridin	2-methylpropyl	diethanolamin
6-ami no-1-hexano1	cyklopentyl	diethanolamin
fenylethylamin	propyl	diethanolamin
2-aminobenzothiazol	ethyl	diethanolamin
3-fenyl-l-propylamin	isopropyl	diethanolamin
2-aminoindan	2-methylpropyl	diethanolamin
4-methoxyfenylethylamin	cyklopentyl	diethanolamin
4-nitrobenzylamin	propyl	diethanolamin
2,6-difluorbenzylamin	ethyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	isopropyl	diethanolamin
4-methoxybenzylamino	isopropyl	1-amino-l-cyklo
4-methoxybenz ylamino	isopropyl	pentanmethanol (+ -)-2-piperi-
cyklopropyl	isopropyl	dinmethanol (+ -)-3-amino-
piperonylamino	isopropyl	-1,2-propandiol Cl
4-sulfaminobenzylamino	isopropyl	Cl
cyklohexanolmethylamino	isopropyl	Cl
2-aminobenzimidazolo	isopropyl	Cl
cyklohexylmethylamino	isopropyl	Cl
3-fenylpropylamino	isopropyl	Cl
cyklopropyImethylamino	cyklopentyl	Cl
piperonylamino	isopropyl	diethanolamin
4-methoxyben zylamino	isopropyl	diethanolamin
4-me thoxyben zylamino	isopropyl	diisopropylamin
4-methoxybenzylamino	isopropyl	trans-2-amino-
4-methoxybenzylamino	isopropyl	cyklohexanol (R)-2-amino-3-

-23CZ 299381 B6

4-methoxybenzylamino	isopropyl	-f enyl-1-propano1 (4S,5S)-(+)-5-
4-methoxybenzylamino	isopropyl	-amino-2,2-di- methyl-4 1-(3-aminopro-
4-methoxyben zylamino	isopropyl	pyl)imidazol 4-hydroxy-4-
4-methoxybenzylamino	isopropyl	-fenylpiperidin S-benzyl-L-
4-methoxybenzylamino	isopropyl	-cysteinol (+ -)-epinefrin
4-methoxybenzylamino	isopropyl	diallylamin
4-methoxyben zylamino	isopropyl	piperazin
4-methoxybenzylamino	isopropyl	(+ -)-(methyl-
4-methoxyben zylamino	isopropyl	aminomethyl)- benzylalkohol (S)-(+)-2-(ani-
4-methoxybenzylamino	isopropyl	linomethyl)- pyrrolidin 4—(allylamino)-
4-methoxybenzylamino	isopropyl	-4-methyl-2- -pentanol 3-(2-hydroxy-
4-methoxybenzylamino	isopropyl	ethylamin)pro- pan-l-ol 1,1'-dimethyl-
4-methoxyben zy1amino	isopropyl	-1,1'-dipropyl- 2,2'-imidodi- ethanol 3,3'-iminodi-2-
4-methoxybenzylamino	Me	-butanol ethanolamino
4-chlorbenzyloxy	H	Cl
4-chlorbenzyloxy	Me	cl
4-chlorbenzylamino	trifluormethyl	Cl

-24CZ 299381 B6

4-methoxybenzylamino	trifluormethy1	Cl
4-methoxybenzylamino	benzyl	Cl
4-methoxybenzylamino	isopropyl	2-aminoethyl-
4-methoxyben z y1amino	2-O-TBDMS-ethyl	amino diethanolamino
4-methoxyben zylamino	perfluorisopropyl	Cl
4-methoxybenzylamino	perfluorisopropyl	diethanolamino
4-methoxybenzylamino	2-hydroxyethyl	diethanolamino
4-methoxybenzylamino	isopropyl	1,3-diamino-2-
4-methoxyben zylamino	isopropyl	-hydroxypropan N-(4-hydroxy-
4-methoxybenzylamino	isopropyl	piperidino) N-pyrrolid ino
3-fenylpropylamino	H	Cl
2-aminoindanyl	H	Cl
2-{4-methoxyfenyl)- ethylamino	H	Cl
4-nitrobenzylamino	H	Cl
2,6-difluorbenzylamino	H	Cl
4-methoxybenz ylamino	isopropyl	N—(2-kyanopro-
4-methoxybenzylamino	isopropyl	pyl)-N-(3-pyridylmethyl)amino 2—(hydroxyme-
3-fenylpropylamino	isopropyl	thyl)-3-methyl- butan-2-amino Cl
2-aminoindanyl	isopropyl	Cl
2—(4-methoxyfenyl)ethylamino	isopropyl	Cl
4-nitrobenzylamino	isopropyl	Cl
2,6-difluorbenzylamino	isopropyl	Cl
4-methoxybenzylamino	isopropyl	2-(5-imidazol-
3-fenylpropylamino	isopropyl	methyl)ethanol- amino diethanolamino

-25CZ 299381 B6

4-methoxyben zylamino	isopropyl	N-(3-hydroxypyrrolidino)
4-methoxybenzylamino	isopropyl	2-(3-indol)- ethylamino
4-methoxyben zylamino	isopropyl	2,3-dihydroxy- propylamino
3-fenylpropylamino	cyklopentyl	Cl
4-methoxybenzylamino	isopropyl	N-benzyl-N-2- -hydroxyethyl- amino
4-methoxybenzylamino	oleyl	Cl
4-methoxybenzylamino	2-naftylmethyl	Cl
4-methoxybenzylamino	4-fenylbenzyl	Cl
4-methoxybenzylamino	1-naftylmethyl	Cl
4-methoxybenzylamino	4-methylstilben	Cl
4-methoxybenzylamino	epoxymethyl	Cl
4-methoxybenzylamino	2,3-dihydroxy- propyl	diethanolamino
4-methoxybenzylamino	4-fenylbenzyl	diethanolamino
4-methoxybenzylamino	2-fenylbenzyl	diethanolamino
4-methoxybenzylamino	2-naftylmethyl	diethanolamino
4-methoxybenzylamino	1-naftylmethyl	diethanolamino
4-methoxybenzylamino	4-methylstilben	diethanolamino
4-methoxybenzylamino	oleyl	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	isopropyl	3-amino-l,2- propandiol
4-fenylbenzylamino	isopropyl	hexanolamino
4-fenylbenzylamino	isopropyl	bisfmethoxyethylamino)
4-fenylbenzylamino	isopropyl	furfurylamino
4-fenylbenzylamino	isopropyl	diethylamino
4-fenylbenzylamino	isopropyl	ethanolamino
4-fenylbenzylamino	isopropyl	morfolino

-26CZ 299381 B6

4-fenylbenzylamino	isopropyl	2,4-dimethoxy- benzylamino
4-fenylbenzylamino	isopropyl	4-trifluormetho- xybenzylamino
4-fenylbenzylamino	isopropyl	diisopropanol- amino
4-f enylbenzylamino	isopropyl	2-amino-l,3- -propandiol
4-f enylbenzylamino	isopropyl	diallylamino
4-bromben z ylamino	isopropyl	Cl
4-bromanilino	isopropyl	Cl
4-brombenzy1amino	isopropyl	diethanolamino
4-bromanilino	isopropyl	diethanolamino
N-methyl-4-fenylbenzylamino	isopropyl	Cl
4-fenylanilino	isopropyl	d i i s opropano1- amino
N-methy1-4-fenylbenzyl- amino	isopropyl	diethanolamino
benzylamino	ethyl	ethanolamino
4-me thylben z ylamino	methyl	ethanolamino
4-ethylbenzylamino	methyl	ethanolamino
4-bromanilino	isopropyl	4-bromanilino

Příklad 2

V tomto příkladu je popsán způsob výroby sloučenin podle vynálezu znázorněný v následujícím schématu.

-27CZ 299381 B6

Příprava {2-chlorpurin-6-yl} [(4-chlorfenyl)methyl]aminu

K suspenzi 15 g (0,0794 mol) 2,6-dichlorpurinu ve 250 ml absolutního ethanolu se přidá 12,7 ml (0,0873 mol) triethylaminu a 10,62 ml (0,0873 mol) 4-chlorbenzylaminu. Reakční směs se

16 hodin refluxuje při 80 °C (je pozorován vznik krémově bílé sraženiny). Reakční směs se ochladí. Vysrážený produkt se odfiltruje, promyje ethanolem (3 x 50 ml) a suší 24 hodin za vysokého vakua (výtěžek 15,7 g, 67,4 %). Produkt se charakterizuje 'H NMR.

Příprava {2-chlor-9-(methylethyl)purin-6-yl}[(4-chlorfenyl)methyl]aminu

K roztoku 6 g (0,020 mol) 2-chlor-6-(4-chlorfenyl)methylaminopurinu ve 41 ml bezvodého dimethylformamidu se přidá 5,64 g (0,041 mol) bezvodého uhličitanu draselného a 3,41 ml (0,035 mol) 2-jodpropanu. Vzniklá směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti a přidá se k ní 500 ml vody. Vodná směs se 1 hodinu míchá. Vyloučená sraženina se odfiltruje, promyje vodou (3x50 ml) a 16 hodin suší za vysokého vakua při 50 °C. Získá se produkt ve formě špinavě bílé pevné látky (6,5 g, 97 %), který se charakterizuje ’H NMR.

Příprava {2-[(2-aminoethyl)amino]-9-(methylethyl)purin-6-yl}[(4-chlorfenyl)methyl]aminu

K. roztoku 3,36 g (0,01 mol) {2-chlor-9-(methylethyl)purin-6-yl}[(4-chlorfenyl)methyl]aminu ve 13 ml bezvodého l-methyl-2-pyrrolidinonu se přidá 4,68 ml (0,70 mol) 2-aminoethylaminu. Vzniklá směs se 24 hodin zahřívá na 140 °C. Získaný produkt se podrobí chromatografii na silikagelu s proměnlivým gradientem dichlormethan : methanol. Získá se 3,95 g produktu, který obsahuje l-methyl-2-pyrrolidinon.

Tato směs se rozpustí v dichlormethanu a dichlormethanový roztok se extrahuje vodou (5 x 20 ml). Organická vrstva se vysuší bezvodým síranem sodným a odpaří. Získá se špinavě bílá pevná látka (2,94 g, 81,7 %). Produkt se charakterizuje 'H NMR ajeho čistota se stanoví pomocí RP-HPLC (sloupec YMC C-l 8, 50 x 4,4 mm, S-5 12 nm, 0,1% kyselina trifluoroctová30 voda/0,1 % kyselina trifluoroctová-acetonitril).

V tabulce 2 jsou identifikovány sloučeniny podle vynálezu, které se připraví za použití obecného syntetického postupu uvedeného výše v tomto příkladu. V tabulce 2 MS znamená hmotnostní spektrum a MH+ představuje hmotnost iontu odvozeného od rodičovské molekuly plus jeden atom vodíku.

-28CZ 299381 B6

Tabulka 2

RjX	r₂	^R3
(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	diethanolamino
(4-fluorfenyl)methylamino	isopropyl	diethanolamino
(4-methoxyfenyl)methylamino	isopropyl	5-aminopentylamino
(4-trifluormethyLfenyl)methylamino	isobutyl	diethanolamino
(4-trifluormethylfenyl)methylamino	isopropyl	diethanolamino
(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	(S)-2-amino-3-fenylpropylamino
(4-fluorfenylJmethylamino	isopropyl	2-aminoethylamino
(4-fluorfenyl )methylamino	isopropyl	(D) -l-hydroxymethyl-2-methylpropylamino
(4-fluorfenyl)methylamino	isopropyl	(L) -1-hydroxymethyl-2-methy1propylamino
(4-chlorřenyl)methylamino	isopropyl	(D)-1-hydroxymethy1-2-methy1propylamino
(4-chlorfenyl )methylamíno	isopropyl	(L) -l-hydroxymethyl-2-methylpropylamino

-29CZ 299381 B6

(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	2-hydroxy-2-fenylethylamino
(4-chlorfenyl(methylamino	isopropyl	2-amino-Rl-(2-hydroxyethyl)ethylamino
(4-chlorfeny1(methylamino	isopropyl	2-amino-N2-(2-hydroxyethyl)ethylamino
(4-chlorfenyl)methylamino)	isopropyl	(S)-2-fenyl-l-karboxamidoethylamino
(4-chloríenyl)methylamino	isopropyl	2-amino-N2-(2-hydroxyethyl)-Rl-(hydroxyethyl)ethylamino
(4-sulfonamídofenyl(methylamino	isopropyl	2-aminoethylamino
(4-fluorfenyl(methylamino	2-oxo-3-butyl	diethanolamino
(4-fluorfenyl(methylamino	2-oxo-3-butyl	2-aminoethylamino
(4-chlorfenyl)methylami no	2-oxo-3-butyl	diethanolamino
(4-chlorfenyl)methylamino	2-oxo-3-butyl	2-aminoethylamino
(4-raethylfenyl)methylamino	isopropyl	1-hydroxymethy1-2-methylpropylamino
(3-methylfenyl(methylamino	isopropyl	l-hydroxymethyl-2-methy- propylamino
(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	2-(R2-dimethylamino)-Rl-benzylethylamino
(4-chlorfeny1(methylamino	isopropyl	l-karboxamido-2-methylpropylamino
(4-chlorfenyl(methylamino	isopropyl	2-aminoethylamino
(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	3-aminopropylamino
(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	5-aminopentylamino
(4-chlorfenyl(methylamino	isopropyl	2-amino-2-methylethylamino
(4-chlorfenyl(methylamino	isopropyl	(5)-(+)-1-(hydroxymethy1)propylamino
(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	(R)-(-)-1-(hydroxymethyl)propylamino
(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	(S)-(+)-1-(hydroxymethyl)ethylamino
(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	(R)-(-)-1-(hydroxymethy1) -

ethylamino

-30CZ 299381 B6

(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	(S)-(+J-2-hydroxypropylamino
(4-chlorfeny1Jmethylamino	isopropyl	(R)-(-)-2-hydroxypropylamino
(4-f luorf enyljmethylamino	isopropyl	2-aminopropylamino
(3-chlorfeny1)methyImino	isopropyl	diethanolamino
(3-chlorfenylJmethylamino	isopropyl	2-aminoethylamino
(2-trifluormethylfenylJmethylamino	isopropyl	diethanolamino
(2-trifluormethylfenylJmethylamino	isopropyl	2-aminoethylamino
(4-chlor-3-trifluormethylfenyl)methyl- amino	• isopropyl	diethanolamino
(4-chlor-3-trifluormethylfenylJmethylamino	• isopropyl	2-aminoethylamino
{3,5-dichlorfenylJmethylamino	isopropyl	diethanolamino
(3,5-dichlorfeny1)methylamino	isopropyl	2-aminoethanolamino
(2-trifluormethylfenylJmethylamino	isopropyl	2-(N2-dimethylamino)-Nl-benzylethylamino
(3-chlorfenyljmethylamino	isopropyl	diethanolamino
(3-chlorfenyljmethylamino	isopropyl	2-aminaethylamino
(2-trifluormethylfenyl)nethylamino	isopropyl	diethanolamino
(2-trifluormethylfenylJmethylamino	isopropyl	2-aminoethylamino
(4-chlor-3-trifluormethylfenyl)methylamino	isopropyl	diethanolamino
(4-chlor-3-trifluormethylfenyl)methylamino	isopropyl	2-aminoethylamino
(3,5-dichlorfenylJmethylamino	isopropyl	diethanolamino
(3,5-dichlorfenylJ methylamino	isopropyl	2-aminoethylamino
(2-trifluormethylfenylJmethylamino	isopropyl	2-(N2-dimethylamino)-Nl -benzylethylamino
(3-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	2-(N2-dímethylamino)-Nl-benzylethylamino
(3,5-dichlorfenylJmethylamino	isopropyl	2 -(N2-dimethylamino) -Nl -benzylethylamino
(4-chlor-3-trifluormethylfenyl)methylamino	isopropyl	2-(N2-dimethylamino)-Nl-benzylethylamino
{4-chlorfenyl)methyImino	isopropyl	2-amino-2-methylpropylamino

-31 CZ 299381 B6

(4-flurofenyl)methylamino	isopropyl	(S)-(2-tetrahydrofuryl)- methylamíno
{4-flurofenyl)methylainino	isopropyl	(R) -(2-tetrahydrofuryl)methylamino
(4-methylfenyl)methylamino	isopropyl	diethanolamino
(4-fluorfenyl)methylamino	isopropyl	2-hydroxy-l-methylethylamíno
(4 -f luor feny 1} irethy lamina	isopropyl	(S)-2-hydroxy-2-methylethy1- amino
(4-fluorfenyljmethylamíno	isopropyl	(R) -2-hydroxy-2-methylethyl- amino
(4-fluorfenyl)methylamino	isopropyl	1-hydroxymethylpropylamino
(4-fluorfenyl)methylamino	isopropyl	2-amino-2-methylpropylamino

RjX	r₂	^R3	MS (MH+)
(4 -methy lf eny 1 (methy lamino	isopropyl	2-aminoethylamino	340
(2,4-dichlorfenyl)methylamíno	isopropyl	diethanolamino	439
(2,4-dichlorfenyljmethylamino	isopropyl	2-aminoethylamino	394
(3-methylfenyl(methylamino	isopropyl	diethanolamino	385
(3-methylfenyl)methylamino	isopropyl	2-aminoethylamÍno	340
(3-methylfenyl (methylamino	isopropyl	2-(K2-dimethylamino)-Nl-benzylethylamino	458
(4-trifluormethylfenyl)methylamino	isopropyl	2-aminoethylamino	394
(4-trifluormethylfenyl(methylamino	isopropyl	l-hydroxymethyl-2-methylpropylamino	437
(3,5-bistrifluormethylfenyl)-	isopropyl	diethanolamino	507
methylamino
(3,5-bistrifluormethylfenyl)-	isopropyl	2-aminoethylamino	462
methylamino
(3,5-bistrifluormethylfenyl}-	isopropyl	l-hydroxymethyl-2-methylpropylamino	505
methylamino
(3-chlorfenyl(methylamino	isopropyl	1-hydroxymethylethylamino	375
(2-trifluormethylfenyl(methylamino	isopropyl	1-hydroxyHethylethylamino	409
(4-chlor-3-trifluormethylfenyl)-	isopropyl	1-hydroxymethylethylamino	443

methylamino

(3-chlorfenyljmethylamino	isopropyl	2-hydroxyethylamino	361
(2-trifluormethylfenyl(methylamino	isopropyl	2-hydroxyethylamino	395
(4-chlor-3-trifluromethylfenyl)methylamino	isopropyl	2-hydroxyethylamino	429
(3-chlorfenyl(methy lamino	isopropyl	(IR, 2 S) -2-hydroxy-1-methy1-2fenylethylamino	451
(2-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	diethanolamino	450
(2,5-difluorfenyl)methylamino	isopropyl	diethanolamino	407
(1-naftyl(methylamino	isopropyl	diethanolamino	421
(2-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	2-aminoethylamino	360
(2,5-difluorfenyl(methylamino	isopropyl	2-aminoethylamino	362
(l-naftyl)methylamino	isopropyl	2-aminoethylamino	376
(2-chlorfeny1(methylamino	isopropyl	1-hydroxymethy1-2-methylethylamino	403
(2,5-difluorfenyl)methylamíno	isopropyl	1-hydroxymethyl-2-methylethylamino	405
(1-naftyl(methylamino	isopropyl	l-hydroxymethyl-2-methylethylamino	419
(3-methylfenyl)methylamino	isopropyl	2-aminopropylamino	354
(2-chlorfenyl)methylami no	isopropyl	2-aminopropylamino	374
(3-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	2-aminopropylamino	374
(2,5-difluorfenyl (methylamino	isopropyl	2-aminopropylamino	376
(1-naftyl)methylamino	isopropyl	2-aminopropylamino	390
(2-chlor-5-trifluromethylfenyl)methylamino	isopropyl	diethanolamino	473
(3-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	1-hydrcxymethy1-2-methylpropylamino	403
(2-trifluormethylfenyljaethylamino	isopropyl	1-hydroxymethyl-2-methylpropylamino 437

Příklad 3

V tomto příkladu je popsán způsob výroby sloučenin podle vynálezu. Způsob syntézy popsaný v tomto příkladu je pouze mírně modifikovaným způsobem, jaký je popsán v příkladu 1.

R,-sloučenina butanol, Δ

N«matbylpyrrolkUnon

Ry-sloučenina,

-33CL 299381 B6

Výše znázorněným způsobem se připraví následující sloučenina.

Příprava 2,6-dichlor-9-izopropylpurinu (4)

K roztoku 0,67 g 2,6-dichlorpurinu v 5 ml suchého dimethylformamidu se při teplotě místnosti přidá 0,16 g (1,1 ekv.) suspenze 50% hydridu sodného voleji. Po odeznění vývoje vodíku se k aniontovému roztoku přidá izopropyljodid ve velkém přebytku (2 ml). Reakční roztok se 3 dny míchá při teplotě okolí a poté rozloží 30 ml vody. Vodná směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 50 ml). Organické extrakty se spojí a znovu promyjí 3 x 50 ml vody a poté 20 ml vodného ío roztoku chloridu sodného. Ethylacetátový roztok se vysuší bezvodým síranem horečnatým a odpaří. Sloučenina se podrobí mžikové chromatografií na silikagelu na použití variabilního gradientu hexan/ethylacetát. Získá se 0,37 g požadovaného N-9 produktu (45 %) a 0,08 g N-7 izomerů (10 %).

Příprava 2-chlor-6-anilino-9-izopropylpurinu (5)

2,6-Dichlor-9-izopropylpurin (0,019 g, 0,081 mmol) se rozpustí v butanolu (0,5 ml) a k butanolickému roztoku se přidá anilin (0,044 ml, 0,244 mmol). Reakční směs se 10 hodin zahřívá na 120 °C, ochladí a zředí ethylacetátem. Ethylacetátová směs se promyje 3 x vodou, vysuší síranem hořečnatým a zkoncentruje na špinavě bílou pevnou látku.

Příprava 2-diethanolamino-6-(4-fenylanilino)-9-izopropylpurinu (6)

Roztok 67 mg 2,6-dichlor-N-9-izopropylpurinu a 100 mg 4-fenylanilinu v 1 ml n-oktanolu se 25 24 hodin zahřívá na 80 °C. n-Oktanol se odstraní za sníženého tlaku a nahradí 1 ml 40% diethanolaminu v dimethylsulfoxidu. Výsledný roztok se 48 hodin zahřívá na 130 °C. Reakční směs se ochlad na teplotu okolí a zředí 10 ml vody. Vodná směs se extrahuje ethylacetátem (3 x 30 ml). Organické extrakty se spojí a znovu promyjí 3 x 20 ml vody a poté 10 ml vodného roztoku chloridu sodného. Ethylacetátový roztok se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, přefiltruje a z filtrátu se odpaří rozpouštědlo. 65 mg surového produktu se nechá vykrystalovat z roztoku tetrahydrofuranu a etheru. Získá se 28 mg čistého produktu (23 %).

V tabulce 3 jsou identifikovány sloučeniny podle vynálezu, které se připraví za použití obecného způsobu syntézy, který je popsán v tomto příkladu.

Tabulka 3

Sloučeniny připravené způsobem podle příkladu 3 40

R_x ‘-X	^R2	r₃
8-aminochinolin	isopropyl	Cl
6-aminochinolin	isopropyl	Cl
3-aminochinolin	isopropyl	Cl

-34CZ 299381 B6

anilino	isopropyl	Cl
3,5-dinitroanilin	isopropyl	Cl
4-butylanilin	isopropyl	Cl
8-aminochinolin	isopropyl	diethanolamin
6-aminochinolin	isopropyl	diethanolamin
3-aminochinolin	isopropyl	diethanolamin
anilin	isopropyl	diethanolamin
3,5-dinitroanilin	isopropyl	diethanolamin
4-butylanilin	isopropyl	diethanolamin
2-amino-6-ethoxybenzo-	isopropyl	Cl
thiazol
4-(2-aminomethyl)morfolin	isopropyl	Cl
4-(1-aminomethyl)benzen-	isopropyl	Cl
sulfonamid
4-bromanilin	isopropyl	diethanolamin
3,4-dichloranilin	isopropyl	diethanolamin
2-(2-aminoethyl)-1-	isopropyl	diethanolamin
methylpyrrolidin
3-bromanilin	isopropyl	Cl
4-anisidin	isopropyl	diethanolamin
4-jodanilin	isopropyl	Cl
3-jodanilin	isopropyl	Cl
m-anisidin	isopropyl	Cl
l-(2-aminoethyl)piperidin	isopropyl	diethanolamin
1-(2-aminoethyl)pyrrolidin	isopropyl	diethanolamin
1-aminoindan	isopropyl	diethanolamin
2-amino-6-ethoxybenzo-	isopropyl	diethanolamin
thiazol
4-(2-aminoethyl)morfolin	isopropyl	diethanolamin
4-(1-aminomethyl)benzen-	isopropyl	diethanolamin
sulfonamid
4-bromanilin	isopropyl	diethanolamin
3,4-dichloranilin	isopropyl	diethanolamin
2- (2-aminoethyl)-1-	isopropyl	diethanolamin
-methylpyrrolidin

-35CZ 299381 B6

3-bromanilin	isopropyl	diethanolamin
4-anisidin	isopropyl	diethanolamin
4-jodanilin	isopropyl	diethanolamin
3-jodanilin	isopropyl	diethanolamin
m-anisidin	isopropyl	diethanolamin
1-(2-aminoethyl)piperidin	isopropyl	diethanolamin
1-(2-aminoethyl)pyrrolidin	isopropyl	diethanolamin
1-aminoindan	isopropyl	diethanolamin
3-jodanilin	isopropyl	diethanolamin
3-jodanilin	isopropyl	diethanolamin
3-fenoxyanilin	isopropyl	diethanolamin
4-jodanilin	isopropyl	diethanolamin
4-fenoxyanilin	isopropyl	diethanolamin
3-fenoxyanilin	isopropyl	diethanolamin
4-jodanilin	isopropyl	diethanolamin
2-fluorfenylamino	isopropyl	diethanolamin
1-fluorenylamino	isopropyl	diethanolamin
2-anthracenylamino	isopropyl	diethanolamin
1-anthracenylamino	isopropyl	diethanolamin
2-(6-ethoxybenzothiazol)-	isopropyl	diethanolamin
amino
2-fenylben zylamino	isopropyl	diethanolamin
4-fenylbenzylamino	isopropyl	diethanolamin
2-naftylmethylamino	isopropyl	diethanolamin
1-naftylroethylamino	isopropyl	diethanolamin

Příklad 4

Cl

6A

N

N >

•N

R_z

-36CL 299381 B6

Výše znázorněným postupem se připraví následující sloučenina.

Příprava 2,6-dichlor-9-izopropylpurinu (4)

2,6-Dichlorpurin (5,00 g, 26,46 mmol) se při teplotě místnosti suspenduje v 55 ml suchého dimethylformamidu. Ke vzniklé suspenzi se po částech přidá hydrid sodný (60% disperze, 1,27 g, 31,75 mmol). Vzniklá směs se 1 hodinu míchá a přidá se k ní 2-jodpropan (4,5 ml, 44,98 mmol). Reakční směs se 2 dny míchá a poté nalije do diethyletheru. Výsledná směs se promyje jednou nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jednou vodou, vysuší bezvodým síranem io sodným a zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití 10% acetonu v dichlormethanu, jako elučního činidla. Získá se požadovaný N-9 alkylovaný produkt ve formě bílé pevné látky (výtěžek 47 %).

Příprava 2-chlor-6-(4-methylmerkapto)anilino-9-izopropylpurinu (5A)

2,6-Dichlor-9-izopropylpurin (0,15 g, 0,649 mmol) se rozpustí vn-butanolu (4 ml). Ke vzniklému roztoku se přidá (4-methylmerkapto)anilin (0,089 ml, 0,714 mmol) a triethylamin (0,20 ml, 1,43 mmol). Reakění směs se přes noc zahřívá na 80 °C, poté ochladí a zředí ethylacetátem. Ethylacetátová směs se promyje 1 x 1M kyselinou chlorovodíkovou, 1 x nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a 1 x vodným chloridem sodným, vysuší bezvodým síranem sodným a zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití 2% methanolu v dichlormethanu, jako elučního činidla. Získá se požadovaný produkt ve formě bílé pevné látky (výtěžek 83 %)

Příprava 2-diethanolamino-6-(4-methylmerkapto)anilino-9-izopropylpurinu (6A)

Purin (0,18 g, 539 mmol) se rozpustí v N-methylpyrrolidinonu (3 ml) a diethanolaminu (1 ml). Reakční směs se přes noc zahřívá na 120 °C, ochladí a nalije do diethyletheru. Diethyletherová směs se promyje třikrát vodou, vysuší bezvodým síranem sodným a zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití 5% methanolu v dichlormethanu, jako elučního činidla. Získá se požadovaný produkt ve formě špinavě bílé pevné látky (výtěžek 82 %).

’H NMR (CDC1₃): δ 8,08 (s, IH), 7,58 (d, 2H), 7,47 (s, IH), 7,18 (s, IH), 4,95 (brs, <2H), 4,52 (m, IH), 3,94 (m, 4H), 3,83 (m, 4H), 2,43 (s, 3H), 1,47 (d, 6H)

Příprava 4-(2-thienyl)benzonitrilu

Před reakcí s 2,6-dichlor-9-izopropylpurinem je nutno syntetizovat některé skupiny Rf. Tyto skupiny lze syntetizovat za použití různých kopulačních metod a jiných syntetických postupů, které jsou známy odborníkům v oboru syntézy organických sloučenin.

Do tlakové trubky se předloží 4-brombenzonitril (0,20 g, 1,10 mmol), tetrakis(trifenylfosfin)palladium(O) (0,127 g, 0,1 ekv.) a 2-thiofenboronová kyselina (0,211 g, 1,65 mmol). V reakční trubce se za sníženého tlaku třikrát vymění atmosféra pomocí suchého dusíku a poté se do ní přidá dimethylether ethylenglykolu (5,5 ml) a vodný roztok uhličitanu sodného (2,53 ml, 1M). Trubka se uzavře a přes noc zahřívá na 80 °C. Chladná reakční směs se zředí diethyletherem, promyje dvakrát vodou, vysuší síranem sodným a zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití 10% ethylacetátu v hexanu, jako elučního činidla. Získá se požadovaný produkt ve formě bílé pevné látky (výtěžek 84 %)

Příprava 4-(2-thienyl)benzylaminu

4-(2-thienyl)benzonitril (0,086 g, 0,464 mmol) se rozpustí v suchém tetrahydrofuranu (1,6 ml). Ke vzniklému roztoku se přikape lithiumaluminiumhydrid (0,46 ml, 0,464 mmol, 1M vtetra55 hydrofuranu). Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Chromatografie na tenké

-37CZ 299381 B6 vrstvě za použití 5% methanolu v dichlormethanu ukáže, že ve směsi zůstává přítomna výchozí látka. K reakční směsi se přidá další 1 ekvivalent lithiumaluminiumhydridu. Po 1 hodině se reakční směs rozloží metodou Fieser & Fieser tak, že se k reakění směsi postupně přidá voda (17,46 μΐ), vodný roztok hydroxidu sodného (17,46 μΐ, 15% roztok) a voda (52,37 μΐ). Poté se reakční směs zředí diethyletherem a vodou a vzniklá směs se extrahuje dvakrát diethyletherem, vysuší síranem sodným a zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se ponechá v surovém stavu a dále se nečistí. Výtěžek = 89 %

V tabulce 4 jsou identifikovány sloučeniny podle vynálezu připravené za použití obecného ío postupu syntézy popsaného v tomto příkladu.

Tabulka 4

Sloučeniny připravené postupem podle příkladu 4

R-jJ-X	^R2	^R3
Cl	Me	Cl
ethanolamino	Me	ethanolamino
cyklopropylmethylamino	isopropyl	Cl
cyklopropylmethylamino	isopropyl	diethanolamino
3,5-dinitroanilino	isopropyl	Cl
3-fenoxyanilino	isopropyl	Cl
4-jodanilino	isopropyl	Cl
3-aminochinolino	isopropyl	Cl
3,5-dinítroanilino	isopropyl	diethanolamino
Cl	epoxymethyl	Cl
4-methoxyben zylamino	2,3-dihydroxy- propyl	diethanolamino
4-fenylanilino	isopropyl	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	isopropyl	Cl
2-naftalenylmethylamino	isopropyl	Cl
l-naftalenylmethylamino	isopropyl	Cl
2-fenylbenzylamino	isopropyl	Cl
3-chinolylamino	isopropyl	diethanolamino
5-chinolylamino	isopropyl	diethanolamino
6-chinolylamino	isopropyl	diethanolamino
8-chinolylamino	isopropyl	diethanolamino

-38CZ 299381 B6

n-butylamino	isopropyl	Cl
4-(2-thiofenyl)benzylamino	isopropyl	diethanolamino
4-(2-thiofenyl)benzylamino	isopropyl	Cl
3-thiomethoxyanilino	isopropyl	Cl
4-thiome thoxyani1ino	isopropyl	Cl
3-thiomethoxyanilino	isopropyl	diethanolamino
4-thiomethoxyanilino	isopropyl	diethanolamino
4-(2-pyridyl)benzylamino	isopropyl	Cl
3-methoxyben zylamino	isopropyl	Cl
3,4-dimethoxybenzylamino	isopropyl	Cl
3,4,5-trimethoxybenzyl-	isopropyl	Cl
amino
3-methoxybenzylamino	isopropyl	diethanolamino
3,4-dimethoxybenzylamino	isopropyl	diethanolamino
3,4,5-trimethoxybenzyl-	isopropyl	diethanolamino
amino
4-(3-thiofenyl)benzylamino	isopropyl	Cl
4-(4-methoxyfenyl)benzyl-	isopropyl	Cl
amino
4-(4-bromfenyl)benzylamino	isopropyl	diethanolamino
4-(3-methoxyfenyl)benzyl-	isopropyl	diethanolamino
amino
4-(4-methoxyfenyl)benzyl-	isopropyl	diethanolamino
amino
4-(3-thiofenyl)benzylamino	isopropyl	diethanolamino
4-(3-methylfenyl)benzyl-	isopropyl	Cl
amino
4-(4-methylfenyl)benzyl-	isopropyl	Cl
amino
4-(4-trifluormethylfenyl)-	isopropyl	Cl
benzylamino
3-(4-nitrilofenyl)anilino	isopropyl	Cl
3-(4-nitrolofenyl)anilino	isopropyl	diethanolamino
4-(2-pyridyl)benzylamino	isopropyl	Cl
4-(2-pyridyl)benzylamino	isopropyl	diethanolamino

-39CZ 299381 B6

Příklad 5

C!

H₂N

NaH

Ct

R₂-sloučenína

J Ro-CI I pyridin iCHjCtj

Cl

Výše znázorněným postupem se připraví následující sloučenina Příprava 2-amino-6-chlor-9-methylpurinu (7) ío 2-Amino-6-chlorpurin (1,08 g, 6,4 mmol) se suspenduje v suchém dimethylformamidu (75 ml). Vzniklá suspenze se smísí s hydridem sodným (60% disperze, 0,28 g, 7 mmol). Výsledná suspenze se 15 minut míchá a přidá se k ní jodmethan (0,44 ml, 7,06 mmol). Žlutý reakční roztok se míchá 1,75 hodiny, načež se z něj odfiltruje pevná látka. Filtrát se odpaří a ke zbytku se během 10 minut přidá voda. Vzniklá pevná látka se odfiltruje a suší přes noc. Získá se produkt ve formě směsi N-7 a N-9 alkylovaných produktů. Matečný louh se nechá přes noc stát a následující den se shromáždí další krystaly, které se vysuší. Výtěžek 77 %.

Příprava 6-chlor-2-(2-methoxyacetylamino)-9-methylpurinu (8)

Směs izomerů z předchozího stupně se rozpustí v dichlormethanu a pyridinu (2 ekv.). Vzniklý roztok se smísí s methoxyacetylchloridem (4 ekv.). Reakční směs míchá při teplotě místnosti, dokud reakce není úplná a poté odpaří. Zbytek se nechá projít přes vrstvu silikagelu za použití 2% methanolu v dichlormethanu a poté přečistí na chromatotronu za použití silikagelu a 2% methanolu v dichlormethanu, jako elučního činidla, čímž se izoluje požadovaný produkt.

Výtěžek 31%.

V tabulce 5 jsou identifikovány sloučeniny podle vynálezu, které se připraví za použití postupu popsaného výše v tomto příkladu.

-40CZ 299381 B6

Tabulka 5

Sloučeniny připravené způsobem podle příkladu 5 ^R1 ^R2 ^R3

Cl Me H

Cl Me 2-methoxyacetylamino

Příklad 6

V tomto příkladu je popsán způsob výroby sloučenin podle vynálezu. Způsob syntézy popsaný io v tomto příkladu je pouze mírně modifikovaným způsobem, jaký je popsán v příkladu 1.

Výše znázorněným postupem se připraví následující sloučenina.

Příprava 2-chlor-6-(4-fenylbenzylamino)purinu (9)

2,6-Dichlorpurin (5,0 g, 26,45 mmol) se suspenduje v n-butanolu (50 ml) a ke vzniklé suspenzi se přidá 4-fenylbenzylamin (6,6 g, 29,1 mmol) a triethylamin (4,1 ml, 29,1 mmol). Reakční roztok se přes noc zahřívá na 120 °C, ochladí a za použití přebytku n-butanolu se odfiltruje produkt. Sraženina se promyje 100 ml 1M kyseliny chlorovodíkové a 200 ml vody. Pevná látka se vysuší za vakua při 70 °C, čímž se získá požadovaný produkt ve formě světle žluté pevné látky.

Výtěžek = 99 %.

Příprava 2-diethanolamino-6-(4-fenylbenzylamino)purinu (10)

2-Chlor-6-(4-fenylbenzylamino)purin (2,0 g, 5,96 mmol) se smísí s diethanolaminem (11,4 ml, 119,2 mmol) a N-methylpyrrolidinonem (10 ml). Reakční směs se přes noc zahřívá na 120 °C, ochladí a nalije do dichlormethanu. Dichlormethanová směs se promyje dvakrát vodou.

Organická vrstva se vysuší bezvodým síranem sodným a zkoncentruje za sníženého tlaku. Takto

-41 CZ 299381 B6 získaný požadovaný produkt ve formě světle zelené pevné látky se dále 2 dny suší ve vakuové sušárně při 70 °C.

Příprava 2-diethanolamino-6-(4-fenylbenzylamino)-9-methylpurinu (11)

2-Diethanolamino-6-(4-fenylbenzylamino)purin (0,050 g, 0,124 mmol) se rozpustí v suchém dimethylformamidu. Vzniklý roztok se smísí s hydridem sodným (60% disperze, 5,5 mg, 0,136 mmol) a během 1 hodiny se přidá jodmethan (0,009 ml, 0,148 mmol). Výsledný roztok se míchá přes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se nalije do diethyletheru a diethyletherová ío směs se promyje dvakrát nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší bezvodým síranem sodným a zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití 5% methanolu v dichlormethanu, jako elučního činidla, čímž se získá produkt ve formě bílé pevné látky (výtěžek 63 %).

'H NMR (CDC1₃): δ 7,55 (m, 4H), 7,41 (m, 4H), 7,35 (m, 4H), 6,41 (brs, <1H), 5,10 (brs, <2H), 4,72 (brs, 2H), 3,86 (m, 4H), 3,74 (m, 4H), 3,59 (s, 3H)

V tabulce 6 jsou identifikovány sloučeniny podle vynálezu, které se připraví za použití postupu popsaného výše v tomto příkladu.

Tabulka 6

Sloučeniny připravené způsobem podle příkladu 6

^Rl'“^X	^R2	^R3
4-fenylbenzylamino	methyl	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	cyklopentyl	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	allyl	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	benzyl	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	3-methylbutyl	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	isobutyl	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	terč.butylacetát	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	methylacetát	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	cyklobutyl	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	ethyl	diethanolamino
4-fenylbenzylamino	propyl	diethanolamino

Příklad 7

Sloučeniny podle vynálezu se hodnotí za použití následujících zkoušek.

Zkouška CDK2

Sloučeniny podle vynálezu se zkoušejí za účelem stanovení jejich CDK2 inhibiční aktivity. Zkouškový systém (celkový objem 50 μΐ) obsahuje 50mM Tris-Cl, pH 7,4, lOmM chlorid hořečnatý, 5mM DTT, 1 pg histonu Hl, 30μΜ ATP (1 pCi gamma³²P značený ATP), 10 pg BSA a 1 ng purifikované CDK.2. Po 30minutové inkubaci při 30 °C se reakce ukončí přídavkem 10 μΐ

-42CZ 299381 B6

10% TCA a vzorky se blotují na nitrocelulózové filtry. Tyto filtry se důkladně promyjí v 10% TCA a zkoušejí na radioaktivitu. Slepé pokusy zahrnují žádný enzym. Za účelem zjištění účinnosti různých sloučenin podle vynálezu se tyto sloučeniny přidají k výše uvedenému zkouškovému systému v koncentracích od 100 do 0,02 pg/ml. Po 30minutové inkubaci se obsah zku5 mavek podrobí výše popsanému postupu. Při všech zkouškách se přidávají různé koncentrace olomoucinu, který slouží jako standardní pozitivní kontrola. Hodnoty IC₅₀ - enzym, uvedené v tabulce 7 jsou definovány jako koncentrace (pg/ml) potřebná pro 50% inhibici aktivity CDK.2.

ío Příklad 8

Zkouška s proliferaci buněk

Časnou pasáží buněk hladkého svalu aorty potkana (od CV Therapeutics Cell) se zaočkují

48-jamkové misky (Falcon, ml/jamka) v hustotě 20 000 buněk/ml DME obsahujícího 5% teplotně inaktivované hovězí sérum. Buňky se 48 hodin inkubují ve standardním inkubátoru pro inkubaci tkání. Médium se odsaje a jamky se doplní 0,2 ml čerstvého média. Sloučeniny podle tohoto vynálezu se přidávají v koncentraci od 100 do 0,37 pg/ml. Po 48-hodinové inkubaci se médium odsaje a kultury se ošetří 0,2 ml solného roztoku s obsahem 0,25 pl roztoku metho20 sulfátu fenozinu s obsahem MTS (Cell Titer 96®) Aqueous Non-radioactive Cell Proliferation Assay Kit, katalogové číslo G 5430, Promega, 2800, Woods Hollow Road, Madison, WI 53711-5399, USA). Hodnoty IC₅₀ - buňky, uvedené v tabulce 8 jsou definovány jako koncentrace (pg/ml) potřebné pro 50% inhibici proliferace buněk. Přidávaný olomoucin v různých koncentracích slouží jako standardní pozitivní kontrola.

-43 CZ 299381 B6

Tabulka 7

Biologická účinnost vybraných sloučenin podle vynálezu

R^-X	^R2	^R3	1¾ - enzym	^IC50- buňky
benzylamino	Me	ethanolamino	7	70
4-methoxybenzylamino	H	Cl	60	N
4-methoxybenzylamino	Me	Cl	6	>70
4-methoxybenzylamino	Me	ethanolamino	4	48
4-chlorbenzyloxy	B	Cl	60	K
4-chlorbenzyloxy	Me	Cl	60	N
4-chlorbenzyloxy	trifluormethyl	Cl	>60	K
4-methoxybenzylamino	isopropyl	Cl	4	77
4-methoxybenzylamino	isopropyl	ethanolamino	4	43
4-methoxybenzylamino	Me	diethanolamino	4	48
4-methoxybenzylamino	2-methylpropyl	Cl	60	>70
ethanolamino	Me	ethanolamino	>60	>70
4-methoxybenzylamino	trifluormethyl	Cl	>60	>70
4-methoxybenzylamino	benzyl	Cl	>60	>70
ethanolamino	H	benzylamino	>60	N
4-methoxybenzylamino	isopropyl	diethanolamino	0,2	2,1
4-methoxybenzylamino	perfluorisopropyl Cl	>45	N
4-methoxybenzylamino	perfluorisopropyl diethanolamino	40	N
4-methoxybenzylamino	isopropyl	3-pyrrolin	1	12,5
4-methoxybenzylamino	hydroxyethyl	diethanolamino	0,5	62
4-methoxybenzylamino	isopropyl	serinol	0,4	15
4-methoxybenzylamino	isopropyl	l,3-diamino-2- -hydroxypropan	0,6	25
4-methoxybe nzylamino	3-kyanopropyl	Cl	>60	N
4-methoxybenzylamino	3-chlorpropyl	Cl	>60	N
4-methoxybenzylamino	benzyl	Cl	>60	N
4-methoxybenzylamino	methyl-4- -karboxybenzyl	Cl	>60	S

44CZ 299381 B6

4-methoxybenzylamino	naftaloyiethyi	Cl	>60	N
4-chlorbenzylamino	trifluormethyl	Cl	1	li
4-methoxybenzylamino	isopropyl	R-(2-kyanopropyl)-R-(3-pyridylmethylj- amino	1	ÍT
4-methoxybenzylamino	isopropyl	2-(hydroxymethyl)-3-methylbutan-2- amino	1	S
4-methoxybenzylamino	isopropyl	3-hydroxypiperidino	1	N
cyklohexylmethylamino	isopropyl	Cl	1	R
piperonylamino	isopropyl	diethanolamino	0,8	R
4-methoxybenzylamino	isoproyl	diisopropanolamino	0,8	R
anilino	isopropyl	Cl	1	N
4-methoxybenzylamino	isopropyl	N-benzyl-R-2-hydroxy- ethylamino	1	N
4-fenylanilino	isopropyl	diethanolamino	0,6	N
4-fenylbenzylamino	isopropyl	diethanolamino	0,6	R
4-fenylbenzylamino	isoproyl	3-amino-l,2-propan- diol	0,6	N
4-(2-thiofenyl)benzyl- amino	isopropyl	diethanolamino	0,5	R
4-(4-methylfenyl)ben- zylamino	isopropyl	diethanolamino	0,6	R
4-(4-trifluormethylfenyIjbenzylamino	isopropyl	diethanolamino	0,6	řl
4-thiomethoxyanilino	isopropyl	Cl	0,6	N
3-(4-nitrilofenylj- anilino	isopropyl	diethanolamino	0,5	N
3-thiomethoxyanilino	isopropyl	diethanolamino	0,1	R
4-thiomethoxyanilino	isopropyl	diethanolamino	0,07	R
3-methoxybenzylamino	isopropyl	Cl	0,9	R
4-(2-pyridyl)benzyl- amino	isopropyl	diethanolamino	0,16	R
3-methoxybenzylamino	isopropyl	diethanolamino	0,5	R

R_rX	r₂	^R3	^IC50 ' enzym	s,
(4-chlorfenyl)methyl- amino	isopropyl	diethanolamino	0,12	0,3
(4-fluorfenyl)methyl-	isopropyl	diethanolamino	0,15	2,2
amino {4-trifluormethylfenyl)methylamino (4-trifluormethylfe-	isobutyl	diethanolamino	59	K
nyl)methylamino	isopropyl	diethanolamino	0,56	N
(4-chlorfenyl)methyl-		(S)-2-amino-3-fenyl-
amino	isopropyl	propylamino	1,07	N
(4-fluorfenyl)methyl- amino	isopropyl	2-aminoethylamino	0,17	1,4
(4-fluorfenyl)methyl-		(D)-1-hydroxymethyl-
amino	isopropyl	-2-methylpropylamino	0,06	2,7
(4-fluorfenyl)methyl-		(L)-l-hydroxymethyl-
amino	isopropyl	-2-methylpropylamino	0,19	N
(4-chlorfenyl)methy1-		(D)-1-hydroxymethyl-
amino	isopropyl	-2-methylpropylamino	0,19	N
(4-chlorfenyl)methyl-		(L)-1-hydroxymethyl-
amino	isopropyl	-2-methylpropylamino	0,05	N
(4-chlorfeayl) methyl-		2-hydroxy-2-fenyl-
amino	isopropyl	ethylamino	0,08	>5
(4-chlorfenyl)methyl-		2-amino-Nl-(2-hydroxy-
amino	isopropyl	ethyl)ethylamino	0,07	0,2
(4-chlorfenyl)methyl-		2-amino-H2-(2-hydroxy-
amino	isopropyl	ethyl)ethylamino	2,02	N
(4-chlorfenylJmethyl-		(S)-2-fenyl-l-karbox-
amino	isopropyl	amidoethylamino	1,07	N
(4-chlorfenyl)methyl-		2-aaino-N2-(2-hydroxy-
amino	isopropyl	ethyl)-Sl-(hydroxyethyl)ethylamino	0,43	N

46CZ 299381 B6

(4-sulfonamidofenylJ- isopropyl methylamino	2-aminoethylamino	9	B
(4-fluorfenyl)methyl- 2-oxo-3-butyl	diethanolamino	11	H
amino
(4-chlorfenyl)ntethyl- 2-oxo-3-butyl	diethanolamino	37	N
amino
(4-chlorfenyl)methyl- isopropyl	2-aminoethylamino	0,35	0,1
amino
(4-chlorfenyl)methyl- isopropyl	3-asinopropylamino	1,0	N
amino
{4-chlorfenyl)methyl- isopropyl	5-aminopentylamino	31	»
amino
(4-chlorfenyl)methyl- isopropyl	2-amino-2-methyl-	0,05	0,1
amino	ethylamino
(4-chlorfenyl)methyl- isopropyl	(S)-(+)-l-(hydroxy-	0,17	N
amino	methyl)propylamino
(4-chlorfenylJmethyl- isopropyl	(R)-(-J-l-(hydroxy-	0,18	N
amino	methyljpropylamino
(4-chlorfenylJmethyl- isopropyl	(S)-(+)-l-(hydroxy-	0,26	N
amino	methyljethylamino
(4-chlorfenyl)methyl- isopropyl	(R)-(-J-l-(hydroxy-	0,35	N
amino	methyljethylamino
(4-chlorfenylJmethyl- isopropyl	(S)-(+)-2-hydroxy-	0,38	N
amino	propylamino
(4-chlorfenyl)methyl- isopropyl	(R)-(-)-2-hydroxy-	0,43	N
amino	propylamino
(4-fluorfenyl)methyl- isopropyl	2-aminopropylamino	0,48	N
amino
(4-fluorfenylJmethyl- isopropyl	(S)-(2-tetrahydro-	0,63	H
amino	furylJmethylamino
(4-fluorfenylJmethyl- isopropyl	{R)-(2-tetrahydro-	0,58	H
amino	furyljmethylamino
(4-fluorfenyl)nethyl- isopropyl	2-hydroxy-l-methyl-	0,18	N
amino	ethylamino

(4-fluorfenyl)methyl- isopropyl	(S)-2-hydroxy-2-	0,22	N
amino	methylethylamino
(4-fluorfenyl)methyl- isopropyl	(R)-2-hydroxy-2-	0,23	>5
amino	methylethylamino
(4-fluorfenyl)methyl- isopropyl	1-hydroxymethyl-	0,11	2,4
amino	propylamíno

Inhibiční vlastnosti sloučenin podle vynálezu při proliferací buněk jsou demonstrovány jejich schopností inhibovat buněčnou proliferací při koncentraci v rozmezí od asi 0,05 do 100 pg/ml, přednostně méně než 0,5 pg/ml.

Provede se podobná zkouška za použití následujících buněčných linií: P388 - myšího lymfoidního neoplazmu; LI210 - myší lymfocytámí leukémie; Caco2 - lidského adenokardinomu kolonu; MCF7 - lidského adenokardinomu prsu; PupVSMC - neonatální buňky hladkého svalu aorty potkana; Ovcar - lidského karcinomu vaječníků; Panel - lidského adenokarcinomu slinivky; a ío HUVEC - lidské buňky endothelia pupečníku. Inhibiční aktivita několika sloučenin podle vynálezu proti jedné nebo většímu počtu těchto buněčných linií je uvedena v následující tabulce 7A.

Tabulka 7 A

Rj-X	r₂	^r3	P388	L1210	Caco2	KFC7
(4-methoxyfenyl)-	isopropyl	diethanolamino	1,5	2,5	4,5	8,0
methylamino
(4-fenylfenyl)amino isoproyl	diethanolamino	1,0	4,0	0,5	4,0
(4-fenylfenyl)-	isopropyl	diethanolamino	<1,0	1,0	3,5	1,0
methylamino
(4-methoxyfenyl)-	isopropyl	morfolino	>5
methylamino
3-fenoxyfenyl,	isopropyl	diethanolamino	1,5			2,0

3-benzyloxyfenyl

Příklad 9

Účinnost sloučenin podle vynálezu se hodnot na modelu myší leukémie. Model myší leukémie je 20 standardním modelem používaným pro hodnocení protinádorových činidel. Myším CDF1 se i.p. injekcí aplikují buňky L1210 (1 χ 10³ buněk/myš). Po 24 hodinách se myši ošetří různými dávkami (i.p.) sloučeniny 3 z příkladu 1 v solném roztoku. Při zkoušce se použije dávkovacího režimu uvedeného dále v tabulce 8. Sloučenina 3 se myším podává denně nebo obden. Kontrolní myši obdrží solný roztok. Po 7 dnech se dávkování přeruší a monitoruje se doba přežití.

-48CZ 299381 B6

Tabulka 8

Ošetření n Medián doby Ošetření/ přežití (dny) kontrola x 100

kontrolní solný roztok		7	10	(9	až	13)	100
sloučenina 3	0,5 mg/kg bíd	7	11	(10	až	15)	110
	1,0 mg/kg bíd	7	13	(11	až	13)	130
	2 mg/kg bid 4 mg/kg - dny	7	12	(10	až	14)	120
	1, 3, 5, 7 8 mg/kg - dny	7	13	(10	až	15)	130
	1, 3, 5, 7	7	13	(12	až	16)	130

Výsledky ukazují, že myši, kterým byla podávána sloučenina 3 přežili déle než kontrolní skupina.

Příklad 10

Při této zkoušce se měří účinek akutní místní dodávky sloučeniny 3 z příkladu 1 na snižování tvorby neointymy po balonové angioplastice na modelu potkaní karotidové artérie. Dospělým io samcům potkana (10 ve skupině, n = 10) se za použití Fogartyho katétru pro arteriální embolektomii chirurgicky poraní levá společná karotidová artérie. Ihned po poranění se společná karotidová artérie rozpůlí pomocí cévní svorky, čímž se vymezí ošetřený a neošetřený úsek. Poté se do distální poloviny společné karotidy zavede katétr pro dodávku léčiva. Po dodání léčiva se katétr vyjme a nadbytek léčiva se vymyje tak, že se cévní svorka odstraní a před uzavřením artérie se obnoví krevní oběh. Zvířata se před vyjmutím společné karotidové artérie nechají 14 dní zotavit. Vyjmutá tkáň se rozřízne a plocha neointimy se digitalizuje a měří za použití počítačového planimetrického systému. Pro každé zvíře se stanoví průměr z 15 měření u neošetřeného úseku a z 15 měření ošetřeného úseku.

{2-[(2-Aminoethyl)amino]-9-(methylethyl)purin-6-yl]} [(4-chlorfenyl)methyl]amin podaný v dávce 5 mg/ml snižoval plochu neointimy o 90 %, zatímco podání samotného solného roztoku ji snižovalo o 6 %.

Výsledky z této zkoušky jsou znázorněny na obr. 1. Jak je zřejmé z obr. 1, podávání sloučeniny 3 z příkladu 1 do poškozené karotidové artérie snížilo plochu neointimy o 88 % oproti 6% snížení v případě podávání samotného solného vehikula.

Příklad 11

Zkouška s IkappaB-alfa kinázou

Sloučeniny podle vynálezu se zkoušejí za účelem stanovení inhíbiční účinnosti na IkappaB-alfa kinázu. Linie buněk endothelia imbilikální vény člověka (HUVEC), které se používá při této zkoušce, pochází od firmy Clonetics (San Diego, CA, USA). Buňky se udržují v růstovém médiu

-49CZ 299381 B6 pro endotheliální buňky doplněném 2% fetálním hovězím sérem, 10 ng/ml lidského rekombinantního epidermálního růstového faktoru, 1 pg/ml hydrokortisonu, 50 pg/ml gentamicinu, 50 ng/ml amfotericinu B a 12 pg/ml extraktu hovězího mozku při 37 °C v inkubátoru pro kultivaci tkání. Všechna růstová média a doplňky pocházejí od firmy Clonetics (San Diego, CA, USA). Lipo5 polysacharid (LPS) E. coli sérotyp 011UB4 pochází od firmy Sigma (Saint Louis, Ml, USA). Všechny ostatní chemické látky jsou v kvalitě reakčních činidel.

Příprava buněčného lysátu ío Monovrstvy (75 cm²) buněk HUVEC se ošetřují LPS (100 ng/ml) po dobu 5 minut. Poté se buněčné médium rychle odstraní a monovrstvy se třikrát promyjí ledově chladným PBS. Vrstva buněk seškrábne do 10 ml PBS a buňky se peletizují centrifugaci (3000 min”¹, 5 min, 4 °C). Buněčný lysát se připraví tak, že se buněčné pelety inkubují v 0,2 ml lysačního pufru (20mM HEPES, pH 7,3, 50mM chlorid sodný, lOmM chlorid hořečnatý, lmM EDTA, lmM EGTA, lmM orthovanadičnan sodný, lOmM β-glycerofosfát, lmM fenylmethylsulfonylfluorid, lmM dithiothreitol, 0,5% Nonidet P-40) po dobu 15 minut při 37 °C za častého vortexování. Buněčné fragmenty se ze vzorku odstraní centrifugaci (10 000 g, 15 minut, 4 °C). Supematant se „předčistí“ tak, že se k němu přidá suspenze Sepharose 4B v lysačním pufru (100 ml) a vzniklá směs se 1 hodinu při 4 °C jemně míchá. Perly Sepharose 4B se odstraní míkrocentrifugací, supernatant se rozdělí na alikvoty a skladuje při 80 °C.

Zkouška s IkappaB-alfa kinázou v pevné fázi pg GST-lkappaB-alfa odpovídající plné délce IkappaB-alfa lidského původu (Santa Crus

Biotechnology) se 30 minut při teplotě místnosti inkubuje s 20 pl 50% suspenze glutation S Sepharose 4B (Pharmacia) v reakčním pufru (20mM HEPES, pH 7,3, lOmM chlorid hořečnatý, 15mM β-glycerofosfát, 0,5mM orthovanadičnan sodný, 0,5mM EGTA). Komplex GST-IkappaB-perly se promyje třikrát 0,5 ml reakčního pufru, přičemž se vždy resuspenduje a mikrocentrifuguje a přidá se k němu 10 pg lysačního proteinu buněk HUVEC ve 100 pl reakčního pufru. Vzniklá směs se za mírného míchání inkubuje 1 hodinu při 4 °C. Komplex s perlami se poté promyje třikrát reakčním pufrem obsahujícím 0,2M chlorid sodný a jednou reakčním pufrem samotným. Na závěr se komplex s perlami resuspenduje v 20 pl reakčního pufru obsahujícího pCi [gamma-³²P]ATP (>5000 Ci/mmol, New England Nuclear Corp. Boston, MA, USA). Výsledná suspenze se 15 minut inkubuje při teplotě místnosti. Reakce se ukončí přídavkem 10 pl

SDS-PAGE zkušebního pufru. Směs se 3 minuty vaří a poté rozdělí pomocí SDS-PAGE (10 až 20% gradient, Readygel, BioRad). Po elektroforéze se gel fixuje (50% methanol, 10% kyselina octová) po dobu 15 minut, třikrát promývá po dobu 5 minut, vždy destilovanou vodou a po dobu 15 minut se na něj působí 5% glycerolem. Poté se gel vysuší a exponuje na film pro autoradiografii (X-OMAT XAR-5 Kodak).

Zkouška s kinázou v gelu

Aktivita isozymů IkappaB-alfa se zkouší za použití modifikace dříve publikovaných postupů. Zkoušku je možno stručně popsat takto: Výše popsaným postupem se ve dvojím provedení připraví vzorky komplexu IkappaB s perlami glutathion sepharose 4B a rozdělí se elektroforézou na 12% gelu SDS-PAGE, který byl polymerován za přítomnosti 15 pg/ml GST-lkappaB-alfa. Po elektroforéze se gel dvakrát 30 minut opatrně promývá vždy 50mM Tris-HCl (pH 8,0), 5mM β-merkaptoethanolem, 20% isopropylalkoholem, aby se odstranil SDS. Poté se protein v gelu denaturuje 45minutovou inkubací v 100 ml 50mM Tris-HCl (pH 8,0), 5mM β-merkaptoethanolu a 0,04% Tween 40. Gel se rozřízne na poloviny, aby se oddělily duplikáty vzorků. Jedna polovina se inkubuje v 10 ml reakčního pufru samotného a druhá polovina v 10 ml reakčního pufru s obsahem 10 pg/ml 2-diethanolamino-6-(4-fenylanilino)-9-isopropylpurinu (sloučenina z příkladu 3) po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Poté se k inkubační směsi přidá 10 pCi [gamma³²P]ATP a v inkubaci se pokračuje další hodinu při teplotě místnosti. Gely se podrobí

-50CZ 299381 B6 několikanásobnému 15minutovému promytí 100 ml vždy 5% kyseliny trichloroctové obsahující 1% difosforečnan sodný, dokud se radioaktivita 1 ml promývacího roztoku neblíží radioaktivitě pozadí. Poté se gely vysuší a exponují na film pro autoradiografii.

Příprava afinitní matrice Sepharose 6B s aktivovanými epoxyskupinami pro 2-diethanolamino6-(4-fenylbenzylamino)-9-isopropylpurin

Pro kopulaění reakci se zvolí lyofilizovaná Sepharose 6B s aktivovanými epoxyskupinami (Pharmacia LKB, Piscataway, NJ, USA), na základě její schopnosti tvořit etherovou vazbu mezi ío hydroxyskupinami ligandu a epoxyskupinami na Sepharose. Gel se nechá nabobtnat podle pokynů výrobce. 100 mg sloučeniny 6 z příkladu 3 se rozpustí v 1 ml kopulačního roztoku (směs dimethylformamidu a 0,lM hydroxidu sodného v objemovém poměru 1,2 : 1) a vzniklý roztok se během 72 hodin při teplotě místnosti za mírného míchání smísí s 0,5 ml nabotnalého gelu o pH 10 až 11. Nadbytek reaktivních skupin se blokuje působením 1M ethanolaminu po dobu

4 hodin při 50 °C. Gelová suspenze se nalije do lml kolony s pístem. Pryskyřice se aktivuje třemi střídavými cykly vždy 20 objemů pufru pH 4,0 (0,lM acetát, 0,5M chlorid sodný) a pufru pH 8,0 (0,1 M Tris-HCl, 0,5M chlorid sodný) a poté dvaceti objemy reakčního pufru (20mM HEPES, pH 7,3, lOmM chlorid hořečnatý, 15mM β-glycerofosfát, 0,5mM orthovanadičnan sodný, 0,5mM EGTA). Sloupec se uloží při 4 °C v reakčním pufru obsahujícím 0,5% azid sodný a před každým použitím regeneruje za použití střídavých cyklů vysokého a nízkého pH, jak je uvedeno výše.

Aktivovaný lysát buněk HUVEC (500 pg proteinu v 1 ml reakčního pufru) se nechá postupně pětkrát projít přes matrici CVT-1545 Sepharose a filtrát se dá stranou (nenavázaná látka). Matrice se poté promyje třikrát 1 ml reakčního pufru (promytí 1 až 3), poté třikrát vždy reakčním pufrem obsahujícím 0,5M chlorid sodný (eluát 1 až 3). Alikvóty (20 μΐ z 1 ml) každého vzorku se zkoušejí na schopnost fosforylovat komplex GST-IkappaB-sepharosové perly a analyzují pomocí SDS-PAGE výše popsaným postupem.

Zkouška s afinitně obohacenou IkappaB-alfa kinázou

Spojené 0,5M NaCl eluáty z afinitní matrice se použijí jako zdroj enzymu pro zkoušku IkappaB-alfa kinázy na filtru. Každá reakční směs obsahuje afinitně obohacenou IkappaB-alfa kinázu (1 pg proteinu), lOng GST IkappaB-alfa kinázy a 0,5pCi [gamma-³²P]ATP (>5000 Ci/mmol, New England Nuclear Corp. Boston, MA, USA) ve 20 pl reakčního pufru.

Reakční směs se inkubuje 15 minut při teplotě místnosti, načež se přídavkem 2 pl 0,5M EDTA ukončí reakce. Reakční směs se blotuje na fosfocelulózové filtrační kotouče (Gibco, BRL Life Technologies, Gaithesburg, MD, USA). Filtry se za mírného třepání během 15 minut promyjí třikrát 0,15M kyselinou fosforečnou (300 ml 0,15M kyseliny fosforečné se promyje až 10 filtrů). Po třetím promytí se filtry vysuší na vzduchu, přidají do scintilační kapaliny a podrobí kapalinové scintilační spektrometrii.

Elektroforetická zkouška mobility

Za použití extrakčního postupu s koncentrovaným solným pufrem se připraví jaderné extrakty.

10 pmol dvouřetězcového NF-kappaB konvenčního oligonukleotidů (5-AGTTGAGGGACTTTCCCAGGC-3', Promega) se na 5' konci označí 5 pCi [gamma-³²P]ATP (>5000 Ci/mmol, New England Nuclear Corp. Boston, MA, USA) inkubací s T4 polynukleotidy se odstraní tak, že se reakční směs nechá projít lml rotující kolonou Sephadex G-5. Vazebná zkouška se provádí po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti za použití 10 pg jaderného proteinového extraktu, 1 pg DNA lososího spermatu a 5 x 10⁴ (cpm) ³²P značeného konvenčního oligonukleotidů za přítomnosti a za nepřítomnosti padesátinásobku neznačeného oligonukleotidů. Komplexy DNA-protein se rozdělí elektroforézou na 8% nedenaturovaném polyakrylamidovém gelu. Gely se vysuší na filtračním papíru a vizualizují autoradiografii.

-51 CZ 299381 B6

Tabulka 9

Aktivita enzymu za použití vybraných sloučenin podle vynálezu

R-^-X	*2	*3	^IC50 ' enzym
4-fenylbenzylamino	isopropyl	diethanolamino	1,1
4-fenylbenzylamino	isopropyl	diethanolamino	>2,4
4-fenylbenzylamino	isopropyl	ethanolamino	2,5
4-bromanilino	isopropyl	diethanolamino	14
4-(3-methoxyfenyl)benzylamino	isopropyl	diethanolamino	>10
4-(4-methoxyfenyl)- benzylamino	isopropyl	diethanolamino	11
3~(4-nitrilofenyl)- anilino	isopropyl	diethanolamino	2,2
4-thiomethoxyanilino	isopropyl	diethanolamino	12,4
4-(2-pyridylJbenzal- amino	isopropyl	diethanolamino	4,5
(4-methoxyfenyl)methylamino	isopropyl	diethanol- 5 amino	0,4
(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	2-amino- 1 ethylamino	0,1
(4-chlorfenyl)- methylamino	isopropyl	2-amino-2- 1 methylethyl- amíno	0,1
(4-chlorfenyl)- methylamino	isopropyl	2-amino-Nl- 1 -(2-hydroxyethyl)ethylamino	0,3
(4-chlorfenyl)methylamino	isopropyl	diethanol- 3 amino	0,3

MR.C-5 - lidský fibroblast

PupVSMC - neonatální buňky hladkého svalu aorty potkana

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. 2,6,9-Trisubstituovaný purin obecného vzorce I kde

10 R] představuje halogen;

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, halogenu a -C(O)R;

15 R a R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -O- alkylskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku, halogenu, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, merkaptoskupiny, alkylthiolové skupiny s 1 až 10 atomy uhlíku, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku valkylové části,

20 -C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí nebo

-C(O)O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku valkylové části, kyanoskupiny, fenyloxyskupiny, alkenylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, alkynylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, skupiny vzorce -C(O)alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, nebo fenyl- nebo monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku, popřípadě substituovanou

25 jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z alkylskupiny s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenu, merkaptoskupiny, alkylthioskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku, zbytku acetylenu, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, 30 C(O)O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, nebo -C(O)alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, hydroxyskupiny, fenylskupiny, fenoxyskupiny, monocyklické nebo bicyklické heteroarylskupiny s jedním atomem dusíku, nitroskupiny nebo kyanoskupiny; a

R₃ představuje halogen, -NR4R5 nebo zbytek obecného vzorce kde m, n a o představuje nezávisle 1, 2 nebo 3;

5 Y představuje -NR4R5, hydroxyskupinu, merkaptoskupinu, -OR, nebo alkylthiolovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části; a

R4, Rť, R4, Rť, R5, R5 a R₅' představuje každý nezávisle vodík, hydroxyskupinu, alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupina10 mi zvolenými z hydroxyskupiny, NRR', nebo fenylskupinu, monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části; nebo

Y a R₄' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo

R4 a R₅” mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo

R4' a R₅' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku;

20 nebo jeho farmaceuticky vhodná sůl.
2. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 1, obecného vzorce I, kde Ri představuje chlor.
3. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 2, obecného vzorce I, kde R₂ představuje alkyl25 skupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi hydroxyskupinami.
4. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 2, obecného vzorce I, kde R₃ představuje halogen nebo -NR₄R₅.
5. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 4, obecného vzorce I, kde R₃ představuje chlor.
6. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 4, obecného vzorce I, kde R₃ představuje -NR4R5.
7. 2,6,9-Trisubstituovaný purin obecného vzorce T

Rť představuje chinolin-3-yl nebo chinolin-6-yl; nebo

Rť představuje benzylskupinu, jejíž kruhová část je substituována jednou, dvěma nebo třemi 45 skupinami zvolenými z halogenu, skupiny OR, thienylskupiny, nitroskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupiny, přičemž fenylskupina je nesubstituovaná nebo

-54CZ 299381 B6 substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, nižší alkoxyskupinou se 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, merkaptoskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo kyanoskupinou; nebo

R,' představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z bromu, jodu, skupiny -OR, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny nebo fenylskupiny, přičemž fenylskupina je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy io uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, merkaptoskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo kyanoskupinou;

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, halogenu a -C(O)R;

R a R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, skupiny -O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, halogenu, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, merkaptoskupiny, alkylthiolové skupi20 ny s 1 až 10 atomy uhlíku, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, -C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, nebo -C(O)Oalkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, kyanoskupiny, fenoxyskupiny, alkenylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, alkynylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, skupiny vzorce -C(O)alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, nebo fenyl- nebo monocyklickou nebo bicyklickou

25 heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z alkylskupiny s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenu, merkaptoskupiny, alkylthiolové skupiny s 1 až 10 atomy uhlíku, acetylenové skupiny, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku

30 alkylové části, C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, -C(O)Oalkyl s 1 až 10 atomy uhlíku alkylové části, nebo -C(O)alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku alkylové části, hydroxyskupiny, fenylskupiny, fenoxyskupiny, monocyklické nebo bicyklické heteroarylskupiny s jedním atomem dusíku, nitroskupiny nebo kyanoskupiny;

35 R představuje vodík nebo alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, která je popřípadě substituovaná jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, skupiny -O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, halogenu, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, merkaptoskupiny, alkylthiolové skupiny s 1 až 10 atomy uhlíku, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části,

40 -C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, nebo

-C(O)O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, kyanoskupiny, fenoxyskupiny, alkenylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, alkynylskupiny se 2 až 10 atomy uhlíku, skupiny vzorce —C(O)alkyl se 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, nebo fenyl— nebo monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku, popřípadě substituovanou

45 jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z alkylskupiny s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenu, merkaptoskupiny, alkylthiolové skupiny s 1 až 10 atomy uhlíku, acetylenové skupiny, aminoskupiny, mono- nebo dialkylaminoskupiny s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylových částí, skupiny vzorce -C(O)NH-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, -C(O)N-dialkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v každé z alkylo50 vých částí, -C(O)O-alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, nebo -C(O)alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, hydroxyskupiny, fenylskupiny, fenoxyskupiny, monocyklické nebo bicyklické heteroarylskupiny s jedním atomem dusíku, nitroskupiny nebo kyanoskupiny;

-55CZ 299381 B6

R₃ představuje halogen, -NR4R5 nebo zbytek obecného vzorce kde

5 m, n a o představuje nezávisle 1, 2 nebo 3;

Y představuje -NR4R5, hydroxyskupiny, merkaptoskupinu, -OR nebo alkylthioskupinu s 1 až 10 atomy uhlíku; a

10 R4, R4', R4, R4', R₅, R5 a R₅' představuje každý nezávisle vodík, hydroxyskupinu, alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, NRR', nebo fenylskupinu, monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části; nebo

Y a R4' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo

R4 a R₅ mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo

20 R4' a R₅' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku;

nebo jeho farmaceutická sůl.
8. 2,6,
9-Trisubstituovaný purin podle nároku 7, obecného vzorce Γ, kde

Ri představuje NH Ar; a

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z bromu, jodu, skupiny -OR, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo

30 fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, merkaptoskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.

35 9. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 8, obecného vzorce Γ, kde,

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny nebo halogenu;

40 R a R' nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

-56CZ 299381 B6

R představuje vodík nebo alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku; R₃ představuje halogen, -NR4R5 nebo zbytek obecného vzorce

5 kde m, n a o představuje nezávisle 1, 2 nebo 3;

Y představuje -NR4R5, hydroxyskupinu, merkaptoskupinu, -OR, nebo alkylthiolovou skupinu
10 s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části; a

R4, R4', R4, R4', R5, R5” a R₅' představuje každý nezávisle vodík, hydroxyskupinu, alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, NRR', nebo fenylskupinu, monocyklickou nebo bicyklic15 kou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části;

Y a Rť mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo 20 Rť' a R₅'' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku;

nebo

R4' a R₅' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku;

10. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 8, obecného vzorce Γ, kde R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku,

30 R a R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

R představuje vodík nebo alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde 35

R4 a R₅ nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenylskupinu, monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části.

-57CZ 299381 B6
11. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 8, obecného vzorce T, kde R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku,

5 Ra R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

R představuje vodík nebo alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

R4 a R5 nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo monocyklickou nebo bicyklickou heteroarylskupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části a

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z bromu, jodu, skupiny -OR”, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku,

20 hydroxyskupinou, aminoskupinou, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.
12. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 8, obecného vzorce I', kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku,

R a R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

R” představuje vodík nebo alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

30 R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

Rt a R₅ nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části a

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z bromu, jodu, skupiny -OR”, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku,

40 hydroxyskupinou, aminoskupinou, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.
13. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 7, obecného vzorce Γ, kde

Ri představuje NHCH₂Ar;

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z halogenu, skupiny -OR, thienylskupiny, nitroskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny,

50 nebo fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, merkaptoskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.

-58CZ 299381 B6
14. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 13, obecného vzorce Γ, kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny nebo halogenu;

Ra R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5 nebo zbytek obecného vzorce

10 kde m, n a o představuje nezávisle 1, 2 nebo 3;

Y představuje -NR4R5, hydroxyskupinu, merkaptoskupinu, -OR, alkylthioskupinu s 1 až 10
15 atomy uhlíku; a

R4, R/, R4, Rť, R₅, R₅ a R₅' představuje každý nezávisle vodík, nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku popřípadě substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, NRR', nebo fenylskupinu, monocyklickou nebo bicyklickou heteroaryl20 skupinu s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části; nebo

Y a R4' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; nebo 25 Rť' a R₅ mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku;

nebo

Rť a R₅' mohou dohromady představovat jediný atom kyslíku; a

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z halogenu, skupiny -OR, thienylskupiny, nitroskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku,

35 hydroxyskupinou, aminoskupinou, merkaptoskupinou, alkylthioskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.

15. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 13, obecného vzorce Γ, kde

40 R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

-59CZ 299381 B6

R a R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

5 R4 a R₅ nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku; popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenylskupiny nebo monocyklické nebo bicyklické heteroarylskupiny s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části.

10
16. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 13, obecného vzorce Γ, kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R a R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

R4 a R5 nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu, popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenylalkylskupiny nebo

20 monocyklické nebo bicyklické heteroarylskupiny s jedním atomem dusíku nebo fenylalkylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části;

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z halogenu, skupiny -OR, thienylskupiny, nitroskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny,

25 nebo fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinou, aminoskupinou, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.
17. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 13, obecného vzorce Γ, kde

R₂ představuje alkylskupinu se 2 až 10 atomy uhlíku;

R a R' představuje nezávisle vodík nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;

35 R₃ představuje halogen nebo -NR4R5, kde

R4 a R₅ nezávisle představují vodík nebo alkylskupinu, popřípadě substituovanou jednou nebo dvěma skupinami zvolenými z hydroxyskupiny, -NRR', nebo fenylalkylskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části; a

Ar představuje fenylskupinu substituovanou jednou, dvěma nebo třemi skupinami zvolenými z halogenu, skupiny -OR, thienylskupiny, pyridylskupiny, piperonylskupiny, nebo fenylskupinu, která je nesubstituovaná nebo substituovaná trifluormethylskupinou, halogenem, alkylskupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxy45 skupinou, aminoskupinou, nitroskupinou nebo kyanoskupinou.
18. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 7, obecného vzorce Γ, kde

Ri představuje NHR,' a Rf představuje chinolin-3-ylskupinu.
19. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 8, obecného vzorce V, kde Ar představuje 3-jodfenylskupinu, 4-bromfenylskupinu nebo 4-bifenylskupinu.

-60CZ 299381 B6
20. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 13, obecného vzorce Γ, kde CH₂Ar představuje 4-fenylbenzyl, 4-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-(2-thienyl)benzyl, 4-(4-methyl)fenylbenzyl, 4-(4-trifluormethyl)fenylbenzyl, 3-(4-kyanofenylbenzyl), 4-(4-kyanfenyl)benzyl, 4-(2-pyridyl)benzyl, 3-methoxybenzyl, 2-ehlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,5—di5 fluorbenzyl, 4- a 4-nitrobenzyl.
21. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 11, obecného vzorce Γ, kde R₃ představuje chlor, diethanolamino, diisopropanolamino, 2-aminoethylamino, 2-aminopropylamino, 2-(methylamino)ethylamino, l-hydroxymethyl-2-methylpropylamin nebo 3-amino-l,2-propandiol a R₂ ío představuje isopropyl.
22. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 21, obecného vzorce T, kde R₃ představuje chlor, diethanolamino, diisopropanolamino, 2-aminoethylamino, 2-aminopropylamino, 1-hydroxymethyl-2-methylpropylamin nebo 3-amino-l,2-propandiol a R₂ představuje isopropyl.
23. 2,6,9-Trisubstituovaný purin podle nároku 7, kterým je

2-{(2-hydroxyethyl)-[9-isopropyl-6-(4-methoxybenzyl-amino)-9H-purin-2-yl]amino}ethanol; nebo

2-[[6-(4-brombenzylamino)-9-isopropyl-9H-purin-2-yl]-(2-hydroxyethyl)amino]ethanol.
24. Sůl sloučeniny podle nároku 1 nebo 7 s kationtem.
25 25. Adiční sůl sloučeniny podle nároku 1 nebo 7 s kyselinou.
26. Použití terapeuticky účinného množství 2,6,9-trisubstituovaného purinem podle některého z nároků 7 až 25 k výrobě farmaceutické kompozice na inhibici buněčné proliferace u savce.

30
27. Použití podle nároku 26, při němž terapeuticky účinné množství sloučeniny leží v rozmezí od 0,001 do 100 mg/kg tělesné hmotnosti savce.
28. Použití podle nároku 26 nebo 27, při němž je kompozice vhodná k podávání savci, který trpí poruchou buněčné proliferace zvolenou ze souboru sestávajícího z rheumatoidní arthritis, lupu,

35 diabetes typu I, roztroušené sklerosy, rakoviny, restenózy, choroby host-versus-štěp, dny a polycystické choroby ledvin.
29. Použití podle některého z nároků 26 až 29, při němž je savcem člověk.

40
30. Farmaceutická kompozice, v y z n a č u j í c í se t í m , že obsahuje 2,6,9—trisubstituovaný purin podle některého z nároků 7 až 25 a jeden nebo více farmaceutických excipientů.
31. Farmaceutická kompozice podle nároku 30, vy znač u j í c í se tí m , že je ve formě roztoku.
32. Farmaceutická kompozice podle nároku 30, vy zn ač u j í cí se tí m , že je ve formě tablety.
33. Antifungální činidlo užitečné k léčení fungálních infekcí u člověka, vyznačující se 50 t í m , že obsahuje 2,6,9-trisubstituovaný purin podle některého z nároků 7 až 25.